ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

2.% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21. heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad.. ¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua. molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio. embudo para recolección de muestras. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%.05 % 95 3. Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1. . frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. osea que no se elimina totalmente el agua.

sino que es inversa al contenido de materia seca. Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas. es mucho más confiable que la anterior. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión. CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad. destilación de otros componentes. sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm. Homogenice.PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas. que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos. sin embargo. constituye un elemento de trascendencia económica. adherencia de gotas de agua. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. . si es necesario prolongue el tiempo de desecación. evaporación incompleta del agua. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. etc. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla. rápido y el más usado en los laboratorios.

% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia. Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. Seque en estufa durante tres horas a 110ºC. Conductividad eléctrica especial para granos. etc. las temperaturas inadecuadas(bajas). La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. generalmente conllevan a que se formen carbonatos. NaCl. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. además de que aceleran el proceso. . haga este proceso con replica para verificar sus resultados. como lo son Método de Karl Fischer. especial para sustancias con bajo contenido de agua. carbonos. sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas. cajas de petri. Para muestras con menos del 15 % de humedad.) que hacen parte de la fracción en cuestión. PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella. Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior. campana para desecación. permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. enfría en desecador y pese.Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. 1980). Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores. En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo.. tres horas es suficiente. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar. SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 .

EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. . generalmente éter. enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. crisoles de vidrio y porcelana. Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. como carbohidratos. papel filtro o dedales de celulosa. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. los cuales no son el objetivo de este documento. si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. Si observa puntos negros. campana de desecación. PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo.Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos. Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. cuando se trata de productos con bajo contenido. granallas de zinc. benceno. el crisol se enfría en desecador y se pesa. etc. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras. de petróleo o hexano. levaduras. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . coloque un gramo de muestra sólida. dan mayor confiabilidad a los resultados. Esto es debido a que los solventes utilizados. se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. la ceniza pura.. este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. cloroformo. estufa con graduación de temperatura. REACTIVOS: éter etílico.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. enfriado y tarado.

entórchelo para que la muestra quede en el fondo. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. 2. Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. luego hidrolizar y extraer. si ese es el caso. 4. conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) .PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. 3. y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción. 1980). NOTAS: 1. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. recupere el solvente. Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. Una vez transcurrido el tiempo necesario. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. urea. glucolípidos. demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura. asegúrese de que el balón este limpio y seco. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. 5. extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. Acople el balón al equipo extractor. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. enfríe y pese. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa. . ácido láctico. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. Coloque la muestra en la unidad de extracción.

Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos.25%. idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. requiere procedimientos difíciles. grasa y ceniza. EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. lana de vidrio. vasos Berzelius o erlenmeyers. aparato de reflujo. azúcares.25%. Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores. esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1. acetona y etanol. proceso que se detallará más adelante. etanol. adicione 5 gotas de antiespumante. PROCEDIMIENTO A. Sin embargo. La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este. Hidrólisis ácida: pese 0. bomba de vacío. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. insufle aire o adicione antiespumante. etc. mufla. sino el residuo de una operación matemática. almidones. B.. crisoles filtrantes (Gooch). El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes. en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento. Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN). enfríelo en un desecador y péselo (peso A). Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. si hay formación de espuma.DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. El ELN se determina por diferencia. antiespumante (alcohol octílico). Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) . lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta. acetona. desecador. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas. acumulando los errores de las demás determinaciones.25%.2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1. estufa. hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%).. Acople el digestor. Además de que el ELN no es producto de un proceso. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo). este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia. El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. proteína. planchas de calefacción.

) o California (Nalge Co. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1. Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original. Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1. tanto directa como indirectamente. se solubiliza el contenido de la célula y la pectina.) son adecuado.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración. Muy disponibles B. Descuente también la humedad del material que este analizando 3.2 00. Al hervir la muestra con detergente neutro. y C. El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0. Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito. dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa.05 g 95 2. De disponibilidad incompleta. Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos. 4. así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% .

Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC . FC. las que por incineración da el valor de celulosa. FDN = celulosa. Este procedimiento se detalla a continuación.

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5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. crisoles filtrantes (Gooch). REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6. 5% de Na3PO4 y 0. PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm). antiespumante (alcohol octílico). enfríelo en un desecador y péselo. proteínas. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979.) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN). estufa. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso.9 – 7. 6. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. aparato de reflujo.1: 30g de Lauril sulfato sódico. Lave luego dos veces con acetona. En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales. 0. lana de vidrio. desecador. Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A).1 Pese aproximadamente 0. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. glúcidos solubles. El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6. acetona. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza. enfríe en desecador y pese (B). Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso.5g de sulfito de sodio. pues tiende a erosionar el vidrio.9 – 7. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. se prepara una solución caliente de 20% de KOH.81g de borato de sodio decahidratado. y repita el lavado varias veces.1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. 18. 4. etc. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter). verifique pH. Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina.5g de sulfito sódico.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa.9 – 7. . Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro.61g de EDTA disódico. 0.56g de fosfato disódico. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. vasos Berzelius o erlenmeyers.

0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro). Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso. El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular. A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado. lana de vidrio. haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol. ayuda a reducir el tiempo de filtración. Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar. . REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1. los resultados darían un contenido alto de paredes celulares. antiespumante (alcohol octílico). sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío. Dentro del porcentaje pared celular. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA. se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. Acetona. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . aparato de reflujo. obstruyendo el filtro.% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 . crisoles filtrantes (Gooch). esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra.% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. la que debe descontarse al final del análisis. vasos Berzelius o erlenmeyers. por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa. estufa. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición. desecador.

su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Oxidación por cloruro de sodio. Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0). Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos. Oxidación por ácido acético permanganato de potasio. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular.% FDA NOTA.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo. . Es más. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina. aunque de alguna manera constituye un carbohidratos.% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN . Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. y repita el lavado varias veces. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber.0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación. Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Conserve el residuo para la determinación de Lignina. enfríe en desecador y pese (B). Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1. Lave luego dos veces con acetona. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes.

La solución B disolviendo 0. 1. Filtre la solución sin lavar con agua. bandeja de vidrio. no se determina con este método. Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. Una variación que se introduce en estos casos. La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas. varilla de vidrio. Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora. es la de usar el permanganato . para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. 70mL de etanol al 95%.466 g de nitrato férrico. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. 0. Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. La solución A con 0. El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado). los que se diluyen en 5mL de agua. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones.0075g de nitrato de plata. crisoles filtrantes (Gooch). 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. desecador. no moje la fibra.25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. Enfríe en desecador y pese(C). Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco. Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer). horno desecador. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1. estufa.

para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. lignina. Solución ácido detergente. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. Determinar la normalidad del ácido por titulación.5 mL y adicionarle 2. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. lleno de agua antes de adicionar el ácido. en estos casos los resultados dan valores bajos. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente.45mL de H2SO4. Medir el H2SO4. aforar con agua destilada. tomar 5mL y adicionarle 4. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. 3. . adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. Ácido sulfúrico al 72% peso. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L).A. los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. REACTIVOS: Acetona R. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes. La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. y con agitación suave.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Colocar el matraz dentro del lavadero.04g / 1L). El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina. por espacio de 3 horas. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. Asbesto. a) H2SO4 1N valorado (49. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado.5mL de agua. En consecuencia. es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente.5cm de la marca de calibración a 20ºC. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Si el volumen es demasiado grande. El menisco debe estar a 0. molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. Este método por lo tanto. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio). Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas.

enfriar a 100ºC y pesar. tres veces es suficiente.. Dejando el agitador dentro. agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido. . si esto no es posible. La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%. Lavar y quitar el agitador. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. Mantener los crisoles a 20 . Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes. La pesada deberá hacerse en caliente.550ºC / 3 horas. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. Sin embargo.23ºC. el factor cutina es resistente a la degradación microbiana. Incinerar los crisoles en mufla a 500 . Secar los crisoles a 100ºC y pesar.PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. enfríe en desecador y pese (D). LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa. La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas.

Si el volumen es muy pequeño sacar 1. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado.REACTIVOS: Acetona R. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). El menisco debe estar a 0. Solución ácido detergente.5 mL y adicionarle 2.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0. tomar 5mL y adicionarle 4.15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada. Asbesto. y con agitación suave. a) H2SO4 1N valorado (49. disuelva 6. Para preparar 1 litro de solución. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse.45mL de H2SO4. Antes de ser usado. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua.0g de acetato de potasio y mézclese la solución. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. lleno de agua antes de adicionar el ácido. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas.5mL de agua.A. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Manténgase la solución protegida de la luz solar directa. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72. aforar con agua destilada. n-Hexano R.8L 1. Ácido sulfúrico al 72% peso. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por . Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros.2L Solución de permanganato combinada.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Solución amortiguadora de lignina. Determinar la normalidad del ácido por titulación.0g 1g 6L 60g 4. Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada. Medir el H2SO4.5cm de la marca de calibración a 20ºC.A Permanganato de potasio saturado.04g / 1L). Si el volumen es demasiado grande. Colocar el matraz dentro del lavadero.

agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese. mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice. (Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original). Calcular la cutina como pérdida después de incinerar. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina.2L de alcohol etílico de 95%. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos. Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%. en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%. Lave con acetona y filtre. . Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar. CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica.5L Alcohol etílico de 80% v/v.8L de agua destilada y 15. Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente. Para preparar 18L mezcle 2. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado. Incinere a 500ºC por 3 horas. Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12. Enfríe en desecador y pese(E).6L 900mL 4.una semana en refrigeración en ausencia de luz.

ácido bórico 4%. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total. Aminas. Agregue 0. tubos de destilación Kjeldahl. Este método. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio.41% y selenio 1. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9. pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. Ácido salicílico para nitrógeno total. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación. a partir del calentamiento.El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína.5g de ácido salicílico.05g de rojo de metilo y 0. erlenmeyer de 250mL. Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. sales de amonio. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con . etc. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. reportado por Kjeldahl en 1883.54%. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl.5g de muestra. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos. nitratos. Transfiérala al tubo Kjeldahl. ácido sulfúrico 0. NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado. Cosa que no es cierto para ningún alimento. La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación. Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica. microbureta.05% . Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico. sulfato de cobre pentahidratado 2. hidróxido de sodio 32%. PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0. destilador Kjeldahl.1N. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96. Indicador: disolver 0. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”.

Presione el botón de destilación y destile a 35mL.sumo cuidado. CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N.1N hasta cambio de color (rojizo). Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). Agregue a la solución. agua hasta complementar 5mL (en la escala). Alcalinice la solución con NaOH al 32%.4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde. Antes de comenzar este paso. El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda. V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0. Anote el gasto (restándole el del blanco). esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL).1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio. Titule con ácido sulfúrico 0. . por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1. asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico).

Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra. soya y subproductos. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora.1g de ureasa utilizada en solución. frutas. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. centeno. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea. 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante. Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa. y no podrían aplicarse a mezclas. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . REACTIVOS: CaCl2 al 25%.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0. En el caso de pastos y forrajes.1N por cada 0. linaza. Calcule el porcentaje de N. Adicione 2g de MgO. verduras y subproductos.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos.7% para el caso de productos lácteos. destilador Kjeldahl. huevos. Lave el tapón y cuello del matraz.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0. antiespumante. Aunque existan estas limitaciones.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl.1N. Para mezclas de cereales: maíz. cebada. sino aquellos para los cuales se determinaron. fríjoles. determinada por la recuperación del N total. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. Utilice rojo de metilo como indicador. Par carnes. arroz. semillas de algodón. se asume un contenido de N del 16% y 15. trigo. Agregue el mismo volumen de HCl 0. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl. Para leche y derivados.

2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible. 0. % de N 46. utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad.1438 3.13 aprox.7167 FACTOR 2.2007 19.6459 33. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos. que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal. PRINCIPIO. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro.1625 13. NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar.7168 5. Comprobar el contenido en metales de los ácidos. La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición.20 aprox. 0. ácido nítrico concentrado (peso específico 1.06 aprox. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual. Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro. 0. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento. . por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. como se dijo antes. Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada. El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios .84). La determinación de cenizas por el método de Weenden.0004 4.3272 21. Agua.08 aprox.15 aprox. Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua. 0. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN.42).2185 7. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. En este caso nos referimos a los macroelementos.

manganeso. DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA .5% en etanol. además de que juega un papel importante en las demás células. solución de HCl en agua (1: 3).APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido. indicador de rojo de metilo al 0. Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial. Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos.2%. Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos. es obligado su análisis en el laboratorio. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. Par el análisis de calcio. Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza. solución 0. PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL.05 o 0. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. NOTA. hierro y aluminio. Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida. especialmente en el tejido óseo.15N de KMnO 4. solución de NH 4 en agua (1: 1). es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico. Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1.42). Para la determinación de calcio en un alimento. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico.84).

DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. aforar con agua. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio. calentar a ebullición.6 indicado por un calor café naranja. 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado. NOTA. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2.0).5 – 3. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio.Pesar con exactitud aproximadamente 2. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. hace parte de un gran número de compuestos diversos. El fósforo presente en organismos vegetales y animales.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación). Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4. homogenizar. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado. Si el indicador vira al anaranjado o amarillo. transferir a un matraz volumétrico de 100mL. DETERMINACIÓN. añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. . Diluir aproximadamente a 150mL. en parte como fosfato inorgánico puro.05N equivale a un mg de calcio. se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. enfriar. 1mL de KMnO4 0. asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50). pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica. Dejar reposar durante la noche. Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar.

PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca. Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios. PRINCIPIO.84) a un litro. Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz.3N para neutralizar la solución. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1). Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0. EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL. Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL. pesar 0. . Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. la anterior se considera como solución madre.131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua. Preparar este reactivo fresco cada día.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color. ácido clorhídrico 3N y 6N. DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. NaOH 0. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL). cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico.286g de fosfato monopotásico. Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar. espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm . Almacenar. Esta solución es la de trabajo.53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise. Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL.APLICACIÓN. Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC.

Estas soluciones contienen 0. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y.00815 x (a – b) W xV NOTA 1. 60.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0. 3. El color es estable durante varias horas . 40. continuar como las instrucciones. 20. ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL. Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0. 80 y 100µg PO4 por 50 mL.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco. 1. 2. Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL.

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