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Obtencion de Muestras de Laboratorio

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Trabajo científico

Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto?
Paloma Chaves Sanz
Directora técnica del laboratorio APG Rodriguez San Pedro 10 28015 Madrid

Obtención
La primera pregunta que nos planteamos cuando tenemos que hacer un análisis de sangre es ¿qué tipo de aguja debo emplear, en que tipo de tubo tengo que recogerlo, qué cantidad de sangre se necesitará? El uso de palomillas o agujas y el distinto calibre de las mismas, lo mismo que el volumen de las jeringuillas y la elección de la vena dependerá en ocasiones del tamaño del animal al que vamos a extraer la sangre. La cantidad de sangre extraída dependerá también de las pruebas que solicitemos al laboratorio. La aguja rosa es de 18G (la más gruesa), la amarilla de 20G, la verde de 21G, la azul de 23G y la naranja de 25G de insulina (la más fina). (Fig. 1)

Figura 2 ¿Qué tubo elijo?

Figura 3 Código Internacional de colores para recogida de tubos (Norma ISO 6740)

Figura 1¿Qué calibre de aguja, que jeringuilla, qué cantidad? Dependerá del tipo de animal.

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Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué. La concentración de la muestra debe ser de 1-2 mgr/ml de sangre. Tubo de tapón rojo no lleva ningún tipo de anticoagulante. cuál.4). existe un Código internacional de colores para recogida de tubos (norma ISO 6740).NH4 20 U/ml Desaconsejable hematología Conserva factores lábiles coagulación algunas horas Desaconsejable en otras determinaciones bioquímicas Perfiles bioquímicos VERDE Citrato sódico Quelante calcio Sol. Actúa como anticoagulante por ser quelante del calcio de la muestra. sangre Hemostasia Coagulación AZUL Fluoruro Sódico Inhibe glucólisis 2-4mg/ml Conservador de la glucosa Deter. Hemograma El tapón lila corresponde al anticoagulante EDTA (etilendiaminotetra-acético) en forma de sales de sodio o potasio (Fig. Dependiendo del color del tapón el anticoagulante será diferente y se utilizará para distintos fines.K. Tubo de tapón verde lleva heparina sodio. de la glucosa GRIS Sin anticoagulante Bioquímica Inmunología ROJO En cuanto a los tubos. El EDTA es el anticoagulante que mejor conserva las células sanguíneas. Esto lo conseguimos añadiendo la cantidad de sangre que nos indica el tubo. potasio. (Figura 3). hormonas e inmunología. 3. litio y amonio se utiliza para perfiles bioquímicos. Anticoagulante Modo de acción Cantidad/ ml sangre Ventajas Inconvenientes Utilización Color tapón EDTA Na o K Quelante Calcio Inhibe paso protrombinatrombina 1-2 mg/ml Conserva morfología células sanguíneas Conserva pH sanguíneo Interfiere determinaciones bioquímicas Hemograma Parásitos hemáticos LILA Heparina Na.Chaves P. cómo. Tubo de tapón lila lleva EDTA sódico o potásico se usa para la realización de hemogramas y estudio de células y parásitos hemáticos. Tubo de tapón azul lleva citrato sódico y se utiliza para pruebas de coagulación.citrato/ 9 vol. Con él obtenemos suero para pruebas de bioquímica.8%: 1vol. El tubo de tapón gris lleva fluoruro sódico y se utiliza para determinación de glucosa. cuánto? . Li. Li.4 Tubos de EDTA 15   . Fig.

sexo. (Figura 11) Si además acompañamos a las muestras identificadas de un protocolo facilitaremos mucho el trabajo al laboratorio. Mirad en el tubo siempre la señal hasta donde hay que llenarlo de sangre. Datos de la clínica o veterinario que la remite. Si el volumen de sangre es menor se nos producirán: Hemólisis. Tratamientos empleados. es muy cómodo pero si lo vamos a remitir al laboratorio.Trabajo científico Excepcionalmente podemos hacer un hemograma en tubos con otro tipo de anticoagulante como por ejemplo Heparina litio pero conserva peor la morfología celular y se producen con más frecuencia todavía agregados plaquetarios. Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coagulará la sangre. Identificación Es importantísimo identificar los tubos con los datos del animal al que realizaremos el análisis antes incluso de depositar la sangre en él. Métodos Una vez obtenida la muestra de sangre quitamos la aguja de la jeringuilla y solo con esta introducimos la sangre en el tubo correspondiente. edad. Evitaremos así un posible error preanalítico que puede complicarse en el laboratorio. Tipo de muestra.5 a 1 ml de sangre. la sangre puede salirse y no os podéis imaginar lo que cunde una gota de sangre (Fig. Tapamos con el tapón e invertimos suavemente varias veces (cinco o seis) para que la sangre se mezcle bien con el anticoagulante. Breve historia clínica. 8). Se puede hacer un hemograma con 0. Figura 7 El tubo de la izquierda tiene poco volumen de sangre y el de la derecha demasiada por lo que se ha formado un coágulo. os llevará unos segundos más y hacedlo como si fuera un tubo de tapón hermético (Fig. indicando: • • • • • • Los datos del animal: Nombre. (Figuras 5 y 6).10). crenación de los hematíes. Figura 9 Figura 5 SI Figura 6 Figura 8 NO Si añadimos un volumen distinto de sangre al indicado en el tubo tendremos problemas. VCM y falsos aumentos de CCMH. Figura 10 Por favor quitad el tapón. falsas disminuciones del hematocrito. Nunca bruscamente como si fuera una coctelera. raza. En caso de usar tubos Tapval podemos quitar la aguja e introducir en émbolo por el orificio superior (Fig. Determinación que se solicita. NO   16 . 9) en un sobre y no podéis imaginaros como llega el tubo o tubos que le acompañan al laboratorio pues sigue goteando.

falsas disminuciones del hematocrito. Fig. Las plaquetas deben determinarse lo antes posible para evitar agregados. neutrofilia madura y/o linfocitosis. 15.Trabajo científico La contaminación con un exceso de antiséptico puede producir hemólisis debido al alcohol. 18 . 15).13. Conservación: Lo ideal son dos horas desde la obtención de la muestra a temperatura ambiente o 24 horas en nevera a 4º C para no alterar los valores del hemograma. en plasma también siempre que el anticoagulante no interfiera en la prueba. Si el volumen de sangre es menor se nos producirán: Hemólisis. JAMÁS introducir en el congelador. La extracción de sangre extravasada puede producir hemólisis y agregación plaquetaria (Fig. Hay una serie de factores a considerar Un animal estresado puede presentar Híperglucemia. creación de los hematíes (Fig. VCM y falsos aumentos de CCMH. 14. Figura 12 Fig. Los frotis sanguíneos deben realizarse como máximo dos horas después de haber obtenido la muestra y fijarlos en metanol durante dos minutos una vez secos. 16). 13 y 14) Figura 10 SI Fig. NO Pruebas de bioquímica Las podemos hacer prácticamente todas en suero. Crenación de hematíes Figura 16 NO Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coagulará la sangre. Agregados plaquetarios. Produciremos hemólisis si usamos agujas de bajo calibre y jeringas de alto volumen (Figura 12). Hemólisis NO La contaminación con el líquido de fluidoterapia producirá una dilución de la muestra e incluso contaminación de la misma si el fluido lleva potasio produciendo hiperkalemia (Fig.

19 El microtubo de la Fig. tubos con tapón verde (Fig. No debemos refrigerarlo antes de su coagulación y retracción del coagulo (de treinta minutos a una hora después de la recogida) pues produciríamos hemólisis. En el mercado hay tubos sin anticoagulante que no siguen esta norma y hay tapones de todos los colores. Fig. Para inmunología el tubo de elección es el de suero lo mismo que para la determinación de hormonas. 17.Chaves P. Diferencias entre el suero y el plasma Suero • Riesgo de hemólisis mayor que en suero • Centrifugación tras coagulación • Muestra idónea para la mayoría de pruebas: bioquímicas e inmunológicas • No contiene fibrinógeno Plasma • Riesgo de hemólisis menor que en suero • Centrifugación inmediata • En pruebas bioquímicas posible interferencia con anticoagulante (mínimas con heparina Litio) • Contiene fibrinógeno Fig. según las norma ISO 6710 (Fig. Lo ideal es separarlos antes de las dos horas de recogida de la sangre.Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué. cuánto? . esto suele ser lo habitual.17). Si la sangre la recogemos en tubo de heparina litio podemos centrifugarla inmediatamente después para la obtención del plasma. en los dos se ve el coagulo y su retracción. Conservación de suero o plasma Se conserva 3 días a 4º C y congelado a – 20º C durante mucho tiempo Conservación de las muestras Compuesto Albúmina ALT (GPT) AST (GOT) Bilirrubina total Calcio Colesterol Creatinina Fosfatasa alcalina Fósforo inorgánico GGT Glucosa (en FlNa) Potasio Proteínas totales Urea 20 – 25 º C 6 días 1 día 3 días Solo muestra reciente 10 días 6 días 1 día 4º C 6 días 7 días 7 días 10 días 6 días 1 día -20º C Varios meses 1 mes 1 mes 8 meses 4 meses Varios meses 1 mes Varios meses 1 mes Varios meses 6 meses 10%actividad 7 días en 7 d. cuál. 18 Fig. 18 se dejó en posición horizontal el de la Fig. tenemos que dejarlo en posición vertical y a temperatura ambiente Fig. Si la sangre no desuera bien. 19 en posición vertical. Los tubos de suero no llevan ningún tipo de anticoagulante y el tapón es de color rojo. 2 días 5 días 1 día 7 días 1 día 7 días 10 días 2 días 1 mes 3 días 2 semanas 2 semanas Varios meses 19 . Tubos de Heparina Li y sin nada   Manejo de las muestras Si recogemos la sangre en tubo de suero.500-3000 rpm durante 5-10 minutos. centrifugaremos a 2. 17) pues no interfieren los resultados sin embrago en EDTA interfieren las pruebas enzimáticas (fosfatasa alcalina) y los iones Ca y K. (18 y 19). cómo. Tenemos que asegurarnos que el tubo elegido para suero no lleve anticoagulante de ningún tipo. Las pruebas de bioquímica también pueden hacerse en plasma recogido en un tubo con heparina litio.

Análisis de heces Lo ideal son los análisis seriados de 3 a 5 días en caso de diagnóstico de giardias por ejemplo. micción espontánea. 21 Tubos de Citrato sódico   Citologías y biopsias Citologías Materiales: Agujas. tubo de tapón gris (Fig. 21). Fig. Usar recipientes adecuados NO USAR BOLSAS DE PLASTICO o PAPEL DE ALUMINIO para remitir las muestras. Los portas con las extensiones para las citologías deben ir fijadas en metanol. sonda o cistocentesis y especialmente cuando se trate de urocultivos. Líquidos orgánicos Se remitirán en dos tubos. en cuyo caso el frasco o tubo deberá ser estéril. 20 Tubos de fluoruro Na La sangre se recogerá en un tubo de citrato sódico. Se conservan perfectamente de 12 a 24 horas a 4 ºC. tubo de tapón azul (Fig. Coagulación Fig. Centrifugar antes de los 30 minutos de extracción de la sangre a 3. Durante el transporte suelen ser frecuentes los accidentes. Para el cultivo bacteriológico se empleará un tubo estéril o la propia jeringuilla de extracción. 20). Fig.Trabajo científico Determinación de glucosa La sangre la podemos recoger en un tubo de suero. en cuyo caso la deberemos centrifugar en el momento que se haya coagulado o en un tubo con Heparina Litio en cuyo caso deberemos centrifugar inmediatamente o en un tubo de Fluoruro sódico. Conviene indicar la forma de recogida de la muestra: Métodos: Podemos realizarla de dos formas: Punción con aguja fina o punción–aspiración con aguja fina. Para el urianálisis solo son necesarios 5 ó 10 ml de orina. jeringuillas y portas. Las cantidades de sangre serán las correspondientes al volumen de anticoagulante. 22 22 . Se conservaran a 4ºC excepto la última muestra que se enviará a temperatura ambiente y lo más fresca posible. que inhibirá las enzimas de la glucólisis y conserva el valor de glucosa durante 24 horas a temperatura ambiente o 48 horas a 4 º C. Refrigerar un máximo de 2 horas o congelar a -20 ºC.000 rpm durante 15 minutos. Si no lo hacemos siguiendo este protocolo no podremos valorar la glucosa pues se produce un consumo de esta por parte de los hematíes. Urianálisis Recomendamos NO USAR frascos de orina para remitir la muestra al laboratorio. (9 partes de sangre por 1 de anticoagulante). a no ser que sean herméticos es preferible remitirla en tubos. uno con EDTA para el recuento de células y la citología y otro de suero para pruebas bioquímicas en caso de que se soliciten. Para coprocultivos los frascos deberán ser estériles.

Lo remitimos al laboratorio sin teñir. Fijación La fijación de las muestras para oncología se hace por métodos químicos (fijadores). La primera es ideal para ganglios pues al ser estos muy frágiles asegura la integridad de las células y en tejidos muy vascularizados para minimizar la contaminación sanguínea. En caso de muestras de mayor tamaño deberemos hacer cortes cada 1. 26 y 27). 9 partes de agua (también puede substituirse el agua por solución salina fisiológica al 9%). Recipientes Existen distintos tipos de recipientes.5 cms perpendiculares al eje mayor o tomar varias muestras incluyendo los márgenes de extirpación (Fig.Chaves P. 22).24). fijador (Fig. Sacamos la aguja y la volvemos a introducir en otra dirección y aspiramos de nuevo. 22 Las dos técnicas son muy similares. Hay otras fórmulas pero esta es la más común. cómo. cuál. 25 No tomaremos muestras de zonas ulceradas pues solo reflejara el proceso inflamatorio. punch. Ponemos la aguja de nuevo y vaciamos la jeringa en un porta (Fig. tijeras. pinzas. 23). separamos la aguja y llenamos la jeringuilla de aire.Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué. frascos herméticos. El más común es el formol al 10%. Formol al 10%: Se prepara con 1 parte de formaldehído al 40%. En lesiones de gran tamaño la zona central suele estar necrosada/inflamada por tanto debemos ir a los bordes. ponemos sobre el porta que contiene la gota otro porta formando una cruz con el anterior y lo deslizamos suave y rápidamente. 26 23 . Fig. Si lo visualizamos nosotros se teñirá con técnicas Romanowsky. Es decir. Fig.preparaciones de plástico o envueltas en papel absorbente para acolcharlas. Dejamos secar y fijamos con metanol. cuánto? . la única condición es que sea hermético y adecuado para la muestra (Fig. Deberá ir perfectamente identificado. Una vez realizada la aspiración. Biopsias Materiales: Bisturí. 24 Fig. Se enviarán en porta. Métodos: Fig. 25). Introducimos la aguja y aspiramos con una jeringuilla de 10 ml. Hacemos la extensión inmediatamente por el procedimiento de squash o aplastamiento (Fig. Tamaño El tamaño ideal de la muestra seria de 1cm x 1cm aproximadamente.

Inc 1.999 Davidsohn I. Figura 29 • El frasco es de plástico y hermético pero demasiado pequeño para la muestra. • No hay fijador en el frasco.: Diagnóstico clínico por el laboratorio. Mosby 1. 3. 24 . Steven E. 27 Volumen de fijador Deberá superar el volumen de la muestra en una proporción 20:1 o 40:1 Se debe sumergir el material en el fijador y no a la inversa para evitar el contacto de esta con las paredes y el fondo del recipiente. Analíticas si las hubiera. • No está etiquetado o identificado el frasco Protocolo Las muestras deberán ir acompañadas de un protocolo con: • • • • • • Los datos del animal: nombre. E.5 cm. sexo.Tayler RD: Diagnostic Cytology of dog and cat. está entera. evitando que se adhiera. Datos de la clínica o veterinario que la remite. Ed. edad. 2.008 7. Ed.: Manual del Laboratorio Veterinario de Análisis Clínicos. Ed. Bush B. Historia clínica. Acribia BE Powers “The Pathology of Neoplasia” Small Animal Clinical Oncology 2. Meinkoth JH: Diagnostic cytology and hematology of the dog and cat. 4. Ed. raza. Weisbrode: “The Histopathology laboratory in Diagnosis of Neoplasia” Por favor recordad que enviáis la muestra a un citólogo o a un patólogo no a un adivino.989 CowellRL. Bibliografía 1. • La muestra no está fileteada en porciones de 1. Tratamientos empleados y respuestas a estos. Errores Figura 28 • No es aconsejable el uso de frascos de cristal pues durante el transporte pueden ocurrir accidentes. Martínez de Merlo.Trabajo científico Fig. está vacío.: Atlas de citología clínica del perro y el gato. • El volumen del fijador no es el adecuado. • La muestra no está fileteada en porciones de 1. Henry J.001-WD Saunders Co Cowell RL. Localización: Día y hora de la extracción y fijación.5 cms. Figura 28 NO Figura 29 NO Duración de la fijación Generalmente las muestras están fijadas a las 24-36 horas de haberlas introducido en el fijador. American Veterinary publications.B. Salvat 6ª edición 6. Si la muestra flotara (pulmón) la sumergiremos totalmente en el fijador. 5. Tayler RD. Ed.M. Servet 2. En formol las muestras no se alteran en semanas o meses.

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