BIOMETRIA HEMATICA
OBJETIVOS. Determinar la cantidad de hemoglobina presente en la sangre. Determinar el número de eritrocitos presentes en la sangre del paciente. Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la sangre. Identificar el número de leucocitos presentes en la sangre. Hacer una correcta extensión sanguínea. Realizar una identificación de los glóbulos blancos. INTRODUCCION. La biometría hemática es un auxiliar en el diagnostico y seguimiento de anemias, leucemias, pacientes con quimioterapias, síndrome febril e infecciones. La biometría hemática también denominada hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que da información que de aquí se deriva i nos proporciona una idea muy confiable del estado general de salud del paciente. Este estudio consta de varios parámetros HEMOGLOBINA. La hemoglobina es una mediada indirecta de la capacidad de transporte de oxigeno de la sangre. La sangre se diluye en líquido de Drabkin, que destruye los eritrocitos y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina. La solución que se produce se examina por medio de un espectrofotómetro o un colorímetro. Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre. El método fotoeléctrico de la cianometahemoglobina permite hacer los cálculos más precisos de la cantidad de hemoglobina existentes. CUENTA DE ERITROCITOS. El número de eritrocitos contenidos en un litro de sangre se denomina concetracion de número de eritrocitos. Es difícil lograr determinaciones
precisas de la concentración de número de eritrocitos con una cama para recuento. Los eritrocitos se diluyen por medio del líquido para diluir eritrocitos. Los eritrocitos se cuentan con el microscopio en una cámara para recuento y se calcula el número por litro. MICROHEMATOCRITO. Volumen del paquete globular, después de centrifugación respecto del volumen sanguíneo total expresado en litros/litros. El volumen total que ocupan los eritrocitos en un volumen dado de sangre, dividido entre el volumen de sangre, se denomina fracción de volumen de eritrocitos. El resto de sangre se compone de casi completamente de plasma, junto con una reducida cantidad de glóbulos blancos. RECUENTO DE LEUCOCITOS. Constituye una guía muy útil sobre la gravedad de la enfermedad. En distintos procedimientos, se observa patrones específicos de las respuestas leucocitarias. La concentración de leucocitos es el número de ellos que se encuentra en un litro de sangre La sangre se deposita en un líquido para diluir leucocitos (türk), que: -destruye los eritrocitos y deja intacto a los glóbulos blancos. FROTIS SANGUINEO. La extensión se prepara repartiendo uniformemente una gota pequeña de sangre sobre un portaobjetos de manera que solo se deposite uan acapa de células. Después de teñirlas, las extensiones se sangre se utilizan para. Determinar las fracciones de número de los tipos de leucocitos. Para detectar glóbulos rojos anormales Identificar ciertos parásitos.
TINCIONES (Wright y Giemsa) Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y. La acción combinada de estos colorantes produce el efecto de Romanowsky y da una coloración purpúrica a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrófilos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes principales causantes de este efecto son el azul B (un producto de oxidación del azul de metileno) y la eosina Y. La amplia variación en los colores y sombras observadas con la tinción de Romanowsky permiten distinciones sutiles de las características celulares. La naturaleza ácida o básica de las estructuras celulares determina su avidez por los componentes del colorante policromático de Wright; es así como los ácidos nucleicos se tiñen con azul B que es el básico y la hemoglobina con la eosina Y que es ácida. Otras estructuras se tiñen por una combinación de ambos y se denominan neutrófilas. La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos y otro tipo de muestras biológicas Permite la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente al microscopio núcleo celular
Los índices eritrocitarios son aquellos q se miden el tamaño y su contenido de hemoglobina, su utilidad extrema es para clasificar eritrocitos, se basan en las mediciones de la hemoglobina, el numero de eritrocitos y el hematocrito.
MATERIAL Tubos de ensaye de 13X100 Pipetas de 1 y 5 ml Pipeta de shally (0.02ml) Pipeta de Thoma para globulos rojos y blancos Cámara de Neubauer
Tubo de Witrobe graduado Tubos capilares Porta y cubreobjetos Papel parafilm Cerillos Guantes Gasas Gradilla Instrumentos. Microscopio Agitador de pipetas Espectofotometro Centrifuga Lector de hematocrito Reactivos. Liquido de Türk Etanol al 70% Liquido de Hayem Reactivo de Drabkin Solución estantard de cianometahemoglobulina
DESARROLLO: A). Hemoglobina 1. En un tubo de ensaye agregue 4 ml de cianometahemoglobina y 0.02 ml de sangre, agitar cuidadosamente. Reposar 10 minutos y leer la absorbancia o el % de transmitancia contra el blanco reactivo. B). cuenta de eritrocitos. 1. Llenar con sangre bien mezclada, la pipeta de Thoma hasta la marca 0.5 2. Limpiar cuidadosamente la parte externa de la pipeta, completar con el líquido de Hayem, hasta la marca de 101.
3. Sellar con papel parafilm, agitar durante 3 minutos, mezclar perfectamente. 4. Colocar el cubrehematimetro sobre la cámara. 5. Descartar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematimetro sobre la cámara. 6. Dejar reposar de 3-5 minutos., con el objetivo de 40x se cuentan los eritrocitos contenidos en los 80 cuadros pequeños. C). Microhematocrito. 1. Se llena con sangre proveniente del tubo de la muestra, las 2/3 partes de dos tubos capilares. 2. El extremo vacio de cierra con la flama o plastilina. 3. Colocar en los canales de centrifuga, con el extremo cerrado dirigido hacia fuera, centrifugar a 12000 rpm por 5 minutos. D). Leucocitos. 1. Homogenizar la sangre, con la pipeta de toma para glóbulos blancos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5, secar cuidadosamente la parte superior de la pipeta. 2. Completar con líquido de Türk hasta la marca 11, agitar 2 minutos. 3. Desechar las primeras 4-5 gotas y se carga la cámara de Neubauer. 4. Dejar reposar la cámara con la muestra durante 3 minutos. Observar al microscopio con el objetivo de 10x. 5. Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadrados de 1 mm2 de las esquinas de la cámara. E). Frotis sanguíneo. 1. Se coloca un agita de sangre anticoagulada en uno de los extremos de un portaobjetos, se sujeta colocando pulgar e índice en extremos opuestos, con un segundo portaobjetos se toca la gota de sangre y por capilaridad difunde, en un ángulo de 30° se desliza rápida y firmemente en la dirección opuesta. F). Tinción de Wright 1. En el soporte de tinción se coloca el frotis en posición horizontal
2. Se le añade colorante de Wright, sobre el frotis de manera que quede todo cubierto con el colorante. Se deja actuar durante 2 min. 3. Agregar sol. Amortiguadora, de manera que se forme una capa metálica, con una pipeta soplar para que la muestra sea uniforme, se deja la muestra durante 3-6 minutos. 4. Se lava la tinción con agua corriente y se dejas secar. G). Tinción de Giemsa. 1. Colocar el frotis en el soporte de tinción, fijar el frotis con metanol de de 10-20 minutos. 2. Se cubre el frotis con el colorante de Giemsa y 10 ml de amortiguador de fosfatos por 30 min. 3. Se lava la tinción con agua corriente y el frotis se seca al aire libre. 4. Se observa al microscopio con el objetivo de 40x. H). Índices eritrocitarios. Se calculan cada uno de los índices.
RESULTADOS Cuenta eritrocitaria
Cálculos:
Formula Nx200x10x400 80
Sustitución 184x200x10x400 80
Resultado 1,840,000
Cuenta Eritrocitaria Valores de Referencia Hombres Mujeres 4.5 – 6.1x106 /mm3 4.0 – 5.3x106 /mm3
Resultado Obtenido 1.84 x106 /mm3
Hematocrito:
Cálculos:
Hematocrito Valores de Referencia Hombres Mujeres 40.7 – 50.3% 36.1 – 44.3% HEMOGLOBINA Cálculos:
Resultado Obtenido 28%
Formula Sustitución Resultado Absorbancia x Standard = g/dL 0.23 x 36.7 8.4 Hemoglobina Valores de Referencia Hombres Mujeres 12 – 18 g/dL 12.1 – 15.1 g/dL
Resultado Obtenido 8.4 g/dL
CUENTA LEUCOCITARIA Cálculos: Formula Sustitución Resultado Nx20(dilución)x10(conc. de altura) 208x20x10 10,400 4 4
Cuenta Leucocitaria Valores de Referencia Hombres Mujeres 4,000 – 10,000 cel/mm3 4,000 – 10,000 cel/mm3
Resultado Obtenido 10.4x103 cel/mm3
Cuenta Diferencial Células Campos Linfocitos Monocitos Eosinofilos Basofilos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Total 2 2 1 2 3 2 2 2 2 2 20 1 0 1 0 1 1 0 1 1 2 8 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 4 0 1 0 1 0 1 0 0 1 0 4
Neutrofilos Neutrofilos segmentados en Banda 4 0 5 1 5 0 4 1 5 0 5 0 5 1 5 0 5 0 5 1 48 4
Valores de Referencia Células Porcentaje Neutrofilos Segmentados 50 – 70% Neutrofilos en Banda 0 – 2% Basofilos 0 – 2% Eosinofilos 0 – 4% Linfocitos 20 – 40% Monocitos 2 – 10%
Indices eritrocitarios VCM (Volumen Corpuscular Medio) Valores de Referencia 80 – 100 Fl Menos de 80 Fl Mayor de 100Fl Indica Anemia Normocitica Anemia Microcitica Anemia Macrocitica
Formula Hematocrito / Cuenta Eritrocitaria x 10 = Fl
Sustitución 28% / 1.84 x106 /mm3 x 10
Resultado 152.17 Fl
HCM (Hemoglobina Corpuscular Media) Valores de Referencia 27 – 31 Pg Menor de 27 Pg Mayor de 31 Pg Indica Anemia Normocromica Anemia Hipocromica Anemia Hipercromica
Formula Hemoglobina / Cuenta Eritrocitaria x 10 = Pg
Sustitución Resultado 8.4 g/dL / 1.84 x106 /mm3 45.6 Pg x 10
CHCM (Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media) Valor de Referencia 31 – 36 g/dL
Formula Sustitución Resultado Hemoglobina / Hematocrito x 100 = g/dL 8.4 g/dL / 28% x 100 30 g/dL
