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ACEITES ESENCIALES (AE)

Los aceites esenciales son una mezcla de lpidos o grasas de bajo peso molecular muy hidrofbicas, generalmente menos densos que el agua, aromticos y voltiles, producto del metabolismo secundario de las plantas, formados por terpenos, en particular monoterpenos y sesquiterpenos, as como sus derivados oxigenados, alcoholes, aldehidos, cidos y esteres terpenicos que se denominan respectivamente, monoterpenoides y sesquiterpenoides. (Batish et al., 2008; Bakkali et al., 2008; Bosquez et al., 2009; Stashenko, 2000). Se les llama aceites por su apariencia fsica y consistencia parecida a las grasas.

Se encuentran muy difundidos en el reino vegetal, especialmente en las fanergamas y se pueden encontrar localizadas en diferentes partes de la planta, por ejemplo en las hojas (albahaca, mejorana, menta, romero, salvia), en las raices (valeriana, vetiver), en la corteza (canela, cedro), en la cascara del fruto (limon, mandarina, naranja) o en los frutos (anis, cardamomo, hinojo). La cantidad y composicin del aceite varia de una especie a otra y dentro de los mismos gneros de la planta (Meza et al., 2007; Nejad et al., 2008).

Los AEs se clasifican con base en diferentes criterios: consistencia, origen y naturaleza qumica de los componentes mayoritarios (Goni et al., 2006). De acuerdo con su consistencia, los aceites esenciales se clasifican en esencias fluidas, lquidos voltiles a temperatura ambiente, blsamos de consistencia ms espesa y poco voltiles, y oleorresinas, las cuales tienen el aroma de las plantas en forma de lquidos muy viscosos o sustancias semislidas.

De acuerdo a su origen los AEs se clasifican en naturales, artificiales y sintticos. Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren modificaciones posteriores o sea que son los compuestos tal como se destilan de la planta; los artificiales se obtienen a travs de procesos de enriquecimiento del mismo aceite con uno o varios de sus componentes o mezclas de varios aceites o productos de

refinacin; y los aceites esenciales sintticos, son mezclas de componentes sintetizados, que emulan la composicin de la esencia natural (Stashenko, 2000). Desde el punto de vista qumico pueden ser clasificadas segn el predominio de algunos componentes como por ejemplo monoterpenoides (hierbabuena,

albahaca, salvia), sesquiterpenoides (aceite de cedro, jenjibre), y del tipo de mezcla donde los compuestos oxigenados son mayoritarios, entre estos los fenoles (clavo, canela, anis, albahaca, laurel, tomillo, entre otras) (Sheng-Yang et al., 2005; Bosquez et al., 2009; Stanshenko, 2000).

CANELA: La canela es de la familia Lauraceae, del genero Cinnamomum que comprende aproximadamente 250 especies, el rbol es nativo de la India, la canela tiene efectos biolgicos como la analgesia, es antisptico antiespasmodico,

afrodisiaco,astringente, carminativo, hemosttico, insecticida y parasitidica.

Clasificacin cientfica de la canela: Nombre cientfico: (Cinnamomum verum= Cinnamomum Zeylanicum) El nombre Cinnamomum procede del griego Kinnamomon. Reino: Plantae Divisin: Magnoliopsida Orden: Lauraceae Gnero: Cinnamomun Especie: C. verum Hbitat y caractersticas botnicas de la canela: El canelo es un rbol perenne de la familia de las laurceas de hasta 15m de altura, aunque las formas cultivadas no suelen superar los 10. Ramas muy

aromticas con doble corteza. Hojas ovaladas de hasta 18cm de longitud, con tres nervios bien marcados, coriceas, acuminadas con el borde liso y muy fragante. Haz rojizo cuando son jvenes, pasando a verde brillante y con envs verde plido en la madurez. Flores de olor desagradable en panculas, de color blanco rojo.

Frutos negros o pardos azulados, en baya, de 1cm de dimetro, muy picante. rbol procedente del sur de la India y de Sri Lanca, aparece cultivado en muchos lugares clidos del mundo.

Composicin qumica de la Canela: cidos: ascrbico, palmtico p-cumerico (corteza) Terpenos: alfa-pineno, alfa-terpineno, alfa- ylangeno, beta-pineno canfeno, cariofileno, limoneno, linalol (corteza) Camarinas (Corteza) Aceite esencial, rico en benzolhehido(planta) eugenol, famesol, gamma-terpineol, geraniol,isoeugeneol, cariofileno, 3-fenilpripenal (aldehdo cinamico) (corteza)

Contiene

resinas

cianogenicas

cido

hidrocianico

con

propiedades

antibacteriales y taninos con accin hemosttica y astringente (Martinez, 2003). Se ha encontrado que estos AEs son eficaces contra bacterias como Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterobacter spp., Lactobacillus spp. Y Pseudomonas. (Gutierrez et al., 2009; Gutierrez et al., 2008; Goni et al., 2009; Burt, 2004), y Salmonella enteritidis. (Bosquez et al., 2009), inhiben tambin el crecimiento en el pan de arroz de Eurotium spp, Aspergillus spp y Penicillium spp, pero su eficacia depende del pH y de la actividad de agua (Aw) (Guynot et al., 2005), tambin tiene efectos teraputicos, incluyendo antiemtico, analgsico, antiespasmdico, antisptico, hipoglicemico y preventivo contra el cncer (Wang et al., 2009; Kwon-Keun et al., 2009; Bosquez et al., 2009).

Algunas plantas segn sus variedades, aunque poseen los mismos AEs, presentan concentraciones diferentes. Ensayos realizados en cinco especies de canela, Cinnamomum cassia, Cinnamomum zeylanicum, Cinnamomum tamal, Cinnamomun burmannii y Cinnamomm pauciflorum para determinar el contenido

de cinamaldehido y eugenol, se encontro que la C. cassia y C. zeylanicum tenian la mayor cantidad de cinamaldehido y C. zeylanicum, C. burmannii y C. pauciflorum eran ricas en eugenol (Wang, 2009).

MTODOS DE EXTRACCIN DE LOS ACEITES ESENCIALES (AE)

Para obtener un AE de calidad hay que tomar en cuenta los diferentes factores que pueden alterar su composicin. Son varios los aspectos fundamentales que determinan la composicin qumica de los AEs, se incluyen la variedad genetica, el estado de desarrollo de la planta o sus organos, factores geograficos y ambientales como temperatura, luminosidad, humedad relativa, composicin del suelo; prcticas culturales, corte y operaciones postcosecha, y el mtodo de extraccin (Meza et al., 2007; Bosquez et al. 2009), siendo este ltimo el ms importante de todos los puntos mencionados.

Los mtodos empleados para la extraccin de AEs incluyen:

Enfleurage o enflorado, extraccin con solventes, extraccin por prensado, extraccin con fluidos sper criticos e hidrodestilacion o extraccin por arrastre con vapor (Guan et al., 2007; Ciani et al., 2002; Juarez et al., 2010). El mtodo de hidrodestilacion es el ms comunmente utilizado; la extraccin con fluidos supercriticos ofrece mejor perfil pero es el ms costoso y la extraccin con solventes, como hexano ha mostrado mayor actividad antimicrobiana que la hidrodestilacion. Los AEs son volatiles y fotosensibles por lo tanto necesitan almacenarse en recipientes hermeticos opacos o en la oscuridad y a baja temperatura con el fin de evitar cambios en la composicin (Burt, 2004).

Enfleurage o enflorado: fue usado por los ancestrales egipcios para extraer componentes aromticos del material vegetal (generalmente flores) y exudados. Su uso contino hasta el siglo XX, pero ahora no tiene importancia comercial. Las flores se ponen en contacto con un aceite vegetal de punto de fusin alrededor de

40oC, que acta como vehculo extractor, se extiende el material vegetal en bandejas de profundidad no mayor de 0.5 cm. El contacto puede durar de 3 a 5 das, momento en el cual se remueve el material y se remplaza por otro fresco, esta operacin se repite buscando la saturacin de la grasa y la impregnacin con el aceite perfumado; la grasa se funde y la mezcla se filtra para remover la materia slida. El aceite oloroso es extrado con alcohol, se filtra y se destila a vaco hasta recuperar como minimo un 80% del volumen del alcohol, quedando en el fondo un residuo llamado absolute (Archila, 2008; Martinez, 2003).

Extraccin con solventes: Previamente se muele el material a utilizar, para permitir mayor rea de contacto entre el slido y el solvente. Durante el proceso, el slido o el lquido, o ambos estarn en continuo movimiento (agitacin), y se realiza preferiblemente a temperatura y presin ambiente. El proceso puede ejecutarse por lotes o en forma continua. Los solventes solubilizan los aceites y extraen tambin otras sustancias como ceras (Martinez, 2003; Sanchez 2006). Los solventes ms empleados son: etanol, metanol, isopropanol, hexano, ciclohexano, tolueno, xileno, ligroina, eter etilico, eter isopropilico, acetato de etilo, acetona, cloroformo, finalmente se recuperan por destilacin y pueden ser reutilizados (Guan et al., 2007).

Extraccin por prensado: El material vegetal es sometido a presin, bien sea en prensas tipo batch o en forma continua. Dentro de estos se tienen los equipos tornillo sin fin de alta o de baja presin, extractor expeller, extractor centrfugo, extractor decanter y rodillos de prensa. En estos procesos la mezcla de aguaaceite se centrifuga a 5000 rpm durante 40 minutos y el AE recuperado se coloca a 3o C durante 4 horas, para solidificar gomas y ceras que se localizan en la superficie. El AE se guarda en recipientes oscuros a 12 oC. (Guan et al., 2007; Ciani et al, 2002; Del valle y Aguilera, 1999).

Extraccin con fluidos supercrticos: La extraccin con fluidos supercriticos, es una operacin unitaria que aprovecha el poder de disolucin de los fluidos, en

condiciones por encima de su temperatura y presin crticas. Es posible obtener extractos sin disolventes y la extraccin es ms rpida que cuando se utilizan disolventes orgnicos convencionales (Del valle y Aguilera, 1999). Las propiedades de la fase Liquida y/o vapor son las mismas, es decir no hay diferencia visible ni medible entre gas y lquido. La sustancia ms empleada es el CO2 que en estas condiciones presenta baja viscosidad, baja tensin superficial, alto coeficiente de difusin (10 veces ms que un lquido normal). El material vegetal cortado en trozos pequeos, licuado o molido, se empaca en una camara, el lquido supercrtico al penetrar a la muestra, solubiliza los aceites que son arrastrados, el solvente extractor (liquido supercrtico) se elimina totalmente por descompresin progresiva hasta alcanzar la presin y temperatura ambiente, as se disminuye la perdida de sustancias volatiles y se evita la formacin de sabores y olores extranos (Martinez, 2003). El CO2 no es toxico ni explosivo, ni incendiario, es bacteriostatico, clasificado por la FDA como GRAS (Generally Recognized As Safe). La temperatura y presin crticas para el CO2 son Pc 73 bar y Tc 31oC (Guan et al., 2007; Ciani et al., 2002; Del valle y Aguilera, 1999). Este mtodo presenta varias ventajas como: rendimiento alto, ecolgicamente compatible, el solvente se elimina fcilmente y se puede reciclar; adems las bajas temperaturas utilizadas para la extraccin no modifican qumicamente los componentes de los aceites (Martinez, 2003).

Hidrodestilacin o extraccin por arrastre con vapor: Es la tcnica mas comun para la obtencion de AEs, el material vegetal se rompe por efecto de la temperatura del vapor de agua (100oC) en un cierto tiempo. El agua caliente penetra y se difunde a traves de las membranas de las celulas de los tejidos, liberando el AE insoluble en agua, se condensa en el separador y se forman dos fases, una de AE y otra de agua a una temperatura menor que la del agua, (Vargas y Bottia, 2008; Wang et al., 2009), donde los vapores generados se condensan y se colectan. La ventaja del metodo es que no requiere solventes organicos y se obtienen aceites denominados aromas y sabores naturales

(Stashenko et al., 2003). Si el aceite presenta componentes solubles en agua, estos quedaran en la fase que puede comercializarse como tal, por ejemplo agua de rosas, agua de jazmin (Wang et al., 2009).

MECANISMOS DE ACCIN DE LOS ACEITES ESENCIALES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Los aceites esenciales al ser mezclas complejas de numerosas molculas con gran diversidad de grupos qumicos, la actividad antimicrobiana no se debe a un mecanismo especfico, ya que en las clula hay diferentes sitios donde pueden actuar y los eventos pueden llevarse a cabo en forma independiente, simultanea o consecuente. Bosquez et al. (2009) y Maguna et al. (2006), proponen como posible sitio de accin, la membrana celular donde los terpenoides surtirian efecto desencadenando una serie de procesos que podran provocar la muerte bacteriana. El carcter hidrofobico de los AEs les permite incorporarse en los lipidos de las membranas bacterianas y mitocondriales perturbando su estructura y consecuentemente su permeabilidad, dando lugar a la fuga de iones y otros contenidos celulares vitales, conduciendo finalmente a la muerte del

microorganismo (Bosquez et al., 2009). Los AEs tambin podran actuar sobre las protenas embebidas en la membrana citoplasmtica interfiriendo en la interaccin lipido-proteina y afectando la actividad de enzimas como la ATPasa, disminuyendo la produccin de energa requerida para el funcionamiento celular. Otra posible accin seria la interaccin directa de los componentes lipofilicos con las partes hidrofobias de la molcula de protena (Singh et al., 2008; Wang et al., 2009).

Algunas investigaciones de actividad antimicrobiana de aceites Aes de clavo y canela combinados (Valero y Salmeron, 2003; Burt, 2004; Goni et al., 2009), se realizaron para evaluar el crecimiento de bacterias Gram-negativas: Escherichia coli, Yersinia enterocolitica, Pseudomonas aeruginosa y Salmonella choleraesuis y cuatro bacterias Gram positivas Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes,

Bacillus cereus y Enterococcus faecalis. Se determin que ejercen efecto antagonico sobre el crecimiento de E. coli y sinergico en la inhibicion de L. monocytogenes, B. cereus y Y. enterocolitica.

En otros estudios, sobre el efecto antifungico del AE de canela (Valero y Salmeron, 2003), y aceite esencial de clavo (Barrera y Garcia, 2008), presentaron un efecto inhibitorio relevante sobre el crecimiento de Fusarium proliferatum y la produccin de aflatoxinas cuando se aplicaba en nueces que se almacenaban por varios das, determinndose que se puede aplicar con seguridad en alimentos en grano y semillas, como conservantes y como sustitutos de fungicidas quimicos. Tambien, Bosquez et al., (2009), determinaron efecto inhibitorio de extractos acuosos de clavo y canela a concentraciones de 5% y 10%, sobre el 100% del crecimiento micelial de Fusariun oxysporum, Rhizoctonia solany y Verticillium dahliae, hasta 72 horas de incubacin.

MTODOS PARA EVALUAR LA CAPACIDAD ANTIBACTERIAL DE LOS ACEITES ESENCIALES

Los metodos actualmente utilizados para evaluar la actividad antimicrobiana de los extractos vegetales son: Tcnica de difusin en agar: El mtodo consiste en aplicar una cantidad determinada del extracto en estudio, en un disco de papel que se coloca sobre la superficie de la placa donde se ha distribuido el inoculo con el microorganismo sobre el que se quiere ver el poder antimicrobiano. Por gradiente de concentracin, el extracto difunde alrededor del disco. La sensibilidad del microorganismo al extracto se relaciona con el tamao del halo de inhibicion del crecimiento bacteriano. Segun el diametro del halo de inhibicion, los microorganismos se clasifican en: no sensibles (d < 8mm.), sensibles (9mm. < d < 14mm.), muy sensibles (14mm.< d < 19mm.) y extremadamente sensibles (d > 20mm) (Tajkarimia et al., 2010; Burt, 2004).

Mtodo de dilucin en medio de cultivo y en agar: El extracto se incorpora al medio con agar cuando an esta lquido. Para lograr el rango de dilucin deseado se preparan una serie de placas con diferentes concentraciones del extracto. Los resultados se expresan como. Concentraciones Minimas Inhibitorias (CMI) o como Concentraciones Minimas Bactericidas (CMB). CMI se define como la menor concentracin del extracto que produce el 90% de reduccin en el crecimiento de las colonias. La CMB se define como la mnima concentracin del extracto que produce al menos un 99.9% de reduccin en el crecimiento de las colonias. Si se usan medios lquidos, el procedimiento es el mismo, solo que se usan tubos de ensayo p ara las diferentes diluciones. Ambos mtodos permiten obtener datos cuantitativos (Tajkarimia, et al., 2010; Burt, 2004).