NOCIONES DE BIO ELECTROQUMICA

UN POCO DE HISTORIA
Desde los primeros trabajos realizados por Luigi Galvani el estudio de la llamada
electricidad animal ha sido motivo de inters de muchos cientficos. La idea de la
presencia de un tipo especial de electricidad en algunos animales que producan una
descarga elctrica al ser perturbados, fue el primer motivo de estudio. Sin embargo, ahora
podemos tener una visin mucho ms amplia de este concepto.
Es importante recordar que para la poca de estos estudios an no se tena una descripcin
clara del modelo de tomo, ni de la identidad de los portadores de esa carga elctrica.
Para contradecir lo postulado por Galvani, A. Volta realiz una serie de experimentos que
condujeron finalmente, a la invencin de la pila voltaica. De esta manera se intentaba
demostrar que la teora de la corriente animal era equivocada.
Al cabo de todos estos aos, se puede afirmar que tanto Volta como Galvani, estaban en lo
cierto puesto que actualmente se puede explicar no solo las evidencias experimentales
obtenidas con ciertos animales, sino que tenemos una idea mas clara de la importancia de la
presencia de electricidad para el funcionamiento del cuerpo humano. Sin duda la analoga
ms fcil de realizar es comparar lo que sucede cuando se transmite electricidad por un
conductor metlico y el transporte de impulsos en el sistema nervioso. Tambin se
encontrarn analogas al analizar lo que sucede a nivel de membranas celulares.

SISTEMA NERVIOSO
Unidades bsicas del sistema nervioso
Una clase de clulas que constituyen el sistema nervioso son las denominadas neuronas,
las que se unen unas con otras a travs de las sinapsis.
Los primeros estudios realizados con este tipo de clulas se llevaron a cabo observando el
comportamiento del axn del calamar cuando se someta a estimulacin. Esta observacin
era relativamente fcil ya que tiene 1mm de dimetro.

Transmisin de impulsos nerviosos
La transmisin se da fundamentalmente a travs de dos mecanismos:

Seales elctricas: se recorren rpidas distancias dentro de las neuronas
Seales qumicas: se da entre neuronas a travs de neurotransmisores
(acetilcolina, norepinefrina, dopamina, etc.). Este mecanismo acta a nivel de
las sinapsis.

POTENCIAL DE MEMBRANA
El potencial de membrana es el resultado de la separacin de cargas positivas y negativas a
travs de una membrana celular. Esta separacin, cargas positivas en el exterior de la
membrana de una clula del sistema nervioso en reposo, es posible debido a que la bi-capa
lipdica acta como una barrera para la difusin de los iones y da lugar a la generacin de
una diferencia de potencial. Esta diferencia toma valores de 60 a 70 mV.

POTENCIAL DE REPOSO
Cuando una clula est en reposo, el potencial de membrana se conoce como potencial de
reposo. Por convencin se toma el potencial externo como cero, por lo que teniendo en
cuenta que el interior tiene un exceso de carga negativa, el potencial de membrana en este
caso toma valor negativo de -60 a -70 mV.
La separacin de carga a travs de la membrana, y por lo tanto el potencial de reposo se
modifica cada vez que ocurre un flujo neto de iones hacia o desde el interior de la clula.
Cuando se produce una disminucin de la separacin de carga el proceso se denomina
despolarizacin. El caso contrario se conoce como hiperpolarizacin.
Al modificarse el potencial de membrana se genera un flujo de corriente. Esto es posible
por la accin de canales inicos.
Existen dos tipos de canales inicos en la membrana:
Canales gated (algo equivalente a decir que tienen posibilidad de ser cerrados) y
nongated (lo opuesto)
Los canales gated se abren o cierran en respuesta a seales elctricas, mecnicas o
qumicas especficas. Mientras que los segundos estn siempre abiertos y no son
influenciados significativamente por factores extrnsecos. Ellos son importantes para
mantener el potencial de membrana en reposo.

EQUILIBRIO DE SODIO Y POTASIO
Dado que los canales inicos reconocen y seleccionan iones especficos, la distribucin de
especies inicas a travs de la membrana depender de la distribucin particular de canales
inicos que tenga la membrana celular.
Las especies inicas no se distribuyen de igual manera en ambos lados de la membrana:
El sodio y el cloruro estn ms concentrados en el exterior de la clula
El potasio y los aniones orgnicos (cidos orgnicos y protenas) estn ms concentrados en
el interior.

Qu previene que estos gradientes sean vencidos simplemente por difusin a travs de
los canales nongated?
La explicacin est relacionada con la existencia de un equilibrio de fuerzas actuantes.
Por una parte se tiene un gradiente de concentraciones que acta impulsando los iones en el
sentido de disminuir el mismo. Por otra parte, debido a la separacin de cargas en la
membrana se tiene un campo elctrico que actuar tambin permitiendo o no el movimiento
de los iones. Veamos con ms detalle esta situacin

Analizando por ejemplo al in cloruro, ya que se encuentra ms concentrado en el exterior
de la clula tendr la tendencia a moverse hacia el interior a travs de los canales
nongated. Sin embargo si se tiene en cuenta que en el interior de la clula existe un
exceso de carga negativa esto provocar la salida de los iones cloruros.
De lo anterior se espera se alcance un estado de equilibrio, directamente relacionado con el
potencial de membrana.
Para el caso de los cationes, se debe hacer el anlisis conjunto del movimiento de los iones
sodio y potasio, ya que el movimiento de los iones sodio hacia el interior de la clula tiene
que ser compensado por la salida de iones potasio.
Este intercambio estacionario de iones previene una despolarizacin reversible, sin
embargo no puede sostenerse indefinidamente a menos que se revierta el proceso. Esto se
consigue mediante la accin de las bombas de sodio y potasio. Estos sistemas permiten la
salida del sodio del interior de la clula e incorporan el potasio. Este proceso implica un
consumo de energa puesto que los movimientos se realizan en contra de los gradientes
electroqumicos. Esta energa se obtiene de la hidrlisis de ATP, que es la molcula
portadora de energa por excelencia.
Algunas clulas poseen tambin bombas de cloro que funcionan de la misma manera que
la mencionada arriba.

TRATAMIENTO TERMODINMICO
Si se tuviera una membrana que solo fuera permeable al paso de los iones potasio, sera
factible aplicar la ecuacin de Nernst para calcular el potencial de membrana que se
generara a temperatura ambiente, al tener distintas concentraciones en ambos lado de la
misma.
[ ]
[ ]
exterior
erior
K
K
mV V
int
log 60
Es decir que si se tuviera una concentracin 0,1M en el interior y 0,01M en el exterior de la
clula respectivamente, en el equilibrio se generara una diferencia de potencial de unos 60
mV. Este potencial es el que contrarresta el gradiente de concentracin y que permite que
se alcance el equilibrio.

En el anlisis anterior se considero una membrana permeable solo a iones potasio.
Obviamente que esto no corresponde con la realidad puesto que las membranas celulares
muestran cierto grado de permeabilidad a otros iones diferentes al potasio, particularmente
sodio y cloruro. Por este motivo, es necesario modificar la ecuacin de Nernst para tener en
cuenta esta influencia mltiple. Esta modificacin es conocida como Ecuacin de
Goldman
[ ] [ ] [ ]
[ ] [ ] [ ]
)
`

+ +
+ +

int
int int
log 60
Cl P Na P K P
Cl P Na P K P
mV V
Cl ext Na ext K
ext Cl Na K


Donde P, con unidad de cm.s
-1
, es la permeabilidad de cada in y est relacionada con la
actividad de los canales.

POTENCIAL DE ACCIN
As como el potencial de reposo se corresponde con un estado donde la neurona est sin
estimular, cuando es estimulada se produce una explosin de actividad elctrica conocido
como potencial de accin.
Ante el estmulo, el potencial de reposo toma valores ms positivos, pero solo cuando
alcanza un valor umbral, de unos 55 mV, se produce el disparo de un potencial de accin.
Es importante mencionar que todos los potenciales de accin tienen la misma magnitud
para cualquier neurona.
En trminos generales el proceso puede describirse teniendo en cuenta el funcionamiento
de los canales inicos. Ante el estmulo se abren primero los canales de sodio permitiendo
el ingreso al interior de la clula lo que conduce a la despolarizacin. Cuando los canales
de sodio comienzan a cerrarse se abren los de potasio, permitiendo la salida del mismo con
lo que se revierte la despolarizacin anterior. Con esto se regresa al valor de potencial
inicial (-70mV) es decir ocurre la re polarizacin.

En resumen se comprueba la estrecha relacin que existe entre la generacin de diferencias
de potencial a nivel de la membrana celular y el proceso de transmisin de impulsos
nerviosos. Es decir que una vez ms estamos en evidencia de la electricidad animal que
tanto ha intrigado a los cientficos histricamente.

ALGUNOS TRASTORNOS RELACIONADOS CON EL FUNCIONAMIENTO DEL
SISTEMA NERVIOSO

Epilepsia: es una afeccin neurolgica que implica una actividad elctrica anormal del
cerebro. Provoca convulsiones repetidas de algn tipo. Este trastorno no es
contagioso ni est relacionado con ninguna enfermedad o retraso mental. La
epilepsia es un trastorno con muchas causas posibles, cualquier cosa que impida o
distorsione el patrn de actividad neuronal normal puede conducir a la aparicin
de una crisis epilptica.

Alzheimer: enfermedad irreversible que ataca el cerebro provocando una prdida gradual
de la memoria y dificultades con el lenguaje y las emociones. Se produce la
interrupcin del paso de mensajes entre las neuronas que controlan la memoria y
el pensamiento. En estas clulas y en la corteza del cerebro se producen
modificaciones distintivas.

Mal de Parkinson: es el deterioro progresivo de las neuronas de la parte del cerebro que
controla el movimiento muscular, rea en la cual se produce
normalmente la dopamina, uno de los neurotransmisores. Este deterioro
reduce la cantidad de dopamina disponible para el organismo. Esto
afecta el equilibrio con otros transmisores como la acetilcolina. Al no
poderse transmitir adecuadamente los mensajes en las clulas nerviosas,
se produce prdida en la funcin muscular.


TECNICAS E INSTRUMENTOS RELACIONADOS CON LA INTERACCIN
ELECTRICIDAD-SERES VIVOS

Electrocardiograma (ECG): instrumento que permite monitorear el funcionamiento del
msculo cardaco mediante la medicin del potencial elctrico
generado. Fue inventado por el holands Einthoven en 1907
(Premio Nbel en 1924). El instrumento fue mejorado
significativamente por el cardilogo norteamericano Wilson en
1929 con la introduccin de las derivaciones unipolares.

Electroencefalograma (EEG): Fue inventado en 1929 por Hans Berger Mediante este
instrumento se detecta y registra los patrones de la actividad
elctrica del cerebro.

Electromiograma: mediante este anlisis se estudia el sistema neuromuscular, consiste una
prolongacin del estudio clnico neurolgico. Se fundamenta en el
registro de los potenciales de las clulas excitables. La electro miografa
se ocupa del registro de los potenciales evocados involuntariamente por
el msculo, mientras que la electro neurografa estudia los potenciales
generados luego de una estimulacin elctrica sobre los nervios que
mantienen conexin anatmica o funcional con la zona de registro

Terapia Electro convulsiva (Electroshock): aplicacin de estmulo elctrico en el cerebro
que produce efectos similares a los causados por
la epilepsia. Se emplea para el tratamiento de
algunas enfermedades mentales

Marcapasos: instrumento alimentado con bateras que enva seales elctricas al msculo
cardaco. Ideado por Hyman en 1927, es empleado externamente al cuerpo en
1956. En 1958 Senning lo utiliza por primera vez incorporado en el cuerpo. Se
emplean en aquellos pacientes cuyo corazn late muy lentamente (bradicardia)
y eventualmente se puede utilizar en aquellos con una frecuencia cardiaca
anormalmente alta (taquicardia).

Defibrilador: instrumento que permite aplicar durante un corto tiempo un choque elctrico
de alta energa. Con este procedimiento se detiene la fibrilacin (contracciones
cardacas rpidas y descoordinados).

DROGAS QUE AFECTAN EL SISTEMA NERVIOSO

Alcohol
Barbitricos
Cocana
Herona
LSD
Nicotina
Anfetaminas
Cafena
xtasis
Inhalantes
Marihuana
Rofinol
Hongos alucingenos

DOBLE CAPA ELCTRICA
En todos los procesos de electrodo, es decir en aquellos donde el proceso electroqumico se
establece en la regin que incluye la interfaz electrodo-solucin se genera una distribucin
de cargas (an cuando no se aplique un potencial al electrodo) conocida como doble capa
elctrica.
Es de gran importancia el estudio de los procesos que ocurren a nivel de esta zona puesto
que de esta manera se tendr una mejor comprensin del comportamiento macroscpico del
sistema.
TEORIA DE LA DOBLE CAPA
El estudio de la distribucin de carga en la vecindad de la interfase ha sido motivo de
inters de cientficos desde mediados del siglo XIX, es as que se destacan los aportes
realizados por:
Helmholtz (1879)
Gouy (1910)
Chapman (1913)
Stern (1924)
Grahame (1947)
Estos estudios han tenido como propsito elaborar un modelo de doble capa que permita
interpretar como vara el potencial elctrico desde la superficie metlica hasta el seno de la
solucin.
MODELOS DE DOBLE CAPA ELCTRICA
Teora de Helmholtz
De acuerdo a esta teora la interfaz se considera similar a un condensador elctrico, es decir
dos placas paralelas cargadas y separadas una distancia d. De acuerdo a esta analoga se
puede definir la capacidad por unidad de rea de la doble capa elctrica como:
d
C

4
=
Donde es la constante dielctrica del medio.

De acuerdo con esa ecuacin la capacidad de la doble capa debera ser independiente del
potencial. Sin embargo experimentalmente puede verificarse que no solo existe esa
dependencia sino que tambin vara de acuerdo a la concentracin inica de la solucin y a
la naturaleza de sus componentes. Todo lo anterior indica que el modelo presenta
inconsistencias con la realidad por lo que debe ser tenido en cuenta estos factores.

Teora de Gouy-Chapman
En la teora anterior se consideraba que al igual que en la superficie metlica (electrodo) la
carga se ubicaba en la superficie, del mismo modo se estableca que el exceso de carga en
la solucin se ubicaba en una capa de solucin. Sin embargo esta ltima suposicin no es
correcta puesto que existe una distribucin de carga hacia el interior de la solucin que
debe ser tenido en cuenta. En la teora de Gouy-Chapman se define una capa difusa de
iones hacia el interior de la misma

En esta interfase la cada de potencial no es funcin lineal de la distancia. En el metal hay
un plano de cargas del mismo signo, mientras que las de signo opuesto se distribuyen del
lado de la solucin a lo largo de una cierta distancia.
En esta teora se trabajan con dos ecuaciones fundamentales:
Potencial elctrico (Ley de Poisson)

p 4
=
Concentracin inica (Ecuacin de Maxwell-Boltzman)

|
.
|

\
|
=
kT
ze
C C
io i

exp
Suponiendo que la doble capa se ajusta a una geometra de un paraleleppedo, es decir que
tenga superficies equipotenciales paralelas, se llega a la expresin:

|
.
|

\
|
=

=
kT
e z
eC z
x
i
io i

exp
4
2
2

resolviendo la ecuacin anterior y considerando valores de potencial pequeos tal que se
cumpla que
1 <<

kT
e z
i


se llega a
) exp( kx
o
=
Esta relacin es una buena aproximacin para mV
z
o
50
a 25
o
C
CONSECUENCIAS
De acuerdo a este anlisis, ahora el potencial elctrico establecido en la doble capa elctrica
resulta funcin de:
Distancia
Concentracin del electrolito
Valencia del electrolito
Constante dielctrica del medio
Temperatura
LIMITACIONES DE LA TEORA
Como limitaciones de la teora se puede afirmar que se requiere que la concentracin inica
Cio sea muy baja para que no exista interaccin entre los iones. Asimismo se requiere que
la constante dielctrica sea invariable en todo el medio.

Teora de Stern
En la teora de Gouy-Chapman los iones se consideran como entidades puntuales, y por lo
tanto con posibilidad de acercarse arbitrariamente tanto como se desee a la superficie del
electrodo. Esta descripcin no es correcta en la medida que los iones no pueden
aproximarse a distancias menores que el propio radio inico. Adems de lo anterior si se
tiene en cuenta la solvatacin de los mismos, el radio ahora ser mayor y por lo tanto la
mxima aproximacin ser menor todava.
Stern propuso un modelo de doble capa elctrica que consiste en la suma de las dos
estructuras mencionadas antes, es decir que la diferencia total de potencial a travs de la
interfase resulta ser entonces la suma de la cada lineal de potencial en la doble capa de
Helmholtz y la cada exponencial de potencial en la doble capa difusa. Admitiendo incluso
que las dos contribuciones sean del mismo signo o de signo opuesto

En este modelo mas completo se define una capa interna, ms prxima al electrodo, donde
los iones se encuentran especficamente adsorbidos. Esta capa se la conoce como: capa
compacta, de Helmholtz o de Stern. El centro de estos iones define un plano, conocido
como plano interno de Helmholtz que se encuentra a la distancia de menor acercamiento de
los iones adsorbidos especficamente.
COMENTARIOS FINALES
La estructura de la doble capa puede afectar la velocidad de los procesos electroqumicos
que se producen sobre el electrodo. Por ejemplo, una especie electro-activa que no se
encuentre adsorbida especficamente sobre el electrodo, podr acercarse a l solo hasta el
plano externo de Helmholtz y por lo tanto sentir un potencial diferente al establecido
entre la superficie del electrodo y el seno de la solucin. Esta diferencia puede ser
importante o no, dependiendo del proceso bajo estudio. Es as que en algunos estudios
cinticos la presencia de la doble capa puede despreciarse, pero en otros casos cuando la
concentracin de la especie electro activa es muy pequea, la capacidad de la doble capa
elctrica, y la corriente necesaria para cargarla, debe ser considerada porque incluso puede
tener una magnitud superior a la corriente faradaica de inters.


ESPESOR TERICO DE LA DOBLE CAPA ELCTRICA
Analizando la ecuacin aproximada derivada en la teora de Gouy-Chapman se observa que
la inversa del parmetro k tiene dimensiones de longitud y caracteriza la disminucin
espacial del potencial. Por este motivo se toma el valor de 1/k como una medida del espesor
de la capa difusa. Este espesor es funcin de varios parmetros: concentracin inica,
temperatura, fuerza inica, etc.

Variacin con la concentracin inica
Teniendo en cuenta que el parmetro 1/k responde a la ecuacin
io i
C z e
kT
k
2
8
1

=
Para un electrolito 1:1 a 25
o
C en H
2
O, tomando una concentracin C* como el cociente
entre el nmero de moles y el nmero de Avogadro, se tiene la siguiente variacin (tomada
de Electrochemical Methods. Fundamental and Applications, A.J.Bard y L.P.Faulkner)

C*(M) 1/(A)
1 3.0
10
-1
9.6
10
-2
30.4
10
-3
96.2
10
-4
304

Variacin con la fuerza inica
A 20
o
C , tomando un valor de de 80 y teniendo en cuenta la relacin k=2,3x10
9
(C
i
Z
i
2
)
1/2

Se tienen los siguientes valores representativos

Soluciones Espesor 1/k (A)
H
2
O 9000 (aprox 1m)
NaCl 1x10
-4
M 310
MgSO
4
1x10
-4
M 150
Agua de mar 4




TCNICAS ELECTROQUMICAS PARA EL BIOANLISIS

VOLTAMETRA IN VIVO
A fines de los aos 60 y comienzo de los 70 se realizaron los primeros experimentos con
electrodos miniaturizados de pasta de carbono implantados en el cerebro. El propsito era
obtener corrientes de oxidacin correspondiente a una clase de neurotransmisores, las
catecolaminas. Sin embargo, si bien se obtuvieron lecturas de corriente, el mtodo no era
selectivo y otras especies interferan en la determinacin. Era necesario por lo tanto realizar
modificaciones en el procedimiento experimental. Posteriormente esto se mejor mediante
el uso de coberturas de Nafion, un polmero aninico que redujo la interferencia del cido
ascrbico y otros metabolitos acdicos. Tambin se incorpor el pre-tratamiento
electroqumico que permite desplazar los potenciales de oxidacin de los interferentes.


LIBERACIN E INCORPORACIN DE NEUROTRANSMISORES
Ante la gran dificultad experimental para poder cuantificar la liberacin basal de dopamina,
se comenz a emplear una modificacin en el procedimiento. Se produce la estimulacin
elctrica de los tejidos y se mide la liberacin y posterior remocin del neurotransmisor en
el espacio extracelular.
Esta modificacin permite la aplicacin de distintas tcnicas volta mtricas para estudiar la
dinmica real del neurotransmisor. La posibilidad de emplear tcnicas con gran velocidad
de adquisicin de datos permite estudiar cuan veloz es el proceso de liberacin e
incorporacin de neurotransmisores.
Desde el punto de vista fisiolgico es importante es considerar que el cerebro, a diferencia
de una celda electroqumica convencional, es un ambiente elctricamente y electro
qumicamente activo por lo que la implantacin de un electrodo es traumtico para las
clulas. De aqu la importancia de utilizar electrodos con el menor dimetro posible, como
los electrodos modernos de fibra de carbono de solo 10 m de dimetro.

VOLTAMETRIA EN TIEMPO REAL
Para poder detectar la liberacin de neurotransmisores en tiempos lo ms prximo al real,
es posible actualmente emplear voltametra de alta velocidad de barrido. Esto se consigue
empleando los electrodos de fibra de carbono de rea pequea mencionados anteriormente.
De esta manera, por ejemplo empleando un electrodo de dimetro de 8 Mm. es posible
realizar un barrido de potencial en solo 20 ms, lo que implica una velocidad de barrido de
aproximadamente 400 V/s. Dado el corto tiempo del barrido es posible realizar varios en un
intervalo pequeo de tiempo.
Estas modificaciones experimentales son importantes tambin en el sentido que no
interfieren con la actividad neuronal normal. Incluso es posible combinar las
determinaciones volta mtricas con medidas electrofisiolgicas al mismo tiempo, es decir
que se monitorea simultneamente la actividad elctrica junto a la neuroqumica.