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DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE UN AMINOÁCIDO

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DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE UN AMINOÁCIDO Diana Lalaleo; Egda María Fernanda Garcés; Ing.

María Teresa Pacheco Universidad Técnica de Ambato, Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos Av. Los Shyris .Campus Huachi Laboratorio de Química de los Alimentos II Av. Colombia y Chile Campus Ingahurco. diani-4444@hotmail.com RESUMEN Los puntos isoeléctricos proporcionan información útil para razonar sobre el comportamiento de los aminoácidos y proteínas en solución. Así, la presencia de grupos ionizables en éstas moléculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad. Se realizo titulaciones de un aminoácido polar con carga y un aminoácido no polar, con NaOH para haciendo mediciones de pH en cada mL adicionado de ácido para encontrar los pKa del aminoácido; graficamos los resultados y determinamos su punto isoeléctrico de los aminoácidos fenilalanina e isoleucina. El pI de los á-aminoácidos monoamino-dicarboxílicos se encuentra a un pH intermedio entre los valores de pKa de los grupos carboxílicos y en el caso de los á-aminoácidos diamino-monocarboxí-licos entre los valores de pKa de los grupos amino los cuales fueron de la isoleucina . Palabras clave: aminoácidos, isoleucina, fenilalanina, punto isoeléctric,o amino, carboxilo 1. INTRODUCCION El comportamiento ácido-base de los aminoácidos reviste una gran importancia biológica, ya que influye a su vez en las propiedades de las proteínas de las que forman parte. Además, las técnicas para separar y analizar los aminoácidos componentes de una proteína se basan en gran medida en su comportamiento ácido-base. DOMINGUEZ, X. CANTU, L. R, HINOJOSA, D., ROJAS GARCIDUEÑAS CANO, J., (1989). Por lo cual el objetivo de este estudio es determinar el punto isoeléctrico de los aminoácidos isoleucina y fenilalanina a partir de pka de grupos carboxílicos y amino mediante la curva de titulación.

Los aminoácidos son compuestos orgánicos que poseen un grupo carboxilo y un grupo amino. Pueden ser α, β, γ, δ aminoácidos. En la naturaleza existen distintos tipos de aminoácidos que desempeñan diferentes funciones, sin embargo, los aminoácidos que forman parte de las proteínas son todos ellos α-aminoácidos. los aminoácidos existen en disolución, y cristalizan a partir de las disoluciones, en forma de iones dipolares A pH neutro el grupo carboxilo cede un protón y queda cargado negativamente y el grupo amino capta un protón y queda cargado positivamente. Así, los aminoácidos pueden comportarse como ácidos o como bases según el pH del medio; se dice que son sustancias anfóteras. Existe un valor de pH llamado punto isoeléctrico (pI) para el cual el aminoácido está compensado eléctricamente (carga neta = 0). pI = (pKa¹ + pKa²)/2 ROWN, T., LEMAY, H. E., BURSTEN B., E. (1993). Las curvas de titulación de los aminoácidos son más complejas que las de los pares conjugados ácidobase corrientes. Esto se debe a que cada aminoácido posee dos grupos funcionales capaces de aceptar o ceder protones (amino y carboxilo), cada uno de los cuales tiene su propio pK y comportamiento ácido-base característico. Por otra parte, algunos aminoácidos presentan cadenas laterales (R) con grupos funcionales que son potenciales dadores o aceptores de protones, y que por lo tanto también influyen de manera determinante en sus propiedades ácido-base. BURTON, D. J. ROUTH, J.L. (1990).

2.

METODOLOGIA Y MATERIALES

En un dos matrazes aforados, se preparo 25 ml de una solución 0.1 M de dos aminoácidos tales como isoleusina y fenilalanina, acidulando hasta pH cercano a 1, con el HCl 1 M. Se Enraso una bureta de 50 ml con el NaOH1 M y se procedió a titular la solución de los aminoácidos con el NaOH1. se tomo nota del pH que adquiere la solución del aminoácido después de cada 0,5 ml de título añadido se continuó la titulación hasta llegar a pH 12.

3.

DATOS OBTENIDOS

5 2 2.88 2.5 1 1.54 PI 6.5 4 4.10 1.77 13.5 6 Ph fenilalanina) 6.Tabla 1.74 10.59 COOH pKa2 9.5 3 3.01 14 12 10 pH 8 6 4 2 0 0.5 5 5. titulación de la solución de Isoleucina ( NaOH añadidos y pH alcanzado) Grafica 2: Curva de titulación de Fenilalanina ml NaOH Inicial 0 1 2 2.5 2 2.a.5 4 4.06 NH3 pKa 1 Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Química de los Alimentos II 4.41 1.a.5 5 5.99 2.24 (a.60 12.49 9.5 1 1. Isoleucina) 6.35 12.5 3 3.71 9. 14 12 10 pH 8 6 4 2 0 0.5 5 5.5 3 3.09 8.50 Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Química de los Alimentos II Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Química de los Alimentos Tabla 2.27 9.54 11.13 P. titulación de la solución de fenilalanina ( NaOH añadidos y pH alcanzado) Grafica 1: Curva de titulación de Fenilalanina ml NaOH Inicial 0 0.12 2.92 10.88 NH3 5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .48 9.5 6 ml de NaOH COOH pKa 2 9.5 6 7 Ph (a.63 1.59 8.85 7.13 9.81 12.5 5 5.5 1 1.5 4 4.5 6 6.40 1.I pKa 1 1.5 7 ml de NaOH Elaborado por: Diana Lalaleo Fuente: Laboratorio de Química de los Alimentos II 2.64 12.5 3 4 4.5 2 2.42 2.

65 6. . Mediante el promedio se puede determinar el Punto Isoelectrico .05 para la isoleucina los mismo que son muy similares a los bibliogrficos (5.La curva de titulación realizada a partir de los aminoácidos isoleucina y fenilalanina se determino el punto isoeléctrico de cada uno mediante los datos que se muestran en la tabla N° 1 y tabla N°2 respectivamente previo a la titulación fue necesario acidular el ph para obtener la curva que se observa en las graficas 1 y 2 en la neutralización de dichos aminoácidos se identifican el pKa1 y el pKa2 que es la fuerza que tienen las moléculas de disociarse en el caso de pKa1 es respecto al primer protón se elimina de una molécula neutra en el caso de la fenilalanina se observa como a partir de 1.1 Reportar una tabla de valores bibliográficos de PI de aminoácidos.68 5. La determinación del PI es importante porque el orden de los aminoácidos en la molécula de proteína determina la relación mutua de las cadenas laterales y por consiguiente determina cómo la proteína interacciona consigo misma y el medio. la importancia de la determinación de PI es que permite conocer el tipo de proteína y la estabilidad . asi la grafica 1 presenta que el de la fenilalanina corresponde a 5.06 y de la fenilalanina es 5. De acuerdo con las ramificaciones que presentan los aminoácidos que conforman las proteínas así será su comportamiento anfotérico y la tendencia a formar enlaces de hidrógeno que son una característica trascendental en las proteínas.87 5.50 y 6.59 9.98 6.77 3. Esto ocurre porque un electron del oxigeno del grupo carboxilo es atraído por el grupo amino NH2 (ya que a al nitrogeno le sobraban dos electrones de valencia) que está en posición alfa y quedando este como grupo amoníaco NH3+ por lo que se determino que el punto isolectrico a partir del pKa del grupo amino y carboxilo presente en los aminoácido en el caso de la Isoleusina es 6. este dato puede variar dependiendo a la concentración de las soluciones de acido-base que se utilicen y a los reactivos porque presentan diferente fuerza para e el movimiento de las moléculas.02 5. CONCLUSIONES ANEXOS CALCULOS Punto Isolectrico Fenilalnina Isoleucina CUESTIONARIO 1. 5.97 5.48 5. estado donde presentó menor solubilidad.74 2. Y pKa2 que se refiere al segundo protón se quita de un negativamente cargada de iones. debido a la polaridad de sus grupos funcionales. El PI representa el pH en el cual el número de cargas positivas se iguala al número de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de la isoleucina y fenilalanina. AMINOÁCIDO Glicina Alanina Valina Leucina Isoleucina Fenialanina Tirosina Triptófano Serina Treonina Cisteína Metionina Ácido Aspártico Ácido Glutámico Histidina Lisina Arginina Asparginina Glutamina Prolina TABLA 3: Valores de pI de los á-aminoácidos.50.48 los grupos ionizables de Los aminoácidos tienen en su forma interna. PUNTO ISOELÉTRICO 5. amino. En el punto isoeléctrico la carga neta de los aminoacidos es cero (0).89 5.22 7. un estado llamada zwitterión.48 y 6. En los aminoáci-dos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos.07 5.74 10.41 5.66 5.88 de ph se incrementa significativamente al igual que en el aminoácido isoleucina donde es mas evidente en la curva representado en la grafica 2 y la solubilidad es muy baja . tal como se observa en la grafica del aminocido fenilalanina donde el pKa2 marca la inflexión superior donde la acides del grupo carboxilo ya es constante y la solubilidad aumenta.02) respectivamente.97 6.07 5.76 5.

trigo. (elaborar y reportar una tabla). carga – pH =pl… carga neutra BIBLIOGRAFIA ROWN. L. pH<pl…. CANTU.L. 3. amaranto. HINOJOSA. segunda edición . Química Orgánica y Bioquímica. cebada. chocho. PrenticeHall Hispanoamérica S. R.El pI de los aminoácidos neutros se localiza a pH ≈ 6-8. Tercer Grado de Enseñanza Secundaria Noriega Editores Limusa.. quinua. 3.2 Cómo se llama el estado en el cual un aminoácido presenta carga neutra? Punto isoeléctrico (pI): pH en que la carga neta del aminoácido es nula. DOMINGUEZ.F. México D. leche. en este punto elminoácido se encuentra en forma de ion dipolar. (1967) Fisiología Humana. (casi todos los aminoácidos esenciales el amaranto) .. Editorial Interamericana S. ROJAS GARCIDUEÑAS CANO.3 En qué estado se halla un aminoácido cuando el medio es ácido y porqué? Cationico por que al estar en un ambiente acido tiende a cargarse posititivamente. Química La ciencia central quinta edición. huevos.ar/quimicabiologica/Tabla %20pKa. Ciencias Naturales.U. México D. de C. J. LEMAY. Primera edición Sistemas Editoriales Técnicos S. Ile Carne Leche Huevos Soya Frejol Lenteja Trigo Cebada Quinua Amaranto Chocho Leu x x x x x x x x x x x Met x x x x x x x x x x x phe x x x x x x x x x x x Thr x x x x x x x x x x x Trp x x x x x x x x x x Val x x x x x x x x x x His x x x X X X X x X x X x x x x x x x x x x x Valina (Val) Leucina (Leu) Treonina (Thr) Triptófano (Trp) Histidina (His) Fenilalanina (Phe) Isoleucina (Ile) Metionina (Met) En conclusión estos alimentos poseen todos los aminoácidos esenciales. BURSTEN B.F. soya. México. J. (1993). fréjol..A. México D. (1990). carga + pH>pl…. E. (1989). BURTON. A. D.qb.4 Consultar qué aminoácidos se hallan presentes en los siguientes alimentos: carne. E.. T. GUYTON. H.uba. ROUTH.fcen.Fuente: http://www. J.F.html 3. así como en pequeñas cantidades equimolaresde aniones y cationes y una pequeña fracción de aminoácido no ionizado. X. lenteja..A.A. D.

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