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Cromatografa de Intercambio Inico

Introduccin
El intercambio inico es el intercambio reversible y estequiomtrico de iones entre una fase slida y una fase lquida. En las cromatografas vistas anteriormente el equilibrio asociado al fenmeno de retencin involucra a cada analito individualmente en una fase u otra. En equilibrios entre iones en solucin esto no es posible dado que estamos sujetos a la condicin de electroneutralidad que exige que para cada catin haya un anin y viceversa. Si nos interesa separar analitos catinicos deberemos utilizar una fase estacionaria que contenga sitios activos negativos, los cuales debern encontrarse unidos a algn catin que mantenga la electroneutralidad. Este catin deber ser desplazado por nuestro analito para establecer el equilibrio y unirse al sitio aninico de la fase estacionaria. De manera anloga, para separar aniones deberemos utilizar fases estacionarias con cargas fijas positivas que se encontrarn unidas a algn anin encargado de mantener la electroneutralidad, y que ser desplazado por nuestro analito para el establecimiento del equilibrio. Por esta razn, si bien podemos plantear tericamente equilibrios individuales entre algn ion libre y un contrain fijo, por ejemplo: -R- + H+ -R-:H+ o -R + Na -R :Na
+ +

KH =
+

[R :H ] + [R ] [ H ]
+

[R : Na ] K Na = + [R ][ Na ]
+

en la prctica no existirn tales equilibrios por separado sino que solamente podr existir la sustitucin de un ion por otro originando un equilibrio de intercambio inico: -R :H + Na -R :Na + H
+ + + +

Na H+

[R - : Na + ][ Na + ] K Na = = [R - : H+ ][ Na+ ] K H

Recordemos que en el resto de las tcnicas separativas la selectividad es, entre otras cosas, el cociente entre la constante del equilibrio de separacin de un analito respecto de la constante de otro analito. De manera anloga, en intercambio inico a E se lo llama coeficiente de selectividad. En el ejemplo anterior sera el coeficiente de selectividad de intercambio de protones por iones sodio. Las razn por la que E no es directamente selectividad es que en realidad las constantes de equilibrio involucradas no son constantes sino que son coeficientes de distribucin ya que varan con la cantidad de iones sustituidos. Para visualizarlo de modo grfico, intercambiar el primer catin no cuesta lo mismo que intercambiar el segundo ni el tercero:

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Para poder realizar algn tratamiento matemtico se utilizan los coeficientes de selectividad que se obtienen cuando el grado de intercambio tiende a cero, y se consideran vlidas hasta saturaciones menores al 5% del total de sitios de intercambio activos. Por otra parte, el equilibrio considerado es el mas simple ya que tomamos un intercambio entre dos iones monovalentes. Para un intercambio genrico de sitios protonados por cualquier catin con valencia +n la reaccin es : -R :H + 1/n M -R :M
+ +n +n 1/n

+H

M H+

+n

[R : M1 / n ][ H ] [R :H ][ M ]
+ +n 1 / n

+n

donde la estequiometra y la constante se expres por miliequivalente de protones Los equilibrios tericos de unin de iones individuales a contraiones fijos en la fase estacionaria dependen de la fuerza o energa de unin de los iones. Para ello se observa la acidez o basicidad de Lewis, es decir, la capacidad de atraer u ofrecer electrones al contrain. En el caso de los cationes, sern mas cidos cuanto mayor sea la carga y menor el radio inico. Esto es lo que llamamos, poder polarizante. El catin Fe+3 es pequeo y con varias cargas positivas y por ello es fuertemente cido (de Lewis) y muy polarizante. El catin Rb+ tiene una sola carga y tiene un radio inico mucho mayor, con lo cual se dice que es dbilmente cido y poco polarizante. Bajo este criterio se pueden establecer escalas de poder polarizante de un catin respecto de otro. Por ejemplo, el poder polarizante emprico en orden creciente es: Cationes Monovalentes: Li+>H+>Na+>NH4+>K+>Rb+>Cs+>Ag+>Tl+ Cationes Divalentes: Mg++>Zn++>Co++>Cu++>Cd++>Ni++>Mn++>Ca++>Sr++>Pb++>Ba++ Cationes Trivalentes: Fe+++>La+++>Ce+++>Cr+++ Para el caso de aniones la energa de unin depende de su basicidad de Lewis o capacidad para compartir electrones, lo cual denominamos polarizabilidad. A mayor cantidad de carga negativa y mayor radio inico los electrones de la ltima capa sern mas susceptibles a ser atrados por cationes y formarn uniones mas fuertes. Si los ordenamos en una escala en polarizabilidad creciente: F->OH->Cl->CN->Br->NO3->I->SCNLa combinacin de un catin muy polarizante y un anin muy polarizable resultar en energas de enlace altas y constantes de unin elevadas, lo cual explica las elevadas constantes de formacin de los complejos de hierro y tiocianato. Durante una separacin por intercambio inico en la fase mvil se utilizar un electrlito que formado por un ion que ser el contrain de los sitios activos de la fase estacionaria y otro ion que se mantendr como contrain de nuestro analito. El fenmeno de intercambio inico sucede en en la naturaleza cuando el agua permea a travs del suelo, agregando o quitando iones. En la prctica un lecho intercambiador puede utilizarse para desionizar agua o para llevar a cabo una separacin cromatogrfica como la que realizaremos en el laboratorio. Para desionizar agua se utilizan dos columnas sucesivas, una intercambiadora de aniones y otra intercambiadora de cationes. Dado que cada una de ellas funcionar como trampa de iones interesa que los sitios de intercambio establezcan enlaces fuertes de modo tal que los iones en solucin se unan irreversiblemente a los sitios intercambiadores fijos. Para intercambiar aniones se utilizaran lechos con cationes altamente polarizantes activados con iones hidroxilo que sern liberados en el fenmeno de intercambio y se mantendrn en solucin con los cationes de la solucin. La solucin que eluye es alcalina dado que tiene mezcla de cationes e hidroxilos. A continuacin se utiliza un lecho de aniones altamente polarizables activados con protones. Los cationes de la solucin se intercambian con los protones y quedan unidos a los sitios fijos del lecho, mientras que los protones se liberan estequiomtricamente neutralizando la solucin. El orden de los lechos a utilizar no cambia el producto final (agua pura), pero cambia el pH de la solucin intermedia. Dado que muchos hidrxidos
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son insolubles generalmente primero se quitan los cationes y luego los aniones. La regeneracin de los lechos intercambiadores fuertes se lleva a cabo con cidos fuertes (HCl) o con hidrxidos fuertes (NaOH) sin introducir la elucin de un activador en la siguiente columna. Para realizar separaciones cromatogrficas no nos resulta til que los iones del lecho formen uniones muy fuertes ya que deseamos que los iones vayan eluyendo en tiempos razonables. Esto se regula con el tipo de iones fijos utilizados y el electrlito elegido para la fase mvil.

Fases Estacionarias
Las fases estacionarias empleadas comercialmente pueden clasificarse de dos maneras. En funcin de las energas de unin o poder polarizante o polarizable: - Fuertes: sitios fijos de Aniones muy Polarizables o Cationes muy polarizantes - Intermedios - Dbiles: sitios fijos de aniones poco Polarizables o Cationes poco polarizantes Segn su naturaleza qumica: 1- Intercambiadores Inorgnicos 2- Polmeros Sustituidos (resinas) 3- Geles 1- Entre los intercambiadores inorgnicos mas utilizados se encuentran las Zeolitas que son almino silicatos complejos de origen mineral y que activados con cidos sirven como intercambiadores catinicos fuertes. Son baratos y se utilizan para armar desionizadores de agua a gran escala. En menor medida pueden utilizarse almina y slice. 2- Las resinas son polmeros lineales de estireno entrecruzados con divinilbenceno.

Tanto el monmero base como el entrecruzador (crosslinker) proveen de anillos aromticos que pueden ser funcionalizados con diversos grupos funcionales intercambiadores. El porcentaje de crosslinker cambia las propiedades de rigidez estructural de la resina y puede variar el grado de sustitucin con grupos funcionales. A mayor porcentaje de divinilbenceno mayor rigidez estructural. A modo de ejemplo, la empresa DOW llama a sus resinas DowEx o DIonEx y el porcentaje de divinilbenceno lo rotula con un signo x. As, una resina Dowex x4 contiene 4%p/p de divinilbenceno, Dowex x8 tendr 8% y as sucesivamente hasta un mximo de 16%.

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Las resinas pueden ser sustituidas con distintos grupos funcionales: Para Intercambio Aninico fuerte: - N(CH3)4+ Para Intercambio Aninico intermedio o dbil: - NHR2+ donde las longitudes de cadena de R varan la fuerza como intercambiador Para Intercambio Catinico fuerte: Para Intercambio Catinico intermedio: Para Intercambio Catinico dbil: - SO3- PO3H- COO-

3- Los geles derivan de polmeros naturales sustituidos, generalmente polisacridos. Se utilizan celulosas, poli-glucosas entrecruzados con glicerol, dextranos, agarosas. Generalmente es tecnolgicamente dificultoso obtener dimetros de poro pequeo y por ello se utilizan solamente para separaciones de macromolculas biolgicas. La Sepharosa es de uso corriente en biologa molecular a escala preparativa. En la siguientes tablas se listan factores de selectividad para diversos cationes en resinas con diferentes proporciones de crosslinker
Catin Li
+

% Divinilbenceno x4 1 1.30 1.49 1.75 2.09 2.22 2.37 4.00 5.20 x8 1 1.26 1.88 2.22 2.63 2.89 2.91 7.36 9.66 x16 1 1.45 2.23 3.07 4.15 4.19 4.15 19.4 22.2

H+ Na K
+ +

NH4
+

Rb+ Cs Ag Tl
+ +

Estos son factores de selectividad para el intercambio de los cationes de la primera columna pero intercambio por cual?

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En la siguiente tabla se muestran los coeficientes de selectividad para algunos aniones en una resina adecuada:
Anin FOHCl
3

ECl

0.09 0.09 1 2.8 3.8 8.7

4

Br I-

NO

ClO

10

Cmo calculara Cmo calculara

EX
E

Cl IOH

por ejemplo ?

ECl ?
-

F-

Capacidad de un lecho Intercambiador

La capacidad se define como la cantidad de sitios inicos fijos por unidad de peso seco o de volumen. El intercambio inico es un fenmeno de superficie y por ello la cantidad de sitios intercambiadores depender del grado de funcionalizacin en el caso de intercambiadores sintticos (resinas y geles) y de la superficie especfica del lecho. A mayor porosidad mayor superficie. Si prestamos atencin a la definicin de capacidad podemos observar que pueden aparecen inconsistencias. Si queremos utilizar la definicin capacidad dada en miliequivalentes por gramo de fase estacionaria seca (meq/g):

Qw =

neq ws

donde neq indica nmero de equivalentes y ws son los gramos de resina activada y seca. Normalmente la resina se pesa antes de suspenderse en agua e hidratarse. Pero sta podra haberse secado conteniendo diferentes tipos de contrain obtenindose el mismo nmero de equivalentes en un peso total diferente en caso de que se haya utilizado un contraion u otro. Por ello siempre debe especificarse con que contrain se seca la resina. Generalmente las resinas catinicas se activan con cidos y pueden secarse activadas en estado protonado. Las resinas aninicas es comn activarlas con cloruros o con iones hidroxilo y almacenarlas secas bajo alguna de esas dos formas. Si intentamos utilizar la capacidad en miliequivalentes por unidad de volumen tenemos que:

Qv =

neq vt

en este caso tambin encontraramos inconsistencias dado que los iones siempre van acompaados de una esfera de hidratacin, la cual queda incluida en la resina ya que sta cuenta con sus contraiones hidratados. Como regla general los cationes mas polarizantes se hidratan con esferas de coordinacin mayores y su agua de hidratacin queda formando parte del volumen total de fase estacionaria. Por

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ello la misma cantidad de resina de intercambio catinico en estado protonado ocupa un volumen mucho mayor que en estado sdico. Aclaremos los diferentes volmenes que manejaremos: Vt: volumen total: lecho hidratado+fase mvil. Se calcula con la longitud y el dimetro del tubo. V0: volumen muerto o de fase mvil. Se obtiene con t0 Vs: volumen de resina activada e hidratada. Se obtiene por diferencia entre los dos anteriores Vt = Vs - V0 En funcin de estos volmenes conviene definir algunos parmetros que permitirn convertir la capacidad en peso en capacidad en volumen. : sigue siendo la relacin de fases, o sea, Vs/V0. 1/(1+)=Vt/Vs h s : gramos de fase estacionaria hmeda por ml de fase estacionaria hmeda, ( w s / V s ). *: gramos de fase estacionaria seca por ml de columna rellena, ( w s/ V t ).
h

n w n w s w s Vs 1 Qv = eq s = Qw * = eq h =Q w XS s ws V t ws ws V s V t 1

Coeficiente de particin en peso

Anteriormente mencionamos al coeficiente de equilibrio o particin de un ion individual. Sin embargo, el lecho intercambiador es un slido, por tanto en ese caso utiliza una concentracin en milimoles por gramo de resina mientras que para los iones en solucin sern milimoles por ml de solucin intersticial:

K w=

donde [ M ]WR es la concentracin por gramo de resina mientras que [ M ]S es la concentracin normal en el lquido intersticial. Dado que el coeficiente vale solo para saturacin tendiendo a cero la actividad de la resina slida (hipottica) sin catin sera unitaria y por ello se omiti en este coeficiente. Si se conoce la capacidad de la resina, la concentracin del ion que en la prctica se intercambiar por nuestro analito, y su coeficiente de selectividad podra calcularse el coeficiente vlido para determinadas condiciones. Supongamos que la resina est activada inicialmente con iones hidrgeno:

[ M ] WR [ M ]S

K w= E

Mn + nH

[ M ] WR [ M ]S

=E

M1 / n + H

[ M ] WR [ M ]S

Para intercambios entre iones de distinta carga, el coeficiente de distribucin depende en buen grado de la concentracin inica de la solucin externa.

Universidad Nacional de La Plata Licenciatura en Qumica Qumica Analtica III Separacin por contacto discreto (batch)

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En operaciones en batch, la tcnica consiste en colocar simplemente la resina dentro de la solucin de contacto permitiendo que se establezca el equilibrio mediante agitacin y tiempo de espera apropiados. Luego se elimina la fase solucin por centrifugacin. El coeficiente de particin por s solo no da informacin acerca de la proporcin de un ion absorbido por el intercambiador. Para una informacin ms especfica se necesitan conocer las cantidades de resina (en g) y de solucin (en ml) para obtener la cantidad total de ion en la resina y en la fase solucin y poder calcular as el factor de capacidad k':

k ' =K w

wr [ M ]WR wr nR = = V 0 [ M ]S V 0 nS

donde, Wr es el peso de la resina seca y V0 el volumen de solucin. El grado de intercambio que tiene lugar en una separacin batch est limitado por la selectividad de la resina. La absorcin completa de un ion por parte de la resina puede producirse cuando Kw > (V0 / Wr)/1000. Bajo condiciones prcticas, un ion puede ser absorbido si Kw >10000 y quedar en solucin cuando Kw < 1/100. Estas consideraciones son vlidas siempre que los intercambios generen en todos los casos especies inicas solubles ya que, de lo contrario, si los productos de reaccin son electrolitos dbiles, compuestos no disociados o slidos muy poco solubles, el intercambio procede cuantitativamente, de forma independiente a esos lmites, en la medida que haya un exceso de funciones de intercambio con respecto a la relacin estequiomtrica.

Cromatografa de intercambio inico

La cromatografa de intercambio inico consiste en separar especies inicas de igual signo, en una columna cargada con una resina intercambiadora con funciones fijas de signo contrario, aprovechando los diferentes coeficientes de selectividad. Para ello se carga una columna con una suspensin acuosa de la resina, la que debe mantenerse permanentemente cubierta de fase lquida (se carga en suspensin totalmente hidratada para evitar explosin de la columna por hinchamiento de la resina y se mantiene cubierta de lquido para evitar formacin de vas de aire). Generalmente se procede por la tcnica denominada elusin, en la que la introduccin de la muestra (solucin que contiene los iones a separar) se realiza colocando una fina banda de la misma en la parte superior de la columna. Luego, los iones son arrastrados en sentido descendente mediante el pasaje de un eluyente adecuado, en una serie de procesos de intercambio. Si los coeficientes de los iones de la muestra difieren suficientemente, cada ion viajar por la columna con diferente velocidad y emerger como una banda distinta.

Parmetros de retencin en intercambio inico.

En operaciones en columna se introduce un nuevo parmetro: coeficiente de particin en volumen:

KV =

[ M ]R [ M ]S

En este caso la concentracin de M en la resina [M]R se da en miliequivalentes por mililitro de lecho, incluyendo resina y solucin intersticial.

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La relacin entre ambos coeficientes de particin (en peso y en volumen) est dada por:

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K v =K w

wr 1 =K w * =K w X S s Vt 1

Luego, el factor de capacidad puede calcularse fcilmente como:

k ' =K V
En la tcnica de elucin, si se grafica la concentracin del ion metlico a la salida de la columna en funcin del volumen de eluyente se obtiene un cromatograma de picos gaussianos cono en cualquier otra cromatografa. La resolucin, eficiencia, nmero de platos tericos y altura equivalente de plato terico se calculan de igual manera.

Universidad Nacional de La Plata Licenciatura en Qumica Qumica Analtica III Parte 1: Determinacin de la Capacidad de una Resina
Objetivo Determinar la capacidad de una resina de intercambio inico (catinico). Fundamento

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Se har circular una solucin de NaCl a travs de una columna rellena con una cantidad definida de una resina de intercambio catinico activada (totalmente protonada) hasta saturacin de los sitios de intercambio con iones Na+. El intercambio hace que los iones Na+ de la solucin inicial queden retenidos mientras los iones H+ son liberados a la fase mvil y eluyen pudiendo ser cuantificados mediante una simple titulacin cido-base. Mientras la resina acta intercambiando Na+ por H+ se introduce NaCl y se obtiene HCl, lo cual puede detectarse midiendo el pH de la solucin. Cuando la resina se satura comienza a eluir NaCl y el pH del eluyente es neutro. Procedimiento Disponer el tubo de vidrio en el soporte en posicin vertical y cerrar el tubo de goma inferior con una pinza de Mohr y llenar con AD hasta 34 de su altura total. Se entregar la resina pretratada y activada de manera tal que todos los sitios de intercambio se encontraran protonados. Colocar la resina suspendida en AD en una probeta. Dejar sedimentar, medir el volumen del slido y anotarlo. Volver la resina al un vaso de precipitado y trasvasarla a la columna dejando drenar lquido a un vaso de descarte y manteniendo el nivel de lquido a mas de 5 cm por encima de la superficie de resina sedimentada. Regular el caudal a unas 20 gotas por minuto (1 gota cada 3 segundos). NUNCA DEJAR QUE EL NIVEL DEL LIQUIDO QUEDE POR DEBAJO DE LA RESINA. Sustituir el vaso de precipitado por un Erlenmeyer de 500 ml para recoger el eluyente a titular y comenzar el agregado de NaCl 5% manteniendo el caudal. Agregar una nueva porcin de solucin de entre 10 y 20ml cada vez que el lquido desciende a menos de 5 cm por sobre la superficie de la resina. Ir comprobando el pH del eluyente. Cuando el pH se vuelve neutro suspender el agregado de solucin de NaCl, reemplazar el Erlenmeyer por un vaso de precipitados de descarte y mantener flujo de AD para lavar la resina. Trasvasar la resina a la probeta y, una vez sedimentada, medir su nuevo volumen. Luego volverla al vaso de precipitado y regenererla con HCl 3 M. El eluido recogido en el Erlenmeyer se titula con solucin valorada de NaOH y calcular la capacidad de la resina en meq/g de resina.

Universidad Nacional de La Plata Licenciatura en Qumica Qumica Analtica III Parte 2: Separacin de Cu++ y Co++ de una Mezcla
Objetivo

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Separar Cu++ y Co++ de una solucin mezcla por cromatografa de intercambio inico empleando una resina de intercambio aninica y cuantificar cada uno de los iones por espectrofotometra UV/Vis. Fundamento En esta parte se hace pasar una solucin que contiene la mezcla de iones como complejos clorurados por una columna de intercambio aninico. Se eluirn selectivamente variando la concentracin de HCl en el eluyente aprovechando diferencia en las constantes de estabilidad de los complejos originalmente retenidos. Usando resinas de intercambio aninico pueden separarse iones di y trivalentes en mezcla. La mayora de los cationes forman complejos inicos con el cloruro, en mayor o menor extensin, segn : M+n + mCl- MClmn-m (1) Cuando m > n, el in complejo es un anin y como tal puede ser retenido por una resina aninica. La distribucin del ion metlico entre las formas catinicas y aninicas quedan determinadas por la concentracin de cloruro. Para bajas concentraciones de cloruro la especie predominante ser M +n , mientras que para altas concentraciones la forma predominante ser la de complejo aninico. Como los diferentes metales tiene distintas constantes de estabilidad para sus complejos clorurados se observa que, por ejemplo, mientras Zn+2 en HCl 6 M se encuentra como ZnCl4-2, el Ni+2 se encuentra en forma catinica. Si una mezcla de metales (p. Ej. : Fe+3, Mn+2, Co+2, Zn+2, Ni+2 y Cu+2) se encuentran en HCl 12 M, todos ellos estarn como anin excepto el nquel. Si dicha mezcla se introduce en una columna de intercambio aninico todos los metales sern retenidos (bajo la forma de sus complejos clorurados), a excepcin del nquel. Este pasar a travs de la resina y ser fcilmente separado. Si luego se pasa HCl 6 M por la columna, el complejo de cobalto (cuya constante de estabilidad es tal que se encuentra como catin en esas condiciones), ser desorbido y eluir. De la misma manera cada uno de los metales puede elurse por disminucin gradual de la concentracin de cloruros y consiguiente pasaje de los complejos aninicos a cationes no retenidos. El zinc, que forma los complejos mas estables, requiere muy baja concentracin de cloruro para pasar a la forma catinica; por lo tanto ser el ltimo en salir de la columna. En la fig (I) se muestran concentraciones relativas de cloruro, para las cuales eluye cada in. La Fig. (II) muestra las curvas carctersticas de absorcin de los iones arriba mencionados y sirve para predecir separaciones cromatogrficas. D es la relacin de distribucin (para un in) entre la fase lquida y la fase estacionaria (resina). De la observacin de las curvas puede apreciarse que para la concentracin de HCl en que D alcanza su mximo valor para el Co+2, es mnima para el Cu+2. En el trabajo prctico se trabajar con una mezcla de cobre y cobalto y, en este caso, eluye primero el Co++ mientras que Cu++ queda retenido y puede ser eluido cambiando la concentracin de HCl empleado como eluyente. La resina (aninica) usada ser la Dowex 2x8. Esta resina tiene buena capacidad y la ventaja de no ser fuertemente coloreada lo cual permite la observacin del progreso de la separacin. La banda de cobalto es de color turquesa y la de cobre es amarilla. Una vez eludos los dos iones, se hace su determinacin cuantitativa por espectrofotometra (mtodo adecuado para las bajas concentraciones con las que se trabaja), aprovechando la formacin de complejos coloreados, por parte de los mismos. Los complejos que se forman para la determinacin
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espectrofotomtrica son el ya conocido Cu(NH3)4+2 de color azul y el [Co(SCN)4]-2 que en acetona ve exaltado su color turquesa: Co+2 + 4SCN- [Co(SCN)4]-2 Cu+2 + 4NH3(ac) [Cu(NH3)4]+2 Procedimiento Separacin - Tratar una cantidad suficiente de resina Dowex X8 con HCl 4 M, para eliminar impurezas, en un vaso de precipitados. Lavarla con porciones sucesivas del cido y con ella rellenar una columna de modo tal que no queden canales o burbujas de aire en su interior. - Drenar el lquido hasta que el nivel del mismo est justo sobre el nivel de la resina, regulando a su vez, el caudal en 1-1,5 ml cada 10 min. - Pipetear 0,50 ml de muestra y sembrarla muy cuidadosamente sobre la resina, evitando que se produzca agitacin en la superficie de la misma. - Una vez que la muestra ingres a la columna y cuando el nivel de fase lquida alcanza ajustadamente al de resina se comienza a agregar HCl 4 M. Inicialmente en pequeas alcuotas y dejando que disminuya el nivel, y luego incrementar los volmenes cuidando de no alterar la superfcie. Cuando la banda azul de cobalto se aproxima al extremo inferior de la columna se reemplaza el vaso de precipitados de descarte por un matraz de 100,00 ml, recogiendo el eludo hasta que haya desaparecido la banda azul. Reservar el matraz. - Cambiar la concentracin de eluyente y usar HCl 1 M, para desestabilizar el complejo de cobre (banda amarilla) y eluirlo de la columna. Cuando esta banda llegue al extremo inferior de la columna recoger en un matraz de 25,00 ml. Desarrollo del color Cobalto : - Llevar a volumen con AD en el matraz donde se recogi la banda correspondiente. - Tomar de all una alcuota de 10,00 ml y transferirla a un matraz de 25,00 ml - Agregar 2,5 ml de tiocianato de amonio saturado y enrasar con acetona, agitando (para evitar la formacin de emulsin blanca). Si es necesario intercalar con pequeos volmenes de AD. - Preparar cinco soluciones patrn a partir de una solucin madre de Co++ provista. - Leer a 610 nm la absorbancia de la muestra y de soluciones patrn de calibracin preparadas de la misma manera midiendo contra un blanco de reactivos. - Determinar la concentracin de cobalto en la mezcla original de Cu y Co. Cobre : - A la solucin recogida en el matraz agregar NH3 6 M hasta desarrollo del color azul y enrasar con AD. - Preparar cinco soluciones patrn a partir de una solucin madre de Cu++ provista. - Leer a 610 nm la absorbancia de la muestra y de soluciones patrn de calibracin preparadas de la misma manera midiendo contra un blanco de reactivos. BIBLIOGRAFA Dean, J., Chemical Separation Methods , Van Nostrand Reinhold Co. (1969)

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