ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

3.1. AMINOÁCIDOS COMO CONSTITUYENTES DE LAS PROTEÍNAS Las células vivas producen gran variedad de macromoléculas como son las proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos, entre otros. Estas macromoléculas son biopolímeros constituidos por unidades monoméricas o estructurales. Para los ácidos nucleicos, las unidades estructurales son los nucleótidos; para los polisacáridos son los monosacáridos.

En virtud de que las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones esenciales en los organismos, las cuales describiremos más adelante, es evidente que para conocer tanto el funcionamiento normal como patológico de un organismo se requiere un conocimiento claro de la estructura y propiedades de las proteínas. Aunque muchas proteínas contienen otras sustancias, además de los aminoácidos, la estructura y muchas de sus propiedades biológicas están determinadas por las clases de aminoácidos presentes y el orden en el que están dispuestos en la cadena polipeptídica. Es asombroso que en una célula existan millares de proteínas con estructura y fun-

ción diferentes, pero resulta aún más sorprendente que todas ellas estén integradas por sólo 20 aminoácidos comunes. Los aminoácidos comunes son aquéllos para los que existe un codón específico en el código genético del DNA (ver el capítulo Ácidos nucleicos). Los aminoácidos derivados son generados después de su incorporación a la molécula proteínica. Además de ser las unidades estructurales de las proteínas, los aminoácidos tienen otras funciones importantes como la transmisión de impulsos en el sistema nervioso, como material energético, y otros. 3.1.1. Estructura general

Desde el descubrimiento del primer aminoácido, asparagina, en 1806, habrían de pasar más de 130 años para que le llegara el turno a la treonina, con la que se cerró la lista de los 20 aminoácidos. Un aminoácido es un compuesto que contiene dos grupos funcionales: un grupo amino y uno carboxüo. Ambos grupos están unidos al mismo átomo de carbono, designado carbono a. Al carbono a de cada aminoácido también está unido un átomo de hidrógeno y

Tabla 3.2.
del espárrago, alanina de alantoides) o de alguna propiedad característica (glicina por su sabor dulce). De la denominación trivial ha surgido una abreviatura de tres letras que, dadas las técnicas modernas de secuenciación, han obligado la anotación de los aminoácidos por una sola letra mayúscula (tabla 3.1.). Los aminoácidos presentes en las proteínas pueden clasificarse en dos grandes grupos dependiendo de la polaridad relativa de sus grupos R (tabla 3.2). Clasificación de los L-a-aminoácidos presentes en las proteínas con base a las polaridades relativas de sus grupos R. Un grupo no polar es aquel que tiene poca o ninguna diferencia de carga de una región a otra, en tanto que un grupo polar tiene una diferencia de carga relativamente grande en diferentes regiones.

3.1.4.1. Aminoácidos con grupo R no polar Los aminoácidos más hidrofóbicos (no polares) son la fenilalanina, leucina, isoleucina, valina, alanina, metionina y triptofano.

La mayoría de las cadenas laterales de los ca, lejos del agua de solvatación de la superaminoácidos más hidrofóbicos están orien- ficie. tadas hacia el interior de la molécula protei-

Aminoácidos con grupo R polar con carga negativa En esta categoría se encuentran los ácidos aspártico y glutámico. cisteína. arginina e histidina.1.43.2. 3.1.4. 3. 3. glutamina y tirosina.En la prolina el grupo R es único ya que incorpora el grupo amino en la cadena lateral. Aminoácidos con grupo R polar sin carga A este grupo pertenecen aminoácidos cuya cadena lateral tiene naturaleza polar (hidrofi'licá) como son la serina.4.4. Realmente la prolina es un iminoácido que tiene consecuencias estructurales importantes para las proteínas como veremos más adelante. La glicina. Las cadenas laterales de los aminoácidos polares sin carga se encuentran en proporciones significativas tanto en el interior como en la interfase de la proteína con el disolvente.1. el más pequeño de los aminoácidos. Por el contrario. los aminoácidos polares glutamina y asparagina y los que tie- . asparagina. puede encajar en regiones de la estructura tridimensional de las proteínas inaccesibles para otros aminoácidos. Aminoácidos con grupo R polar con carga positiva Los aminoácidos que pertenecen a este grupo son la lisina. treonina.

Existen aminoácidos que no forman parte de las proteínas pero que realizan importantes funciones en el metabolismo intermediario. La colocación poco usual de una cadena lateral cargada en el interior de una proteína globular se correlaciona con un papel estructural o funcional esencial. arginina. neurotransmisores y otras. Los grupos R con carga de los aminoácidos básicos y acídicos.5. como hormonas. 3.nen grupos cargados a pH 7.1. a d r e n a l i n a y noradrenalina.0 como Usina.1.1. Además. histidina. junto con la citrulina. Ya se ha mencionado el lugar importante de la histidina en la catálisis enzimática en virtud de la carga de su grupo imidazol que le permite funcionar. tienen un papel clave en la estabilización de la conformación proteínica a través de enlaces salinos.0. glutamato y aspartato se hallan predominantemente en la superficie de las proteínas globulares donde la carga se encuentra estabilizada por el disolvente acuoso. La DOPA (dihidroxifenilalanina) es un aminoácido neurotransmisor.5. o bien. Ejemplos de importancia La omitiría funciona como intermediario en el metabolismo de la treonina. Aminoácidos no proteínicos 3. a pH 7. aspartato y metionina. funcionan en sistemas enzimáticos que requieren de transmisión de cargas. precursor de la melanina y se encuentra en la vía metabólica biosintética de las aminas neurotransmisoras: d o p a m i n a . . es un intermediario en la biosíntesis de la urea. como base o como ácido catalítico.

el doble enlace del etileno representa una estructura rígida que impide la libre rotación. Formación El enlace peptídico posee una serie de interesantes características estructurales. es decir.2.3. Definición El grupo a -carboxilo de un aminoácido (RO puede unirse covalentemente al grupo a amino de otro aminoácido (R2) eliminando una enlace peptídico tiene naturaleza de doble enlace parcial.2. en cambio.2. Estructura del etano Si recordamos la estructura del etano (un enlace C-C) y del etileno (doble enlace C=C) veremos que en el primer caso. su estructuración corresponde a una polimerización de aminoácidos.1. 3. Dada la resonancia del grupo carbonilo (-C-).8) 3.2. los átomos de carbono del etano giran libremente teniendo como eje el enlace sencillo. una proteína es un polipéptido complejo. el II o El ácido gama-aminobutírico (GABA) es un neurotransmisor derivado del glutamato. .2. ENLACE PEPTÍDICO La reacción más importante de los aminoácidos es el enlace peptídico.molécula de agua y formando un tipo de enlace amida conocido como enlace peptídico (fig-3. Este enlace determina la fuerza de unión primaria de una proteína. H2N-CH2-CH2-CH2-COOH GABA 3. 3.

5.3. no con tres enlaces peptídicos. en las proteínas naturales. 3. Esto trae como consecuencia que. Los aminoácidos constituyentes se denominan residuos de aminoácidos. PÉPTIDOS 3.10). Definición Cuando los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos se combinan para formar un polipéptido. Un péptido consta de dos o más residuos de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. determina una estructura rígida entre carbono y nitrógeno y por lo tanto es un enlace coplanar. . sí puede haberla en torno a los enlaces C-N y C-C determinando ángulos de conformación (y y <fr) que. que se coloca a la izquierda.1. En la figura 3.2.2. Clasificación Por convención. Rotación del enlace Así como en el enlace peptídico no puede haber rotación. los carbonos a de aminoácidos cercanos están en situación trans respecto al enlace peptídico.3. las estructuras peptídicas se describen a partir del residuo amino terminal (grupo-NH2 libre).4 Estructura coplanar El enlace peptídico con la característica de ser un doble enlace parcial. 3. 33. En un polipéptido. los enlaces peptídicos presentan una alternancia que determina una secuencia en zig-zag (fig.3. en un péptido. y termina con el residuo carboxilo 3.10 se muestra un tripéptido en el que hay que hacer notar que es aquel formado con tres residuos. presentan poca variabilidad en sus valores.2.

es poco práctico usar las fórmulas estructurales convencionales.Tre. 3. 3.4.Gli . se requiere para la actividad de varias enzimas y participa en el transporte de aminoácidos.. Como los polipétidos pueden contener un número de residuos muy elevado. el término oligopéptido se reserva para moléculas con 2 a 20 residuos. como ocurre con la gran mayoría de los péptidos. Los antibióticos polipeptídicos a menudo contienen D y L-aminoácidos y otros no presentes en proteínas. A-S-G-T-. la tirocidina y gramicidina S. o bien. Rp). Estos polipétidos no son sintetizados en los ribosomas. Péptidos de importancia biológica Las estructuras polipeptídicas pueden representarse colocando el aminoácido inicial (el del extremo amino terminal) y a partir de éste colocar en zig-zag los residuos en el orden secuencial correspondiente (fig.11). Representación de estructuras 3.3.3. La repetición de este proceso secuencial genera un polipéptido con una secuencia de aminoácidos específica ( R r R2-R3-R4. Tir-Gli-Gli-Fen-Met Encefalina (Metionina) Arg-Pro-Lis-Pro-Gln-FenFen-Gli-Leu-Met Sustancia P. . como la sustancia P (decapéptido) o los analgésicos opiáceos como las endorfinas y encefalinas. Aunque existen discrepancias en la literatura. La oxitocina y vasopresina son polipétidos cíclicos. En nuestro ejemplo (fig. Este tripéptido lleva a cabo funciones oxidorreductoras por su grupo sulfhídrilo (-SH).11) se podría escribir: Ala Ser .3. Un grupo importante es el de los péptidos cerebrales con actividad de neurotransmisores. polipéptido de 20 a 50 residuos y proteína a las que superan esta cifra. por ejemplo. que contienen D-fenilalanina y ornitina. 3. Uno de los más sencillos es el tripéptido glutatión (y-glutamil-cisteinil-glicina). puede utilizarse la abreviatura de tres letras (o incluso de una sola) para designar el péptido. en el cual el glutamo inicial está unido a la cisteína por medio del carboxilo gama (y) en lugar del alfa ( a ).terminal (grupo -COOH libre) que se coloca a la derecha. En todos los seres vivos se han aislado péptidos de interés biológico.. En cambio.

estas moléculas son tan importantes que merecen un capítulo especial dentro de la bioquímica. en todas las proteínas. dentro de las cuales se encuentran la insulina.4. Así pues. albúmina y Las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones que pueden agruparse en dos clases: dinámicas y estructurales.3. 3. aun las más simples.4. Una proteína simple es aquélla que contiene sólo aminoácidos.1.2.4. ejemplos de este grupo son la hemoglobina y mioglobina.4. se ha establecido como línea divisoria entre polipétidos y proteínas un peso molecular de 8.).4.4. Otras tienen una función de reconocimiento. que se responsabilizan en gran parte de las funciones metabólicas y de la morfología de los seres vivos.000 y 10. PROTEÍNAS 3.3. en particular en bioquímica clínica (tabla 3. solubles en agua. Otra función dinámica de las proteínas es el transporte.4. En realidad. Clasificación En la actualidad no existe un sistema de clasificación de las proteínas universalmente aceptado. de forma esférica. Algunas participan en los mecanismos contráctiles como la miosina y actina. Otras proteínas actúan como hormonas. como se ha señalado antes. Arbitrariamente.3. No en vano el término proteína deriva del griego proteos que significa "primero". Todas las proteínas son polipéptidos de peso molecular elevado. 3. lípidos. no se puede hacer una distinción entre albúminas y globulinas únicamente en base a sus solubilidades en agua o en soluciones salinas.3. la insulina y glucagón.2. En esto se basa la clasificación propuesta en la tabla 3. Sin embargo. Basada en su solubilidad Un sistema de clasificación basado en la solubilidad todavía está en uso. De hecho. carbohidratos o elementos minerales (metaloenzimas). 3. Durante mucho tiempo se dividieron en simples y conjugadas. "primoridaT. la elastina y la queratina. 3. 3. la hormona liberadora de tirotropina y otras. Las proteínas también pueden funcionar con un papel protector como las inmunoglobulinas y el interferón. la más importante es la función catalítica. Importancia biomédica el caso de los receptores hormonales situados en la membrana celular o en el citosol. como es . además. otras moléculas diferentes como el hemo (de la hemoglobina). Sin embargo en esta clasificación. De las funciones dinámicas.1. Definición Las proteínas constituyen sin duda uno de los grupos de moléculas de gran trascendencia en los seres vivos.000. casi siempre están asociadas otras moléculas llamadas grupo prostético. vitaminas.Otros polipéptidos importantes son las hormonas colecistocinina y gastrina. Basada en la forma Otra clasificación se basa en la forma (relación entre longitud y amplitud) y en ésta se consideran Xas proteínas globulares. las proteínas son quizá las macromoléculas más versátiles. Dentro de las proteínas estructurales se encuentran el colágeno. se subdividieron en seudoglobulinas (solubles al agua) y euglobulinas (insolubles en agua exenta de sales). la mayor parte de las reacciones químicas celulares son catalizadas por enzimas. casi todas ellas de naturaleza proteica. una proteína compleja contiene. Así.

protectoras (inmunoglobulinas). Sin aminoácidos distintivos Protaminas Solubles en etanol a 70-80% pero insolubles en agua y en alcohol etilíco absoluto. 3. resistentes a la tracción. Basada en sus funciones Las proteínas se pueden clasificar de acuerdo a sus funciones en proteínas estructurales.3.4. nos indica que tal variabilidad depende de la combinación casi infinita de aminoácidos en cada una de las proteínas existentes en un ser vivo. catalíticas ( e n z i m a s ) . baja solubilidad en agua. Genes y proteínas. Sin aminoácidos distintivos Escasamente solubles en agua pero solubles en soluciones salinas. Ricas en arginina Histonas Solubles en soluciones salinas Escleroproteínas Insolubles en agua o en soluciones salinas.5). reguladoras. 3. Importancia biológica de las proteínas. dentro de las cuales tenemos la queratina. formadas a partir de 20 aminoácidos. etc. de transporte. miosina. Ricas en glicina. (tabla 3. colágeno y fibrina. alanina y prolina globulinas plasmáticas y numerosas enzimas. Diversidad Hemos mencionado el papel tan relevante y versátil de las proteínas con sus múltiples funciones. Las proteínas fibrosas.Albúminas Globulinas Solubles en agua y en soluciones salinas. ¿Qué determina tal variabilidad? En los siguientes subcapítulos hablaremos de los niveles de organización de la es- . son de forma alargada.4.43. La diversidad de formas y funciones proteicas que existen en una sola célula.

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2. Formas iónicas de los aminoácidos Los grupos amino y carboxilo de un aminoácido pueden ionizarse. 3.2). para la cual R-H. con el grupo a-amino hacia la derecha tiene la configuración absoluta denominada D. 3. En la configuración absoluta.).1). designada R que es diferente para cada uno de los 20 aminoácidos comunes excepto para la glicina (fig.3. el grupo H y el grupo -NH2» en el carbono a están dirigidos hacia el lector. si por convención el grupo examino está proyectado hacia la izquierda. ambos grupos están cargados (fig. el aminoácido tiene la configuración absoluta. como en el D-gliceraldehído (fig. Esta orientación tetraédrica con cuatro grupos diferentes alrededor del carbono a confiere actividad óptica (capacidad de rotar el plano de luz polarizada) a los aminoácidos. aquella forma en la que la carga positiva es igual a la carga negativa (carga neta . Cabe aclarar que la estructura sin carga de un aminoácido indicada en la fig. dentro de los límites fisiológicos del pH.4). Los aminoácidos tienen carácter anfótero.1. 3.1. 3. El pK del grupo amino es 9. los cuatro grupos unidos al carbono a de los aminoácidos son diferentes. el grupo R de la cadena lateral se dirige hacia abajo y atrás del mismo plano. En los aminoácidos neutros. que existen como ion dipolar. el centro asimétrico es R (RECTUS en latín) y S (sinisterenel opuesto) (ver fig. 3. Asimetría.8 y el del grupo carboxilo es 2. al describir la química de los aminoácidos. las proteínas también tienen propiedades asimétricas. el COOH está dirigido hacia arriba y atrás del plano de la página. constituyendo un ion dipolar o switterion (en alemán. En las proteínas de mamífero sólo se encuentran L-a-aminoácidos. Si los otros tres grupos se ordenan de mayor a menor prioridad en el sentido de las manecillas del reloj. por comportarse como ácidos o bases debido a sus grupos ionizables. Dado que los aminoácidos de las proteínas son asimétricos.1. Su enantiómero óptico.1 no puede existir a ningún pH. Estereoisomería Con excepción de la glicina. Propiedades generales 3. el sistema RS. 3. Por tanto.una cadena lateral. ion híbrido). En todos los casos el grupo H se encuentra debajo del plano. donde los grupos unidos a un orden basado en el número atómico: SH>OH>NH2>CDOH>CH3>H.1.2 2. es decir.1. 3.2. pero es posible usarlo por conveniencia. utilizando la proyección de Fisher. La dificultad surgida de intentar denominar familias de isómeros ópticos con dos o más centros asimétricos ha dado lugar al establecimiento de un método más general de desig¿ nación estereoquímica.

3. Ese elemento dictador de la secuencia polipeptídica es la unidad transmisora de los caracteres hereditarios. el DNA. Niveles estructurales de una proteína* 3. la insulina. fuera la fibrosa.2. o estructura primaria. Estructura secundaria Si una proteína estuviera constituida por sólo una disposición polipeptídica lineal. En este sentido. La máxima estabilidad de la hélice está determinada por puentes de hidrógeno que se establecen entre el grupo carbonilo (C-0) de un enlace peptídico y el amino (N-H) presente cuatro residuos más adelante en la cadena (fig. gracias a los méto- dos automáticos en el análisis de aminoácidos introducidos por Moore y Stein en 1964.tructura proteica. la localización de los puentes disulfuro (cistina).1. Esta estructura fue propuesta inicialmente por Pauling y Corey. bioquímicamente. La fuerza estabilizadora de esta estructura es el enlace covalente (peptídico). En esta estructura se incluye. En este tipo de estructura secundaria. Esto ha sido posible gracias a los esfuerzos de Sanger. ya familiar desdé la descripción de los péptidos. las proteínas vienen a ser las ejecutoras de las ordenes dictadas por los genes. surge una estructura particularmente estable que es la a-hélice. el gene o gen. . Sin embargo. que utilizan la técnica de degradación de Edman. 3. El primer nivel. hablar de ese factor particular en cada célula u organismo que determina ese ordenamiento y.5. quizá adelantando un poco. se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica. Ahora se conoce la secuencia completa de más de 2. cada proteína posee un ordenamiento o secuencia de aminoácidos bien definido per o . Es decir.4. quien en 1953 fue el primero en estudiar y determinar la estructura primaria de una proteína. con una elevada hemolisis y obstrucción de capilares por los eritrocitos anormales. ¿qué determina ese ordenamiento? Aquí debemos detenernos y. La importancia de la estructura primaria es tal que una variación en un solo aminoácido de una cadena polipeptídica puede determinar una falta letal en la proteína completa. . la cadena polipeptídica se pliega adoptando una forma helicoidal con giro a la derecha que contiene 3.5. E s t r u c t u r a primaria La estructura primaria. 3. Los individuos que tienen este defecto padecen anemia de células falciformes.000 proteínas. su única conformación posible. muy frecuentemente de una enzima. en virtud de la estructura coplanar del enlace peptídico y los ángulos de rotación § y vy que regularmente toman valores de 132 y 123° respectivamente. La información genética contenida en cada célula o individuo se expresa a través de una proteína. y los métodos secuenciales del gen que codifica a la proteína en estudio.4. Sobre esto se tratará más ampliamente en el capítulo de ácidos nucleicos. por ende. además de la secuencia de aminoácidos. El analizador automático de aminoácidos (secuenciador) está cediendo lugar actualmente a sistemas basados en métodos cromatográficos de alta eficacia. La determinación de la estructura primaria de una proteína es actualmente una técnica accesible a la mayor parte de los laboratorios de bioquímica. la gran diversidad de estructuras y funciones proteicas.5.4. . El ejemplo clásico es el de la hemoglobina S (HbS) que tiene la sexta posición de la cadena P ocupada por valina en lugar de glutámico como la hemoglobina normal (HbAí).12). se refiere al orden de los aminoácidos en la cadena polipeptídica.6 residuos de aminoácidos por vuelta.

sus interacciones desestabilizan la estructura helicoidal. La conformación p está formada por dos o más cadenas polipep- . isoleucina). siendo la a-hélice la primera). Pauling y Corey también propusieron otra estructura secundaria que es la estructura P (P porque fue una segunda estructura.Figura 3.12. Otro factor que rompe la conformación a-helicoidal es la presencia de prolina. Otro aminoácido que tiende a desestabilizar la a-hélice es la glicina. Representación de un polipéptido en conformación de a-hélice En la conformación de a-hélice las cadenas laterales R se proyectan en forma perpendicular al eje de la hélice y hacia el exterior de la estructura en espiral generada por la cadena peptídica. Si estos grupos R están próximos y tienen carga del mismo signo o están ramificados (valina. además. La presencia de prolina entre dos cadenas en a-hélice produce una acodadura de la dirección general de la molécula. por tener un grupo R muy pequeño. porque no puede ocurrir rotación del enlace N-C. ya que el anillo pirrolidina de su cadena lateral interacciona estéricamente con la cadena lateral del aminoácido precedente y. lo cual es de gran importancia en la configuración general de una proteína.

La estabilidad es mayor en la conformación antiparalela. como los grupos aromáticos de la fenilalanina o los no aromáticos de alanina e isoleucina. En general. c) interacción de cadenas polares. En términos de su función biológica. dentro de la estructura secundaria.15). respectivamente. 3. Cuando una proteína oligomérica contiene dos o cuatro monómeros o subunidades se denomina dímero o tetrámero. la más frecuente en las proteínas naturales. pueden existir algunas regiones de las proteínas que no son a-hélice ni tira plegada. es un depósito de proteína en forma de tira plegada. El estudio de la estructura terciaria ha sido posible gracias a la cristalografía de rayos X desarrollada por la escuela de Bragg en Cambridge y a la labor pionera de Kendrew sobre la mioglobina y de Perutz sobre la hemoglobina. Estructura cuaternaria Cuando una proteína se compone de más de una cadena polipeptídica. la a-hélice y la hoja plegada p. Se trata de un arreglo tridimensional que forma diversos repliegues específicos. El mejor ejemplo estudiado es la hemoglobina que es una proteína tetramérica (fig. Esto sólo puede ocurrir si suponemos que.3.tídicas que pueden ser paralelas (en el mismo sentido) o antiparalelas (en direcciones opuestas) y se estabilizan también por puentes de hidrógeno (fig. se dice que posee estructura cuaternaria. . oxhidrilo (-OH) o los propios grupos carbonilo (-C=0) de las uniones peptídicas. Es común que en numerosas proteínas ocurran simultáneamente ambas estructuras. protómeros o subunidades. En tanto que la hélice es una cadena polipeptídica enrollada. por ejemplo.4. Las proteínas que poseen este grado de organización estructurai se denominan oligoméricas y las cadenas polipeptídicas individuales que la integran se denominan monómeros.14. b) puentes de hidrógeno. las regiones de enrollamiento aleatorio son de igual importancia que las de a-hélice o tira plegada.4. que se establecen entre los grupos sulfhidrilo (-SH) de la cisteína para dar el enlace covalente disulfuro (-S-S-) entre cadenas vecinas (fig. existe un superplegamiento de la proteína que da lugar a una estructura compacta. 3. Estructura terciaria Existen razones sobradas para pensar que gran parte de las proteínas tienden a adoptar forma esférica. incluso más que la a-hélice. Los tipos de enlaces que estabilizan la estructura terciaria son: a) atracción electros- tática de tipo salino entre un grupo carboxilato (-COO . El resultado de las distintas uniones descritas es una estructura terciaria de gran estabilidad. e) puentes disulfuro. la sustancia amiloide que se deposita en condiciones patológicas. hidroximetilos de la serina.5. cuando los residuos son idénticos como dos metilos de la alanina. 3. etc. la tira plegada p está extendida y se dispone a la manera de un acordeón con los grupos R proyectados por encima y por debajo de los planos generados por las cadenas polipeptídicas. estas estructuras laminares se dan en las proteínas fibrosas como la queratina del pelo y la piel. proteínas fibrosas de forma alargada y proteínas globulares de forma esferoidal.13). 3. sino que son conformaciones enrolladas al azar. 3. la fibroma de la seda. etc.4. Las estructuras terciarias de las proteínas permiten agruparlas en familias y subfamilias. d) fuerzas de Van der Waals.5. Finalmente. 3.16). Es la que se conoce como estructura terciaria de las proteínas. además del plegamiento secundario. como se ilustra en la fig. globular. entre grupos carboxilato.) y un grupo amino (-NH3+) de residuos glutamato o aspartato con Usina o arginina.

13.Figura 3. . Conformación p de una proteína con disposición paralela (a) antiparalela (b).

Representación esquemática del plegamiento de la cadena principal de la ribonucleasa bovina. 3 interacción dipolo-dipolo entre dos serinas. 4 unión de disulfuro. 2 puentes de hidrógeno. . y 5. interacción hidrofóbica entre leucina e isoleucina. convalente.14. La región de a-hélice está encerrada en un óvalo y la región p está sombreada. 1.Figura 3. entre treonina y serina.15. Figura 3. Otras porciones constituyen un enrollamiento al azar. Tipo de uniones que estabilizan el plegamiento de las proteínas. interacción electrostática. entre dos cisternas.

. Estructura cuaternaria de ias proteínas. formada por dos cadenas a en la parte inferior de la figura y dos cadenas p en la parte superior.16.Figura 3. Esquema de la disposición de cuatro subunidades de una molécula de hemoglobina.

puesto que la estructura primaria determina la secundaria. Otros agentes físicos (radiaciones. el plegamiento puede ser alterado por condiciones como alta temperatura. tiene estructura cuaternaria. De este modo. excepto enlaces covalentes. terciaria y (cuando está presente) la cuaternaria.17). es decir la proteína altamente ordenada queda reducida a un polimero estadístico formado por una cadena de aminoácidos (fig. la ot-quimotripsina contiene tres cadenas polipeptídicas unidas por enlaces disulfuro y no se considera estructura cuaternaria. RELACIÓN ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIÓN La actividad biológica de una proteína depende del ordenamiento tridimensional apropiado de sus grupos funcionales. En proteínas cuya estructura tridimensional está determinada por enlaces disulfuro. particularmente en los sistemas llamados alostéricos.1. En el estado desnaturalizado los niveles de estructuración superior de la conformación nativa se encuentran al azar. L Desnaturalización La alteración de una proteína que modifique su conformación nativa se denomina desnaturalización. Por ejemplo. altas presiones) o químicos (ácidos. pH extremo o presencia de solventes orgánicos que debilitan las interacciones no covalentes. Otros ejemplos incluyen la sintetasa de ácidos grasos. pueden ser desnaturalizadas por agentes reductores como el mercaptoetanol 3 . Debido a que las con- . 5 . conservándose la primaria (covalente). La mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica y no posee estructura cuaternaria. esto tiene aplicación cotidiana en el laboratorio de bioquímica. En estos sistemas. Agentes desnaturalizantes Todos aquellos agentes capaces de romper o alterar los enlaces que mantienen las estructuras de orden superior de una proteína pueden desnaturalizarla. no es necesario postular un control genético independiente para los niveles de estructuración superiores al nivel primario.5. álcalis. este cambio provoca la consiguiente alteración o desaparición de sus funciones. detergentes) capaces de alterar las interacciones débiles pueden llegar a desnaturalizar las proteínas. a las cuales se les conoce como complejos multier>zimáticos o estructuras supramoleculares. La estructura cuaternaria está íntimamente ligada a las propiedades reguladoras de las proteínas. 3. Sin embargo. por tanto. La existencia de enlaces disulfuro en una proteína aumenta su resistencia a la desnaturalización. la piruvato deshidrogenasa. tensoactividad. la hemoglobina contiene 4 subunidades unidas no covalentemente y. Un agente desnaturalizante muy común es el calor.1. La enzima aspartato transcarbamilasa tiene una estructura cuaternaria formada por 12 subunidades.Los enlaces que mantienen la estructura cuaternaria son del mismo tipo que los que mantienen la estructura terciaria.5. la respuesta puede estar afectada por la presencia de efectores (inhibidores o activadores) que modulan la acción primaria de la proteína (ver capítulo de Enzimas). 3. urea. Las estructuras secundaria y terciaria de una proteína están determinadas por la estructura primaria. formaciones nativas de la mayor parte de las proteínas están estabilizadas sólo por enlaces no covalentes. 3. terciaria y cuaternaria. En una proteína se produce la desnaturalización al perder su estructura secundaria. las proteínas sólo funcionan cuando están plegadas en su estructura original o conformación nativa. Por lo tanto.

debido a que la proteína tiene un hueco molecular con la forma precisa para el hemo y dado que las cadenas laterales de los aminoácidos en contacto con el anillo son no polares.2. Una consecuencia de la desnaturalización es la pérdida drástica de solubilidad. hormona. son también proteínas de reconocimiento. grupo prostético). efector. que representan el primer sitio de acción hormonal. Siendo la conformación de la molécula proteínica la base principal de su función. que permite a la proteína (sea enzima. de ellas nos ocuparemos más adelante. el grupo hemo. Como regla general. Ese sitio de reconocimiento se debe a la presencia en la proteína de una estructura complementaria a la de la molécula (llámese sustrato. Otras alteraciones incluyen disminución de la viscosidad. Para explicar el fenómeno de la especificidad. Los receptores membranales de reconocimiento de las hormonas. Por ejemplo. En otros casos la desnaturalización es irreversible. 3. En ocasiones esta alteración es reversible cuando se elimina el agente agresivo. Clásico ejemplo de reconocimiento es la unión de sustancias llamadas antígenos con su anticuerpo específico. anticuerpo. Emil Fisher propuso en 1894 una analogía similar a la que existe entre llave y cerradura. receptor membranal) reconocer a la molécula en cuestión y asociarse con ella en forma específica. Otro ejemplo es el de la globina que se une específicamente a su grupo prostético.o el ditiotreitol. Complementarte dad y capacidad de reconocimiento Existen proteínas capaces de reconocer determinado tipo de moléculas que serán objeto de su actividad. El anticuerpo es una molécula proteínica especial perteneciente al grupo de las inmunoglobulinas. En las proteínas donde más se ha ejemplificado el fenómeno de la especificidad de reconocimiento molecular es entre las enzimas y su sustrato. las globulinas plasmáticas desnaturalizadas pierden sus funciones de anticuerpos. un sitio fijador (de reconocimiento) en una proteína se ajusta al . velocidad de difusión y facilidad con que cristalizan. al desnaturalizarse la proteína. antígeno.5. se altera su actividad fisiológica.

3. El material usado como revelador es usualmente la ninhidrina mencionada antes. ya que se emplean dos diferentes solventes aplicados secuencialmente para desplazar un solo compuesto (fig. tamaño y polaridad. La cromatografía en capa fina utiliza el mismo principio de la cromatografía en papel (cromatografía de adsorción).6. La separación cromatográfica se basa en el coeficiente de partición líquido-líquido de los compuestos.18). La cromatografía en papel. 3. aplicando gotas de colorantes en papel y notando la separación en diferentes colores. consiste en colocar en tiras de papel como soporte de una fase estacionaria acuosa mientras una fase móvil orgánica se desplaza en la tira. además del sitio activo (para el sustrato). Las dos primeras técnicas descritas se utilizan generalmente para separar e identificar aminoácidos o péptidos pequeños. 3. ha revolucionado la se- paración y detección de productos de reacción y la determinación e identificación de compuestos. La relación de la distancia recorrida por el compuesto entre la distancia que recorre el frente del solvente desde el sitio de aplicación se conoce como valor Rf (relación de frentes) del compuesto.3. el soporte utilizado es sílica gel o celulosa colocadas en una hoja de vidrio o plástico en forma de capas muy finas. En un proceso alostérico debe haber en la proteína centros separados de fijación para el sustrato (por ejemplo. la ocupación de este otro sitio determina una inhibición o una activación de la reacción. También utilizando una separación en columna. O2 en el caso de la hemoglobina) y el efector (inhibidor o activador) que ejerce el control alostérico.5. se describe la cromatografía de . cuando Runge describió un método para el análisis de mezclas de colorantes. La gota del compuesto (generalmente un aminoácido o un péptido) se "revela" como una mancha en el papel. 3. como todas las técnicas simples. mecanismo conocido como alostérico.19). Bajo condiciones estrictamente controladas el Rf es una constante importante para propósitos de identificación. El método descrito es cromatografía unidimensional. otro sitio de reconocimiento para moléculas llamadas efectores alostéricos. La cromatografía bidimensional es una variante de considerable poder de separación.compuesto que se va a unir en forma. gotas de la sustancia a separar cerca del punto donde partirá el desplazamiento de la fase orgánica (fig. quien en 1906 efectuó la separación de mezclas de pigmentos vegetales en un tubo conteniendo material adsorb e n t e s ó l i d o f i n a m e n t e d i v i d i d o . la separación cromatográfica es muy rápida (fig. 3. Cromatografía Las experiencias en cromatografía se remontan a 1850.20). Sin embargo. el crédito del descubrimiento de'la cromatografía se le dá al botánico Tswett. MÉTODOS DE SEPARACIÓN Y ANÁLISIS 3. Un mecanismo alostérico es un proceso común en moléculas proteicas en el que la asociación del sustrato está influenciada por la fijación de otras moléculas que no son sustratos directos de la proteína. En este proceso.6.1. pero aprovechando las cargas residuales de las proteínas como carácter diferencial. Desarrollada en 1944 por Martin en Inglaterra. Alosterismo En algunas enzimas y en la hemoglobina se encuentra. A continuación se describirán técnicas para la separación e identificación de proteínas.

Figura 3.18 Cromatografía en papel.

intercambio iónico. Las resinas de intercambio iónico para preparar la columna cromatográfica, se preparan a partir de materiales insolubles (agarosa, poliacrilamina, celulosa, etc.) que contienen ligandos cargados negativamente (R-CH3-COO--SO5) o ligandos cargados positivamente (dietilamino) unidos a la resina insoluole.

Las resinas cargadas negativamente fijan cationes conociéndose como resinas de intercambio catiónico. Igualmente, las resinas cargadas positivamente fijan aniones y se denominan resinas de intercambio aniónico. El grado de retención o retardo de una proteína (o aminoácido) por una resina dependerá del número de cargas (positivas o negativas) de la proteína al pH del experimento (revisar pl de una proteína). Aquellas moléculas proteicas con la misma carga que la resina se eliminarán primero, seguidas por proteínas de carga opuesta, que por atracción de cargas, se retendrán más tiempo en la columna. Cuando es difícil eliminar una molécula fuertemente atraída por la resina, se utilizan cambios de pH o fuerza iónica para debilitar la interacción. Los derivados de celulosa como carboximetil celulosa (CMC) y dietilaminoetil celu-

cero), no se desplazan ni hacia el cátodo ni hacia el ánodo en un campo eléctrico. El punto isoeléctrico (pl) de un aminoácido se define como el pH en el cual no tiene carga eléctrica neta; en el caso de los aminoácidos con sólo un grupo amino y uno carboxilo corresponde a la siguiente ecuación: pl = | ( P K 1+ pK2) Si consideramos la curva de titulación de un aminoácido sencillo como la glicina, su equilibrio de ionización corresponde a: A pH de 1 la forma iónica predominante tiene una carga de +1 (forma catiónica) y se desplazará hacia el cátodo en un campo eléctrico. La adición de base hasta alcanzar la forma de zwitterión, corresponde al punto isoeléctrico (pl=5.97).

La adición de base a la forma dipolar de la glicina, completa la titulación del grupo NH 3, el pH de la solución es superior a 11.5 y la especie predominante tiene una carga formal de -1 (forma aniónica). Como puede verse en la fíg. 3.5, la glicina y otros aminoácidos con cadena lateral no ionizable y valores de pKi próximos a 2.5 y de pK2 próximos a 9.5, pueden actuar como amortiguadores en dos zonas de pH, donde ninguna les permite actuar como amortiguadores al pH fisiológico del plasma. Precisamente, el pH de 7.4 es un valor cercano al pl de dichos aminoácidos, y éste es el punto de menor solubilidad de aminoácidos y proteínas. Un caso más complejo lo constituyen los aminoácidos con un grupo ionizable en su cadena lateral. Tal es el caso del ácido glutámico y del aspártico que poseen un grupo

losa (DEAE) se han utilizado con éxito en la purificación de proteínas. En la cromatografía líquida de alta resolución, la mezcla de proteínas a separar e

identificar se pasa a través de una columna empaquetada con pequeñas esferas de resina insoluble. Como en esta técnica la resina está tan densamente empaquetada se requiere

500. La electroforesis de proteínas se ha llevado a cabo de acuerdo al principio desarrollado por el sueco Tiselius en 1937. pero insolubles. por lo que tendrán que desplazarse por espacios sinuosos y viajar más a través de la columna. inhibidores no covalentes específicos y anticuerpos específicos. grupos prostéticos.de bombeo a elevada presión para forzar el paso de la proteína.500-4. Las proteínas pequeñas pueden penetrar por los poros del gel. Estos compuestos de alta afinidad se pueden unir en forma covalente a una resina insoluble y utilizarse para purificar una proteína mediante cromatografía en columna. que las proteínas grandes. El nombre comercial de este gel es sephadex. las cuales. Figura 3. una corriente eléctrica a tra- . una mez- cla de proteínas se separa en función del tamaño saliendo primero las proteínas más grandes y a continuación las más pequeñas.2. Electroforesis El movimiento de una partícula cargada en un campo eléctrico externo. sephadex G-50 para PM de 8-10.6.21). que al colocarlas en agua se hinchan para formar un gel insoluble. Las esferas de resina pueden cubrirse con grupos cargados. se hace pasar durante un cierto tiempo. como en la cromatografía de intercambio iónico. 3. las cuales se retardan por tener que viajar por el retículo del gel (fig.6. el sephadex G-25 excluye compuestos de peso molecular de 3. El polisacárido dextrana es tratado químicamente para que se formen enlaces cruzados que den un retículo o malla por la cual pueden pasar moléculas pequeñas. son excluidas por motivos estéticos. o con residuos hidrofóbicos con lo que las moléculas no polares se retrasarán al paso por la resina. Así. Las esferas pueden ser porosas y actuar con el mismo principio de la cromatografía de exclusión molecular. En esta técnica la columna es metálica y no de vidrio como la cromatografía a presión normal.000 de PM. Según esta técnica.3. 3. 3. receptores de membrana. Los geles de sephadex G-100 y G-200 se utilizan para separar proteínas de alto peso molecular. al no poder penetrar por el retículo del gel. hacia el electrodo de carga opuesta se denomina electroforesis. separando moléculas grandes de las pequeñas.21 Filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular en columna El bioquímico tiene para elegir varios tipos de sephadex para preparar columnas. La cromatografía de afinidad se basa en la alta afinidad que tienen las proteínas por sus sustratos.000 y sephadex G-75 para 40-50. Esta sustancia queda como pequeñas esferas hidrofílicas. Filtración en gel La separación de proteínas de diferente tamaño haciéndolas pasar a través de una columna empaquetada con un gel poroso en forma de pequeñas esferas insoluoles se denomina filtración en gel o cromatografía de exclusión molecular. En consecuencia.

cada una de ellas formada por cadenas polipeptídicas con dos estructuras primarias diferentes y cada subunidad con su grupo hemo.vés de un tubo en U (un electrodo en cada extremo) lleno con una proteína disuelta en un amortiguador con la misma fuerza iónica. En esta técnica se utilizan mezclas de anfolitos formados por ácidos poliamino-policarboxílicos con un intervalo de pl definido para establecer un gradiente de pH a través del campo eléctrico aplicado. y de la forma. particularmente las proteínas plasmáticas (fig. El grado de migración depende de las cargas de la proteínas. Una modificación altamente simplificada de la técnica electroforética de Tiselius es la llamada eléctroforesis de zona. actúan como transporte de CO2 y de iones hidrógeno. El sitio donde se concentra la proteína en el tubo puede ser determinado por un proceso óptico. 3. Durante la electroforesis. En este punto la proteína se mantiene estacionaria en el campo eléctrico y puede visualizarse o eliminarse de la columna (fig. agar. proteínas protectoras como las inmunoglobulinas. La luz refractada nos da un patrón de picos. la constituyen 4 subunidades. 3. La proteína globina desde el punto de vista de su estructura cuaternaria es un tetrámero. 3. Se han escogido las proteínas de transporte. la separación electroforética se realiza sobre un soporte inerte como papel. presentes en los glóbulos rojos. El aparato de Tiselius se utilizó para determinar el punto isoeléctrico y la movilidad electroforética de las proteínas. El isoelectroenfoque ofrece una resolución sumamente elevada. Hemoglobina y mioglobina- Las hemoglobinas son proteínas globulares. 3. almidón. La primera combina la separación electroforética con la especificidad de las reacciones inmunológicas. hemoglobina y mioglobina.7.24). y y 6 . que fijan oxígeno en los pulmones y lo transportan por la sangre hacia los tejidos. el más reciente gel de poliacrilamida. al volver a los pulmones desde los capilares. cada pico representa la separación entre la molécula proteica y el amortiguador (fig. Así. las dos subunidades de una clase se denominan cadenas a y los otros dos monómeros de la misma clase se designan como cadenas p. HbAí. En la forma más común de hemoglobina humana adulta. pH y conductividad. En ésta. las proteínas plasmáticas.Se conoce la secuencia completa de aminoácidos de las cadenas a(141 aminoácidos) y de las cadenas p . Variantes más desarrolladas de la eléctroforesis simple son la inmunoelectroforesis y el isoelectroenfoque. 3. La medida de la concentración de cada proteína separada se hace por revelado y lectura en un densitómetro.M. Una proteína cargada se desplazará a través del gradiente de pH en el campo eléctrico hasta que alcance una región de pH en el gradiente igual al valor de su pl. La hemoglobina (Hb) está formada por la proteína globina (una histona) y el grupo prostético hemo.7. es decir. la fórmula tetramérica de la HbAí es 0 ^ 2 .23). como ejemplo de proteínas cuya estructura y función es esencial estudiar para una correcta comprensión de sus procesos bioquímicos normales y de su mal funcionamiento en las enfermedades.272» la hemoglobina de las células falciformes (HbS) es ct2£2 y la hemoglobina menor del adulto (HbA2) es a252.22). PROTEÍNAS DE IMPORTANCIA MÉDICA En esta sección. 1.La hemoglobina fetal (HbF) es 0. Es especialmente útil para separar proteínas y otras sustancias antigénicas con carga. del P. proteínas estructurales como el colágeno y proteínas contráctiles como la tropomiosina. se estudiarán algunas proteínas con importantes funciones biomédicas. acetato de celulosa y. las diferentes proteínas migran hacia el electrodo de carga opuesta.

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La mioglobina (Mb) es una proteína que almacena 02 en el tejido muscular rojo. es de aproximadamente 67.25). El PM de la hemoglobina. que contiene un átomo de hierro en su centro. patrón característico de las proteínas globulares. Su distribución especial es el de una superficie polar y el interior no polar. El átomo de hierro. identificada como una molécula casi esférica con un diámetro de 5. 3. Su concentración en la sangre humana es de 16 g por 100 mi. la mioglobina está compuesta por una sola cadena polipeptídica (monómero) y un solo centro de fijación de 02 (hemo). La hemoglobina fue la primera proteína analizada por difracción de rayos X. El tipo de porfirina de la hemoglobina y la mioglobina corresponde a la protoporfirina IX con dos propionilos. 3. La cadena polipeptídica consta de 153 aminoácidos y tiene un PM de 17. En las cadenas polipeptídicas con 02 ligado. El quinto enlace de coordinación del átomo ferroso de los hemos es con el nitrógeno imidazólico de una histidina {histidina proximal de la apoproteína). tanto en la hemoglobina como en la mioglobina. un tetrapirrol cíclico.(146) aminoácidos). incluyendo el grupo hemo. esta molécula . El polipéptido P de la Hb es muy semejante a la mioglobina.000. se encuentra en estado ferroso (Fe2*). A diferencia de la hemoglobina. El grupo prostético hemo es una molécula de porfirina.000.26).5 nm (fig. dos vinilos y cuatro metilos como cadenas laterales unidos a los grupos pirrólicos (fig.

El hemo se sitúa dentro de un espacio hidrofóbico en cada una de las subunidades de globina. los grupos hemo se localizan en la periferia. las 4 subunidades se disponen en un arreglo espacial tetraédrico preciso. forma un sexto enlace coordinado con el Fe 2+ y el segundo imidazol de una histidina distal de la globina. es . Esta combinación se lleva a cabo sin alterar la valencia del hierro que sigue como ferroso. Cinética de oxigenación de hemoglobina y mioglobina La hemoglobina se combina con el oxígeno y se transforma en oxihemoglobina (Hb0 2 ).25 Estructura cuaternaria de la hemoglobina. De esta manera.Figura 3. en realidad fija ocho átomos de oxígeno por tetrámero (dos por cada subunidad). con las cadenas en contacto con las P.

en la proteína existe un sitio de fijación para el sustrato y otro para el efector alostérico (positivo o negativo). lo que indica que la mioglobina tiene mayor afinidad por el 0 2 que la hemoglobina y es una molécula inadecuada como transportadora de 0 2 pero eficaz para almacenarlo.27). A esta presión. el hierro pasa de ferroso a férrico (Fe 2+ —• Fe 3+ ) y se denomina metahemoglobina (MHb). la forma T es más acida. la mioglobina muestra una curva de saturación de oxígeno de tipo hiperbólica (fig. no es una oxidación sino una oxigenación. Al ocupar su sitio el ion H. pero puede producirse un exceso si se ingieren sulfonamidas. si el tetrámero se disgrega en monómeros. En la hemoglobina el sitio activo es ocupado por el oxígeno y el sitio alostérico es ocupado por el hidrogenión. la cooperatividad desaparece y la curva de saturación de oxígeno adquiere forma hiperbólica. En cambio. Así. La reducción de la afinidad oxígeno-hemoglobina en un pH bajo se denomina efecto Bohr (fig. Los datos de cristalografía con rayos X indican que la hemoglobina tiene dos estructuras cuaternarias. El efecto Bohr. Por tanto. llamada "tensa" o estado conformacional T. desplaza a la Hb a la forma T. La cooperatividad positiva de la hemoglobina depende de la integridad de la estructura cuaternaria. fenacetina u otros oxidantes. en estas condiciones no transporta oxígeno. por lo tanto. La curva de saturación de oxígeno con hemoglobina es sigmoidea. Esto se debe a que una vez fijado el primer átomo de 0 2 facilita la unión del siguiente. La fijación del efector en el sitio alostérico influye sobre la conformación del sitio del sustrato (sitio activo). El efecto Bohr puede encajar en la definición de un mecanismo alostérico.29). la mioglobina cede con facilidad su oxígeno para apoyar la síntesis oxidativa de ATP en las mitocondrias musculares. según el cual. donde el estado T tiene afinidad menor por el sustrato. producen ácido carbónico y ácido láctico que incrementan la concen- . Las dos formas son de conformación desoxi. nitritos. Bajo condiciones de escasez de oxígeno (como en el ejercicio intenso). cuando la Hb oxigenada se encuentra a pH bajo (ácido) y C 0 2 alto. Normalmente se forma menos del 1 % de MHb. la hemoglobina muestra una cinética cooperativa de fijación. la p 0 2 del tejido muscular puede disminuir hasta 5 mm Hg. tiende a liberar su oxígeno y representa un aumento de oxigenación en tejidos metabólicamente activos. T y R se emplean también para describir las estructuras cuaternarias de las enzimas alostéricas. 3.28). sobre equilibrio ácido base. 3. de afinidad más baja por el oxígeno. Cuando la hemoglobina se oxida químicamente. la conformación pasa del estado T al R ("relajado"). En la unidad II. tiene consecuencias fisiológicas importantes. es decir. 3. ya habíamos señalado la influencia del oxígeno sobre el pKa de la hemoglobina: H H b + 4 0 2 — Hb(0 2 ) 4 +H + .decir. Las células con metabolismo rápido y con requerimientos elevados de 0 2 . La constante de afinidad del 0 2 es mayor en el estado R que en el estado T (fig. al fijarse el oxígeno a las subunidades.

En los pulmones. la concentración de H+ disminuye. la HbF es inadecuada. y reduce su afinidad por el oxígeno. Después del parto. Cuando la liberación de oxígeno está alterada como en el ascenso a grandes alturas o en la enfermedad pulmonar crónica. Por lo tanto. una disminución de O2 hace que se acumule el 2. el pH sube. 3-difosfoglicerato (2. los protones son liberados de la hemoglobina favoreciendo la forma R y la captación de oxígeno. En los tejidos periféricos.3-DPG de los eritrocitos hace que la hemoglobina ceda una porción mayor de su oxígeno a los tejidos. ya que su elevada afinidad por el oxígeno la haría ceder menos O2 a los tejidos. en tanto que un incremento en el oxígeno causa la liberación de hidrogeniones. En resumen. un aumento en el contenido de 2. La hemoglobina fetal (HbF) tiene mayor afinidad por el oxígeno que la adulta (Hb A) lo que le permite extraer O2 de la HbA de la sangre placentaria. Dado que el H+ fuerza alostéricamente hacia la conformación T de la hemoglobina. el cual es un efector alostérico de la hemoglobina cuando ésta se encuentra en la forma T.3-DPG el cual se une a la forma T de Hb. . la estabiliza.3-DPG). disminuye la afinidad C>2-Hb y se disocia una mayor cantidad de O2 hacia los tejidos. un incremento de hidrogeniones provoca liberación de oxígeno. el eritrocito aumenta la producción de 2. La mioglobina no presenta efecto Bohr.tración de H+ en la célula.

La unión de zonas complementarias y adherentes hace que la HbS desoxigenada se polimerice y forme precipitados fibrosos largos que distorsionan mecánica y físicamente al eritrocito. La hipoxia producida conduce a policitemia. La interacción del CO2 con la hemoglobina afecta también la transición del estado T al R. Las proteínas mutantes no muestran cooperatividad en la fijación del oxígeno ni efecto Bohr. Aproximadamente el 15% del CO2 es transportado como carbodioxihemoglobina o carbaminohemoglobina (HbCO2). la fijación del O2 obliga a la expulsión del CO2 de acuerdo al efecto de Bohr que ya revisamos. Los H+ son captados por la Hb que actúa como amortiguadora. Hb-NH2+C02 -* Hb-NH-COO-+H+ Cuando están carbamilados. la afinidad por el oxígeno está disminuida y puede faltar el efecto Bohr. Además de transportar el oxígeno de los pulmones a los tejidos. Hemoglobinas humanas mulantes Las mutaciones en los genes que codifican las cadenas a y P pueden afectar la función transportadora de la hemoglobina. el grupo hemo funciona con Fe2+ pero pequeñas cantidades se oxidan a férrico (Fe3+)y se transforma en metahemoglobina. Hemoglobina S (hemoglobina falciforme). férrica. Hemos mencionado que en la hemoglobina normal. La sustitución de un solo aminoácido de la cadena P (Glu por Val) produce una hemoglobina que. que se presenta en la HbS desoxigenada. los residuos His proximal y distal son reemplazados por Tir la cual estabiliza el Fe en forma oxidada. Así. En los pulmones el proceso descrito se invierte y conforme el oxígeno se une a la hemoglobina. a tensiones iguales de O2 y CO. el trastorno se conoce como una hemoglobinopatía. cuando esto ocurre.La hemoglobina se combina con el monóxido de carbono (CO) para formar carboxihemoglobina. El CO2 forma radicales carbamilados reversiblemente con los extremos amino de las cadenas polipeptídicas de hemoglobina cuando ésta cede su O2. Hemoglobinas mutantes con afinidad mayor de lo normal por el oxígeno. Por tanto. los H+ se liberan y se unen al HCO3 para formar H2CO3. la hemoglobina facilita el transporte de CO2 de los tejidos a los pulmones. Los eritrocitos deformados se denominan células falciformes (forma de hoz) y su lisis al pasar por las sinuosidades esplénicas produce anemia. no cederá suficiente oxígeno a los tejidos. Muchas de las imitantes pueden ser asignadas a una de las cuatro clases siguientes: Hemoglobina M. En las variantes de hemoglobina M. En virtud de la mayor afinidad de la hemoglobina por el CO (210 veces). al cambiar un aminoácido polar (Glu) por uno no polar (Val) se genera en la superficie de la cadena p una zona adherente. En estas mutantes se favorece la forma R. En consecuencia se presenta metahemoglobinemia. Esta zona. la fijación del CO a la Hb excede con mucho a la del oxígeno. los extremos tienen carga negativa y pueden formar enlaces iónicos que estabilizan la estructura cuaternaria. La carboxihemoglobina (HbC0) tiene un color rojo brillante característico. Para desplazar el CO de la Hb-CO en las personas intoxicadas con este gas se requiere el uso de la oxigenoterapia hiperbárica (O2 puro a 3 o más atmósferas de presión) para forzar la expulsión del monóxido de carbono. esta enfermedad hereditaria se conoce también como anemia de células falciformes. causando lisís. por tanto. tiene una zona complementaria en la forma oxigenada de la HbA. Los individuos homocígotos (genotipo S/S) presentan anemia pero los heterocigotos (genotipo A/S) tienen el rasgo .

Precisamente. 3. Obsérvese que la histidina con un pK R = 6.7. este comportamiento excepcional de la histidina le confiere un papel único en las proteínas enzimáticas como activador fisiológico.0. la hemoglobina contiene una elevada proporción de histidina y posee así un alto poder amortiguador en los eritrocitos. muy próximo al pH fisiológico. una enzima puede requerir un imidazol de una histidina que es esencial en su forma básica para que exista actividad catalítica.0 .En el caso de la histidina. A pH 6. la mitad de las enzimas estarán en forma básica (imidazol) activa y la mitad en forma acida (imidazolio) inactiva. Por ejemplo. Por otro lado. las formas iónicas posibles son las observadas en la fig. .0. debido a esta proporción la enzima mostrará el 91% de su actividad potencial máxima. A pH 7. el pH es una unidad (10 veces) por encima del pK del imidazolio y el cociente imidazol/imidazolio es 10:1. es el único aminoácido que puede actuar como amortiguador en los líquidos corporales.

derivadas de un linfocito B. En la respuesta humoral intervienen dentro del eritrocito.30). 3. facili- .bulinas.ticuerpos. hongos. por ejemplo. Las hemoglobinas mutantes son ines. Todas las acciones de respuesta a material En general. que se desarrolla cinas. En estas enPara que una sustancia actúe como antígefermedades.covalentemente a moléculas grandes. no determinan Esta respuesta puede ser de tipo celular y de la formación de anticuerpos pero. al unirse tipo humoral. etc.seis o siete aminoácidos en total de la proteínos bioquímicos y fisiológicos de defensa na. 3. no puede contener múltiples determinantes antige'nicos. En estas mu. capaz de destruir a las sustancias extrañas. un determinante antigénico extraño se denominan respuesta inmune. solo o una molécula pequeña. Cuando se introduce al organismo tético. Un antígeconduce a formas severas de anemia. cen en una proporción de 1:1. virus.2. de tal lo propio (nuestros tejidos y células) de lo manera que inducirán múltiples tipos de anno propio (bacterias.propios de ese organismo. lulas derivadas de estos linfocitos B segreHemoglobinas inestables. la ducción de la cadena complementaria que albúmina de cualquier mamífero. tantes.7. parási. se presenta aumento de pro. Las sustancias que inducen la producción de anticuerpos en un organismo se Normalmente. es antigénica para el hombre cuando destrucción prematura del eritrocito. Un antígeno puede poseer decenas o migracias a los cuales el organismos distingue les de estos grupos determinantes. producen anticuerpos.gan. la sustitución de un aminoácido denLas moléculas de anticuerpos (Ab) son tro del espacio para el hemo reduce la proteínas que pertenecen a las inmunogloafinidad de la subunidad con el grupo pros. esto se la introduce parenteralmente.) y es n o c e r y u n i r s e a c a d a u n o de los determinantes (fig.sustancias por ellas liberadas llamadas linfoción contra el parásito. la síntesis de las cadenas a-o no en un organismo debe poseer una estruclas p de la hemoglobina está disminuida. esto proporciona cierta protec. En la respuesta celular inter. excepto la precipita intracelularmente y da lugar a la humana. cada uno de ellos capaz de recotos.aunque en general no están anémicos. El gene vienen células sanguíneas denominadas linpara la HbS manifiesta elevada incidencia focitos T (que maduran en el timo). debido a que las células los linfocitos B (de bursa o bolsa de Fabricio infectadas requieren más oxígeno que las no de las aves). las cadenas a y p se produ. que son pequeñas regiones de la molécula de antígeno que inducen específicamente la producción de un anticuerpo. células tumorales. proteínica no puede unirse a la apoproteína. que acen poblaciones expuestas endémicamente al túan directamente o bien a través de paludismo. En tura química distinta de los constituyentes consecuencia. y su acción se ejerce a través de infectadas y al adquirir la forma semilunar los anticuerpos (inmunoglobulinas) que cé(de hoz) son eliminadas de la circulación. las células normalmente estabiliza la conformación plasmáticas. Estructura y función de los En las proteínas. trasplantes.denominan antígenos (Ag). un determianticuerpos nante antigénico puede comprender sólo La inmunología estudia todos los fenóme.una sustancia extraña como una proteína. Por ejemplo. La molécula de anticuerpo se asocia de forma no covalente con la sustancia extraña y la elimina del organisTalasemias mo. un tables y destruidas porque el hemo que polisacárido o un ácido nucleico.

Estas poseen la función de sintetizar y secretar inmunoglobulinas a las cuales en un principio. una vez separado de su portador. de péptidos sintéticos o el 2.Cada anticuerpo se une al determinante antigénico frente al que se ha formado. Es el caso. Al estimularse los linfocitos B con un antígeno se induce una serie de cambios que los hace transformarse en células plasmáticas. por ejemplo. lúe- . ANTICUERPOS (Igs) Figura 3.30 Esquema de un antigeno. el hapteno conserva su capacidad de unirse al anticuerpo. 4-dinitrofenol. que puede ser una proteína y donde se muestran distintos e hipotéticos determinantes antigénicos y cómo a ellos se pueden unir diferentes anticuerpos de manera especifica. tan la génesis de anticuerpos dirigidos específicamente contra la molécula pequeña. se les denominó anticuerpos. A estas moléculas pequeñas se les conoce como haptenos. DNP-glicina. etc. Al tiempo que un hapteno requiere la unión a una molécula grande para producir anticuerpos.

por su bajo PM. Sin embargo. la IgG. y ver que emigraban en la fracción gamma. los anticuerpos producidos son idénticos. En la incontribuyeron a vencer el obstáculo. la proteína de Bence-Jones. las proteínas de Bence-Jones son las cadenas ligeras de las inmunoglobulinas que. Al aislar anticuer. El conocimiento cada vez más avanzado cadenas son de bajo peso molecular y se les de ios mielomas y la cantidad anormalmente denomina cadenas ligeras. cada cadena H está . nal de los anticuerpos. munoglobulina más común. constituyen una clona (células provenientes de una misma estirpe) y por tanto. En la estructura tridimensioTodas las células del tumor son idénticas. al conocerse con precisión su estructura y función en 1965. se obtenía una por cuatro cadenas polipeptídicas unidas por pequeña cantidad de una mezcla de globuli. aparecen fácilmente en la orina. homogéneos. aunque es diferente Estructura de ¡nmunoglobulinas cuando se comparan entre sí las proteínas de La heterogeneidad de las inmunoglobulinas diferentes enfermos de mieloma. su El mieloma múltiple es un tipo de cáncer cadena pesada tiene aproximadamente 440 en que se presenta la multiplicación descon. nas pesadas. las de mayor PM se denominan cadeestos pacientes. Dos de estas nas.puentes disulfuro (fig. fue durante años un serio obstáculo para esCada inmunoglobulina está formada por tudiarlas químicamente. La proteína de Bence-Jones es homogénea para cada individuo con mieloma. 3.go.una "unidad básica" tetramérica construida pos contra un solo antígeno. En realidad. H (del inglés heavy).000).aminoácidos (PM 50. (PM 25. se les dio el nombre de gammaglobulinas. al descubrirse la electroforesis. se le denominó inmunoglobulinas (Ig).000) y sus cadenas litrolada de multitud de células provenientes geras contienen la mitad de aminoácidos de una sola célula productora de anticuerpos. L (del inglés alta de una proteína presente en la orina de light).31).

denominada región variable (V). dentro de la región variable hay zonas hipervariables.asociada con una cadena L (fig. La conformación que adopta la molécula completa es de una T o una Y. llamada bisagra o gozne. determinados por cada antígeno particular. 3. con grupos de aminoácidos siempre distintos. . La porción central de las cadenas H es una zona (de unos 15 aminoácidos) de gran flexibilidad. Las cadenas L constan de dos regiones de estructura primaria bien definidas y diferenciadas: una región de gran variabilidad en número y secuencia de aminoácidos. por donde se deforma la molécula cuando se produce la unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ab).32).

a los que se refie- ren las cinco clases diferentes de inmunoglobulinas. Esta clase de Ig se encuentra en el plasma a elevadas concentraciones y es la que se forma en mayor cantidad durante la respuesta secundaria a antígenos extraños. mu. alfa. Otra parte de las inmunoglobulinas muestra una composición fija en número y orden de aminoácidos que se denomina región constante (C). la parte constante determina cinco tipos: alfa (a). respectivamente.Estos son los sitios de combinación donde se realiza la unión de la inmunoglobulina con su antígeno. Clases de inmunoglobulinas Las inmunoglobulinas pueden ser de las clases siguientes: IgG. IgG. En las cadenas pesadas. gamma (y).6). IgA. y épsilon (e). según posean las cadenas pesadas gamma. IgM. de ahí que existan dos tipos de cadenas ligeras: kappa (K) y lambda (X). mu (ji). . La parte constante de las cadenas ligeras puede ser de dos tipos. Las regiones constantes de las cadenas H son las que determinan la clase a la que pertenece el anticuerpo (ver más adelante). delta y épsilon. delta (5). (tabla 3. Cada clase de inmunoglobulinas sólo contienen un tipo de cadenas pesadas pero pueden contener uno u otro tipo de cadena ligera. es la que produce la fijación de las proteínas del complemento y proporciona la región necesaria para que los anticuerpos crucen la membrana placentaria. en cierto modo comparables al sitio activo de una enzima. Los anticuerpos IgG pueden promover la fagocitosis y también activar el complemento. IgD e IgE.

La IgE posee la capacidad de unirse por su extremo Fe (ver adelante) a los mastocitos o células cebadas. Se han reconocido 4 subclases de IgG.Actúan en forma sinérgica con otras secreciones (lisozima y complemento) para destruir a ciertos microorganismos. 3. La IgM tanto en sangre como en otros líquidos se encuentra como tetrámero o pentámero. estas inmunoglobulinas son la defensa inicial contra los antígenos virales y bacterianos invasores. leche y calostro). Se encuentran principalmente en el plasma. Tanto a los dímeros de IgA como a los pentámeros de IgM se pueden unir dos péptidos adicionales que son la pieza de secreción y la cadena J. cuando la madre Rh (-) produce anticuerpos anti Rh ( + ) contra el feto en la llamada enfermedad hemolítica del recién nacido. Como tales. de ahí que esta Ig sea la de mayor PM (900. Fijación de antígeno por molécula de anticuerpo Las regiones variables de las cadenas L y H constituyen un centro de fijación de anticuerpo. bronquial. Aunque presente en plasma en concentraciones bajísimas es la inmunoglobulina que determina las reacciones alérgicas y anafilácticas.000). la IgM es un anticuerpo muy efectivo. Se presentan habitualmente como un dímero de la estructura básica (LH2)2. rinitis alérgica.Tienen la propiedad de atravesar activamente las membranas biológicas. IgM. Cuando los mismos antígenos que indujeron su formación vuelven a entrar.terminal de la cadena H y toda la cadena L. es la que permite a IgA e IgM salir a las secreciones biológicas. Está presente en la superficie de los linfocitos del recién nacido. IgE. con anterioridad a su entrada en el plasma. Parece participar en la diferenciación de linfocitos B a células plasmáticas. urinaria. se producen cambios alostéricos y se liberan grandes cantidades de histamina. Estos fragmentos se designan fragmentos Fab (antigen binding) y pueden fijar antígenos con una afinidad similar a la del anticuerpo completo. puede tener consecuencias nefastas para el feto. incluso el más grave de todos. Las Ig de esta clase se encuentran principalmente en las secreciones extravasculares (secreciones mucosas. Este hecho. urticaria. las IgM pueden promover la fagocitosis de microorganismos por los macrófagos y leucocitos polimorfonucleares y son potentes activadores del complemento. esto puede acarrear la muerte del individuo por hipotensión e insuficiencia respiratoria. dos de los cuales son iguales entre sí y comprenden la porción NH 2 . como son asma bronquial. El alto nivel de IgG en el feto se debe a que esta Ig atraviesa la placenta. y son los primeros anticuerpos que actúen contra un antígeno extraño (respuesta primaria). Al igual que las IgG. ciertos casos de dermatitis. existen dos centros de fijación de antígeno por molécula de anticuerpo. intestinal.33). lágrimas. serotonina. el choque anafiláctico. en determinadas circunstancias. La pieza de secreción es una glicoproteína que se sintetiza en células epiteliales de mucosas y glándulas exócrinas. leucotrienos y otras sustancias vasoactivas que producen vasodilatación periférica o broncoconstricción. se unen por el extremo Fab. Los anticuerpos como los presentes en la artritis reumatoide (anti IgG) son de esta clase. enzima que divide la molécula en tres fragmentos (fig. Debido a esa estructura pentamérica que determina 10 sitios de unión con el antígeno. (unidos estos por puentes disulfuro) de una estructura cova lente básica [(LH)2]5. Esta característica ha podido ser estudiada tratando las Ig con papaína. IgD. Se han identificado 2 subclases de IgM. IgA. Dado que cada unidad básica de anticuerpo contiene dos pares de cadenas (LH)2. El otro . nasal.

escapa a los objetivos de este texto de bioquímica cubrir estos trascendentales aspectos que pueden consultarse en obras dedicadas a esas disciplinas. fragmento conocido como Fe (cristalizable). las reacciones de hipersensibilidad y alergia. En resumen.7. muchas no son estrictamente "plasmáticas" ya que se encuentran ahí sólo transitoriamente o experimentando parte de su catabolismo. 3. si se impide la coagulación de la sangre y se separan las células. Por el contrario. éste no contiene elementos figurados (células) ni fibrinógeno. se deja coagular y se separa el coágulo. el líquido remanente es el suero. Esta propiedad favorece la aglutinación y precipitación clásicas de la reacción antígeno-anticuerpo (Fig. es la mitad COOH. la autoinmunidad.).terminal de las cadenas H y no puede fijar antígeno. Sin embargo. La valencia 2 que tiene cada molécula de Ab permite que cada Ab fije dos Ag diferentes. Proteínas plasmáticas El plasma es el medio líquido de suspensión de los elementos sólidos de la sangre (eritrocitos. plaquetas. 3.Ag por molécula de Ab) situados en los extremos amino-terminales de las cadenas H y L que comprende las secuencias variables de aminoácidos.34). Aunque en el plasma se encuentran más de 200 proteínas. Es evidente que existen sobradas razones para hablar más extensamente de los fenómenos inmunológicos en medicina.3. por lo que se deduce que hay dos centros de fijación de . el líquido resultante es el plasma.33 Hidrólisis de la IgG en los fragmentos Fab y uno Fe por la enzima proteolítica papaina. los trasplantes y el cáncer. que contiene lo mismo que el suero y además fibrinógeno. la sangre sin elementos celulares es el plasma y el plasma sin fibrinógeno es el suero. El término proteínas plasmáticas se restringe a unas 50 moléculas que realmente llevan a cabo funciones Figura 3. etc. basta mencionar la inmunidad a las infecciones. leucocitos. La fuerza de asociación entre Ag y Ab se debe a fuerzas no covalentes. proteína involucrada en la formación del coágulo. Si se toma una muestra de sangre.

6. Como se podrá observar. Hasta hoy se han aislado puras unas 70 proteínas plasmáticas. Es una de las pocas proteínas del plasma que carecen de carbohidratos. la mayoría contiene un resto glucídico. específicas en el plasma: de transporte. A medida que las técnicas de fraccionamiento se hicieron más resolutivas.Figura 3. en particular. reguladora del equilibrio hídrico y ácido base.3). la albúmina es responsable del 80% de la presión osmótica coloidal total deljílasma. de la bioquímica clínica. p y y) que con las primeras técnicas migraban juntas. etc. Está compuesta por 610 aminoácidos en una sola cadena polipeptídica con 50% de a-hélice y 15% de estructura p. Esta es una de las proteínas que une y transporta hormonas tiroideas. La facilidad con la que pueden obtenerse muestras de sangre ha permitido que el estudio de sus constituyentes sea uno de los pilares más importantes del desarrollo de la bioquímica en general y. como las glucoproteínas y lipoproteínas.34 Unión de anticuerpo a antígenos en reacciones de precipitación (a) y en reacciones de aglutinación (b). nutritiva. aunque también fija algunos fármacos como aspirina y barbitúricos. inmunitaria. En la tabla 3. Se sintetiza exclusivamente en el hígado a razón de 20g al día y tiene una vida media de 10 días. . electroforesis e inmunoelectroforesis. Es la más abundante (55%) y tiene un PM muy bajo (69. por lo tanto. sino también conjugadas. permitió separarlas en diferentes componentes: albúmina^lobulinas^y fibrinógeno (ver subcapítulos 3. Las primeras técnicas de separación. F'realbúmina. Albúmina. Las proteínas plasmáticas son una mezcla muy heterogénea que comprende no solo proteínas simples. seguramente quedan muchas por descubrir y caracterizar.000). se identificaron subgrupos de globulinas (a. ordenadas de acuerdo a su movilidad electroforética.7 se muestran las principales proteínas plasmáticas.

responsable éste del bajo punto isoeléctrico (3. colagenasa.) pero sobre todo sobre la elastasa de origen neutrófüo. salicilatos. ésta posee el 90% de la capacidad antiproteásica total del plasma. digitálicos.2. fenilbutazona. También se fija a la albúmina el triptófano. Su actividad antiproteasa es polivalente (tripsina. el más bajo de todas las plasmáticas. por el efecto Gibbs-Donnan. Su función nutritiva consiste en proveer de aminoácidos utilizables para la síntesis de proteínas del organismo. Contiene un alto contenido en carbohidratos. hecho importante porque un incremento de su concentración libre repercute sobre el funcionamiento cerebral (por aumento de serotonina cerebral). en la función coloidosmótica. oligoelementos y algunos fármacos: cafeína. subcapítulo 2. antibióticos. elastasa. Además.4 posee 17 cargas negativas que.2. ok\-glucoproteína acida. ácidos grasos. en ausencia . Forma parte de otras proteínas antiproteásicas. en las enfermedades renales y hepáticas que también se acompañan de hipoalbuminemia. la albúmina a pH 7. Según la teoría elastasaantielastasa del enfisema (destrucción de alveolos pulmonares y ensanchamiento de bronquiolos). barbitúricos. Esta hipoalbuminemia repercute. sobre todo. la albúmina actúa como molécula transportadora de bilirrubina.Además de contribuir a la presión osmótica coloidal. ai-antitripsina. Se sintetiza en el hígado y por su abundancia en plaquetas se le ha relacionado con la coagulación. se presenta edema tisular (ver unidad 2. etc. aumentan la concentración plasmática de cationes y ocasiona indirectamente un aumento de presión osmótica. etc. quimotripsina.1). los neutrófilos pulmonares liberan elastasa de sus lisosomas. disminuye la síntesis de proteínas y se presenta hipoalbuminemia. En casos de desnutrición grave. sobre todo ácido siálico.5) de la proteína.

Se une específicamente a los esteroides testosterona. Fracción y-globulínica. y las proteínas relacionadas con la coagulación.de al-antitripsina. parte de las lipoproteínas. Es sintetizada por las células linfoides. Contribuye a la enfermedad el humo de tabaco que inhibe a la antitripsina. Su papel consiste en la fijación del grupo hemo con lo cual se impide su excreción urinaria y contribuye al ahorro de hierro. al-Macroglobulina. Transcortina. Constituye el 25% de las proteínas plasmáticas. Dentro de las proteínas plasmáticas se encuentra este grupo complejo de proteínas y lípidos unidos por fuerzas no covalentes. Incorpora las dos terceras partes de las hormonas tiroideas circulantes. dada su concentración en la secreción bronquial. la tercera fase es la formación de un coágulo sanguíneo insoluble o trombo rojo. se une prácticamente a todas las endopeptidasas. ocasionando insuficiencia respiratoria crónica. se logra así un ahorro de hierro y se protege al riñon del efecto nocivo de la hemoglobina libre. Su concentración aumenta en tumores digestivos. que por su importancia en el transporte de lípidos es más conveniente tratar en el capítulo correspondiente al metabolismo de estas sustancias. Es otra de las antiproteasas plasmáticas. Su función es unirse irreversiblemente a la hemoglobina con lo que se excede el umbral renal de excreción. Es una proteína de membrana de linfocitos. que transporta hierro. Está integrada por las inmuno globulinas que se trataron en el subcapítulo 3. Da cuenta del 3% de la capacidad antiproteasa plasmática. Factores de la coagulación Se define como hemostasia el cese de la hemorragia que sigue a la interrupción traumática de la integridad vascular. a\-Fetoglobulina. Inter-al-inhibidor de la tripsina. Otras proteínas de la fracción a-globulínica son la ceruloplasmina. a\-Antiquimotripsina. la segunda fase consiste en la formación de un trombo o coágulo blanco de plaquetas en el lugar del daño. androstanolona y estradiol. $2-Microglobulina. Hemopexina. la proteína C reactiva (que aumenta en procesos infecciosos y denominada así porque precipita al polisacárido C del neumococo). células PMN y de cultivos de carcinoma mamario. Aumenta en enfermedades malignas y en pacientes con riñones trasplantados. que es reutilizado por el hígado. posee gran afinidad por los estrógenos. Globulina fijadora de tirosina. La coagulación sanguínea es uno de los tres mecanismos que contribuyen al proceso fisiológico de la hemostasia. El primero de estos mecanismos es la constricción del vaso dañado con objeto de frenar la salida de sangre de la herida. ^-Globulina ligadora de esteroides.7.Se denomina también globulina fijadora de corticosteroides. Haptoglobina. En la primera fase participan sustancias vasconstrictoras locales cuya acción es lúe- . En la fracción fi-globulínica se encuentran también la P1 -glucoproteína específica del embarazo. Sería interesante prevenir a fumadores potenciales con fenotipos predisponentes al efisema. la transferrina.2. Se ha sugerido un papel protector de las mucosas. pulmón embrionario. plaquetas. Proteína ligadora de retinol. carcinoma hepático y tumor embrionario del testículo. En líquido amniótico se ha encontrado elevada en embarazos que conllevan fetos anencefálicos. las células pulmonares son sensibles a la proteasa que destruye la elastina de las fibras y disminuye la elasticidad pulmonar. que transporta cobre y parte de las lipoproteínas. Lipoproteínas plasmáticas. Es la proteína plasmática de mayor peso molecular. etc. Su papel es transportar la vitamina A. Llamada también a l fetoproteína.

a un pH superior al pl. un dipéptido. la proteína tendrá una carga neta negativa. El grupo carboxilo de un aminoácido puede reaccionar con el grupo amino de otro para formar. De esta manera. . No obstante que no es objetivo primordial de este texto revisar exhaustivamente el alto número de reacciones posibles.3. 3. se considerarán aquellas reacciones importantes de identificación de aminoácidos. 3. Reacciones del grupo a -carboxilo El grupo carboxilo a puede esterificarse con alcoholes o formar amidas en presencia de amoniaco. La importancia del cálculo del pl de una proteína se tratará más adelante en este capítulo.7.Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos por un enlace particular (enlace peptídico) que bloquea los grupos ct-amino y a-carboxilo. en las proteínas la existencia de grupos ionizables dependerá de las cadenas R laterales de los aminoácidos. Al igual que con los aminoácidos. En virtud de que el pH isoeléctrico de una proteína es difícil de calcular a partir de los valores de pK de sus aminoácidos constituyentes. A un pH inferior al pl la proteína tendrá una carga neta positiva. los valores de pl de las proteínas se miden experimenta 1mente determinando el pH en el que la proteína no se mueve en un campo eléctrico.1. Reacciones químicas de los aminoácidos Los aminoácidos pueden presentar reacciones químicas a tres niveles: en el grupo a amino. excepto en el aminoácido inicial y el terminal. por medio de un enlace peptídico. y el valor del pl característico de una proteína dependerá de las concentraciones relativas de los diferentes grupos ácidos y básicos.13. en el a-carboxilo y en los grupos activos de la cadena lateral R.

En ésta. con el factor Vlla (activado) plasmático. pues la sangre entra en contacto con una superficie ajena a los vasos y. que forma un complejo activo. al activar el factor X. en conjunto con el ADP liberado del tejido colágeno. la protrombina se transforma en trombina. Esta vía es sumamente rápida en respuesta al daño tisular. contribuyen a la agregación plaquetaria para formar el tapón laxo de plaquetas que constituye la segunda fase. el tromboxano A2 que. La coagulación sanguínea o tercera fase. y una potente sustancia vasoconstrictora derivada de prostaglandinas. en presencia de Ca 2+ . Las dos vías convergen en el camino común y finalmente se forma el coágulo. La vía extrínseca es la que sigue a una lesión en respuesta al daño tisular. además. una pared vascular anormal o un área de circulación sanguínea restringida. adrenalina. Se inicia con la liberación de un factor tisular. la cual cataliza la transformación de fibrinógeno (soluble) en el coágulo de fibrina (insoluble). debido a la presencia de sustancias que no están presentes normalmente en la sangre. una nomenclatura para los mismos. con otras sustancias de los tejidos que interaccionan con ella. La vía intrínseca se inicia a través del contacto de la sangre con una superficie distinta de los va- sos sanguíneos. Vía extrínseca.go amplificada por serotonina. la tromboplastina. A causa de una herida se desencadenan ambos mecanismos. que culmina con la formación del trombo rojo de eritrocitos y fibrina. El elevado número de factores plasmáticos de la coagulación ha obligado a establecer por parte de un Comité Internacional. Esta fase de la hemostasia se mide mediante el tiempo de sangrado. La tromboplastina tisular es una lipoproteína que se encuentra ampliamente distribuida en las membranas . cada factor se designa por un número romano de acuerdo al orden cronológico de su descubrimiento pero que no tiene relación con el orden en el cual actúa (tabla 3. se puede llevar a cabo a través de dos vías {extrínseca e intrínseca) que convergen en una ruta final común que. por ejemplo.8).

enzima autocatalítica.7. Existe interés terapéutico en este activador tisular del plasminógeno.35). porque en ella intervienen un número mayor de factores que. La activación del factor X. las antiproteasas descritas anteriormente y. a la forma de monómero de fibrina. especialmente cerebro. 3.000 veces. La activación del factor X constituye la etapa clave y vía común de la coagulación al estar regulada por las vías extrínseca e intrínseca. El paso de fibrinógeno a fibrina se produce por la acción proteolítica de la trombina sobre el fibrinógeno. Glicoproteínas y proteoglicanos Las glicoproteínas y proteoglicanos son moléculas constituidas por proteínas a las cua- . fundamentalmente. La formación de la red de fibrina se inicia con el paso de protrombina a trombina. Esta es una vía lenta. el efecto de la antitrombina es potenciado varios cientos de veces por heparina.de los tejidos. la urocinasa serinproteasa sintetizada en el riñon y la estreptocinasa del estreptococo p-hemolítico. llamado^fer/ndlisis. que ataca al factor XII y lo activa totalmente (Xlla). estimulan la activación del plasminógeno. de los residuos de glutamato a carboxiglutamato (Gla) en las regiones NH2-terminales de los factores II. así. antagonista de la vitamina K. los procesos de formación del coágulo están bloqueados por sustancias inhibidoras de la coagulación que aseguran la ausencia de trombos intravasculares. 3. IX y X. El sustrato principal del factor Xlla es el factor XI el cual es activado (Xla). cuando la plasmina digiere a la fibrina. La acción del factor Xla constituye la última etapa del sistema intrínseco. Las propiedades anticoagulantes de la estreptocinasa se utilizan a nivel terapéutico. se inicia con la activación del plasminógeno plasmático a plasmina. su sustrato es el factor IX el cual se activa en dos etapas con participación de Ca 2+ . que inhiben la carboxilación. El activador del plasminógeno es una serinproteasa tisular catalíticamente inactiva hasta que se expone a la fibrina. Otros factores anticoagulantes de uso terapéutico incluyen a los cumarínicos. La heparina se localiza en los granulos metacromáticos de las células cebadas que se localizan en la pared vascular. Estas sustancias son principalmente la heparina. generan el factor Xa (activado). se usa como anticoagulante en pacientes predispuestos a formar coágulos intravasculares.4. Vía intrínseca. estos monómeros se asocian y forman una fibra polimerizada conocida como coágulo blando cuyo paso a la estructura insoluble llamada coágulo duro o red de fibrina requiere la presencia del factor XHIa como catalizador. Así mismo. catalizado por el complejo Xa-Ca 2+ -Va-FL. es acelerada 500 veces por la presencia del factor VIII o factor antihemofílico. este último factor es activado previamente por trombina (fíg. VII. el activador ya no manifiesta actividad y la fibrinólisis cesa. enzima que cataliza la transformación de prekalikreína (factor Fletcher) en kalikreína. al operar en un mecanismo de cascada. El valor global del complejo activador de protrombina es de 20. pulmones y capas del endotelio vascular. En situación normal. El dicumarol. La velocidad de activación de la protrombina por el factor Xa aumenta 50 a 100 veces en presencia de fosfolípidos (FL) y Ca 2+ . El cofactor Va acelera el proceso unas 350 veces. catalizada por el factor IXa. por lo que su distribución es muy amplia. para reducir el daño de una trombosis coronaria aguda. que se encuentra a una alta concentración en el plasma. dependiente de vitamina K. la antitrombina III. El fibrinógeno pasa. El proceso de disolución del coágulo a los pocos días de su formación. Se inicia con la fase de contacto en la cual se activa parcialmente el factor XII. que es una serinproteasa capaz de digerir tanto al fibrinógeno como a la fibrina.

Las glicoproteínas forman la mayor parte . los grupos sanguíneos y algunas hormonas. Muchos investigadores del cáncer piensan que el fenómeno de la metástasis se debe. Muchas proteínas de membrana. Casi todas las proteínas plasmáticas. son glucoproteínas. a alteraciones de las glucoproteínas de la superficie de las células cancerosas. excepto la albúmina.les se han agregado cadenas de oligosacáridos unidos por covalencia. por lo menos en parte. son glucoproteínas.

La especificidad de las reacciones inmunológicas a las bacterias depende de los peptidoglicanos de su pared. entre otras moléculas. Las bacterias gram positivas tienen una pared que contiene peptidoglicanos y ácido teicoico. No posee triptófano ni cisterna.12%). La heparina es un proteoglicano en la que más de la mitad de las serinas se encuentran enlazadas con cadenas de polisacáridos. con una glicina cada tercer aminoácido. Predomina en el tejido conjuntivo o conectivo donde forma parte de los tendones. prolina (10. es importante la unión entre la glicoproteína colágena y los proteoglicanos con sulfato y carboxilato (ver más adelante). en virtud de que la pared bacteriana está construida por peptidoglicanos. En la estructura del colágeno predomina la glicina (35%). rígida y muy resistente a la tensión. llamadas mucopolisacaridosis. la heparina se une a la lipoproteinlipasa de la pared capilar y causa su liberación. cartílagos. Existen por lo menos 5 tipos distintos de colágeno en los tejidos por lo que se considera una familia de moléculas que comparten numerosas propiedades. Es de particular interés el estudio de estos compuestos en medicina.9). Los proteoglicanos son de mayor tamaño en comparación con la glucoproteínas. El colágeno. En el aspecto estructural. clasificadas dentro de los errores innatos del metabolismo. Por defectos hereditarios en la enzima lisosomal encargada de hidrolizar los glicosaminoglicanos presentes en los proteoglicanos. Las glucoproteínas son proteínas con pesos moleculares que van de 15. o según la terminología más reciente. cuya síntesis es bloqueada por penicilina.7. etc. tienen 90-95% de carbohidratos. es la que proporciona fuerza estructural y forma a todos los tejidos y órganos del cuerpo. La unidad molecular básica del colágeno en las fibrillas contiene tres cadenas polipeptídicas. alanina (11 %) y los aminoácidos derivados hidroxiprolina (10%) y 5-hidroxilisina (10%). a las cuales se unen una o varias cadenas de oligosacáridos (menos de 15 azúcares) que contribuyen con 60%. (tabla 3. proteína de uso común. Es una proteína insoluble en agua. principal proteína del tejido conectivo es la proteína más común en el mundo animal y más abundante del cuerpo humano. cristalino. (ver unidad de carbohidratos). simplemente colágeno. La propiedad .5 Colágeno y proteínas contráctiles.del mucus secretado por las células epiteliales que permite la lubricación de los conductos del cuerpo. 3.000 a más de un millón. con múltiples cadenas de glicosaminoglicanos. Además de anticoagulante. que se denomina tropocolágeno. en particular de la microbiología. se obtiene como alimento desnaturalizando el colágeno por el calor. Se denomina sustancia fundamental o basal a la estructura de carácter gelatinoso compuesta de fibrillas de colágeno incrustadas en un matriz de polisacáridos aminados y glicoproteínas. su PM es de varios millones. piel. se produce un grupo de enfermedades. La gelatina.

ocasionando fragilidad de los tejidos y la aparición de lesiones de la piel. huesos. Con este nombre se designa a un grupo de al menos 10 enfermedades que comparten entre todas ellas síntomas de debilidad estructural en el . Síndrome de Ehlers . En ausencia de ácido ascórbico. Síntesis de colágeno. En esta enfermedad se impide la formación normal de la triple hélice con la consiguiente degradación de todas las cadenas. Es el nombre que se da a un grupo de 4 enfermedades caracterizadas por múltiples fracturas (fragilidad ósea) que dan como resultado deformidades óseas. El resultado es la fibra de colágeno madura. Enfermedades del colágeno Las enfermedades del colágeno pueden resultar de defectos adquiridos o hereditarios. En el cartílago. sobre todo. a-cetoglutarato. ácido ascórbico. todas ellas características del escorbuto. La consideración de los pasos de biosíntesis del colágeno (fig. hierro ferroso y. no pueden formarse con facilidad los enlaces covalentes y el colágeno se vuelve muy frágil. Este precursor pierde una secuencia guía de 100 aminoácidos (péptido señal) y se transforma en procolágeno. con glucosa o galactosa. El colágeno maduro es una proteína extracelular pero su síntesis es de inicio intracelular bajo la forma de una molécula precursora llamada preprocolágeno. se debe a síntesis defectuosa de una de las cadenas del colágeno tipo I. fenómeno denominado con propiedad "suicidio proteico". entre los primeros podemos ubicar al escorbuto y el latirismo. En una etapa posterior. Las enfermedades hereditarias por defectos en la síntesis o el ensamble sirven muy bien para ilustrar las consecuencias de diferentes tipos de mutaciones. el procolágeno glicosilado alcanza el exterior. en este entrecruzamiento participan condensaciones aldólicas con el e-amino de la lisina que se desamina oxidativamente a un 6-aldehído (al-lisina) y forma bases de Schiff con otros e-NH 2 de lisinas o hidroxilisinas. Después de este proceso intracelular.37) es necesaria para entender estas enfermedades. estructura enrollada de tres subunidades polipeptídicas unidas entre sí por puentes de hidrógeno. dientes y vasos sanguíneos. 3. Sin embargo. se forman puentes disulfuro entre cadenas de procolágeno y se integra una triple hélice que sale de la célula. durante la adolescencia hay una gran demanda de vitamina C para este tipo de reacciones. no puede ocurrir una hidroxilación ulterior de los residuos de prolina y lisina. Osteogénesis imperfecta.más definida es la triple hélice. en las hidroxilisinas. donde se encuentran las cisternas. 3. el procolágeno es glicosilado. se forma un colágeno con dificultad para formar fibras. en está forma las hidroxilasas de prolina y lisina las transforma en hidroxiprolina e hidroxilisina respectivamente. estas fibrillas no tienen la fuerza tensora del colágeno maduro hasta que se forman enlaces covalentes en forma cruzada. El cartílago es una matriz extracelular en la cual el colágeno contribuye a su fuerza tensora y los proteoglicanos son los causantes de su notable elasticidad. los proteoglicanos y el colágeno son biológica y mecánicamente interdependientes. y se forman unidades de tropocolágeno que se ensambla espontáneamente en fibrillas de colágeno inmaduro. La prolina determina su arreglo helicoidal y el pequeño tamaño de la glicina asegura la íntima unión de las tres cadenas que permite una estructura de superhélice (fig. enfermedad que se debe a la ingestión del frijol Lathyrus. Estas enzimas requieren oxígeno molecular. Después de la formación de triple hélice. responsables de los puentes disulfuro (-S-S-).Danlos. En el latirismo. Posteriormente. las enzimas extracelulares amino y carboxiproteasas remueven los propéptidos amino y carboxilo terminal.36).

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. Hay deficiencia de lisinoxidasa y los enlaces cruzados son defectuosos. se manifiesta por piel suelta. En el síndrome de Ehlers-Danlos tipo VI hay una deficiencia de lisil-hidroxilasa. Síndrome de Menkes. Proteínas contráctiles El movimiento es una característica esencial de todas las formas vivas. Síndrome de Marfán: Es una enfermedad que se caracteriza por síntomas relacionados con esqueleto. en especial con ruptura de la aorta. Se ha identificado el colágeno tipo I como el posible factor donde reside la base de esta enfermedad. Por ejemplo. los síntomas son graves por el embarazo o el parto y tendencia a sufrir contusiones. llamada también cutis laxa. que aparece excesivamente arrugada y cuelga en pliegues. esta asociado a un metabolismo anormal del cobre. El síndrome de Ehlers-Danlos tipo V. En el tipo VII del síndrome la piel se magulla fácilmente y es hiperextensible. desde el movimiento de cilios y flagelos hasta el más fino de la mano humana. el síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV. las características clínicas incluyen marcada hiperextensibilidad de la piel y las articulaciones. ojo y corazón..tejido conectivo. El mecanismo contráctil del músculo esquelético de los vertebrados es el mejor conocido. que suelen ter- minar con accidentes vasculares. Las moléculas responsables de esta importante propiedad son las proteínas contráctiles. está causado por defectos en el colágeno tipo III. difícil curación de las heridas y deformaciones músculo-esqueléticas. pero la principal manifestación es la dislocación de las articulaciones como la cadera y rodillas. Se caracteriza porque el cabello toma aspecto rizado.

el) Diámetro de 1 5 A Prolina Figura 3. .37 Estructura de! colágeno desde la secuencia primaria hasta la fibrilla.

el músculo liso no es estriado. la banda I es isotrópica. El músculo esquelético y cardiaco aparecen estriados en el microscopio. Cada fibra muscular contiene millares de miofibrillas. por tres tipos de músculos: esquelético. Las miofibrillas son la maquinaria contráctil del músculo y su unidad es la sarcómera. descubierta por Straub. La línea Z es un material amorfo de a-actinina al cual se unen los filamentos delgados y la línea M es un ensanchamiento de los filamentos gruesos formada por proteína M. 3.38). El músculo esquelético se encuentra bajo control nervioso voluntario. lo cual habla de una síntesis proteica muscular poco activa. Cada sarcómera está formada por filamentos gruesos. Al corte transversal. Este se debe a la alternancia de bandas oscuras y claras. Proteínas musculares La actina. Este sistema mecanoquímico es la maquinaria más eficiente y versátil de conversión energética jamás conocida. Todos los músculos estriados del cuerpo están formados por gran número de fibras. mioglobina y citocromos. 2) debe haber un sistema regulador de la actividad mecánica.500 filamentos que se encuentran inmersos en un citoplasma soluble (sarcoplasma). Más del 40% de la masa muscular de un individuo adulto es músculo esquelético. lo que indica un ordenamiento más al azar. no es refringente. tropomiosina y troponina. ordenadas en paralelo. Un transductor químico-mecánico debe satisfacer varios requerimientos: 1) suministro constante de energía. El músculo es el principal transductor bioquímico que convierte la energía (química) potencial en energía (mecánica) cinética. 3. cardiaco y liso. su contenido en mitocondrias es muy variable. confinados a la zona H de la banda A y que constan de la proteína miosina. banda A. la banda oscura. lo cual sugiere un ordenamiento geométrico regular de las moléculas. las cuales poseen a su vez unos 2. son los llamados músculos rojos. Dentro de la banda I se define una línea muy densa a los electrones o línea Z. dos líneas Z delimitan una sarcómera (fig. cada filamento grueso está rodeado por seis filamentos delgados y cada filamento delgado está rodeado por tres filamentos gruesos (fig. los músculos pueden consumir 85% o más del ATP total producido en el metabolismo. los músculos aeróbicos de actividad continua son muy abundantes en mitocondrias. Detrás de la estructura microscópica de la miofibrilla subyace una estructura molecular de sus componentes. los músculos blancos son poco abundantes en mitocondrias y mioglobina y su metabolismo es anaeróbico. en el hombre. rodeados por una membrana celular (sarcolema). 3) debe existir un operador. Estos requerimientos son satisfechos. El tejido muscular es el más abundante del cuerpo humano. una fuente de energía (el ATP) y un sistema transductor (el músculo). es anisotrópica. Dentro de la banda A se distingue una zona de poca densidad a los electrones o zona H con una línea central muy densa. en cambio.39). los filamentos delgados se localizan en la banda I pero se extienden hasta la banda A y consisten en las proteínas acuna.Para que se realicen los movimientos de una célula (pseudópodos) o de un organismo (contracción muscular) se requiere de un mecanismo disparador del proceso (el Ca 2+ ). Cuando se examinan cortes de una miofibrilla al microscopio óptico o electrónico presentan un aspecto estriado. función cubierta por el sistema nervioso y 4) que la máquina pueda regresar a su estado original. linea M. el músculo cardiaco y liso es de control involuntario. es una proteína globular que representa el 25% en . birrefringente a la luz polarizada. La célula muscular posee un abundante retículo endoplásmico (sarcoplásmico) poco rugoso. Durante una actividad muscular intensa.

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en presencia de Mg 2 + para formar un filamento de doble hélice. se acorta la sarcómera. conserva la actividad ATPasa y se une a la actina-F. se une a la troponina-C y se produce un cambio conformacional que afecta a las otras subunidades de troponina y a la tropomiosina que se desplaza de su lugar y permite interaccionar a las cabezas globulares de la miosina con las moléculas de actina. La meromiosina ligera contiene la porción fibrosa y no muestra actividad ATPasa ni se une a la actina-F. la troponina-I. se produce un deslizamiento de filamentos de actina sobre los de miosina y con ello un acortamiento.40). sino de la zona H (fig. la cual se prolimeriza. se forman 2 fragmentos denominados meromiosinas.5% de las proteínas musculares. Esta despolarización provoca aumento de permeabilidad al Ca 2+ . 3. es una molécula en forma de varilla o bastón que se encuentra asociada con filamentos de actina. esto justificó el considerar que una fibra de actomiosina preparada es. cada cabeza globular está asociada a dos cadenas ligeras. Además. La tropomiosina. Actomiosina. la troponina es exclusiva del músculo estriado. inhibe la interacción actina-miosina y también la actividad ATPasa. proteína fijadora de calcio. En ausencia de calcio la interacción actinamiosina está inhibida por la troponina-I y el músculo está en reposo. interviene en el ensamble de las subunidades C e I al complejo actina-tropomiosina (fig. la troponina-T. La forma globular monomérica es la actina-G. es la proteína más abundante del músculo esquelético (55% de la proteína muscular). Cuando la miosina es digerida con tripsina. 3. . En conjunto. La troponina consta de tres subunidades diferentes: la troponina-C. Al acortarse la zona H. La miosina está compuesta por dos cadenas pesadas entrelazadas helicoidalmente con una cabeza globular en cada extremo. en efecto.peso de la proteína muicular. La meromiosina pesada posee la porción globular y parte de la porción fibrosa. 3. En términos simples. La otra proteína ligada a la actina es la troponina. La porción globular de la miosina tiene actividad ATPasa y se combina con la actina. Hace ya más de 30 años que Szent-Gyórgyi mezcló en un tubo de ensayo actina con miosina y observó la formación de un complejo actomiosina que aumentó la viscosidad de la solución. La característica de este ciclo bioquímico de contracción es que la actina posee poca afinidad por el complejo miosina-ATP (fibra-relajada). Constituye el 2. La actividad ATPasa se incrementa 100 a 200 veces por la adición de actina-F. Ninguna de las dos formas (G o F) muestra actividad catalítica. relajado. se produce la contracción por la elevada afinidad de la actina por el complejo miosina-ADP (fibra contraída). Mientras que la tropomiosina existe en todos los músculos. la energía producida por hidrólisis de ATP se usa para que se produzca la unión-desunión de actina y miosina. la miofibrilla y el músculo completo. Al entrar el Ca 2 + al sarcoplasma. al hidrolizarse el ATP. Bases moleculares de la contracción muscular La contracción muscular se inicia con la llegada del impulso nervioso y con ello la acetilcolina que despolariza la membrana muscular y se alcanza el potencial crítico o de acción que se propaga por el sarcolema. un modelo molecular de la fibrilla muscular. llamado actina-F. El componente fundamental del filamento grueso es la miosina descubierta por Kuhne.41).42). no de filamentos. posee un comportamiento óptico de doble refracción análogo a la fibra muscular intacta. La fibra de actomiosina preparada por Engelhardt. insoluble. descubierta por Bailey. lo cual le da un aspecto característico (fig. La energía que aporta fuerza para la contracción muscular es la hidrólisis del ATP (ver capítulo Bioenergética).

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hacia afuera de la célula por una C 1+-M | + -ATPasa.La relajación de músculo tiene lugar con el cese del impulso nervioso y el retorno del sarcolema a su estado polarizado original lo cual se logra por bombeo de Na+ hacia afuera y de K+ hacia dentro de la célula por me- dio de una Na+-K+-ATPasa. contra un gradiente de concentración. . En esta fase de relajación interviene también el ATP para bombear Ca2+.

La fluorescamina reacciona con los aminoácidos a temperatura ambiente dando un producto fluorescente.2. ya que na con la ninhidrina en caliente para dar un permite detectar cantidades de nanogramos compuesto púrpura intenso (excepto la de un aminoácido o 10-10 a 10"11 moles. te detectar cantidades del orden de 1 microgramo ó 3 * 10~9 moles de un aminoácido. Este es un reactivo aún más sensible (10 a El grupo amino de los aminoácidos reaccio. Los a -aminoáciEl color obtenido con la ninhidrina es la dos en presencia del reactivo dan lugar a los base de una prueba colorimétrica que permi. nales. Reacciones del grupo a -amino puede medirse con un espectrofluorímetro. .100 veces mayor que la ninhidrina). cuya concentración 5.13. prolina que da un derivado amarillo) que La reacción con dinitrofluoro benceno absorbe al máximo la luz con longitud de (reactivo de Sanger) fue muy utilizada hace onda de 570 nm (el amarillo de la prolina a años para identificar aminoácidos N-termi440 nm).dinitrofenil derivados. casi en desuso.El grupo carboxilo puede ser químicamente descarboxilado para dar la correspondiente amina. hoy.

1. El reactivo de Ellman (ácido ditiobis-nitrobenzoico) reacciona con el tiol de la cadena lateral de la cisterna a pH 8. que absorbe intensamente a 412 nm.3. El reactivo de Ehlrich es un ensayo colorimétrico para el grupo indol del triptófano.3. quizá la más extendida es la que los agrupa según las propiedades fisicoquímicas de su cadena lateral.13. fruto del material donde se aislaron por primera vez (asparagina . en cuanto a su polaridad. La más extendida es la denominación trivial o común. El reactivo de Pauly da un color rojo con el imidazol de la histidina y el fenol de la tirosina. 3. La reacción de Sakaguchi se utiliza para cuantificar espectrofotométricamente el grupo guanidino de la arginina.0 dando un producto. en particular. Reacciones de la cadena lateral Un buen número de reacciones químicas pueden ser utilizadas para cuantificar cadenas laterales específicas en una solución de aminoácidos libres o proteínas desnaturalizada. Los aminoácidos se denominan en forma sistemática o trivial.4. el ácido tionitrobenzoico. Clasificación Entre las diferentes clasificaciones estructurales de los aminoácidos.

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