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Analisis Proximal

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ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

05 % 95 3. frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. .. heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%.% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21. embudo para recolección de muestras. 2.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos. osea que no se elimina totalmente el agua. ¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5. antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material. Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1.

VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm. sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. evaporación incompleta del agua. destilación de otros componentes. rápido y el más usado en los laboratorios. adherencia de gotas de agua. etc. constituye un elemento de trascendencia económica. si es necesario prolongue el tiempo de desecación. Homogenice. 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. sino que es inversa al contenido de materia seca. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión.PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas. Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. es mucho más confiable que la anterior. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla. . sin embargo. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos.

NaCl. PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. además de que aceleran el proceso.. En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo. enfría en desecador y pese. Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores.Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. especial para sustancias con bajo contenido de agua. haga este proceso con replica para verificar sus resultados. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella.% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia. campana para desecación.) que hacen parte de la fracción en cuestión. Conductividad eléctrica especial para granos. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa. CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 . sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas. como lo son Método de Karl Fischer. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. Seque en estufa durante tres horas a 110ºC. 1980). permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. etc. las temperaturas inadecuadas(bajas). Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar. generalmente conllevan a que se formen carbonatos. cajas de petri. carbonos. SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). Para muestras con menos del 15 % de humedad. Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior. . tres horas es suficiente.

campana de desecación. los cuales no son el objetivo de este documento. EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. benceno. enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. REACTIVOS: éter etílico. granallas de zinc. enfriado y tarado. Si observa puntos negros.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. . Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico. el crisol se enfría en desecador y se pesa. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. la ceniza pura. Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. crisoles de vidrio y porcelana. etc. dan mayor confiabilidad a los resultados.. si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. coloque un gramo de muestra sólida. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras.Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. papel filtro o dedales de celulosa. PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo. cuando se trata de productos con bajo contenido. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. estufa con graduación de temperatura. Esto es debido a que los solventes utilizados. levaduras. cloroformo. como carbohidratos. generalmente éter. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes. de petróleo o hexano.

conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) . Acople el balón al equipo extractor. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. recupere el solvente. 3. Coloque la muestra en la unidad de extracción. Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado. Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. 5. y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción. 4. luego hidrolizar y extraer. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. enfríe y pese. entórchelo para que la muestra quede en el fondo. Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. Una vez transcurrido el tiempo necesario. si ese es el caso. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura. asegúrese de que el balón este limpio y seco. ácido láctico. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. 1980). extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. NOTAS: 1. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa.PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan. . urea. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. 2. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. glucolípidos. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas.

. Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores.25%. estufa. Sin embargo. Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN). azúcares. aparato de reflujo. idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. vasos Berzelius o erlenmeyers. lana de vidrio. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1. bomba de vacío. almidones. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%. mufla. Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos. Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más.DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. Además de que el ELN no es producto de un proceso. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia. si hay formación de espuma.25%. Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. sino el residuo de una operación matemática. es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa. B. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas. antiespumante (alcohol octílico). Acople el digestor.2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). proteína. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) . Hidrólisis ácida: pese 0.25%. acumulando los errores de las demás determinaciones. requiere procedimientos difíciles. en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento. grasa y ceniza. La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este. El ELN se determina por diferencia. planchas de calefacción.. esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. acetona y etanol. adicione 5 gotas de antiespumante. etanol. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo). hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%). enfríelo en un desecador y péselo (peso A). El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. desecador. El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes. proceso que se detallará más adelante. crisoles filtrantes (Gooch). EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1. acetona. lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. PROCEDIMIENTO A. permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta. insufle aire o adicione antiespumante. etc.

dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos. Descuente también la humedad del material que este analizando 3. Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A.) son adecuado. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1.2 00. se solubiliza el contenido de la célula y la pectina. tanto directa como indirectamente. y C. Muy disponibles B. 4. Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. Al hervir la muestra con detergente neutro. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% . así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0. Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp.05 g 95 2. hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). De disponibilidad incompleta.) o California (Nalge Co.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración. Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original. DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito.

las que por incineración da el valor de celulosa. Este procedimiento se detalla a continuación. FDN = celulosa. FC.Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC .

.

vasos Berzelius o erlenmeyers.81g de borato de sodio decahidratado.) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN). glúcidos solubles. antiespumante (alcohol octílico). Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. 6. 18. proteínas.9 – 7. 5% de Na3PO4 y 0. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro. hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal. 4. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979. .5g de sulfito de sodio. enfríelo en un desecador y péselo.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm). estufa. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente. etc. 0. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico.61g de EDTA disódico. acetona. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas.9 – 7. pues tiende a erosionar el vidrio. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. aparato de reflujo. crisoles filtrantes (Gooch). Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. desecador.1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones. REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6. y repita el lavado varias veces. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter). PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. Lave luego dos veces con acetona.5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. enfríe en desecador y pese (B).5g de sulfito sódico.1: 30g de Lauril sulfato sódico.9 – 7. verifique pH. 0.1 Pese aproximadamente 0. En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. se prepara una solución caliente de 20% de KOH. lana de vidrio.56g de fosfato disódico. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A). El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6.

Acetona. obstruyendo el filtro. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra. aparato de reflujo. A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado. Dentro del porcentaje pared celular. El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. ayuda a reducir el tiempo de filtración. vasos Berzelius o erlenmeyers. DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular. . haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol. los resultados darían un contenido alto de paredes celulares.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . antiespumante (alcohol octílico). REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1. sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición.% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA. La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío.% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 . crisoles filtrantes (Gooch).0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro). Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar. la que debe descontarse al final del análisis. se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso. por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa. estufa. desecador. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. lana de vidrio.

% FDA NOTA. Es más.% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN . su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos. Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra. Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0). aunque de alguna manera constituye un carbohidratos. Oxidación por ácido acético permanganato de potasio. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Lave luego dos veces con acetona.0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina. Oxidación por cloruro de sodio.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber. Conserve el residuo para la determinación de Lignina. y repita el lavado varias veces. Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida. que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes. . enfríe en desecador y pese (B). Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación. Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos.

Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. los que se diluyen en 5mL de agua. Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. bandeja de vidrio. Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer). Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. 1. La solución A con 0. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado). Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. no moje la fibra. 0. horno desecador. La solución B disolviendo 0.25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado.466 g de nitrato férrico. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. crisoles filtrantes (Gooch). desecador.0075g de nitrato de plata. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría. Filtre la solución sin lavar con agua. Enfríe en desecador y pese(C). estufa. Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos. 70mL de etanol al 95%. La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas. Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora. Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. varilla de vidrio. Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. Una variación que se introduce en estos casos. Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1. es la de usar el permanganato . no se determina con este método.

los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato.para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio). molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes. . 3. En consecuencia. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. en estos casos los resultados dan valores bajos.5 mL y adicionarle 2. El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. Determinar la normalidad del ácido por titulación. Solución ácido detergente.5cm de la marca de calibración a 20ºC. Ácido sulfúrico al 72% peso. REACTIVOS: Acetona R. Medir el H2SO4. por espacio de 3 horas. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. y con agitación suave. La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. lignina.04g / 1L). El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. Colocar el matraz dentro del lavadero. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente. Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina. tomar 5mL y adicionarle 4. Si el volumen es demasiado grande. a) H2SO4 1N valorado (49. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado.5mL de agua. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto. Este método por lo tanto. El menisco debe estar a 0. lleno de agua antes de adicionar el ácido. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. Asbesto.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina.A. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. aforar con agua destilada.45mL de H2SO4. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar.

La pesada deberá hacerse en caliente. Sin embargo.. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%. Lavar y quitar el agitador.550ºC / 3 horas. La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra. LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. Secar los crisoles a 100ºC y pesar. Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes.23ºC. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas. si esto no es posible. el factor cutina es resistente a la degradación microbiana. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido. agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. tres veces es suficiente. enfríe en desecador y pese (D). Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. Mantener los crisoles a 20 . Dejando el agitador dentro. Incinerar los crisoles en mufla a 500 . CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. enfriar a 100ºC y pesar.PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. .

enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. El menisco debe estar a 0. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Colocar el matraz dentro del lavadero. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas.5mL de agua.5 mL y adicionarle 2. disuelva 6. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas.45mL de H2SO4. Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada. Medir el H2SO4. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. Si el volumen es muy pequeño sacar 1.8L 1. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar.5cm de la marca de calibración a 20ºC. Antes de ser usado. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua.2L Solución de permanganato combinada.04g / 1L).REACTIVOS: Acetona R. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). Determinar la normalidad del ácido por titulación.0g de acetato de potasio y mézclese la solución. a) H2SO4 1N valorado (49. Solución amortiguadora de lignina. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. Si el volumen es demasiado grande. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. n-Hexano R. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0. Solución ácido detergente. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen. Manténgase la solución protegida de la luz solar directa. aforar con agua destilada.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Ácido sulfúrico al 72% peso. lleno de agua antes de adicionar el ácido.15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada. Asbesto. tomar 5mL y adicionarle 4.A.A Permanganato de potasio saturado.0g 1g 6L 60g 4. y con agitación suave. Para preparar 1 litro de solución. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por .

mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%.6L 900mL 4. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos. Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos. por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%. Lave con acetona y filtre. Calcular la cutina como pérdida después de incinerar. Para preparar 18L mezcle 2. (Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original). DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice.2L de alcohol etílico de 95%.5L Alcohol etílico de 80% v/v. . CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica. Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente. Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar. agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%. en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina. Enfríe en desecador y pese(E).una semana en refrigeración en ausencia de luz.8L de agua destilada y 15. Incinere a 500ºC por 3 horas.

El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína. NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl.41% y selenio 1. Aminas. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio.5g de muestra. microbureta. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total. ácido bórico 4%.1N. erlenmeyer de 250mL. Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. Este método. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”. Cosa que no es cierto para ningún alimento. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con .5g de ácido salicílico. reportado por Kjeldahl en 1883. etc. Agregue 0. nitratos. tubos de destilación Kjeldahl. ácido sulfúrico 0. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación. Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica. Ácido salicílico para nitrógeno total. a partir del calentamiento. sales de amonio. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos. REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado.05% . Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). Indicador: disolver 0. destilador Kjeldahl. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9. hidróxido de sodio 32%. PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0.54%. Transfiérala al tubo Kjeldahl. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos. sulfato de cobre pentahidratado 2. pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación.05g de rojo de metilo y 0.

Titule con ácido sulfúrico 0. Anote el gasto (restándole el del blanco). Alcalinice la solución con NaOH al 32%. Presione el botón de destilación y destile a 35mL.1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio. asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico). CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N. Agregue a la solución.4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde.1N hasta cambio de color (rojizo). Antes de comenzar este paso. esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL). Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0. agua hasta complementar 5mL (en la escala).sumo cuidado. El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda. . por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1.

Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa. soya y subproductos. En el caso de pastos y forrajes. y no podrían aplicarse a mezclas. Calcule el porcentaje de N. Para leche y derivados.1N por cada 0. Agregue el mismo volumen de HCl 0. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0. sino aquellos para los cuales se determinaron.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0. 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante. antiespumante. Utilice rojo de metilo como indicador. fríjoles. Par carnes. Adicione 2g de MgO. Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . centeno. REACTIVOS: CaCl2 al 25%.1N. frutas. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl. Aunque existan estas limitaciones. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento. verduras y subproductos.7% para el caso de productos lácteos. trigo. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando. Para mezclas de cereales: maíz. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así. arroz. semillas de algodón. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. Lave el tapón y cuello del matraz. linaza. se asume un contenido de N del 16% y 15. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0. destilador Kjeldahl. determinada por la recuperación del N total. huevos. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico.1g de ureasa utilizada en solución.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos. cebada.

PRINCIPIO. 0. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos.13 aprox. En este caso nos referimos a los macroelementos. utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad.7168 5.1438 3.1625 13.3272 21.2007 19.15 aprox.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. como se dijo antes.7167 FACTOR 2. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. 0. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual. % de N 46. Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada. La determinación de cenizas por el método de Weenden. por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones. que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal.2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible. Agua.0004 4.84).06 aprox. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición. 0.42).6459 33. 0.20 aprox. Comprobar el contenido en metales de los ácidos. El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios . Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro.08 aprox.2185 7. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento. .

NOTA. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal. es obligado su análisis en el laboratorio. así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4.05 o 0. Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza. hierro y aluminio. PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. solución 0. manganeso.5% en etanol. solución de NH 4 en agua (1: 1).2%. además de que juega un papel importante en las demás células. especialmente en el tejido óseo. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica.42). Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos.15N de KMnO 4. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial. DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. solución de HCl en agua (1: 3). REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico. Par el análisis de calcio. Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA . Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos.84). Para la determinación de calcio en un alimento.APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido. indicador de rojo de metilo al 0. Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos.

La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos.6 indicado por un calor café naranja. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2.5 – 3. . Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado. Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4. pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica. homogenizar. calentar a ebullición. Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50).0). Diluir aproximadamente a 150mL. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado. hace parte de un gran número de compuestos diversos. transferir a un matraz volumétrico de 100mL. Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). Dejar reposar durante la noche.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación). 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio. añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio. Si el indicador vira al anaranjado o amarillo. 1mL de KMnO4 0. El fósforo presente en organismos vegetales y animales.Pesar con exactitud aproximadamente 2. DETERMINACIÓN. se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. NOTA. enfriar. en parte como fosfato inorgánico puro.05N equivale a un mg de calcio. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. aforar con agua.

Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz. EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL.286g de fosfato monopotásico. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1. Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar.53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise. Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. pesar 0. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura. Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL. ácido clorhídrico 3N y 6N. DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL. la anterior se considera como solución madre.3N para neutralizar la solución. . disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL). espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm . PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico.84) a un litro. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. Almacenar. Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0. NaOH 0. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz. PRINCIPIO. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios.APLICACIÓN. añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir. Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC. Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. Preparar este reactivo fresco cada día. Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0. Esta solución es la de trabajo. Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1).131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua.

1. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL. 40. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y. Estas soluciones contienen 0. continuar como las instrucciones. 2. Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0. ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces. 20.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0.00815 x (a – b) W xV NOTA 1.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. El color es estable durante varias horas . Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL. 3. 80 y 100µg PO4 por 50 mL. 60.

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