ANLISIS CLNICOS I

UNIDAD I. GENERALIDADES. Definicin de Anlisis clnicos. Importancia de sus determinaciones. Clasificacin de las tcnicas. Cuidados y precauciones en el laboratorio de clnicos. Sistemas internacionales de unidades. Muestras: a) Clasificacin. b) Obtencin. c) Manejo. d) Conservacin. UNIDADAD II. INTRODUCCION A LA HEMATOLOGIA. Definicin de hematologa. Importancia de su estudio. Funciones de la sangre. Composicin de la sangre. Propiedades de la sangre. Origen de las clulas sanguneas. Desarrollo de granulocitos. Desarrollo de linfocitos. Desarrollo de monocitos. Equipo bsico en el laboratorio de hematologa. Obtencin de muestras. a) Puncin cutnea. b) Puncin venosa. c) Prevencin de hemlisis. d) Desfibrinacin de suero y plasma. UNIDAD III. MORFOLOGIA HEMATICA. Definicin e importancia de la morfologa hemtica. Preparacin de frotis sanguneos. Morfologa de los siguientes cuerpos sanguneos. a) Neutrfilo. b) Eritrocitos. c) Plaquetas. d) Monocitos. e) Linfocitos. f) Eosinfilos. g) Basfilos. UNIDAD IV. COAGULACION. Definicin de coagulacin, cogulo y hemostasia. Sistemas hemostaticos.

Clasificacin de tendencias hemorrgicas. Factores de la coagulacin. Inhibicin de la coagulacin. Definicin y accin de los anticoagulantes. Clasificacin de anticoagulantes. a) Naturales. b) Medicamentosos. c) Accin in vitro. Principales anticoagulantes de uso comn. UNIDAD V. INMUNOLOGA. Definicin y conceptos Importancia de la inmunologa Estados de inmunidad a).- inmunidad activa b).- inmunidad adoptativa c).- inmunidad pasiva Componentes bsicos del sistema inmune a).- Antgeno b).- Anticuerpo c).- Complemento d):_ Linfocitos e).- Macrfagos Reacciones antgeno-anticuerpo a).- Reacciones de precipitacin b).- Reacciones de aglutinacin Otros ensayos a).- RIA, ELISA. Inmunohematologa El banco de sangre Sistema sanguneo ABO Sistema sanguneo Rh Prueba de antiglobulina Pruebas de compatibilidad sangunea Recoleccin y procesamiento de sangre a).- Seleccin del donante b).- Recoleccin de la sangre c).- Preparacin de componentes sanguneos d).- Conservacin y transporte de los componentes sanguneos.

UNIDAD I GENERALIDADES

ANALISIS CLINICOS. CONCEPTO: Es una serie de estudios analticos que se realizan en un laboratorio a diversas muestras biolgicas como medio de ayuda para el diagnstico y para el tratamiento del paciente. Las indicaciones o razones para solicitar determinaciones (exmenes) de laboratorio son: 1.- Confirmar una impresin clnica o establecer un diagnstico. 2.- Descartar un diagnstico 3.- Controlar un tratamiento ( gua del tratamiento, efectividad).

MTODOS DE ANLISIS. Las manipulaciones para anlisis pueden dividirse en dos grupos principales: 1.- Anlisis cualitativo: es la identificacin por medios qumicos de las sustancias que se encuentran en una mezcla ( muestra) 2.- Anlisis cuantitativo: es la medicin de la cantidad de una sustancia especfica que se encuentra en la muestra. En qumica clnica, los mtodos cualitativos se utilizan para establecer la presencia de componentes anormales en sangre, orina, heces, etc; mientras que los mtodos cuantitativos permiten conocer la tasa de las distintas sustancias en los lquidos orgnicos. Los mtodos cuantitativos se dividen en tres grupos principales: 1.- Gravimtricos: las sustancias que se analizan se precipitan bajo la forma de sal insoluble, o se extraen con un solvente. El peso seco del precipitado o del extracto es una medida de la cantidad de sustancia que contena la solucin original. Estos mtodos se usan rara vez en el laboratorio, porque exige grandes cantidades de material. En ste tipo de anlisis tambin determinamos la concentracin de algunas sustancias en una muestra. 2.- Volumtricos: se mide la cantidad de sustancia presente mediante titulacin.

3.- Colorimtricos: la sustancia problema se somete a una reaccin qumica cuyo producto final es coloreado. La intensidad del color de la solucin final dependen de la cantidad de la sustancia presente en la solucin original. El laboratorio clnico utiliza ampliamente los mtodos volumtricos y colorimtricos.

CUIDADOS Y PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO.

La tecnologa del laboratorio mdico es una profesin prctica; adems de realizar lo mejor posible los distintos anlisis modernos de laboratorio, se debe

recordar constantemente las posibles causas de accidentes y las medidas ms eficaces para disminuir las probabilidades de lesiones y daos materiales. Los posibles peligros en el trabajo de laboratorio son: Incendios o explosiones al utilizar solventes flamables Reactivos venenosos, corrosivos y casticos. Quemaduras, escalduras y choques elctricos Laceraciones por vidriera rota. Infecciones: bacterianas, parasitarias y virosas. Es muy importante que al trabajar en el laboratorio se evite pincharse con materiales punzocortantes contaminados, pues son vas de transmisin de enfermedades graves y peligrosas como el SIDA O HEPATITIS, adems procurar siempre trabajar con guantes para evitar el contacto directo con cualquier muestra potencialmente infecciosa. Recuerda tambin que antes de eliminar una muestra o lavar el material usado en el anlisis, se deben desinfectar; para evitar riesgos a la persona que lava el material. La sangre es el fluido ms utilizado con fines analticos. Para las tcnicas hematolgicas, es fundamental obtener muestras de sangre adecuadas, atenindose a una tcnica muy precisa. La tcnica utilizada para la obtencin de muestras de sangre es fundamental para mantener su integridad; de otra forma los resultados obtenidos no podrn ser confiables. Para casi todo el trabajo hematolgico y para muchos anlisis bioqumicos se requiere sangre sin coagular. Existen numerosos anticoagulantes. La mayor parte de ellos impiden que el calcio intervenga en la coagulacin, bien sea precipitndolo como sal ( oxalatos) o fijndolo en forma no ionizada ( citrato y sequestrene). La heparina acta como agente antitrombnico, o sea, neutraliza la trombina. Finalmente, puede obtenerse sangre no coagulada (lquida) removiendo la fibrina que se va formando (sangre desfibrinada) . El empleo de cristalera cubierta de silicn no impide la coagulacin, sino que la retrasa impidiendo la activacin del factor XII ( de Hageman ) y la adherencia de las plaquetas a las paredes del tubo ; en otras palabras, se retrasa la produccin de tromboplastina. El empleo de cristalera tratada con silicn es indispensable en el estudio de los trastornos de la coagulacin.

MUESTRAS

OXALATOS.
Oxalatos de amonio y potasio: se utilizan en mezcla, 3 partes del primero y 2 partes del segundo. La sal de amonio aumenta el volumen de los glbulos rojos, y la de potasio lo disminuye. Con las proporciones utilizadas los eritrocitos no se alteran. Esta mezcla se pone en tubos o frascos de tapn de rosca a razn de 0.1 ml por cada ml de sangre ( o sea 2 mg de oxalatos mezclados por ml de sangre). Los tubos se ponen en la incubadora hasta que se evapora toda el agua y queda polvo seco.

La ventaja de sta mezcla de oxalatos es su precio , su facilidad de preparacin y que no requiere dilucin. Suministra muestras de sangre adecuadas para la medicin de la hemoglobina, el recuento de glbulos blancos y rojos, y hematocrito. Puede obtenerse el plasma necesario para muchos exmenes bioqumicos, pero no para el nitrgeno de urea, puesto que la sal de amonio tiene nitrgeno. Entre sus desventajas, est el que no pueden hacerse frotis despus de unos cuantos minutos . El oxalato produce degeneracin nuclear de los leucocitos y plasmlisis de los glbulos rojos. Aparecen vacuolas en el citoplasma de los granulocitos, cuyos lbulos nucleares se juntan hasta formar una masa esfrica. Los ncleos de los linfocitos y monocitos pueden presentar prolongaciones y hasta dividirse en lbulos. Los oxalatos no pueden ser utilizados para transfusiones sanguneas.

Se utiliza la sal disdica. La solucin al 3.8% es isotnica y se emplea una parte de citrato para 9 partes de sangre para estudiar los trastornos de la coagulacin. Es la sal dipotsica o disdica del cido etilendiaminotetrcetico (EDTA). Por quelacin impide que se ionice el calcio y ejerce por lo tanto una accin anticoagulante muy intensa, en cantidades de 1 a 2 mg por ml de sangre. Es preferible la sal dipotsica, pues resulta ms soluble; pero an as la mezcla por inversin debe ser muy cuidadosa. La sustancia tiene muchas ventajas en hematologa; por ejemplo, pueden hacerse recuentos de glbulos blancos y rojos y hematocrito an al cabo de muchas horas. Asimismo, pueden prepararse 3 o 4 horas despus de la puncin buenos frotis con morfologa satisfactoria de leucocitos y eritrocitos. Puesto que sta sustancia tiende a impedir que las plaquetas se aglutinen o se peguen en las superficies , son posibles recuentos bastante exactos de estos elementos en la sangre tratada con EDTA , muchas horas despus de obtener la muestra. Para las tcnicas habituales del laboratorio ( muestras de sangre de 5 ml ) , se pone 0.1 ml de solucin acuosa al 10% de EDTA ( sal potsica ) en tubos o frascos de tapn de rosca, y se evapora a sequedad. Es el mejor anticoagulante para la hematologa habitual, las muestras recogidas sobre EDTA se pueden conservar toda la noche a 4C sin inconvenientes.

CITRATOS.

SEQUESTRENE.

HEPARINA.
Es un anticoagulante excelente ( Y natural), pero es mucho ms caro que los artificiales. Es el mejor anticoagulante (seco) cuando se busca reducir al mnimo la hemlisis ( por ejemplo, para mediciones de electrolitos y estudios de la fragilidad de glbulos rojos). No resulta conveniente para los frotis teidos por los mtodos de de Wright o Leishman, pues produce una coloracin azul difusa. Pueden emplearse a razn de de 0.1 a 0.2 mg por ml de sangre. La heparina es un carbohidrato cido complejo; puede obtenerse bajo forma de sus sales de sodio, calcio o amonio. Se prefiere la ltima para las mediciones de electrolitos.

Vale la pena recordar tambin que la heparina del comercio contiene fosfatos, por lo que su empleo en las mediciones de fosfatos inorgnicos da valores normales algo elevados ( aproximadamente 0.2 mg por 100 ml) Adems de las muestras de sangre fundamentales en hematologa, existen otro nmero importante de muestras como son: orina, excremento, lquidos corporales como lquido cefalorraquideo, peritoneal (dilisis), sinovial, pericardio y amnitico, exudados, trasudados, etc; que tambin son analizadas en el laboratorio. ( algunos de ellos se analizarn en los siguientes programas de anlisis clnicos).

UNIDAD II INTRODUCCIN A LA HEMATOLOGA.

DEFINICIN E IMPORTANCIA. La hematologa comprende el estudio de las clulas sanguneas y de la coagulacin. Comprendidos en su campo se encuentran los anlisis de concentracin, estructura y funcin de las clulas de la sangre, sus precursores en la mdula sea, los componentes qumicos del plasma o suero ntimamente unidos con la estructura y funcin de la clula sangunea, y la funcin de las plaquetas y protenas incluidas en la coagulacin de la sangre. Los cambios en uno o ms de stos

componentes pueden producir una enfermedad hematolgica o ser manifestaciones hematolgicas de otros procesos patolgicos. La sangre es un lquido viscoso, ligeramente alcalino que circula sin cesar dentro del sistema virtualmente cerrado de los vasos sanguneos, lanzado por el corazn, recorre las arterias cuyas paredes son impermeables, se difunden por los capilares, que la llevan hasta lo ms intimo de los tejidos, y vuelve de nuevo al corazn por las venas. En el adulto normal la sangre constituye del 6 al 8% del peso corporal total, o sea entre 65 y 85ml por Kg. lo que significa que en el adulto normal, el volumen sanguneo oscila entre 4.5 y 5 litros.

FUNCIONES DE LA SANGRE:
1.- FUNCIONES DE TRANSPORTE: a) Alimentos, del tubo digestivo a las clulas, desempeando as una funcin de nutricin, puesto que la sangre transporta los materiales alimenticios absorbidos. b) Oxigeno, de los pulmones a la clula, llevan CO 2 desde los tejidos a los pulmones, participando activamente en la funcin respiratoria. c) Productos de desecho de las clulas a los rganos de excrecin; as en sus funciones de excrecin, la sangre lleva los desechos metablicos a los riones, pulmones, piel e intestino para su eliminacin. d) Metabolitos, los transporta contribuyendo de esta manera a la regulacin del metabolismo, transportando tambin a las hormonas a todas las regiones del cuerpo. e) Calor, producido en los tejidos ms activos, a todo el resto del cuerpo, interviniendo as en la regulacin de la temperatura corporal, al distribuir el calor por el organismo. 2.-MECANISMO DE EQUILIBRIO ACIDO-BASE. Interviene en la regulacin del balance hdrico por los efectos que ella tiene sobre el cambio de agua que ocurre entre el compartimiento intravascular e intersticial. 3.-REACCIONES INMUNOLOGICAS. Constituye uno de los mecanismos de defensa del organismo contra infecciones, por medio de los leucocitos y de los anticuerpos circulantes.

COMPOSICION DE LA SANGRE.
1.-PLASMA: Lquido amarillento claro que representa al rededor del 5% del volumen sanguneo y esta constituido por: a) Agua 90%, en la que se disuelven los restantes componentes. b) Slidos disueltos: Protenas, que representan de 6 al 8% del plasma, dan a la sangre su viscosidad y en menor proporcin su presin osmtica, adems desempean un papel fundamental en la coagulacin (fibringeno), estn

relacionadas con la inmunizacin del organismo contra clulas y sustancias extraas (gamaglobulinas). Glucosa, grasas y sustancias grasosas (lpidos), aminocidos, sales (cloruros, bicarbonatos, fosfatos, sulfatos), sodio, potasio, calcio, magnesio; considerados como componentes plasmticos para el suministro de las clulas. c) Productos celulares: enzimas, hormonas y anticuerpos. d) Productos de desecho: urea, creatinina, Ac. rico, etc. e) Gases disueltos: oxgeno y bixido de carbono.

2.-CORPUSCULOS CELULARES: Leucocitos o glbulos blancos; eritrocitos, glbulos rojos o hemates; plaquetas o trombocitos.

PROPIEDADES DE LA SANGRE.
La densidad de la sangre flucta entre 1.054 y 1.060 dependiendo en gran parte del nmero de eritrocitos; la densidad del plasma oscila entre 1.024 y 1.028g/ml. La viscosidad sangunea es aproximadamente 4.5 veces mayor que la del agua, y varia de acuerdo con el nmero de clulas que contenga, la cantidad de protenas plasmticas, as como la temperatura y el grado de hidratacin del organismo. El pH de la sangre es de 7.4, con variaciones normales entre7.35 y 7.45. Intervienen varios mecanismos para mantener el pH sanguneo en este nivel constante. Todos ellos exigen que se conserve la capacidad amortiguadora de la sangre. la presin osmtica sangunea se mantiene relativamente constante principalmente por los riones; la presin sangunea se debe fundamentalmente a las distintas sales, productos de desecho, azucares y otros minerales disueltos en el plasma y en menor grado a las protenas plasmticas. Puesto que la composicin de la sangre cambia continuamente, aunque en pequea proporcin, por ganancia y perdida de agua, alimentos disuelto y productos de desecho, la presin osmtica tambin vara, pero estas variaciones son corregidas muy pronto por los riones. Las soluciones de NaCl que contienen 0.9 g/dl tienen la misma presin osmtica que la sangre, ha estas soluciones salinas se les a denominado isotnicas o fisiolgicas, aunque en realidad estas soluciones de NaCl no son fisiolgicas puesto que carecen de otros iones que son necesarios para el funcionamiento de la clula.

NOMENCLATURA, ORIGEN Y DESARROLLO DE CLULAS SANGUNEAS.

En el embrin las clulas de la sangre, con excepcin de los linfocito, provienen del tejido conjuntivo embrionario conocido como mesnquima. Las primeras clulas son eritroblastos primitivos, en los islotes sanguneos del saco vitelino; pero en el segundo mes de desarrollo, el hgado se ha vuelto centro hematopoytico, y han aparecido leucocitos granulosos. En el cuarto mes la mdula sea se vuelve un centro importante de produccin de clulas sanguneas. La mdula sea se encuentra dentro de las cavidades de todos los huesos, y puede adoptar dos variedades:

a)
.

Mdula amarilla que es la mdula inactiva, formada principalmente por tejido adiposo, que puede transformarse en mdula activa en caso de necesidades anormales Mdula rojo es la variedad activa, formada por tejido esponjoso, que produce las clulas mieloides ( leucocitos), eritroides (eritrocitos) y megacariocitos (plaquetas).

b)

Durante el primer ao de vida se encuentra mdula roja rica en clulas, en prcticamente todos los huesos. Entre los 3 y 7 aos, hacen su aparicin las clulas adiposas, y al pasar el tiempo la mdula activa emigra progresivamente de las partes distales del esqueleto hacia el tronco. A los 18 aos slo queda mdula roja en las vrtebras, costillas, esternn, huesos del crneo, crestas ilacas y hasta cierto punto en las epfisis proximales de fmur y hmero. Es probable que dentro de la mdula, las clulas sanguneas se formen alrededor de los sinusoides , que provienen de una red capilar en la cavidad medular. Las clulas sanguneas maduras entran a los sinusoides por dapdesis, y siguen luego a la circulacin perifrica. Los precursores de las clulas maduras no pasan a la circulacin, salvo en caso de stress fisiolgico o patolgico sufrido por la mdula Se ha calculado que la mdula sea del adulto puede producir 900,000millones de eritrocitos por da; pero adems , en caso de necesidad urgente la mdula amarilla puede verse obligada a adoptar el estado activo de nuevo. Si se utiliza de esta manera toda la mdula y las necesidades siguen en pie, cabe encontrar hematopoyesis extramedular en bazo, ganglios linfticos e hgado.

CARACTERISTICAS DE LOS BLASTOS.

Los blastos son clulas primitivas o madres de todos los glbulos sanguneas, tienen en comn algunas caractersticas fundamentales:

1.- Son relativamente grandes (20 u de dimetro). La maduracin para los distintos tipos se supone una disminucin de tamao. 2.-la cantidad de citoplasma es pequea en relacin con el tamao del ncleo. Conforme la clula madura la proporcin de citoplasma aumenta. 3.-El citoplasma es muy basfilo o sea, toma coloracin azul intensa con los colorantes de Romanowski (Ruso que cre los sistemas de tincin conocidos). Esto se debe a que contiene muchos cidos nucleicos; y al madurar la clula esta basofilia va desapareciendo. 4.-El citoplasma de los blastos no contiene grnulos. 5.-La cromatina de los ncleos es relativamente delicada (fina) conforme la clula va madurando, los grnulos se hacen ms gruesos y se tien con ms intensidad. 6.-Los ncleos de los blastos contienen cuerpos pequeos, claros y habitualmente bien delimitados, que se llaman nuclolos. Solamente estn presentes en los blastos aunque pueden encontrarse sus restos en etapas posteriores.

SERIE GRANULOCTICA.
La clula primitiva es el mieloblasto ; su cromatina es delicada, al parecer pulverulenta uniformemente distribuida, y no muestra masas condensadas a nivel de la membrana nuclear. Puede tener de 2 a 5 nuclolos, su citoplasma es azul intenso, en los frotis teidos por el mtodo de Romanowski. El contorno del ncleo es redondo u oval, auque puede presentar pequeas muescas. Normalmente los mieloblastos representan del 0.5 al 3% de las clulas nucleadas de la mdula sea. PREMIELOCITO (Promielocito): corresponde a la fase de la maduracin que sigue al mieloblasto. El citoplasma es mucho menos basfilo y ya contiene grnulos. El ncleo es relativamente ms pequeo, excntrico, oval, o con pequeas muescas. Toda va puede verse nuclolos. Representan del 1 al 8% de las clulas medulares nucleares. MIELOCITO: Proviene del promielocito a travs de una maduracin mayor que se traduce por reduccin del tamao del ncleo, que tambin aumenta su excentricidad, es menos regular, y a menudo presenta una muesca del lado de la masa principal del citoplasma. En ste los grnulos son ms numerosos y especficos; mientras que en el promielocito los grnulos presentan a veces una ligera acidofilia, en el mielocito adoptan las caractersticas especificas de tincin de los grnulos definitivos correspondientes: neutrfilos, acidfilos, y basfilos. En la mdula normal los

mielocitos representan del 5 al 20% de las clulas nucleadas. De stos mielocitos la gran mayora es de tipo neutrfilo; los mielocitos eosinfilos representan del 0.5 al 3% y los basfilos menos del 0.5% de todas las clulas medulares nucleadas. METAMIELOCITO: El mielocito sigue madurando y da origen al metamielocito, cuyo ncleo es mucho ms pequeo, presenta una gran hendidura o una forma de media luna, y posee una cromatina condensada y ms intensamente teida que la de su precursor. En esta etapa empiezan a aparecer los movimientos amiboideos en la serie granuloctica. Los metamielocitos comprenden del 10 al 30% de las clulas nucleadas de la mdula sea normal.

LEUCOCITOS POLIMORFONUCLEARES ( GRANULOCITOS SEGMENTADOS). Son las formas maduras finales de la serie granuloctica . El ncleo est formado por cromatina irregular densa que adopta un color prpura con los colorantes de Wright o de Leishman . La clula ms joven es la clula en banda o en cayado cuyo nombre proviene de que su ncleo adopta la forma de un bastoncillo curvo; al envejecer la clula , el ncleo se segmenta en varios lbulos unidos por pequeos puentes de cromatina. Por lo tanto mientras ms viejo sea el neutrfilo, ms lbulos tendr n su ncleo. En la mdula sea, la maduracin (del metamielocito a clula en banda) necesita de 4 a 6 das, y de 6 a 8 mitosis. Los leucocitos polimorfonucleares (PMNS) maduros, probablemente no pasen ms de 8 horas en la sangre circulante , a la que abandonan para emigrar a varios tejidos, donde sobreviven 2 a 4 das ms. Se cree que los leucocitos PMNS eosinfilos tienen una vida un poco ms larga. El citoplasma de los PMNS tiene un color rosa plido en los frotis teidos por el mtodo de Romanowski, y contienen grnulos especficos. En los neutrfilos, que son los ms numerosos, los grnulos son finos, de color violeta, distribuidos uniformemente. En los PMNS eosinfilos, los grnulos son mayores, esfricos todos, y de color rosa salmn intenso ; son ms numerosos que en el PMNS neutrfilo , y generalmente no dejan ver el ncleo, que rara vez tiene ms de 2 lbulos. En el basfilo, los grnulos son numerosos, grandes negro prpura, y cubren casi completamente el ncleo. Todos los leucocitos segmentados poseen movilidad, mxima para los neutrfilos y mnima para los eosinfilos. La movilidad va unida a la actividad fagoctica, o sea la capacidad de la clula para ingerir partculas extraas, bacterias , etc. En cuanto a tamao, los granulocitos segmentados miden en promedio de 10 a 12 micras, en otras palabras, su tamao es aproximadamente una y media veces de los eritrocitos. Comprenden del 10 al 30% de las clulas nucleadas de la mdula sea normal. Despus de los 4 aos los neutrfilos segmentados son las clulas nucleadas ms numerosas en la sangre perifrica.

SERIE LINFOCITICA.
Las investigaciones inmunolgicas recientes han permitido conocer mejor el ciclo vital del linfocito. El timo guarda una estrecha relacin con el desarrollo del lin focito pequeo. En la novena semana de vida intrauterina , pueden verse linfocitos en desarrollo en la regin del timo; en la duodcima semana , se encuentran en la sangre, despus de la semana decimosexta a vigsima, los hay en bazo y ganglios linfticos. El timo es el principal rgano de la regulacin de la linfocitopoyesis, de regulacin del timo, el apndice y las amgdalas. La principal va de entrada de los linfocitos a la circulacin es el conducto torcico. De 80 a 90% de stas clulas son pequeas, el resto grandes. Los linfocitos se originan principalmente en ganglios linfticos. Se cree que algunos circulan, y despus de pasar cierto tiempo en ganglios linfticos, vuelven a circular; otros se destruyen en los propios ganglios; un tercer grupo se transforma en otra variedad de clulas. En ste ltimo caso estan los que dan lugar a las clulas plasmticas. LINFOBLASTO: Esta clula mide entre 15 y 20 micras; posee ncleo grande, con una cromatina ms gruesa, densa y pesada que el del mieloblasto. Es muy raro encontrar ms de dos nucleolos, habitualmente de lmites ms claros y forma ms esfrica que los del mieloblasto . En la tincin de Wright o Lieshman, el ncleo presenta un aspecto denso y homogneo, como caoba. El anillo delgado de citoplasma azul claro muestra a veces una zona ms plida en forma de media luna cerca del ncleo. El citoplasma del linfoblasto es ms homogneo, que el del mieloblasto. PROLINFOCITO: no se distinguen bien sus nuclolos, de ncleo ms pequeo en relacin con la masa de citoplasma, que es menos azul. LINFOCITO MADURO: adopta normalmente dos formas en la sangre perifrica: Linfocito pequeo y linfocito grande. Linfocito pequeo, tiene un ncleo denso de color prpura intenso con los colorantes de Wright y Leishman, suele ser esfrico pero puede presentar una pequea muesca del lado principal del citoplasma. El citoplasma es azul cielo y muy escaso, forma slo un delgado anillo alrededor del ncleo relativamente grande , siempre ligeramente excntrico; no presenta grnulo; sin embargo, a veces muestra unos cuanto grnulos azurfilos (rojo prpura). Los linfocitos grandes pueden medir entre 15 y 20 micras. La diferencia entre el linfocito prqueo con el grande es solo descriptiva y depende principalmente de la masa del citoplasma.

CELULAS PLASMATICAS.
Hasta 2% de las clulas nucleadas de la mdula sea normal son clulas plasmticas. Normalmente no aparecen en la sangre periferica. Es una clula de tamao medio, cerca de 15 micras, habitualmente de contorno ovalado, y posee una gran cantidad de citoplasma, que en los frotis teidos al Wright o Leishman adoptan un color ms azul que cualquier otra clula medular. El ncleo, excntrico, tiene un dimetro de menos de la mitad de la clula y presentan manchas densas de cromatina dispuestas en forma de ruedas de carreta. A menudo se ve una zona plida en el citoplasma, cerca del ncleo, del lado de la masa principal del citoplasma. Puede haber vacuolas en el citoplasma. Se piensa que las clulas plasmticas son las encargadas de fabricar los anticuerpos.

SERIE MONOCITICA.
MONOBLASTO: Es una clula de tamao mediano o grande ( 15 a 20 micras) , y su contorno es a menudo irregular por sus caractersticas amiboideas. El citoplasma es gris o gris; tambin puede presentar vacuolas y contener grnulos azules muy finos. El ncleo rara vez es regular, pues suele mostrar alguna muesca o circunvolucin. La cromatina forma una red fina, existen, generalmente uno o dos nucleolos irregulares. PROMONOCITO: hay muescas y se ve ms citoplasma, en general las caractersticas de sta clula son intermedias entre las del monoblasto y las del monocito maduro. MONOCITO: Esta es la clula ms grande ( 15 a 20 micras) de la sangre perifrica normal; comprende de 4% a 8% de la frmula blanca. El ncleo es grande, ligeramente excntrico e irregular, con grandes muescas o en forma de herradura. La cromatina forma una red delicada de color violeta pardo. El citoplasma es abundante, de color azul-gris plido, con aspecto de vidrio esmerilado, y contiene generalmente pequeos grnulos como polvo de color lila. A veces el ncleo del monocito es casi redondo (pero nunca completamente), y para conocer la diferencia entre un monocito y un linfocito grande , son tiles la cromatina nuclear ms delicada y plida, y el aspecto de cristal despulido del citoplasma del monocito. Una de las funciones y caractersticas ms notables de los monocitos es su gran movlidad de tipo amiboideo y su actividad fagoctica . Los monocitos se forman en la mdula sea, los ganglios linfticos, el bazo y probablemente muchos otros tejidos

MEGACARIOCITOS.

sta clulas son las que producen las plaquetas sanguneas. Normalmente comprenden aproximadamente el 0.5% de las clulas nucleadas de la mdula sea; tambin pueden encontrarse en pulmn y bazo. Son clulas muy grandes ( de 35 a 75 micras) de forma irregular, con un grupo central de ncleos grandes unidos en forma de anillo lobulado que parece un racimo de globos. No hay nucleolos aunque s se les encuentra en los megacarioblastos ms pequeos de ncleo nico, que comprenden del 1 al 15% de las clulas gigantes de la mdula sea. El citoplasma es abundante, de color gris plido, con muchos grnulos acidfilos muy finos. Los megacariocitos introducen seudpodos citoplsmicos entre las clulas de la pared de los sinusoides sanguneos de la mdula, luego estos seudpodos se separan del resto de la clula y se transforman en plaquetas libres en el plasma sanguneo

PLAQUETAS:

se encuentran normalmente de 150 000 a 500 000 de stos cuerpos citoplasmticos pequeos ( de 2 a 4 micras) por mm3 y no tienen ncleo. En los frotis teidos por las tcnicas de Wrigt o Leishman, son cuerpos hialinos (vidriosos), de color azul claro a prpura, ovalados, redondos o irregulares, con numerosos puntos azules. Aparecen formas gigantes ( hasta 20 micras) en algunas enfermedades y cuando existe una produccin excesiva de sangre. Las plaquetas tienen un papel fundamental en la hemostasis (suspensin del sangrado). Para ello cuentan con muchos factores qumicos muy activos. Por ejemplo, su contenido de 5-hidroxitriptamina (serotonina), adrenalina y noradrenalina facilita sin lugar a dudas la vasoconstriccin en el lugar de la lesin. Adems las plaquetas tienden a aglutinarse y adherirse en poco tiempo a los tejidos lesionados. Esta aglutinacin y sta fijacin van seguidas a corto plazo por rotura, disolucin y liberacin de factores qumicos activos. Estos fenmenos no tienen lugar en presencia de superficies lisas, que no se mojen , o hasta cierto punto , de anticoagulantes (heparina, citrato, EDTA). Despus de disolverse, las plaquetas liberan tomboplastina de plaquetas, una cefalina (variedad de lpido ) que contiene fosftido de etanolamina , de importancia fundamental para iniciar el mecanismo de la coagulacin sangunea. Al completarse la coagulacin, las plaquetas tambin intervienen en la retraccin del coagulo de fibrina.

SERIE ERITROCTICA:
El glbulo rojo maduro no nucleado (eritrocito) proviene de precursores nucleados bien conocidos: PRONORMOBLASTO: (proeritoblasto) es una clula de tamao medio ( 15 micras en promedio). La cromatina nuclear es burda que adopta una disposicin filamentosaal envejecer el pronormoblasro. Los ncleos suelen verse bien , y existe un anillo delgado de citoplasma homogneo azul obscuro . En la mdula sea normal comprende del 5 al 10% de las clulas nucleadas.

NORMOBLASTO JOVEN: (basfilo) El ncleo tiene un color prpura obscuro; la cromatina es gruesa o filamentosa. No hay nucleolos . El citoplasma tiene un color azul marino. Estas clulas constituyen sel 1 al 4% de las clulas hemticas nucleadas de la mdula sea. NORMOBLASTO POLICROMATOFILO: Tiene un dimetro de 12 a 15 micras, con un ncleo compacto condensado y ms maduro , cuya cromatina tiene un color negro azulado. El citoplasma es de color rojo azulado, con un rea ms clara por la aparicin de los primeros indicios de hemoglobina cerca del ncleo.

NORMOBLASTO VIEJO: (acidfilo u ortocromtico) Al seguirse formando hemoglobina , desaparece la basofilia, y el citoplasma de sta clula suele presentar un aspecto de cobre mate. El ncleo puede todava tener mitosis, pero pronto encoge para formar una masa densa , pardo negruzca de cromatina y a menudo tiene forma irregular. Finalmente, el ncleo puede romperse, y de cualquier manera termina siendo expulsado de la clula. RETICULOCITOS: es un glbulo rojo joven representa de 0.5 a 1.5% de los glbulos rojos totales, se forma cuando el ncleo del normoblasto viejo se expulsa o disuelve. Su nombre proviene de que contiene una red de material basfilo que puede teirse con colorantes supravitales como el azul de cresil brillante. Los reticulocitos son un poco mayores que los eritrocitos maduros y su abundancia en la circulacin perifrica es un ndice de la actividad eritropoytica. As pues, se encuentran cifras altas en los primeros das de vida, despus de perdida de sangre o hemorragia y despus de tratar la anemia carencial con sustancias especficas ( vitamina B 12 en la anemia perniciosa, cido flico con la anemia megaloblstica del sprue, o hierro en la anemia hipocrmica por la deficiencia de hierro). En general, la intensidad de la respuesta reticulocitaria en estas condiciones es directamente proporcional a la gravedad de la anemia. ERITROCITO MADURO: La maduracin del reticulocitompor prdida de la sustancia reticular basfila da origen al eritrocito maduro intensamente basfilo (eosinfilo). Es un disco circular bicncavo, sin ncleo, se 7.2 micras de dimetro. Posee una membrana compleja de lpidos y protenas, que encirra una arquitectura parecida a la de una esponja que contiene la hemoglobina, de importancia fundamental. La proporcin volumen/peso de la hemoglobina es de 34%; ( 32 a 36%) . En los adultos normales, la cifra de eritrocitos es de 5.4 millones/mm 3 en hombres y en mujeres de 4.8 millones/mm3. Al estudiar la vida de los eritrocitos , se encuentra que para el hombre es de unos 120 das en promedio. Esto significa que alrededor del 0.83% de todos los glbulos rojos circulantes se destruyen cada da, lo cual est de acuerdo con la produccin de eritrocitos indicada por el recuento de reticulocitos.

OBTENCIN DE MUESTRAS SANGUNEA

PUNCION CUTNEA Se utiliza frecuentemente la puncin cutnea cuando bastan pequeas cantidades de sangre; por ejemplo en las determinaciones de hemoglobina, recuento de glbulos blancos o rojos y de plaquetas, frotis de sangre y microanlisis bioqumicos. Se utiliza cuando la puncin venosa resulta difcil, por ejemplo en los nios y en el caso de quemaduras extensas. En esta tcnica la muestra se obtiene en pequeos tubos de vidrio ( 3mm de dimetro interno aproximadamente) que contienen anticoagulante heparina. En sta forma puede obtenerse sin dificultad 0.5 ml de sangre completa ( aproximadamente) Existen 3 lugares habituales para la puncin cutnea: en la yemas de los dedos, lbulo de la oreja y el taln del pie, ( bebs).Cualquiera que sea el lugar escogido, debe uno cerciorarse primero de que los vasos cutneos estn dilatados y la sangre fluya libremente. De no ser as, se obtiene poca sangre, de composicin muy distinta a la sangre venosa, debido, bien sea por concentracin por estasis, o dilucin con lquido intersticial ( por la presin ) o ambas. El lugar de eleccin se frota luego con alcohol, que se deja evaporar. Se realiza una puncin limpia de 2 o 3 mm de profundidad con una lanceta estril de metal, en envoltura individual, que existen en el comercio y son muy convenientes de ste tipo de muestras sanguneas. La sangre obtenida es de tipo capilar y difiere ligeramente de la sangre venosa, aunque en muchos casos las diferencias exactas no se han establecido o no existe acuerdo sobre ellas. Generalmente la sangre capilar contiene ms glucosa (10 a 20mg por 100ml), ms leucocitos (ms de 1000 por mm3), los glbulos rojos y la hemoglobina son ms altos (5 por 100), pero las plaquetas son ms bajas y los glbulos rojos son menos frgiles que los venosos ( por tener stos un pH ms bajo). Deben utilizarse en cada paciente un tubo capilar y una lanceta estril nueva. Las desventajas del uso de sangre capilar consisten en que slo puede obtenerse una pequea cantidad de sangre y en que no pueden hacerse determinaciones repetidas sin volver a punzar la piel. La sangre capilar recogida en microtubos tiende a hemolizarse y su recoleccin lleva mucho tiempo.

MTODO DE PUNCIN EN EL TALN PARA OBTENER SANGRE CAPILAR EN LACTANTES

PUNCION VENOSA. Casi todas las muestras de sangre se obtienen por puncin venosa . Es el mtodo ms fcil y adecuado para obtener un volumen de sangre suficiente para llevar a cabo gran nmero de pruebas. La puncin suele hacerse en la vena mediana ceflica. Se localiza o se palpa fcilmente en casi todos los pacientes (salvo en los obesos). En muchos casos cuando resulta difcil localizar la vena se pueden usar las venas del dorso de la mano, pero se necesita un cuidado especial y experiencia para evitar la formacin de hematoma alrededor de esto vasos mviles que carecen de fijacin. Despus de localizar la vena, debe verificarse que todos los tubos de ensayo y el resto del equipo se encuentren listos y estn rotulados convenientemente. La sangre puede obtenerse con una jeringa y aguja ordinarias, o un tubo al vaco con su aguja, como existen en el comercio. Este segundo mtodo se utiliza cada da ms, por las siguientes ventajas: 1. La unidad est esterilizada de antemano, y no requiere ninguna preparacin 2. Existe gran variedad de tamaos de tubos, y del anticoagulante que contienen. 3. Es un mtodo ms seguro para la obtencin de sangre, pues las muestras pasan directamente al tubo rotulado. 4. No existe el peligro de que se rompan las jeringas. 5. No hace falta preparar anticoagulantes ni sus recipientes, o los rtulos del caso.

El paciente escoge una posicin cmoda en la cual pueda presentar el brazo y mantenerlo inmvil sin esfuerzo ni fatiga. No debe intentarse tomar sangre de un enfermo sentado o de pie y cuyo brazo no est apoyado sobre una superficie plana. Se prepara el brazo frotando la regin anterior del antebrazo con una torunda de algodn con alcohol. Se aplica un torniquete de caucho blando a unos 7 cm. Por arriba del pliegue del codo ( sin presionar demasiado) y sujetarse con un medio nudo para que pueda quitarse jalando el extremo libre.

Se quita ahora el estuche protector de la jeringa (aguja) y se toma sta de manera que el bisel de la aguja se encuentre hacia arriba se sujeta la parte posterior del brazo del paciente a nivel del codo y se jala ligeramente la piel sobre la vena. Poniendo la aguja paralela al trayecto de la vena, se perfora la piel a lo largo de la cara lateral de la vena. Se hace avanzar la punta de la aguja de 0.5 a 1 cm en el tejido subcutneo, y luego se perfora la pared de la vena. La sangre puede subir espontneamente en la jeringa, pero si no es as, se jala ligeramente el mbolo, a una velocidad igual a la del flujo de la sangre. Se debe soltar el torniquete, lo cual resulta preferible, pues al cabo de un minuto de estasis se produce cierta hemoconcentracin. En cualquier caso, en cuanto se tenga la sangre suficiente, se suelta el torniquete y luego la aguja se retira rpidamente y se aplica una torunda de algodn sobre el sitio de la puncin, indicando al paciente que la comprima con los dedos de la otra mano o que flexione el codo ( es mejor lo primero). La aguja se remueve de la jeringa por un movimiento de torsin y la sangre se vaca lentamente en los recipientes correspondientes. Estos se tapan y los que contienen anticoagulantes se invierten varias veces ( sin sacudir) para evitar la hemlisis. Solamente deben utilizarse para la puncin jeringas y agujas estriles, por el peligro de transmitir varios organismos patgenos, como el virus del SIDA y de la hepatitis. Se obtiene sangre suficiente para un gran nmero de estudios, puedo obtenerlas con anticoagulante y sin este o para pruebas especiales. Adems a diferencia en la obtencin por puncin capilar ( muestras muy pequeas), se puede repetir o confirmar un resultado. Tambin hay desventajas en el uso de sangre venosa. La estasis producida por el torniquete, si es prolongada, hace la muestra inapropiada para pruebas hematolgicas exactas porque provoca hemoconcentracin. Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada y por eso los recuentos de plaquetas y las determinaciones del ndice de sedimentacin deben hacerse no ms de 2 horas despus de obtener la sangre.

PREVENCIN DE HEMLISIS:

Dado que la presencia de hemlisis invalida la muestra de sangre para ser utilizada en muchos anlisis, en especial cuando se requiere suero, es necesario prevenir la hemlisis siguiendo sistemticamente las reglas siguientes: 1. La jeringa y la aguja deben estar completamente secas. 2. se debe evitar la brusquedad al manejar la sangre y tener cuidado en todos los pasos. 3. para sacar la sangre de la jeringa , debe retirarse primero la aguja. 4. Al vaciar la sangre, se debe dejar escurrir lentamente por las paredes del tubo. 5. La mezcla con el anticoagulante se consigue por inversin suave, no por sacudimiento. 6. Si no puede hacerse el anlisis antes de una a tres horas, no debe dejarse la muestra destapada a la temperatura ambiente. Se tapa y se guarda en un refrigerador entre 4 y 10 C. 7. Hay que estar seguros de que todas las soluciones con las cuales se mezcla o diluye la sangre estn correctamente preparadas y resultan isotnicas. Las soluciones hipotnicas producen hemlisis. DESFIBRINACIN: Se lleva a cabo en un matraz erlenmeyer de 50 a 100 ml, utilizando perlas de vidrio. La sangre ( de 10 a 30 ml) se pone en el matraz inmediatamente despus de aspirada de la vena. El matraz se sujeta por el cuello y se hace girar describiendo ochos durante 5 a 10 minutos, al cabo de los cuales todas la fibrina se habr pegado a las perlas. Se obtiene as una buena desfibrinacin; se conserva la morfologa de los glbulos rojos y blancos y se obtiene una gran cantidad de suero.

SUERO Y PLASMA: SUERO: La sangre coagulada, si se deja reposar, se divide en una masa de glbulos rojos y fibrina que se deposita en el fondo del tubo, y un lquido que queda por encima, el suero. LA separacin de ste ltimo puede acelerarse centrifugando la sangre una vez producida la coagulacin. El suero difiere del plasma principalmente por su falta de factores de coagulacin I (fibringeno), II (protrombina), V (factor lbil) y VIII (factor antihemoflico). PLASMA:

Si la sangre anticoagulada se centrfuga forma tres capas principales: la masa de glbulos rojos en el fondo de la columna lquida, el plasma por encima y la capa leucocitaria en la interfase de contacto. Los reticulocitos se concentran al tope de la columna de glbulos rojos. La capa leucoitaria consiste en plaquetas y glbulos blancos, las primeras ms cerca de la columna plasmtica.

UNIDAD III MORFOLOGA HEMTICA

La preparacin y tincin de frotis de sangre o mdula sea es una tcnica fundamental en hematologa. La informacin que suministran stas muestras puede ser inestimable para la atencin del paciente. Los frotis se pueden hacer sobre portaobjetos o cubreobjetos. Este ltimo mtodo permite una distribucin ms homognea de los glbulos, pero sin embargo, se prefieren los portaobjetos porque: 1. Son ms fciles de manipular 2. Se rompen menos 3. Se pueden rotular ms fcilmente 4. no requieren montaje, y pueden archivarse en forma automtica.

PREPARACIN Y TINCIN DE FROTIS SANGUNEO. Es esencial utilizar portaobjetos limpios y sin grasa. Para preparar un frotis en portaobjetos, se pone a 1 2 cm del borde una gota de sangre (2 3 mm de dimetro), y el portaobjetos se deja sobre la mesa con la gota hacia arriba. Se escoge para extender la sangre otro portaobjetos con un borde liso y regular, cuyas esquinas se rompen para que la anchura del borde que extiende la sangre sea unos 4 mm menor que la anchura total del portaobjetos. Este borde de extensin se pone sobre el portaobjetos que tiene la gota de

sangre , formando con l un ngulo de unos 30. Luego, el borde del portaobjetos que sirve para extender la sangre se hace retroceder hasta que toque la gota de sangre , que se encuentra dentro del ngulo agudo, inmediatamente la gota de sangre se extiende a lo largo del bode del segundo portaobjetos, que, formando el mismo ngulo de 30, se hace deslizar en sentido contrario, rpida, cuidadosa y uniformemente. Mientras ms rpido es el movimiento , ms espeso resulta el frotis.

Son tiles los frotis espesos (gota gruesa) en la bsqueda de parsitos (plasmodia, filarias, tripanosomas, etc); pero; para el trabajo hematolgico habitual, son preferibles frotis ms delgados. Mientras ms lentamente se hace un frotis ms delgada resulta, y mayor es la proporcin de leucocitos segmentados en los bordes y en la porcin final. En los frotis gruesos, los leucocitos son pequeos, difciles de teir, y puede ser imposible reconocer las clulas.

GOTA GRUESA: se utiliza mucho para diagnstico de parasistosis hemtica, principalmente paludismo, para realizarlo se necesita cierta experiencia ya que este debe ser 10 veces ms espeso que los delgados. Tcnica: Se pone una gota de sangre grande sobre un porta objetos limpio, se extiende con la esquina de otro o con una varilla hasta que se puedan ver las manecillas de un reloj ordinario (a travs de), se espera que seque con el aire o en una estufa a 37 oC. La tincin utilizada destruye los glbulos rojos y tie los glbulos blancos y los parsitos en esto es muy satisfactorio el Giemsa. 1.- Los portaobjetos se ponen en colorante diluido 10 veces con agua destilada amortiguada de pH 6.8 Los frotis no deben fijarse antes de sta inmersin . Se espera de 30 a 60 minutos. 2.- Se aclara con agua destilada durante 3 a 10 minutos. 3.- Se seca al aire y se examina. Las extensiones delgadas teidas al Wright tambin pueden ser tiles para deteccin de parsitos sanguneos en vez del frotis grueso. TINCIN DE FROTIS SANGUNEOS Los frotis de sangre se dejan secar al aire para posteriormente teirlos. Cuando se utilizan los colorantes hematolgicos habituales, la fijacin se produce durante la aplicacin del colorante ( por el alcohol metlico absoluto que se utiliza como solvente). Cuando se trabaje con un colorante acuoso como giemsa, el frotis secado al aire debe ser fijado primero cubrindolo durante 3 a 5 min con alcohol etlico o metlico absoluto. Los colorantes cidos se unen con los componentes bsicos de las clulas ( citoplasma). Inversamente, los colorantes bsicos son atrados por los compuestos cidos de la clula y se combinan con ellos (cidos nuclecos y nucleoprotenas del ncleo). La eosina es un colorante cido, por lo que se puede emplear indistintamente los trminos eosinfilo y acidfilo para describir las propiedades tintreas de los componentes celulares.

Romanowsky (1890) encontr que al mezclar una solucin de azul de metileno vieja (madura, y por lotanto policromtica con eosina, y disolviendo el precipitado en alcohol metlico, se obtena un colorante, que poda teir los ncleos celulares y los grnulos de las plaquetas ( a los que la mezcla de Jenner no coloreaba) Los colorantes modernos de Romanowsky. Por ejemplo, los colorantes de Wright, Leishman, , etc; son semejantes, en principio, al mtodo original de Romanowsky; la diferencia estriba en el mtodo de obtencin de la policroma del azul de metileno.

WRIGHT Este excelente colorante se utiliza ampliamente, sobre todo en Amrica. En su preparacin, la policroma del azul de metileno se obtiene por calentamiento con bicarbonato de sodio. Puede comprarse en solucin lista para el uso o bajo la forma de polvo, del cual se disuelve cuidadosamente 1.0 g en 600 ml de alcohol metlico. TCNICA: 1. Una vez preparado y seco el frotis, se pone sobre una gradilla de tincin. 2. La extensin se cubre con el colorante sin diluir, y se deja actuar 1 min. El alcohol metlico fija la sangre. 3. Se diluye el colorante con agua destilada (aproximadamente el mismo volumen) hasta que aparezca una escarcha metlica. Se deja actuar de 2 a 5 min. 4. Se lava con agua destilada, se deja secar para examinarse con objetivo de inmersin. Muchas veces el agua destilada, nos d una buena diferenciacin. En ste caso, debe utilizarse un amortiguador de fosfato ( pH 6.4 a 6.5).

UNIDAD IV

La coagulacin sangunea:

se percibe como una secuencia de reacciones estrechamente acopladas en las cuales factores de la coagulacin que circulan como precursores enzimticos inactivos se convierten en enzimas activas, actuando cada factor primero como substrato y despus como enzima. La naturaleza enzimtica de la mayora de los factores de coagulacin se ha demostrado y hay evidencias que indican que el sistema funciona con un amplificador biolgico, porque pequeas cantidades de enzima son capaces de activar grandes cantidades de sustrato en cada paso sucesivo de secuencia.

.FACTORES DE LA COAGULA CINNME RO ROMANO I II III IV V

NOMBRE HABITUAL

SINNIMO

Fibringeno Protrombina. Tromboplastina. Calcio. Proacelerina Factor lbil, de la globulina Ac. Factor estable, SPCA. Globulina antihemoflica (AHG), factor antihemoflico A. Factor Chrisman, factor antihemoflico B Factor Prower Factor antihemoflico C

VII

Proconvertina.

VIII

Factor antihemoflico (AHF).

IX X XI

Componente de tromboplastina del plasma(PTC). . Factor Stuart Antecedente de tromboplastina del plasma(PTA) Factor Hageman

XII

Factor de vidrio o de contacto

XIII

Fibrinasa

Factor estabilizador del coagulo o de la fibrina

FACTOR I: FIBRINOGENO. Es un globulina grande, ms larga que ancha, pertenece al grupo de protenas fibrilares, las cifras normales son de 200 a 500mg por 100ml en promedio 300mg. Por exposicin a la trombina, el fibringeno pierde dos pptidos, quedando un monmero de fibrina. Los monmeros se polimerizan a base de puentes de H 2, formando una masa insoluble, luego se producen otras modificaciones y el

reforzamiento final se debe al factor XIII (estabilizador de la fibrina), que crea enlaces covalentes dentro del polmero de fibrina. El fibringeno aumenta en sangre en varios estados como: inflamacin, mieloma mltiple, nefrosis y embarazo, en las que se presenta una sedimentacin acelerada: Este puede disminuir en los trastornos que se acompaan del paso a la circulacin de tromboplastina tisular, que produce una transformacin de este en fibrina sin trombosis local. El tejido placentario, la decidua y el tejido pulmonar son muy ricos en tromboplastina tisular. Los cuadros clnicos de disminucin de fibringeno (fibrinogenopenia) son: 1.- Obsttricos. 2.- Consecutivos a intervencin sobre el pulmn. 3.- Transfusiones de sangre incompatible. 4.- Quemaduras extensas. 5.-Cancer de prstata. 6.- Sndromes trombohemolticos microangiopticos. En los que puede producirse hemorragias si no se establecen los normales mediante una transfusin de concentrado de fibringeno. Fibrinogenopenia congnita: esta se hereda como un rasgo recesivo no ligado al sexo, no es raro que los padres sean consanguneos; la insuficiencia de fibringeno no es absoluta. Para combatir una hemorragia en estos casos es ms efectivo el fibringeno en suero fisiolgico por va intravenosa. En el sndrome de fibrinogenopenia adquirida disminuyen al mismo tiempo las plaquetas y los factores V y VIII. En esta enfermedad el tiempo de coagulacin de la sangre completa, de protombina y el tiempo de trombina se prolonga y la retraccin del cogulo es inadecuada. El fibringeno es producido por el hgado, y en las enfermedades hepticas graves puede disminuir ligeramente su concentracin en plasma.

FACTOR II: PROTOMBINA. Es una protena del tipo de las globulinas alfa, contiene unos 18 cidos aminados (incluyendo los que contienen S). Su concentracin normal en sangre es de 20mg por 100ml. En presencia de iones de Ca, se transforma en trombina por accin enzimtica de las tromboplastinas extrnsecas e intrnsecas y es activada tambin por concentraciones elevadas de citrato. Es producida por el hgado bajo la influencia de la vitamina liposoluble K. La protombina esta relacionada con el factor VII (proconvertina) producida tambin por el hgado. La protombina se absorbe sobre BaSO 4 y Al(OH)3.

Insuficiencia de protombina: suele ser adquirida y se debe a enfermedades que impiden la absorcin de la vitamina K en el intestino o su utilizacin por el hgado, la mayor parte de estas es producida por las bacterias intestinales, no se almacena en el organismo y es liposoluble, su absorcin intestinal es paralela a la de las grasas. Los trastornos de la absorcin de stas puede producir insuficiencia de vitamina, ejemplo: ictericia obstructiva (falta de bilis, que facilita la absorcin de grasas). Las enfermedades hepticas graves hacen disminuir las cifras de protombina ya que las clulas ya no pueden utilizar la vitamina K. Los anticoagulantes a base de dicumarol hacen descender las cifras pero en dosis excesivas pueden ocasionar una hipotrombenemia grave: En los recin nacidos suelen encontrarse cifras menores a los normales de protombina y de factores VII, IX y X pero aumentan con la edad. FACTOR III: TROMBOPLASTINA. Se da este nombre a cualquier substancia capaz de transformar la protombina en trombina. En la coagulacin de la sangre intervienen mecanismos inicialmente distintos que producen tromboplastina: el extrnseco y el intrnseco, a pesar de su separacin inicial, los fenmenos finales son los mismos (reaccin con factores V y X para producir tromboplastina que transforma la protombina en trombina) y se logra la transformacin de fibringeno en fibrina o sea la coagulacin.

Mecanismo extrnseco o tisular de produccin de tromboplastina.

Todos los tejidos lesionados liberan una mezcla compleja de substancias tanto termostables como termolbiles con actividad potencial de tromboplastina. Se trata de substancias complejas de tipo lipoprotenicas, cuyas fracciones lpidas se parecen a la cefalina. Las fracciones ms potentes pertenecen extractos acuosos de los tejidos estos no resisten temperaturas elevadas, con extraccin alcohlica se obtienen fracciones menos poderosas pero resistentes a temperaturas elevadas (ebullicin). Estas substancias se comportan como enzimas y parecen ser activadas por factores plasmticos, principalmente el factor VII. Mecanismo intrnseco o sanguneo de produccin de tromboplastina. Se trata de un sistema complejo en el que se llama factores a las substancias que resultan esenciales para el fenmeno de la coagulacin. Corresponden en su mayor parte a la fraccin globulnica de la s protenas de la sangre y se les llama factores huella. Se identifican a travs de los efectos producidos por: a) Su presencia o adicin. b) Su ausencia (congnita o adquirida) o su supresin. Intervienen cuando menos 5 factores en el mecanismo intrnseco de produccin de tromboplastina: factor plaquetas, IX, VIII, XI y XII. FACTOR IV: CALCIO.

Los iones Calcio son necesarios para el mecanismo de la coagulacin en tres momentos: a) Durante la produccin o activacin finales de la tromboplastina. b) Durante la transformacin enzimtica de protombina en trombina. c) Durante la formacin de fibrina. Del calcio normal de la sangre (9.0 a 11.0mg por 100ml) la mitad est ionizada; se necesitan muy pocos iones en el mecanismo de la coagulacin por lo que ste no presenta trastornos por insuficiencia. FACTOR V: PROACELERINA. Es una globulina intermedia entre la globulina beta y gama, est se agota durante el proceso de la coagulacin, por lo que no se encuentra en suero. Parece que es producida por el hgado, es indispensable para las ltimas fases de formacin de tromboplastina; los productos tromboplastnicos de los mecanismos extrnsecos e intrnsecos reaccionan con este factor en presencia de los iones Ca. El factor V no se absorbe sobre BaSO4 ni con Al(OH)3. Insuficiencia del factor V. La insuficiencia congnita fue descrita por primera vez por Owren en 1944: Produce una tendencia hemorrgica que puede resultar mortal, su transmisin se efecta a travs de un gen autosmico recesivo (puede afectar tanto hombres como mujeres) para que el rasgo hereditario se manifieste el gen debe encontrarse en ambos progenitores, los sujetos afectados son homocigotos. Los enfermos que estn sangrando deben recibir transfusiones de sangre completa fresca o plasma fresco y el efecto no dura ms de un da. La insuficiencia adquirida de factor V puede presentarse en las enfermedades hepticas graves o cuando existen anticoagulantes en sangre.

FACTOR VII: PROCONVERTINA. Esta relacionado con la protombina y puede ser transformado en protombina por el hgado (produce este factor bajo la accin de la vitamina K). Este factor no se destruye ni se gasta en el proceso de la coagulacin. Parece ser una globulina beta y se separa del plasma o suero por absorcin del gel de Al(OH) 3 y BaSO4. Su accin estriba en : a) Activar las tromboplastinas tisulares. b) Acelerar la produccin de trombina a partir de la protombina. Su concentracin disminuye bajo la accin de los anticoagulantes del tipo dicumarol. Insuficiencia del factor VII. Puede ser congnita y depende de un gen recesivo autosmico y adquirida por enfermedad heptica grave y tratamiento con anticoagulante del tipo dicumarol. Puede traducirse por tendencia hemorrgica con moretones prpura.

FACTOR VIII: ANTIHEMOFILICO. Es un globulina que no se ha podido aislar a un estado puro es consumida durante la coagulacin y no existe en suero. Resulta indispensable para el mecanismo intrnseco de produccin de tromboplastina debe existir cuando menos 40 po100 de la concentracin normal para que se forme un buen cogulo, si hay menos aparece el cogulo pero de consistencia gelatinosa que se desprende fcilmente. Deficiencia del factor VIII. Es de origen congnito y tiene como resultado la hemofilia clsica, en el cual el sangrado repetido en articulaciones (hemartrosis), mucosa, riones y otros rganos produce invalides o la muerte. En los hemoflicos el nivel de esta globulina es inferior a 15 20 por 100 de las cifras normales.

HERENCIA HEMOFILICA. Madre portadora. Padre normal. Progenitores. XXh Nios. XX hija normal XXh hija portadora XY XY X hY hijo hijo normal hemoflico

Madre portadora. Progenitores. Nios.

h h

Padre hemoflico. X hY XY hijo normal X hY hijo hemoflico

XXh
h

XX XX hija hija hemoflica portadora

Este es un carcter recesivo ligado al sexo, las mujeres hemoflicas se debe al carcter mortal de la herencia doble. Para detener el sangrado en ellos es necesario una transfusin de sangre fresca completa, concentrados de factor VIII o plasma fresco.

FACTOR IX: COMPONENTE DE TROMBOPLASTINA DEL PLASMA. Es un factor protenico estable, no se consume durante la coagulacin, ni se destruye con el tiempo, es absorbido por BaSO 4 y Al(OH)3, es un componente esencial

del sistema intrnseco de produccin de tromboplastina y acta sobre la cantidad de esta producida. Deficiencia de factor IX. Esta deficiencia fue descrita inicialmente por una familia inglesa de apellido Christmas en 1952; esta es congnita, la herencia desempea el mismo papel que en la hemofilia clsica, trastorno ligado al sexo. Da una produccin tarda de tromboplastina y se puede corregir con pequeas cantidades de plasma o suero normales. FACTOR X: STUART. Es relativamente estable, que no desaparece durante la coagulacin se absorbe con BaSO4 y Al(OH)3, parece estar relacionado con SPCA (VII). Insuficiencia del factor X. Se caracteriza por hematomas, epistaxis. Puede detenerse la hemorragia con una transfusin de sangre, plasma o suero. Su transmisin depende de ungen autosmico incompletamente recesivo y los portadores (heterocigotos) pueden presentar una tendencia hemorrgica ligera, la vitamina K es indispensable para la produccin del factor X; disminuye con anticoagulantes del tipo dicumarol. FACTOR XI: ANTECEDENTE DE TROMBOPLASTINA DEL PLASMA. Es una globulina beta que nos e gasta totalmente durante la coagulacin, es indispensable para el mecanismo intrnseco de produccin de tromboplastina. El factor XI y XII son los dos factores de contacto; se absorbe sobre vidrio, la celite y la bentonite no es activado por estas. Insuficiencia del factor XI. Los primeros en describirla fueron Rosenthal y colaboradores en 1953-1954. Se hereda como un dominante simple autosmico no ligado al sexo por lo que afecta a hombres y mujeres por igual; es heredada en forma congnita y lleva a una hemofilia ligera (hemofilia C), se debe a una insuficiente produccin de tromboplastina, puede ser corregida con suero normal y tambin plasma de hemoflicos verdaderos o enfermos de Christmas, el efecto de este desaparece en una semana.

FACTOR XII: HAGEMAN. Es una globulina estable no desaparece durante la coagulacin se absorbe en polvo de vidrio (que parece ser reversible). Este factor reacciona con el XI para formar una sustancia protomboplstica activa. El envejecimiento del suero o plasma no lo destruye. La insuficiencia de este no produce ditesis (tendencia) hemorrgica. Interviene en la activacin de la cinina, que forma parte del sistema de la fibrinolisina. FACTRO XIII: FIBRINASA.

La trombina (T) rompe cuatro enlaces arginilo-glicina del fibringeno (F), producindose dos pptidos A y dos pptidos B (designados conjunto P) y un monmero de fibrina (que se designa f). La fibrina se polimeriza, formando polmero intermedios de fibrina (fn). El cogulo de fibrina se debe a una nueva polimerizacin. Con reactivos purificados se obtiene un cogulo fino (fibrina I)soluble en urea 5M y NaBr 1M, si se aade Calcio un factor srico aparece un coagulo grueso (fibrina II) insoluble, en los reactivos mencionados. El factor srico en cuestin se llama factor XIII o fibrinasa. Es una enzima que cataliza la polimerizacin de la fibrina, formando enlaces transversales (-glutamil) lisina. Este factor es inhibido por el EDTA. Se sospecha deficiencia cuando todas las pruebas de coagulacin resultan normales, pero el cogulo de fibrina sufre lisis.

HEMOSTASIA. Es el nombre que se aplica al conjunto de fenmenos que combaten y detienen el sangrado de un vaso sanguneo lesionado. El proceso no es sencillo, y debe considerarse como una progresin o cadena de modificaciones fsicas y bioqumicas que normalmente son desencadenadas por lesiones en tejidos y vasos sanguneos, y termina por la transformacin de la sangre lquida en un trombo o cogulo slido que tapa con gran eficiencia los vasos rotos.

Este proceso de la hemostasia puede dividirse en 3 partes . 1. FENOMENOS EXTRAVASCULARES. a) El efecto fsico de los tejidos circunvecinos que tienden a cerrar y ocluir la abertura en los vasos sanguneos lesionados. b) Los efectos bioqumicos de las sustancias liberadas por los tejidos lesionados, que reaccionan con el plasma y los factores de las plaquetas. Este sistema de coagulacin o sistema extrnseco tal ves desempee un papel importante en la activacin del mecanismo de coagulacin intrnseco de la sangre misma en el caso de traumatismos y hemorragias in vivo. 2.FENOMENOS VASCULARES. El vaso sanguneo lesionado se cierra casi instantneamente. Este proceso conocido como vasoconstriccin, interviene en las primeras fases del control de la hemorragia despus de la lesin del vaso. Esta vasoconstriccin nerviosa refleja, tiende a desaparecer al cabo de un tiempo relativamente corto, aunque variable dependiendo de la liberacin local de una sustancia vasoconstrictora, la serotonina. La serotonina es liberada al adherirse o pegarse las plaquetas a los labios de la herida, produciendo un estrechamiento local y directo de origen bioqumico del vaso seccionado y de los vasos vecinos.

2. FENOMENOS INTRAVASCULARES. Comprende la serie muy completa de reacciones fisicoqumicas que transforman la sangre lquida en cogulo slido de fibrina. En esta etapa participan los factores de la coagulacin con la intervencin de los iones de calcio. FASES SUCESIVAS NORMALES A LA HEMOSTASIA. 1.Los vasos sanguneos y los tejidos sufren una lesin y se inicia el sangrado. 2.Se produce la constriccin de los vasos lesionados . 3.El endotelio rasgado del vaso se retrae o enrolla. 4. Los tejidos lesionados liberan sustancias tromboplastnicas. 5. Sobre los tejidos lesionados, pasa sangre o plasma. El factor XII (de contacto) queda activado, lo que inicia la funcin del sistema intrnseco. El factor VII del plasma activa las sustancias tromboplastnicas tisulares (activacin del sistema extrnseco de produccin de tromboplastina). 6. Las tromboplastinas extrnsecas activadas en presencia de Ca ++, reaccionan con los factores V y X, formndose tromboplastina definitiva, que transforma parte de la protombina plasmtica en trombina. 7.Las plaquetas han empezado a adherirse al cemento intersticial liberado por el endotelio vascular lesionada. La trombina producida por el sistema extrnseco entra en contacto con las plaquetas adherida a los labios de la herida, e inicia en ellas una metamorfosis viscosa (MR). Aumenta as lo pegajoso de las plaquetas y siguen adhiriendo ms plaquetas que a su vez experimentan el mismo cambio. 8.Cuando las plaquetas sufren metamorfosis viscosa, liberan distintas sustancias: a)serotonina (5-hidroxitriptamina) puede prolongar la constriccin del vaso seccionado. b)fosftido de etanolamina y factor 3 de plaquetas, que tal vez activen el sistema intrnseco de produccin de tromboplastina. 9.El tapn hemosttico de plaquetas sigue creciendo hasta que consigue cerrar la abertura del vaso. 10. Durante este tiempo, las plaquetas del tapn metabolizan glucosa y producen trifosfato de adenosina (ATP), de alta energa, este inicia la contraccin de una protena de las plaquetas parecida a la actomiosina. 11.Entretanto, se ha activado el mecanismo intrnseco de formacin de tromboplastina, lo que tiene como resultado la produccin de cantidades relativamente grandes de trombina. 12.La trombina producida transforma el fibringeno en fibrina. La fibrina absorbe gran parte del exceso de trombina, siendo neutralizado el resto por las antitrombinas.

13.La red de fibrina producida dentro y alrededor del tapn de plaquetas se polimeriza y se retrae, fijando enrgicamente el tapn de plaquetas y sellando la abertura vascular. 14. El endotelio del vaso crece sobre el tapn de fibrina y cualquier cogulo que se haya formado a la luz del vaso ve abrirse en su interior un nuevo canal, que restablece la continuidad de la luz vascular. La fibrina se transforma lentamente en colgena, y se sigue contrayendo hasta que la lesin de la pared del vaso queda reducida a una pequea cicatriz.

FACTORES SIN NUMERO ASIGNADO. Factor Fletcher: (precalicrena) es idntico a la precalicrena, una glucoprotena de peso molecular 108.000 27 que se convierte a la forma ( calicrena) por el factor XII activado, siendo entonces capaz de dirigir mayor activacin del factor XII (retroalimentacin positiva). Factor Williams: (kiningeno HMW): es una glucoprotena presente en el plasma con la forma de alto peso molecular ( 200.000). Parece ser un cofactor requerido para la plena activacin por contacto del factor XII y para la activacin plena activacin por contacto del factor XII y para la activacin de la precalicrena. (factor de Fletcher) por factor XXIIa Factor de willebrand (vwf) :se requiere para la adherencia normal de las plaquetas a estructuras expuestas subendoteliales de la pared vascular y otras superficies, y no interviene en el mecanismo de coagulacin como tal . CASCADA DE LA COAGULACION. INTRINSECA. Contacto con superficie activa Calicrena XII XIIa Precalicrena

kiningeno HMW XI IX XI IXa VIIa VII Factor tisular

ms PF3, CA, VIII X Xa fibringeno ms PF3, V, Ca ++ Protombina Trombina Fibrina Fibrina M COMN XIII Ca ++ Fibrina Ps XIIIa Fibrina Pi Colgeno VA INTRNSECA : FASE DE CONTACTO: El primer paso que desencadena la coagulacin por va intrnseca incluye la unin del factor XII a una superficie activa o extraa como el colgeno, un constituyente de la pared vascular que puede exponerse a la sangre circulante despus de injuria vascular , o quizs otros activadores circulantes como endotoxinas o cidos grasos. La unin a stas superficies se considera asociada a un cambio conformacional de la molcula de factor XII , que puede exponer el sitio activo de la enzima. El factor XIIa generado por contacto de superficie convierte precalicrena en calicrena , que parece requerir un cofactor el kiningeno y llega a la acitvacin ulterior directa de factor XII por un mecanismo de retroalimentacin positiva. El factor XIIa convierte al factor XI en la enzima activa XIa (producto de contacto) , que tambin parece requerir kiningeno como cofactor. La activacin del factor XII no solo representa la primera reaccin en la iniciacin de la coagulacin sangunea intrnseca , sino que tambin parece tener un papel clave en la activacin de otros 3 sistemas enzimticos biolgicos de importancia, por lo menos: 1.- el sistema plasmingeno-plasmina, que es capaz de degradacin proteoltica y remocin de depsitos intravasculares de fibrina y por eso puede servir como importante mecanismo de control hemosttico. 2.- el sistema calicrena-bradikinina, que desempea un papel importante en el proceso inflamatorio. 3.- el sistema del complemento, que interviene en mecanismos de defensa inmunolgicos humorales y celulares. VA EXTRNSECA La va extrnseca de coagulacin consiste en una sola reaccin donde la proenzima factor VII es activada por factor tisular, una lipoprotena presente en

todos los tejidos que puede ganar acceso a la sangre circulante por injuria vascular y tisular. Aunque el factor de los tejidos forma un complejo compacto con el factor VII durante ste proceso de activacin, el factor VIIa separado de la actividad del factor tisular activa probablemente el factor X. Evidencia reciente indica que la conversin de factor VII a VIIa puede inducirse con calicrena formada con precalicrena por factor XIIa, reaccin que puede ser un eslabn entre el sistema intrnseco y el extrnseco. VA COMN FORMACIN DE COMPLEJO CONVERSOR DE PROTROMBINA: La primera reaccin de la va comn incluye la conversin de factor X en Xa en presencia de iones Ca++, que puede lograrse por el complejo de activacin del factor X formado en la ltima reaccin de la va intrnseca, o por el factor VIIa formado en la reaccin de la va extrnseca. El factor Xa, que es una potente serina proteasa, forma en la siguiente reaccin un complejo reversible con el factor V, fosfolpido procoagulante asociado a las plaquetas y iones de calcio (complejo conversor de protrombina, protrombinasa) , que es un poderoso activador de la protrombina. ACTIVACIN DE PROTROMBINA: El complejo conversor de protrombina formado en la reaccin anterior acta sobre su sustrato, protrombina. Hay evidencias de que sta reaccin incluye la unin de protrombina al complejo de lipoprotena, de que el factor Xa es la enzima de sta reaccin ( que se acelera marcadamente en presencia del factor V) y de que la trombina se libera del complejo de activacin durante la reaccin. La activacin de protrombina a trombina parece ocurrir en varios pasos con tres productos proteolticos intermedios, por lo menos. Se observ desde el comienzo que trazas de trombina aumentan mucho la generacin de complejo conversor de protrombina . Luego se obtuvo evidencia de un marcado aumento de actividad de los factores V y VIII por exposicin a trazas de trombina. Adems, sta ltima es un inductor muy poderoso de la reaccin de liberacin de plaquetas asociada a la disponibilidad de factor 3.(plaquetario). Estos hallazgos han llevado al concepto de que la trombina puede tener un papel fundamental de amplificador o autocatalizador que pasa a la coagulacin a zonas de alta velocidad. FORMACIN Y POLIMERIZACIN DE FIBRINA: Despus de la activacin de protrombina la enzima activa, trobina, convierte el fibringeno en fibrina monmera. Una vez formado el monmero fibrina (fibrina M) se polimeriza espontneamente con aparente agregacin extremo a extremoy tambin lado a lado . Los monmeros de fibrina que participan en sta reaccin estn unidos por ligaduras no covalentes relativamente dbiles que pueden disociarse fcilmente por exposicin del polmero a urea 5M , de donde proviene el nombre de polmero de fibrina soluble (fibrina Ps) . La fibrina M formada en la sangre circulante durante la coagulacin intravascular puede tambin unirse al fibringeno para formar complejos de fibrina soluble.

ESTABILIZACIN DE FIBRINA La fibrina Ps formada en la sangre normal se convierte rpidamente en polmero de fibrina insoluble, que incluye la unin cruzada covalente (transglutaminacin) de las cadenas gamma ( y en grado mucho menos de las alfa) de los monmeros de fibrina adyacentes . esta reaccin est catalizada por una enzima, el factor XIIIa , que se forma con un precursor inactivo por trombina, y requiere la presencia de iones ca++ . Fibrina Pi , mucho ms resistente que fibrina Ps a la protelisis por la enzima fibrinoltica plasmina, es entonces el producto final de la va comn de cascada de coagulacin. TENDENCIAS HEMORRAGICAS. Las tendencias hemorrgicas pueden ser consecuencias de anomalas en cualquiera de los tres mecanismos hemostticos principales: extravascular, vascular e intravascular (sangre). Las anomalas que requieren estudio tecnolgico se refieren a aquellas que se encuentran en el sistema intravascular (coagulacin de la sangre). Tendencias hemorrgicas debidas a anomalas en los tejidos extravasculares. Atrofias del tejido elstico, hiperlaxitud de la piel, fragilidad excesiva (muy sensible a los traumatismos) y presiones locales (produccin de la anoxia).

Tendencias hemorrgicas por anomalas del sistema vascular.

Retraccin y contraccin defectuosa de los vasos pequeos, anomala congnita o hereditaria de los vasos a) Escorbuto se debe a carencia de vitamina C, que es indispensable para la conservacin del estado normal de las paredes vasculares. b) Anoxia general o localizada puede producir petequias, falta de O 2 por lo que no hay coagulacin. y c) Trombocitopnia deficiencia de plaquetas (30 a 40 mil o menos) de valores muy bajos. Estados hemorrgicos debido a defectos del mecanismo de coagulacin intravascular. a) Deficiencia de fact. VIII Hemofilia clsica. b) deficiencia de fact. IX Christmas o hemofilia B. c) deficiencia del factor XI hemofilia C. d) Anticoagulantes circundantes, efectos nocivos contra fact. VIII, IX o la tromboplastina. ANTITROMBINAS. En sangre existen dos inactivadores de trombina: una globulina y otro unido a la albmina. La heparina se considera una antitrombina, acta a travs del factor albumnico. Otras es la absorcin por la fibrina que ella misma produce; tenemos el

ATIII (antitrombina tres) que es una glucoprotena producida por el hgado, Alfa2macroglobulina y Alfa1-antitripsina.

ANTICOAGULANTES. Para casi todo el trabajo hematolgico y para muchos anlisis bioqumicos se requiere sangre sin coagular. Existen numerosos anticoagulantes y la mayora de ellos impiden que el calcio intervenga en la coagulacin, bien sea precipitndolo como sal (oxalatos) o fijndolo en formas no ionizadas (citrato y secuestrene). La heparina acta como agente antitrombnico, es decir neutraliza la trombina. Puede tambin obtenerse sangre no coagulada removiendo la fibrina que se va formando. El empleo de cristalera cubierta con silicn no impide la coagulacin sino que la retrasa impidiendo la activacin final del factor XII y la adherencia de las plaquetas a las paredes del tubo; en otras palabras se retrasa la produccin de tromboplastina. OXALATO DE AMONIO Y POTASIO: Se utiliza bajo la forma de 3 parte de amonio y 2 de potasio. La sal de amonio aumenta el volumen de los glbulos rojos y la del potasio la disminuye. Esta mezcla se utiliza a razn de 0.1ml por cada mililitro de sangre. La ventaja de esta mezcla de oxalatos es su precio, su facilidad de preparacin y que no requiere dilucin. Suministra muestras de sangre adecuadas para la medicin de hemoglobina, hematcrito y recuento de glbulos rojos y glbulos blancos. Puede obtenerse el plasma para realizar exmenes bioqumicos pero no de nitrgeno puesto que el amonio lo contiene. Entre las desventajas esta el que no se pueden hacer frotis despus de unos cuantos minutos, ya que se produce degeneracin nuclear de los leucocitos y plasmlisis de los eritrocitos. Adems aparecen vacuolas en el citoplasma de los granulocitos, cuyos lbulos nucleares se juntan hasta formar masa esfrica. El ncleo de los linfocitos y monocitos presentan prolongaciones hasta dividirse en lbulos. Los oxalatos no pueden utilizarse en las transfusiones sanguneas. CITRATO DE SODIO Y POTASIO: Se utiliza la sal disdica. La solucin al 3.8% es isotnica y se emplea en proporcin de una parte de solucin de citrato para nueve partes de sangre (1:9) para estudiar los trastornos de la coagulacin y uno a cuatro (1:4) para la sedimentacin globular de Westergren. ACD: Citrato dextrosa cida, se utiliza como anticoagulante para las transfusiones sanguneas y puede resultar til en el laboratorio de hematologa para preservar los antgenos de glbulos rojos cuando se quieran estudiar estos. HEPARINA: Es un anticoagulante excelente y natural pero mucho ms caro que los artificiales. Es el mejor anticoagulante en seco cuando se busca reducir al mnimo la

hemlisis (por ejemplo determinacin de electrlitos sericos o estudios de fragilidad de glbulos rojos). Tenemos sales de est de sodio, potasio o amonio. No resulta conveniente para los frotis teidos al Wright pues produce una coloracin azul difusa, puede emplearse a razn de 0.1 a 0.2 mg/ml de sangre. La heparina es un carbohidrato cido complejo, que puede obtenerse bajo la forma de sus sales de sodio, calcio y amonio. Se prefiere amonio para la medicin de electrlitos. La heparina comercial contiene fosfatos, por lo que se deber considerar a la hora de las mediciones de fosfatos inorgnicos.

UNIDAD V
RESISTENCIA E INMUNIDAD. La inmunidad se define como la capacidad del individuo vivo para resistir o vencer una infeccin. Este estado de resistencia se manifiesta por el hecho de no desarrollar la enfermedad despus de la exposicin a la misma o por la demostracin de anticuerpos de inmunidad especficos en la sangre considerados eficaces contra los microorganismos invasores. INMUNIDAD NATURAL. Es un tipo de inmunidad que nace con el individuo y lo capacita para resistir una infeccin sin haber tenido previamente la enfermedad. 1. De especie: es caracterstica de una especie en particular, y esta asociada con la posicin relativa del husped en el reino animal, por ejemplo, las enfermedades infecciosas de los animales de sangre fra, muy rara vez se producen en los animales de sangre caliente, los perros son inmunes al carbunco o a la tuberculosis. 2. De raza: es caracterstico de una especie dentro de una raza, por ejemplo: las ovejas de Argelia son inmunes al carbunco. El ganado Brahman resiste los protozoos parsitos que producen la fiebre de las garrapatas y ataca a otras razas vacunas. En las razas humanas, los negros son relativamente resistentes a la fiebre amarilla y ms susceptibles a la tuberculosis que los blancos. 3. De individuo: esta inmunidad de individuos particulares, puede ser ampliamente atribuida a una inmunidad adquirida por ataques previos, leves, no reconocidos de la enfermedad.

4. Congnita: esta inmunidad, encontrada en los recin nacidos, se debe a la transferencia pasiva de anticuerpos de la madre al feto por la placenta. Los nios durante el primer ao de vida son resistentes a la difteria y a la escarlatina. INMUNIDAD ADQUIRIDA. Esta inmunidad la adquiere el individuo en el transcurso de su vida. Se divide en: 1. Activa: es una inmunidad relativamente duradera, debida a la formacin dentro del individuo de anticuerpos como resultado del contacto con los microorganismos o sus productos. Las clulas y tejidos del cuerpo reaccionan para producir una inmunidad especfica. a) Inmunidad natural adquirida : esta inmunidad se alcanza como resultado de un ataque de la enfermedad misma. Algunas enfermedades confieren inmunidad para toda la vida, son ejemplo la difteria y tosferina. b) Inmunidad artificial adquirida : esta inmunidad es el resultado de un tratamiento de inmunizacin con cultivos atenuados. 2.- Pasiva: es una inmunidad de corta duracin en la que los anticuerpos son producidos en otro animal, cuya sangre o suero se inyecta a la persona. Las clulas del cuerpo de los individuos tratados no toman parte en la produccin de ste tipo de inmunidad. RESPUESTAS DE INMUNIDAD. Son procesos mediante los cuales los animales forman protenas reactivas y clulas especficas en respuesta a la gran variedad de macromolculas y molculas orgnicas extraas. COMPONENTES BASICOS DEL SISTEMA INMUNE. ANTIGENOS. En general son sustancias ajenas al cuerpo en el cual actan para producir la respuesta de los anticuerpos. Un antgeno tiene dos propiedades: la inmunogenicidad o la capacidad de estimular la formacin de anticuerpos especficos, y la reactividad o propiedad de reaccionar especficamente con esos anticuerpos. Los antgenos constan de ms de una parte funcional: una parte responsable de la especificidad (reactividad) y otra responsable de la estimulacin (inmunogenicidad) en el cuerpo del animal. Los antgenos que tienen inmunogenicidad y especificidad se llaman ANTIGENOS COMPLETOS. La porcin responsable de la especificidad puede ser separada de la parte excitadora del anticuerpo. La porcin especfica reacciona con anticuerpos especficos pero no puede incitar la produccin de anticuerpos. A estas fracciones se les llama ANTIGENOS PARCIALES o HAPTENOS. La especificidad de los antgenos completos y de los chapetones se debe a su capacidad de unirse con las

estructuras qumicas relacionadas con los anticuerpos. Son conocidos tambin como inmungenos (Ag). Para que una sustancia sea inmungeno ha de tener un volumen mnimo; los inmungenos eficaces tienen pesos mayores a 10,000 daltons. Tienen agrupamientos de superficie (aminocidos, protenas globulares, cadena lateral de azucares) llamadas DETERMINANTES ANTIGENICAS o EPITOPOS que representan zonas reactivas expuestas de la molcula con las cuales puede combinarse un anticuerpo. Los antgenos pueden ser: EXOGENOS: Son los que se presentan al husped desde el exterior en forma de microorganismos, polen medicamentos o contaminantes. ENDOGENOS: Son los que se descubren dentro de un individuo.

ANTICUERPOS. Sustancias especficas formadas por el cuerpo en respuesta a un estmulo antignico, qumicamente son protenas. A todas las protenas que funcionan como anticuerpos se les llama actualmente INMUNOGLOBULINAS. Las inmunoglobulinas humanas se dividen en cinco grupos principales: IgG, IgM, IgA, IgE y IgD. Un anticuerpo producido en respuesta a un antgeno evidentemente ha de tener caractersticas estructurales diferentes de un anticuerpo producido en respuesta a otro antgeno diferente. Esta depende de la secuencia primaria de aminocidos en la molcula de anticuerpo. COMPLEMENTO. El sistema del complemento es una parte integral del sistema inmunitario del cuerpo, aunque l termin complemento se us inicialmente para describir un factor auxiliar existente en el suero, que actuando sobre una clula cubierta de anticuerpo poda causar su muerte, actualmente sabemos que el sistema del complemento incluye por lo menos 20 protenas que circulan en el plasma en forma inactiva. Estas protenas pueden activarse por dos vas independientes, denominadas, va clsica y va alternativa. La activacin del sistema del complemento origina una cascada de interacciones de stas protenas, culminando en la generacin de productos que tienen importantes actividades biolgicas y constituyen un sistema mediador humoral importante muy sustancial que interviene en reacciones inflamatorias. FUNCIONES: En primer lugar, el revestimiento de partculas, como bacterias o complejos inmunes, por ciertos componentes del complemento, facilita su ingestin por clulas fagocticas (funcin opznica del complemento).

En segundo lugar, el acontecimiento activador genera varios productos de desintegracin de protenas del complemento para los cuales existen receptores especficos en diversas clulas inflamatorias, como granulocitos, linfocitos, y otras clulas. La fijacin de estos productos derivados del complemento a tales receptores produce actividades biolgicas como la Quimiotaxis y la activacin del tipo hormonal de funciones celulares (funcin inflamatoria del complemento). En tercer lugar, las protenas que actan finalmente en la cascada del complemento forman el complejo de ataque de membrana, que provoca la muerte de las clulas blanco. Esta actividad mortal puede estar dirigida contra virus, bacterias, hongos, parsitos, clulas infectadas por virus y clulas tumorales (funcin citotxica del complemento). Un sistema del complemento intacto es esencial para la conservacin de la salud. Adems en ciertas situaciones clnicas ha resultado particularmente til medir algunos componentes del complemento como indicadores de actividad patolgica. LINFOCITOS. Los linfocitos intervienen en el sistema inmunitario, tanto en la inmunidad humoral como en la medida por clulas. Hay un depsito de linfocitos recirculantes que pasan de la sangre a los ganglios linfticos, bazo y otros tejidos y vuelven a la sangre por los canales linfticos principales como el conducto torcico. Hay grandes concentraciones de linfocitos en los ganglios linfticos y en los sitios donde se forman y maduran: mdula sea, timo y bazo. Los linfocitos T pasan por el timo en su camino a los tejidos mientras que los B no pasan por ste rgano. Vistos al microscopio luminoso se ven iguales, pero se distinguen con la microscopa electrnica de barrido. Los linfocitos T (que pasaron por el timo) se hacen inmunologicamente competentes. Las clulas T pueden reconocer determinantes antignicas o epitopos y poseen molculas de anticuerpos como receptores de superficie. Los linfocitos T se transforman en linfoblastos cuando son activados por el antgeno y as participan en la eliminacin del material extrao. Las clulas T tienen capacidad para destruir otras clulas, como las cancergenas, y tejidos transplantados que exhiben epitopos extraos. Estas cuentan con la ayuda de los macrfagos para destruir patgenos e incluso estimular a las clulas B para aumentar la produccin de anticuerpos, proceso que se le llama COOPERACION. Los linfocitos B se transforman en clulas plasmticas que son las que producen y segregan los anticuerpos. Una clula plasmtica sintetiza y segrega unas 2000 molculas de anticuerpos idnticas por segundo hasta que muere, generalmente a los pocos das de haber alcanzado la madurez. Adems de transformarse en clulas plasmticas, los linfocitos B forman CELULAS DE MEMORIA, las cuales forman un mecanismo para el aumento acelerado de clones celulares, capacitando al individuo que ha sido expuesto una vez al antgeno para responder de manera ms rpida y vigorosa a un encuentro posterior. MACROFAGOS

La transicin del monocito a macrfago se acompaa de cambios morfolgicos, bioqumicos y funcionales. Las clulas aumentan en tamao y nmero y la complejidad de sus organelos, y el contenido de enzimas lisosmicas como la fosfatasa cida, lisozima, beta-glucoronidasa, etc. Bajo ciertas condiciones, los macrfagos pueden sintetizar DNA y multiplicarse. Debido a su capacidad de diferenciacin, en los tejidos se les denominan histiocitos tisulares, en el hgado clulas Kupffer, y en los pulmones macrfagos alveolares. Los macrfagos estn altamente especializados para llevar a cabo su funcin de ingerir y destruir toda la materia en partcula por el proceso de endocitosis. Estas clulas eliminan y destruyen ciertas bacterias, clulas lesionadas o desgastadas, material coloide y macromolculas. El proceso fagoctico aveces es facilitado por anticuerpos, pues las partculas revestidas de anticuerpos son ingeridas ms eficazmente; el complemento tambin puede intervenir como amplificador de la fagocitosis. Se emplea el termino OPSONINA para describir este principio estimulante de la fagocitosis de ambos, anticuerpo y complemento.

Los monocitos circulantes son atrados hacia la zona lesionada (inmunotaxia) por cierto nmero de factores, algunos de los cuales provienen del sistema del complemento o son secretados por los linfocitos T. Aqu son activados en formas diversas; bien sea por endocitosis o por sustancias humorales, incluyendo anticuerpos, complementos o producto de linfocito (linfocinas). Una vez activadas, las clulas llevan a cabo una actividad metablica intensa y muestran gran aumento de sus funciones; por ejemplo: actividad microbicida. Se cre adems que el papel de vigilancia y defensa, el sistema e macrfagos es importante para el reconocimiento inicial y la elaboracin de antgenos, etapas que pueden ser necesarias para inducir respuestas inmunitarias especficas. REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO Las interacciones Ag-Ac pueden dividirse en tres categoras: 1. Primarias: La interaccin inicial o primaria es el acontecimiento bsico que consiste en la fijacin del Ag con una molcula de Ac. 2. Secundarias: LA reaccin primaria rara vez es visible y su descubrimiento suele lograrse con reacciones secundarias, que proporcionan los medios auxiliares para observar la reaccin, es decir, precipitaciones. 3. Terciarias: Son expresiones biolgicas de la interaccin Ag-Ac, que pueden ser beneficiosas o perjudiciales. El tipo de valoracin utilizado para descubrir el anticuerpo no depende tanto del anticuerpo producido como de la forma fsica y qumica del antgeno correspondiente. Los antgenos solubles, cuando estn combinados con su anticuerpo especfico, causarn precipitacin, en la cual complejos de Ag-Ac forman agregados voluminosos insolubles. Si los mismos Ag se unen natural o artificialmente a materia en partculas

pro ejemplo: clulas bacterianas, glbulos rojos partculas de ltex o partculas de bentonita formarn aglutinados o acmulos, est proceso se denomina Aglutinacin. Hasta cierto punto la aglutinacin y la precipitacin pueden considerarse manifestaciones de las mismas interacciones Ag-Ac; la nica diferencia estriba en la forma fsica del Ag de prueba. En ambos casos tiene caso la unin qumica reversible en dos etapas: 1. En la primera los anticuerpos que existen en el suero inmune reaccionan con determinantes antignicas especficas que existen en el ligado. La facilidad de combinacin depende de varios factores, en particular pH, fuerza inica y temperatura. Por ste motivo las reacciones Ag-Ac in vitro se llevan a cabo a temperaturas especficas en medios amortiguados que contienen electrolitos. La unin entre Ag-Ac se logr por medio de enlaces no covalentes.

2. Cuando la reaccin de acoplamiento primario a logrado el equilibrio, tiene lugar la segunda etapa o formacin de red. Durante est fase las zonas receptoras libres en las molculas de Ac se unen a receptores adecuados, o bien a molculas adicionadas de Ag, formando una red. En la aglutinacin el Ag forma parte de una partcula voluminosa insoluble, como un glbulo rojo o una clula bacteriana, y se necesita relativamente menos molculas para que tenga lugar la agregacin visible; todo lo contrario a la precipitacin donde el Ag es una molcula soluble y por lo tanto tiene que formarse una red bastante voluminosa antes que pueda observarse un agregado visible. Esto requiere de un nmero elevado de molculas de Ac y proporciones ptimas de reactantes.

Manifestaciones secundarias de la reaccin Ag-Ac.

C Fijacin del complemento Fagocitosisopsonizacin Quimiotaxis Adherencia inmune

Reaccin de aglutinacin- precipitacin.

COMPLEMENTO. Es un sistema de globulinas del plasma, consiste en complementar los fenmenos iniciados por la reaccin entre antgeno y anticuerpo. Uno de sus componentes ejerce efectos sobre la permeabilidad vascular. El smbolo abreviado para la totalidad del sistema del complemento es C. Esta formado por varas protenas del plasma sanguneo que tiene por funcin ayudar en la defensa inmunitaria. El sistema es capas da causar lisis de las bacterias. Consiste en una serie de protenas identificadas con la letra C y un nmero del 1 al 9, que se desdobla en dos molculas designndolas con las letras a y b. Tienen la cualidad de ser la primera lnea de defensa contra infecciones ya que es la primera que se activa. CASCADA DEL COMPLEMENTO. Clsica. C1q C1r Ca++ C1 C4 Igs GoM C2 C2a C2b C3a C3b Fagocitos. Lisis.
C5

C1s

Alterna. C4a C4b C2b Membrana. C3 Comn.

Factor D Ba Properdina Factor B Bb

C5a

C5b C6, C7, C8 C9 lisis.

MACROFAGOS. Existen dos principales variedades de clulas fagocticas, los leucocitos polimorfonucleares neutrfilos (LPM) y los macrfagos. Ambos desempean funciones dobles como defensa de primera lnea y tropas de limpieza. Los macrfagos (monocitos, histiocitos tisulares, clulas reticuloendoteliales) tienen un doble papel, son indispensables para la funcin normal de los sistemas inmunitarios. Parece ser un intermediario indispensable entre el antgeno y la clula inmunitaria. Los antgenos deben ser ingeridos y trasformados por los macrfagos para estimular la clula inmunizante competente, (ejemplo para producir los anticuerpos G cuando menos es preciso que los antgenos sean procesados por los macrfagos).

Los linfocitos se acumulan alrededor de los macrfagos llenos de antgenos con los que permanecen en contacto o mitin en el cual el macrfagos trasmite el mensaje inminolgico en cdigo a los pequeos linfocitos satlites. En las ltimas etapas de la inflamacin, los macrfagos actan como clulas de limpia y eliminan los restos. Los macrfagos adems de programar los linfocitos tienen la obligacin de eliminar el exceso de antgenos. Tambin destruyen las clulas que sufren degeneracin e intervienen en el rechazo de trasplante de tejido al desconocer a las clulas trasplantadas. LINFOCITOS. Se acepta que los pequeos linfocitos en sangre, ganglios linfticos y bazo provienen fundamentalmente del timo. Los linfocitos pequeos son clulas que dan lugar a la inmunidad celular o sea son responsables de las reacciones de sensibilidad tarda, el rechazo de homoinjertos y las reacciones de injerto contra husped (cuando ciertos linfocitos del husped equipados en forma especifica se adhieren a las clulas del injerto y las matan). La poblacin total de linfocitos pequeos del timo se renueva cada tres o cuatro das. Estos inoculan ciertos rganos y tejidos. Antes de sali del Timo estos linfocitos no pueden responder a estmulos antignicos o sea no poseen competencia inmunolgica. Cuando abandonan el rgano ya han desarrollado esta competencia inmunolgica, han aprendido a distinguir lo propio de lo ajeno. Tienen a su cargo la inmunidad celular o sea la hipersensibilidad tarda y el rechazo a los injertos. Estos linfocitos pequeos tienen a su cargo la inmunidad celular, y difiere de los linfocitos grandes y clulas plasmticas que tienen a su cargo la inmunidad humoral. Los linfocitos grandes quiz provienen del equivalente de la bolsa de Fabricio. Pueden observarse en la sangre perifrica. Las clulas plasmticas tambin provienen

del sistema de la bolsa o de su equivalente, pero al parecer interviene en este caso una transformacin de las grandes clulas linfocitoides. Las grandes clulas linfocitoides producen las inmunoglobulinas M, las clulas plasmticas sintetizan las G. este sistema de la bolsa cubre todo el aspecto humoral de la inmunidad. Los linfocitos originados en la bolsa y programados por los macrfagos se transforman en grandes clulas pironinfilas, que se dividen originando linfocitos grandes (o linfocitos B) y clulas plasmticas. Los linfocitos B al estimularse por los antgenos se reproducen y diferencian, dan origen a las clulas plasmticas productoras de anticuerpos, originan linfocitos B pequeos que pueden seguir multiplicndose o pueden transformarse en clulas plasmticas; los linfocitos B se denominan clulas de memoria conservan la informacin del antgeno estimulador. Los linfocitos T (pequeos) se caracterizan por tener los antgenos CD (diferenciacin de grupo) en su membrana y receptores de antgenos. Se dividen en Linfocitos T Killers (clulas asesinas o supresoras) son activadas por clulas anormales (tumores o infectadas por virus) se fijan a estas y liberan sustancias txicas para destruirlas. Los linfocitos T helpers (cooperadores) estimulan la actividad de los T Killers e intervienen en otros aspectos de la reaccin inmunitaria. Estos son responsables de la inmunidad celular, atacan y destruyen directamente a los antgenos. Los linfocitos B y T tienen la capacidad de recordar. BANCO DE SANGRE Y HEMOTERAPIA La hemoterapia se define como la infusin de sangre o elementos sanguneos con fines terapeticos. Los elementos sanguneos pueden ser componentes o derivados de la sangre. BANCO DE SANGRE: es un centro con capacidad para reclutar donantes, extraer sangre, preparar las unidades simples en sus componentes, procesar y almacenar cada uno de stos y distribuirlos entre los hospitales segn las necesidades. SELECCIN DE LOS DONANTES DE SANGRE. Con el fin de proteger al donador lo mismo que al receptor, cada donante de sangre debe ser reconocido antes de cada donacin mediante la historia clnica y un reconocimiento fsico limitado al da de la donacin. Esto sirve para asegurar que no sobrevendr un dao al donante por proporcionar sangre y que la unidad transfundida tampoco daar en modo alguno al receptor.

CALIFICACIONES BASICAS. 1. Edad mnima de 18 aos y consentimiento del tutor.

2. Peso corporal entre 50Kg o ms. 3. Temperatura menos de 37.5 (sin temperatura o fiebre). 4. Pulso entre 50 y 100 pulsaciones por minuto, regular. 5. Presin sangunea: Sistlica entre 10- 180 mm Hg Diastlica entre 50-100 mm Hg 6. Mnimo de hemoglobina: 13.5 g/dl varones. 12.5 g/dl mujeres. 7. Hematocrito mnimo: 41% hombres. 38% mujeres.

RECHAZOS. 1. Permanentes: Historia de hepatitis vrica, de ictericia de causa desconocida, tumores malignos, leucemia, convulsiones despus de infancia, diabetes, VIH, entre otras. 2. Temporales: Estados que hagan preciso el reposo o la medicacin (resfriados, gripe, tuberculosis, sfilis, entre otras). OTRAS CONSIDERACIONES IMPORTANTES 1. Identificacin: nombre completo, direccin y telfono, edad, sexo. 2. Consentimiento: se precisa consentimiento por escrito del presunto donante. 3. Preparacin antes de la donacin: comer comida regular, evitar alimentos grasos y no beber alcohol en las 12 horas que anteceden a la donacin. BOLSAS DE RECOLECCION. Las bolsas de plstico se pueden obtener de muchas formas y cada una est destinada a una finalidad especfica. Cuando la unidad se va a emplear como sangre completa, es suficiente una bolsa simple.

Bolsa simple

Bolsa especial con mltiples bolsas satlites

Tambin se pueden obtener bolsas especiales con mltiples bolsas satlites para pacientes peditricos y el almacenamiento congelado a temperaturas ultrabajas. Estas bolsas estn construidas de tal forma que la transferencia del contenido se puede realizar dentro de un sistema cerrado para evitar la contaminacin.

PREPARACION Y DISTRIBUCION. Pruebas para cada unidad de sangre o sus componentes sanguneos: Tpificacin ABO y Rh, VDRL (prueba de sfilis), prueba para hepatitis, VIH (prueba de SIDA), adems la unidad deber contar con el reporte de la Hb y Ht, la fecha de extraccin y caducidad y el nombre de l donante. Tambin deber tener bien claro la procedencia de la misma. TRANSPORTE DE LOS COMPONENTES DE LA SANGRE.

Todos los componentes almacenados entre 1-6C deben transportarse con hielo para asegurar una temperatura de 1-10C. El plasma fresco congelado deben transportarse con hielo seco. CONSERVACION DE LOS COMPONENTES DE LA SANGRE. Los eritrocitos son conservados a una temperatura entre 1-6 C que proporciona el 70% de viabilidad como mnimo y adems a sta temperatura el metabolismo glucoltico es muy lento. El plasma fresco congelado (PFC) se conserva a 18 C durante un ao. Los congeladores con una temperatura inferior a los 18 C conservan mejor la actividad de los factores de la coagulacin. Se deben descongelar en un bao a 37 C y emplearse tan pronto como sea posible (en un plazo de 2 horas).

CONSERVADORES. (ANTICOAGULANTES) ACD (cido-citrato-dextrosa): el citrato produce una quelacin del calcio actuando como anticoagulante, mientras que la dextrosa proporciona la fuente de energa y el cido ctrico aporta a la solucin un pH de 5 (al agregar la sangre y a una temperatura de 4 C el pH es alrededor de 7.4) CPD (citrato-fosfato-dextrosa) : est sustituyendo al ACD, ya que la presencia de fosfato contribuye al depsito de fosfato de adenosina y por ello mejora la viabilidad de los eritrocitos. Tienen tambin un pH un poco ms elevado (5.5 solo, 7.5 a 4 C). GRUPO SANGUINEO ABO Y RH Todas las clasificaciones de los grupos sanguneos se basan en los tipos de antgenos presentes o ausentes en la superficie de los eritrocitos. Karl Landsteiner inmunlogo austraco y ganador del premio Nobel de 1930 por sus investigaciones en fisiologa, cre la ms importante de las clasificaciones que es el sistema ABO. Landsteiner clasific los eritrocitos humanos en A, B, Ab u O, con base en la presencia o ausencia de stos antgenos en su superficie. Las personas con grupo A poseen eritrocitos con antgenos A; las de grupo B poseen antgenos B; las de grupo AB contienen ambos antgenos; y los de grupo O no contienen ninguno de los dos tipos de antgenos. Por consiguiente los individuos poseen Ac contra antgenos diferentes a los que poseen sus glbulos rojos, es decir, los de grupo A, poseen Ac contra B, los del grupo B poseen Ac contra A, las personas con grupo AB no contienen Ac y los de grupo O poseen Ac contra A y B. En 1940 Landsteiner y Alexander S. Wiener, inmunoserlogos, crearon el sistema Rh, despus de descubrir un antgeno particular en la superficie de los eritrocitos de los monos Rhesus. En los humanos en promedio, 85% de los sujetos de raza blanca y un porcentaje an mayor de raza negra, indios norteamericanos y orientales tienen ste antgeno Rh llamado factor Rho-(D) en sus eritrocitos.

Sobre tales bases se clasifica la sangre como Rh positiva; el 15% restante (o menos) de la poblacin carece de dicho factor y se clasifica su sangre como Rh negativa. El antgeno es fuertemente inmungeno, esto es, muestra enorme posibilidad de estimular la formacin de un Ac, de otros Ag conocidos. En consecuencia una persona Rh positiva no tiene anticuerpos contra Rh en su suero, porque destruira sus eritrocitos. Sin embargo las personas Rh negativas comienzan a formar Ac contra Rh despus de la exposicin a sangre Rh positiva (por transfusin o embarazo). PRUEBAS DE ANTIGLOBULINAS Esta prueba detecta Ac Rh incompletos, o sea Ac absorbidos por hemates Rh positivos pero no capaces de producir aglutinacin directa de los mismos hemates suspendidos en NaCl al 0.9%, es decir, que el Ac incompleto, aunque se combina con el antgeno eritroctico en solucin salina y la globulina de que est constituido recubre a los eritrocitos sin separarse de ellos al lavarlos, la reaccin no es visible. Y al contrario los Ac completos si aglutinan a los hemates suspendidos en solucin salina fisiolgica. El suero antiglobulina humana (suero de Coombs) se prepara inmunizando animales, normalmente conejos, con suero humano total o con fracciones especficas del mismo. Cuando ste antisuero se agrega a los eritrocitos que han quedado cubiertos (sensibilizados) con Ac incompletos, se produce una aglutinacin visible. Los eritrocitos recubiertos deben lavarse cuidadosamente para eliminar el exceso de globulinas sricas sin combinar, que reaccionaran con el suero antiglobulina humana y dara una reaccin de Coombs falsa negativa, al ya no quedar antiglobulina humana disponible para reaccionar con los eritrocitos sensibilizados (recubiertos). As pues, los anticuerpos incompletos, entre ellos muchos de los que explican la eritroblastosis fetal como resultado de la isoinmunizacin durante el embarazo , la anemia hemoltica autoinmune (como resultado de anticuerpos no revelados en la prueba cruzada comn previa a la transfusin sangunea), se absorben sobre la superficie de los eritrocitos, pero no los aglutina. El suero de Coombs permite reconocer stos eritrocitos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulnicos que ya cubren su superficie, con lo cual se produce la aglutinacin. El suero antiglobulina humana es en realidad un antisuero que reacciona con el anticuerpo globulnico humano que recubre la superficie del eritrocito; puede considerarse que su accin produce una unin especfica entre un eritrocito recubierto y otro. Puesto que el suero contiene globulinas que neutralizan muy rpidamente los anticuerpos antiglobulina humana, es evidente que para identificar los glbulos sensibilizados es absolutamente necesario remover la totalidad del suero (y por ende sus globulinas no combinadas) mediante lavados repetidos( tres cuando menos) con grandes volmenes de solucin salina fisiolgica.

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD SANGUNEA

Las pruebas de compatibilidad son todos los procedimientos que se efectan en el banco de sangre para entregar una unidad segura de sangre con fines de transfusin a un receptor. Ellos sn: 1. Recoleccin de muestras 2. revisin de los registros de banco de sangre 3. Clasificacin de grupos ABO, tipificacin Rh y deteccin de anticuerpos de una muestra del receptor 4. Clasificacin de grupos ABO, tipificacin Rh y deteccin de anticuerpos de una muestra del donador 5. Compatibilizacin mutua y cruzada. Pruebas cruzadas: Una de las aplicaciones ms importante de las determinaciones de grupos sanguneos es la que se refiere a la preparacin para transfusin. Se recomienda siempre utilizar sangre del mismo grupo y factor Rh que el receptor. Ello significa que la sangre del receptor y del donador deben estudiarse con sumo cuidado. La mayora de los hematlogos concuerdan en que las pruebas cruzadas deben efectuarse mediante tres mtodos por lo menos: 1. Prueba en tubo con solucin salina. 2. Prueba de protena concentrada. 3. Prueba de Coombs indirecta. Las ltimas dos pruebas sn los mtodos ms seguros para detectar la mayora de las incompatibilidades. De acuerdo con su importancia relativa, las pruebas cruzadas se dividen en Prueba mayor y Prueba menor. TCNICA: Etapa salina 1. extraer sangre con y sin anticoagulante tanto a donador como receptor . 2. Las muestras sin anticoagulante, una vez completada la coagulacin se centrifugan para obtener el suero tanto de donador como de receptor . 3. Las muestras con anticoagulantes, se lavan 4 veces con solucin salina fisiolgica y se preparan suspensiones ( con la solucin salina fisiolgica ) al 4 o 5% de glbulos rojos lavados tanto de donador como de receptor. 4. Se rotulan 3 tubos de la siguiente manera: Prueba mayor, Prueba menor y Prueba testigo y proceder de la siguiente manera: 5. A la prueba mayor : se le agregan 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de la suspensin de eritrocitos del donador. 6. A la prueba menor: se le agrega 2 gotas del suero del donador y 2 gotas de la suspensin de glbulos rojos del receptor. 7. A la prueba testigo: se le agrega 2 gotas del suero del receptor ms 2 gotas de la suspensin de eritrocitos del receptos. 8. Agitar sus tubos y centrifugar 30 segundos . remover los glbulos rojos y verificar si existe aglutinacin o hemlisis. Si existe la prueba se considera INCOMPATIBLE, es decir sa sangre (o su componente) no se le puede

transfundir al receptor. Pero si no existe aglutinacin o hemlisis se pasa a la siguiente etapa que es la Prueba de Albmina : 9. Agregar a los tubos 2 gotas de albmina bovina al 30%, agitar los tubos e incubar a 37C durante 30 a 60 minutos. 10. Sacar del bao mara , agitar y centrifugar 30 seg. Y cerificar si existe aglutinacin o hemlisis, si es as la prueba se considera INCOMPATIBLE; si no existe aglutinacin o hemlisis entonces proceder con la 3era. Etapa que es la Prueba de Coombs: 11. Lavar 4 veces todos los tubos con solucin salina fisiolgica y en el ltimo lavado, eliminar completamente el sobrenadante. 12. Agregar 2 gotas del suero de Coombs, agitar y centrifugar 30 seg. Y observar si existe aglutinacin o hemlisis, si es as la prueba se considera INCOMPATIBLE y la sangre no puede ser transfundida. Pero si no existe aglutinacin o hemlisis las pruebas cruzadas se consideran COMPATIBLES y la sangre si puede transfundirse al receptor. Recuerda que si la prueba mayor da compatible, significa que el receptor puede recibir concentrado de eritrocitos. Si la prueba menor da compatible, significa que el receptor puede recibir plasma. Si ambas pruebas te dan compatibles entonces el receptor podr recibir la sangre completa de se donador. RECOMENDACIONES: Siempre corroborar los grupos y Rh tanto de donador como de receptor tanto por grupo directo como grupo inverso Realizar las pruebas por duplicado, una; incubarla a 37 C y la otra a temperatura ambiente. Esto para detectar tanto anticuerpos fros como anticuerpos calientes.