Ciclo de Krebs

Dr. Giuliano Bernal Dossetto

Departamento de Ciencias Biomédicas
Universidad Católica del Norte
 Ciclo de Krebs

 Vía catabólica común en la oxidación de los

azúcares, ácidos grasos y aminoácidos. Todos
convergen en la formación de acetil-CoA
 La energía de oxidación del grupo acetil-CoA
produce CO2 y poder reductor (NADH, FADH2).
 Estos últimos son conducidos por la cadena
respiratoria, hasta el oxígeno molecular, con la
consecuente síntesis de ATP
 Localización intracelular de las
enzimas del ciclo de Krebs.
 Las reacciones enzimáticas tienen lugar en la
matriz mitocondrial. La mayoría de las enzimas
son solubles en la matriz y una se encuentra
unida a la membrana interna.
 Piruvato es transportado al interior de la
mitocondria a través de un transportador
específico.
 Piruvato se oxida y forma acetil CoA con
perdida de CO2, posteriormente reacciona con
oxalacetato para formar citrato.
Complejo Piruvato Deshidrogenasa
La reacción general catalizada por esta
enzima es una descarboxilación oxidativa.
Esta reacción es irreversible en los tejidos
animales. No forma parte directa del ciclo
de Krebs.
La descarboxilación oxidativa del piruvato
a CO2 y acetil CoA requiere de 3 enzimas
y de 5 coenzimas.
Overall reaction catalyzed by the piruvate dehydrogenase complex
Complejo Piruvato Deshidrogenasa
3 de las coenzimas están unidas al complejo,
tiamina pirofosfato (TPP), lipoamida y flavin
adenin dinucleotido (FAD). Las otras coenzimas
son NAD+ y CoA-SH.
El complejo posee tres actividades enzimáticas
y en mamíferos forma un complejo de 8 x 106
kDa.
Las enzimas se denominan piruvato
deshidrogenasa (E1), dihidrolipoil transacetilasa
(E2) y dihidrolipoil deshidrogenasa (E3).
Regulación del Complejo Piruvato
Deshidrogenasa

Este complejo es regulado en dos formas:

Acetil-CoA y NADH inhiben la reacción en forma
competitiva como inhibidores feed-back.
Por otra parte el complejo es regulado por
fosforilación y desfosforilación. El complejo es activo
en su forma desfosforilada y viceversa.
La inactivación es mediada por una proteina-kinasa
dependiente de Mg2+-ATP. La activación es mediada
por una fosfoproteína fosfatasa dependiente de Ca2+ y
Mg2+.
Deficiencia de Piruvato Deshidrogenasa

Niños que presentan alguna deficiencia de esta enzima

generalmente exhiben elevados niveles séricos de
lactato, piruvato y alanina.
Frecuentemente presentan trastornos neurológicos que
generalmente terminan con la muerte del individuo.
El diagnóstico de deficiencia enzimática se realiza
usando muestras de fibroblastos tomados de la piel del
paciente.
Algunos pacientes responden positivamente a una dieta
pobre en carbohidratos.
Otros son tratados con dicloroacetato, un inhibidor de la
kinasa que fosforila e inactiva al complejo.
Reacciones del Ciclo de Krebs
Cuatro reacciones del ciclo transfieren electrones al
NAD+ o FAD, generando NADH y FADH2. Otra
reacción da origen a un GTP.
Se liberan 2 CO2 a través de descarboxilaciones.
El ciclo comienza con una molécula de Acetil-CoA que
se condensa con una molécula de oxalacetato,
generando citrato. El producto final del ciclo será otra
vez oxalacetato.
Finalmente cada NADH y FADH2 generado entregará
sus electrones generando 2,5 y 1,5 ATP
respectivamente.
 Formación de Citrato
 El Citrato se forma por acción de la citrato
sintetasa.
 Esta enzima produce una condensación aldólica
entre el grupo metilo del acetil CoA y el grupo
carbónilo del oxalacetato.
 La enzima es alostérica y depende de las
concentraciones de los sustratos y del succinil CoA
(compite con acetil CoA).
 Además es inhibida por ATP, NADH y ácidos
grasos de cadena larga.
Formación de isocitrato vía cis-aconitato
 Citrato es convertido en forma reversible en Isocitrato a
través de la enzima aconitasa, la cual forma un
intermediario cis-aconitato.
 Cis-aconitato permanece unido a la enzima.

 La mezcla en equilibrio presenta un 90% de citrato y

10% de isocitrato, sin embargo este último se oxida
rápidamente.
 La enzima contiene centros Hierro-Sulfuro los cuales
participan en la unión del sustrato y en la catálisis.
 Fluoroacetato es un potente inhibidor de la enzima.
 Oxidación del isocitrato a α-
cetoglutarato y CO2
 Reacción reversible catalizada por la isocitrato–
deshidrogenasa.
 Cataliza una descarboxilación oxidativa del isocitrato.

 La enzima presenta dos formas, una NAD+ dependiente

presente sólo en las mitocondrias y la forma NADP+
dependiente, presente en las mitocondrias y citoplasma.
Esta última participa en procesos anabólicos.
 La enzima mitocondrial necesita Mg2+ para su actividad.
 Oxidación de α-cetoglutarato a
succinil-CoA y CO2

 Reacción irreversible catalizada por el complejo α-

cetoglutarato-deshidrogenasa.
 NAD+ es el aceptor de electrones en la reacción.

 La reacción es similar a la oxidación del piruvato a acetil

CoA y el complejo presenta las mismas características de
la piruvato deshidrogenasa.
 El complejo posee 3 actividades enzimáticas y 5
coenzimas.
 Las proteínas de estos complejos probablemente
presentan un origen evolutivo común.
 Conversión de Succinil CoA a
Succinato
 El succinil CoA, posee un enlace de alta energía con el
grupo CoA.
 La hidrólisis de este grupo genera la energía necesaria
para la síntesis de GTP a partir de GDP y Pi.
 La reacción es catalizada por la succinil CoA-sintetasa.

 El GTP posteriormente es utilizado para la síntesis de

proteínas mitocondriales, RNA o DNA.
 El GTP puede ser utilizado para fosforilar ADP y formar
ATP.
The succinyl-CoA
synthetase reaction
 Oxidación de Succinato a fumarato.

 Reacción catalizada por la succinato-

deshidrogenasa, flavoproteína que contiene FAD
unido covalentemente.
 Esta enzima se encuentra ubicada en la cara
interna de la membrana interna mitocondrial.
 Los e- fluyen desde el succinato al FAD,
entrando en la cadena de transporte electrónico.
 La enzima es activada por succinato, ATP y
CoA. Es inhibida por oxalacetato y malonato.
 Hidratación de Fumarato a Malato

 La hidratación reversible del fumarato a

malato es catalizada por fumarasa.
 La enzima es un homotetrámero de 200
kDa y es estereoespecífica.
 La reacción es reversible en condiciones
fisiológicas y también presenta
estereoespecificidad.
 El D-Malato no es un sustrato.
 Deficiencia de Fumarasa
Se han reportado muchos casos de deficiencia de las
isoenzimas mitocondrial y citosólica de fumarasa.
Los pacientes desarrollan un temprano daño neuronal,
encefalomiopatía y distonia.
En la orina se detectan cantidades anormales de
fumarato y niveles elevados de succinato, α-
cetoglutarato, citrato y malato.
Las isoenzimas citosólica y mitocondrial son codificadas
por un mismo gen.
La enfermedad es autosómica recesiva por lo que los
padres presentan la mitad de la actividad enzimática.
 Oxidación de malato a oxalacetato
 Reacción catalizada por la L-malato-
deshidrogenasa dependiente de NAD+.
 Es un proceso endergónico, pero transcurre
con facilidad en el sentido contrario, por la rápida
oxidación de oxalacetato a citrato.
 El NADP+ es débilmente reducido por la
enzima y es estereoespecífica para el L-malato.
 Las células animales presentan dos formas, la
mitocondrial y citoplasmática.
 Conservación de energía en el
Ciclo de Krebs
Ingresan a la vía 2 átomos de carbono en forma de
acetilo, combinándose con oxalacetato.
Dos átomos de carbono en forma de CO2 son
liberados de la oxidación de isocitrato y α-
cetoglutarato.
La energía liberada por estas oxidaciones se
conserva en la reducción de 3 NAD+ y un FAD, y en
la producción de 1 GTP o ATP.
La oxidación de NADH genera 2,5 ATP y la
oxidación de FADH2 genera 1,5 ATP.
 Rol del Ciclo de Krebs
 Su rol no se limita a la oxidación del acetato.
 Juega un importante rol en el metabolismo
intermediario a través de la entrega de precursores para
los procesos anabólicos.
 La transaminación convierte α-cetoglutarato en
glutamato, el cual es capaz de salir de la mitocondria.
 α-cetoglutarato es capaz de convertirse en
neurotransmisor en el tejido nervioso (glutamato y
GABA).
 Oxalacetato se convierte en fosfoenolpiruvato
durante la gluconeogénesis.
 Reacciones Anapleróticas
Son reacciones de “relleno” destinadas a suplir
algún intermediario del ciclo cuando este ha sido
utilizado en un proceso biosintético.
En condiciones normales las reacciones que llevan
a la salida de intermediarios del ciclo y aquellas que
los reingresan se encuentran en un equilibrio
dinámico.
La reacción anaplerótica más importante es aquella
catalizada por la enzima piruvato carboxilasa, la
cual convierte piruvato y CO2 en oxalacetato. Los
niveles de esta enzima son altos en el tejido
hepático y nervioso.
 Piruvato Carboxilasa
La enzima consta de cuatro subunidades, cada una de las
cuales posee una Biotina unida.
Esta vitamina esta unida covalentemente a la enzima. Es
un grupo prostético que transporta CO2 y depende de ATP.
La reacción ocurre en dos pasos. Primero el bicarbonato se
une a biotina y luego reacciona con piruvato.
La biotina es una vitamina necesaria para el ser humano,
se encuentra en muchos alimentos y es sintetizada por las
bacterias del tracto digestivo.
Avidina es una proteína de los huevos que une fuertemente
a biotina, impidiendo su absorción.