P. 1
Murray Robert - Bioquimica de Harper (14ed)

Murray Robert - Bioquimica de Harper (14ed)

|Views: 450|Likes:
Publicado porEkthor Dk

More info:

Published by: Ekthor Dk on May 03, 2013
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

08/19/2015

pdf

text

original

Bioquímica de Harper
Índice de Capítulos
Capítulo 1: Bioquímica y medicina Capítulo 2: Biomoléculas y métodos bioquímicos Capítulo 3: Agua y pH

Sección I

Estructura y funciones de proteínas y enzimas
Capitulo 4: Aminoácidos Capítulo 5: Péptidos Capítulo 6: Proteínas. Estructura y función Capítulo 7: Proteínas. Mioglobina y Hemoglobina Capítulo 8: Enzimas. Propiedades generales Capítulo 9: Enzimas. Cinética Capítulo 10: Enzimas. Mecanismos de acción Capítulo 11: Enzimas. Regulación de la actividad enzimática

Sección II

Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos
Capítulo 12: Bioenergenética. La función del ATP Capítulo 13: Oxidación biológica Capítulo 14: Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Capítulo 15: Carbohidratos de importancia fisiológica Capítulo 16: Lípidos de importancia fisiológica Capítulo 17: Panorama del metabolismo intermediario Capítulo 18: El ciclo del ácido cítrico. Catabolismo de la acetil-CoA Capítulo 19: Glucólisis y oxidación del piruvato Capítulo 20: Metabolismo del glucógeno Capítulo 21: Gluconeogénesis y control de la glucosa sanguínea Capítulo 22: Vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de las hexosas Capítulo 23: Biosíntesis de ácidos grasos Capítulo 24: Oxidación de los ácidos grasos. Cetogénesis Capítulo 25: Metabolismo de ácidos grasos insaturados y de los eicosanoides Capítulo 26: Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos Capítulo 27: Transporte y almacenamiento de lípidos Capítulo 28: Síntesis, transporte y excreción del colesterol Capítulo 29: Integración del metabolismo y el suministro de energéticos tisulares

Sección III

Metabolismo de proteínas y aminoácidos

Capítulo 30: Biosíntesis de aminoácidos no esenciales en la nutrición Capítulo 31: Catabolismo de proteínas y del nitrógeno de aminoácidos Capítulo 32: Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos Capítulo 33: Conversión de aminoácidos en productos especializados Capítulo 34: Porfirinas y pigmentos biliares

Sección IV

Estructura, función y replicación de las macromoléculas informativas
Capítulo 35: Nucleótidos Capítulo 36: Metabolismo de los nucleótidos de purina y pirimidina Capítulo 37: Estructura y función de los ácidos nucleicos Capítulo 38: Organización y replicación del DNA Capítulo 39: Síntesis, procesamiento y metabolismo del RNA Capítulo 40: Síntesis de proteínas y el código genético Capítulo 41: Regulación de la expresión genética Capítulo 42: Tecnología del DNA recombinante

Sección V

Bioquímica de la comunicación extracelular e intracelular
Capítulo 44: Acción de las hormonas Capítulo 45: Hormonas de hipófisis e hipotálamo Capítulo 46: Hormonas tiroideas

Capítulo 43: Membranas. Estructura, ensamble y función

Capítulo 47: Hormonas que regulan el metabolismo del calcio Capítulo 48: Hormonas de la corteza suprarrenal Capítulo 49: Hormonas de la médula suprarrenal Capítulo 50: Hormonas de las gónadas Capítulo 51: Hormonas del páncreas y vías gastrointestinales

Sección VI

Tópicos especiales

Capítulo 52: Estructura y función de las vitaminas hidrosolubles Capítulo 53: Estructura y función de las vitaminas liposolubles Capítulo 54: Nutrición Capítulo 55: Digestión y absorción Capítulo 56: Glucoproteínas Capítulo 57: Matriz extracelular Capítulo 58: Músculo Capítulo 59: Proteínas plasmáticas, inmunoglobulinas y coagulación sanguínea Capítulo 60: Eritrocitos y leucocitos Capítulo 61: Metabolismo de xenobióticos Capítulo 62: Cáncer, oncogenes y factores de crecimiento

http://booksmedicos.blogspot.com

Bioquímica y medicina
Roberf K. Murray, MD, PhD

INTRODUCCIÓN
La bioquirnica es la ciencia que estudia las diversas moliculas que ce presentan en las células y organismos vivos, asi como las reacciones quimicas que tienen lugar en los mismos. Una comprensibn más completa de todas 1% manifestaciones de la vida, demanda el conocimiento de la bioquímica. AdemBs, los estudiantes de que adquieren una base siilida de la bioquimica estarhn en una posición firme para enfrentarse, en la práctica y la investigación, a los dos intereses centrales de las ciencias de la salud: 1 ) la comprensión y conservación de la salud y 2) la apreciación y tratamiento eficaz de la enfermedad.

La bioquímica es la química de la vida
La bioquimica puede definirse de manera más forma1
como la ciencia que se ocupa de la base química de la vida (del griego, bios: vida). La cblula es la unidad estructural de los sistemas vivientes. La concfderaci0n de este concepto conduce

a una definicion funcional de la bioquímica como la ciencia que se ocupa de los constituyentes químicos de las células vivas y de las reacciones y procesos que experimentan. Con esta definición, la bioquimica abarca extensas heac de la biología celular, la biología molecular y la genkitica moIecular.

El objetivo de la bioquímica es describir y explicar, en términos moleculares, todos los procesos químicos de las células vivas
El interés principal de la bioquimica es la comprensión completa a nivel rnolecular de todos los procesos

químicos relacionados con las células vivas. Para lograr este objetivo, los bioquimicos han necesitado aislar las numerosa moléculas de que se componen las cé1u]a1 determinar sus e s t ~ - ~ c t u Y r a analizar la forma en que funcionan. Para dar un e j e m ~ l o 10s ~ e~füerms de numerosos bioquímicos Para comprender la base mOlecular de la -proceso quc acompaiia de preferencia, pero no de manera exclusiva, a las células musculares- han emprendido la purificación de muchas moléculas, siniples y complejas, seguida por detallados estudios de esh-uctura-funcibn. A iraves de estos esfuerzos, se han encontrado algunas de los fundamentos muleculares de la contracción muscular. Un obietivo adicional de la bioqliímica es intentar la comprensión del origen de la vida; este fascinante tema aún se encuentra en la etapa embrionaria. El campo de la bioquimica es tan amplio como la vida misma. Dondequiera que hay vida, se prodiicm procesos quimicos. Los bioquimicos los estudian en microorganismos, vegetales, insectos, peces, aves, mamíferos y en el ser humano. Es lbgico que los estudiantes de ciencias biomédicas centren su interes en la bioquimica de los dos últimos grupos. No obstante, una apreciaci6n respecto a formas de vida menos complejas tiene a menudo relevancia directa con la bioquimica humana. Por ejemplo, las teorías contemporaneas sobre la regulación de las actividades de genes y enzima5 en el ser humano provienen de estiidios pioneros en pan enmohecido y bacterias. El campo del DNA recombinante surgió de estudios en bacterias y sus virus; su rapidez para la multiplicacibn y la facilidad para extraer su material genético los hace adecuados para análisis y manipulaciones gentticas. El cor,ocimiento logrado por el estudio de genes virales causantes de ciertos tipos de cáncer en animales (oncogenes viraIes) ha permitido avanzar profundamente-en el modo en que la célula humana se torna cancerosa.

2

Bioquim icu d~ JIarper

(Capitulo I )

El: conocimiento de la bioquímica es esencial en todas las ciencias de la vida, incluyendo la medicina
Los fundamentos de la genética se apoyan en la bloquímica de los ácidos nucleicos; a su vez, los enfoques geneticos han dilucidado numerosas áreas de la bioquímica. La fisiologia, estudio de la función corporal, se traslapa casi por completo con la bioquimica. La inmunoIogía, por su parte, emplea numerosas técnicas bioquimicas y muchos de los aspectos inmunol0gicos han encontrado uso extenso eiitre bioquimicos. Asimismo, la farmacologia y la farmacia se apoyan en un co~iocimiento sblido dc bioquimica y Ilsiologia; en particular, la mayoría de los firmacos son metabolizados por reacciones catalizadas por enzimas y las comple,jas interacciones entre fármacos se comprenden mejor desdc el punto de vista bioquimico. También los venenos actúan por medio de rcaccjones o procesos bioquimicos y este es el terna de la toxicologia. Cada vez más se emplean enfoques bioquimicos en el estudio de aspectos básicos de la patología (estudio de la enfermedad}, como inflamación, lesión celular y cancer. Muchos profesionales en rnicrobiologia, 7001ogía y botanica emplean métodos bioquímicos casi de manera exclusiva. Estas relaciones 1 1 0 sorprenden, debido a que la vida como se conoce dcpende de reacciones y procesos bioquirnicos. De hecho, han caído las viejas barreras entre las ciencias de la vida y la bioquirnica se toma cada vez mas su lenguaje común.

Una relación recíproca entre la bioquímica y la medicina ha estimulado adelantos mutuos
Como se estableciii al principio de este capítulo, las dos preocupaciones principales de los estudiosos de

las ciencias de la salud, en particular médicos, son la comprensión y mnservacibn de la salud y la comprensión y tratamiento eficaz de las enfcmedades. !,a hioquimica tiene un impacto tremendo en ambos. De hecho, la interrelación entre bioquimica y medicina es un amplio camino de doble sentido. Los estudios bioquimicos han ilurriinado numerosos aspectos de salud y enfermedad y, de manera inversa, cl estudio de éstas ha abierto areas nuevas en bioquimica. En la figura 1-1 se muestran algunos casos de esta via de doble dirección. Por ejemplo, fue necesario el conocimiento de la estructura y Ilinción de las proteinas para dilucidar la sencilla diferencia bioquimica entre la hcmoglnbina normal y la de las células falcifonnes. Por otra parte, el analisis de esta última ha conwibuido de mancra significativa a la comprensibn de la estructura y función dc la hemoglobina normal y de otras proteínas. Podrian citarsc ejemplos análogos del beneficio reciproco entre bioquimica y medicina para los demhs pares de conceptos mostrados en la figura 1 -1 . Otro ejemplo es el trabajo pionero de Garrod, mkdico inglCs, a principios de este siglo. Estudió pacientes con cierto número de trastornos relativamente raros (alcaptonuria. alhinismo, pentosuria y cistinuria; descritos en loc últimos capítulos) y estableció que su origen era genciico. Garrod designb a estas enfemcdades como errores congdnitos del metabolismo. Sus punros de vista proporcionaron una base importante para el desarrollo del campo de la genktica bioquímica humana. La relaciún entre medicina y bioquímica tiene implicaciones filosóficas importantes para la primera. Hasta donde el tratamiento medjco se asiente en el conocimiento de la bioquimica y otras ciencias básicas pertinentes (como fisiología, microbiologia y nutricibn), la práctica de la medicina tendrá una base racional que puede acomodar nuevos conocimientos. Esto contrasta con culros de saliid no ortodoxos, que a menudo se elevan a poco más que un mito sin fundamento intelectual alguno.

Actdos nucEelc05

Proteína

t
I t
MEDICINA

Lípidos

Carbohidratos

geneticas

Anemia de células
falciforme5

Aterosclerosis

Diabetes

sacarina

Figura 1-1. Ejemplos de la via de doble dirección (interrelación) que existe entre la bioquímica y medicina. El conocimiento de los Compuestosmostradosen la porci6n superior del diagrama ha esclarecido las enfermedades mencionadas en la porcion inferior; de manera inversa, análisis de los trastornos mostrados abajo han despejado numerosas áreas de la bioquimica Debe aclararse que la anemia de cklulas falciformes es una enfermedad genetica y que tanto la aterosclerosiscomo la diabetes sacarina tienen componentes geneticos

Bioquímicuy medicina

3

LOS PROCESOS BIOQU~MICOS NORMALES SON LA BASE DE LA SALUD
La Organización Mundial de la Salud (OMS) define a la salud como un estado de "bienestar fisico, mental y social completo y no unicamente fa ausencia de enferrnedad o dolencia". Desde un punto de vista bioquimico estricto, puede considerarse a la salud como la situación en donde las miles de reaccioiies intra y extracelulares que tienen lugar en el cuerpo proceden a velocidades adecuadas a su supervivencia máxima en el estado fisialogico. Sin embargo, este es un concepto sumamente reduccionista; es necesario enfatizar que atender la salud de los pacientes no sólo requiere de un extenso conocimiento de los fundamentos biológicos sino tambien de principios sociales y psicolbgicos.

Cuadro 1-1. Principales causas de enfermedad. Tcd a s las cairsiisenunieradas actiian bajo tia dt! varios rnecanisnl o s bioquírnicos t la o t:n el cuerpo*
. .

-. . -.

.

. p .

. .-

- -- -

1.

2.
3.
4.

5.

6.

7.

Agcnt cs f i s i c o s - ~ r a i i a t i s m or n e c á n i c o ~ tcinper aturas extremas, cambios repentinos cn la prcsióri atmosférica, radiacibn, choque elkctrico Aeente quirnicos y famacos: Ciertos comnuestos tvxicoc,, agentes terapéutica: ; , etcétera Agente hiológicos: Vinis. ri ckettsias, b lngos, fo rmas superiores de p : ! ~rásilos . ~ 5 i i c n c i de a o~igeno: Falta de Tumrnlsrro sangulneo, deficiencia en la capacidad sanpiiinea para t~mspori :ar oxigeno, intouicaciiin de las enzimns oxidativas Gen6tica: Alteraciones congenita~ or n , ~ ,, oiies ininuiioliigicas: Anafilaxia nd nunológic; 1 iilihrio nut riconal: DÍ:ficiencia r :S,

-

.

A-

-M:---.

La investigación bioquimica tiene impacto en la nutrición y la medicina preventiva
Un prerrequisito importante en la conservaci6n dc la salud es la ingestión óptima de cierto numero de compuestos qufmicos; de entre ellos los principales son vitaminas, varios aminoficidos, &cidos grasos, minerales y agua. Dado que el objeto de la bioquimica y la nutrición es precisamente el estudio de los diversos aspectos de estos compuestos, hay una selaci~n estrecha entre las dos ciencias. AdemBs, con la intenci6n de restringir 30s costos en aumento del cuidado médico, se enfatizan los esfiierzos sistemáticos para conservar la salud y anticiparse a la enfermedad, es decir, la medicina preventiva. Por tanto, cada vez tiende a considermsc m6s el aspecto nutricional, por ejemplo, en la prevención de aterosclerosis y c h c e r . El conocimiento de la nutricibn depende en alto grado de la bioquimica.

u>

--

Dtsequilibrio en docrino: 1 >eficiencias o excesos hurmonates -* i\dapiado con autori7acion ae KObblnS SL,Colram RS,Kizmm

8.

V Tlie Pafhologic Rasis ojDtseasr, 3rd ed. Saunders, 19R4

a Io Eargo del libro. N o obstante, aquí se presentan s61o siete ejemplos breves para ilustrar la envergadura del tema y estimular e1 interés del lector. I) Los seres humanos deben ingerir cierto numero de rnol&culasorgánicas comple,ja~ llamadas vitaminas para conservar la salud. Si en la dieta hay deficiencia de determinada vitamina, se comprometen las reacciones en que participan. Esta situación puede manifestarse como una enfermedad por deficiencia como escorbuto o raquitismo (resultado de Ingestidn insufíciente de vitamina C y D, respectivamente). Dilucidar la actividad de las vitaminas o sus derivados con acción biolbgica ha sido una inquietud constante de bioquimicos y nutri6logos desde el principio del siglo. Una vez que el estado patologico por deficiencia de una vitamina se estableció, es racional tratarla mediante la administracidn de la vitamina apropiada. 2) El hecho de que numerosos vegetales en África son deficientes en uno o más aminohcidos esenciales (es decir, aminoacidos que deben ingerirse con los alimentos para conservar la salud) ayuda a explicar la desnutrición debilitante (kwashiorkor) que padecen quienes dependen de esos vegetales como fuente principal de proteínas. El tratamiento de deficiencias de aminoácidos esenciales es racional pero, desafortunadamente, n o siempre es posible. Consiste en proporcionar una alimentacibn balanceada que contenga cantidades suficientes de tales aminoácidos.

Todas las enfermedades tienen una base bioquímica Las enfermedades son manifestaciones de anorrnatidades de molécu tas, reacciones quimicas o procesos. En el cuadro 1-1 se enumeran tos principales factores como causa de padecimientos en el ser humano y los animales. Todos ellos afectan a una o más reacciones quimicas criticas Q rnaleculas del cuerpo.

Los estudios bioquimicos contribuyen al diagnóstico, pronóstico y trataltiiento
Existe un caudal de información respecto al uso de la b i a q u i m i c a e n la prevención, d i a g n ó s t i c o y tratamiento de la enfermedad; muchos casos se citarhn

3) Los esquimales Tnuit de Gruenlandia consumen cantidades abundantes de aceites de pescado ricos en ciertos acidos grasos poliinsaturadosy se sabe que su concentración plasrnática de colesterol es baja, lo mismo que la frecuencia de aterosclerocis. Estas observaciones han estimulado el interés en el uso de esos Bcidos para reducir los valores plasrná~icos de colesteral. Las enfermedades por deficiencia vitamínica o de aminoácidos esenciales son ejemplos de desequi librios nutricionales (cuadro 1 -1 ). La aterosclerosis puedc considerar~eun desequilibrio de la nutricjon, pero tambikn intervienen otros factores (corno el genético). 4) El estado conocido como fcnilcetonuria si no se trata, puede cotiducir en la infancia a retraso mental grave. Desdc 1953, se conoce la base bioquimica de este trastorno, el cual está. detcrminado gencticarnente y se debe a la actividad escasa o nula de la enzima que convierte el aminoácido fenilalanina en tirosina. Esto, a su vez, eleva la concentración sanguínea de fenilalanina, lo que dafia al sistema nervioso central en desmollo. Cuando se descubrió la naturaleza del daAo bioquímico, se trató la enfermedad haciendo que los lactantes afectados ingirieran una alimentación pobre en fenilalanina. Una vez que se dispuso de pruebas bioquimicas selectivas para diagnosticar feni lcetonuria al nacimiento, pudo instituirse el tratamiento desde el principio en el niño afectado. 5 ) La fibrosis quistica es una enfermedad genMica común de las glindulas exocrinas y las glhndtilas sudoríparas ecrinas. Se caracteriza por secseciones anomalmente viscosas que obstruyen los conductos secretores del phncreas y los bronquiolos. Ademhs. los pacientes con esta afección muestran una concentración elevada de cloruro en el sudor. A menudo, las víctimas mueren a temprana edad por infecciones pulmonares. En 1989, se inform6 sohrc el aislamiento y la secuencia completa del gen causante de esta enfermedad. El gen normal codifica una proteína transrnembrana (regulador de la conductancia transmembrana en la fibrosis quísticaj formada de 1480 arninoacidos, la cual funciona como un conducto del cloruro. En 70% de los pacientes con la enfermedad se ha observado una deleción de tres bases en el gen, lo cual hace que en la proteina transmembrana falte el aminoacido 508, un residuo de fenilalanina. Se esth determinando la forma en que esta omisión altera la hnciún de la proteína transmembrana con produccion de moco demasiado denso. Este importante estudio facilitarii la identificacion de portadores del gen de la fibrosis quistica y se espera que conducirá a un tratamiento rnás racional dc la enfermedad que el existente hasta ahora, Por ejemplo, quizfi será posible desarrollar fhrrnacos que corrijan la anor-

malidad en la proteina transmembrana; de igual modo, podría introducirse un gen normal en las células pulmonares por manipulaciiin genética. Ida fenilcetonuria y la fibrosis quistica son ejemplos de enfermedades g e i a i c a s (cuadro 1-1 ). 6) El análisis del mecanismo de accihn de la toxina bacteriana que causa el cálera ha proporcionado infonacibn importante sobre el modo en que ocurren las manifestaciones clínicas de la enfermedad (diarrea copiosa y pérdida de sal y agua). 7) El hallazgo de que los mosquitos transmisores de parásitos (plasmodios) que causan el paludismo pueden desarrollar resistencia bioquímica a la acción de insecticidas, tiene consecuenciac importantes s o b r e los intentos para erradicar esta enfermedad. Este caso y el anterior, son ejemplos de enfermedades causadas por agentes bioliigicos (cuadro 1-1).

Muchos estudios bioquirnicos aclaran mecanismos patológicos y, a su ver, las enfermedades inspiran estudios en áreas especificas de la bioquímica
Las observaciones iniciales reali~adas por el mhdico inglés Archibald Garrod en un grupo pequeño de errores congknitos del metabolismo al principio del decenio de 1900, estimulb la investigación de las vias hiliqiiimicas afectadas en estas alteraciones. Los esfuerzos para comprender la base de la enfermedad genktica conocida como hipercolesterr)lemia familiar, que lleva a aterosclerosis grave a edad temprana, condujeron al notable progreso en el conocimiento de los receptores celulares de los mecanismos de captación ddel colesterol por las cÉlulas. Los estudios actuales de los onrogenes en células cancerosas han dirigido la atención a mecanismos moleculares que interv-ncn en el control de la inultiplicacibn celular normal. Estos y otros numerosos ejemplos posibles ilustran la forma en que el estudio de la enfermedad puede abrir areas enteras de la funci6n celular para la investigación bioquimica bhsica.

ESTE TEXTO AYUDARÁ A RELACIONAR CONOCIMIENTOS BIOQU¡MICOS CON PROBLEMAS CL~NICOS
En cl texto se encuentran dispersas, breves descripciones de los mecanismos bioquímicos en que sc basan muchas enfermedades. En particular, las capítulos 63, 64 y 65 se refieren a las bases bioquimicas de varias enfermedades importantes. En el apcndice se analizan brevemente algunos conceptos basicos para interprctar los resultados de las pruebas bioquimicas de labo-

Bioyuimicu y medicina

5

Cuadro 1-2. Algunas investigaciones bialhgicas y pruebas de laboratorio aplicadas al estudio de las enfermedadi
--- - .-.. . - -

-

2 -

-L.u-

1. Revelar, ;I , , u , , Au,,uu,,,L,,,ules y los mccanicmos dc la enfermedad 2. Sugerir tratamientos racionales de las enfi con base en las causas mencionadas antes ( 3. Ayudar al diagnóstico de enfermedades especirlcas 4 , Actuar colmo pruebas para deteccibn y dlagnóstid:O tcmpranci dc ciertas cnfemedades 5 . Ayudar ein la vigilancia de le. evolucifin (por qemp,lo 111 ,,,,,,,,,cien, empeoramiento. remisibn o recaid,, de ciertas en remidades 6. Ay udar a evaluar la respuesta dc las cnfcrmedad
"PrllnP-rl

"." Dernostr~la i , , , , , , , , ,

-:" :---"
. .

-.

-

. . . .

Ejemplo

,,,,,,,,va

-

de los de,,,,,

la
to

,

. .. . .. , de Ia enrima piaqrnatica creatina cinasri tvln (CK-MR) en r I diagniistico de infarto de rniocardio ileo de mediciones de tiroxina sangiilnea o d na l'm~ estirnulante del tiroidcs (TSH. del inglCs rhiroii TK hnrr ,.u, ,nnne) en el diagnostico neonatal del hipotiroidismo
l.

I isis quistic: ileo de una dieta baja en fenilalanina para e i fenilcetuiiiui-ia
c.

...

.

;hito de laenzirr
i vigilancia

ca alaninaíiminotransferasa /AI,l')

al tratamiento

ucibn de laihepatitis i nfrcciosa - - ~a~iriuernbrionario r,irilileo de mrurL1uiie.i de anti~eiiu (CEA) sanguíneo en cierta s tratados por cáncer de

ratorio y se presenta una lista de las mas empleadas junto con el intervalo en el cual varian sus valores normales. El propbsito global es animar at lector a dar a SU ~0nocitTlient0de bioquimica U n USO ~ l i n i c 0 eficaz.

Las inve~tigaciones bioquimicas en relacion con
las enfermedades se resumen en el cuadro 1-2. En

varias secciones de este libro se presentan ejemplos de muchos de estos usos.

RESUMEN
La bioquimica es la ciencia que se ocupa del estudio de las diversas molkculas que componen las células y organismos vivos así c o n o de sus reacciones quimicas, Debido a que la vida depende de estas reacciones, la bioquimica se ha convertido en el lenguaje b;isico de todas las ciencias biológicas. bioquímica se interesa en la totalidad de las forma? vivientes, desde virus y bacterias, relativamente simples, hasta les cornpIejos seres humanos.

La bioquimica y la medicina tienen una relacion estrecha. La salud depende del equilibrio armonioso de [as reacciones bioquimicas que tienen lugar en cl ,,,mo,. y en - la enfermedad biornold~ulas, reacciones bioquimicas o procesos biológicos, Los adelantos en el conocimiento bioquirnico han iluminado numerosas áreas de la medicina. De modo inverso, a menudo el estudio de las enfermedades ha revelado aspectos previamente no sospechados de la bioquimica. Con frecuencia, un enfoque bioquímico es fundamental para aclarar las caus& de Ias enfermedades e idear terapéuticas apropiadas+ E E uso racional de varias pruebas bioquimicas de laboratorio es un componente integral del diagnhstico Y vigilmcia Un conocimiento sólido de la bioquimica y de otras disciplinas bQsicasrelacionadas es esencial para la practica racional de la medicina y ciencias de la salud afines. I

REFERENCIAS
Garrod AE: Inhorn errors of metabolism (Croonian Lec-

tures). Lance[ 1908;2: 1.73, 142,2 14. Kornberg A: Basic rssearch: The lireline of medicine
FASBB J 1992:6:3143.

Scriver CR et al. (editors): The Melabelfc andiIhlecular Bases nJ Inherited Disease, 7th cd McGraw Hill.
1995. Willilims DL, Marks V: Scient13c Fooundaiions o f Biochemi.~tryin Clin~cal Practice, 2nd ed. Bunenuorth1 leinemann, 1994.

RiornoAéculas y métodos bioquímicos

Este capitulo tiene cinca objetivos. El primero se refiere a la camposici6n del cuerpo y a las principales clases de moléculas que se encuentran en 61. El estudio de estas mol&culasconfonnagrnn parte de este texto. La ctluIa es la principal unidad estructural y funcional de la biología. La mayor parte de las reacciones químicas dentro del cuerpo tienen lugar en las c6lulas. Por tanta, el segundo objetivo es dar una descripci6n concisa de los componentes de las c&lulas y de la forma en que pueden aislarse; los detalles de las funciones de estos componentes constituyen gran parte de la estructura del libro. El tercer objetivo concierne al hecho de que la biquimica es una ciencia experimental. Es importante comprender y apreciar el enfoque experimental y los mbtodos usados en bioquimica, para permitir que su estudio se convierta en un ejercicio rutinario del aprendizaje. Más aún, la bioquímica no es un cuerpo inmutable de conocimiento, sino un campo en evolución constante. Los adelantos, como en otras lireas de la bioquímica, dependen de la innovación en el enfoque experimental y tecnológico. El cuarto objetivo consiste en resumir de manera breve los principales logros obtenidos en bioquímica. La visibn concisa de la ciencia, que se presentad aquí, ayudará a impartir en el lector un sentido de la direccibn global del resto del texto. El quinto objetiva se dirige a destacar lo poco que conocemos en ciertas Areas, por ejemplo, sobre el desarrollo, la di ferenciacidn y funcibn cerebral, el cáncer y muchas otras enfermedades humanas. Quizá esto sirva de estimulo a algunos lectores para contribuir a la investigacibn de estas Areas.

EL CUERPO HUMANO SE COMPONE DE UNOS CUANTOS ELEMENTOS QUE COMBINADOS FORMAN UNA EXTENSA VARIEDAD DE MOLÉCULAS
Los principales elementos san carbono, hidrágeno, oxígeno y nitrógeno
Se ha determinado la composición elemental del cuerpo humano y en el cuadro 2-1 se muestran los principales resultados. El carbono, oxígeno, hidrbgeno y nitrógeno son los constituyentes principales de casi todas las biomol&culas.El fosfato es un componente de los Iicidos nucleicos as1 como de otras moléculas y tambikn se distribuye ampliamente en su forma ionizada en el cuerpo humana. Por su parte el calcio tiene una funci6n importante en innumerables procesos biolbgicos y sobre él esta enfocada buena parte de la investigacibn. Los elementos enumerados en la tercera columna desempefían diversas funciones. Muchos de ellos se manejan casi diariamente en la prhctica mkdica al atender a pacientes con desequilibrios electroliticos (K', Na', C1- y Mg2+},anemia por deficiencia de hierro (Fe2+) y enfermedades de la tiroides (1-1.

Las cinco principales biomolécufas complejas son DNA, RNA, proteínas, polisacaráridos y Iípidos complejos
Como se muestra en el cuadro 2-2, las principales biomol~culas complejas encontradas en las células y tejidos de los animales superiores (incluyendo al ser humano) son DNA, RNA, proteínas, polisacfiridos

8

Biuqriim ica de Hrrrper

Cuadro 2-1. Composición ekemental aproximada del cuerpo humano (con base en peso seco)*
-

Carbono

50
Azufre

Ovigeno I lidrógeno N itrógcno
alcio F.cjsforo

-- 0.00005 * Reproducido con autorizacibn de West ES. l o d d WR. T?xzbook
ofRiochcmist~. 3rd e d . Macmillan, 1961.

ques estructurales de los Iipidos, aunque éstos no son polimeros de acidos grasos. Al DNA, RNA, proteinas y polisacaridos se les conoce como hiopolimeros debido a que esthn compuestos de unidades repetidas de sus bloques estructurales (los mon6meros). Las rnol~culasantes mencionadas constituyen esencialmente el "ingrediente vital" de este texto; la rnayor parte se ocupa de describir sus características bioquímicas y las de sus bloques estructurales. Por lo general se encuentran las mismas moleculas complejas en los organismos inferiores, pero pueden diferir de los que se muestran en el cuadro 2-2. Por ejemplo, las bacterias no contienen giucogeno o triaci!gliceroles, pero poseen otros polisacaridos y Iípidos.

y lipidos. Lac moiéculac complejas se construyen a partir de biomoMculas simples, tainbien enumeradas. Los bloques estructurales del DNA y el RNA (Ilarnados colectivamente ácidos nucleicoc) son los desoxinucleótidos y los ribonucle6tidos, respcctivamente. Por su parte, las bases estructurales de las protehas con los arninoitcidos, mientras que los polisacaridos estan constituidos por carbohidratos simples; en el caso del glucógeno (polisacárido principal de los tejidos humanos), el carbohidrato es la glucosa. Los ácidos grasos pueden considerarse como los bloCuadro 2-2. Biomol&culas orghnicas comptejas principales de células y tejidos. Los &cidos nucleicos, proteinas y plisadridos son biopolimems, constrriidm a partir de las bases estructurales mostradas. Por lo general, tos lipidos no son biopolimaros y no bases estructurates todos tienen ácidos grasos como -. -. .
. ..

Proteínas, I ípidos, carbohid ratos, agua y minerales son los principales componentes del cuerpo humano
Ya se mencionb cual es la composici6n elemental del cuerpo humano. Su composición quimica se muestra en el cuadro 2-3; proteina, grasa, carbohidrato, agua y minerales son los elementos principales. E1 agua coristituye la proporción mayor, aunque su cantidad varia ampliamente en los difcrentes tejidos. Su naturaleza polar y su propiedad de formar puentes de hidrogeno hacen al agua idealmente adecuada para su función como solvente en el cuerpo. En el capítulo 3 se presentan con mayor detalle las propiedades del agua.

LA CÉLULA ES LA UNIDAD BÁSICA DE LA BIOLOG~A
La célula fue reconocida como la unidad fundamental de la actividad biológica por Schleidcn y Schwann y por otros pioneros como Virchow en el sigloXIX. Sin embargo, en los aRos posteriores a la Segunda Guerra

D -"
R
-

1

la =

- [estructurales 1
-,

ases

-

-

principales ~uncioni

-

"

.-

P

I

?-1

(

Riboni

~ AminoAcidos ~ ~ Numerosas: ~ por ~ lo gene~ ral son las moEculas que

:Prrotelnica

nolde par

sis
-

~

.---

Cuadro 2-3. Composici6n química normal d Sn que pesa 65 kg" . . . -

---

Proteínas
Grasas

! 1

"q
11

. ."

. A "

--

Carbohidrato
(elucóeeno)

9 I
d_

P0rce-D" 17.0 13.8
15

Agua?
,

--L ipidos
branas y almaccnaje por tiempo prolongado dc energía como triacil-

Milierales * Reproducido con

' 4. I i 51 -- s .-i I ación de D : avidson SD, Parsmore R, autor17

1

aliccroles

Hrock JF: Iiuman ,l'uiri rion and Di ererrcs, 5th ed. Churchill Livingstone, 1973. El valor para el agua pucdc variar ampliamente entre los riircrentes tejidos, siendo tan bajo como 22 5% para e l hueso sin mtdula Además, el porcentaje dcf agua tiende a disminuir confunnc alimenta 13 grasa curpura)

Biomoléculas y métodos hioquímrcos * 9

Mundial, tres sucesos ayudaron al inicio de un periodo de actividad sin paralelo en la bioquimica y la biologia celular. Fueron: 1 ) la disponibilidad creciente del microscopio electrónico; 2) la introducci~n de rnktodos que permiten separar las células bajo condiciones relativamente poco agresivas de modo que se preserve su función: 3) el desarrollo y disponibilidad de una ultracentrifuga refrigerada de alta velocidad, capaz de generar fuerzas centrífugas suficientes para aislar los constituyentes de las celuias separadas sin sobrecalentarlos y, por tanto, sin desnaturali7arlos. El uso del microscopio electrónico reve16 muchos de los componentes ce!ularec que hasta entonces eran desconocidos o deficientemente observados, en tanto que la rotura de las células y la ultracentrifugación permitió su aislamiento y anhlisis in vitro.

Retículo endopllrsmico

h

Citoesqueleto

El hepatocito de rata muestra características comunes a muchas células eucariotas
En la figura 2-1 se muestra un diagrama de la estrucmra de una ckIuEa hepatica (hepatocito) de rata; es

probabEe que ésta sea la célula m8s estudiada desde el punto de vista bioquímico, en parte por su disponibilidad en cantidades relativamente grandes, por su facilidad para fraccionarse y por la diversidad de siis funciones. El hepatocito contiene todos los organelos principales que se encuentran en [as células eucariotas (cuadro 2 4 ) ; es decir, niicleo, mitocondrias. retículo endoplásmico, ribosomas libres, aparato de Golgi, lisosomas, peroxisornas, membrana plasrnatica y ciertos elementos citotsque2eticos.

Membrana plasmalica

Peruxisoma

citoso1

Lisosoma

Figura 2-1. Representacibn esquematica d e una d l u l a hep8tica d e rata, con sus organefos principales

Para disgregar células y aislar moléculas intracelulares y organelos subcelulares se usan técnicas físicas
Para estudiar con profundidad la funcidn de cualquier organelo, es necesario primero aislarlo en forma relativamente pura, sin contaminacion importante de otros organelos. El proceso habitual para conseguirlo se llama fraccionamiento subcelular y, por lo general, comprende tres procedimientos: extraccibn, homogeneización y centrifugaci6n. Gran parte de los trabajos iniciales en esta irea utilizaron higado de rata.

A. Extracción Como primer paso hacia el aislamiento de un organelo (o molécula) especifico, es necesario extraerlo de las cAulas en que se localiza. La rnayoria de los organelos y muchas ~iomoleculas son bastante Ihbiles y propensos a perder sus actividades biolbgicas. De acuerdo a ello, deben extraerse en condiciones poco agresivas

(es decir, usando soiuciones acuosas y evitando sitiiaciones extremas de pH, presibn osmótica y temperaturas altas). En realidad, muchos de los psocedimientos para aislar organelos se efectria aproximadamente entre 0 y 40 "C (por ejemplo, en un cuarto frlo o utilizando materiales conservados en hielo). A la temperatura ambiente puede haber pérdida significativa de la actividad, en parte por la acción de varias enzima5 digestivas (proteasas, nucleasas, etcktera), liberadas cuando se rompen las cdlulas. Una solución comun para la extraccion de organelos consiste en sacarosa 0.25 moVL (Esosmótica), ajustada a un pH de 7.4 con un amortiguador de hcido cIorhidrico-TRIS (tris [hidmimetil] am jnomewno), 0.05 moW, que contiene iones K' y Mg2' a concentraciones casi fisiol~gicas; a esta solución se le conoce con las siglas STKM (del ingles, Sucrosu, Tris, Kulium y Magnesiurn). No todos los solventes usados para la extraccibn son tan suaves como el STKM ; por ejemplo, para extraer lipidos y ácidos nucleicos se emplean solventes orghnicos.

10

Bioquimica de Harper

(Cupitulo 2)

imdro 2 4 poriancia
t

ates árgarios intrac idas con cada o q a i
O

t sus fuar
lgunos ca

ta se enunneran las funciones de mayt en ocurrir muchas otras vtas,procesos

es en el o

-

fraccibn* - . -A

Marc:ador DNA

- .

--. .

Funcio'nes princi
A

A

Mitoconorion -~ibosoma*
:f ículo endc

los cromo!iornas Lugar donde se desarrvl . .. ,la la sintesi

dirigida pc

biut&nico d ~ h i d r o g ~ n ~ a Alta contenido de RNA
Glucosa.

! teina)

lo c A ( t r r g osforilaci b n oxidativa-ASitio de la sínitesis protteí! icibn del mRNA a pro-

-

Li: ATPEI~

Mi

Aparato de Golgi

Pe

-

.Ciitoesy ueletc

1

Cata! asa

ieshidroge .. - -nasa Citosol* 1 En:zlmas-ae !a gtuco~isis, ". & síntesis de:-hcidos * Un organelo se puedc dcfinir como una entidad suba:eEulwquue e stá limiida oormembranav se aislarior ccntxifup aci6n a altas .. ..
necesario pnr lo menos, c ierto numerci de ciclos. fracciones de citoesqueleto se pi ieden recont xer por mii:roscopia el carxteristicñs que contiei1P"

Oxidasa del Qido iirica e marcadc No tien! + 'OS'

LoS rihosomas unidos a la mernbrama son un tanite de síntesis proteinica Siritesis de varios Iípidas Ox idación de n u m e ~ o s o s ~ e n ~ i 6 t i ( cc oist o c m m o _ i ~ 4 ~ o ~ io dc almacenaje de muchas hiilrolasas (e e alizan reacciones deg: radativas) . insporte dc molCculm dentro y tiuera dc las herencxa y comunicacibn interce Di:jtribucion intracelular de protein Reacciones de glucosilac:i6n Reacciones de sulfatación gradación iie ciertos ácidos gracos y amino iducción y degtadrtcíiin .de - peroxido de h d ! crofilamentos, microtiÚbulos, filamentos intl
u

D e acuerdo a Ia definicihn, los r i b m a 5 , ei crioesqueieto y ei citosoi no son organclos. Sin embargo, aqui se les considera junto con ellos dehido a que, por lo general. también se aislan p r centrifugacibn F'ueden ctasiiiicarse comcb entidades ci fracciones subcelulares Un organelo al sisl arse por un ciclo ii c ccetrifug aci6n diferencial rara vi2s: es puro; 1Jara obtener una fraccib n pura, habi tudmente eS
por análisis

Laq

oforesis de

S

B. Homogeneización
Para extraer un organela (o biomolkcu1a) de las c&lulas, primero es necesario romperlas bajo condiciones suaves. Los 6rganos (hígado, rifion, cerebro) y las células que contienen se pueden separar de manera conveniente mediante el proceso de homogeneizacibn; éste consiste en girar manualmente o por medio de un motor, un agitador dentro de un tubo de vidrio de dimensiones adecuadas que contiene los fragmentos desmenuzados del &gano en estudio con un medio hornogeneizante apropiado como STKM. La rotacibn controlada del agitador ejerce una fuerza mechica en las dtulas y las rompe l i h d o sus constituyentes en la sacarosa. Resulta una suspensión que contiene muchos organelos intactos, la cual se conoce como homogenado.

C. Centn'fugacidn
El subfraccionamiento del contenido de un homogenada por centrifugación diferencial ha sido una tkcnica de importancia capital en bioquimica. El mttodo

clásico utiliza una serie de tres pasos de centrifugación diferencial, con velocidades sucesivamente mayores (figura 2-2) y cada uno produce un sedimento y un sobrenadante. El sobrenadante de cada paso es centrifugado en el siguiente. Este prmedimiento proporciona tres sedimentos, que son las fracciones nuclear, rnitocondrial y rnicrosbmica. Ninguna de las fracciones está compuestade organelos absolutamente puros. Sin embargo, se ha establecido con precisión por el uso del microscopio electrbnico y por mediciones de enzimas "marcadoras" adecuadas y de componentes químicos (por ejemplo, DNA y RNA) que los constituyentes principales de cada 1 de las 3 fracciones son nucleos, mitocondrias y microsomas, respectivamente. Una enzima o un compuesto químico "marcador" es aquel que esta casi exclusivamente confmado a un organelo particular, corno la fosfatasa hcida en los lisosomas y el DNA en el núcleo (cuadro 2 4 ) . Por tanto, sirve para indicar la presencia o ausencia, en una fracción determinada, del organelo en el que esth contenido. La fraccibn microsbmica (mi-

Biomol~culus y métodos biquimicos

JI

Sobrenadante (1)

-

'

Sobrenadante (3)

15 o00 g x 5

P

min

Fraccibn
nuclear

Fraccibn microsbmica

Figura 2-2. Esquema de separacibn de fracciones cubceluTares por centrifugaeibn diferencial. fl tejido hornogeneuado (por ejemplo, hepfitico) se sujeta primero a centrifugacibn a bala velocidad para obtener la fraccidn nuclear (que contiene tanto núcleo como dlulas enteras) y el sobrenadante (1). Este ultimo se decanta y sujeta a centrifugacion a veloadad intermedia para producir la fraccibn mitocondr~af (que contiene rnitocondrias, lisosomas y peroxisomas) y el sobrenadante (2) este se decanta y sujeta a centrifugacibna alta velocidad para obtener la fracción microsórnica (que contiene una mezcla de ribosomas libres y reticuio endoplAsmico liso y rugoso) y una soiucibn final clara, el sobrenadante (3). Este último corresponde aproximadamente al citocol o savia celular. Modificando de varias maneras el mktodo, por lo general, es posible aislar mda organelo en forma casi pura

crosomas) contiene principalmente una mezcla de

reticulo endoplásrnico liso, retículo endopliismico rugoso (es decir, que tiene adheridos ribosomas) y rEbosornas libres. E! contenido del irltimo sobrenadante corresponde a la savia celular (citosol). Las modificaciones a este proceso bácico, que utilizan medios diferentes de homogeneizacibn o protocolos distintos de centrifugacion (por ejemplo, el uso de gradientes, continuos o discontinuos, de sacarosa), han pem itido el aislamiento, en fonna más o menos pura, de todos los organelos ilustrados en la figura 2-1 y enumerados en el cuadro 2 4 . El esquema descrito anteriormente es aplicable en tkrminos generales a la mayoría de los 6rganos y las dlulas; sin embargo, los fraccionamientos celulares de este tipo deben ser valorados con mediciones de enzimas o de compuestos químicos marcadores y por el rnjcroscopio electrónico, hasta que el procedimiento global pueda considerarse estandarizado. La importancia de los estudios d e fraccionamiento subcelular en el desarrollo de la bioquímica y la biologia celular, no se exagera por su enfoque experimental y amplio uso, constituye una parte fundamental en el estudio de las funciones de los organelos celulares. La infomaci6n de estas funciones, resumida en el cuadro 2 4 , representa uno de los mayores logros de la investigac i 6n bioquimica (vkase despubs).

El enfoque experimental tiene tres componentes
Los componentes principaEes del enfoque experimental son tres: 1) el aislamiento de biomoldculas y organelos (vdase Centrifugación, antes) contenidos en las células; 2) la deteminacibn de la estructura de las biomoléculas, y 3) el aniilisis, utiIizando diversas preparaciones, de la funcion y el metabolismo (es decir, sintesis y degradacibn) de las biornoltculas.

El enfoque experimental requiere del aislamiento de biomoléculas
Como en el caso de los organelos, conocer la funci6n de cualquier biomoidcula requiere que primero se le aisle en fonna pura. En el cuadro 2-5 se resumen los mktodos principales empleados para separar y purificar biomolkculas. Aquí no se detall&, pero algunos se explicarán de modo breve en otras partes del libro. Para purificar una biomol&culase necesita casi siempre una cornbinaci6n de mitodos hasta lograr la homogeneidad (la forma pura sin contarninacibn por cualquier otra biomolécula). Es importante apreciar que los adelantos en bioquimica dependen del desarrolIo de ttscnicas nuevas

C u a d r o 2 -5. Prin cipales nmbtodas risados p ara separar y purificar biamoléc:ulas. Mu chos de e 110s son adecu:ados paríi analiza t los comr)orientes i4 "e 1 -- -... 1 - v eii _ - virus ..-existen en ius extractos celulart.~ matcriales bioq uimicos. El uso en secuenciaI de varias d e estas tbcnicas permiitirA, por 1 0 general1, la purifícacihn de In mmJaJ,,s ,a de las bilirliurrcuid~.Para maY ores deta lles respt: ~ f a cadla uno de los rnétodos d e investig,aci6n bioquimica, el lector d ebe dirigiirse sI los texto1 s especiallimdos . ..-

-

--

CYuadro 2- 6. Principiales meto determinacibn de la1s estructi
. .

-

ados para la iomolécu las . . .

A--

- A

4

mnrrrir:ri

.

. -

-

. .

- -. -

- . . -. . . -. -

Fraccionarniento srli no (por ejemrnyilo, prec sulfato d c:amonio) Cromatogt-afia

En papel Por intercambio ibnrco (intercan Por afinidad En capa fina Gas-l1qu1 do En fase li quida a alt
Filtración itn gel Electroforr:sis

Anaiisis cielncntñl . . . . . . .. Espectroscopia ultrnvioleta, visilsle, infrarr o,ja y de resonancia magnética nuclear (RMt'4 Uso de hidrólisis ácida o alcalina para degrasdar la hiomolecula balo estudio en sus const,,,,,,,,,, 1 1so de una serie dc enz ¡mas de esplecificidad conocidapara degradar la biornolrScula (por ejemplo, piroteasas, r1 ucleaqas o glucosidast 1s) ~spectrometria de mas: Mdtodos es[)ecificos para secuenciaci6n (por cjcmplo, de protcinas o de ácido: ; nucleicos;b Cristalografiia de rayos X m m

En papel Con alto vvltaje En agarosa En acetato de cclulosa En gel de almidiin En poliacrilamida Poliacrilamida y dot
I!ltracentrifugacibn

I

sódico (S1

--

-

de anliIisis, purificacibn y determinación de estmcturas. Por ejemplo, el campo de la bioquimica de los Iípidos avanzó con rapidez gracias a la introduccibn de la crornatografia en capa fina y gas-liquido. El anklisís de la membrana y de muchas proteínas era extremadamente dificil hasta la introducción de la electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato sódico (EGPASDS); el detergente dodecilsulfonato sódico permiti6 la "solubilización" para la electroforesis de muchas proteinas que antes no habían logrado disolverse. Asimismo, el desarrollo de métodos para la secuenciacihn y clonacion del DNA ha tenido un efecto revolucionario en el estudio de los ácidos nucleicos y de la biología en general.

biornoléculas. El lector con algunos conocimientos de química orghnica los encontrara familiares. Ciertas enzimas cuya especificidad se conoce, son medios muy poderosos para revelar estas caracteristicas estructurales. El perfeccionamiento en la resolución respaldado por los adelantos tebricos y tecnolbgicos, está convirtiendo cada vez más a la espectrometria de masa y a la de resonancia magnetita nuclear (RMN), en los métodos de elección rutinarios para estos analisic. Las estructuras de las cadenas extremadamente complejas de los carbohidratos contenidos en ciertas biomoléculas, como las glucoproteinas, se pueden ahora aclarar por la elevada resolucibn de la espectrometría RMN. Una infomacion m8s detallada se logra con la difraccibn de los rayos X y la cristalografia. Su uso fue decisivo para revelar las estructuras dctalIadas de varias proteínas, enzimas y la naturaleza de la doble hélice de DNA.

El enfoque experimental requiere análisis de la función y metabolismo de biomoléculas, utilizando varias preparaciones
La investigacihn bioquímica inicial en el ser humano y los animales se hizo con el anima1 intacto. Son ejemplos los estudios de la respiracibn y el destino de las sustancias ingeridas. Pronto se descubri6 que el animal íntegro erademasiado complejo para permitir dar respuestas definitivas a numerosas interrogantes. En concordancia, se hicieron preparaciones más sencillas in vitro, que eliminaron muchas de las complicaciones experimentadas con el animal intacto. El cuadro 2-7 resume los diversos tipos de preparaciones de que se dispone ahora para estudiar los procesos bioquimicos; la mayosia de tos conocimientos presentados en este texto se han obtenido gracias a su uso. El enlistado se

El enfoque experimental requiere la determinación de la estructura de biomole~ulas
Una vez que una biornoIecula ha sido purificada es necesario determinar su estnictura. De este modo puede hacerse una correlacion entre estnictura y función. En el cuadro 2 4 se enumeran los metodos principales en uso para analizar la estructura de las

,a 2-7. Je rarquia de las preI
. . -.. -. -

:S

utilizadias para e
. . . . . . . . - .

35

procesi

id0

7-

. - . .. .

-

-- -- --

Comentar

Esruaios a ni vcl del animal int;

.

p .

i}rgano aislado
. p .

perfundido ,-

c crtes de teji

rueaen sc. 1. Bxtirpaci6n de un 6rgano (por ejemplo. hepatectomia) 2. Alteraciones en la alimentación (por qjemplo, ayuno-posprandial) 3. AdministraciOn de un fármaco (por ejemplo. fenobarbital) 4. Administracihn de una toxina (por qemplo, tetracloruro dc carbono) 5. uso de iin anirrial cori una enferrned:id especific:a (por cjernplo, diabc:tes sacarina) 6. Emp leo de tecn icas sofistjcadas corrio espectri3scopia R:MN y tam ografia po:r emisibn dc nositrones . '. - - - .-. Los Cstiid~ub achrc n ~ v c sur1 i a rricnriuu iibiuiugicoh, pcru uueucri x r uiliciics CYCirricruretar debido a la intcracción orgánich mediada por la circulacion ia nervioso1 central . . . . - . En particular higado, ~oraz6n y rifiiin son adecuado: Este método permite el estudio de un organo aislado de la influencia dc otros o dcl sistema nervioso .. -Especfalnnente se ha n usado cortes de tejido hephtict) Aislíi los cortes tisu1ares de otras influencias. pero lar; preparaciimes tiende o . ac . nutrientcs de alguna 1 s heras, cn parte debido al suministro inadecuado -..... ...... i . Aplicable en particular a lm células sanguínea, que pueden ser purificad 7.En m u c h a breas de la biología son indispensahles los culiivos de teji . -. . -- . t . Asegura una prcparacibn qiie no contiene cklul;Ls .. ... :... .,. ... 2. Pueden agregarse o removerse comnuestos esneciiiuis rnor eiemniri. nur ui~hisisi v ehrudiar sus
p .
8
p -

L - . . . - 2 A A A - L . . . .

"

A

-

A

TI-.

d..

efectos
.

OrganeIos cetulares . aislados -ente usadoS, por ejemplo, en cstudios de la funcibn mitocondrial Subfraccionamiento de organelos . . . . . . . . . . . Aislamiento aci=. t= pai rc v irni uLi aiiálisis de cualquier reacciiin o vía quirnica ri~ación di:metabulinas tos y emir " . Clonacidn de genes qu~ t l aislamiento del gen clonado es esencial para cstudtar los detalles de su estructura y rcgulaclbn: It la enzimia o proteinla n la que 1 codifican r t ambitn iuede revel ar b secuencia de a m
A

pa -.ra pproduciir orgnnelos : celulares i .3. Pucdc ser - subfraccionado .- -- por centrifugacibn s, para estu d i la ~ func ~ b de n mitr icondrias, r *eticuIo enc loplásmico Ampliamente usados

" "

s.-.---A""

"

presenta en orden decreciente de complejidad. Igual que el uso de animal integro tiene desventajas, las demás preparaciones tambiéin tienen sus limitaciones. De los procesos usados in vitro pueden derivar resultados erroneos (artefactos); por ejemplo, E a homogeneizacién de las células puede liberar enzimas que digieran parcialmente a las moléculas celulares.

reacciones responsables de la síntesis de un com-

puesto complejo a partir de uno o miis compuestos simples o de la degradación de una sustancia hasta su producto final. La existencia de un proceso bioquimico complejo o de cienas vias metabhiicas puede inferirse de las observaciones a nivel del animal intacto. Por ejemplo, observaciones directas de nuestros congeneres indican que los músculos se contraen. Sabemos que la glucosa sirve como fuente de energia para el ser humano y otros animales; por tanto, podemos deducir que debe ser degradada (metabolizada) en el cuerpo para producir energia. Sin embargo, la comprensi6n total de la forma en que la glucosa se metaboliza en las cklulac humanas -su conocimiento está aún lejos de ser completo- se requieren anhlisis a diferentes niveles. Lafiqura2-3 muestravarios tipos de observaciones y anhlisis utilizados en un intento por comprender los procesos bioquimicos, como la degradación inicial de la glucosa para producir ener-

LAS ESTRATEGIAS PARA EL ESTUDIO DE REACCIONES BIOQU~M~CAS SON COMPLEJAS Y EN MÚLTIPLES NIVELES
Gran parte de esta obra se dedica a los procesos bioquimicos complejos (por ejemplo, slntesis de proteinas y contracción muscular), incluyendo las vías rnetabólicas. Una vía metabhlica es una serie de

14

Bioquimiccr de Hurper

(Capituio 2)

gia (proceso conocido como glucblisis). El esquema de la figura 2-3 se aplica en un nivel general a todos los procesos bioquimicos principales por lo cual representa una estrategia global para diIucidarlos; cada uno de los procesos (glucblisis, oxidación de los Acidos grasos, etcétera) debcdn tenerse en mente al estudiar el texto, aunque no siempre encontrarán lugar todos los puntos mencionados. Algunos puntos importantes del cuadro 2-7 y de la figura 2-3 ameritan discusión. 1) A pesar de la posibilidad de artefactos, es absohtamente necesario aislar e identificar cada uno de los componentes de un proceso bioquimico en forma pura para comprenderlo a nivel molecular. Más adelante se encontrarán numerosos ejemplos de esto. 2) También es importante ~ o d e reconstituir r in vitro el vroceso en estudio. mediante el ensamblaje sistemático de sus componentes individuales. Si el proceso no se realiza al ser reensambladas sus partes, una explicacibn puede ser que algun componente critico ha escapado a la identificaci6n y, por tanto, no se ha afiadido. 3) Los adelantos tecnologicos recientes (por ejemplo, en espectroscopia RMN y en tomografia por emisión de positrones [TEP]) han permitido la detección de ciertas biomoléculas a nivel del &gano intacto y la vigilancia de Eos cambios en sus cantidades con e1 tiempo. Estos desarrollos indican que se esti haciendo posible efectuar anhlisis sofisticados de muchos procesos bioquímicos in vivo. 4) Cuando los resultados obtenidos con el uso de varios planteamientos a diferentes niveles son congruentes, entonces sejustifica concluir que se ha logrado un progreso real en la comprensión del proceso bioquímico en estudio. Si utilizando diversos enfoques, se obtienen incongruencias imporiantes, en toncesdekn inrestigme sus causas hastaobtener explicaciones racionales. 5 ) Las preparaciones y niveles de anhlisis delineados pueden utilizarse para estudiar alteraciones bioquimicas en animales con estados metabólicos alterados (como ayuno o ingestión de alimentos) o enfermedades especificas (por ejemplo, diabetes sacarina, o cincer). 6) Muchos de los mktodos y enfoques indicados pueden aplicarse a estudios de ctlulas o tejidos humanos normales o enfermos. Sin embargo, debe tenerse cuidado de obtener material fresco y prestar atención particular a las consideraciones tticas que se aplican a la experimentaci6n en el ser humano.

Deduccibn de la existencia del proceso bioquímico de la vla metabólica por las observaciones hechas a nivel del animal intacto

&
Anhlisis de sus mecanismos de control in vrtro

J
Anhlisis de sus mecanismos de mntrol in vivo

.1
AnBltsis de bc efectos de enfermedades específicas sobre di (por epmpio. errores cong8nitos del metahlismo. cáncer)

&
SU locallzaubn en uno o mas brganoc

1
Su localizacibn en uno o mAs organelos celulares o fracciones sub-

celulares Determinación del número de reacciones que intervienen en 81

3.

4
Purificación de sus susb-atos. productos, enzimas y uifactores individuales u otros componentes

&
Establecimientode los mecanismos de control utilizados en él

.1
Su reconstruccibn

L
Estudios del proceso o vla a nivel genbnm por los mktodos de la tecnología del DNA recombinante

Figura 23. Esquema de la estrategia general utilizada para analizar un proceso bioqulmim o una vía metabblica. Los planteamientos enumerados no necesrtan efectuarse obligadarnente en la secuencia precisa indicada aquí Sin embargo, por lo general mediante su uso se han dilucidado los detalles de los procesos o vías bioquimicos Por tanto, &te es el esquema que se aplica de modo común a M a s las vias rnetabblicas principales explicadas e n los capítulos siguientes

Los Esótopos radiactivos pesados han contribuido de manera importante en el ecclarecimienta de procesos bioquímicos

La introduccibn del uso de isbtopos en la bioquimica en el decenio de 1930 tuvo un impacto notable; en consecuencia, su uso merece discusibn especial. Antes de su empleo, era muy dificil "marcar" las biomo-

Itculas de modo que sus destinos metabblicos pudieran vigilarse de modo conveniente. Los estudios iniciales, en particular los de Schoenheimer y sus colaboradores, se aplicaron a la utilización de ciertos isótopos estables (por ejemplo, D2 y NI5)combinados con su identificación por espectrometría de masa, para dilucidar muchos problemas bioquimicos. Por ejemplo, pudieron sintetizarse varios arninoAcidos, azúcares y iicidos gsasos que contenian un isótopo estable adecuado y, entonces, administrarse a un animal o agregarse a una preparacibn in vitro para trazar su destino metabólico (por ejemplo, vidas medias y conversi611 a otras biomoltculas). Los compuestos marcados con is6topos estables se utilizaron para investigar muchos aspectos del metabolismo de proteinas, carbohidratos y lipidos. De estos estudios, se dedujo que el metabolismo es un proceso muy activo, en donde E a mayoría de los compuestos en una cdlula se estan sintetizando y degradando de manera continua, aunque a velocidades que difieren amplia-

mente. Schoenheimer llam6 a estos hallazgos "la
naturaleza d i n h i c a del metabolismo". La introducción subsiguiente de los is6topos radiactivos y de instrumentos capaces de medirlos también fue muy importante. En el cuadro 2 4 se muestran los isdtopos principales, estables y radiactivos, usados en los sistemas biológicos. El uso de los dos tipos de isótopas es decisivo para el desarrollo de cada irea de Ia bioquimica. La investigación de las biomoléculas complejas y simples, in vivo o ipi vim, se apoya fweftemente en su empleo. El gran avance logrado en la secuenciacib de los hcidos nucleicos y en la rnedici~n de cantidades extremadamente pequeflas de compuestos que se encuentran en los sistemas biolbgims se debe a la radioinmunovaloración que también utiliza isotopos.

LOGROS IMPORTANTES CARACTERIZAN LAS CONTRIBUCIONES DE L A BIOQU~MICA A LA CITOLOG~A Y A LA MEDICINA
Los siguientes piirrafos resumen los descubrimientos principales en el campo de la bioquimica, en particular en relacibn con la bioquimica humana. Gran parte de este texto desarrolla los temas que aquI se enumeran.

1) Se ha determinado la composición quimica global de c&lulas,tejidos y 6rganos; los compuestos principales se han aislado y sus estructuras se han
establecido.

2) Se comprenden, por la menos a un nivel general, las funciones de muchas biomoléculas simples, las
cuales se describirhn en los capitulas subsiguientes. Tambitn se han establecido las funciones de biomol&culas complejas. Es de capital interks el conocimiento actual de que el DNA es el material gendtico que transmite s u información a un tipo de RNA (RNA mensajero, o mRNA) y este RNA a su vez dicta la secuencia lineal de los aminoácidos en

las proteínas. E! flujo de 3 a información del DNA puede ser representado convenientemente como DNA +RNA -+ proteina. Sin embargo, se conocen excepciones importantes de algunos de los enunciados anteriores. El RNA es el material gendtico de ciertos virus. Además, en algunas circunstancias la información contenida en el RNA puede transcrjbirse al DNA; este proceso se conoce como transcripción inversa y es usado, por ejemplo, por el virus HIV-1 (virus de inrnunodeficiencia humana-1), causa posible del SIDA. 3) El desarrollo de la tecnología del DNA recornbinante constituye un logro fundamental. Esta tecnologla revolucion6 el estudio de la estructura y funcibn de los genes y también tuvo un impacto revolucionario en todos los campos de la biologia, incluyendo la medicina. 4) Se han aislado los principales organelos de las células animales y establecido sus funciones principales. 5) Se sabe que casi todas las reacciones que tienen lugar en las células son catalizadas por enzimas; muchas de estas han sido purificadas y estudiadas y se han descubierto las caracteristicas generales de sus mecanismos de acción. Aunque la mayoría de las enzirnas son proteinas, en la actualidad se ha establecido de manera firme que ciertas moldculas de RNA tambidn tienen actividad biocatalitica. 6) Se han delineado las vías membólicas que intervienen en la síntesis y degradacibn de numerosas biomolCculas simples y complejas. En general, se sabe que 1a vía de sintesis de un compuesto es distinta de su via de degradacion. 7) Se han esclarecida algunos aspectos de la regulacidn del metabolismo, 8) Se han reconocido las características generales de la forma en que las cClulas conservan y utiIizan la energia. 9) Se comprenden muchos aspectos de la esmctura y funcion de las diversas membranas encontradas en la ctlula; sus componentes principales son proteínas y lfpidos. 1(3 Se dispone de información importante a nivel general sobre el modo de accibn de las hormonas. 1 1 )Se han descubierto las bases bioqufmicas para un número considerable de enfermedades.

g. Isatopo,S princip investigaici6n bioc
. J

. m. esra mies

-. --

r

-.

1s oropos racliictivnr

QUEDA MUCHO POR APRENDER
Aunque es importante saber que es mucha la información que se ha acumulado, tiene igual relevanciaapreciar lo escaso del conocimiento en numerosas areas. Probablemente los dos problemas principales por resolver
respecto al establecimiento de sus bases bioquirnicas son el desarrollo, la diferenciacibn y la función cere-

I ) :
41:

Y'

Virtualmente nada se sabe can respecto a las bases bioquimicac de fenómenos neurolbgicos complejos como la conciencia y la memoria. Fruton JS: iWo/ectrJes aridLfe: HrSiorical fisqyson ihe Jnferplay ofChemisfryandBioln~. Comprender la regulación génica es tarnbitn un &ea clave en el aprendizaje de la forma en que las células se diferencian y toman cancerosas. Scientific American Books. Es posible que en el año 2005 o antes se logre conocer la secuencia del genoma humano. Para investigar la estructura. Sólo se riene informacibn muy limitada de los mecanismos de la secrecion celular. 1995. Si bien está perfectamente asentada la naturaleza quimica del material genético. de este modo. pueden separarse por fraccionamiento subcelular y. fbsforo. casi nada se sabe acerca de los mecanismos que activan y desactivan a los genes eucariotas durante el desarrollo. desde el anima! íntegro al gen aislado. Estos organelos resume la fuerza propulsara de gran parte del esfuerzo contemporáneo en bíoquímica. En particular. Radda GK. Walker J: Pnncipdes and Technáques ofPraciical Rinchemistty. Control. 1992. la informacihn disponible gracias a este esfuerzo masivo tendrh un impacto tremendo sobre la biologia humana y la medicina. M REFERENCIAS Freifelder D: Phys~cal Biochemistry: Applicaiions to Rin- c h e m i . Se han descubierto las bases bioquímicas y genéticas de numerosas enfermedades y la aplicación reciente de la tecnología del DNA recombinante ha acelerado enormemente el progreso en esta área. Ademls el calcio. Watson JD et al. El agua. Las células son las unidades biolbgicas hndamentales.6:3032. In: Scriver CR et al. la diferenciacibn celular y !a función cerebral. Contienen v e o s organelos que desempeiian numerosas funciones especializadas. ha tenido tremenda importancia en el adelanto del conocimiento hjoquímico. se desconocen los fundamentos moleculmes de la mayoria de las enfermedades genéticas principales. potasio. No obstante. polisacaridos y lipidos son las moléculas principales de células y tejidos. 7th ed. Wilson K. T 982. hierro. Cambrídge Univ Press. El conocimiento de la división y el crecimiento celular -tanto normal como malignoy su regulaci6n es muy primitivo. A perar de cierto progreso. 2nd ed. como la apreciacibn de la ~omposicibn corporal y la comprensibn parcial de estructuras y funciones de enzimac. se han hecho muchos otros avances en el conocimiento de la bioquimica. and adaptation in health and disease: Non-invasive biochemistry from nuclear magnefic resonance. Cox DR. 4th ed. Freeman. hidrógeno y nitrbgeno son los constituyentes principales de gran parte de las biomoléculas. McGraw-Hill. El avance de la bioquímica ha dependido del aislamiento de biomolkculas celulares. r f and ~ MolecuIar Biolo~y. rnagnesio.: Recombinani DNA. aún es mucho lo que se desconoce. bioenergetics.bral. los retos principales para el futuro incluyen definir ("mapear") el genorna humano y proporcionar explicaciones moleculares de los mecanismos que intervienen en el desarrollo orghnico. Sin embargo. proteínas. Myers RM: The human genamc prajcct and its impact on ihe snidy of human discasc. cloro. FASEB J 1992. hormonas y membranas. sodio. R N A . el uso de isotopos. yodo y otros elementos tienen gran importancia biol6gica y medica. funci6n y metabolismos d e las biomoléculas se han utilizado diferentes planteamientos. 1994. Wiley-lnterscience. (editors): The Melabolic and MolecuIar Bases o f lnhenfedDiseare. pero las tentativas proporcionadas por la tecnología del DNA recombinante sugieren que en los próximos afios se logrará un progreso notable en esta hrea.1972. Green ED. DNA. estudiar sus fiinciones en detalle. manganeso. La representacihn: Transcripcibn Traslación RNA-Proteina D N A - RESUMEN El carbono. . de la dcterminación de sus estructuras así como del an8lisis de su funcibn y metabolismo. tanto estables como radiactivos. oxígeno.

Por ultimo. sirven para mantener la homeostasis. cuthnea por sudaciún intensa y gastrointestinal eii diarrea intensa en lactantes y en ctilera).Victor W.Un mecanismc) algo menos sensible desencadena la Iiheración no osmólica de ADH y la sed. 1. de origen genético. es cscncial para la salud. La regulaciiin del equilibrio hídrico depende de mecanismos hipcitaláinicos para controlar la sed. PhD Ld5 biomolecula~ polarcs orghicas e inorgánicas de 1% células vivienles existen y reaccionan de manera priniariri en un ambiente acuoso El agua. cuando disminuye 10nA el volumen de liquido circulante extracelular. Ciertos niecanismos osrnóticos y no osmóticos protegen el agua y la htirneostasis osrn0tica del liquido extracelular. se caracteriza por sed extrema. protcinas y carbohidratos al formar puentes de hidr6geno con sil? grupos fi~nciotiales. La conservación del liquido extracelular dcntto de un p1-E entre 7. excesiva administración de liquidos IV) y excrecibn escasa (por ejemplo. solubiIi75~ características de biomoléculas coino hcidos nucleicos.45. el plasma sanguineo constituye cerca de 25 por ciento. Las alteraciones del equilibrio acidobásico se diagnostican en el labora- . perdida renal en la diabetes sacarina. La diabetes insípida nefrogeiia. de la hormona aiitidiurdtica y de la retención o excrecion del agua por los riilones. Rodwell. Del liquido extracelular remanente.0s estados de depleción de agua y exceso de Iíqiiido corporal son bastante comunes. ingest icin abundante de agua e incapacidad para concentrar la orina o para responder a cambios sutiles en la osmolaridad de liqiiido extracelular. Las causas de dealecibn hidrica son a una disminución de la ingestión (por ejemplo. Las causas de exceso de agua corporal se deben al incremento en la ingertión (por ejemplo. ].35 y 7. en estados de coma) e increniento de la perdida (por ejemplo.os cambios le dan a las molkciilas ias propiedades esenciales para el ciclo de la vida.si$ biornoléculas -aun aquéllas relativamei1:e no pulares. incluye considerar la distribucihn dcl agua en el cuerpo y la preservaci~n del ptl así como de concentmciones clecirol iticas apjopiadas. conservaci6n de la cornposic~ón del rnedio interno que es esencial para la salud. en insuficiencia renal grave).tambiéti inodificw las propiedades del agua La comprensión de 3us mecanismos honieostáticos utilizados por los organismos para conservar un entorno intraceliilar relativamente constante debe considerar el pH y el amortiguarnierito en liquidos corporales y compartimienlos siibcelulares.Estas interacciones mridifican las propiedades de las biomoléculas y si15conformaciones en solucicin. una molécula y modifica las notable esencial para la vida. esto se dehc a la incapacidad de los osmorreceptores de ADH en los túbulos renales para responder a la ADH. Dos terceras partes del agua corporal total (55 a 65% del peso corporal eri varones y alrededor de 10% menos en mujeres) cs liquido intracelular. [. tales como ciertos lipidos. cn donde el sistema amortiguador de bicarbonato tiene una funcihn importante. Tanto la conservacibn del agua por la atitidiuresis como la ingestihn de liquido por la sed. En inuchos casos se acompañan de deficiencia o exceso de sodio. Incrcmentos tan pequefios como 2% en la osmolaridad del liquido r:xtraceluIar pueden provocar sed y Iiberacihn de liorniona antidiurética (ADH) en la hipáfi~is. el comportamiento de disociación de los gmpos funcionales de biomol~culas en soJuci6n acuosa a diversos valores de pH e? critico cn la comprensióti de sus reacciones y propiedades tanto en células vivas corno en el laboratorio IMPORTANCIA B I O M ~ D I C A Ida homeostasis.

La propiedad de las moltculas de agua de unirse unas con otras tanto en estado líquido como sblido surge del carhcter dipolar del agua. m i e n t r a s que las de la alcalosis (gH sanguineo > 7. EL AGUA ES UN SOLVENTE BIOLÓGICO IDEAL El agua es una molécula tetraédrica ligeramente asimétrica La molCcula del agua es un tetraedro irregular con oxígeno en el cenúo (figura3-1).45) comprenden el vbmito de contenido ácido gástrico o el tratamiento con ciertos diun5ticos. los angulos de enlace entre hidrbgenos (107 grados) se aproximan al ángulo del tetraedro aun miis que en el agua (figura 3-2). En estado liquido. El término "dipoEoV se refiere a moléculas como el agua que tienen carga electrica (electrones) distribuida en forma desigual alrededor de su estructura. Se conserva como liquido más que como sblido debido a la naturdeza transitoria de estos complejos macromoleculares (la vida media de asociacibn-disociacidn de las moléculas de agua es de alrededor de un microsegundo). de hidrógeno escasos en electrones forman una regi6n de carga positiva local. Entre ellos se Incluyen alcoholes. El amoniaco también es dipolar y tetraédrico En el amoniaco. El lado de1 oxigeno opuesto a los dos hidrbgenos muestra cierta riqueza de electrones. Los dos enlaces con hidrbgeno se dirigen hacia dos vértices del tetraedro. en tanto que los electrones no compartidos del oxigeno en el orbital 2sp3 híbrido ocupan los dos vertices restantes. cada moltcula de agua se une con otras cuatro. la carga eléctrica no se distribuye de manera uniforme alrededor de la moltcula de agua. aminohcidos y hcidos nucleicos.torio clínico por medicibn del pH de la sangre arteria1 y el contenido de COZde la sangre venosa. El ángulo entre los dos Atomos de hidrogeno (105 grados) es algo menor que el Angulo del tetraedro (109. Las causas de la acidosis (pH sangutneo < 7.5 grados). En estado sdlido. Estructura tetrabdrica del agua Flgura 3-2. los núcleos Figura 3-1. Un diagnóstico preciso y un rápido tratamiento del desequilibrio hidrico y de las alteraciones acidobiisicas se apoyan en gran medida en la comprensi6n de los conceptos considerados en este capitulo. Muchos compuestos químicos son dipolos. Con excepcibn de Las rnoléculas de agua forman dipolos Debido a la estructura tetraédrica asimktrica. el agua liquida muestra una estructura rnacromolecular ankloga a la disposicibn ggeom&tricade las molkculas de agua en el hielo. en tanto que del otro lado. LAS MOLÉCULAS DE AGUA FORMAN PUENTES DE HIDRÓGENO Los puentes de hidrogeno confieren una estructura macromolecular Debido a su caríicter dipolar. las moléculas de agua pueden asumir conf~rtmaciones ordenadas (considerese un copo de nieve). formando una figura geomdtrica ligeramente asimktrica.35) incluyen cetoacidosis díabdtica y acidosis 1Actica. Estructura tetraMrica del amoniaw . fosfollpidos.5). Al igual que el hielo. el número es algo menor (mlis o menos 3.

La reduccibn a E mlnimo de la superficie apolar expuesta al agua es un proceso gobernado entrópicamente. del mismo modo que el agua. El DNA se pliega de modo que expone su azúcar y sus grupos fosfato polares a las moiéculas de agua. Romper un enlace de hidrógeno en agua Iíquida requiere alrededor de 4. Grupos apolares como aquellos presentes en hidrocarburos no tienen capacidad para formar uniones hidrbgeno y. pueden participar como donadores y como aceptores de hidrógeno en la formación de puentes de hidrdgeno con agua o con otras biomoltsculas. Figura 3-4. Esta estructura es típica deT hielo y. Los puentes de hidrógeno estabiliran proteínas y ácidos nucleicos En tanto que el metano (peso molecular 16) y el amoniaco (peso molecular 17) son gases a la temperatura ambiente. este fenbmeno se ilustra con la tendencia del aceite de olivo en agua fria para formar una sola gran masa flotante. Fomacibn de puentes de hidrbgeno entre un alcohol y agua. De manera similar. Las molCculas que pueden formar puentes de hidrógeno con el agua (por ejemplo. entre dos molbculas de etanol y entre el oxigeno carbonilo de un pbptido y el hidrbgeno del grupo amino de otro pkptido adyacente. o ambas cosas a la vez Derecha: Unldn de una rnol6cula central de agua con otras cuatro mol6culas mediante puentes de hidrógeno. compuestos con radicales 4 N o S H . ksta se parece al hielo en su estructura macromolecular mSis de lo que en un principio se imaginaba. e l agua (peso molecular 18) es un liquido. El cariicter dipolar de las moldculas de agua favorece los enlaces mutuos en conformaciones ordenadas con una geometría precisa dictada por la configuracibn interna de cada molécula de agua (figura 3-3). lo cual explica tambien su viscosidad y su tensibn superficial relativamente altas. La interacción electrostAtica entre el nijcleo de hidrdgeno de una moldcula de agua y el par de ekctrones no compartidos de otra se denomina puente de hidrógeno. los puentes de hidriigeno son bastante debiles. Así.5 kcal de energía por mot -más o menos 4% de la energía que se requiere para romper el enlace O-H del agua ( 1 I O kcal/mol). las moléculas apolares forman gotas esfericas con una supeficie mínima expuesta al agua. residuos polares de proteinas se presentan primariamente en la superficie biopolímera donde participan extensamente en interacciones con las moléculas de agua. esleres. estos grupos no polares pueden afectar la estructura hidrica. aminas. sentativos de biomol~culas.Agua y pH a 19 la naturaleza transitoria de las interacciones intermoleculares en el agua liquida. Nbtese que una mol8wla dada de agua puede actuar como donador o como aceptor de hidrbgeno. Izquierda: Reunibn de dos mol&culasdipolares de agua. son insolubles en agua. Comparados con enlaces covalentes. lo que incrementa la solubilidad. No obstante. . las proteinas solubles están recubiertas con una capa de agua formada por intercambio de enlaces de hidrbgeno intermoleculares superfjciales por puentes de hidrógeno intramoleculares del agua. La propiedad del agua de servir como solvente para iones y numerosas mol&culasorghnicas se debe a su carácter bipolar y a su capacidad para formar puentes de hidrhgeno. El carácter dipolar del agua afecta profundamente sus interacciones con las biomoltculas. La presencia de moltculas apolares reduce el numero de posibles orientaciones (grados de libertad) de las rnol~culas Figura 3 3 . aldehidos y cetonas) se sotvatan con facilidad lo que por su solubilidad en agua aumenta. Cuando se añaden el agua. ¿Por quc es ast? L a respuesta se apoya en la capacidad del agua para formar puentes de hidrogeno. del agua líquida. La línea punteada representa un puente de hidrógeno. En el ambiente acuoso de las cClulas vivientes se producen muchas interacciones entre cargas y grupos polares de l a s biomoléculas. en menor grado. por tanto. La figura 3 4 ilustra la formacibn de puentes de hidrógeno entre el agua y grupos funcionales repreN6tese que los alcoholes.

los hidrocarburos forman estructuras clatrato rígidas (semejante a cajas). aunque de modo ligero. su ionización puede describirse por estadística. los tCrtninos entre parkntesis reprcsentan la actividad molar en lugar de la concentración molar.56 moles.56 moIL. Las moléculas de agua presentan una tendencia ligera a disociarse.01 significa que un átomo de hidrhgeno tiene una oportunidad en 100 de estar como ion y 99 posibilidades en 100 de estar como parte de una rno4&culade agua. Asi. un litro (1 000 g) de agua contiene 1000 + I g = 55. Ahora puede calcularse la K para el agua: .. La relación entre K . K. no puede definirse si un hidrógeno o un oxigeno deterrninado tiene el estado de ion o de una parte de una moiécula de agua En un instante están como ion. recuérdese que una molkula de agua pesa 1& g. minimiírando asi su contacto con el agua. no es necesario considerar iones o molkculas individuales. el producto iónico.56 moYL) no se afecta de manera significativa por la disociacibn. Dado que el agua puede actuar como un hcido o como una base. resulta conveniente considerarla en esencia como una constante. La disociacion del agua. La probabilidad real de que un Atorno de hidrhgeno en agua pura exista coma ion hidr6geno es alrededor de 0. Por fortuna. reduce al mínimo el incremento en entropía. Definido de otra manera.S x 104.' adyacentes al agua por lo que se acompafía de un incremento en la entropía. tiene importancia capital para la vida sobre la tierra. la concentración del agua pura es 55. desorden máximo) de las mo!éculas de agua cercanas y. por tanto. rnlentras que la K es la constante de disociación. las partes no polares de los biopolímeros tienden a situarse dentro de su estructura. la concentración molar de iones H' (e de iones OH-)en agua pura se calcula multiplicando la probabi tidad. por la concentracion molar del agua. N o obstante.46 x moléculas. la probabilidad de estar como parte de una rnotecula es casi la unidad.. 109 moléculas de agua. un momento después como una parte de una mol6cula. En consecuencia. Establecer que la probabilidad de que un hidrbgeno exista como un ion es 0. no siilo como H30. Este resultado es 1 x 10" rnoYL. En realidad.56 molar.Como su nombre sugiere. los iones hídr0geno y oxhidrilo contribuyen de modo significativo a las propiedades del agua. que foma un ion hidronio (I. en el ambiente acuoso de las ctlulas vivientes. 55. es en cifras igual al producto de las concentraciones rnolares de H ' y OH-: * Estrictamente hablando.0000000018 o 1. m . K.X x La elevada concentración de agua molecular (55. La reducción al minimo del área de la superficie apolar expuesta permite el m k i m o grado de libertad (por ejemplo. Por tanto.S x 1 Omy. iones oxhidrilo y rnolkculas de agua sin disociar*. hay 1. por cada ion hidrbgeno y cada ion oxhidrilo en agua pura. molesZpor litro2. el protbn transferido est6 asociado con un racimo de: mol$culas de agua y existe en solucion. Aunque para propósitos prhcticos este protbn ' al parecer 'Vesnudo" se escribe casi siempre como "H'". Para calcular este valor. K.sino como algo semejante a HrOz' o H703'. es posible representar su ionizacibn como una transferencia protónica intermolecular.8 x 1 Q4.I. De manera similar. Por tanto..no debe olvidarse que de hecho esta fuertemente hidratado. designada el producto ibnico para el agua. Es suficiente conocer la probabilidad de que un hidrbgeno estC presente como ion o como parte de una molécula de agua. para crear una nueva constante. En el agua. lo cual es fisiolciqicarnente importante La propiedad del agua de ioni~arse. Ya que los iones se recombinan de manera continua para formar rnolécu2as de agua y viceversa.O&) y un ion hidr6xido (OH-): donde los t6rminos entre paréntesis representan concentraciones molares de iones hidrbgeno. 1. y K se muestra a continuación: Nótese que las dimensiones de K son moles por litro y las de K.S bi tlones o 1 . Ya que la probabilidad de que un hidrbgeno en agua pura exista como ion H' es de 1 . que luego puede incorporarse a la constante de disociación. Dado que 1 g de agua contiene 3.

aunque no es rigurosa*.log Para resolver el problema bajo estc enfoque: W+l.0 x .2 x lo4) = . HCI.log [H'] Ejemplo: ¿Cuál es el pH de una colucihn cuya concentracion de ion oxhidrilo es 4. A temperaturas que a menores a 25 O C . Por ejemplo. se hace una distinción entre ácidos fuertes (por ejemplo. a la temperatura del cuerpo humano (37 "C). es mayor de 1 O-". KOH. Los ácidos son donadores de protones y las bases son aceptores de pmtones. que se disocian completamente aun en soluciones muy ácidas (pH bajo) y los iicidos débiles.0 = 3. Sin embargo. Para calcular el pH de una solucihn se debe: 1) Calcular la concentración del ion hidrdgeno.2) . es menor de 10-'"mientras superiores a 25 O C .109[H+] = log (3. quien lo definió como el logaritrno negativo de l a concentraci~n de iones hidrúgeno: pH = . K. S610 las bases ruerics sc disocian a pH alto. K.0 x 1OA2mol/L de KOH y de b) 2.log (104) = .os valores de pH bajos corresponden a concentraciones elevadas de H. Los siguientes ejemplos ilustran el modo de calcular el pH de soluciones ácidas y alcalinas.5 - EL pH ES EL LOGARlTMO NEGATIVO DE LA CONCENTRACI~N DEL ION HIDR~GENO El término pH fue introdiicido en 1909 por Sorensen. que se disocian solo de manera parcial en selucíones bcidas. es adecuada para la mayor parte de los estudios bioquimicos.0 Ahora: ]. la contribucion del agua al [OH-] total es despreciable. - * pH = -log (actividad dcl H +).0 x 1 Oa m o l k de KOH? Los oxhidrilos proceden de dos fuentes: KOH y agua. En el primer caso. = (1 0-'j2 = I O ' ' (molJL)'.2 x 1O-' mol/L? PH = . 3) El pH es el negativo del valor encontrado en el paso 2.0 x 1O4 mol/L? Para abordar este problema. Por ejemplo. . = . Ejemplo: ¿Cuales son los valores del pH de a) 2. No puede decirse lo mismo en el segundo caso Molaridad di:KOH [OH-] de KC)H [OH-1 del agua 2. Esta constante se usarii en el cálculo de valores de pH para soluciones ácidas y alcalinas.log (3. Dado que el pH esta determinado por el [HA] totai (y pOH por el [OH-] total). Una distinción semejante se hace entre bases fuertes (por ejemplo. incluso las que contienen acidos o bases. Dentro de las lim itaciunes establecidas por el efecto de la temperatura.(-7) = 7. que sea igual a -1og [OH-] y que puede derivarse de la definiciiin de Kw: por tanto: Esta definición. es preciso considerar los dos orígenes. hay que definir una cantidad pOH.K .la concentración de iones H' en agua pura es algo mayor de 1 mol/L. Ca[OH]:). 2) Calcular el logaritmo de base 10 de [ w ' ] . que poseen el grupo acido fosfórico primario fuertemente acídico.A 25 OC. para agua pura a 25 O C : pH = -lag [HJ = . H:SOd).y los valores de pH altos a concentraciones bajas de H'. Las excepciones son tos intermediarios fosforilados.0.5 + 4. NaOH) y bases debiles (por ejemplo. Ejemplo: cuál es el pH de una solución cuya concentracibn de ion hidrógeno es 3. = lW4 (mol/L)' para todas las soluciones acuosas. Muchas sustancias bioquimicas son Bcidos ddbiles.

A continuacibn se muestran las expresiones de la constante de disociacidn (K) para dos ácidos débiles representativos. A. que expresan su tendencia a ionizarse. En otras palabras. Dado que los valores numéricos de K para hcidos débiles son exponentes negativos. sus bases conjugadas (centro) y tos valores de pK (derecha) incluyen lo siguiente: Nótese que la relacibn de pK con respecto a K es igual a la de pH con la concentracion de H'. cuando las especies asociada (protonada) y disociada (base conjugada) están presentes C u a d r o 3-1. dicarboxílico y tricarboxílico. es conveniente cxpresar a K como pK.40 x 1 O4 (segundo) 1. calcular el pH. aminos o fosfatos derivados de la disociación secundaria de esteres de fosfato. es fundamental -para comprender la influencia del pH intracelular en la estructiira y actividad bioquimica de estos compuestos. nbtese que: o cuando: entonces.jemplo.08 . Constantes de disociacibn y valores de1 pK para ácidos carhoxllicos r e ~ r e s e n t a t k o s - . tambihn los hay en la rnayoria de las coenzimas y los metabolitos intermediarios. HA o RNH?') se le designa como el hcide y a la forma no protonada (por ejemplo. es posible referirse a una base (por e. El cuadro 3-1 enumera valores de K y pK ilustrativos para un ácido monocarboxílico.80 x 1 3. Esta aseveración es válida para soluciones relativamente diluidas de bases o ácidos fuertes. se asurni6 que la base Fuerte KOH estaba completamente disociada en la solución y que. Dado que estos electrólitos dkbiles se disocian sólo un poco en soluci6n. por tanto. cuniungre: reunirse). hcidos o bhsicos. A la forma protonada de un hcido (por ejemplo. la palabra proviene del latln. donde: Los grupos funcionales que son ácidos débiles tienen un gran significado fisiológico Numerosos compuestos bioqulmicos poseen grupos funcionales que son ácidos o bases dkbiles.o RNH?}.--Acktico A Glutdrico Citrico (primero) 8. En todas las proteínas y ácidos nucleicos existen uno o más de estos: carboxilos. Los hcidos débiles representativos (izquierda). A-o RNH2) y su hcido conjugado (HA o RNH3'). De igual modo. R-LOOH y R-NHJ-. Su sepmtci&ne identificación en los laboratorios clinicos y de investigacidn se facilita tambidn cuando se conoce el comportamiento de disociacibn de sus grupos funcionales. el comportamiento de disociacibn (equilibrios protónicos) de grupos funcionales débiles. Observese que los grupos hcidos más fuertes tienen los valores de pK mas bajos. De las ecuaciones anteriores que relacionan K a [ H ' ]y a las concentraciones de un ácido no disociado y su base conjugada. la concentracion molar de iones OH-era igual a la concentración molar de KOH. posteriormente. Las potencias relativas de ácidos y bases dkbiles se expresan de manera cuantitativa como sus constantes de disociacibn.(Capitulo 3) Una vez que se ha comprendido el significado de la contribucihn del agua. pero no para soluciones de acidos o bases dbbiles. base conjugada. En los ejemplos anteriores. el pM puede calcularse como se describid. se debe calcular la concentracidn de H ' (o de [OH-1) producida por una molaridad dada del hcido (o base) usando la constante de disociación antes de calcular [H'] total (o [OH-] total) y. Por tanto.

109 [HT = . con 50% de neutralizacibn. En esta situacibn. se ioniza de la manera siguiente: HA = H+ + A- La ecuaci6n de Henderson-Hasselbalch ha probado ser una expresión de gran valor predictivo en equilibrios protonicos.5 equivalentes de iilcali por cada equivalente de acido. Si se obtienen los logaritmos de los dos lados de la ecuacibn anterior y la ecuación completa se multiplica por -1.Agua y pH 23 en concentraciones iguales. Para eliminar el signo negativo se invierte el ÚItirno El comportamiento de ácidos dkbiles y de amertiguadores se expresan par la ecuación de Henderson-Hasselbalch El pH de una solucihn que contiene un Bcido débil se relaciona con la constante de disociaci6n de dicho acido. pH PK. K. respectivamente. La relación puede establecerse en la forma convenientede la ecuaci6n de Henderson-Hasselbalch. el pK de un grupo 4cido es el pH al cual Ias especies protonada y no protonada esthn presentesen la misma concentración. Un acido ddbil.lag K . (E) y Las soluciones de ácidos debiles sus sales amortiguan e l pH Las sofuciones de ácidos dkbiles y sus bases conjugadas (o de bases dtbiles y sus k i d o s conjugados) . El pK de un &ido puede determinarse de modo experimental agregando 0. -log K se defínib como pK y -1og [H'] es la definicibn de pH.toa I H 4 [A7 . Se multiplican los dos términos entre si: pki = pK + log %o = PK + (-1) Se dividen ambos miembros entre [A-]: Se obtiene el logaritmo de toda la ecuacibn: log [H7 = log K Si la ecuación se valora en varias proporciones de [A-]/[HA] entre los limites 103 y 1O-? y los valores de pH obtenidos se grafican. el resultado describe la curva de titulación para un a ácido débil (figura 3-5). luego: es decir. La ecuación puede quedar como: K = [H'] Se sustituye pM y pK en lugar de -log [Ht] y -lag K. las expresiones serfan las siguientes: Se multiplica todo por -1 : .iog [HT Ahora. 1 [Hl AI = p ~ + ~ o g ~ = p ~ + pH = pK + log f Por tanto. HA. que se desarrolla desputs. Por ejemplo: 1) Cuando un hcido se ha neutralizado exactamente a la mitad [ A 7 = [HA].log K = . El pH resultante seri igual al pK del ácido. la concentración prevalente de ion hidrógeno [H'] es numh-icarnente iguat a la constante de disociacion. como se mosirb antes para el agua como Acido débil. 2) Cuando la proporci6n [A-JI[HA] = 100:1. = La constante de equilibrio para esta disociacibn se escribe: 3) Cuando la proporción [A-]/[HA] = 1 : 10.

18---" 6 0 0 .t 0. 1 mEq de KOH a 1 mEq de cadauna de estas soIuciones: RESUMEN El agua. A valores de pH próximos al pK. Los compuestos que contienen O.2) y al HEPES (pK 7.5 es la probabilidad estadística de que una rnolkcula dada tenga una carga negativa. N o S son solvatados por el agua. deberfi usarse un Acido o una base débil cuyo pK no se separe mas de 2.6).80 0. .00 i.02 0. ortofosfato inorgánico ( H ? P O ~ .00 9. Las soluciones de ácidos débiles y sus bases conjugadas amortiguan mejor en valores de pH que oscilan alrededor de pK k 2.0 unidades de pIJ del pH X. Ecto significa q u e para amortiguar una solución a pH X.12 0.37 5. Una carga fraccionaria de -0. punto (m) ~ndica .. - Figura 3 4 . Los amortiguadores fisiol6gicos importantes incluyen bicarbonato (HCOi/H2C0i). pK = a 5.60 5. . Los amortiguadores no fisiolbgicos usados en experimentacibn bioquirnica comprenden al TRIS (pK S.00 4.50 [HAI~nicia~ 7.tPQ4C2) '/~ y proteínas intracelulares.18-_-5:60 5-95 6.70 0. viscosidad.50 0. exhiben la propiedad de amortiguar -tendencia de una solrici6n para resistir con inayor eficacia a un cambio en el pH después de la ztdicibn de un Cicido o una base fuertes que un volumen igual de agua. proteinas plasmhticas y hemoglobinas anormales.33 2. Forma general de una curva de tlulacibn calculada con la ecuación de Hende~on-Hasselbalch.33 4. En la figura 3-6 se muestra la carga neta en una rnoltcula del ácido como funcihn del pH.98 0..0 unidades de pH. estado líquido a temperatura ambiente y potencia solvente del agua se deben a su capacidad para formar puentes de hidrógeno. forma puentes tanto con sus propias rnol~culas como con otros donadores o aceptores de protones.24 Bioquinaica de Harper Figura 3-5.176 0.20 0.00 1. Obskwese que el cambio de pH por miliequivatente de OH.30 0. es posible calcular el desplazamiento del pH que acompaiia a la adición de Acido o de base a una solución amortiguada. .T meq de KOH produce 0.40 [HAlfinai 49.88 0.0 y su base conjugada se encuentra inicialmente en 1 de los 4 valores de pH indicados. La consideración de la carga neta de macromoléculas como funcibn del pH constituye Ia base para numerosas tkcnicas de separación.602 0. De manera alterna. incluyendo la separacibn electroforética de aminohcidos. la soluciOn resiste los cambios con mayor eficacia y se dice que ejerce un efecto amortiguador. La tensión superficial.86 0.00 [A-]inicial L~PH 0.50 ([A-[4HA])fina1 log ([A-]I[HA])n.80 0. El efecto de amortiguador se observa mejor por titulacibn de un hcido o base débil utilizando rin potenciómetro (medidor de pH).20 0.95 1. el amortiguador (mezcla de un ácido débil.00 ([A-]l[HA])inlclal La adición de O.agregado varía de modo notable dependiendo del pH iniciai. ya que tienen la propiedad de servir como aceptores o donadores de hidrdgeno para formar puen- 5.90 0.69 pHfinal " 5. Curva de titulación para un ácido del tipo HA El el pK 5. En el ejemplo.s no significa que una molécula individual posea una carga fraccionaria sino que 0. Se calculará el desplazamiento del pH que resulta cuando se agrega O.10 0. que en !os estados liquido y sdlido existe como racimos rnoleculares unidos por hidrógenos.69 pH inicial 5.60 [A-lfinai 0.0.

y nombran a los aceptores protónicos correspondientes ( R . los cuales de manera convenciona! se representan como protones desnudos (H'). El agua se disocia para formar iones hidrdxido y protones hidratados de modo masivo. Las proteínas y otras rnacromoteculas se estabili~an por intercambio de eniaces de hidrbgeno intermoleculares superficiales con los enlaces de hidrtigeno del agua. REFERENCIAS Segel 1M: Riocochemicnl Calculations. La capacidad amortiguadora máxima a IT I unidad de pH en cualquier región de pK.') como bcidos. las bases conjugadas de estos ácidos.y R-NH2). en tanto que sus porciones no polares se ocultan en el interior de la biomolCcula. Los ácidos relativamente fuertes tienen pK bajo mientras que en los relativamente débiles es alto. Estos ácidos débiles desernpeíian actividades claves en el metabolismo. Un pH bajo denota una solución ácida y uno alto una solución básica o alcalina. 1968 . Los amortiguadores resisten los cambios en el pH cuando se producen o consumen protones. expresa la acidez relativa. Wiley.4 0 0 . E1 agua modifica las propiedades de biomolkculas como las proteinas y los hcidos nucleicos que poseen gmpos funcionales polares y no polares. R-NH. Los bioqulmicos consideran tanto a los hcidos carboxilicos (como el R X O O H ) como a las aminas (por ejemplo. Las fuerzas entrópicas indican que las macrornoleculas en soluci6n acuosa se pliegan de modo que sus porciones polares entran en contacto con la interfasr acutisa.tes con el agua. El pH. el cual es el logaritmo negativo de su constante de disociación. Entre los amortiguadores fisiológicos importantes se encuentran el bicarbonato. logaritmo negativo de [H']. e[ ortofosfato y las proteínas. Su potencia heida se expresa de manera cuantitativa con el simbola pK.

. . . . . . . . . . . . . . . . . . 119 Capítulo 4 Aminoácidos . . . . . . . . . .111 Capitulo 11. . Capítulo S. . . . . . . .Emzimas: regulacióln de actividades . . .91 Capitulo 10. . . . . .Yéptidos . . . . . . . . . . . 65 Capitulo 8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77 Capitulo 9. . . . . . . . . . .Estructura y funciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51 Capítulo 7 . . . . . . . . . Enzimas: propiedades generales . . . . . . .Enzirnas: mecanismos de acción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Proteínas: estructura y función . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 . . . . . . Enzirnas: cinética . . . . . . . . . . . . . 39 Capitulo 6 . . . . . . . . . . .Proteínas: mio~lobina y hemoglobina . . . . . . . . . . . . . . .

Victor W Rodwell, PhD

Una de las múltiples funciones de los arninohcidos en las ~Clulasvivientes es la de servir como unidades monómeraq a partir de las cuales se sinteticen cadenas pEipéptidicas de proteinas. La mayoría de las proteinas contienen. cn proporciones diferentes, los mismos 20 1,-al fa-am inokidos. Muchas protcinas específicas contienen además aminoicidos 1.-alfa derivados de algunos de los 20 aminoacidos basicos mediante procesos que tienen lugar después de la fbrtnacibn del esqueleto fundamental del polipéptido. Estos aminohcidos "poco habituales" satisfacen funciones altamente específicas de la proteína en cuestidn. El tipo de aminoácido, el orden en que se unen y su relación espacia1 mutua estableceii las estructuras tridimensionales y las propiedades biológicas de proteínas simples y son determinantes importantes de la estructura 4 fiinción de proteinas complejas que contienen aderntis de aininoácidos, hem, carbohidratos, Iípidos, ácidos nucleicos, etcktcra. Este capítuIo estudia las estructuras, propiedades fisicas, estereoquim ica, reacciones químicas y equilibrios iOnicos de los L-alfaaminoacidos presentes en las proteínas.

trastornos graves. Varias enfermedades genéticas. Telativamente raras, del catabolismo de arninoácidos (como la fenilcetonuria y la enfermedad dc la orina de jarabe de rnaple) producen, si no se tratan, retraso mental y muerte temprana. Otros padecimientos genkticos pueden deberse a la alteración de la capacidad para transportar aminoácidos específicos a las células. Dado que estos defectos de transporte por lo común causan una excreción urinaria exagerada de uno a más amino8cidos, a menudo se designan como aminoacidurias. Además de sus actividades como proteinas, los 1,-arninoacidos y sus derivados participan en runciones intraceIuIares tan diversas como Ia transmisión nerviosa, la regulación del desarro110 celular y en la biosintesis de porfirinas, purínas, pirimidinas y de urea. IdosI .-arninohcidos de pkptidos de peso moIecular bajo actúan como hormonas y tanto los aminoicidos ri como los l. esthn presentes en 10% antihioticos polipeptidos elaborados por microorganismos.

PROPIEDADES DE LOS

AMINOACIDOS

El código genético específica 20 L - a l f a - a m i n o á c i d o s
La alimentación humana debe coniencr cantidades adecuadas de 1 0 1,-alfa-aminoácidos esenciales, ya que, ni el ser humano ni los demás animales superiores pueden sintetizarlos en las proporciones necesarias para mantener el crecimiento infantiI o conservar la salud en los adultos. En forma de proteinas, los aminoAcidos realizin una multitud de funciones estructurales, hormonales y cataliticas esenciales para la vida. Por tanto, no sorprende que defectos genttícos en el metabolismo de los aminoacidos puedan conducir a Aunque existen más de 300 arninoácidosdiferentes en la naturaleza, sólo un subconjunta de 20 constituye las unidades monomericas a partir de las cuales se construye el esqueleto básico de las proteínas polipeptidicsts. Un cbdigo genetico de tres letras no repetidas podría incluir más de 20 arninoacidos, pero la redundancia en el código genetico universal limita los codones de arninohcidos disponibles a los 20 arnino8cidos L-alfa que se presentan en e1 cuadro 4-1. Por consiguiente, todas las proteinas contienen diferentes pro-

30

Bioquimic.a de Harper

(cupí6ul o 4)

r i i s d rn 4-1.r.-alfa-~m~no"ácidos presentes
--

en las proteina~i --

I

iula estrur

Alanina

Lc---.:-'.

I,eu [l

'
i

.

-

-

- .

I--. 2.3
2

m

I -..---- 9.8

Con crdcnas laterales que tienen grupos bidroxila [OH)

1 ;
I

Se?-

Scr FS'

nI

I

CkI2&.
OH

!
Treonina Tre 1 7

I

.NHI

l

i
2.1

~m~-CH-ch'1

I

9.1

Casi 13

.

Tir
Con cadenas laterales que contienen 4tomnr de azufr*

ci:

Cis [C

CH,-CH-

8.3

i
A

~n,-CH2-W S I

-. - -- Con cadenas laterales que contienen grupos hcidos o sus amidas I
A--

Metionina -

~

"

e [I t

2
1.u

,Y.Y

ÁCido asphrtil

o [

I

Asparagina

Asn

Ac ido gIuiárnico Glu [E

Glutamina

A -

1 :on cadenais IatcralejI que conti
NombriLI_- Silmbolo

-

u

Cuadro 4-f. t-milfa-Aminohcidos presentes en las proteínas (continuación) ---.*u..--. -A

'

.

"

A-----A

-."..".

1 A r e m1

1
1 istidina iue contiei

1

Lis 1

Fistidina

icos 1 VCase desputs

F

Tirosina

rolina

porciones de estos 20 L-alfa-aminoAcidos. Sin embargo, ciertas proteínas contienen, además, aminohcidos L-alfa "poco habituales" originados en algunos de los 20 aminoácidos básicos mediante un procesamiento postraslacional (o sea, un proceso que tiene lugar despues de la fomaci6n de un esqueleto de polipép tidos). Un ejemplo frecuente es la cistina, que se produce por oxidacibn a partir de los grupos S H de dos cistefnas para convertirse en una unibn -S-S(disulfuro). Otros aminoficidos modificados menos comunes o "poco habituales" tambidn cumplen funciones muy especificas en las proteínas donde se encuentran. Algunos casos de modificaciones postraslacionales son la metitación, la formilaci6n, la acetilacibn, la psenilacidn, la carboxilacibn y la fosforilacibn (capítulo 40).

En las proteínas sólo existen L-alfa-aminoácidos
Los aminohcidos contienen grupos funcionales amino y carboxilo. En un alfa-aminoAcido, ambos esthn unidos al mismo atomo de carbono (figura 4-1).

R-CI

NH,

COOH

R

o

Flgura 4-1. Dos representacionesde un alfa-aminoAcido.

(Capífulo 4)

Se dice que un átomo de carbono que tiene cuatro sustituyentes diferentes es un carbono quiral. Con excepcion de la glicina, para la cual R es un átomo de hidrógeno (figura 4-l), los cuatro grupos unidos al átomo de carbono alfa de los aminoácidoc son diferentes. Esta orientación tetraedrica de cuatro grupos distintos alrededor del carbono alfa le confiere actividad óptica (la capacidad de rotar el plano de la luz polarizada) a 10s aminoácidos. A~inque en las proteinas se han encontrado algunos aminoácidos dextrorrotatorios y algunos levorrotatorios a pI.1 7.0, todos tienen las configuraciones absolutas del bgliceraldehido por lo cual son L-alfa-aminoacidos. Dado que los u-aminoicidos existen en la naturaleza e inclusive en antibióticos polipeptldicos, ¿por q u e se encuentran sOlo L-aminoácidos en las proteínas? Los autores proponen la hipbtesis dc quc los L - a m i n o a c i d o s f u e r o n s e l e c c i o n a d o s por un fenómeno, en cierta manera fortuito, que tuvo lugar a vida. muy temprano durante la evolución de E

Figura 4-2. Estructura ionicamente correcta para un aminoacido a pH fisiológico o cerca de el (A). La estructura sin carga que se muestra en (B) no puede existir a ningún pH, pero es posible usarla por conveniencia cuando se describe la quimica de los aminoacidos

un grupo carboxilo estará presente como ion carboxi-

lato (R-COO-). Sin embargo, por conveniencia se utiliza la representación i 3 para numerosas ecuaciones en las que no intervienen los equilibrios protbnicos.

Los aminoácidos pueden tener carga neta positiva, negativa o cero
Los aminoácidos portan por lo menos dos grupos Bcidos débiles ionizables, un -COOH y un -NHq'. En solucibn, dos formas de estos grupos, una con carga y otra sin carga. existen en equilibrio protónico:
R-COOH R-NH3'

Las fuenas relativas de los icidos débiles se expresan en términos de su pK,
Las fuer7as relativas de los icidos dhbilec son expresadas en tkrminm de sus constantes de disociaci6n de ácidos, K,, o de su pK., que es simplemente el log negativo de la constante de disociación, esto es.

-

R-COO-

+ H'
El cuadro 4-1 enumera los valores de pK para los grupos funcionales presentes en los 20 arninohcidos de las proteinas. Por conveniencia, el subindice a en K, y pK, queda implicito, pero se omitirá de aquí en adelante. La figura 4-3 iIustra Ias formas protonadas de los grupos R imidazol de la histidina y el grupo R guanidino de la arginina. Ambos existen como híbri-

e R-NH2

+H '

R-COOH y R-NHit representan los miembros protonados o acídicos en estos equilibrios. El R-COOy el R-NH2 son las bases conjugadas (es decir, los aceptores dc protones} de los ácidos correspondientes. Aunque el R X O O H y el R-NHj' son Acidos dhhiles, el R-COOH es un acido con mayor fuerza que el R-NH]'. Al pH de1 plasma sanguíneo o del liquido intracelular (7.4 y 7.1, respectivamente), los grupos carboxilos existen casi enteramente como iones carboxilato, R--COO-. A estos valores de pH, la mayoría de los grupos amino estfin predominantemente en la f o m a proíonada, R-NH?'. Las especies ionicas prevalentes de los aminoácidos en la sangre y en la mayoria de los tejidos, deberán representarse como se muestra en la figura 4-2A. La estructura E3 (figura 4-2) no puede existir a ningún pH. En un pH suficientemente bajo para ionizar al grupo carboxilo, el grupo amino con el Bcido r n h débil tambien se protonaría. A un pH dos unidades por debajo de su pK,, un hcido estarh protonado aproxiniadamente 99 por ciento. Si el pH se eleva de manera gradual, el protbn del ácido carboxílico se perderh mucho tiempo antes que el del R-NH3'. A cualquier pH bastante alto para que predomine [a base conjugada sin carga del grupo amino,

NH

I C - NH,

!I

-

NM

1 0
C=NHi,

=

NH

i : . o
1:

I
N'%

G~NH,
NH2

ONH,

Figura 43. Hlbridos de resonancia de las formas protonadas de los grupos R de histidina y arginina.

dos de resonancia, por lo que se pueden representar como se muestra a la derecha, con la carga positiva distribuida entre ambos nitrógenos (histidina) o sobre P los tres nitrogenos (arginina). La carga neta (la suma algebraica de todos los gnipos con cargas positivas y negativas que se encuentran presentes en la moléculaj de un aminoacido depende del pH o de la concentraci6n de protones de la solucihn en que se encuentren. La capacidad de alterar la carga de los aminoáicidos o de sus derivados por manipuIacíón del pH facilita la separación fisica de aminoácidos, péptidos y proteínas.

En este ejemplo.

Este procedimiento es uti! para todos los aminoácidos con grupos disociables adicionales, como la lisina o la histidina. Qespuks de escribir las fórmulas para todas las especies cargadas posibles de los arninoacidos lisina y arginina, se observa que:

A su pH isoelectrico (pl), un aminoácido tiene una carga neta de cero
Para un aminohcido aIifático como la alanina, la especie isoeléctrica es la forma que se muestra en la figura 4 4 . El pH isoeléctrico es el pH que esta en medio de los valores de pK de ambos lados de la especie isoeléctrica. Para un aminohcido con s61o dos grupos disociables, no puede haber ambigüedad posible, como se muestra abajo en el cálculo del p l para la alanina. Dado que p K l (R-COOH) = 2.35 y pKz(R-NH,') = 9.69, el pH isoeléctrico (pl) de la alanina es:

El calculo del pl para un compuesto con más de dos grupos disociables tiene una posibilidad mayor de m o r . Por ejemplo, considerando la figura 4-5, ¿cuál podria ser el pH isoeléctrico (p1) para el Acido aspartico? Primero, se escriben todas las estructuras ibnicas posibles para un cornpiiesto en el orden en el cual se presentan cuando se va de una solución fuertemente acida a una solución alcalina (por ejemplo, para el ácido aspártico en la figura 4-5). A continuación, se identifica la representaci6n isoibnica, zwitterionica o neutra (como en la figura 4-58). El pI es el pH que esta en medio de los vaiores de pK de ambos lados de las especies isoiónica.

Para la Iisina, el pl es 9.7; para la arginina es 10.8. El ectiidiantc deberli determinar el pl para la histidina. Determinar por inspección de las estructuras cargadas, los valores de pK a ambos lados del zwitterion, no se limita a los aminoicidos. Puede ser aplicado al cálculo de la carga de una molécula con cualquier numero de grupos disociables. [,a capacidad de realizar cálculos de este tipo es valiosa en el laboratorio clínico para predecir la movilidad de los compuestos en los campos elkctricos y para seleccionar Iris arnortiguadores apropiados para Ias separaciones. Por ejemplo, un amortiguador a pH 7.0 podria separar dos moleculas con un pl de 6 y S, respectivamente, debido a que la molécula con pl = 6 tendrfi una carga negativa neta mayor a pH 7.0 que la molécula con pl = 8. Consideraciones análogas se aplican a la comprensión de separaciones sobre soportes ibnicos como las de polimeros con carga positiva o negativa (por ejemplo, celulosa DEAE o resina 1 Dowex).

La solubilidad y el punto de fusión de los aminoácidos reflejan su carácter iónico
Dado que los aminoácidos poseen múltiples grupos con carga, se solvatan con facilidad y, por tanto, son solubles en solventes polares como agua y etanol, pero insoluhles en solventes no polares como benceno, hexano y &ter.Sus elevados puntos de fusidn (> 200 "C) reflejan la gran cantidad de energía necesaria para romper las fuerzas iónicas que estabilimn la red cristalina.

O

II

Fiqura 4-4. Estructura isoeléctrica o "zwttteri6nica" de la alanina Aunque tiene carga, el zwitterlbn Presenta una carga neta igual a cero y por consiguiente no emigra en u n campo elkctrico de corriente directa.

LOS AMINOAGIDOS PUEDEN CLASIFICARSE POR LAS POLARIDADES DE SUS GRUPOS R
dividirse en dos Los aminoficidos proteinicos amplios grupos de acuerdo a la polaridad o no polari-

34

Bioquimica de Hurper

(Capítulo 4)

En actdo fuerte (menor de pH 1); carganeta=+ 1

Aproximadamente pH 3: carga neta = O

Aproximadamente pH6a8 carga neta = -1

En hlcali fuerte (arriba de p W i1); carga neta = -2

Figura 4-5. Equilibrio protbnico del Bcido asplrtico.

dad de los grupos R adheridos a los átomos de carbono alfa (cuadro 4-2). Las abreviaturas de una sola letra (cuadro 4-1) se emplean para representar secuencias extremadamente largas de arninoacidos (por ejemplo, para anotar la secuencia completa de aminoacidos en una proteína). Los aminoácidos que se encuentran en estados libre o combinado (pero no en proteinas} desempefían funciones importantes en los procesos metabólícos. Por ejemplo, la ornitina, la cimilina y el arginosuccinato participan en la formación de la urea. Hay mas de 20 u-aminohcidos en la naturaleza, los cuales incluyen D-alanina y D-glutamato de las paredes celulares de ciertas bacterias y varios D-aminoácidos de antibióticos.

LOS GRUPOS ALFA-R DETERMINAN LAS PROPIEDADES DE CADA AMINOACIDO
La glicina, el más pequefio de los aminoácidos, puede encajar en regiones de la estructura tridimensional de las proteinas inaccesibles para otros aminoácidos y se

Cuadro 6 2 . Ctasificaci6n de los alf fa-aminohcidos

presentes en las proteinas con base en su relativa liidrofilicidad (tendencia a asociarse con el agua) o hi dad (tcnd encia a asociarse a I qte no polar en lugar de agua) .
-

Lis- FIidrbfot.-

l

-

"

"

-

"~

. .. ..

. -

1' w : 3 . . c E , . -

A lanina F r:niIalanina 1solcucina

Lc M PI Ti Triptófano Valina

do aspártic o Áci do glutamico ,inina imagina Cisi:eina Glic:ina G lutamina

Histiclina
Cisinia
Serin. a 1 reoriína

encuentra en regiones donde tos pdptidos se doblan en forma aguda. Los grupos R alifáticos de alanina, valina, leucina e isoleucina y los gmpos R aromáticos de fenilalanina, tirosina y triptdfano son hidrof6bicos, propiedad que tiene consecuencias importantes para el ordenamiento de !as moldculas de agua de las proteinas que estan en la vecindad inmediata. Es tlpica la presencia de estos aminohcidos en el interior de proteinas citosólicas. Los grupos R con carga, de los aminoácidos básicos y acidicos, estabilizan las conformaciones proteínicas especificaspor intermedio de la formación de enlaces salinos. Por ejemplo, la rotura y reconsúucciSn de enlaces salinos que acompafla a la oxigenación y desoxigenación de la hemoglobina (capitulo 7). Además, los aminokidos con grupos Rde cargapositiva o negativa funcionan en los sistemas de "transmisibn de carga" que las transportan a distancias considerables durante la catálisis enzimática. Por último, la histidina tiene funciones unicas en la catalisis enzimática, debido a que el pK de su protón imidazblico le permite, a pH 7.0, funcionar alternativamente como base o como acido catalitico. El grupo alcohol primario de la serina y el grupo tioalcohot primario (-SI+) de la cistelna son nucleófi los excelentes y pueden funcionar como tales en muchos procesos de la catklisis enzimhtica. Aunque el alcohol secundario de la treonina es tambitn un buen nucleófilo, no se sabe que se comporte como taI en la catálisis. Además de su papel catalitico, el grupo 4 H de la serina y de la tirosina actúa en la regulación de la actividad de ciertas enzirnas cuya acción catatitica depende del estado de fosforilación de residuos seril o tirosil especificas. Los arninohcidos no absorkn la luz visible (es decir, son incoloros) y, con excepcibn de los arninoficidos aromaticos triptófano, tirosina, fenilalanina e histidina, tampoco absorben la luz ultravioleta de una longitud de onda mayor de 240 nm. Varios aminoAcidos, particularmente el triptdfano, absorben luz ultravioleta de longitud de onda de alta frecuencia (250 a 290 nm) (figura 4 4 ) . Aunque el triptofano es relativamente

dos también reaccionan, pero con mayor lentitud que un alfa-aminoácido. La prolina y la 4- hidroxiprolina producen un color amarillo con ninhidrina. La fluorescamina (figura 4 - 9 , un reactivo aun más sensible, puede detectar nanogramos de un aminohcido. Igual que la ninhidrina, S a fluorescamina f u m a un complejo con arninas de otros compuestos además de los arninoácidos.

VARIAS TÉCNICASAISLAN LOS AMINOACIDOS
Crornatog rafía
240
260
Longitud de onda (nm)

280

Figura 4 4 . Espectrode absorcidn ultravioleta del triptbfano, tirosina y fenilalanina.

poco común en la mayoria de las proteínas, contribuye de manera importante a la capacidad de muchas de ellas, para absorber h z en la región de los 280 nm.

En todas las separaciones cromatográficas, las moldculas son separadas dentro de una fase estacionaria y una rnbvil. La separacion depende de la tendencia !elativa de tas moléculas en la mezcla para asociarse con mayor fuerza a una o a otra fase. Aunque estas tkcnicas de separacidn se describen principalmente en reIaci6n con aminoácidos, su uso de ninguna manera está restringido a estas moléculas.

Cromatografía en papel

LA NlNHlDRlNA O LA FLUORESCAMINA DETECTA LOS AMINOACIDOS

La ninhidrina (figura 4-7) descarboxila por oxidación los alfa-aminohcidos a Coz, NN3 y un aldehido con un htomo de carbono menos que el arninoficido precursor. Luego, la ninhidrina reducida reacciona con el amoniaco liberado, formando un complejri azul que absorbe al rnkirno la luz a una longitud de onda de 570 nm. Este color azul es la base de una prueba cuantitativa para alfa-aminohcidos que puede detectar cantidades de aminoAcidos tan pequeflas como 1 pg. Otras arninas distintas a los alfa-aminoicidos también reaccionan con ninhidrina dando un color azul, pero sin liberar Coz. Por tanto, la formación de COZindica E a presencia de un alfa-aminohcido. El NH, y los pépti-

Para la cromatografia en papel, se coloca una gota de solucibn que contenga uno o mas aminokidos a unos 5 cm del borde de una tira de papel filtro. La tira se coloca en un vaso cerrado donde su extremo entra en contacto CUII un solvente, generalmente un alcohol de bajo peso molecular en solución saturada con agua que contiene un ficido o una base. Despds de la migración del solvente sobre el papel, se seca la tira, se trata con ninhidrina en acetona y se calienta un poco; entonces las posiciones de los arninoácidos aparecen como puntos de color purpura (figura 4-9). Los aminoácidos con grandes cadenas laterales no polares (Leu, Ile, Fen, Tri, Val, Met, Tir) emigran m& que los que tienen cadenas laterales mas cortas no polares (Pro, Ala) o cadenas laterales polares (TE, Glu, Ser, Arg, Asp, His, Lis, Cis) (figura 4-9). Esto

Figura 4-7. Ninhidrina.

Figura 4-8. Fluorescamina.

(Capítulo 4)

sentidode rnigracibn
del solvente

1
*
)

1

-origen

Cis

fases liquidas: una estacionaria y otra móvil de polaridad diferente, conforme la fase móvil pasa sobre [a estacionaria. La separacidn se produce por la diferencia de solubilidad de los componentes en las fases estacionaria y móvil. En la CCFP nonnal, la fase ectacionana es el componente más polar. El solvente desarrollado contiene ambos elementos: polares y débilmente no polares, típicamente agua, un alcohol de 4 o de 5 carbones y
un Acido débil o una base débil como ácido acético o arnoniaco. Conforme se desplaza sobre la placa de apoyo, el solvente cambia de composición debido a los elementos más polares que acornpairan a los grupos - O H polares de la celulosa. Por tanto, el solvente que avanza paulatinamente se convierte en más no polar. Los componentes más no polares de una mczcIa se desplazan mLs lejos que los componentes mas polares de igual tamafio. Por ejemplo, el glutamato y la lisina se retardan, en tanto que la leucina y la valina migran junto con el solvente. En la CCFP en "fase reversa", tanto las polaridades de las fases como las movilidades de los componentes de la mezcla se revierten respecto a la CCFP normal. La fase móvil suministra la fase polar. La fase estacionaria, por lo común celulosa recubierta con un líquido no polar como el aceite de silicon, suministra la fase más no polar. En contraste con la CCFP normal, los componentes polares rnigran con el solvente en tanto que se retrasa el desplazamiento de los componentes menos polares. En la CCF de absorción (CCFA), la separacidn se basa en un principio totalmente diferente. La resolucibn implica absorber los componentes de la mezcla en gel de sílice que se calienta para expulsar toda el agua fija. La fase móvil, típicamente una mezcla simple o binaria de calventes organices, desplaza los compuestos absorbidos compitiendo por los sitios de unibn sobre el gel de sltice. Primero se desplazan los componentes unidos con menor firmeza y asf se logra la resolucibn.

-Iir
Met

4
Tri
'

Figura 4-9. ldentificacibnde los aminoAcidos presentes en las proteínas DespuBc de crornatwrafia descendiente en papel, en A-butanol. ;ícido acético. agua, las manchas fueron vistas al añadir ninhidrina

refleja la mayor solubilidad relativa de las moltculas polares en la fase estacionaria hidr6fila y de las moI&culas no polares en solventes orgánicos. Para una serie no polar (Gli, Ala, Val, Leu), a mayor longitud de !a cadena lateral no polar se incrementa su caracter no polar lo cual aumenta su movilidad. La relacibn entre la distancia recorrida por un aminohcido con la distancia que viaja ei solvente, medidas ambas desde el sitio marcado para la aplicacibn de la rne7cla de arninoácidos, se designa como valor RF (movilidad relativa con el solvente) de ese aminohcido. Los valores RFpara un aminohcido dado varían de acuerdo con las condiciones experimentales, por ejemplo, según solvente usado. Aunque es posible identificar es tentativamente un aminohcido s61o por su valor RF, preferible hacer la cromatografia estandar de aminoácidos conocidos de manera simultáneacon la mezcla desconocida. Luego, la movilidad puede expresarse en relacion a la de uo esthndar (es decir, como RI,m8s que como Rf). Las movilidades expresadas como relativas a un estAndar varían menos que los valores Rf de un experimento a otro.

Cromatografía de intercam bia ionico
El anhlisis de los residuos de aminolicidos despuks de la hidrólisis de un polipéptido, por la general involucra a la crornatografía automatizada d e intercambio i6nico. La separación, identificación y cuantiticación completas requieren menos de tres horas. EI procedimiento de Moore y Stein utiliza una columna corta y una larga las cuales contienen la forma ionizada de Na" de una resina de poliestireno sulfonatada. Cuando e 3 ácido hidrolizado a pH 2 se apZica a las columnas, los arninoácidos se unen mediante el intercambio de cationes con el catión Na'. Las columnas se eluyen despues con citrato de sodio bajo condiciones prede-

Cromatografía en capa fina
Hay dos tipos distintos de cromatografia en capa fina (CCF): CCF de partición (CCFP) y CCF de absorción (CCFA). En Ia CCF de partfcion, la resolucibn implica

particihn de los elementos de una mezcla entrz dos

Aminoácidos

* 37

terminadas de pH y temperatura. El material eluido se hace reaccionar con la solucibn de ninhidrina y las densidades de la coloración se miden en un colorimetro de flujo. Los datos aparecen en un tubo de sayos catbdicos con integración relacionada con cornputadora de las áreas pico (figura 4-1 0 ) .

Electroforesic de alto voltaje (EAV)
Las separaciones de aminoacidos, polipkptidos y otros anfhlitos (moléculas cuya carga neta depende del pH del entorno) en un campo el6ctrico de corriente directa tienen extensa aplicación en bioquimica. Para los aminoCicidos. las hojas de papel o capas finas de celulosa en polvo son las que se usan Con mayor frecuencia como soportes inertes. Para poliptptidos grandes o proteínas, se emplea gel de poliacrilamida con enlaces cruzados. Para oligcimeros de nuclehtidos se utilizan soportes de agarosa y poliacrilarnida. Las separaciones dependen de la carga neta del anfólito y del peso molecular de los compuestos que seran separados. Para molécuIas con carga idéntica, la de peso molecular más bajo emigra más lejos. Sin embargo, la carga neta es el factor mas importante que determina la separación. Esta técnica es htil para aminohcidos, polipeptidos de peso molecular bajo, ciertas proteínas, nucleótidos y fosfoazúcares. Las muestras se aplican a! soporte, que a continuación se humedece en una solución amortiguadora de un pH apropiado y se pone en contacto con reservorios de amortiguador

mediante tiras de papel. El papel puede cubrirse con una placa de vidrio o sumergirse en un hidrocarburo refrigerante. Al aplicar lacorriente, las mol&culascon carga negativa neta al pH seIeccionado, emigran hacia el Iinodo y aquellas con carga positiva neta, hacia el chtodo. Para visualizar la separacidn, el electroferograma ya seco es tratado con ninhidrina (aminohcidos, péptidos) o expuesto a la liiz ultravioleta (nuclebtidos). La elección de pH es dictada por los valores de pK de los grupos que se disocian en las rnol&culasde la mezcla.

LOS GRUPOS FUNCIONALES DETERMINAN LAS REACCIONES QU~M~CA DE S LOS AMINOACIDOS
Los grupos funcionales que poseen los aminoácidos gobiernan las reacciones quimicas en las que participan, las funciones Bcidas alfa-amino y alfa-carboxílica y los grupos Funcionales presentes en los grupos R. Cada grupo funcional puede participar en todas sus reacciones químicas características. Estas reacciones incluyen para los grupos del Iicido carboxílico, la ionización y ia formación de &teres. amidas y anhidridos ficidos. Estas reacciones incluyen la ionizaciiin, la acilacibn y la esteri ficacibn d e grupos amino, oxidacibn y alquilación de grupos -SH, y esterificacibn de grupos -OH, etcétera.

Figura 4-10. Anhlisis automatizado de los aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteínas. Los arninoacidos se adsorben en una resina intercambiadora de cationes en una base de poliestireno, Dowex 50, se eluyeron con amortiguadores del pH indicado, se sometieron a reaccidn Con ninhidrina y se registr6 la absorbencia a 570 y 440 nrn (para detectar prolina). Las hreas máximas son proporcionales a la canttdad existente de cada aminoácido. Una columna corta (A) determina arninoAciUoc bastms a pH 5.28. La elución de una columna mBc larga (B) a pH 3.25 y 4.25, identifica los amino8cidos restantes. El aminohcido no proteinico norleucina sirve como estBndar intenso

38

Bioquímica de Hurper

comprender la conversion previa en un cloruro de acido. En los procesos biolbgicos, la activación comprende una condensación inicial con ATP con la formacibn de un am inoaciladenilato.

RESUMEN
Sblo los L-alfa-aminoácidos forman las protelnas, aunque en la naturaleza existen o-aminoácidos y no al fa-aminoácidos. Todos los aminoácidos poseen por lo menos dos grupos funcionales acidos débiles, RNHH y R-CQOH, que, para los arninoacidos protelnicos, residen en el átomo de carbono alfa. Adernas, estos y otros grupos funcionares hcidos ddbiles ( 4 H , -SH, guanidino, imidazol) determinan que la carga neta en un aminoácido varíe con el pH. Por tanto, los arninoacidos son anfhlitos cuya carga neta a un pH dado depende de los valores de pK, de sus grupos funcionales. El pI es el pI4 en el que un amínohcido tiene e mueve en un una carga neta igual a cero y por ende no s campo elkctric~ de corriente directa. AdernBs de determinar las relaciones de carga y las clases de reacciones qulmicas que un aminohcido experimentará (por lo cual la formación del enlace peptidico es de suma importancia}, los grupos R y sus funcionalidades definen las funciones bioauimicas únicas para cada aminohcido. Las funcionalidades del grupo R proporcionan también una base para clasificar a los aminoácidos como básicos, ácidos, aramhticos, alifáticos y con contenido de azufre. Después de la separacion de mezclas de aminohcidos por particihn o cromatografia de intercambio iónico, estos compuestos pueden detectarse y cuantificarse por su reaccibn con ninhidrina. E

Figura 4-1 1. Aminoicidos unidos por un enlace peptídim (porei6n sombreada).

LA REACCION MAS IMPORTANTE DE LOS AMINOACIQOS ES LA FORMACIÓN DEL ENLACE PEPTIDICO
En principio, la formacion del enlace peptídico comprende la eliminacion de un m01 de agua entre el grupo aIfa-amino de un aminoácido y el grupo alfa carboxilo de un segundo aminoácido (figura4-11). N o obstante, esta reacción no procede en esta direccibn, ya que la constante de equilibrio favorece con firmeza la hidrólisic del enlace peptídico. Para sintetizar la unibn entre dos aminohcidos, primero debe activarse el grupo carboxilo. Desde el punto de vistaquimico, esto puede

REFERENCIAS
Barrett GC: Chemistty and Biochem~s~ty o f rhe Amino Acids. Chapman & Hall, 1985. Davies JS: Amzno A c ~ d sand Peptides Chapman & Hall. 1985. Gehrke CW et al.: Amino Acid Analysis by Gas Chromatography. 3 vals. CRC Press, 1987.

Hancock WS: llandbook o f IfPLCJnr the Sepuratinn o f Amino Acids, Peptides, and Proteins. 2 vols. CRC Press. 1984. Hugli TE: Teckniques rn Protein C'herrnisfry.Acadcmic Press, 1989.
Rattenbury 1981.

JM: Amrno Acid

Analysis. Halstcad Press,

Péptidos
. .

Vicior W. Rodwell, PhD

La polimerización de los L-alfa-aminoácidos por enlaces peptidicos constituye el marco estructural para las proteínas. Este capitulo describe las características de estos enlaces, las propiedades de los péptidos, los m&todos para deteminar la estructura primaria de los mismos y de las proteínas así como las tdcnicas para la sintesis de péptidos.

LOS L-ALFA-AMINOACIDOSSE UNEN MEDIANTE ENLACES PEPT~DICOS PARA FORMAR LOS PEPTIDOS
En la figura 5-1 se muestra un tripkpcido constituido por alanina, cisteina y valina. Advierta que un tripdptido es aquél formado con tres residuos. no con tres enlaces peptidicos. Por convencion, las estructuras peptidicas se escriben con el residuo amino-terminal (el residuo con un gmpo de alfa amino libre) a ta izquierda y con el residuo carboxiío terminal (et residuo con un gmpo alfacarboxiIo libre) a laderecha. Este péptido tiene un solo grupo alfa amino libre y un solo grupo a3fa carboxilo libre. Sin embargo, en algunos péptidos, los grupos terminales arnino o carboxilo pueden derivarse (por ejemplo, una amina N-fomilo o una amida del gmpo carboxilo) y por tanto no están libres.

Idos pdptidos tienen un enorme inteds biornédico, en particular para endocrinologia. Muchas de las hormonas son péptidos y pueden suminislrarse a los pacientes para corregir deficiencias (como la administración de insulina a pacientes con diabetes sacarina). Ciertos antibibticos son peptidos (por ejemplo, la valinomicina y la gsamicidina A), igual que algunos agentes antitumorales (como la bleomicina). Por su parte, el dipéptido aspartame se utiliza como edulcorante en muchas bebidas. La dpida síntesis quirnica y la tecnologia de recombinacibn del DNA facilitan la producción de cantidades sustanciales de hormonas peptídicas que en el cuerpo existen solo en concentraciones rninimas, por lo cual son dificiles de aislar en cantidad suficiente para usarse en teraptutica. La misma tecnologia permite la slntesis de otras péptidos, también disponibles de fuentes naturales, pero solo en cantidades pequeilas (es e E caso de ciertos peptidos y proteínas viralec), para usarse en vacunas.

Alanil

Cisteinil

Valloa

Figura 5-1. Fbrmula estructural de un tripkptido. Los enlaces peptídicos están sombreados para enfatizarlos.

Las estructuras de los péptidos son fáciles de representar
Por conveniencia, los peptidos se representan con su terminal amino a la izquierda y la terminal carboxilo a la derecha de la página. Para mostrar las estructuras de los péptidos, primero se dibuja la cadena principal o esqueleto y en seguida se agregan los grupos R apropiados. Escriba un zig-zag formado a partir de la secuencia de Atomos que se repite en el esqueleto o cadena principal: alfa-nitrbgeno, alfa-carbono, carbiin carbonilo.

alanilo, aspartilo, tirosilo). Los ptptidos reciben su nombre como derivados de la terminal carboxilo del residuo aminoacilo. Por ejemplo, el tmapéptido LisLeu-Tir-Gln se denomina como derivado de la glutamina y se le llama lisil-leucil-tirosil-glutamina. La terminación -ina en la glutmina indica que su grupo atfa-carboxilo no participa en la formación del enlace del péptido.

La estructura primaria afecta la actividad biológica
La mutación del DNA que altera codones puede producir la inserción de grupos aminoacilo inapropiados en un polipkptido o proteina. Aunque a menudo no tiene el mayor efecto biolbgico, en ocasiones incluso una sola sustitución puede reducir o abolir la actividad bioE6gica con efectos resultantes leves (es el caso de la intolerancia al alcohol en muchos asihtiticos) o mhs serios {como la enfermedad de ckluIas falciformes). Muchos errores metab6licos hereditarios comprenden un cambio sencillo de este tipo. Ai respeczo. b s nuevos mdtodos para determinar la estructura proteinica y del DNA han incrementado de manera notable la comprensión de la bioquimica de numerosas enfermedades metabolicas hereditarias.

Después, se completan las terminales atnino y carboxilo, se agrega un hidrogeno a cada uno de los alfacarbonos y a cada nitrógeno del pbptido; ademhs se añade oxígeno a los carbonos carbonilos.

Para dar nombre a los aminoácidos existentes en los péptidos se utilizan abreviaturas
Por ultimo, se incluyen los grupos R apropiados (con sombra) a cada átomo de alfa-carbono.

l C /c\ /N\ \ / COQN C

Se utilizan las abreviaturas de 3 y de 1 letras de los aminolicidos (cuadro 4-1) para representar las esmcturas primarias (figura 5-2). Las abreviaturas de tres letras ligadas por líneas rectas, qresentan una estructura primaria conocida e inequlvoca. Estas líneas se omiten para las abreviaturas de una sola l&a. Cuando hay
incertidumbre acerca del orden preciso de una porción de un polipkptido, los residuos en duda se encierran en parentesis y separados por comas (figura 5-3).

/ c\
/ Ci-h

H

O

l

H/C\cY I

Numerosos péptidos tienen actividad fisielogica La secuencia de aminoácidos determina la estructura primaria de un péptido
Cuando el número, estructura y orden de todos los residuos de aminoácidos en un polipéptido se conocen, su estructura primaria ha sido determinada. Los aminoácidos cuyos grupos alfa-carboxilo participan en la formacibn de los enjaces del péptido se designan "residuos aminoacilo". Estos se denominan mediante la sustitucibn de las terminaciones -ato o -ina de los arninohcidos libres, por la terminación -ilo (como

Las cklulas animales, vegetales y bacterianas contienen diversos polipkptidos de peso molecular bajo

Glu-Ala-Lis-Gli-Tir-Ala

E A K G Y A
Figura 5-2. Representacibn de 3 y 1 letra de un hexapbptido.

Figura 53. Heptapeptido que contiene una regidn de estruci tura primaria incierta (en el parbntesis)

(3 a 100 residuos aminoacilos) que tienen actividad fisioldgica importante. Algunos, incluyendo la mayoría de las hormonas polipeptidicas de tos marniferos, contienen solo enlaces peptidicos formados entre los grupos alfa-amino y alfa-carboxilo de los L-aifa-aminohcidos de las protelnas. Sin embargo, en los polipéptidos también pueden existir aminoacidos o derivados de aminohcidos proteinicas adicionales. El glutatihn (figura 541,en el cual el glutamato amino-terminal estB enlazado a la cisteína por un enlace alfa no peptidico, es requerido por varias enzimas. El glutatión y la enzima glutatibn reductasa participan en la forrnacibn de los puentes disulfuro correctos de numerosas hormonas proteinicas y polipeptidicas así como tarnbidn en el metabolismo de los xenobióticos (capitulo 6 1). Los antibióticos polipeptidicos elaborados por hongos contienen aminohcidos D y L así como otros no presentes en las proteinas. Ejemplos son la tirocidina y la gramicidina S, polipkptidos clcIicos que contienen n-fenilalanina y e[ aminohcido no proteinico ornitina. La hormona liberadora de tirotropina (TRH, del inglds, flyrotropin-releming hormone} (figura 5-5) ejemplifica otra variante más. El glutamato amino-termina1 experimenta ciclizaci6n a hcido pirogluthmico y el carboxilo del propilo carboxilo terminal se arnida. Un polipéprido de mamífero puede contener más de w n +pido con actividad fisiol6gicapotente. Denm de la estructura primaria de la beta-lipotropina (hormona hipofisaria que estimula la liberación de hcidos grasos del tejido adiposo) hay secuencias de aminohcjdos que son comunes a otras hormonas polipep-

Flgura 5-5. TRH (pir~lutamilhistidiIprolinamida).

tidicas con actividades fisioldgicas diversas (figura 54). El poli@ptido grande es un precursor de los poIipkptidos menores.

Los peptidoc con polielectrólitos
El enlace peptidico (mida) no estA cargado a cualquier pH de interés fisiolligico. Por tanto, la forrnacibn de péptidos a partir de arninohcidos a pH de 7.4 se acompafia de una pérdida neta de una carga positiva y una negativa, por cada en!ace peptidico formado. No obstante, a pH 5siolbgico los peptidos son maléculas con carga debido a sus grupos R ácidos o básicos.

El enlace peptidico tiene carácter de enlace doble parcial
Aunque los péptidos se representan con un enlace sencillo que conecta los htomos alfa-carboxilo y alfanitrdgeno, este enlace tiene en realidad un caracter de doble ligadura parcial (figura 5-7). No posee libertad de rotación alrededor de[ enlace que conecta a los htomos C y N. En consecuencia, los cuatro iitornos mostrados en la figura 5-7yacen en el mismo plano, esto es, son coplanares. Esta semirrigidez tiene consecuencias importantes para órdenes de estructura proteínica superiores al primer nivel. Por el contrario, hay plena libertad de rotacibn alrededor de los enlaces remanentes del esqueleto polipeptidico. En la figura 5-8, que resume estos conceptos, los enlaces que tienen rotación libre estan circundados por flechas y los átomos coplanares se han sombreado.

O II

CH,
I
II

H 1 I COO -

7%
I

/C\N/CH\C/N\CH, CHz 1 I

Las fuenas no covalentes restringen
O

H

la conformación de los péptidos
Un polipkptido puede tener un gran número de conformaciones (disposiciones espaciales). Sin embargo, en solución tiende a predominar un número mucho menor de conformaciones. Estas conformaciones favorecidas resultan de factores como bloqueo espacial,

H-C-NH~+
COO -

Figura 6 4 . Glutatibn (gamma-giutarnilcisteinil-glicha).Obsérvese el enlace ara no peptldiw que une a la Glu con Cis

42

a

Biogulmica de H a r ~ e r

(Capitulo 5)

Metioninaencefalina

Figura 54. Estructura primaria de la beta-lipotropina. Los residuos 41 a 58 son la hormona estimulante de los melanocitoc (0-MSH). Los residuos 61 a 91 mntienen las estructuras primarias de las endorfinas sefíaladas.

interacciones coulómbicas, puentes de hidrhgeno e interacciones hidrbfobas. T m t o para que las proteinas, como para que los poli@ptidos (capítulo 6) tengan actividad fisiológica se reqviercn ~onformaciones específicas.

El m g o de variacibn de los residuos no consewados de una proteína entre especies indica la divergencia de

SECUENCIACI~N PROTE~NICA: DETERMINACION DE LA ESTRUCTURA PRIMARIA

La comparación de las secuencias de
los peptidos muestra residuos clave e interrelaciones filogenéticas
La comparacibn de las estructuras primarias de una proteína determinada entre organismos con reIacibn distante, proporciona indicios vitales respecto al modo en que una proteína puede servir como componente del citoesqueleto, transportador de electrones o catalizador.

Ffgun 5-7. La estabilrzacibn por resonancia del enlace peptidico le confiere un cardcter de doble enlace parcial, de ahi la rigidez en el enlace C-N.

Ftgura 5 4 . Dimensionesde una cadena polipeptidica completamente extendidas. Los cuatro $tomos que se encuentran en las áreas sombreadas, las cuales son coplanares, comprenden al enlace polipeptidico Los átomos en las áreas no sombreadas son los átomos alfa carbono, alfa hidrbgeno y el grupo alfa R de un aminofiado en particular. La libre rotacibn puede producirse alrededor de los enlaces que unen el alfa carbono con el alfa nitrbgeno y las funciones del alfa carbonilo (flechas azules). La cadena de polipéptido extendida es asi una estructura semirrigida con dos teroeras partes de los Btomos de la estructura unidos en una relación planar fijada La distancia entre los Btomos alfa carbono adyacentes es de 0.36 nm (3.6 A) También se muestra la distancia interatbmica y los Angulos de enlace, los cuales no son equivalentes (Redibujada y reproducida con autoriracibn de Pauling L, Corey LP. Branson HR, The structure o€ proteins Two hydrogen-bonded helical configurations of the polypeptide chain. Proc Natl Acad Sci USA 1957;37:205.)

las mismas durante la evolucibn. Las relaciones evolutivas estrechas se vinculan con un alto grado de semejanza de las secuencias. mientras que las relaciones mas distantes corresponden a más diferencias en las secuencias. Esta interrelacibn, que primero se documentb en el iibicuo residuo 104 a 1 11 del polipeptido transportador de electrones citocromo c, se mantiene como verdadera en un número cada vez mayor de proteinas.

Sanger fue el primero en secuenciar un polipéptido
Casi cuatro ddcadas han transcurrido desde que Sanger detenni116 la estructura primaria completa de la hormona polipeptidica insulina. La idea de Sanger h e separar primero las dos cadenas polipeptídicas, A y 0, de la insulina y entonces convertirlas, mediante separación enzimhtica especifica, en péptidos más pequeílos que contuvieran regiones de secuencia sobrepuesta. Utilizando el reactivo l -fluoro-2,4-dinitrobenceno (figura 5-9), entonces removio e identificó, uno en cada ocasibn, los residuos aminoterminales de los aminokcidos de estos pkptidos. Por medio de la comparación de las secuencias de péptidos sobrepuestas. fue capaz de deducir una estructura primaria inequívoca para ambas cadenas, A y B. Las siguientes dos tkcnicas han revolucionado la determinación de las estructuras primarias de los polipkptidos (proteínas). La primera fue la introducci6n por Edman, en 1967, de un procedimiento para la separacion e identificación automfitica de residuos ítmino terminales de aminoácidos asi como sus derivados feniltiohidantoinicos. La segunda fue la introducción independiente por Sanger y por Maxm y Gilbert de tkcnicas para la secuenciación rápida del DNA. En la actualidad, la estrategia óptima consiste en utili7ar ambas técnicas de manera simulthnea.

Los peptidos se purifican antes

del análisis
Los datos de secuenciacion de los pdptidos serlan ininterpretables a menos que la homogeneidad peptídica. valorada por EGPASDS. excediera de 95 por ciento. Por tanto, los pkptidos deben purificarse primero mediante tkcnicas convencionales de purificacibn de proteínas (capitulo 8 ) .

Por lo general primero se determina la composición de los aminoácidos
1,a determinación de los aminoácidos que componen un péptído, por lo general, se lleva a cabo antes de iniciar la secuenciacion, para identificar los posibles escollos y, de manera subsiguiente verificar los datos de secuenciacidn. Primero se rompen los enlaces peptldicos que unen a los aminohcidos por hidrólisis. Luego, los aminoicidos liberados se separan e identifican por LLAR o cromatografia de intercambio i6nico. Ningun procedimiento hidroliza pkpcidos de manera total sin algunas pdrdidas. El mdtodo de: eIeccibn es la hidrdlisis de muestras repetidas en HCI 6N a 110 "C en tubos de vidrio sellados al vacío por 24, 48,72 y 96 horas. Esto destruye todos los Tri y Cis, y si estan presentes iones rnetblicos, se pierde algo de Met y Tir. I,a recuperacibn de Ser y Tre es incompleta. Los enlaces Val-Val, Ile-[le, Val-Ile e Ile-Val, son muy resistentes a la hidrdlisis, en tanto que Gln y Asn son desarninados a GIu y d s p . ¿Cómo se superan estas dificultades? Antes de la hidrdlisis, la Cis se convierte en hcido cisteico, un derivado ácido estable. El Tri se mide desputs de la hidrdlisis bhsica, proceso que destruye a la Ser, Tre, Arg y Cis. Los datos de Ser y Tre se extrapolan al tiempo cero de la hidrdlisis. La Val y la t e u se determinan de datos obtenidos a las 96 horas. Sobre los hcidos dicarboxilicos y sus arnidas se informan de manera colectiva como "Glx" o "Asx". Por ultimo, dado que las proporciones relativas de cada aminohcido deben expresarse en números enteros, las fracciones decimales se redondean al nhrnero entero más próximo.

Las estructuras primarias de los polipéptidos se determinan por la técnica automatizada de Edman
Dado que numerosas protelnas están constituidas por más de una cadena polipeptidica ligada por fuerzas no covalentes o pos puentes disulfuro, es posible que el primer paso sea disociar y separar las cadenas poli-

Figura 5-9. Reacción de un arnino~cidocon 1-fluoro-2,4dinitrobsnmno (reactivo de Sanger). El reactivo recibe ese nombre en honor del bioqulmico Frederick Sanger, laureado con el premio Nobel en 1958. quien lo us6 para determinar la estructura primarta de la insulina.

peptídicas individuales. Los agentes desnaturalizantes como ta urea o el clorhidrato de guanidina destruyen los puentes de hidrógeno, y disocian polipéptidos unidos de modo no covalente. Por su parte, los agentes oxídantes y reductores rompen los puentes disulfuro (figura 5-1 0). Entonces los polipCptidos son separados pos cromatografia.

anhidrido citracbnico (una reacción reversible) para cambiar su carga de positiva a negativa, ahora la tripsina se separa solo despues de Arg. La obtención de residuos de arginina es menos útil, debido a la abundancia relativa de residuos de lisina. No obstante, resulta de utilidad en la divisihn subsecuente de fraprnentos obtenidos con CNBr.

Los polipéptidos largos se fraccionan antes de su secuenciación
[,os instrumentos automáticos mas eficaces para Ia obtencibn de secuencias (secuenciadores) operan sobre polipéptidos de 20 a 60 residuos de longitud. Por tanto, es deseable una partición especifica y completa en sitios relativamente raros. Los reactivos siguientes cumplen con este requerimiento.

C. o-Yodosobenceno
El o-yodosobenceno fracciona los relativamente escasos residuos de Trí-X. No se requiere una proteccibn previa de los demas residuos.

D. Hidroxiiamina La hidrox i larn ina separa los enlaces comparativamente raros de Asn-Gli, aunque por 1 0 general no
da resultados cuantitativos.

A. Bromuro de cianógeno (CNBr)
Inicialmente, los residuos de cisteina son modificados con ácido yodoacético. Despuks, el CNBr rompe en el lado COOH de la Met. Puesto que la metionina es comparativamente escasa en los polipéptidos, por lo general se producen fragmentos peptidicos dentro de los limites de tamafio deseado.

E. Proteasa V8
La proteasa V8 de Staphylococcus aureus separa los residuos Glu-X-pdptido con preferencia por condiciones en que X es hidrdfobo. La uni6n Glu-Lis resiste el fraccionamiento. Esta reaccibn es útil para la degadacibn subsecuente de fragmentos obtenidos con bromuro de cianógeno.

B. Tripsina
La tripsina rompe el lado COOH de los residuos Lis

y Arg. Si los residuos de lisina son obtenidos con

F. Hidróiisis con ácidos moderadamente débiles
Esta separa el enlace raro ~sp-!+o.

La secuenciación requiere de múltiples digestiones
Las 2 o 3 digestiones del polipdptido original, normalmente en Me[, Tri, Arg y Asn-Gli, combinadas con subdigestiones apropiadas de los fragmentos resultantes, por lo general permitir& la determinacibn de la estructura primaria completa del polipeptido. Exceptuando algunas dificultades extraordinarias en la purificacibn de los fragmentos, kstapuede efectuarse con unos pocos micromoles del polipéptido.

LAS MEZCLAS DE PÉPTIDOS DEBEN SEPARARSE ANTES DE LA SECUENCIACI~N
La purificación de fragmentos se logra principalmente por filt~aci6nen gel en iicido acético o fbmico por cromatografia liquida de alto rendimiento de fase invertida (CLAR) o por cromatografía de intercambio i6nico en fosfocelulosa o en sulfofenil-Sephadex en soluciones de k i d o fosfbrico.

Figura 5-10. Separacibn oxidativa de cadenas polipeptldicas adyacentes enlazadas por puentes disulfuro (sombreado) por Bcido perfbrmrco (lzqulerda) o la separacidn reductiva con beta-mercaptoetanal (derecha) forman dos pbptidos que incorporan residuos de Acido eisteico o de cisteinilo, respectivamente.

A. Cromatografia de intercambio iónico y electroforesis de alto voltaje (EA
Estas técnicas (capitulo 4), que separan con base en la carga, se adican a polipkptidos de peso molecular bajo y también a aminoácidos. El valor de pK para el grupo carboxilo-terminal del hcido alfa-carboxilico de un polipéptido es más alto que el del grupo alfacarboxilo en el aminoAcido correspondiente (es decir, el COOH peptídico es un hcido mas dkbil). De m a n e p inversa, el grupo amino-terminal es un ácido rnhs fuerte (tiene un pK menor) que el aminoacido del cual proviene.

someten a etectroforesic en presencia del compuesto desnaturalizante dodecilsulfato sbdico (SDS). Ea molécula con carga negativa CH3-(CH2)ii-S012recubre a los pkptidos en la proporcibn aproximada de un SDS por cada dos enlaces peptidicos. Esto "sumerge*' la carga original de la proteina, volviendola fuertemente negativa. Así, las separaciones subsiguientes se basan de manera primaria en el tamaflo molecular. El EGPA-SDS se usa de manera extensa para determinar los pesos moleculares de péptidos por comparación de sus movilidades con la de esthdares de pesos moleculares conocidos.

B. Filtracibn en gel
La secuenciación automatizada utiliza cantidades pequeiias de polipéptidos grandestde30 a 100 residuos). Sin embargo, muchos polipkptidos de peso molecular alto desnaturalizados pueden ser insofubles debido a la exposicibn de residuos hidrófobos antes escondidos durante la desnaturalimciiin. Aunque la insolubilidad puede resolverse con urea, alcoholes, hcidos orgánicos o bases, estos restringen el uso subsiguiente de tCcnicas de intercambio ibnico para la purificacibn de péptidos. Sin embargo, la filtración en gel de ptptidos hidrbfobos grandes puede llevarse a cabo entre hcido formico o acético, I y 4 molar. Esta tkcnica separa moliculas de tamaflos diferentes con base en su exclusión o inclusión en los poros de un filtro molccular como Sephadex.

Para la secuenciación se utiliza la reacción de Edman
La secuenciación automatizada utiliza el reactivo de Edman, fenilisotiocianato. La reaccion de secuencia (figura 5-1 1) libera el aminohcido arnino-terminal como un derivado de la feniltiohidantoina, el cual se identifica mediante C LAR. E! prbximo arninoálcido por secuenciar entonces se deriva y se elimina; luego se repite el proceso. Una secuencia de 30 a 40, o, en ocasiones, 60 a 80, residuos aminoácidos se determina en una operación continua. Las reacciones de Edman se llevan a cabo en una pelicula delgada sobre la pared de una cámara de reaccibn giratoria o en una matriz s61ida a la cual el carboxilo terminal del pdptido se ha acoplado de manera covalente. La secuenciación en fase gaseosa, una técnica en fase sblida, emplea reactivos gaseosos y facilita la remoción de productos gaseosos. Los metodos de secuenciacibn en fase sólida son aplicables a cantidades muy pequefias de péptidos, en algunos de hasta 1 pg.

C. CLAR de fase invedida
Una tdcnica potente para la purificación de péptidos no polares de peso molecular grande es la cromatografia líquida de alto rendimiento en material no polar con elucibn mediante solventes polares (CLAR de fase invertida). La filtracibn en gel y la CLAR de fase invertida se emplean juntas para purificar las mezclas complejas de péptidos obtenidas por digestibn parciai de proteinas.

Deben secuenciarse varios péptidos sobrepuestos
Conocer la secuencia de todos los peptidos CNBr de una proteina no proporciona, por si mismo, su estructura primaria completa ya que no se sabe el orden en que estos péptidos se encuentran en la proteína. Para deducir una estructura primaria inequívoca tambikn deben prepararse y cecuenciarse péptidos adicionales cuyas teminaies m i n o y carboxilo se sobrepongan con los de los peptidos CNBr. Estos ptrptidos adicionales se producen por tecnicas (por ejemplo, digestion con quimiotripsina) que dividen la proteina en otros lugares distintos aresiduos Met. Luego, L a deduccibn de una estructura primaria inequivoca por comparación de secuencias peptidicas se efectiia por un proceso aniilogo al ensamblaje de un rompecabezas (figura 5-12). Para localizar los puentes disulfuro, los péptidos de protelna sin tratar y de proteina reducida u oxidada

D. EA V en filtros moleculares
La filtracirin molecular puede usarse junto con la separacibn por carga para facilitar la particibn. Aunque es posible emplear almidbn y agarosa, el soporte mhs común es un polimero de enlaces cruzados de acrilarnida (CHi=CN-CONH2). Para la electroforesis en gel de poliacrilamida (EGPA), las soluciones de proteínas se vacian en tubos o se aplican en placas que contienen un amortiguador de poliacrilamida can 2 a 10% de enlaces cruzados por inclusibn de bisacrilamida de metileno (bis) (CHZ=CH-CONH~)~-CH~ o reactivos con enlaces cruzados similares. Luego se aplica corriente directa. La visualizacián se logra por tincibn con azul de Coornassie o Ag". Una variante popular es la EGPA bajo condiciones de desnaturalizacihn. Las proteinas se hierven y a continuacibn se

Así. muchos de ellos experimentan una o más modificaciones postraslación por procesamiento proteolítico. Los codones triples y tas moléculas apropiadas de tRNA solo se encuentran disponibles para Eos 20 arninoacidos más comunes. En tanto que las estructuras primarias de las proteínas se pueden deducir mediante la secuenciación de los genes que Eas codifican. El fenilisotiocianato reacciona con el amino-terminal de un residuo de un peptido para dar acido feniltiohidantotw El tratamiento con acido en un solvente hidroxilim libera una feniltiohidantoína la cual es identificada posteriormente mediante su movilidad crornatogrhfica y un phptido mas corto en un residuo. La espectometria de masas puede utilizarse para secuenciar péptidos El bombardeo rápido de fitomos (BRA) unido a la espectrometria de masas (EM). la técnica de Edman continuarii siendo fundamental para demostrar la determinación esrruct~ralde pkptidos y proteínas. La secuenciación del DNA no puede mostrar la posición de los puentes disulfuro o la presencia de otras muchas modificaciones postraslacionales. cada una con ciertas ventajas. Por tanto. fosforitado. Entonces el proceso se repite se separan por cromatografía bidimensional o por electroforesis y cromatografía (huellas dactilares). esterifjcado u otros residuos aminoacilo postraslacionales modificados que efecttian funciones esenciales en proteinas especificas. en dos espectrómetros . Uso del peptido Z sobrepuesto para deducir que los pépttdos X y Y ectbn presentes en la proteina original enelom'enX~Y. la secuenciacibn directa de las proteínas continúa siendo esencial para el anhlisis de su estructura. Por tanto.noYtX. es posible inferir las posiciones de los puentes disulfuro. metano Una feniltiohidantolna y un peptido mds corto en un residuo Figura 5-71. Reaccidn de Edman. isoprentilado.46 0 Bioquímica de H q e r (Capítulo 5j Fenilisotrocianato(reactivode Edrnan) y un peptido Pomi6n C-terminal del peptido X Porcibn N-terminal del pbptido Y Figura 5-32. La visualizacidn con ninhidrina revela los piptidos mhs escasos en la digestión de protelna sin tratar y un pkptido adicional en la digestibn de proteina tratada. hidroxilisil o un hutsped metilado. La secuenciación de péptidos y de DNA son técnicas complementarias Aunque la simplicidad y velocidad de la técnica de secuenciacibn del DNA (capítulo 42) ha revolucionado la forma en que se determinan las estructuras peptidicas. Aunque la secuenciacibn de péptidos no presenta estas desventajas. la secuenciación de péptidos y DNA son tecnicas complementarias más que mutuamente exclusivas. la secuenciacibn de DNA es una ayuda valiosa para detectar prepéptidos y prepropkptidos Ilibiles importantes en la cathlisis (capitulo 10) o en la sefializacibn de péptidos dirigidos a organelos subcelulares específicos. Con el conocimiento de la estructura primaria de estos péptidos. la secuenciacjbn del DNA no puede revelar la presencia de propilo.

inicib un renacimiento en la química de los péptidos. El primer espectt-ografo de masa limpia el ion gkptido de iones contaminantes. la termina carboxito del residuo aminoacilo). Representaubn sirnbblica de la sintesis de un dipéptido genérico por la técnica de fase s6Fida iniciada por MernReld Véase el texto para explicación de los simbolos. La qufmica básica de la sintesis de los péptidos. quien desarrollb la síntesis en fase dlida. La tdcnica automeica de síntesis de Merrifield que produce ptptidos largos sintkticos en periodos cortos. y luego lo transfiere a una celdilta en donde colisiona con atomos de helio. proporciona los elementos para la activaci6n de los grupos carboxilo y para la adición y eliminación de los grupos bloqueados.de masa integrados. Muchos aAos despues. cuyas estnicturas primarias difieren sblo un poco. el ion pkptido se fragmenta a partir de sus dos terminales con lo cual forma mliltiples iones de tamafío decreciente. a diferencia de la tdcnica de Edman. Figura 5-13. las principales desventajas del BRA-EM son su alto costo y menor sensibilidad. La tkcnica BRA dirigida por computadora es muy rápida. en el segundo espectrómetro de masa se determina la masa molecular de estos fragmentos del ion. permite la identificación de todos los fragmentes aminoacilo y de la secuencia del péptido completo. permite profundim en el conocimiento de la relacibn entre la estructura del péptido y la actividad bioldgica. proporciona un camino alternativo para secuenciar péptidos con longitud de alrededor de 25 residuos. LOS PÉPTIDOS PUEDEN SINTETIZARSE MEDIANTE TECNICAS AUTOMATIZADAS Las péptidos que se obtienen mediante síntesis qulmica sirven como fArmacos o aditivos alimentarios. las tkcnicas de sintesis de los pbptidos fueron evolucionados por Bmce MerrifieEd (Premio Nobel 19841.Entoncw. La comparacion de los iones de acuerdo con los incrementos sucesivos de masa. 2) Activar el gmpo carboxilo de t-BOC-B con diciclohexilcarbodiimida (DCC) (b): . que evita reacciones colaterales indeseables. de los htomos de un péptido disuelto en glicerol forma un ibn pkptido con carga positiva. Estos pasos son como sigue: 1) Proteger las terminales amino del aminohcido A (en blanco) y del arninoiicido B (en negro) con el grupo t-butiloxicnrboniIo (t-BOC) (m): Síntesis de peptidos en fase sólida La figura 5-1 3-muestra la sintesic de un dipéptido A-B representativo (en el cual A es la terminal m i n o y E famando t-BOC-A y t-BOC-B. aciladas). puede cecuenciar péptidos cuyas terminales amino están bloqueadas (por ejemplo. desarrollada a fines del decenio de 1800 por el químico a l e m h Emil Fisisher. El bombardeo rápido por átomos de argon o xenbn. En comparación con los secuenciadores avanzados de Edman. Debido a la energía que absorbe. no requiere pkptidos altamente purificados. rnediante la tkcnica en fase s6lida de Merrifield y resume las reacciones que se requieren para sintetizar un ptptido de cualquier tamaño deseado. La capacidad para sintetizar conjuntos de peptidos similares. identifica residuos modificados por traslacibn y.

Esto limita el numero de conformaciones peptidicas posibles. Foret P : Capillary electrophoresis of proteins and nucleic acids. Strickler JE. Fenselau C: Beyond gene sequencing: Analysis of proteín structure with mass spectrometry. 5) 6) 7) Los logros iniciales de la técnica de Merrifield fueron la síntesis de las cadenas A y B de inculina y de la enzima pancrektica ribonucleasa.48 Bioquimica de Hurper (Capítulo 5) 3) Hacer reaccionar al grupo carboxilo del aminoácido A (que se convertírh en el residuo carboxilo4) terminal del peptido) con una resina activada de poliestireno insoluble @I Eliminar al grupo protector de r-BOC-A con ácido tnfluoroac&tico(TFA. los pkptidos se separan por crornatografia de intercambio iónico y técnicas electrofor&ticas. Como poiielectrblitos. vol 182. Las péptidos grandes se escinden en sitios raros con reactivos como CNBry los pkptidos resultantes se purifican por filtración en gel y CLAR. Condensar el grupo carboxilo activado de t-BOCR con el grupo amino libre del inmovilizado A. es posible omitir los pasos 3 y 4 puesto que ya se dispone en el comercio de resinas con cualquier aminoácido f-BOC conectado por un enlace éster a una moltcula "enlazadora" de fenilacetamidometilo. 1988. Methods in Enzymology. Eliminar el grupo protector (d-BOC) con TFA (véase paso 4). CRC Press. Kent SBH: Chemical synthesis of peptides and proteins. Karger BL. 3989. Luego pueden enlazarse por su terminal carboxilo a un soporte sólido para facilitar la secuenciacibn. formados por la pérdida de agua entre los grupos carboxilo y amino de los aminohcidos. Bienmann K: Mass spectrometry of peptides and proteins. F 3 C 4 0 0 N )a la temperatura ambiente. Mejoras subsecuentes han reducido el tiempo para la sintesis y han incrementado el rendimiento de manera significativa. En solucibn. 1990. Primero se oxidan o reducen los enlaces disuffuro. p h e ~ lucetamidometkyí). Esto ha abierto el campo para producir vacunas y hormonas polipeptldicas y aun puede pensarse en tratar errores congénitos del metabolismo seleccionados. .adherida al pol iest ireno.Knippenberg PH. In: Laboratory Techniques rn Biochemistry rvnd Molecular Riulo&.20:205. Sus estructuras primarias (orden de aminoácidos listados desde la amino-terminal) determinan la actividad biológica y las conformaciones. Annu Rev Biophys Biomol Struct 1995.Lar operaciones automáticas subsiguientes comprenden quimica de líquidos o reactivos y productos gaseosos que facilitan la recuperación y purificacibn de la muestra. El carácter de doble ligadura parcial del enlace que une al carbono del COOH y al N de un péptido. Protein Sci 1992. las tkcnicas automáticas permiten la síntesis inequívoca de pdptidos de estructura primaria conocida y actividad biol6gica completa. Doolittle RF (editor): Makcular Evolirtion: Campufer A nalys~s ofProlein nnd Nucleic AcidSeguences Methods in Enzymology. hace que cuatro Iitomos del enlace peptidiw sean coplanares. se designan de acuerdo al numero de aminoicidos presentes. Por tanto. Doolittle RF: Reconstructing history with mino acid se- 2nd edl Burdon RH. Para definir el orden de ensamblaje de los ptptidos secuenciados en el polipéptido original. Ademis.226:304. Hunkapiller Biophys Chem 1991. Science 1984. RESUMEN Los pkptidos. Annu Rev Biochem 1992. se determina la secuencia de péptidos sobrepuestos generados por diferentes ttcnicas de partición. Bhwon AS: ProieidPeptide Sequence Analysis: Current Meihodologies. Liberar el dipéptido A-13 de la particula de resina por tratamiento a -2 "C con hcido hidroflubico (HF) en diclorometano. del inglks. PAM. Deutscher MP (editor): Guide bo Protern PuriJicabron. (Nota: En la prhctica.57:957. Despuks de la hidrblisis Acida es posible deteminar la composición de los péptidos purificados. pero se requiere correccihn por perdida de ciertos aminolcidos. no mutuamente excluyentes.24:579. Elsevier. quences. Por lo general pueden secuenciarse hasta 40 residuos mino-tem inales sucesivos. Annu Rev Biophys m. La determinacibn de la estructura primaria emplea tkcnicas de Edman automatizadas. Los péptidos pequefios pueden contener enlaces diferentes a alfa-peptidilo y aminolcidos poco comunes. W i b o n KJ: Contemporary methodology fos protein structure determination.. REFERENCIAS Allen G:Sequencing of proteins and peptides. estas conformaciones son restringidas aún m8s por fuerzas no covalentes. Chy YH.61:977. las tkcnicas de secuenciacion de DNA y péptidos son complementarias. De manera alterna. Annu Rev Biochem 1988. los enlaces entre péptidos pueden inferirse de la secuencia de DNA del gen apropiado. vol 183. 1990.1:E 91. que pueden realizar la secuenciacibn en cantidades tan pequefias de hasta microgramos de phptido purificado.

MerrifieEd RB: S o l i d phasc s y n t h e c i s .182:50. Stellwagen E: G e l filtration. Anal Biochem 1980. Strickler JE. Anal Biochem 1984:140:553. Sanger F :Sequences. Senko MW.Gooding KM: High performance liquid chromatography of proteins. 14:252.57: 1 . . sequences.McLafferty FW: Mass svctrometry of mac- romolecules Has its time come now? Annu Rev Riophys Riomol Struct 1994:23. Methods Enzymol 1990. Trends Biol Sci 1989.and solid-phse degradaiion of proteins and peptides al law picomole levels. and sequences.103:1 .763.182 587 Regnier FE. M e t h o d s Enzymol 1990:182:317 Stoscheck CM: Quanlilation of proteins. Methods Enzymol 1990. Science 19&6:232:341. Annu Rev Hiochem 1988. Ozols J : Amino acid analysis. Wilson KJ: Utility of the gas-phase sequencer for both liquid. Wilson KJ: Micro-leve1 protein and peptide separations. Hunkapiller MW.

Además. reguladoras (proteínas unidas a DNA. Tambikn pueden clasificarse bashndose en su fonna global. cataliiicas y de señalización. con énfasis en las fuerzas que estabilizan estos ordenes m& elevados de estructum y los metodos físico5 empleados para examinarlos. forma. El sindrome de EhlersDanlos ilustra defectos geneticos en la rnaduraciOn proteínica y el escorbuto la deficiencia de un coiactor esencial para esta maduracion. giro beta y asa. Se ilustra la estrecha vinciilacilin entre estructura y funci6n biolhgica de estas rnolt5culas mediante dos proteinas fibrosas que tienen funciones estructurales: la fibroina de la seda y el colageno. Así. proteinas de alrnacenainiento (ferritina. el modo en que estas estructuras características secundarias Sorman dominios y estructuras terciarias. inrnu- IMPORTANCIA BIOMEDICA Los millares de proteínas presentes en el cuerpo humano realizan funciones demasiado numerosas para enumerarlas. las proteinas globulares (por ejemplo. "globulinas". "historias". Los principales temas iiicluyeii hdlice alfa. se examinan las vias propuestas para que las proteíiias se plieguen y el papel de las chaperoninas {proteinas acornpafiantes)y de otras proteinas accesorias que facilitan el rápido y correcto plegamiento in vnJo Las ~amcterísticn~ y comentarios mencionados antes generalmente son validos para todas aunque algunas proteinas especificas pueden mostrar estructuras secundarias y terciarias peculiares que Ies confieren propiedades para cumplir funciones biologicas también especifica. hoja beta. Las proteinas fibrosas tienen proporciones axiles mayores de 10 Las proteinas pueden clasiticarse según sus funciones bioIogicas en: cnzimar (deshidrogenasas. PhD dc vilaminas. así como el ensamblado de polipiptidos en subunidades de proteinas multiméricas.Proteínas: estructura y función Victor W Rodwell. protectoras (factores de coagulación sanguínea. oxígeno y bióxido de carbono. En este capítulo 5e analizan las estructuras secundaria. plegadas cn forma compacta y proporciones axiles (proporciones dc longitud a anchura) menores de 10 y que iio exceden de 3 a 4 por lo general. las proteínas pueden clasificarse con base en su solubilidad. LAS PROTE~NAS SE CLASIFICAN EN NUMEROSAS FORMAS Si bien no existe un sistema universal. Entre ellas están: servir como portadores . numerosas enzirnas) tienen cadenas polipeptidicas enrolladas. etcétera. Los capitulos subsecuentes amplian esta estrecha reIaci6n al estudiar las proteinar globulares mioglobina y hemoglobiiia así como las proteínas catalíticas conocidas como eiizimas. cineticas. ademAs de Las características comunes a todas las proteinas incluyen restricciones en su conformación por enlaces covalentes y no covalentes. función biolbgica o estructura tridimensional. cinasas). dependiendo de su solubilidad en soluciones salinas acuosas. pueden derivar consecuencias igualmente desastrosas de la deficiencia de cofictores csenciales para la maduración de una proteína. no deben sorprender las terribles consecuencias que pueden surgir de mutaciones en genes que codifican proteínas o en regiones de DNA que controlan la expresibn genktica Asimismo. hormonas peptídicas). llevar a cabo actividades estructurales. Por tanto. estructurales (colligeno. proteoglucanos). mioglobina). terciaria y cuatemarfa de las proteínas. Un sistema de uso limitado en bioquimica clinica las clasifica como "albiiminas".

y PIK (Protein fdenllficdron Resource S~quence Dufuhuse). F). Sistemas especialiados de clasificacibn distinguen ciertas proteinas complejas de interés médico elevado. HDL o VHDL basándose en sus propiedades de sedimentación en una ultracentri fugación (figura 6. HDL. La estructura primaria se determina por métodos descritos para polipkptidos en el capítulo S. alfaz o beta de acuerdo con su movilidad elemforéticaap1-I 8. puentes salinos. acciones electrostáticas y f u e r m ~ Puentes de hidrógeno En la superficie de las proteinas globulares por lo general se encuentran residuos con grupos R polares.o como quilomicrones. ESTRUCTURA SECUNDARIA Configuración y conformación El tkrtnino "configuracion" se refiere a las relaciones gcométricas entre un conjunto dado de htomos. Asimismo. La interconversión de alternativas diferentes de configuracibn (por ejemplo.6. 1-DL. las semejanzas en la estructura tridimeiisional. Magnitud y densidad de distribucibn de las lipoproteínas (CHYLO. . interacciones hidrófobas. Por ejemplo. D. LDL.45 303) Varías interacciones no covalentcs que individualmente son dgbiles. para una cierta proteina s61o un pequefío número de posibles conformaciones tienen significacibn biolbgica. Lp [a]. pero formidables en número. GenBank (Genefic Sequence Dafabank). las proteinas qiie unen nuclcótidos comparten un dominio fijador de nucleiitido de estructura terciaria. El nbrnero de las secuencias conocidas de proteínas es tan grande y crece con tal rapidez que. lipoproteinas alfa. los datos de las secuencias se depositan en bases de datos electrhnicac de secuencias de proteinas a las cuales se puede tencr acceso a través de Internet. Iipoproteinas plasnihticas) y contráctiles o dotadas de motilidad (actina. reveladas principa2rnente por cristalografia con rayos X. lrpoproteinas de muy baja densidad. estabilizan la conformacion de una proteina. La interconversión de estructuras conformadas no implica la rotura de uniones covalentcs sino la rotura y restablecimiento de fuerzas no covalentes (puentes de hidrógeno. lipoproteínas de alta densidad. Iipoproteinas de baja densidad. VLDL. Estas fuenas incluyen puentes de hidrhgeno. de transporte (hemoglobina.. Iipoproteina [a]) (Reproducida con autorizacibn de Segrest JP y colaboradores The amphipathic alfa-helix A rnultrfundionalstructural motrf in plasma Itpoproteins Adv Protein Chem 1995. C. la rotación libre alrededor de las dos terceras partes de las uniones covalentes dc la cadena principal de un polipéptido (figura 5-81 permite clasificar por etapas un gran númcro de conformaciones posibles para una proteína d e t e n i nada. De este inodo. las relaciones espaciales de todos los itomos entre sí. Sin embargo. fl importante término similar "conformación " se refiere a la arquitectura tridirnensional de una proteína. las lipoproteinas plasmhticas se denominan de "origen". !a conversión de 0. proporcionan una base potencialmente valiosa para la clasificación de proteinas. ESTRUCTURA PRIMARIA La estructura primaria de la cadena polipeptidica de una proteína es el orden en el cual los aminoacidos se Diferentes fuenas que estabilizan las estructuras proteínicas Tama Ao Más graride Figura 6-1. E. interde van der Waals. Las lipoproteínas puedcn clasi ficarse tam bien por deteminacibn inmunol0gica dc las apopruteinas presentes (A. VLDI.52 Bioquírnicu de Harper (Capitulo ti) noglobulinas). Las bases de datos importantes continuamente actualizadas inc lu yen EM R L (Europeun Molecu~ur 13ioloa Laboraiory Oaia I.ibrary). interacciones hidr~fobas) que estabilizan una conformaci6n dada Incluso después de excluir las ~onfonnaciones que las interacciones estcricas impiden.1 ). B. en la actualidad.. en vez de disponer de formas impresas. unen e incluye la uhlcacidn de los enlaces bisulhro. tubilina).a L-alanina) sulo se puede logmr rompiendo y restableciendo uniones covalentes. quilomicrones.

Cuando se especifican todos los ~ g u l o fi psi. la presencia de sales como KCI puede disminuir de manera significativa las interacciones iónicas entre los residuos de la superfície. Por otra parte.a concentracibnde residuos no polares en el interior de la proteína disminuye cI número de residuos superficiales e incrementa al m b u n o la oportunidad para que la pelicula superficial de moldculas de agua formen puentes dc hidrhgeno entre si. pero despuks los analisis cristalográficos de rayos X las confirmaron ampliamente. La rotación sólo puede darse alrededor de las unioncs entre e E carbón alfa (Cm) al carbbn carbonilo (C. [. que son sumamente dkbiles y sblo actúan a distancias extremadamente cortas. cuyos grupos R no polares participan en interacciones hidrlirobas con las cadenas laterales alquil de los ésteres acilgrasos de las bicapas de la membrana. ademas de Ias unidades hélices alfa regulares repetitivas. Aunque todos los gmpos con carga forma1 tienden a localizarse sobre la supesficie las proteínas globulares. hay excepciones. Los átomos tienen un radio van der Waals característico y la distancia de contacto óptima entre dos es la suma de sus radios van der Waals. repulsión es mínima se denomina distancia de contacto van der Waals. Las estructuras secundarias incluyen.-N denomina ángulo fi (m) y el que se encuentra alrededor de la unión C. Interacciones hidrófobas Las interacciones hidrófobas implican a los grupos R no polares de los residuos arninoacilo que en las proteínas globulares típicas residen en el interior de E a proteína. Ramachandran fue el primero en emplear una grhfica de los Angulos fi contra los ángulos psi para ilustrar tanto los valores permitidos como los numerosos. Las fuerzas repulsivas entran en juego cuando dos Atomos se aproximan tanto que sus orbitales electrónicoc se superponen. Interacciones de las fuerzas de van der Waals Las fuerzas de van der Waals.ificos empieza con la deteminacilin de los principales ángulos fi y psi de la cadena. Una forma esférica regular reduce al mínimo el área de supedcie. Al principio. como los gmpos terminales amino y carboxilo de los péptidos y los grupos R cagados de los residuos aminoacilos. la existencia de una estructura secundaria se propuso con bases exclusivamente teoricas.Proteinus: esfrucfura y función 53 los cuales forman puentes de hidrógeno principalmente con moléculas de agua. pues existen grupos polares específicos ejecut a n t e ~de funciones biológicas indispensables. La formación de interacciones hidrhfobas es "conducida por la entropia". el anhlisis de los datos crista1ogr. se conoce la conforrnaci6n de la totalidad de Atomos de la cadena principal o esqueleto de u n polipéptido. incluyen componentes de airaccihn y de repulsión. 13uesto que los residuos polares también pueden participar en interacciones ihnicas. Por cI contrario. Por tanto. es el ingulo psi (Y). Las conformaciones regulares e irregulares caracterizan a la estructura secundaria La conformacibn de los esqueletos polipeptidicos de las proteínas constituye su estructura secundaria. Los tipos de estructura secundaria esthn limitados por el carlicter de doble uni6n parcial de la unibn peptídica (figuras 5-7 y 5-8) y por el tarnaiio y la forma de los grupos R arninoácidos.-C. Interaccionec electrostáticas Las interacciones eiectrosthticac o puentes salinos se forman entre grupos con carga opuesta. el ambiente no polar dc las membranas biológicas favorece a los residuos hidrófobos de la superficie. El carhcter de doble unión parcial de la ligadura que unc el grupo carbonilo al nitrógeno alfa de la uniiin peptidíca restringe de manera significativa las confomaciones posibles de los átomos que la constituyen.N. La distancia a la cual la fuerza de atracciciii es rnAxima y la fuerza de . G. los residuos aminoacilo del esqueleto carbhnico forman puentes de hidrogeno entre si. las hojas beta y las incurvaciones beta con formaciones irregulares denominadas asas o bobinas. Las fuerzas de atraccibn implican interacción enve dipolos inducidos formados por las occilaciones instanthneas en la distribucion de electrones en los htomos cercanos. No e s t h permitidas las combinaciones de los IinguEos fi-psf qiie produ7can impedimento estérico entre los Atomos no s y unidos. los cuales es posible que residan en hendiduras quc penetran hasta el interior de la proteína. Uniones peptídicas que restringen las posibles conformaciones secundarias La rotacidn solo es posible alrededor de 2 de las 3 uniones covalentes que forman el esqueleto polipeptidico de las proteínas. uii proceso relacionado con un incremeiito de la entropia. la cual debe ser coplanar (figura 5-8). no permitidos (figura 6 1 2 1 .) y al se nitrogeno. Las combinaciones estéricamente permitidas caracterizan a la Ii&licealfa y a la hoja plegada beta y a la helice triple de colágeno w a l i ~ a d a más adelante. El ángulo alrededor de la unión C.

Para visualizar una hElice derecha.54 nm (5. Las helices alfa tienen ángulos favorables fi y psi y un patrbn de uniones de hidriigeno que les conficre la máxima estabilidad.- 0 54-nm paso (3 6 residuos) I . Los diferentes tipoc de hélices formados cuando los giroc tienen dirección y extensibn diferentes se describen según el número (n) de residuos aminohcidos por vuelta y el paso Ip) o distancia por vuelta que la hélice se eleva alrededor de su eje. de 4 a 50 residuos (en promedio cerca de 12 residuos). la interferencia estérica de los grupos R de los residuos L-arninoacilos determina que las hélices izquierdas no pueden tener lugar en las proteinas. lo cual reduce al mínimo la interferencia esterica. Las uniones de hidrógeno y las f u e n a s de van der Waals estabilizan las hélices alfa Q Figura 6-2. Las hklices alfa de proteínas contienen.4 A). La distancia a 10 largo del eje de la hélice que separa htornos equivalentes en las cadenas principales. El pulgar sefiala en la dirección del carboxilo terminal del polipeptido de hélice derecha. como las manos) y por tanto muestran quiralismo -o sea.-- 1 1 15nm .6 residuos por vuelta y p = 0.Waals que pueden formar y estabilizar un tipo determinado de hdice. La estabilidad de las P La hélice alfa Cuando se gira el esqueleto de iin polipeptido por una magnitud igual alrededor de cada carbón alfa. de los residuos adyacentes es de O. Los puntos representan las mmbinaciones pemitidas y los espacios las combinaciones prohibidas de Bngulos fi-psi (Reproducida con autorización de Richardson JS. el cual avanza en la dirección de los dedos curvados. Aunque los polipéptidos sinteticos de D-aminoácidos pueden furmar hélices izquierdas. se forma una bobina o hélice. Idos tipos de hilices polipeptidicas presentes en las proteinas.. son hélices con giros hacia E a derecha o hacia la izquierda. The anatomy and taxonomy of protein structures Adv Protein Chem 1981. en ocho proteinas cuyas estructuras fueron resueltas a resolución alta. Las hélices polipeptidicas están formadas por aminoácidos quiraIes (estrwcturas que no pueden superponer su imagen en espejo. en todas partes.) Puesto que la hélice alfa es la confomacibn de menor Y más estable para una cadena de P ~ ~ ~ se forma de manera espontánea. además están limitadas por factores cstéricos adicionales y por el numero de posibles puentes de hidrógeno e interacciones de van der -----. Los grupos Rarninoacil se dirigen hacia afuera del eje de la hClice (figuras 6 4 y 6-51. Orientacibn de átomos de la cadena principal de u n peptido alrededor del eje de una h8lice alfa .5 A). los dedos ligeramente curvados y el pulgar apuntando alejándose de uno mismo. GrBfica de Ramachandrande 10s ángulac fi y pci de la cadena principal para 1000recidvos no giicina aproximadamente. Los parametros relevantes de una helice-alfa (figura 6-3) son n = 3. 15 nrn (1.-0 .-- t Figura 6-3.34 167. se debe mantener la mano derecha con la palma hacia arriba.

las hélices anfipáticas sc presentan en las lipoproteinas plasrnaticas y en ciertas hormonas polipí. Pro. Puesto que el nitrbieno pcptidico de un residuo proilo. Estos puentes de hidrógeno tienen una distancia N-a-O practicamente óptima dc 20 nm (2. Sin embargo. glucoproteinas del virus de la inrnunodeficiencia humana y en proteínas cinasa reguladas por calmodulina. Puentes de hidrógeno (puntos) formados entre Alomos de H y O estabilizan un polipeptido en una conformación alfa helicoidal (Reimpreso con autorización de Haggrs GH y colaboradores Introducfronto Molecular Brology Wiley. Las curvaturas también tienen lugar con frecuencia eii los residuos GIi. no puede I'orrnar un pucn te tle tiidrógeno. es la hoja plegada-beta. pues los átomos firmemente empaquetados en el núcleo de una hélice alfa están en contacto van der Waals con otros a través del eje de la helice alfa. Las interacciones van der Waals tambitn confieren mayor estabilidad. Figura 6-4.) mente encaja en la primera vuelta de una hélice alfa En otro puiito produce una incurvación. antibihticos. tienc lugar donde las helices alfa forman interfase con un ambientc al mismo tiempo polar y no polar. Se le llama beta porque fue la segunda estructura regular descrita. Por su parte. Leu y Met que Gli. o Tir. Copyright 1995 por W H Freeman y Cia. hélices alfa se debe principalmente a la formación del máximo número posible de puentes de hidrúgeno.Figura 6 6 . Los carbones alfa y sus grupos R relacionados alternati entre un plano ligeramente arriba La prolina puede doblar una hélice alfa En las hélices alfa son residuosmas comunes Ala.ja plegada" describe su aspecto cuando se le obscrva con el borde hacia arriba. 2a ed Freeman. también pueden estar total o parcialmente integradas en el interior de una proteína La hélicc antipática. casi no hay espacio libre en el interior de la hélice (Ligeramente modificada y reproducida con autorizacion de Stryer L Biochernistry.8 A). el término "110. 1964 ) Las hélices alfa pueden ser anfipáticas Aunque por lo común. las hClices alfa se encuentran en la superficie dc las proteinas. presente en la mayor parte de las proteinas. Ser. venenos. Aiiinisrno.ptjdas. la psoliaa sola- . y el oxigeno del carbonilo del cuarto residiio en linea posterior cn un sentido estructural primario actúa corno aceptador de hidrógeno (figura 6-4). Vista superior del eje de una hélice alfa Las cadenas laterales (R) están en el exterior de la hélice Los radios de van der Waals de los Atomos son mas grandes que los mostrados aqui. Los aminoácidos de diferentes regiones forman hojas beta La segunda conforn~aciónregular. Sin embargo. 1981. esta tendencia no es util para proncisticos cstructuraIes. por tanto. n o todas las incurvaciones en las hélices alfa son causadas por residuos prolilo. un caso especial en el cual los residuos alternan entre hidroSbbicos e hidrofilicos casi cada 3 o 4 residuos (figura 6 4 ) . Glu. Los nitrógenos peptidicos actúan como donadores de hidrhgcno.

Nbtese que los carbonos alfa sucesivos se localizan justo arriba y abajo de este plano. Figura 6-7. Los puentes de hidrogeno que estabilizan cordones paralelos están regularmente espaciados pero angulados transversalmente a travks de las tiras. pares alternos de puentes de hidrdgeno. A diferencia de las helices alfa compactas. en E a misma direcciiin. Las hkiicec de las apolipoproteínas plasrn$ticas son anfrpSticas: es decir. y estan estabilizados por puentes de hidrógeno que se forman entre los hidrbgenos de los pbptidos nitrogenados y los de los carbonilos oxigenados de tiras adyacentes. Todos los posibles puentes de hidrbgeno se forman excepto para las tiras de los flancos (figura 6-81. Para estabilizar las hojas antiparalelas se en- M á s o menos la mitad de los residuos en una proteína globular típica se presentan en forma de h6Iices alfa o hojas beta. aquellas de láminas paralelas. el esqueleto peptidico de una hoja beta esti casi por completo extendido. y otro ligeramente abajo de la cadena principal del polipeptido (figura 6-71. El recto reside en conformaciones "asa" o "bobina" que. Qui7. dando un efecto plegado.56 Bioquimica de Hurper (Capítulo 6) Figura 6-6. Como las hklices alfa. Los polipéptidos se alinean a lo largo. Las cadenas adyacentes de polipkptidos de una lámina antiparalela proceden en direcciones opuestas. Las asas o bobinas no se deben confundir con "bobinas al m". Las regiones en asa forman sitios de unión de antígenos Las hojas beta plegadas pueden ser paralelas o antiparalelas La figura 6-7 ilustra tiras antiparalelas de laminas beta plegadas. aunque ordenadas de manera irregular no tienen menor importancia biolligica que las esiructuras secundarias regularmente ordenadas. las hojas beta implican t~amos de 5 a 10 arninoacidos de diferentes regiones estructurales primarias. Los puentes de hidrogeno agrupados por pares estabilizan la conformación de hoja beta En hojas plegadas paralelas (no mostradas). las cadenas adyacentes corren en la misma dirección. Tiras adyacentes corren en direccionesopuestas (veanse las flechas) Los grupos R se localizan arriba y abajo del plano de la hoja. Casi todo los cordones de láminas beta están girados en el sentido de la mano derecha. Estos cordones girados de I h i n a s beta forman el núcleo central de muchas proteinas globulares. Regiones en asa de tamaiio y forma variables constituyen una de las principales carac- . las hojas beta tienen aningulos fi y psi repetitivos. Representaciónespiral de aminoAcrdos en una hélrce alfa anfipLtica. cuentran ubicadas de manera estrecha y amplia. las lhminas beta paralelas de cinco cordones son un poco más raras.á por SU estabilidad algo menor.6 residuos = 100" por residuo) mirando hacia abajo del eje de la hblice Los círculos negros representan residuos no polares y los circulos blancos. una cara es polar y la otra no polar. estabilizados con el máximo número posible de uniones de hidrogeno. Modelo de una hoja plegada beta antiparalela. Una lámina beta puede estar conformada pw 2 a 15 cordones y son comunes las regiones donde hay laminas mixtas paralelas y antiparalelas. Sin embargo. aunque las hklíces alfa contienen residuos adyacentes en un sentido estructural primario. uno d e t r h de otro. residuos polares. Los residuos están gratificados con 100" de separación (360°13. un término que describe las conformaciones desordenadas y con menos importanciabiológica de las proteinas desnaturalizadas.

Las estructuras secundarias pueden formar tipos supersecundarios En muchas proteínas globulares. Hay regiones especificas en muchas proteinas que tienen abundantes confomaciones en solucion. compuesta de hojas antiparalelas beta conectadas por una region corta de asa. asi denominada porque recuerda un motivo decorativo de un vaso griego antiguo. si son lo bastante largos. Las tiras de hojas beta están conectadas por regiones de poliptptidos que. Figura 6 4 . flechas anchas para tiras beta y cordones semejantes a listones para las demas estructuras como asas y hojas beta. Los Atomos de nitrágeno alfa donadores de hidrógeno se muestran con eirculos azules. con frecuencia contienen hélices alfa. pero oblicuos en direcciones alternas. dos tiras de hoja beta conectados por una hdlice alfa. el sitio para interacciones ligando. Abajo: Hoja beta paralela Los puentes de hidrbgano están regularmente espaciados. por lo que se presentan en verdad desordenadas Los ejemplos incluyen los grupos U largos de los residuos Lis y porciones de los amino o carboxilo terminales de muchos polipéptidos. teristicas de superficie de las proteinas. Un caso común es la estabilizacibn de las regiones desordenadas de los centros cataliticos de muchas enzimtls cuando se unen a un ligando. las asas en gancho u horquilla se conectan con las hojas beta adyacentes antiparalelas. y el motivo o figura "llave griega". pero que carecen de estructura regular secundaria. empleamos representaciones simplificadas de manera convencional para exhibir las caracteristicas estructurales.Estas vueltas invertidas o incuracioncs beta. En consecuencia. se omitieron los grupos R y los hidrógenos alfa. ESTRUCTURA TERCIARIA Los diagramas esquemáticos simplifican la esttuctura de las proteínas El alto contenido de informacibn de los diagramas o modelos en donde se incluyen todos los atomos de una proteína. Los pares de puentes de hidrógeno alternan entre pares muy próximos y pares muy separados y esthn orientados en dirección perpendicular aproximada al esqueleto polipeptldico. La figura 6-9 ejemplifica varios tipos supersecundarias: beta-alfa-beta. . muchas regiones desordenadas pueden llegar a ser ordenadas cuando se les une un ligando especifico. Por otra parte. Para mayor claridad en la presentacidn. Distancia y ángulos de unibn de los puentes de hidrógeno entre hojas beta plegadas paralelas y antiparalelas Las flechas indican la dirección de cada tira. Las repeticiones de estas figuras supersecundarias pueden Las proteinas globulares contienen giros beta El cwActer compacto de las proteinas globulares se debe a mAs o menos 20 tramos rectos de residuos unidos por regiones de polisacáridos que bruscamente cambian de direccibn. dificulta el estudio de las características totales de la estructura proteinica. afectan cuatro residuos unidos por puentes de hidrbgeno era varias formas y se presentan de manera primaria en la superficie de las proteínas. ricos en residuos cargados y polares. Con Erecuencia. Este desorden significa flexibilidad y puede decempefíar un papel biológico vital. regiones de asa de estructura primaria y longitud variables forman los sitios de unibn de antigenos en los anticuerpos. las formas estmcturales secundarias de una hClice alfa o de una hoja beta plegada forman tipos reconocibles "supercecundanas". la horquilla o gancho beta. Arriba: Hojas beta antiparalelas. Las proteinas pueden contener regiones desordenadas Nonecesariamente todos los residuos se presentan como estructuras con ordenamiento secundario. Los símbolos qtie se emplean son cilindros para hélices alfa. Cuando se exponen a solventes.

Estas uniones son individualmente muy debiles y no son estequiom&tricas. pero estmcturaimente conectadas llamadas dominios. Las uniones de disulfuro confieren estabilidad adicional Además de los enlaces pcptidicoc. Figuras supersecundarias Las hélices alfa y hojas plegadas beta de numerosas proteínas globulares estan ordenadas en untdades repetidas como las figuras supersecundarias d e clave griega (izquierda) o ~eta-alfabeta (derecha) entonces formar estructuras como las unidades regularmente repetitivas beta-alfa-beta de toda una proteína (figura 6-1 0). mostrada en una vista de frente. Alternativamente. . sin embargo. se pueden formar ~inii~nc (IisuIfu h ni covalentes entre residuos de cfsteína presentes en el mismo o cn un polipéptido diferente. lnteaacciones hidrofobas enlazan residuos interiores Las cadenas laterales no polares de los aminoicidos Figura 6-1 0. determina su importancia para mantener la estructura de la proteina. Estructura terciaria. Los enlaces electrostáticos unen los residuos de superficie Los enlaces salinos (electrosthticos) unen grupos R con carga opuesta de residuos y grupos al fa con carga de residuos terminales C y N. los lipandos pucdcn cntrar en contacto con residuos formados de modo exclusivo por un solo dominio. Ios cuales con frecuencia ejecutan funciones discretas tales como la unibn con ligandos específicos. está constituida por cuatro beta-alfa-beta consecutivasen los dos sentidos estruciurales primario y terciario (Cortesia de 3 Richardson ) confluyen en el interior de las protelnas globulares. Por su parte. el plegamiento de un polipéptido dentro de un dominio se prodiice dc mancra indcpcndienic del plcgamierito en otrni domiiiicis. Los polipeptidos grandes tienen dominios distintos Figura 6-9. el grupa R de Lis (a pH fisiolhgico. Estas uniones disulfuro confieren estabilidad adicional a la conformación especifica de proteínas tales como enzirnas (como la ribonucleasa) y proteínas estmcturales (ES el caso de la queratina). El teririino "estructura terciaria" se refiere a las relaciones espaciales entre los elementos estructurales secundarios. los residuos de los dominios de diferente? subunidades pueden enlazarse con ligandos como las coenzimas en las interfases con subunidades cuyas superficies de contacto se derivan de residuos proccdentes de suburiidades diferentes. carga neta + 1 ) y de aspartato o glutamato (carga neta -1 ).as estructuras secundarias y s u p e r w cundarias de una proteina grande casi siempre están organizadas coma dominios -unidades compactas conectadas por el esqueleto polipeptidico. Su gran numero. en las proteina~multimericas. Por lo gcneral. [. las La estructiira seciindaria-terciaria. Triosa fosfato isornerasa. Por otro Eado. se puede organizar en unidadcs relativamente independientes. en particular de lor polipeptidos grandes. Idas cstructiiras terciarias describen las relaciones entre estos dominios. un ligando puede establecer contacto con residuos de más de un dominio y así residir rn la interfase entre los dominios. Por ejemplo. puede interactuar por fuerzas electrostáticas para estabilizar proteínas.58 Uinqzdímica de Hut-per (Capitulo 6 ) maneras en las cuales las proteínas plegadas pueden reunir aminoácidos separados en un sentido estriictural primario y los enlaces que estabilizan estas confbrmacicincs.

etcétera. su orientación mutua y las interacciones que los unen. Idos datos. obtenidos de placas rotográficas o detectores de área unidos a computadoras. la cristalografía con rayos X ha revelado vistas tridimensionaIes detalladas de mhs dc 1000 proteinas. Enzima activa (nativa) Enzima inactiva (desnaturalizada) u Figura 6-1 l. numerosos métodos pueden dar información de esta propiedad. se traducen a mapas de densidad electrónica y se emplean para construir modelos tridimensionalcs generados por computación. Los métodos físicos determinan el peco molecular y la estructura cuatemaria La determinacion de la estructura cuaternaria de las proteínas oligoméricas comprende la identificación del número y clase de protómeros presentes. Las subunidades diferentes de proteinas heterooligoméricas ejecutan de manera tipica funciones discretas. es costosa y requiere personal adiestrado. Si se prueba que los oligómeros no experimenten desnaturalizacion durante el procedimiento usado para determinar el peso molecular (PM). Los desnaturalizantes de proteínas destruyen su estructura secundaria. en tanto que otro conjunto de subunidades. se analizan por mitodos matemhticoc. excepto su estruchrra primaria. etcétera en muchos casos utilizando simplemente una computadora personal Pentium. terciaria y cuaternaria Los reactivos como la urca. girarlos en todas dirccciones. Una subunidad o un conjunto de subunidades idénticas. se encargaria del reconocimiento de ligando0 tendría un papel regulador. Estas mismas técnicas pueden utilizarse para determinar el PM de los protómeros si primero se desnaturaliza el oligómero. Las hornodimeras.Proteínas: esfructura yfunción 59 La cristalografía con rayos X muestra la estructura secundaria y terciaria Los rayos X dirigidos a un cristal de proteína y de un derivado que contiene un metal pesado agregado. y anulan su actividad biológica (figura 6-1 1) Las bases de datos y los programas de computación perfeccionados facilitan el estudio y la manipulación de la estructura de las proteínas Un resumen coordinado de todor los Atomas de las proteínas cuyas estructuras se han determinado mediante cristalografia con rayos X es accesible a travCs de Intemet procedente de bases de datos eIectr0nicas. añadir o sustraer radicales. ESTRUCTURA CUATERNARIA Las proteínas oligoméricas tienen cadenas polipeptidicas múltiples Se dice que las protehas que contienen dos o mas cadenas de polipbptidos unidos por fuerzas no covalentes muestran una estructura cuaternaria. En estas proteinas multiméricas. de subunidades distintac. consisten en subunidades identicas. Aunque consume tiempo. enlaces hidrbfobos y electrostáticos {peso no los enlaces peptidicos ni los puentes disulfuro). . Por tanto. destruyen todos los 6rdenes de las proteinas. Representaeibn de la desnaturalizacibn de un iprotbmero. puede efectuar una funcion catalítica.que permiten generar y manipular modelos sobre la pantalla. se han usado para resolver la estructura tridimensional de ciertas proteínas pequcfías y parece que es prometedora para aplicarse a proteinas de mayor tamaño. Las proteinas compuestas de 2 o 4 siibunidades sc denominan proteínas bimiricas o tetramtricas. Sus contribucio~ies a la comprensión de la estructura proteínica apenas pueden sobreenfatizarse. Estas coordinaciones pueden cargarse y enlazarse con programas de compuración perfeccionados -muchos del dominio públicc. rompen los puentes de hidrógeno. hornotetrámeras. mientras que las IieterooligomCricas. los bcidos ddbiles (H') y las bases débiles (OH-). respectivamente. Los puentes de hidrbgeno y las uniones electrostaticas formadas entre los residuos de superficie en unidades adyacentes estabilizan la unibn de las subunidades. las cadenas polipeptidicas individuales se llaman protómeros o subunidades. cambiar ángulos de unión. Las imágenes por resonancia magnética ORM). son dispersados en patrones que dependen de Ias densidades electrbnicac en diferentes partes de la proteína. Las diferentes orientaciones en el espacio de las subunidades les confiere propiedades diferentes en relación con el oligómero y permite a las proteínas multimkricas desempefiar papeles peculiares en la regulación intracelular. dominios o ligandos. el dodecilsulfato de sodio (SDS).

CÓMOSE PLIEGAN LAS PROTE~NAS ¿Cómo puede un polipkptido plegarse en sus estados fisiolbgicos nativos en una fraccibn de segundo? Todavía no hay respuestas definitivas disponibles por lo que esta pregunta sigue siendo objeto de investigacihn activa. La movilidad de la proteina desconocida se expresa en relación con la de estandares de PM conocido. mide E a velocidad a la cual una proteina se scdimenta en un campo gravitacional de alrededor de 10' x R. etcétera. Puede haber errores importantes si la proteina es muy asimétrica o interactúa fuertemente con el material del que se ha manufacturado el filtro molecuIar. análoga a la anterior. que luego se tifien para la visualizacibn de la proteína usando colorante azul de Coomassie o Ag'. El pIegamiento no puede proceder a traves de un enfoque "de búsqueda al azar"'. D. Primero se forman tramos cortos de estnictura secundaria -re. se aplica mejor a proteinas globulares. permite observar particulas virales. excelente para la determinación de pesos moleculares. Las proteinas desnaturalizadas. Para las proteinas monomeras. lo cual es bargo. pueden observarse algunos principios generales. protelnas oligoméricns y oligbmeros de PM elevado. desarrollado por Svederg. Las proteínas desnaturalizadas pueden volver a naturalizarse Muchas proteinas desnaturalizadas se vuelven a plecon el restablecimiento gar esponthneamente in v~tro subsecuente de su actividad biológica. que implique la exploracibn de todas las conformaciones posibles en la ruta hacia su estado nativo. que puede amplificar hasta 100 000 diiimetros. los dominios plegados se reunen para formar el denominado "glbbulo fundido" que tiene una estnictura secundaria extensa pero muy poca estructura terciaria ordenada. Filtración en gel Coliimnas de Sephadex o matrices semejantes. conducen a una estructura polipéptida original. que quedan recubiertas con SDS en su totalidad y por tanto con carga negativa. mientms que. Los cambios de conformación exitosos convierten el gl6bulo fundido en una forma compacta con una estructura terciariaordenada. Aun para polipéptidos comparativamente pequeños.A. Esta tkcnica física. Esto condujo a Anfinsen a concluir que la estructura primaria de los poliptptidos era en si misma suficiente para dirigir y orientar los plegarnientos de las protehas. ha sido reemplazada en años recientes por métodos menos complejos. Electroforesis en gel de poliacrilamida (EGPA) Proteínas desconocidas y esihndar se separan por electroforesis en gelcs de acrilamida con 5 a 15% de enlaces cruzados de diversa porosidad. Sin embargo. Ultracentri fugaclon analítica Este procedimicnto.oiones de hCIices alfa. para proteínas con estructura cuaternaria. giros beta. hojas beta. preparada por congeIación-descongelaci6n repetida de sacarosa a 20 por ciento. se separan con base en su tamafio (no en su carga) por EGPA-SDS en geles que contienen SDS. jel plegamiento a travts de una via de búsqueda al azar requeriría no segundos sino un periodo mayor que el estimado para la edad del universo! Es claro que el plegamiento debe ser un proceso más altamente dirigido que implica vias intermedias muy conocidas entre el estado presentc y el estado fisiolbgico normal. relativa a estos estándares. Las proteinas esthndares y las desconocidas se estratifican en un gradiente de sacarosa amortiguada de 5 a 20%. el contenido del tubo se retira en fracciones y se analiza la proteína contenida en cada fracción. las proteinas oligomtricas se desnaturalizan primero hirviéndolas en presencia de betamercaptoetanol y el detergente ionico con carganegativa dodecilsulfato sbdico (SDS). el plegamiento de los polipéptidos y de las proteínas multimGricas parece invoIucrar las siguientes etapas. En las proteinas de múltiples dominios. el proceso de plegamiento ya en este momento es completo. Centrifugación en gradiente de densidad de sacarosa Esta tecnica. luego se computa y se calcula su PM Principios generales Con base en el conocimiento actual. el PM de una proteina desconocida se calcula de su posicibn en la elucidn. Sin emtoma horas. C.es decir. complejos~enzim~ticos. Después de centrifugar toda la noche a 10' x g. que tienen "poros" de tamaño promedio definido. El microscopio electrónico visualiza complejos macromoleculares El microscopio electrbnico. B. Por su parte los cambios menores de la conformación entonces. el repliegue espontán~o mucho más de lo necesario para explicar el plegamiento de las proreinas in vitro. . La conclusilin de Anfisen de que P a estructura primaria dirige el ple- E. Para utilizar la tkcnica de EGPA-SDS. estos polipéptidos ordenados sirven como subunidades que se reúnen para formar multimeros. se calibran usando proteinas de PM conocido. Luego. La difusión dirigida hace crecer estos tramos cortos y conduce en últiino termino a un dominio.

seda o lana. La mayoría de las proteinas fibrosas desempefían funciones estructurales en piel. disulfuro diferentes. las cuales aceleran el proceso de plegamiento y lo guían a lo largo de vías específicas. o cistina) se fonrian bajo condiciones de oxidacidn dentro y entre los polipkptidos y estabilizan tanto la estructura secundaria como la terciaria. Las cadenas plipeptidicas de Eibroina forman arreglos de hojas beta antiparalelas. una proteína de un insecto. ilustra la estabilizacibn de una estructura secundaria por medio de fuerzas diferentes de los puentes de hidrbgeno. Estos arreglos esthn estabilizados exclusivamente por interacciones hidrófobas enee los gmpos Rde Gli sobre una superficie y entre los grupos R de Gli o Ser de la otra. por tanto. Pequetras cantidades de residuos como Val o Tir con gmpos R voluminosos aparecen con periodicidad e interrumpen las regiones de hojas beta y le confieren un poco Figura 6-1 t. mitocondrias y cloroplastos son proteínas grandes de múltiples subunidades que aceleran el proceso de plegamiento porque suminism un ambiente protegido cuando los p lipéptidos se pliegan en sus conformaciones nativas para formar estructuras cuaternarias. Las secuencias atipicas de aminohcidos en las proteínas fibrosas definen estruchiras secundarias-terciarias especificas que confieren propiedades mecánica específicas. LA FORMA DETERMINA LA FUNCIÓN El examen minucioso de proteínas representativas ilustra no sblo las estructuras únicas que han evolucionado para cumplir con funciones biologicas especificas sino también el estrecho nexo entre estructura proteinica y funcion biológica. en las cuales los gmpos R de residuos Gli (hidrbgeno} se extienden desde una superficie y los grupos R de Ala o Ser de la o m . Un residuo cisteinil dado puede. Estas proteinas incluyen las disulfuro isomerasa. . cual se pueden acomodar polip&ptidosgrandes.Proreinas: estructura y función 61 gamiento in vrvo todavía es vhlida. Las 14 subunidades idénticas de las proteínas HsplO y Hsp60. coli y Cpn 10 y Cpn60 de ¡os cloroplastos-forman parejas de anillos de siete subunidades que rodean una espaciosa cavidad central en la cual se pueden acomodar polipéptidos grandes. Las chaperoninas incluyen las proteinas de choque térmico cuya estructura consta de dos anillos de subunidades idknticas dispuestas alrededor de un espacio central en el Las fueizas hidrófobas estabilizan la hoja beta de la fibroína de la seda La fibroína de la seda. los cuales sólo uno es apropiado para el plegamiento biológico correcto. por tanto. aumenta la velocidad de todo el proceso de plegamiento. Prolil cís-trans isomerasa La configuraci6n de las uniones pdptido X-pro de los poIipéptidos recibn sintentizados es trans. La proteina enzimática disulfuro isomerasa facilita el "barajeo" de las uniones -S-Sporque acelera el Indice al cual los disulfuros sufren intercambio neto y. a s uniones disulfuro (-S-S-. proli-cis-frans-isomerasa y las chaperoninas. lsornerizaeibn del enlace peptídiw prolil N-alfa1 de una configuración cis a una trans relacionada can el esqueleto del polipbptido. formar muchos pares de enlaces. cejido conjuntiva o fibras como cabellos. Las chaperonhas incluyen las proteínas Hsp60 de choque tkrmino elaborada por las bacterias o los cloroplastos en respuesta a una elevación termica. sin embargo. Sin embargo. la cual revierte la desnaturalizacidn y agregacibn de las proteínas que se produce a temperaturas elevadas. GroES y GroEL de E. todavia no se comprende bien el mecanismo mediante el cual las chaperoninas logran esto. La enzima isomerasa prolil cis-fruns caializa esta isomerizacihn y. Chaperonas maleculares Las chaperonas moleculares de bacterias. Este ambiente protector contrarresta la tendencia de las regiones hidrrifobas expuestas a solventes de los polipCptidos parcialmente pegados o desnaturalizados a autorseunirse y formar agregados insolubles. pero requiere modificaciones para incorporar la participacidn de las proteínas accesorias. pero mQs de 10% de las uniones X-pro de las proteinas maduras tienen coiifiguración cts. facilita el proceso de plegamiento (figura 6-12). La composición de los aminoAcidos de la fibroina consiste casi por completo (85%) de residuos Gli que alternan con residuos Ala o Ser. Proteina dicu lfuro isomerasa [ . Las chaperoninas favorecen la? vías que inhiben las interacciones inapropiadas entre superficies complementarias y facilitan las apropiadas.

las estabilizan puentes de hidrógeno dentro de la cadena y despuks. el único residuo con un grupo R lo bastante pequeño para encajarse dentro del núcleo central de la superhdlice. Entonces. Tres hklices izquierdas se giran para formar una triple hdlice derecha o una superespiral. pero todavía son muy flexibles debido al caracter no direccional de las fuerzas hidrófobas estabilizantes. Los residuos prolil e hidroxiproli1 son inflexibles en su conformaciún y confieren rigidez. enzimas que requieren ácido ascorbico (vitamina C). Cada glicina está precedida por un residuo prolil o hidroxiprolil. estas extensiones terminales carboxilo y amino se retiran medianteproteólisis selectiva. reducci6n y glucosiIación. Esta triple superespiral helicoidal es sumamente fuerte. las terminales carboxiI y m i n o del precursor de la mlágena procolagena tienen una composicibn de aminoácidos típica de una proteina globular. Este proceso implica la participación de la enzima oxidasa lisil que requiere cobre. estabilizada con puentes de hidrdgeno formados entre (no dentro. Durante la maduración de la procolhgena. Por su parte. Cada tercer residuo es glicina.5 nm por casi 300 nm. lo cual refleja su conformacibn extendida estable. que comprenden casi 25% del total de las proteinas de un mamífero. A continuación estos aldehidos sufren una condensación aldol o se condensan con los grupos amino no alfa de la lisina o la hidroxilisina para formar bases Schiff. La reduccibn subsecuente foma enlaces covalentes cruzados estables que confieren una gran fuerza tensil. Al principio. Cada tercer residuo es glicina La figura estructural primaria de la colagena madura es (Gli-X-ProtHip). Finalmente. tendbn. incluyendo las de la piel. La hidroxilacion de los residuos prolil y lisil es catalizadapor laproIiIhidroxiIasa y Iisilhidroxilasa. los residuos hidrosilil específicos son glucosilados por las transferasas galactosil y glucosil. casi completamente extendidas en hojas antiparatelas beta resisten el estiramiento. Las modificaciones adicionales postraslacionales implican hidroxilacibn. la colhgena. hueso y músculo que tienen funciones esmcturales protectoras y de motilidad. un polimero de fosfato de calcio. Regiones largas de fibroina estrechamente empaquetada. La colágena ejemplifica diversas relaciones entre estructura y función Las colagenas. como en la hdlice alfa) las cadenas individuales de polip6ptidos (figura 57-1). mientras que de la piel forma tramos laxos y fibras flexibles. organizadas como una Iidlice no alfa izquierda que tiene alrededor de tres residuos por giro. la cual convierte los grupos no alfa amino a de los residuos Iisil e hidroxil en aldehidos. Estructura secundaria de las proteinas fibrosas La esrructura secundaria de las proteínas fibrosas. A continuación se analiza la estructura secundaria de la proteina mas abundante de los mamíferos.(Capitulo 6) de flexibilidad.. un principio que también se usa en los cables de acero para suspender puentes. muestran caracteristiczs estructurales que contrastan notablemente con las de las proteínas globulares. Muchas modificaciones postraslacionales caracterizan la maduración de la procolagena A diferencia de las superhelices de la colágena madura. ilustran de manera notable las diversas relaciones entre estructura y función que caracterizan a las proteinas Eibrosas de tos vertebrados.. La colagena de los tendones forma estructuras muy asimdtricas de fuerza tensil elevada. Pro y Hip La tropocolágena consiste en tres cadenas de polipéptidos con 1000 residuos aproximadamente. La repulsibn mutua entre los residuos prolil obliga al polipeptido a formar una hklice extendida con giro a la izquierda. Los enlaces covalentes cruzados estabilizan las fibras de la colagena Las cadenas de tropocolAgena se reúnen para formar rnicrofibrillas de coIhgena. Las fibras de colhgena maduras altamente asimbtricas miden 1. la colagena de las regiones d u r a de los dientes y de [os huesos contiene hidroxiapatita. por enlaces covalentes formados entre y en el interior de las hdlices. Trastornos nutricionales y genéticos que pueden involucrar estructuras secundarias deficientes La importancia mddica de la estructura secundaria estable está ampliamente documentada por los trastor- . condensación de aldol. La tropocolágena es una molécula de triple hélice rica en Gli. oxidación. La superespiral resiste la distorsión debido a que sus tres polipéptidos están en espirales con direcciones opuestas. en la córnea del ojo está ordenada de manera casi cristalina y es transparente.

62:349. Las estructuras secundaria y terciaria. La estructura cuaternaria. las hidroxilasas prolil y iisil son inactivas. Copeland RA: hethods of protein analysis: A practica1 guidc to laboratury protocolc. 1990. llames BD. beta-alfa-bcta). Los reactivos que rompen enlaces no covalentes (por ejemplo. Annu Rev Biochcm 1993. Annu REV Biophys Biomol Struct 1994. Ann Rcv Ccll Biol 1993. IY9 1. [Annual publication. son dictadas Dor la estructura nrimaria. Petsko GA: Wrakly polar interactions in proteins. Creighton TE: Prorein Struchre. Rickwead D: Gel Eleczrophoresis ofFroteins A Pracaical Approacl~. proteins as molecular chapcroncs. Luego. enlaces salinos (electrostáticos) entre residuos de superficie y relación. pueden producirse formas geneticamente distinhs de la enfermedad. Ciersach LM: Polypeptide interactions with molecular chaperones and their relationship ta in vivo protein folding. una enfermedad nutricional caracterizada clínicamente por sangrado dc las encías.62:653. De mancra similar. La estructura secundaria hescribe el plegaAiento de cadenas polipeptidicas en figuras unidas por pucntes de hidrbgeno rnuftiples como helice alfa y hoja plegada beta. Las enfennedades relacionadas con defectos en la maduración de la colagena comprenden al síndrome de Ehlers-Danlos y el escorbuto (enfermedad por deficiencia de vitamina C). Neupert W: Protciii foIding in the cell: Thc role of inolecular chaperones Hsp70 and HspóO. La estructura terciaria se refiere a las relaciones entre dominios estructurales secundarios v entre residuos bastante alejados desde el punín de vista de su estructura primaria. 1990 Brrnden C. l l a r t l FU. estructuru y función 63 nos de la biosintesis y maduracibn de la tropocolhgena. la enfermedad de Menkes que se distingue por el pelo ensortijado y retardo del crecimiento. que conciernen a conformaciones proteíni- cas permitidas por los enlaces peptídicos. Matthews CR: Pathways of protein folding Annu Rev Biochem 1993. M a r t i n J. Adv Protcin Chem 39. Chapman & Hall. terciaria y cuaternaria con perdida concomitante de la actividad biolhgicn (desnaii~alizacion). 1943. varios tipos del sindrome de Ehlers-Ilanlos se distinguen clinicamente por articulaciones desplazadas y anomalias de la piel que muestran defectos eii los genes que codifican procolágeiiaalfa. Anierican Asso- ciation for the Advancement of Science. se caracteriza por la fragilidad de los huesos. 1986.34:269. procoihgcna N-peptidasa. filtracf~nen gel y electroforesis en gel (estructura cuaternarial. Las técnicas físicas para estiidio de órdenes superiores de estructura proteinica incluyen cristalografía con rayos X (estructura secundaria v terciaria) mhs ultracetitrifugación.32:645. en último término. REFERENCIAS Advances zn Frolein Chemistw Academic Prcss. secundario. IRL Press. causadas por defectos en diferentes genes de la biosintesis de coIágena. no estequiometrica de grupos R hidrofobos en el interior de las proteínas. y la tropocolágena no puede sufrir las reacciones para f o m a r enlaces covalentes cruzados. Como consecuencia se produce el escorbuto. 1944 to Georgopoulos C. En la insuficiencia grave de vitamina C. terciario y cuaternario (para proteínas oligoméricas').Proteinm. . 1990. secuencia de aminoácidos y ubicación única de cualquier puente disulfuro.9:601 Gierasch LM.: Predicting the conformation of proteins from sequcnces: Progress and future progress. presente sólo en proteinas que tienen dos o m& cadenas polipep~ídicas (proteínas oligomdricas).21293 Hendrick JP. las iirdenes su~eriores se estabi lizan sólo por fuer7as dbbiles que incluyen puentcs de hidrhgena múltiples. describe puntos de coniacto y otras relaciones entre estos polipéptidos o subunidades. Además. la muerte. Tooze J: Introductzon lo Prorein Structure Garland. la estructura primaria contiene enlaces covalentes. El estrecho nexo entre la estructura proteinica y la función biológica se ilustra con dos proteínas fibrosas: fibroina dc la seda y colágena. Annu Rev Riophys Rinmol Struct 1992. urea o SDS) destruyen las estructuras secundaria. En tanto que.Edelstein Sd: Prntein Meihods. o l isi l hidroxilasa (capitulo 57) RESUMEN Las caracterlsticas estructurales de las protehas se consideran bajo cuatro órdenes: primario. 1989: 125. 1990. Welch WJ: Role of major hcat-shock date..] Benncr SA et al. Hartl FU: Molecular chaperone functions of heat-shock proteins. Dunn MJ: Gel electrophoresis of Proteins Wright. Los trastornos geneticos de la biosintesis de la colágena incluyen varias formas de osteogénesis imperfecta que. 1993. IRL Psess. combinaciones de estos motivos pueden f o m a r estructura^ supersecundarias (por ejemplo. La estructura primaria. De manera similar. deticiente cicatrización de las heridas y. refleja una defíciencia en la dieta respecto a la IisiIoxidasa que requiere cnbrc. Landry S J . Bollag DM. King J: Prolein Folding. Creighton TE: Proteln Structuve A Practica1 Approach Oxford. Wiley-Liss. Burley SK. Adv Enzymc Regul 1994. en clinica. está codificada en los genes. Darby NJ.

1995. Adv Protein Chern 1958. Hyberts SE. In: Predzctinn of Proiein Structure arad fhe Prznciples oJProtein Conformaation Fasman GD. Kiviriklo K3: Collagens: Molecular biology.37: 3 .303. Adv Protein Chern 1993. Scopes RK: Profein Purificahon: Pr~nczpl~s andPractices Springer. Plenum Press. Stein RL: Mechanism of enzymatic and nonenzymatic prolyl c i s . 1993.64 4 Bioquím~ca de Harper (Cupi!ulo 6) Prockop DJ. Adv Protein Chem 45. Wligner C.21:167. Annu Rev niophys Biomol Struct 1992. Richardson JS. Rose CR.21 95. Baldwin RL: The mechanism ora-helix formation by peptides. .64:403.44: 1. Weber PC: Physical principles of protcin crystalIization. Annu Rcv Biophys Biomol Struct 1993. 1989. Annu Rev Biochem 1995.t m isomeri7aiinn. diceases. and potentials for therapy. Adv Protein Cbem 1 99 1:41: 1. Gierasch LM. Schmid FX: Prolyl isomeraqe: Enzymatic catalysis of slow protein-rolding reactions. Smith JA: Tums in proteins and peptides. Havel TF: NMR structure determination and solurion: h critique and comparison with x-ray crystallography. Segrest JP et al: The amphipathic a-helix: A muliifunctional structural molif in plasma lipoproteins. Scholz JM. Annu Rev Biophys Uiornol Struct 1992. Richardson DC: Principies and patterns of protcin conformation.22: 123.

La extensa red de enlaces dobles conjugados del hem absorbe luz en el extremo bajo del espectro visible. Pr. El estudio detallado de la hemorrlobina y la mioglobina ejemplifica aspectos estructuraIes comunes a muchas proteinas. Los carbonos beta sostienen a los sustituyentes característicos de un tetrapirrol específico. la oxidación del Fe2'de mioglobina y hemoglobina destruye su actividad biológica. En un sentido. Los tetrapimoles constan de cuaao mol~culas de girrol (figura 7-1) enlazadas en un anillo planar por cuatro puentes al fa-metileno. la estabilizacEbn de la eshuctura cuatemariade la desoxihemoglobina por el 2.En los citocromos. este conocimiento permite reconocer la base rnolecular de enfermedades genéticas como la enfermedad de cklulas falciformes (que resulta de la alteracibn de las propiedades de superficie de la cubunidad beta de la hemoglobina) y tas talasemias (enfermedades hemoiiticas familiares crbnicas. EL HEM Y EL HIERRO FERROSO CONFIEREN LA PROPIEDAD DE ALMACENAR Y TRANSPORTAR OX~GENO La mioglobina y la hemoglobina poseen coma grupo prostdtico un tetrapirrol cicIico. Por último. Los sustituyentes beta deteminan si un tetrapirrol es hem o un compuesto analogo. su mayor significado médico consiste en que su conocimiento muestra. M. respectivamente. Rodweii. este capitulo estudia la rnioglobina y la hemoglobina. proteinas con grupos prostt5ticos tetrapirrdlicos (y sus iones methlicos relacionados) incluyen los citocromos (Fe2' y Fe3'). V. los grupos son metilo (M). del inglés. PhD Como ejemplo de la relación estructura-función proteinica. El cianuro y el mon6xido de carbono son tbxicos debido a que interrumpen la función fisiolbgica de las proteinas hdrnicas. de manera elocuente. en el transporte de electrones y en la fotosintesis. Por el contrario. Pirrol. IMPORTANCIA BIOMÉDICA Las proteínas hemicas intervienen en el transporte y fijacibn de oxígeno.3bisphosphoglicerafe) es esencial para comprender los mecanismos del mal de montafía y de la adaptacihn a las grandes altitudes. En el centro de este anillo planar. M (figura 7-2). las relaciones estructurafuncibn de las proteínas. la oxidación y la reducción del htorno de hierro son esenciales para su funci6n bioldgica. vinilo (V) y propionato (Pr) y siguen el orden M. citocromo oxidasa y hemoglobina. las enzima catalasa y triptófano pirrolasa y la clorofila (Mg2*). M. En el hern. Los carbonos alfa estdn unidos por puentes metileno en un tetrapirrol. V.3-bisfosfoglicerato (BPG. - Figura 7-1.Proteínas: miogIobina y hemoglobina Víctor W. por lo que su color es rojo intenso. hay un titorno de hierro ferroso ( ~ e ~ ' ) Otras . como el hern . caracterizadas por defectos en la síntesis de la hemoglobina). Ademiis. proteinas importantes por derecho propio y porque en ellas puede apreciarse cómo las estructuras de las proteinas conforman o determinan sus funciones bioldgicas. 2. Pr. el hem.

Los residuos con regiones polares y no polares (por ejemplo. "His FX" se refiere al m v o residuo en la hClíce F e identifica a un residuo histidilo. los residuos histidilo Fg (proximal) y E7 (dista]) (figura 7-3). Leu. Comenzando por la terminal amino. embargo. La estructura secundaria y terciaria de la rnioglobina en solución es muy semejante a la de larnioglobina cristalizada. Sin embargo. Val. en su distribución espacial hay diferencias evidentes. no obstante. 2 Neurath H [Editor]. el oxigeno almacenado se libera para usarse en las mitocondrias musculares para la síntesis de ATP dependiente de oxígeno. se denominan hklíces de la A a la H.jemplo. Exhiben virtualmente el mismo espectro de absorción. Las regiones donde se localizan las hklices alfa se designan con las letras que van de la A hasta la H. Los residuos que en la esttuctum primaria se encuentran bastante alejados (por ejemplo. el interior de la mioglobina s61o contiene residuos no polares (por e. por ejempIo. Sin Figura 7 3 . La quinta y la sexta posiciones de coordinacbn del Fe2+con perpendiculares y directamente arriba y abajo del plano del anillo hemico. hoja beta o asa se le asigna un nhmero o letra a partir de la terminal amino del polipeptido. los residuos polares están en la superficie de la rnioglobina L a mioglobina. cadena polipeptfdica sencilla con peso moIecular de 17 000. La mioglobina es rica en hélices alfa La mioglobina es una molecula compacta. La oxirnioglobina almacena oxígeno La mioglobina del tejido muscular rojo almacena oxlgeno.5 nm (figura 7-3). no es excepcional respecto a sus 153 residuos aminoacídicos. a cada hélice alfa. toscamente esférica. la cristalina fija oxígeno y la cantidad de hélice alfa en una solucibn (calculada por la dispersión óptica rotatoria y dicroísmo circular) se aproxima bastante a la mostrada por el análisis cristalográfico con rayos X.Las regiones interRelicales se identifican con las letras de las dos hhlices que conectan. Hem Los carbonos de los anillos pirrolicos y de los puentes de metileno son coplanares y el átomo de hierro (Fez+) esta casi en el misma plano.La superficie es polar y el interior no polar. Con dos excepciones. Fen y Met). Los residuos individuales se designan por la letra de la hdlice en la que residen y un nrjmero que indica su distancia desde [a terminal amino de esa hélice. 2nd ed vol. en hélices diferentes) pueden. estar en sentido espacial muy juntos. en el ejercicio extenuante). patrón típico de las proreinas globulares. Tri y Tir) orientan sus partes no polares hacia el interior. Bajo condiciones de escasez (por ejemplo. el Btorno central de hierro y la ubicación del lado polar del anlllo hemica (casi a las siete horas del reloj) que se enfrenta a la superficie de la molécula de mioglabina.5 x 2. 1964 Reproducida con autorización ) . Aproximadamente 75% de sus residuos se distribuyen en ocho hhlices alfa (giro a la derecha) de 7 a 20 aminohcidos de longitud. Obsérvese la naturaleza de los grupos sustitvyentes en los carbonos beta de los anillos pirrblicos.5 x 3. Por ejemplo. Academic Press. Sin contar los dos residuos histidilos que funcionan en lafijacion del oxlgeno. Tre.66 Rioquímica de Harper (Capitulo 7) Figura 7-2. Modelo de mioglobina de baja resolucibn S610 se muestran los Btomos de carbono alfa. Para facilitar la referencia a regiones particulares de estructura secundaria o terciaria de un polipéptido. (Basada en Dickerson RE en: The Proteins. que mide 4. su conformación es atipica.

se orienta con sus propionatos polares en la superficie. especificar el plegamiento de la proteina a su conformacibn nativa con actividad biológica. El hierro se mueve hacia el plano del hern cuando se fija el oxígeno En la rnioglobina no oxigenada.Proteínw: miog/obinuy hemoglobina 67 En presencia del hem.03 nm (0.5. con excepcidn de His E7 y de His FS. un htorno de oxigeno ocupa la sexta posicion de coordinaci6n del iitorno de hierro y entonces &te se desplaza a 0. y el consecuente desplazamiento de His FB y los residuos aminoacldicos enlazados por covalencia a CI. Este movimiento produce una nueva conformacibn de ciertas porciones de la proteina. hacia el plano del anillo. los residuos circundantes son no polares. Por tanto. Aunque no estit enlazada a la sexta posicion de coordinacidn del hierro. Springer-Verlag. Un segundo átomo de oxigeno se une en un dngulo de 121" con respecto al plano del hern y orientado alejándose de la h istidina dista1 (figura 7-51. En la mioglobina oxigenada. Como se explic6 en el capítulo 6.3 A) fuera del plano del anillo en direccidn a His F8. Si se retira la urea por diálisis y se agrega hem. la estructura primaria de la apomiogiobína determina un plegamiento proteínico correcto Cuando la apomioglobina (mioglobina sin el grupo hem) es preparada reduciendo el pH a 3. Figura 7-6. este importante concepto se extiende a otras proteinas: la estructura primaria de una proteina dirige su conformacibn secundaria y terciaria. la histidina distal (His E7) permanece en el lado del aniilo hdrnico al otro lado de His F8 (figura 7-4).1 A) fuera del plano del hem. el contenido completo de hélice alfa se recupera y la adiciirn de Fe2' restablece su actividad biolbgica (fijaci6nde oxigeno) integra. en presencia del hern. Adicidn del oxlgeno al hierro hemico en la oxigenacibn Tambien se muestran las cadenas imidazólicas laterales de los dos resrduos importantes de histidina de la globina que se adhieren al hierro del hem (Reproducida con autoruacion de Harper HA y colaboradores Phys~ologische ChemEe. 4 ' HISdista1 (ET) Las histidinas F8 y E7 llevan a cabo funciones únicas en la fijación de oxígeno El hern de la mioglobina. La adicibn subsecuente de urea elimina todo el contenido de hklices atfa. 1975 ) La apomioglobina proporciona un ambiente adverso para el hierro hernico Cuando el oxigeno se une a la rnioglobina. La quinta posici6n de coordinacion del átomo de hierro se une al nitrógeno de un anillo de la histidina proximal. el enlace entre este y Fe2' es perpendicular al plano del anillo hemico. su contenido de h&licealfa decrece de manera notable. el hierro del hern se encuentra aproximadamente a 0. la oxigenacibn de la rnioglobina va acornpaflada por el movimiento del átomo de hierro. Anguios pceferidos para el enlace del oxfgeno y el rnonbxido de carbono al átomo de hierro del hern libre [línea gruesa) . His F8 (figura 7 4 ) . His proximal (Fa) P. Por tanto. Figura 7 4 .01 nm (0. El resto se proyecta hacia el interior de la rnolkcula de mioglobina en donde. la infomacidn estnictural primaria contenida en la apomioglobina puede. que se encuentra en un surco entre las hélices E y F (figura 7-3).

en la mioglobina la histidina dista! obstaculiza esttricamente a los enlaces de CO en este Angulo (figura 7 6 ) . la PO2 del tejido muscular puede disminuir hasta 5 mrn Hg. O) en posición perpendicular respecto al anillo hémico (figura 7-5). como PO2 o presión parcial de oxigeno) en et entorno inmediato del hierro h&rtico. Flgura 7-7. aqui sólo se describirkn las hemoglobina~ humanas. Anguios para el enlace del oxigeno y e l rnonbxido de carbono al hierro hérnico de la mioglobina La histidina distal E7 obstaculiza el enlace del CO en su Angulo preferido (1 80 O) respecto al plano del anillo hbmico. la mioglobina cede con facilidad su oxigeno pare la síntesis oxidativa de ATP por las rnitocondrias musculares. No obstante. Sin embargo. por lo común. la forma de la isotenna de absorción de oxígeno es hiperbblica (figura 7-7). A esta presión. aproximadamente 200 veces la fuerza del enlace hem02. NO obstante. Si la amibsfera contiene restos de CO y el catabolismo normal del propio hern produce cantidades pequefias de este gas. tejidos (20mm Hg) y el músculo en trabajo activo (5 mm Hg). . Aunque la bioquímica comparativa de las hemaglobinas de los vertebrados constituye un campo fascinante. ¿por qué entonces no es el CO (en lugar del Oz) e[ que ocupa la sexta posicidn de coordinacibn del hierro hémico de la mioglobina? La respuesta se encuentra en el ambiente adverso del hem en la mioglobina. COZ Y PROTONES La hemoglobina de los eritrocitos de los vertebrados llevan a cabo dos funciones biolbgicas principales: 1) transportar el 0 2 del aparato respiratorio a los tejidos perifericos y 2) transportar el C01 y los protones. la miaglobina podria retener oxigeno de manera eficaz en los pulmones. La orientacihn preferida del CO para enlazarse al hierro hkmico es con los tres átomos (Fe.El mon6xido de carbono (CO) se une al hem aislado con una afinidad aproximadamente de 25 000 veces mayor que la del oxigeno. en la privacibn de oxigeno que acompaflñ al ejercicio físico extenuante. pero eficaz para almacenarlo? La cantidad de oxigeno unido a la rnioglobina (expresada como "porcentaje de saturacibn ") depende de la concentracibn de oxigeno (expresada LA HEMOGLOBINA TRANSPORTA 0 2 . Dado que la PO2 en el lecho capilar pulmonar es de 100 mm Hg. Esto obliga al CO a unirse en una configuracibn menos favorabte y reduce la fuerza de la unión hem-CO en más de dos órdenes de magnitud. Aunque esta orientacion es posible para el hem aislado. desde los tejidos perifericos hasta los pulmones para ser excretados. la POz de la sangre venosa es de 40 mm Hg y la del músculo activo aproximadamente de 20 mm Hg. Figura 7 4 . Para la mioglobina. Ea relacion entre PO? y la cantidad de oxlgeno unido puede graficarse como una curva de saturacibn de oxigeno (disociacidn del oxígeno). Curva de fijecibn de oxlgeno para la mioglobina Obsérvese la relacibn entre el porcentaje de saturacidn y las presiones pardaks representativasen pulmones(lO0 mm Hg). LAS CURVAS DE DISOCIACIÓN DEL OX~GENO PARA LA MIOGLOBINA Y LA HEMOGLOBINA EXPLICAN SUS FUNCIONES FISIOLQGSCAS ¿Por que la mioglobina es inadecuada como proteina transportadora de oxígeno. Puesto que la mioglobina no puede liberar una fracción grande de su oxigeno unido aún a 20 rnm Hg. una pequeila cantidad (m8s o menos 1%) de la mioglobina está presente en forma de mioglobina-CO. C. no sirve como un vehículo eficaz para el transporte del oxigeno de los pulmones a los tejidos perifkricos.

Igual que en la rnioglobina.gammaz(a2. Dependiendo del organismo. compuestas de pares de polipbptidos diferentes (denominados alfa. compdrense estas cantidades a la PO2 de los pulmones humanos (100 mrn Hg) y de tos tejidos (20 mm Hg) con las de la rnioglobina (figura 7-8). garnrna. la hemoglobina muestra una cinética cooperativa de fijacibn. steros: espacio} de la hemoglobina proporcionan un modelo para comprender otras proteínas alostericas. es consecuencia en parte de la presencia de aminohcidos de propiedades análogas en puntos equivalentes en las estructuras primarias de ambos. Si ya existe oxigeno unido. Curvas defijacibn del oxígeno de la hemoglobina y la mioglobina. La P50 compara las afinidades relativas de diferentes hemoglobinas para el oxigeno La PW es la presibn parcial de oxfgeno que satura la mitad de una moltcula de hemoglobina. la fijacibn de subsiguientes moltculas del mismo tiene lugar con mayor facilidad. Wyngaarden JB.LAS PROPIEDADES ALOSTÉRICAS DE LAS HEMOGLOBINAS SON CONSECUENCIA DE SUS ESTRUCTURAS CUATERNARIAS Las propiedades de cada hemoglobina son consecuencia inherente de su estructura cuaternaria. Ademas las propiedades alostéricas (del griego. p 40 30 20 'lo ' 0 20 40 00 80 100 120 140 Presidn gaseosa del oxígeno (mrn Hg) Flgura 7-8. los polipdptidos alfa (14 1 residuos) y beta (146 residuos) de la hemoglobina A (HbA) son codificados por genes diferentes y tienen estructuras primarias distintas. f 978 ) . con la POz baja que prevalece en los tejidos perifdrjcos. Por tanto. 4th ed McGraw-Hill.50 P a. la facilidad con la que el Ozse une a la hemoglobina depende de la presencia de otras moléculas de 0 2 en el mismo tetrámero. también rnkirna. Las estructuras tekarnéricas de 1a.&). así como de la secundaria y la terciaria. allos: otros. Por tanto. propiedad que le permite retener una cantidad máxima de oxígeno en los pulmones y ceder una cantidad. exhiben estructuras secundarias y terciarias casi idrlnticas. Esta semejanza que se extiende a la ubicacibn del hem y de las ocho regiones helicoidales. 2 60 . Por ejemplo. HbS pernoglobina de c&lulasfalciformes) = alfa2S2. la tensibn caprlar (músculo activo) del oxígeno es de 20 mm Hg y la tensibn de oxígeno minirna requerida por las enzimac citocrómicas es de 5 mm Hg. y sus curvas de saturacibn de oxigeno son sigmoideas (figura 7-8). y HbAz (una hemoglobina menor del adulto) = alfaz. delta y g a m a de las hemoglobinas humanas tienen estructuras primarias altamente conservadas. HbF memoglobina fetal) = alfaz. La oxigenación de la hemoglobina se acompaña por cambios en la conformación de la apoproteína La hemoglobina fija cuatro rnol~culas de oxlgeno por tetrhmero (uno por cada subunidad hdmica). Aunque semejantes en longitud global. S. aun- 100 . Z a hemoglobina es una proteína tetramérica Las hemoglobinas son protcinas tetramdricas. la tensión de oxígeno de la sangre venosa mezdada es de más o menos 40 rnm Hg.shemoglobinas comunes son: H1iA @emoglobina normal del adulto) = alfazbeta2. La agrupacibn de cadenas en una estructura tetramkrica (hemoglobina) permite una cesibn mayor de oxígeno que la que sería posible mn cadenas sencillas. las estructuras primarias de las cadenas beta. Fredrrckson DS [editors]: The Metabolic Basis of lnhented Disease. A diferencia de la mioglobina. deltaz (azSz. La tensión artenal de oxigeno es aproximadamente de 100 mm Hg.). tos residuos hidrbfílos son características de la superficie en las subunidades alfa y beta de la HbA. No asi. etcétera). la Psopuede variar ampliamente. los residuos hidrofobos son internos y (de nuevo con excepci6n de los dos residuos His por subunidad). el polipéptido beta es muy semejante a la rnioglobina a pesar de la presencia de siete hélices en lugar de ocho. Ademh. La estructura cuaternaria Z e da a la hemoglobina propiedades adicionaIes sorprendentes (no existentes en la mioglobina) que la adaptan a su función biologica única y le permiten una regulacibn precisa de sus actividades. (Modificada con autorizacidn de Stanbury JB. delta.g so 'O c 90 5 70 - La mioglobina y las su bunidades beta de hemoglobina comparten estructuras secundarias y terciarias casi idénticas A pesar de las diferencias en el tipo y niimero de aminoácidos presentes en la mioglobina y en el polipéptido beta de HbA. beta.

Estos cambios alteran lambidn de manera profunda las estructuras secundaria. terciaria y cuaternariade la hemoglobina. alfa ha reemplazado a las subunidades zeta y a 10s pCptidos Cpsílon. Figura 1-9. el feto humano no sintetiza cadenas alfa ni beta sino reta y epsilon. Brachemistry. el par alfa2lbeta2 derjva un poca hacia el eje. Sin embargo. Grandes cambios de conformación acompañan la oxigenación de la hemoglobina La unión del oxígeno ocasiona la rotura de los enlaces salinos entre carboxilo de las cuatro subunidades (figura 7-9). Para H bA. Cambios en el contado alfailbeta2 en la oxigenacion Et contacto se cierra de un Area en forma de cola de paloma a otra. la hemoglobina F. cuya sintcsis comienza en el tercer trimestre. dcspuks del parto la HbF es inadecuada. 2nd ed Freernan. Las cadenas beta. Asi. haciendo compacto al tetramero e incrementando Ia afinidad de los hemes por el O: (figuras 7-1 0 y 7-1 1 ).' II. Pru= 20 mm Hg. La fijación subsecuente de O2se facilita ya que se requiere la rotura de un número menor de enlaces salinos. 1 Forma T wi Forma R Figura 7-10. tiene la camposici6n alFa: gammaz.) Figura 7-1 1. human~iaI hemoglohin) proporciona un ejemplo representativo.408 ) . el par aifallbetal no ect6 sombreado y se conserva f ~ oen . Al principio. comprende el cambio de un puente de hidrbgeno a otro distinto Los dernac enlaces son no polares (Reproducida con autorización de Perutz MF: Molecular pathology of human hemoglobin Stereochernical interpretation of abnormal oxygen affinities Nature 1971.70 Bioquimica de Harper (Capiau/o 7) que en todos los casos es superior a la PO?en !os tejidos periféricos del organismo en cuestihn. 1981. que es la hemoglobina de Ia vida fetal tardía. La hemoglobina fetal humana (H bl: del inglés. Durante la trancicibn de la forma T a la R de la a rotacibn da un par de subunihemoglobina se produce F dades rigidas (alfaZlbeta2) de 15 grados en relación con el otro par de subunidades rígidas (alfallbetal) El eje de rotacibn es excéntrico y además. Pro = 26 mm Hg. L a estructura cuaternaria de la hemoglobina parcialmente oxigenada se describe como el estado T (tenso) y el de la hemoglobina oxigenada (HbOz) DESOXI (forma T) 0x1 (forma R) His 94 Asn G41102) COO 4 / n= ASP NH. ya que su elevada afinidad por el oxígeno la obliga a ceder menos O2a los tejidos. Al final del primer trimestre. para HbF. Un par de unidades alfdheta gira con respecto al otro par alfabeta. En el diagrama.232. Esta diferencia permite a la HbF extraer oxígeno de la HbA de la sange placentaria. tantu que el par sombreado alfa2lbeta2 gira y se desplaza. Enlaces salinos entre las diferentes subunidades de la desoxihemoglobina Estas interaccioneselectrastáticas no covalentec son interrumprdas por la oxigenación (Ligeramente modtficada y reproducida con autorización de Stryer L. no reemplala en su totalidad a gamrna hasta algunas semanas despues del nacimiento.

Para evitar que se aumente la acidez en la sangre. la fijacibn de! oxigeno obliga la expulsibn del COz. Este movimiento se tsansmite a la histidina proximal (Fg). debido a que son demasiado inestables para existir en cantidad significativa. CO~+H~-NH. La Iransicibn de la estructura T a la estructura R es mfis probable conforme se oxigena cada 1 d e los 4 grupos hem de una hemoglobina tetrhmera En este modelo. debe existir un sistema amortiguador que absorba el exceso de protones. el proceso se invierte. Este fenbmeno reversible se llama efecto Bohr: este efecto se acompafía por una desviacibn de la curva de oxigenacibn hacia la derecha. más oxígeno debe unirse para desencadenar la transiudn Aquí no se muestran mol&culac totalmente oxigenadas en la estructura T ni totalmente desoxigenadas en su forma R. Con ayuda de la anhidma carbbnica. es decir. los Qtomosde hierro de la desoxihemoglobina (que se encuentran alrededor de 0. la hemoglobina se encuentra menos saturada a una presión parclal de oxígeno dada. formando un car- La conversión del amino terminal de una carga positiva a una negativa favorece la formacibn de un puente salino entre las cadenas alfa y beta. m Estructura T Estructura R Figura 7-12.=ZH'+ H ~b4-COO- La oxigenación de la hemoglobina se acornpaiia de cambios de conformación en la vecindad del grupo hern En la oxigenación. En los pulmones. es decir. los puentes salinos (lineas delgadas) que enlazan las sribunidades en la estructura T. Mientras mayor sea su mncentracion. laanhidrasa carbónica de Ios eritrocito5 cataliza Ia formación de ácido carbonico (figura 7-14). La transición entre las dos estructuras es modificada por varios factores. conforme el oxígeno se une a la desoxihemoglobina. El efecto Bohr es una propiedad de la hemoglobina tetramérica y depende de la interaccibn hem-hem o de efectos cooperativos. En los pulmones. La hemoglobina retiene dos prorones por cada cuatro rnoltculas de oxigeno que pierde y de este modo aumenta la capacidad amortiguadora de la sangre (figura 7-15).como el estado R (relajado) (figura 7-12). la oxigenacibn de la hemoglobina se acompafía de la expulsi6n y la subsiguiente exhalación de COZ. cloro y BPG. (Modificada y redibujada Con autorizacidn de Perutz MF Hemoglobin structure and respiratory transport Sci Am [Dec] 1978:239. donde el estado T tiene afinidad menor por el susírato. pero se vuelve rnhs probable con cada oxígeno sucesivo que se une. que avanza hacia el plano del anillo y arrastra consigo a residuos adheridos a His F8. bióxido de carbono. los protones se liberan y se unen al bicarbonato formando hcido carbónico.92 ) . la hemoglobina transporta COZy protones a los pulmones Además de llevar el oxigeno de los pulmones a los tejidos periféricos. Cuando la sangre recibe el Coa. se rompen progresivamente al unirse al oxigeno y aún aquellos enlaces salinos que no se han roto se debilitan cada vez m i s (lineas onduladas) La transicibn de T a R no tiene lugar sino decpu6s de q u e se han filado cierto numero de rnolewlas de oxigeno. la hemoglobina facilita el transporte del COz de los tejidos a los pulmones para ser exhalado. Este se disociacon rapidez en bicarbonato y un protón. Por tanto. el hcido carb6nico forma Coz. situación tipica del estado "desoxi". incluyendo protones. El bióxido de carbono reacciona con los grupos amino terminales de la hemoglobina. Después de la liberación de oxígeno a los tejidos. La hemoglobina puede un irse directamente al COI cuando cede su O? y aproximadamente 15% del CO1 acarreado por Ia sangre es transportado asi. La mioglobina no muestra tal efecto. bamato y liberando protones que contribuyen al efecto Bohr.06 nm fuera del plano del anillo hérnico) se mueven hacia este plano (figura 7-13). La R y T se utilizan tambikn para describir las estructuras cuaternarias de las enzirnas alostkricas. que es exhalado.

Los protones que causan el efecto Bohr se generan por rotura de enlaces salinos durante la fijación del oxígeno Los protones que ocasionan el efecto Bohr. 2nd ed Freeman 1981. cuando es dechidratadopor la anhtdrasa carbbnica. La hemoglobina desoxigenada actúa como un amortiguador al fijar protones y liberarlos en los pulmones Aqui. Formacibn de á d o carbónico. el cual es liberado como C 0 2en la sangre alveolar (figura 7-1 5). Este compuesto se forma a partir del intermediario de la vla glucolitica. y tos protones se unen a los residuos HC3 de la cadena k t a .3-bicfosfoglicerato (BPG) estabiliza la estructura T de la hemoglobina En los tejidos perifericos.(Capítulo 7) Histidina Fa ZCO.3-bisfosfoglicerato. Una molécula de BPG se une a cada tetrámero de la hemoglobina en una cavidad formada por residuos de las cuatro subunidades. El 2. la unibn del oxígeno a la hemoclobina desaloja a los protones. estos se combinan con el ion bicarbonato y regeneran al ácido mrbbnico el cual.:>-03 TEJIDOS FERIFERICOS (Amortiguador) 2HzCOa PULMONES Generado por el dcb de Krebs /' Figura 7-13. Efecto Bohr El bibxido de carbono generado en los tejtdos periféricosse combina con el agua para formar Audo carbbnico el cual se disocia en iones bicarbonato y protones. (Ligeramente modificada y reproducida con autorizacibn de Stryer L Biochemistry. liberados de los itomos de nitrógeno de los residuos HC3 (His 146) de la cadena beta. El primer fenbmeno puede representarse en una curva de disociacibn del oxigeno por un desplazamiento a la derecha al aumentar la concentración de iones hidrbgeno (protones). En resumen.. es decir cuando la molécula de hemoglo- Figura 7-14. mtatizada por F a anhidrasa carbbnica eritroutaria y disociacibn del áudo carbbnico a ion bicarbonato y un protbn. Por tanto. son generados por la rotura de puentes salinos durante la fijacibn del oxigeno a la estructura T. en tanto que un incremento en el oxlgeno provoca la liberacibn de protones. La cavidad central es de tamaño suficiente para el BPG sblo cuando el espacio entre las hélices H de las cadenas beta es de una anchura adecuada. en la cesibn del oxigeno E a estructura T y los puentes salinos se regeneran. una escasez de oxigeno acumula el 2. 1. La regene- Figura 7-15. Estos protones. produce bibxido de carbono. El Btomo de hierro se mueve en el plano del hem durante la oxigenacibn La histidina F8 y sus residuos relacionadosson arrastrados con el fitomo de hierro. ración de los enlaces salinos propicia la liberacibn del O2 de la hemoglobina oxigenada (forma R). + 2HzO 2HXOs 1l z 3 Il Repulsibn 41 Plano de la porñrina 2HCO3- + 2H + 4% x.3-difosfoglicerato (BPG)(figura 7-1 6). Por otro lado. . que es exhalado desde los pulmones. conducen al bicarbonato hacia el acido carbbnico. la presen~iade protones en los tejidos periféricos favorece la formación de puentes salinos en la residuo His terminales de las subunidades beta. un incremento en los protones estimula la liberacibn de oxígeno.

341phospho. Asi. Lis EF6 y His H21 (figura 7-17). que deben romperse antes de que se produzca la f o m a R. enzima que reduce el Fe" de MetHb a Fe2+.ceden en suficiente cantidad a los tejidos periftricos. por tanto.3-bisfosfoglicerato(BPG). en seguida se descriixn algunas. glycerate to human deoxyhemoglobin Nature 1972. con la oxidacirin de Fe2' a Fe3+por compuestos tales como las sulfonamidas). Modo de enlace del 2-3-bisfosfoglieeratoa la Chesapeake} que favorecen la f o m a R muestran una deaoxihemoglobina humana.) . Larnetahemoglobinemia. Por lo anterior el SE HAN IDENTIFICADO VARIOS CIENTOS DE HEMOGLOBINAS HUMANAS MUTANTES Las mutaciones en los genes que codifican las cadenas alfa y beta tienen potencial para afectar la functdn bioldgica de la hemoglobina. El BPG se une de manera más dtsbil a la hemoglobina fetal que a la hemoglobina del adulto debido a que el residuo H21 de las cadenas gamma de la hemoglobina fetal es Ser en lugar de His y no puede formar un puente salino con BPG.237. un cambio minimo en la posición de Fe2' en relacibn al anillo de porfirina induce variaciones significativas de las confonnaciones de la hemoglobina y afecta de manera decisiva su función biolbgica en respuesta a una sena1 ambiental. donde el ion hierro del hem está en estado férrico en lugar de ferroso.146. Reproducida con autorizacibn. puede ser adquirida (por ejemplo. ya que forma un complejo i6nico firme con el anión fenolato de Tir. La hipoxia tisuIar que se produce lleva a policiternia (incremento en el número de eritrocitos). la hemoglobina Figura 7-17. cuya función biológica esti alterada. el equilibrio R-T favorece a la forma T. BPG tiene un efecto menos profundo en la estabilización de la HbF y es causa de que esta parezca tener una mayor afinidad por el oxigeno que la hemoglobina del adulto. De los varios cientos de hemoglobinas humanas mutantes conocidas (lamayoría son muy raras y benignas). Estructura del 2. se produce el efecto Boht. por lo cual no lo grupos d e carga positiva en cada cadena k t a (Basada en Arnone A: X-ray diffraction study o f binding o f 2. hereditaria (debido a la presencia de HbM) o causada por la disminuci6n de Ia actividad de la rnetahemoglobina reductasa. El BPG es unido mediante puentes salinos entre sus Sitornos de oxigeno y las dos cadenas beta a travks de sus grupos m i n o arnino-termina1 (Val NAl ). Tanto los factores espaciales como los electrostáticos median ese desencadenamiento. El BPG interactba con tres afinidad creciente por el oxigeno. En las variantes de la cadena alfa de la hemoglobina M. La afinidad por el oxigeno esta disminuida y no hay efecto Bohr. el BPG estabiliza la forma T o desoxigenada de la hemoglobina por medio de enlaces cruzados con las cadenas beta y por contribuir con puentes salinos adicionales. bina esta en la forma T. el trastorno se conoce como una hemoglobinopatia. Las mutaciones (por ejemplo. En la hemoglobina M. Cuando la alteracibn de la funcibn biolbgica se debe a una rnutacidn en la hemoglobina. La cadena beta de estas variantes presenta cambio R-T y. Tir reemplaza a His F8 El hierro hdmico se estabiliza en el estado Fe". no puede participar en el transporte de oxlgeno. El desencadenante de la transicibn entre R y T de la hemoglobina es el movimiento del hierro dentro y fuera del plano del anillo de porfirina.Proteinas: miogioblna y hemoglobina 73 Figura 7-16. Por tanto.Puesto que la metahemoglobina no fija 01.

capitulo 52). [a mioglobina liberada de las fibras muscuIares rotas aparece en la orina. La desoxihernoglobina S puede formar una estructura fibrosa que distorsiona los eritrocitoc Cuando la hemoglobina S está desoxigenada. 2) Anemias: Las anemias comunes (reducciones en la cantidad de eritrocitos o de hemoglobina en la sangre) se deben al deterioro de la slntesis de hemoglobina (por ejemplo. no se formarían estos polímeros y se evitaria la aparición de "células falciformes". cuya seccion cruzada contiene 14 moléculas de HbS (figura 7-1 9). Esta zona existe en las formas oxigenada y desoxigenada de la hemoglobina S pero no en la hemoglobina A. Aunque la desoxihemoglobina A contiene los sitios receptores para ia zona adherente que existe en las hemoglobinas S. la uni6n de la desoxihemoglobina A a la forma R o a la forma T de la hemoglobina S terminará la polimerizacibn.) . En la superficie de la hemoglobina S desoxigenada hay un complemento para la zona adherente. su zona adherente puede unirse a la zona complementaria de otra molécula S desoxigenada. El diagnbstico de las 0 x 1A Desoxi A Oxi S Desoxi S Desoxi A Desoxi S Flgura 7-18.En ia hemoglobina S. el residuo 6 de la cadena beta localizado en la superficie de la hemoglobina. oxigenada y desoxigenada (figura 7-1 S). Val reemplaza a Glu A2 (6)P. pero la presencia de la desoxihernoglobina A termina la polimerizacibn debido a que no posee zona adherente. un residuo valil reemplaza al glutamato beta-6 En la hemoglobina S. Estas fibras tubulares distorsionan al eritrocito de modo que toma la forma de una hoz (figura 7-20) y son vulnerables a lisis cuando penetran a los intersticios de los sinusoides esplknicos. Esta sustitución reemplaza el residuo polar glutamato por uno no polar y da lugar a una "zona adherente" en la superficie de la cadena beta. colorehndola de rojo oscuro. (Modificada y reproducida con autorizaubn de Stryar L. es decir. Aunque después de un infarto del mimardio es Q O S ~ ble detectar la mioglobina en el plasma. EI polimero forma una fibra helicoidal torcida. o si la concentracidn de la Forma desoxigenada lograra mantenerse en un mínimo. expuesta al agua. Es evidente que la forma T de la hemoglobina S es la que se polimeriza. 1981. en deficiencia de hierro. 2nd ed Freernan. si [a hemoglobina S pudiera conservarse en su estado oxigenado. ya que esta iiltírna no tiene zona adherente para promover a su vez la unibn de otra molCcula de hemoglobina. Asl. Representacidn de la zona adherente (A) en la hemoglobina S y su "receptor" ( A ) en las desoxihemoglobinas A y S Las superficies complementarias permiten que la desoxihernoglobina S po/irnerice en una estructura fibrosa. 1) Mioglohinuria: Despues de lesiones multiples. la uni6n de la hemoglobina S adherente a la desoxihernoglobina A no puede extender el polimero. Esta union hace que la hemogiobina S desoxigenada se polimerice. formando precipitados fibrosos largos que se extienden a través del eritrocito y lo distorsionan mecfinicamente causando lisis y mtiltiples efectos cllnicos secundarios. Por tanto. Biochemrstry. pero en la hemoglobina S oxigenada este sitio complementario esta enrnascarado (figura 7-1 8). capítulo 59) o a la produccibn alterada de eritrocitos (es el caso de la deficiencia de ácido fólico o vitamina Biz. el andlisis de las enzimas skricas (capitulo 8) proporciona un indice m& sensible del daflo miocárdico.

Asi.Proteínas: miog/ubina y hemoglobina 75 3) Hemoglobinopatias: En tanto que la mutación de ciertos residuos crlticos de la hcmogIobina (como las histidinas E7 o F8) tiene consecuencias graves. puede separarse de HbA por cromatografía de intercambio ionico o electroforesis.211 265 Copyright Q 1981 by the Arnerican Association for tha Advancement of Science ) anemias comienza con la deteminacidn espectrofotométrica de la concentración de hemoglobina sanguinea. es posible que la rnutacidn de muchos residuos superficiales. una HbA icelevada. Figura 7-20. Las talasemias y el uso de probadores de DNA para su diagnóstico se consideran en los capitulas 8 y 42. La HbAic. crisis de céluEas Fatciformes y trombosis) provienen de la mutación de un solo residuo polar por uno no polar. es proporcional a la concentracibn de glucosa en la sangre. las esferas representan moléculas inviduales de HbS (Reproducida con autorizacibnde Maught II: A new understanding of sickle cell emerges Scienoe 1981. en donde todos los signos y sintomas (por ejemplo. alejados del sitio de fijacion del hem. un control m i s riguroso de la alimentación o una dosificacibn mayor de insulina). puede guiar al mkdico en la seleccibn del tratamiento apropiado (por ejemplo. la hemoglobina es glucosilada de manera no enzimatica y su hidroxilo anomérico deriva los grupos amino presentes en los residuos lisil y en las terminales amino. la concentración de HbA i c refleja la concentración sanguínea promedio de glucosa en el periodo de 6 a 8 semanas precedentes. que indica control deficiente de la glucosa sanguinea. lo cual conduce a la sustitucidn de un residuo de valrna por uno de glutamina en la malécula de globina beta . Por tanto. La fraccibn de hemoglobina glucosilada. Micrografla electrdnica de barrido de un eritrocito normal (A) y uno falciforme {B). la medicibn de HbAic proporciona Pnfomaci6n util para el manejo de la diabetes sacarina. Dado que la vida media de un eritrocito es de 60 dias. El cambio en la mol6cula de globina beta que causa esta alteracibn estructural. es consecuencia de la mutacibn de una sola base en el DNA Ttmina (T) por adenina (A). Figura 7-19. no se traduzca en anormalidades clinicas. Una excepcE6n notable es la anemia de cklulas falciformes. Reprecentacidn de la estructura helimidal propuesta de una fibra de desoxthamoglobina S agregada En este modelo. normalmente alrededor de 5%. 4) Hemoglobina glucosilada (HbAlr): Cuando la glucosa sanguínea entra a los eritrocitos.

His F8 y Pos residuos adyacentes se mueven hacia el anillo htmico. La Mb y la subunidad beca de Hb. mioglobina (Mb) y hemoglobina (Hb). El grupo prostktico hem de Mb y I-Ib es un tetrapirrol ciclico. que estabilizan aún m8s la desoxiHb. McGraw-Hill. Fe2'. rica en hélices aIfa. Los residuos His proximal (F8) y dista1 (E7) descansan en sitios opuestos del anillo hémico. Generic. respectivamente. volviendo laxa la estructura cuaternaria y facilitando la fijación de moliculas adicionales de oxigeno. Friedman JM: Structure. planar en esencia. el compuesto 2. ésta se pliega de nuevo en su confomación nativa. Las afinidades relativas de las diferentes hemoglobinas se expresan como Pso. . La consecuencia es una anemia que puede ser muy grave (capítulo 42). Biophysiml methods. REFERENCIAS Bunn HF. la cavidad central se c o n h e . La Hb tiene también la funcibn de transportar COI y protones desde los tejidos al pulmbn. FASEB J 1988.230:1350. Hb es un tetrhmero de dos tipos de subunidades (alfazbetaz en la hemoglobina del adulto. se une con más fuerza al hierro que el 02. respectivamente. 1986. Holfrichter J: Sickle cell hemoglobin polym- eritalion. El Fe2' del hem se une a los cuatro átomos de nitrogeno del hem y a los dos ligandos adicionales localizados arriba y abajo del plano del hem. con un Fe" central. la información estructural primaria impEicita en apoMb (y por extensidn.En una intoxicacibn con monhxido de carbono. Weatheral! DJ et al. comparten una estructura secundaria y terciaria vimialmente idtnticas (no así la Los residuos de arninoAcidos de sus seis (A a H) regiones helicoidales se denominan (por ejemplo) "His P8" -la histidina que es el octavo residuo en la hClice F o sexta. 1995. desoxiHbS polimeriza. Page 2281 In: The Metabolic Basis of Inherited Disease. Embury SH: The clinical pathology of sickle-celI disease. Las hernoglobinas se saturan a las presiones parciales de sus respectivos órganos respiratorios (por ejemplo. en otras proteínas) basta para definir la estructura secundaria y terciaria. Scriver CR et al (editors). La curva de Mb es hiperbblica. Las curvas de saturación muestran la captacibn y liberacirln del oxigeno. Cuando el grupo hem se agrega a una apomioglobina desnaturalizada (Mb sin hem).40:63. forma fibras y distorsiona los eritrocitos dándoles formas de hoz. Scienm 1985. and reactivity in hemaglobin. La adición de Oza desoxiHb destruye los en taces salinos entre subunidades y dentro de ellas.: Altered amounr and activíty of superoxide dismutase in sickle celE anemia. En la cavidad central de la desoxiHb. Methods Enzymol23 1 :1994. Entre los cientos de mutantes de Hb (en gran parte benignos) se destaca la hemoglobina de las células falciformes (HbS). Embury SH et al. el sexto ligando es CO el cual. Un ligando es la histidina FX. Annu Rev Med 1986. La ~b &S monomerica.3-bisfosfoglicerato (RPG) forma enlaces salinos con las subunidades beta. Vandergriff Kü.: The hernoglobinopathies. [a oxigenacidn de Hb se acompafía de cambies notorios en la conformación. funcionan en el almacenaje y transporte de oxigeno. Por tanto. de un residuo His.316:56. Durante la oxigenacion. Adv Protein Chem 1990.2:237. Winslow RM: Hemoglobins: Part B. Esto crea una "zona adherente" que tiene un complemento sobre la desoxiHb (pero no en oxi Hb). Saiki RK et al. La liberación de oxigeno de ra oxiHb (HbO2) a los tejidos se acornpaiía de captacibn de protones debido a la disminucirln del valor de pK. En la oxiMb y oxiHb. un poco plegado. H1iA). Vandergriff KD. que es la presi6n parcial de O?a la cual se saturan la mitad de hemoglobinas con oxígeno.37:361. Esta ultima forma es critica para una mol6cula transportadora de Oz que debe saturarse con oxígeno en los pulmones y liberarlo al m k i m o en los tejidos. Por tanto. el BPG es expulsado y la estructura cuaternaria de nuevo queda laxa. Forget BG: Hemoglobin Molecular. HbF se satura con la PO1 de la placenta). En concentraciones bajas de oxigeno. . en la cual Val reemplaza a Glu beta6 de HbA. Las talasemias al fa y beta son anemias causadas por disminución en la produccibn de subunidades alfa y beta de HbA. N Engl J Med 1987. and Clinical Aspects. a pesar del obsthculo espacial por la presencia de His F7. en tanto que con Wb es sigmoidea. la síntesis de las cadenas alfa (alfatalasemias} o beta (beta-tarasemias) de la hemoglobina estA disminuida.Winslow RM:Hernoglobiiis: Pmt C. Durante la oxigenacirln. Saunders. Evers~ J. Everse J.228: 1273.: Rapid prenatal diagnosis of sickle cell anemia by a new method of DNA analysis. RESUMEN Las proteínas globulares compactas.: Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sicklecell anemia. Schacter L et al. 6th ed. dynamic. Eaton WJ. el sexto ligando es 02. Biochernical and analytical rnethods. Methods Enzymol232:1994.Las talasemias se originan de la síntesis reducida de cadenas alfa o beta En las talasemias. Science 1985.

Con el descubrimiento de m&. Internotional Union o f Biochemistry) adoptó un sistema complejo. Aunque hasta hoy persisten numerosos vestigios de esta terminología. de la nomenclatura . alrnidbn (amylon. Luego se describen las isoenzimas. De este modo. la determinación de estas enzirnas intracelulares en el suero sanguineo proporciona a los m6dicos inforrnacidn valiosa para el diagnbstico y pronóstico. las amilasas. las deshidrogenasas catalizan la eliminacibn de hidrógeno y 1% transferasas. Para remediar esta deficiencia. coma hephtico. Asimismo. el. Un conjunto de enfermedades genbticas raras. esta última puede ser perturbada de manera profunda. diagnbstico y el significado pronóstico de las enzirnas dricas. La incapacidad celular para convertir el arnoniaco tbxico a urea no tóxica es seguida por intoxicacibn con amoniaco y. reacciones de transferencia de grupo. infarto del miocardio o pulmonar. E s m enzimas se identificaban por la adición del sufijo -asa al nombre de la sustancia o sustrato que hidrolizaban. durante los estados patoldgicos. por ejemplo. las enzimas llevan a cabo funciones capitales relacionadas con la salud y la enfemedad. Despues del daflo tisular grave (por ejemplo. demostr6 ser inadecuada cuando se descubrieron varias enzimas que catalizaban reacciones diferentes del mismo sustrato. la participacibn de coenzimas en reacciones de transfemcia de grupo catalizadas por enzima y aspectos de la especificidad enzimiitica. análisis y deteminacibn de la distribucilin intracetular de enzimas. Aunque el sufijo -asa sigue en uso. laces covalentes. se introducen los m ttodos para purificación. en griego) y las proteasas. pero inequivoco. concluyendo con el uso de endonucleasas restrictivas en el diagnostico de enfermedades geneticas. Por ejemplo. proteinas. proporciona otros ejemplos impresionantes de las drásticas consecuencias fisiolbgicas del deterioro de la actividad enzirnhtica. Por ejemplo. el dafío tisular grave que caracteriza a la cirrosis hepfitica puede deteriorar de modo notable la propiedad de las células para producir enzimas que catalizan procesos metabólicos claves como la sintesis de urea.Enzirnas: propiedades generales Los temas considerados en este capitulo incluyen las clases de reacciones catalizadas por enzirnas. Por tanto. regulada y se conserva la homeostasia. surgieron ambigtiedades inevitables y con frecuencia no estaba claro cukl era la enzima que un investigador deseaba estudiar. pero con frecuencia debilitaiites y a menudo mortales. las enzimas propias de los tejidos específicos pasan a la sangre. Igual que [a biocatálisis que regula [a velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiológicos. trituracidn de un miembro) o posterior a la multiplicación celular descontrolada (como en el carcinoma prostktico). en griego). muchas de las cuales catalizaban la hidrbtisis de en- IMPORTANCIA BIOMÉDICA Sin enzimas no sería posible la vida que conocemos. las lipasas hidrolizaban grasas (lipos. LAS ENZIMAS SE CLASIFICAN POR TIPO DE REACCIÓN Y MECANISMO Hace un siglo s61o se conocían algunas enzimas. Mientras que en estado de salud todos los -esos fisiológicos se llevan a cabo de una manera ordenada. la Uni6n Internacional de Bioquirnica (IIJB. oxidacibn o reducción de la función alcohol de un azúcar. en la actualidad los nombres de las enzirnas enfatizan el tipo de reaccidn catalizada. por último. incfusive de una sola enzima. del inglis.y mhs enzimas.

La reacción sirve solamente para oxidar la coenzima reducida NADH a NAD'. Por ejemplo. en las bacterias o Fevaduras que crecen en un medio anaerobio. En primer lugar.C. 3) Infonnacion adicional.1. Una segunda raz6n para dar igual tiifasis a las reacciones de la coenzima es que este aspecto de lareacción es el que puede tener el mayor significado fisioPogico fundamental. si es necesario aclarar la reacción. Un caso es la importancia de la capacidad det músculo que trabaja en condiciones anaerobias para convertir el piruvato en lactato no reside en el piruvato ni en el lactato. 2. Las reacciones liticas que comprenden reacciones hidroliticas catali~adas por enzimas digestivas no necesitan de coenzimas. ' H S/ denomina como 1. puede seguir en paréntesis. Otras reacciones pueden servir iguaImente bien. 5 y 6 de la .C. una rnoIkcula de coenzima es reducida (figura 8-1). enzima que cataliza la transferencia de fosfato desde el ATP al grupo hidroxilo del carbono 6 de la glucosa. nombres mis ambiguos. 2. El último digito denota a la enzima hexocinasa o ATP:D-hexosa-6-fosfotransferasa. Las coenzimas pueden considerarse como segundo sustrato Puede ser útil considerar a la coenzima como un segundo sustrato por dos razones. sub-subclase 1 (una función alcohol como aceptor de fosfato). necesarias para ta actividad de las enzimas. cada una con 4 a 13 subclases. El cuarto digito es para la enzima especifica. Aunque su claridad y carencia de ambigüedad recomiendan a[ sistema de nomenclatura IUB para trabajos de invcstigación. una segunda mol~culaorghnica conocida como coenzima.1 denota la clase 2 (una transferasa}.1. la reduccion del piruvato en lactato reoxida al NADH y permite la sintesis de ATP.) que caracteriza al tipo de reaccibn segun la clase (primer digito). subclase 7 (transferencia de fosfato). algunos metabolitos derivados del piruvato son utilizados como oxidantes para el NADH y ellos mismos son reducidos (cuadro 8-1). Ia segunda. Entre las reacciones que necesitan coenzimas están las oxidorreducciones. Por ejemplo. en las reacciones de oxidorreducci6n (deshidrogenasa). IUB). Para distinguirlas de iones methlicos activadores y de las enzimas mismas. Por esta razón. indica el tipo de reacción catalizada. Las que forman enlaces covalentes con las enzirnas se denominan tambikn grupos prostkticos. c-Lactato o NAD" x O piruvato NADH + H+ Flgura 8-1.enzimhtica basado en el mecanismo de reacción. cuando una rnolecula de sustrato es oxidada. 2) El nombre de la enzima tiene dos partes. de peso molecular bajo. el trabajo) tiene que cesar.1. las reacciones de transferencia de grupo e isomerizacibn y las reacciones que forman enlaces covalentes (claves 1. a continuación se presentan sólo principios generales del sistema IUR: 1) Las reacciones y las enzimas que las catalizan se dividen en seis cIases principales. los cambios químicos en la cOenzima compensan exactamente a los que se realizan en el sustrato. pero afortunadamente: bastante mhs cortos persisten en libros de texto y en el laboratorio clínico. La mayoda de las coenzimas se unen a las enzimas por fuerzas no covalentes. Por ejemplo. ademb de su sustrato. E. la enzima que cataliza ]. Las coenzimas funcionan como reactivos en la transferencia de grupos Las reacciones bioquímicas de transferencia de grupo del tipo MUCHAS ENZIMAS NECESITAN UNA COENZIMA Muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos y otras reacciones necesitan. sin la cual son inactivas. La primera es el nombre del o de los sustratos. AsC. con terminación -asa. las coenzimas se definen como compuestos orgánicos termoestables. 4) Cada enzima tiene un número clave (E.7. subclase (segundo digito) y sub-subdase (tercer digito).37 ~-malato:NAD oxidorreductasa (descarboxi lante).-malato + NAD' = pinivato + COI + NADH t . Sin N A D ' la glucólisis no puede continuar y 3 a sintesis anaerobia de ATP (y por tanto. El NAD+ actúa como cosustrato en la reaccibn de la lactato deshidrogenasa . En condiciones anaerobias.

Girando mentalmente la moldcula de sustrato en el espacio. i Coenzimas del folato. . Numerosas coenzimas contienen adenina. u . Cuando eI grupo transferido es el hidrhgeno. Coenzimas de cobalamina (R 12). Ácido lipoico. . La reaccibn misma puede estar confinada a los Atomos unidos en los sitios 1 y 2 aun cuando los htomos 1 y 4 sean idénticos. podrían clasificarse las coenzirnas del siguiente modo: . 4 Fosfato de piridoxal.~phate). La figura 8-3 muestra una molécula de sustrato. L a . pr6ximos a adherirse en tres puntos a un sitio de la enzima. COA-SH. Para la transferencia del hidrbgeno: - ia viviente- Pir :ctaldehido . El esquema siguiente muestra el ultimo concepto. se acostumbra representar s61o la "mitad izquierda de la reaccion ": Las vitaminas i 3 forman parte de la estructura de numerosas coenzimas. bacterias lácrica: Levadiira Frr ias lietert en la cual un grupo funcional. durante el curso de la reacción global. Mecanismos para l a regeneración obia de iu A n+ - Para la transferencia de grupos distintos del hidrógeno: Fosfatos de azucares. NADP+ FMN. las reaccicne? de deshidrogenación) o como portador intermediario del grupo (como las reacciones de transaminacion). En consecuencia. * Ácido lipoico. aunque sean idénticos. adenmine monopho. FAD. siboflavina y iicido pantoténico son constituytntes esenciales de las coenzirnas para las oxidaciones y las reducciones bioIógicas mientras que las coenzimas Bcido fhlico y cobamida funcionan en el metabolismo de compuestos de un solo carbono. NAD+.Enzimas: propiedades generales 79 - Cuadro 8-1. del tos ejemplos ininglés. * Biotina. por lo gencral comprende la participaci~nde una coenzima como ultimo aceptor (por ejemplo. G. pueden intervenir varios complejos intermediarios C o E 4 en una reacción particular (como la transaminacibn). Esta "adherencia en tres puntos" puede conferir asimetría a una moldcula por otro lado cimCtrica. Las enzimas son catalizadores estereoespecificos Que esto representa en realidad sólo un caso especial de la transferencia general de grupos puede apreciarse mejor en tkrminos de las reacciones que tienen lugar en las células intactas (cuadro 8-1 ). cluyen NAD' y NADP' (tlgura 8-2). Si el sitio puede ser alcanzado sblo desde un lado y únicamente los fitomoc compIementarios y los sitios pueden interactuar (ambas suposiciones válidas para las enzimas reales). D . - dihidroxini L IVIUSLU la. representada como un átomo de carbono que tiene tres grupos diferentes. a una moltcula aceptora. . Se pueden representar de la siguiente manera: Casi todos los sustratos forman por lo menos tres enlaces con las enzirnas. los Atomos 1 y 4. A. Pirofosfato de tiamina.G . ribosa y fosfato y se derivan del monofosfato de adenosina (AMP. Las nicotinamida. vienen a ser distintos Las coenzimas pueden clasificarse de acuerdo al grupo cuya transferencia facilitan BacBndose en este concepto. es transferido de una moIecula donadora. Coenzima Q. Muchas coenzimas derivan de vitaminas B y del monofosfato de adenosina Aunque esto sugiere la fomacion de un complejo sencillo C o E 4 . nótese que puede adherirse en tres puntos a un costado del sitio planar con una sola orientaci6n. la molécula se unira sólo en una forma. . tiamina.

De este modo. Representación de la adherencia en tres puntos de un sustrato a un sitio activo planar da una enzima. por ejemplo. Numerosas proteasas Sitio enzimatim Sustrato Figura 8 3 . y son altamente especificas para la porcibn azúcar y para la uni6n (alfa o beta). Las reacciones con otros sustratos alternativos tienden a efectuarse si ellos se encuentran en altas concentraciones. es qui7A su propiedad miis significativa. Asi. En NAD'. la D-aminoacidooxidasa del riilon). oxidación-reduccióin. Con unas cuantas excepciones (por ejemplo.catalizan la interconversión de 10s idmeros bpticos. la figura no puede mostrar la causa de que la reducción catalizada por la enzima del piruvato sin actividad bpticaproduzca L-lactato en vez de D. Por tanto. R = cuando el sustrato esta adherido a la enzima. las enzimas por lo general muestran una especificidad bptica absoluta por lo menos para una porción de la rnoldcula de sustrato.80 Bioquimica de Harper MUCHAS ENZlMAS CATALIZAN UNA REACCION O UN TIPO DE REACCION ESPEC~F ICA L a capacidad de una enzima para catalizar una reacción específica y esencialmente ninguna otra. S i bien los sitios activos de las enzimas no son las supeficies planas que se muestran en la figura 8-3. . las velocidades de procesos metabólicosespecificas pueden regularse por cambios en la eficiencia catalitica de enzimas específicas. glucosidas% sobre glucbsidos. Las enzimas presentan un alta especificidad para el tipo de reacciiin que catalizan Las enzimas líticas actúan sobre grupos de compuestos quimicos particulares.pero no de los L-fosfoanjcares. porción de la mol~cula Las glucosidasas proporcionan ejemplos de ambos casos. Que todas las reacciones posibles ocurran en el microorganismo vivo depende de la concentracibn relativa de sustratos alternativos en las células y de la afinidad relativa de la enzima para esos sustratos. que. Las enzimas muestran especificidad óptica Figura 8-2. Estas enzimas catalizan la hidrblisis de las uniones glucosidicas entre aziicares y alcoholes. L-lactato Excepto las epimerasas (racernasas). Sin embargo. en NADP*. -R 0~03"'. un cambio químico puede afectar e1 &tomo 1 (pero no el Btomo 4) o viceversa. etcdtera) con un pequeflo numero de sustratos relacionados estructuralmente. L a especificidad 6ptica se puede extender a una del sustrato o a su totalidad. la p a n mayoría de las enzirnac de los marniferos actúan sobre los L-isbmeros de los aminohcidos. las enzirnas de la via glucolitica y de la oxidativa directa catalizan la interconversibn de los D. el número de enzirnas digestivas que de otro modo serian requeridas. NAD(P)+. la mayoría de las enzima~ catalizm el mismo tipo de reacción (transferencia de fosfato. pero relativamente inespecíficas para la porcion alcohólica o aglicona. Un p a n numero de sustratos pueden ser atacados reduciendo asi. pepsina y tripsina sobre los enlaces peptidicos y las esterasas sobe los ksteres. = H.

ya sea con NAD' o con NADP' como aceptores de electrones. o del NADPH (pero no del NAD' o del NADP') para absorber la luz a una longitud de onda de 340 nm (figura 8-41. Por fortuna. se establece la velocidad de la reacción catalizada por ella. el uso de ésteres como sustratos sinttticos ha sido importante en el estudio del mecanismo de accion de las proteasas. presente en una muestra biológica dada como suero o extracto de tejido. Las cantidades relativas de la enzima se pueden entonces comparar en diferentes extractos. expresada en unidades de actividad.proporcional a la cantidad de NAD que se oxida.Espectros de absorcibn del NADt y del NADH.nU y pU. cuando el NAD' se reduce. Este cambio de DO. Las carboxipeptidasas y las aminopeptidasas desdoblan los aminoácidos I por 1 de la terminal carboxilo o de la amino de [as cadenas polipeptldicas. se puede utilizar para el anhlisis cuantitativo de cualquier NAD' o NADP' dependientes de deshidrogenasa. Para una deshidrogenasa que cataliza la oxidación de NADH. . Para medir la cantidad de una enzima en una muestra de extracto tisular o de algún liquido biológico. En circunstancias apropiadas. Dado que es dificil determinar el número de mol&culaso la masa de enzima presente. en la síntesis de ácidos grasos o de esteroles) utilizan NADPH como reductor. lo4 rnol) o picomoles (pmol. mientras que las funcionales en los procesos de degradación (por ejemplo. El NADP* y el NADPH tlenen espectros semejantes a los de NAD* y NADH. Tales unidades se expresan mejor en micromoles (prnol. la glucólisis. tal como sigue. En el ejemplo anterior se midi6 la velocidad de formaci6n de un producto (NADH} para determinar ta actividad enzimatica. De igual manera. o la velocidad de decrecimiento de DO a 340 nm es directamente proporcional a la concentracibn enzimática. tirosina o triptbfano. las oxidorreductasas funcionales en los procesos biosintéticos de los sistemas de mamlferos (por ejemplo. la medicibn de la velocidad de decrecimiento en DO a 340 nrn permite deducir la cantidad de enzima. 1Q4 mot). 10-'' mol) de sustrato reaccionante o de producto formada por minuto.Enzimm: propied~des generales 81 catalizan tarnbidn la hidrólisis de los tsteres. mediante su s u s ~ oxidado. la DO aumenta en proporcion a la cantidad de NADH que se produce. Muchas enzirnas pueden analizarse por acoplamiento de una reacción a una deshidrogenasa LA ACTIVIDAD CATAL~TICA DE UNA ENZIMA FACILITA SU IDENTIFICACI~N Las pequeiías cantidades de enzimas presentes en la célula obstaculizan la rnedicidn de la cantidad de una enzima en liquidos o extractos de tejidos. la oxidacibn de [os hcidos grasos) utilizan NADkomo oxidante. la mayor parte de ellas usan exclusivamente uno o el otro.Por tanto. la velocidad medida es proporcional a la cantidad de enzima presente. TambEen es posible analizar la ac- tividad de otras enzimas diferentes de las deshidrogenasas por la medicibn de la velocidad de aparición 1 1 200 1 I 1 233 300 350 Longitud de onda (nm) 600 Las deshidragenasas que dependen de NAO' puede analizarse a 340 nm En las reacciones que interviene el NAD' o el NADP' (deshidrogenasas) se utiliza la propiedad del NADH Figura 8 4 . Las unidades internacionales enzimáticas correspondientes son pU. La quimiotripsina hidroliza los enlaces peptidicos en tos cuales el grupo carboxilo es apostado por los aminohcido~ aromhticos fenilalanina. Ciertas enzimas líticas presentan alta especiftcidad. los resultados se expresan en unidades enzimáticas. respectivamente. Aunque algunas oxidorreductasas funcionan igualmente bien. En general. La oxidación de NADH en NAD' se acompaíia de una disminucibn de la densidad bptica (DO) a 340 nm. En tanto que esto es probablemente de importancia fisioldgica limitada. la actividad catitalitica de una enzima provee un dispositivo sensible y especifico para su propia medición. nanomoles (nmol. Las densidades corresponden a una solucibn de 44 m g k en una celdilla de 1 m de paso de luz. respectivamente.

glumsa. El problema es separar la enzima deseada de una me7cla de cientos de proteínas quirnica y fisicamente semejantes. los Licidos nucleicos por precipitacihn con el antibiótico estreptomicina.A "A--"" (mCJ)* 100 00(. ES ESENCIAL DISPONER DE ENZlMAS PURAS PARA COMPRENDER SU ESTRUCTURA. la velocidad dc desaparición de un sustrato). glucosa6-focfato deshidrogenasa.. Las propiedades fisictiquimicac del producto o sustrato determinan el mEtodo especifico seleccionado para la cuaníificacihn. columna DBAE I'recipitado con (NH4)?SO443 a 4 8% Prirneroc cristales Recristalixacion 49 O00 . OOC (mrr) L ~ U 29 1 20 12 .. sitios activos. estructura y mecanismo de acción tam bien nccesita cnzinias altamente purificadas. la filtracihn en gel y la electroforesis. la cantidad de hexocinasa presente determina la velocidad de la reacción acoplada global y. Entonces. A menudo es conveniente "acoplar" el producto de una reacción a una deshidrogenasapara la cual este producto representa un sustrato (figura 8-5). Ia centrifugación diferencial. la dcsnaturalizacidn diferencial por calor o pH.~ SU MECANISMO DE REACCION Y SU REGWLACION E:l conocimiento de las reaccionecy los intermediarios quimicus en las vias meiabólicas así como de los Para la purificación se emplean crornatografía de intercambio ionico y cromatografía con soportes de exclusion de tamaño Los procedimientos de purificacibn clásicos útiles incluyen la precipitacilin con concentraciones salinas variables (por lo general con sulfato de sodio o de amonio) o solventes (acetato o etanol). GLUCO-SA6-FOSFATO DESHIDROGENASA La purificación incrementa la actividad especifica NADPH + H' Figura 8-5. Todos los reactivos. se agregan en exceso.82 Rioquimicu de Harper (Capitulo 8) Glucosa [HEXC)CINASAI Gluwsa 6-fosfato 1 ATP. SU FUNCIÓN. 98 995 90 . etcktera. la velocrdad de formación del NADPH. Andlisis acoplado para la actividad de la hexocinasa La reaccibn se acopla a la catalizada por la glucosa-6fosfato deshidrogenasa. - 49 . y NADP*. -* mlJ = milienzima: milimolcs de sustrato que cambian por minu A. por tanto. El objetivo de la purificacihn de la enziina es aislar una proteina enzimhtica especifica dc un cxtracio crudo de celulas que contienen muchos otros compcinentes. derivan en gran medida de los estudios de enzima purificadas. ~ g " ADP.. Nótese la forma en que se calcuEan la actividad especifica y la recuperacibn de la actividad inicial El objetivoes lograr la actividad especiiica máxima ( m i dades de enzima por miligramo de proteína) coi1 la mayor recuperación posible de la actividad inicial. ATP. En el cuadro &-2 se muestra el progreso de la puri~~cación tipica de una enzima hepática con una recupcraci6n adecuada y una purificación de 490 veces. h2+ mecanismos reguladores que operan a nivel de la catálisis.. de modo menos común. la cual puede ser medida a 340 nrn de uii produclo (o. cofactores.. . La absorción celcctiva y la elucion de las proteínas en Cuai accibn dc ia iesumen de un esqluemn típico de pu rificación de una e 1 Actividad ~ii~irria 1 - iteina tota Hornogene izado criidc Liquido sol~rcnadante I'recipitado con (NIld Precipitado con acetorl a 20 a 350/u Fracciones 80 a 1 1 0 e ri. La información fidedigna referente a la cinética. Idas moléculas pequeiias pueden eliininarse por dialisis o por filtracidn en gel.

La proteina deseada se eluye del Iigando inmovilizado. plantas o . las proteinas grandcs salen de la columna antes que las menores. eii tanto que las proieínas sin carga o con carga positiva fluyen libremente a traves de la columna.vmeih~~/celJul~ tambien han sido extremadamente utiles para la purificación extensa y ripida de proteínas. los únicos materiales iniciales disponibles para preparar enzimas purificadas eran las células de animales. valor en el cual la mayoría de las proteínas tienen una carga negativa neta. primero las que se enlazan débilmente y. las de enlace fuerte. Las pusificaciones logradas por las técnicas de cromatngrafia por afinidad son iinpresioriantes. Las proteínas con carga negativa sc Lincn a DEAE por interacción de cargas opuestas. Cuando una mezcla de proteínas fluye a través de una columna que contiene un filtro molecular.5. por lo general con una concentración elevada de sal o de la Coma soluble dcl ligando.cla de proteínas de diferentes tarnafios fluye al través de la columna.a característica sobresaliente de la cromatografia por afinidad es sil capacidad para remover selectivamente de una mezcla proteínica compleja. Conforme urja me7. dietilarninoetilcelulosa (DEAE del ingles. el emplco subsiguiente de sustsato (mas que de coenzima) a los soportes afínes o la elución con una "mezcla ternaría abortiva" de un producto y un sustrato han probado tener éxito en muchos casos. una protcína particular o un pequeiio número de ellas. la movilidad de las protefnas pequeflas se retarda en relación con proteínas demasiado grandcs para pasar estos poros. Separaciones proteínicas an5logac emplean un soporte crin cargia negativa como carboximetiIceIulosa o fosfocelulosa a un p l l algo menor. al último.. coenzima a efecror alostCrico. valor al cual llt. Dado que numerosas deshidrogcnasas puedcn fijarse y ser eluidas juntas cuando la columna es tratada con NAD' soluble. Las proteínas se adicionan a soluciones que contienen una concentración alta de una sal (por ejemplo. los filtros rnoleculares tienen capacidad limitada y eil general sOlo se usan después de haber logrado una piirificación previa por otras técnicas. Por su parte La tecnología del DNA recombinante puede ser una fuente abundante de enzimas Hasta fechas relativaniente recientes. diefhyIunainoe/hyoy en !a de intercambio catiónico carboximetilcclulosa (CMC. las iinicas proteinas que se unen son las que interactúan fuertemente con él. La técnica emplea un ligando inmovilizado que interactúai cspecificamente con la enzima cuya purificacilin se desea. La primera emplea como ligando inmovilizado a un colorante organice que sirve como análogo del sustrato. Asi. Luego.celulosa de intercambio aniónico.AE tiene carga positiva. En general. La retención de proteínas en estos soportes comprende interaccioncc hidrofbbicac entre la cadena alquil y ias regiones hidrófobas de la proteina. Sin embargo. se adiciona la mezcla de proteínas solubles a una oolurnna de celulosa D E A E amortiguada a pH 7. verde o rojo y E de ligando hidrofobo como octil o fenil-Sepharose son técnicas con relación estrecha con la crornatografía pos afinidad. dcl inglds. Por ejemplo. disuelto en amortiguador con pH 7. por lo común usando iin gradiente de NaCl que va de concentración ba. carhox. la proteína indeseada fluye a lo largo de la columna y descarta. la introducción de H complica la scparacihn. Los soportes de cromatografía por afinidad sirven para identificar regiones específicas de las enzimas L. la elución se logra usando gradientes salinus. las proteinac pequeñas se distribuyen cn Iris espacios entre las partículas y en los espacios internos o poros del soporte. a menudo sucesiba de superando las posibles por la aplicaci~n numerosas técnicas clásicas. Luego. la coliimna se eluye.ja a alta. E1 perfil de la clución presenta un patrón graduado que va desde las proteinas mas grandes hasta las pequefias. éstas se eluyen de manera selectiva. En la cromatografía de ligando hidrlifobo. para asegurar que ias proteínas tcngaii una carga m i s positiva Las separaciones de proteínas también pueden lograrsc sobre nrateriales porosos conocidos como -'filtros moleculares". 5e La crornatografía de ligando colorante y ligando hidrófobo son técnicas análogas de cromatografia por afinidad La crornatografia de Iigando colorante en soportes a cromatografia como Sepharose azul.5. Entre Ins ejemplos de aplicación exitosa de la cromatograt'ía por aiinidad se incluyen la purificación de muchas dcshidrogenasas diferentes sobre soportes dc afinidad de NAD'. un hidrocarburo alquil o aril se adhiere a un soporte como Sephadex. un extracto acuoso de tejido hepático se ajusta a pH 7. al agregar a la cromatrigrafia ese elem~ntohidrdfoha (vCase después). Cuando la mezcla proteínica se expone a este ligando inmovilizado. Dado que CI-compite con las proteínas por sitios de fijación cn cl soporte con carga positiva. Los ligandos favorecidos son derivados dc sustratos y coenzimas adheridos por covalencia a un soporte como Sephadex. [NH4]2S04)y se eluyen con gradientes decrecientes de la misma sal. en general por niedio de utia mtilécula enla7~dora de 3 a 8 carbonos de longitud n "ligando" hidrbfobo Sin embargo.5.

En presencia de un inductor apropiado. se examina el contenido enzimátiw de cada fraccidn. oxidasas. tramaminasas. levaduras o de cultivos de mamíferos. en Ias cuales se encuentran dichas enzimas. la maquinaria de síntesis proteinica de la célula huésped se [leva a la shtesis de E a enzima deseada. Esta situación se ha modificado en gran medida por la tecnología del DNA recombinante. la presencia de contaminantes protelnicos mayores y menores. con base en los tamailos moleculares de sus unidades protoméricas. la "isozima" tiene un significado más restringido. si bien la malato deshidrogenasa de hlgado de rata y la de E. Estos vectores se trasladan al interior de d l u las. fosfatasas. al provenir de una forma de vida diferente a la del hubsped puede diferir en grado significativo de las propiedades de las proteínas de éste. hasta cientos de miligramos de proteína homogCnea por litro de celdas de Escherichia coli. pronto se obsenib que. coli. LAS ISOZIMAS SON FORMAS F~SICAMENTE DISTINTAS CON LA MISMA ACTIVIDAD CATALITICA Cuando se aplicaron las tdcnicas de purificación de enzirnas a la malato dechidrogenasa de diversas fuentes (por ejemplo. lo que imponía un límite máximo z la cantidad de enzima purificada que se podía obtener con un costo razonable. la segunda dimensibn separa a las protefnas. permanece en el sitio de formaci6n y sirve como un indice para la localizaci6n de la enzima. En la EGPA bidimensional (O'Farrell). bajo el control de un promotor fuerte. vegetales y microorganisrnos unicelulares. catalizan la misma reaccidn. hcido cíirico están en las mitocondnas. sus propiedades físicas y quimicas exhibían numerosas diferencias importantes. transfosforilasas y proteasas. Tejidos diferentes pueden contener isozimas distintas y tstas a su vez diferir en su afinidad por los sustratos. En las regiones donde se encuentra la enzima se forma el producto de la reacción catalizada por ella. se puede lograr frecuentemente por procedimientos histoquimicos (histoenzimologia}. cantidades adecuadas para los amplios estudios de cristalografía de rayos X y otros anklisis fisicos necesarios para deteminar la estructura tridimensional. Las levaduras varían desde pocos. Se han localimdo isozimas de numerosas deshidrogenasas. presentes en tipos celulares diferentes o en compartimientossubcelulares de un ser humano. en especial en la medicina clínica. en distintos tipos celulares. sustratos y cofactores dentro de las c&lulas son de importancia cardinal.84 Bioquímica de Harper (Capitulo 8) bacterias. en tanto que [as del ciclo del . ya que [os genes que codifican muchas enzimas se han donado y secuenciado y pueden colocarse en un vector de expresibn derivado de pllismido o fago. en las cklulas hepáticas. La localizaci6n de una enzima particular en un tejido o cdlula. La purificación subsecuente se facilita tanto por las cantidades relativamente grandes de la enzima recombinante como por el hecho de que. es decir. La histoenzimologia proporciona una imagen grhfica y relativamente fisiológica de los patrones de distribucibn enzimática. la primera dimensibn separa a las proteinas desnaturalizadas con base en sus valores pI. Si el producto es colorido e insofuble. Pueden existir formas físicamente distintas con la misma actividad catalitica en diferentes tejidos del mismo organismo. Cortes delgados de tejido congelado (2 a 10 pm)son tratados con un sustrato para una enzima particular. La EGPA unidimensional de la proteina original revelará. si se aplica suficiente muestra. Mientras que el ttmino "isozima" (isoenzirna) podría utilizarse para englobar a todos los ejemplos anteriores de formas fisicarnente distintas con una actividad catalftica dada. La cantidad existente de una enzima dada en muchos casos era muy pequefía. insectos. equilibrindolos en un campo eldctrico que contiene urea y se mantiene un gradiente de pH por los anfblitos polimerizados. hfgado de rata y Escherichia coli). Entonces. LAS EN2IMAS PUEDEN ENCONTRARSE EN ORGANELOS ESPEC~FICOS El ordenamiento espacial y la compartimentaiizacibn de enzimas. como serfa E a estabilidad al calor. Tanto la clase como el número de enzima involucradas es igualmente diverso. Las isozimas son comunes en los sueros y los tejidos de todos los vertebrados. Entonces. La distribución de las enzimas entre !3s organelos subcelulares puede estudiarse despues de fraccionar los hornogeneizados de células mediante ultracentrifugación. en compartimientos subcelulares o en pr-otas como E coli Este descubrimiento fue una consecuencia de aplicar los procedimientos de separacidn electroforktica a la separaci6n de entidades electroforéticamente distintas de una actividad enzimktica particular. Por ejemplo. despuds de su tratamiento con SDS. las enzimas de la gluc6lisis están localizadas en el citoplasma. las formas distintas y físicamente separables de una enzima dada. La electroforesis en gel de po!iacrjlamida detecta contarninantec La homogeneidad de las proteínas se valora mejor por electroforesis en gel de poiiacrilamida (EGPA) bajo diversas condiciones. ya sea de Escherichia coli. en estado relativamente inalterado. en la prhctica.

propiedades generoles 85 La capacidad para separar e identificar isozimas tiene valor diagnóstico El interds mCdico en las isotimas fue estimulado por el descubrimiento de que tos sueros humanos contenían varias isozimas de la lactato deshidrogenasa y quesus proporciones relativascambian significativamente en ciertos estados patol~gicos. un tejido produce un protornero de manera predominante y otro tejido sintetiza un prothmero diferente. La separacidn y reconstitución no produce nuevas isozímas las cuales. Las intensidades relativas de las bandas pueden ser cuantificadas por un foriimetra de barrido (figura 8-7). agar o poliacrilamida como soporte.) Las isozimas de la laciato dcshidrtigeiiasa difieren en el orden de la estructura cuaternaria. La figura 8 4 ilustra la aplicacibn de este tipo de anklisis para visualizar y cuantificar isozimas de lactato deshidrogenasa shica (LDH. un sustrato reducido.Enzimas . Las proporciones aproximadas de las isozimas encontradas son las que resultarian si la relacibn fuera: lsazirna lactato deshidrogenasa 11 12 13 14 Subunidades HHHH HHHM HHMM HMMM 15 MMMM . Market ha usado condiciones que se sabe disgregan y reforman la estructura cuatemaria para esclarecer las relaciones entre las isozimas de la lactato deshidrogenasa i. Luego. se han descrito numerosos ejemplos adicionales de cambios en las proporciones de isozimas como consecuencia de una enfermedad. Las isozimas de la lactato deshidrogenasa del suero pueden demostrarsesometiendo una muestm de suero a laelectroforesis. PMS. (NBT nttroazuF de tetrazoilo. E-1 y M (peso molecular aproximado de 34 000). amortiguador e iones activantes segun sea necesario. metoculfato de fenacina. litro blue lelrmolrum) intermediario necesario para la transferencia de eIectrones de NADH a NBT. La reaccibn procede a una velocidad mensurable s61o en presenciade la lactato deshidrogenasa. tarnbikn se producen las lactato deshidrogenasas Iz. Este fenómeno se representa despues mediante una enzima de importancia en el diagnóstico: la deshidrogenasa Ifictica. lactnle dehydrogenuse) en el laboratorio clínico. Cuando una mezcla de lactato deshidrogenasa I l y lactato deshidrogenasa 1s son sujetas al mismo tratamiento. la forma oxidada de un colorante redox como nitroaml de tetrazolio (NBT. Si cl urden no e i iinportante. un tetrhmero). 1. del inglks.usando un gel de almidon.6. La molécula oligomérica de la lactato deshidrogenasa activa (peso molecular de 130 000) consiste en cuatro protomeros de dos tipos. La lactato deshidrogenasa cataliza la transferencia de dos electrones y un ion hidrbgeno del lactato al NAD' (figura 8-1). La isozima mas negativa. Si es posible que Cstos se combinen de varios modos para construir una enzima activa (por ejemplo. e 14. Una mezcla tipica para anhlisis de deshidrogenasa contiene NADA.. o de la lactato deshidrogenasa Is. se localizan por medio de su capacidad para catalizar la reducción de un colorante incoloro a su forma colotida e insoluble. estos prothmeros pueden Fer combinado'. Cuando la mezcla se rocía sobre el electroferograma y se incuba a 37 "C. del ingles.tienen lugar las reacciones coordinadas de transferencia de electrones s61o en aquellas regiones donde se encuentra la lactato deshidrogenasa (figura 8 4 ) . Sólo la molécula tetramirica posee actividad catalitica. Reacciones acopladas para la demostración de la actividad de la lactato deshidrogenasa en un etectroferograma. de cinco maneras diferentes como se muestra en seguida: HHHH HHHM HHMM HMMM MMMM Las isozimas son productos de genes estrechamente relacionados Las enzimas oiigoméricas con varios protómeros disimiles pueden existir en diversas formas. consisten en un solo tipo de protómeso. se dice que se han formado isozimas de esa actividad enzirnática. usualmente a pH 8. se denomina 1 (Lactato) sH2 WCTATO S k D E S H IDROGENASAJ (Pjruvatc) FMS reducido ~~C'oxidado NBT oxidado (incoloro) (azul) Flgura 8 4 . Con frezuencia. Posteriormente. por tanto. Las isozimas tienen diferentes cargas a este pH y emigran a cinco regiones distintas del electroferograrna.

aparentemente proceden de la desmiccibn rutinaria normal de los eritrocitos.) La sfntesis de subunidades H y M es controlada por distintos Iocr geneticos que estiin expresados de manera diferencial en diversos tejidos. leucocitos y otras cdlulas. pero tarnbikn se encuentran en la sangre a concentraciones equivalentes o mayores que en los tejidos. ras estiin normalmente ausentes de E La destrucción normal de c&lulas conduce a la presencia en plasma de concentraciones bajas de enzimas no funcionaIes Los valores bajos de enzima no funcionales que se encuentran por lo general en el plasma. proenzimas y sus sustratos se encuentran siempre en la circulacibn de las personas normales y realizan una funcibn fisiológica en la sangre.86 Bioquimica de Harper (CapifuJo 81 NORMAL Figura 8-7. St Luke's Hospital. difunden en forma pasiva al plasma. Las isozimas de LDH del suero fueron separadasen acetatode celulosa a pH 8. Hugh Miller. Algunas de estas enzimas plasmhticas funcionales son la lipoproteinlipasa. las enzimas plasmáticas no funcionales no desempeiian ninguna funcibn conocida en la sangre. fosfatasa biliar alcalina y fosfazasa ácida prostática. El fotbmetro de rastreo muestra la produccibn de las isozimas El patrbn A es suero de un pauente con infarto del rniocardio. B es suero normat y C de un paciente con enfermedad hsphtica. Las enzimas exocrinas. Los sustratos de ellas con frecuencia faltan en el plasma y las propias enzimas se encuentran en la sangre de personas normales en valores hasta de un mil1611 de veces inferiores a los de los tejidos. la seudocolinesterasa y las proenzimas de la coagulacibn sanguinea y de la disolución del cohgulo. Melvin Black y Mr. por ejemplo. Con la muerte acelerada de las c~lulas. el coraz6n y el mUsculo esquel&ico. amilasa pancsektica. Patrones normal y patolbgioode las isozimas de la laetato deshidrogenasa(LDH) en suero humano. (Cortesía del Dr. Generalmente son sintetizadas en el hlgado. Las enzimas intracelu lares verdadea circulacion. la medicion de estos valores de enzimas plasmhticas no funcionales puede constituir para el médico una prueba valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico. EL ANALISIS CUANTITATIVO DE CIERTAS ENZIMAS PLASMÁTICAS TIENE SIGNIFICADO DIAGNOSTICO Ciertas enzimas. Por tanto. Su presencia en el plasma en cifras mayores que tos valores normales sugiere una velocidad aumentada de destruccibn tisular. Las enzimas plasrnhcicas no funcionafes comprenden a las que existen en las secreciones exocrinac v a las enzimas intracelulares verdaderas. lipasa. las enzimas solubles entran .6 y tenidas en busca d e la presencia d e enzimas. San Francisco. Como lo dice su nombre.

". delta talasemias. De manera alternativa. El desarrollo de pruebas de hibridización para fragmentos de DNA ha conducido a técnicas de sensibilidad suficiente para investigar. El cuadro 8-3 contiene una lista de lar enzimas principales utilizadas en el campo de la enzimologla para diagnóstico. para la detección prenatal de talasemias (que se caracterizan por un defecto en la sintesis de las subunidades de la hemoglobina. Las enzimas plasmáticas no funcionales ayudan en el diagnóstico y pronóstico Por mucho tiempo.-. . propiedades generales * 87 en la circulación.-antilipsina se ha relacionado con el enfisema y con la cirrosis hephtica infantil. . el cual proviene de unasupresidn en ese gen. como sucede en atgunas alfa talasemias y en ciertos tipos poco frecuentes de beta y beta. el ejercicio intenso tambikn libera cantidades importantes de enzimas musculares. los trastornos hereditarios p r mapeo de enzirnasde mtricci6n det DN A derivado de las cklulas fetales en el líquido amnibtico. . tras'tornos he1 1smas) - trucitivos he- y-Glutamil t k m 1 3 p ~ C l ~1 . desde antes del nacimiento. se ha preparado un detector o probador de cDNA sintktico que se hibridiza a la secuencia de una beta-globina que contiene una rnutacidn sin sentido. . ser preparadas para el diagnástico de la mayoría de las enfermedades gendticas. Muchas de kstas no son cas para la enferm ncionada A . Principales enzimas séricas utitizadas en el diagnóstico clinico.minotrans! ferasas I Usa -- uiirriuiriicu uriiiciuaI Aspartat o aminoti .Varias ~ ~ a entermcdades -- L actato d e . Cuadra 8-3. En el Apendice se incluye la escala de valores normales de las principales enzimas usadas con propositos de diagnostico. LAS ENDONUCLEASAS RESTRICTIVAS FACILITAN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES GENÉTICAS El diagnbstico de las enfermedades genéticas ha recibido un impulso tremendo con la tecnología del DNA recombinante.Enzimas.. . Esta valiosa inforrnacidn para el diagnóstico y el pronóstico se obtiene muchas veces con equipos totalmente automáticos.-M -. -. Las pruebas para el DNA pueden. La ausencia del inhibidor de la proteasa plasmática alfa. Los detectores de hibridizacidn tambitn pueden utilizarse para averiguar alteraciones genkticas que conducen a la pdrdida del sitio de una endonueleasa de restriccibn (capitulo 42).. Por ejemplo. capitulo 7). . la mutación en un punto del coddn Glu (GAG) al codbn Y al (GTG) tipica de la enfermedad de c6lulas falcifonnes puede detectarse en el gen de la beta-globina en las células contenidas en cantidades tan pequeiías de hasta 10 mL de liquido amniótico usando la endonucleasa de restriccion MstII o SauI. en principio. La presencia de una alfa. :reat~tisaguda -- 'eruloplasn iina hepatote nticu :rrnedad Ij c -" Creatinacine stornos m usculares e infarto del mi0cardio F - iíio Carcinoma rnr la prhstata de Eosfatasa alcalina (isozi.-antitripsina inactiva se ha identificado por un probador construido contra el alelo inactivo que contiene una mutacián en un punto en el gen para la alfai-antitripsina.. .. pero no en el gen normal de la beta-globina.* rerasa (rtST o SGOTI Alanina aminotr ferasa (A LT o SGR 1 Infariu uei ~ n i u . Aunque desde hace tiempo se sabe que todas las enfermedades moleculares son consecuencia de una alteracibn del DNA.. Aunque los valores elevados de enzirnas plasmiiticas se interpretan generalmente como prueba de necrosis celular. una prueba preparada contra una porcidn del gen para una subunidad de una hemoglcbina normal puede detectar un fmgmento de rwtnccibn acortado o inexistente. las técnicas para el examen directo de las secuencias del DNA s610 se han desarrollado en épocas recientes. . presente en ciertas beta-talasemias.-A- Enzinna sérica A.... la práctica profesional médica ha usada la cuantificacibn de ciertas enzimas plasmaticas no funcionales..Varias enfermedades bseas. Por ejemplo. (isozirnas) Lipasa nasa Infarto del miocardio LA DIGESTIQN RESTRICTIVA DE PROBADORES PUEDE REVELAR GENES H O M ~ L O G O S CON DIFERENTES SECUENCIAS DE BASES Los detectores de DNA tambibn pueden usarse para encontrar secuencias de DN A íntimamente enlazadas -Pancreatitis aguda -- .

pero en realidad no dentro de 4. Las ribozimas catalizan la trunsesterificacibn y. Al parecer. En consecuencia. La medicihn de la actividad enzimática es fundamental pam la cuantificacián de enzimas en investigacibn o en e3 laboratorio clínico. Aunque los sitios de accibn de las ribozimas se limitan a los enlaces fosfodiésteres de RNA. la especificidad de su acci6n se compara plenamente con la de las enzimas clksicas. Las ribozimas inter- . por ejemplo. por ende. coenzirnas y tipo de reaccion catalizada. la hidrólisis. La digestión del DNA con una endonucleasa de restricci6n genera diferentes mapas (patrones de fragmentos de DNA) de genes hornúlogos que contienen secuencias diferentes de bases. Los análisis pueden extenderse a la identificacibn de variaciones específicas de cromosomas (diferencias en la secuencia entre cromosomas hom6logos). Las tdcnicac para purificar enzimas incluyen precipitación selectiva por sales o solventes orgánicos y cromatografía en soportes de intercambio idnico. oxidomducción o sintesis de enlaces covalentes necesitan un cosustrato conocido como coenzima. en iiltirna instancia. las deficiencias vitamínicas pueden afectar de modo adverso la funci6n enzimiitica y. Acoplar otras enzimas a las deshidrogenasas puede facilitar su análisis. La mayoría de las enzimas tienen especificidad elevada por sus sustratos. Dado que numerosas coenzimas son derivados de la vitamina B. Estos RNA. RESUMEN Las enzimas son catalizadores protelnicos que regulan la velocidad a la cual se realizan los procesos fisiolbgicos. Este enfoque que se ha empleado recientemente en la búsqueda de los fenómenos mutacionales que intervienen en la formación de los retinoblastomas y la enfermedad de Huntington. fi ttracibn en gel. debe notarse que este enfbque general no es infalible. ciertos ácidos ribonucleicos (RNA) presentan actividad catalitica altamente específica de sustrato. puesto que el PLFR no causa la enfermedad sino que simplemente se localiza cerca del gen defectuoso. En el capitulo 42 se encuentran más ejemplos de los usos de las enzimas de restriccibn para diagnóstico. tambikn pueden reacciona. el portador de la enfermedad poseerá un cromosoma con un gen n o m a l y uno con un gen defectuoso. las enzimas deben purificarse a una homogeneidad mayor de 95 por ciento. de los enlaces fosfodidcttres en moléculas de RNA.al gen que interesa. En la investigacidn de su estructura. La localizacibn intracelular precisa de enzimas se infiere por medio de tbcnicas de histoquimica y fraccionamiento celular acopladas con análisis enzimático de cortes de tejido o de fracciones de hornogeneizados celulares. la homeostasia. Las enzimas que actúan sobre sustratos de peso molecular bajo. Las enzimas que catalizan reacciones que comprenden trasferencia de grupo. En todas las formas de vida y tejidos existen isozimas. que cumplen con todos los criterios clhsicos de la definicibn de enzirnas. vienen de manera clave en procesos de separacidn de intrones esenciales para la conversián de premRNA a m RNA maduro (capítulo 39). La capacidad para explotar tdcnicas de QNA secombinante en la expresión de enzimas en hutspedes utiles ha revolucionado la puriftcacibn de enzimas al proporcionar cantidades grandes de enzimas que en la mayorÍa de tos casos ya pueden purificarse hasta la homogeneidad. La actividad de deshidrogenasas dependientes de NAD(P)' s e analiza en espectrofotrimetro a través de la medición del cambio en la absorcion a 340 nrn que acompafla a la oxidacibn o reducción de NAD(P)+/NAD(P)H. en residuos de guanosil. con análogos de sustratos. se conocen como ribozimas. El progreso de una purificación se valora con la medición del incremento en la actividad especifica de la enzima (actividad por unidad de masa) y su homogeneidad final mediante la electroforesis en gel de poliacrilamida (EGPA). Estas reacciones son facilitadas por grupos libres --OH. afinidad por sustrato o interaccibn ligando colorante o ligando hidrbfobo. Se h a desarrollado una exploracibn basada en los PLFR para identificar la fenilcetonuria infantil (capítulo 32): Sin embargo. mecanismo de accián y regulacibn de su actividad. algunas proteasas tambiéri escinden esteres. se detectan dos bandas de hibndizacibn (que es distinto a una sola banda cuando ambos genes son idénticos). Varias coenzimas también contienen e[ nudebtido AMP. Cuando los fragmentos de restriccibn se analizan y sondean. El fenbmeno de PLFR relacionado se ha aplicado al anhlisis de rasgo de las cdlulas falcifomes (bastsándose en un PLFR I-lpal relacionado) y de la beta-talasemia (ligada a un PLFR HindIII y BamHII. las deficiencias en la función enzim htica con frecuencia causan patología. pero en general a velocidades bajas. Sin embargo. que son formas fisi- RNA CATALITICOS Aunque es evidente que no son proteinas. isomerimción. Los descendientes que heredan el cromosoma portador del defecto exhiben una sola banda de hibridizacibn que difiere de la producida por cromosornas normales. Este fenómeno se denomina "polilimorfismo d e la Longitud del fragmento de restriccibn" (PLFR). la importancia firtura del PLFR radica en que es punto de partida para la identificacion del gen de las enfemidades relacionadas. En una enfermedad genética ligada a un polimorfismo de la longitud de restriccibn.

hocCF of Env m i c Analysis. Freeman. Fersht A: Enzyme Srrucrure and Mechanism. Patrones distintivos de isozimas de enzimas skricas no funcionales revelan daíio de tejidos humanos específicos y proporcionan informacibn valiosa para el diagnóstico y el pronostico. 1955-present Acadcrnic Press Naqui A: Where are the asymptotes of Michaelis-Menten? Trends 13iochem Sci 1986.1:459 . Por Ultimo. Lamente DS.1 1 54. Bergmeyer J. Curr Gpinon Structural Biol 1991. Aunque casi todas las enzirnas son proteínas.Wot!f~. Honuood. Scapes R: Protern Purr$cation Principlcs nnd Praciice Springer-Verlag. Applicatiom lo Biochemi. Tijssen P: Practice and Theoty o f E w m e Immunoassays.54:597. Freifelder D: Physical B~ochem~stv. 1985.Phospho~ialion. Chaprnan & Hall. REFERENCIAS Advunces in Enzymolop. Grass M: Me. Vol X I . Acadcmic Press Aitken A: IdentiJcactron ofllrotein Lonsensus Sequelnces Active Site .Wetkod. 1986. VCH Kaiser T. Suckling CJ: Eníymt Chemistry. 2nd ed. and Orher Posttramlatzonal .~ty and MolecuIar Bioiom. 1990. Over 130 volurnes. Elsevier. 1982 Uhlenbeck OC: Catalytic RNAs. lssued annually.Enzrmas: propiedades generales 89 misma actividad catatítica.~ in E y m n l n m . Annu Rev Riochem 1985. 19R2. Anta~ens anddntibodies. Estas reacciones son importantes en fenómenos de procesamiento que incluyen la maduración de pre-mRNA. 1990. Frccman. se conocen RNA catalíticos. . Puhlishers. la propiedad de las endonucleasas restrictivas para detectar cambios sutiles en la estructura de los gcnes permite al médico el diagnhstico de enfermedades genkticas donde las mucamente distintas con la taciones conducen a sintesis de enzimas defectuosas o no funcionales. Bergmeyer H.WodiJcatrons. 1985. como las ribozimas que catalizan de manera muy especifica la hidrolisis de enlaces fosfodiéster en el RNA.b k i t a SE The chernical modi Ii&m ofenzyme spo~ificity.

la fiebre y la hipotermia perturban la homeostasia al modificar la velocidad de numerosas reacciones catalizadas por enzirnas. Por tanto. Por su parte. Los venenos metabiilicos como los mercuriales. temperatura. famacos usados para tratar la hipercolesterolemia y el SlDA. No lograrlo perturba el equilibrio horntostatíco de los tejidos. la disminucibn en la actividad de todas las enzimas que tiene lugar a temperatura corporal baja (hipotermia). Sin embargo. PhD Muchas caracterisiicas de la cinetica enzirnática provienen. LAS REACCIONES PROCEDEN A TRAVÉS DE ESTADOS DE TRANSICIÓN El concepto de estados de transicidn es fundamental para la comprensibn de las catfilisis de cualquier tipo. Por ultimo. la buena salud exige no sólo que se produzcan cientos de reacciones catalizadas por enzimas. numerosos fármacos importantes en terapéutica actúan por reduccjon de las velocidades de reacciones metabblicas al competir con el sustrato natural por una enzima clave. la toxicologia y la farmacología aprovechan eI conocimiento de los factores que modifican la velocidad de reacciones enzimiticas. Todos los factores que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas (concentración de enzima y de sustrato. incluyendo la enzirnhtica. el curare y los gases nerviosos ejercen su toxicidad mediante la inhibicibn de enzimas y en consecuencia toman lentas o anulan reaccionasmetaMlicas esenciales.Vicfor W Rodwell. Algunos ejemplos escogidos ejemplifican sobre este puitto. dado que esta velocidad se eleva o baja en respuesta a las fluctuaciones correspondientes en temperatura. A menudo estos medicamentos tienen una estructura anhloga a la del sustrato natural. puede explotarse para reducir la demanda rnetabolica global durante cirugia a coraz6n abierto o en el transporte de órganos para trasplante quirúrgico. Por ejemplo. este capitulo describe primero aspectos de la teoría de la velocidad de reaccidn. Ejemplos son la lovastatina y la zidovudina (AZT). Por tanto. considkrese unareacción de desplazamiento donde un grupo L que . respectivamente. Ambos tienen efectos teraptuticos mediante la alteracion de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. EI principio biológico principal del estado homeostático de buena salud requiere que la composición del medio interno corporal se conserve dentro de limites relativamente estrechos. la concentraci6n de enzimas y de sustrato así como los inhibidores influyen en las velocidades de esas reacciones. eszos cambios mínimos pueden convertirse en ventaja para el mtdico. válidos para reacciones químicas en general y luego considera los factores exclusivos para reacciones cata1izadas por enzimas. El medico debe comprender el modo en que el pH. con profundas consecuencias potenciales. sino que procedan a velocidades apropiadas. pH y presencia de inhibidores) tienen interés en clínica. de conceptos propios de la cinbtica de reacciones químicas no catalizadas. Además. Por ejemplo. por lógica. La velocidad de ciertas reacciones catalizadas por enzirnas responde a las desviaciones sutiles del pH intracelular que caracterizan a la acidosis o alcalosis metabdlica.

cualquier elevación de temperatura. hay una barrera energetica que debe superarse para que la reacción tenga lugar. es independiente del número de estados de transición. se deduce que la termodinamica de la reacción global (AG) no puede proporcionar indicios del camino que una reacción sigue [es decir. ya sea que todas o s61o una fraccion de las mol&culasposean energia suficiente para reac- Barrera de energia NUMEROSOS FACTORES MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN La teoria cinética o de colisión de la cindticaquimica. las moléculas reactantes deben poseer energia suficiente para sobrepasar esta barrera energhtica. cuya íormacibn y desintegración subsiguiente puede representarse con dos ''reacciones parciales". . Esta es tarea de la cinética. la frecuencia de colisión. AG. Por tanto. L = E-R+ L reaccionar.. ya que aumenta la energia cincrica e incrementa la frecuencia de las colisioncs. que se acercan una de otra a distancias suficientes para formar enlaces. b) abata la barrera energktica para la reacción o c) incrernente la frecuencia de colisión.R. por ende. Gn AGF y AGD son 10s cambios de energia libre que se producen en la formación y dcsintegracibn del estado de transicibn. modwadamente alta para gran parte de las rnolkculas orgánicas. incorpora dos conceptos claves: 1) s61o las maltculas que chocan. cualquier cosa que: a) eleve la energía cinética de las nioléculas reactantes. AGF Temperatura Elevar la temperatura incrementa el número de moléculas que pueden reaccionar. es desplazado por la entrada del grupo E: E + R-L = E-R+ L En realidad este desplazamiento pasa por un estado de transicion. Barrera energética para las reaeeiones químicas .R . Es importante observar que el cambio de energia libre para la reacción global. a partir de la concideracihn del cambio de energia libre en la reaccihn global. Para que una colisibn termine en una reacción. cada una con un cambio caracteristico en la energia libre: E + R-L E. Adernhs. Esta temperatura limitante tiende a ser en extremo elevada para reactantes inorghtcos. pero bastante menor de 100 "C para la mayoría de las reacciones de interés biolbgico. es a Iormacibn igual a la suma de las energías libres de E y degradación del estado de transicihn: De la misma manera que en cualquier ecuación con dos tCrminos. es iniposible.R*. Como se muestra en la figura 9-1. . Reacciones m i s complejas involucran varios y sucesivos estados de transición y proceden a travhs de una seric de reacciones parciales. Esto es verdad. De otro modo. cada una con un cambio de energia libre. inferir dato alguno respecto a los cambios de la energia libre relacionados con la f o m a ción y degradación de los estados de transición. adherido en uii principio a R. cambio de energía libre relacionado con la reacción global. E Z AG. AG. acelera el movimiento molecular y. este incremento de la velocidad de reacción no continua de manera indefinida. Los dos factores contribuyen al incremento en la velocidad de reacción que acompafia a un aumento dc temperatura. el numero de mol&culas cuya energia cindtica excede la barrera energktíca para la reaccion (barra vertical) aumenta cuando la temperatura sube desde un valor bajo (A) a travds de uno intermedio (B) a uno alto (C). respectivamente. Dado que la catalisis se relaciona de manera intima con AGF y AGn.L = E. deberá aumentar la velocidad de reacción. pueden Figuta 3-1. no es posible inferir el signo o magnitud de AGF y AGn por observación del signo algcbraico y magnitud de AG. su mecanismo). L. Concentración de reactantes A concentraciones elevadas de reactantes. y 2) para cada reaccion química.92 Bioqrcím ica de IJarpw se desprende. tanto la cantidad de mol&culas con energia suficiente para reaccionar como su frecuencia de colisión son altas. dado que finalmente se alcanza una temperatura a la cual las mol6culas reactantes ya no son estables. . Esto se deriva del hecho de que AG es la suma algebraica de los cambios de energía libre para cada reacción parcial participante. E. es decir. Sin embargo.

las velocidades (no las constantes de la velocidad} de las reacciones hacia la derecha y hacia Ia izquierda con iguales. la velocidad pe reacción aumenta al cuádruple. A y R: la expresidn apropiada de la velocidad es: Velocidad a [AnBd La reversibilidad se presenta por flechas dobles: Duplicar la concentración de A o de 13 elevará la velocidad de reacción al doble. Deberh tenerse en mente las siguientes propiedades importantes de un sistema en equilibrio. forman n moléculas de A y m moléculas de B: * Hablando de manera estricta. El signo "proporcional a" (E) puede reemplazarse con un signo de igualdad mediante la inserción de una constante de proporcionalidad. 1) La constante de equilibrio es la proporción de las constantes de la velocidad de reacción. en lugar de concentraciones debería decirse actividades molares.. kik-1. Aunque en el equilibrio no existe un cambio neto en la concentracion de nioléculas reactantes o productos. Dupticar la concentración de ambas. . o Velocidad or [A][B]~ luego Para el caso general donde n moléculas de A reaccionen con m rnoldculas de B: ki[AIn[B]"' = k-~[AnBrn] Y la expresibn de la velocidad es: Velocldad a [Aln[BIm La proporción de ki a kise conoce como la constante de equilibrio.".. es decir.B. incrementarh cuatro veces la probabilidad de colision. A y B se están convirtiendo de manera continua a AnRm y viceversa. Para el caso general o Velocidad s : [A] [B] las expresiones para las velocidades de reacción hacia la derecha (velocidad I ) y la izquierda (velocidad -I) son: Para la situaciiin representada por: la expresihn de la velocidad es: Velocldad m [A][B][B] Cuando las velocidades de las reacciones hacia la derecha e iquierda son iguales. Los corchetes denotan concentraciones molaresk* cr sigriifica "proporcional a". característica de la reacci6n en estudio. Por tanto. Considtsrense reacciones que comprendan dos moléculas diferentes.B. 4) La constante de equilibrio puede tener un valor numérico si se conocen las concentraciones de A. para la reacci6n inversa donde A. La expresihn de la velocidad es: Velocidad E [rnolbculas reactantes] Esta expresión se lee: "ri moléculas de A y m moléculas de B están en equilibrio con A. se dice que el sistema esta en equilibrio.cionar. I. A y B. es una proporción de constantes de velocidad Dado que todas las reacciones qulmicas son reversibles.a velocidad de reaccihn es proporcional a las concentraciones de las moléculas reactantes.. 3) El equilibrio es un estado dinámico. 2) En el equilibrio. TG. B y AnBm en el equilibrio. K. k.

las enzimas participan de manera directa en la formación de estados de transición. tiene lugar lo contrario. caializadas por enzirnas: Las enzimas proporcionan estados de transición alteinoc Igual que en toda catálisis verdadera. AGF. como 3 2) La enzima es un reactante coeguivalente con D-G y con A. la reacción es espontánea. a un aceptor.94 a Bioauimica de Hur~er AGO puede calcularse a parkir de K. que previamente se demostrb concierne sólo a los estados inicial y final. nbtese que si bien las enzimas afectan a AGr. es decir. no de la magnitud de AGO. Si es < 1. durante el proceso. 3) Si bien en la reaccidn global la enzima actiia de manera catalitica (es decir. Esto se debe a que K. un grupo. La reacción global comprende tanto la rotura del enlace D-G como la forrnacidn de un nuevo enlace A-G. De manera tipica. La mayoríade los factores que afectan la velocidad enzimas disminuyen la barrera energéticaen una reaccibn. pueden representarse de la siguiente manera: Esto enfatiza tres características importantes de las reacciones de transferencia de grupo. no modifican a AG. un factor importante que contribuye a la capacidad de una enzima para acelerar la velocidad de una reacci6n dada es que el AGFpara formar un estado de transicidn enzima-sustrato sea bastante menor que el AGF para la reaccibn no catalizada correspondiente. el G. permite el chlculo del valor para AGa. La constante de equilibrio se relaciona con AG' de la siguiente manera: R es la constante de los gases y T. se favorece la reacci6n según se ha escrito (de izquierda a derecha). los estados de transicibn enzima-sustrato estan en niveles energeticos significativamente menores que los estados de transici6n cuando la misma reaccibn procede en ausencia de catalisis enzimhtica. No obstante. La AGn de la reacci6n global es igual estt catalizada o no por enzimas. es transferido de un donador. A o ambas pueden estar ausentes. Esto es. D 4 . se requiere en proporcibn molar 1: 1 con los demhs reactantes). la enzima es un reactante estequiomktrico (esto es. Debido a que la constante de equilibrio para una reacción química es una funcibn del cambio de energia libre estandar para una reacciiin se deduce que en las enzimas y otros catalizadores no tienen efecto sobre la constante de equilibrio para una reaccibn. reacciones de isomerización (como la interconversión de glucosa 6-fosfato y glu- . vkase antes). catalizadas por enzimas. Por tanto. Las velocidades de reacción dependen de l a magnitud de la barrera energética. no informa acerca de la magnitud de la barrera energttica para la reacci6n (es decir. Ias 1) Cada reaccibn parcial comprende tanto la rotura a formacibn de un enlace covalente. las enzimas se recuperan sin cambio después que la reaccibn termina. De otra manera. la temperatura absoluta. Las reacciones de transferencia de grupo.. Numerosas reacciones bioquímicas adicionales pueden considerarse casos especiaks de la transferencia de grupo en la cual D. Sin embargo. A. nbtese que aunque la constante de equilibrio para una reacci6n indica la direccidn a la cual una seaccibn es espontánea. Las enzimas catalisan la formación o rotura de enlaces covalentes Para la reacci6n de transferencia de grupo: de las reacciones catalizadas por enzirnas lo hacen mediante el cambio de la concentraci6n local de reactantes. es decir. no indica si tendra lugar con rapidez. Por ejemplo. En consecuencia. se requiere 5610 en oligocantidades y puede recuperarse sin cambio cuando lareaccibn ha terminado). el conocimiento del valor numérico de K . Dado que estas se conocen. una proporcibn mayor de moléculas de sustrato son capaces de reaccionar. Sin embargo. es mas probable que la reacción proceda de derecha a izquierda. Si la constante de equilibrio es > 1. determina a AGO.. para cada reaccidn parcial.

el "sitio activo". . se podría expresar la fortaleza de la relación entre un reactante. se ocupaba de la catálisis. la participacibn en la reacción global de dos o más fonnas intermediarias del complejo EnzS y la participación consecuente de u11 canjunto de varias reacciones parciales secuenciales. es. por arriba de su concentracion en soluci6n libre. a una distancia que posibilite la formacidn de enlaces (o su rotura). un valor bajo para Kd representa un complejo R . laconcentracibn local de cada uno aumenta en razún de un factor que depende de su afinidad individual (valor &) por el catalizador. la fijación de los dos A y l catalizador puede conducir a un incremento enorme (varias miles de veces) en la velocidad de la reacción global. Para una solucibn quinrica homogenea. R. para el complejo R-C o la constante de equilibrio para la reacción: R-C R*C Los complejos EnzS participan en la catálisis Las representaciones anteriores todavia no son suficientes para enfatizar otra característica fundamental de las reacciones catalizadas por enzimas. EnzG* y EnzG* * representan sucesivamente los complejos EnzS formados durante la reaccion global. Las enzirnas incrementan la proximidad del reactivo y la concentración local Para que cualquiera de las reacciones anteriores tenga lugar.C fuerte. Una consecuencia importante es que cuando un reactivo se une a un catalizador. como se ve. C. De este modo. Para comprender estas propiedades distintivas de las enzimas. uno del otro. Aunque este enlace es un procese reversible. proporcional a la concentracibn de 3 por e! ambos. éste aumenta la concentracion del reactante en un Area localizada de la solución. todos los reactantes deben encontrarse. Las enzirnas son catalizadores extremadamente eficaces y muy selectivos. en ausencia de catalizadores. por ende. la concenación de las mol~culasreactantes es constante en toda la solución. hay Cuantitativamente. Estacondición yano se cumple despuks de introducir un catalizador.Enzimus: cinética 9j cosa 1-fosfato) podrían presentarse como reacciones en las cuales tanto D como A estan ausentes: en términos de la constante de disociacibn. y un catalizador. A y B. &. Una representación de una reacción de transferencia de grupo que enfatiza estas características podria ser: Así. El gran tamafío de las proteínas en relación con los sustratos condujo al concepto de que una region restringida de la enzima. se ha introducido el concepto de sitio "activo" o "catalitico"*. De manera cualitativa. en la velocidad de la reaccihn. ya no m m o s con una soluci6n quimica homogbnea. sobre éstas. esto podria representarse asl: Reactante + catarizador complejo reactante-catalizador LA CATALISIS SE PRODUCE EN EL SITIO ACTIVO Una propiedad esencial de las enzimas es su capacidad para fijar los reactantes la cual se acompafia de incremento en la soncenmación local de estos y. la constante global de equilibrio para la unión favorece fuertemente las formas enlazadas miis que las libres de mol6culas reactantes. otros sitios "activos" que se relacionan con la regulación de la actividad enzimática m& que con la enzimologIa intermediaria del proceso cataIítico. Los catalizadores tienen sus propios dominios de superficie para unirse a las moIdculas reactantes. Si el catalizador para una reacción bimolecular (dos reactantes) se une a ambos. Puesto que la velocidad de la reaccibn biomolecular global en la cual EnzG. era extremadamente enig- * Aunque en muchos textos se establece una equivalencia entre los sitios activos y los catalíticos de las enzimas. sino heterogknea. Inicialmente.

la unión ordenada de dos o más sustratos (figura 9-3) o la cin6tica dc una curva de saturación del sustraio simple. se reconoce que una porcion mucho mayor de la proteina actua reciprocamente con el sustrato que la que se suponia antes. En el ejemplo (figura 9 4 ) . están representados por los de lisina y metionina.matico para los bioquimicos el porqug las enzimas cran tan grandes ciiando s6Io una porción de su estmctura parecía requerirse para unirse con el sustrato y para la catAlisis. El modelo de un sitio catalitico rígido explica muchas de las propiedades de las enzirnas El modelo de un sitio catalitico. Esto aIlnea los residuos de aminoácidos y otros grupos de la enzima en ia orientación espacial correcta para la combinacion del sustrato. pero no todos. Como se puede observar en el modelo de ajuste inducido. todavía es útil para entender ciertas propiedades de las enzimas. Figura 9-3. el cual a su vez es necesarbo para unir a S2 Los sustratos inducen un cambio de conformación en la enzima 1Jna caractcristica desafortunada del modelo de Ficher es que implica rigidez del sitio catalitico. Una caracteristica final es el sitio mostrado como una pequefia muesca a 12 derecha de la enzima. Este modelo dc cerradura y Ilave o modelo de plantilla rigida (figura 9-2). Representacibn bidimensional de un ajuste inducido por un cambio de conformación en la estructura de la proteina Obsérvenselas pastciones relativasde los residuos clave antes y despues de la unibn del custrato . no implicados en proceso alguno. represenro la accion reciproca del sustrato y la enzima en tkrminos de la analogia de una "cerradura y Ilave". Otros residuos. Tal vez se pueda imaginar una molécula reguladora uniéndose en este punto y "bajando" uno de los braz. Una fosfoserina (-P) y el -SH de un residuo de cisteina intervienen en la catálisis. los grupos hidrófobos [porción rayada) y los grupos cargados (área punteada) se encuentran implicados en la combinacibn del sustrato.1 combinarse con el sustrato y para la catálisis. por ejemplo. alineando los grupos correctamesite par. En el modelo de ajuste inducido. Los anhlogos del sustrato pueden causar algunos. Figura 9-2. Representacibn de la absorcibn sucesiva de una uienzima (CoE) y de dos sustratos ($1 y $2) sobre una encima en término de la hipbtesis de la plantilla. Reprecentacidn de la fomacibn de un complejo EnzS de acuerdo con la hipdtesis de la plantilla de Fischer Figura 9 4 . A1 mismo tiempo.0~ polipeptídicos que portan un grupo catat itico. En elmodelo de Fischer se presume que el sitio catalitico esta prefigurado para adaptarse al sustrato. el grupo catalitlcci y el fijador de sustrato estíh separados por varios enlaces. Un modelo mis geneml es el del "ajiiste inducido" de Koshland. Al adherirse el verdadero sustrato (A). los residuos qtie comprenden el sitio catalitico. el cual ha recibido un considerable apoyo experimental. las orientaciones espaciales de otras regiones tambikn están alteradas -la lisina y la metionina están ahora más juntas (tigura 9 4 ) . todos los grupos (representados como circulos negros en todas las ilustraciones) son alineados correctamente. La adherencia de un análogo del sustrato que es demasiado "voluminoso'' (figura 9-5 B) o demasiado "delgadc" (figura 9-5C) induce una alineación incorrecta. En ausencia de sustrato. Ida aproximación del sustrato induce un cambio en la conformacibn dc la proteína enzimatica. propuesto por Emil Fischer. los cambios en la confomacibn correctos (figura 9-5). Cuando aparece también la necesidad de sitios alostdricos de igual ramaiio ya no debe sorprender e! tamafio de las enzimas. la cathlisis o ambas. pero especialmente cercanos cuando se considera la estructura tridimensional (terciaria). Entonces puede producirse la uni6n del sustrato. Se supone que la coenzima porta un grupo esencial que se une al primer sustrato [Si). pueder! estar niuy distantes entre si en la estructura primaria. Hoy en día. el sustrato induce un cambio en la conformación de la enzima. pero no la catalisis.

El sitio catalItico de la ribonucleasa también Figura 9 4 . Arg114 Figura 9-6. residuos Koshland.ostrado que es iitil el examen de la estructura de los denoiniiiados complqjoc terciarios abortivos compuestos de un sustrato y uti producto. (Según través de la cual se encuenmn His 12 e FIis 1 19.. a (A) a análogos inactivos del sustrato (B) y (C).cadena polipéptida de 129 residuos y tiene una profunda hendidura central que alberga un sitio catalitico con seis subsitios (figura 9 4 ) los cuares enla. Uno de estos ejemplos es la enzima HMG-COA reductasa. Estos complejos. soii el sitio catalitico.ían varios susrratos. El tamaiio amplio y 61 carhcter tridimensional de los sitios activos determinan su visualizacibn 6ptima en las pantallas de computadoras mediante programas que permiten girar la estructura en todas las direcciones. Sin embargo. o de complejos enzima-sustrato anhlogos al inhibidor. Está constituida por una soIa Ser 36 h F. Las limitaciones de la hoja impresa tan solo permiten una representacibn iinperfecta de los sitios activos. Los residuos que originan la rotura del enlace se encuentran entre los sitios D y E. cn particular la cisteína y otros aminolicidos hidroxllicos.) que. Al parecer.en tanto que Asp 52 Con carga negativa estabiliza el ion c a r b ~ n desde el lado posterior. Cicídos o bhsicos tienen funciones claves en la catllisis. la cual lisa las paredes celulares de muchas bacterias grarnpositivas trasmitidas por el aire. Muchos residuos arninoacilo participan en el sitio activo ¿Qué partes de una enzima conforman y participan eii su sitio activo? EI sentido de esta pregunta se entiende mejor mediante el examen de las estructuras tridimensionales de un complejo terciario (tres componentes) formado por unaenzima y dos sustratos. como catalimdores generales bhicos Tri 63 ' Asn 46 Los sitios activos a menudo se localizan en hendiduras Para las enzimas que consisten en una subunidad cnica. propercionan una estrecha aproximacibn al sitio activo durante el paso inicial de erilace con el sustrato en la c a t á l ~ s i s . Los residuos cataliticoc se conservan mucho Ciertos arninoacidos. Representación de cambios de c~nformacibn~en la protelna enrimatica cuando ocurre la unión can el sustrato radica dentro de una hendidura semejante a la anterior. Sin embargo. incluso en el estado de cristales. Estos residuos sirven como nucle6fi los. Los residuos aminoacilo de ambos sustratos contribuycn al sitio activo. enzima presente en las lágrimas y en el moco nasal. Los sitios activos de enzimas multiméricas pueden encontrarse en subunidades de interface Para ciertas enzimas que contienen multiples polipkptidos o subunidades.Estos estudios muestran que muchos residuos aminoacilo esthn en contacto con sustratos o coenzimas unidos y. lo cual complica Ia interpretacihn de los datos. el sitio activo amenudo radica en una hendidura de la enzima. Un ejemplo es la lisozima. constituyen parte del sitio activo. el sitio activo se encuentra en la interfase entre estas. Enz + S EnzS este último cede prolones al enIace acethlico de1 srisA B C @ato. que es la enziina limitante de la velocidad de colesterologenesis (figura 9-7). se pueden establecer algunas generalizaciones. Por tamo. segiin la evidencia química. al servir para enlazar sustratos o para funcionar en la cathlisis. si estan presentes todos los siistratos se producira la catAlisis. por tanto. verlas en tres dimensiones y acercar las partes que interesan. cerca de los grupos carhoxiIo de Asp 52 y Glu 35. Representacibn'bidimencionaldel sitio catalitico en la regibn hendida de la Ircozima De la A a la F representan las fracciones glucosilo de un hexasadrido Algunos residuos en la región hendida se muestran junto con sus números en las secuencias en la Iisorima (Adaptado de Koshland ) . se ha dei. que no pueden pasarse por alto.

mientras mhs tiempo se conserve una enzima a una temperatura a la cual su estructura es apenas estable. para todas las formas de una enzima que cataliza una reacción o una ciase de reaccibn dadas. 1972. A esta temperatura. el mAs pequeíio de los cuales (abajo izquierda) contiene un enlace nuclebtido doblado compuesto de hola beta y h6licec alfa Los residuos aminoacilo esun numerados para facilitar el trazo del polipéptido desde su terminal amino (N) hasta su teminal carboxilo (C). Na Y 1' :dlcnl Rcscarch " J. tienden a mostrar una conservación elevada.98 Bioauim ica de Hurper ~Cu~íieclo 9) generos. No obstante. En consecuencia. MULTIPLES FACTORES INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS Figura 9-7. Por su parte. " 1. la velocidad de la reacci6n aumenta cuando latemperatura se eleva. -. los aminoácidos que tienen funciones altamente especificas en la cathlisis y. Sin embargo. entra al dominio pequeno y al final termina en el dominio grande (Rediseriada con autorizaubn de Lawrence CM. debido al incremento en la energía cinktica de las moléculas reactantes. Swuenrrlaa de los aminohcidos en la vecindad de los sitios catalíticos de varias proteasas bovinas. esto es verdad s610 dentro de limites estrictos de tempemtura (figura 9-81.' '7 - - - tzi m a t Secuenci ir d e la ser C Q 0 . ya que la temperatura óptima depende de la duración del analisis usado para determinarla. El cuadro 9-1 muestra esta conservacibn de la estructura primaria en los sitios cataliticos de en7imas hidroliticas relacionadas. es decir. . Al principio. No obstante. Rodwell VW. kste no es un parhmetro fundamental. dado que un "tipo" estructural terciario puede construirse a partir de varias estructuras primarias diferentes. C K K N fi G V ? ' lo m n autor 1. Por tanto.. predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad cataiitica. Crystal structure of Pseudomonas mevalon~i HMG-COAreductase at 3 O angstrom resolution Science 1995:268 1758 ) Temperatura Aunque la elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reaccihn cata1izada por enzimas. Las regiones que se muestran son las situadas a cada lada de los residuos serilo S e histidilo J1l Sitio Ir'! -. la energía cinetica de Ia enzima excede a la barrera energética para romper los enlaces dkbiles de hidr6geno e hidrdfobos que conservan su estructura secundaria-terciaria. el mecanismo de reaccidn sea idéntico sin importar el tejido o forma de vida original. pero diferentes. Ios aminoácidos adyacentes. inclusive entre Cuadro 9-1. Stauffacher CV. o acicidos o como aceptores de un grupo que esth experimentando transferencia. Es probable que. Observese que el polipéptido inicia en el dominio grande. L C E G iayhoff M 0 M K S P 2. las enzimas muestran una temperatura optima. i P V V C S G K mncia alred S A A histidina H Y K S G G V T Quimotripsina A C M G D@GC ' - . al final. hasta cierto grado. mayor probabilidad tiene de experimentar desnaturalizacibn. el cuadro 9-2 aclara la conservaci0n de "tipos" estructurales primarios a través de los gkneros para la enzima biosintética H M G X o A reductasa. Estructurade una subunidad rjnica de HMG-COA reductasa de la bacteria Pseudomonasmevalonii La subunidad consta de dos dominios. la estructura primariaglobal de las enzimas esta mucho menos conservada que la terciaria. "I' A P Vol 5 .

como la contracci6n de un cosaz6n fuera de la cavidad toiricica. organismos homottmicos como el ser humano toleran sblo alteraciones estrictamente limitadas en su temperatura.tasa. entonces. L( i s residi10s subrayados se desvian de E a secuencia consensual --. los cambios en la velocidad de reacción en el ser humano. por definicibn para este ejemplo.S-- - :ima de marniferos . los valores extremos de pH disminuirán las concentraciones efectivas de Enz. Para la enzima. 2) Alteraciones en el estado de carga de la enzima del sustrato o de ambos. las unicas formas que interaccionan son SH' y Enz-. debidos a Cuando se mide la actividad enzimAtica a diversos pH. Las de los microorganismos adaptados para crecer en aguas termales o en áreas oceánicas termales profundas muestran temperaturas bptimas prbxirnas al punto de ebullición del agua. El factor por el cual la velocidad de un proceso biológico aumentacon un incremento de temperatura de 10 O C es el coeficiente de temperatura o Qio. SH' se ioniza y pierde su carga positiva: Figura 9-8.-. la Enz-adquiere protones y pierde su carga negativa: A valores de pH altos. La estructura primaria de algunas regiones d.0 y 9. La velocidad de numerosos procesos biolbgicos. Sin embargo.0. con lo cual se reduce la . Para casi todas las enzimas. los cambios de carga pueden afectar la actividad. L Aminohcidc Ser humano C F Y - Levadura" -- m - alteraciones en la temperatura tienen escaso significado fisiológico. ya sea cambiando la estructura o la carga en un residuo que funciona para ligar el sustrato o en la catálisis. - -. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de una reaocibn hipotetia catalizada por enzimas. considérese una enzima con carga negativa (Enz-) que reacciona con un sustrato cuya carga es positiva (SH*): Temperatura dptime I A pH bajo. Por tanto. son activadas a valores de pH muy alejados de estos límites.. Por el contrario. ofkce escasas opciones para los organismos homotkrmicos. casi se duplica con una elevacibn de 10 "C en Ia temperatura (Qio = 2).Cuadre 9--2. e un sitio catalttico puede conservarse a través de 1os generris. La alteracidn en las velocidades de numerosas reacciones catalizadas por enzimas que acompaña a una elevacibn o caida de la temperatura corporal. Se piensa que los aminokidos. . mostiar~uaaurit rodeando al residuo elutan n n la catá tisis realiizada por la e A reduc. ¿cómo incrementan sus velocidades de reaccibn? La respuesta se apoya en la propiedad de las enzimas de abatir las barreras energéticas para las reacciones y elevar las concentraciones locales de reactantes. Dado que el aumento en el nhrnero de moléculas con energia cinética suficiente para superar la barrera energktica. constituye una caracteristica de supervivencia esencial para formas de vida como las lagartijas que no conservan constante su temperatura corporal. la hptima generalmente se observa entre los valores de 5. Para aclarar esto. Puesto que. La fomia de las curvas de p T 1 bptimo estii determinada por: 1) Desnaturalizaci6n de la enzima a valores de pH altos o bajos.y SH'. excepto cuando hay fiebre o hipotermia. . como la pepsina. las temperaturas 6ptimas son iguales o mayores a las de las células en las que se encuentran. unas cuantas enzimas.

los cuales son los factores que determinan a K. Aunque Cste es el caso de algunas reacciones catalizadas por enzirnas. No obstante. Así. EnzS. Podría ser necesario un grupo cargado dista1 a la región donde el sustrato se ha fijado. En su f m a miis simple. no pueden modificar a K. (la velocidad medida cuando m u y poco sustrato ha reaccionado). la velocidad inicial de una reacción enzirnática es siempre proporcional a la concentracibn de la enzima. LA VELOCIDAD INICIAL ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA La velocidad inicial de una reacción es la velocidad medida antes de que se haya formado suficiente producto para permitir que la reacción inversa ocurra.te de equilibrio glohaI la [Enz] se cancela. enzirnas cambian la via de la reacci6n. velocidad^ = kl [Enz] [S] Veloeidad. que se descompone para formar un producto. Además. las enzimaspueden experimentar cambios de conformación con las variaciones del pH. crece hasta un valor mfiximo. todo lo cual conduce a la pérdida de la actividad.. esta consideración no invalida lo siguiente. volverse más compacta o disociarse en protiimeros. y la enzima libre. la proteína puede desenrollarse.. y AGO. velocidad de reacción (figura 9-9). Dicho de otra manera. las reacciones enzimáticas son tratadas como si tuvieran un solo sustrato y un producto unico. La velocidad inicial medida alcan7a un valor máximo y no es afectada por el incremento ulterior en la concentraci6n del sustrato. Efectos del pH cobre la actividad enzimhtica. La velocidad se incrementa al aumentar la concentracibn del sustrato hasta el punto donde se dice que la enzima estli "saturada" con el mismo. v. puesto que las enzimas afectan a las velocidades y no a las constantes de velocidad. P.100 Rioquímica de Harper (Capítulo 99) mSH* X m Enz en la expresihn de la constan. obsdrvese que este enunciado se sostiene sole para velocidades in tiales. la actividad puede ser restablecida o no cuando la enzima regresa a su pH bptimo.. la velocidad inicial medida. Dependiendo de la gravedad de estos cambios. d e una reaccibn es la misma sin importar que se alcance el equilibrio con catálisis enzirnhtica o sin ella (recordar A G ~Las . para conservar una estructura activa terciaria o cuaternaria. y no mas (figura 9-1 0 ) . . V . . . se encuentran Enz y S en el estado ibnico apropiado y sus concentraciones rnliximas están correctamente cargadas a pH X. No obstante. que es una relacion de constantes de velocidad. Entonces. Figura 9-9. la mayorla de ellas tienen dos o mas sustratos y productos. la concentración de la enzima no tiene efectas sobre la constante de equilibrio. la K. debido a que este está presente en Aunque las expresiones de la velocidad para las reacciones hacia la derecha e izquierda y global incluyen el tCrmino [Enz]. Solamente en el área som breada con rayas cruzadas. Conforme cambia la carga en este grupo. Si se aumenta la concentracion del sustrato [S1 mientras que todas las demás condiciones se conservan constantes. pero no afectan las concentraciones de equilibrio inicial y final de los reactantes y productos. Ademh. Las enzimas no afectan las constantes de equilibrio La enzima es un reactivo que se combina con el sustrato formando un complejo enzirna-sustrato. esto puede representarse como: LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATOAFECTALA VElOClDAD DE LAS REACCIONES En la explicación siguiente.i = kl [Enz] [P] .

Figura 9-10. Incluso si [S] decreciera 100 veces. o constante de Michaelis... muchas de las enzimas poseen dando un exceso molar de lo6 de sustrato sobre la enzima. Efecto de la ooncentracibn del suctrato sobre la velocidad de una reaacibn catalizada por enzimas. Por ejemplo. esencialmente toda la enzima se encuentra combinada con el sustrato. puesto que no existe enzima libre disponible para reaccionar. Representacibn de una enzima a concentraciones bajas (A).1 pglmL = 7 0 molar ~ [S] = 0. es muy sensible a los cambios en [S] y la enzima esta trabajando precisamente a la mitad de su vclocidad máxima. En los puntos A y B solamente una porcihn de la enzima presente estl combinada con el sustrato. altas (C) y a la wncentracibn Km del sustrato (6) Los puntos A. En C. El caso B presenta una situacibn de mayor interés tebrico donde exactamente la mitad de las rnol&culas de enzima esthn "saturadas con" sustrato. un gran exceso molar con relación a la enzima. v. de manera que un incremento ulterior en [S]. La situación en los puntos A. la velocidad es la mitad dc la vclocidad rnbxima alcanzable { V . aumenta o disminuye la cantidad de Enz ligada con S como EnzS: de aquí que V I dependa de [S]. De hecho. Cuando [S] es aproximadamente igual a K.1 mglm L = 1o4 molar Enz + S & EnzS (formación del complejo EnzS) no es infinitamente grande. LAS ECUACIONES DE MICHAELIS-MENTEN DE HlLL REPRESENTAN LOS EFECTOS DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO La ecuación de Michaelis-Menten La concentraci6n del sustrato que produce la mitad de la velocidad mhxima. llamada valor K. no puede causar incrementos en la velocidad de reacción. si una enzima de peso molecular de 100 000 actúa sobre un sustrato de peso molecular de 100 y ambos se encuentran a la concentración de 1 mg/mL. La Km tiene las dimensiones de la concentracidn molar. como funcibn de [S] (figura 9-10). De acuerdo con esto./ 2 ) a esa concentración particular de la enzima. En los puntos A o B al aumentar o disminuir [S]. Cifras mhs realistas serian: [Enz] = 0. aun cuando haya muchas mhs molkculas de sustrato que de enzima. Esto se debe a que la constante de equilibrio para la reaccihn Figura 4-11. B y C corresponden a los de la figura 9-1 0 . B y C de la figura 9-1 0 se aclara en la figura 9-1 1. aunque praduce un aumento en la frecuencia de las colisiones entre Enz y S. el sustrato todavia estaria presente en un exceso molar de 10 000 veces sobre la enzima. existen 1 O00 moles de sustrato por cada mol de enzima. se puede determinar experimentalmente graficando v.

El . por lo tanto el tCrmino Km se elimina del denominador.valores de Km que se aproximan a la concentraci6n fisioliigica de sus sustratos. es IIV. Esta gráfica es llamada gráfica del doble reciproco. ) . la velocidad inicial vi es semimáxima. Ln dependencia de la velocidad inicial de una reacción catali7ada por enzirnas en [S] y en Kmpuede aclararse valorando la ecuaci6n Michaelis-Menten como sigue: 1 ) Cuando ISI es mucho menor que Km(punto A en las figuras 9-1 O y 9-1 1). es graficada contra [S]. se puede expresar en cualquier tipo de unidad.h. las dimensiones de Km esthn en molaridad o moles por litro. K: yi Invirtiendo: .2 Esto expresa que cuando la concentracion del sustrato es igual al valor de Km.v " F l . VI Si y. La ecuacihn de Michaelis-Menten puede ser invertida y factorizada como sigue: describe el comportamiento de muchas enzimas de acuerdo a las variaciones de la concentracibn de sustrato. En otras palabras. por ejemplo. La velocidad. 3) Cuando [Si = Km (punto B./V. y la pendiente.. se usa una forma lineal de L a ecuación de Michaelis-Menten Puesto que numerosas enzimas dan curvas de saturación que no permiten fácilmente la valoración de Vmex (y por tanto de Km). a.vi = ! ! ! ? % N = be Km Km [S] Km + [ S I' K [S] "aproximadamente igual a"]. La interseccibn negativa en x puede ser valorada haciendo y = O. o de l/[S]. esto significa que cuando la concenlracihn del sustrato es considerablemente inferior a la requerida para producir la .. es K.(l lv. Agregando ahora Km a [S] en el denominador. el valor de [S] cambia muy poco. Aííadiendo ahora [S]a Kmen el denominador. cambia muy poco su valor. puesto que Km es independiente de [Enzl. L a expresión de Michaelis-Menten Para determinar Kmy V. Entonces = 'V d x [SI Km + [C] ' Vdx = - [SI ..A. v.) se grhfica contra el reciproco de [S] (l/[S]). esto es. . el reclproco de v. Y.. depende de la concentraci6n del sustrato [S].. Puesto que el [S] está expresado en rnolaridad.. [a significa Simplificando: ~ s t es a la ecuación de una linea recta: donde: Esto establece que cuando la concentración del sustrato [S] excede con mucho el valor de Km.la velocidad inicial v. 2) Cuando [S]es mucho mayor que Km(punto C.. El valor dc K.cuando la v.Vmh [ S I Vrns! p] SI+ [S] 2 [SI . Tambikn indica la forma de evaluar a Km. la interseccion en y. de modo que el término [S] puede ser eliminado dcI denominador. b... de determinar de manera experimental la concentracion del sustrato donde la velocidad inicial es la mitad de la rnhxirna. miiad de la velocidad miixirna (el valor U la velocidad inicial v. puede: ser calculado a partir de la grhfica de Lineweawer-Burk o del doble reciproco (figura 9-1 2) usando la pendiente y la intersección en y o la interseccibn negativa en x. figuras 9-10 y 9-1 1). Dado que tanto Vmav como Km son constantes. es mhxima. se puede reemplazar su relación por una nueva constante. es conveniente reordenar la expresión de Michaelis-Menten para simplificar la valoracihn de Km y V. se grafican en función de x.. figuras 9-10 y 9-1 1).. o 1/v.

es el de Eddie y Hofstee.Km 1 3 [S] que da kr + k-1 pero cuando k-. se grafica v. EnzS. Kd.. En otras palabras. >> entonces kz + k-. (eje x}. = Kd = afinidad. mayor será la afinidad de la enzima por el sustrato.entonces liK.. La derivación supone que el primer paso de Izt reacción catalizada enzimáticamente es rapido y siempre esta en equilibrio. Gráfica de Lineweaver-Burk o de/ doble reciproco. la velocidad de dicaciacion de EnzS a Enz + S debe ser mucho mhs rápida que su disociación a enzima + producto..8. la determinación rigurosa de Km y V. Sin embargo. Los valores de K.= V.. Los tratamientos con el doble reciproca también tienen aplicacihn extensa en la cvaluacion de los inhibidorcs dc enzimas. para el comple. seleccionadas para el estiidfo. debe ser válida una hipótesis incluida en la derivacidn de la expresión de Mfchaelis-Menten./2 es: [S] = kl . . De manera experimental./K.. l l v . subestima la afinidad.jo enzima-sustrato. En la expresion de Michaelis-Menten. Éste cs el caso cuando las concentraciones del sustrato. El valor de Km indica la cantidad de sustrato que debe usarse para medir V .. y la intersección en x es Vmk.. Aunque la gráfica de Lineweaver-Rruk y el enfoque de Eadie-Hofstee son útiles en los ejemplos escogidos.. 1 /Kd. El valor Kmde una enzima para su sustrato puede tratamienta por el doble recíproco requiere relativamente pocos puntos para definir Kmy es el método más utilizado para determinarla.. cuyos reciprocos difieren por incrementos constantes. son de importancia prActica considerable. para que esto sea verdadero. Un enfoque alternativo a la evaluaci6n experimental de Km y V. la enzima actuará esencialmente a velocidad mhxima y por tanto la velocidad mhxima (V.. Figura 9-12. ... Si kz es no a proximadamente igual a km. . rcquiere de tratamiento estadistico. .r k2 k-I En estas condiciones. Para evaluar Kmy V.. 1/K. el uso de la grhfica de Lineweaver-Burk para valorar Km puede dar origen a una importancia no justificada de los datos reunidos a concentraciones bajas del sustrata. Este inconveniente puede superarse seleccionando las concentracioncs de sustratos. A una concentracion de sustrato de 100 veces K.l[S] (eje y) contra v. v. en el análisis de enzimas esta situación es deseable. difieren por un incremento constante. contra [S] usado para valorar K m y Vmh Esto es.) reflejara la cantidad de enzima activa presente. La ecuación de Michaelis-Menten puede reordenarse a servir también corno una medida de su Kd. .Kmpuede aproximarse a una constante de fijación La afinidad de una enzima por su sustrato es igual al inverso de la constante de disociación..La pendiente es -1 /Km. Entonces la interstccidn en y es V. Por lo general. mientras menor sea la tendencia del sustrato y de la enzima para disociarse.

el enlace cooperativo del sustrato a sitios múltiples./V.v.J(V. tanto Los inhibidores competitivos típicos se asemejan al sustrato La inhibicibn competitiva clásica tiene lugar en el sitio de unión del sustrato (catalitico). La estructura qulmica de un inhibidor (1) analogo del sustrato (S) Figura 9-1 3. que originalmente se derivó para describir el enlace cooperativo de moléculas de oxígeno a la hemoglobina.104 Bioquímica de Harper La ecuación de Hill Ciertas enzimas y otras proteinas que -jan ligandos. será m& "sigmoide" la cinética de saturación..J(Y. Una grAfica de v. la ecuacihn .. por lo general. Evaluación grafica de la ecuacibn de Hill para determinar la concentracibn de sustratos que produce la mitad de velocidad mhxima. . . Escrita de manera lineal.. donde k' es una constante compleja.v. se traza una Ilnea perpendicular al eje de las x desde el punto donde log v. numerosos inhibidores no muestran las propiedades ideales de inhibicibn competitiva o no competitiva puras que se describen despubs. -vi) contra log [S] proporciona una recta con pendiente = n. / 2 ) .)= 1. y cuanto mayor sea el valor de n. v.. Para la cinktica de saturacibn del sustrato sigmoide no son válidos los métodos dc evaluacibn gráficas de la concentración del sustrato que produce la mitad de la velocidad máxima. y por tanto.v. El enlace en un sitio afecta el enlace en otros como se describió en el capitulo 7 para la hemoglobina. log v. para determinar S r o (concenlracibn del sustrato que produce la mitad de la velocidad maxima)./(V. no muestran la cinética clásica de saturación de Michaelis-Menten. donde n es un pariirnetro empírico cuyo valor depende del número de sitios de enlace del sustrato y del numero y tipo de interacciones entre los sitios de enlace. la velocidad de reacción aumenta a la enésima potencia de [S]. . como la hemoglobina.. De este modo. como se describib (no se producen rectas).) = 0. La figura 9-1 4 presenta una gráfica de Hill de datos cinéticos para una enzima con cinbtica de enlace cooperativo. La ecuación afirma que cuando [S] es baja comparada con k'. Algunos se unen a la enzima en el mismo sitio que el sustrato (el sitio catalitico). de este modo. Este método se emplea cuando la curva de la cinbtica de saturacibn del sustrato es un sigmoide . Si pl 1 1. se dice que los sitios exhiben una cooperativismo negativo. la curva de saturacibn es sigmoide (figura 9-13). A la mitad de la velocidad máxima (v. = V . los sitios de union achian de modo independiente uno del otro.. los sitios son cooperativos. Cuando [S] ce grafica contra v. Si rr < 1. Figura 3-14. Para valorar la sigmoide de T a cinttica de saturacibn se utiliza una representacidn gráfica de la ecuación de Hill. Esto indica. EL ANALISIS CINETICO DISTINGUE ENTRE INHIBICIÓN COMPETlTlVA Y NO COMPETITIVA Aunque de manera tebtica se distinguen los inhibidores de la actividad enzimática con base en si la inhibici~n se anula o no por el incremento de la concentraci6n del sustrato.) = O. otros lo hacen en alguna región alejada de &te (un sitio alostérico).a. Sigrnoide de la cinética de saturacibn. Cuando n = 1.de Hitl es log k' mejor será el cooperativismo y. Un criterio alternativo para la clasificación de inhibidores es su sitio de acción.

La succinato deshidrogenasa cataliza la formaci6n de fumarato mediante la remacibn de un htomo de hidrbgeno de cada htomo de carbono alfa del succinato (figura 9-1 5 ) . Un caso muy estudiado de inhibición competitiva es el del malonato (1) con el succinato (S) por la succinato deshidrogenasa. Las líneas trazadas a travds de los puntos experimentales coinciden en el eje de las y. un inhibidor competitivo eleva la Km aparente (K'. v. puesta que no hay manera de quitar ni siquiera un atomo de hidrógeno del único atomo de carbono alfa del malonato sin formar un átomo de carbono pentavalente. compiten por los mismos sitios de unión sobre la superficie de la enzima. por tanto. El malonato (DOC-CT-iz-C003 puede combinarse con la deshidrogenasa formando un complejo EnzI. Ahora hay una cantidad escasa de enzima libre (Enz) disponible para combinarse con S para formar EnzS y finalmente Enz + P. Si esto es asi. una concentración igual de un inhibidor unido con menor fuerza (K. en lugar de hacerlo con 1. Figura 9-16.) para el sustrato. Reaeeibn del suminato deshidrogenasa.. Supbngase que a una concentración fija de 1 se agrega más S. La velocidad de reacción (v. Sup6ngase que el inhibidor H H -C -COO I 1 - -0012C-H --OOC-C-H . Puede. esto dice que a una concentración infinitamente grande de S (l/S = O). Este no puede ser deshidrogenado. combinarse de manera reversible con la enzima. Sin embargo..) en presencia del inhibidor.2H H. O b s é ~ e s e la liberacibn de la inhibición a concentración alta [S] (1I[S] baja). Así. Puesto que la jnterseccibn en y es lIV. = un numero mayor) no hará disminuir la velocidad de la reaccibn de manera tan marcada. la velocidad de reaccibn (formación de P) sera lenta.) a una concentración fija del inhibidor fue medida a diversas concentraciones de S.por lo general es similar a la de este. Así. puesto la constante de equilibrio Ki es: La accibn de los inhibidores competitivos se puede entender en tkrminos de las siguientes reacciones: Enzl (inactivo)+ Enz Enz + P EnzS (activa) -+ Enz + P La velocidad de formacibn del producto depende sOIo de la concentracibn de EnzS. Por razones anhlogas. la velocidad de la reacción catalizada sera la misma que en ausencia del inhibidor (figura 9-1 6). GrAfica de Lineweaver-Burk de la inhibicidn cornpetiwa c l h s k .C-COOII Succinato Fumarato Figura 9-1 5. La proporcion de EnzS a EnzI y la velocidad de reacción se incrementan. Para la reaccibn reversible. es la misma que en ausencia del inhibidor. la interseccibn sobre el eje de las x (que está relacionado a Km) varia con la concentración del inhibidor y se convierte en un número mayor (-1 K'. La gráfica del doble recíproco facilita la evaluación de los inhi bidores La figura 9-1 6 representa un caso tipico de inhibición competitivamostrada gráficamente en la forma de una línea de Lineweaver-Burk. . ki E R A + S $ Enz + I k-i se fija firmemente a la enzima (K. La única reaccion que puede experimentar el complejo EnzI es la descomposicibn regresiva en enzima más inhibidor. la concentración relativa de EnzI desaparecerá. es mayor que -1/K. Cuando tanto el sustrato como este tipo de inhibidor están presentes. = una cifra pequefla). A una concentracibn suficientemente elevada de S. formando un complejo enzima-inhibidor (EnzI) en lugar de un complejo EnzS. Esto aumenta la probabilidad de que Enz se combine con S.

Sin embargo. 1-Ig2'). la intersección sobre el eje de las x es: que tran en la figura 9-1 7 son los que se obtienen cuando l l v . Puesto que estos inhibidores no tienen semejanza estructural con el sustrato.106 nioquim ica de Har-p~r Km es la concentración del sustraío a la cual la concentraci6n de enzima libre es igual a la concentración de enzima como EnzS. denominadas "Bi Bi".. Aunque el análisis detallado de la cinCtíca de los mecanismos de las reacciones de rnultisustrato esta m& allá dcl asunto de este capítulo. la reaccihn puede retrasarse pero no impedirse Es posible que se presenten las siguientes reacciones de competencia: La mayoría de las reacciones implica a dos o mas sustratos Ida exposición anterior de las reacciones enzimhlicas catalizadas considera 3610 las reacciones que involucran sustratos y productos únicos. Sin embargo.. los resultados que se mues- Figura 9-17. con los valores más bajos dc K. un incremento en la concentración de éste. Para la inhibicion competitiva simple. produciran el mayor grado de inhibición. Inhibidores irreversibles "envenenan" a las enzimas Unagran variedad de "venenos'knzimáticos tales como la yodoacetarnida. es ineficaz para suprimir esta inhibicr~n. Si S tiene igual afinidad par Enz y por En21 (1no afecta la afinidad de Enz por S). Un análisis cinetico del tipo anteriormente tratado puede no distinguir entre venenos enzirnáticos e inhibidores no competitivos reversibles verdaderos. Los inhibidores no competitivos reversibles reducen Vmax pero no afectan a K m En la inhibicibn no competitiva no hay competencia entre S e 1. también puede serlo usando Ia ecuación anterior. Se supone que no ha habido ninguna alteracion importante en la conformacibn del sitio activo cuando está unido 1.. los iones de metales pesados (Ag'. la presencia de uno o más sustratos o productos pueden proteger a la enzima contra la inactivacion. Gráfica de Lineweaver-Burk para inhibición reversible no competitiva. en presencia y en ausencia de inhibidor. es graficado contra 1 /[S]. El valor de Kmpuede ser evaluado en ausencia de 1. indican cuales son los mas eficaces.) pero por lo general no afectan a K. Usualmente el inhibidor no muestra analogía estructural con S o esta es muy escasa y puede asumirse que se une a un espacio diferente en la enzima. en todo caso.jantc. para una serie de inhibidores análogos al susirato (competitivos). Puesto que S e I se pueden combinar en diferentes sitios es posibje la formacibn d e complejos En21 y EnzIS. esto no se aprecia siempre. reducen la actividad enzimhtica. etcétera. una cantidad sustancial de enzima libre estd disponible para combinarse con el inhibidor. en general. agentes oxidantes. como la irreversible. Por desgracia. rara. a continuación se comentan las reacciones de dos sustratos y de dos productos.. muestran cinética serne. Los valores de K. y K. La inhibicidn reversible no competitiva cs. A una concentración baja. . Ya que EnzlS puede descompanerse para formar el producto a una velocidad menor que la de EnzS. Muchos medicamentos eficaces en clíiiica actúan corno inhibidores competitivos de actividades enzimkticas importantes en las células microbianas y animales. Si el nbmero de moles de 1 agregado es mucho mayor que el numero de moles de enzima presente [1] puede ser generalmente tomado como la concentracián agregada (conocida) der in hi bidor. ya que tanto la inhibicihn no competitiva reversible. la mayoria de las reacciones bioquímicas implican dos o más sustratos y productos. Los inhibidores reversibles no competitivos disminuyen la velocidad rnfixima alcanzable con una cantidad dada de enzima (reducen V.

Reacciones en ping pong El tkrmino ping pong se aplica a mecanismos en los cuales uno o más productos se desprenden de la enzima antes de la adicibn de todos los sustratos. los productos se designan P. Una explicación para un orden compulsorio en la adicibn de sustratos es que agregar A induce un cambio en la conformación que alinea residuos escnciales para el enlace de B. característico de muchas oxidorreductasas dependientes de NAD(P) Centro: Una reacción BI Bi aleatoria. Abajo: Una reacción de ping pong.jernplo. E EA EAB-EPQ t EQ t E P B a FB-EQ E EA-FP t F t E Reacciones en secuencia o de desplazamiento unico En las reaccioncs en secuencia todos los sustratos deben combinarse con la enzima antes de liberar cualquier producto. Dependiendo del modo en el cual los sustratos se agregan a la enzima. Los patrones de las lineas cuando 10s datos se representan mediante grhficas del doble recíproco muestran el tipo de mecanismo. denotan el número de reactantes y productos. se mide la dependencia de la velocidad inicial en la concentracihn del sustrato A en varias series de concentraciones diferentes (pero constantes) del sustrato B. en las cuales la E corresponde a la enzima libre. mientras que en las segundas solo A puede reaccionar con E. en tanto que B reacciona c61o con el complejo E-A (figura 9-1 8). incluyen: 1) V. Los datos se obtienen ahora considerando B coma el sustrato variable y A como el sustrato constante. cualquier sustrato puede agregarse primero para formar ya sea E-A o E-8. C y D de acuerdo al orden en que se agregan a la enzima. y Cuater (4) Los términos Uni ( 1 ). Ter (3. propia de l a s arninotransferasas (transaminasas) y de la quimiotripsina zan para distinguir entre diferentes mecanismos.. reacciones Bi Ter). velocidad de reacción media cuando están presentes tanto A como B en concentraciones saturadas. y 3 ) las constantes de disociación para el desprendimiento de A y B de la enzima. Bi ( 2 ) . Por ejemplo. Aun cuando muchas reacciones catalizadas por enzimas involucran mis reactantes y productos (por e. Q. Las reacciones Bi Ri ping-pong son reacciones de doble desplazamiento porque el grupo sujeto a transferencia ( G ) primero es desplazado de A 4 por E y a continuación de E-G por B. Aunque Ios t&rminocen estas ecuaciones cinéticas son m& numerosos. 2) las concentraciones de A y B que dan como resultado la mitad de la velocidad m k i r n a cuando el otro sustrato esth presente en concentracion saturada. Los diferentes tipos de la enzima se denominan E. Reprecentaci6n de tres clases de mecanismos de reacuones Bi Bi Las líneas representan la enzima y las flechas la adición de sustrato y desprendimiento de productos Arriba: Un mecanismo Bi 61 ordenado. F y G.. aquellas que tienen dos sustraios y dos productos. es decir. un mecanismo Bi Bi ordenado.Términos especiales describen las reacciones enzimáticas complejas Los siguientes términos convencionalec se emplean pasa caracterizar reacciones compIe. aquí sblo se consideran las reacciones Bi Bi. Estas tambikn se denominan reacciones de desplazamiento unico porque el grupo sujeto a transferencia (G) se pasa directamente desde el sustrato donador A-G al sustrato aceptor B. Las gráficas de doble reciproco diferencian entre los mecanismos ping pong y los secuenciales Para distinguir entre diversos tipos de mecanismos. t o s datos cineticos sirven para distinguir los tipos de mecanismos Los datos sobre el estado de reposo cinbtico y las ecuaciones apropiadas respecto a la velocidad se utili- . En las primeras. típica de algunas deshidrogenasas y cinasas. las lineas paralelas indican un mecanismo Bi Bi ping pong. son análogos a los de la ecuación de sustrato único de Michaelis-Menten. se distingue entre reacciones en orden aleatorio y reacciones en orden compulsorio. y las lintas que se intersectan en el cuadrante negativo. Figura 9-18. R y S de acuerdo al o r d ~ n en que se separan de la enzima. Idossustratos se denominan A.jas catalizadas por enzirnas. B. Dc igual manera. con formación del producto Q-G.

en Ia regibn de pH 5 a 9) afectan la actividad enzimktica al alterar la carga de grupos R bcidos o bhsicos dkbites de los arninoácidos que actúan en la caaisis. el pH. los cambios en la concentraci6n del sustrato [S] afectan la velocidad de reacción sbIo cuando alrededor hay suficiente enzima libre para reaccionar. Aunque las enzimas modifican de manera profunda las velocidades de las reacciones. fijación de sustrato o conformaci6n del sitio catalltico. Para una gráfica de doble recipraco de 1 /v. La constante de Michaelis (Km) es la concentracihn de sustrato que produce la mitad de lavelocidad de reaccibn mhxima (V. En este punto.. incrementos mayores de [S] ya no aumentan la velocidad de la reaccihn. Los extremos de pH desnaturalizan las enzimas al protonizar o desprotonizar residuos de arninoácidos acidicos o alcalinos. cualquier incremento o decremento en la concentración de la enzima va acornpaflado de un aumento o disminucidn en la velocidad de reacción.. 1.. contra I/[S]. Por qjemplo.1 K y en el eje de Ins y es lIV. De este modo. 2) servir como plantillas para incrementar las concentraciones tocales de sustrato y 3) proporcionar aminoicidos cuyos grupos funcionales cumplan con funciones especificas en la catiilisis. Los valores de Km tienen dimensiones de molaridad y se determinan mediante grhficas.os patrones mfis complejos de inhibiciOn de las reacciones B i Bi ordenadas involucran patrones de inhibición tanto competitivos como mixtos. en una reacción Bi Bi de equilibrio m i d o . En casi todas las situaciones de ínter&s fisio16gic0. con importantes implicaciones en la salud y la enfermedad. Los anhlogos de sustrato que se unen de manera reversible al sitio catalitico y actúan como inhibfdores competitivos de las enzima. dependiendo del producto que se estudie. de3 sustrato que varia y del que permanece constante. región tridimensional de una enxima que.pero no tienen efecto sobre ./2. RESUMEN La temperatura. los inhibidores competitivos decrecen la Km. los sitios cataliticos experimentan cambios de conformación que pueden propagarse mhs allá del sitio catalitico (recukrdese la fijaci6n de 01 a la hemoglobina). cualquier producto es un inhibidor competitivo de A con [B] constante y de B con [A] constante. La catAlisis enzimática comprende estados de trancicibn de menor energía que los correspondientes en reacciones no catalizadas. Sin embargo. disminuye la barrera energetica para la reacci6n. Los sitios activos con frecuencia radican en hendiduras en las enzimas o en la interfase entre subunidades de enzimas multimericas. la concentración enzimática y de sustrato y los inhibidores alteran las velocidades de las reacciones catalizadas por entimas. como el ser humano. Por tanto. además de residuos de aminoacidos. Cambios de temperatura mAs moderados también afectan la velocidad de reacciones catalizadas por enzimas in vivo. Ida ecuacidn de MichaelisMenten describe los efectos de la concentracihn del sustrato sobre la actividad de numerosas enzimas. de modo que ya no pueden formar los enlaces salinos que conservan la estructura secundaria y terciaria de la enzima. El efecto de [S] sobre las velocidades de reacciones catalizadas por enzimas alostkricas es descritopor laecuacibn de Hill. Cuando toda la enzima está unida como complejo EnzS (condiciones de V.).. La mayoria de los compuestos quimicos con poca o nula semejanza estructural con sustratos y que se unen al sitio catalitico o a algún otro. la velocidad de reaccion aumenta. la mitad de la enzima se encuentra como EnzS). De manera breve. aunque a un grado estrictamente limitado en organismos homotérmicos. las enzimas tienen valores de pH a los cuales muestran actividad 6ptima (pI-l óptimo). la actividad decrece en forma precipitada. Dado que se dispone de abundante sustrato para reaccionar con la enzima libre.. Lamayoriade las reacciones c a t a l i d a s por enzimas implican dos o más sustratos o productos. incluyen muchos f h a cos de valor en medicina. Las variaciones de pH t a m b i h pueden alterar la carga elkctrica de los sustratos. no afectan las constantes de equilibrio ni los cambios globales en la energía libre de esas reacciones. Los cambios moderados del pH (es decir. Estos cambios de conformaci6n inducidos por el sustrato pueden crear bolsas para su retenci6n y alinear residuos clave para la catálisis. la concentraci6n molar de una enzima [E] es de un orden de magnitud menorque laconcentración molar de su sustrato [S]. La fíjaci6n y catalisis del sustrato se produce en el sitio activo (catalitico). Los criterios para establecer las diferentes clases de reacciones Bi Bi (reacciones que involucran dos sustratos y dos productos) son si el sustrato se enlaza en secuencia o al azar y si el producto se libera antes de que se una la totalidad del sustrato (reacciones ping p o n d .. actúan como inhibidores no competitivos de la actividad enzimhtica. Cuando los sustratos se aproximan.. pero sblo hasta que el nivel de la energia cinetica de la enzima excede a la de rotura de las ddbiles fuerzas no covalentes que mantienen su estructura secundaria y terciaria nativa. Las enzimas alteran las velocidades de reaccidn por medio de: 1) abatir la energía de activacidn para formar estados de transición. la intercepcidn en el eje horizontal es . Cuando la temperahira de una enzima se eleva.108 Bioquímica de Harper Los estudios sobre inhibición de producto se utilizan para completar estos anhlisis cintticos y para distinguir entre mecanismos Bi Bi ordenados y Bi Bi aleatorios. puede contener coenzimas o iones metálicos.

Wiley-Interscience. Academic Press.. Annu Rev Biochem 1984. En la inhibicidn no competitiva. Annu Rcv Biochem 1992. pero la intercepcibn (-IJK.. I - - REFERENCIAS Bcnder ML. En la inhibicibn competitiva clfisica. 1990. . Komiyama M: The Rioorganic Chemistty ofEmynalic Latalysis.b disminuye). Estos inhibidores pueden distinguirse por la medicion de la actividad enzimática a varias concentraciones de sustrato en presencia o ausencia del inhibidor. rnechanism4ased enzyme inactivators: Recent developments. Syrnons RH: Small catalytic RNAs. 1984.) disminuye por la presencia de inhibidor (es decir. en apariencia Kmha disminuido). Luego.0 angstrom resolution. Freeman RB. en tanto que los inhibidores no competitivos decrecen V .53:493.) aumenta en presencia del inhibidor (es decir. no cambia).' o f Postiramlational ModEjicatinn ofProieins. pero la intercepcibn en x no se modifica. Science 1995368 1758. las dos líneas se intersec- tan en el eje y (es decir.. la intercepción en y (l/V. los dos conjuntos de datos se grafican como l/v. Rodwell VW.. V. Walsh CT: Suicide substrates. Suckling CJ: Eníyme Chemzstv Chapman & Hall. Hawkins HC (editors): The Enzymolo~). V.61:641. Stauffacher CV: Crystal smicturc of Pseudomonas mevalnnii HMG-COArductaqe at 3. Rergeron RJ. 1985 Lawrence CM. Vtase tambikn las referencias del capitula T. sin afectar a Km. contra lI[S].Vmb.

PhD INTRODUCCION Los mecanismos de la catAlisis enzimática reflejan muy de cerca 10s mecanismos de las reacciones químicas. Tir. Los caminos o vías por los cuales las enzimas convierten los sustratos en productos involucran una sucesión de intermediarios. requiere de: la identificacion de la etapa o fase limitante de la velocidad en la reaccibn global. coenzimas o grupos prosteticos que participan en el enlace de sustratos. una proteína comparativamente sencilla que no contiene coenzimas. Sin embargo. con el fin de modificar la especificidad enzimática o la eficiencia catalítica. Aunque la propiedad de la quirnotipsinapara catalizar la hidriilisis de ésteres no tiene importancia fisiolbgica. En ultimo caso. en contraste con la catálisis inorgánica o la orgánica más sencilla. la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis del ~olesterol. los estudios de los mecanismos sugieren ciimo puede usarsc la tecnologia del DNA recombinante y la mutagenesis dirigida a un sitio. la identificación de los iones metálicos o grupos funcionales en los residuos de aminohcidos. Por anaIogia con el estudio de los intcrmediarios en las vías del metabolismo intermedio. o Tri) o por uno con un grupo R voluminoso no polar (Met). . mas que uno solo entre la enzima y el sustrato. de ellos. Este objetivo todavía lejos de alcanzarse. la quimotripsina cataliza también la hidrólisis de ciertos ésteres. LA "ENZIMOLOG~A INTERMEDIARIA" DE LA QUHMOTRIPSINA MUESTRA LAS C A R A C T E R ~ T I C A S GENERALES DE LA CATÁLISIS ENZIMATICA La quimotripsina cataliza la hidrolisis de los enlaces peptidices en los que el grupo carboxilo es cedido por un aminohcido aromático (Fen. a nivel molecular. y. facilita ahora la preparación de farmacos que inhiben enzimas especlf'ícas como H M G X o A reductasa. esto es consecuencia del prolongado desarrollo evolutivo de sitios adaptados a la perfección pasa la cathlisis rripida y selectiva de reacciones individuales. se denomina con toda propiedad "enzimología intermediaria". si facilita el estudio del mecanismo catalitico. Estos estudios conducen a un enfoque racional para la terapéutica y la preparaciiin de medicamentos . Igual que muchas otras proteasas. Asimismo. la caracterización de todos Tos intermediarias enlamdos en la enzima.á r e a s dc gran potencial de desarrollo en un futuro inmediato. por qud las cnzimas son catalizadores eficientes y específicos. La informacihn estructural de alta resolucion obtenida por cristalografía con rayos X. estas técnicas facilitarán el diseflo y la introducción en seres humanos de enzimas con las propiedades especificas deseadas. Rodwell. combinada con la información mecanicista. IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los fenbmenos moleculares que acompafian la conversibn de sustratos a productos constituyen el tema del mecanismo de acción enzimática. las enzimas muestran un orden en extremo alto de especificidad al sustrato y una enorme eficiencia catalítica. productos e intermediarios en el sitio activo. identificación del participante directo en la cathlisis.Enzimas: mecanismos de acción Victor W. el de los intermediarios enlazados a las enzimas que se forman durante la cathlisis. grupos prostéticos ni iones metAl3cos. El propósito final de los estudios de estos mecanismos es entender. En este capitulo los principales comportamientos de la catálisis enzimática se ejemplifican Gon la enzima quimotripsina.

complejo quimotripcina-pnitrofenilacetata.CT-Ac. La etapa lenta es la hidrólisis del complejo quimotripsina-acetato (CF-Ac) Una vez que toda la quimocsipsina disponible forma parte del complejo CT-Ac. Estos experimentos utilizan cantidades equivalentes de sustrato (mas o menos cantidades equimolares de enzima y sustrato) y ponderan los fenómenos que tienen lugar en los primeros milisegundos desputs de hacer la mezcla.tCT-& ucT CT-PNPA Rapida RBpida Lenta Flgura 1 0 3 . caracterizada por el desprendimiento mhs rApido del anión p-nitrofenilato y 2) una liberaci6n mhs lenta.D O 5 e Z Flgura 10-1. el contenido de ambas jeringas en un tubo angosto que pasa a cravts de un espectrofot6metro. CT-PNPA. ya no puede haber más desprendimiento dep-nitrofenilato hasta que se libera quirnotripsina mediante la remocibn hidrolitica lenta del ani6n acetato procedente del complejo CT-AC (figura 10-3). Cste se convierte en el anión amarillo p-nitrofenilato. con liberaci6n simultánea del ani6n p-nitrofenilato. A F . quirnotripsina. PNPA. El carhcter bifhico de la liberacibn del anión p-nitrofeniEato se comprende en tkrminos de los pasos sucesivos de la catdlisis mostrados en la figura 10-3. debido a que su hidrólisis libera p-nitrofenol. anibn acetato. . EI aparato tiene dos jeringas: una para la quimotripsina y la otra para el p-nitrofenilacetato. subsiguiente.) La formación de los complejos CT-PNPA y CT-Ac es rápida en relacibn a la hidrblisis del complejo CT-Ac. En esta grfifica. pNttrofenilacetato (PNPA) Tiempo (mseg) 1 . el "fenol liberado" se calwfb a partir de la densidad bptica del anión p-nitrofenilato. Ilido". Pasos intermedios en la cathlicis de la hidrblisis del p-nitrofenifacetato por la quimotripsina (CT. del mismo. La densidad 6ptica como función del tiempo despuds de la mezcla. Fase de "estallido' Fase de equilibrio El sustrato sintttico p-nitrofenilacetato (figura 10-1) facilita el análisis colorimétrico de la actividad de la quimotripsina. anrbn pnitrofenilato.p-nitrofenilacetato. El p-nitrofenilato (feno[PNPA del ingl~s~p-nifropknylafe) ~ + despds ~ de la fase de "estallido" es consecuencia de la formación lenta de quimotripsina libre por hidrbtisis del cornplejo CT-Ac. Esta quimotripsina libre queda entonces disponible para la formación posterior de complejos La liberación del anión p-nitrofenilato es bifasica La liberacihn del anión p-nitrofenilato tiene lugar en dos fases distintas (figura 10-2): 1) una fase de "esta- ~ CT + PNPA . Figura 10-2. La mezcla instantanea de la enzima y el sustrato se logra con un dispositivo mecanice que expele con rapidez y de manera simulthnea. se registra en un tubo de rayos catbdicos. La fase de "estallido" (figura 10-2) corresponde a la conversion de toda la quimotripsina libre disponible en el complejo CT-Ac. En un medio alcalino. LA CINÉTICA DE FLUJO INTERRUMPIDO REVELA LA "ENZIMOLOG~A INTERMEDIARIA" DE LA QUlMOTRlPSlNA La cinética de la hidrólisis del p-nitrofenilacetato por la quimotripsina puede estudiarse en un aparato de "flujo interrumpido".fenol. complejo quimotripsina-acetato. CinBtica de liberación del anión p-nrtrofenilato cuando la quimotripsina hidroliza al p-nitrofenrlacetato en un aparato de flujo interrumpido.

Aunque la mayoría de los residuos cargados de la quimotripsina estan en la superficie de la molkcula. como transaminasas se explican en Figura 1 0 4 .(es decir.. Los tres residuos se encuentm alineados en e! orden Asp 102-His 57-Ser 195. En realidad. Operacibn de la lanzadera de protones de la quimotripsina durante la acilacibn de Ser 195 por e l sustrate (Sus3 Durante la desacilacion del intermediario acil-Ser 195. La fomacihn de derivados de la Ser 195 inactiva a la quimotripsina.-O-P=O A DIPF A LAS COENZIMAS PARTICIPAN DIRECTAMENTE EN LA CATALISIS ENZIMÁTICA La participación directa de las coenzimas para las enzimas conocidas como arninotransferasas. en el sentido de la estructura terciaria. La elevada reactividad de la Ser 195 se demuestran por su capacidad (aunque no por la de los 27 residuos seril restantes de la quimotripsina) para reaccionar con el diisopropilfosfofluorjdato ( D 1 P F . Reacciones análogas tienen lugar con otras proteasas de serina.N N-H A O- Ser Figura 10-5. .6-bifosfato. Estas se conocen como "serina proteasas". Al igual que muchas proteasas. ésta implica una "triada catalitica". diisopropylphosphoJuuridate) (figura 10-4).6-bifosfatasa es una fosfohidrolasa (capitulo 21) que cataliza la remocibn mediante hidrdlisis del fosfato del carbono 2 de la fructosa2. como la es un pCptido. La figura 10-6 muestra la funcibn de siete residuos de sitios activos en la catilisis efectuada por esta fosfohidrolasa. -C-O-H- . Estos residuos son Asp 102. Muchas otras proteasas son inactivadas por el DiPF mediante un mecanismo analogo. Un sistema relevador de carga funciona como una lanzadera de protones durante la catá!isis Este proceso utiliza tres residuos aminoacil que están bastante separados respecto a su estructura primaria. His ' Sus. Tal como se explicara en el capitulo 1 1. His 57 y Ser 195. la magnitud de la fase de "estallido'' (es decir. de la fuerte carga negativa del sustrato. los protones se mueveii en direccidn contraria. .OH+ ' f F-P=O 4 S"' Y o I I Enz-CH. los que pertenecen n la "lanzadera" estan "enterrados" en el interior no polar de la mol~cula. aunque a distancia suficiente para formar enlaces entre si. Catálisis mediante fructssa-2. Se cree que una serie análoga de desplazamiento de protones acompaña la hidrblisis de un sustrato fisio16gico de la quimotripsina. los moles dep-nitrofenilato liberados) es directamente proporcional al número de moles de quimotripsina presentes inicialmente. Ac-) La señina 195 tiene una funcibn clave en la catálisis El grupo acil del intermediario acil-CT está enlaza'do a un residuo seril altamente reactivo -serina 195de la quimotripsina.Enzirnas: mecanismos de acci& 1 13 CT-PNPA y CT-Ac con iiberacibn concurrente del PNPA.6-bifosfatasa La fructosa-2.O l Enz-CH. d e 1 in g Id S. o. Reaccibn del hidroxilo primario de la Ser 195 de quimotripsina con el diisopropilfosfofluoridato (DIPF). Recuérdese que Ser 195 es el residuo acilado durante la catalisis por quirnotripsina. También se muestra la estabilizacibn por residuos de Arg y Lis con carga positiva. la quimotripsina se libera desde los ribosomas como precursor de la enzima sin actividad catalitica denominado preenzima o cirnógeno. La aproximacibn del ani6n acetato (derivado del pnitrofenilacetato) al Btomo de oxígeno del grupo R de la Ser 195 desencadena el desplazamiento secuencia! de protones que se mueven como "lanzadera" de Ser 195 a travhs de His 57 a Asp 102 (figura 10-5). aunque una parte de ella consta de dos His y un residuo Glu. Igual que en la catálisis que producen las proteasas de serina. la conversibn de la preenzima quimotripsinbgeno en la enzima activa quimotripsina implica una serie de fenomenos proteoliticos selectivos cuyo resultado final es la formación del sitio activo y el alineamiento del sistema relevador de carga responsable de la catálisis. con mayor frecuencia.

Lo mismo que muchas reacciones que requieren coenzimas. aunque las reacciones cuyas velocidades varían en respuesta a los cambios en la concentraci6n de M' o II3O1son independientes de las concentraciones de otros hcidos o bases presentes en la soluci6n.6-bisphosphatase. seguida. Arg 352 y LIS 356. se dice que las reacciones con velocidades sensibles a todos los ácidos (donadores de protones) o a todas las bases (aceptores de protones}en Ia solucibn. Catálisis por fructosa-2. Si seeleva lavelocidad de lareacci6n apH constante con los incrementos en la concentración del amortiguador. los grupos funcionales cargados {o con posibilidad de tener carga) de las cadenas laterales de residuos aminoacil cercanos.6-Phosphofructo-2-kinaselfrucose-2. alanina. ' /CHzNHaLE-CH2~H2 \ \ -E \ E-cHo Giu A I ~ Pir KG Figura 10-7. con liberacion de un producto antes de agregar el segundo sustrato (figura 10-7). respectwamente. alfa-cetoglutarato.astán sujetas a catálisis hcida general o básica general.6-P.transaminacas implica los mecanismos de ping pong que se expusieron en el capitulo 9. posiblemente asistida por Glu 327 que actua como base. estas reacciones son fundamentales para la biosintesis y el catabolismo de los aminoácidos (capitulas 30 y 3 1). Arg 307 His 392 *rg 257 HIS asa E-P H.O EmP. Arg 307. E-P Fru-6-P LOS RESIDUOS EN EL SITIO CATAL~TICO PUEDEN ACTUAR COMO CATALIZADORES ~ci~oaÁsicos Una vez que el sustrato se ha unido al sitio catalítice. A rnetabotic signaling enzyrne Annu Rev Biochem 1995. forma fosfato inorgánico. (4) Se desprende ortofosfato inorg8nim desde Arg 257 y Arg 307 (Reproducida con autorizaci6n de Pilkic SJ et al . Uno d e los integrantes de la trfada catalitica. Pir. estabiliza la carga positiva d e His 392 (2) L a nucleofilica His 392 ataca al carbono 2 del grupo fosforilo.6-bifosfatasa. Existen dos amplias categorías de catllisis acidobásica efectuada por enzimas: la catálisis Acida (o blsica) general y especifica. (Ala. sediceque esthsujetaa catálisis bhsica general (cuando el pH es mayor de 7) o cathIisis hcida general (con pH inferior a 7). pueden participar en la catálisis al funcionar como catalizadores Acidos o bhsicos. glutamato.64:799 ) Figura 1 0 4 . oxnlacetato o aIh cetoglutarata. (1) La mrga negativa cuádruple del sustrato unido se estabiltza por las interacciones d e carga a carga con brg 257. E-CHO y E-CH2NH2 representan los complejosenzima-fosfato de piridoxal y enzima-focfato de piridoxamina. Las transaminasas catalizan el intercambio de grupos alfa amino de los aminoacidos por grupos alfa 0x0 de los alfa oxoacidos del piruvato.) . E Fru-2. se dice que están Sujetas a catálisis ácida específica o bhsica especifica. Por otro lado. KG. y transfiere el fosfato a His 258 con formación d e un fosfate intermedio Se desprende fructosa 6-fosfato d e la enzima (3) Un segundo ataque nucleofilico por una rnol&culade agua. Por su parte. Glu. Las variaciones del pH y de las concentraciones de amortiguador establece la diferencia entre catálisis acidobásica general y la especifica Si la velocidad de la reacci6n cambia como una función del pH a concentracion constante de amortiguador. Mecanismode ping pong de la transaminacibn. la catálisis por medio de las E-cHo d c H 0 E N . Glu 327. se dice que es catálisis básica específica (cuando el pH es superior a 7) o catalisisiicida específica (con pH menor a7). piruvato.

luego expresarlo y caracterizar la enzima mutante. Las expresiones de velocidad para la cathlisis hcida general con frecuencia son complejas por lo cual no se describen aquí. considérese la conversihn de un sustrato (S) a un producto (P). y resonancia del spin del electrón (RSE). Destaca entre ellas la posibilidad de alterar a voluntad Ia secuencia de bases de nucleótidos de los genes y expresar las proteínas en huespedes unicelulases como células de mamíferos cultivadas o la bacteria EScherichia col[ En combinaci6n con estudios de la estmctura tridirnensional en solución por cristalografía con rayos X 'y con investigaciones cinkticas clasicas. es templado in vjtro al gen original aislado. Ademas. LA MUTAGENESIS DlRlGlDA A UN SITIO PROPORClONA NUEVAS PERSPECTIVAS Las técnicas de la biologia molecular proporcionan herramientas poderosas para la investigacion del me- . la posibilidad puede ser respaldada mediante el cambio del aminoacido por otro incapaz de ejecutar Ia funcián postulada. estas tdcnicas moleculares proporcionan nuevas perspectivas sobre los mecanismos de accibn de las enzirnas. t = tiempo. Puesto que el imidazol es un ácido débil (pK. determinante de la velocidad. generado por síntesis automatizada. de reordenamiento del sustrato protonado a producto: El aumento de la concentracibn del ion hidronio [ H d 3 + jincrementa la velocidad de la reacción aI elevar la concentraci6n de SH'. ese gen se traslada a un vector para expresion detrfis de un promotor potente. por eso la reacción canismo de accibn de las enzimas. un mer-F 9) que codifica un aminohcido mutante. aproximadamente 7). por tanto. la mutagknesic dirigida a un sitio. esto puede lograrse con la modificaci6n química de la enzima. A continuación. Las rnetaloenzimas contienen una cantidad definida de un ion methlico funcional que es retenido es lenta y determina la velocidad para la reacción global. El proceso tiene dos pasos. Cuando los datos físicos y cinhticos indican que un residuo aminoacídico dado desempefia una funcibn especifica en la catiilisis (es decir. Asimismo. Junto con el conocimiento de la formación y [a degradaci~nde los complejos metAlicos y de las reacciones dentro de las esferas de coerdinacion de los iones methlicos. Nótese que el paso rhpido y el lento estan invertidos cuando el mecanismo cambia de catfilisis Bcida especifica a general. proporcionan una perspectiva de sus funciones en la cathlisis enzimática. considbese que. Por la alteración de la secuencia de bases de un codón especifico. que sirve como una base general o como un reactivo de transferencia de grupo). que es a su vez el sustrato para el paso determinante de la velocidad en la reacción global. las cuales se considerarAn más tarde. k = constante especifica de la velocidad y [SH '1 = concentracion del acido conjugado del sustrato.Como ejemplo de catálisis ácida especifica. seguida por un pasa más lento y. la mutagénesis dirigida a un sitio puede producir numerosas mutantes en un punto. Las funciones de éstos se estudia por medio de la cristalografía con rayos X. Dado que la concentraci~n de SH' depende de las concentraciones de S y de &O'. Un oligonuclebtido corto (es decir. e imágenes de resonancia rnagnktica (IRM). hay también catalisis por el ian irnidazolio de un amortiguador imidazblico. En algunos casos. en adicibn a la catlilisis ácida especifica descrita antes. Expresado de manera matemhtica. se expresa y la enzima mutante que se obtiene es purificada para examinar SLIS propiedades. la expresibn general de la velocidad para las reacciones catalizadas ácido especificas es: Nótese que un requisito de la catálisis hcida especifica es que la expresión de la velocidad contenga $610 términos para S y para h O + . puede reemplazar un aminoácido dado por cualquier aminohcido proteínico deseado. una transferencia de protones rápida y reversible. es un donador de protones malo. Luego se produce un gen mutante por adición de DNA polisomerasa. un enfoque mhs general consiste en emplear la mutagenesis dirigida a un sitio para modificar el gen que codifica la enzima. el acido conjugado del sustrato. DNA ligasa y trifosfatos de ribonucle6tidos. Sin embargo. Velocidad = dlpl dt = WH 7 donde P = producto. LOS IONES METALICOS PUEDEN FACILITAR LA FIJACIÓN Y LA CATÁLISIS DEL SUSTRATO Mfis de 25% de las e n z i m a contienen iones metálicos firmemente unidos o los necesitan para su actividad.

Ademhs de su función estructural. capitulo 7). Las enzimas activadas por metales se unen con &. Para los complejos binarioc (dos componentes) E n N . mbredoxina. En muchas peptidasas. Es probable que la reacciOn lenta sea et reordenamiento confomacional del compIejo binario EnzM para llegar a la forma activa. de conformación apropiada en el complejo cuaternario activo. por ejemplo: . 2) Las fosfotransferasas. Los mecanismos que emplean los iones metAlicos para desempefiar sus funciones parecen ser semejantes en las metaloenzimas y en las enzirnas activadas por metal. la fomaci6n de complejos ternarios de trifosfatos de nucleósido y enzima. pero no todas las cinasas (ATP:fosfotransferasas) forman complejos con puente de sustrato del tip Enz-nuclebtido-M. las enzimas que catalimn otras reacciones del fosfoenolpiruvato y las carboxilasas. un ion metálico (M) y el sustrato (S) que presentan estequiometría 1 : 1 : 1. En las reacciones de las fosfotransferasas. la glutamina sintetasa) o forman un puente metiilico hacia el sustrato (por ejemplo. carboxipeptidasa A. forman complejos con puente rnethlico. Piruvatocinasa- ATP Creatlna \ En la catálisis funcionan complejos ternarios con metales Para los complejos temario5 (de tres componentes) del sitio catalítico (Enz). mientras que las rnetaloenzimas no pueden formar el complejo EnzSM. pero los necesitan para ser activas. methtico en la piruvatocinasa mantiene un sustrato (ATP) en su lugar y lo activa. la activación por los iones metklicos es un proceso lento que requiere muchas horas. formando el complejo ternario: Complejo can puente metálico cíclico Complejo con puente metálico simple Para las enzimas activadas por metal. los iones met8licos se consideran como activadores de los átomos de fbsforo que ast forman un complejo rigido pol ifosfato-aden ina. se cree que el ion Los datos cristalogrhficos y de secuenciación han establecido que un residuo His interviene en la fijación del metal al sitio activo de muchas proteinas (por ejemplo. 3) Una enzima dada puede formar un tipo de puente en el complejo con un sustrato y uno de tipo diferente con otro. que utilimn pinivato o fosfoenolpiruvato como sustrato. debido a que retienen al metal a travds de la purificacidn (es decir. la piruvatocinasa).tos de manera menos firme. las cuatro disposiciones son posibles. metal y sustrato con puentes de sustrato. son posibles cuatro disposiciones: B. la distinci6n entre rnetaloenzimas y enzimas activadas por metal radica en la afinidad de una enzima particular por su ion metálico. rnetamioglobina y metahemogfobina. Complejos cuyo puente es el sustrato (EnaSAfJ Al parecer. citocromo c. Complejos con puente metálico A. Por tanto.116 e Binguímicade Harper (Capíf u10 J O ) durante !a purificación. el paso limitante de la velocidad es en muchos casos la separación del agua de la esfera de coordinación del ion methlico. ya son un complejo BnzM). se atribuye al desplazamiento del HzO desde la esfera de coordinacibn del metal por el ATP: A T P ~+ ' M ( H ~ o ) ~ ~ATP' M ( H ~ O )+ ~3H20 ~' Complejo con puente de sustrato Complejo con puente enzimatico Las enzimas entonces se enlazan. Pueden enunciarse tres generalizaciones: 1) la mayoria. C. Complejos con puente enzimáfico (MEnzS) Se presume que los metales en los complejos con puente enzimático tienen funciones estructurales en el mantenimiento de la conformacibn activa (por ejemplo.

Dnsionales metales pueden activar a los nuclebfilos o actuar como xilosa isi3rnerasa..n " y ~ a ? 'aunque . frecuentemente tienen una carga positiva > 1 y pueden formar enlaces pi. . nucleófi~osellos mismos. Myrhack K quelatos en una o en otro (rigidez o tensión). al igual que los protones. Ademas. . otros iones metálicos (por ejemplo. las cuales incluyen la formación de intermediarios unidos a enzima (CT-PNPA y CT-Ac). (aproximación) o crear una distorsión que produce Pagc 456 in The Enzymes Boyer P U.mecanismos de acciún 117 Unibn del metal: Rhplda Enz + M(Hfl)s -+ Enz-M{H20)6...I S ' Los iones metálicos desempeñan múltiples funciones en la catálisis 1-0siones methlicos pueden participar en cada 1 de los 4 mecanismos con los que se sabe las enzimas aceleran la velocidad de las reacciones qufmicas: 1) catálisis acidobásica general.I valo descarboxilasa ácidos de Lewis (etectr6filos) y pueden compartir un par de electrones para formar un enlace sigma. + nH20 Reordenamiento a una conformacibn activa (Enz'): Lenta un ion metklico puede "enmascarar" a un nuclebfilo y así prevenir una probable reaccibn secundaria..de aminohcidos p&iculares en el sitio catalitico se mostraron por la función de un residuo Ser (SeriYs)como aceptor de un grupo (Ac-) que es transferido a agua y por las funciones de los residuos Ser. general). Finalmente. . pirii. Idas funciones. .Enzimas . los iones metálicos pueden aceptar Piruvato cinasa. En~-M(Hz0)6. pueden ser considerados "superácidos". . Asimismo (a diferencia de los protones). el control estereoquimico del curso de una reacción catalizada por enzimas. activar electrófilos o nucleófilos (catálisis acidobksica adeni latoci -. 2) catáIisis covalente.alysis Vol 2.. . IWeinas ftmt sin k m Donación nes pi (n) -. . Por otro lado. los metales carboxiplcptidasa. Ejemplos escogidos de funciones dc? y el manganeso que funcionan en las proteínas hémilos iones me. Lardy H . (editors) Academrc Press 1970 6 L u F E A ! .. La esfera de coordinación .. son Cinasas.. Pi ruvato cal-boxilasa. His 57 y Asp 102) Enz-iUi + S k Enz-M4 o Enz / ' . la naturaleza escalonada del proceso (tres reacciones parciales}.. el mecani IS cas. los iones metálicos que intervienen más común:nzimas* mente en la catálisis enzimática son ~ g ~~ ' .m . puede lograrse con la propiedad de la esfera de coordinacibn del metal para actuar como un molde tridimensiona! para mantener los grupos reactivos en una orientación espacial especifica (cuadro 10-1).. el carácter limitante de la velocidad de una reaccibn parcial sencilla (hidrdlisis de CT-Ac) y Ia liberacihn en secuencia de productos (fenol seguida por acetato).. ~ Sin embargo. pirue y orienia electrones a travhs de los enlaces sigma o pi para vato carlioxilasa.~ + E l i f4 ! A ( H 2 0 ) ~ . 1-Iis y Asp específicos en la formación d e un sistema relevados de carga. liasas. i1 hemoproteirids -de un metal puede atraer a la enzima y al sustrato * Adaptado de Mildvan AS Meials in enzyme cat. Ar rbbnica i Activaciiin de un nuclebfilo Ademhs. los Fosfotrancf crasa. . en las metaloenzimas el compleio ternario con puente metfilico debe formarse mediante Ia combinación del sustrato (S) con el complejo binario EnzM : RESUMEN La quimotripsina proteasa (CT) ejempIifica numerosas características generales de la catalisis enzimática.. 3) aproximación de los reactantes y 4) induccion de rigidez o tension en la enzima o el sustrato. pueden servir como plantillas tridirnensionaies para la alcohol dr:shidrogeorientación de los grupos bhsicos en la enzima o el nasa sustrato. Además del hierro Cuadro 10-1. este sistema relevador de carga ejemplifica quc los residuos adicionales bastante separados en el sentido de una estructura primaria (Ser 195.. IIisnaina riesarninasa Los iones metblicos. Además. Mediante la donaci6n de electrones... K') Funcion uei iuii irieiaiicu son importantes para la actividad de ciertas enzirnas.. dado En ~rnldicas El meta! actiia como un nucieóque existen en soluci6n neutra.

Wechan~sm. Vease: tambitn las rcfcrencias de los capítulos 7 y 8. La proteblisis selectiva de la preprotefna quimotripsinbgeno inactiva crea el sitio activo de la quimotripsina y lleva los tres residuos que conforman el sistema relevador de carga a una distancia. 2nd ed. Los iones methlicos facilitan la fijación del sustrato y la catálisis mediante la creacibn de varias clases de complejos puente.Hawkins HC (editors): The E q m o l o L w of Post-translational ~ ~ o d ~ J i c a r i of on Proteins. 1985.22:257. 1980. REFERENCIAS Coleman JE: Structure and mechanism of alkaline phosphataw. Durante la catllisis. Regan L: Tne design of metal hinding sites in proteins. uno de otro. que permita formar enlaces. Bajo un mecanismo de ping pong (por ejemplo. Freeman RB. metal y sustrato. Annu Rev Riophys Biomol Struct 1993. Vol 64. Acadernic Press. Freeman. Arp. Academic Press. transaminación). Fersht A: E q m e Structure and. La adicion de sustratos y la liberación de productos pueden proceder en forma ordenada o de una manera aleatoria.118 * Rioquimica de Hurper {Capitulo 10) pueden formar porciones contiguas del sitio catalítico de una enzima. 1985. Vol 63. Asp) o bases (His. Purich DL (editor): Enzyme kinetics and mechanisms. constítuidoc por enzima. Los iones met8licos pueden actuar como catalizadores acidos generales o facilitar la aproximaci6n de los reactantes. . los residuos del sitio catalitico pueden actuar como ácidos (Glu. h u Rev Riophys Biomol Stnict 1992. la reaccibn avanza a travks de los fenómenos alternos de adicibn de sustrato y liberacibn de producto.21:MI. Lis) generales. Parts A and B in: Methods in Eyvmology. 1979.

Al parecer. envejecimiento. Una cCIula u organismo pueden considerarse enfermos cuando no responden o lo hacen inadecuada o incorrectamente a una seiial interna o a un esmés externo. por tanto. Dentro de la celula viva.Enzirnas: regulación de actividades Victor W. Rodwell. es posible que no se produzca la reversibilidad porque los productos * Una reacciiin fácilmente reversible tiene un pequeao valor numérico de AG. sin embargo. son en cierto grado reversibles*. Este concepto impIica que todas las reacciones necesarias catalizadas por enzimas se efectúan a velocidades que responden a cambios tanto en el medio interno como en el externo. es esencial para entender el mecanismo de la homeostasia en las células normales y para comprender la base molecular de la enfermedad. caso que ejemplifica la conclusi6n ya establecida. algunos ejempIos escogidos muestran los mecanismo^ que regulan los procesos metabólicos mediante la cantidad o eficiencia catalítica de las cnzimas. LA R E G U L A C I ~ W DEL METABOLISMO LOGRA LA HOMEOSTASIA El concepto de regulación homeostática del medio interno emitido por Claude Bernard a finales del siglo XIX hizo hincapie en la facultad de los animales para mantener constante su medio intracelular a pesar dc los cambios en el exterior. cardiopatias. La accibn de los famiacos proporciona otro ejemplo importante que comprende la regulación enzimática. accihn h-onal y de Fármacos. El conocimiento de los factores que afectan las velocidades de las reacciones catalizadas por enzirnas. En todo el libro se hace referencia a otros muchos ejemplos espectficos para mostrar las diversas caracterís-ticas de la regulación metabólica. pues la induccidn enzimática es una causa bioquimica importante en las interacciones medícamentosas. diferenciación. fisiologia microbiana. conducir a cambios importantes en el fenotipo celular. muchas celulas canmrosas exhikn anormalidadesen Ia regulación de su complemento enzimático (carecen de induccion o de represiOn). incluyendo las catalizadas pos enzimas. puede fosforilarmuchas proteínas y enzirnas que normalmente no lo estAn y. En todas estas áreas. . IMPORTANCIA BIOMEDICA ¿De qué manera Ias células y ios organismos íntegros regulan y coordinan el metabolismo global? Esta pregunta interesa a los trahaiadores en áreas de las ciencias biornkdicas tan diversas como chncer. un cambio de esta naturaleza es la base de ciertos tipos de transformacibn oncogenica vira!. La intención es establecer las características de los patrones globales de regulación. ciertos virus onctjgenos contienen un gen que codifica para una tirosina proteincinma. En este capitulo. Cuando esta cinasa actúa en las células del hugsped. PhD de un medicamento provoca cambios significativos en el metabolismo de otro (capitulo 61). Por ejemplo. se han encontrado ejemplos importantes de regulaciiin n o m a l o anormal. De nuevo. situaciones en las que la administracibn El flujo de metabolitos tiende a ser unidireccional Todas las reacciones quirnicas. micntras que una con un valor negativo grande para AG podría llamarse "realmentc irreveriihle" cn casi todas las siiuacioncs bioquimicas. de qtic las alteraciones del control qenktico son fen6menoS fundamentales en las c&lulascañcerosas. rnetakorfosis.

Sin embargo. ingestibn de minerales y agua. las cuales carecen de las complejidades del control hormonal o neurológico y en las cuales los estudios genéticos pueden llevarse a cabo con facilidad para analizar los acontecimientos moleculares. La produccidn de ATP. El flujo de metabolitos en una celulavivaes análogo al flujo de agua en un acueducto el cual aunque es capaz de transportar agua en ambas direcciones. si ocurren osciiaciones de corta duración en las concentraciones del meiaholito y de la enzima y tienen gran importancia fisiológica. lejos de ser característico de la vida. La cantidad de enzima se determina por el balance neto entre la sintesic de la enzima su degradación Las K. La célula viva es un sistema dinámico estacionario conservado por un flujo unidiseccional de metabolitos (figura 1 1-1). En tanto que la regulacion metab6lica en los mamíferos difiere de modo signifi- cativo. la replicación del DNA). la regulacibn de los procesos metab6licos en &as ser6 el ejemplo a discutir debido a que proporciona un marco conceptual de referencia para considerar la regulación en el ser humano TRES MECANISMOS GENERALES REGULAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTI~A El flujo neto de carbono de una reacción catalizada enzirnAticamente podria ser influido: 3 ) cambiando la cantidad absoluta de enzima presente. La cantidad de una enzima dentro de una celula puede Enzima Aminoácidos * Sin emhargo. Obsérvese que el flujo de rnetabolitos es unidireccional. la secreción y la resorción tubular. debe regularse el flujo de metabolitos a travks de las vías anabólica y catabólica. de los fenómenos superficialmente semejantes de las bacterias. Figura 11-2.120 Bioquimica de Harper (Capibulo I 1) de reacciiin son removidos con rapidez mediante reacciones adicionales catalizadas por enzimas. Las velocidades de reacción responden a las necesidades fisio~ogicas cambiantes Para que la vida proceda de una manera ordenada. los detalles moleculares de la regulacibn son mejor comprendidos en las bacterias. el transporte. Se necesita que estos procesos sean coordinados y. en la prhctica el fiujo es unidireccional. Es preciso que todos los fenómenos quimicos necesarios tengan lugar a velocidades congruentes con los requerimientos del organismo en relacidn con su medio. respondan a cambios a corto plazo del medio externo (por ejemplo. se alcanza s61o a la muerte de la célula. } (figura 1 1-2). 2) alterando el tamaiio del conjunto de reactantes distintos de la enzima y 3 ) alterando la eficacia catslitica de la enzima. la adicibn o la eliminaci6n de un nutriente). además. ncl como a sucesos intracelularcs periddicos (por ejemplo. la sintesis de precursores macromoleculares. Las velocidades de síntesis y degradación determinan la cantidad de enzima La cantidad absoluta de una enzima presente esta determinada por su velocidad de sintesis (k. En las cklulas maduras. Una oélula ideal en estado de estabilidad. rendimiento de trabajo o temperatura externa. a pesar de Ias amplias variaciones en alimentaciiin. y Kdegson las mnstantes de velocidad para el proceso completo de sintesis y degradacibn. La flexibilidad del sistema estacionario s e manifiesta en los delicados desplazamientos y equilibrios mediante los cuales los microorganismos conservan constante el medio intemo.) y por Ia velocidad de su degradación ( b . deben responder todos a cambios suti les del medio celular. El equilibrio verdadero. las concentraciones medias de los metabolitos permanecen relativamente constantes durante periodos considerables*. respectivamente . El flujo de metabotitos en la d l u l a también lo es en gran parte. nuestra comprensihn de la regulacibn rnolecular en la célula animal está en un estado de rhpida expansibn. del brgano y del animal integro. I-lasta ahora. Las tres opciones son utili~adasen casi todas las formas de vida. / grandes \m Figura 11-1.

). Puesto que otros nutrientes oxidables diferentes a este carbohidrato producen efectos semejantes. Frecuentemente. o por velocidad de degradacibn (disminucion de h ambos. ) . Se not6 que la adición de glucosa reprimía la síntesis de las enzimas encargadas de1 catabolismo de X y este fenómeno fue inicialmente llamado el "efecto de la glucosa*'. En todas las formas de vida. EL RECAMBIO DE PROTE~NAS TIENE LUGAR EN TODAS LAS FORMAS DE VIDA Los procesos combinados de síntesis y degradacibn de [as enzimas constituyen el recambio enzimático reconocido como una propiedad característica de las c&IuIasde los tiamíferos. coli creciendo en una Euente de carbono (X) distinta de la glucosa. la represion y la desrepresidn se dcscribirhn en el capitulo 4 1. La induccibn enzimhtica tambitn existe en las células eucariotas. la cual es mediada por el cAMP. términos relativos. mientras que la adicibn de leucina reprime la síntesis de las tres primeras enzimas peculiares para su biosíntesis. se ndopt6 el tdrrnino represidn por catabolito. una cantidad menor de enzima puede resultar de una disminucihn de k. Por tanto. se les llama inductores gratuitos. hay inducción de síntesis de beta gaIactosidasa y entonces el cultivo puede catabolizar la Iactosa. Despues de la eliminación o del agotamiento de un intermediario biosintético esencial del medio. Una enzima particular puede ser constitutiva en una cepa. puede reducir la nueva síntesis del mismo por medio de la represión. Las células capaces de ser inducidas por una enzima particular. metabolitos especificos sirven corno correpresores o coinductores que al enlazarse a proteínas transactuantes. Tanto en la induccion como la represión participan elementos cis. tanto la naturaleza como la magnitud de la respuesta al inductor.. Los productos finales reprimen la síntesis de enzimas La presencia de un metabolito biosintktico en el medio de crecimiento bacteriano. por tanto. por lo general contienen una cantidad basa1 pequefía medible de esta enzima. pero no un inductor. t o s términos "constitutiva'" e "inducible" son. Aunque muchos inductores son sustratos para la enzima que inducen. por una disminución en su . Por ejemplo. aun en ausencia del inductor agregado. de un incremento en kdq. O deambos procesos. fhcilmente (figura 11-2). que hidroliza la lactosa a galactosa y glucosa. De manera semejante. la tirosina alfa cetoglutaratotransaminasa. pero no sustratos. y ausente en una tercera.Enztmar: regulación de uctividudes 121 elevarse ya sea por un incremento en su velocidad de síntesis (incremento de k. mucho tiempo antes de que . en Salrnonelh typhirnurrum. de nuevo se produce la biosintesis enzirnitica. A la inversa. la invertasa. ciertos compuestos estmcturalmente semejantes al sustrato pueden ser inductores. Esto constituye lo que se denomina dessepresión. Las enzimas cuya concentraci6n en una ctIula es independiente de un inductor agregado se denominan enzimas constitutivas. La herencia gendtica de la ctlula determina así. la síntesis de enzimas en k a partir de los aminoAcidos y su degradacibn hasta aminohcidos son procesos distintos catalimdos por conjuntos de enzimas por completo diferentes. que representan los extremos de un amplio espectro de respuestas. como + . la represión por catabolito es un fenómeno relacionado que se refiere a la facultad de un intermediario en una sucesi6n de reacciones catabólicas catalizadas por enzimas para reprimir la sintesis de las enzimas catab0Iicas. Los inductores pueden estimular la síntesis de enzirnas Las celulas pueden sintetizar enzimas especificas en respuesta a la presencia de inductores especificos de peso molecular bajo. Además. y proteínas reguladoras trunTactuantes. producto. Si al medio de cultivo se agrega lactosa o algunos otros beta galactosidos. los valores intracelulares altos de un metabolito como una purina o un aminoácido pueden interrumpir la síntesis de las enzimas que participan en su propia biosíntesis. un inductor estimula a varias enzirnas de una ruta catabdlica(por ejemplo. Este efecto fue observado primero en cultivos de E. inducible en otra. Ejemplos de enzimas inducibles en los animales son la triptbfano pirrolasa. como "caliente" o "frio". tanto la beta galactosidopemeasa como la beta galactosidasa son inducidas por lactosa). En el ser humano se encuentran ejemplos de cambios tanto en k. secuencias especificas de DNA ubicadas en la parte superior de la cascada de genes que codifican una enzima dada. Los mecanismos moleculares de la inducción. lo mismo fortalecen que debilitan su integracihn con un elemento cis. Por ejemplo. las enzimas del ciclo de la u la HMG-COA reductasa y el citocromo P450. La regulación independiente de la sintesis y de la degradacihn de las enzimas se logra asl. la treonina deshidrogenasa. Escherichia colr cultivada en glucosa no cataboli~ara la lactosa debido a la falta de la enzima beta galactosidasa. Los ejemplos anteriores muestran la represibn por retroalimentación con el. un compuesto puede ser un sustrato. Por otro lado. la adición de histidina reprime la síntesis de todas las enzimas que intervienen en su biosíntesis. típica de Ias vias biosinttticas de las bacterias.

laconcenmci61-ide sustratos.jemplifican estos conceptos. el incremento en la ingesti6n de nitrhgeno por una dieta abundante en proteinas puede elevar las cifras hepáticas de arginasa (capitulo 3 1). tripsina y quimotnpsina (proproteínas = pepsindgeno. proceso que convierte la proproteina en una forma que tiene la actividad típica de la proteina madura (su actividad enzimfitica} mediante uno o más "cercenamientos" proteoliticos sucesivos. tanto la inyeccidn de glucocorticoides como la ingestión de triptófano aumentan 30s valores de triptofano oxigenasa en los mamíferos. los valores hepriticos de arginasa se elevan debido a un incremento en la velocidad de su sintesis. La existencia del recambio de proteínas en el ser humano se dedujo de experimentos dietkticos hace bastante más de un siglo. alteran lasusceptibilidad proteolítica. Se conocen ejemplos para una diversidad de tejidos y vias metabólicas. que se estableció concluyentemente. coenzirnas o iones metálicos. pero nuestro conocimiento es fragmentario acerca de los detalles molecularec que intervienen para producir estos cambios. es la degradación de la arginasa la que está disminuida. superficialmente. de 4 a 5 veces. asi como las independientes dc ATP. De este modo. Midiendo las velocidades de incorporación de aminoácidos rnarcados con NI5 a las proteinas y los índices de pCrdida de NI5 de las proteinas. un proceso acompañado de cambios en la conformación que revelan o "crean" el sitio catalítico. aun cuando el triptbfano puede actuar como un inductor en las bacterias (afecta k. La susceptibilidad de una enzima a la degradacibn proreolitica depende de su ~onfomacibn.). de manera independiente. que pueden modificarla. Los valores enzimaticos en los tejidos de marniferos pueden ser alterados por una amplia gama de factores fisiologicos. Los ejemplos de proteinas elaboradas como proproteinas incluyen la hormona insulina (proproteina = profnsulina). se describen en el capitulo 3 1. La insulina y cl glucagbn. sin embargo.. La presencia o la falta de sustratas. incluyendo los Iípidos y los ficidos nucleicos. La conversion de una proteína en proteina madura implica la proteólisis selectiva. En el caso de Ia arginasa. Este fue el primer caso cSaro de una hormona reguladora de la sintesis dc una enzima de mamíferos. En un segundo ejemplo. La arginasa y la triptófano oxigenasa (tripthfano pirrolasa) e. tripsindgeno y quimotripsinógeno. Estos dos casos contrastan con la inducción enzimática en las bacterias. Cuando son enzimas. Aquí. su efecto en los marniferos sc qjerce solamente sobre el proceso degradante (abate kd. Los mismos valores también aumentan en los animales hambrientos. .se mostrara que también tenia lugar en las bacterias. La síntesis de ciertas enrimas como precursores inactivos tienen ventajas en la regulación La actividad enzimatica puede regularse con la conversión de una proenzima inactiva a la forma catalítica activa. hormonales o dietéticos. un concepto extendido desde entonces a otros constituyentes del cuerpo. justamente antes y durante la 11 Guerra Mundial.. respectivamente). En el caso de la triptdfano pirrolasa. El efecto del glucagón probablemente es mediado a través del cAMP. pero abate be. . El efecto de las hormonas es la elevacibn de la velocidad de síntesis de la oxigenasa (aumento de k).. no obstante sus cfectos fisiológicos mutuamente antagbnicos. las enzima5 digestivas pepsina. permanece inalterada. Schoenheimer concluyó que las proteínas están en un estado de "equilibrio dinamico". la proenzima debe experimentar una proteólisis limitada. estabilizando la oxigenasa respecto a la digestibn proteolitica. La regulación de las cifias hephticas de arginasa puede incluir ya sea un cambio en k. aunque fue hasta el trabajo clásico de Schoenheimer. Los glucocorticoides incrementan Ia con~entración de tirosina trancaminasa estimulando su k. influenciar las vclocidades a las cuales son degradadas enzimas especificas. El aumento en Ia velocidad de síntesis de la arginasa se parece así. sin embargo. o en L .El triptófano. en tanto que k. Para volverse catallticamente activa. no ejerce efecto sobre k. Las velocidades de degradación de las enz'imas específicas están sujetas a regulación La degrada~ionde proteínas de mamfferos por vías que dependen de ATP y ubiquitina. incrementan k. Despudc de la ingestidn de una dieta abundante en protehas. MUCHAS PROTEASAS SE SECRETAN COMO PROENZIMAS SIN ACTIVIDAD CATAL~TICA Ciertas proteinas se elaboran y secretan en forma de proteinas precursoras inactivas conocidas como proproteínas. de coenzímas y posiblemente de iones en las cklulas puede. a la induccibn por sustrato en las bacterias.). varios factores de la cascada de la coagulacibn sanguínea y de la disolución del cohgulo (capitulo 59). Esto se mostrara después en relacibn con la enzima quimotripsina. sin embargo. las proproteinas se denominan proenzimas o cimógenos. y la proteina cotágena del tejido conjuntivo (proproteina = procoIágena}.

la sintesis de proteasas como proteinas precursoras sin actividad catalítica sirve para proteger el tejido de origen (por ejemplo. estar disponible un conjunto completo de los aminohcidos precursores. el cambio mena conformación origina el sitio cionado en T catalítico de la enzima. cl proccso de secrecidn puede ser de lentitud relativa con relación a la demanda físiológica. 3) El proceso puede (o no) cumplirse con cambio significativo en el peso molecular. la proteolisis selectiva de una proenzima puede verse como un proceso que desencadena cambios esenciales en la conformación que "crean" el sitio catalitico. sb10 requiere un cercenamiento proteolítico Único. Otros. 2) Los productos polipéptidos se pueden separar o permanecer integrados a la proteína madura.jernplo de conversihn de una proproteína a s u Las proenzimas facilitan la movilización rápida de una actividad en respuesta a la demanda fisiológica ¿Por qu$ cicrias proteínas se secretan en la forma inactiva? Algunas son necesarias practicamenlc en todo momento. lo cual muestra la manera en que la proteólisis selectiva da lugar al sitio catalítico. pero bastante regulares y predecibles (aunque éste pudo no ser el caso para los seres humanos primitivos). lacual puede presentarse en lapancreaiitis. Más aun. mientras que otras (como las enzimas de la fomacidn y disolucilin del coágulo sanguíneo) se requieren sólo de manera intermitente. 5) Si la proproteína es una enzima. tan rolo deben estar "en Iinea". En la alfa quimotripsina las cadenas A. B y C permanecen integradas en virtud de la presencia de dos enlaces disulfuro entre las cadenas (figura 1 1 4 ) .En taI virtud. . en la enzima alfa quimotripsina activa implica tres cercenamientos y la formación de un intermediario activo conocido como piquimotripsina (pi-QT) (figura 1 1-3). La sintesis de nuvo de las protehas que se requieren puede no efectuarse con la rapidez suficiente para responder a la presión de una demanda fisiopatolégica como es la pérdida de sangre.Convessi611de la proquimotripsina {pro-QT) a pi-quimotflpsina (pi-QT) y de manera subsecuente a la enzima madura alfa quimotripsina (alfa-QT) con actividad catalitica. en algunos casos. Ciertos procesos flsiologicos como la digestión son intermitentes. Además. 4) La principal consecuencia de la proteólisis selectiva es alcanzar una nucva conformación.La conversibn de proquimotripsina (pro-QT). polipéptido de 245 residuos aminoacilo. La activación de la proquimotripsina requiere de proteolisis selectiva El e. para responder a la presibn de una necesidad fisiológica o fisiopatológica. Obskrvese que mientras His 57 y Asp 102 se encuentran sobre el peptido B de la alfa quimotripsina. Como consecuencia. como la formacibn y disolución de coágulos sanguíneos y la reparación tisular. La proteblisis selectiva de la proquimotripsina (quimotripsinógeno) facilita la aproximación de los tres residuos del sistema relevador de carga. Nótcse que el contacto y los residuos Figura 113. Puede apreciarse con facilidad que el proceso de formación y disoluci6n de coágulos sanguíneos debe ser coordinado en el tiempo para alcanzar Ia homeostasia. el pfincreas) de la autodigestibn. Ser 195 se encuentra sobre el peptido C (figura 1 1-3). Más aún. debe forma madura con actividad fisiológica ejernplifica los principios generales siguientes de tal conversión: 1) El proceso implica la proteblisis selectiva que. cuando estas últimas se necesitan de urgencia.

COENZIMAS Y CATIONES PUEDEN REGULAR LAS ENZIMAS La concentracién intracelular media de un sustrato. la concentracidn . su regulación independiente se facilita. que convierten el metahlito en una forma permeable para la barrera del compartimiento. generalmente se le da poca importancia a la discrepancia entre la concentracibn total y libre del metabolito. Al mismo tiempo. Es necesaria la informaci6n sobre las concentraciones de metabolitos esenciales en la vecindad inmediata de la enzima en cuestibn. es posible laamplificacion de los efectos reguladores. Por ejemplo. La extensa formación de compartimientos de los procesos metabolicos tipicos de las formas superiores de vida confiere asi el potencial para un ajuste fino de la regulación del metabolismo. describe la función de los "mecanismos de lanzadera" para poder lograr el equilibrio de Ias confluencias metabblicas dc equivalentes reductores. coordina a las enzimas y a los canales intermediarios a lo largo de una via metabdlica. una coenzima o un ion methlico puede tener escaso significado para el camportamiento rn vivo de una enzima. LAS ENZIMAS PUEDEN FORMAR COMPLEJOS MACROMOLECULARES La organización de un conjunto de enzimas quecatalizan una secuencia de reacciones metabhlicas. Sin embargo. los cambios de confomacl6n en un componente del complejo puede transmitirse por interacciones de proteína con proDe este iriodo teína hacia otras ennimas del ~omple~jo. plantea problemas con respecto a lamovilizacion de metabolitos a través de las barreras de los compartimientos. aun la medicibn de las concentraciones de metabolitos en compartimientos celulares diferentes no toma en cuenta las discontinuidades locales en su concentraci6n dentro de los compartimientos. se puede preguntar si la cantidad de enzima ha cambiado o si la enzima es un catalizador más o menos eficaz. LA SEPARACIÓNDE ENZIMAS EN COMPARTlMlENTOS FACILITA LA R E G U L A C I ~ N DEL METABOLISMO No se puede pasar por alto la importancia de la disposicidn en compartimientos de Tos procesos metabhlicos en las ct5lulas eucariotas. que incluyen las de los mamíferos. Esto permite un modo más fino de control metabólico que el posible con los componentes aislados del complejo. Por último. En censecuencia. A todos los cambios de la actividad enzimatica sin modificación de la cantidad de enzima presente se les denominara como "efectos en la eficacia catalítica". aunque la concentración total del 2. La alineacibn apropiada de las enzirnas puede facilitar la transferencia del producto entre las enzimas sin equilibrio previo con las confluencias metabblicas. pero mantenerse a una distancia que permita formar enlaces con el sustrato enlazado.S-S S-C S - S Flgura 1 1 4 Enlaces de disulfuro intra e tntercadenas de la alfa quirnotripsina (alfa-QT). del ciclo del hcido cltrico y de otros intermediarios anfibólicos. causadas por factores como la proximidad al sitio de entrada o de producción de un metaboiito. por ejemplo. La IocaZización de los procesos metabólicos especificas en el citosol o en los organelos subcelulares facilita la regulación de estos procesos independientemente de los que suceden en otras partes. lo cual va seguido por el iransporte y la conversión a la forma original en el otro lado de la barrera. estas interconversiones requieren. Además. Estos metabolitos pasan las barreras mediante "mecanismos de lanzadera". cataliticos pueden localizarse sobre diferentes cadenas de péptidos.3-difosfoglicerato en los eritrocitos es extremadamente alta. Puesto que estas dos formas de la enzima están fisicamente separadas. formas citosólicas y mitocondriales de la misma actividad catalítica. En el capitulo 18 se LAS CONCENTRACIONES LOCALES DE SUSTRATOS. EXISTEN MÚLTIPLES OPCIONES PARA REGULAR LA ACTIVIDAD CATAL~TICA Si una modificacibn fisiológica altera el grado de la actividad enzimatica.

si B se encuentra en exceso. Sin embargo. En la inhibicidn por retroalimentación acumulativa. La cinetica de la inhibición por retroaccion puede ser no competitiva. sirviendo la porción inicial para la síntesis de dos o mBs metabolitos esenciales. La regulacibn por retroacción tiene Iugar generalmente en el paso mhs temprano. de este modo. Es la más común en tas vias biosinttticas. Como se anot6. es precursor únicamente de D. Una hiphtesis del enfoque cinético de MichaelisMenten es que la concentración del sustrato total es igual en esencia a la concentración del sustrnto libre. Frecuentemente. Los Si. B. Frecuentemente. el efecto inhibidor de dos o mhs productos finales sobre una sola enzima reguladora es estrictamente aditivo. esta suposicibn puede no ser vilida in vivo. Esto no implica un simple "retraso" de los intermediarios sino la capacidad de D para unirse a Enzl e inhibirla. la biosintesis d e nucleotido (capitulo 36) proporciona ejemplos especificas. uno con un gran AG negativo . Enzi EUQ Eny constituyen sucesiones de reacciones lineales de las que puede esperarse sean inhibidas por sus productos finales. Circuitos múltiples de retroalimentación regulan vías biosintéticas ramificadas Múltiples asas de retroalimentación (figura 3 1 4) proporcionan control fino adicional.. catalizada por las enzimas En21 a Enq. El S4 e5 un precursor de B y C y S. por tanto. arninohcidos antes de proteínas o nucleótidos antes de ácidos nucleicos). Por ejemplo. Dado que los di y trifosfatos de nucleósidos forman complejos estables con los cationes divalentes. inhibitii de manera típica la conversion de A en B. A+B+C-+ D una concentraci6n alta de D. C y D). para aminoácidos. D actúa como un efector alostérico negativo o inhibidor por retroalimentacihn de Enz. Asi. disminuye el requerimiento de S. que es exclusivo para una serie biasintética particular. De nuevo. D se une a la enzima sensible en un sitio alost4rico remato del sitio catalítico. pueden tener tambien funciones reguladoras particularmente en las reacciones en que el ATP y otros polianiones son sustratos. por medio de un producto final de esa vía.S2y S3 son precursores de los cuatro productos finales (A. La inhibición por retroalimentacibn se refiere a la inhibición de la actividad de una enzima inicial en una vía biosintktica. Se observa la tlpica actividad mhxima cuando el cociente molar de ATP a metal es casi la unidad. la actividad de ciertas enzimas. purinas o pirimidinas). existen mecanismos para evitar esta dificultad.Enzimas: regulucidn de actividades 1. esto es. el inhibidor por retroacciones es la ultima molkcula pequefia antes de una macromol~cula (por ejemplo. parcialmente compe- * Uno favorecido fuertemente (en terminos termodinamicos) en una sola dirección. la inhibicidn por retroalimentaci6n de Enzl mediante D regula la slntesis de D. un exceso de B deberá reducir la síntesis de los cuatro productos finales. Ias concentraciones intracelulares de 30s nucle6tidos pueden influir sobre las concentraciones intracelulares de los iones methlicos libres y. una ruta biosintkticapuede estar ramificada. Para la biosíntesis de D a partir de A. La figura 1 1-5 muestra los sitios probables de inhibición por setroacción simple en una vía biosintdtica ramificada (por ejemplo. Consideraciones semejantes se aplican a otros metabolitos en presencia de proteínas que los fijan de modo eficaz y que reducen su concentracibn en estado libre. Los iones metálicos que desempefian funciones catalíticas y estructurales en mas de una cuarta parte de todas las enzimas conocidas (capitulo 103. Claramente esto es indeseable.25 libre de bisfosfoglicerato (es decir. titiva. no unida a la h e m e globina) es comparable a la de otros tejidos. si el exceso de B puede inhibir no 5610 la porción de la vía particular de su propia síntesis. El exceso de metal o de ATP son inhibitorios.La capacidad de B para disminuir la producción de S2 confiere asi una ventaja biolbgíca. C o D. sino tambitn porciones comunes a la de la síntesis de A. Por tanto. las secuencias: CIERTAS ENZIMAS SON REGULADAS POR EFECTORES ALOSTÉRICOS La actividad catalítica de ciertas enzimas reguladoras es controlada por efectores alostericos de peso molecular bajo que por lo general tienen poca o ninguna semejan72 estructura1 con los sustratos o coenzimas para la enzima reguladora. no acoplada o mixta. Sin embargo. De manera tlpica. donde es posible que las concentraciones de los sustratos libres se aproximen a las de la concentracibn de enzimas. competitiva. funcionalmente irreversible*. Un ejemplo muy estudiado es la inhibición de aspartato transcarbamilasa bacteriana por CTP (véase después y capitulo 36).

a los efectos aditivos que se ven en la inhibición por retroalimentación acumulativa. La ATCasa es inhibida por retroacción mediante el trifosfato de citidina (CTP. pues. lnhibicibn milltiple por retroalimentacidn por una via ramificada biocint&titica. Esto sugiere que el CTP esta unido a un sitio (alostérico) diferente del de cada sustrato. cyfidine triphosphate}. la aspartato transcarbamilasa pierde su sensibilidad a la inhibicion por el CTP. Cada protómero catalitico contiene cuatro sitios aspartato (sustrato) y cadaprotbmero regulador por lo menos dos sitios CTP (reguladores}. Los sitios catalíticos y alostéricos muestran diferencia espacial Monod observ6 la falta de semejanza estructural entre el inhibidor por retroalimentacibn y el sustrato para la enzima cuy a actividad regula. SI o S5 son intermediariosen la biosintesis de los prcdudos finales R a D.pero retiene su actividad completa para la slntesis del carbamilaspartato. la inhibicibn completa se produce sólo cuando dos o más productos finales están presentes en exceso. . del ingles. Las enzimas alostdricas son. Después del tratamiento con compuestos mercuriales. Sobrepuestas a las asas de retroalimentaciónsimple (flechas curvas de guiones) estfin las asas de retroalimentacidnmúltiples (flechas curvas eontinuas) que regulan las enzirnas comunes a la biosíntesis de varios productos finales 4 C I c\ ' o H COO - Figura 11-7. este investigador propuso que las enzimas cuya actividad es regulada por efectores aIost&ricos(por ejemplo. Varias pruebas apoyan En la inhibici6n por retroalimentaciónconcertada o multivalente. enzirnas cuya actividad en el sitio catalítico puede ser regulada por la presencia de efectores en un sitio atostérico. fosfato Carbami'- + L-Aspartato II -o C . con mucho. O CHP I H HzN Figura ll4. La ATCasa consiste en múltiples protómeros cataliticos y reguladores. La enzima alosterica más estudiada es la aspartato transcarbamilasa La aspartato transcarbamilasa (ATCasa) cataliza la a biosintesis de las primera reaccibn peculiar a E pirimidinas (figura 1 1-7). Sitios de inhibicibn por cetroalimentaubn en una via biosintética ramificada.(Capítulo 11) Flgura 11-5. las flechas rectas representan las entimas que catalizan las conversiones indicadas. pero la inhibición que se observa cuando se encuentran dos o m& productos finales excede. Las flechas curvas representan asas de relroalimentacibn e ~ndican los sitios probables de inhibicibn por retroalimentación medlante productos finales esnecificos. Dado que los efectos no son kocstéricos con un sustrato. un solo producto final presente en exceso inhibe la enzirna regladora. En la inhibición por retroalimentación cooperativa. sino alostéricos (ocupan otro espacio). Reacción de la aspartato transcarbamilasa (ATCa sa) . los inhibidores por retroalimentacidn) fijan el efector en un sitio alostérica físicamente distinto del sitio catalítico.

en presencia y ausencia de un inhibidor alostdrico. enzima proteoliticas. no competitivo. esto sugiere un segundo sitio alostérico en cualquier otra parte de la molkcula enzirnAtica. La desnaturalización selectiva de los sitios alostéricos ha sido lograda mediante tratamiento con derivados del mercurio. fuerza ilinica o pH exmmos. el sitio alostkrico se halla colocado en un protómero diferente al que posee el sitie catalitico. Cuando este último falta.Emimus: regulación de actividades 127 la existencia de sitios alosttricos fisicamente distintos en las enzimas reguladas. Nótese la analogía de la relacion con las curvas de saturación de 0 2 de la rnioglobina y la hemoglobina (capitulo 7). el modelo cinético ya no es válido. 3) En ciertas células mutantes. Si aconcentraciones elevadas de S. El anhlisis cinktico de la inhibicibn por remalimentaci6n parece ser competitivo. el grado de inhibición se vuelve m e w s intenso. la curva de sahraciiin por sustrato es dis&rsionada de una hipdrbola a una curva sigmeidea. eenzirnas reguladas. no es posible obtener resultados significativos graficando los datos para la inhibicibn alostérica por la tkcnica del doble recíproco. El carácter sigmoide de la curva de v respecto a [S] en presencia de un inhibidor alostérico. Las enzírnas alostericas por lo general muestran una cinética sigmoidea de saturación con sustrato En la figura 1 1-8 se muestra la velocidad de reaccibn catalizada por una tipica enzima alosttrica medida a varias concentracianes del sustrato. pero sus propiedades catalíticas son idénticas a las del tipo nativo de donde deriv6 la mutante. S) En ciertos casos (por ejemplo. La cooperatividad de la fijacibn del sustrato se describid en los capitulos 7 y 9: la curva sigmoide de saturación de Oz se forma a consecuencia de las interacciones cooperativas entre cuatro sitios de fljacj6n de oxígeno que se localizan en los diferentes protbmeros de hemoglobina y en el uso de la escala de Hill para cuantificar la cooperatividad. refleja el fenómeno de cooperatividad. donde la presencia de una molécula de sustrato en un sitio catalitico facilita la unión de una segunda molkcula del mismo en un segundo sitio. Curva sigmoide de saturación para el sustrato en presencia de un inhibidor alostérico. Este método de análisis fue elaborado para la inhibicibn competitiva con el suskato en el sitio catalítico. bacterianas y de mamíferos. Figura 11-8. frecuentemente se vuelven insensibles a sus efectores alostkricos sin alteración de su actividad catalítica. Sin embargo. la cindtica superficialmente se parece a la de una inhibicibn competitiva. la actividad en presencia del inhibidor es baja con relacibn a la que se observa en su ausencia. Así. . dado que la curva de saturacibn por el sustrato es sigmoide y no hiperbólica. Sin embargo. En su presencia. Dado que parece inverosfmíl que un efector unido al sitio catalitico proteja cuando no lo hacen los sustratos. hay actividad comparable en presencia o ausencia del inhibidor aIostkrico. modificadas portkcnicac químicas o fisicas apropiadas. envejecimientode O a 5 "C opor congelación o calentamiento. pmcialmente competitivo de otros tipos. la estructura de Ios sitios alost&ricosy catalitica son geneticamente distintos. las propiedades para ia regulacion de las enzimas reguladoras tienen modificadas sus propiedades para la regulacidn. Puesto que los inhibidores alost&ricosactúan en un sitio diferente (alóstérico). que a concentraciones altas de sustrato puede coincidir con su forma hiperbdlica. Estas cinéticas son congruentes con la presencia de dos o más sitios de uni6n de sustrato que actuan reciprocamente. con urea. entre ellas está la siguiente: 1 ) LE. se observa una cindtica de saturacidn hioerbólica normal. A bajas concentraciones de sustrato. rayos0X. 4) Los estudios sobre uni6n de sustratos y de efectos alost&ricosa las enzima5 reguladas muestran que cada uno se puede unir independientemente del otro. ATCasa). 2) Lo efectos alostéricos frecuentemente protegen el sitio catalitico de la desnaturalización en condiciones en las cuales los propios sustratos no lo hacen. cuando [S] aumenta.

las enzimas reguladoras de orígenes distintos pueden tener curvas sigmoideas de saturacibn desplazadas a la izquierda o a la derecha para acomodarse a los llmites de las concentraciones de sustrato que prevalecen i n vivo. Por ejemplo. La referencia a fa cinktica de la inhibición como "competitiva'k ''no competitiva" respecto al sustrato lleva implicaciones mecanicistas que son desorientadoras. Cuando la concentración del sustrato se eleva. disminuya. la regulación es más eficiente en el momento en que la necesidad es máxima. Si se comienza a disponer de más sustrato. se pueden observar efectos intermedios sobre Kmy Y . una de eficacia catalítica elevada y otra de baja eficacia. la curva sigrnoide de saturacion del sustrato en presencia del inhibidor también asegura que cambios relativamente pequefíos en la concentraci6n del sustrato ocasionan grandes modificaciones en la actividad. Tir o His.Y . esto involucra la inhibicibn por retroalimentacibn de una enzima biosintCtica inicial. sin afectar la Km aparente... inducidos por Ia fijacion del efector alostérico en el sitio alostérico.Para una de la serie V. Para una enzima alostérica de la serie K. Asl. De este modo. entonces es menos necesaria una regulación rigurosa. los productos finales retroalimensan y controlan su propia síntesis. Las enzirnas interconvertibles existen en dos condiciones de actividad. e inhibición por retroalimentación. formando el O-fosfoseril o un residuo tirosil es fosforilado para formar el residuo O-fosfotirosil. se logra un control sensible de la actividad catalitica mediante cambios pequefios en la concentración del sustrato. pero el mecanismo comprende la interrupción de la expresibn de los genes que codifican para la formacibn de la HMG-Coh reductasa mediante el colesterol o un metabolito derivado de él. La fijación cooperativa de un sustrato confiere una ventaja fisiológica Las ventajas de la cinCtica de fijación cooperativa de3 sustrato son anklogas a aquetlas que se producen por la fijación cooperativa del O? a Ia hemoglobina. es decir. por analogla con las diferencias en l a curvas de saturacion de 0 1 de hemoglobinas de diferentes especies. LA REGULACIÓN POR RETROALIMENTACI~N. LA MODIFICACIÓMCOVALENTE REVERSIBLE REGULA ENZIMAS ESENCIALES DE MAM~FEROS La modulacibn reversible de laactividad catalitica de las enzimas puede producirse por la adherencia covalente de un grupo fosfato a uno o mhs residuos Ser. un termino fenomenol~gico exento de implicaciones mecanísticas. Aunque una enzima interconvertible puede contener muchos residuos Ser o Tir. el catalizador más activo puede ser la fosfoenzima o la que no posee grupo fosfato (cuadro 1 1-1). Tri. un mecanismo para fa regulación de numerosas enzimas bacterianas y de mamíferos.Una enzima inicial (HMG-COA reductasa) es afectada.Para las enzimas de la serie V el inhibidor alostdrico abate V . el colesterol de la dieta restringe la sintesis de1 procedente de acetatos en los tejidos de los mamíferas. el grado de inhibicion disminuye y se formauna cantidad mayor de producto. Probablemente las alteraciones en Kmo en V .(Capítulo I 1) Los efectos alostéricos pueden ser en Kmo sobre. de modo que V. Finalmente. NO ES SINÓNIMO DE INHIBICIÓN POR WETROALIMENTACIÓN En ambas clases de ctlulas. este cambio en la conformación puede debilitar los enlaces entre el suctrato y los residuos que se fijan a &l. las de la serie K y las de la serie V. Las enzirnac pueden tener numerosos sitios de fosforilación Un residuo seril especifico es fosforilado. Las enzimas que experimentan modificacibn covalente con regulacilin concomitante de su actividad se denominan "enzimas interconvertibles". h concentraciones bajas de sustrato. el efector alostérico es un inhibidor eficaz. Al igual que con la hemoglobina. Es preferible referirse a dos amplias clases de enzimas reguladas. . la fosforilación es sumamente selectiva y se produce s61o en un pequefio nUmero de sitios posibles. esta regulación al parecer no hace intervenir a la inhibicibn por retroalimentacidn de una enzima inicial de la biosintesis del ~olesterol. El colesterol agregado directamente a la HMG-COA reductasa no tiene efecto sobre su actividad catalitica. No obstante. de mamíferos y bacterianas. Para !as mzimas alostkricas de la serie K. resultan de cambios conformacionaies en el sitio catalitico.. cuando la concentración intracelular de los sustratos es baja. Dependiendo de la enzima de que se trate. En muchos casos. Sin embargo. Probablemente estos sitios no f m e n parte del sitlo . consecutivos a estos cambios en la confomacibn. la cinética de saturacibn por sustrato es competitiva en el sentido de que Kmse eleva sin efecto alguno sobre Vmk. se debe distinguir entre regulacibn por retroalimentaci6n. Sin embargo. es posible que el efecto primario sea alterar la orientacion o la carga de los residuos cataliticos.

La actividad de la proteina cinasaestli regulada y. EP. ATP ADP + ADP * Pi + ATP +ADP * E n z 4 e r 4 . aunque su actividad es regulada. lo mismo que la de la proteina fosfatasa. ciiando menos en lo que se refiere a la estructura. primaria. respectivamente (figura I 1-9). la regulación de las enzimas de los marniferos por fosforilacilindesfosforil ación comprende a varias proteinas y ATP estk bajo directo control hormonal y ncurol6gica. deberhn.- * ATP + ADP + Glucoca-fi-P 2. RESUMEN Figura 11-9. El resultado neto de la fosforilaci6n y luego de la desfocforilación de 1 m01 de sustrato (enzima o azúcar) representa la hidrálisis de 1 mol de ATP. del flujo de metabolitos en respuesta a señales fisioldgicas específicas. Sin embargo. Ejemplos de enzimas dc mamíferos cuya actividad catalítica está alterar'acihn-de! izime La fosforilacion-desfosforilación consume ATP Las reacciones de la figura 1 1-9 se parecen a las de la interconversión de gIricasa y gIucosa 6-fosfato o de fructosa-6-frrsfatoy fnictosa. Por el contrario. HzO + Glucosa-6-P + Pi + Glucosa Neto: HzO + ATP 3. las mismas protefnas convertidoras pueden ser enzimas convertibles (cuadro 1 1 -1 ).E m i m m : reqialacihn de actividades 129 " > Cuadro 1 1-1. en sí mismas. con su alta especificidad.a capacidad de estas proteínas cfnasac para reconocer figuras o patrones distintivos de la estructura primaria esta relacionada en parte. que catalizan las reacciones 1 y 3 (abajo). .6-difosfato (capitulo 1 4). dcslosforocn7ima. - - A< GI . actúan sin alterar la expresión gendtica. fhcilmente reversible. 1' Citratoliiisii l'cisforil¿isnb L I I I ~ M IIMG-COA reductnsa cinnsa E. porque de otra manera podrian actuar juntas para catalizar de modo incontrolable la hidrolisis del ATP. que catalizan las reacciones 2 y 4. actúan cobre enzimas tempranas de una prolongada secuencia metabólíca (a meniido biosintética} y en los sitios alostéricos más que en los cataliticos. Modificacibn covalentede una enzima regulada por la focforilación-desfosfonlacibnde un residuo ser11 La regulaciiin de la actividad enzimática contribuye en gran parte a preservar la homeostasia que mantiene . si bien los detalles precisos por los cliales estos agentes actúan están lejos de ser claros en la mayor parte de los casos. En casos especificas. De este modo hay proteína cinasa y prcrfeina cinasa fosfatasa que catalizan la interconversicin de estas ~roteinas convertidoras. l. csth baja control hormonal y neurolbgico. Enz-Ser4i-I Las prateinas cinasas y las fosfatasas son proteinas convertidoras La fosforilaci0n y la desfosforilacion son catalizadas por una variedad de proteínas cinasas y proteina fosfatasa (proteinas ctinvertidoras).P - 4. ser reguladas. Las tiruebas de que las proteha fosfatasa sean proteínas interconvertibles son menos convincentes. y de lac fosfatasas. por lo cual constituyen otro ejernplo de iin sitio alosterico. fosfuenzimn.l. HzO + Enr-Ser-O-P 4 ADP -+ + Pi Pi + E n z 4 e r 4 H Neto: H2O + ATP La modificación covalente regula el flujo del metabolito La regulación de la actividad enzimática por medio de la fosforilación-desfosforilación tiene analogías con la regulacion mediante la inhibicibn por retroalimentaci~n. la inhibición por retroacciiin incluye a una sola proteina y carece de las caracteristicas hormonales y neuroIógicas.. Las actividades de Ias cinasas.P 1 . -- catalítico.arboxilasa ntasa I'iruvalo deshrdrogcnasr HMG-COA ri Glucbpcno fc t f Rnjo Alto 11. Ambas proporcionan una regulación a corto plazo.

un metabolito dado puede regular la actividad de varias enzimas. Para lograr la homeostasia. A su ve& la actividadde estas en7imasconvertidoras puede ser regulada. insulina y las proteasas de las cascadas de la formacibn y disolucibn de los coagulos sanguíneos. protege contra su acci6n hasta que surge la necesidad.12:5. La modulación de la actividad enzimbtica por cambios en la conformación del sitio catalitico puede incluir la alteración de Kmpara un sustrato. las alteraciones rhpidas y minimas en la actividad catalitica de enzimas clave reguladas tienen funciones importantes en la canalizacibn selectiva de metabolitos hacia uno u otro proceso metabólico. de V. Krebs EG: Consensus sequences as substrate sptcificity determinants for protcin kinases and protein phosphatascs. Los ejemplos incluyen quirnotripsina. Barford D: The effect ofphospho~lationon the structure and function of protcins. Uno o más procesos proreoliticos desencadenan cambios en la conformación. Annu Rev Riophys Biomol Stnict 1993. Kennelly PJ. Cuando más de un metabolito puede regular por retroalimentación a una enzima dada. en general a sitios (alost&rfcoc) bastante separados del sitio catalitico. las curvas de saturacibn de sustrato para la inhibición aIostéríca son sigmoideas. la inhibicibn por retroalimentaciOn incluye metaboiitos reguladores. siendo la forma más cornun la fosforilacibn dependiente de ATP con elirninaci6n hidrolitica de fosfato como ortofosfato inorgánico. La evaluacibn cuantitativa de la cooperatividad de las enzimas alostericas utiliza la ecuacicin de Hill. cn parlicular de residuos específicos de Ser o Tír. What have we to rneasurev l'rends 13iochem Sci 1987. En el ser humano y otros eucariotes. cambios repetidos entre estados bajo y alto de actividad catalitica) cuando no hay nueva síntesis ni degradaciiin proteinica. la enzima blanco y sus enzimas convertidoras pueden constituir una porcibn de una cascada reguladora que responde a una sefial disparada por una hormona o por un segundo mensajero como cAMP. J Bio! Chem 199 1.Porteus JW: Control of metabolism. al mismo tiempo que facilita la movilización rhpida de una actividad sin que se requiera nueva sintesis de la proteina. quimotripsina) sin actividad catalitica. Las enzimas reguladas tienden a ser aquellas que catalizan una reaccibn inicial única (con frecuencia la primera) de una secuencia detenninada de reaccionw metaMlicas. La secrecibn. son catalizados por proteínas cinasas y proteínas fosfatasas (cnzimas convertidoras). inhibición de la aspartato transcarhomilasa por CTP). Además.. La fosforilación selectiva y la desfosforilaciiin subsiguiente. contribuyen a la regulacibn de los procesos metabólicos. Ia separacibn de enzimas en compartimientos y la secrecibn como proenzimas o cimiigenos (por ejemplo. las velocidades de numerosas reacciones bioquímicas deben responder a la necesidad físiolbgica. II REFERENCIAS Crabtree B.266:15555.33:255. dos dipéptidos de QT) o pueden permanecer unidos mediante enlaces disulfiro (los peptidos A. para la reacción global o efectos sobre los dos. Para procesos biosintéticos. cada una de ellas única para una secuencia particular de reacciones rnetabálicas (asas múltiples de retroalimentacibn). los cuales aproximan y alinean 30s residuos previamente distantes para formar el sitio catalítico. La actividad catalitica de las enzimas reguladas puede modularse (por qjernpto.12:4. Por tanto. Falfvey E. metabolitos "corriente abajo en la biodegradacion" de la enzima en cuestibn actúan como reguladores (como la inhibición de fosfofructocinasa por ATP o citrato). y C de la QT y las cadenas A y B de la insulina). Trends Biochcm Sci 1987. Kacser H.1311 Bioquímiea de Hurper un entorno intracelular e intraorganismo relativamente constante en presencia de arnpl i a q fluctuaciones en el medio ambiente externo (como cambios de temperatura.22:199.. que se encuentran en la biocintesis "corriente arriba" de la enzima regulada (por ejemplo. Los pkptidos que se forman por la proteblisis selectiva pueden descartarse (qjernplo. cooperativa o multivalente.. la actividad de numerosas enzimas es regulada por modificacibn covalente. presencia o ausencia de agua o tipos específicos de alimentos). A menudo. La modu- lacibn se logra cuando metabolitos específicos se fijan a la enzima regulada. En secuencias de reacciones catabólicas. como precursor inactivo. Johnson LN.. Schibler U: How are the regulators rcgulatcd? Ped Am Soc Exp Riol J 1990. la accion de estos metabolitos reguladores múltiples puede ser acumulativa.: Molecular cloning of h e branched-chain a-ketoacid dehydragenase kinase and the COA-dependcnt methylmalonate semialdehyde dehydrogenase. Km y V. ¿Cómo se logra este propósito? Las concentraciones locales de sustrato. por lo cual no se aplica la ecuación de Michaelis-Menten. .5:309 Harris RA et al. Muchas proteasa y otras proteinac se secretan como proproteínas biol6gicamente inertes que deben someterse a un desprendimiento proteolitico selectivo para formar una enzima u hormona con actividad biológica. B. Newsholme EA: A systcmatic approach to describing and analyzing metabolic control systerns. Adernris. Adv Enzume Regul 1993.

Schlesinger MJ.~ 13 1 Pilkis SJ et al. . Roach FJ: Multisite and hierarchical protein phosphorylation. Academic. 1963-present. Pcrgarnon Press.266 14239.: 6-Phosphofructo-2-kinascJfructose-2. 6th ed. Stadtman ER. (editors): The Metabolic Basis of lnheriied Disease. 1995 Soderling TR: Role of hormones and protcin phosphoryla- tion in metabolic re@lation. Chock PB (editors): CUrrent Topics in (:ellarlar Hegulatinn. Hershko A: The Ijhiquiiin System Cold Spring Harhour Press.6- bisphosphatase: A rnetabolic signaling enzyrne. Fed Proc 1982:41:2615. J Biol Chcm 1991.64:799.Enzlmas: regulación de decf ividade. McGraw-1 lill. Scriver CR et al. 1988. Annu Rev I3iochem 1995. 1969 to the preseni Weber G (editor): Advances in Enzyme Regulalion.

.

Entender la forma en que los organismos obtienen esta energía de sus alimentos basico para comprender la nutrici6n y el metabolismo nomales. que combina las dos leyes de la termodinhica: IMPORTANCIA BIOQU~MICA Para proveer la energia que capacite a! ser vivo para llevar a cabo sus procesos normales. La segunda ley de la termodinámica establece que si un proceso se produce espanthneamente. dentro de ese sistema total. la relaci6n entre el cambio de energia libre (AG) de un sistema en reacci6n y el cambio de la entropia (AS) estfi dada por la siguiente ecuación. Bajo las condiciones de las reacciones bioquímicas. pero los sistemas bioIbgicos son en esencia isotbrmicos y emplean la energla química para energizar el proceso de la vida. Ia energia química puede convertirse en calor. PhD. electricidad. medida por el indice rnetab6lic0. la entropia total de un sistema debe aumentar. se requiere un combustible adecuado. En condiciones de temperatura y presibn constantes. Implica que durante cualquier cambio dentro del sistema completo. la energía puede transferirse de una parte a otra o puede transformarse a otm forma de energia. es decir. una de las enfermedades más frecuentes de la sociedad occidental. La entropia representa e1 grado de desorden o lo fortuito del sistema y se torna mfixima en un sistema cuando &te se aproxima at equilibrio verdadero.Bioeneraetica: la función de AñP +ir Peter A. Los sistemas no bioldgicos pueden utilizar la energia calorífica para realizar trabajo. es el estudio de los cambios de energía que acompaíían a las reacciones bioqulmicas. la energía iitil. debido aque A-3 es aproximadamente igual a AE. Por ejemplo. ksta es también la ley de la conservacibn de la energia. Los sistemas biológicos cumplen con las leyes generales de la termodinámica La primera ley de la termodinhrnica establece que T a energía total de un sistema. Mayes. conocida tarnbikn en los sistemas químicos como potencial qilimica. incluyendo la de su entorno. w se pierde ni se gana energia. se controla por las hormonas tiroideas cuya disfuncion es una causa de enfermedad. El índice de emisión de energía. Sin embargo. donde hH es el cambio de la entalpía (calor) y T es la absoluta. que es el cambio total en la energía interna dc la reacción. DSc La bioenergética o termodinhrnica bioquimica. permanece constante. La muerte por inanicibn se produce cuando las reservas energeticas disponibles se agotan y ciertas formas de desnutrición se relacionan con un desequilibrio de la energía (marasmo). Proporciona los principios que explican la causa de que algunas reacciones puedan producirse en tanto que otras no. LA ENERG~A LIBRE ES LA ENERG~A UTIL EN UN SISTEMA El cambio en la energia libre (AG) es esa porci6n del cambio de la energía total de un sistema que está disponible para realizar trabajo. El almacenamiento excesivo del suministro de energia produce obesidad. . energia radiante o energía mecánica en los sistemas vivos.

un proceso endergónico no puede existir solo. independientemente de la forma de energia de que se trate. La conversibn del metabolito A al metabolito B produce energia libre. Puede calcularse a partir de la constantedeequilibrio K'. AG*' = . AG es de gran magnitud. Cuando. Por otra parte. En la prhctica. con las reacciones oxidativas. DeberA apreciarse que este tipo de sistema tiene incorporado un mecanismo para el control biotogico de la velocidad a la cual se permite que se produzcan los procesos oxidativos. sino que debe ser un componente de un sistema acoplado exergónico-endergónico donde el cambio neto global es exergonico. la reacción procede de manera espontánea con pdrdida de energla libre. segiin la concentracion de los diversos reactantes. Es importante destacar que la 3G real puede ser mayor o menor que AG". En los sistemas biolbgicos. ya que la existencia de un intermediario común obligatorio para las dos reacciones. en tanto que las reacciones sintéticas que fuman sustancias se denominan anabolismo. Aco'plamiento de una reaccidn exergbnica y una endergbnica. es endergónica. Si. de impulsos la contracción muscular.O mol!L. exergbnica y endergbnica. algunas reacciones exergónicas y endergbnicas estan acopladas de esta manera. si AG es positiva. es decir. En su lugar. e\ proceso global debe estar acompaiiado por pérdida de energia libre como calor.la relacibn anterior puede expresarse de la manera siguiente: Si AG es de signo negativo. Cuando los reactantes esthn presentes en concentraciones de 1 . la conduccione~ nerviosos y el transporte activo. donde R es la constante de los gases y T es la temperatura absoluta (capítulo 9). una condicióti estándar se define con un pH de 7.2. respectivamente.obtienen energía por enlace quimico o acoplamiento.0. ademas. En un sistema de reacciones bioquimicas. Como parte de la energia liberada en la reacci6n degradativa se transfiere a la reaccibn sinte-tica en forma diferente al Energía qulmica Figura q2-1. es decir. El cambio de la energia libre estlndar a este pH se designa por AG". AG' es el cambio de la energia libre esiandar.303 RT log Ks. es decir. El conjunto de procesos catab6licos y anabblicos constituye el metabolismo. Las reacciones exergiinicas constituyen el cata bolismo (degradacion u oxidacián de moléculas combustibles). se emplean las palabras exergunico y endergbnico para indicar que un proceso se acornpafia con perdida o ganancia. . de energía libre. el sistema es estable con poca o ninguna tendencia para que se produzca una reaccibn. debe apreciarse que una enzima s61o las acelera hasta liegar al equilibrio: esto nunca modifica la concentracion final de los reactantes en equilibrio después de su desprendimiento de la enzima. en la cual se requiere energia libre para convertir el metabolito C al metabolito D. De manera más simple. Esta se acopla con otra reacción. los t$minos químicos nomiales exotémico y endotermico no pueden aplicarse a estas reacciories. la magnitud de AG es grande. Puede concebirse un mecanismo posible de acoplamiento si un intermediario comun obligatoria (I)toma parte en ambas reacciones. En las reacciones bioquímicas. el sistema esta en equilibrio y ningUn cambio neto tiene lugar. la reaccidn procede s61o si puede ganarse energia. Si AG vale cero. Si la reacción mostrada en la figura 12-1 se mueve de izquierda a derecha. incluso el solvente. varios iones y proteinas. este tipo de acoplamiento puede ser representado como se muestra en la figura 12-1. es exergónica. deja que la velocidad de utilizacibn del producto de la vla sintetica (D) determine por acci6n de masas E a velocidad Calor LOS PROCESOS ENDERGONICOS SE LOGRAN POR ACOPLAMIENTO A PROCESOS EXERGON~COS Los procesos vitales -como las reacciones sintéticas. adembs. calor. la reaccicín se dirige virtualmente a su consumaci6n y es esencialmente irreversible.

Figura 12-3. Acoplamiento de las reacciones de deshidrogenactbn e hidrogenacrón mediante un portador tntermediario Figura 12-4. el ATP desempefia una funcihn en la transferencia de la energia libre de las reacciones exerg~nicasa las endergíinicas (figuras 12-3 y 124).ejemplo. el principal compuesto intermediario o portador de alta energía (designado es el trifosfato d c adcnosina (ATP. El ATP se considerh Proceso enderg6nlco Excitacibn nerviosa activo Figura 12-2. efectuando así una transferencia de energía libre de la a la endergónica. udenosine djphosphuie) y del fosfato inorghnico (P. U n metodo alterno de acoplar un proceso exergónico a unti enderghnico es sintetizar un compuesto con alto potencial energético en la reaccion exergonica e incorporar cstc nuevo compuesto a la cndergbnica.) en este proceso (capítulo 19). En sus actividades celulares. -a) LOS FOSFATOS DE ALTA ENERG~A DESEMPENAN UNA FUNCIÓN PRINCIPAL EN LA CAPTURA X TRANSFERENCIA DE ENERGIA Para conservar los procesos de la vida. no necesita tener una estructura seme-jante a A. En todos estos organismos. En la figura 12-3. La imporiancia de los fosfatos en el metabolismo intermedio se hizo cvidente con el descubrimiento de los detalles quiniicos de Ia glucólisis y de la función del ATP. -@ via exerg~nica es un compuesto con un alto potencial energetico y @ cs el compuesto correspondiente con bajo potencial enercélico. todos los organismos debcn obtener suministros de energia libre a partir de su entorno. las plantas verdes utilizan la energía de la luz solar y ciertas bacterias autotrofas utilizan la reacción FeZ' -r Fe3'. por .Transduccibn de energla a los procesos biolbgiees que la requieren (endergbnims) a través de un compuesto común de alta energia . Por otro lado. Por otro lado. en la cdlula viva. dcI inglés. El ATP es un nucleiitido especiaIizado que contienc adenina. funciona como un complejo con Mp7+(figura 12-51. De hecho. proceso que evita que un organismo fuera de control se incendie. del difosfato de adenosina (ADP. del iriglés. Transferencia de energla libre de una reacción exergonica a una endergbnica a travhs de la formación de un compuesto de alta energía. como se muestra en la figura 1 2 4 . I. ribosn y tres grupos fosfato.~phate).n la cual A es oxidado. que están acopladas a hidrogenaciones por iin portador intermediario (figura 12-2). los organismos heterbtrofos obtienen energia libre mediante el acoplamiento de su metabolismo a la rotura de moléculas orghnicas cornple-jas procedentes de su entorno. Los orgmisinos autótrofos acoplan su metabolismo a aEgiin proceso exergónico simple en su entorno. al contrario de 1 en el sisten~a anterior. R.a ventaja biológica de este mecanismo es que u -@. Esto J actuara como transductor de energía perm itiria que K desde una amplia gama de reacciones exerglinicas a un igualmeiite extenso grupo de rcnccioncs o procesos endergónicos. ~r(ic~i7osine f ripho. estas relaciones proporcionan una base para el concepto del control respiratorio. C o D. Una extensión del concepto de acoplamiento lo dan las reacciones de deshidrogenación.

La función del ATP en la energdtica bioquimica fue descubierta en experimentos que demostraron que el mencionado ATP y la fosf'ocreatina eran degradados durante la contraccion muscular y que su síntesis ulterior dependia del suministro de energia procedente de procesos oxidativos en el rnUcculo.+ - Gl ucosa I-fo!sfato Friuctusa h-fosfato AFvil' G1ucosa 6-foi G1icerol 3-fo! * P i. .3-difosfoglicerato). Figura 12-5. tiene valores AGO' menores que el del ATP. El alto cambio de energía libre en la hidrólisis de ATP Cuadra 12-1. en tanto que en el otro grupo. e~jemplilicado por los fosfoksteres intermediarios de la gIucolisis. a partir de los AG"' de su hidrólisis (medido a 37 "C).3-Diti)sfi~gI liccrato f a glicerato) Fosfocreatin~ I'P -+ ADP I'il '010S1iit0 A11I' + AMI . acetil-COA). designado fosfatos dc alta energia. Es posihEe obtener el c8lculo de la tendencia comparativa de cada uno de los grupos dc fosfatos para transferir energia a un aceptor adecuado. Asi.138 Bioquimica de Harper se debe a la carga de repulsilin de los ritomos de oxigeno adyacentes. Orros compuestoc de importancia bíologica que se clasifican como "compuestos de altaenergia" son tioésteresentre losquese encuentran ésteres de la coenzima A (por ejemplo. Los valores difieren entre investigadores según las situacioncs precisas bajo la cuales se efeclunron las mediciones. con carga negativa y a la estabilización de los productos de la reaccion. que la función de estos compuestos en hioenergdtica se apreció con claridad. proteínas acilportadoras. El valor intermedio para Ia energía libre de la hidrólisis de ATP comparado con el de otros organofosfatos tiene un importante significado bioenergético En el cuadro 12-1 se muestra la enesgla libre esthndar dc la hidrólisis de varios fosfatos importantes desde el punio de vista bioquirnico. enolfosfatos (corno el fos. por lo general son anhidridos (pos ejemplo.foenolpiruva2o)y fosfoguanidinas (por ejemplo. en la transferencia a un aceptor apropiado. Uno. especialmente fosfatos. . focfato de creatina. como híbridos de resonancia. fosfato de arginina). El trifosfato de adenosina se muestra aquí como un complejo de magnesio. mientras que el enlace fosfato del AMP (monofosfato de adenosina) es del tipo de baja energia ya que se trata de un enlace Cster normal (figura 1 2 4 ) . Lipmann introdujo el slmbolo -@. esteres de aminoácidns que participan en la síntesis proteínica. incluyendo al ATP y al ADP. El simbolo seiiala que cl grupo adherido al enlace. Los fosfatos de alta energia se designan por el símbolo -@ como un medio de transferir radicales fosfato en el proceso de la fosfonlacion. No fue sino hasta que Lipmann introdu-jo el concepto de "fosfatoc de alta energia" y el de "enlace fosfato de alta energia". Energía libre estlindar de la hidr6lisis de algunos fosfatos orgánicos e import:incia bioc -" -- - A A ~ l rompuesto Fosfocnolpiruvato CarbamillFisFato 1. para indicar la presencia del enlace fosfato de alta energia. el valores igual o misalto queel del ATP. traspasa la mayor cantidad de energia libre. El ADP forma u n complejo similar con ~ g ~ ' . Por esta razlin algunos prefieren el termino "potencial d e transferencia de griipo" al de "enlace de alta energia". de fosfatos de baja energía. S-ad~nosilmetionina (metionina activa) UDPGIc (uridindifosfato glucosa) y PRPP (S-fosforrihosi 1-pirofosfato). el I -fosfato del 1. ortofosfatc + Valores de ATP y ntms rnbs tomados de Krebs y Krirnberg (1957). . En et cuadro se puede observar que el valor de la hidról isis del fosfato terminal del ATP divide la lista en dos grupos. Los componentes de este ultimo grupo. La posicicin intermedia del ATP le permite desernpefiar una fi~ncián importante en la transferencia de energía. el ATP cnntiene dos grupos fosfato de alta energia y el ADP contiene uno.

para formar ATP. el ATP puede actuar como donador de fosfato de alta energía para formar aquellos compuestos que están después de él en Ia lista. Hay tres ruentes principales de -@. activaciones y procesos endergbn~cos Monofoslato de adenosina (AMP) Figura 12-6.OII 1 O -@-@ Disfosfato de adenosina (ADP) I Adenoctna .O . Otro grupo de compuestos fosfhgenos representado en el cuadro actúan como formas de almacenamiento de fosfato de alta energía. y la fosfoarginina. un ciclo ATPIADP conecta los procesos que generan *a las reacciones que lo utilizan (figura 12-7). As[. Asimismo. los ecpermatomides y en el cerebro de los vertebrados.'@ Otras fosforilaciones. esta reaccilin permite que las concentraciones de ATP se conserven en el m. aunque esté utilizindose rhpidamente. el ADP puede aceptar fosfato de alta energía proveniente de aquellos compuestos que estén en la parte superior del cuadro.I Adenosina .P . En efecto. Estructuras del ATP. porque la fosfocreatina . La energía libre para conducir este proceso procede de la oxidacibn de la cadena Figura 12-7. que existe en el músculo esquelético. En éste se incluye a la fosfocreatina. En condiciones fisiológicas.O . generados en dos reacciones catalizadas por la fosfoglicerato cinasa y la piruvatocina. 3) Ciclo del hcido cítrico: En el ciclo se genera un directamente en el paso catalizado pos la succinil tiocinasa (figura 18-3). Obdrvese que @no existe en un estado libre sino que es transferido en las reacciones que se muestran respiratoria empleando O? rnolecular dentro de Ias mitocondriats (capítulo 13). Función del uclo ATPlADP en la transferencia de fosfato de alta energia. que toman parte en la conservación o captura de la energía: 1) Fosforilaci6n oxidativa: Ésta es la fuente los organismos cuantitativa mayor de -@en aerobios. 2) GIucblisis: Hay una t'ormacibn neta de dos @como resultado de la formación de Iactato a partir de una mol8cula de glucosa. Esto tiene lugar a una velocidad muy rápida. a. siempre y cuando se disponga de la maquinaria enzimlitica adecuada. ADP y AMP que muestran la posición y el número de fosfatos de alta energía (a) // \ Glucusa 1.P o o Adenosina 11 . que s61o se encuentra en el músculo de los invertebrados. respectivamente (figura 19-2).O- .3-Difosfogliceratc P-0-P-O-P-0- o II o 11 o II Fosforilación oxidativa Trifosfato de adenoslna (ATP) Adenosina . dado que el depósito ATP/ADP total es en extremo pequeno y suficiente para mantener un tejido activo s61o durante algunos segundos.iisculo. en el com6n. el ATP se consume y regenera de manera continua.O - I I Fosfoenol piruvato 1.6difosfato Glicerol 3-fosfato Glucosa 6-fosfato LOS FOSFATOS DE ALTA ENERG~A ACTUAN COMO LA "ENERGIA CIRCULANTE" DE LA CELULA Como consecuencia de su posición media en la lista de energías libres cstándar de la hidrblisis (cuadro 12-1 ).O I a o Adenosina H - P.

Pi + Glucosa 6-fosfato+ H20 (AG" = + 13. cuando el ATP es abundante. se ha descrito una lanzadera de fosfato de creatina que traslada fosfato de alta energía de las mitocondrias al sarcolema y que actua como un amortiguador del mismo {figura 14-16). Glicerol + Adenocina -@ Glicerol -@ + Adenosina . este amortiguador puede ser importante para proveer una protección inmediata contra los efectos del infarto. es irreversible para propbsitos prhcticos. Tal reaccihn es la hidrblisis del fosfato terminal del ATP. podria no proceder en esa forma. por ejemplo: de la glucosa. en condiciones fisiológicas. ( 7 ) Glucosa +. por tanto. Por otra parte. la fosforilación de la glucosa avanza con facilidad en una reaccibn altamente exergónica que en condiciones fisiolbgicas dista mucho del equilibrio y.@ @ ) a Glucosa + ATP 9 - Glucosa 6-fosfato + ADP (AG" = .5 kJlmol) Cuando (1) y ( 2 ) se acoplan en una reacción catalizada por la hexocinasa. la reacci6n debe estar acoplada con otra que sea más exergbnica que la fosforilacibn Esta reaccibn tiene tres funciones: 1) Permite al fosfato de afta energia del ADP ser usado en la formación de A V .I4O Biquímica de Harper (Capítulo 12) sirve como fuente de energía para la contraccion muscular. que es endergónica por excelencia y que. su concentración puede funcionar como almacén de fosfato de alta energia (figura 12-8). 3) Permite al AMP. el grupo fosfato es convertido invariablemente en otro de baja energía. actuar como una seflal metabblica (alostérica) para incrementar la velocidad de las reacciones catabólicas. 2) Permite al AMP.16. Tal reacción es la primera en la vía de glucólisis (figura 19-2). Cataliza la interconversion de ATP y AMP por un lado y de ADF por el otro: ATP + AMP >- f 2 ADP Para que tenga lugar. La adenilil cinasa produce la interconversión de nucleótidos de adenina La enzima adenilil cinasa (miocinasa) esta presente en la mayoria de las células. Cuando el ATP actiia como donador de fosfato para formar aquellos compuestos de menor energia libre de la hídrólisis (cuadro 12-11. . 'Ha \ HIC-N G-N 1 ? 'a ' ADP ATP Coow (dGO' -12. la fosforilación de la glucosa a glucosa 6-fosfato. ser fosfosilade nuevamente para formar ADP.30. las que a su vez llevan a la generacidn de rnhs ATP (capitulo 2 1). Transferencia de fosfato de alta energla entre el ATP y la creatina. el cual aumenta en concentracibn cuando el ATP se agota.@ . En el muscrilo.8 kJlrnol) modelo.6 W/moll Fasfato de creatina - c m Creatina Flgura 724. En el miocardio.7 kJlmol) Muchas reacciones de "activación" siguen este El ATP permite el acoplamiento de reacciones desfavorables en el aspecto termodinámico con otras favorables La energktica de las reacciones acopladas se describe con m& detalfe en las figuras 12-1 y 12-3. (2) ATP t ADP + P (AG"= . formado como consecuencia de diversas reacciones de activacibn en las que interviene el A V .

1) Los sistemas biolbgicos son isotkrmicos en esencia y usan energia química para suministrar energía a los procesos de los seres vivientes. ATP + Nucleósido -@ P ADP * Nucleósido -@ -@ Por tanto. lo cual asegura que la reaccibn de activación se desplace hacia la derecha. RESUMEN I ADP Flgura 12-9. se forman pirofosfatos inorgánicos (PPi) Este proceso tiene lugar. transfiriendo energia libre derivada de sustancias con mayor potencial energético a las de potencial menor. La combinacibn de las reacciones anteriores hace posible que el fosfato pueda utilizarse de nuevo y que los nucleótidos d e adenina se intercambien (figura 12-9). reacción que por sí sola tiene un elevado AGO' de -27. 3) Los procesos endergbnicos se efectúan sblo cuando se acoplan a procesos exerg6nicos. Si AG es positiva. 2) Las reacciones son espontheas cuando hay pérdida de energia libre (AG es negativa). catalizada por la pirofosfatasa inorghnica.. PIROFOSFATASA Todos estos lxifosfatos intervienen en las fosfonlaciones en la célula. es decir. 4) El ATP actúa como la '"moneda circulante" o "corriente energktica" de la cdlula. las nucleósido monofosfato cinasas específicas de cada nucleósido de purina o pirimidina. en la activacibn de los ácidos grasos de cadena larga: Otros trifosfatos de nucleósidoc toman parbe en la transferencia de fosfatos de alta energia Por medio de la enzima nucle6sido difosfatocinasa. A fP + U D P > ATP + GDP ATP + C D P < > - ADP + UTP (trifosfato de uridina) ADP + GPT (trifosfato de guanosina) ADP + CTP (trifosfato de citidina) a. pero que contienen una base distinta de la adenina. son exergiinicas. por ejemplo. la reaccibn tiene lugar 5610 si puede disponerse de energIa libre. la adenilil cinasa es una monofosfato cinasa especializada. los trifosfatos de nucleósidos semeiantes al A'TP. esto es facilitado ulteriormente por la escisión hidrolitica del PP. Ciclos del fosfato e intercambio de los nucledtidos de adanina. catalizan la formación de difosfatos de nucleósido a partir de los rnonofosfatos cosrespondientes. . Obsérvese que la activacidn por la ruta del pirofosfato produce una perdida de dos en lugar de uno que es lo que se pierde cuando se forman ADP y P. es decir. es endergbnica.Cuando el ATP reacciona para formar AMP. De modo similar.6 kJ/mol. pueden ser sintetizados a partir de sus difosfatos. por ejemplo: ATP + COA SH + R C O O H AMP * PPi + R COCCoA DIFOSFATOClNASA La reaccibn se acompafía de perdida de energia libre en forma de calor.

Kornberg HL: Energi Transforma~ionsan Ernster L (editor): Rlnencrgeti~s Elseiier. H a r o l d F M : T h e l ' ~ t a l F o r c e A ~ ~ t ~ ~ u f B r o e n e r g e r iLehningerAt:Rioenergetics cs TheMolecularRasr~oj' Freeman. . Acapounds: Water. Diological Energy i'ransformaí~ons. transport ATPases.306:287. 1984. 1957.iving Matter. and cntropy endemic Press. 2nd ed Renlamin. Krebs HA. Springer. 1971. 1986.142 Bioqquimica de Hurper (Capítulo IZ) REFERENCIAS de Meis L: The concept of enetgy-rich phosphate comKlotz I M : lntroduction to Biornolecular Ensrge~ics. I. 1986 ergy Arch Biochcin Riophys 1993.

de manera análoga.0 voltios. ES uso principal de este es en la respiracibn. Se apreciar&que numerosas oxidaciones biologicas pueden tener lugar sin la participaciiin del oxígeno molecular.42 voltios. el oxigeno molecular es incorporado a una variedad de sustratos por las enzimas designadas como axigenasas. expresarlo numkricamente como un potencial de oxidación-reduccibn o potencial redox (E'& F A usual comparar el potencial redox de un sistema (E. muchos medicamentos.) contra el potencial del electrodo de hidrógeno. Ia oxidacidn se define como la pérdida de electrones y la reducción como la ganancia de ellos. en forma de A V . Sin embargo. PhD. esto se ilustra mediante la oxidación del ion ferroso en férrico. se designa como 0. La lista de potenciales redox que se muestran en el cuadro permite predecir la dirección del flujo de electrones de un par redox al otro. La administración de oxigeno puede salvar la vida de pacientes con insufíciencia respiratoria o circulatoria LAS ENZIMAS QUE INTERVIENEN EN PROCESOS DE OXIPACIÓN Y REDUCCI~N SE DENOMINAN OXIOORREDUCTASAS En la siguiente descripcibn. la administración de oxigeno a presiones altas (terapéutica con oxigeno hiperbarica) ha proEn química. 'i LOS CAMBIOS DE ENERG~A LIBRE PUEDEN EXPRESARSE EN TÉRMINOS DEL POTENCIAL REDOX En las reacciones que implican oxidacián y reducción. en ocasiones. de la reaccibn controlada del hidrbgeno con el oxigeno para formar agua. es posible. deshidrogenasas. Mayes. que puede ser definida como el proceso por el cual las cdlulas obtienen energía. DSc y. IMPORTANCIA BIQMÉDICA Aunque ciertas bacterias (anaerobias) sobreviven en ausencia de oxfgeno. Este principio de oxidacibn-reducción se apiica del mismo modo a los sistemas bioquimicos y es un concepto importante en la comprensidn de la naturaleza de la oxidacion biolbgica. las oxidorreductasas se clasifican en cuatro grupos: oxidasas.(electrón) bado ser valiosa. la vida de los animales superiores depende de manera absoluta de su suministro.0 en el cual el potencial del electrodo de hidrdgeno es -0. a pH O. . aunque puede causar intoxicaciún. conocida como el sistema del citocromo P450. el cual. Además.Oxidación biolóqica V Peter A. En consecuencia. las deshidrogenaciones. De este modo. el intercambio de energia libre es proporcional a la tendencia de las sustancias reaccionantes para donar o aceptar electrones. por ejemplo. la oxidación está siempre acompaiíada por la reduccion de un aceptor de electrones.) a pH 3. contaminantes ambientales y carcinbgenos quimicos (xenobibticos) son metaboli7ados por enzimas de esta clase. hidroperoxidasas y oxigenasas. e. Los potenciales de oxidorreducci6n de algunos sistemas redox de interés especial en la fisiología de los mamíferos están indicados en el cuadro 13-1. además de expresar eI cambio de energía en términos de A G ' (capitulo ~ 1S). para los sistemas biológicos es normal expresar el potencial redox (E'.

durante la oxidacibn y la reduccién. Oxldacibn de un metabolito catalizado por una oxidasa (A) que forma H20.(Capitulo 13j Cuadro 13-1. Contiene molibdeno y desempefla una fincibn importante en la conversión de las bases púricas en ficido úrico (capitulo 36). pues se encuentra en la leche. Las enzimas que pertenecen a este grupo de oxidasas incluyen a la ~ a m i n a a c i d o oxidasa. Además. pues tiene cl típico grupo prostetico hem presente en la rnioglobulina. Estudios mhs recientes demuestran que los dos citocromos estiin combinados con la misma proteína y el complejo se conoce como ci- * Algunas veces el tkrmino "oxidasa" se utiliza indistintamente para nombrar n todas las enzimas que catalizan reacciones en que interviene oxlgeno rnolecular prost&icos. Numerosas enzimas flnvoproteinicas contienen uno o mAs metales como cofactores esenciales y se conocen como metaloflavoproteinas.nn Figura 13-1. dado que cada uno tiene un espectro distinto y propiedades diferentes con respecto a los efectos del monóxido de carbono y el cianuro. de este modo. Otras oxidasas son flavoproteínas Las ~nzimas flavoproteinicascontienen rnononucle6tido de flavina (FMN. Contiene dos moleculac de hem. hemoglcibulina y otros citocromos (capitulo 7). . Es de particular irnportaicia en el higado y los tifionec de las aves. A1 principio.del ingl&s. Es el cornpcincnte terminal de la cadena de portadores rcspiratorios que se encuentran en las mitocondrias y resulta. una enzima ligada al FMN que se encuentra en el riñiin con especificidad general para la desaminacibn oxidativa de los L-an~inoicidosque se encuentran en la naturaleza. responsable de la reacción por la cual los electrones que provienen de la oxidación dc las moléculas del sustrato por las deshidrogenasac son transferidos a su aceptor final. Citocromo I l hiquinon Citocromo tocromo uaf. ('B) que forma H202. . ligado cada uno con una unidad hemica. La xantina oxidasa tiene una extensa distribución. las cuales excretan hcido úrico como el principal producto final nitrogenado. Forman agua o peróxido de: hidrbgeno como u n producto de la reacción (figura 13-1). se pensó que el citocromo a y el citocrorno a 3 eran compuestos separados. La aldehido deshidmgenasa es una enzima ligada al FAD que se encuentra en el hígado de los marniferos. teniendo cada una un &tomode Fe. El FMN (figura 52-2) y FAD (figura 52-31 se forman en el cuerpo a partir de la vitamina rihoffavina (capitulo 52). flavin adeninc u'inucleorrde) como grupos Algunas oxidasas contienen cobre Idacitocrorno oxidasa es una hemoproteínaamplíarnente distribuida en muchos tejidos. Es una metaloflavoproteina que contiene molibdeno y hierro no h6mico la cual actúa sobre aldehidos y sustratos N-heterociclicos. TamhiCn se le ha llamado ci~ocromo a. apoenzima. no sblo del metabolismo de las pwinas. sino también del catabolismo de las protetnas y aminodcidos. en el intestino delgado. La glucosa oxidasa. el rirlon y el hígado.a su respectiva proteina. una enzima FAD especifica preparada a partir de algunos hongos. LAS OXIDASAS UTILlZAN OXÍGENO COMO ACEPTOR DEL HIDRÓGENO Las oxidasas catalirart la eliminacihn de hidrógeno be un sustrato iisando al oxígeno como aceptor de hidriigenoa. e1 oxígeno.Algunos potenciales redox importaricia espm temas de oxid acitin en -+" I S ' m - - "nlt. que oscila entre Fe" y Fe2. del ingles. es de interés ya que se emplea para deteminar glucosa. EMN y FAD están unidos estrcchamente -pero no por covalencia. el cianuro y el bcido siilfhídrico. están presentes dos aíomos de Cu. La enzima e5 envenenada por el monbxido de carbono..flavin rnononucleotide) o dinucleliticlo dc flavina y adenina (FAD. Por lo general.

se ha descubierio que algunas deshidrogenasas dependientes de las coenzimas de nicotinamida contienen cinc. Sin embargo. tiene utilidad particular para permitir los procesos oxidativos en ausencia de oxígeno. 2) Como componentes m una cadena respiratoria de transporte de electrones del sustrato al oxigeno (figura 13-43. Sin embargo. del ingles. estas propiedades permiten que los eqiiívalentes reductores se transfieran con libertad dentro de la cklula. nicotinamide adenine dhucleolide phosphare) como coenzimas. Cuando las reacciones son reversibles. nicotinamideadenrne dinucleoride)o para fosfato de dinucieótido de adenina y nicotinamida (NADP'. Por otro lado. Oxidorreduccibn del anillo isoaloxacina en los nucléotidoc de Ravina . en el ciclo del Acido citrico y en la cadena respiratoria de la rnitocondria. particularmente e n la glucólisis. Están. que habilita a un sustrato para ser oxidado a expensas de otro. más estrechamente unidas a sus apoenzimas que las coenzimas Figura 13-2. Oxidación de un metabolita catalizado por deshidroaenacas amaladas Son numerosas las enzimas de esta clase. del inglés. algunas deshidrogenasas pueden usar en forma in- distinta NAD' o NADP". como en la vía extrarnitocondrial de la slntesis de los Acidos grasos y de los estecoides. Este tipo de reacción.Red)-\/D PoFtador (OX. Las deshidrogenasas ligadas al NADP se encuentran característicamente en la síntesis reductora. de modo remarcable la alcohol deshidrogenaca del higado y la gliceraldehido-3-fosfatodeshidrogenasa del músculo esquelktico. AH2 . A diferencia de FMN y FAD'.Oxidación biológica 145 Los mecanismos de oxidacibn y reducciiin de estas enzimas son complejos. Estas deshidrogenasas son especificaspara sus sustratos. Las coenzirnas son reducidas por el sustrato específico de la deshidrogenasa y oxidadas de nuevo por un aceptor de electrones adecuado (figura 13-5). pero a menudo utilizan la misma coenzima o portador de hidrogeno qiie otras deshidrogenasas por ejemplo NAD'. en gencral. También se encuentran como coenzimas de las deshidrogenasas en la vfa de la pentosafosfato. Portador-H2 O DEStIIDROGENASA ESPECIFICA PARA A DESHIDROGENASA ESPECIFICA PARA B LAS DESHIDROGENASAS PUEDEN USAR OXIGENO NO Figura f3-3. tienen la peculiaridad de disociarse libremente y de modo reversible de sus apoenzimas respectivas. las deshidrogenasas ligadas al NAD cataban reacciones de oxidorreducciiin en la vía oxidativa del rnetaboIismo. No se considera que los iones cinc participen en la oxidacibn y reducción. Por lo general. Otras deshidrogenasas dependen de la riboflavina Los grupos flavínicos relacionados con estas deshidrogenasas son semejantes a los FMN y FAD que se presentan en las oxidasas. Los NAD' y NADP' son formados en el cuerpo a partir de la vitamina niacina (figura 5 2 4 ) . la evidencia seaala que la reduccihn del anillo de isoaloxacina se efectúa en dos pasos por la via de una serniquinona (radical libre) intermediaria (figura 13-2). Llevan a cabo dos funciones principales: 1) Transferencia de hidrdgeno de un sustrato a otro en una seaccibn de oxidacihn-reduccibn acoplada (figura 13-3). como sucede durante la fase anaerobia de la gIuchlisis (figura 19-2). Muchas deshidrogenasas dependen de coenzirnas de nicotinamida Muchas deshidrogenasas son especiticas para dinucleótido de adenina y nicotinamida (NAD'.

en las cuales el &romode este metal EzEcl ESPECIFICA PARA 6 Figura 13-5. . Otras deshidrogenasas. de banda5 características de absorción. en cl estado reducido. Oxidacibn de un metabolito por deshidrogenasas y. Mecanismo de oxidación y reduccibnde las coenzimac de nicotinamida Hay estereoespecificidadalrededor de la posicibn 4 de la n~cotinamida cuando es reducida por un sustrato AH2. Los citocromos son hemoproteinas que contienen hierro. como la succinato deshidrogenasa. La mayoría de las deshidrogenasas anaerobias ligadas a la riboflavina están implicadas en el transporte de electrones en (o hacia) la cadena respiratoria (capitulo 14). Los citocromos pueden considerarse también como deshidrogenasas Excepto por la citocromo oxidasa (descrita previamente). debido al bajo potencial redox. 1% cuales desaparecen cn la oxidación. En la cadena respiratoria. El hidrbgeno remanente del par removido del cuctrato se conserva libre como ion hidrbgeno. Uno de los átomos de hidrbgeno es removido del sustrato como un n~icleo de hidrágeno con dos electrones (ion hídndo. H 2 y es transferido a la posicidn 4. de nicotinamida.146 Bio~uiminica de Harper (Capitulo 13) Figura 1 3 4 . la acil-COAdeshidrogenasa y la glicerol-3fosfato deshidrogenasa mitocondrial transfieren equivalentes reductores de manera directa desde el sustrato a la cadena respiratoria (figura 14-4). finalmente. La flavoproteína que transfiere electrones es un transportador intermediario de electrones entre la acil-COA deshidrogenasa y la cadena respiratoria (figura 144). los citocromos están clasificados como deshidrogenasas. En este caso particular. Su identificación y estudio se facilitan por la presencia. la flavoproteína (FAD} actiia como un portador de electrones desde el lipoato reducido al NAUt (figura 19-5). un intermediario en la descarboxilacibn oxidativa del piruvato y el alfa cetoglutarato (figura 14-4). La NADH desbidtogenasa es un miembro de la cadena respiratoria que actliacomo un transportador de electrones entre el NADH y los componentes mhs electropositivos (figura 14-3). Otro papel de las deshidrogenasas dependientes de la flavina es deshidrogenar el lipoato reducido (dihidrolipoil deshidrogenasa). donde puede adherirse en las posiciones A o B de acuerdo a la especificidad determinada por la deshidrogenasa particular que cataliza la reaccidn. por una oxidasa en una cadena respiratoria. intervienen como portadores de electrones desde las flavoproteinas por un lado hasta la citocromo oxidasa por otro (figura 14-4).

Estos dos tipos se encuentran en animales y en vegetales. En la reacción catali~adapor la peroxidasa. lo cual sugiere que puede haber alguna ventaja biológica al agrupar a las enzimas que producen H 2 0 2 con la enzima que la destruye (figura 2 3 4 ) . 1 A 1 En los eritrocito&y otros tejidos. De estos. es capa? de usar una molécula de H20?como sustrato donador de electrones y otra molécula de H202 como oxidante o aceptor de electrones. la actividad peroxidasica de la catalaca parece ser favorecida. que a su vez destruyen membranas y son causa posible de cáncer y aterosclerosis (capítulos 16 y 53 para una descripción y resumen de los mecanismos de defensa contra los radicales librcs). Las enzirnas de este gmpo calalizan la 1 PEROXIOASA 1 A'H. Figura 13-6. En ellos abundan las oxidasas y la catalasa.Oxidación hiolh~ica 147 oscila entre Fe3' y Fe2+durante la oxidación y la reducciirn. el retículo endoplhrnico (citocromo P450 y Bs). Las peroxidasas reducen peróxidos usando varios aceptores de electrones Aunque consideradas originalmente como enzimas vegetales. Ademfis de poseer actividad peroxídfisica. La reacción catalizada por la peroxidasa es compleja. las células vegetales. protegiendo a los Iípidos de la membrana y a la hemoglobina contra la oxidacibn por los peróxidos (capítulo 22). rifiiin e higado. LAS HlDROPEROXlDASAS 'USAN PEROXIDO DE HIDRQGENO U OTRO PERÓXIDO ORGANICO COMO SUSTRATO Dos tipos de enzima entran en esta categoría: las peroxidasas y las catalasas. más bien que m las reacciones que proveen de energía a la dlula. por ejemplo. Los microcuerpos o peroxisomas se encuentran en numerosos tejidos incluyendo el hlgado. CI. Ademhs de las enzimas peroxisomales. que c o n t i e n e selenio c o m o g r u p o prostktico. es decir. a diferencia de la mayoria de las hemoproteinas. . bacterias y levaduras. Las hidraperoxidasas protegen al cuerpo de los peMoxidos nocivos. plaquetas y otros tejidos que intervienen en el metabolismo eicosanoide(capítulo 25). La acumulación de perdxidos pueden conducir a la generación de radicales libres. médula bsea. el cual. pero la reaccibn global es como sigue: LAS OXlGENASAS CATALliAN LA TRANSFERENCIA DIRECTA Y LA INCORPORACI~N DE OX~GENO A UNA MOLÉCULA DE SUSTRATO Las oxigenasas intervienen en la síntesis o la degradacibn de numerosos tipos diferentes de metabolitos. la enzima glutatión peroxidasa. La catalasa utiliza a l peróxido de hidrogeno como donador y como aceptor de electrones La catalasa es una hemoproteína que cantíene cuatro grupos hem. 1CATALASA --A En la mayoría de las condiciones in vivo. las quinonas y el citocromo c. La catalasa se encuenm en sangre. cataliza la destrucción del HzOz y los hidroperbxidos lipidicoc por el glutatibn reducido. Se supone que su funcidn es la desmiccibn del: peróxido de hidrógeno formado por la accibn de las oxidasas. el perdxido de hidrdgeno es reducido a expensas de varias sustancias que actúan como dondores de electrones tales come el ascorbato. Además de la cadena respiratoria. mucosas. El grupo prostético es el protohem. Varios citocromos identificables se encuentran en la cadena respiratoria. las peroxidasas se encuentran en la leche y en leucocitos. los citocromos b. sólo el citocromo c es soluble. c. los sistemas mirocondriales y microsómicos de transporte de electrones asi como la xantina oxidasa se deben considerar como ruentes de H202. Función de la catalasa en la destruccibn de peroxido de hidrogeno. los citocromos se encuentran en otros sitios. a y al (citocromo oxidasa). esta débilmente unido a la apoproteina.

El cianuro (CN-) inhibe e l paso indicado . la btriptófano dioxigenasa (triptbfano pirrolasa) del hígado. morfina y benzotelarnina. los cuales son oxidados a su vez por sustratos en una serie de reacciones NADH Amino oxidasa. se ha atribuido por tanto a la formación de H202. hidroxilasas): incorporan sólo un átomo de oxígeno al sustrato El otro átomo de oxígeno es reducido a agua.148 Bioquimica de Harper (Capítulo 13) incorporacibn del oxigeno a una molécula de sustrato.y 24. Fármaco-H + Oz + 2 ~ e +~2 H t * (P450) Las dioxigenasas: incorporan los dos átomos de oxigeno molecular al sustrato La reacción básica es: F a m i a c o 4 H + HzO + Xe3' (P450) Ejemplos de ese tipo incluyen las enzimas que contienen hierro. la arninopirina. En la corteza suprarrenal.del 25hidroxicolecaIciferoI y el hígado cataliza Ia hidroxilaci6n en 26. el citocromo P450 mitocondrial es seis veces mlis abundante que los citocromos de la cadena respiratoria. etdtem \ / + FlavoPr~telna2 Flavopmteina3 NADPH Flavoproteina~ /l- - CNEstearil-COA desaturasa Cit bs Cit P450 A + Hidraxilaabn Figura 13-7. Tanto el NADH como el NADPH donan equivalentes reductores para la reducci6n de estos citocromos (figura 13-71. los ovario y la placenta e intervienen en la biosíntesis de las hormonas esteroides a partir del colesterol (hidroxilaci6n en CZZ y CZO en la separación de la cadena lateral y en las posiciones 1 1P y 18). recientemente. Entre los f i m a c o s metabolizados por este sistema están el benzopireno. Las monooxigenasas (oxidasas de función mixta. ~~ki*i.Sin embargo. por ejemplo. y las enzimas que utilizan hem como grupo prostktico. Muchos fármacos como el fenobarbital tierieri la capacidad de inducir la formación de enzimas rnicrosOmicas y de citocromo P450. Los sistemas microsómicos de la monooxigenaca del citocromo P450 son importantes para la hidroxilacion de muchos fhrrnacos Estas monooxigenasas se encuentran en los microsomas del higado junto con el citocromo P450 y el LA TOXICIDAD DEL OX~GENO PUEDE DEBERSE AL RADICAL LIBRE SUPERÓXIDO La potencial toxicidad del oxigeno.en la biosíntesis de Acidos biliares. por ejemplo. Hay dos subgrupos de oxigenasas: enzimhticas conocidas ~olectivamente como ciclo de la hidroxilasa (figura 13-8). Los sistemas mitocondriales de la monooxigenasa del citocromo P450 catalizan hidroxilaciones de esteroides Estos sistemas se encuentran en tejidos esteroidogenicos como la corteza suprarrenal. Esto se efectiia en dos etapas: 1) la fijación del oxigeno al sitio activo de la enzima y 2) la reacción en la que el oxígeno unido se reduce o es transferido al sustrato. por lo que es necesario un donador adicional de elecirones o cosustrato. los testlculos. Cadena de transporte de electrones en los microsomas.l. anilina. la facilidad con la que el oxigeno puede ser citocromo bs. Los sistemas renales catalizan las hidroxilaciones la. la homagentisato dioxigenasa (oxidasa) y la 3-hidroxiantranilato dioxigenasa (oxidasa) de la fracción sobrenadante del higado.

Ciclo de 3 a citocromo P450 hidraxilasa en los microsomas El sistema mostrado es tipico de las hidroxilasas de esleroides de la corteza suprarrenal. Se ha propuesto que el RESUMEN 1) En los sistemas biológicos. Bstc dcscubrimiento apoya la hiphtesis dc que la? mitocondrias han evolucionado a partir dc uii procariota que entrb en simbiosis con un protoeucariota. 0 2 ' unido al citocromo f ' 4 5 0 es un intermediario en la activación del oxigenri en las reacciones de hidroxilación (figura 13-8). La enzima citosólica. La runciiin dc Iri superhxidri disinutasa parece ser la de proteger a los microurganismos aerobios contra los efectos deletéreos potenciales del siiperoxído. Se origina superóxido cuando las flavinas reducidas -por eiernplo. La enzima se encuentra en varios cornpartimicntos difer~ntes de la célula. en tanio rlue la enzima mitocondrial contiene Mn". por ejemplo. la exposición prolongada ocasiona daRn puIrnonar y muerte. La dismutasaesta presentc cn todos los principales te-jidos acrvhios. como en los qziímicos.son reoxidadas de modo univalente por el oxigeno molecular. particularniente en loc pulmones. Figura 13-8. La citocromo P450 hidroxrlasa microsórnica del higado no requiere de la sulfoproteina ferrica Fe2S2 El rnonoxido de carbono (CO) rnhibe el paso indicado rcdiicido en los te-jidos al radical superóxido libre (Oz5} y la existencia de una supcróxido dismutasa en los rnicroorganisrnns acrobios (aiinque no en los aiiaerobios obligados) ha sugerido que latoxicidad del oxigcnri cs dcbida a su conversibn e n superóxidn. los efectos quimicos cn los tejidos son amplificados por las reacciones de las cadenas con i-ndicalcs libres (capítulo 16). el alfa tocoferol (vitamina E). presentes en la xantina deshidrogenasa. Los antioxidantes.. por lo que es similar a la enzima que se encuentra en la bacteria. actúan como recolectorcs d e radicales Iibrcs y reducen la toxicidad del oxígeno (capitulo 53).NADPH t H' r A-OH o. la oxidacihn (perdida de electrones) . Si bien la exposición de los animales a una atmbsfera de 100% de O2 causa un incremento adaptativo de la enzima. En esta ieaccicín el super6xido actúa como oxfdantc y como reductor. está compuesta de do?subunidades similares que contienen cada una un equivalente de Cu" y Zn2'. El superoxido puede reducir cl citocromo c oxidado 0 2 ' + Cit c ( ~ e ~4 ' )0 2 + Cit c (Fe2+) o ser eliminado por la prcsencia de la enzima especifica superhxido dismutasa.

mientras que las oxigenasas realizan la hidroxilaci6n de medicamentos. FASEB J 1992. In: Mernbrane Strucfure and Function Vol. Acadcmic Press. 1984 Yang CS.50: E 33.La enzima específica super6xido dismutasa protege a los tejidos del superóxido.: Cytochromc P450: Progress and predictions. I REFERENCIAS Ronnett R: Oxygen activation and tetrapyrroles. 1992. Essays Biochem 1981:17:1. Packer L (editors): Biological oxidaiions. Brrdy JF. 1984. Tyler DD: The Mitochondrion in Health and Disease YCH Puhlishers. deshidrogenasas. Biomcmbranes. 1984. 2) Las oxidorreductasas se clasifican en cuatro grupos: oxidasas. 3) Oxidasas y deshidrogenasas tienen diversas funciones en el metabolismo. V o l . 4) Las hidroperoxidasas protegen al cuerpo contra Iesion por radicales libres. cytochrome P450. Tolbert NE: Metabolic pathways in peroxisomes and glyoxysomes Annu Rcv Biochem 198 1.44:147.6:669 Ernster L (editor): Bioenergeticx Elsevier. Coon MJ et al. and uther hemoprotcin systerns. 5 Hittar EE (editor) Wiley. 5 2 .1SO Rioquimica de Harper (Capilulo 13) se acompafia siempre con la reduccibn de un aceptor de electrones. hidroperoxidasas y oxigenasas. part C. 1978. I3iological Supply Company. aunque las dos clases de enzimas desempeiian actividades importantes en la respiración. Nicbolls DG: Cylochromes and Cell Respzraiion Carolina microsomal. Tyler DD. In: Methods in E~izyrnology.xenohiotic metabolism. and toxicity. Fleischer S. Sutdon CM: Respiratoy cnzyme systerns in milochondrial mcmbranes. Annu Rev Biochcm 1975. Hong SY: Dietary effects on cytochromes M50. FASEB J 1992:6:737 . 5) La toxicidad del oxígeno puede ser causada por el radical libre super~xido. Friedovich 1: Superoxide dismutases.

Ida 3-hidroxibutirato deshidrogenasa se fija t a m b i h en eI lado de la matriz de la membrana interna. La teoría quimiosmóiics ofrece una perspectiva de la forma en que esto ocurre. amobarbital). En el espacio intermembrana se encuentran adenilil cinasa y creatina cinasa. LA CADENA RESRlRATORlA COLECTA Y OXIDA EQUIVALENTES REDUCTORES Toda la energia útil liberada durante la oxidacidn de ácidos grasos. acil-COA sintetasa. y venenos (por ejemplo.Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Peter A. aminoheidos y virtualmente toda la que proviene de la oxidaci6n de los carbohidratos se vuelve disponible dentro de las rnitocondrias en forma de equivalentes reductores (-H o electrones). inhiben la fosforilación oxidativa. donde transporta equivalentes reducidos por las enzimas de la cadena respiratoria. en pliegues o crestas y una matriz dentro de la membrana intema (figura 14-1). La glicerol3 -fosfato deshidrogenasa se encuentra en la superficie exterior de la membrana interna. Los pacientes presentan miopatia. Se han informado diversos defectos rnitocondriales hereditarios que comprenden componentes de la cadena respiratoria y de la fosforilación oxidativa. puesto que es dentro de este organelo en donde se captura la mayor parte de la energia derivada de la oxidacihn respiratoria. Tambikn está en las mitocondrias la maquinaria que atrapa la ener- ENZIMAS ESPEC~FICAS ACTÚAN COMO MARCADORES DE LOS COMPARTIMIENTOS SEPARADOS POR tAS MEMBRANAS MITOCONDRIALES Las mitocondrias tienen una membrana externa permeable a la mayor parte de rnetabolitos. La membrana externa puede removerse por tratamiento con digitonina y se caracteriza por la presencia de monoamino oxidasa. DSc La mitocondria ha sido llamada apropiadamente. La succinato deshidrogenasa se ubica en la superficie interior de la membrana interna. Las enzimas solubles del ciclo del icido citrico y las enzimas de la beta oxidación de Acidos grasos se Iocal izan en la matriz. PhD. glicerofosfato aciltransferasa y fosfolipasa Az. por lo general con consecuencias letales. El sistema de las rnitocondrias donde la respiración se acopla para la generacion del Intermedio de alta energía. una membrana interna con permeabilidad selectiva y moldeada . lugar adecuado para participar en la lanzadera de glicerofosfato(figura 14-1 S). ATP. Mayes. la "casa de fuerza" de la célula. Las mitocondrias contienen la serie de cataliadores conocidos como la cadena respiratoria que colectan y transportan equivalentes reductores y los dirigen a su reacción final con el oxígeno para formar agua. cncefalopatia y con frecuencia presentan lactacidosis. cianuro y monbxido de carbono}. se denomina fosforilaci6n oxidativa. El fosfolipido cardioiipina se concentra en la membrana intema. siendo estas ultimas los constituyentes principales de la membrana interna. requ irikndose mechnisrnos para el transporte de metabolitos y nucleótidos a travds de la membrana intema. La fosforilaci6n oxidativa capacita a los organismos aerobios para aprovechar la energía libre disponible de sustratos respiratorios en una proporción mucho mayor que los organismos anaerobios. Cierto número de medicamentos (por ejemplo.

Funcibn de la cadena respiratoria mitocondrialen la conversión de energia de los alimentos a ATP La oxidación de los nutrientes principales genera equivalentes reductores (2H) que son capturados por la cadena respiratoria para la oxidac16ny formación acoplada de ATP . Estas interrelaciones se muestran en la figura 14-2. Éstas también contienen los sistemas enzimiiticos responsables de la producción de la mayor parte de los equivalente? reductores en primer lugar..--\ ATP t 4 - $ h Glucosa. las enzimas de la beta oxidación y del ciclo del acido citrico. ' I I I MITOCONDRION I ADP l I I Fuentes extramitouindrialesde equivalentes reductores Figura 14-2. donde las subunidades fosforilantea estan en el lado externo.MATRIZ Particula submitocondrial formada por fragmentos de membrana interna Figura 14-1.. A Glicerol .. ALIMENTO Lipidos - Carbohidratos .. Este último es la via mctabólica final corniin para E a oxidacion de todos !os alimentos principales. es decir. gi'a libre producida como fosfato de alta energia.. beta-Oxidacibn \ --.etc Acetil-COA :o / .1 1 bcidos grasos + 2 P O E . Estructura de las membranas mitocondriales Las partículas submitocondrialesestán "al revés" y permiten el estudio del sistema encerrado en la membrana.

1 voltios dcl NAD'/NAUH al 0?/2Hz0 (cuadro 1 3-1). En aAos recientes se ha aclarado que se encuentra otro poriador adicional en la cadena respiratoria que une las flavoproteinas con ei citocromo h. el cual esta relacionado con las flavoproteinas (metaloflavoproteínas) (figura 1 4 4 ) y con el citocromo h. hasta el oxigeno molecular. También es semejante a la plastoquinona que se encuentra en los cloroplastos. Transporte de equivalentes reductores a traves de la cadena respiratoria. prolina. se encuentra unida con firmeza a la cadena respiratoria y pasa equivalentes reductores a Q. dimetilglicina y acil-COA (figura 1 4 4 ) . citocromos. Se cree que el azufre y el hierro intervienen en el mecanismo de oxidorreducción entre la flavina y la coenzima Q. sarcosina. las e n z i m a deshidrogenasas catali~an la transferencia de electrones desde los sustratos hasta el NAD de la cadena. Esta e n ~ i m contiene a FeS y F M N .Cadena respiratoria y fosforilacih~l oxidutrvu 153 Los componentes de la cadena respiratoria están colocados por orden creciente de su potencial redox Los componentes principales de la cadena respiratoria se muestran en la figura 1 4-3. al parecer se acoplan directamente con el NAD de la cadena respiratoria. La transferencia de electrones de otras deshidrogenasas como las de L (+)-2-hidroxiacil-COA. No todos los sustratos esthn ligados a la cadena respiratoria a través de deshidrogenasas específicasde N AD: algunos. figura 14-51. Un componente adicional que se encuentra en las preparaciones de la cadena respiratoria es Ia proteína fierrosulfurada (FeS: hierro no himico). (citocromo oxidasa) es el responsable de la combinacibn final de los equivalentes reductores con el oxigeno rnolecular. flavoproteinas. existe en las miiocondrias en fuma de quinona oxidada en condiciones acrobias y en la forma de quinol reducido en condiciones anaerobias. Existen varias diferencias en la manera como esto se IIeva a cabo. El NADH reducido de la cadena respiratoria es a su vez oxidado por la enzima metaloflavoproteinica NADH deshidrogenasa. La Q es tambikn el punto de acopio en la cadena respiratoria para los equivalentes reductores derivados de otras sustancias que estan unidas directamente a la cadena respiratoria a través de las flavoproteína deshidrogenasas. Estos sustratos son succinato. las cuales a su vez esthn ligadas a los citocromos de Ia cadena respiratoria (figura 1 4 4 ) . esthn ligados directamente a las deshidrogenasas flavoproteinicas. Los citocromos están arreglados en orden creciente de su potencial redox. colina. esto es compatible con Q actuando sobre un coinponente mhvil de la cadena respiratoria que recoge cquival entes reductores fijados a los complejos de flavoproteinas y los pasa a los citocromos. hasta llegar aI oxigeno molecular. el miembro de la cadena de citocromos de mBs bajo potencial redox Esta sustancia. un compo' A NADH 2Fs2' %O* Figura 1 4 3 . Se observa que este sistema de enzima contiene cobre. cuadro 13-1 ). que incluye el cambio de un sor0 e-. D (-)-3-hidroxibutirato. glicerol 3-fosfato. Todas estas sustancias se caracterizan por la posesi~nde una cadena lateral poli-isoprenoide. Los alfa cetohcidos pirúvico y cetoglutarico tienen sistemas compIejos de deshidrogenasas que implican al lipoato y al FAD antes de1 paso de electrones al NAD de la cadena respiratoria. a traves de una expansión redox de 1. el atomo de hierro experimenta oxidorreduccibn entre Fe2' y Fe3 . En la terminal electronegativa de la cadena. Los electrones o el hidrogeno fluyen a travÉs de la cadena de manera escalonada desde los componentes más electronegativos al oxigeno mas electropositivo. Los electrones fluyen desde Q a través de la serie de citocromos que se muestra en la figura 14-4. malato e isocitrato. Ida cadena resuiratoria de las rnitocondrias está formada por cierto número de portadores redox que va desde los sistemas de deshidrogenasa unidos aNAD. La coenzima Q tiene una estructura muy semejante a la de las vitaminas K y E (capitulo 53). El citocromo terminal ua. En las mitocondrias hay un gran exceso estequiométrico de Q coinparado con otros miembros de la cadena respiratoria. furnaratolsuccinato. que ha sido IIamada uhiquinana o Q (cwnzima Q. debido a que sus potenciales rcdox ron mhs positivos (por ejemplo. . La coenzima Q es un constituyente de los Iípidos mitocondriales. glutamato. El componente flavina de todas estas deshidrogenasas parece ser el FAD. El punto de vista actual acerca de los componentes principales de la cadena respiratoria se muestra en la figura 1 4 4 . siendo los otros lipidos predominantemente fosfolipidos que conslituyen parte de la membrana rnitocondrial.

los componentes de la cadena respiratoria se encuentran en la membrana interna de la mitocondria corno cuatro complejos de la cadena respiratoria proteína-llpido que se extienden en la membrana. Componentes de la cadena respiratoria en las mitomndrias mostrando las puntos de reunibn para las equivalentes reductores a partir de los sustratos importantes. Dado que &sta es una reaccidn irreversible (la única en la cadena). es decir.Prolina 3-Hidr~~ia~il-Cd 3-Hidroxibutirato Glutamato Malato Piruvato Succinato Colina Isocitrato FP (FAW FeC i Cit b FeS --t Cit CI - Cit c Cit aa3 Cu FP (FAD) ' FP (FTE) FP FAD) t Acil-COA Saruisina Dimetilgliuna t FTE Flavoproteina transferida de electrones Fp Flavoproteína Q Ubiquinona Cd citocromo Flgura 1 4 4 . lo cual permite que la cadena respiratoria funcione a velocidad mkirna hasta que virtualmente se ha agotado el oxigeno en el tejido. Asi. le imparte dirección al movimiento de los equivalentes reductores en la cadena respiratoria y a la producción del ATP a la que está acoplada. . algo de la energia libre resultante de los procesos catabblicos y que corno ATP pasa esta energia para impulsar aquellos procesos que la requieren. FeS ocurre en la secuencia del lado del 0 2 de Fp o de Cit b nente dc algunas oxidasas. Forma totalmente oxldada o quinbnica Forma semiquindnica (radical libre) Forma reducida e qulndllca (hidroquinona) Figura 14-5. El citocromo c es el unico citocrom~ soluble y al igual que Q. La citocromo oxidasa tiene una afinidad muy elevada por el oxigeno. LA CADENA RESPIRATORIA APORTA LA MAYOR PARTE DE LA ENERGIA OBTENIDA DEL METABOLISMO El ADP es una molécula que captura. QIO. parece ser el componente m i s mbvil de la cadena respiratoria que conecta a los complejos fijados (figuras 14-7 Y 14-10). en forma de fosfato de alta energia. De importancia es el descubrimiento de proporciones molares casi constantes entre los componentes. Funcional y estructuralmente. n = número de unidades isoprenoides el cual es 10 veces mayor en animales. el ATP ha sida llamado la "liqujdez" energética de la cdlula (figura 12-7). Estructura de la ubiqulnona (0). La organizacibn estructural de la cadena respiratoria ha sido un tema de considerable especulaci6n.

Pr. wrnplejo I .2 kJlmol de gfucosa. Crs. más las fosforilaciones al nivel del sustrato. Por otro lado. es decir. revela que cuando los sustratos son oxidados por la r í a de las deshidrogenasas ligadas al NAD y la cadena respiratoria. Los sitios que al parecer apoyan a la fosforilación estan indicados. el cual se obtuvo a partir de una concentracibn estándar de 1. NAOH ubiquinona oxidorreductasa. apoproteina. Debido a que un m01 de glucosa genera aproximadamente 2780 kJ en la combustibn completa. residuo de cisteina. . la via final para la oxidacibn completa de la glucosa. el AG para la síntesis de ATP a partir de ADP se ha calculado que es de aproximadamente 5 1. drnercaprol: T F A es un agente quelante del hierro. cuando un susirato es oxidado por la vía de una deshidrogenasa Iigada a flavoproteína. la conversi6n de succinil-COA en succinato. tomando en cuenta que este valor es a partir de las concentraciones actuales de los reactivos presentes en la cilula. se incorporan 3 mol de fosfato inorgáslico al ADP para formar 3 m01 de ATP por medio mol de O2consumido. Todas las fosforilaciones descritas hasta ahora ocurren al nivel del sustrato. Las reacciones del ciclo del ácido cítrico. azufre lábil a los hudos. s61e se forman dos moléculas de ATP. lo cual permite la captura de dos fosfatos de alta energía m& por m01 de glucosa. Ésta es mayor que el AGQ'para la hidrolisis de ATP como se muestra en el cuadro 12-1. compuestos qulmieos y antibidtieds especlfims. ubiquinol~ferricitocromo c oxidorreductasa. BAL. P:O = 2.(ln vivo. Sitios propuestos de inhibiUbnOds la cadena respiratoriapor medicamentos. es posible ahora das cuenta de al menos 68% de la energía libre que resulta de la combustión de glucosa. capturada en la forma de fosfato de alta energia.6 kJ/mol. complejo III. incluyen s61o un paso de fosforilaci6n. ferrocitocromo:oxigeno oxidorreductasa. sucunato:ubiquinona oxidorreductasa. Tomando en consideración las deshidroger&iones en la r í a del catabolismo de la glucosa. Es evidente que la cadena respiratoria es responsable de una proporclbn importante del total de ATT formado. Maloneto Complejo II Suocinato TTFA BAL Antimiuna A H2S CO Complejo IV Complejo r -I FMN. FeS De=coliladores 4 1 Piencidina A ArnobarbAl Rotenona I esac copla dar es ADP + PI ATP ADP . es decir. Las demhs abreviaturas son iguales a tas de la figura 1 4 4 . Hay una capturaneta de dos grupos fosfato de alta energia en las reacciones glucoliticas (cuadro 19-1) que equivalen aproximadamente a 103. Estas reacciones se conocen como fosforilacidn oxidativa al nivel de la cadena respiratoria.Cadena resprratoriay f~~forilacrón oxidativa 1j5 Gis \ Pr Figura 14%. complejo II. la energia capturada por fosforilación en la glucólisis es insignificante. mmplejo IV. El complejo hierro-azufre-proteína (Fe&) @. tanto en la gludlisis como en el ciclo de! &ido cftrico.0 mol/L). Algunas proteínas fierrosulfuradas contienen dos Btornos de azufre y de hierro (FezS2). E[ examen de las mitocondrias intactas respirando. la relacibn P:O = 3 (figura 14-7). PI T+ Oligomlcina ATP ADP I PI 4 ATP Flgura 14-7.

indicando que la oligomicina no actua directamente en la cadena respiratoria. ineficaz y sin control como en muc2ios procesos no biológicos. en tanto que el malonato es un ínhibidor competitivo de la succinato dcshidrogenasa.criptivos se pueden dividir en inhibidores dc la propia cadena respiratoria. a la inversa. - - Condic iones que limitan la velocidad de res. son rnortaPcs in vivo. eficaz (apmximadamcnte 68%) y conirolada.plración -- - . que es un insecticida y veneno de Deces. En el animal dc sangre calientc contribuye a la conservación de la temperatura corporal. Sin embargo. A una dosis suficiente. en lugar de explosiva. lo cual a su vez reabastece el depósito de A'I'P (figura 1 4 4 ) . se convierta en el limiiante de la velocidad.I " 1 Dispcinihildad de ADP solamca idad de ox Ipcnci solarnente - . Los venenos cl6sicos &S.El control respiratorio asegura un suministro constante de ATP La velocidad de recpimci6n de las mitocondrias se puede controlar por la concentración de ADP. NUMEROSOS VENENOS INHIBEN LA CADENA RESPIRATORIA Mucha de la infot-rnaciiin de la cadena respiratoria ha sido obtenida por el uso de inhibidores y. saturaci6r. la oxidación procede sin fosforilacibn. el A'l'P es convertido en ADP. 1. Conforme la frcciiencia respiratoria aumenta (como con el e. sino en un paso subsecuente de la fosforilaci6n (figura 14-9). es escalonada. cs decir. El antibihiíco oiigomicina bloquea completamente laoxidación y la fosforilación en I& rnitocrindrias intactas. en presencia del desacoplante dinitrofennl." III'~~JL.ya no limita la velocidad de la -y' y ? $ ' . bloLos inhibidores que detienen la re~piración queando la cadena respiratoria parecen actuar en tres sitios. Esto se debe a íluc !a oxidacihn y la fosforilacibn están íntimamente nc. cuantlo to dos los susiratus y componen les esthn psect>ntesen cantidades de. Cuando se efectúa trabajo. rnonóxida de carbono y cianuro inhiben a la citocromo oxidasa. inhibidores de la fcisforilacihn oxidativa y desacoplantes de la misma. pemitiendo que ociirra m i s respiración. Pareceria que eii ciertas condiciones la concentmcibn de fosfato iiiorgánico podria afectar tambiCn la velocidad de funcionamicnto de la cadena respiratoria. Chance y Williams han definido cinco condiciones que pueden controlar la velocidad dc respiraciOn en las mitocondrias (cuadro 14-1 ). dado que asegura que cl sistema respiratorio como iin todo sea suficientcrnente exerghico para alejarse del equilibrici y permite un flujo unidireccional cotitiriuo y una provisión constante de ATP. a ripacidad de la cadena respiralorra misniii. Estos inliibidores evitan la oxidación dc los sustratos que coinunican directamente con la cadena respiratoria por la via dc una desliidr-ugeilasa ligada al NAD al bloquear la transferencia de FeS a Q. Así. El primero es inhibido por los harbitíiricris como el amobarhital. Se considera que inhibe al portador de ADP en la mitocondria y el ATP fuera de ella (figura 14-1 2).3 energía libre remanente. que no es capturada como fnsfato de alta energía se libera en forma de calor.IIILJJ LLU(IU IIC I XIII' Y ~11StTüiv auiniii~iite r - Dispcinihil idud de su! - - Estado 3 1 [ . Con propósitos der. la oxidaciiin no puede proceder por la vía de la cadena respiratoria sin la fo~forilacion ~oncornitantc del ADP. Esta i~ecesidadno debe considerarse coma "despilfarro". esto ha aportado in Cormación sobrc el mecanismo de acción de algunos venenos. sicndo larespimcion controlada por la disponibilidad del ADP. EI atractilásido inhibe la fosforilaci~n oxidativa. la célula se aproxima al estado 3 o al 4 ya sea que la capacidad de la cadena respiratoria sc satura o la PO2 decrece a valores menores del Km para el citocromo 01..-. Esto da por resultado una respiracion no controlada. que tjcilita la entrada de ADP citosólico a la mitocondria. En general. El dimercaprol y la antimicina A inhiben la cadena respiratoria entrc el citrocromo h y el citocromo c. la manera en que lo? procesos oxidativos hiol6gicoc permiten que !a energía libre que resulta dc la oxidacicihn de los alimentos se vuelva disponible y sca capturada. La acción de los desacoplantes consiste en separar la oxidacibn de la fasforilaciiin en la cadena respiratoria y esta accibn puede explicar la toxicidad de estos compuestos i n vivo. porcl antibiótico piericidina A y por la rotenona. La carhoxina y el TTFA inhiben especificamente la transferencia de equivalentes reductores d e la succinato dcshidrogenasa a Q . Este lugar dc accion propuesto se muestra en la figura 14-7. la cual depende del transporte de nuclebtidos de adenina a t r a v h de la membrana interna de la mitocondria. puesto que E a concentracihn de ABP o P.iercicio). -- Cuadro Lados de control riiq?iratorio -. la mayor parte de las células en estado de repriso se encuentran en el cstado 4. 'También existe la posibilidad de que el transportador de ADPIATP (figura 14-2).opladas. -.

el pentaclorofenol y la CCCP (m-clorocarbonilcianuro fknilhidrazona). Cuando el ADP exdgeno ha sido fosforilado a ATP. Funcion del ADP en el control respiratorio. la cual es acelerada por la adiubn de ADP. No obstante. la membrana interna. distribución a~imétrica FI'j se emplea para dirigir el mecanismo responsable de la formacibn de ATP (figura 14-1 O ) . La adición de un desacoplante separa nuevamente a la recpiractbn de ia fosforilaubn La teorla quimiasmática de Mitchell postula que la energía de la oxidación de componentes en la cadena respiratoria genera iones hidrógeno que son expulsados al exterior de una membrana acopladora en la mitocondria. LA TEOR~A QUIMIOSM~TICA EXPLICA EL MECANISMO DE LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA Se han emitido dos hipotesis principales tanto quirnica como quimiosm6tica para explicar el acoplamiento dc la oxidacion y la fosforilación. creando una diferencia de potencial electroquímico a travds de la membrana ( A ~ H + )Esta . El experimento A mllestra la situacibn básica de la respiraudn en el estado 4. III y 1V (figuras 14-7 y 14-10) actúan como una bomba de protones. pero en la actualidad se calcula que el complejo . respiración.Cadena res~iraforia Y fo. La diferencia de potencial electroquímico que resulta de la de iones hidrógeno (protoncs. La membrana interna es en general impermeable a iones. la respiración regresa al estado 4. separa a la respiracidn de la fosforilacibn. nunca lograron aislarse intermedios ricos en energíaque enlaman oxidación con fosforilacibn y la hipotesis se desacreditb. dinitrofenol. ADP Estado 4 1 La cadena respiratoria es una bomba de protones Desacoplamiento 1 1 2 3 Minutos 4 5 Figura 14-9. es cerca de 100 veces mBs activo. La hiphtesis quimica postula el acoplamiento químico directo en todas las etapas del proceso.4-dinitrofenol. comparado con el dfnitrorenol. pero en particular a protones. diferencia consiste en un potencial químico (diferencia de pH) y un potencial elkcbico. incluso al dinitrocresol. La adicrón de un desacoplante.sforiiación oxidatrva 157 Figura 14-8. que se acumulan fuera de la membrana. En el experimento E S . como en las reacciones que generan ATP en la gtucblisis. El desacoplador que ha sido usado mis frecuentemente es el 2. Este último compuesto. pero otros compuestos actúan de una manera semejante. la adicibn de oligomicina bloquea la fosforilacibn del ADP aAadido y por tanto tambibn a la respirac16n.No se conoce con certeza el numero preciso de protones bombeados por cada NADH oxidado. por ejemplo. es decir. Control respiratorio en las mitocondrias. Cada uno de los complejos de la cadena respiratoria 1.

el gradiente electroquimico de protones.Membrana acopladora Oligommcina Ubiquinona Citocromo c EXTERIOR + (APH) Figura 14-10. 3. El mecanismo de acoplamiento de la expulsibn de protones al sistema de la ATP sintasa es una conjetura de la Ripdtesic. Las subunidades están adheridas. esto es. pero en sentido inverso en los cloroplastos. Es significativo que el gradiente de protones es de fuera hacia dentro en mitocondrias y bacterias. colapsando asi. Así. a una subunidad protetnica de la membrana conocida como Fo. conducida por los complejos 1. no es el paso principal que requiere energja. la cual se proy ecta hacia la matriz y contiene a la A V sincasa (figura 14-1 0). Específicamente la oiigcrmicina bloquea la conduccidn de H* a través d e Fo el complejo IV. En esta accibnpodrian intervenir cambios de confomaci6n de la subunidad FI. Los estudios sugieren que la sintesis de ATP. II y 1 V de la cadena respiratoria. no hay intermediario de alta energta común para la oxidacion y la fosforilación como en la hipbtesis química. Los protones pasan a travks del complejo FOa F 1con formación de ATP a partir de ADP y P. el complejo I I I . por ejemplo. Por simplificacibn. la cual puede tener lugar mientras se encuentra pegado a la enzima. se continuarhn utilimdo en este texto un vaior de 3 para la oxidacibn del NADH + H ' y de 2 para la oxidacidn del FADH2. la relacibn P:O puede no ser un enterocabal. + ADP forma ATP (figura 14-1 0).5. que es probable se extienda a travks de la membrana (figura 14-10}. . Esparcidas en la superficie de la membrana interna están los complejos fosforilantes responsables de laproduccibn de ATP (figura 14-1). Principios de la teoria quimiosmótica de la fosforitacrbn oxidativa El circuito protbnico principal es creado por el acoplamiento de la oxidacibn a la expulsibn de protones del interior al exterior de la membrana. Estos constan de varias subunidades de protehas que se conocen en conjunto como la subunidad F. sino más bien la liberacibn del ATP del sitio activo. cada uno de los cuales actúa como una bomba de protones.. pero es posible que sea 2.En la figura 14-1 1 se muestra un mecanismo posible para el bombeo de protones por el complejo 911.2. Es interesante observar que unidades fosforilantes similares se encuentran en el interior de la membrana plasrnitica de las bacterias. el ciclo Q. 1expulsa 3 a4. Por tanto.. posiblemente mediante un tallo. Subunidades F i y Fo de la proteina las cuales utilizan energfa de la gradiente de protones para promover la fosforilación Los agentes desacoplantes como el dinitrofenol permiten la fuga de iones H' a travbs de la membrana. 4 y Una ATP sintasa localizada en la membrana forma ATP La diferencia de potencial electroquimico se usa para impulsar a una ATP sintasa localizada en la membrana la cual en presencia de P. asi como en el exterior de la membrana de los tilamides en los cloroplastos.

. Debe haber una membrana cerrada para obtener fosforilacidn oxidativa (figura 14-1 0). Ciclo "Q" generador de protones. en tanto que. La teoria quimiosmótica explica la existencia de sistemas transportadores de intercambio mitocondrial Estos sistemas son una consecuencia de la membrana acoplada que debe ser impermeable a los protones y otros iones para conservar el gradiente electroquimico (vkase adelante). Los hallazgos experimentales respaldan la teoria quirniosmótica 1) La adicidn de protones (gcido) al medio extemo de mitocondriasconduce a la generación de ATP. 3) La cadena respiratoria contiene componentes organizados lateralmente (asimetríatransversal) como los requiere la teoria quimiosm6tica. LA IMPERMEABILIDAD RELATIVA DE LA MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA NECESITA DE INTERCAMBIO DE TRANSPORTADORES Los sistemas de difusidn para intercambio existen en la membrana para cambiar aniones por iones OH-y . una vez establecida como resultado de la translocacibn de protones. QH2 Y Q son móviles. reduciendo así el potencial electroquímico y el corto circuito de la ATP Por tanta. son mfiphticos (capitulo 16) e incrementan la permeabilidad de las mitocondrias a los protones (figura 14-10). La teoría quimiosmótica explica la acción de los desacopladores compuestos ( ~ o r e j e m ~ ldinitrofenol) o. La figura muestra corno los componentes del complejo III están organizados como bomba de protones. 2) La fosforilaci6n oxidativa no ocurre en sistemas solubles donde no existe la posibilidad de una ATP sintasa vectorial. La teoria quimiosrnótica puede explicar el fenómeno de control respiratorio La diferencia de potencial electroqulmica a travts de la membrana. la procede focforilacibn.Cadena resprratnriay JosforilaciOn oxidufrva 159 Figura 44-41. El QH' se anda a cada lado de la membrana a una proteína fijadora de Q. Los citocromos se muestran como b y ci. Esto a su vez depende de la disponibilidad de ADP y P. inhibe el transporte posterior de equivalentes reductores a travks de la cadena respiratoria a menos que se descargue por una translocación retrógrada de protones a traves de la membrana hacia la ATP sintasa vectorial.

El simportador H+IP. Los iicidos grasos de cadena larga son transportados al interior de la mitocondria por el sistema de la ornitina (figura 24-1) y existe también un transportador para piruvato que comprende un "simport" que utiliza el gradiente de t i ' del exterior al interior d e la mitacondria (figura 14-12). ~ o medio r de mecanisinos d c intercambio re conserva el equilibrio osmiitico. Se cree que Membrana interna de EXTERIOR la mitouindria INTERIOR los ácidos sin disociar o m& liposoluhles son la especie molecular que atraviesa mejor la membrana lipoide.(CapituloId) cationes por iones H'. C02 y NHI y a acidos monocarboxilicos. Carnbinacibn del transportador de fosfatosm con el transportador del nuclebtido de adeninacg en la sintesis del ATP. Se piensa que la captación activa de Caz' por las mitocondrias ocurre con transferencia de una carga neta con valor de 1 (Ca' "uniport"). como 3-hidroxibutírico. El transportador de alfa cetoglutarato tambikn necesita intercambio con malato. el cual atraviesa con facilidad como ion HzP04-enintercambio por OH-. Dcbe apreciarse que el transporte de citrato a traves de la membrana mitocondrial depende no solo del transporte de malato sino tambien dcl intercambio de fosfato inorgánico. El Na' puede intercambiarse por H'. Sin embargo. como oxígeno. agua.a liberacion de calcio de las mitocondrias es facilitada por el intercambio con Na' . EXTERIOR Membrana interna de la INTERIOR mitoccndria Figura 14-12. Netilmaleimida. acetoacético y acético. Sistemas transportadores en la membrana mitocondrial Transportador de fosfato @ Sirnportador de piruvato @Transportador de dicarboxilato. L a membrana mitocondrial bilipoide interior es totalmente pemeable a moléculas pequefias sin carga. Estos sistemas son necesarios para la captación y excreción de metabolitos ionizados en tanto se conserva la neutralidad eldctricn y osrnbtica. TambiBn existen (pero aqui no se muestran) sistemas transportadorespara glutarnatolaspartato (fgura 14-1 5)-glutamina. hidroxicinarnato y atratilbsrfo inhiben los sistemas indicados. La captacibn neta de malato por el transportador de dicarboxilato requiere fosfato inorghnico para intercambiar10 en direccion opuesta. Tres o posiblemente cuatro protones penetran a la mitocondriapor cada ATP que sale. si. ]. El transporte de aniones dicarboxílicos y tricarboxilicos se relaciona de manera estrecha con el fosfato inorgánico. ( @ Transportadorde nudeótido de adenina. aniones diwboxilato y trimboxilato y amino8cidosrequieren un transportador especifico o sistemas de transportadores para facilitar su paso a rravks de la membrana. Esto es esencial para dejar salir al ATP de las mitocondrias hacia los sitios de su utilización exn-arnitocondrial y permitir el regreso del ADP para la produccibn de ATP denm de la rnitocondria (figura 14-13). los ácidos monocarboxílicos penetran con mAs facilidad debido asu menor disociacibn. aminoácidos neutros y carnitina (figura 24-1) 8 ($2 Figura 14-13. cori ayuda del gradiente de protones.(a Transpertador de tricarboxilato. El transportador de nucleiitidos de adenina permite el intercambio de ATP y ADP. Sin embargo. . La captacion neta de citrato. es equivalente si antiportador PJOH que se observa en la figura 14-12. pero no AMP.penetra un protbn menos cuando el ATP es usado en el interior de la mitocondria. Transportador de alfa cetoglutarato. isocitrato o cisaconitato por el transportador de tricarhxilato requiere malato en intercambio. ornitina. quizá a traves de un antiport Ca2'/H'. Al parecer.

Eri presencia de valinomicina y nigericina. En la figura 1 4-1 5 se muestra el sistema lanzadera del malato. como glutamñto deshidrogenasa e hidroxilasa. De hecho.os ionóforos reciben ese nombre por su capacidad para fonnar compIc. ligados por deshidrogenasas apropiadas. La com- Una transhidrogenasa traslocadora de protones es fuente del NADPH intramitocondrial Esta trarishidrogenasri ligada a energía. . Debe advertirse que la enzima mitocondrial se enlaza a la cadena respiratoria a travCs de una flavoproteina en lugar de N A D y que en lugar de tres. Al parecer actua como un amortiguador redox ligado a energía y como fuente de N A D P H para la? enzimas intramitocondriales. músculo cardiaco) muestran deficiencia de glic~rol3-fosfato deshidrogenasa. El mecanisrnv de transferencia que utili7a la lanzadera d e glicerofosfato se muestra en la figura 14-14. La nigericina actúa también como un ionhforo para K' pero en iiiicrcambio por HA. tejido adiposo oscuro y cn cI miiscrilo blanco y podrta ser importante en el hígado. que intervienen en la slntcsis de esteroides.jidos (por ejemplo. cerebro. que iin sistcma de trancporte que implica al malato y al malato citos6lico y mitocondrial es de mayor utilidad universal. Por tanto. se acopla al paso de protones corriente abajo del gradiente electroqiifmico del exterior al interior de la mitocondria con transferencia de hidrhgeno del NADI-1 intramitocondrial para formar NADPH. Sin embargo. que es una prciteina de la membrana mitocondrial interna. Un qiernplo es el antibiótico valinomicina.jos con cationes específicos y facilitar su transporte a través de membranas biológicas. En algunas cspccics. Estos iinplican la transferencia de equivalentes rediictores a travis dc la membrana rnitocondrial por la vía de los parcs dc sustratos. Es necesario que se encuentre la deshidrogenasa especifica en ambos Iados de la mern brana mitocondrial. Figura 14-14. tanto cl potcnc~aldc niembrana como el gradiente dc pll desaparecen y por tanto. es producido continuamente en el cftosol por la 3-tos~oglfceraldehido deshidrogenasa. Lanzadera de glicerofosfato para la transferencra de equivalentes reductores desde el citosol al interior de la mltocondria.Los ionóforos permiten a cationes específicos atravesar membranas [. La oxidacion del NADH extramitocondrial es mediada por lanzaderas de sustrato Aunque el NADH no piicde penetrar la mcnihrana mitocondria1. Se cree. los desacoplantes clásiccis como dinitrorenol son ion6foros de proiones. que le permite atravesar membranas lipoides como Ia rnitocondrial. Aunque esta lanzadera existe en el músculo de las alas de IOF insectos. shlo se fonnan dos moléculas de ATP por átomo de oxígeno consumido. otros ie. que ayuda al paso de K ' a travCs de In niembrana mitocondrial y luego descarga el potencial de mernbrwa*del interior al exterior de la mitocondria. una enzima de la secuencia de la glucólisis (iigtira 19-2). la actividad de la enzima ligada a FAD decrece despues de tiroidectomia y aumenta después de la administración de tiroxina. Se han considerado varios mecanismos posibles quc permiten este proceso. Esta propicdad de fonoforesis se debe a su carácter l ipofílico. por tanto. en condicione$ aerobias. la fosforilación es completarnente inhibida. el N A DH extram itocondrial no se acumula y sc supone que es oxidado por la cadena respiratoria cn las mitocondrias. elimina el gradiente de pIl a travis de la membrana.

para transferir fosfato de alta energia desde la mitocondria. de la mayor parte de las oxidorreductasas de la cadena respiratoria. En el espacio intemembrana de la mitocondria se encuentra una isoenzima de la creatincinasa (CK. transportador de glutarnato-aspaflato (nótese el sirnportador protbnica con glutamato). Diferentes isoenzimas de la creatincinasa median la transferencia de fosfato de alta energia hacia y desde los diversos sistemas que lo utilizan o generan. La lanzadera de creatina fosfato facilita el transporte de fosfato de alta energía desde la mitocondria Esta lanzadera (figura 14-1 6) aumenta las funciones de la creatina fosfato como un amortiguador de energía al actuar en los tejidos activos como son el corazón y el musculo esquelético. Na'. como un sistema dinámico . Ca2'. El transporte de iones en las mitocondrias se enlaza a la energia Las mitocondrias que respiran activamente en donde se lleva a cabo la fosforilacion oxidativa. contraccion muscular. o ausencia. gluc6lisis (figura 14-1 6). ejemplo. MgZ' y P. lo que sugiere que la energíano necesita ser suministrada por la fosforilacion del ADP. Lanzadera del malato para transferencia de equivalentesreductores del citosol al interior de la mitocondria portador del oetoglutarato.. el dna fosfato se transporta al interior del citosol mediante los poros de proteinas en la membrana mitocondrial exterior y queda disponible para la generación extramitocondrial de ATP. Cierto numero de fhrmacos y venenos actúan por inhibicibn de la fosforilacibn oxidativa (vkase antes). conservan o acumulan cationes como K'. ASPECTOS CL~NICOS M m t o m o de la miopatfa mitocondrialy la disfuncibn renal infantil mortal comprenden disminución grave. Se han descrito las enfermedades que implican deficiencias de gran parte de la fosforilacibn oxidativa. La MELA (miopatía. lactacidosis y apoplej ia) es un estado hereditario causado por NADH: deficiencia de ubiquinona oxidorreductasa (complejo 1) o de citocromo oxidasa. el cual debe reaccionar con el glutamato y ser transarninado a aspartato alfa cetoglutarato antes de su transporte a travks de la membrana rnitocondrial y reconstituido a oxalacetato en el citosol. Se considera que una bomba primaria de protones dirige el intercambio catidnico. encefalopatía.)que cataliza la transferencia de fosfato de alta energia a la creatina a partir del ATP que surge del nuclebtido transporhdor de la adenina A su vez. a plejidad de este sistema se debe a la impermeabilidad de la membrana mitocondrial al oxalacetato. El desacoplamiento con dinitrofenol conduce a la pérdida de iones del interior de la mitocondria pero la captacibn de iones no es inhibida por la oligomicina.162 Rioquímica de Harper (Capitulo 14) MEMBRANA CITOSOL INTERIOR MITOCONORIA MALATO DESHIDROGENASA + H' transFigura 14-15.

. Biochcm SOE Trans 1990..26 8503..-. A D P ~ -y rnetabolitoc. :> . exterior .. P17ATP~-. . . Cross RL:The mechanism md regulation o f ATP synthesis by Fi-A'TPases.. Boyer PD: 'l'he unusual enzyiiielogy o f A'I'I' synthase..: . : : : : .:.y. REFERENCIAS Balaban RS: Regulation of oxidative phosphorylation in the rnammal!an cell Arn J Physiol 1990.. . A n Introduction to !he Chemiosmotic T h e o ~Academic . Morgan-Huges JA et al..:. .Cadena respiratoria yfo.. .... .:S -. : . 1986 Aatefi Y: The rnitochondrial electron transport and oxidativc phosphorylation system.: . En esta forma...54:1015. transportadores de intercambio especiales se extienden a travks de la membrana para permitir el paso de iones como OH-. ... o f Bioener~erics. 4) Debido a que la membrana mitocondrial intema es impermeable a protones y otros iones. 3) Atravesados de uno a otro lado de la membrana estan los complejos de ATP sintasa que usan la energía potencial del gradiente de protones para sintetizar ATP a partir de ADP y Pi. Freernan.. A Sliru5.. 5) N u m e r o s o s v e n e n o s c o n o c i d o s ..38:523. .. contraccibn rnuswlar RESUMEN \ ADP 1) Virtualmente toda la energia liberada de la . C k . Estos son canalizados a la cadena respiratoria.: : : -. $ . : ..embrana mitomndria ..258:C377. : ." ATP / \ ADP Espacio intermembrana Figura 14-16. como cianuro.. Biochemistry 1987.:. -.. ? :: ' :.. La lanzadera de creatina fosfato del músculo cardiam y esquelético La lanzadera perrnlte el transporte rhpido de fosfato de alta energia desde la matriz de la mitomndria al interior del citosol (Cka. ejemplo. 2) Los transportadores redox se agrupan en complejos de la cadena respiratoria en la membrana mitocondrial interna... .. contraccibn muscular. .:..-. . : ! ' . Annu Rev Biochem 1985. .. C b es la isoenzlma que acopla la glucblisis a la slntecis de creatina fosfato.50:6& 1.. Barold FM: The I/i#olForce. ..... .>. Mitchell P: Keílin's respiratory chain concept and its chemiosmotic consequences.sforilacidn oxidativa 163 / ATP P m s o s que requreren energía ejemplo.. . Annu Rev Biochem 198 1 ... es la creatina ctnasa que interviene en los grandes requerimientos de ATP... donde pasan corriente abajo por un gradiente redox de transportadores a su reaccibn final con oxigeno para formar agua.::f<<:' p . . Estos usan la energía liberada en el gradiente redox para bombear protones al exterior de la membrana.:. : .. detienen la respiracibn mitocondrial por inhibicibn de la cadena respiratoria.. sin descargar el gradiente electroquimico a través de la membrana.. ::.: .... : .. .... 1 982. ... es la icoenzirna que mantiene el equilibrio entre la creatina y el fosfato de creatina con ATPIADP. P es el poro de la proteína en la membrana mitocondrial exterior. creando un potencial electroquimico a través de ésta.. Science 1979. . .. ! ' . . Press.. C b e3 la creatincinasa mitocondrial que media la creaci6n de fosfale de creatina a partir del ATP formado en la fosfoñilacibn oxidativa. : : : p . Iípidos y proteinas se vuelve disponible en las mitocondrias como equivalentes reducidos (-H o e-). -.: Mitochondrial myopathies: Clinical defects. la oxidación se acopla en forma íntima a la fosforilacibn para proveer a las necesidades energdticas de la cklula.mi...:.. .206:1 148..) oxidación de carbahidratos.. Nicholls DG: Bioenergetics.. :::%.

1992.: Defecrs in oxidative phosphoqlation. structurc and function of creatinc kinase isoeiiqmes in tisues with high nnd fluctuatiiig energy clernandq Hiocheiii J 1992. Scholte HR.281:21 .10.: Intrrtcellularcomparírncniation.Prince RC: l'he proton pump nl' cytochromc oxidase Trends Biochcm Sci 1988: 13:159. Uiochcrnical investigatiuns in skelehl musclc and exprcssion o f the lesion in other cell5 J lnhcr Metab Dis IYX7. Wallimann T et al.Suppl 1 :81 Tyler DD:The W~tochondrion in Iiealth andllrsease YCH Publishers. ct al.

La mayor cantidad del carbohidrato dietético pasa al torrente sanguíneo en forma de glucosa o es convertida en el hígado y. En los vegetales. DSc Los carbohidratos esthn ampliamente distribuidos en vegetaIes y animales.os oligosacáridos son los compuestos que por hidrólisis dan 2 a 10 moléculas de rnonosacirido. * Obsérvese que esla no es una triosa verdadera sino un trisacárido giic conticnc trcs rcsiduos de alfa glucosa. y como aldosas y cetosas dependiendo si tienen o no grupo aldehido o cetona. tetrosas. heptosas u octosas. mhs de 10 moléculas de monosacaridoc. Mayes. combinada con proteinas en las glucoproteínas y los proteoglucanos. LOS CARBOHfDRATOS SON DERIVADOS ALDEH~DOS O CETONAS DE ALCOHOLES POLIH~QRICOS Se clasifican como sigue: 1) Los monosacásidos son aquerlos carbohidrato~que no pueden ser hidrilizados en moleculas más sencillas. Pueden subdividirse en triosas. ribosa en los ácidos nucleicos. que produce una inolécula de glucosa y una de fructosa. en ocasiones se le designa como hexosanos o pentosanos. que produce dos moléculas de glucosa. por ejemplo. la glucosa es sintetizada por fotosintesis a partir de bióxido de carbono y agua y almacenada como almidón o convertida a celulosa que forma parte de la estructura . pueden formarse los demás carbohidratos en el cuerpo. . Los almidones y las dextrinas son ejemplos de polisacáridos que pueden ser lineales o ramificados. pero el volumen mayor de los carbohidratos de animales se d ~ r i v a en Última instancia de los vegetales. o s animales pueden sintetizar de soporte vegetal. al ser hidrolizados. IMPORTANCIA BIOMÉDICA Para comprender su funci6n fundamental en la economia del organismo de los marniferos es esencial el conocimiento de la estructura y propiedades de los carbohidratos de importancia fisiologica. En el organismo es convertida a otros carbohidratos que tienen funciones altainente especificas. PhD. Las enfermedades que se relacionan con carbohidratos incluyen diabetes sacarina. El azúcar glucosa es el carbohidrato más importante. a partir de ella.Carkohidratos de importancia fisiológica Peter A. pentosas. galactosa en la lactosa de la leche y en ciertos Iípidas complejos y. En el cuadro 15-1 se dan algunos e-jemplos 2) Los disachridos producen dos moléculas del mismo o de diferentes monosacáridos cuando se hidrolizan: ejemplos de estos compuestos son la maltosa. y la sucrosa. 4) Los polisachridos so11aquellos carbohidratos que dan. dependiendo de la cantidad de ariíornos de carbón que contengan. Es tarnbien el combusliblc principal de los mamíferos (excepto los rumiantes) y un combustible universal para el feto. 1 algunos carbohidratos a partir de Iípidos y proteinas. 3) [. La maltotriosa* es un ejemplo. donde desempeñan funciones estructurales y rnetabólicas. Segun la naturaleza de los monosacAridos a que dan origen por hidrblisis. glucbgeno para almacenaje. enfermedades por almacenaje d e glucógeno e infolerencia a la lactosa. galactosemia. hexosas.

. una estructura cíclica cs favorecida por razones temodinSimicas y expIica completamente el resto de sus propiedades quimicas..jiinto con los correspondientes isdmeros de la glucosa. pero no necesariamente exhibiendo la misma rotacibn 6ptica. 1 3 1 anilisis por difracción de rayos X muestra que el anillo de seis miembro5 contienc un átomo de oxigeno y que en realidad tfenc la forma de una silla (figura 15-1 C). Cuando un rayo de luz polarizada en un plano se hace pasar a través de la soluciiin de u11Eshmero óptico. cuando esti a la izquierda. con cuatro htomos asimttricos de carbono tiene. La orientacihn de los grupos -H y -0H alrededor del átomo de carbono adyacente al carbono con el ~ l c o h o l primario terminal (por ejemplo. pero que difieren en configuracibn espacial se conocen camo etercoisómeros. " - -- 1 -- ulosa ulosa Para la mayor parte de los praphsito~. L(-) o c(+). o-Glucosa A: Forma en cadena recta.OH Figura 15-1. el plano de polarizaci0n girarA en el sentido de las manecillas del reloj si el isómero es dextrorrotatario (+). Por ejemplo. ctosa Los azúcares poseen varias formas de icornerismo LA GLUCOSA ES EL MONOSACARIDO MÁS IMPORTANTE EN MEDICINA La estructura de la glucosa puede representarse de tres maneras Aunque la fhmula estructural de cadena lineal (aldohexosa. B alfao-Glucosa proyección de Haworth. figura 15-1 A) puede ayudar a comprender algunas de sus propiedades. Cuando el grupo -OH en este carbono está a la derecha {como se ve en la figura 15-2). la forma de F a fructuosa que ocurre en la naturaleza. Los tipos más importantes de isomeria que se encuentran en la glucosa son los siguientes: o 'C-H 11 I . Clasificaciónde aziicares importnntes ---L. el Atomo de carbono cinco en la glucosa) determinan si el asicar pertenece a la serie D o a la l. es el isiimcro D(-). La presencia de atonios de carbono asimétricos (Atomos de carbono unidos a o grupos diferentes) permite la formación cuatro h~omos de isbrneros.H 1 H -4C .el azúcar de tres carbonos. la glicerosa (gliceraldehído). o en el sentido opuesto si es levomtatorio (-1.indicando su rclación estructural con la glicerosa n o L.Cuadro 15-1. La presencia de átomos de carbono asimCtncos tambikn confiere actividad óptica a los compuestos. pertenece a la serie L. por tanto. el azúcar es miembro de la serie D. Las formas L y D de este azíicar se muestran en la Figura 15-2.OH HO -3C . Los compuestos que tienen Ia misma formula estructural. La mayor parte de los monosacaridos dc los mamíferos tienen la configuracibn u y las enzimas qiie intervienen en su metabolismo son específicas para esta configuracibn. C: alfa-o-Glucosa forma de silla. 1 6CH. La glucosa.OH l H -=C -OH H -2C 1 1) lsomerismo D y L: La designación de un isiimero como 13 o de su irnagcn en espejo como la forma L está determinada por su relacion espacial con el compuesto progenitor de la familia de carbohidrato~.la fbrmula estructural puede ser representada como un simple anillo en perspectiva como lo propuso Haworth (figura 15-1 R). »(A). El numero de isbrneros posibles de un compuesto depende de1 numero de htomos asimétricos de carbono (n) y es igual ri 2". 16 isomeros. Un compuesto puede scr designado n(-).

Cuando existen cantidades iguales de isomeros n y l. [. El cambio se efectua probablemente via una molécula hidratada.jempi0. 'CH. la mezcla resultante no tiene actividad 6ptica puesto que las actividades de cada isbmero se anulan entre si.4 ) .0025 por ciento. La desviación bpticade la glucosa en soIución es dextrorrotatoria. acíclica. el nombrc alterno de dextrosa que se usa con frecuencia en medicina. En el caso de la glucosa en solucit~n. aunque la polarografia ha mostrado que la glucosa existe en forma aciclica en una proporción de sólo 0.de la glucerosa y de la glucosa. de aqul. La estructura ciclica se conserva en solución. En forma semejante. puesto que esti formada por la combinacibn de un aldehído y un grupo aIcohol (figura 15-5).menos de 1 % esta en la forma furanosa. También las cetosas pueden presentar la forma ciclica (por e.. dc cadena recta. La glucosa cristalina es alfa-u-glucopiranosa. por tanto.y L. la estructura cíclica de una cetusa es un semiacético.C -H I H-C I -OH Furane O ti C -H HO- ' C -H I 1 1 H-C 1 -0H -51 HO-C H-C I I I -0M m-" -H I H-C -0H Figura 15-3. anbmeros alfa y beta de la glucofuranosa. ya que las oportunidades para la forrnacíón de cada ic6mero ~ p t i c o son idénticas. D-fsuctofuranosa o D-fn~cto~iranosa) (figura 1 5 . Menos de 0. Este equilibrio se acompaña de rotacibn 6ptica (mutarrotación) cuando el anillo semiadtico se abre y se vuelve a formar con cambio de la posicibn de los grupos -H y 4 H del carbono 1. el carbonilo o atorno anornérica d i carbono. prodriciendo una rnezcIa de alfa-u-glucopiranosa (38%) y beta-glucopiranosa (62%). Isomeria o. 3) Anbrneros alfa y beta: La estructura ciclica de una aldosa es un sem iacética. 2) Estructuras cíclicas piranosa y furanosa: Esta terminologia se basa en el hecho de que las estructuras ciclicas estables de los rnonosacáridos son sirnilms a las del pirano y del furano (figura 15-3). pero el isomerismo tiene lugar alrededor de la posicihn 1.. Formas piranosa y furanosa de la glucosa. m& de 99% esta en la forma piranosa. . Formas piranosa y furanosa de la fructosa.3% e s t $ representado principalmente por Figura 15-4.os compuestos producidos por síntesis son necesariamente recdrnicos. Tal mezcla se designa como racemica o mezcla ni.OH CH?OH Figura 15-2.

3 y 4 de la glucosa se conocen corno epimeros. HOCH. entre adenina y ribosaen nuclcbtidos como ATP (figura 12-5). e1 enlace O-glucosidico es un enlace acetal debido a que resulta de utia reaccihn entre un grupo semiacético (formado de un grupo aldehido y un grupo -0H) y otro grupo -0H. en las espccias y en las constituyentes de tejidos animales. Los glucósidos se encueiitran en muchos medicamentos. formadas por epimerizaci6n en los carbonos 2 y 4. Si el segundo grupo es un hidroxilo. el compuesto resultante es un glucbsido. si es la galactrisa. pentosas. (sedcheptiilosa). Muchos monosacáridos tienen importancia fisiológica Los derivados de triosas se forman en el ciirso de la degradación metabolicade la glucosapor la vía de la glticólisis.0s isomeros que difieren como con- secuencia de variaciones en la configuracibn de los 4 H y -H unidos a los átomos de carbono 2. los epimeros más importantes de la glucosa qon la manosa y la galactosa. ácidos nucleicos y numerosas coenziinac (cuadro 15-2). Forma de aldehido aciclico 0h HOCH. En la figura 15-7 se muestran cinco cetosas que son importantes en el metabolismo. De las hexosas. S') lsom~rismo aldí)sa+etosa: La fructuosa tiene la tnisma formula niolecular de la glucosa.jemplo. se forman en la degradacibn de la gliicosa por la vía alterna del fosfato de pentosa. HOCH. por c. Si el segundo grupo es iina arnina. Mutarrotaciones de la glucosa. Figura 15-5. etdtem. tetrosas. dado que hay un grupo cetosa potencial en la posición 2 dc la fmctuosa (figura 15-73 y un grupo aldehido potencial en la posición 1 dc la glucosa (figura 15-8). figura 2 2 4 ) .-gulonato (un in iembro de la via del icido urhnico. glicerol. a partir del azúcar de siete carbonos HOCH. Todos los gluc6sidas que son irnportantcs en medicina. debido a su acci6n sobre el corazón (glucosidos cardiacos). en tanto que los derivados de iriosas. galactosa. Las pentosas son constituyentes importantes de nucleótidos. un esterol o fenol.HO O'd H L. un galactosido. Los azúcares forman glucósidos con otros compuestos y entre si Los glucósidos son compuestos formado< de la condensación entre el grupo hidroxilo del c ~ r b o n o anomérico de un monosaclirido o un residuo de monosacarido y un segundo compuesto que puede spr o no (en el caso de una aglucona). En la figura 15-8 se muestran las estructuras de los azúcares aldosas de importancia bioquimica. Evímeroq: 3. o una base como adenina. También significativos so11 los derivados ácido carboxílicos de la glucosa como el D-glucuronato (importante en la formación de gliicurhnidos y prescnte en los glucosaminog~ucanos) y sus derivados metabolicos 1--iduronato (presente eii glicosarninoglucanos) (figura 15-9) y 1 . pero difiere en su fiirmula estructural. Epimerización de la glucosa . las fisiolúgicamente más importantes son Ja glucosa. se forma un enlace N-glucosídico. Si la porcihn serniacética es la glucosa. Figura 15-6. otro monosacarido. contienen esteroides como 4). respectivamente (figura 15-45). Diológicarnente. El aglucano puede ser metanol. fructosa y manosa (cuadro 1 5-3).

OH I I C=O 1 HO-C I -H C-O I C=O HO-C-H 1 I H-C .OH CHZOH CH20H Figura T5-8.H I I CHO I H-C-OH HO -C -H H-C-OH 4 HO-C -H H-C I HO -C -H I 4 H-C-OH 1 HO-C -H H-c-OH H -C . LOS deoxiazúcares carecen de un oxígeno Son aqiiéllos en los cualcs un gnipo hidroxilo unido a la estructura cíclica ha sido reempla7ado por un atomo CHO I H-C-OH CH2OH ~Gllcerosa (Dgllceraldehldo) I CHO f .0 H H-C . Otros glucósidos incluyen antibióticos como la estreptomicina (figura 15-?U).H I H-C .0 H CH20H I .H l m CHO 1 I $HO H-C . Relaciones estructurales de las aldosac de la serie o con importancia fisiológica La o-triosa no tiene importancia fisiológica.OH I CH. Estos gluciisidas incluyen derivados de la digital y del estrofanto coma la oua baína. CHO I CHO HO-C .0 H I CHIOH .0 H H-C I H-C .0 H I H -C . La serie se construye por la adicidn tebrica de una unidad CHzO al grupo -CHO del azúcar .0 H H-C .CHIOH I C=O I CH.~Erltrosa HQ-C -H I HO-C . que es un in hibidor de E a Na'f K' -PiTPasa de las membranas celulares.0 H I H-C .0 H 4 -OH ~Ribosa &. Ejemplos de cetosas de importancia fisiol6gica componente aglucona.0 H I I HO-C-H H-C-DH I H-C -0H H-C -0H H-C -OH I CHzOH Dihidmxiacetona Figura 15-7.OH ~Llxosa ~Xllosa -7 CHO [ CHO HO-C .

- eicos YnbnbU.. la D-galactosamina y la D-ma- Cuadro 15-3.. Tambien se encuentran como un carbohidrato de glucoproteinas en forma de desoxi id-fucosa (figura 1 5-1 7 ) y la 2-desoxiglucesa es un inhibidor impartante del metnbolisma de la glucosa.. f U'ADP.rvteintis . -- - ---. Un ejemplo es la desoxirribosa (figura 1 5-1 1) que existe en los hcidos nucleicos (DNA).-- ente - I - - 3 lucosa . --.. 1 rormada cn los nroce. . maltosa y la lac - insporta leI sangre y el que incipalmente usan los tejidos r de In g1ucosa santesgluce~ni. Los aminoazúcares (hexosaminas) son componentes de glucoproteinas. ciruela Y de rd ~ G I C L ~ ~ v e gel iomas nstituyenie de glucop eptidogliucnnos Iiicosamint)gluc. 3) - 1iglucosa J del azúcar de cziaa y de la i nulina con v k i r ~ i e (pro1cedente de la alcachi]fa de foirma In lisa iel organisn Jem~ fructuosa r:ondiice a Iación dc c:cte cnrbrih 1izipogluceniia - Hidr ólisis de la zada cn las glándulas mamwias para formar la lactosade la leche.m A de hidrógeiio. Import:ancia bio~uírnica (ii&zi :mentas es1:ructuraIcs de los acidl . Jugo : ar" del 1Prescntc cnI la orina (E "lm. . Aexosas de importancia Tisiolligica A .. 1 . NAD.e las coen7imaq com 'P.inos un constit!~ y e n t cde u la cual ha Sido aislada diaco hum. llav.lai~n~ A .. .Cuadro 15-2. . .m0 1 I ' iterrnediario en la via aer aciao urnnico ae encucnira en ia orina cn l a -pentosuria cscncial "" T. nsiiluyente dc glucop.sus I f i i fosl'ato de : rinuiusa es iin inxcrrn ) dia rio en la vi a de la pcntosa fosfati 1 rnetüb6licos . Es un constituyente de Ios gluD-1 imposibilidad de metaboizarla caiisa galact oscmia y :ataratas Hidrblisis del mank y gomas Es un ctinsliiuyente de muchas vegetales glucoproteinas . Pentosas de importancia fisiolbgica . . - - -- -. gangliócidos y glucosami nog lucanos Ejemplos de aminoazúcares con la r~-glucosarnina (figura 15-12).{>proteínas S fosfatus de rihiisa !Fon intcrm rios en la i [la de la peintosn fosfa ...

las cuales han sido identificadas en la naturaleza. de 24 a 30 residuos de glucosa unidos por enlaces 1 -+ 4 en las cadenas y por enlaces I + 6 en los puntos de ramificación. Estreptomicina (izquierda) y ouabalna (derecha). . El glucógeno (figura 15-15) es el polisacárido que se almacena en el organismo animal. La galactosamina o condrosamina es un componente de la condroitina (capitulo 57). es un homopolímero denominado gIucosano o glucano. y la amilopectina (S0 a 85%). las patatas. Los dos constituyentes principales del almid6n son: la amilosa (15 a 20%) que tiene estructura helicoidat no ramificada (figura 15-14). Constituye la fuente más importante de carbohidrato$ de los alimentos y se encuentra en los cereales. alfa-o-Glucuronato (izquierda) y beta-L-iduronato (derecha) Figura 15-17. sacarosa. Los disachridos fisiológicamente importantes son maltosa. que consiste en cadenas muy rarnificadas. La hidrblisis de la sacarosa da una mezcla cruda que se denomina "azucar invertida" debido a que la fnictosa que se produce es fuertemente levorrotatoria y cambia (invierte) la previa accibn dextrorrotateria de la sacarosa. Figura 15-9. LOS POLISACARIDOS TIENEN FUNCIONES DE ALMACENAJE Y ESTRUCTURALES Entre los polisachridos figuran los siguientes carbohidrato~ que son lisiol6gicamente importantes: El almidón esta formado por una cadena alfaglucosídica. Varios antibióticos como la eritromicina y la carbomicina contienen aminoazúcares. A menudo se le designa como almidón animal. Es una estructura mucho más ramificada que la arnilopectina con cadenas de 12 a 14 residuos de alfa-D-glucopiranosa (con enlaces glucosidicos alfa-D-f l -% 41) y ramificaciones LOS DISACARIDOS MAS IMPORTANTES SON MACTOSA. SACAROSA Y LACTOSA Los disacáridos son azucares compuestos de dos residuos de monosachrido unidos por un enlace glucosidico (figura 15-1 3). Se cree que los aminoazUcares están relacionados con la actividad antibidtica de estos medicamentos. las legumbres y en otros vegetales.COO- H 5 HOCH. Figura . La glucosarnina es un constituyente del ácido hialurdnico. trehalosa y lactosa (cuadro 1 5 4 ) . 2-Desoxi-D-ribofuranosa (forma beta) nosamina. Compuesto que siilo produce glucosa en la hidrólisis. Su nombre quimice refleja sus componentes monosacáridos.15-10.

La inulina es un alrnidhn que se encuenbaen los tuMrcu los y raíces de las dalias. hay microorganismos que pueden atacar el enlace beta. largas. Glucosamina (2-amino-o-glucopiranosa) (forma alfa) La galactosarnina es E a 2-amino-o-galactopiranoca Tanto la glucosamina como la galactosamina a menudo se presentan como derivados N-acetilo en carbomas complelos. con elementos estructurales de los tejidos como el hueso. por ejemplo. haciendo a la celulosa accesible para usarse como fuente energktica importante. Por tanto. las cuales por repulsión conservan separadas a las cadenas de carbohidrato. es auxiliada por el gran número de grupos 4 H y de cargas negativas de las molkculas. el compuesro se conoce como un proteoglucano. La celulosa es el principal constituyente del armazón de los vegetales. Se encuentra.~ . Estructuras de disacáridos representativos Los simboloc alfa y beta se refieren a la configuración en el átomo anomériw de carbono (*) Cuando el carbono anormerico del segundo residuo toma parte en la formación del enlace glucosidim. No es soluble en los solventes ordinarios y consiste en unidades de beta-D-glucopiranosa unidas por enlaces beta (1 + 4) para Fomar cadena rectas. alcachofas y dcl diente de león. Ejemplos son el ácido bialurbnico. Químicamente.g l u c o s a m i n a unidas por enlaces beta (1 -r 4)-glucosídicos (figura 15-I6). hidrato~ SACAROSA unidas por medio de enlaces glucocidicos al fa (1 +6). la elastina y la colhgena. aldehido o cetona. Su propiedad de retener grandes cantidades de agua y de ocupar espacio. en los exosqueletos de los crustáceos e insectos. el sulfato de . Por hidrólisis se obtiene fructosa y por tanto es un h c tosano. acojinando o lubricando otras estructuras. el residuo se convierte en un glucósido conocido corno furanósido o piranbsido Como el azúcar ya no tiene carbono anomerico con un grupo libre potencial. En el intestino de los rumiantes y otros hcrbivoros. por ejemplo. incluso el ser humano debido a la ausencia de una hidrolasa que ataca al enlace beta. Este almidón diferente: al de la patata es fácilmente soluble en agua caliente y se usaen fisiología para determinar la velocidad de filtración glomenilar. A l igual que la sustancia fundamental o de envoltura. Los glucosaminogiucanos ~mucopolisac~ridos) están constituidos por cadenas de carbohídratos complejos que se caracterizan por su contenido en aminoazúcares y iicidos urónicos. L a celulosa no puede ser digerida por numerosos mamíferos. están relacionados LACTOSA H O Q H O H H H oH H H Figura 15-13. dextrinas son los primeros productos que se forman cuando la hidrdlisis alcanza un cierto grado de las ramificaciones. reforzadas por enlaces cruzados de puentes de hidrógeno. Cuando estas cadenas se unen a una molicula de proteína. la quitina está formada por unidades de h c e t i l . Las dextrinas son sustancias que se producen durante el proceso de desintegración liidrolítica del a l m i d ~ nLas . es fuente importante del "volumen" en la alimentación. Este proceso puede tener lugar a un grado limitado en el colon humano. ya no muestra propiedades reductoras. glucoproteinas. La quitina es un importante polisacárida estructural de los invertebrados.17 2 Rioquírnicu de Hurper MALTOSA (Capitulo ISI Figura 15-1 2. como la mayor parte de los demas azucares.

iow-de~sifv proleiris).u" . Excepto en la colágena. Su existencia en la superficie externa de la membrana plasmática (el glucocáliz) ha sido de- Figura 15-14. Estructura del almidón. Los gangliosidos tamhien son glucolípidos. Son proteinas que contienen carbohidratos en diversas proporciones adheridos en fonna de cadenas cortas o largas (hasta 15 unidades). Los carbohidratos constituyentes se listan en el cuadro 15-5.n la deficienciade Iactasü. B: Amilopectina. . incliiyendo las membranas celulares (capítulos 43 y 56). Pifia. descritos con detalle en el capítulo 57. al contrario de los glucosaminoglucanos y peptidoglucanos. Las gliicoproteínas (mucoproteinas) existen en muchas condicianes diferentes en los líquidos corporales y en los tejidos. Los acidos siirlicos son derivados N-acilo u Oacilo dcl icido neuraminico (figura 15-18). Los cm-bohidratos también estan presentes en algunas lipoproteinas. flatulenci: Jcar princ ipal de l a condroitina y la heparina (figura 15-16}.DL del ínglks. la glucosa no se encuentra en las glucoproteinas maduras y. las lipoproteinas lipode baja densidad (1. Los ácidos siBlicos son constituyentes de gliicoproteínas y ganglicísidos(capítulos 16 y 56). presentes como glucoproteínas y glucolipidos. ramificadas o no. """"" " " " . u""-- " . Sorgo. A: Amilosa. Sin embargo. caTecen de acidos urónicos. LOS CARBOHIDRATOS ESTÁN PRESENTES EN LAS MEMBRANAS CELULARES Y EN LAS LIPOPROTE~NAS La estructura lipídica de la membrana celular se describe cn los capítulos 16 y 43.Cuadra 15-4. Disachridos -. El hcido neurzimínico es un aziicar de nueve carbonos derivado d e la manosarnina (un epimero de la glu- cosamina) y piruvato. kwahorias En la deficiencia de sacarosa. mostrando F a estructura helicoidal. el análisis de componentes de membranas celulares de los marniferos indica que aproximadamente 5% de ellos son carbohidratos. la rnalabsorciiiii . - " -LA Fuente A - + - clínica n can arnilasa n hir 1 piicdc apnirccer eri l a I. flatulencia Zzúcar de caria y betabcl. por ejemplo. Estas se denominan cadenas oligosacáridas (aun cuando en ocaciones pueden exceder de 10 unidades). mostrando un punto de ramificación 1+ 6. sii nialahsorciún crinduce a diarrea \.

la primer molécula de la sintesis del gluc6geno) mostrada con el empleo de las lectinas. La molécula es una esfera que se aproxima a los 21 nm de diámetro y puede visualizarse en el microscopio elecirbnim.. La glucoforina es la mas importante glucoproteina integral de la membrana de los eritrocitoc humanos. la concanavalina A tiene especificidad hacia r e s i d u o s alfa-glucosilo y alfa-manosilo. 15-18). 2) La glucosa es el carbohidrato m b importante en la bioquirnica de los mamíferos debido a que casi todo el carbohidrato de los alimentos se convierte en glucosa por metabolismo adicional. . Las cadenas ramificadas (cada una tiene dos ramas) se localizanen las capas interiores y las cadenas no ramificadas en la capa externa (G.1 74 Binqztitnica de Harper (Capitulo I 5) Figura 15-5. figura 1 . - Cuadro 15-5.c. . Tiene una masa rnolecular de 1 0 ' Da y consta de cadenas polisacaridas cada una de las cuales contiene alrededor de 13 residuos de glucosa.. . Las cadenas de carbohidrato únicamente están adheridas a la porcion arnino terminal del lado externo de la superficie de la membrana (capitulo 43). Acetil hexr samin. Molecula de glurkgeno A: Estructura general B: Amplifimcibn de la estructura en un punto de ramificación. hciilo . 3) Los azúcares tienen un número elevado de estereoisbmeros debido aque contienen varios Atomos de carbono asjmétricos. vegetales que se fijan de modo especifico a ciertos residuos glucosilo. predominante C)rlmii A. . e l ácido sialico . .. -.. dejando porciones polipeptidicas libres tanto por el lado externo como por el interno (citoplismico) de la superficie. Por ejemplo. ntosas tilglucosmiina (GlcNAc) iilgalactosíimina (GalNAc) Arabinosa (Ara) neurhico. Las cadenas son ramificadaso no ramificadas y se agrupan en 12 capas conoéntricas (enla figura sdlo se muestran cuatro). is Derivados K-acilc1 del ácidom h7-aceti' Ineurhico p r ejt:mplo. .. Carbohidsatos que se encuentran en las g:lucoprot1 eínas . Tiene 130 residuos de aminohcidos y se extiende por la membrana Eipidica. Pueden caracterizarse por el tipo y número de residuos monosac8ridos en sus mol&culac. glumgenina... . . xosas a( M 4 osa (Gal) RESUMEN 1) Los carbohidratos son constituyentes principales del alimento y los tejidos animales. . .

que es el "azúcar sanguíneo". I H OH Acido B-glucurónico Suifato de N-acetiigaiactosamina Heparina Glucosamina sulfatada Acido idudniw sulfatado Figura 15-1 6.Quitina Figura 15-77. Estructura del Bcido N-acetilneuraminico. sacarosa. que son elementos estructurales de los tejidos y glucoproteinas. 5) Los disacaridos de importancia fisiolhgica son rnalíosa. respectivamente. incluyendo la membrana celular. 4) Los monosacaridos de importancia fisiológica cm- H HN*CO*CH - H OH Condro~tin 4-sulfato [Nofa: tambien hay 6-sulfatoj HOCHZ incluyen glucosa. irnportante como constituyente dietktico que se compone de h c l o s a y glucosa. que son proteínas que tienen adheridas cadenas de oligosacáridos. un lcido siálico (Ac = CH3-CO-). hnico azticar encontrado en la leche y que contiene galactosa y glucosa. . Flgura 15-1 8. Estructura de algunos polisacaridos complejos y glucosaminoglucanos. 7) Las carbohidmtos complejos contienen otros derivados como aminoazúcares. 6 ) El almidón y el glucógeno son polimeros de almacenaje de glucosa en vegetales y animales. beta-L-Fucoca(6-desoxi-p-L-galactoca) Acido hlalurónico HOCH. ácidos ur6nicos y ácidos sialicos. y ribosa. constituyente importante de nucleótidos y dcidos nucleicos. y lactosa. Incluyen a proteoglucanos y glucosaminoglucanos. intermedio importante en la digestión de alrnidbn y glucdgeno. se encuentran en los organismos en numerosas ubicaciones. Son fuentes importantes de energia de la alimentación.

l Lindaht U. 1977. Ress DA: Polysaccharide Shapes.1 76 Bioq~iitnica de Hurper (Capítulo 15) REFERENCIAS Callins PM (editor): Carbohydrates. Vols 1A ( 1 972) and 1B (1980) Acadcmic Press. Collins PM: ~Ifonosaccharidr Chernis!~ Penguin I3onk5.ChapmandZHall. 1972 Hughes RC: The complex carbohydnteq of mamaIian cell surfaces and their biological roles. 1988. Horton B (editors): I'he Carhohydrates.245 90 . El-Khadem HS: llarhohydrntc C h e r n z s t ~ Molaosnccha. 1987.47:385 Melendes-Hevia E. Ferrier RJ. Wiley. Shelton DE: Optimiraiion of rnolecular design in the evoluíion of metabolism: 'lhe glycogen molccule Riochem J 1993:295:477 Pigman WW. Sci Am 1980. rldes and their O1igomer. Sharon N: Carbohydrates.Il. Hiriik M: Cilycnsan~inoglycansand lheir hind[ng to bialogicnl macromolcculcs Annu Rev Brochem 1978. Essays Biochem 1975. Waddell TC.v Academic I'ress.

el colesterol y los esteres de colestenlo sc IIaman Iípidos neutros. mis que por las químicas. PhD.Lípidos de importancia fisiológica Peter A. obesidad. Los lipidos y proteínas combinados (Iipoproteínas) son constituyentes celulares importantes que se encuentran en la membrana celular y en las rnitocondrias y sirven tambien como medios para transportar Iípidos en la sangre. las grasas sirven como una fuente eficiente. DSc LOS L~PIDOS SE CLASIFICAN COMO SIMPLES O COMPLEJOS Los Iípidos son un grupo heterogéneo de compuestos emparentados. El conocimiento de la bioquirnica de los Iípidos es importante en la comprension de muchas áreas biomkdicas de interés. . en Ios glicerofosfolipidos el alcohol es el glicerol y en los esfingofosfolípidosel alcohol es la esfingosina. Los lipidos son constituyentes importantes de la alimentación no cOlo por su elevado valor energitico. c e r a y compuestos relacionados. c. El contenido de lipidos en el tejido nervioso es particularmente alto. Fasfolfpidos: Lipidos que contienen ademhs de hcidos grasos y un alcohol. aterosclcrosis y la fincibn de varios Acidos grasos poliinsaturadris en la nutrición y la salud. vitaminas Eiposolubles y hormonas. Mayes. por ejemplo. el cloroformo y el benceno. Tienen la propiedad corntín de ser: 1 ) relativamente insoliibles en agua y 2) solubles en los solventes no polares como el Mer. Sirven como aislante t&rmicocn los tejidos subcucaneos y alrededor de ciertos organos. aceites. aldehidos de las grasas y cuerpos cetónicos (capitulo 241. por sus propiedades físicas. También las lipoproteinas pueden colocarse en esta categoría. a. esteroides. Unagrasaen estado iiquido se conoce como aceite. La siguiente clasificaci6n de los lipidos modifica la de Eloor: 1 ) Lípidos simples: Ésteres de hcidos grasos con diversos alcoholes. 2) Lipidos complejos: Ésteres de ácidos grasos que contienen otros grupos quimicos además de un alcohol y del Acido graso. esteroides. los lipidos incluyen grasas. Ceras: Esteres de icidos grasos con alcoholes rnonohidricos de peso molecular más elevado. hidrocarburos. y los Iípidos no polares actúan como alslantes clkctricos que permiten la propagacion rápida de las ondas dcspolñrizantes a lo largo de los nervios rnielinizados. Crasas: h t e r e s de hcidos grasos con glicerol. b. sino tarnbiin por las vitaminas liposolubles y los ticidos grasos escnciales contenidos en lagrasade los alimentos naturales. directa y potencial. b. Glucolipidos (glucoesfingolípidos): Lipidos que contienen un ácido graso. Asi. por ejemplo. real o potencialmente. glicerol. Debido a que no poseen carga eleictrica. los acilgliceroles (acilglicéridos). Otros lipidos complejos: Lipidos como sulfolipidos y aminolípidoc. alcoholes diferentes al glicerol y los esteroles. esfingosina y carbohidratos. 3) Lipidos precursorm y derivados: Incluyen ácidos gracos. de energía directa cuando están almacenadas en el tejido adiposo. a. Con frecuencia tienen bases nitrogenadas y otros sustituyentes. IMPORTANCIA BIOMÉDICA En el cuerpo. un residuo de acido fosfdrico.

Ejemplos de los ácidos de esta serie se muestran en cl cziadro 16-1. w6 u w3) y el carbono del carboxilo. airIU1111.... Acido oleim.cn. microor - Caproico . A'5ndica una doble ligadura entre Ios &tomos de carbono 9 y 10 del hcido graso. En los animales.. Se usan varios convencionalismos para indicar el numero y I A posicibn de las dobles ligaduras.. el carbono metiiico terminal se conoce como carbono omega o carbono n. Fhrmice* Acftico 2 1 Principal producto final de rilmcllt u i i vlVLIUbLU Interviene en cl metabiilisrno de las unidddes *'Cl (fomiato) " L . 3 y Nci.. 2) 5e le conoce también como el carbono alfah1. -.. por ejemplo el ácido octanoico.. * r. Ácidas grasos saturados Numei -.os itomos de carbono No. Nuez 1.. .... por ejemplo. sin dobles ligaduras) o no saturada (con una o más dobles ligaduras). los ácidos saturados terminan en -iinoico..c[ric[amcntc.. .-COOH) que sería el primer miembro de la serie en la cual se adicionan progrer~vamente --CH?entre Ins grupos 4 O O H y el CI1. --.>. Al átomodecarbono adyacente al carbono carboxilico (No. 1)...l* ExisTcn mi ntrlueii~x . Los que existen en las grasas naturales generaln~ente contienen un níimero par de átomos dc carbono porque sc sintetizan a partir de unidadcs de 2 carbonos. :quilla mes cn totins Iss Erasas -is) ' Figura 16-1. .lo iirti>baiiix...&.. 4 son el carbono beta y el carbono gamma. el ácido octadecenoico (Acido oleico}. las dobles ligaduras adicionales se introducen solo entrc la doble ligadura existente (por ejemplo. recpcctivamente..:.. conduciendo a Eses series de &cidos grasos. o final por la tenninacion -oico (sistema ginebrino). irnr criiiii~iíadcs en ciertas grasas (cspccialmente: cn la mntitcquilln) Iln producto final ri e la Ikrrnentar:ihi 7 ne carnohidratos pnr 1 1 1 ~ ~de 1 la ferrncntaciiin de (.. Así.arhnhidra tos del-rumen .. conocidas como las familias 09. a - Cerek 1 . por ejemplo. el símbolo m 4 indica una doble ligadiira en el noveno carbono contando desde el itomo de carbono omega. sustituycndo la. pero se les encuentra sin esterificar como acidos grasos libres. Los acidos grasos se denominan de acuerdo a los hidrocarburos correspondientes a . CLllllcn)CU dra dt:palma... [ noinenclatura cistemhtica usada mis frecuentemente " - < Cuadro 16-1.LOS ÁCIDOS GRASOS SON ACIDOS CARBOXFLICOS ALIFÁTICOS Los ácidos grasas existen en grasas y aceites naturales en gran parte como ésteres. y los ácidos insatiirados cnn dobles ligaduras terminan en -cnoico. ciiiiiciiui o de aceites dl to.. modalidad plasmritíca de transporte. Una costumbre in iiy difiindida consiste en indicar el número de atitornos de carbono y el número y la posición de las dobles ligaduras como se muestra en la figura 16-1. m 6 y w3.. serie con mayar número dc átomos de carbono. nianteq .311b1lllaliCLI* IiIIIICLU. (119. La cadena puede ser saturada (esdecir.no es un aerivauo TarnbiCn se forma en el ciego de los hcxbívor'os y cii menor cantidad en el colon de seres hurnni 10s.... " Nombre común se basa en poner al icido graso el nombre del hidrocarburo con el mismo número de átomos de carbono.noi en cn peclueAas cnriti- en mucnas grasas (iiiilla): cspccliil- vegetal .. i ' fcrmc:ntacion di: carbohidradel tos pi31.termina1. Se sabe que existen otros miembros de esta. Los acidos grasos saturados no contienen dobles ligaduras Los acidos grasos saturados teóricamente se puedcn considerar como provenientes del ácido acético (CI4. n-9 (n menos 9) es equrvalente a (:19 iceite de ciicahiia . at el.. . Los ritornos de carbono se numeran a partir del carbono mrboxilico(carbonoNo.

. monoenoico). Los ácidos grasos insaturados contienen una o más dobles ligaduras (cuadro í6-2) Se pueden subdividir según el grado de insaturacihn en: 1) Ácidos monoinsaturados (rnonoetenoide.12 gmrna-l . .-..16.. I C ~ cacahuate..19 aceites de pescado..Y.. O ~ C O semillas de aldhn. -% Ácirlos dienoic:os (dos . .~ Z .. por gempio.. pero ahora se sabe qiie mportencia fisiolhgica y nutricional . - -.. polienoioo). los cerebr IX:2. . . que contienen dos o más dobles ligadurac. .. .. do 1 h d o s cis-Y...12 - . ales - Ácidos trienoicos (tres dohles ligaduras) 18:3.. prostaciclinas (PGI) y tsomboxanos (TX).marcarda. .%A rehro 17 16.O C ~ ~ ~ ~ C ~ Maíz. .t... eeiosapolienoicos (20-421.. higado d e bacaIao. . frijol de soju 1 SS . pul iruiiG U< los fosfolipidos en los imales .. Tambikn se han aislado algunos hcidos grasos de cadena ramificada de fkentes vegetales y animales. Los prostanoides incluyen a las prostaglandinas (PG)... cornponcnte A... " - - Yambre sir Presencia - oicos (una doble liga I casi todas las grasas isiblemente el icido graso mas rnun en las grasas naturales laidico nicico 1 7 a o nabo j I erv6nico . 3) Eicosanoides: Estos compuestos derivados de IOF Acidosm .ietracoseno .. d . aceite i de la hierba del asno. " .- I i ac.. . -- Cuadro 16-2. I u ' - -1.. .30. --. . .19-ducuhn.-- -..cerebro . cites vegct. llUIrleruuiatomi~T de C y porricibn de as dobles Iligaduras . + 1 cir. 2) Ácidos poliimburadm ( p o l i o i d e . l r c e i i c b uc pcxauu. .--... . . .. t .6. . . .. crh-..9. .1 5 .. mprenden a los prmtanoides y los Ieumtrienos (LT). .. shbaio. . que contienen una doble ligadura. Ácidos pentaenoiicos (cinco dobles lig 22:5. hcido graso i mi :nor en los animales -- 1 Acidos tetrnenoicos (cuatro dobles lig 1 " " A " - C c) n frecuencia se encuentra juntO con el áado linoleico pero en pa rtic ular en el eiceite de !iri a a m r n q u i d b Todos c i co 1 -1 encuentra en grasas animales y en aceite de i:acahuatc. .Lipidos de importancia fisiol6:ica J 79 en especial en las ceras... Ác idos grasi común . salmiin 1 tenoico icos (seis dlobles ligniiduras) .13..i- noico & - nolenico Todos ci. i u ~ i v ~ ~ l i i u uel us - Lcr voriico 1 hexanoico I uulii... huevo. Las prostaglandinas fueron descubiertas originalmente en el plasma seminal.... .7.. .. .. . ioico AI gunas plantas.

en el ácido oleico. El aumento en el numero de doblcs ligaduras cis en un Bcido graso conduce a una diversidad de configuraciones espaciales prisi hles de la mulécula. Descritos en un principio en los leucocitos. La presencia de dobles ligaduras trans alterará las relaciones espaciales. PG?. Los leucotrienos y las Iipoxinas son un tercer grupo dc derivados eicosanoidcs romados por la via de Ia lipoxigenasa mas bien que por ciclización de la cadena del ácido graso (figura 164). puede tener "rizos " o una forma de U.jcmplo. si estan en lados opuestos. descubiertos en las plaquetas. el iicido oleico tiene forma de L. Figura 1 6 3 . los acilgliceroles naturales contienen una mezcla de ácidos grasos que los adapta con precisión a sus funciones.existen virtualmente en todos los tejidos de marniferos y que actúan como hormonas locales. B. los tromboxanos. Algunos alimentos contienen hcidos grasas fraris. el tipo "E" de prostaglandina (como en PGE:) ricnc un grupo cet6nico en la posición 9. Por tanto. tienen importaiites actividades fisiolbgicas y farmacológicas. con cuatro enlaces dobles crs. es s6lido a la temperaturacorporal. PGi. algunos enlaces giran. Prostaglandina E2 (PGE2). Si las cadenas acilo están en el mismo lado del enlace es ~ i scomo . Figura 1 6 4 . tienen el anillo ciciopentano interrumpido por un átomo de oxígeno (anillo oxano) (figura lb-3). ácido araquidónico) para formar un anillo ciclopentano (figura 16-2 j. con un "doblez" de 120" en la doble ligadura. Tromboxano A2 (TXA2) La mayor parte de los ácidos grasos insaturados naturales tienen dobles ligaduras cls Las cadenas de carbono de los ácidos grasos saturados tienen un patrón de zigzag cuando se extienden.es liquido por abajo de O "C.I. corno seria el caso a temperaturas bajas. Flgura 46-2. Las variaciones en los grupos sustituyentes adheridos a los anillos originan tipos diferentes en cada serie de prostaglandinas y tromboxanos.a mayor parte son subproductw en la saturacion de los ácidos grasos durante el proceso de hidrogenación o "endurecimieiito" de aceites naturales para fabricar margarina. Esto puede tener un significado profiindo e n el empaquetamiento molecular dentro de las membranas y en las posiciones ocupadas por los acidos grasos en moleculas más complejas como los CosfoIipidos. lo cual explica por que las biornembranas se adelgazan cuando la temperatura aumenta. denominados A. Por ejemplo. Los hcidos grasos insaturados de cadena larga que existen en la naturaleza son casi todos de la configuración cis. Son sintetizadas in vivo por ciclización del centro de la cadena de carbono de los ácidos grasos poliinsaturados 20-C (eicosanoicos) (por ejemplo. En los ácidos grasos insaturados existe un tipo de isomeria geométrica. U n triacilglicerol que contienc todos los Bcidos gracos de 12 C omhc saturados. etcetera. por c. ácidri araquidonico. en tanto que. Una contribución pequefia adicional proviene de la íngestihn de grasas de n i rniantes que contienen ácidos grasos iruns procedentes de la acción de los rnicroorganismos en el rumen. en tanto que el ácido elaidico se conserva "recto" en su doble ligadura Irunh. A temperaturas mayores. los puntos de fusión de ácidos grasos con un numero par de carbonos se elevan con la longitud de Ia cadena y bajan de acuerdo a la insaturacion. es tran~. si los tres residuos de ácido graso son I&:2. Tres hcidos grasos eicosanoicos diferentes daii origen a tres grupos de eicosanoides caracteri7ados por el niirnere dc dobles ligaduras en sus cadenas laterales. isómero del Acido olclico (figura 16-5). dependiendo de la orientación de los átomos o grupos funcionales alrededor del eje de Ias dobles ligaduras. t'G3. En la práctica. en tanto que el tipo "F" tiene un grupo hidroxilo en esta posición. como en el acido elaidico. haciendo que la cadena se acorte. se caracterizan por la presencia de tres dobles ligaduras conjugadas. Una sene análoga de compuestos. por ejemplo. Leucotrieno A4 (LTA4) . respectivamente. Las propiedades físicas y fisiolcigicas de los ácidos grasos están determinadas por la longitud de su cadena y por su grado de insaturación Por tanto.

lnrernat~onal Union o f Prwe and Applled Chemishy) y de la Unibn Internacional de Riuquiiiiica (IUB. 3 ) fosfatidiletanolarnina. digliceridos y triglirkridos se designarj. Casi todos son acilgliceroles mixtos. la grasa scrla la triestearina. el glicerol siempre es fosforilado en sn-3 por la glicerocinasa para dar 3-fosfato de glicerol y no 1-fosfato de glicerol. por ejempIo. del inglks. . Stn embargo. También se encuentran en los tejidos acilgliceroles parciales que consisten de mono y diacilgliceroles en los cuales dos hcidos grasos o solo uno esthn esterificados con el glicerol. son más insatusados. se utiliza el sistema -sn(s~ereuchernreal numhering = numcraciún estereoqu imica).diacilglicernles y triacilgliceroles. los monuglicéridos. 7) plasmalógenos y 8) esfingomielinas. en donde el fosfato se esterifica con el . la terminología anterior se utiliza con amplitud. I)e acuerdv con la terminología estandarizadaactual dc la Uniún Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC. las cuales no contienen glicerol.I 8. en adelante como monoacilglicerciles. diferentes de las esfingomielinas. si los tres ácidos g a s o s representados por R fueran Bcido estchríeo. que deben ser líquidos a todas las temperaturas ambientales. Un ejemplo de acilgliceroles mixtos se muestra en la figura 16-7. 2) fosfatidi lcolina. ("H Y' coo - Figura 16-5. el colesterol y los alcoholes superiores (por usualmente H). Todos &tos son fosfoacilgliceroles. Los Iipidos que en los tejidos están sujetos a enfriamiento. dolicol (figura 16-26). LOS FOSFOL~PFDOS SON LOS PRINC1PALES CONSTITUYENTES LIP~DICOS DE LAS MEMBRANAS Los fosfollpidoc comprenden los siguientes grupos: F j hcicido fosfatidico y fosfatidilgl iceroles.m-gliceroI (que se muestran GQmOuna fbmula proyectada tarnbien en la tigura 16-81. enejemplo. Estos son de particular importancia en la síntesis e hidrolisis de los triacilgliceroles. son más insaturados que Ios lipidos almacenados. C L ~ H ~ ~ Q contrados en las ceras y cl alcohol poliisoprenoide. pero no se encuentra en gran cantidad en los tejidos.0 H del alcohol adecuado. Pueden considerarse como derivados del hcido fosfafidico (figura 16-9). 6j lisofosfolipidos. 4) fosfatidilinositol. Las enzimas los reconocen con facilidad y son casi siempre especificas para uno u otro carbono. Es importante comprender que los carbonos 1 y 3 de glicerol no son iddnticos cuando se ven en tres dimensiones. Inlernaiiunal IJniun nJ Bincirerni. rcspcctivamentc. En la figura I 6 4 . cn particular en la medicina clinica.Lipidos de importancia fisinlb~ica 18J puesto que se forma por tres residuos d e acido estearico esterificados por el glicerol.~tg~). LOS TRIACILGLICEROLEC (TRIGLICERIDOC)*SON LAS PRINCIPALES FORMAS DE ALMACENAJE DE LOS ÁCIDOS GRASOS Los triacilgliceroles son &eres del alcohol glicerol y ácidos grasos.3-distearil-2-palmitil-.1 (Acidos oleico y elaidico). 4 S Ciertos alcoholes se encuentran en los Fípidos naturales Los alcoholes relacionados con los lipidos incluyen el glicerol. Los átomos de carbono 1 y 3 del glicerol no son idénticos Cuando es necesario numerar de manera inequívoca a los carbonos del glicerol. 5) fosfatidilserina. El ácido fosfatídico es muy importante como intermedio en la síntesis de triacilgliceroles y fosfollpidos. por ejemplo. lsomeria geometrica de los ácidos grasoc d9. del ingles. en hihernadores o en las extremidades de animales. 1. alcohol cetílico. : Forma cis : (Bcido oleico) \ II c '. Los lípidos de la membrana. por ejemplo. En las grasas que se encuentran en la naturaleza. la proporción de rnoleculas de triacilgliceroles que contienen el mismo residuo de ácido graso en las tres posiciones esterificadas ES muy pequetia.

la mayor parte de los! fosfolipidos tienen un radical acilo saturado en la posicidn an-1 y un radical no saturado en la posición sn-2 del glicerol. se encuentra en la mayor parte de los tejidos (figura 16-13). Su ausencia en los pulmones de los Iactantesprernaturos causa el sindrome de insuficiencia respiratoria. También se han aislado fosfolipidos que contienen tresnina. Figura 16-8.C-R.P .0 I R Los lisofosfolípidos son intermedios en el metabolismo de fosfogliceroles Estos fosfoacilgliceroles contienen s61o un radical acilo. II R.O-CH CH. Son los fosfolipidos m6s abundantes de E a membrana celular y constituyen la reserva corporal mhs importante de colina. .3-Diectearopalmitina. . II T H .18. Triacilglicerol. La dipalmitil-iecitina es un agente activo de superficie muy eficaz y el principal constituyente de los surfactantes que impide la adherencia debida a la tensión superficial. el cual n su vez. Figura 16-7. O lf E! fosfatidilinositol es un precursor de segundos mensajeros El inositol se halla como el estereois6mero mioinositol (figura 16-1 4). 0- Figura 16-9.I I II C-Rl R2- C . da origen a la cardiolipina (figura 16-1 0) en las rnitocondrias. . Sin embargo. la lisolecitina que es importante en el metabolismo y en la interconversibn de los fosfolipidos (figura 16-1 5). -O-C-R. se separa en diacilglicerol y trifosfato de inositol. por ejemplo. -C -O 261-1 O I II La cardiolipina es el principal Iipido de las membranas mitocondriales El hcido fosfatidico actúa como precursor del fosfatidilglicerol.Hifosfato de fosfatidilinositoE es un constituyente importante de los fosfolipidos de la membrana celular. 1. Triacil-snglicerol O O rl CH. que contiene al aminokcido serina en lugar de ebnolamina.O .2 0 Bioauimica de Harner (Capítulo 16) O O 'CH. Esta última se requiere como neurotransmisor y para almacenar grupos metilo libiles. El 4. con la estimulaci6n por un agonista hormonal apropiado. Las fosfatiditcolinas (lecitinas) se encuentran en las membranas celulares Éstas son fosfogliceroles que contienen colina (figura 16-1 1 ). I H$- O . La fosfatidilserina. actuando ambos como sefiaies internas o segundos mensajeros (capitulo 44).O-C-R. de las superficies internas de los pulmones. Figura 16-6. La Fosfatidiletanolamina (cefalina) difiere de las lecitinas s61o en que la etanolamina reemplaza a In colina (figura 16-12). Acido fosfatidico.

. Figura 16-14. Las esfingomielinas también se presentan en el sistema nervioso u l7HI -O-C-Rl RrC-OLyH >CHl -O-P 11 f 1 -O-CH2* O- CH.NHi Etanolamina J Las esfingomielinas se encuentran en grandes cantidades en el endfalo y tejido nervioso. estructura que también se encuentra en los glucosfingo1 ipidos (vkase adelante). 3-Fosfatidilcolrna Estos compuestos llegan a constituir hasta 10% de los fosfolípidos del encefalo y del músculo. 3-Fosfatidilserina. N o hay glicerol. Clasicamente el radical alquilo es un alcohol insaturado (figura 16-1 6). Cardiolipina (difocfatidilgiicerol) Los plaamalógenos se encuentran en el cerebro y los músculos o II lp. los plasmalogenos semejan a la fosfatidiletanolamina. Colina F H 3 O- c Figura 16-1 1. Por hidrólisis de las esfingomielinas se obtienen un hcido graso.3-Fosfatidiletanolamina. colina y un aminoalcohol complejo. la esfingosina (figura 16-17).o -%tiI . pero poseen un enlace éter en el carbono SPI-1 en lugar del enlace &ter normal que se encuentra en casi todos los acilgliceroles.-O-C-R. -0-7 -O-CI I i. Figura 16-1 2. c . En ocasiones la colina. \CH. R r C -02CH 9 T H .O-P HHa+ FI -0-CHp-Ctl-C00I o- F C Serina Y Fígura 16-1 3.CH. La combinación de la esfingosina con un Acido graso se conoce con el nombre de ceramida. hcido fosfbrico. 14 II 'yH2 -O-C -R1 FH.Fosfatidil acilglicerol Diosfatidil acilglicerol (cardiolipina) Figura 16-10. 3-Fosfatidilinositol. la serina o el ínositol pueden sussituirse por la etanolamina. Estructuralmente.

pero se encuentra en cantidades relativamentebajas en el resto del cuerpo.jidos es Gw. que contiene ceramida. en particular en el tejido nervioso (como en el cerebro). El gangliósido m8s simple en los te. Los gangliosidos están presentes también en el tejido nervioso en concentraciones altas. una mol&culade Colina Figura 16-15. R = ~ 0 4 ~ 7 . pero también existe en el cerebro en cantidades pequefias. Contiene cierto número de acidos grasos C:r caracteristicos. La galactosilceramida (figura 1 6-1 8) puede convertirse a sulfogalactosflceramida (el sulfato clasico).). La glucolipidos principales en los tejidos animales son los glucoesfingolipidos. Un ganglidsido es un glucoesfingolipido que contiene adernh una o más moléculas de un ácido sihlico. . Plasmalbgeno (fosfalidaletanolamina) Ceramida Acido fosfórico I O=P-0 I 1 0 graso - O-CH. Lisolecitina. Al parecer tienen funciones de receptor y otras.O-C-R 7 LOS GLUCOL~PIDOS (GLUCQESFINGOL~PIDOS) TIENEN IMPORTANCIA EN TEJIDOS NERVIOSOS Y EN LA MEMBRANA CELULAR Los glucolipidos están distribuidos ampliamente en cada tejido del cuerpo. Contienen ceramida y una o mas anicares. una molécula de glucosa.-CHyN(CH. Una esfingomielina f OH \ 1 CH.CH2.2-CH= CH-CH-CH-N-C- o 11 CH(0H) . Etanolamina Figura 16-1 6. La glucosilceramida es el glucoesfingolipido sencillo predominante en los tejidos extraneurales.lI.(CH2)2i-CH. Los gangliósidos son glucosfingolipidos complejos que se derivan de la glucosilceramida. Estructura de galactosilcerarnida (galactocerebrbcido. Colina + Figura 16-1 7. capitulo 15) es el principal &ido siálico encontrado en los tejidos humanos. La galactosilceramida es un glucoesfingolipido mayoritario del cerebro y otros tejidos nerviosos. se encuentran en la capa extenia de la membrana plasmática donde forman partc de los carbohfdratos d e la superficie celular. Los dos más sencillos son galactosilceramida y glucosilceramida. En especial. Figura 16-18. Ácido graso por ejemplo. Bcido cerebróniw H I Galactosa O-CH. R = H) y sulfogalactosllceramida (un sulfato. que abunda en la mielina.-(CH. El ácido neurarninico (NeuAc.

Forma de "silla' Forma de "barca" Figura 16-20. Todas las dobles ligaduras se muestran como tales. No obstante. en bioquimica también tiene importancia debido a que es precursor de un gran numero de esteroides igualmente importantes que incluyen ácidos biliares. Es impartante Debido a la asimetría en la molécula esteroidea con posibles numerosos estereoisómeros Cada uno de los anillos de seis carbonos del núcleo del esteroide es capaz de existir en la conformacibn tridimensional de "silla" o de "barca" (fígura 16-2 1). un simple anillo hexagonal denota 1 de 6 carbonos completamente saturado. no es un anillo bencénico. Todos los esteroides tienen un núcleo ciclico semejante al del fenantreno (anillos A. los anillos pueden ser crs o trans (figura 16-22). Otros ganglibsidos pueden contener de 1 a 5 moléculas de Bcido sihlico. El nicle0 esteroide. Las posiciones de los carbonos en el núcleo esteroide se numeran como se muestra en la figura 16-20. M es una especie que contiene un monosialice y el subindice tres es un numero arbitrario asignado con base en SU migración crornatográfica. Si el compuesto posee uno o m i s grupos hidroxilo y carece de grupos carbonilo y carboxilo. Figura 16-21. con todas las valencias satisfechas con ligaduras de hidrógeno a menos que se sefíale de otra manera. galactosa y una molCcula de NeuAc. Respecto uno del otro. hormonas suprarrenales. es decir. B y C). En la nomenclatura abreviada que se utiliza. Conformaciones de los estereoisdmeros . sitosteroles del reino vegetal y algunos alcaloides. trisialogangliósidos. al cual se une un anillo de ciclopentano (anilla D). etcétera. El GMIes un compuesto de considerable interés biolbgico ya que se sabe es el receptor en el intestino humano para la toxina del colera. Esto sucede clásicamente en las posiciones 10 y 13 (constituyendo los atomes de CIs y Cis). como sucede en el colesterol. LOS ESTEROIDES DESARROLLAN NUMEROSAS ACTIVIDADES FISIOLÓGICAS IMPORTANTES El colesterol es quizá el esteroide mejor conocido debido a su relación con la aterosclerosis. hormonas sexuales. dando origen a di-. Gangliosido G M ~ un . virtualmente todos los anillos estan en forma de "silla" que es la conformaci6n m8s estable. se trata dc un esterol y el nombre termina en -1. (3 representa al ganglibsido. rnonosfa10gangl1~sido que es el receptor en el intestino humano para la toxina del cólera. La estructura de un gangliósido más complejo derivado de GVI. Es comun una cadena lateral cn la posicihn 17. Las cadenas laterales de metilo sc señalan como ligaduras sencilIas libres en el extremo (metilo) final. En los esteroides que se encuentran en la naturaleza. comprender que en las fórmulas estructurales de los estcroidcs. glucósidos cardiacos. Ilamado GM~. se muestra en la figura 16-19.Ceramida-Glucosa4alaciosa-A-Acetilgalaosa (Acilesfingosina) NeuAc oí I Cer-Glc-Gal-GalNAc-Gal NeuAc I Figura 16-19. vitaminas D.

un miembro de Figura g6-23.Figura 16-22. El ergosterol es un precursor de la vitamina D El ergosterol existe en vegetales y levaduras y es importante por ser precursor de la vitamina D (figura 96-24). Aquélla entre B y C es trans y la unión C/Des truns excepto en los gluc6sidos cardiacos y los venenos de sapo. Figura 16-24. y (E) una configuración cis entre los an~llos A y B. A menudo se encuentra combinado con ácidos grasos como &ter de colesterilo. mientras que es cis en un ecteroide Sbeta. por las bacterias intestinales. Las ligaduras que unen grupos de sustitucion por arriba del pIano de los anillos se indican con líneas negras continuas (beta). Existe :n Ias grasas animales. En el10s se incluye la u biquinona (capitulo 14). La union entre los anillos A y B pueden ser cis O trans en los esteroidec que se encuentran en la naturaleza. de la doble ligadura entre los carbonos 5 y 6 del colesterol. mientras que aquellas que unen grupos por abajo lo están con líneas punteadas (al fa). El coprosterol se encuentra en las heces El coprosterol (coprostanol) existe en las heces como producto de la reducción. Ergosterol. 3-htdroxi-58-colesteno. Los grupos metilo unidos los C i n y CI3 esthn invariablemente en la configuración beta. pero no en las vegetales. están relacionados debido a que se sintetizan al igual que el colesterol (figura 28-2) a partir de unidades de isop p n o de cinco carbonos (figura 16-25). Es un constituiente de mayor importancia de la membrana celular y de las lipoproteinas plasmaticas. Los poliprenoides comparten el mismo COrn~UestQ precursor que el Aunque estos compuestos no son esteroides. El anillo A de un esteroide Salfa está siempre en la forma trans con respecto al anillo B. Núcleo generalizado de los esteroides que muestra (A) una mnfiguracibn trans total entre andlos adyacentes. pero especialmente en las del teiido nervioso. . El colestro! es un constituyente importante de numerosos tejidos El colesterol (figura 16-23) se encuentra ampliamente distribuido en todas las cdlulas del organismo. Cuando sc irradia con luz ultravioleta adquiere propiedades antirraquiticas debido a la abertura del anillo B (figura 5 3 4 ) . cuando se esterifica el grupo hidmilo de la oosicibn 3 con un acido graso de cadena larga. Colesterol.

etcétera 3) Terminación: ROO' + ROO* -+ ROOR + 0 2 ROO'+ R" +ROOR R' + R ' + R R Puesto que el precursor rnolecular para el proceso de inicio es generalmente el producto hidroperoxido ROOH. El malondialdehldo es el único compuesto formado por los Bcidos grasos con tres o mBs dobles ligaduras y se emplea como una medida de la peroxidacibn de los Ilptdos junto con el etano del carbono 2 terminal de los hcidos grasos omega3 y el pentano del carbono 5 terminal de los ácidos grasos omega6.l P + H' X'+KH+R0+XH LA PEROXIDACIÓN DE LOS L~PIDOS ES UNA FUENTE DE RADICALES LIBRES La peroxidación (autooxidacibn) de los Iípidos expuestos al oxígeno es la causa no sólo del deterioro de los alimentos (sancidez). Para controlar y reducir la peroxidacion lipídica. ~a pperoxidaci6n lipidica es una reacción en cadena que produce un suministro continuo de radicales libres que inician la peroxidacibn poste- R' + 0 2 + ROO' ROO' + RH -+ ROOH + R. El proceso completo puede ilustrarse como sigue: 1) Inicio: ROOH + metal(")++ ROO' + metal(". RO' . Figura 16-27. es decir. ROO* -LvH H H Al& / k :H m Hidroperbxido ROOH +Rm H H Malondialdehldo. . Peroxidadón de los lipidoc La reaccidn se inicta por la luz o por ionec metálicos. Figura 16-26. que toma parte en la síntesis de glucoproteínas transfiriendo residuos de carbohidratos a residuos de asparagina del polipkptido (capitulo 56). envejecimiento. Dolicol a alcohol de 95 carbonos. El galato R R m R. tanto los seres humanos en sus actividades como la naturaleza.Lípidos de in?portanciafisioIOgica 187 Figura 16-25. Cgs.donde pueden ser una causa di*chncer. t o s efectos deletéreos se inician por los radicales libres (ROO'.OH' ) producidos durante la formación de peróxido a partir de Qcidos grasos que contienen enlaces dobles de grupos metiIenos interrumpidos.os compuestos isoprenoides derivades de los vegetales comprenden el hule. E y K. la cadena respiratoria en la mitocondria y el alcohol de cadena larga.. etcetera. las vitaminas liposolubles A. dolicol (figura 16-26). rior. el alcanfor. la peroxidación de los lipidos es una reaccidn en cadena ramificadora con efectos potencialmente devastadores. D. de los Acidos grasos poliinsaturados que se encuentran en la naturaleza (figura 16-27). aterosclerosis. 1. usan los anbioxidantes. Unidad isoprenica. enfermedades inflamatorias. y el beta caroteno (provitamina A). sino tarnbidn del daflo a los tejidos rn vivo.

Sin embargo. basados cn procedimientos quimicos clasicos de cristaltzación. rorman micelas. butilato dc hidroxianisol (RHA. Por tanto. Las ernalsiones son partículas mucho inhs grandes. que ec liposoluble. la cromatografía gas-líquido (CGL). los lipidos son insolubles en el agua puesto que en SU contenido predominan los grupos no polares (de hidrocarburos). Tienen uso clínico potencial. que reducen la velocidad de iniciación de la cadena y 2 ) los interruptores de la cadena quc interfieren con su propagación Los antioxidantes preventivos incluyen a la catalasa y otras peroxidasas y reaccionan con ROOH y con quelantes de ionec metálicos como el dietilentriaminopentaacetato (DTPA) y etilendiaminotetraacetato (ED'I'A). Cuando se halla una concentración critica de estos lípidos en un medio acuoso. en la terapéutica del cáncer. Ademas. Antes de aplicar estas técnicas a los tejidos húmedos. Los antioxidantes perttnccen a dos clases: 1) preventivos. Los liposomas pueden formarse sorneticndo a un lipido anliphtico aultrasonido en medio acuoso. Particularmente util para la separación de las diversas clases de lipidos es la cromatografía en capa fina (CCF) (figura 16-28) y para la separación de los Acidos grasos individuales. que actúan en la rase lipídica para atrapar a los radicales ROO' (figura 53-9). ea1 ve2 el urato. liposamas y emulsiones En general. los ácidos grasos. En las interfases aceiteagua se orientan con el grupo polar en la fase acuosa y el no polar en la fase oleosa. la lecitinn) los cuales forman una capa superficial que separa la masa principal del material no polar de la fase acuosa (figura 16-29). esfingolipidos (las lipidos polares) y en menor grado. o insoluble en agua. los principales son: la superóxido dismutasa que actúa en la fase acuosa para atrapar a los radicales superóxido libres (O2-). usualmente formadas por lipidos no polares en un medio acuoso. Un sistema adecuado de solventes para ellos seria hexano-&ter dietilico-acido famiice (80~ O ' ~ V / V / V ) . orientados a órganos específicos. /n vivo. Consisten en esferas de dobles capas de Iipidos que encierran parte del medio acuoso. Los agregados de salec biliares en micelas asi como Iiposomas. Q L ente del ente Triscilglicerolea l t Ácidos grasos libres Colesterol 1.3-üiacllgliceroles 1. La peroxidacion rn vivo se cataliza tam bien por los compuestos hemicos y por las lipoxigenasas que se encuentran en plaquetas y leucocitos. y parte es hidrófila o soluble en agua. Separaciónde las principales clases de Ifpidos por cromatografia en capa fina. particularmente cuando se combinan con anticuerpo5 específicos de los tejidos. destilacion y extracción por solventes.del inglés. y los uratos y la vitamina C que son hidrosolubIes. . Los antioxidantes naturales son la vitamina E (tocoferol). se les utiliza como gen transferidor hacia el interior de las células vasculares y como porteadores para la administraciiin topica y transd6rmica de medicamentos y cosmeticos. el colesterol. etcetera. Estas moléciilas se describen como anfipáticas (figura 16-29).Z-Diacilgliceroles Figura 46-20. hu~latedhydroxy~nluene) son antioxidantes usados como aditivos en los alimentos. contienen grupos polares. del inglCs. Una capa doble de lales lipidos polarcs se considera como una estructura básica en las membranas biol~gicac(capitulo 43). se han reemplazado en gran parie por procedimientos cromatograficos.de propilo. Los antioxidantes interruptores de la cadena son a menudo fenoles o aminas aromat icas. y la vitamina E. Son estabilizadas por agentcs emulsionantes como los lipidos an fipáticos (por ejemplo. El heta caroteno es un oxidante cuando la PO: es baja. y Ia formacibn de micelas mixtas con las productos de la digestión de las grasas son importantes para facilitar la absorción de lipidos en el intestino. micelas. LOS L~PIDOS ANFIBÁTICQS SE ORIENTAN POR S! MISMOS EN LAS ENTERFASES ACE1TE:AGUA Forman membranas. como transportadores de fármacos en la circulacibn. algunos fosfelipidos. PARA IDENTIFICAR Y SEPARAR L~PIDOS SE UTILIZAN METODOS CRQMATOGRÁFICOS Los antiguos métodos de identificación y separacion de lipidos. parte de la molécula es hidrhfoba. los lipidos se extraen por un sistema de solventes usualmente basado en una mezcla de clorofomo-metano1 (2: 1). hutytated hdroq)unisole)y but ilato de h idrox itolueno (BI-ET. por ejemplo.

donde forman parte de los carbohidratos de la superficie celular. Sin embargo. por ejemplo. iromboxano. los lipidos más importantes. que tiene gran significado como constituyente principal de las lipoproteinas y como manera de almacenaje de Iípidos en el tejido adiposo. los lipidos anfipaticos tienen agregado uno o mhc gmpos polares que los vuelve en particular adecuados como constituyentes de membranas en interfases 1ipidolagurt. como el encéfalo y la capa exterior de la membrana celular. . fosfolipido RESUMEN 1) Los lipidos tienen la propiedad común de ser relativamente insolubles en agua (hidrofobos) pero solubles en solventes no polares. 4) Los eicosanoides se forman de hcidos grasos poliinsaturados de 20 carbonos y constituyen un grupo importante de compuestos activos en aspectos fisiológicos y farmacológicos. constituyentes mayores de las membranas y de su capa exterior de Iipoproteínas. por ejemplo. conocidos como prostaglandinas. tensoactivos en el pulmón. representados por triacilglicerol ("grasa"). micelas. 6) Los glucolipidos son tambiCn constituyentes significativos del tejido nervioso. monoinsaturados o poliinsaturados. 3) Los ácidos grasos de cadena larga pueden ser saturados. Formacidn de membrana Iipidicas. Los fosfoacilgliceroles son Iípidos anfipaticos y cubren numerosas funciones importantes. precursores de segundos mensajeros y componentes importantes del tejido nervioso. 3) Los lípidos de mayor importancia fisiol6gica son los acidoc grasos y sus esteres. junto con colesterol y otros esteroides.Grupo polar o hidrdfilo Grupo no polar o hidrofob Fase acuosa Fase acuosa Fase "olsosa"o no polar ! 000 Fase acuosa "k Compat4rmientos ~CUOSOS DE ACEITE EN AGUA O Bicapas Iipidicas LlPOSOMA (UNICAMELAR) E LlPOSOMA (MULTILAMELAR) F Figura 16-29. S) Los Csteres de glicerol son respecta a su cantidad. ernulsiones y liposomas a partir de lípidos antipatims. leucotrienos y lipoxinas. Su fluidez disminuye de acuerdo con la longitud de la cadena y aumenta con el grado de insaturacion. de acuerdo con el número de dobles ligaduras presente.

Chapman & Hall. Padley FB: The Lipid lfandhnok Chapman & 1-Iall. Annu Rev Pharmacol Toxicol 1988. vitamina B y hcidos biliares. Aarwood JL. Gurr . 1986. 199 1.23: 197. Frankel EN: Chernistp of Tree radical and singlel oxidarian of lipids. Es la rnolecula precursora a partir de la cual se sintetizan los demás estervides corporales.190 Broquímica de Hurpr (Capitulo 16) 7) El colesterol. Srnall DM: Lateral chainpacking in lipids and membranes. Harwood JL: Lipid Biuc~iemistry An Introduction. 2nd ed. 1991. Lipoproterns and iUernhranes. es un componente importante de las membranas.Orrenius S: 1-Iost hiachemical defense mechanisrns against prooxidants. Elsevier.ilnnlyris. Vance DE. Ansell G R (editors): Phospholipidc Elsevier. Cunstone FD. Vance 3 E (editors): R~ockemisttyo f Lipidr. 1982. Prog Lipid Res 19X5. Hawthorne JN.iprd . Moldeus P. I OH2 Cotgreave l A .28:189. como lipido anfipático. M REFERENCIAS Christie WW: 1. J Lipid Res 1984. Pergamon Press. Ml. Éstos incluyen hormonas importantes como las suprarrenacorticales y sexuales.25: 1490. 4th ed.

Las anfibblicas actuan como enlace entre las dos categorías anteriores. carbohidratos. 2) Vias catabólicas. realizan procesos oxidativos que producen energia libre.Panorama del metabolismo intermediario Peter A. Mayes. Las tres categorlas princrpales de las vías metabblicas. Las vías catabblicas producen energía libre en forma de equivalentes reductores (2H) o fosfato de aRa energia para suministrarla a ias vías anabblicas. constituye el metabolismo intermediario. Las vías metabóli cas pueden c tasificarse en tres categorías (figura 17-1): 1) Vías anabhlicss. con mhs de una función y tienen lugar en las "encrucijadas" del metabolismo. Proteinas. en forma de fosfatos de alta energia o de equivalentes reductores. por ejemplo. el ciclo del Acido citrico. PhD. por lo general. se ocupan de la síntesis de los compuestos que constituyen la estruc- tura y la maquinaria corporal. (a) . sino que intenta comprender sus interrelaciones y los mecanismos que regulan el flujo de los metabolismos a través de ellas. abarca un campo extenso que no sólo describe las vias metabólicas seguidas por las moléculas individuales. Icidos nucleicos. la cadena respiratoria y la fosforilacibn oxidativa. etdtera Mol&ulas del alimento Digestidn Molbculas sencillas Vlas Otms endergdnicos aníibólicas Figura 1 7 4 . 3) Vías anfibálicas. DSc El destino de los componentes de [a dieta después de la digestidn y la absorción. lipidos. Una de ellas es la sintesis de proteinas. Por tanto. por ejernplri. La energia libre requerida por estos procesos proviene de la categoría siguiente. cuando actijan como enlace entre las vías anabblicas y catabdlicas.

El metabolismo de los carbohidratos se ocupa del destino de la glucosa (figura 17-31 Todas las cklulas de los mamíferos metabolizan la glucosa a piruvato y lactato por la vía de la glucóIisis. lipidos y absorbidos de E proteínas de la dieta. acetiE-CoA. que puede entrar al ciclo del itcido cítrico para su oxidacibn completa a COI y HzO. Ios tejidos que pueden utilizar el oxigeno (aerobios) tienen la facultad de metabolizar el piruvato a acetilXoA. Asi. Tpdas las vias conducen a la producudn de acetil-COA. Es una fuente de equivalentes reductores (2H) para la biosintecis -por ejemplo. Acidos grasos. Todos estos productos de digestibn se procesan por sus vias metabólicas respectivas a un producto común. originando finalmente ATP en el procese de fosforilacibn oxidativa. la glucosa es el combustible principal de numerosos tejidos. LAS V ~ A S METAB~LICAS BASICAS PROCESAN LOS PRODUCTOS PRINCIPALES DE LA DIGESTION La naturaleza de la alimentación define el patr6n btisico del metabolismo en los tejidos. particularmente en el músculo esqueIético e hígado. La glucosa es un sustrato único ya que la gluc6lisis puede realizarse en ausencia de oxígeno (anaerobia) y el producto final es el lactato. deficiencia de enzimas o la secreción alterada de hormonas. de ácidos grasos. se denomina gluconeogénesis. Los principales son glucosa. embarazo y lactancia. por ejemplo. Los desequilibrios del metabolismo son consecuencia de.192 a Bioquirnica de Harper (Capítulo 17) El conocimiento del metabolismo en el animal normal es rin prerrequisito para la comprensión profunda de las anomalías que se producen en muchas enfermedades. Por otro lado. una deficiencia nutricional. interviene en otros procesos. Un ejemplo importante de una enfermedad causada por metabolismo alterado ("enfermedad metabólica") es la diabetes sacarina. que se utiliza en la formación de nuclebtidos y hcidos nucleicos. Figura t7-2. 2) La vía de la pentosa fosfato que proviene de intermediarios de la glucólisis. Ademis.aminoAcidos y glicerol. como los siguientes: 1) conversi611 a su polimero de almacenaje. Los mamíferos como el ser humano necesitan procesar los productos a digestión de carbohidratos. con algunos de sus metabolitos. gluc6gen0. que luego se oxida en el ciclo del icido citrico (figura 17-2). El proceso que produce glucosa a partir de precursores que no son carbohidratos. protelnas y grasas dietarias.con producción de gran cantidad de energia libre como ATP en el proceso de fosforilación oxidativa (figura 18-21. respectivamente. Esquema de las vías para el catabolismo de carbohidratos. qiercicio. 4) El piruvato y los intermediarios del ciclo del acido citrico proporcionan los esqueletos de carbono para la sintesis de aminohcidos y la acetil-CoA es el bloque estructural para los hcidos grasos de cadena larga y para el colesterol. El metabolismo normal incluye las variaciones y adaptaciones necesarias en periodos de inanicihn. En los rumiantes (y en menor extensihn en otros herbívoros). 3) La triosafosfato da origen a la fracción glicerol de los acilgliceroles (grasas). precursor de todos los esteroides sintetizados en el cuerpo. propiónico y butírico) pues en estos animales el metabolismo tisular se ha adaptado para utilizar ácidos grasos de cadena corta como sustratos principales. EI metabolismo de los fipidos se centra principalmente en los ácidos grasos y en el colesterol (figura 1 7 4 ) El origen de los hcidos grasos de cadena larga es la sintesis de novo de la a c e t i l 4 o A a partir de los carbohidratos o lipidos de los alimentos.y es tambikn fuente de ribosa. la celulosa proveniente de los alimentos la digieren microorganisrnos simbiontes a hcidos grasos de peso molecular bajo (acdtico. En los teji- . como los lact a n t e ~ . glicerol y aminoácidos. la mal se oxida en el ciclo del ácido citrico.

Esquema del metabolismo de los carbohidratos que muestra las prinupales vlas y productos finalec La gluconeog8nesis no se muestra. constituyen la principal reserva calhrica de! cuerpo. 1) Como en el caso de la a c e t i l 4 o A proveniente de los carbohidratos.Panorama del metabolismo rnlermedrarro 193 Giudgeno Glucofosfatas Vias de la pentosa fosfato 'O 3i O Triosafosfatos -----A- -+ Rtbosafosfato Acilglicerol Acetil-Co-A f Ácidos grasos Colesterol l Proteína 1 Figura 17-3. los acidos grasos pueden ser oxidados a acetilCOA(beta-xidación) o esterificadosa acilgficeroles. que son combustibles tisulares hidrosolubles alternos. por tanto. 2) Es una fuente de &tomos de carbono para el colesterot y otros esteraidcs. 3) En el hígado forma cuerpos cetónicos. los cuales se convierten en importante fuente de energía bajo ciertas condiciones (por ejemplo. dos. tidad considerable de energía en la beta oxidacibn y en el ciclo del Bcido cítrico y. donde. La a c e t i l 4 o A formada por la beta-xidacibn tiene varios destinos importantes. son combustibles tisulares muy efi- caces. Los ácidos grasos producen una can- . en inanicihn). como triacilgliceroles (grasas). es oxidada completamente a Coz+ H 2 0 en el ciclo del ácido cítrico.

ya que los tejidos son incapaces de sintetizarlos. utilizando el nitrbgeno arninico de otros arninoAcidos que estén en exceso. Ia mitocondria) o compartimiento (como el citosol) posee funciones bioquimicas especificas que determinan un patrón subcelular de vías metabblicas. Los cuerpos oetbnicos comprenden las sustancias acetoacetato. también se obtienen de la dieta. 2) forman glucosa (gluconeogCnesis). o 3) forman cuerpos cetónicos. LAS V ~ A S METABÓLICAS PUEDEN ESTUDIARSE A DlFERENf ES NIVELES DE ORGANIZACI~N Hasta la fecha s610 se ha visturnbrado el metabolismo como ocurre en el organismo intacto. El resto. Algunos deben ser suminismdos de manera específica por los alimentos (aminoácidos esenciales). Después de la desaminacián. A tisu lar y de órgano. Gran parte del metabolismo de los aminoácidos se enfoca a la transaminación (figura í 7 6 ) Los aminoácidos son necesarios para ta síntesis de proteinas. 3-hidroxibutirato y acetona. La ubicación e integracihn de vias metabblicas se han identificado por estudios a niveles menores de organización. la naturaleza de los sustratos que entran y los metabolitos que salen de tejidos y brganos es definida y su destino final se conoce. pues cada organelo (por ejemplo. los arninoácidos también son precursores de muchos otros compuestos importantes. como las purinas. pero pueden formarse a partir de intermediarios por transarninaci6n. o aminohcidos no esenciales. esto es: 1) A nivel tejida y 6rgan0. 2) A niver subcelular.194 Bioqeciminica de Harper (Capitulo 17) Dieta e ' Carbohidrato Aminoácidos \ Cuerpos cetónlcos Figura 17-4. e3 exceso de nitrógeno aminico es eliminado como urea y los esqueletos de carbono que permanecen despuh de [a transaminación: 1) son oxidados a COIpor el ciclo del ácido cítrico. Además de requerirse para la sintesis protelnica. pirirnidinas y hormonas como adrenalina y tiroxina. Esquema del metabolismo de Iípidos mostrando sus v[as y productos finales más importantes. la circulación sanguínea se integra al metabolismo Los aminohcidos obtenidos de la digestión de las proteínas procedentes de los alimentos y la glucosa .

mediante la formación de urea. El mtsculo esqueletico utiliza glucosa como combustible.Panorama del rnetabo/isrno intermediario 195 Cuerpos cetdnlcos Nitrbgeno arnlnica en del aado citrico Figura 17-5. en consecuencia. formando lactato y Coz. El hígado tiene la funcibn rnetabólica primaria de regula la concentracibn sanguínea de la mayoría de los metabolitos. Los Eipidos de la dieta (figura 17-71. tos triacilgliceroles quilomicrones no son captados por el hígado. desputs se secretan. Estos son captados por casi todos los tejidos (pero no por el . forman lipoproteínas para facilitar su transporte a los tejidos en un ambiente acuoso.conocidas como quilomicrones. Al contrano. Despuks de su hidrblisis Oiphlisis). Almacena glucógeno que se utiliza como combustible en la contracci6n muscular y sintetiza proteínas musculares a partir de aminaácidos procedentes del plasma. comparten una via común de absorcion por la vena portal hephtica. albúmina) y de desarninar a los aminohcidas que exceden los requerimientos. en particular en el tejido adiposo y en e[ higado. Además. liberando hcidos grasos que son incorporados a los tipidos tisulares u oxidados como combustible. en particular de la glucosa y aminoácidos. principalmente triacilgliceroles. convertir metabolitos no carbohidratos como lactato. durante la digestibn forman monoacilgliceroles y acidos grasos. glicerol y aminohcidos en glucosa (gluconeog&nesis). el plasma.de la glucosa y los arninoácidos. En el caso de la glucosa. inicialmente al torrente linfático y de aht a la circulación como lipoproteínas. esta enPma hidroli~a el triacilglicerol. el exceso es convertido a glucbgeno (glucog~nesis) o a grasa (lipogénesis). El musculo constituye aproximadamente 50% de la masa corporal y. La otra fuente principal de Acidos grasos de cadena larga es su síntesis (lipoghesis) a partir de carbohidratos. por ejemplo. El trirtcilgliceral del tejido adiposo es la reserva de combustible mhs importante del organismo. los ácidos graso: pasan a la circulacibn como acidos grasos libres. los cuales se recombinan con proteinas en las cdlulas intestinales. De este modo se asegura que ambos tipos d e metabolitos y otros productos hidrasolubles de la digestibn se dirijan inicialmente al hígado (figura 1 7 4 ) . La conservaci6n de una concentracidn adecuada de glucosa en la sangre es vital para ciertos tejidos en los que es combustible obligatorio. en particular cuando la alimentación es escasa. Esquema del metabolismo de aminoAcidos que muestran las vlas productos finales prinupales que se produce durante la digestibn de los carbohidrato~. Todos los productos hidrófoims y liposolub~esde la digestibn. el cerebro y los eritrocitos. lacual es transportada por la circulacibn hasta el rifión para ser excretada. Los tejidos extrahepáticos que poseen la enzima lipoproteína lipasa los metabolizan. en colaboracibn con el rifíón. Entre comidas el higado puede extraer sus reservas de glucbgeno para restituir la concentracibn sanguinea de glucosa (glucogen6Iisis) a. representa una reserva considerable de proteína que puede ser aprovechada para suministrar aminoácidos al plasma. el hígado se ocupa de sintetizar las principales protelnas plasmáticas (por ejemplo.

De inmediato se observa la funci6n central del mitocondrión. Los cuerpos cetónicos son transportados a los tejidos extsahepáticos. En particular. La figura 17-8 esquematiza las vías metab6llcas principales y su integracibn en una c61ula del parenquima hephtico. A nivel subcelular. donde actúan como otra fuente importante de combustible. otras. Dos vías de importancia adicional existen en el hígado: I } el triacilglicerol en exceso procedente de la lipogenesis y de los Acidos grasos libres es secretado a la circulación como lipoprotelna de muy baja densidad (VLDL. La glucólisis. Las membranas del retlculo endopliismico contienen el sistema ensirnhtico para la sintesis de acil- . Se observará que en la gluconeogénesis. lípidos y aminoácidos. deben entrar al mitocondrión y formar axalacetato antes de su conversion a glucosa. de la cadena respiratoria y la ATP sintetasa. la glucblisis se lleva a cabo en el citosol y el ciclo del ácido cítrico en las rnitocondrias En el cuadro 2 4 se proporciona un resumen de las funciones bioquimicas principales de los componentes y organelos subcelulares. con knfasis especial en su ubicacion intracelular. la vía de la pentosafosfato y la sintesis de ácidos grasos tienen lugar en el citosol. Además. No obstante. Nbtese que en el músculo hay escasa cantidad de glucosa libre. very Sow demi@ lipoprokin). alberga las en7irnas del ciclo del ácido cítrico. del inglés. Transporte y destino de sustratos y metabolitos de los carbohidratos y aminoácidos principales.196 Bioquimicu de Jirarper - (Capitulo 17) Roteinas plasmaticas Figura i 7 4 . 2) La oxidación parcial de los iicidos grasos libres conduce a la produccibn de cuerpos cetónicos (cetogenesis). sustancias similares. es sitio de depbsito para los esqueletos de carbono de arninoácidos después de la transminacion y suministra estos esqueletos para la sintesis de aminoicidos no esenciales. la mayoría de la ceIulas e s t h especializadas en sus funciones y tienden a enfatizar ciertas vias metabólicas y a relegar . ya que actúa como base y encrucijada del metabolismo de carbohidratos. ya que es fosforilada con rapidez al entrar cerebro y los eritrocitos) y esterificados a acilglicerofes u oxidados como combustible principal a Coz. de la beta oxidación de los ácidos grasos y de la producción de cuerpos cet~nicos. Este triacilglicerol tiene un destino semejante al de los quilomicrones. como lactato y piruvato que se forman en el citosol.

Las reacciones "no equilibradas" son puntos de control potenciales EL FLUJO DE METABOLITOS EN LAS VIASMETABOLICAS DEBE REGULARSE DE MANERA COMBINADA La regulacion de todo el flujo a tmvis de una via metabblica a menudo se combina con el control de sólo l o quizá 2 reacciones clave en la vía. gliceroles mientras que los ribosomas se ocupan de la sintesis proteínica. se conservan constantes cn los vertebrados de sangre caliente y tienen poca irnportancia reguladora. lipoproteina de muy bala densidad). Por otra parte. VLOL. capítulo 55). TG. Muchas reacciones en 7% vins metab6licas son de este tipo.Panorama del mefaholi. monoacilglicerol. catalizadas por "enzimas reguladoras". es decir son reacciones equilibradas. Sin embargo.~mo infermediario 19 7 Figura 17-7. como la concentraci6n de custrato son de primordial importancia en el control de la velocidad En una reacción en equilibrio. bajo condiciones de "estado constante" habría probablemente un flujo neto de . carga y solubilidad a travks de las membranas que separan a [os organelos requiere mecanismos complejos. Iipoproteina Iipasa. Los factores fisicoqulmicos que controlan Ia velocidad de una reacción de cathlisis enzimática. Algunos se explicarhn en relacibn con la membrana mitocendrial (capitulo 14) y otros en los capítulos siguientes. total de una via rnetabblica (capítulo 9) . la temperatura y et pH son factores que influyen en la actividad enzimatica. In vrvo. Transporte y destino de los sustratos y rnetabofitos prrncipales de los Iípidos (AGL. las reacciones hacia adelante e inversa se llevan a cabo a velocidades iguales y por tanto no hay un flujo neto en cualquier dirección. ácidos grasos libres: LPL. (No obstante. recuérdese la variación de pH en el aparato gastrointestinal y sus efectos en la digestión. Puede apreciarse que el transporte de metabolitos de diferentes tamaiíos. MG. triacilglicerol.

Esta via podria funcionar. En E a practica.CITOSOL m grasoe Figura 1 7 4 .metabolismo de uno o más de los srninoácidos no esenciales) izquierda a derecha debido al aporte continuo de A y la elirninaci~ncontinua de D. pero tendría poco objeto controlar el flujo regulando la actividad enzirnhtica ya que un incremento de ia actividad s61o servirla para acelerar y lograr el equilibrio. (AA +. en una vía metabolica hay invariablemente una o más reacciones del tipo no equilibrado en las que los reactantes se encuentran en concentraciones que están lejos del equilibrio. metabolismo de uno o m i s aminoAcidos esenciales. Ubicacibn rntracetular e integracibn de las vías metabblicas principales en una célula del parknquima hepdtico. se producen grandes pérdidas de energía libre en forma de calor. el cual no puede . AA e. En un intento por alcanzarlo.

Por otro lado. Uno es la modificacibn covalente de la enzima por fosforilaci6n y desfosforilacibn. en la cual las reacciones A ByCt . las reacciones que generan flujo.Panorama del me fabolismo intermediario 199 ser utilizado de nuevo. Las hormonas pueden afectar la sintests de las enzirnas controiadoras del ritmo. o la proteína cinasa dependiente de Ca2'/calmodulina. o por fosfatasas especificas que desfosforilan [a enzima.D son equilibradas y B + C es una reacción no equilibrada. . como la acetiI4oA de cadena larga. a veces como respuesta inmediata a las necesidades de la dlula (capitulo 1 1). la fosforilasa cinasa (figura 206). el cual a su vez convierte una enzima inactiva eii activa. como la relacibn [ATP]/[ADP]. C. Esto depende de su abastecimiento por la sangre. Con ft-ecuencia. cataliadas por la fosforilasa en el higado (figura 20-l ). que suministra Bcidos grasos libres. D. Algunas enzimas reguladoras pueden ser fosforiladas sin intervencibn del cAMP y proteína cinasa dependiente de cAMP. pero se agotaria a si misma si no se ejerciera control.05 mmollL para glucosa es bastante menor que la concentracion sanguínea de glucosa de 5 rnmol/L. catalizada por hexocinasa (figura 19-Z). Estas enzima5 responden a otras sefíales metabhlicas. B. las hormonas pueden actuar como inductoras o represoras de la formaci6n de mRNA en el núcleo. Las enzirnas que catalizan reacciones no equilibradas son a menudo proteinas alostéricas sujetas a la rhpida accibn de "retroalimentación" o "alimentacibn delantera" controladas por modificadores alostericos. es un paso generador de flujo debido a que su Km de 0. Las enzimas que catalizan reacciones no equilibradas suelen estar en concentraciones bajas y sujetas a otros mecanismos de control. la síntesis de glucbgeno y su desdoblamiento (figura 20-1 j. la cual ataca las reservas de glucbgeno y proporciona la glucosa sanguínea y la lipasa hormona sensible en el tejido adiposo (figura 27-8). La primera reacción en la glucólisis. que a su vez esta sujeto a la absarcibn de alimento por el intestino o a ciertas reacciones clave que conservan y liberan sustancias importantes a la sangre. por ejemplo. El flujo tambikn depende de la capacidad del sustrato A para pernear la membrana celular. como en enzimas catalizadoras de vías degradativas (por ejemplo. lo cual permite el control separado de cada una. La reacción de generación de flujo es la primera reacci6n en una vía saturada con custrato Puede identificarse como una reaccibn no equilibrada en la cual el Km de la enzima es considerablemente mas bajo que la concentracion normal de sustrato. Estas actúan por varios mecanismos diferentes [capitulo 44). El flujo a travds de una via de este tipo puede ser regulada por la disponibilidad de sustrato A. Por lo general participan dos vias independientes por completo. pimvato deshidrogenasa (figura 196). Otros mecanismos de control dependen de la acci6n de hormonas que responden a las necesidades del cuerpo como un todo. Adernhs. el producto de una via biosintética. por ejemplo. La forma activa de la enzima puede ser la enzima fosforilada. Este cambio es originado por la actividad de una protetna cinasa dependiente de cAMP que fosforila la enzima. Una caracteristica importante que ayuda al control metabblico es que las vias que catalizan la degradacibn de una sustancia no son una simple inversi6n de la sintesis. haciendo que este ripo de reacción sea esencialmente no reversible. por ejemplo. LOS MECAN1SMOS ALOSTERICOS Y HORMONALES SON IMPORTANTES EN EL CONTROL METABÓLICO DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS En la figura 17-9 se muestra una vía metabdlica hipotktica. por ejemplo: Calor Reaccidn no equilibrada Esta vía tiene flujo y direccidn. no es un cambio rápida pero a menudo es una respuesta a variaciones nutricionales. la fosforilasa a) o la enzima desfosforili7ada. la acetil-CeA carboxilasa. dependerh de la eficacia de la eliminacibn del producto final D y la disponibilidad del cosustrato o cofactores representados por X e Y. A. por ejernpio. principales combustibles para los tejidos. por ejemplo. Ésta ec rápida y con frecuencia mediada a través de la formación del segundo mensajero cAMP. Esto es similar a la apertura y cierre de una válvula "unidireccional" permitiendo controlar el flujo total. Ya que esto incluye [a síntesis de nuevas proteínas. como las enzirnas catalizadoras de procesos de síntesis (como la glucbgeno sintasa a). inhibirá la enzima que cataliza la primera reacción en la via. o estimulantes de la fase de traslacibn de la sintesis de proteínas a nivel ribosbmico (capítulos 41 y 44).

acetil<oA. el cual. algunas de las cuales son exportadas al resto del cuerpo. por lo general involucra reacciones de fosforilaci6n. as1 como combustible para energizar los procesos vivientes. antes de su oxidación final a C 0 2 en el ciclo del ácido cítrico. @ y son formas rapidas. colesterol y otros esteroides a partir de carbohidratos y de colesterol y cuerpos cetiinicos a partir de Acidos grasoc. incluyendo glucosa y aminoAcidos. lípidos y proteínas son catabolizados a un metabolito común. @ inducción de la formacibn del nuevo mRNA y @ represion de la formacibn de mRNA. a menudo.200 Bioquim ica de Happer (Capitulo 17) Inactiva Enzl Membrana celular X Y Activa D c - Activación alostArica "alimentacion delantera" Inhibición afostkrica negativa retroalimentacion Producción en el núcleo de mRNA Induccibn Figura 17-9. en tanto que @ a @ son mecanismos más lentos d e regular la actividad enzimatrca. Represibn Mecanismos d e control de una reaccion catalizada por enzimas Los números en 10s círculos indican posibles sitios de actividad d e hormonas @ alteración de la permeabilidad de la membrana. dado que su función primaria es servir a los tejidos extrahepáticos. El hígado tiene una función directa en la regulaciiin de la concentraciór! de numerosos constituyentes sanguíneos. a a RESUMEN 1) Los productos de la digestion proporcionan a los tejidos. 3) La Acetil-CoA se utiliza también como bloque estructirral para la biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga. 4) La glucosa proporciona esqueletos de carbono para la fraccibn glicerol de las grasas y para varios arninohcidos no esenciales. . comprende la oxidacibn o sintesis de moltculas. bloques estructurales para la bioslntesis de moleculas complejas. alteración d e la velocidad d e traslacibn del mRNA a nivel ribosomico. 2) Casi todos los productos de la digestión de carbohidrato~. las proteínas plasrnaticac. inversibn de una enzima inactiva. desfosforilacion. por ejemplo. 5) Todos los productos hidrosolubles de la digestibn son transportados al hlgado a través de la vena portal hepática para procesamiento.

Hue L. incluyendo las del ciclo del ficido cítrico. incluyendo la formación de glicerolipidos y el metabolismo de fármacos. Csabtree B: Flux-generüting and regulatory steps in rnetabolic control. Start C: ReguIaiinn in iidetabolasm. sino tambien en el retículo endoplásmico. A menudo. donde en los ribosomas. El metabolismo de aminoacidos tiene lugar no solo en el citosol y las mitocondrias. F a modificacibn alostérica y covalente. Por su parte. EIsevieriNonh Holland. a través de la estimulaciiin o inhibición de la síntesis de protelnas enzimiiticas. del fosfato de pentosa o pentosafosfato y de la lipogénesis. REFERENCIAS Cohen P: Conaro¡ o f l 3 r y m e Activiv 2nd ed.6:53. beta oxidacibn de Iicidos grasos y cadena respiratoria. 7) Las vías metabblicas son reguladas por mecanlsmos rapidos que afectan la actividad de enzimas existentes. Newshome EA. Newsholme EA. los aminoacidos son convertidos en proteínas. las membranas del retículo endoplasmico contienen enzimas para otros numerosos procesos. hay tres compartimientos metabblicos subcelulares primarios. Wilcy.Panorama del metaboiismo rnb~rmediario 201 6) Además del núcleo. 198 1. Chapman & Hall. Las hormonas regulan tambiCn mecanismos mhs prolongados o lentos. 1983. por ejemplo. . Trends Bzochem Ser 1981. Van de Werve C (editors): Short-Term Regulation o f Lzver hdefaholism. glucogknesis. 1973. Además. El citosol contiene las enzirnas de las vías de glucblisis. !a mitocondria contiene las enzimas principales de la oxidacibn. esta ultima es iniciada por la acción de hormonas. glucogenó2isis.

pero el hepatico es el único donde todos tienen importancia extrema. La COA contiene la vitamina acido pantoténico. Además. Ciirato (c6) Figura 18-1. los que.FiI ciclo del ácido cítrico: Petes A. respectivamente. permiten la liberación y captura como ATP de la mayor parte de la energía libre de los combustibles tisulares. por lo que se presume que estas anomatías sean incompatibles con un desarrollo normal. un &ter de la coenzima A. un hcido tricarboxílico de seis carbonos. Los residuos acetilo estfin en forma de acetil4oA ( C H 3 .lipidos y proteínas. . se ha informado muy pocas. desaminacibn y lipogdnesís. EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO PREPARA EL SUSTRATO PARA LA CADENA RESPIRATORIA En esencia. durante la oxidaciiin. se puede considerar que desempefia una función catalítica. DSc El ciclo del acido cítrico (ciclo de Krebs. - La función principal del ciclo del ácido cítrico es servir como vía comun final de la oxidación de carbohidrato~. las cuales llevan a cabo el catabolismo de los residuos acetilo. PhD. respecto a los seres humanos. lo que da por resultado la fomacibn de citrato. el ciclo comprende la cornbinacibn de una molecula de acetilXoA con el oxalacetato. si es que algunas. Por tanto. ciclo de los icidos tricarboxilicos) es una serie de reacciones que se efectúan en las mitocondrias. Esto es porque la glucosa. Un mudo testimonio de la importancia vital del ciclo del hcido citrico es que. acetato activo). Algunos de estos procesos se realizan en casi todos los tejidos. Cielo del dcido cltrim que ilustra la funcibn catalítica del oxalaeetato. gran número de células hepaticas esthn dafíadas o han sido reemplazadas por tejido conectivo. como en la hepatitis aguda y en la cirrosis.C o S-CoA. las repercusiones con profundas cuando. los ácidos grasos y muchos arninoácidos son metabolizados a a c e t i l 4 o A o a intermediarios del ciclo. por ejemplo. hcido dicarboxilico de cuatro carbonos. Puesto que sólo se necesita una pequefia cantidad de oxalacetato para facilitar la cenversibn de una gran cantidad de unidades acetilo en Coz. desempefia un papel principal en la gluconeogénesis. en la transarninación. liberando equivalentes de hidrógeno. Mayes. anoi-malidades genéticas de sus enzima. Sigue despuCs una serie de reacciode Cozson nes en el curso de las cuales dos mol~culas liberadas y se regenera el oxalacetato (figura 18-1 1.

lo cual facilita la transferencia de equivalentes reductores a las enzimas adyacentes de la cadena respiratoria. La oxidación del isocitrato acoplada con la cadena respiratoria procede casi completamente a travbs de la enzima dependiente del NAD'. ferrosulíürada (Fe:S). que forma la citrilXoA. ya sea libres o adheridas a la superficie interior de la membrana interna. la ausencia (anoxia) o deficiencia (hipoxia) de O1causa la inhibición total o parcial del ciclo.marcada en el ciclo del ácido cítrico. también catalizada por la isocitrato deshidrogenasa. Las otras dos enzimas son NADP+-especIficas y se encuentran en las mitocondrins y en el citosol.. que es atraido por el enlace de tres puntos de la enzima hacia el sustrato (figura 8-31. citrato sintasa. el cual en forma de fluoroacetil4oA.acompafíada por una considerable pérdida de energia libre como calor. alfa-Cetoglutarato + COI + NADH + H' Sigue una descarboxilacibn a alfa-cetogiutarato. se encuentra sblo en las mitocondrias. Este proceso es aerabfo por lo cuaI requiere oxígeno como oxidante final de los equivalentes reductores. algo del cual permanece unido a la enzima. la terminacibn -ato por ejemplo. Es posible que el cis-aconitato no sea un intermediario obligatoria entre el citrato y el isocitrato. Esto era desconcertante. en palmitato. puede apreciarse por referencia del destino de la acetil-COA. y rehidratación hasta isocitrato. pero de hecho puede ser una rama lateral de la via principal.ya que el ácido cítrico es un compuesto simktrico. Pareceria que el oxalosuccinato permanece unido a la enzima como un intemediario en [a reacci6n global. que contiene hierro en el estado Fe2' en forma de una proteina compleja La reaccidn es inhibida por la presencia de fluoroacetato. Citrato Cirsconitato (unido a enzima) H20 HzO LAS REACCIONES DEL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO LIBERAN EQUIVALENTES REDUCTORES Y CO2 (figura 1 8 3 ) " La condensación inicial de acetil-CoA con oxalacetato para formar citrato es catalizada por la enzima condensante. respectivamente. Se han descrito tres isocitrato deshidrogenasas diferentes. denota cualquier mezcla de ácido libre y la(s) forma(s) ionizada(s) (segUn el pH) en la cual no cstán especificados los cationes". es seguida por la hidrólisis del enlace tioCster de la COA. Una. lo cual asegura que la reaccibn prosiga hasta su terminación. . La misma regta se adopta en este texto para todos los ácidos carboxilicos. Durante el curso de la oxidacihn de la a c e t i l 4 o A en el ciclo. Estos equivalentes reductores entran entonces en la cadena respiratoria donde son generadas grandes cantidades de ATP en el proceso de fosforilaci6n oxidativa (tigura 18-2 y capitulo 14). lsocitrato + NAD' e+Oxalosuccinato H (unido a la enzima) * De la circular No. tal como se muestra en la figura 15-3. Ia que también esta situada en lamembrana mitocondrial interna. que es NAD+-específica.lipidos y amino8cidos. Este ÚEtimo inhibe a la aconitasa lo que ocasiona acumulación del citrato. La reacción de condensación. 200 del Comitt de Editores de Hiochemical Journals Recommendations ( 1 975): "De acuerdo Con la regla bioquímica esthndar. se forman equivalentes reductores en forma de hidrbgeno o de electrones como resultado de Ia actividad de deshidrogenasas especificas. Los experimentos con intermediarios marcados con C" indican que el citrato reacciona con la aconxtasa de manera asimktrica.204 Bioquímica de Harper (Capitulo 18) El ciclo del hcido cítrico es una parte integral del proceso por el cual se hace disponible mucha de la energía Iibre liberada durante la oxidación de carbohidrato~. El Mn" (o Mg2') es un componente importante de la reacción descarboxilante. Sin embargo. que efectúa la sintesis de un enlace carbono a carbono entre el carbono del metilo de la acetil-CoA y el del carbonilo del oxalacetato. Esta conversión tiene lugar en dos pasos: deshidratacibn hasta cis-aconitato. ahora se comprende (cuando la mol&culaes visualizada en tres dimensiones) que los dos grupos -CH2C00no son idinticos en el espacio con respecto a los grupos 4 H y 4 0 0 . con el resultado de que tsta siempre actúa sobre aquella parte de la molécula que deriva del oxaiacetato. se condensa con el oxalacetato formando fluorocitrato. Las enzirnas del ciclo del ácido cítrico localizan en la matriz mitocondrial. Acetil-CoA + Oxalacetato + HzO + Citrato + COA El citrato es convertido en isocitrato por la enzima aconitasa (aconitato hidratasa). Por tanto. El isocitrato experimenta deshidrogenacibn en presencia de isacitrato deshidrogenasa formando oxalosuccinato. Las consecuencias de la acci6n asirnktrica de [a aconitasa.

producto del catabolismo de carbohidratos. Ciclo del Bcido cítrico la vía catabblica principal para la acetil-COAen los organismos aerobies La acetil-COA. se generan 11 -@ por medio de fosforilactón oxidativa y un surge a nivel de sustrate a partir de la conversion del succinil-COAen sucunato. y oxidada a C02 con Iiberacibnde equivalentes reductores (2H) La oxidacibn subsiguientede 2H en la cadena respiratoria conduce al acoplamiento de la fosforilación de ADP a ATP Para una vuelta del crclo. proteínas y Iipidos. a .El crclo del ácido citr'rrico: cutaholrsrnu de la acetilJoA 0 205 lsocitrato (Ce) t Q ~ r e s p M Fosforilacion oxidativa -@ 5 Flavoproteina anaerobiosis (hipoxia. anoxia) Cit Citocromo m@ Fosfato de alta energía H . es introducida al ciclo junto con H20. " Figura 18-2.

.00. los dos Btomos de carbono del radical aoettlo se muestran marcados en el carbono del carboxilo (usando la designacibn y en el carbono del rnetilo (usando la desgnaubn [i]).COO- k ~ . Se indican los sitios de inhibicibn por fiuoroacetato. m) .C H .C 0 0 Isocitrato I ADP + Pi Arsenito NADH + H* Oxalosuccinato O Z C -coo- Figura 18-3. . parte de la marca en el oxalacetato es rncarporado a la glucosa y el gludgeno (figura 21-1) Para una explicacibn de las aspectos estereoquimicos del ciclo del Bcido citrico.o COA SH CH. Aunque se pierden dos &tornos de carbono como CO2 en una revolucrbn del ciclo. malonato y arcenito. estos dtomos particulares no derivan de acetil-COAque ha entrado inmediatamente antes al ciclo sino que surgen de aquella porción de la moléwla de citrato que derivb del oxalacetato. el oxalacetato que se regenera está ahora marcado.-~OOL-Malato 1 -&ONAO* Fluoroacetato ~ H ~ ~ o o - H.~ O O - c-coo- i . se produce un "proceso aleatorio" del marcaje en este paso de modo que los cuatro Btomocde carbono del oxalacetatoaparecen marcados decpuks de una revolucibn del ciclo. Para seguir el paso del aeetil-COAa travks del ciclo. Sin embargo. consultese Greville (1 968). El ciclo del ácido cltrico (de Krebs).COOHO-C-CODCH. de él se forma el COZ marcado que se elimina en la segunda vuelta de uclo Debido a que el succinato es un compuesto simétrica y la suminato deshidrogenasa no distingue entre sus dos grupos carboxilo. al completarse una vuelta del uclo.¿ . Durante la gluwneogenesis.-COOCitrato I HO-CH k~.-gFumarato n 1I CH-COOCls-aconitato A J C H ~ ~ O O Succinato H 0. La oxidación del NADH y del FADH2 en la cadena respiratoria wnduce a la generacibn de ATP a travks de la fosforilacibn oxidativa.

pero esta no interviene en el ciclo del ácido cihico. La enzima contiene FAD y proteína ferrosulfurada (Fe:S). difosfato de tiamina. Los experimentos con isótopos han mostrado que la enzima es esteroespecifica para los Atomos de hidrógeno trans de los carbonos metileno del succinato. Aunque pueden cata1izar reacciones similares. El succinato es metabolizado ahn mfis por medio de una deshidrogenacibn seguida por la adicibn de agua y. Se f m a fumarato como resultado de la deshidrogenacibn. La fumarasa (fumarato hidratasa) cataliza la adicibi de agua al fumarato para formar malato. Las enzimas del ciclo del hcido citrico. ya que ambos sustratos son aIfa-cetoacidos.E/ ciclo del úcido cjtrico. Como en el caso de la oxidacion del pinivato (capitulo 193. dando por resultado [a acumulación de succinato. que Pa reaccion se debe considerar fisiológicamente unidireccional.y da por resultado la . especifica para nucleótidos de guanina. subsiguientemente. es la conversión de la succinil-CoA en succinato acoplada con la conversión del acetoacetato en acetoacetil-CoA (capitulo 24). catahoiismo de l a acetil-CoA 207 Luego. reaccibn que requiere NAD'. NAD'. el flujo neto es en la direccibn del oxalacetato porque este compuesto. Una reacción alternativa en los tejidos extrahepaticos catalizada por succinilZoAacetoacetato COAtransferasa (tioforasa). Es la única deshidrogenaci6n en el ciclo del k i d o cltrico que incluye la trans- . que se encuentran en la matriz. Succinil-COA+ COI + NADH + H' La reacción catali~ada por un complejo de alfa-ceiogluhrato deshidrogenasa tarnbitn requiere de idénticos cofactorec -por ejemplo. tmbikn se encuentran fuera de la mitocondria. que está unida a la superficie interior de la membrana mitocondrial interna. Estos equivalentes reductores son transferidos a la cadena respiratoria situada en la membrana mitocondrial interna (figura 18-2). POR CADA CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO SE FORMAN 12 MOLECULAS DE ATP Como resultado de las oxidaciones cataljzadas por las enzimas deshidrogenacas del ciclo del ácido cítrico. Succinato favor del malato. FAD y COA. algunas de las enzimas. Fumarata + H 2 0o L-Malato Además de ser especifica para el L-is6mero del malato. por una deshidrogenacihn más que regenera el oxalacetato. La adición de rnalonato o de oxaiacetato inhibe a la succinato deshidrogenasa competitivamente. rioéster de alta enerformación de s u c c i n i l ~ o Aun gía. ferencia directa de hidrdgeno desde el sustrato a una flavoproteína sin la partictpacibn del NAD'. al contrario de otras enzimas del ciclo. Durante el paso a lo largo de la cadena. lipoato. junto con el otro producto de la reacción (NADH) es eliminado continuamente en reacciones ulteriores. la túmarasa cataliza la adición de los elernentos del agua a la doble ligadura del fumarato en la confíguracibn tranrr. son isoenzimas.Fumarato + FADHz La primera reaccidn de deshidrogenacidn es catalizada por la succinato deshidrogenasa. tos equivalentes reductores del NADH generaran tres enlaces fosfato de alta energia por la esterificacibn del ADP en ATP en el proceso de F a fosforilación oxidatira (capitu- * FAD t . por ejemplo. el arsenito inhibe la reacción haciendo que se acumule el sustrato alfa<etoglutarato. la malato deshidrogenasa. El malato es convertido en oxalacetato por la malato deshidrogenasa. L-Malato + NAD* e Oxalacetato * NADH + H' Aunque el equilibrio de esta reaccihn esta muy en Éste es el único ejemplo en el ciclo del hcido citrico de la generación de un fosfato de alta energia a nivel sustrato y se produce debido a que la liberacibn de energia libre procedente de la descarbaxilacibn oxidativa del alfa-cetoglutarato es suficiente para generar un fosfato de alta energía además de la formación de NADH (que equivale: a 3 4. El equilibrio de esta reaccibn está tan en favor de la fonnacibn de succinil<oA. es decir. Para continuar el ciclo. la succinil-CoA se convierte en succinate por la accibn de la enzima succinato tiocinasa (succinil4oA sintetasa). La matriz mitocondrial tambikn contiene una segunda succinil4oA sintetasa. el alfa-cetoglutarato pasa por una descarboxilaci6n oxidativa de una manera anhloga a la del piruvato (figura 1 9-5). pueden no ser de hecho las mismas proteinas que las enzimas mitocondriales del mismo nombre. se producen tres moléculas de NADH y una de FADHz por cada molécula de acetilXoA catabolizada en una vuelta del ciclo. excepto las alfa-~etoglutaratay succinato deshidrogenacas.

Son: 1) Riboflavina en forma de dinucleótido d c flavina y adenina (FAD) cot'actor en el compleLio de la alfa<etoglutarato deshidrogenasa 4 en el succinato deshidrogenasa. Las reacciones de la arninotransferasa (transaminasa) producen piruvato a partir de la alanina. evadiendo asi el primer sitio de iosforilaciDn oxidativa en la cadena respiratoria (flgiira 14-7).stas vias intervienen en los procesos de gluconeogcncsis. transaminación. rolCculas d P formada La transferencia neta al cicIo es resultado de varias reacciones diferentes. Io cual asegura un abastecimiento de oxalacetato. ATP + COZ+ HzO + Piruvato + Isocitrato . 1 Neto 12 Esta reacción se considera importante en conservación de concentraciones adecuadas de oxalacetato para la reacción de condensacibn con la acetil-CoA. desaminaci~n y sintesis de acidos grasos. desde el citrato hasta el oxalacetato. 2) Niacina en forma de diniicleótido de adenina y nicotinamida (NAD). 12 nuevos enlaces fosfato de alta energia son generados en cada vuelta del ciclo EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO ACTÚA COMO P!VOTE EN EL METABOLISMO Algunas vías metabólicas terminan en un ctinstitiiyente del ciclo en tanto que otras se originan de C1. el FADH? produce s61o dos enlaces fosfato de alta energía porque transfiere su poder reductor a la Q.E 1 1 ' 1 . Organos quc contienen un Jiiego completo de enzima5 para la gluconeogénesis (capitulo 2 1). A- ---. isocitrato deshitlrogenasa.I. Un nuevo enlace de alta energia es generado a nivel del ciclo mismo (csto es. 4) Acido pantotknico como parte de la coenzirnn A. hacia dentro de la via principal de gluconeogénesis es la fosfoenolpiruvato carhoxicinasa. a nivcl del sustratci) durante Ia conversión de la succinilXoA en succinato. Debido a que estas reacciones son reversibles. entra en el ciclo a través de la conversión en piruvato y oxalacetato. un irnportante sustrato para la gluconeogénesis. Sus actividades se resumen a continiiacion.susui m idacihn D i I2en la respiratc in 2 idacibn IDH cn la ia respiratc. oxidativo y sintktico. oxalacetato del aspartato y alfa-cetoglutarato del ácido glutamico. 1 uirieru Kcacció catalizad~ : prodircci de -@ 4 . .". cocnzima para tres deshidrogenaas de! cicIo. El lactato. puesto que pueden dar origen a una produccián neta de glucosa en el hígado o el riñbn. Sin embargo. cs anfihtilico.iuncirin iI>t l en la . el ciclo tambikn sirve como fuente de . De este modo. la transaminación y la desaminación Todos los miembros principaIes de ciclo. El ciclo del ácido cítrico interviene en F a gluconeog6nesis. cofactor adherido a residuos acilo "~ctivos" como en la acctil-CoA y s u c c i n i l ~ o A . Portanto. . Entre las mas importantes está la fomacibn de oxalacetato por la carhoxilacicín del piruvato. que catalim la descarboxilación del oxalacetato para dar fosfocnolpiruvato. calalizada por la piruvatn carhoxilasa. como difosfato de tiamina. Cerieración (i e ATF p del ácido cítrico . coenzima para la descarboxilaci6n en la reacción de la alfa-cetoglutarato deshidrogenasa. Oxalacetato + GTP + Fosfoenolpiruvato+ COZ+ GDP -1. (cuadro 18-1).208 Bioquimica de Hurper In 14). ia rt'spiralc -idación del rDt l en la ia respiratc Oxalacetato + ADP + Pi 1 1 - e1 uc -u" . 3) Tiamina (vitaniina RI). Laenzima clave que facilita la transferencia neta fuera del ciclo.. el ciclo del ácido cítrico interviene en ambos procesos. actuando el GTP como fuente de fosfato de alta cncrgia (figura 184). LAS VITAMINAS TIENEN FUNCIONES ESENCIALES EN EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO Cuatro dc las vitaminas solubles del cornple-jo 3 intervienen de rnancra precisa en el funcionamiento del ciclo dcl hcido cilrico. actúa como un activador alosterico de la piruvato carboxilasa. alfa-cetoglutarato deshidrogenasa y malato deshidrogenasa. - . es decir. J. Si ésta se acumula. son glucogénicos en potencia.

De particular importancia para los rumiantes es [a conversión del propionato. + Glucosa + - P-enolpiruvato . la ícoleucina. la cual es imper- . a-Cetoglutarab vla glucogenica a través de la carboxilación formando oxalacetato. la treonina y el triptdfano. . (En los rumiantes. + Piruvato t . el principal producto glucogCnico de la fermentación en el rumen. Otros aminoácidos contribuyen a la gluconeogénesis debido a que el total o parte de sus esqueletos de carbono del O ácido cítrico despuks de la desamientran al C ~ C ~ nacibn o la transaminacion. Las flechas gruesas indican la via principal de la glumneog8nesis esqueletos de carbono para la síntesis de aminohcidos no esenciales. la metionina y la valina forman succinilCOA. la serina. la cisteina. la histidina.Oxalacetato + + Alani"= Grutamato + PiruMto e-.) Dado que la pimvato deshidrogenasa es un enzima mitocondrial y las enzimas responsables de la síntesis de ácidos grasos son extramitocondriales. Participacibn del ciclo del Bcido citriui en la transaminación y la gluconeog6nesic. la hidroxiprolína. y la tirosina y fenilalanina forman fumarato (figura 18-4). por ejemplo. la a c e t i l 4 o A proviene directamente del acetato. en succ i n i l 4 o A por la via de la m e t i l m a l o n i l ~ o A (figura 2 1-2). Ejemplos son la alanina. la cdlula necesita transportar acetil-CoA a traves de la membrana de la mitocondria. la glutamina y la prolina forman alfa-cetoglutarato por la vía del glutamato. Oxalacetato Tirosina Fenilalanina + Fumarato f COZ Aspartata Citraio lsoleucina Metionina Valina Propionato ~[TRANSAMINASA ) Glutamato ] Histidina Pmlina Glutarnina Arginina 7 Figura 1 8 4 . Se debe notar que las sustancias que forman piruvato tienen la opción de oxidación completa hasta C 0 : si siguen la vía de la piruvato deshidrogenasa hasta acetilZoA o pueden seguir la El ciclo del ácido cítrico interviene en la síntesis de ácidos grasos (figura 1 8 4 ) La acetilXoA formada a partir del piruvaio es el principal bloque de construcción para la síntesis de Acidos grasos de cadena larga en los no rumiantes.El ciclo del ácido clfrico: catabolismo de l u aceti/-CoA \ 209 Hidroxiprollna Serina Cisteina Treonina Glicina 1 Lactato . la arginina. la glicina. los cuales forman piruvato.

A[ parecer. Esto se logra permitiendo que la acetil4oA forme citmto en el ciclo del ácido cítrico. el control del ácido cítrico puede producirse en el paso de la piruvato deshidrogenasa. el complejo de la alfa-cetoglutarato deshidrogenasa esta bajo un control anilago al de piruvato deshidrogenasa (figura 1 9 4 ) . isocitrato deshidrogenasa ligada a NAD y alfa+etoglutarato deshidi-ogenasa.21 0 Bioquimica de Harper (Capítulo 18) Glucosa * b t~iruvato cido os grasos MEMBRANA MITOCONDRIAL . L ~ N Figura 1 8 4 . siempre que se disponga de la cantidad adecuada de 02.JL. hay inhibición alostérica de citrate sintasa por ATP y por a c i l 4 o A de cadena larga. la velocidad de utilización de ATP para efectuar trabajo determina el índice de respiracibn y de actividad del ciclo del Acido citrico. las propiedades de algunas de las enzimas del ciclo indican que la regulación podria ejercerse tambidn n nivel del ciclo mismo para refoszar el control. Ademhs de este control global y ordinario. Todas estas deshidrogenasas son activadas por Caz'. dependen de la disponibilidad de ADP y por tanto. En un tejido como el cerebro. citrato sintasa. entonces se transporta el citrato fuera de la mitocondria y. Los sitios de regulación más probables son las reacciones sin equilibrio. En el propio ciclo. cuando hay un incremento en la demanda de energia. se hace que quede disponible acetilXoA en el citosol medianie escisihn del citrato en una reacción catalizada por la enzima ATPcitrato liasa. que depende en gran medida de carbohidratos para el suministro de acetilXoA. de la velocidad de utilizaciiin del ATP. Participación del ciclo del hado cítrico en la clntecic de Bcidos grasos a partir de la glucosa Véase tambien la figura 23-5 meable a este compuesto. Citrato + ATP + COA + Acetil-COA+ Oxalacetato ADP + Pi * La regulación del ciclo del ácido cítrico depende principalmente del suministro de cofactores oxidados En la mayoría de los tejidos. los cuales a su vez. las cuales son catalizadas por la piruvato deshidrogenasa. NAD). Así. donde la funcibn primaria del ciclo del ácido cítrico es proporcionar energia. cuya concentraci6n aumenta durante la contracción muscular y secrecibn. en ultima instancia. La succinaio deshidrogenasa se inhibe la presencia de oxalacetato y la disponibilidad de oxalacetato regulada por mala10 deshidrogenasa. por último. debido al estrecho acoplamiento entre oxidacibn y fosforilación. De este modo. La activacibn alostérica de la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NAD mitocondrial por ADP es c o n m t a d a por ATP y NADH. varias enzimas son sensibles at estado energético tal como se expresa en las proporciones [ATPlJrADP] y [NADI-I]/[NAD]. Por tanto. la actividad depende de manera inmediata del suministro de cofactores oxidados de la deshidrogenasa (por ejemplo. de- . hay escasa duda respecto a que el control respiratorio a travks de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa es el regulador dominante de la actividad del ciclo del acido citrico.

Vol 13 in. Dickens F. transaminación. Kay J. Academic Press. Por tanto. Academic Press. con oxalacetato para formar citrato. in: Curhohydrate ~Wetabolism and Its Disorders. Goodwin TW (editor): The Metabolic Roles o f Cilate. . Nature 198 1. dado que tiene otras funciones metabólicas además de Ia oxidaci6n. Por una serie de deshidrogenaciones y descarboxilaciones. London. Control and fimpartmentation. la acetil<oA. p 297.43:57. Adv Enzymol 1975. 1992. Lowenstein JM (editor): Citric Acid Cycle. desarninacion y en la síntesis de acidos grasos. 1969. Krebs HA: The evolution of rnetabolic cycles. Methods in En. 3) El ciclo del ácido citrico es anfbblico.nzvmolo~. Qekker. Randle PJ. RESUMEN 1) El ciclo del Bcido cítrico es la vía final para la oxidaci~nde carbohidratos. 1 0 7 1L . Iipidos y proteínas. 2) Los equivalentes reductores son oxidados por la cadena respiratoria con forrnacibn de ATP.29 1 :38 1. Tyler DD: Ths Mrtochondrion in Healtk and Dilease VCII Publishers. . Dado que la Kmpara oxalacetato de citrato sintasa es del mismo orden de magnitud que la concentración intramitocondrial. 1969. Whelan WJ (editors). podria parecer que la concentración de oxalacetato interviene en el control de la velocidad de formación de citrato. REFERENCIAS Baldwin JE. Greville GD: Vol 1. Aún faSta por resolver cual de estos mecanismos (si es que se trata de alguno de ellos) opera rn vivo. el ciclo es ta vía principal para la generacibn de ATP y se ubica en la matriz de las rnitocondrias adyacente a las enzimas de la cadena respiratoria y la fosforilacibn oxidativa. Academic Press. Academic Press. L 968.El ciclo del iicido cítrico: catubolismo de ¡a acetilXoA 2 11 pende de la proporcibn !?lADHJ/pAD']. 1968. 1987. liberando equivalentes reductores y 2CO2 y regenerando oxalacetato. Srere Ph: Thc cnzymology of the formation and breakdown of citrate. A . Boyer PD (editor): The Erqvmes. Cataliza la combinacion de su metabolito comilin. el citrato es degradado. Lowenstein JM (editor): Citric Acid Cvcle. Toma parte en la gluconeogénesis. 3rd ed. Weitzman PDJ (editors): Krehs ' Ciric Acid Cycle-Hay a cenhity and StiIl Tnrning Rinchemical Society.

El resultado es una producciiin excesiva de lactato. sino que también proporciona una vía importante para metabolizar fiuctosa y galactosa provenientes de los aliineiitos. situacióii quc puede tener implicaciones con ciertos tipos de terapéuíicii contra e1 ciinccr. se comprendió que el proceso de fermentacihn en las levaduras es semejante a la degradacihn del gluciigeno en el m ~ s c u l oSe . a E a vez que IOF tc. DSc isquemia. PhD. ATP en ausencia de oxígeno tiene crucial significado biomedico. e1 ciclo del iicido cítrico y la cadena respiratoria. por ejemplo. Existe un número pequeño de enfer- Hay una necesidad mfnima de glucosa en todos los te-jidos. tiene capacidad glucolítica relativamenie deticicntc y escaw supervivencia en condiciones de LA GLuCÓLISIS PUEDE FUNCIONAR EN CONDICIONES ANAEROBIAS Al principio del curso de las investigaciones sobre la gliichlisis. si la contracción se produce en condiciones aerobias. porque permite al musculo csqueletico trabajar con mucha eficiencia aun'cuando la oxidación aerobia se vuelva insuficiente. IMPORTANCIA BIOMÉDICA L a glircólisis iio sólo es la ruta principal para el metabolisiiio de la glucosa que conduce a la producción de acetil-CoA y a su oxidacihn cn el ciclo del Iicido cítrico. Cuando se intraducc el oxígeno. dado que pucde utili7ar oxigeno si estl disponible (aerohia) o fi~ncioiiar en su ausencia total (anaerobia). el músculo cardiaco. Tambien se produce acidosis lhctica debida a varios factores incluso a la deficiencia de piruvato desliidrogcnasa. Sin embargo. es casi total. En las cClulas cancerosas que proliferan con rapidez. notó que cuando iin musculo se contrae en un medio anaerohici. no hay acuinulacion de lactato y el piruvato se convierte en el prodiicto . como en los critrocitos. en el cerebro. que favorece un entornti local relativamente ácido en el tumor. la necesidad es sustancial. precisa no solaincnte oxigeno moleculas. en tanto que en otros.jo acrobio. Por el contraria. Sin embargo. Cn algunos casos. La capacidad de la gluc6lisis para proporcioiiai.Gbucólisis y la oxidación del piruvato Peter A. Es una via única.iidos con capacidad glucolítica importante pueden obrev vivir a episodios de anoxia. si tienen lugar eii el niiisculo esquelético (por ejemplo. tiene lugar la recuperacióia aerobia y el glucógeno reaparece. se produce inás piruvato que el que puede ser metaboli7. estos trastornos se manifiestan principalmente como anemias hemolíticas o. mientras que el lactato desaparece. como el complejo piruvato deshfdrogenasa. Mayes. la gluc6lisis procede a una velocidad mucho mayor que la precisada por el ciclo del ácido cítrico. el glucógeno desaparece y sc forma Iactato como principal producto final. medades donde las enzimas de la gluciilisis (coino la pimvato cinasa) muestran actividad deficiente. coino fatiga.ado. que esth adaptado al traba. Por tanto. es decir excnlo de oxigeno. la fosfofructocinasa). sino también sistemas eiiziiiiáiicos rnitoccindriales. para que la glucosa se oxide hasta la etapa terminal del piauvnto de laglucólisis. La gIuciilisis es la via prii~cipalpara la utililación de la glucosa y se lleva a cabo en el citosol de todas las células.

fusforilar lo cual mantiene un alto gradiente de cone e n t r a f i de glucosa entre la sangre y el medio intracelular. LAS REACCIONES DE LA GLUCÓLISIS SON LA PRINCIPAL V~A DE UTILIZACION DE LA GLUCOSA La ecuacihn global para la gIucolisis desde gliicosa hasta lactato e$: Glucosa * 2ADP * 2Pi t 2L(+)-Lactato * 2ATP + 2Hz0 Glucosa Cs Glua6geno (CsIm Todas las enzimas de la vía de Ia gluchlisis (figura 1 9-2) se encuentran en la fracción soluble extirimitocondrial de la célula. el citoso!. se altera la reoxidación del NADH. como ocurre en los eritrocitas que existe virtualmente en todas las J ~iene una gran afinidad (K. esta distinción es arbitraria ya que las reacciones de la gluclilisis son las mismas tanto en presencia de oxígenci como en su ausencia. Se utiliza un enlace fosfato de alta energia del ATP y sc produce ADP. este hltitno es oxidado después a COZ y agua (figura 19-1 ). pero esto tiene un precio.lo obstante. mayor cantidad de glucosa debe intervenir en lagluciilisis anaerobiapara proporcionar la misma cantidad dc energía que la obtenida en condiciones aernbias.En estas circunstancias. Consecuentemente. Sin embargo. del modo siguiente: La glucosa entraen la vía gluctiIitica mediante su fosforilación a glucocad-iosfato. en las células del parinquirna hephtico y en Ias dc los islotes pancreáticos. hasta piruvato y lactato. Como resultado de estas observaciones. Ellas catalizan Ias reacciones implicadas en la gluclilisis de la glucosa. reacciona coino el complejo Mg-ATP. La fiinciiin de la u elucocinasa cs la dc eliminar la glucosa de la sangre después de la ingestihn de alimentos. el alfa y beta y puede también catalizar Ia fosforilación de otras hexosas. ya que limita lacaiitidad de energía Iiberada por rnol&cula degli~cosaaxidada. es realizada por la glococintisa. La glucólisis pucdc así efectuarse en condiciones anaerobiac. La hexocinasa es inhibida de modo alostérico por e1 producto glucosad-fosfato. puede considerarse como irreversible. excepto en su extensión y en siis productos finales. por ejemplo.. Actúa sobre ambos anómeros de la gii~cosa. Cuando ci aporte de oxígeno es pequeño. pero a una velocidad mucho menor que a la glucosa. baja) por 't ' su siistrato. aiin en presencia q de concentraciones bajas de glucosa sanguínea. ticne una Km alta para la glucosa y opera de modo dplimo en x .final principal. en condiciones fisiológicas. como en muchas reacciones en que interviene la fosforilacihn. En cornparaci0n con la hexocinasa. Su f u n c i ~ n consiste en asegiirar $* el suministro dc glucosaa los tejidos. El ATP es necesario coma donador de fosfato y. . formado a partir de NAD' dusaiite In glucóli~is. Resumen de la gluc61isis 0. el NADH es reoxidado al acoplarse a la reducción dcl piruvato en lactato y el N A D ' que resulta se utiliza para pcrnlitir qiie ulteriormente prosiga la glucólisis (figura 19-1). función que realiza la enzima hexocinasa. TriosatosfaZa C3 +H+ - Glucosa + ATP - Glucosa-6-fosfato + ADP Triosalosfato o* Figura 19-1. aunque se acumula evidencia indicadora de que alguna de las enzimas puede estar integrada con estructuras subcelulares ranto en la celula como en e1 citosol. se Iia hecho costumbre separar el rnetaboI ismo de los carbohidratos en una fase anaerobia y otra aerobia. par consiguiente. laglucnsa. La reacciiin se acompana por una phrdida considerable de energia Eibre como calor y. cuya actividad en el hígado puede inducirse y afectarse por los cambios en el estado nutricional. bloqueado por condiciones anaerobias o por ausencia de mitowndrias que contengan las enzimas respiratorias claves.

glucosa 6-fosfato r+Fruciosa 6-fosfato CINASA ~Fructosa l.6-bisfosfato EH. como en bifosfato. en tanto que difosfato como en el difosfato de adenosina.C-OH CH. en tanto que los carbonos 4 a 6 forman gliceraldehido bfosfato El termino bis. Vía de la glucólisis -PO~~-.DH EspontAnea $00- $00 - CH2 (Enol) piruvato (Ceio) Piruvato L(+)-Lactato Figura 19-2.O 4 C=O COO I CINASA H-c=O H.glucosa ADP tx. . inhibicibn *Los átomos de carbono 1 a 3 de bisfosfato de fructosa forman focfato de dihidroacetona.. $ -0-E) CHI plWvATo CINASA ?O0 - 1 I 1 Fosfoenolpiruvato I Oxrdacibn en el ciclo del I I I q 1 1 1 acrdo cítrico l NADH+H+ t 1 NAD' CoOC II .. 0. indica que los grupos focfato están separados.Glucosa 1-fosfato CHz-O- AfP (1.P HQPQ~'-.3-bisfosfoglicerato 3-fosfatn Mitochondrial respiratory chain dehido FOSFOGLICERATOMUTASA $00H-$-O-@ CHz0H 2-Fosfqlicerato 1 I 1 I I I 1 3ADP + p. 3ATP I I I I I Anaembiosi~ I I I I I I Mg2+p. indica que están juntos e ) . ~.-O-@ ADP NAOH +H Focfato de dihidroxiacetona 3 ATP + NAD+ Gllceral- 3-Fosfoglicerato 1.

I. proceso que cainprcndc iina isomeriznción nldosa-cetosa.a g1ucrisn4-frisfato es un compuesto irnportaiiic ~ L I Cti en el enironque de varias vías metabólicas (gl~icólisis. Se encueritran ciiiitro grupos -SH cn cada polipkptido.jeinplo dc IR propiedad del nrseniato para IIcvar a cabo el desacoplamiento de la ovidacihn y la Cosforílacibn.En la glucOlisis. pero reaccionan coi1 la liisfohcxosa isomerasa. c s La energia liberade durante la oxidacihn cs crinccrvada por la formación de un enlacc dc a ~ u f r c de alla cncrgía qiie se vuelve. gliceraIdehido-3fosfato dcsliidrogcnasa. I. derivados dc los scsiduos de cisteina dentro de la cadena polipeplídica. i 1.ies otra cnziina inducibfe y alristérica. y la en7ima libre. E1 NADH prtid~icido en la eiizima no estiran íirnicincntc unido a clln como el NAD'. Eii consecuencia. Es cstxcítica para la glucosa. un e-jempl de fusrorilación "a nivel del sustrato".3-Bisfosfoglicerato + ADP H 3-Fosfoglicerato + ATP Fosfato de di hidroxiacetona Sc hnii dcscrito diferentes aldola~as quc coiitienen cuatro subiinidades.concentracioriec dc glucosa sanguinea por arriba de loc 5 inmol/C (tigiim 2 1 -S).Es probable que el 7. [. es separada por la aldolasa (ftuctosa I . el NADI Ies fácilmente desplazado por otra molécula de NAD'. Este es uri importante e. actividad de la fo~fritrio~a isonierasa. gluconeogénesis.a yliicOli5i~ prosigue por la oxidacihn del gliceraldeIiido 3-fosfato cn 1. 1. adcinis. Si hay arscninto. . la B se encuentra en el higado y el riñbti.(i-hisfoslato. que se hidroli7a en fnrniri espontanea para dar 3-fosfoglicerrito y calor. catali~adapor la fosfogliceratocinasa. E1 piso siguiente es catatizado por la enolasa e iinplica unadeshidratacioi~ y redistrihución de la energia .) en las reacciones anteriores para prod~icir I -atscno-3-fosfoglicerato. cl zliceraldehído-3-fosfato y el fosfato de diliiclroxiacetonn.oc fosfator.a hifcifi. sin gcnerar ATP. en esta etapa se generan dos moléculac de ATP por molécula de glucosa. el fosfato d e diliidroxiacetona es también oxidado . L K P . D-Fructosa-6-fosfato + ATP -+ 0-Fructosa 1. El gliceraldchida 3-fosfato y el fosfato de diIiidroxincetrin:i son interconvertidos por la enzima Fosfotriosa isomeraisa. despucis d c la rosforiilisis. desiando 3 fosfogliccrato. en inglis..sloglicerato (difosfoglicerato. dc fructosa existen cn la célula principalinenle bajo la forma furanhsica.fogliceratopor la eninia fosfogliceratom~itasa. O. Este fosfato de alta cncrgia cs capturado como ATP en una rcaccihn posterior con cl ADP.a aldciliisa A existe en la mayoría cle los te. es convertidoen 2-fol. v i n de la pentosafosfato. I. competirá con el fosfato inorganico (P. Uno de estos grupos se localiza en el sitio activo dc la enziina (figura 19-3). c:ilalitada por la eri7iina fnifofriictocinass (fosfofructocinasn-1) para prodiicir íiiiictosa 1. tiiralmente consiste en cuatro polipéptidos identicos (rnonhmeros) que forman un terrhrnero.jidoc 4. el sustrato se conibina con ese gmpi -SH.h-hisfc>sfato aldolasa) eii dos tricisahsfritos. Inicialmente.6-bisfosfato Ida fructoca 1 . coi1 un grupo -SH rcctinstituido. y se considera quc su actividad tiene uiia I'~ii1ciiin ir~iportarite en la regulación de In velocidad de la gFuccilisis Tainbien la reacción de la fosfofructocinasa puede considerar~efiincionalmente irreversible cii cciiidiciones fisiológicas. rominndo un tioliemiacctal qiie cs convertido en iin ester tiolico por oxidación: los hidrógenos removidos eii estaoxidacibn ce trancfiereii al NAD' unido a la enzii~ia.Gliceraldehido 3-fosfato u Fosfato de dihidroxiacetona I. formindose I. la fosfofructocinaca y la aldolasa en la configuracion de cadena abiertri.3-bisfosfnglicerato. Finalmente. glucugérieiií y ~lucogenólisis).3-Bisfosfoglicerato + NADM + H' La enziina que causa Iaoxidaci~n. cs cciiivcrtida a fiuctosa4-fosfato por la Frisfohexosa irornerssa.6-bisfosfato.vpho~/yccvwie) sea un intermediario en esta seaccibi~. se adiciona fosfato inorg5nicn (P. C 1 3-fosfoglicerato que proviene de la5 reaccicincs anteriores. diphu. 1.~ictocinas. depende del NAD'.3-bisfosfoglicerato y.3-bisfosfo~Iicerato por 13 via dcE gliccraldchidn 3-fo~fato. Shlo participa el anomero alfa de E a glucosa4-losfato.3-bi~fosfnglicerato.3-bi~fr. uiz cnlacc i'isfato dc aIta energia en la posición I del I .) mediante fosforolisis. Estruc- Ectn reacciiin e i scgiiida por otra focforilacibn con ATP. debido a la Puesto que se forman dos mol~culas d e triosafosfato por moléculas de glucosa que experimenta la glucolisis.

H-C-OH I CH~O-Q t Gliceraldehido 3. el cual de esta manera es capaz de inhibir la glucólisis dei~tro de la niolécula. Los equivalentcs reductores a partir de NADH . se han encontrado varias isoziinac de esta y iicnen importancia clínica (capitulo 8). Mecanismo de oxidacrón del gliceraldehido 3-fosfato. La eaizilna depende tambicn de la prcsencia de Mg2'o de Mnn+. Piruvato + NADH + H' ++ L(+)-Lactato + NAD' El fosfato dc alta energía del fosfoenolpíruvato es transfcrido al A D P por la enzima piruvato cinasa. En condiciones aerobias. Si prevalecen las condiciones La reoxidación del NADlI. se eviia la reoxidacibn del N A U H mediante la transferencia de equivalentcs rcductores a través de la cadena respiratoria liasta el oxigeno.C .quc se forman en la gluc6lisis se introducen a las rnitocondrias por medio de 1 de las 2 lanzaderas que cc describen en el capitulo 14. para generar en este estadio dos moléculas de ATP por inolécula de glucosa oxidada.. que es un veneno para el -SH. . por la via de la formación de lactato. En enolpiriivrtto que se forina eii csta reacciiin cs convertido cspontkneamentc a la forina ceto del piruvato. gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa ) La enzima es inhibida por el yodoacetato.fosfato 7 i . se le oxida a CQ2 en el ciclo del ácido cítrico. Fosfoenolpiruvato + ADP t Piruvato + ATP L'! estado redax dcl tejido determina ahora riifil de las dos vias se debe seguir.OH I Intermediario rico en energia Figura 19-3. formándose así e E fosfocnolpiriivato.Fosfoenolpiruvato + H20 anaerobias. 7 Complejo enzima-sustrato Oxidación del sustrato por I H .H. el piruvato se lleva al interior de las mitocondrias y. (Enz. antes de su conversión en acetil-COA. lo cual eleva el fosfato de la posiciiin dos al estado dc alta energía. en una reaccibn catalizada por I n en7ima lactato deshidrogenasa. iina propiedad que puede usarse cualido se ncccsite impedir la glucólisis antes de calcular la gllicosa sangvinca. 2-Fosfoglicerato t . Esta es otra reacción sin equilibrio que se acompaña de una pérdida considerable de energía libre en forma de calor y debe considerarse fisi<ilhgicainente irreversible. permite que la gluc0lisis prosiga en auscncia de oxigeno al regenerar suficiente NAD' para otro ciclo dc la reacción calalizada por la gliceraldchído3-Tosfato deshidrogenasa. El pirtivato es reducida por el NADH hasta lactato. La enolasa cs inhibidri por C] flririruro.

músculo liso y eritrocitos. Ciclo del 2. aun en condiciones aerobias. L r 7 p é d i d s de un fosfato de alta energía. la g~ucóiisS. termina siempre en lactato porque la ~nitocondria. el paco catalizado por la fosfoglicerato cinasa. pcro In producen shln en condiciones de hipoxia. ya que permitiría que la glucólisis continuara cuando la necesidad de ATP fuera mínima. El eritrocito de mamiferos es único en el sentido de qiie 90% de su necesidad total de energia es sumfnistrada por la gluc0lisis. 700H-C-OH L-- + Piruvato Figura 1 9 4 .3-b1sfosfoglFceratoen loseritrocitos. su presencia en los eritrocitos ayuda a la oxihemoglobina a descargar oxigeno (capitulo 7 ) . puede ser vent. puede suprimirse el segundo sitia de glucólisis para generación de ATP E n los eritrocitos d e numerosas especies d e mamiferos. !a bisfosfoglicerato mutasa.3-bisfosfoglicerato a 2. la fosfofructocinasa y el piritvato cinasa y son los principales sitios de regulación de la gluc6lisis. En los eritrocitos. . el conducto gastrointestinal.-bisfosfoglicerato. la in6diila renal.josa para la economía del eritrocito. que se encuentra en concentracibn elevada. la energía libre relacionada con el fosfato de alta energía del 1. Sin embargo. cataliza la convcrsfdn dcl 1. Las cantidades adicionales dc lnctato producidas piiedcn ser determinadas eii los tejidos y en la sangre y la orina. T coo- La glucólisis se regula en tres pasos que implican ecuaciones no equilibradas Aunque la mayoría de las reacciones glucolíticas son reversibler. Las cClulas que son capaces de efectuar un movimiento total de metabolitos en la direccion de la síntesis de la vía glucolitica (gluconeogénesis) lo hacen debido a la presencia de diferentes sistemas enzimáticos.3bisfosfogliceratofosfatasa. en forma de calor. riñones y corazón por lo general captan el lactato.lnal tratar la regulación de la gluceneogknesis cn el capitiilo 2 1. H-c=O H-C-OH I t---Glucosa JN j ADH + H' ADP. el 2. puede ser desviado por un proceso que disipa eficazmente.2 ¡S Bruquimrca de Hrrrper (Capítulo I9j Tejidos que funcionan en circunstancias hipóxicas tienden a producir lactato (figura 19-2) Esto e5 particularmente cierto en el rnusculo csqueIético.3-bisfosfoglicerato. donde la velocidad de trabajo del órgano IIO e s t i limitada por su capacidad de oxigenaci6n.. por tanto. deben considerarse fisiológicamente irrever5ibles. junto con !a re&<?cidn dt. se combina con la hemoglobina. Laglucólisis en los eritrocitos.ifu rnuktsa. Asi. Estas. la retina y la piel.que contiene la maquinaria enzirnhtica para la oxidación aerobia del piruvato no esta presente.3-bicfos- foglicemto (figura 194). Indicadora de que no hay produccihn neta de ATP cuando la gluchlisis toma esta vía. El último es convertido en 3-fosfoglicerato par la 2.~fogliceer.~tua'ia. Estas reacciones con catalizadas por la herocinasa (y la glucocinasa). actividad que tambien se atribuye a la fo. Ademhs de las fibras blancas del niiisculo esqueletico. causando una disminucibn de la afinidad por el oxigeno y un desplazamiento hacia la derecha de la curva de disociación de la oxihemoglobina. otros te¡idos que nortnalrnente derivan la mayor parte de SLI cncrgia a partir de la glucólisis y producen Iactato. El hígado. tres de ellas son marcadamente exergbnic a i y. incluyen al cerebro.se e. los cuales proporcionan rutas alternas de las reacciones irreversibles catalizadas por las enzimas mencionadas. Una enzima adiciona!.

En el cuadro 19-1 se muestran las reacciones responsablps de la forinacicín de fosfato de alta energia durante la oxidación de la glucosa y la producción total cn condiciones acrobias y anacrubias.iiialogas al comple. que a su veL i~acciona con la lipoamida oxidada. cuando se increnienta la concentración dc icidos graso5 libres. 6 kJ. pero no en el Iiigndo.jo piriivato deshidrogenasa y son . la piruvaio dcshidrogenasa y. eii presencia de dihidrolipoil deshidrogenasa. La tiamina es un imporiantc miembro del complc. quc incrementan estas proporciones. t:l pirutato es descarboxilado por Ia piruvato dcshidrogenasa.itci crlmprcnde un mecanisnio simportador q ~ c c o t r i n ~ p o riin t a proton (figura 14-1 2). pero sólo dos cuando no hay oxígeno Cuando un m01 de glucosa es qucmado e n un calorímetro hasta CO? y agua. EI aceti 1-Tipoamida reacciona con la cticnrinia A formando acetil-CoA y lipoamida rediicido. tambien genera un cnlace tioester de alta energia en la acetilXoA. Un aumento en la actividad en el tejido adiposo ocurrc dcspiiks de la administración de insulina. Piruvato + NAD' + COA 4 La piruvato deshidrogenasa se regula mediante la inhibición por el producto final y la modificación covalente La piruvato deshidrogenasa cc inliiblda por siis productos.i~cicin nperarido secuencialmente en 1111 comple-jo riiultieiiziinático. acetilCoA y N A D H (figura 1 9 4 ) Tamhibn Fe regula mediante la fosforilaciún de tres recidiios de serina dcl componente piruvato desl-iidrogcnasa del compleio multienzima con participacihii de una cinaa especifica de A'ff'. lo que eleva la eficiencia global. La cinasa se activa cuando aumeiitan las proporciones de [acetil4oA]ilCoA]. el piruvato es descarboxilado por oxirlaciiin a a c e t i l 4 o A . Así. sino quc cs "capturada" en enlaces fosfato de alta energía. El resto es generado por fosCoriIacih a "nive1 de sustrato" (capítulo 14). se liberan aproximadamente 2780 kJ como calor.13 iin transportador especial de piruvato que a) uda a su paso a través de la membrana mitocondrial interna. algo de esta energia no se pierde inmediatamente como calor. La mayor parte del ATP se produce como consecuencia de la fosforilación oxidativa resultantc de la reoxidación por la cadena respiratoria de las coenzimas reducidas. E. cino que permanecen unidas a las enzirnas. además de generar tina coenzima reducida (NADH). en donde los sustratos se manejan dc una enzima a la siguiente. E1 ciclo de reacción se complcta ciiando el uliimo cs reoxidado por iina flavoprotcina conteniendo FAD. In vivo. pADH]rmAD'l o [ATP]/[ADP]. rinnlmcnte.s de notarse que el sistema piruvato deshidrogenasa es suficientemente elecíronegativo con respecto a la cadena respiratoria que. para formar .icciil-liponrnida (figura 19-5). Tal complejo enzimatico. del mismo modo. el grupo prnsiiiico dc l a riihidrolipolil transacetilasa. Aprouimadamcnie 38 moles de A'TP son generados por molécula de glucosa oxidada hnsia CO? 4 agua. cI que a su ve7 transfiere equivalentes rediictores a la cadena respiratoria. se ha calculado que el AG para la reacción de la sintesis de ATP es de aproxiinadamente de 5 F . la glucólisis se iiihiben no shlnpor un potencial energético eievado. k. Dentro de la iiiitocondria. Se asume que la energia total capturada en forma de A'I'P por las moleculas de glucosa oxidada es de 1961 kJ. Se lec designa de manera colectiva coino cl cornple. Varias enzima5 catalizan esta rc.jo de vitamina B (capitulo 52). . La oxidación de la glucosa produce hasta 38 moles de ATP en condiciones aerobias. Cuando la oxidacion tiene lugar en los tejidos. o cerca de 68% de la energia de combustión. incrementa la velocidad de reaccion y elimina reacciones secundarias. en la inanicihn. sino también bajo condiciones de oxidación de acidos grasos.io de la alfa-cetoglutarato dcsliitlrogenasa del ciclo del hcido cítrico (figiira 18-3). componente del complejo de la en7inia ii un dcrivado hidroxietilico del anilla tiazhlico del riifosfatn de tiamina unido a la enzima. El movimiento de las enzimas individuales parcce ser restringido y los intermediarios inctabiilicos no se disocian libremente. la flavoproteina reducida cs oxidada por cl NAD-. y por medio de la fo~forilacionpor iina fosfiitasa quc iiicrtnientn la actividad de la deshidrogeriasa. Acetil-Cok + NADH + H' + CO2 CI coniplejo piruvato hidrogenasa consiste en cierto riiiinero de cadenas polipeptidicas de cada una de las tres en7imas componentes. organizadas en una config~iración espacial regular. Por tanto. la cual disminuye la actividad.LA OXIDACIÓN DE PIRUVATO A ACETIL-CoA ES LA V ~ A IRREVERSIBLE DE LA GLUCOLISIS AL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO Aiitcs dc quc cl piriivato pueda entrar en el ciclo del acidocitricci debc Ilcvarsc al interior de lamitocondria 1. di+ rninuye la proporcihn dc Ia cnzima en la forma activa lo que ahorra carbohidratos.

cuando reciben glucosa. Los alcoh6licos privados de aliinei~iostienen deficiencia de tiamina por lo que. en especial después de una carga de glucosa. que puede deberse a defectos en uno o más de los componentes del complejo de la enzima. muestran una acumulacion ripida de piruvato y acidosis lactica. se preseiitan con una acidosis lactica similar. Forma un brazo largo y flexible. FAD. los pacientes con carencia hereditaria de piruvato deshidrogenasa. Descarboxilacion oxidativa por el complejo piruvato deshidrogenasa El acido Iipoico esta unido mediante un enlace amida al residuo de Iisina del componente transacetilasa del complejo enzimatico. En virtud de su dcpeiidencia de este carbohidrato como combustible.Figura 19-5. permitiendo que el grupo prostetico del Acido Iipoico gire secuencialmente entre el sitio activo de cada una de la$ entimas del complejo (NADt. la cual permite la acurnulaciiin de piruvato. dinuclebtido de flavina y adenina. difosfato de tiamina. dinucleotido de adenina y nicotinamida. Por su parte. que con frecuencia es mortal.) ASPECTOS CL~NICOS La inhibición del metabolismo del piruvato produce acidosis Iáctica Los iones arsenito o mercuricos forman complejos con los grupos -SH del ácido lipoico e inl~ibena la piruvato deshidrogenasa. . cl ccrebro es uti tejido relevante para que este defecto metabblico se manifieste en trastornos neurol6gicos. del mismo modo que una dcftcicncia diet4tica de tiamina. TDP.

durante iriaiiicihn.i-i-1 NADH + H+ PDH-a [ A~etil-COA ] !COA] [NADH] [NAD'] W I [Aopl M~'' fOESFOSF0-ENZIMA activa) 1 PDHFOSFATASA M ~ ' +ca3+ . fosfofiuctocinasa y pinivato cinasa. A: Regulación por inhibición d e producto final B: Regulación por interconverción de formas activa e inactiva Se Fabe de mutaciones de virtualmente todas las enzimas del metabolismo de carbohidratos. inejora la capacidad para el trabajo. Proporcionar iin coinbustible lipidico alterno. cada una de el las relacionada con enfermedades Iiumanas. en particiilar con dietas ricas en carbohidratos. la cual - se efectúa en el ciiosol de todas las celulas de mamíferos. 5) En los eritrocitos. en el músculo en ejercicio) o cuando la maquinaria inetabhlica no existe para oxidacion ulteriw del pituvato (comoen los eritrocitoc). gmsos y cuerpos cetonicos auincntaii. La capacidad de esfuerzo de los pacientes con deficiencia muscular dc frisfofriictocinasa es baja. puedc ser . hexocinasa (o glucocinasa). por ejemplo. La deficiencia hereditaria de aldolasa A y de piruvato cinaFa en los eritrocitos causa anemia hemolítica. el segunda sitio donde se lleva a cabo la gluciilisis para producir ATP. por acoplamiento de csta reacción a la reduccihn de piruvato a lactato. \ 1 Insulina (en el tejido adrposo) Figura 1 9 4 . 4) La glucolisis se regula por tres enzirnas qiie catalizan reacciones sin equilibrio. ciian'do hcida'. RESUMEN 1) Ln glucolisis es la via para el metabolismo de rlucosa (o gliicbgeno) a piruvata y lactato. a saber. 2) Funciona de manera anaerobia mediante la regeneración del NAD' necesario en la reaccion de gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa. 3) El lactato es cl producto final de la glucolisis anaerobia(por ejemplo. Regulacion de la piruvato deshidrogenasa (PDH) Las flechas onduladas indican afectos alost8ricos.

. Mniversiw Park Press.222 Binquimfca de Harper (Capitulo 19) - Cuadro 19-1. 3rd ed. lo cual conduce a la formacibn de 2.*"A"" Total 30 4 T c)tal por moslkculas de glucosa en condiciont -. . importante para disminuir la afinidad de la hemoglobina por 0 2 .: Regulation of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex. 6 ) El piruvato es oxidado a acetilXoA por un complejo multienzimatico conocido como piruvato deshidrogenasa que depende del cofactor vitarnínico difosfato de tiamina. . siendo ent nnces la producción ñetrI 14-16) Si se emplea la lanzadera de glicerofosFato s61o podrian formarse 2 . lo cual totali r que l a prodiicci6n total 43e fosfato dr hay un beneficio sustancial en condiciones anacrobiaf SI el glucbgeno es el punto de Iinicio.ria Oxidacibn dc 2 NADH. 1981. ixidaciiin de 2 FADH2 en la cadena respiratolria ixidación de 2 NADH: en la cade . Generacibn de fosfato de alta energía en el catabolismn de la glucosa acci6n cat ción d e 4 rcspiratoria osforilacion .urirs -. Phil T m s R Soc London R 1981. Veneziale CM (editor): The Regulation of Carbohydrnte Formation and L'til~z~tion in Mammals. .56:89. Annu Rev Biochem 1987. . el NADH que c---. . t 9 Rt . 7) Los trastornos que implican una incapacidad para metabolizar pimvato con frecuencia conducen a acidosis Iáctica. 1995. 1972. REFERENCIAS Behal RH et al. puesto que e l ATP ya no se necesita para la reaccibn de hexocinaa. 1E :47.. Whelan W J (editors): Carbohdrate 1Metabolism and lts Dnsorders Val 3 . .77. Boyer PD (editor): The E v m e s .. Hess B: Design of glycolysis.liiiiiiiiuiii c i i las rnitocandiim ~ J IiiicJio de la l a n ~ ~ suc i ai ~ a l a t o (figura 1 de NADE1. Academic Press. A. Srere PA: Complexes of sequential metabolic enzymes.c. dado .3bisfosfoglicerato. alta cnergil en la glucíilisis se eleve de 2 a 3. Fothergill-Gilmore LA: The evolution of the glycolytic pathway.P por mo total de 36 en lugar de 38 El calculo ignora la pequeiia perdida de ATP debido al transporte de H N con piruvato hacia la niitocondria ) a aproximridamente 1 rno1 del ATP'. Annu Rev Nutr 1993. L> L I ~ I W ~ U ~ tado hacia - esquivado. . McGraw Htll. Vols 5-9.iE nivel cle1 sirstrato osforilación al nivel cle1 sustrato Gliceralaeniao-. Nótese qur un transporte semejante de H' en la operacibn de la lanzadera de malato.S 6 2 4 - Totai por moiecuia ae glucosa eti condiciones aerobias - as respiratosria . Sols A: Multirnodulation of enzyme activity. en la cade respira10 0ixidacihn de 2 NADH: en la cadc licL respiratoria ixidacibn al nivel del sustrato .293:5. Malato cleshidroger nasa Qxidacibn de 2 NADH en la cade rcspirato. Boiteux. 13:497. Steiner DF.19.+-tosrato deshiidrogenasa Fosfogliscerato cina Piruvato cinasa Cantidad de ATP consumida por reacciones catalizadas por la hexocinasa y la fosfofructacinasa clo del ido rico deshidrogi iglutmato r o tiocinasa . Academic Press. Randle PJ.. Trends Biochem Sci 1986.. Scriver C R (editor): Metabolic Basis oflnheritedDasease 7th ed. Curr Top Cell Reg 1981.Ia glucblisis St.

Se encuentra en proporcibn mayor en el hígado (hasta 6%) y en el musculo. El glucógeno hepatico sirve en gran medida para exportar unidades de htxosa para la conservación de la glucosa sanguinea. de1 ingles. es un polimero ramificado de alfa-D-glucosa (figura 15-1 5). Por su parte. La glucosa-6-fosfato es convertida en glucosa-l -fosfato en una r e a c c i ~ n que catafiza la enzima fosfoglucomutasa. Las enfermedades por almacenamiento de glucógeno son un grupo de trastomos hereditarios caracterizados por la deficiente movili7ación de glucógeno o por la deposicibn de formas de glucógeno anormales.rifosfato de uridina (UTP. Despuds de 12 a 18 horas de ayuno. el higado casi agota su reserva de dro 20-1. El glucógeno muscular funciona como fuente de fácil disponibilidad de unidades d e hexosa para la glucblisis dentro del propio musculo. donde rara vez excede de 1 por ciento. imen total.-m i del hlgado. después Glucógeno hepi (ilucúgtno mus Glucosa extrace --. inclubo. el glucógeno muscular s61o disminuye de manera significativa después de un qjercicio vigoroso prolongado. y en el liigado por la glucocinasa. Almacenamiento de carbohidsatos I I ser humano adulto normal (70 kg). debido a su masa mayor. uridine briphos- . la glucosa-1-fosfato reacciona con el .. La enzima participa misma está fosforilada y cl gmpo fosf~rico en una reacción reversible en la cual la glucosa-1. el músculo almacena 3 a 4 veces la cantidad de gluciigeno que tiene el hígado como reserva (cuadro 20-1). 10 L. LA GLUCOGENESIS SE PRESENTA PRINCIPALMENTE EN MÚSCULO E HIGADO La vía de biosíntesis del glucógeno utiliza un nucleótido de glucosa especial (figura 20-1) La glucosa es fosforilada a glucosa-6-fosfato. 33 ~ g . una reaccihn que es comun para la primera reacción en la vía de glucblisis a partir de la glucosa.6bisfosfato es un intermediario. glucógeno. Sin embargo. En seguida. en particular entre comidas. a muscular. la muerte.El glucaghn es la principal forma de almacenaje de carbohidratos en los animales y corresponde al almidón de las plantas. originando debilidad muscular o. Al igual que el almidón. Esta reacción es catalizada en el rnúscuto por la hexocinasa.

~ Glucosa liberada por la enzima desramificante 2 PI Tnfosfato de uridina (UTP) \ Glucosa-1 -fosfato u CINAJA Glucosa-6-fosfate ATP T o alyc0Wsis and mntoss bhmphaie pathway Glucosa Figura 20-1. del inglés. UDPGIC+ PPi * hbc conoccii otros compuestos de ~iiiclc~sidos de dií'nsfatos <le wucares. Se emplean dos enlaces fosfato de alta energía en la incorporacion de 1 mol de glucosa al glucbgeno 0 . uridine ~liphmphute pltrrn. inhibición La insulina reduce la concentración de cAMP s61o después de que el glucagón o la adrenalina la han elevado. La reacción entre l a glucosa-1-fosfato y el trifosfato de uridina es catalizada por la enzima UDPGIc pirofosforilasa. La consiguiente hidrblisis del p i r o f o s f a t o inorzanico por la pirofosfiitasa inorganica impulsa la reacción la derecha la Gracias a la acción de la enzima gluchgeno sinta-9 el C I de la g l u c ~ s a a c t i v a d a de la UnPGlc forma un enlace glucosidico c o n e l C4 d e l residuo . antagoniza su accibn El glucagon es activo en el músculo cardiaco pero no en el músculo esquelético.re)* (figura 20-2).Gjucbgeno (Unidades glucos~lo1 4 y 1+6) (Unidades glucosilo 1 +4). e . Vía de la glucog4nesis y glucogenblisis en el higado. estimulacion. phcrrc) para formar el nucleótido a c t i v o difosfato de gliicosa de tiridina (UDPGlc. la glucanotransferaca y la desramificación son dos actividades separadas de la misma enzima. es decir. tiinidinn. asi como a Iris de guatiosina. la glucosa puede enlazarse a los nuclcótidos de iiridina (cumu se muestra desput's). CI mismo sriicar pucdc citar unido a diferentes nuclchtidiir Por cjcinplo. por cjernplo el UDPGal. UJP + Glucosa-1-fosfato c-. Insulina I "Glucogeno primordial" t 1 0 I Glucagon Adrenalina D~fosfato de uridina y glucosa A la vla del Bcido v r 6 n i c ~ UDPW PPIROFO~~JFORIMSA. Además. adcnosina o citidina. Al parecer.

. Otros rcciduos adicionales deglucosa se adhiere11en la pocicibn 1 4 4 para hacer una cadena corta cpe se activa For la gluc6geno sintasa.liicogeriiriaes una prntcina de 37 kDa qiie se glucohila sobre iin residuo especifico de timsina medinnte UDPGlc.a adición de un residuo de glucosa a una cadena previa de gluc6geiio o molkcula primordial tiene lugar eii el extremo externo no reductor de la molécula. Las ramas crcceii por inis adiciones de unidades glucosilo 1 +4 con ramificacihn posterior. . para formar un enIace 1. ~nicntias qtic en el higado. Biosintesis del glucogeno El mecanismo de la ramificación puede observarse por adición de glucosa marcada con C" a la dieta en animales vivos y examinando el glucbgeno hephtiw en posteriores intewalos . estableciendo de este niodo un punto de ramificación en la molécula. . Ciiando el número de residuos terininales no redrictores aumenta. el numero de moléculas tic :I~ic6gcnci supcra al de glucogenina. la glucogenina pcrmancce adIierida en el centro de la molécula de glucógeno (figura 15-5 j. liberando difosfato dc uridina (llDP). * (CE. una segunda enzima.6. En el iiiúsciilo esqueletico. transtiere tina parte de la cadena 1 4 4 (longitud rnfnima de seis residuos cfc glucosa) a una cadena vecina. P r + (C&-1 + Glucosa-1-fosfato glucogeno glucogeno O Residuos de glumsa no marcado OK3 Enlace glucosidico l+6 ~~~-~lucosa adicionada . CC' 1 / Figura 20-3. la enzima ramificante ([1+41=tl l k 6 ) amilotransgliicosidasa). Debe haber una molécula preexisterite d e glucógeno o gluchgeno primordial para iniciar esta reacción. Cuando la cadena se ha alargado como minimo a 1 I residiios d e glucosa. Ida molécula priinordial dc gliicrjgeno puede a su ycz haberse formado de una ~iroteinaconocida como glicogenina. de manera que las "rainas" dcl "árbol" de glucógerio se vayan alargando conforme se constitiiycn otroc enlaces 1 +4 (figura 20-3). lo cual acelera taiito la glucogCiiesis como 13 glucogen<ilisic. que es liinitante de la velocidad en la glucogenhlisis: (C8)n + Ln ~l. . la cantidad total de ciclos reactivos en lamcil~ciila F e eleva.il de glucosa dcl glucogeno. UDPGlc L. Difosfato de glucosa de uridina (UDPGlc) teriiiin.En el mecanismo de ramificación hay desprendimiento de cadenas de glucógeno existentes O I ---HO OH Ribosa Glucrisa Cifosfato Uridina Figura 20-2.1" t UOP + (Cs)n+i glucogeno glucogeno LA GLUCOGEN~LISIS N 0 ES LA INVERSA DE LA GLUCOGENES~S SINO UNA V ~ A SEPARADA En la via de degradación interviene un mecanismo de desramificación (figura 20-1 ) Es el paso catalizado pos In fosforilasa.

que rctira cl fosfato de la glucosa-6-fosfato. pi~ede proseguir la accfiin de Ia fosforilasa. Se sabc que la insulina incrementa su actividad en el liigado. La fosforilasa hepática es diferente a la muscular En el higadn.están controIadas a sti vez por una serie compleja de reacciones que comprenden mecanismos alostéricos y modificaciones cova~entesdebidos a la fosforilacibn y desfosforilación reversible de la proteína enzimatica (capítulo 1 1). Con Ia acción de una fosfatasa especifica (proteína fosfatasa-ll ). exponiendo los puntos f+6 de la rama. . AMP cíclico) (figura 20-5).5' -adenilico cidico.5'-adenilico (AMP ciclico. disminuyendo por tanto la concentración de cAMP. cAMP). Otra enzima (alfa-1 I +4]-+aIfa-[1-+4] glucano transferasa) transfiere una unidad trisachrida de una rama a la otra.Esta enzima es especifica para la degradacion fosforolítica (fosforólisis confrontese hidrólisic) de Ios enlaces 1 4 del glucbgeno para producir glucosa-l -fosIaro. que se encuentra en la superficie interna de las membranas celulares. Ácido 3'. La accihn combiiiada dc la fosforilasa y de estas otras enzimas conduce a la degradación completa del gIucbgeno. EL AMP C~CLICO INTEGRA LA REGULACIÓN DE GLUCOGENOLIS~S Y GLUCOGÉNESIS Las principales enzimasqlic controlan el metabolismo del glucógeno -gluccigcno fosforilasa y glucógeno sintasa. E1 cAMF es destruido por una fosfodiesterasa y la actividad de esta enzima es la que. que actúa a traves de un independiente receptor de glucaghn. La reacción catali7. la enzima existe en tanto en la forma activa como en Ia inactiva. Proviene dcl ATP mediante Ia acción de la enzima adenilato ciclasa. L a fosforilasa activa (fosforilasa a) tiene uno de sus grupos hidroxiIo de seriiia fosforilado en un enlace éster. conserva baja la concentracihn de cAMP. la cual se refiqja en la elevación de fa glucosa canguinea. por lo c o m h . Éste es el paso final de l a glucogenolisis hepática.ada por la fosfoglucomutasa e5 reversi hle. permitiendo que la glucosa libre difiinda de fa cklula a la sangre. la enzima es cosa por enlaces glucosidi- cos 1+4 Unibnde residuos de glucosa por enlaces glucosldicos 1+6 Figura 2 0 4 . Pasos en la glucogenólisis Figura 2 0 6 . La escisibn hidrnliticii de estos últimos enlaces requiere la acción de una enzima desramificante Q[1+61amilogliicosidasa). La adenilato ciclasa es activada por hormonas como la adrenalina y la noradrenalina que actúan a travCs de receptores beta adrenérgicos en la membrana ccEular y en el higado por medio de! glucagdn. la glucosa-ti-fosfatasa. En e1 hígado y e1 riñiin (pero tio en el míisculo). El cAMP es el compuesto intermediario intraccluIar o segundo rncnsajero. hay una enzima específica. de modo quc puede formarse glucosa-h-fosfato a partir de la glucosa-l-fosfato. Con la eliminacion de la rama. Muchas modificaciones covalcntes se deben a la acción del cAM P (ácido 3'. a travbs del cual actúan numerosas hormonas. Los residuos glucosilo de las cadenas más externas de la inolécula del glucógeno son separadas hasta qiie nihs o mcnns cuatro residuos de glucosa permanecen en cualquier lado de una rama 1 4 6 (figura 2 0 4 ) .

Es un hecho significativo que la calmodulinn sea analoga cn estructura a la 'lpC.acibn de Ca2-.Metabolismo d i ! ¡ g/i:cb. Esta cinasa catali7a la foshrilación por el ATP de la fosforilasa cinasa b inact ¡va a la fosforilasa cinasa a activa. Existe en dos formas: fosfiirilasa a. la misma sefía1 que inicia la contracción. aumentando la nctivacibn. el cual es aclivo siilo después de que ha sido fosforilado por una proteina cinasa dependiente de cAMP. La rcaciivacion requiere una nueva fosforilaci6n con A 1'1' y u n a enzima especifica. Por tanto. activü a la t'osforilasa b a fosforilasa a. por conducto de una fosforilacibn posterior. liberando los inonómeros C activos. La fosforilasa cinasa muscular tiene cuatro tipos de subunidades: alfa.a fcisforilasa en el músculo es activada por la adreiialiiia (lisura 20-6). La subunidad beta fija 4 Ca" y es identica a Ia pmtcina . [. Esto implica una movili. cada par formado de una subunidad reguladora (R). La inactivación de la fosforilasa es efectuada por la proteina fosfatasa-í Tanto la fosforilasa a como la fosfori lasa ciiiasa a son desfosforiladas e inactivadas por la proteína fnsfatasa-l. la fbrma activa está desfosforilada (gliicógeno sintasa a) y puede ser inactivada a gliiciigeno sintasa b mediante la l'osforilaci6n en siete residuos de scrina por no metios dc . lacual. 1. inactiva activa El Ca2+sincroniza la activación de la fosforilasa para iniciar la contracción muscular La glucogenólisis aumenta cn el mucculo varios ciendespués del comienzo de tos de veces inmedia~amente la ~nnlraccibn. la proteína cinasa dependiente de cAMP. al contrario de la primera.yyno 22 7 inactiv~da a fosforilasa b en una reacción que comprende In cliiiiinacion hidrolitica del residuo de serina. L. Una segunda molecula de ca!modulina o dc TpC puede interactuar con la fosforilasa cinasa. La fijación del Ca2' activa el sitio cataIitico de la subunidad garnma en tanto que la molécula permanece en la configuracicin b desfnsforilada. la fosforilasa cinasa. segiiida por la estimulacion de una fnsforilasa cinasa sensible a Ca2t/ca1modulina. La combinacihn con el cAM13 hacc que el cornple+joR2C2 se disocie. gamma y deIta en una estructura represcntada como (apyG)4. a SLI vez. la glucógeno sintasa existe en estado fosforilado y no fosforilado. independiente del cAMP. la f ~ m a fosforilada sólo es activada por completo en presencia de Caz'. la oxitocina y la angiotensina 11 que acíiian a travds del calcio o de la via del bisfosrato de fosfatidilinositol (figura 44-7). la calmodulina {capítulo 44). la cual esta desfosforilada 4 es activa solo en presencia del AMP.a f<isSorilasa muscular es inrnunol~gicay genéticainente distinta a la dcl hígado. Por tanto. de las mitocondrias al citosol. El cAMP activa la fosforilasa muscular I . beta.¡adora dc Caz+. La gliicogenólisis independiente de cAMP es causada tambidn por la vasopresina.a fosforilasa a es la forma activa Iisiolhgicamente normal de la enxima. Sin embargo. esto ciicede no conio u11 cfccto directo cine por medio de la accion del cAMP. la activaciiin de la contraccibn muscular y de la glucogcn6lisis son realizadas por la misma proteina tijadora de Caz-. EI increinento en la concentraci6n del cA M 1' activa a iina enzima con especificidad amplia. Esta ultima es inhihida por una proteina denominada inhihidor-l. dependiente de cAMP.as subunidades alfa y beta contienen residuos de scrinn que son fosforilados por la proteina cinasa La actividad de la glric0geno sintasa y de la fosforilasa se regula de manera recíproca (figura 20-7) AI igual que la fosforilasa. caiisada por la activación de la fosforilasa c i n a ~ apor el Caz+.jadora de Cal' en el mlisculo. mecanismo que proporciona combiistiblc al músculo. el cAM13 controla tanto la activación como la inactivacibn d e la fasforilasa (figura 2 0 4 ) . R2C2 + 4cAMP o 2C + 2(R<AMPz) Enzima Enzima La glucogenólisis en el hígado puede ser independiente del cAMP AdemBs de la importante accihn del gIucag6n en la formacibn del cAMP y en la activacion de la fosforilasa hepática.Esto comprende la activación rhpida de la fosforilasa. Sin embargo. que contiene cl sitio activo. Sin embargo. la proteina . la cual esta fosforilada y es activa en precencia o en ausencia de A M P (su rriodificador alosterico) y la fosforilasa h. Esto ocurre diirante ejercicio cuando laconcentracibn dc cAM P aumenta. los csiudios han mostrado que los receptores alfa. 10 cual asegura su sincronizacidn. son los principales mediadores de la estimulaci6n de las catecolaminas en la glucogenolisic. La proteína cinasa inactiva depeiidiente de cAMP esti ctinslituida por dos partes de subunidades. que fija 2 moleculas de cAMP y una subunidad catalitica (C).r.

Adrenalina Receptor p Adenilato clclasa inactiva Adenilato ciclasa activa FQSFODIESTERAJA ATP r- Glu~&geno(~+i] c 5'-AMP CAMP 1 Figura 20-6. Control d (n = numero de La secuencia de reacciones ordenadas corno una cascada permite la amplificación de la seíial hormonal en cada paso .

a 5 cinasas rcstnntcs son conocidas como gliicogeno sintnsa cinasa-3. al proinover la de~fosforiIaciiiri y activaciiin de Iri glucbgeiici sintasa b. Dos de las proteína cinasas son depeiidientes de Caz-'calmodulina (una de estas es E a frisforilasa cinasa). -4 y -5. L a ioslorilasa sc activa no solo por uii aiinicnto en la ~oiicentraciónde c A M t' (por medin de uiia fci~ftirilasaciiiasa). flecha ondulada. Por lo general. que C¿ILIWLIII~ wduccihn en Ia Klllpara la UDP-glucoca y que permite lii síntesis dcl gluctigeno por la cn~ii-tia l i i s h i ilada.tratn (por alosterismo) asi coino b o i . glucógeno sintasa cinasa-3. sino quc al inisnio licinpo la Adrenalina Receptor p @ Adenilato ciclasa activa Adenilatocicla~a inactiva ATP 4 cAMP l 1 FOSFODIESTEWSA 1 t 5'-AMP inactiva DEPENDIENTE Inhibidor-1 (inactivo) p r r 9 m u a Cl*& DEFf PI3 E n PROTEINA DEPENDIENTE ADP Glucosa-6-tosfato GlucbgenomF + UDPG Inhibidor-1-fosfato (activo) PROTE~NA FOSFATASA-1 Figura 20-7. la cual estd Iiajo el coritrol de la proteina cinasa dependicntc dc c A M I ' (tigura 20-7). y la insulina t.de iiiliibir la síntesis de glucogeno dc inodo siiicronizado con la activación de la glucosenniisis.. control horinonal. Otra c i In prolcliia ciiiasa depend i c i ~ t edc cAMP.1 . la decfosfo- rilacion de la glucOgeno sintasa b se efectUa por la acciiin de la proteina fosfatasa. que permite la accioli honnonal mediada por cAM13. -4 y -5. [ .~cic proteina cinasas difcrcntcs. E l g l u c ~ g e n o tatnbien e-jeerce una iiihibición sobre su propia forniacibii. lo que hace que cantidades nanomolares de hormonas produzcan cambios importantes en la concentracibn de glucbgeno (GSC. Los siete sitios dc fosfori laciijn ecthri coriten idos eii cada 1 de 4 subunitladts idkilticas.irnbi&i-i estiinula la ~ i n t e ~ de i s gluchgcno en cl iníisculo. EL EQUILIBRIO DE LAS ACTIVIDADES ENTRE LA GLUCOGENO SINTASA Y LA FOCFORILASA REGULA EL METABOLISMO DEL GLUCOGENO (Figura 20-8) La glucógeno sintasa y fosforilasa estan baio control del su. adivacion alostérica) . Control de la glucogeno sintasa en el musculo (n = número de residuos de glucosa) La secuencia de reacciones ordenadas en cascada permite la amplificacibn de cada paco. La glucosa-ú-iosI'.iio cs ti11 aclivador alostérico de la glucbgenci sintasa li.

Estas fosFnrilaciones secundarias modifican la sensibilidad de los sitios primarios para fosforilacion y desfrisforilaciiin. Io cuaI se conoce como fosfnril~cihn de sitios rnirltiples. la gliicogenolicis ~ ~ c krminarse d c y la glucog&nesis estimularse dc inanera sincrnnizada o viceversa. A sii vez. a sir vez. Control coordinado de glucogenólisis y glucog8nesis por proteina cinasa dependiente de cAMP Las reacciones que conducen a glucogenólisis como resultado de un incremento en la concentracibn de cAMP se muestran por flechas gruesas y las que inhiben por activacibn de la proteina focfatasa-1 se muestran por flechas interrumpidas Lo inverso ocurre cuando la concentración de cAMP disminuye debido a la actividad de la fosfodresterasa. La dos cnzimas. Por tanto. controla la sintcsic de glucogeno (figura 20-3). piicden iosforilarsc de mancrareversible en mhs de un sitio por de las cinasas y la acción de las fosfatasas separadas. ' Y / glucbgeno \ \ / J / Glucosa 1-Fosfato Giuwsa (higade) Glucosa Lactato ( m ú s w i ! ~ } Figura 20-8. El factor principal en el control del metabolismo hepático del glucógeno es la concentración de fosforilasa a Esta cnzima controla no sOlo cl paso limitante de velocidad en la glucogentílisis. sino qiie tambien inhibe la actividad de la proteína fosfatasa. La inactivacibn de la fosforilasa es consecuencia de la inhibición alostérica por glucosa cuando In concen- ' J / PKOTEINA FOSFATASA-1 / PwTEINA CIHASP DEPEND~ENT E DE cAMP PROTE~M A FOSFATASA-í A \ O \ \ / . Aqí. Im dos efectos son mediados por una proteína cinasa dependiente dc cAMP. de este modo.I (Figura 20-8). Tn~iibiCi~ en la regulacihn del metabolismo del gluch~eno es importante el hallazgo de que la desfostorilación cie la fosforilasa a. la inhibición de la glucogenblisis potencia la glucogenesis total y. la inhihiciOn de ésta incrementa Ia glucogenblisis total. conduciendo a glucogenesis .glucógeno sintasa se convierte en la forma inactiva. debido a que los dos prncecns se sincroilizan por la actividad de la proteína cinasa dependiente de cAMP. fosfo- rilasa y glucógerio sintasa.I y. de la fnsforilasacinasa g dc la gliicíigeno sintasa h cs llevada a cabo por una sola enziina de especificidad amplia-proteína iosfataw-l. esta ultima cs ínhibida por una ~xwteinacii~asadependiente de cAMP a tmvtSs del ilihibidor.

a - iipo ir hfemeaaa oe trompe Deficiencia de fa glucosidasa alfa-1 +4 y 1 +6 l isosornal (maltasa ácida) iusencia dr inzima di Tipo III Dex trinosis Iírnite o enf: dad de Forbes o Cori ris.Metahdi~mo del nlucúgeno 23 1 tracibn de esta se eleva después de una comida. . cubre las necesidades s61o d e ese órgano. . . 2) En el hígado. hipogluclcmia Como eri el tipo V . No se produce regulación de las enzimas de rarnificación y desramificacidn. ejercicio:.. . Causa del trasto rno . . Enf .- iento de es por alrnacenam .5 a 4. -.. En el músculo. su función principal es servir a otros tejidos mediante la generación de glucosa sanguinea. Noin b r e 'aracterist Enfi :von Gierke Deficiencia d e gIu fi . cnfcrn antc enzima ante: Acumula dos rami- . pero tm bitn eki ste la pos ibilidad di anemia h emolitica Lurrici cri )eficienciaI de fosfo fructociasa en mil:rculos y eri trocitos Jeiicierrcla de fosforilasn ciria- el tino VI . se tienen informes de deficiencias de adenilata cinasa y proteína cinasa dependiente de cAMP.--. se tiendle hacia 1. como una fuente de combustible metabólico lista para usarse. Es degradado por una vía separada conocida como glu- ASPECTOS CL~NICOS Las enfermedades por almacenamiento de glucógeno son hereditarias El termino de "enfemedad por almacenamiento de glucógeno" es una expresidn genkrica que intenta describir a un grupa de trastornos hereditarios que se caracterizan por depósitos de un tipo o de una cantidad anormal de glucógeno en los tejidos. los musc UIOS tienen ---*--LA -Luiireriiuub aiiuiiirale~altos de glucbgeno (2. POCO O nada de lactato en la sangre dcsputs de ejeercich 4 Tipo V Deficiencia de miofosfoi sind:reme de McArdlc fosforilasamuscular Tipo VI de fosfor ilasa he- Alto coritcnido de gluchgeni hcphtíco . La muerte se debe a insuficiencia cardiaca o hepática en el primer ano de vida Disminliyc la tol erancia a 1 . cetosiS e hiperlipidemia acumulaci en los lis ~ c i cardia. La activación es causada por 5'-AMP que responde a la depleción de ATP.. Las principales Cuadro : 20-2. Asimismo. polisaciri acterísticu: Tipo l V Acumula S con puntos cioncle no esian muy ramificados. lo cual es seguido por activación de la glucdgeno sintasa.1%). Hipogluceinia. Los efectos de la insulina requieren la presencia de giucosa. La administración de insulina de inmediato inactiva a la fosforilasa. 3) El glucógeno se sintetiza a partir de glucosa y otros precursores por la vía de la glucogénesis. Las ctlulas hephticas y del túbulo renal cargad as con glu cbgcno. glucogenosis se resumen en el cuadro 20-2. RESUMEN 1) El glucógeno representa la rnhs importante forma de almacenaje de carbohidrato en el cuerpo del mamífero y se encuentra principalmente en hígado y músculo. . Algunos de los trastornos descritos han me-¡orado con los trasplantes de higado.

REFERENCIAS 11 ctivih 2nd ccl Chnpinnn & E::ilicn 1': htirr.I. Nuttall FQ: Iricrirprirulitin cif glycogc~~¡in iiifo n hcpntic prciteoplycogen allcr nrnl ~Jti~oic: iidininistrati(~[~.il control r i l ' eii/yiiie artivity.T (editors): I 'rirhnl<i:rlvotc A.ZI~tahnlic ~ Husis nflnlicrircrl Disrr~ssp.siol 1991:200:13430. 4) El A M P cíclico integra la rcgiilacion de In glucog c ~ i ~ i l i s iys de l a glucogdnesis cn Iin patroii recíproco nl pi*omovcr la ac~ivaciiinde la fosforilasa y la inhibiciún de In glucógeno ~intasa.ericia respectiva de gluciisa-O-fosfataca. Elir S Biuchciii 19x5: l j l:130.15:167. I\cadcrri ic I'ress.(editor): 7 % .324~30. Annu Rcv Biochcm 1976:.lc~nholisni otzd lis Disorcicrs. Selhy R et al.cogenbli~is.Whelan W. Exton JH: Molccular mechanisrns i n v o l ~ c d in cx-adrenerpic icsponses. 1 9x3. M o l Ccll Endocrinti1 I 'IX 1 :23:233. N Liigl 1 Mrtl 1Oi)1. Mc( iraw-tiill. E ~ t última a conduce a la formacion de gliicora cri el hígado y de lactato en el músculo dehiclo ¿i la prcsenciñ o aur. Randle P.: I.lq~cigcn:14 mctnbnlic viewpoinl. Katz A. Vol 3 . i r i tiumaii skele~al muscle. Am J I'hj. .íver transplnntation for typc i V pliictigcn storngc discnsc. 'rciiti N. 5 ) Dcficicncias Iiercditarias en enziinas c h p c c i f i ~ r i s de metabolismo en hígado y múcciilo ocasionan enfermedades por almacentlrniento de glucógeno.269:2232R. 1% l . Scrivcr CR et r l. Cierldes R: (. 71h etl. Steiner DF. Iliosciencc I k p 198h:Ci:415. Spcnccr MK: Fpiticpliriric inliiliits iiisulinincdiiitcd gly ccigenesiii h u i enhances glycoly sil. Hers HC:: 'l'liecrinlrril cif~pliicngen metaholistn in itic livcr. Raz I.o/ o/ E~qvnli* 1 Iiil E. d Riol Cliem 1994. C'cilicn 1': I'lic rrilc rit' prutein phrisphorylation in thc lirirri\iin. 1995. Gnnnnn RIL.

Piruvato y fosfoenoIpiruvato En la mitocondria se locali7a la enzima piruvato carboxilasa. ya que contienen el conjuntocompleto de enzirnas necesarias. Además. Es posible esquivarlas mediante reacciones especiales.MAS ALGUNAS REACCIONES ESPECIALES (Figura 21 -1) Las barreras termodinámicas impiden una inversión simple de la glucólisis Krebs seílaló que las barreras energeticas obstruyen la reversión simple de la gluciilisis: entre el pimvato y el fosfoenolpiruvato. lactato.de la glucosa sanquinea U Peter A. . Mayes. es un sustrato importante para la gluconeogénesis en estas especies.L la gluconeogénesis es por lo general mortal. A. entre la hctosa-l . convierte al piruvato en oxalacetato. glicerol y propionato. hay siempre un cierto requerimiento basa1 de glucosa. producido por el músculo y los eritrocitos. Además. que se f o m a continilamente por el tejido adiposo. hay disfunción cerebral que puede conducir a coma y muerte. la glucosa es el unico cambustible que suministra energia al muscu!o esquelético en condiciones de anaerobiosis. lactato. Es precursora del azucar de la leche (lactosa) LA GLUCONEOGENESIS INCLUYE LA GLUCOLISIS Y EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO.B-bisfoshto y la fnictosa-6-fosfato. Se rcquiere un suministro constante de gtucosa como fuente de energia. El higado y el riíión son Tos tejidos donde se realiza principalmente el proceso. en presencia de ATP. la cual. Es evidente que aun en las situaciones en qiie la grasa puede suministrar la mayor parte del requerimiento calórico del organismo. IMPORTANCIA BIOMÉDICA La gliiconeogénesis cubre las necesidades corporales de glucosa cuando el carhhidrato no esta disponible en cantidades suficientes en la alimentacion. y glicerol. Los sustratos princihidrato~ pales para la gluconeogénesis son los amínoacidos glucogknicos. los mecanismos gluconeogénicos sc utiliran para depurar los productos dcl metabolismo de otros tejidos desde la sangre. La insuficiencia L. entre la glucosa-6-fosfato y la glucosa. DSc La gluconeogénesis es el temino que se iitiliza para incluir todos los mecanismos y vías responsables de convertir otras sustancias diferentes de los carboa glucosa o glucbgeno. PhD. La glucosa se requiere también por el te-jido adiposo como fuente de glidrido-glicerol y es probable que intervenga en la conservaci6n de la cifra de intermedios en el ciclo del acido cítrico en numerosos tejidos. Por debajo de una concentraci6n critica de la glucosa sanguínea. la vitamina B biotina y CQ:. en la glándula mamaria y se capta activamente por e! feto. principal ácido graso glucogénico producido por los rumiantes en la digestión de las carbohidratos. Todas estas reacciones no tienen equilibrio. por ejemplo. y entre la glucosa-l -fosfato y el gluc6geno. El pmpionato. en especial para el sistema nervioso y los eritrocitos. liberan gran parte de energia libre como calor y por tanto son fisloliigicarnente irreversibles.

Las enzirnas gluconeogenrcas clave se muestran con un rectángulo doble El ATP requerido para gluconeog8nesis se suministra por oxidacibn de Budos grasos de cadena larga. Vias mayores y regulacibn de gluconeog8nesis y gluc6lisis en el higado. El propionato s6lo tiene importancia cuantrtativa en los rumiantes. Las flechas onduladas significan efecto alost&rico.234 Bioquím ica de Hurper capitulo 2 1) - Glucosa HEXOCINASA Glucosa 6fosfato Glucógeno AMP A 1 Gliceraldehido 3-tosfato Fosfato de dihidroxiacetona 3-Fosfato de glicerol Fosfoenotpiruvato Oxalacetato Figura 21-1. las flechas cortadas modificación covalente por fosforilacibn reversible Las concentraciones altas de alanina actuan como una "cefial gluconeogifnica" que inhibe la glucblisrs en el paso de piruvato cinasa . Los puntos de entrada de aminoácidos glucog&nicosse indican por flechas que salen de circulos (figura 1 8 4 ) .

experimenta una reaccibn de fijacibn de COZpara formar D-metilmalonil-COA. cítríco C H ~ -C<>Pnlim. entra a la ruta gluconeog&nica principal por la via del ciclo del hcido cítrico despuis de su conversidn en succinil-COA. supresencia a un agregar glucosa a la sangre.jos. CoA*SH CO2 +H. las enzima se distribuyen por igual en mitocondrias y citosol.S. producto de esta reacción.6-bisfosfato en fiuctosa6-fosfato. En el higado de pichones. pollos y cone. el lactato forma pinivato y dehe entrar las mitocondrias antes de convertirse en oxalacetato y en último término en glucosa. . En esta reacción se necesita fosfato de alta energía en la fonna de GTP o ITP v se libera CO. Por tanto. En la rata y el raton la enzima esta en el citosol. catalizada por la propionil-COA carboxilasa (figura 2 1-2). ~at~ cataliZí! la Conversi6n dcl oxalacetato en fosfoenolpinivato.~a san~uinea 235 La función de la biotinaes ligar el CO?del bicarbonato a la enzima antes de la adición del CO: al pinivato (figura 52-13). Estas enzimas esenciales que permiten la inversión de la glucólisis tiene una función importante en [a gluconeogenesic.Bli~~~-tH 60-$-COA CO-S. el cual puede transportarse al interior del citosol y reconvertirse en seguida a oxalacetato mediante la malato deshidrogenasa extramitocondrial. El propionato.COO- coo Propronato CO. Esta reaccion es anhloga a la fijacibn det C 0 2 en la B. Se sostiene que esth ausente en los musculos cardiaco y liso. se cataliza por una enzima especifica.O CARROXILASA H -$. la fosfocnolpiruvato carboxicinasa es una enzima mitocondrial y el fosfoenolpiruvato se transporta al citosol para su conversión en 1. o-Metilmalonil-COA lntermedlos del ciclo del Acido e CH. con la avuda de estas dos enzimas que catalizan transformaciones endergbnícas y de la deshidrogenasa Iáctica. El propionato se activa primero con ATP y COA por una acil-COA sintetasa apropiada.lo. no .I-fosfato y glucógeno La degradacihn del glucógeno Iiasta gl~icosa 1 -fosfato se efectua por la fosforilasa. Esta es una enzima clave en el sentido de que su presencia determina si un tejido es o no capaz de sintetizar glucógeno a partir no s61o del piruvato sino tambiin de los triosafosfatos. Asi. Metabolismo del propionato. Decputis de la transarn inacidn o desaminacibn. en glucosa o glucógeno.&bisFosfatasa. a! rebasar la barreraenergetica entre el piruvato y el fosfoenolpinivato. Esto se resuelve mediante conversión a malato. Fructosa 6-fosfato y fructosa 7. Esta enzima se encuentra en higado y pero tejidos muscular y adjpoco. La propionil-COA. . la fructosa-1 . Por tanto. Glucosa 6-fosfato y glucosa ~a conversión de glucosa h-fisfato en glucosa se cataIiza por otra fosfatasa especifica. Las relaciones entre e s t a enzimas claves de la gluconeogénesis y la vía glucoIitica se muestran en la fígum 2 1-1 . lo cual genera un problema ya que el oxalacetato no difunde al travCc de la membrana mitocondrial interior. Una segunda enzima la fosf ~ e n ~ l p i r l l carboxicinasa. el lactato se puede convertir en fosfoenolpiruvato. C. La sinresis de gluc6geno implica una vía enteramente diferente a travds de la formacibn de la difosfato de widina y glucosa y la actividad de la glucógeno sintasa (fígura 20-1). Esth presente en el hígado y ridones y demostrada en eI músculo estriado.Gluconeogknesis y control de la gluco. las reacciones descritas pueden dar cuenta de la conversibn tanto de los aminodcidos glucog&nicos como del lactato. los aminoacidos glucog~nicos forman ya sea piruvato o miembros del ciclo del ácido cítrico.6-bisfosfafo La conversión de fnictosa 1. D.. En el ser humano. la glucosa ó-fosfa- h .COA SucclnilEoA L-Metilmalonil-COA I Figura 21 -2. que es la fuente principal de glucosa en los rumiantes.COA ATP A M P + PPI Propionil-COA ATP ADP + p.6-bisfosfato de fmctosa por inversión de la glucólisis. cobayoc y vacas. necesaria para lograr la reversión de la glucolisis. Glucosa .

E b hígado y el riii6n son capaces de convertir el glicerol a glucosa sanguinea haciendo uso de las enzimas anteriores. de algunas de las enzimas de la glucólisis y de las enzimas especificas de la via gluconeogénica: fmctuosa-1. Las dos deshidrogenasas de la vía de la pentosa fosfato pueden clasificarse como enzimas adaptativas. hormonas que disminuyen la glucosa en la sangre. Es importante observar que las enzimas clave que intervienen en una vía metabólica se activan o deprimen d e manera coordinada.6hisfosfataca y glucosa-6-fosfatasa (figura 2 1-1). el propionato puede también utilizarse como cebo rnolecular para la sintesis. ficarse como responsables de la regulacíon de la actividad enzimática en el metabolismo d e carhohidratos se muestran en el cuadro 21-1: 1 ) cambios en la velocidad de sintesis enzimática. y cataliza la conversibn de glicerol en glicerol-3-fosfato. Las tluctuaciones de su concentración sanguínea por cambios en la disponibilidad dietética pueden alterar el indice de secrecidn de hormonas. que requiere ATP. 2) modificación covaientc por fosforilación reversible y 3) efectos alost~ricos.acetil-COA por la acetil-COA carboxilasa (capitulo 23) en que forma un derivado malonilo y requiere la vitamina biotina como coenzima. El gIicerol es un producto del metaboIismo de[ tejido adiposo y sólo los tejidos que poseen la enzima activadora glicerol cinasa. que a su vez. por E a metilmalonil-COA racemasa antes de cu isomeracícin final a succinil-COA por la enzima metilmalonil-COA isomerasa. en el tejido adiposo y glandula mamaria. La inducción y represión de la síntesis de ensimas clave no son rápidas sino que utilizan varias horas Algunos dc los cambios mejor estudiados de la actividad cnzimática que ociirre bajo diversas condiciones rnetaMlicas aparecen en el cuadro 2 1-1. se encuentra entre otros tejidos. Aunque la via hacia el succinato es su ruta metabólica principal. I -me& rnalonil-COA. La infmaci6n en este cuadro se aplica en gran parte a enzima? hepiiticas. antagoniza el efecto de los glucocorticoides y del cAMF estimulado por glucagón el cual induce la síntesis de las enzimas clave responsables de la gluconeogknesis. dado que aumentan su actividad en ct animal bien alimentado y cuando la insulina se administra a un animal diabético. TODA VEZ QUE LA GLUCOLISIS Y GLUCONEOGENESIS COMPARTEN LA MISMA V ~ A PERO EN DIRECCIONES OPUESTAS. Tres tipos de mecanismos pueden identi- La modificación covalente por fosforilación reversible es rápida El glucag6n y en menor grado la adrenalina. Esta enzima. Las enzimas catali7an reacciones de no equilibrio que fisiológicamente pueden considerarse como " una dirección'' más que ecuaciones balanceadas. Esta via conecta con las etapas de triosafosfatode la vía glucolitica. Del mismo modo. Se ha demostrado. aumenta la sintesis de las enzirnas responsables de la glucólisis. inhiben la glucólisis y estimulan la gluconeogénesis en el hígado mediante el aumento d e la concentraci6n de . la cual requiere vitamina B 1 2 como coenzirna. DEBEN REGULARSE DE MANERA REC~PROCA Los cambios en la disponibilidad de sustratos son responsables de manera directa o indirecta de lamayor parte de los cambios en el metabolismo. La "enzima malica" y la ATP-citrato liasa se comportan de igual moda. lo pueden utilizar. La secreción de insulina. en el higado y riiiones. El cuadro 2 1-1 muestra con claridad que éste es el caso. 10 cual indica que estas dos enzimas intervienen en las lipog6nesis mas que en la gluconeogCnesis (capitulo 23). La D-metilmalonilCOA debe convertirse en su estereoisómero. de los hcidos grasos que tienen un número impar de átomos de carbono en la molécula. Los acidos grasos C I qy C17se encuentran particularmente en los lipidos dc los rumiantes de donde constituyen una fuente importante de estos acidos grasos en la alimentación humana y por iiltimo se degradan en propionato en los tejidos (capitulo 24).la regulación d e las especies mRNA de estas enzirnas y la modulacion de la expresión de sus genes. a menudo modificando la actividad de enzimas clave que intentan compensar el cambio original en Ia disponibilidad del sustrato. h menudo 10s efectos se refuerzan dado que la actividad de las enzimas que catalizan los cambios en la dirección opuesta varían de manera recíproca (figura 2 1-1 1. influye en el patrón del metabolismo en las diversas vias. La deficiencia de vitamina B 1 7 en el ser humano y los animales conduce a la excrecion de grandes cantidades de metilmalonato (aciduria metilrnalhnica). Ias intervienen en S de glucólisis y lipogenesis) son más activas cuando hay un exceso de sustrato y bajo estas condiciones las enzirnas responsables de la pl-oduccibn de glucosa por la vía de gluconeogénesis muestran escasa actividad. Todas las enzimas que a utilízacibn de la glucosa (es decir. Su actividad es baja en diabetes o en ayuno. porque el glicerol-3-fosfato puede ser oxidado a fosfato de dihidroxiacetona por el NAD' en presencia de la glicerol-3-fosfato desfiidrogenasa. que es sensible a la conccntraci6n sanguínea de glucosa.

adrenalina (cAb L . . cuierpos cct& fosfato* n i c o s li * . fructo!. i rI. ~knesis. T ! 1 NAD*. Activid Dieta con r-1 -.n"l - Enzimas ae Piruvata c arboxi1 .ADP.~ -L CCL WU"~ xilasa -" dena la T h. glu S istema de glucógeno sini. asa HLAVL~LLU~ C. AMP 3SB :n 7 h Glucosa-h-t r "ticoides. Enzimas reguladoras y adaptativas de la rata (hephticas en gran parte) . cuerm n r o o t Xn.'. II. adrcnaglucagó~ lina (CAP dl=) ticoides. . adrenaAl'l gón? -- Glucagbn (cAMP 1'6 ato..vi. oA de ca- A A C C LP L. glucagh1.. . Fosfofructot l 1 zenesrs ..1P-C itratc .a + - Piriitfatocin asa - alanina bn (cAMI' ndrcnal ina - Piruvato dt:shidrog cnasa 1 4.cido grasn - * AIOSIC~IC~ --- 'En tejido adiposo pero nin en higado. . J diabetes - Enzimas de gluco~eno.fosfato t l L 1 lnsulina Insulina Enzima m i -P.Citrato (ácidos grasos.Gluconeo.- i - 1- - carbohidratns -"A" . ~ 1 Glucor ticoides.. . aatena- - F carnox~c~ - F t i c o i d e s . A T P * . A A - -" - Insulina 1 Cilucagón I I - fructesa t5. .NADH'..".A c e t i l . ~nsul~na -E C dcshidrol h L giucagui1. c fosfatos ii e pen tosa y de lipop ras vias d8 L t 1 .Pi.~éncsis y control de la nIucosa sanguínea 237 Cuadro 21-1.ATP (ácidos grasos.C O A . - . glucagún. A -. pin1. . i Insulin fosfori geno -- -- I . tnsulina 1.

Una consecuencia de la inhibición de fosfofructocinasa. activando a la ~ r o t e i n a cinasa devendiente de cAMP la cual a su vezrinactiva a la fos'fofructocinasa-2 y activa a la fnictosa-2. cuando la glucosa escasea. Alivia la inhibicibn de fosfofmct~inasa1 por ATP e incrementa su afinidad por fructosa 6-fosfato. Inhibe la fructosa1. También afectan la concentracibn de fructosa 2. la concentracihn de AMP silbe.6 bisfosfata. la síntesis de oxalacerato a partir de bicarbonato y piruvato que se cataliza por E a enzima piruvato carboxilasa.6-bisfosfato y por lanzo la glucólisis y la gluconeogenesis. y también. Por otra parte. ayuda a explicar la accibn "ahorradora" de esta oxidacibn de Bcidos grasos en el metabolismo del pinivato y en la estimulación de gtuconeog~nesishepatita. El aumento en [AMP] tambikn puede explicar por qué la glucólisis se acelera durante la hipoxia. que reduce el valor Km para el bicarbonato. La enzima fosfofnictocinasa-1 se inhibe por citrato y por ATP y se activa con AMP. Su concentmcibn esta bajo control del sustrato (alost&rica) y hormonal (modificación coralente) (figura 2 1-3). Otra enzima que est6 sujeta a control por retroalimentación es Ia fosfoIructocinasa (fosfofructocinasa-1)Ocupa una posicion fündamental en la regulación de la gluc6lisis. y la inhibicibn recíproca de la piruvato deshidrogenasa por el acetil-COA formada de la oxidacilin de Bcidos grasos. La presencia de adenilato cinasa en el higado y muchos otros tejidos permite el equilibrio rápido de Asi. inhibe la captacibn adicional de glucosa en tejidos extrahepáticos por inhibicibn alostérica de la hexocinaca.1 sea muy sensible inclusive a cambios mínimos en el estado energetico de la celula y controle la cantidad de carbohidratos que experimentan glucólisis antes de entrar al ciclo del ácido cítrico. La relación recíproca entre la actividad de piruvato deshidrogenasa y pimvata carboxilasa en hígado y riiíón altera el destino metabólico del pinrvato cuando el tejido cambia de oxidación de carbohidratos por glucólisis a gtuconeogtnesis durante la transicihn de un estado de nutrición adecuada a inanicihn (figura 2 1-1). en un estado de suficiencia de nuiientes. La adición de acetil-COA conduce a un cambio en la estructura Terciaria de la proteína. Este efecto tiene implícaciones importantes en la autorregulación del metabolicrno intermedio. por tanto. la reacción: ATP + AMP H 2ADP . la A M P activa una fosforilasa que incrementa la glucogen6lisis. ya que posee actividad de fructosa-2. Por tanto.'estimula á la cinasa e inhibe a la fosfatasa.6-bisfosfato tiene una función exclusiva en la regulación de la glucólisis y la gluconegoénesis en el hígado El efector aloct6rico positivo más potente de la fosfohctocinasa-1 e inhibidor de la fnictosa-1 .Como [ATP] puede ser 50 veces mLs elevada que [AMP] en el equilibrio. requiere la presencia de acetil-COA como activador alostérico. cuando [ATF] disminuye. ha fructosa 2. I. La inhibición de la fosfohctocinasa-1 por citrato y ATP podria ser otra explicación del efecto ahorrador de la oxidación de ácidos grasos en el consumo de glucosa y también del efecto Pasteur donde la oxidación aerobia (por el ciclo del ácido cltrico) inhibe la degradacirin anaerobia de la glucosa. invertir la reacción catalizada por fosfoglicerato cinasa en la gluc~lisis. Esta enzima bifuncional esta bajo el cona01 alostérico de fnictosa 6-fosfato. conduciendo a fbsforilación e inactivacion de la piruvato cinasa. La fnictosa 2.6-bisfosfato. De manera simultánea. su oxidación ulterior en el ciclo del hcido cítrico por la pinivato carboxilasa. asegura de manera automática una produccién constante de oxalacetato y.6-bisfosfato se forma por fosforilación de la fmctosa 6-fosfato por acción de fosfofructocfnasa-2. a su vez. Lo cual.6bisfosfatasa. 6-bifosfatasa en el hígado es la froctosa 2. a su vez. un cambio g r a n d e en [ A M P ] a c t ú a c o m o a m p l i f i c a d o r metabólico de un cambio pequefio en [ATP].1 es la acumulaci6n de glucosa6-focfato que. es decir. igual que acetil-COA se forma del pinivato. el cual cuando aumenta de concentracirin debido a una abundancia de elucosa. La modificación alosterica tambien es rápida Se dispone de varios qjernplos del metabolismo de carbohidratos para ilustrar el control alostérico de la actividad de una enzima. el glucagbn estimula la producción de cAMP. En la gluconeogknesis. como se expiica adelante.ó-bisfosfatasa por incremento de Km para h c t o s a 1.cAMP. cuando el ATP se usa en procesos que requieren energia y deja como subproducto ADP.6-bisfosfatasa por fosforilación. La misma enzima es también responsable de su degradacidn.a activación de esta última enzima. en donde. Una funcibn importante de la oxidacidn de Bcidos grasos en la promocibn de la gluconeogknesic es suministrar el ATP requerido en las reacciones de piruvato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carboxicinasa. Este mecanismo permite que la actividad de fosfofi-uctocinasa. una disminuci6n fraccionaria pequeña en [ATP] causará una elevacion importante en [AMPJ. El AMP actiia como un indicador del estado energktico de E a cklula. incrernenta la actividad de tina proteína cinasa dependiente de cAMP.

1 mmol/L. como en una sobredosis de insulina. r a t a adaptadas a dietas ricas en grasas parecen normales con una concentración sanguinea de glucosa tan baja como 1. La glucosa sanguinea en ares es bastante mayor (14.6-bisfosfatasa.3 en el ganado vacuno). podria ocurrir una amplificación del efecto de un modificador alostérico.6-bisfosfataca).6-bisfosfato. se estimula la gluconeogénesis por disminucion de la concentración de fnictosa 2. por ejemplo.2 mmollL en ovejas y 3. Los ciclos (vanos)de sustrato permiten un ajuste fino en la gluctilisic Puede apreciarse que muchos de los puntos de control y el metabolismo del gluciigeno comprenden un ciclo de fosforilación y desfosforilaci0n catalimdo por las enzimas siguientes: glucocinasa y glucosa-6-f'osfatasa. la fnictosa2.~i~s y cnnfi-ni de la glucosa sanguinea - 239 Glucosa - y glucbgeno . Que esto no ocurra de manera extensa se debe a varios mecanismos de control que aseguran la inhibición de un extremo en tanto que el otro se estimula en cada ciclo. como fnictosa 2. Durante el ayuno.6-bisfosfatasa.5 mmollL. lnvestigac iones recientes indican que el 1.6-Paca (6-fosfofructo-2-cinasalfructoca-2. es probable que haya alguna ventaja fisiológica en permitir cierta ciclizacibn. Al parecer estos valores bajos se relacionan con el hecho de que los rumiantes fermentan casi la totalidad del carbohidrato de los alimentos a hcidos grasos de cadena corta (volátiles) y estos reemplazan en gran parte a la glucosa como combuctible metabolico principal de los tejidos en estado de suficiencia de nutrientes.6 bisfosfato.9.5 a 5. de acuerdo al requerimiento tisular y corporal.3 y 3. No obstante. en el ciclo fosfofructocinasa~fructosa-l.l. Cuando se ingiere una comida rica en carbohidratos. ADP tA CONCENTRACION DE GLUCOSA Fructosa 1.0 rnrnollL) y en rumiantes considerablemente menor (alrededor de 2. Una disminución repentina de glucosa sanguínea causa ~onvulsiones. Por ejemplo.s-bisfosfato Piruvato t SANGU~NEA SE REGULA DENTRO DE L~MITES MUY ESTRECHOS Después de la absorción. Figura 21-3.6-bisfosfatasa. F16-Pasa. fosfofnictocinasa. productor de un cambio algo mayor en el flujo total de mmbolitos en cualquier direccibn que el que ~ u r r i r i a en ausencia de la ciclizaci6n de sustrato. (PFK fosfofructocinasa 16-fosfofructo-9-cinasa]. No obstante. Cuando la glucosa escasea. serian ciclos vanos (inutiles) cuyo resultado neto conduciría a la hidrólisis de ATP. Control de gluo61isic y glucuneogénesis en el higada por fnrctoca 2.l y h c t o s a I . que desactiva la fosfofructocinasa. fructosa-l. .6-bisfosfataca.6-brsfocfatasa. debido a la dependencia inmediata del cerebro de! suministro de glucosa. Fnictosa 6-fosfato 1 .Este mecanismo tambi&nasegura que la estimulación de la glucogen6lisis hephtica por el glucag6n conduzca a liberación de glucosa y no a gluc6lisic. Este "ajuste fino" del control metabolico causa siempre cierta pérdida de ATP.6-bisfosfato y la enzima bifuncional PKFIF-2. Las flechas onduladas indican efectos alost~riws E Por tanto.2. piruvato cina~a. Si se permitiera a estos ciclos continuar sin freno.5 a 7.1 y ddesinhibe a la fnictosa-1. bajo abundancia de glucosa. si se permite una adaptación progresiva es posible tolerar concentraciones sanguínea mucho menores de glucosa.:luconeogkne. pinivato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carhoxicinasa.6-bisfosfato de glucosa desempeila una funcibn semejante en algunos tejidos extraheplticos.6-bisfosfato aumenta su concentraci6n y estimula la gluc~lisis por activación de fosfofructocinasa-1 e inhibicion de fnictosa. los valores bajan entre 3. y glucógeno sintasa y fosforilasa. la concentración dc glucosa sanguínea en el ser humano y muchos mamíferos se encuentra dentro de los límites de 4. puede elevarse a 6.

t o s carbohidmtos dietéticos que se digieren en forma activa contienen residuos de glucosa. seguida por transam inacihn a alan ina. el lactato. galactosa y fnictosa que se liberan en el intestino. El 3-fosfato de glicerol para la síntesis de triacilgliceroles en el tejido adiposo deriva de la glucosa sanguinea. La glucosa se forma a partir de compuestos glucogénicos su. luego. Éstas se transportan al higado por la vena portal. La energia requerida para la síntesis hepática de glucosa a partir de piruvato deriva de la oxidacion de ácidos grasos. Al parecer.jetos a gluconeogcnesis (figuras 1 8 4 y 21-1). Ocurre una transferencia neta de nitrógeno de amina del rnúsculo al higado y de energia libre del higado al músculo. donde se sintetizan de nuevo a glucosa. Asi. GLUCONEOGENESIS Y GLUCOGENOL~SIS La mayor parte de los carbohidratos digeribles de la alimentación en última instancia forman glucosa. predomina la alanina. La glucosa tambien se genera a partir del gluchgeno hephtico por glucogenolisis (capitulo 20). como algunos aminoácidos y propionato. Mecanismos metabólicos y hormonales regulan la concentración sanguínea de glucosa La conservación de valores estables de glucosa en la sangre es uno de los mecanismos homeostá~icos regulado con mayor precisibn y en el10 toman parte el hígado. formado por oxidacibn de glucosa en músculo esquelktico y eritrociios. De los aminoácidos tmnsnortadosdesde el músculo al higado durante inanición.LA GLUCOSA SANGU~NEA DERIVA DE ALIMENTACI~N. Esto tia conducido a la hipótesis de un ciclo glucosaalanina. Ciclo del ácido lactico (Cori) y ciclo de la glucosa-alanina. . las celulas hepaticas son totalmente per- Figura 2 1 4 . Estos aciIgliceroles experimentan hidrólisis en forma continua para formarglicerof libre. Estos compuestos se agrupan en dos caxegorias: 1) los que tienen conversión neta directa a glucosa sin reciclamiento significativo. esta es llevada al h igado y sigue gluconeogénesfc de rcgreso a glucosa. como se muestra en la figura 2 1 4 . con fonnaciiin de pinivato. difunde a la sangre y sc convierte de nuevo a glucosa por mecanismos gluconeogenéticos en hígado y rifion (figura 71 -1 j. qiie tiene e1 efecto de un ciclado de glucosa desde hígado al musculo. y 2) aquellos que son productos del metabolismo parcial de lo glucosa en ciertos tejidos y se llevan a hígado y riflbn. se transporta al hígado y riflón para regenerar la glucosa. tejidos extrahepáticos y varias hormonas. que está de nuevo disponible para oxidación en los tejidos. que no puede utilizarse por el tejido adiposo y por tanto. La galactosa y fnictosa se convierten con facilidad a glucosa en el higado (capitulo 22). Este proceso se conoce como cicln de Cori o del heido Ihctico (figura 2 1 4 ) .

-.. . Por otro lado. . los índices de absorción y los de excrecihn son iguales a la concentracion de glucosa en E a sangre de la vena porta esto es.. aumenta su actividad con concentraciones de glucosa por arriba de los límites fisiol6gicos (figura 2 1-5) y al parecer.L. El aumento en las concentraciones de IZTP inhibe los canales de K' sensibles al ATP lo que da lugar a despolarizacion de la membrana de la célula B.. el ciclo del ácido cítrico y la generación de A'I'P. . céluln B pancrcitica. Cuadro 21-2.. l l bitación tisula - -- Fu nciiincs . el paso a traves de la membrana celular es la Iimitante de la veIocidad en la absorción de glucosa en tejidos cxtrahepáticos y la glucosa se fosfotila con rapidez por acción dc una hexocinaca al entrar a la célula. de modo que es posible ejercer cierto control por retroal imentaci6n en la absorción de glucosa por tqjidos extrahepáticos dependientes de hexocinasa mediante la fosforilacihn de glucosa.. ...eritrociin .\1nial renal contra el gradiente dc conccntraciún . Se calcula que en la rata. cuando la glucosa se eleva. - .. . Ida funciiin de varias proteínas transporíadoras de glucosa que se encuentran en la membrana celular. Su ausencia en los rumiantes.. I " ...--. La insulina tiene una función central en E a regulación de la glucosa sanguínea Adernis de los efectos directos de la hiperglucemia para amplificar la captación de glucosa en hígado y tejidos perifericos. . placenta. Debido a esto. ]. intestino del gatlo. No obstante.. La glucocinasa.. cal rifiún Ccrcbro. Es de remarcarse que los medicamentos de Ia sulfonilurea que se utilizan para estimular la secrecidn de insulina en la diabetes sacarina de tipo 11 (diabetes sacarina no La glucocinasa es importante en la regulación de la glucosa sanguínea posprandial Debe recordarse que la hexocinasa se inhibe por glucosa 6-fosfato.-*. .. Sin embargo.~ I L I C ~ I ' CII ~ U CI IUUUIU p~11. .~L. a su vez.. la concentracidn de glucosa en sangre es un factor importante en el control del indice de absorcibn tanto en hígado como cn tejidos extrahepáticos. X. . t-ligado.Gliaconeogéne~z.5 rnmol:L) el hígado se comporta como un productor neto de glucosa.. incrementa el influjo de Ca" por la vía de canales de Ca2' sensibles al voltaje y estimula la exocitosis de insulina. se ocupa de manera específica de la captacion de glucosa en el hígado bajo las elevadas concentracio- . . A A . . es compatible con esta función. Transportadores de ~lucosa . En concentraciones sanguineas nonnales de glucosa (4....UW -Imln. nes encontradas en la vena portal después de una comida rica en carbohidraios...irln Transportadores unidireccionalesdepcnd odio 1 . colon.. riilon.5 a 5. cada 1 con 12 dominios transmembrana. tejido ad iposo Cal ! " -- .... itacihn nctiiva de gluc la luz intc: l.. El higado no esta sujeto a esta restriccion debido a que la glucocinasa no se altera con el 6-fosfato de glucosa. Asi la concentración dc glucosa sanguinea determina el flujo por medio de la gluc6lisis. esto. es probable que la actividad de ciertas enzimas y la concentracibn de intermedios clave ejerzan un efecto mucho más direcm sobre la captación y salida de gliicosadel hígado. Intestino LC. la honiiona insulina interviene de manera critica en la regulacion de los valorcs sanguíneos de glucosa. en donde entra poca glucosa a la vena porta procedente del intestino.... Y A + - itacibn de 1 bcración r$ Miisculoscardiaco y esquelktico. la excreción hepatica de glucosa cesa.a célula del islote es permeablc a la gliicosa por la via del transportador GLUT 2 y se fosforila por tina glucocinasa de una Kmalta. que tiene una Km (menos afinidad) mas elevada para la glucosa que la hexocinasa. Esta hormona se sintetiza en las ~Clulas 13 de los islotes de Langerhansen el páncreas como una respuesta directa a la hipergiucemia..3 rnmol/L.ltina1 y Icariwi LICIII ut. de modo que a valores altos hay una captación ncta de glucosa. .~ -v control de la ~Iucosu sanguíneu * 211 meables a glucosa (vía el transportador GLUT 2) en tanto las células de los tcjidos extrahepfiticos (excepto los islotes pancreiiticos) son relativamente impermeables.. - :lucnsa est ir insulina GLVLJ l.. '. se muestran en cl cuadro 2 1-2. - -- 'ransportadotes hidlreccionaleS facilitadi~ r e s Cerebro. .

Esta hormona reduce la captacion de glucosa en ciertos tejidos. Otras hormonas inftuencian la glucosa sanguínea Glumsa sanguinea {mmolfL) Figura 2 1 4 . Al c o n m i o de la adrenalina. para la glucosa de la hexounasa es de O 05 mmollL y de la glucocinasa es de 10 mrnollL. Esto es consecuencia del catabolismo proteínico tisular excesivo. secretina y el fármacoto!butarnida. Estas son hormonadel crecimiento. Variacibn de la actividad fosforilantede glucosa de hexocinasa y glucocinasa con incremento de la concentración sanguinea de glucosa La K. Además. la glucosa es el producto principal con elevacidn concomitante de la glucemia. actuan asi al inhibir los canales de K' sensibles al ATP. Los glucocorticoides (1 1-oxiestcroidcs) se secretan en la corteza suprarrenal y lienen importancia en el metabolismo de carbohidratos. La administración crhnica de hormona del crecimiento conduce a diabetes. ticidos grasos libres. estos hallazgos concuerdan con el hecho de que el metabolismo de glucosa en higado no es16 limitado en velocidad por su permeabilidad a la glucosa. Se tienen datos experimentales de que la tiroxina tiene accibn diabetógena y que la tiroidectomia inhibe el desarrollo de diabetes. hipoglucemia. hemorragia. También se observa que en animales tirotbxicos no existe glucbgeno hepático. En el músculo. La mayor parte del g l u q ó n La hip6fisis anterior secreta hormonas que tienden a elevar la glucosa san~uinea y. en tanto que en el hígado. En el ser humano.Vmai 100 Hexocinasa endógeno (e insulina) se depura de la circulación por el hígado. QSNID). etcdtera). La glucogen0lisis y gluconeogénesis hepática contribuyen al tfccto hipergluccmiante del glucagón. Cuando alcanza al higado (por la vena porta). cuerpos cetlinicos. glucagbn. por ausencia de accihn de la glucosa-6-focfatasa. por tanto. Esta accirin se debe a una aceleración en el transporte de glucosa através de la membranacelular por reclutamiento de transportadores de glucosa (GLUT4) desde el interior de la cdlula a la membrana plasrnática. cuyas acciones se oponen a las de la insulina. agotamiento de las células B. No obstante. La insulina tiene un efecto inmediato de incremento en la captación de glucosa en tejidos como el adiposo y el músculo. el glucagón no tiene efecto sobre la fosforilasa muscular. sobreviene glucogenolisis con formacibn de lactato. los glucocorticoides inhiben la utilizaci6n de glucoca en los tejidos extraheptiticos. Sin embargo. Por el contrario. De esta manera la concentración de insulina en sangre va en paralelo con la glucosa sanguinea y sil administración conduce con rapidez a hipoglucemia. por ejemplo. En todas estas actividades. El glucagón se opone a las acciones de la insufina El glucagón es la hormona producida por las células A de los islotes de Langerhans del pancreas. insulinoclependiente. Es probable que parte de este efecto no sea directo. ya que moviliza acidoc &rasos libres del tejido adiposo que por si mismos inhihen la uti li7ación de la glucosa. la glitcosa sanguinea en ayunas esth elevada en pacientes hipertiroideos y es baja en hipotiroideos. no hay efecto directo de la insulina sobre ta penetración de glucosa a células hephticas. Otras susrancias que provocan la liberacibn d d e insulina incluyen aminohcidos. antagonizan la acción de insulina. causa glucogenolisis por activacion de la fosforilasa. Idaad rerralina. También incrementa la glriconeogénesis a partir de aminolcidos y lactato. excitaciún. La insulina tiene un efecto inmediato al activar la glucógeno sintasa (capítulo 20). La hipoglucemia estimula su secrecion. Laadrenalina y la noradrcnalina bloquean la secreci~n de insulina. los glucocorticoides actúan como antagonistas de la insulina. La administración de estos esteroides Encrementa la gluconeogénesis. hipoxia. La hipoglucemia estimula la secrecidn de hormona del crecimiento. muscular. la insulina incrementa de manera indirecta la captacion hepática a largo plazo de glucosa como resultado de sus acciones sobre la sintesic de las enzirnas que controlan la glucólisis. del incremento en la absorcion hepática de arninoacidos y del aumento de la actividad de aminotransferasas y otras enzimas que inservienen en la gluconeogénesis hepática. secretada por la mddula suprarrenal como~sultndo de estímulos intensos (temor. al parecer las personas hipertiroideas utili7an la glucosa a una velocidad nomal o . ACTH (corticotropina) y qui& otros principios "diabetogenos". La hormona tiroidea tambitn d c b r á considerase aquí por su efecto modificador de la glucosa sanguínea. la gtucogénesis y la gluconeog~nesis. por ultimo. origina glucogenolisis hepática y muscular debido a activación de la fosforilasa. Al causar hiperglucemia estimula la secrecihn de insulina y origina.

Las enzimas dc la fungluconeogénesis pueden no estar compl~tamente cionales en tal momento y el proceso depende del suministro de Acidoc grasos libres para la energía. que inhibe al sistema de resorci6n de la glucosa en el túbulo.. Esto se debe a la dependencia de la gluconeogénesis de una oxidacihn activa de estos ácidos (véase antes). se encuentra menos disponible para glucaneoginesis. En anirnaIes de laboratorio puede producirse glucosuria con florhicina. La glucosa se filtra de manera continua en los glomemlos pero. . Curvas de la glucosa sanguínea de una persona nomal y de un dtabbtico después de administracibn oral de 50 g de glucosa Nbtece la elevacdn inicial de la concentracidn en el diabetico El criterio de normalidad es que la curva regrese a su valor inicial en dos horas. Prueba d e tolerancia a la glucosa. La hipoglucemia se puede presentar durante el embarazo y en el neonate Durante el embarazo aumenta el consumo de glucosa por el feto y existe riesgo de hipoglucemia materna y posiblemente fetal.5 a 10. En personas nomales. Esto se conoce como umbral renal para la glucosa. el filtrado glomerular puede contener mis glucosa de la que logra resorber. Además. El glicerol. Aderniis. La diabetes sacarina (tipo 1. Tiempo (hora) Figura 2 1 4 .Iiiconeogkne. en particular si hay un intervalo largo entre las comidas o durante 3 a noche. ASPECTOS CL~NICOS ADICIONALES Cuando el umbral renal para glucosa se excede se presenta glucosuria Cuando la glucosa sanguínea se eleva a valores relativamente altos. que podría liberarse a partir del tejido adiposo. La resorción de glucosa contra su gradiente de concentración se enlaza con el suministro de ATP en las celulas tubulares. Con frecuencia. La capacidad del cuerpo para utilizar glucosa puede investigarse por medición de su tolerancia a la glucosa La tolerancia a la glucosa se indica por la naturaleza de la curva de glucosa en sangre después dc la administraci6n de una dosis de prueba de este azúcar (figura 2 1 4 ) . los niños prematuros o de bajo peso al nacer son mas susceptibles a la hipoglucemia toda vez que tienen escaso te-jidoadiposo para generar combustibles alternativos como son los ácidos gasos libres o los cuerpos cetónicos durante la tmnsicih del estado de dependencia fetal al de la vida independiente. la presencia de glucosuria es indicador de diabetes sacarina. El trastorno puede controlarse con dietas ricas en carbohidratos que contengan cantidad escasa de fnictosa así como sacarosa y evitando el ayuno. de ordinario. El deterioro de la oxidación de ácidos grasos produce hipoglucemia Varios trastornos en los que la oxidacidn de los Bcidos grasos es deficiente se caracterizan por hipogliicemia. Esto se conoce como glucosuria renal. Estos trastornos se describen en el capitulo 24. o diabetes sa- La deficiencia de fructcisa-1. La capacidad del sistema tubular para resorber glucosa se limita a una velocidad de alrededor de 350 mg/minuto. retorna en su totalidad a la sangre por el sistema de resorción de los tubulos renales.6-bisfosfatasa causa lactacidosis e hipoglucemia El bloqueo de la glucogenog&nesispor deficiencia de esta enzima impide que el lactato y otras sustancias glucogenicas se transformen a glucosa en el hígado. el exceso pasa a la orina para generar glucosuria. en tanto 10shipotiroideos muestran disminucidn en su capacidad para utilizar glucosa. se produce glucosuria cuando la concentración de glucosa en sangre venosa excede de 9. Cuando la concentracion sanguínea de glucosa aumenta.~isy control de la glucossa sanguinea 8 243 mayor. e! riñon también ejerce un efecto regulador. La glucosuria de origen renal puede deberse a defeoos renales hereditarios o es posible adquirirla por procesos patolbgicos.0 mmol/L. estos iiltfmos son mucho menos sensibles a la insulina que las personas normales o hipertiroideas.

Las enzimas que catalizan las reacciones adicionales son: piruvato carboxilasa. atribuible a una reduccidn en el antagonismo normal a insulinapor parte de 1% hormonas que estas glindulas sccretan de manera normal. Lenzen S: Hexose recopnition mechanisms i n pancrcatic R-cells. debido al antagonismo de las hormonas de esta glándulas endocrinas a la acción de la insulina. Crain MR. qiie es permeable a glucosa. glicerol y propionato. Start C: &~u¡ation fn :Metnholism. En insuficiencia hipofisaria o suprarrenal se observa un incremento de tolerancia a la glucoca. fosfoenolpiruvato carboxicinasa. . Newsholme EA. Por el contrario. El-Maghrnbi MR. REFERENCIAS Boyle PJ. Shar SD. El bloqueo de la oxidación de ácidos grasos es causa adicional del deterioro de la gluconeogenesis y de hipoglucernia. RESUMEN 1) [ .7:903. Arn J Physiol l9P9. Yki-Jarvinen H: Action of insulin cin glucuse rnetabolirm in \ ivo Balllieres Clin Lndocrinol Meiah 1993. 139. 2) La vía de gluconeogenesis. Diabetes Mctab Rcv 1989. mas cuatro reacciones adicionales que evitan las reacciones irreversibles de no equilibrio. el glucagbn se secreta en respuesta a hipoglucemia y activa la fosforilasa en el hígado. 2) modificaci6n mvalentc por rosforilacibn reversible y 3) efectos aloctéricor. 3) El lactato forma piruvato. 1973. Trcnds Biochem Sci 1 984.5:379. Rurant CF et al. Recent Pro& Horm Rec 1991:47:339. La insulina incrementa la tolerancia a glucosa. cabe esperar que ocurra en preseiicia de hiperactividad de la hiphfisis o la corteza suprarrenal.. en diabetes sac'uina tipo 11 (diabetes sacarina no insulinodependiente. que se secreta en respuesta directa a hiperglucemia. La insulina. utiliza las reacciones de la glucólisis que son reversibles. que se acompaiia con obesidad y valores elevados de ácidos gasos plasmaticos. bajo la influencia de algunos fámacos y en ocasiones en aterosclerosis.6-bisfosfatasa y glucosati-forfatasa. Suministra glucosa al cuerpo cuando no dispone de carbohidratos dietéticos. a gluconeogénesis es el mecanismo que convierte compuestos no carbohidratos a glucosa o glucdgeno.545. sus actividades deben regiilme de rnariera recíproca. Wilcy.que tiene lugar en el hígado y riñón. Chaliss RAJ. antes de su conversión a fosfoenolpiruvato seguida por biosíntesis de glucosa en el citosol.25h:Eh51 Ruchalter SE. Esto se manifiesta por concentraciones altas de glucosa sanguínea (hiperglucemia) y glucosuria y puede acompañarse con cambios en el metabolisino de lipidos. Krebs HA: Gluctineogcnesiq. 4) Dado que gluc6lisis y gluconeogenesis comparten la misma vía pero operan en direcciones opuestas. Kreisberg R: Reculation of lactate metabnlism in vivo. La inyección de insulina reduce el contenido de glucosa en sangre e incrementa su utilización y su almacenaje en hígado y musci~locomo glucógeno.: Mammnlian gliicose transportcrs: Striictiire aiid rnolecular regulation.carina insulinodependiente.9 277 Newshotme EA. lactato. 7 ) Una deficiencia en la secreción de insulina conduce a diabetes sacarina tipo 1. Pilkis SJ. Claus TH: I-EormonaI regulatirin of hepatic gluconeogenesis and glycolysis. quc prosigue a convulsiones e inclusive muertc a menos que se administre glucosa con prontitud. que desencadena glucogenólisis y liberacibn dc glucosa a la sangre. TambiCn. Esto sc logra por medio de tres mecanismos principales: 1 ) induccilin o represión de la síntesis enzimática. I'rnc R Soc London (Biol) 1964. Un exceso de insulina puede causar hipoglucernia grave. Watford M: What is the rnetabolic Tait of dievaty glucosc? Trcnds Biochem Scl 1988. DSID) se caracteriza por disminución de la tolerancia a la glucosa debida a secreción insuficiente de insulina en respuesta a una carga de glucosa. constituye el medio principal de regulación de la concentración sanguínea de glucosa debido a que contiene la glucocinasa dc Km alta que se adapta especificarnente a la disposición dc la glucosa ingerida. Annu Rcv Biochem 198857. colabora con el hígado para el almacenaje de glucosa corno glucógeno y facilita la captacihn de glucosa en tejidos extrahepáticos. Los sustratos importantes son aminohcidos glucogénicos. en algunas infecciones. Crabtree R: Substraie cyclcs: Thcir role in improving sensitivity in metabolic control. Cryer FE: Iiisulin. 6) Las enzirnas defectuosas de la vía de gluconeoginesis conducen a hipoglucemia y lactacidosis.l.13329. La tolerancia a la glucosa declina no sólo cn diabetes tipo 1 sino tambien en estados donde el higado se Icsiona. que entra a la mitocondria por carboxilación a oxalacctata.755. glucagon. and catccholamines in preventiun orhypoglycernia during fistinp. DSNID). fructuosa. llliochem Soc Tran5 1990:18: 105. 5) La cilula hcpatica.

PhD.Vía de la pentosa fosfato y otras vías eel rnetaboAismo de hexosas Pefer A. Dado que dos moldculas del gliceraldehido 3-fosfato regeneran a la glucosa. Deficiencias en enzimas del metabolismo de fructosa y galactosa causan enfermedades metabólicas como fructosuria esencial y gal~ctosemias. determinados gedticamente. Derivan respectivamente del n l m i d ~ n . La fnictosa se usa para alimentación parenteral. en especial el hígado. DSc El ciclo d t la pentosa fosfato no genera A V . fnictosa y galactosa son por su cantidad las hexosas más importantes que se absorben por las vías gastrointestinales. pero en concentracibn elevada puede causar deplccibn de nucleótidos de adenina en el higado y necrosis hepática.6-fosfato de la vía puede efectuar la oxidacion completa de la glucosa. La principal enzima afectada es la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa. La ausencia total de iina enzima particular de la via en todos los primatec explica el hecho de que en la alimentaci~n humana se requiere hcido ascbrbica (vitamina C). pero de importanpentosa fosfa~o. para convertir fmctosa y galactosa a glucosa.sacarosa y lactosa dieteticos. es la elaboracibn de acido glucurbnico por la vía del acido urtínico a partir de glucosa. deficiencia en esta vía conduce a un estado conocido como pentosuria esencia1. no asi en la mayor parte de otros mamíferos. que conduce a un tipo de anemia hemolítica. cia cuantitativa menor para la excreci6n de metabolitos y compuestos quim icos extraaos (xenobi 6ticos) como glucurbnidos. Estos últimos se ordenan para regenerar dos moléculas de glucosa-6-fosfato y una del intermedio glucolítico glicemldehido 3-focfato. Las principales rutas metabblicac para la utilización de la glucosa son la glucólisis y la via de la pentosa fosfato. Mayes. La glucosa. Es un proceso multiciclico en el ciial tres mo!éculas de glucosa-6-fosfato dan origen a tres moléculas de COzy a tres residuos de cinco carbonos. pero tiene dos funciones importantes: 1) La generacibn de NADPFI para la síntesis reductivas como la biosintesis de ácidos grasos y esteroides y 2) la fortnaci6n (provisirin) de ribosa para la biosintesis de nucle6tidos y de acidos nucleicos. LA V ~ A DE LA PENTOSA FOSFATO GENERA NADPH Y RIBOSA FOSFATO (Figura 22-1) La vía de la pentosa fosfato (derivado de la hexosa monofosfato) es un camino alterno para la oxidacibn de la glucosa. Las principales vías metabhlicas para la utilización de glucosa son Ia gluc6lisis y el ciclo de la De mayor significado. Se han desarrollado vías especializadas en el cuerpo. Una Gliceraldehido 3-fosfato + GNADPH + 6H' . Las deficiencias de ciertas enzimas de la vía de pentosa fosfato son la causa principal de hemólisis. Cerca de 100 millones de personas en el mundo pueden tener valores bajos de esta enzima.

246 Bioyuimicu dc Hurper (Cupitulo 22) 6-Fosfato de glucosa 6-Fosfato de glucosa 6-Fosfato de glucosa NADP*+ H20 DESHIDROGENASA 6-FOSf0- NADP'+ HIO NADP'+ H10 NADPH + gluconato Ht o-F0SfOgluconato NADPH + Hf Cb P 6~ * . c._ NADPH t H' NADPH + Hr NADPH + H* Ribulosa 5-fosfato - Ribulosa 5-fosfalo . en tanta que las inferiores con reversibles.-- Xilulosa 5-fosfato Ribosa 5-fosfato Xilulosa 5-fosfalo Slniesls de nuckalidos.Ribulosa 5-fosfato caz . DNA Gliceraldehido 3-fosfato Cedoheptulosa 7-Iosfato TRANSACDOMSA FructOSa 6-fosíato 1 Eritrosa 4-fosfato C b '*. . Diagrama de flujo de la via de la pentosa fosfato y sus conexiones con la vía de la gluc6lisis. 6-Fosfato de glucosa Gliceraldehído 3-fosfato 112 Fructosa 6-fosfato 4 112 Fructosa 6-fosfato C6 ' Glucosa 6-losfato ~Glucosa-6-fosfato '11 6-Fosfato de glucosa C* c .. la via completa consiste en tras ciclos intermneciados donde la glucosa-6-fosfato es tanto sustrato como producto final Las reacciones arriba de la línea punteada son irreversibles. ANA. Figura 22-7. Como se indica.

glucosa 6-fosfato. por ejemplo. En las primeras reacciones.LAS REACCIONES EN LA V ~ A PENTOSA FOSFATO SE DESARROLLA EN EL CITOSOL Las enzirnas de la via de la pentosa fosfato como en la gluciilisis se encuentran en el citosol. Sigue la descarboxilación con la formación de la cetopentosa ribulosa-5-fosfato. que contiene los carbonos 1 y 2 de una cetosa. la ribulosa-5-fosfato se convierte nuevamente a glucosa-6-fosfato por una serie de reacciones en las que intervienen principalmente dos enzimas: la transcetolasa y la transaldolasa (figura 72-11. la eritrosa-4-fosfato. En este caso. La reacción probablemente se efectúa en dos pasos a través del intermedio 3-ceto-6-fosfogluconato. Los fosfatos de ribosa son el principal producto de la vía de la pentosa fosfato. Como en ella. el 3-fosfato de gliceraldehido sigue la vía normal de la glucólisis a pimvata. es decir. actua coino aceptor y los productos de Ia reacción son fruct~sa-6-&fato y gliceraldehído-3-fosfato. Todos los tejidos que tienen actividad de la vía utilizan NADPH en síntesis reductoras. pero en el caso de la vía pentosa fosfato. la cual tambikn requiere NADP' como aceptor de hidrbgeno. Estos dos productos entran luego en otra reacción conocida como transaldolación.&bisfosfatasa. la glucow6-fosfaío experimenta deshidrogenación y descarboxilación para dar una pentosa. reacción catalizada por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa. mismo que es el precursor de los residuos d e ribosa que se requieren en la sintesis de nucleótido y ácido nucleico. La reacción requiere una vitamina B. rihulosa-S-fosfato. Una reacción posterior se efecíwa implicando otra vez a la transcetolasa. tejido adiposo. ademas de la enzima gluconeogenicq fructosa-1 . Es activa en hígado. formando el epimero xilulosa-5-fosfato. como la coenzima difosfato de tiarnina. aminohcidos por la ruta de la glutamato deshidrogenasa o glutatión reducido en los eritrocitos. tiamina. No lo es en las glhndulas mamariaq si no hay lactancia y su actividad es baja en el m ~ s c u l o esquelktico. lo que no ocurre en toda la glucblisis. En ausencia de esta enzima. por ejemplo. hay oxidacibn y COZes un producto caracterlstico. pero no de la glucólisis. al carbono aldehidico de una aldosa. corteza suprarrenal. formada antes. La transcetolasa catali7a la transferencia de la unidad de dos carbonos de la xilulosa-5-fosfato a la ribosa-5-focfato. La fase no oxidativa genera precursores de riboca La ribulosa 5-fasfato sirve ahora como sustrato para dos enzimas diferentes. además de iones Mf. en cambio esa es una funcibn principal de glucólisis. que es otra cetopentosa. En la primera. La transaldnlasa permite la transferencia de un grupo de tres carbonos. aroduciendo la cetosa de siete carbonos sedoheatulosa5-fosfato y la aldoca gliceraldehído 3-fosfatg. que utilizan NADP en lugar de NAD. La fase oxidativa genera UADPH (figuras 22-1 y 22-2) La deshidrogenacibn de la glucosa-6-fosfato a ó-fosfogluconato se efectúa por la via de la formación de 6-fosfogluconolactona. En la segunda fase. Por tanto. El fragmento de dos carbonos transferido es probablemente el glucolaldehido enlazado al difosfato de En los tejidos especializados para síntesis reductivas se generan equivalentes reductores La valoracibn de la actividad de la vía de la pentosa fosfato en varios tejidos indica su importancia metab6lica. La hidr~lisisde la 6-fosfogluconolactona se logra por la accibn de la enzima gluconolactona hidrolasa. Con el fin de oxidar a la glucosa completamente hasta CO? por la via de la p. en la cual la xilulosa-5-fosfato sirve como donador del "glucolaldehido activo". esteroides. se usa NADP' y no NAD' como aceptor de hidrógeno. Un segundo paso oxidativo es catalizado por la 6-fosfogluconato deshidrogenasa. es necesario que las enzimas esten presentes en el tejido para convertir el glicemldehido-3-fosfato en glucosa-6-fosfato. eritrocitos. esto es. el 5-fosfato de ribosa. una enzima dependiente del NADP. Esto implica que trabajan en sentido inverso las entimas de la vía d e glucólisis. . "la dihidroxiacetona activa" (carbonos I al 3) de la cetosa sedoheptulosa-7-fosfato a la aldosa gliceraldehldo 3fosfato para formar la cetosa fnictosa-6-fosfato y la aldosa de ciiatrci carbonos eritrosa-4-tbsfato.entosa fosfato. Las dos vías principales para el catabolisrno de glucosa tienen poco en común Aunque algunos metabolitosson comunes. En la vía de pentosa fosfato no se genera ATP. la oxidación se logra por deshidrogenacibn. testículos y glandulas mamarias en lactancia. La ribosa 5-iosfato cetoisomerasa convierte el 5-fosfato de ribulosa a la aldopentoca correspondiente. la síntesis de hcidos grasos. la ria de pentosa fosfatos es notablemente diferente de la glucolisis. Ida secuencia de reacciones de la vía puede dividirse en dos fases: una fase irreversible oxidativa y una fase reversible no oxidativa. tiroides. La transcetotasa transfiere la unidad de dos carbonos. tiarnina. el "glucolaldehido activo". efecnía la conversidn de una cetosa en una aldosa con dos carbonos menos y simultáneamente convierte una aldosa en una cetoca con dos carbonos más. La ribiilosa-Sfosfato 3-epimerasa altera la configuraci6n alrededor del carbono 3 .

.i .OH I .C. .. . ~ . .. H3C-OH *cH. .248 Bioauimica de Harner HO (Canírulo 221 NADPH + H ' .- H NADPt rdg2+ or cap' HO-C-H .. . . . .I' . *c=o I t I H O -.0 -@ ! Fructosa 6-fosfato *c=o HO 'CH. ..OH l C I =O 'd-C-OH CH. . PRPP. PO^^-. . ..OH DESHIDROGENASA 79 - 1 ~ g ? :n2: or '\ - 100H-C-OH HO-C-H I H-C-oH I I HIDROLASA I H-C-OH ~H?-O-@ 6-Fosfogluconato 1 NADP' [ !r:H ]m H-C-OH H-C-OH NADPt+ H' CH. H 8 + .-O-@ Seudoheptulasa 7-fosfato Rtbosa 5-fosfato AMP ATL4 I H-C-OH TiaminaM ~ @ . . O . C -H L.-O-@ PRPP ZS TRANSALDOMSA .-O-@ Xilulosa 5-fusfato Gliceraldehido 3-fosfato Fructosa 6-fosfatu Figura 22-2.-O-@ 3-Ceto-6-fost~luwnato Ribulosa 5-fosfato 3-EPIMERASA . I I O I H .. . H -" 1 - / H -*c . . Via de la pentosa fesfato. . . .OH l 1 1 ~iamrna@ . .C -. . (@... ...OH *GH2 . .-O-@ Forma enediol I H-6-OH I CH. 5-focforribosi~-l-~irofocfato.-O-@ Xriuiosa 5-tosfato I H-C-OH I CH.o H H. -O -@ I I H-C-OH H-C-OH I CH.GI I H-C=O FH....) . . ~ + H"C=O l H'G-OH 1 *m. m TH. .-O-B Gliceraldehido 3-fosfato .C i) p I HO-C-H H I t O H I H-C c l H9 0 .. 'GH. ~ g ~ HO-c-H ' H-C=O I H-C-OH I H-C-OH -G -H H-G-OH H-C-OH I I CH.M .. .DH 1 'G 'fH20H j i =O *C=O H-C-OH E H-C-OH 1 I H03C-H I I t I H. .. .

cofactor de celenro ) . conocida come la vía del ácido uránico. LA VIADE PENTOSA FOSFATO COLABORA CON G L U T A T I ~ N PEROXIDASA EN LA PROTECCIÓN DE LOS ERITROCITOS CONTRA HEM~LISIS La via de la pentosa fosfato en el eritrocito proporciona NADPH para la reducci6n del glutatitin oxidado a glutatión reducido catarizada por la glutation rcductasa. La glucosa-6-fosfato se convierte en glucosa-lfosfato. Por tanto. Todos estos pasos hasta aqui son los mismos señalados anteriormente en la vía de Ia glucogénesis hepática (capitulo 20). En la vía del acido uronico. En casi todos los tejidos es posible la síntesis de ribosa La vía de la pentosa fosfato proporciona ribosa para la sintesis de nucleótidos y ácidos niicleicos (figura 22-2). Esta reaccihn es importante. A su vez el glutariiin reducido remueve M : O 2 del eritrocito en una reacción catalizadapor laglutation peroxidasa. El UDP-glucuronato es la forma "activa" del glucuronato para las reacciones que implican la incorporacibn de Bcido glucurónico a los proteoglucanor o para las reacciones en las cuales el glucumnato se conjuga con siistratos como las hormonas esteroides. el acido glucuronico se forma ñ partir de la glucosa por las reacciones que se muestran en la figura 2 2 4 . EL GLUCURONATO. los tejidos deben satisfacer su propio requerimiento de este precursor importante de nucleótidos. pero al igual que la via pentosa fosfato. la UDPGlc deshidmgenasa. difosfato de uridina y glucosa (UDPGlc}. catatizada por una enzima dependiente del NAD. ES UN PRODUCTO DE LA VIA DEL ÁCIDO URONICO Aparte de las vias principales del metabolismo de la gliicosa-6-fosfato que se han descrito.acido ascórhico y pentosas.el musculo esquelético como miichos otros tejidos. UN PRECURSOR DE PROTEOGLUCANOS Y DE GLUCURONIDOS CONJUGADOS. es por tanto UDP-glucuronato. glutatibn. una enzima que contiene el oligoelemento. no es necesario tener una via de pcntosa fosfato funcionando completamente para que un tejido cintetice ribosa fosfatos. glutatión oxidado. es capaz de sintetizar ribosa 5-fosfato para la síntesis de nucleótidos. utilizado en la biosintesis de nucleótidos (capitulo 36). La ribosa no ES un constituyente sanguíneo significativo de la circulacihn general. La fuente es el intermedio ribosa-5-fosfato que reacciona para formar PRPP. se obtiene NADP' que normalmente es escaso debido a la naturaleza irreversible de las primeras reacciones en la vía. FOSFATO DE -PENTOSA PEROXIDASA NADP* 2G-SH Figura 22-3. El te-jidomuscular contiene cantidades muy pequeiías de glucosa-6-fosfato deshidrogenaa y 6-fosfogluconaro deshidrogenasa. existe una vía para la conversicin de glucosa en ácido glucurónico. Tantbién puede inducirse la síntesis dc enzimas glucoca-6-fosfato deshidrogenasa y 6-fosfogluconato deshidrogenasa por la insulina durante circunstancias relacionadas con el "estado nutricional" (cuadro 2 1-1). seleniri (figura 22-3 j. Se. Es probable que esto se lleve a cabo por inversibn de la fase no oxidatíva de la vía pcntosa fosfato utilizando la fructosa-6-fosfato. El producto de la oxidacihn. no conduce a la generacibn de ATP. G-SH. Es tambibn una ruta oxidativa alterna para la glucosa.Via de /u uentosu fosfato y orrus vías dcl mefaboltsmo de hexosns 218 Es probable que la presencia de lipogénesis activa o de un sistema que utiliza NADPH estimule una degradación activa de la glucosa por la vía de la pentosa rosfato. una enzima flavoproteinica que contiene FAD. No o'bstante. la cual reacciona entonces con el hifosfato de uridina ( U n ) formando el nuclebtido activo. ciertos medicamentos o la bilirrubina (figura 34-1 3). De este modo. Esta ultima reacción se cataliza por la enzima UDPGlc pirnfosforilasa. El UDPGlc se oxida en el carbono 6 por una operaci~n en dos pasos para convertirlo en acido glucurbnico. (G-S-S-G. Funcrbn de la via de la pentosa fosfato en la reaccibn catalizada por glutatibn peroxidasa de los eritrocitos. ya quc la aciimulación de HzOz puede reducir la duración de la vida del eritrocito al incrementar la velocidad de oxidación de la hemoglobina a metahernoglobina. Por tanto.

OH Gluwsa 1 -fosfato 2H* Undindifosfatoglucosa (UDPGlc) / / UDP {-O O Uridindfosfato glucuronato GLUCUR~NIDOS H. Esto se debe al hecho de que no requiere el paso en e1 metabolismo de glucosa catalizado por fosfofnictocinasa.O Pfokoglucanas n 7-0 ~ NADP' NAQPH + He ~ q - 0 ~ NADH + H' NAO+ $ . el cual entonces se oxida en una reaccion dependiente del NAD pasando a D-xilulosa. que se utilizan en la elaboración de alimentos y bebidas.5 -0H HO-$ -H m H-7-OH H-C-OH HO-{ . En el ser humano y otros primates. así come en los cobayoc.OH - 1 1 2NADf 2NADH + CH. el glucuronato se reduce a L-gulonato. Este último compuesto es el precursor directo del ascorbato en aquellos animales que son capaces de sintetizar esta vitamina.5 7 HO-5 . después de convertirse en ~xilulosa-5-fosfato se metaboliza posteriormente en la vía pentosa fosfato. La L-xilulosa se convierte en el D-isomero mediante una reduccidn dependiente del NADPH que la convierte en xilitol.250 Bioquirnica de Harper {Capitrrln 2 2 ) H:c-o-QMUTPGA H-C-OH 1 - H-C-OH 1 UTP PP. LA INGESTIÓN DE CANTIDADES MASIVAS DE FRUCTOSA TIENE CONSECUENC~AS METABOLICAS PROFUNDAS Las dietas abundantes en sacarosa o en jarabes de fnictosa alta (HFS). conducen al ingreso en la vena porta de grandes cantidades de fructosa (y glucosa).H 'CH20H L-Xilosa 3-Ceto-~~gulonatn Oxalato 'CH. Via del Bcido urbnico. o.OH t 'FHzDH 12Hl i O HO-C-H Xrlitol aXiioca 5-fosfato HO-C-H &CH.OH L-Deshtdroascorbato: Via pentosa fosfato Figum 22-4.. el hcido ascórbico no puede sintetizarse debido a la ausencia de la enzima ~gulonolactona oxidasa. La fmctosa se glucoliza por el hígado con mayor rapidez que la glucosa. que es donde se ejerce el control sobre la velocidad del catabolismo de glucosa (figura 22-5).OH L-Aswrbato " CH. (Indica el destino del carbono 1 de la glucosa. @ PO^^-.W O C-O II c=o H .H-C-OW u CH. Esto ocasiona que la fmctosa . este último compuesto.O ~ . El gulonato se oxida a 3-ceto-L-gulonato que es entonces descarboxilado para formar la pentosa t-xilulosa.OH L-Gulonato O ~Glucuronato NADPH + Ht NAOP' BLOQUEO EN LA PENTOSURIA 4 Glucolato Glucolaldehido Gulonolactona BLOQUEO EN PRMATES Y COBAYOS O ' f Y BLOQUEO EN EL SER HUMANO 2-C~~PL-gulonolactona wxiiosa 1-fosiato - ?H.) En una reacción dependiente del NADPH.

lo que puede explicar por qué la fructosa desaparece a una velocidad normal de la sangre de los pacienres diabdticoc. la fructocinasa. formando h c t o s a 1-fosfato. donde sblo existe aldolasa B. La Km de la enzima para la h c t o s a en el higado es muy baja.sas 25 J Dieta [FRUGTUOCIMASA\ BLOQUEO EN LA FRUCTOSURlA ESENCIAL Fructosa 1.rfato y orrm vías de¡ metabolismo de hexo. La enzima tambikn ataca a la fnictosa 1. El D-gliceraldehido puede entrar en la serie de reacciones de la . La h c t o s a .6 bisfosfato. enzima que se encuentra en el higado. Una cinasa especifica.Vio de la pen~osu fo. Es probable que ésta sea la ruta principal para la fosforilacion de la fi-uctosa. que pueden elevar lo5 triacilgliceroles siricos y al fina! eleva las concentraciones de colesterol de LDL (figura 27-7). (No se encuentra en el higado ) inunde Ias vías en el hígado causando incremento de la síntesis de hcidos grasos. Esta enzima no fosforila a la glucosa y. lo cual indica una gran afinidad de la enzima por su sustrato. de Ia esterificacih de &os y de la secreci6n de VLDL. que potencia todos estos efectos. La cantidad adicional de glucosa captada por el torrente sanguíneo estimula Ia secrecibn de mhs insulina.1 -fosfato se desdobla en D-glicesaldehida y fosfato de dihidroxiacetona por la aldolasa B. se encuentra en el higado y efectúa la transferencia del fosfato desde el ATP a la hctosa.6 bisfosfato FRUCTUOSA 1-P BLOQUEO EN INTOLERANCIA HEREDITARIA A LA FRUCTOSA t AFP OIH1DROXIACETONA FOSFATO TRIQSA 1SOMEWSA GLICERALDEH~DO 3-FOSFATO 4 ATP DGLICERALDEH~DO t pEEiÑzq Figura 22-5. su actividad no se afecta por el ayuw o por la insulina. Metabolismo de la fructoca La aldolasa A se encuentra en todos los tejidos a excepción del higado. a diferencia de la glucocinasa. Tarnbidn se ha demostrado en el riilon e intestino.

En este paso. B: Glucosa a galaciosa en la glandula mamaria . GLUCOL¡PIDOS. Lo último es el destino de mucha de In fructosa metabolizada en el hígado. Sin embargo. En todas estas situaciones representa una fuente potencial de energía. pueden degradar por la vía de la glucólisis o comhinarsc por la influencia de la aldosa y convertirse en glucosa. el anicar de la leche. la cual cataliza su fosforilación a gliceraldehido 3-fosfato.l -fosfato. en presencia de glucosa se inhibe en gran medida la fosforilación de la fnictosrt. En el hígado se convierte facilmente en glucosa.252 Bioauim ica de H a r ~ e r gluclilisis por medio de otra enzima presente en el hígado.1 -fosfato. catalizado por una enzima llamada galactosa-1-fosfato uridiltrans- Galactosa t GalaCtOSa-l -1osfato BLOQUEO EN GAIACTOSEML': I 7 UDPGlc? FOSFOGLUCOMCITASA 6-FOSFATASA Glucosa-6-fosfato Glucosa - B Glucosa UDPGlc NAD' - UDPGal Lactosa 6-Fosfato de giuwsa - c 1-Fosfato de glucosa Glucosa Figura 22-6. Los dos triosafosfatos. Mhs aún. LA GALACTOSA ES NECESARIA PARA LA S~NTESIS DE LACTOSA. es probable que por esta vía parte de la fnictosa se pueda metabolizar en tejido adiposo y rnusculo. PROTEOGLUCANOS Y GCUCOPROTE~NAS La galactosa proviene de la hidrblisis en el intestino del disacarido lactosa. Via de convercibn de A: Galactosa a glucosa en el hígado. La facultad del hígado para llevar a cabo esta conversibn puede usarse como un examen del funcionamiento hepático en la prueba de tolerancia a la galactosa. reacciona con el difosfato de uridina y glucosa (UDPGlc). La hexocinasa cataliza la fosforilacion de la mayon'a de los anícares hexosas. La vía mediante la cual la galactosa se convierte en glucosa se muestm en la figura 2 2 4 . El producto galactosa. la triocinasa. para formar cl difosfato de uridina y galactosa (UDPGal) y glucosa. La fnictosa libre se encuentra en el plasma s ~ m i n ay l una cantidad significativa se secreta hacia la circulación fetal en los ungulados y ballenas donde se acumula en los líquidos amniótico y alantoideo. inclusive la fnictosa. el fosfato de dihidroxiacetona y el gliceraldehido 3-fosfato. La galactosa se fosfwila mediante la galactocinasa usando ATP como donador de fosfato.

que contienen aminoazúcares con UDPGlcNAc. sino también como un constituyente de los glucolipidos (cerebrosidos). probablemente desp~its ración al glucógeno seguida por fosforólisis. la galactosa se transporta a una posición en la ASPECTOS CL~NICOS El deterioro de la vía de la pentosa fosfato conduce a hemolisis Una mutación presente en algunas poblaciones cauQ una deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidro. Finalmente. 6) los azúcares de nucleótidos son las formas en que Tos aminoazúcare5 se utilizan para la biosintesís de las glucoproteinas y de otros compuestos complejos. Debido a que la reaccihn con epimema es reversible. hipercolesterolemia e hiperuricemla Ya se hizo referencia a los efectos de la fructosa sobre el metabolismo hepático en la promocion de la síntesis de triacilglicerol y secreción de VLDL e hipemiaciIglicerolemia. La conversibn de galactosa en glucosa tiene lugar en una reacción del nucleótido que contiene galactosa catalizada por una epimerasa. la administracibn de barbital o de clorobutanol a ratas causa un aumento significativo en la conversión de glucosa a glucuronato. 3) la N-acetil manosarnina 6-fosfato se forma por epimerización de la glucosamina 6-fosfato. Esto se debe a la conversibn de n-xilulosa a oxalato a travCs de la formación de xilulosa l -fosfato. Los aminoazúcares principales son glucosamina. proteoglucanos y glucoprotcinas. Se forma como glucosamina 6-fosfato a partir de la fnictosa-6fosfato.rus 233 ferasa. Este hallazgo puede explicarse por la ausencia cn pacientes pentosíiricos de la enzima necesaria para catalizar la reducción de L-xilulasa a xilitol. La glucosa es precursor de todos los aminoazúcares (hexosaminas) Los aminoazúcares son componentes importantes de las glucoproteinas (capítulo 56). la glucosa se libera de la UDPGlc bajo la fonria de glude !a incospocosa. las siguientes son sus caracteristicas sobresalientes: 1) la glucosamina es el aminoanicar principal. 5) la galactosamina se sintetin por epimerización de UD?-A'-acetilglucosamina (WDPClcNAc) a UDPN-acetilgalactosamina (UDPGlcNAc). La UDPGal se condensa con la glucosa para dar lactosa catalizada por la factosa sintasa (figura 2 2 4 ) . con N AD como coenzima. de modo que la gaiactosa preformada no es esencial en la dieta. con la consecuente perturbación en la formación de NADPH. El donador del radical acetilo es la acetil-COA. La medicí6n sanguínea de la actividad de la transcetolasa refleja el grado de deficiencia de tiamina. En la figura 22-7 se muestra un resumen de las interrelaciones entre los aminoazúcares. como el antipalhdico primacrina. Esta anormalidad se manifiesta como hemolisis cuando el individuo susceptible se sujeta a oxidantes. El unico trastorno donde su actividad se eleva es en la anemia perniciosa. Ataca a perhxídos organices ademis del MzO?. El producto es UDPGlc. reemplazando a la glucosa. galactosamina y manosamina (todas éstas son hexosarninas) y el compuesto de nueve carbonos hcido siilico. y de glucosaminoglucanos (capihllo 57).Yía de d a pentosa fusfafo y otras vim del rnerubo/ismo de hexo. aspirina o sulfonamidas o cuando ingiere habas (Y~ciafuvu -favismo).-giiIonato y accorbato. la glucosa pucde convertirse en galactosa. 4) NeuAc se forma por la condensación de rnanosamina 6-fosfato con fosfoenolpiruvato. utilizando a la glutamina como donador del grupo amino. La administración parentera! de xilitol puede conducir a oxalosis que consiste en deposito de oxalato de calcio en encéfalo y rifiones. 1. de ciertos glucoesfingolipidos (por ejemplo. Varios medicamentos incrementan de manera importante la velocidad de entrada de glucosa a la vía del ácido urónico.1-fosfato. La carga hepática con fructosa puede potenciar hipertriacilgliceralemia. enfermedad hereditaria poco común. UDPGalNAc y CMP-NeuAc. La epimerización probablemente implica una oxidacibn y reducción en el carbono 4. Por qjcrnplo. La galactosa se necesita en el organismo no sólo para la formacidn de laciosa. La interrupción de la vía del ácido urónico se produce por defectos enximáticos y por algunos fármacos En la pentosuria esencial. La glutatión peroxidasa es un antioxidante natural que se encuentm en numerosos tejidos y depende del suministro de NADPW.Junto con la vitamina E. Se tienen informes de cierta relación entre la frecuencia de algunos canceres y la presencia de concentraciones sanguineas bajas de selenio y de la actividad de la glutation peroxidasa. UDPGlc. aparecen en la orina cantidades considerables de L-xilulosa.-xilulosa en sujetos pentoslirícos. En la sintesis de lactosa en la glándula rnamaria. Se sabe que la arninopirina y antipirina aumentan la excreción de 1. achía como parte de la defensa corporal contra la peroxidaciún lipidica (figura 16-27). que puede 1levar a incremen- . El acido sihlico más importante que se encuentra en los tejidos humanos es el ácido IV-acetilneurarnínico (NeuAc).-enasa. glucoaldehído y glucolato (figura 2 2 4 ) . gangliósidos) (capítulo 16). la glucosa se convierte en UDPGal por las enzima descritas anteriormente. los anícares de nucl&tidos importantes. 2) los aminoazúcares aparecen principalmente en la forma N-acetilada.

Ejemplos son timidina de difosfalo (TDP)-glucosamina y TDP-N-acetitglucosamina tos en las concentraciones de colesterol LDL.) Es posible que otros nucleotidos d e purina o pirimidtna estén enlazados de manera similar a azúcares o aminoazúcares. N-ACEflLGLUCOSAMINA 1 -FOSFATO 1 b GLUCOSAMINOGLUCANOS (COMO HEPARINA) N-ACETILMANOSAMINA UDP- 6-FOSFATO FOSFOENOLPIRUVATO N-AC ETILGLUCOSAIAINA - GLUCOSAMINOGLUCANOS (AC100 HIALURGNICO) GLUCOPROTEINAS NAO+ t Aciua N-ACETILNEURAM~NICO 9-FOSFATO UDP N-AC ETILGALACTOSAMINA 1 -1 inhibitorio ÁCIDO s r A ~ l c o GANGL16SlDOS GFUCOPROTEINAS GLUCOSAMINOGLUCANOS (CONDROITINAS) GLUCOPROTE~NAS Figura 22-7. Los defectos en el metabalismo de fructosa causan patología (figura 2 2 6 ) La carencia de fnictocinasa hepatica causa fructosuria esencial y la ausencia de aldolasa hepitica E. que . la sobrecarga aguda del higado con fructosa. da lugar a secuestro de fosfato inorganico en el 1-fosfato de f r u c t o s a y disminuci6n de la síntesis de ATP. produciéndose hipeniricemia. la cual es causa de gota (capinilo 36). Además. Resumen de las interrelaciones en el metabolismo de los aminoazúcares ('Análogo al UDPGlc. Estos efectos son de particular importancia en personas que tienen predisposici6n a la hipertriacilglicerolemia o hipemricernia. En consecuencia. todo lo cual puede considerarse como potencialmente aterogénico (capitulo 28).O PIRWVATO GLUTAMATO Glucosamina Acetil-COA UTP GLCICOSAMINA* N-ACETICGLUCOSAM INA N-ACETIL- FLUCOSAMINA 6-FOSFATO P> p.254 Bioqtrimicu de Hurper (Capitulo 22) ATP GLUCOSA GLUCOSA 1-FOSFATD ADP GLUCOSA 6-FOSFATC t Glucdl~sis FRUGTOSA 6-FOSFATO - Ciclo del Bcido citnco CO1+H. como puede suceder con la infusión intravenosa o ingesta muy grande de ella. se suprime la inhibicibn por el ATP de la enzima de la degradacibn del nuclebtido de adenina y se promueve la formacibn de hcido urico.

aumenta confonne la concentración de glucosa aumenta en la diabetes. Las dietas deficientes en fructosa y sacarosa son benéficas en los dos trastornos. El sorbitol no se difunde con facilidad a través de las membranas celulares y. 3) En los eritrocitos.55 Vía de la pcnro~ degrada a la fmctosa 1-fosfato. por ejemplo. uridilo transferasa o 4epimerasa (figura 22-6A). Se han descrito varios defectos gentiticos que causan deficiencia parcial m& que tofal. por tanto. y se están oliteniendo resultados promisorios en la practica clínica. que se acumula generando cataratas. Cuando el sorbitol se administra por via intravenosa. puede realizar la oxidación completa de la glucosa y sus productos principales son NADPH y COL. incluyendo el fetal. que es reversible y proporciona precursores de ribosa para la síntesis de nucle6tidos. cuya concentracion sanguinea aumenta. es decir. A . se reduce por la aldosa reductasa en el ojo al polio1 con-espondiente (galactitol). Por ultimo. la fase no oxidativa se encuentra en todas las dlulac que requieren ribosa. Las deficiencias enzimáticas en la vía de la galactosa causan galactosemia En las galactosemias existe incapacidad para metabolizar esta hexosa y pueden deberse a deficiencia hereditaria de galactocinasa. se acumula para producir daño osmotico. La presencia de sorbitol deshidrogenasa en el hígado. RESUMEN 1) La vía de la pentosa fosfato. ocurre insuficiencia hepática y deterioro mental. pero en estos individuos aun existe en hfgado y otros drganos y aI parecer este tercer trastorno es asintomático. se convierte a fructuosa y no a glucosa. incluyendo RNA y DNA. si se administra por via oral. Los edulcorantes "exentos de azúcar" que contienen sorbitol pueden causar dolor abdominal (intolerancia al sorbitol). En la deficiencia de uridiE transferasa. la patogenia de la catarata diabética puede incluir un aumento en B a concentracibn de éstas. Esto explica por qué es posible que los niiios afectados muestren crecimiento y desarrollo normales a pesar de la dieta exenta de galactosa para controlar los sintomas de la enfermedad. La aldosa reductasa cataliza la reducción de glucosa a sorbitol por la NADPH. La galactosa. las concentraciones de rnioinositol bajan. Una consecuencia de la intolerancia hereditaria a fructosa y otro padecimiento causado por deficiencia de fructosa-l. dado que hay acumulación de galactosa 1-fosfato y perdida de fosfato inorgánico hepatico.vmo de hexosas * 2. Se han encontrado deficiencias eritrocitarias de epimerasa. el cristalino humano contiene fructosa y sorhitol. por tanto. nervios periféricos y glomérulos renales. la acumulaci6n de fructosa l-fosfato y fructosa 1.6-hisfosfato inhibe la actividad de la fosfori lasa hephtica por mecanismos alostéricos. el defecto se identifica 5610 en homocigotos. Como normalmente la enzima esta presente en exceso. aunque la me-jor conocida es la deficiencia de uridilo transferasa. cristalinos.:a fos fato y otras vIas del rnetaholi. La acurnulaci6n de sorbitol. de la transferasa. seguida por oxidación de1 sorbitol a fructosa en presenciadeNAD4 y sorbitol rleshidrogenasa (polio1 deshidrogenasa). La catarata diabética se relaciona con la presencia de fructosa y sorbitol en el cristalino Normalmente. El defecto en la aldolasa €3 no afecta de manera tan nociva la actividad hacia el 1. La via del sorbitol (poIiol) (no localirada en el higaiio) es responsable de Ia fomacibn de fiuctosa a partir de glucosa (figura 22-5) y su actividad. La vía completa existe s61o en los tejidos que requieren NADPH para slntesis reductorris. por lo que la persona galactosémica aun puede formar UDPGal a partir de glucosa. cuyas enzimas se encuentran en el citosol.La via no genera ATP. una reduccirin de su actividad de 50% o menos no causa síntomas o signos de enfermedad. conduce a la conversibn del sorbitol a hctosa. en aquellos tejidos que no son sensibles a la insulina. así sólo hay ligero deterioro de la gluconeogenesis. la vía tiene la importante hnci6n de evitar la hem6lisis ya que suministra NADPH para mantener al glutation en el estado reducido. conduce a intolerancia hereditaria a la fructosa. La aldosa reductasa se encuentra en la placenta de la oveja y ocasiona la secrecibn de sorbitol a la sangre fetal.dbisfosfatasa es una hipoglucemia inducida por fmctosa a pesar de la presencia de abundante resetva de glucógeno. 2) Esta via tiene una fase oxidativa que es irreversible y genera NADPH y una fase no oxidativa. Al parecer. gran parte escapa a la absorción en el intestinoy se fermenta por las bacterias del colon a productos como acetato e hidrógeno. disminucion de mioinositol y catarata diabctica pueden evitarse en ratas diabéticas mediante la adrninistraciiin de inhibidores de la aldosa reductasa. El estado general es m& grave si la galactosemia se debe a deficiencia de uridilo transferasa. por el contrario. en tanto que. De manera sirnulthnea. lipogknesis o esteroidogenesis. la epimerasa eszá presente en cantidades adecuadas. Esta vía es responsable tambidn de la presencia de fructosa en el liquido seminal.ó-bisfccfato d e fructosa.

1995. Am J Crin review. I REFERENCIAS Couet C. Acadernic Press. (editors): The 81!etnbolic und . V a n den Rerghe G : Inborn crrors of fr~ictose rnetabolism Annu Kei Nutr 1994. 5) La h c t o s a tiene fácil acceso a las vias metabolicas.actose and cataract in humans: A Mayes PA: Intcrrncdiary mctabolism o fructose.325. Igual que la galactosa.We#abolicbfects n f Uietay I:arbol?ydrates Karger. 1981.58. 1983.h54S.su vez.Int J Riochem E990.22:k85 James H M et al. W o o d T: TIie Pentose Phosphate Parhwq. Academic Press.14:41. Cox TM: H z r e d i t a ~ fructose intoler. que es esencial para eliminar a la H202.I.~ncc. 4) La vía del acido urónico suministra ácido glucurónico necesario para la conjugacibn con numerosas sustancias endógenac y exógenas. McGraiu-Hill. Por tanto. 1 9Xh. el glutatión sirve como sustrato de la glutatiiin peroxidasa. Cross NCP. 6 ) La galactosa se sintetiza a partir de la glucosa en la glándula mamaria y en otros tejidos donde se requiere para la formacidn de glucolipidos. Vrana A (editors): . Macdonald 1.loleculur Bulisr~xuflnheriied Diseme.8. Vol 3. nociva para la celula. Steiner DF. Jan Dehry G: !. . proteoglucanos y glucoprotetnas.ietaboiism and Its Disorders. esquivando el paso principal de control de la gliicólisis. Whelan WJ (editors): Carbnhydrare . forma con facilidad glucosa en el higado. que se eliminan en la orina como glucurbnídos. Kador PF: The role af aldose reductase in the development of diabctic complications Mcd Rcs Rcv 1988. Randle PJ. J Am Coll Nutr 1991:10:79. Scriver CR et al. Nutr 1943. estimula la síntesis de ácidos grasos y la secrecibn de triacilglicerol hepático. cata1izado por fosfofnictocinasa. 7th ed.I.: Models l'nr ihc meiaholic production o f oxalate from xylitol in hiirnans Aust J Exp Biol Med Sci 1982:60: 1 17.

DSc A semejanza de muchos otros procesos degradativos y siniéticos (por ejemplo. que incIuyen el hfgado. Ec por tanto una proteína multienzimlitica. La reacciiin tiene lugar en dos pasos: 1) la carboxilacibn de la biofina (que utiliza ATP. biotina carboxilasa. proteína portadora de carboxibiotina y transcarboxilasa. En 1% aves. una especie que ha proporcionado gran parte de la información acerca de lipogenesis. En las bacterias. glucogenólisis y glucogenesic). En la rata. Otro sistema para la elongacion de la cadena de ácidos gasos también está presente en el reticulo cndoplismico hepático. la slntesis de los ácidos grasos (lipogénesis) se consideraba como la inversa de la oxidacihn en la mitocondria. la lipogénesis se confina al higado. La acetil-CoA es e1 sustrato inmediato y el palmitato libre es el producto final. las variaciones en su actividad pueden determinar la naturaleza y extensión de la obesidad y una de las lesiones causadas por la diabetes sacarina insulinodependiente o tipo 1 es la inhibicion de la lipogénesis. Mayes. El complejo 5cido graso sintasa es un polipeptido que contiene siete enrimas activas Al parecer hay dos tipos de hcidos grasos sintasas. la glucosa es el sustrato primario para IipogtSnesis. que es la molécula combustible principal producida por la dieta. Sin embargo. enckfalo. IMPORTANCIA BIOMEDICA Existen amplias variaciones entre especies en la dispasicihn de las principales vías lipogknicas en los tejidos y en sustratos principales para síntesis de ácidos grasos. Dado que la via de lipogénesis puede ser de poca importancia en el ser humano no sorprende que se carelca de informes acerca de enfermedades criticas de ella. las enzimas individuales dcl sistema están separadas y los radicales aciro se encuentran en combinación con una proteina llamada proteina portadora de acilos . asi como biotina. En muchos mamíferos. la vía se efectiia de preferencia en tejido adiposo e hígado. ATP. figura 52-1 3) y 2) la transfercncia del carboxilo a la acetil-CoA para formar malonilXoA. Sin embargo. Estaultima requierc de la vitamina biotina (figura 23-1). PhD. donde su importancia es pariicular para proporcionar lipidos utiluados en la formación del huevo. plantas y formas inferiores. Sus requerimientos de cofactores incluyen el NADPI-I. rifíbn. La producción de malsnil-COA es el paso inicial y de control en la sintesic de ácidos grasos El bicarbonato como fuente de COI resulta necesario en la reacción inicial para la carboxilacion de la acetilCOAa m a l o n i l ~ o A en presenciade ATP y acetil-CoA carboxilasa. pero en los nimiantes esta función la descrnpefia el acetato. biotina y HCOi(como fuente de CO:).Biosíntesis de ácidos grasos Peter A. parece claro que un sistema extrarnitocondrial activo es responsable de la cnmpleta síntesis de palmitato a partir de acetil-CoA en el citosol. La enzima contiene un numero variable dc subunidades idénticas. glándula mamaria y tejido adiposo. en tanto que en el ser humano el tejido adiposo puede no ser un sitio importante y el higado sólo manifiesta escasa actividad. pulmbn. LA PRINCIPAL V ~ A PARA LA NUEVA S~NTESIS DE ÁC~DOS GRASOS (LIPOGÉNESIS) OCURRE EN EL Clf OSOL Este sistema est8 presente en muchos tejidos. y lambien un sitio alosterico regulador.

- CO-S- COA Acetil-COA Malonil-CGA ATP + HCOT + Enz-biotina Figura 23-1. Biosintesis de la malonil-COA. en las levaduras.-- - - I Cvs 4'-Fosfopantetelna Figura 23-2. y el Tiol cisteina. el sistema sintasa es un comple. cada uno constituido por seis adividades enzirnáticas y la proteina portadora de acitos (ACP) (El Cis-SH. El complejo rnultienzimática de los Bcidos grasos sintasa.. El complejode la hcidos graws sintasaes un dírnero (figura 23-21. En este sistema la AC asume la función de la COA.. los mamíferos y las aves.CO-S . . la actual unidad funcional consiste en una mitad de un monbmero en interaccibn con la mitad complementaria del otro Así. En los animales.- .) El -SH de la 4'-fosfopanteteina de un rnonbrnero está en proximidad estrecha con el -SH del residuo de cisteina de la cetoacil cintasa de otro monomero. de la subunidad .. y así se logra el efecto de compartimentalización de la actividad en la célula. acetil-COAcarboxilasa. La agregación de todas las enzima5 de una vía particular en una unidad funcional rnultienzimática ofrece gran eficacia y libertad de interferencia por procesos competitivos._ \ - \ \ I -. sin necesidad de erigir barreras de permeabilidad.jo multienzitnAtico que no puede subdividirse sin la pérdida de actividad y la ACP es parte de este complejo. y están formados por una cadena SH SH I I \ OivisiQn .. Tanto la PPA como el complejo rnultientim~ticode las bacterias contienen la vitamina ácido pan totenico en la forma de 4'-fo~fo~anteteina (figura 5 2 4 ) . El complejo es un dírnero de dos rnonámeros de polipeptidoc idknticos.-.COA . La secuencia detallada de las enzimas en cada rnonbmero es tentativa (basada en Wakil) Aunque cada mon6mero contiene todas las actividades parcialesde la secuencia de la reaccibn.CH.) (ACP).-- I SH y SH . sugiriendo un arreglo "cabeza a cola" de dos monomeros. cada rnonómero es idkntico al otro. 1 y 2. Sin embargo. (Enz.O O ~ -CH. dos cadenas acilo se producen simultáneamente. Otra ventaja del polipkptido multienzimático Único es que la sintesis de todas las enzimas del complejo es coordinada ya que todo está codificado por un solo gen. .

La butiril-CoA puede actuar como molécula cebadora en el hígado de Ios mamíferos y en la glándula mamaria. La malonil-CoA se combitia con el gmpo -SH en la 4'-fo~fo~anteteínade C A P del otro rnonómero. hay una enzima tioesterasa separada. La eciiaci~npara la síntesis global de pairnitato a paflir de a c e t i l x o h y rnalonil-COA se muestra en seguida: CH2 COiS*CoA + 7HOOC*CHz COiSiCoA + + 14NADPH + 14H' + CH3 (CH2)11i COOH + 7CO2 + 6H20+ * 8CoAmSH + 14NADP' La acetil-CoA iitilizada como piintal forma los átoLa adicion de mos de carbono 15 y 16 del palniita~o. Además ambas vias metabblicas se localizan en la región extramitocondrial de la celula. la acetil-COA no se difunde con facilidad en el interior del citosol extramitocondrial sitio principal de la sintesis de los ácidos grasos.larga con un numero impar de átomos de carbono. la tioesterasa (deacilasa). El gmpo 3-zetoacilo se reduce. Las reacciones oxidat i v a ~de la vía pentosa fosfato (capítulo 22) son la fuente principal del hidrbgcno que s e requiere para la sintesis reductora de k i d o s grasos. es decir. aumenta en condiciones dc buena nutricibn. para formar la grupo enzima acetiI [acill-malonit. la de los derivados 3<etoaciZos y la dc los derivados acilo 2. s61o el dimero es activo. A e ~ t o . La secuencia de las reacciones se repite seis veces más incorpohdose un nuevo residuo rnalonilo en cada secuencia. especifica para residuos acilo de Cs C 10 O C 12.polipeptidica notable que contiene las siete enzimns de la sintasa y una ACP con un grupo 4'-fosfopanteteína -SH. Éste se libera del complejo enzimático por la actividad de una séptima enzima en el complejo. En un principio. en correlaci~n estrecha con la actividad del sistema de síntesis de ácidos grasos (cuadro 2 1-1). se producen ácidos grasos de cadena. Si la propiotiilCOA actúa como cebador. Aunque ambos tíoles participan en la actividad de la sintasa. Se considera en la actualidad que la utilizacícin del pimvato para la IipogCnesis es mediante el citrato. rejido adiposo y glándula mamaria en lactancia. La fuente principal de equivalentes reductores (NADPH) para lipogenesis es la vía de la pentosa fosfato El NADPFI interviene Como coenzima en ambas reducciones. al igual qiie la de la '-enzima malica". En la glindula marnaria de: los rumiantes. Orras fuentes de NADPH incluyen la reacci~n que convierte el malato a piruvato y se cataliza por la "enzima miilica" {NADP malato deshidrogenasa) (tigura 23-5) y la reaccibn extramitocondrial de la isocitrato deshidrogenasa (probablemente no sea una riiente s~istancial). Podría parecer que son dos centros de actividad en un complejo dirnérico que funcionan de manera independiente y simultinea para formar dos moleculas de palmitato. La actividad de la ATP-citrato liasa extramitocondrial. catalizada por la malonil transacilasa. El palmitato libre debe activarse a acil-CoA antes de que pueda proceder a otra mita rnetabálica. deshidrata y reduce de nuevo para formar la aci1-Senzima saturada correspondiente. ocupado hasta el momento por el grupo acetilo. Esta descarboxilacion permite que la reaccibn prosiga harta su terminación y actíia como un fuerza de cond~iccion para la secuencia entera de reacciones. una molécula cebadora d e acetil-CoA se combina con un grupo -SH de cisteina catalizada por acctil transacilasa (figura 23-31. La acetil-CoA es el bloque estructural de los ácidos grasos Se forma a partir de los carbohidratos a traves de la oxidaciiin del pinivato dentro de las rnitocondrias. En proximidad estrecha esta otro ti01 de un residuo de cisteina adherido a la3<etoaciI sintasa (enzima condensante) de otro rnonómero (figura 23-21. hasta que se ha ensamblado un radical acilo saturado de 16 carbonos (palmitilo). SOR también los especializados en la lipogtncsic activa.3-insaturados. El destino habitual es su esterificación a aciIgliceroles (figura 2 3 4 ) . los cuales se encuentran después en los Iípidos lácteos. donde el propionato se forma por la acción microbiana en el rumen. El . Esto se debe a que los dos rnonórneros se encuentran en una configuracibn "cabeza a cola". esta cnzima es parte del complejo de la iicidos grasos sintasas. de manera que iio hay barreras de membranas ni de permeabilidad para la transferencia de NADPH a partir de una vía a otra. Sin embargo. seguida por la condensacion con oxafacetato para formar citrato como parte del ciclo sigue la translocación del del ácido cítrico. todas las iinidadec C: subsiguientes es a traves de la formación de rnaloníl<oA. Estos se encuentran en forma particular en los riimiantes. Es significativo que los tejidos que poseen una via pentosa fosfato activa. Una nueva moltcula de malonil4oA se combina con el -SH de la4'-f~sfo~anteteína y desplazaal residuo acilosaturado en el gmpo -SI-I libre de: la cisteina. En la glanduia mamaria. La via involucra la glucrilisis seguida por la descarboxilación oxidativa del piruvato a acetil-CoA dentro de las mitocondrias. Esto libera el grupo -SH de la cisteina. acetilo ataca al grupo metileno del residuo malonilo catalizado por 3detoacil sintasa para liberar COZ y fonnar una enzima 3xetoacilasa (enzima acetoacctil). higado.

y @ representan los rnonbmeros individuales de la sintasa de hados grasoc. .C H .) Enzima acilo Figura 23-3.S . Detalles de la forma e n que la adicion de un residuo malonilo hace que la cadena acilo crezca cada vez dos átomos de carbono. Enzima acilo 2. 11 (C. (Cis. a .) En la figura 23-2 se muestran los detalles del dimero de la stntasa de los ácidos grasos.Acetil-COA + Malonil'-COA Cntransferidos desde TRANSACILASA Complefo multienzim8tim de la acldo graso sintasa o 111 a P a n ~ ~ ~ ~ I .C .C H ~ . Pan.3-insaturado o a trads de los pasos ( 1 !a : $ Palmttato Despues de 7 ciclos ~ P ~ ~ . Biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga. residuo de cisteina. 4'-fosfopanteteina.C H .IC'/ ~ ~ ~ - Enzima Acil (aceti1)-malonila Enzima 3-cetoacilo (enzima-acetoacetiio) Enzima N-)-3-hidroxiacilo - SH O =Pan-s -c- II CH=CH-CH.

K. T. transportador de piwvato.) . P. + Acilgltceroles cstes de colesterrlo f Estenficactbri Palmitil-COA / \ Alargamiento de la cadena de desaturactbn ' r Acil-COA 1 Figura 2 3 4 . Destino del palrnitato después de la biosintesis. transportador del tricarboxilato. transportador del alfa-celoglutarato.Biosínresis de ácidos grasos 26 1 ATP + COA Palmilato u AMP PP. El abastecimiento de aoetil-COA y NADPH para la lipogénecis. Glucosa Palmitato Glucosa 6-fosfato 1 f rato - lsocitrato Figura 23-5. (VPF.vla de la pentoca fosfato.

R ~ H ~ O C H . lo cual constituye ta fase anabblica de este ciclo. El alargamiento de la cadena de los ácidos grasos tiene lugar en el retículo endoplásmico La vía ("sistema micrnsomat") convierte a los compuestos acil-CoA de los Bcidos grasos a derivados acilo con dos átomos de carbono m6s. mediante la utilización de rnaIonil-CoA como donador de aceti lo y el NADPH como reductor y catalinda por las enzimas del sistema cromosómico de [a clongasa de los 4cidos grasos (figura 2 3 4 ) . incluso el ser humano. Debido a que el acetato surge y es aczivado a a c e t i l 4 o A fuera de las mitocondrias. A su vez.C H ' ~ .s-Acil-COAinsaturada NADPH 2. La generacion de NADPH via la isocitrato deshidrogenasa extramitocondrial es más importante en estas especies. catalizada esta fragmentaci~n por la ATP-zitrato liasa.3-ACIL-COA INSATURADA + Ht NADP+ Figura 23-6. al igual que hcidos grasos insaturados. debido a la deficiencia de enzima málica. Laacetil-CoA se tiene después disponible para la fomacion de malonilCOA y la síntesis de palmitato (figura 23-5). El proceso de lipogknesis se ocupa de la conversi6n de glucosa e intermedios como piruvato. lactato y acetilXoA a lipido. Sistema microsbmiul de la elongasa para el alargamiento de las cadenas. El alargamiento de la estearil-CoA en el encdfalo aumenta con rapidez durante la mielinizaci6n con el fin de proporcionar hcidos grasos con 22 y 24 átomos de carbono que estan presentes en los esfingolipidos. el malato puede transportarse al interior de la mitocondria donde puede reformar el oxalacetato. Esta vía es un medio de transferir equivalentes reductores del NADH extramitocondrial al NADP. En forma alterna.S-COA 2. seguida por la generacion de NADPH a través de la enzima malica. El ayuno suprime principalmente el alargamiento de las cadenas. el NADPH se tiene disponible para la lipogknesis. malato para intercambio con e Hay poca ATP-citrato liasa o enzima malica en los rumiantes probablemente debido a que en estas especies el acetato (proveniente del mmen) es la fuente principal de acetil-CoA. toman su alimento como comidas espaciadas y por tanto. donde en presencia de COAy ATP sufre la ft-apentacihn a a c e t i l 4 o A y a oxalacetato. no hay necesidad alguna de transportar citrato fuera de la mitocondria y forme citrato antes de su incorporacion en los ácidos grasos de cadena larga. Es de notarse que el transportador de citi2t~ (tricarboxilato) en la membrana mitocondrial requiere E ciwato (figura 14-13). El estado nutricional del cuerpo y los tejidos es el factor .citrato dentro del compartimiento extrarnitocondria!. EL ESTADO NUTRICIONAL REGULA LA LIPOGÉNESIS Muchos animales. Los grupos acilo que pueden actuar como moléculas cebadoras incluyen las series saturadas desde el CIOhacia adelante. El oxalacetato puede formar malato mediante la maIato deshidrogenasa enlazada al NADH. deben almacenar gran parte de la energía de su dieta para usarla entre alimentos.

la inhiben moléculas a c i l X o A de cadena larga.) . es escasa la conversión de carbohidrato dieteitico a grasa.5 I . reducid de manera autornatica la sintesis de acido graso nuevo.8 mmollmL de plasma) en los que Acidos grasos plasmáticos aumentan durante la transición de la alimentación a la Inanicibn. (Experimento del laboratorio del autor con DC Topping.a 2. La inhibicibn mayor de la lipoghesis ociirre por arriba de los valores de Bcidos grasos libres (0. Asi. bcidoc grasos libres.principal de control de la velocidad de E a Eipogknesis. Se deprime en situaciones de ingestión caldrica restringida. La grasa de la dieta también deprime la lipogénesis en el higado y cuando la alimentación contiene m&$ de t 0% de lipidos. La sintesis de ácidos grasos de cadena larga se regula a termino corto por modificación alostérica y covalente de enzimas y a largo plazo por cambios en la expresibn genica que regula las velocidades de sintesis enzimáticac. lo cual conduce a incremento en las proporciones [ATP]/[ADP] dentro de la mitocondria y por tanto a conversibn de pimvato deshidrogenasa activa a inactiva (figura 19-6). un ejemplo de inhibición metablilica por retroaiimentacidn negativa por un producto de la secuencia de acciones s. De igual modo. LA LIPOGÉNESISSE REGULA CON MECANISMOS INMEDIATOS Y A LARGO PLAZO La Acil-CoA regula también a la piruvato deshidrogenasa Existe tambien una relacibn inversa entre la concentracirin de hcidos grasos libres y la proporcibn entre piruvato deshidrogenasa activa e inactiva que regula la disponibilidad de acetilXoA para lipoginesis. como en diabetes sacarina. en tejido adiposo) y por consiguiente aumenta la disponibilidad de piruvato para la síntesis de hcidogmo y de glicerol 3-fosfatopara esterificación de estos ácidos grasos. La concentración de citrato y acEl4oA regula a la acetil4oA carboxilasa La reacción limitante de la velocidad en la vía lipogénica es el paso de la acctil4oA carboxilasa. Existe una r e l a c i ~ ninversa entre lipogenesis hephtica y la concentracion d r i c a de ácidos grasos libres (figura23-7). La insulina convierte la forma inactiva de piruvato deshidrogenasa a la forma activa en el tejido adiposo. Las hormonas también regulan la lipogénesic 0. La regulación del movimiento de icidos grasos libres del tejido adiposo se describe en el capitulo 27. ¡a oxidación de a c i l 4 o A por aumento de la concentracibn de acidos grasos libres puede elevar las proporciones [acetil4oA]qCoA] y FADH]/[NADt] en la rnitocondrias. cuya concentracion aumenta en estado de nutncion adecuada y es un indicador de suministro complcto de acetilCOA. La Acil-CoA puede inhihir tambikn al transportador mitocondrial de tricarboxilatos. Todos estos estados se acompañan de incremento en la concentración placmatica de acidos p q o s libres. acelera el transporte de glucosa al interior de la celula (por ejemplo. Inhibicibn directa de la lipogénesis hepatica por Acidoc grasos libres La lipog&necis ce deteminb de la incorp~racion de 3 ~ z a 0 $cidos grasos libres en hígado de rata perfundido. Sin embargo. si la acilXoA se acumula como resultado del aumento de lipolisis o del flujo de hcidos grasos libres hacia el tejido. Erta enzima es alosterica y se activa por citrato.AGL.2 0. si la a c i l 4 o A se acumula debido a que no se esterifica con suficiente rapidez. con dietas ricas en Iípidos o cuando hay deficiencia de insulina. DE este modo. también se inhibirá la formación de acido graso nuevo (figura 23-7). La AciIXoA inhibe a la piruvato deshidrogenasa por bloqueo del transportador del intercambio ATP-ADP de la membrana interna mitocondrial. pero no en el Figurá 23-7. AdemBs.0 AGL cbricos (~tmollmC) La insulina estimula la lipogénesis por diversos mecanismos.3 a 0. La activacibn alostCrica de la enzima implica Ia agregación de la configuraciiin dimerica en polimCrica de varios millones de masa molecular. y en consecuencia inhibir la piruvato deshidrogenasa. la velocidad es alta en el animal nutrido cuya dieta contiene una elevada proporcihn de carbohidratos. e impedir de este modo la salida de citrato de las mitocondrias al citosol.0 3. La lipogknesis es mayor cuando se ingiere sacarosa en lugar de glucosa debido a que la fructosa esquiva el punto de controt de fosfofmctocinasa en Z a glucolisis e inunda la vía lipogénica (figura 22-51.

ice@COA carboxylase. en estas especies.7: 157. Annu Rev Nutr 1987. 5) El alargamiento de la cadena de los ácidos grasos tiene lugar en el retículo endoplhmico. Mabrouk C M et al. cl complejo multienzim~tico de una sola cadena polipeptídica con siete actividades enzirnaticas separadas. La insulina activa la a c c t i l Z o h carhoxilasa. por incremento de cAMP. Page 143 in: B i o c h ~ m r s t y o f Lzpids and . se evitan muchos de los mecanismos de control en los que intervienen mitocondrias y por tanto no son aplicables. Etir J Biochem 1990. En los rumiantes. dieta rica en Iípidos y diabetes. la acetilXoA carboxilasa es una enzima que puede regularse por fosforilaci6n reversible. se ajustan a los requerimientos fisiolbgicos del organismo por incremento en la cantidad total en estado de nutrícibn adecuada y disminución en ayuno. Otra proteina cinasa dependiente de 5'-AMP también inactiva la enzima. la a c i l 4 o A de cadena larga inhibe su actividad. 2) La vía convierte la acetilXoA a palmitato y requiere NADPH. M#. IlenjaminlCurnmings. que permite a la proteína cinasa dependiente de cAMP que inactlve a la enzima por fosforilacilin.264 0 Bioquirnica de IJarper (Capitulo 23) hígado. E l complejo de ácido graso sintasa y a c e t i l 4 o A carboxilasa son enzirnas adaptativas Esto es. J Biol Chem 1990. A su vez. Goodridge AG: Dietav regulation of gcnc expression: Enzyrnes involved in carbohydrate and lipid metaboIism. ATP. a proficient multifunctional enqrne.como cofactorec. 4) La lipogénesis se regula en el paso de la acetilCOA carboxi lasa por modifi cadoses alostéricos. modificación covalente e induccibn y represidn de Ia sintesis enzimhtica. La insulina es una hormona importante que produce expresión génica e induce biosíntesis enzimática y el glucagán amagoniza este efecto. Vance JE (editors). . por 5u propiedad de deprimir la concentraci6n de cAMP intracelular. inhibe la lipolisis y por tanto.35: 1076. El glucagbn y la adrenalina tienen acciones ovuestas a-la insulina.187:199. Estos mecanismos para el control a largo plazo de la lipogénesis recién descritos emplean varios días para manifestarse en forma plena y aumentan el efecto directo e inmediato de ácidos grasos libres y hormonas como con la insu Iina y glucagón. por inducción de la síntesis. Por este mismo mecanismo.: Roles of thc AMP-activated and cyclic-hMP4ependent protein kinascs in the adrcnaline-induced inactivationof acetyl-COA carboxylase in rat adipoqtes. cataliza el ensamble de palmitato a partir de una mol&culade a c e t i l 4 o A y siete de rnalonil4oA. cataliadapor el sistema enzirnhtico de la etongasa microshíca.265:6330.ipid Kes 1994. 1985. Tarnbidn.: Coordinate regulation of glycolytic and lipogenic gene exprcssion by polyunsaturated fatty acids. la insulina activa la acetil-CoA carboxilaca por desfosforilaci6n y a plazo largo. La ingestión de grasas que contienen ficidos grasos poliinsaturados regula la manera ordenada la inhibiciiin de la expresión de enzirnas criticas REFERENCIAS Goodridge AG: Fatty acid synthesis in eukatyotes. El citrato activa la enzima. Biochemistry 1989. la insulina.Uernhrañes. los cuales inhiben la a c e t i l 4 o A y por consiguiente la lipogénesis. reduce la concentración de la acil-CoA de cadena larga.28. Se infiere que. biotina. 3) El sistema de la a c e t i l 4 o A carboxilasa se requiere para la conversion de la acetil-CoA a malonilCOA. ácido pantotenico y HCOt. Wakil SJ:Faay acid synthaie. Vance DE.4523. la Bcido graso sintasa. la insulina antagoniza las acciones de glucagón y adrenalina. Ademhs. Haystead TAJ et al. A plazo corto. Jump DI3 et al.: Aciite hormonal control of . el acetato y no la glucosa es el compuesto de inicio de la lipogénesis. RESUMEN 1) La síntesis de hcidos grasos de cadenas largas (lipogenesis) se realiza por dos sistemas enzimá~icos presentes en el citosol de la célula: la acetilXoA carboxilasa y hcido graso sintasa. I I. un inhibidor de la lipogénesis. Esta activación implica la desfosforilac i ~ por n una proteína fosfatasa acornpaflada por el cambio en la agregacibn de monomeros a partir de un octbmero a un estado más polimerico. de la gluctjlisis y la lipogénecis.

comprende derivados acilo adheridos continuamente a un complejo multienzimatico. La oxidacion de los ácidos grasos se lleva cabo en las mitocondrias. como en la diabetes. causa cetoacidasis que finalmente es mortal. Por el contrario. IMPORTANCIA BIOMEDICA El incremento de la oxidacibn de los hcidos grasos es tipico de la inanición y de la diabetes sacarina. LA OXIDACION DE LOS ÁCIDOS GRASOS SE PRODUCE EN LAS MITOCONDRIAS Los acidos grasos san transportados en la sangre como ácidos grasos libres lAGL1 El término "acido graso libre" se refiere a los ácidos grasos que no esthn esterificados. varios estados de deficiencia de carnitina o de las enzimas esenciales para la oxidacibn de los ácidos grasos (como la carnitina palmitoiltransferasa) o cuando la oxidacihn es inhibida por venenos (por ejemplo la hipoglicina). dc modo quc en realidad nunca están "librec". antes de que reaccionen con las enzimas responsables de su metabolismo ulterior. cuya producción excesiva por periodos largos. La oxidacibn de Bcidos grasos separada de la biosíntesis permite que cada proceso se regule e integre de manera individual de acuerdo a las necesidades tisulares. cada paso comprende derivados acil-COA catalizados por enzírnas diferentes. Otras nomenclaturas son AGNE (ácidos gracos no esterificados) o AGSE (acidos p o s sin esterificar). Ésta se presenta en Los ácidos grasos deben activarse antes de que puedan ser catabolizados A1 igual que en el metabolismo de la glucosa.Oxidación de ácidos grasos: cetoaénesis Wd Peter A. los AGL de cadena larga se combinan con la albumina y en la célula están adheridos a la proteína fijadora d e hcidos grasos o proteína Z. OSC Los ácidos gsasos son oxidados a acetil-COAy sintetizados a partir de la misma. En presencia de ATP y de la . Los acidos grasos de cadena corta son m8s solubles en agua y existen como acido no ionizado a como anion. utiliza NADP' como coenzima y requiere de ionec bicarbonato y ATP. la biosintesis d e los ácidos grasos (Iipogenesís} se desarrolla en el citosol. los Acidos grasos primero deben convertirse mediante la reaccibn con el ATP a un intermediario activo. La oxidación de hcidos grasos es un proceso aerobio. Debido a que la gluconeogénesis depende de la oxidacihn de Ios hcidos grasoc. PhD. sino un proceso entemente distinto que tiene lugar en la célula en un compartimiento separado. la biosintesis de los acidos grasos no es simplemente la inversa de su oxidacihn. Esta es ia única a a p a en la degradación completa de un ácido graso que requiere energía a partir dcl ATP. donde ocasiona la produccibn de cuerpos cetónicos por el hígado (cctosis). que exige la presencia de oxígeno. utiliza NAD' y FAD como coenzimas y genera ATP. cualquier alteración de dsta da lugar a hipoglucemia. Aunque la materia prima de un proceso es idéntica al producto de otro y las etapas químicas son comparables. Los cuerpos cetónicos son ácidos. Mayes. En el plasma.

La activación de los Acidos grasos mas pequefíos y su oxidacidn pueden ocurrir en el interior de las mitocondrias. Una enzima. De este modo. la carnitina palrnituiltransferasa 1 esta relacionada con el lado exterior de la rnernbseina mitocondrial interna y convierte a los grupos acil-COA de cadena larga en acilcarnitina. La acilcarnitina se transporta al interior acoplada con la salida de una molecula de camitina. Luego. en particular. pero puede ser que facilite el transporte de grupos acetilo a través de la membrana de la mitocon- PIROFOSFATASA ATP AMP+ PPi La acil-COA sintetasa se encuentra en el retículo endoplasmico y en el interior y sobre la membrana externa de las mitocondrias. se encuentra presente en las mitocondrias. Es sintetizada en el hígado y el riñén a partir de lisina y metionina. Otra enzima. catalizando la transferencia de grupos acilo de cadena corta entre la COA y Ia carnitina. la cual es capaz de penetrar la membrana interior de las mitocondrias y tener acceso al sistema de enzirnas de la beta oxidacibn (véase la reacción después). acompanada por el gasto de un focfato de alta energia. independientemente de la carnitina. la carnitina acctiltransferasa. la acilcarnitina .266 Bioquimica de Harper coenzima A. Han sido descritas varias acil-COAsintetasas. paro si su producto metabolico. La funcibn de la carnitina en e 4 transporte de los ácidos grasos de cadena larga a travec de la membrana interna de la rnitocondria La cadena larga de acetil-COA no puede atravesar la membrana interna de ta mitomndria. pero la acil-COA de cadena larga (o AGL} no penetrara a las mitocondrias y no es oxidada a menos que forme acilcarnitinas. (CH&W -CH2-CH(Oi-WH:4OO-. Acil-CoA + Carnitina e Acilcarnitina + Cob La presencia de la pirofosfata~ainorghnicti asegura que la activacihn sea cornplrtta. de hecho son dos fosfatos de alta energia los que se gastan durante la activación de cada molécula de ácido graso. es abundante en particular en el musculo. la enzima acil-COA slntetaqa (tiocinasa) cataliza la conversión de un ácido graso (o ácido graso libre) a un "ácido grasa activo" o acil-COA. La carnitina-acilcarnitina translocasa actúa como un transportador de intercambio dc carnitina. La función dc esta enzima es poco conocida.+ AMP ciona con COA. facilitando la pérdida del fosfato de alta energia adicional del pirofosfato. está ampliamente distribuida y. adherida al interior de la membrana intenia. por acción de carnitina palmitoiltransfersa 11. especificas pasa cada ácido graso de diferente longitud de cadena. Ácido graso + ATP + COA + Acil-COA + PP. tos acidos grasos de cadena larga atraviesan la membrana mitocondrial interna como derivados de carnitina La carnitina (beta-hidroxi-gamrna-trimeti!amoniobuikato). En la matriz mitocondrial se desprende la camitina y se regenera acil-COA (figura 24-1). la acilcarnitina reacCarnitina Acilcarnitina ! I COA / \ Carnitina Acil-COA Aulwmitina &brnitina - beta ni da cid^ Figura 24-2.

Esto resulta en la formación de A'-trans-enoil-COA. Esquema global de la beta oxidacion de los ácidos grasos. la acetilcarnitina es una fuente energdtica importante para el esperma. el la 3-cetoacil-Coa es fragmentada en la posición 2. un ácido mitocondrial adyacente a la cadena respiratoria (la graso de cadena larga puede ser degradado por completo a acetil-COA (unidades C:). denominada flavoproteina transferenie de GRASOS IMPLICA SU electrones (capitule 13).cual se encuentra en la membrana interna}.Los productos de esta reacción son La secuencia de reacción cíclica la acetil-COA y un derivado acil-COA que contiene genera NADH y FADH2 dos carbonos menos que la motccula original de acilCOAoxidada. En este caco. La coenzima para la desh idrogenasa es una flavoproteina que contiene FAD como grupo prostttico. un constituyente del ciclo del ácido cítrica (figura 2 1-2). De aquí que. Después de que el residuo acilo penetra en Ia mernbma m itmondnal mediante el sistema transporAcetil-COA + Carnitina t . el residuo propionilo d e un ácido graso de cadena impar es la única parte glucogénica de 61. La acil-COA formada en la reacción dc Diversas enzimas conocidas colectivamente corno fragmentacion vuelve a entrar a la vía oxidativa en la "acidos grasos oxidasas" se localizan en la matriz reaccihn 2 (figura 24-31.Acetilcamitina + COA tador de la carnitina y la reformacibn de acil-COA. cataliCON LIBERACION DE ACETIL-COA zada por la enzima A'-enoil-COA hidratasa. Como la acetil-COA puede ser oxidada a COz y agua a través del ciclo del ácido cítrico (que se encuentra tarnbikn dentro de las mitocondrías}. Las unidades de NAD interviene en la deshidrogenación. Finalmente. De esta manera. Estas * catalizan la oxidacibn de la acil-COA a acetil-COA. . cada vez se rior sobre el carbono 3 (L(+)-3-hidroxiacil-COA separan dos carbonos de las rnol&culasde acil-COA. se logra Ia oxidacion completa de los ácidos grasos. por tanto. El derivado 3-hidroxi sufre una deshidrogenación posteEn la beta oxidación (figura 24-2). Este compuesto se convierte en succinil-COA. La oxidacion de un ácido graso can un número impar de carbonos produce una molécula de acetil-COA y una molécula de propionil-COA 1 Remoción sucesiva de dos unidades C Acetil-CoA Figura 24-2. dc aquí el nombre de beta oxidación. Se afíade agua para saturar DESDOBLAM1ENñO SUCESIVO el doble enlace y formar 3-hidroxiacil-COA. cuya nueva oxidacibn por la cadena LA BETA OXIDACION DE ÁCIDOS respiratoria requiere la mediación de otra flavoproteína. la cual cataliza un desdoblamieiito tiolítico que afecta otra molécula de COA. sigue la eliminaciiin de dos átomos de hidrhgeno de los carbonos ?(alfa) y 3(beta). catalizada por la acilCOAdeshidrogenasa. la coenzima rompe entre los Atomos de carbono alfa(2) y beta(3). dria. Junto con fiuctosa y lactato. dos carbonos formadas son acetil-COA. Los acidos grasos con un número impar de átomos de carbono son oxidados por la vía de la beta oxidación produciendo acetil-COA hasta que quede un residuo de tres carbonos (propionil-COA). deshidrogenasa) para formar el compuesto 3-cecomenzando por e! extremo carboxilo. por una tiolasa (3-cetoacil-COA-tiolasa). respaldando su movilidad.3 palrnitoil-COA forma ocho molt5culas de acetil-COA. La cadena se toacil-COAcorrespondiente. acopliindose el sistema con la fosforilación del ADP a ATP (figura 24-3).

1 I - Lado C (fuera) -e---------------- +- TRANSPORTADOR CARNITINA - . - -.'CH$ I -O - S 1 NTETASA AMP+ PP. . la acetil-COA es separada en cada cicla por la Ziolasa (reaccibn 5) Cuando el radical acilo tiene únicamente cuatro Atomos de carbono se forman dos moléculas de acetil-COA en la reaccidn 5.. ---------- o II Lado M (dentro) Cadena NADH+H Cadena CCdo del af ido Figura 24-3. Aul-COA (Acido graso activo) R"CIi. 7CHrC-S-CoA .L L - MEMBRCrN.4 MITOCONDRWL INTERNA C f- R ~ C H T ~ C H . Beta oxidacibn de los ácidos gracos La acil-COA de cadena larga participa en el ciclo a través de las reacciories 2 a 5.d 0 II Acido graso R3CH.C -S-COA Acv'-cOA DESHlOROGENASpl .-------------------+ . .

conducira a la síntesis de cinco fosfatos de alta energia (capitulo 14) para cada una de las primeras siete rnolticulas de acetil-COAformados por la beta oxidacidn del palmitato (7 x 5 = 35). Este es beta oxidado habituarmente a ácido adipico (Cbjy sub6rico (CR). La omega oxidación se origina en el reticulo endoplAsmico por las enzímas hidroxilasas. la secuencia de la beta oxidación termina en el octanoil-COA. Como la energia libre de la combustión del ficido palniitico es de 979 1 kJlmol.6* = 6656 kJ. t o s peroxisomas no contienen carnitina palmitoiltransferasa. cualquier d4-cis-acil-COAse conserva. Estas enzimas se inducen por dictas abundantes en grasas y. Los peroxisomas oxidan a ácidos grasos de cadena muy larga En los peroxisomas se encuentra una forma moditicada de la beta oxidacion que conducc a la formación de acetil-COA y HzOl (del paso de la deshidrogenasa ligada a flavoproteína). lo cual forma un acido dicarboxiIico. Se forma un total de ocho moles de acetil-COA y cada uno dar&lugar a 12 moles de ATP en la oxidación en el ciclo del ácido cítrico. facilita la oxidación de ácidos grasos cuya cadena tarnbikn es muy larga (por ejemplo. No necesita intermediarios COAy no conduce a la generación de fosfatos de alta energía.I que posteriormente es oxidado a -COOH.dependiendo de la posición de las dobles ligaduras (figura 2 4 4 ) .~ ' ' c i s d ienoil-COAreductasa.La oxidación de los ácidos grasos produce un gran numero de msleculas de ATP El transporte de electrones en la cadena respiratoria. el higado * AG para la reacción ATP. en algunas especies. la alfa oxidación.c i ~ . Los peroxisomas también participan en la síntesis tanto de Cter glicerolipidos (capitulo 26). obteniendoce 8 x 12 = 96 moles de ATP derivados de la acetil-COA formada a partir del pahitato. como del colesterol y del dolicol (figura 28-2). LA ALFA O X I D A C I ~ N Y LA OMEGA OXIDACIQN DE ACIDOS GRASOS SON V ~ A S ESPECIALIZADAS De manera cuantitativa. ~ ~ . es decir. ambos son oxidados en las mitocondrias. Las cnzimas en los peroxisomas no atacan a los ácidos grasos de cadenas más cortas. LA OXIDACIÓNDE ÁCIOOS GRASOS INSATURADOS SE PRODUCE POR UNA V ~ A MODIFICADA DE LA BETA OXIDACION Los ésteres COA de estos Acidos son degradados por las enzimas que normalmente se ocupan de la beta oxidacibn hasta que se forma un compuesto A'-cisacil-COA o un AA-cis-acil-COA. A continuación los grupos octanoilo y acetilo se eriminan de los peroxisomas en la forma de octanoil carnitina y acetit carnitina y. es decir. los ciialcs se excrefan en la orina. mediante la activación inicial por la acil-COA sintetasa de cadena muy larga. El grupo -CHi se convierte en el 4 H l O I .). como en el caso del hcido linoleico (figura 2 4 4 ) o entra a la via en este punto y es convertido por la acil-COA deshidrogei~asa a ~~-trans-~~-cis-dienoi 1-COA. un total de 129 x 5 1. interviniendo un citrocromo P450 (capitulo 13). La A 3 .t s a n s . LA CETOGÉMESIS SE PRESENTA CUANDO HAY UN ~NDICE ELEVADO DE OXIDACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS EN EL HÉGADO En ciertas condiciones mctab6licas relacionadas con un índice alto de oxidación de ácidos pasos. por fhrrnacos hipolipiddmicos como el ctofibrato. . de éstos se restan dos por la activación inicial del ácido graso. procedentes del FADEI: y el NAD. Sin embargo. la beta oxidacion en las mitocondrias es la via mas importante para la oxidación de los acidos graos. Una funcihn posterior de la beta oxidación peroxisómica es acortar la cadena lateral del colesterol en la fomaci6n de hcido biliar (capítulo 28). más tarde. Ésta es convertida a A3-irans-enoit-COA por una enzima que depende de NADP. tal como se explica cn el capítulo 19. Por tanto. CZo y C2. El primer coinpuesto es isomerizado (~"cis-tA~-irunsenoiS-COAisomerasa) a la etapa correspondiente A ~ tram-COA de la beta oxidación para la subsiguiente hidsatacidn y oxidacibn. del extremo carboxilo de la molécula ha sido detectada en el tejido encefático. un intermediario en la beta oxidación. la eliminación de un carbono a la vez.f A Z ~ n s e n o i ~ o ~ isomerasa tarnbikn atacará a la doble ligadura A'-iruns para producir A~-rruns-enoil-COA. el proceso captiira como fosfato de alta energia alrededor de 68% de la energia total de combustiiin del acido graso. esta primera deshidrogenación no se vincula directamente con la fosforilación y la generación de ATP pero. rindiendo una ganancia total de 1 29 moles de ATP por mol de palmitato.

2 mmollL. como la formación de cuerpos cetbni- 4 Ciclos de p oxidacibn 5-Aoetil-COA ! Figura 24-4. 3-hidroxi-3-metilglutaril-COA (HMG-COA) es un intermediario en la vía de la cetogénecis Las enzimas que forman cuerpos cet6nicos estan relacionadas principalmente con las mitocondrias. Estas tres sustancias se conocen colectivamente como cuerpos cetánicos (se designan como cuerpos acetónicos o [incorrectamente*] "cetonas") (figura 24-5). es decir. El flu-jo neto de cuerpos cetónicos del hígado a tos tejidos extrahepaticos proviene de un activo mecanismo enzimatica en el hígado para la produccion de cuerpos cet6nicos acoplado con una actividad muy baja de las enzimas encargadas de su utilizacidn. En general la perdida por la orina es menor de 1 mg por 24 horas en el ser Iiumano. no contribuyen de manera importante a la producción de cetosis en estas especies.cis cis C 0 S . La concentración de cuerpos cetónicos totales en la sangre de mamlferos bien arimentados por lo común no excede de 0. por ejemplo. A l principio se creía que sólo se formaba una molécula de acetoacetato a partir de los cuatro carbonos terminales de un ácido graso despues de oxidacibn. La situacidn inversa tiene lugar en los tejidos extrahepaticos (figura 2 4 4 ) . Acido linoleiw. por ejemplo cl piniuato y la fructosa. La proporcibn E-hidroxibutirato]/[acetoacetato] en la sangre varia entre 1 : 1 y 10:1 . Las fuentes extrahepáticas de cuerpos cetbnicos. el hígado parece ser el Unico 6rgano en los no rumiantes que agrega una cantidad significativa de cuerpos cet6nicoc a la sangre. el estado redox. para explicar tanto la produccihn de mlis de un equivalente de acetoacetato a partir de un hcido graso de cadena larga. El acetoacetato continuamente se descarboxila de manera esponthnea para dar acetona. Más tarde. isocitrato deshidrogenasa y MAD(P)H transhidrogenasa * El termino "ceionaq" no debe usarce debido a que el 3-hidroxibutirato no es iinacetona y ha! muchas ceicinas en la sangre que no son ciicrpos cetónicos. El acetoacetato y el 3Aidroxibutirato son interconvertidos por la enzima mitocondrial D(-)-3-hidr~xibutirato deshidrogenasa.COA - 3 Ciclos de B oxidacibn 0 3 AwtiI-CoA a2-trans-i\6-c~s-Dienoi~-~o~ (A~-tmns-Enoil-COA estado de a-oxidación) Un uclo de p oxidacibn Acetil-COA produce cantidades considerables de acetoacetato y de D(-)-3-hidroxibutirato (beta bidroxibutirato). En los rumiantes es algo mayor debido a la formacidn en la pared del mmen de 3-hidroxibutirato a partir del ácido butirico [un producto de la fermentación en los rumiantes). el equilibrio es controlado por la proporción mitocondrial del fNADt] a WADH]. Los tejidos extrahepAticos los utilizan como sustratos respiratorios. Los Acidos grasos h4-ciso los que forman n4-us-enoil-COA entran a la via en la posicibn que se muestra. . Secuencia de reacciones en la oxidacibn de Bcidoc grasos insaturados. El NADPH para el paso de la dienoil-COA reductasa es tomada de fuentes intramitocondriaies como la acción del glutamato deshidrogenasa. el epitelio del rumen en los rumiantes. por elernplo. In vivo.

los resultados no sugieren que esta enzima sea limitante de la velocidad en la cetoh~nesis.CH.- cm- Figura 2 4 6 . La o(-)-3-hidroxibutirato deshidrogenasa es una enzima mitoconcirial cos a partir del acido acktico se propiiso que las unidades C2 formadas en la beta oxidación se condensaban entre si para formar acetoacetato. L SANGRE --+. el cuerpo cetonico predominante en la sangre y orina en la cetosis. ya sea directamente durante el curso de la beta oxidación o como resultado de la condensación de acetil-COA(figura 24-7). El acetoacetato está en equilibrio con el 1i(-)-3hidroxi butirato catalirado por la n(-)-3-hidroxibutirato dcshidrogenasa. (La vía principal está indicada por las flechas continuas ) .. cuantitativamente. Esto sucede exclusivamente en el epitelio del mmen y en el hígado. Así.- CH . Los átomos de carbono separados de la molécula de acetil-COA provienen de la molécula de acetoacetil-COA original (figura 24-71. Esto puede ocurrir por una invessiíin de la reacci6n de la densan para formar acetoacetil-COA. la 3bidroxi-3-metilglutaril-COA liasa. Ambas enzimas deben estar presentes en las mitocondrias para que se lleve a cabo la cetogénesis. Interrelaciones de los cuerpos cetbnicos. cet o~énesis 2 71 tiolasa donde dos moléculas de acetil-COA se con- Acetoaoetato a[-FJ-HtPROXfBUTiWTO UADH + W f CH. ronos EXTRAWEPATICOS Cuerpos cetaniws Cuerpos cetonicos cuerpos cetonicos del ácido cítrico Figura 24-6.*.Oxidació~1 de úcidos grasos. La presencia de otra enzima en las mitocondrias. dejando acetoacetato libre. utilizacion y excrecion de los cuerpos cetbnims. q u e s e e n c u e n t r a en la mitocondria d e muchos tejidos. Esta vía implica la condencacion de acetoacetil-COA con oua molécula de acetil-COA para formar HMG-COA catalizada por la 3-hidroxi-3-metilglutaril-COA sintasa.. Forrnacidn. surge la acetoacetíl-COA. que es el material inicial para la cetogénesis. Aunque la actividad de la HMG-COA liasa aumenta durante el ayuno. s e p a r a a la acetil-COA de la HMG-COA. incluyendo el hepático (figura 24-5). El n(-)-3-hidroxibutirato es. .

k. La acetoacetil-COA que se produce. (AGL. mas que a una deficiencia en . una gran proporcibn del consumo de oxígeno puede deberse a la oxidación de los cuerpos cetónicos.AGL Acii-COA ' I Ertefificacisn + r. una vez que se forma.3-hidroxi-3-metilglutaril ) Los cuerpos cetiinices se utilizan como combustible para los tejidos extrahepáticos Aunque el hígado cuenta con un activo mecanismo enzimático para la producci6n de acetoacetato a partir de acetoacetil-COA. a una concentracibn de aproximadamente 12 mmol/L..igiiceroi fosfolípido (Acetii- beta Oxidacibn COA^ Figura 24-7. Bcidos grasos libres. Los cuerpos cetónicos son oxidados en los tejidos extrahepáticos de modo proporcional a su concentraci6n en la sangre. saturan la maquinaria oxidatíva. En los tejidos extrahepliticos. es separada en acetil-COA por la tiolasa y oxidada en el ciclo del ácido cítrico como se muestra en la figura 2 4 4 . Cuando esto ocurre. Vias de cetogénesis en el hígado. cinato libre (figura 24-81. Si esta se eleva. donde es precursor en la síntesis del colesterol. La mayoría de las pruebas sugieren que la cetonemia se dcbc a la elevadaproducci6n de cuerpos cetónicos por el higado. E 1 acetato reacciona con la succinil-COA. no puede ser reactivado directamente en este 6rgano excepto en el citosol de su5 cklulas. la principal via de utilizacion para la activacihn del acetoacetato a acetoacetil-COA irnptica a la succinil-COA y a la enzima succinil-COA-acetoacetato COA transferasa. la oxidación de los cuerpos cetonicos aumenta hasta que. una via mucho menos activa. Esto explica la produccion total de cuerpos cet6nicos por el hígado. y la COA se transfiere para formar acetoacetil-COA. dejando suc. HMG.

En ta cetonemia moderada. Coma hay efectos que semejan el renal (aunque no hay verdadero umbral). en el hígado. Aunque el acetoacetato y el D(-)-3-hidroxibutirato se oxidan con facilidad por los te-jidos extrahepáticos. no de la cetonuria. La capacidad de esterificaci6n como un factor anticetogénico depende de la disponibilidad. tiene la facultad de extraer 30% o más de lbs ácidos grasos libres que pasan a través de él por !o que. In medición de la cetonemia. de precursores (figura 26-2) que suministran suficiente glicerol 3-fosfato.7 graso. la disponibilidad de glicerol 3-fosfato no limita la esterificacibn en hígados sin nutrientes. tamvoco se tiene información critica acerca de si las actividades i n vivo de las enzirnac que intervienen en la esterificacibn son limitantes de la veloci- LA CETOGENESIS ES REGULADA EN TRES PASOS CR~TICBS 1) Al principio.^: cerogénesis 2 73 Figura 24-8. No se sabe si su disponibi1idadchepática es siempre el factor limitante en la esterificación. los factores que regulan la rnovi!i7acirjn de los ácidos grasos desde el tejido adiposo son importantes en el control de la cetogcnesis (figuras 24-9 y 27-9). su utilización por parte de los tejidos extrahepáticos. el flujo por el hígado es sustancial. los experimentos con ratas despancreatizadas apoyan la posibilidad de que la cetosis en la diabetes grave puede empeorar por una capacidad reducida para catabolizar los cuerpos cetónicos. Sin embargo. La cetosis no ocurre i n vivo a menos que haya una elevación concomitante en la concentraci6n de hcidos grasos libres en la circulación que resulta de la lipólisis del triacilglicerol en el tejido . adiposo. Los ácidos grasos son los precursores de los cuerpos cetbnicos en el hígado. tanto en el animal alimentado como en ayuno. Transporte de cuerpos cetbniws desde el hígado y mecanismos de utilizacion y oxidación eii los tejidos intra hepatioos.Oxidación de cicrdo. cuando hay concentraciones altas de Acidos grasos libres. o se esterifican en triacilglicerol y fosfoiipido. Este brgano. 2) Uno de dos destinos esperan a los ácidos gracos libres despukc de su captacidn por el hígado y de ser activados a acil-COA: se oxidan en COz o en cuerpos cethnicos. Ios cuales varían entre especies y personas. la acetona es difícil de oxidar ir? vivo y una gran cantidad se volatili~a en los pulmones. Por tanto. No obstante. la pérdida dc cuerpos cetónicos a través de la orina es s610 un pequeño porcentaje de su produccidn y utilización. el control se ejerce en el tejido adiposo. es el método preferido para valorar la gravedad de la cetosis.

.. el cual aumenta en estado de nutrición. un mayor número es convertido en cuerpos cetonicos de modo proporcional y una cantidad menor es oxidada por la ruta del ciclo del dcido cítrico a COZ.. cuando hay nutrición adecuada. Partanto. cl indirecto es el aumento en la lipblisis en el tejido adiposo y la liberacibn dc ácidos grasos libres. carnitina palmitoiltransferasa l. El resultado directo de este decremento es la inhibición de la acetil-Coh carboxirasa en el higado mediante fosforilación covaIente. en tanto que solo se producen 33 moles de ATP cuando el acetoacetato es el producto final y sólo 21 moles cuando es el 3-hidroxibutirato.) dad de reaccibn. Regulacibn de la cetogenesic. (CPT-1.... cuando la oxidación de ácidos grasos aumenta..t .. la cetogenesis puede considerarse como un mecanismo que permite al higado oxidar grandes cantidades de hcidoc grasos dentro de un sistema de fosforilacion oxidativa al parecer estrechamente acoplado. m a n acil-COA en el higado e inhiben la acetil-COA carboxilasa (figura 24-1 0).. la beta oxidaciiin a partir de los ficidos gmos libres se controla por la compuerta de la camitina palmitoiltransferasa 1 en el interior de la mitocondria. al ticmpo que permite que una cantidad mayor de acil-COA sea beta oxidada. Conforme aumenta la concentracibn de ácidos grasos libres séricos. cuando lanutrición es adecurula. Por tanto. que inhibe la carnitina palmitoiltransferasa 1 (figura 24-10).. desinhibiendo a la eanitina palrnitoil-transferasa I. . Los ácidos grasos libres. cuando la oxidacion de hcidos grasos se encuentra deprimida.... permanece constante. sin aumentar su gasto total de energía. Malonil-COA es un intermediario inicial en la biosintesis de hcidos grasos (figura 23-l)... @ a @. hay lipogénecis activa y concentración elevada de malonil-COA.... Su actividad es escasa cuando hay una nutrición adecuada. del inglés vepy Iow c l e n ~ lipoproteins). Estos resultados pueden explicarse por el hecho de que la actividad de la carnitina palmitoiltransferasa 1 en la membrana mitocondrial exterior. Es posible apreciarlo cuando se considera que la oxidacibn completa de un mol de palmita10 conduce a una producción neta de 129 moles de ATP por la via de la beta oxidacidn y la produccibn de COZen el ciclo del acido citrico (vease antes). conforme la concentración de Acidos grasos libres aumenta con el principio de la inanicihn. Al parecer no es un proceso regulador ya que ni los hcidos grasos librec ni sus intermediarios en la via de esterificación a triacilglicerol (figura 26-2) se acumulan jamás en el hígado.. la acetil-COA se inhibe y malonil-COA disminuye. muestra tres etapas cruciales en E a via del metabolismo de los acidos grasos libres (AGL) que determinan la magnitud de la cetogenesis.. lo cual bloquea la beta oxidacibn. Estos procesos se refuerzan en la inanicibn por una caída en la proporción insulinaJglucag6n. Por tanto. Los hígados con riego sanguíneo de ratas hambrientas oxidaron considerablemente mlis hcidos grasos marcados con C" a ~ 0 ~ cI4 ' "cuerpos cetonicos y esterificaron menos como C'Lacilglicerol que los órganos de ratas nutridas.La reparticihn de la acetil-COA entre la via cetogtnica y la de oxidación a COIes regulada de tal modo que laenergia libre total que resulta de la oxidacibn de los hcidos grasos atrapada en e1 ATP.... entran a la célula hepática en concentraciones bajas y son ecterificados casi en su totalidad a acilgliceroles y transportados fiera del hígado cn Eipoproteinas de muy baja densidad (VLDL. Se han planteado otras varias hipótesis para explicar la desviación de la oxidación de los acidos . regula la entrada de gmpos acilo de cadena larga en las rnitocondrias antes de la beta oxidación (figuras 24-1 y 24-1 0 ) ..... se eleva en ayunas. i~ Sin embargo... la acetil-COA formada en la beta oxidacion se oxida en el ciclo del ácido cítrico o entra en la vía de la cetogénesis para formar cuerpos cetbnicos... inhibe a esta enzima. 3) A su vez. y se esterifica el remanente de la captación de ácidos grasos libres no oxidados. SANGRE AGL Cuerpos cetbnicos Figura 24-9.despuks de su capt a c i ~ nf . los cuales. asimismo...

así como la cetosis del ganado. Esto puede ocurrir debido a un incremento en la relacidn ~ADH]/[NAD']. Regulacion de la oxidacibn de Bcidoc grasos de cadena larga en el higado (AGL. producido a su vez por la elevación de la k t a oxidación. los pacientes con aciduria pierden grandes cantidades de carnitina. podria restar capacidad al ciclo del Acido cítrico para metabolizar la acetil-COA. Acil-CzA beta Oxidacibn Mitocondria . que disminuye la concentración de oxalacetato. en particular dentro de las mitocondrias. una caída en la concentracibn de oxalacetato. ASPECTOS CC~NICOS La oxidación defectuosa de los ácidos gracos da origen a enfermedades que con frecuencia se acompañan de hipoglucemia La deficiencia de carnitina puede presentarse en particular en recién nacidos -y de modo especial en lactantes prematuros. En consecuencia. El tratamiento es mediante suplementación . con disminución de la concentración del oxalacetato. . ácidos grasos libres. En algunos individuos. . F CARNITIIVA PALM lTOlL TRANSFERASAj I . graso5 de la formaci6n de COzhacia la cetogdnesis.Oxidaci&~ de úciu'os grasos: cetog&ne. que cataliza la conversion del piruvato en oxalacetato. . lapotenciación de esta. --. la deficiencia de carnitina indica un requerimiento dietético semejante al de las vitamina. lipoproteinas de muy baja densidad. No obstante. que se excreta conjugada con los acidos orginicos. debe haber suficiente oxalacetato para iniciar la reacciiin de condensacion en el ciclo del ácido cit~ico. puesto que el oxatacetato se encuentra tambitn en la vía principal de la gluconeogénesis.} Los efectos reguladores. Teóricamente. lo cual puede afectar el equilibrio entre el oxalacetato y el malato. que conducen a la acurnulaci6n de lipidos con debilidad muscular. Glucagon Malonil-COA Insultna -. Acetil-COA - Coz Figura 24-10. Su pérdida también puede darse en hemdiálisis.debido a hiosíntesis insuficiente o escape renal. Utter y Keech han mostrado que la piruvato carboxilasa. cuando existen cantidades importantes de acetil-COA. positivos @ y negativo O están representados por líneas punteadas y el flujo de sustrato por líneas continuas.~is 275 AGL Carbohidratos ) ) Acetil-COA Esterificac16n Acll-CaA t f H~GADO Ac~lgliceroles ACETIC-COA . es activada por la acetil-COA. Los signos y sintomas de deficiencia incluyen episodios peribdicos de hipoglucemia causados por la reduccion de la gluconeogénesis que resulta de una oxidación defectuosa de hcidos grasos y de cetogénesis en presencia de concentraciones plasmáticas elevadas de AGL. VLDL. puede ocasionar las formas graves de cetosis que se encuentran en la diabetes. Krebs ha sugerido que.

Se conocen bien los defectos en Ios genes para la 3-cetoacil-COA tiolasa. Este defecto causa la acumulación de ácidos poliénicos Ct6 a Cis en el tejido encefalico. Forrnas no patológicas de cetosis se encuentran en condiciones de alimentación rica en grasas y despues de ejercicio extenuante durante el periodo posabsorción. La acetil-COA se oxida en el ciclo del ácido citrico. Por otro lado. La enfermedad jamaiquina del vbmito es causada por comer fruta sin madurar del árbol a h e (Blighia sapidaj que contiene una toxina. ningún otro trastorno donde se presenta la cetosis difiere cualitativamente de este patrbn general de metabolismo. un constituyente de la clorofila que se encuentra en alimentos vegetales. La aciduria dicarboxilica se caracteriza por la excreción de Bcidoc omega dicarboxilicos C ~ IyD por la hipoglucemia no cetbtica. pero en este hltimo las cantidades de carnitina son adecuadas y su origen se desconoce. que puede ser mortal en diabetes sacarina no controlada. Esto altera la beta oxidacibn.jidos.oral de carnitina. causando cetoacidosis. la cual también afecta la degradacibn de leucina. pero incrementa la omega oxidación de acidos grasos de cadena larga y media. que es glucogenica. en su forma más grave.4 deshidrogenasa de ácidos grasos de cadena media y corta. un arninohcido cetogénico (capítulo 32). No obstante. toxernia gravidica en ovejas y cetosis en vacas cn lactancia. aunque también presenta una perdida generalizada de las funciones peroxisdmicas. En la actualidad se sabe de deficiencias de acil-COA deshidrogenasas de cadena larga y media. junto con deficiencias de hidroxiacil-COA deshidrogenasa y 2. a ácidos dicarboxilicos de cadenas media y corta. al hígado. También se han ohservado errores innatos de la cetogénesis. La forma más simple de cetosis tiene lugar en la inanicihn y se debe a la deplecibn de los carbohidratos disponibles acoplada con la movilizacic5n de ácidos grasos libres. El trastorno global se llama cetosis. formado del fitol. Por su pme. su excreción continua en cantidad produce cierta pbrdida de amortiguamiento catiónico (a pesar de la produccibn de e o n i a c o en el riñón) que agota de manera progresiva la reserva de álcali. las sulfonilureas hipoglucémicas (glihurida [glibenclamida]y tolbutamida) reducen la oxidación de iicidos grasos por medio de la inhibición de la camitina palrnitoiltransferasa. 2) La oxidación de hcidos grasos de un numero impar de carbonos produce acetil-COAmás una molkcula de propionil-COA. inhibiendo la beta oxidación y causando hipoglucemia con excreción de ácidos mono y dicarboxilicos de cadena media y corta. La enfermedad de Refsum es un trastorno neurolbgico poco común causado por acumulación de ácido fithnico. como es el caso de la deficiencia de H MC-COAliasa. la cual inactiva a la acil-Co. !os cuales son excretados. debido a Ia incapacidad para oxidar ácidos grasos de cadcna larga en los peroxisomac. RESUMEN 1) La oxidaci6n de los ácidos grasos en las mitocondrias produce cantidades abundantes de ATP por un proceso llamado beta oxidacibn. Al parecer. pero las personas con esta enfermedad tienen un defecto hereditario en la alfa oxidación que permite la aciimulaci6n del hcido fithnico. aunque: en el aspecto cuantitativo puede exagerarse para producir los estados patológicos encontrados en diabetes sacarina. una alfa oxidación inicial elimina at grupo metilo. El sindrorne de: Zellwegcr (cerebrohepatorrenal) se presenta en individuos con una rara ausencia hereditaria de peroxisomas en todos los te. hipoglicina. por ejemplo. . la cual conduce a excreción urinaria de 2-truns-4-crs decadienoilcarnitina como consecuencia de la deficiencia de E a beta oxidacibn de ácidos grasos pol iinsaturados. la deficiencia de !a beta oxidación-COA deshidrogenasa de cadena larga puede ser una causa de hígado graso agudo en el embarazo.4-dienoil-COA reductasa. respectivamente. con formación adicional de ATP. Los ácidos acetoacético y 3-hidroxibutirico son ácidos moderadamente fuertes y necesitan ser amortiguados cuando se presentan en la sangre o en los tejidos. que luego son acortados por la beta oxidacibn. el cual escinde en secuencia las unidades de acetil-COA de las cadenas de acidos grasos. como la deficiencia en la síntesis de hcido biliar y de &eres de Iípido~. Su causa es la falta de acil-COA deshidroeenasa de cadena media en lar " mitocondrias. Los síntomasson semejantes al síndrome de Reye (encefalopatía con degeneracidn grasa de las vísceras). la deficiencia de carnitina palmitoi~transferasaF1 afecta de manera primaria al músculo esquelético (debilidad y necrosis con mioglobiniiria) y. La cetoacidosis se debe a la cetosis prolongada La presencia en sangre u orina de cantidades de cuerpos cetónicos mayores de las normales constituye cetoancmia (hipercetonemia) o cetonuria. la deficiencia de carnitina palmitoiltransferasa 1 afecta sólo al hígado y conduce a reduccion de la oxidacihn de acidos grasos y cetogcnesis con hipoglucemia. Normalmente. En un patrhn semejante. Los defectos hereditarios en las enzirnas de la beta oxidación también ocasionan hipoglucemia. coma e higado graso. El ácido fithnico contiene un grupo metilo en el carbono 3 que bloquea la beta oxidación.

Biochcm Soc Trans 198 1 .10R1:109. 16 320.14:343. b) actividad de carnitina palmitoiltransferasa 1 en el hlgado. pero grave en diabetes sacarina y en la cetosis de rumiantes. (editors): The .2&:35. REFERENCIAS 3rd ed. la cual determina la proporción del flujo de hcidos grasos hacia oxidación en lugar de esterificacilin. pero siilo hasta octanoil-COA que luego debe ser transferido a las mitocondrias para oxidacihn ulterior. Treem WR et al. Biochim Biophys Acta 1991.h droxyacy ~ 1-coenayme A dehydrogenase deficiency. Reddy JK. Scriver CR et al. 1983. hlayes PA. McGraw-Hill. 7th ed. 4) Los cuerpos cetónicos (acetoacetato.49:395. 8 ) La cetosis es leve en la inanicihn. Enyer PD (editor): The En-?mes. Mepatology 1994. 6 ) La cetogdnesis es regulada en tres etapas criticas: a) control de la movilización de acidos grasos libres del tejido adiposo. Havik R: p-oxidation of polyunsatured fa@ acids. Laker ME: Rcgiilation of ketogenesis in the liver.OxidaciBn de ácidos grasos: cetogénesis 2 77 3) Los peroxisornas tienen la propiedad de oxidar ácidos grasos de cadena muy larga. Poulos A: Lipid metabolism in Zellaeger's Syndrome. . 19:339. infiltración de grasa de órganos e hipocetonernia.9 339.: Acute fatty livcr ef pregnancy and long-chain 3 . Vol 16 of Lipid E ~ y m o l o pAcadcmic . Annu Rev Nutr 1994. Osmundsen H. Schoite HR et al. f'ress. Schulz H: Reta oxidation oT faiiy acids. Mannaerts GP: Perovisomal lipid metabolism. Foster DW: Regulation ofhepatic fatty acid oxidatiun and ketone body production.28:35 1 . Annu Rev Riochem 1980. HMG-COA sintasa y HMG-COA liasa. 3-hidroxibutirato y acetona) se forman en las mitocondrias hephticas cuando hay un índice elevado de axidacion de hcidos grasos. c) reparticion de acetil-COAentre las vías de cetog4nesis y ciclo del Acido cítrico. La vía de la cetogknesis comprende la formacion y degradacion de 3hidroxi-3-metilglutaril-COA (HMG-COA) por acc i o n d e dos e n z i m a s c e t o g é n i c a s claves. 1995. 7) Las enfermedades relacionadas con el deterioro de la oxidacion de ácidos grasos conducen a hipoglucernia. Biochem Soc l'rans 1988.: Primary carnitine deficiency. McGarry JD. 5) Los cuerpos cetónicos son energéticos importantes en los tejidos extrahepáticos. I Clin Chem Riochem 1990.Metaholic and holeculnr Rrrces o f lnherited fluear~. I'rog Lipid Rcs 1989.

ciertos ácidos grasos poliinsaturados derivados en última instancia de fuentes vegetales. parte.) Otros ácidos grasos polienoicos de C2n. Es de notarse que todos los enlaces dobles presentes en los ácidos grasos insaturados naturales en los mamiferos. por tanto. capitulo 16. Tales &cidos grasos esenciales dan origen a los acidos grasos eicosanoicos (&). Estos pueden ser derivados de los ácidos oleico. por ejemplo. Por esto requieren ingerir en los alimentos. actiian mediante la inhibición de la síntesis dc prostaglandinas. Se ha identificado a la sustancia de reaccihn lenta de la anafilaxia (SRL-A} como una mezcla de leucotrienos. linoleico y alfa linolénico mediante el alargamiento de las cadenas. como la aspirina. que sugieren una intervencicin importante en las reacciones aldrgicas y en la inflamacibn. los tejidos animales tienen una capacidad limitada para desaturar a los ácidos grasos. Los antiinflamatorios no esteroides.uñados y de A o s eicosanoides Peter A. lo cual indica que sería posible modifícar el curso de la enfermedad por medio de la alimentacibn. PhD. (Para una revisión de la nomenclatura de los ácidos p s o s . los leucotrienos y las lipoxinas. de su fluidez. Una proporción alta de ácidos grasos poliinsaturados a Acidos grasos saturados (proporcibn P:S) en la alimentación es un factor importante para reducir el colesterol plasmático por medios dietéticos y se considera benifico en la prevención de la enfermedad coronaria. De modo similar. Por su LOS MAM~FEROS NO PUEDEN SINTETIZAR ALGUNOS ÁCIDOS GRASOS POLIINSATUMDOS POR LO CUAL SON ESENCIALES EN LA NUTRICIÓN En la figura 25-1 se muestran algunos Iicidos grasos insaturados de cadena larga. Las principales actividades fisiol6gicac de las prostaglandinas son como reguladores de la acci6n de la adenililo ciclasa. Cz: y Cz4 pueden detectarse en los tejidos. es posible influir en el tipo de cicosanoides sintesiz.ados. IMPORTANCIA BIOMÉDICA El contenida de iicidos grasos insaturados en un lipido natural es un determinante principal de su punto de fusibn y. son de la configuración cis. Los acidos palmitoleico y oleico no son esenciales en la alimentacidn. 1 ) en el control de la agregaclon plaquetaria y 2) en la inhibicibn del efecto de la hormona antidiuretica en el riR6n. los tromboxanos. Estos constitiiyen las prostaglandinas. los fosfolipidos de la membrana celular contienen hcidos grasos insaturados importantes en la conservación de la fluidez de la misma membrana. Los experimentos con el palmitato marcado han demostrado que la marca penetra libremente al interior . Las prostaglandinas y tromboxanos son hormonas locales sinteti~adas con rapidez en el momento en que se necesitan y que actiian cerca de sus sitios de sintesis.de los que dwivan familias de compuestos conocidos como eicosanoides. DSc Comparados con los vegetales. debido a que los te.jidos pueden introducir una doble ligadura en la posicidn A9 en el Acido graso saturado correspondiente. Variando las proporciones dietkticas de los diferentes Bcidos grasos poliinsaturados. de importancia en el metabolismo de los mamíferos.insa+. los leucotrienos causan contracción mizccular y tienen propiedades quimiotácticas. Mayes.

los números m (porejemplo. y A' (contando desde la terminal carboxilo: capítulo 163. ~ A6 . pero se haya ausente de los ácidos Iinoleico. Por el contrario. es decir. Estructura de algunos ácidos grasos insaturados. Aunque los átomos de carbono en las moléculas ecthn numerados de manera convencianal.4.) de los acidoc pahitolcico y oleico.B. por lo que deben incluirse en la dieta. por ejemplo. incluyendo al ser humano. Estos son los únicos ácidosgmos conocidosque son esenciales para lanutricion completa de muchas especies de animales.dobles ligaduras en las posiciones A ~ A . se considera que varios tejidos incluyendo al hígado. los vegetales pueden introducir dobles ligaduras en las posiciones &'l y A". en consecuencia se conocen como Acidos grasos esenciales en la nutrición. en el retículo endoplacCOOH 20 Estearoil-COA+ Enzima *Acido amquidbnico (cii6.A ~ ~ ~ f ~ ' . que el acida U-linolénica contiene dobles ligaduras comenzando en el tercer carbono desde el metila terminal.11-14 Estearoil-Enz Ácido eicosapentaenoico ((03. y alfa linolénico. y de esta manera pueden sintetizar acidos grasos esenciales en la nutrición.20:5. su cadena es de 18 carbonos w n tres dobles ligaduras en los carbonos novena. LOS ÁCIDOS GRASOS MONOlNSATURADOS SE SINTETIZAN POR UN SISTEMA DE DESATURASA A' En cuanto a los ácidos grasos monoinsaturados no esenciales. duodécimo y decimoquinto desde el carboxilo temlnal ("Clasificado como "hcido graso esencial". En la mayoria de 10s animalec. Un sistema enzimAtico. La primera doble ligadura introducida en un acido graso saturado es siempre en las cercanias de laposicibn A'. a partrr del carboxilo terminal. pero nunca más allá de la posición A'.El acida araquidónico puede formarse a partir del hcido linoleico en la mayoria de los mamíferos (figura 2 5 4 ) . donde debe clasificarse como ricido graso esencial. ~ Figura 25-1. d5. A9 desaturasa (figura 25-2). 20. pero no en los felinos. es posible introducir COA SH hansferasa Oleil-COA+ Enzima Figura 25-2. La informacibn entre paréntesis muestra. Sistema de desaturasa rnicrosbmica 3" . ~ ~ . se encargan de su forrnacibn a partir de ácidos grasos saturados. w 7 en el Acido pafmitoleico) se calculan desde el extremo opuesto (del metila terminal) de las mol8culas.

capitulo 13). son capaces de sintetizar completamente la familia omega 9 (ácido oleico) de ácidos grasos incaturados mediante una combinación de alargamiento de la cadena y desaturacion (figura 25-3 ). Este último forma araquidonato mediante una deshidrogenacibn ulterior. estos hcidos necesitan ser surninistrados en la dieta para que se efectúe la síntesis de los demás miembros de la familia omega6 y omega3 de los ácidos grasos poliinsaturados. El sistema deshidmgenantc es semejante al descrito antes para los acidos grasos samrados. respectivamente. Los Bcidos grasos poliinsaturados m 9 sólo se vuelven cuanttativamente importantes cuando los ácidos Iinoleico y a-linol&nico se restringen en la dieta Esto se debe a que cada serie compite por los mismos sistemas enzirnátims y las afinidades decrecen desde la familia 0 3 a la 09. Biosintesis de las series w9.para producir eicosatrienoato (dihomo gamma linolenato).~anni&s 28 1 mico catalizara la conversi611 de palmitoil-CoA o estearoil-CoA en palmitoleil<oA y oleiE<aA.(06 y m3 de Bcidos grasos poliinsaturados. puesto que son incapaces de sintetizar ácidos linoleico (omega6) o alfa IinolCnico (omega3). por tanto. (e. excepto en las bacterias.^ iniaturadmy de los eico. inhibicibn). Sin embargo. En los animales. al estar ausentes las desaturasas necesarias. NADPH o el NADH son necesarios para la reaccibn. Así. 18.Mefabolismo de los Ucidos graso. Acido . LA S~NTESIS DE ÁCIDOS GRASOS POLIINSATURADOS IMPLICA A LOS SISTEMAS ENZIMATICOS DE DESATURASA Y ELONGASA Los dobles enlaces adicionales introducidos en los ácidos grasos monoinsaturados siempre se separan uno de otro por un grupo metileno (intempcidn metilénica).r .2 - 20:2 * 20:J----+ 22:3 m--+- + 22-4 la deficiencia de acidos grasos esenciales 20. dado que los animales tienen una A' desaturasa. seguida por la adición de una unidad de dos carbonos de la malonil-COA en el sistema microsiimico de alargamiento de las cadenas (figura 2 3 4 ) ) . El linoleato puede convertirse en araquidonato (figura 2 5 4 ) .2 E /@ I I I Ácido a-linolbnico Figura 2 5 3 . Al principio. la vía es por deshidrogenacibn del éster COA a aavks de gamma linolenato. . Las enzimas parecen ser las de un sistema típico de monooxigenasa que involucm al citocromo hs (hidroxilasa. pero en las plantas pueden tambien ser introducidos entre el enlace doble existente y el carbono omega (metito terminal).Cada paso es cataltzado por los cisternas rnicros6rnims de alargamiento de la cadena o sistema desaturasa. omitirse cuando hay linoleato en la alimentación. El requerimiento nutricional para el araquidonato puede. El oxigeno. los enlaces dobles adicionales son introducidosentre el enlace doble existente y el grupo carboxilo.

ademas de la fomaci6n de prostaglandinas y leucotrieno (vease después). ornega3. Las funciones de los ácidos grasos esenciales parecen ser diversas. Los gatos no pueden reafizar esta wnversibn ya que no poseen ri6 desaturasa y deben recibir araquidonata en su atimentacibn. manifeszaban reduccibn de lavelocidad de crecimiento y deficiencia reproductiva.. aunque no bien definidas. alfa linolénico y araquidbnico a la alimentaci6n. aunque el trastorno no es mortal.NADPH) DE AiARGAMIEN'TO O7 + NADH + Ht-.que se sintetiza a partir de Acido alfa linolknico o se obtiene de manera directa de aceites de pescados.o C-S . existe en concentraciones elevadas en la .2:6). necrocis de la cola y lesiones en el sistema urinario. Converstbn del linolealo en araquidonato. SE PRODUCEN SINTOMAS DE DEFICIENCIA En 1928. CUANDO LA DIETA CARECE DE ÁCIDOS GRASOS ESENCIALES (AGE). Los hcidos grasos esenciales que se hallan en los lipidos estructurales de la cklula se relacionan can la integridad estructural de la membrana rnitocondrial. Estos ácidos grasos se encuentran en concentraciones altas en diversos aceites vegetales (cuadro 16-21 y en cantidades pequeiias en los canales de animales. Evans y Burr notaron que las ratas alimentadas con una dieta purificada libre de lipidos a la cual se habían afíadido las vitaminas A y D. Posteriores características diag- n6sticas del sindrome incluyen piel con escamas. 1 (Maionil-COA.C O A IB II O7 + NADH + H+. La desaturacibn y el sistema de alargamiento de las cadenas están muy disminuidos en el estado de ayuno. Las membranas celulares contienen hcido araquid6nico que constituye entre S y 15% de los hcidos grasos de fosfolípidos. 1 C-S m -COA Figura 2 5 4 . El ácido docosahexaenoico (DHA. Trabajos posteriores mostraron que el sindrome de deficiencia se curaba mediante la adicibn de hcidos linoleico. en la administración de glucagón y adrenalina y ante la falta de insulina como en la diabetes sacarina tipo 1.

principalmente en E a posición 2. la mayoria de los fosfolípidos contiene al menos rnolkculas de éste. Hay tres grupos de eicosanoides (cada una conteniendo PG.~anoides 283 retina. El araquidonato. que habitualmente deriva de la posición 2 de los fosfolípidos de la membrana plasmhtica. trornboxanos (TX) y leucotrienos (LT) y aipoxinas (LX) (capítulo 16). margarina) plantea la interrogante respecto a su seguridad como aditivos de alimentos. La aspirina. La actividad de los ácidos grasos esenciales y la producción de prostaglandinas está correlacionada Aunque existe una notable comlaci6n entre Ia actividad de ácido graso esencial en varios hcidos grasos y su propiedad de convertirse en prostaglandinas. o directamente del araquidonato y eicosapentaenoato en la dieta (figura 2 5 4 ) . Sus efectos a largo plam en el ser humano son dificiles de valorar. pero la presencia de cantidades abundantes de ácidos grasos trans-insaturados en los aceites vegetales parcialmente hidrogenados (por ejemplo. El producto de la vía de la ciclooxigmasa. Al parecer la gran fluidez resultante se necesita para el funcionamiento de la rodopsina.Metaboll~mo de los ácidos grasos insaturudosy de los eico. Sus vías metabólicas son divergentes. Hasta 15% de hcidos grasos tisulares se han hallado en la configuracibn bram durante las necropsias. Son metabolizados más como hcidos saturados que como hcidos insaturados de forma cis. ningún efecto grave ha sido comprobado. LOS EICOSANOIDES SE FORMAN DE ÁCIBOS GRASOS BOLllNSATURADOS C20 El araquidonato y algunos otros ácidos grasos Czocon enlaces interrumpidos por metilenos dan origen a los eicosanoides. Esto puede deberse a su conformaci6n semejante de cadena lineal (capitulo 16).' '-eicosatrienoico (figura 25-31. los ácidos grasos esenciales se hallan presentes en los fosfolipidos. En los pacientes con retinitis pigmentosa se encuentran valores sanguíneos bajos de DHA. es convertido en las prostaglandinas D. Los recikn nacidos prematuros tienen una baja actividad de A4 desaturasa. donde se originan por la accihn de los rnicroorganismos en et turnen. Pasa diagnosticar el grado de deficiencia de los ácidos grasos esenciales puede usarse la proporción trieno:tetraeno en los lipidos plasmáticos. linoleato y alfa tinolenato.la cortezacerebral. Cada tipo celular produce una sola clase de prostanoide. Sin embargo. tos testículosy e! esperma El DEIA se requiere en particular durante el desarrollo cerebral y es suministrado a través de la placenta y la leche. En el aspecto físiológico. LA S~NTESIS DE PROSTANOIDES SE E F E C T ~ A POR LA V ~ A DE LA CICLOOXIGENASA La sintesis de prostanoides (figura 25-7) implica el consumo de dos moléculas de 0 7 catalitadas por la prostaglandina-endoperbxidosintasa. La fÜnci6. al parecer los hcidos grasos esenciales no ejercen todos sus efectos fisiolbgicos a travds de la síntesis de estas últimas. los hcidos pol ienoicos no esenciales de la serie omega9 reemplazan a los ácidos grzisos esenciales en los fosfolipídos. que consiste en activacion por un fotbn que produce movimientos laterales y rotatorios dentro de la membrana. TX2. como resultado de la actividad de la focfolipasa A2 (figura 26-6).n de los ácidos grasoc esenciales en . tiende a elevar las concentraciones de LDL y bajar las de HDL y por tanto se contraindican en relación con el incremento de aterosclerosisy enfermedad coronaria. En muchas de sus funciones estructurales. compuestos activos de manera fisiológica y famacológica. compitiendo la síntesis de las series PG2 y TX: (prostanoides) con la de LT4 y LX4 por el sustrato araquidonato.LT4 y LXs. sc considera que actiian como hormonas locales que funcionan a travds de receptores enlazados a proteína G para estimular sus efectos bioquímicoc. Los ácidos grasos trans pueden competir con ácidos grasos cis Se han encontrado pequehas cantidades de ácidos p o s con insaturación truns en las grasas de los rumiantes. Estas dos vías se conocen respectivamente como la via de la ciclooxigenasa y la de la lipoxigenasa (figura 25-5). En la deficiencia de hcidos grasos esenciaIes.*. Los hcidos grasos trans-poliinsaturados no poseen actividad de ácido graso esencial por lo que pueden antagonizar el metabolismo de los hcidos grasos esenciales y agravar su deficiencia. otros Iípidos complejos y membranas. en particular el hcido A'. hasta la fecha. Los segmentos exteriores de los bastones de la retina contienen concentracionesmuy altas de DHA. la indometacina y el ibuprofeno inhiben a la ciclooxigenasa. A este respecto. E y F así como en el tromboxano (TXAz) y la prostaciclina (PGI2). conocidos como prostaglandinas (PC). es e[ sustrato para la síntesis de los compuestos PGz. lo cual reduce su capacidad para sintetizar DHA a partir de precursores de ácidos grasos n-3. la cual posee dos actividades enzimhticas separadas.. cidooxigenasa y peroxidasa. un endoperóxido (PGH). TX. aunque han estado en la alirnentaci6n humana por muchos aííos. LT y posiblemente LX) que con sintetizados de ácidos eicosanoicos Czoderivados a partir de los ácidos grasos esenciales.

Sin embargo. incluyendo ácido alfa Iinolénico. L a eliminación subsecuente del glutamato y la glicina genera en secuencia a los leucotrienos D s y L. Conversión del Acido araquidbnico en prostaglandinas y tromboxanos por la vía de la ciclooxigenasa y en leucotrienos y lipoxinas por la vía de la Iipoxigenasa. dando origen a hidroperoxidos (HPETE). Las deficiencias atribuibles a falta de ácido5 grasas esenciales.Fosfollpldo de la membrana . es decir. Ieucotrienos. ocurren también en pacientes que reciben exclusivamente nutricion intravenosa pobre en lipidos por periodos Iargos. LOS LEUCoTRIENoS Y LAS LIPOXINAS SE FORMAN POR LA VIA DE LA LlPOXlGENASA Los leucotrienos son una familia de trienos conjugados que se forman a partir de hcidos eicosanoicos en los leucocitos. los cuales sblo inhiben la via de la ciclooxigenasa. plaquetas y macrófagos por la vTa de la Iipoxigenasa en respuesta a estimulos inmunologicos y no inmunoIógicos (figura 25-31. 12 y 15 del ácido araquidbnico. La ciclooxigenasa es una "enzima suicida" La "suspensibn" de la síntesis de prostaglandinas se logra en parte por una propiedad notable de la ci- clooxigenasa: la de catalizar su propia destt-ucci~n. son mejores agentes antiinflamatorios que los medicamentos análagos de la aspirina. se-observan síntomas cutheos y deterioro del transporte de lipidos. desarrollaron defectos cutaneos que se curaron mediante la administracibn de linoleato. cilulas de los rnastocitomas. es una "enzima suicida". Varias lipoxinas (LXA4 a LXE4) se forman de manera similar a la descrita antes para los leucotrienos. que introduce mas oxigeno en la molecuIa. El esquema indica por q J los esteroides que inhiben la produoción total de los eicocanoides. Este ultimo se forma por la adicibn del péptido glutation mediante un enlace tioéter. ASPECTOS CL~NICOS El ser humano también muestra síntomas cuando tiene deficiencia de ácidos grasos esenciales En seres humanos cuyas dietas carecen de los ácidos grasos esenciales. oor ejemplos. Solo la 5-lipoxigenasa forma .adrenalina. Las lipoxinas con una familia de tetraenos conjugados tambKn presentes en los leucocitos. las cuales no alivian los síntomas de deficiencia de los hcidas prasos esenciales y un sindrome por esta deficiencia no es causado por inhibicibn crbnica de síntesis de prostaglandinas. Tres diferentes lipoxigenasas (dioxigenasas) insertan oxigeno en las posiciones 5. trombina o \ Corticosteroides antiinflamatorios Leucotrienos y llpoxlnas Brostaglandinas y tromboxanoc Aspirina lndometacina Ibuprofeno Figura 2 5 6 . FOSFOLtPhm bradicinina. El bloqueo de la a c c i ~ n sulfasalacina o indometacina puede prolongar la vida media de las prostaglandinas en el cuerpo. La inactivacibn de las prostaglandinas es ripida. La deficiencia puede prevenirse mediante la ingestión de un ticido graso esencial de I a 2% del requerimiento calórico total. no se ha informado de signos de deficiencias de Acidos graos esenciales. Se piensa que los antiinflamatorios esterordes inhiben la fosfolipasa A2 por ~nduccibn de una proteína rnhibidora llamada Iipocortina la fortnacibn de membranas no se relaciona Con la formacidn de prostaglandinas.que a su vez es metaboli~ado a leucotrieno R4 o a C4. La presencia de la enzima 15-hidroxiprostaglandina deshidrogenasa en l a mayoría de los tejidos de mamíferos es quizh la causa de esta enzima con principal. En los adultos que subsisten con alimentacion ordinaria. lactantes a~imentadosconf6rmulas pobres en grasas. angiotensina II. El primero en ser sintetizado es el Ieucotrieno As. Varios estimulos. Se forman por la acciiin combinada de una lipoxigenasa.

el cual puede estar conectado con insuficiencia dietktica en la fibrosis quisrica. en particular en las lipoproteinas de baja densidad. Las dietas con una alta proporción P:S (ácidos grasos pol iinsaturados: saturados) reducen las concentraciones del colesterol sérico. síndrome hepatorrenal. Las prostaciclinas (PG12) son producidas por las paredes de los vasos sanguíneos y son potentes inhibidorec de la agregación plaquetaria. leucotriene. prostaglandina: PGI. l l.l4-Eiwsatrienoato (dihorno-7-linolenato) f icosatstraenoato Eicosatetraenoato \ Octadecatetraenoato 5. acrodermatitis enteropatica. U ( . Los tres grupos de eicosanoides y sus orígenes biasint&ticos. LT. @ via de la Iipoxigenasa. Por tanto.11. prostaciclina. tromboxanos y prostaciclinas son antagónicos .lipoxina.17- Eiwsapentaenoato Dieta t Dieta t Figura 2 5 6 .Metabolismo de los ácidos graaTosinsulzarudo. trornboxano. @ vía de la ciclooxigenasa.) El subíndice denota el numero total de dobles ligaduras en la molécula y las series a las cuales pertenece el compuesto. síndrome de Sjtjgren-Larsson. (PG.$. TX. En los cerebros de pacientes con el síndrome de Zellweger (capítulo 24) se han encontrado concentraciones elevadas de ácidos polienoicos de cadenas muy largas. En varias enfermedades e! metabolismo de ácidos grasos esenciales es anormal Ademb de la deficiencia de icidos grasos esenciales y de los cambios en los patrones de acidos grasos insatwrados en la desnutrición crónica. enfermedad de Crohn. Esto se considera benéfico en vista de la retacion entre la concentración sbrica de colesterol y la enfermedad coronaria.~ y de los eicosanoides 285 Dieta 1 y-linolenato kPC B . se ha observado un metabolismo anormal de hcidos grasos esenciales.14. t o s prostanoides son potentes sustancias biológicamente activas Los tromboxanos se sintetizan en las plaquetas y su liberación produce vasoconstricción y agregacibn plaquetaria. cimsis y alcoholismo y en el síndrome de Reye. degeneracion neurona1 multisistimica.

Concentraciones de prostaglandinas tan pequehas como de 1 ng/mL provocan la contraccibn del músculo liso en los animales. adenohipófisis y pulmones. el equilibrio de la actividad est6 desplazada contra la agregacibn. TX. L. Los leucotrienos y las lipoxinas son potentes reguladores de muchos procesos patológicos La sustancia de reaccibn lenta de la anafilaxia (SRL-A) es una mezcla de los leucotrienos G. la prevencibn o alivio de las úlceras gástricas.)' (Lasdos adivklades se atnbuyen a una enzima. prostaciclina. tromboxano. Conversibn del heido araquidbnica en prostaglandinas y tromboxanos de la serie 2. D4y E4. Ademas. HHT. La PGI. COOH OH OH OH OH Figura 25-7. (PG.286 Bioquirnica de Harper (Capítulo 23) COOH Araquidonato * 8Aspirina Indometactna lbupmfeno 6-ceto PGFl.a escasa frecuencia de cardiopatias. las concentraciones plasmhticas de colesterol. la agregacibn plaquetaria disminuida y los tiempos prolongados de coagdacibn de los esquimales de Groenlandia se han atribuido a su elevada ingestion de aceites de pescado que contienen205 omega 3 (EPA o ácidoeicosapentaenoico). en tanto que las de lipoproteinas de alta densidad esthn elevadas. la terminación del embarazo.pera el TXA3 es un agregador más dkbil que e E TXA2. hidroxiheptadecatnenoato. triacilglicerol y de las lipoproteinas de baja densidad y de muy baja densidad. Las prostaglandinas aumentan el cAMP en las plaq w . la induccibn del parto a tkrmino. el control de la inflamacibn y de Ia presión arteria1 y el alivio del asma y de la congestión nasal. par tanto. pero lo disminuyen en las dlulas de los tiibuloc renales y en el tejido adiposo (capítulo 27). el cual da origen a la serie 3 de las prostaglandinas (PG3)y de los tromboxanos TX3 (figura 2 5 4 ) . inhiben la liberacibn de araquidonatos de los fosfollpidos y la ~onfomaci6n de PGz y TXz. La PG3 y el TX. es tan potente como antiapgador plaquetario como la PGI2. Conversiones semejantes tienen lugar en las prostaglandinas y tromboxanos de la sene 1 y 3). se considera que todos estos factores operan contra la aterosclerosis y el infarto del miocardio. son todas bajas en los esquimales. tiroides. prostaglandina. Esta . prostaglandina endoperbxido stntasa. hueso fetal. Los usos terapéuticos potenciales incluyen la prevencirin de la concepcihn. PGI. cuerpo lúteo.

@ ~isteinilglicina dipeptidasa. Los leucotrienos son vasoactivos y la 5lipoxigenasa se ha encontrado en las paredes arteriales. @ y-glutamrRransferasa. LXA4 Giutat'6n Cisteina Leucntrieno C4 Leucotrieno D4 Leucotrieno E* Figura 25-8. leucotrieno A4 epdxldo hidrolaca. la atraccibn y activacibn de los leucocitos y parecen ser reguladores importantes en numerosos trastornos que invoiucran reacciones inflamatorias o de hipersensibilidad inmediata como el asma. @ @utatibn S-transferasa. (HPETE. por ejemplo. como contrarreguladores (chalonas} de la respuesta inmunitaria. Existen pruebas de que las lipoxinas participan en las funciones vasoactivac e inmunosreguladoras. RESUMEN 1) La biosintesis de los iicidos grasos insaturados de cadena larga se logra por medio de la combinación . HETE. Estos leucotrienos junto con el Bd provocan también la permeabilidad vascular. es decir.Merahnlismn de los úcrdos grusos insaiurados y de los eicosunoides 287 COOH + COOH Leucotrieno 8 4 Acido glutamico b -/ Leumtrieno & Lipoxinas.) a mezcla es entre 100 y 1000 veces más potente que la histamina o las prostaglandinas como constrictor de la musculatura de las vias respiratorias bronquiales. hidroperoxieicosatetraenoato. Conversidn del Acido araquiddnico a leucotrienos y Iipoximas de la serie 4 por la via de la lipoxigenasa Algunas conversiones similares se presentan en las serres 3 y 5 de los leucotrienos. hidroxieicosatetraenoato) @ peroxidasa.

Neuringer M. 1'185. los que comprenden prostaglandinas. tromboxanos. Borgeat P: The eicosanoids. leucotrienos y lipoxinas. el equilibrio entre los efectos fisiológicos de los diversos eicosanoides puede ser manipulado cambiando la composición de acidos grasos de la alimentacihn. REFERENCIAS Rrenner RR: Endocrine control of f a p acid desaturation.l.Arn J Clin Nutr 1990. Kinsella JE.5:183. Serhan CN: Lipoxin biosynthcsis and its impact in inflammatov and vascular events. Vance JE (edi- t o r ~ )Benjamin/Cumrnings. Smith WL.s Acta 1994:121:2: t . Connos WE: The essential- ity of n-3 fatty acids for the devtlnpment and funciion of the retina and hrain.tlernbrunes Vancc DE. Cakesh 6. A' y A ~ lo . J Am Call Nutr 1986. cual no les permite introducir dobles ligaduras m i s alla de la posición 9 de los hcidos grasos. La consecuencia es que no pueden sintetizar ácidos linoleico (o6)y alfa linolénico ( 0 3 ) y deben recibirlos en la dieta. Riochim t3ioph. que alargan las cadenas acilo existentes en dos carbonos por vez. .SZ. A'. 4) Dado que a partir de los ácidos grasos esenciales se sintetizan grupos diferentes de eicosanoides. y enzimas elongasas. 18:773. . Biochem J 1989:259:315.atedfatty acids and eicosanoid furmation in humans. tos leucotrienos y las lipoxinas se sintetizan en la vía de la lipoxi- genasa. 2) Los animales estan restringidos a desaturasas A ~ . Gualde N. Fischer S: Dict.Uy polyinsaturat.8:517. Estos se conocen como acidos grasos esenciales. 3) Los acidos g a s o s esenciales dan origen a ácidos Czo(eicosanoicos) a partir de los cuales se sintetizan grupos muy importantes de compuestos con actividad fisioIógica y farmacol6gica: los eicosanoides. Smith WL: The eicosanoids and rheir biochcmical mcchanisms of action.288 Bioquim ica de Harper (Capitulo 25) de enzimas desaturasas. tn: Brochemistri: ofLipids ond . Los dos primeros se sintetizan por la vía de la glucooxigenasa (inhibida por la aspirina). Anderson GJ. Rigaud M: Mctabolic inieractions betwcen eicosanoids in blmd and vascular cells. Hiochem Soc Trans 1990. Holman RT: Control of poli insaturated acids in tissue lipids. Annu Rev Nutr 1988. Biochem 1 1989:257:3 13. que introducen dobles ligaduras. Adv Lipid Res 1989:23:169. Stone l b % :Dictary n-3 polyunsatutaied fatty acids and amelioration of cardiovascular disease: Possiblc mechanisms. Legarde M.

Además.Peter A. los fosfolipidos intervienen en el metabolismo de muchos lípidos. PhD. Mayes. Los fosfogliceroles. la enfermedad de Gaucher y la de Tay-Sachs) que se deben a deficiencias en la enzima hidrosiiasa de la via que degrada los glucolipidos en los lisosomas. Los triacilgliceroles son tambikn los lipidos principales locatizados en los depositos de grasa y en los alimentos. fosfoesfingolípidos y glucoesfíngolipidos. Esto va seguido por la absorcibn de ácido graso libre en los tejidos y la oxidacidn subsiguiente o su reesterificación. mhsculo. forman de 5 a 10% de los lipidos de la membrana plasrnática. Los glucoesf3ngolipidos. la toxina que causa el cólera). los acilgllceroles. Muchos tejidos (incluyendo hígado. G r a n parte de esta hidrhlisis tiene lugar en el tejido adiposo con la liberación de acidoc grasos libres en el plasma. por ejemplo. EL CATABOLISMO DE LOS AClLGLlCEROLES NO ES EL PROCESO INVERSO DE LA BIOS~NTESIS La función del triacilglicerol en el transporte y almacenaje de los lipidos y en varias enfermedades como la obesidad. que se encuentran en la capa externa de la membrana placmhtica con sus cadenas de oligosaclidos protuberante$. rifiiin. Los fosfolípidos de inositol actúan como precursores de los segundas mensajeros de las hormonas y el . pulmones. man parte del glucocáliz de la superficie celular y se consideran importantes: 1) en la comunicacián intercelular y contacto. DSc Los acilgliceroIcs constituyen la mayoria de los lipidos en el cuerpo. Se ha descrito aproximadamente una docena de enfermedades por almacenamiento de glucolipidos (por ejemplo. diabetes e hiperlipoproteinemia se describirá con detalle en los capitulas siguientes. testiculos.factor activador de plaquetas es un alquilfosfolipido. son todos anfipáticos y por tanto. idealmente adecuados como constituyentes lipidicos principales de la membranaplacrnatica. y 3) como sustancias de los grupos sanguíneos ABO. corazbn. 2) como receptores para las toxinas bacterianas (por ejemplo. donde se hallan combinados con la albúmina sérica. cuya ausencia en los lactantes prematuros provoca el sindrome de insuficiencia respiratoria del recien nacido. Por su parte. Algunos fosfolípidos tienen funciones especializadas. encéfalo y tejido adiposo) tienen la capacidad de oxidar a los Acidos grasos d e cadena larga aunque el encéfalo no puede extraerlos fAcilmente de la sangre. son componentes importantes de la membrana plasmhtica y de otras membranas. la dipalmitoil lecitina es el componente principal del surfactante pulmonar. residuos de azúcares y ácidos grasos. en particuiar los fosfolipidos. for- El catabolismo del triacilglicerol comienza con la hidrólisis Los aiacilgliceroles deben ser hidrotizados a sus ácidos grasos constituyentes y glicerol por las lipasas antes de proseguir con su catabolismo. La utilización del glicerol depende de la posesion por parte de dichos . que contienen esfingosina. Los glucoesfingolIpidos.

inositol y cardiolipina. catatizada por diaciIgliceml aciltransferasa. o esti baja en actividad como ocurre en el músculo o en el tejido adiposo. Del fosfato d e dihidroxiacetona derivan fosfogliceroles que contienen un enlace kter ( 2 . o es un miembro. éste no es el mecanismo por el cual se sintetizan los acilgliceroles en los tejidos. mediante la cual este es convcrtldo en 1. de la via de la glucólisis. E1 fosfatidato es transformado por la fosfatidato fosfohidrolasa a 1 . A partir del glicerol 3-fosfato se forman numerosas sustancias importantes que desempeñan funciones vitales en el metabolismo celular. de los cuales los mejor conocidos son los plasmal6genos y el factor activador de plaquetas (PAF. Debe hacerse notar que el glicerol 3-fosfato o fosfato de dihldroacetona deriva. la glicerol3-fosfato aciltransferasa. En la mucosa intestinal.290 Rioquimica de ffuvper (Capítulo 26) tejidos de la enzima activante glicerol cinasa. Dos moléculas de acil-COA se combinan con glicerol 3-fosfato para formar fosfatidato (1.La glicerol cinasa catalizará la activación de glicerol a sn-glicerol 3-fosfato. etanolamina. 'ramo el glicerol como los k i d o s grasos deben ser activados por el ATP antes de incorporarse a los aci~glíceroles. La mayor parte de la actividad de estas enzimas reside en el retículo endoplásrnico celular. lo cual sefiala una conexibn muy importante entre los carboy el metabolismo de los lípidos.24iacilglicerol como resultado de la presencia de monoacilglicerolaciltraneferacia. La actividad de la fosfatidato fosfohidrolasa s e encuentra principalmente en la fraccidn sobrenadante libre de partículas pero tambien est8 iinida a la membrana. Estos compuestos van de reservas importantes de triacilgticerol a derivados fosfatidilos de colina. A. el intestino. factor activador de ptaquetas ) . el riiihn.0 4 . utilizando ATP y COA (capitulo 24).5-Bisfosfato de fosfatidilinositol Figura 26-2. ]. Esto se Ileva a cabo en dos etapas mediante la vía del lisofosfatidato. hidrato~ ser invertidas en el laboratorio. la mayor parre del glicerol 3-fosfato debe derivarse de un intermediario del sistema glucolítico.1 . Si esta enzima se halla ausente.S-diaciIglicerol. dihidroxiacetona El fosfatidato es el precursor común en la biosíntesis de triacilgliceroles muchos fosfociliceroles Y cardiolipinas Aunque las reacciones en las que interviene la hidrdlisis de los triaciIgliceroles por la lipasa pueden Glicerol 3-fosfato T Fosfato de Fosfatidato plasmalbgenos PAF ~iac~lgliCer~l Fosfatidilinositol Cardiolipina Fosfatidiluilina. el tejido adiposo pardo y la glhndiila mamaria en lactancia. el fosfato de dihidroxiacetona. LOS TRIACILGLICEROLES Y FOSFOGLICEROLES SE FORMAN POR ACILACIÓN DE FOSFATOS DE TRIOSAS En la figura 26-1 se delinean las vías principales de la biosíntesis de triacilgliceroles y fosfogliceroles. catalizada primero por glicerol 3-fosfato-aciltranskrasa y luego por la l~cilglicerol-3-fosfato~ciltransferasa. un constituyente de las membranas rnitocondriales. plo~eletaclivafing factor). fosfatidiletanolamina 1 Triacilglicerol 1 \ 4. Panorámica de la biosíntesic del acilgltcerol y fosfoglicerol (PAF. Una nueva rnoldcula de acil-COA se esterifica con diacilglicerol para formar un triacilglicerol. existe una via del monoacilglicerol. Hay dos puntos de ramificacihn importantes en los pasos intermedios de fosfatidato y diacilglicerol.a enzima ha sido hallada en cantidad significativa en el higado. por ejemplo. del inglks. que forma glicerol 3-fosfato mediante reducción con NADH catalizada por la gliccrol3-fosfato deshidsogenasa (figura 26-2). pero parte se encuentra tambikn en las mitocondrias. Biosintesis de triacilgliceroles Los ácidos grasos son activados a a c i l 4 o A por la enzima acil-CoA sintetasa.2diacilglicerol fosfato).

c -OH I &-C-0-C-H &-a-@ 1-Acilglicerol 3-hfata (Ilsoíosfaiidam) m g ( h e l r F . e F .y-OH C=O I H~C-OH ~GL~CERO CL ~NASA~ I H~C-O-B Glicerol sn-Glicerol 3-íosfato Aul-COA (pnncipalmeniesaturada) E_ 3-fosfato dah'drOgenasa H.C-O-C-R1 R.-C-O-C-H O ~~-c-a-c-n II I O I &-c-o-c-H 'i O 1 I 1 o II I I Lb H.2-Diacilgliceml I INOStTOL CMP H?C-O-C-R.WH 1. R.@ @ 4. I &-C-O-C-H II I H ~ C O- - @. Biocintesisdel triacilglicerol y f m b l í p i d o s Vía del monoaulglicerol. I I HPC-O-C-R.C-O-C-R1 Cn A R2-C-O-C-H I I I I O n. I I m3-CH n. R.C-O-@ I -- * GIucbI~sis n~Fosfato d e ~ dlhidroxiacetona H2C-O-C-R. V í a del glicerol focfato. HIC-O-C-R.2-DiaciiglicerolCdina CTP Fosfwolina HIC-O-C-R. H.C-O-C-n3 Triaalglwml II H.C-O-@-@ &-C-O-C-H I H O H.-C-O-C-H II I a H.c-O-@ 1.?-0: HO-C-H \) .ATP H?p-OH HO-C-H \ ADP NAD' ) . La fosfa tidiletanolam i n a puede formarse a partir de la e t a n o l a m i n a por una via srmilar a la mostrada p a r a formación de focfatidilcolina a partir de colina 0 . H2C-O-C-R.. NADW t Ht .C-O-@ Colina Fosfatdilcolina I Inositol Fosfa~ilinositol o ~~C-~-e)-l~~~it~l-@i 4-Fosfato de fosf&tidilrnositol Fosratdiletanolarnln.fnasifol.5=Bisfosfato de loslatidilinosiiol I Figura 26-2.-C-O-C-H Il I I HIC-O-@ H. 4DP Fosfatdrkenne O H~C-O-C-A. e n ! t 7-Act@licemr insaturada\ II O I H~C-OH 2-Monoaolgliceml AUI-COA acl~ansfwesa a~ittransbm H. .

el grupo metilo de la metionina puede derivar de mefil-Ha fo'Iato(figura 52-1 5). Un fosfolipido presente en las rnitocoridrias es la cardiolipina (difosfa~idilglicerol. Por fosforilaciones sucesivas. o a "etanolamina activa". el 1 -alquil-2-acilglicerol-3-fosfato resultante (anhlogo al fosfatidato en la figura 26-2) es hidrolizado para dar el derivado del glicerol libre. Gran parte de los fosfolipidos de las mitocondrias con plasmalbgenos. Este es un proceso en dos etapas. de proteínas a Fosfatidilglicerofosfato I Fosfatidilglicerol CMP Cardiolipina (difosfatidilgliceroi} Figura 263. A pesar de estas fuentes de colina. este compuesto reacciona con hositol. se requiere de manera específica para el funcionamiento del transportador de fosfazo y para la actividad de la citocromooxidasa. El fosfato de dihidroxiacetons es el precursor del residuo fosfolípidos de glicerol &ter(figura 264). respectivamentc. Biosintesic de la cardiolipina.figura 16-1 0). el fosfatidilinositol. o a partir del 1. A su vez. del ingles. respectivamente. La fosfatidilserina puede volver a formar fosfatidiletanolamina mediante descarboxilacibn. cualquiera de ellas reacciona con el 1. vasopresina. seguida de una reacción con el CTP para formar citidina difosfocolina ( C D P ~ o l i n a o ) citidina difosfoetanolmina (C&P+tanolamina). El factor de activacibn plaquetaria (PAF) se sintetiza a partir del derivado 3-fosfocolina correspondiente y ha sido identificado como 1-alquil-2-acetil-. el cual a su vez se ha sintetizado de CDP-diacilg!icerol (figura 26-21 y glicerol 3-fosfato de acuerdo al esquema mostrado en la figura 26-3. Este ultimo es desdoblado en diacilglicerol y trifosfato de inositol por las hormonas quc incrementan [Ca"]. tsifosfato de citidina (CTP. Los sintetizan muchas de las ctlulas y otros tejidos y causa agregación plaquetaria a concentraciones tan bajas de hasta lo-'' rnolk. una vía alterna permite a la fosfatidiletanolamina dar lugar directamente a rosfatidilcolina. formado a partir de ATP (capítulo 12) reacciona con fosfatidato para formar citidina4ifosfato4iacilgiicerol (CDPdiacilglicerol). C. . En el higado. La cardiolipina. se considera un nutriente esencial en muchas especies de mamíferos. mediante la metilación progresiva de residuo de etanolamina utilizando la S-adenosilmetionina como donador de metilo. En esta forma. La citidina transferasa parece ser la enzima que regula la vía de la fosfatidilcolina.2-diacilglicerol como la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina. En la biosintesis de )a fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolarnina (lecitinas y cefalinas). En la sintesis de fosfaiidilinositul. el ciral en presencia de NA DPH se convierte a 1 -alquil-glicerol-3-focfato. el fosfatidilinositol es iransformado primero a fosfatidilinositol4-fosfato y despuds a fosfatidilinositol 4. Se lleva a cabo una reacción de intercambio entre el grupo acilo y un alcohol de cadena larga para dar I -alquildihidroxiacetonafosfato(que contiene el enlace éter).(Capitulo 26j B. cataliziida la reaccibn por Ia enzima CDP-diacllglicerol inositol transferasa para formar fosfatidilinositol (figura 26-2). por ejemplo. ubicada en la membrana interior de la mitocondria. pero esto no se ha establecido en el ser humano. Este compuesto se combina con la acil-CoA para dar 1-acil4ihidroxiacetona fosfato. Biosíntesis de fosfolipidos de glicerol éter Al parecer esta via se encuentra ubicada de manera exclusiva en los peroxisomas. Biosintesis de fosfogliceroles !:$tos festblipidos son sinteti7. Estos dos productos actúan como segundos mensajeros en la acción hormonal (capítulo 44). cytidine friphosphate) un fosfato de alta energía.idos a partir de fosfatidato: por ejemplo. por ejemplo. que implica primero.24iacilglicerol de manera que una base fosforilada (ya sea fosfocolina o fosfoetanolamina) es transferida al diacilglicerol para formar fosfatidilcolina o fosfatidiletanolamina. Las fosfolipasas permiten la degradación y remodelación de fosfogliceroles La degradación de muchas moléculas complejas en los tejidos es completa.~n-g1icerol-3fosfocolina. la colina o la etanolamina deben primero convertirse a "colinaactiva". una reaccibn con ATP para formar el monofosfato correspondiente. Los p l a s m a lbgenos se forman por desaturación del derivado analogo 3-fosfoetanolamina (figura 2 6 4 ) .5-bis~osfato.e interviene en diversas respuesta biológicas incluyendo quimiotaxis y fosforilación de proteinas. También tiene propiedades hipotensoras y ulcerogenicas. Despues de acilacion ulterior en la posición 2. Finalmente. Se forma de fosfatidilglicerol. Se forma fosfatidilserina a partir de la fosfatidiletanolamina directamente por reaccibn con la serina (figum 26-2).

.O H. La IisoIecitina puede formarse mediante una vla alterna que involucra a la Lecitin:colesterol aciltransfcrasa (LCAT. los cuales pueden ser reacilados por Ia acil-COA en presencia de una aciltransferasa.~ O bI H. el tiempo de recambio del grupo fosfato es diferente del tiempo de recambio del grupo l-acilo. I C-O-C-H &o-@ -a+cH2-NI R. que hidroliza la base nitrogenada de los fosfolipidos.-~p CDP-Etanolamina? G O H H. del ingles. 3-fosíom~ina Coiina 1-Alquil. liberando glicerol 3-fosfato mas una base. evitando los dos ultimos pasos de la vía que se muestra aqul. liberando 1. 1ecitin:cholestesol ucyltran. Biosíntesis de éteres lipídicoc.I. De manera alterna.2diacilglicerol miis una base fosforilo.I. En la vía de novo para sintesis de PAF. d~acilgiiceroies 1-Alquil. puede determinarse un tiempo de recambio para dicha rnolecula.C-OH RS-C-O -C-H r FOSFOHlbROMSA 1 H?&-O -@ 1-Alquil.COH Acyi-COA I II HIC-O-C-R.-C -O-C-H H. La fosfolipasa A2 cataliza la hidrblisis del enlace dster en ta posicibn 2 de los glicerofosfolípid~s para formar un hcido graso libre y un Iisofosfolipido.C-O-rCH. I . aminoscidos. La fosfolipasa C ataca el enlace éster en la posición 3.-R.~ ~ q u i 2-fisogltcerol f. aoettl-COA s e incorpora en la etapa". La iosfolipasa D es una enzima descrita principalmente en los vegetales. plasmalogenos y del factor activador de plaquetac (PAF). 2-acetilglkerol 3-fosfomlina PAF Figura 2 6 4 . Es una de la principales toxinas secretadas por bacterias. eliminando el grupo 1-acilo residual y formando la base glicerilfosforilo correspondiente. que se: encuentra en el . Esto se debe a la presencia de enzimas que permiten la degradación parcial seguida por nueva slntesis (figura 26-5).~e).C-O-ICH~I~-R NADPH +H' NADP' HiC-O-ICHiIl-R> I HO-C-H HCIOr-R --- 1-Alquilgiiceroi 3-fosfatc Fosfato de dihidroxiacetona Fosfato de 1-acildihidroxiaceton6 1-alqurldihidroxiacetona Fosfata de Acil-COA ACILTRANS.ICH. 2-acilglicerol 3-fosfocolina Acetil-C* Colina \ 1. la cuat a su vez puede ser fragmentado poruna bidrolasa.OH H. cada porción de la molécula se recambia a una velocidad distinta.$era. Por tanto. La fosfolipasa Ai ataca el enlace éster en la posicion 1 mientras que la fosfolipasa Az ataca el enlace en la posición 2 de los fosfolipidos (figura 2 6 4 ) .C -O. por ejemplo. Al-ECHIIi. el lisofosfolípido (como [a lisolecitina) es atacado por la lisofosfolipasa (fosfolipasa B). Aunque los fosfolipidos son degradados activamente. 2-acilgliceml 3-fosfato FOSFOCOLIND~AC~LGLICEROL TRANSFERASA Alquil. Esta enzima.R.

C 1 . Primero. mediante la transacilacion entre el ester colesterilo y la lisolecitina. por oposicihn. los precursores de las prostaglandinas) se incorporan mis en la posicitrn 2.C 4 -0 L @ - Colina Glicerilfoslocolina t H. Hay evidencia de que la cerarnida puede actuar como un mediador lipido (segundo mensajero).plasma y es sintetizada en el hígado.O -@- Lecitina + Colesterol P colina Lisofusfatidilcolina (lisolecitina) Lisolecitina + Éster de colesterilo H. Esto se !leva a cabo principalmente en el aparato de Golgi y en menor grado en la membrana plásrnica. Sitios de la actividad hidrotitica de las fosfolipasas sobre un sustrato fosfolipido. mediante la activacibn de una proteina cinasa y. particularmente en relación con la introducciiin de hcidos grasos esenciales al interior de las molécuIas de fosfolípidos.$-OH HO . mientras que los acidos poliinsaturados (por ejemplo. se forma dihidroceramida.C H. a algunas de las acciones del diacilglicerol (capítulo 44). seguida por desaturacihn para originar ceramida. La incorporacibn de los Bcidos grasoc a la lecitina tiene lugar por Ia sintesis completa del fosfolipido..C. En los organelos que participan en los procesos secretorios y endociticos. Idas consecuencias de la deficiencia de LCAT se describen en el cuadro 28-1. la esfingomielina está restringida a la región luminal. Las esfingomielinas san fosfolípidos (figura 16-1 7) y se forman cuando la ceramida reacciona con fosfatidi! colina para formar esfingomielina más diacilglicerol (figura 26-8). HO-C-H I -0-e. se sintetiza en el retículo endoplásmico. el aminohcido serina se activa mediante cornbinacibn con fosfato de piridoxal.OH Se encuentran icidosgrasos saturados de cadena larga predominantemente en la posición 1 de los fosfoliptdos. este se convierte en dihidroesfingosina en un paso reductor que utiliza NADPH. cataliza la trmsferencia de un residuo de Acido graso de la posición 2 de la lecitina al colesterol para formar éster de colesterilo y se considera la causa de gran parte del &ter de colesterilo de las lipoproteinas del plasma. Por una combinación con acil-COA. Por tanto. LEClflN: COLESTEROL ACILTRANSFERASA ACII-CQ A H. y por acilacidn directa de lisolecitina por la acil-CoA. LTO FOSFOLIPASA A i 1 FOSFOLIPACA A ~ A Figura 26-6. + Colma sn-Glicerol 3-fosfate TODOS LOS ESF~NGOL~P~DOS SE FORMAN DE CERAMIDA La ceramida (figura 26-7). es posible un intercambio continuo de los Qcidos grasos. .H H. Figura 26-5. El grupo acilo se presenta con frecuencia por cadenas largas saturadas o ficidos monoenoicos. . Metabolismo de la fosfatidilcolina (lecitina). A su vez. se combina con palmitoil-COA para formar 3-cetoesfingonina.

se sintetiza por alargamiento del ácido oleico. La GlcCer es un llpido importante de la mielina. El Bcido lignt>cérico (C23H47COOH) es sintetizado completamente a partir de acetil-COA.CH.-C S -COA Palmitoil-COA - I W O C . se forma a partir de &te.-CH2-CH. Biocíntesic de galactosilceramida y su sulfo derivado (PAPS. formando asi difosfato de galactosa de uridina [UDPGal). por 10 general el iicido N-mcetilneliramlnico (figura 26-10). i_ Fosfato de piridoxal. La reacción en el cerebro es semejante a la descrita cn la figura 22-6 para el higado y la glándula mamaria. en tanto que GlcCer es el glucoesfingol ipido principal de los tejidos extraneurales y un precursor de la mayoría de los glucoesfingolipidos más complejos. La sulfogalactosilceramida se formadesp d s de reaccionar con e1 31-fosfoadenosina-51-fosfosulfato (PAPS. que es el derivado Z-hidroxi de! Bcido lignodrico. "sulfato activo"). "cuifato activo".CH-CH I l -CH. eE hcido cerebrónico. El PAPS interviene tambikn en la biosintesis de otros sulfolipidos. focfoadenosina-5'-fosfosulfato. I Dihidmesfingosina(esfinganina) A~yl-COA COA SH CH3-/CH. Bioslntesis de la ceramida.CH .Serina OH Los glucoesfingolípidos son una combinación de ceramida con uno o mas residuos de azúcar Es típico que los hcidos grasos de muchos glucoesfingolípidos sean C 2 4 . La difosfato de uridina y galactosa epimerasa (figura 26-9) utiliza la difosfato de glucosa de uridina (UDPGlc) como sustrato y epimeriza la fiacci6n de gtucosa en galactosa.-OH OH Dihidroceramida NH-CO-R Figura 26-7.en particular en el cerebro (ácidos lignocérico. Los gangliúsidos son sintetizados a partir de la ceramida por la adicibn escalonada de azúcares activados (por ejemplo.. Puede formarse un gran número de ganglibsidos de peso mdecular creciente.). UDPGlc Cerada Fosfatidilcolina Esiingornielina Diacilglicerol UDPGal Ceramida 11- UDP PAPs Sulfogalactosil ceramida (sulfatido) Figura 26-8. UDPGlc y UDPGal) y un Acido sihlico..Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos 0 293 II CH3-(CH. La galactosilceramida es sintetiada en una reacción entre ceramida y UDPGal.) . el ácido nervhnico (C23H45COOH)r un Iicido monoinsaturado. cerebrbnicoy nervhnico). Los glucoesfingolipidos mas sencillos (cerebrásidos) son galactosilceramida (GalCer) y glucosilceramida (GIcCer).). es decir. los sulfo(galacto)gtuccrolipidos y los sulfatos de esteroides. Figura 26-9. ~ 2 n ~ ' NHj 3-Cstcesfinganina NADPH + Ht 3-CETOESFINGANINA NADP+ OH N W . Bioslntesis de esfingomielina. La mayoría de las enzirnas que transfieren los anjcares desde los nucledtidos (gIucosil transferasas) se encuentran en el aparato de Golgi. Por Último. Por su parte.

por ejemplo. En la esclerosis múltiple. ácido N-acetilneurárnico. Se pueden enconh-ar dsteres de colesterilo en la sustancia blanca. La actividad del surfactante se atribuye principalmente a la presencia de un fosfolípido. 2) La velocidad de síntesis del lipido almacenado es comparable a la de las personas E defecto enzimático en cada una de normales. Estos padecimientos son parte de un grupo mayor de trastornos de los lisosomas. el cual evita el colapso de los alveolos. hay pérdida de fosfol ipidoc (en particutar det plasmalbgeno etanolamina) y de esfingolipidos de la sustancia blanca. la digalmitoilfosfittidilcolina. para la toxina del cblera. La administración de surfactante natural o artificial tiene beneficios terap6uticos. UDP CMP-NeuAc Cer-GIc-Gal \ CMP ) . La deficiencia pulmonar de surfactante en los pulmones de recién nacidos prematuros da origen al sindrorne de insuficiencia respiratoria. al grado que su composición se asemeja a la de la sustancia gris. Las enfermedades por almacenamiento de lipidos muestran diversas características constantes: 1) En varios tejidos. que a menudo se manifiestan en la niAez.UDPGlc Ceramida \ /" UDP UDPGal GIUCOSII ceramida (Cer-Glc) < f. Ciertos ganglibsidos actúan como receptores de toxinas bacterianas (por ejemplo. Biosíntesis de ganglibsidos (NeuAc. 2) esfingolipidosis. a menudo en e! sistema nervioso. 4) El grado en que se encuentra disminuida La deficiencia de surfactante pulmonar causa el síndrome de insuficiencia respiratoria El surfactante pulmonar es una secrecion con propiedades notables de tensoactivo. Pueden clasificarse en dos gmpos: 1) enfermedades desmiclinizantes verdaderas. Cadenas semejantes de oligosacáridos son constituyentes de las glucoproteinas de la membrana plasmática. la cual de manera subsecuente activa a la adenilato ciclaca). aunque por lo común es& ausentes.) Los glucoesfingolipidos son constituyentes de la capa exterior de la membrana plasmática. 3 ) E de una estas enfermedades es una deficiencia ~pecffica enzima lkodmica hidrolitica necesaria para degradar al lipido. cuya síntesis comienza poco después del nacimiento en los lactante5 a tdrmino. Los fosfolipidos y los esfingolípidos contribuyen a la esclerosis múltiple y a la lipidosis Ciertas enfermedades se caracterizan por cantidades anormales de estos lipidos en los tejidos. y pueden ser importantes en la comunicación y el contacto intercelufar. La esfingolipidosis constituye un grupo de enfermedades hereditarias. . El liquido cefalorraquideo muestra elevadas cifras de fosfolipidos. hay una acumulación de lipidos cemplejos que tienen una porción de su estmctura en comijn. Algunos son antigenos. 7Ga1 UDP-N acetil galadosamina "Dp 4 Gangliósidos superiores(disiaio y trisialogangliósidos) Cer-Glc-Gal-C~INAGG~I I NeuAc (GM~) Cet-Glc-GaCGaiiu~c I NeuAC (GMZ) Figura 26-10. que se compone en gran parte de lipidos con cantidades pequeñas de proteinas y carbohidratos. el anzígeno de Forssman y las sustancias de los grupos sanguineos ABO. = Cer-Glc-Gal I NeuAc (D. que es una enfermedad desmiel inizante. una ceramida.

al igual que detectar en el feto la presencia de esfingolipodistrofia. . precursores de segundos mensajeros para hormonas. En la actualidad la terapiutica génica para los trastornos lisos6micos se encuentra en investigacibn. piel gruesa generaiizac nglihsido :eTay-Sacl2s Variante d e enlerme Tay-Sachs de Sandho Hexosamidinase I - WJ~cIngliósido ~ 4 1 ~ 4 obósido m : 1irn6tirn . . . crecimiento esqueental. . los sulfaros de esteroides y peptidoglricanos.. . ahora es posible descubrir a los portadores heterocigotos de las anormaIidades geneticas quc producen estos padecimientos. que forma - .iea neta-Glucosidas. lazo crecidos: retraso &*I*l .: . miento del hígado y brazn - e Krabbc Jalactosid. retraso nentaI en 1:actantes Enfermedad de NiemannP.. por ejernplo. debido a una deficiencia combinada de las arilsulfatasas A. La vía se bifurca a fosfatidato.L ina : 1 .. antes de endocitosis mediada por el receptor.--..ivo. 1 Sitio de reaccibn enzrmática deficiente. en tanto que los fosfogliceroles. -Gai Enfer zima deficientc Lipidii acumula A - :r4ilc4aINAc4al-Fuc . :r-Glc4al Ceramida Iacthsidc mida Daao ccrcbral progre'. sin embargo. NeuAc = Ácido :Ir-acetilneuraminico: Cer = cernida. Como resultado de estas consideraciones básicas unificadoras. Asimismo. C i d = galactosa. se han creado procedimientos para ei diagnóstico de pacientes con estos padecimientos. En el cuadro 26-1 se muestra un resumen de las lipidosis más importantes. Fuc.Eje1mplos de esfingoliliidosis -. en época reciente. surfactante pulnionar y factor activador de plaquetas (PAF). La deficiencia multiplc dc sulfatasa conduce a la acumulaci6n de sulf~galactosflceramida. creci.. Enfermeaaa ae ciaucner 1 ~r elina casi ie les hur:sos largo S. por ejemplo. deformabJqueleto. Durante muchos afios se ha intentado la terapéutica de restituciiin de enzimas con escaso éxito.Metabolismo de aciiglicerolesy ~sfingolipidos 29 7 la actividad de la enzima afectada. deformación ' I tRetraso m lidad rnmusciilar j 1Retraqo niental. RESUMEN 1) Los triacilgliceroles son los principales encargados del almacenaje de lipidos. - ticidad mu: icular. . 2) Los triacilgficeroles y algunos fosfogliceroles se sintetizan por acilación progresiva de glicerol 3fosfato.-.- Cei-amida lact nida lactc Iinidmi < Cei . retraso men--" . cegilera debi- Enfermedad de Fabry -m. :A--- A- 1- e Farher osina a L~~~~~ ubi aermariris. es semejante en todos los tejidos de la persona enferma. - .-.A-. 3 y C y de esteroides sulfatasa (cuadro 5 7 4 ) . - Cuadro 2!6-1. Glc = glucosa. esfingomielina y glucoesfingolipidos son anfipáticos y cubren numerosas actividades. que van desde funciones estructurales en las membranas celulares a acciones especializadas. se han logrado tratamientos exitosos con enzimas cuya estructura química se han modificado para asegurar su fijacibn a los receptores de las células blanco.. ---.. a los macrdfagos en el higado para entregar beta glucocidasa (glucocerebrocidasa) en el tratamiento de la enfermedad de Gaucher.

Elscvier.WetaboJic and . Physiol Rev 1988:68:374.1004. Scriver CR et al. 7th ed.fosfolipidos de inositol y cardiolipina por un lado y triacilglicerol. La esfingomielina es un fosfolipido que se encuentra de manera típica en las membranas de los organelos que se ocupan de los procesos secre~orios (por ejemplo. Annu Rev Riochem t 991. Los glucoesfingo~ipidos más simples son una combinación de ceramída más un residuo anicar (por ejemplo. van Golde LMC: Regulation o[ the biosynihesis of triacylgliccrol. I REFERENCIAS Hannun YA: The sphingomyelin cycle and second messcnger function of ceramidc. Se encuentran en la capa externa de la membrana plasmatica. por otro. Sandohoff K: Ganglioside metabolisrn. 1982.259:C697. Los gangliósidos son glucoesfingollpidos rnbs complejos que contienen un número mayor de residuos azúcar más ácido siálico. Pagano RE: Intracellular transport and metabolism of sphingomyelin. 3) Los plasmalhgenos y el PAF son éteres de fosfolípidos formados por acilación y alquilacion del fosfato de dihidroxiacetona. Am J Physiol 1990.2h8:5341. Riochim Biophys Acta 1989. Koval M. . Neufeld EF: L) sosemal ctorage discases. McGraw-llill. phosphatidylcholine and pliosphatidyEcthanolamine in the liver. In: Riochemistp o f Ltpids and Hormones Henjamin/Cummings. J Riol Chem 1993.incluyendo el sindrome de insuficiencia respiratoria (carencia de surfactante pulmonar). S) Los fosfolipidos y esfingolipidos intervienen en varios procesos patol&gicos. J R i o l C h e m 1994269 3125.60:257. donde contribuyen al glucochliz y son importantes como antígenos y receptores celulares. Biochirn Biophys Acta Tijburg LBM.1. Snyder F: Platelct-activating factor and related acetylated Iipids as potent biologically active cellular mediators. 4) Todos los esfingolípidos se forman de ceramida (N-acilesfingosina). 1985.1082:13. Ansell GB (editors): Phospholipids. aparato de Golgi). glycerols. ether-linked glycerolipids. 1995. Robertson B: The pulmonary surfactant system. Vance JE (editors): Metabolism o f trracyl- 1991. Geelen IWJH. a esclerosis múltiple (desmielinización) y la esfingolipidosis(incapacidad para degradar esfingolipidos en los lisosornas debido a alteraciones hereditarias de enzirnas hidrolasas). (editors): The . biochemical aspccts and functional significance. sphingolipids. Batenburg JJ. VanGolde LMG. Vance DE. colina y fosfolipidos de etanolamina. GalCer en la rnielina). Aasthorne J N .MoIecular Bases o f lnheriied Disease. phospholipid metabolism. van Echten G.

para su oxidacibn en gran parte de los tejidos y al tejido adiposo para su almacenamiento.Transporte y aIrnacenamiento de Iipidos Peter A. . de las enzimas clave o de [os receptores de lipoproteinas. DSc Las grasas absorbidas a partir de la alimentación y 10s lipidos sintetizados por el hígado y el tejido adiposo deben ser transportados a los diversos tejidos y organos para su utilizacién y almacenamiento. Algunos de estos defectos causan hipercolesterolemia y aterosclerosis prematura. Los lipidos son movilizados de este último tejido como ácidos grasos libres (AGL) fi-jadosa la albúmina sérica. Los depbsitos excesivos de grasa producen la obesidad. donde la deficiencia de insulina causa la movilízacibn excesiva de LOS L~PIDOS SON TRANSPORTADOS EN EL PLASMA COMO LIPOPROTE~NAS Existen cuatro grupos principales de Iípidos en las lipoproteinas La extraccion de los Iípidos del plasma con un solvente adecuado para lipidos y la subsiguiente separación del extracto en diversas clases de lipidos. La solucibn consiste en asociar lípidos no polares (triacilglicerol y esteres de colesterilo) con lipidos anfipáticos (fosfolipidos y colesterol) y protefnas. IMPORTANCIA BIOMEDICA En un ornnivoro consumidor de carne como el ser humano. Dado que los lípidos son insolubles en el agua. La mayor parte de tos demás trastornos patoIbgicos que afectan al transporte lipidico. diabetes sacarina n o insulinodependiente (DSNID). son los Iipidos plasmaticos más activos en el metabolismo. causando varios tipos de hipo e hiperlipoproteinemias. La más común es la diabetes sacarina. Se sabe ahora que esta última fracción. muestra la presencia de triacilgliceroles. hiperglucemia y varias disfunciones endocrinas. para formar lipoproteinas rniscibles en agua. AGL y la subutilizacilin de quilomicrones y VLDL lo cual provoca hipertriacilglicerolemia. se ingieren catorias en exceso en la fase anabólica del ciclo alimentario. hiperlipidemia. Mayes. seguido por un periodo de equilibrio calórico negativa en que el organismo utiliza sus reservas de carbohidrato5 y grasas. hipertensibn. Las anormalidadesdel metabolicino de los lipidos se presentan en los sitios de producción o en los deutilización de las lipoproteinas. PhD. además de una muy pequeiía fraccibn de ricidoc grasos de cadena larga no esterificados (acidos grasos libres} que cuman menos de 5% del total de ácidos grasos presentes en el plasma (cuadro 27-11. Las lipoproteinas median este ciclo transportando a los Iípidos del intestino como quilomicroncs y a los hephticos como lipoproteinas de muy baja densidad (VLDL}. colesterol y &eres de colesterilo. es un problemael transporte en unmedio acuosocomo el plasma sangnineo. los hcidos grasos libres (AGL). se deben de manera primaria a defectos hereditarios en la sintesis de la porcion apoproteinica de la lipoproteina. En particular. la obesidad abdominal es un factor de riesgo para aumentos en la mortalidad. fasfollpidos.

. se han identificado cuavo grupos mayores de lipoproteinas fisiológicamente importantes y Útiles en el diagnostico clínico. m :I total de Ilipidos foli- dr* co- Qu i lomicroncs Intestinc L ~ioproteina F s Hígado 0.DL) Lipoproteínas de densidad intermedia je'alta der sidad VLDL kli-1 lornicroines Al1juminaAGL - * Una unidad Sf (Svedberg) es igud a 1Ux" ACiL. Sin contar los AGL. Estos son: 1) q u ilom icrones.Cuadro 27-1. . Esta propiedad se utiliza para separar a las diversas Iipoproteinas plasmhticas mediante ultracentrifugacibn. .ht ) Se han identificado cuatro grupos principales de lipoproteínas plasmáticas ~ c i a o grasos s libres (no estcrifi.45% son fnsfolipidos.O cados) I * Analizado como fhqtoro lir1A. Composicibn de las lipoproteinas en el niasma human Y- =====e-1 UlZll . de esto se deduce que cuanda la proporción de lipidos a proteina aumenta en las lipoproteínas.21 y 1. Est os limites pueden ex 1 sit~iacionesansormales o 1~atolhgicas - La grasa pura es menos densa que el agua. t - . Ia densidad disminuye (cuadro 27-2).95 a l.rn ' Varia con el estado niitricii El total de acidos grasos. Dado que las fracciones representan las entidades fisiologicac presentes en el plasma. La composición de las diversas fracciones lipoproteinicas obtenidas por ultmcentrifugación se muestra en el cuadro 27-2.. imposición .2 a O. 1 Soh Esteres de colesterilo y menos de 3% de ácidos graso5 libres.. . .25. densidad (VI.OOh 2 ae muy naja (intestinr 3 . derivados de la absorción intestinal - Cuadro 27-2. el anhlisis químico simple de los lípidos plasmtiticos (sin incluir los AGL) aporta escasa informacibn sobre su función fisiológica. Llpidos del plasma sanguíneo Triacilglicerol Total de fosfolipidoc* - Tot C - :erol irc (no este1 [meu'uF 0. VHDL (lipoproteinasj : muy alta dewidad) es una fritccihn mnor que se encuenh a una densidad de enbe 1. kidos crn/seg!dina/g a 16 ' C libres. Se ha observado que concurren varias clases de compuestos químicos en cantidades diferentes en la mayoria de las fracciones lipoproteinicac.

que representan una etapa final en el catabolismo de VLDL. Sin embargo. La B 4 8 es sintetizñda en el intestino y B-l M) en el hígado. 3) lipoproteínas de baja densidad (LDL. en el intestino. A d e m b del uso de técnicas que dependen de su densidad. Aproproteina periférim (por ejemplo. las lipoproteinas pueden separarse por sus propiedades electraforkticas en alfa. se introduce por un mecanismo editor del RNA que detiene la traslación en el residuo aminoacidico~2153 para liberar la apo B 4 O . Estructura generalizada de una lipoproteína plasm8tica. en tanto que otras pueden ser transferidas con libertad a otras lipoproteinas (figura 27-2). La apo B-48 (con 48% de la longitud de B-100) se sintetiza del mismo mRNA como apo E-100.cn tanto que el colesterol y los fosfolipidos predominan en las LDL y HDL. galactosa. En las lipoproteínas plasrnhticac se han cncon- Densidad Figura 27-1. La apoIipoproteina principal de LDL (beta lipoproteina) se designa B y también se encuentra en VLDL y quilomicrones. beta y prebetalipoproteinas (figura 27-1) y se identifican con mayor precisión por medio de inmunoelectroforesis. respectivamente (cuadro 27-2). Algunas apoproteinas son integrales y no pueden ser removidas. se encuentran en la capa cuperficial y algo del colesterol libre se ubica en el núcleo.) La apo E-1 00 es 1a cadena polipeptidica sencilla más larga que se conoce. Ia apo R de los quilomicrones ( B 4 g ) es m8s pequ&a que la apo B-l O0 de LDL o VLDL. Por tanto. La fraccidn proteinica de las tipoproteinas se conoce como una apolipoproteina o apoprotelna y constituye casi 60% de algunas HDL y sólo 1% de los quilomicrones. un codbn de detencibn que no está presente en el DNA genómico. De acuerdo a la nomenclatura ABC. Las apolipoproteinas C-1. pues tiene 4536 arninoácidos. glucosa. en el higado de rata se f m a B-48 además de B-100. La distribución de apolipoproteinas caracteriza a la lipoproteína En cada lipoproteina hay una o mhs apolipoproteínas (proteínas o polipéptidoc). Aparentemente. La apo B tiene un contenido aproximado de 5% de carbohidratosque incluyen manosa. algunas lipoproteinas son también gliicoproteínas.c o m o quilomicrones o VLDL. C-II y C-111 son los polipkptidos más pequefios que se transfieren libremente entre varias lipoproteínas diferentes (cuadro 27-3).. . como en la membrana celular(capitu1o 16). y 4) lipoproteínas de alta densidad ([HDL] o alfa lipoproteínas). glucosarnina y ácido sialico. Estas se orientan de modo que sus grupos polares se enfrentan al medio acuoso.de triacilgEiceroles. Ceparacibn de Iipopmteínas del plasma por ekctroforesis en gel de agarosa. Se notan las semejanzas con la estructura de la membrana plasmhtica.consiste en un nUcleo Iipidico formado en gm parte de triaciIglicero1no polar y Éster de colesterilo rodeado por una sola capa superficial de moléculas de fosfolípido anfipatico y colesterol. Una pequefia cantidad de éster de colesterilo y tnacilglicerof. apo C) Iipidos no polares principalmente qzj:si Apoproteína lipidos anfipaticos principalmente Los Iípidos anfipáticos son componentes esenciales de las lipoproteinas Una Iipoprotelna tlpica . la apolipoproteina mayor de HDL (alfa lipoproteina) se designa A. derivadas del hígado para exportar los triacilgliceroles. (Al parecer. Fígura 2 7 3 . que intervienen en el metaboSismo de las VLDL y los quilomicrones y tambitn en el transporte del colesterol. 2) lipoproteinas d e muy baja densidad (VLDL o prebetalipoproteínas). o betalipoproteínac). fucosa. El triacilglicerol es el lipido predominante en !os quilomicrones y en las VLDL.

HDL. Iinoleico. I'uncilin di:scnnocida n+at. quilom icrnnes [ -. . . mientras que en los que se alimentan de manera continua como los rumiantes. aunque existe en exceso en el espectro de las beta VLDL de pacientes con hiperlipoproteinemia tipo 111. rica en arginina.. 1 receptor de LUL resente en t s con hipt is trado otras apolipoprotelnas. .l*~ . 1 C' A T'I V 1 Sei:retado ccIn Pel.CA'r). nr de rema 3r la dicta. Bcidos grasos inesterificados) aparecen en el plasma a partir de la lipblisis de los triacilgliceroles en el tejido adiposo o como resultado de la accibn de la lipoproteina lipasa durante la incorporación en los tejidos de los triacilgliceroles plasmaticos. apo E para el receptor remanente y apo A-1 para el receptor de HDL. estclirico.5 pEqlmL en la posabsorción y entre 0. oleico. Se han descrito sitios de unión sobre la albúmina. - (1-VLDI 1 inemia tipc .o quilami sc transfiere a I. IILc.- .nt.1 y 2 pEq/mL del plasma y comprenden a los hcidos grasos de cadena larga que se encuentran en el tejido adiposo.DL: HDZ ilomicrnne . . -. Ligando 1 : do y para e 1 rntcs de qii ilomicrtine . 2) Pueden actuar como Iípidos para transferir proteinas.e animales con hiperc~ iia inducid:3. .. LOS ÁCIDOS GRASOS LIBRES SE METABOLIZAN CON SUMA RAPIDEZ Los ácidos grasoc libres (AGL.-.. elevándose a cerca de 0. -- Lipo proteína 11. A . ra Ia fornTan dos n?onómeros énticos uinidos por un puente disul ruro. . -- polipopro . la cifra puede elevarse a 2 pEqlmL. por ejemplo. Una es la apolipoproteina E. . El valor cae inmediatamente después de comer y sube otra vez antes de la siguiente comida. - . .uLk.jo.IDL sociado co n la forma civn de tri acilglicero :o en lipolprotcinas. L .. . por ejemplo. apo B-100. .. Se encuenzran combinados con la albúmina del suera en concentraciones variables entre 0.. -h:L:. es decir..DL. ao para e1 Apa B 4 . acidos palrnitico. de afinidad variable para los ácidos grasos.DL. q u i i v i i r r .LIL. los ácidos grasos libres permanecen eszables en un valor ba. . HDL. Apoproteinas de las lipoproteinas del plasma hurnan . Apa C-1 Apo D le HDL ariac. otros Acidos poliinsaturados y cantidades mas pequeiías de otros Acidoc grasos de cadena larga. ctivadnrn de Ia lipoproteinn lipa. .. su contenido en arginina ec hasta de 10% del total de aminoacidoc y representa de 5 a 10% de las apolipoproteinas VLDL totales en personas normales."nA.i . ..302 Bioquímica de Hurper (Capítulo 27) Cuadro 27-3.-.CI - Apo B-1 1 IDL en el higr 1. En la diabetes sacarina no controlada. .nnnicrones mes iLCAT nanentcs Apo CApo C-1 . --. hcidos grasos no esterificados. palmitoleico.A. form. .-.Ligandc1 para cirer:eptor HI31... en donde hay constante afluencia de nutrientes a partir del intestino.-. . A-1 para lecitin:colesterol aciftrancferasa.UUU rinr nl . ----- FMasa mole (Da) s adiciona les Apo A- ctiva~~ora ae p la ~ecitin:co~cstero~ aclltransrasa fl. . 3 ) Sirven como ligandos para interaccionar con receptores de lipoproteinas en los tejidos. . .7 y 0.8 pEqlmL en el ayuno total. . Las apolipoproteinac tienen varias acciones: 1) Son cofactores de enzimas. apo E para el receptor LDL.-. . Se registran valores bajos de hcidos grasos libres en el plasma en estado de alimentacidn completa. .r1 LII~V~J~I~O . is polimórlTeas dcpendiendo del intenido dr:ácidos sialicos ucde actuar como proteina ae transferencia : Iípidas - Apo E . aislada de las VLDL y HDL. C-11 para lipoproteina lipasa. .

Aunque tanto los quilomicrones como las VLDL aisladas de la sangre tienen apolipoproteínas C y E. tos ácidos gmsos se unen a una proteina membrana1 fijadora de Acidas grasos que actúa como un comansportador transrnembrana con Na'. siendo mayor la oxidaci6n en el estado de ayuno que en el de nutrición. LOS TRIACILGLICEROLES SE TRANSPORTAN DESDE EL INTESTINO EN QUILOMICRONES Y DESDE EL H~GADO EN LIPOPROTE~NAS DE MUY BAJA DENSIDAD Por definición. El recambio de ácidos grasos libres está directamente relacionado con su concentraci6n.~ 303 La velocidad de eliminación de ácidos grasos libres de la sangre es muy rápida. la velocidad de producción de ácidos &rasos libres en el tejido adiposo controla su concentraci6n en e[ plasma. donde se encuentran depósitos considerables de lipidos en las células musculares. En la inanición. Se forman incluso en estado de ayuno. Así. altera la proporción de la cantidad que es oxidada comparada con la fraccién que es esterificada.Transuorfe y almacenamiento de linido. Se liberan los qiiilomicrones y las VLDL ya sea de la célula intestinal o dc la hephfica por medio de la fusión de la vacuola secretora con la membrana celular {pinocitosis inversa). Esta diferencia se puede explicar por la oxidación de kipidos esterificados circulantes o de !os presentes en los tejidos. Las VLDL son secretadas por las células del parénquima hepático dentro del espacio de Disse y luego en los sinusoides hepaticos a través de las venranas del revestimiento endotelial. los acidos grasos libres son retenidos por una proteína fijadora de Bcidos grasos o proteína Z. por tanto. la apoB es incapaz de funcionar a causa de un defecto en una proteina transferidora de triacilglicerot que evita la carga de la apo B con lipidos. la formacibn de quilomicrones aumenta con la carga de triacilglicerol absorbida. los tejidos intestinal y hepatico son los únicos desde donde se excretan lipidos particulados. Por otro. DesputSs de la disociacion del complejo Iicido grasoalbúmina en la membrana plasmiitica. En la abetalipoproteinemia (una enfermedad poco frecuente). Ellas son el vehículo de transporte del triacilglicerol desde el hígado hasta los tejidos ex- nales y el de las VLDL con las células del parénquima hepático (figura 27-3). no se forman las lipoproteinas que la contienen y las gotitas de lipidos se acumulan en el intestino y el higado. se oxida una cantidad de grasa considerablemente mayor de la que puede ser atribuida a la oxidacion de los acidos grasos libres. la cual a su vez determina su captación por otros tejidos. Al entrar al citosol. Parte de la captacihn se oxida y suministra alrededor de 25 a 50% de los requerimientos energéticos durante el ayuno. Sin embargo. Las similitudes entre los dos procesos y los mecanismos anatómicos son sorprendentes porque. Los quilomicrones pasan a los espacios entre las células intestinales. Las lipoproteínas atraviesan el aparato de Golgi donde más lipidoc y residuos de carbohidratos se agregan a la lipoproteina. que es el principal sitio de sintesis de triacilglicerol. La incapacidad de un lipido particulado del tamafio de los quilomicrones y de las VLDL para pasar a través de las células endoteliales de los capilares sin una hidrolisis previa es probablemente la razbn por la que las grasas de los alimentos entran a la circulación a travks de los linfhticos (conducto torácico) y no por el sistema portal hepático. las Iipoproteinac recien secretadas o "nacientes" contienen poca o nada de ella. La mayoría de las VLDL plasmaticas es de origen hephtico. El resto de la incorporación es esterificada. El estado de nutriciiin no parece tener un gran efecto sobre la incorporacibn Fraccionada de los hcidos grasos libres por tos tejidos. Se cree que E o último e n particular se presenta en el corazón y el músculo esquelCtico. sus Iípidos derivan principalmente de las secreciones biliares e intestinales. aparte de la glándula marnaria. Se piensa que la función de ksta en el transporte intracelular es semejante al de la albúmina serica en el transporte extracelular de los ácidos grasos de cadena larga. La apolipoproteína B es sintetizada por los ribosomas en el retículo endopl~smico rugoso y ES incorporada a las lipoproteínas en el retículo endoplasmico liso. Se ocupan del transporte de todos los Iipidos diet6ticos en la circulaci6n. La apo B es indispensable para la formación de quilomicrones y VLDL.lado. pues su tiempo medio de desapariciones del orden de minutos en los animales pequefios (como trahephticos. Hay muchas semejanzas entre el mecanismo de fomaci6n de los quilomicrones con las cdlulas intesti- . abriéndose camino fínalmente hacia el sistema linfático (quiliferos) que drena el intestino. y pareceria que el cornplemento de polipéptidos de la apoproteina C y E es tomado por transferencia desde l& HDL una vezque los quiIomicrones y las VLDL han entrado en la circulación (figuras 2 7 4 y 27-5). Una descripcidn mas detallada de los factores que controlan la secreción hepática de VLDL se da despds. los quilomicrones se encuentran en el quilo formado sólo por el sistema linfatico que drena el intestino. Hay partículas m& pequefias y m& densas que tienen características de la VLDL que tarnbikn se encuentran en el quilo. LOS QUILOMICRONES Y LAS LIPOPROTE~NAS DE MUY BAJA DENSIDAD SON CATABOLIZADAS RÁPIDAMENTE La depuracibn de la sangre de los quilomicrones marcados es rápida.

apolipoproteina B d 8 . DE.TG. C. Figura 2 7 4 . Destino rnetabdlimde los quilomicrones. reticulo endopl~smico Q . Iipasa hephtica. endotelio.) Se muestran $610 los Ilpidos más importantes . 8-48. aparato de Golgi: N. VLDL. G. (RER. P. E. triaeilglicerol. núcleo. espacio de Disee. apolipoprofeina A. quilomicrones. Iipoproteínasde alta densidad. Iipoproteinac de muy baja densidad. por una dlula hep8tica. colesterol y éster de colestetilo. apolipoproteina E.apolipoproteína C. que contiene plasma sanguíneo. 0. REL. (A. Forrnacibn y secrecibn de (A) quilomicrones por una célula intestinal y (B) lipoproteinas de muy baja densidad liso. HDL. reticule endoplBsmiw rugoso.) El esquema es una representacióndiagramática de sucesos que pueden observarse con microsmpio electrbniw. fosfolípido: LH.3 04 * Bioauímica de Haraer (Cmítulo 2 7) A Luz intestinal B Capilar sanguineo Vasos Iinfaticos hacia el mndLicto E Luz del sinusoide sangulneo torAcico Figura 27-3. E.

Tmtiikn del higado se libera una lipasa. E. aunque es mas largo en los animales grandes (como en el ser humano). Q.Transporte y alrnaceriamiento de lípidos 305 Figura 2 7 6 . corazón y músculo. triacilglicerot. Cuando se administran. tejido adiposo. pulmdn. TG. Los triacilglicerol de los quilomicrones y las V L D t se hidrolizan por acción de la lipoproteina lipasa Hay una corretacion significativa entre la capacidad de un tejido para incorporar ácidos graso5 de los triacilgliceroles de l a lipoproteinas y la actividad de la enzima lipoprotefna lipasa. Es posible que una parte de IDL sea metabolizada por la via del receptor para el remanente de quilomicrbn (apo E). cuando hay grandes cantidades de heparina. Por consiguiente. quilomicrones marcados en los acidos grasos del triacilglicerol. los quilomicranes y las VLDL proporcionan la enzima para su metabolismo con su sustrato y sus cofactores. casi 80% de la marca se encuentra en el tejido adiposo. La apo C-Fl contiene un sitio específico de fijación de fosfolipido n través del cual se adhiere a la Iipoproteína. . en quienes todavía es menor de una hora. Se encuentraen las células endotelialesdel hígado y se vincula con el quilomicrón remanente y el metabolismo de las HDL. después de una inyeccibn de heparina se libera la lipoproteina lipasa de su enlace al sulfato de heparán y entra en la circulacibn acompañada de la desaparicihn de la lipemia. la lipasa hephtica. Se loca!iza en las paredes de los capilares sanguíneos. por la vía venosa. meduIa renal. lipoproteína de densidad rntermedia. Como los experimentos con organo irrigado han demostrado que el hígado no mesaboliza de manera significativa los quilomicrones o las YLDL locales la marca en el higado debe ser un resultado secundario de su metabolismo en los tejidos extrahepáticos. fosfolípidos ) Solamente se presentan los Iipidos mas importantes. C. apolipoproteina E: HDL. Destino rnetabólico de las Iipoproteinas de muy baja densidad (VLDL) y producción de Iipoprotelnas de baja densidad (LDL) (A. glhndula mamaria en lactancia y en el hígado del recien nacido. SDL. lipoproteina de alta densidad. apolipoproteina A: B-100. aorta. y aproximadamente 20% en el hígado. diafragma. anclada por ca- denas de peptidoglucano de sulfato de heparhn y se ha encontrado en extractos de corazhn. colesterol y ester de colesterilo: P. apolipoproteina C. pero esta enzima tiene propiedades diferentes de las de la lipoproteina Iipaca y no reacciona facilmente con los quilomicrones. La sangre noma1 no contiene cantidades apreciables de la enzima. no es activa en el del adulto. apolipoproteina B?00. las ratas). Las particu las más grandes se catabolizan más rapidamente que las mas pequefias. Tanto los fosfolipidas como Ia apolipoproteina C-II se requieren como cofactores para la actividad de la lipoproteína lipasa. bazo. sin embargo.

véase capitulo 28. Algunos de los Acidos grasos liberados regresan a la circi~lacion. Estos receptores son deficientes en la hipercolesterolemia familiar. La Apo E 4 8 carece del dominio carboxilo terminal de B-100 que contiene el ligando para el receptor de LDL. permitiendo la captacibn de triacilglicerol can hcidos grasos de cadena larga. En la rata. Un encausamiento semejante se produce d~irante S a lactancia. figura 27-5). En tejido adiposo. solo apolipoproteína A. Cambios semejantes tienen lugar en las VLDL con la formación de VLDL remanentes o IDL (lipoproteinas d e densidad intermedia. El hígado capta las lipoproteínas remanentes Los quilomicrones remanentes son captados por el higado a través de endocitosis mediada por receptor y los Csteres de colesterilo y los triacjlgliceroles son hidrolizados y rnetabolizados. han demostrado que las VLDL son precursoras de las IDL y que estas Últimas lo son de las LDL. LAS HDL INTERVIENEN EN EL METABOLISMO DE LOS TR1ACILGLICEROLES Y DEL COLESTEROL Las HDL son sintetizadas y secretadas tanto en el hígado como en el intestina (figura 2 7 4 ) . La lipoproteína lipasa cardiaca tiene una Kmbaja para el triacilglicerol en tanto que la ICTl de la enzima en el tejido adiposo es 10 veces mayor. Los estudios en cultivos de fibroblastos humanos. pero la saturación de la enzima disminuye en el tejido adiposo. pero no para apo R-48 y bajo ciertas circunstancias captará lipoproteinas ricas en apo E. de las lipoprotelnas. los receptores (B-100. El triacilglicerol es hidrolizado de modo progresivo a travb de un diacilglicerol a iin monoacilglicer~l que finalmente se hidroliza a hcido graso libre y glicerol. Dos destinos posibles esperan a IDL. la mayoria de las LDL se forman a partir de las VLDL como se describió. unidos a la albúmina. Idos estudios que utilizan VLDL con apo B-100 mascada. Conforme la concentraci~n del triacilglicerol plasmlitico decrece en la transicion del estado de nutrición al de ayuno. las HDL nacientes (recitn secretndas) del intestino no contienen apolipoproteina C o E. La infomacion actual sugiere que tanto el receptor de LDL (apo B-100. linfocitos y celulas de músculo liso arteria1 han demostrado la existencia de sitios especiiicos de enlace o receptores para las LDL. Así. su composicion se enriquece relativamente en colesterol y en Csteres de colesterilo por la perdida de triacilglicerol (figura 2 7 4 ) . La IBpoproteina resultante o quilomicr6n remanente tiene un diámetro aproximado de la mitad del quilomimbn precursor y. Aproximadamente 30% de LDL es degradada en los tejidos extrahepáticos y 70% en el hígado. La lipasa hepática tienc una funcion doble: 1) actuar como ligando para la lipoproteina y 2) hidrolizar sus triacilgliceroles y fosfolipidos. La acción de la lipoproteína lipasa forma lipoproteinas remanentes La reacción con la lipoproteína lipasa conduce a la pérdida de aproximadamente 90% del triacilglicerol de los quilomicrones y a la pérdida de apo C (la cual regresa a HDL) pero no la apo E (la cual es retenida).(Capitulo 27) La hidrdlisis tiene lugar mientras las lipoproteinas esthn adheridas a la enzima en el endotelio. en la cual la actividad del te-jido adiposo disminuye y Ia de la glándiila mamarla aumenta. El tiempo promedio de desaparición de la circulación de la apoproteína 0-1 00 en las LDL es d e alrededor de dos días. E) y el receptor remanente específico para apo E participan en la captación del remanente. LA LDL ES METABOLIZADA POR INTERACCIQN CON SU RECEPTOR A1 parecer. la apolipoproteina C parece ser sintetizada en el hígado y transferida a las IlDL . la insulina incrementa la sintesis de lipoproteína lipasa y su traslado a la superficie luminal del endotelio capilar. con lo cual la captación se redirige del tejido adiposo hacia el corazbn. para la sintesis de los lipidos lácteos. pero existen evidencias de alguna producción efectuadadirectamente por e[ higado. Para descripcibn adicional de la regulación del receptor para LDL. la mayoria de las IDL se captan por cl higado. en tkrrninos de porcentaje. E) o convertirse en LDL. y participa así en la mayor concentración de LDL en éstos en comparación con la rata (y muchos otros marniferos). pero el volumen mayor es transportado al tejido (figuras 2 7 4 y 27-5). Pueden ser captados de manera directa por el higado a través del receptor para LDL Capo 8-1 00. las enzirnas cardiacas permanecen saturadas con sustrato. Solamente una de la apo R-100 esta presente en cada particula de esta lipoproteína y se conserva durante las rransformaciones. E). en tanto que en Ios seres humanos una proporcibn mucho mayor forma LDL. Cada pariiculia de LDL deriva de una sola partícula de VLDL (figura 27-5). la captacidn es mediada por un receptor específico para apo E (figura 2 7 4 ) . Al parecer. Existe una correlación positiva entre la frecuencia de la aterosclerosis coronaria y la concentracibn plasmática de LDL. Se designa asi debido a que es específico para apo B-100. Sin embargo.

Las HDL nacientes consisten en dobles capas discoides de fosfolipidos que contienen apoproteinas y colesterol libre. intestinales cuando esths entran al plasma.aidos* 307 Figura 2 7 4 . fosfolípido. C. AGL. cuadro 27-2 Además de triacilgliceroles. Bster de colesterila.Transporte y alrnacenumlento de 1i. lecitin:mlesterolaciltransferasa. Los ésteres de coleszerilo no polares penetran en el interior hidrófobo de la doble capa. EC. lo que permite la formación de HDL3 más pequeños y más densos La actividad de lipasa hepAtica es incrementada por andrbgenos y disminuye por estrógenos. aproproteina A-l. liberando colecterol para captación hepatita. lo cual puede explicar los valores plasmáticos más elevados de HDL2 en mujeres. Una funci6n importante de las HDL es actuar como reservorio de las apoproteinas C y E que son requeridas en el metabolismo de quilomicrones y VLDL (figuras 2 7 4 y 27-5). El higado es el sitio final de degradacilin de los esteres de coleste- . HDL3. De este modo. en tanto que la licolecitina es transferida a la albúmina del plasma. se unen al disco. el sistema de la LCAT interviene en la eliminación del CXGeSO de colesterol no esterificado de tas lipoproteinas y de las tejidos. La reacción continúa generando un nucleo no polar que empuja a E a doble capa hasta que se forma una HDL esferica seudomicélica. La LCAT y la apolipoproteina activadora A-1 de dla. La catllisis por la LCAT convierte el fosfoIipido superficial y el colesterol libre en ésteres de colesterilo y en licolecitina. A-1. ácidos grasos libres. Estas lipoproteinas son similares a las partículas encontradas en el plasma de pacientes can deficiencia de la enzima lecitin:colesterol~ciltransderasa (LCAT) y en el plasma de pacientes con ictericia obstructiva. colesterol. Metabolismo de las lipoproteinas de alta densidad (HDL) (LCAT. la lipasa hepática hidroliza fosfolípidos de la superficie de HDL2. PL.) La figura muestra el papel de las tres enzimas lipasa hep8tica LCAT y LPL en el ciclo de las HDL postulado para el transporte del colesterol desde los tejidos al hígado HD4. cubierta por una película superficial de lipidos y apolipoprotcinas polates.

Se ha propuesto un ciclo de las 1-IDLpara explicar el transporte del colesterol de los tejidos al hígado. En estas condiciones. fosfolipidos y apo A-1 liberados durante la hidrólisis de quilomicrones y que contribuye a la formacibn de HDL naciente. por ejemplo. donde la particula se condensa más. Las concenmiones de HDL p L 2 ) tienen relación inversa con la frecuencia de la aterosclerosis coronaria. 3 ) altos valores de hcidos grasos libres circulantes. fosfolípidos (capítulo 26). se eleva la cifra de hcidos grasos libres circulantes y mAs de ellos son captados por el hígado. en las dietas ricas en -as oen la diabetessacarina. Es por esta razón que estos hltimos se designan en ocasiones receptores apo B-100. (HDL. se debe inferir que son transportados del hígado en las VLDL tan rápidamente como son sintetizados y que la sintesis de apo B. un proceso conocido como transporte inverso de colesterol (figura 2 3 4 ) . Los ácidos grasos usados en la síntesis de h a cilgliceroles hepáticos se derivan de dos fuentes posibles: 1) sintesis dentro del hígado a partir de ta acetil-CoA derivada principalmente de los carbohidratos (quizls no sea inlportante en los seres humanos) y 2) captación de bcidos grasos libres desde la circulacibn. 2) Tiene sistemas enzimliticos activos para la formacihn y oxidación de los Bcidos grasos (capítulos 23 y 24) y para sintetizar triacilgliceroles. que asi se reincorpora al ciclo.. Sin embargo. EL H~GADO TIENE UNA FUNC~ÓN PRINCIPAL EN EL TRANSPORTE Y METABOLISMO DE LOS L~PIDOS Al principio se pens6 que mucho del metabolismo de los lipidos del cuerpo era prerrogativa del higado. Los valores de HDL varían reciprocamente con las concentraciones plasmaticas de triacilglicerol y de manera directa con la actividad de la lipoproteina lipasa. que incrementan la sintesis y esterificación de hcidos grasos e inhiben su oxidación. Por otro lado. y 5) la presencia de concentraciones altas de insulina y bajas de glucagón. 3 ) Convierte los ácidos grasos en cuerpos cetonicos (cetoghnesis) (capitulo 24). la lipogenesis se inhibe y !os Qcidos graos libres son la fuente principal de ácidos gasos de los triacilgliceroles en el hígado y en las VLDL. Los triacilgliceroles hepáticos son precursores inmediatos de sus homblogoc contenidos en las VLDL plasmfiticas (figura 27-7).) se encuentra en la sangre de los animales con hipercolestesolemia causada por la dieta. La primera fuente predomina en estado de buena alimentacibn. volvit5ndose a fonnar HDL. de modo significativo. No se sabe con precisibn si en la endocitosis de HDL interviene un receptor verdadero para HDL O apo A-P. N o parece que el hígado capte las HDL que contienen apo A-1. posiblemente debido a que reflejan la eficiencia de la depuración del colesterol de los tejidos. Los mecanismos enzimáticos encargados de la síntesis de triacilgliceroles y fosfolipidos han sido descritos en el capitulo 26.rilo HDL. La lipasa hepática hidroliza fosfolípido HDL y triacilglicerol. que conduce a velocidades elevadas de lipogknesis y de esterificación de ticidos grasos. durante el ayuno. Esto se puede deber a los elementos de superficie. La sintesis de triacilglicerol proporciona el estímulo inmediato para la creación y secrecibn de VLDL.100 no es limitante de la velocidad. Las apo A-l son disociadas y eliminadas por el riirbn. 4) la ingestibn de etanol. el concepto de una funcion central y única para el hígado en el metabolismo de los lipidos es todavía importante. digestión mediante la produccibn de bilis. El ciclo considera captaci~n y esterificación de colesterol mediante HDL. han tendido a modificar el Cnfasis anterior sobre la funci6n del hígado. cuando la síntesis de hcidos grasos es alta y el valor de acidos grasos libres circulantes es bajo. permitiendo que la partícula libere su carga (colesteril Csrer hacia el hígado. Este brgano lleva a cabo las siguientes funciones principales en el metabolismo de los lípidos: l} Facilita su absorcion y . La HDL. Los factores que aumentan tanto la sintesis de triacilgliceroles como la secrecibn de VLDL por e! higado incluyen: 1 ) estado de nutrición adecuada más que ayuno. Parece que todas las lipoprotefnas plasrnáticas son componentes interrelacionados de uno o más ciclos metabolicoc que juntos son responsables del complejo proceso del transporte de los lipidos plasmAticos. Como los triacilgliceroles no se acumulan normalmente en el hígado en este estado. que contiene colesterol y sales biliares sintetizados en el propio higado de novo o de la captación del colesterol de las lipoproteinas (capítulo 28). Es captada por el hígado por medio del receptor para la apo E remanente. 2 ) la alimentación con dietas abundantes en carbohidratos (particularmente si contienen sacarosa o fmcrosa). E! descubrimiento de que muchos tejidos tienen la facultad de oxidar completamente los acidos grasos y el conocimiento acumulado que demuestra que el tejido adiposo es metabólicamente activo en extremo. pero también por los receptores para LDL. La secreción de VLDL hepaticas se relaciona con el estado nutricional y hormonal Ya se describieron las acciones celulares que intervíenen en la formación y secrecion de VLDL. 4) Desempefia una parte integral en el metabolismo de las lipoproteínas plasrnhticas (en este capítulo). que a su vez se toma menos densa formando aci HDL?. Es rica en colesterol y su Unica apolipoproteina es apo E.

7 309 Figura 27-7. lipoprotelnac de alta densidad.MTP proteína microsomalde transferencia d e b l a s v i a s indicadasforman la base para los fenbmenos que se muestran en la figura 27-38. Sintesis de lipoproteinasde muy baja densidad (VLDL) y los posibles sitios de accibn de los factores que causan acumulacibn de triacilglicerolese hígado graso. HDL. AGL.Por tanto.Transporte y alrnucenamren~o de lipido. (AGE.A p o apolipoproteina. Sicidos rasos libres. AGL. se sintetiza apo 8-100 en exceso a los requerimientos de secrecibn para VLDL. ácidas grasos esenciales. insulina y glucagbn benen efectos inmediatos sobre la secreción de VLDL ya que su concentracibn afecta directamente al depósito precursor pequeiio de triacilglicerol En el estado de alimentación total. La reserva principal de triacilglicerot en el higado na está en fa via directa de sintesis de VLDL a partir de acil-COA. y el exceso se destruye por vía hepática .

Una deficiencia de vitamina E aumenta la necrosis hepatica en el hígado graso por deficiencia de colina. cirrosis. atrapa adenina disponible y así evita la síntesis de ATP. la infiltración de grasa es suficientemente gravc para causar palidez visible (apariencia grasa) e hipertrofia del hígado. Es muy verosimil que el íetracloruro de carbono afecte tambikn al mecanismo secretor mismo o a la conjugación del lípido con la apoprotcina de la lipoproteina. Tebricamente. su Iiberacibn y explicando la disminución notoria de las lipoproteinas plasrnáticas que contienen apo B. Otras sustancias aue actúan en forma similar incluyen a la etionina (&ido alfa-amino-garnmnmercaptobutlrico). otras sustancias. principalmente como triacilglicerolcs. la capacidad de secretar VLDL también está deteriorada. El higado incorpora cantidades crecientes de ácidos grasos libres y los esterifica. El icido orolico también causa la acumulaci6n de grasas en el higado. en ultima instancia. los que progresan hasta lacirrosis y el deterioro de las funciones hepáticas. como el colesterol. permitiendo que se acumulen los triacilgliceroles y dé por resultado un hígado graso. En muchos casos (por ejemplo. La primera está relacionada con valores elevados de Acidos grasos libres plasmátkos qiie resultan de la movilizaciiin de kas grasas del tejido adiposo. E a s deficiencias de Acidos grasos esenciales y vitaminas (por ejemplo. los Iípidos. donados por ta metionina en el proceso de transrnetiZacibn (capítulos 32 y 33). N o estB . por consiguiente. fosforo. Cuando se hace crhnica. La acumulación extensa es considerada coma patolbgica. El etanol tambien causa acumulación de grasas en el hígado El atcoholismo tarnbien provoca la acumulaci6n de grasas en el higado. macicín de radicales libres que pueden desintegrar a las membranas 3ipidas en el reticulo endoplásmico mediante la formación de peróxidos de Ilpidos. tetracloruro d e carbono. incluyendo su ausencia. en inanicion). La acumulaciún de grasaen el hígado se cla~ifica en dos categorías principales. Como la colina puede ser sintetizada usando grupos metílo Iábiles. Las causas pueden ser concentración baja de insulina y alteración en la sintesis de proteinas. El mecanismo exacto de la acción del alcohol a largo pla7o es todavía desconocido. La alimentacibn enriquecida con vitamina E proporciona cierta protección contra la peroxidacibn de los lipidos inducida por el tetracloruro de carbono. inhibiendo. hiperlipidemja y. 3 ) a una falla en la provisibn de fosfolípidos que se encuentran en las lipoproteínac. La administración de vitamina E o una fuente de selenio tiene un efecto protector al combatir la peroxidación del lípidos. dc la hidriilisis de triacilgliceroles de las lipoproteínas o de los triacilgliceroles de los quilomicrones por la acción de la lipoproteína lipasa en los tejidos extrahepiiticos. El segundo tipo de acumulación de grasa en el higado se debe generalmente a un bloqueo metabólico en la produccion de lipoproteinas plasrniticas lo cual ocasiona que se acumulen los triacilgliceroles. que reemplaza a la metionina en la S-adenosilmetionina. Además de la deficiencia proteinica. Un tipo de hígado graso que ha sido estudiado extensamente en las ratas se debe a una deficiencia de colina. Se han sugerido varios mecanismos para explicar la funcihn de la colina como agente Iipotrópim. conforme se acumulan VLDL en el aparato de GoEgi. cloroformo. o 4) a una falla en el propio mecanismo secretor. se pueden acumular en el higado (figura 27-7). pueden también causar acumulación de grasas en el higado. sino que m8s bien depende de la transfomacibn ulterior Esto probablemente implique ta forde la mol~cula. se considera que el ácido or6tico bloquea la glucosilacibn de S a lipoproteína. que compiten por los Acjdos grasos esenciales disponibles para"laesterificacihn. 2) a un bloqueo en la síntesis de lipoproteína a partir de los lipidos y las apolipoproteinas. Esto resulta cuando la etionina. Se cree que la deficiencia de ácidos grasos esenciales deprime la síntesis de fosfolípidos. se producen cambios fibrsticos en las c&lulas. ácido linoleico.(Capítulo 2 7) El desequilibrio en la velocidad de formación y exportación de triacilglicerol causa la acumulación de grasa en el hígado Por muchas razones. La colina no protege al organismo contra esos agentes pero parece que ayuda en la recuperación. que cama alteraciones en la síntesis de los fosfolípidos lipoproteínicos. en la toxemia del embarazo de las ovejas y en la cetosis del ganado. la lesión se puede deber a: 1) un bloqueo en la sintesis de apolipoproteinas. plomo y arsénico. La producción de VLDL no va pareja con la afluencia de dcidos grasos libres. la deficiencia se debe básicamente a la escasez de ese grupo metilo. Se cree que la acción de la etionina es causada por una reduccidn en la disponibilidad del ATP. la que por esto ha sido llamada factor lipotrdpico. El antibibtico puromicina inhibe la sintesis proteinica y provoca la aparición de hígado graso y una marcada reducción en la concentracibn de VLDL en las ratas. piridoxina y ácido pantoténico) pueden causar infiltracion grasa en el higado. por tanto. Su efecto no es directo. En la diabetes sacarina no controlada. La cantidad de triacilglicerol que se encuentra en el higado aumenta de modo significativo durante la inanición y en la alimentacibn con dietas ricas en grasas. con posible disfuncion hepática.

Transportey almacenamiento de lbidos

3I I

claro si la movilización adicional de acidos grasos libres interviene en la acumulación de grasas, pero varios estudios han demostrado valores elevados de ácidos grasos libres en la rata despues de la adrninistración de una sola dosis intoxicante de etanol. Sin embargo, el consumo de alcohol por periodos [argos conduce a la acumulación de ácidos graso5 en el hígado los cuales derivan de la síntesis endógena m8s que del tejido adiposo. Después de la ingestibn de etanol no hay al~eraciánde la síntesis proteinica en el hígado. Existen evidencias de un incremento en la sintesis hepatica de triacilglicerol, disminucihn de la oxidaci6n de Acidos grasos libres y reducción d e la actividad del ciclo del ácido cítrico, causada por la oxidacihn del etanol en el citosol de las células hepaticas por la acción de la alcohol deshidrogenasa que conduce a la producción excesiva de NADH.

inhibe t a m b i h el metabolismo de algunos fatmacos, por ejemplo, barbituratos, al competir con las enzimas dependientes de citocromo P45O (capitulo 61).

C H z - C H 2 4 H + NADPH + H" + 0 2 Etanol CHj-CHO + NADP' + 2HzQ kcetaldehido

!
ALCOHOL
DESHIDROGENASA

La alcohol deshidrogenasa se encuentra tarnbien en la mucosa gástrica, pero su actividad es 60% menor en mujeres que en varones. La elevada disponibilidad de etanol causada por esa escasa utilizacibn gástrica puede explicar por qué las mujeres son más susceptibles a los efectos del consumo de alcohol. DespuCs de L a ingestión de etanol, algunas poblaciones asiaticas y de indios americanos muestran predisposiciiin a un incremento en las reacciones adversas a acetaldehido debido a un defecto genético de la aldehido deshidrogenasa mitocondrial.

CH3-CHz4H p C H 3 Ebnol NAD' NAOH + H'

2 H 0 Acetaldehido

EL TEJIDO ADIPOSO ES EL PRINCIPAL SITIO DE ALMACENAJE

El NADH generado compite con los equivalentes reductores de otros sustratos por la cadena resplratoria, inhibiendo su oxidacibn. El aumento de la proporción [NADH]I[NAD"] origina un desplazamiento a la izquierda en el equilibrio rnaIato = oxalacetato, que puede reducir la actividad del ciclo del ácido citrico. E E efecto total de inhibir la oxidacibn de los Acidos grasos es provocar mayor esterificacidn de los mismos en el triacilglicerol, lo cual parece ser la causa de la acumulación de grasa en el hígado. La oxidacion del etanol conduce a la fomación de acetnldehido, el cual e5 oxidado por la aldehído deshidrogenasa en las mitocondrias, y el acetato es el producto final. O t o s efectos del alcohol pueden incluir aumento de la lipogénesis y de la síntesis de colesterol a partir de acetilXoA. El mayor cociente de [NADH]/[NAD'] provoca también un mayor cociente de [lactato]/[pinivatoj que produce hiperlactiacidemia, la que a su vez disminuye la capacidad del rifibn para excretar acido úrico.Al parecer, esto último es la causa del agmvamiento de la gota por la ingestion alcohblica. Aunque la principal ruta del metabolismo del etanol es a través de la via de la atcoho! deshidrogenasa, algo del rnetabolismo se lleva a cabo mediante el sistema oxidante de etanol de los microsomas (MEOS, del inglds rnicrosomal ethanoi' oxidizing sistem) dependiente del citocromo P45O que involucrael NADPI-Iy al Oz.Este sistema aumenta su actividad en el alcoholismo crónico y explicaría la depuración metabblica acelerada en este trastorno, como lo indican las altas concentraciones sanguineas de acetaldehido y acetato. El etanol

DE TR\AC\LGL\CEROLEN EL CUERPO
Los depisitos de tríacilglicerole~ en el tejido adiposo estan continuamente experimentando lipólisis (hidrblisis) y reesterificaciiin (figura 27-8). Estos dos procesos no son las fases en ambos sentidos de la misma reoccibn. MAS bien con vEas enteramente diferentes en las que intervienen reactivos y enzimas distintos. Muchos de los factores nutritivos, rnetabólicos y hormonales que regulan el metabolismo del tejido adiposo acnian ya sea cobre los procesos de esterificacibn o en la lipblisis. La resultante de estos dos procesos determina la magnitud del depósito de ácidos grasos libres en el tejido adiposo, que a su vez es la fuente y determinante de la cantidad de ácidos grasos libres que circulan en el plasma. Debido a que la cifra plasmaticade acidos grasos libres tiene efectos m& profundos sobre el metabolismo de otros tejidos, particularmente el hepático y muscular, los factores que operan en el tejido adiposo y regulan la salida de ácidos grasos libres qiercen una influencia más alla del zejido mismo.

La provisión de glicerol 3-fosfato regula la esterifícación: la Iipóllsis es controlada por una lipasa sensible a hormona
En el tejido adiposo, el triacilglicerol es sinteti~ado a partir de la acil-CoA y del glicerol 3-fosfato. segun

312

Bioquimicade Hurper

(Capítulo 2 7)

Glrceml3-fosfato

TEJIDO ADIPOSO

Figura 27-8. Metabolismo del tejido adiposo. La lipasa sensible a hormonas es activada por la ACTH, la TSH, el glucagbn, la adrenalina. la noradrenalina y la vasopresina, e inhibida por la insulina, la pmctaglandina Ei y el lcrdo nicotínico. Los detalles de la forrnacibn d e glicerol 3-fosfato a partir d e intermediariosd e la gluCblisis se muestran en la frgura 26-2. (VPF, vía de la VLDL, Iipoproteínas d e muy baja densidad.) pentosa fosfato; TG, triacilglicerol,AGL, ácidos grasoc I~bres;

el mecanismo que se muestra en la figura 26-2. Debido rt la baja actividad de la enzima glicerol cinasa en el tejido adiposo, el glicerol no puede ser utilizado de manera amplia en la esterificación de acil-CoA. Para. la pmvisibn de glicerol 3-fosfato, el tejido depende de la gluc6lisis y de un suministro de glucosa. El triacilglicerol es cometido a hidrotisis por la tipasa sensible a hormona para formar ácidos grasos libres y glicerol. Esta lipasa es distinta de la lipoprotcina lipasa que cataliza la hidrólisis de los triacilgliceroles lipoproteinicos antes de su captacibn por los tejidos extrahepáticos (vCace antes). Puesto que este

tejido no puede aprovechar con facilidad al glicerol, este se difunde al plasma, desde donde ya puede ser utilizado por tejidos como el higado y el rifírjn, los cuales poseen una glicerocinasa activa. Los acidos grasos libres obtenidos en la lipdlisis pueden volver a ser convertidos dentro de1 tejido adiposo en acil<oA por la a c i l z o h sintetasa y reesterificados con glicerol 3-fosfato para formar triacilglicerol. Por tanto, hay un ciclo continua de Iip6lisis y reesterificacibn dentro del tejido. Sin embargo, cuando la velocidad de reesterificacibn no es suficiente para igualar la velocidad de la lipblisis, 30s Acidos grasos

Transporte y almacenutnien~o de lbidos

3 13

libres se acumulan y difunden hacia el plasma, en donde se combinan con la albúmina y elevan laconcentracion de ácidos grasos libres plasmaticos. Estos son una fuente importante de energía para muchos tejidos.

Un metabolismo acelerado de glucosa reduce la salida de ácidos gracoc libres
Cuando aumenta la utilizacibn de glucosa por el tejido adiposo, la salida de ácidos grasas libres disminuye. Sin embargo, la liberacion de glicerol continúa demostrando que el efecto de la glucosa no es mediado por la reduccion de la velocidad de lipólisis. Se cree que el efecto se debe a la provisión de glicerol 3-fosfato, e 1 cual mejora la estesificacion de Lcidos grasos libres por la vía de la acil-CoA. La glucosa puede tomar varias rutas en el tejido adiposo, incluyendo la oxidacihn a COI por la vía del ciclo del ácido citrico, la oxidación en la vía de la pentosa fosfato, converci6n en ácidos grasos de cadena larga y formación de acilglicerol por la via del glicerol 3-fosfato. Cuando la utilizacihn de la glucosa es elevada, una mayor proporcion del consumo es oxidada a COI y convertida en ácidos grasos. Sin embargo, a medida que disminuye la utilización total de glucosa, es más grande la praporcibn de la misma que se dirige a la formacihn de glicerol 3-fosfato y para la esterificacibn de acil-CoA, los cuales ayudan a minimizar la salida de ácidos grasos libres.

Los ácidos grasos libres son captados debido a la actividad de la Fipoproteína lipasa
Existe m m 8 s de un depbsito de AGL dentro del tejido adiposo. Se ha demostrado que el depósito de ácidos grasos libres (figura 27-8, depósito 1) formado por lipdlisis de triacilglicerol es el mismo que surte los kidos grasos para la reesterificacidn; también los libera hacia el medio externo (plasma). Los hcidos grasos captados del entorno como resultado de la accibn de la lipoproteina Eipasa sobre el triacilglicerol de quilomicrones y VLDL, no marcan al depbsito 1 antes de ser incorporados al triacilglicerol, pero viajan a travks de un pequeflo depbsito 2 de recambio rhpido.

hormonas que influyen tanto en el indice de esterificacion como en el de lip6lisis. La insulina inhibe la liberacidn de acidos grasos del tejido adiposo, lo cual va seguido por una disminución de 6cidos grasos libres en el plasma circulante. El efecto es un incrementa de la lipogdnesis, de la síntesis de acilglicerol y de la oxidaciún de la glucosa a CO: por la vía de la pentosa fosfato. Todos estos efectos dependen de la presencia de la glucosa y pueden explicarse en gran parte con base en la capacidad de la insulina para acelerar la captacihn de glucosa por las células del tejido adiposo. Esro lo efectúa la insulina causando la traslocación de los transportadores de glucosa del aparato de Golgi a la membrana plasmhtica (figura 5 1-91. También se ha demostrado que la insulina incrementa la actividad de la piruvato deshidrogenasa, acetil-CoA carboxilasa y glicerofosfato aciltransferasa, que reforzaría los efectos que surgen del incremento en E a captaciiin de glucosa sobre la amplificación de la síntesis de iicido graso y acilglicerol. Se sabe ahora. que estas tres enzimas san reguladoras par una rnodificacibn covalente, esto es, por mecanismos de fosforilaci6n-desfos€orilacion. Una acción principal de la insulina en el tejido adiposo es la de inhibir la actividad de la lipasa sensible a hormona, lo que reduce la liberación no sólo de Bcidos grasos libres sino tambibn la de glicerol. El tejido adiposo es mucho más sensible a la insulina qire otros muchos tejidos, lo cual sefíata al tejido adiposo como un sitio principal de la acción insulinica in vivo.

Un gran número de hormonas estimulan la fipolisis
Otras honnonas aceleran la likracion de acidos gasos

LAS HORMONAS REGULAN LA MOVILIZACIÓNDE LIPIDOS
La insulina reduce la salida de grasos libres La velocidad de liberación de los hcidos grasos libres desde el tejido adiposo es afectada por numerosas

libres del tejido adiposo y elevan el valor plasmático de kidos grasos libres aumentando la velocidad de lipólisis en los depósitos de t~iacilglicerol (figura 27-9). &m incluyen la adrenalina, la noradrenalina, el glucagbn, la hormona adrenocorticotr6pica (ACTH, del inglds, adrenocorticotropic hormone), hormonas alfa y beta estimulantes de los melanocitos (MSH, del inglks alfa y k t a - m e l a n ~ t e 1 ~ t i m u l a t i n hormones), g hormona estimulante de la tiroides (TSH), hormona del crecimiento (GH} y vasopresina. Muchas de éstas activan a la lipasa sensible a hormona. Para un efecto óptimo, la mayoría de estos procesos ljpoliticos requieren la presencia de glucocorticoides y hormonas tiroideas. Por si mismas, estas hormonas particulares noaumentan la lipólisis notablemente, pero actúan como facilitadoras o permisivas con respecto a otros factores endocrinos lipofíticos. Las hormonas que actúan rápidamente en la activncibn de la lipblisis, es decir, las catecolaminas, lo

Adrenalina, noradrelina

Insulina, prostaglandina Eñ,
gluwgdn
1

,Bcrdo nicotinico

Bloqueadores
p-adrenergtcos

'@d * ,
S L _ _ _ .

. 7

1
1

1

Tria~ilglicero~ lipasa b

sen51ble a hormonas

Inhibidores de

sintests proteinica
'

,

Adenosina

Glucocorticoides

'nhibidore$de la sintesis proteinica

Figura 27-9. Control de la lipblisis en el tejido adiposo (TSH, hormona estimulante de la tiroides; AGP, $cidos gracos libres ) Nbtese la secuencia en cascada de las reacciones que permiten la amplificacibn en cada paso. El estimulo lipolitico es "desconectado" por la eliminación de la hormona estimulante; la accidn de la Iipasa fosfatasa; la inhibición de la Iipasa y la adenilato uctasa por mncentraciones altas de AGL, la inhibtaón de la adenilil ucbsa por la densidad. y la depuraubn del dVMP por acción de la fosfodiesterasa La ACTH, TSH y glucagon no pueden activar a la adenilato ciclasa in viw dado que la concentrauon que se requiere in wtmde cada una de ectas homlonas es mucho mayor que la que se enaientra en la circulacibn. Los &dos reguladoresposrtivo @) y negatrvo están representados por líneas punteadas y el sustrato Ruye por las llneas gtuesas.

{e)

logran estimulando la actividad de la adenilil ciclasa que es la enzima que convierte el ATP en cAMP. El mecanismo es anhlogo al que se ocupa de la estimulacibn hormonal de la glucogenólisis (capitulo 20). Al parecer, el cAMP, mediante la estimulación de la proteína cinasa que depende de cAMP, convierte la triacilglicerol lipasa inactiva sensible a hormona, en Iipasa activa. La lipólisis en gran parte es controlada por la cantidad de cAMP presente en el tejido. Se deduce que los procesos que destruyen o preservan el cAMP tienen efecto sobre la lip6lisis. El cAMP es degradado a 5'-AMP por la enzima 3', S'-nucle6tido fosfodiesterasa cíctica. Esta enzima es inhibida por las rnetilxantinas como la cafeina y la teofilina. Es significativo que el tomar café, que contiene cafeina, produzca una elevación marcada y prolongada de acidos graso5 libres en el plasma humano. La insulina antagoniza la acci6n de las hormonas lipoliticas. En la actualidad, se considera que la lipólisis puede ser m6s sensible a los cambios en la

concentraci6n de insulina que lo que son la utilizacion de la glucosa y la esterifícación. Los efectos antilipoliticos d e insulina. acido nicotinico y prostaglandina El pueden explicarse por la inhibicion de la síntesis de cAMP en el sitio de la adenilil ciclasa, actuando a travds de una proteina Gi. Tambiin la insulina estimula a la fosfodiesterasa y a la lipasafocfatasa que inactiva a la lipasa sensible a hormona. Los mecanismos posibles para la accilin de las hormonas tiroideas incluyen un aumento en la concentracion de cAMP mediante la facilitacibn del paso del estímulo desde el sitio receptor en el exterior de la membrana celular al sitio de fa adenilil ciclasa en el lado interno de la membrana y una inhibición de la actividad de la fosfodiesterasa. El efecto de la hormona del crecimiento en la promocibn de la lipdlisis, es lento. Depende de la síntesis de las proteínas que intervienen en la formación del cAMP. Los glucocorticoides favorecen la lipólisis por medio de la síntesis de nueva proteina lipasa pero por una via independiente del cAMP. Este hallazgo tambitn ayuda a explicar la hnci6n de la

Transporte y almacenamrenfode lbidos

315

hipbfisis y de la corteza suprarrenal en el incremento de la movilización de lípidos. El sistema nervioso simphtico, a traves de la liberación de noradrenalina en el tejido adiposo, tiene una funciiin central en la movilización de ácidos grasos libres, al ejercer una influencia tónica aun cuando la actividad nerviosa no aumenta. Así, la lipolisis elevada, causada por muchos de los factores descritos previamente, se puede reducir o abolir por la desnervación del tejido adiposo, el bloqueo ganglionar con hexarnetonio o el agotamiento dc los depósitos de noradrenalina con reserpina.

EL TEJIDO ADIPOSO PARDO FAVORECE LA TERMOGENESIS
EI tejido adiposo pardo interviene en el metabolismo, en partici~laren los momentos en que es necesaria la generación de calor. Así, el tejido es extremadamente activo en algunas especies al despertar de la hibernación, en animales expuestos al frío (temogCnesis sin escalofríos) y en la producción de calor en el animal recitn nacido. Aunque no es un tejido importante en el ser humano, recientemente se ha demostrado que es activo en los individuos normales, donde parece ser la causa de la "termogénesis inducida por los alimentos", que podría explicar ta causa de i u e algunas penonas puedan "comer y no engordar". Es conveniente hacer notar que en las personas obesas el tejido adiposo pardo es escaso o rio existe. Ademis, este tejido se caracteriza por disponer de un suministro sanguíneo bien desarrollado y un contenido elevado de mitocondrias y citocromos, pero poca actividad de ATP sintatasa. El enfasis metahblico está en la oxidacion tanto de la glucosa como de los Bcidos grasos. La noradrenalina liberada dc las terminaciones nerviosas simphticas es importante en el incremento de la lipdlisis tisular. La oxidacilin y la fosforilación no esthn acopladas en la mitocondrias de este teiido, puesto que el dinitrofenol no ejerce efecto alguno y no hay control respiratorio por el ADP. La fosforilación es a nivel del sustrato; es decir, en el paso de la succinato tiocinasa y en la gluc6lisis. Por tanto, la oxidación produce mucho calor y un poco de encrgia libre se atrapa como ATP. En teminos de la teoría quimiosrnótica (capitulo 141, podria parecer que el gradiente de protones normalmente presente a travh de la membrana mitocondrial interna de las rnitocondrias acopladas, es disipado de modo continuo en e[ tejido adiposo pardo por una proteina temogdnica, la termogenina, que actúa como una vía de conduccibn de protones a través de la membrana. Esto explicaría la aparente carencia de efecto de los desacopladores (figura 27-1 0).

Han evolucionado una variedad de mecanismos para el control fino del metabolismo en el tejido adiposo
Es posible que el tejido adiposo humano no sea un sitio importante de lipogenesis. Esto se sehala por la observaci6n de que no hay una incorporaci6n significativa de radiactividad en los ácidos grasos de cadena larga, procedente de glucosa o de piruvato marcados y que a[ parecer no estri presente la ATP-citratoliasa, enzima clave en la lipogénesis, y tiene una actividad extremadamente baja en el higado. Otras enzimas, GOmO la glucosad-fosfato deshidrogenasa y Ia enzima málica, que en la rata experimentan cambios adaptativos coincidentes con un incremento en la Iipogenesis, no sufren cambios semejantes en el tejido adiposo humano. De hecho, se ha sugerido que en e1 ser humano hay un "síndrome de exceso de carbohidrato~"debido a una lirnitacion única en la capacidad para desechar por medio de la lipogénesis. En las aves, la lipoginesis esta confinada al hígado, donde tiene importancia particular en el suministro de lipidos para la f o m a c i b n del huevo, estimulado por los estrbgenos. El tejido adiposo humano no es sensible a la mayoria de las hormonas lipoliticas, excepto a las cateco2aminac. De mayor interés es la ausencia de respuesta lipolitica a la adrenalina en el conejo, cobayo, cerdo y pollo; el efecto lipolitico pronunciado del glucag6n en las aves, junto con la ausencia de efecto antilipolitico de la insulina y la carencia de sintesis de glicerol como aciIglicerol a partir de la glucosa en el pichbn. Al considerar e3 profundo desarreglo del metabolismo en la diabetes sacarina (que se debe en lo principal al incremento en la liberacidn de ácidos grasos libres de los depdsitos) y el hecho de que la insulina corrige esta situacibn en gran medida, se debe concluir que la insulina desernpefia una función prominente en la regulación del metabolismo en el tejido adiposo.

RESUMEN
1) Dado que son insolubles en agua, los lipidos no

polares, como las lipoproteínas, deben combinarse con lipidos y proteínas anfipaticos para volverlos miscibles en agua para su transporte a los tejidos en el plasma sanguineo acuoso. 2) Se reconocen cuatro grupos principales de lipoproteínas; quilomicrones que transportan Iipidos que provienen de la digestión y absorcidn. Las lipoproteínas de muy bajadensidad (VLDL) que imnsportan triacilglicerol desde el hígado. Lipoproteinas de

316

+

Bioquímica de Hurper

EXTERIOR

(

MEMBRANA M ~ T O C O N D R ~ ~ ~ ( INTERIOR INTERNA

1

hormonas

1

r'
, A

W :.u '

,,..\*

"

,,,-

",

\

&l.

Cadena
respiratoria
Triacil1

Figura 27-10. Termogénesis en el tejido adiposo pardo. La adividad de la eadena respiratoria produee calor adem6s de la traslocacibn de protones (capítulo 14). Estos protones disipan más calor por medio de la termogenina cuando regresan al compartimiento mitocondrial interno en lugar de generar ATP, como ocurre cuando regresan por medio de la Fi ATP sintasa. El paso da H* por medio de la termogenina es fnhibido por las nuclebtidos d e purina cuando e l tejido adiposo parda no es estimulado. Bajo la influencia de la noradrenalina, la inhibicibn desaparece por el estimulo de la producci6n de dcidos grasos libres (AGL) y acil-COA. Ndtese el papel doble de la acil-COA en facilitar tanto la accibn de la termogenrna, como el suministro de equivalentes reductores para la cadena respiratoria. Efectos reguladores positivos (O) o negativos (O).

baja densidad (LDL), que son ricas en colesterol y provienen del metabolismo de las VLDL y lipoproteínas de alta densidad (HDL), que tambitin son ricas en colesterol, pero cuya actividad consiste en remover el colesterol de los tejidos y participar en el metabolismo de otras lipoproteinas. 3) Los quilamicrones y VLDL son metabolizados primero por hidrblisis catalizada por la proteina lipasa en tejidos extrahepáticos. Se remueve la mayor parte de triacilgliceroles y en la circulacidn queda un remanente de lipoproteina. Estos remanentes son captados por el hígado por endocitosis mediada por receptor, pero algunos remanentes (IDL) generados de VLDL forman LDL y por último son retirados de la circulacibn por el higado y otros tejidos mediante el receptor para LDL. 4) La fraccibn proteínica de las lipoproteinas recibe el nombre de apolipoproteina. Actiia como activador enzimitico (por ejemplo, apo C-II y apo A-1) o como ligando para receptores celulares (pos ejemplo, apo A-1, apo E y apo B-100). S) El desequilibrio en la velocidad desintesjshepatica de triacilglicerol y en la secrecibn de VLDL causa la acumulacibn de grasa en el hígado. Este efecto tiene importancia clínica ya que se presenta en el alcoholísrno donde prosigue a cirrosis y disfunción hepática. 6 ) El rriacilglicerol es el lipido de almacenaje principal en el tejido adiposo. Despuds de la hidrdlisis por acci6n de una lipasa sensible a hormonas, es eliminado a la ci~ulacibn en forma de Acidos grasos libres y glicerol. Los ácidos grasos libres se unen a la albúmina sCrica para su transporte a los tejidos, donde se utilizan como una importante fuente energktica. La lipasa sensible a hormona es estimulada por la adrenalina y la noradrenalina e inhibida por la insulina. 7) El tejido adiposo pardo es el sitio de "Eemogdnesis sin escalofríos". Se encuentra en animales en hibernacibn y recjkn nacidos y en cantidades pequefias en el ser humano, donde parece ser la causa de la 'Yermogénesis inducida por los alimentos". La termogtnesis se debe a una protelna, la terrnogenina, que actúa como una vía conductora de protones a travks de la membrana interna mitocondrial, que desacopla la oxidación de la fosforilacibn.

REFERENCIAS
Boresztajn J (editor): Lipoprotein Lipase. Evener Publishers, 1987.

Brewer HB et al.: Apolipoproteins and lipoproteins in human plasma: An overview. Clin Chem 1988;34:B4.

Transporfey almacenamiento de Iipidos

31 7

Coppack SW et al.: Effects of insulin on human adipoqe tissue rnetabolism in vivo. Clin Sci 1989;TT:6&3

Eisenberg S: High density Iipoprotein metaholism. J Lipid Rcs 1914:25: 1017. Fietding CJ, Fielding PE: Metabolism of cholcstcrol and lipoproteins. Page 404 in: Biochemisity ofLipi& and ,Membranes. Vance DE, Vance JE (editors) BenjaminlCummings. 1985.

Kaikans KM, Rass N M ,Ockner RK: Functions of fatty acid hinding proteins. Experientia 1990,46: 617. Lnrdy H, Shrago E: Riochemical aspects of o b e s i ~Annu . Rev Biochem 1990;59:689. Lieber CS: Alcohol, liver, and nutrition. J Am Coll Nutr
1991;10:h02

Varios autores: Brown adipose tissue-role in nutritional energetics. (Simposium). Proc Nutr Soc 1989;41: 165.

Síntesis, transporte y excreción de! coIesteroI
Peter A. Mayes, PhD, DSc

INTRODUCCIÓN
El colesterol se encuentra en los tejidos y en las lipoproteínas plasmáticas como colesterol libre o, combinado con un Acido graso de cadena larga, como &ter de colesterilo. Es sintetizado en numerosas tejidos a partir de acetil<oA y finalmente eliminado del cuerpo en la bilis, como cotesterol o como sales biliares. Es el precursor de todos los dernls esteroides del organismo. como los corticosteroides, las hormonas sexuales, los ácidos biliwes y la vitamina D. Además, es un producto del metabolismo animal, por lo cual existe en los alimentos de este origen, Como la yema del huevo, carne, hígado y cerebro.

vitales, causando enfermedad cerebrovascular, coronaria y vascular pesiférica. La aterosclerosis coronaria se correlaciona Con un alta proporcibn plasmhtica LDL:HDL colesterol.

EL COLESTEROL DERIVA DE LA ALIMENTACI~N y LA BIQS~NTESIS POR PARTES IGUALES
Un POCO mhs de la mitad del colesterol del organismo Se origina de su síntesis (cerca de 700 mddia) y el resto es proporcionado por una alimentacibn promedio. El higado sintetiza rnhs o menos 10% del total en los seres-humanos y los intestinos cerca de 10 por ciento. Prácticamente todos los tejidos que contienen cklulas nucleadas son capaces de sintetizar colesterol. La fracciiin microcómica (retículo endopl8smico) y el citosol se ocupan del proceso.

IMPORTANCIA BIOMEDICA
El colesterol, como lipido anfiphtico, es un componente estructural esencial de membranas de la capa exterior de las lipoproteínas plasmAticas. AdemBs, 1% lipoproteínas transportan en la circulación colesterol libre, donde fitcilmente se equilibra con el de otras lipoproteínas y de las membranas. El ester de colesterilo es una forma de almacenamiento de colesterol que se encuentra en la mayor parte de los tejidos. Es transportado como cargamento en el centro hidrofobo de las lipoproteinas. La LDL es mediadora de la captación del colesterol y del &ter de colesterilo en muchos tejidos. El colesterol libre es removido de los tejidos por las HDL y transportado al hígado para su conversión en ácidos biliares en el proceso conocido como transporte inverso del colesterol. Es un importante constituyente de los cAlculos biIiares. Sin embargo, su principal función en los procesos patolbgicos es como factor de la gknesis de la aterosclerosis de arterias

La a c e t i l 4 o A proporciona todos los átomos de carbono para el colesterol
La biosintesis del colesterol puede dividirse en cinco etapas: 1) Se sintetiza mevalonato, un compuesto de seis c a h n o s , a partir de acetil-CoA (figura 28-11.2) Se forman unidades isoprenoides por pdrdida de C 0 2del mevalonato (figura 28-2). 3) Se condensan seis unidades isoprenoides para formar el intermediario, escualeno. 4) EI escualeno se c i e m en forma cíclica para dar origen al esteroide precursor, lanosterol. 5) El colesterol se forma de lanosterol después de varios pasos ulteriores, incluyendo la perdida de tres grupos metilo (figura 28-3).

320

Bioquimica de Harper

(Capítulo 28)

Audo biliar miesterol

2NADPH + 2H*
Mevastatina,

lovastatina,

( 3 Mevalonato
O .

etdtera 2NADPt + COA SH

-006-CH,-C-GH2-GH2-OH

" l . II
OH

6~~
O

Mevalonato
Figura 28-1. Biosíntesisdel mevalonato.(HMG, 3-hidroxi-3rnetilglutaril.)La sintesic de HMG-COAfedudasa es inhibida por los metabolitos rnicéticos mevastatina (cornpactina), lovastatina (rnevinolina},provastatina y simvastatina.

Paso 1. La acetilXoA forma HMG-COA y mevalonato: La via a travds de HMGXoA (3hidraxi-3-metilglutaril~oA) sigue la misma secuencia de reacciones que se describen en el capitulo 24 para la síntesis de los cuerpos cetónicos en las mitocondrias. No obstante, dado que la sintesis del colesterol es extrarnitocondrid, las dos vías son distintas. inicialmente, se condensan dos moléculas de acetilCOApara formar acetoacetil-COAcatalindas por una enzima citosólica, la tiolasa. Como altemativñ en el higado, el acetoacetato formado en el interior de la mitocondria en la via de cetogdnesis (capitulo 24) se difunde al citosol y puede ser activado a acetoacilCOApor la acetoacil-COA sintasa, que requiere ATP y COA. La ncetoacil-COA se condensa con otra moldcula de acetil-COA, reaccibn catalizada por la HMG-COA sintssa para formar HMG-COA. Este ultimo es convertido a mevalonato en una reducción de dos etapas por NADPH, catalizada por la HMG-COA reductasa, enzima micros6mica considerada como la que cataliza el paso limitante de la

velocidad en la vía del colesterol y es el sitio de a c c i ~ n de la clase más efectiva de farrnacos reductores del colecterol, esto es, los inhibidores de la HMG-COA reductasa, estatinas (figura 28-1). Paso 2. El mevalonato forma unidades isoprenoides activas: El mevalonato es fosforilado por el ATP para formar varios intermediarios activos (figura 28-2). Por medio de una descarboxilación, se obtiene la unidad isoprenoide activa, el isopentenil pirofosfato. Pasa 3. Seis unidades isoprenoides forman escualeno: Esta etapa comprende E a condensación de tres mol~culas de isopentenil pirofosfato para formar farnesil pirofosfato. Esto sucede por la isomerización del isopentenil pirofosfato con desplazamiento de la doble ligadura que origina dimetilalil pirofosfato, seguido por la condensación con otra molkcula de isopentenil pirofosfato para formar el intermediario de 10 carbonos, geranil pirofosfato (figura 28-2). La condensacibn ulterior con isopentenil pirofosfato produce farnesil pirofosfato. Dos mol4culas de este ultimo se condensan en el extremo pirofosfato en una reacción que comprenden primer lugar, la elim inacion del pirofosfato para formar pre-escualenpirofosfato, seguida por una reduccidn con NADPH para eliminar el radical pirofosfato remanente. E: compuesto resultante es el escualeno. Puede haber una vía alterna conocida la cual como "la desivacibn tr~ns-metilglutaconato", elimina una proporcibn significativa (5% en higados nutridos, que se eleva a 33% en higados sin nutrientes) del dimetilalil pirofosfato y lo regresa, por la vía de la trans-3-metilglutaconato4oA, a HMGqoA. Esta vía puede tener potencial regulador respecto a la velocidad global de la sintesis del colesterol. Paso 4. El escualeno se convierte en lanosterol: El escualeno tiene una estructura muy semejante a la del niicleo de los estemides (figura 28-3). Antes de que el anillo se cierre, el escualeno en el reticulo endoplismico se transforma en 2,3dxido de escualeno por una oxidacibn de función mixta, la escualeno epo-xidasa. El grupometilo del Cides transferido al C i 3 yel del CB al Ci4cuandotiene lugar la ciclizacibn, catalizada por la oxidoescualeno: lanosterol ciclasa. Paso 5. El lanosterol se convierte en colesterol: En esta última etapa (figura 28-3), la formacih del colesterol a partir del lanosterol, tiene lugar en las membranacdel retfculo endoplásmico e implica cambios en el nlicleo esteroide y en la cadena lateral. EI grupo metilo del C 1 4 es oxidado aCOz para formar 144esmetil lanosterol. De igual modo, se remueven otros dos grupos rnetilo del C d para producir zimosterol. A partir de este iiltirno se forma A7h24-colestadienol por la doble ligadura situada entre CS y C9 que se mueve a la posicibn entre CSy CI.En este punto se forma desmosterol por un desplazamiento ulterior de la doble ligaduraen el anillo B, para quedar entre Cs y C6 como

Sinlesis, Ircsnsporre y excreción del colesterol

3.71

ATP
- OOC

ADP
CH,
- OOC

OH

' t '
Mevalonato 5-fosfato

CH,

CH,

Mevalonato

ADP

CH, CH? O-@-@ Mevalonato-3-fosfo-5pimfosfato

1

ADP

ATP

IzÑzq

- OOC
CH,

CH?

O @ @

Mevalonato-5pimfocfato

h4 EVACONATO Denvacibn i I del trans-rnetiigluta- t - - C
mnato

CH,

CH,

,
/\
CH

/Y
lsopentenil pirofosfato
TRANSFERACA

3pJ-Dimet~laiii irofosfalo

lsopentenil tRMA

, I t

Protelnas prenilatadas

Geranil pirofosfato
'FRANSFERASA

Cadena lateral de la
ubiquinona

\
Famesri pirofosfato

-

Doticol

Hem a

Escualeno
Figura 28-2. Biosintesis del escualeno, ubiquinona, dolicol y otros derivados de polisopreno. (HMG, 3 hidroxi-metifglutaril; &, citocinina. En el hem a d e citocromo oxidaca hay un residuo d e farnesilo. El carbono con asterisco* se wnviette en C i i o C12 en el escualeno. La eccuareno sintetaca es una enzima miuosbmica, todas las otras enzimas indicadas son proteínas citosblicac solubles.

322

Bioquimica de Harper

(Capitulo 28)

0
II

CH3-

OC

- S -COA+

o .

CH3
0 1 .
O

-0OC-CHz-C-CH1-CH20H OH
O

CHJ-C=CH-CH2-

0

EH~
1 .

O

Acetii-COA

1

CO,

HzO

Unidad isoprenotde

Mevalonato

\
12

*CH
Epdxido de
it

,
1 .

escualeno

I
CH FA D

1

1
CH3
CH

CH,
Eswaleno

LANOSTERQL-

HO
14-~esmetiC lanosterol Zimosterol

1s

'-27

NADPH

NADPH
7

5 1 0
Trlparanol Coiesteml Desmosterol
(24-deshidrocoksterol)

HO
~~,~~-~oiestadienol

Figura 28-3. Biosíntesis del colesterol. Las posicFones numeradas son las del núcleo esteroide mientras que les circulos claros y oscuros indican el destino de cada carbono en la porción acetil de la cetil-COA Se refiere al marcale, del escualeno en la tigura 28-2

Síntesis, transporte y excreciún del colesterol

323

en el colesterol. Finalmente, se obtiene el colesterot, mediante la reducción de la doble ligadura de la cadena lateral, aunque ésta puede presentarse en cualquier etapa de la conversión global. No se conoce con certeza el orden exacto en que se presentan los pasos descritos. Es probable que los intermediarios desde el escualeno al colesterol. estén adheridos a una proteina portadora especial conocida como proteína portadora de escualeno y esteroles, la cual se une a los esteroks y a otros Iípidos insolubles, pemitikndoles reaccionar en la fase acuosa de la célula. Además, es probable que sea en la forma colesterol-proteína transportadora de esteroles que el colesterot reaccione para convert i s e en hormonas ecteroides y hcidos biliares y participe en la fomacion de membranas y Iipoproteinas.

LDt-co!esterol captado por medio de los receptores para LDL (receptores apo B-100, E). Tanto en Easintesis del colesterol como en la actividad de la reductasa se manifiesta una vnriaciún diurna. Sin embargo, hay efectos mhs rápidos sobre la actividad de la reductasa. que los que pueden explicarse únicamente por los cambios en la velocidad de la síntesis de proteinas. La administracibn de insulina o de hormona tiroidea incrementa la actividad de la FIMGXoA reductasa, en tanto que la de glucaghn o glucocorticoides la reduce. La enzima en las dos formas, activa e inactiva, pueden ser modificadas dc manera reversi ble por mecanismos de fosforilacion, algunos de los cuales pueden depender de cAMP y por tanto ser sensibles al glucagdn

El farsenil pirofosfato origina otros compuestos isoprenoides importantes
El farnesil pirofosfato es el punto de bifirscacilin para la sintesis de los otros poliisoprenoides, dolicol y ubiquinona. El aIcohol poliisoprenil dolicol (figura 16-26 y capítulo 56) se forma por adición ulterior de hasta 16 residuos de isopentenil pirofosfato, en tanto que la cadena lateral de la ubiquinona (figura 14-5) se origina por la adición posterior de 3 a 7 unidades isoprenoides. Algunas de las proteinas fijadoras de GTP de la meinhrana celular pueden experimentar prenilacibn por combinación con residuos geranilo y famesilo. De este modo puede facilitarse el anclaje de proteínas prenilada en las membranas lipoides.

(figura28-4). El efecto de las variaciones de la cantidad de colesterol en la dieta sobre la de su producción endógena se ha estudiado en ratas. Cuando sólo había 0.05% de colecterol en los alimentos, entre 70 y 80% del colesterol dentro del organismo era sintetizado en el higado, intestino delgado y glándulas suprarrenales, en tanto que si la dieta contenía 2% de colesterol, se reducía la producción endbgena. Al parecer, sólo la síntesis hepática es inhibida. Los experimentos con hígado irrigado han demostrado que los quilornicrones remanentes ricos en colesterol, que son captados por el higado (capítulo 27), inhiben la sintesis de esterol. Los intentos para reducir el colesterol plasrnhti co en el ser humano mediante la ingestión dietetjca baja producen resultados variables. En general, una disrninucibn de 100 rng en el colesterol de los alimentos causa una reduccidn aproximada de 0.13 mmol/L en el suero.

LA REGULACIÓN DE LA HMG-COA REDUCTASA CONTROLA LA S~NTESIS DEL COhESf EROL
La segulaci6n de la cintesis del colesterol se ejerce casi al principio de la via, en el paso de H M G X o A reductasa. En los animales en ayuno hay una notable declinacion de la actividad de la HMG-COA reductasa, que explica la reducción de la slntesic del colesterol en esa condición. Hay un mecanismo de retroalimentacibn, por el cual, la HMG-COA reductasa es inhibida en el hígado por el mevalonato, el producto inmediato, y por el colesterol, el producto principal de la vía. Puesto que no se ha demostrado una inhibici6n directa de la enzima por el colesterol, es posible que éste (o un metabolito como el esterol oxigenado) actúe por represión de la sintesis de reductasa nueva o por inducción de síntesis de enzimas que degraden a la reductasa existente. La sintesis del colesterol es inhibida tambiin por eI combinado

NUMEROSOS FACTORES INFLUYEN EN EL EQUILIBRIO TISULAR DEL COLESTEROL
Se considera que, a nivel tisular, los siguientes E equilibrio del colesterol celular procesos gobiernan e (figura 28-5). El incremento se debe a: 1) captacion por los receptores de lipoproteinas que contienen colesterol, por ejemplo, el receptor LDL o por el receptor de limpieza; 2) captacibn de lipoproteinas que contienen colesterol por una viano mediada por receptores; 3) cap1aci6n de colesterol libre a partir del lipoproteinas ricas en colesterol, pasa la membrana celular; 4) sintesis de colesterol; y 5) hidrhlisis de Csteres de colesterilo por la enzima éster d e colesterilo hidrolasa. La reducción se debe a: 1) efusión de colecterol de la membrana a las lipoproteinas pobres en colesterol, en particular a HDL, o HDL naciente, promovida por LCAT (lecitin:colesterol aciltrans-

324 * Bioquim ica de Harper

(Capiiulo 28)

ATP

REOUCTASB CINASA (inactiva)

PI

REDUCTASA
ClNASA CTNASA

FOSFATASAS

I
REDUCTASA
AOP
CINASA
H20

le
I

(activa)

1
ADP

I

Giucagbn

I

I
ATP
Inhibidor-1

fosfato'
HMG-COA

*N
@

P

LDL coiesterol

HMECQA REDUCTAS4 (aaiva)

HME-COA
REDUCTASA
(inadiva)

1 3
I

I

I
H20

I
I

Pl

1

S
I
PROTEIN-

I

SIntesis

Figura 28-4. Mecanismos posibles de la regulacibn de la síntesis del colesterol por la HMG-COAreductasa. La insulina tiene una funcibn dominante comparada con glucagdn.Véase figura 206.

ferasa}; 2) esterificación del colesterol por ACAT (aciI-Cok:colesterol aciltransferasa); y 3) utilizaci6n del colesterol para la síntesis de otros esteroides, como hormonas o ácidos biliares en el higado.

El receptor para LDL tiene una regulación estricta
Los receptores para LDL (apo B-100, E) se encuentran en la superficie celular en hendiduras del lado citosólico de la membrana plasmhtica con una proteína llamada clatrina. El receptor es una glticoproteina que se expande a travts de ia membrana, eskndo la regiiin fijadora B-100 en el extremo m i n o terminal expuesto. Despu&sde fijarse al receptor, la LDL es captada intacta por endocitosis. En los lisosomas es d e gradada por hidrólisis de la apoproteína y del éster de colesterilo, seguida por traslocacibn del colesterol dentro de la ciula. LOS receptores no son destruidos sino que retornan a la superficie celular. Esta entrada del colesterol inhibe a la HMG-CoA reductasa y la sintesis de colesterol, estimulando la actividad de ACAT. El nitmero de receptores para LDL en la

superficie celular es regulado por el requerimiento de colesterol para membranas y para síntesis de hormonas esteroides y de Iicido biliar. Por tanto, la salida de colesterol regula a la baja el número de receptores LDL (figura 28-51, El receptor para apo B-100 E es un receptor LDL de "elevada afinidad" que puede saturarse bajo diversas circunstancias. Al parecer, existen tambikn otros receptores de "baja afinidad" para LDL, adernls de la vía no mediada por receptor o "vía de limpieza", que no es regulada.

EL COLESTEROL SE TRANSPORTA ENTRE LOS TEJIDOS DENTRO DE LAS LIPOPROTE~NAS PLASMÁTICAS (Figura 284)
En los seres humanos cuya subsistencia se basa en dietas de tipo occidental, el colesterol plasmático total es aproximadamente 5.2 mmollL y se eleva con la edad, aunque hay variaciones amplias entre los indi-

Sínresis, transportey excreción del colesterol

325

MEMBRANA CELULAR

Figura 28-5. Factores que afectan el equilibrio del colesterol a nivel celular La inversibn del transporte de colecterol puede ser inicrada por la fijaubn de HDL a su receptor (apo A-l), el cual por medio de la proteína cinaca C (capitulo 44) estimula la traslocacibn del colesterol a la membrana plasrnática. (C, colesterol, CE, ester de colesterlo, ACAT, acil-CoA:colesterol aciltransferasa; LCAT, lecitina:wlesterol aciltransferasa; A-1, apoproteína A-1, LDL, lipoprotelnas de baja densidad; VLDL, lipoproteínas de muy baja densidad.) Las LDL y HDL no se muestran a escala.

viduos. En su mayor parte esta esterificado, es transportado en las lipoproteinas del plasma y su mayor proporcion se encuentra en las LDL. Sin embargo, bajo ciertas situaciones en que predominan cuantitativamente las VLDL, aumenta la cantidad d e colesterol pla~m8tíco que reside en esta fracción. El colesterol dietetico tarda varios días en equilibrarse con el colesterol del plasma y algunas semanas para equilibrarse con el de los tejidos. Su recambio en el hlgado es relativamente rápido comparado con la vida media del colesterol corporal total. El calesterol libre plasmático y hepatico se equilibra en algunas horas, dado que se intercambia y transfiere con facilidad entre las membranas celulares, lipoproteinas plasmhticas y membranas eritrocitarias. El &ter de colesterilode los alimentos es hidrolizado en colesterol libre, que se mezcla con el colesterol libre dietdtico y biliar, antes de su absorcion desde el intestino junto con otros lipidos. Se mezcla cun el wlest m l sintetizado en el intestino para incorporarse a los quilomicrones. Entre 80 y 90% del colesterol absor-

bido es esterificado con ácidos grasos de cadena larga en la mucosa intestinal. Los ecteroles vegetales (sitosteroles) apenas se absorben. Cuando los quilomicrones reaccionan can la lipoproteína lipasa para formar quilomicrones remanentes s61o se pierde 5% de los ksteres de colesterilo, el resto es captado por el hígado cuando los remanentes reaccionan con el receptor apo E o LDL y son hidrolizados a colesterol libre. Las VLDL formadas en el higado transportan colesterol al plasma. La mayor parte del colesterol de las VLDL es retenido en tos remanentes de estas lipoproteinas (IDL) que con captadas por el higado o convertidas en LDL,las que a su vez son captadas por los receptores para LDL, de los hepatocitos y a [os tejidos extrahepáticos.

LCAT se ocupa de la mayoría de los esteres de cotesterilo plasmáticos
La actividad de la LCAT en el plasma se encarga virtualmente de todo el &ter de colesterilo plasrnhtico

326

Biaquímica de Harpcr

(Capitulo 28)

en el ser hurnano. (No es asi en otras especies como la rata, donde hay actividad apreciable de ACAT en el hígado, permitiendo que se exporte un2 cantidad significativa de cster de colesterilo en las VLDL nacGntes.) La actividad de la LCAT ce relaciona con una especie de HDL que contiene apo A-1. Cuando el colesterol de la HDL se esterifica, crea un gradiente de concentración y extrae colesterol de los tejidos y de otras lipoproteínas (figuras 28-5 y 28-61, Se vuelve menos denso y forma HULi, de la cual se piensa que se ocupa de entregar el colesterol al hígado. Por consiguiente, las características de la HDL destacan el transporte inverso dcl colesterol, proceso en el que se lleva el colesterol tis~ilar al higado.

La riroteína de transferencia de esteres colecterilo facilita el movimiento de éstos de las HDL a otras lipoproteínas
Esta proteína, que se encuentra en el plasma humano, pero no en el de rata, se relaciona tambien con la H UL. Facilita la transferencia del éster de colesterilo de HDL a VI,DL, lDL, LDL y, en menor extensibn, a los quilomicrones, lo cual permite al triacilglicerol desplazarse en direccihn opuesta. Por tanto, releva de la inhibicion por producto a la actividad de LCA'T en Eas HDL. Así, en el ser tiurnano. mucho del éster de colesterilo formado por LCAT en IlDL encuentra su camino al

Figura 284. Transporte del colesterol entre los tejidos en los humanos. (C, colesterol libre; CE. éster de colesterila; TG, triacilglicerol; VLDL. lipoproteina de muy baja densidad, IDL, Iipoproteina de densidad intermedia; LDL, lipoproteina de bala densidad. HDL, lipoproteína de alta densidad; ACAT, acil-CoA.colesterol aciltransferasa: LCAT, lecitin:colesterol aciltransferasa: A-1, apoproteína A-1, CETP, ester de colesterilo que transfiere proteínas, LPL, lipoproteina lipasa; LH, Itpasa hepatita.)

hígado por medio de los remanentes de VLDL (IDL) o de LDL (figura 2 8 6 ) . De manera simultanea, HDL;, que se ha enriquecido con triacilgliceroles. se descarga de este en el hígado desp~iksde reaccionar con la lipasa hephtica y se recicla como HDLj.

POR ÚLTIMO, TODO EL COLESTEROL DEBE ENTRAR AL H~GADO Y EXCRETARSE EN LA BILIS, COMO COLESTEROL O COMO ÁCIDOS BlLlARES (SALES)
Aproximadamente el cuerpo elimina 1 g de colesterol por dia. Cerca de la mitad es excretado en las heces después de su conversión en acidos biIiares. El resto se excreta Como colesterol. Gran parte de1 coiesterol secretado en la bilis es resorbido y se cree que por lo menos un poco del que sirve como precursor para los esteroles fecales deriva de la mucosa intestinal. El coprostanol es el estero1 principal en 1 s heces; se forma del colesterol en la parte inferior de