ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla. osea que no se elimina totalmente el agua. frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad.05 % 95 3..% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). ¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%. embudo para recolección de muestras. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. . 2. antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos. heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1.

DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. sin embargo. si es necesario prolongue el tiempo de desecación. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. etc. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla. . evaporación incompleta del agua. sino que es inversa al contenido de materia seca. Homogenice. La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas. 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. rápido y el más usado en los laboratorios. constituye un elemento de trascendencia económica. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. adherencia de gotas de agua. es mucho más confiable que la anterior. destilación de otros componentes. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión. VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm.PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas.

especial para sustancias con bajo contenido de agua. Seque en estufa durante tres horas a 110ºC. En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo.. campana para desecación. PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire).Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas. enfría en desecador y pese. carbonos. Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. haga este proceso con replica para verificar sus resultados. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar. etc. 1980). Para muestras con menos del 15 % de humedad. . tres horas es suficiente. cajas de petri. Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior. además de que aceleran el proceso.) que hacen parte de la fracción en cuestión. NaCl. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. como lo son Método de Karl Fischer. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella. CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 .% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa. Conductividad eléctrica especial para granos. las temperaturas inadecuadas(bajas). Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. generalmente conllevan a que se formen carbonatos.

enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. cuando se trata de productos con bajo contenido. cloroformo. dan mayor confiabilidad a los resultados.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. de petróleo o hexano. Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos. coloque un gramo de muestra sólida. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. papel filtro o dedales de celulosa.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras. benceno.. si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico. enfriado y tarado. EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. generalmente éter. se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo.Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. REACTIVOS: éter etílico. este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. etc. la ceniza pura. los cuales no son el objetivo de este documento. campana de desecación. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas. granallas de zinc. Esto es debido a que los solventes utilizados. crisoles de vidrio y porcelana. . Si observa puntos negros. como carbohidratos. levaduras. el crisol se enfría en desecador y se pesa. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. estufa con graduación de temperatura. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes.

demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura.PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. NOTAS: 1. ácido láctico. asegúrese de que el balón este limpio y seco. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción. . 2. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) . entórchelo para que la muestra quede en el fondo. extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan. urea. luego hidrolizar y extraer. 1980). Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. 4. Una vez transcurrido el tiempo necesario. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. recupere el solvente. 3. 5. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. si ese es el caso. Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. Coloque la muestra en la unidad de extracción. glucolípidos. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. Acople el balón al equipo extractor. enfríe y pese. Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado.

Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN).25%. enfríelo en un desecador y péselo (peso A). proceso que se detallará más adelante. etanol. B. acetona. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas. esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. grasa y ceniza. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo). proteína. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. lana de vidrio. EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. planchas de calefacción. lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. sino el residuo de una operación matemática. PROCEDIMIENTO A. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) .. El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes. etc. en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento.2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). estufa. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1. vasos Berzelius o erlenmeyers. si hay formación de espuma. mufla. idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. desecador. Hidrólisis ácida: pese 0. El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%. crisoles filtrantes (Gooch). Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores. aparato de reflujo. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1. Además de que el ELN no es producto de un proceso. acumulando los errores de las demás determinaciones..25%. acetona y etanol. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta. Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más. La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este. bomba de vacío. hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%). almidones. Sin embargo. Acople el digestor. azúcares. antiespumante (alcohol octílico). Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos.25%.DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. El ELN se determina por diferencia. es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa. insufle aire o adicione antiespumante. requiere procedimientos difíciles. Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. adicione 5 gotas de antiespumante. este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia.

se solubiliza el contenido de la célula y la pectina. DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos.) son adecuado. Al hervir la muestra con detergente neutro.) o California (Nalge Co.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% . Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A. De disponibilidad incompleta.05 g 95 2. y C. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1. El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0. dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa. Descuente también la humedad del material que este analizando 3. así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1. hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. Muy disponibles B. tanto directa como indirectamente.2 00. 4. Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp. Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original.

hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC . Este procedimiento se detalla a continuación. las que por incineración da el valor de celulosa.Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. FDN = celulosa. FC.

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6. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. enfríelo en un desecador y péselo.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa.9 – 7.81g de borato de sodio decahidratado. Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina. acetona. vasos Berzelius o erlenmeyers. 4. enfríe en desecador y pese (B). hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal. Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente.61g de EDTA disódico. 0. Lave luego dos veces con acetona. y repita el lavado varias veces. crisoles filtrantes (Gooch). 0. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter).56g de fosfato disódico. Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. 18. REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6.5g de sulfito de sodio.9 – 7.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm).1: 30g de Lauril sulfato sódico. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. antiespumante (alcohol octílico).1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones. se prepara una solución caliente de 20% de KOH. PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. lana de vidrio.5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. aparato de reflujo.) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN). verifique pH.5g de sulfito sódico. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico. En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales. 5% de Na3PO4 y 0. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos.1 Pese aproximadamente 0. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. . proteínas. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A). Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. pues tiende a erosionar el vidrio. etc. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979.9 – 7. estufa. glúcidos solubles. desecador.

B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición. haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol. Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso.0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro). estufa. A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado. aparato de reflujo. antiespumante (alcohol octílico). se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. la que debe descontarse al final del análisis. crisoles filtrantes (Gooch). La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío. Acetona. lana de vidrio. por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa.% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 . DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular.% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos. los resultados darían un contenido alto de paredes celulares. vasos Berzelius o erlenmeyers. esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra. REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . obstruyendo el filtro. . El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. ayuda a reducir el tiempo de filtración. Dentro del porcentaje pared celular. sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. desecador. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA. Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar.

enfríe en desecador y pese (B).0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1. Es más.% FDA NOTA. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida. y repita el lavado varias veces. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Oxidación por ácido acético permanganato de potasio. . Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. aunque de alguna manera constituye un carbohidratos. Conserve el residuo para la determinación de Lignina. Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber. Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo. Lave luego dos veces con acetona. Oxidación por cloruro de sodio. en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0).% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN .

Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado.0075g de nitrato de plata. 0. La solución B disolviendo 0. 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer).466 g de nitrato férrico. Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. bandeja de vidrio. varilla de vidrio. no se determina con este método. Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. no moje la fibra. La solución A con 0. desecador. Filtre la solución sin lavar con agua. Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. Una variación que se introduce en estos casos. Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora. 70mL de etanol al 95%. El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado). Enfríe en desecador y pese(C). es la de usar el permanganato . Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. crisoles filtrantes (Gooch).25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. horno desecador. Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. 1. Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco. los que se diluyen en 5mL de agua. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. estufa.

Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Medir el H2SO4. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. Asbesto. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente.45mL de H2SO4. El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina. en estos casos los resultados dan valores bajos. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. y con agitación suave.para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. aforar con agua destilada. 3. Solución ácido detergente.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente.04g / 1L). Si el volumen es demasiado grande. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Este método por lo tanto. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. a) H2SO4 1N valorado (49. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. REACTIVOS: Acetona R. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato. La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. Colocar el matraz dentro del lavadero. El menisco debe estar a 0. lleno de agua antes de adicionar el ácido. es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto.5mL de agua.A. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente. En consecuencia. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio). adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. tomar 5mL y adicionarle 4. Ácido sulfúrico al 72% peso.5cm de la marca de calibración a 20ºC. Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes.5 mL y adicionarle 2. Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. lignina. molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. Determinar la normalidad del ácido por titulación. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. por espacio de 3 horas. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. .

si esto no es posible. Incinerar los crisoles en mufla a 500 .550ºC / 3 horas.. Dejando el agitador dentro. Lavar y quitar el agitador. Mantener los crisoles a 20 . La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. enfriar a 100ºC y pesar. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. La pesada deberá hacerse en caliente.23ºC. enfríe en desecador y pese (D).PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. tres veces es suficiente. Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. Secar los crisoles a 100ºC y pesar. Sin embargo. agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%. el factor cutina es resistente a la degradación microbiana. Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes. Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. . La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión. Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido.

15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L).A. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por . a) H2SO4 1N valorado (49. Medir el H2SO4. n-Hexano R.0g de acetato de potasio y mézclese la solución. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. Para preparar 1 litro de solución.5mL de agua. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen.04g / 1L).5cm de la marca de calibración a 20ºC. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. Colocar el matraz dentro del lavadero.0g 1g 6L 60g 4. Manténgase la solución protegida de la luz solar directa. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. Ácido sulfúrico al 72% peso. El menisco debe estar a 0. Solución amortiguadora de lignina. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. Solución ácido detergente. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros.A Permanganato de potasio saturado. Determinar la normalidad del ácido por titulación. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar.8L 1. aforar con agua destilada. lleno de agua antes de adicionar el ácido.REACTIVOS: Acetona R.2L Solución de permanganato combinada. y con agitación suave.5 mL y adicionarle 2. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5. Asbesto. disuelva 6. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. Si el volumen es demasiado grande. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse.45mL de H2SO4. tomar 5mL y adicionarle 4. Antes de ser usado.

Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente.8L de agua destilada y 15.6L 900mL 4. mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice. Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%. Calcular la cutina como pérdida después de incinerar. (Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original). Enfríe en desecador y pese(E).5L Alcohol etílico de 80% v/v. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos.una semana en refrigeración en ausencia de luz. Para preparar 18L mezcle 2. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%. Incinere a 500ºC por 3 horas.2L de alcohol etílico de 95%. por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina. CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar. Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado. Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos. . en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. Lave con acetona y filtre. agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese.

1N. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio. destilador Kjeldahl.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. ácido bórico 4%. nitratos. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con . NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado. Agregue 0. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro.5g de muestra. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl. Ácido salicílico para nitrógeno total. PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0.5g de ácido salicílico. etc. Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico. La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación. sales de amonio. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96. microbureta. Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). tubos de destilación Kjeldahl. sulfato de cobre pentahidratado 2. a partir del calentamiento. hidróxido de sodio 32%. REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9. Este método. en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación.05% . Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold. Indicador: disolver 0.05g de rojo de metilo y 0. ácido sulfúrico 0.El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína.54%. pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. Aminas. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos.41% y selenio 1. Cosa que no es cierto para ningún alimento. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total. reportado por Kjeldahl en 1883. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. Transfiérala al tubo Kjeldahl. erlenmeyer de 250mL. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”.

Titule con ácido sulfúrico 0. Agregue a la solución. V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0. agua hasta complementar 5mL (en la escala). asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico). Anote el gasto (restándole el del blanco).sumo cuidado.1N hasta cambio de color (rojizo). Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda. Alcalinice la solución con NaOH al 32%. Presione el botón de destilación y destile a 35mL. CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N. .4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde.1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio. por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1. esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL). Antes de comenzar este paso.

Adicione 2g de MgO. cebada. Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra. verduras y subproductos. Aunque existan estas limitaciones. Para mezclas de cereales: maíz. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando. arroz. sino aquellos para los cuales se determinaron.1g de ureasa utilizada en solución. frutas. Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos. determinada por la recuperación del N total. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0. destilador Kjeldahl. Utilice rojo de metilo como indicador. centeno.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora. antiespumante. soya y subproductos. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea. Calcule el porcentaje de N.1N por cada 0. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así.1N. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. Lave el tapón y cuello del matraz. huevos. linaza. trigo. En el caso de pastos y forrajes. y no podrían aplicarse a mezclas. fríjoles.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento. se asume un contenido de N del 16% y 15. semillas de algodón. Agregue el mismo volumen de HCl 0. Par carnes. REACTIVOS: CaCl2 al 25%.7% para el caso de productos lácteos. Para leche y derivados.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0.

13 aprox. Comprobar el contenido en metales de los ácidos.2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible.2185 7.42).2007 19. que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento. Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada.84). Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua. utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad.06 aprox.1438 3. PRINCIPIO.20 aprox.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. % de N 46.1625 13. 0. Agua. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos. En este caso nos referimos a los macroelementos.15 aprox. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. 0. 0. 0. como se dijo antes.7167 FACTOR 2. El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios .08 aprox. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual.6459 33.3272 21. . Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro.0004 4. La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición.7168 5. La determinación de cenizas por el método de Weenden. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN. por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones. ácido nítrico concentrado (peso específico 1.

2%. además de que juega un papel importante en las demás células.APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico.5% en etanol. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL. así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. indicador de rojo de metilo al 0. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica. Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos.15N de KMnO 4.05 o 0. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4. manganeso. Para la determinación de calcio en un alimento. es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos. solución 0. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal. especialmente en el tejido óseo. solución de HCl en agua (1: 3). Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza.84). Par el análisis de calcio. Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos. DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. NOTA. Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida. Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial. hierro y aluminio.42). es obligado su análisis en el laboratorio. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA . solución de NH 4 en agua (1: 1).

añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado. DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. . Dejar reposar durante la noche. pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica. enfriar. 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). Diluir aproximadamente a 150mL. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar.5 – 3. Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. calentar a ebullición. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación).05N equivale a un mg de calcio. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio.Pesar con exactitud aproximadamente 2. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. hace parte de un gran número de compuestos diversos. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. 1mL de KMnO4 0.6 indicado por un calor café naranja. La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos. El fósforo presente en organismos vegetales y animales. Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3. aforar con agua. añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2. Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4. Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado.0). asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50). homogenizar. NOTA. en parte como fosfato inorgánico puro. transferir a un matraz volumétrico de 100mL. DETERMINACIÓN. Si el indicador vira al anaranjado o amarillo.

3N para neutralizar la solución. Esta solución es la de trabajo. Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0. Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir. Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1. Almacenar. Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm . NaOH 0. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. . la anterior se considera como solución madre. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura. cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0. Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz.53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise. pesar 0. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios. PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca.286g de fosfato monopotásico. EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL. añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar. Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar. Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color.131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua. Preparar este reactivo fresco cada día. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1). ácido clorhídrico 3N y 6N. PRINCIPIO.84) a un litro.APLICACIÓN. disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL).

40. ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces. 80 y 100µg PO4 por 50 mL. 2. 3. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y. El color es estable durante varias horas . Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0. Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL. Estas soluciones contienen 0. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco.00815 x (a – b) W xV NOTA 1. continuar como las instrucciones.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. 20. 60. 1. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0.

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