ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

. Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua.05 % 95 3. embudo para recolección de muestras. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). ¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5. molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%.% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21. Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. 2.. heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. osea que no se elimina totalmente el agua. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos.

Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos. 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm. sin embargo. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. evaporación incompleta del agua. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. Homogenice. CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. sino que es inversa al contenido de materia seca. destilación de otros componentes. adherencia de gotas de agua. es mucho más confiable que la anterior. si es necesario prolongue el tiempo de desecación. rápido y el más usado en los laboratorios. Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . etc. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. .PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas. sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión. constituye un elemento de trascendencia económica. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad.

% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia.Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. 1980). Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior. Para muestras con menos del 15 % de humedad. Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. además de que aceleran el proceso. Seque en estufa durante tres horas a 110ºC. tres horas es suficiente.. CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 . Conductividad eléctrica especial para granos. NaCl. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa. . SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo. haga este proceso con replica para verificar sus resultados.) que hacen parte de la fracción en cuestión. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. como lo son Método de Karl Fischer. enfría en desecador y pese. especial para sustancias con bajo contenido de agua. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar. etc. las temperaturas inadecuadas(bajas). sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas. generalmente conllevan a que se formen carbonatos. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. cajas de petri. campana para desecación. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella. carbonos. PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores.

Si observa puntos negros. Esto es debido a que los solventes utilizados.. campana de desecación. PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . la ceniza pura.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. el crisol se enfría en desecador y se pesa. generalmente éter. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. . Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. enfriado y tarado. etc. cloroformo. dan mayor confiabilidad a los resultados. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas. EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. benceno. Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos. coloque un gramo de muestra sólida.Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. granallas de zinc. enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. REACTIVOS: éter etílico. los cuales no son el objetivo de este documento. como carbohidratos. levaduras. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes. estufa con graduación de temperatura. papel filtro o dedales de celulosa. cuando se trata de productos con bajo contenido. crisoles de vidrio y porcelana. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras. se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. de petróleo o hexano.

extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. 5. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. . Coloque la muestra en la unidad de extracción. demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura. glucolípidos. y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción. asegúrese de que el balón este limpio y seco. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. 3.PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. 4. Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. recupere el solvente. 2. Una vez transcurrido el tiempo necesario. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. Acople el balón al equipo extractor. si ese es el caso. luego hidrolizar y extraer. ácido láctico. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. entórchelo para que la muestra quede en el fondo. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa. urea. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) . 1980). NOTAS: 1. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. enfríe y pese. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer.

en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento. este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia. Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN). El ELN se determina por diferencia. Acople el digestor. mufla. Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más. requiere procedimientos difíciles. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%.25%. adicione 5 gotas de antiespumante. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas.. EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. antiespumante (alcohol octílico). enfríelo en un desecador y péselo (peso A). hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%). Sin embargo.25%. vasos Berzelius o erlenmeyers. Además de que el ELN no es producto de un proceso. Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1. crisoles filtrantes (Gooch).25%. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. desecador. es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa. permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta. lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. acetona. etanol. proceso que se detallará más adelante. Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos. idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. almidones. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1. El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. PROCEDIMIENTO A. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo). La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este.2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) . proteína. aparato de reflujo. esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. etc. Hidrólisis ácida: pese 0. acumulando los errores de las demás determinaciones. bomba de vacío. Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. acetona y etanol. grasa y ceniza. si hay formación de espuma. lana de vidrio. B. insufle aire o adicione antiespumante. azúcares. planchas de calefacción..DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. sino el residuo de una operación matemática. estufa.

DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1. tanto directa como indirectamente. se solubiliza el contenido de la célula y la pectina. y C. Descuente también la humedad del material que este analizando 3.) son adecuado.) o California (Nalge Co. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% . dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa. 4. así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración.05 g 95 2. hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original.2 00. Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. Al hervir la muestra con detergente neutro. Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A. Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos. El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0. De disponibilidad incompleta. Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. Muy disponibles B.

Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. FC. las que por incineración da el valor de celulosa. Este procedimiento se detalla a continuación. FDN = celulosa. hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC .

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5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979.9 – 7. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. verifique pH. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A). 18. proteínas. desecador. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter). PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro. acetona.1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones.5g de sulfito de sodio. En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza.1 Pese aproximadamente 0.56g de fosfato disódico. . 5% de Na3PO4 y 0. se prepara una solución caliente de 20% de KOH. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico. Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso. enfríelo en un desecador y péselo.1: 30g de Lauril sulfato sódico. etc.81g de borato de sodio decahidratado.9 – 7. enfríe en desecador y pese (B). EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. y repita el lavado varias veces. vasos Berzelius o erlenmeyers. glúcidos solubles. Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina. 6.9 – 7. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso. crisoles filtrantes (Gooch).) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN). pues tiende a erosionar el vidrio. antiespumante (alcohol octílico). 0. hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal. El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. lana de vidrio. Lave luego dos veces con acetona.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos. estufa.5g de sulfito sódico.61g de EDTA disódico. 4. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. 0. aparato de reflujo. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm). Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente. Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos.

A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado. crisoles filtrantes (Gooch). EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición. Dentro del porcentaje pared celular. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . obstruyendo el filtro. vasos Berzelius o erlenmeyers. . por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos.0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro). la que debe descontarse al final del análisis. los resultados darían un contenido alto de paredes celulares.% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 . estufa. DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular. El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso. esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra. lana de vidrio. Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar. se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. antiespumante (alcohol octílico).% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol. La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío. aparato de reflujo. ayuda a reducir el tiempo de filtración. desecador. REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1. sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. Acetona.

aunque de alguna manera constituye un carbohidratos. y repita el lavado varias veces. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos.% FDA NOTA. Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0). Oxidación por ácido acético permanganato de potasio. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. Es más. Lave luego dos veces con acetona. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante.0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo.% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN . enfríe en desecador y pese (B). Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. . Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos. Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber. Oxidación por cloruro de sodio. Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). Conserve el residuo para la determinación de Lignina. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación. su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza. en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular. Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra.

Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1. Filtre la solución sin lavar con agua. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado).25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. varilla de vidrio. Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. estufa. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos.0075g de nitrato de plata.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. 0. La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas. no se determina con este método. bandeja de vidrio.466 g de nitrato férrico. no moje la fibra. horno desecador. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado. Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco. 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría. para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. los que se diluyen en 5mL de agua. Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. La solución A con 0. Una variación que se introduce en estos casos. Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer). Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. crisoles filtrantes (Gooch). Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora. Enfríe en desecador y pese(C). es la de usar el permanganato . Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. La solución B disolviendo 0. desecador. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones. Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. 1. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. 70mL de etanol al 95%.

45mL de H2SO4. . Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. lignina. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. por espacio de 3 horas.A. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente. Si el volumen es demasiado grande. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. Medir el H2SO4. El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. Colocar el matraz dentro del lavadero. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente. molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina. Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. Determinar la normalidad del ácido por titulación. aforar con agua destilada. La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. 3.5mL de agua. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente. en estos casos los resultados dan valores bajos.para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto.5cm de la marca de calibración a 20ºC.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. tomar 5mL y adicionarle 4. REACTIVOS: Acetona R.5 mL y adicionarle 2. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes. Solución ácido detergente. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. Asbesto. a) H2SO4 1N valorado (49.04g / 1L). lleno de agua antes de adicionar el ácido. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). En consecuencia. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto. y con agitación suave. El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio). Este método por lo tanto. El menisco debe estar a 0. Ácido sulfúrico al 72% peso.

el factor cutina es resistente a la degradación microbiana. Secar los crisoles a 100ºC y pesar. Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. Lavar y quitar el agitador.550ºC / 3 horas. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. Mantener los crisoles a 20 . Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. Sin embargo. .PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. Incinerar los crisoles en mufla a 500 . agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas. LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa. Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes. si esto no es posible. La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra. tres veces es suficiente. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. Dejando el agitador dentro. enfriar a 100ºC y pesar.. La pesada deberá hacerse en caliente. La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión. CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. enfríe en desecador y pese (D). Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%.23ºC.

adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5.45mL de H2SO4. Para preparar 1 litro de solución. Si el volumen es muy pequeño sacar 1.REACTIVOS: Acetona R. Antes de ser usado. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. tomar 5mL y adicionarle 4.A Permanganato de potasio saturado. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. Si el volumen es demasiado grande. a) H2SO4 1N valorado (49. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). Medir el H2SO4. Solución amortiguadora de lignina.8L 1. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. n-Hexano R. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. Manténgase la solución protegida de la luz solar directa.5cm de la marca de calibración a 20ºC.15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada. El menisco debe estar a 0.04g / 1L). El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. lleno de agua antes de adicionar el ácido. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por . Ácido sulfúrico al 72% peso. disuelva 6. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua.0g de acetato de potasio y mézclese la solución.2L Solución de permanganato combinada. Determinar la normalidad del ácido por titulación. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. Solución ácido detergente. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen.A. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado.5 mL y adicionarle 2. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. y con agitación suave. Colocar el matraz dentro del lavadero. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse.5mL de agua.0g 1g 6L 60g 4. aforar con agua destilada.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72. Asbesto.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada.

5L Alcohol etílico de 80% v/v. (Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original). Calcular la cutina como pérdida después de incinerar. Lave con acetona y filtre.6L 900mL 4. DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice. en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica. Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12.2L de alcohol etílico de 95%. Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente. Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%. por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%. Para preparar 18L mezcle 2. mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado.8L de agua destilada y 15. Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos. Enfríe en desecador y pese(E). Incinere a 500ºC por 3 horas. .una semana en refrigeración en ausencia de luz. agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar.

reportado por Kjeldahl en 1883. La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación. Indicador: disolver 0. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio. en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos. erlenmeyer de 250mL.1N. Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). etc. a partir del calentamiento. tubos de destilación Kjeldahl. Ácido salicílico para nitrógeno total. REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado. Agregue 0. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos. Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica. sulfato de cobre pentahidratado 2. Este método. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. destilador Kjeldahl. Cosa que no es cierto para ningún alimento. NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl.05g de rojo de metilo y 0.5g de ácido salicílico. sales de amonio. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total. ácido sulfúrico 0. hidróxido de sodio 32%. PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro. microbureta.5g de muestra.41% y selenio 1. Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con . nitratos. Transfiérala al tubo Kjeldahl.El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9.54%. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación. Aminas. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold. ácido bórico 4%.05% . pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”.

por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1. Agregue a la solución. Titule con ácido sulfúrico 0. . agua hasta complementar 5mL (en la escala). esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL).1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio.4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde.sumo cuidado. Presione el botón de destilación y destile a 35mL. Anote el gasto (restándole el del blanco). El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda. Antes de comenzar este paso. Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0.1N hasta cambio de color (rojizo). asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico). CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N. Alcalinice la solución con NaOH al 32%.

Aunque existan estas limitaciones. Utilice rojo de metilo como indicador. cebada. determinada por la recuperación del N total. Par carnes. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. centeno. semillas de algodón.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0. antiespumante. Lave el tapón y cuello del matraz. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . REACTIVOS: CaCl2 al 25%.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. Agregue el mismo volumen de HCl 0. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando. Calcule el porcentaje de N.7% para el caso de productos lácteos. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl. linaza. destilador Kjeldahl.1N.1g de ureasa utilizada en solución. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0. Para mezclas de cereales: maíz. huevos. soya y subproductos.1N por cada 0. verduras y subproductos. Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra. arroz. frutas. fríjoles. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. Adicione 2g de MgO. En el caso de pastos y forrajes. Para leche y derivados. trigo. Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0. 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0. y no podrían aplicarse a mezclas. se asume un contenido de N del 16% y 15. sino aquellos para los cuales se determinaron. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora.

El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios . La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición.84). ácido nítrico concentrado (peso específico 1. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos.7168 5. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual. como se dijo antes.7167 FACTOR 2. Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua. % de N 46. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN.2007 19. Agua. 0.20 aprox.2185 7. que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal. 0.2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible.08 aprox.06 aprox.1625 13.13 aprox. Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro. La determinación de cenizas por el método de Weenden. Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada.1438 3. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento. 0.42). por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones. PRINCIPIO. .15 aprox. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1.6459 33.0004 4. NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. Comprobar el contenido en metales de los ácidos. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro.3272 21. 0. En este caso nos referimos a los macroelementos.

especialmente en el tejido óseo. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4. solución 0.15N de KMnO 4.05 o 0. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos. indicador de rojo de metilo al 0.APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido. Par el análisis de calcio.84). Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos.2%. solución de NH 4 en agua (1: 1). ácido nítrico concentrado (peso específico 1. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal. Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial. hierro y aluminio. además de que juega un papel importante en las demás células. es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica.42). Para la determinación de calcio en un alimento. es obligado su análisis en el laboratorio. NOTA.5% en etanol. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza. PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL. así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. solución de HCl en agua (1: 3). Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA . manganeso. Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos.

Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3. enfriar. Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4.Pesar con exactitud aproximadamente 2. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación). 1mL de KMnO4 0.0). calentar a ebullición.05N equivale a un mg de calcio. añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado. hace parte de un gran número de compuestos diversos. Dejar reposar durante la noche. aforar con agua. DETERMINACIÓN. pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50). Diluir aproximadamente a 150mL. El fósforo presente en organismos vegetales y animales. Si el indicador vira al anaranjado o amarillo. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2. 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. . se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos. en parte como fosfato inorgánico puro. Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado.5 – 3. DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. NOTA. transferir a un matraz volumétrico de 100mL. Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio. añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. homogenizar.6 indicado por un calor café naranja.

cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico. la anterior se considera como solución madre. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios. Preparar este reactivo fresco cada día. Esta solución es la de trabajo. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz. PRINCIPIO. Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. Almacenar.131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua. NaOH 0. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color.APLICACIÓN. Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL. Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1.84) a un litro.3N para neutralizar la solución. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1). Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0.53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise. pesar 0.286g de fosfato monopotásico. disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL). Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL. Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. . Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC. espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm . Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente. ácido clorhídrico 3N y 6N. DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL. Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0.

1. El color es estable durante varias horas . 3. 40. Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL. Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0. 2. Estas soluciones contienen 0. 20. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. 80 y 100µg PO4 por 50 mL. ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL. 60. continuar como las instrucciones.00815 x (a – b) W xV NOTA 1.

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