LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA AMINOCIDOS Y PROTENAS Laura Daniela Bentez Jezir Valencia Gmez 1023332 1023851

Departamento de Biologa, Universidad del Valle, Cali (Colombia) 12/11/2010

1. RESULTADOS En la prctica se realizaron algunas reacciones de los aminocidos y protenas, adems se comprob cualitativamente qu efectos pueden tener factores como la temperatura y sustancias como cidos o sales en estos. Para eso se hicieron varios experimentos: y y y y y y Acidez de los aminocidos. Formacin de una sal compleja de acido aminoactico. Coagulacin de la albumina Reaccin Xantoproteica Reaccin de biuret. Reaccin coloreada del formaldehido para protenas.

Procedimientos y resultados 1.1 Acidez de los aminocidos: Se tom en un tubo de ensayo 0.1 mL de cido aminoactico al 2%, se le adicion agua y con un trozo de papel indicador se midi el pH. Se colore y al comparar con la micro-escala, se obtuvo que el pH del cido aminoactico fue de 6. 1.2 Formacin de una sal compleja de acido aminoactico: Se tom en un tubo de ensayo y se adicionaron 0.3 g de cido aminoactico, 5 mL de agua y un 1 g de CuO (II) y se calent la mezcla durante 5 minutos. Al calentar se form un precipitado de color negro en la superficie y en el fondo, en la mitad la coloracin fue azul. Por ltimo se filtr y se sec en el horno el filtrado, formndose as unos cristales. Los datos obtenidos fueron: y y Peso de la capsula + filtrado: 36.8050 g Peso de la cpsula: 36.5891 g

Peso del filtrado: 0.2209 g

0.3g NH2CH2CO2H x 1mol (C2H5NO2) x 1mol producto x 138.54g producto 75g (C2H5NO2) 1mol(C2H5NO2) 1mol producto = 0.5541g %R = 0.2209g = 0.39 * 100 = 39% 0.5541g 1.3 Coagulacin de la albumina: Se tomaron 5 tubos de ensayo, a cada uno se le adicion clara de huevo, y se hicieron las siguientes pruebas: Tubo 1: Calentamiento = La solucin se someti a calor y a los 78C esta present coagulacin, su coloracin es blanca. Tubo 2: Adicin 4 mL de etanol: Al hacer la mezcla, esta se coagula y la coloracin es blanca. Tubo 3: Adicin HCl conc: Al hacer la mezcla, se esta se coagula y la coloracin es blanca. Tubo 4: Adicin HNO3: Al hacer la mezcla, se forma un precipitado de color amarillo lo que indic que si hubo coagulacin. Tubo 5: Adicin NaOH conc: Al realizar esta mezcla, se observa que no se coagula y es totalmente transparente. 1.4 Precipitacin de protenas con metales pesados: Se tomaron 2 tubos de ensayo y a cada uno se le adicion 1 mL de clara de huevo, y se hicieron las siguientes pruebas: Tubo 1: Adicin CuSO4 (II) al 5%: Se adicionaron 13 gotas de CuSO4 (II) , se form muy poco precipitado y el color azul del sulfato de cobre se disolvi en la clara de huevo. Tubo 2: Adicin acetato de plomo (II) al 5%: Se adicionaron 13 gotas de acetato de plomo (II), se form un precipitado de color blanco, la mezcla en general se torna blanca. 1.5 Reaccin Xantoproteica: Se calent 1.0 mL de solucin de clara de huevo + 0.4 0-6 mL de acido ntrico concentrado.

Inicialmente la mezcla fue blanca, viscosa y en el fondo de color amarillo, al calentarlo la coloracin se torn amarilla. Al adicionarle NaOH la mezcla se torno de color naranja. 1.6 Reaccin de Biuret: Se calent en un tubo de ensayo 1.0 mL de clara de huevo + 1.0 de NaOH al 10% y gotas de sulfato de cobre. Al agregar el sulfato de cobre, este no desciende inmediatamente, por el contrario se qued en la superficie y era de color azul violeta, al agitar la mezcla, se torn violeta. 1.7 Reaccin coloreada del formaldehido para protenas: En un tubo de ensayo se agregan 0.2 mL de solucin de clara de huevo + gota de formaldehido y 3 gotas de HSO. Al adicionar las gotas de formaldehido no se observ un cambio notable en la mezcla, al adicionarle las 3 gotas de HSO se form un precipitado blanco. 2. ANLISIS DE RESULTADOS

Se realizaron pruebas cuantitativas y cualitativas, para determinar el comportamiento de aminocidos y protenas, conociendo su importancia para la vida diaria 2.1 Acidez de los aminocidos:

Al hacer la mezcla de de cido aminoactico al 2%, y agua, y midiendo el pH de esta (gilicina), dio como resultado un pH=6. Los grupos -COOH y -NH de los aminocidos son capaces de ionizarse (al igual que los grupos-R cidos y bsicos de los aminocidos). Como resultado de su capacidad de ionizacin las siguientes reacciones de equilibrio inico pueden ser escritas: R-COOH <> R-COO + H+ R-NH3+ <> R-NH2 + H+ Las reacciones de equilibrio, segn lo escrito arriba, demuestran que los aminocidos contienen por lo menos dos grupos cidos dbiles. Sin embargo, el grupo carboxilo es un cido ms fuerte que el grupo amino. Siempre que una molcula presenta dos o ms grupos ionizables, existe un valor de pH al cual la especie inica ms abundante posee una suma de cargas positivas y negativas igual a cero, es decir, no posee carga elctrica neta. Si se analiza el movimiento electrofortico de los aminocidos a distintos valores de pH, se encuentra un valor al cual su movilidad electrofortica es nula. Este valor de pH corresponde a la condicin en la cual la especie dominante es aquella que no posee carga elctrica neta. Este valor de pH recibe el nombre de punto isoelctrico.

2.2 Formacin de una sal compleja de acido aminoactico: En esta parte de la prctica se quiso ver la formacin de una sal compleja a partir de glicina y oxido de cobre (II); la glicina ejerce un efecto protector de compuestos con una eficiente capacidad de reduccin en este caso por iones cpricos y, como consecuencia de ello, disminuye la generacin de radicales hidroxilo; es probable que esta accin haya ocurrido como consecuencia de la formacin del complejo constituido por glicina y cobre, de tal manera que no se dispondra de Cu-II para oxidar cierto tipo de compuestos reductores como por ejemplo el acido ascrbico y formar radicales hidroxilo. CH2COOH NH2

+ CuO

H2O (

Se ha mostrado que la glicina ligada al Cu-II puede formar un complejo [Gly-Cu]+ cuyo pico de mxima absorcin es a 732 nm, mientras que el complejo [Cu-Gly ] 2 tiene un pico mximo a 624 nm16. Asimismo, se ha sugerido que se formara un complejo de bisglicinato-Cu-II, que tendra una estructura tetracoordinada planar, en la cual las molculas de agua estaran excluidas de las posiciones axiales del cobre 16. Experimentalmente se adicion el agente oxidante CuO a la glicina esta solucin se calent y se vio la formacin de un precipitado de color negro en la superficie y en el fondo, en la mitad la coloracin fue azul. Por ltimo se filtr y se sec en el horno el filtrado, formndose as unos cristales que segn lo mencionado anteriormente sera el complejo [Gly-Cu]+; estos cristales fueron pesados y se compararon con los datos tericos dando un porcentaje de error del 39% que es un valor significativamente alto y cuyas causas de ese valor se puede haber debido a un mal filtrado, a la mala manipulacin de los reactivos o impurezas de estos o a que no hubo un reaccin completa pues siempre hay un reactivo limitante. 2.3 Coagulacin de la albumina: Prueba # 1 (Calentamiento) Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70C, como lo realizado en la prctica, o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin de su estructura secundaria y terciaria. Esto se puede evidenciar mediante el rompimiento o desmoronamiento de la estructura helicoidal caracterstica de este tipo de protenas puesto

que existe ruptura en los enlaces de hidrgeno; esto se puede observar en el siguiente esquema

Prueba # 2 (Adicin etanol) A la albumina se le aadi una pequea cantidad de etanol, al agitar la mezcla formo una solucin blanca homognea, esta indica la formacin de un ster producto de la reaccin; la siguiente ecuacin representa la reaccin: O RCHCOOH RCHCOCH2CH3 + H2O + CHCHOH NH2 NH2

Prueba # 3 (Adicin HCl) En esta prueba a la albmina se le adicion HCl concentrado, la mezcla se coagul y de nuevo como la anterior prueba, la coagulacin es blanca, es se debi a que el el cido clorhdrico aumenta la concentracin de protones del medio, (disminuye el pH). El exceso de protones cambia las cargas de los grupos ionizables que permiten mantener la estructura terciaria de la protena (albmina), as como tambin afecta las uniones puente de hidrgeno de la estructura secundaria. La prdida de todas las estructuras proteicas, (excepto la primaria), se conoce como desnaturalizacin, y tiene como consecuencia la prdida de las funciones biolgicas. La siguiente ecuacin representa la reaccin: RCHCOOH NH2 +

+ HCl

RCHCOOH NH3

Cl-

Prueba # 4 (Adicin HNO3) Al hacer la mezcla, se forma un precipitado de color amarillo lo que indic que si hubo coagulacin, esto sucedi por la sustitucin del grupo (NO2) en el anillo aromtico puesto que este tipo reaccin se caracteriza por dar una coloracin amarilla donde, en la siguiente reaccin se demuestra lo anterior.

OH OH O NH 2 OH tirosina NH 2 OH

HNO 3

NO 2 O

Prueba # 5 (Adicin NaOH) Esta prueba consisti en la adicin de NaOH, se observ que no se coagul y se torn transparente, esto sucedi debido a la formacin de la sal del cido, proveniente del grupo carboxlico, el Na desplaz al hidrgeno de este grupo, el cual es cido dando as la formacin del carboxilato, en la siguiente reaccin se demuestra lo anterior. O RCHCOOH NH2 + NaOH RCHCO-Na+ NH2 + H2O

2.4 Precipitacin de protenas con metales pesados Las protenas cuando se encuentran en solucin a pH superiores a su punto isoelctrico son capaces de reaccionar con diferentes metales pesados formando los correspondientes proteinados insolubles. Se colocaron en 2 tubos 1mL de solucin de clara de huevo, a uno de ellos se le adicion gota a gota solucin al 5% de sulfato de cobre (II) y al otro tubo solucin al 5% de acetato de plomo, se observ lo que suceda en cada caso, vindose la formacin de proteinados insolubles que se form con cada uno de los metales; es decir se vio en cada tubo de ensayo la formacin de precipitado. y RCHCOOH NH2 + CuSO4 RCHCOONH2 Ca2+ 2 Pb2+ 2

y RCHCOOH NH2

+ (CH3COO-)2Pb

RCHCOONH2

Con respecto al experimento anterior tambin se pudo decir que el pH tiene influencia en el efecto de los metales pesados sobre las protenas; pues dependiendo de qu protena se est tratando, el pH influir para que las protenas estn ms all de su punto isoelctrico, ya que as son capaces de reaccionar con diferentes metales.

2.5 Reaccin Xantoproteica Esta reaccin se debe a la formacin de nitroderivados aromticos por reaccin del cido ntrico sobre los grupos bencnicos que poseen algunos aminocidos como la fenilalanina, la tirosina, y el triptfano. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas protenas que tengan aminocidos aromticos en su molcula Para este experimento se quiso apreciar si la ovoalbmina de la clara de huevo contiene aminocidos aromticos y que segn los resultados mostrados anteriormente en la seccin correspondiente dieron positiva a esta prueba ya que se vio la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando la protena fue tratada con cido ntrico concentrado. NO2 HO CHCOOH 1)HNO3/( CHCOOH Na+O- 2)NaOH NH2 NH2 NO2 La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un alcalino vira a un color anaranjado oscuro. 2.6 Reaccin de Biuret Todas las molculas que contengas 2 o ms uniones peptdicas, por lo tanto todas las protenas y todos los pptidos no menores de 3 unidades, dan positiva a la reaccin de Biuret. El nombre se debe al compuesto biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Cuando una protena o un polipptido se hacen reaccionar con sulfato de cobre en solucin alcalina se produce un color caracterstico prpura o violeta; el color se debe a un complejo que resulta al unirse el cobre con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Esta reaccin nos sirve para diferenciar las protenas y pptidos de los aminocidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrlisis proteica, la reaccin ser negativa cuando la hidrlisis sea completa. Experimentalmente se coloc un 1ml de ovoalbmina en un tubo de ensayo y a este se le adicion 1 mL de solucin al 10% de hidrxido se sodio y varias gotas de solucin al 10% de sulfato de cobre, esta mezcla se agit y se calent luego se vio la aparicin de una coloracin violeta. RCHCOOH NH2 NaOH CuSO4 RCHCOONH2 NH2
-OOCCHR

Cu2+

Con lo anterior se puede decir que esta reaccin est dada solo por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno . 2.7 Reaccin coloreada del formaldehido para protenas: En esta ltima prueba al adicionar las gotas de formaldehido no se observ un cambio notable en la mezcla, al adicionarle las 3 gotas de HSO se form un precipitado blanco. La reaccin se puede ver en la siguiente ecuacin: RCHCOOH + HCHO NH2 H2SO4 RCHCOOH + H2O N=CH2

Esta reaccin se da por la adicin del ataque del grupo amino, este posee electrones libres y a su vez el carbonilo del formaldehido posee una carga positiva, esto provoca que se rompa el doble enlace del carbono con el oxigeno, quedando este con una carga negativa por lo tanto al protonarlo con el cido sale en forma de agua, mientras que el grupo amino se desprende de su protn para formar un doble enlace con el carbono. 3. SOLUCIN AL CUESTIONARIO 3.1 En qu consiste la prueba del milln? Cules protenas dan positivas esta prueba? Cul es la reaccin qumica fundamental? R//. Esta reaccin da positiva con las protenas que contienen el aminocido tirosina. El reactivo de Milln se prepara disolviendo mercurio en cido ntrico y est constituido por una mezcla de nitrato mercrico y nitrito mercurioso. Cuando se calienta este reactivo con una protena que contenga tirosina, como en la clara de huevo de gallina, se forma un precipitado blanco que luego pasa a rojo, rojo parduzco o rojo ladrillo. 3.2 Por qu el cido ntrico colorea la piel de amarillo? Qu sucede en esta reaccin? R//. El cido ntrico concentrado tie la piel humana de amarillo al contacto, debido a una reaccin con la Cistena presente en la queratina de la piel (oxidacin) 3.3 Describa el ensayo de la reaccin coloreada del formaldehido para protenas. R// Los grupos aminos primarios tiene la cualidad de reaccionar favorablemente con el formaldehido, lo cual generara un compuesto cido, que puede ser analizado volumtricamente, teniendo en cuenta que para lograrlo debe utilizarse un indicador adecuado; procediendo de la misma manera que si se estuviese analizando un cido ordinario. Un ensayo que describira la reaccin entre una protena y el formaldehido es el siguiente: Se toman en un tubo de ensayo 0.2mL de la solucin problema (aminocido), a este se le aade una gota de formaldehido diluido, a esta mezcla posteriormente se le adicionada cuidadosamente una solucin de cido sulfrico concentrado, observando la formacin de un precipitado en la parte inferior del tubo;

luego se agita el tubo obteniendo una reaccin en la cual se observa la coloracin del aminocido, la cual obedece a la siguiente reaccin La coloracin producida en esta reaccin puede ser provocada tambin por las combinaciones metilnicas. 3.4 Qu es una protena globular? R//. Las protenas fibrosas tienen misiones estructurales en los organismos y por tanto son muy abundantes y esenciales para el mismo. Sin embargo, la gran mayora de las funciones celulares las llevan a cabo protenas globulares. Su nombre se debe a que sus cadenas polipptdicas se pliegan sobre si misma de manera compacta. La gran variedad de plegamientos diferentes que encontramos en las protenas globulares refleja la variedad de funciones que realizan estas protenas. A pesar de esta enorme variedad de plegamientos podemos encontrar una serie de motivos y principios comunes. La estructura terciaria de una protena es el modo en el cual se pliega la cadena polipetdica. La complejidad que presenta la estructura terciaria de las protenas hace que se distingan subestructuras dentro de sta. En la imagen vemos diferentes representaciones de la estructura terciaria de la mioglobina. 3.5 Qu es el punto isoelctrico de una protena? R//. El punto isoelctrico es el pH al que una sustancia anftera tiene carga neta cero. El concepto es particularmente interesante en los aminocidos y tambin en las protenas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula. Para calcularlo se deben utilizar los pKa.

(Los pKa a considerar para esta ecuacin, en una tabla de pH, son los que contienen a la especie qumica con carga igual a cero, cuando tienen ms de un pKa). Las molculas complejas, tales como las protenas, se combinan con los iones hidrgeno y con otros iones presentes en la disolucin, dando lugar a la carga neta de la molcula. A la concentracin de iones hidrgeno, o al pH, para el cual la concentracin del ion hbrido de una protena es mxima y el movimiento neto de las molculas de soluto en un campo elctrico es prcticamente nulo, se le denomina punto isoelctrico.

3.6 Escriba las frmulas de los siguientes aminocidos: Aminocidos Alanina Estructura lineal-radical C3H7NO2 cido 2aminopropanoico Estructura completa

Leucina

C6H13NO2 cido 2-amino-4metilpentanoico

Valina

C5H11NO2 cido metilbutanoico

2-amino-3-

Prolina

C5H9NO2 cido pirrolidin-2carboxlico C9H11NO2 cido 2-amino-3fenilpropanoico C11H12N2O2 cido 2-amino-3(1H-indol-3-il) propanoico

Fenilalanina

Triptofano

Cisteina

C3H7NO2S cido 2-amino-3sulfanilpropanoico

Arginina

C6H14N4O2 cido 2-amino-5(diaminometilidenoamino) pentanoico C6H9N3O2 cido 2-amino3-(1H-imidazol-4-il) propanoico

Histidina

Tirosina

C9H11NO3 cido 2(S)-ammino3-(4-idrossifenil)propanoi

3.7 Cmo se determina la presencia de azufre en las protenas? R//. Se puede determinar la presencia de aminocidos azufrados por precipitacin; debido a que el NaOH separa al azufre de la cistena y la metionina (aminocidos azufrados que forman parte de la protena albumina) dejando libre a la fraccin azufrada captada por el acetato de plomo; formando un precipitado negruzco. Esta reaccin dar positiva con aquellos aminocidos que presenten azufre en su estructura, como son la cistina, la cistena y la metionina. La rehidrlisis alcalina con hidrxido de sodio. R-SH + 2 NaOH R-OH + Na2S + H2O

De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo Na2S + (CH3-COO)2 Pb 2 CH3-COONa + PbS (precipitado). Al someterse al bao Mara con el hidrxido de sodio se forma una precipitacin lechosa, y al agregar acetato de plomo la precipitacin formada separa la parte azufrada del aminocido para que reacciones con el acetato de plomo y forme un precipitado negruzco, que nos indica la presencia de azufre en la protena. 4. CONCLUSIONES 4.1 Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo, ya que cumple muchas funciones. 4.2 Las protenas estn constituidos por aminocidos, por los cuales los basan en el reconocimiento de los aminocidos. mtodos se

4.3 Al realizar las diferentes pruebas con la albmina, se pudo comprobar experimentalmente que efectivamente se trata de una protena. 4.4 Las protena son sensibles con las sales metlicas pesadas (mercurio, plomo), formando precitados. cobre,

4.5 En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un cambio en el estado fsico de la protena, mientras que en la coagulacin se ha producido un cambio en el estado fsico y en la estructura qumica por eso es irreversible.

4.6 La constante acidez de una protena est dada en realidad por el catin amonio, y la constante basicidad est dada por el anin carboxilato.

5. BIBLIOGRAFA INSUASTY, B. RAMIREZ, A. Prcticas de qumica orgnica en pequea escala. Universidad del Valle, Cali. Pp. 129-133. MORRISON, RT. Qumica orgnica. Editorial Addison-Wesley Iberoamericana. 1996. http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_n%C3%ADtrico (09/11/2010) http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna_globular (09/11/2010) http://es.wikipedia.org/wiki/Punto_isoel%C3%A9ctrico (09/11/2010) http://www.scribd.com/doc/40512891/A-a-Azufrados (09/11/2010)