Mtodos de conservacin de cepas Congelacin

Mara Fernanda Del Pozo Gonzlez No Trinidad Marcos

 Consiste en bajar la temperatura hasta el punto de congelacin o por debajo de ste, pues se reduce el metabolismo drsticamente hasta el caso de prcticamente anularlo con nitrgeno lquido (-196C).

Sin embargo, existen una serie de problemas que debemos tener en cuenta. La formacin de cristales de hielo pueden romper las clulas, Al eliminar el agua lquida por convertirse en hielo existe una concentracin de sales que puede ser perjudicial. Para evitar estos problemas se deben utilizar suspensiones que contengan el mnimo de sales posibles as como utilizar agentes protectores como el glicerol (25%) o dimetilsulfxido (DMSO c.a. 10%) que neutralizan el efecto de las sales.

 El realizar el proceso de congelacin de una forma rpida o gradualmente no est claro. Algunos recomiendan una bajada gradual (1C/min) hasta -20C para posteriormente enfriar rpidamente. Sin embargo, la descongelacin debe ser rpida.

Las distintas temperaturas que se utilizan para la conservacin de los microorganismos por congelacin son: -30C: congelador de frigorfico. No se recomienda debido a la formacin de eutcticos (suspensin con distintos puntos de congelacin debido a los solutos que pueden daar a las clulas).

 -70C: nieve carbnica (CO2 slido) o ultracongeladores. Es el mtodo ms utilizado en los laboratorios de microbiologa. -196C: nitrgeno lquido. Se utiliza para la conservacin de bacterias, virus y lneas celulares. Existen varios problemas prcticos: el nitrgeno se evapora continuamente por lo que se debe rellenar regularmente; se deben utilizar recipientes que resistan bien estas temperaturas y que estn bien cerrados para evitar la entrada de nitrgeno lquido.