ANALISIS PROXIMAL.

METODO DE WEENDE

Generalidades Podría definirse el análisis próximo como un “esquema de análisis químico mediante el cual se determina la composición de un alimento en términos de sus principales grupos de nutrientes ”. En otras palabras, evalúa la calidad de un alimento en función de grupos de compuestos con características físico-quimicas semejantes, pero con diferente valor nutritivo. Este método ideado hace mas de 100 años por HENNEBERG y STOHMANN en la estación de Weende – Alemania, con pequeñas modificaciones se sigue utilizando. Este método determina los siguientes componentes: a. b. c. d. e. Residuo seco (Materia Seca) Proteína bruta (Nitrógeno Total) Ceniza bruta Grasa bruta (Extracto Etéreo) Fibra bruta

Resultado de restar del total de la muestra los componentes descritos se obtiene el extracto libre de nitrógeno, que comprende fundamentalmente carbohidratos solubles. A pesar de las limitaciones que tiene el análisis proximal ha sido por mas de un siglo el punto de partida en la evaluación de un alimento y aunque los métodos de análisis hayan cambiado, el fundamento permanece intacto. El análisis proximal consta de las siguientes determinaciones: humedad, proteína cruda, materia mineral ó cenizas, grasa cruda o extracto etéreo y por diferencia a cien, extracto libre de nitrógeno . En la aplicación de los métodos para el análisis próximo debe tenerse cuidado en seguir el método lo más fielmente que se pueda a lo sugerido, ya que algunos de ellos, como la fibra cruda, son empíricos y en cualquier cambio en la concentración de los reactivos o en el tiempo de digestión va alterar los resultados. Un incremento en la temperatura de ignición de la muestra para la determinación de ceniza o material mineral (se sugiere 550 – 600 ºC) nos puede provocar volatilización de sale minerales y dar resultados erróneos. MATERIA SECA Este método sirve para determinar únicamente la cantidad de materia seca presente de una sustancia y no es una medida exacta del contenido de humedad puesto que en desecación ocurren una serie de reacciones químicas que ocasionan variaciones en esta determinación. La determinación exacta del contenido de agua es un problema para ciertos productos, que aún no han sido solucionados.

Para la interpretación clara de los resultados es necesario conocer la terminología empleada en su obtención, por ello se incluye en este manual lasa definiciones de ellas. BASE FRESCA (BF) = Resultados obtenidos de una muestra con su humedad original BASE PARCIALMENTE SECA (BPS) = Resultados obtenidos de una muestra, cuya humedad es menor al 15%, proceso más usual en el laboratorio. BASE SECA (BS) = Resultados obtenidos de une muestra cuya humedad es cero, proceso que se hace por métodos matemáticos

Cualquiera que sea el método empleado para presentar los resultados, está basado en un material que se llama MATERIA SECA, pero es necesario aclarar si este contiene o no agua, para lo cual se usa las siguientes denominaciones. MATERIA SECA PARCIAL (MSP) = Materia residual que contiene la muestra después de la desecación a menos de 75ºC hasta peso constante (± 48horas) . MATERIA SECA (MS) = Material residual que contiene la MSP después de desecarse a 110ºC por tres horas.

Por lo anterior para calcular la materia seca real (MSR) de una determinada sustancia es necesario proceder de la siguiente manera: 1. Determinar el porcentaje de materia seca parcial de la muestra fresca 2. Determinar el porcentaje de materia seca de la muestra seca parcialmente 3. calcular el porcentaje de materia seca real de la muestra fresca, con la siguiente fórmula % MATERIA SECA REAL (MSR) = % MSP x %MST 100 Hay que tener en cuenta que este procedimiento es necesario para expresar los resultados de las demás determinaciones (proteína, gras, fibra, etc.) en cualquier base que desee, con las siguiente fórmulas: 1. % en BS = % en BPS x 100 MS 2. % en BPS = % en BS x %MS 100 Ejemplo: El porcentaje de proteína del raigrás en base parcialmente seca es de 20%, el porcentaje de humedad de la muestra es de 5%. ¿Cuál es el porcentaje de proteína de dicha muestra en base seca? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 %

.05 % 95 3. Aquellas con un contenido de humedad inferior al 15%. molino de tejido vegetal con tamiz de 1mm de malla. Al primer caso pertenecen sustancias como pastos frescos. osea que no se elimina totalmente el agua. que permiten ser procesadas inmediatamente llegan la laboratorio. Estas consideraciones dan lugar a clasificar las muestras en dos tipos: 1. embudo para recolección de muestras. frasco de vidrio con tapa o bolsa plástica. % en BF = % en BSP x % en MSR % en MST % MS en BF = MSR Ejemplo: Si la proteína de la alfalfa verde en base parcialmente seca es del 22% y el contenido de materia seca en base fresca es del 25%. Las que necesitan secarse parcialmente por contener más de 15% de humedad. 2. heces y otros forrajes verdes que deben secarse parcialmente. antes de iniciar cualquier tipo de proceso en el laboratorio.79% 95% DETERMINACIÓN DE MATERIA SECA PARCIAL Este tipo de determinación solo es necesario realizarlo en aquellas muestras que tengan un contenido superior al 15% de agua.. Aquellas que contiene menos de esta cantidad pueden analizarse inmediatamente después de que lleguen al laboratorio previa molienda del material. Este proceso se conoce como MSP porque permite bajar la humedad a un contenido menor del 15%. OBTENCIÓN DE MSP EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). ¿Cuál es el porcentaje de proteína en base fresca si la materia seca en parcialmente seca es del 95%? %MS de la muestra parcialmente seca = 100 – 5 = 95 % % de proteína base fresca (BF) = 22% x 25 % = 5.% de proteína del raigrás en base seca = 20 x 100 = 21.

La gran variedad de métodos a seguir para determinar el contenido de agua en una sustancia se basan principalmente en tres factores: presión. constituye un elemento de trascendencia económica. aunque no es un procedimiento que permite la medida exacta de la humedad. Seque en la estufa a 60ºC (ver preparación de las muestras) hasta obtener un peso constante de ± 48 horas. DESTILACIÓN CON UN SOLVENTE (Xilol): las reacciones químicas que se producen con los procedimientos anteriores se reducen . CÁLCULOS % MSP = Peso de la muestra parcialmente seca x 100 Peso de la muestra fresca DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La medida de humedad es de gran importancia no solo para establecer su cantidad en una alimento. etc. evaporación incompleta del agua. no es el más aconsejable pues a esta temperatura pueden perderse otros componentes o presentarse reacciones que alteran su composición. Pese nuevamente y calcule el porcentaje de materia seca parcial. sin embargo. Homogenice. además de que influye en la calidad y estabilidad de ellos. sino que es inversa al contenido de materia seca. tiempo y temperatura y dependen de un tipo de alimento en cuestión. si es necesario prolongue el tiempo de desecación. Saque de la estufa y deje equilibrar la muestra con la humedad ambiente durante 24 horas.PROCEDIMIENTO Corte la muestra (si es necesario) en trozos pequeños y coloque en unos 300 gramos en bolsas de papel previamente pesadas. . que lo obtiene del promedio de las 3 submuestras. VACIO PARCIAL Y BAJA TEMPERATURA: (25mm. sin embargo tiene sus dificultades como: lectura en el menisco. es mucho más confiable que la anterior. 70 –90 ºC)constituye el método más preciso para la mayoría de alimentos. A continuación se describen brevemente algunos sistemas utilizados para este tipo de determinación: CALENTAMIENTO A 110ºC: es el método más simple. adherencia de gotas de agua. De la mezcla extraiga unos 100 gramos aproximadamente y consérvelos en un frasco de vidrio bien tapado o en bolsas plásticas para los demás análisis. destilación de otros componentes. rápido y el más usado en los laboratorios. Mezcle las submuestras y páselas por el molino con tamiz de 1mm de malla.

enfría en desecador y pese. 1980). PROCEDIMIENTO Peso de 2 a 5 gramos de muestra. tres horas es suficiente.. como lo son Método de Karl Fischer. CÁLCULOS % MS = muestra seca x 100 muestra húmeda % HUMEDAD = 100 . cajas de petri. SECADO EN ESTUFA EQUIPO Y MATERIALES: estufa con graduación de temperatura (en lo posible con extractor de aire). especial para sustancias con bajo contenido de agua. carbonos. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. por lo que debe hacerse en forma cuidadosa.Además de los descritos existen métodos químicos muy rápidos y eficientes que se realizan en laboratorios especializados. Conductividad eléctrica especial para granos. NaCl. haga este proceso con replica para verificar sus resultados. Para muestras con menos del 15 % de humedad. mas no es un indicativo claro del valor o calidad mineral de ella. Seque en estufa durante tres horas a 110ºC.) que hacen parte de la fracción en cuestión. las temperaturas inadecuadas(bajas). etc. Este proceso encierra la posibilidad de un buen número de errores. sugiere que el contenido de agua de alimentos secos al aire se realice por secado por estufa a 103 ±1ºC durante 4 horas y que aquellas muestras ricas en azúcares o grasas deberán secarse al vació a 80 ± 2ºC durante 4 horas. . además de que aceleran el proceso. campana para desecación. carbono de los cuales no pertenece a la fracción inorgánica que se pretende determinar. permiten la volatilización de sales alcalinas (KCl. Repita el calentamiento y enfriamiento hasta obtener diferencia de pesos menor de 5mg en dos pesajes sucesivos. Esta determinación únicamente sirve para conocer en formar aproximada el contenido mineral. Las temperaturas altas ( 700ºC) si bien obvian el error anterior.% Materia Seca DETERMINACIÓN DE CENIZA La ceniza se considera como el producto inorgánico obtenido po la incineración de una sustancia. generalmente conllevan a que se formen carbonatos. En ambos casos podría ser necesario prolongar el tiempo de sedo por un rato más para asegurar que el secada fue completo.

Otro error puede deberse a la contaminación del alimento con elementos propios para animales. de petróleo o hexano. generalmente éter. Para la determinación de grasas en sustancias ricas en azúcar. Por esto el nombre generalizado de extracto etéreo. cloroformo. Si observa puntos negros. . si la muestra es líquida pese 25 gramos y evapore en baño de vapor hasta sequedad aparente. Para determinar en forma apropiada el contenido real de grada es necesario complementar este método con procesos específicos. EQUIPO Y MATERIALES: extractor Soxhlet o goldfish. enfríe y añada unas gotas de nitrato amónico. coloque un gramo de muestra sólida.E) Este proceso es válido en caso de sustancias relativamente ricas en gras. PROCEDIMIENTO En un crisol previamente calentado al rojo. granallas de zinc.% Ceniza (BS) DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA (E. en estos casos debe realizarse un proceso adicional para diferenciar de la cenizas bruta. estufa con graduación de temperatura. se evapora en estufa hasta desecación y se calienta de nuevo en estufa a 550ºC. enfriado y tarado. arrastran consigo en el proceso otras sustancias diferentes a las grasas.. etc. El proceso termina cuando obtiene peso constante (±3 horas) CÁLCULOS % Ceniza = Peso ceniza x 100 Peso muestra % de Materia Orgánica (BS) = 100 . los cuales no son el objetivo de este documento. campana de desecación. dan mayor confiabilidad a los resultados. cuando se trata de productos con bajo contenido. vitaminas o ciertos lípidos que carecen de valor práctico. levaduras. EQUIPO Y MATERIALES: horno de mufla con graduación de temperatura. el crisol se enfría en desecador y se pesa. este proceso puede dar resultados con amplia margen de error. REACTIVOS: éter etílico. crisoles de vidrio y porcelana. la ceniza pura. papel filtro o dedales de celulosa. como carbohidratos. Incinere en la mufla a temperatura de 550ºC para obtener ceniza blanca y en casos excepcionales de color gris claro. Esto es debido a que los solventes utilizados. leche o harina de huesos debe utilizarse procesos diferentes. benceno.

Pese con precisión alrededor de 2 gramos de muestra seca en un papel filtro previamente tarado. enfríe y pese.PROCEDIMIENTO Para esta determinación es indispensable utilizar una muestra libre de humedad ya que el agua disminuye la acción del solvente. Grandes cantidades de componentes solubles en agua como carbohidratos. en caso de muestras con mayor contenido de grasa prolongue el tiempo 24 horas. en tal caso es necesario hacer una hidrólisis ácida de la muestra antes de la extracción. . 4. glucolípidos. NOTAS: 1. 5. y lipoproteínas se podría hacer una primera extracción. CÁLCULOS % Extracto Etéreo = Peso extracto etéreo x 100 Peso muestra Peso extracto etéreo = Peso del balón mas el extracto – Peso del balón vacío. Conserve la muestra desengrasada para la determinación de fibra bruta. conecte las planchas de calefacción y controle la temperatura (±40ºC) . luego hidrolizar y extraer. Si va a determinar la grasa a heces o dietas que contiene sale de Ca o Mg probablemente haya formación de jabones los cuales no son solubles en los mismos disolventes. Debido a que la hidrólisis ácida extrae también fosfolípidos. recupere el solvente. demás por razones de seguridad del laboratorio ya que l punto de ebullición del éter etílico es de 35ºC y el del éter de petróleo y del hexano es de 55 a 65ºC aunque para realizar la extracción con estos disolventes se requiere mayor temperatura. Muestras ricas en grasa en ocasiones requieren una extracción antes del secado y una segunda extracción después. asegúrese de que el balón este limpio y seco. Pese el balón de destilación con 2 o 3 granalla de zinc. si ese es el caso. extraer dos gramos de muestra sobre un papel filtro en un embudo con 5 porciones de mL de agua antes de secar la muestra para determinar el extracto etéreo. La asociación europea para reproducción animal (Van Es-Van-Der-Meer. Acople el balón al equipo extractor. seque los balones en la estufa a 50ºC para permitir que los vapores de éter desaparezcan. 2. En caso de hacer esta determinación en el aparato de goldfisch son necesarios los dedales de celulosa y vasos adecuados para e proceso que sustituyen el papel filtro balones descritos en el anterior proceso. sugiere el uso de éter de petróleo o de hexano arguyendo que el éter etílico extrae otras sustancias aparte de las grasas como azúcares y pigmentos. ácido láctico. glicerina y otros pueden interferir con la extracción de grasa. 3. urea. 1980). Extraiga por un tiempo mínimo de 8 horas. entórchelo para que la muestra quede en el fondo. vierta sobre él 200 mL de éter etílico o de petróleo. Una vez transcurrido el tiempo necesario. Coloque la muestra en la unidad de extracción.

B.25%. estufa. lana de vidrio. requiere procedimientos difíciles. en muchos casos es mayor al del ELN en el mismo alimento. sino el residuo de una operación matemática. acetona y etanol. EQUIPO Y MATERIALES: bomba para inyección de aire. Acople el digestor. adicione 20 mL de ácido sulfúrico 1. Sin embargo. si hay formación de espuma. Acople el quipo y continúe la ebullición por 30 minutos más. Colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos. acumulando los errores de las demás determinaciones. Secado e incineración: lleve el crisol a estufa a 130ºC durante dos horas. mufla. este sistema de análisis tiene fallas serias debido a que el ELN se determina por diferencia. Este hecho condujo a que los investigadores los agrupasen en dos.25%. colóquela en un erlenmeyer (u otro recipiente que permita el reflujo). lavando el residuo sucesivamente con agua hirviendo ácido sulfúrico al 1. Coloque el recipiente sobre la plancha de calefacción. azúcares. almidones. Filtre la solución caliente a través del crisol con la lana de vidrio. desecador. Los más digeribles y los menos digeribles en el caso del método Weende los agrupa en fibra cruda y extracto libre de nitrógeno (ELN). Hidrólisis ácida: pese 0. aparato de reflujo. hidróxido de sodio 24% (o KOH 28%). etc. proteína. El ELN se determina por diferencia. enfríelo en un desecador y péselo (peso B) . La fibra cruda por su parte es un término descriptivo de poco valor y se ha demostrado que el valor nutritivo de este. es lo que se conoce como fibra cruda después de descentar la ceniza y que está compuesta principalmente por lignina y celulosa.2g de muestra desengrasada (residuo de la determinación de EE). idearon un método para separar las fracciones de los alimentos de acuerdo a su disponibilidad nutricional. antiespumante (alcohol octílico). acetona. etanol. esto es lo que queda después de restar todos los valores determinados como fibra. grasa y ceniza. PROCEDIMIENTO A. Hidrólisis alcalina: retire el condensador y adicione al recipiente (sin quitarlo de la plancha) 2 mL de hidróxido de sodio al 24%. permita la ebullición durante 30 minutos contando a partir del inicio de esta.. bomba de vacío. Además de que el ELN no es producto de un proceso.25%. Al tener presente estas consideraciones Van Soest y colaboradores.. REACTIVOS: ácido sulfúrico 1.DETERMINACIÓN DE FIBRA BRUTA O CRUDA (Weende) La determinación de cada uno de los carbohidratos es una labor que hace mucho tiempo. enfríelo en un desecador y péselo (peso A). planchas de calefacción. insufle aire o adicione antiespumante. El primero determinado por la ebullición alterna de la muestra con un ácido y un álcali fuertes. El residuo que queda libre de componentes solubles como proteína. adicione 5 gotas de antiespumante. crisoles filtrantes (Gooch). vasos Berzelius o erlenmeyers. proceso que se detallará más adelante.

Ejemplo si peso un gramo de muestra (desengrasada) que contenía 5% de extracto etéreo. 95 % (Sin extracto etéreo) 100% .05 g 95 2. De disponibilidad incompleta.) son adecuado. Para tal efecto Van Soest en la década de los sesenta propone un método para separar los constituyentes celulares y los clasifica como: A. Los embudos tipo kaahoma (Labconco Corp. se solubiliza el contenido de la célula y la pectina. especialmente los llamados estructurales que se consideran fundamentales en la alimentación de herbívoros y que ejercen una influencia marcada sobre al digestibilidad y valor nutritivo de los vegetales. Al hervir la muestra con detergente neutro. tanto directa como indirectamente. DETERMINACIÓN DE FIBRA POR VAN SOEST El método de Weende para determinación de fibra que se ha descrito.La Fibra se representa por la pérdida de peso en la incineración.) o California (Nalge Co. 4. y C. 1g X Peso Real = 100 x 1 = 1. Descuente también la humedad del material que este analizando 3. CÁLCULOS % Fibra Cruda = Peso fibra x 100 Peso muestra Fibra = Peso A – Peso B = Peso (Fibra + Ceniza) – Peso Ceniza NOTAS: 1.2 00. Se debe tener en cuenta el porcentaje de EE para convertir la cantidad pesada a la base original. así como un agente quelante (EDTA) que remueve los metales pesados y los iones alcalinos contaminantes. no permite el estudio apropiado de los carbohidratos presentes en los alimentos. Frecuentemente no disponibles En este método se utilizan detergente que se combinan con la `proteína para solubilizarla. hemicelulosa y lignina (Fibra Detergente Neutro (FDN). dejando un residuo que es la pared celular que es la que contiene la celulosa. El filtrado también puede llevarse a cabo sobre embudos tipo Gooch cubiertos con un circulo de alguna tela resistente o tela de alambre de malla de No 0. Muy disponibles B.

las que por incineración da el valor de celulosa. FC. FDN = celulosa. hemicelulosa y lignina FDA = celulosa y lignina OXIDACIÓN DEL PRODUCTO DE FDA (Con KMnO4) = Celulosa y ceniza ºC .Por ebullición posterior de un detergente ácido se hidroliza la hemicelulosa que se encuentra libre y la que esta combinada con lignina dejando la celulosa y lignina como fibra detergente ácida (FDA) La oxidación de la lignina con KMnO4 deja la celulosa y ceniza como residuo. Este procedimiento se detalla a continuación.

.

y repita el lavado varias veces. .5 de tilendiamino tetracetato de sodio y se hace pasar forzada de abajo hacia arriba a través del filtro de vidrio del crisol. Colóquela en un erlenmeyer para iniciar el reflujo. Una manera adecuada de limpiarlos es la de ponerlos a incinerar a 500ºC y luego forzarles agua de abajo hacia arriba e dirección opuesta a través del filtro. incluido dentro de esta fracción se encuentra la ceniza. enfríelo en un desecador y péselo. Lugo colóquelo en la mufla a 600ºC durante 30 minutos.1: 30g de Lauril sulfato sódico. 0. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm). PROCEDIMIENTO Controlar pH = 6. proteínas. 6. 10mL de 2-etoxietanol (etilenglicol monoetil éter). estufa. acetona. verifique pH.DETERMINACIÓN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO Y CONTENIDO CELULAR (FDN) Este es un procedimiento rápido que permite determinar los constituyentes de la pared celular(celulosa. 4. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Aunque es posible obviar este problema utilizando la técnica propuesta por Mc Queen y Nicholson en 1979. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. El tratamiento de la muestra con detergente neutro (pH 6.9 – 7.9 – 7. etc. antiespumante (alcohol octílico).81g de borato de sodio decahidratado. glúcidos solubles. aparato de reflujo. cuando los crisoles de obstruyen con partículas minerales después de mucho uso. enfríe en desecador y pese (B). desecador. Lave luego dos veces con acetona. Caliente para lograr la ebullición entre 5 y 10 minutos. vasos Berzelius o erlenmeyers.9 – 7.1) permite obtener por una parte los compuestos solubles en el (almidones. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. los crisoles tienden a obtruirse con material residual que es resistente a l filtrado corriente con ácido crómico. Filtre la solución a través de un crisol con la lana de vidrio previamente tarado (A).1 Pese aproximadamente 0. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. Adicione en orden los siguientes reactivos 20 mL de solución detergente neutro a temperatura ambiente.5g de sulfito de sodio. se prepara una solución caliente de 20% de KOH. lana de vidrio.5g de sulfito sódico. En alimentos con elevado nivel de proteína o almidones y bajo contenido de fibra no es práctico su implementación puesto que la confirmación de geles o la coagulación de la proteína impide la filtración adecuada dando valores de fibra superiores a los reales. hemicelulosa y lignina) especialmente de aquellos alimentos fibrosos utilizados en la alimentación animal.) denominado contenido celular y los compuestos no solubles (FDN). 18.56g de fosfato disódico. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. crisoles filtrantes (Gooch). Se debe evitar el uso continuo de la solución alcalina. 5% de Na3PO4 y 0. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. 0. pues tiende a erosionar el vidrio.61g de EDTA disódico. REACTIVOS: Solución Detergente Neutra (en 1000 mL de agua) pH = 6. Limpieza de los Crisoles: después de mucho uso.

La construcción previa de un tubo múltiple (batería) que reciba hasta 6 muestras simultáneamente para filtrado con vacío. por esto debe tenerse en cuenta que al diferencia entre FDN y FDA proporciona una estimación del contenido de hemicelulosa. También si dejan una muestra en remojo en agua caliente mientras las otras están siendo filtradas ayudara a un mejor lavado NOTA. La digestión ácida remueve de la muestra la hemicelulosa y la proteína presente en la pared celular que a pesar de ser poca debe considerarse para los cálculos. obstruyendo el filtro. REACTIVOS: Solución Detergente Ácido (en 1000 mL de H2SO4 1N) pH = 1. antiespumante (alcohol octílico). ayuda a reducir el tiempo de filtración. crisoles filtrantes (Gooch). Esta adherencia dificulta la filtración y se puede evitar por medio de un calentamiento más rápido y una rotación frecuente del vaso. . desecador. Si por esta razón las muestras no se pudieron lavar. la que debe descontarse al final del análisis. DETERMINACIÓN DE FIBRA DETERGENTE ACIDO (FDA) Este procedimiento permite la determinación rápida de lignina y celulosa presente en los alimentos considerados como las fracciones menos digestibles de la pared celular. Acetona. lana de vidrio. existe la posibilidad de que forme un material gelatinoso derivado de los almidones y la proteína. se debe tomar precaución para que la muestra no se adhiera al fondo del vaso. El tubo múltiple debe construirse en forma tal que permita el control de la fuerza del vacío. esta incluida la cantidad de ceniza de la muestra.0 : 20g de Bromuro de cetil trimetil amonio(hexodecil trimetil amonio bromuro).% Ceniza Peso muestra % Contenido Celular = 100 . Dentro del porcentaje pared celular. vasos Berzelius o erlenmeyers. EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío.% Pared Celular En el caso de muestras de granos y subproductos de molinos. haciendo pasar aire de abajo hacia arriba en el crisol.CÁLCULOS % FDN (Pared Celular) = B–A x 100 . los resultados darían un contenido alto de paredes celulares. estufa. sin embargo la filtración sería normal si se siguen indicaciones. aparato de reflujo. B) Durante la parte inicial del calentamiento de la muestra hasta la ebullición. A) Con frecuencia se puede mejorar el tiempo de filtrado.

% Ceniza Peso muestra % Hemicelulosa = % FDN . Adicione 20mL de solución detergente ácido a temperatura ambiente (verifique pH que debe ser casi 0). Oxidación por ácido acético permanganato de potasio. Es más. Rote el recipiente para que la muestra sea bien tratada por el reactivo. enfríe en desecador y pese (B). en aquellos animales que derivan su sustento de los forrajes. Lave la muestra con la menor cantidad de agua posible. y repita el lavado varias veces.0(idealmente casi cero) Pese aproximadamente 0. Reduzca la temperatura para evitar la formación de espuma. Filtre la solución a través de un crisol Gooch con la lana de vidrio previamente tarado (A). Oxidación por cloruro de sodio. Separación de la célula con ácido sulfúrico al 72 % El procedimiento que se detalla a continuación se basa en la relativa facilidad con la que la lignina se oxida. su contenido en la muestra está determinado por pérdida de peso que sufre la muestra sometida a este proceso y que el residuo que queda este constituido por celulosa y ceniza.PROCEDIMIENTO Controlar pH = 1. Lave luego dos veces con acetona.% FDA NOTA. es un polímero amorfo de derivados del fenilpropano de elevado peso molecular. Seque el crisol a 105ºC por un mínimo de ocho horas. Ajuste la temperatura para lograr ebullición constante. DETERMINACIÓN DE LIGNINA (POR PERMANGANATO) La lignina. aunque de alguna manera constituye un carbohidratos. . Existe en un buen número de procedimientos para su determinación a saber. que por hacer parte de la pared celular se trata en este capítulo. Mantenga la solución en ebullición por 60 minutos contados a partir de que esta se estabilice. Conserve el residuo para la determinación de Lignina.2g de muestra finamente molida (tamiz de 1mm) y transfiera a un erlenmeyer para reflujo. Esto lo convierte en un elemento importante y de allí la trascendencia de su cuantificación. interfiere en gran medida el aprovechamiento de estos. Caliente para lograr la ebullición entre 5 a 10 minutos. CÁLCULOS % FDA = B–A x 100 . Tenga en cuenta que FDA aún conserva la ceniza de la muestra.

Antes del análisis mezcle la solución de permanganato con la solución buffer en una proporción 2: 1. 1.0075g de nitrato de plata. crisoles filtrantes (Gooch). Si el filtrado es de color café repita los pasos anteriores. no moje la fibra. Filtre la solución sin lavar con agua. Una variación que se introduce en estos casos. bandeja de vidrio. La cutina que es una fracción muy importante en muchas de la s cubiertas exteriores de las semillas. Lave con solución desmineralizadora hasta que el residuo quede de color blanco.25g de acetato de potasio en 25mL de ácido acético y 20mL de tercbutanol. desecador.EQUIPO Y MATERIALES: bomba de vacío. Permita que la solución trate la muestra un tiempo mínimo de 90 minutos adicionando solución si es necesario(debe permanecer de color morado). los que se diluyen en 5mL de agua. La solución A con 0. Enfríe en desecador y pese(C). Con la varilla de vidrio descomponga los grumos formados. Etanol al 80% para el lavado Acetona PROCEDIMIENTO Coloque el crisol que contiene FDA en una bandeja de vidrio que contenga una copa de 1cm de espesor de agua fría. 5mL de HCl concentrado y 25mL de agua. no se determina con este método. CÁLCULOS % Lignina = B–C x 100 Peso muestra C = Celulosa + Ceniza NOTAS. Lave dos veces con acetona de igual manera que los hizo con alcohol. Solución desmineralizadora: 5g de ácido oxálico deshidratado. es la de usar el permanganato . Llénelo hasta la mitad con la solución desmineralizadora. Coloque el crisol en una bandeja de vidrio limpia. para que la muestra esté siendo tratada por la solución constantemente. horno desecador. estufa. Dele un grado de inclinación apropiado a la bandeja. Agregue al crisol 25mL de la solución combinada(permanganato + buffer). 70mL de etanol al 95%. 0.466 g de nitrato férrico. Seque el crisol durante la noche a 105ºC. Llene y lava el contenido del crisol con alcohol etílico del 80% y repita el lavado. El peso B es el correspondiente al proceso de FDA 2. Coloque una varilla de vidrio dentro del crisol para remover el contenido. varilla de vidrio. Después de 5 minutos filtre y repita los dos pasos anteriores. El tiempo necesario en este paso es de 20 a 30 minutos. REACTIVOS: KMnO4 al 5%. La solución B disolviendo 0. Solución buffer: para 50mL de buffer se prepara dos soluciones.

El residuo de la fibra ácido detergente consistente de celulosa. cuya forma física es inapropiada debido a la posibilidad de dañar la muestra con cloro. LIGNINA ACIDO DETERGENTE Este método determina lignina por el método ácido detergente. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L). Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. lignina. REACTIVOS: Acetona R. tomar 5mL y adicionarle 4.5cm de la marca de calibración a 20ºC. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua. a) H2SO4 1N valorado (49.45mL de H2SO4. El menisco debe estar a 0. Colocar el matraz dentro del lavadero. es que las partículas de mayor tamaño las penetra completamente los reactivos y por lo tanto. molerse y prepararse a través de un tamiz de 1mm para reducir el tamaño de la partícula. Si el volumen es demasiado grande. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. lleno de agua antes de adicionar el ácido. Este método por lo tanto. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. cutina y cenizas insoluble en ácido(principalmente silicio).0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente. Solución ácido detergente. En consecuencia. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado. Como paso preliminar se determina la fibra ácido detergente. Ácido sulfúrico al 72% peso. 3. Determinar la normalidad del ácido por titulación.5mL de agua. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado. pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros. no es adecuado para heces y forrajes frescos que han sido molidos en un molino para carnes. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). El tratamiento con H2SO4 al 72% disuelve la celulosa. Para determinación y separación de cutina y lignina ver el procedimiento de determinación de lignina por permanganato. aforar con agua destilada.5 mL y adicionarle 2. El detergente elimina la proteína y otro material soluble en ácido que interferirá con la determinación de lignina. Asbesto.para celulosa y tratar la muestra con ácido sulfúrico al 72% y asbesto. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. por espacio de 3 horas. Medir el H2SO4. en estos casos los resultados dan valores bajos. Si el volumen es muy pequeño sacar 1. Una desventaja que se le puede atribuir al método por permanganato.04g / 1L). Este procedimiento resulta en el fraccionamiento de la lignina cruda en las dos fracciones descritas seguidamente. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. es preferible usar ácido sulfúrico al 72% para determinar lignina.A. . La incineración del residuo determina la fracción de lignina cruda incluyendo la cutina. los materiales con alto contenido de humedad deberán secarse parcialmente. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. y con agitación suave.

Esta fracción puede ser grande en algunas cáscaras de semillas o no ser importante como en forrajes comunes. si esto no es posible. La pérdida de peso constituye el contenido de celulosa de la muestra..PROCEDIMIENTO Pesar 1g de muestra y determinarle FDA como se indicó antes. Sin embargo. Dejando el agitador dentro. Cubrir el contenido del crisol con H2SO4 al 72% (15ºC) y agitar con un agitador de vidrio a formar una pasta. CÁLCULOS Calcular la lignina ácido detergente LAD = L x 100 S donde. enfriar los crisoles en desecador con P2O5 como desecante. La relación que hay entre la cutina y el valor nutritivo de las otras partes de la planta no se conoce con precisión. Incinerar los crisoles en mufla a 500 . Agregar ácido hasta la mitad del crisol y agitar. DETERMINACIÓN DE CELULOSA Incinere la muestra procedente de la determinación anterior a 500ºC durante 3 horas. Lavar y quitar el agitador. Después de 3 horas eliminar todo el ácido que sea posible haciendo vacío. Lavar el residuo con agua hasta que esté libre de ácido. agregar H2SO4 72% varias veces según se vaya drenando el crisol. Mantener los crisoles a 20 . el factor cutina es resistente a la degradación microbiana.550ºC / 3 horas.23ºC. material que no es oxidado por KMnO 4 y resiste la hidrólisis por H2SO4 al 72%. CÁLCULOS % CELULOSA = C–D Peso muestra x 100 CUTINA ACIDO DETERGENTE Este método determina la cutina. LAD= Lignina ácido detergente L = pérdida por ignición después del tratamiento con H2SO4 al 72% S = peso de la muestra seca en estufa. La pesada deberá hacerse en caliente. enfriar a 100ºC y pesar. Secar los crisoles a 100ºC y pesar. enfríe en desecador y pese (D). tres veces es suficiente. Agregar al crisol que contiene el residuo de la fibra ácido detergente una cantidad de asbesto igual al volumen de la fibra. .

Determinar la normalidad del ácido por titulación. combine y a la vez mezcle la solución de permanganato de potasio saturado con la solución amortiguadora de lignina en la relación de 2: 1 volumen. Si el volumen es demasiado grande.2L Solución de permanganato combinada. Manténgase la solución protegida de la luz solar directa.0g 1g 6L 60g 4. enfriar a 20ºC y asegurase si el volumen sea el correcto. aforar con agua destilada. Almacenar en forma seca hasta que se vaya a necesitar. lleno de agua antes de adicionar el ácido. Incinerar el asbesto residual a 800ºC/16 horas. Antes de ser usado. Medir el H2SO4. a) H2SO4 1N valorado (49. Asbesto. n-Hexano R. Filtrar sobre un embudo Buchner y lavar con agua.04g / 1L). tomar 5mL y adicionarle 4. Lavar por inmersión y agitación en agua para eliminar las partículas finas. Revolver 5g de KMnO4 grado de reactivo por litro de agua destilada o 900g KMnO4 para un volumen de 18 litros de agua destilada. y con agitación suave. La bolsa debe cocerse con hilo apropiado.0g de nitrato férrico nonahidratado y 0.0g de acetato de potasio y mézclese la solución. Solución amortiguadora de lignina.45mL de H2SO4. Para preparar 12L se emplean las siguientes cantidades de reactivo: Nitrato férrico nonahidratado Nitrato de plata Acido acético Acetato de potasio Alcohol butírico terciario Agua destilada 72. Si el volumen es muy pequeño sacar 1.0 x 12 moles Análisis H2SO4 (en por ciento) = gramos de ácido necesarios (1000 x 1634)3 – gramos de ácido = gramos de agua necesaria Medir la cantidad de agua calculada dentro de un matraz volumétrico (con bulbo en el cuello) y adicionar la cantidad calculada de H 2SO4 lentamente.REACTIVOS: Acetona R. Colocar el matraz dentro del lavadero. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente por 2 horas. El asbesto usado puede ser nuevamente lavado e incinerado.8L 1. agregar 800mL de agua y 1400mL de H2SO4 concentrado.A Permanganato de potasio saturado. disuelva 6. Combine esta mezcla con 500mL de ácido acético glacial y 5.15g de nitrato de plata en 100mL de agua destilada. adicionar el bromuro de cetil trimetil amonio y agitar. La porción no utilizada de esta mezcla puede mantenerse por .5cm de la marca de calibración a 20ºC. b) Bromuro de cetil trimetil amonio grado técnico (20g / 1L).5mL de agua.A. Resuspender el residuo en agua y ponerlo dentro de una bolsa de 46 x 30cm de fibra de vidrio de malla de 14 x 18 (aproximadamente 1mm). pesar 100g de asbesto (fibra larga) en un matraz de 3 litros.5 mL y adicionarle 2. Para preparar 1 litro de solución. Ácido sulfúrico al 72% peso. Solución ácido detergente. Calcular los gramos de ácido y agua necesario en un litro de solución de acuerdo a la formula siguiente: 100 x 98. El menisco debe estar a 0. usar acetona libre de color y que no deje residuo al evaporarse.

(Este último peso no es necesario si el residuo de ceniza en menor del 2% de la muestra original).6L 900mL 4. PROCEDIMIENTO Seguir el procedimiento para la lignina. Los reactivos deben ser enfriados antes de usarlos. Solución desmineralizadora: par cada litro de solución disuelva 50g de ácido oxálico deshidratado en 700mL de etanol al 95%. Enfríe en desecador y pese(E).8L de agua destilada y 15. por esto el químico asume que el contenido de nitrógeno en las diferentes proteínas es en promedio de 16%. en el caso de la leche o el trigo donde su contenido de nitrógeno es conocido debe utilizarse el factor apropiado para convertir el nitrógeno a proteína. CÁLCULOS % SÍLICE = E– A x 100 Peso muestra DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO La determinación e identificación de cada una de las proteína que integran el alimento es de poca utilidad práctica. celulosa y sílice por permanganato hasta el paso en el que se pueda calcular la lignina pero sin incinerar. DETERMINACIÓN DE SÍLICE Es posible obtener un valor aproximado al contenido de sílice. Para preparar 18L mezcle 2. Calcular la cutina como pérdida después de incinerar.una semana en refrigeración en ausencia de luz. Para preparar 18L se emplea la siguientes cantidades de reactivos: Ácido oxálico Etanol 95% Ácido clorhídrico concentrado Agua destilada 900g 12. Esta solución puede utilizarse si mantiene l color morado y esta libre de precipitado. agregue 50mL de HCl concentrado(aproximadamente 12N) y 250mL de agua destilada y luego mézclese. Lave con acetona y filtre. . Para 1L mezcle 155mL de agua destilada y 845mL de alcohol etílico del 95%. Jones ha publicado factores específicos para 121 proteínas y alimentos. Tratar el residuo sin incinerar con H2SO4 72% como el procedimiento de lignina ácido detergente. mediante la percolación del residuo de ceniza obtenida en el proceso anterior con ácido bromhídrico concentrado (48%) hasta que el color haya desaparecido. Incinere a 500ºC por 3 horas.5L Alcohol etílico de 80% v/v.2L de alcohol etílico de 95%.

reportado por Kjeldahl en 1883. Estas consideraciones deben tenerse presentes para diferenciar la llamada proteína cruda de la proteína verdadera de los alimentos.25g de verde de bromocresol en 100nL de etanol. La solución se alcaliniza y el amoniaco liberado se destila para su posterior titulación. NITRÓGENO PROTÉICO Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado. ha sufrido numerosas modificaciones que han conducido a su mayor simplificación. En este manual se describe el método Kjeldahl que ha sido el más aceptado de los muchos que se han propuesto para la determinación de nitrógeno total.41% y selenio 1.El valor protéico estimado a partir de su contenido nitrógeno hace suponer que todo el nitrógeno presente en la sustancia analizada se haya haciendo parte de una proteína. REACTIVOS: Ácido sulfúrico concentrado. Tres pasos principales contemplan el método digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador y a elevada temperatura para transformar el nitrógeno en sulfato de amonio.54%. tubos de destilación Kjeldahl. Si la muestra contiene nitratos proceda con “Nitrógeno total”. nitratos. Traslade el matraz al equipo de destilación acóplelo con . Agregue 1 tableta Kjeldahl o 2g de la mezcla catalítica.05g de rojo de metilo y 0. Cosa que no es cierto para ningún alimento. a partir del calentamiento. etc. ácido bórico 4%. microbureta. Aminas. Ácido salicílico para nitrógeno total. Agite y deje reposar por lo menos 10 minutos. Indicador: disolver 0. por lo que oficialmente hoy se conoce como el método Kjeldahl – Gunning – Arnold. destilador Kjeldahl. pues contiene también cantidades considerables de compuestos nitrogenados que no son proteínas como aminoácido. Continúe la digestión hasta que la solución se torne de color verde claro. Adicione a la muestra en el tubo 5mL de ácido sulfúrico concentrado y un tableta Kjeldahl o 2g de mezcla catalítica. Apague el digestor y deje enfriar la solución por 15 minutos (sin desmontar el equipo). en caso contrario proceda con “Nitrógeno Protéico” NITRÓGENO TOTAL Evite la pérdida de ácido nítrico del N proveniente de los nitratos. erlenmeyer de 250mL.05% . Transfiérala al tubo Kjeldahl. hidróxido de sodio 32%. sulfato de cobre pentahidratado 2.1N. Este método. Coloque el digestor previamente calentado(Tª 6) y aumente la temperatura a 9. ácido sulfúrico 0.5g de muestra. EQUIPO Y MATERIALES: digestor Kjeldahl.5g de ácido salicílico. Catalizador: mezclar sulfato de potasio anhidro 96. PROCEDIMIENTO Pese con exactitud alrededor de 0. sales de amonio. Agregue 0. Continúe el proceso de la misma forma que con la N protéico.

CÁLCULOS Cantidad de amoniaco titulado V x N x Eq = miligramos de NH3 V x N x 17 = miligramo de NH3 Cantidad de nitrógeno 1mol de NH3 contiene 1at-g de N.4 x V x N = % de N M x 1000 M Donde. Agregue a la solución. V = volumen en mL de ácido sulfúrico gastado para titular N = Normalidad del ácido utilizado para titular = 0. agua hasta complementar 5mL (en la escala).sumo cuidado. El ácido bórico con indicador debe cambiar de rojizo a verde esmeralda. Titule con ácido sulfúrico 0. esto se logra cuando la solución se torna de color café o azul ( ±20mL). asegúrese que todos los accesorios del equipo estén en posición correcta para su utilización(consulte al técnico).1N M = peso de la muestra en gramos CONVERSIÓN A PROTEÍNA Se ha señalado ya que no todo el contenido de N determinado por este proceso hace parte de proteínas por lo que es necesario aplicar el factor apropiado para cada alimento con el fin de obtener un resultado satisfactorio. Antes de comenzar este paso.1N hasta cambio de color (rojizo). Presione el botón de destilación y destile a 35mL. . por lo tanto 17mg de NH3 contiene 14mg de N V x N x 17 miligramo de NH3 contiene X miligramos de N X = 100 x V x N x 14 = V x N x 14mg de N 17 Porcentaje de Nitrógeno V x N x 14 miligramo de N proviene de M x 1000mg de muestra X mg de N proviene de 100g de muestra X = 100 x V x N x 14 = 1. Reciba el resultado en un erlenmeyer que contenga 5mL de ácido bórico al 4% con indicador (3 gotas). Alcalinice la solución con NaOH al 32%. Anote el gasto (restándole el del blanco).

cebada. centeno. determinada por la recuperación del N total. Destile de igual forma como lo hizo con el N protéico. Para leche y derivados. Calcule la actividad de la ureasa con la cantidad que convierta completamente la urea. destilador Kjeldahl. se asume un contenido de N del 16% y 15. Ureasa liofilizada: prepare una solución tal que 10mL de ella conviertan el N de 0. es necesario aplicar factores que aunque aproximados dan una idea mas o menos clara del contenido protéico de la muestra que se está analizando.1N por cada 0.1g de urea Determinación de alcalinidad: disolver 0. REACTIVOS PARA CALIBRACIÓN DEL PROCESO KJELDAHL . 5mL de solución de CaCl2 y 3mL de antiespumante. trigo. Si el alimento contiene más del 5% de urea adicione más ureasa. En el primer caso el porcentaje de proteína será igual a: % PROTEÍNA = V x N x 14 x 6. Para mezclas de cereales: maíz. semillas de algodón. Aunque existan estas limitaciones. arroz.1g de ureasa en 50mL de agua titular con ácido clorhídrico 0. Utilice rojo de metilo como indicador. adicione diferentes cantidades de solución a muestra de 0.1g de ureasa utilizada en solución. huevos. Agregue el mismo volumen de HCl 0. antiespumante. soya y subproductos. Adicione 250mL agua y agregue 10mL de solución de ureasa. Para esto se han agrupado los alimentos debido a que su factor d conversión es aproximado a así. debido a la dificultad existente para separar las proteínas verdaderas de un mismo alimento. REACTIVOS: CaCl2 al 25%.7% para el caso de productos lácteos. fríjoles.Hay que tener presente por otra parte que no todo los factores de conversión son exactos. Adicione 2g de MgO. PROCEDIMIENTO Coloque 2g de muestra en un matraz Kjeldahl. Lave el tapón y cuello del matraz. Calcule el porcentaje de N. En el caso de pastos y forrajes. verduras y subproductos. Determinación de la actividad: prepare 50mL de solución neutra.1g de urea y continúe con la digestión enzimática y destilación que se anotan más delante. Tape el recipiente y deje en reposo por 1 hora.1N. Par carnes. linaza. y no podrían aplicarse a mezclas. sino aquellos para los cuales se determinaron.25 x 100 mg de muestra NITRÓGENO NO PROTÉICO (Ureico y Amoniacal) EQUIPO Y MATERIALES: matraz Kjeldahl. frutas.

que representan la fracción más grande del contenido mineral del animal. DIGESTIÓN HUMEDA DE PRODUCTOS ALIMENTICIOS PAR ANÁLISIS DE ELEMENTOS APLICACIÓN. como se dijo antes. por esto se hace necesario la determinación analítica de los componentes inorgánicos que son de interés usual.84). 0.7168 5.6459 33. 0. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. Los recursos disponibles en el laboratorio son una condicionante grande que no permite la implementación de métodos mas modernos. utilizar agua desmineralizada o destilada de buena calidad. % de N 46.20 aprox. no es una medida confiable del contenido mineral de una alimento.2964 DETERMINACIÓN DE MINERALES La importancia de los minerales en la alimentación animal es de un interés indiscutible.08 aprox.1625 13.1438 3.2007 19.COMPUESTO Urea Acido úrico Sulfato de amonio Lisina Triptófano GRAMOS 0. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdida de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro.3272 21.7167 FACTOR 2. Utilizar reactivos que no contengan más de 1mg de metal objeto de determinación por litro. Se debe más bien determinar cada elemento por procesos específicos que permiten visualizar la calidad mineral de la sustancia analizada. por ello debemos seguir desarrollando los sistemas que se ajustan a estas condiciones. Comprobar el contenido en metales de los ácidos. En este caso nos referimos a los macroelementos. Líquido para el lavado de ácido del material de vidrio: diluir 1 a100 ácido nítrico concentrado en agua.42). REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. La materia orgánica se destruye y oxida por la acción del ácido sulfúrico y del ácido nítrico en ebullición. PRINCIPIO. .2185 7. Agua. El método puede aplicarse a todos los tipos de productos alimenticios . NOTA Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar. 0.13 aprox.0004 4. 0. La determinación de cenizas por el método de Weenden.06 aprox.15 aprox.

Par el análisis de calcio.84). Calentar con precaución hasta que cese la violenta reacción inicial.2%.5% en etanol. es necesario tomar en cuanta que se pueden presentar interferencias con elementos como ácido fosfórico. Preparar un blanco usando las mismas cantidades de los reactivos. Calentar hasta que se liberen los humos blancos de sulfúrico. indicador de rojo de metilo al 0. hierro y aluminio. solución de HCl en agua (1: 3). Calentar con mayor intensidad hasta que se desaparezcan casi todos los vapore nitrosos. Añadir 5mL de ácido nítrico concentrado y mezclar. especialmente en el tejido óseo. manganeso. así como se hizo para el fósforo se debe partir de la solución “P” obtenida por la digestión de la muestra original de alimento. además de que juega un papel importante en las demás células. ácido nítrico concentrado (peso específico 1. NOTA. Para la determinación de calcio en un alimento. REACTIVOS: ácido sulfúrico concentrado (peso específico 1. Para la medida del contenido del elemento seguir las instrucciones dadas para dicho metal. Todas las operaciones deberán ejecutarse bajo vitrina de gases con ventilación adecuada y lavado de los gases de salida.15N de KMnO 4. solución diluida de NH4OH en agua (1: 50) solución acuosa de oxalato de amonio al 4. solución de NH 4 en agua (1: 1). Añadir 10mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar energéticamente asegurándose de que no queden grumos secos. solución 0.42). DETERMINACIÓN DE CALCIO A PARTIR DE CENIZAS Este elemento por ser el que en mayor cantidad hace parte del organismo animal. es obligado su análisis en el laboratorio. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA . PROCEDIMIENTO Pesar 2g (si la muestra contiene 10% de agua) o 1g (si la muestra contiene menos de un 10% de agua) de muestra homogenizada y transferirla a un matraz de 100mL.05 o 0. Guardar separadamente el material de vidrio destinado a la determinación de metales traza. Continuar añadiendo ácido nítrico gota a gota hasta destruir toda la materia orgánica.APARATOS: lavar todo el material de vidrio con líquido ácido.

añadir 2 gotas de rojo de metilo y NH4OH (1:1) gota a gota hasta alcanzar un pH de 5. DETERMINACIÓN. Diluir aproximadamente a 150mL. 1 –2 horas en baño María a modo de que se sedimente el precipitado de oxalato de calcio. transferir a un matraz volumétrico de 100mL. añadir HCl (1:3) hasta obtener el color rosado. Dejar reposar durante la noche. Calentar a unos 70ºC y titular con una solución de KMnO 4 hasta alcanzar el color rosado.0). pero la mayor cantidad hace parte de compuestos de naturaleza orgánica.5 – 3. DETERMINACIÓN DE FOSOFORO. calentar a ebullición. NOTA. en parte como fosfato inorgánico puro. Añadir 40mL de HCl (1: 3) y unas gotas de HNO3. aforar con agua. El uso de una temperatura excesivamente alta también puede determinar pérdidas de sales volátiles como cloruro de sodio y de hierro. homogenizar.6 indicado por un calor café naranja. Añadir entonces dos o tres gotas de HCl (1:3) a modo de que el indicador vire al rosa (pH 2. El fósforo presente en organismos vegetales y animales. FÓSFORO TOTAL(Método Colorimétrico). Transferir 50mL de la solución de la muestra a un vaso de precipitados de 250mL. 1mL de KMnO4 0. enfriar. .05N equivale a un mg de calcio. Filtrar el precipitado a través de papel filtro retentivo. La presencia de papel puede decolorar la solución en unos cuantos segundos. hace parte de un gran número de compuestos diversos. A pesar de que casi todos los compuestos contiene el fósforo como ácido ortofosfórico. Debe evitarse el calentamiento demasiado rápido puesto que algunas sales funden y absorben carbono que luego es difícil de quemar.5g de muestra en crisol de porcelana o sílice y calcinar a 550ºC durante 2 horas (el residuo de la determinación de cenizas puede usarse para esta determinación). Colocar el papel o crisol con el precipitado con el vaso original y añadir una mezcla de 125mL de agua y 5mL de H2SO4. se requiere frecuentemente una ataque químico fuerte para transformarlo en un compuesto analizable. calentar a ebullición y añadir lentamente y con agitación constante 10mL de solución oxalato de amonio.Pesar con exactitud aproximadamente 2. Corregir por determinación en blanco y calcular el porcentaje de calcio. Si el indicador vira al anaranjado o amarillo. asbesto filtro de vidrio poroso y lavar el precipitado repetidamente con NH4OH (1:50).

Solución patrón de fósforo: diluir 5mL de la solución anterior a 500mL con agua (20 µg PO4/mL). Diluir hasta la señal de enrase con agua y mezclar. Lavar perfectamente el papel de filtro y recoger los lavados en el matraz. Preparar este reactivo fresco cada día. Tratar las cenizas con 5 – 10mL de ácido clorhídrico 6N para mojarlas completamente y desecarlas con cuidado sobre una placa caliente a una baja temperatura.3N: disolver 12g de NaOH en un litro de agua. PRINCIPIO. la anterior se considera como solución madre. El método puede aplicarse a las cenizas de los productos alimenticios. Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico (NOTA 1) reteniendo en el crisol la mayor cantidad de sólidos posible. Añadir un volumen igual de hidróxido sódico 0. Dejar que el color se desarrolle durante 10 minutos (NOTA 1).131g de tartrato de antimonio y potasio (C4H4O7SbK) en 400mL de agua.84) a un litro. DETERMINACIÓN Pipetear una alícuota de los 250mL del extracto de cenizas hacia un matraz volumétrico de 50mL. NaOH 0. Añadir 15mL de ácido clorhídrico 3N y calentar el crisol sobre placa caliente hasta que la solución comience justamente a hervir. REACTIVOS: ácido sulfúrico 5N: diluir 140mL de ácido sulfúrico (peso específico 1. Almacenar. Leer la absorbancia a 882nm en cubeta de 1cm. pesar 0. ácido clorhídrico 3N y 6N. Lavar el crisol al menos tres veces con agua destilada y filtrar los lavados hacia el matraz. diluir a un litro con agua y volver a mezclar. El ortofosfato del extracto de las cenizas reacciona con el molibdato amoniaco en solución ácida para formar ácido fosfomolibdico. . EQUIPOS Y MATERIALES: dispensador automático de 8mL. Este compuesto es reducido por el ácido ascórbico dando un intenso color azul que se mide colorimétricamente.APLICACIÓN. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta la señal del enrace con agua. cubeta de vidrio de 1cm de camino óptico. añadir 500mL de ácido sulfúrico 5N y mezclar. Añadir al crisol 10mL de ácido clorhídrico 3N y calentar hasta que la solución comience a hervir.53g de ácido ascórbico por cada 100mL de solucón madre de los reactivos del color que se precise. Solución de trabajo de los reactivos del color: añadir 0. Solución madre de los reactivos del color: disolver 6g de molibdato de amonio y 0.3N para neutralizar la solución. espectrofotómetro o colorímetro adecuado para la región de 880nm . Esta alícuota debe contener menos de 100µg de fosfato y más de 20µg. disolver en agua y diluir a 100mL (2mg PO4/mL). Enfriar y filtrar a través de papel filtro hacia un matraz volumétrico de 250mL.286g de fosfato monopotásico. PROCEDIMIENTO Cenizas obtenidas por incineración seca. Solución Patrón de fósforo: desecar fosfato monopotásico (KH 2PO4) durante dos horas a 105ºC. Añadir agua hasta alcanzar un volumen total de unos 30mL. Esta solución es la de trabajo. Utilizando el dispensador automática añadir 8mL de solución de trabajo de los reactivos del color.

Contenido de Fosfato (%PO43-) = 0. 2. A partir de la curva de calibración leer la concentración de fosfato de la muestra y del blanco. CALCULOS Construir una curva de calibración representando gráficamente la concentración de los patrones sobre el eje X (g PO4/50mL) frente a la absorbancia sobre el eje Y.025 x (a – b) W xV Contenido de Fosfato (%P) = 0. 40. 20. ANÁLISIS DE LOS NUTRIENTES DE LOS ALIMENTOS Si fosfato de la muestra µg PO4 / 50 mL = a fosfato del blanco µg PO4 / 50 mL = b Peso (g) de la muestra tomada para el análisis de cenizas = w Alícuota (mL) tomada para el análisis = v Entonces. 3. 80 y 100µg PO4 por 50 mL.00815 x (a – b) W xV NOTA 1. Estas soluciones contienen 0. continuar como las instrucciones.ESTANDARIZACIÓN Pipetear alícuotas de 0. 4 y 5 mL de la solución de trabajo patrón a matraces volumétricos de 50mL. Añadir agua hasta llevar el volumen a unos 30mL. 60. 1. El color es estable durante varias horas .

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful