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BIOMETRIA HEMATICA

OBJETIVOS.

Determinar la cantidad de hemoglobina presente en la sangre.


Determinar el número de eritrocitos presentes en la sangre del paciente.
Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la
sangre.
Identificar el número de leucocitos presentes en la sangre.
Hacer una correcta extensión sanguínea.
Realizar una identificación de los glóbulos blancos.

INTRODUCCION.

La biometría hemática es un auxiliar en el diagnostico y seguimiento de


anemias, leucemias, pacientes con quimioterapias, síndrome febril e
infecciones.

La biometría hemática también denominada hemograma, es uno de los


estudios de rutina de mayor importancia, ya que da información que de
aquí se deriva i nos proporciona una idea muy confiable del estado
general de salud del paciente.

Este estudio consta de varios parámetros

HEMOGLOBINA.

La hemoglobina es una mediada indirecta de la capacidad de transporte


de oxigeno de la sangre.

La sangre se diluye en líquido de Drabkin, que destruye los eritrocitos y


convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina. La solución que se
produce se examina por medio de un espectrofotómetro o un colorímetro.
Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina
que contenga la sangre.

El método fotoeléctrico de la cianometahemoglobina permite hacer los


cálculos más precisos de la cantidad de hemoglobina existentes.

CUENTA DE ERITROCITOS.

El número de eritrocitos contenidos en un litro de sangre se denomina


concetracion de número de eritrocitos. Es difícil lograr determinaciones
precisas de la concentración de número de eritrocitos con una cama para
recuento.

Los eritrocitos se diluyen por medio del líquido para diluir eritrocitos. Los
eritrocitos se cuentan con el microscopio en una cámara para recuento y
se calcula el número por litro.

MICROHEMATOCRITO.

Volumen del paquete globular, después de centrifugación respecto del


volumen sanguíneo total expresado en litros/litros.

El volumen total que ocupan los eritrocitos en un volumen dado de sangre,


dividido entre el volumen de sangre, se denomina fracción de volumen de
eritrocitos.

El resto de sangre se compone de casi completamente de plasma, junto


con una reducida cantidad de glóbulos blancos.

RECUENTO DE LEUCOCITOS.

Constituye una guía muy útil sobre la gravedad de la enfermedad. En


distintos procedimientos, se observa patrones específicos de las respuestas
leucocitarias.

La concentración de leucocitos es el número de ellos que se encuentra en


un litro de sangre

La sangre se deposita en un líquido para diluir leucocitos (türk), que:

-destruye los eritrocitos y deja intacto a los glóbulos blancos.

FROTIS SANGUINEO.

La extensión se prepara repartiendo uniformemente una gota pequeña de


sangre sobre un portaobjetos de manera que solo se deposite uan acapa
de células.

Después de teñirlas, las extensiones se sangre se utilizan para.

- Determinar las fracciones de número de los tipos de leucocitos.


- Para detectar glóbulos rojos anormales
- Identificar ciertos parásitos.
TINCIONES (Wright y Giemsa)

Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos


de oxidación, así como eosina Y. La acción combinada de estos
colorantes produce el efecto de Romanowsky y da una coloración
purpúrica a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrófilos y de
color rosado a los eritrocitos. Los componentes principales causantes de
este efecto son el azul B (un producto de oxidación del azul de metileno) y
la eosina Y. La amplia variación en los colores y sombras observadas con la
tinción de Romanowsky permiten distinciones sutiles de las características
celulares.

La naturaleza ácida o básica de las estructuras celulares determina su


avidez por los componentes del colorante policromático de Wright; es así
como los ácidos nucleicos se tiñen con azul B que es el básico y la
hemoglobina con la eosina Y que es ácida. Otras estructuras se tiñen por
una combinación de ambos y se denominan neutrófilas.

La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis


sanguíneos y otro tipo de muestras biológicas

Permite la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y


concretamente de uniones A-T.

Esto permite distinguir perfectamente al microscopio núcleo celular

Los índices eritrocitarios son aquellos q se miden el tamaño y su contenido


de hemoglobina, su utilidad extrema es para clasificar eritrocitos, se basan
en las mediciones de la hemoglobina, el numero de eritrocitos y el
hematocrito.

MATERIAL

Tubos de ensaye de 13X100


Pipetas de 1 y 5 ml
Pipeta de shally (0.02ml)
Pipeta de Thoma para globulos rojos y blancos
Cámara de Neubauer
Tubo de Witrobe graduado
Tubos capilares
Porta y cubreobjetos
Papel parafilm
Cerillos
Guantes
Gasas
Gradilla

Instrumentos.

Microscopio
Agitador de pipetas
Espectofotometro
Centrifuga
Lector de hematocrito

Reactivos.

Liquido de Türk
Etanol al 70%
Liquido de Hayem
Reactivo de Drabkin
Solución estantard de cianometahemoglobulina

DESARROLLO:

A). Hemoglobina

1. En un tubo de ensaye agregue 4 ml de cianometahemoglobina y


0.02 ml de sangre, agitar cuidadosamente. Reposar 10 minutos y leer
la absorbancia o el % de transmitancia contra el blanco reactivo.

B). cuenta de eritrocitos.

1. Llenar con sangre bien mezclada, la pipeta de Thoma hasta la


marca 0.5
2. Limpiar cuidadosamente la parte externa de la pipeta, completar
con el líquido de Hayem, hasta la marca de 101.
3. Sellar con papel parafilm, agitar durante 3 minutos, mezclar
perfectamente.
4. Colocar el cubrehematimetro sobre la cámara.
5. Descartar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cámara por
capilaridad por uno de los bordes del cubrehematimetro sobre la
cámara.
6. Dejar reposar de 3-5 minutos., con el objetivo de 40x se cuentan los
eritrocitos contenidos en los 80 cuadros pequeños.

C). Microhematocrito.

1. Se llena con sangre proveniente del tubo de la muestra, las 2/3


partes de dos tubos capilares.
2. El extremo vacio de cierra con la flama o plastilina.
3. Colocar en los canales de centrifuga, con el extremo cerrado
dirigido hacia fuera, centrifugar a 12000 rpm por 5 minutos.

D). Leucocitos.

1. Homogenizar la sangre, con la pipeta de toma para glóbulos


blancos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5, secar
cuidadosamente la parte superior de la pipeta.
2. Completar con líquido de Türk hasta la marca 11, agitar 2 minutos.
3. Desechar las primeras 4-5 gotas y se carga la cámara de Neubauer.
4. Dejar reposar la cámara con la muestra durante 3 minutos. Observar
al microscopio con el objetivo de 10x.
5. Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadrados de 1 mm2
de las esquinas de la cámara.

E). Frotis sanguíneo.

1. Se coloca un agita de sangre anticoagulada en uno de los extremos


de un portaobjetos, se sujeta colocando pulgar e índice en extremos
opuestos, con un segundo portaobjetos se toca la gota de sangre y
por capilaridad difunde, en un ángulo de 30° se desliza rápida y
firmemente en la dirección opuesta.

F). Tinción de Wright

1. En el soporte de tinción se coloca el frotis en posición horizontal


2. Se le añade colorante de Wright, sobre el frotis de manera que
quede todo cubierto con el colorante. Se deja actuar durante 2 min.
3. Agregar sol. Amortiguadora, de manera que se forme una capa
metálica, con una pipeta soplar para que la muestra sea uniforme,
se deja la muestra durante 3-6 minutos.
4. Se lava la tinción con agua corriente y se dejas secar.

G). Tinción de Giemsa.

1. Colocar el frotis en el soporte de tinción, fijar el frotis con metanol de


de 10-20 minutos.
2. Se cubre el frotis con el colorante de Giemsa y 10 ml de
amortiguador de fosfatos por 30 min.
3. Se lava la tinción con agua corriente y el frotis se seca al aire libre.
4. Se observa al microscopio con el objetivo de 40x.

H). Índices eritrocitarios.

Se calculan cada uno de los índices.


RESULTADOS

Cuenta eritrocitaria

Cálculos:

Formula Sustitución Resultado


Nx200x10x400 184x200x10x400
1,840,000
80 80

Cuenta Eritrocitaria
Valores de Referencia Resultado Obtenido
Hombres Mujeres
1.84 x106 /mm3
4.5 – 6.1x106 /mm3 4.0 – 5.3x106 /mm3

Hematocrito:

Cálculos:

Hematocrito
Valores de Referencia Resultado Obtenido
Hombres Mujeres
28%
40.7 – 50.3% 36.1 – 44.3%

HEMOGLOBINA

Cálculos:

Formula Sustitución Resultado


Absorbancia x Standard = g/dL 0.23 x 36.7 8.4

Hemoglobina
Valores de Referencia Resultado Obtenido
Hombres Mujeres
8.4 g/dL
12 – 18 g/dL 12.1 – 15.1 g/dL
CUENTA LEUCOCITARIA

Cálculos:

Formula Sustitución Resultado


Nx20(dilución)x10(conc. de altura) 208x20x10
10,400
4 4

Cuenta Leucocitaria
Valores de Referencia Resultado Obtenido
Hombres Mujeres
10.4x103 cel/mm3
4,000 – 10,000 cel/mm3 4,000 – 10,000 cel/mm3

Cuenta Diferencial
Células
Campos Linfocitos Monocitos Eosinofilos Basofilos Neutrofilos Neutrofilos
segmentados en Banda
1 2 1 1 0 4 0
2 2 0 1 1 5 1
3 1 1 0 0 5 0
4 2 0 0 1 4 1
5 3 1 1 0 5 0
6 2 1 0 1 5 0
7 2 0 0 0 5 1
8 2 1 0 0 5 0
9 2 1 1 1 5 0
10 2 2 0 0 5 1
Total 20 8 4 4 48 4

Valores de Referencia
Células Porcentaje
Neutrofilos Segmentados 50 – 70%
Neutrofilos en Banda 0 – 2%
Basofilos 0 – 2%
Eosinofilos 0 – 4%
Linfocitos 20 – 40%
Monocitos 2 – 10%
Indices eritrocitarios

VCM
(Volumen Corpuscular Medio)

Valores de Referencia Indica


80 – 100 Fl Anemia Normocitica
Menos de 80 Fl Anemia Microcitica
Mayor de 100Fl Anemia Macrocitica

Formula Sustitución Resultado


Hematocrito / Cuenta Eritrocitaria x 10 28% / 1.84 x106 /mm3 x
152.17 Fl
= Fl 10

HCM
(Hemoglobina Corpuscular Media)

Valores de Referencia Indica


27 – 31 Pg Anemia Normocromica
Menor de 27 Pg Anemia Hipocromica
Mayor de 31 Pg Anemia Hipercromica

Formula Sustitución Resultado


Hemoglobina / Cuenta Eritrocitaria x 8.4 g/dL / 1.84 x106 /mm3
45.6 Pg
10 = Pg x 10

CHCM
(Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media)

Valor de Referencia
31 – 36 g/dL

Formula Sustitución Resultado


Hemoglobina / Hematocrito x 100 = g/dL 8.4 g/dL / 28% x 100 30 g/dL