ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

3.1. AMINOÁCIDOS COMO CONSTITUYENTES DE LAS PROTEÍNAS Las células vivas producen gran variedad de macromoléculas como son las proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos, entre otros. Estas macromoléculas son biopolímeros constituidos por unidades monoméricas o estructurales. Para los ácidos nucleicos, las unidades estructurales son los nucleótidos; para los polisacáridos son los monosacáridos.

En virtud de que las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones esenciales en los organismos, las cuales describiremos más adelante, es evidente que para conocer tanto el funcionamiento normal como patológico de un organismo se requiere un conocimiento claro de la estructura y propiedades de las proteínas. Aunque muchas proteínas contienen otras sustancias, además de los aminoácidos, la estructura y muchas de sus propiedades biológicas están determinadas por las clases de aminoácidos presentes y el orden en el que están dispuestos en la cadena polipeptídica. Es asombroso que en una célula existan millares de proteínas con estructura y fun-

ción diferentes, pero resulta aún más sorprendente que todas ellas estén integradas por sólo 20 aminoácidos comunes. Los aminoácidos comunes son aquéllos para los que existe un codón específico en el código genético del DNA (ver el capítulo Ácidos nucleicos). Los aminoácidos derivados son generados después de su incorporación a la molécula proteínica. Además de ser las unidades estructurales de las proteínas, los aminoácidos tienen otras funciones importantes como la transmisión de impulsos en el sistema nervioso, como material energético, y otros. 3.1.1. Estructura general

Desde el descubrimiento del primer aminoácido, asparagina, en 1806, habrían de pasar más de 130 años para que le llegara el turno a la treonina, con la que se cerró la lista de los 20 aminoácidos. Un aminoácido es un compuesto que contiene dos grupos funcionales: un grupo amino y uno carboxüo. Ambos grupos están unidos al mismo átomo de carbono, designado carbono a. Al carbono a de cada aminoácido también está unido un átomo de hidrógeno y

Tabla 3.2.
del espárrago, alanina de alantoides) o de alguna propiedad característica (glicina por su sabor dulce). De la denominación trivial ha surgido una abreviatura de tres letras que, dadas las técnicas modernas de secuenciación, han obligado la anotación de los aminoácidos por una sola letra mayúscula (tabla 3.1.). Los aminoácidos presentes en las proteínas pueden clasificarse en dos grandes grupos dependiendo de la polaridad relativa de sus grupos R (tabla 3.2). Clasificación de los L-a-aminoácidos presentes en las proteínas con base a las polaridades relativas de sus grupos R. Un grupo no polar es aquel que tiene poca o ninguna diferencia de carga de una región a otra, en tanto que un grupo polar tiene una diferencia de carga relativamente grande en diferentes regiones.

3.1.4.1. Aminoácidos con grupo R no polar Los aminoácidos más hidrofóbicos (no polares) son la fenilalanina, leucina, isoleucina, valina, alanina, metionina y triptofano.

La mayoría de las cadenas laterales de los ca, lejos del agua de solvatación de la superaminoácidos más hidrofóbicos están orien- ficie. tadas hacia el interior de la molécula protei-

el más pequeño de los aminoácidos. treonina.43. Aminoácidos con grupo R polar con carga negativa En esta categoría se encuentran los ácidos aspártico y glutámico. Las cadenas laterales de los aminoácidos polares sin carga se encuentran en proporciones significativas tanto en el interior como en la interfase de la proteína con el disolvente.4. Aminoácidos con grupo R polar con carga positiva Los aminoácidos que pertenecen a este grupo son la lisina. los aminoácidos polares glutamina y asparagina y los que tie- . Aminoácidos con grupo R polar sin carga A este grupo pertenecen aminoácidos cuya cadena lateral tiene naturaleza polar (hidrofi'licá) como son la serina.1.2. arginina e histidina. puede encajar en regiones de la estructura tridimensional de las proteínas inaccesibles para otros aminoácidos. 3. 3. Realmente la prolina es un iminoácido que tiene consecuencias estructurales importantes para las proteínas como veremos más adelante. cisteína.1. La glicina.4.En la prolina el grupo R es único ya que incorpora el grupo amino en la cadena lateral. Por el contrario. 3.4.1. asparagina. glutamina y tirosina.

como base o como ácido catalítico. La DOPA (dihidroxifenilalanina) es un aminoácido neurotransmisor. aspartato y metionina. neurotransmisores y otras.1.1. precursor de la melanina y se encuentra en la vía metabólica biosintética de las aminas neurotransmisoras: d o p a m i n a . Existen aminoácidos que no forman parte de las proteínas pero que realizan importantes funciones en el metabolismo intermediario. tienen un papel clave en la estabilización de la conformación proteínica a través de enlaces salinos. Los grupos R con carga de los aminoácidos básicos y acídicos. Ya se ha mencionado el lugar importante de la histidina en la catálisis enzimática en virtud de la carga de su grupo imidazol que le permite funcionar. o bien. .5. a pH 7.5. Además. junto con la citrulina. Aminoácidos no proteínicos 3. 3.nen grupos cargados a pH 7. funcionan en sistemas enzimáticos que requieren de transmisión de cargas. glutamato y aspartato se hallan predominantemente en la superficie de las proteínas globulares donde la carga se encuentra estabilizada por el disolvente acuoso. histidina. La colocación poco usual de una cadena lateral cargada en el interior de una proteína globular se correlaciona con un papel estructural o funcional esencial. como hormonas. Ejemplos de importancia La omitiría funciona como intermediario en el metabolismo de la treonina. arginina.0 como Usina.0. es un intermediario en la biosíntesis de la urea.1. a d r e n a l i n a y noradrenalina.

una proteína es un polipéptido complejo. los átomos de carbono del etano giran libremente teniendo como eje el enlace sencillo. Dada la resonancia del grupo carbonilo (-C-).2. 3.1.8) 3. es decir. Definición El grupo a -carboxilo de un aminoácido (RO puede unirse covalentemente al grupo a amino de otro aminoácido (R2) eliminando una enlace peptídico tiene naturaleza de doble enlace parcial. el II o El ácido gama-aminobutírico (GABA) es un neurotransmisor derivado del glutamato. Estructura del etano Si recordamos la estructura del etano (un enlace C-C) y del etileno (doble enlace C=C) veremos que en el primer caso. 3. Este enlace determina la fuerza de unión primaria de una proteína. ENLACE PEPTÍDICO La reacción más importante de los aminoácidos es el enlace peptídico. el doble enlace del etileno representa una estructura rígida que impide la libre rotación. .3. su estructuración corresponde a una polimerización de aminoácidos.2.2.2.2. Formación El enlace peptídico posee una serie de interesantes características estructurales. en cambio. H2N-CH2-CH2-CH2-COOH GABA 3.molécula de agua y formando un tipo de enlace amida conocido como enlace peptídico (fig-3.

presentan poca variabilidad en sus valores. 33. En la figura 3. 3. Clasificación Por convención. las estructuras peptídicas se describen a partir del residuo amino terminal (grupo-NH2 libre).1.2. En un polipéptido.4 Estructura coplanar El enlace peptídico con la característica de ser un doble enlace parcial. que se coloca a la izquierda. Rotación del enlace Así como en el enlace peptídico no puede haber rotación. sí puede haberla en torno a los enlaces C-N y C-C determinando ángulos de conformación (y y <fr) que. los enlaces peptídicos presentan una alternancia que determina una secuencia en zig-zag (fig.10). Un péptido consta de dos o más residuos de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. PÉPTIDOS 3.3. . 3.3.5.2.10 se muestra un tripéptido en el que hay que hacer notar que es aquel formado con tres residuos. determina una estructura rígida entre carbono y nitrógeno y por lo tanto es un enlace coplanar. Esto trae como consecuencia que.2. en un péptido. en las proteínas naturales. los carbonos a de aminoácidos cercanos están en situación trans respecto al enlace peptídico. Los aminoácidos constituyentes se denominan residuos de aminoácidos. no con tres enlaces peptídicos. y termina con el residuo carboxilo 3.3. Definición Cuando los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos se combinan para formar un polipéptido.

se requiere para la actividad de varias enzimas y participa en el transporte de aminoácidos. Los antibióticos polipeptídicos a menudo contienen D y L-aminoácidos y otros no presentes en proteínas. Estos polipétidos no son sintetizados en los ribosomas. Este tripéptido lleva a cabo funciones oxidorreductoras por su grupo sulfhídrilo (-SH).11). En todos los seres vivos se han aislado péptidos de interés biológico. La repetición de este proceso secuencial genera un polipéptido con una secuencia de aminoácidos específica ( R r R2-R3-R4. Rp).3. 3. puede utilizarse la abreviatura de tres letras (o incluso de una sola) para designar el péptido. o bien. Aunque existen discrepancias en la literatura. la tirocidina y gramicidina S. Tir-Gli-Gli-Fen-Met Encefalina (Metionina) Arg-Pro-Lis-Pro-Gln-FenFen-Gli-Leu-Met Sustancia P. Representación de estructuras 3. polipéptido de 20 a 50 residuos y proteína a las que superan esta cifra. La oxitocina y vasopresina son polipétidos cíclicos. el término oligopéptido se reserva para moléculas con 2 a 20 residuos. como ocurre con la gran mayoría de los péptidos.. por ejemplo. Un grupo importante es el de los péptidos cerebrales con actividad de neurotransmisores. En nuestro ejemplo (fig. Péptidos de importancia biológica Las estructuras polipeptídicas pueden representarse colocando el aminoácido inicial (el del extremo amino terminal) y a partir de éste colocar en zig-zag los residuos en el orden secuencial correspondiente (fig. En cambio. Uno de los más sencillos es el tripéptido glutatión (y-glutamil-cisteinil-glicina). en el cual el glutamo inicial está unido a la cisteína por medio del carboxilo gama (y) en lugar del alfa ( a ).Gli .11) se podría escribir: Ala Ser .3. . que contienen D-fenilalanina y ornitina.Tre. 3.terminal (grupo -COOH libre) que se coloca a la derecha. es poco práctico usar las fórmulas estructurales convencionales.3.. Como los polipétidos pueden contener un número de residuos muy elevado. como la sustancia P (decapéptido) o los analgésicos opiáceos como las endorfinas y encefalinas. A-S-G-T-.4. 3.

1. De hecho. en particular en bioquímica clínica (tabla 3. vitaminas.4. Otras proteínas actúan como hormonas. casi siempre están asociadas otras moléculas llamadas grupo prostético. Sin embargo. Algunas participan en los mecanismos contráctiles como la miosina y actina. la mayor parte de las reacciones químicas celulares son catalizadas por enzimas. dentro de las cuales se encuentran la insulina. Basada en su solubilidad Un sistema de clasificación basado en la solubilidad todavía está en uso. una proteína compleja contiene. Basada en la forma Otra clasificación se basa en la forma (relación entre longitud y amplitud) y en ésta se consideran Xas proteínas globulares. Una proteína simple es aquélla que contiene sólo aminoácidos. lípidos.000 y 10. que se responsabilizan en gran parte de las funciones metabólicas y de la morfología de los seres vivos. Importancia biomédica el caso de los receptores hormonales situados en la membrana celular o en el citosol. Así. otras moléculas diferentes como el hemo (de la hemoglobina). "primoridaT. 3.2. ejemplos de este grupo son la hemoglobina y mioglobina. en todas las proteínas. PROTEÍNAS 3. la hormona liberadora de tirotropina y otras. Arbitrariamente. como es . No en vano el término proteína deriva del griego proteos que significa "primero".2. Todas las proteínas son polipéptidos de peso molecular elevado.).4. casi todas ellas de naturaleza proteica. 3. 3.4. solubles en agua. En realidad. la más importante es la función catalítica.3. estas moléculas son tan importantes que merecen un capítulo especial dentro de la bioquímica.4.4.000. la elastina y la queratina.3. Así pues. Dentro de las proteínas estructurales se encuentran el colágeno. Otras tienen una función de reconocimiento. albúmina y Las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones que pueden agruparse en dos clases: dinámicas y estructurales.Otros polipéptidos importantes son las hormonas colecistocinina y gastrina.4. se subdividieron en seudoglobulinas (solubles al agua) y euglobulinas (insolubles en agua exenta de sales). no se puede hacer una distinción entre albúminas y globulinas únicamente en base a sus solubilidades en agua o en soluciones salinas.3. carbohidratos o elementos minerales (metaloenzimas). En esto se basa la clasificación propuesta en la tabla 3. se ha establecido como línea divisoria entre polipétidos y proteínas un peso molecular de 8.4. además. 3. Durante mucho tiempo se dividieron en simples y conjugadas. 3. Clasificación En la actualidad no existe un sistema de clasificación de las proteínas universalmente aceptado. Las proteínas también pueden funcionar con un papel protector como las inmunoglobulinas y el interferón. de forma esférica.1. Otra función dinámica de las proteínas es el transporte. como se ha señalado antes. la insulina y glucagón.3. Sin embargo en esta clasificación. las proteínas son quizá las macromoléculas más versátiles. De las funciones dinámicas. aun las más simples. Definición Las proteínas constituyen sin duda uno de los grupos de moléculas de gran trascendencia en los seres vivos.

4.Albúminas Globulinas Solubles en agua y en soluciones salinas. etc.4. nos indica que tal variabilidad depende de la combinación casi infinita de aminoácidos en cada una de las proteínas existentes en un ser vivo. Ricas en arginina Histonas Solubles en soluciones salinas Escleroproteínas Insolubles en agua o en soluciones salinas. protectoras (inmunoglobulinas). Sin aminoácidos distintivos Escasamente solubles en agua pero solubles en soluciones salinas. baja solubilidad en agua. La diversidad de formas y funciones proteicas que existen en una sola célula. de transporte. 3. Diversidad Hemos mencionado el papel tan relevante y versátil de las proteínas con sus múltiples funciones. miosina. Basada en sus funciones Las proteínas se pueden clasificar de acuerdo a sus funciones en proteínas estructurales.43. Ricas en glicina. ¿Qué determina tal variabilidad? En los siguientes subcapítulos hablaremos de los niveles de organización de la es- . 3. dentro de las cuales tenemos la queratina.3. resistentes a la tracción. formadas a partir de 20 aminoácidos. colágeno y fibrina. Las proteínas fibrosas. (tabla 3. catalíticas ( e n z i m a s ) . Sin aminoácidos distintivos Protaminas Solubles en etanol a 70-80% pero insolubles en agua y en alcohol etilíco absoluto. son de forma alargada.5). alanina y prolina globulinas plasmáticas y numerosas enzimas. Genes y proteínas. reguladoras. Importancia biológica de las proteínas.

.

3.1 no puede existir a ningún pH. constituyendo un ion dipolar o switterion (en alemán. 3. Si los otros tres grupos se ordenan de mayor a menor prioridad en el sentido de las manecillas del reloj. El pK del grupo amino es 9. los cuatro grupos unidos al carbono a de los aminoácidos son diferentes.1). donde los grupos unidos a un orden basado en el número atómico: SH>OH>NH2>CDOH>CH3>H. ion híbrido).1. ambos grupos están cargados (fig. Los aminoácidos tienen carácter anfótero. para la cual R-H. 3. 3. dentro de los límites fisiológicos del pH. Por tanto. La dificultad surgida de intentar denominar familias de isómeros ópticos con dos o más centros asimétricos ha dado lugar al establecimiento de un método más general de desig¿ nación estereoquímica. al describir la química de los aminoácidos. 3. En todos los casos el grupo H se encuentra debajo del plano. Formas iónicas de los aminoácidos Los grupos amino y carboxilo de un aminoácido pueden ionizarse.una cadena lateral. aquella forma en la que la carga positiva es igual a la carga negativa (carga neta . por comportarse como ácidos o bases debido a sus grupos ionizables.2. En la configuración absoluta. Dado que los aminoácidos de las proteínas son asimétricos. como en el D-gliceraldehído (fig. que existen como ion dipolar.1.1. En los aminoácidos neutros. el sistema RS. el grupo H y el grupo -NH2» en el carbono a están dirigidos hacia el lector. utilizando la proyección de Fisher.2 2. Esta orientación tetraédrica con cuatro grupos diferentes alrededor del carbono a confiere actividad óptica (capacidad de rotar el plano de luz polarizada) a los aminoácidos. Su enantiómero óptico. el COOH está dirigido hacia arriba y atrás del plano de la página.3. 3. con el grupo a-amino hacia la derecha tiene la configuración absoluta denominada D.4).1. es decir. el grupo R de la cadena lateral se dirige hacia abajo y atrás del mismo plano. designada R que es diferente para cada uno de los 20 aminoácidos comunes excepto para la glicina (fig. pero es posible usarlo por conveniencia. el centro asimétrico es R (RECTUS en latín) y S (sinisterenel opuesto) (ver fig. si por convención el grupo examino está proyectado hacia la izquierda. En las proteínas de mamífero sólo se encuentran L-a-aminoácidos. 3.2).1.8 y el del grupo carboxilo es 2. el aminoácido tiene la configuración absoluta. Cabe aclarar que la estructura sin carga de un aminoácido indicada en la fig.). las proteínas también tienen propiedades asimétricas. Asimetría. Estereoisomería Con excepción de la glicina.2. Propiedades generales 3.

El ejemplo clásico es el de la hemoglobina S (HbS) que tiene la sexta posición de la cadena P ocupada por valina en lugar de glutámico como la hemoglobina normal (HbAí).4. quizá adelantando un poco. La máxima estabilidad de la hélice está determinada por puentes de hidrógeno que se establecen entre el grupo carbonilo (C-0) de un enlace peptídico y el amino (N-H) presente cuatro residuos más adelante en la cadena (fig.2. la insulina. Niveles estructurales de una proteína* 3. ¿qué determina ese ordenamiento? Aquí debemos detenernos y. Esta estructura fue propuesta inicialmente por Pauling y Corey. la gran diversidad de estructuras y funciones proteicas. Es decir. La fuerza estabilizadora de esta estructura es el enlace covalente (peptídico). el DNA. La información genética contenida en cada célula o individuo se expresa a través de una proteína.5. con una elevada hemolisis y obstrucción de capilares por los eritrocitos anormales.000 proteínas. Los individuos que tienen este defecto padecen anemia de células falciformes. muy frecuentemente de una enzima. El primer nivel. por ende. se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica. hablar de ese factor particular en cada célula u organismo que determina ese ordenamiento y. gracias a los méto- dos automáticos en el análisis de aminoácidos introducidos por Moore y Stein en 1964. bioquímicamente. 3. su única conformación posible. ya familiar desdé la descripción de los péptidos. además de la secuencia de aminoácidos. las proteínas vienen a ser las ejecutoras de las ordenes dictadas por los genes. se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica. Sobre esto se tratará más ampliamente en el capítulo de ácidos nucleicos. en virtud de la estructura coplanar del enlace peptídico y los ángulos de rotación § y vy que regularmente toman valores de 132 y 123° respectivamente.4.1.5. Sin embargo. 3. quien en 1953 fue el primero en estudiar y determinar la estructura primaria de una proteína. Ahora se conoce la secuencia completa de más de 2. . Ese elemento dictador de la secuencia polipeptídica es la unidad transmisora de los caracteres hereditarios. En este tipo de estructura secundaria. que utilizan la técnica de degradación de Edman. el gene o gen. En esta estructura se incluye. La determinación de la estructura primaria de una proteína es actualmente una técnica accesible a la mayor parte de los laboratorios de bioquímica. la cadena polipeptídica se pliega adoptando una forma helicoidal con giro a la derecha que contiene 3.5.tructura proteica. 3. cada proteína posee un ordenamiento o secuencia de aminoácidos bien definido per o . . la localización de los puentes disulfuro (cistina). E s t r u c t u r a primaria La estructura primaria. En este sentido.6 residuos de aminoácidos por vuelta. fuera la fibrosa.4. El analizador automático de aminoácidos (secuenciador) está cediendo lugar actualmente a sistemas basados en métodos cromatográficos de alta eficacia.12). y los métodos secuenciales del gen que codifica a la proteína en estudio. o estructura primaria. . La importancia de la estructura primaria es tal que una variación en un solo aminoácido de una cadena polipeptídica puede determinar una falta letal en la proteína completa. surge una estructura particularmente estable que es la a-hélice. Esto ha sido posible gracias a los esfuerzos de Sanger. Estructura secundaria Si una proteína estuviera constituida por sólo una disposición polipeptídica lineal.

porque no puede ocurrir rotación del enlace N-C. además. sus interacciones desestabilizan la estructura helicoidal. Pauling y Corey también propusieron otra estructura secundaria que es la estructura P (P porque fue una segunda estructura.Figura 3. Otro aminoácido que tiende a desestabilizar la a-hélice es la glicina. ya que el anillo pirrolidina de su cadena lateral interacciona estéricamente con la cadena lateral del aminoácido precedente y. isoleucina). La conformación p está formada por dos o más cadenas polipep- . Representación de un polipéptido en conformación de a-hélice En la conformación de a-hélice las cadenas laterales R se proyectan en forma perpendicular al eje de la hélice y hacia el exterior de la estructura en espiral generada por la cadena peptídica. La presencia de prolina entre dos cadenas en a-hélice produce una acodadura de la dirección general de la molécula. por tener un grupo R muy pequeño. Si estos grupos R están próximos y tienen carga del mismo signo o están ramificados (valina. lo cual es de gran importancia en la configuración general de una proteína. Otro factor que rompe la conformación a-helicoidal es la presencia de prolina. siendo la a-hélice la primera).12.

En términos de su función biológica. El mejor ejemplo estudiado es la hemoglobina que es una proteína tetramérica (fig.5. entre grupos carboxilato. 3. por ejemplo.3.15).5. la más frecuente en las proteínas naturales. Las estructuras terciarias de las proteínas permiten agruparlas en familias y subfamilias. como se ilustra en la fig. Cuando una proteína oligomérica contiene dos o cuatro monómeros o subunidades se denomina dímero o tetrámero. la sustancia amiloide que se deposita en condiciones patológicas. Estructura cuaternaria Cuando una proteína se compone de más de una cadena polipeptídica. como los grupos aromáticos de la fenilalanina o los no aromáticos de alanina e isoleucina. Los tipos de enlaces que estabilizan la estructura terciaria son: a) atracción electros- tática de tipo salino entre un grupo carboxilato (-COO .tídicas que pueden ser paralelas (en el mismo sentido) o antiparalelas (en direcciones opuestas) y se estabilizan también por puentes de hidrógeno (fig.13). d) fuerzas de Van der Waals. . c) interacción de cadenas polares. 3. El estudio de la estructura terciaria ha sido posible gracias a la cristalografía de rayos X desarrollada por la escuela de Bragg en Cambridge y a la labor pionera de Kendrew sobre la mioglobina y de Perutz sobre la hemoglobina. proteínas fibrosas de forma alargada y proteínas globulares de forma esferoidal. Las proteínas que poseen este grado de organización estructurai se denominan oligoméricas y las cadenas polipeptídicas individuales que la integran se denominan monómeros. e) puentes disulfuro. etc.4. que se establecen entre los grupos sulfhidrilo (-SH) de la cisteína para dar el enlace covalente disulfuro (-S-S-) entre cadenas vecinas (fig. 3. Finalmente. etc.) y un grupo amino (-NH3+) de residuos glutamato o aspartato con Usina o arginina. existe un superplegamiento de la proteína que da lugar a una estructura compacta.4. además del plegamiento secundario. 3. hidroximetilos de la serina. Es la que se conoce como estructura terciaria de las proteínas. respectivamente.16). la fibroma de la seda. Se trata de un arreglo tridimensional que forma diversos repliegues específicos. En tanto que la hélice es una cadena polipeptídica enrollada. Estructura terciaria Existen razones sobradas para pensar que gran parte de las proteínas tienden a adoptar forma esférica. cuando los residuos son idénticos como dos metilos de la alanina. b) puentes de hidrógeno. estas estructuras laminares se dan en las proteínas fibrosas como la queratina del pelo y la piel. En general. las regiones de enrollamiento aleatorio son de igual importancia que las de a-hélice o tira plegada. es un depósito de proteína en forma de tira plegada. globular. sino que son conformaciones enrolladas al azar. pueden existir algunas regiones de las proteínas que no son a-hélice ni tira plegada. 3. la tira plegada p está extendida y se dispone a la manera de un acordeón con los grupos R proyectados por encima y por debajo de los planos generados por las cadenas polipeptídicas. oxhidrilo (-OH) o los propios grupos carbonilo (-C=0) de las uniones peptídicas. La estabilidad es mayor en la conformación antiparalela. El resultado de las distintas uniones descritas es una estructura terciaria de gran estabilidad. dentro de la estructura secundaria. incluso más que la a-hélice. se dice que posee estructura cuaternaria.14. Es común que en numerosas proteínas ocurran simultáneamente ambas estructuras. protómeros o subunidades. Esto sólo puede ocurrir si suponemos que. la a-hélice y la hoja plegada p. 3.4.

Conformación p de una proteína con disposición paralela (a) antiparalela (b).Figura 3.13. .

Figura 3. 4 unión de disulfuro. 2 puentes de hidrógeno. Figura 3. convalente. y 5. 3 interacción dipolo-dipolo entre dos serinas. entre treonina y serina. Representación esquemática del plegamiento de la cadena principal de la ribonucleasa bovina. 1. . entre dos cisternas.14. Tipo de uniones que estabilizan el plegamiento de las proteínas. interacción hidrofóbica entre leucina e isoleucina. Otras porciones constituyen un enrollamiento al azar. interacción electrostática.15. La región de a-hélice está encerrada en un óvalo y la región p está sombreada.

Esquema de la disposición de cuatro subunidades de una molécula de hemoglobina. .16.Figura 3. Estructura cuaternaria de ias proteínas. formada por dos cadenas a en la parte inferior de la figura y dos cadenas p en la parte superior.

a las cuales se les conoce como complejos multier>zimáticos o estructuras supramoleculares. En proteínas cuya estructura tridimensional está determinada por enlaces disulfuro.5. 5 . La existencia de enlaces disulfuro en una proteína aumenta su resistencia a la desnaturalización. L Desnaturalización La alteración de una proteína que modifique su conformación nativa se denomina desnaturalización. En una proteína se produce la desnaturalización al perder su estructura secundaria. la ot-quimotripsina contiene tres cadenas polipeptídicas unidas por enlaces disulfuro y no se considera estructura cuaternaria. La enzima aspartato transcarbamilasa tiene una estructura cuaternaria formada por 12 subunidades.1. 3. La mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica y no posee estructura cuaternaria. por tanto. no es necesario postular un control genético independiente para los niveles de estructuración superiores al nivel primario. Otros ejemplos incluyen la sintetasa de ácidos grasos. Otros agentes físicos (radiaciones.Los enlaces que mantienen la estructura cuaternaria son del mismo tipo que los que mantienen la estructura terciaria. tensoactividad. Agentes desnaturalizantes Todos aquellos agentes capaces de romper o alterar los enlaces que mantienen las estructuras de orden superior de una proteína pueden desnaturalizarla. detergentes) capaces de alterar las interacciones débiles pueden llegar a desnaturalizar las proteínas. Por ejemplo. 3. De este modo.1. Debido a que las con- . puesto que la estructura primaria determina la secundaria. Por lo tanto. pueden ser desnaturalizadas por agentes reductores como el mercaptoetanol 3 .17). 3. terciaria y (cuando está presente) la cuaternaria. Las estructuras secundaria y terciaria de una proteína están determinadas por la estructura primaria. urea. la hemoglobina contiene 4 subunidades unidas no covalentemente y. En estos sistemas. la respuesta puede estar afectada por la presencia de efectores (inhibidores o activadores) que modulan la acción primaria de la proteína (ver capítulo de Enzimas). particularmente en los sistemas llamados alostéricos. pH extremo o presencia de solventes orgánicos que debilitan las interacciones no covalentes. tiene estructura cuaternaria. terciaria y cuaternaria. el plegamiento puede ser alterado por condiciones como alta temperatura. es decir la proteína altamente ordenada queda reducida a un polimero estadístico formado por una cadena de aminoácidos (fig. Sin embargo. Un agente desnaturalizante muy común es el calor. En el estado desnaturalizado los niveles de estructuración superior de la conformación nativa se encuentran al azar. formaciones nativas de la mayor parte de las proteínas están estabilizadas sólo por enlaces no covalentes. RELACIÓN ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIÓN La actividad biológica de una proteína depende del ordenamiento tridimensional apropiado de sus grupos funcionales. la piruvato deshidrogenasa. esto tiene aplicación cotidiana en el laboratorio de bioquímica. altas presiones) o químicos (ácidos. conservándose la primaria (covalente).5. este cambio provoca la consiguiente alteración o desaparición de sus funciones. álcalis. La estructura cuaternaria está íntimamente ligada a las propiedades reguladoras de las proteínas. las proteínas sólo funcionan cuando están plegadas en su estructura original o conformación nativa. excepto enlaces covalentes.

Los receptores membranales de reconocimiento de las hormonas. que representan el primer sitio de acción hormonal. Clásico ejemplo de reconocimiento es la unión de sustancias llamadas antígenos con su anticuerpo específico.o el ditiotreitol. Ese sitio de reconocimiento se debe a la presencia en la proteína de una estructura complementaria a la de la molécula (llámese sustrato. El anticuerpo es una molécula proteínica especial perteneciente al grupo de las inmunoglobulinas. Una consecuencia de la desnaturalización es la pérdida drástica de solubilidad. Siendo la conformación de la molécula proteínica la base principal de su función.2. son también proteínas de reconocimiento. velocidad de difusión y facilidad con que cristalizan. el grupo hemo. Para explicar el fenómeno de la especificidad. efector. En otros casos la desnaturalización es irreversible. antígeno. Complementarte dad y capacidad de reconocimiento Existen proteínas capaces de reconocer determinado tipo de moléculas que serán objeto de su actividad. debido a que la proteína tiene un hueco molecular con la forma precisa para el hemo y dado que las cadenas laterales de los aminoácidos en contacto con el anillo son no polares. receptor membranal) reconocer a la molécula en cuestión y asociarse con ella en forma específica. Como regla general. anticuerpo. de ellas nos ocuparemos más adelante. al desnaturalizarse la proteína. grupo prostético).5. Por ejemplo. Otro ejemplo es el de la globina que se une específicamente a su grupo prostético. que permite a la proteína (sea enzima. hormona. se altera su actividad fisiológica. 3. Emil Fisher propuso en 1894 una analogía similar a la que existe entre llave y cerradura. las globulinas plasmáticas desnaturalizadas pierden sus funciones de anticuerpos. Otras alteraciones incluyen disminución de la viscosidad. un sitio fijador (de reconocimiento) en una proteína se ajusta al . En ocasiones esta alteración es reversible cuando se elimina el agente agresivo. En las proteínas donde más se ha ejemplificado el fenómeno de la especificidad de reconocimiento molecular es entre las enzimas y su sustrato.

Sin embargo.1. La gota del compuesto (generalmente un aminoácido o un péptido) se "revela" como una mancha en el papel. MÉTODOS DE SEPARACIÓN Y ANÁLISIS 3. Bajo condiciones estrictamente controladas el Rf es una constante importante para propósitos de identificación. La cromatografía bidimensional es una variante de considerable poder de separación. el soporte utilizado es sílica gel o celulosa colocadas en una hoja de vidrio o plástico en forma de capas muy finas.compuesto que se va a unir en forma. El material usado como revelador es usualmente la ninhidrina mencionada antes.20). La relación de la distancia recorrida por el compuesto entre la distancia que recorre el frente del solvente desde el sitio de aplicación se conoce como valor Rf (relación de frentes) del compuesto. se describe la cromatografía de . quien en 1906 efectuó la separación de mezclas de pigmentos vegetales en un tubo conteniendo material adsorb e n t e s ó l i d o f i n a m e n t e d i v i d i d o . ya que se emplean dos diferentes solventes aplicados secuencialmente para desplazar un solo compuesto (fig. La cromatografía en papel. la ocupación de este otro sitio determina una inhibición o una activación de la reacción. El método descrito es cromatografía unidimensional. además del sitio activo (para el sustrato). gotas de la sustancia a separar cerca del punto donde partirá el desplazamiento de la fase orgánica (fig.18). A continuación se describirán técnicas para la separación e identificación de proteínas. otro sitio de reconocimiento para moléculas llamadas efectores alostéricos. pero aprovechando las cargas residuales de las proteínas como carácter diferencial.6. Desarrollada en 1944 por Martin en Inglaterra.6. aplicando gotas de colorantes en papel y notando la separación en diferentes colores.3. ha revolucionado la se- paración y detección de productos de reacción y la determinación e identificación de compuestos. 3. En este proceso. La separación cromatográfica se basa en el coeficiente de partición líquido-líquido de los compuestos. 3. La cromatografía en capa fina utiliza el mismo principio de la cromatografía en papel (cromatografía de adsorción). O2 en el caso de la hemoglobina) y el efector (inhibidor o activador) que ejerce el control alostérico. mecanismo conocido como alostérico. tamaño y polaridad.19). el crédito del descubrimiento de'la cromatografía se le dá al botánico Tswett. la separación cromatográfica es muy rápida (fig. En un proceso alostérico debe haber en la proteína centros separados de fijación para el sustrato (por ejemplo. Cromatografía Las experiencias en cromatografía se remontan a 1850. Las dos primeras técnicas descritas se utilizan generalmente para separar e identificar aminoácidos o péptidos pequeños. Un mecanismo alostérico es un proceso común en moléculas proteicas en el que la asociación del sustrato está influenciada por la fijación de otras moléculas que no son sustratos directos de la proteína. También utilizando una separación en columna. 3. consiste en colocar en tiras de papel como soporte de una fase estacionaria acuosa mientras una fase móvil orgánica se desplaza en la tira. como todas las técnicas simples. 3. cuando Runge describió un método para el análisis de mezclas de colorantes. Alosterismo En algunas enzimas y en la hemoglobina se encuentra.5. 3.

Figura 3.18 Cromatografía en papel.

intercambio iónico. Las resinas de intercambio iónico para preparar la columna cromatográfica, se preparan a partir de materiales insolubles (agarosa, poliacrilamina, celulosa, etc.) que contienen ligandos cargados negativamente (R-CH3-COO--SO5) o ligandos cargados positivamente (dietilamino) unidos a la resina insoluole.

Las resinas cargadas negativamente fijan cationes conociéndose como resinas de intercambio catiónico. Igualmente, las resinas cargadas positivamente fijan aniones y se denominan resinas de intercambio aniónico. El grado de retención o retardo de una proteína (o aminoácido) por una resina dependerá del número de cargas (positivas o negativas) de la proteína al pH del experimento (revisar pl de una proteína). Aquellas moléculas proteicas con la misma carga que la resina se eliminarán primero, seguidas por proteínas de carga opuesta, que por atracción de cargas, se retendrán más tiempo en la columna. Cuando es difícil eliminar una molécula fuertemente atraída por la resina, se utilizan cambios de pH o fuerza iónica para debilitar la interacción. Los derivados de celulosa como carboximetil celulosa (CMC) y dietilaminoetil celu-

cero), no se desplazan ni hacia el cátodo ni hacia el ánodo en un campo eléctrico. El punto isoeléctrico (pl) de un aminoácido se define como el pH en el cual no tiene carga eléctrica neta; en el caso de los aminoácidos con sólo un grupo amino y uno carboxilo corresponde a la siguiente ecuación: pl = | ( P K 1+ pK2) Si consideramos la curva de titulación de un aminoácido sencillo como la glicina, su equilibrio de ionización corresponde a: A pH de 1 la forma iónica predominante tiene una carga de +1 (forma catiónica) y se desplazará hacia el cátodo en un campo eléctrico. La adición de base hasta alcanzar la forma de zwitterión, corresponde al punto isoeléctrico (pl=5.97).

La adición de base a la forma dipolar de la glicina, completa la titulación del grupo NH 3, el pH de la solución es superior a 11.5 y la especie predominante tiene una carga formal de -1 (forma aniónica). Como puede verse en la fíg. 3.5, la glicina y otros aminoácidos con cadena lateral no ionizable y valores de pKi próximos a 2.5 y de pK2 próximos a 9.5, pueden actuar como amortiguadores en dos zonas de pH, donde ninguna les permite actuar como amortiguadores al pH fisiológico del plasma. Precisamente, el pH de 7.4 es un valor cercano al pl de dichos aminoácidos, y éste es el punto de menor solubilidad de aminoácidos y proteínas. Un caso más complejo lo constituyen los aminoácidos con un grupo ionizable en su cadena lateral. Tal es el caso del ácido glutámico y del aspártico que poseen un grupo

losa (DEAE) se han utilizado con éxito en la purificación de proteínas. En la cromatografía líquida de alta resolución, la mezcla de proteínas a separar e

identificar se pasa a través de una columna empaquetada con pequeñas esferas de resina insoluble. Como en esta técnica la resina está tan densamente empaquetada se requiere

500. grupos prostéticos. 3.21). pero insolubles. como en la cromatografía de intercambio iónico. o con residuos hidrofóbicos con lo que las moléculas no polares se retrasarán al paso por la resina. el sephadex G-25 excluye compuestos de peso molecular de 3. Filtración en gel La separación de proteínas de diferente tamaño haciéndolas pasar a través de una columna empaquetada con un gel poroso en forma de pequeñas esferas insoluoles se denomina filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular.6. por lo que tendrán que desplazarse por espacios sinuosos y viajar más a través de la columna.de bombeo a elevada presión para forzar el paso de la proteína. sephadex G-50 para PM de 8-10. En consecuencia. una mez- cla de proteínas se separa en función del tamaño saliendo primero las proteínas más grandes y a continuación las más pequeñas. Las esferas de resina pueden cubrirse con grupos cargados. una corriente eléctrica a tra- . Estos compuestos de alta afinidad se pueden unir en forma covalente a una resina insoluble y utilizarse para purificar una proteína mediante cromatografía en columna.3. La cromatografía de afinidad se basa en la alta afinidad que tienen las proteínas por sus sustratos.500-4. El nombre comercial de este gel es sephadex.21 Filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular en columna El bioquímico tiene para elegir varios tipos de sephadex para preparar columnas. Así. La electroforesis de proteínas se ha llevado a cabo de acuerdo al principio desarrollado por el sueco Tiselius en 1937. 3. Figura 3. al no poder penetrar por el retículo del gel. que las proteínas grandes. Según esta técnica. las cuales. Electroforesis El movimiento de una partícula cargada en un campo eléctrico externo. que al colocarlas en agua se hinchan para formar un gel insoluble. son excluidas por motivos estéticos. 3. En esta técnica la columna es metálica y no de vidrio como la cromatografía a presión normal. se hace pasar durante un cierto tiempo. Los geles de sephadex G-100 y G-200 se utilizan para separar proteínas de alto peso molecular. El polisacárido dextrana es tratado químicamente para que se formen enlaces cruzados que den un retículo o malla por la cual pueden pasar moléculas pequeñas.6. receptores de membrana. Esta sustancia queda como pequeñas esferas hidrofílicas.2.000 y sephadex G-75 para 40-50. las cuales se retardan por tener que viajar por el retículo del gel (fig. separando moléculas grandes de las pequeñas.000 de PM. Las proteínas pequeñas pueden penetrar por los poros del gel. Las esferas pueden ser porosas y actuar con el mismo principio de la cromatografía de exclusión molecular. inhibidores no covalentes específicos y anticuerpos específicos. hacia el electrodo de carga opuesta se denomina electroforesis.

La primera combina la separación electroforética con la especificidad de las reacciones inmunológicas. En ésta.7. la constituyen 4 subunidades. 3. 3. PROTEÍNAS DE IMPORTANCIA MÉDICA En esta sección. Hemoglobina y mioglobina- Las hemoglobinas son proteínas globulares. el más reciente gel de poliacrilamida. cada pico representa la separación entre la molécula proteica y el amortiguador (fig.M. HbAí.272» la hemoglobina de las células falciformes (HbS) es ct2£2 y la hemoglobina menor del adulto (HbA2) es a252. 3. hemoglobina y mioglobina. El grado de migración depende de las cargas de la proteínas. Es especialmente útil para separar proteínas y otras sustancias antigénicas con carga. La proteína globina desde el punto de vista de su estructura cuaternaria es un tetrámero. Una proteína cargada se desplazará a través del gradiente de pH en el campo eléctrico hasta que alcance una región de pH en el gradiente igual al valor de su pl. y de la forma. La luz refractada nos da un patrón de picos. 1. que fijan oxígeno en los pulmones y lo transportan por la sangre hacia los tejidos. particularmente las proteínas plasmáticas (fig. Una modificación altamente simplificada de la técnica electroforética de Tiselius es la llamada eléctroforesis de zona. En la forma más común de hemoglobina humana adulta. se estudiarán algunas proteínas con importantes funciones biomédicas. del P.24). como ejemplo de proteínas cuya estructura y función es esencial estudiar para una correcta comprensión de sus procesos bioquímicos normales y de su mal funcionamiento en las enfermedades. cada una de ellas formada por cadenas polipeptídicas con dos estructuras primarias diferentes y cada subunidad con su grupo hemo. y y 6 . almidón. las proteínas plasmáticas. Variantes más desarrolladas de la eléctroforesis simple son la inmunoelectroforesis y el isoelectroenfoque. pH y conductividad. actúan como transporte de CO2 y de iones hidrógeno.La hemoglobina fetal (HbF) es 0. 3. El aparato de Tiselius se utilizó para determinar el punto isoeléctrico y la movilidad electroforética de las proteínas. proteínas estructurales como el colágeno y proteínas contráctiles como la tropomiosina. La medida de la concentración de cada proteína separada se hace por revelado y lectura en un densitómetro. la fórmula tetramérica de la HbAí es 0 ^ 2 .Se conoce la secuencia completa de aminoácidos de las cadenas a(141 aminoácidos) y de las cadenas p . la separación electroforética se realiza sobre un soporte inerte como papel. Se han escogido las proteínas de transporte. agar. las diferentes proteínas migran hacia el electrodo de carga opuesta. El sitio donde se concentra la proteína en el tubo puede ser determinado por un proceso óptico. 3. presentes en los glóbulos rojos. es decir. Así. El isoelectroenfoque ofrece una resolución sumamente elevada. Durante la electroforesis. La hemoglobina (Hb) está formada por la proteína globina (una histona) y el grupo prostético hemo.7.23). En esta técnica se utilizan mezclas de anfolitos formados por ácidos poliamino-policarboxílicos con un intervalo de pl definido para establecer un gradiente de pH a través del campo eléctrico aplicado.vés de un tubo en U (un electrodo en cada extremo) lleno con una proteína disuelta en un amortiguador con la misma fuerza iónica.22). las dos subunidades de una clase se denominan cadenas a y los otros dos monómeros de la misma clase se designan como cadenas p. al volver a los pulmones desde los capilares. acetato de celulosa y. proteínas protectoras como las inmunoglobulinas. En este punto la proteína se mantiene estacionaria en el campo eléctrico y puede visualizarse o eliminarse de la columna (fig.

.

.

El átomo de hierro. 3. En las cadenas polipeptídicas con 02 ligado. es de aproximadamente 67.26). Su concentración en la sangre humana es de 16 g por 100 mi. El quinto enlace de coordinación del átomo ferroso de los hemos es con el nitrógeno imidazólico de una histidina {histidina proximal de la apoproteína). un tetrapirrol cíclico. 3. dos vinilos y cuatro metilos como cadenas laterales unidos a los grupos pirrólicos (fig. A diferencia de la hemoglobina.000. la mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica (monómero) y un solo centro de fijación de 02 (hemo).25). tanto en la hemoglobina como en la mioglobina. esta molécula .(146) aminoácidos). El tipo de porfirina de la hemoglobina y la mioglobina corresponde a la protoporfirina IX con dos propionilos. La hemoglobina fue la primera proteína analizada por difracción de rayos X. La mioglobina (Mb) es una proteína que almacena 02 en el tejido muscular rojo. patrón característico de las proteínas globulares. El grupo prostético hemo es una molécula de porfirina. que contiene un átomo de hierro en su centro. incluyendo el grupo hemo. se encuentra en estado ferroso (Fe2*). identificada como una molécula casi esférica con un diámetro de 5.000.5 nm (fig. La cadena polipeptídica consta de 153 aminoácidos y tiene un PM de 17. Su distribución especial es el de una superficie polar y el interior no polar. El PM de la hemoglobina. El polipéptido P de la Hb es muy semejante a la mioglobina.

las 4 subunidades se disponen en un arreglo espacial tetraédrico preciso.Figura 3. El hemo se sitúa dentro de un espacio hidrofóbico en cada una de las subunidades de globina. Esta combinación se lleva a cabo sin alterar la valencia del hierro que sigue como ferroso. en realidad fija ocho átomos de oxígeno por tetrámero (dos por cada subunidad). forma un sexto enlace coordinado con el Fe 2+ y el segundo imidazol de una histidina distal de la globina. Cinética de oxigenación de hemoglobina y mioglobina La hemoglobina se combina con el oxígeno y se transforma en oxihemoglobina (Hb0 2 ). con las cadenas en contacto con las P. los grupos hemo se localizan en la periferia. De esta manera.25 Estructura cuaternaria de la hemoglobina. es .

de afinidad más baja por el oxígeno. Las dos formas son de conformación desoxi. la p 0 2 del tejido muscular puede disminuir hasta 5 mm Hg. 3. Bajo condiciones de escasez de oxígeno (como en el ejercicio intenso). En la unidad II. en la proteína existe un sitio de fijación para el sustrato y otro para el efector alostérico (positivo o negativo). T y R se emplean también para describir las estructuras cuaternarias de las enzimas alostéricas.27). El efecto Bohr puede encajar en la definición de un mecanismo alostérico. tiende a liberar su oxígeno y representa un aumento de oxigenación en tejidos metabólicamente activos. 3. la forma T es más acida. Normalmente se forma menos del 1 % de MHb. Esto se debe a que una vez fijado el primer átomo de 0 2 facilita la unión del siguiente. donde el estado T tiene afinidad menor por el sustrato. sobre equilibrio ácido base. la mioglobina cede con facilidad su oxígeno para apoyar la síntesis oxidativa de ATP en las mitocondrias musculares. es decir. pero puede producirse un exceso si se ingieren sulfonamidas. la conformación pasa del estado T al R ("relajado"). Por tanto. nitritos. A esta presión. al fijarse el oxígeno a las subunidades. La curva de saturación de oxígeno con hemoglobina es sigmoidea. La constante de afinidad del 0 2 es mayor en el estado R que en el estado T (fig. Así. fenacetina u otros oxidantes. llamada "tensa" o estado conformacional T. no es una oxidación sino una oxigenación.decir.28). El efecto Bohr. 3. según el cual. En cambio. lo que indica que la mioglobina tiene mayor afinidad por el 0 2 que la hemoglobina y es una molécula inadecuada como transportadora de 0 2 pero eficaz para almacenarlo. Las células con metabolismo rápido y con requerimientos elevados de 0 2 . cuando la Hb oxigenada se encuentra a pH bajo (ácido) y C 0 2 alto. la mioglobina muestra una curva de saturación de oxígeno de tipo hiperbólica (fig. la hemoglobina muestra una cinética cooperativa de fijación. la cooperatividad desaparece y la curva de saturación de oxígeno adquiere forma hiperbólica. por lo tanto. si el tetrámero se disgrega en monómeros. La reducción de la afinidad oxígeno-hemoglobina en un pH bajo se denomina efecto Bohr (fig. el hierro pasa de ferroso a férrico (Fe 2+ —• Fe 3+ ) y se denomina metahemoglobina (MHb). producen ácido carbónico y ácido láctico que incrementan la concen- . La cooperatividad positiva de la hemoglobina depende de la integridad de la estructura cuaternaria. Al ocupar su sitio el ion H. en estas condiciones no transporta oxígeno. La fijación del efector en el sitio alostérico influye sobre la conformación del sitio del sustrato (sitio activo). tiene consecuencias fisiológicas importantes.29). Los datos de cristalografía con rayos X indican que la hemoglobina tiene dos estructuras cuaternarias. ya habíamos señalado la influencia del oxígeno sobre el pKa de la hemoglobina: H H b + 4 0 2 — Hb(0 2 ) 4 +H + . desplaza a la Hb a la forma T. Cuando la hemoglobina se oxida químicamente. En la hemoglobina el sitio activo es ocupado por el oxígeno y el sitio alostérico es ocupado por el hidrogenión.

ya que su elevada afinidad por el oxígeno la haría ceder menos O2 a los tejidos. Por lo tanto. el cual es un efector alostérico de la hemoglobina cuando ésta se encuentra en la forma T. un incremento de hidrogeniones provoca liberación de oxígeno. la estabiliza. el pH sube. los protones son liberados de la hemoglobina favoreciendo la forma R y la captación de oxígeno. La mioglobina no presenta efecto Bohr. Después del parto. 3-difosfoglicerato (2.3-DPG de los eritrocitos hace que la hemoglobina ceda una porción mayor de su oxígeno a los tejidos.3-DPG el cual se une a la forma T de Hb. La hemoglobina fetal (HbF) tiene mayor afinidad por el oxígeno que la adulta (Hb A) lo que le permite extraer O2 de la HbA de la sangre placentaria.tración de H+ en la célula. . y reduce su afinidad por el oxígeno. Cuando la liberación de oxígeno está alterada como en el ascenso a grandes alturas o en la enfermedad pulmonar crónica. una disminución de O2 hace que se acumule el 2. la HbF es inadecuada. Dado que el H+ fuerza alostéricamente hacia la conformación T de la hemoglobina. disminuye la afinidad C>2-Hb y se disocia una mayor cantidad de O2 hacia los tejidos. En los tejidos periféricos. el eritrocito aumenta la producción de 2. En los pulmones. en tanto que un incremento en el oxígeno causa la liberación de hidrogeniones. En resumen. un aumento en el contenido de 2.3-DPG). la concentración de H+ disminuye.

Para desplazar el CO de la Hb-CO en las personas intoxicadas con este gas se requiere el uso de la oxigenoterapia hiperbárica (O2 puro a 3 o más atmósferas de presión) para forzar la expulsión del monóxido de carbono. La hipoxia producida conduce a policitemia. En virtud de la mayor afinidad de la hemoglobina por el CO (210 veces). Aproximadamente el 15% del CO2 es transportado como carbodioxihemoglobina o carbaminohemoglobina (HbCO2). los H+ se liberan y se unen al HCO3 para formar H2CO3. Esta zona. El CO2 forma radicales carbamilados reversiblemente con los extremos amino de las cadenas polipeptídicas de hemoglobina cuando ésta cede su O2. la hemoglobina facilita el transporte de CO2 de los tejidos a los pulmones. esta enfermedad hereditaria se conoce también como anemia de células falciformes. Así. el trastorno se conoce como una hemoglobinopatía. tiene una zona complementaria en la forma oxigenada de la HbA. cuando esto ocurre. Muchas de las imitantes pueden ser asignadas a una de las cuatro clases siguientes: Hemoglobina M. Los individuos homocígotos (genotipo S/S) presentan anemia pero los heterocigotos (genotipo A/S) tienen el rasgo . En consecuencia se presenta metahemoglobinemia. Los eritrocitos deformados se denominan células falciformes (forma de hoz) y su lisis al pasar por las sinuosidades esplénicas produce anemia. Además de transportar el oxígeno de los pulmones a los tejidos. La unión de zonas complementarias y adherentes hace que la HbS desoxigenada se polimerice y forme precipitados fibrosos largos que distorsionan mecánica y físicamente al eritrocito. que se presenta en la HbS desoxigenada. el grupo hemo funciona con Fe2+ pero pequeñas cantidades se oxidan a férrico (Fe3+)y se transforma en metahemoglobina. los extremos tienen carga negativa y pueden formar enlaces iónicos que estabilizan la estructura cuaternaria. En las variantes de hemoglobina M. En estas mutantes se favorece la forma R. Hemoglobina S (hemoglobina falciforme). la afinidad por el oxígeno está disminuida y puede faltar el efecto Bohr. férrica. los residuos His proximal y distal son reemplazados por Tir la cual estabiliza el Fe en forma oxidada. al cambiar un aminoácido polar (Glu) por uno no polar (Val) se genera en la superficie de la cadena p una zona adherente. Hb-NH2+C02 -* Hb-NH-COO-+H+ Cuando están carbamilados. La sustitución de un solo aminoácido de la cadena P (Glu por Val) produce una hemoglobina que. Hemoglobinas humanas mulantes Las mutaciones en los genes que codifican las cadenas a y P pueden afectar la función transportadora de la hemoglobina. Por tanto. por tanto. La interacción del CO2 con la hemoglobina afecta también la transición del estado T al R. Hemoglobinas mutantes con afinidad mayor de lo normal por el oxígeno. la fijación del CO a la Hb excede con mucho a la del oxígeno. a tensiones iguales de O2 y CO. En los pulmones el proceso descrito se invierte y conforme el oxígeno se une a la hemoglobina. causando lisís. no cederá suficiente oxígeno a los tejidos.La hemoglobina se combina con el monóxido de carbono (CO) para formar carboxihemoglobina. la fijación del O2 obliga a la expulsión del CO2 de acuerdo al efecto de Bohr que ya revisamos. Las proteínas mutantes no muestran cooperatividad en la fijación del oxígeno ni efecto Bohr. Los H+ son captados por la Hb que actúa como amortiguadora. La carboxihemoglobina (HbC0) tiene un color rojo brillante característico. Hemos mencionado que en la hemoglobina normal.

muy próximo al pH fisiológico. Por ejemplo. 3.7. las formas iónicas posibles son las observadas en la fig. Precisamente. Obsérvese que la histidina con un pK R = 6.0. debido a esta proporción la enzima mostrará el 91% de su actividad potencial máxima.0. A pH 6.0 . la hemoglobina contiene una elevada proporción de histidina y posee así un alto poder amortiguador en los eritrocitos. una enzima puede requerir un imidazol de una histidina que es esencial en su forma básica para que exista actividad catalítica. este comportamiento excepcional de la histidina le confiere un papel único en las proteínas enzimáticas como activador fisiológico. A pH 7. la mitad de las enzimas estarán en forma básica (imidazol) activa y la mitad en forma acida (imidazolio) inactiva. el pH es una unidad (10 veces) por encima del pK del imidazolio y el cociente imidazol/imidazolio es 10:1.En el caso de la histidina. Por otro lado. . es el único aminoácido que puede actuar como amortiguador en los líquidos corporales.

la sustitución de un aminoácido denLas moléculas de anticuerpos (Ab) son tro del espacio para el hemo reduce la proteínas que pertenecen a las inmunogloafinidad de la subunidad con el grupo pros. trasplantes. virus.2. que son pequeñas regiones de la molécula de antígeno que inducen específicamente la producción de un anticuerpo. facili- . etc. En tura química distinta de los constituyentes consecuencia. La molécula de anticuerpo se asocia de forma no covalente con la sustancia extraña y la elimina del organisTalasemias mo.propios de ese organismo. no puede contener múltiples determinantes antige'nicos. que se desarrolla cinas. tantes.aunque en general no están anémicos. la ducción de la cadena complementaria que albúmina de cualquier mamífero. al unirse tipo humoral.gan. cen en una proporción de 1:1. las células normalmente estabiliza la conformación plasmáticas. la síntesis de las cadenas a-o no en un organismo debe poseer una estruclas p de la hemoglobina está disminuida. excepto la precipita intracelularmente y da lugar a la humana. esto proporciona cierta protec. derivadas de un linfocito B. se presenta aumento de pro. Un antígeno puede poseer decenas o migracias a los cuales el organismos distingue les de estos grupos determinantes.denominan antígenos (Ag).7. y su acción se ejerce a través de infectadas y al adquirir la forma semilunar los anticuerpos (inmunoglobulinas) que cé(de hoz) son eliminadas de la circulación. Cuando se introduce al organismo tético. Las sustancias que inducen la producción de anticuerpos en un organismo se Normalmente. que acen poblaciones expuestas endémicamente al túan directamente o bien a través de paludismo. debido a que las células los linfocitos B (de bursa o bolsa de Fabricio infectadas requieren más oxígeno que las no de las aves). 3. un determianticuerpos nante antigénico puede comprender sólo La inmunología estudia todos los fenóme. lulas derivadas de estos linfocitos B segreHemoglobinas inestables. cada uno de ellos capaz de recotos.ticuerpos. proteínica no puede unirse a la apoproteína. un tables y destruidas porque el hemo que polisacárido o un ácido nucleico. esto se la introduce parenteralmente. parási.30). En la respuesta humoral intervienen dentro del eritrocito. Las hemoglobinas mutantes son ines.seis o siete aminoácidos en total de la proteínos bioquímicos y fisiológicos de defensa na. hongos. En la respuesta celular inter. de tal lo propio (nuestros tejidos y células) de lo manera que inducirán múltiples tipos de anno propio (bacterias. Un antígeconduce a formas severas de anemia. Por ejemplo. En estas mu. capaz de destruir a las sustancias extrañas. solo o una molécula pequeña. Todas las acciones de respuesta a material En general.sustancias por ellas liberadas llamadas linfoción contra el parásito.bulinas. Estructura y función de los En las proteínas.) y es n o c e r y u n i r s e a c a d a u n o de los determinantes (fig. las cadenas a y p se produ. no determinan Esta respuesta puede ser de tipo celular y de la formación de anticuerpos pero.una sustancia extraña como una proteína. un determinante antigénico extraño se denominan respuesta inmune. por ejemplo. 3.covalentemente a moléculas grandes. El gene vienen células sanguíneas denominadas linpara la HbS manifiesta elevada incidencia focitos T (que maduran en el timo). producen anticuerpos. células tumorales. es antigénica para el hombre cuando destrucción prematura del eritrocito. En estas enPara que una sustancia actúe como antígefermedades.

ANTICUERPOS (Igs) Figura 3. de péptidos sintéticos o el 2.Cada anticuerpo se une al determinante antigénico frente al que se ha formado. lúe- .30 Esquema de un antigeno. Al tiempo que un hapteno requiere la unión a una molécula grande para producir anticuerpos. se les denominó anticuerpos. por ejemplo. que puede ser una proteína y donde se muestran distintos e hipotéticos determinantes antigénicos y cómo a ellos se pueden unir diferentes anticuerpos de manera especifica. una vez separado de su portador. Estas poseen la función de sintetizar y secretar inmunoglobulinas a las cuales en un principio. Al estimularse los linfocitos B con un antígeno se induce una serie de cambios que los hace transformarse en células plasmáticas. DNP-glicina. tan la génesis de anticuerpos dirigidos específicamente contra la molécula pequeña. A estas moléculas pequeñas se les conoce como haptenos. el hapteno conserva su capacidad de unirse al anticuerpo. 4-dinitrofenol. Es el caso. etc.

homogéneos. la proteína de Bence-Jones. nas pesadas.000). al descubrirse la electroforesis.puentes disulfuro (fig. se le denominó inmunoglobulinas (Ig). nal de los anticuerpos. H (del inglés heavy).una "unidad básica" tetramérica construida pos contra un solo antígeno. 3.000) y sus cadenas litrolada de multitud de células provenientes geras contienen la mitad de aminoácidos de una sola célula productora de anticuerpos. munoglobulina más común. los anticuerpos producidos son idénticos. En la incontribuyeron a vencer el obstáculo.aminoácidos (PM 50.31). se les dio el nombre de gammaglobulinas.go. aunque es diferente Estructura de ¡nmunoglobulinas cuando se comparan entre sí las proteínas de La heterogeneidad de las inmunoglobulinas diferentes enfermos de mieloma. por su bajo PM. cada cadena H está . En la estructura tridimensioTodas las células del tumor son idénticas. L (del inglés alta de una proteína presente en la orina de light). aparecen fácilmente en la orina. al conocerse con precisión su estructura y función en 1965. Sin embargo. La proteína de Bence-Jones es homogénea para cada individuo con mieloma. constituyen una clona (células provenientes de una misma estirpe) y por tanto. (PM 25. la IgG. Al aislar anticuer. El conocimiento cada vez más avanzado cadenas son de bajo peso molecular y se les de ios mielomas y la cantidad anormalmente denomina cadenas ligeras. En realidad. fue durante años un serio obstáculo para esCada inmunoglobulina está formada por tudiarlas químicamente. su El mieloma múltiple es un tipo de cáncer cadena pesada tiene aproximadamente 440 en que se presenta la multiplicación descon. Dos de estas nas. y ver que emigraban en la fracción gamma. las proteínas de Bence-Jones son las cadenas ligeras de las inmunoglobulinas que. las de mayor PM se denominan cadeestos pacientes. se obtenía una por cuatro cadenas polipeptídicas unidas por pequeña cantidad de una mezcla de globuli.

por donde se deforma la molécula cuando se produce la unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ab). dentro de la región variable hay zonas hipervariables. con grupos de aminoácidos siempre distintos.asociada con una cadena L (fig. Las cadenas L constan de dos regiones de estructura primaria bien definidas y diferenciadas: una región de gran variabilidad en número y secuencia de aminoácidos. .32). La conformación que adopta la molécula completa es de una T o una Y. La porción central de las cadenas H es una zona (de unos 15 aminoácidos) de gran flexibilidad. llamada bisagra o gozne. determinados por cada antígeno particular. denominada región variable (V). 3.

Estos son los sitios de combinación donde se realiza la unión de la inmunoglobulina con su antígeno. En las cadenas pesadas. La parte constante de las cadenas ligeras puede ser de dos tipos. IgM. Otra parte de las inmunoglobulinas muestra una composición fija en número y orden de aminoácidos que se denomina región constante (C). delta (5). mu. es la que produce la fijación de las proteínas del complemento y proporciona la región necesaria para que los anticuerpos crucen la membrana placentaria. Clases de inmunoglobulinas Las inmunoglobulinas pueden ser de las clases siguientes: IgG. Esta clase de Ig se encuentra en el plasma a elevadas concentraciones y es la que se forma en mayor cantidad durante la respuesta secundaria a antígenos extraños. (tabla 3. alfa. mu (ji).6). gamma (y). IgG. . IgA. delta y épsilon. en cierto modo comparables al sitio activo de una enzima. Las regiones constantes de las cadenas H son las que determinan la clase a la que pertenece el anticuerpo (ver más adelante). Los anticuerpos IgG pueden promover la fagocitosis y también activar el complemento. de ahí que existan dos tipos de cadenas ligeras: kappa (K) y lambda (X). Cada clase de inmunoglobulinas sólo contienen un tipo de cadenas pesadas pero pueden contener uno u otro tipo de cadena ligera. y épsilon (e). a los que se refie- ren las cinco clases diferentes de inmunoglobulinas. respectivamente. según posean las cadenas pesadas gamma. la parte constante determina cinco tipos: alfa (a). IgD e IgE.

Se encuentran principalmente en el plasma. El alto nivel de IgG en el feto se debe a que esta Ig atraviesa la placenta. leucotrienos y otras sustancias vasoactivas que producen vasodilatación periférica o broncoconstricción. las IgM pueden promover la fagocitosis de microorganismos por los macrófagos y leucocitos polimorfonucleares y son potentes activadores del complemento. Estos fragmentos se designan fragmentos Fab (antigen binding) y pueden fijar antígenos con una afinidad similar a la del anticuerpo completo. se unen por el extremo Fab. Fijación de antígeno por molécula de anticuerpo Las regiones variables de las cadenas L y H constituyen un centro de fijación de anticuerpo. Parece participar en la diferenciación de linfocitos B a células plasmáticas. Como tales. leche y calostro). 3. rinitis alérgica. nasal. (unidos estos por puentes disulfuro) de una estructura cova lente básica [(LH)2]5. con anterioridad a su entrada en el plasma. existen dos centros de fijación de antígeno por molécula de anticuerpo. El otro . Está presente en la superficie de los linfocitos del recién nacido. Debido a esa estructura pentamérica que determina 10 sitios de unión con el antígeno. La IgE posee la capacidad de unirse por su extremo Fe (ver adelante) a los mastocitos o células cebadas. como son asma bronquial. es la que permite a IgA e IgM salir a las secreciones biológicas. la IgM es un anticuerpo muy efectivo. bronquial. La IgM tanto en sangre como en otros líquidos se encuentra como tetrámero o pentámero. incluso el más grave de todos. La pieza de secreción es una glicoproteína que se sintetiza en células epiteliales de mucosas y glándulas exócrinas. ciertos casos de dermatitis. Se presentan habitualmente como un dímero de la estructura básica (LH2)2. enzima que divide la molécula en tres fragmentos (fig. Cuando los mismos antígenos que indujeron su formación vuelven a entrar.terminal de la cadena H y toda la cadena L. Las Ig de esta clase se encuentran principalmente en las secreciones extravasculares (secreciones mucosas. intestinal. Se han reconocido 4 subclases de IgG. IgE. Aunque presente en plasma en concentraciones bajísimas es la inmunoglobulina que determina las reacciones alérgicas y anafilácticas. IgA. el choque anafiláctico. y son los primeros anticuerpos que actúen contra un antígeno extraño (respuesta primaria). serotonina.000). Tanto a los dímeros de IgA como a los pentámeros de IgM se pueden unir dos péptidos adicionales que son la pieza de secreción y la cadena J. urinaria. lágrimas. cuando la madre Rh (-) produce anticuerpos anti Rh ( + ) contra el feto en la llamada enfermedad hemolítica del recién nacido.33). en determinadas circunstancias. estas inmunoglobulinas son la defensa inicial contra los antígenos virales y bacterianos invasores. Los anticuerpos como los presentes en la artritis reumatoide (anti IgG) son de esta clase. Dado que cada unidad básica de anticuerpo contiene dos pares de cadenas (LH)2. puede tener consecuencias nefastas para el feto. Se han identificado 2 subclases de IgM. esto puede acarrear la muerte del individuo por hipotensión e insuficiencia respiratoria. se producen cambios alostéricos y se liberan grandes cantidades de histamina. de ahí que esta Ig sea la de mayor PM (900. Al igual que las IgG.Tienen la propiedad de atravesar activamente las membranas biológicas. IgM. Esta característica ha podido ser estudiada tratando las Ig con papaína.Actúan en forma sinérgica con otras secreciones (lisozima y complemento) para destruir a ciertos microorganismos. IgD. Este hecho. urticaria. dos de los cuales son iguales entre sí y comprenden la porción NH 2 .

34). que contiene lo mismo que el suero y además fibrinógeno. los trasplantes y el cáncer. La fuerza de asociación entre Ag y Ab se debe a fuerzas no covalentes. basta mencionar la inmunidad a las infecciones.terminal de las cadenas H y no puede fijar antígeno. se deja coagular y se separa el coágulo. Esta propiedad favorece la aglutinación y precipitación clásicas de la reacción antígeno-anticuerpo (Fig. La valencia 2 que tiene cada molécula de Ab permite que cada Ab fije dos Ag diferentes. Es evidente que existen sobradas razones para hablar más extensamente de los fenómenos inmunológicos en medicina. por lo que se deduce que hay dos centros de fijación de . etc. el líquido resultante es el plasma. muchas no son estrictamente "plasmáticas" ya que se encuentran ahí sólo transitoriamente o experimentando parte de su catabolismo.). proteína involucrada en la formación del coágulo. En resumen. las reacciones de hipersensibilidad y alergia. si se impide la coagulación de la sangre y se separan las células. Por el contrario. Proteínas plasmáticas El plasma es el medio líquido de suspensión de los elementos sólidos de la sangre (eritrocitos. éste no contiene elementos figurados (células) ni fibrinógeno. plaquetas. la sangre sin elementos celulares es el plasma y el plasma sin fibrinógeno es el suero. leucocitos. es la mitad COOH. 3. Sin embargo.Ag por molécula de Ab) situados en los extremos amino-terminales de las cadenas H y L que comprende las secuencias variables de aminoácidos. fragmento conocido como Fe (cristalizable).3. Aunque en el plasma se encuentran más de 200 proteínas. Si se toma una muestra de sangre. escapa a los objetivos de este texto de bioquímica cubrir estos trascendentales aspectos que pueden consultarse en obras dedicadas a esas disciplinas.7. la autoinmunidad.33 Hidrólisis de la IgG en los fragmentos Fab y uno Fe por la enzima proteolítica papaina. El término proteínas plasmáticas se restringe a unas 50 moléculas que realmente llevan a cabo funciones Figura 3. el líquido remanente es el suero. 3.

7 se muestran las principales proteínas plasmáticas. la albúmina es responsable del 80% de la presión osmótica coloidal total deljílasma. F'realbúmina.Figura 3. se identificaron subgrupos de globulinas (a.000). Es una de las pocas proteínas del plasma que carecen de carbohidratos. Esta es una de las proteínas que une y transporta hormonas tiroideas. Como se podrá observar. etc. inmunitaria. Albúmina. la mayoría contiene un resto glucídico. específicas en el plasma: de transporte. sino también conjugadas.34 Unión de anticuerpo a antígenos en reacciones de precipitación (a) y en reacciones de aglutinación (b). En la tabla 3. ordenadas de acuerdo a su movilidad electroforética. Hasta hoy se han aislado puras unas 70 proteínas plasmáticas. La facilidad con la que pueden obtenerse muestras de sangre ha permitido que el estudio de sus constituyentes sea uno de los pilares más importantes del desarrollo de la bioquímica en general y. Es la más abundante (55%) y tiene un PM muy bajo (69. aunque también fija algunos fármacos como aspirina y barbitúricos. electroforesis e inmunoelectroforesis. como las glucoproteínas y lipoproteínas. A medida que las técnicas de fraccionamiento se hicieron más resolutivas. por lo tanto.3). permitió separarlas en diferentes componentes: albúmina^lobulinas^y fibrinógeno (ver subcapítulos 3. seguramente quedan muchas por descubrir y caracterizar. Las primeras técnicas de separación.6. nutritiva. en particular. reguladora del equilibrio hídrico y ácido base. Está compuesta por 610 aminoácidos en una sola cadena polipeptídica con 50% de a-hélice y 15% de estructura p. . p y y) que con las primeras técnicas migraban juntas. Se sintetiza exclusivamente en el hígado a razón de 20g al día y tiene una vida media de 10 días. Las proteínas plasmáticas son una mezcla muy heterogénea que comprende no solo proteínas simples. de la bioquímica clínica.

salicilatos. ácidos grasos.1).2. los neutrófilos pulmonares liberan elastasa de sus lisosomas. ok\-glucoproteína acida. responsable éste del bajo punto isoeléctrico (3. También se fija a la albúmina el triptófano.Además de contribuir a la presión osmótica coloidal. subcapítulo 2.) pero sobre todo sobre la elastasa de origen neutrófüo. Forma parte de otras proteínas antiproteásicas. barbitúricos.5) de la proteína. sobre todo ácido siálico.4 posee 17 cargas negativas que. Esta hipoalbuminemia repercute. aumentan la concentración plasmática de cationes y ocasiona indirectamente un aumento de presión osmótica. en ausencia . digitálicos. el más bajo de todas las plasmáticas. oligoelementos y algunos fármacos: cafeína. Su actividad antiproteasa es polivalente (tripsina. la albúmina actúa como molécula transportadora de bilirrubina. elastasa. Se sintetiza en el hígado y por su abundancia en plaquetas se le ha relacionado con la coagulación. fenilbutazona. por el efecto Gibbs-Donnan. ai-antitripsina. sobre todo. Su función nutritiva consiste en proveer de aminoácidos utilizables para la síntesis de proteínas del organismo. disminuye la síntesis de proteínas y se presenta hipoalbuminemia. Además. Según la teoría elastasaantielastasa del enfisema (destrucción de alveolos pulmonares y ensanchamiento de bronquiolos). En casos de desnutrición grave. colagenasa. ésta posee el 90% de la capacidad antiproteásica total del plasma. quimotripsina. Contiene un alto contenido en carbohidratos. antibióticos.2. la albúmina a pH 7. en las enfermedades renales y hepáticas que también se acompañan de hipoalbuminemia. hecho importante porque un incremento de su concentración libre repercute sobre el funcionamiento cerebral (por aumento de serotonina cerebral). etc. en la función coloidosmótica. se presenta edema tisular (ver unidad 2. etc.

Se denomina también globulina fijadora de corticosteroides. Da cuenta del 3% de la capacidad antiproteasa plasmática. pulmón embrionario. $2-Microglobulina. que transporta hierro. ^-Globulina ligadora de esteroides. parte de las lipoproteínas.7. Se une específicamente a los esteroides testosterona. la proteína C reactiva (que aumenta en procesos infecciosos y denominada así porque precipita al polisacárido C del neumococo).de al-antitripsina.2. que transporta cobre y parte de las lipoproteínas. plaquetas. En la primera fase participan sustancias vasconstrictoras locales cuya acción es lúe- . las células pulmonares son sensibles a la proteasa que destruye la elastina de las fibras y disminuye la elasticidad pulmonar. Otras proteínas de la fracción a-globulínica son la ceruloplasmina. etc. androstanolona y estradiol. Lipoproteínas plasmáticas. al-Macroglobulina. posee gran afinidad por los estrógenos. que es reutilizado por el hígado. Incorpora las dos terceras partes de las hormonas tiroideas circulantes. la segunda fase consiste en la formación de un trombo o coágulo blanco de plaquetas en el lugar del daño. la tercera fase es la formación de un coágulo sanguíneo insoluble o trombo rojo. Haptoglobina. Transcortina. Proteína ligadora de retinol. a\-Fetoglobulina. Sería interesante prevenir a fumadores potenciales con fenotipos predisponentes al efisema. la transferrina. En la fracción fi-globulínica se encuentran también la P1 -glucoproteína específica del embarazo. y las proteínas relacionadas con la coagulación. Es otra de las antiproteasas plasmáticas. células PMN y de cultivos de carcinoma mamario. La coagulación sanguínea es uno de los tres mecanismos que contribuyen al proceso fisiológico de la hemostasia. Se ha sugerido un papel protector de las mucosas. que por su importancia en el transporte de lípidos es más conveniente tratar en el capítulo correspondiente al metabolismo de estas sustancias. Su concentración aumenta en tumores digestivos. Inter-al-inhibidor de la tripsina. Es la proteína plasmática de mayor peso molecular. El primero de estos mecanismos es la constricción del vaso dañado con objeto de frenar la salida de sangre de la herida. Su papel es transportar la vitamina A. Su papel consiste en la fijación del grupo hemo con lo cual se impide su excreción urinaria y contribuye al ahorro de hierro. Su función es unirse irreversiblemente a la hemoglobina con lo que se excede el umbral renal de excreción. Hemopexina. Es sintetizada por las células linfoides. Llamada también a l fetoproteína. ocasionando insuficiencia respiratoria crónica. Contribuye a la enfermedad el humo de tabaco que inhibe a la antitripsina. Fracción y-globulínica. se logra así un ahorro de hierro y se protege al riñon del efecto nocivo de la hemoglobina libre. Aumenta en enfermedades malignas y en pacientes con riñones trasplantados. se une prácticamente a todas las endopeptidasas. a\-Antiquimotripsina. Está integrada por las inmuno globulinas que se trataron en el subcapítulo 3. Globulina fijadora de tirosina. Dentro de las proteínas plasmáticas se encuentra este grupo complejo de proteínas y lípidos unidos por fuerzas no covalentes. En líquido amniótico se ha encontrado elevada en embarazos que conllevan fetos anencefálicos. Es una proteína de membrana de linfocitos. Constituye el 25% de las proteínas plasmáticas. Factores de la coagulación Se define como hemostasia el cese de la hemorragia que sigue a la interrupción traumática de la integridad vascular. carcinoma hepático y tumor embrionario del testículo. dada su concentración en la secreción bronquial.

3. El grupo carboxilo de un aminoácido puede reaccionar con el grupo amino de otro para formar. En virtud de que el pH isoeléctrico de una proteína es difícil de calcular a partir de los valores de pK de sus aminoácidos constituyentes. los valores de pl de las proteínas se miden experimenta 1mente determinando el pH en el que la proteína no se mueve en un campo eléctrico.1. la proteína tendrá una carga neta negativa. en las proteínas la existencia de grupos ionizables dependerá de las cadenas R laterales de los aminoácidos. De esta manera.13. a un pH superior al pl. en el a-carboxilo y en los grupos activos de la cadena lateral R. 3. y el valor del pl característico de una proteína dependerá de las concentraciones relativas de los diferentes grupos ácidos y básicos. Reacciones del grupo a -carboxilo El grupo carboxilo a puede esterificarse con alcoholes o formar amidas en presencia de amoniaco. por medio de un enlace peptídico. La importancia del cálculo del pl de una proteína se tratará más adelante en este capítulo. A un pH inferior al pl la proteína tendrá una carga neta positiva. Al igual que con los aminoácidos. excepto en el aminoácido inicial y el terminal. No obstante que no es objetivo primordial de este texto revisar exhaustivamente el alto número de reacciones posibles. Reacciones químicas de los aminoácidos Los aminoácidos pueden presentar reacciones químicas a tres niveles: en el grupo a amino. se considerarán aquellas reacciones importantes de identificación de aminoácidos.Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos por un enlace particular (enlace peptídico) que bloquea los grupos ct-amino y a-carboxilo. 3.7. un dipéptido. .

debido a la presencia de sustancias que no están presentes normalmente en la sangre. La vía extrínseca es la que sigue a una lesión en respuesta al daño tisular.8). con otras sustancias de los tejidos que interaccionan con ella. con el factor Vlla (activado) plasmático. se puede llevar a cabo a través de dos vías {extrínseca e intrínseca) que convergen en una ruta final común que. por ejemplo. además. la cual cataliza la transformación de fibrinógeno (soluble) en el coágulo de fibrina (insoluble). Esta fase de la hemostasia se mide mediante el tiempo de sangrado. Las dos vías convergen en el camino común y finalmente se forma el coágulo.go amplificada por serotonina. La coagulación sanguínea o tercera fase. La tromboplastina tisular es una lipoproteína que se encuentra ampliamente distribuida en las membranas . y una potente sustancia vasoconstrictora derivada de prostaglandinas. La vía intrínseca se inicia a través del contacto de la sangre con una superficie distinta de los va- sos sanguíneos. Esta vía es sumamente rápida en respuesta al daño tisular. en conjunto con el ADP liberado del tejido colágeno. la protrombina se transforma en trombina. que culmina con la formación del trombo rojo de eritrocitos y fibrina. Vía extrínseca. una pared vascular anormal o un área de circulación sanguínea restringida. una nomenclatura para los mismos. adrenalina. cada factor se designa por un número romano de acuerdo al orden cronológico de su descubrimiento pero que no tiene relación con el orden en el cual actúa (tabla 3. al activar el factor X. El elevado número de factores plasmáticos de la coagulación ha obligado a establecer por parte de un Comité Internacional. el tromboxano A2 que. la tromboplastina. pues la sangre entra en contacto con una superficie ajena a los vasos y. en presencia de Ca 2+ . Se inicia con la liberación de un factor tisular. En ésta. que forma un complejo activo. contribuyen a la agregación plaquetaria para formar el tapón laxo de plaquetas que constituye la segunda fase. A causa de una herida se desencadenan ambos mecanismos.

por lo que su distribución es muy amplia. catalizado por el complejo Xa-Ca 2+ -Va-FL. En situación normal. el efecto de la antitrombina es potenciado varios cientos de veces por heparina. El sustrato principal del factor Xlla es el factor XI el cual es activado (Xla). El fibrinógeno pasa. la urocinasa serinproteasa sintetizada en el riñon y la estreptocinasa del estreptococo p-hemolítico. especialmente cerebro. al operar en un mecanismo de cascada. el activador ya no manifiesta actividad y la fibrinólisis cesa. El cofactor Va acelera el proceso unas 350 veces. las antiproteasas descritas anteriormente y. generan el factor Xa (activado). estimulan la activación del plasminógeno. VII. Así mismo. El proceso de disolución del coágulo a los pocos días de su formación. catalizada por el factor IXa. enzima que cataliza la transformación de prekalikreína (factor Fletcher) en kalikreína. llamado^fer/ndlisis. que ataca al factor XII y lo activa totalmente (Xlla). Se inicia con la fase de contacto en la cual se activa parcialmente el factor XII. de los residuos de glutamato a carboxiglutamato (Gla) en las regiones NH2-terminales de los factores II. El dicumarol. porque en ella intervienen un número mayor de factores que. La formación de la red de fibrina se inicia con el paso de protrombina a trombina. La activación del factor X constituye la etapa clave y vía común de la coagulación al estar regulada por las vías extrínseca e intrínseca. Vía intrínseca. antagonista de la vitamina K. La heparina se localiza en los granulos metacromáticos de las células cebadas que se localizan en la pared vascular. El valor global del complejo activador de protrombina es de 20. este último factor es activado previamente por trombina (fíg.000 veces. Las propiedades anticoagulantes de la estreptocinasa se utilizan a nivel terapéutico. se usa como anticoagulante en pacientes predispuestos a formar coágulos intravasculares. IX y X. Estas sustancias son principalmente la heparina.35). que es una serinproteasa capaz de digerir tanto al fibrinógeno como a la fibrina. estos monómeros se asocian y forman una fibra polimerizada conocida como coágulo blando cuyo paso a la estructura insoluble llamada coágulo duro o red de fibrina requiere la presencia del factor XHIa como catalizador. La acción del factor Xla constituye la última etapa del sistema intrínseco. para reducir el daño de una trombosis coronaria aguda. 3. enzima autocatalítica. El activador del plasminógeno es una serinproteasa tisular catalíticamente inactiva hasta que se expone a la fibrina. cuando la plasmina digiere a la fibrina. Glicoproteínas y proteoglicanos Las glicoproteínas y proteoglicanos son moléculas constituidas por proteínas a las cua- . Otros factores anticoagulantes de uso terapéutico incluyen a los cumarínicos. que se encuentra a una alta concentración en el plasma. a la forma de monómero de fibrina. 3. La activación del factor X.7. así. La velocidad de activación de la protrombina por el factor Xa aumenta 50 a 100 veces en presencia de fosfolípidos (FL) y Ca 2+ . Esta es una vía lenta. Existe interés terapéutico en este activador tisular del plasminógeno. pulmones y capas del endotelio vascular. es acelerada 500 veces por la presencia del factor VIII o factor antihemofílico.de los tejidos. los procesos de formación del coágulo están bloqueados por sustancias inhibidoras de la coagulación que aseguran la ausencia de trombos intravasculares.4. fundamentalmente. se inicia con la activación del plasminógeno plasmático a plasmina. su sustrato es el factor IX el cual se activa en dos etapas con participación de Ca 2+ . dependiente de vitamina K. El paso de fibrinógeno a fibrina se produce por la acción proteolítica de la trombina sobre el fibrinógeno. la antitrombina III. que inhiben la carboxilación.

a alteraciones de las glucoproteínas de la superficie de las células cancerosas. por lo menos en parte.les se han agregado cadenas de oligosacáridos unidos por covalencia. Muchos investigadores del cáncer piensan que el fenómeno de la metástasis se debe. son glucoproteínas. son glucoproteínas. excepto la albúmina. Muchas proteínas de membrana. Las glicoproteínas forman la mayor parte . Casi todas las proteínas plasmáticas. los grupos sanguíneos y algunas hormonas.

prolina (10. Además de anticoagulante. la heparina se une a la lipoproteinlipasa de la pared capilar y causa su liberación. es importante la unión entre la glicoproteína colágena y los proteoglicanos con sulfato y carboxilato (ver más adelante).12%).7. que se denomina tropocolágeno.5 Colágeno y proteínas contráctiles. cartílagos. cristalino. simplemente colágeno. con una glicina cada tercer aminoácido. El colágeno. La unidad molecular básica del colágeno en las fibrillas contiene tres cadenas polipeptídicas. en particular de la microbiología. es la que proporciona fuerza estructural y forma a todos los tejidos y órganos del cuerpo. principal proteína del tejido conectivo es la proteína más común en el mundo animal y más abundante del cuerpo humano. con múltiples cadenas de glicosaminoglicanos. En el aspecto estructural.9). La heparina es un proteoglicano en la que más de la mitad de las serinas se encuentran enlazadas con cadenas de polisacáridos. La gelatina. Por defectos hereditarios en la enzima lisosomal encargada de hidrolizar los glicosaminoglicanos presentes en los proteoglicanos. Los proteoglicanos son de mayor tamaño en comparación con la glucoproteínas. piel. Es una proteína insoluble en agua. Existen por lo menos 5 tipos distintos de colágeno en los tejidos por lo que se considera una familia de moléculas que comparten numerosas propiedades. La especificidad de las reacciones inmunológicas a las bacterias depende de los peptidoglicanos de su pared. Es de particular interés el estudio de estos compuestos en medicina. alanina (11 %) y los aminoácidos derivados hidroxiprolina (10%) y 5-hidroxilisina (10%). proteína de uso común. Predomina en el tejido conjuntivo o conectivo donde forma parte de los tendones. o según la terminología más reciente. La propiedad .000 a más de un millón. a las cuales se unen una o varias cadenas de oligosacáridos (menos de 15 azúcares) que contribuyen con 60%. rígida y muy resistente a la tensión. clasificadas dentro de los errores innatos del metabolismo. en virtud de que la pared bacteriana está construida por peptidoglicanos. se produce un grupo de enfermedades. (tabla 3. llamadas mucopolisacaridosis. Se denomina sustancia fundamental o basal a la estructura de carácter gelatinoso compuesta de fibrillas de colágeno incrustadas en un matriz de polisacáridos aminados y glicoproteínas. (ver unidad de carbohidratos). entre otras moléculas. Las bacterias gram positivas tienen una pared que contiene peptidoglicanos y ácido teicoico. su PM es de varios millones. Las glucoproteínas son proteínas con pesos moleculares que van de 15. etc. En la estructura del colágeno predomina la glicina (35%). cuya síntesis es bloqueada por penicilina. se obtiene como alimento desnaturalizando el colágeno por el calor. No posee triptófano ni cisterna. tienen 90-95% de carbohidratos. 3.del mucus secretado por las células epiteliales que permite la lubricación de los conductos del cuerpo.

en las hidroxilisinas.36). dientes y vasos sanguíneos. a-cetoglutarato. estructura enrollada de tres subunidades polipeptídicas unidas entre sí por puentes de hidrógeno.37) es necesaria para entender estas enfermedades. se debe a síntesis defectuosa de una de las cadenas del colágeno tipo I. La prolina determina su arreglo helicoidal y el pequeño tamaño de la glicina asegura la íntima unión de las tres cadenas que permite una estructura de superhélice (fig. se forma un colágeno con dificultad para formar fibras. fenómeno denominado con propiedad "suicidio proteico". Estas enzimas requieren oxígeno molecular. Este precursor pierde una secuencia guía de 100 aminoácidos (péptido señal) y se transforma en procolágeno. y se forman unidades de tropocolágeno que se ensambla espontáneamente en fibrillas de colágeno inmaduro. ocasionando fragilidad de los tejidos y la aparición de lesiones de la piel. Posteriormente. Las enfermedades hereditarias por defectos en la síntesis o el ensamble sirven muy bien para ilustrar las consecuencias de diferentes tipos de mutaciones. en este entrecruzamiento participan condensaciones aldólicas con el e-amino de la lisina que se desamina oxidativamente a un 6-aldehído (al-lisina) y forma bases de Schiff con otros e-NH 2 de lisinas o hidroxilisinas. En ausencia de ácido ascórbico. enfermedad que se debe a la ingestión del frijol Lathyrus. Osteogénesis imperfecta. se forman puentes disulfuro entre cadenas de procolágeno y se integra una triple hélice que sale de la célula. todas ellas características del escorbuto. los proteoglicanos y el colágeno son biológica y mecánicamente interdependientes. el procolágeno glicosilado alcanza el exterior. Después de este proceso intracelular. En el cartílago. huesos. Enfermedades del colágeno Las enfermedades del colágeno pueden resultar de defectos adquiridos o hereditarios. en está forma las hidroxilasas de prolina y lisina las transforma en hidroxiprolina e hidroxilisina respectivamente.más definida es la triple hélice. sobre todo. Después de la formación de triple hélice. con glucosa o galactosa. El resultado es la fibra de colágeno madura. En esta enfermedad se impide la formación normal de la triple hélice con la consiguiente degradación de todas las cadenas. Síndrome de Ehlers . estas fibrillas no tienen la fuerza tensora del colágeno maduro hasta que se forman enlaces covalentes en forma cruzada. hierro ferroso y. Síntesis de colágeno. Es el nombre que se da a un grupo de 4 enfermedades caracterizadas por múltiples fracturas (fragilidad ósea) que dan como resultado deformidades óseas. En el latirismo. donde se encuentran las cisternas. el procolágeno es glicosilado. responsables de los puentes disulfuro (-S-S-). no puede ocurrir una hidroxilación ulterior de los residuos de prolina y lisina. El colágeno maduro es una proteína extracelular pero su síntesis es de inicio intracelular bajo la forma de una molécula precursora llamada preprocolágeno. 3. Con este nombre se designa a un grupo de al menos 10 enfermedades que comparten entre todas ellas síntomas de debilidad estructural en el . La consideración de los pasos de biosíntesis del colágeno (fig. El cartílago es una matriz extracelular en la cual el colágeno contribuye a su fuerza tensora y los proteoglicanos son los causantes de su notable elasticidad. entre los primeros podemos ubicar al escorbuto y el latirismo. En una etapa posterior. Sin embargo. 3. ácido ascórbico. durante la adolescencia hay una gran demanda de vitamina C para este tipo de reacciones.Danlos. las enzimas extracelulares amino y carboxiproteasas remueven los propéptidos amino y carboxilo terminal. no pueden formarse con facilidad los enlaces covalentes y el colágeno se vuelve muy frágil.

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el síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV. desde el movimiento de cilios y flagelos hasta el más fino de la mano humana. . las características clínicas incluyen marcada hiperextensibilidad de la piel y las articulaciones. Se caracteriza porque el cabello toma aspecto rizado. Se ha identificado el colágeno tipo I como el posible factor donde reside la base de esta enfermedad. En el síndrome de Ehlers-Danlos tipo VI hay una deficiencia de lisil-hidroxilasa. El síndrome de Ehlers-Danlos tipo V. Hay deficiencia de lisinoxidasa y los enlaces cruzados son defectuosos. que suelen ter- minar con accidentes vasculares.. pero la principal manifestación es la dislocación de las articulaciones como la cadera y rodillas. llamada también cutis laxa. está causado por defectos en el colágeno tipo III. Síndrome de Menkes. ojo y corazón. esta asociado a un metabolismo anormal del cobre. Proteínas contráctiles El movimiento es una característica esencial de todas las formas vivas. difícil curación de las heridas y deformaciones músculo-esqueléticas. los síntomas son graves por el embarazo o el parto y tendencia a sufrir contusiones. en especial con ruptura de la aorta. En el tipo VII del síndrome la piel se magulla fácilmente y es hiperextensible. Por ejemplo. se manifiesta por piel suelta.tejido conectivo. que aparece excesivamente arrugada y cuelga en pliegues. El mecanismo contráctil del músculo esquelético de los vertebrados es el mejor conocido. Las moléculas responsables de esta importante propiedad son las proteínas contráctiles. Síndrome de Marfán: Es una enfermedad que se caracteriza por síntomas relacionados con esqueleto.

el) Diámetro de 1 5 A Prolina Figura 3. .37 Estructura de! colágeno desde la secuencia primaria hasta la fibrilla.

en el hombre. Este se debe a la alternancia de bandas oscuras y claras. Detrás de la estructura microscópica de la miofibrilla subyace una estructura molecular de sus componentes. es anisotrópica. descubierta por Straub. la banda I es isotrópica. función cubierta por el sistema nervioso y 4) que la máquina pueda regresar a su estado original. Cuando se examinan cortes de una miofibrilla al microscopio óptico o electrónico presentan un aspecto estriado. dos líneas Z delimitan una sarcómera (fig. lo que indica un ordenamiento más al azar. rodeados por una membrana celular (sarcolema). birrefringente a la luz polarizada.39). tropomiosina y troponina. 3) debe existir un operador. los músculos blancos son poco abundantes en mitocondrias y mioglobina y su metabolismo es anaeróbico. Durante una actividad muscular intensa. por tres tipos de músculos: esquelético. Todos los músculos estriados del cuerpo están formados por gran número de fibras.500 filamentos que se encuentran inmersos en un citoplasma soluble (sarcoplasma). Cada fibra muscular contiene millares de miofibrillas.38). mioglobina y citocromos. lo cual sugiere un ordenamiento geométrico regular de las moléculas. El músculo es el principal transductor bioquímico que convierte la energía (química) potencial en energía (mecánica) cinética. banda A. La línea Z es un material amorfo de a-actinina al cual se unen los filamentos delgados y la línea M es un ensanchamiento de los filamentos gruesos formada por proteína M. Al corte transversal. confinados a la zona H de la banda A y que constan de la proteína miosina. linea M. 3. El tejido muscular es el más abundante del cuerpo humano. Más del 40% de la masa muscular de un individuo adulto es músculo esquelético. La célula muscular posee un abundante retículo endoplásmico (sarcoplásmico) poco rugoso. los filamentos delgados se localizan en la banda I pero se extienden hasta la banda A y consisten en las proteínas acuna. una fuente de energía (el ATP) y un sistema transductor (el músculo). Este sistema mecanoquímico es la maquinaria más eficiente y versátil de conversión energética jamás conocida. ordenadas en paralelo. Estos requerimientos son satisfechos. son los llamados músculos rojos. 2) debe haber un sistema regulador de la actividad mecánica. Un transductor químico-mecánico debe satisfacer varios requerimientos: 1) suministro constante de energía. los músculos aeróbicos de actividad continua son muy abundantes en mitocondrias. El músculo esquelético se encuentra bajo control nervioso voluntario. en cambio. los músculos pueden consumir 85% o más del ATP total producido en el metabolismo. la banda oscura.Para que se realicen los movimientos de una célula (pseudópodos) o de un organismo (contracción muscular) se requiere de un mecanismo disparador del proceso (el Ca 2+ ). su contenido en mitocondrias es muy variable. Dentro de la banda I se define una línea muy densa a los electrones o línea Z. El músculo esquelético y cardiaco aparecen estriados en el microscopio. es una proteína globular que representa el 25% en . Cada sarcómera está formada por filamentos gruesos. el músculo liso no es estriado. las cuales poseen a su vez unos 2. no es refringente. lo cual habla de una síntesis proteica muscular poco activa. cada filamento grueso está rodeado por seis filamentos delgados y cada filamento delgado está rodeado por tres filamentos gruesos (fig. 3. cardiaco y liso. Las miofibrillas son la maquinaria contráctil del músculo y su unidad es la sarcómera. Proteínas musculares La actina. Dentro de la banda A se distingue una zona de poca densidad a los electrones o zona H con una línea central muy densa. el músculo cardiaco y liso es de control involuntario.

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La fibra de actomiosina preparada por Engelhardt. al hidrolizarse el ATP. llamado actina-F. es la proteína más abundante del músculo esquelético (55% de la proteína muscular). la troponina-I. la energía producida por hidrólisis de ATP se usa para que se produzca la unión-desunión de actina y miosina. un modelo molecular de la fibrilla muscular. proteína fijadora de calcio. La meromiosina ligera contiene la porción fibrosa y no muestra actividad ATPasa ni se une a la actina-F. La tropomiosina. Bases moleculares de la contracción muscular La contracción muscular se inicia con la llegada del impulso nervioso y con ello la acetilcolina que despolariza la membrana muscular y se alcanza el potencial crítico o de acción que se propaga por el sarcolema.40). El componente fundamental del filamento grueso es la miosina descubierta por Kuhne. 3. se acorta la sarcómera. en presencia de Mg 2 + para formar un filamento de doble hélice. Constituye el 2. conserva la actividad ATPasa y se une a la actina-F. interviene en el ensamble de las subunidades C e I al complejo actina-tropomiosina (fig. Al acortarse la zona H. En conjunto. 3. Mientras que la tropomiosina existe en todos los músculos. En ausencia de calcio la interacción actinamiosina está inhibida por la troponina-I y el músculo está en reposo. Al entrar el Ca 2 + al sarcoplasma. se forman 2 fragmentos denominados meromiosinas. la cual se prolimeriza. . La troponina consta de tres subunidades diferentes: la troponina-C. se produce la contracción por la elevada afinidad de la actina por el complejo miosina-ADP (fibra contraída). La energía que aporta fuerza para la contracción muscular es la hidrólisis del ATP (ver capítulo Bioenergética).peso de la proteína muicular. Esta despolarización provoca aumento de permeabilidad al Ca 2+ . no de filamentos. lo cual le da un aspecto característico (fig. es una molécula en forma de varilla o bastón que se encuentra asociada con filamentos de actina. La meromiosina pesada posee la porción globular y parte de la porción fibrosa. la troponina es exclusiva del músculo estriado. relajado. En términos simples. insoluble. La porción globular de la miosina tiene actividad ATPasa y se combina con la actina. La miosina está compuesta por dos cadenas pesadas entrelazadas helicoidalmente con una cabeza globular en cada extremo. se une a la troponina-C y se produce un cambio conformacional que afecta a las otras subunidades de troponina y a la tropomiosina que se desplaza de su lugar y permite interaccionar a las cabezas globulares de la miosina con las moléculas de actina. inhibe la interacción actina-miosina y también la actividad ATPasa. posee un comportamiento óptico de doble refracción análogo a la fibra muscular intacta. La actividad ATPasa se incrementa 100 a 200 veces por la adición de actina-F. se produce un deslizamiento de filamentos de actina sobre los de miosina y con ello un acortamiento. La otra proteína ligada a la actina es la troponina. Actomiosina. sino de la zona H (fig. descubierta por Bailey. Además. 3. en efecto. La característica de este ciclo bioquímico de contracción es que la actina posee poca afinidad por el complejo miosina-ATP (fibra-relajada). Ninguna de las dos formas (G o F) muestra actividad catalítica. la miofibrilla y el músculo completo. Hace ya más de 30 años que Szent-Gyórgyi mezcló en un tubo de ensayo actina con miosina y observó la formación de un complejo actomiosina que aumentó la viscosidad de la solución.42). Cuando la miosina es digerida con tripsina. cada cabeza globular está asociada a dos cadenas ligeras.41). La forma globular monomérica es la actina-G. esto justificó el considerar que una fibra de actomiosina preparada es.5% de las proteínas musculares. la troponina-T.

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contra un gradiente de concentración.La relajación de músculo tiene lugar con el cese del impulso nervioso y el retorno del sarcolema a su estado polarizado original lo cual se logra por bombeo de Na+ hacia afuera y de K+ hacia dentro de la célula por me- dio de una Na+-K+-ATPasa. En esta fase de relajación interviene también el ATP para bombear Ca2+. . hacia afuera de la célula por una C 1+-M | + -ATPasa.

dinitrofenil derivados. cuya concentración 5. Reacciones del grupo a -amino puede medirse con un espectrofluorímetro.13. . prolina que da un derivado amarillo) que La reacción con dinitrofluoro benceno absorbe al máximo la luz con longitud de (reactivo de Sanger) fue muy utilizada hace onda de 570 nm (el amarillo de la prolina a años para identificar aminoácidos N-termi440 nm). Este es un reactivo aún más sensible (10 a El grupo amino de los aminoácidos reaccio.El grupo carboxilo puede ser químicamente descarboxilado para dar la correspondiente amina. nales. Los a -aminoáciEl color obtenido con la ninhidrina es la dos en presencia del reactivo dan lugar a los base de una prueba colorimétrica que permi. te detectar cantidades del orden de 1 microgramo ó 3 * 10~9 moles de un aminoácido. hoy. La fluorescamina reacciona con los aminoácidos a temperatura ambiente dando un producto fluorescente.2.100 veces mayor que la ninhidrina). ya que na con la ninhidrina en caliente para dar un permite detectar cantidades de nanogramos compuesto púrpura intenso (excepto la de un aminoácido o 10-10 a 10"11 moles. casi en desuso.

13. en cuanto a su polaridad. fruto del material donde se aislaron por primera vez (asparagina . quizá la más extendida es la que los agrupa según las propiedades fisicoquímicas de su cadena lateral. en particular. Reacciones de la cadena lateral Un buen número de reacciones químicas pueden ser utilizadas para cuantificar cadenas laterales específicas en una solución de aminoácidos libres o proteínas desnaturalizada. El reactivo de Ehlrich es un ensayo colorimétrico para el grupo indol del triptófano. Los aminoácidos se denominan en forma sistemática o trivial. Clasificación Entre las diferentes clasificaciones estructurales de los aminoácidos.0 dando un producto. 3. La más extendida es la denominación trivial o común.1.3. El reactivo de Pauly da un color rojo con el imidazol de la histidina y el fenol de la tirosina. que absorbe intensamente a 412 nm. La reacción de Sakaguchi se utiliza para cuantificar espectrofotométricamente el grupo guanidino de la arginina.4. El reactivo de Ellman (ácido ditiobis-nitrobenzoico) reacciona con el tiol de la cadena lateral de la cisterna a pH 8.3. el ácido tionitrobenzoico.

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