PESQUISAS QUMICAS EM FEZES

Dosagens de: cidos orgnicos totais ou cidos de fermentao Amonaco e cidos aminados Enzimas pancreticas das fezes Pesquisa de substncias redutoras Pesquisa de gordura nas fezes

Teste de Digestibilidade - MTODO: Schmidt e Strasburger. Dosagem de gordura fecal - MTODO: Van de Kamer modificado. Pesquisa gordura fecal - MTODO: Sudam III. Avaliao diagnstica de esteatorria. Processos de m digesto e malabsoro podem causar esteatorria. Pacientes com m digesto excretam triglicrides, enquanto pacientes com malabsoro excretam cidos graxos em excesso. Esta anlise permite esta distino. Em casos de insuficincia excrina pancretica, contudo, a liberao de triglicrides pode ser normal. A pesquisa de cidos graxos encontra-se alterada em casos de insuficincia excrina pancretica ou condies malabsortivas de intestino delgado. Interferentes: metamucil, brio, bismuto, enzimas pancreticas. A presena de at 100 gotculas por campo (450 x aum.) considerada normal.

PESQUISA DE GORDURA NAS FEZES. Mtodo: Qumico-microscpico Fundamento: A gordura neutra presente nas fezes tinge-se em laranja-vermelho na presena de Sudam II ou III, enquanto que os cidos graxos apenas so evidenciados aps acidificao e aquecimento da amostra fecal. A estimativa da quantidade de gordura nas fezes feita por comparao com amostra fecal controle obtida de um animal sadio submetido mesma alimentao do paciente. Amostra: Fezes frescas ou mantidas refrigeradas por at 24 horas. Materiais e equipamentos cido Actico Glacial. Bico de Bunsen. Basto de vidro. Lminas e lamnulas para microscopia desengorduradas. Microscpio ptico com objetiva de 10X. Corante: Sudam II ou III (soluo alcolica saturada) Sudam II ou III .............................................................1 g lcool a 70% + Acetona (partes iguais) q.s.p...................100 ml. Procedimento 1. Misturar uma pequena poro de fezes frescas (equivalente a um gro de arroz) 1. com soluo salina sobre a lmina. 2. Colocar duas gotas de Sudam II ou III e misturar bem com um basto de vidro. 3. Cobrir com a lamnula. 4. Examinar ao microscpio com aumento 100x e 400x; se houver a presena de gordura neutra nas fezes, estas se apresentaro como glbulos corados em alaranjado e vermelho (Fig.16A). 5. Repetir o processo (passos 1, 2 e 3) adicionando previamente cido actico s fezes. 6. Aquea levemente a lmina com auxlio de um bico de Bunsen. 7. Examinar ao microscpio com aumento 100x e 400x. A reao forte com Sudam (vermelho) indica presena de gordura na forma de cidos graxos.

Presena de gordura neutra (gotculas vermelhas) em fezes coradas com Sudam II (A). Presena de amido (seta preta) e fibra parcialmente digerida (seta branca) em fezes coradas com lugol (B). Imagens com aumento 100X.

PESQUISA DE AMIDO E FIBRAS NAS FEZES. Mtodo: Qumico-microscpico Fundamento: O amido nas fezes tinge-se de preto na presena de iodo. As fibras no digeridas so facilmente evidenciadas na presena de soluo iodada de lugol. A quantidade de amido presente nas fezes do paciente comparada com amostra fecal de um animal sadio submetido mesma alimentao do paciente. Para melhor anlise da presena de amido e fibras musculares nas fezes, deve-se oferecer ao animal, nas refeies que antecederem o exame, uma dieta caseira contendo arroz e carne. Amostra: Fezes frescas ou mantidas refrigeradas por at 24 horas. Materiais e equipamentos Basto de vidro. Lminas e lamnulas para microscopia limpas e desengorduradas. Microscpio ptico com objetiva de 10X. Soluo forte de lugol: Iodo .............................................. 1g Iodureto de potssio .....................2g gua destilada q.s.p......................50 ml Procedimento 1. Misturar uma pequena poro de fezes frescas (equivalente a um gro de arroz) com soluo salina sobre a lmina. 2. Colocar duas gotas de lugol e misturar bem com um basto de vidro. 3. Cobrir com a lamnula. 4. Examinar ao microscpio com aumento 100x e 400x. O amido nas fezes se apresentar como glbulos corados em preto e as fibras no digeridas apresentam-se na forma de cilindro amarelado com aresta e estrias bem visveis.

PESQUISA DE TRIPSINA FECAL. Mtodo: Filme radiogrfico. Fundamento: A emulso protica que reveste o filme radiogrfico digerida pela tripsina fecal em meio alcalino. Amostra: Fezes frescas ou mantidas refrigeradas por at 24 horas. Materiais e equipamentos Banho-maria a 37 oC. Tiras (15 cm x 0,8 cm) de filme de raio-x usadas (parte preta). Tubos de ensaio de 100 x 10 mm. Soluo aquosa de bicarbonato de sdio 5%. Procedimento 1. Em um tubo A misturar uma parte de fezes frescas ( 1 ml) de um animal sadio com nove partes de soluo de bicarbonato de sdio 5%. Repetir o procedimento em um tubo C utilizando fezes do paciente suspeito de insuficincia pancretica. Em um tubo B controle adicione apenas soluo de bicarbonato (Fig.A). 2. Colocar uma fita de raio-x em cada um dos tubos e incuba-los por duas horas em temperatura ambiente (Fig.B) ou por uma hora a 37 C em banho-maria (Fig.C). 3. Lavar as fitas em gua corrente. Na presena de tripsina fecal a emulso protica do filme radiogrfico desaparecer (Fig., fita A). Nos casos de insuficincia pancretica (Fig., fita C) e no tubo controle (Fig., fita B) o filme se manter inalterado. Eventualmente, se ocorrer digesto da fita do tubo controle (B), o teste dever ser repetido com outro lote de filme radiogrfico. Principais procedimentos para a pesquisa de tripsina fecal. As fezes de um animal sadio controle (A, tubo A) e do paciente (A, tubo C) so diludas em soluo de bicarbonato na proporo de (1:9) e incubada com fitas radiogrficas na temperatura ambiente (B) ou em banho-maria (C). Fezes de normais contendo tripsina fecal digerem o filme radiogrfico (D, fita A), enquanto que em amostras fecais de pacientes com insuficincia pancretica (D, fita C) ou na ausncia de fezes (D, fita B) a emulso protica no digerida, permanecendo o filme inalterado.

EXAME PARASITOLGICO DO SANGUE

MTODOS DIRETOS Exame a fresco ou direto: Para realizao desta tcnica, uma pequena gota de sangue obtida por puno da polpa digital ou de sangue venoso colhido com anticoagulante colocada entre lmina e lamnula e examinada exaustivamente ao microscpio em objetiva de (40 x). Entretanto, face aos pequenos volumes de sangue examinados a cada vez, o mtodo necessita ser repetido vrias vezes ao dia ou mesmo em dias consecutivos at que o parasita possa ser detectado. Preparaes coradas: O esfregao delgado e a gota espessa devem ser preparados e corados pelo mtodo de Giemsa ou de Leishman. O exame do material corado permite, alm da deteco, a diferenciao morfolgica entre tripomastigotas sangneos de T. cruzi e T. rangeli e a identificao especfica de Plasmodium spp. A desvantagem dos esfregaos corados que estes normalmente requerem parasitemias elevadas para evidenciao do parasita. No entanto, a utilizao de diferentes mtodos parasitolgicos isolados ou combinados, podem levar deteco rpida e precoce da infeco.

MTODOS INDIRETOS Hemocultura: O T. cruzi capaz de crescer e de multiplicar-se em diferentes meios de cultura acelulares que contenham hemina ou derivados da hemoglobina. A hemocultura uma tcnica mais difcil de ser realizada uma vez que requer condies asspticas para a coleta e o manuseio da amostra de sangue, o que a torna pouco prtica nos trabalhos de campo. A tcnica consiste em coletar cerca de 10 ml de sangue venoso do paciente com anticoagulante e semear alquotas de cerca de 1 a 2 ml de sangue total em tubos contendo 5 ml de meio LIT. As culturas so mantidas a 28C e examinadas em intervalos de 15 dias at um total de 4 meses. As percentagens de positividade obtidas na hemocultura convencional por diferentes estudos so muito semelhantes a quelas observadas para o xenodiagnstico. Xenodiagnstico: Este mtodo introduzido por Brumpt em 1914 largamente empregado ainda nos dias atuais no diagnstico da doena de Chagas. A multiplicao do T. cruzi no trato digestivo do triatomneo permite sua deteco nas fezes ou na urina dos insetos alimentados com sangue do paciente ou de animais suspeitos aps um perodo 1 a 3 meses. O xenodiagnstico uma tcnica perfeitamente aplicvel para a pesquisa de campo e/ou isolamento de amostras de T. cruzi de pacientes e/ou animais. Entretanto, sua utilizao em pacientes pode ocasionar com certa frequncia reaes alrgicas decorrentes da saliva dos triatomneos levando rejeio do exame pelo paciente.

Neste mtodo, recomenda-se a utilizao de 30 a 40 ninfas de 3o a 5o estgio de desenvolvimento, as quais so criadas em condies controladas em laboratrio, sendo portanto livres do parasita. As ninfas em jejum alimentar de 20 a 30 dias so acondicionadas em pequenas caixas cobertas com tela, as quais so aplicadas diretamente sobre o hospedeiro por 30 a 60 minutos, at completar-se a alimentao dos insetos. Em humanos, a caixa aplicada no antebrao e em animais deve-se escolher um local onde os pelos no dificultem a alimentao dos triatomneos. O exame dos insetos para pesquisa do T. cruzi realizada aos 30 e 60 dias aps o repasto sanguneo, devendo ser realizada individualmente ou em grupos dependendo do propsito do estudo. As fezes ou urina dos triatomneos so obtidas atravs de uma leve compresso do abdmen dos insetos, adicionadas de uma gota de soluo salina e em seguida examinadas a fresco ao microscpio tico entre lmina e lamnula, ou utilizadas para a confeco de preparaes coradas. Cultura: A cultura de Leishmania pode ser realizada a partir do fragmento de tecido retirado na bipsia do bordo da leso que semeado em meio LIT (liver infusion tryptose), NNN (gar-sangue)+ LIT ou Schneider. A coleta do material pode ser feita atravs de aspirao de material da leso

utilizando-se uma seringa de 5 ml com agulha de 25x8 , onde, aps assepsia e anestesia local, a agulha introduzida no bordo da leso injetando-se cerca de 1-3 ml de salina estril e, atravs de movimentos rotacionais, possvel aspirar o material o qual pode ser semeado em meio de cultura. Leishmaniose visceral: Na leishmaniose visceral (LV) o agente etiolgico a L. chagasi, a qual demonstrada em amostras de tecido obtidas por puno de vsceras (bao, fgado e medula ssea). A bipsia de bao e fgado so procedimentos de elevado risco e s devem ser realizados em condies especiais. Face maior simplicidade e menor risco ao paciente, o material de medula ssea coletado atravs de puno do esterno, tbia ou da crista ilaca, sendo esta a preferencial em adultos. Com o material coletado devem ser feitos esfregaos corados pelo Giemsa, semeadura em meio de cultura NNN+LIT, inoculao em hamster, e se possvel, esfregaos sobre papel Whatman No 1 esterilizado ou papel de nitrocelulose, visando-se ao diagnstico por PCR. A cultura deve apresentar-se positiva aps um perodo de at 4 a 5 semanas, sendo que os repiques das culturas devem ser feitos semanalmente. A inoculao de animais, embora no tenha aplicao prtica para fins de diagnstico imediato, pode ser til para o isolamento do parasita visando a sua caracterizao e estudos epidemiolgicos.