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VALIDACIN DE MTODOS MICROBIOLGICOS Y BIOLGICOS

Referencia USP 29, Farmacopea Mexicana Validacin de mtodos analticos AEFI

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Ensayos biolgicos
Los mtodos biolgicos se emplean para determinar la potencia o el contenido de ciertas elementos que no pueden ser ensayados por otros mtodos qumicos o fsicos

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El principio de un ensayo biolgico


Es la comparacin de la respuesta de la sustancia patrn (o de referencia) de concentracin conocida con la del producto a ensayar, con una probabilidad determinada
Los ensayos biolgicos como su nombre lo indica, utilizan materia viva (animales, clulas, microorganismos entre otros)
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Ensayos biolgicos
Se dividen en ensayos cualitativos y cuantitativos

Ensayos cualitativos
En los cualitativos se identifica una sustancia por alguna reaccin caracterstica producida en una especie particular de entidad biolgica

BBL

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Ensayos biolgicos
Ensayos cuantitativos
Los ensayos cuantitativos, permiten determinar la potencia o concentracin de un activo en la muestra
Valoracin por cilindro- placa o en placa : Difusin Valoracin turbidimtrica

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Ensayos biolgicos

Pueden ser difciles de "validar" "Validez" se hace prcticamente caso por caso

Lo recomendables es: Cumplir estrictamente las monografas de los Ensayos biolgicos en las farmacopeas

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Validamos todos los mtodos microbiolgicos?

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Requieren validacin

Ensayos de lmites microbianos Recuento microbiano Ensayo de esterilidad Ensayo de eficacia de preservativo Programa de control de ambiente Ensayos biolgicos

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Validacin de ensayos microbiolgicos

Es virtualmente imposible validar completamente los procedimientos de ensayo para cada microorganismo
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LA VALIDACIN DEL MTODO DEBE DEMOSTRAR:

Que cualquier sustancia inhibitoria presente en la muestra ha sido neutralizada/inactivada o diluida a niveles por debajo del nivel inhibidor. La capacidad de los medios para promover el crecimiento de los microorganismos que puede afectarse por el proceso de preparacin del medio, por los procesos de esterilizacin y de almacenamiento, entre otros.
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Actividades preliminares:
Neutralizar/inactivar o diluir las sustancias inhibidoras. Enfrentamiento peridico de los medios. Tener los mtodos normalizados Tener los Equipos de medicin calibrados.

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Parmetros que deben incluirse


Temperatura y tiempo de incubacin Todos los microorganismos no pueden crecer en los medios Variaciones en los medios puede afectar la recuperacin Desinfectantes o preservativos inhibidores Muestra

procedimientos manejo, almacenamiento, transporte


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Parmetros que deben incluirse

Mtodos
incorporacin en placa / diseminacin en placa filtracin por membrana Nmero ms probable

Tamao de la muestra Dilucin de ensayo

BBL

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Parmetros que deben incluirse

Condiciones de la filtracin por membrana Condiciones de incubacin Criterios de aceptacin


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Parmetros que deben incluirse

Microorganismos de enfrentamiento para la validacin


Los recomendados por las farmacopeas.

Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Escherichia coli Candida albicans Aspergillus niger

Tamao del inculo 10 100 ufc totales inoculadas en de 0.1ml a 100mL de la solucin de ensayo.

Los microorganismos deben ser enfrentados por separado y no mezclados en un ensayo

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Requerimientos de la validacin de ensayos de esterilidad

pH, promocin del crecimiento y esterilidad de los medios Ensayo de la ESTSIS (comprobacin del medio Control ambiental Controles negativos Microorganismos de enfrentamiento segn USP
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Unidades y estndares de referencia

La potencia de los antibiticos est especificada en Unidades o g de actividad. La preparacin de los estndares se puede en algunos casos con anticipacin como una solucin madre y las diluciones el da de la ejecucin del ensayo.
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Pruebas de aptitud de los Deben cumplir medios


Prueba de promocin de crecimiento Estabilidad de los medios preparados.

Para un mes de almacenamiento, en envase cerrado, verificar cada 2 semanas Para un ao de almacenamiento, en envase impermeable y bien cerrado, verificada cada 3 meses.
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Reporte de Validacin
n Objetivo y alcance del mtodo, aplicabilidad o Tipo de analito y la matriz sobre la que se hizo la validacin, p Detalles del analito, reactivos, estndares de referencia y control y estabilidad de las muestras preparadas. q Procedimiento para la verificacin de la calidad de los estndares y reactivos qumicos usados r Condiciones de seguridad
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Reporte de Validacin
sParmetros del mtodo tParmetros crticos establecidos a travs del test de robustez uListado de equipos, funcionamiento, condiciones de desempeo. IQ,OQ,PQ v Detalle de las condiciones y cmo fue realizado el proceso, incluyendo la preparacin de la muestra wTratatamiento estadstico y clculos realizados
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Procedimientos de control rutinario


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Reporte de Validacin
Registros como cromatogramas, espectros y curvas de calibracin 13 test de aceptacin de las variables
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Resultados de la incertidumbre de la medicin 15 Criterios para revalidacin


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Persona que desarroll y valid el mtodo inicialmente


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Resumen y conclusiones
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