Protocolo para superovulacin de ratonas: Da 1 (lunes): inyectar a 10 hembras vrgenes de 4 semanas 5UI de PMSG/IP a las 13:00 pm Da 3 (mircoles): 48 horas

despus de la inyeccin de PMSG administrar nuevamente a las 10 hembras 5UI de HCG/IP entre las 12:30 pm-13:00 pm. Aparear a las hembras con un macho frtil (1:1) Aparear 40 hembras receptoras con machos vasectomizados (1:1) Da 4 (jueves): revisar la presencia de tapn vaginal a las 8 am en las hembras superovuladas -Sacrificar a las hembras superovuladas -Colectar los ovocitos en medio M2 a 37C -Seleccin y cultivo in vito de ovocitos en el medio de cultivo M16+ 37C+ Co2 -Adicionar una solucin de 0.1-0.5 mg/L de hialuronidasa a los ovocitos antes de su transferencia (dejarlo actuar 5-6 minutos, agitarlo en un bortex), porteriormente aspirarlos y liberarlos de la zona pelucida. - Lavar los ovocitos 12 veces con solucin buffer. -Capturar los ovocitos con una micropipeta. -Colocar los ovocitos en un portaobjetos cncavo -Inyectar el transgen en cualquiera de los proncleos (el del macho es ms grande), slo inyectar ovpcitos con cuerpo polar y proncleos visibles y que no tengan alteraciones celulares. -Aspirar parafina lquida a la mitad de la pipeta+aire+ medio M2+ ovocitos -La transferencia de los ovocitos a las receptoras se realiza por cesrea izquierda de la ratona en la fosa iliaca. Sujetar la cpsula ovrica con una sutura catgut Agregar a la pipeta de transferencia adrenalina+heparina antes de la transferencia 19-20 dias Parto