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Investigacin Qumica

Nanopartculas de plata: mtodos de sntesis en disolucin y propiedades bactericidas

Miguel Monge
Resumen: Los mtodos de sntesis qumica en disolucin permiten la sntesis de nanopartculas de plata de manera sencilla. Estas nanopartculas metlicas poseen un gran potencial en aplicaciones biomdicas como agente bactericida, fungicida, antiviral o cicatrizante. La modificacin de los parmetros involucrados en estas reacciones en disolucin conducen a un control preciso sobre el tamao, la forma, la monodispersidad y la superficie de estas nanopartculas. El mtodo organometlico cumple todos estos requisitos dando lugar a nanopartculas de plata de tamao pequeo con una alta capacidad bactericida. Palabras clave: Plata, nanopartculas, nanomateriales, propiedad antimicrobiana, aplicaciones biomdicas. Abstract: Chemical methods allow an easy synthesis of silver nanoparticles in solution. These metal nanoparticles have a great potential for biomedical applications as antibacterial agent, antifungal, antiviral or wound healing. The modification of the parameters involved in these reactions permits a precise control over the size, the shape, the monodispersity and the surface of the nanoparticles. The organometallic method meets these requirements giving rise to small silver nanoparticles with a high antibacterial activity. Keywords: Silver, nanoparticles, nanomaterials, antimicrobial property, biomedical applications.

Introduccin
El inters sobre especies qumicas de tamao nanomtrico es una de las reas de trabajo ms importantes de la investigacin en qumica debido, fundamentalmente, a la gran variedad de nuevas propiedades y potenciales aplicaciones que se pueden explotar en diversos campos.[1] Esta escala de tamao se corresponde, por ejemplo, con macromolculas orgnicas como los polmeros o los dendrmeros; proteinas; micelas o vesculas formadas por molculas pequeas que se autoorganizan; nanopartculas inorgnicas, etc. Dentro de estas ltimas, las nanopartculas de metales, de xidos metlicos o de compuestos basados en metales muestran interesantes propiedades biolgicas, pticas, magnticas, electrnicas, catalticas, etc. que, en general, se relacionan con el tamao y la forma de los nuevos materiales y pueden ser interesantes desde el punto de vista de su aplicacin prctica. As, las propiedades nicas que muestran las nanopartculas metlicas provienen de la alta relacin superficie:volumen, del confinamiento cuntico del movimiento electrnico en nanopartculas semiconductoras, de la resonancia de plasmones superficiales en algunas partculas metlicas o del superparamagnetismo en nanomateriales magnticos.[2] La plata ha sido empleada durante miles de aos como metal precioso por el ser humano en aplicaciones tan dispares como joyera, utensilios, moneda, fotografa o explosivos. De todos estos usos, uno de los ms importantes es su empleo como agente desinfectante con fines higinicos y mdicos. As, ya desde la antigedad se empleaban vasijas de plata para almacenar agua o vino ya que se consideraba que preservaba sus condiciones. Tambin Hipcrates, padre de la medicina

moderna, describi el empleo de polvo de plata para su aplicacin en la curacin de heridas y en el tratamiento de lceras. En los siglos XVII y XVIII se emple nitrato de plata para el tratamiento de lceras y su actividad antimicrobiana se estableci en el siglo XIX. Sin embargo, despus de la introduccin de los antibiticos en 1940 el uso de las sales de plata disminuy. Posteriormente se han empleado sales y compuestos de plata en diferentes campos biomdicos, especialmente en el tratamiento de quemaduras.[3] La sntesis de partculas de plata de tamao nanomtrico es un campo de trabajo bien establecido, aunque ciertamente no intencionado, desde hace siglos. El primer ejemplo reconocido es la copa de bronce Lycurgus del siglo IV d. C. que posee vidrio coloreado cuya propiedad es que dispersa luz verde y transmite luz roja debido a que contiene nanopartculas metlicas de unos 70 nm que son una aleacin de plata (70%) y oro (30%).[4] Otro ejemplo curioso es el lustre, que es un tipo de decoracin cermica consistente en el empleo de nanopartculas de plata, entre otros metales, para producir un efecto de brillo metlico en la superficie de cermicas ya cocidas. En Espaa existen numerosos ejemplos de decoracin cermica de este tipo a partir del siglo XII. En el caso concreto del lustre dorado, este se realizaba mediante una mezcla de almagre, xido de cobre y monedas de plata.[5] (Figura 1)

Figura 1. Recipiente cermico procedente de Manises (Valencia) del siglo XV decorado con lustre. (Cortesa del Museu de Cermica de Barcelona)
M. Monge

Universidad de La Rioja. Departamento de Qumica. Complejo Cientfico Tecnolgico. Madre de Dios 51. 26004-Logroo (La Rioja) C-e: miguel.monge@unirioja.es Recibido: 12/09/2008. Aceptado: 20/10/2008.
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Los ejemplos histricos anteriormente descritos son el punto de partida actual para el desarrollo de nanomateriales basados en plata. Actualmente los dos campos de trabajo ms activos relacionados con las nanopartculas de plata son el estudio y aplicacin de sus propiedades pticas y biomdicas.
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Las propiedades pticas de las nanopartculas de los metales nobles se basan en la oscilacin colectiva de electrones de conduccin libres como resultado de su interaccin con la radiacin electromagntica. El campo elctrico de la radiacin electromagntica induce la formacin de un dipolo en la nanopartcula crendose una fuerza restauradora en la nanopartcula que intenta compensar ese efecto, resultando en una longitud de onda de resonancia que confiere el color caracterstico a las disoluciones coloidales de nanopartculas de metales nobles. En relacin con esta propiedad se han desarrollado interesantes aplicaciones relacionadas principalmente con la deteccin de especies qumicas, orgnicas o inorgnicas, o biolgicas. Otras propiedades como SERS (Surface Enhanced Raman Scattering) o MEF (Metal Enhanced Fluorescence) estn siendo ampliamente estudiadas.[6,7] Como ya se ha mencionado, las propiedades biomdicas de las nanopartculas de plata constituyen tambin un campo de investigacin de gran relevancia. La mayora de las publicaciones a este respecto se basan en las propiedades antimicrobianas de las nanopartculas de plata, aunque existen tambin estudios sobre sus propiedades antivirales, fungicidas o de cicatrizacin. Evidentemente, de manera paralela al estudio de estas propiedades se estn desarrollando multitud de aplicaciones prcticas.[7] As, en el contexto del gran desarrollo que ha experimentado la nanociencia y la nanotecnologa en los ltimos aos se han desarrollado diferentes mtodos fsicos y qumicos para la obtencin de nanopartculas de plata. En este trabajo nos centraremos en la descripcin de algunos de los mtodos qumicos ms importantes. La mayora de los mtodos de sntesis qumica de nanopartculas de plata se basan en reacciones de reduccin de sales metlicas de plata (I). Junto con la descripcin de algunos de los mtodos qumicos para la obtencin de nanopartculas de plata, en este artculo se mencionan algunas de las propiedades ms interesantes de las mismas, dedicando una especial atencin a su capacidad como agente bactericida. Adems, se muestran los resultados obtenidos por nuestro grupo de investigacin en la sntesis y estudio de capacidad antimicrobiana de nanopartculas de plata sintetizadas a partir de un mtodo organometlico.[8]
NUCLEACIN

M. Monge
CRECIMIENTO

AgNO3

agente reductor disolvente tomos de plata libres nanopartculas de plata

Figura 2. Mecanismo de formacin de nanopartculas de plata a partir de la reduccin qumica en disolucin de la sal AgNO3.

Sntesis de nanopartculas de plata

Desde un punto de vista qumico, la sntesis de nanopartculas en disolucin (disolucin coloidal) requiere del empleo de mtodos que permitan obtener un control preciso sobre el tamao y la forma de las nanopartculas para as obtener un conjunto de partculas monodispersas que presenten una propiedad determinada. En general, la sntesis de nanopartculas metlicas en disolucin se lleva a cabo mediante el empleo de los siguientes componentes: i) precursor metlico; ii) agente reductor; iii) agente estabilizante. El mecanismo de formacin de las disoluciones coloidales a partir de la reduccin de iones plata consta de dos etapas diferentes: nucleacin y crecimiento. El proceso de nucleacin requiere una alta energa de activacin mientras que el proceso de crecimiento requiere una baja energa de activacin. El tamao y la forma de las nanopartculas depender de las velocidades relativas de estos procesos que pueden ser controladas a travs de la modificacin de los parmetros de reaccin (concentracin, temperatura, pH, poder reductor, etc.). (ver Figura 2)[2,9]

En el caso de las nanopartculas de plata los primeros mtodos descritos son el mtodo Lee-Meisel[10] y el mtodo Creighton.[11] El primero de ellos consiste en una variacin del mtodo Turkevich para la obtencin de nanopartculas de oro, en el que se emplea AgNO3 en lugar de HAuCl4 como precursor metlico y citrato de sodio como agente reductor. En el mtodo Lee-Meisel se obtienen nanopartculas de plata con una distribucin amplia de tamao de partcula (polidispersas). El mtodo Creighton consiste en la reduccin de AgNO3 con el agente reductor NaBH4. Este mtodo es el ms popular en la actualidad y da lugar a la obtencin de nanopartculas de plata de aproximadamente 10 nm y con una distribucin estrecha de tamaos (monodispersas). A partir de los dos mtodos anteriormente mencionados se han descrito un gran nmero de reacciones qumicas que permiten la sntesis de nanopartculas de plata mediante la reduccin qumica de una sal de plata(I).[1216] En este tipo de reacciones la oxidacin de las nanopartculas formadas no es termodinmicamente favorable debido al alto potencial de reduccin de la plata lo que permite obtener suspensiones acuosas o alcohlicas sin la ayuda de agentes estabilizantes. Adems, las dobles capas elctricas formadas alrededor de las nanopartculas en disoluciones coloidales de baja fuerza inica inhiben la agregacin de las nanopartculas. En el caso de disoluciones coloidales de alta fuerza inica o en fase orgnica es necesario el concurso de agentes estabilizantes como monocapas autoensambladas,[1721] surfactantes,[2224] polmeros[2530] o dendrmeros.[31] Estos agentes no solo protegen a las nanopartculas y previenen su aglomeracin sino que juegan tambin un importante papel en el control de su tamao y forma. Los mtodos en los que las nanopartculas se sintetizan mediante el concurso de la sal metlica y un agente reductor qumico son los que ms variaciones presentan. De entre ellos merece la pena destacar la formacin de nanopartculas de plata a partir de AgNO3 empleando como agentes reductores cido ascrbico,[12] polioles,[13] o monosacridos.[14] En el caso del empleo de cido ascrbico como agente reductor se pueden obtener nanopartculas de plata de tamao grande (hasta 1200 nm) variando las condiciones de reaccin. El empleo de agentes reductores dbiles, como son los polioles, a altas temperaturas de reflujo permite obtener nanopartculas de plata de unos 40 nm de dimetro. En el caso de los monosacridos, se ha desarrollado un mtodo denominado "verde" por su respeto por el medioambiente. En este mtodo se provoca la reduccin qumica de la sal AgNO3 mediante el empleo de -D-glucosa como agente reductor en presencia de almidn como agente estabilizante, lo que da lugar a la obtencin de nanopartculas de plata de aproximadamente 5 nm. (Figura 3) Tambin se pueden sintetizar nanopartculas de plata mediante el mtodo Tollens.[15] Este mtodo se ha empleado durante dcadas para la deposicin electroltica de pelculas
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Tabla 1. Algunos mtodos de sntesis de nanopartculas de plata en disolucin
Precursor AgNO3 AgNO3 AgNO3 AgNO3 AgNO3 [Ag(NH3 )2 ]+ AgNO3 AgNO3 Ag(COOR) Ag(COOCH3 ) Ag(COOCH3 ) [Ag(Mes)] 4 AgNO3 AgNO3 AgNO3 AgNO3 [Ag(C 6F5)] Reductor Citrato NaBH4 Ac. Ascrbico Polioles -D-glucosa Azcares DMF DMF Termlisis Acetaldehido OLA Termlisis Ac. Ascrbico N2H4H2O Radiacin UV Radiacin UV HDA OLA HDA CTAB AOT PVP PEG HDA APS PVP PVP Almidn Estabilizante Ref 10 11 12 13, 26 14 15 16 16 18 20b 20a 21 22 24 26 30 8
H3 CO APS = H3CO Si H3 CO

PVP

Ag

O Ag+ + H3C N CH3 Dimetilformamida

NH2

SiO 2 H APS Ag

PVP =

O
n

PVP

Ag

Figura 4. Sntesis de nanopartculas de plata empleando DMF como agente reductor. Cuando se emplea el polmero PVP como agente reductor se pueden obtener nanopartculas (arriba) o nanoprismas (abajo) de plata. Cuando se emplea APS se obtienen nanopartculas de plata rodeadas de una capa de slice (centro).

APS = aminopropiltrietoxisilano, PVP = polivinilpirrolidona, HDA = hexadecilamina, OLA = oleilamina, CTAB = Bromuro de cetil trimetil amonio, AOT = bis(2-etilhexil)sulfosuccinato de sodio, PEG = polietilenglicol.
H OH AgNO3 + HO HO H HO H OH H OH Almidn
Ag NP

-D-Glucosa
H OH

Alm idn =

O HO H

HO H OH H O

habituales es el empleo de ligandos orgnicos de cadena alqulica larga con grupos funcionales como tioles,[17] carboxilatos,[18] fosfinas oxidadas[19] o aminas.[20] El proceso de formacin de las nanopartculas suele ser similar al anteriormente descrito, es decir, reduccin de una sal de plata en presencia de un agente reductor. Sin embargo, el uso de estos agentes permite, por un lado, evitar la agregacin de las nanopartculas en disolventes orgnicos y, por otro, ejercer un control preciso sobre su tamao, su forma y su monodispersidad mediante la modificacin de las condiciones de reaccin. Un ejemplo curioso, es la sntesis de nanopartculas de plata de pequeo tamao (2.8 15.4 nm) a partir alquilcarboxilatos de plata mediante termlisis. En este proceso no se requiere el concurso de agentes reductores qumicos y el propio ligando carboxilato acta como agente estabilizante de las nanopartculas formadas. (Figura 5) Otro ejemplo interesante es la sntesis de nanopartculas de plata a partir de la sal acetato de plata y el ligando hexadecilamina que acta como disolvente y agente estabilizante al mismo tiempo, en presencia de acetaldehdo como agente reductor.[20b]

Figura 3. Mtodo de sntesis de nanopartculas de plata empleando reactivos respetuosos con el medio ambiente.

finas de plata metlica (espejo de plata). Es un proceso de reduccin del complejo [Ag(NH3)2]+ en disolucin por la accin de aldehidos y azcares reductores. En el caso de la sntesis de nanopartculas de plata se emplean concentraciones menores y ultrasonidos para producir disoluciones coloidales. Un interesante mtodo de sntesis de nanopartculas de plata es el que ha desarrollado el grupo del Profesor Liz-Marzn. En este caso se ha empleado dimetilformamida (DMF) como disolvente y como agente reductor frente a sales de plata en diferentes condiciones de reaccin.[16] As, se han conseguido nanopartculas de diferentes tamaos empleando aminopropiltrietoxisilano (APS) o polivinilpirrolidona (PVP) como agentes estabilizantes o incluso nanoprismas de plata (Figura 4). Como se ha mencionado anteriormente se puede prevenir la agregacin de las nanopartculas en disolucin mediante el empleo de agentes estabilizantes. Uno de los mtodos ms
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Figura 5. Nanopartculas de plata de tamao muy pequeo (aprox. 4 nm) preparadas a partir de la termlisis de [Ag(C13H27CO2)]. (Adaptada de la referencia 18a con permiso de The Royal Society of Chemistry)

El empleo de altas temperaturas permite emplear los ligandos alqulicos de cadena larga como disolvente y agente estabilizante al mismo tiempo. Utilizando un mtodo de inyeccin rpida de un compuesto organometlico como [Ag(Mes)]4 (Mes=mesitil) en una disolucin de hexadecilamina a 300C se pueden obtener nanopartculas de plata de unos 8.5 nm de dimetro en un proceso de termlisis.[21]
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Tambin se han desarrollado mtodos de sntesis de nanopartculas de plata mediante el uso de micelas o micelas inversas. Estas entidades supramoleculares formadas a partir de surfactantes se pueden considerar como nanoreactores en los que se puede producir la reaccin de reduccin de una sal de plata en presencia de un agente reductor qumico como cido ascrbico,[22] NaBH4[23] o N2H4H2O.[24] Algunos de los surfactantes ms empleados en la sntesis de nanopartculas de plata son CTAB (Bromuro de cetil trimetil amonio) y AOT (bis(2-etilhexil)sulfosuccinato de sodio). Cuando se emplea el surfactante AOT en una mezcla dodecano/agua se pueden sintetizar nanopartculas de plata por reduccin de nitrato de plata con hidracina en el interior de las micelas inversas formadas.[24c] (Figura 6)
AgNO3
+

M. Monge

N2 H4

AgNO3 N2H4

Disolucin A

Disolucin B

Reduccin de Ag+ en micela inver sa

= AOT O O O O

O S O- Na + O

Ag NP

Figura 6. Sntesis de nanopartculas de plata empleando micelas inversas de AOT formadas en una mezcla dodecano/agua.

El grupo de la Profesora Murphy ha desarrollado un mtodo de sntesis de nanoestructuras de plata unidimensionales (nanobarras o nanocables) empleando micelas formadas con el surfactante CTAB en un proceso en dos pasos denominado "seed-mediated growth" (crecimiento mediante semillas). Este mtodo parte de la sntesis inicial de nanopartculas de plata de 4 nm (semillas) por reduccin de AgNO3 con NaBH4 en presencia de citrato de sodio. A partir de estas nanopartculas de plata, la adicin de AgNO3, cido ascrbico como agente reductor, NaOH y CTAB como plantilla micelar permite la obtencin de nanobarras y nanocables de plata.[22] (Figura 7)

Aunque la sntesis y el estudio de propiedades de nanopartculas de plata posee un gran inters, una de las vas de trabajo ms importantes en este campo es la preparacin de nuevos nanomateriales basados en este metal. Para ello se han empleado multitud de matrices que estabilizan las nanopartculas de plata y que permiten que stas mantengan o modifiquen sus propiedades como por ejemplo polmeros orgnicos o recubrimientos de slice. El polmero poli(vinil pirrolidona) (PVP) es uno de los ms ampliamente usados como agentes estabilizantes de nanopartculas metlicas.[25] Existen tambin un buen nmero de publicaciones en el que este polmero se ha empleado en la sntesis de nanopartculas de plata. As, una de las primeras sntesis consisti en la fotoreduccin de AgNO3 en presencia de PVP como agente estabilizante empleando radiacin UV de 243 nm. Con este mtodo se pueden obtener nanopartculas de plata entre 15 y 22 nm en funcin de la relacin molar entre AgNO3 y PVP.[25b] Posteriormente se han descrito diferentes mtodos en los que PVP acta como agente estabilizante de nanopartculas de plata sintetizadas mediante reduccin de sales de plata con distintos agentes reductores qumicos como bitartrato potsico,[25c] o DMF,[16b] e incluso empleando microondas y el propio PVP como agente reductor.[25d] Tambin se ha empleado PVP como estabilizante en reacciones de reduccin de AgNO3 con polioles (mtodo poliol) que conduce a la sntesis de nanoesferas, nanocubos, nanobarras o nanocables de plata (Figura 8). En general, el estudio de los parmetros que afectan a las reacciones y, en especial, la concentracin del polmero estabilizante, permite ejercer un gran control sobre el tamao y la forma de las nanopartculas de plata.[25e-f]

nanoesfera

nanobar ra AgNO3 + HO OH Etilenglicol PVP

PVP =

nanocubo

nanocable

Figura 8. Diferentes nanoestructuras de plata sintetizadas mediante la reduccin de nitrato de plata en etilenglicol, empleando polivinilpirrolidona como agente estabilizante.
AgNO3 + NaBH4
citr ato

nanopartculas de Ag "semilla" de 4 nm

+ AgNO3 + ac. a scrbic o

CTAB

nanopartculas de Ag "sem illa" de 4 nm

nanobarras o nanocables de Ag

Figura 7. Micrografas de microscopa de transmisin electrnica de nanobarras y nanocables de plata. Sntesis de nanobarras y nanocables de plata empleando micellas de CTAB. (Micrografas adaptadas de la referencia 22a con permiso de The Royal Society of Chemistry)

Otros polmeros empleados en la sntesis de nanopartculas de plata como agentes estabilizantes son poliacrilatos,[26] poli(vinil alcohol),[27] poliacrilonitrilo,[28] poliacrilamida[29] o poli(etilenglicol).[30] Otro tipo de polmeros de inters en la estabilizacin de nanopartculas de plata son los dendrmeros.[31] Se trata de macromolculas tridimensionales con estructura arborescente. Este tipo de molculas puede estabilizar las nanopartculas de plata mediante mecanismos diferentes: el primero consiste en la estabilizacin estrica mediante la interaccin con los grupos funcionales de los dendrmeros dando lugar a una estabilizacin similar a la de los
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polmeros no arborescentes; el segundo mtodo consiste en la estabilizacin de nanopartculas de plata muy pequeas en el interior de los dendrmeros lo que produce su encapsulacin. (Figura 9) temperatura ambiente y/o a la humedad conducen a su descomposicin. As, la reaccin de este precursor con el agente estabilizante hexadecilamina (HDA) en tolueno a temperatura de reflujo conduce a la obtencin de una disolucin coloidal amarilla intensa de nanopartculas de plata (Figura 10).[8] Estas nanopartculas se han caracterizado empleando diversas tcnicas. El espectro de UV muestra una banda correspondiente al plasmn superficial a 412 nm lo que est de acuerdo con la existencia de nanopartculas esfricas de tamao pequeo. Este resultado se confirma mediante microscopa de transmisin electrnica (TEM) observndose nanopartculas uniformes de 9.8 nm de tamao (Figura 11). Su naturaleza cristalina se confirma mediante difraccin de rayos X de polvos donde se obtiene el patrn caracterstico de la plata metlica con estructura cbica centrada en las caras.

Ag NP

Ag

Nanopartcula de plata estabilizada por dendrmeros

Nanopartcula de plata encapsulada en un dendrmero

Figura 9. Nanopartculas de plata estabilizadas mediante el empleo de dendrmeros.

Mediante la aplicacin del mtodo de preparacin de nanopartculas de plata mediante el empleo de DMF como agente reductor se han preparado nanopartculas de plata recubiertas de slice (SiO2) o de xido de titanio (TiO2). Estos recubriemientos confieren una gran estabilidad a las nanopartculas y las hacen estables durante meses.[16]

[Ag(C 6F 5)] + HDA Tolueno, 110 C - (C6F5-C 6F 5)

Ag NP

Mtodo organometlico
Adems de todos los mtodos anteriormente descritos nuestro grupo de investigacin se ha centrado en el desarrollo de un nuevo mtodo para la sntesis de nanopartculas de plata. Este mtodo organometlico ha sido ampliamente estudiado por el grupo del Dr. Chaudret para la sntesis de nanopartculas de un buen nmero de metales y de xidos metlicos.[32] Como ya se ha comentado al inicio de este apartado la sntesis de nanopartculas requiere mtodos que permitan controlar el tamao y la forma de las nanopartculas. Adems, una gran cantidad de tomos presentes en las nanopartculas son tomos superficiales con lo que la naturaleza de la superficie de las nanopartculas influir en gran medida en sus propiedades. Por tanto, tambin es necesario ejercer un control sobre la superficie. En este sentido, los mtodos de reduccin qumica de sales metlicas con reductores qumicos fuertes como NaBH4 presentan, en general, poca variabilidad en cuanto al control de forma. Los mtodos que emplean micelas inversas s permiten ejercer un gran control sobre el tamao y la forma (esferas, cables, cubos) pero la presencia de agua y sales puede modificar la superficie de las nanopartculas mediante pasivacin, lo que puede cambiar su reactividad y sus propiedades. Los compuestos organometlicos son susceptibles de descomponerse empleando condiciones muy suaves de reaccin dando lugar a la formacin de nanopartculas metlicas en presencia de agentes estabilizantes. Adems, el desplazamiento de ligandos orgnicos de la esfera de coordinacin de los metales deja a estos la posibilidad de constituir nano-objetos cuyas superficies estn casi libres de contaminantes qumicos. En nuestro caso hemos llevado a cabo la sntesis de nanopartculas de plata mediante el empleo del precursor organometlico [Ag(C6F5)]. La sntesis y caracterizacin de compuestos organometlicos de plata u oro con ligandos perhalofenilo es una de las lneas de investigacin ms fructferas de nuestro grupo de investigacin.[33] Estos ligandos confieren la estabilidad necesaria como para poder manejar los compuestos con cierta facilidad pero su exposicin larga a
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= NH2-(CH 2)15-CH 3 (HDA)

Figura 10. Mtodo organometlico de sntesis de nanopartculas de plata

Figura 11. Micrografas de microscopa de transmisin electrnica de las nanopartculas de plata sintetizadas mediante el empleo del precursor organometlico [Ag(C6F5)] e imagen de una disolucin coloidal de las nanopartculas.

El mecanismo de formacin de estas partculas estara de acuerdo con la reduccin de los iones Ag+ a Ag(0) y la oxidacin de las especies C6F5- a C6F5-C6F5 tal y como se observa mediante resonancia magntica nuclear. La presencia de HDA evita la agregacin dando lugar a las nanopartculas de plata.

Propiedades bactericidas de las nanopartculas de plata

Como se ha mencionado en la introduccin de este trabajo, el efecto antimicrobiano de las sales de plata es conocido desde el siglo XIX. En estudios realizados en la actualidad se ha establecido la plata como "oligodinmica" debido a su capacidad para producir un efecto bactericida a concentraciones muy bajas. Esta caracterstica de los iones Ag+ se debe a su gran reactividad frente a sustancias como protenas, enzimas, ADN,
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ARN, etc. debido a las interacciones que se producen frente a grupos funcionales de tipo tiol, carboxilato, fosfato, hidroxilo, imidazol, indol o amina. Esta interaccin se puede producir de manera sencilla o combinada lo que puede provocar una serie de eventos que interfieren en los procesos microbianos.[7] Por su parte. el efecto bactericida de las nanopartculas de plata se conoce tambin desde hace tiempo pero el mecanismo de accin de las mismas se ha estudiado recientemente, aunque sigue sin conocerse completamente. Por ejemplo, el modo de interaccin posible entre las nanopartculas de plata y diferentes bacterias gram-negativas ha sido estudiado en profundidad empleando la tcnica High Angle Annular Dark Field (HAADF) Scanning Electron Transmission Microscopy (STEM) que permite observar las imgenes a escala nanomtrica y con un alto contraste.[34] En este estudio se ha observado un efecto bactericida muy fuerte cuando las nanopartculas de plata poseen un tamao entre 1 y 10 nm. Las nanopartculas aparecen unidas a la membrana celular de las bacterias provocando modificaciones en la permeabilidad y en la respiracin de la bacteria. Los autores proponen que, adems, las nanopartculas de plata de tamao tan pequeo pueden penetrar en el interior de la bacteria daando compuestos que poseen grupos funcionales basados en azufre o fsforo, como por ejemplo el ADN. Finalmente, como efecto complementario a la accin bactericida, las nanopartculas de plata desprenden de su superficie iones Ag+ que contribuyen al efecto bactericida del mismo modo que los iones Ag+ procedentes de las sales de plata. Los mismos autores han estudiado la interaccin de nanopartculas de plata de diferente tamao con el virus HIV-1.[35] De la misma manera que en el estudio anterior se observa que slo las nanopartculas en el intervalo de tamao entre 1 y 10 nm aparecen unidas al virus. La interaccin se produce entre las nanopartculas de plata y la glicoproteina gp120 bloqueando as la capacidad del virus de unirse a clulas receptoras. Por otro lado el grupo del Profesor Che ha realizado recientemente un estudio[36] que se basa en el anlisis protemico del modo de accin de nanopartculas de plata de 9.3 nm. Este estudio concluye que las nanopartculas desestabilizan la membrana externa de las bacterias E. coli, colapsan el potencial de membrana plasmtica y merman el nivel de ATP intracelular de un modo similar al de los iones Ag+. Tambin se observa que, mientras que los iones de plata procedentes de

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la sal AgNO3 producen un efecto bactericida empleando concentraciones a nivel micromolar, las nanopartculas de plata muestran un comportamiento bactericida a concentraciones a nivel nanomolar. En un ltimo estudio, estos autores han mostrado que las nanopartculas de plata con una superficie parcialmente oxidada podran ser transportadores de iones Ag+ quimisorbidos en cantidades suficientes como para producir un efecto bactericida, mientras que las nanopartculas de plata sintetizadas bajo atmsfera de nitrgeno no presentan actividad bactericida.[37] En nuestro caso, se ha llevado a cabo un anlisis de la actividad antimicrobiana de las nanopartculas de plata sintetizadas mediante el mtodo organometlico, a partir del precursor [Ag(C6F5)], frente a los microorganismos: Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Listeria monocytogenes CECT 4032. Estos microorganismos resultan de gran importancia desde el punto de vista mdico y de seguridad alimentaria. Se han empleado estas nanopartculas ya que cumplen el requisito anteriormente descrito de tener un tamao entre 1 y 10 nm y porque, adems, el mtodo organometlico conduce a nanopartculas de superficies poco contaminadas. Para dilucidar la actividad antimicrobiana de las nanopartculas de plata se han determinado dos parmetros como son la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), que es la concentracin mnima de nanopartculas necesaria para la inhibicin del crecimiento de los microorganismos, y por otro lado, la Concentracin Bactericida Mnima (CMB), que es la concentracin minima de nanopartculas necesaria para eliminar un 99.9% o ms del inculo bacteriano inicial a las 24 h de contacto entre las nanopartculas y el microorganismo. Tambin se han llevado a cabo estudios de curvas de muerte que muestran la evolucin de los microorganismos E. coli y S. aureus a diferentes tiempos durante 24 horas en presencia de diferentes cantidades de nanopartculas de plata. Los valores de CMI y CMB obtenidos para la actividad de las nanopartculas de plata frente a los tres microorganismos son muy bajos (12.5 25 g/ml) lo que indica una muy buena actividad bacteriosttica y bactericida de las nanopartculas, especialmente frente a E. coli. La actividad bactericida de las nanopartculas queda tambin claramente reflejada en las curvas de muerte, en las que se observa una fuerte actividad bactericida cuando se emplean concentraciones de nanopartculas

Figura 12. Micrografas de microscopa electrnica de barrido de los microorganismos E. coli y S. aureus. Esquema de la actuacin de las nanopartculas de plata sobre una bacteria.

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Nanopartculas de plata: mtodos de sntesis en disolucin y propiedades bactericidas.

Cu rvas de m uerte: E. co li
10 10 10
9 8 7 6 5 4 3 2 1

CFU/ml

10 10 10 10 10 10

no A g 6.2 5 g /m l 12 .5 g /m l 25 g /m l 50 g /m l 10 0 g/m l

10

15

20

25

Tiem po ( hora s)

Figura 13. Curva de muerte de E. coli frente a diferentes cantidades de nanopartculas de plata.

de plata mayores de 12.5 o 25 g/ml para E. coli y S. aureus, respectivamente. Resulta especialmente interesante el caso de E. coli, cuya eliminacin resulta casi completa despus de su exposicin al agente bactericida durante solamente 2.5 horas.

titud de instrumentos y materiales que contienen o estn recubiertos de nanopartculas de plata como por ejemplo: vendajes y materiales relacionados (agente cicatrizante), instrumentos quirrgicos, catteres o prtesis de huesos.[42] A modo de ejemplo, se han desarrollado implantes de titanio recubiertas mediante la tcnica de co-sputtering con nanopartculas de plata e hidroxiapatita con el objeto de mejorar sus propiedades bactericidas. Los resultados muestran que hay una reduccin significativa en la adhesin de bacterias (S. Aureus y S. Epidermidis) a la superficie del implante. Tambin se ha realizado un estudio de biocompatibilidad en el que se muestra que este recubrimiento no es txico frente a los precursores de clulas seas.[43] En aplicaciones cotidianas caben destacar las aplicaciones desarrolladas en consumibles diarios como detergentes, purificadores de agua o pinturas.[44] Tambin se han incorporado nanopartculas de plata en fibras textiles para manufactura de prendas de vestir[45] o en lavadoras y frigorficos que incorporan nanopartculas de plata en su interior.

Aplicaciones biomdicas de las nanopartculas de plata

Adems de la propiedad bactericida de las nanopartculas de plata que es la ms estudiada, existen otras propiedades biomdicas de inters centradas en el uso de nanopartculas de plata. As, existen diversos trabajos en los que se ha estudiado la capacidad antiviral o fungicida de stas nanopartculas. Por ejemplo, se ha estudiado la inhibicin de la replicacin del virus HIV-1[38] o la inhibicin del crecimiento de levadura en presencia de nanopartculas de plata.[39] En el caso de la actividad frente al virus HIV-1 los autores describen que el empleo de concentraciones de nanopartculas de plata entre 0.5 y 50 M conduce a una actividad anti-retroviral y, adems, observan un potente efecto en la inhibicin de la replicacin del virus con una concentracin 50 M de nanopartculas de plata. Por otro lado, se ha descrito la capacidad fungicida de nanopartculas de plata de aproximadamente 13.4 nm de dimetro en concentraciones entre 6.6 y 33 nM frente a levadura. La comparacin de la inhibicin del crecimiento de levadura que producen estas nanopartculas con la de un control de itraconazol muestra una actividad similar a una concentracin 33 nM de nanopartculas, pero stas siguen mostrando una actividad inhibitoria incluso a bajas concentraciones por debajo, incluso, de 13.2 nM. Una de las propiedades ms importantes desde el punto de vista de su potencial aplicacin es el empleo de nanopartculas de plata como agente cicatrizante.[40] Se ha llevado a cabo un estudio en el que se ha observado que la actividad cicatrizante de las nanopartculas de plata insertadas en los vendajes es mayor que la del compuesto sulfadiazina de plata, ampliamente usado para este objetivo. El estudio muestra que las nanopartculas de plata, adems de sus propiedades antimicrobianas son capaces de controlar procesos inflamatorios mediante la inhibicin de citoquinas pro-inflamatorias. Por otro lado, de acuerdo con informes de investigacin de mercados "Las nanopartculas de plata estn emergiendo como una de las categoras de producto de mayor crecimiento en la industria nanotecnolgica".[41] Las propiedades biomdicas, especialmente las propiedades antimicrobianas de las nanopartculas de plata han dado lugar en los ltimos aos al desarrollo de mltiples aplicaciones en diversos campos. En el campo de la biomedicina se estn desarrollando mulAn. Qum. 2009, 105(1), 3341 www.rseq.org

Efectos sobre la salud y el medioambiente

Es importante sealar que la exposicin del cuerpo humano a las nanopartculas de plata es cada vez mayor. Tradicionalmente se ha pensado que, exceptuando la enfermedad argiria (cambio de color de la piel por exposicin continuada a la plata), la plata es relativamente no txica para las clulas de los mamferos. En cualquier caso y tal y como se ha mencionado en este trabajo, las nanopartculas de plata poseen propiedades diferentes a la plata en estado masivo y, por tanto, es necesario investigar sobre las implicaciones toxicolgicas que conllevan su empleo, especialmente en el caso del desarrollo de aplicaciones de uso cotidiano de las nanopartculas.[46] En este sentido, recientemente se ha llevado a cabo una revisin sobre los modos de interaccin de las nanopartculas de plata con los tejidos humanos y las rutas principales de exposicin (sistema respiratorio, piel, tracto intestinal y otros tejidos). En estos estudios se pone de manifiesto que las nanopartculas de plata pueden presentar citotoxicidad a travs de la interaccin de las nanopartculas con proteinas y enzimas a nivel intracelular. Los autores sugieren que es necesario un mayor esfuerzo en la investigacin desde un punto de vista mdico sobre los efectos sobre la salud de las nanopartculas al mismo tiempo que se siguen desarrollando un gran nmero de aplicaciones. Otro aspecto de gran inters es el impacto que las nanopartculas en general y, las de plata en particular, podrn generar en el futuro sobre el medioambiente. El empleo de nanopartculas de plata en aplicaciones cotidianas como, por ejemplo, en textiles o electrodomsticos, puede producir un efecto de aumento de concentracin de nanopartculas en aguas residuales. Esta situacin choca frontalmente con el empleo de bacterias nitrificantes en la depuracin de aguas residuales ya que el aumento de la concentracin de nanopartculas de plata producira un efecto bactericida sobre estas nanopartculas beneficiosas disminuyendo su capacidad.[47]

Conclusiones
Existen multitud de mtodos qumicos en disolucin para la sntesis de nanopartculas de plata. La experiencia ya adquirida en este campo permite disear nanomateriales basados en
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plata con un tamao y una forma determinada o con un recubrimiento especfico que lo haga interesante para su posterior aplicacin prctica. Sus propiedades bactericidas son muy interesantes en diversos campos de aplicacin y su mecanismo de actuacin sigue siendo una lnea de investigacin muy activa. Los ltimos estudios realizados sugieren que el mecanismo de accin de las nanopartculas de plata como agente bactericida es similar al que presentan las sales de plata, pero empleando concentraciones muy inferiores en las primeras. Tambin parece ser que la actividad bactericida que presentan las nanopartculas est directamente ligada a la presencia de iones Ag+ quimisorbidos en la superficie de las mismas, probablemente producidos por una oxidacin parcial de la superficie de las nanopartculas. As, una de las grandes ventajas de las nanopartculas de plata es que se comportan como nano-transportadores de iones Ag+ que se dosifican de manera estable en el tiempo. En este sentido los compuestos organometlicos de plata pueden ser precursores de gran inters ya que la sntesis de nanopartculas de plata se puede llevar a cabo empleando condiciones de reaccin muy suaves lo que a su vez permite un gran control sobre su cintica de formacin. Adems, la ausencia de agentes reductores qumicos conduce a la obtencin de superficies no contaminadas lo que las hace muy interesantes desde el punto de vista de su aplicacin prctica.

M. Monge

Agradecimientos
El autor agradece a los proyectos de investigacin D.G.I.(MEC)/FEDER (CTQ2007-67273-C02-02) y European Commission, Interreg III A (NANORET, I3A-7-341-O) por el apoyo econmico recibido. Tambin desea expresar su agradecimiento a los miembros del grupo de investigacin: Prof. Dr. Antonio Laguna, Dr. Eduardo J Fernndez, Dr. Jos M. Lpez de Luzuriaga, Dra. M. Elena Olmos y Jorge Garca; a la Prof. Carmen Torres por los estudios de actividad bactericida y a los Dres. Bruno Chaudret y Katerina Soulantica.

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Nanopartculas de plata: mtodos de sntesis en disolucin y propiedades bactericidas.

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