UNIVERSIDAD DE ORIENTE NCLEO DE SUCRE ESCUELA DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOANLISIS PRACTICA PRE-PROFESIONAL TEMPRANA I

NCLEO TEMTICO N 8

YANET ANTN MARN

COMPETENCIAS A DESARROLLAR
Define conceptos bsicos desinfeccin y esterilizacin.
Cita

en

limpieza,

las diferencias entre desinfeccin, esterilizacin y lavado. Explica las tcnicas para lavado y desinfeccin en el laboratorio clnico. Cita los detergentes y desinfectantes utilizados en el laboratorio clnico. Reflexiona sobre la composicin y utilidad de los detergentes y desinfectantes.

COMPETENCIAS A DESARROLLAR
Participa en las actividades para la comprobacin de la

presencia de trazas en el material de vidrio expresando sus ideas abiertamente sobre las posibles interferencias en los anlisis clnicos y plantea soluciones concretas.. Asume la importancia de la esterilizacin en el laboratorio. Clasifica y explica los mtodos de esterilizacin. Explica la utilidad de cada uno de los mtodos de esterilizacin. Trabaja en equipo en la organizacin de los materiales en el laboratorio .

SUB-NCLEOS TEMTICOS
Conceptos

bsicos de limpieza, desinfeccin y esterilizacin: limpieza, lavado, antisptico, desinfectantes, detergentes, asepsia, esterilizacin. Diferencias entre desinfeccin, esterilizacin y lavado. Tcnicas para el lavado de la cristalera, material de plstico, otros materiales. Desinfectantes y detergentes especiales: cloro, Mucasol, formaldehido, otros. Clasificacin de los desinfectantes. Composicin de los detergentes, caractersticas de los detergentes.

Pruebas para verificar el adecuado lavado: prueba visual, prueba del escurrido, prueba del rojo de metilo y de la bromo sulfoftaleina sdica. Control de calidad del lavado material de laboratorio. Importancia de la esterilizacin en bacteriologa y en otras reas. Mtodos de esterilizacin: clasificacin de los mtodos de esterilizacin y fundamento de cada uno de los mtodos de esterilizacin. Utilidad de los mtodos de esterilizacin. Organizacin adecuada de los materiales despus de lavados.

CONCEPTOS BSICOS LIMPIEZA

Remocin del polvo, basura, residuos, desperdicios etc. Proceso de separacin por medios mecnicos y/o fsicos de la suciedad depositada en las superficies inertes. Su agente bsico es el detergente.
Destruccin de las formas vegetativas, no necesariamente las esporas, su objeto es la destruccin de microorganismo mediante agentes de naturaleza qumica (desinfectantes y antisepticos), con el fin de disminuir el nmero de formas vegetativas a niveles mnimos

DESINFECCIN

DESINFECTANTE:

Sustancia qumica que inhibe o destruye microorganismos al aplicarla sobre material inerte

CONCEPTOS BSICOS

DETERGENTE: Sustancia que tiene la capacidad de "descomponer" otras molculas. Generalmente su forma de accin es por carga elctrica. Producto cuya composicin ha sido establecida para una operacin de limpieza mediante el desarrollo de los fenmenos de DETERGENCIA. Proceso por el cual las suciedades son separadas del sustrato sobre el que estaban retenidas, y puestas en estado de disolucin o dispersin

ASEPSIA
Aquellas condiciones en las que se impide el desarrollo y la contaminacin por microorganismos. Puede alcanzarse mediante el uso de un antisptico o un agente fsico. Trmino que se aplica a los procedimientos usados para prevenir que los microorganismos progresen en un medio determinado (quirfano, laboratorio. etc.)

ANTISPTICOS
Agente que evita el desarrollo de los microorganismos ya sea por impedir su crecimiento o por matarlos. Generalmente se refiere a sustancias aplicadas al cuerpo humano o de animales domsticos. Son germicidas qumicos, agentes qumicos, pero que son para utilizar para la piel y no para superficies o instrumentos

ESTERILIZACIN
Proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto esterilizado est libre de microorganismos vivos. Proceso fsico o qumico que destruye toda forma de vida de vida microbiana, incluidas las esporas

DESINFECCIN, ESTERILIZACIN, LAVADO: DIFERENCIAS

DESINFECCIN: Se utiliza para eliminar muchos de los

microorganismos patgenos, aunque no siempre las esporas, de los objetos inanimados y en tejido vivo. No elimina sucio

ESTERILIZACIN: Se utiliza para alcanzar la

muerte de todas las formas de vida microbiana, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas. Solo se hace sobre objetos inanimados
LAVADO: No implica la eliminacin de microorganismos, se

utiliza principalmente para eliminar material slido: manchas diversas, metales, etc. Es el paso previo e imprescindible para conseguir una correcta descontaminacin del material

LIMPIEZA GENERAL
LAVADO MANUAL LAVADO A MAQUINA LIMPIEZA DE TRAZAS ANALTICA

Por Frotado

Por inmersin

Lavadoras automticas

Sistemas de ultrasonido

Trazas de metales

Trazas orgnicas

Arrastre mecnico del sucio. Por pao, esponja o cepillo de cerdas no metlicas

No hay arrastre Se sumergen completament e en sol. detergente los materiales de 20 a 30 min. Ideal para material de plstico

Utilizan chorros de agua y ligera agitacin tanto del agua como de los materiales.

Generan ondas de alta frecuencia que dan alternancia s de presin depresin.

cidos (HCl 1 N y/o HNO3 1N)

Lejas, alcohol, cloroformo

Enjuague H2O chorro y destilada

Enjuague H2O chorro y destilada

TCNICAS DE LAVADO
1 2 3 4

TUBOS DE ENSAYO Y BALONES AFORADOS C NUEVOS HCL 2% H O de H O

2 2

60

(24b H)

Chorro (3 veces)

Destilada (5 veces)

H2 O de Chorro

TUBOS DE ENSAYO Y BALONES AFORADOS USADOS H O de H O

2 2

Detergente

HCL 2%

Chorro (3 veces)

destilada (5veces)

TCNICAS DE LAVADO
1 2 3 4

H2 O de Chorro fra

Detergente HCl 2%

H2 O de Chorro (3 veces)

H2 O Destilada (5 veces)

5 4

PORTAOBJETOS NUEVOS
HCL 2% H2 O de Chorro (3 veces) H2 O destilada (5veces)

Desinfectante

PORTAOBJETOS USADOS

Detergente (24H)

H2 O de Chorro (3 veces

Agua destilada (5 veces)

COMPOSICIN: Surfactantes: Estn SURFACTANTES presentes en porcentajes del 8 y AGENTES ABLANDADORES 10 % y son los responsables de AGENTES AUXILIARES formar las micelas y as remover ENZIMAS el sucio.
Surfactantes aninicos como el laurilsulfato de sodio, ms representativamente en los cuales una cadena de hidrocarburo est directamente unida al azufre.

Estn presentes desde el 5 al 25 %. Potencian la accin de los surfactantes porque pueden acomplejar iones calcio y sodio presentes en el agua y mantienen la alcalinidad del medio. Los ms conocidos son los polifosfatos, zeolitas cuya estructura molecular permite la retencin de los iones actuando como a la Agentes auxiliares. Ayudan tamiz, EDTA que es un agente fluidez del de polvo o del lquido acomplejante iones calcio.

Agentes ablandadores:

dependiendo de las caractersticas del detergente. Los ms usados son el sulfato de sodio y el borax (borato de sodio hidratado).

Enzimas (0,75 %). Se aaden a los detergentes para ayudar a limpiar la suciedad de origen biolgico como grasa o sangre
El carbonato y el sulfato de sodio tienen una accin alcalina, ayudan a neutralizar la suciedad, que la mayora de las veces es de tipo cido. El carbonato tambin contribuye al ablandamiento del agua, aunque resulta menos efectivo que los fosfatos. Los compuestos fosfatados (polifosfatos) retienen las sales de calcio y de magnesio del agua dura, ablandndola facilitando la limpieza.

Humectacin: Capacidad de mojar ms, es decir una misma gota de agua es capaz de abarcar una mayor superficie de contacto, por reduccin de la tensin superficial del agua

Suspensin: Consiste en dejar la suciedad o partculas de suciedad en solucin, evitando que estas se vuelvan a depositar

Penetracin: Capacidad de penetrar o introducirse en las superficies porosas sucias o en la suciedad

Emulsin: Es la dispersin o suspensin de finas partculas de uno o ms lquidos en otro lquido

Dispersin: promueve la separacin de la suciedad adherida mediante una desfloculacin de las partculas, a travs de la superacin de las fuerzas cohesivas ejercidas entre las partculas individuales

COMO DEBE SER UN DETERGENTE DE USO EN EL LABORATORIO?

Gran poder humectante, emulsionante y dispersante. Inmediata miscibilidad con cualquier tipo de agua.

Reaccin neutraBajo poder espumgeno

No txico Escurrido rpido y total sobre superficies brillantes, sin dejar pelcula opaca.

Biodegradable en concentraciones bajas

No debe daar durante el lavado por inmersin a los objetos delicados

MARCAS COMERCIALES
Detergente lquido, alcalino, para lavado por inmersin, por frotado o en bao de ultrasonidos. El detergente universal para aparatos de laboratorio e instrumentos de vidrio, porcelana, plstico, goma y metal. Bacteriosttico y se utiliza para la descontaminacin de utensilios radioactivos. El material queda limpio sin ayuda mecnica en aprox. 10 a 30 min, reemplaza la mezcla sulfocrmica, exento de cloro y de lcalis custicos, no es venenoso ni es agresivo, es respetuoso con la piel, tiene bajo contenido en fosfatos y biodegradable.

Composicin: > 30% fosfatos, < 5% tensioactivos aninicos, inhibidores de corrosin, productos auxiliares

Detergente aninico, ideal no solamente para la limpieza de contaminantes de todas las formas de utensilios de vidrio de laboratorio, sino tambin de artculos de metal, plstico, cermica, porcelana no contiene amonaco, sin embargo, contiene EDTA

Detergente lquido libre de fosfatos, de bajo espumado, para uso en lavadoras automticas y aparatos limpiadores manuales y ultrasnicos. Presenta una formulacin recomendada para artculos de vidrio, metales, plstico, cermica, porcelana, hule. Se enjuaga hasta niveles de residuo de no-interferencia, algunas veces conocido como "de enjuague libre

SUSTANCIAS QUMICAS QUE INHIBEN O DESTRUYEN MICROORGANISMOS AL APLICARLA SOBRE MATERIAL INERTE.

La actividad antibacteriana est relacionada con: - El tiempo de exposicin. - La temperatura. - La concentracin de la solucin

El mecanismo de accin depende de 3 mecanismos bsicos:

1. Capacidad de coagular o precipitar protenas. 2. Alterar las caractersticas de permeabilidad celular 3. Toxicidad (envenenamiento) de los sistemas enzimticos de las bacterias.

Segn su accin sobre los microorganismos se pueden dividir en dos categoras:

BACTERIOSTTICOS

BACTERICIDAS

Impiden el crecimiento y la multiplicacin. Ejem: Impiden la accin de la ARN polimerasa

Destruyen o matan

Las propiedades de desinfeccin del cloro en agua se basan en el poder de oxidacin de los tomos de oxigeno libre y reacciones de sustitucin del cloro.

Segn su capacidad de destruccin

De nivel bajo De nivel medio De nivel alto

Derivados de amonio cuaternario, son activos contra la mayor parte de bacterias. Elimina solo formas vegetativas y algunos hongos Hexaclorofeno, mercuriales

Destruyen todos los microorganismos pero no activos contra esporas. Elimina formas vegetativas de bacterias, hongos y virus, pero no todos los virus, rompen las paredes y membranas celulares, precipitan las protenas e inactivan las enzimas. Fenoles, alcoholes, clorados

Destruyen todas las formas de microorganismos y esporas incluyendo los virus resistentes. Alquilacin de protenas y ac. nucleicos: formaldehidos: formol 2%, glutaraldehido 2%, oxido de etileno,

Segn su naturaleza:
DESINFECTANTES VOLTILES DESINFECTANTES NO VOLTILES

OXIDO DE ETILENO, TER, CLOROFORMO, ACETONA, TOLUENO, ETC.

LISOL, FENOL, FORMALDEHIDO, HIPOCLORITO DE SODIO, ETC

PRUEBAS PARA VERIFICAR EL ADECUADO LAVADO: CONTROL DE CALIDAD

Prueba visual
Prueba del escurrido
se

Indicador*
se Baan

Percibimos Vista

Sumergen

en
Agua destilada
y

los
Utensilios

color

descarta

Debe correr

Rosado

Amarillo

Sucio macroscpico

Uniformemente Acida
Descarta

reaccin Bsica
Descarta

*Rojo de metilo (1:80) Bromosulfoftaleina Verde de bromocresol

Sucio microscpico

Detergentes

Importancia de la esterilizacin en bacteriologa y en otras reas del laboratorio

Para evitar la transmisin de las enfermedades y las infecciones. Para eliminar microorganismos de diferentes materiales y as evitar su deterioro y alteracin.

RESULTADOS CONFIABLES

ESTERILIZACIN
SECO

*Flameado DIRECTO *Llama directa

UTILIDAD:
CALOR

Horno CONTROLAR O DESTRUIR DISTINTAS INDIRECTO de aire caliente POBLACIONES DE MICROORGANISMOS, HMEDO CON FUNDAMENTALES PARA EVITAR LA Autoclave FSICOS PRESIN 121C x 15' CONTAMINACIN LUZ DE MEDIOS DE UV CULTIVO, PLACAS, REACTIVOS EN SIN PRESIN 240 a ESTERILIZACIN *Tindalizacin 280 nm GENERAL, AS COMO LA PROPAGACIN DE MECNICO *Ebullicin *Pasteurizacin INFECCIONES * Membrana

Filtracin

(Millipore)
*Vidrio

QUMICOS DESINFECTANTE

ORGANIZACIN DE LOS MATERIALES

El material de vidrio limpio y seco se deber guardar en una gaveta para preservarlo del polvo. Se recomienda que los recipientes se taponen con algodn no absorbente, o se les cubra la boca con pequeas tapas hechas de papel o, de preferencia, con hojas delgadas de parafina o material plstico adherente (por ejemplo, Parafilm).

RECAPITULANDO
CONCEPTOS BSICOS TCNICAS DE LAVADO: LAVADO MANUAL Y A MAQUINA DETERGENTES: CARACTERSTICAS COMPOSICIN DESINFECTANTES CLASIFICACIN PRUEBAS: CONTROL DE CALIDAD VISUAL ESCURRIDO INDICADORES IMPORTANCIA DE LA ESTERILIZACIN EN BACTERIOLOGA ESTERILIZACIN: MTODOS FUNDAMENTO UTILIDAD ORGANIZACIN DE LOS MATERIALES DESPUS DE LAVADOS

no aprendes lo que te ensean sino lo que quieres aprender RAFAEL VIGNOLI

Esterilizacin: es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto esterilizado est libre de microorganismos vivos. Desinfeccin: es el proceso de destruir las formas de vida vegetativa (activa), pero no necesariamente las esporas. Antisptico: es un agente que impide el desarrollo de los microorganismos, ya sea por impedir su crecimiento o por matarlos. Generalmente se refiere a sustancias aplicadas al cuerpo humano o de animales domsticos. Llamamos condiciones de asepsia a aquellas en las que se impide el desarrollo y la

contaminacin por microorganismos. Pueden alcanzarse mediante el uso de un antisptico o un agente fsico Desinfectantes: Agentes que destruyen microorganismos que estn situados sobre superficies o instrumentos, segn su capacidad los desinfectantes se pueden dividir en tres categoras Detergentes. Se usan para lavar y sanear la piel, cabello, superficies, instrumentos, etc., por facilitar el arrastre mecnico de las bacterias por un chorro de agua. Adems, algunos tienen altas propiedades bactericidas. Destacanespecialmente los detergentes catinicos cuyo catin es un compuesto de Detergentes: Los agentes que rebajan la tensin superficial o agentes humectantes son empleados primordialmente para limpiar superficies. Su accin se basa en el arrastre de los microorganismos al englobarlos en la espuma. A algunos detergentes se les incorporan algunas sustancias qumicas para aumentar su poder germicida.