2 ESCUELA DE NANOMEDICINAS

1er SIMPOSIO LATINOAMERICANO DE NANOMEDICINAS

da

25-29 Octubre 2010, La Plata, Buenos Aires, Argentina

Libro de resmenes

Comit Comit Organizador y Cientfico Dra. Eder Romero

Universidad Nacional de Quilmes

Dr. Alejandro Sosnik

Universidad Nacional de Buenos Aires

Dra. Laura Hermida

Instituto Nacional de Tecnologa Industrial

Dra. Maria Jose Morilla

Universidad Nacional de Quilmes Asociacin Argentina de Nanomedicina

Indice
Parte I, Programa 3 Parte II, Curriculum Vitae Bilmes, Sara Carrer, Dolores Foldvari, Marianna Hallberg, Karen Hermida, Laura Kogan, Marcelo Lisziewicz, Julianna Lori, Franco Martinelli, Marisa 9 9 9 10 10 10 11 11 11 Morilla, Maria Jose Raffin Pollhman, Adriana Romero, Eder Roncaglia, Diana Santos Magalhares, Neride Sosnik, Alejandro Uchegbu, Igeoma Winik, Beatriz Ybarra, Gabriel 12 12 12 13 13 14 14 15 15

Parte III, Resmenes de exposiciones Bilmes, Sara Carrer, Dolores Hallberg, Karen Hermida, Laura Kogan, Marcelo Lisziewicz, Julianna Lori, Franco Morilla, Maria Jose
er

19 22 24 16 21 18 18 16, 23

Perez, Ana Paula Raffin Pollhman, Adriana Romero, Eder Roncaglia, Diana Santos Magalhares, Neride Sosnik, Alejandro Ybarra, Gabriel

17 19 16, 17,18, 23 17 20, 22 21, 22, 23 17

Parte IV, 1 Simposio Latinoamericano de Nanomedicinas, Resmenes de trabajos Aldana, AG Alexandrino, GL Bender, EA Calderini, A Colom, LM Cortez, ML Cuestas, ML Devis-Ruiz, S Dicelio, LE Flor, S Gndola, Y Garaicoechea, L Gonzalez, MC Herrera, B Higa, LH Langenheim, ME Lecot, N Martins, MH Medeiros de Quadros Barbosa, L Moretton, MA Morhell, N Perez, AP Pickholz, M Pio Santos, AC Policastro, L Santiago, RR Schilrreff, P Silva, AL Soto Castro, D Uchiyama, MK Valduga, CJ Zamit, AL Zapata-Urza, C 32 47 29 41 34 42 28 38 46 33 49 32 36 45, 48 42 40

25 30 28 26 44 35 31 39 39 38 46 50 40 37 43 27 49

PARTE I PROGRAMA
Lunes 25 de Octubre
8.00-8.45 8.45-9.00 Acreditacin Introduccin- Dra Eder Romero Programa Nanomedicinas (PNM), Universidad Nacional de Quilmes (UNQ), Argentina Liposomas: Generalidades estructurales y mtodos de preparacin- Dra MJ Morilla, PNM, UNQ Nanopartculas Lipdicas slidas: Generalidades estructurales y mtodos de preparacin- Dra EL Romero, PNM, UNQ

9.00-9.45

9.45-10.30

10.30-10.45 10.45-11.30

Caf
Dendrmeros, la cuarta generacin de los materiales. Caractersticas estructurales. Multivalencia- Dra. Marisa Martinelli, Dpto. Qumica Orgnica Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Nacional de Crdoba

11.30-12.15 Determinacin de parmetros estructurales, tamao en el rango nanomtrico y Potencial Z- Dra L Hermida, Unidad Operativa de Liberacin Controlada Instituto Nacional de Tecnologa Industrial (INTI), Argentina 12.15-14.00 14.00-14.45

Almuerzo
Espectrometra de masas: determinacin macromolculas - Dra. DI Roncaglia, PNM, UNQ estructural de lpidos y

14.45-15.30 Microscopa de fuerza atmicaArgentina 15.30-15.45

Dr G Ybarra, Centro de Nanoscopas, INTI,

Caf

15.45- 17.00 Microscopa electrnica de transmisin y barrido - Dra B Winik, Centro Integral de Microscopia Electrnica, Tucumn, Argentina 17.00-18.00 Aspectos experimentales (grupos de discusin y tips experimentales) Parte I. Separacin de principios activos, cuantificacin y determinacin de tamao- Lic Higa, PNM, UNQ

Martes 26 de Octubre
9.00-9.45 Vas de administracin y biodistribucin de nano-objetos- Dra EL Romero, PNM, UNQ Trafico intracelular de nano-objetos- Lic. AP Perez, PNM, UNQ

9.45-10.30 10.30-10.45

Caf

10.45-11.30 Nano-vacunas: aplicaciones humanas y veterinarias- Dra EL Romero, PNM, UNQ 11.30-12.15 Nano-toxicidad- Dra EL Romero, PNM, UNQ 12.15-14.00 14.00-14.45

Almuerzo
Novel biomaterials to build nanomedicines: characterization, formulation and testing- Dra M Foldvari, Canada Research in Biotechnology and Nanomedicine, School of Pharmacy, University of Waterloo, Canad Microscopia electrnica de transmisin y barrido aplicadas al estudio de la ultraestructura de la piel- Dra B Winik

14.45-15.30

15.30-15.45

Caf

15.45-18.00 Aspectos experimentales (grupos de discusin y tips experimentales) Parte II. Ensayos de citotoxicidad y determinacin de estrs oxidativo-Lic AP Perez, PNM, UNQ Parte III. Pasaje transepitelial de nano-objetos en el modelo de barrera epitelial de clulas Caco-2- Lic P Schilrreff, PNM, UNQ

Mircoles 27 de Octubre
9.00-9.45 Dermal and transdermal drug delivery systems for macromolecules Dra M Foldvari DermaVir Therapeutic HIV Vaccine: Synthetic Nanomedicine Formulation, dendritic cell-targeted, topical administration and Phase II clinical data- Dra J Lisziewicz, Chief Executive Officer of Genetic Immunity

9.45-10.30

10.30-10.45

Caf

10.45-11.30 Development and validation of a lymph node-targeting medical device (DermaPrep) for topical pDNA nanomedicine vaccine administration Franco Lori MD Chief Executive Officer of ViroStatics 11.30- 12.15 Polymeric nanoparticles for topical dermatological applications- Dra A Raffin Pollhman, Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Brasil 12.15-14.00 14.00-14.45

Almuerzo
Nanopartculas en cosmtica- Dra S Bilmes, Nanoqumica y sistemas complejos, INQUIMAE, Universidad Nacional de Buenos Aires (UBA), Argentina Lipid-core nanocapsules: innovative drug carrier systems- Dra A Raffin Pollhman, UFRGS

14.45-15.30

15.30-15.45

Caf

15.45-16.30 Liposomas antimicobacterianos- Dra NS Santos Magalhes, Grupo de Sistemas de Liberacao Controlada de Medicamentos, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil

16.30-18.00

Aspectos experimentales (grupos de discusin y tips experimentales) Parte IV. Penetracin trascutnea de nanopartculas empleando el modelo de Saarbrcken - Dr J Montanari, PNM, UNQ

Jueves 28 de Octubre
9.00-9.45 Nanopartculas de oro funcionalizadas con pptidos para el diagnstico y terapia de enfermedades neurodegenerativas -Dr M Kogan, Centro para la Investigacin interdisciplinaria en Ciencias de los Materiales, Universidad de Chile, Santiago, Chile Micelas polimricas- Dr A Sosnik, Facultad de Farmcia y Bioqumica (FFyB), The Group of Biomaterials and Nanotechnology for Improved Medicines (BIONIMED), UBA

9.45-10.30

10.30-10.45 10.45-11.30

Caf
Exploiting nanotechnology to deliver drugs across biological barriers - cell membranes, gut epithelial and the blood brain barrier- Dra I Uchegbu, Science Secretary of the Controlled Release Society (CRS), School of Pharmacy, University of London, United Kingdom Delivering Nucleotide Therapeutics to Tumours - New Cancer Treatments- Dra I Uchegbu

11.30-12.15

12.15-14.00 14.00-14.45

Almuerzo
Microscopa de dos fotones: penetracin de liposomas ultraflexibles- Dra D Carrer, Instituto Ferreyra, INIMEC - CONICET, Crdoba

14.45-15.30 Nanotecnologa aplicada a enfermedades desatendidas: 1. Malaria- Dra NS Santos Magalhes, Pernambuco, Brasil 15.30-15.45 15.45-16.30

Caf
2. HIV- Dr A Sosnik, BIONIMED, FFyB, UBA

16.30-17.15 3. Tuberculosis- Dr A Sosnik, FFyB, UBA 17.15-18.00 4. Chagas- Dra EL Romero, PNM, UNQ

18.00-18.45 5. Leishmaniasis- Dra MJ Morilla, PNM, UNQ

Viernes 29 de Octubre

1er Simposio Latinoamericano de Nanomedicinas

8.30-9.15 Conferencia: tica en nanotecnologa con aplicaciones a la salud humana Dra K Hallberg, Miembro del Consejo Directivo de las Conferencias Pugwash para Ciencia y Asuntos Mundiales. Centro Atmico Bariloche, Argentina.

El comit cientfico seleccionar trabajos para conformar un Captulo especial de la revista Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine (IF: 5,4):

Nanomedicines in Latin America

Seccin 1: Nano y micro partculas polimricas Chair: MJ Morilla 9.30-9.40 Obtencin de microesferas de quitosano modificadas con molculas dendrticas de primera generacin. Aldana AA, Strumia MiC y Martinelli M (Argentina) Preparation and characterization of PLGA nanospheres, containing 5-Fluorouracil, coated with Folic acid and Chitosan for targeted drug delivery. Calderini A and Pessine
FBT (Brasil)

9.40-9.50

9.50-10.00

Nanopartculas de quitosano para la encapsulacin de drogas: Potenciales aplicaciones en tuberculosis. Langenheim ME, Chiappetta DA, Moretton MA, das Neves J
A, Sarmento B, Sosnik A (Argentina)

10.00-10.10 Poly-epsilon-caprolactone/chitosan nanoparticles: physicochemical characterization, blood compatibility and potential application as active vectorization system. Bender
EA, Adorne MD, Abdalla DSP, Guterres SS, Pohlmann AR (Brasil)

10.10-10.20 Insights into polymeric cellulose acetate as carrier for a copper-sulindac metallodrug.
Pio Santos AC, Costa IM, de Oliveira Silva D (Brasil).

10.20-10.40

Caf

Seccin 2: Nanopartculas polimricas Chair: L Hermida 10.40-10.50 Aspectos Moleculares de la Nanoencapsulacin de Rifampicina en Micelas Polimricas de Tipo Flor. Moretton MA, Chiappetta DA, Sosnik A (Argentina)

10.50-11.00 Encapsulation of Thiabendazole in -cyclodextrin: spectroscopic characterization and theoretical calculations. Alexandrino GL and Pessine FBT (Brasil) 11.00-11.10 Poloxaminas, superfamilia de transportadores ABC y su rol para optimizar la farmacoterapia. Cuestas ML, Mathet VL, Sosnik A (Argentina). 11.10-11.20 Preparation and characterization of dapsone inclusion complex in eta-cyclodextrin.
Martins MH, Calderini A and Pessine FBT (Brasil)

11.20-11.30 Sntesis de nuevos dendrmeros no citotxicos como potenciadores de la solubilidad de frmacos. Soto Castro D, Cruz Morales JA, Ramrez Apan MT y Guadarrama Acosta P
(Mxico)

11.30-11.40

Nanotoxicidad y transcitosis de megameros sobre un modelo de clulas Caco-2.

Schilrreff P, Romero EL, Morilla MJ (Argentina)

11.40-11.50 Trfico intracelular de dendriplex de siRNA en clulas de glioblastoma. Perez AP,

Cosaka L, Romero EL, Morilla MJ (Argentina)

12.00-13.40 Almuerzo Seccion 3: Nanopartculas aplicadas al diagnstico y desarrollo de nano- aparatos Chair: A Sosnik 13.40-13.50 Determinacin electroqumica de dopamina utilizando nanotubos de carbono dispersos en una matriz polialilamina/dodecilsulfato. Cortez ML, Cukierman AL,
Battaglini F (Argentina)

13.50-14.00 Nanobiomaterials and Its Applications on Diagnostic Diseases. Uchiyama MK, Araki K,
Colli W, Alves MJM (Brasil)

14.00-14.10 Sntesis de nanopartculas esfricas magnticas para bioaplicaciones. Herrera B, Silva

N, Moris S, Jara P y Kogan M (Chile)

14.10-14.20 Caracterizacin de la unin de nanotubos de carbono a protenas y oligonucletidos para su aplicacin en la fabricacin de nanobiosensores. Tropper I, Cerda MB,
Villagrasa L, Lerner B, Prez M, Boselli A, Lamagna A, Durn H, Policastro L (Argentina)

14.20-14.30

Desarrollo de sistemas nanoestructurados utilizados en la tecnologa analtica aplicados al diagnstico y monitoreo de distintas patologas. Flor S, Contin M, Tripodi V,
Lucangioli S (Argentina)

14.30-14.40 Nanocomposito Laminar TiO2/cido Esterico Funcionalizado con Quitosano. DevisRuiz S, Lpez-Cabaa Z, Mauro L, Gonzlez G (Chile)

14.40-14.50 14.50-15.00

Fotosensibilizadores en nanopartculas magneticas polimricas. Diz VE, Piol MN,

Verrengia Guerrero NR, Zysler R, Awruch J y Dicelio LE (Argentina)

Irradiacin de Nanopartculas de Silicio con rayos X: Generacin de Especies reactivas en suspensin acuosa y en cultivos celulares de Glioma C6. Gara PMD,
Garabano NI, Llansola Portoles MJ, Dodat D, Casas OR, Gonzalez MC, Kotler M L (Argentina).

15.00-15.10 Conjugacin de compuestos bioactivos a nanopartculas de oro para mejorar sus propiedades biofarmacuticas. Kogan MJ, Zapata-Urza C, lvarez A, Nez L, Adura C,
Guerrero S, Meneses A, Lavilla R, Salazar R (Chile)

15.10-15.20 Desarrollo de un microviscosmetro de sangre para usos clnicos. Morhell N y Pastoriza

H (Argentina)

15.20-15.40 Caf Seccion 4: Nanopartculas lipdicas Chair: E Romero 15.40-15.50 Local Anesthetics-Phospholipid Membranes Interactions by Molecular Dynamics Simulations. Pickholz M (Argentina) 15.50-16.00 Improving delivery of nanovehicles by decorating with CPPs or targeting moieties.
Zamit AL, Pappalardo JS, Salmaso S, Toniutti M, Musacchio T, Levchenko TS, Torchilin VP (Argentina)

16.00-16.10 Arqueosomas ultradeformables: nuevos agentes para nanovacunacin tpica. Higa

LH, Schilrreff P, Roncaglia DI, Morilla MJ, Romero EL (Argentina).

16.10-16.20 Antioxidant activity evaluation of idebenone loaded-theospheres intended to topical application. Colom LM, Klkamp IC, Bender EA, Santos GS, Pohlmann AR, Guterres SS
(Brasil)

16.20-16.30

Lipid nanoemulsion as a vehicle for a lipophilic curcumin derivative. Santos MA, Gonalves ID, Rocha OV, Pardi PC, Guerrieri BC, Marques AS, Magalhes C, Mendes WK, Valduga CJ (Brasil) Anlisis biolgico de sistemas nanomtricos para vehiculizacin de siRNA constituidos por lecitina. Gndola Y, Prez S, Carlucci A, Bregni C, Gonzlez L (Argentina)

16.30-16.40

16.40-16.50 Sesame oil emulsions: development and physicochemical characterization. Santiago

RR, Silva KGH, Silva KS, Silva KCH, Egito EST (Brasil)

16.50-17.00 Interference on the shaping of the Candida spp biofilms by Amphotericin Bmicroemulsion system. Medeiros de Quadros Barbosa L, Pires RH, Lima da Silveira W L,
Mendes Giannini MJ, Egito EST (Brasil)

17.00-17.10 In vitro activity of miltefosine plus itraconazole-loaded lipid-based nanoemulsion against L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi. Bitencourt JJG, Medeiros AC, Santos MR
M, Marques AS, Guerrieri BC, Santos MA, Mendes WK, Valduga CJ (Brasil)

17.10-17.20

177

Lu DTPA-Liposomas como nanosistemas para terpia de cancer. Lecot N, Cabrera

M, Fernndez M, Cabral P (Uruguay)

17.20-17.30 Influencia del cambio de la fase de incorporacin de estearilamina en el procceso de complejacin del ADN por nanoemulsin catinica. Verssimo LM, Silva ALA-JF, AgnezLima LF, Egito EST (Brasil)

17.30-17.40 Nanoanticuerpos VHH dirigidos contra antgenos virales. Garaicoechea L, Barbieri E,

Asenzo G, Zamit A, Wigdorovitz A y Parreo V. (Argentina)

18.00 CIERRE

PARTE II Currculum Vitae

Sara Bilmes Aldabe
y es Investigadora asistente de CONICET en Instituto Ferreyra, INIMEC - CONICET, Crdoba. Ha publicado sus trabajos en revistas como Journal of Controlled Release, Langmuir y Soft Matter. Sus areas de inters son: el estudio de la interaccin lpido-protena en la membrana plasmtica de clulas en cultivo, la reconstitucin de protenas de membrana en sistemas modelo y la construccin de superficies funcionarizadas.

La Dra Aldabe Bilmes es profesora titular del departamento de Qumica Inorgnica, Analtica y Qumica Fsica (DQIAQF) e investigadora principal del CONICET en el Instituto de Qumica de Materiales Medio Ambiente y Energa (INQUIMAE), ambos en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (FCEN) de la Universidad de Buenos Aires (UBA). Obtuvo los ttulos de Lic. en Cs Qumicas (FCEN-UBA, 1977) y Dra en Cs Qumicas de la misma universidad (1982). Realiz su trabajo de tesis bajo la supervisin de A.J. Arva en INIFTA, La Plata donde continu trabajando en temas de electrocatlisis hasta 1987. Realiz estudios posdoctorales en la Universidad de Dusseldorf (1987-1989) incorporndose en 1989 al DQIAQF como investigadora y docente. Desde entonces ha llevado adelante proyectos en sntesis, caracterizacin y propiedades de xidos y calcogenuros con aplicaciones a fotocatlisis, fotoelectrocatlisis, sensores y al diseo de materiales con actividad biolgica. Ha dictado y organizado escuelas, talleres y cursos de posgrado y dirigido numerosos estudiantes, pasantes e investigadores entre los cuales 6 concluyeron su tesis doctoral con la mas alta calificacin. Es coautora de ms de 50 artculos en revistas internacionales con referato, captulos de libros as como de dos libros de texto y material de divulgacin. Ha realizado actividades de transferencia tecnolgica y participado en proyectos de extensin con empresas recuperadas.

Marianna Foldvari
Dr. Marianna Foldvari is the Canada Research Chair in Bionanotechnology and Nanomedicine. She is also a Professor of Pharmaceutical Sciences and the Associate Director, Research and Graduate Studies, at the University of Waterloos School of Pharmacy. Dr. Foldvari received a Pharmacy degree and a Doctorate in Pharmaceutical Sciences from Semmelweis Medical University in Budapest, Hungary. She then obtained a PhD in Pharmaceutical Sciences, specializing in drug delivery, from Canadas Dalhousie University in Halifax, Nova Scotia. Dr. Foldvaris research program focuses on the development of intelligent delivery systems and biomolecular devices. The main objectives are to investigate the fundamental physicochemical properties of delivery systems and to use these discoveries to develop new, non-invasive technologies to deliver and ultra-specifically target therapeutic agents into the body to diseased tissues. Her scientific vision is to advance the field of bionanotechnology by developing increasingly intelligent and reliable diagnostic and therapeutic systems. Dr. Foldvaris research interests specifically include non-invasive drug delivery, gene therapy and pharmaceutical development of nano-enabled products. This research will lead to the development of individual health monitoring methods, including systems that serve individual patient needs for early diagnosis, disease pre-onset monitoring, functionality monitoring and treatment option identification. She is Associate Editor of Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, and an Editorial Board Member of Current Drug Delivery, the Journal of

Dolores Carrer
La Dra Carrer es Licenciada y Dra en Qumica de la Universidad Nacional de Crdoba, realiz sus estudios posdoctorales en la Alexander von Humboldt Foundation y TU Dresden Alemnia en el Grupo de Biofsica del Centro de Biotecnologa. Actualmente es profesora asistente de Biofsica en la Facultad de Ciencias Exactas, Fsicas y Naturales de la Universidad Nacional de Crdoba

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Bionanoscience and the International Journal of Pharmaceutical Compounding. She is a Founding Member of the American Society for Nanomedicine (ASNM). She served as Board Member for Genome Prairie, was a Member of the Advisory Committee to the Prime Minister on Science and Technology, and was one of the Founders of the Canadian Society of Pharmaceutical Sciences. Dr. Foldvari has received the YWCA Women of Distinction Award and the Sabex Award of Innovation. She has authored more than 100 papers and 70 conference presentations and is the inventor on 14 patents. She founded two spin-off companies that focus on nanomedicine product development to commercialize technologies that she and her research team have developed.

Karen Hallberg
La Dra. Hallberg es Licenciada en Fsica (1987) y Doctora en Fsica, Instituto Balseiro (1992). Realiz estudios Postdoctoral en el Max Planck Institut fr Festkrperforschung, Stuttgart, Alemania (1993-1994) y en el Max Planck Institut fr Physik komplexer Systeme, Dresden, Alemania (1994-1997). Actualmente es Profesora en el Instituto Balseiro, Investigador del CONICET, Miembro del Consejo Directivo de las Conferencias Pugwash para Ciencia y Asuntos Mundiales (institucin galardonada con el Premio Nobel de la Paz 1995), Miembro del Comit Nacional de tica en la Ciencia y la Tecnologa (CECTE), Miembro de la Comisin de Bajas Temperaturas (C5) de la IUPAP (International Union of Pure and Applied Sciences) y Representante por Argentina ante el Consejo Directivo del Centro Latinoamericano de Fsica (CLAF). Ha recibido los premios John Simon Guggenheim Fellowship (2005) y Premio L'OrealCONICET, Mencin Especial 2008. Ha publicado 69 trabajos publicados en revistas internacionales con referato; 7 captulos de libro; 4 artculos de revisin; edicin de un libro sobre mtodos computacionales en Fsica; 12 artculos de divulgacin y notas especiales.

Sistemas de Liberacin Controlada y Coordinadora de la Unidad Tcnica Tecnologa de Nuevos Procesos y Productos del Centro de Qumica del Instituto Nacional de Tecnologa Industrial. Desde fines de 2009 se desempea adems como Miembro del Comit Tecnolgico de la Direccin de Transferencia en Metrologa, Micro y Nanotecnologa y Nuevos Materiales del mencionado instituto. Su rea de investigacin actual se basa en el diseo, obtencin y caracterizacin de sistemas de liberacin controlada para diversas aplicaciones como farmacuticas, veterinarias, alimenticias, textiles, entre otras, empleando preferentemente tecnologas que puedan ser transferidas a escala industrial. Entre los sistemas estudiados pueden mencionarse emulsiones, liposomas, niosomas, micro y nanopartculas a base de polmeros naturales o sintticos. En algunos casos supervisa actividades de investigacin aplicada en colaboracin con otros institutos o universidades, mientras que en otros promueve convenios de transferencia tecnolgica con empresas de base tecnolgica.

Marcelo Kogan
Dr. Marcelo Kogan es Profesor Asociado de Qumica Farmacolgica de la Universidad de Chile e Investigador del Centro para la Investigacin interdisciplinaria en Ciencias de los Materiales (CIMAT) de la Universidad de Chile. Es director del Laboratorio de Nanobiotecnologia de la Universidad de Chile. Asimismo, dirige un grupo de investigacin de nanobiotecnologia para el diagnstico y terapias de enfermedades como Alzheimer, diabetes y Chagas. Es coordinador del Magster en Bioqumica Toxicolgica y miembro de cuatro claustros de Doctorado en la Universidad de Chile. En 1989 obtuvo el ttulo de Bioqumico y en 1991 el de Farmacutico en la Universidad de Buenos Aires. Se doctor en Qumica Orgnica en 1995 por la misma universidad. Realiz estudios posdoctorales en la Universidad de Barcelona (1999-2002) en el laboratorio del Dr. Ernest Giralt. En 1999, fue becario de la Agencia Espaola de Cooperacin Internacional (AECI) y en 2001-2002 ha obtenido una beca para estancias de profesores extranjeros otorgada por el Ministerio de Educacin de Espaa. En los aos 2006 y 2007 ha sido profesor visitante en la UTMB (University of Texas medical Branch, Galveston, USA) en el laboratorio del Dr. Soto del Departamento de Neurologa. En 2010 fue profesor visitante en la Universidad de Aachen (Alemania) en el grupo

Laura Hermida
Licenciada en Ciencias Qumicas (FCEyN-UBA, 1990) y Ph.D. en el rea de Nanotecnologa Farmacutica (FFyB-UBA, 2006). En la actualidad es Responsable del Laboratorio de

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del Dr. Ulrich Simon. Su inters cientfico se dirige al campo de las aplicaciones de nanobiomateriales, en particular en el campo de enfermedades conformacionales. Todo ello incluye estudios relacionados con los nuevos sistemas de liberacin de frmacos, los inhibidores de agregacin de la protena amiloide, diabetes y cncer. En los ltimos tres aos ha obtenido 11 proyectos de investigacin (5 nacionales de Chile y seis de la Agencia Espaola de Cooperacin Internacional). Sus investigaciones han despertado un gran inters en la comunidad internacional habiendo sido referenciado en portales como el de la American Chemical Society (http://pubs.acs.org/4librarians /livewire/2006/7.2/nthenews. html). Marcelo Kogan, ha publicado alrededor de 60 artculos experimentales, diversos artculos de revisin y dos captulos de libro. Ha presentado trabajos en alrededor de 80 congresos nacionales e internacionales y ha sido invitado a impartir 18 conferencias. Ha sido miembro del comit cientfico de congresos nacionales e internacionales y ha dirigido 6 Tesis de doctorado y 10 Tesis licenciatura. Actualmente dirige 5 tesis Doctorales, 4 tesis de Licenciatura y 2 de Magster.

Franco Lori
Franco Lori MD, PhD, Chief Executive Officer, ViroStatics srL, is the President and Chief Executive Officer of ViroStatics, Franco Lori received his MD from the University of Parma in Italy. Dr. Lori was Senior Investigator in the Laboratory of Tumor Cell Biology at the National Cancer Institute (NCI, NIH) before cofounding the Research Institute for Human and Genetic Therapy (RIGHT) in 1994. As co-director of RIGHT, Dr. Lori successfully raised over $20 million to fund innovative research in the HIV/AIDS field and has overseen the successful start-up of three biotechnology companies. In 2000, Dr. Lori was recognized as a "Hero in Medicine" for his achievements in HIV therapy. The International Association of Physicians in AIDS Care (IAPAC) gave its Heroes in Medicine Award to 40 women and men who developed the first organized US and international response to what would become the AIDS pandemic. Dr. Lori has authored and co-authored over 100 publications in the field of HIV/AIDS. He is a much sought-after presenter on innovative therapeutic approaches - including therapeutic vaccines and AntiViral-HyperActivation Limiting Therapeutics (AV-HALTs) - in the treatment of HIV and AIDS.

Julianna Lisziewicz
Dr. Julianna Lisziewicz cofounded Genetic Immunity in 1998 and has served as the President and Chief Executive Officer of Genetic Immunity since its founding. In 1994, Dr. Lisziewicz co-founded the non-profit Research Institute for Genetic and Human Therapy (RIGHT) and directed its research and business affairs in the USA. RIGHT was focusing on the treatment of HIV/AIDS from multiple perspectives: virology, molecular biology, immunology and medicine. From 1990 to 1995, she was Head of the Antiviral Unit in the Laboratory of Tumor Cell Biology at the National Cancer Institute of the NIH in Bethesda, Maryland. While at NIH, she discovered and developed antisense oligonucleotide therapy and gene therapy for HIV/AIDS treatment. In 2005, she was appointed as the Marie Curie Chair at the Semmelweis University Budapest. She received her Ph.D in molecular biology from the MaxPlanck Institute (Goettingen, Germany) and two Masters of Science in Chemistry and Biochemistry from the Technical University (Budapest, Hungary). She has co-authored over 100 peer reviewed scientific publications.

Marisa Martinelli
Licenciada en Qumica, Facultad de Ciencias Qumicas Universidad Nacional de Crdoba (UNC 1991), Doctora en Ciencias Qumicas. Facultad de Ciencias Qumicas, UNC (1998), Post-Doctorado, Remocin de metales a partir de soluciones acuosas empleando polmeros biodegradables (1999-2001), direccin Dr. Hctor Bertorello. Actualmente es Investigadora Adjunta de CONICET, Profesora Asistente (DE) por concurso, Dpto. de Qumica Orgnica, Facultad de Ciencias Qumicas, UNC. Ha colaborado en el dictado los cursos de post-grado: Avances en Sntesis Orgnica II: Nuevos Materiales Macro y Nanomoleculares. Dpto. de Qumica Orgnica. Facultad de Ciencias Qumicas, UNC. Desarrollo de Sistemas Catalticos y Qumica Verde: alternativas para un desarrollo sostenible. Dpto. de Qumica Orgnica. Facultad de Ciencias Qumicas, UNC. Directora de becarios de posgrado CONICET y ha publicado 18 trabajos cientficos en revistas internacionales

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con referato y 40 presentaciones en Congresos Nacionales e Internacionales.

Mara Morilla

Jose

Licenciada en Biotecnologa (Universidad Nacional de Quilmes-UNQ, 1999), Dra. en Biotecnologia Mencin Ciencias Exactas y Naturales (UNQ, 2003). Profesora Adjunta (exclusiva) del rea Qumica, UNQ e investigadora asistente de CONICET. Directora de proyectos de Investigacin de la UNQ, orientado al desarrollo de dendrmeros y megameros como nano-sistemas de entrega de drogas. Ha co-dirigido dos tesis doctorales (2008 y 2009); dirige otras dos y es codirectora y directora de becarios de CONICET. Co-autora de dos patentes en Argentina en el rea de sistemas de entrega de drogas. Co-autora de artculos en las siguientes revistas: International Journal of Pharmaceutics, Journal of Controlled Release, Expert Opinion in Drug Delivery, BMC Biotechnology, Advanced Drug Delivery Reviews.

shape, surface and physico-chemical properties. She advises Graduate and Post-Graduate students in Chemistry and Pharmaceutical Sciences. She is a National Council for Scientific and Technological Development (CNPq/Brazil) researcher developing works as leader of the group: Micro- and nanoparticles for therapeutics. She is the Vice-Director of one of the Brazilian National Nanotechnology Network, and Coordinator of a collaborative IBSA project between India, Brazil and South Africa both supported by the Brazilian Ministry of Science and Technology. She has published more than 90 research papers, 1 book and 5 book chapters, and 4 patents. She is member of the Editorial Board of the Journal of Biomedical Nanotechnology, the Open Drug Delivery Journal, the Open Drug Delivery Reviews, the Open Drug Delivery Letters e the Open Nanomedicine Journal. She is Ad-hoc reviewer for more than 20 Scientific Journals and for National and State Agencies to support scientific research. She is a member of the Brazilian Association of Pharmaceutical Scientists (ABCF) and the Brazilian Chemical Society (SBQ).

Eder Romero
Eder L. Romero was educated at University of La Plata, Argentina where she obtained her M.A. Biochemistry and PhD in Exact Sciences (1996). Following a post-doctoral research in Groningen University, The Netherlands under the supervision of Prof. Gerrit Sherphof (1997-1998), she returned to Argentina where currently is an Independent Researcher at the National Council of Scientific and Technological Research (CONICET) (2006) and Associate Professor of Chemistry (2008), at the Department of Science and Technology, National University of Quilmes, Buenos Aires, Argentina. From 2007 she is leading the Program of Nanomedicine Research (PNM), being under her supervision three finished PhD thesis in nanomedicine (2003, 2008 and 2009) and other five ongoing doctoral research subjects on different nanomedical therapeutic strategies. Her research interest deals with a) development of targeted nanomedicines (photodynamic therapy) and nanocosmetics across the skin b) across the oral (delivery of macromolecules) and olfactory mucosa (bypassing the blood brain barrier), c) treatment of infectious parasitic diseases. Additionally the PNM is developing vaccination strategies employing biodegradable nano vesicles prepared with total polar archaeolipids extracted from extreme halophile archaeas, to be applied by

Adriana Raffin Pohlmann

Adriana Raffin Pohlmann teaches Organic Chemistry at the Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Brazil, since 1990, and nowadays she is Associate Professor II at the Department of Organic Chemistry in the Institute of Chemistry (UFRGS). She received her Graduation in Pharmacy (1985) and Master in Chemistry (1991) at UFRGS, and Doctor in Therapeutic Chemistry at the University of Paris V, France (1997). In 1998, she received the Roussel-Uclaf award for her Dissertation and a Laureate Diploma from the College of Pharmaceutical and Biological Sciences, University of Paris V, France. She was Head of the Department of Organic Chemistry (19992001), First Director of the Center of Nanoscience and Nanotechnology at UFRGS (2006), member of the Committee of the Postgraduate Program in Chemistry (2001-2003; 2009-2011) and ViceDean of the Institute of Chemistry (2003-2007). Her main research is focused on the organic chemistry applied to drug nanocarriers, including polymeric nanocapsules and nanospheres, with the view of understanding and controlling their sizes,

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parenteral/ topical/ mucosal routes, as cattle and human adjuvants. Her main contributions in the last five years as corresponding author have been published in: International Journal of Pharmaceutics, Journal of Controlled Release, Expert Opinion in Drug Delivery, BMC Biotechnology, Advanced Drug Delivery Reviews. She is member of the American Society for Nanomedicine (ASNM) and since 2008 member of the Advisory Committee of the Argentinean Foundation for Nanotechnology (FAN). Romero has been responsible for the first and second Nanomedicine School in Latinoamerica (2008, 2010). Currently she is a scientific advisor for regional pharmaceutical companies interested in developing therapeutic nanomedicines. Since 2010 she is Member of the Editorial Board of Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine (Elsevier).

Nereide S. SantosMagalhes
Nereide S. SantosMagalhes is Associate Professor II (currently under full professor nomination) at the Federal University of Pernambuco (UFPE), Brazil. Graduated in Pharmaceutical Sciences from the UFPE (1981), Master in Pharmaceutical Sciences from the UFPE (1986) and Ph.D. in Pharmaceutical Sciences from the University of Paris-Sud XI, France, in 1991. She has broad experience in pharmacy, with emphasis on Pharmaceutical Nanotechnology, working on the following research subjects: development and physicochemical characterization and biological integrity of liposomes, nanocapsules and microspheres for treatment of tuberculosis, cancer and infection diseases. Pr. Santos-Magalhes is the head of the research group "Systems of Controlled Release of Drugs and Vaccines: Pharmaceutical Nanotechnology (SLC-NF). This research group develops innovative projects using nanotechnology for therapeutic treatment of cancer, tuberculosis and infectious diseases, besides the application of biomaterials for developing products for medical and cosmetic application (biomembranes and surgical dressings, bone implants, biopolymer gel). She is also the coordinator of NanoCETENE network of the Center for Strategic Technologies of the Northeast of Brazil since 2008. She co-authored over 50 publications including two book chapters and two patents and her main scientific contributions have been published in Advanced Drug Delivery Reviews, International Journal of Pharmaceutics, Journal of Colloid and Interface Science, Journal of Controlled Release, Journal of Microencapsulation, Lipid Research (h =10-Index, Scopus h-index = 10, ISI). She is currently a Research Fellow of the Brazilian Council for Research and Technology (CNPq) in the field of Pharmaceutical Nanotechnology. She holds a research prize "ex-aequo" from the Universit Ren Descartes/Paris-Sud XI in 1990 and was awarded the National Medal of Merit of the Federal Brazilian Council of Pharmacists in 2008. She is member of the Brazilian Association on Pharmaceutical Sciences and the International Society of Drug Delivery Sciences and Technology (APGI, France). Funding for projects comes from Brazilian agencies CNPq, CAPES and FINEP. The set of R&D of SLC-NF in cooperation with abroad research groups allowed the filing of patents and the creation of the enterprise "POLISA Biopolymers for Health".

Diana Roncaglia
Diana Roncaglia es Qumica con orientacin fisicoqumica (1984) de la Universidad Nacional de La Plata (UNLP) se doctor en el Programa QUINOR (Qumica Inorgnica) en la misma Universidad (1993). Docente de las Ctedras de Qumica Inorgnica y Qumica para Ingeniera de la UNLP desde 1981 hasta 1994. Actualmente docenteinvestigador del Departamento de Ciencia y Tecnologa de la Universidad Nacional de Quilmes (UNQ) desde 1995. Realiz varias estancias como profesor visitante en el Grupo de Fsica No Lineal (GFNL) de la Universidad de Santiago de Compostela (USC). Pertenece al Programa de investigacin Nanomedicinas de la UNQ, en calidad de investigador dirige un proyecto en el que se estudia la interaccin de nanopartculas con medios qumicos activos y colabora con la aplicacin de tcnicas de caracterizacin espectroscpica en los distintos proyectos pertenecientes al programa. Posee artculos cientficos publicados en revistas internacionales y nacionales, presentaciones a Congresos y ha dictado cursos de posgrado.

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Alejandro Sosnik
Dr. Alejandro Sosnik is currently Adjunct Professor (tenure) of Pharmaceutical Technology at the Faculty of Pharmacy and Biochemistry (University of Buenos Aires) and Investigator of the National Science Research Council (CONICET). He received a Pharmacy degree of the University of Buenos Aires in 1994 and a M.Sc. (equivalence) and Ph.D. in Applied Chemistry under the supervision of Dr. Daniel Cohn at The Casali Institute of Applied Chemistry (The Hebrew University of Jerusalem, Israel, 2003). His Ph.D. research focused on the design and synthesis of injectable biomaterials for the minimally-invasive administration of drugs. Between 2003 and 2006, Dr. Sosnik spent a postdoctoral stay in the laboratory of Dr. Michael Sefton (Institute of Chemical Engineering and Applied Chemistry, University of Toronto, Canada) where he worked on the design and characterization of semisynthetic matrices for the construction of a modular scaffold for tissue engineering. Upon his return to Argentina in 2006, he founded The Group of Biomaterials and Nanotechnology for Improved Medicines (BIONIMED), a multidisciplinary research group that gathers 10 scientists in the different levels of academic education, among them 1 assistant investigator, 6 Ph.D. students and 2 postdocs. His research interests are focused on the investigation of new technologies for the synthesis of biomaterials and the exploration of nanotechnologies for the encapsulation, delivery and targeting of drugs involved in the pharmacotherapy of HIV, tuberculosis and viral hepatitis. Under a lly multidisciplinary conception of the research, his group undertakes collaborative projects with research groups in Argentina, Spain, Colombia, Portugal and South Africa. Dr. Sosnik is the author of over 50 scientific articles, reviews, editorial and book chapters and co-inventor in 6 patents and patent applications. He serves in the Editorial Board of several recently launched journals and as permanent reviewer in over 10 high-impact factor journals. He served as the main guest editor of the Theme Issue entitled Nanotechnology solutions for infectious diseases in developing nations published in the prestigious journal Advanced Drug Delivery Reviews. This compendium introduced the concept of ethical affordability to address the optimization of the prevention, diagnosis and pharmacotherapy of neglected diseases mainly hitting developing countries. Dr. Sosnik is member of several international scientific societies (American

Chemical Society, European Society for Nanomedicines, European Foundation for Clinical Nanomedicine, Tissue Engineering International and Regenerative Medicine Society) and has recently co-founded the Argentine Society for Nanomedicines (NANOMED-ar), where he serves as Secretary. He is also visiting professor at the National University of Colombia and the University of Santiago de Compostela, where he teaches graduate courses, participates in several research grants and co-supervises a M.Sc. student.

Ijeoma Uchegbu
Ijeoma Uchegbu holds a Chair in Pharmaceutical Nanoscience at the School of Pharmacy, University of London and is Director of Postgraduate Research Studies at the School. Ijeoma obtained her PhD from the School of Pharmacy, University of London in 1994, was appointed to a lectureship within the Department of Pharmaceutical Sciences, Strathclyde University in 1997 and a Chair in Drug Delivery at Strathclyde University in 2002. In 2006 Ijeoma was appointed to the Chair in Pharmaceutical Nanoscience at the School of Pharmacy, University of London. Ijeomas research in pharmaceutical nanoscience has provided insights into nanoparticle design for drug delivery, producing nanosystems (nanomedicines) that promote oral drug absorption and drug transport to the brain for example. Ijeoma and Andreas Schtzlein have also designed an anti-cancer gene medicine that is currently in pre-clinical development. Ijeoma and Andreas currently supervise a research group of 20 scientists. Ijeoma is the Science Secretary of the Controlled Release Society (CRS), a US based learned society with over 2,000 members and with interests in the delivery of pharmaceuticals, former Chair of the Academy of Pharmaceutical Sciences of Great Britain and is the Academia Expert on the Department for Business Innovation and Skills Science Engineering and Technology Strategy for Women Expert Group. Ijeoma has been awarded various prizes for her work, the latest of which is the Department for Innovation University and Skills Women of Outstanding Achievement in Science Engineering and Technology award. Ijeoma along with five other awardees took part in a national photographic exhibition in 2007 at various venues including the Science Museum and the British Museum. Ijeoma is the editor of two books and over 80 patents, patent applications, peer reviewed journal articles and book chapters (see Publication).

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Beatriz Winik
Dra en Ciencias Biolgicas y Profesora adjunta de Biologa Celular y Molecular en la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn (UNT). Directora del Centro Integral de Microscopia electronica, CCT, CONICETTucumn UNT. Principal area de investigacin alteraciones de la estructura de la piel en procesos patolgicos. Ha publicado sus trabajos en las siguientes revistas: Journal of Investigative Dermatology, Brithish Journal of Dermatology, Journal of Cutaneous Pathology, Pediatric Dermatology. Ha recibido el primer premio en el III Latin American Congress on Pediatric Dermatology. Lima, Per por el trabajo Epidermlisis ampollar con ausencia congnita localizada de piel (Sndrome de Bart) y el premio La Roche Posay Foundation Award al mejor trabajo de investigacin: Juvenile Hyaline Fibromatosis. Ultrastructural Study.

Gabriel Ybarra
Gabriel Ybarra se gradu de Licenciado y Doctor en Ciencias Qumicas en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de Buenos Aires. Es coautor de veinte artculos cientficos en qumica y ciencia de los materiales. Lleva a cabo tareas de investigacin y desarrollo en el Centro INTI-Procesos Superficiales del Instituto Nacional de Tecnologa Industrial. Su principal inters actual es el desarrollo de sensores y biosensores electroqumicos empleado electrodos nanoestructurados, tema en el que codirige dos tesis doctorales. Es miembro del Grupo INTINanotecnologa Industrial y de la Asociacin Argentina de Microscopa.

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PARTE III Resmenes de exposiciones

Liposomas: Generalidades estructurales y mtodos de preparacin
Maria Jose Morilla
Programa Nanomedicinas (PNM), Universidad Nacional de Quilmes (UNQ), Argentina Probablemente por ser los nano-sistemas coloidales ms estudiados desde la primera observacin en 1965 de una vescula compuesta de fosfolpidos encerrando un espacio acuoso interno por Alec Bangham y colegas, los liposomas (y tecnologas de nanovesculas derivadas) son hoy una de las piedras angulares de la bionanotecnologa. La versatilidad nica de los liposomas con respecto a composicin, variedad de tamaos (desde 50nm a varios micrones) y capacidad de encapsular molculas hidroflicas e hidrofbicas tanto de bajo como alto peso molecular, sumado a la biocompatibilidad y seguridad, hizo que actualmente existan 4 productos comerciales (Doxil, AmBisome, Novasome y Nyotran) y alrededor de 10 en pruebas clnicas avanzadas. Los liposomas (20-100 nm) ofrecen de 0.2 a 2 l de volumen de encapsulacin por mol de fosfolpidos, con eficiencias de encapsulacin de activos hidrosolubles entre 15-50%. Las tcnicas de produccin incluyen mtodos de hidratacin de pelcula lipdica, inyeccin y emulsificacin hasta produccin a escala industrial bajo normas de Buenas Prcticas de Manufactura. parmetros del mtodo de fabricacin y controlando composicin y concentracin lipidica y de surfactantes. As, pueden obtenerse liberaciones burst, sostenida o una combinacin de ambas. Se analizaran los factores que disparan las transiciones hacia fases cristalinas perfectas, as como el empleo de tcnicas necesarias para caracterizar cuantitativa y cualitativamente las suspensiones de SLN y NLC.

Determinacin de parmetros estructurales, tamao en el rango nanomtrico y potencial Z

Laura Hermida
Unidad Operativa de Liberacin Controlada Instituto Nacional de Tecnologa Industrial (INTI), Argentina Luego del lanzamiento comercial de la anfotericina y la doxorubicina liposomal, estos sistemas lipdicos de entrega de frmacos se han extendido a otros frmacos para diversas aplicaciones, dando lugar a nuevos productos con mayor eficacia y menores efectos colaterales que los convencionales. Una de las ventajas de los liposomas es su biocompatibilidad, ya que se obtienen a partir de materias primas de origen natural. Sin embargo, y a partir de su empleo teraputico, es imperativo contar con mtodos de caracterizacin que permitan asegurar su eficacia y baja toxicidad. Entre los parmetros ms importantes a controlar se encuentran el tamao medio y la carga superficial. El tamao de los liposomas es clave para que las vesculas alcancen su sitio de accin, mientras que la carga superficial puede determinar la agregacin de las vesculas y modular efectos inmunolgicos no deseados. El contenido del frmaco obviamente debe determinarse para establecer la dosis adecuada, slo que en este caso se requiere conocer el porcentaje de frmaco asociado a los liposomas, que podra variar durante el almacenamiento o en condiciones fisiolgicas, segn la estabilidad del sistema. Otro parmetro a estudiar, especialmente en las combinaciones de fosfolpidos con otras sustancias, es la temperatura de transicin de las bicapas lipdicas. Una falta de control de este parmetro podra tener como consecuencia una liberacin indiscriminada del frmaco fuera del sitio blanco. No menos importante es determinar el grado de oxidacin de los lpidos, un proceso que altera la estructura de las vesculas, aumentando su

Nanopartculas Lipdicas slidas: Generalidades estructurales y mtodos de preparacin

Eder Romero
Programa Nanomedicinas (PNM), Universidad Nacional de Quilmes (UNQ), Argentina Las nanoparticulas lipidicas slidas (SLN) y las nanoestructuradas (NLC) son nano-objetos preparados en base a lipidos y surfactantes empleados en la industria alimenticia y farmacutica. A diferencia de liposomas, su principio de accin depende de la inclusin de principios activos- tanto farmacuticos como cosmticos - en un core slido, con objeto de impedir su degradacin qumica (hidrlisis, oxidacin). La expulsin del principio activo ocurre mediante transiciones polimorfitas lipidicas desde una fase cristalina desordenada hasta otra de mximo orden. Es posible programar el perfil de liberacin del principio activo manipulando los

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permeabilidad e introduciendo cambios estructurales que pueden llegar a la desestabilizacin del sistema.

as como de ciertas nanoestructuras empleadas en biosensores.

Empleo de la espectrometra de masas en la identificacin de los componentes de mezclas lipdicas. Aspectos cualitativos y cuantitativos.
Diana I. Roncaglia
Programa Nanomedicinas (PNM), Universidad Nacional de Quilmes (UNQ), Argentina e-mail: diana@unq.edu.ar El presente trabajo abordar los principios fsicoqumicos de las tcnicas modernas utilizadas en espectrometra de masas (MS). Desde su nacimiento esta tcnica ha sido empleada para la determinacin de masas atmicas, moleculares y determinacin estructural. Su desarrollo la ha convertido en una importante herramienta para el anlisis y caracterizacin de grandes biomolculas y macromolculas de variada complejidad (protenas de alto PM, mezclas lipdicas, dendrmeros, megmeros, etc.). Se describirn las interfases de Ionizacin a Presin Atmosfrica (API), con sus dos fuentes de ionizacin ms representativas: Electrospray (ES), e Ionizacin Qumica a Presin Atmosfrica (APCI). Seguida por la tcnica MALDI (matrix assisted laser desorption/ionisation) desarrollada por Karas en 1987, que aument el lmite de masas que puede detectarse y por ende permiti la aplicacin de la MS a biomolculas por encima de 300000 Da, se explicar la modalidad TOF (time of flight). Por ltimo se realizar una revisin de las ms recientes aplicaciones a mezclas de lpidos naturales y sistemas dendrimricos.

Vas de administracin y biodistribucin de nano-objetos

Eder Romero
PNM, UNQ Para que puedan ejercer su accin en forma competitiva, las nanomedicinas deben acceder a las clulas blanco, donde luego de su captura recorren un complejo trfico intracelular. El acceso al interior corporal depende de la capacidad (directamente ligada a su diseo estructural) de los nano-objetos para atravesar barreras anatmicas y fenomenolgicas. Hasta el momento, la nica va que permite un acceso relativamente directo y controlado de nano-objetos a rganos perifricos, es la administracin endovenosa. Se analizaran los fenmenos ocurridos a partir de la administracin endovenosa de diferentes tipos de nano-objetos: agregacin, leakage, opsonizacion y sus consecuencias y efecto EPR (enhanced permeation and retention). Necesidad y funcin de la estabilizacin esterica. Perfiles farmacocinticos y biodistribucion de diferentes tipos de nano-objetos administrados endovenosamente. Administracin subcutanea, e intraperitoneal: requisitos estructurales y perfiles farmacocinticas de distintos nano-objetos. Administracin mucosa: oral y nasal. Se discutir la relacin entre estructura de nano-objetos y su capacidad de targeting a clulas epiteliales subyacentes.

Trafico intracelular de nano-objetos

Ana Paula Perez
Programa Nanomedicinas (PNM), Universidad Nacional de Quilmes (UNQ), Argentina Una de las propiedades fundamentales de los nano-objetos derivadas de su tamao, es su capacidad para ingresar a las clulas y liberar su contenido en diferentes ubicaciones sub-celulares. Los nano-objetos emplean diferentes rutas endociticas para ingresar a las clulas, como fagocitosis, pinocitosis dependiente por clatrina o pinocitosis independiente de clatrina. El modo de ingreso de un nano-objeto define el trfico intracelular y el sitio sub-celular donde los nanoobjetos pueden acceder. Sobre el modo de ingreso juega un rol fundamental el tipo celular, el tamao, la forma, la composicin, la superficie y la carga de los nano-objetos. El procesamiento intracelular de los nano-objetos dictar la respuesta celular resultante de la interaccin nano-objeto-clula.

Microscopia de fuerza atmica

Gabriel Ybarra
Centro de Nanoscopas, INTI, Argentina El microscopio de fuerza atmica (AFM) es un instrumento que permite analizar la topografa de muestras con una resolucin de fracciones de nanmetros. Su particular principio de funcionamiento en esencia, una punta muy aguda que recorre e interacta suavemente con la superficie de la muestra- ha hecho del AFM una de las herramientas de preferencia para estudiar macromolculas y material biolgico. En esta presentacin se ver el principio de funcionamiento del AFM, su instrumentacin y sus modos de operacin, finalizando con una revisin de casos de inters en nanotecnologa farmacutica, tales como la observacin de nanopartculas, dendrmeros y otros objetos de dimensiones nanomtricas utilizados para la liberacin controlada de drogas,

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Nano-vacunas: aplicaciones humanas y veterinarias

Eder Romero
PNM, UNQ La intervencin de la nanotecnologia en el campo de las vacunas esta basada en el empleo de nano-objetos como adyuvantes. Las aplicaciones ms promisorias de los nano-objetos resultan de la generacin de adyuvancia a partir de su administracin no inyectable, tanto por vas mucosas (oral y nasal) como por va transdermica. Analizaremos las relaciones estructura /funcin de diferentes tipos de nano-objetos, para conseguir adecuadas respuestas humorales, celulares y de memoria.

Nano-toxicidad
Eder Romero
PNM, UNQ La toxicidad causada por los nano-objetos es campo de estudio de la nanotoxicologia. Analizaremos los efectos txicos causados por la exposicin no intencional por vas inhalatoria y transdermica a nano-objetos en el medio ambiente, fundamentalmente por aquellos ingenierizados y en exposicin crnica. Asimismo, analizaremos los efectos txicos esperables y comprobados causados por la exposicin intencional a nano-objetos empleados como reactivos diagnsticos in vivo y como agentes teraputicos, principalmente cuando administrados por va parenteral. Brevemente, describiremos problemas asociados con la determinacin de citotoxicidades frente a nanoobjetos no biodegradables y de elevada relacin area/masa y el empleo de modelos de barrera alternativos a la experimentacin animal

polymer (PEIm) to form a pathogen-like nanoparticle. These nanoparticles are effectively endocytosed by DCs, stimulate IL-12 production, express the pDNA-encoded antigens, and prime nave T cells to generate Th1-polarized immune responses. DermaVir nanomedicine is delivered to lymph node DC with a new medical device called DermaPrep. The device targets the nanomedicine to Langerhans cells (LC) and benefits from their ability to capture, process and transport antigens directly to the lymph nodes. DermaPrep supported reproducible delivery of > 50% of the absorbed vaccine dose to the lymph nodes. Antigenexpressing DCs were located in the T cell area of the lymph nodes and induced Th1 polarized immunity and memory/precursor type antigenspecific T cells. DermaVir was investigated in HIV+ subjects. Phase I studies conducted in nine subjects on fully suppressive antiretroviral therapy confirmed the induction of memory/precursor T cells. A Phase II double blinded, placebo controlled study in 36 drugnave HIV+ subjects demonstrated a bell-shaped dose response curve for both induction of T cell responses and reduction of HIV RNA. Similarly to cancer vaccines, DermaVir treatment effect was slow and required repeated immunizations (Q6 weeks). These data suggest that DermaVir has both antiviral and immunomodulatory activities and provide a new class of antiretroviral medicine to be developed for the initial treatment of HIV-infected people.

Development and validation of a lymph node-targeting medical device (DermaPrep) for topical pDNA nanomedicine vaccine administration
Julianna Lisziewicz PhD, and Franco Lori MD
Genetic Immunity, USA & Hungary and ViroStatics, Italy Epidermal injury through skin scarification is crucial for the generation of highly protective T cellmediated immunity and has been shown to be superior to vaccination via hypodermic injection1. We have developed the DermaPrep medical device to facilitate, improve and modernize vaccine administration via controlled skin scarification. The DermaPrep medical device combines a special skin preparation procedure safely mimicking epidermal injury with a semi-occlusive patch that permits needle-free topical administration of vaccines. Transport of antigens to the secondary lymphoid organs in sufficient, but not excessive, quantities and for a sufficient period of time is required to induce an effective immune response 2. We have demonstrated that DermaPrep accomplishes this through a novel mechanism of action based on nanomedicine capture by epidermal

DermaVir Therapeutic HIV Vaccine: Synthetic Nanomedicine Formulation, Dendritic Cell-Targeted Topical Administration and Phase II Clinical Data
Julianna Lisziewicz
Genetic Immunity, McLean, VA and Budapest, Hungary Therapeutic HIV vaccines aim to expand HIVspecific T cells capable of seeking-out and eliminating infected cells. Successful priming of T cell responses requires sufficient quantities of antigen to be presented by dendritic cells (DC) in the lymphoid organs. We have developed DermaVir therapeutic vaccine and employed nanotechnology for in vivo targeting of HIV-specific complex antigen repertoires to DCs. DermaVir consists of a single plasmid DNA (pDNA) encoding 15 HIV protein antigens and a synthetic mannosylated

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Langerhans cells and their subsequent migration into the draining lymph nodes. In mice and macaques, DermaPrep has reproducibly delivered pDNA/PEIm nanomedicine vaccine to lymph nodes and induced potent antigenspecific precursor/memory type immune responses similar to ex vivo dendritic cell-based vaccinations3. Quantitative analyses from two different rabbit cohorts have shown reproducible vaccine delivery by DermaPrep. Greater than 50 percent of the absorbed dose of a pDNA/PEIm nanomedicine vaccine entered the lymph nodes and remained there over 60 days. The direct targeting of vaccines to the lymph nodes accomplished with the DermaPrep medical device may provide a therapeutic advantage over current approaches such as the gene gun, needle injection where the published data has demonstrated the majority of a DNA vaccine dose remains at the vaccination site with only sporadic DNA expression detected in the lymph nodes. The use of DermaPrep has been safe, well tolerated and capable of inducing functional and potent T cell-mediated immunity in multiple preclinical and human clinical studies 4. The main adverse events associated with DermaPrep vaccine administration have been mild and transient local skin reactions (< 10%) that decrease upon repeated vaccinations. Although reported as adverse events, these localized reactions are actually desirable as they mimic epidermal injury to induce Langerhans cell activation, antigen capture, and delivery to the lymph nodes. The DermaPrep medical device has recently obtained regulatory approval in Europe (CE Mark) and offers a novel, needle-free topical administration method for liquid vaccines formulated as nanomedicine. DermaPrep provides an alternative approach for vaccine delivery via controlled skin scarification and is expected to provide improvement in the generation of protective T cell-mediated immunity.
1. Liu et al. Nat Med 2010:224-227 2. Zinkernagel. Semin Immunol 2000:369-371 3. Lisziewicz et al. J Invest Derm 2005:160-169 4. Lisziewicz et al. CROI 2008: Poster 715; Lisziewicz et al. IAS 2010: Poster A-240-0111-12561

as minimal systemic effects of drugs and their targeting for the disease areas. Nevertheless, the stratum corneum is an obstacle for the delivery of many molecules at therapeutic levels. Different strategies have been proposed to increase and control the drug skin permeation and to circumvent the inadequate physico-chemical characteristics of several substances. Nanotechnological systems have a great surface area, which renders them highly satisfactory for the application of lipophilic substances promoting a homogeneous drug release. Applied epicutaneously, those systems modulate the transdermic diffusion, modifying the molecule activity and/or its partition and diffusivity. In consequence, their use can alter the drug pharmacokinetic and biodistribution through the skin. In this talk we will focus on the insights and data generated by our research group on the dermatological applications of pharmaceutical and cosmetic formulations containing polymeric nanoparticles, specifically for carrying antioxidants (quercetin, melatonin), antinflammtory drugs (nimesulide) and sunscreens (benzophenone-3, octyl methoxycinnamate, avobenzone). Acknowledgments: CNPq/MCT, PRONEX CNPq/FAPERGS, FAPERGS, INCT-if CNPq

Nanopartculas en la formulacin de cosmticos: ventajas y peligros

Sara A. Bilmes
INQUIMAE-DQIAQF, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA Las nanopartculas de metales y de semiconductores presentan un cambio notable en sus propiedades pticas con el tamao y la forma, as como con las molculas ligadas a su superficie. Esta caracterstica junto con su estabilidad, entre otras, las hacen muy atractivas para el empleo en formulaciones cosmticas. Sin embargo, no todo lo que reluce es oro y por su tamao, pueden atravesar la membrana celular produciendo efectos txicos importantes. Esta presentacin se centrar en las propiedades de las nanopartculas en relacin con su tamao, las vas de sntesis, de estabilizacin y de derivatizacin para su inclusin en medios dispersantes y se discutirn algunos resultados de experimentos recientes vinculados a su toxicidad.

Polymeric nanoparticles for topical dermatological applications

Adriana R. Pohlmann1, Slvia S. Guterres2
Departamento de Qumica Orgnica, Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil.2 Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil Polymeric nanoparticles have been widely studied for systemic and topical administration of drugs. Topical administration has advantages such
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Lipid-core nanocapsules: innovative drug carrier systems

Adriana R. Pohlmann1, Slvia S. Guterres2
Polymeric nanoparticles are submicrometric drug carriers widely studied in the past 30 years. The term polymeric nanoparticles refers to vesicular or matricial colloids containing polymer as a domain in the system. Nanocapsules are vesicular carriers constituted of an oil core surrounded by a

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polymeric wall, while nanospheres are polymer matrixes. Recently, we developed lipid-core nanocapsules composed by a dispersion of solid and liquid lipids in the core enveloped by a linear polymer wall. To propose a model for the supramolecular structure of those innovative carriers, we developed environment sensitive fluorescent polymers. The polymer is restricted at the oil/water interface forming a wall, which interacts with both inner and outer pseudo-phases at the same time. Then, to establish a quantitative correlation between the drug permeability and the polymer concentration in the nanocapsules, an indomethacin ester derivative was used as lipophilic model to simulate a perfect sink condition of release. After increasing the polymer concentration (0 to10 mg/mL), the concentration of particles in suspension was constant, and the release of indomethacin ester was delayed. The ester diffusion was the main mechanism of release, and applying the Ficks first law, the indomethacin ester fluxes (J) decreased from 2.20 x 10-7 to 1.43 x 10-7 mg cm2 min-1. So, the drug relative permeability decreased according to the increase in the polymer concentration fitting a power law. After increasing either the concentration of sorbitan monostearate or that of capric/caprylic triglyceride, the core materials, the half-lives of indomethacin ester release varied from 198 to 365 and 266 to 495 min, respectively, keeping constant the polymer concentration. The control of the indomethacin ester release is dependent on the supramolecular architecture of the materials in the carrier and it can be achieved either by changing the thickness of the polymeric wall or by varying the concentration of the core constituents. In parallel, we investigated the conversion of indomethacin ethyl ester (IndOEt) released from lipid-core nanocapsules into indomethacin (IndOH) after oral administration to rats, as well as using ex vivo everted gut sac model. The everted rat gut sac model showed IndOEt passage of 0.16 molm-2 through the serosal fluid (30 min). From 15 to 120 min, the IndOEt concentrations in the tissue increased from 6.13 to 27.47 molm-2. No IndOH was formed ex vivo. A fluorescent formulation was used to determine the copolymer bioadhesion (0.012 molm-2). After oral administration, IndOEt and IndOH were detected in the gastrointestinal tract (contents and tissues). In the tissues, the IndOEt concentrations decreased from 459 to 5 gg-1 after scrapping, demonstrating the nanocarrier mucoadhesion. In plasma (peripheric and portal vein), in spleen and liver, exclusively IndOH was detected. In conclusion, after oral dosing of NC-IndOEt, IndOEt is converted into IndOH in the intestinal lumen and wall before reaching the blood stream. The complexity of a living system was not predicted by the ex vivo gut sac model.

Acknowledgments: CNPq/MCT, PRONEX CNPq/FAPERGS, FAPERGS, INCT-if CNPq

Liposomas antimicobacterianos
Nereide S Santos Magalhes
Grupo de Sistemas de Liberacin Controlada de Medicamentos, Universidad Federal de Pernambuco, Brasil La captura celular y la actividad antimicobacteriana del cido snico (AU) y de liposomas conteniendo cido snico (LIPO-AU) fueron evaluados utilizando macrfagos J774. La concentracin inhibitoria mnima (CIM) y la concentracin bactericida mnima (CBM) del AU y los LIPO-AU han sido determinadas frente a Mycobacterium tuberculosis. As, las CIM del AU y los LIPO-AU fueron de 6,5 y 5,8 g/mL, respectivamente, mientras que el valor de la CBM del LIPO-AU fue dos veces inferieur (16 g/mL) en relacin al valor de la CBM del AU (32 g/mL). Las concentraciones necesarias para inhibir 50% de la proliferacin celular (IC50) fueron de 22,5 ( 0,60) y 12,5 ( 0,26) g/mL, para el AU y LIPOAU, respectivamente. Un aumento en la captura intracelular de los LIPO-AU fue observada (21,6 104 28,3 102 c.p.s.), en comparacin con el AU (9,5 104 11,4 102 cps). Adems, los LIPO-AU permanecen mayor tiempo dentro de los macrfagos (30 h) al mismo tiempo que los datos presentados indican una fuerte interaccin entre los LIPO-AU y los macrfagos, lo que facilitara la penetracin del AU en las clulas. De otra parte, la -ciclodextrina (-CD) fue utilizada para aumentar la solubilidad del AU y formar un complejo de inclusin (AU:CD) que fue incorporado en los liposomas para producir un sistema de liberacin controlada de frmacos. Para la primera condicin, fue realizado el ensayo de solubilidad de fases del AU en la CD a un pH 7,4, obtenindose una constante aparente de estabilidad K1:1=234,5 M-1 y una eficacia de complexacin de 0,005. La solubilidad del AU aument ms de 5 veces (7,3 g/mL) en presencia de una concentracin de16 mM de -CD. El complejo de inclusin AU:-CD fue preparado por la tcnica de liofilizacin y caracterizado a travs de espectroscopa de infrarrojo, 1HNMR, difraccin de rayos-X y anlisis trmico. El complejo de inclusin AU:-CD present modificaciones espectrales en comparacin con los espectros de AU y -CD. El espectro de resonancia 1 HNMR del complejo de inclusin AU:-CD mostr desplazamientos significativos en los protones H-5 situados dentro de la cavidad de la CD (= 0,127 ppm), lo que sugiere que el anillo fenilo del AU se inclue en la cavidad de la -CD, interagiendo con los protones H-5. De outra parte, un cambio para el AU pasando de su forma cristalina a su forma amorfa fue verificado en el

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difractograma, lo que sugiere la formacin del complejo de inclusin AU:CD, confirmado por el anlisis DSC que indic la desaparicin del pico de fusin del AU en el complejo AU:CD. Con referencia a la actividad antimicrobiana no se encontraron diferencias para el AU y el complejo AU:CD, confirmando la hiptesis de que la formacin de complejos con ciclodextrina no interfieren con la actividad de la droga. Liposomas que contienen AU:CD fueron preparados utilizando el mtodo de la hidratacin de la pelcula fina de lpidos seguida de sonicacin. Las formulaciones de liposomas que contienen AU:CD exhibieron una eficacia de encapsulacin del AU de 99,5% y se mantuvieron estables durante cuatro meses bajo forma de suspensin. Curiosamente, la encapsulacin de AU:CD en los liposomas dio lugar a una modulacin de la cintica de liberacin in vitro del AU, o sea fue liberado una concentracin bien inferior. De hecho, los liposomas que contienen AU:-CD presentaron un perfil de liberacin ms lento del cido snico en comparacin con los liposomas cargados solamente de cido snico.

Nanopartculas de oro funcionalizadas con pptidos para el diagnstico y terapia de enfermedades neurodegenerativas
Marcelo J. Kogan , E. Araya , C.Adura , J. Mena1, S.Guerrero1, C. Molina1, A. Riveros1, B. Herrera1, L. Medel1, M. Vera1.
1

patologas como Alzheimer y cncer. Para lo cual se funcionalizan NP con pptidos con el objetivo de aumentar su estabilidad y selectividad por el blanco teraputico, reducir su toxicidad y mejorar la entrega de las mismas hacia rganos como el cerebro. NP de oro unidas selectivamente a agregados txicos amiloides (AT) involucrados en la enfermedad de Alzheimer fueron empleadas para su destruccin mediante la aplicacin de radiofrecuencias (2,3,4). Sin embargo, uno de los grandes desafos es dirigir las NP al cerebro donde se encuentran los mencionados AT. Para lograr este objetivo se conjugaron NP de oro a pptidos anfipticos aumentndose as el pasaje a travs de la barrera hematoenceflica (5). La conjugacin de NP con pptidos hace disminuir la interaccin con protenas plasmticas reducindose tambin la captacin por el sistema retculoendotelial y por rganos como bazo y hgado de manera tal de aumentar la disponibilidad en cerebro. Por otra parte, NP de oro fueron utilizadas para aumentar la entrega de pptidos antitumorales logrando reducir las dosis efectivas de los mismos ya que las NP actan como vehiculo para el transporte hacia el interior de las clulas (6). Se presentarn resultados relacionados con la preparacin, caracterizacin, toxicidad in vivo e in vitro y aplicaciones de las NP en diagnostico y terapia de diferentes patologas.
1- Kogan MJ y cols. Nanomedicine, 2,3, 287 (2007). 2- Kogan MJ y cols. Nanoletters 6, 1, 110 (2006). 3-.Araya E y cols. Nanoscale research letters 3, 11, 435 (2008). 4- Olmedo I y cols. Bioconjugate Chemistry 19, 6, 1154 (2008). 5- Guerrero S y cols, Nanomedicine, Vol. 5, No. 6, Pages 897-913 (2010). 6- Hosta L y cols. Bioconjugate Chemistry 20,1,138 (2009).

1,3

Universidad de Chile; 2 Universidad Andrs Bello; 3 Universidad de Santiago de Chile. E-mail: mkogan@ciq.uchile.cl

Las nanoparticulas (NP) presentan promisorias aplicaciones tanto en el campo de la entrega de frmacos (drug delivery) como en el tratamiento de diferentes patologas entre ellas las relacionadas con el sistema nervioso central. Por una parte, las NP llegan a diferentes sitios del organismo debido a su tamao y a los diferentes mecanismos de internalizacin y transporte celular emplendose como vectores para la entrega de frmacos y por otra parte, NP metlicas se utilizan para la llamada ciruga molecular en la que se destruye selectivamente el blanco teraputico debido a que las mismas absorben y disipan la energa de manera local. Las NP utilizadas en terapia y diagnostico deben ser no toxicas, biocompatibles y estables en diferentes medios biolgicos. Asimismo, para que su accin sea selectiva es necesario dirigirlas al sitio de accin deseado para lo cual pueden unirse a molculas como por ejemplo pptidos que presenten afinidad y selectividad por la diana (1). En nuestro laboratorio se desarrollan nanomateriales para el tratamiento y diagnostico de

Micelas polimricas como herramienta nanotecnolgica verstil en la optimizacin de la biodisponibilidad oral de frmacos
Alejandro Sosnik1,2
1

The Group of Biomaterials and Nanotechnology for Improved Medicines (BIONIMED), Departmento de Tecnologa Farmacutica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires, Argentina. 2Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET). Email: alesosnik@gmail.com

La baja solubilidad acuosa de frmacos constituye una de las limitaciones fisicoqumicas ms notables para lograr la absorcin adecuada de los mismos en el tracto gastrointestinal. Una de las estrategias nanotecnolgicas ms verstiles para mejorar la solubilidad acuosa de frmacos hidrofbicos es la encapsulacin en estructuras formadas por la

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autoagregacin de molculas polimricas anfiflicas en medio acuoso y denominadas micelas polimricas. Las mismas despliegan un ncleo hidrofbico y una corona hidroflica. Esta estructura las dota de una notable capacidad solubilizante; las molculas insolubles se pueden alojar en el ncleo, con lo que su solubilidad aparente puede llegar a superar en varios rdenes de magnitud su solubilidad intrnseca en un medio acuoso libre de micelas. La presentacin discutir el potencial de estos nanotransportadores como herramientas en la optimizacin de la biodisponibilidad oral de frmacos. En este contexto, se discutirn avances de nuestro grupo de investigacin en el desarrollo de formulaciones peditricas para el tratamiento de la infeccin por el Virus de Inmunodeficiencia Humana.

Microscopa de dos fotones: estructura de la piel de cerdo y penetracin de liposomas ultraflexibles

Dolores C. Carrer
Instituto Ferreyra (INIMEC-CONICET), Friuli 2434, 5000 Crdoba, Argentina. En este trabajo se caracteriz la arquitectura y las propiedades fsicas de la epidermis de piel de cerdo, incluyendo su permeabilidad a diferentes formulaciones de liposomas. Las imgenes de autofluorescencia muestran que las clulas de la epidermis estn organizadas en columnas o grupos, separados por estructuras que llamamos caones. Estos caones comienzan en la superficie como una arruga, eventualmente cerrndose y penetrando toda la epidermis hasta el estrato basal. El anlisis de la polarizacin generalizada de Laurdan en imgenes de la piel muestra que los caones estn formados por un material no polar pobremente hidratado, similar al material observado en el estrato crneo. Estos resultados sugieren que los caones son invaginaciones o extensiones del estrato crneo. Molculas lipdicas fluorescentes incorporadas en liposomas ultraflexibles penetran preferentemente a travs de los caones, alcanzando la capa basal y el plano de la dermis.

40 millones de personas infectadas. La farmacoterapia antirretroviral de alta actividad (HAART) fue introducida en 1996 y combina al menos 3 frmacos antirretrovirales (ARV). Las dosis son elevadas y los regmenes de administracin complicados. De acuerdo a estudios epidemiolgicos, niveles de adherencia inferiores al 95% reducen las posibilidades de xito teraputico a aproximadamente el 50%. El VIH peditrico ha sido eliminado casi por completo en pases desarrollados mediante la prevencin del contagio madre-feto. La situacin es notablemente diferente en pases emergentes, donde ~90% de los nios infectados no tienen acceso apropiado a la medicacin. La implementacin de la farmacoterapia peditrica constituye un desafo an mayor debido al reducido nmero de frmacos aprobados para uso en nios y la limitada disponibilidad comercial de formulaciones peditricas que permitan el ajuste de la dosis por peso corporal y la fcil deglucin. Sin embargo, la enfermedad no es curable debido a la conformacin de reservorios celulares y anatmicos donde el virus permanece en estado latente. La presentacin discutir las principales estrategias nanotecnolgicas investigadas para optimizar las farmacoterapia y los aspectos cientfico-ticos que deben ser considerados en dichos desarrollos.

Malaria
Nereide S Santos Magalhes
Pernambuco, Brasil A pesar del desarrollo tecnolgico y cientfico, la malaria contina siendo uno de los principales problemas de salud pblica que deben abordarse em sus multiples aspectos. Las estrategias modernas para el control de la enfermedad deben efectuar acciones conjuntas, como la lucha contra el insecto vector, el diagnstico rpido y preciso, asegurando un tratamiento adecuado, la reduccin de casos de resistencia, y el desarrollo de nuevos frmacos y vacunas por medio de la optimizacin de accin de los medicamentos utilizados en la actualidad. Los sistemas de liberacin controlada de frmacos han recibido una atencin especial en esta rea de investigacin, desarrollando estrategias para la introduccin de agentes bioactivos y vacunas bajo la forma de nanodispositivos, como liposomas, nanopartculas y micropartculas. Varios nanosistemas ya han demostrado as su eficacia en la optimizacin de las vacunas y la quimioterapia para el control de la malaria. Esta revisin de la literatura cientifica tiene como objetivo demostrar el potencial de la nanotecnologa farmacutica como una herramienta para la lucha contra la malaria.

Nanotecnologa aplicada a enfermedades desatendidas Nanotecnologas en la optimizacin de la farmacoterapia del VIH: Estado-delArte
Alejandro Sosnik
BIONIMED, CONICET Un reporte reciente sobre la situacin global de la infeccin por el Virus de la Inmunodificiencia Humana (VIH) indica que viven actualmente unas

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Nuevos-viejos desafos en el tratamiento de la tuberculosis

Alejandro Sosnik
BIONIMED, CONICET La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa bacteriana altamente contagiosa causada por bacilos pertenecientes al gnero Mycobacterium. En la actualidad, la enfermedad demuestra elevada incidencia en poblaciones pobres de pases no desarrollados; TB constituye la segunda causa de muerte por enfermedad infecciosa despus del VIH. Aproximadamente un tercio de la poblacin mundial actual se encuentra infectada con M. tuberculosis (5). Segn estadsticas de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), cada ao ms de 9 millones de personas adquieren la enfermedad, de las cuales slo el 5-10% desarrolla la enfermedad en forma activa. Dado que los pacientes con VIH son ms susceptibles a desarrollar TB activa y el incremento de la co-infeccin VIH/TB, la OMS declar la emergencia sanitaria global en 1993. El tratamiento de la TB incluye frmacos de primera lnea: isoniazida, rifampicina, etambutol, pirazinamida y estreptomicina, los cuales son utilizados en una terapia combinada por un perodo no menor a seis meses. Tambin, existen frmacos de segunda lnea que son utilizados en el tratamiento de cepas resistentes. En estos casos, los tratamientos son ms prolongados (9-12 meses) para asegurar la eficacia teraputica. Si bien la TB es curable, la baja y adherencia al rgimen teraputico constituye la principal causa de fracaso teraputico debido a las altas dosis y frecuencias de administracin y a lo prolongado del tratamiento. La conferencia abordar las principales aproximaciones estudiadas para mejorar los resultados teraputicos en la enfermedad.

ms importantes de los nano-objetos, es la

factibilidad de controlar su estructura para conseguir su distribucin selectiva en los sitios donde deben ejercer su accin, evadiendo el resto del cuerpo donde no son requeridos. Este targeting pasivo es fundamental para reducir los efectos txicos de citostticos o antimicticos
transportados, por ejemplo. En esta exposicin discutiremos nuestras experiencias pre-clnicas aplicando nano-objetos como agentes antichagsicos (liposomas pH-sensibles). La estructura de los liposomas pH-sensibles experimenta una transicin de fase frente al descenso de pH en los endo/lisosomas. Consecuentemente su contenido acuoso es volcado al citoplasma celular. Luego de capturados in vitro por clulas infectadas con amastigotes de T cruzi cepas RA y Tulahuen, los liposomas pH-sensibles volcaron masivamente droga antichagasica al citoplasma y eliminaron los nidos de amastigotes, mientras que dosis iguales o mayores de droga libre, no. Administrados a un modelo animal de infeccin aguda, una cantidad nfima de droga en liposomas pH-sensibles elimin la parasitemia al cabo de cuatro semanas, en tanto una dosis 200 veces mayor de droga libre no afect el curso de la infeccin. El control del trfico intracelular provisto por diferentes nanomedicinas es una promisoria herramienta para el tratamiento del Mal de Chagas tanto agudo como crnico.

Leishmaniasis Maria Jose Morilla

PNM, UNQ La Leishmaniasis es una enfermedad parasitaria que se presenta en diferentes manifestaciones clnicas: lesiones ulcerosas de la piel (leishmaniasis cutnea), inflamacin destructiva de las mucosas (muco-cutnea) y como infeccin diseminada en las vsceras (kala-azar). Todas estas manifestaciones son causadas por el parasito de leishmania que una vez en el interior del cuerpo del husped se aloja dentro de los macrfagos residentes en diferentes sitios anatmicos. La ubicacin escondida de estos parsitos es uno de los principales factores que impide la correcta llegada de las drogas leishmanicidas en cantidades teraputicas a los parsitos. El desarrollo de nano-objetos podra permitir contar con formas de administracin que utilicen rutas menos invasivas que las actuales, que aumenten la actividad leishmanicida de las drogas y que reduzcan la toxicidad de la medicacin actual. Luego de ms de 30 aos de investigacin en el campo, actualmente AmBisome (liposomas unilamelares conteniendo anfotericina B) administrado por va parenteral es la nica nanomedicina en uso contra la forma visceral de la enfermedad, mientras que el uso de nanomedicinas para las formas cutnea y muco-cutnea contina en

Nanomedicinas: su aplicacion como agentes antichagasicos

Eder Romero
PNM, UNQ El termino Nanomedicina engloba el empleo de cualquier tipo de nano-objeto capaz de ejecutar funciones teraputicas y/o de diagnstico en Medicina. Los nano-objetos mas empleados en teraputica son las nanoparticulas (materiales con tres dimensiones por debajo de los 250-300 nm). Tanto pequeas molculas hidrofobicas como macromolculas pueden ser incorporados a nanoobjetos; as la resultante de nano-objeto + principio activo es una nanomedicina. Tanto farmacocintica como biodistribucion y trfico intracelular de la droga transportada son independientes de su estructura qumica, pero dependientes de la estructura, tamao, forma, naturaleza superficial y qumica del nano-objeto. Una de las propiedades

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pre-clnica. El desarrollo de nanomedicinas contra las diferentes formas de leishmaniasis podra contribuir al desarrollo de nuevas y ms eficientes estrategias teraputicas.

tica en nanotecnologa con aplicaciones a la salud humana

Karen Hallberg
Centro Atmico Bariloche, Argentina La nanotecnologa tiene aplicaciones en la mayora de las ramas de la ciencia y la tecnologa. Siendo un rea nueva del desarrollo tecnolgico, es necesario reflexionar sobre los aspectos ticos, .

legales y sociales, as como sus consecuencias en el ambiente, la salud, la seguridad y el desarrollo humano. Durante la exposicin se discutir sobre la situacin actual en estos temas y en particular sobre posibles acciones tanto para evitar algunos aspectos negativos como para incentivar el desarrollo de la nanotecnologa para mejorar la condicin humana especialmente en los pases en desarrollo. Esta nueva tecnologa abre nuevas posibilidades para mejorar la calidad de vida de las personas, un desafo que requiere de equipos interdisciplinarios, y es importante que se desarrolle en forma responsable respetando los principios ticos fundamentales

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PARTE IV

1er Simposio Latinoamericano de Nanomedicinas

Resmenes de trabajos
Seccin 1: Nano y micro partculas polimricas Obtencin de microesferas de quitosano modificadas con molculas dendrticas de primera generacin.
Ana Agustina Aldana, Miriam C. Strumia y Marisa Martinelli
Departamento de Qumica Orgnica IMBIVCONICET Fac.Cs. Qumicas UNC aaldana@fcq.unc.edu.ar Introduccin: Los polmeros dendronizados son hbridos estructurales formados por un esqueleto polimrico y dendrones como grupos pendientes. stos son de especial inters debido a su compleja arquitectura, hiperramificacin con un alto grado de funcionalidad y propiedades fsicas nicas, tal como baja viscosidad con alto peso molecular. 1 Es importante destacar que, el uso de fuentes renovables en arquitecturas moleculares complejas es de gran inters debido a la bsqueda de sustitutos de materiales derivados de petrleo. El quitosano es un biopolmero obtenido de la desacetilacin de quitina, el cual es biocompatible, biodegradable y posee propiedades como antitrombognico, homeosttico e inmunognico. 2-3 Por otro lado, las micro/nanoparticulas polimricas biocompatibles han atrado considerablemente la atencin como potenciales vehculos para liberacin controlada y sitio-especfica de drogas. El quitosano combina caractersticas bioadhesin y flotante, adems, alta biocompatibilidad y biodegradabilidad hacindolo favorable para la formacin de esferas.4-5 El objetivo del presente trabajo, es desarrollar nuevos materiales polimricos a partir de quitosano modificado con molculas dendrticas en forma de microesferas, y el estudio del efecto de la dendronizacin sobre las propiedades originales del polmero. Resultados: En primer lugar, se sintetizaron dendrones de 3 o 6 grupos perifricos de distinta polaridad (-tert-butilo, -COOH) y con un grupo amino como punto de anclaje al polmero. El quitosano fue obtenido en forma de microesferas, y activado con espaciadores (epiclorhidrina y butilendiglicidilter) para llevar a cabo la posterior unin de dendrones con grupos amino. Finalmente, se unieron los dendrones a las esferas. Los sistemas obtenidos se caracterizaron por FT-IR y RMN. En todos los casos la incorporacin de los dendrones de primera generacin fue mayor que los de segunda generacin. Adems, mayor incorporacin de dendrn se observ cuando el espaciador es ms largo (BDGE). Esto demuestra la importancia del impedimento estrico. A travs de las imgenes obtenidas por MEB, se determin un dimetro medio en el rango de 0,8 1,2 mm con poca variacin de tamao luego de la dendronizacin. Por otra parte, se realizaron estudios de hinchamiento (Esw) a distintos pH (1,2 y 7,4). A travs de estos estudios se observ un mayor hinchamiento en las esferas con ECH a pH 1,2 y tambin, el aumento de la generacin del dendrn produce un aumento de Esw. A pH 7,4, se observ el comportamiento inverso. Con Ch-ECH, probablemente, se ha producido la dendronizacin principalmente en la superficie, mientras que con BDGE, una penetracin de los dendrones dentro de las esferas podra ser posible dado el menor porcentaje de hinchamiento y que no se observ una variacin marcada con el cambio del pH o la generacin de la dendrn. Adems, en este caso hemos observado porcentajes ms altos de la incorporacin de dendrn. Por lo tanto, ECH fue el mejor espaciador y permitio la modificacin de la superficie y el BDGE fue el mejor entrecruzante y espaciador, dentro y fuera de la microesfera, obtenindose los mayores porcentajes de dendronizacin. Conclusiones: Se lograron obtener microesferas dendronizadas la cuales, teniendo en cuenta las ventajas bien conocidas del quitosano y con la posibilidad a darle a su superficie, las propiedades multivalentes a travs de la introduccin de las molculas especficas (como molculas solubilizadoras o drogas especficas como receptores de membranas, cido flico)

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representan materiales de gran inters dado a sus potenciales aplicaciones como macro-carriers de liberacin controlada de drogas en terapias diferentes como el cncer. Referencias
1) stmark E, Lindqvist J, Nystrm D, Malmstrm E; Biomacromolecules, 8, 12, pp 38153822 (2007). 2) Duarte M L, Ferreira M C; Int J of Biological Macroms, 31, 1 (2002). 3) Sashiwa H, Sei-ichi Aiba; Prog Polym Sci., 29, pp 887908 (2004). 4) Yassin A E B, Alsarra I A, Al-Mohizea A., Sci Pharm, 74, 175-188 (2006). 5) Agnihotri S A, Mallikarjuna N N, Aminabhavi T M; J of Controlled Release, 100, 5-28 (2004).

Preparation and characterization of PLGA nanospheres, containing 5Fluorouracil, coated with Folic acid and Chitosan for targeted drug delivery.
Adriana Calderini1, Francisco B.T. Pessine2
Instituto de Qumica, Universidade Estadual de Campinas, Campinas - SP, CEP 13084-970 1 acalderini@iqm.unicamp.br, 2 francisco.pessine@iqm.unicamp.br Introduction: 5-fluorouracil (5-FU) is one of the most used drugs to treat cancers. In summary, the major biochemical effect of 5-FU is the inhibition of DNA synthesis, since concentrations which inhibit this synthesis may still permit RNA synthesis. It possess severe adverse effects as myelo suppression, mucositis, dermatitis, diarrhea and cardiac toxicity.[1,2] As it is well known, its encapsulation in nanoparticles can reduces these adverse effects, prolong its release and the carrier can be placed directly to its site of action. The conjugation of the nanospheres (NS) with Chitosan (CTS) is expect to add some of its properties as absorption-enhancing effect, controlled releasing and bioadhesivity [4] Folic acid helps to solve some limitations to deliver drugs to cancer cells, because cell surface receptors for folic acid are generally overexpressed on human neoplasic cells and since folate conjugates enter cancer cells by receptormediated endocytosis. [5] In this work, we study the preparation of a new formulation of 5-FU loaded PLGA NS coated with CTS-FOL, which could improve the delivery of this drug to cancer cells and the efficacy of the chemotherapy treatment. Results and Discussion: Firstly, we have prepared the nanoparticles by the double emulsion method using a central composite experimental design. Secondly, CTS-FOL was synthesized following the method used by Dub et al. [4] and we adsorbed it in PLGA NS surface by testing different volumes of 1% CTS-FOL solution (w/v) in acetic acid 1%. The pH was changed to 5, 6 and 7. The diameter and polydispersity index was monitored with time by Dynamic Light Scattering. The zeta

potential was also obtained and the no precipitation was observed. The morphology was observed by Scanning Electron Microscopy. The 5-FU content was calculated by CHN analyses. The release profile was performed via dialysis and the best lyophilized formulation was obtained studying different cryoprotectors and different concentrations. By testing different amounts of CHI-FOL and the pH with which formulation tested was possible to find the best CTS-FOL:NS rate and pH were the particles remain stable for a prolonged time, with no precipitation, size and polidispersity index almost unchanged, and high zeta potential. The best formulation was found CTS-FOL 0.5% in buffer acetate pH 5, with no precipitation and good stability. The best concentration of cryoprotectors was found to be 400mmol.L-1 of threalose and 250 mmol.L-1 sacarose. The release profile was characterized by a burst in the first three hours and a slow release for at least four days. Conclusion: Through an experimental design we could find particles with good drug content and encapsulation efficiency. The changing of the amount of CTS-FOL and the pH in which formulation tested was possible to find the best CTS-FOL:NS rate and pH were the particles remain stable for a prolonged time, with no precipitation, no significant variation of size and polidispersity index and high zeta potential. In vitro studies are being done to prove the efficacy of this new formulation in several tumor cells. Acknowlegments Thanks to CAPES for financial support. References
1) B.C. Rudy, B.Z. Senkowski, (1973) Fluorouracil. In: Analytical Profiles of Drug Substances 2, 221, ed. K. Florey, Academic Press. 2) S.M. Bayomi, A.A. Al-Badr (1989) Fluorouracil. In: Analytical Profiles of Drug Substances 18, 599, ed. K. Florey, Academic Press. 3) V. Dodane, V.D. Vilivalam (1998) Pharmaceutical applications of chitosan. PSTT 1, 246-253. 4) D. Dub, M. Francis, J.C. Leroux, F.M. Winnik (2002) Preparation and tumor cell uptake of poly(Nisopropylacrylamide) folate conjugates. Bioconjugate Chemistry 13, 685692. 5) S. Wang, P. S. Low (1998) Folate-mediated targeting of antineoplastic drugs, imaging agents, and nucleic acids to cancer cells. Journal of Controlled Release 53, 39-48.

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Nanopartculas de quitosano para la encapsulacin de drogas: Potenciales aplicaciones en tuberculosis

Mariana E. Langenheim1, Diego A Chiappetta1,2, Marcela A. Moretton1,2, Jos A. das Neves3, Bruno Sarmento3, Alejandro Sosnik1,2*
1

The Group of Biomaterials and Nanotechnology for Improved Medicines (BIONIMED), Departamento de Tecnologa Farmacutica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires, Argentina. 2Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET), Argentina. 3 Departamento de Tecnologa Farmacutica, Universidad de Porto, Portugal. *Contacto: alesosnik@gmail

Introduccin. La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa causada por distintas especies del gnero Mycobacterium. TB presenta una elevada incidencia en poblaciones pobres de pases en desarrollo. Entre los frmacos de primera lnea empleados en el tratamiento de la enfermedad se encuentran la rifampicina (RIF) y la isoniazida (INH). La infeccin es curable pero la baja adherencia a los regmenes teraputicos, resulta en bajas tasas de xito teraputico. El diseo de sistemas de liberacin localizada de frmacos antituberculosos en pulmn utilizando nanotransportadores polimricos ha surgido como una estrategia tecnolgica prometedora para disminuir la frecuencia de administracin y las dosis administradas, reducir los efectos adversos a nivel sistmico y mejorar la efectividad teraputica [1]. Sin embargo, las nanopartculas utilizadas deben presentar un dimetro aerodinmico adecuado para permitir la llegada y deposicin en las vas respiratorias bajas luego de la inhalacin. En este contexto, el empleo de polmeros mucoadhesivos permitira mejorar la retencin de las mismas y extender el tiempo de residencia, maximizando liberacin en el tracto respiratorio. Por otro lado, la modificacin qumica de la superficie de los nanotransportadores con ligandos reconocibles por receptores presentes en la superficie de los macrfagos alveolares, el principal reservorio celular del mycobacterium, aumentara la captacin selectiva del frmaco por parte de los mismos. El presente trabajo discutir los resultados preliminares de los estudios de encapsulacin de frmacos antituberculosos en nanopartculas de quitosano y la posterior modificacin qumica de la superficie para el direccionamiento activo del frmaco como potencial aproximacin para la optimizacin de la terapia antituberculosa. Materiales y Mtodos. Los materiales empleados son quitosano de distintos pesos moleculares (low molecular weight, LMW, 50190KDa; medium molecular weight, MMW, 190-

310 KDa; high molecular weight, HMW, 310>375KDa), tripolifosfato pentasdico (TPP, entrecruzante inico), glutaraldehdo (GA, entrecruzante qumico), cido actico 2%, RIF, galactosa, solventes de grado analtico y membranas de dilisis. Las nanopartculas se obtienen inicialmente por gelificacin ionotrpica de de quitosano 0.20%-0.25% en TPP 0,1% y posterior entrecruzamiento qumico con GA (0,005%-1%). El tamao, la distribucin de tamaos y el potencial zeta se determinaron por difraccin de luz lser (DLS). Para evaluar estabilidad fsica de las partculas obtenidas a distintos valores de pH (45,5), las muestras se almacenaron a diferentes temperaturas (15C-40C) y el tamao y la distribucin de tamaos fueron monitoreadas durante 7 das. Resultados. Inicialmente se obtuvieron diferentes lotes de nanopartculas control (sin frmaco) utilizando quitosano LMW 0.20% a valores de pH entre 4-5,5 y 0,25% a pH 5,5, respectivamente. El entrecruzamiento ionotrpico se realiz con TPP 0,1% en proporciones quitosano:TPP de 8:1, 6:1,4:1 y 2:1. Los resultados obtenidos hasta el momento indican que mediante a regulacin del pH y de la concentracin de polmero y TPP, se puede ajustar el tamao de las nanopartculas obtenidas. Por ejemplo, en el caso de soluciones de quitosano 0,20%, las partculas generadas mostraron tamaos en el rango de 250300 nm. El posterior entrecruzamiento con GA provoc la contraccin de las nanopartculas y disminucin de los tamaos a 220-260 nm. Por el contrario, el aumento de la concentracin de quitosano a 0,25% provoc un aumento dramtico a tamaos de 1000-1500 nm. En este caso el entrecruzamiento con GA no result en la reduccin del tamao de las nanopartculas. Adems, se han modificado las nanopartculas con galactosa mediante reacciones de adicin de restos amina libre en el quitosano al grupo aldhedo del monosacrido, para la formacin de bases de Schiff. En la prxima etapa se estudiar la encapsulacin de RIF como frmaco modelo en dichas nanopartculas y la captacin in vitro por parte de macrfagos. Conclusiones. Las nanopartculas obtenidas con quitosano 0,20% a pH 5,0 en todas las relaciones de quitosano:TPP permite un mayor control del tamao y ser considerado como candidato en la incorporacin de droga RIF. Dicho pH es compatible con RIF, la cual demuestra alta inestabilidad qumica a valores de pH extremos. Referencias.
Sosnik A, Chiappetta DA, Moretton MA, Glisoni RJ, Carcaboso A, New old challenges in tuberculosis: Potentially effective nanotechnologies in drug delivery, Adv Drug Del Rev, 62, 547-559 (2010).

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Poly-epsilon-caprolactone/chitosan nanoparticles: physicochemical characterization, blood compatibility and potential application as active vectorization system
Bender E.A.1,2; Adorne M. D.2; Abdalla D.S.P.3; Guterres S.S.1; Pohlmann A. R.1,2
Faculdade de Farmcia - UFRGS; 2 Instituto de Qumica - UFRGS; 3Faculdade de Farmcia USP Porto Alegre RS, Brasil Introduction: Of critical importance for systemically administered nanoparticles (NP) is their compatibility with blood and blood cells. There are different studies using nanoparticles mainly to transport drugs, genes or in diagnostic imaging. These studies are focused on different biological applications1,2. However, complete characterization of the particles under the physiological conditions is still lacking2. Surface modifications that inhibit capture by the immune system or complexation with ligands are able to decrease the interaction of nanoparticles with proteins present in biological fluids. Moreover, the functionalization with carbohydrates, peptides and antibodies can direct these nanostructures to specific sites in the body1,3. This goal is challenging, but highly interesting as a means of reducing adverse effects, increasing drug half-life and promoting physical and chemical stability of various compounds 1,4. Objective: The aim of this study is to develop and characterize PCL nanocapsules coated with chitosan as a model for antibody binding in an active vetorization system. Beisdes, this study was focused in to assess the hemocompatibility of the proposed system. Materials and Methods: Nanoparticles made of PCL were prepared by interfacial deposition of pre-formed polymers (NC PCL). After that, these nanoparticles were coated with chitosan (NC PCLCS). The size and size distribution of particles were evaluated by laser difraction, dynamic light scaterring (DLS) and nanoparticle tracking analysis (NTA). The values of surface charge (zeta potential) before and after coating with chitosan were determined by electrophoretic mobility. Hemocompatibility studies using two differents concentrations of NC PCL and NC PCL-CS (2 and 10% w/v) in human blood was carried out by evaluation of hemolisys, platelet function, membrane integrity, and blood coagulation. Results and Discussion: We can verify that the nanocapsules maintained their nanometric size even after coating with chitosan. Size mean values were 119 1.71 and 133 1.12 nm for NC PCL and NC PCL-CS respectively. Both nanoparticle suspensions showed a monodisperse distribution in all measurement particle size tecchniques used, which is of great importance for parenteral
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systems4. The polydispersity index (PDI) were lower than 0.17. The NC PCL suspension showed negative zeta potencial (-15.1 mV), while the NC PCL-CS suspension presented a positive value (+ 9.3 mV). The evaluation of the extrinsic coagulation pathway (prothrombin time - PT) showed that NC PCL and NC PCL-CS in both concentrations used did not significantly change the plasma clotting time, keeping the prothrombin activity higher than 70%, as recommended. The intrinsic pathway (activated partial thromboplastin time - aTTP) presented higher activation in 10% (w/v) nanocapsules concentration in plasma, but keep within the reference limits. For the same concentration of NC PCL and NC PCL-CS in the blood, we observed significant hemolysis after 8 h evaluation, differently from that observed in the concentrations of 2% (< 4% of the hemolyis). Besides, there was no presence of platelet aggregates in a blood smear containing NC PCL or NC PCL-CS (2 and 10% w/v) was analyzed under

optical microscope.
Conclusions: The particle distribution of NC PCL and NC PCL-CS systems were in nanometrical range. The NC PCL-CS system is promising to be functionalized with antibodies. Besides the hemocompatibility studies showed that NC PCL and NC PCL-CS had an acceptable degree of hemocompatibility and therefore they can be considered suitable for intravenous administration. References:
1. K. Letchford et al., Eur. J. Pharm. and Biopharm. 196, 206 (2009); 2. N. Nafee et al., Int. J. Pharm. 130,139 (2009); 3. A. Mayer et al., Toxicology. 139, 147 (2009); 4. M. A. Dobrovolskaia et al. Nanomed.-Nanotec. Biol. Med. 106,117 (2009)

Insights into polymeric cellulose acetate as carrier for a copper-sulindac metallodrug

AC Pio Santos, IM Costa, D de Oliveira Silva
Departamento de Qumica Fundamental - Instituto de Qumica USP Av. Prof. Lineu Prestes, 748, B2T, CEP: 05508-000 - So Paulo, SP, Brasil. acps@.iq.usp.br Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely prescribed for inflammatory diseases. However, they are a matter of concern because of side-effects on gastrointestinal tract. An interesting way to circumvent this problem is metal coordination. Copper complexes such as copperindomethacin have advantageously replaced the drug indomethacin in veterinary therapy. Our group has reported that side-effects of ibuprofen can also be significantly reduced when it is orally administered as a copper-ibuprofen compound [1]. On the other hand, the development of sustainedrelease systems of NSAID/biocompatible polymer

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has attracted much attention with the aim to enhance therapeutic efficacy and to decrease toxicity. Additionally, we have showed that spray-drying of drug/polymer mixtures can be used to prepare nanoor micro- particles in order to improve dissolution rate and oral bioavailability of drugs [2]. In the present work we report studies on interactions of a Cu(II)-sulindac compound (CuSulin) and cellulose acetate (CAc). A CuSulin/CAc hybrid material has been prepared starting from CuSulin and CAc in the presence of Tween-80, Span-80, mineral oil and monohydrated lactose. The product isolated by spray-drying (58 % yield) was characterized by elemental analysis, FTIR vibrational spectroscopy, powder X-ray diffraction, thermal analysis (TGA/DSC/MS), scanning electron microscopy and dynamic light scattering. CuSulin/CAc exhibits noncrystalline diffraction pattern. The distribution of particle sizes indicates a medium diameter of 80 nm. Comparison between FTIR spectra of CuSulin/CAc and the physical-mixture of CuSulin and CAc gives

evidence for interaction of copper complex with the polymer in the hybrid material. Thermal decomposition of this material occurs above 185 oC. Preliminary studies based on high performance liquid chromatography are underway to follow the drug release in vitro. The results show that spraydrying can be useful for preparation of hybrid materials containing nanometric particles of copperbased NSAIDs which are interesting approach to alternative low-gastrointestinal damaging antiinflammatory metallodrugs. Acknowledgements: Financial support from FAPESP and CNPq Brazilian agencies. References
[1] Andrade, A.; Namora, S.F.; Woisky, R.G.; Wiezel, G.; Najjar, R.; Serti, J.A.A., de Oliveira Silva, D., J. Inorg. Biochem. 81, 23, 2000. [2] Pio Santos, A.C.; de Oliveira Silva, D.; Abstracts of the 11th Conference on Advanced Materials, Rio de Janeiro, Brazil, 2009

Seccin 2: Nanopartculas polimricas Aspectos Moleculares de la Nanoencapsulacin de Rifampicina en Micelas Polimricas de Tipo Flor.
Marcela A Moretton1, 2, Diego A Chiappetta, Alejandro Sosnik1, 2
Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET). 2The Group of Biomaterials and Nanotechnology for Improved Medicines (BIONIMED), Departamento de Tecnologa Farmacutica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires (UBA). Introduccin. La tuberculosis es una enfermedad infecciosa altamente contagiosa de alto impacto en la sociedad actual. Constituye la segunda causa de muerte por enfermedad infecciosa despus del VIH/SIDA. La rifampicina (RIF) es uno de los frmacos de primera lnea de alta efectividad utilizado ampliamente en el tratamiento de la enfermedad. Esta droga presenta una serie de desventajas (bio)farmacuticas: (1) baja solubilidad en medio acuoso (1-3 mg/ml entre pH 3-7.4 respectivamente) y (2) baja estabilidad qumica en medio acuoso a pH tanto cido como bsico. La degradacin en medio cido se encuentra acelerada notablemente en presencia de otro frmaco antituberculoso denominado isoniazida (INH); RIF e INH se co-administran durante la farmacoterapia. Desde el punto de vista tecnolgico, la incorporacin de la RIF en nanotransportadores conocidos como micelas polimricas no slo permitira una mejora en la solubilidad acuosa del frmaco sino tambin otorgarle una mayor estabilidad qumica y disminuir la interaccin con INH en la terapia combinada, mejorando su biodisponibilidad oral. Sin embargo, el elevado
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volumen molecular de RIF dificulta el proceso de encapsulacin dentro de micelas polimricas. Nuestra hiptesis de trabajo fue que la utilizacin de micelas polimricas de tipo flor (flower-like), las cuales presentan un ncleo micelar de mayor tamao permitirn mejorar su incorporacin. En este contexto, el presente trabajo estudi los aspectos moleculares que gobiernen la encapsulacin de RIF en micelas poli(-caprolactona)-poli(etilenglicol)poli(-caprolactona) (PCL-PEG-PCL), las cuales por poseer una arquitectura molecular que combina dos bloques hidrofbicos terminales con un bloque hidroflico central deben plegarse generando agregados con un dominio hidrofbico de mayor tamao. Materiales y Mtodos. Los materiales utilizados fueron: PEG de diferente peso molecular (6000 Da, 10000 Da y 20000 Da),-CL, octanoato de estao (SnOct, catalizador), RIF, solventes de grado analtico y membranas de dilisis. La sntesis polimrica asistida por microondas (MAPS) se llev a cabo mediante una reaccin de polimerizacin de apertura de anillo de -CL por iniciadores de PEG y catalizada por SnOct. Los copolmeros se caracterizaron mediante 1H-RMN, GPC, FT-IR, se determin la concentracin micelar crtica por tensin superficial a 18C, su solubilidad en medio acuoso mediante gravimetra, comportamiento trmico por DSC, tamao micelar, distribucin de tamao y potencial zeta de las soluciones micelares con y sin frmaco mediante DLS. La obtencin de los sistemas micelares con y sin frmaco se llev a cabo mediante la tcnica de evaporacin del cosolvente (acetona) de la fase acuosa. La cuantificacin de RIF en los sistemas micelares se

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llevo a cabo mediante espectroscopia UV. La morfologa micelar se estudio mediante microscopa electronica de transmisin (TEM). Los ensayos de liberacin in Vitro se realizaron utilizando el mtodo de la membrana de dilisis en buffer fosfato pH 7.4 a 37C para tres concentraciones de copolmero (1%-4%-6%). Resultados. Se sintetizaron 10 copolmeros de diferente peso molecular y balance hidroflico/hidrofbico. Los valores de CMC se encuentran en el orden de 10-6M y disminuyen a medida que se incrementa la hidrofobicidad del polmero. En concentraciones tericas entre 1%-4%, el 90% del polmero permanece en solucin y los tamaos micelares se hallan entre 50-460 nm respectivamente. Estos tamaos se incrementan entre el da 0 y el da 7 dada la formacin de agregados producto de la baja estabilidad fsica del sistema micelar en medio acuoso. El potencial zeta de las micelas cargadas con RIF fue neutral lo que sugiriendo que RIF se incorpora preferentemente en el ncleo micelar. La solubilidad aparente (Sa) en agua de RIF se logr incrementar hasta 5.43 veces superando lo estudiado hasta el momento tanto con ciclodextrinas como con dendrmeros modificados. Los ensayos de liberacin in Vitro demuestran una cintica de liberacin de orden uno. Conclusiones. Se logr la encapsulacin de RIF en micelas polimricas flower-like de PCLPEG-PCL, mejorando la Sa en medio acuoso. El tamao micelar, una de las propiedades cruciales para una adecuada incorporacin del frmaco, es principalmente controlado por el PM del bloque central (PEG). Copolmeros con una relacin CL/EO alta y bloques de PCL suficientemente largos, tienden a formar sistemas micelares con adecuada estabilidad fsica y con un ncleo capaz de incluir la voluminosa molcula de RIF. Copolmeros con PEG 10000 Y CL/EO >0.30 mostraron la mejor combinacin entre capacidad de encapsulacin y estabilidad fsica. Cabe destacar la necesidad de liofilizacin de los sistemas micelares con frmaco en el da 0 a fin de asegurar la adecuada estabilidad fsica del sistema a largo plazo.

Encapsulation of Thiabendazole in cyclodextrin: spectroscopic characterization and theoretical calculations

Guilherme L. Alexandrino and Francisco B. T. Pessine
Chemistry Institute, State University of Campinas UNICAMP Campinas, So Paulo, Brazil guialexandrino@iqm.unicamp.br Introduction: Thiabendazole [2-(4-tiazolil)1H-benzimidazole], TBZ, is a drug with wide pharmacological applications due to its antihelmintic, fungicide and bactericide

properties[1]. Cyclodextrins (CDs) are cyclic polysaccharides containing 6(), 7( ) or 8() glycopyranose molecules united by 1-4 chemical bonds, resulting in a hollow toroid-shape structure. This conformation creates two chemical environments, a hydrophobic inner cavity and a hydrophilic surface. The encapsulation of the high hydrophobic TBZ, in CDs is a powerful strategy to increase its bioavailability and decrease its undesirable side effects [2]. Results: The chemical environment change due to the encapsulation of TBZ in CD aqueous solutions reflects on its fluorescence spectra. The increase of the emission band intensity, when a fixed amount of TBZ is added to CD solutions with different molar concentrations, was investigated and the complex stability constant was obtained through the Benesi-Hildebrand non-linear model [3], eq.1 F = (F-Fo)*K1:1*[CD]/(1+ K1:1*[CD]) (1), F and Fo are the fluorescence intensity for the encapsulated and free TBZ molecules, respectively. K1:1 is the stability constant of a complex TBZ: CD with 1:1 stoichiometry. The experiment was done in buffer [KH2PO4] 50mM/NaOH pH 6.8 0.1 solution. It was obtained K1:1 = 6921 and R2 = 0.96 and the TBZ: CD stoichiometry was confirmed by the Job Plot (experimental details in ref. [1]) also by fluorescence measurements. NMR is the main experimental technique used for investigation of structural details of CDs complexes. Analysis based on Nuclear Overhauser Effects (NOE) provides the guest-CDs proton interactions, providing structural information of CDs complexes. For the TBZ: CD system, ROESY-1D (Rotating frame Overhause Effect SpectroscopY) was employed using DMSO-d6 solvent, due the low solubility of the complex in D2O. It was observed that the protons of thiazolil group of TBZ molecule interacted stronger with 1H(2), 1H(4), 1H(5) and 1H(6) of CD than those of benzimidazole group, suggesting preferred encapsulation from the thiazolil group in that solvent. It was expected complexation from benzimidazole group due to its higher hydrophobicity compared to that of the thiazolil group, but it is known that solvents can have important role in the guest orientation for CDs inclusion complexes [4]. Theoretical calculations are an important tool for further understanding the host-guest interactions and complex stability. As CDs systems have large numbers of atoms, the PM3 semi-empirical (approximate) quantum methods was employed, because the computer cost is less expensive than that of ab-initio calculations. Optimized complex structures were obtained simulating all possibilities of drug encapsulation. The center of CD was placed in the XY plane origin, whereas TBZ molecule was in the Z axis. Then, all TBZ molecule was passed though the CD

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cavity, and the complex structure optimization was done at each 1 TBZ displacement. No symmetry restriction was employed and no solvent molecules were considered in the calculations. Two graphics were ploted (one for each TBZ molecule orientation), and the most stable complex structure (lowest absolute energy) was obtained. Modifications in electronic and conformation properties of the complexed TBZ molecule were also investigated in the minimum energy structure using DFT theory with the basis set B3LYP/6-31*G. Conclusions: Fluorescence spectroscopy was a powerful technique for structural and thermodynamic studies of CDs complexes. Theoretical results were different from the NMR ones, revealing the importance of the solvent effects in the guest-CD interactions. References
[1] Lezcano, M, et al; J. Agric. Food Chem., 2002, 50, 108 [3] Benesi, M.L., et al; J. Am. Chem. Soc. 1949, 71, 2703 [2] Szejtli, J; J. Chem. Rev., 1998, 98, 1743 [4] Connors, K.A; Chem. Rev., 1997, 97, 1325

Poloxaminas, superfamilia de transportadores ABC y su rol para optimizar la farmacoterapia.

Cuestas, Mara Lujn1, 2; Mathet, Vernica Lidia1, 3; Sosnik, Alejandro1, 2
Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET). 2The Group of Biomaterials and Nanotechnology for Improved Medicines (BIONIMED), Departamento de Tecnologa Farmacutica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires (UBA). 3Centro para el Estudio de Hepatitis Virales, Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, UBA. Introduccin: Las poloxaminas son copolmeros anfiflicos termosensibles de poli(xido de etileno) (PEO) y poli(xido de propileno) (PPO). A diferencia de los poloxameros que presentan una estructura lineal, las poloxaminas son ramificadas y la presencia de dos grupos amina terciaria centrales les confiere dependencia del pH. En concentraciones superiores a la concentracin micelar crtica, estos copolmeros se autoagregan formando estructuras nanoscpicas denominadas micelas polimricas, las cuales han sido explotadas para encapsular y estabilizar qumicamente frmacos poco solubles en agua. Adems, estos copolmeros han demostrado actividad como inhibidores de protenas pertenecientes a la superfamilia ABC (ATP-binding cassette). Las ABC son bombas de transmembrana activas que transportan sustratos (frmacos) en contra del gradiente de concentracin, utilizando la hidrlisis de ATP como fuente de energa. Por ejemplo, en el intestino, dichas bombas de eflujo remueven
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frmacos en direccin basolateral-apical, provocando una disminucin de la absorcin efectiva del mismo y de las biodisponibilidad oral. En este contexto, su sobre-expresin est ntimamente asociada a la resistencia a mltiples frmacos antitumorales y antirretrovirales. Contrariamente a los poloxmeros que han sido ampliamente estudiados, la actividad inhibitoria de bombas ABC por parte de poloxaminas prstinas y N-alquiladas fue estudiado por primera vez por nuestro grupo [1]. As se evidenci la inhibicin de la actividad de la glicoprotena P en monocapas de clulas de carcinoma de colon (Caco2), un modelo in Vitro de epitelio intestinal y el aumento de la acumulacin de doxorrubicina. Una nueva lnea de investigacin en nuestro grupo es estudiar estrategias nanotecnolgicas para optimizar la farmacoterapia de hepatitis virales y el hepatocarcinoma asociado. En este contexto, el objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de poloxaminas con diferencias estructurales (peso molecular y balance hidroflico-hidrofbico) sobre la citotoxicidad y los niveles de ARNm de diversas protenas de la superfamilia ABC en una lnea celular heptica. Materiales y Mtodos: Se incubaron clulas de estirpe hepatocitaria (Huh7) con las poloxaminas T304, T904, T1107 y T1301 a diversas concentraciones (1%; 0,1%; 0,01%). Al cabo de 24, 48, 72, 96 y 168 h se evalu la variacin en la expresin relativa de los genes que codifican para las protenas ABC BCRP, MDR1, MRP1 y MRP2 mediante RT-PCR en tiempo real. Asimismo se analiz a las 24 h post-tratamiento con poloxaminas y mediante citometra de flujo la citotoxicidad de dichos copolmeros a las concentraciones ensayadas. La capacidad inductora de apoptosis se estudi con la tincin de anexina V-FITC/yoduro de propidio y calculando el porcentaje de hipodiploida por tincin del ADN como as tambin mediante la evaluacin del potencial de membrana mitocondrial con el colorante fluorescente Rhodamina 123. Finalmente se estim la hepatotoxicidad in Vitro mediante la determinacin del nivel de las enzimas hepticas GOT, GPT y fosfatasa alcalina en los sobrenadantes celulares. Resultados: Todas las poloxaminas fueron citocompatibles a baja concentracin (0,01%). Sin embargo, a concentraciones ms elevadas (0,1 y 1%), T904 indujo necrosis celular. Por otro lado, algunas de las poloxaminas estudiadas demostraron una variacin estadsticamente significativa en la expresin de genes ABC al compararse con las clulas control. Conclusiones: El efecto inhibidor de algunas poloxaminas sobre los niveles de ARNm correspondientes a los genes bcrp, mdr1, mrp1 y mrp2 fue demostrado por RT-PCR en tiempo real. Dicho comportamiento de algunos de estos copolmeros constituye nueva evidencia de la alta

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versatilidad de estos copolmeros como nanotransportadores de frmacos y como potenciales adyuvantes en la farmacoterapia de las enfermedades hepticas. Agradecimientos: MLC agradece la beca posdoctoral del CONICET. Los autores agradecen el apoyo de la UBA (UBACyT B424 y UBACyT M612). Referencias:
[1] Alvarez-Lorenzo C, Rey-Rico A, Brea J, Loza MI, Concheiro A, Sosnik A*, Inhibition of P-glycoprotein pumps by PEO-PPO amphiphiles: Branched versus linear derivatives, Nanomedicine, en prensa.

Preparation and characterization of dapsone inclusion complex in etacyclodextrin

Milene H. Martins, Adriana Calderini and Francisco B. T. Pessine
Instituto de Qumica UNICAMP, Brazil, milene@iqm.unicamp.br Introduction. Dapsone (DAP) has been the principal drug for the treatment of leprosy. As an anti-infective agent, it is also used for treating malaria, Pneumocystic carinii pneumonia in AIDS patients, Kaposi's sarcoma and other dermatoses. In some cases, therapy may be continued for 3 to 5 years. DAP therapy may cause a variety of adverse effects: methemoglobinemia, hemolysis, anemia, dyspnea, nausea, tachycardia, fatigue, anorexia, headache, dizziness, exanthematous eruption, Stevens-Johnson syndrome, toxic epidermal necrolysis and others1,2. The encapsulation of DAP in cyclodextrins could improve the water solubility, bioavailability and minimize side effects.The present study describes the inclusion complex formation of this drug with beta-cyclodextrin (CD). Results. The preparation of the complex was performed in two different methods: physical mixture (PM) and freeze drying (FD).The complex formation after liophilization was investigated by different methods and compared with its physical mixture and isolated compounds. The methods used were infrared spectroscopy (FT-IR), X-ray diffraction (XRD) and differential scanning calorimetry (DSC). The stability constant was calculated by phase solubility diagram (Higuchi Connors) and the stoichiometry of the complex was confirmed by Jobs plot. FTIR spectrum showed the disappearance of excitation of -SO2 asymmetric stretching band of the DAP at 1275 cm-1 after complexation. The amortization of the X-ray diffraction (XRD) patterns in the XRD difratograms in the complex was an indirect proof of the inclusion complex. Also, DSC curves showed an outstanding difference among the samples. We could clearly see that the thermal curves of the PM

are a combination of both constituents while the absence of the melting peak of the drug in the FD complex curve suggests the inclusion of the drug in the CD cavity. DAP provided a 1:1 supramolecular complex with -CD by Jobs plot. There was a linear increase in solubility of DAP with increasing concentrations of -CD and the complex was classified as AL- type. The value of the stability constant K1:1 was 3998 L.mol-1 calculated by the Higuchi-Connors Diagram indicated a strong interaction between the compounds. Conclusions. An inclusion complex of DAP/CD was prepared successfully by freeze drying method. The solubility of DAP was significantly increased in presence of -CD. The complex formed is stable and it exhibits 1:1 stoichiometry. The results obtained by different characterization techniques clearly indicate the formation of complexes between DAP and -CD. References. 1. Orzech C.E., Nash N.G. et al. Dapsone. Anal. Profiles Drug Subs. 5 (1976) 87-114. 2. Wolf R., Tzn B. et al. Dapsone: unapproved uses or indications. Clin. Dermatol. 18 (2000) 3753.

Sntesis de nuevos dendrmeros no citotxicos como potenciadores de la solubilidad de frmacos.

Delia Soto Castro1*, Jorge A. Cruz Morales1, Mara Teresa Ramrez Apan2 y Patricia Guadarrama Acosta1*
1 Instituto de Investigaciones en Materiales, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Apartado Postal 70-360, CU, Coyoacn, Mxico DF 04510, Mxico. 2Instituto de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Apartado Postal 70-213, CU, Coyoacn, Mxico DF 04510, Mxico*sotodelia@hotmail.com; patriciagua@iim.unam.mx

Los dendrmeros, debido a su potencial aplicacin en biomedicina (diagnostico y aplicaciones teraputicas (1-3), as como en otras reas de la qumica y la ingeniera de materiales, son una de las arquitecturas macromoleculares mas estudiadas en las ultimas tres dcadas. Especialmente en acarreo y liberacin de frmacos, los dendrmeros han sido estudiados para mejorar la solubilidad y reducir los efectos citotxicos de ciertos frmacos. En aos recientes grandes esfuerzos han sido desarrollados en la sntesis de dendrmeros con caractersticas bsicas para esta aplicacin, es decir, que sean monodispersos, multifuncionales, no citotxicos, biodegradables y solubles en agua (4). Sin embargo, aunque se han dado grandes pasos, an existen serios problemas por resolver.

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En este contexto, nuestro trabajo describe la sntesis de dos nuevas familias de dendrmeros basados en la esterificacin del 3-amino-1-propanol N-alquilado (dendrn) y dos ncleos, cido adpico (G2) y etilendiamina (G1.5) y su posterior hidrlisis para obtener dendrmeros con terminales de cido carboxlico, que brindan solubilidad en medios acuosos y adems pueden ser fcilmente funcionalizables. De acuerdo con la evaluacin citotxica de estos nuevos dendrmeros y de los posibles productos de degradacin en cultivos celulares primarios, estos materiales pueden ser considerados como no-citotxicos. Aunado a esto se evalu la capacidad de estos materiales para mejorar la solubilidad de dos frmacos prcticamente insolubles en agua a pH 7.4: el metotrexato (MTX, frmaco anticancergeno) y el albendazol (frmaco contra el cisticerco) con la finalidad de proponerlos como acarreadores para administrarse por va intravenosa. Las interacciones intermoleculares tipo husped-anfitrin entre frmaco-dendrmero resultan en un incremento de solubilidad hasta en dos rdenes de magnitud. Sin embargo, el dendrmero con ncleo de cido adpico, muestra resultados ms favorables, presumiblemente por la mayor flexibilidad en el ncleo, lo que recae en interacciones ms favorables. Estas interacciones varan enormemente al cambiar el pH de la solucin, en un pH de 4 la solubilidad mejora significativamente, donde las terminales carboxlicas estn protonadas y se favorecen las interacciones tipo puente de hidrgeno. Con los complejos formados entre el MTX y cada uno de los dendrmeros se realizaron estudios in vitro para determinar su citotoxicidad en diferentes lneas celulares cancerosas humanas as como en clulas sanas MT-2 (linfocitos humanos). Los resultados obtenidos indican que la citotoxicidad del MTX es muy similar a la del MTX libre en clulas cancerosas, pero la citotoxicidad hacia los linfocitos decrece drsticamente. En conclusin, los resultados obtenidos hasta ahora demuestran que los nuevos dendrmeros poseen las caractersticas idneas para actuar como acarreadores de frmacos. Referencias
1 S-E. Stiriba, H. Frey, R. Haag, Angew. Chem. Int. Ed., 2002, 41, 1329-1334; C.C. Lee, J.A. MacKay, J.M.J. Frchet, F.C. Szoka, Nature Biotech., 2005, 23, 15171526. 2 5. S.B.A. Halkes, I. Vrasidas, G.R.Rooijer, A.J.J. Van den Berg, R.M.J. Liskamp, R.J. Pieters, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2002, 12, 1567-1570. 3 F. Aulenta, W. Hayes, S. Rannard, Eur. Polym. J., 2003, 39, 1741; U. Boas, P. M. H. Heegaard, Chem. Soc. Rev., 2004, 33, 43-63 4 S. Svenson, D. A. Tomalia, Adv. Drug Deliv. Rev. 2005, 57, 21062129

Interaccin y pasaje transepitelial de megmeros a travs de clulas caco-2

Schilrreff Priscila, Romero Eder Lilia y Morilla Mara Jos.
Programa de Nanomedicinas, Universidad Nacional de Quilmes, Buenos Aires, Argentina. pschilrreff@unq.edu.ar Introduccin: La administracin de pptidos teraputicos por la va oral es un desafo aun no resuelto por la tecnologa farmacutica convencional. El desarrollo de un sistema de delivery es especialmente dificultoso, ya que deben superarse los problemas de la pobre biodisponibilidad oral, inadecuada estabilidad, corta vida media en plasma y escasa penetracin a travs de membranas biolgicas. En tanto los dendrmeros son polmeros tridimensionales monodispersos en la nanoescala de tamaos, los megmeros, que se obtienen por formacin de puentes covalentes o entrecruzamiento entre dendrmeros, poseen un nuevo grado de complejidad y mayor ordenacin. La oferta de gran cantidad de grupos superficiales resultante de la asociacin de un gran numero de dendrmeros, hace a los megmeros nano-objetos con elevada capacidad para entablar interacciones superficiales/ anclaje que pudieran ser tiles a la hora de inducir el delivery de pptidos en ellos incluidos, para as favorecer su captura en la zona apical del epitelio intestinal. En este trabajo proponemos estudiar la interaccin de megameros con un modelo clsico de barrera epitelial como son las clulas Caco-2. Materiales y mtodos: La sntesis de MG, core-shell (tecto) dendrmeros saturados, involucra la autoasociacin por neutralizacin electrosttica de una limitada cantidad de dendrmero core catinico (dendrmero PAMAM de generacin (G) 5 de grupos superficiales amina), con un exceso de reactivo de cubierta aninico (dendrmeros G 2,5 de grupos superficiales carboxilo) con la subsiguiente formacin de enlaces covalentes tras el agregado del carbodiimida. El producto resultante se purific mediante cromatografa de exclusin molecular (CEM) y se liofiliz obteniendo un slido blanco cristalino. La formacin y caracterizacin de los MG se estudi por: a) SDS-PAGE (Electroforesis en Gel de PoliAcrilamida) b) Cromatografa liquda de alta performance (HPLC) c) CEM d) Tamao, polidispersidad y potencial Z (dispersin dinmica cuasi-elstica de luz) e) AFM y f) MALDI-TOF. Luego se determin la citotoxicidad de los MG sobre clulas de adenocarcinoma humano Caco-2 (tipo enterocitos) con y sin mucinas, por el mtodo de formazn (MTT) y liberacin de enzima citoslica lactato deshidrogenada (LDH). Posteriormente, se marcaron MG con el fluorforo isotiocianato de fluorescena (MG-FITC) y se determin la tasa de internalizacin en clulas Caco2 por citometra de flujo. Finalmente, se evalu el

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pasaje transepitelial de MG-FITC en el modelo de epitelio intestinal de monocapas de clulas Caco-2 sobre insertos de polietilen tereftalato. Resultados: Se obtuvieron MG de estructura controlada, monodispersos con un tamao de 8 1.5 nm, potencial Z negativo (-10 mV) y peso molecular de 98000 Da en forma reproducible utilizando tcnicas de sntesis sencillas, con relativa alta pureza (se elimin el 92 % del DG 2,5 en exceso). Por otra parte, calculando la masa terica de MG inicial y determinando la masa final por HPLC se calcul que el rendimiento de sntesis y purificacin fue de un 50 %. La viabilidad de clulas Caco-2, ya sea cubiertas con una capa de mucinas de 5mg/ml (simulando la capa de mucus fisiolgica) o sin cubrir, tras 24 h de incubacin con diferentes concentraciones de MG (5-153 M) no se vio reducida, utilizando los mtodos complementarios de determinacin de citotoxicidad (MTT y LDH). Estos megmeros fueron capturados por enterocitos en funcin del tiempo hallndose un mximo tras 5 h de incubacin e indujeron el pasaje transepitelial de la sonda fluorescente FITC cuando se hallo asociada a ellos. Conclusiones: Este trabajo muestra que fue posible obtener megmeros de estructura controlada en forma reproducible y en escala del orden de los cientos de miligramos. Los MG obtenidos fueron puros, estructuralmente estables, monodispersos con un grado de saturacin de 85-90% lo que corresponde a la ubicacin de alrededor de 10-11 dendrmeros cubierta (G2,5) por dendrmero core G5. Los MG pudieron conservarse como polvo liofilizado sin afectar su tamao, potencial Z y peso molecular. Estos MG en ausencia de toxicidad, demostraron que fueron internalizados y permeabilizados por clulas Caco-2.

Trafico intracelular de dendriplex de siRNA en clulas de glioblastoma humano

Ana Paula Perez, Luz Cosaka, Eder L Romero y Maria J Morilla.
Programa de Nanomedicinas, Universidad Nacional de Quilmes, Buenos Aires, Argentina. apperez@unq.edu.ar Con el objeto de incrementar/facilitar el acceso de cadenas cortas de RNA interferentes (siRNAs) a clulas blanco, diferentes estrategias basadas en el empleo de nano-sistemas de entrega de drogas han sido ensayadas. En este trabajo empleamos dendrmeros catinicos, cuya elevada densidad de carga superficial positiva permite la formacin de complejos electrostticos con cidos nucleicos. Estudios previos en nuestro laboratorio [1] mostraron que complejos electrostticos de tamao nano-mtrico entre dendrmeros comerciales de poliamidoamina y siRNA (dendriplex), actuaron

como agentes de silenciamiento in vitro con una actividad comparable a la del agente comercial lipofectamina. A diferencia de esta ultima, los dendriplexs tendrian mayor estabilidad estructural in vivo. Las clulas eucariotas capturan y procesan material particulado mediante mecanismos endocticos, como fagocitosis y pinocitosis. nicamente macrfagos y clulas dendrticas son capaces de fagocitar (proceso activo y degradativo) material de hasta 20 m dimetro, en tanto que todas las clulas pueden pinocitar fluidos, solutos y partculas de dimetros en la nanoescala. Existen diferentes rutas pinociticas, como las dependientes (ruta degradativa) o independientes (rutas no degradativas que no culminan en los lisosomas) de clatrina. Entre estas ltimas se cuentan la endocitosis mediada por caveolina, la macropinocitosis y la endocitosis no mediada por clatrina no mediada por caveolina. Todas las clulas de mamferos son capaces de capturar material por endocitosis dependiente de clatrina, una ruta degradativa donde intervienen endosomas de acidez creciente (pH 5-6) para culminar en los lisosomas (pH ~4.5 y enzimas degradativas). Las clulas musculares, endoteliales, fibroblastos y adipocitos son capaces adems de capturar material por endocitosis dependiente de caveolina, una ruta donde intervienen caveosomas y trfico retrogrado desde el trans-golgi network al reticulo endoplasmtico para culminar en el citosol [2]. El correcto trfico intracelular de los dendriplexs depende de la modalidad de captura y es responsable de una adecuada transfeccin. Conociendo la ruta primaria seguida por el dendriplex, la misma podra modificarse introduciendo cambios en su estructura, lo que permitira incrementar su tasa de captura, su delivery al citoplasma, reducir su exocitosis o su degradacin en lisosomas. En este trabajo se estudi la tasa de internalizacin y la modalidad de captura de dendriplexs siRNA-G7 en clulas T98G (glioblastoma) y J774 (macrfagos), utilizando los inhibidores metil--cyclodextrina (MCD), filipin, cloroquina, citocalasina D (CtD) y nocodazole. Para ello, en principio se estudi la citotoxicidad de los inhibidores por los ensayos de MTT y LDH. Luego se determin la captura de dendriplexs utilizando siRNA marcado con el fluorforo Cy3, en ausencia o presencia de los inhibidores, por citometra de flujo. La internalizacin de los dendriplexs tanto en clulas J774 como en clulas T98G aument linealmente al aumentar el tiempo de incubacin hasta las 5h de incubacin. Los tratamientos con MCD y CtD disminuyeron significativamente la captura de los dendriplexes (75 y 65%, respectivamente) en ambos tipos celulares. Los tratamientos con cloroquina y con nocodazole

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disminuyeron significativamente la captura de dendriplexs en clulas J774 (80% y 75%, respectivamente) pero no modificaron la captura en clulas T98G. El tratamiento con filipin no afect la captura de los dendriplexs en ningn tipo celular. Esto indic que en clulas J774 los dendriplexs ingresaran por mecanismos degradativos donde estn involucrados el contenido de colesterol, la acidificacin de endosomas, el citoesqueleto de actina y los microtbulos. Al tratarse de macrfagos la va de ingreso seria fundamentalmente por fagocitosis. En cambio, en clulas T98G los dendriplexs ingresarian por una va no degradativa donde estn involucrados el contenido de colesterol y el citoesqueleto de actina. Esto podra indicar el ingreso por macropinocitosis. Los ensayos fueron complementados con estudios de co-localizacion de siRNA y dendrmero en el interior celular y co-localizacin de los dendriplexs con el marcador de endocitosis mediada por clatrina (transferrina), con el marcador de rafts lipdicos (toxina colrica) y con el marcador de lisosomas (lysotraker), por microscopia confocal de fluorescencia. Los resultados obtenidos mostraron que en clulas J774 los dendriplexs siguieron una ruta degradativa que culmin en lisosomas, en tanto

en clulas T98G si bien se siguieron rutas mltiples, donde una de ellas no culmin en lisosomas, se evidenci una separacin del siRNA de los dendrmeros dentro de la clula. Contrastados con los valores de silenciamiento, que resulto mayor en J774 que en T98G, estos resultados podran indicar que el silenciamiento efectivo se relacionara con la ruta intracelular seguida. La acidez del medio sobre los dendriplexs procesados por una ruta degradativa dejara libres a los siRNA para acceder al citoplasma. Por el contrario, los dendriplexs procesados por vas no degradativas, no se desensamblaran. As, a pesar de hallarse elevadas cantidades de siRNA intracelular en T98G, el mismo no estara disponible para silenciar. El control de las nanoestructuras tal que transitaran por rutas adecuadas seria la clave para incrementar el silenciamiento. Referencias
1. Perez AP, Romero EL, Morilla MJ. Ethylendiamine core PAMAM dendrimers/siRNA complexes as in vitro silencing agents. International journal of pharmaceutics. 2009; 380(1-2):189-20 2. Gaurav Sahay, Daria Y. Alakhova, Alexander V. Kabanov. Endocytosis of nanomedicines. Journal of Controlled Release 145 (2010) 182195

Seccion 3. Nanopartculas aplicadas al diagnostico y desarrollo de nano-aparatos Determinacin electroqumica de dopamina utilizando nanotubos de carbono dispersos en una matriz polialilamina/dodecilsulfato
M. Lorena Corteza,b, Ana Lea Cukiermanb, Fernando Battaglini a
INQUIMAE, Departamento Qumica Inorgnica, Analtica y Qumica Fsica. b PINMATE, Departamento de Industrias Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Universitaria, C1428EHA Buenos Aires, Argentina Introduccin: La dopamina (DA) es una de las catecolaminas ms importantes, pertenece a la familia de neurotransmisores qumicos y desempea un papel importante en el funcionamiento del sistema nervioso central, los sistemas renal y hormonal. La determinacin de DA es un tema de gran importancia, ya sea para la investigacin de sus caractersticas fisiolgicas y funciones como as tambin para el diagnstico de las enfermedades nerviosas resultantes de su anormal metabolismo, como la epilepsia, la demencia senil y el Parkinson. En tejidos de mamferos, el cido ascrbico (AA) est presente junto con varios neurotransmisores incluyendo DA. Como DA y AA son sustancias electroactivas, los mtodos electroqumicos son las tcnicas mas favorables para la determinacin de ambos compuestos, debido a su
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bajo costo, alta sensibilidad y facilidad de operacin. Sin embargo, uno de los principales problemas encontrados en la determinacin electroqumica de DA es la interferencia de AA, que se oxida a un potencial cercano al de DA en la mayora de los electrodos slidos (Au, Pt, C). Resultados: En este trabajo se presenta la combinacin de un polielectrolito (polialilamina) con un surfactante (dodecil sulfato de sodio) que permite dispersar eficientemente nanotubos de carbono. Esa dispersin aplicada apropiadamente sobre un electrodo de grafito genera, una vez evaporado el solvente, una red tridimensional estable que contiene los nanotubos de carbono. La dispersin de los nanotubos como finas hebras sobre el electrodo fue comprobada por microscopa electrnica de barrido. Su presencia produce dos efectos: el incremento de la seal y un incremento en la velocidad del proceso de transferencia electrnica entre el electrodo y DA. El mismo sistema muestra una respuesta ms lenta para AA, con lo cual utilizando tcnicas electroqumicas rpidas como voltametra diferencial de pulso o voltametra de onda cuadrada es posible la determinacin de dopamina en presencia de ascorbato. Conclusiones: La dispersin de nanotubos de carbono en una red tridimensional constituida por polialilamina y dodecil sulfato sobre un electrodo de grafito permite en forma sencilla la construccin de un sensor selectivo para dopamina en presencia de

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cido ascrbico. Utilizando voltametra diferencial de pulso se determinaron cuantitativamente concentraciones de DA 5 M.

Nanobiomaterials and Its Applications on Diagnostic Diseases

M. K. Uchiyama(1)*, K. Araki(1), W. Colli(2), M. J. M. Alves(2)
LQSN, Departamento de Qumica Geral, Universidade de So Paulo, Brazil e-mail: mayara.uchiyama@usp.br LBP, Departamento de Bioqumica, Universidade de So Paulo, Brazil. * Corresponding author. Abstract Gold nanoparticles exhibits suitable optical, electronic and bonding properties for the development of nanobiomaterials displaying higher sensibility and selectivity for diagnostics and therapeutic than conventional methods. Accordingly, gold nanoparticles (AuNP) were labeled with monoclonal antibody immunoglobulin G (IgG), characterized by DLS, UV-Vis spectroscopy and scanning electron microscopy, and the interaction properties, stability and reactivity were studied. In the last 15 years the field of molecular diagnostics1 has witnessed an explosion of interest in the use of nanomaterials in different assays for many diseases. Intense research has been fueled by the need for practical, robust, and highly sensitive and selective detection agents that can address the deficiencies of conventional technologies. The integration of nanoparticles, which exhibit unique optical, electronic and photonic, such as size-controlled plasmon absorbance, with biomaterials2, which display unique recognition, catalytic, and inhibition properties, yields novel hybrid nanobiomaterials with synergetic properties and functions. AuNPs were synthesized by reducing tetrachloroauric acid with trisodium citrate, a method pioneered by Turkevich et al3. Briefly, 100 mL of 0.01% HAuCl4 solution was boiled under vigorous stirring, and 3 mL of a trisodium citrate solution (1%) was rapidly added to the boiling solution. When the solution turned deep red, indicating the formation of AuNps, the solution was left stirring and cooling until room temperature. Monoclonal antibodies were obtained by the fusion of P3U1 myeloma cell line with spleen cells removed from mice immunized with a recombinant protein from Trypanosoma cruzi (Tc-85). IgG was purified from cultured cells by affinity chromatography (protein A-Sepharose). The nanocomposite was prepared by spontaneous adsorption of protein on AuNP surface and its interaction, stability and reactivity was examined by UV-Vis spectroscopy, dynamic light scattering (DLS) (Figure 3), Zeta Potencial and scanning electron microscopy (SEM) (Figure 1 and (1)

2). Bovine serum albumin (BSA) was used for initial tests, being manipulated just later the IgG, when were already clear the system conditions and proportions among reagents of nanocomposite. The nanobiocomposite is being exploited for the preparation of immunonanosensors and diagnostics, targeting and therapeutic use of plasmon induced heating of AuNPs, and development of immunoassays systems with high sensibility and specificity.

Figure 1. SEM of albumin (BSA) conjugated gold nanoparticle (AuNP) synthesized by 1mL of AuNP suspension and 0,15mL of 10ug/mL BSA aqueous solution.

Figure 2. SEM of antibody (IgG) conjugated gold nanoparticle (AuNP) synthesized by 1mL of AuNP suspension and 0,15mL of 10ug/mL IgG aqueous solution.

(a)

(b)

(c)

Figure 3. Size intensity distribution by dynamic light scattering of (a) bovine serum albumin (BSA), (b) gold nanoparticle (AuNP), and (c) AuNP-BSA nanobiocomposite.

References
[1] Nathaniel L. Rosi and Chad A. Mirkin, Chem. Rev., 105, 1547 1562, 2005. [2] I. Willner and E. Katz, Angew. Chem. Int. Ed., 43, 6042 6108, 2004. [3] B. V. Enstn, J. Turkevich, J. Am. Chem. Soc., 85, 3317 3328, 1963.

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Sntesis de nanopartculas esfricas magnticas para bioaplicaciones

B. Herrera1, N. Silva1, S. Moris1, P. Jara1 y M. Kogan2
Depto. de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Las Palmeras 3425, Santiago, Chile. 2Depto. de Qumica, Facultad de Qumica y Farmacia, Universidad de Chile, Sergio Livignstone Introduccin: En la actualidad, las nanopartculas (Nps) magnticas son de gran inters debido a sus diversas aplicaciones biomdicas por ejemplo como agentes de contraste en imgenes de RMN y entrega selectiva de drogas o genes1. De cara a estas y otras aplicaciones es necesario conseguir nanomateriales de un tamao adecuado (<100nm), estables y no txicos. En este trabajo se presenta la obtencin de nanopartculas esfricas de Ni y Co mediante el mtodo fsico de pulverizacin catdica en vaco, sobre compuestos de inclusin (CIs) de -ciclodextrina (-CD) con alquiltioles2 y alquilaminas y sobre el pptido antiptico CLPFFD el cual reconoce selectivamente agregados txicos de -amilodes (A) implicados en la enfermedad de Alzheimer3. Este mtodo permite preparar de
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manera controlada, NPs esfricas de un tamao deseado. Resultados: Las nanopartculas han sido caracterizadas por Microscopa Electrnica de Transmisin (TEM) y Espectrofotmetra de Reflectancia difusa UV-visible. Posteriormente se complementarn estos resultados y se evaluar la toxicidad de ests. Conclusiones: La utilizacin de los CI como sustratos para el depsito de las Nps result adecuado debido a la gran afinidad existe el NH2 con las NiNPs y el SH con las Conos. Las micrografias TEM muestran NPs de un tamao promedio de 23 nm para NiNPs y de 5nm y 85nm para las CoNPs con una baja dispersin de tamao. Mediante estudios pticos se observ la Resonancia de Plasmn Superficial caracterstica de las NiNPs y CoNPs, que concuerdan con las longitudes de onda esperadas para estas partculas. Referencias
[1] Q A Pankhurst, J Connolly, S K Jones R167R181 [2] P. Jara, L.Barrientos, B.Herrera and I. Sobrados, J. Chil. Chem. Soc., (2008). [3] Kogan MJ, Bastus NJ, Amigo R et al.: Nano Lett. 6, 110115 (2006).

Figura 1. Micrografas TEM para a)NPsNi en -CD/DDA, b) NPsCo en -CD/OT c) NPsCo en -CD/DT

Figura 2. Espectros de absorcin de a) NiNPs y b) CoNPs depositadas sobre CI de -CD/DDA y -CD/OT, respectivamente

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Caracterizacin de la unin de nanotubos de carbono a protenas y oligonucletidos para su aplicacin en la fabricacin de nanobiosensores
Tropper I1,2, Cerda MB3, Villagrasa L2, Lerner B1,3, Prez M1,3, Boselli A1, Lamagna A1,2, Durn H1,2,3, Policastro L1,3
Departamento de Micro y Nanotecnologa, Comisin Nacional de Energa Atmica, 2 Universidad Nacional de San Martn, 3CONICET, Argentina El objetivo de este trabajo es la funcionalizacin de nanotubos de carbono (CNTs) con anticuerpos u oligonucletidos para su utilizacin en naobiosensores electrnicos. El primer paso de funcionalizacin consiste en la oxidacin de los CNTs, la cual se realiz mediante la incubacin en una mezcla de cidos. Luego, los CNTs oxidados (CNTs-COOH) fueron unidos covalentemente a anticuerpos o a oligonucletidos modificados con un grupo amino en el extremo 5, mediante la incubacin con 1-etil-3(dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) and Nhidroxisuccinimida (NHS). Como resultado de esta reaccin se forman enlaces amida entre los grupos carboxilo de los CNTs-COOH y los grupos amino de las protenas o de los oligonucletidos modificados. Los productos obtenidos luego de ambos pasos de la funcionalizacin fueron caracterizados por microscopia electrnica de barrido (SEM), espectroscopia Raman y anlisis termogravimtrico (TGA). Las imgenes de SEM y los espectros Raman mostraron las diferencias esperadas entre los CNTs y los CNTs-COOH en la morfologa y en los picos Raman. Mediante TGA se demostr la presencia de las molculas orgnicas (protena o DNA) y el grado de funcionalizacin obtenido en las muestras de CNTs-protena y CNTsDNA. Por lo tanto, estas tcnicas permitieron caracterizar la funcionalizacin de CNTs con biomolculas para el posterior desarrollo de dispositivos electrnicos nanotecnolgicos (nanobiosensores). Se prev obtener este tipo de sensores para la deteccin de genes asociados a radiorresistencia a fin de poder diagnosticar la respuesta individual a radioterapia de tumores que presentan gran variabilidad en su sensibilidad a los tratamientos, tales como los adenocarcinomas de colon.
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Desarrollo de sistemas nanoestructurados utilizados en la tecnologa analtica aplicados al diagnostico y monitoreo de distintas patologas.
Flor Sabrina1, Contin Mario1, Tripodi Valeria1,3, Lucangioli Silvia2,3
Ctedra de Qumica Analtica. Facultad de Farmacia y Bioqumica.UBA. 2 Ctedra de Control de Calidad de Medicamentos. Facultad de Farmacia y Bioqumica.UBA. 3 Consejo Nacional de Investigacin Cientfico tecnolgica. CONICET. En los ltimos aos, la investigacin tecnolgico-analtica se ha preocupado en el diseo de diversas metodologas que permitan estudiar, de manera rpida y sencilla, compuestos de difcil resolucin aplicados a diversos campos. Nuestro grupo de trabajo se ha caracterizado por tener una visin innovadora respecto del desarrollo de tecnologas cromatogrficas, siguiendo la tendencia hacia la miniaturizacin que se plantea hoy en la tecnologa analtica. En este sentido, hemos sido precursores en el desarrollo de metodologas analticas basadas en sistemas nanoestructurados utilizados como fases pseudoestacionarias aplicados en la electroforesis capilar, diseando sistemas tiles tanto para el control de calidad de medicamentos como para el diagnstico y monitoreo de distintas patologas. Entre los sistemas desarrollados podemos enumerar sistemas micelares simples, mixtos con el agregado de tensioactivos polimericos y microemulsiones. Un ejemplo de un sistema micelar simple, es el mtodo desarrollado para la determinacin simultnea de 15 cidos biliares libres y conjugados con glicina y taurina por electroforesis capilar de manera rpida, sencilla y confiable. Este sistema est compuesto por laurilsulfato de sodio y ciclodextrinas. Se aplica a la determinacin de los perfiles de cidos biliares en suero en distintas patologas y diversas matrices en la industria. Dentro de los sistemas micelares mixtos con el agregado de tensioactivos polimricos, podemos nombrar un nuevo sistema cromatogrfico, aplicado a la determinacin simultnea en orina de estrgenos, progestgenos y andrgenos, utilizado para la evaluacin de alteraciones hormonales. Otro desarrollo de inters fue aplicado a la cuantificacin de Co Q10 en plasma. Este mtodo es el primero por electroforesis capilar que permite su cuantificacin en plasma. Este sistema utiliza como fase pseudoestacionaria una microemulsin basada en el uso de un tensioactivo de doble cadena (AOT) y un cido biliar (cido clico). Esta determinacin es til para el diagnstico de la enfermedad mitocondrial y para realizar el seguimiento post tratamiento.
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Los sistemas nanoestructurados desarrollados constituyen un avance en la tecnologa analtica ya que presentan ventajas como son la alta resolucin en cortos tiempos de anlisis, elevada sensibilidad, utilizacin de poca cantidad de muestra, bajo consumo de solventes y ofrecen la posibilidad de separacin de una amplia variedad de analitos de manera simultnea con distintas caractersticas fisicoqumicas.

Nanocomposito Laminar TiO2/cido Esterico Funcionalizado con Quitosano.

S. Devis-Ruiz1, Z. Lpez-Cabaa1,2, L. Mauro1, G. Gonzlez1,2
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Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Casilla 653, Santiago, Chile. 2Center for the Development of Nanoscience and Nanotechnology CEDENNA, Chile. e-mail: sindymdr@gmail.com

Estudios recientes sobre la sntesis de nanocompositos orgnico-inorgnicos autoensamblados han abierto nuevas expectativas en el diseo de materiales avanzados1. Los compositos laminares inorgnico-surfactante reconstituidos por capas orgnicas alternadas con capas de semiconductores inorgnicos originan nanoestructuras con nuevas propiedades, diferentes de aquellas de sus componentes2. El TiO2 es un material semiconductor intrnseco que, debido especialmente a la magnitud de su brecha de energa, ha tenido una variedad de aplicaciones. Entre ellas se destaca su uso en la formulacin de filtros solares. En este trabajo se describe la obtencin de redes bidimensionales Ti-O, con propiedades similares a las del TiO2, ordenadas laminarmente por accin del surfactante3, as como el efecto de ese confinamiento bidimensional sobre las propiedades de las mismas. Adicionalmente, se exhibe la funcionalizacin del nanocomposito sintetizado en un polmero biocompatible (quitosano) considerando su eventual proyeccin hacia aplicaciones en nanomedicina. En la sntesis del nanocomposito se utiliz tetraisopropxido de titanio (TTP) como precursor de la fase inorgnica (TiO2) y cido esterico (AE) como agente director de la estructura. La mezcla en relacin molar 1:1,5 en forma de gel en alcohol proplico4 se hidroliza al aire en forma lenta (24 h, temperatura ambiente). El producto lavado y seco (vaco, 50 C) es un slido microcristalino blanco que presenta un patrn de difraccin de rayos X (DRX), en el que se observan las reflexiones a bajo ngulo {00l} hasta un orden 3, caracterstico de una fase laminar con espaciamiento entre las lminas del orden de los nanmetros (2,85 nm) altamente ordenada. La imagen obtenida por microscopia electrnica de barrido concuerda con el patrn DRX revelando la formacin de un slido con un crecimiento en capas, morfologa tpica para compuestos laminares. La comparacin de la brecha

de energa ptica del producto, 3,73 eV, con aquella del TiO2 en volumen, 3,37 eV, revela un claro efecto de confinamiento. La funcionalizacin con quitosano del nanocomposito hbrido TiO2/AE, realizada tratando una suspensin del mismo en un gel de quitosano bajo radiacin ultrasonnica por 2h, origina pelculas de gran transparencia y flexibilidad. La brecha de energa del nanocomposito en la pelcula de quitosano es 3,69 eV, indicando que el semiconductor mantiene su confinamiento en el polmero. Interesantemente, las pelculas TiO2/AEquitosano son inestables bajo la accin de los electrones en el microscopio electrnico de barrido. Este resultado, posiblemente debido a interaccin redox del nanocomposito excitado con el polmero, permite esperar una actividad excitnica similar en procesos fotoinducidos. Experimentos dirigidos a comprobar actividad fotoqumica correspondiente estn en curso. Los resultados descritos sern discutidos en el contexto de la potencialidad de los productos para su uso en eventuales aplicaciones biomdicas. Referencias:
1.- Y. D. Wang, et al., Eur. J. Inorg. Chem., (2005), 727731. 2.- W.Y. Lin, et al, J. Mater. Chem., (1999), 9, 641-642. 3.- H. Lozano, et al. J. of Nanoscience and Nanotechnology (2009) Vol.9, 969973. 4.- Takenaka, et al. J. Sol-Gel Sci. Tech. (2000) 19, 711 714. Agradecimientos: Universidad de Chile; CONICYT, Programa Financiamiento Basal FB0807 (CEDENNA), Beca Doctorado (CD-R.); FONDECYT Proyecto 1090282; Ncleo Cientfico Milenio P06-022-F.

Fotosensibilizadores en nanoparticulas magneticas polimricas

V. E. Diza, M. N. Piolb, N. R. Verrengia Guerrerob, R. Zyslerc, J. Awruchd y L. E. Dicelioa
INQUIMAE / Depto. de Qumica Inorgnica, Analtica y Qumica Fsica. bToxicologa y Qumica Legal, Depto. de Qumica Biolgica. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Universitaria, Pabelln II, C1428EHA, Buenos Aires. cCentro Atmico Bariloche. dDepartamento de Qumica Orgnica, Facultad de Farmacia y Bioqumica,UBA. Email: vdiz@qi.fcen.uba.ar Los sistemas nanoparticulados polimricos han sido estudiados en los ltimos aos con sumo inters, ya que los mismos presentan potencial aplicacin para cuestiones biomdicas, tales como Terapia Fotodinmica del Cncer, as como en procesos de descontaminacin y/o remediacin de efluentes. En este trabajo se sintetizan Nanopartculas de PLGA (Polyoly(D,L-lactide-co-glycolide) magnticas (Np-PLGA-MN), en las cuales se
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incorpora una ftalocianina octosustituda (S1). Se realizan bioensayos a los efectos de verificar la influencia de los sistemas nanoparticulados en la bioacumulacin de otras especies qumicas como cadmio en Lumbriculus variegatus. Se realiz la caracterizacin fotofsica de NpPLGA-MN-S1 y de Np-PLGA-S1, evaluando medidas de Absorbancia, Fluorescencia, Reflectancia Total y Difusa, as como de Transmitancia con el objetivo de obtener rendimientos cunticos de oxgeno singlete () y rendimientos cunticos de fluorescencia (F). Se ha caracterizado el tamao de los sistemas obtenidos recurriendo no solo a determinaciones de Dynamic Light Scattering (DLS) sino tambin a imgenes de Microscopia Electrnica de Transmisin (TEM) e imgenes de Microscopia Electrnica de Superficie (SEM). Asimismo se han realizado curvas de histresis comparativas de las nanopartculas magnticas incorporadas en estos nanosistemas polimricos. Se estudia la eficiencia de estos sistemas de Nps para remediar contaminantes metlicos, especficamente cadmio. Para ello, se realizaron bioensayos a 48 hs empleando Lumbriculus variegatus, una especie reconocida como bioindicador para ensayos de toxicidad de aguas y sedimentos por distintas agencias ambientales. Agradecimientos. ANPCyT, CONICET, UBA.

cuantificar la generacin de especies excitadas por irradiacin de las NP-Si en suspensin acuosa se utilizaron diferentes sustancias capaces de reaccionar con las distintas ER con cierta selectividad. Las NP-Si se caracterizaron por FTIR, XPS, espectroscopia de luminiscencia y de absorcin, antes y despus de la irradiacin con distintas dosis de rayos X, de forma de evaluar el efecto de la radiacin ionizante sobre su estructura. Los resultados muestran que las nanopartculas en suspensin producen entre 10 y 20 veces ms ER (dependiendo del reactivo utilizado como atrapador) que en su ausencia. Entre las especies reactivas que se han podido identificar se encuentran el oxgeno singulete (que no se forma en ausencia de NP) y el H2O2. En ambos casos, se observa mayor produccin de estas especies con las NP-Si obtenidas en el laboratorio. Por otro lado, se observa la oxidacin de la superficie de la NP-Si y una disminucin de su emisin luminiscente con las dosis de rayos-X. La irradiacin de cultivos celulares de glioma C6 con incorporacin de NP-Si muestra una marcada produccin de ER proporcional a la dosis recibida. En ausencia de NPSi, las clulas no ven aumentada su produccin de ER por irradiacin con rayos X. Los resultados obtenidos son categricos en demostrar que las NP de silicio poseen gran potencial para ser utilizadas como radiosensibilizadores en terapias contra el cncer.

Irradiacin de Nanoparticulas de Silicio con rayos X: Generacin de Especies reactivas en suspensin acuosa y en cultivos celulares de Glioma C6.
Pedro M. David Gara,1,3 Natalia I. Garabano,2 Manuel J. Llansola Portoles,3 Diego Dodat,1 Oscar R. Casas,1 Mnica C. Gonzalez,3* and Mnica L. Kotler.2*
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Conjugacin de compuestos bioactivos a nanoparticulas de oro para mejorar sus propiedades biofarmacuticas
M.J. Kogan, C. Zapata-Urza, A. lvarez, L. Nez, C. Adura, S. Guerrero, A. Meneses, R. Lavilla, R. Salazar.
Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacuticas, Universidad de Chile, Casilla 233. Santiago. Sergio Livingstone Polhammer (ex Olivos) 1007. e-mail: mkogan@ciq.uchile.cl El desarrollo de la nanotecnologa y sus potenciales aplicaciones en biomedicina ha conducido a una mejora en la eficacia teraputica de diferentes compuestos activos, debido tanto a un aumento en la actividad, biodisponibilidad y estabilidad de dichos agentes, como en la capacidad de lograr un direccionamiento selectivo hacia el sitio de accin y la disminucin en la toxicidad asociada. En este sentido, las nanopartculas de oro (AuNP) se han perfilado como uno de los candidatos ms promisorios para aplicaciones en biomedicina, debido a su adecuada biocompatibilidad y a las interesantes propiedades fsicas, qumicas, biolgicas y fototrmicas que poseen. Es as como la conjugacin de compuestos activos a la superficie de AuNP ha permitido obtener conjugados con mayor actividad farmacolgica, estabilidad,

CITOMA, Fundacin Avanzar, Instituto de Terapia Radiante S.A., CIO La Plata, Calle 60 Nro. 480 (1900), La Plata, Argentina. 2 Departamento Qumica Biolgica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA. Intendente Giraldes 2160 Ciudad Universitaria - C1428EGA TE/FAX: +541145763342, E-mail: kotler@qb.fcen.uba.ar 3 INIFTA, Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP, CC16 Suc. 4 (1900) La Plata. TE:+542214257430. E-mail: gonzalez@inifta.unlp.edu.ar

Se investig la capacidad de las nanopartculas de silicio (NP-Si) de producir especies reactivas (electrones y radicales, ER) por irradiacin con rayos X de 4 MeV de energa. Esta propiedad se verific, tanto en suspensin acuosa de NP-Si como para aquellas incorporadas en cultivos celulares de Glioma C6, y para nanopartculas que fueron sintetizadas en el laboratorio, como aquellas adquiridas comercialmente. Para detectar y

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solubilidad y biocompatibilidad, mostrando potencial utilidad en el tratamiento de enfermedades como cncer, diabetes y Alzheimer (1). Este aumento en la actividad de los agentes farmacolgicos unidos a la superficie de AuNP podra deberse a la gran rea superficial que presentan estos nanomateriales, lo cual permite que acten como un agente concentrador de frmacos y por ende se pueda alcanzar una mayor concentracin local del compuesto activo. En nuestro laboratorio se han sintetizado AuNP de distintas formas y tamaos, las cuales han sido conjugadas con compuestos bioactivos, tanto del tipo peptdico como de sntesis qumica, con vistas a diferentes aplicaciones teraputicas. Un ejemplo de ello es el uso de conjugados de AuNP con pptidos para aplicaciones en la enfermedad de Alzheimer. Tanto nanoesferas como nanobarras de oro se han conjugado al pptido CLPFFD con el objetivo de producir la desagregacin de agregados txicos de la protena amiloide involucrados en dicha patologa (2, 3).Asimismo, se ha observado que la conjugacin con este pptido favorece la penetracin a travs de la barrera hematoenceflica (BHE) (4). Otro ejemplo es la obtencin de AuNP a partir de sales de oro utilizando dihidropiridinas como agentes reductores, con el objetivo de controlar el tamao final de las nanopartculas y obtener conjugados que favorezcan la penetracin a travs de la BHE. De esta forma, en el presente trabajo se discutir la obtencin y caracterizacin de los distintos conjugados de nanoesferas y nanobarras de oro con compuestos bioactivos desarrollados en nuestro laboratorio, as como tambin los diferentes ensayos in vitro e in vivo que se han realizado con el propsito de evaluar sus potenciales aplicaciones biomdicas y sus mejoras biofarmacuticas. Agradecimientos: Beca Conicyt de Estudios de Doctorado en Chile. Proyecto Fondecyt 1090143, Proyecto Anillo ACT-95 y AECID. Referencias 1. M.J. Kogan, I. Olmedo, L. Hosta, A. Guerrero, L.J. Cruz, F. Albericio. Nanomedicine, 2007, 2, 287-306. 2. M.J. Kogan, N.G. Bastus, R. Amigo, D. Grillo-Bosch, E. Araya, A. Turiel, A. Labarta, E. Giralt, V.F. Puntes. Nano Lett., 2006, 6, 110-115. 3. Olmedo, E. Araya, F. Sanz, E. Medina, J. Arbiol, P. Toledo, A. lvarez, E. Giralt, M. J. Kogan. Bioconjugate Chem., 2008, 19, 1154-1163. 4. S. Guerrero, E. Araya, J. Fiedler, J.I. Arias, C. Adura, F. Albericio, E. Giralt, J.L. Arias, M.S. Fernndez, M.J. Kogan. Nanomedicine, 2010, 5, 897-913.

Desarrollo de un Microviscosmetro de Sangre para Usos Clnicos

Nadim Morhell, Hernn Pastoriza
Instituto Balseiro - Comisin Nacional de Energa Atmica El sndrome de hiperviscosidad, causado por trastornos como la policitemia, aparece en un nmero significativo de recin nacidos. Clnicamente se trata de una sobreabundancia de glbulos rojos que trae como consecuencia un aumento en la viscosidad de la sangre. Si bien se sabe que una mayor porcentaje de glbulos rojos resulta en una mayor viscosidad, esta funcionalidad es no lineal. Por tal motivo un diagnstico ms preciso de estos trastornos consistiran en una medicin directa de la viscosidad. En este trabajo presentamos los avances en el desarrollo de un dispositivo que permite medir en forma precisa y rpida la viscosidad sangunea en volmenes pequeos de muestra (una gota de aproximadamente 80L). En el actual desarrollo fabricamos microcanales en vidrio de entre 5 y 100 m de ancho y hasta 20 m de profundidad, micromaquinados con tcnicas de litografa ptica, atques hmedos y sellados por fusin trmica (Fig. 1)

Figura 1. Perfilometra ptica de los microcanales fabricados en vidrio

Se ingresa la gota a los microcanales por capilaridad y la medicin consiste en el registro de la dinmica del fluido dentro de los microcanales utilizando tcnicas de video-microscopa. Realizamos las primeras pruebas en fluidos de referencia utilizando un sistema automtico de adquisicin y procesamiento de datos por computadora. La dinmica de los fludos medidos (Fig. 2) corresponde a un flujo de Poiseuille completamente desarrollado donde x y t vienen dados por la presin de capilaridad P, el radio hidrulico rh y la viscosidad segn:

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De donde se puede calcular la viscosidad si se conoce la presin de capilaridad.

microcanal cerrado. La columna de lquido entrante comprime el aire dentro del canal hasta que la presin interna se iguala a la suma de la presin de capilaridad y la presin atmsfrica. Luego se tiene

Figura 2. Grficos en escala logartmica de la dinmica de algunos fluidos de referencia

Actualmente estamos realizando una caracterizacin geomtrica del microcanal utilizando microscopa electrnica de barrido para poder calcular con precisin el volmen total de aire dentro del microcanal. Finalmente la presin de capilaridad se calcular midiendo directamente la posicin final que alcanza la columna de lquido en el canal cerrado.

Implementamos un mtodo indirecto para medir la presin de capilaridad ingresando el lquido en un

Seccion 4 Nanopartculas lipdicas Local Anesthetics-Phospholipid Membranes Interactions by Molecular Dynamics Simulations
Mnica Pickholz
Department of Pharmaceutical Technology, Universidad de Buenos Aires, Junin 954 RA-1053, Buenos Aires,Argentina and Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET). Relief of localized pain is a challenging problem in medical and odontological research. Local anesthetic agents used to relieve pain symptoms are characterized by limited duration of analgesia and may result in both systemic and local toxicity. However, many of the pharmacological properties of conventional drugs can be improved through the use of drug delivery systems, which include particulate carriers, composed primarily of lipids and/or polymers, and their associated therapeutics. For instance, local anesthetics encapsulated in liposomes have shown to gradual release the drug, obtaining a prolonged duration of the anesthetic action and reducing the central nervous and/or cardiovascular system toxicity [1]. In this work, we investigate the interaction of Prilocaine (PLC) an aminoamide local anesthetic with model membranes by Molecular Dynamics (MD) simulations. PLC has a pKa of 7.9, therefore their charged and uncharged forms are relevant at physiological pH. In this way, we have carried out a series of simulations where charged and uncharged PLC were introduced into a POPC (1-palmitoyl-2oleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine) phospholipids bilayers at 1:3 (LA:Lipid) molar ratio. Simulations for different ionization states of the PLC were able to capture important features of the PLCphospholipid bilayer interactions. Furthermore, we study the encapsulation of prilocaine, in a small unilamellar liposome [2]. We carried out a series of molecular dynamics simulations using a coarse grain model. We extended the recently developed MARTINI [3] coarse grain model to access relevant time and length scales. Our simulations, for different protonation states of the PLC, captured important features of the PLC-vesicle interactions. References:
[1] C. Cereda, G. Brunetto, D. de Araujo, and E. de Paula, Canadian Journal of Anesthesia 2006, 53, 1092-1097. [2] S.J. Marrink, H.J. Risselada, S. Yefimov, D.P. Tieleman, and A.H. de Vries, J. Phys. Chem. B 2007, 111, 7812-7824. [3] M. Pickholz and G. Giupponi, , J. Phys. Chem. B 2010, 114(20):7009-15.

Improving delivery of nanovehicles by decorating with CPPs or targeting moieties

A. L. Zamit2, J. S. Pappalardo1,2,3, S. Salmaso34 , M. Toniutti3, T. Musacchio3, T. S. Levchenko3, V. P. Torchilin3.
1

CONICET, Capital Federal, C1033AAJ, Argentina; 2 Virology institute, INTA, Hurlingham, Bs.As., 1686, Argentina; 3Center for Pharmaceutical Biotechnology and Nanomedicine, Northeastern University, Boston, MA, 02115, USA; 4Department of Pharmaceutical Sciences, University of Padova, 35131 Padova, Italy.

Introduction: One of the most promising ways to modulate the immune response is the targeting

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and delivering of antigens to cells of the immune system. In addittion, targeting drugs or proapoptotic agents to specific cells, while the immune response is being modulated, would be useful in some diseases such as cancer. However, antigenpresenting cells (APC) are very resistant to intracytoplasmic antigen delivery and transfection. Cell-penetrating peptides (CPP) such as TAT peptide (TATp) are capable of transporting different molecules through lipid bilayers. In this work we used TAT peptide-modified (TATp-L) liposomal carriers as specific vehicles for enhancing the efficiency of intracellular delivery of rhodamine to mouse APC. Once improved the liposome uptake by APCs, we proceed on targeting liposomes to dendritic cells (DCs), the key-linkers between the innate and the adaptive immunity, and to glioma cell lines as a combined immunological-pharmaceutical approach to treat cancer in the future. Specific targeting moieties included: 1. Mannose which is specifically recognized by APCs, and 2. Vitamin C, since its receptor (SVCT-1) is overexpressed in certain cancer types. Summing up, we were able to (1) improve rhodamine delivery into macrophages and DCs by using TATp derivatives, (2) target specifically DCs by using Mannosamine derivatives and (3) target glioma cell lines by using Vit.C derivatives. Materials and Methods: Rhodamine-loaded PEGylated liposomes additionally modified with TATp, Mannosamine or Vit.C were prepared. Liposomes consisted of a mixture of PC:Chol:DOTAP:PEG-PE (plain-L) and PC:Chol:DOTAP:X-PEG-PE (where X could be TATp or Man or Vit.C) in a 60:30:10:2 molar ratio. Rhodamine was used for visualization of liposomes. Prior to testing in vitro, the nanovehicles were characterized as follows: size and size distributions were measured by dynamic light scattering (DLS); -potential of liposome and micelle formulations were measured by a Zeta phase Analysis Light scattering (PALS); and TEM photographs were taken. Results: The cell uptake of rhodamine-labeled liposomes was significantly improved in case of TATp-L in BALB/c mouse derived M and DC. Specific targeting of DC was performed with ManL. Specific binding of micelles and liposomes to C6 and F98 glioma cell lines was demonstrated while using Vit.C-L and Vit.C-M as well. Conclusion: TATp and Man decorated liposomes enhance penetration and targeting respectively to DCs and might be combined for improving DC-targeted vaccines. On the other hand, Vitamin C liposomes and micelles were able to target cancer cells and can be used as a combination in immune anticancer therapies. Thus, these liposomes can be used as tools for DC-targeted vaccination/ glioma-cell drug delivery combination as a first step in immune therapy against cancer.

Arqueosomas Ultradeformables con actividad in vitro contra clulas de melanoma

Higa LH, Schilrreff P, Roncaglia DI, Morilla MJ and Romero EL.
Programa de Nanomedicinas, Universidad Nacional de Quilmes, Buenos Aires, Argentina. lhiga@unq.edu.ar Los Arqueosomas Ultradeformables (AUD) son liposomas unilamelares compuestos de fosfatidilcolina de soja, colato de sodio y lpidos polares totales (LPT) (3:3:1 p/p). Los LPT extrados de la arquebacteria hiperhaloflica Halorubrum tebenquichense, a diferencia de los lpidos de bacterias y eucariotas, son dieter lpidos o arqueoles (2,3-di-O-diphytanyl-sn-glycerol) unidos a cadenas isoprenoides de 20 C. El anlisis por cromatografa en capa delgada (TLC) mono- y bi-dimensional (utilizando tinciones especificas) y espectroscopia de masa por ionizacin electrospray (ESI-MS) (iones negativos) mostr que esta mezcla de LPT contiene arquetidil-fosfatidilglicerol (PG, m/z=805), fosfatidilglicerofosfato metil ester (PGP-Me; m/z=899), diglicosil difitanilglicerol dieter sulfatado (S-DGD-5; m/z=1055) y en menor proporcin la glicocardiolipina arquetidilsulfoglicodieter esterificado con cido fosfatdico (S-DGD-5PA; m/z=885*) y la cardiolipina arqueal bifosfatidilglicerol (BPG; m/z=760*) (*especies bicargadas) adems de carotenoides retinal y bacterioruberina(1). Se ha demostrado que tras una aplicacin sobre la superficie de la piel en condiciones no-oclusivas, el contenido acuoso de estos AUD penetra hasta la profundidad de la epidermis, mientras que su matriz lipdica se distribuye en el espesor de todo el estrato corneo(2). En este trabajo comparamos la capacidad de AUD cargados con la proteina modelo ovoalbumina (OVO) con la de liposomas ultradeformables convencionales (LUD fosfatidilcolina de soja: colato de sodio, 6:1 p/p) para generar adyuvancia antigeno-dependiente luego de su aplicacin trascutnea sobre el lomo de ratones BALB-c no afeitados. Adicionalmente, determinamos citotoxicidad tanto de AUD como de LUD sobre clulas de melanoma maligno humano (SK-MEL28) y sarcoma murino (J774), utilizando los mtodos de LDH y MTT. OVO se incorpor en AUD y LUD en cuatro niveles de relacion OVO/lipidos totales por hidratacin de la pelcula lipdica y posterior extrusin y elucion por columna de exclusin molecular. Los OVO-AUD y OVO-LUD obtenidos resultaron vesculas unilamelares de 170 20 nm y 220 75 nm y potencial Z de -23mV, respectivamente. Luego de 4 aplicaciones (da 0, 7, 14 y 21) de OVO-AUD a 0,075 - 0,15 - 0,3 y 0,6 mg OVO/ 2 cm2, la respuesta generada (IgG srica anti-

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OVO) fue 0,5-1 log mayor que tras la administracin de OVO-LUD, alcanzando un mximo que se mantuvo entre las 3 y 7 semanas. La respuesta decay a partir de la semana 8, aunque se observ la generacin de respuesta de memoria como un aumento de 2,5 log en los ttulos de IgG tras la aplicacin de un boost. La respuesta obtenida tras la administracin de las dosis mas bajas (0,075 y 0,15 mg OVO/2cm2) fue mas corta (semana 4 y 5) aunque la respuesta al boost fue similar. Remarcablemente, el perfil de la respuesta generada con las dosis mas altas de OVO-AUD transcutaneos fue similar a la generada tras la administracin de OVO-AUD subcutneos, aunque en esta ltima los ttulos obtenidos fueron 1 log mayores. Los OVOLUD prcticamente no respondieron al boost. Los ensayos de citotoxicidad sobre dos lneas tumorales mostraron que en el rango de concentraciones utilizado (0,25-2 mM lpidos) los LUD no fueron txicos. Sin embargo, los AUD disminuyeron la viabilidad de clulas J774 en forma dosis dependiente (hasta un mnimo de 80% a 2mM) en tanto que la disminucin de la viabilidad de SKMEL28 fue dosis independiente, a un 50%. Estos resultados indican que OVO-AUD son capaces de provocar una respuesta immune dependiente de antgeno en aplicaciones transcutneas y citotoxicidad sobre clulas de melanoma. Por lo tanto, OVO-AUD podran ser vehculos adecuados para emplear plataformas profilcticas-teraputicas contra el melanoma maligno. Referencias: 1. RO Gonzalez, LH Higa, RA Cutrullis, M Bilen, I
Morelli, DI Roncaglia, RS Corral, MJ Morilla, PB Petray, EL Romero. Archaeosomes made of Halorubrum tebenquichense total polar lipids: a new source of adjuvancy. BMC Biotechnology 2009, 9:71 2. Montanari J, Maidana C, Esteva MI, Salomon C, Morilla MJ, Romero EL. Sunlight triggered photodynamic ultradeformable liposomes against Leishmania braziliensis are also leishmanicidal in the dark. Journal of Control Release 2010 Aug 19 in press.

Antioxidant activity evaluation of idebenone loaded-theospheres intended to topical application

Colom L.M., Klkamp I.C., Bender E.A., Santos G.S., Pohlmann A.R., Guterres S.S.
1Faculdade de Farmcia; 2Instituto de Qumica. Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre RS, Brasil Introduction: Among the different drug delivery systems, lipid nanoparticles are colloidal carriers essentially based on pure lipids or lipid mixtures. In our research group, we have been using nonerefined natural biodegradable and biocompatible lipids Cupuau seed butter and Brazil nut seed oil for the preparation of nanoparticles named theospheres1. Cupuau

(Theobroma grandiflorum) seed butter presents important compounds as unsaturated fatty acids, amino acids, vitamins and known flavonoid antioxidants2, being interesting for the cosmetic use. Similarly, Brazil nut (Bertholletia excelsa) seed oil contains about 70% unsaturated fats and it is the highest known plant-based source of selenium3. Idebenone (IDB) is a synthetic analogue of coenzyme Q10 with known antioxidant properties. IDB has been proposed for the treatment of neurodegenerative diseases. However, IDB has also been studied as an antiaging component in skin formulations4 since the skin is constantly exposed to a prooxidative environment which plays a critical role in photoaging and photocarcinogenesis. Objective: The aim of this study is to prepare IDB-loaded theospheres, a novel lipid nanoparticles intended for topical application, and to evaluate their antioxidant activity by thiobarbituric method. Materials and Methods: Theospheres were prepared by emulsification-solvent evaporation technique using Cupuau seed butter with (T5-5) or without (T10-0) Brazil nut seed oil. Theosphere suspensions were characterized by measurement of pH, viscosity, encapsulation efficiency, size and size distribution (laser diffractometry). Additionally, in vitro lipid peroxidation experiments were conducted by thiobarbituric method. Results and Discussion: IDB theospheres presented size in nanometrical range. The obtained span values indicated narrow size distribution of the colloids. Regarding the reological characterization, all theospheres presented Newtonian behavior. Concerning the pH values no difference (p>0.05) was observed regarding the influence of lipid ingredients or presence of drug in the theospheres. Encapsulation efficiency values were close to 100 % for both IDB-loaded theospheres with or without Brazil nut seed oil. Regarding the in vitro antioxidant activity all theosphere formulations showed significative difference from the positive control solution. The protection results ranged within 67.2 2.3 % to 87.6 1.6 %, within 79.1 1.1% to 97.1 3.9 % and within 75.4 4.7 to 97.3 3.8 % for IDB solution, IDB-loaded T10-0 teospheres and IDB-loaded T5-5 theospheres, respectively, considering all drug concentrations tested. Theospheres conatining IDB showed better antioxidanty activity (p<0.05) than IDB solution in 0.4 and 0.8 mM drug concentation (79.9 2.3 %, 93.0 3.9 %, 85.5 4.0 % in 0.4 mM; 87.6 1.6 %, 97.1 3.9 %, 97.7 3.8 % in 0.8 mM, for IDB solution, IDB-loaded T10-0 teospheres and IDBloaded T5-5 theospheres, respectively). Conclusions: Stable theospheres prepared using Cupuau seed butter and Brazil nut seed oil showed size in the nanometrical range and narrow distribution. Idebenone was successfully incorporated with high encapsulation efficiency values. IDB-loaded theospheres showed to be better

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than free IDB for avoiding lipid peroxidation, proving to be valuable to topical administration of antioxidant compounds. References: 1. L.M. Colom et al., Soft Mat. 8, 77 (2010); 2. H. Rogez et al., Eur. Food Res.Tech., 218, 380 (2004); 3. J. F. Gonalves et al., J. Plant Phys. 14,139 (2002); 4. N. S. Sadick et al., Clin. Derm., 27, S3 (2009). Acknowldgements: Financial support and doctor scholarship from CNPq/Brazil.

Lipid nanoemulsion as a vehicle for a lipophilic curcumin derivative

Maria A. Santos, Ivair D. Gonalves, Oseraldo V. Rocha, Paulo C. Pardi, Bruno C. Guerrieri, Ana S. Marques, Cristiane Magalhes, Wendy K. Mendes, Claudete J. Valduga
Bandeirante University of So Paulo cvalduga@usp.br Introduction and Objective: Lipophilic 1,5diarylpenta-1,4-dien-3-one derivative (Figure 1) is a phenolic compound with structure similar to curcumin, a natural substance with a large variety of biological effects1. The 1,5-bis(4-hydroxy-3methoxyphenyl)-penta-1,4-dien-3-one shows a good antitumor activity and a low toxicity in in vivo studies2, but it is not water-soluble. Problems related to solubility are very usual for new discovered substances with biological activity and we could solve them by using nanoparticle systems based on emulsions that, more than simply to ease administration of new substances increase their concentration in tumor tissues, minimizing side effects. Here we developed a formulation for intravenous injection based on emulsion for a lipophilic diacyl derivative of the 1,5-bis(4hydroxy-3-methoxyphenyl)-penta-1,4-dien-3-one and evaluated in vitro and in vivo toxicity.

Figure 1. Lipophilic 1,5-bis(4-hydroxy-3methoxyphenyl)-penta-1,4-dien-3-one derivative. Materials and Methods: Lipophilic 1,5-bis(4hydroxy-3-methoxyphenyl)-penta-1,4-dien-3-one derivative was incorporated into lipid emulsion by high-pressure homogenization. The emulsion composition was cottonseed oil, phosphatidylcholine, -carotene, cholesterol and Tween 20. The formulation, as well as free lipophilic derivative and controls, 1,5-bis(4hydroxy-3-methoxyphenyl)-penta-1,4-dien-3-one and emulsion without active principle were assayed against murine melanoma (B16F10), using MTT method. For animal toxicity we followed the OECD

protocol, starting from 300 mg/Kg dose, injected in bolus by intraperitoneal via of lipophilic derivativeloaded lipid nanoemulsion and as controls we injected nanoemulsion, without principle active, at the same volume, and saline. Body weight was followed until day fourteen after injection and blood samples were collected a day before injection, two days after and at the end of the experiment, when animals were sacrificed organs (heart, liver, spleen, brain, kidney, lung, intestine, ovary and stomach) were colleted for histophatological analysis. Results: The efficiency of incorporation of lipophilic derivative was roughly a hundred percent and the formulation remains stable for at least three months. The size of the nanoparticles, measured in Zeta Potential Analyzer, was around 95 nm. Cytotoxicity assay showed that the free as well as associated to lipid nanoemulsion lipophilic derivative lesser cytotoxic than 1,5-bis(4-hydroxy3-methoxyphenyl)-penta-1,4-dien-3-one. Animal toxicity experiments showed that lipophilic derivative associated to lipid nanoemulsion has very low toxicity at 300 mg/kg dose. There was no significant weight loss and biochemical and hematological analysis showed minimal alterations when compared with control groups. In the histophatological analysis of the organs there was not significant alterations in their morphology, as necrosis, fibrosis, or leucocitary infiltration of preclinical interest, except for a little concentration of leukocytes in the myocardium, for mice treated with lipophilic 1,5-diarylpenta-1,4-dien-3-one derivative associated to nanoemulsion. Conclusion: The lipophilic 1,5-diarylpenta1,4-dien-3-one derivative-loaded lipid-based nanoemulsion has the great advantage of avoiding toxic organic solvents, decreasing in vivo toxicity. The reduction of toxicity of the formulation was expected, since the nanoemulsion reduces in vitro toxicity too. Acknowledgments: FAPESP Proc. No 06/61533-2 and 2009/17077-0 INCT-FCx - Proc. No 573560/2008-0 Bandeirante University of Sao Paulo References:
1. Anand, P., et al. Biochem. Pmarmacol., 2008, 76, 1590. 2. Suarez, J. A. Q., et al. PI 0602640-0, 2006.

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Anlisis biolgico de sistemas nanomtricos para vehiculizacin de siRNA constituidos por lecitina.
Yamila Gndolaa, Sebastin Prezb, Adriana Carluccib, Carlos Bregnib, Lorena Gonzleza.a
Departamento de Qumica Biolgica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires. b Departamento de Tecnologa Farmacutica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires. Introduccin: El silenciamiento de genes por interferencia con RNA (RNAi) es un proceso biolgico natural que implica la obstruccin de la traduccin de genes con pequeos fragmentos de RNA (siRNA) (Fire A, 1998; Hannon GJ, 2002). Los siRNA podran dirigirse a prcticamente cualquier gen del genoma humano, con lo cual tendran un potencial ilimitado para el tratamiento de enfermedades, ello ha promovido el desarrollo de reactivos basados en los RNAi para su aplicacin clnica. La formulacin de estos oligonuclotidos para su administracin in vitro y mucho ms an in vivo constituye actualmente un desafo para la utilizacin teraputica exitosa de los siRNA. Factores como la potencia inhibitoria de los siRNA, su especificidad gnica y estabilidad son cuestiones fundamentales a tener en cuenta para el diseo de siRNA para uso teraputico (de Fougerolles A, 2007). La lecitina es una mezcla de fosfolpidos enriquecida en fosfatidilcolina (98% p/p). La lecitina y los fosfolpidos purificados que la componen son ampliamente utilizados con propsitos farmacotcnicos formando parte de liposomas, micelas mixtas o emulsiones submicrnicas. En el presente trabajo se analiza la citotoxicidad, capacidad de unin de siRNA y la capacidad de vehiculizacin intracelular de siRNA por parte de dispersiones acuosas de lecitina con el fin de establecer la utilidad de estos fosfolpidos para el diseo de formulaciones eficientes como carriers de siRNA. Metodologa: Lecitina (Phospholipon 90G, Lipoid, Germany) se dispers en distintos buffers y soluciones, todos ellos isotnicos, resultando en sistemas nanomtricos. Por medio de electroforesis en geles de agarosa se analiz la capacidad de unin de siRNA de las dispersiones en diferentes relaciones N/P. La citotoxicidad de las dispersiones se evalu por medio de un ensayo para determinar viabilidad celular basada en la reduccin del cloruro de tetrazolium. Finalmente, la captacin celular se evalu analizando la transfeccin de siRNA marcado con un fluorocromo y evaluando su distribucin intracelular por medio de microscopia de fluorescencia. Resultados: Los ensayos de viabilidad celular demostraron que ninguna de las concentraciones de lecitina utilizadas es citotxica, tampoco se vi

afectada la viabilidad celular con la composicin del medio en el que se realiz la dispersin de lecitina. En cuanto a la capacidad de unin de siRNA de las dispersiones de lecitina, se puso en evidencia la importancia del medio de solubilizacin para favorecer la unin del siRNA. Sin embargo, no fue determinante la relacin N/P, ya que las dispersiones de lecitina capaces de unir siRNA se asocian a los oligonuclotidos en un amplio rango de relaciones N/P. Finalmente los estudios de microscopa de fluorescencia evidenciaron la capacidad de las dispersiones de lecitina de internalizar siRNA. Conclusiones: Los estudios realizados sugieren la utilizacin de sistemas nanomtrcios compuestos por lecitina para el diseo de formulaciones destinadas a vehiculizar siRNA.
- de Fougerolles A et al. 2007 Nat Rev Drug Discov. 6: 443-53. - Fire A, et al. 1998. Nature. Feb 19;391(6669):806-11. - Hannon GJ. 2002. Nature. Jul 11;418(6894):244-51.

Sesame oil emulsions: development and physicochemical characterization

Santiago RR1, Silva KGH2,3, Silva KS1, Silva KCH4, Egito EST1,2,4
Programa de Ps-graduao em Cincias Farmacuticas, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, Brasil. 2 Laboratoire de Physico-Chimie, Pharmacotechnie et Biopharmacie UMR CNRS 8612, Facult de Pharmacie, Universit Paris-Sud XI, ChatenayMalabry France. 3. Programa de Psgraduao em Cincias da Sade, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, 4. Brasil. Laboratrio de Sistemas Dispersos (LASID), Departamento de Farmcia, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, Brasil. Phase diagrams have been widely used within the pharmaceutical and cosmetic fields for evaluation of equilibrium states of proportional mixtures of water, oil and surfactant compounds. Its graphical representation was made by an equilateral triangle in which each vertices represents one of the three components, water, oils and surfactant.. The aim of this work was to develop phase diagrams with sesame oil, Tween (T) and Span(S), and evaluate the formation of dispersed systems like microemulsion (ME), liquid emulsion (LE), cream emulsion (CE) and phase separation (PS). Such diagrams were constructed by titration, varying the proportions between the surfactant Tween 20 and Span 80 (10:0 to 0:10) for a total of eleven diagrams. The methodology used to classify the systems and build the phase diagrams was simple and reproducible. After titration, it was possible to define different regions in the diagrams and correlate it to the variation on the ratio
1.

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surfactant/co-surfactant. All diagrams show regions of emulsion, however, only in the diagram with a T/S ratio of 1-7 the CE system was revealed. This system was then selected for characterization and stability studies. From these diagrams, seven formulations with HLB (hydrophilic-lipophilic balance) ranging from 9.26 to 16.70 were chosen. Once selected, they were reproduced by the phase inversion temperature (PIT) method and analyzed after 24 hours by the micro-emultocrit technique.3 As a result only one formulation was stable (F1). Results consistent with the micro-emultocrit assay were observed with the long term stability study (visual analysis). The first signs of instability were observed only after four weeks of long term stability at 4 and 45 C. the pH and conductivity of the formulations remained around 4.87 0.47 and 41.90 5.24 S/cm, respectively. As expected for the PIT method, the formulations showed small droplet size. However, a variation in the average size according to the composition of each formulation was observed. The best results were found for the F1 and F3 formulations (0.482 0.007 m and 0.469 0.003 m, respectively). In addition, the rheograms of all formulations showed pseudo-plastic behavior. Finally, the study of phase diagrams revealed to be a useful technique for identifying not only different ternary systems, but also the limits of maximum and minimum concentrations of the components to obtain different pharmaceutical dosage forms. References
1. Mackay RA. Use of Triangular Diagrams in the Study of Emulsions. In: Becher P, editor. Encyclopedia of Emulsion Technology. 3 ed. New York; 1983. p. 223-37. Florence AT AD. Princpios Fsico-Qumicos em Farmciaed. So Paulo; 2003. Macedo JPF, Fernandes LL, Formiga FR, Reis MF, Jnior TN, Soares LAL, et al. Micro-emultocrit Technique: A Valuable Tool for Determination of Critical HLB Value of Emulsions. AAPS PharmSciTech. 2006;7(1):1-7.

Paulista Jlio de Mesquita Filho Araraquara, So Paulo, Brasil 5 Departamento de Farmcia Universidade Federal do Rio Grande do Norte Natal, Rio Grande do Norte, Brasil Introduction: Biofilm is a microbial mass that results from multiplication and development of microorganisms adhered to the surface of solids trapped in the matrix of extracellular polysaccharides in environments which contain liquids, developing into a true community association, forming a food chain. The aim of this work was to study the interference on the biofilm formation by Candida strains submitted to the exposition at amphotericin B microemulsion systems (AmB-ME). Methods: AmB-ME was diluted in RPMI medium at different concentrations (ranged from 128 g/mL to 0,25 g/mL )and added in a 96-well ELISA plate previously seeded with strains of Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida methapsilosis and Candida orthopsilosis. The plate was incubated at 37C over 24 hours. Each strain was tested by two lines of the plate, and a control was performed using wells without AmB-ME. The assays were also performed with blank microemulsion (unloaded ME). Results and discussion: The results showed that the AmB-ME caused interference in biofilms formation in order to 40% when compared to the control. Additionally, the interference caused by ME was in order of 68 %, which indicates that the AmBME doesnt disturb the biofilm formation as ME. Therefore, it could inferred that the surfactants of the formulation are the main cause for biofilms disturbance, and the AmB inhibits this action, once AmB molecules locate themselves in the interface of the droplets of the microemulsion. Conclusion: The biofilm formation by Candida spp. strains were inhibited by both AmB-ME and ME since the surfactants of their composition may be the main reason of this interference. Moreover, AmB molecule located at the interface of the ME droplet decreases this phenomenon. References:
Costerton, J. W.; Cook, G.; Lamont, R. The community architecture of biofilms: dynamic structures and mechanisms. In: Newman, H. N.; Wilson. M. (eds). Dental plaque revisited: oral biofilms in health and disease. London, Cardiff: Bioline, 1999, p. 5-13. Stoodley, P.; Sauer, K.; Davies, D. G.; Costerton, J. W. Biofilms as complex differentiated communities. Annu. Rev. Microbiol., v. 56, p. 187-209, 2002.

2. 3.

Interference on the shaping of the Candida spp biofilms by Amphotericin Bmicroemulsion system.
Leonardo Medeiros de Quadros Barbosa1, Regina Helena Pires2, Walte Louis Lima da Silveira3, Maria Jos Mendes Giannini4, Eryvaldo Scrates Tabosa do Egito5.
Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas Universidade Federal do Rio Grande do Norte Natal, Rio Grande do Norte, Brasil 2 Programa de Ps-Graduao em Biocincias e Biotecnologia Aplicadas Farmcia Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho Araraquara, So Paulo, Brasil 3 Programa de Ps-Graduao em Cincias da Sade Universidade Federal do Rio Grande do Norte Natal, Rio Grande do Norte, Brasil. 4 Departamento de Anlises Clnicas Universidade Estadual
1

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In vitro activity of miltefosine plus itraconazole-loaded lipid-based nanoemulsion against L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi
Jos J. G. Bitencourt, Ana C. Medeiros, Mrcia R. M. Santos, Ana S. Marques, Bruno C. Guerrieri, Maria A. Santos, Wendy K. Mendes, Claudete J. Valduga
Bandeirante University of So Paulo cvalduga@usp.br Introduction and Objective: Leishmaniasis is a neglected tropical disease which affects approximately 12 million people around the world, and each year there are around 2 million of new infected. As it mainly affects poor countries, pharmaceutical industries in general do not invest in research and development of new drugs to fight the disease. As a consequence the only drugs of first choice available to treat Leishmania are the same used at the beginning of the last century, except for miltefosine that was approved for oral treatment of Visceral Leishmaniasis in India in 2002. Nowadays, other chemotherapeutic agents classically used for other diseases have been used to Leismaniasis as anfotericin B and some azole antifungal agents. Here, we developed a miltefosine- and miltefosine+itraconazole-loaded lipid-based nanoemulsions and tested them against promastigotes forms of L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi. Materials and Methods: miltefosine- and miltefosine+itraconazole-loaded lipid-based nanoemulsion were prepared by high-pressure homogenization of a mixture of drugs and phosphatidylcholine, cottonseed oil, cholesterol, oleic acid and Tween 80. The formulations, as well as free miltefosine, itraconazole and miltefosine+itraconazole, were assayed against

promastigotes forms of L. (V.) braziliensis (M2903) and L. (L.) chagasi (M6445) and compared with anfotericin B and control without treatment and NaHCO3 4.2mM, bovine hemin 5g/mL and FBS DMSO. The parasites were cultured in M199, pH 7.4, supplemented with hepes 40mM, adenine 1mM, 20%, at 28C. 1x106 cells/well were counted and incubated in 24-wells microtiter plates for 24h at 28C with 5-50g/mL of all substances. After that parasites were incubated with trypan blue and counted in optical microscope for viability. Results: Miltefosine was associated into the lipid nanoemulsion at a high yield, the particle size was around 100 nm measured in Laser LightScattering equipment, and the formulation showed to be stable. When both miltefosine and itraconazole were mixed and associated to the same lipid nanoemulsion, itrazonazole rate of association was roughly 20%, while for miltefosine it was almost 100%. The particle size was around 130 nm and the time stability was shorter than that of when only miltefosine was present into the nanoemulsion. Even though, miltefosine+itraconazole-loaded lipid nanoemulsion showed excellent cytotoxicity results against both L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi. Miltefosine and miltefosine+itraconazole dissolved in DMSO also showed high cytotoxicity against both Leishmania species. Conclusion: Our results suggest that the combination of miltefosine plus itraconazole as free as loaded lipid-based nanoemulsion can be very efficient against promastigotes forms of L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi. Acknowledgements: FAPESP Proc. No 06/61533-2 and 2009/17077-0; INCT-FCx - Proc. No 573560/2008-0; University Bandeirante of Sao Paulo.

Figure 1. Cytotoxicity against promastigotes forms of L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi after 24h of incubations of miltefosine and itraconazole alone and in combination.

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LU DTPA-Liposomas como nanosistemas para terpia de cancer.

Lecot, Nicole; Cabrera, Mirel; Fernndez, Marcelo; Cabral, Pablo.
Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Universidad de la Republica Introduccin: Los liposomas son sistemas supramoleculares autoensamblables, formados por una o varias capas fosfolipdicas encerrando un volumen acuoso. Dependiendiendo del tamao de estos, se pueden dirigir selectivamente a compartimientos determinados del organismo, como una formacin tumoral. El 177Lu es un emisor de partculas y (E media 166 KeV, E 113 KeV 6,5%, 208 KeV 11%, T1/2 6.7 d) que ha sido utilizado con xito en terapias con radiofrmacos. El objetivo de este trabajo es el desarrollo, evaluacin qumica y biolgica de liposomas convencionales y estricamente estabilizados marcados con 177Lu. Materiales y Mtodos: Los DTPA-liposomas se componen de: fosfatidilcolina: colesterol: 1,2;dimiristoil sn-glicero fosfoetanolamina-3-N-DTPA (9:4:1 p / p).Los liposomas estricamente estabilizados se componen de: fosfatidilcolina: colesterol: 1, 2; dimiristoil-sn-glicero Fosfoetanolamina-3-N-DTPA y 1,2 dimiristoil-snglicero fosfoetanolamina-3-N-(metoxi (polietilenglicol-5000)) (9:4:1:1 p / p). Ambos tipos de liposomas se prepararon utilizando el mtodo de hand shaken. El marcado radiactivo con 177Lu fue realizado de la siguiente manera: 2 L de 177Lu (2.7mCi) con 0,8 ml de dispersin liposomal, se incubaron durante 20 minutos a temperatura ambiente. La eficacia de radiomarcado y de la pureza radioqumica se realiz por ITLC utilizando solucin de acetato de sodio 14% y piridina: cido actico: agua (3:5:1.5 v / v) como fase mvil y por cromatografia de exclusin molecular utilizando una columna PD 10 eluyendo con 0,9% de NaCl. Se realizaron controles de estabilidad de los liposomas marcados hasta 24 horas utilizando los sistemas mencionados anteriormente. Para evaluar la biocinetica de los liposomas marcados se realizaron estudios de biodistribucion en ratones CD1 normales a 4 y 72 horas. Para estudiar el efecto de el bloqueo hepatico se realizaron 2 experimentos: experimento 1 se le realizo un bloqueo del hgado con 0,3 ml (20mg/ml) de liposomas fros, (n = 6); experimento 2 se le efectu bloqueo del hgado con 0,2 ml (20 mg/ml) de liposomas fros, (n = 6). Los ratones fueron sacrificados a las 4 y 72 horas despus de la inyeccin intravenosa. Resultados: La eficacia del marcado fue superior al 95% para ambos tipos de liposomas, la estabilidad de los liposomas marcados de mantuvo durante 24 horas. Las biodistribucines muestran que para ambos liposomas la principal va de eliminacin es heptica, observandose una captacin

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secundaria en bazo, vejiga y orina. Cuando se compara la cintica de depuracin en los liposomas estricamente estabilizados con respecto a los convencionales se observa que los primeros presentan una depuracin ms lenta. Conclusiones: Estos resultados impulsan la investigacin de estos liposomas como potenciales agentes de terapia. Agradecimientos: OIEA, PDT

Influencia del cambio de la fase de incorporacin de estearilamina en el procceso de complejacin del ADN por nanoemulsin catinica
Verssimo, Lourena Mafra; Silva, Andr Leandro; Alexandrino-Junior, Francisco; Agnez-Lima, Lucymara Fassarela; Egito, Eryvaldo Scrates Tabosa.
Laboratrio de Sistemas Dispersos (LaSiD), Departamento de Farmcia, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal/Brasil. Laboratrio de Biologia Molecular e Genmica (LBMG), Centro de Biocincias, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal/Brasil. Rede Nordeste de Biotecnologia (RENORBIO). La terapia gnica, se define bsicamente como el tratamiento de enfermedades, basado en la transferencia de material gentico, con el objetivo de sanar una enfermedad o mejorar el estado clnico del paciente. Para ello, se hace necesario que llegue a la clula, tejido u rgano blanco, el gen a transferir, esto se logra con diversos medios de transporte tales como: vectores virales, no virales y mtodos fsicos. Dentro de los vectores no virales, se encuentran las emulsiones catinicas, las cuales pueden complejar el ADN por interacciones electrostticas y de esta forma condensarlo, permitiendo as traspasar las membranas biolgicas y protegerlo de enzimas (como la DNAsa) hasta que sea incorporada a la clula, por fusin o endocitosis (1). En el presente estudio se desarrollaron dos nanoemulsiones como vehculos no virales, producidas por sonicacin, las cuales estaban compuesta en su fase oleosa por un 5% de Captex 355 y 0,8% de Span 80 y en la fase acuosa, 1,2% de Tween 80 y 93% de agua. Para lograr la carga catinica, se agreg 0,16% de estearilamina (tensoativo catinico). En una de las emulsiones el tensoativo catinico fue agregado a la fase acuosa y en otra a la fase oleosa. Fue evaluado para cada una de ellas, el poder de acomplejar el ADN, por anlisis electrofortico en gel de agarosas 0,7%, tras 30 minutos de complejacin Emulsin/ADN (2,3). Se realiz adems un anlisis de microemultocrito con el cual se evalu la estabilidad a corto plazo de ambos sistemas (4). Con ambos estudios, se logr determinar que al agregar estearilamina a la fase

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acuosa, la tasa de complejacin fue de 115,0 ng/L (ADN/Emulsin) y a su vez cuando se agreg a la fase oleosa, la tasa calculada fue de 46,0 ng/L. En relacin al microemultocrito se demostr que no existe diferencia en este parmetro en ambas emulsiones, siendo de 1% el rango de crema tras la centrifugacin por 10 minutos, a 11500 rpm. Se concluy por tanto, que las nanoemulsiones desarrolladas fueron sistemas aptos para complejar el ADN, logrando un mayor efecto complejante al agregar el tensoactivo catinico a la fase acuosa y que ambas fueron sistemas estables a corto plazo, visualizndose as como un promisor vehculo til para terapia gnica, dado adems por su fcil realizacin y relativamente bajo costo. BIBLIOGRAFIA
1- Verssimo LM, Lima LFA, Egito LCM, Oliveira AGd, Egito ESTd. Pharmaceutical emulsions: a new approach for gene therapy. J Drug Target. 2010 Jun;18(5):333-42. 2- Ott G, Singh M, Kazzaz J, Briones M, Soenawan E, Ugozzoli M, et al. A cationic sub-micron emulsion (MF59/DOTAP) is an effective delivery system for DNA vaccines. Journal of Controlled Release,79(1-3):1-5, 2002. 3- Kim TW, Kim YJ, Chung H, Kwon IC, Sungb HC, Jeonga SY. The role of non-ionic surfactants on cationic lipid mediated gene transfer. Journal of Controlled Release.;82(455465), 2002. 4- Macedo JPF, Fernandes LL, Formiga FR, Reis MF, Nagashima T, Soares LAL, et al. Micro-emultocrit technique: A valuable tool for determination of critical HLB value of emulsions. AAPS PharmSciTech. [Article]. 2006;7(1).

Nanoanticuerpos VHH dirigidos contra antgenos virales

Garaicoechea, L., Barbieri, E., Asenzo, G., Zamit, A. Wigdorovitz, A. y Parreo, V.
Laboratorio de Nanoanticuerpos VHH, INCUINTA, Instituto de Virologa, CICV y A, INTA Los camlidos poseen la particularidad de tener un porcentaje de sus anticuerpos formados por un solo tipo de cadena polipeptdica, denominados anticuerpos de cadena pesada o heavy chain antibodies, ya que carecen de las cadenas livianas que normalmente se encuentran presentes en los anticuerpos convencionales. La porcin variable de estos anticuerpos se denomina VHH y puede clonarse y expresarse en forma soluble resultando as un nanoanticuerpo monoclonal recombinante. Los VHHs son las molculas naturales ms pequeas con capacidad de reconocer y unirse con elevada afinidad a un antgeno especfico. Dado su tamao (2.2 nm de dimetro y 4 nm de largo), pueden acceder a sitios inaccesibles para los anticuerpos convencionales, por ejemplo son

capaces de inhibir enzimas. Los VHHs constituyen nano-reactivos, se incluyen dentro de las disciplinas de la nanotecnologa y pueden ser utilizados en mtodos diagnstico, como reactivos de purificacin de sus antgenos especficos, en el direccionamiento de drogas anti-tumorales y anti-inflamatorias, terapias gnicas y desarrollo de nanosensores, entre las ms destacadas. Asimismo, poseen elevada solubilidad y por esas propiedades pueden penetrar tejidos y la barrera hematoenceflica, pudiendo ser humanizados para no generar respuesta inmune al ser administrados por va parenteral. Desde el ao 2005 nuestro grupo de trabajo est desarrollando una plataforma tecnolgica para el desarrollo de nanoanticuerpos especficos contra antgenos virales. En este marco, las lneas de investigacin desarrolladas hasta el momento incluyen: Desarrollo de Biblioteca de genes VHH especficos para la protena VP6 de Rotavirus: Se desarrollaron nanoanticuerpos con potencial uso como terapia oral para la proteccin contra la diarrea por rotavirus en lactantes y nios. Los nanoanticuerpos, dado su capacidad innovadora de neutralizar cepas de rotavirus grupo A, independientemente de su serotipo, fueron patentados en Argentina y otros pases del mundo conjuntamente por INTA y por la empresa espaola Algenex. Desarrollo de Biblioteca de genes VHH especficos para la protena E2 del virus de la diarrea viral bovina: se seleccionaron VHH con propiedad de reconocer distintas cepas del virus in vitro. El producto se encuentra en vas de patentamiento y ser utilizado en el desarrollo de test diagnsticos de ltima generacin para la deteccin de animales persistentemente infectados. Desarrollo de Bibliotecas de genes VHH especficos para dos cepas de Norovirus: se encuentra en curso la produccin de bibliotecas contra los dos genotipos de Norovirus prevalentes en humanos. Se seleccionarn nanoanticuerpos que permitan la caracterizacin antignica de estos virus fastidiosos (no replican en cultivos celulares) y que puedan utilizarse para prevenir y tratar la diarrea por norovirus en adultos y nios. Desarrollo de Biblioteca de genes VHH especficos para Influenza A H1N1 Padmica y sus variantes: se realizaron 2 estrategias, una focalizando la proteccin contra el virus completo de influenza A-H1N1 y otra especfica contra el ectodominio de la protena de membrana M2, ya que la misma es altamente conservada entre todos los virus de influenza A y anticuerpos frente a este antgeno presentan potencial importancia como estrategia pasiva antiviral.

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Auspician

Centro Argentino-Brasileo de Nanociencias y Nanotecnologa (CABNN)

Empresas

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