ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

3.1. AMINOÁCIDOS COMO CONSTITUYENTES DE LAS PROTEÍNAS Las células vivas producen gran variedad de macromoléculas como son las proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos, entre otros. Estas macromoléculas son biopolímeros constituidos por unidades monoméricas o estructurales. Para los ácidos nucleicos, las unidades estructurales son los nucleótidos; para los polisacáridos son los monosacáridos.

En virtud de que las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones esenciales en los organismos, las cuales describiremos más adelante, es evidente que para conocer tanto el funcionamiento normal como patológico de un organismo se requiere un conocimiento claro de la estructura y propiedades de las proteínas. Aunque muchas proteínas contienen otras sustancias, además de los aminoácidos, la estructura y muchas de sus propiedades biológicas están determinadas por las clases de aminoácidos presentes y el orden en el que están dispuestos en la cadena polipeptídica. Es asombroso que en una célula existan millares de proteínas con estructura y fun-

ción diferentes, pero resulta aún más sorprendente que todas ellas estén integradas por sólo 20 aminoácidos comunes. Los aminoácidos comunes son aquéllos para los que existe un codón específico en el código genético del DNA (ver el capítulo Ácidos nucleicos). Los aminoácidos derivados son generados después de su incorporación a la molécula proteínica. Además de ser las unidades estructurales de las proteínas, los aminoácidos tienen otras funciones importantes como la transmisión de impulsos en el sistema nervioso, como material energético, y otros. 3.1.1. Estructura general

Desde el descubrimiento del primer aminoácido, asparagina, en 1806, habrían de pasar más de 130 años para que le llegara el turno a la treonina, con la que se cerró la lista de los 20 aminoácidos. Un aminoácido es un compuesto que contiene dos grupos funcionales: un grupo amino y uno carboxüo. Ambos grupos están unidos al mismo átomo de carbono, designado carbono a. Al carbono a de cada aminoácido también está unido un átomo de hidrógeno y

Tabla 3.2.
del espárrago, alanina de alantoides) o de alguna propiedad característica (glicina por su sabor dulce). De la denominación trivial ha surgido una abreviatura de tres letras que, dadas las técnicas modernas de secuenciación, han obligado la anotación de los aminoácidos por una sola letra mayúscula (tabla 3.1.). Los aminoácidos presentes en las proteínas pueden clasificarse en dos grandes grupos dependiendo de la polaridad relativa de sus grupos R (tabla 3.2). Clasificación de los L-a-aminoácidos presentes en las proteínas con base a las polaridades relativas de sus grupos R. Un grupo no polar es aquel que tiene poca o ninguna diferencia de carga de una región a otra, en tanto que un grupo polar tiene una diferencia de carga relativamente grande en diferentes regiones.

3.1.4.1. Aminoácidos con grupo R no polar Los aminoácidos más hidrofóbicos (no polares) son la fenilalanina, leucina, isoleucina, valina, alanina, metionina y triptofano.

La mayoría de las cadenas laterales de los ca, lejos del agua de solvatación de la superaminoácidos más hidrofóbicos están orien- ficie. tadas hacia el interior de la molécula protei-

3. Aminoácidos con grupo R polar con carga negativa En esta categoría se encuentran los ácidos aspártico y glutámico.4. 3. glutamina y tirosina. puede encajar en regiones de la estructura tridimensional de las proteínas inaccesibles para otros aminoácidos. Aminoácidos con grupo R polar con carga positiva Los aminoácidos que pertenecen a este grupo son la lisina. treonina.2.En la prolina el grupo R es único ya que incorpora el grupo amino en la cadena lateral.1. los aminoácidos polares glutamina y asparagina y los que tie- . La glicina. arginina e histidina.4. asparagina.1. 3. Por el contrario. cisteína.43. Las cadenas laterales de los aminoácidos polares sin carga se encuentran en proporciones significativas tanto en el interior como en la interfase de la proteína con el disolvente.4.1. el más pequeño de los aminoácidos. Aminoácidos con grupo R polar sin carga A este grupo pertenecen aminoácidos cuya cadena lateral tiene naturaleza polar (hidrofi'licá) como son la serina. Realmente la prolina es un iminoácido que tiene consecuencias estructurales importantes para las proteínas como veremos más adelante.

5. histidina.5. Ejemplos de importancia La omitiría funciona como intermediario en el metabolismo de la treonina. glutamato y aspartato se hallan predominantemente en la superficie de las proteínas globulares donde la carga se encuentra estabilizada por el disolvente acuoso. aspartato y metionina. Además. tienen un papel clave en la estabilización de la conformación proteínica a través de enlaces salinos.0 como Usina.1. La DOPA (dihidroxifenilalanina) es un aminoácido neurotransmisor. Existen aminoácidos que no forman parte de las proteínas pero que realizan importantes funciones en el metabolismo intermediario. Ya se ha mencionado el lugar importante de la histidina en la catálisis enzimática en virtud de la carga de su grupo imidazol que le permite funcionar. Los grupos R con carga de los aminoácidos básicos y acídicos. a pH 7. 3. o bien. a d r e n a l i n a y noradrenalina. como base o como ácido catalítico.0. Aminoácidos no proteínicos 3.1. neurotransmisores y otras.nen grupos cargados a pH 7. arginina. junto con la citrulina.1. precursor de la melanina y se encuentra en la vía metabólica biosintética de las aminas neurotransmisoras: d o p a m i n a . . es un intermediario en la biosíntesis de la urea. La colocación poco usual de una cadena lateral cargada en el interior de una proteína globular se correlaciona con un papel estructural o funcional esencial. como hormonas. funcionan en sistemas enzimáticos que requieren de transmisión de cargas.

es decir. Estructura del etano Si recordamos la estructura del etano (un enlace C-C) y del etileno (doble enlace C=C) veremos que en el primer caso.3.1. una proteína es un polipéptido complejo. el II o El ácido gama-aminobutírico (GABA) es un neurotransmisor derivado del glutamato. Formación El enlace peptídico posee una serie de interesantes características estructurales. Este enlace determina la fuerza de unión primaria de una proteína.2.8) 3. 3.2. el doble enlace del etileno representa una estructura rígida que impide la libre rotación. .2. Definición El grupo a -carboxilo de un aminoácido (RO puede unirse covalentemente al grupo a amino de otro aminoácido (R2) eliminando una enlace peptídico tiene naturaleza de doble enlace parcial. en cambio.2. su estructuración corresponde a una polimerización de aminoácidos. 3. Dada la resonancia del grupo carbonilo (-C-). H2N-CH2-CH2-CH2-COOH GABA 3. los átomos de carbono del etano giran libremente teniendo como eje el enlace sencillo.2.molécula de agua y formando un tipo de enlace amida conocido como enlace peptídico (fig-3. ENLACE PEPTÍDICO La reacción más importante de los aminoácidos es el enlace peptídico.

en un péptido. determina una estructura rígida entre carbono y nitrógeno y por lo tanto es un enlace coplanar. En un polipéptido. presentan poca variabilidad en sus valores. que se coloca a la izquierda. . los enlaces peptídicos presentan una alternancia que determina una secuencia en zig-zag (fig.3.5.4 Estructura coplanar El enlace peptídico con la característica de ser un doble enlace parcial. no con tres enlaces peptídicos. en las proteínas naturales.2. Definición Cuando los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos se combinan para formar un polipéptido. 33.10). Un péptido consta de dos o más residuos de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Clasificación Por convención.3.2. Esto trae como consecuencia que. Rotación del enlace Así como en el enlace peptídico no puede haber rotación. PÉPTIDOS 3. 3. Los aminoácidos constituyentes se denominan residuos de aminoácidos. sí puede haberla en torno a los enlaces C-N y C-C determinando ángulos de conformación (y y <fr) que.2. los carbonos a de aminoácidos cercanos están en situación trans respecto al enlace peptídico.10 se muestra un tripéptido en el que hay que hacer notar que es aquel formado con tres residuos. y termina con el residuo carboxilo 3. En la figura 3.3. 3.1. las estructuras peptídicas se describen a partir del residuo amino terminal (grupo-NH2 libre).

Los antibióticos polipeptídicos a menudo contienen D y L-aminoácidos y otros no presentes en proteínas. polipéptido de 20 a 50 residuos y proteína a las que superan esta cifra.. Rp). por ejemplo. se requiere para la actividad de varias enzimas y participa en el transporte de aminoácidos. . En cambio. Un grupo importante es el de los péptidos cerebrales con actividad de neurotransmisores. Como los polipétidos pueden contener un número de residuos muy elevado. Péptidos de importancia biológica Las estructuras polipeptídicas pueden representarse colocando el aminoácido inicial (el del extremo amino terminal) y a partir de éste colocar en zig-zag los residuos en el orden secuencial correspondiente (fig. Representación de estructuras 3. como la sustancia P (decapéptido) o los analgésicos opiáceos como las endorfinas y encefalinas. La oxitocina y vasopresina son polipétidos cíclicos. puede utilizarse la abreviatura de tres letras (o incluso de una sola) para designar el péptido. La repetición de este proceso secuencial genera un polipéptido con una secuencia de aminoácidos específica ( R r R2-R3-R4.3. Uno de los más sencillos es el tripéptido glutatión (y-glutamil-cisteinil-glicina). es poco práctico usar las fórmulas estructurales convencionales. Tir-Gli-Gli-Fen-Met Encefalina (Metionina) Arg-Pro-Lis-Pro-Gln-FenFen-Gli-Leu-Met Sustancia P. En todos los seres vivos se han aislado péptidos de interés biológico.Gli .3. 3. que contienen D-fenilalanina y ornitina. A-S-G-T-.terminal (grupo -COOH libre) que se coloca a la derecha.. o bien. 3. Este tripéptido lleva a cabo funciones oxidorreductoras por su grupo sulfhídrilo (-SH). como ocurre con la gran mayoría de los péptidos. la tirocidina y gramicidina S. 3.Tre. el término oligopéptido se reserva para moléculas con 2 a 20 residuos.3. En nuestro ejemplo (fig. en el cual el glutamo inicial está unido a la cisteína por medio del carboxilo gama (y) en lugar del alfa ( a ). Aunque existen discrepancias en la literatura.11) se podría escribir: Ala Ser . Estos polipétidos no son sintetizados en los ribosomas.4.11).

de forma esférica. 3. De las funciones dinámicas. una proteína compleja contiene. Dentro de las proteínas estructurales se encuentran el colágeno. como se ha señalado antes. la mayor parte de las reacciones químicas celulares son catalizadas por enzimas. la insulina y glucagón. Definición Las proteínas constituyen sin duda uno de los grupos de moléculas de gran trascendencia en los seres vivos. la hormona liberadora de tirotropina y otras. Una proteína simple es aquélla que contiene sólo aminoácidos. solubles en agua. Así pues. albúmina y Las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones que pueden agruparse en dos clases: dinámicas y estructurales. 3. las proteínas son quizá las macromoléculas más versátiles. además.2. que se responsabilizan en gran parte de las funciones metabólicas y de la morfología de los seres vivos. en particular en bioquímica clínica (tabla 3.1. se ha establecido como línea divisoria entre polipétidos y proteínas un peso molecular de 8. 3. casi siempre están asociadas otras moléculas llamadas grupo prostético. Todas las proteínas son polipéptidos de peso molecular elevado. 3. Así. lípidos.3. Otras tienen una función de reconocimiento.4.4.000.).3.4. En esto se basa la clasificación propuesta en la tabla 3. casi todas ellas de naturaleza proteica. PROTEÍNAS 3. Sin embargo.4. en todas las proteínas. Sin embargo en esta clasificación.2.Otros polipéptidos importantes son las hormonas colecistocinina y gastrina. Otra función dinámica de las proteínas es el transporte.3. Las proteínas también pueden funcionar con un papel protector como las inmunoglobulinas y el interferón. Importancia biomédica el caso de los receptores hormonales situados en la membrana celular o en el citosol. Arbitrariamente. vitaminas. carbohidratos o elementos minerales (metaloenzimas). Basada en la forma Otra clasificación se basa en la forma (relación entre longitud y amplitud) y en ésta se consideran Xas proteínas globulares. ejemplos de este grupo son la hemoglobina y mioglobina. Durante mucho tiempo se dividieron en simples y conjugadas. 3.3. "primoridaT.4.4.000 y 10. dentro de las cuales se encuentran la insulina. En realidad. Otras proteínas actúan como hormonas. no se puede hacer una distinción entre albúminas y globulinas únicamente en base a sus solubilidades en agua o en soluciones salinas. Basada en su solubilidad Un sistema de clasificación basado en la solubilidad todavía está en uso. Algunas participan en los mecanismos contráctiles como la miosina y actina. estas moléculas son tan importantes que merecen un capítulo especial dentro de la bioquímica. otras moléculas diferentes como el hemo (de la hemoglobina).1. aun las más simples. No en vano el término proteína deriva del griego proteos que significa "primero". De hecho. la elastina y la queratina.4. como es . Clasificación En la actualidad no existe un sistema de clasificación de las proteínas universalmente aceptado. se subdividieron en seudoglobulinas (solubles al agua) y euglobulinas (insolubles en agua exenta de sales). la más importante es la función catalítica.

Sin aminoácidos distintivos Escasamente solubles en agua pero solubles en soluciones salinas. ¿Qué determina tal variabilidad? En los siguientes subcapítulos hablaremos de los niveles de organización de la es- . protectoras (inmunoglobulinas).4. formadas a partir de 20 aminoácidos. dentro de las cuales tenemos la queratina. catalíticas ( e n z i m a s ) .4. de transporte. La diversidad de formas y funciones proteicas que existen en una sola célula. Las proteínas fibrosas.Albúminas Globulinas Solubles en agua y en soluciones salinas. Sin aminoácidos distintivos Protaminas Solubles en etanol a 70-80% pero insolubles en agua y en alcohol etilíco absoluto. (tabla 3. miosina. Genes y proteínas. reguladoras. nos indica que tal variabilidad depende de la combinación casi infinita de aminoácidos en cada una de las proteínas existentes en un ser vivo.5). baja solubilidad en agua.43. etc. Ricas en glicina. 3. 3. Basada en sus funciones Las proteínas se pueden clasificar de acuerdo a sus funciones en proteínas estructurales. Ricas en arginina Histonas Solubles en soluciones salinas Escleroproteínas Insolubles en agua o en soluciones salinas. alanina y prolina globulinas plasmáticas y numerosas enzimas. colágeno y fibrina. resistentes a la tracción. Diversidad Hemos mencionado el papel tan relevante y versátil de las proteínas con sus múltiples funciones. Importancia biológica de las proteínas. son de forma alargada.3.

.

3. que existen como ion dipolar.una cadena lateral. Asimetría. el centro asimétrico es R (RECTUS en latín) y S (sinisterenel opuesto) (ver fig. En las proteínas de mamífero sólo se encuentran L-a-aminoácidos. el grupo H y el grupo -NH2» en el carbono a están dirigidos hacia el lector. Los aminoácidos tienen carácter anfótero. Propiedades generales 3. En la configuración absoluta. el aminoácido tiene la configuración absoluta. ion híbrido). el sistema RS. En los aminoácidos neutros. por comportarse como ácidos o bases debido a sus grupos ionizables. para la cual R-H. si por convención el grupo examino está proyectado hacia la izquierda. aquella forma en la que la carga positiva es igual a la carga negativa (carga neta .1.1. Su enantiómero óptico.2. los cuatro grupos unidos al carbono a de los aminoácidos son diferentes.2. 3. Formas iónicas de los aminoácidos Los grupos amino y carboxilo de un aminoácido pueden ionizarse. las proteínas también tienen propiedades asimétricas. 3. el grupo R de la cadena lateral se dirige hacia abajo y atrás del mismo plano. designada R que es diferente para cada uno de los 20 aminoácidos comunes excepto para la glicina (fig. con el grupo a-amino hacia la derecha tiene la configuración absoluta denominada D.3. La dificultad surgida de intentar denominar familias de isómeros ópticos con dos o más centros asimétricos ha dado lugar al establecimiento de un método más general de desig¿ nación estereoquímica. 3. El pK del grupo amino es 9. Dado que los aminoácidos de las proteínas son asimétricos. utilizando la proyección de Fisher. pero es posible usarlo por conveniencia. Por tanto. 3. ambos grupos están cargados (fig. 3. constituyendo un ion dipolar o switterion (en alemán. el COOH está dirigido hacia arriba y atrás del plano de la página. dentro de los límites fisiológicos del pH. Esta orientación tetraédrica con cuatro grupos diferentes alrededor del carbono a confiere actividad óptica (capacidad de rotar el plano de luz polarizada) a los aminoácidos. al describir la química de los aminoácidos. donde los grupos unidos a un orden basado en el número atómico: SH>OH>NH2>CDOH>CH3>H.1. En todos los casos el grupo H se encuentra debajo del plano. como en el D-gliceraldehído (fig.2).1.1).2 2. Si los otros tres grupos se ordenan de mayor a menor prioridad en el sentido de las manecillas del reloj.4). es decir.1.).1 no puede existir a ningún pH. 3.8 y el del grupo carboxilo es 2. Estereoisomería Con excepción de la glicina. Cabe aclarar que la estructura sin carga de un aminoácido indicada en la fig.

La importancia de la estructura primaria es tal que una variación en un solo aminoácido de una cadena polipeptídica puede determinar una falta letal en la proteína completa. muy frecuentemente de una enzima. el gene o gen. además de la secuencia de aminoácidos. El primer nivel. 3.2. surge una estructura particularmente estable que es la a-hélice. En este tipo de estructura secundaria. 3. fuera la fibrosa. Sobre esto se tratará más ampliamente en el capítulo de ácidos nucleicos. o estructura primaria. En este sentido. la localización de los puentes disulfuro (cistina).4. la cadena polipeptídica se pliega adoptando una forma helicoidal con giro a la derecha que contiene 3. Estructura secundaria Si una proteína estuviera constituida por sólo una disposición polipeptídica lineal. En esta estructura se incluye. La información genética contenida en cada célula o individuo se expresa a través de una proteína. hablar de ese factor particular en cada célula u organismo que determina ese ordenamiento y. El analizador automático de aminoácidos (secuenciador) está cediendo lugar actualmente a sistemas basados en métodos cromatográficos de alta eficacia. .1. quien en 1953 fue el primero en estudiar y determinar la estructura primaria de una proteína. cada proteína posee un ordenamiento o secuencia de aminoácidos bien definido per o . Ahora se conoce la secuencia completa de más de 2. Los individuos que tienen este defecto padecen anemia de células falciformes. por ende. .5. El ejemplo clásico es el de la hemoglobina S (HbS) que tiene la sexta posición de la cadena P ocupada por valina en lugar de glutámico como la hemoglobina normal (HbAí). E s t r u c t u r a primaria La estructura primaria. en virtud de la estructura coplanar del enlace peptídico y los ángulos de rotación § y vy que regularmente toman valores de 132 y 123° respectivamente. ya familiar desdé la descripción de los péptidos. la gran diversidad de estructuras y funciones proteicas.5. que utilizan la técnica de degradación de Edman. Esto ha sido posible gracias a los esfuerzos de Sanger. quizá adelantando un poco. se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica.5. La determinación de la estructura primaria de una proteína es actualmente una técnica accesible a la mayor parte de los laboratorios de bioquímica. Ese elemento dictador de la secuencia polipeptídica es la unidad transmisora de los caracteres hereditarios. la insulina. 3.4. el DNA.000 proteínas. gracias a los méto- dos automáticos en el análisis de aminoácidos introducidos por Moore y Stein en 1964. con una elevada hemolisis y obstrucción de capilares por los eritrocitos anormales. Es decir. las proteínas vienen a ser las ejecutoras de las ordenes dictadas por los genes. se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica.4. y los métodos secuenciales del gen que codifica a la proteína en estudio. . Esta estructura fue propuesta inicialmente por Pauling y Corey. bioquímicamente.6 residuos de aminoácidos por vuelta. su única conformación posible.12). ¿qué determina ese ordenamiento? Aquí debemos detenernos y.tructura proteica. Sin embargo. La fuerza estabilizadora de esta estructura es el enlace covalente (peptídico). La máxima estabilidad de la hélice está determinada por puentes de hidrógeno que se establecen entre el grupo carbonilo (C-0) de un enlace peptídico y el amino (N-H) presente cuatro residuos más adelante en la cadena (fig. Niveles estructurales de una proteína* 3.

Figura 3. lo cual es de gran importancia en la configuración general de una proteína. La conformación p está formada por dos o más cadenas polipep- . ya que el anillo pirrolidina de su cadena lateral interacciona estéricamente con la cadena lateral del aminoácido precedente y. Pauling y Corey también propusieron otra estructura secundaria que es la estructura P (P porque fue una segunda estructura. Si estos grupos R están próximos y tienen carga del mismo signo o están ramificados (valina. Otro factor que rompe la conformación a-helicoidal es la presencia de prolina.12. isoleucina). Otro aminoácido que tiende a desestabilizar la a-hélice es la glicina. además. La presencia de prolina entre dos cadenas en a-hélice produce una acodadura de la dirección general de la molécula. sus interacciones desestabilizan la estructura helicoidal. Representación de un polipéptido en conformación de a-hélice En la conformación de a-hélice las cadenas laterales R se proyectan en forma perpendicular al eje de la hélice y hacia el exterior de la estructura en espiral generada por la cadena peptídica. siendo la a-hélice la primera). por tener un grupo R muy pequeño. porque no puede ocurrir rotación del enlace N-C.

14. En tanto que la hélice es una cadena polipeptídica enrollada. En términos de su función biológica. sino que son conformaciones enrolladas al azar. por ejemplo. como los grupos aromáticos de la fenilalanina o los no aromáticos de alanina e isoleucina. entre grupos carboxilato. . Las estructuras terciarias de las proteínas permiten agruparlas en familias y subfamilias.3. Los tipos de enlaces que estabilizan la estructura terciaria son: a) atracción electros- tática de tipo salino entre un grupo carboxilato (-COO . La estabilidad es mayor en la conformación antiparalela. 3. respectivamente. 3. cuando los residuos son idénticos como dos metilos de la alanina. Estructura terciaria Existen razones sobradas para pensar que gran parte de las proteínas tienden a adoptar forma esférica. Se trata de un arreglo tridimensional que forma diversos repliegues específicos. es un depósito de proteína en forma de tira plegada. como se ilustra en la fig. se dice que posee estructura cuaternaria. la tira plegada p está extendida y se dispone a la manera de un acordeón con los grupos R proyectados por encima y por debajo de los planos generados por las cadenas polipeptídicas. Es común que en numerosas proteínas ocurran simultáneamente ambas estructuras. 3. 3.4. En general. la fibroma de la seda. El estudio de la estructura terciaria ha sido posible gracias a la cristalografía de rayos X desarrollada por la escuela de Bragg en Cambridge y a la labor pionera de Kendrew sobre la mioglobina y de Perutz sobre la hemoglobina. etc.13).15). Es la que se conoce como estructura terciaria de las proteínas. existe un superplegamiento de la proteína que da lugar a una estructura compacta.tídicas que pueden ser paralelas (en el mismo sentido) o antiparalelas (en direcciones opuestas) y se estabilizan también por puentes de hidrógeno (fig.4. las regiones de enrollamiento aleatorio son de igual importancia que las de a-hélice o tira plegada.) y un grupo amino (-NH3+) de residuos glutamato o aspartato con Usina o arginina. la más frecuente en las proteínas naturales. El mejor ejemplo estudiado es la hemoglobina que es una proteína tetramérica (fig.5. protómeros o subunidades. pueden existir algunas regiones de las proteínas que no son a-hélice ni tira plegada.5. Esto sólo puede ocurrir si suponemos que. Las proteínas que poseen este grado de organización estructurai se denominan oligoméricas y las cadenas polipeptídicas individuales que la integran se denominan monómeros.4. e) puentes disulfuro. etc. Finalmente. globular.16). proteínas fibrosas de forma alargada y proteínas globulares de forma esferoidal. que se establecen entre los grupos sulfhidrilo (-SH) de la cisteína para dar el enlace covalente disulfuro (-S-S-) entre cadenas vecinas (fig. Cuando una proteína oligomérica contiene dos o cuatro monómeros o subunidades se denomina dímero o tetrámero. dentro de la estructura secundaria. estas estructuras laminares se dan en las proteínas fibrosas como la queratina del pelo y la piel. El resultado de las distintas uniones descritas es una estructura terciaria de gran estabilidad. la a-hélice y la hoja plegada p. 3. c) interacción de cadenas polares. oxhidrilo (-OH) o los propios grupos carbonilo (-C=0) de las uniones peptídicas. además del plegamiento secundario. d) fuerzas de Van der Waals. Estructura cuaternaria Cuando una proteína se compone de más de una cadena polipeptídica. hidroximetilos de la serina. b) puentes de hidrógeno. incluso más que la a-hélice. 3. la sustancia amiloide que se deposita en condiciones patológicas.

.13.Figura 3. Conformación p de una proteína con disposición paralela (a) antiparalela (b).

. interacción hidrofóbica entre leucina e isoleucina. La región de a-hélice está encerrada en un óvalo y la región p está sombreada. 4 unión de disulfuro. entre treonina y serina.Figura 3. interacción electrostática. Otras porciones constituyen un enrollamiento al azar.15. Figura 3. Representación esquemática del plegamiento de la cadena principal de la ribonucleasa bovina. 1. entre dos cisternas. y 5. Tipo de uniones que estabilizan el plegamiento de las proteínas. 2 puentes de hidrógeno.14. 3 interacción dipolo-dipolo entre dos serinas. convalente.

Figura 3. Estructura cuaternaria de ias proteínas. formada por dos cadenas a en la parte inferior de la figura y dos cadenas p en la parte superior. . Esquema de la disposición de cuatro subunidades de una molécula de hemoglobina.16.

3. terciaria y cuaternaria. 3. Otros ejemplos incluyen la sintetasa de ácidos grasos. conservándose la primaria (covalente). urea. álcalis. Sin embargo. pH extremo o presencia de solventes orgánicos que debilitan las interacciones no covalentes. tiene estructura cuaternaria. las proteínas sólo funcionan cuando están plegadas en su estructura original o conformación nativa.17).5. En estos sistemas. la respuesta puede estar afectada por la presencia de efectores (inhibidores o activadores) que modulan la acción primaria de la proteína (ver capítulo de Enzimas). altas presiones) o químicos (ácidos. por tanto. particularmente en los sistemas llamados alostéricos. la ot-quimotripsina contiene tres cadenas polipeptídicas unidas por enlaces disulfuro y no se considera estructura cuaternaria. 5 . la piruvato deshidrogenasa.1. el plegamiento puede ser alterado por condiciones como alta temperatura. Las estructuras secundaria y terciaria de una proteína están determinadas por la estructura primaria. 3. Un agente desnaturalizante muy común es el calor. En el estado desnaturalizado los niveles de estructuración superior de la conformación nativa se encuentran al azar. a las cuales se les conoce como complejos multier>zimáticos o estructuras supramoleculares. es decir la proteína altamente ordenada queda reducida a un polimero estadístico formado por una cadena de aminoácidos (fig. La estructura cuaternaria está íntimamente ligada a las propiedades reguladoras de las proteínas. puesto que la estructura primaria determina la secundaria. Debido a que las con- . tensoactividad. este cambio provoca la consiguiente alteración o desaparición de sus funciones.5. De este modo. La enzima aspartato transcarbamilasa tiene una estructura cuaternaria formada por 12 subunidades. detergentes) capaces de alterar las interacciones débiles pueden llegar a desnaturalizar las proteínas. terciaria y (cuando está presente) la cuaternaria.1. pueden ser desnaturalizadas por agentes reductores como el mercaptoetanol 3 . no es necesario postular un control genético independiente para los niveles de estructuración superiores al nivel primario. L Desnaturalización La alteración de una proteína que modifique su conformación nativa se denomina desnaturalización. Agentes desnaturalizantes Todos aquellos agentes capaces de romper o alterar los enlaces que mantienen las estructuras de orden superior de una proteína pueden desnaturalizarla.Los enlaces que mantienen la estructura cuaternaria son del mismo tipo que los que mantienen la estructura terciaria. la hemoglobina contiene 4 subunidades unidas no covalentemente y. RELACIÓN ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIÓN La actividad biológica de una proteína depende del ordenamiento tridimensional apropiado de sus grupos funcionales. La mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica y no posee estructura cuaternaria. esto tiene aplicación cotidiana en el laboratorio de bioquímica. excepto enlaces covalentes. formaciones nativas de la mayor parte de las proteínas están estabilizadas sólo por enlaces no covalentes. Otros agentes físicos (radiaciones. Por ejemplo. La existencia de enlaces disulfuro en una proteína aumenta su resistencia a la desnaturalización. Por lo tanto. En una proteína se produce la desnaturalización al perder su estructura secundaria. En proteínas cuya estructura tridimensional está determinada por enlaces disulfuro.

5. En ocasiones esta alteración es reversible cuando se elimina el agente agresivo. antígeno. Por ejemplo. efector. En las proteínas donde más se ha ejemplificado el fenómeno de la especificidad de reconocimiento molecular es entre las enzimas y su sustrato. Clásico ejemplo de reconocimiento es la unión de sustancias llamadas antígenos con su anticuerpo específico. el grupo hemo. Ese sitio de reconocimiento se debe a la presencia en la proteína de una estructura complementaria a la de la molécula (llámese sustrato. hormona. Para explicar el fenómeno de la especificidad. velocidad de difusión y facilidad con que cristalizan. El anticuerpo es una molécula proteínica especial perteneciente al grupo de las inmunoglobulinas. que representan el primer sitio de acción hormonal. se altera su actividad fisiológica. Emil Fisher propuso en 1894 una analogía similar a la que existe entre llave y cerradura. Los receptores membranales de reconocimiento de las hormonas.o el ditiotreitol. un sitio fijador (de reconocimiento) en una proteína se ajusta al . las globulinas plasmáticas desnaturalizadas pierden sus funciones de anticuerpos. Otras alteraciones incluyen disminución de la viscosidad. debido a que la proteína tiene un hueco molecular con la forma precisa para el hemo y dado que las cadenas laterales de los aminoácidos en contacto con el anillo son no polares. receptor membranal) reconocer a la molécula en cuestión y asociarse con ella en forma específica. Siendo la conformación de la molécula proteínica la base principal de su función. 3. Una consecuencia de la desnaturalización es la pérdida drástica de solubilidad.2. son también proteínas de reconocimiento. que permite a la proteína (sea enzima. Otro ejemplo es el de la globina que se une específicamente a su grupo prostético. de ellas nos ocuparemos más adelante. grupo prostético). En otros casos la desnaturalización es irreversible. Complementarte dad y capacidad de reconocimiento Existen proteínas capaces de reconocer determinado tipo de moléculas que serán objeto de su actividad. Como regla general. anticuerpo. al desnaturalizarse la proteína.

cuando Runge describió un método para el análisis de mezclas de colorantes. gotas de la sustancia a separar cerca del punto donde partirá el desplazamiento de la fase orgánica (fig.19).6.1. También utilizando una separación en columna.compuesto que se va a unir en forma. La cromatografía en papel. aplicando gotas de colorantes en papel y notando la separación en diferentes colores. otro sitio de reconocimiento para moléculas llamadas efectores alostéricos. el crédito del descubrimiento de'la cromatografía se le dá al botánico Tswett. Las dos primeras técnicas descritas se utilizan generalmente para separar e identificar aminoácidos o péptidos pequeños. En un proceso alostérico debe haber en la proteína centros separados de fijación para el sustrato (por ejemplo. La cromatografía bidimensional es una variante de considerable poder de separación. el soporte utilizado es sílica gel o celulosa colocadas en una hoja de vidrio o plástico en forma de capas muy finas. O2 en el caso de la hemoglobina) y el efector (inhibidor o activador) que ejerce el control alostérico. Un mecanismo alostérico es un proceso común en moléculas proteicas en el que la asociación del sustrato está influenciada por la fijación de otras moléculas que no son sustratos directos de la proteína. pero aprovechando las cargas residuales de las proteínas como carácter diferencial. como todas las técnicas simples. El material usado como revelador es usualmente la ninhidrina mencionada antes. 3. quien en 1906 efectuó la separación de mezclas de pigmentos vegetales en un tubo conteniendo material adsorb e n t e s ó l i d o f i n a m e n t e d i v i d i d o . En este proceso.6.3.20). la separación cromatográfica es muy rápida (fig. además del sitio activo (para el sustrato). ha revolucionado la se- paración y detección de productos de reacción y la determinación e identificación de compuestos. La cromatografía en capa fina utiliza el mismo principio de la cromatografía en papel (cromatografía de adsorción). 3. 3. la ocupación de este otro sitio determina una inhibición o una activación de la reacción. 3. La relación de la distancia recorrida por el compuesto entre la distancia que recorre el frente del solvente desde el sitio de aplicación se conoce como valor Rf (relación de frentes) del compuesto. A continuación se describirán técnicas para la separación e identificación de proteínas. La gota del compuesto (generalmente un aminoácido o un péptido) se "revela" como una mancha en el papel. mecanismo conocido como alostérico. Alosterismo En algunas enzimas y en la hemoglobina se encuentra. Cromatografía Las experiencias en cromatografía se remontan a 1850.5. consiste en colocar en tiras de papel como soporte de una fase estacionaria acuosa mientras una fase móvil orgánica se desplaza en la tira. ya que se emplean dos diferentes solventes aplicados secuencialmente para desplazar un solo compuesto (fig. tamaño y polaridad. MÉTODOS DE SEPARACIÓN Y ANÁLISIS 3. Bajo condiciones estrictamente controladas el Rf es una constante importante para propósitos de identificación. se describe la cromatografía de . La separación cromatográfica se basa en el coeficiente de partición líquido-líquido de los compuestos. El método descrito es cromatografía unidimensional. 3. Sin embargo.18). Desarrollada en 1944 por Martin en Inglaterra.

Figura 3.18 Cromatografía en papel.

intercambio iónico. Las resinas de intercambio iónico para preparar la columna cromatográfica, se preparan a partir de materiales insolubles (agarosa, poliacrilamina, celulosa, etc.) que contienen ligandos cargados negativamente (R-CH3-COO--SO5) o ligandos cargados positivamente (dietilamino) unidos a la resina insoluole.

Las resinas cargadas negativamente fijan cationes conociéndose como resinas de intercambio catiónico. Igualmente, las resinas cargadas positivamente fijan aniones y se denominan resinas de intercambio aniónico. El grado de retención o retardo de una proteína (o aminoácido) por una resina dependerá del número de cargas (positivas o negativas) de la proteína al pH del experimento (revisar pl de una proteína). Aquellas moléculas proteicas con la misma carga que la resina se eliminarán primero, seguidas por proteínas de carga opuesta, que por atracción de cargas, se retendrán más tiempo en la columna. Cuando es difícil eliminar una molécula fuertemente atraída por la resina, se utilizan cambios de pH o fuerza iónica para debilitar la interacción. Los derivados de celulosa como carboximetil celulosa (CMC) y dietilaminoetil celu-

cero), no se desplazan ni hacia el cátodo ni hacia el ánodo en un campo eléctrico. El punto isoeléctrico (pl) de un aminoácido se define como el pH en el cual no tiene carga eléctrica neta; en el caso de los aminoácidos con sólo un grupo amino y uno carboxilo corresponde a la siguiente ecuación: pl = | ( P K 1+ pK2) Si consideramos la curva de titulación de un aminoácido sencillo como la glicina, su equilibrio de ionización corresponde a: A pH de 1 la forma iónica predominante tiene una carga de +1 (forma catiónica) y se desplazará hacia el cátodo en un campo eléctrico. La adición de base hasta alcanzar la forma de zwitterión, corresponde al punto isoeléctrico (pl=5.97).

La adición de base a la forma dipolar de la glicina, completa la titulación del grupo NH 3, el pH de la solución es superior a 11.5 y la especie predominante tiene una carga formal de -1 (forma aniónica). Como puede verse en la fíg. 3.5, la glicina y otros aminoácidos con cadena lateral no ionizable y valores de pKi próximos a 2.5 y de pK2 próximos a 9.5, pueden actuar como amortiguadores en dos zonas de pH, donde ninguna les permite actuar como amortiguadores al pH fisiológico del plasma. Precisamente, el pH de 7.4 es un valor cercano al pl de dichos aminoácidos, y éste es el punto de menor solubilidad de aminoácidos y proteínas. Un caso más complejo lo constituyen los aminoácidos con un grupo ionizable en su cadena lateral. Tal es el caso del ácido glutámico y del aspártico que poseen un grupo

losa (DEAE) se han utilizado con éxito en la purificación de proteínas. En la cromatografía líquida de alta resolución, la mezcla de proteínas a separar e

identificar se pasa a través de una columna empaquetada con pequeñas esferas de resina insoluble. Como en esta técnica la resina está tan densamente empaquetada se requiere

3. las cuales. Las esferas de resina pueden cubrirse con grupos cargados. que las proteínas grandes. como en la cromatografía de intercambio iónico. receptores de membrana. sephadex G-50 para PM de 8-10.000 y sephadex G-75 para 40-50. inhibidores no covalentes específicos y anticuerpos específicos. por lo que tendrán que desplazarse por espacios sinuosos y viajar más a través de la columna. Estos compuestos de alta afinidad se pueden unir en forma covalente a una resina insoluble y utilizarse para purificar una proteína mediante cromatografía en columna. pero insolubles. las cuales se retardan por tener que viajar por el retículo del gel (fig. Esta sustancia queda como pequeñas esferas hidrofílicas. El polisacárido dextrana es tratado químicamente para que se formen enlaces cruzados que den un retículo o malla por la cual pueden pasar moléculas pequeñas.500-4. o con residuos hidrofóbicos con lo que las moléculas no polares se retrasarán al paso por la resina. Las esferas pueden ser porosas y actuar con el mismo principio de la cromatografía de exclusión molecular.6. 3. grupos prostéticos. se hace pasar durante un cierto tiempo. Electroforesis El movimiento de una partícula cargada en un campo eléctrico externo. Figura 3. el sephadex G-25 excluye compuestos de peso molecular de 3. al no poder penetrar por el retículo del gel.21 Filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular en columna El bioquímico tiene para elegir varios tipos de sephadex para preparar columnas. Así. hacia el electrodo de carga opuesta se denomina electroforesis.de bombeo a elevada presión para forzar el paso de la proteína. Según esta técnica. separando moléculas grandes de las pequeñas. son excluidas por motivos estéticos. Filtración en gel La separación de proteínas de diferente tamaño haciéndolas pasar a través de una columna empaquetada con un gel poroso en forma de pequeñas esferas insoluoles se denomina filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular. La cromatografía de afinidad se basa en la alta afinidad que tienen las proteínas por sus sustratos.2. El nombre comercial de este gel es sephadex.500.000 de PM. En consecuencia. 3. Los geles de sephadex G-100 y G-200 se utilizan para separar proteínas de alto peso molecular. En esta técnica la columna es metálica y no de vidrio como la cromatografía a presión normal. una corriente eléctrica a tra- . una mez- cla de proteínas se separa en función del tamaño saliendo primero las proteínas más grandes y a continuación las más pequeñas. Las proteínas pequeñas pueden penetrar por los poros del gel. La electroforesis de proteínas se ha llevado a cabo de acuerdo al principio desarrollado por el sueco Tiselius en 1937. que al colocarlas en agua se hinchan para formar un gel insoluble.21).6.3.

proteínas estructurales como el colágeno y proteínas contráctiles como la tropomiosina. 3. la fórmula tetramérica de la HbAí es 0 ^ 2 . Una modificación altamente simplificada de la técnica electroforética de Tiselius es la llamada eléctroforesis de zona. y y 6 . La primera combina la separación electroforética con la especificidad de las reacciones inmunológicas. al volver a los pulmones desde los capilares. El grado de migración depende de las cargas de la proteínas. acetato de celulosa y. La proteína globina desde el punto de vista de su estructura cuaternaria es un tetrámero. HbAí. las proteínas plasmáticas. Hemoglobina y mioglobina- Las hemoglobinas son proteínas globulares. 3. Se han escogido las proteínas de transporte. y de la forma. Durante la electroforesis. Así.La hemoglobina fetal (HbF) es 0. El sitio donde se concentra la proteína en el tubo puede ser determinado por un proceso óptico. cada una de ellas formada por cadenas polipeptídicas con dos estructuras primarias diferentes y cada subunidad con su grupo hemo. actúan como transporte de CO2 y de iones hidrógeno. la constituyen 4 subunidades.vés de un tubo en U (un electrodo en cada extremo) lleno con una proteína disuelta en un amortiguador con la misma fuerza iónica. que fijan oxígeno en los pulmones y lo transportan por la sangre hacia los tejidos. presentes en los glóbulos rojos. En ésta. En la forma más común de hemoglobina humana adulta. Una proteína cargada se desplazará a través del gradiente de pH en el campo eléctrico hasta que alcance una región de pH en el gradiente igual al valor de su pl. el más reciente gel de poliacrilamida. En este punto la proteína se mantiene estacionaria en el campo eléctrico y puede visualizarse o eliminarse de la columna (fig.22). En esta técnica se utilizan mezclas de anfolitos formados por ácidos poliamino-policarboxílicos con un intervalo de pl definido para establecer un gradiente de pH a través del campo eléctrico aplicado. 3.23). 3. agar.7. proteínas protectoras como las inmunoglobulinas.272» la hemoglobina de las células falciformes (HbS) es ct2£2 y la hemoglobina menor del adulto (HbA2) es a252. El isoelectroenfoque ofrece una resolución sumamente elevada. particularmente las proteínas plasmáticas (fig. las dos subunidades de una clase se denominan cadenas a y los otros dos monómeros de la misma clase se designan como cadenas p. Es especialmente útil para separar proteínas y otras sustancias antigénicas con carga. PROTEÍNAS DE IMPORTANCIA MÉDICA En esta sección. es decir. como ejemplo de proteínas cuya estructura y función es esencial estudiar para una correcta comprensión de sus procesos bioquímicos normales y de su mal funcionamiento en las enfermedades. 1. La luz refractada nos da un patrón de picos. La hemoglobina (Hb) está formada por la proteína globina (una histona) y el grupo prostético hemo. del P.M.Se conoce la secuencia completa de aminoácidos de las cadenas a(141 aminoácidos) y de las cadenas p . 3. cada pico representa la separación entre la molécula proteica y el amortiguador (fig. El aparato de Tiselius se utilizó para determinar el punto isoeléctrico y la movilidad electroforética de las proteínas. Variantes más desarrolladas de la eléctroforesis simple son la inmunoelectroforesis y el isoelectroenfoque. se estudiarán algunas proteínas con importantes funciones biomédicas. la separación electroforética se realiza sobre un soporte inerte como papel. pH y conductividad. las diferentes proteínas migran hacia el electrodo de carga opuesta. hemoglobina y mioglobina. La medida de la concentración de cada proteína separada se hace por revelado y lectura en un densitómetro.24).7. almidón.

.

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3. La hemoglobina fue la primera proteína analizada por difracción de rayos X.000. incluyendo el grupo hemo. La mioglobina (Mb) es una proteína que almacena 02 en el tejido muscular rojo. que contiene un átomo de hierro en su centro.25).000.(146) aminoácidos).26). es de aproximadamente 67. El PM de la hemoglobina. El átomo de hierro. El tipo de porfirina de la hemoglobina y la mioglobina corresponde a la protoporfirina IX con dos propionilos. dos vinilos y cuatro metilos como cadenas laterales unidos a los grupos pirrólicos (fig. la mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica (monómero) y un solo centro de fijación de 02 (hemo).5 nm (fig. El grupo prostético hemo es una molécula de porfirina. Su distribución especial es el de una superficie polar y el interior no polar. En las cadenas polipeptídicas con 02 ligado. El polipéptido P de la Hb es muy semejante a la mioglobina. identificada como una molécula casi esférica con un diámetro de 5. Su concentración en la sangre humana es de 16 g por 100 mi. esta molécula . El quinto enlace de coordinación del átomo ferroso de los hemos es con el nitrógeno imidazólico de una histidina {histidina proximal de la apoproteína). se encuentra en estado ferroso (Fe2*). tanto en la hemoglobina como en la mioglobina. patrón característico de las proteínas globulares. 3. A diferencia de la hemoglobina. un tetrapirrol cíclico. La cadena polipeptídica consta de 153 aminoácidos y tiene un PM de 17.

Cinética de oxigenación de hemoglobina y mioglobina La hemoglobina se combina con el oxígeno y se transforma en oxihemoglobina (Hb0 2 ).Figura 3. De esta manera. forma un sexto enlace coordinado con el Fe 2+ y el segundo imidazol de una histidina distal de la globina. Esta combinación se lleva a cabo sin alterar la valencia del hierro que sigue como ferroso. El hemo se sitúa dentro de un espacio hidrofóbico en cada una de las subunidades de globina. con las cadenas en contacto con las P. en realidad fija ocho átomos de oxígeno por tetrámero (dos por cada subunidad). las 4 subunidades se disponen en un arreglo espacial tetraédrico preciso.25 Estructura cuaternaria de la hemoglobina. los grupos hemo se localizan en la periferia. es .

29). tiene consecuencias fisiológicas importantes. producen ácido carbónico y ácido láctico que incrementan la concen- . sobre equilibrio ácido base. el hierro pasa de ferroso a férrico (Fe 2+ —• Fe 3+ ) y se denomina metahemoglobina (MHb). La fijación del efector en el sitio alostérico influye sobre la conformación del sitio del sustrato (sitio activo). al fijarse el oxígeno a las subunidades. A esta presión. Cuando la hemoglobina se oxida químicamente. pero puede producirse un exceso si se ingieren sulfonamidas. donde el estado T tiene afinidad menor por el sustrato. lo que indica que la mioglobina tiene mayor afinidad por el 0 2 que la hemoglobina y es una molécula inadecuada como transportadora de 0 2 pero eficaz para almacenarlo. 3. según el cual.27). Por tanto. La constante de afinidad del 0 2 es mayor en el estado R que en el estado T (fig. en la proteína existe un sitio de fijación para el sustrato y otro para el efector alostérico (positivo o negativo). Así. la conformación pasa del estado T al R ("relajado"). 3. por lo tanto. es decir. fenacetina u otros oxidantes. la cooperatividad desaparece y la curva de saturación de oxígeno adquiere forma hiperbólica. la forma T es más acida. la p 0 2 del tejido muscular puede disminuir hasta 5 mm Hg. desplaza a la Hb a la forma T. llamada "tensa" o estado conformacional T.decir. La reducción de la afinidad oxígeno-hemoglobina en un pH bajo se denomina efecto Bohr (fig. T y R se emplean también para describir las estructuras cuaternarias de las enzimas alostéricas. La cooperatividad positiva de la hemoglobina depende de la integridad de la estructura cuaternaria. nitritos. El efecto Bohr. Al ocupar su sitio el ion H. Las células con metabolismo rápido y con requerimientos elevados de 0 2 . la mioglobina muestra una curva de saturación de oxígeno de tipo hiperbólica (fig. la hemoglobina muestra una cinética cooperativa de fijación. 3. la mioglobina cede con facilidad su oxígeno para apoyar la síntesis oxidativa de ATP en las mitocondrias musculares. La curva de saturación de oxígeno con hemoglobina es sigmoidea. de afinidad más baja por el oxígeno. Bajo condiciones de escasez de oxígeno (como en el ejercicio intenso). en estas condiciones no transporta oxígeno. si el tetrámero se disgrega en monómeros. Las dos formas son de conformación desoxi. Normalmente se forma menos del 1 % de MHb. tiende a liberar su oxígeno y representa un aumento de oxigenación en tejidos metabólicamente activos. Esto se debe a que una vez fijado el primer átomo de 0 2 facilita la unión del siguiente. En la hemoglobina el sitio activo es ocupado por el oxígeno y el sitio alostérico es ocupado por el hidrogenión. ya habíamos señalado la influencia del oxígeno sobre el pKa de la hemoglobina: H H b + 4 0 2 — Hb(0 2 ) 4 +H + . no es una oxidación sino una oxigenación. cuando la Hb oxigenada se encuentra a pH bajo (ácido) y C 0 2 alto. En cambio. En la unidad II.28). Los datos de cristalografía con rayos X indican que la hemoglobina tiene dos estructuras cuaternarias. El efecto Bohr puede encajar en la definición de un mecanismo alostérico.

En los tejidos periféricos.3-DPG el cual se une a la forma T de Hb. Por lo tanto. un incremento de hidrogeniones provoca liberación de oxígeno. los protones son liberados de la hemoglobina favoreciendo la forma R y la captación de oxígeno.3-DPG de los eritrocitos hace que la hemoglobina ceda una porción mayor de su oxígeno a los tejidos. La hemoglobina fetal (HbF) tiene mayor afinidad por el oxígeno que la adulta (Hb A) lo que le permite extraer O2 de la HbA de la sangre placentaria. 3-difosfoglicerato (2. En los pulmones. el eritrocito aumenta la producción de 2. . disminuye la afinidad C>2-Hb y se disocia una mayor cantidad de O2 hacia los tejidos. Dado que el H+ fuerza alostéricamente hacia la conformación T de la hemoglobina. y reduce su afinidad por el oxígeno. la concentración de H+ disminuye. un aumento en el contenido de 2. la estabiliza. en tanto que un incremento en el oxígeno causa la liberación de hidrogeniones. En resumen. Después del parto.3-DPG). una disminución de O2 hace que se acumule el 2. el pH sube. Cuando la liberación de oxígeno está alterada como en el ascenso a grandes alturas o en la enfermedad pulmonar crónica. el cual es un efector alostérico de la hemoglobina cuando ésta se encuentra en la forma T. ya que su elevada afinidad por el oxígeno la haría ceder menos O2 a los tejidos. La mioglobina no presenta efecto Bohr.tración de H+ en la célula. la HbF es inadecuada.

por tanto. La sustitución de un solo aminoácido de la cadena P (Glu por Val) produce una hemoglobina que. el trastorno se conoce como una hemoglobinopatía. En los pulmones el proceso descrito se invierte y conforme el oxígeno se une a la hemoglobina. la afinidad por el oxígeno está disminuida y puede faltar el efecto Bohr. Hb-NH2+C02 -* Hb-NH-COO-+H+ Cuando están carbamilados. La carboxihemoglobina (HbC0) tiene un color rojo brillante característico. la hemoglobina facilita el transporte de CO2 de los tejidos a los pulmones. esta enfermedad hereditaria se conoce también como anemia de células falciformes. que se presenta en la HbS desoxigenada. La interacción del CO2 con la hemoglobina afecta también la transición del estado T al R. los extremos tienen carga negativa y pueden formar enlaces iónicos que estabilizan la estructura cuaternaria. al cambiar un aminoácido polar (Glu) por uno no polar (Val) se genera en la superficie de la cadena p una zona adherente. Aproximadamente el 15% del CO2 es transportado como carbodioxihemoglobina o carbaminohemoglobina (HbCO2). Así. Los individuos homocígotos (genotipo S/S) presentan anemia pero los heterocigotos (genotipo A/S) tienen el rasgo . causando lisís. La hipoxia producida conduce a policitemia. En estas mutantes se favorece la forma R. La unión de zonas complementarias y adherentes hace que la HbS desoxigenada se polimerice y forme precipitados fibrosos largos que distorsionan mecánica y físicamente al eritrocito. Hemoglobinas mutantes con afinidad mayor de lo normal por el oxígeno. a tensiones iguales de O2 y CO. Esta zona. Los eritrocitos deformados se denominan células falciformes (forma de hoz) y su lisis al pasar por las sinuosidades esplénicas produce anemia. En virtud de la mayor afinidad de la hemoglobina por el CO (210 veces). Las proteínas mutantes no muestran cooperatividad en la fijación del oxígeno ni efecto Bohr. el grupo hemo funciona con Fe2+ pero pequeñas cantidades se oxidan a férrico (Fe3+)y se transforma en metahemoglobina. los H+ se liberan y se unen al HCO3 para formar H2CO3. En consecuencia se presenta metahemoglobinemia. férrica. Muchas de las imitantes pueden ser asignadas a una de las cuatro clases siguientes: Hemoglobina M. En las variantes de hemoglobina M. no cederá suficiente oxígeno a los tejidos. Además de transportar el oxígeno de los pulmones a los tejidos. cuando esto ocurre. Hemoglobina S (hemoglobina falciforme). Por tanto. tiene una zona complementaria en la forma oxigenada de la HbA. Hemos mencionado que en la hemoglobina normal. Los H+ son captados por la Hb que actúa como amortiguadora. la fijación del CO a la Hb excede con mucho a la del oxígeno. la fijación del O2 obliga a la expulsión del CO2 de acuerdo al efecto de Bohr que ya revisamos. Para desplazar el CO de la Hb-CO en las personas intoxicadas con este gas se requiere el uso de la oxigenoterapia hiperbárica (O2 puro a 3 o más atmósferas de presión) para forzar la expulsión del monóxido de carbono.La hemoglobina se combina con el monóxido de carbono (CO) para formar carboxihemoglobina. El CO2 forma radicales carbamilados reversiblemente con los extremos amino de las cadenas polipeptídicas de hemoglobina cuando ésta cede su O2. Hemoglobinas humanas mulantes Las mutaciones en los genes que codifican las cadenas a y P pueden afectar la función transportadora de la hemoglobina. los residuos His proximal y distal son reemplazados por Tir la cual estabiliza el Fe en forma oxidada.

el pH es una unidad (10 veces) por encima del pK del imidazolio y el cociente imidazol/imidazolio es 10:1. A pH 6. es el único aminoácido que puede actuar como amortiguador en los líquidos corporales. este comportamiento excepcional de la histidina le confiere un papel único en las proteínas enzimáticas como activador fisiológico. . las formas iónicas posibles son las observadas en la fig. la mitad de las enzimas estarán en forma básica (imidazol) activa y la mitad en forma acida (imidazolio) inactiva. 3. Precisamente.7. una enzima puede requerir un imidazol de una histidina que es esencial en su forma básica para que exista actividad catalítica. A pH 7.0. Obsérvese que la histidina con un pK R = 6.0. Por ejemplo.En el caso de la histidina. muy próximo al pH fisiológico. Por otro lado. la hemoglobina contiene una elevada proporción de histidina y posee así un alto poder amortiguador en los eritrocitos.0 . debido a esta proporción la enzima mostrará el 91% de su actividad potencial máxima.

En tura química distinta de los constituyentes consecuencia.) y es n o c e r y u n i r s e a c a d a u n o de los determinantes (fig. las células normalmente estabiliza la conformación plasmáticas. no determinan Esta respuesta puede ser de tipo celular y de la formación de anticuerpos pero. parási. que son pequeñas regiones de la molécula de antígeno que inducen específicamente la producción de un anticuerpo. la sustitución de un aminoácido denLas moléculas de anticuerpos (Ab) son tro del espacio para el hemo reduce la proteínas que pertenecen a las inmunogloafinidad de la subunidad con el grupo pros.2. El gene vienen células sanguíneas denominadas linpara la HbS manifiesta elevada incidencia focitos T (que maduran en el timo). un determianticuerpos nante antigénico puede comprender sólo La inmunología estudia todos los fenóme. facili- . hongos. que acen poblaciones expuestas endémicamente al túan directamente o bien a través de paludismo. capaz de destruir a las sustancias extrañas. la ducción de la cadena complementaria que albúmina de cualquier mamífero. al unirse tipo humoral. debido a que las células los linfocitos B (de bursa o bolsa de Fabricio infectadas requieren más oxígeno que las no de las aves). no puede contener múltiples determinantes antige'nicos. Las sustancias que inducen la producción de anticuerpos en un organismo se Normalmente. se presenta aumento de pro. esto se la introduce parenteralmente. Cuando se introduce al organismo tético. que se desarrolla cinas. excepto la precipita intracelularmente y da lugar a la humana. de tal lo propio (nuestros tejidos y células) de lo manera que inducirán múltiples tipos de anno propio (bacterias. es antigénica para el hombre cuando destrucción prematura del eritrocito. Por ejemplo. un determinante antigénico extraño se denominan respuesta inmune.aunque en general no están anémicos. un tables y destruidas porque el hemo que polisacárido o un ácido nucleico. tantes. proteínica no puede unirse a la apoproteína. Un antígeno puede poseer decenas o migracias a los cuales el organismos distingue les de estos grupos determinantes. trasplantes.sustancias por ellas liberadas llamadas linfoción contra el parásito. esto proporciona cierta protec.propios de ese organismo.ticuerpos. virus. 3. por ejemplo. producen anticuerpos.7. la síntesis de las cadenas a-o no en un organismo debe poseer una estruclas p de la hemoglobina está disminuida. solo o una molécula pequeña. Todas las acciones de respuesta a material En general. En estas mu. Un antígeconduce a formas severas de anemia.bulinas. 3. Estructura y función de los En las proteínas. En estas enPara que una sustancia actúe como antígefermedades. células tumorales. En la respuesta celular inter.covalentemente a moléculas grandes.30). cen en una proporción de 1:1. lulas derivadas de estos linfocitos B segreHemoglobinas inestables. etc. La molécula de anticuerpo se asocia de forma no covalente con la sustancia extraña y la elimina del organisTalasemias mo. y su acción se ejerce a través de infectadas y al adquirir la forma semilunar los anticuerpos (inmunoglobulinas) que cé(de hoz) son eliminadas de la circulación. derivadas de un linfocito B. En la respuesta humoral intervienen dentro del eritrocito.una sustancia extraña como una proteína.denominan antígenos (Ag).seis o siete aminoácidos en total de la proteínos bioquímicos y fisiológicos de defensa na. Las hemoglobinas mutantes son ines. cada uno de ellos capaz de recotos.gan. las cadenas a y p se produ.

Es el caso. una vez separado de su portador. Al tiempo que un hapteno requiere la unión a una molécula grande para producir anticuerpos. el hapteno conserva su capacidad de unirse al anticuerpo. lúe- . de péptidos sintéticos o el 2. etc.30 Esquema de un antigeno. 4-dinitrofenol. por ejemplo. DNP-glicina.Cada anticuerpo se une al determinante antigénico frente al que se ha formado. A estas moléculas pequeñas se les conoce como haptenos. se les denominó anticuerpos. Al estimularse los linfocitos B con un antígeno se induce una serie de cambios que los hace transformarse en células plasmáticas. ANTICUERPOS (Igs) Figura 3. Estas poseen la función de sintetizar y secretar inmunoglobulinas a las cuales en un principio. tan la génesis de anticuerpos dirigidos específicamente contra la molécula pequeña. que puede ser una proteína y donde se muestran distintos e hipotéticos determinantes antigénicos y cómo a ellos se pueden unir diferentes anticuerpos de manera especifica.

las de mayor PM se denominan cadeestos pacientes. nal de los anticuerpos.000) y sus cadenas litrolada de multitud de células provenientes geras contienen la mitad de aminoácidos de una sola célula productora de anticuerpos. nas pesadas. Dos de estas nas. L (del inglés alta de una proteína presente en la orina de light). El conocimiento cada vez más avanzado cadenas son de bajo peso molecular y se les de ios mielomas y la cantidad anormalmente denomina cadenas ligeras.31). al descubrirse la electroforesis. la IgG. En la estructura tridimensioTodas las células del tumor son idénticas. 3. munoglobulina más común. se les dio el nombre de gammaglobulinas. los anticuerpos producidos son idénticos.una "unidad básica" tetramérica construida pos contra un solo antígeno. En realidad. constituyen una clona (células provenientes de una misma estirpe) y por tanto. aunque es diferente Estructura de ¡nmunoglobulinas cuando se comparan entre sí las proteínas de La heterogeneidad de las inmunoglobulinas diferentes enfermos de mieloma. homogéneos. (PM 25. La proteína de Bence-Jones es homogénea para cada individuo con mieloma. se obtenía una por cuatro cadenas polipeptídicas unidas por pequeña cantidad de una mezcla de globuli.go. Al aislar anticuer. cada cadena H está . la proteína de Bence-Jones. aparecen fácilmente en la orina. por su bajo PM. las proteínas de Bence-Jones son las cadenas ligeras de las inmunoglobulinas que. H (del inglés heavy).puentes disulfuro (fig.aminoácidos (PM 50. se le denominó inmunoglobulinas (Ig).000). Sin embargo. y ver que emigraban en la fracción gamma. su El mieloma múltiple es un tipo de cáncer cadena pesada tiene aproximadamente 440 en que se presenta la multiplicación descon. fue durante años un serio obstáculo para esCada inmunoglobulina está formada por tudiarlas químicamente. En la incontribuyeron a vencer el obstáculo. al conocerse con precisión su estructura y función en 1965.

con grupos de aminoácidos siempre distintos. .asociada con una cadena L (fig. 3. Las cadenas L constan de dos regiones de estructura primaria bien definidas y diferenciadas: una región de gran variabilidad en número y secuencia de aminoácidos. por donde se deforma la molécula cuando se produce la unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ab). La porción central de las cadenas H es una zona (de unos 15 aminoácidos) de gran flexibilidad. determinados por cada antígeno particular.32). dentro de la región variable hay zonas hipervariables. llamada bisagra o gozne. denominada región variable (V). La conformación que adopta la molécula completa es de una T o una Y.

Cada clase de inmunoglobulinas sólo contienen un tipo de cadenas pesadas pero pueden contener uno u otro tipo de cadena ligera. respectivamente. IgD e IgE. a los que se refie- ren las cinco clases diferentes de inmunoglobulinas. mu (ji). mu. delta (5). es la que produce la fijación de las proteínas del complemento y proporciona la región necesaria para que los anticuerpos crucen la membrana placentaria. en cierto modo comparables al sitio activo de una enzima. delta y épsilon. En las cadenas pesadas. y épsilon (e). alfa. gamma (y). de ahí que existan dos tipos de cadenas ligeras: kappa (K) y lambda (X). Los anticuerpos IgG pueden promover la fagocitosis y también activar el complemento. . Otra parte de las inmunoglobulinas muestra una composición fija en número y orden de aminoácidos que se denomina región constante (C). Esta clase de Ig se encuentra en el plasma a elevadas concentraciones y es la que se forma en mayor cantidad durante la respuesta secundaria a antígenos extraños. Clases de inmunoglobulinas Las inmunoglobulinas pueden ser de las clases siguientes: IgG. la parte constante determina cinco tipos: alfa (a). IgM. Las regiones constantes de las cadenas H son las que determinan la clase a la que pertenece el anticuerpo (ver más adelante). (tabla 3. IgG. La parte constante de las cadenas ligeras puede ser de dos tipos. según posean las cadenas pesadas gamma. IgA.Estos son los sitios de combinación donde se realiza la unión de la inmunoglobulina con su antígeno.6).

3. IgM. bronquial.000). Estos fragmentos se designan fragmentos Fab (antigen binding) y pueden fijar antígenos con una afinidad similar a la del anticuerpo completo. Parece participar en la diferenciación de linfocitos B a células plasmáticas.terminal de la cadena H y toda la cadena L. enzima que divide la molécula en tres fragmentos (fig. serotonina. existen dos centros de fijación de antígeno por molécula de anticuerpo. (unidos estos por puentes disulfuro) de una estructura cova lente básica [(LH)2]5. Se han reconocido 4 subclases de IgG. Las Ig de esta clase se encuentran principalmente en las secreciones extravasculares (secreciones mucosas. y son los primeros anticuerpos que actúen contra un antígeno extraño (respuesta primaria). IgD. en determinadas circunstancias. esto puede acarrear la muerte del individuo por hipotensión e insuficiencia respiratoria. cuando la madre Rh (-) produce anticuerpos anti Rh ( + ) contra el feto en la llamada enfermedad hemolítica del recién nacido. como son asma bronquial. IgA. Dado que cada unidad básica de anticuerpo contiene dos pares de cadenas (LH)2. ciertos casos de dermatitis. leche y calostro). intestinal. Se encuentran principalmente en el plasma. la IgM es un anticuerpo muy efectivo. rinitis alérgica. Debido a esa estructura pentamérica que determina 10 sitios de unión con el antígeno. Los anticuerpos como los presentes en la artritis reumatoide (anti IgG) son de esta clase. La IgE posee la capacidad de unirse por su extremo Fe (ver adelante) a los mastocitos o células cebadas. las IgM pueden promover la fagocitosis de microorganismos por los macrófagos y leucocitos polimorfonucleares y son potentes activadores del complemento.33). IgE. puede tener consecuencias nefastas para el feto. La IgM tanto en sangre como en otros líquidos se encuentra como tetrámero o pentámero. se producen cambios alostéricos y se liberan grandes cantidades de histamina. dos de los cuales son iguales entre sí y comprenden la porción NH 2 . leucotrienos y otras sustancias vasoactivas que producen vasodilatación periférica o broncoconstricción. Al igual que las IgG. urinaria. estas inmunoglobulinas son la defensa inicial contra los antígenos virales y bacterianos invasores.Tienen la propiedad de atravesar activamente las membranas biológicas. El alto nivel de IgG en el feto se debe a que esta Ig atraviesa la placenta. Tanto a los dímeros de IgA como a los pentámeros de IgM se pueden unir dos péptidos adicionales que son la pieza de secreción y la cadena J. Está presente en la superficie de los linfocitos del recién nacido. el choque anafiláctico. Este hecho. Cuando los mismos antígenos que indujeron su formación vuelven a entrar. incluso el más grave de todos.Actúan en forma sinérgica con otras secreciones (lisozima y complemento) para destruir a ciertos microorganismos. Como tales. El otro . lágrimas. Se presentan habitualmente como un dímero de la estructura básica (LH2)2. La pieza de secreción es una glicoproteína que se sintetiza en células epiteliales de mucosas y glándulas exócrinas. de ahí que esta Ig sea la de mayor PM (900. Se han identificado 2 subclases de IgM. con anterioridad a su entrada en el plasma. Fijación de antígeno por molécula de anticuerpo Las regiones variables de las cadenas L y H constituyen un centro de fijación de anticuerpo. es la que permite a IgA e IgM salir a las secreciones biológicas. nasal. Esta característica ha podido ser estudiada tratando las Ig con papaína. Aunque presente en plasma en concentraciones bajísimas es la inmunoglobulina que determina las reacciones alérgicas y anafilácticas. se unen por el extremo Fab. urticaria.

la autoinmunidad. se deja coagular y se separa el coágulo.7. Es evidente que existen sobradas razones para hablar más extensamente de los fenómenos inmunológicos en medicina. muchas no son estrictamente "plasmáticas" ya que se encuentran ahí sólo transitoriamente o experimentando parte de su catabolismo. los trasplantes y el cáncer. es la mitad COOH. Esta propiedad favorece la aglutinación y precipitación clásicas de la reacción antígeno-anticuerpo (Fig. etc. plaquetas. Aunque en el plasma se encuentran más de 200 proteínas. La fuerza de asociación entre Ag y Ab se debe a fuerzas no covalentes. leucocitos. basta mencionar la inmunidad a las infecciones. fragmento conocido como Fe (cristalizable). proteína involucrada en la formación del coágulo.Ag por molécula de Ab) situados en los extremos amino-terminales de las cadenas H y L que comprende las secuencias variables de aminoácidos. Por el contrario.33 Hidrólisis de la IgG en los fragmentos Fab y uno Fe por la enzima proteolítica papaina.3.). Sin embargo. la sangre sin elementos celulares es el plasma y el plasma sin fibrinógeno es el suero. si se impide la coagulación de la sangre y se separan las células. escapa a los objetivos de este texto de bioquímica cubrir estos trascendentales aspectos que pueden consultarse en obras dedicadas a esas disciplinas. que contiene lo mismo que el suero y además fibrinógeno. por lo que se deduce que hay dos centros de fijación de . las reacciones de hipersensibilidad y alergia.34). 3. El término proteínas plasmáticas se restringe a unas 50 moléculas que realmente llevan a cabo funciones Figura 3. el líquido remanente es el suero. La valencia 2 que tiene cada molécula de Ab permite que cada Ab fije dos Ag diferentes. 3. éste no contiene elementos figurados (células) ni fibrinógeno. el líquido resultante es el plasma. En resumen.terminal de las cadenas H y no puede fijar antígeno. Proteínas plasmáticas El plasma es el medio líquido de suspensión de los elementos sólidos de la sangre (eritrocitos. Si se toma una muestra de sangre.

Como se podrá observar. electroforesis e inmunoelectroforesis. de la bioquímica clínica. la albúmina es responsable del 80% de la presión osmótica coloidal total deljílasma.6. p y y) que con las primeras técnicas migraban juntas. reguladora del equilibrio hídrico y ácido base. sino también conjugadas. Esta es una de las proteínas que une y transporta hormonas tiroideas. la mayoría contiene un resto glucídico. como las glucoproteínas y lipoproteínas. aunque también fija algunos fármacos como aspirina y barbitúricos. Las primeras técnicas de separación.Figura 3. inmunitaria. nutritiva. Se sintetiza exclusivamente en el hígado a razón de 20g al día y tiene una vida media de 10 días.000). en particular. Las proteínas plasmáticas son una mezcla muy heterogénea que comprende no solo proteínas simples. En la tabla 3. F'realbúmina.3). por lo tanto. Está compuesta por 610 aminoácidos en una sola cadena polipeptídica con 50% de a-hélice y 15% de estructura p. Albúmina. específicas en el plasma: de transporte. Es la más abundante (55%) y tiene un PM muy bajo (69. Es una de las pocas proteínas del plasma que carecen de carbohidratos. seguramente quedan muchas por descubrir y caracterizar. se identificaron subgrupos de globulinas (a. Hasta hoy se han aislado puras unas 70 proteínas plasmáticas. ordenadas de acuerdo a su movilidad electroforética. permitió separarlas en diferentes componentes: albúmina^lobulinas^y fibrinógeno (ver subcapítulos 3. La facilidad con la que pueden obtenerse muestras de sangre ha permitido que el estudio de sus constituyentes sea uno de los pilares más importantes del desarrollo de la bioquímica en general y. . A medida que las técnicas de fraccionamiento se hicieron más resolutivas.7 se muestran las principales proteínas plasmáticas.34 Unión de anticuerpo a antígenos en reacciones de precipitación (a) y en reacciones de aglutinación (b). etc.

ok\-glucoproteína acida. digitálicos. hecho importante porque un incremento de su concentración libre repercute sobre el funcionamiento cerebral (por aumento de serotonina cerebral).1). elastasa. ai-antitripsina. ésta posee el 90% de la capacidad antiproteásica total del plasma. En casos de desnutrición grave. la albúmina actúa como molécula transportadora de bilirrubina. colagenasa. en ausencia . Según la teoría elastasaantielastasa del enfisema (destrucción de alveolos pulmonares y ensanchamiento de bronquiolos). se presenta edema tisular (ver unidad 2. salicilatos. responsable éste del bajo punto isoeléctrico (3.2. disminuye la síntesis de proteínas y se presenta hipoalbuminemia. Forma parte de otras proteínas antiproteásicas. barbitúricos.) pero sobre todo sobre la elastasa de origen neutrófüo. quimotripsina.2. el más bajo de todas las plasmáticas. Su actividad antiproteasa es polivalente (tripsina. Se sintetiza en el hígado y por su abundancia en plaquetas se le ha relacionado con la coagulación. fenilbutazona. los neutrófilos pulmonares liberan elastasa de sus lisosomas. en la función coloidosmótica. sobre todo. etc.Además de contribuir a la presión osmótica coloidal. ácidos grasos. la albúmina a pH 7. oligoelementos y algunos fármacos: cafeína. Su función nutritiva consiste en proveer de aminoácidos utilizables para la síntesis de proteínas del organismo. por el efecto Gibbs-Donnan.4 posee 17 cargas negativas que. También se fija a la albúmina el triptófano. etc. en las enfermedades renales y hepáticas que también se acompañan de hipoalbuminemia. antibióticos. subcapítulo 2. Además. Contiene un alto contenido en carbohidratos. Esta hipoalbuminemia repercute. sobre todo ácido siálico.5) de la proteína. aumentan la concentración plasmática de cationes y ocasiona indirectamente un aumento de presión osmótica.

a\-Antiquimotripsina. androstanolona y estradiol. Dentro de las proteínas plasmáticas se encuentra este grupo complejo de proteínas y lípidos unidos por fuerzas no covalentes. a\-Fetoglobulina. Es una proteína de membrana de linfocitos. Otras proteínas de la fracción a-globulínica son la ceruloplasmina. La coagulación sanguínea es uno de los tres mecanismos que contribuyen al proceso fisiológico de la hemostasia. la tercera fase es la formación de un coágulo sanguíneo insoluble o trombo rojo. Haptoglobina.2. la proteína C reactiva (que aumenta en procesos infecciosos y denominada así porque precipita al polisacárido C del neumococo). Transcortina. Es la proteína plasmática de mayor peso molecular.Se denomina también globulina fijadora de corticosteroides.de al-antitripsina. se une prácticamente a todas las endopeptidasas. la transferrina. Inter-al-inhibidor de la tripsina. y las proteínas relacionadas con la coagulación. En líquido amniótico se ha encontrado elevada en embarazos que conllevan fetos anencefálicos. posee gran afinidad por los estrógenos. que transporta cobre y parte de las lipoproteínas. $2-Microglobulina. las células pulmonares son sensibles a la proteasa que destruye la elastina de las fibras y disminuye la elasticidad pulmonar. Su concentración aumenta en tumores digestivos. parte de las lipoproteínas. células PMN y de cultivos de carcinoma mamario. Globulina fijadora de tirosina. Da cuenta del 3% de la capacidad antiproteasa plasmática. al-Macroglobulina. Fracción y-globulínica. que es reutilizado por el hígado. Contribuye a la enfermedad el humo de tabaco que inhibe a la antitripsina. Aumenta en enfermedades malignas y en pacientes con riñones trasplantados. Es sintetizada por las células linfoides. El primero de estos mecanismos es la constricción del vaso dañado con objeto de frenar la salida de sangre de la herida. Su papel es transportar la vitamina A. Llamada también a l fetoproteína. ^-Globulina ligadora de esteroides. que transporta hierro. plaquetas.7. etc. Sería interesante prevenir a fumadores potenciales con fenotipos predisponentes al efisema. se logra así un ahorro de hierro y se protege al riñon del efecto nocivo de la hemoglobina libre. Su función es unirse irreversiblemente a la hemoglobina con lo que se excede el umbral renal de excreción. Proteína ligadora de retinol. Su papel consiste en la fijación del grupo hemo con lo cual se impide su excreción urinaria y contribuye al ahorro de hierro. ocasionando insuficiencia respiratoria crónica. En la primera fase participan sustancias vasconstrictoras locales cuya acción es lúe- . Lipoproteínas plasmáticas. Se une específicamente a los esteroides testosterona. Se ha sugerido un papel protector de las mucosas. que por su importancia en el transporte de lípidos es más conveniente tratar en el capítulo correspondiente al metabolismo de estas sustancias. la segunda fase consiste en la formación de un trombo o coágulo blanco de plaquetas en el lugar del daño. dada su concentración en la secreción bronquial. pulmón embrionario. carcinoma hepático y tumor embrionario del testículo. Hemopexina. En la fracción fi-globulínica se encuentran también la P1 -glucoproteína específica del embarazo. Está integrada por las inmuno globulinas que se trataron en el subcapítulo 3. Incorpora las dos terceras partes de las hormonas tiroideas circulantes. Constituye el 25% de las proteínas plasmáticas. Es otra de las antiproteasas plasmáticas. Factores de la coagulación Se define como hemostasia el cese de la hemorragia que sigue a la interrupción traumática de la integridad vascular.

3. excepto en el aminoácido inicial y el terminal. No obstante que no es objetivo primordial de este texto revisar exhaustivamente el alto número de reacciones posibles. los valores de pl de las proteínas se miden experimenta 1mente determinando el pH en el que la proteína no se mueve en un campo eléctrico. El grupo carboxilo de un aminoácido puede reaccionar con el grupo amino de otro para formar. La importancia del cálculo del pl de una proteína se tratará más adelante en este capítulo.7. la proteína tendrá una carga neta negativa. . en las proteínas la existencia de grupos ionizables dependerá de las cadenas R laterales de los aminoácidos. se considerarán aquellas reacciones importantes de identificación de aminoácidos. a un pH superior al pl. A un pH inferior al pl la proteína tendrá una carga neta positiva.1.13. en el a-carboxilo y en los grupos activos de la cadena lateral R. por medio de un enlace peptídico. Al igual que con los aminoácidos. y el valor del pl característico de una proteína dependerá de las concentraciones relativas de los diferentes grupos ácidos y básicos. 3. Reacciones del grupo a -carboxilo El grupo carboxilo a puede esterificarse con alcoholes o formar amidas en presencia de amoniaco. Reacciones químicas de los aminoácidos Los aminoácidos pueden presentar reacciones químicas a tres niveles: en el grupo a amino.Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos por un enlace particular (enlace peptídico) que bloquea los grupos ct-amino y a-carboxilo. De esta manera. un dipéptido.3. En virtud de que el pH isoeléctrico de una proteína es difícil de calcular a partir de los valores de pK de sus aminoácidos constituyentes.

en presencia de Ca 2+ . contribuyen a la agregación plaquetaria para formar el tapón laxo de plaquetas que constituye la segunda fase. además. una nomenclatura para los mismos. y una potente sustancia vasoconstrictora derivada de prostaglandinas. A causa de una herida se desencadenan ambos mecanismos.8). el tromboxano A2 que. La tromboplastina tisular es una lipoproteína que se encuentra ampliamente distribuida en las membranas . la cual cataliza la transformación de fibrinógeno (soluble) en el coágulo de fibrina (insoluble). que forma un complejo activo. al activar el factor X. Vía extrínseca. pues la sangre entra en contacto con una superficie ajena a los vasos y. La vía extrínseca es la que sigue a una lesión en respuesta al daño tisular. la protrombina se transforma en trombina. la tromboplastina. con otras sustancias de los tejidos que interaccionan con ella. que culmina con la formación del trombo rojo de eritrocitos y fibrina. Las dos vías convergen en el camino común y finalmente se forma el coágulo.go amplificada por serotonina. Esta vía es sumamente rápida en respuesta al daño tisular. adrenalina. Se inicia con la liberación de un factor tisular. por ejemplo. debido a la presencia de sustancias que no están presentes normalmente en la sangre. en conjunto con el ADP liberado del tejido colágeno. con el factor Vlla (activado) plasmático. La vía intrínseca se inicia a través del contacto de la sangre con una superficie distinta de los va- sos sanguíneos. En ésta. Esta fase de la hemostasia se mide mediante el tiempo de sangrado. se puede llevar a cabo a través de dos vías {extrínseca e intrínseca) que convergen en una ruta final común que. cada factor se designa por un número romano de acuerdo al orden cronológico de su descubrimiento pero que no tiene relación con el orden en el cual actúa (tabla 3. El elevado número de factores plasmáticos de la coagulación ha obligado a establecer por parte de un Comité Internacional. La coagulación sanguínea o tercera fase. una pared vascular anormal o un área de circulación sanguínea restringida.

Existe interés terapéutico en este activador tisular del plasminógeno.de los tejidos. catalizada por el factor IXa. antagonista de la vitamina K. las antiproteasas descritas anteriormente y. el efecto de la antitrombina es potenciado varios cientos de veces por heparina. Estas sustancias son principalmente la heparina. así. que ataca al factor XII y lo activa totalmente (Xlla). fundamentalmente. La heparina se localiza en los granulos metacromáticos de las células cebadas que se localizan en la pared vascular. pulmones y capas del endotelio vascular. que se encuentra a una alta concentración en el plasma. porque en ella intervienen un número mayor de factores que. es acelerada 500 veces por la presencia del factor VIII o factor antihemofílico. que es una serinproteasa capaz de digerir tanto al fibrinógeno como a la fibrina. Vía intrínseca. 3. los procesos de formación del coágulo están bloqueados por sustancias inhibidoras de la coagulación que aseguran la ausencia de trombos intravasculares. El activador del plasminógeno es una serinproteasa tisular catalíticamente inactiva hasta que se expone a la fibrina. Se inicia con la fase de contacto en la cual se activa parcialmente el factor XII. dependiente de vitamina K. La formación de la red de fibrina se inicia con el paso de protrombina a trombina. que inhiben la carboxilación. especialmente cerebro. generan el factor Xa (activado). Esta es una vía lenta. El dicumarol. estimulan la activación del plasminógeno. La activación del factor X constituye la etapa clave y vía común de la coagulación al estar regulada por las vías extrínseca e intrínseca. enzima autocatalítica. a la forma de monómero de fibrina. 3. IX y X. enzima que cataliza la transformación de prekalikreína (factor Fletcher) en kalikreína. El paso de fibrinógeno a fibrina se produce por la acción proteolítica de la trombina sobre el fibrinógeno. catalizado por el complejo Xa-Ca 2+ -Va-FL. el activador ya no manifiesta actividad y la fibrinólisis cesa. El fibrinógeno pasa. El proceso de disolución del coágulo a los pocos días de su formación. La activación del factor X. estos monómeros se asocian y forman una fibra polimerizada conocida como coágulo blando cuyo paso a la estructura insoluble llamada coágulo duro o red de fibrina requiere la presencia del factor XHIa como catalizador.000 veces. El sustrato principal del factor Xlla es el factor XI el cual es activado (Xla). llamado^fer/ndlisis. cuando la plasmina digiere a la fibrina. La velocidad de activación de la protrombina por el factor Xa aumenta 50 a 100 veces en presencia de fosfolípidos (FL) y Ca 2+ . Otros factores anticoagulantes de uso terapéutico incluyen a los cumarínicos. El valor global del complejo activador de protrombina es de 20. La acción del factor Xla constituye la última etapa del sistema intrínseco. El cofactor Va acelera el proceso unas 350 veces. VII. este último factor es activado previamente por trombina (fíg. Las propiedades anticoagulantes de la estreptocinasa se utilizan a nivel terapéutico. se inicia con la activación del plasminógeno plasmático a plasmina. su sustrato es el factor IX el cual se activa en dos etapas con participación de Ca 2+ . la urocinasa serinproteasa sintetizada en el riñon y la estreptocinasa del estreptococo p-hemolítico.35). Glicoproteínas y proteoglicanos Las glicoproteínas y proteoglicanos son moléculas constituidas por proteínas a las cua- . de los residuos de glutamato a carboxiglutamato (Gla) en las regiones NH2-terminales de los factores II. En situación normal. para reducir el daño de una trombosis coronaria aguda. Así mismo. por lo que su distribución es muy amplia. al operar en un mecanismo de cascada.7.4. la antitrombina III. se usa como anticoagulante en pacientes predispuestos a formar coágulos intravasculares.

Muchos investigadores del cáncer piensan que el fenómeno de la metástasis se debe. a alteraciones de las glucoproteínas de la superficie de las células cancerosas. Casi todas las proteínas plasmáticas. excepto la albúmina. son glucoproteínas. los grupos sanguíneos y algunas hormonas. son glucoproteínas. Las glicoproteínas forman la mayor parte . por lo menos en parte.les se han agregado cadenas de oligosacáridos unidos por covalencia. Muchas proteínas de membrana.

prolina (10. La heparina es un proteoglicano en la que más de la mitad de las serinas se encuentran enlazadas con cadenas de polisacáridos. piel. cuya síntesis es bloqueada por penicilina. es importante la unión entre la glicoproteína colágena y los proteoglicanos con sulfato y carboxilato (ver más adelante). Las bacterias gram positivas tienen una pared que contiene peptidoglicanos y ácido teicoico. cartílagos. es la que proporciona fuerza estructural y forma a todos los tejidos y órganos del cuerpo. La unidad molecular básica del colágeno en las fibrillas contiene tres cadenas polipeptídicas. Además de anticoagulante. En la estructura del colágeno predomina la glicina (35%). La gelatina. (ver unidad de carbohidratos). (tabla 3. etc. Es de particular interés el estudio de estos compuestos en medicina. cristalino. en virtud de que la pared bacteriana está construida por peptidoglicanos. En el aspecto estructural. se obtiene como alimento desnaturalizando el colágeno por el calor. No posee triptófano ni cisterna. que se denomina tropocolágeno. proteína de uso común. Predomina en el tejido conjuntivo o conectivo donde forma parte de los tendones. principal proteína del tejido conectivo es la proteína más común en el mundo animal y más abundante del cuerpo humano. se produce un grupo de enfermedades. La especificidad de las reacciones inmunológicas a las bacterias depende de los peptidoglicanos de su pared. llamadas mucopolisacaridosis. 3. simplemente colágeno. Los proteoglicanos son de mayor tamaño en comparación con la glucoproteínas. Las glucoproteínas son proteínas con pesos moleculares que van de 15. en particular de la microbiología.7. Se denomina sustancia fundamental o basal a la estructura de carácter gelatinoso compuesta de fibrillas de colágeno incrustadas en un matriz de polisacáridos aminados y glicoproteínas. alanina (11 %) y los aminoácidos derivados hidroxiprolina (10%) y 5-hidroxilisina (10%). rígida y muy resistente a la tensión. Existen por lo menos 5 tipos distintos de colágeno en los tejidos por lo que se considera una familia de moléculas que comparten numerosas propiedades. con múltiples cadenas de glicosaminoglicanos. a las cuales se unen una o varias cadenas de oligosacáridos (menos de 15 azúcares) que contribuyen con 60%. Por defectos hereditarios en la enzima lisosomal encargada de hidrolizar los glicosaminoglicanos presentes en los proteoglicanos. clasificadas dentro de los errores innatos del metabolismo. con una glicina cada tercer aminoácido. entre otras moléculas. La propiedad .9). tienen 90-95% de carbohidratos. o según la terminología más reciente.5 Colágeno y proteínas contráctiles.12%).000 a más de un millón.del mucus secretado por las células epiteliales que permite la lubricación de los conductos del cuerpo. la heparina se une a la lipoproteinlipasa de la pared capilar y causa su liberación. Es una proteína insoluble en agua. su PM es de varios millones. El colágeno.

3. estas fibrillas no tienen la fuerza tensora del colágeno maduro hasta que se forman enlaces covalentes en forma cruzada. Este precursor pierde una secuencia guía de 100 aminoácidos (péptido señal) y se transforma en procolágeno. Es el nombre que se da a un grupo de 4 enfermedades caracterizadas por múltiples fracturas (fragilidad ósea) que dan como resultado deformidades óseas. ocasionando fragilidad de los tejidos y la aparición de lesiones de la piel. Después de la formación de triple hélice. Síntesis de colágeno. y se forman unidades de tropocolágeno que se ensambla espontáneamente en fibrillas de colágeno inmaduro. En ausencia de ácido ascórbico.Danlos.37) es necesaria para entender estas enfermedades. El colágeno maduro es una proteína extracelular pero su síntesis es de inicio intracelular bajo la forma de una molécula precursora llamada preprocolágeno. dientes y vasos sanguíneos. Posteriormente. Después de este proceso intracelular. enfermedad que se debe a la ingestión del frijol Lathyrus. Las enfermedades hereditarias por defectos en la síntesis o el ensamble sirven muy bien para ilustrar las consecuencias de diferentes tipos de mutaciones. fenómeno denominado con propiedad "suicidio proteico". a-cetoglutarato. hierro ferroso y. La prolina determina su arreglo helicoidal y el pequeño tamaño de la glicina asegura la íntima unión de las tres cadenas que permite una estructura de superhélice (fig. Sin embargo. sobre todo. donde se encuentran las cisternas. entre los primeros podemos ubicar al escorbuto y el latirismo. con glucosa o galactosa. durante la adolescencia hay una gran demanda de vitamina C para este tipo de reacciones. Síndrome de Ehlers . se forma un colágeno con dificultad para formar fibras. En el cartílago. responsables de los puentes disulfuro (-S-S-). todas ellas características del escorbuto. en las hidroxilisinas.más definida es la triple hélice. 3. En esta enfermedad se impide la formación normal de la triple hélice con la consiguiente degradación de todas las cadenas. en está forma las hidroxilasas de prolina y lisina las transforma en hidroxiprolina e hidroxilisina respectivamente. El cartílago es una matriz extracelular en la cual el colágeno contribuye a su fuerza tensora y los proteoglicanos son los causantes de su notable elasticidad. no pueden formarse con facilidad los enlaces covalentes y el colágeno se vuelve muy frágil. ácido ascórbico. el procolágeno glicosilado alcanza el exterior. se debe a síntesis defectuosa de una de las cadenas del colágeno tipo I. Estas enzimas requieren oxígeno molecular. Con este nombre se designa a un grupo de al menos 10 enfermedades que comparten entre todas ellas síntomas de debilidad estructural en el . las enzimas extracelulares amino y carboxiproteasas remueven los propéptidos amino y carboxilo terminal. huesos. La consideración de los pasos de biosíntesis del colágeno (fig. los proteoglicanos y el colágeno son biológica y mecánicamente interdependientes. no puede ocurrir una hidroxilación ulterior de los residuos de prolina y lisina. Enfermedades del colágeno Las enfermedades del colágeno pueden resultar de defectos adquiridos o hereditarios. El resultado es la fibra de colágeno madura. En el latirismo.36). Osteogénesis imperfecta. se forman puentes disulfuro entre cadenas de procolágeno y se integra una triple hélice que sale de la célula. En una etapa posterior. el procolágeno es glicosilado. estructura enrollada de tres subunidades polipeptídicas unidas entre sí por puentes de hidrógeno. en este entrecruzamiento participan condensaciones aldólicas con el e-amino de la lisina que se desamina oxidativamente a un 6-aldehído (al-lisina) y forma bases de Schiff con otros e-NH 2 de lisinas o hidroxilisinas.

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en especial con ruptura de la aorta.tejido conectivo. el síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV. Se ha identificado el colágeno tipo I como el posible factor donde reside la base de esta enfermedad. desde el movimiento de cilios y flagelos hasta el más fino de la mano humana. En el tipo VII del síndrome la piel se magulla fácilmente y es hiperextensible. difícil curación de las heridas y deformaciones músculo-esqueléticas. esta asociado a un metabolismo anormal del cobre. que aparece excesivamente arrugada y cuelga en pliegues. El síndrome de Ehlers-Danlos tipo V. En el síndrome de Ehlers-Danlos tipo VI hay una deficiencia de lisil-hidroxilasa. Síndrome de Marfán: Es una enfermedad que se caracteriza por síntomas relacionados con esqueleto. llamada también cutis laxa. pero la principal manifestación es la dislocación de las articulaciones como la cadera y rodillas. las características clínicas incluyen marcada hiperextensibilidad de la piel y las articulaciones. Proteínas contráctiles El movimiento es una característica esencial de todas las formas vivas. . ojo y corazón. El mecanismo contráctil del músculo esquelético de los vertebrados es el mejor conocido. Hay deficiencia de lisinoxidasa y los enlaces cruzados son defectuosos. Se caracteriza porque el cabello toma aspecto rizado. está causado por defectos en el colágeno tipo III.. Las moléculas responsables de esta importante propiedad son las proteínas contráctiles. se manifiesta por piel suelta. Por ejemplo. Síndrome de Menkes. los síntomas son graves por el embarazo o el parto y tendencia a sufrir contusiones. que suelen ter- minar con accidentes vasculares.

.37 Estructura de! colágeno desde la secuencia primaria hasta la fibrilla.el) Diámetro de 1 5 A Prolina Figura 3.

38). 3. 3. dos líneas Z delimitan una sarcómera (fig. El tejido muscular es el más abundante del cuerpo humano. las cuales poseen a su vez unos 2. confinados a la zona H de la banda A y que constan de la proteína miosina. el músculo liso no es estriado. Cuando se examinan cortes de una miofibrilla al microscopio óptico o electrónico presentan un aspecto estriado. El músculo esquelético se encuentra bajo control nervioso voluntario. lo que indica un ordenamiento más al azar. La célula muscular posee un abundante retículo endoplásmico (sarcoplásmico) poco rugoso. Cada sarcómera está formada por filamentos gruesos. Este se debe a la alternancia de bandas oscuras y claras. función cubierta por el sistema nervioso y 4) que la máquina pueda regresar a su estado original. El músculo es el principal transductor bioquímico que convierte la energía (química) potencial en energía (mecánica) cinética.500 filamentos que se encuentran inmersos en un citoplasma soluble (sarcoplasma). los músculos aeróbicos de actividad continua son muy abundantes en mitocondrias. una fuente de energía (el ATP) y un sistema transductor (el músculo). por tres tipos de músculos: esquelético. el músculo cardiaco y liso es de control involuntario. Durante una actividad muscular intensa. es anisotrópica. Este sistema mecanoquímico es la maquinaria más eficiente y versátil de conversión energética jamás conocida. Las miofibrillas son la maquinaria contráctil del músculo y su unidad es la sarcómera. no es refringente. 3) debe existir un operador. su contenido en mitocondrias es muy variable. El músculo esquelético y cardiaco aparecen estriados en el microscopio. los músculos blancos son poco abundantes en mitocondrias y mioglobina y su metabolismo es anaeróbico. los músculos pueden consumir 85% o más del ATP total producido en el metabolismo. banda A. los filamentos delgados se localizan en la banda I pero se extienden hasta la banda A y consisten en las proteínas acuna. en el hombre. Dentro de la banda I se define una línea muy densa a los electrones o línea Z. linea M. Dentro de la banda A se distingue una zona de poca densidad a los electrones o zona H con una línea central muy densa. descubierta por Straub. lo cual sugiere un ordenamiento geométrico regular de las moléculas. son los llamados músculos rojos. 2) debe haber un sistema regulador de la actividad mecánica. Estos requerimientos son satisfechos. Un transductor químico-mecánico debe satisfacer varios requerimientos: 1) suministro constante de energía. cada filamento grueso está rodeado por seis filamentos delgados y cada filamento delgado está rodeado por tres filamentos gruesos (fig. Proteínas musculares La actina. es una proteína globular que representa el 25% en . tropomiosina y troponina. Cada fibra muscular contiene millares de miofibrillas. Más del 40% de la masa muscular de un individuo adulto es músculo esquelético. la banda I es isotrópica. birrefringente a la luz polarizada. rodeados por una membrana celular (sarcolema). Detrás de la estructura microscópica de la miofibrilla subyace una estructura molecular de sus componentes. mioglobina y citocromos.Para que se realicen los movimientos de una célula (pseudópodos) o de un organismo (contracción muscular) se requiere de un mecanismo disparador del proceso (el Ca 2+ ). La línea Z es un material amorfo de a-actinina al cual se unen los filamentos delgados y la línea M es un ensanchamiento de los filamentos gruesos formada por proteína M. Todos los músculos estriados del cuerpo están formados por gran número de fibras. ordenadas en paralelo. cardiaco y liso. la banda oscura.39). en cambio. Al corte transversal. lo cual habla de una síntesis proteica muscular poco activa.

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se acorta la sarcómera. La característica de este ciclo bioquímico de contracción es que la actina posee poca afinidad por el complejo miosina-ATP (fibra-relajada). es la proteína más abundante del músculo esquelético (55% de la proteína muscular). inhibe la interacción actina-miosina y también la actividad ATPasa. un modelo molecular de la fibrilla muscular.peso de la proteína muicular. La actividad ATPasa se incrementa 100 a 200 veces por la adición de actina-F. 3.41). en efecto. La meromiosina ligera contiene la porción fibrosa y no muestra actividad ATPasa ni se une a la actina-F. La miosina está compuesta por dos cadenas pesadas entrelazadas helicoidalmente con una cabeza globular en cada extremo. la cual se prolimeriza. al hidrolizarse el ATP. se produce la contracción por la elevada afinidad de la actina por el complejo miosina-ADP (fibra contraída). La fibra de actomiosina preparada por Engelhardt. la troponina es exclusiva del músculo estriado. . no de filamentos. La meromiosina pesada posee la porción globular y parte de la porción fibrosa. 3. La forma globular monomérica es la actina-G.42). 3. Bases moleculares de la contracción muscular La contracción muscular se inicia con la llegada del impulso nervioso y con ello la acetilcolina que despolariza la membrana muscular y se alcanza el potencial crítico o de acción que se propaga por el sarcolema. descubierta por Bailey. La otra proteína ligada a la actina es la troponina. esto justificó el considerar que una fibra de actomiosina preparada es. lo cual le da un aspecto característico (fig. la energía producida por hidrólisis de ATP se usa para que se produzca la unión-desunión de actina y miosina. Mientras que la tropomiosina existe en todos los músculos. Actomiosina. Además.40). es una molécula en forma de varilla o bastón que se encuentra asociada con filamentos de actina. Al acortarse la zona H. El componente fundamental del filamento grueso es la miosina descubierta por Kuhne. la miofibrilla y el músculo completo. La energía que aporta fuerza para la contracción muscular es la hidrólisis del ATP (ver capítulo Bioenergética). Al entrar el Ca 2 + al sarcoplasma. conserva la actividad ATPasa y se une a la actina-F. la troponina-I. La porción globular de la miosina tiene actividad ATPasa y se combina con la actina. posee un comportamiento óptico de doble refracción análogo a la fibra muscular intacta. la troponina-T. En ausencia de calcio la interacción actinamiosina está inhibida por la troponina-I y el músculo está en reposo. La tropomiosina. en presencia de Mg 2 + para formar un filamento de doble hélice. En términos simples. En conjunto. insoluble. La troponina consta de tres subunidades diferentes: la troponina-C. sino de la zona H (fig. Constituye el 2. proteína fijadora de calcio. Hace ya más de 30 años que Szent-Gyórgyi mezcló en un tubo de ensayo actina con miosina y observó la formación de un complejo actomiosina que aumentó la viscosidad de la solución.5% de las proteínas musculares. cada cabeza globular está asociada a dos cadenas ligeras. interviene en el ensamble de las subunidades C e I al complejo actina-tropomiosina (fig. relajado. Ninguna de las dos formas (G o F) muestra actividad catalítica. se produce un deslizamiento de filamentos de actina sobre los de miosina y con ello un acortamiento. se une a la troponina-C y se produce un cambio conformacional que afecta a las otras subunidades de troponina y a la tropomiosina que se desplaza de su lugar y permite interaccionar a las cabezas globulares de la miosina con las moléculas de actina. Cuando la miosina es digerida con tripsina. Esta despolarización provoca aumento de permeabilidad al Ca 2+ . llamado actina-F. se forman 2 fragmentos denominados meromiosinas.

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hacia afuera de la célula por una C 1+-M | + -ATPasa. .La relajación de músculo tiene lugar con el cese del impulso nervioso y el retorno del sarcolema a su estado polarizado original lo cual se logra por bombeo de Na+ hacia afuera y de K+ hacia dentro de la célula por me- dio de una Na+-K+-ATPasa. En esta fase de relajación interviene también el ATP para bombear Ca2+. contra un gradiente de concentración.

.dinitrofenil derivados. hoy. nales. La fluorescamina reacciona con los aminoácidos a temperatura ambiente dando un producto fluorescente.El grupo carboxilo puede ser químicamente descarboxilado para dar la correspondiente amina. Reacciones del grupo a -amino puede medirse con un espectrofluorímetro.2. ya que na con la ninhidrina en caliente para dar un permite detectar cantidades de nanogramos compuesto púrpura intenso (excepto la de un aminoácido o 10-10 a 10"11 moles. Este es un reactivo aún más sensible (10 a El grupo amino de los aminoácidos reaccio.13. Los a -aminoáciEl color obtenido con la ninhidrina es la dos en presencia del reactivo dan lugar a los base de una prueba colorimétrica que permi. prolina que da un derivado amarillo) que La reacción con dinitrofluoro benceno absorbe al máximo la luz con longitud de (reactivo de Sanger) fue muy utilizada hace onda de 570 nm (el amarillo de la prolina a años para identificar aminoácidos N-termi440 nm).100 veces mayor que la ninhidrina). casi en desuso. cuya concentración 5. te detectar cantidades del orden de 1 microgramo ó 3 * 10~9 moles de un aminoácido.

Clasificación Entre las diferentes clasificaciones estructurales de los aminoácidos.0 dando un producto.3. en cuanto a su polaridad. Los aminoácidos se denominan en forma sistemática o trivial. El reactivo de Pauly da un color rojo con el imidazol de la histidina y el fenol de la tirosina. quizá la más extendida es la que los agrupa según las propiedades fisicoquímicas de su cadena lateral. El reactivo de Ellman (ácido ditiobis-nitrobenzoico) reacciona con el tiol de la cadena lateral de la cisterna a pH 8.13.1. que absorbe intensamente a 412 nm. Reacciones de la cadena lateral Un buen número de reacciones químicas pueden ser utilizadas para cuantificar cadenas laterales específicas en una solución de aminoácidos libres o proteínas desnaturalizada.3. en particular. 3. El reactivo de Ehlrich es un ensayo colorimétrico para el grupo indol del triptófano.4. fruto del material donde se aislaron por primera vez (asparagina . La reacción de Sakaguchi se utiliza para cuantificar espectrofotométricamente el grupo guanidino de la arginina. La más extendida es la denominación trivial o común. el ácido tionitrobenzoico.

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