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El cerebro no es un vaso por llenar, sino una lmpara por encender.

- Plutarco

Franchesca Muiz-Ramos Horas Ofic: M 2:00-4:00, W 10:00-11:00, j 3:00-4:00 B-367 Cubiculo 8B fmuniz07@gmail.com Miciberespaciocientifico.blo gspot.com

Clasificacin - Taxonoma - Categoras taxonmicas - Sistema binomial - Arbol filogentico universal - Dominio, Reino, Especie
Bacterias - Estructura bacteriana - Morfologa de bacterias - Tincin de Gram - Tcnicas de cultivo

Debido a la gran diversidad de organismos vivientes en la tierra el hombre los ha nombrado y categorizado a travs de cientos de aos. La taxonoma es la ciencia que usamos para la clasificacin e identificacin de los organismos. Segn las categoras taxonmicas, el dominio es el nivel taxonmico mas alto. Entre los dominios encontramos el dominio Bacteria. Las bacterias son microorganismos unicelulares con un amplio hbitat y de gran importancia para el hombre.

Entender la clasificacin de las bacterias y las caractersticas usadas para colocarlas en reinos y dominios. Identificar las estructuras bacterianas. Aprender a reconocer las bacterias de acuerdo a su morfologa. Practicar tcnicas de cultivo de bacterias.

Taxonoma - Clasificacin: estructura a los organismos en grupos o taxones en funcin de semejanzas o parentesco evolutivo - Nomenclatura: asigna nombres a los organismos. - Identificacin: determina a que grupo o taxn pertenece un organismo.

Categoras taxonmicas
Son los niveles de jerarquas en un sistema de clasificacin.

Dominio Phylum Clase Orden Familia Gnero Especie Subespecie (de importancia en estudios clnicos y ecolgicos)

Sistema Binomial El sistema de nomenclatura utilizado actualmente es el Sistema Binomial de Linneo . Usa un binomio (expresin de dos palabras). La 1a. palabra hace referencia al gnero y la 2a. Palabra hace referencia a la especie. Ejemplo: Escherichia coli

Dominio Phylum Clase Orden Familia Gnero Especie Bacteria Proteobacteria Gamma Proteobacteria Zymobacteria Enterobacteriales Enterobacteriaceae Escherichia Escherichia coli

Muestra las posiciones evolucionarias de los principales grupos de organismos vivientes, todos compartiendo un ancestro comn. La raz del rbol ha sido determinada por la secuencia comparativa del rRNA (RNA Ribosomal) Dominios. Taxn filogentico que incluye las tres lineas primarias: Bacterias, Archaea y Eukarya.

Bacteria y Archaea : representan las clulas procariotas Eukarya : representa las clulas eucariotas

Clula procariota: (antes del nucleo) el material gentico es una molcula circular llamado nucleoide, carente de membrana. Clula Eucariota: (verdadero nucleo) presentan nucleo rodeado por una membrana nuclear.

Caracterstica
Pared Celular con peptidoglicano Membrana nuclear Organelos limitados por membrana RNA Polimerasa simple Ribosoma (El nmero refiere al coeficiente de sedimentacin cuando es centrifugado) Lpidos de membrana

Bacteria
Presente Ausente Ausente Presente 70S

Archaea
Ausente Ausente Ausente Ausente 70S

Eukarya
Ausente Presente Presente Ausente 80S

Enlaces ester

Enlaces Eter

Enlaces ester

Sensibilidad al Cloranfenicol y Estreptomicina

Si

No

No

Arqueas:

Halogeometricum borinquensis

Haloterrigena thermotolerans

Clulas procariotas (estructura simple) Carecen de ncleo u organelos

limitados por una membrana


Tienen importancia positiva y negativa

Eran conocidas como algas azulverdosas

Organismos fijadores de nitrgeno


Abundantes en charcas y lagos

Categora taxonmica formada por Phylum Existen en la actualidad 5 reinos: - Prokaryotae, bacterias y algas llamadas Cianobacterias - Protista: organismos con una sola clula eucariota - Fungi: hongos, descomponedores, parsitos - Plantae: organismos que usan clorofila para captar la energa lumnica y convertirla en alimento (Fotosntesis). Son auttrofos. - Animalia: organismos hetertrofos

Unidad taxonmica bsica. Grupo de CEPAS con alto grado de similitud en sus propiedades.

La Cepa se define como un grupo de clulas genticamente idnticas que derivan de una sola clula

Fuentes de carbono y nitrgeno Componentes de la pared celular Fuentes de energa Productos de fermentacin Tipo nutricional Temperatura ptima y rango Relaciones con el oxgeno Mecanismos de conversin de energa Tolerancia osmtica Ph ptimo y rango de crecimiento Necesidades y tolerancia a la sal Metabolitos secundarios formados Sensibilidad a inhibidores metablicos y antibiticos Inclusiones de almacn o depsito

Forma Celular Tamao celular Morfologa de las colonias Tincin Cilios y Flagelos Mecanismo de motilidad Formacin de esporas Inclusiones celulares

Son Microorganismos unicelulares Descubiertas por Anton Van Leeuwenhoek (1674) Su tamao oscila entre 0.2 um y 5 um Se reproducen por fisin binaria (reproduccin asexual)

Estructura de la clula bacteriana. A-Pilis B-Ribosomas C-Cpsula D-Pared celular E-Flagelo F-Citoplasma G-Vacuola H-Plsmidos I-Nucleoide J-Membrana celular

Estructuras Internas: - Citoplasma: aspecto viscoso, contiene inclusiones citoplasmticas. - Material gentico: contenido en un nico DNA, no tiene envoltura.
- Espora: estructura compleja que se forma dentro de la clula para resistir condiciones ambientales desfavorables.

Estructuras externas: - Cpsula: sustancia mucoide formada por polisacridos. Impide la fagocitosis. - Pillis o fimbrias: pueden aparecer en el extremo o en toda la superficie de la clula. Ayudan a la adherencia y a la transferencia de material gentico entre bacterias. - Flagelos: filamentos largos ondulados responsables de la locomocin de las bacterias. Segn el nmero y localizacin de los flagelos, las bacterias se clasifican en * Atricas: no poseen flagelos * Montricas: un solo flagelo * Loftricas: 2 o ms flagelos en uno de los extremos * Anftricas: tienen penachos en ambos extremos * Pertricas: flagelos en toda la superficie celular

Los diferentes tipos de disposicin de los flagelos bacterianos. A. Montrico; B. Loftrico; C. Anftrico; D. Pertrico.

Envuelta celular: - Membrana citoplasmtica: compuesta de lpidos, protenas y citocromo. Regula el intercambio de sustancias entre el medio y el citoplasma. - Pared celular: su funcin es darle forma y rigidez a la bacteria. Est compuesta de peptidoglicano.

La morfologa de las bacterias debe considerarse desde dos puntos de vista: - Microscpico: como clulas individuales - Macroscpico: como colonias bacterianas, crecimiento en medios de cultivo slidos.

Formas esfricas o cocos: * diplococos: cocos en parejas * tetracocos: cocos en tetradas * estreptococos: cocos en cadena * estafilococos: cocos en racimos Formas en bastones o bacilos: * diplobacilos: bacilos en parejas * cocobacilos: bacilos con extremos ovalados * estreptobacilos: bacilos en cadenas * en empalizados: dispuestos uno al lado del otro

Formas helicoidales : * vibrios: ligermante curvados y en forma de coma * espirilos: en forma de hlice rgida * espiroquetas: en forma de hlice flexible

Caracterstica bsica para la identificacin de bacterias.


-

Segn el tamao pueden ser: * Pequeas o puntiformes (1 mm de dimetro o menor) * Medianas (hasta 4 mm de dimetro) * Grandes (mayores de 4 mm de dimetro) Segn el borde pueden ser: * Lisas (redondeados u ovalados) * Irregulares (aserrado, lobulado, rizado o espiculado)

- Segn el elevamiento pueden ser: * Semiesfrica o convexa * Plano-convexa * Plana o en disco * Plana con bordes elevados (en * Cerebroide crter) * Acuminada * Plana con centro elevado (huevo frito)

Segn la superficie (examinadas mediante luz reflejada) pueden ser: * lisas y brillantes * rugosas y sin brillo (mate) Segn la consistencia (examinadas con el asa) pueden ser: * seca y frgil * viscosa y pegajosa * cremosa * mucoide

Pigmentacin: algunas bacterias producen pigmentos en sus colonias como el Staphilococcus aureus (pigmento de color amarillo dorado) y la Pseudomona (pigmento verdoso).
Hemlisis: algunas bacterias tienen la capacidad de hemolizar los hematies en un medio como agar sangre, por ejemplo algunos Streptococos. Olor: algunas bacterias descompone sustratos que utilizan para su metabolismo desprendiendo sustancias que proporcionan un olor caracterstico a los cultivos.

Tincin diferencial utilizada en microbiologa para la identificacin de bacterias. Desarrollada por el bacterilogo Christian Gram en 1884. Clasifica a las bacterias de acuerdo a su tincin en grampositivas y gramnegativas. Los fundamentos de la tcnica de tincin de gram se basan en las diferencias entre las paredes celulares de gramositivas y gramnegativas

Tincin: cristal violeta (colorante primario), 1 minuto. Enjuague: se hace con agua Mordiente: Yodo o lugol (fijador), 1 minuto. Decoloracin: alcohol acetona. Enjuague: con agua. Tincin de contraste: Safranina (colorante de contraste), 1 minuto.

Bacterias grampositivas toman el colorante primario, se tien de violeta Bacterias gramnegativas toman el colorante de contraste, se tien de rosa Algunas bacterias son gram variables (poco comn) Ejemplos: Lactobacillus (grampositivos) y E. coli (gramnegativos)

Bacteria Gram +
Pared celular simple Capa de peptidoglucano gruesa No capa externa de lipopolisacridos Retienen cristal violetaIodo: color azul/violeta

Bacteria Gram Pared celular compleja Capa de peptidoglucano fina o delgada Capa externa de lipopolisacridos Retienen safranina: color rojo/rosado

Medios de cultivo Mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y condiciones fsicas ptimas permiten el buen crecimiento de microorganismos.

Existen diferentes tipos de medios de cultivos: - Medio sinttico: composicin qumica definida cualitativa y cuantitativamente. - Medio complejo: composicin qumica variable. - Medio enriquecido: gran exceso de nutrientes, til para microorganismos con grandes exigencias nutricionales. Ej: agar chocolate. - Medio selectivo: permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros. Ej: agar salado-manitol para ciertos Staphilococcus. - Medio diferencial: revela caractersticas fisiolgicas de los microorganismos. Ej: agar sangre.

Siembra de microorganismos - En medio lquido (inoculacin) - En medio slido (estriado)

Mycobacterium tuberculosis (Actinobacteria)

Chloroflexus (Chloroflexi)

Thermus aquaticus (Deinococcus-Thermus)

Oenococcus oeni (Firmicutes)

Bacillus cereus (Firmicutes)

Staphylococcus aureus (Firmicutes)

Bordetella bronchiseptica (Proteobacteria) Campylobacter jejuni (Proteobacteria)

Escherichia coli (Proteobacteria)

Vibrio cholerae (Proteobacteria)

Leptospira (Spirochaetes) Treponema pallidum (Spirochaetes)

Preparar laminilla con muestra de sarro


Procedimiento:

Gota de agua en laminilla Raspar sarro con palillo Pasar palillo en gota de agua Secar la laminilla utilizando lmpara de alcohol Derramar cristal violeta a la laminilla (2-3 gotas) Lavar exceso de tinte Secar con papel especial Observar preparacin a travs del microscopio Dibujar lo observado.

Observar laminillas
Bacterias - tincin gram Bacilos Cocos Otras morfologas

Dibujar lo observado

Observar bajo estereoscopio las placas Petri para identificar la morfologa de las colonias

Tomar muestra de aire, agua, suelo, entre otros, utilizando la tcnica a explicarse en el laboratorio Colocarla en las placas Petri conteniendo un medio de cultivo (TSA) utilizando las tcnicas aspticas correspondientes Cerrar con parafina y rotular las placas: nombre, seccin, clave, instructor. Incubar a 25C por 48 hrs Anotar y dibujar los resultados

Tomar en consideracin a las bacterias, no a

los hongos

Utilizar antibiticos, desinfectantes y/o antispticos para determinar su eficacia inhibiendo el crecimiento de bacterias
Inocular de forma estriada la muestra de

bacterias en el medio de cultivo Colocar 3 discos, impregnados con 3 diferentes sustancias qumicas, sobre el agar y un disco con agua (control) Rotular las placas Incubar a 37C, observar en 24 hrs y anotar/dibujar los resultados (medir la zona de inhibicin-cm)

Biology, Salomon, Berg, Martin Seventh edition Biology of microorganisms Madigan, Martinko, Parker Eighth edition Microbiology , Zinsser Seventeenth edition