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1°metodos de estudio de la célula (1)

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CURSO: BIOLOGIA CELULAR

MÉTODOS PARA EL ESTUDIO DE LA CÉLULA

Mg. Fanny Elizabeth Lazo Manrique

2012-II

Lo que hemos visto es una célula animal típica. Hasta que no se dispuso de buenos M. ópticos a principios del siglo XIX, no se descubrió que todos los tejidos animales y vegetales son agregados de células (Descubrimiento propuestos por Schleiden y Schwann en 1838 como la TEORÍA CELULAR, que marca el nacimiento formal de la BIOLOGÍA CELULAR. • ¿Cómo se estudian las células?

Las células son pequeñas y complejas. Resulta difícil observar su estructura y descubrir su composición molecular, pero resulta más difícil dilucidar como funcionan sus componentes. Los que podemos aprender sobre ellas depende de las herramientas que tengamos a nuestra disposición. Los mayores avances de la ciencia son frecuentemente fruto de la introducción de nuevas técnicas de estudio y por eso para entender la biología celular es necesario conocer algo acerca de estos métodos de estudio.

Empezaremos con las usadas para examinar la célula como un todo y después con las técnicas usadas para analizar sus constituyentes macromoleculares. Nuestro punto de partida será : LA MICROSCOPIA.- La Biología Celular empezó con la M. óptica, la cuál todavía es una herramienta esencial junto con la M. electrónica (1940)y otras formas de radiación. CULTIVOS CELULARES: Desde la observación pasiva iremos hasta la intervención activa, considerando como las células de diferentes tipos pueden ser separadas de los tejidos y crecer fuera del cuerpo Líneas primarias, secundarias y establecidas (células HeLa y L).

. Además la centrifugación a diferentes velocidades. Se usan agentes químicos (sodio dodecil sulfato) y enzimas (lisozima).FRACCIONAMIENTO CELULAR: Cómo se pueden romper las células y aislar de forma pura sus orgánulos y constituyentes macromoleculares.

Ca42 y se sigue su incorporación en las moléculas orgánicas por contadores de centelleo (Geiger-Muller). CROMATOGRAFÍA Y ESPECTROFOTOMETRÍA . •  MARCADO ISOTÓPICO Y AUTORADIOGRAFÍA: Se utilizan átomos radioactivos como C14. En autoradiografía los isótopos son detectados en una emulsión fotográfica. I125.  DIFRACCIÓN DE RAYOS X MÉTODOS INMUNOLÓGICOS Se usan anticuerpos marcados con fluorescencia para detectar principalmente proteínas. P32. Se usan colorantes para distintas partes de la células: Hematoxilina (núcleo). H3. N15. Eosina (citoplasma).COLORACIONES CITOLÓGICAS: Generalmente en base a la carga eléctrica del colorante o del componente celular.

. sino que también son incoloras y traslúcidas. dependió del hallazgo a fines del siglo XIX de diversos colorantes que proporcionaron el contraste suficiente para hacerlas visibles.Tinciones ó Coloraciones Las células animales no sólo son diminutas. lo que depende de la carga de la célula y del colorante. el descubrimiento de las principales características internas de la célula. por ello. Son técnicas que permiten observar células y microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener (o no) determinadas sustancias colorantes.

a) Organismos ó células vivas: . Fijación. verde de Janus. azul de metileno) b)Tejidos Muertos: Biopsias Obtención.Tinción vital ( colorantes inócuos) -Tinción supravital: adición de colorante a células extirpadas de organismos (rojo neutro. Tinción y Montaje . Cortes. Inclusión.

derivados de la anilina (metacromatica) Azul de toluidina. de modo que no tiñen las células. rojo neutro. Hematoxilina . Penetran en el interior de las células y las tiñen.Aniónicos.Liposolubles.ácido pícrico diazoico:azul de tripano. No penetran en el celular.. azul de metileno. rojo de interior En este Eosina. sino el entorno. verde de Janus. Con carga negativa. Ejemplos: Azul de metileno.Catiónicos. . . caso se habla de tinción negativa. 2. Son sustancias que tienen carga positiva. Ejemplos: Nigrosina. tripano 3. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen (Negro sudán. Sudán III) Por otro lado las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos.Tipo de Colorantes 1. Safranina. Cristal violeta. Hematoxilina férrica.

de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (Azul de metileno. Safranina) o no (Nigrosina) . Utilizan un solo colorante. .TIPO DE COLORACIONES -Simples. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno.

lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos.Diferenciales. y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química. Estas tinciones utilizan más de un colorante .-. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Nielsen). según su capacidad de tinción.

Ej. Pueden utilizarse uno o más colorantes .-. de flagelos. de paredes celulares. de corpúsculos metacromáticos. de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. tinción de esporas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química.Selectivas.

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Fluorescencia .M.M. Campo oscuro ..

la microscopía generalmente implica la difracción. reflexión o refracción de radiación incidente en el objeto de estudio. .La microscopía es la técnica de producir imágenes visibles de estructuras o detalles demasiado pequeños para ser percibidos a simple vista.

Un sistema de lentes apropiados (objetivo y ocular) y debe estar alineado para enfocar una imagen de la muestra en el ojo. permite aumentar las imágenes de las células hasta 1500 veces y tener acceso a detalles hasta 0. 2) La muestra tiene que ser cuidadosamente preparada para que la luz pueda atravesarla. • • • • .• El microscopio óptico.25 µm. Se requiere de tres elementos para visualizar una célula: 1) debe proyectarse una luz brillante en la muestra por la lente del condensador.

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MICROSCOPIO DE LUZ Iluminación Longitud onda Lentes Medio Resolución Magnificación Focalización Contraste de Haz de luz 2000 Å .037 Å .450000 x Eléctrica Scattering .2000 x Mecánica Absorción .Reflexión MICROSCOPIO ELECTRONICO Haz de electrones 0.086 Å Electromagnéticas Vacío 3Å 100 x .7500 Å Vidrio Atmósfera 2000 Å 10 x .0.

dibujado sobre una escala logarítmica. óptico y el M. electrónico.Poder de resolución: Tamaño de las células y de sus componentes. nm= 10-9m . indicando el intervalo de resolución del M. µm = 10-6m.

por lo que sólo penetra en las lentes del microscopio la luz dispersada y la célula aparece como un objeto iluminado sobre un fondo negro. Aquí los rayos luminosos del sistema de iluminación son dirigidos desde la parte lateral. . no teñida y consiste en usar luz dispersada por sus diversos componentes.MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO • Es una manera sencilla de observar algunas características de una célula viva.

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formandose un enlace covalente entre el colorante y una proteína (-NH2)u otra molécula –SH) .Colorantes fluorescentes Fluoresceína (verde) y tetrametilrodamina (roja) Emiten luz amarilloverdosa y roja respectivamente cuando se activan con una luz de longitud de onda adecuada. La zona naranja indica la posición de un grupo químicamente reactivo.

La luz atravieza 2 sistemas de filtros: 1) El primero. • • • .MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA • Las moléculas fluorescentes absorben la luz a una determinada longitud de onda y emiten luz a otra longitud de onda más larga. el componente aparece brillante sobre un fondo oscuro. bloquea esta luz. La intensidad y el color es una característica de la molécula fluorescente usada. dejando pasar sólo las longitudes de onda emitidas por el colorante fluorescente. 2) El segundo. Si un componente de este tipo es iluminado a su longitud de onda absorbente y visualizado a través de un filtro que sólo permite pasar la longitud de onda igual a la de la luz emitida. Los objetos coloreados muestran un color brillante sobre un fondo oscuro. filtra la luz antes de que llegue a la muestra y pasan solo las longitudes de onda que excitan al colorante fluorescente.

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Microscopía de fluorescencia_ .

Las tres micrografías fueron tomadas en la misma región de un embrión fijado. marcados con Micrografía de una zona de la superficie de un embrión temprano de Drosophila. en el que se han marcado los microtúbulos con un anticuerpo acoplado a fluoresceína (micrografía de la izquierda) y los filamentos de actina con un anticuerpo acoplado a rodamina (micrografía central). En este estadio. todos los núcleos del embrión comparten un mismo citoplasma y están en el estadio de metafase de la mitosis. . Además los cromosomas se han marcado con un tercer colorante que únicamente emite fluorescencia cuando se une a DNA (micrografía de la derecha) .Método inmunológicos: Se usan anticuerpos fluorescencia para detectar principalmente proteínas. utilizando tres juegos de filtros diferentes en el microscopio de fluorescencia.

A pesar de que se puede unir directamente una molécula marcadora. como un cololrante fluorescente a un anticuerpo que será utilizado para el reconocimiento específico (anticuerpo primario). . se consigue una señal mayor utilizando el anticuerpo primario y luego detectándolo con un grupo de anticuerpos secundarios que se unen a él.Se pueden utilizar anticuerpos para detectar y aislar moléculas determinadas.

Como cada molécula de enzima actúa catalíticamente generando varios cientos de moléculas de producto. este sistema permite la detección de diminutas cantidades de antígeno.MÉTODO INMUNOENZIMÁTICO • Los métodos de amplificación más sensibles utilizan una enzima como molécula marcadora. Este precipitado revela la presencia del anticuerpo secundario que está acoplado a la enzima y por lo tanto la localización del complejo antígeno-anticuerpo al que se ha unido el anticuerpo secundario. Sobre este principio se han desarrollado inmunoensayos unidos a una enzima (ELISA de Enzyme-Linked InmunoSorbent Assay)) . unida al anticuerpo secundario. esta última es una enzima que en presencia de los reactivos adecuados produce fosfato inorgánico que genera un precipitado coloreado. Así se puede utilizar la peroxidasa o la fosfatasa alcalina .

Microscopia Electrónica Permite la observación de la ultraestructura. Los electrones emitidos dentro de un tubo al vació son acelerados y luego desviados a campos magnéticos que actúan como lentes ópticas . Poder resolutivo 0. La imagen se visualiza sobre una pantalla fluorescente y es producida por la dispersión de los electrones al chocar con los núcleos atómicos presentes en el objeto. Las macromoléculas.5 nm y aumento de un millón de veces a más. caso de la estructura de membrana se estudia mediante la técnica de fractura por congelación seguida o no de “grabado” .3 a 0. Se usan átomos pesados que actúan como colorantes electrónicos y aumentan el contraste.

Se obtiene imágenes de macromoléculas sin colorear. los electrones dispersados son analizados con detectores especiales . Se pueden obtener imágenes tridimensionales. TRASMISION (STEM) se utiliza un fino haz de electrones para efectuar el barrido del corte (sección fina de la muestra y revela la estructura interna ). .BARRIDO ( Scanning) permite obtener una vista de superficie del objeto utilizando los electrones secundarios emitidos ya que los electrones se reflejan en la superficie de la muestra y la imagen revela la morfología superficial.

INFILTRACION E INCLUSION .ALCOHOLES 4.EPON 6.GLUTARALDEHIDO 2.OSMIO 3.OSMIO Y CARBON . MONTAJE .ULTRAMICROTOMO 7. DESECACION – DIOXIDO DE CARBON 5. CORTE . CONTRASTACION Y SOMBREADO. POST-FIJACION . ELECTRONICA 1. FIJACION .REJILLAS 8.M. DESHIDRATACION .

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Visualización de microtúbulos: comparación de métodos Microscopio electrónico Inmunofluorescencia .

electrónica de grabado por .• Otros dos métodos que utilizan réplicas metálicas son: • 1) Microscopia electrónica de criofractura • 2) Microscopia congelación.

Las caras de fractura resultantes se metalizan con platino y las réplicas se observan al microscopio electrónico. Las células se congelan a la temperatura del nitrógeno líquido (-196°C) en presencia de un crioprotector (anticongelante) para impedir la distorsión provocada por la formación de cristales de hielo y el bloque se fracciona con una cuchilla. exponiendo así el interior de las membranas celulares. A menudo el corte pasa a través del centro hidrofóbico de las bicapas lipídicas.MICROSCOPIA ELECTRÓNICA DE CRIOFRACTURA: Para visualizar el interior de las membranas celulares. .

El nivel de hielo se reduce por sublimación del agua en el vacío.Microscopía de grabado por congelación La muestra es rápidamente congelada y el bloque de hielo es fracturado con una cuchilla. . de forma que las estructuras de la célula que se encuentran cerca del plano de fractura quedan al descubierto.

A continuación. se prepara una réplica de la superficie todavía congelada. pues las zonas de la célula expuestas a este proceso de grabado son sombreadas para conseguir una réplica de platino. . Esta técnica expones estructuras del interior de la cálula y puede revelar su organización tridimensional con claridad al examinar con el microscopio electrónico de transmisión.

El material orgánico es eliminado por disolución después del sombreado de modo que tan sólo quede la fina réplica matálica de la superficie de la muestra. de manera que se forma una capa que en algunos lugares es más gruesa que en otros “SOMBREADO”. porque se crea un efecto de sombras que da una imagen de apariencia tridimensional. de modo que pueden verse macromoléculas individuales. .El sombreado metálico permite el examen a alta resolución de detalles superficiales mediante el M. Sobre la muestra seca se evapora una fina película de un metal pesado como el platino. electrónico de transmisión. con mayor resolución para estudiar la superficie de una muestra que el M. de barrido. electrónico . La réplica se refuerza con una película de carbono para que pueda ser colocada en una rejilla y examinada al M. electrónico de transmisión. Se usa con el M. El metal se vaporiza desde un ángulo oblicuo.

El plano de fractura se ha desplazado de capa a capa. .Electromicrografia de una criofactura de la membrana del tilacoide de un cloroplasto de una célula vegetal Las membranas del tilacoide se encuentran apiladas en múltiples capas. pasando a través de cada bicapa lipídica y exponiendo la proteínas transmembrana que tienen un tamaño en el interior de la bicapa suficiente para hacer sombra y aparecer como partículas intramembrana en esta réplica de platino. Las partículas mayores que se aprecian en la membrana son el fotosistema II completo-un complejo de múltiples proteínas.

HERRAMIENTAS DE LA NANOTECNOLOGIA Los microscopios ven cosas a través de lo que sienten con una punta muy afilada que está puesta en algo que parece un alfiler. .

La técnicas aplicadas se conocen también como "de barrido de túnel" y están asociadas a la mecánica cuántica. Se basan en la capacidad de atrapar a los electrones que escapan en ese efecto túnel. así también las propiedades electrónicas Átomos del Hierro sobre e el Cobre . para lograr una imagen de la estructura atómica de la materia con una alta resolución.Microscopia de Barrido de Efecto Tunel Microscopio de efecto túnel podríamos definirlo como una máquina capaz de revelar la estructura atómica de las partículas. en la que cada átomo se puede distinguir de otro.

En los microscopios. . se mueve con mucha lentitud. La punta. que mide tan solo unos átomos. La resolución es similar al del efecto túnel pero se utiliza para materiales no conductores. así que no pueden ser utilizados para el estudio de procesos rápidos. como la mayoría de muestras biológicas ( cadena de ADN y hasta átomos individuales). pasan una punta afilada sobre la superficie de objetos diminutos como transistores de silicona o moléculas de ADN.Microscopio de Fuerza Atómica Los microscopios de fuerza atómica también son capaces de reconstruir tal relieve pero no hacen acopio del efecto túnel sino de la fuerza electromagnética entre la sonda y los electrones de la muestra a analizar: la sonda entra en contacto con la muestra y detecta los efectos atractivos o repulsivos de las fuerzas atómicas. Los mejores microscopios atómicos necesitan hasta diez segundos para captar una imagen.

coli Estudio de antibióticos sobre la superficie de células sanguíneas .Bacteria E.

gatos y conejos de indias . •Burrows y Carrel (1912) realizaron los primeros intentos de establecer cultivos de células de mamífero. corazón y piel. Este medio reveló ser mucho mejor que los anteriormente probados. permitiendo observar crecimiento de tejido nervioso. “Técnica de crecimiento de células in vitro. “ que permite •Burrows (1910) uso plasma de pollo para nutrir explantes de tejidos embrionarios de pollo. reproducir las condiciones existentes in vivo. consiguiendo mantener explantes obtenidos a partir de perros.CULTIVOS CELULARES Principal método para estudiar a la célula viviente.

R.G. Harrison (1907), padre de los cultivos de tejidos animales, fue el primero en emplear técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, realizando cultivos embrión de anfibios. Observo el crecimiento de axones de neuroblastos en una gota de linfa de Rana que colgaba de un cubreobjetos en una cámara sellada.

•Rous y Jones (1916) emplearon por primera vez extractos de tripsina para disociar células de embriones de pollo, estableciendo el primer cultivo celular.

Células disociadas mediante el uso de Tripsina

•Entre los años 1920 y 1940 se desarrollaron diferentes estrategias de obtención de cultivos y de mantenimiento de las condiciones estériles, pero sin grandes avances.

Grey, Coffman y Kubicek (1952) establecen la primera línea celular continúa, las actualmente bien conocidas células HeLa obtenidas de carcinoma humano, L y 3T3 de embrión de ratón •1961 se usaron por primera vez antibióticos para prevenir la contaminación de los cultivos de fibroblastos, pudiendo mantenerlos durante 12 meses. •Kohler y Milstein (1975) establecen la primera línea celular productora de anticuerpos monoclonales.

CONDICIONES PARA EL CULTIVO CELULAR (MICROAMBIENTE)

Medio de cultivo. Debe contener los nutrientes básicos para la supervivencia de las células como y estimuladores (hormonas) que promuevan su diferenciación y viabilidad. Gases (O2 y CO2) y pH. Debe garantizarse un 20% de O2 (atmosféricos) y un 5% de CO2 (tisular) en el sistema los cuales deben ser administrados con una adecuado sistema de ventilación y filtros que garanticen la eliminación de contaminantes. Osmolaridad-humedad. Debe garantizarse una ambiente húmedo, que evite la evaporación del agua del medio de cultivo lo que incrementará lo osmolaridad del mismo. Temperatura. El estricto control de la temperatura es muy importante al tratarse de un factor crítico en la mayoría de los experimentos con células de mamíferos cuyo metabolismo óptimo es a 37º . Cuando en un experimento aparecen problemas y datos no explicables, la causa suele ser un deficiente ajuste de la temperatura.

Tipos de Cultivos CULTIVOS PRIMARIOS: Se obtienen a partir de muestras de tejido que son tomadas directamente a partir de organismos vivos. - . los cuales son tratados mediante enzimas proteolíticas a fin de disgregar las células inmediatamente son cultivadas en un medio apropiado por periodos cortos de tiempo dentro de los cuales se da el análisis. Poder ilimitado de expansión (número ilimitado de generaciones). * Cultivos celulares obtenidos a partir de líneas celulares primarias. De uso mas corriente son las líneas establecidas las cuales se han adaptado a un crecimiento prolongado in vitro por transformación cancerosa. CULTIVOS SECUNDARIO: una o varios tipos célulares de un cultivo primario se re-siembran (sub cultivo) LINEAS CELULARES: Estos son cultivos que se establecen a partir de la selección de un clon especifico proveniente de un cultivo primario tripsinado.Inmortalización celular. Importante : por el poder ilimitado de proliferación celular. que hayan sufrido un fenómeno de transformación (natural o no). .

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así como en el análisis de la genética de la célula somática. • Aplicaciones diagnósticas.• Virología: establecimiento de condiciones de cultivo de virus animales y de plantas. producción de vacunas antivirales.. en la diferenciación y en el desarrollo. • Aplicaciones industriales y agronómicas: producción por reproducción "in vitro" de clones de plantas de interés comercial. detección de infecciones virales. insulina. • Estudios de interacción y señalización celular. hormona de crecimiento. Por la producción de proteínas en líneas celulares: interferón. Por ejemplo en medicina y farmacología destacan el análisis cromosómico de células crecidas a partir de muestras de amniocentesis.. . Comprende el estudio de los receptores y de las vías de translocación de la señal. Gracias especialmente a la introducción de las técnicas de fusión celular en la producción de anticuerpos monoclonales. • Aplicaciones médicas: mantenimiento y producción de tejidos para transplante.. • Investigación del Cáncer • Inmunología. ensayos de toxicidad. • Ingeniería de proteínas.

y han probado ser útiles en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades infecciosas. Los anticuerpos monoclonales son herramientas esenciales en el ámbito clínico y biotecnológico. así como también en el estudio de las interacciones patógenohospedero y la marcación. . producidas por las células B.ANTICUERPOS MONOCLONALES Los anticuerpos monoclonales son glucoproteínas especializadas que hacen parte del sistema inmune. con la capacidad de reconocer moléculas específicas (antígenos). detección y cuantificación de diversas moléculas. inmunológicas y neoplásicas.

ANTICUERPOS MONOCLONALES .

complejos multiproteicos.) una fracción de membrana plamática. . ya sea éste un orgánulo (mitocondrias. etc. núcleos. citoesqueleto. membrana total. etc.FRACCIONAMIENTO CELULAR El fraccionamiento celular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen por objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas de un determinado componente celular. peroxisomas. poros nucleares.

etc.). presencia de antígenos (cromatografía de inmunoafinidad. etc.  .Etapas del fraccionamiento célular Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos etapas :  Rotura de células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación. Separación de la fracción deseada mediante algún criterio como diferencia de densidad (centrifugación en gradientes o diferencial). inmunoprecipitación.

produciéndose una intensa agitación que destruye las membranas. Sonicación en la cual se aplica ultrasonidos a la suspensión celular. Los que rompen las células con la ayuda de un émbolo rotatorio que se ajusta perfectamente a las paredes de un tubo de cristal especial.   . Detergentes no ionicos que solubilizan la membrana celular. Dependiendo de la frecuencia. el homogenizador. Homogenizadores. intensidad y energía se puede destruir estructuras subcelulares e incluso complejos proteicos.

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20min RE Ribosomas 1000G 10000G 105.000G .

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se halla en la parte superior de otra de menor densidad. Para estabilizar las bandas que sedimentan y evitar que se mezclen por fenómenos de convección originados cuando una solución densa (una que contenga orgánulos). los diferentes componentes pueden recogerse por separado. el tubo contiene un gradiente continuo de sacarosa que aumenta de concentración hacia el fondo del tubo (5 a 20% de sacarosa). El fondo del tubo tiene mayor densidad y se consigue que cada una de las regiones de la solución de sacarosa sea más densa que cualquier solución superior.• • VELOCIDAD DE SEDIMENTACION La muestra se coloca sobre una solución diluída de sacarosa y los componentes subcelulares sedimentan a diferentes velocidades de acuerdo con su tamaño. Después de la centrifugación. . el sistema más sencillo consiste en perforar el tubo de centrifuga y recoger el medio gota a gota.

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Finalmente se producirá una serie de bandas en la que las más próximas al fondo del tubo contienen los componentes de densidad de flotación más elevados. independientemente de su tamaño o forma.EQUILIBRIO DE SEDIMENTACION • La ultracentrifuga también puede utilizarse para separar componentes celulares sobre la base de su densidad de flotación. La muestra se coloca en una capa en la parte superior o dispersa dentro de un pronunciado gradiente de densidad que contiene concentraciones muy altas de sacarosa o de cloruro de cesio. Cada componente subcelular se desplaza hacia arriba o hacia abajo cuando se centrifugan hasta que alcanzan una posición donde su densidad coincide con la que le rodea y no se moverá más. El método también se conoce como “Centrifugación por gradiente de densidad” .

El descubrimiento de los rayos X. científico alemán. tomografías. la Química y la Biología. desconocida hasta entonces y que denominó rayos X. descubrió una radiación. como lo es la luz visible. Röntgen. . K. que equivale a un Ángstrom. capaz de penetrar en los cuerpos opacos. etc. Las aplicaciones de los rayos X en el campo de la Medicina son de todos conocidas. y su aplicación al estudio de materiales. pero su uso también se ha extendido a otras áreas como la detección de microfracturas en metales o en el análisis de obras de arte. Los rayos X son radiaciones electromagnéticas. del orden de 10-10 metros. y lo único que los distingue de las demás radiaciones es su longitud de onda. revolucionó a lo largo de los años los campos de la Física. radiografías..DIFRACCION DE RAYOS X Hace algo más de un siglo. en 1895 W.

Esta propiedad de la luz utilizada también con los rayos X por su alta frecuencia . la mayoría de rayos X pasaran a su través. de modo que se obtienen imágenes las cuales aplicando ecuaciones matemáticas. Sin embargo una pequeña fracción de ellos serán dispersados por los átomos de la muestra. los haces dispersados se reforzarán unos a otros en ciertos puntos y aparecerán como manchas de difracción.Definición: Fenómeno óptico producido por la luz por la cual los rayos al atravesar una rejilla o cristal se separa en zonas claras y oscuras. Esta técnica permitió descubrir la estructura de la doble hélice del ADN en 1953 y actualmente se utiliza para determinar la estructura de las proteínas. es decir el cristal hace que algunos rayos se superpongan y se intersecten. . computarizadas (como ley de Bragg o Series de Furrier) se logra la figura tridimensional de dicha muestra. Los rayos X.1 nm) Si se dirige un haz estrecho y paralelo de rayos X a una muestra de proteína pura. Si la muestra es un cristal bien ordenado. como la luz son una forma de radiación electromagnética pero de una longitud de onda mucho menor (alrededor de 0. se emplea para analizar moléculas biológicas. cuando los rayos X sean recogidos sobre un detector.

y por fin (e) una red bidimensional de moléculas. . (d) una red puntual. (b) una repetición en línea de puntos (c) una repetición en línea de moléculas en línea de moléculas.Conjunto de objetos y sus Correspondientes diagramas de dispersión / difracción: (a) una molécula.

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. Las mediciones de diversos aspectos del patrón señalan las dimensiones de la hélice del ADN.La cruz formada por los puntos oscuros es característico de moléculas helicoidales como el ADN. Por ejemplo la distancia entre los puntos en cruz corresponde a la distancia entre las vueltas de la hélice.

Separación de proteínas por cromatogtafía .

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MUCHAS GRACIAS .

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