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3. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

3. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

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  • 3.1.1. Estructura general
  • 3.1.4.1. Aminoácidos con grupo R no polar
  • 3.1.4.2. Aminoácidos con grupo R polar sin carga
  • 3.1.5.1. Ejemplos de importancia
  • 3.2.1. Definición
  • 3.2.2. Formación
  • 3.2.3. Estructura del etano
  • 3.2.4 Estructura coplanar
  • 3.2.5. Rotación del enlace
  • 3.3.1. Definición
  • 3.3.2. Clasificación
  • 3.3.3. Representación de estructuras
  • 3.3.4. Péptidos de importancia biológica
  • 3.4.1. Definición
  • 3.4.2. Importancia biomédica
  • 3.4.3.1. Basada en su solubilidad
  • 3.4.3.2. Basada en la forma
  • 3.4.4. Importancia biológica de las proteínas, Genes y proteínas. Diversidad
  • 3.4.5.1. Estructura primaria
  • 3.4.5.2. Estructura secundaria
  • 3.4.5.3. Estructura terciaria
  • 3.4.5.4. Estructura cuaternaria
  • 3.5.1.1. Agentes desnaturalizantes
  • 3.5.2. Complementarte dad y capacidad de reconocimiento
  • 3.5.3. Alosterismo
  • 3.6.1. Cromatografía
  • 3.6.2. Filtración en gel
  • 3.6.3. Electroforesis
  • 3.7.1. Hemoglobina y mioglobina-
  • 3.7.2. Estructura y función de los anticuerpos
  • 3.7.3. Proteínas plasmáticas
  • 3.7.4. Glicoproteínas y proteoglicanos
  • 3.7.5 Colágeno y proteínas contráctiles
  • 5.13.2. Reacciones del grupo a -amino

ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

3.1. AMINOÁCIDOS COMO CONSTITUYENTES DE LAS PROTEÍNAS Las células vivas producen gran variedad de macromoléculas como son las proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos, entre otros. Estas macromoléculas son biopolímeros constituidos por unidades monoméricas o estructurales. Para los ácidos nucleicos, las unidades estructurales son los nucleótidos; para los polisacáridos son los monosacáridos.

En virtud de que las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones esenciales en los organismos, las cuales describiremos más adelante, es evidente que para conocer tanto el funcionamiento normal como patológico de un organismo se requiere un conocimiento claro de la estructura y propiedades de las proteínas. Aunque muchas proteínas contienen otras sustancias, además de los aminoácidos, la estructura y muchas de sus propiedades biológicas están determinadas por las clases de aminoácidos presentes y el orden en el que están dispuestos en la cadena polipeptídica. Es asombroso que en una célula existan millares de proteínas con estructura y fun-

ción diferentes, pero resulta aún más sorprendente que todas ellas estén integradas por sólo 20 aminoácidos comunes. Los aminoácidos comunes son aquéllos para los que existe un codón específico en el código genético del DNA (ver el capítulo Ácidos nucleicos). Los aminoácidos derivados son generados después de su incorporación a la molécula proteínica. Además de ser las unidades estructurales de las proteínas, los aminoácidos tienen otras funciones importantes como la transmisión de impulsos en el sistema nervioso, como material energético, y otros. 3.1.1. Estructura general

Desde el descubrimiento del primer aminoácido, asparagina, en 1806, habrían de pasar más de 130 años para que le llegara el turno a la treonina, con la que se cerró la lista de los 20 aminoácidos. Un aminoácido es un compuesto que contiene dos grupos funcionales: un grupo amino y uno carboxüo. Ambos grupos están unidos al mismo átomo de carbono, designado carbono a. Al carbono a de cada aminoácido también está unido un átomo de hidrógeno y

Tabla 3.2.
del espárrago, alanina de alantoides) o de alguna propiedad característica (glicina por su sabor dulce). De la denominación trivial ha surgido una abreviatura de tres letras que, dadas las técnicas modernas de secuenciación, han obligado la anotación de los aminoácidos por una sola letra mayúscula (tabla 3.1.). Los aminoácidos presentes en las proteínas pueden clasificarse en dos grandes grupos dependiendo de la polaridad relativa de sus grupos R (tabla 3.2). Clasificación de los L-a-aminoácidos presentes en las proteínas con base a las polaridades relativas de sus grupos R. Un grupo no polar es aquel que tiene poca o ninguna diferencia de carga de una región a otra, en tanto que un grupo polar tiene una diferencia de carga relativamente grande en diferentes regiones.

3.1.4.1. Aminoácidos con grupo R no polar Los aminoácidos más hidrofóbicos (no polares) son la fenilalanina, leucina, isoleucina, valina, alanina, metionina y triptofano.

La mayoría de las cadenas laterales de los ca, lejos del agua de solvatación de la superaminoácidos más hidrofóbicos están orien- ficie. tadas hacia el interior de la molécula protei-

3. glutamina y tirosina. 3.1.En la prolina el grupo R es único ya que incorpora el grupo amino en la cadena lateral.4.2.43.4. La glicina. el más pequeño de los aminoácidos. Aminoácidos con grupo R polar sin carga A este grupo pertenecen aminoácidos cuya cadena lateral tiene naturaleza polar (hidrofi'licá) como son la serina. arginina e histidina.1. 3.4.1. Por el contrario. puede encajar en regiones de la estructura tridimensional de las proteínas inaccesibles para otros aminoácidos. los aminoácidos polares glutamina y asparagina y los que tie- . Las cadenas laterales de los aminoácidos polares sin carga se encuentran en proporciones significativas tanto en el interior como en la interfase de la proteína con el disolvente. treonina. Realmente la prolina es un iminoácido que tiene consecuencias estructurales importantes para las proteínas como veremos más adelante. Aminoácidos con grupo R polar con carga negativa En esta categoría se encuentran los ácidos aspártico y glutámico. cisteína. Aminoácidos con grupo R polar con carga positiva Los aminoácidos que pertenecen a este grupo son la lisina. asparagina.

5. Los grupos R con carga de los aminoácidos básicos y acídicos.nen grupos cargados a pH 7. funcionan en sistemas enzimáticos que requieren de transmisión de cargas.1. aspartato y metionina. es un intermediario en la biosíntesis de la urea. . La DOPA (dihidroxifenilalanina) es un aminoácido neurotransmisor. a d r e n a l i n a y noradrenalina. Ejemplos de importancia La omitiría funciona como intermediario en el metabolismo de la treonina. Aminoácidos no proteínicos 3. precursor de la melanina y se encuentra en la vía metabólica biosintética de las aminas neurotransmisoras: d o p a m i n a .0. histidina.5. como hormonas. glutamato y aspartato se hallan predominantemente en la superficie de las proteínas globulares donde la carga se encuentra estabilizada por el disolvente acuoso.0 como Usina. o bien. La colocación poco usual de una cadena lateral cargada en el interior de una proteína globular se correlaciona con un papel estructural o funcional esencial.1. a pH 7. Además. Existen aminoácidos que no forman parte de las proteínas pero que realizan importantes funciones en el metabolismo intermediario. Ya se ha mencionado el lugar importante de la histidina en la catálisis enzimática en virtud de la carga de su grupo imidazol que le permite funcionar. arginina.1. como base o como ácido catalítico. neurotransmisores y otras. 3. tienen un papel clave en la estabilización de la conformación proteínica a través de enlaces salinos. junto con la citrulina.

3. H2N-CH2-CH2-CH2-COOH GABA 3.3.2. los átomos de carbono del etano giran libremente teniendo como eje el enlace sencillo. Estructura del etano Si recordamos la estructura del etano (un enlace C-C) y del etileno (doble enlace C=C) veremos que en el primer caso.2. su estructuración corresponde a una polimerización de aminoácidos. es decir. el doble enlace del etileno representa una estructura rígida que impide la libre rotación.2.1.2.molécula de agua y formando un tipo de enlace amida conocido como enlace peptídico (fig-3. una proteína es un polipéptido complejo.8) 3. 3.2. el II o El ácido gama-aminobutírico (GABA) es un neurotransmisor derivado del glutamato. Definición El grupo a -carboxilo de un aminoácido (RO puede unirse covalentemente al grupo a amino de otro aminoácido (R2) eliminando una enlace peptídico tiene naturaleza de doble enlace parcial. en cambio. Dada la resonancia del grupo carbonilo (-C-). Este enlace determina la fuerza de unión primaria de una proteína. . ENLACE PEPTÍDICO La reacción más importante de los aminoácidos es el enlace peptídico. Formación El enlace peptídico posee una serie de interesantes características estructurales.

. en un péptido.2.3. Rotación del enlace Así como en el enlace peptídico no puede haber rotación. Los aminoácidos constituyentes se denominan residuos de aminoácidos.2.1. Definición Cuando los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos se combinan para formar un polipéptido. los enlaces peptídicos presentan una alternancia que determina una secuencia en zig-zag (fig. sí puede haberla en torno a los enlaces C-N y C-C determinando ángulos de conformación (y y <fr) que. determina una estructura rígida entre carbono y nitrógeno y por lo tanto es un enlace coplanar. y termina con el residuo carboxilo 3.2. 3. Esto trae como consecuencia que.10 se muestra un tripéptido en el que hay que hacer notar que es aquel formado con tres residuos. Un péptido consta de dos o más residuos de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Clasificación Por convención. En un polipéptido. en las proteínas naturales. presentan poca variabilidad en sus valores. 33. no con tres enlaces peptídicos. PÉPTIDOS 3. 3.5.4 Estructura coplanar El enlace peptídico con la característica de ser un doble enlace parcial. las estructuras peptídicas se describen a partir del residuo amino terminal (grupo-NH2 libre). que se coloca a la izquierda.3.3. En la figura 3.10). los carbonos a de aminoácidos cercanos están en situación trans respecto al enlace peptídico.

Uno de los más sencillos es el tripéptido glutatión (y-glutamil-cisteinil-glicina).terminal (grupo -COOH libre) que se coloca a la derecha.. Representación de estructuras 3.3. En cambio. se requiere para la actividad de varias enzimas y participa en el transporte de aminoácidos. como la sustancia P (decapéptido) o los analgésicos opiáceos como las endorfinas y encefalinas. polipéptido de 20 a 50 residuos y proteína a las que superan esta cifra. 3.11). Tir-Gli-Gli-Fen-Met Encefalina (Metionina) Arg-Pro-Lis-Pro-Gln-FenFen-Gli-Leu-Met Sustancia P. la tirocidina y gramicidina S. por ejemplo.11) se podría escribir: Ala Ser . En nuestro ejemplo (fig. La repetición de este proceso secuencial genera un polipéptido con una secuencia de aminoácidos específica ( R r R2-R3-R4.3.Gli .Tre. Estos polipétidos no son sintetizados en los ribosomas. Este tripéptido lleva a cabo funciones oxidorreductoras por su grupo sulfhídrilo (-SH). es poco práctico usar las fórmulas estructurales convencionales. 3. 3. que contienen D-fenilalanina y ornitina. en el cual el glutamo inicial está unido a la cisteína por medio del carboxilo gama (y) en lugar del alfa ( a ). Los antibióticos polipeptídicos a menudo contienen D y L-aminoácidos y otros no presentes en proteínas. Péptidos de importancia biológica Las estructuras polipeptídicas pueden representarse colocando el aminoácido inicial (el del extremo amino terminal) y a partir de éste colocar en zig-zag los residuos en el orden secuencial correspondiente (fig. La oxitocina y vasopresina son polipétidos cíclicos.4. . Un grupo importante es el de los péptidos cerebrales con actividad de neurotransmisores. Aunque existen discrepancias en la literatura. como ocurre con la gran mayoría de los péptidos. Rp). puede utilizarse la abreviatura de tres letras (o incluso de una sola) para designar el péptido. A-S-G-T-. o bien.. Como los polipétidos pueden contener un número de residuos muy elevado. En todos los seres vivos se han aislado péptidos de interés biológico.3. el término oligopéptido se reserva para moléculas con 2 a 20 residuos.

3.4. Durante mucho tiempo se dividieron en simples y conjugadas. Clasificación En la actualidad no existe un sistema de clasificación de las proteínas universalmente aceptado. Otras tienen una función de reconocimiento. En esto se basa la clasificación propuesta en la tabla 3. En realidad. además.1. Arbitrariamente. Las proteínas también pueden funcionar con un papel protector como las inmunoglobulinas y el interferón. en todas las proteínas. la mayor parte de las reacciones químicas celulares son catalizadas por enzimas. Basada en su solubilidad Un sistema de clasificación basado en la solubilidad todavía está en uso. Sin embargo en esta clasificación. como se ha señalado antes.000 y 10. Importancia biomédica el caso de los receptores hormonales situados en la membrana celular o en el citosol. casi siempre están asociadas otras moléculas llamadas grupo prostético. vitaminas. la más importante es la función catalítica. lípidos. ejemplos de este grupo son la hemoglobina y mioglobina.4.000. Así pues. las proteínas son quizá las macromoléculas más versátiles. Dentro de las proteínas estructurales se encuentran el colágeno. casi todas ellas de naturaleza proteica. solubles en agua. Basada en la forma Otra clasificación se basa en la forma (relación entre longitud y amplitud) y en ésta se consideran Xas proteínas globulares. Todas las proteínas son polipéptidos de peso molecular elevado. De hecho. se subdividieron en seudoglobulinas (solubles al agua) y euglobulinas (insolubles en agua exenta de sales). la hormona liberadora de tirotropina y otras.3. Una proteína simple es aquélla que contiene sólo aminoácidos. 3.4. se ha establecido como línea divisoria entre polipétidos y proteínas un peso molecular de 8. la elastina y la queratina.).2. Así.3.Otros polipéptidos importantes son las hormonas colecistocinina y gastrina.1. aun las más simples. Algunas participan en los mecanismos contráctiles como la miosina y actina. 3. como es . de forma esférica. que se responsabilizan en gran parte de las funciones metabólicas y de la morfología de los seres vivos. una proteína compleja contiene. la insulina y glucagón. Otra función dinámica de las proteínas es el transporte.2. dentro de las cuales se encuentran la insulina. Definición Las proteínas constituyen sin duda uno de los grupos de moléculas de gran trascendencia en los seres vivos.3. carbohidratos o elementos minerales (metaloenzimas). otras moléculas diferentes como el hemo (de la hemoglobina). no se puede hacer una distinción entre albúminas y globulinas únicamente en base a sus solubilidades en agua o en soluciones salinas. en particular en bioquímica clínica (tabla 3.4. PROTEÍNAS 3.3. Otras proteínas actúan como hormonas.4. estas moléculas son tan importantes que merecen un capítulo especial dentro de la bioquímica. 3. Sin embargo. albúmina y Las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones que pueden agruparse en dos clases: dinámicas y estructurales. 3. No en vano el término proteína deriva del griego proteos que significa "primero". De las funciones dinámicas. "primoridaT.4.4.

3.43. miosina. alanina y prolina globulinas plasmáticas y numerosas enzimas. Diversidad Hemos mencionado el papel tan relevante y versátil de las proteínas con sus múltiples funciones. reguladoras.5). Importancia biológica de las proteínas. Genes y proteínas. La diversidad de formas y funciones proteicas que existen en una sola célula. protectoras (inmunoglobulinas).4. resistentes a la tracción. dentro de las cuales tenemos la queratina. Basada en sus funciones Las proteínas se pueden clasificar de acuerdo a sus funciones en proteínas estructurales. Sin aminoácidos distintivos Escasamente solubles en agua pero solubles en soluciones salinas. etc. Sin aminoácidos distintivos Protaminas Solubles en etanol a 70-80% pero insolubles en agua y en alcohol etilíco absoluto. baja solubilidad en agua. Las proteínas fibrosas. son de forma alargada. de transporte. formadas a partir de 20 aminoácidos. Ricas en arginina Histonas Solubles en soluciones salinas Escleroproteínas Insolubles en agua o en soluciones salinas. nos indica que tal variabilidad depende de la combinación casi infinita de aminoácidos en cada una de las proteínas existentes en un ser vivo. catalíticas ( e n z i m a s ) . (tabla 3. Ricas en glicina. ¿Qué determina tal variabilidad? En los siguientes subcapítulos hablaremos de los niveles de organización de la es- .Albúminas Globulinas Solubles en agua y en soluciones salinas.3. colágeno y fibrina. 3.4.

.

3.1). el grupo H y el grupo -NH2» en el carbono a están dirigidos hacia el lector. Su enantiómero óptico.2. pero es posible usarlo por conveniencia. Cabe aclarar que la estructura sin carga de un aminoácido indicada en la fig. al describir la química de los aminoácidos. Si los otros tres grupos se ordenan de mayor a menor prioridad en el sentido de las manecillas del reloj.una cadena lateral.1 no puede existir a ningún pH. para la cual R-H. En todos los casos el grupo H se encuentra debajo del plano. utilizando la proyección de Fisher. el sistema RS. ambos grupos están cargados (fig.1. dentro de los límites fisiológicos del pH. En las proteínas de mamífero sólo se encuentran L-a-aminoácidos. Por tanto.1. por comportarse como ácidos o bases debido a sus grupos ionizables. 3. 3.1. ion híbrido). El pK del grupo amino es 9. Estereoisomería Con excepción de la glicina.1. si por convención el grupo examino está proyectado hacia la izquierda. como en el D-gliceraldehído (fig. es decir. las proteínas también tienen propiedades asimétricas.1. el grupo R de la cadena lateral se dirige hacia abajo y atrás del mismo plano.2 2.3. La dificultad surgida de intentar denominar familias de isómeros ópticos con dos o más centros asimétricos ha dado lugar al establecimiento de un método más general de desig¿ nación estereoquímica. 3.4). 3.2.). 3. constituyendo un ion dipolar o switterion (en alemán. Dado que los aminoácidos de las proteínas son asimétricos. Formas iónicas de los aminoácidos Los grupos amino y carboxilo de un aminoácido pueden ionizarse.8 y el del grupo carboxilo es 2. 3. los cuatro grupos unidos al carbono a de los aminoácidos son diferentes. Propiedades generales 3.2). aquella forma en la que la carga positiva es igual a la carga negativa (carga neta . que existen como ion dipolar. Los aminoácidos tienen carácter anfótero. Asimetría. donde los grupos unidos a un orden basado en el número atómico: SH>OH>NH2>CDOH>CH3>H. el aminoácido tiene la configuración absoluta. En la configuración absoluta. el COOH está dirigido hacia arriba y atrás del plano de la página. En los aminoácidos neutros. designada R que es diferente para cada uno de los 20 aminoácidos comunes excepto para la glicina (fig. Esta orientación tetraédrica con cuatro grupos diferentes alrededor del carbono a confiere actividad óptica (capacidad de rotar el plano de luz polarizada) a los aminoácidos. el centro asimétrico es R (RECTUS en latín) y S (sinisterenel opuesto) (ver fig. con el grupo a-amino hacia la derecha tiene la configuración absoluta denominada D.

las proteínas vienen a ser las ejecutoras de las ordenes dictadas por los genes.4. con una elevada hemolisis y obstrucción de capilares por los eritrocitos anormales. cada proteína posee un ordenamiento o secuencia de aminoácidos bien definido per o . fuera la fibrosa. gracias a los méto- dos automáticos en el análisis de aminoácidos introducidos por Moore y Stein en 1964. que utilizan la técnica de degradación de Edman. . Esta estructura fue propuesta inicialmente por Pauling y Corey. la gran diversidad de estructuras y funciones proteicas. surge una estructura particularmente estable que es la a-hélice.12). Sobre esto se tratará más ampliamente en el capítulo de ácidos nucleicos. hablar de ese factor particular en cada célula u organismo que determina ese ordenamiento y. la localización de los puentes disulfuro (cistina).5. 3. La fuerza estabilizadora de esta estructura es el enlace covalente (peptídico). se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica. por ende. ya familiar desdé la descripción de los péptidos. 3.4. La máxima estabilidad de la hélice está determinada por puentes de hidrógeno que se establecen entre el grupo carbonilo (C-0) de un enlace peptídico y el amino (N-H) presente cuatro residuos más adelante en la cadena (fig.tructura proteica. o estructura primaria. En este sentido.1. Ahora se conoce la secuencia completa de más de 2. Los individuos que tienen este defecto padecen anemia de células falciformes.2. se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica. La determinación de la estructura primaria de una proteína es actualmente una técnica accesible a la mayor parte de los laboratorios de bioquímica. 3. en virtud de la estructura coplanar del enlace peptídico y los ángulos de rotación § y vy que regularmente toman valores de 132 y 123° respectivamente.5. . la cadena polipeptídica se pliega adoptando una forma helicoidal con giro a la derecha que contiene 3. E s t r u c t u r a primaria La estructura primaria. y los métodos secuenciales del gen que codifica a la proteína en estudio.6 residuos de aminoácidos por vuelta. Niveles estructurales de una proteína* 3. Estructura secundaria Si una proteína estuviera constituida por sólo una disposición polipeptídica lineal. el DNA. Es decir. además de la secuencia de aminoácidos. El primer nivel.000 proteínas. la insulina.4. Sin embargo. muy frecuentemente de una enzima. . bioquímicamente. En este tipo de estructura secundaria. El ejemplo clásico es el de la hemoglobina S (HbS) que tiene la sexta posición de la cadena P ocupada por valina en lugar de glutámico como la hemoglobina normal (HbAí). su única conformación posible. La información genética contenida en cada célula o individuo se expresa a través de una proteína. En esta estructura se incluye. Esto ha sido posible gracias a los esfuerzos de Sanger. La importancia de la estructura primaria es tal que una variación en un solo aminoácido de una cadena polipeptídica puede determinar una falta letal en la proteína completa.5. quizá adelantando un poco. ¿qué determina ese ordenamiento? Aquí debemos detenernos y. Ese elemento dictador de la secuencia polipeptídica es la unidad transmisora de los caracteres hereditarios. el gene o gen. quien en 1953 fue el primero en estudiar y determinar la estructura primaria de una proteína. El analizador automático de aminoácidos (secuenciador) está cediendo lugar actualmente a sistemas basados en métodos cromatográficos de alta eficacia.

Figura 3. ya que el anillo pirrolidina de su cadena lateral interacciona estéricamente con la cadena lateral del aminoácido precedente y. Otro factor que rompe la conformación a-helicoidal es la presencia de prolina. además. Otro aminoácido que tiende a desestabilizar la a-hélice es la glicina. Pauling y Corey también propusieron otra estructura secundaria que es la estructura P (P porque fue una segunda estructura. sus interacciones desestabilizan la estructura helicoidal. porque no puede ocurrir rotación del enlace N-C. isoleucina). por tener un grupo R muy pequeño. La presencia de prolina entre dos cadenas en a-hélice produce una acodadura de la dirección general de la molécula. Representación de un polipéptido en conformación de a-hélice En la conformación de a-hélice las cadenas laterales R se proyectan en forma perpendicular al eje de la hélice y hacia el exterior de la estructura en espiral generada por la cadena peptídica. Si estos grupos R están próximos y tienen carga del mismo signo o están ramificados (valina. siendo la a-hélice la primera). La conformación p está formada por dos o más cadenas polipep- .12. lo cual es de gran importancia en la configuración general de una proteína.

las regiones de enrollamiento aleatorio son de igual importancia que las de a-hélice o tira plegada. entre grupos carboxilato.16). protómeros o subunidades.3. se dice que posee estructura cuaternaria.4.5. la sustancia amiloide que se deposita en condiciones patológicas. proteínas fibrosas de forma alargada y proteínas globulares de forma esferoidal. El mejor ejemplo estudiado es la hemoglobina que es una proteína tetramérica (fig. etc.14. que se establecen entre los grupos sulfhidrilo (-SH) de la cisteína para dar el enlace covalente disulfuro (-S-S-) entre cadenas vecinas (fig. e) puentes disulfuro. d) fuerzas de Van der Waals. respectivamente. 3. incluso más que la a-hélice. como los grupos aromáticos de la fenilalanina o los no aromáticos de alanina e isoleucina. El resultado de las distintas uniones descritas es una estructura terciaria de gran estabilidad. 3. hidroximetilos de la serina. globular. sino que son conformaciones enrolladas al azar.) y un grupo amino (-NH3+) de residuos glutamato o aspartato con Usina o arginina. Finalmente. dentro de la estructura secundaria. Cuando una proteína oligomérica contiene dos o cuatro monómeros o subunidades se denomina dímero o tetrámero.4. Los tipos de enlaces que estabilizan la estructura terciaria son: a) atracción electros- tática de tipo salino entre un grupo carboxilato (-COO . 3.4. En términos de su función biológica. 3. Estructura terciaria Existen razones sobradas para pensar que gran parte de las proteínas tienden a adoptar forma esférica. existe un superplegamiento de la proteína que da lugar a una estructura compacta. cuando los residuos son idénticos como dos metilos de la alanina. estas estructuras laminares se dan en las proteínas fibrosas como la queratina del pelo y la piel. pueden existir algunas regiones de las proteínas que no son a-hélice ni tira plegada. es un depósito de proteína en forma de tira plegada. Esto sólo puede ocurrir si suponemos que. . c) interacción de cadenas polares.15). El estudio de la estructura terciaria ha sido posible gracias a la cristalografía de rayos X desarrollada por la escuela de Bragg en Cambridge y a la labor pionera de Kendrew sobre la mioglobina y de Perutz sobre la hemoglobina. En general. En tanto que la hélice es una cadena polipeptídica enrollada. como se ilustra en la fig.tídicas que pueden ser paralelas (en el mismo sentido) o antiparalelas (en direcciones opuestas) y se estabilizan también por puentes de hidrógeno (fig. la más frecuente en las proteínas naturales.13). oxhidrilo (-OH) o los propios grupos carbonilo (-C=0) de las uniones peptídicas. etc. la fibroma de la seda. b) puentes de hidrógeno. Las proteínas que poseen este grado de organización estructurai se denominan oligoméricas y las cadenas polipeptídicas individuales que la integran se denominan monómeros. 3.5. Estructura cuaternaria Cuando una proteína se compone de más de una cadena polipeptídica. La estabilidad es mayor en la conformación antiparalela. Es común que en numerosas proteínas ocurran simultáneamente ambas estructuras. Es la que se conoce como estructura terciaria de las proteínas. la a-hélice y la hoja plegada p. además del plegamiento secundario. 3. por ejemplo. Las estructuras terciarias de las proteínas permiten agruparlas en familias y subfamilias. Se trata de un arreglo tridimensional que forma diversos repliegues específicos. la tira plegada p está extendida y se dispone a la manera de un acordeón con los grupos R proyectados por encima y por debajo de los planos generados por las cadenas polipeptídicas.

Conformación p de una proteína con disposición paralela (a) antiparalela (b).Figura 3. .13.

4 unión de disulfuro. 3 interacción dipolo-dipolo entre dos serinas. Otras porciones constituyen un enrollamiento al azar. convalente. 2 puentes de hidrógeno.14. entre dos cisternas. entre treonina y serina. interacción electrostática.15. 1. La región de a-hélice está encerrada en un óvalo y la región p está sombreada. . y 5.Figura 3. Representación esquemática del plegamiento de la cadena principal de la ribonucleasa bovina. interacción hidrofóbica entre leucina e isoleucina. Figura 3. Tipo de uniones que estabilizan el plegamiento de las proteínas.

.Figura 3.16. Esquema de la disposición de cuatro subunidades de una molécula de hemoglobina. formada por dos cadenas a en la parte inferior de la figura y dos cadenas p en la parte superior. Estructura cuaternaria de ias proteínas.

La mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica y no posee estructura cuaternaria. 3. urea. este cambio provoca la consiguiente alteración o desaparición de sus funciones. Otros agentes físicos (radiaciones. la hemoglobina contiene 4 subunidades unidas no covalentemente y. 5 . Debido a que las con- . 3. Por lo tanto. altas presiones) o químicos (ácidos. L Desnaturalización La alteración de una proteína que modifique su conformación nativa se denomina desnaturalización. Por ejemplo. Agentes desnaturalizantes Todos aquellos agentes capaces de romper o alterar los enlaces que mantienen las estructuras de orden superior de una proteína pueden desnaturalizarla. 3. excepto enlaces covalentes. RELACIÓN ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIÓN La actividad biológica de una proteína depende del ordenamiento tridimensional apropiado de sus grupos funcionales. particularmente en los sistemas llamados alostéricos. no es necesario postular un control genético independiente para los niveles de estructuración superiores al nivel primario. La existencia de enlaces disulfuro en una proteína aumenta su resistencia a la desnaturalización.17). terciaria y cuaternaria. la ot-quimotripsina contiene tres cadenas polipeptídicas unidas por enlaces disulfuro y no se considera estructura cuaternaria. Un agente desnaturalizante muy común es el calor. La enzima aspartato transcarbamilasa tiene una estructura cuaternaria formada por 12 subunidades. Otros ejemplos incluyen la sintetasa de ácidos grasos. álcalis. puesto que la estructura primaria determina la secundaria. tensoactividad. es decir la proteína altamente ordenada queda reducida a un polimero estadístico formado por una cadena de aminoácidos (fig. terciaria y (cuando está presente) la cuaternaria. formaciones nativas de la mayor parte de las proteínas están estabilizadas sólo por enlaces no covalentes. por tanto. el plegamiento puede ser alterado por condiciones como alta temperatura. Sin embargo. la piruvato deshidrogenasa. pH extremo o presencia de solventes orgánicos que debilitan las interacciones no covalentes. pueden ser desnaturalizadas por agentes reductores como el mercaptoetanol 3 .5. la respuesta puede estar afectada por la presencia de efectores (inhibidores o activadores) que modulan la acción primaria de la proteína (ver capítulo de Enzimas).Los enlaces que mantienen la estructura cuaternaria son del mismo tipo que los que mantienen la estructura terciaria. De este modo. conservándose la primaria (covalente). Las estructuras secundaria y terciaria de una proteína están determinadas por la estructura primaria. las proteínas sólo funcionan cuando están plegadas en su estructura original o conformación nativa. La estructura cuaternaria está íntimamente ligada a las propiedades reguladoras de las proteínas. En estos sistemas.1. En el estado desnaturalizado los niveles de estructuración superior de la conformación nativa se encuentran al azar. En proteínas cuya estructura tridimensional está determinada por enlaces disulfuro. detergentes) capaces de alterar las interacciones débiles pueden llegar a desnaturalizar las proteínas. tiene estructura cuaternaria. esto tiene aplicación cotidiana en el laboratorio de bioquímica. a las cuales se les conoce como complejos multier>zimáticos o estructuras supramoleculares.5.1. En una proteína se produce la desnaturalización al perder su estructura secundaria.

el grupo hemo. Complementarte dad y capacidad de reconocimiento Existen proteínas capaces de reconocer determinado tipo de moléculas que serán objeto de su actividad. antígeno.2. velocidad de difusión y facilidad con que cristalizan. se altera su actividad fisiológica. Otro ejemplo es el de la globina que se une específicamente a su grupo prostético. Para explicar el fenómeno de la especificidad. Los receptores membranales de reconocimiento de las hormonas. Emil Fisher propuso en 1894 una analogía similar a la que existe entre llave y cerradura. receptor membranal) reconocer a la molécula en cuestión y asociarse con ella en forma específica. Clásico ejemplo de reconocimiento es la unión de sustancias llamadas antígenos con su anticuerpo específico. que representan el primer sitio de acción hormonal. En ocasiones esta alteración es reversible cuando se elimina el agente agresivo. Otras alteraciones incluyen disminución de la viscosidad. debido a que la proteína tiene un hueco molecular con la forma precisa para el hemo y dado que las cadenas laterales de los aminoácidos en contacto con el anillo son no polares. Como regla general.5. 3. anticuerpo. que permite a la proteína (sea enzima.o el ditiotreitol. grupo prostético). En otros casos la desnaturalización es irreversible. de ellas nos ocuparemos más adelante. El anticuerpo es una molécula proteínica especial perteneciente al grupo de las inmunoglobulinas. Una consecuencia de la desnaturalización es la pérdida drástica de solubilidad. Ese sitio de reconocimiento se debe a la presencia en la proteína de una estructura complementaria a la de la molécula (llámese sustrato. son también proteínas de reconocimiento. Siendo la conformación de la molécula proteínica la base principal de su función. hormona. las globulinas plasmáticas desnaturalizadas pierden sus funciones de anticuerpos. Por ejemplo. un sitio fijador (de reconocimiento) en una proteína se ajusta al . al desnaturalizarse la proteína. efector. En las proteínas donde más se ha ejemplificado el fenómeno de la especificidad de reconocimiento molecular es entre las enzimas y su sustrato.

el crédito del descubrimiento de'la cromatografía se le dá al botánico Tswett. mecanismo conocido como alostérico. gotas de la sustancia a separar cerca del punto donde partirá el desplazamiento de la fase orgánica (fig. se describe la cromatografía de . además del sitio activo (para el sustrato). como todas las técnicas simples. Sin embargo.18). consiste en colocar en tiras de papel como soporte de una fase estacionaria acuosa mientras una fase móvil orgánica se desplaza en la tira.6. La separación cromatográfica se basa en el coeficiente de partición líquido-líquido de los compuestos. Alosterismo En algunas enzimas y en la hemoglobina se encuentra. La cromatografía en capa fina utiliza el mismo principio de la cromatografía en papel (cromatografía de adsorción). la separación cromatográfica es muy rápida (fig. En un proceso alostérico debe haber en la proteína centros separados de fijación para el sustrato (por ejemplo. aplicando gotas de colorantes en papel y notando la separación en diferentes colores. 3. otro sitio de reconocimiento para moléculas llamadas efectores alostéricos. Desarrollada en 1944 por Martin en Inglaterra. 3. 3. ya que se emplean dos diferentes solventes aplicados secuencialmente para desplazar un solo compuesto (fig. El material usado como revelador es usualmente la ninhidrina mencionada antes. O2 en el caso de la hemoglobina) y el efector (inhibidor o activador) que ejerce el control alostérico. También utilizando una separación en columna. tamaño y polaridad. La relación de la distancia recorrida por el compuesto entre la distancia que recorre el frente del solvente desde el sitio de aplicación se conoce como valor Rf (relación de frentes) del compuesto. En este proceso. el soporte utilizado es sílica gel o celulosa colocadas en una hoja de vidrio o plástico en forma de capas muy finas. la ocupación de este otro sitio determina una inhibición o una activación de la reacción. MÉTODOS DE SEPARACIÓN Y ANÁLISIS 3. Un mecanismo alostérico es un proceso común en moléculas proteicas en el que la asociación del sustrato está influenciada por la fijación de otras moléculas que no son sustratos directos de la proteína.compuesto que se va a unir en forma. pero aprovechando las cargas residuales de las proteínas como carácter diferencial. La gota del compuesto (generalmente un aminoácido o un péptido) se "revela" como una mancha en el papel.20). La cromatografía en papel. El método descrito es cromatografía unidimensional. cuando Runge describió un método para el análisis de mezclas de colorantes. A continuación se describirán técnicas para la separación e identificación de proteínas. quien en 1906 efectuó la separación de mezclas de pigmentos vegetales en un tubo conteniendo material adsorb e n t e s ó l i d o f i n a m e n t e d i v i d i d o .19).1. La cromatografía bidimensional es una variante de considerable poder de separación.3. 3. Las dos primeras técnicas descritas se utilizan generalmente para separar e identificar aminoácidos o péptidos pequeños. Cromatografía Las experiencias en cromatografía se remontan a 1850. Bajo condiciones estrictamente controladas el Rf es una constante importante para propósitos de identificación.5. 3.6. ha revolucionado la se- paración y detección de productos de reacción y la determinación e identificación de compuestos.

Figura 3.18 Cromatografía en papel.

intercambio iónico. Las resinas de intercambio iónico para preparar la columna cromatográfica, se preparan a partir de materiales insolubles (agarosa, poliacrilamina, celulosa, etc.) que contienen ligandos cargados negativamente (R-CH3-COO--SO5) o ligandos cargados positivamente (dietilamino) unidos a la resina insoluole.

Las resinas cargadas negativamente fijan cationes conociéndose como resinas de intercambio catiónico. Igualmente, las resinas cargadas positivamente fijan aniones y se denominan resinas de intercambio aniónico. El grado de retención o retardo de una proteína (o aminoácido) por una resina dependerá del número de cargas (positivas o negativas) de la proteína al pH del experimento (revisar pl de una proteína). Aquellas moléculas proteicas con la misma carga que la resina se eliminarán primero, seguidas por proteínas de carga opuesta, que por atracción de cargas, se retendrán más tiempo en la columna. Cuando es difícil eliminar una molécula fuertemente atraída por la resina, se utilizan cambios de pH o fuerza iónica para debilitar la interacción. Los derivados de celulosa como carboximetil celulosa (CMC) y dietilaminoetil celu-

cero), no se desplazan ni hacia el cátodo ni hacia el ánodo en un campo eléctrico. El punto isoeléctrico (pl) de un aminoácido se define como el pH en el cual no tiene carga eléctrica neta; en el caso de los aminoácidos con sólo un grupo amino y uno carboxilo corresponde a la siguiente ecuación: pl = | ( P K 1+ pK2) Si consideramos la curva de titulación de un aminoácido sencillo como la glicina, su equilibrio de ionización corresponde a: A pH de 1 la forma iónica predominante tiene una carga de +1 (forma catiónica) y se desplazará hacia el cátodo en un campo eléctrico. La adición de base hasta alcanzar la forma de zwitterión, corresponde al punto isoeléctrico (pl=5.97).

La adición de base a la forma dipolar de la glicina, completa la titulación del grupo NH 3, el pH de la solución es superior a 11.5 y la especie predominante tiene una carga formal de -1 (forma aniónica). Como puede verse en la fíg. 3.5, la glicina y otros aminoácidos con cadena lateral no ionizable y valores de pKi próximos a 2.5 y de pK2 próximos a 9.5, pueden actuar como amortiguadores en dos zonas de pH, donde ninguna les permite actuar como amortiguadores al pH fisiológico del plasma. Precisamente, el pH de 7.4 es un valor cercano al pl de dichos aminoácidos, y éste es el punto de menor solubilidad de aminoácidos y proteínas. Un caso más complejo lo constituyen los aminoácidos con un grupo ionizable en su cadena lateral. Tal es el caso del ácido glutámico y del aspártico que poseen un grupo

losa (DEAE) se han utilizado con éxito en la purificación de proteínas. En la cromatografía líquida de alta resolución, la mezcla de proteínas a separar e

identificar se pasa a través de una columna empaquetada con pequeñas esferas de resina insoluble. Como en esta técnica la resina está tan densamente empaquetada se requiere

de bombeo a elevada presión para forzar el paso de la proteína. Electroforesis El movimiento de una partícula cargada en un campo eléctrico externo.000 de PM.3. el sephadex G-25 excluye compuestos de peso molecular de 3. El polisacárido dextrana es tratado químicamente para que se formen enlaces cruzados que den un retículo o malla por la cual pueden pasar moléculas pequeñas. La electroforesis de proteínas se ha llevado a cabo de acuerdo al principio desarrollado por el sueco Tiselius en 1937. las cuales se retardan por tener que viajar por el retículo del gel (fig. 3. Figura 3. como en la cromatografía de intercambio iónico. pero insolubles. receptores de membrana.2. 3. En esta técnica la columna es metálica y no de vidrio como la cromatografía a presión normal. hacia el electrodo de carga opuesta se denomina electroforesis. se hace pasar durante un cierto tiempo. En consecuencia. separando moléculas grandes de las pequeñas. Las esferas de resina pueden cubrirse con grupos cargados.000 y sephadex G-75 para 40-50. al no poder penetrar por el retículo del gel. grupos prostéticos. que las proteínas grandes. Así. Esta sustancia queda como pequeñas esferas hidrofílicas.500-4.500. Las esferas pueden ser porosas y actuar con el mismo principio de la cromatografía de exclusión molecular. 3.6. Filtración en gel La separación de proteínas de diferente tamaño haciéndolas pasar a través de una columna empaquetada con un gel poroso en forma de pequeñas esferas insoluoles se denomina filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular.21). Estos compuestos de alta afinidad se pueden unir en forma covalente a una resina insoluble y utilizarse para purificar una proteína mediante cromatografía en columna. las cuales. Las proteínas pequeñas pueden penetrar por los poros del gel. sephadex G-50 para PM de 8-10. que al colocarlas en agua se hinchan para formar un gel insoluble. una corriente eléctrica a tra- .21 Filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular en columna El bioquímico tiene para elegir varios tipos de sephadex para preparar columnas. Los geles de sephadex G-100 y G-200 se utilizan para separar proteínas de alto peso molecular. son excluidas por motivos estéticos. una mez- cla de proteínas se separa en función del tamaño saliendo primero las proteínas más grandes y a continuación las más pequeñas. Según esta técnica. El nombre comercial de este gel es sephadex. por lo que tendrán que desplazarse por espacios sinuosos y viajar más a través de la columna. inhibidores no covalentes específicos y anticuerpos específicos. La cromatografía de afinidad se basa en la alta afinidad que tienen las proteínas por sus sustratos. o con residuos hidrofóbicos con lo que las moléculas no polares se retrasarán al paso por la resina.6.

hemoglobina y mioglobina. y y 6 . HbAí. es decir.7. como ejemplo de proteínas cuya estructura y función es esencial estudiar para una correcta comprensión de sus procesos bioquímicos normales y de su mal funcionamiento en las enfermedades.Se conoce la secuencia completa de aminoácidos de las cadenas a(141 aminoácidos) y de las cadenas p . El isoelectroenfoque ofrece una resolución sumamente elevada. 3. las diferentes proteínas migran hacia el electrodo de carga opuesta. Una proteína cargada se desplazará a través del gradiente de pH en el campo eléctrico hasta que alcance una región de pH en el gradiente igual al valor de su pl.vés de un tubo en U (un electrodo en cada extremo) lleno con una proteína disuelta en un amortiguador con la misma fuerza iónica. Durante la electroforesis. pH y conductividad. Es especialmente útil para separar proteínas y otras sustancias antigénicas con carga. el más reciente gel de poliacrilamida. proteínas protectoras como las inmunoglobulinas. y de la forma. En este punto la proteína se mantiene estacionaria en el campo eléctrico y puede visualizarse o eliminarse de la columna (fig.M. cada pico representa la separación entre la molécula proteica y el amortiguador (fig. proteínas estructurales como el colágeno y proteínas contráctiles como la tropomiosina. La primera combina la separación electroforética con la especificidad de las reacciones inmunológicas.7.23). 3. La hemoglobina (Hb) está formada por la proteína globina (una histona) y el grupo prostético hemo. la fórmula tetramérica de la HbAí es 0 ^ 2 . almidón. se estudiarán algunas proteínas con importantes funciones biomédicas.La hemoglobina fetal (HbF) es 0. Se han escogido las proteínas de transporte. En la forma más común de hemoglobina humana adulta. que fijan oxígeno en los pulmones y lo transportan por la sangre hacia los tejidos. Así. La proteína globina desde el punto de vista de su estructura cuaternaria es un tetrámero. 1. La medida de la concentración de cada proteína separada se hace por revelado y lectura en un densitómetro. particularmente las proteínas plasmáticas (fig. PROTEÍNAS DE IMPORTANCIA MÉDICA En esta sección. La luz refractada nos da un patrón de picos. 3. Hemoglobina y mioglobina- Las hemoglobinas son proteínas globulares. cada una de ellas formada por cadenas polipeptídicas con dos estructuras primarias diferentes y cada subunidad con su grupo hemo. acetato de celulosa y. las dos subunidades de una clase se denominan cadenas a y los otros dos monómeros de la misma clase se designan como cadenas p. del P. actúan como transporte de CO2 y de iones hidrógeno. El grado de migración depende de las cargas de la proteínas. En ésta.22). Variantes más desarrolladas de la eléctroforesis simple son la inmunoelectroforesis y el isoelectroenfoque. la separación electroforética se realiza sobre un soporte inerte como papel. El aparato de Tiselius se utilizó para determinar el punto isoeléctrico y la movilidad electroforética de las proteínas.24). las proteínas plasmáticas.272» la hemoglobina de las células falciformes (HbS) es ct2£2 y la hemoglobina menor del adulto (HbA2) es a252. agar. la constituyen 4 subunidades. 3. El sitio donde se concentra la proteína en el tubo puede ser determinado por un proceso óptico. 3. En esta técnica se utilizan mezclas de anfolitos formados por ácidos poliamino-policarboxílicos con un intervalo de pl definido para establecer un gradiente de pH a través del campo eléctrico aplicado. presentes en los glóbulos rojos. Una modificación altamente simplificada de la técnica electroforética de Tiselius es la llamada eléctroforesis de zona. al volver a los pulmones desde los capilares.

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(146) aminoácidos). El átomo de hierro. A diferencia de la hemoglobina. El grupo prostético hemo es una molécula de porfirina.000. es de aproximadamente 67. tanto en la hemoglobina como en la mioglobina. patrón característico de las proteínas globulares.000. El PM de la hemoglobina. que contiene un átomo de hierro en su centro. incluyendo el grupo hemo. se encuentra en estado ferroso (Fe2*). un tetrapirrol cíclico. El tipo de porfirina de la hemoglobina y la mioglobina corresponde a la protoporfirina IX con dos propionilos. La cadena polipeptídica consta de 153 aminoácidos y tiene un PM de 17. esta molécula . la mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica (monómero) y un solo centro de fijación de 02 (hemo). Su distribución especial es el de una superficie polar y el interior no polar. 3.5 nm (fig. El quinto enlace de coordinación del átomo ferroso de los hemos es con el nitrógeno imidazólico de una histidina {histidina proximal de la apoproteína).26). 3. Su concentración en la sangre humana es de 16 g por 100 mi. dos vinilos y cuatro metilos como cadenas laterales unidos a los grupos pirrólicos (fig. En las cadenas polipeptídicas con 02 ligado. La mioglobina (Mb) es una proteína que almacena 02 en el tejido muscular rojo. La hemoglobina fue la primera proteína analizada por difracción de rayos X.25). El polipéptido P de la Hb es muy semejante a la mioglobina. identificada como una molécula casi esférica con un diámetro de 5.

Esta combinación se lleva a cabo sin alterar la valencia del hierro que sigue como ferroso.Figura 3. El hemo se sitúa dentro de un espacio hidrofóbico en cada una de las subunidades de globina. es . Cinética de oxigenación de hemoglobina y mioglobina La hemoglobina se combina con el oxígeno y se transforma en oxihemoglobina (Hb0 2 ). forma un sexto enlace coordinado con el Fe 2+ y el segundo imidazol de una histidina distal de la globina.25 Estructura cuaternaria de la hemoglobina. con las cadenas en contacto con las P. las 4 subunidades se disponen en un arreglo espacial tetraédrico preciso. en realidad fija ocho átomos de oxígeno por tetrámero (dos por cada subunidad). los grupos hemo se localizan en la periferia. De esta manera.

tiene consecuencias fisiológicas importantes. En cambio. la p 0 2 del tejido muscular puede disminuir hasta 5 mm Hg. El efecto Bohr puede encajar en la definición de un mecanismo alostérico.27). T y R se emplean también para describir las estructuras cuaternarias de las enzimas alostéricas. nitritos. la forma T es más acida. pero puede producirse un exceso si se ingieren sulfonamidas. la mioglobina cede con facilidad su oxígeno para apoyar la síntesis oxidativa de ATP en las mitocondrias musculares. sobre equilibrio ácido base. en estas condiciones no transporta oxígeno.29). llamada "tensa" o estado conformacional T. tiende a liberar su oxígeno y representa un aumento de oxigenación en tejidos metabólicamente activos. La fijación del efector en el sitio alostérico influye sobre la conformación del sitio del sustrato (sitio activo). fenacetina u otros oxidantes. en la proteína existe un sitio de fijación para el sustrato y otro para el efector alostérico (positivo o negativo). el hierro pasa de ferroso a férrico (Fe 2+ —• Fe 3+ ) y se denomina metahemoglobina (MHb). no es una oxidación sino una oxigenación. Los datos de cristalografía con rayos X indican que la hemoglobina tiene dos estructuras cuaternarias. la mioglobina muestra una curva de saturación de oxígeno de tipo hiperbólica (fig. de afinidad más baja por el oxígeno.decir. A esta presión. La reducción de la afinidad oxígeno-hemoglobina en un pH bajo se denomina efecto Bohr (fig. es decir. desplaza a la Hb a la forma T. Por tanto. al fijarse el oxígeno a las subunidades. Cuando la hemoglobina se oxida químicamente. Así. 3. por lo tanto. 3. la cooperatividad desaparece y la curva de saturación de oxígeno adquiere forma hiperbólica. según el cual. cuando la Hb oxigenada se encuentra a pH bajo (ácido) y C 0 2 alto. ya habíamos señalado la influencia del oxígeno sobre el pKa de la hemoglobina: H H b + 4 0 2 — Hb(0 2 ) 4 +H + . la hemoglobina muestra una cinética cooperativa de fijación. Al ocupar su sitio el ion H. En la hemoglobina el sitio activo es ocupado por el oxígeno y el sitio alostérico es ocupado por el hidrogenión. La cooperatividad positiva de la hemoglobina depende de la integridad de la estructura cuaternaria. la conformación pasa del estado T al R ("relajado").28). El efecto Bohr. La curva de saturación de oxígeno con hemoglobina es sigmoidea. Las dos formas son de conformación desoxi. Esto se debe a que una vez fijado el primer átomo de 0 2 facilita la unión del siguiente. Normalmente se forma menos del 1 % de MHb. Bajo condiciones de escasez de oxígeno (como en el ejercicio intenso). producen ácido carbónico y ácido láctico que incrementan la concen- . donde el estado T tiene afinidad menor por el sustrato. 3. si el tetrámero se disgrega en monómeros. lo que indica que la mioglobina tiene mayor afinidad por el 0 2 que la hemoglobina y es una molécula inadecuada como transportadora de 0 2 pero eficaz para almacenarlo. En la unidad II. Las células con metabolismo rápido y con requerimientos elevados de 0 2 . La constante de afinidad del 0 2 es mayor en el estado R que en el estado T (fig.

3-difosfoglicerato (2. La hemoglobina fetal (HbF) tiene mayor afinidad por el oxígeno que la adulta (Hb A) lo que le permite extraer O2 de la HbA de la sangre placentaria. y reduce su afinidad por el oxígeno. la concentración de H+ disminuye. una disminución de O2 hace que se acumule el 2. En los pulmones. el eritrocito aumenta la producción de 2. En los tejidos periféricos. la HbF es inadecuada. la estabiliza. Dado que el H+ fuerza alostéricamente hacia la conformación T de la hemoglobina. ya que su elevada afinidad por el oxígeno la haría ceder menos O2 a los tejidos. un incremento de hidrogeniones provoca liberación de oxígeno. disminuye la afinidad C>2-Hb y se disocia una mayor cantidad de O2 hacia los tejidos. Cuando la liberación de oxígeno está alterada como en el ascenso a grandes alturas o en la enfermedad pulmonar crónica. en tanto que un incremento en el oxígeno causa la liberación de hidrogeniones. los protones son liberados de la hemoglobina favoreciendo la forma R y la captación de oxígeno.tración de H+ en la célula.3-DPG). un aumento en el contenido de 2. La mioglobina no presenta efecto Bohr. el pH sube.3-DPG de los eritrocitos hace que la hemoglobina ceda una porción mayor de su oxígeno a los tejidos. En resumen. Después del parto. . Por lo tanto. el cual es un efector alostérico de la hemoglobina cuando ésta se encuentra en la forma T.3-DPG el cual se une a la forma T de Hb.

Aproximadamente el 15% del CO2 es transportado como carbodioxihemoglobina o carbaminohemoglobina (HbCO2). Además de transportar el oxígeno de los pulmones a los tejidos. La sustitución de un solo aminoácido de la cadena P (Glu por Val) produce una hemoglobina que. cuando esto ocurre. Hemos mencionado que en la hemoglobina normal. por tanto. los residuos His proximal y distal son reemplazados por Tir la cual estabiliza el Fe en forma oxidada. La hipoxia producida conduce a policitemia. el trastorno se conoce como una hemoglobinopatía. Hemoglobina S (hemoglobina falciforme). Esta zona. la hemoglobina facilita el transporte de CO2 de los tejidos a los pulmones. la fijación del O2 obliga a la expulsión del CO2 de acuerdo al efecto de Bohr que ya revisamos. no cederá suficiente oxígeno a los tejidos. En estas mutantes se favorece la forma R. Los eritrocitos deformados se denominan células falciformes (forma de hoz) y su lisis al pasar por las sinuosidades esplénicas produce anemia. Hemoglobinas mutantes con afinidad mayor de lo normal por el oxígeno. Muchas de las imitantes pueden ser asignadas a una de las cuatro clases siguientes: Hemoglobina M. La carboxihemoglobina (HbC0) tiene un color rojo brillante característico. Por tanto. al cambiar un aminoácido polar (Glu) por uno no polar (Val) se genera en la superficie de la cadena p una zona adherente. Hb-NH2+C02 -* Hb-NH-COO-+H+ Cuando están carbamilados. férrica.La hemoglobina se combina con el monóxido de carbono (CO) para formar carboxihemoglobina. El CO2 forma radicales carbamilados reversiblemente con los extremos amino de las cadenas polipeptídicas de hemoglobina cuando ésta cede su O2. Las proteínas mutantes no muestran cooperatividad en la fijación del oxígeno ni efecto Bohr. Hemoglobinas humanas mulantes Las mutaciones en los genes que codifican las cadenas a y P pueden afectar la función transportadora de la hemoglobina. La unión de zonas complementarias y adherentes hace que la HbS desoxigenada se polimerice y forme precipitados fibrosos largos que distorsionan mecánica y físicamente al eritrocito. En consecuencia se presenta metahemoglobinemia. la afinidad por el oxígeno está disminuida y puede faltar el efecto Bohr. En los pulmones el proceso descrito se invierte y conforme el oxígeno se une a la hemoglobina. el grupo hemo funciona con Fe2+ pero pequeñas cantidades se oxidan a férrico (Fe3+)y se transforma en metahemoglobina. La interacción del CO2 con la hemoglobina afecta también la transición del estado T al R. los extremos tienen carga negativa y pueden formar enlaces iónicos que estabilizan la estructura cuaternaria. los H+ se liberan y se unen al HCO3 para formar H2CO3. que se presenta en la HbS desoxigenada. Los H+ son captados por la Hb que actúa como amortiguadora. causando lisís. a tensiones iguales de O2 y CO. esta enfermedad hereditaria se conoce también como anemia de células falciformes. Así. tiene una zona complementaria en la forma oxigenada de la HbA. Los individuos homocígotos (genotipo S/S) presentan anemia pero los heterocigotos (genotipo A/S) tienen el rasgo . En las variantes de hemoglobina M. En virtud de la mayor afinidad de la hemoglobina por el CO (210 veces). Para desplazar el CO de la Hb-CO en las personas intoxicadas con este gas se requiere el uso de la oxigenoterapia hiperbárica (O2 puro a 3 o más atmósferas de presión) para forzar la expulsión del monóxido de carbono. la fijación del CO a la Hb excede con mucho a la del oxígeno.

este comportamiento excepcional de la histidina le confiere un papel único en las proteínas enzimáticas como activador fisiológico.7.0. las formas iónicas posibles son las observadas en la fig. muy próximo al pH fisiológico. . Por ejemplo. A pH 6. el pH es una unidad (10 veces) por encima del pK del imidazolio y el cociente imidazol/imidazolio es 10:1. Por otro lado. la hemoglobina contiene una elevada proporción de histidina y posee así un alto poder amortiguador en los eritrocitos.En el caso de la histidina. Obsérvese que la histidina con un pK R = 6. Precisamente. es el único aminoácido que puede actuar como amortiguador en los líquidos corporales.0 . debido a esta proporción la enzima mostrará el 91% de su actividad potencial máxima. A pH 7.0. 3. la mitad de las enzimas estarán en forma básica (imidazol) activa y la mitad en forma acida (imidazolio) inactiva. una enzima puede requerir un imidazol de una histidina que es esencial en su forma básica para que exista actividad catalítica.

3.ticuerpos. Todas las acciones de respuesta a material En general.covalentemente a moléculas grandes. Cuando se introduce al organismo tético.bulinas. un determianticuerpos nante antigénico puede comprender sólo La inmunología estudia todos los fenóme. tantes. virus. proteínica no puede unirse a la apoproteína. no determinan Esta respuesta puede ser de tipo celular y de la formación de anticuerpos pero. En la respuesta celular inter. trasplantes.gan. al unirse tipo humoral. En estas enPara que una sustancia actúe como antígefermedades. derivadas de un linfocito B. que acen poblaciones expuestas endémicamente al túan directamente o bien a través de paludismo. debido a que las células los linfocitos B (de bursa o bolsa de Fabricio infectadas requieren más oxígeno que las no de las aves). Las hemoglobinas mutantes son ines. Por ejemplo. Las sustancias que inducen la producción de anticuerpos en un organismo se Normalmente. por ejemplo. cada uno de ellos capaz de recotos. y su acción se ejerce a través de infectadas y al adquirir la forma semilunar los anticuerpos (inmunoglobulinas) que cé(de hoz) son eliminadas de la circulación. que se desarrolla cinas. Estructura y función de los En las proteínas. etc. un tables y destruidas porque el hemo que polisacárido o un ácido nucleico.propios de ese organismo.aunque en general no están anémicos. esto se la introduce parenteralmente. las células normalmente estabiliza la conformación plasmáticas. de tal lo propio (nuestros tejidos y células) de lo manera que inducirán múltiples tipos de anno propio (bacterias. esto proporciona cierta protec.una sustancia extraña como una proteína.sustancias por ellas liberadas llamadas linfoción contra el parásito. células tumorales. solo o una molécula pequeña. la sustitución de un aminoácido denLas moléculas de anticuerpos (Ab) son tro del espacio para el hemo reduce la proteínas que pertenecen a las inmunogloafinidad de la subunidad con el grupo pros.seis o siete aminoácidos en total de la proteínos bioquímicos y fisiológicos de defensa na. no puede contener múltiples determinantes antige'nicos. Un antígeconduce a formas severas de anemia. capaz de destruir a las sustancias extrañas. es antigénica para el hombre cuando destrucción prematura del eritrocito. la ducción de la cadena complementaria que albúmina de cualquier mamífero. se presenta aumento de pro. las cadenas a y p se produ. facili- . producen anticuerpos. En la respuesta humoral intervienen dentro del eritrocito.) y es n o c e r y u n i r s e a c a d a u n o de los determinantes (fig. cen en una proporción de 1:1. Un antígeno puede poseer decenas o migracias a los cuales el organismos distingue les de estos grupos determinantes.7. El gene vienen células sanguíneas denominadas linpara la HbS manifiesta elevada incidencia focitos T (que maduran en el timo). En estas mu. 3.2. lulas derivadas de estos linfocitos B segreHemoglobinas inestables.30). un determinante antigénico extraño se denominan respuesta inmune. la síntesis de las cadenas a-o no en un organismo debe poseer una estruclas p de la hemoglobina está disminuida.denominan antígenos (Ag). En tura química distinta de los constituyentes consecuencia. La molécula de anticuerpo se asocia de forma no covalente con la sustancia extraña y la elimina del organisTalasemias mo. excepto la precipita intracelularmente y da lugar a la humana. que son pequeñas regiones de la molécula de antígeno que inducen específicamente la producción de un anticuerpo. parási. hongos.

tan la génesis de anticuerpos dirigidos específicamente contra la molécula pequeña. ANTICUERPOS (Igs) Figura 3. el hapteno conserva su capacidad de unirse al anticuerpo. lúe- . etc. Estas poseen la función de sintetizar y secretar inmunoglobulinas a las cuales en un principio. 4-dinitrofenol. por ejemplo. una vez separado de su portador. que puede ser una proteína y donde se muestran distintos e hipotéticos determinantes antigénicos y cómo a ellos se pueden unir diferentes anticuerpos de manera especifica. DNP-glicina. A estas moléculas pequeñas se les conoce como haptenos. de péptidos sintéticos o el 2. Al estimularse los linfocitos B con un antígeno se induce una serie de cambios que los hace transformarse en células plasmáticas.30 Esquema de un antigeno.Cada anticuerpo se une al determinante antigénico frente al que se ha formado. se les denominó anticuerpos. Es el caso. Al tiempo que un hapteno requiere la unión a una molécula grande para producir anticuerpos.

Dos de estas nas.una "unidad básica" tetramérica construida pos contra un solo antígeno.31). fue durante años un serio obstáculo para esCada inmunoglobulina está formada por tudiarlas químicamente. En realidad. nal de los anticuerpos.aminoácidos (PM 50.puentes disulfuro (fig. al conocerse con precisión su estructura y función en 1965. (PM 25. las proteínas de Bence-Jones son las cadenas ligeras de las inmunoglobulinas que. se obtenía una por cuatro cadenas polipeptídicas unidas por pequeña cantidad de una mezcla de globuli. aparecen fácilmente en la orina. Sin embargo. homogéneos. aunque es diferente Estructura de ¡nmunoglobulinas cuando se comparan entre sí las proteínas de La heterogeneidad de las inmunoglobulinas diferentes enfermos de mieloma. la IgG. los anticuerpos producidos son idénticos. Al aislar anticuer. y ver que emigraban en la fracción gamma. al descubrirse la electroforesis. se les dio el nombre de gammaglobulinas. El conocimiento cada vez más avanzado cadenas son de bajo peso molecular y se les de ios mielomas y la cantidad anormalmente denomina cadenas ligeras. En la incontribuyeron a vencer el obstáculo. se le denominó inmunoglobulinas (Ig).go. su El mieloma múltiple es un tipo de cáncer cadena pesada tiene aproximadamente 440 en que se presenta la multiplicación descon. las de mayor PM se denominan cadeestos pacientes. 3. H (del inglés heavy). constituyen una clona (células provenientes de una misma estirpe) y por tanto. cada cadena H está . La proteína de Bence-Jones es homogénea para cada individuo con mieloma. la proteína de Bence-Jones.000). nas pesadas.000) y sus cadenas litrolada de multitud de células provenientes geras contienen la mitad de aminoácidos de una sola célula productora de anticuerpos. por su bajo PM. L (del inglés alta de una proteína presente en la orina de light). En la estructura tridimensioTodas las células del tumor son idénticas. munoglobulina más común.

denominada región variable (V). La conformación que adopta la molécula completa es de una T o una Y. llamada bisagra o gozne. por donde se deforma la molécula cuando se produce la unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ab).32). dentro de la región variable hay zonas hipervariables. con grupos de aminoácidos siempre distintos. . La porción central de las cadenas H es una zona (de unos 15 aminoácidos) de gran flexibilidad. 3.asociada con una cadena L (fig. determinados por cada antígeno particular. Las cadenas L constan de dos regiones de estructura primaria bien definidas y diferenciadas: una región de gran variabilidad en número y secuencia de aminoácidos.

Las regiones constantes de las cadenas H son las que determinan la clase a la que pertenece el anticuerpo (ver más adelante). a los que se refie- ren las cinco clases diferentes de inmunoglobulinas. delta (5). Cada clase de inmunoglobulinas sólo contienen un tipo de cadenas pesadas pero pueden contener uno u otro tipo de cadena ligera. IgA. la parte constante determina cinco tipos: alfa (a). es la que produce la fijación de las proteínas del complemento y proporciona la región necesaria para que los anticuerpos crucen la membrana placentaria. mu (ji). Los anticuerpos IgG pueden promover la fagocitosis y también activar el complemento. Esta clase de Ig se encuentra en el plasma a elevadas concentraciones y es la que se forma en mayor cantidad durante la respuesta secundaria a antígenos extraños. IgD e IgE. respectivamente. mu.Estos son los sitios de combinación donde se realiza la unión de la inmunoglobulina con su antígeno. gamma (y). IgM. Otra parte de las inmunoglobulinas muestra una composición fija en número y orden de aminoácidos que se denomina región constante (C). y épsilon (e). de ahí que existan dos tipos de cadenas ligeras: kappa (K) y lambda (X). (tabla 3. según posean las cadenas pesadas gamma. La parte constante de las cadenas ligeras puede ser de dos tipos. en cierto modo comparables al sitio activo de una enzima. alfa. En las cadenas pesadas. Clases de inmunoglobulinas Las inmunoglobulinas pueden ser de las clases siguientes: IgG. .6). delta y épsilon. IgG.

(unidos estos por puentes disulfuro) de una estructura cova lente básica [(LH)2]5. Como tales.000). Parece participar en la diferenciación de linfocitos B a células plasmáticas.33). IgE. Al igual que las IgG. Esta característica ha podido ser estudiada tratando las Ig con papaína. nasal. Tanto a los dímeros de IgA como a los pentámeros de IgM se pueden unir dos péptidos adicionales que son la pieza de secreción y la cadena J. urticaria. estas inmunoglobulinas son la defensa inicial contra los antígenos virales y bacterianos invasores. el choque anafiláctico. urinaria. es la que permite a IgA e IgM salir a las secreciones biológicas. como son asma bronquial. y son los primeros anticuerpos que actúen contra un antígeno extraño (respuesta primaria). serotonina. con anterioridad a su entrada en el plasma. Dado que cada unidad básica de anticuerpo contiene dos pares de cadenas (LH)2. la IgM es un anticuerpo muy efectivo. rinitis alérgica. incluso el más grave de todos. dos de los cuales son iguales entre sí y comprenden la porción NH 2 . en determinadas circunstancias. IgD. leche y calostro).terminal de la cadena H y toda la cadena L. esto puede acarrear la muerte del individuo por hipotensión e insuficiencia respiratoria. Se han reconocido 4 subclases de IgG. de ahí que esta Ig sea la de mayor PM (900. El alto nivel de IgG en el feto se debe a que esta Ig atraviesa la placenta. se producen cambios alostéricos y se liberan grandes cantidades de histamina. lágrimas.Actúan en forma sinérgica con otras secreciones (lisozima y complemento) para destruir a ciertos microorganismos. Los anticuerpos como los presentes en la artritis reumatoide (anti IgG) son de esta clase. La IgM tanto en sangre como en otros líquidos se encuentra como tetrámero o pentámero. Cuando los mismos antígenos que indujeron su formación vuelven a entrar. enzima que divide la molécula en tres fragmentos (fig. La pieza de secreción es una glicoproteína que se sintetiza en células epiteliales de mucosas y glándulas exócrinas. Se han identificado 2 subclases de IgM. las IgM pueden promover la fagocitosis de microorganismos por los macrófagos y leucocitos polimorfonucleares y son potentes activadores del complemento. IgM. Este hecho. bronquial. cuando la madre Rh (-) produce anticuerpos anti Rh ( + ) contra el feto en la llamada enfermedad hemolítica del recién nacido.Tienen la propiedad de atravesar activamente las membranas biológicas. Se encuentran principalmente en el plasma. intestinal. Fijación de antígeno por molécula de anticuerpo Las regiones variables de las cadenas L y H constituyen un centro de fijación de anticuerpo. puede tener consecuencias nefastas para el feto. Aunque presente en plasma en concentraciones bajísimas es la inmunoglobulina que determina las reacciones alérgicas y anafilácticas. Está presente en la superficie de los linfocitos del recién nacido. IgA. Debido a esa estructura pentamérica que determina 10 sitios de unión con el antígeno. Estos fragmentos se designan fragmentos Fab (antigen binding) y pueden fijar antígenos con una afinidad similar a la del anticuerpo completo. El otro . se unen por el extremo Fab. La IgE posee la capacidad de unirse por su extremo Fe (ver adelante) a los mastocitos o células cebadas. Se presentan habitualmente como un dímero de la estructura básica (LH2)2. leucotrienos y otras sustancias vasoactivas que producen vasodilatación periférica o broncoconstricción. 3. existen dos centros de fijación de antígeno por molécula de anticuerpo. ciertos casos de dermatitis. Las Ig de esta clase se encuentran principalmente en las secreciones extravasculares (secreciones mucosas.

7. muchas no son estrictamente "plasmáticas" ya que se encuentran ahí sólo transitoriamente o experimentando parte de su catabolismo. Esta propiedad favorece la aglutinación y precipitación clásicas de la reacción antígeno-anticuerpo (Fig. es la mitad COOH.). por lo que se deduce que hay dos centros de fijación de . etc. Si se toma una muestra de sangre. éste no contiene elementos figurados (células) ni fibrinógeno.3. si se impide la coagulación de la sangre y se separan las células. el líquido remanente es el suero. La fuerza de asociación entre Ag y Ab se debe a fuerzas no covalentes. El término proteínas plasmáticas se restringe a unas 50 moléculas que realmente llevan a cabo funciones Figura 3. escapa a los objetivos de este texto de bioquímica cubrir estos trascendentales aspectos que pueden consultarse en obras dedicadas a esas disciplinas. se deja coagular y se separa el coágulo. En resumen. La valencia 2 que tiene cada molécula de Ab permite que cada Ab fije dos Ag diferentes. Proteínas plasmáticas El plasma es el medio líquido de suspensión de los elementos sólidos de la sangre (eritrocitos.34). los trasplantes y el cáncer. el líquido resultante es el plasma. plaquetas. leucocitos.Ag por molécula de Ab) situados en los extremos amino-terminales de las cadenas H y L que comprende las secuencias variables de aminoácidos. fragmento conocido como Fe (cristalizable). Es evidente que existen sobradas razones para hablar más extensamente de los fenómenos inmunológicos en medicina.terminal de las cadenas H y no puede fijar antígeno. que contiene lo mismo que el suero y además fibrinógeno. 3. Por el contrario. basta mencionar la inmunidad a las infecciones. la autoinmunidad. la sangre sin elementos celulares es el plasma y el plasma sin fibrinógeno es el suero. proteína involucrada en la formación del coágulo. Aunque en el plasma se encuentran más de 200 proteínas.33 Hidrólisis de la IgG en los fragmentos Fab y uno Fe por la enzima proteolítica papaina. Sin embargo. las reacciones de hipersensibilidad y alergia. 3.

reguladora del equilibrio hídrico y ácido base.000). por lo tanto. La facilidad con la que pueden obtenerse muestras de sangre ha permitido que el estudio de sus constituyentes sea uno de los pilares más importantes del desarrollo de la bioquímica en general y.Figura 3. Las proteínas plasmáticas son una mezcla muy heterogénea que comprende no solo proteínas simples. inmunitaria. la mayoría contiene un resto glucídico. Se sintetiza exclusivamente en el hígado a razón de 20g al día y tiene una vida media de 10 días. Albúmina.6. en particular.7 se muestran las principales proteínas plasmáticas. específicas en el plasma: de transporte. En la tabla 3. permitió separarlas en diferentes componentes: albúmina^lobulinas^y fibrinógeno (ver subcapítulos 3. . Es la más abundante (55%) y tiene un PM muy bajo (69. la albúmina es responsable del 80% de la presión osmótica coloidal total deljílasma. p y y) que con las primeras técnicas migraban juntas. Hasta hoy se han aislado puras unas 70 proteínas plasmáticas. Las primeras técnicas de separación. seguramente quedan muchas por descubrir y caracterizar. ordenadas de acuerdo a su movilidad electroforética. A medida que las técnicas de fraccionamiento se hicieron más resolutivas. se identificaron subgrupos de globulinas (a. etc. Es una de las pocas proteínas del plasma que carecen de carbohidratos. sino también conjugadas. como las glucoproteínas y lipoproteínas. aunque también fija algunos fármacos como aspirina y barbitúricos. nutritiva. Esta es una de las proteínas que une y transporta hormonas tiroideas. F'realbúmina. Como se podrá observar. Está compuesta por 610 aminoácidos en una sola cadena polipeptídica con 50% de a-hélice y 15% de estructura p. electroforesis e inmunoelectroforesis. de la bioquímica clínica.34 Unión de anticuerpo a antígenos en reacciones de precipitación (a) y en reacciones de aglutinación (b).3).

colagenasa. elastasa. En casos de desnutrición grave.2. aumentan la concentración plasmática de cationes y ocasiona indirectamente un aumento de presión osmótica. Su función nutritiva consiste en proveer de aminoácidos utilizables para la síntesis de proteínas del organismo. Esta hipoalbuminemia repercute.4 posee 17 cargas negativas que. en las enfermedades renales y hepáticas que también se acompañan de hipoalbuminemia. Contiene un alto contenido en carbohidratos. Según la teoría elastasaantielastasa del enfisema (destrucción de alveolos pulmonares y ensanchamiento de bronquiolos). salicilatos. Forma parte de otras proteínas antiproteásicas.1). la albúmina actúa como molécula transportadora de bilirrubina. digitálicos. subcapítulo 2. en la función coloidosmótica.5) de la proteína. Su actividad antiproteasa es polivalente (tripsina. responsable éste del bajo punto isoeléctrico (3. etc. hecho importante porque un incremento de su concentración libre repercute sobre el funcionamiento cerebral (por aumento de serotonina cerebral). se presenta edema tisular (ver unidad 2. ok\-glucoproteína acida. ésta posee el 90% de la capacidad antiproteásica total del plasma.) pero sobre todo sobre la elastasa de origen neutrófüo. fenilbutazona. el más bajo de todas las plasmáticas. oligoelementos y algunos fármacos: cafeína. barbitúricos. antibióticos. etc. por el efecto Gibbs-Donnan. la albúmina a pH 7.Además de contribuir a la presión osmótica coloidal. sobre todo. Además. Se sintetiza en el hígado y por su abundancia en plaquetas se le ha relacionado con la coagulación. disminuye la síntesis de proteínas y se presenta hipoalbuminemia. ácidos grasos. sobre todo ácido siálico.2. quimotripsina. los neutrófilos pulmonares liberan elastasa de sus lisosomas. en ausencia . ai-antitripsina. También se fija a la albúmina el triptófano.

se une prácticamente a todas las endopeptidasas. Factores de la coagulación Se define como hemostasia el cese de la hemorragia que sigue a la interrupción traumática de la integridad vascular. Es otra de las antiproteasas plasmáticas. Transcortina. En líquido amniótico se ha encontrado elevada en embarazos que conllevan fetos anencefálicos.2. Dentro de las proteínas plasmáticas se encuentra este grupo complejo de proteínas y lípidos unidos por fuerzas no covalentes. Es sintetizada por las células linfoides. En la fracción fi-globulínica se encuentran también la P1 -glucoproteína específica del embarazo. Constituye el 25% de las proteínas plasmáticas. la proteína C reactiva (que aumenta en procesos infecciosos y denominada así porque precipita al polisacárido C del neumococo). la tercera fase es la formación de un coágulo sanguíneo insoluble o trombo rojo. El primero de estos mecanismos es la constricción del vaso dañado con objeto de frenar la salida de sangre de la herida. se logra así un ahorro de hierro y se protege al riñon del efecto nocivo de la hemoglobina libre. que es reutilizado por el hígado. la segunda fase consiste en la formación de un trombo o coágulo blanco de plaquetas en el lugar del daño. Su función es unirse irreversiblemente a la hemoglobina con lo que se excede el umbral renal de excreción. al-Macroglobulina. a\-Fetoglobulina. Globulina fijadora de tirosina. Llamada también a l fetoproteína. Se une específicamente a los esteroides testosterona. plaquetas. posee gran afinidad por los estrógenos. androstanolona y estradiol. Sería interesante prevenir a fumadores potenciales con fenotipos predisponentes al efisema. ocasionando insuficiencia respiratoria crónica. Su papel consiste en la fijación del grupo hemo con lo cual se impide su excreción urinaria y contribuye al ahorro de hierro. Contribuye a la enfermedad el humo de tabaco que inhibe a la antitripsina. Da cuenta del 3% de la capacidad antiproteasa plasmática. Haptoglobina. dada su concentración en la secreción bronquial. pulmón embrionario.7. Es una proteína de membrana de linfocitos. $2-Microglobulina. Fracción y-globulínica. Está integrada por las inmuno globulinas que se trataron en el subcapítulo 3. Aumenta en enfermedades malignas y en pacientes con riñones trasplantados. que transporta hierro. etc. Inter-al-inhibidor de la tripsina. la transferrina.de al-antitripsina. Lipoproteínas plasmáticas. y las proteínas relacionadas con la coagulación. parte de las lipoproteínas. las células pulmonares son sensibles a la proteasa que destruye la elastina de las fibras y disminuye la elasticidad pulmonar. Incorpora las dos terceras partes de las hormonas tiroideas circulantes. Otras proteínas de la fracción a-globulínica son la ceruloplasmina. células PMN y de cultivos de carcinoma mamario. ^-Globulina ligadora de esteroides. Hemopexina. Proteína ligadora de retinol. La coagulación sanguínea es uno de los tres mecanismos que contribuyen al proceso fisiológico de la hemostasia. a\-Antiquimotripsina. que transporta cobre y parte de las lipoproteínas. Su concentración aumenta en tumores digestivos. Es la proteína plasmática de mayor peso molecular.Se denomina también globulina fijadora de corticosteroides. carcinoma hepático y tumor embrionario del testículo. En la primera fase participan sustancias vasconstrictoras locales cuya acción es lúe- . Su papel es transportar la vitamina A. que por su importancia en el transporte de lípidos es más conveniente tratar en el capítulo correspondiente al metabolismo de estas sustancias. Se ha sugerido un papel protector de las mucosas.

3. A un pH inferior al pl la proteína tendrá una carga neta positiva. No obstante que no es objetivo primordial de este texto revisar exhaustivamente el alto número de reacciones posibles.7. Reacciones químicas de los aminoácidos Los aminoácidos pueden presentar reacciones químicas a tres niveles: en el grupo a amino. se considerarán aquellas reacciones importantes de identificación de aminoácidos.Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos por un enlace particular (enlace peptídico) que bloquea los grupos ct-amino y a-carboxilo. en las proteínas la existencia de grupos ionizables dependerá de las cadenas R laterales de los aminoácidos. excepto en el aminoácido inicial y el terminal. a un pH superior al pl. por medio de un enlace peptídico. El grupo carboxilo de un aminoácido puede reaccionar con el grupo amino de otro para formar. los valores de pl de las proteínas se miden experimenta 1mente determinando el pH en el que la proteína no se mueve en un campo eléctrico. un dipéptido. y el valor del pl característico de una proteína dependerá de las concentraciones relativas de los diferentes grupos ácidos y básicos. la proteína tendrá una carga neta negativa. La importancia del cálculo del pl de una proteína se tratará más adelante en este capítulo. De esta manera. Reacciones del grupo a -carboxilo El grupo carboxilo a puede esterificarse con alcoholes o formar amidas en presencia de amoniaco. en el a-carboxilo y en los grupos activos de la cadena lateral R.1. . 3.13. Al igual que con los aminoácidos. En virtud de que el pH isoeléctrico de una proteína es difícil de calcular a partir de los valores de pK de sus aminoácidos constituyentes. 3.

la protrombina se transforma en trombina. el tromboxano A2 que. Esta fase de la hemostasia se mide mediante el tiempo de sangrado. la cual cataliza la transformación de fibrinógeno (soluble) en el coágulo de fibrina (insoluble). La vía intrínseca se inicia a través del contacto de la sangre con una superficie distinta de los va- sos sanguíneos. que forma un complejo activo. una pared vascular anormal o un área de circulación sanguínea restringida. A causa de una herida se desencadenan ambos mecanismos.go amplificada por serotonina.8). que culmina con la formación del trombo rojo de eritrocitos y fibrina. debido a la presencia de sustancias que no están presentes normalmente en la sangre. cada factor se designa por un número romano de acuerdo al orden cronológico de su descubrimiento pero que no tiene relación con el orden en el cual actúa (tabla 3. pues la sangre entra en contacto con una superficie ajena a los vasos y. En ésta. adrenalina. una nomenclatura para los mismos. La coagulación sanguínea o tercera fase. El elevado número de factores plasmáticos de la coagulación ha obligado a establecer por parte de un Comité Internacional. la tromboplastina. y una potente sustancia vasoconstrictora derivada de prostaglandinas. con el factor Vlla (activado) plasmático. La vía extrínseca es la que sigue a una lesión en respuesta al daño tisular. Vía extrínseca. en presencia de Ca 2+ . Se inicia con la liberación de un factor tisular. al activar el factor X. se puede llevar a cabo a través de dos vías {extrínseca e intrínseca) que convergen en una ruta final común que. Esta vía es sumamente rápida en respuesta al daño tisular. La tromboplastina tisular es una lipoproteína que se encuentra ampliamente distribuida en las membranas . contribuyen a la agregación plaquetaria para formar el tapón laxo de plaquetas que constituye la segunda fase. con otras sustancias de los tejidos que interaccionan con ella. además. Las dos vías convergen en el camino común y finalmente se forma el coágulo. por ejemplo. en conjunto con el ADP liberado del tejido colágeno.

VII. enzima autocatalítica. que se encuentra a una alta concentración en el plasma. especialmente cerebro. catalizada por el factor IXa. En situación normal. El activador del plasminógeno es una serinproteasa tisular catalíticamente inactiva hasta que se expone a la fibrina. El paso de fibrinógeno a fibrina se produce por la acción proteolítica de la trombina sobre el fibrinógeno.000 veces. La activación del factor X constituye la etapa clave y vía común de la coagulación al estar regulada por las vías extrínseca e intrínseca. dependiente de vitamina K. llamado^fer/ndlisis. se usa como anticoagulante en pacientes predispuestos a formar coágulos intravasculares. Estas sustancias son principalmente la heparina. este último factor es activado previamente por trombina (fíg. enzima que cataliza la transformación de prekalikreína (factor Fletcher) en kalikreína. la urocinasa serinproteasa sintetizada en el riñon y la estreptocinasa del estreptococo p-hemolítico.4. Así mismo.de los tejidos.35). El cofactor Va acelera el proceso unas 350 veces. El sustrato principal del factor Xlla es el factor XI el cual es activado (Xla). se inicia con la activación del plasminógeno plasmático a plasmina. la antitrombina III. La acción del factor Xla constituye la última etapa del sistema intrínseco. estos monómeros se asocian y forman una fibra polimerizada conocida como coágulo blando cuyo paso a la estructura insoluble llamada coágulo duro o red de fibrina requiere la presencia del factor XHIa como catalizador. de los residuos de glutamato a carboxiglutamato (Gla) en las regiones NH2-terminales de los factores II. Las propiedades anticoagulantes de la estreptocinasa se utilizan a nivel terapéutico. el efecto de la antitrombina es potenciado varios cientos de veces por heparina. IX y X. cuando la plasmina digiere a la fibrina. al operar en un mecanismo de cascada. es acelerada 500 veces por la presencia del factor VIII o factor antihemofílico. antagonista de la vitamina K. catalizado por el complejo Xa-Ca 2+ -Va-FL. Esta es una vía lenta. el activador ya no manifiesta actividad y la fibrinólisis cesa. que inhiben la carboxilación. El dicumarol. los procesos de formación del coágulo están bloqueados por sustancias inhibidoras de la coagulación que aseguran la ausencia de trombos intravasculares. así. a la forma de monómero de fibrina. que ataca al factor XII y lo activa totalmente (Xlla). El proceso de disolución del coágulo a los pocos días de su formación.7. porque en ella intervienen un número mayor de factores que. las antiproteasas descritas anteriormente y. Se inicia con la fase de contacto en la cual se activa parcialmente el factor XII. fundamentalmente. generan el factor Xa (activado). Glicoproteínas y proteoglicanos Las glicoproteínas y proteoglicanos son moléculas constituidas por proteínas a las cua- . La velocidad de activación de la protrombina por el factor Xa aumenta 50 a 100 veces en presencia de fosfolípidos (FL) y Ca 2+ . La formación de la red de fibrina se inicia con el paso de protrombina a trombina. 3. Otros factores anticoagulantes de uso terapéutico incluyen a los cumarínicos. 3. El fibrinógeno pasa. que es una serinproteasa capaz de digerir tanto al fibrinógeno como a la fibrina. El valor global del complejo activador de protrombina es de 20. La activación del factor X. su sustrato es el factor IX el cual se activa en dos etapas con participación de Ca 2+ . Existe interés terapéutico en este activador tisular del plasminógeno. Vía intrínseca. para reducir el daño de una trombosis coronaria aguda. pulmones y capas del endotelio vascular. por lo que su distribución es muy amplia. estimulan la activación del plasminógeno. La heparina se localiza en los granulos metacromáticos de las células cebadas que se localizan en la pared vascular.

Las glicoproteínas forman la mayor parte . son glucoproteínas. a alteraciones de las glucoproteínas de la superficie de las células cancerosas. los grupos sanguíneos y algunas hormonas. excepto la albúmina. por lo menos en parte.les se han agregado cadenas de oligosacáridos unidos por covalencia. Muchas proteínas de membrana. son glucoproteínas. Casi todas las proteínas plasmáticas. Muchos investigadores del cáncer piensan que el fenómeno de la metástasis se debe.

con una glicina cada tercer aminoácido. cartílagos. Es una proteína insoluble en agua. Las bacterias gram positivas tienen una pared que contiene peptidoglicanos y ácido teicoico.12%). (ver unidad de carbohidratos). Es de particular interés el estudio de estos compuestos en medicina. etc. en virtud de que la pared bacteriana está construida por peptidoglicanos. es la que proporciona fuerza estructural y forma a todos los tejidos y órganos del cuerpo. (tabla 3. La unidad molecular básica del colágeno en las fibrillas contiene tres cadenas polipeptídicas. entre otras moléculas. tienen 90-95% de carbohidratos. alanina (11 %) y los aminoácidos derivados hidroxiprolina (10%) y 5-hidroxilisina (10%).5 Colágeno y proteínas contráctiles. se produce un grupo de enfermedades. principal proteína del tejido conectivo es la proteína más común en el mundo animal y más abundante del cuerpo humano. La especificidad de las reacciones inmunológicas a las bacterias depende de los peptidoglicanos de su pared.000 a más de un millón. La propiedad . cuya síntesis es bloqueada por penicilina. que se denomina tropocolágeno. simplemente colágeno. en particular de la microbiología. No posee triptófano ni cisterna. La gelatina. Se denomina sustancia fundamental o basal a la estructura de carácter gelatinoso compuesta de fibrillas de colágeno incrustadas en un matriz de polisacáridos aminados y glicoproteínas. proteína de uso común. Las glucoproteínas son proteínas con pesos moleculares que van de 15. Además de anticoagulante.del mucus secretado por las células epiteliales que permite la lubricación de los conductos del cuerpo. Existen por lo menos 5 tipos distintos de colágeno en los tejidos por lo que se considera una familia de moléculas que comparten numerosas propiedades. prolina (10. piel. rígida y muy resistente a la tensión. Por defectos hereditarios en la enzima lisosomal encargada de hidrolizar los glicosaminoglicanos presentes en los proteoglicanos. es importante la unión entre la glicoproteína colágena y los proteoglicanos con sulfato y carboxilato (ver más adelante). Los proteoglicanos son de mayor tamaño en comparación con la glucoproteínas. 3. a las cuales se unen una o varias cadenas de oligosacáridos (menos de 15 azúcares) que contribuyen con 60%. con múltiples cadenas de glicosaminoglicanos. En la estructura del colágeno predomina la glicina (35%). En el aspecto estructural. o según la terminología más reciente. clasificadas dentro de los errores innatos del metabolismo. Predomina en el tejido conjuntivo o conectivo donde forma parte de los tendones.7.9). llamadas mucopolisacaridosis. El colágeno. se obtiene como alimento desnaturalizando el colágeno por el calor. su PM es de varios millones. cristalino. la heparina se une a la lipoproteinlipasa de la pared capilar y causa su liberación. La heparina es un proteoglicano en la que más de la mitad de las serinas se encuentran enlazadas con cadenas de polisacáridos.

Con este nombre se designa a un grupo de al menos 10 enfermedades que comparten entre todas ellas síntomas de debilidad estructural en el . ácido ascórbico. y se forman unidades de tropocolágeno que se ensambla espontáneamente en fibrillas de colágeno inmaduro. entre los primeros podemos ubicar al escorbuto y el latirismo. con glucosa o galactosa. se forma un colágeno con dificultad para formar fibras. 3.Danlos. En una etapa posterior. donde se encuentran las cisternas.37) es necesaria para entender estas enfermedades. todas ellas características del escorbuto. fenómeno denominado con propiedad "suicidio proteico". Síntesis de colágeno. en este entrecruzamiento participan condensaciones aldólicas con el e-amino de la lisina que se desamina oxidativamente a un 6-aldehído (al-lisina) y forma bases de Schiff con otros e-NH 2 de lisinas o hidroxilisinas. durante la adolescencia hay una gran demanda de vitamina C para este tipo de reacciones. las enzimas extracelulares amino y carboxiproteasas remueven los propéptidos amino y carboxilo terminal.36). Posteriormente. Enfermedades del colágeno Las enfermedades del colágeno pueden resultar de defectos adquiridos o hereditarios. hierro ferroso y. Después de la formación de triple hélice. Este precursor pierde una secuencia guía de 100 aminoácidos (péptido señal) y se transforma en procolágeno. Las enfermedades hereditarias por defectos en la síntesis o el ensamble sirven muy bien para ilustrar las consecuencias de diferentes tipos de mutaciones. responsables de los puentes disulfuro (-S-S-). La prolina determina su arreglo helicoidal y el pequeño tamaño de la glicina asegura la íntima unión de las tres cadenas que permite una estructura de superhélice (fig. no puede ocurrir una hidroxilación ulterior de los residuos de prolina y lisina. Osteogénesis imperfecta. no pueden formarse con facilidad los enlaces covalentes y el colágeno se vuelve muy frágil. En el latirismo. huesos. Después de este proceso intracelular. En ausencia de ácido ascórbico. sobre todo. el procolágeno glicosilado alcanza el exterior. En el cartílago. Síndrome de Ehlers . estructura enrollada de tres subunidades polipeptídicas unidas entre sí por puentes de hidrógeno. los proteoglicanos y el colágeno son biológica y mecánicamente interdependientes. en está forma las hidroxilasas de prolina y lisina las transforma en hidroxiprolina e hidroxilisina respectivamente. estas fibrillas no tienen la fuerza tensora del colágeno maduro hasta que se forman enlaces covalentes en forma cruzada. se forman puentes disulfuro entre cadenas de procolágeno y se integra una triple hélice que sale de la célula. enfermedad que se debe a la ingestión del frijol Lathyrus. El resultado es la fibra de colágeno madura. el procolágeno es glicosilado. El cartílago es una matriz extracelular en la cual el colágeno contribuye a su fuerza tensora y los proteoglicanos son los causantes de su notable elasticidad. Estas enzimas requieren oxígeno molecular. En esta enfermedad se impide la formación normal de la triple hélice con la consiguiente degradación de todas las cadenas.más definida es la triple hélice. 3. La consideración de los pasos de biosíntesis del colágeno (fig. ocasionando fragilidad de los tejidos y la aparición de lesiones de la piel. en las hidroxilisinas. El colágeno maduro es una proteína extracelular pero su síntesis es de inicio intracelular bajo la forma de una molécula precursora llamada preprocolágeno. Es el nombre que se da a un grupo de 4 enfermedades caracterizadas por múltiples fracturas (fragilidad ósea) que dan como resultado deformidades óseas. dientes y vasos sanguíneos. se debe a síntesis defectuosa de una de las cadenas del colágeno tipo I. Sin embargo. a-cetoglutarato.

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Por ejemplo. Hay deficiencia de lisinoxidasa y los enlaces cruzados son defectuosos. El síndrome de Ehlers-Danlos tipo V. los síntomas son graves por el embarazo o el parto y tendencia a sufrir contusiones. En el tipo VII del síndrome la piel se magulla fácilmente y es hiperextensible. difícil curación de las heridas y deformaciones músculo-esqueléticas. Proteínas contráctiles El movimiento es una característica esencial de todas las formas vivas. Se ha identificado el colágeno tipo I como el posible factor donde reside la base de esta enfermedad. esta asociado a un metabolismo anormal del cobre. las características clínicas incluyen marcada hiperextensibilidad de la piel y las articulaciones.. el síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV. Síndrome de Marfán: Es una enfermedad que se caracteriza por síntomas relacionados con esqueleto. Síndrome de Menkes. desde el movimiento de cilios y flagelos hasta el más fino de la mano humana. En el síndrome de Ehlers-Danlos tipo VI hay una deficiencia de lisil-hidroxilasa. en especial con ruptura de la aorta. llamada también cutis laxa. Se caracteriza porque el cabello toma aspecto rizado. El mecanismo contráctil del músculo esquelético de los vertebrados es el mejor conocido. se manifiesta por piel suelta. . ojo y corazón.tejido conectivo. pero la principal manifestación es la dislocación de las articulaciones como la cadera y rodillas. está causado por defectos en el colágeno tipo III. que aparece excesivamente arrugada y cuelga en pliegues. que suelen ter- minar con accidentes vasculares. Las moléculas responsables de esta importante propiedad son las proteínas contráctiles.

el) Diámetro de 1 5 A Prolina Figura 3. .37 Estructura de! colágeno desde la secuencia primaria hasta la fibrilla.

el músculo liso no es estriado. Las miofibrillas son la maquinaria contráctil del músculo y su unidad es la sarcómera. El músculo es el principal transductor bioquímico que convierte la energía (química) potencial en energía (mecánica) cinética. por tres tipos de músculos: esquelético. Más del 40% de la masa muscular de un individuo adulto es músculo esquelético. 3. es una proteína globular que representa el 25% en . Detrás de la estructura microscópica de la miofibrilla subyace una estructura molecular de sus componentes.38). cada filamento grueso está rodeado por seis filamentos delgados y cada filamento delgado está rodeado por tres filamentos gruesos (fig. los músculos aeróbicos de actividad continua son muy abundantes en mitocondrias. mioglobina y citocromos. Cada fibra muscular contiene millares de miofibrillas. lo cual habla de una síntesis proteica muscular poco activa. la banda oscura. cardiaco y liso. el músculo cardiaco y liso es de control involuntario. la banda I es isotrópica. rodeados por una membrana celular (sarcolema).Para que se realicen los movimientos de una célula (pseudópodos) o de un organismo (contracción muscular) se requiere de un mecanismo disparador del proceso (el Ca 2+ ). son los llamados músculos rojos. ordenadas en paralelo. Cada sarcómera está formada por filamentos gruesos. El músculo esquelético se encuentra bajo control nervioso voluntario. La línea Z es un material amorfo de a-actinina al cual se unen los filamentos delgados y la línea M es un ensanchamiento de los filamentos gruesos formada por proteína M. Estos requerimientos son satisfechos. 3. Este sistema mecanoquímico es la maquinaria más eficiente y versátil de conversión energética jamás conocida. dos líneas Z delimitan una sarcómera (fig. banda A. Cuando se examinan cortes de una miofibrilla al microscopio óptico o electrónico presentan un aspecto estriado. Este se debe a la alternancia de bandas oscuras y claras. El tejido muscular es el más abundante del cuerpo humano. linea M. los filamentos delgados se localizan en la banda I pero se extienden hasta la banda A y consisten en las proteínas acuna. en cambio. Todos los músculos estriados del cuerpo están formados por gran número de fibras. función cubierta por el sistema nervioso y 4) que la máquina pueda regresar a su estado original. Durante una actividad muscular intensa. 3) debe existir un operador. lo que indica un ordenamiento más al azar. los músculos blancos son poco abundantes en mitocondrias y mioglobina y su metabolismo es anaeróbico. una fuente de energía (el ATP) y un sistema transductor (el músculo).39). lo cual sugiere un ordenamiento geométrico regular de las moléculas. es anisotrópica. El músculo esquelético y cardiaco aparecen estriados en el microscopio. su contenido en mitocondrias es muy variable.500 filamentos que se encuentran inmersos en un citoplasma soluble (sarcoplasma). los músculos pueden consumir 85% o más del ATP total producido en el metabolismo. en el hombre. Al corte transversal. La célula muscular posee un abundante retículo endoplásmico (sarcoplásmico) poco rugoso. descubierta por Straub. Dentro de la banda A se distingue una zona de poca densidad a los electrones o zona H con una línea central muy densa. Un transductor químico-mecánico debe satisfacer varios requerimientos: 1) suministro constante de energía. 2) debe haber un sistema regulador de la actividad mecánica. confinados a la zona H de la banda A y que constan de la proteína miosina. las cuales poseen a su vez unos 2. Dentro de la banda I se define una línea muy densa a los electrones o línea Z. no es refringente. birrefringente a la luz polarizada. Proteínas musculares La actina. tropomiosina y troponina.

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. La forma globular monomérica es la actina-G. en presencia de Mg 2 + para formar un filamento de doble hélice. La miosina está compuesta por dos cadenas pesadas entrelazadas helicoidalmente con una cabeza globular en cada extremo.40). la miofibrilla y el músculo completo. 3. La fibra de actomiosina preparada por Engelhardt. La porción globular de la miosina tiene actividad ATPasa y se combina con la actina. se une a la troponina-C y se produce un cambio conformacional que afecta a las otras subunidades de troponina y a la tropomiosina que se desplaza de su lugar y permite interaccionar a las cabezas globulares de la miosina con las moléculas de actina. conserva la actividad ATPasa y se une a la actina-F. proteína fijadora de calcio. inhibe la interacción actina-miosina y también la actividad ATPasa. La energía que aporta fuerza para la contracción muscular es la hidrólisis del ATP (ver capítulo Bioenergética). La tropomiosina.5% de las proteínas musculares. La característica de este ciclo bioquímico de contracción es que la actina posee poca afinidad por el complejo miosina-ATP (fibra-relajada). La troponina consta de tres subunidades diferentes: la troponina-C. descubierta por Bailey. no de filamentos. interviene en el ensamble de las subunidades C e I al complejo actina-tropomiosina (fig. La otra proteína ligada a la actina es la troponina. en efecto. En ausencia de calcio la interacción actinamiosina está inhibida por la troponina-I y el músculo está en reposo. la energía producida por hidrólisis de ATP se usa para que se produzca la unión-desunión de actina y miosina. sino de la zona H (fig. la troponina es exclusiva del músculo estriado. se forman 2 fragmentos denominados meromiosinas. la troponina-T. cada cabeza globular está asociada a dos cadenas ligeras. se produce la contracción por la elevada afinidad de la actina por el complejo miosina-ADP (fibra contraída). esto justificó el considerar que una fibra de actomiosina preparada es.41). Mientras que la tropomiosina existe en todos los músculos. relajado. La actividad ATPasa se incrementa 100 a 200 veces por la adición de actina-F. al hidrolizarse el ATP. posee un comportamiento óptico de doble refracción análogo a la fibra muscular intacta. En conjunto. insoluble. se produce un deslizamiento de filamentos de actina sobre los de miosina y con ello un acortamiento. Al entrar el Ca 2 + al sarcoplasma. Al acortarse la zona H. 3. El componente fundamental del filamento grueso es la miosina descubierta por Kuhne. Cuando la miosina es digerida con tripsina. Constituye el 2. lo cual le da un aspecto característico (fig. es una molécula en forma de varilla o bastón que se encuentra asociada con filamentos de actina. 3. se acorta la sarcómera. En términos simples. Esta despolarización provoca aumento de permeabilidad al Ca 2+ . Ninguna de las dos formas (G o F) muestra actividad catalítica. un modelo molecular de la fibrilla muscular. la troponina-I. La meromiosina ligera contiene la porción fibrosa y no muestra actividad ATPasa ni se une a la actina-F. es la proteína más abundante del músculo esquelético (55% de la proteína muscular).42). Además. Hace ya más de 30 años que Szent-Gyórgyi mezcló en un tubo de ensayo actina con miosina y observó la formación de un complejo actomiosina que aumentó la viscosidad de la solución. Bases moleculares de la contracción muscular La contracción muscular se inicia con la llegada del impulso nervioso y con ello la acetilcolina que despolariza la membrana muscular y se alcanza el potencial crítico o de acción que se propaga por el sarcolema. la cual se prolimeriza.peso de la proteína muicular. La meromiosina pesada posee la porción globular y parte de la porción fibrosa. Actomiosina. llamado actina-F.

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.La relajación de músculo tiene lugar con el cese del impulso nervioso y el retorno del sarcolema a su estado polarizado original lo cual se logra por bombeo de Na+ hacia afuera y de K+ hacia dentro de la célula por me- dio de una Na+-K+-ATPasa. En esta fase de relajación interviene también el ATP para bombear Ca2+. hacia afuera de la célula por una C 1+-M | + -ATPasa. contra un gradiente de concentración.

13. cuya concentración 5. .dinitrofenil derivados.2. te detectar cantidades del orden de 1 microgramo ó 3 * 10~9 moles de un aminoácido. nales. La fluorescamina reacciona con los aminoácidos a temperatura ambiente dando un producto fluorescente. Este es un reactivo aún más sensible (10 a El grupo amino de los aminoácidos reaccio. casi en desuso. ya que na con la ninhidrina en caliente para dar un permite detectar cantidades de nanogramos compuesto púrpura intenso (excepto la de un aminoácido o 10-10 a 10"11 moles. hoy.100 veces mayor que la ninhidrina).El grupo carboxilo puede ser químicamente descarboxilado para dar la correspondiente amina. Reacciones del grupo a -amino puede medirse con un espectrofluorímetro. prolina que da un derivado amarillo) que La reacción con dinitrofluoro benceno absorbe al máximo la luz con longitud de (reactivo de Sanger) fue muy utilizada hace onda de 570 nm (el amarillo de la prolina a años para identificar aminoácidos N-termi440 nm). Los a -aminoáciEl color obtenido con la ninhidrina es la dos en presencia del reactivo dan lugar a los base de una prueba colorimétrica que permi.

Los aminoácidos se denominan en forma sistemática o trivial. en particular. quizá la más extendida es la que los agrupa según las propiedades fisicoquímicas de su cadena lateral. el ácido tionitrobenzoico. 3.3. La más extendida es la denominación trivial o común.1. que absorbe intensamente a 412 nm. El reactivo de Ehlrich es un ensayo colorimétrico para el grupo indol del triptófano. El reactivo de Ellman (ácido ditiobis-nitrobenzoico) reacciona con el tiol de la cadena lateral de la cisterna a pH 8. en cuanto a su polaridad. fruto del material donde se aislaron por primera vez (asparagina . La reacción de Sakaguchi se utiliza para cuantificar espectrofotométricamente el grupo guanidino de la arginina. Reacciones de la cadena lateral Un buen número de reacciones químicas pueden ser utilizadas para cuantificar cadenas laterales específicas en una solución de aminoácidos libres o proteínas desnaturalizada.0 dando un producto.13. El reactivo de Pauly da un color rojo con el imidazol de la histidina y el fenol de la tirosina.3. Clasificación Entre las diferentes clasificaciones estructurales de los aminoácidos.4.

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