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INTRODUCCIÓN

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Práctica 1

Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae

UNIVERSIDAD POLITECNICA DE PACHUCA

LABORATORIO DE FISFER
0

FERMENTACIONES INDUSTRIALES

PRÀCTICA 1: “Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae”

M. en C. Jorge Álvarez Cervantes

GRUPO: 27265

INTEGRANTES Hernández Hernández Yenni Leidy Luna Valdez María Ofelia Marcelino Pérez Gabriel Reyes Mata Silvia Denisse Sánchez Martínez Rosa Gloria

FIRMA

MAYO – AGOSTO 2013

FECHA DE ELABORACION DE LA PRÁCTICA: 22 DE MAYO DE 2013 FECHA DE ENTREGA DEL REPORTE: 29 DE MAYO 2013

Ingeniería en Biotecnología

Fermentaciones Industriales

etanol. sino también por la posibilidad de manipular el proceso.  Antibióticos: bacitracina.  Esteroides: cortisona. También es posible clasificar a las fermentaciones por la presencia o ausencia de oxigeno molecular durante el proceso. etc. hidrocortisona. Prescott. (M. penicilina. Los procesos se pueden denominar. dióxido de carbono y agua. butanol. testosterona. y en el que el ATP se produce normalmente por fosforilación a nivel del sustrato (T. 2. Esteptomiciana. Es de gran importancia conocer las rutas bioquímicas de degradación de compuestos orgánicos.  Aminoácidos: lisina. neomicina. el proceso de producción del metabolito de interés se desarrolla en ausencia de oxigeno. fumárico. metionina. 2009). vegetales microscópicos de una sola célula. por lo que controlar la presencia de oxígeno para incrementar la producción (Pares Arras. Stanier. Mientras que la fermentación anaerobia. Existen varias rutas. 2009). ya que ello ayuda a determinar que compuestos se obtendrá.  Ácidos orgánicos: acético. valina. Madigan. el aceptor final de electrones es el oxígeno. el ciclo de Krebs que ayudan a transportar electrones durante el metabolismo aerobio y la cadena respiratoria (T. M. láctico. más específicamente hongos. en este proceso los microorganismo producen mucho menor energía que los aerobias y por suplir sus necesidades de energía metabolizan mayor cantidad de azucares. su presencia implica el desarrollo del microorganismo y la producción del compuesto fundamental biomasa. 2002). triptófano. Madigan et al. V. (García Garibay. El pH más favorable para ella se encuentra entre 3-5 y 4-5. Clark. 2005) Las levaduras son organismos vivos. los productos finales son sustancias orgánicas. 2002). lo cual conlleva cambios químicos en las sustancias orgánicas (Y.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae INTRODUCCIÓN La fermentación es el catabolismo anaerobio de un compuesto orgánico en el que el compuesto sirve tanto de donador de electrones como de aceptor como de aceptor de electrones. crecen bien en un medio constituido por aun azúcar.3-butanodiol. & P. glicerol. Son diversos los productos que se pueden obtener de una fermentación tales como:  Alcoholes y solventes: acetona. fermentación aerobia y anaerobia. sin embargo únicamente las más relevantes son la dela glucolisis (Vía Embden-Meyerhof-Parnas). fosfatos y extracto de lavadura. Martinko. cítrico. Dunlap. El proceso de fermentación es producido por acción de las enzimas. itacónico. riboflavina. 1 En la fermentación aerobia. por tanto elaboran más metabolitos. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . 2005). glucónico.

2005). OBJETIVO 2 Determinar el sustrato (carbohidratos) a que la levadura Saccharomyces cerevisiae metaboliza más rápidamente teniéndola a diferentes temperaturas (ambiente y 37 °C) y al mismo tiempo entender el cambio que sufren las moléculas de los carbohidratos. y otra parte quedan en la masa del pan. La mayor parte de los azúcares que desdobla la levadura los utiliza la propia levadura para vivir y desarrollarse. su asimilación por el microorganismo y las distintas temperaturas a las que se someterán. HIPÓTESIS La fermentación que se llevará a cabo dependerá directamente del tipo de carbohidrato. PROCEDIMIENTO: 1) Activación de la levadura Se pesan 9g de levadura Se activa en 90 ml de H2O a 37°C Levadura activada a 37°C Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae En la elaboración del pan las levaduras transforman el almidón (un azúcar complejo) en glucosa. METODOLOGÍA MATERIALES  5 vasos de precipitado de 50 ml  2 vasos de precipitados de 600 ml  1 vaso de precipitados de 150 ml  Termómetro  16 tubos de fermentación  1 vidrio de reloj  1 probeta de 100 ml  1 parrilla de calentamiento  1 gradilla  1 espátula  1 propipeta  5 pipetas de 10 ml REACTIVOS      90 ml Agua destilada 60 ml Lactosa 60 ml Almidón 60 ml Sacarosa 60 ml Glucosa MICROORGANISMOS 9g de Sacharomyces cerevisiae. dándole parte de su sabor y el color dorado del horneado (García Garibay. Lo hacen mediante la enzima amilasa (otras enzimas: glucosidasas y amiloglucosidasas).

15. 30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 2) Fermentación de Glucosa 1 Glucosa Se toman 15 ml de glucosa Se vacía 15 ml de glucosa en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con glucosa Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0.

Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 3) Fermentación de Almidón 2 Almidón Se toman 15 ml de almidón Se vacía 15 ml de almidón en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con almidón Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0. 15. 30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .

Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 4) Fermentación de Sacarosa 3 Sacarosa Se toman 15 ml de sacarosa Se vacía 15 ml de sacarosa en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con sacarosa Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0. 15. 30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .

30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . 15.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 5) Fermentación de Lactosa 4 Lactosa Se toman 15 ml de lactosa Se vacía 15 ml de lactosa en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con sacarosa Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0.

.3 10 1. Ambiente 20 30 40 50 Tiempo (minutos) Figura 1.1 7.2 9.3 3 5.1 4.1 Saccharomyces cerevisiae en Glucosa 10 9 8 7 CO2 (cm2) 6 5 4 3 2.5 8.4 5 Tiempo (minutos) 0 5 15 30 45 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D 0 0.7 0.7 4.5 4. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .9 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C 0 0.2 9.3 1.6 0. GLUCOSA Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A 0 0. lactosa 10% y almidón 10%) por la levadura Saccharomyces cerevisiae en diferentes temperaturas que fueron a temperatura ambiente y a 37 °C.1 3.2 3. Ambiente Tubo D a temp.5 2 1 0 0 0 0. sacarosa 10%.1 3 5. Tiempo y producción de CO2 por Saccharomyces cerevisiae al metabolizar glucosa.5 Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B 0 2.5 4.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae RESULTADOS En la presente practica se llevó a cabo la fermentación de azucares (glucosa 10%.4 5.Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.2 1.5 7.3 5. Tabla 1.9 Tubo A a 37 C Tubo B a 37 C Tubo C a temp.6 7.1 7.6 1.6 8.

2 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C 0 0.2 Tiempo (minutos) 0 5 15 30 45 6 Saccharomyces cerevisiae en Sacarosa 8 7 6 5.2 1. ambiente Tubo D a temp. Tiempo y producción de CO2 por Saccharomyces cerevisiae al metabolizar sacarosa.7 6.3 0.-Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae Tabla 2.7 6.6 6.5 1.9 Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B 0 2.8 0.3 4 4.5 1.4 4 4.3 5 6.2 Tubo A a 37 C Tubo B a 37 C Tubo C a temp.7 Figura 2.4 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D 0 0. SACAROSA Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A 0 2.4 2. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .3 2.9 6.5 2.8 1. ambiente 6.7 3.2 3.5 5 4.6 5 CO2 (cm2) 4 3 2 1 0 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (minutos) 2.2 4.4 5.

2 Tiempo (minutos) 7 0 5 15 30 45 Saccharomyces cerevisiae en Lactosa 0.5 Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B 0 0 0.2 0.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae Tabla 3.2 0.1 0.35 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C 0 0 0 0. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .4 0. LACTOSA Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A 0 0 0.5 Tubo C (Ambiente) Tubo D (ambiente) 0.2 0.4 CO2 (cm2) 0.-Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.35 Figura 3. 0.Tiempo y producción de CO2 por Saccharomyces cerevisiae al metabolizar Lactosa.1 0 0 0 0 10 0 20 30 40 50 Tiempo (minutos) Figura 3.4 0.15 0.2 0.1 0.6 Tubo A a 37 C Tubo B a 37 C 0.3 0.1 0..1 0.15 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D 0 0 0 0.-Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.5 0.1 0.3 0.3 0.

Lactosa Β-Galactosidasa + H2 O (Galactosa + Glucosa) Al igual que la sacarosa pasa lo mismo con la lactosa se obtienen dos monosacáridos que son galactosa y glucosa. 2. solo que aquí hay una diferencia ya que la galactosa lleva a cabo una serie de trasformaciones que se muestran en la imagen 4 hasta llegar α-D-glucosa-6-fosfato para entrar a la ruta de la glucolisis.6 kJ/mol de lactosa fementada Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . Tiempo que tardo la levadura en consumir el Almidón.8 kJ/mol de glucosa fementada. Etanol/CO2= Glucosa 238. ALMIDÓN Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D Tiempo (minutos) 8 No se observó producción de CO2 en las dos diferentes temperaturas durante los 45 minutos que duró el experimento por este sustrato. 3. Etanol/CO2= 477. Balance energético de azucares fermentados por levaduras Azúcar Estequiometria Energía libre 1. Etanol/CO2= 477. Sacarosa Sacarosa fosforilasa α-D-glucosa + 1-Pfructosa Al deshacerse el disacárido se obtienen α-Dglucosa + 1-P-fructosa los cuales son introducidos rápidamente a la vía de la glucolisis obteniéndose el doble de productos que con una sola molécula de glucosa.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae Tabla 4.6 kJ/mol de sacarosa fementada. Tabla 5.

suero hidrolizado y en algunos casos particulares puede utilizar etanol (Owen P. 2002) DISCUSIÓN En la Figura 1 se muestra la gráfica de producción de CO2. la cual fue construida con los datos de la Tabla 1 y se observa una mayor eficiencia de fermentación de la Glucosa a 37 °C que a temperatura ambiente al igual que cualquier otro carbohidrato probado en esta práctica ya que se obtuvo hasta 9. sacarosa. debido a que es el azúcar que metaboliza preferentemente las levaduras del genero Saccharomyces aunque en algunos casos prefiere fructosa como las levaduras del vino. Transformaciones de la Galactosa para entrar a la vía de la Glucolisis. 1989).Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 9 Figura 4. El rendimiento Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .5 cm2 de CO2 resultado de la fermentación de la glucosa en 45 minutos . Prescott. galactosa. maltiotriosa. Otras fuentes de carbono que puede utilizar Saccharomyces cerevisiae son: maltosa. . (M.

.9 cm2 en 45 minutos. en la Figura 2 se observa la producción gradual de CO2 conforme trascurre el tiempo con y sin temperatura. Madigan et al.51 g de etanol y 0. Madigan et al. 1989). 2009). Esta no fue tan eficiente como la glucosa. Madigan et al. debido q que tiene un sistema lactosa permeasa para transportar la lactosa dentro de la célula. Los datos arrojados en el experimento con Lactosa mostrados en la Figura 3 y Tabla 3 nos dicen que Saccharomyces cerevisiae metaboliza la Lactosa en mínimas proporciones casi nada a 37 °C y mucho menos a temperatura ambiente. que entran a la vía de la glucolisis. 2009). donde se hidroliza a glucosa y galactosa. estos datos se visualizan en Tabla 2. Otro factor que pudo afectar el experimento fue que no se midió el pH y es indispensable para la formación de subproductos el cual debe estar en un rango de entre 3-6 que son favorables para la actividad fermentaría (T. pero Owen P. En el caso del almidón no se observó producción alguna de CO2 con y sin temperatura (37°C) debido a que las levaduras Saccharomyces son incapaces de hidrolizar el almidón y las dextrinas (T. Sacarosa fue el segundo carbohidrato en mostrar una buena fermentación a 37 °C.49 g de CO2. obteniendo una máxima producción de CO2 de 6. en 1989 reporta que Saccharomyces cerevisiae puede fermentar la lactosa. el empleo de materiales basados en almidón para la fermentación alcohólica requieren la acción de enzimas extracelulares como las α y β-amilasas (glucoamilasas) y pululanasas (Owen P. ya que para llevar a cabo la fermentación tuvo que excretar una enzima para poder hidrolizar al disacárido (glucosa y fructosa conforman a la sacarosa). Probablemente no se obtuvieron estos resultados causados por las condiciones de temperatura y pH explicados anteriormente. Por lo cual.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae teórico posiblemente obtenido por gramo de glucosa es de 0. CONCLUSIÒN 10 Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . en este caso la enzima que excreto fue una invertasa. para que después los monosacáridos (glucosa y fructosa) sean transportados a través de la membrana celular ya sea por transporte activo o pasivo en donde intervienen permeasas producidas constitutivamente o inducibles para después entrar a la vía de Embden-Meyerhof en el caso de la glucosa y para la fructosa a la vía de la pentosas fosfato para después incorporarse a la vía de EmbdenMeyerhof (T. Y si el rendimiento quizá no se obtuvo porque no se tuvieron las condiciones óptimas como los son la velocidad de fermentación que aumenta generalmente entre los 15 y los 35 °C y nuestra temperatura utilizada fue de 37 °C. 2009).

En la fermentación alcohólica suceden dos reacciones consecutivas:   11 Ácido pirúvico Acetaldehído CO2 Acetaldehído + NADH+H+ Etanol + NAD+ Este tipo de fermentación ocurre en levaduras. produciéndose CO2 y alcohol etílico (etanol). En este tipo de fermentación es el ácido pirúvico producto de la glucólisis. crema agria y quesos. 2010) Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . Prescott. La diferencia entre estas fermentaciones inicia desde el microorganismo. este ácido pirúvico en condiciones anaeróbicas se descarboxila para transformarse en acetaldehído. el cual se reduce a alcohol etílico por acción del NADH2 convirtiéndose así en el aceptor final de los electrones del NADH obtenido en la glucólisis. 1 etanol y 1 CO2 por una molécula de glucosa fermentativa. ciertos hongos y algunas bacterias. si heterofermentativa se obtendrá 1 ATP. La acumulación del ácido láctico causa el dolor característico cuando ejercitamos los músculos excesivamente. Las moléculas de glucosa (presentes en la masa) sufren glucólisis originando ácido pirúvico. 1 lactato. debido a que la fermentación alcohólica es llevada por levaduras y bacterias. (M. durante el ejercicio fuerte y continuo. 2002) Los productos al fin de la fermentación en la alcohólica se obtiene etanol. Este proceso sucede también en el músculo esqueletal humano cuando hay deficiencia de oxígeno. mientras que la fermentación láctica depende si es homofermentativa se obtiene 2 lactatos y 2 ATP. (Respiracion Celular . CO2 y 2ATP. llamada lactato deshidrogenasa. como por ejemplo. mientras que la fermentación láctica es llevada por bacterias. el que acepta los electrones y se convierte en ácido láctico. Se realiza por las bacterias del ácido láctico gracias a la presencia de una enzima.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae CUESTIONARIO 1) Menciona las diferencias entre la fermentación alcohólica y láctica La fermentación láctica ocurre en algunas bacterias y gracias a este proceso obtenemos productos de origen lácteo tales como yogurt.

desarrollaron un mecanismo bioquímico sencillo y primitivo de producción de energía libre sin necesidad de este elemento. Las levaduras y bacterias causantes de este fenómeno son microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y contribuyen en gran medida al sabor de los productos fermentados.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 12 Figura 5.500 millones de años la atmosfera de la Tierra contenía muy poco oxígeno. Fermentación alcohólica 2) En términos evolutivos ¿Cuál de las dos rutas debió surgir primero? La fermentación alcohólica. 2008) Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . debido a que hace 3. por lo cual los organismo primitivos surgieron en una atmosfera sin oxígeno. (Macias. Ruta de la glucólisis Figura 6. Una de las principales características de estos microorganismos es que viven en ambientes completamente carentes de oxígeno (O2).

en la cual se oxida parcialmente la glucosa para obtener energía. obtendríamos ATP. & P. Dunlap. Prescott. R. México: Limusa.planetasaber.edu/~jvelezg/lab8. Barcelona: PEARSON EDUCACIÓN. M. Microbiologia Industrial . alcohol y CO2. 2009) 4) ¿Qué pasaría si en vez de llevar a cabo la fermentación láctica que nosotros llevamos utilizáramos la fermentación alcohólica? Tendríamos que cambiar el microorganismo por que la fermentación alcohólica es llevada por levaduras y bacterias. (1989). 2-3. 2010) 5) ¿En qué parte de una célula Eucariota debe ocurrir la fermentación? En el citosol. 2012) BIBLIOGRAFÍA Planeta Saber (2012).com/celulas_eucariotas/biology/32456/ García Garibay.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 3) ¿Cuál es el propósito de la fermentación? El propósito de la fermentación es que los microorganismos produzcan metabolitos o biomasa a partir de la utilización de sustancias orgánicas en ausencia o presencia de oxígeno. (2005).. S.A.S.uprm. (M. Martinko. W. (2009). R. (2002). (2005). (14 de Marzo de 2010). de http://academic. J. P. (2008). S. La descomposición de los sustratos se llevara a cabo por enzimas producidas por microorganismos para la finalidad. Stanier. M. M. mientras que la fermentación láctica es llevada por bacterias. Recuperado el 28 de Mayo de 2013. lactato. Bioquímica de los microorganismos.). D. 13 Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . L. M. Macias. MICROBIOLOGÍA (SEGUNDA EDICIÓN ed. Owen P. E. (Respiracion Celular . Madigan. Microbiología.). Cèlulas Eucariotas. Calvo Rebollar. Biología de los microorganismos (Duodécima Edición ed. Fermentación por Saccharomyces cerevisae de algunos tipos de glúsidos. Barcelona:REVERTÉ. de http://www. Recuperado el 28 de Mayo de 2013. Pares Arras. Respiracion Celular .. (2009). S.A. V. Lo que pasaría seria la obtención de productos en la fermentación láctica. B. etanol y CO2 mientras que en la alcohólica obtenemos ATP.pdf T. Primera Edición: ACRIBIA. A. Congreso de la Investigación. Clark. Argentina . (Hernandez.) Madrid. .. A. Madrid: McGraw-Hill. (2002). Barcelona: REVERTÉ. A. Biotecnología alimentaria. (Planeta Saber. Y. Trad. Hernandez. Biotecnología de la Fermentación.

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