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VERIFICACIÓN DE METODOS

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VERIFICACION DE METODOS

D.C. EDUARDO BRAMBILA COLOMBRES Facultad de Ciencias Químicas Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

TAREAS DEL PROFESIONAL DEL LABORATORIO CLINICO
  Introducir nuevos métodos al trabajo del

laboratorio   Elegir el método mas apropiado   Evaluar el método bajo las condiciones del laboratorio   Establecer un control de calidad permanente   Determinar los limites de referencia en el laboratorio   Transferir el método al trabajo de rutina

Paciente ??? Diagnóstico Tratamiento Orden

? ?

Interpretación

Recolección

Análisis

Transporte

Ejecución de un proceso analítico en el laboratorio clínico .

La calidad es obtenida por un proceso de trabajo Planeado cuidadosamente Operado adecuadamente Optimamente controlado Medido apropiadamente Mejorado continuamente Estándares De Calidad ADMINISTRACIÓN ADECUADA DE LA CALIDAD .

y representa pureza.   En términos administrativos   Provee una forma consistente de hacer las cosas       Proceso estándar de pruebas Proceso estándar de validación de métodos Estándar de calidad. veracidad. Criterio que describe el nivel aceptable de alguna característica     Tiempo de reporte de resultados Que tan cercanos están los resultados del valor “verdadero” . Empleada para calibración o evaluar un proceso.Estándares de Calidad   En términos analíticos   Solución estándar.

Proceso Estándar para el Manejo Total de la Calidad C Mejoramiento de la Planeación De la C C C Estándares Cen el laboratorio C Control de Procesos Evaluación de la .

Procesos de Calidad en el Laboratorio   Determinan el trabajo en el laboratorio   Políticas   Procedimientos   Estándares del personal   Recursos físicos   Manuales de Laboratorio   Describen los procesos de operación .

Control de Calidad   Procedimientos para monitorear el proceso de análisis   Detección y corrección de problemas antes de liberar el producto (resultado)   Control de Calidad Estadístico .

Tiempo de entrega del resultado   Preparación del paciente   Obtención del especimen   Etc.Evaluación de la Calidad   Monitoreo de la totalidad de las características del proceso que permitan satisfacer las necesidades del usuario.e.   . p.

Diagramas causa-efecto.Mejoramiento de la Calidad   Determina las causas o problemas identificados por el CC o EC   Problemas identificados       Analistas Individuales Equípo de Analistas Herramientas (Cartas de flujo. Diagramas de Pareto. etc) .

Planeación de la Calidad   Establecimiento y validación de los procesos encaminadas a las necesidades de los usuarios Selección y evaluación de nuevos métodos e instrumentos   Selección y diseño de los procedimientos de control de calidad   .

Objetivos de la Calidad   Requerimientos que deben ser logrados para satisfacer las necesidades de los usuarios   Calidad Analítica   Producir resultados que sean correctos dentro de ciertos limites establecidos .

Selección de la Prueba diagnóstica Selección del método Validación del método Implementación Del método Especímenes Ejecución de las pruebas Proceso para establecer un método de rutina VALIDACION VERIFICACION Mejoras al método Mantenimiento del método Prevencion de problemas ? Monitoreo CC estadístico Resultados Proceso de análisis en el laboratorio de rutina .

Confirmación a través de la obtención de evidencia objetiva que los requerimientos especificados han sido completamente satisfechos   VALIDACION.DEFINICIONES DE ACUERDO A LA NORMATIVA ISO 15189   VERIFICACION. Confirmación a través de la obtención de evidencia objetiva. que los requerimientos para un uso pretendido o aplicación han sido completamente satisfechos .

¿Cuáles son los criterios para introducir un método al trabajo de rutina en un laboratorio? .

Objetivo de la VALIDACION DE METODOS El proceso de evaluación de métodos tiene como objetivo EVALUAR LA MAGNITUD DEL ERROR DEL MÉTODO   Determinar si la magnitud del error del método afecta la interpretación de los resultados y el diagnóstico dado a los pacientes .

La dirección y la magnitud del error no puede ser predicha Los errores al azar se agrupan como una distribución “normal” que resulta cuando se realiza una serie de determinaciones en un mismo especimen Los determinación de los errores al azar son una medida de IMPRECISIÓN .Errores analíticos de los métodos   Errores al azar       Son errores que afectan los resultados tanto positivacomo negativamente.

por lo que es útil calcular el coeficiente de variación (CV)   El tamaño del error al azar es expresado como 2s o 3s. lo que ayuda a conocer la magnitud del error presente   Valor medio Error al azar .Errores analíticos de los métodos   Imprecisión Es usualmente cuantificada mediante la desviación estándar (s)   La “s” incrementa con la concentración.

ya sea positiva.Errores analíticos de los métodos   Error sistemático Son errores que que afectan los resultados en una dirección.o negativamente. por lo que causan que los resultados sean elevados o bajos   Los errores sitemáticos son una medida de INEXACTITUD   Valor correcto o verdadero Valor medio Error sistemático .

Errores analíticos de los métodos   Error Total Es el efecto neto o combinado del error al azar y el error sistemático   Debido a que los laboratorios realizan una sola medida por analíto. el resultado puede estar en la región del error comprendido entre la: media+/-2 ó 3s   Valor correcto o verdadero Valor medio E. Sistemático E. al azar Error Total .

EXPERIMENTOS EMPLEADOS EN LOS PROTOCOLOS DE VALIDACION DE METODOS
  LINEALIDAD. Determina el intervalo reportable   REPLICACION. Estima la imprecisión o errores al azar   COMPARACION DE METODOS. Estima la inexactitud        

o error sistemático INTERFERENCIA Y RECOBRO. Determinan los errores constantes y proporcionales (especificidad analítica) LIMITE DE DETECCION. Caracteriza la sensibilidad analítica SI EL DESEMPEÑO DEL METODO SE JUZGA ACEPTABLE: Se verifican los LIMITES DE REFERENCIA

REGLAS FINALES CLIA
  Enero 24 de 2003   Todos los métodos de moderada a alta

complejidad deben ser validados antes de ser introducidos al trabajo de rutina.

Métodos No Modificados
  Validación en sus características de

ejecución:

  Exactitud   Precisión   Intervalo

Reportable (Linealidad)   Verificación de los limites de referencia

Métodos No Modificados   Validación en sus características de ejecución:   Exactitud   Precisión   Intervalo Reportable (Linealidad)   Verificación de los limites de referencia .

Métodos Modificados o Desarrollados en el Laboratorio   Validación en sus características de ejecución:   Exactitud   Precisión   Sensibilidad Analítica   Especificidad Analítica   Intervalo Reportable (Linealidad)   Intervalos de Referencia   Cualquier otra característica de desempeño del método. Validación en sus características de ejecución .

? ¿Que estándares de calidad debemos emplear para determinar si la magnitud del error del método es lo suficientemente grande para afectar la interpretación de los resultados? .

Requerimientos médicos   La decisión de aceptar o rechazar un método candidato para su introducción a rutina depende de los requerimientos del usuario final   El error del método es excesivo si tiene efecto en los resultados finales y puede producir un diagnóstico incorrecto ??? DIAGNÓSTICO .

Concentraciones de nivel de decisión médica   Son los niveles de concentración a los cuales existe la mayor probabilidad de cometer un error diagnóstico. 12 g/dL 16 g/dL Límites de Referencia para Hemoglobina .

Estándares de ejecución   Para cada concentración a un nivel de decisión médica (Xc) se han formulado estándares de ejecución: Error permitido (Ep) La validación de los métodos determina el error de los métodos a un nivel de decisión médica y los resultados se comparan con el error permitido para cada método en particular .

8 2.5 1.008 0.ERRORES PERMITIDOS RECOMENDADOS ANALITO NIVEL DE DECISIÓN BARNET TONKS ALBÚMINA BICARBONATO BILIRRUBINA CALCIO CLORUROS COLESTEROL CREATININA GLOBULINAS GLUCOSA pH PCO2 35 g/L 20 mmol/L 30 mmol/L 10 mg/L 200 mg/L 85 mg/L 100 mg/L 90 mmol/L 100 mmol/L 2500 mg/L 20 mg/L 35 mg/L 500 mg/L 1200 mg/L 7.2 250 2 5 120 200 - .45 35 mm Hg 50 mm/Hg 5 2 2 4 30 6 5 4 4 400 3 5 100 100 0.012 6 6 2 60 4 5.35 7.

5 6 4 4 300 40 10 4. SODIO TRIGLICÉRIDOS BUN ÁCIDO ÚRICO ENZIMAS FOSFATASA ÁCIDA FOSFATASA ALCALINA AMILASA LACTATO DESHIDROGENASA ASPARTATO AMINO TRANSFERASA 80 mm/Hg 45 mg/L 3 mmol/L 6 mmol/L 70 g/L 130 mmol/L 150 mmol/L 1600 mg/L 270 mg/L 60 mg/L 10 4 0.5 0.26 0.5 0.59 4.7 27 6 NIVEL DE DECISIÓN 20% 20% 20% 20% 10% .ERRORES PERMITIDOS RECOMENDADOS PO2 FÓSFORO POTASIO PROTEÍNAS TOT.3 2.9 2.

Hematología Clia `88 Prueba o Analito Identificación celular Cuenta Diferencial Error Permitido 90% o más de la identificación Valor Blanco ± 3SD basado el porcentaje de Leucocitos Cuenta de Eritrocitos Valor Blanco ± 6% Hematocrito Valor Blanco ± 6% Hemoglobina Valor Blanco ± 7% Cuenta de Leucocitos Valor Blanco ± 15% Cuenta de Plaquetas Valor Blanco ± 25% Fibrinógeno Valor Blanco ± 20% Tiempo Parcial de Tromboplastina Valor Blanco ± 15% Tiempo de Protrombina Valor Blanco ± 15% .

ESPECIFICACIONES DE CALIDAD   En Abril de 1999 la IUPAC. convocaron a la discución de las estrategias para determinar las especificaciones de calidad en los laboratorios clínicos. El consenso fue publicado en : “Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation”   . la IFCC y la WHO.

Especificaciones Generales de Calidad basados en Variabilidad Biológica B. Guias de Grupos de Expertos Nacionales o Internacionales B. Especificaciones de calidad determinadas por organizadores de EQAS A. Guias de expertos individuales o Grupos Institucionales A. Especificaciones de calidad determinadas por Regulaciones B. Datos Publicados de PT o EQAS B. Especificaciones Generales de Calidad basadas en opiniones medicas A. Datos de Metodologias Individuales Publicadas 2 Valoracion del efecto del Desempeño Analitico sobre una Decision Clinica General 3 Recomendaciones profesionales 4 Especificaciones de calidad determinadas por Regulaciones o por Organizadores de EQAS 5 Datos Publicados sobre el estado del arte .CATEGORIA ESTRATEGIA SUBCLASES 1 Valoracion del Efecto del Desempeño Analitico sobre una Decision Clinica Especifica Especificaciones de calidad en situaciones clinicas especificas A.

Secuencia para la selección de un método Definición de los Requerimientos -Aplicación -Metodológicas -Ejecución Revisión de la literatura Selección del Método .

Validación de métodos   Formulando un plan   Defina los requerimientos de calidad (Error permitido)   Seleccione los experimentos apropiados para revelar los tipos de error analítico   Recolecte los datos experimentales necesarios   Compare los errores experimentales con los errores permitidos   Juzque la aceptabilidad o rechazo .

C. E.A. Sistemático constante E. E.Tipos de errores   Todas las mediciones presentan un error   E. Imprecisión   Inexactitud     E.P. Sistemático proporcional .

Experimentos para estimar errores analíticos .

. ha surgido la pregunta de cuales son los estudios minimos necesarios para satisfacer los requerimientos regulatorios para verificar el desempeño establecido por los productores de reactivos y equipos de laboratorio.VERIFICACION DE METODOS   Debido a que los laboratorios buscan la manera de asegurar la calidad al menor costo.

EP15 STANDARD.   Es una guia que permite a los usuarios demostrar que pueden obtener el mismo desempeño en los métodos analíticos como ha sido establecido por los productores .VERIFICACION DE METODOS   CLINICAL LABORATORY STANDARDS INSTITUTE.

OBJETIVOS DE LA VERIFICACION DE METODOS   Desarrollar un protocolo que sea bastante simple para ser aplicado a laboratorios con un amplio intervalo de sofisticación y recursos   Desarrollar un protocolo lo suficientemente riguroso para obtener conclusiones estadísticas válidas para los estudios de verificación .

  La guía EP15 puede ser usada cuando un método es inicialmente introducido al trabajo del laboratorio   También puede servir de base para verificar el desempeño de un método después de una acción correctiva en el método .

CLSI EP15   Describe tres protocolos específicos para:   Verificación de la precisión   Verificación de la veracidad (bias) usando muestras de pacientes   Verificación de la veracidad (bias) usando materiales de referencia con valores asignados .

EXPERIMENTOS EMPLEADOS EN LOS PROTOCOLOS DE VERIFICACION DE METODOS   REPETIBILIDAD. Condiciones en donde los resultados son obtenidos con el mismo método. Precisión de medidas suscesivas del mismo mesurando obtenida bajo las mismas condiciones de medida (anteriormente llamada precisión dentro de la corrida)   CONDICIONES DE REPETIBILIDAD. el mismo material de prueba. en el mismo laboratorio y con el mismo operador en un intervalo de tiempo corto .

Precisión en un tiempo definido. La medida de la veracidad es usualmente expresado en términos de bias. Proximidad entre el promedio obtenido de un número infinito de valores repetidos y un valor de referencia aceptado. .EXPERIMENTOS EMPLEADOS EN LOS PROTOCOLOS DE VERIFICACION DE METODOS   PRECISION DENTRO DEL LABORATORIO. los operadores calibradores y los reactivos pueden variar dentro de las mismas instalaciones y usando el mismo equipo (anteriormente llamada precisión total)   VERACIDAD DE LAS MEDICIONES.

o muy similares (matriz) . emplear los mismos materiales que el productor.PROTOCOLO DE PRECISION   Periodo de Familiarización   Se recomienda emplear un protocolo de Control de Calidad   Los materiales de control deben tener valores cercanos a los niveles de decisión médica y cercanos a los niveles especificados por el productor en donde realiza sus especificaciones de precisión   Si es posible.

descarte los datos y realice una corrida adicional Incluya las muestras de control empleadas diariamente Las muestras para los experimentos de veracidad pueden ser analizadas en las mismas corridas Calibre el sistema de acuerdo a las especificaciones del productor (calibración única o multiples) .PROTOCOLO DE PRECISION   Analizar una corrida por día con 3 muestras         replicadas a cada una de dos concentraciones por 5 días Si existe algun problema y se tiene que rechazar una corrida (CC).

Ecuaciones para el cálculo de Precisión D n 2 ( x − x ) d ∑ ∑ di sr = d =1 i= 1 Desviación Estándar dentro de la corrida D( n − 1) D 2 ( x − x ) ∑ d d =1 2 sb = Varianza entre corridas D −1 n −1 2 2 ∗ sr + sb n Desviación Estándar dentro del laboratorio sI = € € .

Ecuaciones para el cálculo de Precisión (( n − 1) ∗ s + ( n ∗ s )) T= 2 2 2 n −1 n ∗ ( sb ) 4 ( ) ∗ sr + ( ) D D −1 2 r 2 b 2 D = Numero total de días n = Numero de replicados por día € € x di = Resultado del replicado i para el día d x d = Promedio de todos los resultados para el día d x = Promedio de todos los resultados € .

VERIFICACION DEL DESEMPEÑO DE LA PRECISION La guia EP15 recomienda que sea calculado un valor de verificación para proveer un limite superior para la precisión establecida por el productor. Este valor depende del numero de replicados (n). El procedimiento calcula el parámetro T. el numero de días (D). la varianza dentro de la corrida (sr2) y la varianza entre las corridas (sb2). el cual son los grados de libertad efectivos. .

VALOR DE VERIFICACION Valordeverificación = sestablecida ∗ C 1/ 2 T 1/ 2 € C es determinado a partir de una tabla De puntos de porcentaje seleccionados De una distribución chi-cuadrada al 5% de falsos rechazos .

PROTOCOLO PARA DETERMINACION DE VERACIDAD (con muestras de pacientes) Método a ser reemplazado Muestras Nuevo Método Las diferencias se atribuyen al método reemplazado Esto es verdadero si el nuevo método es de mejor calidad que el método a se reemplazado .

PROTOCOLO RECOMENDADO   Ensayar 20 muestras con concentraciones que cubran el intervalo reportable del método   Ensayar las muestras bajo las condiciones de rutina del laboratorio   Mida de 5 a 7 muestras al día en un periodo de 3 a 4 días con los dos sistemas de medición. de preferencia de manera simultánea (4 h de diferencia máximo) .

PROTOCOLO RECOMENDADO   Evalúe las muestras en conjunto con un sistema de CC para asegurar la operación estable de los sistemas de medición   Inspeccione los resultados e identifique resultados discrepantes   Calcule la diferencia entre los pares de resultados y grafique la diferencia contra el valor de comparación .

.PROTOCOLO RECOMENDADO   Realizar un análisis estadístico mediante una prueba t de “student” para datos pareados y determine la diferencia promedio entre los métodos   Calcule los limites de confidencia o verificación para comparar el bias observado con las especificaciones del productor.

PROTOCOLO PARA DETERMINACION DE VERACIDAD (con materiales de referencia)   EP15 provee un segundo protocolo para verificar la veracidad de un método con el empleo de materiales de referencia con valores asignados   Los materiales deben ser cuidadosamente seleccionados .

Materiales recomendados   Materiales de referencia certificados. Disponibles en el         Instituto Nacioanal de Estándares y Tecnología US (NIST) Materiales de referencia con valores asignados por programas de competencia de pruebas Materiales del productor con valores asignados Materiales de programas de evaluación externa de la calidad Materiales de tercera opinión con valores asignados por analisis en diferentes laboratorios   Estándares que preparados con concentraciones conocidas .

RECOMENDACION   La guia EP15 que sean seleccionados al menos 2 materiales que representen concentraciones de niveles de decisión altos y bajos en el intervalo reportable del método   Los materiales deben prepararse de acuerdo a las direcciones del productor. analizando 2 replicados por corrida en 3 a 5 corridas .

COMPARACION ENTRE VALIDACION Y VERIFICACION METODO LINEALIDAD IMPRECISION Dentro de la corrida Entre corridas INEXACTITUD (VERACIDAD) Interferencia Recobro Sensibilidad Comparación de métodos Comparación con un material de referencia si si si si no no no no si si si si si si VALIDACION si VERIFICACION no .

un método con base a estándares de calidad definidos basados en requerimientos médicos   VERIFICACION. Permite juzgar y aceptar o no. Permite juzgar y aceptar o no un método con base en las especificaciones de los productores de equipos y reactivos .USO PRETENDIDO   VALIDACION.

GRACIAS .

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