MTODOS DE MEDICIN

ESTERILIZACIN

ESTERILIZACIN
Es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto esterilizado en el sentido microbiolgico esta libre de microorganismos vivos y sus esporas Concepto absoluto

La actividad metablica de un organismo es el resultado de la suma de todas las reacciones qumicas y como estas son influenciadas por la temperatura, en consecuencia el proceso vital tambin lo esta. Todos los microorganismos dependen del agua, su masa es en su mayora agua y todas sus actividades se realizan en medios acuosos.

PUNTO TRMICO LETAL Temperatura mas baja a la cual una suspensin de microorganism os mueren en 10 minutos.

TIEMPO TRMICO LETAL Tiempo mas corto necesario para matar una suspensin de microorganism os o esporas a una temperatura determinada y bajo condiciones especificas.

REDUCCIN DECIMAL DE TIEMPO

Tiempo en minutos para matar al 90% de la poblacin.

CALOR HUMEDO
Esterilizacin
Vapor a presin: autoclave 121 C a 15 lb/in Desinfeccin: agua fluyente y pasteurizacin.

CALOR SECO
Esterilizacin con aire caliente por 2 horas a 160C incinerizacin.

BAJAS TEMPERATURAS
No se usan para esterilizar ni desinfectar. Son tiles para para preservar cultivos de: Bacterias Levaduras Hongos De 4 a 7C

PRESIN OSMTICA
En la mayora de los microorganismos a concentraciones elevadas de sal (10 a 15%) y de azcar (50 a 70%) se inhiben, las clulas son deshidratadas y as no son capaces de metabolizar y crecer, se mueren o permanecen vivas pero en condiciones estticas.

RADIACIONES
Ionizantes: para esterilizar quirrgico sensible al calor materiales mdicos.
EQUIPO IONIZANTE

material y otros

FILTRACIN
FILTROS DE MEMBRANA Para esterilizar lquidos biolgicos (suero, solucin de enzimas, vitaminas o antibiticos) sensibles al calor. Membrana con porosidades de 0.01 a 10m.

CULTIVO MIXTO
Se utiliza en el estudio de las poblaciones mixtas de microorganismos en hbitats diversos, para determinar a los microbios especficos, se requieren muy diversas condiciones fsicas y medios de cultivo, por ejemplo: Suelo Agua Lecheetc.

CULTIVO PURO
Se emplea para separar distintas especies de microorganismos ya que un cultivo puro esta formado de poblaciones de clulas derivadas de una sola clula.

CULTIVO DE AMBIENTE CONTROLADO

Se relaciona con el estudio de los cultivos puros para mantenerlos viables por lapsos largos de tiempo, se les denomina cultivos tipo, con el fin de tener perfectamente identificado el microorganismo de los cultivos puros listos para usarse en laboratorios, procesos especficos industriales e investigacin.

CONTROL DEL CRECIMIENTO: MTODOS DE CONSERVACIN

Estos cultivos industrialmente se emplean: Para probar la efectividad de agentes quimioteraputicos nuevos y potencialmente efectivos. Como agentes de ensayo para antibiticos y vitaminas. Como cultivos de referencia que citan en las patentes de las compaas. Para estudios taxonmicos.

TIEMPO DE CONSERVACIN
En cada poblacin de microorganismos en cultivo puro se determina su tiempo de desarrollo en condiciones optimas, sin embargo este tiempo debe prolongarse si es posible para lograr su mantenimiento viable por varios periodos.

MTODOS DE CONSERVACIN Y VIABILIDAD

1. RESIEMBRA PERIODICA A MEDIOS FRESCOS Se consideran 3 aspectos importantes: medio de cultivo apropiado, la temperatura apropiada y el tiempo necesario para la resiembra.
BACTERIA MEDIO TIEMPO DE SIEMBR A 1 mes INCUBACIO N/TEMP. C ALMACENAM IENTO/TEMP. C 35

Neisseria sp.

Agar cistina tripticasa Agar nutritivo

35

Bacilius sp.

12 meses

28

10

Mycobacterium sp.

Agar glicerol

4 meses

30

10

2. CEPA DE ACEITE MINERAL Se cubre el agar en que esta creciendo el microorganismo con aceite mineral estril. El tiempo de mantenimiento varia segn la sp. pero generalmente es cuestin de aos. Tiene la ventaja de que se puede tomar una muestra del desarrollo que esta abajo del aceite e inocular medios frescos y aun preservar el cultivo original. Fcil y atractivo.

3. LIOFILIZACIN Mtodo eficaz, muchas sp preservadas por esta tcnica han permanecido viables e invariables por mas de 20 aos. Las clulas se secan rpidamente, mientras son congeladas mediante las siguientes etapas: la suspensin de la clulas se pone en pequeos frascos que se sumergen en una mezcla de hielo seco y alcohol (-78C). Los frascos se conectan inmediatamente a una lnea de alto vacio y se sella.

Ventajas de la liofilizacin: Gran longevidad Baja oportunidad de cambio en las caractersticas del cultivo Fcil almacenamiento.

4. ALMACENAMIENTO A TEMPERATURAS MUY BAJAS Las clulas se congelan con un agente protector (glicerol o dimetil sulfoxido). Los especmenes congelados se guardan en refrigeradores con nitrgeno lquido. Todos los cultivos que pueden mantenerse por liofilizacin pueden mantenerse por este mtodo.

CEPARIOS
Tambin llamado cultivo tipo. Conserva especies de microorganismos que se mantienen en el laboratorio para diversos estudios.

CULTIVOS Y REACTORES MICROBIANOS

CULTIVO DE SUPERFICIE

Medio base agar Se utiliza para proporcionar una ventilacin aumentada durante la incubacin de microorganismos aerobios Se recomienda para obtener organismos aerobios en grandes cantidades En frasco esttico se coloca el medio en capas poco profundas en recipientes adecuados: matraz de Fernbach, de Ckolle y las botellas de Roux.

Matraz de Fernbach

Botellas de Roux

CULTIVO EN SUSPENSIN
MATRAZ AGITADO En frasco rotatorio, los matraces se fijan a una plataforma, la cual se mueve circundantemente de manera que el medio liquido se agita constantemente durante la incubacin exponiendo de esta manera mayor superficie del medio a la fase gaseosa.

FERMENTADOR Se emplea con el fin de obtener ciertos productos del metabolismo anaerobio de los microorganismos por lo que se requiere la eliminacin del oxigeno y la abundancia de bixido de carbono:

1. Sistemas de anaerobiosis GasPak contiene hidrogeno mas un generador de CO2 y catalizadores de paladio a temperaturas de laboratorio. Al sobre GasPak se le agrega agua y se produce hidrogeno, este reacciona con el oxigeno en la superficie del catalizador formando una tira indicadora de anaerobiosis que cambia de azul a incolora en ausencia de oxigeno.

2. Sistema de anaerobiosis GasPak con cajas de petri inoculadas, el sobre generador GasPak y la tira indicadora de anaerobiosis. 3. Mtodo mecnico de incubacin y sustitucin.- el aire es expulsado mediante el bombeo del recipiente el cual se limpia varias veces con nitrgeno y finalmente se llena con gas nitrgeno, o mezcla de nitrgeno y bixido de carbono, mediante un manmetro se puede medir el gas que se saca o incorpora al sistema.

SISTEMA GAS-PACK

REACTOR CONTINUO Mecanismo que se utiliza para producir biocatalizadores (enzimas) de manera continua o de uso repetido controlado. Este principio se basa en el cultivo continuo de microorganismos mantenindolos en fase exponencial de crecimiento con ayuda del turbidiostato o quimiostato.

CUENTA DE MICROORGANISMOS
DIRECTAMENTE.microscopio o mediante un contador electrnico de partculas.

CUENTA CELULAR

INDIRECTAMENTE.- cuenta de colonias.

DESARROLLO O MAGNITUD DE LA POBLACION TOTAL

DIRECTAMENTE.- pesando o midiendo el contenido celular de nitrgeno.

MASA CELULAR
INDIRECTAMENTE.turbidimetra.

ACTIVIDAD CELULAR

INDIRECTAMENTE.- relacionando el grado de actividad bioqumica al tamao de la poblacin microbiolgica.

DETERMINACIN DEL NMERO DE CELULAS MEDIANTE CUENTA DIRECTA AL MICROSCOPIO

A.

B.

C.

Frotis teido + VOLUMEN (0.01 ml)+ rea (1cm). Cuenta del nmero de clulas en diferentes campos microscpicos al azar (# de campos)(promedio del # de clulas en cada campo)(100)= # de clulas por ml. Cmara de petroff.- portaobjetos excavado y cuadriculado. La desventaja de estos mtodos es que no se puede conocer si la clula es viable o no.

CONTEO POR FILTROS DE MEMBRANA

Uso practico y comn Filtros moleculares o de membrana con porosidad determinada y uniforme Determina el numero de bacterias en grandes volmenes de aire o agua La membrana con las bacterias que detuvo se pone en una almohadilla con medio nutritivo(medios especiales y/o colorantes especficos) Se incuban y los microorganismos desarrollan colonias que quedan en la superficie de la membrana.

DETERMINACION DE LA DENSIDAD CELULAR MEDIANTE TURBIDIMETRIA

La suspensin de clulas se deposita en una cmara clara de dimetro conocido El espectrofotmetro o colormetro mide la relacin de intensidad de luz incidente con la intensidad del rayo luminoso que sale de la cubeta, la densidad ptica del cultivo es proporcional a la densidad celular Se debe tener presente que tanto clulas vivas como muertas contribuyen con la turbiedad.

DETERMINACIN DEL NMERO DE CELULAS QUE PUEDEN MULTIPLICAR BAJO CIERTAS CONDICIENES DEFINIDAS PARA LA CUENTA EN PLACA
A.

Se basa en el principio de que cada organismo viable originara una colonia.

SELECCIN DEL PROCEDIMIENTO PARA MEDIR EL DESARROLLO MICROBIANO.

MTODO
1. CONTEO MICROSCOPICO

APLICACIONES
RECUENTO DE BACTERIAS EN LECHE Y VACUNAS.

2. CONTEO EN PLACA

RECUENTO DE BACTERIAS EN ALIMENTOS, SUELOS, CULTIVOS, ETC.

LECHE,

AGUA,

3. FILTROS DE MEMBRANA O MOLECULARES

4. MEDICION POR TURBIDIMETRIA 5. DETERMINACION DE NITROGENO 6. DETERMINACION DEL PESO

RECUENTO DE BACTERIAS EN ALIMENTOS, SUELOS, CULTIVOS, ETC.

LECHE,

AGUA,

ENSAYOS MICROBIOLOGICOS, ESTIMACION DE COSECHAS BACTERIANAS EN CALDO O SUSPENSION ACUOSA. MEDICION DE LAS COSECHAS BACTERIANAS EN SUSPENSIONES ESPESAS DE CULTIVOS PARA INVESTIGACIONES DEL METABOLISMO. MEDICION DE LAS COSECHAS BACTERIANAS EN SUSPENSIONES ESPESAS DE CULTIVOS PARA INVESTIGACIONES DEL METABOLISMO. ENSAYOS MICROBIOLOGICOS.

7. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD BIOQUIMICA

IMPORTANCIA DE LA MEDICION CUANTITATIVA DEL DESARROLLO MICROBIANO La medida cuantitativa es importante para determinar las diferentes respuestas de desarrollo bajo diversas condiciones ambientales y nutricionales dependiendo del inters de nuestro estudio.