Unamba

RESUMEN
En el presente informe se estudio el aislamiento de levadura procedente de la superficie de una manzana adquirida en el mercado de abastos de la ciudad, se utilizo: agua peptona para la revivificacin de la cepa, el agar Sabouraud para el cultivo de la levadura, a una temperatura de 25C . Los resultados obtenidos nos dieron un crecimiento de 76 UFC a los 5 das del inoculo en la primera dilucin (10-1), 20 UFC a los 5 das en la segunda dilucin (10-2), 6 UFC a los 5 das en la tercera dilucin (10-3), todos presentaron el color caracterstico de blanco lechoso, forma circular, superficie ovalada.
Fecha del boletn

UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIALLABORATORIO

DOCENTE: Bio. Yanett Campos ALUMNO: Christian Andrew Aguilar M.

ABANCAYAPURIMAC

INTRODUCCION
Levadura es el nombre genrico dado a un grupo de hongos Ascomicetes pertenecientes al orden Endomicetales. Las levaduras son microhongos que se encuentran generalmente en forma de clulas nicas y que se reproducen mediante gemacin. Las levaduras fueron en un principio aisladas y utilizadas en el mbito comercial en el ao 1970 y muchas de las cepas de las levaduras de este tiempo se encuentran en uso en la actualidad. La levadura bayanus del Instituto Enolgico del Champagne (Institut Oenologique de Champagne) ha constituido uno de los pilares principales de la industria durante dcadas. El aislamiento y reproduccin de la levadura constituye un proceso largo y de gran trabajo. Primero se identifican las cepas aisladas por lo general en los viedos, frutas y luego se analizan las caractersticas de fermentacin. Se piensa que luego de haber buscado durante treinta aos entre los viedos y frutas, ya se ha encontrado la levadura ideal. En la actualidad, la tecnologa se centra en comprender y manipular lo que ya se ha establecido.

Contenido:
Resumen, introduccin, objetivo Marco Terico

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Materiales y Procedimiento Resultados

Discusiones, Conclusiones, y Bibliografa

OBJETIVO
Estudiar la tcnica de asilamiento de levaduras de la superficie de una manzana

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AISLAMIENTO DE LEVADURAS

MARCO TEORICO
LEVADURAS Las levaduras son organismos pertenecientes al reino de los hongos: Como tales, son organismos heterotrficos por el hecho de que solo pueden alimentarse de materia ya preformada (como nosotros los mamferos), al contrario que las plantas, que son organismos autotrficos y que al estar dotadas de clorofila pueden utilizar la energa del sol juntamente con el aire y el agua para obtener todos los nutrientes. Las levaduras estn distribuidas en casi todos los hbitats naturales. Son comunes en las hojas de las plantas y en las flores, tambin se encuentran en la superficie de la piel y en el tracto intestinal de los animales de sangre caliente donde pueden vivir en simbiosis o como parsitos. Tambin se encuentran en los suelos y en el agua salada donde contribuyen a la descomposicin de plantas y algas. Las levaduras se multiplican asexualmente como clulas individualizadas que se dividen por gemacin o por divisin directa (fisin), hay especies que pueden crecer como filamentos formando el micelio tpico de los hongos. En su apartado de reproduccin sexual las levaduras producen unas estructuras llamadas ascas, que contienen hasta 8 esporas. Estas asco esporas pueden fusionarse entre s y originar un nuevo individuo que podr multiplicarse a travs de una divisin vegetativa. Pero los ms conocido y comercialmente significativo de las levaduras son las especies y cepas relacionadas de Saccharomyces cerevisiae. Este organismo ha sido largamente utilizado para fermentar azcares del arroz, del trigo, de la cebada y del maz para la produccin de bebidas alcohlicas y en la industria de panificacin para expandir o aumentar la masa. Saccharomyces cerevisiae es comnmente usada como levadura en el pan y para algunos tipos de fermentacin. Extractos de levadura se administran a menudo como suplemento vitamnico ya que estn constituidas en un 50% por protenas y son fuente importante de vitaminas B, niacina, y cido flico. ESTRUCTURA DE LA CLULA DE LEVADURA: Una clula de una levadura tpica tiene, cuando se halla plenamente desarrollada, entre 8 y 14 nm de dimetro y una masa de materia seca de 40 pg. Por tanto 1012 clulas desecadas pesan unos 40 g. En vivo, prensadas, ese mismo nmero de clulas pesan unos 200 g. El examen al microscopio ordinario revela que cada clula est rodeada por una pared y que en el interior de la misma se pueden distinguir pocas estructuras, salvo una o ms vacuolas. Para observar el ncleo y varios otros orgnulos se necesita recurrir a preparaciones teidas, o a la microscopa de contraste de fases. La superficie de las levaduras se puede estudiar mediante microscopa electrnica de barrido y las estructuras internas mediante microscopa electrnica de transmisin, sobre preparaciones fracturadas por congelacin, frescas, no fijadas. En la siguiente figura se muestra un diagrama de la seccin de una levadura. Una informacin ms detallada de las partes de la clula exige la identificacin bioqumica de sus componentes. La pared ce-

Diagrama de una electronografa de la seccin transversal de una clula en reposo de levadura de panaderos (Saccharomyces cerevisiae). ER, retculo endoplsmico; M, mitocondrias; N, ncleo; Nm, membrana nuclear; Nn, nuclolo; Pi, invaginacin; Pl, plasmalerna; V, vacuola; Vp, granulo de polimetafosiato; W, pared celular; Ws, cicatriz de gemacin; L granulo lipdico

lular representa el 30 % del peso seco total y tiene un grosor de 100-200 nm. Est constituida por aproximadamente un 40 % de (3 glucanos, otro 40 % de a mananos, 8 % de protena, 7 % de lpidos, 3 % de sustancias inorgnicas y 2 % de hexosamina y quitina. El glucano est unido a la protena y representa el componente estructural ms abundante; se halla fundamentalmen-

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te en la cara interna de la pared. El tamao se encuentra tambin ligado a la protena, a veces a travs de hexosamina, y tiende a localizarse en la cara externa de la pared. La superficie de la clula se encuentra cargada, debido a la presencia de grupos carbxilo y fosfato que, al pH de la cerveza, la confieren una fuerte carga neta negativa. Tambin se encuentran grupos amino, pero slo le confieren regiones locales de carga positiva. Las paredes celulares se pueden disolver mediante el uso de una preparacin enzimtica mixta, procedente de un actinomiceto denominado Arthrobader luteus, o de la glndula digestiva de un caracol comestible, Helix pomada. Generalmente, se requiere un agente reductor, como el mercaptoetanol. Si se mantienen en un estabilizador osmtico, como una disolucin acuosa de manitol al 20 %, las clulas de levadura permanecen intactas, pero esfricas, al haber perdido su pared; se les denomina esferoblastos y, si las condiciones culturales son las adecuadas, resintetizan sus paredes. Algunas tcnicas de manipulacin gentica explotan estos hechos. CULTIVO: Las caractersticas macro y micromorfolgicas son importantes para la identificacin y si la formacin de las ascosporas no puede ser observada en Malta-Glucosa a 25-30C, se inocula elmedio Acetato . Las cepas productoras de cido desarrollan en Malta-Actico y las levaduras xerfilas crecen sobre Malta-Sal -Glucosa o Malta-50%Glucosa. Con estos datos y el resultado de la incubacin a 37C, se puede acceder a la identificacin de las 14 especies ms comunes de levaduras observadas en el 42,3% de los alimentos. Se utiliza tambin el medio Sabouraud par el crecimiento de levaduras. AMBIENTE: La vasta mayora de las levaduras son mesfilas, con una temperatura mxima de crecimiento entre 24 y 48C. Solo unas pocas (2%) son psicrfilas con una temperatura mxima de crecimiento por debajo de 24C, pero mayor es el nmero de las levaduras que tienen la temperatura ptima de crecimiento por debajo de 20C. No hay levaduras que puedan crecer a 50C y solamente unas pocas pueden desarrollar cerca de 0C, entre las que se encuentran Yarrowia lipolytica, Debaryomyces hansenii y Pichia membranae-

faciens. Por otra parte, Kluyveromyces marxianus crece a 48C, mientras que otras de los molinos azucareros son capaces de proliferar por sobre los 40C, entre ellas Pichia polymorpha, Geotrichum capitatum, Saccharomyces cerevisiae y especies de Candida y Debaryomyces. En general, la presencia de etanol o bicarbonato aumenta la temperatura mnima de crecimiento (Dak & Beuchat 1996). La mayora de las levaduras que causan deterioro de alimentos crece a una actividad de agua mnima de 0,90-0,95. En general las levaduras toleran mejor altas concentraciones de azcar que de sal. Entre las que prefieren substratos salados se hallan Geotrichum terrestre, Stephanoascus ciferrii, D. hansenii y Lipomyces kononekoae. Por otra parte Zygosaccharomyces mellis tolera mejor la glucosa que la sacarosa (Dak & Beuchat 1996). CARACTERSTICAS DE LOS CULTIVOS: Crecimiento en forma de velo en la superficie de los medios lquidos indica que se trata de una levadura oxidativa o formadora de velo. La produccin de un pigmento carotenoide confirma que la levadura que ha crecido pertenece al genero Rhodoturola. El aspecto de crecimiento de los microorganismos tiene importancia cuando estos producen un moteado pigmentado en la superficie de los alimentos La mayora de las colonias jvenes de levaduras son hmedas y algo mucosas, aunque es posible que tengan aspecto harinoso. Algunas colonias tienen un color crema o rosado. Las levaduras son oxidativas, fermentativas o bien su actividad metablica es a la vez de ambos tipos. En la superficie de un liquido, las levaduras oxidativas pueden ser en forma de pelcula, de velo, o espuma y por ello se denominan levadura formadoras de pelculas. El aspecto de crecimiento de los microorganismos tiene importancia cuando estos producen un moteado pigmentado en la superficie de los alimentos Las levaduras fermentativas suelen crecer en toda la masa del liquido y producen dixido de carbono.

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MATERIALES
Beaker de 200 ml. Agua peptona. Matraz. Tubos de ensayo. Agar sabouraud. Placas petri. Pipeta. Manzana.

PROCEDIMIENTO

Introducir, la manzana en el medio de agua peptona par revivificar a la levadura y agitar por alrededor de 30 minutos, el medio debe tapar completamente a la manzana.

Si hay bacterias, se aplica Rouling (bactericida)

Libre de bacterias

Medio agua peptona libre de bacterias y carga de levaduras.

1 gota 1 gota 1 gota Cada tubo de ensayo contiene 15ml de agar sabouraud a una temperatura de 45C

10-1

10-2

10-3

Incubacin a 25C promedio.

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RESULTADOS
En la siguiente tabla se muestran el crecimiento de la levadura segn los das.
Da cero Da 1 Da 2 Da 3 Da 4 Da 5

No hay crecimiento

No hay presencia de colonias, t=38C, presencia de agua.

La presencia de No se analizo colonias es muy poca.

No se analizo

Existe presencia de colonia y es posible realizar el conteo

Los siguientes grficos nos muestran el crecimiento al da 5 (lunes 09/05/08)

Dilucin 10-1

UFC101 = 19 4 UFC101 = 76

Dilucin 10-2

UFC102 = 20

Dilucin 10-3

U F C 10 3 = 6

En el siguiente cuadro se muestra la descripcin cualitativa de las colonias

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COLOR FORMA TAMAO BORDE SUPERFICIE CONSISTENCIA ESTRUCTURA INTERNA OPACIDAD ELEVACIN

Blanco lechoso Regular 1.8-2.00mm Circular Lisa Semidura Amorfa Opaco Convexa

DISCUSIONES
SOBRE EL CRECIMINETO: Dak & Beuchat 1996, menciona que la vasta mayora de las levaduras son mesfilas, con una temperatura mxima de crecimiento entre 24 y 48C, pero que responden mejor a temperaturas menores a 30C, el da 1 se tuvo una temperatura de 38C lo cual no dejo crecer a las levaduras normalmente, ya de ah par el da 5 se dejo la placa al medio ambiente y se tuvo el crecimiento adecuado. SOBRE EL COLOR: Montes Daz 2003, menciona al respecto: que la mayora de las colonias jvenes de levaduras son hmedas y algo mucosas, aunque es posible que tengan aspecto harinoso. Algunas colonias tienen un color crema o rosado, las colonias aisladas presentaron un color blanco lechoso, lo cual nos muestra que resultados obtenidos concuerdan con la teora. SOBRE SU HABITAT: Fernndez Vila 2005, menciona que las levaduras son comunes en las hojas de las plantas, en los frutos y en las flores, tambin se encuentran en la superficie de la piel y en el tracto intestinal de los animales de sangre caliente donde pueden vivir en simbiosis o como parsitos. Tambin se encuentran en los suelos y en el agua salada donde contribuyen a la descomposicin de plantas y algas, para el asilamiento se utilizo manzana, lo cual nos indica por terica que existe crecimiento de levaduras tal como se dio en la prctica.

CONCLUSIONES
El crecimiento de levaduras se da dentro de una

temperatura de 24 a 48C, pero para mejores resultados se debe cultivar a temperaturas menores de 30C. El color caracterstico de las levaduras es de color

El habitad natural de las levaduras son la superfi-

blanco lechoso.

cies de las frutas, hojas, tambin se encuentran en el suelo y agua salada.

BIBLIOGRAFIA

Dak T, Beuchat LR. 1996. Handbook of Food Spoilage Yeasts. CRC Press, Boca Ratn, Florida. Fernndez Vila Juan Antonio . 2005. Las Levaduras. http://www.cuinant.com/ Montes Daz Elizabeth. 2003. Mtodo de cuenta total de Mohos y Levaduras. Revista Microbiologa Industrial, Bogota-Colombia.