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Plan de limpieza y desinfección de laboratorios

Plan de limpieza y desinfección de laboratorios

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LIMPIEZA Y DESINFECCION EN EL LABORATORIO FISICOQUIMICO Y EN EL LABORATORIO MICROBIOLOGICO

KAREN DANEY REAL ACUÑA INGRID MELISSA ROMERO CUELLAR PAULA ANGELICA ALBARRACIN PEÑALOZA PAOLA ANDREA RONCANCIO FERNÁNDEZ

SENA CENTRO DE GESTIÓN INDUSTRIAL QUÍMICA APLICADA A LA INDUSTRÍA Bogotá D.C. 2013

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LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN EN EL LABORATORIO FISICOQUIMICO Y MICROBIOLOGICO

KAREN DANEY REAL ACUÑA INGRID MELISSA ROMERO CUELLAR PAULA ANGELICA ALBARRACIN PEÑALOZA PAOLA ANDREA RONCANCIO FERNÁNDEZ

Limpieza y desinfección en laboratorio fisicoquímico y microbiológico

Instructor JUAN PABLO MEDINA

SENA CENTRO DE GESTIÓN INDUSTRIAL Bogotá D.C. Enero 28 de 2013

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TABLA DE CONTENIDO

BIBLIOGRAFIA.................................................................................................... 35 GLOSARIO......................................................................................................... 32 INTRODUCCION................................................................................................... 4 MARCO TEORICO................................................................................................. 6 MATERIALES LABORATORIO FISICO-QUIMICO....................................................20 MATERIALES LABORATORIO MICROBIOLOGICO.................................................22 OBJETIVO GENERAL............................................................................................. 5 PROCEDIMIENTO LABORATORIO MICROBIOLOGICO..........................................28 PROCEDIMIENTO LIMPIEZA LABORATORIO FISICO-QUIMICO..............................23

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INTRODUCCION La limpieza y la desinfección son procedimientos de gran importancia, ya que permiten controlar la presencia de microorganismos sobre las superficies. La limpieza se define como el proceso de remover físicamente el sucio, el polvo, la grasa, y otros contaminantes de las superficies, equipos, áreas, etc. La desinfección es un proceso que implica la destrucción de microorganismos perjudiciales (formas vegetativas), a través del uso de sustancias químicas o agentes físicos aplicados sobre superficies inertes. La limpieza debe ser un paso previo a la desinfección ya que con este proceso, además de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las soluciones desinfectantes actúen eficientemente. En un laboratorio microbiológico se debe tener control sobre todos los microorganismos de superficies, personal y aire ya que bacterias podrían interferir y afectar los procedimientos de fabricación de productos. En este protocolo se especificara el procedimiento de limpieza y desinfección de las áreas del laboratorio microbiológico.

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OBJETIVO GENERAL

Encontrar el mejor método de desinfección y limpieza en laboratorios Fisicoquímicos de tal manera que sea el más apropiado en menor tiempo posible. Conocer el proceso y comprender la importancia de la limpieza y desinfección del laboratorio de microbiología para mantener un espacio adecuado para el trabajo; estético y que no afecte a la salud ni al ambiente.

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MARCO TEORICO Desinfección y limpieza de Laboratorios: La desinfección de instrumentos y superficies de los puestos de trabajo, básicamente en el laboratorio donde se manipulan muestras biológicas, constituye la forma más adecuada de evitar el posible contagio. Esto se consigue con una correcta utilización de desinfectantes. Para el empleo de estos productos es necesario conocer los riesgos ligados a su utilización y los consejos de prudencia que deben estar indicados en la etiqueta y en la ficha de datos de seguridad. En general, el producto debe poderse aplicar de tal manera que no presente ningún riesgo de toxicidad aguda o crónica para los animales y el hombre. Debe tenerse en cuenta que, por su propia función, destrucción de microorganismos, la mayoría de desinfectantes tienen unas características de toxicidad importantes. La primera acción preventiva en cuanto a su uso es comprobar que estén adecuadamente etiquetados según la normativa vigente, (Reales Decretos 1078/1993, preparados, y 363/1995, substancias, y siguientes, transposición de las correspondientes Directivas de la Unión Europea), tanto si se han adquirido comercialmente como si se han preparado en el propio laboratorio. Al adquirir productos químicos debe exigirse siempre con la primera entrega la ficha datos de seguridad correspondiente. Relación de desinfectantes químicos de uso más corriente • Ácido peracético

Las soluciones de ácido peracético (peroxiacético) al 35%, que pueden ser diluidas hasta un mínimo del 0,2%, se emplean como sustitutas del glutaraldehído, que es el desinfectante más ampliamente usado. El ácido peracético es una substancia corrosiva y comburente, que a concentraciones superiores al 10% tiene asignadas las frases R: 7-10-20/21/22-35 y S: 3/7-14-36/37/ 39-45. NOTA: Para el significado de las frases R y S consultarla NTP-332. • Agua oxigenada (peróxido de hidrógeno)

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Se emplea en soluciones acuosas en concentraciones del orden del 35% o también, cuando se trata de procedimientos que implican la generación de fase vapor, a concentraciones ambientales no inferiores a 2 mg/L. Se usa muchas veces como sustituto del glutaraldehído.El peróxido de hidrógeno es un compuesto que, a concentraciones superiores al 20%, es corrosivo y comburente. La American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH) establece para el peróxido de hidrógeno un TLV-TWA (valor límite ambiental para exposiciones de 8 horas/día y 40 horas a la semana) de 1 ppm (1,4 mg/m3). Las frases asignadas son R: 8-34 y S: 3-28-36/39. • Alcohol etílico (etanol)

Es el desinfectante de uso tópico más conocido y universalmente aplicado, especialmente para desinfección de la piel. Se emplea a diferentes concentraciones en agua. Es poco eficaz frente a ciertos tipos de virus y la mayoría de esporas. Tiene un valor TLV-TWA de 1.000 ppm (1.880 mg/m3). Es una substancia inflamable; tiene asignadas las frases R: 11 y S: 7-16. • Alcohol isopropílico (isopropanol)

Es utilizado también como antiséptico de uso tópico en concentraciones del 70% en agua, con una efectividad equivalente a la del etanol. El TLV-TWA es de 400 ppm (983 mg/m3) y el TLV-STEL (valor límite umbral para exposiciones de corta duración) de 500 ppm (1230 mg/m3). Es una substancia inflamable y tiene asignadas las frases R: 11 y S: 7-16. • Aldehídos

La actividad de los aldehídos, básicamente formaldehído y glutaraldehído, está ligada a la desnaturalización de las proteínas y de los ácidos nucléicos por reducción química. Los aldehídos destruyen muy bien las bacterias, los hongos microscópicos y tienen también una excelente acción virucida. Se emplean para desinfectar superficies, aparatos e instrumentos. • Formol-formaldehído

El formol o formalina es la disolución de formaldehído en agua en una proporción de alrededor de un 37% en peso, conteniendo así mismo entre un 10 y un 15% de metanol para evitar su polimerización. Las soluciones de formol que contienen concentraciones de formaldehído iguales o superiores al 5% constituyen un eficaz desinfectante líquido de uso muy extendido.
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El formaldehído debe considerarse como un producto especialmente peligroso, ya que, además de su acción irritante (la irritación ocular en el hombre se presenta a concentraciones entre 0,1 y 1 ppm) y alérgena (el formol es responsable además de sensibilizaciones cutáneas), está clasificado por la International Agency for Research on Cancer (IARC) en el grupo 2A (substancia probablemente cancerígena). La ACGIH ha fijado un TLV-C (valor techo no sobrepasable en ningún instante) de 0,3 ppm (0,37 mg/m3) y lo incluye en el grupo A2 (carcinógenos con sospecha de serio en el humano). Es una substancia considerada tóxica, por lo que la exposición debe reducirse al máximo; tiene asignadas las frases R: 23/24/25-34-40-43 y S: 26-36/37-45-51. • Glutaraldehído

La solución de glutaraldehído al 2% aplicada durante 30 minutos es efectiva como desinfectante y, en aplicaciones de 10 a 12 horas, se puede utilizar como esterilizante. La ACGIH establece un valor TLV-C para el glutaraldehído de 0,2 ppm (0,82 mg/m3). La solución de esta substancia entre el 2 y el 10% está clasificada como nociva y peligrosa para el medio ambiente y tiene asignadas las frases R: 20/22-37/38-41-42/43-50 y S: 26-36/37/39-45-61. En la práctica diaria, el glutaraldehído no es un producto que presente una especial peligrosidad, ya que tiene una tensión de vapor muy baja (es poco volátil) y, por ello, raramente se encuentra en forma de vapor en el aire, a no ser que se calienten las soluciones que se empleen del mismo que, por otro lado, suelen ser siempre bastante diluidas; sin embargo se pueden generar aerosoles por agitación o manipulaciones bruscas al sumergir o sacar material del líquido. El formol y el glutaraldehído se pueden emplear solos o bien asociados a un detergente, siendo esta última combinación especialmente efectiva frente a los polivirus. También se emplean mezclados con fenol y fenolatos. • Alcohol isopropílico (isopropanol)

Es utilizado también como antiséptico de uso tópico en concentraciones del 70% en agua, con una efectividad equivalente a la del etanol. El TLV-TWA es de 400 ppm (983 mg/m3) y el TLV-STEL (valor límite umbral para exposiciones de corta duración) de 500 ppm (1230 mg/m3). Es una substancia inflamable y tiene asignadas las frases R: 11 y S: 7-16. • Aldehídos

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La actividad de los aldehídos, básicamente formaldehído y glutaraldehído, está ligada a la desnaturalización de las proteínas y de los ácidos nucléicos por reducción química. Los aldehídos destruyen muy bien las bacterias, los hongos microscópicos y tienen también una excelente acción virucida. Se emplean para desinfectar superficies, aparatos e instrumentos. • Formol-formaldehído

El formol o formalina es la disolución de formaldehído en agua en una proporción de alrededor de un 37% en peso, conteniendo asimismo entre un 10 y un 15% de metanol para evitar su polimerización. Las soluciones de formol que contienen concentraciones de formaldehído iguales o superiores al 5% constituyen un eficaz desinfectante líquido de uso muy extendido. El formaldehído debe considerarse como un producto especialmente peligroso, ya que, además de su acción irritante (la irritación ocular en el hombre se presenta a concentraciones entre 0,1 y 1 ppm) y alérgena (el formol es responsable además de sensibilizaciones cutáneas), está clasificado por la International Agency for Research on Cancer (IARC) en el grupo 2A (substancia probablemente cancerígena). La ACGIH ha fijado un TLV-C (valor techo no sobrepasable en ningún instante) de 0,3 ppm (0,37 mg/m3) y lo incluye en el grupo A2 (carcinógenos con sospecha de serio en el humano). Es una substancia considerada tóxica, por lo que la exposición debe reducirse al máximo; tiene asignadas las frases R: 23/24/25-34-40-43 y S: 26-36/37-45-51. • Glutaraldehído

La solución de glutaraldehído al 2% aplicada durante 30 minutos es efectiva como desinfectante y, en aplicaciones de 10 a 12 horas, se puede utilizar como esterilizante. La ACGIH establece un valor TLV-C para el glutaraldehído de 0,2 ppm (0,82 mg/m3). La solución de esta substancia entre el 2 y el 10% está clasificada como nociva y peligrosa para el medio ambiente y tiene asignadas las frases R: 20/22-37/38-41-42/43-50 y S: 26-36/37/39-45-61. En la práctica diaria, el glutaraldehído no es un producto que presente una especial peligrosidad, ya que tiene una tensión de vapor muy baja (es poco volátil) y, por ello, raramente se encuentra en forma de vapor en el aire, a no ser que se calienten las soluciones que se empleen del mismo que, por otro lado, suelen ser siempre bastante diluidas; sin embargo se pueden generar aerosoles por agitación o manipulaciones bruscas al sumergir o sacar material del líquido.

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El formol y el glutaraldehído se pueden emplear solos o bien asociados a un detergente, siendo esta última combinación especialmente efectiva frente a los polivirus. También se emplean mezclados con fenol y fenolatos. • Compuestos de amonio cauternario

Este conjunto de compuestos (conocidos como "quats") representan una familia de compuestos antimicrobianos en los cuales las cuatro valencias del átomo de nitrógeno están ocupadas por grupos tipo alquilo de complejidad variable. Son solubles en agua y en alcohol y poseen propiedades tensoactivas. Los compuestos de amonio cuaternario actúan a nivel de la superficie celular, incrementando la permeabilidad de la membrana con la consecuente pérdida de los componentes citoplasmáticos. El espectro de actividad de estos productos es bastante elevado frente a bacterias y hongos, pero escaso frente a virus y esporas. Es necesario remarcar que hay microorganismos, como pseudomonas, que en algunos amonios cuaternarios encuentran un medio de cultivo en el que se multiplican perfectamente. Esta bacteria puede crecer, por ejemplo, en cloruro de benzalconio que, utilizado como desinfectante de superficies, ha sido la causa de inesperadas infecciones en hospitales. Los compuestos de amonio cuaternario son inactivos frente a las aguas duras, por lo que no deben utilizarse para desinfectar el agua de los sifones de vaciado, rica en sales. • Compuestos fenólicos

Diferentes compuestos fenólicos constituyen la base de muchos desinfectantes corrientes, empleándose a veces para sustituir a los hipocloritos. Los aril-fenol halogenados o no halogenados tienen una muy buena actividad bactericida, pero su actividad fungicida es muy discreta y su acción virucida es discutida. El fenol y sus derivados son irritantes de la piel y mucosas respiratorias y oculares. Tienen efecto alergénico y fotosensibilizante. El TLV-TWA establecido para el fenol es de 5 ppm (19 mg/m3). Las soluciones de concentraciones superiores al 5% se clasifican como tóxicas y tienen asignadas las frases R: 24/25-34 y S: 28-45. • Yodo y Yodóforos

La acción de estos desinfectantes es parecida a la del hipoclorito. Las superficies limpias pueden tratarse adecuadamente con soluciones que contengan 75 ppm de
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yodo libre. En presencia de una cantidad apreciable de material proteico, su eficacia no es tan buena. Los yodóforos pueden diluirse en alcohol etílico para el lavado de manos o como esporicida. La ACGIH establece para el yodo un TLV-C de 0,1 ppm (1,0 mg/m3). Se considera una substancia nociva y tiene asignadas las frases R: 20/21 y S: 23-25. • Povidona-Yodada (complejo de Polivinipirrolidona con yodo)

Es el yodóforo mejor conocido. Se compone de un polímero de 1- vinil - 2 pirrolidona con yodo, con un 9-12 % de yodo disponible. Se utiliza en forma de solución, es de color amarillo pardo y olor característico. Es de uso terapéutico en aplicaciones tópicas como desinfectante. Comercialmente se conoce bajo distintos nombres: Topionic, Betadine e lsodine, entre otros. 1 Limpieza es el conjunto de operaciones que permiten eliminar la suciedad visible o microscópica de una superficie. Una limpieza regular y periódica tiene además un efecto “higienizante” ya que reduce la presencia de microorganismos patógenos, disminuyendo a su vez la necesidad de desinfectar. Se entiende por suciedad las impurezas indeseables, ya sea porque facilitan el desarrollo de microorganismos patógenos, deterioran los materiales o afectan la estética. (Bellon-Fontaine, 2002). Los métodos para eliminar la suciedad se clasifican en físicos y químicos: Métodos físicos: Consisten en el arrastre de las impurezas ya sea con agua o con aire (ej. Mangueras a presión, vapor), arena, cepillado, rascado, barrido o aspiración. Con estos métodos es importante tener en cuenta que pueden producir a su vez contaminaciones. Por ejemplo, la limpieza a alta presión o el barrido en seco produce aerosoles que pueden mantener los gérmenes en suspensión en el aire durante cierto tiempo. Métodos químicos: Consisten en la aplicación de productos de limpieza que reaccionan con los componentes de la suciedad facilitando su dilución o dispersión. (Bellon-Fontaine, 2002). PRINCIPIOS DE LA LIMPIEZA QUÍMICA No existe un único agente que remueva todo tipo de suciedad.
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(insht)

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La suciedad incluye distintas sustancias ej. Algunas son hidrosolubles, otras insolubles, algunas orgánicas y otras inorgánicas. (ESCOBAR, J. 2000) Un producto de limpieza debe tener las siguientes propiedades: • • • • Emulsionar y saponificar las grasas. Surfactar, dispersar y suspender la suciedad. Disolver las proteínas. Tener agentes suavizantes del agua.

Los principales componentes de los productos de limpieza son: Alcalinos: Compuestos cáusticos (pH mayor de 7) utilizados para la limpieza de azúcares solubles, hidratos de carbono y proteínas. En general son sustancias corrosivas; los de acción más fuerte se utilizan para eliminar suciedades incrustadas como las que se encuentran en los hornos y también pueden remover grasas. Los de acción media se utilizan diluidos para limpiar suciedades livianas. Entre ellos se encuentran el amoniaco, la sosa, la potasa o el bicarbonato sódico. Ácidos: (pH menor de 7) Se utilizan para remover materiales incrustados en superficies, como óxidos metálicos o sales minerales. Se utilizan en limpiezas específicas; no pueden ser utilizados como detergentes multiuso. Entre los más utilizados se encuentran el acido clorhídrico, nítrico, fosfórico, acético, peracético y cítrico. Desengrasantes: Son productos que disuelven restos de grasas y aceites, tanto naturales, como derivados del petróleo, como aceites lubricantes. Contienen alcohol o éter: dietilenglicol, butoxietanol, propanol, propanol, tolueno, benceno, xileno, tricloroetileno, acido cítrico. Secuestrantes: Son productos que impiden que los minerales cristalicen, precipiten o se incrusten en los materiales con los que contactan. Los más utilizados son EDTA, polifosfatos, gluconatos, citratos y zeolitas. Tensoactivos: Se conocen como agentes humedecedores, desagregan la suciedad de las superficies y la mantienen en suspensión, facilitando su dilución en agua. (HAYES, 2002) Existen cientos de sustancias tensoactivas diferentes, que se agrupan en cuatro familias:
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Aniónicos

• • •

Ácidos carboxílicos saturados (sales de ácidos grasos animales y vegetales). Alquil aril sulfonatos. Alquil sulfonatos. Sales de amonio cuaternario. Alquil imidazolinas. Amidas etoxiladas. Alcoholes grasos etoxilados (alkylfenoles etoxilados): derivados de octilfenol, nonilfenol y dinonilfenol. Alcoholes: alcoholes primarios con cadenas de 8 a 18 átomos de carbono. Ésteres de ácidos grasos y poliglicoles. Acil-aminoácidos y derivados. N-alquil-aminoácidos.

Catiónicos

• • •

No iónicos

• • Anfóteros • •

Tabla 1. Clases de sustancias tenso activas. Tomado de: www.istas.net

Se pueden seguir los siguientes criterios a la hora de elegir un producto de limpieza:

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DISPONIBILIDAD DE El primer criterio para decidirnos por un producto INFORMACIÓN debería ser la información que tengamos sobre su: composición, uso y aplicaciones, ficha de seguridad. Si no tenemos información adecuada no debemos utilizarlo. SENCILLEZ EN LA La mayor parte de acciones limpiadoras y FORMULACIÓN desinfectantes pueden realizarse con unos pocos principios activos de diversas sustancias. Desde la perspectiva del riesgo por exposición, siempre resulta más adecuado trabajar con una sustancia, de la que se conoce o se puede conocer sus efectos, que una mezcla de la que resultara muy difícil conocer bien sus posibles efectos. AUSENCIA CLORO DE El uso del cloro en actividades de limpieza y desinfección obedece fundamentalmente a su alta capacidad de oxidación. Debido a su gran reactividad es un potente tóxico que contamina el medio ambiente al dispersarse a través de las aguas residuales. La mayor parte de las sustancias usadas en la limpieza y desinfección son irritantes y tienen un cierto riesgo de afecciones dérmicas y quemaduras. Debemos tener en cuenta estos riesgos para protegernos y además evitar otros riesgos mayores, como los efectos crónicos: cáncer, daños reproductivos, daños al sistema nervioso central, disrupción endocrina, asma, entre otros.

RIESGO TÓXICO

CONSIDERACIONES Si bien prácticamente todos los productos químicos DE PELIGROSIDAD usados para la limpieza y desinfección son peligrosos, deberemos conocer las características de cada uno para poder optar por aquellas sustancias menos peligrosas. Criterios para elegir un producto de limpieza. Tomado de www.istas.net

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TIPOS DE LIMPIEZA 1. Limpieza de instrumentos y equipos 2. Limpieza de las superficies ambientales tales como pisos, paredes y mobiliario.

FACTORES IMPLICADOS EN LA LIMPIEZA Energía química: acción del detergente. Energía térmica: acción de la temperatura. Energía mecánica: acción de fricción.

METODOS DE LIMPIEZA Debe haber normas escritas para la limpieza; en cualquier sector la limpieza debe efectuarse con un orden: • • • Iniciarla desde las zonas menos sucias, progresando a las más sucias. Iniciarla desde las zonas más altas progresando a las más bajas. Las superficies más altas deben limpiarse con un fregadero especial impregnado con un agente de limpieza evitando dispersar el polvo.

FRECUENCIA MINIMA DE LIMPIEZA • • • La frecuencia con que debe efectuarse la limpieza de cada área debe de ser planeada de acuerdo a las necesidades del sector. Debe quedar consignada por escrito y controlarse su cumplimiento. Los laboratorios requieren limpieza diaria. Los pisos se limpiarán con una solución de detergente desinfectante. (ESCOBAR, J 2000)

LIMPIEZA DEL PISO

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• •

No se debe barrer ya que se diseminan microorganismos en el aire. La utilización de trapos y lampazos humedecidos con productos de limpieza reduce la contaminación microbiana y es el método más común y recomendado.

La desinfección es un proceso que implica la destrucción de microorganismos perjudiciales (formas vegetativas), a través del uso de sustancias químicas o agentes físicos aplicados sobre superficies inertes.

ROTACIÓN DE DESINFECTANTES La rotación con dos o tres desinfectantes es la mejor medida para prevenir la aparición de fenómenos de resistencia y adaptación. La limpieza y la desinfección son etapas fundamentales en la higienización de superficies industriales pero no siempre se consigue el resultado perseguido. Tras un tratamiento continuado suele apreciarse que las superficies no solo no se desinfectan bien, sino que en ocasiones se da un incremento del número de bacterias. Cuando ello ocurre se define una situación de riesgo que puede ser especialmente importante si entre los microorganismos que permanecen se encuentran bacterias patógenas. Entre los desinfectantes más utilizados podemos citar los alcoholes, los compuestos de amonio cuaternario, y los compuestos clorados, etc. EFECTOS DEL MAL USO DE LOS DESINFECTANTES El poder desinfectante de un producto difiere entre cepas adaptadas y persistentes en las superficies, con respecto a las no adaptadas. En consecuencia, aunque los tiempos de contacto sean breves, los desinfectantes a concentraciones subletales o a tiempos insuficientes provocan cambios en las estructuras celulares que conllevan respuestas de tipo adaptativo. Por tanto, en la medida que el tratamiento de higienización sea insuficiente en tiempo por las prisas en terminar con la limpieza, o cuando la dosificación de los productos a emplear sea también insuficiente, por un intento de reducir costos o porque los
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equipos empleados no sean los adecuados, no sólo se dará una reducción en la eficacia desinfectante, sino que además se facilitará la adaptación de los microorganismos a situaciones que incrementarán el peligro de la presencia de patógenos. (MCDONNELL, G. 1999) La única recomendación posible es un buen empleo de los desinfectantes, a concentraciones adecuadas y en las condiciones que indique el fabricante. En este sentido, es igualmente recomendable no diluir excesivamente los productos químicos y dejarlos actuar el tiempo necesario, así como no utilizar siempre el desinfectante, sino ir cambiando periódicamente con el fin de evitar que se produzcan fenómenos adaptativos cruzados entre sustancias que, siendo diferentes, tengan el mismo principio de acción. (Mc DONNELL. G. 1999). 2 La limpieza debe ser un paso previo a la desinfección ya que con este proceso, además de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las soluciones desinfectantes actúen eficientemente. En el Laboratorio de Microbiología estos procesos deben realizarse de rutina, ya que el trabajar con microorganismos exige que se tomen medidas para evitar la contaminación del ambiente, del material de trabajo y del personal. Si hablamos de empresas en donde se elaboran productos farmacéuticos, cosméticos o alimenticios; la limpieza y la desinfección tienen como finalidad eliminar los desechos y materiales que se han depositado sobre las superficies y reducir o eliminar los microorganismos presentes en los equipos, pisos o techos de la misma. Por tal razón, la limpieza y la desinfección no deben considerarse como el último paso en la manufactura de un producto, sino como el primer paso en la elaboración del siguiente lote. En las farmacias la limpieza y desinfección también se emplea con mucha frecuencia, sobre todos en las áreas destinadas a la preparación de fórmulas extemporáneas, donde la presencia de microorganismos puede influir en la calidad del producto. En las instituciones de salud como clínicas, hospitales, etc. la limpieza y la desinfección buscan disminuir la transmisión de microorganismos patógenos que pudieran causar alguna enfermedad. CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL AIRE
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(Estudiantes)

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Existen diferentes métodos que permiten evaluar la calidad microbiológica del aire. Uno de los más utilizados es el método de sedimentación en placas de agar, que consiste en exponer placas con un medio nutritivo sólido al ambiente durante un periodo determinado, incubar las placas y hacer el recuento de las colonias obtenidas. El tiempo de exposición depende del ambiente a evaluar, mientras mayor sea la contaminación menor será el tiempo de exposición de las mismas. Normalmente se utilizan placas de 9 cm de diámetro. Con este método se detectan los microorganismos que caen sobre la superficie de la placa, lo cual simula lo que ocurre normalmente cuando estamos trabajando en el laboratorio. Como las condiciones ambientales influyen en la sedimentación de los microorganismos es necesario que, cuando se realiza este método, las placas se expongan siempre en el mismo lugar y bajo las mismas condiciones para poder comparar los resultados obtenidos. CONTROL MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES El control microbiológico de superficie nos proporciona información sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una superficie, la cual puede ser un equipo, mesón, ropa, etc. Esta evaluación generalmente se hace utilizando: • Placas de contacto (RODAC) Las placas de contacto o RODAC (Replicate Organism Direct Agar Contact) son placas de 55-60 mm de diámetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una superficie convexa, que sobresale del borde de la placa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente. Placa Rodac Generalmente se utilizan para determinar la calidad microbiológica de superficies planas. Para tomar la muestra se abre la placa y se presiona sobre la superficie a ensayar, sin deslizarla. Se tapa la placa y se incuba bajo las condiciones adecuadas. Se cuenta el número de colonias y se calcula el número de ufc/área de la placa, la cual está entre 24 y 30 cm², dependiendo del diámetro de la misma. NOTA: Es necesario desinfectar la superficie evaluada luego de tomar la muestra, ya que podrían quedar restos del medio de cultivo que favorecen el crecimiento de los microorganismos.
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• Método del Hisopo Se recomienda para tomar muestras de superficies irregulares donde no se pueden utilizar placas RODAC. Se debe definir el área donde se va a tomar la muestra, generalmente se usa una plantilla con un área entre 24 y 30 cm². El hisopo estéril se humedece en un diluente y se frota sobre la superficie a evaluar, en por lo menos dos direcciones distintas, rotándolo ligeramente. Luego la punta del hisopo se coloca en el diluente y se toman alícuotas para sembrarlas en placas con agar. Se incuba y se cuenta el número de colonias. Se calcula el número de ufc/área.

CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL PERSONAL Para evaluar al personal se pueden utilizar placas RODAC, las cuales se presionan sobre su vestimenta. Cuando queremos detectar la presencia de microorganismos en las manos del personal se pueden usar placas con medio de cultivo (Touch plates), el personal toca el agar de dichas placas con la punta de los de dos, luego se incuban por el tiempo y bajo las condiciones adecuadas. Al final del periodo de incubación se cuentan las colonias. NOTA: El personal debe lavarse y desinfectarse las manos luego de tocar las placas, ya que podrían quedar restos del medio de cultivo en los dedos y favorecer el crecimiento de los microorganismos. 3

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(Universidad central de Venezuela)

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MATERIALES LABORATORIO FISICO-QUIMICO

ELEMENTO A DESINFECTAR Agua potable Desinfección de manos Desinfección inoxidable de mesas e instrumental de acero

PARTES POR MILLÓN(PPM) 0.2 50 200 500 5000

Desinfección de pisos, mesones en baldosín, ropa, útiles de aseo y material plástico Desinfección de material orgánico

Para la elección de los detergentes y desinfectantes se ha priorizado que cumplan los siguientes requisitos: - Anulación de la contaminación residual después de su aplicación. - Rápida biodegradabilidad. - Baja toxicidad.
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- Rápida y fácil eliminación de las superficies sobre las que sean aplicados. No obstante, estas prioridades están supeditadas al objetivo final de la elección, que es el de la conservación de todas las superficies de los laboratorios, sobre todo las de trabajo, limpias y desinfectadas. Aunque en el mercado no existen productos detergentes ni desinfectantes de carácter específico para su utilización en unidades de transformación ecológica se ha optado por seguir utilizando los actuales e introducir variaciones en su aplicación. Para la ejecución de esta prueba se deben utilizar los siguientes materiales y equipos: • Detergente: Jabón líquido multiusos para vidriería. Jabón en polvo para pisos y mesones. • Desinfectante: Hipoclorito de sodio (200 – 300 ppm para mesones y 600 ppm para pisos). Alcohol al 78%. • Ajax en polvo. • Agua. • Cepillos para piso, escoba y trapero de uso exclusivo para el laboratorio. • Esponjillas y escobillones. • Toallas desechables. • Dulce abrigo de color blanco. • Horno esterilizador. • Autoclave. - Se deberán realizar los lavados específicos según el tipo de práctica realizada y desinfección del área trabajada. - Para la manipulación de estos reactivos es recomendable utilizar los elementos de protección necesarios como guantes, blusa de laboratorio, tapabocas, mascarillas, etc. Para la manipulación de material sometido al calor (autoclave y horno) se deben utilizar guantes de fibra espectral de resistencia calórica.

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- Para la realización de los procedimientos de limpieza y desinfección del laboratorio se debe usar guantes y mascarilla. - Todos los elementos, equipos y materiales de laboratorio se deberán mantener organizados, tanto en el área de lavado como en las áreas de fisicoquímicos y derivados.4

MATERIALES LABORATORIO MICROBIOLOGICO • • •

Toalla desechable Solución desinfectante (compuesto de amonio cuaternario) Agar nutritivo Placa de contacto RODAC5

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(Laboratorios UNAL) (Universidad central de Venezuela)

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PROCEDIMIENTO LIMPIEZA LABORATORIO FISICO-QUIMICO
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DESARROLLO DEL CONTENIDO Procedimientos de Limpieza y desinfección particulares a cada laboratorio Ejemplo: Laboratorio de Leches – Sede Palmira

Procedimiento para limpieza y desinfección de pisos. • Alzar las sillas de laboratorio. • Recoger todos los objetos que obstaculicen la realización adecuada del procedimiento. • Barrer bien. • Preparar en cinco (5) litros de agua 50 ml de detergente industrial y refregar. • Preparar 5 litros de hipoclorito de sodio a 600 ppm: 41 ml de hipoclorito de sodio al 6% se diluyen en 5 litros de agua potable. • Enjuagar con suficiente agua y secar con el trapero limpio. Este procedimiento se debe realizar dos veces por semana o cuando se requiera.

Procedimiento para limpieza de mesones. • Retirar todos los objetos que se encuentren encima • Lavar con jabón Dersa y refregar adecuadamente con esponjilla. • Secar con un paño húmedo. • Desinfectar con una gasa embebida de alcohol al 78% (si la práctica requiere). • Desinfectar con hipoclorito de sodio a 200 – 300 ppm: 10,9 ml de hipoclorito de sodio al 6% se diluyen en 4 litros de agua potable. • Secar con paño húmedo. Procedimiento para limpieza de vidrios. • Para la parte externa del laboratorio preparar una solución de jabón con 5 litros de agua y 50 ml de jabón líquido multiusos. • Para la parte interna utilizar alcohol industrial y limpiar con toallas de papel. • La limpieza de vidrios debe realizarse diariamente en las zonas críticas como en el área de lavado, y de manera general mensualmente.
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Los vidrios ubicados detrás de las incubadoras y el horno, en donde el acceso por la parte interna es difícil, deberán barrerse con una escoba, mantenerlos sin polvo y lavarlos cada dos meses mediante el procedimiento para el lavado externo

Limpieza de equipos. Procedimiento para limpieza de hornos. • Sacar todas las parrillas, lavarlas con jabón lavaloza Dersa. • Limpiar el horno con una solución de jabón líquido al 1% (1 litro de agua y 10 ml del producto). • Secar el horno con un paño limpio y húmedo. Este procedimiento se realizará una vez por semestre o cuando se requiera.

Procedimiento para limpieza de autoclave. • Lavarlo con jabón lavaloza Dersa o Ajax y refregar con esponjillas de brillo. • Enjuagarlo con agua potable. Este procedimiento se debe realizar una vez por semestre o cuando se requiera. Para funcionamiento del autoclave se debe utilizar agua destilada y así evitar la aparición de depósitos de sales.

Procedimiento para limpieza de incubadoras. • Las cajas de Petri deben ser retiradas de las incubadoras por el auxiliar de laboratorio. • Sacar todas las parrillas, lavarlas con jabón Dersa y refregarlas con esponjilla suave. • Limpiarlas por dentro y por fuera con vinagre. Pasar una gasa con alcohol al 78% para desinfectarlas. Este procedimiento se realizará cada vez que se utilicen.

Procedimiento para limpieza de neveras.
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• Desocupar completamente las neveras y descartar reactivos y soluciones preparados. • Sacar todas las parrillas, cubetas y cajones; lavarlos con jabón suave y refregarlos con esponjilla suave. • Secar todas las partes lavadas. • Lavar la parte interna de cada nevera con jabón suave y refregar con esponjilla suave. • Secar con un paño absorbente. • Finalmente pasar una gasa o paño con alcohol al 78% para desinfectar. Este procedimiento se realizará una vez por semestre.

Procedimiento para limpieza de cabina de flujo laminar. • Limpiar con solución de jabón líquido multiusos al 1%. • Limpiar con paño húmedo tanto las partes metálicas como acrílicas. • Desinfectar con hipoclorito de sodio al 2%. Este procedimiento se realizará cada vez que se utilice la cabina.

Procedimiento para limpieza de canecas de basura. • Preparar en 5 litros de agua 50 ml de detergente industrial y 20 ml de hipoclorito de sodio y refregar. • Enjuagar y escurrir. • Colocar bolsas plásticas nuevas. Este procedimiento debe realizarse dos veces por semana o cuando se requiera.

Procedimiento para lavado y desinfección de material de laboratorio. • Preparar una solución de jabón líquido multiusos al 1% en agua caliente. • Colocar el material a lavar por 1 o 2 horas en el caso de vidriería (pipetas, butirómetros, tubos de ensayo, etc.). • Refregar todo el material usando cepillos, escobillones o esponjillas. • Enjuagar con abundante agua para eliminar residuos de detergente.

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• Colocar el material en solución desinfectante por 5 minutos para material de microbiología. • Enjuagar el desinfectante con agua destilada. • Secar el material en el horno por 10 minutos a 180 °C. Procedimiento para esterilización de material de laboratorio. • Una vez limpio y seco el material de laboratorio como cajas de Petri, pipetas, morteros, espátulas y cuchillos, empacarlos en papel Kraft y llevar al horno a 180°C por 2 horas.6

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(Laboratorios UNAL)

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PROCEDIMIENTO LABORATORIO MICROBIOLOGICO Limpieza del personal Para evaluar al personal se pueden utilizar placas RODAC, las cuales se presionan sobre su vestimenta. Cuando queremos detectar la presencia de microorganismos en las manos del personal se pueden usar placas con medio de cultivo (Touch plates), el personal toca el agar de dichas placas con la punta de los dedos, luego se incuban por el tiempo y bajo las condiciones adecuadas. Al final del periodo de incubación se cuentan las colonias. NOTA: El personal debe lavarse y desinfectarse las manos luego de tocar las placas, ya que podrían quedar restos del medio de cultivo en los dedos y favorecer el crecimiento de los microorganismos. Actividad de limpieza y desinfección 1. Verificar que sobre el mesón de trabajo no exista sucio, polvo, etc. 1. Impregnar una toalla desechable con solución desinfectante (compuesto de amonio cuaternario). 2. Pasar la toalla con el desinfectante sobre la superficie sobre el mesón de trabajo haciendo trazos paralelos de atrás hacia delante.

3. Dejar secar la solución desinfectante antes de comenzar a trabajar. 4. Repetir el procedimiento al finalizar el trabajo práctico.

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Actividad de control microbiológico del aire 1. Marcar con el número de su equipo la tapa de la placa con agar nutritivo que le suministre el profesor y, de acuerdo a su número, exponer la placa en el lugar y durante el tiempo señalado en la siguiente tabla: Equipo # 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Tiempo y lugar de exposición de la placa 10 minutos sobre el mesón de trabajo 20 minutos sobre el mesón de trabajo 30 minutos sobre el mesón de trabajo 10 minutos sobre el mesón de la cabina del laboratorio 20 minutos sobre el mesón de la cabina del laboratorio 30 minutos sobre el mesón de la cabina del laboratorio 10 minutos en el pasillo 20 minutos en el pasillo 30 minutos en el pasillo 10 minutos en el área de los baños de maría 20 minutos en el área de los baños de maría 30 minutos en el área de los baños de maría 10 minutos en el baño de caballeros 20 minutos en el baño de caballeros 30 minutos en el baño de caballeros 10 minutos en el área aséptica 20 minutos en el área aséptica 30 minutos en el área aséptica

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19 20

10 minutos en el baño de damas 20 minutos en el baño de damas

2. Incubar la placa a 32,5 ± 2,5°C en posición invertida durante 48 horas. 3. Contar el número de colonias en la placa. 4. Calcular el número de microorganismos que caen por cm² minuto. durante 1

CÁLCULO DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS POR CM² Para calcular la cantidad de microorganismos que cayeron en la placa por unidad de tiempo: • Contar el número de colonias en la placa. Este número se expresa como ufc (unidades formadoras de colonias), ya que varios microorganismos podrían estar juntos y al multiplicarse sólo se verá una colonia. • Calcular el área de la placa (A). A = π r² Para una placa de 9 cm de diámetro el área es A = 3,14 x 4,5 cm²= 63,62 cm² • Calcular el número de microorganismos que caen en el área por unidad de tiempo. Se puede expresar en: ufc/ placa/ min ufc/ cm²/ min o ufc/ área total/ min. Ejemplo Se expone una placa de 9 cm de diámetro en un área durante 30 minutos. Se incuba 24 horas a 32,5 +/- 2ºC y se cuentan 25 colonias. Calcular el número de ufc/ placa/ min y ufc/ cm² / min
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25 ufc ---------30 min X --------- 1 min X = 0,833 ufc/ placa/ min

Si deseamos expresar los valores en ufc/ cm²/ min 0,833ufc -------- 63, 62 cm² X -------1 cm² X =0, 0131 ufc/ cm²/ min

Es importante asegurarse al momento de comparar los resultados, que éstos están expresados en los mismos parámetros Actividad de control microbiológico de superficies 1. Seleccionar para el muestreo una sección del mesón, del piso, pared, etc. que tenga una superficie de 25 cm², según lo indique el profesor. 2. Identificar la placa con los datos necesarios. 3. Retirar la tapa de la placa RODAC y presionar suavemente la superficie del agar sobre el área de muestreo elegida. 4. Tapar la placa e Incubar durante 24-48 horas a 32,5 ± 2,5°C. 5. Limpiar con solución desinfectante el área muestreada, para eliminar los residuos de agar. Nota: La superficie delimitada por las placas es de 25 cm², por lo que el resultado se expresa en ufc/25 cm² / placa rodac.7

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(Universidad central de Venezuela)

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GLOSARIO

Agar nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Asepsia: Método para prevenir las infecciones por la destrucción o evitando los agentes infectivos, en especial por medios físicos. Aséptico: Ausente de gérmenes patógenos. Bactericida: Se denomina así a un producto que tiene la propiedad de matar las bacterias en unas condiciones de empleo definidas.

Bacteriostático: Es un producto que posee la propiedad de inhibir momentáneamente la multiplicación de las bacterias en unas condiciones de empleo definidas. Descontaminación: Es una acción que tiene por fin eliminar, matar o inhibir los microorganismos indeseables en función de los objetivos fijados. Sólo son destruidos los microorganismos presentes durante esta operación. La descontaminación es parcialmente bacteriostática, es decir, que los procedimientos utilizados por la descontaminación sólo pueden inhibir momentáneamente la multiplicación de una fracción de la población bacteriana en unas condiciones bien definidas. Desengrasante: Que quita la grasa. Desinfección: Destrucción de los microorganismos patógenos en todos los ambientes, materias o partes en que pueden ser nocivos, por los distintos medios mecánicos, físicos o químicos (desinfectantes) contrarios a su vida o desarrollo. Desinfectante: Sustancia química que reduce el número de bacterias nocivas o patógenas hasta un nivel seguro para la vida humana, animal o vegetal.
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Detergente: Sustancia química que se utiliza para eliminar la suciedad y la grasa o el material orgánico de una superficie antes de desinfectarla. Esterilidad: Ausencia absoluta de microorganismos. Este estado debe ser mantenido hasta que el producto, el local o el fluido sean utilizados. La esterilidad es una noción relativa. Se debe considerar siempre en referencia con los métodos utilizados para controlarla: tipo de muestra, naturaleza del medio de cultivo, condiciones de estos cultivos, tales como temperatura y duración de la incubación, pH, potencial de oxidación/reducción, etc. Bacteria: Microorganismo vegetal unicelular, de forma alargada (bacilo) o esférica (coco). Cepa: Conjunto de microorganismos derivados de las múltiples divisiones de una célula inicial. Colonia: En biología, asociación de organismos que proceden de un mismo progenitor y están claramente unidos entre sí. Desinfección: Acción y efecto de quitar los gérmenes de algo. Fricción: Fuerza que se opone al movimiento de un cuerpo cuando su superficie roza contra otra. Grasa: Ésteres glicéricos de ácidos grasos con número par de átomos de carbono (pralte. ácidos palmítico, esteárico y oleico). Higiene: Limpieza del cuerpo y de los objetos que rodean a las personas para mejorar la salud y prevenir enfermedades o infecciones. Hisopo: Un hisopo o cotonete es un instrumento utilizado para recoger muestras, para su posterior estudio, normalmente en medicina se usa para saber que germen afecta a una infección. Tiene forma de bastoncillo acabado en una punta de algodón. Incubación: Periodo en el que un cultivo microbiológico se encuentra en un equipo cerrado que permite controlar la temperatura, humedad y otras condiciones necesarias para su desarrollo. Laboratorio microbiológico: Centro que recibe indicaciones médicas, toma y recibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicas mediante exámenes microscópicos directos y por cultivos, con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas, precisar su
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cuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. Limpieza: Es la eliminación de restos de alimentos, grasa o suciedad mediante el uso de agua, jabón o detergente. Medio de cultivo: Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Microbiología: Ciencia que estudia los microbios (o microorganismos) y sus actividades. Microorganismo: Organismo vivo unicelular, animal o vegetal, especialmente el que puede producir enfermedades; no se puede ver sin la ayuda del microscopio. Patógeno: Dícese del productor o causante de una enfermedad. Placa de contacto RODAC: Son placas de 55-60 mm de diámetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una superficie convexa, que sobresale del borde de la placa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente. Sedimentación: Formación de sedimento en el fondo de un líquido. Solución: Combinación de un sólido o de un producto concentrado con agua, para obtener una distribución homogénea de cada uno de los componentes. Suciedad: Conjunto de manchas, de polvo o de impurezas que hay en una cosa o en un lugar.

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BIBLIOGRAFIA

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NTP 429: Desinfectantes: características y usos más corrientes

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IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk to Humans. (Volume 62)
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Manual de limpieza y desinfección

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