ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos. osea que no se elimina totalmente el agua.05 % 95 3. Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1. 2.. embudo para recolección de muestras. frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material. Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). ¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5. . antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%.% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla.

. Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión. sino que es inversa al contenido de materia seca. constituye un elemento de trascendencia económica. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . rápido y el más usado en los laboratorios. sin embargo. es mucho más confiable que la anterior. Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas. 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla. Homogenice. adherencia de gotas de agua. que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. evaporación incompleta del agua. destilación de otros componentes.PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos. si es necesario prolongue el tiempo de desecación. etc.

Conductividad eléctrica especial para granos. especial para sustancias con bajo contenido de agua. además de que aceleran el proceso. haga este proceso con replica para verificar sus resultados. permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. Seque en estufa durante tres horas a 110ºC. Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. NaCl. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. como lo son Método de Karl Fischer. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella. cajas de petri. etc. Para muestras con menos del 15 % de humedad.) que hacen parte de la fracción en cuestión. Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores. sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas. tres horas es suficiente. . las temperaturas inadecuadas(bajas). En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo. enfría en desecador y pese.% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa. carbonos. CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 .. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar. 1980). generalmente conllevan a que se formen carbonatos. SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior.Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. campana para desecación.

coloque un gramo de muestra sólida. estufa con graduación de temperatura. el crisol se enfría en desecador y se pesa. campana de desecación. Si observa puntos negros. granallas de zinc.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . enfriado y tarado. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos. Esto es debido a que los solventes utilizados. cloroformo. papel filtro o dedales de celulosa. . Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. la ceniza pura. EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. etc. dan mayor confiabilidad a los resultados. de petróleo o hexano.Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. los cuales no son el objetivo de este documento. levaduras. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes. benceno. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico. crisoles de vidrio y porcelana. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. REACTIVOS: éter etílico. este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo. se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. generalmente éter. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras. como carbohidratos. si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. cuando se trata de productos con bajo contenido..

ácido láctico. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas.PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. 2. Coloque la muestra en la unidad de extracción. Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. urea. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. 5. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. 3. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. Acople el balón al equipo extractor. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. asegúrese de que el balón este limpio y seco. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan. enfríe y pese. luego hidrolizar y extraer. . 4. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura. 1980). Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa. Una vez transcurrido el tiempo necesario. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. glucolípidos. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado. si ese es el caso. recupere el solvente. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. entórchelo para que la muestra quede en el fondo. NOTAS: 1. conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) . y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción.

lana de vidrio. B. crisoles filtrantes (Gooch). Sin embargo. estufa. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este. bomba de vacío. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%. lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. enfríelo en un desecador y péselo (peso A).25%. PROCEDIMIENTO A. Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más. esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. proceso que se detallará más adelante. acumulando los errores de las demás determinaciones. antiespumante (alcohol octílico). proteína. si hay formación de espuma. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1.DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. Además de que el ELN no es producto de un proceso. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1. en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento. idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. grasa y ceniza. etc. desecador. Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN). Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos. almidones. adicione 5 gotas de antiespumante. Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores. es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa. mufla.25%. vasos Berzelius o erlenmeyers. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo).25%. este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia. acetona. Hidrólisis ácida: pese 0. aparato de reflujo..2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). acetona y etanol. El ELN se determina por diferencia. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) . hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%). permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta. azúcares. requiere procedimientos difíciles.. planchas de calefacción. El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas. EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. Acople el digestor. insufle aire o adicione antiespumante. etanol. sino el residuo de una operación matemática. El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes.

hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1. así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. tanto directa como indirectamente. DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito. y C. El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0. Muy disponibles B. Descuente también la humedad del material que este analizando 3. De disponibilidad incompleta. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos. se solubiliza el contenido de la célula y la pectina.05 g 95 2.) o California (Nalge Co. 4. Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% . Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original.2 00.) son adecuado. Al hervir la muestra con detergente neutro. Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1.

FC. Este procedimiento se detalla a continuación.Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC . las que por incineración da el valor de celulosa. FDN = celulosa.

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Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter). hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal. desecador. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente. Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso. glúcidos solubles. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979.9 – 7. 4. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A). En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales. 0. enfríelo en un desecador y péselo. . vasos Berzelius o erlenmeyers. proteínas.5g de sulfito de sodio. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza.1: 30g de Lauril sulfato sódico. crisoles filtrantes (Gooch). antiespumante (alcohol octílico).5g de sulfito sódico. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. 18. Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso.61g de EDTA disódico. Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina. etc. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. lana de vidrio. aparato de reflujo.1 Pese aproximadamente 0.5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. y repita el lavado varias veces. acetona.81g de borato de sodio decahidratado. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa. PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. 6. pues tiende a erosionar el vidrio.9 – 7. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. estufa. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico. El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6. se prepara una solución caliente de 20% de KOH. 5% de Na3PO4 y 0. 0.56g de fosfato disódico.1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones.) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN). REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. enfríe en desecador y pese (B).9 – 7. Lave luego dos veces con acetona. verifique pH.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm).

la que debe descontarse al final del análisis.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . antiespumante (alcohol octílico). Acetona. se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. .% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol. ayuda a reducir el tiempo de filtración. vasos Berzelius o erlenmeyers. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. estufa. Dentro del porcentaje pared celular. B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA. La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío. El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular. Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos. Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar. por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. obstruyendo el filtro. aparato de reflujo. esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra. desecador. REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1. crisoles filtrantes (Gooch).% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 .0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro). los resultados darían un contenido alto de paredes celulares. lana de vidrio. A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado.

Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos. en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes. Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Lave luego dos veces con acetona. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación.% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN . Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo.% FDA NOTA. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular.0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber. enfríe en desecador y pese (B). y repita el lavado varias veces. que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo. Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0). Oxidación por cloruro de sodio. Es más.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1. . Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida. Conserve el residuo para la determinación de Lignina. Oxidación por ácido acético permanganato de potasio. su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. aunque de alguna manera constituye un carbohidratos. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible.

25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. 0. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. no se determina con este método.466 g de nitrato férrico. Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría. 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. Una variación que se introduce en estos casos. para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. no moje la fibra. La solución A con 0. Enfríe en desecador y pese(C). 1. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado). Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. estufa. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones. Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. es la de usar el permanganato . El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas. Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. los que se diluyen en 5mL de agua.0075g de nitrato de plata. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. desecador. horno desecador. Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer). varilla de vidrio. Filtre la solución sin lavar con agua. 70mL de etanol al 95%. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco. bandeja de vidrio. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado. crisoles filtrantes (Gooch). La solución B disolviendo 0. Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora.

El menisco debe estar a 0. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. Asbesto.5cm de la marca de calibración a 20ºC. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. Medir el H2SO4.A. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua.5mL de agua. REACTIVOS: Acetona R. Si el volumen es demasiado grande. El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina.5 mL y adicionarle 2. Solución ácido detergente. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar.para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. 3. los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente. Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato. aforar con agua destilada. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. tomar 5mL y adicionarle 4. Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98.45mL de H2SO4. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio). Determinar la normalidad del ácido por titulación. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes. LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente. Ácido sulfúrico al 72% peso. en estos casos los resultados dan valores bajos.04g / 1L). La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. . es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto. a) H2SO4 1N valorado (49. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. por espacio de 3 horas. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina. lleno de agua antes de adicionar el ácido. lignina. y con agitación suave. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente. En consecuencia.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Este método por lo tanto. Colocar el matraz dentro del lavadero.

LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. si esto no es posible.. . tres veces es suficiente. Mantener los crisoles a 20 . Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes. agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. enfriar a 100ºC y pesar. Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido.550ºC / 3 horas. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%. Incinerar los crisoles en mufla a 500 . Secar los crisoles a 100ºC y pesar. Sin embargo. La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión.PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. el factor cutina es resistente a la degradación microbiana. La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra. Dejando el agitador dentro. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. Lavar y quitar el agitador. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas. enfríe en desecador y pese (D). La pesada deberá hacerse en caliente.23ºC.

El menisco debe estar a 0.REACTIVOS: Acetona R. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm).15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada.A. Si el volumen es demasiado grande. Colocar el matraz dentro del lavadero. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. aforar con agua destilada. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por . agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado.45mL de H2SO4. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. Determinar la normalidad del ácido por titulación. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar.0g 1g 6L 60g 4. Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72.0g de acetato de potasio y mézclese la solución. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. Antes de ser usado. disuelva 6.5mL de agua.5 mL y adicionarle 2.A Permanganato de potasio saturado.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. Para preparar 1 litro de solución. Ácido sulfúrico al 72% peso. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado.04g / 1L).5cm de la marca de calibración a 20ºC. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen. Solución amortiguadora de lignina. a) H2SO4 1N valorado (49.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Manténgase la solución protegida de la luz solar directa.8L 1. tomar 5mL y adicionarle 4. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. Medir el H2SO4. Solución ácido detergente.2L Solución de permanganato combinada. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. Asbesto. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. y con agitación suave. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5. n-Hexano R. lleno de agua antes de adicionar el ácido.

por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%. DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice. en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%. Lave con acetona y filtre. Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos. Calcular la cutina como pérdida después de incinerar. Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%. Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12. Incinere a 500ºC por 3 horas.5L Alcohol etílico de 80% v/v. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina. agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese. Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente. Para preparar 18L mezcle 2. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos.una semana en refrigeración en ausencia de luz. .8L de agua destilada y 15.6L 900mL 4. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado. Enfríe en desecador y pese(E). (Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original).2L de alcohol etílico de 95%. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar.

La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9. a partir del calentamiento. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total. tubos de destilación Kjeldahl.El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio. hidróxido de sodio 32%. Agregue 0. reportado por Kjeldahl en 1883.5g de ácido salicílico. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. nitratos. en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos.5g de muestra.54%. REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado.1N. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con . PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación.41% y selenio 1. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro. NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado. ácido sulfúrico 0. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica. pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. erlenmeyer de 250mL. Aminas. etc. sulfato de cobre pentahidratado 2. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96.05% . Indicador: disolver 0. Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl. sales de amonio.05g de rojo de metilo y 0. microbureta. Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). Este método. ácido bórico 4%. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos. Transfiérala al tubo Kjeldahl. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. destilador Kjeldahl. Cosa que no es cierto para ningún alimento. Ácido salicílico para nitrógeno total.

. Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). Alcalinice la solución con NaOH al 32%. Anote el gasto (restándole el del blanco). Presione el botón de destilación y destile a 35mL.4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde. asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico). CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N. El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda. Titule con ácido sulfúrico 0. V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0. Agregue a la solución.1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio. esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL). Antes de comenzar este paso. por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1.sumo cuidado. agua hasta complementar 5mL (en la escala).1N hasta cambio de color (rojizo).

se asume un contenido de N del 16% y 15. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico. Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra. Agregue el mismo volumen de HCl 0. Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa. Calcule el porcentaje de N. huevos. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así. linaza. Utilice rojo de metilo como indicador. Aunque existan estas limitaciones. verduras y subproductos. destilador Kjeldahl. antiespumante. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando. Lave el tapón y cuello del matraz. soya y subproductos. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento. cebada. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0. Adicione 2g de MgO. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos. Para leche y derivados.1N por cada 0. frutas. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0. fríjoles. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl. Para mezclas de cereales: maíz. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. Par carnes. y no podrían aplicarse a mezclas.1N. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . trigo.1g de ureasa utilizada en solución. arroz. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea. semillas de algodón.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl. sino aquellos para los cuales se determinaron. determinada por la recuperación del N total. En el caso de pastos y forrajes. REACTIVOS: CaCl2 al 25%. centeno.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante.7% para el caso de productos lácteos.

6459 33.13 aprox.08 aprox. . como se dijo antes.15 aprox.1625 13. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos. % de N 46.7167 FACTOR 2. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento. por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones.2185 7.2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible. Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro.3272 21.2007 19. Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada. 0.84). 0.42). El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN.0004 4. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual.7168 5. La determinación de cenizas por el método de Weenden. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios . NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. Comprobar el contenido en metales de los ácidos.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición. Agua. PRINCIPIO. 0.1438 3. que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal. 0. utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad. En este caso nos referimos a los macroelementos.20 aprox. Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua.06 aprox. ácido nítrico concentrado (peso específico 1.

solución de NH 4 en agua (1: 1). es obligado su análisis en el laboratorio. DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida.15N de KMnO 4. solución 0. es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico.APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido.84).05 o 0.5% en etanol. solución de HCl en agua (1: 3). Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos. Par el análisis de calcio. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4. NOTA. Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos. hierro y aluminio. PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL. manganeso. Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza. Para la determinación de calcio en un alimento. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal.2%. además de que juega un papel importante en las demás células. Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos. Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial.42). PREPARACIÓN DE LA MUESTRA . así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. especialmente en el tejido óseo. indicador de rojo de metilo al 0.

05N equivale a un mg de calcio. enfriar. añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado.0). se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. Si el indicador vira al anaranjado o amarillo. Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4. La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2. transferir a un matraz volumétrico de 100mL.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación). 1mL de KMnO4 0. Diluir aproximadamente a 150mL. Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio. Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica. calentar a ebullición. Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado. El fósforo presente en organismos vegetales y animales.6 indicado por un calor café naranja. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio. aforar con agua. en parte como fosfato inorgánico puro.Pesar con exactitud aproximadamente 2. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50). Dejar reposar durante la noche. . DETERMINACIÓN. añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. homogenizar. NOTA.5 – 3. hace parte de un gran número de compuestos diversos.

Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL. la anterior se considera como solución madre. Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico. Esta solución es la de trabajo.53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise. PRINCIPIO. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1). Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0. Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0. disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL). añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar.286g de fosfato monopotásico. Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. ácido clorhídrico 3N y 6N. Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios. pesar 0. . Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir. EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL.84) a un litro. DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL.3N para neutralizar la solución. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. Preparar este reactivo fresco cada día. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color. PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca.APLICACIÓN.131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura. NaOH 0. Almacenar. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm .

40.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco. El color es estable durante varias horas . 60. Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL. 80 y 100µg PO4 por 50 mL. ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces. Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0. 3.00815 x (a – b) W xV NOTA 1. 2.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y. 20. continuar como las instrucciones. Estas soluciones contienen 0. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL. 1.