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Ciencia y Tecnologa

Amaranto:

Ciencia y Tecnologa

Amaranto:

Editor

Eduardo Espitia Rangel

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias Mejoramiento Gentico de Cereales (Amaranto, Avena y Trigo) Celaya, Guanajuato, Mxico Libro Cientfico No. 2 Diciembre 2012

Eduardo Espitia Rangel


Naci en el rancho El Varal de Cabrera, Municipio de Abasolo, Gto. el 12 de agosto de 1957 en el seno de una familia campesina muy humilde. Estudi la carrera de Ingeniero Agrnomo en la Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro en Saltillo Coah., Maestra en Ciencias en el Colegio de Posgraduados y Doctorado en la Universidad de Nebraska en Lincoln con especialidad en mejoramiento gentico de plantas. A la fecha ha publicado ms de 75 artculos cientficos, 6 libros, 54 publicaciones de difusin y divulgacin, 37 tesis dirigidas o asesoradas, 15 captulos de libro y ha participado en la liberacin de 26 variedades mejoradas (16 de trigo, 6 de avena y cuatro de amaranto). Las lneas de investigacin actuales comprenden mejoramiento gentico de trigo, avena y amaranto en reas como: conservacin y uso de recursos genticos, resistencia a sequa, contenido y calidad de protenas en trigo, calidad forrajera de avena, mejoramiento gentico para resistencia a enfermedades en cereales y gentica biomtrica. Actualmente es coordinador de la Red de Amaranto del Sistema Nacional de Recursos Fitogenticos, Director Regional del CIR Centro del INIFAP y miembro del Sistema Nacional de Investigadores Nivel 3.

Amaranto: Ciencia y Tecnologa Primera Edicin 2012 Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias Progreso No. 5, Barrio de Santa Catarina Delegacin Coyoacn, C.P. 04010 Mxico, D.F. Telfono (55)3871-8700 Derechos Reservados ISBN: 978-607-425-897-4 No est permitida la reproduccin total o parcial de esta publicacin, ni la trasmisin de ninguna forma o por cualquier medio, ya sea electrnico, mecnico, fotocopia, por registro u otros mtodos, sin el permiso previo y por escrito de la institucin. Cita correcta: Autor(es) de captulo. 2012. Ttulo del captulo. In: Espitia Rangel E. (ed). Amaranto: Ciencia y Tecnologa. Libro Cientfico No. 2. INIFAP/SINAREFI. Mxico, pp (pginas del captulo consultado).

Eduardo Espitia Rangel Editor Crea Diseo Grfico Diseo y diagramacin Diana Escobedo Lpez Edicin

Comit Editorial del CIRCE Presidente Dr. Eduardo Espitia Rangel Secretario Dr. A. Josu Gmez Vzquez Vocales M.C. Santa Ana Ros Ruz Dra. Martha Blanca G. Irizar Garza Dr. Francisco Becerra Luna Dra. Alma Velia Ayala Garay Dr. Alejandro Rodrguez Guilln Revisores Tcnicos Jos Luis Anaya Lpez, Erica Muz Reyes, Mario Gonzlez Chavira, Vctor Montero Tavera, Oscar A. Grageda Cabrera, Gerardo Armando Aguado Santacruz, Jos Luis Pons Hernndez, Luis Antonio Mariscal Amaro, Talina Olivia Martnez Martnez, Miguel ngel vila Perches, Jos Roberto Augusto Dorantes Gonzlez, Salvador Horacio Guzmn Maldonado, Mara Guadalupe Herrera Martnez, Alvaro Loza Pea y Bertha Larque Saavedra.

Al nonillo del Varal Municipio de Abasolo, Gto. y a todos los nios campesinos que han tenido que luchar inmensamente para llegar a ser alguien en la vida.

SECRETARA DE AGRICULTURA, GANADERA, DESARROLLO RURAL, PESCA Y ALIMENTACIN Lic. Enrique Martnez y Martnez
Secretario

Lic. Jess Aguilar Padilla


Subsecretario de Agricultura

Prof. Arturo Osornio Snchez


Subsecretario de Desarrollo Rural

Lic. Ricardo Aguilar Castillo


Subsecretario de Alimentacin y Competitividad

Lic. Marcos Bucio Mjica


Oficial Mayor

SERVICIO NACIONAL DE CERTIFICACIN DE SEMILLAS Ing. Enriqueta Molina Macas


Directora General del SNICS

INSPECCIN

M. en C. Rosalinda Gonzlez Santos


Subdirectora de Recursos Fitogenticos

INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIONES FORESTALES, AGRCOLAS Y PECUARIAS Dr. Pedro Brajcich Gallegos
Director General

Dr. Salvador Fernndez Rivera


Coordinador de Investigacin, Innovacin y Vinculacin

M.Sc. Arturo Cruz Vzquez Lic. Marcial Garca Morteo

Coordinador de Planeacin y Desarrollo Coordinador de Administracin y Sistemas

CENTRO DE INVESTIGACIN REGIONAL CENTRO Dr. Eduardo Espitia Rangel


Director Regional

Dr. Alfredo Josu Gmez Vzquez


Director de Investigacin

Dr. Mario Martn Gonzlez Chavira


Director de Planeacin y Desarrollo

C.P. Manuel Ortega Vieyra


Director de Administracin

CAMPO EXPERIMENTAL BAJO M.C. Roberto Paredes Melesio


Jefe de Campo

Autores
Alma Velia Ayala-Garay Diana Escobedo-Lpez

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato.

Ana Paulina Barba-de la Rosa

Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A.C., San Luis Potos, S.L.P.

Dora Mara Sangerman-Jarqun

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Araceli Daz-Ortega

Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Coyoacn, Mxico, D.F.

Eduardo Espitia-Rangel

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato.

Ariana Navarro-Melndez

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Enrique Maldonado-Cervantes

Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A.C., San Luis Potos, S.L.P.

Aurora Montfar-Lpez

Subdireccin de Laboratorios y Apoyo Acadmico, Instituto Nacional de Antropologa e Historia, Mxico, D.F.

Erandi Vargas-Ortiz

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Axel Tiessen

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Erica Muiz-Reyes

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Carlos Alberto Nez-Coln

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato.

Fannie Isela Parra Cota

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Ciro. G. S. Valds-Lozano

Divisin de Estudios de Posgrado, Facultad de Agronoma, Universidad Autnoma de Nuevo Len, Marn, N. L.

Gabriel Alejandre-Iturbide

Instituto Politcnico Nacional, Centro Interdisciplinario de Investigacin para el Desarrollo Integral Regional, Unidad Durango. Durango, Dgo.

Cristina Mapes-Snchez

Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Coyoacn, Mxico, D.F.

Guadalupe Palomino

Laboratorio de Citogentica, Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Coyoacn, Mxico, D.F.

Hugo S. Aguilar-Hernndez

Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A.C., San Luis Potos, S.L.P.

Kena Casarrubias-Castillo

Javier Martnez

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Laboratorio de Citogentica, Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Coyoacn, Mxico, D.F.

Micaela de la O-Oln

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Jess Garca-Pereyra

Instituto Tecnolgico del Valle del Guadiana, Durango, Dgo.

Miriam Jazmn Aguilar-Delgado

John P. Dlano-Frier

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato.

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Norma A. Martnez-Gallardo

Jos ngel Huerta-Ocampo

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A.C., San Luis Potos, S.L.P.

Paola A. Palmeros-Surez

Jos Blancas

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Centro de Investigaciones en Ecosistemas. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Campus Morelia. Morelia, Michoacn.

Patricia Rivas-Valencia

Jos Luis Arellano-Vzquez

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Paula A. Castrilln-Arbelez

Juan Manuel Hernndez-Casillas


Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Rub V. Reyes

Julio A. Massange-Snchez

Laboratorio de Citogentica, Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Coyoacn, Mxico, D.F.

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Sara Hirn Morn-Bauelos

Lorena Corts-Espinoza

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias. Campo Experimental Zacatepec.

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Silvia Edith Valds-Rodrguez

Luz Gabriela Campos-Silva

Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato), Irapuato, Gto.

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato.

Vctor Cuauhtmoc Hernndez

Ruiz-

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Valle de Mxico, Coatlinchn, Estado de Mxico.

Contenido
Etnohistoria
Amaranto (Amaranthus), planta ritual mesoamericana. Tzoalli, de cuerpo de dioses a alegra de mortales.
3-13 15-27

Gentica molecular
El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento. Identificacin de genes de respuesta a estrs por calcio y sequa en amaranto. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs. Anlisis protemico del amaranto, sometido a herbivora y evocadores de resistencia a insectos. Respuestas moleculares y bioqumicas inducidas en Amaranthus cruentus en respuesta a la defoliacin por insectos herbvoros. La defoliacin por dao mecnico y herbivora en Amaranthus cruentus induce simultneamente respuestas de tolerancia y resistencia. Uso de bacterias promotoras de crecimiento vegetal para aumentar la productividad de amaranto de grano. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto
31-48

49-58

59-74

75-84 85-97 99-111

113-127 129-144

Recursos genticos
Conservacin de los recursos genticos de amaranto (Amaranthus spp.) en Mxico. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp.)
147-163 165-181

Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura. Distribucin del amaranto cultivado y sus parientes silvestres y sus posibles zonas de adaptacin en Mxico.

183-201 203-211

Citogentica y mejoramiento gentico


Nmero cromosmico (2n) y cariotipo en especies de grano y verdura de Amaranthus spp. de Mxico. Estrategia y metodologa para el mejoramiento gentico del amaranto. Seleccin y adaptacin de variedades criollas de amaranto (Amaranthus cruentus L.) en el Noreste de Mxico. Hbito de crecimiento de la inflorescencia y su relacin con la calidad fsica y fisiolgica de semilla de amaranto (Amaranthus hypochondriacus L.).
215-226

227-247 249-256

257-265

Plagas y enfermedades
Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.).
269-290

Protenas y propiedades funcionales


Caracterizacin bioqumica y estructural de las protenas de reserva de amaranto. Amaranto: propiedades benficas para la salud.
293-302

303-312

Situacin actual, rentabilidad y comercializacin


El cultivo de amaranto en Mxico, descripcin de la cadena, implicaciones y retos. La rentabilidad del amaranto en la Regin Centro de Mxico. Formas de consumo del amaranto en Mxico.
315-330 331-340 341-354

Presentacin
La Secretaria de Agricultura, Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin (SAGARPA), coordinado por el Servicio Nacional de Inspeccin y Certificacin de Semillas (SNICS) desde el ao 2002, a travs del Sistema Nacional de Recursos Fitogenticos para la Alimentacin y la Agricultura (SINAREFI), cuyas actividades principales son llevar a cabo acciones conjuntas que contribuyan a la conservacin, conocimiento y uso sostenible de los Recursos Fitogenticos para la Alimentacin y la Agricultura (RFAA). Conforme al Plan Nacional de Accin para la conservacin de los RFAA en Mxico, operando como mecanismo de coordinacin de asociaciones civiles, organizaciones no gubernamentales, universidades, centros de investigacin y productores. En este sentido el SINAREFI ha promovido la integracin de redes por gnero. De esta manera hace tres aos se integr la Red Amaranto cuyo Plan de Accin consta de una serie de estrategias y acciones en cuatro reas prioritarias: conservacin y mejoramiento in situ, conservacin y mejoramiento ex situ, uso y potenciacin de los RFAA y creacin de capacidades. El propsito fundamental de la Red Amaranto es colectar, estudiar, conservar y caracterizar el germosplasma de Amaranthus. Se pretende formar una coleccin nacional nica de germoplasma de amaranto que incluya las colecciones institucionales y personales con fines de conservacin y uso de la variabilidad gentica de Amarathus; otro compromiso importante de la Red es posicionar el recurso ante la sociedad en general ya que la mejor forma de conservarlo ser utilizndolo. Dentro de la estrategia de creacin de capacidades se tiene planeado la produccin de diversos medios de divulgacin a fin de lograr un mayor conocimiento del amaranto entre investigadores, acadmicos, estudiantes, productores, transformadores y sociedad en general. Es dentro de esta estrategia que naci la idea de Amaranto: Ciencia y Tecnologa; libro que contiene el estado del arte en el conocimiento de este recurso, el cual est integrado por las secciones que a continuacin se describen. La primera parte denominada Etnohistoria donde se presenta informacin sobre el uso de Amaranto en Mxico en ceremonias prehispnicas, la manera en que a partir de la semilla se elaboraba el tzoalli para representar a sus dioses y luego era consumido por quienes asistan a las ceremonias. Contiene tambin informacin de cmo estas costumbres todava se conservan en algunas comunidades y se sigue utilizando el amaranto en rituales de peticin y cmo se siguen elaborando figuras antropomorfas, zoomorfas y de cerros con tzoalli como parte de ofrendas.

La segunda seccin est integrada por informacin sobre Gentica molecular. Se presenta el transcriptoma de novo de Amaranthus hypochondriacus L. el cual se est usando como base para el estudio de respuestas a estrs hdrico y salino, de defensa contra insectos y patgenos, se dan avances para conocer de qu manera se promueve el crecimiento y rendimiento al ser inoculado con microorganismos benficos del suelo. Se est evaluando la funcin de genes asociados con pigmentacin a la resistencia a estrs; esta informacin ser de utilidad para la seleccin asistida en el mejoramiento gentico del amaranto. La tercera seccin muestra temas de recursos genticos en la que se exponen los avances en la recoleccin de germoplasma de especies cultivadas y parientes silvestres, adems de la caracterizacin morfolgica de colectas de las especies representadas en la coleccin. Contiene adems, informacin sobre la distribucin de especies en el territorio colectado. La cuarta seccin describe aspectos sobre mejoramiento donde se presenta informacin sobre la citogentica de materiales mexicanos y la metodologa para el cruzamiento artificial y seleccin genealgica para amaranto. Se integra informacin sobre evaluacin de variedades criollas en el Norte del pas y el efecto del crecimiento determinado de la inflorescencia sobre la calidad fsica y fisiolgica de semilla. Otro tema que se cubre es sobre los aspectos fitosanitarios del cultivo donde se incluye informacin sobre las plagas y enfermedades ms importantes del cultivo. La quinta seccin trata sobre protenas y propiedades funcionales. En esta parte se expone informacin sobre la caracterizacin bioqumica y estructural de las protenas de reserva de la semilla de amaranto; informacin sobre la caracterizacin de pptidos con importantes funciones biolgicas encriptados en estas protenas. Se ofrece una visin general de los pptidos bioactivos presentes en las protenas de la semilla de amaranto, as como de los compuestos fitoqumicos presentes en la semilla y planta de amaranto, los cuales son benficos para la salud. Finalmente en la seccin de situacin actual, rentabilidad y comercializacin se hace una descripcin de la cadena en el pas sus perspectivas y retos. Adems de informacin de la rentabilidad del cultivo del amaranto y las formas de consumo en Mxico. El INIFAP, el SINAREFI y los integrantes de la Red Amaranto desean que la informacin de Amaranto: Ciencia y Tecnologa sea de utilidad y que coadyuve al posicionamiento de este cultivo en Mxico.

Etnohistoria

Captulo I

Amaranto (Amaranthus spp.), planta ritual mesoamericana


AMARANTH (Amaranthus spp.) A MESOAMERICAN RITUAL PLANT

Aurora Montfar Lpez


Subdireccin de Laboratorios y Apoyo Acadmico Instituto Nacional de Antropologa e Historia Moneda 16, Centro, Mxico, D.F., C.P. 06060 Autor para correspondencia: auromontu@yahoo.com

RESUMEN En esta investigacin se vierte informacin etnogrfica sucinta sobre el ritual de peticin de lluvias en Temalacatzingo, Guerrero, que se celebra el 25 de abril, de cada ao, en la cima del cerro Quiauhtpetl. Se destaca la montaa como lugar de culto y se hace nfasis en el contenido de figuras antropomorfas, zoomorfas, de cerros, etc., elaboradas en masa de semillas de alegra (Amaranthus hypochondriacus L.) como parte de la ofrenda. Esta investigacin se compara con el registro de semillas de Amaranthus sp dentro de las ollas Tlloc de algunas ofrendas del Templo Mayor de Tenochtitlan. Al final, a la luz de algunos datos etnohistricos de la Nueva Espaa, se patentiza la relevancia ceremonial de la masa de Amaranthus (tzoalli) para reproducir las imgenes de los dioses del agua, entre otras entidades divinas de los mexicas, en sus fiestas mensuales del calendario solar y el ciclo agrcola del maz. As, se constata la continuidad de la tradicin cultural mesoamericana, reelaborada por la influencia de la liturgia cristiana. Palabras clave: ofrenda, mexicas, nahuas, tzoalli, Mesoamrica.

ABSTRACT This paper presents ethnographic information about the asking for rain ritual at Temalacatzingo, Guerrero, Mexico, which is celebrated each April 25th on the peak of Quiauhtpetl Mountain. The paper emphasizes the function of the mountain as ceremonial area and the artifacts left by the inhabitants as offering, particularly the anthropomorphic and zoomorphic figures made of alegra seeds (Amaranthus hypochondriacus L). It compares the data obtained with the seeds of Amaranthus sp found inside the ollas Tlloc of some offerings of the Templo Mayor of Tenochtitlan. Finally, based on colonial etnohistorical data, the paper stress the ritual relevance of amaranth dough or tzoalli as raw material of water gods images, which were used by the mexicas in their monthly rituals associated with the Solar Calendar and the cycle of maize. As conclusion, it proves the persistence of Mesoamerican cultural tradition, re-elaborated by the Chretien liturgy. Key words: offering, mexicas, nahuas, tzoalli, Mesoamerica.
3-13

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

INTRODUCCIN Las ceremonias de propiciacin de las lluvias, entre muchas otras fiestas religiosas ligadas al calendario agrcola en Mxico, manifiestan la relacin recproca entre los dioses y el hombre, en el marco de la naturaleza que los hospeda y que es regida por los primeros; por ello los actores biolgicos, entre otros materiales de ofrenda, reflejan en cierta manera, el pensamiento religioso y la concepcin del mundo de los grupos culturales indgenas que han trascendido el tiempo y ahora se exhiben de forma sincretizada. El objetivo de este trabajo es describir el ritual de peticin de lluvias en Temalacatzingo, Guerrero que se realiza, ao con ao, los das 25 de abril para celebrar a la Santa Cruz, advocacin de la Madre Tierra y pedirle la pronta manifestacin del temporal para empezar la siembra de maz; asimismo, constatar la continuidad de la tradicin cultural mesoamericana y la influencia de la liturgia cristiana sobre la misma. Se trata de una ceremonia organizada por un grupo de campesinos de habla nhuatl, que en un acto de reciprocidad, entregan a la entidad divina la promesa u ofrenda de materiales muy diversos y abundantes, como parte de un compromiso que se tiene para merecer la lluvia, bajo el cdigo ideolgico doy para recibir. Se enfatiza la relevancia de esos dones, en especial aquellos elaborados a base de masa de semillas de alegra; esta planta que de acuerdo con la etnografa (Neff, 2001; Villela, 2001), los datos arqueolgicos (Montfar, 1998; 1999a, 2007) y la informacin etnohistrica de la Nueva Espaa (Durn, 1984; Sahagn, 2006; Ponce, 1987; Ruiz de Alarcn, 1987; Serna, 1987) goza, como vamos a documentar, de probada importancia ritual arqueolgica, histrica y contempornea, y es testimonio de la pervivencia de la reproduccin cultural mesoamericana. En este estudio se hace referencia a importantes aspectos de la ritualidad indgena en Mxico, se destaca la realizacin de las ceremonias de peticin de lluvias en la cima de los cerros, el da de San Marcos (25 de abril) y de la Santa Cruz (3 de mayo) de cada ao, siempre al final del lapso de sequa que contrasta con la temporada de lluvias en nuestro pas. En Temalacatzingo, Guerrero se realiz el estudio
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Aurora Montfar Lpez

del ritual de propiciacin de lluvia, en los aos 2007 y 2008; los datos recabados muestran los hechos sobresalientes de su ejecucin, desde los preparativos hasta la entrega de la ofrenda, en la madrugada del 25 de abril, frente al altar de la Santa Cruz. Como parte del evento y de la ofrenda est la manufactura de figuras de masa de amaranto (angelitos, una gran serpiente y otros animales alusivos al agua, volcanes, estrellas y granizo), imgenes que guardan un gran simbolismo vinculado con el agua desde tiempos prehispnicos. La informacin histrica, arqueolgica y etnogrfica recabada es comparada y analizada, junto con los datos etnobotnicos de A. hypochondriacus L. (alegra o amaranto) y probablemente Amaranthus hybridus L., esta ltima especie responde a los nombres de huauhtli, quilitl, quelite, amaranto y bledo. El conocimiento recuperado plantea el uso ritual del amaranto como una tradicin cultural de raigambre Mesoamericana. METODOLOGA El estudio etnogrfico consisti en recabar informacin, entre los asistentes al ritual y los mayordomos, por medio de encuestas espontneas y realizar las observaciones de campo pertinentes. Los datos obtenidos son la base para entender la relacin de la comunidad campesina y sus entidades divinas, mismas que ante los ostentosos festejos y ofrendas que reciben, abren el temporal para la siembra. Como parte de la ofrenda hallamos materiales de masa de amaranto, la interpretacin simblica y ritual de estos se complementa con los datos arqueolgicos del Templo Mayor de Tenochtitlan (Montfar, 1998, 1999a, 1999b, 2007), en los etnohistricos de los Cronistas de la Nueva Espaa (Durn, 1984, Sahagn, 2006), y de los siglos XVI y XVII (Ponce, 1987, Ruiz de Alarcn, 1987, Serna, 1987). RITUALES DE PETICIN DE LLUVIAS, CERROS Y MILPA Los rituales de propiciacin del agua se realizan en tiempo y forma con motivo de la siembra del maz de temporal; el inicio de esta actividad depende del establecimiento de la estacin anual de lluvias, ya que la siembra necesita de las

Captulo I. Amaranto (Amaranthus), planta ritual mesoamericana

primeras precipitaciones pluviales. Los ltimos das de abril y los primeros de mayo son los ms calurosos del ao y marcan el fin de la etapa anual de sequa; en este lapso las comunidades indgenas efectan sus rituales por la lluvia. Dichas ceremonias estn dedicadas a ciertos santos o vrgenes de la liturgia catlica, pues esos nmenes al parecer han tomado el lugar de las antiguas deidades autctonas, entidades divinas que estn relacionadas estrechamente con la naturaleza y el calendario agrcola. La expresin ritual propiciatoria del agua, entre otras, se remonta a la poca prehispnica, cuando las fiestas por el temporal se hacan para honrar a Tlloc, la deidad telrica de las tormentas, los rayos y el agua (Broda, 1971, 2004, 2008, 2009). Despus de la conquista, los rituales a los dioses de la lluvia fueron combinndose con elementos de la iglesia catlica y han sido objeto de profundos estudios de campo desde hace varias dcadas, particularmente en el Altiplano Central y en el estado de Guerrero. Por ejemplo, al ritual de peticin de lluvias, el tres de mayo, en Ameyaltepec (pueblo nahua del Alto Balsas, en Guerrero) lo llaman yalo tepetl, la ida al cerro, este concepto refleja la cosmovisin ancestral mesoamericana que imagina a los cerros como deidades atmosfricas que influyen en el ciclo meteorolgico, pero tambin como los lugares donde se almacena el agua y los mantenimientos (Broda, 2001, Good, 2001a). Los mexicas hacan sacrificios de infantes, en los rituales de culto a los cerros, en analoga a los pequeos ayudantes del dios Tlloc, los tlaloques. La percepcin de los infantes como propiciadores y vectores de la precipitacin se reelabora y a la luz del catolicismo, se les imagina como angelitos, entidades que se encargan de continuar la labor de los tlaloques, es decir, los que acarrean las nubes cargadas de agua y que ayudan al crecimiento del maz (Broda, 2004, 2008). Bajo esta perspectiva, en esta investigacin se destacan los materiales de ofrenda elaborados con masa de semillas de alegra que son ofrendados a la Santa Cruz, por que empiece el temporal y se inicie la siembra de maz. Para entender el uso de materiales de oblacin de masa de amaranto en estos rituales, se necesita comprender algunos aspectos del

pensamiento religioso del grupo de campesinos nahuas que realizan esta prctica cada ao y preparan y entregan la promesa a la Santa Cruz o Madre Tierra en su hbitat, la cima del cerro. En este sentido, a continuacin se emiten algunas de las principales actividades y productos para esa ceremonia, incluyendo el amaranto. PREPARACIN DEL RITUAL DE PETICIN DE LLUVIAS EN TEMALACATZINGO La ceremonia de peticin de lluvias o fiesta del copal, del barrio de Santiago en Temalacatzingo, Guerrero, se efecta a las primeras horas de la maana del 25 de abril, da de San Marcos, la organiza un grupo de agricultores de la localidad encabezados por un mayordomo (electo por ellos mismos), que con la participacin de su esposa e hijos, coordina la preparacin de la promesa y su entrega a la Santa Cruz, en el cerro Teopan o Quiauhtpetl. El 24 de abril de los aos 2007 y 2008 tuve la oportunidad de presenciar este festejo y hacer las anotaciones pertinentes; ese da, por la tarde, la gente se dio cita en el domicilio del mayordomo (seores Juan Mximo Flores en 2007 y Santiago Rosendo Almazn Reynosa en 2008) para comenzar los arreglos y preparacin de la promesa. Previamente los responsables del ritual haban recabado, entre los interesados, una cooperacin econmica o en especie, voluntaria. A esta casa llegaron los participantes trayendo consigo copal, velas, veladoras, aguardiente, cigarros, cerillos y flores para la ofrenda; tambin traan parte de los materiales para cocinar los alimentos (tamales, tortillas, guisados, etc.) y pan, entre otras cosas. Hombres, mujeres, jvenes y nios permanecieron toda la tarde y noche conviviendo armoniosamente mientras preparaban los distintos ingredientes para la comida ritual y dems quehaceres culinarios; se vea a unas mujeres tostando los chiles secos y molindolos en el metate para el mole rojo y de manera simultnea otras limpiaban, asaban y molan las pepitas de calabaza para el pipin. En el patio de la casa, un grupo de hombres se encarg de matar, sangrar y quitarle la piel y las vsceras a un chivo y a un par de guajolotes. La sangre, corazn, plumas y piel de los animales sacrificados fueron recuperados en recipientes individuales y guardados en el altar
Aurora Montfar Lpez

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

familiar, pues eran parte esencial de la promesa. Destazaron el cuerpo del chivo y lo cocieron en barbacoa, sin sal y con muchas hojas de aguacate (Persea americana L.). De los guajolotes recuperaron sus plumas, corazones y sangre, pero adems les retiraron cuidadosamente su buche; cada buche fue inflado lo ms posible a manera de globo, anudado, sellado y colocado tambin en el altar. La gente, durante la tarde y la noche, segua llegando y traa consigo cosas para enriquecer la promesa (cadenas de flores, velas, veladoras y/o copal), pero, sobre todo se integraba a la labor comunitaria del momento, se sumaba con los que estaban configurando las cadenas de coloridas, aromticas y vistosas flores de cacaloxchitl (Plumeria rubra), ensartndolas con hilo y aguja, o bien con los que estaban adornando dos pares de varas, con flores de bugambilia, gladiola, malvn y plmbago, a manera de bastn florido. Tambin hubo quienes atendan el nixtamal con ceniza del fogn, para luego hacer tamales nejos envueltos en hojas verdes de maz o preparaban las tortillas o el chocolate. Haba mucho movimiento, la gente desempeaba variadas actividades para un bien comn, contar con los materiales de ofrenda en tiempo y forma. El trabajo para la oblacin fue salvado con entusiasmo, mientras velaban al calor de la lumbre del fogn, de la luz tenue e intermitente de un foco y con gran consumo de mezcal, por parte de los hombres. Es importante destacar la forma del uso ceremonial de la alegra, para ello tostaron en el comal 3 4 kg de sus semillas, las molieron en el metate y las hicieron harina; despus, al amparo del humo aromtico del

copal, amasaron esa harina con agua y azcar. La masa fue trabajada por una seora y varios nios e hicieron un conjunto de figuras miniatura, de casi 7 cm de largo, y una gran serpiente. Las pequeas esculturas eran objetos antropomorfos de infantes (a los que llamaban angelitos), animales alusivos al agua (ranas, tortugas, camaleones, araas, milpis, etc.) y ciertos elementos geogrficos (cerros y volcanes) y meteorolgicos (granizo) y estrellas. Cada tipo de figuras estuvo representada por 12 piezas, todas tenan sus ojos de frijol negro y su boca era un grano de maz. La enorme vbora pesaba aproximadamente dos kilos y meda 60 cm de largo (su cabeza tena 10-12 cm de dimetro y su cascabel, 2-3 cm de grosor), su apariencia era intimidante, tena sus ojos de frijol, su lengua de fuera y sus fauces estaban abiertas mostrando sus grandes y amenazadores dientes de maz (Figuras 1 y 2). Al terminarse la masa, apagaron el sahumerio, colocaron las figuras de amaranto dentro de dos palanganas y las resguardaron en el altar domstico. Cabe mencionar, que a algunos de los pequeos cerros de masa les hicieron una cavidad en su cima, a manera de crter, y con carbonato y unas gotas de agua emularon la erupcin volcnica; el carbonato tambin les imprimi la cualidad nevada de los volcanes de nuestro pas. Santiago Rosendo Almazn, el mayordomo del ritual en 2008, coment que los jvenes y los nios son los encargados de modelar las figuras de amaranto, pues se trata de seres inocentes y esos objetos evocan a las entidades divinas de la lluvia y la naturaleza y que est tarea la realizan entre el humo de copal en un acto de vestir (con nuevos ropajes) a los angelitos que se

Figura 1. Angelitos de masa de amaranto.

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Captulo I. Amaranto (Amaranthus), planta ritual mesoamericana

Figura 2. Serpiente de cascabel de masa de amaranto.

encargan de traernos la lluvia, pues sus prendas se deterioran por la accin violenta de los vientos, estos meteoros estn representados en la gran serpiente, quien arrastra enrgicamente a los angelitos mientras laboran para nosotros. El trabajo y la convivencia armoniosa y de ayuda comunitaria trascendi la noche, todos los materiales de la promesa quedaron listos: pan, chocolate, pollo, mole rojo, pipan, guajolotes, chivo en barbacoa, tamales nejos, tortillas, figuras de amaranto, aguardiente, cigarros, cerillos, veladoras, velas, cadenas de flores de cacaloxchitl, varas enfloradas y dos estructuras pirotcnicas, toritos, entre otros elementos. A las tres de la maana, del da 25, comenz el ascenso de los ritualistas a la cima del cerro Quiauhtpetl; los materiales de la promesa fueron transportados en camioneta a ese lugar y luego los pusieron al pie del altar de la Santa Cruz. sta es una pieza cruciforme de madera, de aproximadamente 4 m de altura y de color azul y est orientada al Este; sta desplanta de la parte media del margen Oeste de un pedestal rectangular de mampostera (de 3 x 4 m de ancho y largo, respectivamente y 1.20 m de alto), a manera de recinto, el cual est orientado de E a W y tiene una pequea entrada en el centro de su lado E. CEREMONIA DE PETICIN DE LLUVIAS EN EL QUIAUHTPETL La actividad ritual inici en plena oscuridad, prendieron el carbn con copal del sahumador y entre el humo aromtico de esa resina adornaron a la Santa Cruz con las cadenas de flores y las varas

enfloradas; estos dones de ornato y uno a uno de los materiales de ofrenda fueron entregados a la Santa Cruz, a travs del especialista ritual, entre sahumaciones de copal dirigidas hacia los cuatro rumbos del universo, presentando cada unidad de oblacin al sol, ofrecindola a la Santa Cruz y, junto con la emisin de una plegaria en nhuatl, era acomodada sobre su altar. Esa rogativa, segn el seor Santiago Rosendo Almazn deca: Seor Jesucristo, Seor Santa Cruz, San Marcos, Madre Guadalupana, Madre Tierra, aqu venimos este da de las Cruces y del Quiauhtpetl, aqu mismo en el Teopan, a entregarte la promesa para ti y para los angelitos y la serpiente de la lluvia, para que los que trabajamos la tierra, los que estamos presentes, los que no pudieron venir y todos tengamos la lluvia, porque ya es tiempo de que sta llegue. De esta forma, cada uno de los dones fueron depositados en el altar (corazones, sangre, buches, plumas, sal, un recipiente con agua, un pao y todos los contenedores con los elementos de oblacin (cacerolas y ollas con alimentos, botes o cazos con los animales de sacrificio cocidos y de tamales, petacas de tortillas, palanganas con las figuras de masa de amaranto, etc.). Luego sirvieron la comida ritual de la entidad divina: tazas con chocolate y dos piezas de pan, los platos con mole rojo y pipin, todos en nmero de doce y dispuestos en hileras paralelas y en forma radial, desde la base de la Santa Cruz hasta las esquinas Noreste y Sureste del altar. Las botellas de aguardiente, cigarros y cerillos, entre algunos ramos de flores, fueron puestos al pie de las esquinas del altar. La
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sesin de los dones de la promesa se enriqueci porque la gente que iba llegando traa tambin flores, velas o veladoras y copal, que colmaron la superficie del altar. Conviene sealar que los olores y esencias de los materiales de oblacin (comida, copal, flores, cigarro, etc.), segn el pensamiento religioso de las comunidades indgenas de habla nhuatl de Guerrero, constituyen el alimento de las entidades divinas (Good, 2001b). Es importante destacar que antes de que saliera el Sol ya se haban depositado la promesa completa y el ltimo de los elementos cedidos fueron bolsas de copal, entre emanaciones aromticas del sahumerio. Luego, esas bolsas fueron amontonadas a unos cuantos metros de la esquina Noroeste del altar y les prendieron fuego al amparo del humo odorfero del sahumerio. El momento de ofrendar el copal estuvo marcado por el instante en que el sol inici su emergencia en el firmamento, en ese lapso se quemaba el copal y al cundir el fuego los efluvios de su humo, que al principio formaron una nube tenue de color gris, pronto se transformaron en una nube negra que creca rpidamente y era llevada por el viento apacible hacia los confines del Sol que apenas se asomaba en el cielo; luego la gran nube se expandi y envolvi el entorno del ritual, proveyndolo de un olor perfumado y relajante. Este humo se constituy en una inmensa nube, densa y negra que contrastaba con el tenue claro de la maana y la esfera solar amarillo-rojiza. sta emulaba a los imponentes nubarrones que anuncian tormenta y que se aprecian en el cielo, en pleno temporal, junto con estrepitosos rayos y relmpagos que engendran temor y presagian lluvia torrencial. En este ambiente, mgico y simblico, se rez el rosario dirigido por un rezandero, para reforzar la plegaria por la propiciacin de las lluvias y al concluirlo, aun entre aroma de copal, el mayordomo y su esposa, repartieron entre los ritualistas, como desayuno, la comida ritual. FIGURAS DE AMARANTO EN LA DANZA DEL TEPONAZTLE Despus del desayuno, los organizadores del ritual, distribuyeron entre los nios y jvenes todas las figuras de amaranto ofrendadas y tambin les dotaron de un ramo de hojas de ahuehuete (Taxodium mucronatum) y de
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una corona del mismo rbol. Todos lucan engalanados con la corona de ahuehuete en sus cabezas y portando sobre las palmas de sus manos, una figura de amaranto, en una y en la otra un ramo de ahuehuete, la serpiente la cargaba un adulto tambin ataviado con su corona y se distingua un muchacho que iba armado con una pequea vara aguda punzn, con la que deba pinchar y matar a cada una de las piezas de amaranto. As organizados se prepararon para ejecutar la danza del Teponaztle, la cual consiste en una especie de carrera alrededor del altar de la Santa Cruz, encabezada por una nia que cargaba el sahumerio ardiendo con copal, cuya funcin era sahumar hacia los cuatro rumbos del mundo, a la Santa Cruz y al Sol. El grupo comenz a bailar (correr) en semicrculo en torno al altar de la Santa Cruz, corrieron desde la esquina Sureste, hacia el Oeste y hasta la esquina Noreste y viceversa, por seis veces, para luego hacer el recorrido en crculo completo, por tres ocasiones. Durante la realizacin de esta danza quemaron dos estructuras pirotcnicas (toritos) y en medio de esas detonaciones, el muchacho que traa el punzn, correte a los bailarines con el fin de matar a cada una de las imgenes de amaranto (angelitos, ranas, serpiente, volcanes, etc.), al pincharlas. Esta danza culmin con la muerte de las figuras de alegra y luego cada quien pudo ingerir la suya, tras atestiguar su deceso al quitarle los ojos y la boca o dientes (de semillas de frijol y de maz). Lo mismo sucedi con la serpiente, la cual fue repartida entre los oferentes que no danzaron. As, todos consumimos la carne de los representantes sagrados y smbolos del agua. Cabe destacar que las semillas de frijol y de maz de las imgenes, fueron recuperadas y se guardaron para mezclarlas con las otras semillas que serviran para la siembra, pues el carcter sacralizado de las primeras, favorecera a las dems para una siembra exitosa. Despus de la danza se nos invit a fumar un cigarro y a tomar unos tragos de mezcal, materiales que tambin fueron sujetos de oblacin y adquirieron un carcter sagrado. Antes de concluir el ritual, excavaron un antiguo agujero cercano al altar de la Santa Cruz y lo limpiaron, para luego depositar y enterrar los corazones, buches, sangre, plumas,

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piel, restos seos de los animales sacrificados, desechos de la comida ritual, etc. y, como cada ao, este hoyo es tapado con su propia tierra y lo sellan con piedras. Este proceso de inhumacin de los materiales mencionados, lo realizan al abrigo del humo del copal y fue un acto de ofrenda a la Madre Tierra, que es honrada, despus de haber sido reverenciada en su advocacin de la Santa Cruz. Al final, los ritualistas procuran allegarse algunas de las flores que adornaron a la Santa Cruz, como smbolo de buenaventura, por las lluvias y el desarrollo exitoso de su milpa. Estas flores fueron retiradas por el especialista ritual, a peticin de la gente, quien las aventaba, a manera de ramos de novia, entre los oferentes; los nios, jvenes y adultos pugnaban por atrapar y adquirir algunas, pues al tenerlas consigo aseguran a su familia y a la milpa, salud y prosperidad, ya que fueron el vestido y ornamento de la Santa Cruz y se conciben como objetos sagrados garantes del temporal y la buena cosecha de maz.

AMARANTO EN LAS OFRENDAS PREHISPNICAS Los datos arqueobotnicos de las ofrendas del Templo Mayor de Tenochtitlan revelan la presencia de semillas del gnero Amaranthus (Montfar, 1996, 1998, 1999a, 1999b, 2002), la cual obedece a una intencionalidad y a una concepcin cultural. De manera especial se cuenta con el registro de innumerables propgulos de Amaranthus cfr. hybridus al interior de las ollas Tlloc de varios depsitos de oblacin (ofrendas 102, 120, 126, 141, etc.). Se trata de recipientes de cermica con la efigie del dios de la lluvia; tambin se han encontrado al interior de un tecomate (Lagenaria siceraria) (Figuras 3 y 4). Estas semillas, por lo general, se acompaan de varios miles de semillas de cha (Salvia hispanica L.), epazote (Chenopodium sp.), y de algunos decenas de cha de Colima (Hyptis suaveolens Poit.) (Montfar, 2007). En varias ocasiones han sido halladas junto con numerosas cuentas de piedra verde, las cuales simbolizan a las gotas de agua y se les asocia al culto de los dioses mexicas de la lluvia y de la fertilidad (Lpez Lujn, 2009).

Figura 3. Olla Tlloc, Ofrenda 102 del Templo Mayor de Tenochtitlan.

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Figura 4. Semillas de amaranto halladas en el interior de la olla Tlloc de la ofrenda 141.

LA MASA DE AMARANTO Tzoalli EN LOS DOCUMENTOS HISTRICOS De acuerdo con la informacin etnohistrica de la Nueva Espaa se conoce de la importancia ritual del quelite, quilitl o quintonil, entre otras de sus nominaciones (Martnez, 1979), estas plantas corresponden con varias especies del gnero Amaranthus y que se les menciona especialmente como bledo. Existen numerosos testimonios histricos del uso de las semillas de bledo, principalmente para preparar harina y hacer una masa llamada tzoalli y con ella configuraban las estatuas de importantes entidades divinas (de la guerra, el fuego, el agua y los cerros, etc.). Este material era ofrendado por los mexicas en varias de sus fiestas mensuales que realizaban en torno a su calendario solar y particularmente en relacin con el ciclo agrcola del maz y de otros cultgenos. Por ejemplo Durn (1984: 156) sostiene que el tzoalli era una especie de pan hecho, por los naturales, con semillas de bledo y maz molidas y amasadas con miel. Se usaba para hacer las imgenes de los dioses y despus de haberlos festejado, honrado y sacrificado los repartan a pedazos y lo reciban en nombre de carne del dios y comulgaban con ello. Tambin se menciona que celebraban a Toc, la Madre de los dioses, en el mes Tozoztontli, con tamales elaborados a base de harina de semillas de bledo tostadas y de maz frangollado amasados con miel y que festejaban en el mes
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Etzalqualistli a la diosa fluvial Chalchiuchuatl, a quien deban el agua y sus bondades y por eso todo el pueblo iba a lavarse muy de maana y despus a comer la carne de dios, que era tzoalli (Durn, 1984: 172, 251). De igual modo, el dominicano indica que en las ceremonias del mes Xocotl Huetzi, hacan sacrificios humanos y ofrendas en honor de Huitzilopochtli, en esa fiesta reproducan la imagen del dios en masa de tzoalli y la colocaban en la punta del rbol Xocotl. La estatua era del tamao de un hombre y la vestan a semejanza de la divinidad, tena la forma de un pjaro y a sus pies ponan cuatro pias muy pintadas, hechas tambin de masa de tzoalli. Estatua y pias iban fijas en el extremo superior del gran madero y los oferentes bailaban alrededor de l, toda la tarde, al son de un tambor y llevaban en la mano, en lugar de rosas, unos idolillos y ramos hechos de la mesma masa de que era el dolo, luego derribaban el rbol, lo hacan pedazos y los restos de masa de las pias y del dios de tzoalli eran levantados, Y as pugnando todos por llevar algo, as de la masa del dolo, como de las cuatro pias, que alcanzando algo de ello se tenan por dichosos (Durn, 1984: 123). Sahagn (2006: 106, 126, 127) indica que en el mes Toxcal, para honrar a Huitzilopochtli, configuraban su imagen de masa de bledo (tzoalli), sta consista de unos palos de mizquitl que eran revestidos de aquella

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masa hasta hacer el bulto de un hombre, luego lo vestan con los atavos del dios y a sus pies colocaban una especie de huesos tambin de tzoalli, al final despus de sacrificarlo, consuman esa masa, como alimento divino. En la ceremonia de culto a los cerros, en el mes Tepeilhuitl, disponan de unos palos hechos como culebras y de otros a manera de nios que representaban a los grandes montes y todos eran revestidos con masa de bledo. A las figuras de infantes las llamaban hecatotonti, delante de stas ponan unos como huesos configurados con la misma masa (momios). Estos materiales de tzoalli servan de ofrenda a los difuntos, a los montes y a los dioses de los montes y despus los consuman como alimento, cada da, poco a poco. Durante los festejos del mes Panquetzaliztli los ritualistas configuraban una estatua de Huitzilopochtli con masa de semillas de bledo y despus de honrarla, la sacrificaban con un dardo en el corazn, luego su cuerpo era repartido, una mitad era para los ministros del dios y los mexicas, la otra mitad era para los Tlatelolco y el corazn se destinaba al rey, as los que reciban y coman el cuerpo de Huitzilopochtli se llamaban ministros de dios (Sahagn, 2006: 134, 135, 187). En las ceremonias del mes Atemoztli festejaban al dios de la lluvia y a sus ministros (Tlloc y Tlaloques), para ello reproducan las imgenes de los montes en masa de tzoalli, sus dientes eran de pepitas de calabaza y sus ojos de frijol ayocote. Estos cerros de tzoalli eran ataviados a semejanza de los dioses del agua, se colocaban ordenadamente en el oratorio familiar, se les ofrendaba comida y pulque y se les velaba, eran las imgenes de los montes, sobre que las nubes se arman, como es el Volcn, la Sierra Nevada y la Sierra de Tlaxcala , los tepeme. Por la maana los sacerdotes o ministros los mataban clavndoles un tzotzopaztli (aguja de tejer). Estas estatuas muertas eran despojadas de todos sus atributos y luego ingeridas como alimento (Sahagn, 2006: 144). Durante el siglo XVII y principios del XVIII, Pedro Ponce (1987), Juan Ruiz de Alarcn (1987) y Jacinto de la Serna (1987) describen las ceremonias mensuales del calendario solar de varias poblaciones del territorio mesoamericano e informan de las fiestas dedicadas a los dioses Tlloc, Chalchiuhtlicue, Xiuhtecuhtli,

Huitzilopochtli, etc., a travs del ao, en relacin con la agricultura del maz, entre otras actividades econmicas. En esas fiestas de honra a las entidades divinas que rigen la naturaleza, hacan uso de la masa de semillas de amaranto, como antes de la llegada de los espaoles, para reproducir la figura de sus dioses, honrarlos y despus consumirlos como alimento sagrado. CONCLUSIONES El trabajo etnogrfico que hemos planteado, bajo la perspectiva arqueolgica y etnohistrica del uso de amaranto para la elaboracin de figuras relacionadas con el agua (que representan a los angelitos, a diversos animales, cerros y estrellas) para la ofrenda de peticin de lluvias en Temalacatzingo, Guerrero y su trascendencia simblica y cultural en el tiempo, obedecen a un pensamiento religioso autctono, ahora reelaborado por la influencia catlica. Se trata de un ritual de propiciacin de la lluvia, justo en la poca extrema de sequa del ao y al considerar los objetos que intervienen en la ceremonia se percibe la continuidad ritual de varios de los actores, a las figuras de masa de amaranto se les concibe como entidades divinas del temporal, las cuales sin duda son ofrendadas, veneradas y sacrificadas, como antao, para luego ser consumidas como alimento sagrado. Esta manifestacin ceremonial marca uno de los rasgos culturales que perviven y sus races se hunden en la antigua Mesoamrica, como queda constatado en las fuentes histricas del Mxico antiguo. LITERATURA CITADA Broda J (2009). Las fiestas del Posclsico a los dioses de la lluvia. Arqueologa Mexicana XVI (96):58-63. Broda J (2008). Las ollas de nubes entre los indios pueblo y los mexicas: una comparacin. In: Las Vas del Noroeste II: Propuesta para una Perspectiva Sistmica e Interdisciplinaria. C Bonfiglioli, A Gutirrez, M-A Hers y M E Olavaria (eds). Instituto de Investigaciones Antropolgicas-UNAM. Mxico. pp.31-63.

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Captulo II

Tzoalli, de cuerpo de dioses a alegra de mortales


Tzoalli, FROM BODY OF GODS TO ALEGRA OF MORTALS

Sara Hirn Morn-Bauelos1, Lorena Corts Espinoza2, Eduardo Espitia Rangel3, Dora Mara Sangerman-Jarqun2
1Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Zacatepec, Zacatepec, Morelos. 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias. Campo Experimental Valle de Mxico. 3Campo Experimental Bajo. km 0.5 carretera Zacatepec Galena Zacatepec Morelos, MX. C.P. 62780 Tel. (734) 343 0230 Autor para correspondencia: shimbamb@gmail.com

RESUMEN El amaranto (Amaranthus spp.) o huauhtli, en lengua nhuatl, se cultiva desde la poca prehispnica, entonces tena gran importancia como alimento y como elemento simblico en la cosmovisin mesoamericana. Estuvo presente, junto con el maz (Zea mays) en las ceremonias relacionadas con la fertilidad y el ciclo agrcola. Imgenes de la planta completa, de sus coloridas inflorescencias y semillas, son capturadas en los cdices prehispnicos y coloniales, como parte de las escenas de la vida diaria, como tributo y en piezas ceremoniales denominadas tzoalli. Hay poca informacin sobre la manera en que a partir de la semilla se elabor el tzoalli para representar a sus dioses y luego era consumido por quienes asistan a las ceremonias. Probablemente se elaboraban de una manera similar a como en la actualidad se preparan los dulces de amaranto, tradicionalmente consumidos y conocidos como alegra. A pesar de que el amaranto ha perdido gran parte de su valor religioso, ahora sabemos que su valor nutricional nico, contribuye a reubicarlo como recurso alimenticio. Palabras clave: Amaranto, Amaranthus spp., Tulyehualco.

ABSTRACT Amaranth (Amaranthus spp.) or huauhtli, in Nahuatl language, grown since pre-Hispanic times, then was very important as food and as a symbolic element in the Mesoamerican worldview. Was present, along with maize (Zea mays) in ceremonies related with fertility and the agricultural cycle. Images of the complete plant, colorful inflorescences and seed are captured in prehispanic and colonial codices as part of scenes of daily life, like tribute and ceremonial pieces named tzoalli. There are limited available information about how with seed was elaborated the tzoalli to represent their gods and then were consumed by the assistants to ceremonia, probably were made in a similar way like at present are elaborated candy of amaranth, typically known and consumed as alegra. Even though amaranth has lost most of its religious value, we now know that their unique nutritional value contributes to reposition it as a food resource. Key words: Amaranth, Amaranthus spp., Tulyehualco.

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INTRODUCCIN Los hallazgos arqueolgicos efectuados en Tehuacn, Puebla y Tlapacoyan, Estado de Mxico muestran que el amaranto se cultiv en Mesoamrica desde hace 5500 y 7 000 aos, respectivamente (Rojas, 1991). Entonces, entre los mexicas los amarantos eran nombrados huauhtli, aunque el trmino no se utilizaba de manera exclusiva para las plantas ubicadas taxonmicamente dentro del gnero Amaranthus, ya que el estudio de los dibujos plasmados en el Libro Undcimo del Cdice Florentino (Sahagn, 1979) (Figura 1) seala que en combinacin con otros vocablos pudo hacer referencia tanto a amarantos como a algunos quenopodios (Chenopodium spp.), identificados todos ellos por Sahagn como bledos o cenizos. Algunos ejemplos son: xochihuauhtli, nexhuauhtli, tlapalhuauhtli, michihuauhtli,

tezcahuauhtli (Figura 2) (Martnez, 1979; Espitia, 1994; Velasco, 2001; Espitia et al., 2010). Velasco (2001) detalla tambin que los mayas lo nombraban tez o xtes y los purpechas ahparie. Los registros de finales del siglo pasado sealan que en otras regiones es llamado cha de chapata, guaute o huaute, ziimy huajaquilitl, bledo; en las lenguas totonaca y tarasca la especie A. hybridus se nombra saua-shalsoco, tsaua, saua-sacaca y shacua ochacua, respectivamente (Martnez, 1979). Los indios del noroeste de Mxico, jovas y tarahumaras, lo nombraban con algunas variantes de la palabra guegui (Alejandre y Gmez, 1986). La semilla de muchos de esos bledos no era muy apetecible y se consuman solo las hojas de la planta, como era el caso del petzicatl, que aparece en el Cdice Florentino (Figura 3) y actualmente se identifica con el quintonilli,

Figura 1. De las semillas de los cenizos (Cdice Florentino, III, f.282v).

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S. H. Morn Bauelos et al.

Captulo II. Tzoalli, de cuerpo de dioses a alegra de mortales

Figura 2. Michihuauhtli o amaranto pescado (arriba a la derecha) y tezcahuauhtli o amaranto espejo (abajo) (Cdice Florentino, III, f. 404v)

una planta de semilla negra, cuyo grano no era muy demandado pero la parte vegetal an es consumida cuando est tierna, como verdura cocida o en alguna sopa; Bravo (2009) menciona que en ambas preparaciones su sabor es ms agradable que el sabor del huahtli, que es ms fuerte cuando se consume en forma semejante. Al respecto Barros y Buenrostro (1997) y Velasco (2001) describen ampliamente los diferentes patillos que se preparaban con hojas de huauhtli, entre ellos los tamales de maz con huauhtli y los potajes. Barrales y colaboradores (2010) enumeran diversas fuentes documentales de la poca colonial que hacen alusin a la importancia de la semilla como alimento, tributo y uso

ritual, entre ellos los de Alva Nez Cabeza de Vaca en 1536, los Cdices Mendocino (1541) y Florentino (1550), Fray Hernndez Ruz de Alarcn (1629), Fray Jacinto de la Serna (1659), Fray Agustn de Betancurt (1698) y habr que agregar a Juan Bautista Pomar (1582). Velasco (2001) menciona que esta semilla era parte del sustento habitual de la poblacin en Tenochtitlan y formaba parte del tributo de 17 de las provincias conquistadas. En adelante trataremos sobre el papel del huauhtli en los rituales mesoamericanos, su prevalencia dentro de las ceremonias que persisten en comunidades indgenas y grupos promotores de la cultura mexica, as como su posicin actual como alimento.

Figura 3. Quintonil, una planta de semilla negra (Cdice Florentino, III, f. 285r). S. H. Morn Bauelos et al.

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EL MODELADO DE LAS FUERZAS DIVINAS La importancia alimenticia del huauhtli fue ensombrecida por lo sorprendente que pareci a los espaoles su uso dentro de los rituales locales. Dentro de las referencias de aquella poca se menciona con frecuencia el carcter diablico del tzoalli elaborado con huauhtli. A partir de entonces su cultivo disminuy al verse desplazado por aquellos que preferan los espaoles; aunque hay autores que sealan que fue prohibido por Fray Bernardino de Sahagn, en 1570, y por Ruiz de Alarcn, en 1626 (Iturbide y Gispert, 2012), a la fecha no existen indicios histricos documentales que apoyen dicha idea (Velasco, 2012). Al mismo tiempo, el proceso de evangelizacin limit la continuidad de las ceremonias y la presencia del amaranto en la vida cotidiana. El huauhtli era tostado y molido para despus mezclarse con un ingrediente adhesivo o pegajoso que permitiera el modelado de formas y figuras, el tzoalli. An persiste la controversia sobre la naturaleza de dicho material adhesivo; diversas fuentes sealan que era sangre humana de los cuerpos de los sacrificados o de nios, sin embargo por su naturaleza, ste fluido no dara la consistencia necesaria a la pasta. Curiel (2007) citando a Fray Bernardino de Sahagn menciona que se mezclaba con sangre de codornices durante la fiesta de Xiotecuhtli. Tambin se ha sealado que consista en pulpa de tuna roja o pitaya, de ah que se creyera que era sangre humana, otras

fuentes mencionan que era mezclado con miel de maguey o de abeja silvestre (EL UNIVERSAL, 2008; Curiel, 2007), incluso existe la idea de que se preparaba con la miel de las hormigas melferas (Myrmecocystus sp.) (Morales, 2012). Otro de los aspectos que sorprendieron a los espaoles fue el hecho de que al final de las ceremonias o al da siguiente, el tzoalli era fragmentado y repartido entre la comunidad para consumirlo. Velasco (2001) presenta un amplio estudio sobre el calendario ritual donde estaba presente el tzoalli y las deidades que representaban, sugerimos su revisin para ampliar la informacin al respecto y de ah retomamos, las principales ceremonias. El calendario mexica estaba dividido en 18 veintenas, dentro de cada una de ellas se llevaba a cabo una ceremonia para venerar a distintos dioses y es probable que en cada una de ellas hayan estado presentes las figuras elaboradas con huauhtli. En la cuarta veintena, cuyo inicio corresponde al 30 de abril, la diosa dadora de los mantenimientos llamada Chicomecatl era modelada con tzoalli y colocada en un adoratorio adornado con plantas de maz y huauhtli (Figura 4). La quinta veintena, cuyo inicio corresponde al 20 de mayo, llamada del Txcatl, se haca la imagen de Huitzilopochtli de tzoalli, tan alta como un hombre hasta la cinta, forrando con la masa un pedazo de madera de mezquite, los ojos eran cuentas verdes, azules o blancas y por dientes le ponan granos de maz; la figura era llevada al templo de Huitznhuac,

Figura 4. Durante la veintena Hueytozozti se elaboraba un adoratorio para Chicomecotl, diosa de los mantenimientos, adornado con plantas de maz, tules y huauhtli de panoja roja y amarilla (Cdice Borbnico, f. 29).

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donde le hacan ofrendas de tamales y otras comidas. Posteriormente se le vesta con el resto de los ornamentos que complementaban sus atributos. La dcima veintena, cuyo inicio corresponde al 28 de agosto, se dedicaba a las festividades del Xcotl, un gran tronco pulido y colocado en el centro de la plaza para su adoracin. En la cima de dicho tronco se colocaba una pieza de tzoalli en forma de pjaro o dios, que los mancebos deban alcanzar para demostrar su valenta, al final de la ceremonia la figura se reparta entre los presentes (Figura 5).

Alejandre y Gmez (1986) mencionan que a los cerritos les hacan caras con ojos, los adornaban y colocaban en cada casa. La dcima sexta veintena, cuyo inicio corresponde al 26 de diciembre, se dedicaba a las deidades asociadas con el agua, la lluvia y la fertilidad, donde los cerros tenan un papel importante y por ello se modelaban con el tzoalli la Sierra Nevada, la Sierra de Tlaxcala, Popocatzin, Tlloc, Matlalcueye, Chalchiuhcueye, Iztactepetl y Cihuacoatl (Figura 6).

Figura 5. Escena de la dcima veintena del calendario azteca, que era cuando se levantaba el tronco Xcotl y los mancebos suban a l para alcanzar la figura de tzoalli colocada a lo alto del tronco (Cdice Magliabechiano, CL. XIII. 3, f. 38v.).

En la dcima tercera veintena, cuyo inicio corresponde al 27 de octubre, se celebraba la fiesta de los montes o Tepeilhuitl, durante la cual se elaboraban figuras de tzoalli que representaban como figura principal y de mayor tamao al volcn Popocatepetl, junto con figuras ms pequeas que correspondan a cerros.

Para la ceremonia del dcimo quinto mes o veintena dedicada a Huitzilopochtli, se guardaba un ayuno de cuatro das, durante los cuales slo se tomaba a la media noche tzoalli con miel y agua (Alejandre y Gmez op cit.) Con aquella masa tambin se modelaban otras figuras como huesos, plumas,

Figura 6. Imgenes de cerros modelados con huauhtli, representando cada uno al dios del viento, Ehcatl y al dios de la lluvia, Tlloc (Cdice Florentino, I, f. 52v.). S. H. Morn Bauelos et al.

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saetas, mariposas y elementos simblicos, como la figura del rayo que cae del cielo (Sahagn, 1969; Velasco, 2001). Adems de la cultura nahuatl, otras muchas hicieron del huautli su alimento ritual en ofrendas o en la confirmacin de sus dioses, como los tepehuanos, mayas, tarahumaras, yaquies. Los coras lo denominan b-be y los huicholes wa-ve. Los huicholes y los purepechas manufacturaban galletas con figuras de animales, llamadas tuycen (Iturbide y Gispert, 2012). Las masas de huauhtli representaron entonces las fuerzas naturales en forma de dioses y al ser comidas por aquellos pobladores los provean de esa energa revitalizante o incluso pudieron considerarse curativas, como seala Velasco (2001). A principios de la dcada de los

meda 80 centmetros. Consista en una estructura de metal sobre la cual se coloc la pasta de tzoalli (que haba sido elaborada con huauhtli y miel de piloncillo) y se dio forma a una figura antropomorfa muy sencilla (Figura 7). Antes de que se elaborara con huauhtli, ya conocido como amaranto, se utilizaban ingredientes de panificacin y se realizaba una figura bidimensional. Tanto el Huitzilopochtli de pan como el de huauhtli fueron repartidos entre los presentes para su consumo, como lo hacan en la poca prehispnica. Dos aos despus de aquel primer Huitzilopochtli moderno, su estructura metlica se reemplaz con ramas de rbol de tepozn (Buddleja spp.), que es comn en la zona cerril de Tulyehualco, tambin conocida

Figura 7. Figura de Huitzilopochtli elaborada de huauhtli y miel de piloncillo, para la fiesta de Txcatl celebrada en 1997 en Mxico, Distrito Federal. (Con autorizacin de Jaime Morales Olivos).

setentas, del siglo pasado, un grupo promotor de la cultura mexica en el Distrito Federal rescat la Fiesta de Txcatl, citada prrafos arriba. El grupo Cemnahuac-Tlamachiloyan organiza la ceremonia en honor a Huitzilopochtli cada ao el segundo o tercer sbado del mes de mayo, coincidiendo con la veintena correspondiente en el calendario mexica. Fue hasta el ao 1997 cuando se utiliz el tzoalli para elaborar una figura de Huitzilopochtli. Los directivos del grupo se dirigieron a Tulyehualco, en particular con la familia del seor Jaime Morales Olivos, productor y comercializador nativo de este lugar. La primera figura que elabor el seor Morales o Jaimito, como lo llaman respetuosamente,
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como el Teuhtli. A partir de entonces el tamao de la figura fue aumentando y su diseo ahora es ms detallado. La figura en la que basaron su modelado y vestimenta es aquella que aparece en el Cdice Borbnico, donde resalta el color azul turquesa. Actualmente el tzoalli mide dos metros de alto hasta la cabeza del dios y 50 centmetros ms hasta al nivel ms alto de la serpiente que sujeta con la mano derecha (Figura 8). Parte de la ceremonia consiste en vestir al dios el sbado por la tarde, para que el domingo por la maana empiece el resto del ritual que concluye a las siete de la noche de este da. Las primeras celebraciones se llevaban a cabo en el Zcalo de la ciudad, sin embargo desde hace

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siete aos se realiza en la Plaza Tols del centro histrico y ahora son los hijos del seor Jaime, Camilo y Bolvar, los encargados del modelado de Huitzilopochtli, lo cual les toma alrededor de dos semanas de trabajo. LOS CERROS VENERADOS Y LOS IDOLITOS QUE TRASCIENDEN Durante el siglo pasado diversos autores realizaron estudios antropolgicos respecto a las ceremonias y elementos rituales presentes en diversas comunidades de la montaa de Guerrero. En la resea de Villela (1998) resalta la ceremonia de peticin de lluvias en Chiepetepec,

y frijoles negros como ojos, representaban a los llamados tlaloques, ayudantes de Tlloc y encargados de repartir la lluvia. Actualmente se les identifica con los angelitos, como los trabajantes que ayudan a San Marcos y San Miguel para traer las lluvias y alejar los vientos nocivos (Villela, 2012). De igual manera en Petlacala, otro de los pueblos de la montaa, cada 25 de abril, en sincretismo con la Fiesta de San Marcos, se realiza la peticin de lluvias en la cima del cerro Petlacaltpetl (Figura 9), en el paraje conocido como Coapotzaltzin (Oettinger y Horcasitas, 1982; Jimnez y Villela, 2003). La ceremonia

Figura 8. Figura de Huitzilopochtli elaborada de huauhtli y miel de piloncillo, para la fiesta de Txcatl celebrada 2011 en Mxico, Distrito Federal. (Con autorizacin de Jaime Morales Olivos).

donde la pareja de fundadores mticos: Mara Antonia y Chiepetzin, son modelados como tamales de tzoalli, reciben la ofrenda de los pobladores de ese lugar. Al lado de estas figuras se encuentran los idolitos otros tamales de tzoalli, modelados en formas rectangulares elaborados a base de amaranto, maz tostado y calabaza con un par de frijoles a manera de ojos y un grano de maz como boca. En la poca prehispnica los idolitos de tzoalli tenan pepitas de calabaza como dientes

incluye un arreglo de piedras ceremoniales que simbolizan gotas de lluvia (Schultze-Jena, 1938 citado por Broda, 2008), sobre cada una de estas piedras se coloca una pieza de tzoalli en forma de cerro, figurando de esta forma las elevaciones que rodean el sitio ceremonial y a quienes se dirigirn los llamados y plegarias de los tlahmaquetl o huehuetl, los sabios de mayor edad (Villela, 1998). Piezas de tzoalli con forma de culebra o idolitos son sacrificados de manera simblica al finalizar las acciones rituales en el
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cerro, los ritualistas se dirigen a la casa del comisario municipal, donde el oficiante realiza una accin simblica de sacrificio, al pinchar con un palillo a los tamales de tzoalli, rememorando los tiempos en que eran sacrificadas realmente las personas (Villeda op cit.). En Coachimalco tambin se siguen elaborando las figuras de tzoalli en forma de animalitos y plagas del campo; en Coatlaco, municipio de Cualc, tienen figura de cuervo: La semilla de alegra significa el granizo y las figuras en forma de cuervo dicen que representan el animal que trajo el maz desde lugares muy lejanos (Gonzlez, 1992 citado por Villela, 2012). CERCA DE LOS TULES INICI LA ALEGRA Tulyehualco o lugar cerca de los tules o cercado de tules es uno de los pueblos originarios de la Delegacin Xochimilco, se ubica en el sureste del Distrito Federal y en la poca prehispnica representaba la zona de transicin entre la zona lacustre y la zona cerril del volcn Teuhtli. La fertilidad del suelo en las terrazas y faldas del volcn permiti el establecimiento de grupos nmadas y el inici de su tradicin agrcola.

la cuenca y la expansin imperial de la Triple Alianza, formada por Tenochtitlan, Texcoco y Tlacopan, que les demandaba mayor suministro de productos agrcolas, entre ellos el huauhtli. Despus de la llegada de los espaoles, esta regin fue una de las primeras que se ocuparon y utilizaron para la introduccin de nuevos cultivos y ganado. Bravo (2009) seala que el pueblo de Santiago Tulyehualco fue fundado el 25 de julio de 1525. A escasos 13 meses despus de la llegada de los 12 frailes misioneros que vinieron a estas tierras a sistematizar la evangelizacin de los pueblos recin conquistados. El fraile que encabez aquel primer grupo de misioneros fue Fray Martn de Valencia, quien adems de realizar sus labores propias de evangelizacin, ense artes y oficios a los habitantes originarios; algunos como el tallado de madera, tapicera de plumas, confeccin de telas de lana y algodn, fabricacin de esteras de tule y palma, alfarera, cermica, cantos y pintura, entre otros (Gonzlez, 2003 citado por Ramrez, 2007). A Fray Martn de Valencia se le atribuye la transicin del tzoalli a alegra, al instruir tanto a pobladores nativos de Tulyehualco como

Figura 9. Durante la ceremonia de peticin de lluvias en Petlacala, se coloca el Lienzo de los Fundadores en el altar de la cruz del cerro y se ofrendan tamales de tzoalli (Jimnez y Villela, 2003).

De igual manera, con la construccin de las chinampas entre 1300 y 800 aos a.C. tuvieron un suministro seguro de alimentos; incluso junto con los otros pueblos de Xochimilco se constituyeron como una de las fuentes de alimento y tributo para la Gran Tenochtitlan. Rojas (1991) menciona que en esta zona las chinampas llegaron a ocupar 120 kilmetros cuadrados, debido al crecimiento geogrfico de
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a espaoles, a mezclar el huauhtli reventado con miel de abeja. Aunque tambin en la regin de Huiramangaro y Opopeo en Michoacn persiste la costumbre de elaborar alegras redondas (Carrillo et al., 2010). En distintas fuentes documentales y en la tradicin oral se menciona que al probar los indgenas esta nueva preparacin empezaron a bailar y cantar de alegra (Ortz, 1997) y de ah

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provino el nombre de esa nueva preparacin; al respecto coincidimos con los productores que tal afirmacin es deshonrosa para la comunidad indgena, quienes posean una tradicin de uso y apropiacin del huauhtli desde haca ya cientos o miles de aos, de modo que tambin coincidimos que tal versin no debe promoverse. Otro relato popular menciona que al tostar las semillas, parece que stas saltan de alegra, de ah el nombre del dulce; sin embargo, recientemente Curiel (2007) en su resea de la dulcera mexicana hace mencin al hecho de que en Espaa ya elaboraban un dulce con el mismo nombre a base de ajonjol y que los espaoles lo asignaron tambin al dulce elaborado con huauhtli, habr que investigar ms al respecto. Es probable que a partir de la poca colonial la elaboracin de alegras se haya establecido como una actividad artesanal familiar en la regin de Tulyehualco y las nacientes alegras pudieron difundirse, junto con los productos agrcolas de la chinampa, hasta el centro de la Nueva Espaa con las canoas prehispnicas que ya transitaban a travs de los canales distribuidos en los antiguos lagos. Las referencias de aquellos tiempos son escasas, es hasta aos recientes que la historia oral de los habitantes de mayor edad da testimonio del proceso de transformacin y venta despus de la Revolucin Mexicana. De dichos relatos se desprende que para 1930 haba familias que se dedicaban a la comercializacin de las alegras; las mujeres y nios iban a los barrios ms cercanos a ofrecer su producto, en tanto que los hombres se trasladaban al centro de la ciudad usando el tranva (Mundo, 2012). La ruta inaugurada por

Porfirio Daz el 12 de julio de 1910 viajaba de Tulyehualco al Zcalo pasando por los pueblos de San Gregorio, Nativitas, Xochimilco, Huipulco, Tasquea, Churubusco y Tetepilco. El tranva contaba con un carro para pasajeros y un segundo carro que era una especie de gndola, sin techo ni puerta alguna (Figura 10), y era un servicio especial para los agricultores que llevaban sus productos al mercado de la Merced (Morrison, 2003; Aguirre, 2000). El dulce que preparaban lo acomodaban en una base de madera, reconocida localmente como la tpica tablita (Alejandre y Gmez, 1986) e iban calle por calle, en los atrios de las iglesias, plazas populares, durante fiestas patronales o reuniones familiares. En 1970, varios vecinos del pueblo, con el apoyo de las autoridades delegacionales tuvieron la iniciativa de organizar una Feria de la Alegra y el Olivo, con el fin de dar a conocer y promover los productos locales, ampliar los espacios para su comercializacin, atraer visitantes y dar a conocer la cultura y tradiciones de Tulyehualco. Tambin en esta dcada aument la demanda de materia prima para elaborar las alegras, como la produccin en el Teuhtli no fue suficiente, los transformadores empezaron a comprar semilla producida en otros estados, principalmente Morelos y Puebla. El proceso tradicional para elaborar las alegras fue descrito detalladamente por Alejandre y Gmez (1983). En la actualidad, se ha dejado de lado el comal de barro con el que por la noche se tostaba el amaranto de a puitos, para usar hoy en da maquinas reventadoras que con aire caliente tuestan en una hora lo que uno

Figura 10. Tranva que transportaba campesinos y sus productos agrcolas a lo largo de la ruta que viajaba Tulyehualco hacia el Zcalo inaugurada en 1910. (Bill Volkmer collection, http://davesrailpix.com/odds/mx/htm/ mxc16.htm). S. H. Morn Bauelos et al.

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necesita para toda la semana (Lpez y Manzo, 2010) tambin se utilizan moldes de diferentes formas y tamaos, as como nuevos ingredientes para ampliar las posibilidades de venta. Durante los 41 aos que lleva la Feria de la Alegra se han experimentado nuevas formas de uso de la semilla y su harina, actualmente se pueden enumerar algunos de ellos: a) Diferentes tipos de alegras: Con miel, con piloncillo, con otros granos (pin, semilla de calabaza, cacahuate), sabor chocolate, sabor nuez, sabor cajeta, sabor yogurt, sabor fresa; b) A base de harina de amaranto: complemento alimenticio, panes y pays, atoles, tamales, hot cakes y churros, frituras extrudidas (charritos, totopos), galletas, hojuelas, tortillas enriquecidas, mazapanes, agua, pulque; c) Grano reventado adicionado a: frutas, yogurt, licuados, leche, palomitas de maz, enjambres, bombones, mezcla para empanizar; d) Grano reventado como granola con mascabado, con oleaginosas (girasol, linaza,

COMENTARIOS FINALES La historia del tzoalli puede dividirse en diversos captulos, el primero de ellos es el enigmtico uso prehispnico que culmina con la llegada de los espaoles y la satanizacin de aquellas figuras que parecan estar elaboradas con sangre de sacrificados, de doncellas o de nios. Un nuevo captulo marca la sobrevivencia del tzoalli en la tradicin ceremonial de comunidades indgenas, como aquellas de la sierra de Guerrero, que las siguen utilizando junto con el maz para comunicarse con las fuerzas divinas. El captulo mestizo del tzoalli corresponde a la conversin a alegra, ahora patrimonio biolgico y cultural del Pueblo de Santiago Tulyehualco; donde el huauhtli y la miel toman nuevas y diversas formas contemporneas, sin la carga simblica y ceremonial de otros tiempos.

Figura 11. Figuras hechas a base de amaranto comercializadas en Tulyehualco, Distrito Federal, con motivo de das festivos.

ajonjol), con frutas secas (nuez, pasas, coco, ciruela). La tradicin de elaborar alegras forma parte del patrimonio cultural del pueblo de Santiago Tulyehualco, y el oficio de alegrillero es un elemento de identidad (Tristn, 1994; Ramrez et al., 2010) que en la actualidad permite a diversas familias establecer microempresas donde se moldea la alegra en mltiples formas asociadas al calendario de festividades populares contemporneas (Figura 11).

Tiempo despus, el huauhtli comenzara a transformarse en amaranto. En los siglos XVI y XVII en Europa ya existan diversas plantas asociadas a la palabra griega Amaranthus, que significa inmarcesible o que no se marchita, Costea y Tardif (2003) presentan una amplia revisin al respecto. Es despus de la conquista y debido al intercambio que se dio entre los continentes, que las plantas de huauhtli fueron descritas y clasificadas taxonmicamente por Carlos Lineo en 1753 dentro del gnero Amaranthus, donde se incluyen hasta la fecha plantas asiticas, australianas, europeas, africanas y americanas. A partir de entonces, la comunidad cientfica nombra al huauhtli como Amaranthus

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hypochondriacus, A. cruentus y A. hybridus (Feine et al., 1979; Costea, 2003; Iturbide y Gispert, 2012). El captulo que estamos viviendo en este nuevo siglo es el del aprovechamiento del tzoalli disociado hasta el nivel molecular, para utilizar sus cidos nucleicos (fragmentos de ADN o genes completos) en el mejoramiento de cultivos (Valds-Rodrguez et al., 2007) y como materia prima para alimentos y bebidas procesadas (Reyna, 1988; Bejosano y Corke, 1998a,1998b; Morales et al., 2009); Desde 1986, Alejandre y Gmez resaltaron el aporte nutricional y en 2009, Morales y colaboradores retoman el estudio con mayor profundidad; de ste ltimo se desprende el papel del amaranto como alimento funcional para el estilo de vida contemporneo, donde el cambio de dieta ha generado la epidemia que combina desnutricin con obesidad, tanto en poblaciones urbanas como rurales. Ante ello el huauhtli, ahora amaranto tiene un amplio potencial como fuente de elementos nutricionales y compuestos bioactivos para enfrentar la crisis actual. LITERATURA CITADA Aguirre B M (2000) [En lnea]. Los tranvas de la Ciudad de Mxico, 1850-1971. Mejor cuntame uno de tranvas... Direccin URL: http://www.mexicomaxico.org/Tranvias/ TRANVIAS.htm [Consulta: Agosto de 2012] Alejandre I G, Gmez L F (1986) Cultivo del amaranto en Mxico. Coleccin Cuadernos Universitarios. Serie Agronoma No.12. Universidad Autnoma Chapingo. 245 p. Barrales D J S, Barrales B E, Barrales B E (2010) Amaranto. Recomendaciones para su produccin. Fundacin Produce Tlaxcala A.C., Plaza y Valds. Mxico, D.F. 166 p. Barros C, Buenrostro M (1997) Amaranto. Fuente maravillosa de sabor y salud. Grijalbo. Mxico, D.F. 158 p. Bejosano F P, Corke H (1998a) Effect of Amaranthus and Buckwheat Proteins on Wheat Dough Properties and Noodle Quality. Cereal Chemistry 75(2): 171-176.

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S. H. Morn Bauelos et al.

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Gentica Molecular

Captulo III

El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus L.: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento
THE TRANSCRIPTOME OF Amaranthus hypochondriacus L.: A POWERFUL TOOL FOR ITS DEEPER UNDERSTANDING AND UTILIZATION

John P. Dlano-Frier1 y Norma A. Martnez-Gallardo1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato) Km 9.6 del Libramiento Norte. Carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico. Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx Telfono: (52) 462 39636 462 39600 FAX: (52) 462 45996 462 39611

RESUMEN Se realiz un anlisis transcriptmico en Amaranthus hypochondriacus para identificar genes expresados en tallos pigmentados y en condiciones de estrs (a)bitico. De un total de 2,700,168 lecturas, se ensamblaron 21,207 secuencias de alta calidad agrupadas en 799 contigs y 20,408 isotigs. Los contigs, que son grupos de secuencias individuales que se superponen al compartir segmentos de su secuencia, tuvieron una longitud promedio de 930 pb. Los isotigs, que son variantes de un mismo contig generadas por splicing alternativo, tuvieron una longitud promedio de 1064 pb. Los isotigs se agruparon en 15,667 isogrupos, que representan transcritos nicos. Se registraron 5113 singletons stas son secuencias nicas que no se alinearon con ninguna otra. El proceso de anotacin y funcionalidad, se hizo consultando varias bases de datos, incluyendo una dedicada exclusivamente a las amarantceas. Una anlisis in silico identific 1971 genes, muchos de funcin desconocida, que se expresaron diferencialmente en respuesta a estrs. Algunos de ellos son ahora parte de un anlisis funcional para evaluar su capacidad de conferir resistencia a mltiples condiciones de estrs en plantas modelo.

Paralelamente, este transcriptoma se est usando como base para el estudio de sus respuestas de defensa inducibles contra insectos y patgenos y de los mecanismos que permiten su excepcional tolerancia a la defoliacin. Tambin se emplea para conocer de qu manera se promueve el crecimiento y el rendimiento al ser inoculado con microorganismos benficos del suelo. Adems, genes asociados con pigmentacin se estn estudiando para evaluar su funcin en la resistencia a estrs. As, el transcriptoma del amaranto es la base de una intensa investigacin enfocada hacia un mejor entendimiento de los factores que hacen del amaranto una planta de tan excepcionales caractersticas. Esta informacin ser de utilidad para la seleccin asistida en el mejoramiento gentico del amaranto y otros cultivos comerciales mucho ms susceptibles a condiciones medio-ambientales adversas. Palabras clave: amaranto, transcriptoma, resistencia al estrs, defensa, tolerancia, mejoramiento agronmico. ABSTRACT A large scale transcriptome analysis was performed to generate pigmented stem and (a)
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

biotic stress-responsive gene expression profiles in grain amaranth. A total of 2,700,168 raw reads were obtained, which were assembled into 21,207 high quality sequences grouped into 799 contigs, which are groups of independent reads with segments of overlapping sequence and 20,408 isotigs, which are alternative splicing variants of a given transcript. The average sequence length was 1,064 bp and 930 bp for isotigs and contigs, respectively. Contigs/isotigs were further incorporated into 15,667 isogroups, representing a collection of isotigs containing reads that imply connections between them. Only 5,113 singletons were recovered after quality control; these are individual sequences unable to be grouped into a contig. All unique sequences were queried against several databases for annotation and functionality. Digital expression analysis identified 1,971 differentially expressed genes, many of unknown function, in response to the stress treatments tested. The functional characterization of some of these genes is now in progress to test for multiple stress resistance in model plants. Parallel investigations using the information provided by the transcriptome are being performed to study inducible defense responses against pests and pathogens. It is also being utilized to determine the mechanisms underlying its exceptional tolerance to defoliation, which is based on an active mobilization of its carbohydrate reserves. Its use will also help to determine how beneficial soil bacteria promote growth and increase yields in amaranth, and the possible role of pigmentrelated genes in stress resistance. Thus, the amaranth transcriptome has become the basis of a research program aimed to gain a better understanding of the factors that contribute to the exceptional qualities of amaranth. The information gained will surely find application in programs designed to increase the agronomic performance of amaranth and also of much more susceptible commercial crops, particularly under stress. Key words: amaranth, transcriptome, stress resistance, defense, tolerance, agronomic improvement.

INTRODUCCIN El amaranto pertenece a la familia de las amarantceas compuesta por 70 gneros. El gnero Amaranthus (Caryophyllales: Amaranthaceae) comprende alrededor de 60 especies. Es una planta dicotilednea no gramnea que produce semillas tipo granos, por lo que se le ha denominado como pseudocereal (Belton y Taylor, 2002). Por el tipo de usos que tiene, el amaranto se clasifica tambin en amaranto de grano y foliceo, aunque tambin se usa con fines ornamentales. Los primeros se reconocen como originarios de Amrica y comprenden tres especies: A. cruentus, A. hypochondriacus y A. caudatus, mientras que entre los amarantos productores de hoja, se encuentran A. cruentus, A. dubius, A. hybridus y A. tricolor, todos ellos cultivados principalmente en Asia y frica (Shukla et al., 2006; Morales Guerrero et al., 2009). Otras especies son malezas agresivas que afectan muchas zonas de produccin agrcola en el mundo (Steckel, 2007). Las semillas contienen niveles elevados de protena total, as como del aminocido lisina (Belton y Taylor, 2002) generalmente deficiente en otros cereales. Adems, estas protenas generan, al hidrolizarse, pptidos biolgicamente activos, mientras que los lpidos son una rica fuente de fitoesteroles, incluyendo escualeno. Por ello, se sugiere que su consumo puede ser benfico en personas con problemas de hipertensin, enfermedades cardiovasculares asociadas a hiperlipidemias, diabetes y ofrece, adems, el potencial de prevenir algunos tipos de cncer (Marcone et al., 2004; Martirosyan et al., 2007; HuertaOcampo y Barba de la Rosa, 2011). Las hojas tambin contienen altos niveles de protena, minerales como calcio, magnesio y fsforo, as como vitaminas, principalmente cido ascrbico (Akubugwo et al., 2007). El inters por el amaranto a nivel mundial, como fuente de grano y verdura, ha ido gradualmente en aumento ya que adems de su alto contenido nutricional, posee numerosas caractersticas agronmicas deseables, como una alta tolerancia a suelos pobres y/o salinos, climas semiridos y/o condiciones desfavorables del medio ambiente, as como la produccin de grandes volmenes de biomasa. Adems, el amaranto de grano es considerado una excelente

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Captulo III. El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento

alternativa para regiones con dificultades para la siembra de cereales (Brenner et al., 2000; Kadereit et al., 2003; Omami et al., 2006; Huerta-Ocampo et al., 2009). La habilidad de crecer en condiciones de sequa que caracteriza al amaranto est relacionada directamente con una sobresaliente eficiencia del uso del agua (EUA). Varios estudios han sealado que la EUA en amaranto es superior al de la mayora de cultivos C3 y C4, entre los que se incluyen trigo, maz, algodn y sorgo (Weber, 1990). La eficiente EUA del amaranto tambin se ha asociado a su alta tolerancia a la salinidad (Omami et al., 2006). La tolerancia a la sequa del amaranto se atribuye, tambin, a su fisiologa C4, a un hbito de floracin no determinado y a la capacidad de generar largas races principales, as como de un extenso sistema de races laterales, en respuesta a la falta de agua en el suelo (Putnam, 1990; Johnson y Henderson, 2002). Asimismo, los resultados de un reciente estudio basado en el uso combinado de estrategias protemicas y genmicas sugieren que la resistencia a sequa en amaranto se debe a una respuesta coordinada que incluye la acumulacin de solutos compatibles y la expresin de genes diseados para evitar el estrs oxidativo causado por la inevitable formacin de especies reactivas de oxgeno durante condiciones de estrs (Takahashi y Murata, 2008; Chaves et al. 2009), y para conferir estabilidad a las protenas y regular el crecimiento (Huerta-Ocampo et al., 2009, 2010). La actual revolucin genmica ha facilitado la identificacin y entendimiento del mecanismo de accin de un gran nmero de genes, especialmente en plantas modelo como Arabidopsis thaliana. Sin embargo, el progreso en este sentido ha sido limitado cuando se trata de especies vegetales marginalmente estudiadas, entre las cuales est el amaranto. stas son usualmente de inters para grupos de investigacin pequeos, con recursos econmicos que raramente permiten invertir en programas de secuenciacin genmicos/transcriptmicos masivos que an son costosos y, que adems, usualmente carecen de las herramientas bioinformticas necesarias para analizar el alud de informacin generado por los secuenciadores actuales o de nueva generacin. Otro factor limitante, es que normalmente estas plantas

marginadas o poco estudiadas carecen del valioso apoyo que representa tener como referencia el genoma totalmente secuenciado de una especie relativamente cercana, el cual normalmente se utiliza para organizacin de datos genmicos en una especie recin secuenciada (Wheat et al., 2010). A pesar de ello, se han podido usar herramientas moleculares para realizar un reducido nmero de estudios genmicos/ transcriptmicos avanzados en amaranto: en 2008, se gener una biblioteca de los llamados BACs (de Bacterial Artificial Chromosomes) conteniendo el genoma completo de A. hypochondriacus, con una cobertura aproximada de 10.6 veces (Maughan et al., 2008). sta fue empleada un poco ms adelante para identificar ADN satlite en amaranto de grano, el cual fue usado posteriormente para clarificar relaciones taxonmicas dentro del complejo de A. hybridus, del cual se cree provienen las especies modernas de amaranto usadas para la produccin de grano (Mallory et al., 2008). Inclusive, se emple la pirosecuenciacin 454 para obtener datos genmicos de un amaranto silvestre (A. tuberculatus), que es una de las malezas ms agresivas de los cultivos de maz y soya en los Estados Unidos (Lee et al., 2009). Esto se hizo con la intencin de obtener informacin relevante acerca de su capacidad de generar una rpida tolerancia a herbicidas con el propsito de emplearla para el diseo de mejores estrategias de control de malezas (Lee et al., 2009). Tambin se gener el transcriptoma de esta especie, del cual se generaron cerca de 50,000 secuencias nicas, muchas de ellas similares a las presentes en A. thaliana, y se identificaron genes nuevos, potencialmente asociados a la resistencia a herbicidas (Riggins et al., 2010). Finalmente, la pirosecuenciacin 454 fue empleada para detectar polimorfismos en poblaciones de A. caudatus (Maughan et al., 2009). En este captulo se describirn inicialmente los resultados del primer anlisis transcriptmico de novo de A. hypochondriacus, el cual fue realizado para identificar genes relacionados con estrs (a)bitico y pigmentacin. Posteriormente, se har mencin de la utilizacin que se le est dando actualmente a la vasta informacin generada por el transcriptoma para conocer aspectos importantes y poco conocidos del amaranto de grano, como los siguientes:
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resistencia a insectos, patgenos bacterianos y fitoplasmas; resistencia a estrs por sequa y salinidad; tolerancia a la defoliacin, basada en la movilizacin activa de sus reservas de carbohidratos; posible funcin de los pigmentos en defensa y quiz proteccin al estrs, y mecanismos de promocin del crecimiento por microorganismos del suelo. Adems, se ha usado para dar los primeros pasos en el descubrimiento de nuevos genes que pudieran tener el potencial de aplicarse para el mejoramiento agronmico del amaranto y otros cultivos de importancia. MATERIALES Y MTODOS El transcriptoma de A. hypochondriacus se obtuvo de acuerdo a las metodologa descrita en Dlano-Frier et al. (2011). Para ello se emple la pirosecuenciacin 454, una de las tecnologas de secuenciacin masiva, llamadas de la nueva generacin, surgidas en 2005 y ahora ampliamente disponibles. Antes de su irrupcin en los laboratorios, el anlisis transcriptmico involucraba la generacin de extensas bibliotecas de ADN complementario (ADNc), en los cuales fragmentos de ADNc de diversa longitud y casi nunca completos, producidos de transcritos o ARN mensajeros (ARNm) por una reaccin llamada de transcripcin reversa, eran subsiguientemente insertados en plsmidos. stos son pequeos fragmentos de ADN circular que pueden ser fcilmente clonados en bacterias para su manipulacin y almacenamiento (Bouck y Vision, 2007). Esta es una labor muy intensa y costosa. Adems, adolece de cuatro debilidades experimentales: 1) dificultad para detectar genes raros cuya expresin es normalmente baja, ya que se diluyen dramticamente ante una mayora de genes, llamados de house keeping o mantenimiento celular bsico, que pueden llegar a constituir hasta 50% de los transcritos presentes en la biblioteca, dependiendo del tejido del cual fueron aislados y/o de las condiciones experimentales; 2) la prdida irreversible de ciertos transcritos debido al efecto letal que producen al expresarse, en las bacterias que los contienen (aunque este problema ha sido resuelto mediante el uso de vectores en los cuales los ADNc insertados no se expresan; Weber et al., 2007); 3) la tendencia a que los ADNc pequeos e incompletos predominen, en
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detrimento de ADNc largos e incluso completos, que es el resultado deseado, simplemente debido a que la eficiencia de transformacin bacteriana favorece a los plsmidos ms pequeos, y 4) el uso de la clsica tcnica de Sanger, lenta, lineal y limitada a 700 pb, para determinar la secuencia de estos ADNc (Sanger et al., 1975). La pirosecuenciacin 454 masiva y en paralelo evita todos estos problemas, ya que utiliza ADN no clonado que es inicialmente cortado al azar. Luego, los mltiples fragmentos individuales son subsiguientemente secuenciados masiva y simultneamente en nano placas (de 1.59 106 pozos!). Esto es posible gracias a avances tecnolgicos que permiten tanto la micro amplificacin de ADN en cada pozo as como la deteccin diferencial de la incorporacin de nucletidos a cada secuencia en crecimiento. sta se logra detectando los pulsos de luz generados por la liberacin de pirofosfato producida durante la extensin de la cadena de ADN catalizada por la ADN polimerasa (Margulies et al., 2005). De este modo, una corrida de 4 h, realizada en los primeros modelos de estos secuenciadores generaba aproximadamente 300,000 lecturas de una extensin promedio de 110 pb cada una, equivalente a un total 33 Mpb. Modelos posteriores de mucho mayor eficiencia, como los empleados para obtener el transcriptoma del amaranto (e.g. Roche-454 GS FLX y Roche-454 GS FLX; 454 Life Sciences, Branford, CT, USA) permiten un nmero similar de lecturas por corrida pero de una longitud aproximada de 500 pb. En nuestro estudio, se hicieron un total de seis corridas, con ADNc generado de plantas de A. hypochondriacus var. Revancha y A. hypochondriacus, accesin India 38040. sta ltima fue elegida por su intensa pigmentacin, y fue usada exclusivamente para el estudio del transcriptoma de tallo. Las semillas fueron donadas por los Dres. Eduardo Espitia (Inifap) y David Brenner (Iowa State University, EUA), respectivamente. Se generaron plntulas a partir de semilleros en mezcla de germinacin, las cuales se transfirieron posteriormente a macetas de 1.3L conteniendo un substrato estril compuesto por tres partes de mezcla Sunshine 3TM (SunGro Horticulture, Bellevue, WA), una parte de greda rica en humus, dos partes de turba, una parte de vermiculita (SunGro Hort) y una parte de perlita (Termolita S.A., Nuevo Len, Mxico).

Captulo III. El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento

Una vez que alcanzaron seis hojas expandidas, las plantas se separaron en diferentes grupos para ser sometidas a cuatro diferentes tratamientos: 1) estrs salino agudo, producido al regar las macetas con una solucin de 400 mM de NaCl por tres das consecutivos (equivalente a una concentracin de sal en el suelo slo tolerada por especies halfilas y extremfilas; fact sheet No. 66/00, http://www.pir.sa.gov.au/factsheets); 2) estrs por sequa, producido por la falta de riego por tres das consecutivos, lo que provoc una marchitez evidente en las plantas al trmino del tratamiento, quizs por su incapacidad de buscar fuentes de agua mediante el crecimiento de su raz principal y proliferacin de sus races laterales; 3) herbivora continua hasta por 24 h por larvas de Estigmene acrea, un insecto masticador generalista colectado de plantaciones experimentales de amaranto en Irapuato, Gto., y 4) infeccin con Pseudomonas sp., clasificada tentativamente como P. argentinensis, que result tener una interaccin virulenta con amaranto y que fue aislada tambin de plantos experimentales de amaranto. Se generaron bibliotecas normalizadas de ADNc, es decir, tratadas de un modo tal que favorecieron que cada transcrito, por ms raro que este fuera, estuviera representado ms o menos equitativamente en la poblacin total de transcritos a partir de ARN total. ste fue extrado de plantas intactas, de plantas sometidas a cada uno de los tratamientos descritos, y del tallo pigmentado, y se us para realizar cuatro corridas de pirosecuenciacin independientes; en la quinta y sexta corridas, el ADNc de del control y cada uno de los tratamientos/ tejidos (estrs salino, sequa, herbivora, infeccin bacteriana y tallo pigmentado) se distribuy uniformemente en una de las cuatro secciones de la placa de secuenciacin. Los resultados de estas dos ltimas corridas fueron empleados para realizar el anlisis de expresin digital (ver ms adelante). La pirosecuenciacin se realiz como un servicio externo en el Laboratorio Nacional de Genmica para la Biodiversidad, en el Cinvestav, Unidad Irapuato. Las secuencias obtenidas de estas corridas se ensamblaron de novo (es decir, sin la ayuda de un genoma de referencia) usando la versin 2.3 del programa Newbler, el cual tiene

una opcin para el ensamblado de transcriptomas. sta permite la formacin de isogrupos a partir de isotigs, como se describi anteriormente. La anotacin de las secuencias ensambladas se hizo usando las siguientes herramientas bioinformticas: Basic Local Alignment Search (BLASTX) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) (Altschul et al., 1990), la base de datos de secuencias no redundantes (nr) del Gene Bank y The Arabidopsis Information Resource (TAIR) para Arabidopsis thaliana (http://arabidopsis.org/ index.jsp). Tambin, se usaron las bases de datos UniRef50 and UniRef100 (UniProt Reference Clusters; European Bioinformatics Institute) y todos los ADNc de plantas pertenecientes a la familia Amaranthaceae depositadas en el GenBank (bsicamente betabel, espinaca y varias halfitas). Las secuencias que no dieron un hit significativo (E 110-10) con estas bases de datos se compararon con la base de datos PFAM para intentar anotarlas en base a la presencia de ciertos dominios conservados en sus protenas (Sonnhammer et al., 1997). Los resultados que resultaron significativos despus un bsqueda BLAST contra la base de datos TAIR se usaron para obtener la anotacin funcional de las secuencias (Ashburner et al., 2000). El anlisis de expresin digital se realiz para cuantificar los cambios de expresin de cada uno de los transcritos detectados en amaranto en las diferentes condiciones de estrs estudiadas y expresados diferencialmente en el tallo. Bsicamente, este anlisis consisti en contar el nmero de secuencias de transcritos de un gen en particular en cada uno de los tratamientos y compararlo, despus de un proceso de normalizacin, con el nmero de secuencias del mismo gen obtenido en plantas control y en tallo. En este anlisis, los transcritos con lecturas 5 fueron descartados. Los transcritos expresados diferencialmente en uno o ms tratamientos y/o tallo se detectaron usando tcnicas estadsticas (R y X2) (http://telethon. bio.unipd.it/bioinfo/IDEG6_form/) (Romualdi et al., 2003). Se consider que la expresin de un transcrito era diferencial cuando al menos una de las dos pruebas estadsticas gener un valor de significancia 0.0001.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

RESULTADOS Y DISCUSIN RESULTADOS DE SECUENCIACIN, ENSAMBLADO Y ANOTACIN DEL TRANSCRIPTOMA Se generaron 910 Mpb, equivalentes a 2, 913, 966 secuencias crudas. stas se depositaron en el Sequence Read Archive (SRA) del NCBI. El proceso de ensamblado gener
3000 2500 No. de Contigs 2000 1500 1000 500 0

21,207 secuencias de alta calidad (20,408 isotigs + 799 contigs). El tamao de estas secuencias se distribuy dentro de un rango de tamao de 80 a 3,379 pb con un tamao promedio de 1,014 pb (para isotigs) y 930 bp (para contigs) (Figura 1). Adems, se obtuvieron 5,113 singletons. Los isotigs se incorporaron, a su vez, en 15,667 isogrupos. Un resumen del proceso de secuenciacin y ensamblado se presenta en el Cuadro 1.

Figura 1. Distribucin de acuerdo a su longitud de los contigs/ isotigs obtenidos despus del ensamblado de los reads. Cuadro 1. Resumen del anlisis transcriptmico de A. hypochondriacus (Modificado de Delano et al., BMC Genomics 2011).

INFORMACIN INICIAL Total de nucletidos (nt) Nmero de secuencias crudas (reads) Nmero de secuencias limpias Total de nucletidos usados en el ensamblado ENSAMBLADO Nucletidos alineados Secuencias (reads) alineadas Secuencias ensambladas Total de singletons Singletons de buena calidad Secuencias desechadas (muy cortas, repetidas, incongruentes, etc.) ENSAMBLADO EN CONTIGS Nucletidos ensamblados en contigs Total de contigs Contigs: Tamao promedio Contigs: Tamao mximo ENSAMBLADO EN ISOTIGS Nucletidos ensamblados en isotigs No. promedio de contigs por isotig Mximo No. de contigs por isotig Isotigs: tamao promedio Isotigs: tamao mximo
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0-100 101-200 201-300 301-400 401-500 501-600 601-700 701-800 801-900 901-1000 1001-1100 1101-1200 1201-1300 1301-1400 1401-1500 1501-1600 1601-1700 1701-1800 1801-1900 1901-2000 2001-2100 2101-2200 2201-2300 2301-2400 2401-2500 >2500 Longitud de los contigs/isotigs (pb)

909, 631, 600 2, 913,966 2, 700, 168 877, 153, 000 803, 229, 499 2, 417, 008 1, 886, 081 178, 636 5, 900 171, 819 15, 170, 717 15, 608 971 3, 379 20, 710, 069 1.7 17 1, 014 4, 762

Captulo III. El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento Contina Cuadro 1...

ENSAMBLADO EN ISOGRUPOS No. total de isogrupos No. promedio de isotigs por isogrupo No. promedio de contigs por isogrupo No. mximo de contigs por isogrupo No. mximo de isotigs por isogrupo No. de isogrupos con un solo isotig ANOTACIN No. de secuencias anotadas con la base de datos nr No. de secuencias anotadas con la base de datos TAIR No. de secuencias anotadas con la base de datos UniRef 50 y 100 No. de secuencias anotadas con la base de datos Amaranthaceae No. de singletons anotados con la base de datos TAIR

15, 667 1.3 3.0 22, 172 52 12, 950 22, 105 11, 499 17, 440 10, 846 1000

Aproximadamente 82% de las secuencias agrupadas en contigs/isotigs y cerca de 1000 singletons produjeron hits significativos (E 110-10) al ser comparadas con las bases de datos empleadas para su anotacin. La anotacin funcional se determin dentro de de las categoras de Proceso Biolgico, Proceso Molecular y Componente Celular. Los resultados se muestran en la Figura 2. En la primera categora, se encontr que 3% de los contigs/ isotigs pudieron agruparse dentro de genes estimulados por estrs, 2% en procesos de desarrollo y un 4% adicional en otros procesos biolgicos y metablicos. Estas categoras eran de particular inters para nosotros considerando que uno de los objetivos primordiales de este anlisis transcriptmico fue la identificacin de genes asociados con respuestas a estrs (a)bitico (ver ms adelante). De entre los transcritos con una posible funcin defensiva, los cuales representaron aproximadamente 1% del total
1%

de transcritos anotados funcionalmente, ms de la mitad se relacion con genes asociados con respuesta a infeccin bacteriana (41%) y/o regulados por cido jasmnico (AJ) (24%), incluyendo muchos genes involucrados en la sntesis o rutas de sealizacin controladas por AJ (Figura 3). Muchos de estos genes se estn estudiando con ms detalle en un proyecto cuyo objetivo es estudiar las respuestas de defensa que se inducen en amaranto, y el costo fisiolgico en trminos de crecimiento y rendimiento que esto involucra, al aplicar diferentes estmulos. Para ello se eligi la aplicacin exgena de AJ o de un compuesto anlogo al cido saliclico, llamado BTH (conocido comercialmente como BION o Actigard), que es usado en ciertos cultivos agrcolas para protegerlos contra la infeccin de patgenos. Tambin se incluy la respuesta de defensa inducida por la interaccin con una bacteria avirulenta (Ver Captulo X de Casarrubias-Castillo).

A)

3%

1%

1%

2% 8% Organizacin celular y biognesis Procesos de desarrollo Metabolismo de ADN o ARN Transporte de electrones y energa Otros procesos biolgicos Otros procesos celulares Otros procesos metablicos Metabolismo de protenas Respuesta a estrs (a)bitico Respuesta a estrs Transduccin de seales Transcripcin Transporte Procesos biolgicos desconocidos Funcin desconocida

3%

46%

8%

1% 3% 2% 4% 1%

16%

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37

1%

Amaranto: Ciencia y Tecnologa


8% 1% 1% 1% 1% 2% 4% 4%

B)

46%

3% 2% 4%

6% 2% 12% 0.3%

Pared celular Cloroplasto Citoplasma Retculo endoplsmico Apoplasma Aparato de Golgi Mitocondria Ncleo Otros componentes celulares Otros componentes citoplsmicos Otros componentes intracelulares Otros componentes membranales Membrana plasmtica Plastidios Ribosomas Componente celular desconocido Funcin desconocida

3% 6% 3% 1% 3% 5% Unin a ADN o ARN Actividad hidrltica Actividad tipo cinasa Unin a cido nuclicos Unin a nucletidos Otro tipo de unin Otro tipo de actividad enzimtica Otro tipo de funcin molecular Unin a protenas Receptor o unin a receptor Molculas estructurales Factores de transcripcin Transferasas Transportadores Funciones moleculares desconocidas Funcin desconocida

C)

45%

7%

1% 5% 0.2% 2% 3% 3% 12% 1%

Figura 2. Resumen de la anotacin de los isotigs/contigs obtenidos del transcriptoma de novo de A. hypochondriacus. Las secuencias se anotaron de acuerdo a 3 grupos: (A) Procesos Biolgicos, (B) Funcin Molecular y (C) Componente Celular y 45 subgrupos.
1% Otros procesos Defensa

6%

12% Hongos Bacterias Interaccin incompatible cido Jasmnico cido Saliclico

24%

99%
41%

17%

Figura 3. Nmero de isotigs/contigs de of A. hypochondriacus categorizados dentro de la respuesta a estrs bitico.

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Captulo III. El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento

En general, el anlisis transcriptmico del amaranto permiti la identificacin de una gran variedad de genes involucrados en defensa, muchos de ellos reportados en esta especie por primera vez, como por ejemplo genes que muy posiblemente contribuyan a la sntesis de fitoecdisteroides y oxalatos, que se cree son utilizados por el amaranto y otras especies con propsitos defensivos, principalmente contra insectos herbvoros (Schmelz et al., 2002; Korth et al., 2006; Bakrim et al., 2008). Tambin se detectaron numerosos tipos de genes defensivos, incluyendo numerosas lectinas, proteasas e inhibidores de proteasas, protenas asociadas con patognesis, cinasas similares a receptores que son indispensables en respuestas de defensa innata y enzimas involucradas en la generacin de la respuesta hipersensible y de las especies reactivas de oxgeno asociadas con ella, y su posterior detoxificacin, entre otras. Una lista de estos genes de naturaleza defensiva se presenta en los Cuadros 2 y 3. Resulta hasta cierto punto paradjico encontrar tan rico arsenal de genes defensivos en una especie considerada como altamente tolerante a la defoliacin, ya que usualmente tolerancia y resistencia son dos caractersticas mutuamente excluyentes, aunque no es raro encontrar excepciones en situaciones naturales (Nuez-Farfan et al., 2007; Schmidt y Baldwin, 2009). En relacin al posible mecanismo de tolerancia a defoliacin, result importante identificar genes potencialmente

asociados con mecanismos de compensacin de fotosntesis, sntesis y degradacin de almidn, sntesis e hidrlisis de sacarosa, movilizacin de carbohidratos y sealizacin por azcares, entre otros (Figura 4). Su estudio podra mejorar el entendimiento de los mecanismos sobre los cuales se basa la excepcional tolerancia a la defoliacin en amaranto, causada mecnicamente o por insectos masticadores. sta se basa, al parecer, en una eficiente utilizacin, movilizacin y recuperacin de las reservas de carbohidratos. La participacin de muchos de estos genes en el proceso de tolerancia a la defoliacin est empezando a ser analizada en nuestro laboratorio, y el panorama que se tiene de su importancia en este proceso, hasta el momento, se describe con ms detalle por CastrillnArbelez en el captulo 7 de este libro. Aspectos adicionales y complementarios de la tolerancia a la defoliacin por insectos, que i) involucran utilizacin de reservas de carbohidratos almacenadas en raz y tallo para amortiguar eventos de defoliacin completa sin afectar significativamente la productividad en cuanto a produccin de semilla, y ii) que demuestran que el amaranto puede tolerar y resistir (i.e. mediante la induccin de genes de defensa, como inhibidores de proteasa) simultneamente la perdida de tejido foliar por herbivora o dao mecnico, se describen a profundidad por Vargas-Ortiz en el Captulo VIII de este libro. Asimismo, se identificaron varios genes

Cuadro 2. Algunos genes representativos, relacionados con defensa y estrs abitico identificados en el anlisis transcriptmico del amaranto (Parte 1).

FUNCIN Y NOMBRE DEL GEN TOTAL1 6 3 2 35 17 8 26 6 2 5 2 5 6


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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Contina Cuadro 2...

FUNCIN Y NOMBRE DEL GEN TOTAL1 3 6 9 6 1 6 5 20 4 2 1 3 14 21 6 6 5 10 15 2 2 1 4 3


1Isotigs y/o contigs Cuadro 3. Algunos genes representativos, relacionados con defensa y estrs abitico identificados en el anlisis transcriptmico del amaranto (Parte 2).

FUNCIN Y NOMBRE DEL GEN TOTAL1 10 2 1 2 5 9 15 18 30 11 9 3

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Captulo III. El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento Contina Cuadro 3...

FUNCIN Y NOMBRE DEL GEN TOTAL1 16 14 5 27 6 2 22 2 6 18 7 2 12 4 4 2 2 18


1

Isotigs y/o contigs


21 33

Metabolismo de sacarosa (sntesis y degradacin) Metabolismo de almidn (sntesis y degradacin)

Sealizacin por azcares Transportadores: glucosa, sacarosa, triosas fosfato, fosfato, fotoenolpiruvato

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Figura 4. Nmero de isotigs/contigs de of A. hypochondriacus genes relacionados con la sntesis, metabolismo, almacenamiento y movilizacin de carbohidratos.

relacionados con sntesis o sealizacin por fitohormonas y con el proceso de floracin (Figura 5). Algunos de estos pudieran estar relacionados, por ejemplo, con el incremento en el nmero de ramificaciones que se observa en plantas de amaranto defoliadas severamente, quizs por la prdida de dominancia apical causada por la alteracin en los niveles endgenos de auxinas y citocininas (Leyser, 2005) y con el rpido rebrotar de tejido foliar despus de defoliacin, quizs estimulado por una combinacin de giberelinas, brasinoesteroides y posiblemente citocininas (Achard et al.,

2009; Clouse y Sasse, 1998; Werner et al., 2001; Dayan et al., 2012). Genes asociados con fitohormonas, principalmente auxinas, adems de genes clave en fotosntesis C4 y en otros procesos, como transporte de azcares y aminocidos y regulacin de la relacin tejido fuente-consumidor, tambin se estn estudiando para tener un mejor entendimiento de los mecanismos mediante los cuales la inoculacin con bacterias del suelo benficas promueven el crecimiento y, posiblemente, el rendimiento de grano, en amaranto. Este tema se describe con ms detalle en el captulo sobre promocin de crecimiento en amaranto escrito por Parra-Cota
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A)

119

121 Floracin Auxinas Citocininas Giberelinas cido Abscsico Etileno


0.57% 2.73%

166

199

B)

55

41

Contigs Relacionados a Floracin Contigs Relacionados a Hormonas Resto 96.69%

Figura 5. (A) Nmero de isotigs/contigs de of A. hypochondriacus categorizados dentro de funcin hormonal y floracin. En (B) se muestra la abundancia relativa de estos genes en el transcriptoma.

en el Captulo IX de este libro. Adems, el anlisis de genes relacionados con fitohormonas con aquellos que pudieran ser similares a los que controlan el proceso de floracin en otras especies, como el gen CONSTANS o APETALA (Putterill et al., 2004; Jaeger et al., 2006), podran dar un indicio de los cambios morfolgicos severos que se producen en plantas de amaranto infectadas con fitoplasmas, como la filodia y el desperfecto llamado escoba de bruja, entre otros (OchoaSnchez et al., 2009). El ensayo de expresin digital en hojas de amaranto permiti la identificacin de 1971 genes diferencialmente expresados en respuesta a al menos uno de los cuatro tratamientos de estrs aplicados. Muchos genes de funcin desconocida aparecieron en este anlisis, algunos de ellos inducidos por mltiples condiciones de estrs. Esto permite pensar en la posibilidad de descubrir nuevos genes que pudieran tener aplicaciones agro-biotecnolgicas importantes. El estudio de uno de ellos, llamado Ah24, que no fue identificado en ninguna de las bases de datos existentes y carece de dominios conservados evidentes es, al parecer, un nuevo modulador de la respuesta a dao mecnico y herbivora
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mediada por AJ (Massange-Snchez, 2011). La identificacin del gen Ah24 coincidi con los resultados del anlisis protemico de hojas de amaranto tratadas con AJ o sometidas a dao mecnico o herbivora por insectos masticadores. Los detalles de este trabajo se describen en el Captulo VI de este libro, escrito por Navarro Melndez. En estos momentos la caracterizacin funcional de este gen se est realizando en plantas transgnicas de tabaco (Nicotiana tabacum) y A. thaliana. El anlisis in silico tambin permiti la identificacin de numerosos factores de transcripcin, muchos de ellos capaces de regular respuestas de estrs en otras especies de plantas, y de genes que se han identificado como parte del arsenal de genes que permite a plantas xerfitas, halfitas o extremfilas sobrevivir en hbitats inaccesibles para la gran mayora de las plantas, como licopeno sintasa (Han et al., 2008) acuaporinas o canales de agua (Johansson et al., 2000), Mio-inositol-1-fosfato sintasa, (Baisakh et al., 2008) cistationina gamasintasa (Tabuchi et al., 2005) fosfoenolpiruvato carboxilasa (Cushman et al., 1989), canales de Na+/H+ y Ca2+/H+ (Li et L., 2011; Han et al., 2011), fosfatasa-2C (Senadheera y Maathuis,

Captulo III. El transcriptoma de Amaranthus hypochondriacus: una poderosa herramienta para profundizar en su conocimiento y aprovechamiento

2009), protena similar a calcineurina B (Chen et al., 2011), inositol monofosfatasa (Sahu y Shaw, 2009), y numerosas protenas inducidas ya sea por sal o por condiciones generales de estrs (Guan et al., 2010). De estos genes se hizo una seleccin de aquellos que presentaron altos niveles de expresin en al menos tres de las condiciones de estrs analizadas. Se incluyeron, adems, factores de transcripcin poco estudiados y genes de funcin desconocida. La intencin es introducirlos en plantas modelo, como Arabidopsis y tabaco, y en el propio amaranto una vez que se establezcan las condiciones para su transformacin gentica, para determinar si son capaces de conferir resistencia a mltiples condiciones de estrs (a)bitico, al sobreexpresarse por medio de un promotor fuerte y constitutivo. Los detalles de esta lnea de investigacin se describen con mucho ms detalles en el Captulo V de este libro, escrito por Palmeros-Surez y Masssange-Snchez. El anlisis transcriptmico del tallo pigmentado permiti la identificacin de transcritos que aparentemente son exclusivos de este tejido. Muchos de ellos tienen que ver con genes involucrados en la sntesis de la pared celular (e.g. pectinas, celulosa y hemicelulosa) y de las enzimas requeridas para su expansin, as como ceras, cutcula y lignina. Se detectaron tambin numerosos factores de transcripcin (bsicamente del tipo MYB, AP2-EREBP, GRAS, dominio bHLH y de reconocimiento de cajas hometicas, como WOX4; Ji et al., 2010) cuya funcin es controlar la diferenciacin de los tejidos vasculares, la sntesis de fibras, as como de regular la ruta de sntesis de fenilpropanoides, bsicos para la sntesis de ligninas, sobre todo. Curiosamente, muchos transcritos asociados con respuestas a estrs abitico mostraron una mayor expresin en tallo que en hojas sometidas a estrs. Tambin se detect una alta expresin de numerosos genes asociados comnmente con defensa, muchos de ellos poco comunes. Entre estos sobresalen una metil transferasa de AJ y un CXE carboxilesterasa, ambos posiblemente asociados a sealizacin por AJ (Sasaki et al., 2001; Islam et al., 2010), una epxido hidrolasa 2 (Wijekoon et al., 2008) y una protena de procesamiento vacuolar VPE-1B, tambin asociada con resistencia estrs abitico (Zhang

et al., 2010): Las dos ltimas estn involucradas en cierta medida en respuestas de defensa contra patgenos microbianos, como cierre de estomas, sntesis de compuestos antimicrobianos y generacin de la respuesta hipersensible. Pero en general, el perfil trancriptmico no fue muy diferente al reportado para tallos en desarrollo de Arabidopsis (Ehlting et al., 2005; Minic et al., 2009) y Populus trichocarpa, una especie leosa (Dharmawardhana et al., 2010). Por ltimo, result importante el hallazgo de transcritos de genes como el de DOPA dioxigenasa (DODA), ciclo-DOPA glucosil transferasa (cDOPA-GT) y otros, como el que codifica a una 5-glucosiltransferasa similar a la de Phytolacca americana (Strack et al., 2003). Su importancia radica en que todos ellos estn involucrados en la sntesis de pigmentos en amaranto. Tambin se detect un transcrito de un gen similar al gen DODA, o DODA-like gene, slo detectado hasta ahora en plantas que producen antocianinas y cuya funcin es an desconocida, aunque podra estar involucrado en defensa (Bahramnejad et al., 2010). El hallazgo de estos genes result consistente con el hecho de que fueron detectados predominantemente en tallo pigmentado. Actualmente, se est estudiando activamente el patrn de expresin de estos genes en diferentes tejidos, como raz, tallo y hoja y en respuesta a diferentes tipos de estrs, como salinidad, sequa y herbivora por insectos masticadores. Los resultados de este enfoque permitirn definir el papel que juegan estos genes en la resistencia a estrs (Casique-Arroyo G, datos no publicados). CONCLUSIONES Este estudio representa el primer anlisis transcriptmico a profundidad de A. hypochondriacus. Este estudio se ha convertido en la plataforma para el estudio de diversos aspectos fisiolgicos importantes, pero prcticamente desconocidos del amaranto de grano, como los mecanismos que le permiten tolerar altos niveles de defoliacin sin afectar la produccin de semilla y la naturaleza de la resistencia inducible contra patgenos bacterianos y/o insectos inducida por evocadores qumicos o bacterias avirulentas. Tambin se est usando para incrementar el entendimiento de la funcin de los pigmentos en amaranto y su
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posible contribucin a la resistencia a estrs (a) bitico y de los mecanismos de promocin de crecimiento, que pudieran establecer la base para incrementar los rendimientos de grano, que en amaranto son relativamente bajos, en general. Adems, revel la presencia de numerosos genes con el potencial de conferir proteccin a agobios ambientales en amaranto, y quizs en otros cultivos, por medio de manipulacin gentica. Es importante resaltar que muchos de estos genes tienen una funcin desconocida, lo que abre las puertas para el descubrimiento de nuevos genes que pudieran tener aplicaciones agronmicas y/o biotecnolgicas importantes en un futuro no muy lejano. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por el Dr. Alberto Crdenas Jimnez, en ese entonces Secretario de SAGARPA, Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. BIBLIOGRAFA Achard P, A Gusti, S Cheminant, M Alioua, S Dhondt, F Coppens, T S Gerrit Beemster, P Genschik (2009) Gibberellin signaling controls cell proliferation rate in Arabidopsis. Current Biology 19: 1188-1193. Akubugwo IE, N A Obasi, G C Chinyere, A E Ugbogu (2007) Nutritional and chemical value of Amaranthus hybridus L. leaves from Afikpo, Nigeria. African Journal of Biotechnology 6: 2833-2839. Altschul S F, W Gish, W Miller, E W Myers, D J Lipman (1990) Basic local alignment search tool. Journal of Molecular Biology 215: 403410. Ashburner M, C A Ball, J A Blake, D Botstein, H Butler, J M Cherry, A P Davis, K Dolinski, S S Dwight, J T Eppig, M A Harris, D P Hill, L Issel-Tarver, A Kasarskis, S Lewis, J C Matese, J E Richardson, M Ringwald, G M Rubin, G Sherlock (2000) Gene Ontology: tool for the unification of biology. Nature Genetics 25: 2529.
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Captulo IV

Identificacin de genes de respuesta a estrs por calcio y sequa en amaranto


IDENTIFICATION OF CALCIUM AND DROUGHT STRESS-RESPONSIVE GENES IN AMARANTH

Hugo S. Aguilar-Hernndez1, Ana P. Barba de la Rosa1, Eduardo Espitia-Rangel2, Jos ngel Huerta-Ocampo1
1IPICyT, Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A.C., Camino a la Presa San Jos No. 2055, Lomas 4 seccin, 78216, San Luis Potos, S.L.P., Mxico. 2INIFAP, Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo, Carretera Celaya-San Miguel de Allende Km 6.5, Celaya, Gto., Mxico. Autor para correspondencia: jose.huerta@ipicyt.edu.mx

RESUMEN El calcio es un in indispensable para el crecimiento y desarrollo de las plantas, tiene adems un papel importante en la transduccin de seales en respuesta a condiciones de estrs bitico y abitico. La sequa es el principal factor abitico que limita la productividad agrcola a nivel mundial. La sobrevivencia y productividad de las plantas depende en gran medida de su capacidad de adaptacin y respuesta a condiciones ambientales desfavorables como el exceso de sales de sodio, magnesio o calcio y la sequa. Mediante la tcnica de hibridacin supresiva sustractiva (SSH) se analiz la respuesta a estrs por cloruro de calcio en hojas y sequa en races de amaranto (Amaranthus hypochondriacus L.). Los transcritos diferencialmente expresados en hojas en respuesta al estrs por calcio estn relacionados con la transduccin de seales y la respuesta a estrs, adems de factores de transcripcin y en algunos casos transcritos con funcin hasta ahora desconocida. Entre los transcritos sobre-expresados en races sometidas a sequa encontramos genes de defensa y de respuesta a estrs, genes relacionados con rutas de sealizacin y con el transporte de agua en la planta. Adems de factores transcripcionales

como DOF1 y MIF1 que se han relacionado con procesos biolgicos nicos de plantas. Entre los genes reprimidos se encontraron genes relacionados con la diferenciacin celular y el metabolismo secundario. Mediante el empleo de SSH hemos identificado interesantes y novedosos genes de respuesta a estrs abitico. La caracterizacin funcional de estos genes permitir conocer el papel que juegan en la respuesta a estrs en amaranto. Palabras clave: Amaranthus hypochondriacus L., Estrs abitico, Calcio, Sequa, Hibridacin supresiva sustractiva. ABSTRACT Calcium is an essential ion for growth and development of plants, also plays an important role in signal transduction in response to biotic and abiotic stress. Drought is the major abiotic factor limiting crop productivity worldwide. Plant survival and productivity depend largely on its ability to adapt and respond to unfavorable environmental conditions such as excess of sodium, potassium or calcium and drought. We used the suppressive subtractive hybridization (SSH) to analyze the response to
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calcium chloride stress in leaves and drought stress in roots of amaranth (A. hypochondriacus L.) Differentially expressed transcripts in amaranth leaves subjected to calcium stress were related to signal transduction and stress response as well as transcription factors and in some instances transcripts with unknown function. Among the over-expressed genes in amaranth roots were those related to defense, signaling, stress response, water movement and transcription factors such as DOF1 and MIF 1 which have been related to biological processes unique to plants. Repressed genes are related to cellular differentiation and secondary metabolism. By using SSH we have identified interesting and novel abiotic stress responsive genes in amaranth. However functional characterization of these genes will allow us to know the role played by these genes in response to stress. Amaranth is an excellent model for studying the response to abiotic stress. Key words: Abiotic Stress, A. hypochondriacus L., Calcium, Drought, Suppression subtractive hybridization. INTRODUCCIN El exceso de sales de sodio, magnesio o calcio y la sequa son algunos de los factores abiticos que limitan el crecimiento y productividad en plantas. Para hacer frente a las diferentes condiciones de estrs abitico, las plantas han desarrollado sofisticados mecanismos de tolerancia, que incluyen la exclusin/captacin selectiva de iones y su acumulacin en vacuolas, la sntesis de solutos compatibles, el ajuste de la fotosntesis y el metabolismo energtico, la acumulacin de enzimas antioxidantes, la regulacin de hormonas y la modificacin de la estructura celular (Zhang et al., 2012). Las plantas dependen en gran medida de los mecanismos de percepcin del estrs y de la transduccin de seales que les permiten encender los mecanismos de respuesta para lograr su supervivencia y reproduccin en ambientes adversos (Chinnusamy et al., 2004). Sin embargo, los sensores de estrs salino y la mayora de los intermediarios de sealizacin en respuesta a estrs abitico no se han caracterizados hasta ahora (Agarwal y Zhu, 2005). Aspectos como el crecimiento, desarrollo y la respuesta a condiciones de estrs como la
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sequa, estn mediados por una sealizacin qumica (Mahajan et al., 2008), donde la perturbacin en los niveles de Ca2+ citoslico activa la respuesta al estrs (Matsumoto et al., 2002). Estudios moleculares, genticos y bioqumicos han demostrado que la va SOS (Sal-Overly-Sensitive) es una ruta involucrada en la percepcin y transduccin de seales, en donde el calcio es un in crtico que acta como segundo mensajero en respuesta a diferentes tipos de estrs en las plantas (Turkan y Demiral, 2009). El amaranto es un cultivo alternativo que produce semillas con alto valor nutricional y propiedades nutracuticas (Barba de la Rosa et al., 2009). Su valor energtico es mayor al de los cereales y su grano es rico en protena (13 a 18%), calcio, fsforo y potasio. Sus hojas que tambin son comestibles contienen altos niveles de calcio, potasio y vitaminas A y C (Saunders y Becker, 1984). El amaranto es un cultivo capaz de crecer en regiones semiridas muy proclives a la sequa y el estrs salino (Omami et al., 2006), por lo que es un buen modelo para el estudio de la tolerancia al estrs abitico. MATERIALES Y MTODOS CULTIVO DE PLANTAS DE AMARANTO (A. Hypochondriacus L.) Y TRATAMIENTO PARA GENERAR ESTRS POR CaCl2 Se germinaron semillas de amaranto (A. hypochondriacus L.) variedad Nutrisol en sustrato comercial estril (Sunshine Premix 3, Sun Gro Hoticulture Inc. Washington. USA). Plntulas con cuatro hojas verdaderas se trasplantaron a macetas con el mismo sustrato estril y se cultivaron durante 45 das en una cmara de crecimiento iluminada (300mol.m-2s-1) durante ciclos de 12 h/12 h en luz/oscuridad. Las plantas se regaron cada tercer da con 100 mL de solucin de CaCl2 a diferentes concentraciones. Tras 45 das de cultivo se colectaron las hojas, se congelaron en nitrgeno lquido y se almacenaron a -80C. Tres experimentos independientes se prepararon para cada tratamiento. Con base en la observacin, se determin que la concentracin ptima de CaCl2 para el crecimiento del amaranto fue de 20 mM (control), mientras que a concentraciones de 50 mM las hojas presentaron sntomas de estrs (Figura 1).

Captulo IV. Identificacin de genes de respuesta a estrs por calcio y sequa en amaranto

EXTRACCIN DE RNA DE HOJAS DE AMARANTO SOMETIDO A ESTRS POR CaCl2 Y GENERACIN DE GENOTECAS SUSTRACTIVAS Las hojas de amaranto sometidas a estrs por CaCl2 se molieron en nitrgeno lquido y se extrajo el RNA total utilizando el kit RNeasy Plus Mini Kit System (Qiagen, GMBH, Hilden Germany) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. A partir de este RNA se sintetiz cDNA utilizando el kit SMART PCR cDNA Synthesis Kit (Clontech, Palo Alto, CA) este

presencia de X-gal e IPTG. La presencia de los insertos de los transcritos sustrados se confirm mediante ensayo con enzimas de restriccin del DNA plasmdico de las clonas obtenidas. Las clonas con insertos mayores a 250 pb se secuenciaron (MCLab, Molecular Cloning Laboratory, San Francisco, CA, USA). Las secuencias se editaron para remover las secuencias del vector y se analizaron contra diferentes bases de datos (GenBank, TIGR Arabidopsis thaliana y TIGR Rice) utilizando el algoritmo BLAST.

Figura 1. Plantas de A. hypochondriacus L. regadas con diferentes concentraciones de CaCl2 durante 45 das. 1) 10 mM, 2) 20 mM , 3) 30 mM, y 4) 50 mM. Las condiciones seleccionadas como control y problema se sealan con flechas.

cDNA se purific en un primer paso mediante el mtodo de fenol-cloroformo-alcohol isoamlico y enseguida se purific mediante columnas cromatogrficas (SMART, Clontech). La hibridacin sustractiva se llev a cabo utilizando el sistema PCR-Select Subtraction Kit (Clontech) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los cDNAs sustrados (transcritos sobre-expresados y reprimidos en respuesta al tratamiento) se clonaron en el plsmido pGEM-T Easy Vector (Promega, San Luis Obispo, CA) y se usaron para transformar clulas qumicamente competentes de Escherichia coli Top10 (Invitrogen, Carlsbad, CA), mismas que se cultivaron toda la noche a 37C en placas de medio LB con Ampicilina (100 g/mL) en

CULTIVO DE PLANTAS DE AMARANTO (A. Hypochondriacus L.) Y TRATAMIENTO PARA GENERAR ESTRS POR SEQUA Se germinaron semillas de A. hypochondriacus L. variedad Nutrisol en una mezcla de sustrato comercial (Sunshine Premix 3, Sun Gro Horticulture Inc. Bellevue, Washington. USA). Una vez germinadas, las plntulas se trasplantaron el da 11 a bolsas de plstico de 15 x 25 cm que contenan el mismo sustrato en donde se germinaron y fueron cultivadas 22 das ms en invernadero, se determin el contenido de agua del suelo (Hydrosense, Campbell Scientific, INC.) y se mantuvo entre un 30-35%. A partir de un lote de 60 plantas se formaron 3 grupos de 20 plantas. Para provocar el estrs por sequa se dej de suministrar agua a dos de los tres grupos
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a partir del da 22 en invernadero. Al llegar al da 29 un grupo de plantas sometidas a sequa se rehidrat. Se realizaron tres experimentos independientes para cada tratamiento. Se recolectaron muestras de raz, se congelaron en nitrgeno lquido y se almacenaron a -80C. Se determin el contenido relativo de agua (CRA) en hojas de los diferentes grupos de plantas de acuerdo con el mtodo reportado por Barrs y Weatherly (1962). Para lo cual se determinaron los pesos: fresco (PF), turgente (PT) y seco (PS) en hojas de 4 plantas de cada grupo seleccionadas al azar y finalmente se calcul el contenido relativo de agua (CRA) utilizando la siguiente frmula: CRA= [(PF-PS)/ (PT-PS)] x 100. EXTRACCIN DE RNA Y GENERACIN DE GENOTECAS SUSTRACTIVAS EN RACES DE AMARANTO SOMETIDO A SEQUA Las races de amarantos sometidos a estrs por sequa se molieron en nitrgeno lquido y se extrajo el RNA total utilizando reactivo de TRIzol (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. A partir de este RNA se sintetiz cDNA utilizando el kit SMART PCR cDNA Synthesis Kit (Clontech, Palo Alto, CA). La hibridacin sustractiva se llev a cabo utilizando el sistema PCR-Select Subtraction Kit (Clontech) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los cDNAs sustrados (transcritos sobre-expresados y reprimidos en respuesta al tratamiento) se clonaron en el plsmido pGEM-T Easy Vector (Promega, San Luis Obispo, CA) y se transformaron clulas qumicamente competentes de Escherichia coli Top10 (Invitrogen, Carlsbad, Ca), mismas que se cultivaron toda la noche a 37C en placas de medio LB con ampicilina (100 g/mL) en presencia de X-gal e IPTG. La presencia de los insertos de los transcritos sustrados se confirm mediante ensayo con enzimas de restriccin del DNA plasmdico de las clonas obtenidas. Las clonas con inserto se secuenciaron (MCLab, Molecular Cloning Laboratory, San Francisco, CA, USA). Las secuencias se editaron para remover las secuencias del vector y se analizaron en contra de la base de datos no redundante del NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gob/blast/ Blast.cgi). Utilizando el algoritmo BLAST.
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RESULTADOS Y DISCUSIN RESPUESTA DE LAS PLANTAS DE AMARANTO AL ESTRS POR CaCl2 La exposicin de las plantas de amaranto a altas concentraciones de CaCl2 afect el crecimiento de las plantas problema y adems se pudieron observar signos de clorosis en las hojas a causa del exceso de esta sal. El exceso de sales como el sodio y el calcio afecta el crecimiento de la planta en dos fases. En la primera fase denominada fase osmtica el crecimiento de la planta se inhibe por efecto de la alta concentracin de iones en el suelo y que alteran la homeostasis del agua, afectado la turgencia, inhibiendo la divisin celular, el crecimiento de las hojas y en menor medida el de la raz (Munns, 1993; Munns et al., 2000; Munns, 2002). En la segunda fase denominada fase inica la capacidad de acumular iones Ca2+, Na+, Cl- en vacuolas, se ve sobrepasada. Las sales se acumulan en el citoplasma y se generan especies reactivas de oxgeno, que inhiben la actividad enzimtica, causan dao a los lpidos de la membrana y cidos nuclicos (Munns, 2005). PERFIL DE LA RESPUESTA TRANSCRIPTMICA EN AMARANTO POR ESTRS INDUCIDO POR ALTAS CONCENCTRACIONES DE CaCl2 El 48% de los genes sobre-expresados en respuesta a estrs por CaCl2 estn relacionados con respuesta a estrs, transduccin de seales, factores de transcripcin y regulacin de la expresin gnica. El 30% tiene una funcin desconocida y el 22% no presenta homologa con ningn otro gen reportado en las bases de datos empleadas (Figura 2A). Estos nuevos genes sin caracterizar podran tener una funcin clave en la respuesta y tolerancia a estrs en amaranto. El 57% de los genes reprimidos se agruparon en diferentes categoras de acuerdo con su funcin reportada, mientras que el 36% tienen una funcin desconocida y el 7% no presentan homologa con ningn otro gen reportado en las bases de datos (Figura 2B). En la Tabla 1, se muestran algunos de estos genes diferencialmente expresados. Entre las protenas ms interesantes que se inducen en respuesta a estrs por CaCl2 en hojas de amaranto se identificaron dos

Captulo IV. Identificacin de genes de respuesta a estrs por calcio y sequa en amaranto

factores transcripcionales (CID 9 y protena de dedos de zinc). Se obtuvo la secuencia completa del transcrito que codifica para la protena de dedos de zinc y su anlisis muestra que contiene motivos estructurales novedosos. Estos motivos podran interactuar con elementos en cis y activar la expresin de genes de respuesta a estrs en amaranto (Aguilar-Hernndez et al., 2011). RESPUESTA DE LAS PLANTAS DE AMARANTO AL ESTRS POR SEQUA Al llegar al da 29 el contenido de agua del suelo de los 2 grupos sometidos a sequa fue del 3% y A)
Factores de Transcripcin 7% Traduccin de seales 7%

en condiciones adversas, o bien son capaces de recuperarse completamente de los efectos de la sequa al ser rehidratadas (Cabuslay et al., 1999). Las plantas de amaranto sometidas a sequa se mantuvieron turgentes an con niveles de contenido de agua del suelo del 5-7%. En el ltimo da del tratamiento el contenido de agua del suelo de las plantas sometidas a sequa fue del 3% y las plantas mostraban prdida de la turgencia y enrollamiento de las hojas. Un grupo de plantas sometidas a sequa se rehidrat y se observ que al transcurrir dos y media horas, las hojas se desenrollaban y las plantas recuperaban

Regulacin de genes 4%

Sin homologa 22%

Estrs 30%

Funcin desconocida 30%

Defensa contra patogenos 7% Sin homologa 7%

B)

Metabolismo 7%

Funsin desconocida 36%

Plegamiento de protenas 7% Fotosintesis 29% Unin de metales pesados 7%

Figura 2. Clasificacin de los transcritos identificados mediante hibridacin supresiva sustractiva bajo estrs por CaCl2 en hojas de amaranto. A) genes sobre-expresados, B) genes reprimidos. La funcin de los transcritos se asign con base en la homologa de su secuencia o la funcin de los dominios encontrados de acuerdo con informacin disponible en la literatura y en Gene Ontology (http://www.geneontology.com).

las plantas mostraban prdida de la turgencia y enrollamiento de las hojas (Figura 3). Se considera que las plantas tolerantes a sequa son aquellas capaces de mantener constante el contenido de agua de sus tejidos o de sobrevivir a la reduccin drstica de esta

la turgencia, mientras que a las cinco horas las plantas se observaban recuperadas por completo (Figura 4). El contenido relativo de agua (CRA) se ha considerado como un indicador de la tolerancia a la desecacin en cultivos como
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Tabla 1. Identificacin de genes diferencialmente expresados en respuesta a estrs por CaCl2 en hojas de A. hypochondriacus L. (algunos ejemplos)
Categora Respuesta a estrs Nmero de accesoa AF268027.1 AB221009.1 CN782050.1 NP_565864.1 CAA46150.1 Os03g44050 NM_112305.1 NP_567926 Os02g21009 Os02g22100 NP_179378.1 At3g54890.2 X05511.1 P82010 Anotacin Fuente E-value Genes sobre-expresados Metalotioneina-2A (MT2A) Amaranthus cruentus 0.0 S-adenosilmetionina sintetasa (SAMS) Beta vulgaris 0.0 Protena universal de estrs(UspA) Chenopodium quinoa 1e-112 Protena de tolerancia a litio y sodio 1 (SLT-1) Arabidopsis thaliana 3e-58 Calmodulina (CaM) Oryza sativa 2e-76 Cinasa asociada a pared celular (WAK) Oryza sativa 8.7e-6 CID9 Arabidopsis thaliana 8e-65 Protena de dedos de zinc Arabidopsis thaliana 6e-15 Intercambiador vacuolar de cationes/protones Oryza sativa 7.4e-4 (CaX) Genes reprimidos Protena romboide Oryza sativa 1.1e-3 Protena de choque trmico (DNAJ) Arabidopsis thalinana 1e-16 Protena LHC tipo-1 Arabidopsis thaliana 9.4e-9 Protena del Oxygen Evolving Complex (OEC) Spinacia oleracea 0.0 Precursor de la Subunidad XI del fotosistema I Arabidopsis thaliana 3e-32 Protena antifngica rica en cistena Beta vulgaris 8e-7

Sealizacin Transcripcin Exclusin de iones Metabolismo Chaperonas Fotosntesis Defensa

aLos nmeros de acceso corresponden a las bases de datos de GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/), TIGR Arabidopsis thaliana (http://jcvi.org/arabidopsis/qpcr/genelist.php) y TIGR Rice (http://blast.jcvi.org/euk-blast/ index.cgi?project=osa1/)

Figura 3. Fotografas en donde se muestra la apariencia de la parte area y races de las plantas control (a, b, c) y aquellas sometidas a sequa (d, e, f ) al da 29 en invernadero.

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la soya y el trigo. Se estima que el CRA es un determinante principal de la actividad metablica y de la sobrevivencia foliar y se considera este parmetro como una perspectiva ms confiable que las mediciones termodinmicas por ejemplo el potencial hdrico, para analizar las respuestas fisiolgicas a la desecacin (Villalobos et al., 1990). Al determinar el CRA en hojas de amaranto (Figura 5); se observ que las plantas sometidas a sequa presentaron un CRA de 45.39 ( 7.12), esto es indicativo de que el grado de estrs al que se sometieron fue severo. Mientras que las plantas control presentaron un CRA de 95.14% ( 0.43) indicativo de su buen estado de hidratacin. En el caso de las plantas rehidratadas tras someterse a sequa, su

CRA se increment a niveles del 90.20% ( 2.0) adquiriendo una apariencia indistinguible de las plantas control. Al comparar la respuesta a sequa en una variedad de frijol susceptible y una tolerante, Montalvo-Hernndez et al. (2008) observaron que al someter ambas variedades a sequa severa (CRA menor del 50%), la variedad susceptible alcanzaba su punto de marchitez permanente ya que al ser rehidratadas estas plantas no eran capaces de recuperarse, mientras que la variedad tolerante s lo hizo. La capacidad de rpida recuperacin observada en las plantas de amaranto es importante ya que es distintiva de plantas tolerantes a sequa (Huerta Ocampo et al., 2011).

Figura 4. Recuperacin de plantas de amaranto al ser rehidratadas tras someterse a estrs por sequa.

120 Contenido Relativo de Agua % 100 80 60 40 20 0

ControlS

equaR

ehidratacin

Figura 5. Determinacin del contenido relativo de agua en hojas de amaranto. H. S. Aguilar-Hernndez et al.

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ANLISIS DE LA EXPRESIN DIFERENCIAL DE GENES EN RACES DE AMARANTOS SOMETIDOS A SEQUA Los transcritos sobre-expresados en respuesta a sequa en races de amaranto (Tabla 2) estn relacionados principalmente con la sealizacin (cinasas y fosfatasas), defensa (GST), estrs (SLT-1) y el transporte de agua (acuaporinas, nodulinas), entre otros. Entre los transcritos sobre expresados tambin se identificaron los factores transcripcionales DOF1 (DNA binding with one finger 1) y MIF1 (mini zinc finger 1). Los transcritos reprimidos estn relacionados con el metabolismo secundario (SAMS e IFR) y con la diferenciacin celular (WOX5A). CONCLUSIONES El generar el estrs con CaCl2 nos permiti obtener datos para entender el mecanismo de percepcin y traduccin del estrs en el cual se ve involucrado el Ca2+. Se identific una interesante protena con dedos de zinc adems de cinasas y fosfatasas importantes para la transduccin de seales en respuesta a estrs por CaCl2 en hojas de amaranto. Nuestros resultados abren la puerta a futuros estudios de caracterizacin del papel que tienen estas protenas en la respuesta a estrs abitico. En respuesta a estrs por sequa en races de amaranto, la sobre-expresin de transcritos de varias cinasas y fosfatasas indica que los cambios

en la fosforilacin de protenas juegan un papel importante en la respuesta a estrs. La sobreexpresin de factores transcripcionales como DOF1 y MIF1 acoplada con la represin de genes de desarrollo como WOX5A y enzimas del metabolismo secundario involucradas en la sntesis de flavonoides y lignina tales como SAMS e IFR sugiere la detencin del crecimiento, que junto con la disminucin en la lignificacin son respuestas adaptativas al estrs severo en races y esto permite una rpida recuperacin una vez que las condiciones estresantes se revierten. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz bajo el apoyo del 6th Framework Programme, AMARANTH:FUTURE-FOOD, Contract No. 032263. Agradecemos al IPICyT por la beca otorgada durante la realizacin de este trabajo a H.S. Aguilar-Hernndez. Tambin agradecemos a la Fundacin Produce San Luis Potos por el apoyo otorgado. LITERATURA CITADA Agarwal M, J K Zhu (2005) Integration of abiotic stress signaling pathways. In: Plant Abiotic Stress. M A Jenks, P M Hasegawa (eds). Blackwell Publishing Ltd. pp:214247.

Tabla 2. Identificacin de genes diferencialmente expresados en respuesta a sequa en races de A. hypochondriacus (algunos ejemplos)

Categora Cinasas/Fosfatasas

Nmero de accesoa DQ459385.1 NM_113139.2 T51846 NM_179350 NM_111189 NP_172219.1 DQ_490965.1 NM_106124 AF323101 AB219525 AM490238 NM_001112229.1 EU399630

Fuente Nicotiana tabacum Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana Zea mays Arabidopsis thaliana Pisum sativum Hordeum vulgare Zea mays Zea mays Triticum aestivum

E-value 1e-8 3e-9 2e-19 12e-6 1e-17 1e-52 2e-104 3e-9 1e-8 1e-8 2e-4 1e-8 1e-7

Defensa Factores de transcripcin Transporte de agua Factores de transcripcin Metabolismo secundario

aLos nmeros de acceso corresponden a la base de datos del NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gob/blast/Blast.cgi)

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Captulo IV. Identificacin de genes de respuesta a estrs por calcio y sequa en amaranto

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Captulo V

Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus L.: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs
FUNCTIONAL CHARACTERIZATION OF NOVEL Amaranthus hypochondriacus L. GENES: EXPLORING THEIR APPLICATION IN THE GENERATION OF STRESS-RESISTANT CROPS

Paola A. Palmeros-Surez1, Julio A.Massange-Snchez1 y John P. Dlano-Frier1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato) Km 9.6 del Libramiento Norte Carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico. Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx Telfono: (52) 462 39636 o 462 39600 FAX: (52) 462 45996 o 462 39611

RESUMEN El incremento de la poblacin humana, la prdida de grandes extensiones de tierra cultivable por causa de la urbanizacin, la desertificacin, industrializacin y cambio climtico, han ocasionado cambios severos en la agricultura mundial. Esto ha ocasionado una creciente falta de alimentos para poder satisfacer las necesidades de millones de personas que habitan el planeta. Debido a ello, se ha intensificado la generacin de cultivos que puedan resistir condiciones ambientales adversas sin reducir el rendimiento. Como punto de partida, se ha usado la flexibilidad fisiolgica de las plantas para adaptarse a cambios ambientales adversos, con el fin de identificar los genes responsables de la resistencia a diferentes tipos de estrs (a)bitico. En este aspecto, el amaranto presenta un gran potencial para descubrir genes nuevos y funcionales de respuesta a estrs debido a su alta tolerancia a estreses biticos y abiticos. Los nuevos avances en las ciencias micas, han tenido una gran influencia en la mejor comprensin de los mecanismos transcripcionales, postranscripcionales y traduccionales que regulan la respuesta de la planta al estrs. Tomando como herramienta

el transcriptoma de novo de Amaranthus hypochondriacus, dirigido hacia la identificacin de genes inducidos en condiciones de estrs, ha sido posible detectar un grupo de genes, que incluye genes de respuesta temprana, factores de transcripcin y numerosos genes de funcin desconocida, como posibles candidatos para ser expresados en plantas modelo, como arabidopsis y tabaco. Esto para realizar una caracterizacin funcional que permita evaluar el potencial de estos genes para resistir mltiples condiciones ambientales adversas. En este captulo se describir la estrategia experimental que se utilizar para explorar la posibilidad de utilizar estos genes de amaranto para aumentar significativamente la resistencia a mltiples tipos de estrs no slo en el amaranto, sino en cultivos mucho menos tolerantes a stos como el maz. Palabras clave: Amaranto, caracterizacin funcional, estrs bitico, estrs abitico, transcriptoma. ABSTRACT The increase of human population, coupled with the loss of large tracts of agricultural land due to urbanization, industrialization and desertication associated with climatic changes,
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have affected world agriculture. This has led to an increased food deficit to satisfy the requirements of millions of people living on this planet. A possible solution is the creation of crops able to resist adverse environmental conditions without significant losses in yield. The physiological flexibility of the plants that enables their adaptation to adverse environmental changes, together with the identification of stressresponsive genes established the starting point. Next, the new advances of the omics sciences were instrumental for a better understanding of the transcriptional, posttranscriptional and traslational mechanisms that regulate the response of the plant to adverse stress conditions. In this respect, the high tolerance to biotic and abiotic stress that characterizes amaranth suggests an enormous potential as a source of new and functional genes capable of responding effectively to stress. This potential is starting to be explored using the wealth of information contained in the recently reported de novo transcriptome of Amaranthus hypochondriacus, which was aimed at the identification of stress-related genes. Thanks to this approach, our group has been able detect new groups of stress-induced genes, such as early responsive genes, little-known transcription factors and many genes with an unknown function. This was followed by a selection procedure to choose those that will be functionally characterized in model plant like Arabidoposis and tobacco. The main purpose is to assess if the selected genes can confer resistance to multiple stress conditions. In this chapter, we describe the experimental strategy we are using to fulfill these objectives in order to improve the resistance to multiple stresses, not only in amaranth, but also in stressintolerant crops such as maize. Key words: Amaranth, biotic stress, abiotic stress, functional characterization transcriptome. INTRODUCCIN El gnero Amaranthus sp. est constituido por plantas herbceas dicotiledneas anuales de tipo fotosinttico C4, las cuales se distribuyen en todo el mundo, aunque predominan en lugares con climas clidos y regiones tropicales. Muchas especies de amaranto se consideran malezas
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agresivas, otras son ornamentales y algunas otras se consumen como verdura. Tambin hay especies utilizadas para la produccin de semillas de un elevado valor nutricional; entre stas estn A. cruentus, A. caudatus y A. hypochondriacus (Dlano-Frier et al., 2010). En la actualidad se ha incrementado el inters del cultivo de amaranto de grano, debido al alto contenido proteico en la semilla. Adems, presenta caractersticas agronmicas deseables, como la alta tolerancia a sequa y salinidad, que le permiten crecer en suelos pobres no aptos para el cultivo de cereales, por ejemplo (Omami et al., 2006). Debido a ello, el amaranto representa una de las principales alternativas para la produccin de alimentos de buena calidad en zonas con suelos salinos, prolongados periodos de sequa y/o lluvias irregulares (Espitia-Rangel et al., 2010). Son varios los mecanismos capaces de contribuir a una mayor tolerancia a condiciones de sequa que se han identificado en amaranto. Entre stos estn el cierre estomtico, la presencia de barreras cuticulares, acumulacin de ceras en las hojas y reduccin del rea foliar; adems, el metabolismo de asimilacin de CO2 tipo C4 que presenta, le permite tener una alta tasa fotosinttica en temperaturas elevadas, sin que se pierda el agua por transpiracin ni se reduzca la eficiencia de asimilacin por fotorrespiracin, mientras mantiene un ajuste osmtico adecuado (Espitia-Rangel et al., 2010). Presenta una rpida recuperacin despus de periodos de sequa prolongados, debido a la longitud y extensin de su sistema radicular, lo que le facilita la pronta recuperacin (HuertaOcampo et al., 2010). De aqu, el inters por la bsqueda de genes de amaranto que se encienden en condiciones de sequa y salinidad, con el fin de obtener plantas mejoradas que puedan resistir periodos prolongados de estrs. Debido a ello, el estudio de los componentes a nivel molecular que permiten al amaranto sobrevivir a condiciones ambientales adversas, ha ido en aumento en varios grupos de investigacin. Por ejemplo, los trabajos de Huerta-Ocampo (2009, 2010), quienes mediante anlisis protemicos y genmicos encontraron que parte de la resistencia a estrs hdrico en amaranto puede explicarse por una respuesta coordinada en raz que incluye la acumulacin de solutos compatibles y la activacin de genes asociados con estrs, como los

Captulo V. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs

relacionados con la reduccin de ROS (especies reactivas de oxgeno, por sus siglas en ingls), la estabilizacin de protenas y la regulacin transcriptmica del crecimiento vegetal. Esta informacin se reforz con reciente publicacin del transcriptoma de novo de A. hypochondriacus en cuatro diferentes condiciones de estrs reportado por Dlano-Frier et al. (2010), a partir del cual se identificaron numerosos genes que se inducen en las condiciones de estrs analizadas. El estrs se define como un cambio repentino en el ambiente que excede el estado ptimo del organismo y ocasiona una alteracin en el balance homeosttico, el cual debe ser compensado. Se sabe poco acerca de los receptores que perciben el estrs, aunque se han estudiado muchas vas de sealizacin, identificndose diversos genes ortlogos en diferentes especies que responden de la misma manera. Esta similitud sugiere que las vas de respuesta a estrs en plantas generalmente estn conservadas (Kilian et al., 2012). El estrs ambiental es uno de los principales factores que limitan la productividad en las plantas, causando grandes prdidas en la produccin agrcola a nivel mundial. Bajo condiciones de campo, las plantas se enfrentan con diversas combinaciones de estrs en diferentes estados de desarrollo y con una variedad de duracin. Los tipos de estrs abitico como sequa, calor, salinidad, fro, falta de nutrientes, alta intensidad de luz, ozono y estrs anaerobio, ocasionan que la respuesta fisiolgica y bioqumica sea muy variable, existiendo una alteracin en el equilibrio inico y homeostasis celular, observndose la induccin de cientos de genes y sus productos que responden a estos tipos de estrs a nivel transcriptmico y traduccional (Mittler y Blumwald, 2010). stos a su vez estn regulados por mltiples vas de sealizacin, y existe un gran nmero de genes que se expresan no slo en un tipo de estrs, sino en varios (Shing et al., 2002). Como la induccin de genes de respuesta a estrs ocurre principalmente a nivel transcriptmico, es importante la seleccin adecuada de los genes que se desean expresar en plantas modelo, debido a que la regulacin de la expresin temporal y/o espacial de genes que responden a estrs es una parte importante para identificar la respuesta por parte de la planta a un estmulo (Shing et al., 2002).

Sreenivasulu et al., (2007), clasifican los genes que estn asociados con la tolerancia a estrs abitico en cuatro grupos, los cuales estn relacionados con la biosntesis de osmolitos, antioxidantes, protectores de la pared celular y homeostasis inica. El Cuadro 1 muestra algunos de estos genes que se inducen en condiciones de estrs y codifican para protenas que protegen tanto directa como indirectamente a la planta contra cambios ambientales. La mayora de ellos han sido utilizados para llevar a cabo su sobreexpresin en plantas modelo, introduciendo principalmente enzimas que permiten la sntesis de solutos compatibles osmoprotectores, eliminadores de ROS, as como protenas que se inducen por estrs (Le Martret et al., 2011). A su vez, Bhatnagar-Mathur et al. (2008) clasifican a los genes que se inducen bajo condiciones de estrs en tres grupos: 1) genes que codifican para protenas con funcin enzimtica o funciones estructurales conocidas, 2) protenas de funcin desconocida y 3) protenas reguladoras. Las investigaciones ms recientes, se han enfocado en la utilizacin de los genes pertenecientes al tipo dos y tres, ya que la bsqueda de genes de funcin desconocida, ha permitido identificar nuevas vas de sealizacin que se inducen en condiciones ambientales adversas y, por otro lado, el uso de protenas reguladoras, particularmente los factores de transcripcin es tambin de gran inters debido a su papel de induccin multignica. Usando este criterio como base de partida, diversas investigaciones lograron descubrir que algunos tipos de factores de transcripcin son reguladores clave de la respuesta de las plantas a diferentes tipos de estrs ambiental. Un par de caractersticas que repetidamente se manifest de estos estudios fue, primero, la gran complejidad de las redes de sealizacin, y segundo, que muchas de ellas compartan vas de comunicacin en respuestas a diferentes tipos de estrs (Singh et al., 2002). Estos hallazgos representaron un importante logro en pos del objetivo de obtener cultivos ms tolerantes a enfermedades y condiciones ambientales adversas, las cuales son cada vez ms frecuentes y severas por causa del cambio climtico que sufre el planeta (Mittler, 2010). En los ltimos aos, se han caracterizado diversos genes que estn involucrados en la respuesta a condiciones de estrs ambiental. Adems, hay numerosos ejemplos de proyectos
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Cuadro 1. Principales blancos para la ingeniera de cultivos tolerantes. (Tomado de Cushman y Bohnert, 2000).
ELEMENTOS DE RESISTENCIA Osmoprotectores

Eliminadores de especies reactivas de oxgeno

Protenas de estrs Protenas de choque trmico

Transportadores ion/protn Fluidez de la membrana

Estatus del agua

Componentes de sealizacin Control de la transcripcin Reguladores de crecimiento

exitosos que reportan la obtencin de cultivos tolerantes a diferentes tipos de estrs a travs de ingeniera gentica. Sin embargo, slo un nmero limitado de ellos ha trascendido los lmites del laboratorio para realizar pruebas a nivel de campo (Nelson et al., 2007). Esto se refleja en el relativamente bajo porcentaje de cultivos modificados que han sido lanzados al mercado (Reguera et al., 2012). Aspectos fisiolgicos, como sobrevivencia y recuperacin, son las principales caractersticas que representan la tolerancia a estrs en plantas. Desde un punto de vista agrcola, el rendimiento del cultivo es el aspecto principal de xito en plantas tolerantes a estrs.
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Por ello, es importante, tomar en cuenta tanto caractersticas fisiolgicas como agronmicas para determinar un cultivo o variedad como resistente o tolerante y de esta manera asegurar su integracin al mercado (Reguera et al., 2012). Como se mencion anteriormente, muchas veces resulta poco til la modificacin de un slo gen con el fin de obtener plantas tolerantes a estrs, debido a la existencia de mltiples vas regulatorias que podran impedir un cambio fisiolgico significativo, o visible, en la planta. Sin embargo, el uso de factores de transcripcin, los cuales son genes maestros que regulan diversas vas metablicas, permite restaurar la homeostasis en las plantas

Captulo V. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs

durante episodios de estrs, incrementando la probabilidad de xito. Estas caractersticas los hacen ser buenos candidatos para la obtencin de plantas genticamente modificadas (Reguera et al., 2012). Recientemente se ha dado un progreso considerable en la caracterizacin de los factores de transcripcin que estn relacionados en la expresin de genes que se inducen en condiciones de estrs. Con frecuencia, factores de transcripcin que estn ntimamente relacionados, tienen el potencial de activar o reprimir genes a travs de secuencias en cis que corresponden a diferentes tipos de estrs especficos. Desafortunadamente, en muchas ocasiones estos factores pueden tener funciones superpuestas, lo cual impide o dificulta su anlisis gentico, o la determinacin de su rol respectivo (Shing et al., 2002). Como ya se mencion, los patrones de expresin de estos factores de transcripcin son muy complejos, y sugiere que la tolerancia a estrs y resistencia est controlada a nivel transcriptmico por una va regulatoria gnica extremadamente complicada. Chen et al. (2002), identificaron grupos de factores de transcripcin que se clasifican en: a) factores de transcripcin regulados especficamente por estrs abitico y b) factores de transcripcin regulados por estrs bitico y abitico. Dentro de los factores de transcripcin que se activan en condiciones de estrs se encuentran los siguientes: DREB, EREBP, ERF/AP2, HSF, bZIP, MYB, MYC, NAC, WRKY, Cys2His2, MADS-box, dedos de zinc y NFY. Este ltimo, es un factor de transcripcin nuclear constituido por tres subunidades, NFYA, NF-YB y NF-YC, y se ha observado que confiere tolerancia a estrs abitico cuando se sobreexpresa en plantas de arabidopsis y maz (Nelson et al., 2007), sin que stas sufran prdidas en el rendimiento. De manera interesante, se ha observado que el gen que codifica para la subunidad NF-YC se induce en plantas de amaranto en condiciones de sequa, y se mantiene inducido despus de ocho das sin riego (Palmeros-Surez PA., datos no publicados). Por otra parte, Huerta-Ocampo et al. (2010) describieron la expresin de los factores DOF1 (unin a DNA con un solo dedo) y MIF1

(mini dedo de zinc 1) en races de amaranto bajo condiciones de sequa. El primero, es un factor de transcripcin relacionado con factores biolgicos nicos de plantas, como la expresin de genes relacionados con la luz, genes de respuesta a fitohormonas y/o estrs y expresin de genes fotosintticos, mientras que el segundo est involucrado en la interaccin de seales provenientes de diversas hormonas. Las plantas son miembros de comunidades complejas, e interactan con organismos benficos, como micorrizas, microorganismos fijadores de nitrgeno, insectos y mamferos polinizadores, bacterias promotoras del crecimiento vegetal (BPCVs), entre otros. La contra parte la representan los antagonistas o atacantes, como herbvoros, nemtodos y patgenos microbianos. Un ejemplo de interaccin benfica en amaranto, es el uso de la bacteria promotora de crecimiento vegetal Burkhordelia sp., la cual incrementa el crecimiento y peso seco de plantas de A. cruentus en condiciones de invernadero (vase el captulo IX). Por otra parte, la interaccin con organismos patgenos tambin se ha presentado en campo, siendo stos de origen bacteriano, como Pseudomonas spp. (vase captulo X) y Xanthomonas campestris pv. phaseoli (Espitia et al., 2010), o fngico, como Alternaria tenuis, Fusarium spp., Phoma longissima, Sclerotinia sclerotiorum y Thecaphora iresine, entre otros. Adems, existe una gran variedad de virus, fitoplasmas, nemtodos e insectos plaga, capaces de afectar significativamente el cultivo de amaranto (Rojas-Martnez et al., 2009; AragnGarca et al., 2011). Con referencia a lo anterior, una pregunta importante relacionada con los mecanismos de defensa de las plantas es la siguiente: cmo pueden las plantas integrar las seales inducidas por patgenos, microorganismos benficos e insectos, para generar una respuesta adaptativa apropiada? (Pieterse y Dicke, 2007). Las investigaciones realizadas coadyuvan a dar respuesta a esta pregunta al demostrar que las plantas desarrollan estrategias sofisticadas para percibir o reconocer un ataque por patgenos y traducir esta percepcin en una respuesta adaptativa apropiada. Este sistema inmune de las plantas es
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sorprendentemente complejo y altamente flexible en su capacidad de reconocimiento y respuesta a diferentes invasores de manera efectiva mediante diversos mecanismos y vas de sealizacin (Pozo et al., 2005; De Vos et al., 2006; Jones y Dangl, 2006; McHale et al., 2006; Srinivasa et al., 2007; Hann et al., 2010; Dodds y Rathjen, 2010). Los mecanismos incluyen barreras fsicas y qumicas preexistentes, adems de respuestas de defensa inducibles que se activan debido al ataque. Por tanto, la identificacin de los mecanismos de defensa de las plantas, y el tipo de genes involucrados en esta comunicacin ha permitido descubrir la manera en la que se integran seales inducidas por microorganismos patgenos o herbvoros para activar especficamente una respuesta contra el invasor adecuado (De Vos et al., 2006). La respuesta de defensa es vital, pero costosa para la planta; es por ello que, en lugar de mantenerla continuamente encendida, se activan diferentes mecanismos inducibles en la planta, dependiendo del ambiente en el que sta se encuentre. Esta defensa inducible est sujeta a una estricta regulacin debido a que su activacin rpida es la clave del xito de la misma (Felton y Korth, 2000; Pozo et al., 2005). Las hormonas vegetales como cido saliclico (AS), cido jasmnico (AJ) y etileno (ET) son los principales reguladores del sistema inmune de las plantas, las cuales responden en diversas combinaciones al ataque de un patgeno. Adems, se ha observado que el cido abscsico (ABA), brasinoesteroides y auxinas, tambin son hormonas involucradas en la defensa de plantas contra patgenos, y se ha propuesto que las vas de sealizacin que se inducen por el ataque de patgenos estn influenciadas por su particular estilo de vida; por ejemplo biotrfico vs, necrotrfico (Pozo et al., 2005; Bari y Jones, 2009). En este captulo se har una descripcin de las estrategias experimentales que se estn empleando actualmente en nuestro laboratorio para obtener plantas transgnicas de arabidopsis (Arabidopsis thaliana) y/o tabaco (Nicotiana tabacum) capaces de resistir varios tipos de estrs, tanto bitico como abitico. Para ello se realiz una seleccin inicial de genes de amaranto con una ms de las siguientes caractersticas: i) altos niveles de expresin,
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obtenidos de un anlisis in silico basado en los datos del transcriptoma de novo de amaranto; ii) ser un factor de transcripcin poco estudiado; iii) ser una gen con caractersticas atractivas, presente tambin en otras especies, pero sin haber sido caracterizado funcionalmente, y/o iv) ser un gen novedoso, de funcin desconocida. El captulo cerrar con los avances obtenidos hasta el momento en este proyecto, que es la base de al menos dos proyectos de Doctorado en Ciencias, y los retos que enfrenta para lograr su cometido de generar plantas con resistencia a mltiples condiciones de estrs. MATERIALES Y MTODOS Los esfuerzos realizados para aumentar la tolerancia en los cultivos a estrs como sequa, alta salinidad y cambios de temperatura a travs del mejoramiento de la ingeniera gentica, han tenido un xito limitado. Sin embargo, gracias a las nuevas tcnicas moleculares, el descubrimiento de genes desconocidos, la determinacin de su expresin bajo condiciones de estrs, y una visin ms clara de su papel en la adaptacin a condiciones ambientales adversas, ha establecido las bases de una estrategia de ingeniera gentica actualmente mucho ms efectiva. El trabajo desarrollado en nuestro grupo de investigacin, ha permitido la identificacin de diversos genes que se inducen en una o varias condiciones de estrs, obtenidos a partir del transcriptoma de amaranto publicado por Dlano-Frier et al. (2010). Sobre la base de estos resultados, se seleccionaron inicialmente 50 genes, involucrados en diversas vas de sealizacin, funciones fisiolgicas y adaptacin a cuatro tipos de estrs utilizados: para las condiciones de sequa, la planta se dej de regar por cuatro das, alcanzando una prdida de humedad del 55%, equivalente a -2.6 MPa (considerado como un estrs hdrico severo para la mayora de las plantas; Figura 1). El estrs por salinidad se realiz adicionando 100 mL de una solucin de NaCl 400 mM por cuatro das, alcanzando una conductividad en suelo de 12 dS/m (considerada como alta salinidad, no apta para cereales, ni betabel; Figura 2). Por otra parte, las condiciones de estrs bitico fueron la herbivora, por un mximo de

Captulo V. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs

Figura 1. Efectos fisiolgicos en las plantas causados por una disminucin del potencial hdrico del suelo. (Modificado de Root intake en: http://plantphys.info/plant_physiology). >16: Salinidad severa. Slo sobreviven plantas halfitas como: Puccinella spp. Casuarina glauca, Eucalyptus ssp., Atriplex ssp., Melaleuca ssp., Spartina ssp., Saueda ssp., Thellungiella halophila, manglares (e.g. Bruguiera ssp.), etc. Cristales de sal observados sobre la superficie del suelo seco. 8-16: Salinidad alta. Afecta plantas tolerantes. Ausencia de leguminosas anuales. Afecta a cebada y centeno. Predominan especies marcadoras de suelos salinos o perturbados (e.g. Hordeum marinum) y otras (e.g. Eucalyptus camaldulensis). reas pequeas desprovistas de cobertura vegetal. Muerte de algunas especies arbreas tolerantes a sal (e.g. maple, lamo, roble: 3-4*). 4-8: Salinidad moderada. Afecta la mayora de las plantas incluyendo leguminosas anuales. Afecta las leguminosas de grano, triticale (6.1*), trigo (4.7*), avena (5.2*), sorgo (4*), betabel (6.7*) y pastos perenes (6 a 8*). Crecimiento irregular. 2-4: Salinidad baja. Afecta a plantas sensibles. Menor vigor en leguminosas anuales. Afecta a algunas leguminosas de grano. (e.g. frijol, 1.0*) y la mayora de las hortalizas. No afecta a cereales, excepto maz (2.7*). 0-2: No salino. No afecta a la mayora de las plantas. Crecimiento uniforme.
Umbral de tolerancia en dS/m Adaptada de www.pir.sa.gov.au/factsheet

Figura 2. Indicadores de varios rangos de salinidad en suelos. (Adaptada de www.pir.sa.gov.au/pirsa/more/factsheets/fact_sheets/salinity) P. A. Palmeros-Surez et al.

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24 h, por larvas de Spoladea recurvalis del tercer estadio larval; y por otro lado la infeccin con patgenos bacterianos mediante la aspersin de un cultivo de P. syringae pv. tabacci a una densidad ptica de 0.2 a 600 nm. Con el fin de validar la expresin de los genes seleccionados, se realiz la tcnica denominada qRT-PCR (reaccin en cadena de la polimerasa en tiempo real o cuantitativa), utilizando el equipo C1000Touch Thermal Cycler de Bio-Rad. Una vez obtenidos los resultados (ver ms adelante), se seleccionaron aquellos genes inducidos en ms de un tipo de estrs con un umbral de expresin mnimo 1.5 veces ms alto con respecto a los controles no tratados. Adems, deberan ser genes poco estudiados y/o no caracterizados, con el fin de innovar o descubrir genes desconocidos con alto potencial agronmico. El estudio incluy tambin al menos un factor de transcripcin y algunos genes desconocidos que se nombraron con base al nmero de isotig utilizados en el transcriptoma: 01684, 06719 y 01736 (datos no mostrados). La siguiente etapa despus de la seleccin de los genes est actualmente en proceso. En primer lugar se est trabajando para obtener la secuencia completa de las regiones codificantes de los genes elegidos, mediante la tcnica denominada RACE (de Rapid Amplification of cDNA Ends) la cual permite conocer las secuencia que codifica para la protena de inters, junto con las dos regiones reguladoras UTR (del ingls untranslated region o untranslated trailer), las cuales son elementos que tienen gran importancia en la regulacin de la expresin gnica. Con el fin de introducir estas secuencias en otras plantas modelo como tabaco y Arabidopsis, se estn empleando tcnicas de transformacin gentica, dentro de las cuales la transformacin indirecta mediada por una bacteria denominada Agrobacterium tumefaciens es la ms utilizada y fcil de desarrollar (Martnez-Trujillo et al., 2004; Burow et al., 1990). Esta tcnica, permite la introduccin del gen de inters mediante la infeccin de la planta por A. tumefasciens, la cual introduce el DNA hasta el ncleo de las clulas vegetales y lo inserta en el material gentico de la plantas; una vez hecho esto, la planta expresar el gen que se ha introducido como si fuera propio y comenzar a
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sintetizar, en teora, las protenas que le permitan resistir a factores ambientales adversos. Las plantas como tabaco y Arabidopsis se conocen como modelos debido a que son fciles de transformar, ya que se infectan fcilmente con Agrobacterium y poseen recursos genticos muy amplios, como un gran nmero de mutantes y genomas completamente secuenciados. Adems, Arabidopsis es una planta que se utiliza mucho en el rea biotecnolgica debido a que su ciclo de vida es corto (6 a 8 semanas) y es de fcil manipulacin. Ms an, es la planta superior con el genoma ms pequeo (125 Mpb) el cual est contenido en cinco cromosomas y puede transformarse por diversos mtodos. Por otra parte, el tabaco tambin se considera una planta modelo por su fcil transformacin, y se asemeja ms a otras plantas con potencial agronmico; sin embargo, su ciclo de vida es mayor y puede transcurrir hasta el triple de tiempo para observar los resultados esperados, comparado con Arabidopsis. RESULTADOS Y DISCUSIN Los primeros resultados de nuestro grupo de investigacin se muestran en los cuadros 2 y 3. stos presentan los niveles de expresin de numerosos genes de amaranto en las cuatro condiciones de estrs mencionadas, determinados mediante PCR en tiempo real. Con ellos se validaron parcialmente los resultados obtenidos del anlisis de expresin in silico usado inicialmente para su seleccin (Dlano-Frier et al., 2011) y permitieron reducir el nmero de opciones de genes para su caracterizacin futura en Arabidopsis y tabaco. Al analizar con ms cuidado los patrones de expresin en las dos condiciones de estrs abitico, i.e. salinidad y sequa, se observ que existe un mayor nmero y variabilidad de genes que se inducen en condiciones de estrs hdrico comparados con estrs salino y que pocos de ellos se inducen de manera considerable en ambos tipos de estrs. Un ejemplo de ellos es el gen que codifica para una fosfolipasa D, que hidroliza fosfolpidos en una regin muy especfica, el cual se expres de tres a cuatro veces ms que el control en ambos tipos de estrs. Reportes de otros autores, como Peng et al. (2010), mostraron que la induccin de un

Captulo V. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs Cuadro 2. Expresin relativa evaluada mediante qRT-PCR de 50 genes de A. hypochondriacus var. Revancha, bajo cuatro condiciones de estrs (Parte 1).

SALINO quitinasa arginasa Hfr protena de respuesta a herida lectina cistena proteasa proteinasa asprtica inhibidor de cistena proteasa interactor con la cinasa Pto protena de respuesta a estrs lipocalina inducida por temperatura precursor de calreticulina antiportador Na+/H+ esterol delta 7-reductasa desaturasa de cidos grasos fosfolipasa D peroxidasa ascorbato peroxidasa superxido dismutasa catalasa de raz lipoxigenasa fosfolpido hidroperxido glutatin peroxidasa glutatin S-transferasa isocitrato deshidrogenasa dioxigenasa de carotenoides oxidasa alternativa 0.0071 4.44 3.23 1.27 0.17 0.63 0.87 0.20 1.09 0.99 1.08 1.29 0.54 0.82 0.15 2.62 1.79 1.3 2.07 0.27 10.91 1.23 0.08 0.19 0.03 0.47

SEQUAH 1.42 0.18 0.19 4.08 0.044 4.88 8.72 0.32 3.68 1.2 1.47 2.56 0.7 2.85 0.056 3.95 0.19 4.47 1.19 0.22 0.017 5.29 11.97 24.32 0.02 6.27

ERBIVORAB ACTERIANO 1.27 17.8 3.77 1.18 0.35 1.34 0.93 0.28 1.48 1.21 0.67 1.42 1.12 1.07 0.55 1.07 2.58 1.99 1.35 1.16 19.64 0.79 1.66 1.5 0.56 0.96 3.31 0.79 0.23 0.84 136.6 0.71 1.44 0.07 1.00 0.82 0.94 2.00 0.65 1.4 0.28 1.51 1.19 5.76 1.47 1.04 1476.8 1.27 3.45 10.62 0.34 0.85

GENES INVOLUCRADOS EN RESPUESTA A ESTRS BITICO

GENES INVOLUCRADOS EN RESPUESTA A ESTRS ABITICO

GENES DE RESPUESTA A ESTRS OXIDATIVO

1En negritas, genes inducidos ( 1.5 veces el control); en naranja, genes reprimidos ( 0.5 veces el control). Cuadro 3. Expresin relativa evaluada mediante qRT-PCR de 50 genes de A. hypochondriacus var. Revancha, bajo cuatro condiciones de estrs (Parte 2).

SALINO 1.23 0.81 0.20 2.26 0.24 0.03 0.38 0.25 0.58

SEQUAH 3.17 0.06 0.05 0.82 0.03 0.46 0.68 8.3 1.15

ERBIVORO 1.66 1.32 1.42 2.9 0.9 0.37 0.06 1.13 0.92

BACTERIA 1.59 0.85 0.78 6.00 0.63 0.88 0.22 2.33 1.29

GENES INVOLUCRADOS EN EL METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Contina Cuadro 3...

SALINO FACTORES DE TRANSCRIPCIN CONSTANS RAV Protena de unin a RNA Protena de repetidos ricos en leucina Histona H3.2 NF-YC OTROS protena de respuesta a auxinas alfa expansina transportador de oligopptidos YSL WAX sintasa proten fosfatasa serin hidroximetil transferasa Glutamina sintetasa Oxygen-evolving enhancer protein 3 1.18 5.4 1.11 0.29 1.96 0.68 1.10 1.3 0.46 0.13 1.16 0.51 1.11 0.2

SEQUAH 0.54 0.46 2.29 0.29 5.73 1.23 0.06 0.04 3.13 0.23 0.37 0.03 13.13 2.06

ERBIVORO 1.62 1.17 2.03 0.82 0.66 0.8 0.74 1.6 0.99 0.88 0.92 1.17 0.93 2.02

BACTERIA 0.88 1.34 3.16 4.23 0.71 2.9 0.99 4.57 0.84 2.87 0.41 0.74 2.04 264.33

1En negritas, genes inducidos ( 1.5 veces el control); en naranja, genes reprimidos ( 0.5 veces el control).

gen similar bajo mltiples condiciones de estrs abitico en plantas de Setaria itlica, el segundo cereal ms cultivado de Asia, increment la tolerancia a sequa al ser sobeexpresado en plantas de Arabidopsis. De la misma manera, Zhang et al. (2008) reportaron que la sobreexpresin de este gen en plantas de lamo (Populus tomentosa) fue capaz de conferirles alta tolerancia a salinidad y sequa. Por otra parte, nuestros resultados tambin muestran, de acuerdo a una gran nmero de reportes, la induccin de genes relacionados con estrs oxidativo, que codifican enzimas que permiten la eliminacin de especies reactivas de oxgeno (ROS), las cuales ocasionan dao celular en la planta, alteraciones en membrana, DNA, y otras molculas biolgicas, como lpidos y protenas. Entre este tipo de genes destacan aquellos que codifican para superxido dismutasas, ascorbato peroxidasas, isocitrato deshidrogenasas dependientes de NADP, fosfolpido hidroperxidoglutatin peroxidasas y glutatin S-transferasas, entre otras. No es sorprendente entonces que algunas de ellas se induzcan ms de diez veces en condiciones de sequa, una condicin que se caracteriza por la gran acumulacin de ROS. As tambin algunos genes involucrados en el metabolismo de carbohidratos se indujeron en condiciones
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de estrs hdrico y/o salino, como la celulosa sintasa y la -amilasa. Esta ltima, es una enzima involucrada en la degradacin de almidn (exoamilasa) que produce maltosa. Hay 9 genes de -amilasa en Arabidopsis (BMY1-BMY9), pero solamente BMY1 posee el 90% de la actividad total de las -amilasas en esta planta. Se induce por estrs abitico y tiene una regulacin compleja debido a que la expresin y actividad est influenciada por fro, calor, luz, salinidad, fitohormonas, azcares y estrs osmtico. La induccin de -amilasa y la acumulacin resultante de maltosa puede funcionar como un factor estabilizante en el estroma del cloroplasto en respuesta a estrs por altas temperaturas. Tambin se le ha dado un papel de protena de almacenamiento vegetativo (Kaplan y Guy, 2004) y podra inclusive funcionar para reducir el estrs por deshidratacin que normalmente es causado por la herbivora de larvas de insectos masticadores (Tang et al., 2009). Algunos de los genes de amaranto anteriormente mencionados, aunque de gran inters e importancia, no satisfacen uno de los criterios de seleccin antes mencionados. Por ejemplo, ortlogos de la mayora de los genes de amaranto relacionados con la eliminacin de ROS provenientes de otras especies, muchas

Captulo V. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs

de ellas extremfilas, ya han sido clonados, secuenciados y sobreexpresados en plantas modelos como tabaco y Arabidopsis (Allen et al., 1997; Seltmann et al., 2010; Yu et al., 2003; Yadav et al., 2005; Liu et al., 2010). Incluso, ha habido reportes en donde se introducen dos o hasta tres genes en plantas de tabaco que estn relacionados en la respuesta a estrs oxidativo (Kwon et al., 2002; Lee et al., 2007; Le Martret et al., 2011). Siguiendo este criterio se han tenido que descartar numerosos genes que en el papel parecan ser muy interesantes. Es por ello que el estudio se ha enfocado al estudio de genes de amaranto con funcin desconocida (que comprenden una buena parte del total) o que hayan sido poco estudiados y caracterizados en otras especies. Debemos tomar en cuenta que los estudios en los que se llevar a cabo la sobreexpresin de un gen determinado en plantas modelo, ser predominantemente bajo condiciones de invernadero, y se medir su comportamiento ante el reto de un solo tipo de estrs a la vez. Es por ello que los resultados iniciales obtenidos debern tomarse con cierto grado de cautela y las conclusiones sobre su impacto fisiolgico y agronmico tendrn que ser validadas, ya sea aplicando dos o ms tipos de estrs de manera simultnea y en periodos de tiempo indeterminados, o bien realizando ensayos directamente en campo, donde todas las variable posibles que podran afectar a la planta estn presentes, ya sea simultneamente o en ciertos perodos de su desarrollo. Esto permitir obtener una visin ms clara del potencial que puede tener la expresin del gen de inters en condiciones reales y quizs en otras plantas de inters comercial, como cereales u hortalizas. Por otro lado, algunos de los genes que se indujeron en condiciones de estrs bitico, son protenas que estn involucradas en una respuesta inmediata, y los genes que codifican para algunas de ellas como quitinasa o lectina, genes relacionados con el mecanismo de explosin oxidativa, como ascorbato peroxidasa, lipooxigenasa, glutatin S-transferasa y peroxidasas, as como otros genes involucrados en la transduccin de seales, como calreticulina y aquellos que pueden fungir como factores de transcripcin como una protena de unin a RNA o RBP (de RNA Binding Protein). Estas son

protenas que normalmente se acumulan cuando la planta sufre un ataque por patgenos, como se ha observado en amaranto (Tabla 2; ver tambin, Casarrubias-Castillo, 2009 y Fomsgaard et al., 2010). Un gen por el cual se ha tenido el inters particular de ser estudiado con mayor profundidad es el denominado OEE3 (de Oxygen Evolving Enhancer protein subunidad 3), debido a que slo se conoce su funcin biolgica en las plantas como parte del complejo proteico constituido por elementos de tres diferentes pesos moleculares, OEE1 de 33 kDa, OEE2 de 23 kDa y finalmente, OEE3 de 16 kDa. stos estabilizan el fotosistema II, sin que existan reportes que mencionen su papel como un gen que se induce en condiciones de estrs bitico y abitico. Nuestros resultados han mostrado que duplica su expresin al doble cuando se somete a la agresin por insectos herbvoros (i.e. S. recurvalis) y que se induce ms de 200 veces ante una ataque por bacterias que causan infeccin sistmica como P. syrigae var. tabacci. Pocos reportes, como el de Sugihara et al., (2000) han mostrado un aumento en la concentracin de la protena al ser sometida a estrs salino despus de cinco das en plantas de un especie que habita manglares, sin que esta observacin se repitiera en estudios desarrollados por Momonoki et al. (2009) en otra planta halfita. En contraste, nosotros observamos que el gen OEE3 presenta un aumento significativo en su expresin en condiciones de salinidad y sequa comparada con las plantas control. Por lo anterior, es uno de los genes candidatos para ser estudiados con mayor profundidad, y as conocer el papel que desempean en condiciones de estrs bitico y abitico y su posible mecanismo en la respuesta de resistencia multiestrs en plantas. De igual manera, el gen que codifica para una protena tipo RBP, que se detect inicialmente como una protena de resistencia a salinidad o Salt Tolerance Protein en el transcriptoma de amaranto, media el procesamiento del pre-rRNA, el transporte de mRNA y la traduccin. Adems, forma parte de una familia de genes que funciona como factores regulatorios en la transicin floral, patrones florales, sealizacin por ABA, respuesta a estrs, ritmo circadiano y modificacin de la cromatina. En un reporte reciente se detectaron altos niveles de expresin de este gen bajo condiciones de
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estrs bitico (Lorkovc, 2009). De igual manera, su expresin se duplic en condiciones de sequa en el estudio que presentamos. De acuerdo con los resultados propuestos por Ayarpadikannan, et al. (2012), la sobreexpresin en levaduras de una RBP de Suaeda asparagoides, una planta halfita originaria de Korea, indic un aumento en su tolerancia a estrs osmtico, fro y choque trmico. Otro gen de inters es el gen de funcin desconocida que hemos denominado Ah24. ste codifica para una protena totalmente nueva que se induce por herbivora por insectos masticadores, dao mecnico y adicin exgena de AJ, lo que sugiere que puede estar participando en el mecanismo de defensa de amaranto. Adems, la regin promotora del gen Ah24 contiene una sobre-representacin de cajas reguladoras implicadas en procesos de desarrollo, indicando que podra estar participando en procesos tanto de desarrollo como de defensa (Massange-Snchez J, datos no publicados). Dentro de esta lnea tambin result de inters el gen Hfr-2 el cual es sobre regulado por el ataque de la mosca de Hess (Mayetiola destructor) en trigo (Triticum aestivum). El Hfr-2 (de Hessian fly responsive gene-2), contiene dos regiones similares a genes que codifican para una protena aglutinina especifica de semilla de Amaranthus y para una protena hemoltica que es capaz de formar poros en las membranas celulares. La expresin de Hfr-2 aumenta cuando plantas de trigo son atacadas por el herbvoro Spodoptera frugiperda y el fido Rhopalosiphum padi. Tambin se sabe que hay un ligero aumento en la expresin del gen cuando las plantas son tratadas con AS y ABA, por lo cual la protena ha sido propuesta para tener una funcin en la defensa contra ciertos insectos y patgenos. Por otra parte, se ha propuesto que la protena puede ayudar al desarrollo de las larvas de la mosca de Hess (Puthoff et al., 2005). Sin embargo, se cree que el gen Hfr-2 puede estar involucrado en la resistencia de amaranto a suelos salinos, ya que permite el fcil intercambio de agua, iones, azcares solubles y osmolitos para la estabilidad de la turgencia celular. Lo anterior es sustentado en el hecho de que la expresin del gen aumenta cuando las plantas son tratadas con solucin salina (Cuadro 2).
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Otro factor de transcripcin que pareci digno de estudio debido a los criterios aplicados es el conocido GRF8 (de Growth-Regulating Factor 8), que es un factor que se ha descrito regula la expansin de la clula. Existen trabajos que demuestran la participacin de GRF8 en la regulacin del crecimiento de la clula; por ejemplo, triples mutantes en Arabidopsis de GRF1-GRF3 dieron como resultado que hojas y cotiledones fueran ms cortos, mientras que, la sobreexpresin de AtGRF1 y AtGRF2 result en plantas con hojas y cotiledones ms largos (Jeong et al., 2003). Sin embargo, se desconoce si GRF8 est implicado en el mecanismo de defensa en plantas. Dlano Frier et al. (2011) encontraron un aumento en la expresin de ste factor de transcripcin bajo diferentes tipos de estrs, abriendo una nueva ventana para la funcin de GRF8, ya que podra estar participando en la respuesta de la planta a condiciones estresantes. (Cuadro 2). Por ltimo, las lipoxigenasas (LOX) son una familia de dioxigenasas de cidos grasos que contienen hierro no acomplejado en un grupo hemo. En plantas catalizan principalmente la dioxigenacin de -cido linolnico (-LeA). Se clasifican de acuerdo a su especificidad posicional en 9-LOX y 13-LOX o a su estructura primaria en LOX tipo1 y LOX tipo 2. Anlisis de expresin de una LOX2 de arabidopsis (AtLOX2) indicaron que se expresa en hojas y flores, se activa por MeJA, y voltiles de hoja verde (que son un producto secundario de LOX) y es desregulada en la senescencia. En hojas de papas una LOX-H3 (13-LOX tipo 2) es diferencialmente inducida por dao, y las mutantes en LOX-H3 reducen la acumulacin del inhibidor de proteasas (Pin2) que es una protena clsica de defensa contra insectos masticadores y algunos otros (Feussner y Wasternack, 2002). CONCLUSIONES Los enfoques biotecnolgicos de este trabajo enfatizan el desarrollo de cultivos biotecnolgicamente modificados bajo condiciones similares a las del campo y se enfocan en evitar un dao significativo al estado reproductivo de la planta para asegurar buenos rendimientos, impulsarn notablemente las oportunidades para desarrollar cultivos tolerantes a estrs.

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Captulo V. Caracterizacin funcional de genes novedosos de Amaranthus hypochondriacus: explorando su aplicacin en la generacin de cultivos resistentes al estrs

El estudio de genes desconocidos o poco estudiados que se inducen en condiciones adversas en amaranto permitir comprender las funciones que desempean estos genes, as como el posible mecanismo de tolerancia a diversos ambientes adversos. Adems, la sobreexpresin de genes de amaranto en plantas modelo como tabaco y Arabidopsis, permitir conocer con mayor profundidad el papel fisiolgico que estos genes desempean en plantas. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por Conacyt (Proyecto SEP-Ciencia Bsica No. 156912), Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. Agradecemos el apoyo econmico del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa, Conacyt con las becas otorgadas a PAPS (No. 232807) y a JAMS (No. 234771). BIBLIOGRAFA Allen R D, R P Webb, S A Schake (1997) Use of transgenic plants to study antioxidant defenses. Free Radical Biology & Medicine 23: 473-479. Aragn-Garca A, M A D Huato, M HuertaLara, F J Senz-de-Cabezn, I PrezMoreno, V Marco-Mancebn, J F LpezOlgun (2011) Insect occurrence and losses due to phytophagous species in the amaranth Amaranthus hypocondriacus L. crop in Puebla, Mexico. African Journal of Agricultural Research 6: 5924-5929. Ayarpadikannan S, E Chung, C W Cho, H A So, S O Kim, J M Jeon, M H Kwak, S W Lee, J H Lee (2012) Exploration for the salt stress tolerance genes from a salt-treated halophyte, Suaeda asparagoides Plant Cell Reports 31: 3548. Bari R, J D G Jones (2009) Role of plant hormones in plant defence responses. Plant Molecular Biology 69: 473-488.

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Captulo VI

Anlisis protemico del amaranto, sometido a herbivora y evocadores de resistencia a insectos


PROTEOMIC ANALYSIS OF AMARANTH SUBJECTED TO HERBIVORY AND ELICITORS OF INSECT RESISTANCE

Ariana Navarro-Melndez1, Silvia Edith ValdsRodrguez1 y John Paul Dlano Frier1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato) Km 9.6 del Libramiento Norte Carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico. Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx Telfono: (52) 462 39636 o 462 39600 FAX: (52) 462 45996 o 462 39611

RESUMEN El dao causado por insectos herbvoros induce en las plantas diversas respuestas morfolgicas y fisiolgicas que son utilizadas para su defensa. El cido jasmnico (AJ) es, en muchas especies de plantas, la principal seal para la induccin local y sistmica de las respuestas de defensa contra insectos. La planta de amaranto es apreciada por su adaptabilidad climtica, tolerancia a la herbivora y la calidad de protena en semilla. El objetivo de este trabajo fue evaluar mediante protemica comparativa la expresin diferencial de las protenas de hojas de amaranto que pudieran estar involucradas en la defensa contra insectos. Una vez seleccionado el protocolo adecuado para la extraccin de protenas, se analizaron los perfiles protemicos despus de los tratamientos de herbivora por larvas de Spodoptera exigua y de la aplicacin de metil jasmonato (MeJA). Se detectaron 513 manchas en el tratamiento de herbivora y 343 manchas en el de MeJA, muchas de las cuales mostraron alteraciones en su patrn de acumulacin despus del tratamiento. Algunas de las protenas diferenciales fueron secuenciadas por ESIQTOF-MS/MS o MALDI-TOF. En general, se observ que las protenas cuya expresin se alter estn involucradas en el metabolismo

primario de la planta, regulacin transcripcional y traduccional, y defensa. Por ejemplo, la induccin de la subunidad- de la ATP sintasa cloroplstica sugiere que sta pudiera estar involucrada en la liberacin de pptidos similares a inceptinas involucrados en la percepcin de la herbivora por la planta, tal y como ocurre en garbanzo. En contraste, la Amarandina-1, que fue reprimida por el tratamiento con MeJA, es una protena anti-microbiana inducible por la aplicacin de cido saliclico (AS), antagonista de AJ, y perxido de hidrgeno. Adems, esta tcnica permiti identificar protenas desconocidas, demostrando su capacidad para el descubrimiento de protenas novedosas de funcin desconocida y con potencial aplicacin biotecnolgica en la agricultura. Palabras clave: cido jasmnico, defensa, herbivora, protemica. ABSTRACT Insect herbivory damage causes diverse morphological and physiological responses in plants that have a defensive function. In many plant species, jasmonic acid (JA) is the signal responsible for triggering the above events, both locally and systemically. Grain amaranths are
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valued for their climatic adaptability, tolerance to herbivore attack and high protein quality. The aim of this study was to apply a comparative proteomics approach to assess the differential expression of grain amaranth leaf proteins that could be involved in defense against insect herbivores. After selection of a suitable protocol for protein extraction, the leaf protein profiles obtained after exogenous methyl jasmonate (MeJA) application or herbivory by Spodoptera exigua larvae, were compared. Both treatments showed the accumulation of differential proteins of low molecular weight, in the acidic and basic range. Approximately 513 protein spots were detected in hervibory-treated plants, whereas MeJA yielded approximately 343 spots, many of which showed a differential accumulation in response to the treatments. Some of these differential proteins were sequenced by ESIQTOF-MS/MS or MALDI-TOF. In general, induced proteins were involved in primary metabolism, transcriptional and translational regulation and defense. For instance, the induced expression of the chloroplastic ATP synthase -subunit, which is the source of biologically active inceptin peptides that are involved in the plants perception of herbivory in cowpea, suggests that a similar mechanism could be operating in amaranth. On the other hand, the MeJA treatment repressed the expression of amarandin-1, an antimicrobial protein that is inducible by salicylic acid, an antagonist of JA, and hydroxide peroxide. This technique also yielded unknown proteins, thereby indicating that a proteomic approach has the capacity of discovering novel proteins in amaranth with potential biotechnological applications in agriculture. Key words: defense, herbivory, jasmonic acid, extraction, proteomics. INTRODUCCIN Las plantas han desarrollado sistemas sofisticados de defensa para contrarrestar el ataque de los insectos. Estos sistemas estn integrados por molculas que funcionan como defensas directas como los glucsidos cianognicos, alcaloides, fenoles, inhibidores de proteasas (IP), etc. Adems, las plantas emiten compuestos voltiles o
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producen nctar extrafloral como un mecanismo de defensa indirecto, los cuales permiten a la planta reforzar su sistema de defensa para futuros ataques (Kessler y Baldwin, 2001; Heil, 2008). El cido jasmnico (AJ) es la principal molcula de sealizacin involucrada en la activacin de las respuestas de defensa contra insectos herbvoros (Howe, 2004; Reymond et al., 1998). La mayora de los estudios que examinan las respuestas de defensa de las plantas despus del ataque por insectos se han enfocado en la dinmica de genes, protenas y metabolitos especficos responsables de los cambios en la resistencia por el ataque recibido. Recientemente la protemica ha surgido como una poderosa herramienta para el estudio de los cambios en los patrones de expresin de protenas, especialmente en cultivos de importancia agronmica como arroz, maz, tomate y trigo, en respuesta a diversos tipos de estrs (Casati et al., 2005; Agrawal y Rakwal, 2006; Fan et al., 2012). El amaranto (Amaranthus cruentus, A. hypochondriacus y A. caudatus) es de inters agronmico debido su alta tolerancia al estrs abitico. Adems, en los ltimos aos se ha incrementado el inters hacia este cultivo ya que se caracteriza por producir semillas con alta calidad de protena y almidn. Las protenas de la semilla de amaranto son tambin, fuente de biopptidos con actividad antidepresiva, anticarcinognica e hipotensa (Silva-Snchez et al., 2008; Barba de la Rosa et al., 2010) y de escualeno que reduce los niveles de colesterol y triglicridos en pacientes con hipertensin (Martirosyan et al., 2007). A su vez, en semillas y hojas de amaranto se han encontrado inhibidores de proteasas (IP) tipo tripsina y de -amilasa como mecanismos de defensa contra insectos plaga (Valds-Rodrguez et al., 1993; Snchez-Hernndez et al., 2004). Adems, experimentos en campo mostraron que la aplicacin exgena de AJ induce la actividad de inhibidores de proteasas en hojas, as como de otras enzimas involucradas en la resistencia a insectos como la polifenol oxidasa (PPO), leucina aminopeptidasa (LAP) (Dlano-Frier et al., 2004). A la fecha son pocos los reportes sobre los mecanismos de defensa que el amaranto erige contra diferentes tipos de estrs y que involucran cambios en la expresin global de protenas. El

Captulo VI. Anlisis protemico del amaranto, sometido a herbivora y evocadores de resistencia a insectos

objetivo de este trabajo fue conocer mediante un anlisis protemico, la respuesta local (RL) y sistmica (RS) en las hojas de plantas de amaranto daadas por larvas de Spodoptera exigua, un insecto generalista, y por la aplicacin de metiljasmonato (MeJA), un derivado parcialmente voltil del AJ pero igualmente activo. Se evaluaron tres protocolos para la extraccin inicial de protenas para hojas de amaranto para realizar la subsiguiente separacin en geles de dos dimensiones. Se compararon los patrones de protenas de hojas de plantas sin dao (control), contra las hojas daadas (respuesta local o RL), y hojas intactas (respuesta sistmica o RS) en plantas sujetas a herbivora. Para el tratamiento con MeJA, se compararon los perfiles entre plantas tratadas, o inducidas, y no tratadas, o controles. Adems, se logr la identificacin de un nmero de protenas diferenciales, algunas de ellas de funcin desconocida, con posible participacin en la defensa contra insectos. MATERIALES Y MTODOS MATERIAL BIOLGICO Y SU MANEJO Semillas maduras de A. hypochondriacus var. Nutrisol fueron germinadas con mezcla de germinacin (pasta de coco: mezcla general en relacin 1:1) en un cuarto de crecimiento con fotoperodo de 16 h luz a 28C y 8 h de oscuridad a 16C. Las plntulas fueron trasplantadas dos semanas despus a macetas de plstico de 1.3 l en mezcla general (tierra de hoja, limo, Sunshine Mix 3, vermiculita y perlita en relacin 2: 1: 3: 1: 1). Se realizaron tres rplicas con plantas de amaranto de cinco semanas de edad, seis plantas control y seis plantas tratadas para cada uno de los tratamientos de herbivora y aplicacin de MeJA Para el ensayo de herbivora, se estableci una colonia del insecto Spodoptera exigua colectado en un campo experimental de amaranto establecido en Valencianita, Irapuato, Guanajuato, durante los aos 2007-2009. Las larvas fueron alimentadas con una dieta a base de hojas de amaranto y los adultos con una solucin de sacarosa. TRATAMIENTO CON METIL JASMONATO Se prepar una solucin al 5 M de MeJA (Sigma-Aldrich Chemical Co. St. Louis, MO.

USA) en etanol justo antes de su aplicacin. Cada planta fue asperjada con 1 mL de esta solucin y cubierta con una bolsa de plstico, para ser luego colocada en una cmara de crecimiento durante 24 h a 28C con luz constante. Las plantas control se asperjaron con 1 mL de una solucin de etanol-agua y se manejaron de igual forma que las plantas tratadas. Una vez finalizado el tiempo de exposicin, se colectaron las hojas y se molieron inmediatamente en nitrgeno lquido y se almacenaron a - 80 C hasta su uso. TRATAMIENTO DE HERBIVORA Se colocaron dos larvas de Spodoptera exigua de 3 a 4 instar por planta durante 3 h para que se alimentaran, durante este periodo se cubrieron las plantas con una malla para evitar su dispersin. Despus de 24 h de iniciado el ensayo, se colectaron y molieron con nitrgeno lquido las hojas con prdida de tejido foliar para evaluar la RL y hojas intactas para evaluar la RS. Los controles fueron expuestos a las mismas condiciones pero en ausencia de larvas. Todos los ensayos se llevaron a cabo en un cuarto de crecimiento en las condiciones de luz y temperatura antes mencionadas. EXTRACCIN DE PROTENAS La extraccin de protenas de hojas de A. hypochondriacus, se realiz por varios mtodos con el objetivo de seleccionar el ms adecuado para nuestro modelo con base al rendimiento, la calidad y la pureza del extracto. stos fueron los siguientes: 1. Extraccin con TCA/acetona. Se sigui el protocolo reportado por Carpentier et al. (2005) con algunas modificaciones. A 200 mg de tejido congelado se agreg 1 ml de buffer de lisis (0.5 M Sacarosa; 0.075 M KCl; 0.375 M Tris-HCl, pH 7.5; 38 mM EDTA; 2 M Urea; 0.5 M tiourea, 1% v/v del coctel de inhibidores de proteasas 25 Complete de Roche, Alemania, y 2% v/v de -mercaptoetanol). Se agit (700 rpm) durante 15 min a 4C, seguido de una centrifugacin a 13000 rpm en una centrfuga de mesa (SORVALL Biofugue Pico, Kendro; Alemania) por 30 min a 4C, de la cual se recuper el sobrenadante en otro tubo. Se precipitaron las protenas con 1 ml de cido tricloroactico (TCA) al 10% en acetona por cada 1 ml de sobrenadante, se dej a -20C toda
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la noche. Se centrifug, se lav la pastilla 2 veces con acetona con 0.1% de DTT y se dejo secar la pastilla, finalmente se resuspendi en un buffer de 7 M urea y 2 M tiourea. 2. Extraccin con Fenol. Se sigui el protocolo reportado por Isaacson et al. (2006) con algunas modificaciones. A 200 mg de tejido congelado se agregaron 700 l de Buffer de lisis (0.7 M Sacarosa; 0.1 M KCl; 0.5 M Tris-HCl, pH 7.5; 50 mM EDTA, 1% v/v del coctel de inhibidores de proteasas 25 Complete y 2% v/v de -mercaptoetanol y 1 ml de fenol saturado con Tris pH 8). Se agit (700 rpm) a 4C por 15 min y se centrifug a 12000 rpm por 25 min a 4C. Se colect la fase superior (fase fenlica) y se le adicionaron 1.5 ml de acetato de amonio 0.1 M en metanol y se dej en reposo a -20C por 2 h para precipitar las protenas. Se centrifug por 20 min a 12000 rpm y se desech el sobrenadante, se lav la pastilla con 1 ml de metanol fro, centrifugando en cada lavado por 5 min a 12000 rpm a 4C. Finalmente, se lavaron la pastillas con 1 ml de acetona al 80%, se centrifug 5 min a 4C, y se dej secar a temperatura ambiente 3 min y enseguida se resuspendi en un buffer de 7 M urea y 2 M tiourea. 3. Mtodo con Tris 40 mM. A 400 mg de tejido congelado se agregaron 800 l de una solucin de Tris 40 mM y 1% v/v del coctel de inhibidores de proteasas 25 Complete. Se agit (700 rpm) por 15 min y se centrifug a 12000 rpm por 15 min a 4C. Al sobrenadante se le determin la concentracin de protena con el mtodo Bradford. Posteriormente, para limpiar el sobrenadante se utiliz el Kit 2-D Clean Up (Amersham Biosciences, NY, EUA) siguiendo el protocolo del proveedor y por ltimo, se re suspendi la pastilla en un buffer de 7 M urea y 2 M tiourea. La determinacin de concentracin de protena de los diferentes extractos se realiz por el mtodo de Bradford empleando el Bio Rad Protein Assay Kit (Bio Rad, CA, EUA) siguiendo el protocolo para el micromtodo en placas de 96 pozos que marca el proveedor. ELECTROFORESIS DE DOS DIMENSIONES Las protenas obtenidas de los diferentes protocolos anteriormente descritos, se resuspendieron en una solucin de rehidratacin
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(7 M urea; 2 M tiourea; 0.2% de anfolitos; 4% CHAPS; 18 mM DTT). Se tom una alcuota de cada muestra correspondiente a 600 g de protena y se cargaron en tiras de poliacrilamida de gradiente de pH inmovilizado de 18 cm (IPG, Immobiline DryStrip) de pH 3-10 (Amersham Biosciences, EUA). Las tiras fueron rehidratadas de forma pasiva durante 12 h a 22C. El isoelectroenfoque (IEF) se realiz en el equipo IPGphor II (Ettan IPGphor II Isoelectric Focusing Unit; Amersham), bajo el programa para protenas solubles con el modo de incremento lineal de voltaje, para las tiras de 18 cm: (1) 250 V por 30 min, (2) 500 V por 1 h, (3) 1000 V por 1h, (4) 8000 V hasta alcanzar 90 000 Vh totales. Despus del IEF, las tiras fueron inmediatamente equilibradas por 15 min con la solucin de equilibrio I (50 mM Tris-HCl, pH 8.8; 6 M urea; 30% glicerol, 2% SDS; 1% DTT) y posteriormente con 5 ml de buffer de equilibrio II (50 mM Tris-HCl, pH 8.8; 6 M urea; 30% glicerol, 2% SDS; 2.5% iodoacetamida). Posteriormente para la electroforesis de segunda dimensin bajo el sistema SDS-PAGE, las tiras fueron colocadas en la parte superior de un gel al 12% de poliarcrilamida en la cmara vertical PROTEAN II XL Cell (Bio Rad). Los geles bidimensionales fueron teidos con una solucin del colorante PhastGel Blue R-350 al 0.1% (PlusOne Coomassie tablets, GE Healthcare Bio-Sciences). Para su anlisis los geles teidos fueron escaneados con el densitmetro Image Scanner II, (Amersham Biosciences) con un rango de 150 a 300 dpi en formato MEL y TIF. El anlisis de imagen se realiz con el software MELANIE 2D Gel Analysis versin 7.0 (GeneBio, Geneva Bioinformatics, Suiza), siguiendo las indicaciones generales que marca el proveedor. Para anlisis diferencial del proteoma de las hojas de amaranto bajo dos diferentes tratamientos, para cada respuesta de los tratamientos de hervibora y aplicacin de MeJA fue necesario realizar tres rplicas de muestras procedentes de extracciones independientes. El anlisis general de cada imagen consisti en la deteccin, y cuantificacin de la expresin de cada mancha en cada gel; posteriormente se realiz el traslape (match) entre los geles de las respuestas a cada tratamiento, y con los datos generados, se procedi a identificar los cambios en los niveles de expresin de las protenas.

Captulo VI. Anlisis protemico del amaranto, sometido a herbivora y evocadores de resistencia a insectos

Las protenas seleccionadas se cortaron del gel y mandaron secuenciar a la unidad de Espectrometra de masas del CinvestavUnidad Irapuato. Para esto, las protenas de inters fueron digeridas con tripsina, la mezcla de pptidos resultante fueron analizados por ESI-QTOF-MS/MS o por MALDI-TOF. Las secuencias fueron comparadas mediante BLAST en la base de datos del National Center for Biotecnology Information (Bethesda, EUA). La identificacin de las protenas secuenciadas por MALDI-TOF se realiz en la interface de MASCOT. Tambin se realizaron bsquedas de secuencias de protenas en Swissprot y Protein Data Bank (PDB) mediante el algoritmo blastp (Blast protena-protena). RESULTADOS Y DISCUSIN EXTRACCIN DE PROTENAS TOTALES DE HOJAS DE AMARANTO Se evaluaron tres protocolos de extraccin de protena, de los cuales se seleccion el ms adecuado tomando en consideracin el patrn de bandeo y el rendimiento de protena (Figura 1). Con los mtodos de fenol y TCA/acetona, se obtuvo un bandeo claro e intenso, adems de un mayor rendimiento de protena para el mtodo de fenol (4.15 0.124 y 2.90 0.422 mg de protena/g de tejido fresco, respectivamente). Por su parte, el mtodo de Tris present una menor

intensidad de bandeo lo cual correlacion con los bajos rendimientos de protena (0.15 0.014 mg de protena/g de tejido fresco). Para realizar la comparacin de los perfiles protemicos de los tratamientos de herbivora y MeJA, se seleccion el mtodo de extraccin con fenol. Este mtodo ha sido de utilidad para la obtencin de protenas totales de tejidos vegetales recalcitrantes de Arabidopsis thaliana, tomate, arroz, pltano, mango, aguacate, etc., las cuales contienen un gran nmero de metabolitos como polifenoles, carbohidratos, pigmentos, lpidos, etc., que interfieren con la separacin por electroforesis de dos dimensiones (Wang et al., 2003; Saravanan et al., 2004). ANLISIS COMPARATIVO DE LAS PROTENAS DE HOJAS DE AMARANTO SOMETIDAS A ESTRS POR HERBIVORA Y APLICACIN DE MeJA Para estudiar la respuesta de las plantas de amaranto a la herbivora, se realiz el anlisis protemico de las hojas de amaranto bajo dos tratamientos diferentes: herbivora y aplicacin de MeJA (Figura 2A). En la Figura 2B se muestra la distribucin de las protenas en los tejidos tomadas en el tratamiento de herbivora, en el cual se detect un promedio 513 manchas, de las cuales 271 se comparten en las tres condiciones, y 28, 51 y 83 protenas se acumularon en los hojas provenientes de plantas control, de la RL

Figura 1. Comparacin del patrn de bandeo de protenas de hoja de amaranto obtenidas de tres diferentes mtodos de extraccin fenol (F), TCA/acetona (TCA) y Tris 40 mM (Tris). A. Navarro-Melndez1 et al.

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y de la RS, respectivamente. Del anlisis de los geles derivados del tratamiento con MeJA, se detectaron 343 manchas, siendo 28 manchas exclusivas de los geles de hojas control y 58 de hojas tratadas con MeJA (Figura 2C). IDENTIFICACIN DE PROTENAS CON EXPRESIN DIFERENCIAL Todas las protenas consideradas diferenciales estuvieron presentes en al menos dos geles y presentaron una razn de cambio 2 entre el tratamiento y el control con valor de P 0.05. Estos son los parmetros comnmente reportados en otros estudios de protemica comparativa (Giri et al., 2006; Dueckershoff et al., 2008). Para el tratamiento de herbivora (Figura 3) las manchas 298, 299 y 433 se inducen en respuesta a herbivora tanto en la RL como en la RS; las manchas 80 y 226 aumentan su expresin en la RL al dao por el insecto con una razn de cambio respecto al control de 3.46 y 2.08 respectivamente. Por el contrario, las manchas 145 y 151 aparecen sub-reguladas, con valores de 0.483 y 0.446, respectivamente. En (A) se muestran los mapas protemicos representativos de cada tratamiento. En (B) y (C), se muestran diagramas de Venn con la distribucin de protenas detectadas los tratamientos de herbivora, y MeJA, respectivamente.

Se eligieron 20 protenas de ambos tratamientos para secuenciar por ESI-QTOFMS/MS o MALDI-TOF dando prioridad a aquellas protenas que se inducen exclusivamente por el estmulo aplicado y aquellas que presentaron una fuerte expresin o represin con respecto al control. La identificacin de algunas protenas (Tablas 1 y 2) se realiz comparando las secuencias de los pptidos obtenidos por espectrometra de masas en bases de datos de protenas disponibles. Las zonas amplificadas muestran algunas manchas de protenas con diferentes cambios de expresin entre el control (C), la respuesta local (L) y la respuesta sistmica (S). De las protenas inducidas involucradas en la fotosntesis, se detectaron la mancha 512, que corresponde a la protena A-B de unin a clorofila (CAB) en la respuesta sistmica al tratamiento de herbivora, y la anhidrasa carbnica (AC), detectada en las manchas 342 y 298, inducida en respuesta local al tratamiento de herbivora y MeJA, respectivamente (Tabla 1). La AC es una metaloenzima que en las plantas est involucrada en numerosos procesos biolgicos, que incluyen la regulacin del pH, transferencia de CO2, intercambio de iones, respiracin, biosntesis y fijacin de CO2. Su patrn de expresin responde al estrs ambiental y est relacionado con la tolerancia al estrs salino

Figura 2. Comparacin de los patrones de acumulacin de protenas de hojas de amaranto en respuesta al tratamiento de herbivora y MeJA.

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Figura 3. Cambios en los patrones de expresin de protenas en hojas de plantas de amaranto sometidas a herbivora. Tabla 1. Identidad de protenas diferenciales secuenciadas por ESI-QTOF-MS/MS.

Mancha No.

Masa (kDa)1

pI2

Pptidos secuenciados Tratamientos AELDGLNAWATFR TEVVDPLLNK AYAEAGPTGPLDWNVVEVK AVTVLPALAPSVTGV WGVAYADGPAGVFR WVVAFDTAAQK TQNSAYTEVR TSNPFGVNAGLAR FLVFACSDSR LSVEFSDQCVYAFAK FLVFAFNPR ETVEDPLLNK VALVVVTGDR YLEGSTLPTAK SLGQYTVVSVGK ALQESLASELAAR QTQLEVEAK DSQLAALSDSDLGVR ELVEELDEENGAR AFYLGVVGALAPAAGVGGK WLAYGELLDGR LALFVLTTLALNAR LLFPDVTDSAANR FTYLGELVGK

284

16.00

5.12

MeJA (I)3

292 342 298 346 359

23.7/ 23.96 56.5/34.51

9.22 7.79

MeJA (I) MeJA (I) y HRL(I)4 MeJA (I) y HRL(I) MeJA (I) y HRL(I)

17.00 36.0/ 33.33

5.62 6.12

304

13.0/ 24.46

4.56

HRS (I)5

512

56.5/ 20.83

7.08

HRS (I)

359

26.0/ 28.08

9.45

MeJA (R)6

1= Experimental/terico, 2= Punto isoelctrico experimental, 3= Metil jasmonato (Inducida), 4= Herbivora, respuesta local (Inducida), 5= Herbivora, respuesta sistmica (Inducida); 6= Metil jasmonato (Reprimida), 7= Biblioteca substractiva, tratamiento por herbivora, 8= Identificacin de en la base de datos de NCBI. A. Navarro-Melndez1 et al.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Tabla 2. Identidad de algunas protenas diferenciales secuenciadas por MALDI-TOF.

Mancha No. 363

Puntaje en Cobertura de Masa MASCOT1 secuencia (kDa)2 136 81.8/ 88.54 21%

pI3 6.6

422

101

21%

56.3/ 55.4

5.0

363

107

23%

81.8/84.48

6.1

1= Puntaje >53 indica homologa (P < 0:05), 2= Experimental/terico, 3= Punto isoelctrico terico, 4= Herbivora, respuesta local (Inducida), 5= Identificacin de en la base de datos de NCBI. 6= Nmero de acceso de la base de datos SwissProt.

en plantas de arroz (Yu et al., 2007). Tambin se encontr inducida en el tratamiento de herbivora la mancha 359 (Tabla 1) identificada como la subunidad de la ATP sintasa cloroplstica. El reconocimiento de herbivora en ciertas las plantas, como el garbanzo, se puede dar mediante la percepcin de ciertos pptidos, llamados inceptinas, que son el producto de la degradacin proteoltica de la subunidad de la ATP sintasa del cloroplasto, que tiene lugar en el tracto digestivo del insecto agresor. De esta forma, se observ que las inceptinas, presentes en las secreciones orales de las larvas de Spodoptera frugiperda que se alimentaban de plantas de Vigna unguiculata, fueron capaces de promover la produccin de fitohormonas relacionadas con defensa, como etileno, AJ y AS as como la liberacin de compuestos voltiles que se sabe son parte de las defensas indirectas de las plantas (Schmelz et al., 2006; 2007). La Amarandina-1 se encontr dentro de las protenas reprimidas en el tratamiento con MeJA. Esta es una protena RIP (de ribosome inactivating protein) con actividad antiviral y de N-glucosidasa, la cual rompe el enlace N-glucosdico de la adenina presente en secuencias especficas de RNA ribosomales (Kim et al., 1997). En hojas de Beta vulgaris L., se indujo la expresin de una protena RIP (beetin) por virus y por aplicacin exgena de AS y perxido de hidrgeno (antagonistas de la ruta del AJ) (Iglesias, 2008).
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Algunas protenas no pudieron ser identificadas, debido a la falta de secuencias en las bases de datos disponibles. La mancha 284 no pudo ser identificada. Sin embargo, la protena present homologa con la secuencia traducida de una clona de la biblioteca de cDNA de hojas de amaranto generada en respuesta a herbivora en nuestro laboratorio. La fuerte induccin de esta protena por MeJA sugiere que podra desempea una funcin importante en la regulacin de la resistencia a insectos herbvoros dependiente de AJ. La caracterizacin del gen codificante de esta protena de funcin desconocida est en progreso (MassangeSnchez, 2011; ver captulo V). CONCLUSIONES El mtodo basado en el uso de fenol fue el ms eficiente para la extraccin de protenas de hojas de amaranto. Adems, mostr una disminucin de molculas contaminantes propias del tejido utilizado. Los patrones de acumulacin de protenas fueron menores en plantas tratadas con MeJA que en las sujetas a herbivora por insectos masticadores. Este dato refleja diferencias en la respuesta de las hojas de amaranto al estmulo aplicado. La diferencia podra explicarse por la gran variedad de compuestos capaces de inducir o reprimir respuestas de defensa en plantas, que se encuentran en las secreciones orales y/o saliva de los insectos herbvoros (Walling, 2000). Un aspecto interesante fue la fuerte induccin de la protena 284 presente solo en el tratamiento con

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Captulo VI. Anlisis protemico del amaranto, sometido a herbivora y evocadores de resistencia a insectos

MeJA, la cual mostr homologa con la clona jjdfahbpa001_d08 proveniente de una biblioteca de cDNA de amaranto sometido a diferentes tipos de estrs, incluida la herbivora por insectos. Este trabajo deja abiertas nuevas preguntas acerca de la funcin en amaranto de las protenas no identificadas, as como la comprobacin de la participacin de algunas otras protenas, como la subunidad de la ATPasa, la metionina sintasa, etc. en las respuestas de defensa contra herbvoros. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por la Unin Europea (Proyecto AMARANTH: FUTURE-FOOD, Contrato No. 032263), Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. Agradecemos el apoyo econmico del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa, CONACyT por la beca otorgada a ANM (No. 203157). Tambin se reconoce la atinada asesora tcnica prestada por la Dra. Silvia Valds-Rodrguez y por el prstamo del equipo de protemica, y a la M. C. Alicia Chagolla, por el trabajo de secuenciacin de protenas. BIBLIOGRAFA Agrawal G K, M Yonekura, Y Iwahashi, H Iwahashi, R Rakwal (2005) System, trends and perspectives of proteomics in dicot plants Part I: technologies in proteome establishment. Journal of Chromatography B 815: 109-123. Barba de la Rosa A P, A Barba-Montoya., P Martnez-Cuevas, B Hernndez-Ledesma, M F Len-Galvn, A De Len-Rodrguez, C Gonzlez (2010) Tryptic amaranth glutelin digests induce endothelial nitric oxide production through inhibition of ACE: antihypertensive role of amaranth peptides. Nitric Oxide-Biology and Chemistry 23: 106111. Carpentier S C, E Witters, K Laukens, P Deckers, R Swennen, B Panis (2005) Preparation of protein extracts from recalcitrant plant tissues: an evaluation of different methods for two-dimensional gel electrophoresis analysis. Proteomics 5: 2497-2507.

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A. Navarro-Melndez1 et al.

Captulo VII

Respuestas moleculares y bioqumicas inducidas en Amaranthus cruentus L. en respuesta a la defoliacin por insectos herbvoros
MOLECULAR AND BIOCHEMICAL RESPONSES ELICITED IN Amaranthus cruentus L. IN RESPONSE TO DEFOLIATION BY HERBIVORE INSECTS

Paula A. Castrilln-Arbelez1 y John P. Dlano-Frier1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas (Cinvestav-Irapuato), Km 9.6 del Libramiento Norte Carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx Telfono: (52) 462 39636 462 39600 FAX: (52) 462 45996 462 39611

RESUMEN Las plantas de amaranto son especies que tienen la capacidad de crecer en suelos pobres y bajo condiciones poco favorables. Presentan una notable capacidad de desarrollarse bajo ambientes salinos no aptos para otros cultivos, como cereales, con una baja disponibilidad hdrica y una alta intensidad luminosa. Se ha reportado, tambin, que algunas especies de Amaranthus spp. soportan altas tasas de infestacin por insectos herbvoros en condiciones de campo con diferentes efectos sobre la productividad. De modo que, adems de sus caractersticas nutricionales, se ha observado que el amaranto de grano es una especie tolerante a la herbivora. En especies como el tabaco o lamo, se ha encontrado el dao mecnico seguido de la aplicacin de saliva de insectos herbvoros, o simplemente de cido jasmnico, una hormona que regula las respuestas a dao, los niveles de las enzimas responsables de hidrolizar la sacarosa incrementan (e. g. sacarosa sintasas e invertasas) la distribucin de carbohidratos desde las hojas hacia los tallos y races. El almacenamiento de carbohidratos almacenados en estos tejidos, podr ser usado para la futura produccin de metabolitos o protenas de defensa, o para

la regeneracin del tejido daado y/o para la reproduccin. Se postula que en amaranto la tolerancia a la defoliacin, puede estar relacionada con un mecanismo similar, en el cual las reservas de carbono son rpidamente movilizadas ya sea a tejidos de almacenamiento para uso posterior, o para ser empleadas en la rpida regeneracin de tejidos daados que caracteriza al amaranto. Por esta razn, en este trabajo surge el inters por estudiar algunos genes representativos del metabolismo de carbohidratos para tener un mejor entendimiento de los mecanismos bioqumicos y moleculares de la tolerancia a la defoliacin en sta especie. Parte de los resultados obtenidos hasta el momento se describirn en este captulo. Palabras clave: amaranto, defoliacin, herbivora, carbohidratos, movilizacin, tolerancia. ABSTRACT Grain amaranths are hardy plants with the ability to grow in poor soils under unfavorable environmental conditions, surviving low water availability, high light intensity and relatively extreme temperatures. Vegetable and grain
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Amaranthus species have been also reported to sustain high rates of infestation by herbivorous insects under field conditions, with different effects on productivity. In addition to their exceptional nutrimental qualities, grain amaranths are also considered as being tolerant to herbivory. In wild tobacco and poplar, it has been found that herbivory on the foliage or the application of jasmonic acid, a wound-response phytohormone, lead to the mobilization of carbon stores to less vulnerable tissues, mostly roots, to safeguard them for future re-growth, reproduction or even defense, when herbivory pressure has subsided. Sucrose cleaving enzymes, such as invertases and sucrose synthases are also activated, mostly to release hexoses to sustain the plant when photosynthesis levels are greatly reduced due to the loss of leaf area. Our group has postulated that tolerance to defoliation in amaranth is tightly associated with the capacity to mobilize C reserves from leaves to stems and roots and also to the ability to rapidly replenish depleted C reserves. For this reason, we analyzed several representative genes involved in carbohydrate metabolism in order to obtain a better understanding of the biochemical and molecular mechanisms underlying amaranths exceptional tolerance to defoliation, by insect herbivores or mechanical wounding. A description of part of the progress obtained in this line of research is described in this chapter. Key words: amaranth, defoliation, herbivory, carbohydrates, mobilization, tolerance. INTRODUCCIN El gnero Amaranthus comprende ms de 70 especies. Pertenece a la familia Amaranthaceae que incluye el betabel, espinaca, Chenopodium spp. y muchas halfitas. La familia Amaranthaceae ha evolucionado en regiones clidas, secas y con suelos salinos, lo que da como resultado adaptaciones anatmicas y fisiolgicas especiales, como la presencia de tricomas que actan como estructuras de secrecin externa para eliminar las sales que se presentan en exceso en el suelo, cutcula gruesa, en algunas especies presencia de espinas y la fijacin de carbono atmosfrico mediante un mecanismo tipo C4. Es importante sealar que no existe una clara
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separacin entre las especies de amaranto que se usan como verdura y las de grano, ya que las hojas tiernas de estas ltimas (A. hypochondriacus y A. cruentus) se consumen como verdura. En Mxico las especies ms frecuentemente consumidas son: A. hybridus, A. retroflexus, A. dubius, A. fimbriatus, A. powelli, A. spinosus, A. blitoides, A. palmerii y A. watsonii. Las semillas de las especies empleadas para la produccin de grano, tienen un alto contenido de protenas de excelente calidad, razones que le confieren un gran potencial dentro de la industria alimenticia. En Mxico, el cultivo del amaranto se concentra en el centro del pas, pero la produccin no es suficiente para la demanda creciente del grano (Dlano-Frier et al., 2011; Espitia-Rangel et al., 2010). Las plantas de amaranto son especies que tienen la capacidad de crecer en suelos pobres y bajo circunstancias desfavorables. Presentan, adems, una notable capacidad de desarrollarse bajo ambientes altamente salinos, con una baja disponibilidad de agua y una fuerte intensidad luminosa (Brenner et al., 2000; Johnson y Henderson, 2002; Omami et al., 2006). Se ha reportado que las especies de Amaranthus spp. tienen la capacidad de soportar altas tasas de infestacin por insectos herbvoros en condiciones de campo con diferentes efectos en la productividad (Aragn-Garca et al., 2011; Dlano-Frier et al., 2004; Grubben, 1976). Existen diversos reportes que indican que ciertas plagas de insectos pueden reducir la produccin en amarantos de granos o incrementar el riesgo de infeccin por patgenos fngicos en tallos y raz si estos no son controlados apropiadamente (Aragn-Garca et al., 2011; Espitia-Rangel et al., 2010; Wilson, 1989; Wilson y Olson, 1990) y que la infestacin por insectos puede ser deletrea bajo condiciones de sequa (DlanoFrier et al., 2004). La defoliacin de amaranto por larvas de lepidpteros en estadios tempranos de desarrollo ha resultado en una reduccin a largo plazo de tamao y la produccin; aunque experimentos realizados con dao mecnico indican que stas especies pueden recuperarse completamente con pequeos o despreciables costos en su produccin (Fomsgaard et al., 2010; Vargas-Ortiz, 2009; 2012). Adems, la remocin o poda de alrededor de 10 a 40% de tejido vegetativo en plantas de amaranto de grano es

Captulo VII. Respuestas moleculares y bioqumicas inducidas en Amaranthus cruentus en respuesta a la defoliacin por insectos herbvoros.

practicado en algunas regiones de Mxico para incrementar las ramificaciones secundarias y la productividad en biomasa e incluso semilla (Martnez-Moreno et al., 1999). Las plantas responden al dao, incluida la defoliacin, con el despliegue de una gran cantidad de defensas directas e indirectas (Bruce y Pickett, 2007; Howe y Jander, 2008). Por ejemplo, las plantas pueden emplear dos estrategias: produccin de defensas qumicas o morfolgicas para disuadir a los herbvoros (resistencia), y la movilizacin de reservas de almacenamiento para re-brotar y reproducirse despus de la prdida de tejido foliar (tolerancia). Dos caractersticas que podran contribuir a incrementar la tolerancia son: el incremento en la tasa fotosinttica en el tejido foliar remanente (fotosntesis compensatoria), y una inversin mayor de las plantas en la biomasa radicular relativa a la biomasa foliar como se ha visto ocurre en A. hybridus (Gassmann, 2004; Karban y Myers, 1989) La sacarosa es el principal carbohidrato de transporte y para que ste sea utilizado como fuente de carbono y energa, requiere el rompimiento del enlace glucosdico, el cual puede ser catalizado por sacarosas sintasas e invertasas (Arnold et al., 2004; Koch, 2004; Tymowska-Lalanne y Kreis, 1998). Las sacarosas sintasas estn muy relacionadas con los rganos consumidores y en presencia de uridina 5 difosfato (UDP) hidrolizan reversiblemente la sacarosa a UDP-glucosa y fructosa. A su vez, la invertasa rompe la sacarosa produciendo de una manera irreversible glucosa y fructosa. Muchas isoformas de invertasas estn presentes en la planta, y pueden ser clasificadas en dos principales grupos de acuerdo a su pH ptimo. Un grupo lo conforman las invertasas cidas, las cuales usualmente existen en forma glicosilada y su pH ptimo es cido. stas estn asociadas con el crecimiento y desarrollo de los tejidos (Gonzalez et al., 2005; Roitsch et al., 1995; Roitsch y Gonzalez, 2004), son inducidas por heridas (Sturm y Chrispeels, 1990; Zhang et al., 1996), y tienen un rol importante en regular la relacin rgano productor/consumidor y la descarga del floema (Roitsch et al., 1995). El segundo grupo lo conforman las invertasas alcalinas/neutras, que en contraste con las invertasas cidas, no estn glucosiladas y

muestran pH ptimos ligeramente alcalinos o neutros. stas han sido las menos estudiadas; en general, se han considerado como enzimas de mantenimiento, activas cuando la degradacin de la sacarosa por parte de sacarosa sintasas o de las invertasas es baja, lo cual ocurre en rganos maduros (Gonzlez y Cejudo, 2007). A partir del ao 2008, a las invertasas neutras/alcalinas se les empez a atribuir funciones importantes durante el desarrollo de la planta (Barratt et al., 2009; Jia et al., 2008; Welham et al., 2009). Hasta el momento los trabajos relacionados con defoliacin en amaranto de grano se han enfatizado principalmente en un contexto fisiolgico y ecolgico. Aunque las investigaciones a nivel molecular, respecto a la caracterizacin de estas enzimas en especies de inters econmico han venido en aumento, en el amaranto, una planta con un potencial agronmico que ha sido por muchos aos subvalorada, este esfuerzo apenas comienza. Por tal razn, en este captulo se describir la caracterizacin de genes clave en el metabolismo de carbohidratos, como paso inicial para comprender algunos de los aspectos relacionados con la capacidad del amaranto de tolerar el dao por defoliacin. Se postula que algunos de estos genes podran desempear una funcin primordial en la redistribucin de carbohidratos que ocurre en respuesta a la defoliacin del amaranto por insectos o dao mecnico. MATERIALES Y MTODOS MATERIAL BIOLGICO Semillas de los dos genotipos empleados en este estudio, A. cruentus cultivar Tarasca y A. hypochondriacus cultivar Revancha, fueron donadas por Eduardo Espitia (INIFAP, Mxico). Las semillas fueron germinadas como se describe en Dlano-Frier et al. (2011). Las larvas de Spoladea recurvalis, una plaga comn del amaranto y de algunas especies relacionadas, fueron criadas y mantenidas en una colonia establecida a partir de ejemplares colectados en los campos baldos de los alrededores de Irapuato, Guanajuato, Mxico. Las plntulas fueron subsecuentemente trasplantadas a bolsas plsticas de 14 L, conteniendo una mezcla de sustrato estril, 21 das despus de la germinacin, para ser luego transportadas a un invernadero,un
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

invernadero, donde fueron conducidos los experimentos. Las plntulas fueron fertilizadas una vez, una semana despus del trasplante, con una solucin 20:10:20 (N: P: K) segn las indicaciones del fabricante (Peters Professional; Scotts-Sierra Horticultural Products, Marysville, OH, USA). Todos los experimentos de herbivora se realizaron con plantas de A. cruentus de 30 das de edad bajo condiciones naturales de luz y temperatura. La eleccin de A. cruentus para los experimentos de defoliacin se realiz sobre la base de su insensibilidad al fotoperiodo, caracterstica que permiti realizar todos los ensayos de invernadero durante la mayor parte del ao (Espitia-Rangel et al., 2010). La defoliacin por herbivora fue llevada a cabo durante cuatro das, empleando cuatro larvas por planta, resultando en una prdida de tejido foliar de alrededor del 30%. Las muestras del tejido de hoja daada (3 por planta), el tallo (segmentos de 15 cm, partiendo desde la base) y races fueron colectadas de tres plantas a los 0, 1, 5 y 30 das despus del tratamiento. Los experimentos controles con plantas sin dao fueron realizados simultneamente. El tejido de cada tres grupos de plantas fueron mezclados y congelados e nitrgeno lquido y almacenado a -80C hasta su uso. Estas muestras fueron usadas para los anlisis de carbohidratos no estructurales, y expresin gnica. Cada experimento fue repetido tres veces. EXTRACCIN DE RNA TOTAL Y SNTESIS DEL cDNA El RNA total fue extrado a partir de 100-200 mg de tejido congelado empleando TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), siguiendo las instrucciones del fabricante con algunas modificaciones. stas consistieron de la adicin de una solucin salina (citrato de sodio 0.8 M + 1.2 M de cloruro de sodio) durante la precipitacin en una proporcin 1:1 v/v con isopropanol. Posteriormente, se llev a cabo una purificacin adicional con LiCl (8 M) por una hora a 4C. Todas las muestras de RNA fueron analizadas por electroforesis en geles de agarosaformaldehido, confirmndose su integridad a travs de las bandas ribosomales. Un total de 1 g de RNA fue usado para la sntesis del cDNA empleando un oligo dT20 y 200 unidades de la transcriptasa reversa, SuperScript II (Invitrogen).
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AMPLIFICACIN DE LA SECUENCIA COMPLETA DEL cDNA Con el objetivo de amplificar de forma completa los cDNAs de AhSuS-1, AhSuS-2 (sacarosa sintasasas), AhAGPS-1 (subunidad pequea de las ADP-glucosa pirofosforilasa), AhA/NI-1 y AhVI-1 (invertasas; alcalina/neutra o citoslica y vacuolar), 1 g de RNA total de las muestras de hojas de plntulas de amaranto de grano fue empleado. Una alcuota de 2 l fue usada como templado en todas las reacciones posteriores de PCR en presencia de 100 pM de cada uno de los oligonucletidos especficos diseados con base en las secuencias obtenidas en el transcriptoma de A. hypochondriacus. Los fragmentos obtenidos fueron clonados y secuenciados para confirmar la identidad del gen de inters. La amplificacin de los extremos 5 y 3 de los cDNA es realizada con la tcnica RACE (de Rapid Amplification of cDNA Ends) con el kit SMARTer RACE cDNA Amplification (Clontech, Laboratories, Mountain View, CA). SECUENCIACIN DEL DNA Y ANLISIS DE LAS SECUENCIAS El plsmido recombinante obtenido despus de la clonacin y posterior transformacin de E. coli fue preparado y secuenciado. La secuenciacin fue realizada como un servicio por el Laboratorio Nacional de Genmica para la Biodiversidad (Langebio) y el Instituto de Biotecnologa de la UNAM (IBT-UNAM, Mxico). La edicin de las secuencias fue hecha usando los programas FastPCR 6.0, AnnHyb 4.944 and Chromas-Lite 2.01. Las homologas de las secuencias fueron verificadas contra la base de datos del GenBank usando programas de BLAST. POSIBLE LOCALIZACIN SUBCELULAR La probable localizacin sub-celular de las protenas fue realizada in silico siguiendo los programas, disponibles on-line: PSORT (psort. hgc.jp/form.html), SignalP (www.cbs.dtu.dk/ services/SignalP/), TargetP (www.cbs.dtu.dk/ services/TargetP/), Protein Prowler (pprowler. imb.uq.edu.au/) y MitoProt. (ihg.gsf.de/ihg/ mitoprot.html).

Captulo VII. Respuestas moleculares y bioqumicas inducidas en Amaranthus cruentus en respuesta a la defoliacin por insectos herbvoros.

DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE ALMIDN Y HEXOSAS Todos los tejidos (hojas, tallos, races y panojas) fueron colectadas al comienzo del perodo de oscuridad (6:30 p.m.) y congelados en nitrgeno lquido. La extraccin se realiz a partir de 200 mg de tejido molido con 500 l de etanol al 80% (v/v) e incubado a 4C por 10 min en agitacin constante. Despus de la centrifugacin a 10,000 rpm (4C por 10 min), el sobrenadante fue transferido a un tubo nuevo y concentrado por centrifugacin (Heto Maxi Dry Lyo, HetoHolten, Denmark). El residuo fue re-disuelto en 500 l de 100 mM buffer Hepes, pH 7.4, y 5 mM MgCl2, y usado para la determinacin de azcares solubles. El pellet derivado de la centrifugacin se emple para la determinacin de almidn. Al final, ste fue homogenizado con 500 l de 10 mM KOH e incubado a 99C por 2 horas. El contenido de sacarosa, glucosa,

fructosa y almidn fueron medidos usando mtodos enzimticos (Boehringer Mannheim/RBiopharm, Darmstadt, Germany). RESULTADOS Y DISCUSIN IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE LOS GENES DE INTERS La informacin generada por el anlisis de transcriptoma de Ah (Dlano-Frier et al., 2011), proporcion la base para el aislamiento y anlisis detallado de los genes de amaranto de grano involucrados en el rompimiento, movilidad, degradacin y sntesis de los carbohidratos solubles no estructurales. Un total de 31 genes fueron identificados como candidatos (Cuadro 1). El inters fue determinar cuales podran ser clasificados como genes sensibles a estrs involucrados en la tolerancia a defoliacin en amaranto de grano.

Cuadro 1. Genes involucrados en metabolismo de carbohidratos, identificados durante el anlisis transcriptmico de A. hypochondriacus.
No. Isoformas 4 7 14 1 2 1 3 1 7 13 7 8 1 8 5 3 7 1 1 1 2 10 5 1 1 4 7 1 2 1 1

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Con el objetivo de conocer el sitio de inicio y terminacin de la sntesis de las protenas, y adems de esto, identificar las regiones UTR (regiones sin traducir) que le dan especificidad a cada uno de los genes se emple la tcnica RACE. DETERMINACIN DE LA SECUENCIA COMPLETA DE LOS cDNA DE LOS GENES DE SACAROSA SINTASA, AHSUSY-1 Y AHSUSY-2 Las sacarosa sintasas o SuSy (EC 2.4.1.13) catalizan el rompimiento de la sacarosa a UDPglucosa y fructosa. Aunque la sacarosa sintasa es encontrada en todos los rganos de la planta, es ms abundante en los rganos consumidores. Ellas estn principalmente involucradas en apoyar el crecimiento, proveer los requerimientos energticos a la clula y asistir en funciones de almacenamiento creando sustratos para la sntesis de la pared celular, la respiracin y la sntesis de almidn (Klotz y Haagenson, 2008; Koch, 2004). Las sacarosa sintasas conforman una pequea familia multignica en plantas, y, el amaranto de grano, no es la excepcin. En el anlisis transcriptmico se identificaron por lo menos 7 diferentes isoformas, las cuales,
5 UTR ATG

como en otras plantas estudiadas, pueden tener funciones especficas. En este trabajo fueron elegidas, AhSuSy-1 y AhSuSy-2, por presentar alta homologa con isoformas encontradas en Beta vulgaris, las cuales, han sido caracterizadas como isoformas con una expresin tejido especfica y con funciones importantes durante la respuestas a estrs por anoxia, fro y dao (Klotz y Haagenson, 2008). Las caractersticas del cDNAs y de la protena codificada por los genes, AhSuSy-1 y AhSuSy-2, se encuentran sealados en la Figura 1. Las sacarosa sintasas han sido clasificadas en cuatro grupos de acuerdo a su estructura gnica y los patrones de expresin (Komatsu et al., 2002). Con base en sta clasificacin, AhSuSy-1 y AhSuSy-2 fueron identificadas como miembros del grupo SUS-1 y SUS-A, respectivamente. El anlisis in silico de las protenas permite predecir que, adems, de presentarse una localizacin citoplsmica de AhSuSy-1, existe la probabilidad de que AhSuSy-2 tenga un localizacin plastidial. Esto resulta interesante porque esta isoforma de sacarosa sintasa podra estar implicada en otros procesos diferentes de la degradacin de sacarosa, como la regulacin de flujos de solutos hacia los organelos durante una situacin de estrs (Subbaiah et al., 2006).
3 UTR TGA

REGIN CODIFICANTE (ORF)

PROTENA

AhAGPS-1

AhSuSy-1: ORF: 2412 pb; Protena: 92.1 kDa y 811 aa AhSuSy-2: ORF: 2436 pb; Protena: 93.3 kDa y 803 aa AhSuSy-1 AhSuSy-2 Sacarosa sintasas. Distribucin de s acarosa entre rganos p roductores y c onsumidores; participa durante las respuesta a estrs por fro y anaerobiosis; y est involucrada en la sntesis celulosa y almidn.

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AhIN/A-1 AhIN/A-2*

AhIV-1: ORF: 1977 pb; Protena: 73.8 kDa y 658 aa Inver tasa vacuolar. Controla la composicin azcares en rganos de almacenamiento. Participa en procesos de osmoregulacin y alargamiento celular y, est involucrada en respuestas a estrs por fro (Koch, 2004).

AhIV-1

AhIP*

Figura 1. Caractersticas de los cDNAs y de las protenas codificadas por los genes de amaranto de grano involucrados en el metabolismo de sacarosa y almidn. (ORF = marco de lectura abierta [del ingls, Open Reading Frame]; pb = pares de bases; aa = aminocidos; * secuencias parciales).

DETERMINACIN DE LA SECUENCIA COMPLETA DE LOS CDNA DE LOS GENES DE INVERTASAS Las invertasas (EC 3.2.1.26, -fructosidase, -fructofuranosidase) catalizan la hidrlisis irreversible de la sacarosa a sus dos monmeros, glucosa y fructosa. stas cumplen diversas funciones en las plantas, incluyendo descarga del floema y distribucin de carbohidratos, participan durante la diferenciacin celular y desarrollo de la plantas y, tienen funciones especficas durante la respuesta a patgenos, heridas y/o diversos estmulos ambientales (Essmann et al., 2008; Roitsch y Gonzalez, 2004; Ruan et al., 2010). Estas enzimas estn agrupadas en dos subfamilias: 1) las invertasas cidas que incluyen las invertasas de pared celular (IP) y las invertasas vacuolares (IV) y, 2) las invertasas neutras/alcalinas (IN/A), las cuales se predice estn localizadas en el citosol, mitocondria o plastidios.

Teniendo en cuenta la importancia de esta familia de enzimas en las respuestas de la planta a heridas, infecciones por patgenos y herbivora por insectos, en este estudio de un total de 19 isoformas encontradas en el anlisis transcriptmico (Dlano-Frier et al., 2011), se obtuvo el cDNA completo de una IV (AhIV-1) y una IN/A (AhIN/A-1), junto con el cDNA parcial de una IP (AhIP) y una segunda IN/A (AhIN/A-2) (Figura 1). La seleccin de stas isoformas se realiz teniendo en cuenta el resultado del anlisis in silico del transcriptoma de amaranto (Dlano-Frier et al., 2011) y, la similitud de algunas de las secuencias con ortlogos ya caracterizados como sensibles a diversos tipos de estrs bitico y/o abitico. Los trminos empleados como pared celular, vacuolar, y citoslica son usados para describir la localizacin de las invertasas. El anlisis in silico predice que la isoforma IP, la cual presenta un dominio WECPDF es una protena
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secretoria con un secuencia de 25 aminocidos cuyos aminocidos son predominantemente hidrfobicos y forman un pptido seal. Este pptido seal es requerido para la insercin hacia el retculo endoplasmtico y la secrecin a membrana. Por otro lado, el anlisis de la isoforma AhIV-1, evidenci la presencia de una seal de anclaje a membrana, la cual, en otras especies de plantas, se ha pensado podra permitir un control ms preciso del destino y actividad de la protena (Rae et al., 2011). DETERMINACIN DE LA SECUENCIA COMPLETA DEL CDNA DEL GEN DE LA SUBUNIDAD PEQUEA DE LA ADP-GLUCOSA PIROFOSFORILASA (AHAGPS-1) La ADP-glucosa pirofosforilasa plastidial (AGP) cataliza la conversin de Glucosa-1-fosfato y ATP a pirofosfato inorgnico y ADP-glucosa, el sustrato para la almidn sintasa, y es una enzima regulatoria clave de la biosntesis de almidn. La AGP est compuesta de una subunidad grande y una subunidad pequea que son codificadas por diferentes genes. La protena activa es un tetrmero de 2 subunidades pequeas y 2 subunidades grandes. En amaranto hemos identificado el gen que codifica para la subunidad pequea (AhAGPS-1, ver Tabla 1) y 3 secuencias parciales para las subunidades grandes (AhAGPL1, L2, and L3). Adems de la sacarosa sintasa e invertasas, el anlisis de la AGP es de inters en este estudio considerando que la redistribucin de carbohidratos en respuesta a la defoliacin involucra cambios drsticos en la movilizacin y acumulacin de carbohidratos, incluido el almidn (Chen et al., 2009; Schwachtje et al., 2006). IDENTIFICACIN DE OTROS GENES PROBABLEMENTE RELACIONADOS CON LA TOLERANCIA DEL AMARANTO DE GRANO A LA PRDIDA DE TEJIDO FOLIAR Aunque en un principio en este proyecto slo se pretenda identificar y relacionar los genes descritos anteriormente con la tolerancia del amaranto a la herbivora, la obtencin del transcriptoma brind la posibilidad de ampliar el espectro de bsqueda. Es decir, se pudo
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identificar otros genes relacionados con la sntesis, movilidad, degradacin y sealizacin de carbohidratos que estaran influenciando las respuestas de tolerancia del amaranto al dao ocasionado por insectos masticadores. Dentro de este grupo de genes se puede citar algunos relacionados con la sntesis de almidn. En l se identificaron un total de 6 clases de almidn sintasas (AhSSI-VI). En este estudio se determinar la expresin de dos isoformas pertenecientes a la clase III y IV, ya que, tanto la SSIII como SSIV tienen un rol clave en la acumulacin de almidn en Arabidopsis (Ezquer et al., 2010). La almidn sintasa unida al grnulo (AhGBSSI), enzima responsable de la sntesis de amilosa en muchas especies de planta, se encuentra representada en el transcriptoma por dos isoformas; la isoforma elegida para su futuro estudio se encuentra inducida en el anlisis in silico realizado en A. hypochondriacus (DlanoFrier et al., 2011). Para estudiar la movilizacin de carbohidratos se identificaron de las 5 isoformas del transportador anti portador de glucosa-6-fosfato/fosfato inorgnico (AhG6PT), responsable de proporcionar glucosa-6-fosfato (G6P) desde el citosol a los plastidios no fotosintticos para la sntesis de almidn y cidos grasos; la isoforma elegida adems de encontrarse inducida en el anlisis transcriptmico, presenta una alta homologa (80%) con su ortlogo de papa, el cual es sobre-expresado por emisin de voltiles de Alternaria alternata (Ezquer et al., 2010). Otro transportador interesante que result fuertemente inducido por diferentes tipos de estrs (Dlano-Frier et al., 2011), es el intercambiador de fosfoenolpiruvato/ fosfato inorgnico (AhPPT). ste acarrea el fosfoenolpiruvato (PEP) desde el citosol hacia el cloroplasto y plastidios de tejidos no fotosintticos, para la biosntesis de cidos grasos y otros metabolitos. Un tercer gen, el transportador de sacarosa (AhSUT1) fue elegido por su induccin tanto por herbivora como por estrs hdrico y salino (Dlano-Frier et al., 2011). El tercer grupo incluye un gen encargado de la degradacin de almidn (AhBMY1), -amilasa, el cual llega estar inducido hasta dos veces por el tratamiento de herbivora descrito en el trabajo realizado por Dlano-Frier et al. (2011). Como gen de sealizacin, se trabajar con una posible protena cinasa del tipo serina/

Captulo VII. Respuestas moleculares y bioqumicas inducidas en Amaranthus cruentus en respuesta a la defoliacin por insectos herbvoros.

treonina, AhSnRK1, encargada de regular la expresin de genes y el metabolismo en respuesta a disponibilidad de carbono (Halford y Hardie, 1998; Tiessen et al., 2003). ANLISIS DE EXPRESIN Y NIVELES DE CARBOHIDRATOS Con el objetivo de confirmar que los genes seleccionados son parte de la respuesta de tolerancia a la defoliacin en A. cruentus, se inici el anlisis de expresin gnica por medio de PCR semi-cuantitativo para posteriormente llevar a cabo un PCR de confirmacin por tiempo real. Considerando adems, que las protenas pueden sufrir modificaciones post transduccionales, ser necesario determinar las actividades enzimticas tanto de las invertasas como de las sacarosas sintasas. De igual forma, ser indispensable conocer los niveles de carbohidratos no estructurales para de esta forma confirmar una posible redistribucin de carbohidratos como un efecto del ataque del herbvoro. Estos anlisis estn en proceso y slo se presentarn en este captulo los avances ms representativos. En un experimento realizado durante el otoo del ao 2009 en plantas de 30 das de edad de A. cruentus se observ que existe una induccin de los transcritos de AhAGPS, AhSuSy-2 y AhIV-1 por la accin del herbvoro masticador, S. recurvalis (Figura 2). Adems de observarse un incremento en la expresin del transcrito, AhAGPS, a los 5 y 30 das despus de haber transcurrido el dao (dpd), tambin es evidente una

represin a tiempos ms tempranos (0.5 y 1 dpd); indicndonos probablemente que la planta en lugar de sintetizar almidn de forma temprana, est produciendo hexosas adicionales para aumentar la produccin de compuestos defensivos o para exportarlas hacia otros tejidos como fuente de energa para los procesos de recuperacin a la defoliacin, como el rebrote de follaje. Esta propuesta coincide con en el incremento de expresin de AhIV-1 a un 1 y 5 dpd. Las otras isoformas de invertasas analizadas no cambian su expresin ni por desarrollo ni en respuesta al dao. Otro candidato interesante a formar parte de las respuestas defensivas en amaranto es la sacarosa sintasa 2, AhSuSy-2. Esta isoforma se ve inducida por herbivora a los 30 dpd (figura 2), posiblemente proporcionando la glucosa extra para la acumulacin de carbohidratos. Estos resultados nos llevan a postular que una de las formas de tolerancia en amaranto podra ser la acumulacin transitoria de almidn en tejidos de reserva menos vulnerables, como se observa en tallos de plantas sometidas a herbivora (Figura 3). Este proceso podra estar mediado por la accin conjunta de la invertasa vacuolar y la sacarosa sintasa 2. Para confirmar la posible acumulacin transitoria de almidn como mecanismo de tolerancia ser necesario concluir la evaluacin de todos los parmetros mencionados anteriormente, incluidos los anlisis enzimticos y los niveles de azcares como glucosa, fructosa y sacarosa.

Figura 2. Anlisis de expresin realizado en tallo por PCR semi-cuantitativo. C, control; H, herbivora; dpd, das posteriores a la defoliacin. Actina es empleado como control de carga.

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CONCLUSIONES El anlisis transcriptmico ha sido una herramienta til para el entendimiento de muchos de los mecanismos involucrados en respuestas de defensa y tolerancia en amaranto. Gracias a esta informacin, se ha podido
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de grano, que segn ha quedado demostrado por una abundante evidencia experimental, es sumamente eficiente (ver captulo VIII).

Control * Hervivora

umol/gPF

0.5

30

dpd

Figura 3. Niveles de almidn detectados en tallo de plantas de A. cruentus despus de diferentes post herbivora con larvas de S. recurvalis. * P < 0.001

identificar toda una gama de genes interesantes que probablemente estn participando dentro del mecanismo de tolerancia a la prdida de tejido foliar. Tomando en consideracin que las respuestas de defensiva/tolerancia son procesos multignicos y bioqumicos complejos, con los datos obtenidos hasta ahora no ha sido posible aclarar la estrategia de tolerancia del amaranto. Sin embargo, la induccin de AhIV-1 y de SuSy2, junto a la acumulacin de almidn en tallo observada en los experimentos aqu reportados, nos ha dado un indicio de que, en efecto, estos genes estn involucrados en el proceso de tolerancia a la defoliacin en A. cruentus, el cual podra basarse en la acumulacin transitoria de reservas de C en tejidos no expuestos al insecto, como tallo (Figura 3) y raz (CastrillnArbelez P, resultados no mostrados). El anlisis de expresin del resto de los genes propuestos anteriormente, as como datos bioqumicos sobre la cambios en actividad enzimtica de protenas sucrolticas y en los niveles de carbohidratos no estructurales nos darn una idea ms clara del proceso de tolerancia a la defoliacin en amaranto
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AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por la Unin Europea (Proyecto AMARANTH: FUTURE-FOOD, Contrato No. 032263), Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. Se agradece tambin al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) por el apoyo econmico otorgado a PACA para la realizacin de este proyecto (Beca No. 228820). BIBLIOGRAFA Aragn-Garca A, M A D Huato, M H Lara, F Senz-de-Cabezn, I Prez-Moreno, V Marco-Mancebn, J F Lpez-Olgun (2011) Insect occurrence and losses due to phytophagous species in the amaranth Amaranthus hypocondriacus L. crop in Puebla, Mexico. African Journal of Agricultural Research 6: 5924-5929.

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Captulo VIII

La defoliacin por dao mecnico y herbivora en Amaranthus cruentus L. induce simultneamente respuestas de tolerancia y resistencia
DEFOLIATION BY HERBIVORY AND MECHANICAL DAMAGE TRIGGERS SIMULTANEOUS RESISTANCE AND TOLERANCE RESPONSES IN Amaranthus cruentus L.

Erandi Vargas-Ortiz1, Axel Tiessen1, John Dlano-Frier1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas (Cinvestav- Irapuato), Km 9.6 del Libramiento Norte Carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx Telfono: (52) 462 39636 o 462 39600 FAX: (52) 462 45996 or 462 39611

RESUMEN El amaranto es una planta considerada tolerante a la herbivora, aunque la evidencia al respecto es escasa. Datos experimentales indican que en amaranto se presentan respuestas tanto de tolerancia como de resistencia a la herbivora, pero no hay informacin sobre los efectos de estas respuestas sobre la productividad. Con la finalidad de analizar estos efectos, se realizaron experimentos de defoliacin causada tanto por herbivora como por dao mecnico (H + D) en plantas de A. cruentus, en invernadero, durante dos aos consecutivos. Se tomaron datos de rendimiento, altura, peso fresco areo y de raz. Los efectos de los tratamientos sobre la calidad y viabilidad de semilla se analizaron determinando su composicin y porcentaje de germinacin. El tratamiento H + D afect negativamente todos los parmetros medidos. Particularmente, el rendimiento de semilla disminuy un 30% respecto a las plantas control, aunque no se encontraron diferencias en su composicin. Durante estos experimentos se observaron caractersticas tpicas de plantas tolerantes, como cambios en la arquitectura de la planta. En un experimento adicional realizado posteriormente, se analizaron los cambios inducidos a corto y

mediano plazo en los niveles de carbohidratos en hoja, tallo y raz por en plantas sometidas a herbivora. Tambin se cuantificaron los niveles de expresin y de actividad de un inhibidor de tripsina tipo Kunitz, en hojas. La herbivora, caus cambios significativos en los niveles de carbohidratos desde tiempos tempranos, principalmente en hoja, coincidiendo con la expresin y actividad de los inhibidores de tripsina. Los datos de sugieren que en A. cruentus se presentan tanto mecanismos de resistencia como de tolerancia a la herbivora. Los primeros representan costos metablicos que se reflejan en una menor produccin de semilla y biomasa, mientras los segundos permiten a la planta generar semillas viables a pesar de los efectos negativos de la defoliacin. Palabras clave: A. cruentus, dao mecnico, defoliacin, herbivora, resistencia, tolerancia. ABSTRACT Amaranth is considered to be an herbivorytolerant plant, but evidence to support this claim is scant. Previous experimental data suggest that grain amaranth uses both resistance and tolerance mechanisms to cope with herbivory,
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but there are no studies showing the fitness penalties that this double mechanism might impose on the damaged plants. In order to gain a better understanding of this particular strategy, plants of A. cruentus were subjected to mechanical defoliation combined with herbivory. Experiments were done under greenhouse conditions during two consecutive years, in which yield, plant height, and root and shoot fresh weight data were collected. The effects of the treatments on seed quality and viability were assessed via germination assays and analysis of its composition. When mechanical damage was combined with herbivory, amaranth plants showed tolerance traits manifested as changes in plant architecture. In an additional experiment, short- and mid-term changes in sugars levels induced by insect herbivory alone were enzymatically assayed in leaf, stem and root. Also, the expression of a Kunitz inhibitor and total in vitro trypsin inhibitor activity were measured in leaves. Insect herbivory, rapidly modified carbohydrate composition, as changes were detected just a few hours after the beginning of the treatment, mainly in leaf tissue. These changes coincided with the kinetics of expression and activity of trypsin inhibitors. This data suggest that A. cruentus uses both resistance and tolerance mechanisms to cope with herbivory. The former could involve metabolic costs which were probably reflected in reduced biomass and seed yield, whereas the latter may help the plant to ensure reproductive success by producing viable seeds showing no alteration in their composition. Key words: A. cruentus, defoliation, herbivory, mechanical damage, resistance, tolerance. INTRODUCCIN Las plantas que estn continuamente expuestas a los herbvoros han desarrollado toda una serie de estrategias para sobrevivir a la herbivora. Una de estas estrategias es la resistencia inducida, en la cual la planta produce una variedad de compuestos de defensa que afectan al herbvoro ya sea de manera directa (e.g. toxinas, compuestos disuasivos, protenas inhibitorias, etc.) o indirecta (e.g. compuestos voltiles
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capaces de atraer a depredadores o parasitoides del insecto agresor) (Felton y Tumilson, 2008; Howe y Jander, 2008). Otra estrategia utilizada es la tolerancia, que se define como la habilidad que presenta la planta para disminuir los efectos negativos sobre su desarrollo y reproduccin despus de la herbivora (Strauss y Agrawal, 1999). En general se considera que la tolerancia es una estrategia menos costosa para la planta, pues no invierte recursos en la produccin de defensas (Stowe et al., 2000). Los mecanismos de tolerancia incluyen cambios fisiolgicos como la activacin de meristemos, modificacin en la arquitectura de la planta, cambios en la actividad fotosinttica y redistribucin de reservas de carbono (C) y en ocasiones de nitrgeno (N), entre otros (Leimu y Koricheva, 2006; Schwachtje y Baldwin, 2008) El amaranto es una planta que se considera tolerante a la herbivora, aunque hay pocos datos experimentales al respecto. En campo se ha observado que la defoliacin mecnica de Amaranthus hypochondriacus incrementa la produccin de semilla (Moreno et al., 1999). En A. cruentus y A. hypochondriacus se ha visto que defoliacin del 50% en la etapa de floracin no disminuye el rendimiento e incluso en algunas variedades lo mejora (Vargas-Ortiz E., datos no publicados) Estudios realizados con A. hybridus sugieren que la distribucin de recursos a la raz antes de la floracin es el principal mecanismo por el que esta especie tolera la herbivora (Gassman, 2004; Weaver y McWilliams, 1980). Sin embargo, tambin en A. hypochondriacus se han encontrado respuestas de defensa en condiciones de herbivora y mediante la aplicacin de jasmonatos (Dlano-Frier et al., 2004; Snchez-Hernndez et al., 2004) Con base en la informacin anterior, se plantea que en amaranto ocurren mecanismos tanto de resistencia como de tolerancia, afectando de forma diferente la produccin de semilla. Los objetivos de este estudio consistieron en identificar los mecanismos de resistencia y tolerancia a corto y mediano plazo en plantas de amaranto sometidas defoliacin por herbivora y por combinacin de esta con dao mecnico. Tambin, se analiz el efecto de dichas respuestas en la produccin y composicin de la semilla.

E.Vargas-Ortiz et al.

Captulo VIII. La defoliacin por dao mecnico y herbivora en Amaranthus cruentus L. induce simultneamente respuestas de tolerancia y resistencia

MATERIALES Y MTODOS MATERIAL BIOLGICO Para cada uno de los experimentos descritos ms adelante, se utilizaron plantas de A. cruentus var. Tarasca. Las semillas se sembraron en charolas de germinacin de 100 pozos en mezcla de germinacin (pasta de coco: mezcla general en relacin 1:1), las cuales se mantuvieron inicialmente en un cuarto de crecimiento con una humedad relativa del 75% y una temperatura de 26C. A los 20 das de crecimiento las plntulas se trasplantaron a macetas de 18 L en mezcla general (tierra de hoja, limo, Sunshine Mix 3, vermiculita y perlita en relacin 2:1:3:1:1).y se fertilizaron con 400 mL del fertilizante 20-1020 Florida Special (Scotts Company, EUA) siguiendo las especificaciones del fabricante. Las plantas se mantuvieron en un invernadero comercial (modelo baticenital, ACEA, Mxico) en condiciones de temperatura de 10-35 C (mnima nocturna y mxima diurna, respectivamente) y humedad relativa promedio de 55%, hasta el final de cada experimento. Para el experimento de dao mecnico y herbivora las larvas utilizadas fueron Spodoptera ssp., Pholisora catullus, Spoladea recurvalis y Estigmene acrea colectadas en el campo experimental de amaranto establecido en Valencianita, Irapuato, Guanajuato, del ao 2007 al 2009. EXPERIMENTO DE HERBIVORIA Y DAO MECNICO Plantas de 30 das fueron sometidas a herbivora por larvas comunes al cultivo de amaranto (Spodoptera ssp, P. catullus, S. recurvalis y E. acrea). Se permiti que tres larvas por planta se alimentaran libremente durante tres das (28 a 30 agosto 2007). Las plantas se cubrieron con mallas para evitar que las larvas daaran otras plantas. Durante este tiempo, las plantas control tambin estuvieron cubiertas con el mismo tipo de malla. Transcurridos los tres das, se retiraron las mallas y las larvas. Con un sacabocados se termin de daar la planta, hasta la eliminacin de un tercio de rea foliar total (30 de agosto de 2007). Los muestreos se realizaron a 1, 30, 60 y 110 das despus de terminar el tratamiento de defoliacin (31 de agosto, 29 de septiembre y 18 de diciembre 2007). En estas fechas se midieron

los parmetros fenolgicos de seis plantas control y de seis plantas tratadas. Los datos tomados fueron altura, pesos frescos de la raz, la parte area y cuando era correspondiente, de la inflorescencia. En la ltima fecha de muestreo se cort la panoja y se dej secar en condiciones de invernadero. Las semillas de cada panoja se separaron y se limpiaron para determinar el rendimiento. El experimento se repiti en el ao 2008, con la misma temporalidad y con resultados similares. EXPERIMENTO DE HERBIVORA Plantas de 30 das fueron sometidas a herbivora por S. recurvalis. Se permiti que tres larvas por planta se alimentaran por tres das (26 a 29 noviembre 2010). Durante este tiempo las plantas daadas y control permanecieron cubiertas con mallas. Para revisar respuestas tempranas, se realizaron muestreos a las 3, 6, 12, 24 y 48 horas de haber colocado las larvas sobre las plantas. En estos tiempos las larvas se retiraron de la planta y se colectaron hojas daadas, tallo y raz de cinco plantas daadas y cinco plantas control. Los tejidos se congelaron inmediatamente en N2 lquido y se mantuvieron a -80C para su uso posterior. En el resto de las plantas las larvas se retiraron al tercer da y se realizaron tres muestreos ms a los 2, 12 y 27 das de haber retirado las larvas y equivalentes a 5, 15 y 30 das despus de iniciado el experimento. ANLISIS BIOQUMICO Actividad y expresin de inhibidores de tripsina La extraccin y actividad de inhibidores de tripsina se realiz como se describe en Snchez-Hernndez et al. (2004), con algunas modificaciones. La extraccin se realiz a partir de 50 mg de tejido liofilizado en 1ml de solucin de extraccin (50 mM Tris-HCl pH 7.8, 1.7 mM tiourea, 0.3 M KCl 4 mM cido ascrbico y 7% PVP). El tejido re-suspendido se mantuvo en agitacin 15 min a 1200 rpm y 4C. Las muestras se centrifugaron a 13000 rpm, 15 min a 4C, el sobrenadante se separ en un tubo nuevo y se mantuvo en hielo para su uso inmediato. La actividad de inhibidores de tripsina se realiz como se describe en Erlanger et al. (1961), utilizando N--benzoil-L-arginina-pnitroanilida (BApNA; Sigma-Aldrich Chemical)
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

como sustrato y tripsina extrada de larvas de Prostephanus truncatus, un insecto coleptero conocido como una de las plagas ms severas de grano almacenado en ciertas regiones del mundo, incluyendo Mxico. La tcnica se adapt a formato de microplaca. Tambin se evalu la expresin de un inhibidor de tripsina tipo Kunitz por ensayos tipo Northern blot. La sonda empleada para su deteccin por este mtodo sonda se obtuvo de bibliotecas sustractivas de plantas sometidas a herbivora por insectos masticadores (Fomsgaard et al., 2010). Determinacin de azcares solubles y almidn. La extraccin de azcares solubles (sacarosa, glucosa y fructosa) se realiz como se describe en Wright et al. (1998), con algunas modificaciones. Brevemente, 20 mg de muestra liofilizada se extrajeron en 50 mM Hepes KOH (pH 7.4); 5 mM MgCl2 en 80% etanol a 80C. La extraccin se repiti tres veces y al final se combinaron los extractos. Se tom una alcuota del extracto final para la determinacin enzimtica de glucosa, fructosa y sacarosa en formato de microplaca de acuerdo a ngelesNuez y Tiessen (2010). El almidn se determin adaptando la metodologa de Geingerbeger et al. (1998). De forma breve, la pastilla que qued despus de la extraccin de azcares se resuspendi en 0.5 ml 10 mM KOH y se llev a autoclave (120C y 1.5 atm) por 30 min. El almidn se hidroliz con 10 unidades de amilasa (EC, 3.2.1.1; Tipo VI-B de pncreas porcino, Sigma) y 10 unidades de amiloglucosidasa (EC 3.2.1.3; de Aspergillus niger, Sigma) en solucin amortiguadora de acetato de sodio 50 mM pH 5.5, a 37C durante toda la noche. La muestra se centrifug a 4500 rpm por 5 min para recuperar el sobrenadante. La pastilla se hidroliz nuevamente durante 30 min y se centrifug. Ambos sobrenadantes se combinaron y se tom una alcuota para la determinacin enzimtica de almidn, en forma de glucosa, en formato de microplaca. Determinacin de metabolitos en semilla. Para determinar la calidad de la semilla producida se tom el peso de 100 semillas por triplicado de cinco plantas de cada tratamiento. Estas mismas semillas se desinfectaron y
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se germinaron en papel filtro estril para determinar el porcentaje de germinacin. Para la determinacin de la composicin de semilla, muestras de semilla de cada planta se molieron y la harina se utiliz para la determinacin de almidn, protena y lpidos totales. La determinacin de almidn se realiz como se describe anteriormente, eliminando los azcares solubles con una extraccin etanlica. La extraccin de lpidos se realiz va hexano. Para ello, 500 mg de harina se extrajeron en 1 mL de hexano a 1000 rpm y 90C por 10 min, usando un mezclador trmico. La muestra se centrifug a 13200 rpm y se recuper el sobrenadante en un vial previamente pesado. La extraccin se realiz dos veces ms con 0.75 mL de hexano, combinando al final los tres sobrenadantes. El hexano se evapor y el vial se pes nuevamente, para obtener la diferencia entre el vial vaco y con los lpidos recin extrados. La cuantificacin de protena se realiz por la tcnica de Bradford (Protein assay, Bio-Rad) de acuerdo a las especificaciones del fabricante, a partir de un extracto de protena total de harina libre de lpidos, tal y como se describe en Silva-Snchez et al. (2008). ANLISIS ESTADSTICO El anlisis de las diferencias entre tratamientos se realiz mediante ANOVA. En aquellos anlisis donde el valor de F fue significativo a P 0.5 se aplic la prueba de Tukey. El anlisis se realiz con el programa R, versin 2.14.1 (R Development Core Team, 2011). RESULTADOS Y DISCUSIN EFECTO DE LA DEFOLIACIN SOBRE EL DESARROLLO DE LA PLANTA Los resultados muestran que se encontraron diferencias significativas en el rendimiento, altura de planta, peso fresco areo, de raz y de panoja como efectos de la defoliacin por herbivora y dao mecnico (H+D). Como se observa en la Figura 1, la defoliacin de ~30% por herbivora en combinacin con dao mecnico, provoc una disminucin significativa en todos los parmetros medidos, especialmente en los pesos frescos de la parte area, la raz y la panoja. Este efecto se mantiene durante todo el desarrollo de la planta y culmina con una reduccin

Captulo VIII. La defoliacin por dao mecnico y herbivora en Amaranthus cruentus L. induce simultneamente respuestas de tolerancia y resistencia

significativa del 12% de altura de planta y 44, 46 y 40% del peso de tejido areo, raz y panoja, respectivamente. Los efectos de la defoliacin tambin se observaron en la fenologa y arquitectura de
350 300 Peso fresco (g) 250 200 150 100 50 0 175 150 Peso fresco (g) 125 100 75 50 25 0 13 06 01 10

la planta. La emergencia de la panoja se retard en las plantas tratadas con H+D. A los 30 das de tratamiento, todas las plantas control tenan una panoja con un peso promedio de 18 g, en contraste con las plantas tratadas, en las cuales
100

Parte Area

**
80 Peso fresco (g)

***

Raz

***

**

60 40

20 0

13

06

110

Panoja

*
Altura (cm)

150

Altura

*
100

**
50

*
13 06 Control H+D 01 10

13

06 Control H+D

01

10

Figura 1.Efecto de la defoliacin causada por una combinacin de herbivora y dao mecnico sobre el crecimiento de A. cruentus. Se muestran los pesos frescos de la parte area (a), raz (b) y panoja (c), as como la altura de las plantas (d). Cada barra representa el promedio de 12 plantas con su error estndar. * P 0.05, ** P 0.01, *** P 0.001.

a)

Control

H+D

b)

c)

Figura 2. Comparacin del desarrollo en plantas control y plantas defoliadas por herbivora en combinacin con dao mecnico (H+D). Se muestran plantas a 30 das post tratamiento (a) y 60 das post tratamiento (b y c). E.Vargas-Ortiz et al.

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la panoja apenas emerga y su peso promedio fue de 6 g (Figura 2a). Adems del retraso en el crecimiento de la panoja, tambin se observ ramificacin en algunas de las plantas tratadas (Figura 2c). En estas plantas cada ramificacin gener una panoja, posiblemente por prdida de dominancia apical o como una respuesta de la planta para recuperar el rea foliar perdida, en contraste con las plantas control, que generaron una panoja nica (Figura 2b y 2c). La disminucin de las caractersticas fisiolgicas medidas como efecto del tratamiento es una consecuencia ampliamente observada en plantas que presentan resistencia a la herbivora. Esta disminucin del estado fisiolgico ptimo de la planta se explica por el la inversin de recursos destinados a crecimiento a la produccin de compuestos de defensa (Kessler y Baldwin, 2002; Kaplan et al., 2009). Sin embargo, en las plantas daadas tambin se observaron efectos, que son comunes a plantas tolerantes a la herbivora, como son la generacin de ramificaciones y el retraso en la floracin ocasionados por la respuesta de la planta a fin de recuperar el rea foliar perdida, los brotes laterales producen hojas nuevas y evidentemente florecen y maduran ms tarde; estos resultados concuerdan con los

EFECTO DE LA DEFOLIACIN SOBRE LA PRODUCCIN DE SEMILLA Una caracterstica importante para considerar tolerante un genotipo, es el efecto que produce el dao sobre la produccin de semillas y su viabilidad en comparacin con plantas no daadas (Stowe et al., 2000). En el presente estudio a pesar de la disminucin en el peso fresco y seco de la panoja en ~46% por la defoliacin, el decremento de la produccin de semilla por planta fue slo en ~30%. Como se muestra en el Cuadro 1, no se encontraron diferencias significativas en los niveles de almidn, protena y lpidos en las semillas de plantas control y defoliadas. El porcentaje de germinacin tampoco fue diferente entre semillas producidas en plantas controles y tratadas (77% 2.5 y 79% 2.5, control y tratada, respectivamente), por lo que se puede establecer que al menos en las condiciones de este experimento la calidad del grano se mantiene a pesar del dao por hervibora y defoliacin. Puesto que la calidad y viabilidad de la semilla no fue modificada por la exposicin al dao, se puede sugerir que el amaranto fue capaz de tolerar el dao por H+D impuesto en el experimento.

Cuadro 1. Produccin, peso y composicin de semillas. Se determin la produccin de semilla por planta, el peso de 100 semillas y los niveles de almidn, protena y lpidos de plantas control y defoliadas (H+D). Los promedios se realizaron con una n = 12. Letras diferentes representan diferencia significativa a P 0.05.

Tratamiento Semilla / 100 Semillas planta (g) (mg) a Control 19.8 2.2 79.4 0.6a 13.6 1.8 b 79.0 2.5a H+D
reportados anteriormente, donde se seala que el incremento de las tasa fotosinttica despus del dao, altas tasas de crecimiento para compensar la prdida de rea foliar, acumulacin de reservas de C y la capacidad de movilizarlas despus del dao, re-absorcin de N y fsforo de hojas senescentes o daadas e incremento en la eficiencia reproductiva a travs de mayor rendimiento de semilla o nmero de frutos son algunas otras respuestas encontradas en plantas que presentan tolerancia hacia la herbivora (Strauss y Agrawal, 1999; Dlano- Frier et al., 2012).

Protena Lpidos % % a 7.6 3.8 a 12.9 0.7 13.9 0.3 a 6.7 4 a


En conjunto, los resultados obtenidos indican que si bien el tratamiento de H+D tuvo efectos negativos sobre las plantas de amaranto, la planta fue capaz de responder al tratamiento de tal manera que la prdida en produccin no fuera total y que la semilla producida presentara la misma calidad y viabilidad que la semilla generada por una planta sin dao. Por lo anterior, se sugiere que la respuesta observada puede estar dirigida por mecanismos de tolerancia tales como la activacin de meristemos, observado en la generacin de ramificaciones y hojas e inflorescencias nuevas, as como modificacin en la distribucin de nutrientes que permiten mantener la semilla viable.

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REDISTRIBUCIN DE AZCARES EN RESPUESTA A LA HERBIVORA Con la finalidad de establecer si la herbivora genera cambios en la distribucin de carbohidratos en amaranto, se analizaron los niveles de los principales carbohidratos solubles (sacarosa, glucosa y fructosa) y almidn. Plantas de ~45 das fueron sometidas a herbivora con tres larvas de S. recurvalis durante tres das. Se analiz tejido de hoja, raz y tallo a diferentes tiempos tras colocar el herbvoro en la planta. Como se observa en las Figuras 3, 4 y 5, los niveles de almidn son los ms altos en todos los tejidos analizados. Adems de esto, en cada tejido vari la abundancia de azcares solubles. En hoja y raz principalmente se detect sacarosa (Figura 3 y 5), mientras que en tallo el principal azcar soluble fue glucosa (Figura 4). La herbivora modific la distribucin de azcares en varios tejidos de la planta, incluso a tiempos cortos. En hojas, se present una disminucin en los niveles de hexosas principalmente de glucosa, a partir de las 6 hrs despus del inicio de la herbivora, y permaneci as hasta 48 hrs despus. En los tiempos posteriores, cuando las larvas ya haban
40 35 30 mol/gPS 25 20 15 10 5 0 36 12 24 48 1203 60 720

sido retiradas de las planta, no se encontraron cambios en los niveles de glucosa (Figura 3a). De igual manera, la herbivora disminuy los niveles de almidn en hoja a las 6 y a las 12 hrs de iniciar la herbivora. Al igual que en glucosa, no se detectaron cambios en los niveles de almidn despus de haber retirado las larvas de la planta, excepto por la disminucin observada 120 hrs despus de iniciado el tratamiento (Figura 3d). Al igual que en hoja, en tallo los niveles de hexosas y almidn disminuyeron por la herbivora, pero los cambios fueron observados despus de tiempos ms largos. Para glucosa los cambios fueron evidentes a 120 y 360 hrs despus de haber iniciado la herbivora; es decir, cuando las larvas ya no se encontraban en la planta (Figura 4a). Los niveles de fructosa disminuyeron al tiempo de retirar las larvas y se mantuvieron as hasta 360 hrs despus del inicio de la herbivora. Por su parte, los niveles de almidn presentaron una tendencia a aumentar despus de una evidente disminucin 48 hrs despus de iniciado el tratamiento. Inclusive, al final de ste (720 hrs), los niveles de almidn resultaron ser significativamente ms altos en tallos de plantas tratadas.
30 25 20 15 10 5 0

Glucosa

Fructosa

mol/gPS

** * * *

* **

36

12

24

48

120

360

720

Sacarosa
70 60 mol/gPS 50 40 30 20 10 0 36 12 24 48 1203 60 720 700

Almidn

*
mol/gPS

600 500 400 300 200 100 0 36 12 24 48 1203 60 720

*** *

Control

Herbivora

Control

Herbivora

Figura 3. Cambios en los niveles de azcares solubles y almidn en hojas de plantas defoliadas por insectos herbvoros. Se midieron los niveles de glucosa (a), fructosa (b), sacarosa (c) y almidn (d) en hojas de amaranto a tiempos tempranos (3 a 24 hrs despus de iniciar la herbivora) y mediano plazo (48 a 720 hrs despus de iniciar la herbivora) en plantas control y con herbivora. Las barras representan el promedio de cinco plantas con error estndar. * P 0.05, ** P 0.01, *** P 0.001.

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180 160 140 mol/gPS 120 100 80 60 40 20 0 12 24 48 1203 60 7201 0 22 44 81 20 3607 20

Glucosa

100

Fructosa

*
mol/gPS

80 60 40 20

***

100 80 mol/gPS

Sacarosa

400 350 mol/gPS 300 250 200 150 100 50

Almidn

* *

60 40 20 0

12

24

48

120

360

720

12

24

48

120

360

720

Control

Herbivora

Control

Herbivora

Figura 4. Cambios en los niveles de azcares solubles y almidn en tallos de plantas defoliadas por insectos herbvoros. Se midieron los niveles de glucosa (a), fructosa (b), sacarosa (c) y almidn (d) en tallos de amaranto a tiempos tempranos (3 a 24 hrs despus de iniciar la herbivora) y mediano plazo (48 a 720 hrs despus de iniciar la herbivora) en plantas control y con herbivora. Las barras representan el promedio de cinco plantas con error estndar. * P 0.05, ** P 0.01, *** P 0.001.

A diferencia del resto de los tejidos, en raz slo se modificaron los niveles de sacarosa, con tendencia a disminuir en plantas tratadas a partir de tiempos cortos, aunque la cada en sacarosa slo result significativa a mediano plazo (Figura 5b). A su vez, los niveles de almidn presentaron tendencia similar hacia una disminucin en sus niveles, aunque est fue ms tarda y slo alcanz se hizo significativa hasta las 720 h (Figura 5d). Los cambios en los niveles de azcares indican que en amaranto existe una importante reserva de C, en forma de almidn, en todos los tejidos de la planta, que ante estmulos determinados, como defoliacin por herbivora, es capaz de movilizarse para ser utilizada en procesos de recuperacin de rea foliar y de formacin y mantenimiento de estructuras reproductivas. Esto constituira un mecanismo clsico de tolerancia hacia la defoliacin por insectos herbvoros. En general, la herbivora por S. recurvalis en amaranto provoc la disminucin de los niveles de azcares, principalmente de hexosas. El tejido principalmente afectado fue la hoja, en donde los cambios se observaron desde tiempo tempranos (Figura 3). En lamo y tabaco silvestre se ha observado que los cambios
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en los niveles de azcares en hojas despus de tiempos cortos pueden estar relacionados con una redistribucin de stos, no slo para privar al herbvoro de nutrientes carbonados, sino para movilizarlos hacia tejidos menos vulnerables a un insecto folvoro, como tallo y raz (Babst et al., 2005; Schwachtje et al., 2006). En contraste directo, se ha observado tambin que en lamo la herbivora puede influir sobre el metabolismo primario y las reservas de C, desvindolos hacia la sntesis de compuestos de defensa, como compuestos fenlicos txicos para el insecto (Arnold et al., 2004). En comparacin con el dao por herbivora, la defoliacin por dao mecnico de menos de 50% del tejido foliar no provoc modificacin alguna en los niveles de azcares en ninguno de los tejidos analizados (VargasOrtiz E, datos no publicados). Varios estudios han demostrado que la defoliacin mecnica es en muchas ocasiones una imitacin pobre de la prdida de tejido foliar causada por insectos herbvoros, principalmente masticadores (Baldwin, 1990). sta modifica la expresin gnica, la actividad enzimtica y los niveles de metabolitos similares, de una manera que es propia de la herbivora (Reymond et al., 2000). Esta diferencia fundamental se debe

Captulo VIII. La defoliacin por dao mecnico y herbivora en Amaranthus cruentus L. induce simultneamente respuestas de tolerancia y resistencia
Glucosa
100 80 mol/gPS 60 40 20 0 250 200 mol/gPS 150 100 50 0 mol/gPS 16 14 12 10 8 6 4 2 12 24 48 1203 60 7201 0 22 300 250 4 48 1203 60 720

Fructosa

Sacarosa

Almidn

mol/gPS 60 720

200 150 100 50

12

24

48

1203

12

24

48

120

360

720

Control

Herbivora

Control

Herbivora

Figura 5. Cambios en los niveles de azcares solubles y almidn en raz de plantas defoliadas por insectos herbvoros. Se midieron los niveles de glucosa (a), fructosa (b), sacarosa (c) y almidn (d) en tallos de amaranto a tiempos tempranos (3 a 24 hrs despus de iniciar la herbivora) y mediano plazo (48 a 720 hrs despus de iniciar la herbivora) en plantas control y con herbivora. Las barras representan el promedio de cinco plantas con error estndar. * P 0.05, ** P 0.01, *** P 0.001

principalmente a los compuestos presentes en la saliva del herbvoro, aunque otros factores que se generan durante la interaccin de stos con la planta, como dao sobre la superficie al moverse, la deposicin de heces u orina del y/o la dispersin de patgenos tambin podran tener influencia sobre la respuesta (McCloud y Baldwin, 1997; Walling, 2000; Halitschke et al., 2003; Weech et al., 2008). Estas diferencias pueden ser la causa de que en hojas daadas con D+H se afecten los niveles de azcares desde tiempos tempranos y en muchas ocasiones, slo durante el tiempo que la larva permanece en la planta. EXPRESIN Y ACTIVIDAD DE INHIBIDORES DE TRIPSINA Una de las respuestas ms comunes de resistencia hacia la herbivora por insectos masticadores es el incremento en la actividad e inhibidores de proteasas. Estas protenas proveen una efectiva proteccin a la planta ya que tienen fuertes efectos negativos en la nutricin de varios insectos y otras plagas, como caros, con la consecuente disrupcin de sus procesos normales de desarrollo (Habib y Fazili, 2007; Haq et al., 2004). En A. hypochondriacus se ha observado el

incremento de actividad inhibitoria mediante la aplicacin de cido jsmonico (Dlano-Frier et al., 2004), metil-jasmonato y herbivora (Snchez-Hernndez et al., 2004). Con la finalidad de analizar las respuestas de defensa hacia la herbivora en amaranto, se midieron los niveles de expresin de un inhibidor de tripsina tipo Kunitz (Figura 6), as como la actividad total de inhibidores de tripsina en hojas (Figura 7). La expresin del inhibidor tipo Kunitz de amaranto, se analiz mediante un ensayo tipo Northern blot a partir de muestras hoja de las plantas sometidas a herbivora por S. recurvalis durante tres das. Como se muestra en la Figura 6, la expresin del inhibidor se increment desde 6 hrs de iniciada la herbivora, encontrando su mxima expresin a 120 hrs despus de iniciar el tratamiento (dos das despus de retirar las larvas de la planta). La actividad de inhibidores de tripsina se muestra en la Figura 7. Como se puede observar, la actividad se increment 6 horas despus de iniciar el tratamiento y alcanz su mximo 120 hrs despus, dos das despus de haber retirado a los herbvoros de la planta. Cabe hacer notar que la actividad inhibitoria de
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Figura 6. Cambios en la expresin de inhibidores de tripsina tipo Kunitz en hojas de plantas defoliadas por insectos herbvoros. El ensayo de expresin tipo Northern blot se realiz a partir de muestras de hoja tomadas a diferentes tiempos despus de iniciar la herbivora (3 a 48 hrs) y despus de retirar las larvas tras 3 das de herbivora continua (120 y 360 hrs).

tripsina coincide con la expresin del inhibidor de tripsina tipo Kunitz. En plntulas de A. hypochondriacus se ha observado que la actividad inhibitoria de tripsina y -amilasa incrementa con aplicacin de metil jasmonato y con la exposicin de las plantas a herbivora con Tricoplusia ni, un insecto masticador. Sin embargo la actividad de estos inhibidores no aument mediante la aplicacin de dao mecnico o herbivora con Manduca sexta, otro insecto masticador (Snchez-Hernndez et al., 2004). Esto sugiere
40 30 20

Adems de las respuestas de defensa temprana y sus costos, se encontraron respuestas relacionadas con la tolerancia a la defoliacin, como incremento de la ramificacin y produccin de semilla con la misma calidad y viabilidad que plantas sin dao (Figura 2 y Cuadro 1). Esto no es poco habitual, ya que hay evidencias experimentales que muestran que algunas especie de plantas tienen el potencial de expresar simultneamente respuestas de resistencia y de tolerancia al ser daadas por sus enemigos naturales (Rausher, 2001). Esto suele
Actividad Inhibitoria de Tripsina
**
Ui /mgPS 200 300

Actividad Inhibitoria de Tripsina

Ui /mgPS

100 10

*
0 3 61 2 24 48 120 360 0

Control

Herbivora

Control

Herbivora

Figura 7. Cambios en la actividad inhibitoria contra tripsina en hojas de plantas de amaranto sometidas a herbivora por insectos masticadores. La Inhibicin de tripsina de larvas de Prostephanus truncatus, o gran barrenador de los granos, se realiz con extractos de hoja de amaranto de plantas control y sometidas a herbivora. La actividad se reporta como unidades de inhibicin por miligramo de peso seco. Las barras representan el promedio de tres plantas con error estndar. Significancia para Prueba T, * P 0.05, ** P 0.01, *** P 0.001

fuertemente que la induccin de actividad inhibitoria tambin es dependiente del tipo de herbvoro. En algunos cultivos se ha demostrado que la induccin de las respuestas de defensa representa un costo metablico muy alto, el cual se ve reflejado en la disminucin de muchos parmetros fisiolgicos (Kaplan, 2009). En amaranto, la induccin de respuestas de defensa temprana como el incremento en la actividad de inhibidores de tripsina (Figura 7) podra estar incurriendo en costos metablicos para la planta al utilizar C y N para su sntesis. sto explica en cierta manera que en el experimento de H+D ocurriera la prdida de biomasa y productividad (Figura 1) y que se modificaran los niveles de hexosas en hoja (Figura 3), los cuales no se observaron cuando slo se aplic la defoliacin mecnica.
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ocurrir cuando los recursos disponibles para las respuestas de defensa son limitados, o bien, cuando ambas estrategias son fisiolgicamente costosas (Leimu & Koricheva, 2006), tal y como sucedi en el presente estudio. En experimentos de defoliacin total se ha observado una disminucin de almidn de hasta del 70% con respecto a plantas control, a tan solo 24 hrs de terminar el tratamiento. Es muy probable que los altos niveles de este carbohidrato en todos los tejidos de la planta y su rpida movilizacin permitan que las plantas defoliadas no se vean afectadas en parmetros como altura o biomasa total, y que la produccin y calidad de semilla sea la misma que la encontrada en las plantas control (VargasOrtiz E, datos no publicados).

Captulo VIII. La defoliacin por dao mecnico y herbivora en Amaranthus cruentus L. induce simultneamente respuestas de tolerancia y resistencia

CONCLUSIONES En amaranto, se presentan simultneamente procesos tanto de resistencia como de tolerancia hacia la defoliacin por dao mecnico y/ o herbivora. Los procesos de resistencia se presentan desde tiempos cortos (i.e. en cuestin de horas) y muy posiblemente involucren costos metablicos que se reflejan en la disminucin de parmetros fisiolgicos como biomasa total y produccin de semilla. Sin embargo los procesos de tolerancia probablemente permitan compensar estos costos, al reducir el impacto sobre la productividad, lo que asegura que a pesar de que la produccin de semilla sea menor, su calidad se mantenga inalterada para as asegurar su reproduccin en generaciones posteriores. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por la Unin Europea (Proyecto AMARANTH: FUTURE-FOOD, Contrato No. 032263), Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. Agradecemos el apoyo econmico del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnooga, CONACyT con la beca otorgada a EVO (No. 205326). BIBLIOGRAFA Angeles-Nuez J G, A Tiessen (2010) Arabidopsis sucrose synthase 2 and 3 modulate metabolic homeostasis and direct carbon towards starch synthesis in developing seeds. Planta 232: 701-718. Arnold T, H Appel, V Patel, E Stocum, A Kavalier, J Schultz (2004) Carbohydrate translocation determines the phenolic content of Populus foliage: A test of the sink-source model of plant defense. New Phytologist 164: 157-164. Babst B A, R A Ferrieri, D W Gray, M Lerdau, D J Schlyer, M Schueller, M R Thorpe, C M Orians (2005) Jasmonic acid induces rapid changes in carbon transport and partitioning in populus. New Phytologist 167: 63-72 Baldwin I T (1990) Herbivory simulations in ecological research. Trends in Ecology and Evolution 5: 91-93.

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Captulo IX

Uso de bacterias promotoras de crecimiento vegetal para aumentar la productividad de amaranto de grano
USE OF PLANT GROWTH PROMOTING RHIZOBACTERIA TO INCREASE PRODUCTIVITY OF GRAIN AMARANTH

Fannie Isela Parra Cota1 y John Paul Dlano Frier1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato) Km 9.6 del Libramiento Norte Carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico. Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx Telfono: (52) 462 39636 o 462 39600 FAX: (52) 462 45996 or 462 39611

RESUMEN El gnero Amaranthus comprende aproximadamente 70 especies con una amplia variabilidad gentica entre stas. Dichas especies se pueden cultivar para la produccin de grano, como verdura o forraje, aunque tambin pueden ser malezas agresivas. Las tres principales especies cultivadas para la produccin de grano son Amaranthus hypochondriacus, Amaranthus cruentus y Amaranthus caudatus. Una de las caractersticas ms importantes del amaranto es, sin duda, su alto valor nutritivo. Tanto la hoja como el grano poseen una interesante composicin qumica y un valor nutricional superior comparado con otros granos. Desafortunadamente, el rendimiento de grano es relativamente bajo, con una produccin promedio de 1 a 3 ton/ha, lo cual est relacionado con la falta de recursos para un apropiado manejo agronmico. Un factor adicional es la escasa informacin respecto a la presencia y control de plagas y enfermedades, las cuales pueden causar grandes prdidas econmicas a los productores de amaranto. Por tal motivo, es necesario encontrar soluciones de produccin adecuadas. Una alternativa que proponemos es el uso de bacterias promotoras del crecimiento

vegetal (BPCV) que al crecer en asociacin con las plantas estimulan su crecimiento y pueden ayudar al control de enfermedades y plagas. Se estn realizando investigaciones para el uso de rizobacterias, no slo para promover su crecimiento, sino tambin para el biocontrol de enfermedades en especies de amaranto productoras de grano. En el presente captulo se describen las caractersticas generales de las BPCV, las investigaciones de su aplicacin en amarantceas y por ltimo, el posible uso de la informacin generada por el transcriptoma de novo de A. hypochondriacus para entender las bases moleculares de la interaccin BPCVamaranto. Palabras clave: Biocontrol, bioinoculantes, biofertilizantes, Burkholderia, transcriptoma. ABSTRACT The genus Amaranthus includes about 70 species with a wide genetic variability among them. These species can be cultivated for the production of grain, vegetables and forage, but can also be aggressive weeds. The three main cultivated species for grain production are A. hypochondriacus, A. cruentus and A. caudatus.
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One of the most important characteristics of amaranth is undoubtedly the high nutritional value of its leaves and seeds. They both have an interesting chemical composition and the seeds have a higher nutritional value compared with other grains. But, unfortunately, the grain yield is relatively low, with an average production from 1 to 3 ton/ha. This is related to the lack of resources for proper agricultural management as well as to the limited information regarding the presence and control pests and diseases. These can eventually cause great economic losses to amaranth producers. For this reason, it is necessary to find suitable production solutions. A proposed alternative is the use of plant growth promoting bacteria (PGPB) that by growing in association with plants can stimulate growth and help control diseases and pests. Research is presently conducted on the use of PGPB not only for growth promotion but also for biological control of disease-producing pathogens of amaranth grain. In this chapter, we will describe the general information regarding PGPB, the work we have done to explore its application in grain amaranth and the way the wealth of information generated by the de novo transcriptome of A. hypochondriacus will be used to understand the molecular basis of the interaction PGPB-amaranth. Key words: Biocontrol, Burkholderia, Plant growth promoting rhizobacteria, transcriptome. INTRODUCCIN El amaranto es una planta dicotilednea que pertenece a la familia Amaranthaceae y al gnero Amaranthus que comprende aproximadamente 70 especies, existiendo una amplia variabilidad gentica entre stas. Dichas especies se pueden cultivar tanto para la produccin de grano de alto valor nutritivo como de forraje, o pueden tambin crecer como malezas agresivas (Brenner et al., 2000). Las tres principales especies que son cultivadas para la produccin de grano son A. hypochondriacus, originario de Mxico, A. cruentus, originario de Guatemala y el sureste de Mxico y A. caudatus, cuyo origen es Amrica del Sur (Brenner et al., 2000; Paredes et al., 1990). Una de las caractersticas ms importantes del amaranto es, sin duda, su alto
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valor nutritivo. Las hojas poseen una buena textura, sabor y calidad nutricional (contiene altos valores de calcio, hierro, fsforo y magnesio, as como cido ascrbico, niacina, vitamina A y fibra). A su vez, la semilla tiene una interesante composicin qumica y un valor nutrimental superior comparado con otros granos (Paredes et al., 1990; Paredes, 1994). Al igual que los cereales, contiene altas cantidades de almidn, representando del 50 al 60% de su peso seco. El contenido de lpidos va de 7 a 8%, de los cuales el escualeno, que es un potente antioxidante y fortalecedor del sistema inmune, es un componente abundante. El alto porcentaje de protenas (14-19%) es uno de los atractivos del grano de amaranto, ya que es superior al de la mayora de los cereales comerciales. Adems, el 14-18% de las protenas en las semillas corresponden a globulinas (principalmente 11S) ricas en lisina y aminocidos azufrados (Paredes, 1994), los cuales son esenciales para una ptima nutricin. Por otro parte, los rendimientos de grano son relativamente bajos, con una produccin promedio que oscila entre 1 a 3 ton/ha, lo cual est relacionado con la falta de recursos para un manejo agronmico ptimo as como con la escasa informacin que se tiene respecto a la presencia, identificacin, biologa, daos y control de plagas y enfermedades que afectan al cultivo. Las plagas y/o enfermedades pueden llegar a causar grandes prdidas econmicas. Por tal motivo, es necesario encontrar soluciones de produccin adecuadas. Las nuevas tecnologas deben estar orientadas a mantener la sostenibilidad del sistema agrcola mediante explotacin racional de los recursos naturales y la aplicacin de medidas adecuadas para preservar el ambiente (Shankar Singh et al., 2011). Una de estas tecnologas es la aplicacin de biofertilizantes, los cuales presentan beneficios como su capacidad de fijar N2, supresin de enfermedades, solubilizacin y aporte de nutrimentos, produccin de compuestos activos como vitaminas y reguladores del crecimiento as como descomposicin de contaminantes. (AllTaweil et al., 2009; Pooja et al., 2007). Dentro de la gran variedad de fertilizantes microbianos estudiados, las bacterias promotoras del crecimiento vegetal, BPCV (tambin conocidas como PGPR, del

Captulo IX. Uso de bacterias promotoras de crecimiento vegetal para aumentar la productividad de amaranto de grano

ingls Plant Growth Promoting Rhizobacteria), representan una amplia variedad de bacterias no patgenas del suelo, las cuales cuando crecen en asociacin con las plantas estimulan su crecimiento (Nihorimbere et al., 2011). Muchas BPCV estimulan el crecimiento vegetal al controlar organismos patgenos por lo que se consideran como bio-pesticidas (Glare et al., 2012). La informacin del uso de BPCV en amarantceas es muy escasa. Existen pocas publicaciones sobre este tipo de investigacin y la mayora se han desarrollado en especies de amaranto no cultivadas (Adesemoye et al., 2008; Nair et al., 2007; Nair y Anith, 2009; Vrbnicanin et al., 2008). A continuacin se describen algunos aspectos del cultivo, principales mecanismos de accin de las BPCV, as como los avances en la aplicacin de BPCV al amaranto de grano logrados hasta el momento por nuestro grupo de trabajo. Por ltimo, se presenta un apartado donde se describe la posibilidad de utilizar la informacin generada de la secuenciacin del transcriptoma de A. hypochondriacus (Dlano-Frier et al., 2011) para entender las bases moleculares de la promocin de crecimiento en amaranto de grano. EL CULTIVO DEL AMARANTO En las ltimas dcadas, el cultivo del amaranto se ha difundido a nivel mundial, cultivndose en los cinco continentes. Entre los principales pases productores se encuentran la India, Mxico, Per, China, Bolivia, Pakistn, Nepal, Argentina y Estados Unidos (Morales Guerrero et al., 2009). En Mxico, la produccin se concentra principalmente en los Estados de Puebla, Morelos, Tlaxcala y el Distrito Federal (SIAPSAGARPA, 2010), aunque en algunos aos tambin se ha llegado a cultivar en los estados de Guanajuato, Estado de Mxico, Oaxaca y Quertaro, donde las principales especies que se cultivan son A. hypochondriacus y A. cruentus (Espitia Rangel et al., 2010; Morales Guerrero et al., 2009). En el ao 2010, se sembraron en nuestro pas poco ms de 3000 ha, con una produccin total de 3870 ton y un rendimiento promedio de 1.23 ton/ha, que est dentro del nivel mundial reportado, el cual oscila entre 1 a 3 ton/ha. Dentro de los estados productores,

Puebla ocupa el primer lugar aportando ms del 60% del total nacional, aunque la superficie sembrada y produccin flucta ampliamente cada ao (SIAP-SAGARPA, 2010; Espitia Rangel et al., 2010). PLAGAS Y ENFERMEDADES Existe poca informacin sobre las plagas y patgenos que afectan al amaranto, principalmente en lo que respecta a la etiologa de las enfermedades y su control. En el caso de las plagas, stas se pueden agrupar en cuatro grupos de acuerdo a la forma de dao y comportamiento del insecto (Mujica y Berti, 1997; Espitia Rangel et al., 2010; Morales Guerrero et al., 2009 y Aragn Garca et al., 2011), los cuales se muestran a continuacin en el Cuadro 1. Las enfermedades ms comunes del amaranto son aquellas ocasionadas por hongos (Mujica y Berti, 1997; Espitia Rangel et al., 2010; Morales Guerrero et al., 2009) y se resumen en el cuadro 2. Existen otros agentes causales de enfermedades en amaranto. stos son, nemtodos, virus, bacterias y fitoplasmas. Entre los nemtodos que atacan al amaranto se encuentran Nacobbus aberrans y Meloidogyne incognita, los cules producen ndulos en las races causando daos significativos a la produccin del orden del 10-14% del rendimiento de grano (Espitia Rangel et al., 2010; Morales Guerrero et al., 2009). Las principales sintomatologas en plantas con virosis son enanismo, clorosis, enrollamiento y deformacin de las hojas. En Argentina, Asia y Oceana se ha encontrado que el Amaranthus Leaf Mottle Virus afecta a diversas especies de amaranto, entre ellas, A. hypochondriacus y A. cruentus (Espita Rangel et al., 2010). Entre las enfermedades causadas por bacterias, se han reportado plantas de amaranto con la enfermedad conocida como Mancha bacteriana que ocasiona lesiones en las hojas, siendo Xantomonas spp. el agente causal. En Mxico se han encontrado Pseudomonas spp. y Xanthomonas campestris infectando diversas especies de amaranto (Casarrubias Castillo, 2009; Espita Rangel et al., 2010). Tambin se han detectado plantas con proliferacin excesiva de brotes, acortamiento de entrenudos, amarillamiento y filodia o crecimiento
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Cuadro 1. Principales plagas del amaranto.

Especie Nombre comn Agrotis spp. Gusanos cortadores Feltia spp. Gusanos cortadores Peridroma spp. Gusanos cortadores Eurysacca Polilla de la hoja melanocampta Herpetogramm Polilla de la kiwicha a bipunctalis Spodoptera Gusano soldado eridiana Pseudoplusia Falso medidor includens Diabrotica spp. Escarabajo de la hoja Schistocerca Saltamontes piceifrons Spoladea Gusano hawaiano de recurvalis la remolacha Aphis spp. Pulgones Myzus persicae Pulgones Lygus lineolaris Chinche Conotrachelus seniculis Lixus truncatulus Hypolixus truncatulus Amauromyza abnormalis Barrenador del tallo (o gorgojo) Barrenador del tallo Barrenador del tallo Mosca barrenadora

Cuadro 2. Enfermedades fngicas que afectan al amaranto.

Agente Causal Alternaria spp. Macrophoma spp. Sclerotinia sclerotiorium Thecaphora spp. Phytium spp. Fusarium spp. Rhizoctonia spp.

secundario. Diversas investigaciones realizadas indican que estas sintomatologas estn asociadas a la infeccin por fitoplasmas, los cuales mediante caracterizacin molecular se ha determinado que corresponden a Candidatus Phytoplasma Pruni y Candidatus Phytoplasma aurantifolia (Ochoa Snchez et al., 2010; Rojas Martnez et al., 2009).
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Cuando no hay un control y manejo adecuado tanto de las plagas como de los distintos patgenos que estn afectando el cultivo se pueden producir cuantiosas prdidas, como se demostr en un estudio realizado por Aragn Garca y Lpez Olgun (2001) donde se compararon parcelas experimentales con y sin control de los insectos perjudiciales, encontrando que la falta

Captulo IX. Uso de bacterias promotoras de crecimiento vegetal para aumentar la productividad de amaranto de grano

del control de plagas ocasion prdidas hasta del 65% de la produccin. Para el control de las plagas y enfermedades se recomiendan acciones preventivas para evitar el uso de qumicos que afecten o disminuyan la poblacin de insectos y microorganismos benficos y lleven al desarrollo de resistencia por parte de los patgenos, adems de contribuir a la contaminacin ambiental. Una de estas medidas preventivas es el uso de microorganismos benficos, entre los que estn ciertos hongos, como Trichoderma y micorrizas, y las bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV). Las BPCV pueden ser utilizadas en el cultivo de amaranto, no solamente como agentes biocontroladores, sino como biofertilizantes que contribuyan a mejorar su produccin. BACTERIAS PROMOTORAS DE CRECIMIENTO VEGETAL (BPCV) Las BPCV son bacterias de vida libre de importancia agrcola, debido a que presentan efectos benficos sobre el crecimiento y la salud de las plantas eliminando los microorganismos causantes de enfermedades e incrementando la disponibilidad y asimilacin de nutrimentos. Por lo tanto, para mejorar la fertilidad del suelo, aumentar el rendimiento de los cultivos y reducir los impactos negativos de los fertilizantes qumicos en el medio ambiente, es muy recomendable explotar el uso de las BPCV (Babalola, 2010). A diferencia de los efectos adversos del continuo uso de fertilizantes qumicos, cuando las BPCV son aplicadas al suelo mejoran su estructura sin dejar residuos txicos. De esta manera, los inoculantes microbianos o biofertlizantes son un componente importante en la agricultura sustentable (Shankar Singh et al., 2011). Sin embargo, problemas de variabilidad en la eficiencia de colonizacin, desempeo en el campo y competencia en la rizsfera pueden ser temas controversiales. Por ello, para el uso de BPCV como biofertilizantes se requiere la seleccin de microorganismos competentes en la rizsfera con atributos de promocin de crecimiento (Babalola, 2010). Algunas de las especies de BPCV ms estudiadas pertenecen a los gneros Pseudomonas, Azospirillum, Azotobacter, Klebsiella, Enterobacter, Alcaligens, Arthobacter, Burkholderia, Bacillus y Serratia (Ahmad et al., 2006). Todas ellas mejoran el

crecimiento y salud de la plantas por medio de diversos mecanismos, los cuales se explican a continuacin. MECANISMOS DE ACCIN DE LAS BPCV Las BPCV pueden facilitar el crecimiento y desarrollo de las plantas por medio de mecanismos directos e indirectos. La estimulacin directa puede involucrar el suministro de sustancias sintetizadas por la propia bacteria y la ayuda para la toma de nutrientes del ambiente, los cuales pueden ser nitrgeno, fitohormonas, hierro y fsforo (Sarabia Ochoa et al., 2010; Verma et al., 2010), mientras que la estimulacin indirecta incluye la prevencin o eliminacin de fitopatgenos por la produccin de sustancias inhibitorias o por el incremento de la resistencia de la planta (Saleem et al., 2007). Entre los mecanismos directos est la fijacin biolgica de nitrgeno (FBN). Esta caracterstica es importante ya que el nitrgeno es uno de los nutrimentos ms comunes requeridos para el crecimiento y productividad de las plantas al formar parte integral de protenas, cidos nucleicos y otras biomolculas esenciales. Alrededor del 78% del nitrgeno est presente en la atmsfera pero no est disponible para las plantas. La FBN involucra la conversin de nitrgeno a amoniaco por microorganismos usando un complejo enzimtico identificado como nitrogenasa. La FBN fija alrededor del 60% del nitrgeno disponible en el planeta y representa una alternativa econmica y ambientalmente benfica. Algunas especies de BPCV que fijan nitrgeno son Azotobacter, Azospirullum, Pseudomonas, Burkholderia, Rhizobium, Klebsiella y Erwinia (Verma et al., 2010). Otro efecto directo involucra un incremento en la disponibilidad de nutrientes, principalmente el fsforo y el hierro, que son nutrientes esenciales para las plantas. El fsforo es el segundo nutriente mineral limitante del crecimiento de las plantas; el suelo posee grandes reservas de fsforo total pero solo una pequea cantidad es disponible para las plantas. La baja disponibilidad del P para las plantas se debe a que la mayora del P del suelo se encuentra en formas insolubles y las plantas solo pueden absorber P en dos formas solubles, in monobsico y dibsico. Existen BPCV capaces de solubilizar P incrementando su disponibilidad
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para las plantas. Por otra parte, la disponibilidad de hierro puede incrementarse con el uso de BPCV sintetizadoras de siderforos, que son biomolculas de bajo peso molecular que atraen y se unen al hierro de la rizsfera (Verma et al., 2010). La produccin de fitohormonas o molculas estructuralmente similares a stas tambin contribuye directamente a la promocin de crecimiento. Las fitohormonas son reguladores producidos por las plantas que a bajas concentraciones regulan sus procesos fisiolgicos. Las respuestas a estos compuestos estn determinadas por factores como la edad de la planta, el estadio fisiolgico y las condiciones ambientales, entre otras. Algunas especies de los gneros Pseudomonas, Azotobacter y Bacillus liberan auxinas, giberelinas o citoquininas en la rizsfera de las plantas, ejerciendo un efecto estimulador del crecimiento especialmente marcado cuando stas estn en estado de plntula (Lugtenberg y Kamilova, 2009; Verma et al., 2010). Adems, las BPCV que contienen la enzima 1-aminociclopropano-1-carboxilato (ACC) desaminasa facilitan el crecimiento y desarrollo de la planta al disminuir los niveles de etileno. Estas bacterias toman el ACC, precursor del etileno, y lo convierten en 2-oxobutanoato y NH3. Formas de estrs ocasionadas por metales pesados, salinidad, sequa e infeccin por bacterias patgenas son mitigadas por las BPCV sintetizadoras de dicha enzima (Lugtenberg y Kamilova, 2009). Entre los mecanismos indirectos se encuentra la produccin de antibiticos. Las especies de BPCV productoras de antibiticos ms estudiadas pertenecen al gnero Pseudomonas. Fue en una de stas en las cuales se describi el primer antibitico implicado en el biocontrol, la fenazina, el cual ha demostrado su efectividad contra diversas enfermedades en las plantas producidas por hongos (Fusarium spp. y Pythium spp.) causantes de podredumbres de tallo y raz (Pierson y Pierson, 2010). La produccin de siderforos tambin es parte de los mecanismos indirectos de promocin del crecimiento. Los siderforos son molculas de bajo peso molecular que presentan alta afinidad por el hierro. Estas sustancias son sintetizadas en condiciones de escasez de este elemento, atrayendo al hierro y convirtindolo en factor limitante para el crecimiento de los patgenos.
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La capacidad de los siderforos para actuar como supresores de enfermedades depende de la planta, del fitopatgeno a eliminar, la composicin del suelo, el tipo de BPCV y la afinidad del siderforo por el hierro (Sarabia Ochoa et al., 2010; Verma et al., 2010). Adems, las BPCV pueden activar un mecanismo de defensa de la planta conocido como resistencia sistmica inducida (RSI), la cual confiere a la planta una mayor capacidad defensiva. Tras la infeccin con un patgeno esta infeccin se manifiesta como la reduccin de la tasa del desarrollo de la enfermedad, resultando en menos plantas enfermas o una menor severidad de la enfermedad (Van Loon et al., 2007). Diversos componentes bacterianos pueden inducir la RSI, tales como, lipopolisacridos, fragmentos de los flagelos, cido saliclico, siderforos, lipoptidos cclicos, factores antifngicos y hasta compuestos orgnicos voltiles (Lugtenberg y Kamilova, 2009). Asimismo, las BPCV pueden producir enzimas antimicrobianas, como quitinasas, glucanasas y proteasas que hidrolizan o degradan la pared de algunos hongos patgenos. Todas estas enzimas muestran actividad antifngica individualmente, pero a menudo actan sinrgicamente con antibiticos. (Babalola, 2010). La figura 1 nos presenta un esquema general de las interacciones BPCV-Planta, que resultan en la promocin de crecimiento y la induccin de resistencia en la planta. APLICACIONES DE LAS BPCV Entre las bacterias promotoras de crecimiento vegetal ms estudiadas y utilizadas en campo se encuentran principalmente Bacillus, Pseudomonas y Azospirillum; siendo ste ltimo uno de los primeros microorganismos utilizados como biofertilizantes en Mxico. Se ha reportado que la inoculacin de Azospirillum en maz puede reducir hasta en un 50% la aplicacin de fertilizacin qumica, sin disminuir el rendimiento. Incluso se pudo obtener un incremento del 10% respecto a cultivos con el 100% de la fertilizacin qumica (Onofre Lemus et al., 2009a). Del mismo modo, el uso de esta BPCV en sorgo en el estado de Tamaulipas, logr incrementos del 10 al 27% de la productividad en plantas inoculadas respecto a las plantas control (Garca Olivares et al., 2006). Azospirillum

Captulo IX. Uso de bacterias promotoras de crecimiento vegetal para aumentar la productividad de amaranto de grano

Figura 1. Interacciones BPCV-Plantas (modificado de Barret et al., 2011). Pasos importantes en la interaccin son la motilidad (1), la adherencia (2) y el crecimiento de las BPCV (3), siendo tambin importante la afinidad por los exudados radiculares para promover el aporte de nutrientes, hormonas o la inhibicin de patgenos. Esto ltimo pudiendo ser indirectamente travs la induccin de la RSI en la planta o directamente (4) a travs de metabolitos secundarios.

tambin se ha utilizado para apoyar programas de reforestacin, ya que se ha demostrado que plantas inoculadas tienen mayor sobrevivencia y rpido desarrollo comparado con las plantas a las cuales no se les aplica esta BPCV (Bashan et al., 1999; Villegas Espinoza et al., 2010). El gnero Pseudomonas tambin ha sido muy estudiado en nuestro pas. Por ejemplo, se han realizado investigaciones en plantas de tomate (Solanum lycopersicum) y se ha encontrado que acelera su desarrollo, adelanta la floracin 6 das e incrementa su tamao, as como su produccin, hasta 45% comparada con las plantas que no fueron inoculadas (Carrillo Castaeda et al., 2000). En el Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias (INIFAP) se han desarrollado diversos biofertilizantes. Uno de ellos, el Biofertilizante Bacteriano 2709, demostr su efectividad para incrementar la produccin hasta un 50% de cultivos como papa, frijol, maz, tomate y chile ancho. A su vez, se han realizado diversas investigacin con especies del gnero Bacillus. En chile y calabacita se ha encontrado que, adems de incrementar el crecimiento y productividad, su uso proporciona proteccin contra enfermedades

fngicas y virales (Maldonado Cruz et al., 2008; Guilln Cruz et al., 2006). Tambin existen reportes de BPCV que protegen contra el ataque de plagas, como se report en plantas de jitomate, donde la inoculacin con Bacillus subtilis BEB-DN protegi contra la infestacin por mosquita blanca (Bemisia tabaci), al retardar significativamente su desarrollo (Valenzuela Soto et al., 2010). Otro grupo de BPCV que se ha estudiado ms recientemente es Burkholderia, el cual es probablemente el gnero de bacterias asociadas a plantas ms diverso y adaptable al ambiente (Compant et al., 2008). Dada esta gran diversidad, son bacterias que pueden usarse tanto para promover el crecimiento de las plantas y biocontrolar algunas enfermedades como para biorremediar ambientes contaminados. Se han estudiado cepas aisladas y asociadas a diversos cultivos como maz, tomate, mango, caa de azcar y arroz entro otras, obteniendo resultados prometedores en su uso como biofertilizantes y agentes de biocontrol (Caballero Mellado et al., 2007; De los Santos Villalobos et al., 2012; Estrada de los Santos et al., 2001; Onofre Lemus et al., 2009; Reis et al., 2004).

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USO DE BPCV EN AMARANTO La informacin de estudios sobre el uso de BPCV en amaranto es escasa, y la mayora se han realizado en especies de amaranto que no son cultivadas para la produccin de grano, sino en amarantos silvestres o amarantos para consumo como vegetal de hoja. Estos estudios se han realizados en pases del continente Asitico y Africano, donde las hojas de amaranto son consumidas ms que el grano. En 2007, se evalu la capacidad de diversas BPCV para mitigar el retraso en el crecimiento ocasionado por el fungicida Acibenzolar-S-Metil, un activador de las defensa de la planta, mejorando el crecimiento de A. tricolor con Pseudomonas putida 89B61 y Pseudomnas fluorescens PN026R (Nair et al., 2007). Posteriormente, el mismo grupo de investigacin evalu la capacidad de biocontrol de Rhizotocnia solani por distintas BPCV, encontrando que la cepa nativa P. fluorescens PN026R, que a pesar de no demostrar una fuerte capacidad antagnica in vitro, fue la ms efectiva en controlar la enfermedad (Nair y Anith, 2009). En otro estudio se compar el efecto de Pseudomonas aeruginosa y Bacillus subtilis en A. viridis, observndose que el efecto fue positivo en la tasa de germinacin al aumentar en un 40% y la biomasa tambin increment considerablemente, entre 40-80%, con inoculacin de ambas BPCV. Al comparar todos los factores evaluados, no hubo diferencias significativas entre ambas cepas (Adesemoye et al., 2008). En A. retroflexus se report un aumento en la tasa de germinacin al inocular la semilla con Bacillus circulans (Vrbnicanin et al., 2008), mientras que el nico estudio del que tenemos conocimiento donde se ha evaluado el uso de BPCV en una especie de amaranto productora de grano fue realizada en A. paniculatus. En ste, se evaluaron dos aislados de Pseudomonas corrugata, logrando obtener un aumento en el crecimiento y contenido de nitrgeno en las plantas inoculadas con las BPCV (Pandey et al., 1999). EFECTO DE LA INOCULACIN DE BPCV EN AMARANTO DE GRANO En nuestro grupo de trabajo se estn realizando estudios para la evaluacin de la capacidad de promocin de crecimiento vegetal, potencial de capacidad de biocontrol y efecto en la
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productividad de plantas de amaranto con la inoculacin de diversas cepas de BPCV. La bacterias que estn siendo evaluadas son Burkholderia caribensis XV, Burkholderia ambifaria Mex5, Burkholderia cepacia XXVI y Rhizobium spp. XXV, las cuales fueron aisladas y caracterizadas en el laboratorio de Microbiologa Ambiental y Bacillus subtilis BEB-DN aislada en el Laboratorio de Bioqumica Ecolgica, ambos laboratorios del Cinvestav, Unidad Irapuato. Las cepas fueron evaluadas en su capacidad de promocin de crecimiento en dos especies de amaranto, A. hypochondriacus var. Nutrisol y A. cruentus var. Candil por su importancia tanto en Mxico como en Argentina, respectivamente. A su vez, los parmetros morfomtricos que estn siendo evaluados son altura, dimetro de tallo, rea foliar, biomasa rea, radicular y total. Adems, se estn evaluando dos mtodos para la aplicacin de las BPCV: inoculacin de semilla e inoculacin de plntula. Todos los ensayos se estn realizando en invernadero y la promocin de crecimiento est siendo evaluada 7 semanas despus de la germinacin. Hasta este momento, las cepas que se observan ms promisorias son B. caribensis XV y B. ambifaria Mex5, ya que las plantas inoculadas presentan mayor crecimiento y biomasa (Figura 2), principalmente las inoculadas desde semilla. Se observaron resultados similares en ambas especies de amaranto. La mayora de las variables morfomtricas medidas en las plantas inoculadas con estas cepas resultaron con importantes incrementos respecto al control no inoculado, teniendo incrementos en biomasa total de 50 hasta 100%. Tambin se estn llevando a cabo otros ensayos para determinar el efecto de dichas BPCV en plantas de amaranto simultneamente tratadas con fertilizacin qumica. Dichos experimentos tambin se estn realizando a nivel de invernadero. Con las bacterias seleccionadas sobre la base de su capacidad de promover el crecimiento, se realizarn ensayos adicionales para determinar si tienen un efecto en el contenido de nitrgeno y carbohidratos en los distintos tejidos de la planta. Tambin se evaluar su posible efecto sobre la productividad de grano a nivel de invernadero. En caso de que el efecto sobre la productividad resultase positivo, se realizarn entonces experimentos en campo, a partir de marzo de 2013.

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Figura 2. Promocin de crecimiento en amaranto de grano inoculado con BPCV. Se muestran plantas de A. cruentus var. Candil inoculadas con (A) Burkholderia ambifaria Mex5 y (B) B. caribensis XV, respectivamente. Las plantas inoculadas se muestran a la izquierda de cada panel mientras que a la derecha estn los controles no inoculados.

Otro aspecto que se analizar es la capacidad de biocontrol de las BPCV. Para ello, se realizarn ensayos de reto con bacterias patgenas del amaranto de grano (e.g. P. syringae pv. tabaci) en las plantas inoculadas y se evaluar la mitigacin de los sntomas, la disminucin de la poblacin del patgeno, as como tambin el efecto sobre el crecimiento. BASES MOLECULARES DE LA PROMOCIN DE CRECIMIENTO EN AMARANTO A pesar de que la promocin de crecimiento por BPCV es un hecho conocido en muchas especies de plantas, es poco el conocimiento que se tiene sobre las bases moleculares de dicho fenmeno. Es decir, excepto por el caso aislado de Arabidopsis thaliana, no se tiene claro el efecto de la inoculacin de estas bacterias en los patrones de expresin gnica en la mayora de las plantas donde se ha observado su efecto promotor de crecimiento y/o de biocontrol. Por ejemplo, Wang et al. (2005) realizaron un perfil de expresin gnica por medio de microarreglos en plantas de A. thaliana inoculadas con el endfito Pseudomonas fluorescens FPT9601-T5. Este grupo encontr que genes regulados por auxinas y genes tipo nodulina fueron inducidos mientras que genes responsivos a etileno fueron reprimidos. Tambin descubrieron que

algunos genes que podran estar relacionados con la promocin de crecimiento, son genes inducidos por auxinas, genes tipo NAM y genes relacionados a metabolismo de carbohidratos, mientras que la elevada resistencia a enfermedades podra relacionarse con protenas PR, factores de transcripcin tipo WRKY, genes relacionados con metabolismo secundario y protenas de respuesta a estrs como peroxidasa y glutatin-S transferasa. Se han realizado otros estudios adicionales en A. thaliana donde los microarreglos tambin han sido la herramienta experimental usada para estudiar cambios en los patrones de expresin gnica. La mayora se enfocaron a entender las bases moleculares de su capacidad de biocontrol (Cartieaux et al., 2003; Verhagen et al., 2004), a excepcin de dos estudios muy recientes donde el objetivo fue determinar solamente los mecanismos moleculares de la promocin de crecimiento vegetal inducida por cepas del gnero Pseudomonas. Entre los genes sobre regulados se encontraron genes relacionados al metabolismo celular, metabolismo de nitrgeno, transporte de azcares, toma de nutrientes y sealizacin por auxinas (Schwachtje et al., 2011; Srivastava et al., 2012). Otra estrategia que se ha utilizado para entender las respuestas moleculares de las plantas a la inoculacin de BPCV es el establecimiento
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de perfiles protemicos. Esta herramienta se us en plantas de arroz inoculadas con Pseudomonas fluorescens KH1 para detectar protenas expresadas diferencialmente, las cuales fueron identificadas por medio de espectrometra de masas. Entre las protenas detectadas se encontraron algunas protenas diferenciales como un precursor de Ribulosa bifosfato carboxilasa o Rubisco, una tiorredoxina, la subunidad alfa del proteosoma y glutatin-S- tranferasa, las tres ltimas relacionadas con respuestas de defensa o estrs (Kandasamy et al., 2009). En nuestro laboratorio estamos interesados en contribuir al entendimiento de la promocin de crecimiento vegetal. Por ello se pretende utilizar la informacin generada de la secuenciacin y anlisis del transcriptoma del amaranto (Dlano Frier et al., 2011). Con base a los resultados del anlisis digital de expresin basado en los datos del transcriptoma, referencias bibliogrficas y otros estudios realizados en nuestro grupo de trabajo, se han seleccionado genes relacionados a diversos aspectos del metabolismo de la planta como: i) metabolismo de carbohidratos, ii) metabolismo de nitrgeno, iii) sntesis de pared celular, iv) fotosntesis, v) sealizacin y sntesis de auxinas. En el cuadro 3 se presentan algunos de los genes candidatos a ser estudiados. Consideramos que el estudio de genes relacionados a metabolismo de carbohidratos es importante para comparar nuestros resultados con lo que se ha reportado en A. thaliana, donde

se han encontrado perfiles transcriptmicos que semejan a aquellos que se disparan cuando la planta est en un estado de escasez de azcares, generando de manera an desconocida, una alteracin en la expresin gnica acompaada de un incremento de sacarosa en las races. Se especula que estos cambios pueden resultar benficos tanto para la planta como para las BPCV, al servir como fuente de energa para la sntesis de componentes de la pared celular que son requeridos durante el crecimiento as como para las produccin de una mayor cantidad de exudados radiculares que pueden servir como nutrientes para la bacteria (Schwachtje et al., 2011). El estudio de genes relacionados con metabolismo de nitrgeno y sntesis y sealizacin de auxinas se ha considerado debido a que en otro estudios se ha encontrado que genes relacionado auxinas, y en ocasiones los relacionados al metabolismo nitrogenado, se ven inducidos, por lo que se sugiere que las BPCV de alguna manera manipulan la expresin de estos genes, aunque por un mecanismo que todava no ha sido identificado. Por ello consideramos que es importante estudiar si la promocin en amaranto se produce utilizando mecanismos similares a los detectados en plantas modelos como A. thaliana (Schwachtje et al., 2011). De igual manera, proponemos que los genes relacionados a fotosntesis y sntesis de pared celular, seleccionados sobre la base de un estudio diseado para aumentar la productividad de

Cuadro 3. Genes candidatos para estudiar la promocin de crecimiento vegetal en amaranto.

Gen Transportador de azcares Transportador de triosas fosfato Invertasa citoslica Sacarosa Sintasa Metabolismo de Transportador de nitrato nitrgeno Glutamato deshidrogenasa Asparagina sintasa Sntesis y sealizacin Factor de respuesta a auxinas de auxinas Protena asociada a dormancia Sntesis de pared celular Expansina Xiloglucano endotransglicolasa Xilosidasa Fotosntesis PEP Carboxilasa Enzima mlica Rubisco activasa Ruta Metablica Metabolismo de carbohidratos
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sacarosa en caa de azcar (McCormick et al., 2008) deberan estar ms activos, al generar mayores esqueletos carbonados para apoyar la promocin de crecimiento, que requiere necesariamente de un proceso de expansin de la pared celular, en plantas de amaranto. La herramienta experimental que se utilizar para el anlisis de la expresin de los genes seleccionados ser la PCR cuantitativa en tiempo real, que es una de las tcnicas ms avanzadas y confiables hoy en da para el anlisis de expresin gnica. CONCLUSIONES El amaranto en nuestro pas es un cultivo muy importante histrica y culturalmente, aunque su importancia alimenticia y econmica se ha incrementado considerablemente debido al creciente inters por la alimentacin saludable basada en una buena nutricin y en una dieta balanceada. Mientras que el uso de las BPCV ha sido ampliamente estudiado en varios cultivos de inters comercial, como maz, sorgo, tomate, chile, papa y caa de azcar, para los cuales ya existen biofertilizantes muy eficientes, en amaranto es un aspecto que apenas se ha empezado a explorar. Por ello, consideramos que es necesario realizar investigaciones enfocadas a identificar cepas de BPCV que tengan la capacidad, no slo de promover el crecimiento de la planta sino de incrementar su productividad. No menos importante ser la evaluacin de cepas que muestren capacidad de biocontrol de enfermedades que afectan al amaranto. Tanto la promocin del crecimiento como el bio-control contribuirn al disminuir el uso de fertilizantes y plaguicidas qumicos, lo que seguramente contribuir al desarrollo de una agricultura ms sustentable. Otro aspecto de importancia y que deber ser considerado tambin, ser el aislamiento y estudio de cepas nativas de amarantos silvestres que puedan ser utilizadas como BPCV en amarantos cultivados. Por ltimo, es importante resaltar que la investigacin bsica es un campo esencial en todos los aspectos del quehacer cientfico. Por tal motivo, consideramos que ser de gran relevancia incrementar el entendimiento de las

bases moleculares que conducen a la promocin de crecimiento, no slo en plantas modelo como A. thaliana, sino en cultivos de inters, como es el amaranto, para que posteriormente este conocimiento pueda ser utilizado en otras investigaciones que cristalicen en aplicaciones prcticas en el campo. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por la Unin Europea (Proyecto AMARANTH: FUTURE-FOOD, Contrato No. 032263), Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. Se agradece tambin al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) por el apoyo econmico otorgado a FIPC para la realizacin de este proyecto (Beca No. 210295). BIBLIOGRAFA Adesemoye A O, M Obini, E O Ugoji (2008) Comparison of plant growth promotion with Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis in three vegetables. Brazilian Journal of Microbiology. 39: 423-426. Ahmad F, I Ahmad, M S Khan (2006) Screening of free-living rhizospheric bacteria for their multiple plant growth promoting activities. Microbiological Research. 36:1-9. All-Taweil H I, M B Osman, A A Hamid, W M W Yusoff (2009) Development of microbial inoculants and the impact of soil application on rice seedlings growth. American Journal of Agricultural and Biological Science. 4: 79-82. Annimo (2010) Secretara de Agricultura, Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y alimentacin. Servicio de informacin Agroalimentaria y Pesquera. (http://www.siap. gob.mx). Aragn Garca A, J F Lpez Olgun (2001) Descripcin y control de las plagas del amaranto. Benemrita Universidad Autnoma de Puebla. Puebla, Mxico. 32 p.

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Captulo IX. Uso de bacterias promotoras de crecimiento vegetal para aumentar la productividad de amaranto de grano

Valenzuela Soto J H, M G Estrada Hernndez, E Ibarra Laclette, J P Dlano Frier (2010) Inoculation of tomato plants (Solanum lycopersicum) with growth-promoting Bacillus subtilis retards whitefly Bemisia tabaci development. Planta. 231: 397-410. Van Loon L C (2007) Plant responses to plant growth-promoting rhizobacteria. European Journal of Plant Pathology 119: 243-254 Verhagen B W M, J Glazebrook, T Zhu, H S Chang, L C Van Loon, C M J Pieterse (2004) The transcriptome of rhizobacteria-induced systemic resistance in Arabidopsis. Molecular Plant-Microbe Interactions. 17: 895908. Verma J P, J Yadav, K N Tiwari, Lavakush, V Singh (2010) Impact of plant growth promoting rhizobacteria on crop production. International Journal of Agricultural Research. 5: 954-983. Villegas Espinoza J A, E O Rueda Puente, B Murillo Amador, M E Puente, O Grimaldo Jurez, S M Avils Marn, J F Ponce Medina (2010) Efecto de la inoculacin de Azospirillum halopraeferens y Bacillus amyloliquefaciens en la germinacin de Prosopis chilensis. Tropical and Subtropical Agroecosystems. 12: 19-32. Vrbnicanin S, L J Jovanovic, D Bozic, V Raicevic, D Pavlovic (2008) Germination of Iva xanthifolia, Amaranthus retroflexus and Sorghum halepense under media with microorganisms. Journal of Plant Diseases and Protection. XXI: 297-302 Wang Y Q, Y Ohara, H Nakayashiki, Y Tosa, S Mayama (2005) Microarray analysis of the gene expression prole induced by the endophytic plant growth-promoting rhizobacteria, Pseudomonas uorescens FPT9601-T5 in Arabidopsis. Molecular Plant-Microbe Interactions. 18: 385-396.

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Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus spp.)


INDUCED RESISTANCE AGAINST BACTERIAL PATHOGENS IN GRAIN AMARANTH (Amaranthus spp.)

Kena Casarrubias Castillo1 y John P. Dlano Frier1


1Unidad de Biotecnologa e Ingeniera Gentica de Plantas, (Cinvestav-Unidad Irapuato) Km 9.6 del Libramiento norte carretera Irapuato-Len. Apartado Postal 629, C.P. 36821, Irapuato, Gto., Mxico. Autor de correspondencia: jdelano@ira.cinvestav.mx

RESUMEN Para identificar bacterias patgenas en amaranto, se tomaron muestras de hoja de 25 genotipos de amaranto con sntomas de infeccin, que representaban cuatro especies diferentes y un hbrido, los cuales se cultivaron durante tres aos consecutivos (2007-2009) en un campo experimental situado en el municipio de Irapuato, Guanajuato. Se identific a Amaranthus cruentus cv. Tarasca como genotipo resistente y a A. hypochondriacus cv. Revancha como genotipo susceptible a la infeccin por una cepa virulenta de Pseudomonas sp. As mismo, se explor el uso de tratamientos con benzotiadiazol, un anlogo del cido saliclico, metil jasmonato y el contacto con una cepa avirulenta de P. syringae, como estrategias de control contra infecciones con cepas virulentas de la misma especie. Adems, para poder definir el posible origen de la resistencia inducida contra bacterias patgenas en cada tratamiento, se eligieron 63 genes candidatos, seleccionados a partir de bibliotecas substractivas o del anlisis de expresin in silico derivado del transcriptoma de A. hypochondriacus. Despus de un tamizado por Northern blots reversos, se eligieron un total de ocho genes por tratamiento, incluyendo lipoxigenasa 2, aglutinina, catalasa y se validaron

por ensayos de expresin tipo Northern Blot. En un futuro mediante PCR cuantitativo, se evaluar la resistencia a la infeccin contra patgenos bacterianos en plantas de amaranto naturalmente resistentes y en plantas susceptibles previamente sensibilizadas o inmunizadas por los tratamientos mencionados anteriormente. Palabras clave: Amaranto, benzotiadiazol, defensa, metil jasmonato, patgenos bacterianos, resistencia inducida, sensibilizacin. ABSTRACT Symptoms of bacterial disease were observed in leaves of amaranth plants in an experimental field located in Irapuato, Guanajuato, Mexico. In order to understand the mechanisms by which amaranth might cope with the disease, we isolated a number of bacterial pathogens, including Pseudomonas sp. We also identified resistant and susceptible genotypes to infection by a virulent Pseudomonas strain. A total of 25 genotypes of amaranth, comprising 4 different species and a hybrid, were tested in a three-year field study (2007-2009). We identified Amaranthus cruentus cv. Tarasca and A. hypochondriacus cv. Revancha as resistant and susceptible genotypes to infection with a virulent strain of P. syringae,
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respectively. In addition, plants treated with benzothiadiazole, an analog of salicylic acid, or methyl jasmonate and exposed to an avirulent strain of Pseudomonas were tested as a means for the control of a virulent strain of the same bacteria. The expression of 63 genes, selected from subtractive libraries and from an in silico analysis of expression based on transcriptomic data generated in A. hypochondriacus, was tested to determine the possible origin of induced bacterial resistance in each treatment. Eight genes per treatment were selected after a reverse Northern Blot (NB) screening, including a lipoxygenase 2, catalase, agglutinin and pathogenesis-related proteins. These were validated by a NB analysis The expression patterns of these genes will be determined in the near future by qPCR in untreated resistant and treated susceptible amaranth genotypes challenged with a bacterial pathogen. This will be done in order to test their contribution to natural and/or induced resistance. Key words: Amaranth, bacterial pathogens, benzothiadiazole, defense, induced resistance, methyl jasmonate, priming. INTRODUCCIN Las plantas estn continuamente expuestas al ataque de diferentes microorganismos patgenos. La mayora de los patgenos invade solo una parte especfica de la planta y produce una serie de sntomas caractersticos como necrosis, manchas, putrefacciones, entre otros. Para evitar el ataque de estos patgenos, la planta debe ser capaz de detectarlos rpidamente, con el objeto de evitar su proliferacin (Abramovitch et al., 2006) Las plantas pueden perder porciones de su estructura sin que ello traiga consigo problemas de supervivencia, pudiendo inducir la muerte de rganos invadidos por el patgeno para evitar la propagacin de ste al resto de la planta. Este mecanismo de defensa es conocido como respuesta hipersensible (RH), y es uno de los mecanismos ms utilizados por las plantas para evitar la invasin de los organismos patgenos (Hammond-Kossack y Jones, 1996). Algunos patgenos potenciales activan en la planta husped una rpida respuesta de defensa, que
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es muy especfica. El modelo original postulaba que esto ocurre cuando el patgeno porta un gen de avirulencia (Avr) que interacciona especficamente con el correspondiente gen de resistencia del husped (R). Este mecanismo se conoce con el nombre de interaccin gen por gen (Flor, 1971). Hoy en da, se ha modificado este concepto de manera que no es solamente el reconocimiento directo del producto del gen de avirulencia del patgeno, o efector, por los genes de resistencia de la planta (que en su mayora son receptores polimrficos del tipo NB-LRR), sino tambin cambios (e.g. fosforilacin, protelisis parcial, cambios de configuracin, interacciones protena-protena, etc.) producidos por el efector en una o varias protenas clave de la planta husped. Este reconocimiento inicia la cascada de sealizacin y una re-programacin transcripcional que da lugar a la respuesta inmune generada por efectores o ETI, por sus siglas en ingls, cuya caracterstica distintiva es la muerte celular localizada conocida como la reaccin hipersensible o HR que impedir la invasin de la planta por el patgeno, (Jones y Dangl, 2006; McHale et al., 2006; Hann et al., 2010; Dodds y Rathjen, 2010). Entre las respuestas controladas por una rpida activacin transcripcional est la de los llamados genes de defensa o de respuesta a patgenos, que dan lugar a la resistencia sistmica adquirida (RSA), la cual es efectiva contra un amplio espectro de patgenos (Ryals y col., 1996; Jones y Dangl, 2006). La RSA es dependiente de la acumulacin endgena de cido saliclico (AS) y est asociada con la expresin coordinada de un grupo de genes especficos (Ward et al., 1991). Estos genes RSA-especficos incluyen a los conocidos como protenas relacionadas a patognesis o PR (del ingls Pathogenesis-Related proteins) (Van Loon, 1985) y sta ltima es reportada para muchas interacciones planta-patgeno, de hbito ms bien biotrfico o hemi-biotrfico, que resultan en una resistencia de amplio espectro. El cido jasmnico (AJ) meda las respuestas de defensa contra insectos herbvoros y patgenos necrotrficos, conlleva en ltimo lugar a la expresin de genes involucrados en defensa, como por ejemplo defensinas (PDF1.2) o protenas antifngicas, como osmotina y tionina, inhibidores de proteinasas (IP), lectinas y otro tipo de genes PR.

Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)

El amaranto es una planta dicotilednea C4, perteneciente a la familia de las amarantceas. Slo tres especies de amaranto se utilizan actualmente para la produccin de grano: A. cruentus, A. caudatus y A. hypochondriacus. Se han reportado algunos casos de bacteriosis en amarantos de grano y silvestres. Costea et al. (2003) indicaron que A. retroflexus, un amaranto silvestre considerado como maleza agresiva en muchos cultivos comerciales por su resistencia a herbicidas que inhiben el fotosistema II (http:// www.weedscience.org/In.asp), tambin es hospedante alterno asintomtico de numerosos patgenos bacterianos que pueden llegar a infectarlos, como Clavibactacter michoganensis, Xanthomonas phaseoli, X. campestris, P. viridiflaba y P. syringae patovares tomato y syringae. As mismo, en Mxico A. hybridus se ha reportado como hospedante de X. campestris pv. phaseoli (Huerta y Rodrguez, 1994). Sin embargo, los patgenos que afectan el amaranto son principalmente de origen fungoso u oomiceto, entre las que sobresalen la roya blanca causada por Albugo bliti y podredumbres de hojas, inflorescencias y tallo causadas por Choanephora cucurbitarum (pudricin hmeda del tallo) Pythium aphanidermatun (secadera), Macrophoma spp. (mancha negra del tallo) y Thecaphora amaranthi (carbn del amaranto) (Rojas-Martnez et al., 2009). Otros estudios indican que las heridas o insectos vectores barrenadores de tallo son necesarios para las infecciones fungosas en plantas de amaranto (Blodgett et al., 2002; 2004). La principal enfermedad viral es Amaranthus Mottle Virus, que reduce el crecimiento, retarda la floracin y afecta negativamente la produccin de grano (Snchez et al., 1990), mientras que la fitoplasmosis ha sido recientemente identificada como una enfermedad de amaranto, causando sntomas como la escoba de bruja, que se manifiesta con la prolilferacin de brotes y reduccin de entrenudos, clorosis, deformacin en el meristemo apical y filodia (Ochoa-Sanchez et al., 2009; Rojas-Martnez et al., 2009. Poco se sabe acerca de los genes que se expresan como parte de las respuestas defensivas contra patgenos en amaranto. Sin embargo, se han realizado algunos esfuerzos para generar conocimiento sobre las protenas y genes que estn involucrados en la defensa.

Entre stos sobresalen los inhibidores dobles de alfa amilasa y tripsina, las cistatinas, una lectina tipo aglutinina, pptidos antimicrobianos (de unin a quitina clase I) y protenas inactivadoras de ribosomas como las Amarandinas 1 y 2 (Broekaert et al., 1992; Valds-Rodrguez et al., 2007; Chagolla-Lpez et al., 1994; Wu et al., 2006; Roy et al., 2006). Recientemente, se generaron bancos sustractivos y bibliotecas de ADNc a partir de plantas de A. hypochondriacus y A. cruentus sometidos a distintas condiciones de estrs (Casarrubias-Castillo 2009, Navarro Melndez, 2009. Con los resultados de esta primera estrategia experimental se increment significativamente la identificacin del nmero de genes defensivos identificados en amaranto (Fomsgaard et al., 2010). El posterior anlisis transcriptmico del amaranto de grano, permiti la identificacin de miles de genes inducidos en respuesta a infeccin bacteriana, herbivora por insectos masticadores, salinidad y/o sequa (Dlano-Frier et al., 2011). Esta informacin sirvi como base para la seleccin de los genes de defensa contra bacterias patgenas inducidos por diferentes evocadores qumicos, por una interaccin planta-patgeno avirulenta o presentes en genotipos de amaranto naturalmente resistentes, que se describirn con ms detalle en el resto de este captulo. MATERIALES Y MTODOS Este estudio tuvo como objetivos principales identificar genotipos de amaranto susceptibles y resistentes a infeccin por patgenos bacterianos e identificar aquellos genes responsables de la resistencia natural o inducida a estos patgenos. Para la induccin de resistencia se exploraron tres opciones: i) la aplicacin de benzotiadiazol (BTH), un anlogo del cido saliclico capaz de inducir la RSA contra patgenos biotrficos y hemi-biotrficos; ii) la aplicacin de metil jasmonato, para la induccin de respuestas de defensa contra insectos masticadores, algunos insectos chupadores y patgenos de hbito necrotrfico, y iii) el contacto con una bacteria avirulenta para la induccin de una RSA similar a la inducida por BTH. Para la identificacin y seleccin de genes de resistencia inducidos en cada uno de los tratamientos, se utiliz la informacin generada por bibliotecas substractivas derivadas
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de plantas sometidas a varias condiciones de estrs (a)bitico (Fosmsgaard et al., 2010) y por el transcriptoma de novo de A. hypochondriacus (Dlano-Frier et al., 2011). Por otro lado, el aislamiento de posibles patgenos bacterianos de amaranto se realiz en plantas de 25 diferentes genotipos de amaranto que mostraban sntomas de infeccin bacteriana, como clorosis, necrosis extendida o localizada, manchado, etc. Las plantas se colectaron de un campo experimental, ubicado en la localidad de Valencianita municipio de Irapuato Guanajuato (24 44 44 LN y 101 19 19 LO) a 1745 msnm, durante tres aos consecutivos (2007-2009). Los especmenes con sntomas se llevaron al laboratorio para determinar por tcnicas convencionales la presencia de bacterias patgenas. Se obtuvieron varios aislados de bacterias, los cuales posteriormente fueron analizados de forma individual para verificar su virulencia en plantas de amaranto identificadas previamente como susceptibles. Dentro de los 25 genotipos de amaranto analizados, se encontraban varios cultivares de especies productoras de grano y follaje, como A. caudatus, A. cruentus y A. hypochondriacus, y A. pumilus y A. mantegazzianus, respectivamente. En el estudio tambin se incluy un hbrido de A. cruentus y A. hypochondriacus y A. hybridus, est ltima es una especie silvestre utilizada en ocasiones para consumo humano (Tabla 1). Para los experimentos en invernadero y cuarto de crecimiento, las semillas de amaranto se colocaron a una profundidad de 1 cm en tierra de germinacin estril compuesta por pasta de coco y sustrato de uso general en partes iguales. Se mantuvieron en cuarto de crecimiento con fotoperiodo 16 h luz y 8 h de oscuridad, a una temperatura de 25 2C y 80% de humedad relativa. A los 10 das de crecimiento se trasplantaron a macetas con capacidad del 1.3 L con un sustrato compuesto por la mezcla de SunShine Mix 3, tierra de hoja, tierra lama, vermiculita y perlita en relacin 3:2:1:1:1 y se mantuvieron bajo las mismas condiciones. Las plantas fueron regadas diariamente con agua y se fertilizaron 15 das despus del trasplante. Se usaron 10 plantas de cada variedad para los pruebas de patogenicidad para ello se emple un aislado de Pseudomonas sp., identificada bioqumica y molecularmente
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como P. argentinensis. Tambin se usaron cepas de coleccin de P. syringae pv. syringae 3525 y P. syringae pv. tabaci PTBR2004 (donadas por el Departamento de Entomologa y Patologa de Plantas de la Universidad Estatal de Oklahoma), cuya caracterizacin en el laboratorio indic que las cepas establecieron una interaccin avirulenta y virulenta con amaranto, respectivamente. Los ensayos de infeccin se hicieron con cultivos de estas especies incubados por 24 h a 28C en medio KB para Pseudomonas, se empleo la tecnologa descrita por ValenzuelaSoto et al. (2011). Resumiendo, se tom inoculo bacteriano y se disolvi en buffer de fosfatos estril 0.5 M pH 7.0, hasta ajustarlo 1 x 106 Unidades Formadoras de Colonia/mL (UFC/ mL). El ensayo de infeccin se realiz en plantas de 40 das, los 25 genotipos se inocularon por inflitracin con 40 L de la solucin bacteriana utilizando una jeringa de 1 mL. Tambin se hicieron inoculaciones por aspersin uniforme de 2 mL de inculo bacteriano sobre el follaje de las plantas; las plantas control fueron infiltradas o asperjadas slo con buffer de fosfatos estril. A los 10 das despus de la inoculacin se tomaron fotografas a cada una de las hojas que fueron infiltradas. Posteriormente, las fotografas se analizaron con el programa Assess 1.4: Image Analysis Software for Plant Disease Quantification (Lamari, American Phytopathological Society), que cuantifica el porcentaje de rea afectada. Para graficar el rea afectada de cada genotipo se dividi el valor del rea afectada por la bacteria entre el rea del control no infectado. Para los diferentes tratamientos de induccin de resistencia se utilizaron plantas de 5 semanas de edad y se les aplic S-methil benzo [1, 2, 3] thiadiazole-7-carbothiate (acibenzolarS -metil o BTH), un anlogo del AS producido por Syngenta, comercializado con el nombre de BION en Europa o ACTIGARDTM en los Estados Unidos (Ku, 1982; Riveros-Angarita, 2011) o metil jasmonato (MeJA; SigmaAldrich Chemical). El ensayo de resistencia por interaccin planta-patgeno se hizo siguiendo el protocolo de infeccin bacteriana mencionado anteriormente. El BION se asperj como solucin a 1.5 mM disuelto en agua, mientras que las plantas control fueron asperjadas con agua estril. El MeJA se aplic en forma localizada con 16 gotas distribuidas uniformemente sobre

Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)

la hoja (dos por hoja); en total, se aplicaron 250 g de MeJA disuelto en Triton a 0.01% y etanol por planta; las plantas control slo recibieron etanol y Triton a 0.01%. Para el anlisis estadstico de los datos se us el programa Vassar Stats disponible en lnea: http://vassarstats.net/. Se us la prueba t de student para dos muestras independientes con P 0.01. Los genes se seleccionaron a partir de las bibliotecas sustractivas de ADNc (Casarrubias-Castillo, 2009) y del anlisis de expresin in silico del transcriptoma de novo de A. hypochondriacus (Dlano-Frier et al., 2011). De stos ltimos, se seleccionaron aquellos genes inducidos en el tratamiento de infeccin con bacteria, y algunos otros que tambin se seleccionaron para hervivora por insectos, ya que los genes expresados en ese tratamiento probablemente estn mediados por AJ. Tambin se seleccionaron genes que codifican a protenas de respuesta a patognesis y otros genes relacionados con defensa (Dlano-Frier et al., 2011). Adems, se seleccionaron tres genes de expresin constitutiva o de mantenimiento celular (usados como referencia en todos los ensayos de expresin), genes involucrados con la generacin de especies reactivas de oxgeno y otros relacionados con la sntesis del cido jasmnico e inducidos por jasmnico (e.g. inhibidores de proteasas y jacalinas) y otros involucrados en la RSA (e.g. un gen relacionado con la respuesta hipersensible). La lista completa de genes se presenta en la Tabla 2. De estos 63 genes se hizo una seleccin adicional para cada uno de los tratamientos mediante un tamizado realizado mediante ensayos de expresin tipo Northern blot reverso, seguidos por ensayos de confirmacin por ensayos tipo Northern blot. Para el anlisis de expresin tipo Northern blot se colectaron hojas a las 12 y 24 h post inoculacin. Se utilizaron 10 g de ARN en un gel desnaturalizante. El ARN se trasfiri a una membrana de nylon (Hidrobond-N+); una vez transferido el ARN, se fij a una la membrana de nylon durante cuatro minutos en un Crosslinker de luz UV. Posteriormente, se llev acabo la pre-hibridacion de la membrana a 65C con buffer de hibridacin. Para la obtencin de las sondas, se parti de la sntesis del DNAc de 1 g de ARN total, 1 L de Oligo dT, 1L de la

mezcla de dNTPs y se llev a un volumen final de 12 L con agua destilada estril. Se dej a una temperatura de 65C durante 5 min. Despus se le agregaron 4 L de buffer 5 , 2 L de DTT 0.1 M y 1 L de la enzima transcriptasa reversa. Se dej incubar 50 min a 42C y posteriormente 15 min a 70C. Para las reacciones de PCR, se tom 4 L del ADNc y se le agreg la mezcla de reaccin (agua destilada estril, buffer, dNTPs. MgCl, Taq polimerasa y los oligonucletidos correspondientes). Para todos los genes, se utiliz el siguiente programa: 94C, tres minutos; 40 ciclos con una temperatura de desnaturalizacin de 94C, por 30 s, temperatura de alineamiento correspondiente para cada gen por 30 s, y temperatura final 72C de 30 a 45 s, seguidos por una extensin final a 72C de diez minutos. La reaccin de marcaje de las sondas se realiz de acuerdo a las indicaciones del proveedor (RediPrime II DNA Labeling System, INVITROGEN). Se parti de 100 ng de ADNc, se desnaturaliz a 95C por 5 min y se agreg 1 L de dATP, dGTP, dTTP y dCTP32; 20 L de cebadores de secuencia aleatoria; 1 L de la enzima Klenow y 5 L de agua estril. Esta mezcla se dej incubar a 37C por diez min. Para los lavados y exposicin, las membranas se colocaron en una solucin con SSC 2/ SDS 0.1% por 20 min a temperatura ambiente con agitacin suave, seguido de SSC 1/ SDS 0.1 % por 15 min a 65C y posteriormente con SSC 0.1/ SDS 0.1% a 65C el tiempo necesario para eliminar fondos en la membrana. Las membranas se colocaron dentro de un plstico evitando burbujas y retirando el exceso de solucin con papel absorbente. En el cuarto oscuro se expuso una pelcula de rayos X (Kodak XOMATL LS; Eastman Kodak Co.) por encima del plstico que contena la membrana; sta se coloc dentro de un cassette de exposicin y se guard a -80 C el tiempo necesario. Finalmente, se descongel el cassette y se revel la pelcula en cuarto oscuro. Para los ensayos de Northern blot reverso se utiliz como sonda el ADNc total obtenido de cada tratamiento (i.e. BTH, MeJA e interaccin avirulenta) a partir de 5 g de ARN. Del ADNc se marc con dCTP32 como se mencion anteriormente y en las membranas se hizo una reaccin de PCR para cada gen y se fijaron en una membrana 5 L del producto de PCR. Se llev a cabo la hibridacin por 18 h a
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65C. Los lavados de la membrana se realizaron con una solucin de SSC 2/ SDS 0.1% por 20 min a temperatura ambiente con agitacin suave y se expusieron por 24 h como se mencion anteriormente. RESULTADOS Y DISCUSIN En los ensayos de infeccin de los 25 genotipos de amaranto se logr reproducir sntomas de clorosis y necrosis observados en campo en etapas tempranas de desarrollo de las plantas, aunque la severidad fue menor. Se identific a tres genotipos de A. cruentus, R-127, Amont y Tarasca, como resistentes a la infeccin bacteriana (Figura 1). En comparacin con A. cruentus, los genotipos de A. hypochondriacus presentaron lesiones necrticas; mientras que, los cultivares Nepal 2071, Nepal 2255 e India 38040, presentaron lesiones clorticas (Figura 2). El nico genotipo resistente a la infeccin por P. argentinensis fue el cultivar 280 FK-FH1, una planta de estatura corta y precoz. En los cultivares Nepal 2071, Nepal 2255 e India 38040 se observ infeccin en las hojas infiltradas, motivo por el cual no se consideraron cultivares resistentes, adems, de acuerdo al anlisis estadstico no se encontr diferencia significativa de la susceptibilidad a la infeccin por el patgeno entre dichos cultivares; la explicacin radica en que la media del rea daada result muy alta debido a la alta susceptibilidad al dao mecnico generado al momento de infiltrar mostrado por estos genotipos. En las otras especies de amaranto como A. pumilus, A. caudatus y A. hybridus se presentaron lesiones clorticas, mientras que en A. mantegazzianus y el amaranto hbrido se present necrosis (Figura 3). De estos genotipos, el nico resistente fue A. caudatus cv. C48A. En la Figura 4 se observa el porcentaje de dao en los 25 genotipos de amaranto. Los cultivares de A. hypochondriacus muestran un mayor porcentaje de rea afectada, mientras que en los genotipos de A. cruentus el porcentaje es menor en 4.5%. Segn estos datos se puede inferir con cierto grado de certeza que A. cruentus es ms resistente que A. hypochondriacus a la bacteriosis. Para evaluar las vas de defensa dependientes del cido saliclico y cido jasmnico se aplicaron tratamientos como BTH un producto en el mercado anlogo al cido
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saliclico y metil jasmonato, el ster metlico del cido jasmnico. Adicionalmente se infectaron plantas de amaranto con P. syringae pv. syringae 3525 para evaluar genes durante una interaccin incompatible (ver Figura 5B). El BTH ha mostrado ser un inductor de la SAR y de la expresin de protenas de respuesta a patognesis (Gorlach et al., 1996). En amaranto, los genes inducidos con BTH se muestran en la Figura 6. Se observ un incremento en la expresin de genes involucrados en la organizacin de la pared celular como una extensina. Al mismo tiempo se observ la expresin de un inhibidor de pectin metilesterasas, que podra tener una funcin relacionada con la pared celular, aunque algunos autores atribuyen este mecanismo a la funcin de regulacin de respuestas defensivas, sobre todo las que involucran dao, por la inhibicin de la generacin de oligogalacturnidos biolgicamente activos, capaces de iniciar una cascada de sealizacin (Doares et al., 1995; An et al., 2008; 2009). En el 2010, Maffi et al. encontraron un reforzamiento de la pared celular de plantas de frijol tratadas con BTH bajo la infeccin con Uromyces appendiculatus. En este estudio se observ la penetracin de hifas slo a travs de los estomas y una acumulacin de compuestos fenlicos y deposicin de callosa en los sitios de dao por el patgeno. Por otro lado, en otro estudio en plantas de cacao tratadas con BTH se observ un incremento en el porcentaje de genes involucrados en la organizacin de la pared celular, sntesis de protenas y un decremento en los genes involucrados en defensa y transporte (Verica, 2004), mientras que plantas de chile silenciadas en el gen CaPMEI1, el cual codifica para un inhibidor de pectin metilesterasas, mostraron un aumento en la susceptibilidad al ser inoculadas con X. campestris pv. vesicatoria, y la sobreexpresin de ste mismo gen aument la resistencia contra P. syringae pv. tomato (An et al., 2008). En la Figura 6, se observa tambin un incremento en la expresin de un gen que codifica para una protena de transporte vesicular SNARE. Estudios recientes han revelado la existencia de una maquinaria secretora comprometida con la ejecucin de las respuestas inmunes extracelulares. Como resultado de diferentes investigaciones se han descrito una compuesta

Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)

por asociados de vesculas y una red de protenas SNARE mediada por las vas de exocitosis, que al parecer impulsan la secrecin de ccteles antimicrobianos que contienen protenas, molculas pequeas, clulas y mdulos de pared en el espacio apoplstico (Collins et al., 2003; An et al., 2006; Lipka et al., 2008). Adicionalmente, se indujo en este tratamiento un gen que codifica para una arginasa. En arabidopsis, la arginasa se acumula a nivel proteico al interactuar con P. syringae pv. tomato DC3000 (Jones et al., 2006), mientras que en plantas de jitomate se ha observado su induccin por dao mecnico y metil jasmonato. Adems, este gen sobre regula su expresin en plantas retadas con este patgeno virulento (Chen, 2004). Alternativamente, la arginasa juega un rol importante en la regulacin del metabolismo de la L-arginina a xido ntrico (NO) y se cree que desempea un papel en la sealizacin en interacciones compatibles e incompatibles y podra estar tambin involucrada en la re-movilizacin de nitrgeno durante las respuestas de defensa en plantas (Jones et al., 2006). En el tratamiento con BTH se indujo igualmente un gen que codifica para una proteasa asprtica, una clase de endopeptidasa que se activa a pH cido y que se ha comprobado que tiene actividad antimicrobiana Esta enzima se acumula en grandes cantidades en cultivares de papa infectados con P. infestans (Guevara, 2002). Por otro parte, la jacalina se expres en todos los tratamientos (Figuras 6, 7 y 8). Estos compuestos son un subgrupo de protenas con uno o ms dominios de lectinas asociados con estmulos, ya sean biticos o abiticos, y su relacin con la resistencia es poco entendida. Sin embargo, se ha observado su induccin en trigo bajo infecciones patognicas y despus del tratamiento con fitohormonas como AJ y AS (Xiang et al., 2011). En el tratamiento con metil jasmonato (Figura 7) se indujo la expresin de genes involucrados en la explosin oxidativa, como la catalasa, la glutatin-S-transferasa y una de las dos ascorbato peroxidasas analizadas. La induccin de ste tipo de protenas en arroz fue documentada por Rakwa (1999), y sustentada por el trabajo de Mich (2005), que indica que AJ posiblemente est involucrado en la mediacin de la respuesta hipersensible. Al contrario, en el tratamiento con P. syringae

pv. syrinage (interaccin avirulenta, Figura 8), se observa una represin de las dos ascorbato peroxidasas, y de otros genes involucrados ya sea en la sntesis o respuesta a AJ, como la aleno oxido ciclasa, una cisteina proteasa, y lipoxigenasas. Interesantemente, algunos de stos genes son inducidos por los tratamientos con MeJA. Lo que sugiere que la interaccin avirulenta puede estar reprimiendo los genes de respuesta a AJ para potenciar la sealizacin por AS. Esto contrasta con lo que sucede con la infeccin con ciertos patovares virulentos de Pseudomonas que producen coronatina como factor de virulencia para activar las ruta de sealizacin del AJ y promover la infeccin (Block et al., 2005; Zheng et al., 2012). Es importante recalcar que este tamizado se realiz solamente a las 24 horas pos-tratamiento. Pronto se reforzar y validar esta informacin haciendo anlisis a diferentes tiempos despus de la aplicacin de los diferentes tratamientos. Tambin se tiene pensado evaluar el efecto que estos tratamientos pudieran tener sobre el crecimiento y productividad de amaranto. Datos preliminares indican que el BTH afecta negativamente ambos parmetros, por lo que su posible aplicacin para inducir resistencia a patgenos en amaranto podra verse comprometida. En los ensayos de infeccin con Pseudomonas sp., tanto en A. cruentus cv. Tarasca, considerada como resistente a este patgeno, como en A. hypochondriacus cv. Revancha, que result medianamente susceptible (Figura 4), se evalu la expresin la lipoxigenasa, aglutinina y catalasa a las 12 y 24 h post inoculacin. Los resultados mostrados en la Figura 9, indican que la expresin de los tres genes fue ms rpida e intensa en A. cruentus que en A. hypochondriacus, lo que sugiere que pueden estar contribuiyendo a la resistencia en esta especie. Como apoyo a lo anterior est la funcin clave de las lipoxigenasas en la sntesis de hidroperxidos, que son utilizados no slo para la sntesis de AJ, sino otras oxilipinas, voltiles y metabolitos antimicrobianos que funcionan como seales y/o en la defensa de plantas (Allmann et al., 2010). Ejemplo de esto es la acumulacin de POTLX-3 (un gen que codifica para una lipoxigenasa) en plantas de papa tras la aplicacin de etileno, MeJA y el reto con cepas virulentas y avirulentas de Phytophthora infestans, un oomiceto causante
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

del tizn tardo de la papa (Kolomiets et al., 2000). De acuerdo a estos autores, la expresin de este gen fue indicativa de que las defensas mediadas por AJ haban sido activadas. As mismo, la aglutinina de amaranto es una lectina, de la cual se ha documentado su papel defensivo en contra fidos (Wu et al., 2006), Mientras que la expresin de catalasa sugiri la activacin de un proceso de regulacin de un posible exceso de especies reactivas de oxgeno causado en respuesta a la infeccin, ya que esta enzima puede catalizar la descomposicin del perxido de hidrgeno en oxgeno y agua, aunque tambin puede promover la oxidacin con H2O2 de varios metabolitos, incluyendo aldehdos, alcoholes y compuestos fenlicos (Mhamdi et al., 2010). Esta funcin est en aparentemente contradiccin con la conocida funcin del perxido de hidrgeno en la inhibicin del crecimiento de patgenos y en la activacin de ciertas vas de transduccin de seales que inducen respuestas de defensa. Por ello, la importancia de la induccin/ inhibicin de catalasas durante la patognesis ha sido centro de debate. La inhibicin de catalasa por AS fue propuesta en un principio como uno de

los mecanismos por medio de los cuales el AS mediaba respuestas en tabaco. Sin embargo, se ha cuestionado la habilidad del AS para inhibir especficamente a la catalasa in vivo, ya que las concentraciones requeridas para la inhibicin in vitro son muy elevadas, adems de que estos mecanismos pueden llevarse a cabo nicamente en compartimentos celulares especficos. Adems, plantas transgnicas de tabaco deficientes en Cat1 y Cat2 no se vieron afectadas en su respuesta relacionada a patognesis (PR) bajo condiciones normales de crecimiento, lo que implicaba que la inhibicin de catalasa no es suficiente para generar una seal de activacin de respuestas PR. Incluso se encontr que plantas de tabaco deficientes en Cat1 fueron ms susceptibles a infeccin (Dat et al., 2000). CONCLUSIONES Hasta el momento todo indica que el tipo de sntomas y magnitud de las infecciones producidas por patgenos bacterianos biotrficos en amaranto es altamente dependiente de la especie, ya que A. cruentus result ser mucho

Cuadro 1. Genotipos de Amaranto incluidos en el presente estudio.

No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
* Obtenidas del banco de germoplasma conservado en la Universidad Estatal de Iowa (Iowa State University, ISU)

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Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)

Cuadro 2. Genes seleccionados para evaluar la expresin en plantas de amaranto con diferentes tratamientos.

1Tomado de las bibliotecas substractivas; el resto, del transcriptoma. 2Genes constitutivos de referencia

Amaranthus cruentus
CV MEXICANO CONTROL INFECTADA CV R127 CONTROL INFECTADA CV AMONT CONTROL INFECTADA CV GUIEM CONTROL INFECTADA

CV TARASCA CONTROL INFECTADA

CV DON LEN CONTROL INFECTADA

CV CANDIL CONTROL INFECTADA

Figura 1. Ensayo de infeccin en A. cruentus con Pseudomonas sp.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Amaranthus hypochondriacus
CV REVANCHA
CONTROL INFECTADA

CV NUTRISOL
CONTROL INFECTADA

CV MORELOS
CONTROL INFECTADA

CV 280-FK
CONTROL INFECTADA

CV SAN ANTONIO
CONTROL INFECTADA

CV ROSITA
CONTROL INFECTADA

CV ARTASA
CONTROL

CV TULYEHUALCO

CV HUIXCAZDH
INFECTADA

CV TEHUACN
CONTROL INFECTADA

INFECTADA CONTROL

INFECTADA CONTROL

CV NEPAL 2071
CONTROL INFECTADA

CV NEPAL 255
CONTROL INFECTADA

CV INDIA
CONTROL INFECTADA

Figura 2. Reaccin de infeccin en A. hypochondriacus con Pseudomonas sp.

Otras especies de Amaranthus


A. pumilus
CV RAFIN CONTROL INFECTADA CONTROL

A. caudatus
CV 48A INFECTADA CONTROL

Hbrido
CV K535 INFECTADA

A. mantegazzianus
CV DON JUAN CONTROL INFECTADA

A. hybridus
CV ECUADOR CONTROL INFECTADA

Figura 3. Reaccin de infeccin en A. pumilus, A. caudatus, amaranto hbrido, A. mantegazzianus y A. hybridus con Pseudomonas sp.

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Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)


40.00 35.00
Proporcin de rea afectada

Ensayo de infeccin con Pseudomonas argentinensis

30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00


4.35 2.68 2.34 3.82 1.64 V6 V9 3.25 3.10 4.75 1.97 1.74 11.96 8.12 6.39 6.96 6.54 4.13 1.46 V20V V21 22 2.44 1.31 V24 2.39 2.92 6.17

10.10 5.85 5.86

V1

V2

V4

V13

V14

V7

V8

A. cruentus

. caudatus

Figura 4. Grfica del porcentaje de dao en diferentes genotipos de Amaranto infectados con Pseudomonas sp.

A)

B)

C)

Figura 5. G. Interaccin avirulenta y virulenta en amaranto. A) Plantas control B) Interaccin avirulenta con P. syringae pv. syringae 3525. C) Interaccin virulenta con P. siringae pv tabaci PTBR2004. K. Casarrubias Castillo y J. P . Dlano Frier

A.

ma nte

H b rid o ga zzi an us A. hy bri du s

V10 V12V V15 16 V18 V19 Genotipos A. hypochondriacusA

V23

V3

V5

V11

V17

V25

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Figura 6. Ensayo tipo Northern blot reverso de plantas tratadas con BTH. T= tratamiento, Ct= controles. El ensayo se realiz 24 h pos tratamiento. Para la identidad de los genes, referirse al cuadro No. 2.

Figura 7. Ensayo tipo Northern blot reverso de plantas tratadas con metil jasmonato. T = tratamiento, Ct = controles. El ensayo se realiz 24 h pos tratamiento.

Figura 8. Ensayo tipo Northern blot reverso de plantas tratadas con Pseudomonas syringae pv. syringae 3525. T = tratamiento, Ct = controles. El ensayo se realiz 24 h pos tratamiento.

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Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)

Figura 9. Ensayos tipo Northern blot en plantas de A. cruentus cv. Tarasca y A. hypochondriacus cv. Revancha, infectadas con Pseudomonas sp.

ms resistente que A. hypochondriacus y otras especies, incluyendo A. hybridus, una especie silvestre considerada por algunos estudiosos del amaranto como portador sano de bacterias patgenas, al igual que A. retroflexus. Los resultados tambin sugieren que muchas de las bacterias identificadas en amarantos enfermos son patgenos oportunistas, que podran penetrar en la planta a travs de heridas o por la accin de algn insecto vector. Adems, se inici el anlisis de todo un arsenal de genes de defensa provenientes del anlisis transcriptmico de amaranto y de bibliotecas substractivas de ADNc con el fin de definir los mecanismos que utiliza esta planta para defenderse contra estos patgenos, ya sea naturalmente o mediante la induccin de respuestas defensivas por evocadores qumicos o patgenos avirulentos. El posible costo fisiolgico de la induccin de resistencia en cuanto a crecimiento y rendimiento de grano tambin est en proceso de evaluacin para determinar la factibilidad de emplearlos en programas de agricultura sostenible, tal y como se ha hecho algunos cultivos comerciales, como trigo y arroz. AGRADECIMIENTOS Este trabajo se realiz gracias al apoyo brindado por la Unin Europea (Proyecto AMARANTH: FUTURE-FOOD, Contrato No. 032263), Mxico Tierra de Amaranto A.C. y la Fundacin Deborah Presser-Velder. Se agradece tambin

al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) por el apoyo econmico otorgado a KCC para la realizacin de este proyecto (Beca No. 210116). BIBLIOGRAFA Abramovitch R B, J C Anderson, G B Martin (2006) Bacterial elicitation and evasion of plant innate immunity. Nature Reviews Molecular Cell Biology 7: 601-611. Allmann S, R Halitschke, R C Schuurink, I T Baldwin (2010) Oxylipin channelling in Nicotiana attenuata: lipoxygenase 2 supplies substrates for green leaf volatile production. Plant Cell & Environment 33: 2028-2040. An S H, H W Choi, J K Hong, B K Hwang (2009) Regulation and function of the pepper pectin methylesterase inhibitor (CaPMEI1) gene promoter in defense and ethylene and methyl jasmonate signaling in plants. Planta 230: 12231237. An S H, K H Soh, H W Choi, I S Hwang, S C Lee, B K Hwang (2008) Pepper pectin methylesterase inhibitor protein CaPMEI1 is required for antifungal activity, basal disease resistance and abiotic stress tolerance. Planta 228: 61-78.

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Captulo X. Induccin de resistencia contra patgenos bacterianos en amaranto (Amaranthus sp.)

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Recursos Genticos

Captulo XI

Conservacin de los recursos genticos de amaranto (Amaranthus spp.) en Mxico


CONSERVATION OF AMARANTH (Amaranthus spp.) GENETIC RESOURCES IN MEXICO Eduardo Espitia Rangel1, Diana Escobedo Lopez1, Cristina Mapes Snchez2, Micaela de la O Oln3, Miriam Aguilar Delgado1, Juan Manuel Hernndez Casillas3, Alma Velia Ayala Garay3, Patricia Rivas Valencia3, Guillermina Martnez Trejo3, Mara de la Luz Ramrez Vzquez3 y Sara Hirn Morn Bauelos4
1INIFAP Campo Experimental Bajo km 6.5 Carr Celaya San Miguel de Allende, (461)6177108 2Jardn Botnico UNAM cmapes@ibunam.ibiologia.unam.mx 3INIFAP Campo Experimental Valle de Mxico km 13.5 Carr los Reyes-Texcoco. 4INIFAP Campo Experimental Zacatepec. Km 0.5 Carr Zacatepec-Galeana, Morelos Autor para correspondencia: espitia.eduardo@inifap.gob.mx

RESUMEN El amaranto es un recurso puede ayudar a solucionar los problemas alimentacin, de desnutricin y salud en la poblacin. Sin embargo, falta realizar mejoramiento gentico para la obtencin de variedades ms productivas y con mejores caractersticas nutricionales. El primer paso es la recoleccin, estudio y conservacin de la variabilidad gentica disponible. Por lo que el objetivo del presente estudio fue colectar, conservar y caracterizar el germoplasma de amaranto en Mxico. Dentro de los resultados ms relevantes en las cuatro reas estratgicas. Conservacin in situ: en esta rea se cuenta con la informacin etnobotnica reunida en las zonas productoras tanto de grano como de verdura, en relacin al mejoramiento participativo se ha avanzado en la seleccin de variedades desde el punto de vista de productores e industriales. En conservacin ex situ se logr colectar 550 colectas para grano, 150 de verdura y 75 de materiales silvestres. As mismo en uso y potenciacin se realiz la caracterizacin de 552 accesiones de la coleccin que el INIFAP reuni en la dcada de los ochentas, de igual manera se est rescatando mucho de ese germoplasma que estaba en riesgo de perderse. Se encontr una amplia diversidad gentica de materiales

cultivados en los estados de Tlaxcala (San Miguel del Milagro y Santa Apolonia Teacalco), Estado de Mxico (Amecameca, Cuijingo, Juchitepec y Ozumba), Puebla (Cohuecan, San Juan Amecac y Tochimilco), Morelos (Huazulco), Guanajuato (Ciudad Manuel Doblado), y Distrito Federal (Delegacin Xochimilco), principalmente de las especies Amaranthus hypochondriacus y A. cruentus, as como cruzamientos entre especies silvestres y cultivadas. Debido a la amplia distribucin del germoplasma silvestre se colect en lugares desde climas templados hasta climas clidos, principalmente en los estados de Puebla, Estado de Mxico, Guanajuato, San Luis Potos, Coahuila, Distrito Federal, Tlaxcala y Oaxaca. Se colectaron accesiones de las especies A. hybridus, A. powellii, A. retroflexus, A. palmeri y A. spinosus en climas templados, y A. spinosus, A. hybridus y A. dubius en climas clidos. Dentro de la coleccin estudiada se encuentran cultivares criollos y mejorados; en estos ltimos hay predominancia de grano blanco, as como un mayor nmero de razas primarias. Es importante continuar con las exploraciones del gnero Amaranthus ya que la prdida de variabilidad ha continuado de manera acelerada, y existen especies que son fuentes importantes de germoplasma en el mejoramiento gentico. Dentro del material colectado se identificaron
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materiales con caractersticas valiosas como el crecimiento indeterminado y materiales preponderantemente machos. Palabras clave: Amaranto, alegra, Amaranthus, colectas, germoplasma, diversidad gentica, recursos fitogenticos y especies nativas. ABSTRACT Amaranth is a resource that can help to solve problems of feeding, undernourishment and health in the population. Nevertheless, genetic improvement is needed to obtain more productive varieties and with better nutritional characteristics. The first step is the collection, study and conservation of the genetic variability available. The objective available genetic variability was to collect, to conserve and to characterize germplasm of amaranth in Mexico. Advances of results in the four strategic areas have been done. Conservation in situ: most of ethnobotanical information on this strategic area has been collected in the producing grain and vegetable zones. In relation to the participative improvement we advanced in the selection of varieties from the point of view of producers and industrials. In ex situ conservation 550 grain accessions, 150 vegetable and 75 of wild materials have been collected so far. A wide range of genetic diversity of cultivated materials was detected in the states of Tlaxcala (San Miguel del Milagro and Santa Apolonia Teacalco), State of Mexico (Amecameca, Cuijingo, Juchitepec and Ozumba), Puebla (Cohuecan, San Juan Amecac and Tochimilco), Morelos (Huazulco), Guanajuato (Ciudad Manuel Doblado), and Federel District (Xochimilco demarcation), mainly of the species Amaranthus hypochondriacus and A. cruentus, as well as crosses among wild and cultivated species. Due to the wide distribution of wild germplasm collections were carried out in places from temperate to warm climates, mainly in the states of Puebla, State of Mexico, Guanajuato, San Luis Potosi, Coahuila, Distrito Federal, Tlaxcala y Oaxaca. Accessions of the species A. hybridus, A. powelli, A. retroflexus, A. palmeri and A. spinosus were collected in temperate climates, and A. spinosus, A. hybridus and A. dubius were collected in warm climates. Both cultivated landraces and improved varieties
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are present within the studied collection, with predominance of creamy-white grain color as well as a larger number of primary races in improved varieties. It is important to continue explorations of the genus Amaranthus as the loss of variability has continued at an accelerated pace, and there are species which are important sources of germplasm in plant breeding. Key words: Amaranth, Amaranthus, genetic diversity, plant genetic resources, gene pool, native species. INTRODUCCIN El amaranto es una planta herbcea anual que pertenece al gnero Amaranthus, es predominantemente tropical, incluye cerca de 70 especies nativas de los trpicos y de las regiones templadas de todo el mundo (Costea et al., 2001); de las cuales 40 son de las Amricas y el resto pertenece a Australia, frica, Asia y Europa. Dentro del gnero se encuentran las especies A. cruentus, A. hypochondriacus y A. caudatus que son las ms importantes para la produccin de grano de amaranto. Las dos primeras ampliamente distribuidas en Mxico, conformando el centro de diversidad ms importante. El amaranto tiene su centro de origen y diversidad ms importante a nivel mundial en nuestro pas, por lo que es necesario colectar, conservar, estudiar y utilizar racionalmente este valioso recurso gentico. En el presente documento la Red Amaranto presenta los avances en la estrategia para la conservacin, estudio y utilizacin de los recursos genticos en Mxico agrupando las acciones por cada una de las cuatro reas prioritarias: conservacin y mejoramiento in situ, conservacin ex situ, utilizacin de los recursos fitogenticos para la alimentacin y la agricultura e instituciones y creacin de capacidades. Se presentan propuestas sobre las acciones que hay que realizar en el corto mediano y largo plazo en las cuatro reas estratgicas. Se presenta informacin detallada sobre el germoplasma que se ha colectado y conservado en el banco de germoplasma. LA RED AMARANTO La Red Amaranto del Sistema Nacional de Recursos Fitogenticos (SINAREFI) es una de las redes jvenes ya que tiene tres aos de haber

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iniciado actividades. Los integrantes de la misma son Cristina Mapes Snchez y Francisco Basurto del Jardn Botnico de la UNAM, Roberto Bernal de Instituto Tecnolgico del Altiplano, Ana Paulina Barba de la Rosa del IPICYT, John Dlano Frier del CINVESTAV-Irapuato, Gabriel Alejandre Iturbide del CIDIR-Durango, Benito Manrique de Lara Soria de San Miguel de Proyectos Agropecuarios y Mara de la Luz Ramrez Vzquez, Sara Hirn Morn Bauelos, Patricia Rivas Valencia, Guillermina Martnez Trejo, Erica Muiz Reyes, Alama Velia Ayala Garay, Leticia Tavitas Fuentes, Lorena Corts Espinoza, Micaela de la O Oln, Juan Manuel Hernndez Casillas y Eduardo Espitia Rangel del INIFAP. Recientemente se integr Ivonne Snchez del Pino del CICY y desde luego se considera miembros de la Red a todos los productores que han conservado el germoplasma de amaranto a travs del tiempo. El propsito fundamental de la Red Amaranto es colectar, estudiar, conservar y caracterizar el germoplasma de amaranto. Se pretende formar una coleccin nacional nica de germoplasma de amaranto que incluya las colecciones institucionales y personales con fines de conservacin y uso de la variabilidad gentica de Amaranthus; otro compromiso importante de la Red es posicionar el recurso ante la sociedad en general ya que la mejor forma de conservarlo ser utilizndolo. AVANCES EN LAS CUATRO REAS ESTRATGICAS Conservacin in situ La variacin gentica puede ser mantenida bajo diferentes sistemas y metodologas (Vilela et al., 1997). La conservacin de recursos genticos es esencial, tanto para asegurar que los mejoradores continen teniendo acceso a los genes y complejos de genes que se necesitan para el mejoramiento. Entre las metodologas ms destacadas para recursos genticos estn las reservas para la conservacin de la diversidad in situ y las colecciones de germoplasma para mantenimiento de la variabilidad ex situ. La conservacin in situ se logra protegiendo el material vegetal en el sitio que ocurre naturalmente. Para muchos parientes silvestres, esto significa reservas naturales o poblaciones silvestres. Para las variedades nativas o tradicionales de los agricultores, se da en los

campos en los cuales el agricultor las cultiva o en las comunidades tradicionales (Collins y Hawtin, 1999). El mantenimiento in situ tiene ventajas ya que conserva tanto el material gentico como los procesos que originan la diversidad. Permite tambin la conservacin de un gran nmero de especies en un solo sitio. Bajo ciertas condiciones, dependiendo del cultivo o del tipo de recursos genticos, puede ser ms barato y efectivo al hacer intervenciones para mantener la evolucin en las fincas que en el almacenamiento ex situ (Jarvis et al., 2000). En el caso de amaranto es importante la conservacin in situ de las poblaciones nativas de las zonas convencionales de cultivo mediante custodios, dado que debido al reducido nmero de superficie y productores es fcil que se pierda variabilidad gentica. En aspectos etnobotnicos se logr recopilar la informacin del cultivo del amaranto para grano y verdura. Se tiene informacin sobre el cultivo, sistemas de produccin, variedades, siembra, cultivo, fertilizacin, aspectos fitosanitarios, cosecha, trilla, limpieza y manejo de postcosecha. As mismo se reuni informacin sobre la transformacin y uso del amaranto. Se inici tambin un proceso de mejoramiento participativo en Cd. Manuel Doblado, Gto., que es una nueva zona para el cultivo en el cual participan productores, industriales e investigadores. Conservacin ex situ La conservacin ex situ involucra la remocin de recursos fitogenticos de su medio natural para mantenerlo en bancos de germoplasma (semillas), invernaderos, almacenes, laboratorios, cultivo de tejidos o plantaciones, bajo condiciones controladas para su buen desarrollo. Para el buen manejo de las especies de amaranto en la conservacin ex situ (bancos de germoplasma) se tienen que seguir los siguientes pasos: recoleccin, conservacin, caracterizacin y evaluacin, documentacin y regeneracin. Los sistemas de conservacin ex situ surgen como una medida complementaria a los mecanismos de conservacin in situ, orientados principalmente a resguardar el material gentico de las especies de importancia para el mejoramiento gentico (Collins y Hawtin, 1999; Brenner et al., 2000).
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En las actividades de recoleccin de germoplasma se han hecho recorridos de campo en la regin de Cuetzalan y en sus alrededores. En los primeros tres aos se realizaron ms de 150 colectas para verdura de las especies A. cruentus, A. hybridus y A. hypochondriacus. En cuanto a la colecta de amaranto para grano en estos tres aos se colect principalmente en las zonas productoras de Tlaxcala y del Distrito Federal, un poco en Guanajuato, Puebla y Morelos se logr colectar 550 poblaciones nativas de A. hypochondriacus y en menor cantidad A. cruentus. En relacin a la colecta de parientes silvestres se tienen a la fecha 75 accesiones de las especies A. hybridus, A. powellii, A. palmeri, y A. retroflexus en los estados de Tlaxcala, Distrito Federal, Estado de Mxico, Guanajuato, San Luis Potos y Coahuila. En la coleccin nacional se han incluido hasta ahora ms de 800 accesiones las cuales estn debidamente documentadas en la base de datos. Uso y Potenciacin Dentro del rea estratgica de uso y potenciacin de los recursos genticos la caracterizacin y evaluacin preliminar juegan un papel fundamental, la cual es realizada generalmente por los conservadores de recursos genticos y utilizada por los mejoradores para elegir materiales de trabajo. La caracterizacin de las accesiones, es una actividad que siempre se ha considerado responsabilidad del curador del banco de germoplasma, aunque puede ser realizada por otras instituciones. La caracterizacin es el registro de los caracteres altamente heredables de una planta, que pueden ser distinguidos a simple vista y que se expresan en todos los ambientes. Comnmente junto con la caracterizacin se efecta una evaluacin preliminar, la cual consiste en el registro de un conjunto de caractersticas adicionales deseables en un cultivo en particular (Grubben y Sloten, 1981). Espitia en 1986, 1992 y 1994 llev a cabo caracterizaciones de diferentes colectas de amaranto bajo las condiciones de Chapingo. En la actividad de caracterizacin de germoplasma se logr caracterizar 352 accesiones, con morfolgicas y agronmicas. Adems, se identificaron las colectas por especie y por raza. Dentro del material que se est caracterizando se identificaron materiales con caractersticas agronmicas sobresalientes
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tanto de la especie A. cruentus como de A. hypochondriacus, estos materiales sobresalen por su uniformidad, precocidad, color de semilla entre otros caracteres. En los viajes de colecta se identificaron materiales de A. hypochondriacus de crecimiento determinado, carcter que solo se encuentra en A. caudatus, la importancia de estos es que podran resultar de importancia en mejoramiento gentico para uniformizar madurez, tamao de semilla y cosecha mecnica. En lo relativo a rejuvenecimiento (rescate) de germoplasma en peligro de perderse se inici con 155 colectas que estaban disponibles las cuales se sembraron para su regeneracin y caracterizacin al mismo tiempo. De estas colectas slo germinaron 153, de las cuales ya se tienen la semilla que se va a entregar al banco designado. En lo relacionado con la integracin de la Coleccin Nacional se lograron avances muy importantes, se han integrado los 153 materiales rejuvenecidos, las ms de 550 accesiones que se colectaron y materiales que se recibieron de otras colecciones como San Miguel de Proyectos Agropecuarios, IPICYT y CINVESTAV; se tiene la promesa de otros investigadores para entregar el germoplasma que tienen en sus colecciones. Creacin de Capacidades En el desarrollo de las actividades propias del proyecto se est formando personal experto en el estudio y manejo del cultivo, caracterizacin y aprovechamiento. Otro aspecto importante en esta rea es el posicionamiento del recurso ante la sociedad, el cual se debe hacer con medios masivos de comunicacin. El fortalecimiento de la propia red es un aspecto de gran importancia en esta rea. En el caso del sistema amaranto es necesario trabajar mucho en esta rea ya que el posicionamiento del cultivo ante la sociedad en general ser la mejor estrategia para conservarlo. En lo referente a las reuniones de la Red se han realizado dos por ao y en la ltima se incluy a productores de los Consejos Estatales de Productores y Sistemas Producto de Distrito Federal, Morelos, Oaxaca, Puebla, Tlaxcala y San Luis Potos. Se han publicado hasta ahora un libro, dos folletos y se tiene listo para impresin un segundo libro. Se particip tambin en la elaboracin de cuatro videos producidos por

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el CUAED y el Jardn Botnico de la UNAM, estos fueron trasmitidos en red nacional por canal 22 y por la RED Edusat. Por parte de la Red se ha participado en la imparticin de cursos a productores en Morelos, San Lus Potos y Oaxaca. PROPUESTA DE TRABAJO A CORTO, MEDIANO Y LARGO PLAZO Conservacin in situ Es necesario identificar tambin reas adecuadas para la conservacin de germoplasma in situ. Es conveniente definir custodios para algunas razas en peligro de extincin por ejemplo las razas Guatemalteca, Africana, Picos y Mercado, por lo se deber procurar su conservacin por los productores que las poseen. Se deber realizar mejoramiento participativo a fin de mejorar por un lado las poblaciones nativas que tienen los productores y poblaciones introducidas que puedan ser una opcin ms productiva para los productores. En este mejoramiento participativo se deber tener la participacin directa de los productores y de industriales para asegurar que las poblaciones mejoradas respondan a los intereses de los involucrados en la cadena productiva de amaranto. En lo que respecta a la proteccin de especies subutilizadas, en Michoacn se tienen poblaciones nativas que estn en serio peligro de perderse, por lo que se debe asegurar su conservacin y promover su uso. Para poblaciones nativas en peligro en caso necesario se deber buscar la manera de pagar a los productores a fin de que la conserven y promuevan su uso. Conservacin ex situ La conservacin ex situ es una de las lneas de accin donde mayor esfuerzo se requiere, ya que el mantenimiento de colecciones, su regeneracin, rescate de muestras en peligro y la recoleccin son aspectos fundamentales en la conservacin, estudio y uso del germoplasma. Integracin de una coleccin nacional donde se incluyan la mayora de las colecciones institucionales, colecciones de trabajo de investigadores y colecciones de productores. Con el principal fin de que sea conservada en el Centro Nacional de Germoplasma, estudiada y utilizada de manera racional.

Formar colecciones ncleo para facilitar el entendimiento y utilizacin de la variabilidad existente. Mantener la informacin de los materiales de la coleccin nacional de manera accesible para todo el pblico interesado. Uso y potenciacin En lo que se refiere al uso de herramientas biotecnolgicas, en amaranto se han utilizado marcadores genticos con propsito de establecer relaciones filogenticas de especies cultivadas y sus ancestros. Hasta ahora se han reportado resultados controversiales debido a que se han utilizado materiales originarios de otros pases que no son centro de origen. Es necesario que en este respecto se utilicen materiales originarios de Mxico en el caso de A. cruentus, A. hypochondriacus, A. hybridus y A. powellii para establecer relaciones filogenticas o evolutivas del amaranto. Conjuntamente o de manera complementaria se deber promover un esquema de abastecimiento de semilla de variedades nativas y mejoradas ya que la produccin de la misma en Mxico no existe. Esto asegurara la conservacin de la pureza varietal y la conservacin de la variabilidad al promover el uso y mantenimiento de variedades nativas sobresalientes. Creacin de Capacidades En los diferentes proyectos se deber capacitar personal en el rea de estudio y manejo de germoplasma de amaranto. Se deber promover la alianza entre instituciones para el estudio y aprovechamiento de los recursos genticos del gnero Amaranthus, esto promovido por la propia Red. Otra actividad importante ser participar en la sensibilidad de la opinin pblica a travs de la participacin en diferentes medios de comunicacin pgina web del SINAREFI, participacin en videos, programas de radio y televisin y la elaboracin tanto de folletos como trpticos para el pblico en general. Finalmente pero no menos importante ser el fortalecimiento de la Red Amaranto que consideramos puede ser la instancia que vincule investigadores, instituciones, productores y transformadores para la creacin de sinergias y alianzas estratgicas que coadyuven en
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la conservacin, estudio y utilizacin del germoplasma del amaranto en Mxico. GERMOPLASMA COLECTADO La variacin gentica puede ser mantenida bajo diferentes sistemas y metodologas (Vilela et al., 1997). La conservacin de recursos genticos es esencial, tanto para asegurar que los mejoradores profesionales continen teniendo acceso a los genes y complejos de genes que se necesitan para el mejoramiento actual y futuro de los cultivos, como para permitir que los agricultores continen seleccionando y modificando sus cultivos en los ambientes actuales y circunstancias cambiantes. Las colectas de germoplasma de amaranto para la conservacin ex situ han sido con el propsito de enriquecer la base gentica de la coleccin de semilla, de donde posteriormente se podrn liberar nuevas variedades con caractersticas especficas para las diversas zonas productoras del pas. Para el mejoramiento gentico se dispone de especies cultivadas, semidomesticadas, y silvestres; desde el punto de vista de la diversidad gentica podemos definir al amaranto como una especie con diferentes centros de domesticacin y diversidad, dependiendo de las especies, estando ampliamente difundidas en el mundo; sin embargo las especies para grano estn mayormente difundidas en Centro Amrica (Mxico y Guatemala) y los Andes (Per, Bolivia, Ecuador, Argentina); encontrando en estos lugares la mayor variacin gentica (Brenner et al., 2000; Espitia et al., 2010). Dentro del gnero Amaranthus se encuentran las especies A. cruentus, A. hypochondriacus y A. caudatus que son las ms importantes para la produccin de grano de amaranto (Costea et al., 2001). Las dos primeras ampliamente distribuidas en Mxico, conformando el centro de diversidad ms importante. Histricamente, las colectas de germoplasma tenan como objetivo conocer la taxonoma y las relaciones evolutivas entre las especies colectadas y las cultivadas. Actualmente, el objetivo principal de la colecta y conservacin de germoplasma es su utilizacin en fitomejoramiento. La disminucin del cultivo del amaranto en Mxico se debi a motivos religiosos (Burenhult, 1993). Esto se debe a que originalmente las semillas estaban ligadas a
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numerosas festejos religiosos sin embargo debido al carcter violento y pagano de estas ceremonias, la iglesia espaola suprimi casi por completo su cultivo, durante la conquista. Por lo tanto, mucha de la gran diversidad de los materiales ha desaparecido. Es por ello que el objetivo del presente estudio ubicado en el rea estratgica de conservacin ex situ en la lnea de recoleccin, fue realizar colectas de germoplasma para verdura, grano y silvestres, as como la identificacin de las mismas en cuanto a especies y zonas donde actualmente se encuentran produciendo el amaranto. Los avances en la recoleccin de germoplasma muestran una enorme variacin en las variedades criollas de los agricultores (Figura 1) utilizadas para la produccin tanto de grano como verdura. En el Cuadro 1 se muestran las colectas por especie que se han realizado de 2009 a 2011; la variedad A. hypochondriacus es por mucho la especie de la cual se han colectado mayor cantidad materiales. Debido a la amplia distribucin del germoplasma silvestre, se colect en lugares desde climas templados hasta climas clidos, principalmente en los estados de Morelos (Amilcingo y Huazulco), Tlaxcala (San Miguel del Milagro y Santa Apolonia Teacalco), Puebla (Cohuecan, San Juan Amecac, Tochimilco, Tochimizolco), Estado de Mxico (Texcoco), Guanajuato (Ciudad Manuel Doblado, San Felipe, San Miguel de Allende y Celaya), Distrito Federal (Tulyehualco, Mixquic, Tecomitl, Tlaxialmanalco y Tetelco), San Luis Potos (bano, Matehuala y San Luis Potos), Coahuila (Saltillo y Matamoros). Se encontraron hbridos interespecficos (Figura 3) de A. cruentus con A. hybridus reportados anteriormente (Gupta y Gudu 1991). La frecuencia de las principales especies tanto materiales silvestres como cultivadas se encuentran descritas en el Cuadro 1. Dentro del germoplasma colectado se encuentran variedades nativas, predominando las de grano blanco; mientras que dentro de los materiales silvestres colectados se encuentra la predominancia de semillas negras. La gran mayora del germoplasma colectado se concentra en el centro del pas, principalmente en los estados de Puebla, Tlaxcala, Morelos, Distrito Federal y Estado de Mxico el de materiales cultivados y los

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Figura 1. Variabilidad de amarantos cultivados, para verdura y silvestres.

Figura 2. Variabilidad gentica en materiales cultivados de amaranto.

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Figura 3. Parientes silvestres y especies relacionadas. De izquierda a derecha y en orden descendiente. A. hybridus, A. Powellii, A. hybridus tropical, introgresin de A. hybridus en A. cruentus, supermaleza en Tlaxcala y A. palmeri.

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Captulo XI. Conservacin de los recursos genticos de amaranto (Amaranthus spp.) en Mxico Cuadro 1. Frecuencia de las accesiones y especies encontradas en amaranto colectadas en 2009-2011.

Colectas Proporcin 615 76.97 92 11.51 26 3.25 1.75 14 1.00 8 7 0.88 4 0.50 3 0.38 30 3.75 799 100.00
silvestres adems de los estados anteriores en Coahuila, San Luis Potos, Oaxaca, Nuevo Len y Quertaro (Figura 4). En el estado de Puebla se encontr principalmente A. hypochondriacus raza Azteca en las partes altas como Tochimilco, Tochimizolco y Amecac; mientras que en las partes bajas como Huaquechula, Santa Clara y Santiago Tecla se encontr principalmente A. cruentus raza Mexicana debido a que estas localidades se encuentran a menor altitud; de hecho hay localidades donde ambas especies se mezclan (Figura 5). En Huazulco y Amilcingo Morelos se encontr A. cruentus raza Mexicana, es aqu donde probablemente se tenga la mayor variabilidad de materiales cultivados de esta especie (Figura 6). En las localidades del Distrito Federal como Tulyehualco, Tetelco, Tecomitl y Atlapulco se encontr A. hypochondriacus raza Azteca. De igual Manera en las localidades de Amecameca, Cuijingo, Juchitepec y Ozumba del Estado de Mxico (Figura 7); y en San Miguel del Milagro y Santa Apolonia Teacalco en el estado de Tlaxcala (Figura 8). Dentro del germoplasma colectado se encontraron materiales con caractersticas especiales como variantes de crecimiento determinado en la zona productora Tlaxcala. Tambin se colectaron materiales predominantemente machos, materiales con gran produccin de polen, en este caso se colectaron las plantas vecinas ya que estas plantas no producen semilla. Se encontraron tambin lo que parece ser fuentes de androesterilidad ya que son plantas que no producen polen (Figura 9).

Figura 4. Distribucin de colectas del germoplasma colectado (Hijmans et al., 2004).

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Figura 5. Siembras de productores en lomeros de las faldas del volcn en el estado de Puebla .

Distribucin de las especies colectadas La especie A. cruentus est principalmente distribuida en el centro sur de la Repblica Mexicana, principalmente en la zona biogeogrfica del eje volcnico transmexicano (Espitia et al., 2010) en los estados de Puebla, Morelos (Figura 10); concretamente en Huazulco y Amilzingo, Morelos y en Huaquechula y Sierra Norte de Puebla. Esta concentracin de colectas

en estos dos estados se debe principalmente a que se ha colectado hasta ahora en las zonas productoras tradicionales. En este sentido, A. hybridus, que es el posible ancestro de A. cruentus, present una mayor distribucin geogrfica, ya que se encuentra en prcticamente todo Mxico (Espitia et al., 2010). Sin embargo en el rea donde A. cruentus se ha colectado coincide con la distribucin de A. hybridus.

Figura 6. Siembras de amaranto de productores de Morelos.

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Figura 7. Siembras de amaranto de productores de Tlaxcala.

Figura 8. Siembras de amaranto de productores del Estado de Mxico.

Por otro lado, A. hypochondriacus se distribuye principalmente en las regiones biogeogrficas eje volcnico transmexicano y Sierra Madre del Sur en los estados de Mxico, Puebla, Tlaxcala, Oaxaca y Distrito Federal (Figura 11). Aunque tambin hay especmenes reportados en los estados de Sonora, Chihuahua, Coahuila, Guanajuato, Michoacn y Veracruz. En este sentido, A. powellii present una distribucin en las zonas biogeogrficas de California, Sierra Madre Occidental, Sierra Madre Oriental y el Eje Volcnico Transmexicano (Morrone, 2004; Espitia et al., 2010a). Por lo

que a pesar de los pocos datos de pasaporte, esta especie present una mayor distribucin que su relativo cultivado, sin embargo si se traslapan. Patrones de variacin de las especies cultivadas colectadas A. cruentus present un patrn de variacin latitudinal estrecho, concentrndose principalmente entre los paralelos 18 y 20, aunque se distribuye desde los 16 hasta los 29 de latitud Norte (Figura 12). La media geogrfica de esta especie es 18.83 de latitud Norte y a una altitud de 1530 msnm, lo que coincide con el rea donde se ha colectado mayor cantidad
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Figura 9. Arriba materiales con crecimiento determinado y abajo a la izquierda material predominantemente masculino y derecha material con androesterilidad.

de germoplasma. Por el contrario, el patrn de variacin altitudinal es amplio en esta especie, distribuyndose principalmente entre los 724 y 2198 msnm. En el caso de A. hypochondriacus tambin presenta una variacin latitudinal estrecha, aunque ms amplia que A. cruentus, concentrndose principalmente entre los paralelos 16 y 20, aunque esta especie se distribuye desde menos de 16 hasta los 30 de latitud norte. En el caso del patrn de variacin altitudinal es alta por que las colectas de esta especie desde 111 hasta 2,675 msnm. La media geogrfica de esta especie esta ubicada a 19.07 de latitud Norte y a 2138.5 msnm (Figura 13).
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Las especies cultivadas de amaranto fueron domesticadas en las tierras altas de las regiones tropicales y subtropicales de Amrica (Espitia-Rangel, 1994). Las dos especies cultivadas de las cuales se ha colectado germoplasma hasta ahora tienen una mayor distribucin en la zona central de Mxico muy cerca del Valle de Mxico y regiones aledaas, donde se establecieron las antiguas culturas mesoamericanas del centro de Mxico y donde tambin de distribuyen los posibles progenitores de estas especies, por lo que las hiptesis del origen de las especies cultivadas de amaranto de Sauer (1993) pudieran ser ciertas. A. hypochondriacus est ms distribuida al sur, latitudinalmente,

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Figura 10. Distribucin de las colectas de A. cruentus (Hijmans et al., 2004)

Figura 11. Distribucin de las colectas de A. hypochondriacus (Hijmans et al., 2004)

que A. cruentus, por lo que la hiptesis de que A. cruentus tiene un origen ms centroamericano (Grubben, 1976; Grubben y Sloten, 1981), no sera correcta segn nuestros datos, sino ms bien mesoamericana cerca de las culturas prehispnicas mexicanas de la llamada regin biogeogrfica del Eje Volcnico Transmexicano al igual que su posible hijo A. hypochondriacus.

En contraste, Williams y Brenner (1995) mencionan que la hiptesis centroamericana, es por la gran variedad de usos que tiene en Guatemala y el sur de Mxico, donde estos autores creen que fue domesticado, y que de ah se movi hacia el norte, hasta el suroeste de Estados Unidos de Amrica y al sur de los Andes, esto explicara porque A. cruentus
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es considerado ancestro de A. hypochondriacus (Sauer, 1950; 1967, 1993), que se cree que fue domesticado en el centro de Mxico al formar un hbrido de A. cruentus con A. powellii, y de A. caudatus (Coons, 1982), que fue domesticado en los Andes y se cree que es un hbrido entre A. cruentus con A. hybridus (en su variante A. quitensis Kunth). Por otro lado, la hiptesis que A. cruentus es descendiente de A. hybridus puede ser cierta, porque los patrones de distribucin de este trabajo as como los de Costea et al. (2001), manifiestan que A. hybridus es ampliamente distribuida y tambin est presente en las regiones donde est distribuida A. cruentus, entonces esta especie podra ser un material seleccionado a partir de A. hybridus y despus fue domesticado en alguna de las regiones de Centroamrica, hasta llegar a reas que ahora conocemos.

Germoplasma rescatado La disponibilidad de diversidad gentica es requisito fundamental en el mejoramiento de un cultivo, la cual se puede concentrar en un banco que adems sirva para la conservacin de los recursos fitogenticos. En nuestro pas se impuls la recoleccin de germoplasma de amaranto hasta que llegaron misiones extranjeras en busca de estos recursos; de manera conjunta con estos grupos exploratorios, a principios de la dcada pasada, se inici la recoleccin de la variabilidad gentica existente. Hasta ahora se han colectado casi exclusivamente materiales cultivados de las especies A. hypochondricus y A. cruentus, que son las especies productoras de grano ms ampliamente distribuidas en Mxico. Es precisamente de estas dos especies el mayor nmero de colectas que se tienen en la coleccin del INIFAP. De las especies silvestres, slo se han realizado algunas colectas de A. hybridus con el

Figura 12. Distribucin latitudinal y altitudinal de germoplasma colectado de A. cruentus. El punto rojo indica el centro geogrfico.

Figura 13. Distribucin Latitudinal y altitudinal de germoplasma colectado de A. hypochondriacus. El punto rojo indica el centro geogrfico.

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Captulo XI. Conservacin de los recursos genticos de amaranto (Amaranthus spp.) en Mxico

propsito de aprovechar algunas caractersticas ventajosas en mejoramiento gentico. En las misiones de colecta se logr reunir 642 accesiones en el Banco de germoplasma del INIFAP, sin embargo como este trabajo se realiz por el programa de mejoramiento gentico, nunca se conservaron en condiciones controladas. De manera tal que una gran mayora de estas colectas se perdieron o estn a punto de perderse, pues se han conservado en una bodega de lminas de asbesto. Por lo que el objetivo fundamental de esta fue rescatar las colectas que an estn viables. En muchos de los materiales se encontraron solamente unas pocas semillas, por lo que se procedi a germinarlas en laboratorio posteriormente pasarlas a macetas a fin de asegurar su regeneracin. En el caso de los materiales en los que se encontr mayor cantidad de semillas se sembr un surco de un metro de cada colecta de esta manera se tiene semilla rejuvenecida de 150 colectas de las cuales se tiene desde un gramo hasta ms de 200 g en algunas colectas. Sin embargo de la gran mayora se requiere hacer un incremento de semilla para entregar al Banco de Germoplasma. En un 20% de las colectas no se logr germinacin por lo que se deber buscar otra opcin para su posible rescate. Dentro de las colectas rescatadas se tiene germoplasma muy interesante, por ejemplo se rescataron colectas de la Raza Nepal y Picos de la de A. hypochondriacus de baja estatura y precocidad que pueden ser fuente de genes a fin de obtener variedades de menor altura y mayor precocidad.

COMENTARIOS FINALES Es importante hacer colectas y depositar en los herbarios especies de amaranto cultivadas ya que existen pocos ejemplares. Es tambin necesario colectar especies silvestres, sobre todo materiales que puedan tener algn valor en los programas de mejoramiento; sobre todo de aquellas que puedan tener un valor especial como A. albus y A. watsonii, para resistencia a sequa, A. australis para produccin de biomasa y tamao de semilla, A. pumilus tambin para tamao de semilla. Algunos materiales en peligro de perderse como la cha prieta (Amaranthus sp.) en Michoacn, algunas poblaciones de A. hypochondriacus razas Mixteca, Picos. Las colectas que se realizan son tiles para llenar vacos en la coleccin, dirigir la colecta a genotipos especficos, o reducir las prdidas de variabilidad debidas a la erosin gentica. La colecta de materiales silvestres es una fuente importante de germoplasma ya que tienen el propsito de aprovechar algunas caractersticas que les dan ventajas en el mejoramiento gentico, para contar con materiales importantes que tengan genes de resistencia a plagas, enfermedades, sequa, heladas, salinidad u otras condiciones climatolgicas adversas. Es importante continuar con las exploraciones del gnero Amaranthus (cultivado o silvestre) para evitar la erosin gentica; ya que la prdida de diferentes materiales ha continuado con pasos muy marcados, y existen especies o colectas que son fuentes importantes de germoplasma en el mejoramiento gentico.

Figura 14. Colectas de razas Nepal y Picos fuentes de precocidad y baja estatura de planta.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

La Sierra Norte de Puebla resulta ser una regin muy importante para el estudio del conocimiento, uso y manejo del amaranto usado a manera de verdura. De ah que sea prioritario establecer una programa de conservacin in situ y al mismo tiempo lograr la caracterizacin de los materiales presentes en la zona. Mientras que para los materiales para grano las zonas tradicionales son clave para la conservacin in situ de los materiales que ah se siembran. Otra manera importante de conservar una especie o su germoplasma es que la poblacin en general utilice y consuma todos los productos que tanto de manera tradicional o moderna se deriven de ste. Por lo que es necesario posicionar el amaranto con toda la poblacin en general. LITERATURA CITADA Brenner D M, Baltensperger D D, Kulakow, P A, Lehmann J W, Myers R L, Slabbert M M, Sleugh B B (2000) Genetic resources and breeding of Amaranthus. Plant Breed. Rev. 19:227-285. Burenhult, G (1993) People of the stone age: the ilustrated history of humankind Vol. 2. Harper San Francisco. New York 240 p. Crdenas R F (1983) Logros y aportaciones de la investigacin Agrcola en Recursos Genticos. Publicacin Especial No. 106. INIA-SARH. Collins W W, G C Hawtin (1999) Conserving and Using Crop Plant Biodiversity in Agroecosystems. Pp. 267-281 in Biodiversity in Agroecosystems (W.W. Collins and C.O. Qualset, eds). CRC Press, Boca Raton, Washington. Coons M P (1982) Species and varieties. Relationships of Amaranthus caudatus. Econ. Bot. 36:119-146. Costea M, G Sanders, G Waines (2001) Preliminary results toward a revision of the Amaranthus hybridus species complex (Amaranthaceae) Sida 19:931-934.

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Captulo XII

Caracterizacin morfolgica de germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp.)


MORPHOLOGICAL CHARACTERIZATION OF GRAIN AMARANTH (Amaranthus spp.) GERMPLASM

Micaela de la O Oln1*, Eduardo Espitia Rangel2, Alma Velia Ayala Garay1, Juan Manuel Hernndez Casillas1, Jos Luis Arellano Vzquez1, Vctor Cuauhtmoc Ruiz Hernndez1
1Campo Experimental Valle de Mxico. INIFAP. Carretera Los Reyes-Texcoco, Coatlinchn, Texcoco, Estado de Mxico. C.P. 56250. A.P. 307 y 10. Tel. 595 9212738, ext. 180, 2Campo Experimental Bajo. INIFAP. Carretera Celaya-San Miguel de Allende km 6.5, Celaya, Gto. *Autor para correspondencia: micad@colpos.mx

RESUMEN El germoplasma de amaranto disponible en la actualidad muestra una gran diversidad morfolgica, producto de un alto grado de cruzamiento y de mltiples criterios de seleccin por parte de los agricultores. La clasificacin dentro del gnero Amaranthus ha sido difcil, debido a que se han considerado para tal efecto caracteres con alta segregacin dentro de las poblaciones. El objetivo del presente estudio fue caracterizar morfolgicamente el germoplasma de Amaranthus spp., incluyendo colectas recientes y las ya existentes en el banco de germoplasma del INIFAP. Se establecieron 560 accesiones en el ciclo agrcola Primavera-Verano 2009, 2010 y 2011 en el INIFAP-Campo Experimental Valle de Mxico, Santa Luca de Pras, Texcoco, Edo. de Mxico. La caracterizacin morfolgica se realiz con base en una lista de descriptores tanto cualitativos como cuantitativos propuestos por Grubben y Van Sloten (1981). Todas las variables cuantitativas estudiadas presentaron alta variabilidad. La longitud de inflorescencia fue la caracterstica con mayor variabilidad con un coeficiente de variacin de 17.8%. La especie A. hypochondriacus fue la de mayor frecuencia con un 83.8% del germoplasma estudiado, otras

especies encontradas fueron A. cruentus y A. caudatus. Para caracteres cualitativos existi una enorme variacin de colores, tamaos y formas en tallo, inflorescencia y hojas dentro de cada especie. La especie A. hypochondriacus es la de mayores valores de tamaos de inflorescencia, tamao de semilla y altura de planta. Existe una enorme variacin fenotpica entre y dentro de especies del gnero Amaranthus, que puede ser aprovechada en el mejoramiento gentico, as como para conocer la diversidad de este cultivo en Mxico. Palabras clave: recursos fitogenticos, caracterizacin y Amaranthus spp., variabilidad. ABSTRACT Currently available Amaranth germplasm shows large morphological diversity, as a result of a high degree of crossing and multiple selection criteria by farmers. Classification within the genus Amaranthus has been difficult, because characters with high segregation within populations have been considered for this purpose. The aim of this study was to characterize morphologically germplasm of Amaranthus
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

spp., including recently collected accesions existing at the INIFAP genebank. During the 2009, 2010 and 2011 Spring-Summer growing cycles 560 accessions were planted at the INIFAP-Valley of Mexico Experimental Station in Santa Luca de Pras, Texcoco, State of Mexico. Morphological characterization was performed based on a list of both qualitative and quantitative descriptors as proposed by Grubben and Van Sloten (1981). All quantitative traits studied showed large variability. Inflorescence length was the trait with the largest variability, with a coefficient of variation of 17.8%. The species A. hypochondriacus was the most frequent with 83.8% of the studied germplasm, other species found were A. cruentus and A. caudatus. High variation was observed for qualitative characters as colors, sizes and shapes in stem, inflorescence and leaves within species. Species A. hypochondriacus showed the largest values of inflorescence size, seed size and plant height. There is high phenotypic variation among and within the Amaranthus species, which can be exploited in breeding and to understand the diversity of this crop in Mexico. Key words: Plant Genetic Resources, Amaranthus spp., Characterization, Variability. INTRODUCCIN El amaranto se distribuye ampliamente en Amrica, donde presenta gran variabilidad gentica, que se aprecia en la diversidad de caractersticas de la planta, tipo de inflorescencia, color de la semilla, precocidad, contenido protenico de la semilla y resistencia a plagas y enfermedades (Jacobsen y Sherwood, 2002). En Mxico se cultiva mucho las variedades criollas, que son altamente variables en altura, color de panoja, rendimiento de planta, duracin del ciclo vegetativo y contenido de protena. Mxico es uno de los centros de origen de amaranto para grano, es un cultivo tradicional en los valles altos centrales de Mxico, que por su gran valor nutritivo ha ganado importancia en la actualidad. Los cultivos pertenecientes a la familia Amaranthaceae estn an prcticamente sin explotar y poseen caractersticas agronmicas, alimentarias y funcionales para mejorar la salud humana. El gnero Amaranthus es un grupo
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M. de la O Oln et al.

difcil taxonmicamente. Ha existido mucha confusin en la nomenclatura y clasificacin de estas plantas debido a su gran semejanza y amplia distribucin geogrfica (Alejandre y Gmez, 1999). Todos los amarantos exhiben fenotipos muy variados y se adaptan a una enorme variedad de condiciones climticas (Espitia et al., 2010). El germoplasma es un recurso biolgico muy importante para la poblacin y para el pas. Cuando se tiene una coleccin es preciso describirla, porque lo que no se conoce no se utiliza y lo que no se utiliza se pierde. En la actividad de conservar y mantener los recursos fitogenticos, se incluye mantener la integridad de las colecciones as como la identificacin de duplicados (Karp et al., 1997). En primer lugar, esto usualmente implica la descripcin de la variacin de los caracteres morfolgicos, particularmente de caractersticas agromorfolgicas de inters directo para los usuarios. Para que los materiales conservados en algn banco de germoplasma sean de utilidad, se deben conocer sus caractersticas, es decir deben estar caracterizados. Caracterizar una especie es estimar la variabilidad existente en la poblacin de individuos que lo conforman (Hidalgo, 2003). La clasificacin dentro del mismo gnero de Amaranthus ha sido difcil, debido a que se han considerado para tal efecto caracteres que segregan demasiado dentro de las poblaciones. Las accesiones dentro de un grupo morfolgico pueden ser consideradas como variedades nativas; estos son individuos domesticados de reproduccin sexual con caractersticas que les permiten ser distinguidos de otros grupos. Para Grubben y Sloten, (1981) la caracterizacin es el registro de los caracteres altamente heredables de una planta, que pueden ser distinguidos a simple vista y que se expresan en todos los ambientes. Comnmente junto con la caracterizacin se efecta una evaluacin preliminar, la cual consiste en el registro de un conjunto de caractersticas adicionales deseables en un cultivo en particular. El germoplasma de amaranto disponible en la actualidad muestra una gran diversidad morfolgica, producto de un alto grado de cruzamiento; por otra parte, las colecciones son pobres, y la caracterizacin del germoplasma est incompleta. Es por ello que en la lnea estratgica de uso y potenciacin, se

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)

incluy la caracterizacin de germoplasma para grano de amaranto en colectas recientes, as como materiales conservados desde hace 20 aos en el banco de germoplasma del INIFAP. MATERIALES Y MTODOS El estudio se realiz en el ciclo Primavera-Verano del 2009, 2010 y 2011 con la caracterizacin morfolgica de 560 accesiones de Amaranthus, sembradas en el Campo Experimental Valle de Mxico del INIFAP, ubicado en Santa Luca de Pras, municipio de Texcoco, Mx., bajo condiciones de temporal. Se caracterizaron 153 poblaciones en 2009, 207 accesiones en 2010 y 200 en 2011. La parcela experimental fue de tres surcos de 5 m de largo, de cada una de las poblaciones se dejaron en promedio 150 plantas por unidad experimental, aplicando el paquete de recomendaciones generado por el INIFAP. La informacin de campo se registr en diez plantas por accesin, en las cuales se anot por material y por planta cada una de las variables cualitativas y cuantitativas. La caracterizacin morfolgica se realiz en base a Grubben y Van Sloten (1981) quienes proponen una lista de descriptores para la caracterizacin y evaluacin de germoplasma de amaranto, debido a que ellos consideran la produccin tanto de grano como de verdura. Primero se realiz una clasificacin por especie y raza, posteriormente se registraron los siguientes caracteres: Durante la floracin: Color de tallo (COTA), Forma de las hojas (FOHO), Color de las hojas (COHO), Color de la inflorescencia (COIN), Forma de la inflorescencia (FOIN), Densidad de la inflorescencia (DEIN), Color de semilla (COSE), Tipos de cubierta de semilla (TIPSE), Ramificacin lateral (RALAT). Despus de la floracin: Acame (ACAM), Dimetro del tallo (DITA), Longitud de la hoja (LOIN), Ancho de la hoja (ANHO). Durante la madurez: Longitud de la inflorescencia (LOIN), Dimetro de la inflorescencia (DIIN), Altura de planta (ALT). La informacin de campo se registr en formatos preestablecidos, con un listado de las variables en las hileras y columnas individuales para registrar el dato en cada una de las diez plantas. Con esta informacin se conform una base de datos en hoja electrnica (Excel 97) y

posteriormente se clasificaron las variables en cuantitativas y cualitativas. Se realiz un anlisis de frecuencias de las clases a caractersticas de cada una de las variables cualitativas por especie, de acuerdo al total del germoplasma estudiado. As como las colectas sobresalientes en cada uno de los caracteres. RESULTADOS Y DISCUSIN ESTADSTICAS BSICAS DE LA CARACTERIZACIN La caracterizacin es el registro de los atributos altamente heredables de una planta, que pueden ser distinguidos a simple vista y que se expresan en todos los ambientes. El amaranto mostr una amplia diversidad y variabilidad gentica, mostrando diversidad en el color del grano, precocidad, altura de planta, diversidad en forma de inflorescencia, tallos y hojas, etc. En el Cuadro 1 se presentan los resultados de la caracterizacin donde se muestra el promedio, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de los caracteres cuantitativos del germoplasma en estudio. Se ilustra la variabilidad existente en el germoplasma estudiado por medio de estadsticas bsicas a nivel poblacional donde se puede apreciar que el germoplasma analizado presenta cierta homogeneidad para algunos caracteres y alta variacin para otros, lo que coincide con Joshi (1981) quin al estudiar la variabilidad gentica del cultivo encontr una enorme variacin en caracteres de la inflorescencia, en ancho y largo de hoja, ancho y largo del tallo y muchos otros caracteres cuantitativos. Las caractersticas cuantitativas corresponden a poligenes, genes con efectos mayores acumulativos muy afectados por el ambiente (Jacobsen y Shewood, 2002). Todas las variables cuantitativas estudiadas, presentaron variabilidad, lo que significa que en realidad son caracteres cuantitativos determinados por muchos genes e interaccionan con el ambiente. Los valores mximos y mnimos marcan un amplio intervalo de variabilidad corroborado por el coeficiente de variacin. Una amplia variabilidad en caractersticas cuantitativas indica que existen diferentes grados de adaptacin. Son colectas de los agricultores de diferentes estados de Mxico con intervalos de adaptacin muy amplios. Se
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Cuadro 1. Parmetros estadsticos de variables cuantitativas de la caracterizacin de amaranto P/V-2009, 2010 y 2011. Santa Luca de Pras, Mx.

Media 54.6 18.04 1.87 2.04 17.77 9.06 0.944

Valor 87.5 34.8 2.98 4.36 33.26 19.27 1.94

Valor 24.4 8.3 0.74 0.73 5.66 5.69 0.46

Desviacin Estndar 9.75 3.57 0.316 0.411 2.28 1.18 0.099

mximo mnimo

puede ver que la variabilidad es muy marcada por caracteres, lo cual es lgico porque variables cuantitativas estn relacionadas con factores de adaptacin (Molina, 1992). La longitud de inflorescencia es la caracterstica que present mayor variabilidad ya que tiene una desviacin estndar mayor que los dems caracteres 9.75, un valor mximo y mnimo de 87.5 y 24.4 respectivamente, as como un coeficiente de variacin de 17.85, lo cual quiere decir que hay poblaciones cuya longitud de inflorescencia en amaranto rebasan los 80 cm, as como inflorescencias pequeas, es por ello la enorme variacin en dicha variable. El dimetro de inflorescencia fue otro carcter que present variacin con una desviacin estndar de 3.57, lo que significa que hay poblaciones cuyo dimetro en amaranto con inflorescencias totalmente cerradas, as como completamente abiertas, es por ello la variacin en dicha variable. La se present variabilidad en caracteres como altura de planta, dimetro de tallo, ancho y largo de hoja es media, por lo que existe una gran cantidad de materiales totalmente contrastantes que pueden ser aprovechados en mejoramiento gentico de acuerdo al propsito del mejorador. El peso de la semilla es la caracterstica que present una mayor homogeneidad (desviacin estndar 0.099) dentro de los materiales estudiados. CLASIFICACIN POR ESPECIE La clasificacin por especie de las colectas estudiadas se presenta en el Cuadro 2, donde puede apreciarse la especie A. hypochondriacus fue la que se present mayor frecuencia con 469 accesiones que corresponden al 83.8%
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del germoplasma estudiado lo que concuerda con Espitia et al. (2010) quienes mencionan que A. hypochondriacus es la especie de mayor superficie cultivada en Mxico; la segunda especie encontrada en las accesiones fue A. cruentus especie a la que pertenecieron 55 colectas, que corresponden al 9.8% del total del germoplasma, seguida por A. caudatus con 13 accesiones que represent el 2.3% de las accesiones caracterizadas. En menor escala se encontraron cruzamientos entre las especies y una sola accesin de A. hybridus, ya que las accesiones caracterizadas fueron de grano y no silvestres. Para el mejoramiento gentico se dispone de especies cultivadas, semidomesticadas y silvestres, y desde el punto de vista de la diversidad gentica podemos definir al amaranto como una especie con diferentes centros de domesticacin y origen, dependiendo de las especies, estando ampliamente difundidas en el mundo; sin embargo las especies para grano estn mayormente difundidas en Centro Amrica (Mxico y Guatemala), y los Andes (Per, Bolivia, Ecuador, Argentina); encontrando en estos lugares la mayor variacin gentica, pudiendo diferenciarse dentro del gnero Amaranthus ms de 60 especies (Espitia et al., 2010); siendo este grupo difcil en su taxonoma, debido a su gran semejanza y amplia distribucin geogrfica, por ello la confusin en su nomenclatura y clasificacin. De la especie que ms introducciones se tienen es de A. hypochondriacus, proveniente principalmente de Nepal y la India; de A. caudatus todas las colectas caracterizadas fueron introducidas de Sudamrica, resultados que

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp) Cuadro 2. Frecuencia de las especies en accesiones de amaranto caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

Especie Amaranthus hypochondriacus Amaranthus cruentus Amaranthus caudatus Amaranthus hybridus A. hypochondriacus x A. hybridus A. cruentus x A. hybridus A. hypochondriacus x A. cruentus A. hypochondriacus x A. caudatus Total

No. accesiones Frecuencia (%) 469 55 13 1 8 5 8 1 560 83.8 9.8 2.3 0.19 1.41 0.9 1.41 0.19 100 %

concuerdan con Espitia et al. (2010) quines mencionan que esta especie se origin para produccin de grano en la regin andina. CARACTERSTICAS CUALITATIVAS Para analizar las variables cualitativas por especies los resultados del presente anlisis se dan en una serie de figuras, en las cuales se pueden encontrar la frecuencia de cada especie de cada una de las caractersticas con respecto al total de germoplasma. Para ello se analizaron las especies ms importantes dentro de la clasificacin por especie con mayor frecuencia en las accesiones caracterizadas, ya que dentro de especie tambin existe una enorme variacin en los caracteres cualitativos. Color de tallo En la Figura 2 se presentan los colores de tallo ms comunes en cada una de las especies ms importantes de amaranto cultivado en Mxico. Del total del germoplasma estudiado para la especie A. hypochondriacus (83.8%) el 82.9% correspondi a tallos verdes con estras, el 12% a tallos verdes y solo el 5.1% a mezclas de colores (ya que los materiales criollos presentan una enorme variabilidad de colores de tallo). Para la especie A. cruentus (9.8%), se present ms variacin de color de tallo que en A. hypochondriacus, ya que el 53.7% de las accesiones correspondi a tallos de color verde, 14.8% a verde con estras de color rojo o prpura, 13 % a color dorado (caracterstica de los criollos de Huazulco y Amilcingo, Mor., Espitia et al. (2010), 11.1% a colores rojo o prpura y por ltimo el 7.4% a mezcla de colores.

En A. caudatus aunque no es una especie muy abundante en Mxico, se tenan bajo resguardo ciertas colectas, dicha especie tambin present variabilidad de colores predominando el color verde (38.5%), seguida por mezcla de colores diferentes (30.8%) y el verde con estras de color rojo o prpura (23.1%) y en menor escala rojo o prpura (7.7%). Para las especies que se encontraron en menor escala como A. hybridus, se encontr el color de tallo verde, y en el caso de los cruzamientos A. hypochondriacus x A. hybridus, A. hypochondriacus x A. cruentus, el color de tallo encontrado fue verde con estras rojas o prpuras, por lo que se puede apreciar que ese color es dominante sobre los otros colores de tallo. Forma de las hojas En la Figura 2, se muestra los resultados de la variacin de forma de las hojas en sta caractersticas no se muestra mucha variacin en las especies de A. hypochondriacus y A. cruentus, predominando en las dos la forma elptica con 89.5 y 68.5%, respectivamente. En A. cruentus tambin predomin con un 20.4% la forma rmbica. Para A. caudatus encontramos con mayor proporcin la forma ovatinada (53.8%) y elptica (46.2%). En A. hybridus, y cruzamientos entre las especies solo se encontraron las formas elpticas y rmbicas. Color de las hojas En esta caracterstica se present mucha variacin (Figura 3). En A. hypochondriacus se present variabilidad, pero ms del 50% de las
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa


90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Verde 12.0 5.1 Amaranthus hypochondriacus 82.9

60 50 40 30 20 10

Amaranthus cruentus 53.7

14.8

11.1

13.0 7.4

Verde con estrias rojas o prpuras

Mezcla de diferentes colores

Verde

Verde con estrias

Roja o Dorada prpura

Mezcla

45 40 35 30 25 20 15 10 38.5

Amaranthus caudatus

30.8 23.1

7.7

Verde con estras

Verde

Rojo o prpura

Dorado

5 0 Verde Verde con Mezcla de estrias rojas diferentes o prpuras colores Rojo o prpura

Figura 1. Representacin grfica de las frecuencias del color de tallo de las especies de Amaranthus sp., caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

accesiones fueron de color verde normal, seguidas por el verde obscuro (38.8%), y en menor escala el color de hoja verde con una mancha central y hoja con rea basal pigmentada. En A. cruentus el 68.6% de las accesiones correspondieron al verde normal, y con menor frecuencia una variedad de colores (verde obscuro, hoja con margen y venas pigmentadas, etc.). Para A. caudatus solamente se encontraron 4 colores de hojas, pero an as se encontr predominando el color verde normal con 61.5% del total de las accesiones pertenecientes a la especie. Color de la inflorescencia En todas las especies de amaranto se presenta una enorme variabilidad en color de inflorescencia, es uno de los caracteres con mayor variacin. Para A. hypochondriacus el 50.4%
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M. de la O Oln et al.

fueron de color verde, un 25.1% con mezcla de inflorescencia de colores, 16.4% roja o prpura, 7.3% color rosa y solamente un 0.7% de otro color. En A. cruentus el 38.8% fue de color verde, el 20.4% con mezclas de colores, 24.5% rojo o prpura, 10.2% de otros colores, y 6.1% color amarillo, cabe mencionar que sta especie es la nica que presenta colores de inflorescencia amarillos (Espitia et al., 2010). En la especie de A. caudatus predomin el color rojo o prpura con un 61.5% de las accesiones, seguidas por mezclas de colores, as como el color verde (15.4%). En las otras especies como A. hybridus se encontr el color verde, as como en los cruzamientos entre las especies.

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)
Amaranthus hypochondriacus 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 3.4 Lanceolada Elptica 4.1 Ovalinada 3.0 Rmbica 89.5

Amaranthus cruentus 80 70 60 50 40 30 20 10 1.9 0 Lanceolada Elptica Ovalinada Rmbica 9.3 20.4 68.5

56 54 52 50 48 46.2 46 44 42 Elptica

Amaranthus caudatus 53.8

Rmbica

Ovatinada

Elptica

Figura 2. Representacin grfica de las frecuencias de la forma de la hojas de las especies de Amaranthus sp., caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

60 50 40 30 20 10 0

Amaranthus hypochondriacus

56.1

38.8

1.3

3.3

0.2

0.2 Otro

Hoja con rea Hoja con una Hoja con una Verde normal Verde obscuro basal mancha franja en forma pigmentada central de V
M. de la O Oln et al.

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60 50 40 30 20 10 0 1.3
Hoja con rea basal pigmentada

Amaranthus hypochondriacus

56.1

38.8

3.3
Hoja con una mancha central

0.2
Hoja con una franja en forma de V Verde normal Verde obscuro

0.2
Otro

70 60 50 40 30 20 10 0
Hoja con rea basal pigmentada

Amaranthus caudatus

61.5

15.4 7.7
Verde normal Verde obscuro

15.4

Hoja con margen y venas pigmentados

Figura 3. Representacin grfica de la variacin del color de las hojas de las especies de Amaranthus sp., caracterizadas en P/V-2009, Santa Lucas de Pras, Mx.

Forma de la inflorescencia En la Figura 5 se presenta la frecuencia de la forma de la inflorescencia de las accesiones caracterizadas en 2009, 2010 y 2011. A. hypochondriacus fue la especie que ms variacin present en la forma de la inflorescencia, donde el 44.7% de los materiales fueron de inflorescencia con agrupacin en el pice, 28.4% en forma de pancula con ramificaciones cortas y 26.7% con pancula con ramificaciones largas. Para A. cruentus el 88.7% fueron en forma de pancula con ramificaciones cortas y solo un
172
M. de la O Oln et al.

9.4% en forma de pancula con ramificaciones largas. En A. caudatus se encontraron solamente dos formas: pancula con ramificaciones largas (61.5%) y pancula con ramificaciones largas (38.5%). Densidad de la inflorescencia En la Figura 6 se presenta el porcentaje de las accesiones de la variacin de la densidad de la inflorescencia del gnero Amaranthus. En A. hypochondriacus se presentaron una densidad de inflorescencia en la mayora (63%) de tipo intermedio, luego densa (22.9%) y en menor

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)

60 50 40 30 20 10 0

50.4

Amaranthus hypochondriacus

25.1 16.4 7.3


Verde Rosa Roja o prpura

0.7
Otra

45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
70 60 50 40 30 20 10 0

38.8

Amaranthus cruentus

24.5 10.2

20.4

6.1
Amarillo Verde Roja o prpura

Otros
61.5

Amaranthus caudatus

15.4 7.7

15.4

Verde

Rosa

Roja o prpura

Verde Roja o prpura Dorada Payasita Figura 4. Representacin grfica del color de las inflorescencias de Amaranthus sp., caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx. M. de la O Oln et al.

173

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

Amaranthus hypochondriacus

44.7

28.4

26.7

0.2
Otras formas

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Amaranthus cruentus 88.7

70 60 50 40 30 20

Amaranthus caudatus 61.5

38.5

9.4

1.9

10 0

Figura 5. Representacin grfica de la forma de la inflorescencia de amaranto, caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

proporcin (14.1%) laxas, A. cruenthus present algo similar al caso anterior. Para A. caudatus el 53.8% densidad intermedia, 30.8% laxa y 15.4 compacta. Color de semilla En la Figura 7 se presenta el porcentaje del color de la semilla en cada uno de los materiales caracterizados para las especies de amaranto. Para las especies cultivadas como A. cruentus y A. hypochondriacus casi en su totalidad la semilla fue de color amarillo plido, con 76.1 % y 81.2 %, respectivamente. En A. caudatus, existe una enorme variacin en colores de semilla donde el 30.8% correspondi a color caf y otro 30.8% a mezcla de colores, un 23.1% color rosa y 15.4% amarillo plido. Se obtuvo que en A. hybridus, y los cruzamientos donde particip sta especie el color caracterstico de la semilla es negro tpico
174
M. de la O Oln et al.

de las especies silvestres, tambin es un carcter dominante sobre los otros colores de semilla. Tipo de cubierta de semilla En la Figura 8 se presenta el porcentaje del tipo de cubierta de la semilla en cada uno de los materiales caracterizados para las especies de amaranto. Se observa que ste carcter es de menor variacin que otros. En la especie cultivada como A. hypochondriacus casi en su totalidad fueron opacas (90.2%), en A. cruentus el 77.8% fueron opacas, 13% cristalina y 9.3% mezcla. En A. caudatus el 76.9% fueron opacas, 15.4% mezclas y 7.7% cristalinas. Cabe mencionar que en los cruzamientos entre especies cuando eran con A. hybridus como la semilla era de color negro, el tipo de cubierta fue cristalina. En A. hybridus en su totalidad fueron cristalinas.

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)
70 60 50 40 Amaranthus hypochondriacus 63.0

80 70 60 50 40

Amaranthus cruentus 68.6

30 22.9 20 10 0 14.1

30 20 10 0 17.6 13.7

Laxa

Intermedia

Densa o compacta

Laxa

Intermedia

Densa o compacta

60 50 40 30 20 10 0
Laxa

Amaranthus caudatus 53.8

30.8

15.4

Intermedia

Densa o compacta

Figura 6. Representacin grfica de la densidad de inflorescencia en Amaranthus spp., caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

81.2

Amaranthus hypochondriacus

80 70 60 50 40 30

76.1

Amaranthus cruentus

21.7

15.8 1.9
Amarillo plido Caf

20 10 2.2

1.1
Negra Mezcla

Amarillo plido

Rosa

Caf

M. de la O Oln et al.

175

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

35 30 25 20 15 10 5 0 15.4

Amaranthus caudatus

30.8

30.8

23.1

Amarillo plido

Rosa

Caf

Mezcla

Figura 7. Representacin grfica del color de semilla en amaranto, caracterizada en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

Ramificacin lateral En la Figura 9 se presenta la ramificacin lateral en porcentaje en cada uno de los materiales caracterizados para las especies de Amarathus spp. En A. hypochondriacus se observa que el 62.2% de los materiales caracterizados no presentaron ramificacin, el 23.6% con ramas cortas a lo largo del tallo y el resto con muchas ramas y pocas ramas en la base del tallo, sin embargo A. cruenthus se caracteriz por que el 44.4% de los materiales tuvieron muchas ramas largas a lo largo del tallo, 38.8 con ramas cortas a lo largo del tallo, 9.3% con pocas ramas en la base del tallo y 7.4% con muchas ramas en la base del tallo.
Amaranthus hypochondriacus 90.2

En A. caudatus, el 38.5% present muchas ramas en la base del tallo, 30.8% muchas ramas a lo largo del tallo y 30.8% ramas cortas a lo largo del tallo. Dentro de los materiales caracterizados solamente las accesiones de A. hypochondriacus no ramifican, es una de las ventajas que se tiene para mejoramiento gentico principalmente en la cosecha mecanizada (Espitia et al., 2010). CARACTERES CUANTITATIVOS Das a floracin La duracin del ciclo de vida de la planta del amaranto puede variar de una regin a otra, de una especie a otra, de una raza a otra, de tal manera que la clasificacin de precoz,
90 80 70 60 50 40 30 Amaranthus cruentus 77.8

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

8.8 1.1

20 10

13.0

9.3

Cristalina

Opaca

Mezcla

Cristalina

Opaca

Mezcla

176

M. de la O Oln et al.

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 7.7 15.4 Amaranthus caudatus 76.9

Opaca

Cristalina

Opaca

Mezcla

Figura 8. Representacin grfica del tipo de cubierta de semilla en amaranto, caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

intermedio y tardo no se puede aplicar sin la referencia de las condiciones ambientales (Espitia et al., 2010). Se tom el nmero de das de la emergencia hasta que el 50% de las plantas presentaron floracin (antesis). Dentro de las
70 60 50 40 30 20 10 0 0.6 23.6 13.5 62.2 Amaranthus hypochondriacus

Cristalina

Ramas cortas a Pocas ramas en Muchas ramas a lo largo del tallo la base del tallo lo largo del tallo

50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

Amaranthus cruentus 38.9

44.4

9.3

7.4

Ramas cortas a lo largo del tallo

Pocas ramas en la base del tallo

Muchas ramas en la base del tallo

Muchas ramas a lo largo del tallo


M. de la O Oln et al.

177

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

Amaranthus caudatus 38.5 30.8 30.8

Ramas cortas a lo largo del tallo

Muchas ramas en la base del tallo

Muchas ramas a lo largo del tallo

Figura 9. Representacin grfica de la ramificacin lateral de amaranto, caracterizada en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

caractersticas que se estn buscando en los programas de mejoramiento son la precocidad, es por ello que en el germoplasma evaluado se encontr una gran variabilidad de materiales con 67 a 97 das a floracin, lo que permite seleccionar de acuerdo a nuestro inters. En el Cuadro 6 se presentan los valores promedio para los das a floracin en las diferentes especies de Amaranthus. La especie de ciclo ms corto de acuerdo al promedio result ser cruzamiento de A. cruentus x A. hybridus con 69 das a floracin, principalmente por colectas de GTO-099 y GTO-095 que obtuvieron 67 das a floracin. En general todas las especies que tengan A. cruentus son de ciclo ms corto ya que es la especie cultivada ms precoz. Es importante considerar sta parte en mejoramiento gentico ya que se requieren de variedades precoces para regiones donde la estacin de crecimiento es corta y para regiones donde la sequa es frecuente (Kulakow y Jain, 1987). La especie A. hypochondriacus result ser la ms tarda con un promedio de 96.7 das a floracin, esa es una de las desventajas que presenta dicha especie. A. caudatus es una especie que presenta un ciclo intermedio con 90.1 das a floracin. Altura de planta La altura de planta tambin es un carcter cuantitativo por lo tanto es influenciada por el genotipo y el ambiente (Espitia et al., 2010). En el Cuadro 6 se presentan los valores promedio de la altura de planta las especies de Amaranthus spp. En A. hypochondriacus se cuenta
178
M. de la O Oln et al.

con alturas de planta mucho mayor que A. cruentus, lo que provoca que A. hypochondriacus sea ms susceptible a sufrir acame. Accesiones de A. cauadatus fueron los materiales ms altos encontrados en promedio, pero al momento de realizar el anlisis de los valores mximos se encontr que la accesin COL-125 perteneciente a la especie A. hypochondriacus result con una altura mxima de hasta 2.98 m. La accesin con menor porte fue GTO-080 perteneciente a A. cruentus. Es interesante la variacin con que se cuenta en lo materiales para la altura de planta en las especies, ya que sta caracterstica puede ser aprovechada en el mejoramiento gentico para resistencia al acame. Uno de los problemas que enfrenta el cultivo de amaranto nativo es la gran variacin de altura en los materiales. Weber y Kauffman (1990) mencionan que las plantas ms altas tienen una gran susceptibilidad al acame, as como la dificultad de la cosecha. Ancho y Longitud de la Hoja En el Cuadro 6 se presenta el ancho y longitud de la hoja, medida en cm con una regla de madera de 30 cm, de la sexta a la octava hoja de diez plantas de cada colecta, con 3 hojas cada planta, al final se obtuvo el promedio, el cul se tom despus de la floracin cuando las hojas haban terminado su desarrollo. Se observ que las hojas ms largas se encuentran en la especies cultivadas como Amaranthus hypochondriacus, A. cruentus y A. caudatus, en cuanto al ancho de hojas la especie A. cruentus present los mayores valores. De manera

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)

individual la colecta GTO-072 perteneciente a un cruzamiento de A. hypochondriacus x A. hybridus present los menores valores de longitud de hoja, y el mayor valor correspondi a la colecta DF-011 de A. hypochondriacus con longitudes de hasta 33.26 cm, material que puede ser aprovechado para rendimiento de forraje. En ancho de hoja el mayor valor fue para la accesin PSM-0092GA de A. hypochondriacus con 19.27 cm. Las hojas de menor longitud y dimetro se localizan en especies silvestres principalmente donde participa A. hybridus. Dimetro del tallo En el Cuadro 6 se presenta el promedio del dimetro de tallo de cada una de las especies de Amaranthus. Esta caracterstica fue tomada despus de la floracin la medicin se realiz con un vernier digital en la base del tallo de diez plantas de cada colecta. A nivel de especie A. caudatus present los mayores dimetros de tallo con valores hasta de 2.9 cm, siguiendo en orden de magnitud A. cruentus con 1.9 cm y A. hypochondriacus 1.3 cm, lo que explica con mayor claridad el acame que presenta A. hypochondriacus adems de poseer mayor altura de planta. Esas desventajas que presenta A. hypochondriacus se ponen en manifiesto en la dificultad para la cosecha mecanizada (Espitia et al., 2010). En al anlisis individual de las accesiones, el mayor dimetro de tallo (4.3 cm) se encontr en la colecta COL-A-034 perteneciente a A. caudatus, y el menor valor en GTO-099 de A. cruentus x A. hybridus con 0.74 cm. El dimetro de tallo es una caracterstica fundamental de las accesiones ya que podemos seleccionar para resistencia al acame (Weber y Kauffman, 1990). Longitud y dimetro de la inflorescencia La longitud de la inflorescencia (cm) se tom desde la base hasta el pice de la inflorescencia, cuando la planta haba llegado a madurez. El dimetro (cm) tambin se tom a la madurez midindose el dimetro a la mitad de la inflorescencia, con una regla de madera de 1 m. La longitud y el dimetro de la inflorescencia a nivel de especie se observa en el Cuadro 6. Se observ que las panojas ms largas (62.3 y 56.5 cm) se encontraron en la especie A. caudatus y A. hypochondriacus, respectivamente. De la

misma manera las panojas ms anchas (18.5 cm) se encontraron en A. hypochondriacus lo que repercute en el rendimiento de grano de acuerdo a lo que menciona Weber y Kauffman (1990). A nivel individual de acuerdo a los valores mximos y mnimos se encontr que la colecta COL-AG-73 fue la de mayor longitud de inflorescencia (87.5 cm) y el mayor dimetro correspondi a la COL-59 que pertenecen a la especie A. hypochondriacus. Peso de 1000 semillas Esta variable fue tomada de manera adicional para tener una idea del rendimiento de cada una de las accesiones. Frecuentemente se menciona el incremento del peso o tamao de semilla como un objetivo de un programa de mejoramiento gentico de amaranto (Weber y Kauffman, 1990; Espitia, 1992). En el Cuadro 6 se presentan los promedios de cada una de las especies de Amaranthus spp. La especie con mayor tamao de semilla fue A. hypochondriacus con valor de 1.1 g en 1000 semillas, seguida de A. cruentus con 0.9 g. De manera individual el mayor peso de semilla fue para PSM-0020GA de la especie A. hypochondriacus con una valor mximo de 1.94 g en 1000 semillas. La ventaja de las especies de A. hypochondriacus es su peso y rendimiento de semilla, el inconveniente es la altura de la planta (altas) y dimetro de tallo reducido lo que provoca que las plantas se acamen, y al mismo tiempo dificulta la cosecha mecanizada. CONCLUSIONES Existe una enorme variacin dentro del gnero Amaranthus y no solo en el gnero tambin entre especies, que puede ser aprovechada en el mejoramiento gentico, as como para conocer la diversidad de materiales en Mxico que puede ser aprovechada para muchos propsitos. En amaranto existe un amplio campo de exploracin para caracteres morfolgicos, los caracteres cualitativos y cuantitativos representan una parte del espectro de la variacin gentica dentro de las especies. Sin embargo, faltan todava por realizarse ms estudios genticos y de biologa molecular con muchos materiales mexicanos para distinguir las diferentes razas cultivadas de grano. En la actualidad se tiene
M. de la O Oln et al.

179

Amaranto: Ciencia y Tecnologa Cuadro 3. Clasificacin por especie y valores promedio de variables cuantitativas en accesiones de amaranto caracterizadas en P/V-2009, 2010 y 2011, Santa Luca de Pras, Mx.

Especie A. hypochondriacus A. cruentus A. caudatus A. hybridus A. hypochondriacus x A. hybridus A. cruentus x A. hybridus A. hypochondriacus x A. cruentus

DF 96.7 86.0 90.1 84.0 69.0 72.0

ALP DIIN LOIN DITA LOHO ANHO 1.9 1.4 2.3 1.5 1.2 1.0 2.2 18.5 56.5 15.8 47.3 1.3 1.9 3.0 1.3 1.1 1.2 1.8 17.7 17.4 17.6 16.5 14.9 13.0 15.1 17.0 8.9 14.2 9.2 9.8 8.3 7.4 7.7 8.8

PSEM 1.1 0.9 0.7 0.65 0.83 0.84 0.99 0.87

16.5 62.3 2.93 14.7 36.9 14.6 33.7 14.3 34.5 16.9 58.1

92.0 0.95 12.0 34.0

A. hypochondriacus x A. caudatus 93.0

LOIN= Longitud de inflorescencia (cm); DIIN: Dimetro de inflorescencia (cm); ALP = Altura de la planta (m); DITA: Dimetro de tallo (cm); LOHO: Longitud de hoja (cm); ANHO: Ancho de hoja (cm); PSEM= Peso de 1000 semillas.

una gran cantidad de colectas que necesitan ser caracterizadas, para tener una base completa de la diversidad de materiales a usar en los programas de mejoramiento gentico. La diversidad de materiales en el banco de germoplasma lo hace caracterstico para tener germoplasma en todos los programas de mejoramiento gentico para enfrentar los cambios climticos que hoy en da se presentan. La caracterizacin amplia de especies, locales e introducidas es una herramienta poderosa e importante para identificar caracteres de gran valor en el mejoramiento gentico. LITERATURA CITADA Alejandre I G, L F Gmez (1999) Cultivo de Amaranto en Mxico. Direccin de Difusin Cultural. Universidad Autnoma Chapingo. Departamento de Zonas ridas. Mx. 245p. Espitia R E (1986) Caracterizacin y evaluacin preliminar de germoplasma de Amaranthus. Tesis Profesional en Agronoma. UAAN. Saltillo, Coah. Mxico. Espitia R E (1992) Amaranth germplasm development and agronomic studies in Mexico. Food Reviews International. 8(1): 71-86. Espitia R E, C Mapes S, D Escobedo L, M De la O O, P Rivas V, G Martnez T, L Corts E, JM Hernndez C (2010) Conservacin y uso de los recursos genticos de Amaranto en Mxico. INIFAP, Centro de Investigacin Regional Centro, Celaya, Guanajuato, Mxico. 200 pp.
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M. de la O Oln et al.

Grubben G JH, D H Van Sloten (1981) Genetics resources of amaranths International Board for Plant Genetic Resources, Rome. Italy. 57 pp. Hidalgo R (2003) Variabilidad Gentica y Caracterizacin de Especies Vegetales. In: Franco T L, Hidalgo R (eds.). 2003. Anlisis Estadstico de Datos de Caracterizacin Morfolgica de Recursos Fitogenticos. Boletn tcnico no. 8, Instituto Internacional de Recursos Fitogenticos (IPGRI), Cali, Colombia. 89 p. Jacobsen S E, S Shewood (2002) Cultivo de granos andinos en Ecuador: informe sobre los rubros quinua, chocho y amaranto. Quito, Ecuador, FAO-Centro Internacional de la PapaCatholic Relief Service, p.14. Joshi B D (1981) Exploration for amaranth in Northwest India. Plant Genetic Resources. Newsletter no. 48. FAO, Rome. Karp A, S Kresovich, K V Bhat, W G Ayad, T Hodgkin (1997) Molecular tools in plant genetic resources conservation. A guide to the technologies. IPGRI Technical Bulletin No. 2. Rome, Italy. Kulakow P A, S K Jain (1987) Genetics of grain amaranths. Variation and early response to selection in Amaranthus cruentus L. Theor. Appl. Genet. 74:113-120.

Captulo XII. Caracterizacin morfolgica en germoplasma para grano de amaranto (Amaranthus spp)

Molina G JD (1992) Introduccin a la Gentica de Poblaciones y Cuantitativa (algunas implicaciones en Genotecnia). AGT Editor, Mxico, D.F. 370 p. Weber L E, C S Kauffman (1990) Plant breeding and seed production. Proceedings of the Fourth National Amaranth Symposium. Amaranth Institute, Minneapolis MN. Pp. 115128.

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Captulo XIII

Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura


GERMPLASM CHARACTERIZATION OF GREEN AMARANTH (Amaranthus spp.)

Cristina Mapes Snchez1*, Araceli Daz Ortega1 y Jos Blancas2


1Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Circuito Exterior s/n. Ciudad Universitaria. Delegacin Coyoacn. C.P. 04510. Mxico Distrito Federal. Tl. 01 55 56 22 89 84 2 Centro de Investigaciones en Ecosistemas. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Campus Morelia. Antigua Carretera a Ptzcuaro No. 8701. Col. ExHacienda San Jos de la Huerta. C.P. 58190. Morelia, Michoacn. *Autor para correspondencia: cmapes@ibiologia.unam.mx

RESUMEN El germoplasma de amaranto disponible en la actualidad muestra una gran diversidad morfolgica. La regin de la Sierra Norte de Puebla ha sido una de las regiones donde el uso del amaranto como verdura ha tenido un papel muy importante y son denominados genricamente quintoniles, son todos comestibles aunque preferidos en distinto grado por la poblacin local con base en su sabor, color y palatabilidad. La clasificacin dentro del gnero Amaranthus ha sido difcil, debido a que se han considerado para tal efecto caracteres con alta segregacin dentro de las poblaciones. El objetivo del presente estudio fue caracterizar morfolgicamente el germoplasma de Amaranthus spp. utilizado como verdura, dentro del rea estratgica de Uso y Potenciacin de acuerdo al Plan de Accin del SINAREFI. El material evaluado fue colectado en diferentes regiones de la Sierra Norte de Puebla. Se caracterizaron un total de 86 colectas en el ciclo agrcola Primavera-Verano 2011, las cuales fueron evaluadas en dos mtodos de siembra: por trasplante (30 colectas) y por siembra directa (56 colectas). La caracterizacin morfolgica se realiz con base en la clasificacin de Grubben y Van Sloten (1981). Los caracteres

considerados se evaluaron durante la floracin, despus de la floracin y durante la madurez. Los datos se analizaron mediante anlisis estadstico multivariado. Los resultados muestran que existe una enorme variabilidad en el germoplasma presente en la regin de estudio. Se agrupan las colectas por especie y raza. Los caracteres importantes se encuentran relacionados con diferentes aspectos de la hoja, ramificacin lateral y forma de la inflorescencia. Palabras clave: Amaranthus, verdura, caracterizacin morfolgica, Sierra Norte de Puebla. ABSTRACT The available germplasm of amaranth (Amaranthus spp.) displays an ample morphological variation. The Sierra Norte de Puebla is one of the regions where the use of amaranths as greens is relevant, called quintoniles, greens from all species of amaranth are edible, although local people prefer some species in terms of their taste, color and palatability. Classification of species in the genus Amaranthus has been difficult because it is based on characters that segregate amply within populations. The present work had the objective
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

of morphologically characterize the germplasm of Amaranthus spp. used as edible greens within the strategic area 3 of Use and Potentiation according to the Action Plan of SINAREFI. The material for evaluation was collected in different regions of the Sierra Norte de Puebla. A total of 86 samples from the 2011 spring-summer agricultural cycle were characterized, derived from two stages: transplant (30 specimens) and direct sowing (56 specimens). Morphological characterization was based on the classification of Grubben and Van Sloten (1981). Characters were evaluated during and after flowering and at maturity. Data were analyzed by means of a multivariate statistical analysis. Results showed a large variation of the germplasm in the studied region. Samples were grouped by species and race. The most important characters were related to different aspects of leafs, lateral branching and form of inflorescence. Key words: Amaranthus; edible greens; morphological characterization; Sierra Norte de Puebla. INTRODUCCIN El valor de las colecciones de recursos fitogenticos reside en la utilizacin que de ellas se haga para producir nuevos cultivares, domesticar nuevas especies y desarrollar nuevos productos, para el beneficio de las actividades productivas. Las colecciones deben proveer a los mejoradores de variantes genticas, genes o genotipos, que les permitan responder a los nuevos desafos planteados por los sistemas productivos, siendo para ello imprescindible conocer las caractersticas del germoplasma conservado (Abadie y Berretta, 2001). Tradicionalmente la comunidad cientfica ha enfatizado el problema de la falta de caracterizacin y evaluacin y la importancia de que las colecciones de germoplasma cuenten con suficientes datos de este tipo (Frankel y Brown, 1984). Sin embargo, existe una considerable brecha entre el nmero de materiales conservados y el de aquellos de los que se tienen datos de caracterizacin y evaluacin, estimndose a nivel mundial un 80% de muestras sin datos de caracterizacin y un 95% sin datos de evaluacin agronmica (Peters y Galway, 1988). La colecta
184
C. Mapes Snchez et al.

y conservacin de recursos fitogenticos sin que est acompaada de la informacin sobre sus caractersticas convierte a las colecciones en simples depsitos de materiales, sin mayor utilidad. En el informe sobre el estado de los recursos fitogenticos en el mundo (FAO, 1996), resalta que los recursos genticos son de escasa utilidad a menos que vayan acompaados de informacin adecuada. En los informes de los pases se cita este punto como uno de los obstculos ms importantes para utilizar los recursos fitogenticos en los programas de mejoramiento. Todo esto resalta la importancia que tiene esta temtica en las estrategias destinadas a incrementar un uso adecuado de la diversidad gentica. Se entiende por caracterizacin a la descripcin de la variacin que existe en una coleccin de germoplasma, en trminos de caractersticas morfolgicas y fenolgicas de alta heredabilidad, es decir caractersticas cuya expresin es poco influenciada por el ambiente (Hinthum Van, 1995). La caracterizacin debe permitir diferenciar a las accesiones de una especie. El germoplasma de amaranto disponible en la actualidad muestra una gran diversidad morfolgica, producto de un alto grado de cruzamiento y de mltiples criterios de seleccin por parte de los agricultores. La clasificacin dentro del gnero Amaranthus ha sido difcil, debido a que se han considerado para tal efecto caracteres con alta segregacin dentro de las poblaciones (Espitia et al., 2010). El objetivo del presente estudio fue caracterizar morfolgicamente el germoplasma de Amaranthus spp. utilizado como verdura, dentro del rea estratgica 3 de Uso y Potenciacin de acuerdo al Plan de Accin del SINAREFI. La caracterizacin morfolgica se realiz con base en la clasificacin de Grubben y Van Sloten (1981), donde se propone una lista de descriptores para la caracterizacin y evaluacin de germoplasma de amaranto; considerando la produccin tanto de grano como de verdura. Para Grubben y Van Sloten (1981), la caracterizacin es el registro de los caracteres altamente heredables de una planta, que pueden ser distinguidos a simple vista y que se expresan en todos los ambientes. Comnmente junto

Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura

con la caracterizacin se efecta una evaluacin preliminar, la cual consiste en el registro de un conjunto de caractersticas adicionales deseables en un cultivo en particular. La regin de la Sierra Norte de Puebla ha sido una de las regiones donde el uso del amaranto como verdura ha tenido un papel muy importante y son denominados genricamente quintoniles, son todos comestibles aunque preferidos en distinto grado por la poblacin local con base en su sabor, color y palatabilidad. Las especies que se encuentran en la regin son Amaranthus hybridus L., A. hypochondriacus L. raza Mixteca, A. hypochondriacus L. raza Azteca, A. cruentus L. raza Mexicana y A. spinosus L., adems de todo un complejo de hbridos entre las cuatro primeras especies mencionadas. MATERIALES Y MTODOS El material evaluado fue colectado en diferentes regiones de la Sierra Norte de Puebla. Se caracterizaron un total de 86 colectas en el ciclo agrcola Primavera-Verano 2011 (P/V-2011), las cuales fueron evaluadas bajo trasplante (30 colectas) y otra, por siembra directa (56 colectas),

Cuadro 1. El presente estudio se realiz en dos etapas: una por trasplante con 30 colectas y otra, por siembra directa 56 colectas (Tabla 1), teniendo un total de 86 colectas caracterizadas en el ciclo P/V 2011. En el primer caso, las colectas fueron sembradas en condiciones de invernadero (11 de mayo, 2011) en el Jardn Botnico del Instituto de Biologa de la UNAM y posteriormente trasplantadas (4-junio-2011) en el INIFAP-Campo Experimental Valle de Mxico, Santa Luca de Pras, Texcoco, Mxico. En la segunda etapa, la siembra directa se realiz el 2 de junio del 2011, en ambos casos bajo condiciones de temporal en el mismo sitio. Durante el ciclo del cultivo se realizaron las siguientes labores de campo: aclareos (6-8 de julio, 2011) 2 deshierbes (12 de julio y 4 de agosto), riegos de auxilio (3 y 11 de junio) durante el periodo de sequa, as como dos aplicaciones de insecticidas: 1 Lucamet 600 (1 L ha-1) el 9 de julio, 2 Sevin 80PH (1 kg ha-1), as como la aplicacin de TODOMIN (yodo) que acta como viricida, alguicida y bactericida (1 L ha-1) dada la incidencia de algunas enfermedades en el cultivo.

Cuadro 1. Accesiones de Amaranthus spp. utilizado como verdura en la Sierra Norte de Puebla, caracterizadas en el ciclo P/V 2011 bajo los mtodos: siembra directa (1-56) y de trasplante (57-86).
No. No. Colecta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 996 1198 1169 1172 1167 1166 1300 1210 1203 1165 1156 1199 1206 1005 1202 1207 1209 1170 1211 1184 Especie A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A.hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus Raza Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Mixteco Mixteco Mixteco Mixteco Mixteco Mixteco Mixteco Estado Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Localidad Hueyapan S.J. Tahitic. Zoatecpan Ecatln Ecatln Ecatln Ecatln Tecuicuilco Comaltepec Yohualichan Tetelilla de Islas Xochitepec Xalticpac Huahuaxtla Comaltepec Cuaximaloyan Cuaximaloyan Zoatecpan Huahuaxtla Xalcuauta Municipio Hueyapan Zacapoaxtla Xochitlan Jonotla Jonotla Jonotla Jonotla Tetela de Ocampo Zacapoaxtla Cuetzalan Tuzamapan Zacapoaxtla Zacapoaxtla Xochitlan Zacapoaxtla Xochiapulco Xochiapulco Xochitlan Xochitlan Cuetzalan

C. Mapes Snchez et al.

185

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

No. No. Colecta 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 1185 1200 999 1192 1183 1201 1192 1171 1289 1213 1196 1197 1177 1174 1188 1186 1162 1041 1164a 1189 1215 1161 1220 1219 1190 1182 1235 1163 1176 1178 1180 1181 1187 1158 1179 1205 1169 1166 1298 996 1198 1204 1172

Especie A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hybridus A. hybridus A. hybridus A. hybridus A. hybridus A. cruentus A. cruentus A. spinosus A. cruentus x hybridus A. cruentus x hybridus Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus

Raza Mixteco Mixteco

Estado Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla

Localidad Xalcuauta Xochitepec Huahuaxtla S.M.Tenextatiloyan Zoatecpan Comaltepec S,M.Temextatiloyan Zoatecpan Tuxtla Gachupinate Xochiateno Xochiateno Amatln Tepetitlan Yohualichan Reyeshogpan Ayotzinapan Zapotitln Yohualichan Yohualichan Tenampulco Ayotzinapan Limontitln Limontitln Yohualichan Huiziltepec Xalcuauta Ayotzinapan Amatln Amatln Amatln Huiziltepec Reyeshogpan Ayotzinapan Amatln Comaltepec Zoatecpan Ecatln Caxhuacan Hueyapan S.J. Tahitic Comaltepec Ecatln

Municipio Cuetzalan Zacapoaxtla Xochitlan Zautla Xochitlan Zacapoaxtla Zautla Xochitlan Zapotitln Ayotoxco Zacapoaxtla Zacapoaxtla Zoquiapan Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan Zapotitln Cuetzalan Cuetzalan Tenampulco Cuetzalan Hueytamalco Hueytamalco Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan Zoquiapan Zoquiapan Zoquiapan Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan Zoquiapan Zacapoaxtla Xochitln Jonotla Caxhuacan Hueyapan Zacapoaxtla Zacapoaxtla Jonotla

Mexicano Mexicano

Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla

Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca Azteca

Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla

186

C. Mapes Snchez et al.

Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura


No. No. Colecta 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 1300 1167 1005 1202 1221 1213 1193 1298 1193 1171 1041 1010 1010 1164a 1162 1161 1215 1173 1174 1177 1186 1188 1189 Especie A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hypochondriacus A. hybridus A. spinosus A. hybridus x cruentus A. hybridus x cruentus A. hybridus x cruentus A. cruentus x hybridus Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Amaranthus sp. Mixteco Mixteco Raza Azteca Estado Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Puebla Localidad Ecatln Ecatln Huahuaxtla Comaltepec San Jos Acateno Gachupinate Tahitic Caxhuacan S.J. Tahitic Zoatecpan Zapotitln Huapalecan Huapalecan Yohualichan Ayotzinapan Ayotzinapan Tenampulco Xiloxochico Tepetitlan Amatln Reyeshogpan Yohualichan Yohualichan Municipio Jonotla Jonotla Xochitln Zacapoaxtla San Jos Acateno Ayotoxco Zacapoaxtla Caxhuacan Zacapoaxtla Xochitln Zapotitln Xochitlan Xochitln Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan Tenampulco Cuetzalan Cuetzalan Zoquiapan Cuetzalan Cuetzalan Cuetzalan

La unidad experimental fue de tres surcos de 5 m de largo, de cada poblacin, dejando en promedio 150 plantas con una distancia de 15-25 cm entre cada una. Los registros de campo, se realizaron en diez plantas marcadas de cada unidad experimental, en las cuales se realizaron observaciones de variables cualitativas y cuantitativas, principalmente en las etapas de floracin y de madurez fisiolgica. Los caracteres considerados fueron los siguientes (ver apndice): DURANTE LA FLORACIN Color de Tallo (COTA), de hojas (COHO) y de la inflorescencia (COIN), as como la forma de hojas (FOHO), de inflorescencia (FOIN) y la densidad de la inflorescencia (DEIN) y ramificacin lateral (RALAT). DESPUS DE LA FLORACIN Dimetro del tallo (DITA), longitud (LOHO) y ancho de la hoja (ANHO). DURANTE LA MADUREZ Longitud de la inflorescencia (LOIN), dimetro de la inflorescencia (DIIN), color de semilla (COSE) y altura de planta (ALT), entre otras.

La informacin generada de este estudio, considerando los parmetros anteriormente descritos, fue procesada en una base de datos en hoja electrnica (Excel 97) clasificando las variables en cuantitativas y cualitativas. ANLISIS DE LOS DATOS Para determinar el parecido en forma cuantitativa de las diferentes colectas de amaranto se construyeron dos matrices de datos, mismas que se analizaron por separado mediante el programa NTSYS-pc (Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System, versin 2.2. Exeter Software). Una contena los datos de las variables cuantitativas y cualitativas multiestado, tanto para siembra directa como para trasplante. La segunda slo contena datos de variables cualitativas binarias o dos estados. ANLISIS DE CONGLOMERADOS (CLUSTER ANALISYS) Con las variables cuantitativas y cualitativas multiestado se obtuvo un fenograma el cual se construy mediante una matriz de similitud usando el coeficiente de correlacin momentoproducto de Pearson y la tcnica de ligamiento media aritmtica no ponderada (UPGMA,
C. Mapes Snchez et al.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

unweighted pair-group method using arithmetic averages). Para el caso de las variables cualitativas binarias, se construy el fenograma mediante una matriz de similitud usando el coeficiente de asociacin de Jaccard y la tcnica de ligamiento media aritmtica no ponderada (UPGMA, unweighted pair-group method using arithmetic averages). ANLISIS DE COMPONENTES PRINCIPALES (PCA). Adicionalmente y para complementar el anlisis de agrupamiento se hizo un anlisis de componentes principales (PCA) en ambos tratamientos mediante el programa NTSYS-pc (Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System, versin 2.2. Exeter Software). Se realiz este anlisis slo para los datos cuantitativos y cualitativos multiestado. Este anlisis permite encontrar un patrn de relaciones en la totalidad de las colectas y al mismo tiempo permite representar las afinidades entre las colectas por la relacin que guardan en un espacio bidimensional. A partir de una matriz de similitud usando el coeficiente Varianza-Covarianza y el anlisis Eigen, se construy la representacin grfica en los dos primeros componentes de las afinidades entre las colectas. ANLISIS DE COORDENADAS PRINCIPALES (PCO). Para el caso de los datos cualitativos binarios se hizo mediante el programa NTSYS-pc (Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System, versin 2.2. Exeter Software) un Anlisis de Coordenadas Principales (PCO), utilizando una matriz de similitud con el coeficiente de Jaccard. Se realiz el anlisis Eigen y se construy

la representacin grfica en las dos primeras coordenadas principales. RESULTADOS Y DISCUSIN Se presentan los resultados obtenidos solo de las colectas evaluadas que concluyeron su ciclo biolgico durante el ciclo Primavera-Verano 2011 en el INIFAP, ya que desafortunadamente varios de los materiales para verdura son de ciclo tardo y no alcanzaron la etapa reproductiva. Cabe mencionar que de las colectas de siembra directa (56) se evaluaron 27 es decir, el 48% de lo propuesto inicialmente, mientras que de trasplante (30) fueron 15 el 50% de colectas evaluadas. A continuacin en el Cuadro 2 se muestran los valores obtenidos en la evaluacin de los caracteres cualitativos en las diferentes especies de amaranto y bajo siembra directa. En el Cuadro 3 se muestran los valores obtenidos en la evaluacin de los valores obtenidos en la evaluacin de caracteres cualitativos en las diferentes especies bajo trasplante. En el Cuadro 4 se presentan los resultados promedio de los caracteres cuantitativos en diferentes especies de amaranto bajo siembra directa y en el Cuadro 5 bajo trasplante. Cabe mencionar, que el cultivo de amaranto para verdura (P/V-2011), fue fuertemente afectado por las bajas temperaturas o heladas, presentadas desde el mes de septiembre (8 y 9) y posteriormente los das del 23 al 25 de octubre de 2011 (Figura 1), donde se da la parte vegetativa (hojas y tallo) y reproductiva en el crecimiento y desarrollo de la inflorescencia o panoja lo cual afect de manera importante el rendimiento de semilla. Esto debido a que estos materiales para produccin de verdura se caracterizan por presentar ciclo biolgico muy

Cuadro 2. Evaluacin de los caracteres cualitativos (*) en Amaranthus spp. para verdura, bajo siembra directa. Ciclo P/V 2011, CEVAMEX, Santa Luca, INIFAP.
Especie A. hypochondriacus L. Raza Azteca Mixteco COTA 2, 1 2 1 1 3 1 1 FOHO 1 2 2 5 6 5 1 COHO 3 4 6, 8 8 7 8 8 COIN 4, 3 3, 4 2 2 3 2 2 FOIN 2 2 2 2 2 2 2 DEIN 2 2 2, 5 2, 1 2 3 2 RALAT 4,1 4 4 4 4 4 1 POIN 1 1 1, 2 1, 2 2 1 1 MAHO 1, 3 2, 3 1 1 1 1 3 COSE 5 5 5 5 5 5 5

A. hybridus L. Mexicano A. cruentus L. A. spinosus L. A. hybridus x cruentus Amaranthus spp.

* Clasificacin de Grubben y Van Sloten (1981).

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C. Mapes Snchez et al.

Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura Cuadro 3. Evaluacin de los caracteres cualitativos (*) en Amaranthus spp. para verdura, bajo trasplante. Ciclo P/V 2011, CEVAMEX, Santa Luca, INIFAP.
Especie A. hypochondriacus L. A. hybridus L. A. spinosus L. A. hybridus x cruentus A. cruentus x hybridus Amaranthus spp. Raza Azteca Mixteco COTA 1 2 2 3 1 1 5, 1 FOHO 1 2 6 6 5 5 1,2 COHO 3 4 8 7 8 8 10 COIN 4 4 3 3 2 2 4 FOIN 2 2 2 3 2 2 2 DEIN 2 2 3 2 3 2 2 RALAT 4 4 4 4 4 4 4 POIN 1 1 1 2 1 1 2 MAHO 1 3 1 1 1 3 1 COSE 5 5 5 5 5 5 5

* Clasificacin de Grubben y Van Sloten (1981).

Cuadro 4. Resultados promedio de los caracteres cuantitativos (*) en Amaranthus spp. para verdura, bajo siembra directa. Ciclo P/V 2011, CEVAMEX, Santa Luca, INIFAP.
LOIN (cm) DIIN (cm) ALT (cm) DITA (cm) LOHO (cm) ANHO (cm) LOPE (cm) 14.7 10.4 20.7 3.1 203.4 16.6 64.6 16.5 11.9 22.6 3.9 227.0 8.5 34.0 11.0 10.4 18.3 2.8 217.4 14.6 87.5 A. hybridus L. 8.3 7.4 12.8 2.5 175.0 11.5 75.8 Mexicano A. cruentus L. 5.1 3.7 6.0 1.7 106.7 7.8 36.7 A. spinosus L. 16.5 12.6 19.4 3.5 212.5 12.0 80.3 A. hybridus x cruentus 14.9 9.3 18.4 3.7 236.9 21.8 47.0 Amaranthus spp. Especie A. hypochondriacus L. Raza Azteca Mixteco

* Clasificacin de Grubben y Van Sloten (1981). Cuadro 5. Resultados promedio de los caracteres cuantitativos (*) en Amaranthus spp. para verdura, bajo trasplante. Ciclo P/V 2011, CEVAMEX, Santa Luca, INIFAP.
Especie A. hypochondriacus L. A. hybridus L. A. spinosus L. A. hybridus x cruentus A. cruentus x hybridus Amaranthus spp. Raza Azteca Mixteco LOIN (cm) DIIN (cm) ALT (cm) DITA (cm) LOHO (cm) ANHO (cm) LOPE (cm) 13.8 10.6 21.1 3.3 180.9 21.4 72.9 15.8 11.2 21.8 4.2 196.2 22.4 45.8 6.1 4.4 8.7 1.5 107.3 9.0 51.5 5.8 4.3 6.9 2.2 90.4 0.0 0.0 17.5 14.0 22.6 3.5 232.0 14.8 92.6 14.5 11.6 18.0 4.0 206.8 13.0 53.3 14.2 11.0 20.0 2.9 121.7 11.5 45.9

* Clasificacin de Grubben y Van Sloten (1981).

a)
Temperatura (C)

35 30 25 20 15 10 5 0 -5
1 35 79 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29

Tiempo (das)
C. Mapes Snchez et al.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

b)
Temperatura (C)

T. mxima

T. mnimaT

. media

35 30 25 20 15 10 5 0 -5 -10
1 35 79 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29

Tiempo (das)

Figura1. Comportamiento de la temperatura: mxima, mnima y media, durante los meses de septiembre (a) y octubre (b) de 2011 con mayor incidencia de bajas temperaturas o heladas. Datos obtenidos de la Estacin Agrometeorolgica del Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo, Texcoco, Estado de Mxico.

largo y muchas de las colectas no alcanzaron a terminar su ciclo biolgico. Por otra parte y como resultado de la visita del M. en C. Bonifacio Don Juan (Fitopatlogo de la UNAM) a la parcela experimental, se gener la siguiente problemtica: principalmente se detect la falta de fertilizante en el terreno donde se estableci

el cultivo (Figura 2), as como problemas de hongos e insectos para esos ltimos se tomaron muestras en bolsas de plstico para su anlisis en laboratorio. Se detect la presencia de hongos del gnero Fusarium en raz, Cylindrocladium, Alternaria y Phoma en partes vegetativas de plantas, de igual manera se detectaron problemas

a)

b)

c)

d)

Figura 2. Representacin de algunos problemas detectadas en la parcela experimental de amaranto: A decoloracin de hojas, B marchites de planta, C manchas foliares y D hojas minadas.

190

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Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura

de larvas de orden lepidptera y de la familia: Artidae, Geometridae. De los defoliadores encontrados (Figura 3), slo se identific al gusano peludo Stigmene sp., el minador y la larva de lepidptero de la familia Piedidae. Otro problema el cual se pudo notar fue la cada de varias plantas esto debido a la poca cantidad de races que presenta el cultivo (Figura 4). ANLISIS DE CONGLOMERADOS Siembra directa En el fenograma (Figura 5), se pueden apreciar dos grandes grupos. El primero contiene a las colectas: 1198, 1202, 1199, 1211, 1200, 1207, 1209, 1170, 1185, 1184 y 1005 que corresponden la mayora a A. hypochondriacus raza Mixteca con excepcin de

las colectas 1199 y 1198 que corresponden a la raza Azteca. A su vez este se subdivide y muestra a la colecta 1005 aparte del resto del grupo este material corresponde a A. hypochondriacus raza Mixteca colectada en Huahuaxtla, Municipio de Xochitln. El segundo grupo contiene a las colectas (996, 1192, 1192, 1289, 1205, 1193, 1171, 999, 1201, 1213, 1169, 1166, 1300, 1210, 1203 y 1206). Este grupo se subdivide y forma dos grupos el primer subgrupo contiene a (996, 1192, 1192, 1289, 1205, 1193, 1171, 999, 1201 y 1213) que corresponden la mayora a A. hybridus y A. cruentus x A. hybridus y el segundo subgrupo a (1169, 1166, 1300, 1210, 1203 y 1206) que corresponden la mayora a A. hypochondriacus raza Azteca.

a)

b)

c)

d)

e)

f)

Figura 3. Daos por defoliadores: galera y larva de minador afectando a hojas de amaranto de variedad clara y purpura (A, B y C); gusano peludo Stigmene sp alimentndose de hojas de amaranto (D); dao en brote de amaranto (E) y larva de lepidptero que ataca a variedades verdes y purpura de amaranto (F).

Figura 4. Se observa deficiencia en el crecimiento de la raz en el cultivo de amaranto.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Figura 5. Fenograma de relaciones genticas entre los materiales de Amaranthus spp., obtenido a partir de una matriz construida con el coeficiente de correlacin entre los materiales caracterizados en el ciclo P/V 2012 (bajo siembra directa), Santa Luca de Pras, Texcoco, Mxico.

ANLISIS DE COMPONENTES PRINCIPALES (PCA) De acuerdo con Cuadro 5, el modelo que se elabor para representar las afinidades de las colectas y la relacin que guardan en un arreglo bidimensional (Figura 6). Se puede apreciar que como parte del componente principal 1 se forma un grupo que corresponde a A. hypochondriacus raza Mixteca que se separa de A. spinosus (1213), de A. cruentus raza Mexicana (1289,1193 y 1171) y de A. hybridus (1192,1201 y 999). Mientras que para el componente 2 se forman dos grandes grupos: las colectas que

corresponden a A. hypochondriacus raza Mixteca y de A. hypochondriacus raza Mixteca. Se observa que hasta el componente principal 3 representa casi el 70 % de la variacin explicada. El restante 30% se debe al azar. En el Cuadro 6 podemos apreciar el peso que poseen las variables y la relacin que guardan con el arreglo bidimensional (Figura 6). Las variables ms importantes (en negritas) en el CP1 de mayor a menor son largo de la hoja (LOHO), largo del pecolo (LOPE), dimetro del tallo (DITA) y ancho de la hoja (ANHO). Todas tienen una correlacin negativa.

Cuadro 6. Resultados del anlisis Eigen, generado a partir de una matriz de similitud usando el coeficiente Varianza-Covarianza.

Componente 1 2 3 4 5 6

Eigen Valor 8.4105 4.6204 3.8501 2.4012 2.0258 1.3229

Porcentaje % Acumulado 33.62 33.62 52.10 18.47 67.49 15.39 77.09 9.60 85.19 8.09 90.48 5.28

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Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura

Figura 6. Representacin grfica en los dos primeros componentes de las afinidades entre las colectas a partir del anlisis Eigen. Cuadro 7. Resultados del anlisis, generado a partir de una matriz de similitud usando el coeficiente VarianzaCovarianza, donde se aprecia el peso que poseen las variables.

Variables LOIN DIIN ALT DITA LOHO ANHO LOPE REND COTA FOHO COHO COIN DEIN MAHO

CP1 0.0909 0.2913 -0.6908 -0.8486 -0.9358 -0.8054 -0.8811 -0.3545 0.3515 0.461 0.4872 -0.3062 0.2405 -0.6034

CP2 0.0452 -0.4105 0.4438 0.3837 0.083 0.2555 -0.0923 -0.7299 -0.2395 0.5529 0.7397 -0.674 0.204 0.1584

CP3 0.8877 0.6635 0.3088 -0.1115 0.2021 0.0529 -0.1268 0.3198 -0.5091 -0.3016 0.2468 -0.1819 0.4746 -0.1756
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Figura 7. Representacin de la relacin que guardan las variables en un arreglo bidimensional.

Las colectas de A. hypochondriacus raza Mixteca presenta los valores promedio ms altos de las variables anteriormente mencionadas (22.6 cm; 16.5 cm; 3.9 cm y 11.9 cm) comparada por ejemplo con A. spinosus (6.0 cm; 5.1 cm; 1.7 cm y 3.7 cm). En el CP2 las que son eficaces para formar grupos son de mayor a menor color de la hoja (COHO) (correlacin positiva), rendimiento (REND), color de la inflorescencia (COIN) (correlacin negativa) y forma de la hoja (FOHO) (correlacin positiva). De esta manera las colectas que pertenecen a A. hypochondriacus raza Mixteca se diferencian de la raza Azteca en la forma de las hojas en etapa de floracin siendo elpticas; en el color de hojas durante la etapa de floracin presentando hojas con dos franjas en forma de V y en el color de la inflorescencia siendo rosa o roja. TRASPLANTE De acuerdo con el fenograma de la Figura 8, se aprecian dos grandes grupos. El primero incluye a las colectas (1169, 1166, 1202, 1198, 1005, 1189 y 1300) que corresponden a A. hypochondriacus raza Azteca. El segundo grupo contiene a las colectas (1298, 1204, 1193, 1171,
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996, 1186, 1173, 1177, 1221, 1213, 1010 y 1161), que corresponden a A. hybridus, A. cruentus x A. hybridus y Amaranthus sp. En el caso del primer grupo se presenta una subdivisin en donde 1300 sale del resto del grupo, colecta originaria de Ecatln, Municipio de Jonotla. El segundo grupo a su vez se subdivide y quedan en un subgrupo (1298, 1204, 1193, 1171, 996, 1186, 1173 y 1177) que corresponde a A. hybridus y A. cruentus x hybridus y en otro (1221, 1213, 1010 y 1161) que corresponden a Amaranthus sp. Del subgrupo (1298, 1204, 1193, 1171, 996, 1186, 1173 y 1177) que corresponden la mayora a A. hypochondriacus raza Azteca; se vuelven a separar 1298, 1204, 1193 y 1171 del resto materiales colectados en diferentes lugares de la regin de estudio. De acuerdo con Cuadro 7, el modelo que elaboramos para representar las afinidades de las colectas y la relacin que guardan en un arreglo bidimensional (Figura 9), se aprecia que hasta el componente principal tres representa casi el 80% de la variacin explicada. El restante 20% se debe al azar.

Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura

En el Cuadro 9, podemos apreciar el peso que poseen las variables y la relacin que guardan con el arreglo bidimensional (Figura 10).

RESULTADOS DEL ANLISIS BINARIO O DOS ESTADOS. En la Figura 11, se aprecian dos grandes grupos. El primero incluye dos subgrupos: el primero con las colectas: 1298, 1166, 1204, 1193, 1210, 1221 y 1300 en donde predomina A. hypochondriacus

Figura 8. Fenograma de relaciones genticas entre los materiales de Amaranthus spp., obtenido a partir de una matriz construida con el coeficiente de correlacin entre los materiales caracterizados en el ciclo P/V 2012 (bajo trasplante), Santa Luca de Pras, Texcoco, Mxico. Cuadro 8. Resultados del anlisis Eigen, generado a partir de una matriz de similitud usando el coeficiente Varianza-Covarianza.

Componente 1 2 3 4 5 6

Eigen Valor 5.631 5.077 2.729 1.828 1.229 0.829

Porcentaje % Acumulado 32.702 32.702 62.190 29.488 78.039 15.849 88.655 10.615 95.794 7.139 > 100% 4.819
raza Azteca; y el segundo de la 1161, 1010 y 1213 que corresponde a Amaranthus sp. El segundo grupo est formado por varios subgrupos como se aprecia en el fenograma. Las colectas 1005 y 996 corresponden a A. hypochondriacus raza Mixteco; la 1192 y 1289 corresponden a A. hybridus y A. cruentus x hybridus; lo mismo las colectas 999 y 1193. Finalmente las colectas 1203, 1169,1166 corresponden a A. hypochondriacus raza Azteca.

Las ms importantes (en negritas) en el CP1 de mayor a menor son largo de la hoja (LOHO), largo del pecolo (LOPE), ancho de la hoja (ANHO) y dimetro del tallo (DITA) (todas con correlacin positiva). En el segundo componente principal (CP2) las variables ms importantes son de mayor a menor son forma de la hoja (FOHO) (correlacin negativa), largo de la inflorescencia (LOIN), color de la inflorescencia (COIN) y altura (ALT) (correlacin positiva).

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Cuadro 9. Resultados del anlisis, generado a partir de una matriz de similitud usando el coeficiente VarianzaCovarianza, donde se aprecia el peso que poseen las variables.

Variables LOIN DIIN ALT DITA LOHO ANHO LOPE REND COTA FOHO COHO COIN

CP1 0.2377 0.6156 0.6788 0.831 0.9463 0.8695 0.9013 0.5326 -0.3528 0.2457 -0.2606 -0.1982

CP2 0.7355 -0.3219 0.6737 0.0918 -0.1246 -0.0204 -0.0045 0.0861 0.4072 -0.8127 -0.2801 0.7101

CP3 0.3741 0.6115 -0.1076 -0.1704 -0.1089 -0.3289 -0.3483 0.4712 -0.4766 0.1088 0.6339 0.073

Figura 9. Representacin grfica en los dos primeros componentes de las afinidades entre las colectas a partir del anlisis Eigen.

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Captulo XIII. Caracterizacin de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) para verdura

Figura 10. Representacin de la relacin que guardan las variables en un arreglo bidimensional.

ANLISIS DE COMPONENTES PRINCIPALES (PCA) De acuerdo con Cuadro 10, el modelo que elaboramos para representar las afinidades de las colectas y la relacin que guardan en un arreglo

bidimensional (Figura 12), se observa que hasta el componente principal 3 representa casi el 76% de la variacin explicada. El restante 24% se debe al azar.

Figura 11. Fenograma de relaciones genticas entre los materiales de Amaranthus spp., obtenido a partir de una matriz construida con el coeficiente de Jaccard, solo para las variables cualitativas de dos estados, de los materiales caracterizados en el ciclo P/V 2012. Santa Luca de Pras, Texcoco, Mxico.

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De acuerdo con Cuadro 9, el modelo que se elabor para representar las afinidades de las colectas y la relacin que guardan en un arreglo bidimensional (Figura 12), se observa que hasta el componente principal 3 representa casi el 76% de la variacin explicada. El restante 24% se debe al azar. En el Cuadro 11, podemos apreciar el peso que poseen las variables y la relacin que guardan con el arreglo bidimensional (Figura 13).

Las ms importantes (en negritas) en el CP1 de mayor a menor son: prominencia de venas foliares (PVEN), ramificacin lateral en poca de floracin (RALAT) y porte de inflorescencia terminal (POIN) (todas con una correlacin positiva). En el segundo componente principal (CP2) las variables ms importantes son de mayor a menor son forma de la inflorescencia (FOIN) (correlacin positiva) y porte de la inflorescencia terminal (POIN) (correlacin negativa).

Cuadro 10. Resultados del anlisis Eigen, generado a partir de una matriz de similitud usando el coeficiente de Jaccard.

Componente 1 2 3 4 5 6 7 8

Eigen Valor 5.07149012 2.61869883 1.59631756 1.42521804 0.64893402 0.44804997 0.25846760 0.11108472

Porcentaje 41.6438 21.5031 13.1079 11.7030 5.3286 3.6791 2.1224 0.9122

% Acumulado 41.6438 63.1469 76.2548 87.9578 93.2864 96.9655 99.0878 100.0000

Figura 12. Representacin grfica en los dos primeros componentes de las afinidades entre las colectas a partir del anlisis Eigen, para los caracteres cualitativos binarios.

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Cuadro 11. Resultados del anlisis, generado a partir de una matriz de similitud usando el coeficiente de Jaccard, donde se aprecia el peso que poseen las variables.

Variables FOIN RALAT POIN PVEN MAHO

CP1 0.0771 0.7416 0.5779 0.7565 0.5409

CP2 0.9495 - 0.1355 - 0.2442 0.1580 0.0904

CP3 0.2724 0.2688 0.5259 - 0.1959 - 0.6952

Figura 13. Representacin de la relacin que guardan las variables en un arreglo bidimensional de las variables cualitativas binarias.

CONCLUSIONES El Campo Experimental Valle de Mxico Santa Luca de Pras, Texcoco, Estado de Mxico no es un sitio adecuado para la evaluacin de materiales usados a manera de verdura provenientes de la Sierra Norte de Puebla ya que en este campo se presentan heladas muy tempranas que terminan con las plantas, las cuales presentan un ciclo de vida muy largo y no alcanzan a madurar. Es importante considerar la posibilidad de realizar ms estudios sobre la caracterizacin del germoplasma de Amaranthus spp. para verdura, ya que es el material menos estudiado, a pesar del impacto que tiene en la economa de la

poblacin local de la Sierra Norte de Puebla. En el prximo ciclo agrcola se establecern cultivos en esta regin con el objeto de obtener datos ms completos. El germoplasma de amaranto usado a manera de verdura y presente en la Sierra Norte de Puebla presenta una gran diversidad morfolgica y una fuerte hibridacin con A. hybridus. Los descriptores establecidos por Grubben y Van Sloten (1981) usados en este estudio permitieron en trminos generales mostrar algunas tendencias al separar las especies y razas presentes en la regin de estudio.
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Los caracteres ms importantes fueron entre otros: largo, ancho y forma de la hoja, largo del pecolo, prominencia de las venas foliares, altura, ramificacin lateral en etapa de floracin, porte y largo de la inflorescencia terminal. Todas estas diferencias han sido claramente observadas en campo y son caracteres que se encuentran fuertemente relacionados con el uso de las hojas como verdura. La caracterizacin como cualquier actividad tiene sus herramientas y procesos, en este caso la herramienta de trabajo es el descriptor. Hasta ahora diferenciamos la caracterizacin ex situ de la in situ por el uso del descriptor; mientras uno es universal y tcnico, el otro es local y responde la necesidad utilitaria del agricultor, sin embargo, ambos tratan de diferenciar variedades y utilizan caracteres morfolgicas y lo que es ms importante, los dos con cientficos. Se han realizado estudios de caracterizacin y evaluacin del germoplasma de amaranto usado como verdura disponible en el Instituto Indio de Investigacin Hortcola de Bangalore y se concluye que para la explotacin comercial del amaranto se puede utilizar ventajosamente la variabilidad de las caractersticas del tallo, hojas e inflorescencias y algunos caracteres cuantitativos como altura de la planta, cantidad de hojas y perodo de floracin (Varalakshmi, 2004). En el futuro se deben de agregar los siguientes parmetros con el objeto de poder caracterizar con mayor precisin los materiales usados a manera de verdura: 1) biomasa asignada a hojas, tallos, raz e inflorescencia; 2) rea foliar; 3) cociente (rea foliar mxima/ biomasa total mxima); 4) cociente (biomasa hojas/biomasa tallos), 5) contenido de vitamina A; 6) contenido de vitamina C; 7) contenido de calcio; 8 ) capacidad de rebrote. AGRADECIMIENTOS Al Sistema Nacional de Recursos Fitogenticos para la Agricultura y la Alimentacin (SINAREFI) y al Jardn Botnico, Instituto de Biologa de la UNAM por el apoyo y financiamiento de estas investigaciones.

A la Dra. Patricia Rivas Valencia Jefa del Campo Experimental Valle de Mxico por todo su apoyo para la realizacin de este estudio. A la Dra. Micaela de la O Oln Investigadora del INIFAP (CEVAMEX) por todo el apoyo logstico brindado durante este trabajo as como al Ing. Agr. Vctor Ruz. Al Sr. Miguel Trejo y al Sr. Jos Antonio Sandoval Garca por toda su ayuda en diversas labores tcnicas para el establecimiento del cultivo. LITERATURA CITADA Abadie T, A Berretta (2001) Caracterizacin y evaluacin de recursos fitogenticos. En: Estrategia en recursos fitogenticos para los pases de Cono Sur. Procisur. INIA. Uruguay. Espitia R E, Mapes S C, Escobedo L D, De la O Oln M, Rivas V P, Martnez T G, Corts E L, Hernndez C J M (2010) Conservacin y uso de los recursos genticos de Amaranto en Mxico. INIFAP, Centro de Investigacin Regional Centro, Celaya, Guanajuato, Mxico. 200 pp. FAO (1996) The state of the worlds plant genetic resources for food and agriculture. Food and Agriculture Organization of the United Nations, Rome, 510 p. Frankel O H, Brown A H D (1984) Plant genetic resources today: a critical appraisal. In: Holden J. H. W., Williams J. T. (eds). Crop genetic resources: conservation and evaluation. Allen and Unwin, London, UK. pp 249-257. Grubben G J H, Van Sloten D H (1981) Genetics resources of amaranths International Board for Plant Genetic Resources, Rome. Italy. 57 pp. Hintum Van T J L (1995) Hierarchical approaches to the analysis of genetic diversity in crop plants In: Hodgkin, T. A. H. D., Brown, T. J. L. Hintum Van, E. A. V. Morales (eds). Core Collections of plant genetic resources John Wiley and sons, New York. pp. 23-34.

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Peters J P, Galgway N W (1988) Germplasm collections and breeding needs in Europe. Economic Botany 42:503-521. Varalakshmi B (2005) Caracterizacin preliminar del germoplasma de la hortaliza amaranto (Amaranthus spp.). Amarantos. No. 23. Marzo 2005. Repblica Argentina.

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Captulo XIV

Distribucin del amaranto cultivado y sus parientes silvestres y posibles zonas de adaptacin en Mxico
DISTRIBUTION AND POTENTIAL ZONES OF ADAPTATION OF CULTIVATED AMARANTH AND ITS WILD RELATIVES IN MEXICO

Diana Escobedo-Lpez1, Carlos A. Nez-Coln1* y Eduardo Espitia-Rangel1


1Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias (INIFAP), Campo Experimental Bajo. Km. 6.5 Carretera Celaya-San Miguel de Allende, Apartado Postal 112, Celaya, Guanajuato, 38110, Mxico. * Autor para correspondencia: nunez.carlos@inifap.gob.mx

RESUMEN La presente investigacin tuvo como objetivo generar mapas de zonas de adaptabilidad climtica de las dos principales especies cultivadas de amaranto en Mxico y de sus posibles ancestros silvestres con el fin de elucidar las hiptesis de sus posibles regiones de origen y domesticacin. A. cruentus tiene una excelente adaptacin en el occidente del Eje Volcnico Transmexicano. A. hypochondriacus est ms restringido que A. cruentus y presenta una excelente adaptacin en el centro y oriente del Eje Volcnico Transmexicano. A. hybridus presenta una distribucin mucho ms amplia que las especies cultivadas y presenta una excelente adaptacin en el occidente del Eje Volcnico Transmexicano, que corresponden con las de A. cruentus por lo que podra ser su ancestro. A. powellii presenta una distribucin ms restringida que las otras especies estudiadas, y presenta una mejor adaptacin en el Altiplano Mexicano. Sin embargo, las zonas con excelente adaptacin de A. powellii al sur del Altiplano Mexicano en frontera con el Eje Volcnico Transmexicano es donde tambin presentan zonas de excelente adaptacin tanto A. cruentus como A. hypochondriacus por lo que la hiptesis sobre la hibridacin entre A. powellii y A.

cruentus para generar A. hypochondriacus pudiera haberse dado en esta regin donde las tres especies convergen. Palabras clave: Amaranthus cruentus, A. hypochondriacus, A. hybridus, A. powellii, zonas de adaptabilidad climtica. ABSTRACT The present research aims to make maps for regions of climatic adaptation of the two main cultivated species of amaranth in Mexico and their wild relatives ancestors to elucidate the hypothesis of their possible regions of origin and domestication. A. cruentus had an excellent adaptation in the west of Trans-Mexican volcanic axis. A. hypochondriacus had more restricted distribution than A. cruentus and it showed an excellent adaptation in centre and east of Trans-Mexican volcanic axis. A. hybridus had a distribution to much wider than the cultivated species and it showed an excellent adaptation in west of Trans-Mexican volcanic axis, which corresponded with the A. cruentus distribution thus A. hybridus could be the ancestor of A. cruentus. A. powellii had a distribution more restricted than the other studied species and it showed a better adaptation in the Mexican
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plateau. Nevertheless, the regions with excellent adaptation of A. powellii in the southern Mexican plateau in limits to Trans-Mexican volcanic axis was where both A. cruentus and A. hypochondriacus also showed regions with excellent adaptation; that is why the hypothesis about the hybridization between A. powellii and A. cruentus to generate A. hypochondriacus could have occurred in this region where these three species converge. Key words: Amaranthus cruentus, A. hypochondriacus, A. hybridus, A. powellii, regions of climatic adaptability. INTRODUCCIN El gnero Amaranthus L. consiste de alrededor de 70 especies, de las cuales 40 son nativas del continente Americano y el resto de Australia, frica, Asia y Europa (Costea et al., 2001). A. caudatus L., A. hypochondriacus L. y A. cruentus L. son las especies de amaranto que han creado un gran inters durante los aos recientes como cultivos agrcolas en muchas regiones del mundo, debido al alto valor nutrimental de sus semillas y hojas (Costea et al., 2001). Las semillas de amaranto contienen diversos compuestos como pptidos antimicrobianos, inhibidores de las proteasas, lectinas y compuestos antioxidantes (ValdsRodrguez et al., 1993; Broekaert et al., 1992; Snchez-Hernndez et al., 2004; Sani et al., 2004). Adems, recientemente algunos autores han detectado que protenas del amaranto contienen diversos pptidos con actividades antihipertensivas y anticancergenas (Sani et al., 2004; Edwards et al., 2007; Barba de la Rosa et al., 2007). En este sentido, existen cientos de artculos cientficos que documentan el valor nutricional del amaranto adems de su potencial agronmico, el manejo de sus recursos genticos y los programas de mejoramiento de amaranto; sin embargo, una buena revisin sobre aspectos nutricionales se pueden encontrar en Kauffman y Weber (1990) y Kauffman (1992) y para una revisin sobre recursos genticos y mejoramiento a nivel mundial en Brenner et al. (2000) y a nivel nacional en Espitia-Rangel (1994).
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De acuerdo con Grubben (1976) y Grubben y Van Sloten (1981) la especie A. cruentus L. es originaria de Amrica Central, probablemente de Guatemala y sureste de Mxico, donde se cultiva hasta hoy en da y donde tambin se encuentra ampliamente distribuida de manera natural. Sauer (1993) propuso que el progenitor ms probable de A. cruentus es A. hybridus L. que actualmente se encuentra distribuida en una amplia gama de llanuras y montaas en norte, centro y sur del continente Americano. Por otro lado, Sauer (1950; 1967) indic que A. hypochondriacus L. es originaria del centro de Mxico, debido a que en esta zona se cultiva desde el tiempo de los aztecas y donde actualmente se sigue cultivando, adems de que se encuentra ampliamente distribuida en todo Mxico. Esta especie tambin se cultiva en los Himalayas en Nepal y en el sur de la India, donde se han formado centros secundarios de diversificacin. Sauer (1993) mencion que A. hypochondriacus presenta caractersticas tanto de A. cruentus como de la especie silvestre A. powelli Watson, y que incluso A. hypochondriacus pudiera ser un hbrido entre ambas especies. A. caudatus L. es otra especie cultivada para la produccin de grano; es de da corto y se adapta mejor que las otras especies a las bajas temperaturas. Esta especie es originaria de los Andes (Sudamrica) y de aqu se distribuy a otras zonas templadas y subtropicales (Grubben, 1976; Grubben y Van Sloten, 1981 y Hunziker, 1952). Las especies del gnero Amaranthus tienen una amplia distribucin. De esta manera tenemos que el amaranto ha sido cultivado en ambientes que van desde los tropicales, hasta los semiridos (Costea et al., 2001). An cuando el amaranto ha sido cultivado tradicionalmente en regiones comprendidas entre el ecuador y los 30 de latitud, este puede ser cultivado en latitudes mayores si se utilizan materiales que puedan florecer an cuando no cuenten con el fotoperiodo de los trpicos (National Research Council, 1984). En Mxico, la produccin comercial de amaranto se concentra en cuatro regiones: el oriente del estado de Morelos principalmente en Huazulco y Amilcingo; San Miguel del

Captulo XIV. Distribucin del amaranto cultivado y sus parientes silvestres y posibles zonas de adapatacin en Mxico

Milagro en Tlaxcala; Amecac, Tochimilco, Tochimzolco y Santa Clara Tetla en Puebla, y Tulyehualco, Mixquic, Tetelco y Tecmitl en el Distrito Federal. Espordicamente tambin se encuentran algunas parcelas en los estados de Mxico, Oaxaca, Guerrero, Durango y ms recientemente en Chihuahua, Guanajuato, Jalisco, San Luis Potos y Michoacn (Espitia, 1992; Espitia-Rangel, 1994; Espitia-Rangel et al., 2010a). Espitia-Rangel et al. (2011b) hicieron un acercamiento a los patrones latitudinales y altitudinales de las dos especies cultivadas de Mxico (A. cruentus y A. hypochondriacus) y sus posibles ancestros silvestres (A. hybridus y A. powellii). Estos autores encontraron que A. hybridus es el que presenta un rango mayor de adaptabilidad mientras que las otras tres especies presentan un rango ms estrecho de adaptacin, aunque no todas en el mismo sentido. Sin embargo, para complementar los datos de distribucin es necesario hacer mapas de adaptabilidad de estas cuatro especies para compararlas y as elucidar las diferencias entre las zonas de adaptacin de cada una de estas especies as como la frecuencia en diferentes condiciones de temperatura y precipitacin (Hijmans et al, 2004; Guarino et al., 2002). Por lo que la presente investigacin tiene como objetivo generar mapas de las zonas de adaptacin potenciales de las dos especies cultivadas de amaranto en Mxico y sus dos relativos silvestres para as elucidar las hiptesis de sus posibles regiones de origen y domesticacin.

MATERIALES Y MTODOS Se utilizaron 1994 datos de pasaporte tanto de materiales de herbario registrados en la Red Mundial de Informacin sobre Biodiversidad (CONABIO, 2009) como de la coleccin nacional de germoplasma de amaranto (Amaranthus spp.) del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias (INIFAP), de los cuales 626 datos son de A. cruentus; 771, de A. hybridus; 555, de A. hypochondriacus, y 42 de A. powellii. Dichos datos fueron corroborados taxonmicamente en el Herbario Nacional (MEXU) de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM). Se realiz un anlisis de los mapas de zonas de adaptacin climtica, calculados mediante el uso del procedimiento Bioclim del programa DIVA-GIS versin 7.1 (Hijmans et al., 2004) y la base de datos climticos Worldclim (Hijmans et al., 2005) con una resolucin de una cuadrcula de 2.5 minutos tanto de latitud como de longitud. El procedimiento Bioclim se utiliza para obtener zonas de adaptacin climtica basados en patrones climticos a partir de localizaciones de especmenes de herbario y de germoplasma (Hijmans et al., 2004) y se emplearon las regiones biogeogrficas propuestas por Morrone (2005) para ubicar las zonas de adaptacin (Figura 1). Morrone (2005) dividi a Mxico en 14 regiones biogeogrficas de acuerdo a la climatologa y condiciones ecolgicas similares

Figura 1. Mapa de la divisin de Mxico en sus 14 regiones biogeogrficas de acuerdo a Morrone (2005). (1=California, 2=Baja California, 3=Sonora, 4=Altiplano Mexicano, 5=Tamaulipas, 6= Pennsula de Yucatn, 7=Sierra Madre Occidental, 8=Sierra Madre Oriental, 9=Eje Volcnico Transmexicano, 10=Cuenca del Balsas, 11=Sierra Madre del Sur, 12=Costa Pacfica Mexicana, 13=Golfo de Mxico y 14=Chiapas) D. Escobedo-Lpez et al.

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sin tener en cuenta lmites polticos, esto hace que se tenga una mejor perspectiva sobre la adaptacin de las especies. RESULTADOS Y DISCUSIN La mayor distribucin de todas las especies cultivadas fue en el Centro Sur de Mxico, en las regiones del Eje Volcnico Transmexicano y Sierra Madre del Sur, donde se ubican la mayor parte de las zonas de produccin actuales (Espitia, 1992; Espitia-Rangel, 1994; EspitiaRangel et al., 2010a) as como en las regiones del Altiplano Mexicano, Sierra Madre Oriental y Sierra Madre Occidental, que es donde se ubican las nuevas zonas de cultivo (Espitia-Rangel et al., 2010a).

y Van Sloten (1981) que marcan que esta especie tiene un origen centroamericano. Williams y Brenner (1995) mencionan que la hiptesis centroamericana es por la gran variedad de usos que se le da en Guatemala y el sur de Mxico, donde estos autores creen que fue domesticado, y que de ah se movi hacia el norte, hasta el suroeste de Estados Unidos y al sur a los Andes, lo que explicara porque A. cruentus es considerado ancestro de A. hypochondriacus (Sauer, 1993), que se cree que fue domesticado en el centro de Mxico al formar un hbrido entre A. cruentus y A. powellii, y de A. caudatus (Coons, 1982), que fue domesticado en los Andes y se cree que es un hbrido entre A. cruentus y A. hybridus (en su variante de lo designado como A. quitensis Kunth).

Figura 2. Mapa de las zonas adecuadas de adaptacin de A. cruentus.

A. cruentus mostr una mejor adaptacin en el Eje Volcnico Transmexicano, Sierra Madre Oriental y Sierra Madre del Sur (Figura 2). Aunque presenta de buena a muy buena adaptacin en partes del Altiplano Mexicano, la Sierra Madre Occidental, La Cuenca del Balsas y algunos puntos aislados en la parte sur de la Costa Pacfica Mexicana y el norte del Golfo de Mxico. Las zonas con excelente adaptacin estn ubicadas en mayor medida en el Occidente del Eje Volcnico Transmexicano (Figura 2) aunque tiene una excelente adaptacin a casi toda esta regin biogeogrfica. Al no encontrar zonas con excelente adaptacin en el Sur de Mxico, contrapone la hiptesis hecha por Grubben (1976) y Grubben
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Mientras que A. hypochondriacus est ms restringido que A. cruentus y presenta una mejor adaptacin al Eje Volcnico Transmexicano y Sierra Madre del Sur (Figura 3). Aunque presenta de buena a muy buena adaptacin en partes del Altiplano Mexicano, la Sierra Madre Occidental y Sierra Madre Oriental. Las zonas con excelente adaptacin estn ubicadas en mayor medida en el centro y oriente del Eje Volcnico Transmexicano (Figura 2), que es donde se localizan muchas de las actuales zonas de cultivo (Espitia, 1992; Espitia-Rangel, 1994; Espitia-Rangel et al., 2010a). En este sentido, la hiptesis hecha por Sauer (1950; 1967) pudiera ser cierta porque esta especie tiene zonas con excelente

Captulo XIV. Distribucin del amaranto cultivado y sus parientes silvestres y posibles zonas de adapatacin en Mxico

Figura 3. Mapa de las zonas adecuadas de adaptacin de A. hypochondriacus.

adaptabilidad en la zona de influencia de las culturas mesoamericanas. Por otro lado, A. hybridus presenta una distribucin mucho ms amplia que las especies cultivadas y presenta una mejor adaptacin en el Eje Volcnico Transmexicano, Sierra Madre Oriental, Sierra Madre del Sur, Sierra Madre Occidental, sur del Altiplano Mexicano y en la Pennsula de Yucatn (Figura 4). Las zonas con excelente adaptacin en esta especie estn principalmente en el occidente del Eje Volcnico Transmexicano, que corresponden con las de A. cruentus por lo que est de acuerdo con la hiptesis de Grubben (1976) y Grubben y Van Sloten (1981); por lo

tanto, A. hybridus puede ser el probable ancestro de A. cruentus al desarrollarse en ambientes similares, lo que antes haba reportado tambin Costea et al. (2001). Sin embargo, A. hybridus est ms ampliamente distribuida que las especies cultivadas pero tambin est presente en la mayora de las regiones donde est distribuida A. cruentus. Por lo tanto puede generarse la hiptesis de que A. cruentus podra ser un material seleccionado de A. hybridus y que despus fue domesticado en el occidente del Eje Volcnico Transmexicano, que es donde ambas especies tiene una excelente adaptacin, hasta llegar a lo que ahora conocemos como la especie A. cruentus. Ms an, Xu y Sun (2001)

Figura 4. Mapa de las zonas adecuadas de adaptacin de A. hybridus.

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encontraron que una accesin de A. hybridus estaba filogenticamente relacionada con A. cruentus y que los grupos de estas dos especies estaban estrechamente relacionados usando marcadores moleculares. Caso similar reporta Costea y Tardif (2003) al comparar estructuras florales de estas dos especies encontrndolas muy emparentadas. Asimismo, hoy en da los beneficios econmicos por la mejora de la produccin y la calidad de los cultivos as como reducir el riesgo de prdidas en las cosechas son muy significativos; por lo tanto los parientes silvestres como ancestros de los cultivos modernos proveen muchos genes tiles a las plantas de inters antropocntrico (Zagaja, 1988). Por lo que A. hybridus puede ser una importante fuente de genes de adaptacin para A. cruentus ya que presenta algunas caractersticas ventajosas descritas por Costea et al. (2001), debido a que aprovechando estas caractersticas se podra expandir la adaptabilidad de A. cruentus a zonas donde actualmente no se adapta de buena manera pero que si lo hace A. hybridus. A. powellii presenta una distribucin ms restringida que las otras especies estudiadas, y presenta una mejor adaptacin en el Altiplano Mexicano, principalmente, aunque tambin tiene adaptacin en la Sierra Madre Occidental y algunos fragmentos del Eje Volcnico Transmexicano y Sierra Madre Oriental (Figura 5).

Las zonas con buena adaptacin de A. powellii al sur del Altiplano Mexicano en frontera con el Eje Volcnico Transmexicano es donde tambin presentan zonas de excelente adaptacin tanto A. cruentus como A. hypochondriacus por lo que la hiptesis de Sauer (1993) sobre la hibridacin entre A. cruentus y A. powellii para generar A. hypochondriacus pudiera haberse dado en esta regin que es donde las tres especies convergen con zonas de excelente adaptacin (Figuras 2, 3 y 5), que polticamente est al norte del Estado de Mxico entre los estados de Quertaro e Hidalgo, y no hay ningn otra regin en Mxico donde converjan zonas con excelente adaptacin de estas tres especies y que adems es de las zonas con mayor riqueza especfica reportada por Espitia-Rangel et al. (2010c). Aunque su posible domesticacin pudiera ser ms al sur en el Eje Volcnico Transmexicano, como lo mencionan Williams y Brenner (1995), muy cerca del Valle de Mxico, que es donde A. hypochondriacus presenta la mejor adaptacin (Figura 3) y donde A. cruentus tambin presenta buena adaptacin pero no as A. powellii que tiene un patrn de distribucin ms hacia el norte. Por otro lado, estas cuatro especies, que pertenecen al mismo subgnero, pueden generar hbridos entre s con cierta facilidad (Gupta y Gudu, 1991) por lo que la contaminacin gentica de los materiales cultivados por sus parientes silvestres puede ser alta, al igual que posibles genes transgnicos o de resistencia

Figura 5. . Mapa de las zonas adecuadas de adaptacin de A. powellii.

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Captulo XIV. Distribucin del amaranto cultivado y sus parientes silvestres y posibles zonas de adapatacin en Mxico

pueden ser transferidos de los materiales cultivados a sus parientes silvestres. No obstante, la disponibilidad de diversidad gentica es requisito fundamental en el mejoramiento de un cultivo, la cual se puede concentrar en un banco de germoplasma que adems puede servir para la conservacin de los recursos fitogenticos (Zagaja, 1988). En nuestro pas se impuls la recoleccin de germoplasma de amaranto hasta que llegaron misiones extranjeras en busca de estos recursos; de manera conjunta con estos grupos exploratorios, a principios de la dcada de los noventa, se inici la recoleccin de la variabilidad gentica existente. Hasta ahora se han colectado casi exclusivamente materiales cultivados de las especies A. hypochondriacus y A. cruentus (Espitia-Rangel, 1990) por lo que es precisamente de estas dos especies el mayor nmero de colectas que se tienen en la coleccin del INIFAP (Espitia-Rangel et al., 2010a). Sin embargo, tambin se han colectado materiales silvestres pero slo se han realizado algunas colectas principalmente de A. hybridus con el propsito de aprovechar algunas caractersticas ventajosas (Costea et al., 2001) en mejoramiento gentico, y por los resultados de este trabajo puede ser viable utilizar genes, principalmente de adaptacin al ambiente, de A. hybridus para mejorar las especies cultivadas, principalmente A. cruentus. CONCLUSIONES A. hybridus presenta una distribucin ms amplia que las especies cultivadas y presenta una excelente adaptacin en el occidente del Eje Volcnico Transmexicano, que corresponden con las de A. cruentus por lo que podra ser su ancestro. La especie A. cruentus tiene una excelente adaptacin en el occidente del Eje Volcnico Transmexicano. A. hypochondriacus est ms restringido que A. cruentus y presenta una excelente adaptacin en el centro y oriente del Eje Volcnico Transmexicano. A. powellii presenta una distribucin ms restringida que las otras especies estudiadas, y presenta una mejor adaptacin en el Altiplano Mexicano. Sin embargo, las zonas con excelente adaptacin de A. powellii al sur del Altiplano Mexicano en frontera con el Eje Volcnico

Transmexicano es donde tambin presentan zonas de excelente adaptacin tanto A. cruentus como A. hypochondriacus por lo que la hiptesis sobre la hibridacin entre A. powellii y A. cruentus para generar A. hypochondriacus pudiera haberse dado en esta regin donde las tres especies convergen. LITERATURA CITADA. Barba De La Rosa A P, C Silva Snchez, E Gonzlez De Meja (2007) Chapter 9: Amaranth: an ancient crop for modern technology. In: TUNIK, M.H.; GONZLEZ DE MEJA, E. (eds.) Hispanic foods: Chemistry and flavor. American Chemical Society, Washington. pp. 103-116. Brenner D M, D D Baltensperger, P A Kulakow, J W Lehmann, R L Myers, M M Slabbert, B B Sleugh (2000) Genetic resources and breeding of Amaranthus. Plant Breeding Reviews 19: 227-285. Broekaert W F, W Marien, F R G Terras, M F C De Bolle, P Proost, J Van Damme, L Dillen, M Claeys, S B Rees (1992) Antimicrobial peptides from Amaranthus caudatus seeds with sequence homology to the cysteine/glycine-rich domain of chitin-binding proteins. Biochemistry 31: 4308-4314. Comisin Nacional Para El Conocimiento y Uso De La Biodiversidad (Conabio) (2009) Red Mundial de Informacin sobre la Biodiversidad-Especmenes (REMIB). In: website of the Comisin Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad de Mxico. Available to: http://www.conabio.gob. mx/remib/doctos/remib_esp.htlm, Consulted October, 1st, 2009. COONS M P (1982) Species and varieties. Relationships of Amaranthus caudatus. Economic Botany 36:119-146. Costea M, A Sanders, G Waines (2001) Preliminary results toward a revision of the Amaranthus hybridus species complex (Amaranthaceae). SIDA 19:931-974.
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Citogentica y Mejoramiento Gentico

Captulo XV

Nmero cromosmico (2n) y cariotipo en especies de grano y verdura de Amaranthus spp. de Mxico
CHROMOSOME NUMBER (2N) AND KARYOTYPE OF GRAIN AND GREEN Amaranthus SPECIES IN MEXICO

Guadalupe Palomino1*, Reyes Rub V.1, Javier Martnez1 y Cristina Mapes Snchez2
1Laboratorio de Citogentica, Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Circuito Exterior s/n. Ciudad Universitaria. Delegacin Coyoacn. C.P. 04510 Mxico Distrito Federal, Mxico. Tel. 01 55 56 22 90 45 2Coleccin de Etnobotnica, Jardn Botnico, Instituto de Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Ciudad Universitaria, Delegacin Coyoacn. C.P. 04510 Mxico D.F., Mxico. *Autor para correspondencia: palomino@ibiologia.unam.mx

RESUMEN Se reporta el nmero cromosmico (2n) y el cariotipo de cinco especies y razas de Amaranthus utilizadas como grano o verdura y que forman parte del germoplasma existente en Mxico. En Amaranthus hypochondriacus L. raza Azteca cultivado y utilizado como grano, se observ 2n = 34 y un cariotipo formado por 6m+3sm+3st+5t; Amaranthus cruentus L. raza Mexicana cultivado y usado como grano present 2n = 34 y un cariotipo de 6m+3sm+2st+6t; Amaranthus hybridus x Amaranthus hypochondriacus raza Mixteca, plantas arvenses, empleadas como verdura se observ un 2n = 34 y un cariotipo de 5m+2sm+3st+7t; Amaranthus hybridus L., corresponden a plantas ruderales y mostr 2n = 34 y un cariotipo formado por 5m+3sm+3st+6t. En esta especie se observ en todas las plantas analizadas, variacin en el nmero cromosmico: 76% de las clulas con 2n = 34; 16% mostr 2n = 32 y 16% con 2n = 33 cromosomas. Este comportamiento ha sido observado en planta hbridas por otros autores. Amaranthus hypochondriacus L. raza Mixteca, corresponden a plantas fomentadas o inducidas en la milpa o en los cultivos, son utilizadas como verdura y mostraron 2n = 32 y un

cariotipo de 8m+1sm+3st+4t. En todas las razas y especies de Amaranthus estudiadas, se observ un par de cromosomas con satlite. Las especies y razas de Amaranthus estudiadas, mostraron tener dos de los nmeros bsicos (x = 16 y 17) reportados para el gnero. Los cromosomas de estas plantas son pequeos y miden 0.6 - 1.8 m. La presencia de cromosomas metacntricos, submetacntrico, subtelocntricos y telocntricos sugiere que en la evolucin de los cariotipos de estas plantas, se han involucrado cambios estructurales en sus cromosomas, como son deleciones, translocaciones o inversiones que ya han sido observados por otros autores en hbridos de especies del gnero. Palabras clave: Amaranthus spp.; nmeros cromosmicos (2n), cariotipos. ABSTRACT The chromosome number 2n and karyotype of five species and races of Amaranthus consumed as pseudocereal or edible greens is reported. These species are part of the extant germplasm in Mexico. Amaranthus hypochondriacus L. Aztec race, cultivated for its grain, presented 2n = 34 and a karyotype of 6m+3sm+3st+5t;
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Amaranthus cruentus L. Mexican race, cultivated for its grain, presented 2n = 34 and a karyotype of 6m+3sm+2st+6t; Amaranthus hybridus A. hypochondriacus Mixtec race, a weed used as a vegetable, presented 2n = 34 and a karyotype of 5m+2sm+3st+7t; Amaranthus hybridus L., a ruderal, showed 3n = 34 and a karyotype of 5m+3sm+3st+6t. In all observed plants of these species, variation in the chromosome number (2n) was found: 76% of the cells showed 2n = 34; 16% showed 2n = 32 and 16% showed 2n = 33 chromosomes. This behavior has been observed in hybrid plants by other authors. Amaranthus hypochondriacus L. Mixtec race, is a plant tolerated in the milpa or in crops, and used as a vegetable; presented 2n = 32 and a karyotype of 8m+1sm+3st+4t. All the races and species of Amaranthus studied proved to possess two basic numbers, reported for the genus, x = 16 and 17. The chromosomes of these plants are small, measuring 0.6 1.8 m. The presence of metacentric, submetacentric, subtelocentric and telocentric chromosomes suggests that structural chromosomal changes, such as deletions, translocations, and inversions, have been involved in the karyotypic evolution of these plants. These chromosomal rearrangements have also been observed by other authors in interspecific hybrids in the genus. Key words: Amaranthus spp., chromosome number (2n), karyotype. INTRODUCCIN El GNERO Amaranthus Amaranthus es un gnero de plantas herbceas, se encuentra compuesto por aproximadamente 60-70 especies, 40 de las cuales son de Amrica y el resto se encuentran en Australia, frica, Asia y Europa (Sauer, 1967; Espitia et al., 2010). Sus principales centros de distribucin son las reas tropicales de Amrica y la India, aun cuando en los trpicos de frica y Australia se encuentra un gran nmero de especies (Feine et al., 1979; Sauer, 1967, 1976; Pal et al., 2000). Tres de las especies de Amaranthus son econmicamente importantes por la produccin de semilla comestible: A. caudatus L., A. cruentus L. y A. hypochondriacus L. Las semillas de amaranto han sido empleadas en
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la elaboracin de dulces, granolas y hojuelas. Adems la harina obtenida de estas semillas se utiliza para la elaboracin de galletas, cremas, pastas etc. (Mapes-Snchez, 2010). Las semillas de amaranto son ricas en lisina (Becker et al., 1981). El alto contenido de protenas en estas semillas, las hacen econmicamente redituables. El contenido de protena vara entre 12.5 a 22.5 % del peso seco de la semilla (Breener, 1991). Las hojas de varias especies de amaranto son consumidas como verdura, particularmente en algunos poblados de la Sierra Norte de Puebla (Mapes-Snchez et al., 1998) y en el Estado de Mxico. Desde el punto de vista nutricional, tambin son especies importantes ya que contienen altas concentraciones de vitaminas y minerales (Spillari et al., 1989). ORIGEN Y NMERO BSICO (x) EN ESPECIES DE Amaranthus El gnero se consideraba dibsico con x= 16 y x= 17. Pal et al. (2000), reporta un nuevo nmero bsico para el gnero de x = 14, observado en Amaranthus tenuifolius con 2n = 28, distribuido en el norte y sur de la India. Con esta informacin, el gnero Amaranthus se puede considerar tribsico con x = 14, 16 y 17. En algunos casos se reportan los x = 16 y 17 para una misma especie (Grant, 1959; Khoshoo y Pal, 1972; Pal y Khoshoo, 1973; Pal et al., 1982; Sheidai y Mohammadzadeh 2008). Los nmeros bsicos del gnero (x = 14, 16 y 17) se presentan tanto en la seccin Amaranthus como en la seccin Blitopsis, aunque en la ltima se presenta principalmente x=17. Pal y Khoshoo (1973) y Pal et al. (1982), plantearon que x=17 deriv de x=8 y x=9 (nmeros bsicos comunes en Amaranthaceae). Una relacin entre los dos nmeros bsicos fue planteada por Pal et al. (1982) estudiando un hbrido entre A. hypochondriacus (n=16) y A. hybridus (n=17). En las plantas hbridas, estos autores encontraron 2n= 32, 33 y 34 cromosomas; estos autores postulan que x=17 surgi del x=16 por trisoma primaria. Con esta informacin se plantea el origen paleotetraploide del gnero con 2n=4x=32. Todos los granos de Amaranthus son diploides con 2n= 32 y 34. La aneuploida ha sido un factor que favorece la variacin y ocurre naturalmente por hibridacin, especialmente

Captulo XV. Nmero cromosmico (2n) y cariotipo en especies de grano y verdura de Amaranthus spp. de Mxico

cuando las especies de grano y las especies silvestres crecen juntas (Williams y Brenner 1995). En relacin al origen de las especies cultivadas, Sauer (1967) considera que A. hybridus (n=16) origin a A. cruentus (n=17) en Amrica Central; esta especie emigr al norte y se cruz con A. powelli (n = 17) dando origen, luego de repetidas hibridaciones a A. hypochondriacus (n = 16). La migracin de A. cruentus hacia el sur y despus de repetidos cruzamientos con A. quitensis (n = 16) origin a A. caudatus (n = 16). Esta hiptesis postula un antecesor comn en estas especies que permitira explicar la presencia de caracteres compartidos por todas las especies cultivadas y silvestres de amaranto. Khoshoo y Pal (1972) proponen que cualquiera que sea su origen, las especies de grano tuvieron su origen en uno o varios progenitores silvestres por domesticacin. Mallory et al. (2008) consideran que las especies de grano A. hypochondriacus, A. cruentus y A. caudatus se clasifican de acuerdo a sus progenitores putativos: A. hybridus L. A. quitensis H.B.K. y A. powelli S. Wats, que se originaron a travs del complejo de A. hybridus, considerado como un paleo-alotetraploiode (2n = 4x = 32), aunque han sido reportados 2n = 32 y 34 para A. cruentus. (Pal et al., 1982; Greizerstein y Poggio 1994,1995; Greizerstein et al., 1997). Pal et al. (1982) sugiere que el nmero gamtico n = 17 se origin del n= 16 a travs de trisoma primaria. Greizerstein y Poggio (1994; 1995), en base a anlisis citogentico en hbridos interespecficos apoyan esta hiptesis y proponen que las especies con 2n = 32 son poliploides con un x = 8 y que el x = 16 corresponde a un nmero cromosmico bsico derivado. El x = 17 podra haber aparecido despus por trisoma primaria. CROMOSOMAS DE Amaranthus El gnero Amaranthus se caracteriza por presentar la mayor homogeneidad en nmero cromosmico y los cromosomas ms pequeos de la familia Amaranthaceae (Behera y Patnaik, 1974; Song et al., 2002). Varios autores mencionan que A. caudatus, A. hypochondriacus y A. hybridus presentan 2n = 32, mientras que A. cruentus 2n = 34 (Pal y Koshoo, 1973; Pal et al. 1982). Sin embargo, Auquier y Renard (1975) y Dimitrieva (1986) encuentran para A.

cruentus var. cruentus 2n=32. Pal. et al. (1982), Greizerstein y Poggio (1995) reportan 2n = 32 y 34 para A. cruentus. As mismo Tandon y Tawakley (1970) reportan 2n = 34 para A. hypochondriacus. Pal et al. (1982) reportan para A. hybridus proveniente de frica 2n = 34. Los estudios sobre la gentica del gnero se han centrado en la hibridacin interespecfica, la expresin del sexo, la poliploida (Feine et al., 1979), sobre la herencia de algunos caracteres y ms recientemente en estudios moleculares (Ranade et al., 1997; Lee et al., 2008; Mallory et al., 2008; Maughan et al., 2008; Maughan et al., 2009). Los resultados de numerosos trabajos muestran que en general las especies presentan una meiosis normal (Pal et al., 1982; Sheidai y Mohammadzadeh, 2008), sin embargo los hbridos interespecficos entre especies domesticadas y malezas muestran algunas alteraciones como son irregularidades en paquteno, zonas no apareadas en algunos bivalentes heteromrficos, duplicaciones y evidencia de heterocigosis para inversiones pericntricas; en general estos hbridos muestran valores bajos de viabilidad en el polen. Algunos hbridos han sido exitosos y presentan frecuencias quiasmticas intermedias a la que poseen sus progenitores, obtenindose a veces plantas normales en la generacin F2. En otros casos los hbridos son plantas dbiles y presentan malformaciones fenotpcas y en algunos casos son inviables (Pal, 1972; Pal y Koshoo, 1973; Greizerstein y Poggio, 1995). Se ha observado que al menos en la mitad de las especies de Amaranthus est involucrada la hibridacin interespecfica natural y es un factor que ha causado la gran variacin dentro de las especies y la complejidad en la taxonoma del gnero (Sauer, 1957). Se han realizado estudios citogenticos en materiales de Norte y Sur Amrica, Asia y la India, incluyendo especies cultivadas, algunas domesticadas y las malezas consideradas ancestros de ellas, tambin se han incluido en estos estudios hbridos interespecficos y poliploides artificiales. En Mxico existen varias especies de Amaranthus en distintas etapas de domesticacin, encontrndose plantas cultivadas, arvenses, ruderales y fomentadas (Bye, 1998; Mapes et al., 1998). Las especies cultivadas generalmente son utilizadas
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como grano como A. hypochondriacus raza Azteca y A. cruentus raza Mexicana y presentan semilla blanca. Las especies utilizadas como verdura generalmente son arvenses o ruderales y presentan semilla negra. En la Sierra Norte de Puebla, se utilizan las hojas tiernas de A. hybridus, A. hypochondriacus y A. cruentus, consideradas como plantas fomentadas o inducidas en la milpa mediante dispersin intencional de la semilla, cuando una nueva parcela se abre al cultivo (Mapes et al., 1998). Estas especies no han sido incluidas en estudios citogenticos, aunque nuestro pas es considerado como uno de los centros de origen y diversificacin del gnero (Espitia et al., 2010). OBJETIVOS Obtener el nmero cromosmico somtico 2n, cariotipo y niveles de poliploida en poblaciones de: A. hypochondriacus raza Azteca, A. cruentus raza Mexicana, utilizados como grano; Amaranthus hybridus x Amaranthus hypochondriacus raza Mixteca; A. hybridus y A. hypochondriacus raza Mixteca, empleados como verdura. Estas especies y razas de Amaranthus representan parte del gradiente de germoplasma existente en Mxico. La finalidad de estos anlisis es evaluar la variacin inter e intraespecfica en los genomas de estas plantas; esta informacin es bsica para plantear estrategias de mejoramiento, biotecnologa y conservacin in situ y ex situ en estas especies. MATERIALES Y MTODOS PLANTAS UTILIZADAS Se analizaron siete poblaciones de cinco taxa de Amaranthus, tres de las cuales correspondieron a A. hypochondriacus L. raza Azteca, cultivada y empleada por su semilla (Mapes et al., 1998), colectadas en Tulyehualco, D. F.; A. cruentus

L. raza Mexicana, tambin cultivada y utilizada por su semilla (Mapes et al., 1998) colectada en Huazulco, Mor.; Amaranthus hybridus x Amaranthus hypochondriacus raza Mixteca, son consideradas plantas arvenses y consumidas como verdura (Mapes et al., 1998), se colectaron en San Miguel Tianguisalco, Pue.; Amaranthus hybridus L., corresponden a plantas ruderales, utilizadas como verdura y aparecen en los mrgenes de los cultivos de maz (Mapes et al., 1998), colectadas en Chalco, Estado de Mxico y A. hypochondriacus L. raza Mixteca consideradas plantas fomentadas o inducidas, en las cuales se realiza la dispersin de sus semillas en la nueva parcela, son utilizadas como verdura (Mapes et al., 1997, 1998), fueron colectadas en Hueyapan, Pue. (Cuadro 1). Los ejemplares herborizados de cada coleccin, se depositaron en el Herbario Nacional MEXU. Las semillas que se utilizaron en este trabajo fueron colectadas directamente de las plantas. Estos materiales fueron identificadas por los doctores C. Mapes, R. Bye y E. Espitia (Cuadro 1). Se germinaron 20 semillas de cada colecta, colocando cada individuo en una mezcla de tierra negra y de hoja en proporcin de 1 a 1. Una vez obtenidas las plantas, se colocaron en macetas y se mantuvieron en los invernaderos del Jardn Botnico, Instituto de Biologa, UNAM. CONTEOS CROMOSMICOS, CARIOTIPOS E IDIOGRAMAS Para la observacin del nmero cromosmico 2n y elaboracin del cariotipo en plantas de Amaranthus, se utilizaron 20 clulas en metafase mittica de diez individuos de cada poblacin. Los pices de races secundarias se colocaron en una solucin de 8-hidroxiquilnolena 0.002 M por 5 h a 18 C en obscuridad. Posteriormente se fijaron las puntas de raz en una solucin Farmer
Color de la semilla blanca blanca blanca blanca negra negra negra

Cuadro 1. Localidades y datos de colecta de poblaciones, especies y razas de Amaranthus


Especie y raza A. hypochondriacus raza Azteca A. hypochondriacus raza Azteca A. hypochondriacus raza Azteca A. cruentus raza Mexicana A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca A. hybridus. A. hypochondriacus raza Mixteca Colector Uso No. de Colecta R. Bye y E. Linares 14855 A., 1987 grano R. Bye y E. Linares 14855 C., 1987 grano R. Bye y E. Linares 14855 , 1987 grano E. Espitia grano 1018c-3 R. Bye y E. Linares 15187, 1987 verdura C. Mapes C. Mapes 742, 1987 739, 1987 verdura verdura Localidad Tulyehualco, D.F. Tulyehualco, D.F. Tulyehualco, D.F. Huazulco, Morelos. San Miguel Tianguisalco, Puebla. Chalco, Estado de Mxico. Hueyapan, Puebla.

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Captulo XV. Nmero cromosmico (2n) y cariotipo en especies de grano y verdura de Amaranthus spp. de Mxico

(tres partes de alcohol absoluto: una parte de cido actico glacial) por 24 h. Las puntas de raz se hidrolizaron con HCl (1N) 15 min a 60 C y los cromosomas se tieron con reactivo de Schiff por una hora, despus se colocaron en orcena actica al 1.8%. Las preparaciones se congelaron en hielo seco (Conger y Fairchield, 1953) y se montaron en blsamo de Canad. Las mejores clulas se fotografiaron en un fotomicroscopio Zeiss modelo II, utilizando una cmara Axio Vision de Carl Zeiss, utilizando el programa Axio Vision Rel. 4.7. Las imgenes se almacenaron en un programa de imgenes Tif.y en JPG, despus se utiliz un programa Adobe Photoshop para la edicin de las imgenes. Las fotografas se utilizaron para medir los brazos cromosmicos y la longitud total del genoma. La posicin del centrmero se obtuvo siguiendo a Levan et al. (1964), el cociente de los brazos cromosmicos (r = brazo largo/corto; p/q) se calcul para cada cromosoma. La homologa cromosmica se estableci de acuerdo con las similitudes en longitud y posicin centromrica. Adicionalmente la constriccin secundaria fue utilizada para distinguir pares de cromosomas homlogos entre poblaciones. Los idiogramas se construyeron de acuerdo con los valores promedio de nueve

RESULTADOS Y DISCUSIN Los nmeros cromosmicos 2n y el cariotipo de especies y razas de Amaranthus se presentan en el Cuadro 2. Las fotografas de los cromosomas somticos (2n) y los idiogramas, se muestran en el Cuadro 2 y las Figuras 1A- B - 5A- B. En estas investigaciones observamos 2 nmeros cromosmicos 2n = 2x =32 (x = 16) y 2n = 2x = 34 (x = 17) para cinco especies y razas de Amaranthus, utilizados como semilla o como verdura (Cuadro 2). Estos resultados son congruentes con los nmeros cromosmicos bsicos x = 16 y x= 17 ya informados para el gnero por varios autores (Grant, 1959; Khoshoo y Pal, 1972; Pal et al., 1982; Greizerstein y Poggio, 1994, 1995; Song et al., 2002; Sheidai y Mohammadzadeh, 2008). Pal et al. (2000) reportan el 2n = 28; x = 14, encontrado en Amaranthus tenuifolius distribudo en el norte y sur de la India. Con esta informacin se puede considerar al gnero Amaranthus como tribsico con x = 14, 16 y 17. En algunos casos, ambos nmeros cromosmicos (n = 16 y 17) han sido reportados para la misma especie, como en A. hypochondriacus 2n = 32 (Pal y Khoshoo, 1973; Pal et al., 1982) y 2n = 34 (Tandon y Tawakley, 1970).

Cuadro 2. Nmeros cromosmicos 2n y cariotipos de especies y razas de Amaranthus


Longitud de la cromatina haploide (m) ndice de Constricciones Frmula Intervalo de longitud X EE asimetra TF (%) secundarias cariotpica de los cromosomas 16.20 0.43 27.04 1sm 6m+3sm+3st+5t 0.6-1.6 16.80 0.41 28.72 1m 6m+3sm+2st+6t 0.5-1.8 16.10 0.42 23.36 1m 5m+2sm+3st+7t 0.5-1.4 0.6-1.6 0.6-1.6 5m+3sm+3st+6t 8m+1sm+3st+4t 1m 1sm 17.40 0.43 16.60 0.42 25.16 33.49

2n Especie y raza 34 A. hypochondriacus raza Azteca 34 A. cruentus raza Mexicana 34 A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca 32, 33, 34 A. hybridus 32 A. hypochondriacus raza Mixteca

clulas, utilizando el valor del brazo largo y corto en cada par de cromosomas y se agruparon en cromosomas metacntricos (m), submetacntricos (sm), subtelocntricos (st) y telocntricos (t). El nmero de los cromosomas homlogos se asign siguiendo la reduccin en la longitud de los cromosomas, para un total de 16 17 pares, dependiendo de la especie y raza de amaranto. El ndice de asimetra (TF%) se obtuvo conforme a Sharma y Sharma (1959); Sinha y Roy (1979).

En las tres poblaciones de A. hypochondriacus raza Azteca, especie utilizada como grano que crece en Tulyehualco, Estado de Mxico, se observ un 2n = 34 coincidiendo con lo observado por Tandon y Tawakley (1970). En contraste A. hypochondricus raza Mixteca present 2n = 32. Esta especie crece en Hueyapan, en la regin montaosa en el norte del estado de Puebla, donde es mantenida en el campo de maz bajo condiciones ecolgicas diferentes a donde crece A. hypochondriacus raza Azteca. El 2n = 32 concuerda con el observado por Pal y Khoshoo (1973), Pal et al. (1982)
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y Greizerstein y Poggio (1994, 1995). Sin embargo es diferente al 2n = 34 encontrado para las poblaciones de A. hypochondriacus raza Azteca localizado en Tulyehualco, D. F., coincidiendo con el 2n = 34 encontrado para esta especie por Tandon y Tawakley (1970). A. cruentus raza Mexicana, tambin una especie cultivada para grano que crece en Huazulco, Mor., present 2n=34. Este resultado es acorde con los 2n informados por Tandon y Tawakley (1970), Pal et al. (1982) y Greizerstein y Poggio (1994; 1995). Sin embargo Auquier y Renard (1975) y Dimitrieva (1986) encontraron 2n=32 para esta especie. Para A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca, plantas arvenses de San Miguel Tianguisalco, Pue. y para A. hybridus, poblacin ruderal de Chalco en el Estado de Mxico, se observ 2n = 34. Las plantas de estas dos poblaciones son utilizadas como verdura. El 2n = 34 es igual al reportado para poblaciones de A. hybridus de frica estudiadas por Pal et al. (1982). Sin embargo, los resultados encontrados en este estudio contrastan con la mayora de los informes de la literatura donde observaron un 2n = 32 para Amaranthus hybridus (Grant 1959, Pal y Koshoo 1973; Greizerstein et al., 1997). En la poblacin de A. hybridus analizada en estas investigaciones, se observ una variacin significativa en el nmero cromosmico. En una muestra de diez plantas, se observ que el 76% de las clulas presentaron 2n = 34, 16% con 2n = 32 y 8% con 2n = 33. Estos porcentajes de variacin fueron semejantes en cada planta analizada. Estas variantes en el 2n pueden deberse a translocaciones recprocas o aneuploidas, como las reportadas por Pal et al. (1982) para hbridos obtenidos entre cruzas dibsicas de A. dubius (n = 16) y A. spinosus (n = 17), donde estos autores observaron los tres nmeros cromosmicos (2n = 32, 33 y 34). En las plantas de A. hybridus investigadas en este trabajo, el 2n = 34 fue el ms frecuente, sin embargo en nuestros anlisis y en los realizados por Pal (1972); Pal et al. (1982); Behera y Patnik (1974, 1982), observaron variaciones en el nmero cromosmico de hbridos entre A. dubius (2n = 32) y A. spinosus (2n = 34). Los resultados obtenidos en este trabajo, tambin son similares a los obtenidos por Pal et al. (1982), al realizar cruzas inter
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especficas entre A. hypochondriacus (n=16) y A. hybridus (n=17). Estos autores observaron en los hbridos porcentajes altos (98%) de 15 bivalentes + 1 univalente y solo el 2% con 16 bivalentes+ 1 univalente, originando gametos con n = 16 y n = 17. En la A1 del hbrido, estos autores observaron bajo porcentaje de segregacin anormal, originando gametos con n = 16 y n = 17. En las plantas de la generacin F2, obtuvieron 2n= 32, 33 y 34 en una proporcin de 1:2:1, siendo el 2n=33 el ms frecuente. En A. hypochondriacus raza Mixteca de Hueyapan, Pue., se observ un 2n = 32 (Cuadro 2). Estas plantas son consideradas como fomentadas o inducidas, y tambin son usadas como verdura (Mapes et al., 1998). En las especies y razas de Amaranthus analizadas, el tamao de los cromosomas fue muy pequeo y vari de 0.5 a 1.8 m, (Cuadro 2), coincidiendo con lo observado por Greizerstein y Poggio, (1994; 1995; Greizerstein et al., 1997 y Song et al., 2002). En estas investigaciones observamos para las tres poblaciones analizadas de A. hypochondriacus raza Azteca (2n = 34) un cariotipo formado por seis pares de cromosomas metacntricos, tres de submetacntricos, tres de subtelocntricos y cinco de telocntricos (6m+3sm+3st+5t); se observ una constriccin secundaria en un par de cromosomas submetacntricos (Cuadro 2; Figuras 1A y 1B). Greizerstein y Poggio (1994) analizaron una poblacin de A. hypochondriacus con 2n=32 y un cariotipo formado por 5m+4sm+1st+6t, con un par de cromosomas con satlite. La poblacin de A. hypochondriacus (2n = 32) vari de la estudiada en estas investigaciones en el 2n, ya que A. hypochondriacus raza Azteca mostr 2n = 34 y en la proporcin de cromosomas metacntricos, submetacntricos, subtelocntricos y telocntricos. Los nmeros indican el par cromosmico correspondiente y el asterisco seala el par de cromosomas con satlite. La escala 1A equivale a 10 m, y la 1B a 5 m. Las plantas de A. cruentus raza Mixteca analizadas, presentaron 2n=34 y un cariotipo formado de: 6m+3sm+2st+6t; tambin se observ una constriccin secundaria en 1 par de cromosomas metacntricos, Figuras 2A, 2B. Los cariotipos de A. hypochondriacus raza Azteca y de

Captulo XV. Nmero cromosmico (2n) y cariotipo en especies de grano y verdura de Amaranthus spp. de Mxico

Figura1. A. hypochondriacus raza Azteca. (A) Clula somtica con 2n= 34. Las flechas y nmeros indican el par de cromosomas submetacntrico con satlite. (B) Idiograma que muestra el cariotipo de A. hypochondriacus raza Azteca con 6m + 3sm + 3st + 5t.

A. cruentus raza Mexicana fueron muy similares, variando solo en un par de cromosomas subtelocntricos y otro de telocntricos (Cuadro 2; Figuras 2A y 2B). Greizerstein y Poggio (1994) reportan para A. cruentus un 2n = 34 y un cariotipo de 3m+7sm+7t, con un par cromosmico con satlite. Los resultados obtenidos por estos autores para A. cruentus, varan de los obtenidos para esta especie en estas investigaciones en la proporcin de cromosomas metacntricos, submetacntricos, subtelocntricos y telocntricos. Para A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca, se observ un 2n=34, un cariotipo de 5m+2sm+3st+7t y la presencia de un satlite en un par de cromosomas metacntricos (Cuadro 2; Figuras 3A y 3B). Estos valores son muy parecidos a los observados en A. hybridus con 2n = 34 y un cariotipo de 5m+3sm+3st+6t (Cuadro 2; Figuras 4A y 4B) y al observado en A. hypochondriacus raza Mixteca con (2n =32) y un

cariotipo formado de 8m+1sm+3st+4t (Cuadro 2; Figuras 5A y 5B). Ambas especies con un par de cromosomas con satlite, respectivamente. Las plantas de A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca y las de la poblacin de A. hypochondriacus raza Mixteca son similares en diversas caractersticas morfolgicas, tales como la arquitectura de la planta y la forma de las hojas y ambas poblaciones se utilizan como verdura. En la poblacin de A. hybridus (2n = 34) analizada en nuestras investigaciones, se encontr una variacin significativa del nmero cromosmico. En la muestra analizada de diez plantas, el 76% de las clulas mostr 2n =34, 8% con 2n = 33 y 16% con 2n = 32. Estos porcentajes se mantuvieron en los diez individuos analizados. Estas observaciones parecen ser el resultado de cruzas interespecficas que suceden de forma natural en diferentes especies del gnero, como lo han observado Pal et al. (1982), al realizar una cruza entre especies con diferente
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Figura 2. A. cruentus raza Mexicana. (A) Clula somtica con 2n=34. Las flechas y nmeros indican el par de cromosomas metacntricos con satlite. (B) Idiograma que muestra un cariotipo con 6m + 3sm + 2st + 6t. Los nmeros indican el par cromosmico correspondiente y el asterisco seala el par de cromosomas con satlite. La escala 2A equivale a 10 m, y la 2B a 5 m.

Figura 3. A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca. (A) Clula somtica con 2n=34. Las flechas y nmeros indican el par de cromosomas metacntricos con satlite. (B) Idiograma que muestra el cariotipo de A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca con 5m + 2sm + 3st + 7t. Los nmeros indican el par de cromosomas correspondiente y el asterisco el par de cromosomas con satlite. La escala 3A equivale a 10 m, y la 3B a 5 m.

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Figura 4. A. hybridus. (A) Clula somtica con 2n=34. Las flechas y nmeros indican el par de cromosomas metacntricos con satlite. (B) Idiograma que muestra el cariotipo de A. hybridus con 5m + 3sm + 3st + 6t. Los nmeros indican el par de cromosomas correspondiente y el asterisco seala el par de cromosomas con satlite. La escala 4A equivale a 10 m, y la 4B a 5 m.

Figura 5. A. hypochondriacus raza Mixteca. (A) Clula somtica con 2n= 32. Las flechas y nmeros indican el par de cromosomas submetacntricos con satlite. (B) Idiograma que muestra el cariotipo de A. hypochondriacus raza Mixteca con 8m + 2sm + 2st + 4t. Los nmeros indican el par de cromosomas correspondiente y el asterisco seala el par de cromosomas con satlite. La escala 5A equivale a 10 m, y la 5B a 5 m. G. Palomino et al.

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nmero bsico y donde observaron variaciones similares en el 2n de las plantas hbridas entre A. hypochondriacus (n = 16) y A. hybridus (n = 17). Los cariotipos observados en este trabajo para especies y razas de Amaranthus fueron homogneos y asimtricos y todos ellos mostraron 1 par de cromosomas con satlite, que se present en cromosomas submetacntricos o metacntricos (Cuadro 2). Los cariotipos de las especies y razas de Amaranthus estudiadas mostraron cariotipos homogneos entre ellas y asimtricos con valores de mayor asimetra de TF= 23.36% en A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca, a valores de TF= 33.49 % en A. hypochondriacus raza Mixteca (Cuadro 2). En todas las especies se observaron cromosomas metacntricos (m), submetacntricos (sm) subtelocntricos (st) y telocntricos (t), pero en los valores mayores de TF% (33. 49%), se observ la presencia de un mayor nmero de cromosomas subtelocntrico (st) o telocentricos (t). Estos resultados sugieren que en la evolucin de los cariotipos de estas plantas, se han involucrado cambios estructurales en sus cromosomas, debidos a deleciones, translocaciones e inversiones pericntricas, que han causado prdidas de fragmentos cromosmicos, como se ha evidenciado en los hbridos de estas especies por varios autores (Pal, 1972; Pal y Koshoo, 1973 y Pal et al., 1982). CONCLUSIONES A. hypochondriacus raza Azteca, A. cruentus raza Mexicana, utilizados como grano y A. hybridus x A. hypochondriacus raza Mixteca y A. hybridus usados como verdura presentaron los nmeros cromosmicos 2n = 34. A. hypochondriacus raza Mixteca consumido como verdura mostr 2n = 32. Estos nmeros cromosmicos son congruentes con otros autores en la presencia de los nmeros bsicos x= 16 y x = 17 en la mayora de las especies del gnero. A. hybridus present una variacin en el nmero cromosmico de 2n = 34 en 76%, 2n = 33 en 8% y 2n = 32 en 16% en todas las plantas analizadas. Este resultado puede deberse a posibles cruzas interespecficas que suceden de manera natural en algunas especies; resultados similares en variacin cromosmica en la misma planta han sido informados por otros autores en hbridos interespecficos de Amaranthus.
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Los cariotipos fueron similares entre las especies estudiadas y presentaron proporciones diferentes de cromosomas metacntricos, submetacntricos, subtelocntricos y telocntricos y todos ellos un par de cromosomas con satlite. Estas caractersticas en sus cromosomas sugieren que en la evolucin de los cariotipos de estas especies han estado involucrados cambios estructurales en sus cromosomas como son deleciones, translocaciones e inversiones pericntricas como se ha observado en hbridos de especies de Amaranthus. Estos estudios tienen la finalidad de evaluar la variacin inter e intraespecfica en los genomas de especies y razas de Amaranthus, que forman parte del gradiente de germoplasma existente en Mxico, como una informacin bsica para plantear estrategias de mejoramiento, biotecnologa y conservacin in situ y ex situ en estas especies. AGRADECIMIENTOS Al Programa Universitario de Alimentos (PUAL-UNAM) y al Jardn Botnico, Instituto de Biologa de la UNAM por el financiamiento de estas investigaciones. A los Doctores C. Mapes S., R. Bye B. y E. Espitia R. por haber proporcionado las semillas utilizadas en este trabajo y haber realizado la descripcin taxonmica de las especies y razas de Amaranthus estudiadas. Al Dr. F. Chiang por la revisin del manuscrito. LITERATURA CITADA Auquier P y R Renard (1975) Nombres chromosomiques des quelques angiospermes du Ruanda, Burundi et Kivu (Zaire). I. Bull. Jard. Bot. Nat. Belg. 45: 421-445. Becker R, E L Wheeler, K Lorenz, A E Stafford, O K Grosjean, A A Betchard, R M Saunders (1981) A compositional study of amaranth grain. Journal Food Science 46:1175-1180. Behera B y S N Patnik (1974) Cytotaxonomic studies in the family Amaranthaceae. Cytologia 39: 121-131.

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Captulo XVI

Estrategia y metodologa para el mejoramiento gentico del amaranto


STRATEGY AND METHODOLOGY FOR GENETIC IMPROVEMENT OF GRAIN AMARANTH

Eduardo Espitia Rangel, Diana Escobedo Lpez y Miriam Aguilar Delgado


Campo Experimental Bajo CIRCE-INIFAP. Km 6.5 Carretera Celaya-San Miguel de Allende, Celaya Gto. Autor para correspondencia: espitia.eduardo@inifap.gob.mx

RESUMEN El mejoramiento gentico de amaranto hasta ahora se han realizando mediante la evaluacin de variedades nativas y seleccin masal dentro de las ms sobresalientes. De esta manera se han obtenido variedades mejoradas que han permitido mejores rendimientos y caractersticas agronmicas. Hasta ahora se ha realizado muy poco mejoramiento gentico basado en la hibridacin de progenitores con caractersticas ventajosas con el fin de que estas converjan en genotipos que permitan hacer an ms sustentable el cultivo del amaranto. Uno de los factores que ha limitado lo anterior es el desconocimiento de la metodologa para la realizacin de cruzamientos artificiales en este cultivo. En este trabajo se presenta paso a paso la metodologa para este propsito; adems se presenta y discute una serie de recomendaciones para el establecimiento de una estrategia para el mejoramiento gentico del amaranto basado en la hibridacin de genotipos. De igual manera se mencionan cuales seran los objetivos fundamentales de mejoramiento gentico actual y se puntualiza sobre la fuente de germoplasma en la cual se pueden encontrar genes que faciliten el cumplimiento de los objetivos planteados en el programa de mejoramiento gentico.

Palabras clave: hibridacin, mtodo de pedigree, mtodo masivo, cruzamientos artificiales. ABSTRACT Genetic improvement of grain amaranth has been done evaluating landraces and masal selection within the outstanding native varieties; using this methodologies improved varieties with better grain yields and agronomical characteristics have been obtained. Until now little genetic improvement based on the hybridization of genotypes with advantageous characteristics has been made in order to converge in improved varieties that enable a more sustainable grain amaranth crop. Lack of knowledge of the artificial crossing techniques has limited the genetic improvement based on hybridization. In this chapter the methodology for artificial crossing is presented step by step. Besides a series of recommendations for the establishment of a strategy for the genetic improvement of the grain amaranth based on the hybridization is also presented and discussed. Likewise it is mentioned what the main objectives of genetic improvement program would be at the present times; it is emphasized on the sources of germ plasm in which genes can
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be found in order to facilitate the fulfillment of the objectives raised in a grain amaranth genetic improvement program. Key words: hybridization, pedigree method, bulk method, artificial crosses technique. INTRODUCCIN La hibridacin en amaranto ofrece buenas perspectivas para lograr objetivos importantes en la produccin, mayor tamao de grano, resistencia a enfermedades, entre otros, ms an para reunir en una sola variedad varios caracteres favorables. Si deseamos obtener una variedad de grano grande y hbito de crecimiento erecto, forzosamente tenemos que recurrir a la hibridacin, ya que estos caracteres se encuentran en diferentes especies, cultivares o razas y de diferentes ambientes. Se ha demostrado la existencia de heterosis en hbridos interespecficos entre Amaranthus cruentus y Amaranthus hypochondriacus, sin embargo al parecer no existe heterosis intraespecfica (Lehmann et al., 1990). Por el tamao de las flores y de la inflorescencia se recomienda hacer los cruzamientos artificiales en condiciones de invernadero en miniplantas cultivadas en recipientes pequeos, esto facilita la emasculacin ya que solo habr una flor estaminada en cada glomrulo. Es conveniente emplear marcadores morfolgicos para diferenciar la progenie productos de la cruza de la autofecundacin indeseada, entre estos marcadores tenemos al color de planta, color de fruto, forma de la inflorescencia caracterstica de la panoja y otras caracteres dominantes (Kulakow et al., 1985; Kulakow y Jain, 1985b; Kulakow y Jain, 1987). Se recomienda seleccionar adecuadamente el material que servir como progenitor para asegurar el xito de los cruzamientos, puesto que es difcil encontrar los caracteres que se desean combinar en el material que se usar como progenitor; para ello es necesario conocer la heredabilidad de los principales caracteres y correlaciones de los caracteres de los padres. En la hibridacin se puede aplicar cualquiera de los siguientes procedimientos: seleccin masiva, mtodo de pedegree, seleccin genealgica o cruzas regresivas.
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Sin duda un aspecto que ha frenado el mejoramiento por recombinacin de progenitores es el desconocimiento de la tcnica para la polinizacin artificial. La tcnica para realizar cruzamientos artificiales se basa en la plasticidad fenotpica del amaranto (Espitia 1994); esta consiste en el cultivo de plantas en contenedores muy pequeos, lo que da por resultado plantas diminutas que son relativamente fciles de manipular para su emasculacin. Esta metodologa fue desarrollada en la poca de los ochentas por el grupo de investigadores de Rodale Research Center. Una recomendacin es que se seleccionen progenitores contrastantes en alguna caracterstica que pueda ser til en la identificacin de las plantas cruzadas; caractersticas como color del hipocotilo, de la inflorescencia, de los cotiledones pueden servir como marcadores. Desde luego tambin se debe tener presente la compatibilidad entre las diferentes especies del gnero Amaranthus. La intencin de este captulo es dar a conocer la metodologa de mejoramiento gentico de amaranto con el fin de que si alguien est interesado en realizar mejoramiento pueda obtener resultados en un tiempo corto. Esta metodologa se basa principalmente en el trabajo realizado por varios investigadores de Rodale Research Center en Kutztown, Pa. y en experiencias del autor principal. Este programa fue liderado por Charles S. Kauffman y Leon Weber en la dcada de los ochentas en el proyecto de amaranto apoyado por la Academia Nacional de Ciencias. MANEJO DE PLANTAS CON PROPSITOS DE MEJORAMIENTO El amaranto produce su semilla en una inflorescencia de crecimiento indeterminado, lo cual significa que mientras la planta tenga condiciones de humedad y temperatura puede seguir creciendo, es decir produciendo flores nuevas. Todas las especies que se utilizan en la produccin de grano son monoicas y predominantemente autgamas; aunque pueden ocurrir diferentes niveles de cruzamiento en presencia de insectos, aire o de contacto fsico entre plantas (Tucker y Sauer, 1958; Grant, 1959; Hauptli, 1977). El amaranto presenta el fenmeno conocido como plasticidad fenotpica el cual consiste en modificar la morfologa y la

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fenologa de la planta en respuesta a las diferentes condiciones ambientales (Espitia, 1994). Entonces el tamao de la planta y la duracin de las diferentes fases fenolgicas se puede modificar al restringir la disponibilidad de temperatura, luz, agua, suelo, etc. Si la planta de amaranto es sembrada en una maceta pequea produce una planta miniatura totalmente funcional, es decir florece, madura y produce semilla viable; es fcil de mantener en invernadero con los requerimientos de temperatura de la planta. Esta caracterstica de la planta de amaranto ha sido aprovechada para realizar los cruzamientos necesarios en un programa de mejoramiento, pues la estructura de la inflorescencia se simplifica en plantas miniatura; ya que los glomrulos que nacen directamente del raquis, presentan menos dicasios que las plantas normales, esto facilita enormemente la emasculacin. Es conveniente que las plantas con fines de cruzamientos se cultiven en invernadero con el fin de controlar las condiciones ambientales. Las plantas se deben de sembrar en pequeos macetas; por ejemplo en un contenedor de 3.7 x 3.7 cm y 5.8 cm de fondo produce plantas de 15 a 45 cm dependiendo del genotipo comparadas con plantas de 2 m ms en campo.

de excepciones al patrn monoico: las especies dioicas (Sauer 1955 y Mosyakin y Robertson, 1981) y las especies A. spinosus y A. dubius con glomrulos estaminados y pistilados en la inflorescencia (Brenner, 1990 y Pal, 1972a). La unidad bsica de la inflorescencia es una cima dicsica que produce flores estaminadas y pistiladas o ambas; la estructura de cima de los glomrulos es bsicamente la misma en las dos secciones del gnero en especies monoicas y dioicas. En las especies monoicas se tienen dos tipos de arreglos de flores: a) La primera flor de cada glomrulo es estaminada y las siguientes flores en cada dicasio son pistiladas. Cada glomrulo solo presenta una flor estaminada; este arreglo es tpico de las especies para produccin de grano. b) Las flores del glomrulo superior son todas estaminadas; mientras que las flores de los glomrulos inferiores son pistiladas (A. spinosus y A. dubius). Hay variaciones en la estructura de los glomrulos ocasionada por la hibridacin entre genotipos cultivados y silvestres o por las condiciones ambientales, esto ltimo reduce sobretodo el nmero de cimas dicsicas del glomrulo (Figura 2). La flor es muy pequea con organizacin trmera (Seccin Blitopsis) y pentmera (Seccin

Figura 1. Izquierda plasticidad fenotpica en plantas de amaranto; derecha inflorescencia sin ramificaciones y glomrulos naciendo directamente del raquis.

BIOLOGA FLORAL Y SU RELACIN CON EL MEJORAMIENTO Todas las especies utilizadas para la produccin de grano son monoicas. Las flores pueden ser terminales o axiales y organizadas en glomrulos en una inflorescencia (Tirso). La primera flor es generalmente estaminada y las posteriores pistiladas (Pal, 1972a) Figura 2. Hay dos tipos

Amaranthus); cada flor presenta una brctea y tres cinco tpalos escariosos y cada flor estaminada produce tres cinco estambres y abren poco despus de que se libera el polen de las anteras. Las flores pistiladas tienen solamente un ovario con un estilo corto y un estigma glandular con dos tres ramificaciones. Si la planta tiene condiciones para seguir creciendo
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Figura 2. Arriba izquierda representacin diagramtica de un glomrulo; arriba derecha glomrulo tpico, abajo izquierda glomrulo con dos flores estaminadas, abajo derecha glomrulo simplificado de miniplanta.

se producen dicasios sucesivos y por lo tanto se producen ms flores pistiladas y potenciales semillas, hasta que la planta madura. Esto es lo que da el carcter de crecimiento indeterminado al amaranto. En ocasiones en el ltimo dicasio una de las flores es estril y no se desarrolla, en otros casos no se desarrolla ninguna y ah cesa el crecimiento. La semilla de los ltimos dicasios es de menor tamao dando esto como resultado que se tengan en una planta semillas de diferente tamao y madurez. En cada glomrulo las flores pistiladas abren exponiendo sus estigmas receptivos antes de que la flor estaminada madurez (Sauer, 1950). El polen disponible no proviene de la flor

estaminada del mismo glomrulo, sino de flores estaminadas de otros glomrulos. La madurez progresa hacia arriba de la inflorescencia de crecimiento indeterminado, por lo que en la misma inflorescencia se tienen diferentes grados de madurez (Figura 4). En general se dice que amaranto es una planta predominantemente autgama; sin embargo, los amarantos cultivados tienen un sistema de reproduccin mixto, con niveles variables de polinizacin cruzada. Estos niveles varan significativamente dependiendo del genotipo y del ambiente (Kulakow y Jain, 1990 y Espitia, 1991). Un experimento de seleccin disruptiva basado en la proporcin de flores

Figura 3. Representacin diagramtica de una flor individual y sus estructuras: utrculo, brctea, tpalo externo, tpalo interno.

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Figura 4. La floracin progresa de la base al pice de las ramificaciones de la inflorescencia.

masculinas sobre flores femeninas indic que el sistema de reproduccin en amaranto est bajo control gentico (Sauer, 1967). Los niveles de polinizacin cruzada para una poblacin nativa de vari de 5.8 a 28.8% para A. caudatus y de 3.5 a 14% para A. hypochondriacus; la polinizacin cruzada para A. cruentus fue de 31%. Utilizando como marcador el color verde y rojo Espitia (1994), encontr que los niveles de cruzamiento varan entre razas de 7.6 a 41.1%; los niveles de cruzamiento fueron de 7.6, 12.9, 15.6 y 41.1% para las razas Azteca, Mercado, Nepal y Mexicana, respectivamente. Dentro de una poblacin los niveles de polinizacin cruzada de plantas individuales vara de completamente autgama a completamente algama. Con el fin de demostrar que existe variacin en la forma de reproduccin, se realiz un estudio de seleccin masal bidireccional para lneas de niveles altos y bajos de polinizacin cruzada en A. cruentus; en la generacin S1 las tasas de polinizacin cruzada fueron significativamente diferentes entre las lneas. Las lneas de baja polinizacin cruzada produjeron mayor cantidad de polen que las de alta polinizacin cruzada (Jain et al., 1982). Esta respuesta indica el control cuantitativo de la expresin sexual y consecuentemente del

potencial de polinizacin cruzada. El sistema de reproduccin en amaranto puede ser modificado para poder utilizar mtodos de mejoramiento para plantas autgamas como algamas (Sauer, 1967). TCNICAS DE POLINIZACIN ARTIFICIAL Sincronizacin de la floracin La iniciacin de la floracin est estrechamente relacionada con el tamao de la planta, ramificacin y desarrollo de la inflorescencia y es adems una de las variables ms relacionadas con la determinacin del rendimiento. La gran mayora de las especies de Amaranthus se comportan como plantas obligatorias o facultativas para das cortos (Kigel, 1994). Morfolgicamente, la mayor manifestacin de la induccin de la floracin por das cortos es la disminucin del nmero de hojas en el tallo principal y en la disminucin de la longitud del tallo debida a menor nmero de entrenudos o entrenudos ms cortos. Se ha reportado variabilidad en floracin entre las diferentes especies en condiciones de campo (Kaufman, 1992). En Mxico el orden de floracin en ensayos realizados bajo condiciones de campo fue A. hybridus-Prima, A.
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hypochondriacus-Mercado y Nepal, A. cruentusMexicana, A. hypochondriacus-Azteca y A. caudatus-Sudamericana (Espitia, 1992). De acuerdo a lo anterior la duracin del da es un factor clave en la iniciacin floral en amaranto, lo que dispara la iniciacin floral son los das cortos. En algunos casos la iniciacin floral es cuando el da tiene una duracin aproximada de 12 horas. En siembras de invernadero materiales de A. hypochondriacus florecen cuando tienen cuatro hojas; mientras que materiales de A. cruentus florecen cuando presentan de 8 a 12 hojas; si las dos especies crecen a la misma tasa entonces es necesario realizar siembras escalonadas con el fin de tener plantas que se puedan polinizar con polen proveniente de plantas que pertenezcan al otro progenitor (Kaufman, 1981). No hay conocimiento exacto para dar una recomendacin especfica, dependiendo de la localidad y de la poca de ao se deber buscar la mejor opcin en el escalonamiento de la siembra de los diferentes materiales con propsitos de cruzamiento. Relacin de plantas machos y hembras Es ms conveniente realizar los cruzamientos en los meses de invierno ya que en este tiempo los das cortos inducen la floracin en menor tiempo. Esto parece ms importante aun cuando se quiere utilizar materiales de da corto en los cruzamientos. Hay que tener presente tambin que cuando hay das nublados la produccin de polen se reduce drsticamente,

lo cual es una limitante para realizar las cruzas planeadas. Las temperaturas ptimas para realizar este trabajo son de 26 C en la noche y 38 C en el da. Es conveniente llevar un registro de las variedades individualmente para conocer su propensin a producir polen en el invernadero. En general se recomienda un mnimo de 50 plantas de cada progenitor masculino para asegurar la produccin de polen necesario para polinizar dos tres plantas del progenitor femenino. Ahora si se tiene poca semilla se puede sembrar en macetas ms grandes; sin embargo esto tomar ms tiempo para llegar a floracin (produccin de polen) pero habr mayor cantidad de polen en una planta de mayor tamao. Las charolas para produccin de plntula de hortalizas proporciona suficiente espacio para producir 338 200 plntulas en un espacio muy pequeo (Kauffman, 1981). Si se quiere iniciar un programa de mejoramiento se deber invertir cuando menos un ciclo para conocer el comportamiento de los materiales en el invernadero. Separacin fsica de plantas machos y hembras Para realizar la emasculacin de las plantas del progenitor femenino lo ms conveniente es sacar la plantita de la cavidad de la charola o de su macetita; esto es posible ya que el contenedor obliga a la planta a producir una masa compacta de races y esto facilita sacarla de su cavidad o maceta. Despus de la emasculacin

Figura 5. Debido a su plasticidad es posible cultivar un alto nmero de miniplantas de amaranto en un espacio reducido.

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las plantas se colocan en macetitas individuales y son separadas de las plantas masculinas. Para facilitar el trabajo se sugiere realizar la emasculacin cuando hay mejores condiciones de iluminacin y cuando las condiciones son ms confortables.

indeterminado hay produccin de nuevas flores masculinas y por ende de polen. La eliminacin de los glomrulos basales y del pice facilita la identificacin del rea donde hay que polinizar y cosechar.

Figura 6. Izquierda arriba, siembra de diferentes genotipos en invernadero en macetas pequeas con fines de cruzamientos artificiales. Derecha arriba, material necesario para la realizacin de cruzamientos artificiales en amaranto. Abajo izquierda sistema radicular de miniplanta. Abajo derecha manejo de miniplanta fuera de su macetita.

Emasculacin Es muy importante que la emasculacin se realice antes de que la antesis para evitar la autopolinizacin de las flores femeninas. Las flores femeninas y masculinas se pueden distinguir antes de la antesis. Las flores masculinas se hinchan antes de la extrusin de las anteras. Cada flor estaminada sobresale de las flores pistiladas menos maduras que la rodean en su mismo glomrulo. Se recomienda utilizar lentes amplificadores 5X para facilitar el trabajo, pues esto amplifica las partes florales a un punto en el que son fcilmente distinguibles. Algunos materiales de A. cruentus tiene flores que pueden ser distinguidas fcilmente a simple vista; sin embargo hay otras mucho ms pequeas. Es muy complicado eliminar todas las flores sin utilizar lentes amplificadores. Los glomrulos de la parte basal de la inflorescencia debe ser eliminados, de igual manera el pice de la inflorescencia deber ser eliminada ya que por ser de crecimiento

Para evitar contaminacin de polen es necesario limpiar pinzas, tijeras, navajas y manos con alcohol. Es importante secar con aire estos utensilios antes de tocar la planta para evitar quemar los tejidos tiernos de la misma. La eliminacin de las flores masculinas se realiza mejor con unas pinzas quirrgicas o de relojero y es mejor remover las anteras con una de las puntas de las pinzas que tratar de eliminar la flor completa ya que es muy fcil remover el glomrulo completo por ser tejidos muy tiernos y frgiles; otra opcin es cortar toda la flor estaminada con tijeras para cutcula. Despus de completar el despunte y emasculacin la inflorescencia se envuelve en algodn natural. Se coloca luego una cpsula de gelatina (de tamao 000) sobre la inflorescencia envuelta en el algodn; este acta como un pequeo colchn para ayudar a mantener la cpsula en su lugar, se pueden utilizar tambin glassines para cubrir la inflorescencia.
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Figura 7. Miniplanta de amaranto, emasculacin y despunte de inflorescencia en el proceso de cruzamientos artificiales en amaranto.

Polinizacin La maana siguiente a la emasculacin se colecta el polen de las plantas del progenitor masculino. El polen es ms abundante de la 8 AM a las 11 AM. La mayora de las variedades produce mayor cantidad de polen en das soleados y la produccin disminuya cuando se tienen periodos prolongados de das nublados. Es muy conveniente consultar el pronstico del tiempo y tratar de programar los cruzamientos fuera de periodos nublados. El polen se colecta en una mitad de la cpsula de gelatina. Se frota suavemente en las inflorescencias de las plantas del progenitor masculino y el polen caer en la cpsula. La polinizacin se realiza primero descubriendo la inflorescencia del progenitor femenino (previamente emasculada). El polen colectado se frota sobre la superficie estigmtica de la inflorescencia de la planta del progenitor femenino. Es muy difcil identificar cuando los estigmas estn ms receptivos por lo que este procedimiento se repite tres maanas seguidas, esto asegura mayor amarre de semillas. La estructura y biologa floral hace imposible que todas las flores estn receptivas el mismo da. El algodn y la cpsula de gelatina son colocados nuevamente sobre la pequea inflorescencia. Se deber tener cuidado de no mojar la cpsula de gelatina cuando se rieguen las plantas. Las
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plantas que son movidas a una maceta diferente requieren de mayor riego que las normales. Se debe utilizar algodn natural ya que de otra manera se forman hongos sobre algodones (cosmticos) sintticos. Se debe etiquetar cada planta o cruza con los datos de los progenitores femenino y masculino, esto ayuda para estar seguros que se ha realizado la cruza planeada. Marcadores morfolgicos Debido a que la forma de reproduccin en amaranto es predominantemente autgama es muy probable que se tengan autofecundaciones en la realizacin de cruzamientos artificiales por lo que se recomienda seleccionar progenitores contrastantes en algunos caracteres que pudieran servir para diferenciar las plantas F1 autofecundadas para eliminarlas. Caractersticas dominantes como color del hipocotilo, color de los cotiledones, color del follaje, color de la inflorescencia, longitud de la brctea, etc. pueden servir como marcadores morfolgicos y ayudar a identificar las plantas que representan un cruzamiento verdadero. Por ejemplo, si se elige un progenitor femenino verde y un progenitor masculino rojo la F1 ser toda roja; si se encuentran plantas verdes es seguro que se trata de plantas provenientes de una autofecundacin y por consiguiente hay que eliminarlas (Figura 9).

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Figura 8. Recoleccin de polen de progenitor masculino, aislamiento con algodn de inflorescencia polinizada, maduracin y cosecha de inflorescencia polinizada artificialmente.

Figura 9. En la F1 la utilizacin de marcadores morfolgicos ayudan a eliminar plantas procedentes de autopolinizacin. En este caso las plantas verdes son eliminadas por ser autofecundaciones.

Forma alternativa de hacer cruzamientos artificiales Se puede aprovechar siembras comerciales o experimentales en campo a fin de realizar cruzamientos artificiales. Solo que hay que utilizar marcadores morfolgicos para identificar las plantas F1 producto de cruzamientos verdaderos. Una recomendacin prctica es tener progenitores femeninos con marcadores recesivos tales como hipocotilo verde, cotiledones verdes, tamao de la brctea,

etc. Estos progenitores se llevan a siembras de materiales contrastantes en estos marcadores morfolgicos, pero con caractersticas ventajosas que se quieran pasar a variedades mejoradas (Figura 10). EL PROGRAMA DE MEJORAMIENTO Y SUS OBJETIVOS En la definicin de una planta modelo en un cultivo, se utilizan varias caractersticas, en el caso de amaranto, esta descripcin seguramente
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Figura 10. Se puede aprovechar las siembras comerciales para hacer cruzamientos controlados. Las plantas F1 de la semilla de la planta verde en la foto que resulten plntulas de color rojo sern cruzas verdaderas.

evolucionar conforme se aprenda ms sobre este cultivo, con la diversificacin de usos, as como de nichos climticos donde el amaranto demuestre ventajas comparativas. El ideotipo de la planta puede ser descrita como una planta con una altura de 1 a 1.5 m, madurez de acuerdo a los requerimientos de cada regin, vigor en la semilla, sin ramificaciones, semilla blanca, inflorescencia encima del follaje, resistencia a plagas y enfermedades, cada de semilla mnima, secado uniforme, semilla grande y alto rendimiento (Weber y Kauffman, 1990). Para forraje, la produccin de biomasa total ser muy importante. (Pandey, 1981). Componentes nutricionales y funcionales como protena, aceite, almidn, sern importantes para usos industriales y propsitos nutracuticos del amaranto. OBJETIVOS DEL MEJORAMIENTO GENTICO Se han mencionado varias caractersticas para describir una planta modelo de amaranto de grano. Esta descripcin seguramente evolucionar conforme se aprenda ms sobre este cultivo, con la diversificacin de usos, as como de nichos climticos donde el amaranto demuestre ventajas comparativas. El ideotipo de la planta de amaranto puede ser descrita como una planta
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con una altura de 1 a 1.5 m, madurez de acuerdo a los requerimientos de cada regin, vigor en la semilla, sin ramificaciones, semilla blanca, inflorescencia encima del follaje, resistencia a plagas y enfermedades, cada de semilla mnima, secado uniforme, semilla grande y alto rendimiento (Weber y Kauffman, 1990). Para la produccin de forraje la produccin de biomasa total ser muy importante. (Pandey, 1981). Componentes nutricionales y funcionales como protena, aceite, almidn, sern importantes para usos industriales y propsitos nutracuticos del amaranto. A continuacin se discuten algunas ideas sobre mejoramiento para algunas caractersticas y fuentes de germoplasma para las mismas. La gran mayora de los programas de mejoramiento tienen como objetivo fundamental el incremento en el rendimiento de grano, en amaranto esto ha sido ms enfocado a hacia la obtencin de rendimientos ms consistentemente. Desafortunadamente la prdida parcial o total de siembras comerciales de amaranto es muy frecuente, debido ya sea por fallas en la cosecha o por un pobre establecimiento a la siembra. Se han reportado rendimientos promedio alrededor de las tres toneladas, sin embargo, se han tenido reportes excepcionales por encima de las cinco toneladas

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(Espitia, 1990 y Mujica et al., 1997) esto indica que el incremento de mayores rendimientos es posible. Un aspecto importante en relacin al rendimiento es la influencia que tiene el ambiente sobre el mismo y la interaccin de los genotipos x ambiente. Espitia (1991) en un experimento de 30 genotipos de amaranto en ocho localidades de la Mesa Central detect gran variacin entre ambientes (desde favorables hasta crticos), entre genotipos y en la interaccin genotipo ambiente en todos los caracteres evaluados. Mediante el anlisis de parmetros de estabilidad (Eberhart y Russell, 1966), se identificaron 13 genotipos deseables por su rendimiento, 13 por su precocidad a madurez y 23 por su altura de planta. Cuatro genotipos se consideraron con adaptacin adecuada en los ambientes evaluados por su rendimiento y caracteres agronmicos, todos pertenecientes a la raza Mercado; por lo anterior, esta raza (A. hypochondriacus) es la que tiene mayor posibilidad de adaptacin para las condiciones de temporal de la Mesa Central de Mxico. Cada de semilla o dehiscencia es otro objetivo importante en un programa de mejoramiento de amaranto ya que la mayora de las variedades cultivadas presentan un alto grado de cada de semilla a la madurez. Esto se debe a la tendencia normal del utrculo a abrirse a la madurez de la planta. Con el movimiento del viento a con las sacudidas de las plantas durante la cosecha, una buena cantidad de semilla cae perdindose y reduciendo el rendimiento. Mediante mejoramiento gentico se puede reducir este problema desarrollando variedades que tengan utrculos indehiscentes; ya que existen especies relacionadas a las cultivadas con utrculo indehiscente y poblaciones nativas cultivadas con menor cada de grano (Hauptli et al., 1979; Brenner y Hauptli, 1990). La caracterstica de utrculo indehiscente se transfiri de A. Powellii a A. hypochondriacuas y A. cruentus mediante mejoramiento convencional (Brenner, 1992). El carcter de dehiscencia-indehiscencia involucra probablemente dos o pocos genes Mendelianos (Brenner et al., 2000). El carcter indehiscente es un objetivo muy importante en los programas de fitomejoramiento de amaranto para grano, debido a la prdida de las semillas. Con respecto a ste tema algunos resultados se han obtenido

transfiriendo de A. powellii (PI 572261) a A. cruentus y A. hypochondriacus usando las tcnicas tradicionales de mejoramiento. Frecuentemente se menciona el incremento del peso o tamao de semilla como un objetivo del programa de mejoramiento gentico de amaranto (Weber y Kauffman, 1990). Semillas de mayor tamao incrementaran seguramente el vigor de plntula, facilitara el manejo, incrementara la eficiencia en el reventado; sin embargo, el incremento del tamao de la semilla tambin traera consigo una reduccin en la protena, si el incremento se da en el endospermo, en oposicin a que si se diera en el embrin o en los cotiledones. Kauffman (1981) no pudo incrementar el tamao de la semilla por seleccin. Hay especies relacionadas que podran servir como germoplasma para incrementar el tamao de la semilla, los mayores tamaos de semilla en el gnero se dan en A. pumilus y A. cannabinus, alcanzando ms de 0.2 g por cada 100 semillas. Espitia (1994) reporta que la poliploida podra ser otra opcin de incrementar el tamao de semilla, este mismo autor reporta que las accesiones de crecimiento determinado presentan ligeramente mayor tamao de semilla. Con el fin de facilitar la cosecha mecanizada y reducir el problema de acame es necesario reducir la altura de planta. Poblaciones nativas de las razas Azteca y Mixteca pueden alcanzar alturas de planta sobre los 3 m bajo condiciones ptimas de crecimiento; mientras que poblaciones de las razas Prima y Picos pueden alcanzar 0.5 m en condiciones limitantes. Se han seleccionado lneas de baja estatura en las razas Africana, Nepal y Sudamericana; otras fuentes de plantas de baja estatura se han identificado en cruzas de A. hypochondriacus x A. cruentus, A. hypochondriacus x A. hybridus y A. hypochondriacus x A. quintensis (Weber y Kauffman, 1990; Pandey, 1982; Kulakow, 1987). Se ha indicado que mtodos de seleccin reciproca recurrente podran ser de utilidad para explotar las aptitud combinatoria general, as como efectos aditivos de genes menores para altura de planta (Pandey, 1982). En la raza Nepal se han encontrado genotipos con entrenudos cortos que podran utilizarse para reducir la altura de planta en este cultivo.
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Figura 11. Semillas de amaranto de diferente tamao, los materiales cultivados generalmente son de mayor tamao.

Figura 12. Plantas de amaranto de gran altura y plantas de entrenudos cortos.

Un objetivo importante en un programa de mejoramiento debe ser la capacidad de reventado de la semilla. En Mxico la semilla de amaranto se ha empleado tradicionalmente en la elaboracin de la golosina denominada alegra, que se obtiene con el grano tostado en casa, proceso en el que no existe ningn control sobre tiempo o temperatura de reventado, contribuyendo a mayor desperdicio de materia prima y prdidas de nutrientes (Bressani, 1984). El reventado de la semilla de amaranto conlleva varios propsitos: impartir sabor, color y aroma agradables, mejorar la relacin de eficiencia protenica (PER) as como la digestibilidad y la destruccin de factores antifisiolgicos, lo que hace ms nutritiva a la semilla (Beschart
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et al., 1981; Jaik y Tena, 1984; SnchezMarroqun, 1980; Tena, 1984). Los resultados en el incremento del volumen de la semilla van desde 390% (Jaik y Tena, 1984) hasta 1050% (Teutonico y Knorr, 1985) con prdidas variables de peso y nutrientes. El alto volumen de reventado del amaranto se atribuye al reducido tamao de los grnulos de almidn (de una a 3); a su forma esfrica, angular o poligonal; a su bajo contenido de amilasa (7.2%), bajo poder de hinchazn, alta solubilidad, gran capacidad de retencin de agua y alto rango de temperatura de gelatinizacin. Otros factores importantes en el volumen de expansin son la humedad del grano en el momento del reventado, el tiempo y las condiciones de almacenamiento, la temperatura

Captulo XVI. Estrategia y metodologa para el mejoramiento gentico del amaranto

de reventado, la madurez de la semilla y el fenotipo de la planta. En Mxico, Vzquez et al. (1988) estudiando la capacidad de reventado de genotipos de diferentes razas encontraron que los genotipos 78S-125-2-4 de la raza Nepal, as como 153-5-3 y 8-1-3 de la raza Mercado, todos de la especie A. hypochondriacus sobresalieron por su capacidad de reventado. Adems de los objetivos antes mencionados pueden haber otros caracteres a considerar en un programa de mejoramiento para caracteres especiales del amaranto que a la fecha han sido poco estudiados; a este respecto

MTODOS DE MEJORAMIENTO Por tratarse de una especie preponderantemente autgama con polinizacin cruzada frecuente (Espitia, 1994), los mtodos de mejoramiento aplicables para el amaranto son aquellas desarrolladas para plantas autgamas. La eleccin del mtodo de mejoramiento para amaranto estar en funcin de los objetivos del mejoramiento, las caractersticas del material de inicio y de los recursos disponibles. Los mtodos de mejoramiento aplicables al amaranto son la seleccin a partir de poblaciones nativas y la hibridacin. La seleccin a partir poblaciones

Figura 11. Semillas de amaranto de diferente tamao, los materiales cultivados generalmente son de mayor tamao.

Cai et al. (1998) evaluaron genotipos para la produccin de betacianina, la cual podra ser utilizada como colorante en alimentos. Los aceites del amaranto incluyen el escualeno, que es muy til como lubricante y para uso cosmtico (Becker, 1994). El almidn por sus caractersticas tambin podra tener usos especiales, tiene potencial para la industria de las pastas (Rayas et al., 1996) y por lo pequeo de los grnulos de almidn podra ser utilizado en la industria de los cosmticos y en aerosoles (Schnetzler y Breene, 1994). El amaranto tambin tiene un inusual nmero de ismeros de la vitamina E, adems de una serie de compuestos que le confieren al amaranto propiedades funcionales que pueden mejorar la salud humana.

nativas sobresalientes es quiz el mtodo de mejoramiento ms utilizado en amaranto; sin embargo est limitado al aprovechamiento a la explotacin de la variabilidad gentica disponible en forma natural. Por este mtodo se han obtenido una buena cantidad de variedades de amaranto como Revancha, Nutrisol, Rojita, Amaranteca y Dorada (Espitia et al., 2010). En el caso del amaranto es necesario iniciar programas de mejoramiento a partir de la hibridacin de diferentes progenitores con caractersticas sobresalientes que al combinarse permitan obtener mejores variedades tanto en lo agronmico como el calidad de industrializacin. En este documento nos centraremos en esta ltima metodologa.
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LA HIBRIDACIN La hibridacin como mtodo de mejoramiento consiste en la combinacin de caracteres favorables presentes en variedades o accesiones diferentes con la finalidad de combinarlos en el hbrido y posteriormente a partir de la F2 aplicar los mtodos apropiados de seleccin para identificar lneas que presenten los caracteres favorables de los progenitores. La hibridacin implica la definicin previa de los objetivos del programa de mejoramiento gentico, el conocimiento del material gentico o las caractersticas del germoplasma disponible para el mejoramiento y el conocimiento de los mtodos apropiados de hibridacin (Poehlman y Slepper, 1995). Cuando las plantas cruzadas alcanzan la madurez fisiolgica, se procede a cosechar individualmente cada planta y se trilla por separado conservando sus registros respectivos. La semilla obtenida por este proceso, se siembra en surcos individuales para generar las plantas de la primera generacin filial conocida con F1. Cada progenie proveniente de una cruza, se verifica su condicin hbrida mediante la expresin en la progenie de los marcadores morfolgicos presentes en el progenitor masculino. Este procedimiento nos permite distinguir los hbridos verdaderos frente a los provenientes de autofecundaciones accidentales. MTODO GENEALGICO O DE PEDIGREE El mtodo de seleccin genealgica o pedigree (Figura 14) es un mtodo basado en la hibridacin. El trabajo se inicia con la identificacin de los progenitores de inters para combinar sus caracteres mediante la hibridacin, luego realizar la hibridacin para generar la primera generacin filial o F1. Las progenies F1 provenientes de verdaderos cruzamientos, se autofecundan artificialmente. En el manejo de la F1, se deben tomar medidas agronmicas apropiadas para tener las progenies lo ms vigorosas posible, puesto que el tamao de la poblacin segregante F2 depende del nmero de semillas que se pueda obtener por cada unidad de planta F1. Una vez identificada las plantas hbridas, se procede etiquetarlas y posteriormente se pasan a macetas grandes con el fin de tener unos 20 gramos de semilla por planta, esto en caso de que no se
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hayan sembrado en campo; esto asegura semilla suficiente para sembrar la F2 en una poblacin grande (2000-5000 plantas) y as obtener la F2 con una poblacin suficiente para que las progenies puedan expresar las combinaciones posibles donde se pueda ingresar con la seleccin por caracteres favorables. A la madurez fisiolgica de las plantas, las F1 se cultivan en condiciones apropiadas para favorecer un mayor desarrollo de las plantas y de esta forma obtener mayor cantidad de semilla por planta individual (Poehlman y Slepper, 1995). La poblacin F2 se obtiene a partir de semillas cosechadas en F1. Esta poblacin que debe ser necesariamente grande para favorecer a la expresin de todos los segregantes posibles, esta constituye el material base para la seleccin por pedigree. Se sugiere tener 2000 a 5000 plantas F2, entre mayor sea el nmero mejor; Gandarillas (1979) sugiere una poblacin de 2000 plantas por cruza para quinoa (Chenopodium quinoa), un cultivo muy semejante a amaranto. La seleccin en esta poblacin consiste en la aplicacin de los criterios de seleccin establecidos para el mejoramiento en una forma similar a la seleccin surco-panoja, pero con la diferencia de mantener un sistema de registro adecuado de progenitores y progenie, en otras palabras, consiste en llevar el registro de toda la genealoga de las diferentes progenies. Cada planta seleccionada debe tener suficientes datos que permita reconocer sus ancestros y tambin sus descendientes. Las lneas avanzadas que se obtienen por este mtodo son lneas puras con toda la informacin pertinente a sus ancestros. Se debe incluir como testigo la variedad comercial a superar cada cierto nmero de unidades, esto con la finalidad de comparar la expresin de numerosos caracteres que son criterios de seleccin. Lescano (1994) en sus trabajos con quinoa indica que primero se selecciona la lnea y despus el individuo. Las semillas de las plantas seleccionadas de la F2 se siembran en panoja por surco y el tamao de la familia debera ser lo suficientemente grande para mostrar la variabilidad existente en ella. Si se cultivan 50 plantas ser tamao suficiente para cada familia F3. Una variedad control deber incluirse al menos cada 20 hileras y el nmero de selecciones raramente excede el nmero total de familias F3.

Captulo XVI. Estrategia y metodologa para el mejoramiento gentico del amaranto

Puede asumirse que se hacen 150 selecciones y que 25 de ellas se descartan despus de llevar el material al laboratorio La generacin F4 es similar a la anterior se tienen alrededor de 125 familias. An cuando las familias se muestren homogneas se har seleccin de planta. La F4 ofrece una buena oportunidad para reducir el tamao de la poblacin. Esta reduccin se hace visualmente y analizando el pedigree. Aqu suponemos que se cosechan 100 plantas procedentes de 40 familias y que el nmero se reduce a 90, despus de analizarlas en el laboratorio. El manejo de la F5 es similar a la F4. La diferencia radica en que usan parcelas ms grandes, cuyas dimensiones se asemejan bastante a las condiciones de campo, en amaranto se recomienda sembrar tres surcos de 5 m. Como en F4, se eligen alrededor de 100 plantas, que se reducen luego a 80, despus de pasar por el laboratorio. Al hacer las selecciones, asumimos que las plantas son homocigticas. Por tanto, las selecciones deben hacerse de familias que se muestren uniformes y en rendimiento de las mismas, esto se denomina como pruebas preliminares de rendimiento. En la generacin F6 la unidad de seleccin no es la planta individual, sino la familia derivada de una nica planta. En este momento las parcelas se cosechan en conjunto y no separadamente la semilla de cada planta. Por tanto, la densidad de siembra se aproxima mucho a la siembra que se hace con fines comerciales. El tamao de siembra ser lo suficientemente grande como para permitir una identificacin visual rpida de cada familia y si es posible tambin obtener datos de rendimiento. Si se dispone de abundante semilla, se deben hacer repeticiones de parcela. Si se tiene 80 selecciones la parcela de siembra ser similar a la F5. La seleccin, al igual que la F5, tiene en cuenta, no slo el pedigree, sino tambin el comportamiento en parcela. Probablemente 15 de las familias ms uniformes y prometedoras se conservan despus de hacer evaluacin visual, anlisis de rendimiento y anlisis de laboratorio. En el F7 y generaciones sucesivas estas lneas seleccionadas pasan a ensayos de rendimiento en localidades hasta identificar la ms sobresaliente en todas las localidades o identificar variedades con adaptacin especfica a ciertas condiciones o localidades (Poehlman. y Slepper, 1995).

El mtodo de seleccin por pedigree es muy preciso en el seguimiento de las lneas y requiere gran conocimiento del mejorador en cuanto a autofecundacin e hibridacin, manejo de progenies, seleccin de progenies, registro de progenies y evaluacin de progenies. Es aqu donde el proceso de mejoramiento se puede convertir de un proceso cientfico a arte ya que cada mejorador le imprime su propia personalidad a la seleccin. Este mtodo permite ms oportunidades que cualquier otro mtodo para evaluar los resultados del cruzamiento si el mejorador conoce bien el cultivo y es lo suficientemente habilidoso para estimar el comportamiento en campo de cada planta en particular. Para caracteres cualitativos, tales como resistencia a enfermedades este mtodo permite la eliminacin temprana de los tipos que no tienen futuro alguno. De esta forma, se ahorra tiempo y espacio para el material prometedor. MTODO MASIVO La diferencia entre el mtodo masivo o masal (Figura 15) y el de pedigree radica en el momento en que se hace la seleccin. El mtodo masal a diferencia del de pedigree cultiva las generaciones tempranas en masa. El nmero de generaciones cultivadas de esta forma, est en funcin del mejorador y de la naturaleza del cruzamiento. Algunos piensan que la homocigosis absoluta no es necesaria al principio y hacen seleccin de plantas para formar familias y selecciones en la F5 o F6. Otros mejoradores hacen la seleccin en la F7 o F8, o incluso ms tarde. La ltima generacin masal a partir de la cual se seleccionarn las plantas que formarn lneas se plantarn espaciadas (como en la F2 del mtodo pedigree). De aqu en adelante, ambos mtodos son esencialmente iguales. El mtodo masal y el de pedigree no son mutuamente excluyentes. Se pueden combinar de diversas manera por ejemplo se cultivan las poblaciones hbridas en masa hasta que las circunstancias sean favorables para la expresin de caracteres importantes, de aqu se realiza seleccin por planta individual y se sigue con las poblaciones aplicando el mtodo de pedigree. Otros autores han preferido usar el mtodo de pedigree en generaciones tempranas para eliminar fenotipos indeseables rpidamente y luego las mejores plantas en una poblacin y continuar con el mtodo masal (Poehlman y Slepper, 1995).
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X F1 F2

F3

F4

F5

F6

F7

Ensayo de rendimiento

Figura 14. Mtodo genealgico o de pedigree para el mejoramiento en amaranto.

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X F1

F2

F3

F4

F5

F6

Pruebas preliminares de rendimiento

F7

Ensayo de rendimiento con repeticiones y localidades

Figura 15. Mtodo masal o masivo para el mejoramiento en amaranto.

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El mtodo masivo recientemente aplicado a la quinua consiste en el cruzamiento de dos progenitores identificados por sus caractersticas de inters y adems portadores de caracteres morfolgicos de herencia simple. Las progenies F1 que son hbridos verdaderos y han alcanzado la madurez fisiolgica, se cosechan y se trillan juntas. Luego, la semilla masiva se siembra en una parcela con superficie que permita obtener una poblacin aproximada de 30,000 plantas. En las generaciones posteriores, se repite el mismo procedimiento hasta llegar a la F5 o F6. Posteriormente, en la F6 o F7, se procede con la seleccin sea masal o individual segn los criterios establecidos por el programa. Su bajo costo deriva del poco requerimiento en mano de obra en el manejo de la semilla y del campo de produccin, puesto que se requiere menos mano de obra y costo de materiales. Una de las desventajas es que no se tiene un seguimiento preciso de las progenies (Gandarillas, 1979). COMENTARIO FINAL La amplia gama de caractersticas que tienen el amaranto desde el punto de vista nutricional, nutracutico, usos alimenticios y cualidades agronmicas, hacen pensar que el amaranto puede ser una alternativa para coadyuvar a la falta de alimentos, a la desnutricin y a la salud humana; sin embargo, presenta todava muchas caractersticas agronmicas desventajosas como: tamao de la semilla, ramificacin lateral, dehiscencia, maduracin indeterminada, altura de planta, germinacin escalonada, complejo de especies; otros aspectos como superficie de cultivo muy limitada y mercado muy voltil; pero sobretodo, que a pesar de todas sus bondades se le sigue considerando como un cultivo marginado. Las caractersticas agronmicas desventajosas se pueden solventar con un programa de mejoramiento gentico serio, pues existe el germoplasma con las fuentes de resistencia o caractersticas deseables; lo que resta es que se le de la importancia debida al cultivo y se destinen recursos para investigacin y transferencia de tecnologa; adems de la metodologa para mtodos de mejoramiento que involucran la hibridacin de diferentes genotipos con caractersticas ventajosas que se podrn juntar en variedades mejoradas que hagan del amaranto un cultivo sustentable.
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Captulo XVII

Seleccin y adaptacin de variedades criollas de amaranto (Amaranthus cruentus L.) en el Noreste de Mxico
SELECTION AND ADAPTATION ON LANDRACES OF GRAIN AMARANTH (Amaranthus cruentus L.) IN NORTHEAST MEXICO

Gabriel Alejandre Iturbide1*, Ciro. G. S. Valds Lozano2 Jess Garca Pereyra3


1Instituto Politcnico Nacional, Centro Interdisciplinario de Investigacin para el Desarrollo Integral Regional, Unidad Durango. Calle Sigma 119, Fraccionamiento 20 de Noviembre II, CP. 34220, Durango, Durango, Mxico, Tel. (01 618) 8142091 y Fax (01 618) 8144540. 2 Divisin de Estudios de Posgrado, Facultad de Agronoma, Universidad Autnoma de Nuevo Len, Carretera Zuzua Marn, Km. 17.5, CP 66700, Marn N. L., Mxico, Tel. y Fax (825) 2480101 3 Instituto Tecnolgico del Valle del Guadiana, Apartado Postal 393, Durango, Dgo. *Autor para correspondencia: ghiturbide@hotmail.com

RESUMEN Durante los ciclos agrcolas de tardo (ciclo 1, C1) el cual inicia en agosto y finaliza en diciembre y temprano (ciclo 2; C2), que inicia en febrero y finaliza en julio del ao 2003, y el temprano (Ciclo 3; C3) de 2004 se evaluaron en Marn N. L. seis variedades criollas de germoplasma de amaranto (Amaranthus cruentus L.) proveniente de los estados de Guerrero, Morelos y Puebla. Se encontr que el mejor ciclo agrcola para seleccionar las variedades criollas fue el ciclo temprano. Los mejores promedios para rendimiento de grano fueron obtenidos con las variedades Santiago Xochistlahuaca, Morelos Anaranjada, y Morelos Cuarteada. Los mejores promedios obtenidos de la interaccin ciclo por variedad se observaron en el C1 temprano 2003 y el C2 tardo 2003 donde las mejores variedades fueron: Santiago Xochistlahuaca y Morelos Anaranjada. En el C3 temprano de 2004 los mejores promedios de rendimiento de grano se registraron en las variedades Morelos Cuarteada y Morelos Rosada. De acuerdo con los resultados de esta investigacin las variedades Morelos Amarilla y Morelos Anaranjada pueden ser recomendadas para usarse en los tres ciclos agrcolas evaluados.

Palabras clave: A. cruentus, germoplasma, rendimiento de grano, ciclos agrcolas. ABSTRACT During early 2003 and 2004 crop season six landraces of grain amaranths (Amaranthus cruentus L.) were evaluated in Marin, Nuevo Len, Mxico. These landraces were collected in the Mexican states of Guerrero, Morelos and Puebla. Results showed that early crop season is the best in order to evaluate the amaranth landraces. Varieties Santiago Xochistlahuaca, Morelos Anaranjada and Morelos Cuarteada showed the highest grain yields. Varieties by growing cycle interaction in average yield data were significant (p<0.01) and the best performance was for 2003 early and 2003 late crop season, and the better yield performance was observed in Santiago Xochistlahuaca and Morelos Anaranjada. While, during the 2004 early crop season Morelos Cuarteada and Morelos Rosada showed the highest grain yields. According to the results Morelos Amarilla and Morelos Anaranjada may be the recommended cultivars for the three evaluated crop seasons.

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Key words: Amaranthus cruentus, grain yield, germplasm, crop season. INTRODUCCIN Mesoamrica es una regin donde se domesticaron varios cultivos, dentro de ellos el amaranto (Amaranthus spp.), este grano constituy uno de las principales fuentes de alimentacin junto con el maz (Zea mays L.), frijol (Phaseolus vulgaris L.), calabaza (Cucurbita spp.) y chile (Capsicum annuum L.). Las culturas prehispnicas utilizaron el amaranto tanto para consumo humano como para usos religiosos, debido a ello el amaranto era cultivado a gran escala bajo el sistema intensivo de chinampas que desarrollaron los Aztecas en la zona lacustre del Valle de Mxico (Sauer, 1993). Sin embargo, la importancia como cultivo decreci durante el Virreinato de la Nueva Espaa, motivado por la supresin de cultivos nativos y la siembra de cultivos trados de Europa, los cuales desplazaron a las especies vegetales que regularmente se sembraban por los diversos grupos tnicos que habitaron el actual territorio nacional. Otro aspecto que contribuy al declive del amaranto fue la prohibicin de la siembra por motivos religiosos ya que era un grano que se utilizaba en ese tipo de ceremonias, entre los diversos grupos tnicos principalmente los aztecas (Williams 1995; Angus et al., 1982). El amaranto qued relegado a las reas montaosas y marginales donde se cultivaba antiguamente, actualmente se pueden encontrar variedades nativas en los estados del centro y sur del pas. Las especies botnicas que se encuentran en el pas son: A. hypochondriacus y A. cruentus dentro de ellas se encuentra una gran variedad de colores en la hoja, tallo y pancula. La distribucin geogrfica de estas dos especies est bien definida; generalmente A. cruentus se cultiva en zonas clidas y cuyo rango de altitud vara de los 200 a 1800 msnm. En cambio A. hypochondriacus se localiza arriba de los 1900 msnm. La riqueza protenica del grano flucta de 14 a 17%; sin embargo, en las zonas donde actualmente se siembra amaranto, el grano es utilizado principalmente para la elaboracin artesanal del dulce conocido como alegra (Paredes, 1994).
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Dentro de la gran variabilidad que existe en el amaranto en las zonas de cultivo es posible seleccionar variedades para tratar de uniformizar la produccin de estas plantas nativas y que puedan ser sembradas en reas de agricultura intensiva como el norte y noreste del pas. Esta sera una de las formas de impulsar el cultivo de esta especie adems de tratar de incorporarlo a la dieta general de la poblacin con el propsito de aprovechar su riqueza nutritiva. Actualmente el amaranto es cultivado en pequeas superficies en los estados de Guerrero, Morelos, Mxico, Michoacn, Oaxaca, Puebla, Tlaxcala, Nayarit, Veracruz y el Distrito Federal; y a nivel de huerto familiar, en la zona serrana de Sinaloa, Sonora, Chihuahua y Durango. En aos recientes ha habido un gran inters en el consumo de este grano, tanto a nivel nacional como internacional dadas sus propiedades nutritivas (Paredes, 1994; Senft, 1979), por lo que existe para l un mercado potencial relevante, el cual puede extenderse a otras reas agrcolas del pas. Por lo anterior es importante disponer de material uniforme adaptado a las condiciones agrcolas de estas regiones. En estudios agronmicos recientes Garca et al. (2004) encontraron que en el rea de Marn, en el estado de Nuevo Len en el ciclo OI o temprano (febrerojunio) A. hypochondriacus presenta rendimientos de grano muy bajos, en tanto que A. cruentus rinde bien en el ciclo PV o tardo (julionoviembre); A. hypochondriacus encuentra condiciones similares a la altiplanicie del norte, donde el ciclo agrcola para la mayora de los cultivos es primavera verano, como en el caso del Valle del Guadiana, Durango, durante el ciclo PV (mayo octubre), donde rinde bien, en tanto que A. cruentus tiende a rendir igual o ligeramente menos que A. hypochondriacus; por ello, A. cruentus es la especie que potencialmente tendra mayor posibilidad de adaptarse a siembras comerciales en el noreste de Mxico en siembras del ciclo temprano y tardo y A. hypochondriacus de manera especfica para el ciclo tardo en el noreste y el ciclo PV en el norte de Mxico. Es importante disponer de material criollo uniforme debido a que es necesario contar con un mayor nmero de variedades de

Captulo XVII. Seleccin y adaptacin de variedades criollas de amaranto (Amaranthus cruentus L.) en el noreste de Mxico

esta especie. Esto permitira garantizar que el amaranto para produccin de grano fuera un cultivo que se pueda sembrar a gran escala en el noreste de Mxico. Ante esta perspectiva se evaluaron en Marn N. L. 11 variedades criollas de A. cruentus, provenientes de diversas localidades del centro y sur del pas, en las que se consider necesario determinar su potencial agronmico para produccin de grano y sus posibilidades de mejora gentica, para lo cual es esencial conocer la variabilidad gentica disponible dentro de cada una de ellas para ser explotada por seleccin. Al respecto, varios autores han evaluado la variacin gentica existente en variedades criollas de amaranto (Hauptli y Jain, 1984; Vaidya y Jain, 1987; Kulakow y Jain, 1987; Joshi, 1986; Lehmann et al., 1991) los cuales, han encontrado alta variacin de rendimiento de grano dentro de las variedades ensayadas. Para el presente estudio se parte del supuesto de que en las once variedades criollas de amaranto, al provenir de diferentes localidades con condiciones agroecolgicas dismiles, debern existir diferencias en promedios de rendimiento de grano por planta; el objetivo del presente trabajo fue determinar, con base a rendimiento de grano, el potencial de produccin de las 11 variedades criollas de A. cruentus L. introducidas a Marn N. L. y determinar cules de ellas, se debern considerar para escoger las mejores variedades criollas y sus familias respectivas dentro de cada variedad, y que stas variedades criollas de A. cruentus puedan ser llevadas a produccin comercial en el Noreste de Mxico.

MATERIALES Y MTODOS El presente trabajo se desarroll en el Campo Experimental de la Facultad de Agronoma de la Universidad Autnoma de Nuevo Len, en Marn, N. L., localizado en las coordenadas: 25 56 LN y 100 03 LO; a una altitud sobre el nivel del mar de 375 m. Los suelos del rea de estudio son tipo calcreo sedimentario, la textura del suelo es arcillosa, el pH es de 7.9, la vegetacin es matorral xrofilo caducifolio, la humedad relativa vara de 40-90%, donde las temperaturas variaron de 2 a 40C (Garca, 1964). PRIMER CICLO DE SELECCIN EN SIEMBRA TEMPRANA La siembra experimental para el primer ciclo de seleccin (C1) se realiz el 7 de abril de 2003, se consideraron 11 variedades criollas de amaranto (A. cruentus L.) provenientes de los estados de Guerrero, Morelos y Puebla (Cuadro1), al final de los tres ciclos de produccin solo se tuvieron datos completos de seis variedades. La variabilidad gentica de cada una de las diez primeras colectas estuvo representada por diez accesiones o familias, se les consider as por pertenecer al mismo sitio de colecta y fueron ingresados al banco de germoplasma de la Facultad de Agronoma (familias, para fines de seleccin se consideraron todas la plantas que fueron colectadas en un metro cuadrado), que se incluyeron como tratamientos y fueron establecidas bajo un diseo de bloques completos al azar con dos repeticiones en parcelas de 5 m de largo, la colecta 11 tuvo slo tres familias

Cuadro 1. Variedades criollas de A. cruentus evaluadas en Marn, N. L., durante el primer ciclo, temprano 2003.

Nmero de variedad 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Nombre de la variedad criolla Santiago Xochistlahuaca, Gro. Cuexcomapa, Gro. La Loma, Gro. Morelos Morada, Edo. de Morelos Morelos Cuarteada, Edo. de Morelos Morelos Rosada, Edo. de Morelos Morelos Anaranjada, Edo. de Morelos Morelos Amarilla, Edo. de Morelos La Esperanza, Gro. Santiago Tetla, Pue. Chilapa, Gro.
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por la disponibilidad de plantas donde fueron colectadas. Durante todos los ciclos de seleccin se parti de la colecta original. En los 11 ensayos se incluyeron tres testigos: Colecta 33, Huazulco y Acapetlahuaya y el compuesto balanceado (formado por 20 gramos de semilla proveniente de cada una de las accesiones) de las diez accesiones para hacer un total de 14 tratamientos en las variedades criollas 1 a 10, y 7 tratamientos en la variedad criolla 11, la cual se form con las tres accesiones, tres testigos y compuesto balanceado. La siembra se efectu colocando la semilla en el fondo del surco en suelo hmedo, posteriormente se cubri con una capa ligera de tierra. La emergencia de las plntulas se observ a los tres das de haber efectuado la siembra. Se realizaron deshierbes manuales, no se presentaron plagas, ni enfermedades, tampoco se efecto fertilizacin, el raleo se realiz cuando las plantas alcanzaron una altura promedio de 0.4 m, dejndose plantas separadas a una distancia aproximada de 0.1m. Se suministraron tres riegos de auxilio durante el ciclo del cultivo. Se cosecharon manualmente plantas de los surcos centrales y con competencia completa presentes en cada parcela, se trillaron individualmente y el grano se separ con la ayuda de cribas y posteriormente se procedi a medir el rendimiento promedio de grano en gramos por planta. SEGUNDO CICLO DE SELECCIN EN SIEMBRA TARDA La siembra experimental del segundo ciclo (C2) de cultivo se realiz el 7 de septiembre de 2003, fueron establecidas bajo un diseo de bloques completos al azar con dos repeticiones en parcelas de 3 m de largo. El arreglo y composicin de tratamientos, as como el manejo agronmico del experimento fue similar al utilizado en la primera fecha. La emergencia de las plntulas se observ a los cuatro das de haber efectuado la siembra. Se realizaron deshierbes manuales, el raleo se efectu cuando las plantas alcanzaron una altura promedio de 0.20 m, dejndose las planta separadas a una distancia aproximada de 0.1 m. Se suministraron tres riegos de auxilio durante el ciclo del cultivo. La variable estudiada fue rendimiento de grano por planta. Se cosecharon manualmente plantas con competencia completa presentes en cada parcela,
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desgranndolas individualmente para medir el rendimiento de grano en gramos por planta. TERCER CICLO DE SELECCIN EN SIEMBRA TEMPRANA En el tercer ciclo (C3) de seleccin temprano de 2004 se integr con diez variedades criollas de A. cruentus L. provenientes de los estados de Guerrero, Morelos y Puebla, de las cules siete se adaptaron al ambiente de trabajo y que fueron seleccionadas en el C2. Con las diez familias de cada variedad criolla original se form un compuesto balanceado que identificara la variedad criolla. Las diez familias y el compuesto integraron un total de 11 tratamientos en cada una de las diez variedades. Cada una de las diez variedades fue sembrada bajo un diseo de bloques completos al azar con 11 tratamientos (las diez familias y el compuesto balanceado), dos repeticiones y parcelas de 0.7 x 1.20 m. Los once experimentos se sembraron en el ciclo PV el 26 de marzo de 2004 en suelo hmedo. Se eliminaron plntulas, cuando alcanzaron una altura promedio de 0.20 m dejando una cada 0.1 m. Se suministraron tres riegos de auxilio durante el ciclo del cultivo y se hicieron deshierbes manuales. Se cosecharon manualmente un nmero variable de plantas con competencia completa, se trillaron manual e individualmente para medir el rendimiento de grano en gramos por planta. Al final de los tres ciclos agrcolas solo se consideraron seis variedades. Los datos de los tres ciclos se analizaron en forma separada con el paquete de cmputo de la Facultad de Agronoma UANL versin 2.5. Los datos de los tres ciclos agrcolas en conjunto se analizaron con el paquete estadstico de SPSS versin 10, utilizando el diseo de bloques completos al azar (dos repeticiones), considerando los efectos principales de repeticiones, ciclos, variedades y familias, las interacciones simples correspondientes y la de ciclos x variedades x familias. Para las pruebas de comparacin de medias se utiliz la diferencia mnima significativa la cual se calcul con la frmula DMS = t (, g.l.e) 2CME /r, donde CME es el cuadrado medio del error general, r=nmero de repeticiones (observaciones) que permitieron el clculo de las medias a comparar, segn el caso, considerando ni= observaciones debidas a los bloques, nj= observaciones debida

Captulo XVII. Seleccin y adaptacin de variedades criollas de amaranto (Amaranthus cruentus L.) en el noreste de Mxico

a ciclos, nk= observaciones debidas a variedades, nl= familias dentro de variedades (ni= 2, nj= 3, nk= 6 y nl= 9) en el anlisis de varianza. RESULTADOS Y DISCUSIN En el Cuadro 2 se muestra las colectas de amaranto que en el segundo ciclo, tardo de 2003 fueron seleccionadas as como sus das de siembra a la cosecha, los cuales no tuvieron mucha variacin en los tres ciclos ensayados. ANLISIS DE VARIANZA DE LOS TRES CICLOS EN CONJUNTO En el Cuadro 3 se muestra el anlisis de varianza de los experimentos realizados durante los tres ciclos agrcolas en Marn, N. L. Se observa que de las doce fuentes de variacin, cuatro fueron no significativas y en ocho se detect diferencia significativa, siendo tambin significativa la

interaccin Ciclos x Variedades x Familias, lo que indica que el comportamiento de las familias dentro de cada variedad y dentro de cada ciclo fueron diferentes, por lo que las comparaciones por DMS se efectuaron para el efecto principal de ciclos y variedades dentro de ciclos y para identificar con fines de seleccin las mejores familias que se compararon stas dentro de cada variedad, independientemente de los ciclos. ANLISIS DE CICLOS DE CULTIVO POR SEPARADO En el Cuadro 4, se presenta la comparacin entre los tres ciclos agrcolas, se muestra que el mejor promedio (34.01 g/planta) se obtuvo en el C3 que corresponde al temprano de 2004. En cambio el segundo mejor promedio (33.86 g/ planta) se registr durante el C1, siendo ambos estadsticamente iguales, en tanto que el C2 fue inferior en rendimiento de grano respecto a los

Cuadro 2. Variedades criollas de A. cruentus seleccionadas en Marn N. L.

Nmero de variedad 1 2 3 4 5 6

Nombre de la variedad criolla Das de siembra a cosecha 80 Santiago Xochistlahuaca 120 Morelos Morada 110 Morelos Cuarteada 120 Morelos Rosada 115 Morelos Anaranjada 120 Morelos Amarilla

Cuadro3. Anlisis de varianza de los experimentos de amaranto durante los tres ciclos de seleccin realizados en Marn N. L.2003-2004

Grados Fuente de variacin de libertad Modelo corregido 169 Intercepto 1 Repeticiones 1 Ciclos 2 Variedades 5 Familias 8 Ciclos por repeticiones 2 Ciclos X variedad 10 Ciclos X familia 16 Variedades X repeticiones 5 VariedadesXFamilias 40 CiclosXVariedadesXFamilias 80 Error 154 Total 324 Total corregido 323
*Significativo P (0.05), NS=No significativo.

Cuadrados Suma de medios cuadrados 4602.5280 77827.734 243596.000 243596.0990 1071.4780 1071.478 27282.716 13641.3580 1377.5658 6887.829 175.1710 1401.370 718.2740 1436.548 1470.7680 14707.682 131.6465 2106.344 124.4360 622.184 146.6830 5867.331 205.5530 1644.252 15926.677 33735.510 93754.400

F 4.453 2355.400 10.360 131.903 13.320 1.694 6.945 14.221 1.273 1.203 1.418 1.988

P>F 0.0000* 0.0000* 0.0020* 0.0000* 0.0000* 0.1040 NS 0.0010* 0.0000* 0.2210 NS 0.3100 NS 0.0669 NS 0.0000*

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dos ciclos tempranos. Lo anterior indica que A. cruentus tiene un mejor desempeo agronmico durante el ciclo temprano, dichos resultados concuerdan con los obtenidos por Garca et al. (2004). El comportamiento del rendimiento de grano del amaranto en los ciclos temprano y tardo, se explica dado que en los dos primeros ciclos las variedades se establecieron

persisten durante todo el ciclo de cultivo. Por otro lado, el bajo comportamiento en el tardo, se puede explicar por que este ciclo se inicia con temperaturas clidas en agosto (25-35C) que se reducen en septiembre para finalizar con temperaturas frescas en noviembre y diciembre (10-18C) y a medida que la floracin avanza coincide con temperaturas bajas por lo que no se da un llenado completo del grano.

Cuadro 4. Rendimiento promedio de grano (g) de seis variedades criollas con nueve familias por variedad, en Marn N. L., durante los tres ciclos.

Ciclo agrcola Temprano 2004 (C1) Temprano 2003 (C2) Tardo 2003 (C3) DMS (0.05)

Rendimiento de grano g/planta 34.01 a 33.86 a 14.44 b 2.71

Promedios con igual letra en el sentido de la columna, son estadsticamente iguales.

en condiciones de campo y el tercer ciclo que corresponde a temprano de 2004 el experimento se estableci en el rea de bancales, pequeas terrazas de 20 m de largo y 1.2 m de ancho, donde la unidad experimental fue de 1.2 m por 0.7 m de largo; las condiciones fueron ms controladas tanto en distancia de plantas como en condiciones de riego , tambin el desarrollo radical no pudo ser el adecuado porque fue diferente a las condiciones de campo, por otra parte la distribucin natural de amaranto en las zonas tradicionales donde A. cruentus se desarrolla mejor en zonas clidas(20-30C) de donde provienen las variedades criollas ensayadas y esta situacin coincide con las condiciones climticas imperantes en Marn, N. L. en el ciclo de temprano ya que las siembras de este ciclo se inician con las primeras temperaturas clidas(2025C) de finales de febrero a marzo y estas

VARIEDAD DENTRO DE CICLOS En el Cuadro 5 se muestra las comparaciones de promedios de rendimiento de grano en gramos por planta para las variedades (V) dentro de los ciclos (C) agrcolas. Debido a que se detect interaccin V X C se compararon los rendimientos promedio de grano de cada una de las variedades dentro de cada ciclo. En el C1 las mejores variedades fueron: Santiago Xochistlahuaca y Morelos Anaranjada. En el C2 fueron: Santiago Xochistlahuaca y Morelos Anaranjada, en cambio en el C3 fueron: Morelos Cuarteada y Morelos Rosada. Santiago Xochistlahuaca y Morelos Anaranjada tuvieron un desempeo similar tanto en el temprano como en el tardo de 2003. Por otro lado, los genotipos que mostraron mayor rendimiento en el C3 que correspondi al temprano de 2004 fueron: Morelos Rosada y Morelos

Cuadro 5. Comparacin de promedios de rendimiento de grano (g) para variedades criollas dentro de ciclos, Marn N. L.

Ciclo Temprano 2003 g/planta Variedad 56.7 a Santiago Xochistlahuaca Morelos anaranjada 38.1 b 31.8 bc Morelos amarilla Morelos cuarteada 29.9 c 24.3 d Morelos rosada 21.9 d Morelos morada

Ciclo Tardo 2003 g/planta Variedad 24.7 a Santiago Xochistlahuaca Morelos anaranjada 14.0 b 13.9 b Morelos rosada 10.8 bc Morelos amarilla 9.7 bc Morelos morada Morelos cuarteada 9.2 bc

Ciclo Temprano 2004 Variedad g/planta Morelos cuarteada 39.9 a Morelos rosada 38.0 a Morelos amarilla 35.5 a Morelos morada 34.9 a Morelos anaranjada 26.7 b Santiago 25.8 bc Xochistlahuaca

DMS = 7.55 Promedios con igual letra en el sentido de la columna, son estadsticamente iguales.

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Cuarteada; lo que indica que las variedades criollas de amaranto rindieron mejor cuando se establecieron en campo tal como se hizo durante los dos primeros ciclos agrcolas, en cambio para el C3 se establecieron en el rea de bancales, rea de pequeas terrazas de 20 m de largo y 1.20 m. de ancho donde las condiciones estuvieron ms controladas pero que restringieron el desarrollo radical de las mismas, y debido a ello las variedades que tuvieron mejor rendimiento fueron distintas a los dos primeros ciclo agrcolas. Por lo tanto, de acuerdo a los resultados de este trabajo de investigacin los genotipos mejor adaptados y que se pueden recomendar para su siembra comercial son Morelos Amarilla y Morelos Anaranjada, ya que tuvieron un comportamiento intermedio en cuanto a su rendimiento de grano durante los tres ciclos agrcolas. Es importante resaltar que Morelos Amarilla fue la que mostr rendimiento estable durante los C1 y C3, ya que durante el C1 obtuvo un rendimiento de 31.8 g/planta y en el C3 fue de 35.5 g/planta. En cambio, Morelos Anaranjada tuvo una variacin de rendimiento de grano que vari de 38 g en el C1 a 29.7 g obtenidos durante el C3. Esta fue la razn principal para seleccionarla dentro de las materiales criollos recomendables bajo las condiciones donde se desarroll la presente investigacin. FAMILIAS DENTRO DE VARIEDADES Y SELECCIN En el Cuadro 6 se comparan los promedios de cada familia dentro de cada una de las variedades criollas (VC) ensayadas. En la VC1 (Santiago

Xochistlahuaca) las mejores familias fueron la 3 y la 2; en la VC2 (Morelos Morada) las mejores fueron la 1 y la 4; para la VC3 (Morelos Cuarteada) las mejores fueron la 7 y la 2; en la VC4(Morelos Rosada) las mejores fueron las 7 y 8; en la VC5 (Morelos Anaranjada) las mejores fueron la 5 y la 4; por ltimo en la VC6 (Morelos Amarilla) las mejores fueron la 5 y 7. Tambin se encontr que dentro de la variedad criolla Santiago Xochistlahuaca la familia 3 obtuvo los promedios de grano por planta ms altos que todos los genotipos ensayados durante los tres ciclos agrcolas. La variedad Morelos Anaranjada fue la que no present diferencias estadsticas dentro de sus familias. Es importante resaltar que dentro del genotipo Morelos Amarilla en la familia 5 obtuvo el segundo mejor promedio de rendimiento de grano por planta. CONCLUSIONES El ciclo de temprano fue el mejor ambiente para seleccionar variedades de amaranto con alto potencial de rendimiento en Marn, Nuevo Len. Los mejores genotipos fueron: Santiago Xochistlahuaca, Morelos Morada y Morelos Cuarteada debido a que mostraron la mayor produccin de grano. Santiago Xochistlahuaca y Morelos Anaranjada, presentaron poca interaccin en el segundo ciclo mientras que Morelos Cuarteada y Morelos Rosada sobresalieron en el tercer ciclo de evaluacin. Las variedades recomendadas con base en los tres ciclos agrcolas son: Morelos Amarilla

Cuadro 6. Comparacin de medias de rendimiento (g/planta) entre familias dentro de cada variedad criolla.

VC1 Medias VC2 Medias VC3 Medias VC4 fam fam fam fam 7 7 35.6 a 26.8 a 1 41.1 a 3 8 2 33.8 a 26.7 a 4 47.6 a 2 3 9 27.8 a 25.7 a 9 40.5 a 7 2 3 27.0 a 22.9 a 5 36.2 b 1 1 8 26.6 a 22.0 a 3 34.0 b 9 6 6 26.5 a 20.4 a 7 33.6 b 4 9 4 21.9 a 19.4 a 2 33.5 b 5 5 5 19.3 b 17.9 a 8 32.7 b 6 4 1 18.4 b 17.5 a 6 27.4 b 8

Medias VC5 Medias VC6 Medias fam fam 5 5 36.5 a 31.3 a 34.0 a 7 4 33.6 a 29.4 a 29.0 a 6 7 26.4 a 29.2 a 23.8 a 1 6 25.8 a 28.3 a 25.5 a 3 8 25.4 a 28.2 a 23.8 a 8 1 24.4 a 26.0 a 23.5 a 9 3 22.0 a 24.8 a 22.8 a 2 9 20.2 a 24.2 a 22.7 a 4 2 19.7 a 23.8 a 21.9 b

DMS (0.05) = 11.87, Medias con igual letra en el sentido de la columna, son estadsticamente iguales, VC1= Santiago Xochistlahuaca, VC2= Morelos Morada, VC3= Morelos Cuarteada VC4= Morelos Rosada VC5= Morelos Anaranjada, VC6= Morelos Amarilla. G. Alejandre Iturbide et al.

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y Morelos Anaranjada, ya que a pesar de tener rendimientos promedios inferiores a las que obtuvieron la ms alta produccin de grano, estos dos genotipos presentaron ligera variacin en cuanto al decremento de grano durante los tres ciclos agrcolas. AGRADECIMIENTOS El autor G. Alejandre Iturbide agradece a la Comisin de Fomento a las Actividades Acadmicas del Instituto Politcnico Nacional la beca de exclusividad y al programa de Estmulos al Desempeo de los Investigadores, Secretaria Acadmica del IPN, los apoyos econmicos otorgados para el desarrollo de esta investigacin. BIBLIOGRAFA Angus J F, Mackenzie D E, Myers R J , Foale (1982) Phasic development in field crops 3.The pseudocereals , buckwheat and grain amaranth. Field Crop Research 5:305-318. Garca P J, C G S Valds L, E Olivares S, O. Alvarado G, H Medrano R, G Alejandre I (2004) Evaluacin de genotipos de amaranto para adaptabilidad productiva en el Noreste de Mxico. Rev. Fitotec. Mex. Vol. 27:53-56. Hauptli H, Jain S K (1984) Genetic structure of landraces population of the new world grain amaranths. Euphytica 33:857-864. Joshi B D (1986) Genetic variability in grain amaranth. Indian J. Agric. Sci.56:574-576. Kulakow P, Jain S K (1986) Genetics of grain amaranths. 4 Variation and early generation response to selection in Amaranthus cruentus L. Theor. Appl. Genet. 74:113-120. Lehmann J W, R.L Clark , K J Frey (1991) Biomass heterosis and combining ability in interespecific and intraspecific matings of grain amaranth. Crop Sci.31:1111-1116. Paredes L O (1994) Amaranth: biology chemistry and technology. CRC. Press Boca Raton, Fla. 270 p.
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Captulo XVIII

Hbito de crecimiento de la inflorescencia y su relacin con la calidad fsica y fisiolgica en semilla de amaranto (Amaranthus hypochondriacus L.)
INFLORESCENCE GROWTH HABIT AND ITS RELATIONSHIP WITH PHYSICAL AND PHYSIOLOGICAL SEED QUALITY ON GRAIN AMARANTH (Amaranthus hypochondriacus L.)

Ma. de la Luz Ramrez Vazquez1, Eduardo Espitia Rangel*2, Alejandrina Robledo Paz1, Juan C. Molina Moreno1 y Roberto Bernal Muoz3
1Instituto de Recursos Genticos y Productividad. Produccin de Semillas. Colegio de Postgraduados. Km. 36.5. Carr. Mxico-Texcoco, C.P. 56230. Tel. y Fax: 01(595)9520200 Ext.: 1555. Montecillo, Estado de Mxico. 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, CIRCE-INIFAP. Km. 38.5 Carr. Mxico-Texcoco, C.P. 56230. Texcoco, Estado Mxico. 3Profesor-Investigador. Instituto Tecnolgico del Altiplano No. 12 Xocoyucan, Tlaxcala. Km. 7.5. Carr. Fed. San Martn-Tlaxcala. *Autor para correspondencia: espitia.eduardo@inifap.gob.mx

RESUMEN La calidad de la semilla es muy importante ya que de ella depende en gran medida que se alcancen altos rendimientos. El crecimiento indeterminado en amaranto es la condicin normal de la especie, dicha caracterstica est asociada negativamente con aspectos tales como uniformidad en la madurez, produccin de semilla, fisiologa de postcosecha, almacenamiento, dao y cosecha mecnica; debido al traslape de etapas fenolgicas en la misma planta. Por lo anterior, la presente investigacin tuvo como objetivo determinar la calidad fsica y fisiolgica de la semilla en relacin al tipo de crecimiento. Se evaluaron en dos localidades 26 lneas de amaranto de crecimiento indeterminado y 24 lneas de crecimiento determinado. Los resultados indican que las diferencias de calidad, en trminos generales, estn asociadas al tipo de crecimiento. En calidad fsica se detect, que los valores ms altos de peso volumtrico correspondieron al crecimiento determinado; de manera similar, los mayores promedios de germinacin, como indicativo de la calidad fisiolgica, se asociaron con el crecimiento determinado, con lo anterior se concluye que s hubo diferencias en la calidad

de la semilla en funcin del tipo de crecimiento y de manera particular, la mayor diferencia estuvo asociada a la calidad fisiolgica y sta al crecimiento determinado. Palabras clave: Amaranthus hypochondriacus, localidad, determinado, indeterminado, estratos. ABSTRACT Seed quality is very important feature since on it depends to a great extent to reach high performances. The indetermine growth in amaranth is the normal condition of the species, this characteristic is associated negatively with aspects such as uniformity in the maturity, seed production, postharvest physiology, and mechanical harvest; due to it overlapped phenological stages in the same plant. The present research had the objective to determine the physical and physiological quality of the seed in relation to the inflorescence growth habit. A set of 26 indetermine and 24 determine lines was evaluated in two locations of central part of Mexico in order to determine the effect of growth habit on both physical and physiological seed quality. The results showed that seed quality differences are associated to the inflorescence
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growth habit; it was detected that in physical quality, the highest values of test volume weight corresponded to the determine lines; Same way, the greater averages of germination, indicative of the physiological quality, were associated with the determine growth lines. Based on it can be concluded that there seed quality in amaranth are associated to the inflorescence growth habit, particularly physiological seed quality is associated to the determine growth habit in a greater extend. Key words: Amaranthus hypochondriacus, location, determine growth, indetermine growth. INTRODUCCIN El amaranto (Amaranthus hypochondriacus L.) es una especie originaria de Mxico, importante por su produccin de grano. En nuestro pas se le cultiva desde los tiempos prehispnicos. Esta especie se encuentra distribuida ampliamente, adems de Mxico, en regiones como los Himalaya, Nepal y el Sur de la India. En los ltimos aos el cultivo del amaranto ha tomado gran importancia y es ampliamente reconocido por sus bondades alimenticias (hasta 16% de protena) y agronmicas (buena respuesta a altas temperaturas y baja disponibilidad de agua), de hecho se le ha considerado como uno de los pseudocereales promisorios para la agricultura. En general el amaranto presenta inflorescencia de crecimiento indeterminado Kulakow (1987). Las especies con este tipo de crecimiento presentan superposicin de etapas fenolgicas en la misma planta, de esta manera se puede tener desde flores hasta semillas de diferente tamao y grado de madurez, este traslape fenolgico ha sido reportado en especies perenes, de hbito de crecimiento trepador o de gua y pastos entre otras especies (KilgoreNordqueti y Sneller, 2000; Funatsuki et al., 2000; Olivares et al., 2004; Nadal et al., 2005 y Mora et al., 2006). A. hypochondriacus presenta crecimiento indeterminado de la inflorescencia, lo cual resulta en una desventaja para la cosecha mecnica y uniformidad en la madurez, adems, trae como consecuencia diferentes grados de madurez, tamao y calidad en la semilla. El tipo
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de crecimiento en amaranto determinado se ha reportado solamente en A. edulis subespecie de A. caudatus Kulakow (1987). Espitia (1994) report un mutante de crecimiento determinado en la especie A. hypochondriacus raza Azteca, lo cual podra tener varias ventajas agronmicas y en la produccin y calidad de semillas. La calidad de la semilla est determinada por un conjunto de atributos que inciden en el establecimiento y desarrollo de las plantas en el campo, en donde los componentes gentico, fsico, sanitario y fisiolgico, juegan un papel relevante (Hampton, 2001). La calidad fsica abarca aspectos tales como: pureza analtica, contenido de humedad, tamao, peso y color. La pureza analtica nos indica el grado de contaminacin con semillas extraas y materia inerte. El tamao y peso son indicadores de la excelencia de la semilla, ya que un cultivo sujeto a condiciones ambientales desfavorables presentar una disminucin en su peso volumtrico (Moreno, 1996; Copeland y McDonald, 2001). En la actualidad, las pruebas de germinacin han sido aceptadas y se utilizan universalmente para determinar la calidad fisiolgica de un lote de semillas (Delouche, 2002). Sin embargo, la germinacin resulta inadecuada para evaluar el potencial de emergencia, por lo que se ha buscado un parmetro suplementario de calidad conocido ahora como vigor de semilla (Tekrony y Egli, 1991). En este aspecto, la ISTA (2004) define el vigor como la suma total de aquellas propiedades que determinan el nivel de actividad y capacidad de la semilla. Delouche (2002) seala que las principales causas que influyen en el vigor de la semilla son: composicin gentica, condiciones ambientales durante el desarrollo, factores ecolgicos en la etapa de madurez a cosecha, densidad, tamao y peso, integridad mecnica y sanidad, entre otros. El presente estudio se realiz bajo la hiptesis de que el hbito de crecimiento de la inflorescencia en amaranto tiene efecto sobre la calidad de semilla. Para lo cual se plante el objetivo de determinar el efecto del tipo de crecimiento sobre la calidad fsica y fisiolgica en lneas derivadas por descendencia de una sola semilla de un mutante de la especie A. hypochondriacus L.

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Captulo XVIII. Hbito de crecimiento de la inflorescencia y su relacin con la calidad fsica y fisiolgica en semilla de amaranto (Amaranthus hypochondriacus L.)

MATERIALES Y MTODOS El material utilizado se obtuvo de un mutante de crecimiento determinado en la especie A. hypochondriacus raza Azteca, a partir de este mutante se derivaron 50 lneas de crecimiento determinado y 50 lneas de crecimiento indeterminado, se avanzaron a F5 por descendencia de una sola semilla, para este estudio se tomaron 26 lneas de crecimiento indeterminado y 24 de crecimiento determinado (Figura 1). La semilla de todos los genotipos fue proporcionado por el Instituto Nacional de Investigacin Forestal, Agrcola y Pecuaria (INIFAP). La siembra se realiz en el ciclo 2004, en Chapingo Mxico, en terrenos del Campo Experimental Valle de Mxico, INIFAP y en San Miguel del Milagro, Tlaxcala. Se utiliz un diseo experimental de bloques al azar con tres repeticiones; cada unidad experimental consisti de un surco de 2 X 0.80 m. En la localidad de Chapingo se aplic una dosis de fertilizacin de 70-70-30 (incorporada en la siembra y en el

primer cultivo). En Tlaxcala se uso la dosis 8070-50 (en una sola aplicacin). Se realizaron labores de cultivo tales como deshierbes, aclareos y aplicacin de insecticidas. A los 150 das despus de la siembra se hizo la cosecha de toda la parcela (entre cinco y ocho plantas), para ser procesadas posteriormente en el laboratorio. Las inflorescencias se dividieron en nueve estratos de la base al pice, en la semilla de cada estrato se analiz la calidad fsica y fisiolgica en el Laboratorio de Anlisis de Semillas del Colegio de Postgraduados durante el ciclo primavera-verano 2004. Con respecto a la calidad fsica se evalu: el contenido de humedad (CH) de acuerdo con el mtodo de la estufa a 130C (ISTA, 2004), con una modificacin en el tiempo de exposicin (2 horas) y dos repeticiones de 2 g; el peso de materia seca (MS) de la semilla fue considerado directamente como el peso seco de la semilla expresado en gramos. Para determinar el peso volumtrico (PV), se uso un recipiente de 6.5 mL y una bscula de 0.001 g de precisin en cuatro repeticiones, los resultados se reportaron en kg hL-1.

Figura 1. Material de crecimiento determinado encontrado en la zona productora del Distrito Federal en A. hypochondriacus raza Azteca.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

La calidad fisiolgica se evalu en trminos de germinacin y vigor. La prueba de germinacin, se realiz sobre papel a 28 1 C durante cinco das; se hicieron dos conteos (al segundo y quinto da despus del inicio de la prueba). Cuatro repeticiones de veinticinco semillas, se colocaron en cajas Petri las cuales se introdujeron en una bolsa de plstico para evitar la prdida excesiva de agua, se colocaron en una cmara de germinacin. Las variables evaluadas fueron: plntulas normales (PN), plntulas anormales (PA) y semillas no germinadas (SNG) (ISTA, 2004), los resultados se reportan en porcentaje (%). Para determinar el vigor se utiliz como indicador el primer conteo (PC) de la prueba de germinacin y la velocidad de emergencia (VE), para lo cual se sembr en charolas de plstico (40 x 30 x 3 cm) con arena comn; se utilizaron cuatro repeticiones de veinticinco semillas. La semilla se sembr a una profundidad de 1 cm en surcos de 30 cm de largo con una distancia entre stos de 2 cm y 1 cm entre semillas. Las charolas fueron colocadas en cmaras de germinacin a 25 1 C. Los resultados se reportan en trminos del ndice de velocidad de emergencia (IVE) de acuerdo con Maguire (1962). El anlisis estadstico se hizo por localidad, se considero tipo de crecimiento y estrato, para el anlisis de los datos en porcentaje se realiz una transformacin. Los resultados se analizaron mediante el procedimiento GLM (SAS, 2000) y la comparacin de medias se realiz con la prueba de Tukey (p0.05).

RESULTADOS Y DISCUSIN CALIDAD FSICA Las variables contenido de humedad, materia seca y peso volumtrico presentaron diferencias altamente significativas para tipo de crecimiento (Cuadro 1), no obstante, entre localidades, slo el peso volumtrico mostr diferencias. Para estrato y la interaccin tipo de crecimiento por estrato, slo se obtuvieron diferencias significativas para materia seca. En relacin a genotipos dentro de tipo de crecimiento y a tipo de crecimiento, se obtuvieron diferencias significativas en las tres variables evaluadas. El tipo de crecimiento tuvo mayor influencia en la calidad fsica de la semilla ya que para contenido de humedad, materia seca de la semilla y peso volumtrico sus efectos fueron mayores y solamente en velocidad de emergencia el efecto de localidades es mayor. En cuanto al efecto de los dos tipos de crecimiento, el crecimiento indeterminado tuvo mayor efecto en materia seca de la semilla y velocidad de emergencia; mientras que los efectos para contenido de humedad y peso volumtrico fueron mayores para el tipo determinado. En relacin a la calidad fsica por localidades se muestra en el Cuadro 2, encontrndose diferencia significativa para la variable peso volumtrico, con una ligera ventaja para la localidad de Chapingo, Mx. mientras que, para contenido de humedad y materia seca no hubo efecto de la localidad.

Cuadro 1. Cuadrados medios del anlisis de varianza para variables de calidad fsica y fisiolgica de semilla en genotipos de amaranto con diferente hbito de crecimiento de inflorescencia evaluados en dos localidades de La Mesa Central.

Calidad Fsica FV Localidad (Loc) Loc (repeticiones) Crecimiento (Crec) Estrato Crec*Estrato Crec (Genotipos) Indeterminado Determinado Error GL 1 6 1 8 8 50 27 23 154 CH 0.069 0.25 28.25** 1.48 1.23 14.17** 12.55** 16.75** 2.027

Calidad Fisiolgica PN 1.09 0.68 0.91* 0.47* 0.92 0.46 0.14* 0.55 0.47 PA 0.22* 0.59 0.81* 0.37 0.27 0.70* 0.38 0.86* 0.48 SNG 0.12* 0.17 0.04* 0.26* 0.31 0.29 0.55 0.21 0.24

PV PC VE MSS 0.44* 103.98* 4.65* 0.005 1.15 0.55 1.15 0.0004 65.91* 2.41* 0.038** 1.85* 3.19* 0.18* 0.0008* 0.01 2.03* 0.38* 0.0006* 0.01 0.007** 0.11** 20.66** 0.44 0.008** 0.37** 23.13** 0.48 0.007** 0.71** 18.19** 0.42 0.54 0.97 0.0013 0.016

FV: fuente de variacin; GL: grados de libertad; CH: contenido de humedad; MSS: materia seca de la semilla; PV: peso volumtrico; VE: velocidad de emergencia; PC: primer conteo; PN: plntulas normales; PA: plntulas anormales; SNG: semillas no germinadas. *significativo al 0.05 de probabilidad; **significativo al 0.01 de probabilidad.

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En cuanto al tipo de crecimiento, Cuadro 3, la calidad fsica en trminos de peso volumtrico y el contenido de humedad fue ligeramente superior para hbito de crecimiento determinado, en tanto que la materia seca fue menor. De igual manera, se observ que en el caso de los estratos de la inflorescencia, slo peso volumtrico y dentro de ste solo el primer estrato present diferencias estadsticas con el valor ms bajo, lo que se explica por ser la semilla

con menor grado de madurez (Cuadro 4), as se debe tomar en cuenta que en los extremos se ubicaron las semillas con menor y mayor grado de madurez, de modo que las semillas de la parte central presentaron los valores ms altos debido a la mayor uniformidad en la madurez que se tiene en esa rea de la inflorescencia. Los valores de peso volumtrico encontrados en este estudio son mayores que los reportados por Paredes et al. (1990) quienes mencionan un peso hectoltrico de 76.9 kg/hl para amaranto.

Cuadro 2. Comparacin de medias para variables de calidad fsica de la semilla de amaranto por localidad.

Calidad Fsica Peso volumtrico Contenido de humedad (%) (kg hL-1) Localidad 8.24 a 85.23 b San Miguel del Milagro 8.24 a 85.69 a Chapingo 8.24 85.57 Media
Medias con la misma letra dentro de columna son estadsticamente iguales (Tukey, p0.05).

Materia seca (g) 1.83 a 1.83 a 1.83

Cuadro 3. Calidad fsica de la semilla de amaranto en relacin al tipo de crecimiento.

Hbito de crecimiento Peso volumtrico (kg hL-1) Contenido de humedad (%) Materia seca (g)

Determinado Indeterminado 85.82 a 85.23 b 8.38 a 8.12 b 1.83 b 1.84 a

Medias con la misma letra dentro de hilera son estadsticamente iguales (Tukey, P0.05). Cuadro 4. Comparacin de medias para variables de calidad fsica de la semilla de amaranto por estrato de la inflorescencia.

Peso volumtrico (kg hl-1) Estrato 85.52 a 9 85.60 a 8 85.60 a 7 85.54 a 6 85.65 a 5 85.72 a 4 85.58 a 3 85.57 a 2 85.37 b 1 85.57 Media

Contenido de humedad (%) 8.46 a 8.24 a 8.18 a 8.23 a 8.24 a 8.29 a 8.23 a 8.16 a 8.15 a 8.24

Materia seca (g) 1.833 a 1.838 a 1.834 a 1.834 a 1.839 a 1.839 a 1.838 a 1.834 a 1.841 a 1.83

PV: peso volumtrico; CH: contenido de humedad; MS: materia seca. Medias con la misma letra dentro de columna son estadsticamente iguales (Tukey, p0.05).

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La inflorescencia de amaranto forma sus flores desde la base hacia el pice, as, mientras la parte basal posee semillas maduras, la apical an tiene flores en antesis. Los valores de humedad obtenidos en semillas de amaranto provenientes de inflorescencias de crecimiento indeterminado, son similares a los reportados en National Research Council 1984 (6 a 11%) y Teutnico y Knorr, 1985 (11.1%). CALIDAD FISIOLGICA Para la fuente de variacin localidad se observaron diferencias significativas para localidad en las variables velocidad de emergencia, primer conteo, plntulas anormales y semillas no germinadas, no as para plntulas normales. En cuanto al hbito de crecimiento se encontraron diferencias significativas para todas las variables. Para estrato, nicamente la variable plntulas anormales no present diferencias significativas. Con respecto a la interaccin crecimiento por estrato hubo diferencias significativas en las variables velocidad de emergencia y primer conteo. Para genotipos dentro de hbito de crecimiento se encontraron diferencias altamente significativas para velocidad de emergencia y significativas para plntulas

anormales (Cuadro 1). Dentro de localidades, en Chapingo se observ que a excepcin de la variable semillas no germinadas, las dems no presentaron diferencias significativas (Cuadro 5). En cuanto al hbito de crecimiento los valores de las variables primer conteo y plntulas normales fueron superiores para el tipo determinado (Cuadro 6). Lo anterior implica que las semillas formadas en inflorescencias de crecimiento determinado presentaron mayor calidad fisiolgica debido a que mostr menor porcentaje de plntulas anormales y semillas no germinadas, variables relevantes en la produccin de semilla de amaranto de excelentes caractersticas. Con respecto al estrato dentro de la inflorescencia la prueba de medias, observado en el Cuadro 7, indica que se formaron dos grupos, uno que incluy los estratos 3, 6, 7, y 8 y otro con los estratos 1, 2, 4, 5 y 9. De acuerdo a los resultados, las semillas ms vigorosas se ubicaron en la parte apical de la inflorescencia (estratos 7, 8 y 9). Estas diferencias se podran atribuir al grado de madurez fisiolgica de cada estrato y de la semilla misma. Para el primer conteo tambin se observan diferencias significativas, los valores

Cuadro 5. Comparacin de medias para variables de calidad fisiolgica de semillas de amaranto por localidad evaluada.

Calidad Fisiolgica Localidad VE PC (%) PN (%) PA (%) San Miguel del Milagro 4.97 b 87.71 b 84.15 a 12.06 b Chapingo 5.35 a 90.54 a 84.52 a 14.13 a Media 5.18 88.49 84.36 13.25 SNG (%) 3.78 a 1.31 b 2.36

VE: velocidad de emergencia; PC: primer conteo; PN: plntulas normales; PA: plntulas anormales; SNG: semillas no germinadas. Valores con la misma letra dentro de columna son estadsticamente iguales (Tukey, p0.05). Cuadro 6. Calidad fisiolgica de la semilla de amaranto en relacin al tipo de crecimiento.

Determinado Indeterminado Hbito de crecimiento 5.33 a 5.03 b Velocidad de emergencia 87.55 b 89.53 a Primer conteo (%) 83.26 b 85.55 a Plntulas normales (%) 13.95 a 12.51 b Plntulas anormales (%) 2.75 a 1.95 b Semillas no germinadas (%)
Medias con la misma letra dentro de hilera son estadsticamente iguales (Tukey, p0.05).

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Figura 2. Calidad Fisiolgica de la semilla se mide en semillas germinadas (izquierda) y semillas no germinadas y plantas anormales (derecha).

ms altos se obtuvieron en los estratos apicales (9 y 8), seguidos por los estratos de la parte media y los basales. Estas diferencias pueden deberse a la posicin en que se encuentra el estrato, siendo la parte apical que incluye los estratos 9 y 8, la que present la mejor germinacin y la parte basal con los estratos 2 y 1 la que mostr los valores ms bajos. Las semillas obtenidas en el presente trabajo, mostraron ms del 80% de germinacin para ambos hbitos de crecimiento, lo cual sera un indicador para posteriores evaluaciones de calidad fsica y fisiolgica de semilla de amaranto.

El xito reproductivo de las plantas con semilla depende de la produccin de semillas saludables; la viabilidad del embrin se incrementa si la semilla contiene una cantidad substancial de reservas de almidn y protenas para alimentar a la plntula despus de la germinacin. Mayor cantidad de reservas generalmente estn acompaadas de una semilla de mayor tamao (Sundaresan, 2005). La condicin normal en amaranto es que su inflorescencia presente crecimiento indeterminado Kulakow (1987). Las especies con este tipo de crecimiento presentan superposicin de etapas fenolgicas en la misma planta, de esta

Cuadro 7. Comparacin de medias para variables de calidad fisiolgica de la semilla de amaranto por estrato de la inflorescencia.

Calidad Fisiolgica Estrato 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Media VE 5.19 b 5.24 a 5.32 a 5.25 a 5.18 b 5.11 b 5.22 a 5.12 b 5.00 b 5.18 PC (%) 90.05 a 89.02 a 88.65 b 88.72 b 88.59 b 88.91 b 88.27 b 87.48 c 86.78 c 88.49 PN (%) 85.66 a 84.32 b 83.35 b 84.77 b 83.73 b 84.76 b 85.00 b 83.92 b 83.75 b 84.36 PA (%) 12.66 a 13.34 a 14.31 a 12.81 a 14.08 a 12.86 a 12.34 a 13.26 a 13.57 a 13.25 SNG (%) 1.68 b 2.14 a 2.33 a 2.41 a 2.18 a 2.37 a 2.65 a 2.82 a 2.67 a 2.36

VE: velocidad de emergencia; PC: primer conteo; PN: plntulas normales; PA: plntulas anormales; SNG: semillas no germinadas. Medias con la misma letra dentro de columna son estadsticamente iguales (Tukey, p0.05).

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manera se puede tener desde flores hasta semillas de diferente tamao y grado de madurez, este traslape fenolgico ha sido reportado en especies perenes, de hbito de crecimiento trepador o de gua y pastos entre otras especies (KilgoreNordqueti y Sneller, 2000; Funatsuki et al., 2000; Olivares et al., 2004; Nadal et al., 2005 y Mora et al., 2006). La presencia de semillas de diferente tamao y grado de madurez afecta la calidad de las mismas. En los resultados en este estudio se corrobora que efectivamente el amaranto presenta traslape fenolgico y que hay efecto en la calidad de la semilla. Esto a pesar de que la estratificacin que se realiz en la inflorescencia no es del todo representativa de la biologa de la maduracin; una estratificacin que combine tanto la inflorescencia y las ramificaciones seguramente dar resultados ms concluyentes sobre el efecto del tipo de crecimiento de la inflorescencia sobre la calidad tanto fsica como la fisiolgica en amaranto. CONCLUSIONES Se corrobora la presencia de traslape fenolgico en A. hypochondriacus y que este tiene efecto sobre la calidad tanto fsica como fisiolgica de la semilla de amaranto. El tipo de crecimiento tuvo influencia en la calidad fsica de la semilla siendo mayor el efecto para contenido de humedad, materia seca de la semilla y peso volumtrico. En relacin al efecto del tipo de crecimiento, el crecimiento indeterminado tuvo mayor efecto en materia seca de la semilla y velocidad de emergencia; mientras que, los efectos para contenido de humedad y peso volumtrico fueron mayores para el tipo determinado. En relacin a la calidad fsica el hbito de crecimiento tuvo efecto en todas las variables, excepto plantas anormales. Las semillas de inflorescencias de crecimiento determinado presentaron mayor calidad fisiolgica ya que mostraron menor porcentaje de plntulas anormales y semillas no germinadas, variables relevantes en la calidad de semilla.

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Plagas y Enfermedades

Captulo IXX

Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.)


PHYTOSANITARY ASPECTS OF GRAIN AMATANTH (Amaranthus spp.)

Patricia Rivas-Valencia1, Erica Muiz-Reyes1 y Eduardo Espitia-Rangel2


1Campo Experimental Valle de Mxico, Km. 13.5 Carr. Los Reyes-Texcoco. CP. 56250, Coatlinchn, Estado de Mxico, 2Campo Experimental Bajo, CIR Centro. INIFAP. Km. 6.5 Carr. Celaya-San Miguel de Allende CP. 38110, Celaya, Guanajuato. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias (INIFAP). Autor por correspondencia: rivas.patricia@inifap.gob.mx

RESUMEN El cultivo del amaranto ha sido a lo largo de la historia de nuestro pas, parte importante, destacando sus caractersticas agronmicas y nutraceticas. Sin embargo, considerado como un cultivo tradicional, no se haba realizado avances importantes en la conservacin, manejo y mejoramiento del mismo. Especficamente, en el manejo agronmico del mismo y en especial en la parte fitosanitaria, se cuenta con informacin cientfica limitada en Mxico, lo que abre la oportunidad de estudiar diversos aspectos enfocados a este tema que aporten la base para la realizacin de propuestas de manejo y mejoramiento. En este captulo se hace una revisin de las principales enfermedades y plagas que se han identificado en las regiones productoras del pas y que coinciden con lo reportado por otros autores en el mundo, tratando as de motivar el estudio profundo de temas fitosanitarios. Palabras clave: enfermedades, plagas, A. cruentus, A. hypochondriacus, A. caudatus.

ABSTRACT The culture of amaranth has been throughout the history of our country, an important part, highlighting their agronomic and nutraceutical characteristics. However, considered as a traditional crop, had not made significant progress in the conservation, management and improvement of it. Specifically, in the agricultural management and especially in the phytosanitary traits, scientific information is limited in Mexico, which offers the opportunity to study various aspects focused on this topic that provide the basis for the implementation of management and proposals improvements. This chapter is a review of diseases and pests that have been identified in the regions of the country and similar to those reported by other authors in the world, thus trying to motivated the serious study of phytosanitary issues. Key words: diseases, pests, A. cruentus, A. hypochondriacus, A. caudatus.

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INTRODUCCIN El gnero Amaranthus se distribuye en todo el territorio mexicano, las especies A. cruentus, A. hypochondriacus y A. caudatus son las que mayormente se utilizan para la produccin de grano, siendo las dos primeras las ms importantes en Mxico. Se reconoce al amaranto por su alto potencial agronmico, destacando la resistencia a sequa y su amplia adaptacin a diversos ambientes, sin embargo tambin presenta ataques por artrpodos fitfagos y patgenos. Lo anterior, nos ofrece la oportunidad de caracterizar los elementos biolgicos presentes en diferentes ambientes y/o regiones, lo cual constituye base para el estudio y la aplicacin de estrategias para el manejo de las mismas. En Mxico, es poca la informacin que se tiene sobre aspectos fitosanitarios de este cultivo, por lo que el objetivo de este captulo es presentar las principales plagas y enfermedades que han sido detectados atacando al amaranto y se reportan aquellos identificados en Mxico. ENFERMEDADES HONGOS Tizn del amaranto. Se observan lesiones necrticas con crculos concntricos y un halo amarillento en las hojas, lo cual reduce el vigor de las plantas. En Mxico es causado por Alternaria tenuis, en Estados Unidos Alternaria alternantherde, en la India, Kenia y Nairobi Alternaria amaranthi (Snchez-Enciso et al., 1991), Per, Nepal y Ecuador Alternaria spp. (Gardmenia 1985), Argentina Alternaria Chlamidospora y Alternaria alternata (Noelting et al., 2009). Estudios recientes en Sudfrica identifican a Alternaria tenuissima como un patgeno que puede estar presente de forma latente e infectar y colonizar hojas de A. hybridus de manera consistente en ocurrencia de algn dao previo (Blodgett et al., 2002). Mancha negra y mancha del tallo. Se caracteriza por lesiones negras o pardas que inician en la porcin baja del tallo, debilitndolo y avanzando a la parte superior, ocasionando la ruptura del mismo, provocando la muerte de la planta. El agente etiolgico reportado por Snchez y colaboradores (1991) es Macrophoma
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sp., sin embargo Espitia (1986) menciona a Phoma longissiama como el responsable. Cabe sealar, que el gnero Phoma produce lesiones ovales de color gris claro en el centro y bordes obscuros, con presencia en algunos casos de picnidios en el centro de la lesin, sin embrago stas lesiones no sobrepasan los 5 cm de longitud y no estrangulan el tallo (Snchez et al., 1991; Noelting et al., 2009). Pudricin marrn del tallo o esclerotiniosis. Se producen lesiones de color marrn en el tallo e inflorescencias; en hojas produce clorosis y muerte. En ataques severos se observan pudriciones a lo largo del eje central de la inflorescencia para posteriormente ocasionar marchitez. Esta enfermedad es causada por Sclerotinia sclerotiorium, que ataca a gran parte de los rganos de la planta (Noelting y Sandoval, 2005). Carbn del amaranto. Afecta las inflorescencias, reabsorbiendo los granos, lo cual al trillarla solo aparece un polvo negro, causando la prdida total de grano en plantas, se han identificado dos especies del hongo Thecaphora amaranthi y T. amaranthicola como responsables del carbn (Bernal-Muoz et al., 2000; Noelting et al., 2010) (Figura 1). Espitia-Rangel en 1991a report que en zonas tradicionales donde se ha sembrado el amaranto como monocultivo aparece Thecaphora iresine. Esta enfermedad se encuentra con mayor frecuencia en las zonas productoras de Tulyehualco y en San Miguel del Milagro y podra tener inclusive importancia cuarentenaria. Pudricin de raz o damping-off. Se producen pudriciones en raz y base del tallo y normalmente es un complejo de hongos de los gneros Phytium sp., Fusarium sp., Rhizoctonia sp., las especies identificadas por su importancia son P. aphanidermatum (Snchez et al., 1991); Fusarium oxysporum y F. sambucinum (Chen y Swart, 2000; 2001) (Figura 2). Roya blanca. Albugo bliti es el hongo responsable de esta enfermedad que puede causar importantes prdidas en la produccin (Joshi y Rana, 1992). En Mxico est enfermedad se presenta en la

Captulo IXX. Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.)

a)

b)

d)

c)

Figura 1. Carbn del Amaranto (Thecaphora sp.). A) Planta con sntomas de carbn. B) Inflorescencias con sntomas de carbn. C) Inflorescencias trilladas con prdida de grano por carbn. D) Esporas de Thechapora sp.

Figura 2. Pudricin de raz en amaranto causada por hongos. P. Rivas-Valencia et al.

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Figura 3. Sntomas iniciales de roya blanca.

mayor parte de las zonas productoras del centro (Figura 3). Pudricin hmeda del tallo. Esta pudricin es producida por Choanephora cucurbitarum. HONGOS PATGENOS ASOCIADOS A SEMILLAS En Mxico se reportan 18 especies: Alternaria sp., Aspergillus sp., Chaetophoma sp., Fusarium lateritium, Fusarium spp., Macrophoma sp., Penicillium sp. y Phoma sp. (Bernal-Muoz, et al., 2000; Terrazas-Morales, 1999); Aspergillus parasiticus, Epicoccum nigrum, tres especies de Fusarium, Rhizopus rhizopodiformis, Stachybotrys chartarum y tres especies de Trichoderma (Moreno-Velzquez et al., 2005), todos ellos en semillas de A. hypochondriacus. En Argentina en un estudio realizado a semillas de A. cruentus cv Don Guiem y A. hypochondriacus cv G. Covas, se identificaron 14 gneros: Acrenomun sp., Alternaria sp., Aspergillus sp., Arthrinium sp., Aureobasidium sp., Colletotrichum sp., Crysosporium sp., Fusarium sp., Helminthosporium sp., Mucor sp., Penicillium sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp. y Stemphylium sp. (Noelting et al., 2004). En Sudfrica se reportan 19 especies de hongos asociados a semillas de Amaranthus cruentus: Alternaria amaranthi, A. tamarii, A. tenuissima, Aspergillus fumigatus, A. niger, A. flavus, Chaenophora cucurbitarum, Caldosporium sp. Cochliobolus geniculata, Curvularia geniculata, Fusarium oxysporum, F. pallidoroseum, F. verticillioides, Phoma sorghina, Pythium aphanidermatum, Rhizoctonia solani, Rhizopus
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oryzae y Thielavia terrcola (Adebanjo e Ikotun, 1994; Teri y Mlasani, 1994; Blodgett y Swart, 2002). En Polonia Pusz (2009) reporta al menos 18 especies de hongos asociados a semillas, siendo Alternaria alternata el ms frecuente colonizador de semillas de A. cruentus, A. paniculatus y A. retroflexus; seguido de Epicoccum nigrum y Cladosporium cloadosporioides y espordicamente de especies de Fusarium, Penicillium y Phoma. VIRUS Virosis. En campos de cultivo en Texcoco, Mxico se han observado plantas con sntomas de achaparramiento o enanismo, clorosis, enrollamiento y deformacin de hojas. Las plantas con sntomas de virosis se presentaron de forma espacialmente aleatoria, confirmndose la presencia de virus con la obtencin de RNA bicatenario (De la O et al., 2010) (Figura 4). En Argentina, Asia y Oceana se han encontrado afectando a A. blitum, A. caudatus, A. cruentus, A. gracilis, A. hypochondriacus, A. lecocarpus y A. spinosus al Amaranthus Mottle Virus (Mosyakin and Robertson, 2003, citado por Rojas-Martnez et al., 2009). Sammons y Barnett (1987) (citados por Joshi and Rana 1992), reportan al Tobacco Ringspot Virus causando daos a Amaranthus Hybridus en California, USA. A continuacin se enlistan 10 especies de amaranto susceptibles a virus (Cuadro 1), segn lo reportado en la base de datos: Plant Viruses Online: Descriptions and Lists from the VIDE Database. URL http://biology.anu.edu. au/Groups/MES/vide/.

Captulo IXX. Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.)

Figura 4. Sntomas de virosis. Cuadro 1. Especies de amaranto con susceptibilidad a diferentes virus. (Brunt et al., 1996. URL http://biology.anu. edu.au/Groups/MES/vide/).

Especie de amaranto Amaranthus caudatus

Susceptibilidad a virus Abelia latent tymovirus Alfalfa mosaic alfamovirus Amaranthus leaf mottle potyvirus Amaranthus mosaic (?) potyvirus Arracacha A nepovirus Arracacha B (?) nepovirus Bean yellow mosaic potyvirus Beet curly top hybrigeminivirus Beet mosaic potyvirus Cactus X potexvirus Carnation mottle carmovirus Carnation ringspot dianthovirus Carnation vein mottle potyvirus Celery latent (?) potyvirus Chicory yellow mottle nepovirus Clover yellow mosaic potexvirus Clover yellow vein potyvirus Cucumber mosaic cucumovirus Cymbidium ringspot tombusvirus Dahlia mosaic caulimovirus Elderberry carlavirus Grapevine fanleaf nepovirus Heracleum latent trichovirus Humulus japonicus ilarvirus Iris fulva mosaic potyvirus
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Contina Cuadro 1...

Especie de amaranto

Susceptibilidad a virus Lamium mild mottle fabavirus Lettuce mosaic potyvirus Maclura mosaic macluravirus Marigold mottle potyvirus Peanut stunt cucumovirus Plantain X potexvirus Potato 14R (?) tobamovirus Potato Andean latent tymovirus Potato black ringspot nepovirus Potato leafroll luteovirus Red clover necrotic mosaic dianthovirus Ribgrass mosaic tobamovirus Telfairia mosaic potyvirus Tobacco etch potyvirus Tobacco necrosis necrovirus Tobacco rattle tobravirus Tobacco ringspot nepovirus Tobacco streak ilarvirus Tomato black ring nepovirus Tomato spotted wilt tospovirus Turnip mosaic potyvirus Ullucus mild mottle tobamovirus Viola mottle potexvirus Watermelon mosaic 2 potyvirus Zygocactus Montana X (?) potexvirus Amaranthus mosaic (?) potyvirus Amaranthus leaf mottle potyvirus Amaranthus mosaic (?) potyvirus Amaranthus leaf mottle potyvirus Viola mottle potexvirus Celery latent (?) potyvirus Amaranthus mosaic (?) potyvirus Alfalfa mosaic alfamovirus Amaranthus leaf mottle potyvirus Apple mosaic ilarvirus Asparagus 3 potexvirus Beet curly top hybrigeminivirus Beet mosaic potyvirus Beet western yellows luteovirus Cactus X potexvirus Celery latent (?) potyvirus

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Captulo IXX. Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.) Contina Cuadro 1...

Especie de amaranto

Susceptibilidad a virus Cucumber mosaic cucumovirus Elm mottle ilarvirus Grapevine Bulgarian latent nepovirus Lilac chlorotic leafspot capillovirus Nerine X potexvirus Okra mosaic tymovirus Ribgrass mosaic tobamovirus Spinach latent ilarvirus Statice Y potyvirus Strawberry latent ringspot (?) nepovirus Tobacco rattle tobravirus Tobacco streak ilarvirus Tomato black ring nepovirus Tomato ringspot nepovirus Tomato spotted wilt tospovirus Tomato top necrosis (?) nepovirus Amaranthus leaf mottle potyvirus Amaranthus mosaic (?) potyvirus Apple mosaic ilarvirus Amaranthus mosaic (?) potyvirus

BACTERIAS Mancha bacteriana. Reddy y colaboradores (1980) (citado por Joshi y Rana 1992), reportan en la India a Xanthomonas amaranthicola como el agente causal de lesiones en hojas. La informacin de este patgeno atacando las diversas especies de amaranto en Mxico es limitada, sin embargo se han reportado a Pseudomonas argentinensis (CasarrubiasCastillo et al., 2009) y Xhanthomonas campestris pv. phaseoli (Huerta y Rodrguez, 1994). FITOPLASMAS Escoba de bruja. Las plantas enfermas presentan proliferacin de la pancula, amarillamiento foliar, acortamiento de entrenudos, y en algunas los brotes nuevos son raquticos y amarillentos. Se evidenci la presencia de ADN fitoplsmico detectado en tallo, hoja e inflorescencia y semillas germinadas provenientes de plantas con sntomas. El fragmento obtenido mostr

una identidad de 99% con el grupo 16Sr III Candidatus Phytoplasma pruni (Rojas-Martnez et al., 2009). Enverdecimiento. Esta enfermedad ha sido reportada como crecimiento secundario (Espitia, 1992) y como filodia (Surez, 1986) (Figura 5). NEMTODOS Ndulos o agallas de raz. Entre los nemtodos que atacan al amaranto tenemos a Nacobbus aberrans (Santa Cruz y Marbn, 1986) y Meloidogyne incognita (Joshi y Rana, 1992), los cules producen ndulos en las races causando daos significativos a la produccin del orden del 10-14% del rendimiento de grano. Se observa ndulos tanto en la raz principal como raicillas, en ataques severos se observa decaimiento de la planta; se recomienda rotacin de cultivos y evitar siembras en campos infestados.

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a)

b)

c)

Figura 5. Enverdecimiento o crecimiento secundario en amaranto.

PLAGAS Morales et al. (2009) libro, indican que A. cruentus muestra mayor susceptibilidad al dao por plagas que A. hypochondriacus. Espitia (1991) destaca la presencia de miembros de la familia Noctuidae, los cuales han sido observados cuando el cultivo es joven. En 2010, Fomsgaard y colaboradores, realizaron un estudio en varios pases, para determinar los costos de produccin del cultivo de amaranto, en los resultados de dicho estudio, reportan diversas plagas asociadas al cultivo en Mxico: Lebia spp., Disonicha spp.; Diabrotica balteata, D. undecipunctata, D. virguifera, Colapsis spp.; especies de Cicadellidae, Microtalis spp., Orius spp., Lygus spp.; diversas especies de Pentatomidae, Catorhinta guttula, as como dermpteros y lepidpteros. Vejar et al., (1994) reporta en la regin del Centro los fitfagos Acyrtosiphon pisum, Amphicerus cornutus, Aphis fabae, Chaetonema sp., Colaspis sp., Copitarsia decolora,
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Diabrtica balteata, Disonycha sp., Diabrotica undecimpunctata, Epicauta sp., Estigmene acraea, Herpetogramma bipunctalis, Lygus sp., Piesma cinrea, Pholisora catullus, Spodoptera exigua, Spoladea recurvalis. Espitia (1992), reporta el gnero Sciara sp. (Diptera) como barrenador del tallo en las zonas productoras. Por otra parte, la FAO (1990), categoriza a las plagas de amaranto como claves, secundarias y potenciales (Cuadro 2). Es importante sealar que aunque se tiene el reporte de diversas y numerosas especies presentes en el amaranto, no todas pueden considerarse como plagas an cuando se hayan observado alimentndose de algunas plantas del cultivo. Se deben establecer y diferenciar las relaciones que guardan los organismos presentes para evitar aplicaciones innecesarias de insecticidas y buscar la conservacin de los enemigos naturales.

Captulo IXX. Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.) Cuadro 2. Plagas del amaranto

Plagas del amaranto Spoladea recurvalis Heliothis titicacae Peridroma spp, Agrotis spp Mythimna unipunctata Diabrotica speciosa Aphis spp, Myzus persicae Eurisacca melanocampta Pseudoplusia includens Spodoptera eridania Herpetograma bipunctalis Schistocerca peceifrons Calligrapha curvilinea Lygus lineolaris Palisot de Beauvois Contrachelus seniculus Le Conte Epicauta pennsylvanica De Geer
Fuente: FAO, 1990

En general los trabajos de evaluacin de dao en los diferentes genotipos y en las distintas regiones son escasos o nulos. PrezTorres (2011) presenta una lista de especies de insectos asociados al cultivo en la zona del volcn Popocatpetl, Puebla, de las cuales diez especies se relacionaron al follaje, tres atacando al tallo y uno a la raz, sin embargo no presenta datos cuantificables de dao. En el Valle de Tehuacn que las prdidas en produccin sin control de plagas representa el 65%, adems enlistan las principales plagas en la zona dentro de las cuales destacan las del follaje. El mayor dao en la planta se registra en poca de sequa (Morales et al., 2009), en general las plagas presentes en el cultivo no son devastadoras pero tienen efecto en el rendimiento y calidad de grano (Carmona et al., 2008). A continuacin se mencionan los principales fitfagos que tienen como hospedante al amaranto. Lygus lineolaris (DE BEAUVOIS) (HEMIPTERA:MIRIDAE) Importancia y distribucin Cerca de 40 especies de este gnero son reportadas como plagas de importancia agrcola, es una plaga polfaga, considerada como una de las ms abundantes en el cultivo de amaranto en

Mxico, Aragn-Garca y Lpez-Olgun (2001) encontraron hasta 35 chinches en hoja y panoja. Se menciona que en plantaciones comerciales la reduccin en el rendimiento puede alcanzar hasta el 80% (Wilson, 1984 y Espitia-Rangel, 1994). Este mirido se encuentra distribuido en casi todos los estados del pas; Vejar et al. (1994) reportan las localidades de Altepexi, Chapingo, Miacatln, Montecillo y San Miguel de Milagro en la regin central de Mxico, por otra parte destaca su presencia en Estados Unidos, donde se reportaron siete especies de Amaranthus como hospedantes de este insecto. El gnero Amaranthus representa un hospedante muy importante ya que aloja los adultos que presentan diapausa (Snodgrass y Abel, 2004). Descripcin El adulto macho mide entre 4.9-5.9 mm de longitud, mientras que la hembra mide 5.2-5.3 mm de largo. La cabeza es de color marrn amarillento, con lneas negras frontales sub-medianas (Figura 6). Las antenas son largas de cuatro artejos, con patas relativamente largas. El pronoto es de amarillento a caf-rojizo con los ngulos anteriores redondeados, el mesoescuto es negro con las reas laterales plidas o rojizas. Los hemlitros (alas anteriores) son caf-rojizas
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con una pubescencia moderadamente larga, densa y amarillenta. A simple vista el cuerpo se observa en forma oval alargada, de color negro casi en su totalidad con reas verde plido a caf rojizo. En el escutelo se observa un tringulo distintivo. Los huevos son pequeos (1 mm largo y 0.25 mm de ancho), truncados y ligeramente curvados (Dixon y Fasulo, 2009). Las ninfas o estados inmaduros son similares en forma y color y comienzan a alimentarse de las semillas en formacin (Ferguson et al., 2012). Biologa y ciclo de vida Los adultos hibernantes permanecen en zonas protegidas, tales como materia en descomposicin, hojarasca, bajo la corteza, entre hojas de plantas, en rocas presentes en el campo, en hierba seca o en orillas de camino (Ferguson et al., 2012; Dixon y Fasulo, 2009) (Figura 7), stos son mucho ms oscuros que los adultos que se presentan en verano, razn por la cual a veces son considerados errneamente como organismos diferentes. Es probable que la intensidad y el patrn de color, as como

cinco estados ninfales y una nueva generacin de adultos ocurre despus de 30-45 das. El ciclo de vida es completado de tres a cuatro semanas, cuando la duracin del da es de 12.5 horas o menos, la diapausa es inducida en las ninfas y se manifiesta en los adultos (Ferguson et al., 2012). Esta especie presenta dos tres generaciones por ao (Sutherland, 1989). Con frecuencia para as escapar cuando se le acercan, las ninfas caminan rpidamente y se caen si son molestadas. Daos Esta plaga presenta un aparato bucal chupador para succionar la savia de las plantas, esto ocasiona un dao en los tejidos vegetales. El dao lo inducen tanto ninfas como adultos, principalmente se alimentan de botones florales causando que el crecimiento terminal se marchite o distorsione, reduciendo el crecimiento de las plantas. Las hojas que crecen de los brotes daados son de tamaos desiguales y descoloridos. Las flores de brotes daados no se desarrollan de un lado y/o hay aborto de brotes enteros. Las poblaciones de

Figura 6. Adulto de Lygus lineolaris en amaranto.

las diferencias entre machos y hembras, estn influenciados por la temperatura, humedad, fotoperiodo hospedante y edad de los individuos. El insecto se encuentra presente durante todo el ciclo vegetativo pero el mximo de poblacin se ha reportado en septiembre y octubre. (Capinera, 2001; Carmona et al., 2008; Dixon y Fasulo, 2012; Moreno, 2005). Los inmaduros pasan por
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chinches incrementan conforme el amaranto se va desarrollando, aunque en las primeras dos semanas de desarrollo las infestaciones de Lygus no son crticas, el peso de las semillas es reducido significativamente cuando la planta sufre el dao a la tercera a la quinta semana (Wilson y Oslon, 1992; Clark, et al., 1995; Carmona et al., 2008; Dixon y Fasulo, 2012). Espitia-Rangel (1994)

Captulo IXX. Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.)

Figura 7. Estados inmaduros aglomerados.

reporta que las poblaciones nativas de brctea ms larga que el utrculo tienden a ser menos daadas por esta chinche (Figura 8). Manejo Las poblaciones de este insecto se presentan en agregacin, por lo que para realizar el muestreo se requiere tener un gran nmero de individuos para que sea representativa. Es

importante que se lleve a cabo un monitoreo en las malezas adyacentes hospederas de invierno y los lugares de hibernacin que anteriormente se mencionaron para detectar las poblaciones de adultos (Carmona et al., 2008). Es posible utilizar cultivos trampa que ayuden a disminuir poblaciones. Las trampas pegajosas pueden ser tiles para detectar las primeras poblaciones del insecto en huertos

a)

b)

c)

Figura 8. a) Panoja infestada. B) Semillas sanas C) Dao en semillas de amaranto por ataque de Lygus. P. Rivas-Valencia et al.

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de manzano y se menciona que funcionan en hortalizas; las trampas amarillas tambin pueden resultar tiles. (Capinera, 2001). Wilson (1989) identific algunas posibles fuentes de resistencia a este insecto. Aragn y Lpez-Olgun (2001), reportan que el extracto de Croton ciliatusglandulosus Ort. (Euphorbiaciea) al 3% aplicado por semana otorga cierta proteccin al cultivo contra el dao de fitfagos de follaje, aunque no otorga datos de evaluacin de su efecto para cada una de las plagas. Tambin reporta que la semilla de Trichilia havanensis Jacq. (Meliacea), causa fitotoxicidad al cultivo por lo que se recomienda considerar su uso. Como controladores biolgicos naturales se reporta a chinches depredadoras de los gneros Geocoris sp., Nabis sp., Zelus sp. y la especie Orius tristicolor. Tambin se encuentran presentes Crysopas (Carmona et al., 2008). Algunos parasitoides reportados para esta chinche son Anaphis iole Girault, parasitoide de huevos y Leiophron uniformis (Gahan) que parasita ninfas. Los himenpteros Peristenus pallipes (Curtis) y P. pseudopallipes (Loan) son de los ms importantes. Los parasitoides nativos parecen ser ms efectivos en malezas que en cultivo, en Nueva Jersey se reporta que el parasitoide bracnido Peristenus digoneutis Loan disminuye la abundancia de Lygus en un 75%, adems, esto parece no afectar a los parasitoides nativos (Capinera 2001). Liu et al. (2002) determin que cepas de diversos hongos entomopatgenos entre ellos Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae y el gnero Paecilomices tienen potencial como agentes de control microbiano contra L. lineolaris. BARRENADORES Hypolixus truncatulus (SIN: Lixus truncatulus) (FABRICIUS) (COLEOPTERA: CURCULIONIDAE) Importancia y distribucin Junto con el dptero Amauromyza abnormalis, es de las especies ms abundantes en el cultivo. Se han realizado pocas investigaciones al respecto de esta plaga polfaga. Como se ver ms adelante, existen reportes que indican que el efecto del dao en rendimiento de amaranto no se puede generalizar a todas las especies y/o variedades, ni en todos los lugares donde se cultiva. Espitia-Rangel (1994) y Aragn y Lpez280
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Olgun (2001) mencionan que esta especie es un problema serio en siembras comerciales de amaranto al igual que el gnero Sciara. TorresSaldaa et al. (2004) indican que la cantidad de larvas presentes est influenciada por el cultivar, por otra parte, Carmona et al. (2008), reporta infestaciones severas de hasta un 60%. Descripcin Los huevos recin depositados se observan ovalados y redondeados de los extremos, suaves, translcidos o amarillentos brillante, miden entre 1.25 mm de largo y 0.90 a 1.46 mm ancho. El color de stos cambia conforme avanza el desarrollo (Carmona et al., 2008; Tara et al., 2009). Los huevos eclosionan despus de tres a cinco das, las larvas son robustas, curvadas y podas, de color blanco. Se presentan cinco instares larvales, existen slo pequeas diferencias entre el primer y ltimo instar, se utilizan entonces slo la medida del cuerpo y la cpsula ceflica. La pupa es exarata, desnuda, con todos los apndices visibles, libremente proyectados en la superficie ventral. De color blanco cremoso al inicio y gradualmente se torna amarillo plido. Todos los segmentos tienen dorso transversalmente una hilera de setas en medio. Los adultos son caf oscuro con pelillos blancos y zonas oscuras de densa pubescencia. Antenas geniculadas de 14 segmentos (Tara et al., 2010). El cuerpo mide 7.0 a 12.0 mm de largo (Carmona et al., 2008) y de 3.0 a 4.0 mm de ancho (Tara et al., 2009), las hembras sutilmente ms largas que los machos. Cabeza prognata y rostrum pronunciado. Aparato bucal picador-masticador (Tara et al., 2009). Biologa y ciclo de vida Casi inmediatamente despus de la copulacin, la hembra hace un hoyo de 1-2 mm de profundidad y en ramas tiernas o en las nervaduras centrales de la hojas depositando un solo huevo. El huevo tiene una duracin de 2-4 das y las larvas avanzan a los tallos para barrenar. Prez-Torres et al. (2011), reportan que las poblaciones se presentan entre septiembre y noviembre cuando la planta est al inicio de la antesis y empieza su maduracin. Tara et al. (2009) reporta que el ciclo larval completo vara entre 42 y 45 das en la especie Amaranthus caudatus. Antes de la pupacin, las larvas maduras

Captulo IXX. Aspectos fitosanitarios en el cultivo del amaranto (Amaranthus spp.)

perforan el tallo hasta la superficie, donde hace un pequeo agujero redondo dejando la capa delgada epidermis intacta (Tara et al., 2009), este agujero se forma a nivel de la superficie del suelo o en la axila de la rama basal donde se desarrolla la cmara pupal, la cual se observa marrn-griscea, dura y compacta. El adulto no es muy activo en vuelo pero siempre est alerta, de manera que si percibe un movimiento brusco, se deja caer al suelo y simula estar muerto. Dao Ocurre al daar los tejidos vasculares de la planta y debido a esto la capacidad para la absorcin de nutrientes se ve disminuida, provocando un debilitamiento de la planta. Los sntomas observables son amarillamiento progresivo, enrollamiento de la panoja, marchitez y finalmente la muerte de la planta (Carmona et al., 2008). Aragn-Garca et al. (1997) encontraron que las larvas pueden estar presentes hasta en un 92% de los tallos muestreados, es posible encontrar de 33-35 larvas atacando a una sola planta. Torres-Saldaa et al. (2004) observaron barrenacin en la mayora de los tallos de A. hypochondriacus en Tulyehualco, D.F., sin embargo, indican que el nmero de larvas no afect positivamente el rendimiento en grano de las plantas de amaranto, tampoco el nmero de larvas en la produccin de biomasa area. Manejo Se debe colocar atencin sobre las reas de hibernacin, exponer a las larvas a los rayos solares y exponer a los enemigos naturales. Carmona (2008) recomienda la aplicacin de hongos entomopatgenos con Beauveria bassiana o Metarhizium anisopliae despus del trasplante cuando los tallos se empiecen a engrosar. Tambin se recomienda el uso de extractos de higuerilla y epazote. Los insecticidas que son comnmente recomendados son malatin y endosulfn, sin embargo, stos condicionan un grave dao a la salud humana y una degradacin a los recursos naturales locales. Hace falta mayor investigacin respecto a estas y otros fitfagos presentes en este cultivo que sirvan para colocar las alternativas biolgicas de manejo, as como los enemigos naturales locales para buscar la regulacin de plagas.

Amauromyza abnormalis (MALLOCH) (DIPTERA:AGROMYZIDAE) Importancia y distribucin La mosca barrenadora del amaranto es considerada una especie Nertica, la distribucin abarca Estados Unidos y Canad, as como la regin Neotropical. El primer registro de esta especie en nuestro pas fue realizada por Bautista et al. (1997) en localidades del Estado de Mxico y Tlaxcala. Este dptero se encuentra atacando a las especies Amaranthus hypochondriacus y A. cruentus pero sin datos hasta la fecha que aporten la cuantificacin del dao en este cultivo. Por otra parte A. hybridus la encontraron como maleza hospedante. Este insecto est dentro de las ms importantes, en el estado de Puebla se registra de un 90-92% la infestacin en el cultivo (Aragn y Lpez-Olgun, 2001; Carmona et al., 2008), aunque est asociada a por lo menos cuatro especies ms de barrenadores. Descripcin No existe informacin acerca del estado de huevo, sin embargo se mencionan a continuacin las caractersticas para los estados biolgicos que se han reportado en el mundo. El adulto con halterios caf oscuro y mesonoto caf plido (Frick, 1959; Spencer 1981), de 3 mm de longitud. La larva de color blanco de 7 mm de longitud, poda y alargada. Espirculo caudal con cuatro lbulos, lo cual es caracterstica distintiva que separa el resto de las especies (Bautista et al., 2003). La pupa es de color caf brillante, alargada (Carmona et al., 2008). Biologa y ciclo de vida Se encuentra presente en tallos y races de especies de Amaranthus y Chenopodium. Los primeros adultos se observan a mitad de junio, cuando en campo estn presentes tallos tiernos del cultivo para ovipositar. Las larvas se presentan en junio y julio y hasta el final del cultivo, la larva comienza a alimentarse en el tallo y conforme su desarrollo avanza se pueden encontrar galeras que avanzan desde la parte superior hasta la base de la planta (Bautista et al., 2003; Carmona et al., 2008). La pupa se encuentra en la parte interna del tallo o en el suelo (Spencer, 1981; Bautista et al., 2003).
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Daos Al hacer las galeras dentro del tallo, las larvas de la mosca afectan el sistema vascular. El dao por las larvas se ha encontrado hasta la mitad del pednculo de la panoja, en el ltimo instar larval, hace una perforacin para pupar. Carmona et al. (2008), menciona que es posible encontrar hasta diez larvas por planta, mientras que Espitia (1990) reporta 20 ms larvas por planta. El dao mecnico producido por este insecto da cabida a la introduccin de patgenos como el hongo Macrophoma sp., lo que puede ocasionar un debilitamiento general de la planta. Si las plantas presentan un ataque severo, pueden marchitar y morir. Manejo No existe un manejo de la plaga, es necesario hacer mayor investigacin para determinar el impacto del dao en un nivel de produccin comercial, conocimiento puntual de la biologa y ecologa del insecto as como la evaluacin de productos orgnicos o de origen vegetal como insecticidas. Es importante tambin obtener datos de parasitismo natural para tener elementos que nos permitan favorecer la conservacin de estos organismos benficos (Muiz et al., 2011) Carmona et al. (2008), recomienda prcticas culturales para el caso de las pupas en el suelo.

que la infestacin es severa. Tambin se reporta que este insecto se encuentra presente en todas las reas productivas de amaranto en el pas. PULGONES (HEMIPTERA: APHIDIDAE) Importancia y distribucin Vejar et al. (1994) y Carmona et al. (2008) reportan la especie Aphis fabae (Scop.) en Montecillo, Estado de Mxico y Distrito Federal respectivamente. Mujica (1997) menciona como presentes al gnero Aphis spp. y Myzus persicae (Sulzer). En Puebla, Aragn y Lpez-Olgun (2001) y Prez-Torres (2011) registran al gnero Macrosiphum spp. Estos insectos son altamente polfagos y pueden causar daos severos. Descripcin De manera general los individuos de la familia Aphididae son de cuerpo blando, piriforme, de longitud variable en el caso de Macrosiphum de 4 mm, el color vara de verde a negro. Aparato bucal o rostrum es del tipo picador-chupador. La metamorfosis es paurometbola. Todos son polimrficos, es decir tienen formas aladas y pteras. La frente o vrtice, puede ser cncava (Macrosiphum) o convexa (Aphis). En la base de las antenas se encuentran los tubrculos frontales, los cuales son en el caso de la tribu Aphidini poco desarrollados, no as en la tribu Macrosiphini.

a)

b)

Figura 9. Dao por barrenadores en plantas de amaranto.

Sciara spp. (DIPTERA: SCIARIDAE) Espitia (1992) reporta a este dptero como un organismo capaz de ocasionar dao importante en el tallo, aunque no se han realizado evaluaciones dirigidas hacia el efecto en el rendimiento. La larva perfora desde un tnel a la punta de la planta, se pueden encontrar hasta tos como 20 ms larvas en una sola planta. Muchas plantas no muestran sntomas externos del barrenador hasta
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Los tubrculos frontales pueden ser convergentes como en Myzus o divergentes Macrosiphum. Las antenas son de cuatro a seis segmentos y la longitud de los artejos vara. Los sensorios primarios se encuentran en los dos ltimos segmentos de la antena, tanto en alados como en pteros, y son siempre circulares. En los alados, los ojos compuestos estn bien desarrollados y con tres ocelos. De la base del sexto segmento

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emergen los cornculos o sifnculos, que varan en tamao y forma, llegando en algunos casos a reducirse casi por completo. Los cornculos pueden ser de lados paralelos o cilndricos, como en el gnero Aphis. En algunos gneros de la tribu Macrosiphni, los cornculos poseen reticulacin distal. La cauda puede ser bien desarrollada y tener lados paralelos (Aphis), o terminada en punta (Macrosiphum) (Cermeli, 1970). Biologa y ciclo de vida El ciclo de vida de los fidos es complejo, presentan heterogamia o reproduccin cclica, en la cual se alternan generaciones partenogenticas con reproduccin sexual. En la reproduccin partenognicas las hembras paren directamente ninfas, que cuando llegan a adulto pueden presentar alas o no. La migracin se realiza a travs de las formas aladas que empiezan a desarrollarse cuando las condiciones de la planta hospedante no son favorables, o bien cuando la colonia tiene un exceso de individuos pteros, que son los responsables de la dispersin y colonizacin de las nuevas plantas, as como de la transmisin de las enfermedades virales. Los fidos normalmente se localizan en grupos sobre hojas y brotes nuevos, formando en algunos casos densas colonias. Se observan entre los meses de mayo a septiembre (Aragn y Lpez-Olgun, 2001). Daos Se encuentran en el envs de las hojas, sobre todo en las hojas tiernas, afectan los brotes, tallos y panojas, por lo que pueden producir deformaciones y los sntomas por virus. El perjuicio lo ocasionan al introducir los estiletes y succionar la savia de las plantas, llegando a presentar un dao del 13% (Aragn y LpezOlgun, 2001). El sntoma se observa con un amarillamiento generalizado en la planta y un enrollamiento en las hojas (Prez-Torres et al., 2011). Manejo Se recomienda el uso de trampas pegajosas amarillas o azules. El incremento de enemigos naturales como catarinas del gnero Hippodamia y Crisopa (Chrysoperla sp.) es una opcin viable ya que son depredadores clsicos de pulgones y que muestran una accin satisfactoria

en mucho de los casos (Gaona, 2000). Tambin se recomienda el uso de jabones por su accin en el integumento del insecto, uso de insecticidas a base de extractos vegetales ya de uso comercial y de hongos entomopatgenos. Estigmene acrea (DURY) (LEIDOPTERA: ARCTIIDAE) Importancia y distribucin Este insecto se encuentra en todo el pas. Es una plaga generalista y se alimenta de ms de 60 hospedantes (Castrejn y Rojas, 2010). Carmona et al. (2008) reporta infestaciones de hasta un 25%. Descripcin La hembra deposita masas de huevos en el envs de las hojas, de color amarillo y forma esfrica con la superficie esculpida. La larva es de color amarillo o verde-amarillento, tiene numerosas setas o pelos en toda la longitud del cuerpo. La larva mide alrededor de 10 mm durante el primer instar y crece hasta 55 mm de largo (Capinera, 2001). Antes de pupar se desprenden de los pelos para formar la pupa en el suelo (Sifuentes y Young, 1961; Carmona et al., 2008; Prez-Torres, 2011). Los adultos son de color blanco en las alas anteriores y las posteriores de color amarillo o blanco con puntos negros y tienen una expansin alar de hasta 5 cm. Abdomen naranja con bandas negras transversales (Carmona et al., 2008). Biologa y ciclo de vida Es mas activa y se reproduce en los meses de julio, agosto y septiembre. En los meses fros, el insecto se interna en el suelo en estado de pupa protegindose en la hojarasca. Presenta cinco a siete instares larvarios, cuerpo. La duracin del desarrollo larval es de 24 a 37 das, dependiendo de la alimentacin, pero se han reportado periodos larvales de hasta 45 das. La pupa caf oscuro y su duracin es de 12 a 14 das. Las hembras viven de cuatro a cinco das, pero pueden producir ms de un grupo de huevos (Capinera, 2001). Daos El dao por este lepidptero se puede distinguir porque se alimenta de la hoja dejando solo las nervaduras laterales y la principal. El
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consumo del follaje para una larva madura es aproximadamente de 13 centmetros cuadrados de follaje. Se estim adems que de 1 a 1.5 larvas maduras por planta podran provocar el 20% de defoliacin a una planta de frijol, un nivel adecuado para causar la prdida en campo. Manejo Existen depredadores tales como coccinlidos, melridos y redvidos pero no son muy importantes en la regulacin poblacional del gusano peludo. Respecto al control qumico, los productos autorizados estn en funcin del cultivo en que se presente, sin embargo, se recomienda usar stos de manera eficiente y de grupos toxicolgicos bajos. Carmona et al. (2008), mencionan que el insecto es susceptible al contacto con Bacillus thuringiensis. Es posible el uso de extractos vegetales como repelentes o insecticidas orgnicos. Pholisora catullus Fab. (Lepidoptera: Hesperiidae) Importancia y distribucin Graves y Shapiro (2003), la reportan en siete especies del gnero Amaranthus. Carmona et al. (2008) indica que este insecto no es de importancia en el Distrito Federal debido al control por enemigos naturales, las infestaciones son del 5%.

Descripcin El adulto mide 26-32 mm con las alas extendidas, el patrn de manchas blancas en la zona distal de las alas anteriores es evidente. Se pueden diferenciar la hembra porque tiene mayor nmero de manchas que el macho (Aragn y Lpez-Olgun, 2001). Huevos color negro, larvas con dos manchas negras dorsales en el primer segmento torcico que simula un anillo interrumpido. La cabeza es oscura y el cuerpo verde con una lnea longitudinal dorsal. La pupa en sus primeros das de desarrollo es blanca y al final es oscura (Aragn y Lpez-Olgun, 2001). Biologa y ciclo de vida El adulto se alimenta de nctar de flores y oviposita sobre el haz de las hojas en masas de 15 huevos, la larva completa su desarrollo en aproximadamente 19 das, la pupa se forma en la hoja que enrolla para su proteccin. Daos y Manejo El dao se produce en las partes terminales de la planta, Aragn y Lpez-Olguin (2001) reportan infestaciones de hasta el 57%, la larva enrolla hojas tiernas para elaborar la pupa, de manera que evita un desarrollo normal de la planta. El uso de Bt es muy til para disminuir las poblaciones del insecto en las primeras apariciones en el cultivo.

Figura 10. Larva de Pholisora catullus y diferentes aspectos del dao.

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Spodoptera exigua (HBER) (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE) Importancia y distribucin El gusano soldado Spodoptera exigua es nativo del oriente de Estados Unidos, fue reportado primeramente de California en 1876, su distribucin es mundial y se rata de una plaga polfaga, se reportan 60 especies vegetales de 23 familias botnicas. Descripcin, biologa y ciclo de vida En S. exigua, el adulto puede medir hasta 15 mm de longitud, las alas anteriores de color caf grisceo con una mancha central plida o anaranjada orbicular y reniforme de color ocre (Alfaro, 2005). Las alas posteriores son blancas con bordes sombreados oscuros. La hembra oviposita masas de huevos en grupos de 50 o ms en el envs de las hojas o cerca de la base del tallo, La larva puede medir hasta 30 mm, adelgazada en su parte anterior, color verdoso con una lnea dorsal y otra ms ancha, oscura, por encima de la lnea de estigmas y con otra clara debajo de ella. Las larvas se encuentran en la planta en forma agregada, se alimentan de hojas tiernas dejando solo las nervaduras centrales. Para el caso de este insecto, se pueden diferenciar el nivel de dao, desde el dao leve, con una a tres larvas por planta o dao severo cuando se encuentran de 10 larvas en adelante. La dinmica poblacional es variable en cada ciclo, en un ao pueden ser muy destructivas pero en otros no constituir un verdadero riesgo. Los meses de mayor incidencia es de julio a septiembre. Adems de S. exigua, se encuentra presente S. ornitoghalli y S. frugiperda como un complejo de gusanos soldados. Manejo Manejo de malezas adyacentes y/o utilizarlos como cultivo trampa. Trampas de luz con cebo alimenticio. Se encuentran depredadores como Geocoris spp., Orius spp., Hippondamia convergens y Chrysoperla carnea. Tambin se reportan los parasitoides del gnero Cotesia y miembros de la familia Tachinidae. El uso de Bt es recomendado para este tipo de larvas. El uso de trampas con feromonas tambin resulta til. Es importante sealar que en la literatura slo se cuentan escasos trabajos cientficos que den soporte a datos de porcentaje

de dao o la abundancia y eficacia de enemigos naturales como porcentaje de infestacin de las plagas. OTROS FACTORES DE RIESGO PARA LA PRODUCCIN DE AMARANTO Agentes abiticos Las bajas temperaturas y heladas que se presentan durante el desarrollo vegetativo del amaranto, son factores que tienen mucha importancia para la produccin, siendo la fase fenolgica de floracin y panoja las ms sensibles; cuando las temperaturas descienden bajo 4C afecta no slo el crecimiento del amaranto, si no que puede causar dao mecnico en el cultivo como consecuencia del congelamiento, trayendo como resultado muchas veces prdida completa de la produccin. Las granizadas durante la maduracin y llenado del grano causan daos considerables en la produccin, trayendo como consecuencia cada de las semillas maduras y dejando las inflorescencias sin semillas, adems de destrozar la planta completa. Los excesos de humedad en el suelo tambin causan prdidas en la produccin, especialmente en los primeros estados de desarrollo, produciendo pudriciones radiculares, acame de las plantas y consecuentemente mayor incidencia de enfermedades; sobre todo cuando ocurren precipitaciones seguidas en un lapso corto de tiempo, recomendndose efectuar drenes en el campo. OTROS FACTORES QUE DAAN AL AMARANTO Las aves producen daos considerables en la produccin pudiendo disminuir el rendimiento hasta en un 45%, sobre todo en reas donde existen rboles y la presencia de ellas es significativa; no slo consumen los granos maduros, si no que destrozan la inflorescencia trayendo como consecuencia cada de las semillas al suelo (Figura 12). Cuando los granos cosechados son almacenados y no se tiene la precaucin de controlar los roedores, estos causan daos considerables no slo consumiendo las semillas en almacenaje si no que disminuyendo la calidad por las defecaciones que dejan y como consecuencia disminuye fuertemente el precio.
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Figura 11. a) Larvas de S.exigua, b) Larvas de S. ornithogalli. A) B)

Figura 12. Daos por agentes abiticos. A) Heladas y B) cicatrices de dao por granizo.

Figura 13. Pjaros alimentndose de amaranto.

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Protenas y Propiedades Funcionales

Captulo XX

Caracterizacin bioqumica y estructural de las protenas de reserva de amaranto


BIOCHEMICAL AND STRUCTURAL CHARACTERIZATION OF AMARANTH SEED STORAGE PROTEINS

Jos ngel Huerta Ocampo, Ana Paulina Barba de la Rosa


IPICyT, Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A.C., Camino a la Presa San Jos No. 2055, Lomas 4 seccin C.P. 78216, San Luis Potos, S.L.P., Mxico. Autor para correspondencia: apbarba@ipicyt.edu.mx

RESUMEN El amaranto es reconocido como una planta con alto potencial agroalimentario debido a que sus hojas y sus semillas son de alto valor nutricional y ambas pueden emplearse para la alimentacin humana y animal. Aunado a esto, la planta puede crecer en climas ridos bajo poco suministro de agua. En el siglo pasado el amaranto fue conocido por sus propiedades nutricionales, el grano contiene tres veces ms lisina en que el trigo, el arroz y el maz. La grasa de la semilla de amaranto est compuesta por escualeno y cidos grasos insaturados como los cidos linoleco, oleico y palmtico, adems de otros compuestos como tocotrienoles, fitoesteroles y esteroles que ayudan a disminuir el colesterol en la sangre. En este nuevo siglo el estudio de las protenas de amaranto se ha enfocado en la caracterizacin de pptidos con importantes funciones biolgicas encriptados en estas protenas. Las estructuras tridimensionales de protenas como el inhibidor de alfa amilasa y globulinas 11S han sido resueltas. Protenas aisladas de las fracciones albminas y globulinas se han empleado en la modificacin gentica de maz, trigo y papa con el fin de mejorar su calidad nutricional. En este captulo hacemos una revisin de la

caracterizacin bioqumica y estructural de las protenas de reserva de la semilla de amaranto. Palabras clave: Albminas, tridimensionales, Globulinas, Prolaminas. ABSTRACT Estructuras Glutelinas

Amaranth is recognized as a crop with high agri-food potential because its leaves and seeds are highly nutritious and can be used both as food and feed resources. In addition, the plant can grow in arid climates under low water supply. The last century amaranth was known for its nutritional properties, the grain contains three times more lysine than wheat, rice and corn. Amaranth seed fat comprises squalene and unsaturated fatty acids such as linoleic, oleic and palmitic acids. It is also a source of compounds such as tocotrienols, fitosterols and sterols that help to lower blood cholesterol. In this new century, studies have focused on the characterization of bioactive peptides encrypted in amaranth seed storage proteins, such peptides have shown important biological functions to improve the health of consumers. Threedimensional structures of proteins such as alpha amylase inhibitor, lectin and 11S globulins
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isolated from amaranth have been resolved. Due to the high quality of amaranth seed proteins, crops such as corn, wheat and potato have been genetically modified with amaranth albumins and globulins in order to improve their nutritional quality. In this chapter we review the biochemical and structural characterization of amaranth seed proteins. Key words: Albumins, Globulins, Glutelins, Prolamins, 3D structures. INTRODUCCIN Se conocen tres especies de amaranto que pueden producir semillas nutritivas: Amaranthus hypochondriacus L., Amaranthus cruentus L., y Amaranthus caudatus L. (Figura 1), los dos primeros tienen origen en Mxico y Amrica Central y el ltimo tiene como centro de origen Per y Ecuador. La composicin proximal de las

harinas de estas semillas muestra que el contenido de protena vara entre 13 a 18%, la grasa de 6.3 a 8.1%, la fibra de 2.2 a 5.8% y el contenido de cenizas de 2.8 a 4.4%. La comparacin de la composicin proximal de amaranto con la de los principales cereales se muestra en el Cuadro 1. La composicin de aminocidos esenciales en semilla de amaranto (Cuadro 2) presenta un perfil sobresaliente debido a que el balance de aminocidos es cercano al ptimo requerido en la dieta humana (FAO/WHO, 1973). CLASIFICACIN DE LAS PROTENAS DE AMARANTO Las protenas de las semillas pueden clasificarse de diferentes maneras. Con base en su localizacin, se agrupan en protenas de endospermo, embrin y perispermo; con base en sus funciones biolgicas se clasifican como protenas con actividad enzimtica, regulatorias,

a)

b)

c)

Figura 1. Aspecto de la inflorescencia de A) Amaranthus hypochondriacus L., B) Amaranthus cruentus L., C) Amaranthus caudatus L. Cuadro 1. Composicin proximal de amaranto y los principales cereales1.

Componente Amaranto 11.1 Humedad 17.9a Protena Grasa 7.7 Fibra 2.2 Cenizas 4.1 Carbohidratos 57.0
1Porcentaje en base de peso seco; aNx5.85, bNx6.25,cNx5.7.

Maz 13.8 10.3b 4.5 2.3 1.4 67.7

Arroz Trigo 11.7 12.5 8.5b 14.0c 2.1 2.1 0.9 2.6 1.4 1.9 75.4 66.9

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Captulo XX. Caracterizacin bioqumica y estructural de las protenas de reserva de amaranto

estructurales y ribosomales, y considerando su composicin qumica se clasifican en simples (constituidas exclusivamente por una o varias cadenas de aminocidos) y conjugadas (aquellas que contienen otros grupos qumicos unidos a la o las cadenas de aminocidos, por ejemplo: lipoprotenas, glicoprotenas, nucleoprotenas, metaloprotenas). Osborne (1924) clasific a las protenas de granos con base en su solubilidad en diferentes solventes. Las albminas son protenas solubles en agua, las globulinas solubles en soluciones salinas, las prolaminas solubles en soluciones alcohlicas y las glutelinas solubles en soluciones cidas o bsicas.

Las protenas de amaranto se han caracterizado con base en la clasificacin de Osborne, an en la actualidad existe discrepancia sobre cul es la fraccin mayoritaria, esto principalmente debido a los diferentes mtodos y solventes de extraccin empleados por los diferentes autores. En general el contenido de albminas vara del 19 al 45%, el de globulinas (11S y 7S), del 16 al 35%, el de prolaminas de 0.7 a 1.3%, y el de glutelinas de 22 a 41% (Barba de la Rosa et al., 1992a). En la Figura 2 se muestra el patrn electrofortico de las principales fracciones de protenas de reserva de amaranto. Interesantemente la fraccin

Cuadro 2. Composicin de amino cidos esenciales (g/100 g de protena).

Requerimiento estimado por Amaranthus Amino cido FAO/WHO caudatus cruentus hypochondriacus Adultos nios Cistena 3.0 2.3 2.9 Isoleucina 3.3 3.8 5.2 4.6 1.3 Leucina 5.4 6.1 5.3 9.3 1.9 Lisina 4.6 6.1 5.3 6.6 1.6 Metionia 1.4 2.9 1.7 Fenilalanina 4.1 3.7 3.8 Treonina 3.4 3.8 5.3 4.3 0.9 Triptofano 2.5 1.1 nd 1.7 0.5 Tirosina 3.5 2.8 3.2 Valina 3.7 4.4 4.1 5.5 1.3 Met+Cys1 4.1 4.7 4.6 4.2 1.7 Phe+Tyr2 7.7 6.2 7.1 7.2 1.9
1metionina+cistena; 2fenilialanina+tirosina. nd=no determinado

Figura 2. Patrn electrofortico en condiciones reductoras de las 4 fracciones de principales de protenas de reserva en amaranto. Carril 1=marcador de peso molecular, carril 2=albminas, carril 3=globulinas 7S, carril 4=globulinas 11S, carril 5=glutelinas. J. A. Huerta-Ocampo y A. P. Barba de la Rosa

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glutelinas presenta un patrn electrofortico similar al de las globulinas y se ha demostrado que las subunidades de globulinas inmunoreaccionan con las de glutelinas (Vasco-Mndez y Paredes-Lpez, 1994). La composicin de las fracciones de protenas de reserva le da otro inters especial al amaranto debido a que su contenido de prolaminas es muy bajo. Estas protenas son consideradas como txicas para personas que sufren de enfermedad celiaca, por lo tanto se propone al amaranto como un grano libre de prolaminas (Ballabio et al., 2011; Caldern de la Barca et al., 2010; Shoenlechner et al., 2010). COMPOSICIN DE LA FRACCIN ALBMINAS Las albminas eran consideradas como protenas funcionales (housekeeping) hasta que Youle y Huang (1978) reportaron la presencia de albminas en los cuerpos protenicos. Konishi et al. (1991) aislaron dos tipos de fracciones de albminas (alb-1 y alb-2) de A. caudatus L. y A. hypochondriacus L., con propiedades bioqumicas diferentes, sugiriendo que la alb-2 son protenas de almacenamiento que podran estar asociadas con cuerpos protenicos, inaccesibles a la digestin enzimtica. En amaranto las albminas representan una fraccin importante de las protenas de reserva. De esta fraccin se han aislado protenas de alto valor nutricional como las protenas ricas en metionina, una protena de 35 kDa conocida como AmA1, as como pptidos con actividad antimicrobiana, inhibidores de proteasas, inhibidores de alfa amilasa y lectinas. Protenas ricas en metionina En la fraccin 2S de albminas de amaranto se encuentra un grupo de protenas de aproximadamente 18 kDa conocido como

protenas ricas en metionina (2SMRPs). Se han aislado dos tipos, MRP-1 y MRP-12 con 18.6 y 16.6% de metionina, respectivamente y tambin altos contenidos de lisina, 6.4 y 6.1% (SeguraNieto et al., 1994). Un gen de albmina de amaranto (A. hypochondriacus L.) que codifica para una protena de 35 kDa con altas cantidades de amino cidos esenciales, denominada como AmA1 (Figura 3) ha sido empleado para transformar el trigo panadero y la papa, incrementando significativamente el contenido de protena y aminocidos esenciales en estas cosechas. Estos resultados sugieren que la expresin de AmA1 es una estrategia potencial para mejorar el valor nutricional de diversos cultivos (Tams et al., 2009; Chakraborty et al., 2010). Pptidos antimicrobianos Pptidos antimicrobianos han sido aislados de A. caudatus L. y A. retroflexus L. los cuales fueron denominados como Ac-AMP y Ar-AMP, respectivamente. Ambos pptidos presentan alta homologa con la super familia de protenas que enlazan-quitina caracterizadas por tener un dominio de enlace a quitina rico en cistena/glicina (Broekaert et al., 1992, Lipkin et al., 2005). Los Ac-AMPs inhiben el crecimiento de hongos con mayor potencia que otros pptidos antifngicos (Broekaert et al., 1992). Esta propiedad nica como potentes inhibidores del crecimiento fngico in vitro sugiere que estos pptidos pueden tener un papel importante en la defensa de las semillas contra la invasin fngica y por lo tanto podran emplearse como herramientas para la transformacin de plantas contra el ataque de hongos en plantas (Lipkin et al., 2005).

Figura 3. Secuencia de aminos cidos de la protena AmA1. Los aminocidos en negritas representan los aminocidos esenciales (GenBank ID: AF491291.1).

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Inhibidores de proteasas Los inhibidores de proteasas son de particular inters en cereales, leguminosas y papa debido a sus posibles efectos negativos sobre la nutricin animal y humana, as como por su posible papel en la defensa contra ataques de insectos y microbios (Ryan, 1990). En amaranto, se han descrito al menos 13 inhibidores de tripsina altamente termoestables reteniendo el 20% de su actividad original despus ser tratados durante 7 h a 100 C (Koeppe et al., 1985). El inhibidor de tripsina de amaranto, con un peso molecular de 7.4 kDa y un pI cercano a 7.5 es un inhibidor del tipo serina-proteasas que reconoce quimotripsina y tripsina, adems inhiben las proteasas tipo-tripsina extradas de la larva del insecto Prostephanus truncatus (ValdesRodriguez et al., 1993). Un inhibidor tripsina/subtilisina (ATSI) con pI de aproximadamente 8.3 y peso molecular de 7.8 kDa fue aislado de A. caudatus L. La forma madura del (ATSI) muestra una identidad del 33 al 51% con los inhibidores de otras plantas. ATSI es un potente inhibidor de tripsina (Ki aprox 0.34 nM), tambin inactiva quimotripsina y varias protenas microbianas alcalinas incluyendo la subtilisina NOVO. Este inhibidor contiene Trp en lugar del altamente conservado Arg en la posicin 53 lo cual se asume es importante en la estabilizacin del loop del sitio activo durante la formacin del complejo protena-inhibidor (Hejgaard et al., 1994). Otro inhibidor aislado de amaranto denominado Aml, es una protena de 8 kDa estable tanto a

pH neutro como alcalino y es relativamente termoestable. Aml es capaz de inhibir la tripsina y quimotripsina del sistema digestivo de insectos como Tribolium castaneum y Locusta migratoria, soportando la hiptesis de que los inhibidores de proteasas presentes en la semilla pueden ser parte de los mecanismos de defensa contra el ataque de insectos (Tamir et al., 1996). Inhibidores de alfa amilasa Un inhibidor de alfa amilasa (AAI) de 31 residuos de aminocidos fue aislado de la semilla de amaranto (Chagolla-Lpez et al., 1994). La estructura tridimensional del AAI adopta un doblamiento knottin de topologa abcabc estabilizado por tres enlaces di-sulfuro. Esta estructura adopta una conformacin ms compacta cuando se une al sustrato (Figura 4). El doblamiento knottin se caracteriza por un incremento en el nmero de enlaces hidrgeno intermoleculares, una disminucin de volumen y la isomerizacin de trans a cis en el residuo prolina 20 (Carugo et al., 2001). El ADNc que codifica para un inhibidor de cistena-proteasas (AhCPI) fue aislado de semilla inmadura de A. hypochondriacus L. Este inhibidor codifica para un polipptido de 247 aminocidos incluyendo un pptido seal al extremo N-terminal. Los estudios indican que AhCPI acta como un regulador de la germinacin de semillas y es un agente protector contra diversos tipos de estreses abiticos. AhCPI contiene los motivos LARFAV conservados en las fitocistatinas (protenas de plantas que inhiben

Figura 4. Estructura tridimensional del inhibidor de alfa amilasa presente en la semilla de amaranto. Las flechas indican las estructuras de lmina beta y las barras en amarillo muestran los tres enlaces di-sulfuro (Tomada de la base de datos PDB ID: 1HTX). J. A. Huerta-Ocampo y A. P. Barba de la Rosa

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cistena-proteasas), as como el sitio reactivo QVVAG (Valds-Rodrguez et al., 2007). Esta protena es capaz de inhibir el crecimiento de Fusarium oxysporum, Sclerotium cepivorum y Rhyzoctonia solani (Valdes-Rodriguez et al., 2010). Lectinas Las lectinas son glicoprotenas sin actividad cataltica que se unen con alta afinidad a carbohidratos. Se emplean en inmunologa, biologa celular y en investigacin en cncer debido a sus efectos biolgicos tales como inmunosupresin, mitogenicidad y citotoxicidad. Una lectina de 45 kDa y denominada como ACL fue aislada de A. hypochondriacus L. ACL es un dmero con un peso molecular estimado de 66 kDa constituido por dos subunidades de 35 kDa y contiene 2.2% de carbohidratos neutros. La lectina de A. caudatus (ACA) es un homodmero formado por dos subunidades con un peso molecular de 33 a 36 kDa. A diferencia de muchas lectinas, ACA no es glicosilada y no requiere de cationes metlicos para enlazar azcares (Figura 5). La funcin biolgica de esta lectina no ha sido caracterizada pero se ha mostrado que tiene alta especificidad por glicoprotenas del antgeno de Thomsen-Fredenreich o antgeno-T. El antgeno-T se expresa en ms del 85% de los carcinomas humanos tales como colon, mama y prstata, por lo que ACA tiene un promisorio uso como reactivo para la deteccin histoqumica temprana de carcinoma (Transue et al., 1997).

COMPOSICIN DE LA FRACCIN GLOBULINAS Debido a la gran funcionalidad de la fraccin globulinas y a que se encuentra en un porcentaje importante en la semilla de amaranto, existe un inters especial por caracterizarlas. Las globulinas son la fraccin principal en leguminosas y existen dos clases principales, globulinas 7S y 11S referidas de acuerdo con su coeficiente de sedimentacin. Las globulinas 7S son glicoprotenas de 170-141 kDa, compuestas de seis diferentes combinaciones de tres subunidades, (57 kDa), (58 kDa) y (42 kDa) asociadas va interacciones hidrofbicas (Utsumi y Kinsella, 1985). La protena 7S ms representativa es la faseolina de frijol. Las globulinas 11S consisten de dos anillos hexagonales asociados hidrofbicamente conteniendo tres pares de subunidades cidas (35-37 kDa) y bsicas (18-20 kDa) unidas por puentes di-sulfuro. La globulina 11S modelo es la glicinina de soya (Peng et al., 1984). Konishi et al. (1985) caracterizaron una globulina de amaranto con peso de 440 kDa con un coeficiente de sedimentacin de 12.7S. Esta protena est formada por las subunidades cidas y bsicas de 36 y 32 kDa, y de 20 y 18 kDa, respectivamente. Barba de la Rosa et al. (1992b) reportaron por primera vez la presencia de los dos tipos de globulinas (7S y 11S) en amaranto. Las globulinas 11S de amaranto mostraron el fenmeno de asociacin-disociacin presente en las protenas de soya. Barba de la Rosa et al. (1996) aislaron y caracterizaron el gen de una globulina 11S de amaranto, la cual contiene altos contenidos de metionina (Figura 6).

Figura 5. Estructura tridimensional de ACA, lectina purificada de semilla de A. caudatus. ACA es un dmero con sitios de enlace para el disacrido Gal-1,3-GalNAc--O-benzilo (crculos rojos y negros) del antgeno-T. El dmero esta est compuesto de dos subunidades relacionadas por una dada no-cristalogrfica. Cada dominio contiene dos dominios trbol-. En amarillo se representan las estructuras lmina- (tomada de la base de datos PDB ID: 1JLX).

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La estructura cristalogrfica de la globulina 11S (Figura 7) ha sido resuelta por Tandang-Silvas et al. (2012). La estructura muestra los dominios -hlice y lminas- a ambos extremos N-terminal y C-terminal caractersticos de las globulinas 7S y 11S. Konishi y Yoshimoto, (1989) reportaron que la estabilidad y actividad de la emulsin de globulinas de amaranto son alrededor del doble que las reportadas para la protena de soya y menores que las de la casena. Tambin demostraron que la globulina de amaranto es relativamente estable al calor. Estos estudios fueron validados por el anlisis estructural, confirmando que la alta estabilidad trmica y las buenas propiedades emulsificantes de la globulina de amaranto se deben al balance entre la hidrofobicidad e hidrofilicidad de su superficie (Tandang-Silvas et al., 2012). El gen de la globulina 11S de amaranto ha sido empleado para llevar a cabo la transformacin gentica del maz con el fin de mejorar su contenido de aminocidos esenciales (Rascn-Cruz, et al., 2004).

FRACCIN GLUTELINAS Las glutelinas de amaranto tienen un perfil electrofortico similar al de las globulinas 11S, mostrando tres bandas principales de 50, 30 y 20 kDa, por lo que se ha sugerido que esta fraccin pudieran ser las globulinas 11S en una forma ms agregada. Tambin se ha descrito que dependiendo de la solucin de extraccin se puede aislar otra fraccin denominada como globulina-P que presenta una solubilidad y un grado de asociacin intermedio entre las globulinas y las glutelinas (Castellani et al., 1988; Abugoch et al., 2003). La atencin prestada a la fraccin glutelinas se debe a que es una fraccin mayoritaria de protenas de reserva en amaranto y que en esta fraccin se detect por primera vez la presencia del pptido tipo-lunasin. Los pptidos generados por la hidrlisis enzimtica de la fraccin glutelinas (Figura 8) fueron analizados por LC/MS-MS reportando la presencia de pptidos con diversas funciones biolgicas entre los que destacan los pptidos antihipertensivos, antidiabticos, opioides entre otros (Silva-Snchez et al., 2008).

Figura 6. Secuencia de aminocidos de la globulina 11S de amaranto (tomada de base de datos GenBank ID: CAA57633.1).

Figura 7. Estructura tridimensional de la globulina 11S de amaranto (tomada de base de datos PDB ID: 3QAC).

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CONCLUSIONES Existen an discrepancias en el porcentaje de las fracciones de protenas de reserva de amaranto y estudios sobre la estandarizacin de la metodologa de extraccin de estas protenas es necesario. Son necesarios ms estudios sobre la caracterizacin funcional y estructural de las protenas de amaranto, en especial de la fraccin glutelinas. Ballabio C, F Uberti, C Di Lorenzo, A Brandolini, E Penas, P Restani (2011) Biochemical and immunochemical characterization of different varieties of Amaranth (Amaranthus L. ssp.) as a safe ingredient for gluten-free products. Journal of Agricultural and Food Chemistry 59:12969-12974.

Figura 8. Perfil de digestin con tripsina de las glutelinas de amaranto. Carril 1=marcador de peso molecular, carril 2=glutelinas nativas, carriles 3 a 7=glutelinas digeridas con tripsina durante 0.25, 0.5, 1, 12 y 24 h, respectivamente.

Las estructuras de algunas protenas aisladas de semilla de amaranto muestran caractersticas estructurales interesantes, entre ms protenas de amaranto sean estudiadas ms podremos entender a esta planta que presenta alto potencial biotecnolgico y se ha declarado como alimento nutritivo y funcional que ms que nutrir aporta grandes beneficios para la salud del consumidor. AGRADECIMIENTOS Agradecemos el apoyo otorgado por la Fundacin Produce San Luis Potos (Proyecto Validacin y Transferencia del Cultivo de Amaranto en San Luis Potos). LIRETATURA CITADA Abugoch L E, E N Martnez, M C An (2003) Influence of the extracting solvent upon the structural properties of amaranth (Amaranthus hypochondriacus) glutelin. Journal of Agricultural and Food Chemistry 51:4060-4065.
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Captulo XX. Caracterizacin bioqumica y estructural de las protenas de reserva de amaranto

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Captulo XXI

Amaranto: propiedades benficas para la salud


AMARANTH: BENEFICIAL PROPERTIES FOR HEALTH

Jos ngel Huerta-Ocampo, Enrique MaldonadoCervantes y Ana Paulina Barba de la Rosa


IPICyT, Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y Tecnolgica A. C., Camino a la Presa San Jos No. 2055, Lomas 4 seccin C.P. 78216, San Luis Potos, San Luis Potos, Mxico. E-mail: apbarba@ipicyt.edu.mx

RESUMEN Las semillas de las especies de amaranto (Amaranthus spp.) adems de su alto valor nutricional poseen propiedades que contribuyen a mejorar la salud humana. La digestin de las protenas de reserva de la semilla de amaranto libera pptidos con diferentes funciones biolgicas, dentro de las cuales los pptidos con capacidad de inhibir diferentes tipos de enzimas son los ms abundantes. Entre los pptidos bioactivos ms representativos se encuentran inhibidores de la Enzima Convertidora de Angiotensina (ECA) y de la enzima Dipeptidil Peptidasa IV (DPPIV). La ECA es responsable, en cierta medida, de aumentar la presin arterial. Un posible mecanismo de accin de estos pptidos inhibidores de la ECA involucra la produccin del xido ntrico a travs de la induccin de la enzima endgena xido Ntrico Sintetasa (eNOS). La DPPIV es responsable de la degradacin de hormonas insulinotrpicas relacionadas con estimular la sntesis y promover la secrecin de insulina por las clulas beta del pncreas, disminuyendo as los niveles de glucosa en sangre. El uso de inhibidores de la DPPIV incrementa el tiempo de accin de estas hormonas y potencia sus efectos. Tambin

se ha confirmado la presencia en amaranto de un pptido similar al pptido lunasin de soya y que posee propiedades cncer-preventivas. Adems de su alto contenido de protenas ricas en aminocidos esenciales y la presencia de pptidos bioactivos, la semilla de amaranto es una fuente de compuestos con actividad antioxidante tales como la rutina. Extractos alcohlicos y acuosos de amaranto contienen compuestos fitoqumicos con propiedades antioxidantes, hipocolesterolemiantes, antidiabticas, anti-helmnticas y anti-diarreicas. El objetivo de este captulo es ofrecer una visin general de los pptidos bioactivos presentes en las protenas de la semilla de amaranto, as como de los compuestos fitoqumicos benficos para la salud que se han reportado estn presentes en la semilla y la planta de amaranto. Palabras clave: Amaranthus, Fitoqumicos, Lunasin, Pptidos bioactivos. ABSTRACT In addition to its high nutritional value, the seeds of the amaranth species (Amaranthus spp.) have properties that help to improve human health. Digestion of amaranth seed
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storage proteins release peptides with different biological functions, among them, the peptides capable of inhibiting different types of enzymes are the most abundant. The most representative bioactive peptides are inhibitors of the enzyme Angiotensin Converting Enzyme (ACE) and Dipeptidyl Peptidase IV (DPPIV). To some extent ACE is responsible to increase blood pressure. One possible mechanism of action of amaranth ACE-inhibitory peptides involves the production of nitric oxide through the induction of the endogenous enzyme Nitric Oxide Synthase (eNOS). DPPIV is responsible for the degradation of insulinotropic hormones responsible for the stimulation of the synthesis and promotion of insulin secretion by pancreatic beta cells, lowering blood glucose levels. The use of DPPIV inhibitors increases the life span of these hormones and enhances their effects. Amaranth has also a lunasin-like peptide, which possess anti-tumor properties. In addition to the presence of bioactive peptides, high protein content and essential amino acids, amaranth seed is also a source of potent compounds with antioxidant activity such as rutin. Aqueous and alcoholic extracts of the plant contain phytochemicals with antioxidant, hypocholesterolemic, anti-diabetic, antihelminthic and anti-diarrheal properties. The aim of this chapter is to provide an overview of the bioactive peptides present in the seed proteins of amaranth, as well as beneficial health effects attributed to the phytochemicals present in both the seed and the amaranth plant. Key words: Amaranthus, Bioactive peptides, Lunasin, Phytochemicals. INTRODUCCIN El gnero Amaranthus agrupa a ms de 50 especies e incluye plantas con potencial como cultivo alternativo debido a su resistencia a plagas y a condiciones de estrs abitico como la sequa y el estrs salino (Huerta-Ocampo et al., 2009; Huerta Ocampo et al., 2011; Omami et al., 2006; Aguilar-Hernndez et al., 2011). Las tres especies comerciales de amaranto de grano, Amaranthus hypochondriacus, A. cruentus, y A. caudatus son nativas de Amrica. Las dos primeras estn ampliamente distribuidas en
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Mxico, lo que convierte a nuestro pas en el centro ms importante de diversidad para el amaranto de grano (Espitia-Rangel et al., 2010). Otras especies del gnero como A. hybridus crecen como maleza y estn distribuidas por todo el mundo. Algunos autores reconocen a A. mantegazzianus Pass o A. edulis Speg como una cuarta especie cultivable, pero los estudios genticos no parecen justificar el reconocimiento de este grupo (Espitia-Rangel, 1994). El amaranto es una excelente fuente de alimento debido al alto valor nutricional de sus hojas y semillas. Las semillas de amaranto contienen un alto contenido de protenas y estas poseen un mejor balance de aminocidos esenciales que la mayora de los cereales y leguminosas (Barba de la Rosa et al., 1992, Schnetzler y Breene, 1994). El amaranto ha ganado importancia en Estados Unidos y es un producto emergente en Europa, especialmente como un sustituto del trigo para la elaboracin de alimentos para pacientes con enfermedad celiaca. Por su efecto hipocolesterolmico se ha sugerido que el amaranto podra ser un buen sustituto alimenticio en pacientes con hipercolesterolemia alrgicos a cereales (Sangameswaran y Jayakar, 2008). El grnulo de almidn del amaranto (Figura 1) es uno de los ms pequeos de la naturaleza (0.8 - 2.5 m), y presenta caractersticas especiales como una mayor capacidad de hincharse, baja solubilidad, gran capacidad de unin al agua y baja susceptibilidad a la digestin con la enzima -amilasa (Sugimoto et al., 1981; Wilhelm et al., 2002). El aceite de amaranto tiene un alto valor debido a su gran cantidad de escualeno (Johnson y Henderson, 2002). El amaranto se ha incorporado en varios alimentos industrializados tales como, productos de repostera (panes, pasteles y galletas), productos de extrusin (hojuelas de cereal, tortillas y pastas) (Schnetzler y Breene, 1994; Tapia-Blcido et al., 2009), hidrolizados de su almidn permiten obtener una fraccin rica en carbohidratos y una harina con un alto contenido de protenas (Paredes-Lpez et al., 1990). Debido a su alta calidad nutritiva, las globulinas 11S y la albmina de 35 kDa (AmA1) se han empleado para la transformacin gentica de maz, trigo y papa con la finalidad

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Figura 1. Grnulos de almidn de amaranto A) a 2 mm y B) a 500 nm de amplificacin.

de incrementar su contenido de aminocidos esenciales (Chakraborty et al., 2000; Chakraborty et al., 2010; Rascn-Cruz et al., 2004; Tams et al., 2009). La adicin de albminas de amaranto para complementar la harina de trigo no solo mejora la calidad del volumen de la miga y el pan sino que tambin mejora el balance de aminocidos esenciales (Silva-Snchez et al., 2004). En este nuevo milenio, una nueva era de descubrimientos en amaranto ha comenzado. Mediante un anlisis in silico se predijo la presencia de pptidos bioactivos contenidos en las protenas de amaranto (Silva-Snchez et al., 2008), esto ha despertado mucho inters por determinar si los digeridos de protena de amaranto producen estos efectos predichos, as como por dilucidar los mecanismos mediante los cuales dichos pptidos ejercen sus efectos benficos a la salud.
17%

LAS SEMILLAS DE AMARANTO COMO FUENTE DE PPTIDOS BIOACTIVOS Los pptidos liberados por la hidrlisis enzimtica de las protenas presentes en los alimentos que consumimos han recibido mucha atencin de parte de los profesionales de la ciencia de los alimentos. Estos pptidos son inactivos cuando se encuentran formando parte de las protenas que consumimos, pero al ser liberados durante la digestin o el procesamiento de los alimentos son absorbidos por el sistema digestivo (Pihlanto-Leppl et al., 2000). El anlisis in silico de la digestin enzimtica de las protenas de reserva de la semilla de amaranto (Figura 2), predijo que el amaranto podra ser una fuente de pptidos con actividades anti-hipertensivas, anti-trombticas, anti-oxidantes, entre otras (Silva-Snchez et al., 2008). Este primer reporte deton el inters por evaluar y caracterizar los pptidos bioactivos presentes en las protenas de la semilla de amaranto.

2% 2% 3%

39% Inhibidores de enzimas Anti-hipertensivos Anti-trombticos Anti-amnsicos pioides Inmunomoduladores Antioxidantes Otros

4%

5%

28%

Figura 2. Actividad de los pptidos predichos tras la digestin in silico de las secuencias de protenas de amaranto disponibles en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez. J. A. Huerta-Ocampo et al.

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PPTIDOS INHIBIDORES DE LA ENZIMA CONVERTIDORA DE ANGIOTENSINA La Enzima Convertidora de Angiotensina (ECA) es una hidrolasa de pptidos que tiene un importante papel en la funcin cardiovascular y en la regulacin de la presin arterial a travs de dos mecanismos diferentes. La ECA cataliza la conversin del pptido inactivo angiotensina-I al pptido angiotensina-II, el cual es un potente vasoconstrictor, as que la inhibicin de la ECA resulta en una disminucin de la presin arterial (Koike et al., 1980; Fleming, 2006). Adicionalmente, la ECA inactiva al vasodilatador bradicinina que regula algunos procesos biolgicos, incluyendo la liberacin de xido ntrico (NO) en el endotelio vascular. El NO ejerce sus efectos sobre el musculo liso vascular y promueve su relajacin (Ju et al., 1998). Entre los pptidos predichos mediante la digestin in silico de las protenas de reserva de la semilla de amaranto, los pptidos inhibidores de la ECA se encontraron entre los ms abundantes. La digestin con tripsina de la fraccin de glutelinas de amaranto y su anlisis mediante espectrometra de masas (LC-MS/MS) revel la presencia de di-, tri- y tetra-pptidos inhibidores de la ECA. Entre los pptidos liberados tras la digestin de la fraccin de glutelinas de amaranto se encontraron algunos de los pptidos inhibidores de la ECA ms potentes reportados hasta ahora, entre ellos el tri-pptido IKP, as como el di-pptido YP y los tri-pptidos LPP, LRP y VPP (Silva-Snchez et al., 2008). La actividad de estos pptidos ha sido demostrada en ratas y humanos mostrando una reduccin en la presin arterial (Motoi y Kodama, 2003; Nurminen et al., 2001; Seppo et al., 2003; Mallikarjun-Gouda et al., 2006). La capacidad de inhibir a la ECA se prob en la fraccin de glutelinas de amaranto digeridas con tripsina. La mezcla de pptidos obtenida tras la digestin mostr una IC50 (la mitad de la mxima concentracin inhibitoria) de 25 g/ml, siendo menos potente en comparacin con el Captropil, medicamento utilizado para el tratamiento de la hipertensin, el cual tiene una IC50 de 5.4 ng/ml (Barba de la Rosa et al., 2010). Sin embargo, es reconocido que los compuestos activos provenientes de los alimentos pueden tener baja potencia, pero
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al ser ingeridos regularmente en la dieta, se ha demostrado que tienen efectos fisiolgicos sin los efectos secundarios producidos por los frmacos empleadas como medicamentos (FitzGerald y Meisel, 2000). La capacidad de inhibir a la ECA tambin ha sido probada en digeridos de albminas y globulinas de amaranto (TovarPrez et al., 2009). El efecto de la hidrlisis gstrica y la resistencia al tratamiento trmico fueron evaluadas por Tiengo et al. (2009) en muestras digeridas con alcalasa. Los hidrolizados con alcalasa producidos antes y despus de la digestin con jugo gastrointestinal artificial mostraron el doble de actividad inhibitoria de la ECA que los no tratados con alcalasa, mientras que el tratamiento trmico no modific la actividad inhibitoria de le ECA de los digeridos. La purificacin de los pptidos inhibidores de la ECA increment su potencia (Vecchi y An, 2009). Mientras que la purificacin de los pptidos inhibidores de la ECA incrementa su potencia, los hidrolizados crudos de protenas de amaranto podran ser una fuente econmica de pptidos antihipertensivos. PPTIDOS INHIBIDORES DE LA ENZIMA DIPEPTIDIL PEPTIDASA IV La Dipeptidil Peptidasa IV (DPPIV) es responsable de la degradacin de hormonas insulinotrpicas relacionadas con estimular la sntesis y promover la secrecin de insulina por las clulas beta del pncreas, disminuyendo los niveles de glucosa en sangre. El uso de inhibidores de la DPPIV incrementa el tiempo de accin de estas hormonas y potencia sus efectos. Existen varios tipos de inhibidores de la DPPIV que han mostrado resultados prometedores como agentes anti-diabticos, sin embargo la bsqueda de productos naturales con una actividad similar es una va alternativa para el tratamiento de enfermedades como la diabetes y abre un nuevo campo de investigacin (Velarde-Salcedo et al., 2012). Al probar diferentes fracciones de las protenas de reserva de amaranto (Albminas, Globulinas/S, Globulinas 11S y glutelinas) digeridas con tripsina Velarde-Salcedo et al. (2013) encontraron que todas son capaces de inhibir la actividad de la DPPIV y que esta inhibicin es dosis-dependiente. Al probar

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con un modelo de digestin gastrointestinal para determinar si el consumo de amaranto de manera natural es capaz de liberar estos pptidos inhibidores de la DPPIV encontraron resultados similares. Al comparar la actividad inhibidora de DPPIV en harinas y grano reventado de dos especies de amaranto, no se encontraron diferencias entre las especies evaluadas, sin embargo la actividad inhibitoria del grano reventado disminuy considerablemente en comparacin con las harinas (Velarde-Salcedo et al., 2012). PROPIEDADES ANTI-TUMORALES Al amaranto tambin se le han atribuido propiedades inhibitorias de la proliferacin celular cancerosa. Las hojas de Amaranthus tricolor contienen compuestos capaces de inhibir la proliferacin celular cancerosa (Jayaprakasam et al., 2004). En todas las fracciones de las protenas de reserva de la semilla de A. hypochondriacus L. se detect la presencia de una protena de aproximadamente 20 kDa que es reconocida por un anticuerpo anti-lunasin de soya (Silva-Snchez et al., 2008). Este pptido se purific y su secuencia fue similar al pptido lunasin de soya. El lunasin es un pptido de 43 aminocidos, cuyas propiedades cncerpreventivas han sido demostradas en cultivos de clulas de mamfero y en modelos animales como el ratn. El lunasin es eficiente en la proteccin de clulas contra qumicos carcinognicos, oncogenes (genes descontrolados que inducen cncer), e inactivadores de las protenas supresoras de tumores (De Lumen, 2005). La presencia del lunasin ha sido reportada en
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otros granos como la cebada y el trigo (Jeong et al., 2002; Jeong et al., 2007a). En el caso del amaranto, la fraccin protenica de las glutelinas muestra tener una alta concentracin de lunasin (de 1.39 a 1.98 g de lunasin por gramo de protena extrada). En semillas no maduras y en semillas reventadas de amaranto tambin fue posible detectar la presencia del lunasin. Esto sugiere que la protena tipo lunasin del amaranto se produce en las etapas tempranas de la maduracin del grano y no es afectada por los tratamientos trmicos necesarios para reventar el grano. En ensayos con cultivos y lneas celulares, la adicin de glutelinas digeridas de amaranto a concentraciones de 1 y 5 g/ ml indujo un 30 y 40% de muerte celular por apoptosis en una lnea celular de cncer cervicouterino (HeLa), mientras que a las mismas concentraciones solamente 3 y 4% de apoptosis en clulas normales (fibroblastos) fue reportado. Estos resultados preliminares mostraron que los hidrolizados de amaranto tienen una actividad anti-proliferativa (Figura 3) y son selectivos para clulas neoplsicas (Silva-Snchez et al., 2008). En ensayos in vitro, la protena tipo lunasin de amaranto, mostr la habilidad de internalizarse en clulas de mamfero y dirigirse al ncleo 12 horas despus de ser administrado (Maldonado-Cervantes et al., 2010). Este tiempo de internalizacin al ncleo es menor al reportado con los pptidos lunasin de soya y cebada (Jeong et al. 2002; Jeong et al., 2007b). La protena tipo lunasin de amaranto tambin mostr un efecto inhibitorio dosis-dependiente sobre la acetilacin de las histonas en clulas HeLa. La

Clula apoptticas (%)

35 30 25 20 15 10 5 0

ControlC

ontrol

Clulas HeLa

Fibroblastos

Figura 3. Efecto anti-proliferativo de digeridos de glutelinas de amaranto sobre clulas de mamfero. Clulas HeLa, lnea celular de cncer crvicouterino y fibroblastos, clulas de mamfero control. J. A. Huerta-Ocampo et al.

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inhibicin de la acetilacin de las histonas se propone como un mecanismo epigentico para las propiedades anti-carcinognicas del lunasin de amaranto, esto es similar a lo reportado para el lunasin de soya, cebada y tabaco cimarrn (Jeong et al., 2007b). Barrio y An (2010) investigaron las caractersticas anti-tumorales de los aislados protenicos de A. mantegazzianus digeridos con alcalasa. Estos autores demostraron un efecto anti-proliferativo dosis y tipo celular dependiente sobre la proliferacin de lneas celulares tumorales. Tambin demostraron que la accin inhibitoria se debe a los aislados protenicos y no es afectada por componentes de bajo peso molecular. Para evaluar la recuperacin de las lneas celulares tumorales despus de la accin del aislado protenico, clulas UMR106 se expusieron por 24 horas a diferentes dosis de aislados protenicos y despus se realizaron lavados con el fin de dejarlas recuperarse. Las clulas expuestas a 0.1 mg/ml de los aislados protenicos dejaron de proliferar, pero no perdieron su viabilidad, mientras que concentraciones mayores a 0.3 mg/ml ocasionaron la perdida irreversible de la viabilidad celular. El mecanismo de accin de la actividad anti-tumoral de los aislados protenicos del grano del amaranto propuesto por Barrio y An (2010) involucra la inhibicin de la adhesin y proliferacin celular junto con la produccin de dao celular resultando en una prdida permanente de la viabilidad celular. PROPIEDADES ANTI-DIABTICAS E HIPOCOLESTEROLEMIANTES Ratas diabticas fueron alimentadas con suplementos de 250 y 500 mg/kg de extractos metanlicos de A. spinosus. Despus de 15 das se observ una disminucin en los niveles de glucosa en sangre similar al que se obtuvo cuando las ratas fueron tratadas con 500 g/kg del hipoglucemiante glibenclamida. Adems del efecto hipoglucemiante, los niveles de colesterol, triglicridos, HDL, LDL, VLDL y fosfolpidos sricos en estas ratas fueron similares cuando se trataron con extracto metanlico de amaranto o con glibenclamida (Sangameswaran y Jayakar 2008). El efecto positivo del consumo de amaranto sobre los perfiles lipdicos plasmticos se ha demostrado en ratas alimentadas con dietas altas en colesterol (Czerwiskia et al.,
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2004), mientras que el consumo de la aislados de protena, el grano completo y el aceite de amaranto han demostrado tener efectos hipocolesterolemiantes en hmsteres (Berger et al., 2003; Mendona et al., 2009). PROPIEDADES ANTIOXIDANTES El potencial antioxidante de las protenas del amaranto (Amaranthus mantegazzianus) y de sus hidrolizados con alcalasa fueron evaluados por Tironi y Aon (2010), todos las fracciones protenicas tuvieron efecto antioxidante. Adems de las protenas, la harina del amaranto contiene polifenoles. Fenoles como la rutina, isoquercetina y la nicotiflorina, adems de cidos fenlicos como el cido vanllico, el cido 4-hidroxibenzoico y el cido sirngico; se han identificado y cuantificado en la harina de amaranto (Barba de la Rosa et al., 2009). Los polifenoles son compuestos fitoqumicos que estn involucrados en la defensa contra la radiacin ultravioleta o la agresin por patgenos en plantas. Estos compuestos contribuyen al amargor, astringencia, color, sabor, olor y estabilidad anti-oxidativa de los alimentos (Pandey y Rizvi, 2009). Casi todos los polifenoles muestran propiedades antioxidantes y se les han atribuido efectos benficos para la salud. Estn asociados con la proteccin contra el cncer, enfermedades cardiovasculares, enfermedades neurodegenerativas y el envejecimiento (Pandey y Rizvi, 2009). Polifenoles como la quercetina sirven como defensa contra el dao oxidativo in vivo (Meyers et al., 2008). Se ha afirmado que la nicotiflorina tiene efectos protectores al reducir la disfuncin de la memoria (Huang et al., 2007) y tiene potencial teraputico en la enfermedad isqumica cerebral (Li et al., 2006). La rutina es uno de los fitoqumicos con mayor potencial antioxidante y tambin presenta actividad cardioprotectora. Se ha demostrado que la rutina en combinacin con un frmacos reductores del colesterol como la lovastatina incrementa el efecto hipocolesterolemiante en modelos animales (Ziaee et al., 2009). OTROS EFECTOS BENFICOS Diversos efectos benficos diferentes a los nutricionales y a los ya anteriormente mencionados en este captulo tambin han sido reportados y se le atribuyen a los compuestos

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fitoqumicos presentes en la planta de amaranto, por ejemplo, Kumar et al. (2010) demostraron que los extractos metanlicos de hojas de tres especies de amaranto tienen propiedades anti-helmnticas, mientras que Sawangjaroen y Sawangjaroen (2005) han reportado que los extractos acuosos de amaranto poseen propiedades anti-diarreicas. CONCLUSIONES Adems de su alto valor nutricional el amaranto es una fuente de pptidos bioactivos y una serie de compuestos fitoqumicos con propiedades benficas para la salud humana y con potencial de desarrollo biotecnolgico. Es necesario comprender de una mejor manera los mecanismos mediante los cuales los pptidos bioactivos ejercen sus efectos benficos sobre la salud humana. Tambin es necesario identificar los compuestos especficos responsables de los efectos anti-diabticos, hipocolesterolemiantes y anti-helmnticos, entre otros efectos reportados en los extractos obtenidos de diferentes partes de la planta. Finalmente, los usos tradicionales del amaranto como antipirtico, como remedio contra la gonorrea, entre otros efectos supuestos a partir de su uso tradicional en diferentes partes del mundo aguardan estudios cientficos rigurosos para evaluar si en realidad estas propiedades existen en el amaranto y en caso afirmativo ser necesario identificar las molculas responsables de dichos efectos. AGRADECIMIENTOS Agradecemos el apoyo otorgado por la Fundacin Produce San Luis Potos (Proyecto Validacin y Transferencia del Cultivo de Amaranto en San Luis Potos). LITERATURA CITADA Aguilar-Hernndez H S, L Santos, F LenGalvn, A Barrera-Pacheco, E Espitia-Rangel, A De Len-Rodrguez, R G Guevara-Gonzlez, A P Barba de la Rosa (2011) Identification of calcium stress induced genes in amaranth leaves through suppression subtractive hybridization. Journal of Plant Physiology 168:2102-2109.

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Captulo XXI. Amaranto: propiedades benficas para la salud

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J. A. Huerta-Ocampo et al.

Situacin Actual, Rentabilidad y Comercializacin

Captulo XXII

El cultivo de amaranto en Mxico, descripcin de la cadena, implicaciones y retos


GRAIN AMARANTH IN MEXICO, DESCRIPTION OF VALUE CHAIN, IMPLICATIONS AND CHALLENGES

Alma Velia Ayala Garay1, Diana Escobedo Lpez 2, Lorena Corts Espinosa1, Eduardo Espitia Rangel2
1INIFAP Campo Experimental Valle de Mxico, Km.18.5 Carretera Los Reyes-Lechera, Texcoco Estado de Mxico C.P. 56230, Tel. 01(595) 955 76 25 2INIFAP Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato. Autor para correspondencia: ayala.alma@inifap.gob.mx

RESUMEN El cultivo de amaranto es una alternativa ideal de produccin y consumo en regiones marginadas de Mxico. Dada la importancia que ha ido adquiriendo el cultivo, este estudio tiene el fin de analizar las perspectivas de la produccin de amaranto en Mxico. Destaca que tanto la superficie sembrada como el volumen de produccin de amaranto, registraron durante el periodo de 1982 a 2010, tasas de crecimiento media anual (TCMA) del 8.17% y 15.34%, respectivamente. El porcentaje de participacin del valor de la produccin del amaranto en el valor de la produccin agrcola total, creci a una tasa media anual de 8.17% durante el mismo periodo. El incremento de la produccin de amaranto se vio determinado principalmente por la combinacin del incremento de la superficie y el rendimiento en un en 66.12%. El 95% de los productores son minifundistas con superficies de 1.5 hectreas. La comercializacin se realiza por diversos agentes. Actualmente existen centros de acopio que han sido creados por productores primarios, que entregan el grano limpio a las agroindustrias. Sobre la organizacin de los productores de amaranto, en los principales estados se han conformado

sistemas producto y consejos de productores que son reconocidos por los gobiernos estatales, sin embargo, continan en proceso de consolidacin. El amaranto contribuye a la soberana alimentaria, debido a que es originario de Mxico, por su alto contenido nutricional, por formar parte de la cultura y tradiciones de los pueblos del pas. Palabras clave: Produccin, comercio internacional, comercializacin, agroindustria y transformacin. ABSTRACT Amaranth is an alternative for production and consumption in marginal areas of Mexico due to its agronomic, nutritive and nutraceutical properties. Due to the importance that the crop had been acquiring, this study has the objective to analyze the current situation and perspectives for the production of grain amaranth in Mexico. The cultivated area and the volume of production of amaranth increased during the period from 1982 to 2010, at an annual average growth rate (TCMA) of 8.17% and 15.34%, respectively. The percentage of participation of the production value within the value of
315-330

Amaranto: Ciencia y Tecnologa

total agricultural production grew at an annual average rate of 8.17% during the same period. The production increase of grain amaranth was determined by the combination of increments in the surface and in the productivity in 66.12%. About 95% of farmers are small holders averaging 1.5 hectares of land. The marketing is done by various actors; currently, there are collection centers created by farmers who deliver the clean grain to the agro-industries. On the organization of grain amaranth producers, in the main producing States there are Product Systems and Farmers Councils, who are recognized by State Governments and, its consolidation process is undergoing. Key words: production, international trade, marketing, agribusiness and transformation. INTRODUCCIN El amaranto es una planta cultivada, domesticada y utilizada en Mxico desde hace ms de 7,000 aos, (Casas et al., 2001; Sauer, 1976), con una gran tradicin, ya que su fruto fue utilizado en ofrendas a los dioses en las culturas prehispnicas. Su rusticidad, el agradable sabor de la gran cantidad de productos que se pueden fabricar con su semilla y su buen contenido nutricional han hecho que su cultivo e industrializacin se realicen en varias partes de Mxico. Segn la FAO (1997), el cultivo del amaranto tanto en el rea andina como en la costa de los pases de Amrica, tiene enormes posibilidades y perspectivas tcnicas de desarrollo, puesto que las caractersticas agroclimticas, edficas y tecnolgicas son adecuadas y propicias para el cultivo, transformacin e industrializacin; as mismo el uso y consumo de este producto de alto valor proteico traera como consecuencia disminucin considerable de los niveles de desnutricin existente en muchos pases en desarrollo; tambin la demanda del amaranto en los pases europeos e industrializados hace que la produccin en Amrica Latina tenga un enorme impulso y estmulo, con mayores posibilidades de incrementar el rea de cultivo. Es uno de los cultivos ms antiguos de Amrica, la superficie de siembra se ha

incrementado tanto por sus cualidades alimenticias que posee como por su capacidad de adaptabilidad a la mayora de las condiciones climticas de Mxico. A pesar de su importancia econmica y social, el amaranto no ocupa un lugar dentro de los productos que son considerados bsicos y estratgicos en la Ley de Desarrollo Rural Sustentable , sin embargo, autores como la FAO (1997) lo catalogan como un cultivo con la misma cantidad de nutrientes que la soya y capacidad productiva que podra aprovecharse. Otros autores como Barrales et al. (2010) mencionan que es un cultivo prometedor como la mejor fuente de protenas de origen vegetal que se puede obtener en condiciones de temporal, ya que en sequas puede sobrevivir por largo tiempo y presentar mejores rendimientos que otros cultivos en similares circunstancias, adems ante la crisis econmico y social en que se encuentran inmersos pases como Mxico, el amaranto es una alternativa ideal de produccin y consumo en regiones marginadas del pas. Derivado de lo anterior y dada la importancia que ha ido adquiriendo el cultivo, el presente estudio tuvo como finalidad analizar las perspectivas de la produccin del amaranto en Mxico. CONTEXTO INTERNACIONAL A pesar de que no existen estadsticas oficiales que permitan conocer el comportamiento de la produccin y comercio de este producto, de acuerdo a Jacobsen (2002) en los ltimos veinte aos ha existido un aumento notorio en la investigacin y produccin de amaranto en Amrica, Asia, frica, y varios pases del este de Europa. En frica, el amaranto es domesticado y considerado como verdura, mientras que en otros pases, como en Rusia, el amaranto silvestre es usado como forraje (Komen, 1992). En China se usa el amaranto cultivado para grano y forraje (Yue y Sun, 1993). En Dinamarca, la investigacin con amaranto se inici en 1986 (Srensen y Jacobsen, 1987; Itenov y Jacobsen, 1996), pero todava no se cultiva comercialmente. En otros pases se utiliza adems de la semilla, la planta (tallos y hojas) que se procesa y consume en la alimentacin humana,

1En el artculo 70 de la Ley de Desarrollo Rural Sustentable se menciona que productos son considerados como productos bsicos y estratgicos (maz, caa de azcar, frijol, trigo, arroz, sorgo, caf, huevo, leche, carne de bovinos, porcinos, aves, pescado).

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Captulo XXII. El cultivo de amaranto en Mxico, descripcin de la cadena, implicaciones y retos

como forraje para los animales y en la industria farmacutica. Los principales pases que cultivan el amaranto de grano son China, India, Kenya, Mxico, Nepal, Per, los EE.UU., y Russia (Bale y Kauffman, 1992). En la India, se conoce como rajgeera, el grano de los reyes, (Singhal y Kulkarni, 1988). Se sabe que en la regin de los Himalayas existen pequeas unidades de produccin, donde se obtiene como un producto de autoconsumo (Singhal y Kulkarni, 1988). a) China El principal productor de este cultivo es China, segn estadsticas de Export To China (ETCH, 2012), abastece gran parte del mercado internacional, las exportaciones e importaciones que realiz de este producto crecieron de 2005 al 2010 en promedio, se exportaron 111.78
250,000

millones de dlares y se importan 142.08 millones de dlares durante el periodo (Figura 1). China se coloc como principal exportador durante 2005 a 2010, los principales pases compradores fueron Japn (31%), Estados Unidos (15 %) y Holanda (9%). Otros pases que desatacaron fueron Tailandia, Dinamarca y Repblica de Corea. Se espera, que continen aumentando las exportaciones del amaranto, dada la importancia que ha adquirido en los ltimos aos, como un cultivo prometedor y sustentable (Figura 2). b) Estados Unidos El amaranto se siembra y utiliza en los Estados Unidos, donde las semillas se combinan con granos de trigo y maz, en productos para desayuno, harina para diferentes usos como panes, galletas y pastas (NRC, 1989). La

Importaciones en 1000 USD

200,000

150,000

100,000

50,000 -

2005

2006

2007

2008

2009

2010

Importaciones

Exportaciones

Figura 1. China, exportaciones e importaciones de amaranto ($1000 USD). Fuente: elaborada con datos de ETCN (2012) http://trade.e-to-china.com/trade-data/china-import-export-amaranth.html?year=2010.
Francia 5% Chile 5% Japn 31% Australia 6%

Israel 7%

Repblica de Cores 6%

Dinamarca 8%

Estados Unidos 15% Holanda 9%

Tailandia 8%

Figura 2. China, exportaciones de amaranto (%), promedio 2005 a 2010. Fuente: elaborada con datos de ETCN, 2012 http://trade.e-to-china.com/trade-data/china-import-export-amaranth.html?year=2010. A.V. Ayala Garay et al.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

produccin comercial de amaranto de grano en los Estados Unidos comenz a finales de 1970, (Sooby et al., 1999), creci en la dcada de los 80 y ha fluctuado desde entonces (Hackman, 2003). La superficie cultivada vara entre 1,500 y 3,000 hectreas. El precio es relativamente alto, por lo general 10 veces ms que el precio del maz. Su tolerancia a la sequa lo ha llevado a ubicarse desde Nebraska, Iowa, Minnesota, Dakota del Norte, Montana, Kansas, Pennsylvania, y en otros lugares dispersos (Hackman, 2003). La comercializacin en EE.UU. es a partir de productores locales, sin embargo, el principal productor y transformador en EE.UU. es New World Amaranth quienes han llegado a proveer al mercado Canadiense y Alemn y han desarrollado un modelo de agricultura bajo contrato, en Iowa, Kansas y Nebraska (Hackman, 2003). Se considera que el mercado del amaranto en los EE.UU. est dirigido a los consumidores que optan por alimentos saludables, de acuerdo a Hackman (2003), las personas que compran amaranto son aquellas que buscan un cereal con un perfil nutricional alto. Segn el mismo autor, para que el amaranto pueda encontrar una mayor aceptacin en EE.UU. tendr que superar varios obstculos, por ejemplo, los consumidores tendrn que reconocer los beneficios nutricionales del grano, que ser difcil a menos que se comience a invertir en publicidad.
3.00%

CONTEXTO NACIONAL EN MXICO a) Caractersticas generales de produccin El porcentaje de participacin del valor de la produccin del amaranto al valor de la produccin agrcola total aument a una tasa de crecimiento media anual (TCMA) sostenida de 8.17% (1982-2010). Su mxima aportacin fue en 1999, a partir de ese momento disminuy y en los ltimos aos la contribucin del amaranto ha tenido altibajos y en promedio de 2006 a 2010 aporta el 1% (Figura 3). De acuerdo a SAGARPA (2012), la TCMA de la superficie sembrada de 1982 a 2010 fue de 9.82%, entre 1982-2010, esta tasa refleja la importancia que ha adquirido el amaranto en los ltimos aos. Durante los aos 1997,1999 y 2001, se tuvieron las mximas superficies cultivadas con reas superiores a las tres mil hectreas. De 2004 a 2007, se estabiliz la superficie a un nivel ligeramente superior a las dos mil hectreas, ya entre 2008-2010 la superficie alcanz nuevamente ms de tres mil ha, en promedio 3047 ha (Figura 4). Una situacin similar ha ocurrido con la produccin, donde se tuvieron incrementos y gran variabilidad, con un salto a partir de 1995, y un mximo histrico en el ao 2001, con la misma tendencia a la estabilizacin de 2004 a 2007 de tres mil toneladas, de 2008 a 2010 un

2.50% 2.00% 1.50% 1.00%

0.50% 0.00% 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Figura 3. Mxico. Porcentaje de participacin del valor de produccin del amaranto en el valor de la produccin agrcola de Mxico, precios constantes, 2003=100. Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA-SIACON, 2010.

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3500

3000 2500

Hectreas

2000

1500

1000

500 -0 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Figura 4. Superficie nacional sembrada con amaranto en el periodo 1982-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA-SIACON, 2010.

promedio de 4,075 toneladas, y una TCMA (1982-2010) de 15.34% (Figura 5). El aumento en superficie y produccin, responde a que recientemente ha habido un gran inters en el consumo de este grano a nivel nacional, dadas sus propiedades nutritivas. Para analizar el incremento de la produccin durante el periodo de estudio 19822010, se hizo una estimacin de Descomposicin de factores del crecimiento de la produccin. Estos determinan de manera precisa el grado de influencia que han tenido factores como los rendimientos, como indicador de innovacin y la superficie cosechada y/o un efecto combinado en el crecimiento de la produccin. Para lograr lo anterior, se utiliz la frmula de Contreras (2000) y se tomaron los datos de SAGARPASIACON, 2012:
3500

Pt = Y0(At-A0)+Ao(Yt-Y0)+(At-A0)(Yt-Yo); Donde: Pt = Incremento total de la produccin para el periodo de anlisis. Y0(At-A0) = Cuantifica la contribucin de la superficie. Ao(Yt-Y0) = Cuantifica la contribucin del rendimiento At-A0)(Yt-Yo) = Cuantifica el efecto combinado de superficie y rendimiento, A0 = Superficie promedio cosechada inicial (1980=222.50 ha). At = Superficie promedio cosechada final (2010= 3,047.33 ha). Y0 = Rendimiento promedio nacional inicial (1980= 0.41, en t/ha). Yt = Rendimiento promedio final (2010= 1.34t/ ha).

3000 2500

Hectreas

2000

1500

1000

500 -0 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Figura 5. Produccin nacional de amaranto en el periodo 1980-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA-SIACON, 2010. A.V. Ayala Garay et al.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Si el incremento total de la produccin para el periodo 1982-2010 es igual a 100%, es posible determinar la proporcin que corresponde a cada factor, para determinar si el crecimiento ha sido intensivo o extensivo. El crecimiento extensivo consiste en el aumento de la produccin va el incremento de la superficie cosechada, situacin que remite a obsolescencia tecnolgica. El crecimiento intensivo se relaciona con el aumento en la produccin va incremento en rendimientos, hecho que remite a un mayor nivel tecnolgico. Un crecimiento combinado remite a incremento de superficie y rendimiento por igual (Zaraza et al. 2009). En el Cuadro 1 se puede observar que el crecimiento de la produccin de amaranto se vio determinado principalmente por la combinacin del incremento de la superficie y el rendimiento en un en 66.12 %, es decir, este crecimiento se ha dado por la interaccin entre ambos factores. Por otro lado, el incremento del rendimiento por hectrea entre 1982-2010 (Figura 6) creci a una TCMA de 4.36%, mientras que el de la produccin fue de 15.34%.

En relacin al incremento de la productividad, su crecimiento est en funcin de la adopcin de paquetes tecnolgicos, que son recomendados segn las caractersticas de las zonas de produccin (Estrada et al., 2006). Sin embargo, la adopcin de estos paquetes tecnolgicos, ha sido complicada. De acuerdo con Muoz, et al. (2007) en la formulacin de esos paquetes se pueden recuperar las experiencias de los productores, en especial la de aquellos con mayor potencial de innovacin. b) Caractersticas de las unidades de produccin Las unidades de produccin se caracterizan por ser principalmente ejidales y muy pocas superficies son pequea propiedad. Otra caracterstica que se resalta, es que aproximadamente el 95% de los productores son minifundistas con extensiones individuales de 1.5 hectreas en promedio y el 5 % restante son productores cuyos predios son de alrededor de 5 hectreas (INEGI, 2009). El 97% de la produccin de amaranto es de temporal, por lo que su manejo agronmico est basado y calendarizado en torno al periodo de

Cuadro 1. Participacin de factores en el incremento de la produccin de amaranto.

Valor obtenido Porcentaje


2.00 1.80 1.60 1.40 1.20 ton/ha 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 -0 1982 1983 1984

Rendimiento 207.95 5.21%

Total 3,992.55 100%

Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA-SIACON, 2010.

1985 1986 1987 1988 1989 1990

Figura 6. Mxico. Rendimiento de amaranto (ton/ha). 1982-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA-SIACON, 2010.

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1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Captulo XXII. El cultivo de amaranto en Mxico, descripcin de la cadena, implicaciones y retos

lluvias de las regiones productoras, de tal manera que dicho manejo es ligeramente diferente en cada regin, pero su ciclo de produccin es en primavera verano. c) Comercio exterior en Mxico El amaranto est considerando como un cereal, de acuerdo a estadsticas de SAGARPA (2010), las exportaciones del cultivo registraron una cada en 2007 y una recuperacin en 2010, en 2007 se mencionan 12.96 miles de dlares; en 2009 1.93 miles de dlares, el ao con una menor cantidad y en 2011 con 29.75 como el de mayor (Figura 7). Los principales destinos son Italia (42%), Estados Unidos (37%) y Colombia (12%), segn promedio de 2007 a 2011. La
35 30 Miles de dlares 25 20 15 10 5 -0 2007 2008

exportacin se realiza cumpliendo las normas de calidad para consumo humano y grano reventado de amaranto, establecidas en Mxico y en los otros pases (Figura 8). CONTEXTO REGIONAL De acuerdo a datos del SAGARPA-SIACON (2012), la produccin de amaranto se concentra en la zona central de Mxico, destacan los estados de Puebla, Morelos, Tlaxcala, Estado de Mxico, y el Distrito Federal (Figura 9 y Cuadro 2). Tambin se siembra en menores superficies y de manera ms espordica en Aguascalientes, Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Michoacn, Oaxaca, Quertaro, Nayarit, San Luis Potos y Veracruz; a nivel de huerto familiar se cultiva en la zona serrana de Sinaloa, Sonora,

2009 Exportaciones

2010

2011

Figura 7. Mxico. Exportaciones de amaranto. Fuente: SAGARPA con datos del Sistema de Seguimiento Oportuno de Comercio Exterior en Economa, 2012.
Cuba 1% Canad 5% Colombia 12% Otros 3%

Italia 42%

Estados Unidos 37%

Figura 8. Mxico. Exportacin de amaranto, principales destinos (2006/2010). Fuente: SAGARPA con datos del Sistema de Seguimiento Oportuno de Comercio Exterior en Economa, 2012. A.V. Ayala Garay et al.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Chihuahua y Durango (SAGARPA-SIACON, 2010). El comportamiento de la produccin por estado ha variado a travs de los aos, cabe resaltar, la participacin de Puebla ya que esta entidad en la dcada de los ochenta, no figuraba en la produccin, pero a partir de 1995, se convirti en el principal productor (Figura 9). a) Puebla Como ya se mencion, el estado de Puebla mantuvo la hegemona en la produccin de amaranto, las zonas de produccin se ubican en los municipios de Atlixco, Atzitzihuacn,
4000 3500 3000 2500 ton 2000 1500 1000 500 -0 1980

Cohuecn, Huaquechula, Ixcaquixtla, Molcaxac, San Andrs Cholula, San Felipe Teotlalcingo, San Martn Texmelucan, San Matas Tlalancaleca, San Salvador El Verde, Tecamachalco, Tlacotepec de Benito Jurez y Tochimilco (Santa Cruz, 2010). Los rendimientos en esa regin han crecido a un ritmo mayor que los nacionales, su TCMA es de 2.88% (1982-2010), su comportamiento es similar al promedio nacional, con tendencias a la alza. De acuerdo a Santa Cruz (2010) Tochimilco presenta una tendencia constante posicionndose como la zona de mayor rendimiento; el resto de los municipios presenta altibajos.

X XX X

X X

XX

XX

X X X X X X X XX X X
1995 MX. ao MOR. 2000 2005 TLAX. 2010 2015

1985

1990 D.F.

X PUE.

Figura 9. Mxico. Principales estados productores amaranto en el periodo 1982-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA-SIACON, 2010 e INEGI 2012. Cuadro 2. Volumen de produccin de amaranto en diferentes estados, varios aos (ton).

1990 2000 2008 Estado 193 3,059 2,511 Puebla 60 Mxico 147 408 138 Morelos 506 575 Guanajuato 7 146 Tlaxcala 276 190 Distrito Federal 109 218 164 Jalisco Quertaro 9 Oaxaca 7 7 Campeche 20 25 Guerrero 671 4,240 3,863 Total
* Se considera el promedio de la produccin 2008/10 Fuente: SAGARPA-SIACON (2010)

2009 3,356 440 325 196 151 19 7

Participacin % 2010 Promedio* en la Produccin 66 2,489 2,785 11 491 446 9 303 401 5 225 225 5 193 193 4 165 160 0 19 0 5 7 0 7 100

4,493

3,870

4,243

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Captulo XXII. El cultivo de amaranto en Mxico, descripcin de la cadena, implicaciones y retos

En los ltimos aos a nivel nacional, se ha dado una cada drstica de los precios del amaranto, en trminos reales en Puebla este precio siempre ha sido menor que el promedio nacional, aun cuando se tienen tendencias constantes y comportamiento similares. A pesar de la cada del precio, los productores continan sembrando el producto en el estado, hasta convertirlo en el principal productor a nivel nacional (Figura 10 y 11).
2 1.8 1.6 1.4 1.2 ton/ha 1 0.8 0.6 0.4 0.2 -0

b) Morelos Para el caso de Morelos, ocupa el segundo lugar a nivel nacional en cuanto a produccin se refiere, las zonas productoras se ubican en los municipios de Temoac, Tetela del Volcn y Zacualpan de Amilpas. Sobre la superficie sembrada y cosechada, el municipio de Temoac ha permanecido en el primer lugar (Santa Cruz, 2011). El rendimiento del cultivo ha crecido a una TCMA de 1.55% presenta altibajos pero
X X X X X X X

X X X X XX X

X X X XX X

X X

X X X X X

Puebla X Promedio Nacional Figura 10. Puebla. Rendimiento por ha. 1980-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos del SIACON, 2010.

35,000 30,000 25,000 20,000 $/ton

15,000 10,000 5,000 -0

Figura 11. Comportamiento del precio medio rural del amaranto en el estado de Puebla, 1982-2010. (2003=100). Fuente: Elaboracin propia con datos de SAGARPA- SIACON, 2010 e INEGI 2010. A.V. Ayala Garay et al.

1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 Puebla

1980 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

X X X

X X X X X

XX X X X X

X X X X X XX XX X X X X

X Promedio Nacional

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en general se encuentra por abajo del promedio nacional mostrando un comportamiento similar a la tendencia nacional (Figura 12). Sobre el precio medio rural del grano de amaranto, Morelos refleja en algunos momentos una tendencia similar al comportamiento nacional, sin embargo, hay que resaltar que entre 1998 y 2010 fue mayor en Morelos que el nacional a excepcin del 2005. (Figura 13). c) Tlaxcala Tlaxcala aport el 5% de la produccin su superficie sembrada ha registrado una tendencia a la baja, las zonas de produccin se ubican en los municipios de Nativitas y Sanctorum de Lzaro Crdenas. Actualmente la superficie cultivada con Amaranto oscila alrededor de las
2.5

200 Hectreas (Santacruz, 2011). La superficie sembrada y cosechada de Amaranto se concentra prcticamente en el municipio de Nativitas, mientras que Sanctorum de Lzaro Crdenas slo figura en el 2002 con una superficie de 4 Hectreas. En cuanto al volumen de produccin del grano de amaranto, el municipio Nativitas ha permaneciendo como principal zona de produccin (Santacruz, 2011). En cuanto al rendimiento del cultivo de amaranto en el estado de Tlaxcala muestra altibajos en el perodo 1987 a 2010, a diferencia de Puebla y Morelos, para Tlaxcala no existen datos de 1982 a 1986 en el SIACON. En general se encuentra por arriba del promedio nacional hasta 2003, pero a partir de este ao es inferior al promedio nacional (Figura 14).

X
1.5 ton/ha

X
1

X X X X X X XX X X X

X X

XX X

X X X X

X X X

0.5

X X

-0 1980 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 Morelos

X Promedio Nacional

Figura 12. Morelos. Rendimiento por ha. 1982-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos de SIACON, 2010.
35,000.00

30,000.00

25,000.00

$/ton

20,000.00 15,000.00 10,000.00

X X X X X

XX X XXX

X XX X X X X XX X X X X

5,000.00 -0

1982 1984 1986 1988 1990 19921994 19961998 2000 2002 2004 20062008 2010 Morelos

X Promedio Nacional

Figura 13. Morelos. Precio medio rural, (2003=100). 1982-2010. Fuente: Elaboracin propia con datos del SIACON, 2010 e INEGI, 2010

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En cuanto al Precio Medio Rural (PMR), Tlaxcala presenta un comportamiento semejante al precio nacional solo en algunos ao, a partir de 2003, en Tlaxcala el precio va en aumento (Figura 15).
2.50

d) Estado de Mxico Otro estado importante en la produccin de amaranto es el Estado de Mxico, aporta el 10%; las zonas de produccin se ubican en los municipios de Amecameca, Ayapango, Ocuilan, Ozumba, Tepetlixpa y Tlalmanalco, el

2.00

X X X X X X X X X X X X

1.50 ton/ha

X
1.00

X X X X X X X X X

0.50

-0 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Tlaxcala

X Promedio Nacional

Figura 14. Tlaxcala. Rendimiento por hectrea. 1987-2010. Fuente: elaboracin propia con datos del SIACON 2010 e INEGI 2010.
20,000.00 18,000.00 16,000.00 14,000.00 12,000.00 $/ton 10,000.00 8,000.00 6,000.00 4,000.00 2,000.00 -0 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

X X XX X X X X X X X X X

X X

X X

X X X

X X

Tlaxcala

X Promedio Nacional

Figura 15. Tlaxcala. Precio medio rural, (2003=100). 1987-2010. Fuente: elaboracin propia con datos del SIACON 2010 e INEGI 2010. A.V. Ayala Garay et al.

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rendimiento del cultivo y su precio medio rural es similar que el de los otros estados (Santacruz, 2011). TRANSFORMACIN, AGROINDUSTRIA Y COMERCIALIZACIN La transformacin del producto puede ser de manera tradicional o bien a travs de un proceso de industrializacin con mayor complejidad. Para los pequeos productores las instalaciones de las unidades de produccin varan en cuanto a equipamiento e infraestructura, generalmente se ubican en las casas de los productores y ah se han adaptado talleres en donde se encuentran desde equipos de uso domestico hasta hornos industriales. Cabe mencionar que debido a la demanda de espacio, algunas unidades que poseen los recursos han cambiado el taller del hogar a una nave semiindustrial, los productores que cuentan con pequeos talleres familiares donde procesan la semilla de manera artesanal, verifican el contenido de humedad del grano para procesarlo. Enseguida, el grano se revienta, es decir la semilla se coloca en comales de barro o metlicos calentados con fuego de lea o de gas para que se infle (esta forma de reventado ya es muy rara). El grano reventado se criba o cierne para separar el grano que no se expandi, se envasan bolsas para almacenarlo, se vende como cereal o se utiliza como insumo de otros productos. Otra opcin es molerlo y cernirlo para obtener harina (Escalante, 2011). a) Usos de amaranto El amaranto tiene una serie de aplicaciones similares a la de los cultivos bsicos, principalmente del maz, que van desde dulces artesanales como granola, harinas integrales, alimentos extruidos (frituras), panificados, pastas; hasta productos ms sofisticados como aceites comestibles, papillas para bebs, concentrados proteicos, barras energticas y alimentos nutricionales y funcionales para mejorar la salud humana (Manrique de Lara Soria, 2011). El producto tradicional es la alegra que es mezclada con miel, azcar o piloncillo y algunos otros ingredientes. Entre los productos de mayor aceptacin en el mercado adems de las alegras, se encuentran palanquetas simples o
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combinadas con chocolate, garapiadas; barras energticas y granola combinadas con miel y otras semillas como ajonjol, nueces, girasol, cacahuates, pepita de calabaza; pan, galletas, tamales, frituras, harina de amaranto, entre otras. Los productos los empacan en bolsas de plstico o celofn, algunos ya tienen marca (Escalante, 2011). Existen tambin los transformadores que realizan todo el proceso desde el tostado y reventado, para elaborar una gran diversidad de productos, desde los relacionados con la panadera hasta los dulces tpicos (Cerezo Barreto, 2012). b) Calidad En Mxico existe la Norma Mexicana NMXFF-114-SCFI-2009, denominada Grano de amaranto. Especificaciones de calidad y mtodos de ensayo. En ella se establece las especificaciones de calidad del grano de amaranto que se cosecha, procesa y comercializa en el territorio nacional para uso y consumo humano, excluyendo el grano de amaranto genticamente modificado, (Secretara de Economa, 2009). Los granos de amaranto, en cualquiera de sus grados de calidad, deben estar exentos de sabores y olores extraos, y presentar color tpico de la variedad. Estas especificaciones se verifican sensorialmente. Adems deben cumplirse especificaciones fisicoqumicas y sanitarias. La declaratoria de vigencia de esta norma fue publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 25 de agosto de 2009 (Secretara de Economa, 2009). Existe un proyecto de Norma PROY NMX-116-SCFI-2010, Grano reventado de amaranto (Amaranthus spp.) para uso y consumo humano. En las etapas de trilla y encostalado pueden existir riesgos de contaminacin por metales, vidrios y cristales, adems de riesgos qumicos por la condicin de almacenaje en espacios pequeos por productores en lugares cerca de los corrales de sus animales de traspatio, insecticidas, diesel, todos se almacenan en el mismo espacio de almacenaje. Un mecanismo se salvaguarda inherente al proceso de transformacin de amaranto es que el proceso de reventado a temperaturas superiores a los 200 C volatiza casi la totalidad de qumicos. Para cumplir con la norma, los granos de amaranto reventado, en cualquiera de sus grados

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de calidad deben estar limpios, es decir, exentos de cualquier materia extraa visible, de plagas y daos causados por ellas, que afecten al aspecto general del producto, de humedad anormal, de cualquier olor y/o sabor anormal o que indiquen rancidez y deben tener el color caracterstico de la variedad. Estas especificaciones se verifican sensorialmente (Escalante, 2011). Asimismo, el grano reventado de amaranto debe cumplir con especificaciones fsicas, fisicoqumicas, microbiolgicas y toxicolgicas (Secretara de Economa, 2010). Uso de moldes de plstico para hacer figuras. Esta innovacin consiste en sustituir tarimas y moldes de diversos materiales por el uso de los plsticos debido a que estos ltimos contribuyen con proporcionar una mejor presentacin de los productos y asegurar la inocuidad de los mismos (Escalante, 2011). c) Comercializacin del producto La comercializacin del grano se realiza por agentes de diversos tamaos, actualmente existen centros de acopio que han sido creados por productores primarios, que entregan el grano limpio a las agroindustrias. Existen diversas formas de comercializarlo, como semilla, amaranto reventado y harina integral que se venden a las agroindustrias segn su inters, consolidacin y escala: Grupo Nestl, Grupo de Amarantos Popocatpetl, Amarantos Poblanos, Grupo Becerra, Grupo San Miguel de Proyectos Agropecuarios (Manrique de Lara Soria, 2011). Existen cuatro grandes industrias que se dedican a la comercializacin en gran escala del amaranto procesado: Qually, Xomor, Grupo San Miguel de Proyectos Agropecuarios, Expo Food (Espitia Rangel, 2012). De acuerdo a Manrique de Lara Soia, (2011) estos grupos se encuentran consolidados y han exportado productos e incluso han vendido a grandes corporativos como Gamesa (Manrique de Lara Soria, 2011). La Asociacin Mexicana del Amaranto detalla que desde hace unos cuantos aos la produccin y la valoracin del amaranto como alimento se est retomando a raz de la demanda de grandes empresas, como Nestl y Bimbo, que han incursionado en la produccin de las llamadas barritas energticas. Otro de los grandes consumidores ha sido el gobierno federal, a travs del Sistema Nacional para el Desarrollo Integral

de la Familia (DIF) y Diconsa, instituciones que adquieren productos hechos con amaranto para nios y adultos, lo que tambin ha alentado la produccin (Martnez, 2007). En pequea escala, la comercializacin del amaranto es uno de los aspectos ms vulnerables de la cadena, puesto que ms del 80% de la produccin, es comercializada por intermediarios, quienes deciden el precio a inicios de la temporada de cosecha y lo van incrementando o disminuyendo, dependiendo de la oferta y la demanda, es decir, los productores que venden volmenes pequeos, son los ms vulnerables, ya que estn expuestos a la fijacin de precios de los intermediarios (SAGARPAComit Sistema Producto Amaranto Puebla, 2009). En los estados de Morelos, Tlaxcala y Distrito Federal, la comercializacin de los productos a pequea escala se realiza en un local, en algunas ocasiones, este forma parte de las casas, en ellos se comercializan productos de elaboracin propia. Los compradores arriban a los pequeos comercios y adquieren productos al menudeo y mayoreo para posteriormente venderlos al consumidor final en otros lugares (Cerezo Barreto, 2012). LA ORGANIZACIN Y LOS SISTEMAS PRODUCTO EN MXICO. Sobre la organizacin de los productores de amaranto, cabe destacar que en los principales estados se han conformado sistemas producto y/o consejos de productores que son reconocidos por los gobiernos estatales, sin embargo, continan en proceso de consolidacin (Cerezo Barreto, 2012): 1. Los estados de San Luis Potos, D.F. Puebla, Tlaxcala, en este momento estn legalmente constituidos y reconocidos como Sistema Producto. 2. En Oaxaca est en proceso la constitucin de un Sistema Producto Estatal, ya que existe el Consejo Integrador de Productores de Amaranto, Asociacin Civil. 3. En Morelos, el Consejo de Productores est en proceso de cambio a una Asociacin Civil. Adems, existen otro tipo de organizaciones como la Asociacin Mexicana del Amaranto, A.C. (AMA) que es una asociacin civil sin nimo lucrativo, integrada
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por profesionales y personas interesadas en promover la integracin de la cadena productiva del amaranto en Mxico. El objetivo de esta asociacin es establecer estrategias, objetivos y lneas de accin para consolidar la produccin, el consumo y el aprovechamiento integral del amaranto (Asociacin Mexicana del Amaranto, 2012). La AMA es una organizacin multidisciplinaria compuesta por productores de amaranto, micro industrial, industriales, comercializadores, investigadores, farmacuticos, mdicos, qumicos, bilogos, dietistas, nutrilogos, etc. AMARANTO PARTE IMPORTANTE DE LA SOBERANA ALIMENTARIA De acuerdo a Trpaga (2005), el concepto de soberana alimentaria se entiende como la capacidad y el derecho que tienen los pueblos y naciones a determinar, segn sus propios intereses y preferencias histricas y socioculturales, el tipo de productos agrcolas que servirn como base para la alimentacin de su poblacin, suponiendo que es de alta prioridad para promover un modelo de desarrollo que fortalece el mercado interno e incorporar a las zonas rurales para lograr un desarrollo sustentable. Tomando como referencia la definicin anterior, se puede decir que la proteccin y fomento del cultivo del amaranto, contribuye a la soberana alimentaria, debido a que es originario de Mxico, por su alto contenido nutricional, por formar parte de la cultura y tradiciones de los pueblos del pas, adems su produccin se basa en pequeas unidades, utilizando sistemas de produccin agro-ecolgicos, que aseguran que los productores tienen acceso a la tierra, por medio de acciones genuinas de redistribucin. La obtencin de amaranto garantiza la generacin domstica de alimentos y materias primas, avalando con ello estabilidad en el abasto alimentario bsico, al margen de las fluctuaciones del mercado internacional y generando un flujo estable de materias primas para la industria de transformacin. Un aspecto primordial es que permite, el arraigo de los productores familiares en el campo, ya que slo ellos pueden llevar a la prctica dichos objetivos y las nuevas tareas que la agricultura est llamada a cumplir en un contexto de la sustentabilidad. Al mismo tiempo
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que se evitan mayores presiones en el mercado laboral nacional, que no est en condiciones de absorber a la poblacin expulsada del sector rural, y que se contiene la creciente tendencia a la emigracin dentro del pas y hacia los Estados Unidos. Por otro lado, permite asegurar que haya una alimentacin con calidad, de acuerdo con las necesidades del mercado interno, el bienestar de los mexicanos y el medio ambiente. COMENTARIOS FINALES La produccin de amaranto va en aumento, a pesar de que las unidades de produccin se caracterizan por ser pequeas. Se considera al cultivo como un grano verstil para la transformacin e industrializacin, puede utilizarse como cualquier cereal; lgicamente con mayores ventajas nutricionales. El amaranto presenta una gran importancia en la agricultura y alimentacin debido entre otras razones, a su alto contenido de protenas, sus usos mltiples en la alimentacin. Este cultivo se constituye como una importante fuente de empleo, en actividades agrcolas, en procesamiento agroindustrial, en comercializacin, en diversas actividades y servicios colaterales. Cumple con los requisitos bsicos que permiten asegurar la soberana alimentaria en los pequeos productores de la regin centro del pas, sin embargo, es necesario hacer mayor promocin de los beneficios del cultivo de amaranto entre los consumidores para poder incrementar su demanda y que sea considerado como un cultivo bsico y estratgico para Mxico. Cabe resaltar, la falta de datos estadsticos a nivel internacional e incluso nacional, sobre todo en la parte de comercio, dada la poca relevancia que han dado a este cultivo. LITERATURA CITADA Alejandre Iturbide, Gabriel y Federico Gmez Lorence (1986) Cultivo del amaranto en Mxico. Coleccin Cuadernos Universitarios. Serie Agronoma No. 12. Universidad Autnoma Chapingo. Mxico.

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Captulo XXIII

La rentabilidad del amaranto en la Regin Centro de Mxico


PROFITABILITY OF GRAIN AMARANTH IN CENTRAL MEXICO

Alma Velia Ayala Garay1, Lorena Cortes Espinoza1, Patricia Rivas Valencia1, Micaela de La O Oln1, Diana Escobedo Lpez2, Eduardo Espitia Rangel2.
1INIFAP Campo Experimental Valle de Mxico, Km.18.5 Carretera Los Reyes-Lechera, Texcoco Estado de Mxico C.P. 56230, Tel. 01(595) 955 76 25; 2 INIFAP Campo Experimental Bajo, Celaya, Guanajuato Autor para correspondencia: ayala.alma@inifap.gob.mx

RESUMEN El cultivo del amaranto es una alternativa para los agricultores sobre todo en las zonas de temporal de la regin centro del pas, porque, adems, de tener caractersticas nutricionales, tiene caractersticas agronmicas que lo identifica como un cultivo alternativo en donde otros cultivos no se pueden adaptar; en suelos secos, zonas montaosas y altas temperaturas. El objetivo de este estudio fue determinar la rentabilidad de la produccin de amaranto para grano de las principales zonas productoras en la regin centro del pas. Para ello, se utiliz informacin de produccin y costos por hectrea de 2011 de los estados de Morelos, Puebla y Tlaxcala, los datos se obtuvieron de entrevistas directas con los productores mediante un cuestionario. Los resultados encontrados muestran que en Puebla se tiene una mayor rentabilidad, a pesar de que no vara muchos sus costos con respecto a los de Morelos; sin embargo, en cuanto al rendimiento en Puebla fue mayor. La rentabilidad ms baja, se obtuvo en Tlaxcala, donde, tanto costos como rendimiento tambin fueron los ms bajos. No obstante lo anterior es una opcin productiva para los lugares sobre todo de temporal, debido a que se adapta a condiciones ambientales adversas y por sus caractersticas nutracuticos que van tomando cada da mayor importancia.

Palabras clave: Costos de produccin, ingreso, productividad, rentabilidad. ABSTRACT Grain amaranth is an alternative crop for farmers especially in rainfall areas of the central region of the country, due to its nutritional, nutraceutical and agronomic characteristics. Grain amaranth grows well at low water supply and high temperatures. The main objective of this study was to determinate the profitability of production of grain amaranth for the main producer areas in the central region of the country utilizing information of production and cost per hectare of 2011 from the States of Morelos, Puebla and Tlaxcala. Data were obtained from interviews with producers through a questionnaire. Based on the obtained results it can be concluded that the state of Puebla showed the best profitability, despite the production costs do not vary much with respect to Morelos; the state of Puebla showed better grain yields. The lowest profitability and grain yield were obtained in Tlaxcala. Key words: Production costs, income, yield, profitability.

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INTRODUCCIN El amaranto tiene excelentes caractersticas agronmicas, debido a que se puede adaptar a condiciones ambientales adversas, en donde otros cultivos no se adaptan (Omami et al., 2006). Es decir, el amaranto es una alternativa para los pequeos productores; por tener las caractersticas de mayor resistencia a la sequa (Morales et al., 1991; Turriza et al., 1991; Lpez y Lpez, 1991). El grano presenta una gran importancia en la alimentacin para Mxico, Desde el punto de vista nutricional es especialmente benfico para los grupos sociales ms vulnerables, como seran los nios y mujeres embarazadas o las que se encuentran en la fase de la lactancia (Espitia, 1991); debido entre otras razones, a que tiene un alto valor nutritivo debido a la cantidad y calidad de sus protenas; cuenta con el doble de protena que el maz y el arroz, y de un 60 a 80% ms que el trigo. Es una planta cultivada, domesticada y utilizada en Mxico desde hace ms de 7000 aos, (Casas et al., 2001; Sauer, 1976), con una gran tradicin, ya que su fruto fue utilizado en ofrendas a los dioses en las culturas prehispnicas. En Mxico la produccin comercial del amaranto se encuentra concentrada en cuatro regiones: Huazulco y Amilcingo, Morelos; Nativitas, Tlaxcala; San Juan Amecac, Santa Clara Tetla, Tochimizolco, Huaquechula y Temoac, Puebla; Tulyehualco, Mixiquic, Tetelco y Tecmitl en el Distrito Federal (Espitia, 1989; Loza 1991; ngeles, 1994; Medina, 1995). Adems van tomando importancia los lotes que se localizan en Oaxaca, Estado de Mxico, Quertaro, Guerrero, Durango y ltimamente Chihuahua y San Luis Potos (Espitia, 1994; Espitia et al., 2010). Segn datos de SAGARPA (2012), la produccin del amaranto est retomando niveles de produccin importantes. En los ltimos 28 aos, la superficie sembrada ha crecido a una tasa media anual (tma) de 9.82%, entre 1982-2010; esta tasa refleja la importancia que ha adquirido el amaranto en los ltimos aos. Uno de los problemas que enfrentan los productores de amaranto es la baja rentabilidad, esto ha sido consecuencia de la cada drstica de los precios medios rurales; adems de los altos
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costos de produccin debido a la mano de obra utilizada. En trminos reales, entre 1980 y 2010, los precios pagados al productor han decrecido a una tasa media anual de 5.28% (1982-2010), base 2003=100 (SIACON-SAGARPA, 2011 e INEGI, 2012). Mientras que el ndice de precios de fertilizantes y especficamente de urea se han incrementado a una tasa media anual de 24.49% y 22.30% respectivamente (base 2003=100) (INEGI, 2012). El comparativo de estos precios se observa que mientras los de los fertilizantes van a la alza, los pagados al productor van a la baja influyendo negativamente sobre la rentabilidad del amaranto. Actualmente, la estructura de costos de produccin, la dispersin espacial de los productores, la rentabilidad y el precio de venta de los productos generados por el sector agrcola crean una intrincada red de interacciones que influyen directamente sobre la rentabilidad del mismo producto. En este contexto se hizo necesario un estudio de rentabilidad del cultivo del amaranto en el Centro de Mxico en los estados de Morelos, Puebla y Tlaxcala. METODOLOGA La metodologa empleada en este estudio, se bas principalmente en trabajo de campo; utilizndose la encuesta como herramienta de trabajo. ste fue diseado por los apartados de datos generales, caractersticas de produccin para los ciclos P-V y O-I, informacin general del cultivo, manejo postcosecha, comercializacin, variables econmicas de las unidades de produccin, control de calidad, programas de subsidio de gobierno y proceso de transformacin. Los sujetos de estudio fueron productores de amaranto para grano de los estados de Morelos (municipio de Temoac), Puebla (municipios de Tochimilco y Cohuecan) y Tlaxcala (municipio de Nativitas). Para lograr lo anterior, se entrevistaron a 193 productores, distribuidos como se observa en el Cuadro 1. Se utiliz una encuesta dirigida , ya que actualmente no se tiene un padrn actualizado de productores dedicados a producir amaranto. Se entrevistaron 193 productores, los cuales acudieron a diversas reuniones, a las que fueron invitados a travs de los Sistemas Producto de Morelos, Puebla y Tlaxcala.

Captulo XXIII. La rentabilidad del cultivo amaranto en la regin centro de Mxico Cuadro 1. Distribucin de las encuestas por estado.

Estados Morelos Puebla Tlaxcala Total


Las encuestas se aplicaron en los meses de noviembre de 2011 a marzo de 2012, el clculo de la rentabilidad corresponde al ciclo P-V de 2011; se estim el costo total de produccin y el ingreso total del cultivo. Para cuantificar el costo de produccin fue necesario captar a travs de un cuestionario todos los desembolsos que se realizaron durante el ciclo productivo en cada estado sujeto del anlisis. Adems, de informacin para hacer el estudio de rentabilidad del amaranto, dentro de la encuesta se consideraron otros aspectos como las caractersticas socioeconmicas del productor y del proceso de produccin. Los precios comerciales utilizados, fueron los que estaban vigentes durante 2011 en las zonas de produccin, por ejemplo precios de insumos (semilla, fertilizantes e insecticidas), as como otros involucrados dentro de las actividades de produccin, (renta de la tierra, jornales, abono, renta de maquinaria, etc.). Tambin se utiliz el precio medio rural de la zona (P-V 2011) y el rendimiento por hectrea proporcionado por los productores para el mismo ao. Para cuantificar la rentabilidad a nivel unidad de produccin, se determin la productividad y los costos de produccin y se compar entre estados. Los costos fueron divididos en dos partes; costos directos y costos indirectos. Dentro de los costos directos se incluyeron los costos de los insumos y medios de produccin, tales como semilla, fertilizantes, renta de maquinaria, mano de obra y el costo de oportunidad de la inversin. En los indirectos se incluy el costo anualizado del mantenimiento de la inversin en capital en maquinaria, renta de la tierra y gastos generales.

Total 76 86 31 193
Para determinar la rentabilidad se utilizaron las expresiones algebraicas siguientes: CT=PxX; Donde CT = Costo total, Px= Precio del insumo o actividad X y X= Actividad o insumo. El ingreso total por hectrea se obtiene de multiplicar el rendimiento del cultivo por su precio del mercado. La expresin algebraica es: IT= PyY; Donde IT= Ingreso total ($ ha-1), Py=Precio del mercado del cultivo Y ($ t-1); Y= Rendimiento del cultivo (t ha-1). La rentabilidad finalmente es igual: Rentabilidad =IT - CT Produccin de Amaranto Segn datos de SAGARPA-SIACON, (2012) la superficie sembrada y cosechada, la produccin, el rendimiento y el valor de la produccin se observa en el Cuadro 2. Donde se observa que Puebla tiene la mayor superficie cosechada (84.38%) y la mayor produccin (81.70%), aunque obtiene el menor rendimiento, en cuanto a los tres estados; por lo contrario, Tlaxcala tiene el menor nmero de hectreas cosechadas y la menor produccin; sin embargo, es el que obtiene el mayor rendimiento. RESULTADOS Y DISCUSIN Dentro de los resultados, los productores encuestados tienen una edad promedio de 48 aos, la edad vari de 34 a 72 y apenas el 57% de los entrevistados tiene estudios de primaria (Cuadro 3). Lo cual indica que son productores

1 Esta se emplea en diversas disciplinas tanto sociales (antropologa, sociologa, pedagoga, trabajo social) como en otras reas, para realizar estudios de carcter exploratorio, ya que permite captar informacin abundante y bsica sobre el problema. Tambin se utiliza para fundamentar hiptesis y orientar las estrategias para aplicar otras tcnicas de recoleccin de datos. La entrevista estructurada o dirigida se emplea cuando no existe suficiente material informativo sobre ciertos aspectos que interesa investigar, o cuando la informacin no puede conseguirse a travs de otras tcnicas. A.V. Ayala Garay et al.

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con un nivel de estudio bajo. Damin (2007), seala que la apropiacin de tecnologa agrcola, la edad y el nivel de escolaridad son variables que tienen un alto impacto en el desempeo de las actividades, ya que acceden a folletos y revistas tcnicas con informacin agrcola y son capaces de adoptar nuevas tecnologa. En este estudio se encontr que la edad del productor es una variable determinante para las prcticas agronmicas lo que presenta un impacto en el rendimiento del cultivo. Lo anterior tambin ha sido observado por otros autores como Ruiz et al. (2001); INEGI (2002); Rueda (2003). En la regin los entrevistados reconocen que su principal actividad es la agricultura, en donde cultivan primordialmente el amaranto para grano, y entre los cultivos complementarios o secundarios se encuentran en orden de importancia el maz, frijol, sorgo, cacahuate, hortalizas y trigo. Cabe mencionar que, en Tlaxcala no se identificaron otros cultivos adicionales. Por el contrario, en Morelos hay ms diversificacin de los cultivos adicionales o complementarios y en Puebla principalmente son maz y frijol (Cuadro 4). En segundo lugar lo ocupa la actividad comercial, la cual se relaciona directamente con la venta de semilla; la actividad econmica agroindustrial tienen mayor importancia en el estado de

Morelos, debido a que hay un mayor nmero de agricultores que procesan el grano del amaranto. Otra actividad que combinan o complementan con la agrcola es la pecuaria, as como diversos trabajos asalariados. Esto indica que el ingreso lo complementan con varias actividades econmicas; por lo que la rentabilidad del amaranto no permite dedicarse nicamente a la produccin del grano, por consecuencia algunos productores se dedican hasta tres actividades. Sobre la organizacin de los productores, el 12.44% pertenece alguna estructura productiva de amaranto, lo que refleja la falta de organizacin de los productores y bajo nivel de desarrollo de su capital social. Esto implica, por ejemplo, que se enfrentan a los intermediarios que son los que definen el precio al producto y les afecta en gran medida a los costos de produccin. El 95% de los productores refiri que una de las limitantes es la falta de organizacin para la venta de su producto. Si los productores se organizaran trataran de mantener el rumbo de sus produccin de una manera fructfera que buscara una vida mejor para los socios y sus familias, una mayor autonoma en la toma de decisiones, la conservacin de los recursos productivos y una relacin ms equitativa con el mercado, de este modo se generaran economas de escala.
Valor de la

Cuadro 2. Valor de la produccin del amaranto: Superficie cosechada, produccin, rendimiento y precio medio rural (2011).

Estado Puebla Morelos Tlaxcala

Produccin Rendimiento (t) 2,493.50 284.00 276.00 (t ha )


-1

produccin (Miles de pesos) 8,920.44 4,279.36 1,220.00

1.18 1.36 1.50

Fuente: Elaboracin propia con informacin del SAGARPA-SIACON, 2012. Cuadro 3. Nivel acadmico de los productores (%).

Estado Morelos Puebla Tlaxcala General

Ninguno 1.32 3.49 0.00 2.07

Primaria 57.89 58.14 51.61 56.99

Secundaria Preparatoria 19.74 23.26 41.94 24.87 6.58 5.81 3.23 5.70

Licenciatura 1.32 0.00 3.23 1.04

N.D 13.16 9.30 0.00 9.33

Fuente: Elaboracin propia con datos obtenidos de campo. N.D.= No Disponible.

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Captulo XXIII. La rentabilidad del cultivo amaranto en la regin centro de Mxico Cuadro 4. Frecuencia de agricultores por producto cultivado.

Cultivo Maz Frijol Sorgo Hortalizas Cacahuate Trigo

Total 58 41 12 5 5 2

Morelos 9 2 11 1 5 0

Puebla 49 39 1 4 0 2

Tlaxcala 0 0 0 0 0 0

Elaboracin propia con datos obtenidos de campo. Cuadro 5. Nmero de productores por tipo de tenencia de la tierra y superficie promedio por productor.

Estado Puebla Morelos Tlaxcala Total

Ejidal 67 56 11 134

Propiedad privada 12 2 20 34

Comunal 1 0 0 1

Total (ha) 150.80 257.01 46.50 454.4

Sup. promedio Sembrada (ha/productor) 1.90 4.01 1.50 2.52

Fuente: Elaboracin propio con datos obtenidos en campo.

La produccin en superficies menores de 5 ha, en promedio siembran 2.52 ha, lo que los caracteriza por ser minifundistas, por otro lado, en su mayora (81.2%) cultivan tierras ejidales y aproximadamente el 70% son ejidatarios (Cuadro 5). El amaranto se produce en condiciones de temporal, en rendimiento se obtienen en promedio 1.52, 1.43 y 1.02 toneladas por hectrea en Puebla, Morelos y Tlaxcala, respectivamente. Los datos anteriores son similares a lo mencionado por Cortes et al. (2011), quienes indican que el rendimiento promedio para 2010 fue de 1.5, 1.6 y 1.12 toneladas por hectrea en Puebla, Morelos y Tlaxcala, respectivamente. En cuanto al rendimiento promedio de la regin, los productores obtienen 1.46 toneladas por hectrea, este promedio est por debajo del nacional que es de 1.66 ton/ha, incluso durante 2009/2010 en Guanajuato se obtuvieron hasta 3 toneladas. En el escenario actual, la produccin primaria de amaranto demanda una gran cantidad de mano de obra, sobre todo en la cosecha, que de manera generalizada se realiza manualmente 24 jornales por ha; mano de obra familiar, en Tlaxcala sta contribuye en promedio con 3.7 integrantes que participan durante todo el proceso, en Puebla con 3.4 jornales y en Morelos con 3.2 integrantes, de

acuerdo a Corts et al. (2011) mencionan que si bien se genera empleo en la regin, esto influye en el incremento de los costos de produccin (Cuadro 6). Anlisis de rentabilidad del cultivo Para el clculo de la rentabilidad, se obtuvieron promedios, segn el total de productores encuestados por cada estado, los resultados se presentan en el Cuadro 7. Rendimientos En la produccin obtenida por ha, se encontr que Tlaxcala tiene el menor rendimiento y Puebla el mayor, (Cuadro 7). La importancia de tener una mejor productividad, radica en que los costos unitarios disminuyen. Costos por hectrea y tonelada En Tlaxcala, el costo por ha es menor, al igual que el rendimiento, por lo que las ganancias son menores. El costo ms alto se registr en Morelos, mientras que en Puebla es menor (Ver Cuadro 7). De acuerdo a lo anterior, en Morelos se tiene el mayor costo de produccin por ha; sin embargo, al obtener un mayor rendimiento promedio, el costo por tonelada es menor, lo que repercute directamente en el ganancia unitaria. Por estado, los productores de Tlaxcala realizan una mayor inversin en la adquisicin
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de insumos en comparacin a los otros dos estados. En labores mecanizadas Puebla invierte ms y en el caso de labores manuales, Tlaxcala es el que tiene un mayor costo. En la Figura 1 se observa que la ganancia unitaria disminuye si el costo por tonelada aumenta, en Puebla se presentan los mejores rendimientos, por lo que tambin se obtiene la mejor utilidad. En Tlaxcala, los costos de produccin unitarios elevados estn relacionados con los bajos rendimientos que los productores obtuvieron. Es indispensable que los productores ubiquen sus costos por tonelada similares al precio pagado al agricultor, el cual puede ser alcanzado por un mejor uso de la tecnologa que permita incrementar los rendimientos. La estructura de los costos por hectrea tiene a los gastos en labores manuales como el rubro ms importante, el cual acapara 37% de los costos totales, le sigue el uso de insumos con 21%, despus labores mecanizadas con 19% y despus la renta de la tierra con 13%. Finalmente, gastos generales e intereses, que suman 10% (Figura 2). Los factores que han limitado la productividad de amaranto son aspectos tecnolgicos, como el uso inadecuado de fertilizantes, uso de semilla criolla y falta de asesora tcnica hacen que se tengan rendimientos bajos. En el Cuadro 8 se muestra la inversin y utilidad de los productores tomando en consideracin rendimientos, precio de venta del amaranto por hectrea, utilidad bruta, factor rentabilidad (ingreso/costo de produccin). Bajo estas condiciones, los costos de produccin de amaranto, se ven afectados por la productividad, lo que repercute directamente en las ganancias unitarias. La menor utilidad se explica por los bajos rendimientos, que debido a la falta de tecnologa utilizada (semilla criolla,
Estado Morelos Puebla Tlaxcala Promedio

fertilizacin inadecuada, bajo o nulo control de plagas, etc.), hacen que los costos se incrementen de manera significativa. Los problemas tcnicos que enfrentan los productores son elementos que conducen a la necesidad de realizar un programa de transferencia de tecnologa y capacitacin continuo, que detecte las necesidades del productor, con la finalidad de mejorar la produccin y la productividad, as como minimizar los riesgos que se tienen. Las prcticas agrcolas en la regin son, en trminos generales, eficientes, sin embargo, el productor requiere de paquetes tecnolgicos que le permitan hacer frente a los aspectos de control de plagas malezas y enfermedades en su cultivo. Para incrementar la productividad bajo condiciones de temporal, se requiere generar procesos de innovacin que incrementen los rendimientos por unidad y con ello sea rentable el cultivo. Es relevante mencionar que no se trata slo de mejorar la rentabilidad, sino la competitividad del cultivo, para lo cual se requiere entre otras del uso de variedades mejoradas y programas de innovacin tecnolgica, el conocimiento y manejo del mercado que permitan a los agricultores tener certidumbre respecto a los precios y a la comercializacin de su producto, la presencia de organizaciones eficaces, adecuadas polticas pblicas, diferenciadas para regiones y tipo de productores, que brinden apoyos integrales para lograr un desarrollo sustentable. Existen resultados de investigaciones por autores como Villasana (1985), Jaik-Dipp y Tena-Flores (1990), De Macvean (1997), Cai y Corke (1999) que han referido que los costos de produccin para los productores son muy altos y que eso lleva a que las ganancias sean menores, pero a pesar de esto siguen siendo fieles a la siembra del cultivo (Enama, 1994; Judd, 2008; Snchez 1980, 1991).
$ por da 148 106 127 125

Cuadro 6. Precio promedio del jornal por da.

Fuente: Elaboracin propia con datos obtenidos en campo.

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Captulo XXIII. La rentabilidad del cultivo amaranto en la regin centro de Mxico Cuadro 7. Costos de produccin y utilidad por tonelada.
Concepto Semilla Abono Fertilizante Insecticidas Insumos Labores mecanizadas Labores manuales Costo directos ($ ha-1) Renta de la tierra Gastos generales Costo de oportunidad Costo indirectos Costo total Rendimiento (t ha )
-1

Puebla 75.6 930.6 2,350.0 331.0 3,687.2 4,208.5 5,607.0 13,502.7 3,200.0 1,080.2 615.7 4,895.9 18,398.6 1.5 12,104.4 18,000.0 5,895.6

Morelos 100.3 1,328.2 2,048.8 370.0 3,847.3 3,379.0 7,348.0 14,574.3 2,522.0 1,165.9 664.6 4,352.5 18,926.9 1.4 13,235.6 18,000.0 4,764.4

Tlaxcala 104.2 1,104.8 2,973.2 142.6 4,324.8 2,655.0 7,637.0 14,616.8 1,570.0 1,169.3 666.5 3,405.9 18,022.6 1.0 17,669.2 18,000.0 330.8

Promedio 3.4 ,121.2 2,457.3 281.2 3,953.1 3,414.2 6,864.0 14,231.3 2,430.7 1,138.5 648.9 4,218.1 18,449.4 1.3 14,336.4 18,000.0 3,663.6

Costo por tonelada ($ t-1) Precio ($ t-1) Utilidad ($ t-1)


20,000 18,000 16,000 14,000 12,000 $ 10,000 8,000 6,000 4,000 2,000 0

Fuente: Elaboracin propia con datos obtenidos en campo.

Puebla Costo por hectrea

Morelos Costo por tonelada

Tlaxcala Utilidad por tonelada

Figura 1. Costos de produccin y utilidad por tonelada. Fuente: Elaboracin propia con datos obtenidos en campo.
Gastos generales 6% Costos de oportunidad 4%

Insumos 21% Renta de la tieierra 6%

Gasto direco ($ ha-1) 0% Labores mecanizadas 19%

Labores manuales 37%

Figura 2. Promedio de la estructura de costos. Fuente: Elaboracin propia con datos obtenidos en campo. A.V. Ayala Garay et al.

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Segn Ziesemer (2007), existe un potencial para el incremento en la produccin si se aumenta la rentabilidad y el consumo. Para ello, una opcin es la transformacin de la produccin al sistema orgnico, lo que puede abaratar los costos de cultivo abrir nuevos mercados y permitir obtener mejores precios por las cosechas; traducindose en un mejor nivel de vida para los productores de amaranto.
Concepto Costo total de produccin ($ ha-1) Rendimiento (t ha-1) Precio de venta ($ t )
-1

cultivo, sin embargo, los productores demandan un paquete tecnolgico adecuado que les permita incrementar el rendimiento, reducir costos de produccin y por ende incrementar sus ganancias. Adicionalmente, por la diversidad de uso del amaranto, es una alternativa potencial para el productor por ser un cultivo verstil en su aprovechamiento.

Cuadro 8. Inversin y utilidad de una hectrea en cada estado.

Puebla 17,027.69 1.52 18,000.00 27,360.00 10,332.31 1.61

Morelos 17,451.33 1.43 18,000.00 25,740.00 8,288.67 1.47

Tlaxcala 16,420.37 1.02 18,000.00 18,360.00 1,939.63 1.12

Ingreso total ($ ha )
-1

Utilidad bruta ($ ha-1) Factor de rentabilidad (Precio de venta/costo de produccin)

Fuente: Elaboracin propia con datos obtenidos en campo.

CONCLUSIONES Los costos de produccin del amaranto son altos, esto debido al gran nmero de mano de obra que se utiliza y aunado a la tendencia del ndice de los precios pagados al productor que ha ido a la baja; por consecuencia esto influye negativamente a la rentabilidad del amaranto. Sin embargo, los rendimientos han favorecido en los estados de Puebla y Morelos; en Tlaxcala a pesar de se tiene los menores costos de produccin, el rendimiento es bajo a comparacin de los encontrados en Puebla y Morelos; por lo que en Tlaxcala se obtuvo la menor rentabilidad. Por otro lado, el amaranto tiene enormes posibilidades y perspectivas tcnicas de desarrollo, entre otras, el mejoramiento gentico, la mecanizacin, etc. En el proceso de produccin se demanda una gran cantidad de mano de obra, que de manera generalizada se realiza manualmente, si bien influye en los costos de produccin, tambin permite la generacin de empleos y el arraigamiento de los pobladores a su lugar de origen. Adems, las caractersticas agroclimticas y edficas en la Regin Centro son adecuadas y propicias para el
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Captulo XXIV

Formas de consumo del amaranto en Mxico


CONSUMPTION FORMS OF GRAIN AMARANTH IN MEXICO

Diana Escobedo-Lpez1, Alma Velia Ayala Garay2, Luz Gabriela Campos Silva1
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias, Campo Experimental Bajo1; Campo Experimental Valle de Mxico2 Autor para correspondecia: escobedo.diana@inifap.gob.mx

RESUMEN El objetivo principal de esta investigacin fue identificar los diversos productos elaborados a base de amaranto, con la finalidad de conocer los puntos de venta en los que se distribuyen, clasificar el proceso que lleva el amaranto para su elaboracin, verificar el contenido de amaranto en cada producto, comprobar la calidad y limpieza de los productos terminados. Se llev a cabo en la zona centro de Mxico: San Lus Potos, Guanajuato, Quertaro, Estado de Mxico, Distrito Federal, Tlaxcala, Morelos y Puebla, durante los meses de mayo a julio de 2012. Se visitaron cadenas comerciales, tiendas de oportunidad, artesanales y naturistas, donde se compraron diversos productos comestibles que contenan amaranto. Se realiz una clasificacin en la que se tipific cada producto por contenido de amaranto, precio, contenido neto, limpieza, ingredientes extras y localidad de venta. Se concluye que la mayor parte de productos elaborados con amaranto no solo corresponden a dulces de tipo artesanal, en los que destacan las alegras o palanquetas, si no que la mayora de los productos encontrados se manejan como cereal (52.04%); adems que el 47.3% de los productos contienen ms del

95% de amaranto, y en cuanto a la calidad y limpieza el 68.03% de los productos se clasific como excelente. Existe una demanda creciente de amaranto, principalmente, en el mercado nacional de la confitera. Palabras clave: precios, transformacin, comercializacin, calidad y valor. ABSTRACT The main objective of this research was to identify the various products made out of amaranth, know the outlets in which are distributed, classify the preparation process, verify the amaranth content of products and test quality and cleanliness of the end products. The study was carried out in San Luis Potos, Guanajuato, Queretaro, State of Mexico, Mexico City, Tlaxcala, Morelos and Puebla states, during May to July 2012. Retail chains, convenience stores, craft and naturists were visited in order to buy edible products containing amaranth. Products were classified by amaranth content, price, cleanliness, extra ingredients and sale location. The conclusion was that the majority of products made out of amaranth do not correspond to traditional candies (alegra or crowbars), since
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52.04% products were different types of cereals. In addition, the 47.3% of products contain more than 95% of amaranth; and in terms of quality and cleanliness, 68.03% products were classified as excellent. There is a growing demand for amaranth, mainly in the domestic market of confectionery. Key words: prices, processing, marketing, quality and value. INTRODUCCIN El amaranto tiene mltiples usos tanto en la alimentacin humana y animal como en la industria, medicina y en la ornamentacin. Para la alimentacin humana se usa el grano entero o molido en forma de harinas, ya sea tostada, reventada o hervida, las hojas tiernas en reemplazo de las hortalizas de hoja, con los granos enteros o molidos se puede preparar desayunos, sopas, postres, papillas, tortas, budines, bebidas refrescantes y otros (Singhal y Kulkarni, 1988). Desde el inicio de la historia se recolectaban las hojas y tallos jvenes que servan como alimento (Sauer, 1950). En la poca de los aztecas el amaranto se consideraba un alimento importante, adems que lo usaban en ceremonias y festividades religiosas, pues con masa de harina de amaranto a la que le llamaban Zoale, hacan figuras de sus dioses para venerarlos y despus comerlos a manera de comunin. Otro uso que le daban a este cultivo era hacer atoles y tamales con la semilla (Sauer, 1967; Early, 1978). El cultivo tiene una amplia gama de usos en la alimentacin humana debido a su alto contenido y calidad biolgica de protenas y su elevado aporte de vitamina E (ParedesLpez et al., 1990). Adems, el amaranto puede ser postulado como un cultivo potencial para aliviar problemas alimentarios y de desnutricin (Paredes-Lpez et al., 1994). En 1698 aparece la palabra alegra, nombre que se le da al dulce elaborado con semilla de amaranto reventado y que en la actualidad se sigue conociendo (Sauer, 1950). Este dulce es uno de los principales productos en la actualidad, quedando en segundo trmino otros productos como el atole y los tamales. De acuerdo a Hernndez y Herreras (1998) este cultivo puede consumirse casi desde
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la siembra, en forma de germinado, de hojas tiernas en ensalada, o molidas para servirse en forma de sopa. Su digestibilidad es muy alta, alcanzando entre el 80 y el 92%. Puede aportar alimento a la familia a todo lo largo del ciclo de cultivo por su abundante produccin de hojas, que son ricas en vitaminas, protenas y minerales, entre los que destaca el hierro, adems del calcio y el fsforo. La hoja de amaranto tiene ms hierro que la espinaca, lo que la hace ideal para evitar la anemia que afecta principalmente a mujeres embarazadas y a nios. Adems de consumirse fresca, la hoja puede deshidratarse y molerse para conservarla en forma de polvo. Despus de la cosecha, el grano puede emplearse como cereal, tostado y molido para hacer harina y gran cantidad de derivados. De acuerdo con Escalante (2010), el amaranto tiene una serie de aplicaciones anlogas al de los cultivos bsicos, principalmente del maz, que van desde dulces artesanales, granolas, harinas integrales, alimentos extrudos (frituras), panificados, pastas; hasta productos ms sofisticados como aceites comestibles, papillas para bebs, concentrados proteicos, barras energticas, alimentos nutracuticos especiales para prevenir diabetes o cncer y productos para personas mayores. Las galletas y panes adicionados con harina de amaranto son un alimento hipoalergnico para los que padecen intolerancia al gluten, y no pueden consumir panificados a base de harina de trigo. Slo en Europa hay ms de diez millones de personas con este padecimiento; dato que permite dimensionar la potencialidad de estos productos en el mercado (Escalante, 2010). Segn la Asociacin Mexicana de Amaranto (2003), el grano de amaranto posee aproximadamente un 16% de protena, un porcentaje un poco ms alto que el de los cereales tradicionales: el maz 9.33%; el arroz 8.77% y el trigo 14.84%. Sin embargo, su importancia no radica en la cantidad sino en la calidad de la misma con un excelente balance de aminocidos. Adems, la digestibilidad de su grano es del 93%. Cuando se realizan mezclas de harina de amaranto con harina de maz, la combinacin resulta excelente, llegando a ndices cercanos del 100, porque el aminocido que es deficiente en uno abunda en el otro.

Captulo XXIV. Formas de consumo del amaranto en Mxico

Por otro lado, de acuerdo a Jacobsen (2002) el amaranto tiene un nivel alto de lisina, metionina y cisteina, con leucina como el aminocido limitante. El contenido de protenas y lpidos fue mayor en amaranto que en trigo, que normalmente contiene 10-14% de protenas y 2% de lpidos. En la avena y el maz el contenido de lpidos es de aproximadamente 6%. La quinoa, especie bastante relacionada al amaranto, contiene 13-18% de protenas y 6% de lpidos (Repo-Carrasco et al., 2001). Todo lo anterior, lo hacer un producto ideal para el consumo humano, Dada la importancia que ha ido adquiriendo este producto en la alimentacin y su prioridad en la demanda del producto en el mercado, ya que ha logrado captar un creciente inters debido a su potencial como alimento y su calidad nutritiva (Martnez Jimnez, 2007; Kauffman, 1992; Mujica et al., 1999) surge el inters de identificar la diversidad de productos elaborados con amaranto en la actualidad y verificar los puntos de venta en los que se comercializan. Adems de clasificar el proceso que lleva el amaranto para su elaboracin, verificar el contenido de en cada consumible y comprobar la calidad y limpieza de los productos terminados. Para lograr el objetivo planteado, durante los meses de mayo a julio de 2012, se visitaron cadenas comerciales, tiendas de oportunidad, tiendas artesanales y tiendas naturistas, en las cuales se compraron diversos productos comestibles que contenan amaranto en su preparacin. Se realizaron visitas en los principales estados productores de amaranto, en la zona centro de Mxico: San Luis Potos, Guanajuato, Quertaro, Estado de Mxico, Distrito Federal, Tlaxcala, Morelos y Puebla. Las tiendas que se visitaron fueron Walmart, Comercial Mexicana, Soriana y Aurrera, otros centros como la Central de Abastos de la Ciudad de Mxico, ubicada en la Delegacin Iztapalapa, otro tipo de tiendas como Oxxo y naturistas, adems de tiendas ubicadas en las principales zonas productoras. Tambin se hizo compra a vendedores ambulantes. Para el anlisis de la informacin, los productos se clasificaron de la siguiente manera:

1. Presentacin, en funcin del tipo de producto que se refiere: dulces, cereales, fritura, panificacin, tostada, pinole y verdura; 2. Proceso de elaboracin del producto, grano reventado, harina y grano extrudo; 3. Limpieza del producto, el porcentaje de contenido de amaranto, la marca, el precio, el contenido neto de producto, los ingredientes extras en el caso de que sea un producto combinado y la caducidad. 4. Precio, segn el tipo de producto. De los productos muestreados se obtuvieron porcentajes de las variables antes mencionadas para conocer las tendencias del mercado y la calidad de los productos. Cabe resaltar que el documento se divide en los siguientes puntos: consumo internacional, consumo nacional, anlisis de mercado y consideraciones finales. CONSUMO A NIVEL INTERNACIONAL El consumo de productos de amaranto adems de darse en Mxico, tambin se da en pases andinos, de donde es originario; otros pases en los que se pueden encontrar productos de amaranto son Per, Ecuador y Bolivia. En Argentina hay una empresa de produccin primaria y transformadora, se conoce que existen producciones experimentales en Cuba. En Estados Unidos a partir de productores locales, existe consumo y comercializacin de productos de amaranto a travs del principal productor y transformador que es New World Amaranth, quien tambin ha llegado a proveer al mercado Canadiense (Manrique, 2011). En los ltimos aos se ha ampliado el mercado de consumo principalmente en el ramo naturista en pases industrializados como Estados Unidos, Japn y Alemania. Sin embargo, se ha constatado la presencia creciente de productos elaborados con amaranto destinados al mercado masivo (Escalante, 2010). En Europa el consumo de amaranto como cereal, se hace mezclando amaranto con trigo, linaza y avena entre otros y emplendolo reventado, inflado, como hojuela o cubierto de miel Jacobsen (2002). En los noventas el consumo de amaranto se basaba principalmente en productos que contenan grano reventado, aunque en Estados Unidos ya lo consuma como harina con
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la que complementaba la mezcla para elaborar panques, muffins y multigranos que promovieran la salud (Paredes-Lpez et al., 1994). El amaranto es utilizado en los Estados Unidos, donde las semillas se combinan con granos de trigo (Triticum aestivum L.) y maz (Zea mays L.) en productos para desayuno, panes, harina de panques y pasta (National Research Council, 1989), adems, se preparan panes de consistencia esponjosa aprovechando sus buenas condiciones para el horneado (Manrique, 2011). La produccin comercial de amaranto de grano en los Estados Unidos comenz a finales de 1970, siendo una produccin de 1,000 ha cada ao (Sooby et al., 1999). En frica, el amaranto es domesticado como verdura, mientras que en otros pases, como en Rusia, el amaranto silvestre es usado como forraje (Komen, 1992). En China se usa el amaranto cultivado para grano y forraje (Yue y Sun, 1993). En Dinamarca, la investigacin con amaranto se inici en 1986 (Srensen y Jacobsen, 1987; Itenov y Jacobsen, 1996), pero todava no est cultivado comercialmente. Los pases principales para el cultivo del amaranto de grano son China, India, Kenya, Mexico, Nepal, Per, los EE.UU., y Rusia (Bale y Kauffman, 1992). Los granos reventados se consumen mezclados con miel de abejas, miel de caa o chocolate, dndole diferentes formas en moldes de madera o metlicos a las que se conoce como turrones de kiwicha en Per, alegra en Mxico y tadoos en India. En Nepal, las semillas de amaranto son consumidas como mazamorra llamada satoo o la harina se convierte en un alimento llamado chappatis (Singhal y Kulkarni, 1988). CONSUMO NACIONAL En Mxico, el consumo del amaranto se remonta a la poca prehispnica, pues se le cultivaba desde el tiempo de los aztecas, actualmente se contina cultivando con una amplia distribucin en Mxico (Espitia et al., 2010). La importancia del amaranto como alimento en la poca de los aztecas increment, adems del valor religioso que le daban por ser usado ceremonias y festividades, pues hacan una masa de harina de amaranto a la que llamaban Zoale, para elaborar figuras de sus dioses, venerarlos y finalmente comerlos. Tambin se
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menciona que con la semilla de amaranto hacan atoles y tamales (Sauer, 1967; Early, 1978). El cultivo del amaranto se realiza actualmente en pequeas regiones de Mxico, las que han persistido a travs de los aos. Las principales zonas productoras son: Tulyehualco, D. F.; Amilcingo y Huazulco, Morelos; San Miguel del Milagro, Tlaxcala y Huaquechula, Santiago Tecla, San Juan Amecac, Tochimilco y Tochimizolco en Puebla. Recientemente se han iniciado siembras en la zona de Tehuacn Puebla, Guanajuato, Quertaro y San Lus Potos (Espitia et al., 2010). El cultivo es una excelente fuente de alimento debido al alto valor nutricional de sus hojas y semillas. Las semillas contienen un alto grado de protenas y stas poseen un mejor balance de aminocidos esenciales que la mayora de los cereales y leguminosas (Barba de la Rosa et al., 1992, Schnetlzer y Breene, 1994). En Mxico se prepara con las semillas tostadas, molidas o enteras, el conocido plato denominado atole y pinole, que es una especie de mazamorra, del mismo modo se elaboran los tamales con harina de maz, tallos y hojas de amaranto picadas, potaje conocido desde la poca prehispnica con los nombres de vauquilitl, hoauhquilitl en Mxico (Jimnez y Cordero, 1986). El aceite de amaranto tiene un gran valor debido a su elevada cantidad de escualeno (Johnson y Henderson, 2002). El amaranto se ha integrado en varios alimentos industrializados como, productos de repostera (panes, pasteles y galletas), productos de extrusin (hojuelas de cereal, tortillas y pastas) (Schnetzler y Breen, 1994; Tapia-Blcido et al., 2009) (Figura 1). El almidn del amaranto est dividido en dos tipos: aglutinante y no aglutinante, el primero es el apropiado para la industria panadera, este almidn tambin lo tienen los cereales como el arroz, maz, cebada, sorgo y mijos; el amaranto se puede utilizar en la industria ya que rene esta primera caracterstica (Okuno y Sakaguachi, 1984); sin embargo, el amaranto podr ser utilizado en la elaboracin de productos panificados que no necesiten expansin debido a que carece de gluten funcional, y podr ser utilizado en mezclas con harinas de otros cereales (National Research Council, 1984). Al respecto Lorenz (1981)

Captulo XXIV. Formas de consumo del amaranto en Mxico

Hojas

Consumo Directo Concentrado Protico Extrusin Churros Alegra Oblea Palanqueta Horchata Rompope Barra Energtica Granola Grano Garapiado Atole Mazapan Aceites Pinole Tortillas Tostadas Pastas Hotcakes Pan Galletas Rica en Proteina Rica en Almidones Aceites Aislados No alimenticio: Aditivos y Jarabes

Planta Entera Reventado Cereal Semillas

Harina Integral

Molienda Fermentado Germinado Nixtamalizado Tallo Forraje

Mezcla

Fracciones

Figura 1. Categoras de salida de productos de amaranto.

seala que el amaranto puede ser utilizado en la elaboracin de panes en sustitucin de 10% de harina de trigo, lo que mejorara la calidad nutritiva y el sabor es descrito como muy parecido al de la nuez y fue preferido sobre el pan hecho con 100% de harina de trigo. ANLISIS DE MERCADO En las visitas que se realizaron a los diferentes puntos de venta, se detectaron 244 diferentes productos los cuales se clasificaron por tipo de producto (dulces, cereales, fritura, panificacin, tostada, pinole y verdura), el proceso del amaranto para la elaboracin del producto (grano reventado, harina y grano extrudo), adems se tom en cuenta la limpieza del producto, el porcentaje de contenido de amaranto, la marca, el precio, el contenido neto de producto, los ingredientes extras en el caso de que sea un

producto combinado y la caducidad. De los 244 productos encontrados, 70 son dulces (28.68%); 127, cereales (52.04%); 9, frituras (3.68%);35, productos de panificacin (14.34%); 1, tostada (0.42%); 1, Pinole (0.42%), y 1, Verdura (0.42%) (Figura 2). Se puede observar que en presentacin de cereal es el de mayor demanda, lo que indica que existe preferencia por parte del consumidor. El amaranto en forma de cereal es distribuido principalmente en los centros comerciales como Walmart, Comercial Mexicana y Soriana. Por tipo de proceso para su elaboracin se encontraron que 195 corresponden a grano reventado (79.91%); 42, a harina (17.21%), y 7, extruido (2.88%)(Figura 3). Segn los resultados, el amaranto se consume principalmente como grano reventado, del cual se elaboran los siguientes productos
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Tostada 0.42% Frituras 3.68% Verdura 0.42% Pinole 0.42%

Dulces 28.68%

Cereales 52.4%

Figura 2. Clasificacin de los productos de amaranto. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.

finales: alegras, amaranto (cereal) reventado, granolas, atoles, pinole, mazapn, etc. La importancia de conocer el tipo de proceso radica en que existe un efecto del tostado sobre la disponibilidad de lisina, que contiene el amaranto, ya que uno de sus compuestos nutricionales ms valiosos es ste aminocido; el cual, no soporta temperaturas altas. Los procesos que utilizan calor seco, como el tostado a alta temperatura y reventado, o el expandido
Extruido 2.88%

de los granos, pueden disminuir notablemente la disponibilidad de la lisina. As, la prdida es significativa en el grano de amaranto reventado en calor seco; lo mismo en la harina tostada, por lo que se debera preferir el consumo en forma hervida, en hojuelas o en extrudo. El contenido de amaranto por producto se dividi en los siguientes rangos: menos del 50%, del 51 al 70%, del 71 al 90% y ms del 90%. Con base a estos rangos se encontr que

Harina 17.21%

Grano Reventado 79.91%

Figura 3. Productos de amaranto por tipo de proceso para su elaboracin. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.

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23 productos contienen menos del 50% de amaranto (9.43%); 27, del 51 al 70% (11.07%); 77, del 71 al 90% (31.55%), y 117, ms del 90% (47.95%) (Figura 4). De lo anterior, se puede mencionar que el que un producto tenga mayor contenido de amaranto es garanta de que es un producto de mayor calidad nutricional, sin embargo, es importante resaltar que tambin en algunos casos, son productos que no presentan fechas de caducidad. En relacin a la limpieza los productos encontrados se clasificaron en tres rangos: 1. Excelente. Cuando estn empaquetados hermticamente y no presentan elementos extraos al producto ni daos fsicos.
Menos de 50% 9.43% 51 a 70% 11.07%

2. Bueno. Cuando podran presentar daos fsicos, el empaquetado no es totalmente hermtico, podan tener residuos propios del amaranto pero sin contaminacin de otros elementos. 3. Malo. Cando no cumplan con las normas de sanidad mnimas establecidas y su empaque mostraba un aspecto poco apetecible y hasta sucio. Para estos rangos se tuvieron 166 en calidad excelente (68.03%); 58, buena calidad (23.77%), y 20, mala calidad (8.20%) (Figura 5). Los productos con calidad excelente, en general fueron adquiridos en los centros comerciales y cadenas de autoservicio. Los

Ms de 90% 47.95%

71 a 90%% 31.55%

Figura 4. Porcentaje de contenido de amaranto en productos comprados. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.
Mala 8%

Buena 24%

Excelente 68%

Figura 5. Calidad y limpieza de los productos de amaranto. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis. D. Escobedo-Lpez et al.

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productos clasificados como de mala calidad fueron encontrados en pequeas tiendas artesanales o con comercializadores ambulantes. Cabe resaltar que los granos de amaranto, en cualquiera de sus grados de calidad, deben estar exentos de sabores y olores extraos, y presentar color tpico de la variedad. Dentro de la clasificacin que se hizo con los 70 dulces encontrados se tiene que 41 de ellos son alegras (58.57%); cuatro son dulces cubiertos de amaranto (garapiados, bombones, choco-hojuela) (6.34%); cinco son obleas (7.9%); 17 son palanquetas (barras compactadas de amaranto reventado con cacahuate, avena, coco, pasas, nuez, pepitas, entre otros) (24.28%); se encontr un polvo de amaranto para preparar horchata de amaranto (1.58%); adems encontramos una muestra de mazapn (1.58%) y una bebida de rompope (1.58%)(Figura 6). Se sabe de otros productos como no convencionales nieve, pulque, tlayudas, tortillas, guisados, etc., (Espitia et al., 2010). Es importante mencionar que de acuerdo a Escalante (2010), la forma ms conocida de comer amaranto es como alegra, sta palanqueta se ha diversificado en los ltimos aos al adicionarle otros productos como chocolate, miel, nuez, pasas, linaza, arndano, etc., las presentaciones varan de crculos a cuadrados y rectngulos de diferentes tamaos y cubitos en bolsas de papel celofn; de igual manera hay variaciones en colores.
Rompope 1.58%

Sobre los precios de los dulces se dividieron en cinco rangos: de $2.00 a $10.00 por producto, de $11.00 a $15.00, de $15.50 a $18.00, de $18.50 a $25.00 y de $25.00 a $36.00, donde se encontraron 40 productos en el rango de $2 a $10 (57.15%); 16, $11 a $15 (22.86%); 4, $15.50 a $18 (5.71%); 3, $18.50 a $25 (4.28%), y 7, $25 a $36 (10%). El producto se concentra principalmente en el de menor precio, por lo que la mayora de la poblacin que consume amaranto lo relaciona con una golosina, sin saber que a un bajo costo adquieren un alimento con un gran potencial de protenas. Una de las razones del desconocimiento de las propiedades del producto, es que en Mxico no existe informacin de las bondades que tiene este producto y las diferentes formas de consumirlo, por lo que no hay una cultura de comer amaranto a pesar de ser un cultivo tan tradicional como el maz y el frijol. Con menor popularidad, pero con mayor representacin en el mercado, los productos como cereales, que se expenden preferentemente en tiendas naturistas y de autoservicio as como tambin amaranto reventado en bolsas de 250 g para ser consumido como cereal. Para este grupo de cereales se encontraron 127 y se clasificaron de la siguiente manera: barritas energticas con 94 productos (74.01%); 20, a base de grano reventado (15.75%); 12, granola (9.45%), y un producto de grano garapiado (0.79%).

Mazapn 1.58%

Horchata 1.58%

a)

Palanqueta 24.28% Alegra 58.57%

Oblea 7.9%

Cubierto 6.34%

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Captulo XXIV. Formas de consumo del amaranto en Mxico

$18.5-25 4.28% $15.5-18 5.71%

$25.5-36 10%

b)
$10.5-15 22.86%

$2-10 57.15%

Figura 6. a) Clasificacin de dulces. b) Costos de dulces. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.

Las empresas dedicadas a la transformacin de cereales ubicadas compran la semilla para reventarla, procesarla y elaborar barras energticas, harinas y alimentos protenicos. Los cereales, como barritas integrales, son un alimento que adems de ser nutritivo y gustar tanto a nios como a grandes, son concentrados proteicos, y alimentos nutracuticos. Los precios de estos se agruparon en los siguientes rangos: de $1 a $5, $5.5 a $10, $10.50 a $20, $20 a $30, $30.50 a $50 y ms de $50. Para lo que tenemos que de $1 a $5 se encontraron 31 productos (24.41%); 29

productos de $5.5 a $10 (22.83%); 35 cereales de $10.5 a $20 (27.56%); 15 de $20.5 a $30 (11.81%); 12 de $30.50 a $50 (9.45%) y finalmente ms de $50 se encontraron cinco (3.94%) (Figura 7). De los 9 productos encontrados dentro del grupo de frituras se tiene que todos corresponden a churritos de amaranto (100%) y sus precios se mueven de $6 a $10. En la clasificacin de productos panificados encontramos 35 divididos en 24 productos de pan (bisquet, cochinitos, conchas, empanadas, entre otros) (68.57%); siete tipos de galletas (integrales, regaadas, con mermelada, entre otras) (20%); cuatro tipos de harina de

Grano Garapiado 0.79% Granola 9.45%

a)

Grano Reventado 16.75%

Barra Energtica 74.01%

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa


Ms de $50 3.94%

$30.5-50 9.45% $1-5 24.41%

b)

$20.5-30 11.81%

$5.5-10 22.83% $10.5-20 27.56%

Figura 7. a) Clasificacin de cereales. b) Costos de cereales. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.

amaranto (harina integral, blanca, harina para hotcakes y harina para tortilla) (11.43%). Los productos que incluyen harina de amaranto se siguen mejorando por combinaciones de harinas, para aportar alimentos de alto contenido nutritivo que es ideal en anemias y desnutricin, es un alimento rico en hierro, protenas, vitaminas y minerales; a tener en cuenta tambin en la osteoporosis, ya que contiene calcio y magnesio. Los precios para este tipo de producto se agruparon en tres rangos de: 1 a 10 pesos, de 11 a 20 pesos y ms de $20. En base a

esto encontramos que 21 productos para la elaboracin de panificados oscila de 1 a $10 (60%); 11, de 11 a 20 pesos (31.42%), y 3, con precios a ms de $20 (8.57%) (Figura 8). Sobre los precios, los productos son econmicos y quedan al acceso de la poblacin, se encontr que los productos que tienen un mayor precio fueron adquiridos en las cadenas comerciales como Walmart, Soriana, Comercial Mexica, etc. Estos productos contienen una calidad mayor, son productos que poseen una etiqueta y por lo general una marca. Esto es debido a que el consumidor que acude a

Harina 11.43%

a)

Galletas 20% Pan 68.57%

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Captulo XXIV. Formas de consumo del amaranto en Mxico

Ms de $20 9%

b)

$11-20 31%

$1-10 60%

Figura 8. a) Clasificacin de panificados, b) Costos de panificados. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.

este tipo de lugares, se ha vuelto cada vez ms exigente y quiere tener conocimiento sobre lo que consume. Dentro de lo que se observ con las muestras encontradas es que el amaranto tiene una diversidad de productos adems de las alegras, se puede emplear en muchos platillos como sopas (grano y harina), pasteles, galletas, panes (harina, grano entero, grano reventado), cereal para el desayuno (entero, reventado o germinado y molido), lo diferentes usos son mencionados tambin por Ortega (1990), quien menciona que con el amaranto, tanto de sus semillas como de las hojas se preparan diversos platos, desayunos, almuerzos, postres, bebidas y dulces, sin embargo de acuerdo al estudio, predomina su uso para la elaboracin de las alegras. El objetivo principal de promover e incrementar el consumo de productos elaborados con amaranto o mezclados, es el de dar un mejor valor nutritivo a los alimentos, a un costo muy econmico, mejorando as el estado de salud de la poblacin. Hoy en da se pueden encontrar productos a base de amaranto o como complemento aunque ya se utilizan otros cereales y granos como ingredientes extras en la elaboracin de consumibles a base de amaranto, dentro de estos encontramos: trigo, nuez, avena, maz, cacahuate, semilla de girasol, pasas, pepitas, linaza, arndano, nopal y papaya, adems de otros insumos como: miel, miel de agave, chocolate, canela, vainilla, piloncillo, jugo de limn, entre otros.

Los artculos de amaranto encontrados en el mercado, se hacen por medio de elaboracin artesanal aunque ya se est involucrando la industria alimenticia en incursionar con productos a base de amaranto de consumo tradicional, pero a la vez se observ que actualmente se estn generando nuevas formas de preparar el amaranto y con esto el cultivo est obteniendo mayor demanda. La mayora de los productos encontrados tienen marca, aunque no reconocida es un sello distintivo que en cierta medida respalda la calidad de elaboracin. De los 244 productos recolectados 78 se encontraron en Celaya, Guanajuato (33.60%); uno en Cuapiaxtla, Tlaxcala (0.40%); 82 en Huazulco, Morelos (38.93%); dos en Lerma (0.81%), 26 en Texcoco (9.42%), 13 en Mxico, D.F. (5.32%); 8, en Quertaro (3.27%); 14, Oaxaca (5.73%), y 20, San Luis Potos (2.45%)(Figura 9). Un aspecto importante que se encontr es que de las 244 muestras de productos, slo 64 mencionan una fecha de caducidad y las 190 restantes quiz por el lugar de elaboracin no lo creen importante, cabe destacar que la mayora de los productos que no se muestra su caducidad son alegras, dulce de fcil obtencin. En la zona centro del pas donde se encuentra concentrada la mayor parte productora de amaranto y que a su vez se transforma y comercializa es notable la presencia de los productos como cereales y granolas (52.04%) sobre lo que se consideraba el principal mercado, los dulces tradicionales (28.68%), de
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Amaranto: Ciencia y Tecnologa

Oaxaca, Oax. 5.73% Quertaro, Qro. 3.27% Mxico, D.F. 5.32%

San Luis Potos, SLP. 2.45%

Celaya, Gto. 33.6% Texcoco, Edo. Mx. 9.42% Lerma, Edo. Mx. 0.81%

Huazulco, Mor. 38.93%

Cuapiaxtla, Tlax. 0.4%

Figura 9. Distribucin de productos recolectados. Fuente: elaboracin propia con datos extrados del muestreo del anlisis.

los cuales en su mayora son preparados a base de grano reventado (79.91%) y que contienen ms del 90% de amaranto en su composicin (47.95%), alcanzan en su mayora una calidad de excelente ( 68.03%). La prevalencia dentro de este estudio son productos de Huazulco, Morelos (38.93%) y Celaya, Guanajuato (33.60%). Esto indica que el amaranto ya no solo es considerado un ingrediente de dulces dirigido al pblico del mercado artesanal, sino que ahora podemos encontrar una gran variedad de productos dirigidos al pblico en general y muchos ya especficos para atender etapas de desarrollo como papillas infantiles, concentrados proteicos y suplementos para la tercera edad, as como para aquellos que busquen el cuidado de la salud y el bienestar. Cabe sealar que el mercado nutricional es el principal campo para este cultivo ya que aporta los componentes necesarios para el desarrollo de las funciones del organismo y contribuye con aportes nutricionales para personas que puedan presentar alguna deficiencia en la salud (diabticos, hipertensos, ancianos, etc.), adems favorece el crecimiento y desarrollo de los nios y jvenes en estado ptimo, malnutricin y desnutricin.
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Una de las particularidades del cultivo del amaranto y su transformacin en variedad de productos que se comercializan por lo regular como pequeas y medianas empresas, es que se trata de una labor casi artesanal. CONSIDERACIONES FINALES El amaranto tiene un mayor posicionamiento dentro de los granos utilizados por la industria alimenticia, principalmente en la integracin de alimentos precursores y conservadores de la salud a nivel mundial, sobre todo porque las utilidades nutricionales y econmicas son altas, sin embargo, debe de considerarse que el amaranto es un grano que no es de consumo masivo, por lo que es importante fomentar el consumo del mismo. En Mxico aunque el mercado artesanal, sigue siendo uno de los pilares fundamentales de la produccin y consumo de amaranto, el crecimiento del mercado de la salud en cuanto a granos integrales ha permitido al amaranto posicionarse de una manera satisfactoria permitiendo un mayor impulso en la produccin del pas. Actualmente ya existe

Captulo XXIV. Formas de consumo del amaranto en Mxico

un mayor nmero de empresas productoras y transformadoras de amaranto que poco a poco se han ido posicionando en el mercado. La mayora maneja un signo distintivo que lo diferencia y coloca dentro del mercado, lo cual ha permitido al consumidor identificar una gran variedad de productos de origen nacional que mantienen un nivel de calidad superior a los que se elaboraban y comercializaban alrededor de los ochentas. As, de acuerdo con lo anterior, existe una demanda creciente de amaranto, principalmente, en el mercado nacional de la confitera. De esta forma, se identifica una oportunidad de negocio y fomento para este cultivo entre los pequeos productores. LITERATURA CITADA Asociacin Mexicana del Amaranto (2003) Amaranto, el mejor alimento de origen vegetal, beneficios y propiedades nutritivas. Centro de Informacin al Consumidor de Amaranto. http://www.amaranto.com.mx/ salud/propiedades/propiedades.htm. Fecha de consulta 22 de noviembre 2012. Bale J R, C S Kauffman (1992) Special issue on grain amaranth: New potential for an old crop. Food Rev. International. 8:1-190. Barba de la Rosa A P, J Gueguen, O ParedesLpez, G Viroben (1992) Fractionation procedures, electrophoretic characterization, and amino acid composition of amaranth seed proteins. Journal of Agricultural and Food Chemistry 40:931-936. Early K D (1986) Cultivo y usos del Amaranthus (kiwicha) en dos centros de domesticacin: Mxico y Per. In: V Congreso Internacional de Sistemas Agropecuarios Andinos. Puno, 0- 14 marzo. PISA, IID-Canada. Puno, Per. Escalante E M C (2011) Rescate y revaloracin del cultivo del amaranto. Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura (IICA). 2010, Fondo CONACYTSAGARPA, COFUPRO e IICA. 91 p.

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Amaranto: Ciencia y Tecnologa Se termin de imprimir en diciembre de 2012 en los talleres de Celsa Impresos S.A. de C.V. Calle Cuencam No. 108, Parque Industrial Gmez Palacio, Cuarta Etapa, Gmez Palacio Durango, C.P. 35070 Diseo y diagramacin:

creadisenografico@gmail.com Su tiraje consta de 1000 ejemplares. Impreso en Mxico Printed in Mexico

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