ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5. frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos.05 % 95 3.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua. osea que no se elimina totalmente el agua. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%. . Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1. embudo para recolección de muestras. heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio.. 2.% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21. molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material.

VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm.PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas. evaporación incompleta del agua. DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión. . 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. sino que es inversa al contenido de materia seca. constituye un elemento de trascendencia económica. adherencia de gotas de agua. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. destilación de otros componentes. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla. es mucho más confiable que la anterior. etc. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas. si es necesario prolongue el tiempo de desecación. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. sin embargo. rápido y el más usado en los laboratorios. Homogenice.

tres horas es suficiente. Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior. etc. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar.% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia. SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). cajas de petri.Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella. las temperaturas inadecuadas(bajas). Seque en estufa durante tres horas a 110ºC. 1980). además de que aceleran el proceso. . carbonos.. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa. Para muestras con menos del 15 % de humedad. enfría en desecador y pese. campana para desecación. permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo. Conductividad eléctrica especial para granos. Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 . La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. NaCl. PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores. como lo son Método de Karl Fischer. especial para sustancias con bajo contenido de agua. haga este proceso con replica para verificar sus resultados. sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas.) que hacen parte de la fracción en cuestión. generalmente conllevan a que se formen carbonatos.

Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos.Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. REACTIVOS: éter etílico. levaduras. los cuales no son el objetivo de este documento. papel filtro o dedales de celulosa. Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. como carbohidratos. cloroformo. cuando se trata de productos con bajo contenido.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. la ceniza pura. . PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo. si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. coloque un gramo de muestra sólida.. Si observa puntos negros. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. campana de desecación. crisoles de vidrio y porcelana. etc. generalmente éter. benceno. EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. enfriado y tarado. Esto es debido a que los solventes utilizados. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas. el crisol se enfría en desecador y se pesa. de petróleo o hexano. estufa con graduación de temperatura. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. granallas de zinc. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras. dan mayor confiabilidad a los resultados.

PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. enfríe y pese. urea. demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa. 2. si ese es el caso. 3. entórchelo para que la muestra quede en el fondo. Una vez transcurrido el tiempo necesario. glucolípidos. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado. ácido láctico. . La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. recupere el solvente. asegúrese de que el balón este limpio y seco. 1980). y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción. Coloque la muestra en la unidad de extracción. Acople el balón al equipo extractor. Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) . 5. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. 4. Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. NOTAS: 1. Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas. luego hidrolizar y extraer. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan.

mufla. permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta. azúcares. etc. bomba de vacío. Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN). requiere procedimientos difíciles. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) . hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%). esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas.. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1. desecador. El ELN se determina por diferencia. acumulando los errores de las demás determinaciones. acetona y etanol. proceso que se detallará más adelante. La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este.25%. idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. estufa. Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo). El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes. Sin embargo. vasos Berzelius o erlenmeyers. en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento. EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. crisoles filtrantes (Gooch). etanol. enfríelo en un desecador y péselo (peso A). adicione 5 gotas de antiespumante.. Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos. lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. Además de que el ELN no es producto de un proceso. almidones. Acople el digestor. es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa. Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más. Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores.DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. antiespumante (alcohol octílico).2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). PROCEDIMIENTO A.25%. Hidrólisis ácida: pese 0. planchas de calefacción. aparato de reflujo. acetona. El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. insufle aire o adicione antiespumante. lana de vidrio. si hay formación de espuma. este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia. sino el residuo de una operación matemática. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. grasa y ceniza.25%. B. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1. proteína.

Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1. DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito. Descuente también la humedad del material que este analizando 3. 4. Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A.2 00.05 g 95 2. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. De disponibilidad incompleta. tanto directa como indirectamente.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración. Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original. hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). se solubiliza el contenido de la célula y la pectina. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1. y C. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos. Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa.) o California (Nalge Co.) son adecuado. Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. Al hervir la muestra con detergente neutro. así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. Muy disponibles B. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% . El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0.

las que por incineración da el valor de celulosa. Este procedimiento se detalla a continuación. hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC . FDN = celulosa.Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. FC.

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proteínas. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. enfríe en desecador y pese (B). REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza.9 – 7. Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina.61g de EDTA disódico. 5% de Na3PO4 y 0. desecador. y repita el lavado varias veces.1 Pese aproximadamente 0. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. 6. aparato de reflujo. 0. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso. Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso. Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro. glúcidos solubles.1: 30g de Lauril sulfato sódico. El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6.56g de fosfato disódico.9 – 7. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico.81g de borato de sodio decahidratado. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. vasos Berzelius o erlenmeyers. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter). En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales.5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa. lana de vidrio. . Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. 4. hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal. estufa. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A). Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente. antiespumante (alcohol octílico). pues tiende a erosionar el vidrio.5g de sulfito sódico.1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones.5g de sulfito de sodio. crisoles filtrantes (Gooch). etc. acetona. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. verifique pH. se prepara una solución caliente de 20% de KOH.9 – 7.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm). 18. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979. 0. Lave luego dos veces con acetona. enfríelo en un desecador y péselo. Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos.) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN).

antiespumante (alcohol octílico). la que debe descontarse al final del análisis.% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 . lana de vidrio. se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado. aparato de reflujo. ayuda a reducir el tiempo de filtración. obstruyendo el filtro. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA. sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. los resultados darían un contenido alto de paredes celulares. . haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol. Dentro del porcentaje pared celular. Acetona. El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos. La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío. vasos Berzelius o erlenmeyers. DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular. estufa. desecador.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra. Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar. B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición.% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa. crisoles filtrantes (Gooch). Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso.0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro).

2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos. . enfríe en desecador y pese (B).% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN . Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina. Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. aunque de alguna manera constituye un carbohidratos. Es más.% FDA NOTA. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación. Conserve el residuo para la determinación de Lignina. Oxidación por cloruro de sodio.0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes. que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo. Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular. Lave luego dos veces con acetona. y repita el lavado varias veces. Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0). Oxidación por ácido acético permanganato de potasio.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1.

Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer).466 g de nitrato férrico. Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. 0. 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. varilla de vidrio.25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado). para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. Filtre la solución sin lavar con agua. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado. no se determina con este método. Una variación que se introduce en estos casos. es la de usar el permanganato . La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas.0075g de nitrato de plata. 1. no moje la fibra. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones. La solución A con 0. crisoles filtrantes (Gooch). horno desecador. bandeja de vidrio. estufa. Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora. Enfríe en desecador y pese(C). Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. desecador. los que se diluyen en 5mL de agua. Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. 70mL de etanol al 95%. Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. La solución B disolviendo 0.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío.

5mL de agua. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio). es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto. Determinar la normalidad del ácido por titulación.A. a) H2SO4 1N valorado (49.45mL de H2SO4. Si el volumen es muy pequeño sacar 1.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. tomar 5mL y adicionarle 4.para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Si el volumen es demasiado grande. En consecuencia. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. Asbesto. Medir el H2SO4. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). 3. Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. lignina. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Colocar el matraz dentro del lavadero. La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. El menisco debe estar a 0. Ácido sulfúrico al 72% peso. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente. El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina.5 mL y adicionarle 2.5cm de la marca de calibración a 20ºC. El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente. REACTIVOS: Acetona R. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes.04g / 1L). Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. . en estos casos los resultados dan valores bajos. aforar con agua destilada. Este método por lo tanto. Solución ácido detergente. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. lleno de agua antes de adicionar el ácido. por espacio de 3 horas. molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. y con agitación suave.

La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. La pesada deberá hacerse en caliente.PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. Secar los crisoles a 100ºC y pesar. . Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas. Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. tres veces es suficiente. Dejando el agitador dentro.23ºC. el factor cutina es resistente a la degradación microbiana. enfriar a 100ºC y pesar. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido. Incinerar los crisoles en mufla a 500 . enfríe en desecador y pese (D). Lavar y quitar el agitador. agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. Sin embargo. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. Mantener los crisoles a 20 . LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa..550ºC / 3 horas. si esto no es posible. Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes.

Ácido sulfúrico al 72% peso. lleno de agua antes de adicionar el ácido. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas.2L Solución de permanganato combinada.04g / 1L).15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen. Manténgase la solución protegida de la luz solar directa. Solución ácido detergente.45mL de H2SO4. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). aforar con agua destilada.5 mL y adicionarle 2. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. Para preparar 1 litro de solución. Si el volumen es demasiado grande.0g 1g 6L 60g 4.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por . Solución amortiguadora de lignina.REACTIVOS: Acetona R. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado.A. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. Colocar el matraz dentro del lavadero.5mL de agua. Asbesto.5cm de la marca de calibración a 20ºC.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Medir el H2SO4.0g de acetato de potasio y mézclese la solución. tomar 5mL y adicionarle 4.A Permanganato de potasio saturado. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar.8L 1. Determinar la normalidad del ácido por titulación. a) H2SO4 1N valorado (49. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. El menisco debe estar a 0. n-Hexano R. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada. Antes de ser usado. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. y con agitación suave. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. disuelva 6.

por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%.una semana en refrigeración en ausencia de luz. Enfríe en desecador y pese(E). Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12. Para preparar 18L mezcle 2.5L Alcohol etílico de 80% v/v. mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. . Lave con acetona y filtre. agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese. Incinere a 500ºC por 3 horas. DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%.8L de agua destilada y 15. en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%. CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica. Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos.2L de alcohol etílico de 95%. (Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original). Calcular la cutina como pérdida después de incinerar.6L 900mL 4. Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar.

REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio. tubos de destilación Kjeldahl. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos. Transfiérala al tubo Kjeldahl. en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold. etc. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con . PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0. sales de amonio. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación. hidróxido de sodio 32%.54%. erlenmeyer de 250mL.5g de ácido salicílico. Aminas. Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico. ácido bórico 4%.El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína.41% y selenio 1. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”.1N.05% .05g de rojo de metilo y 0. a partir del calentamiento. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro. Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica. NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. Agregue 0. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total.5g de muestra. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. microbureta. reportado por Kjeldahl en 1883. Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). ácido sulfúrico 0. sulfato de cobre pentahidratado 2. Indicador: disolver 0. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9. destilador Kjeldahl. Este método. Cosa que no es cierto para ningún alimento. Ácido salicílico para nitrógeno total. pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. nitratos. La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación.

sumo cuidado. esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL). asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico). Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). Agregue a la solución. V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0. CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N. Anote el gasto (restándole el del blanco). agua hasta complementar 5mL (en la escala). Alcalinice la solución con NaOH al 32%. El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda.1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio.4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde. Presione el botón de destilación y destile a 35mL.1N hasta cambio de color (rojizo). Antes de comenzar este paso. . por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1. Titule con ácido sulfúrico 0.

linaza.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. Utilice rojo de metilo como indicador. sino aquellos para los cuales se determinaron. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. En el caso de pastos y forrajes.1N por cada 0. se asume un contenido de N del 16% y 15.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0.1N. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así. determinada por la recuperación del N total.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0. 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. Para leche y derivados. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . REACTIVOS: CaCl2 al 25%.1g de ureasa utilizada en solución. y no podrían aplicarse a mezclas. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl. destilador Kjeldahl. arroz.7% para el caso de productos lácteos. frutas. Aunque existan estas limitaciones. huevos. Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra. verduras y subproductos. soya y subproductos. cebada. semillas de algodón. trigo. Par carnes. Agregue el mismo volumen de HCl 0.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos. Adicione 2g de MgO. Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico. antiespumante. fríjoles. Calcule el porcentaje de N. Lave el tapón y cuello del matraz. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0. centeno. Para mezclas de cereales: maíz. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0.

Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada. NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. .84).1625 13. Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro.42).1438 3. PRINCIPIO. que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal. Comprobar el contenido en metales de los ácidos. 0. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. % de N 46. por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones.08 aprox.3272 21. La determinación de cenizas por el método de Weenden.0004 4. En este caso nos referimos a los macroelementos.20 aprox.6459 33. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos.13 aprox. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. Agua.2185 7. Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua.2007 19. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual. 0.2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN. La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición. como se dijo antes.7168 5.15 aprox. 0.7167 FACTOR 2. 0. El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios . utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad.06 aprox.

hierro y aluminio. Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos. Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA . es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico. NOTA. ácido nítrico concentrado (peso específico 1.15N de KMnO 4. solución de HCl en agua (1: 3). DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial. solución de NH 4 en agua (1: 1).5% en etanol. especialmente en el tejido óseo. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal.42). manganeso.2%. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4. solución 0.84). Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL. Par el análisis de calcio. es obligado su análisis en el laboratorio. además de que juega un papel importante en las demás células. Para la determinación de calcio en un alimento. Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza.APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico.05 o 0. indicador de rojo de metilo al 0. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica.

Dejar reposar durante la noche. 1mL de KMnO4 0. NOTA.Pesar con exactitud aproximadamente 2. homogenizar. en parte como fosfato inorgánico puro. El fósforo presente en organismos vegetales y animales. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación). Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4. asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50). se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. . DETERMINACIÓN. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio. calentar a ebullición. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio. 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. transferir a un matraz volumétrico de 100mL. añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado. Diluir aproximadamente a 150mL. aforar con agua. La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos. Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). Si el indicador vira al anaranjado o amarillo. enfriar.5 – 3. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro.05N equivale a un mg de calcio. hace parte de un gran número de compuestos diversos. pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica.6 indicado por un calor café naranja.0).

la anterior se considera como solución madre. Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC. disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL). Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente.APLICACIÓN.286g de fosfato monopotásico. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL. EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL. Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar. pesar 0.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. ácido clorhídrico 3N y 6N. Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm . Almacenar. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color. Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. NaOH 0. Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL. Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz. PRINCIPIO. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico. cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico. PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca. Esta solución es la de trabajo. Preparar este reactivo fresco cada día.84) a un litro. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios. .53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise.131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua. añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1). Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0.3N para neutralizar la solución.

2. 3. Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0. Estas soluciones contienen 0. 80 y 100µg PO4 por 50 mL.00815 x (a – b) W xV NOTA 1.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0. 1. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco. 40. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL. 60. El color es estable durante varias horas . ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL. 20. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y. continuar como las instrucciones.

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