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Tecnicas de Identificacion Microbiologica

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Capítulo

Técnicas de identificación
J. L. López-Hontangas, F. J. Castillo y M. Salavert

1.   Introducción El propósito fundamental del diagnóstico microbiológico clínico es optimizar la asistencia que se presta al paciente. Para alcanzar este objetivo es esencial obtener y comunicar, lo antes posible, al médico responsable del mismo resultados útiles para su manejo y tratamiento, usando eficientemente los recursos disponibles. Conjugar estos objetivos, con el máximo rigor científico y una creciente demanda asistencial, es lo que se persigue en los Servicios de Microbiología Clínica. El diagnóstico etiológico directo de las enfermedades infecciosas pretende demostrar la presencia del microorganismo causal en productos patológicos adecuados obtenidos del paciente e incluye, entre otros procedimientos, el cultivo, el cual persigue el aislamiento del microorganismo causante de la infección. Cuando es factible, el cultivo se considera el método diagnóstico de elección, porque permite la identificación del microorganismo implicado, el estudio de su sensibilidad a los antimicrobianos apropiados y facilita la aplicación de marcadores epidemiológicos. Una vez aislado el microorganismo de la muestra, se procede a su identificación, es decir, a clasificarlo dentro de un grupo o taxón ya establecido, con el que tenga la mayor semejanza. La complejidad de este proceso depende del nivel de precisión o discriminación que se pretende conseguir. Aunque en los últimos años se ha asistido a un crecimiento importante en la oferta de métodos genotípicos aplicados al diagnóstico microbiológico, en la mayor parte de los procesos de identificación se siguen utilizando métodos fenotípicos, puesto que su realización, lectura y coste los hacen más asequibles. En este capítulo se revisan las técnicas de identificación de las bacterias patógenas. Los métodos clásicos para la tipificación de las bacterias se basan en sus características morfológicas y metabólicas. Las pruebas diagnósticas se seleccionan en una base empírica, con el fin de proporcionar información sufi-

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hoy en día. Una colonia en cultivo puro está compuesta por un solo tipo de microorganismo y procede de una sola célula original. y la rapidez y la economía por otra. por una parte. la identificación en Microbiología Clínica representará siempre un compromiso entre la exactitud y precisión. especie (un grupo de cepas relacionadas entre sí). Uno de los factores clave para identificar a las bacterias como agentes patógenos depende de su aislamiento en cultivo puro. por ejemplo. las técnicas de biología molecular (basadas en la caracterización de genes específicos o segmentos de ellos) son cada vez más comunes y utilizadas en Microbiología Clínica. Las pruebas de identificación se deben hacer siempre con colonias únicas procedentes de cultivos puros. También permite realizar un seguimiento y control de las infecciones hospitalarias. las categorías y definiciones más utilizadas son familia (un grupo de géneros relacionados entre sí). biotipo. Dentro de la clasificación taxonómica. . potencialmente patógeno o contaminante. facilita el tratamiento de la enfermedad infecciosa con la mayor eficiencia posible.   Identificación BACTERIANA La taxonomía bacteriana tiene como objetivo la construcción de sistemas que permitan clasificar a las bacterias. La economía y la práctica dictan el uso de un número mínimo de pruebas diagnósticas. la identificación de un microorganismo debe ser lo más rápida posible. 3. lo que traerá consigo una disminución de las infecciones nosocomiales y/o comunitarias.  Objetivos Y utilidad DE LAS TÉCNICAS DE identificación La identificación de una bacteria sospechosa de ser la causa de una infección es uno de los instrumentos principales del diagnóstico y tratamiento de las enfermedades infecciosas. Por necesidad. Cómo se logra este compromiso es lo que determina la calidad diagnóstica en Microbiología. tipo (grupos de cepas interrelacionados dentro de las especies.28 Microbiología aplicada al paciente crítico ciente para hacer posible la discriminación entre los géneros y especies. y una menor generación de resistencias en los microorganismos. 2. género (un grupo de especies relacionadas entre sí). y deducir sus posibles mecanismos de resistencia. Para poder ser clínicamente útil. detectar un posible brote infeccioso y establecer una política de antibióticos coherente y apropiada en concordancia con el centro hospitalario o el área asistencial. serotipo) y cepa (aislamiento concreto de una especie en particular). Diferenciar un microorganismo patógeno per se. Además.

fagotipos. agrupación.   Métodos rápidos de identificación bacteriana El término de “método rápido” en microbiología engloba una amplia variedad de procedimientos y técnicas que permiten obtener resultados en menos tiempo que las pruebas diagnósticas convencionales. etcétera Resistencia a antibióticos: antibiograma y antibiotipos.1. pruebas de detección de antígenos y de anticuerpos. Incluso en las técnicas de diagnóstico molecular existe una gradación de celeridad. técnicas de identificación bioquímicas. Los procedimientos microscópicos que utilizan tinciones estándar y/o anticuerpos fluorescentes para detectar microorganismos específicos se consideran métodos rápidos y se utilizan para la diferenciación inicial o la identificación presuntiva de ciertos grupos de microorganismos. etcétera Observación microscópica Metabolismo Otras propiedades Tinciones: formas. siendo algunas de estas pruebas tan “rápidas” como la PCR “a tiempo real” . La identificación rápida de los cultivos clínicos también incluye equipos de identificación comerciales e instrumentos o sistemas robóticos e informáticos completamente automatizados. Existen métodos rápidos aplicables a la microscopía. Criterio Observación macroscópica Observación e inspección de colonias: disposición. tamaños. Las reacciones buscadas pueden ser obtenidas en un  Criterios y ejemplos metodológicos aplicados a la identificación bacteriana Metodología de ejemplo Tabla 1. producción de metabolitos secundarios. esporas. cápsula. Los equipos comercializados son habitualmente sistemas de pruebas miniaturizadas que utilizan sustratos cromogénicos o fluorogénicos para estudiar las enzimas preformadas. pigmentos. etcétera Baterías bioquímicas: uso de sustratos (oxidación/fermentación). textura. flagelos. estudio de sinergias o antagonismos.Técnicas de identificación 29 La taxonomía bacteriana convencional permite la identificación de géneros y especies mediante la aplicación de diversos criterios. formas. como los que se resumen a modo de ejemplo en la tabla 1. ribotipos. estudio de las concentraciones mínimas inhibitorias. etcétera . 3.

como motilidad bacteriana. Wright-­ Giemsa. detección de parásitos o protozoos o visualización de estructuras fúngicas. • Otras: hematoxilina férrica.   Tinciones rápidas El examen de las muestras debe iniciarse con la inspección visual ordinaria y proceder al nivel de magnificación necesario para visualizar el patógeno o determinar la ausencia del mismo. siendo las más usadas las tinciones diferenciales. de color violeta azulado. • Tinción ácido-alcohol resistente: se basa en que ciertos microorganismos no pierden la coloración por una mezcla de ácido y alcohol si han sido previamente teñidos con fucsina fenicada. recuento de leucocitos. la preparación de los cultivos y. que permiten distinguir a los microorganismos por alguna de sus características tintoriales peculiares: • Tinción de Gram: es de gran importancia en Microbiología. Las suspensiones en fresco permiten valorar algunos elementos. En la mayoría de los Servicios de Microbiología se realiza un examen macroscópico de la muestra mediante la inspección visual en el momento de realizar la extensión sobre el portaobjetos. según se comporten ante esta tinción. las tinciones microbiológicas permiten observar a los microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener. un examen microscópico mediante las tinciones elegidas (Tabla 2). posteriormente. de color granate o rojo-rosado). 3. determinados colorantes (Tabla 3). Las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos. Las capacidades y prestaciones de estos equipos y sistemas son muy variables y suelen incorporar sistemas de lectura mecanizada y automatizada mediante espectrofotómetros. .2. Las muestras pueden prepararse de diferentes formas para hacer a los microorganismos más fácilmente visibles y mostrar sus características estructurales. separando dos grandes grupos de bacterias (gram-positivas. aunque algunas de ellas pudieran requerir una incubación ampliada hasta el día siguiente. May Grunwald-Giemsa. tricrómica. lectura e interpretación de los resultados de las pruebas. o no.30 Microbiología aplicada al paciente crítico tiempo de 2 a 6 horas de incubación. el microscopio es el instrumento más necesario para un microbiólogo. realizando de forma secuencial la incubación. por lo tanto. ya que permite hacer diferenciaciones taxonómicas. Se dice que son microorganismos ácido-alcohol resistentes. por otra parte. códigos numéricos y bases de datos computarizadas. dado que permite la observación de microorganismos que no pueden ser apreciados con detalle a simple vista. y gram-negativas.

más apropiados según los microorganismos observados en la tinción. también un diagnóstico etiológico orientativo del líquido cefalorraquídeo (LCR) de un paciente con sospecha de meningitis.Técnicas de identificación 31 Tabla 2. •   Guía para el procesamiento de la muestra: orienta sobre la elección de los medios de cultivo. temperaturas y atmósferas de incubación.000 150 a 100 millones 20-10. sin lugar a dudas. que proporciona información sobre los siguientes aspectos: •   Taxonómico: permite la clasificación inicial de las bacterias usando criterios morfológicos (tamaño. como sucede con los esputos y otras muestras del tracto respiratorio. requerimientos nutricionales adicionales. etcétera. los cuales pueden teñir direc­ tamente las células o pueden acoplarse a anticuerpos que se fijan a las células Determina la ultraestructura de los orgá­ nulos celulares Determina las formas y estructuras de la superficie celular Microscopio de disección Microscopio óptico: –  De campo claro –  De campo oscuro –  Contraste de fases Microscopio de fluorescencia Microscopio electrónico: –  De transmisión –  De barrido 100-1.000 100-400 100-400 100-1. la tinción de Gram. •   Clínico: permite un diagnóstico presuntivo de bacteriuria significativa. agrupación. •   Control de calidad y validez de la muestra remitida para cultivo. etc. carácter tintorial). forma. Ojo humano Lupa o gafa-lupa  Sistemas de observación de los microorganismos patógenos Magnificación (x) Aplicación Herramienta 0 5 2. .000 La tinción más utilizada en microbiología es.5-30 Examen visual ordinario Examen visual ordinario con precisión Examen y manipulación visual precisa y detallada Células teñidas Células no fácilmente teñidas para visua­ lización en campo claro Células vivas y/o no teñidas Preparaciones usando tinciones con fluo­ rocromos.

contrastado sobre cortos o largos y las nocardias. LBA. pero puede diferenciar leva­ duras Los microorganismos AAR muestran un Las micobacterias son ba­ cilos rectos. LCR. preparaciones de Tzanck. orina. Los criptococos poseen una cápsula de Tinción inversa. en neumonía y meningitis de la morfología de bacterias comunes adecuada.) para identificar bacterias Ziehl-Neelsen. Aplicación Resultados esperados Comentarios Tinciones y métodos microscópicos para la detección rápida de microorganismos en muestras y materiales   infectados Tinción o método Wright-Giemsa LBA. etc. no incluye otros agentes in­ bacteriana fecciosos. muestras Morfología general de las estructuras Permite visualizar bacterias.32 Tabla 3. Detección de leucocitos. sangre y orina para Cryptococcus polisacáridos que aparece como un halo requiere experiencia para diferenciar sobre un fondo oscuro leucocitos de levaduras Digiere las proteínas de las muestras y facilita la visualización Microbiología aplicada al paciente crítico KOH 10% Examen directo de las extensiones de piel. color rojo granate. la cápsula no se tiñe. Visualiza elementos fúngicos pelos y uñas para ver dermatofitos . levaduras. reconocimiento Requiere experiencia para valoración sobre todo. bacilos un fondo azulado. Kinyoun ácido-alcohol resistentes (AAR) y para diferenciación de micobacterias y algunos actinomicetales aerobios (AAR parcial) Microscopía de campo oscuro Examen directo de lesiones con sospecha Se ven espiroquetas móviles de sífilis primaria Tinta china Examen directo de la extensión de LCR. permite detectar arboriformes y ramificados también parásitos como Cryptosporidium y Cyclospora Requiere experiencia Tinciones de muestras (esputos. con fondo celular complejo ce­ lulares parásitos e inclusiones virales Corynebacterium diphteriae Azul de metileno Gránulos metacromáticos de corinebac­ Morfología general y seleccionada terias Gram Permite hacer diagnóstico presuntivo.

Tabla 3. fluorescen tanto bacterias viables como no viables Blanco calcoflúor Examen directo de LCR.nú­ cleos de las bacterias. pero no turas fúngicas y algunos quistes parasi­ a bacterias o células inflamatorias. Aplicación Resultados esperados Comentarios Tinciones y métodos microscópicos para la detección rápida de microorganismos en muestras y materiales   infectados (continuación) Técnicas de identificación Tinción o método Naranja de acridina Es eficaz para diferenciar verdaderos mi­ .Tinción de fluorocromo fijada a los Requiere el uso de microscopio de fluo­ cro­ organismos de artefactos. por su rendimiento en el cribado de gran número de muestras Requiere el uso de microscopio de fluo­ rescencia 33 . se tarios prefiere a la tinta china y a preparaciones de KOH Requiere el uso de microscopio de fluo­ rescencia Auramina-rodamina Es útil para búsqueda de AAR en una Extensiones concentradas de sedimentos variedad de muestras clínicas. especialmen. que muestran rescencia te en hemocultivos fluorescencia naranja sobre un fondo oscuro.fluorescencia blanquecina suave celular de hongos y levaduras. LBA y otros Las levaduras y mohos muestran una Tinción fluorescente que se fija a la pared líquidos corporales para detectar estruc. especial­ de micobacterias mente. las más contaminadas con flora normal Tinción preferida para microorganismos AAR.

pero no permiten el aislamiento de una sola especie bacteriana a partir de muestras propensas a la contaminación con un gran número de microorganismos comensales. Los medios de cultivo sólidos pueden clasificarse en: 1. espirales o helicoidales. parejas. tétradas. racimos. o no. •   Puede proporcionar ayuda para orientar la asistencia.3. 2. • ¿Cuál es su disposición y estructura individual o integrada?. como en la adopción precoz de medidas preventivas y de control epidemiológico. ¿son bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR).? y… • ¿De qué tamaño son las células?: ¿grandes.   Identificación presuntiva por la morfología de las colonias Gracias al cultivo microbiológico se obtiene información adicional que es muy valiosa para aislar e identificar a los microorganismos. sistemas indicadores y tampones que ayudan a la .34 Microbiología aplicada al paciente crítico •   Puede indicar la conveniencia de aplicar otras técnicas de diagnóstico rápido (detección de antígenos o de anticuerpos. agrupamientos ordenados o desordenados. o sólo parcialmente? • ¿Cuál es la morfología de las células bacterianas visualizadas?: bastones o bacilos. de dimensiones bacterianas o de aspecto fúngico (levaduriforme o filamentoso micelial)? 3. tanto en pautas terapéuticas empíricas de antimicrobianos. pequeñas. difteromorfos o corinebacteriformes.   “Medios selectivos”: ayudan en el aislamiento de especies de importancia médica en presencia de especies comensales.    “Medios no selectivos” (agar sangre y agar chocolate): posibilitan el crecimiento de muchas especies diferentes de bacterias. •   Guía la calidad del proceso que exige concordancia entre los microorganismos que se observan en la visión directa y los que se obtienen. etc. técnicas de biología molecular). ¿aparecen las células en forma separada o configurando cadenas. cocos. recuperan o aislan por cultivo. El aspecto de las bacterias en el microscopio permite plantear las siguientes cuestiones clave para el diagnóstico microbiológico: • ¿Qué características tintoriales presentan las imágenes o elementos visualizados en las preparaciones?: ¿se trata de bacterias gram-positivas o gram-negativas?. cocobacilos. mediante la adición de sustancias inhibidoras. pleomórficas (forma variable).

sirve de ayuda para la identificación presuntiva. se deben apreciar las principales características de las colonias: tamaño (en general. Streptococcus agalactiae. consistencia y olor. particularmente. las bacterias gram-positivas producen colonias algo más pequeñas que las gram-negativas). Listeria monocytogenes).: S. grado de elevación. Cambios en medios diferenciales: en los medios de cultivo diferenciales se incluyen diversos colorantes. Tipo de hemólisis en el medio de agar sangre.). La hemólisis es una reacción observada en el medio circundante o subyacente a la colonia. superficie. Reacciones en el medio de agar usadas para la identificación de bacterias: 1. 2. color. estreptococos del grupo viridans). azul (Kluyvera spp.Técnicas de identificación 35 detección diferencial (agar MacConkey. orina o exudados genitourinarios). forma. a veces. borde. La interpretación de los cultivos primarios. heces. Es posible hacer una identificación preliminar de muchas bacterias importantes en la clínica. agar VCAT o VCN). Producción de pigmentos en medio de agar: es una de las características inherentes de cada microorganismo específico y pueden estar confinados a la propia colonia o colorear el medio: verde. indicadores de pH y otros componentes meta- . después de 24-48 h de incubación. y debe valorarse frontalmente y por transiluminación. rojo-rosado (Serratia marcescens). Características macroscópicas de las colonias: Después de un examen visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar. pneumoniae. agar CLED. • b-hemólisis: eliminación completa de la sangre circundante o subyacente a las colonias por lisis completa de los hematíes (ej. púrpura (Chromobacterium violaceum) o marrón negruzco (Prevotella melanino­ ge­ nica). originando una decoloración verduzca en el medio (ej. aeruginosa). con brillo metálico (P. basándose en unas pocas y sencillas características macroscópicas de las células apreciables en su disposición en forma de colonias sobre los medios de cultivos en que crecen y se aislan. requiere una evaluación de las colonias con una sistemática bien estructurada. densidad.: Streptococcus pyo­ genes. Se utilizan para sembrar diferentes tipos de muestras contaminadas (intraabdominales. • a-hemólisis: eliminación parcial de la sangre en torno a la colonia. de los estreptococos. agar XLD.

3. que actúan como indicadores de las actividades enzimáticas y ayudan a identificar a las bacterias aisladas. 3. •   Incrementar la calidad de los cuidados del paciente a través de la comunicación rápida de los resultados.36 Microbiología aplicada al paciente crítico bólicos. como los coprocultivos y urocultivos. •   Tener un papel significativo en el control de calidad.  Baterías y pruebas adicionales En la práctica.   Pruebas bioquímicas rápidas Existen varias pruebas bioquímicas de realización fácil y rápida sobre colonias aisladas a partir de medios de cultivo que permiten la diferenciación presuntiva rápida entre grupos de microorganismos o entre especies bacterianas. valorando la correlación de los resultados generados con la identificación esperada. 1) o usando una batería de pruebas simultáneas que permita la identificación aproximada o defi- . la identificación bacteriana se puede realizar con métodos convencionales o con métodos semi o totalmente automatizados. La capacidad de la morfología colonial para hacer una identificación presuntiva permite: •   Realizar un diagnóstico presuntivo rápido en un momento de necesidad crítica basado en el juicio razonado del microbiólogo.4. debidas a inóculos mixtos que alterarían la identificación). especialmente. En la tabla 4 se resumen los principios. especialmente. estas pruebas pueden orientar sobre las técnicas adicionales necesarias para hacer una identificación definitiva.5. muy útiles en determinados tipos de muestras. aumentando el coste-efectividad de las pruebas microbiológicas (diferenciación de patógenos potenciales de la flora normal). los modos de acción y las aplicaciones de algunos de estos procedimientos. Crecimiento en medios líquidos: hay claves importantes para la identificación de los microorganismos que pueden ser detectadas observando el crecimiento en los medios líquidos. en el caldo de tioglicolato o en otros como el Brain-Heart-Infusion (BHI). de los procedimientos automatizados y de otros sistemas de identificación comercial disponibles (evitar interpretaciones erróneas. Los métodos convencionales se suelen llevar a cabo en forma de cascada decisoria. Además. con un algoritmo de identificación consensuado o estandarizado (Fig.

sangre o LCR Catalasa Solubilidad en bilis PYR (L-pirrolidonil-B. Prueba  Principios. Siempre se parte de una identificación preliminar (basada en la tinción de Gram.Técnicas de identificación 37 Tabla 4. color azul-morado). Diferencia Enterococcus de los es­ treptococos del grupo D (reacción +. color rojo brillante) Ureasa (rápida) Ureasa Prueba de cribado (positiva.L.) que permite simplificar la batería a un mínimo de pruebas necesarias y apropiadas. Proteus vulgaris Determina la fermentación de lactosa (color amarillo) en fermentadores lentos de la lactosa. Neisseria lactamica de especies patógenas de Neisseria Oxidasa Citocromo C oxi­ Diferenciación entre los no-fermentadores dasa (reacción +. Diferencia. modos de acción y aplicaciones de algunas pruebas bioquímicas rápidas Enzima bacteriana Aplicaciones Indol ONPG Triptofanasa b-galactosidasa Reacción positiva (color rojo) identifica a E. etc. Klebsiella y Yersinia ente­ rocolitica Especiación de Streptococcus agalactiae. coli. también ayuda a la identificación de Neisseria.pirroglutamil. aureus de estafilococos coagulasa negativos Hipurato (rápido) Plasmocoagulasa nitiva. Campy­ lobacter jejuni y Listeria Diferencia S. morfología colonial. Aeromonas. color rojo) para Cryptococcus. . Proteus. Vibrio y Campylobacter Catalasa Diferenciación de estafilococos (reacción + con burbujeo) de estreptococos (reacción -) y de Listeria de los estreptococos Identificación presuntiva de Streptococcus pneumoniae (colonias lisadas) en cultivos de esputo. por ej..Identificación de estreptococos del grupo A de naftilamida) amino-peptidasa Lancefield.

Por otra parte. MicroScan Walk-Away®. hidrólisis del hipurato. En la identificación de los cocos gram-positivos catalasa positivos es muy importante diferenciar a Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de los estafilococos coagulasa negativos (ECN). Vitek2®. Por ello. .38 Microbiología aplicada al paciente crítico Gram y morfología Coco gram-positivo Catalasa Negativa Positiva Coagulasa Negativa ECN Positiva Staphylococcus aureus No coco gram-positivo Figura 1. del tipo de las enterobacterias. conocer el fenotipo de sensibilidad antibiótica de una determinada especie ayuda de forma determinante a la identificación final. Para la identificación de los bacilos gram-negativos (BGN) aerobios. que permitan identificar el género. ECN: estafilococos negativos para la coagulasa. crecimiento en forma de satélite con una cepa de S. lo más habitual es utilizar galerías comerciales (API rapid ID 32 STREP®. la especie (patrón hemolítico. ya que existe una gran variedad de géneros. aureus hemolítica. y en algún caso. Phoenix® o Wider®).   Ejemplo de identificación por algoritmo en cascada. se realiza una batería de pruebas bioquímicas con la que se identifica a los que se aíslan más frecuentemente en nuestro medio. la identificación preliminar es esencial. prueba del CAMP. Además. para la identificación de los cocos gram-positivos catalasa negativos. solubilidad en bilis y optocina). piracinamidasa. Si interesa la identificación de la especie. se aconseja una identificación en cascada con unas pocas pruebas convencionales.

como el sistema Phoenix®.Técnicas de identificación 39 Para la identificación de los bacilos gram-positivos de los géneros Coryne­ bacterium y Bacillus. a los estreptococos beta-hemolíticos. o el API 50 CHB® para el género Bacillus o mediante métodos automáticos. Aunque para una mayor seguridad en la identificación se puede utilizar también un sistema de galerías para los bacilos corineformes (API Coryne)®. MicroScan Walk-Away ® (Dade). 3. además. el microbiólogo debe comprobar que los resultados de los métodos automáticos se corresponden con los de otras pruebas y con su sospecha diagnóstica.6. permitiendo conseguir la identificación de la especie. Algunos sistemas disponen de paneles especiales para Streptococcus pneumoniae. a los enterococos. Por lo tanto. Phoenix® (Becton-Dickinson) y Wider® (Soria Melguizo). etc. tinción de Gram. estos sistemas requieren controles de calidad estrictos. La diferencia fundamental se encuentra . muchos de estos sistemas permiten realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos al mismo tiempo. Para la identificación de bacterias anaerobias es importante realizar una identificación preliminar. pero estos métodos no permiten siempre la identificación de todas las bacterias. color. En general. Además. Todos los sistemas automáticos actuales son parecidos en cuanto a rendimiento de porcentajes de identificación. disposición y patrón de hemólisis. características al microscopio. hemólisis. dado que en su base de datos incluyen a la gran mayoría de las bacterias clínicamente importantes. Corynebac­ terium y Bacillus) y levaduras. Una identificación definitiva se puede realizar con galería de pruebas como el API rapid ID 32 A®. En general. conocer el género. identifican bien a los BGN del tipo de las enterobacterias y a los BGN no fermentadores. presencia de esporas. Entre los métodos de identificación automáticos comercializados se en­ cuen­ tran Vitek2® (bio-Mérieux). La principal característica de estos métodos es su fácil y cómoda realización. en algunos casos.   Métodos semi o completamente automatizados En el mercado existen varios métodos de identificación semiautomáticos y automáticos que superan a los métodos convencionales por su fácil realización y el menor tiempo que requieren para alcanzar una identificación definitiva de la especie. en función de la morfología. la diferenciación preliminar debe hacerse por la morfología de la colonia. a algunos estreptococos alfa-hemolíticos y a los estafilococos. los métodos auto­ máticos se deberían utilizar para la identificación sistemática en el laboratorio de microbiología. que permite. BGP (como los de los géneros Listeria.

al menos. identificación y análisis de las bacterias que causan enfermedades en los seres humanos es una de las principales funciones del microbiológo clínico. •   La capacidad de las bacterias para cambiar rápidamente. para tres de las áreas fundamentales de la microbiología médica: –  Cultivo de los microorganismos a partir de las muestras de los pacientes. –   Clasificación e identificación de los microorganismos después de haber sido aislados. como el Vitek2®. •   La determinación de las características tintoriales. . El conocimiento de la estructura. Unos emplean simples reglas que aplican a los resultados y otros. patrones y mecanismos de resistencia. •   Las diferencias bioquímicas y metabólicas entre microorganismos conforman la base de la mayoría de los sistemas de identificación bacteriana actualmente en uso. colonizante o contaminante. fisiología y metabolismo bacteriano es muy importante. Resumen •   El aislamiento. •   El conocimiento de los requerimientos nutricionales de una bacteria concreta permite al microbiólogo seleccionar los medios apropiados de cultivo primario y optimizar las posibilidades de aislamiento del patógeno. y que son actualizadas periódicamente. utiliza el AES (sistema experto avanzado) que está basado en el reconocimiento fenotípico del mecanismo de resistencia de la bacteria deducido a partir de la CMI y aplicando la comparación con una base de datos que incorpora los resultados de las CMI publicadas en la bibliografía. es el primer paso hacia la clasificación taxonómica de la bacteria. así como de sus fenotipos. basadas en las diferencias de la estructura de la pared celular. o en documentos de consenso. adquirir nuevos genes y sufrir mutaciones plantea continuos retos diagnósticos al microbiólogo en relación con el aislamiento y caracterización de los microorganismos asociados a las infecciones en humanos.40 Microbiología aplicada al paciente crítico en las pruebas de sensibilidad y en el sistema experto que utilizan. –  Predicción e interpretación de su posible papel patógeno.

4. 2003.Técnicas de identificación 41 4. 8ª  ed. 2003. editors. USA: W. Editorial Médica Panamericana. Gobernado M. 1999. Baron EJ. Diagnóstico Microbiológico. Saunders Company. 5. Métodos microbiológicos en el diagnóstico de infecciones. 3. 5ª ed. Gobernado S. 2006.B. Janda EM. Koneman EW. 2. et al. Murray PR. Textbook of diagnostic microbiology. López Hontangas JL. Mahon CR. Manual of Clinical Microbiology. . Jorgensen JH. Córdoba J. Washington: ASM Press. Enferm Infecc Microbiol Clin. En: Enfoque clínico de los grandes síndromes infecciosos. López-Hontangas JL. Madrid. Identificación bacteriana. 2):54-60. 2ª ed. 1995. Texto y Atlas Color.21(Supl. Allen SD. Philadelphia. Pennsylvania..  BIBLIOGRAFÍA 1. Manuselis G Jr.

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