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MARCADORES MOLECULARES

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VARIABILIDAD GENÉTICA La variabilidad genética se refiere a la variación en el material genético de una población o especie, e incluye los genomas nuclear

, mitocondrial y ribosomal, además de los genomas de otrosorgánulos. La variabilidad genética nueva puede estar causada por mutaciones, recombinaciones y alteraciones en el cariotipo (el número, forma, tamaño y ordenación interna de loscromosomas). Los procesos que afectan la variabilidad genética son la selección natural y la deriva genética. Nos permite explicar por qué los organismos aunque sean de la misma especie, no son iguales entre sí. La variabilidad es la materia prima de la evolución. Para que la selección natural pueda actuar sobre un carácter, debe haber algo que seleccionar, es decir, varios alelos para el gen que codifica ese carácter. Además, cuanta más variación haya, más evolución hay. R.A. Fisher demostró matemáticamente que cuantos más alelos existan para un gen, más probabilidad hay de que uno de ellos se imponga al resto (se fije). Esto implica que cuanta más variabilidad genética exista en una población, mayor será el ritmo de la evolución. Esto se conoce como Teorema fundamental de la selección natural de Fisher, que establece que: El ritmo de aumento en adaptación de un organismo en cualquier momento es igual a su variación genética en adaptación en ese momento.

Sistemas de transformación vegetal. Principios de los Sistemas de transferencia genética en plantas. Antes de elegir un sistema de transformación vegetal, es importante establecer un protocolo de cultivo de tejidos y de regeneración de las plantas. Este protocolo es parte integral de la mayoría de las estrategias de transformación y es generalmente el aspecto más exigente de las mismas. La clave para integrar exitosamente las técnicas de cultivo de tejidos dentro en una estrategia de transformación es la obtención de un sistema de regeneración rápido y eficiente. No todos los protocolos de regeneración son compatibles con todas las técnicas de transformación. Mientras una gran variedad de estrategias de regeneración y transformación son aplicables a muchos cultivos, se requieren protocolos muy particulares y específicos para la modificación de determinadas especies. En términos generales, algunos protocolos son claramente más eficientes que otros. Por ejemplo, la regeneración de embriones maduros a partir de embriones somáticos es el método más adecuado para la regeneración de especies monocotiledóneas. Aplicaciones de la transferencia genética de plantas que incrementa la variabilidad genética. Establecer una buena estrategia de regeneración y cultivo de tejidos es primordial antes de implementar una técnica de transformación. Primero, hay que identificar el tejido o células de las que se puede regenerar una planta, establecer los agentes de selección apropiados, las hormonas requeridas, los medios de cultivos adecuados para desarrollar una regeneración eficiente de plantas enteras y fértiles. Una vez establecidos estos parámetros hay que realizar las construcciones genéticas, y recién entonces determinar el sistema más

apropiado para la introducción del material genético y establecer los principales parámetros del procedimiento correspondiente. Sistemas de transferencia directa de ADN: Sistemas basados en transferencia física. Este último más pequeño y manipulable para introducir genes foráneos entre bordes. Vectores Binarios: plásmido Ti desarmado con solo región vir y en un segundo plásmido bordes de l T-DNA con origen replicación funcional en ambas bacterias. transferirse e integrarse y posibilitar expresión de genes foráneos en genoma de la célula vegetal. (Ver imagen en anexos). Transferencia por microinyección. Plásmidos con información esencial para replicarse. Vectores de transformación. pero no es heredable por la progenie. La transformación de plantas se refiere al evento de introducir e integrar ADN foráneo en células vegetales y regenerar plantas transgénicas. el Dna foráneo de coli se integra en los bordes de su T-DNA por recombinación homologa dando lugar a: Plasmido con región vir y el TDNA con el Dna foráneo. Transferencia con whiskers de carburo de silicio. Los sistemas de trasferencia pueden dividirse en dos grupos: Sistemas basados en vectores biológicos: • • Transferencia mediada por Agrobacterium Transferencia basada en virus vegetales. La expresión transitoria ocurre durante un período corto de tiempo (pocos días) o hasta culminar el ciclo de vida de la planta.coli se transfiere en agrobacterium. . La expresión estable permite la integración del ADN foráneo al genoma vegetal y la consiguiente transmisión a las siguientes generaciones. Transferencia por cationes divalentes y/o electroporación. Tipos de Vectores Vectores Co-integrados: cuando plasmido de E. (Ver imagen en anexos). surgidos como alternativa para transformar especies monocotiledóneas que no son hospedantes naturales de Agrobacterium: • • • • Transferencia por bombardeo de partículas o biobalística. Los métodos de transformación desarrollados permiten la expresión transitoria o la expresión estable del ADN introducido.

Los métodos de transferencia directa presentan diversas ventajas y desventajas al ser comparados con los métodos mediados por vectores biológicos. como las de la región vir o los bordes del plásmido Ti. ya que no son necesarias secuencias particulares. como el Agrobacterium o los virus vegetales. la permeabilización de membranas celulares inducida por corrientes eléctricas (electroporación) y/o por tratamientos químicos con policationes (PEG. El rango natural de hospedantes de Agrobacterium se constituyó en un importante factor limitante en los primeros intentos por transformar monocotiledóneas y algunas dicotiledóneas que no eran susceptibles a la bacteria. e) son útiles para estudiar función y regulación génica. . En una clase se encuentran aquellos métodos basados en la utilización de vectores biológicos. se incluyen métodos tales como el bombardeo con micropartículas (biobalística). la abrasión con fibras de carburo de silicio y la microinyección. Es decir. y en otra clase. que su expresión no será dependiente de la interacción vector-hospedador. independientemente de su susceptibilidad a la infección por parte de los mismos. Desventajas: a) Pueden conducir a una alta frecuencia de re-arreglos del transgén. b) No requieren la eliminación de las células del organismo vector de los tejidos o plantas transgénicas. conocidos como de transferencia directa. aquellos que consisten en la transferencia directa del ADN. c) Las construcciones son más simples y pequeñas. b) La inserción de múltiples copias del transgén es más frecuente que en el caso de los sistemas basados en vectores biológicos. Ventajas: a) Son considerados universales porque. como así también actividad de promotores. ya que en este tipo de métodos la expresión transitoria suele ocurrir en forma muy temprana. Estos nuevos métodos. tanto a nivel transcripcional como post-transcripcional. las células transformadas generalmente contienen secuencias fragmentadas del transgén y del vector en varios sitios del genoma. al no incluir organismos vectores. pueden aplicarse a cualquier especie. d) es más fácil la co-transformación con dos o más genes. se desarrollaron métodos alternativos de transferencia de ADN basados en procedimientos de naturaleza química. PVP) o fusógenos lipídicos. Entre estos últimos. fisicoquímica.Los diferentes métodos desarrollados para la transformación genética de plantas pueden agruparse en dos clases principales de acuerdo con el mecanismo utilizado para la transferencia de ADN. como sucede en la transformación mediada por Agrobacterium. o mecánica. El transgén puede ser transcripto en el núcleo y traducido en el citoplasma independientemente de su integración al genoma nuclear. El bombardeo de micropartículas es el más ampliamente utilizado. Estas dos cuestiones implican que en la transformación directa existe una mayor probabilidad de ocurrencia del silenciamiento génico. En consecuencia. permiten transferir ADN desnudo sin la mediación de vectores biológicos.

La transformación por electroporación ha sido documentada en una amplia variedad de especies y tipos de tejidos. permitiendo así el pasaje de ADN a la célula. siempre que el mismo no esté lignificado. incluyendo la intensidad del campo eléctrico. El alterar estas características mediante la biotecnología de plantas puede hacerse empleando algunos métodos de transferencia directa de AND como los siguientes: Método por permeabilización. Las paredes celulares representan barreras físicas significativas para la transferencia de ADN. Los protoplastos se obtienen siguiendo los pasos mencionados en la transparencia anterior. a electroporación sola no produce altas tasas de transformación. mientras que los protoplastos. Un método alternativo para permeabilizar las membranas celulares y facilitar el ingreso del ADN es la electroporación. Es común el uso de policationes tales como polietilenglicol (PEG). constituyen un tipo de explanto blanco más apropiado. Por otro lado. se utilizan distintas técnicas que incrementan la permeabilidad de las membranas plasmáticas. pero la disponibilidad de protocolos de regeneración de plantas enteras a partir de protoplastos resulta una limitante en la mayor parte de los casos. siendo necesario en algunos casos el agregado de hemicelulasas. por tratarse de células desprovistas de paredes celulares. polivinil alcohol (PVA) y DEA-dextrano que actúan como fusógenos e incrementan la endocitosis del ADN debido a que sus cargas positivas interaccionan con las cargas negativas del ADN y de la membrana plasmática. Se basa en la permeabilización de las membranas plasmáticas de los protoplastos para favorecer el ingreso del material genético. Método por electroporación. La obtención de protoplastos requiere la incubación de tejido vegetal en un medio suplementado con enzimas fúngicas pectocelulolíticas para digerir las paredes celulares.Vectores de transformación. la densidad de protoplastos y la composición del buffer de cultivo. diseño y componentes. Se han determinado las condiciones óptimas para la transformación de células de distintas especies. Las celulasas y hemicelulasas degradan la pared celular. con el objetivo de optimizar la transferencia de ADN a protoplastos. en tanto que las pectinasas digieren la matriz de pectina que mantiene adheridas a las células. El campo eléctrico causa la formación de poros reversibles en la membrana plasmática. El uso de enzimas disponibles comercialmente posibilitó el aislamiento de protoplastos de prácticamente cualquier tejido vegetal. los protoplastos deben ser aislados y lavados. los tratamientos con Ca2+ y calor pueden incrementar la precipitación del ADN. la que consiste en exponer a las células vegetales a intensos campos eléctricos para provocar la apertura de poros y promover la captura del ADN. se incuban luego en una solución buffer conteniendo el ADN (plásmido con el gen de interés y el gen de selección) y son expuestos a pulsos eléctricos de alto voltaje y de duración variable. Además del uso de fusógenos. pero la eficiencia puede incrementarse acoplándola al uso de policationes como el polietilenglicol (PEG). Luego de la digestión. .

posteriormente. Petunia sp. La presión de turgencia de las células vegetales suele dificultar también el procedimiento de inyección. Además. cultivos embriogénicos. Esta técnica se utilizó por primera vez en células animales durante los años 40. d) Permite regular el número de moléculas a transferir. La microinyección de fluorocromos. e) Puede monitorearse a las células blanco durante y después de la transferencia de ADN. cuando se hizo posible la generación y manipulación de microagujas. La microinyección de protoplastos requiere inmovilizar a los mismos en gotas de alginato. se han obtenido plantas transgénicas de Nicotiana tabacum.7 m de diámetro) es a menudo incompleto. La técnica requiere de un micromanipulador y se realiza bajo microscopio. y su uso se extendió posteriormente a las células vegetales. La microinyección es un método de transferencia directa. su aplicación a la transformación de plantas ha sido muy limitada hasta el presente debido a las dificultades para penetrar la pared celular mediante micropipetas e inyectar el núcleo celular (generalmente la vacuola celular ocupa un volumen preponderante). el sellado de la membrana plasmática alrededor de la herida provocada por la punta de la pipeta (alrededor de 0. constituye un método muy aplicable al estudio de funciones celulares y de la fisiología de plástidos. Sin embargo. mediante el cual se inyecta ADN en las células utilizando pipetas microcapilares de vidrio bajo control microscópico. proteínas y material genético es ampliamente utilizada por los biólogos a pesar de sus desventajas relacionadas con la inserción de microcapilares. Durante la transferencia de ADN.Método por microinyección. en la mayoría de las células vegetales y en algunos casos de animales la alta presión celular exacerba los problemas de sellado. . como las huevas de los peces. b) Puede aplicarse virtualmente a cualquier tipo de célula. c) Permite la inyección conjunta de ADN con otras moléculas biológicamente activas. son cultivadas in vitro para regenerar plantas. Utilizando este método. Sin embargo. Las células microinyectadas se dejan recuperar en una gota de medio suspendida en una cámara húmeda y. La microinyección fue ideada principalmente para la transformación de grandes células animales. se han desarrollado protocolos para microinyectar ADN en protoplastos. La microinyección presenta varias ventajas: a) Requiere pequeñas cantidades de ADN. polilisina o agarosa. Por todas estas características. f) Permite la introducción no sólo de ADN sino también de cromosomas dentro de las células. En células pequeñas. Brassica napus y Hordeum vulgare. después de la penetración de la pipeta la presión celular se distiende porque los líquidos celulares son forzados a entrar al capilar. anticuerpos.. células en suspensión y estructuras multicelulares vegetales. cada célula es inmovilizada con una pipeta succionadora.

en los árboles de pino podemos usar como marcadores morfológicos el peso o tamaño de las semillas. hay varias limitaciones para su uso. Este tipo de marcadores son muy utilizados para estimar la variación morfológica existente en una población. pues se ha visto que dicha característica se asocia en la mayoría de las poblaciones con la supervivencia. etc. pues la presencia de A necesariamente implica la de B. Hay otros muchos ejemplos en los que los mutantes producen al mismo tiempo efectos positivos y negativos en los caracteres a seleccionar. De hecho. Por tanto la selección con base en marcadores morfológicos ha sido utilizada de forma muy limitada en la mejora genética de plantas. En ocasiones. de las que la principal es precisamente que se basan en las . una proteína. Por ejemplo entre el mayor rendimiento del grano del trigo y la menor talla de las plantas. La contribución directa de estos mutantes al carácter seleccionado no está cuantificada. etc. y también entre el mayor rendimiento de híbridos de maíz y el ángulo más agudo de inserción de las hojas en el tallo. A lo largo de la historia de la mejora de plantas.) puede considerarse como un marcador. Sin embargo. Gracias al empleo de marcadores ha sido posible mejorar muchas especies que son la base de la alimentación del mundo. La posibilidad de usar marcadores morfológicos como una ayuda en la selección de caracteres cualitativos y cuantitativos en plantas fue sugerida por hace ya más de 70 años. La importancia de los marcadores radica en que ofrecen la posibilidad de estudiar poblaciones de organismos y seleccionar aquellos que presentan rasgos de interés para el hombre. sin embargo simultáneamente produce efectos desfavorables como son una reducción del rendimiento y un mayor encamado del cultivo. es decir. Por ejemplo. Otros mutantes como el bm3 del maíz (pigmento pardo en el nervio de la hoja) proporciona un forraje con menos contenido en lignina y por tanto más alto valor nutritivo. Se consideran marcadores morfológicos a los caracteres de un individuo que se expresan en un ambiente específico y que el hombre identifica con un objetivo determinado. se han hecho intentos para seleccionar caracteres con utilidad agronómica utilizando marcadores morfológicos (denominados también alelos mutantes en contraposición al alelo normal). el uso de marcadores permite seleccionar los individuos aun antes de que expresen el rasgo de interés. el crecimiento y la reproducción. Los marcadores morfológicos fueron el primer tipo de marcadores que el hombre utilizó.) que esté asociada a la presencia o expresión de una característica B (como vigor. pero es muy probable que en estos casos el incremento de rendimiento no se deba a su asociación directa con los marcadores sino a una causa indirecta como es permitir un aumento de la densidad de plantas y del nivel de fertilización en el cultivo. Marcadores morfológicos. se han observado asociaciones entre los caracteres seleccionados y determinados marcadores morfológicos. Hay dos tipos principales de marcadores: los marcadores morfológicos y los marcadores moleculares. etc. resistencia a enfermedades.MARCADORES MOLECULARES Mejoradores Genéticos de Plantas. cualquier característica A (sea un gen. tipo de hoja. altura. ¿Qué es un marcador? Un marcador es un carácter o un gen que debido al ligamiento puede usarse para indicar la presencia de otro gen.

por lo que es importante destacar que no todos los marcadores moleculares pueden considerarse como genéticos. el control genético de la mayoría de las isoenzimas es bien conocido. Estos marcadores tienen la ventaja de que la técnica es relativamente barata.Isoenzimas) Los marcadores bioquímicos incluyen a las proteínas y las isoenzimas o aloenzimas y constituyen la primera generación de marcadores moleculares. Existen dos tipos de marcadores moleculares: los marcadores bioquímicos y los marcadores de ADN. las cuales son fuertemente influidas por el ambiente en que se desarrollan. Las diferencias en la movilidad electroforética de las isoenzimas son resultantes de las diferencias en las secuencias del ADN que codifican tales enzimas. Marcadores bioquímicos. Los marcadores moleculares corresponden a cualquier gen cuya expresión permite un efecto cuantificable u observable (características fenotípicas). accesible y no destructiva debido a que utiliza pequeñas cantidades de material. Este tipo de marcadores pueden evaluarse desde que los individuos están en sus primeros estadios de desarrollo. que consiste en colocar un extracto proteico del material a analizar en los pocillos de un soporte (papel de celulosa o un gel hecho de agarosa o poliacrilamida) que se somete a un campo eléctrico durante varias horas para que se separen las proteínas de acuerdo con su tamaño o carga eléctrica. por lo que es posible realizar inferencias genéticas a partir de los patrones de bandas observados en los geles. Las isoenzimas fueron descubiertas por Hunter y Markert en 1957 y son diferentes variantes moleculares de una misma enzima presentes en una especie. Además. son selectivamente neutrales y están libres de efectos deletéreos (cuando los alelos tienen efectos negativos que imposibilitan la reproducción del genotipo que los posee). Se habla de marcadores genéticos cuando se transmiten según las leyes básicas de la herencia mendeliana. por lo que se ven menos influidos por el ambiente. que además puede detectarse fácilmente. Las proteínas son los productos primarios de los genes y se forman mediante los procesos de transcripción y traducción. las isoenzimas tienen base genética codominante (es decir. (Proteínas . Marcadores moleculares. que en un individuo diploide es posible visualizar la expresión de ambos alelos). efectos pleiotrópicos (cuando un gen controla la expresión de más de un carácter en un individuo) y/o epistáticos (dominancia de un gen sobre otro). las cuales desempeñan la misma actividad pero pueden tener diferentes propiedades Las isoenzimas se identifican mediante el proceso denominado “electroforesis”.características morfológicas o expresadas en el individuo (fenotipo). el gel es colocado en una solución que contiene los compuestos químicos necesarios (colorantes) para que se lleve a cabo una reacción y se puedan observar posteriormente las isoenzimas en forma de bandas de color en el soporte o gel. Por otro lado. . además de que generalmente sólo se pueden identificar y medir en individuos completos o adultos. Marcadores de ADN. Una vez concluida la emigración de las proteínas por medio del frente de corrida denominado Kohlrasusch. y se pueden aplicar usando a todo el individuo o sólo parte de él.

las cuales cortan el ADN en fragmentos de diferente longitud. Finalmente. La hibridación tipo Southern explora las variaciones en la longitud o tamaño de los fragmentos de ADN ocasionadas por la restricción del genoma mediada por una enzima particular (endonucleasa). Finalmente. AFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados) y DAF (amplificación de huellas del ADN). las de reacción de polimerización en cadena (PCR) y las que combinan PCR o sus productos de ADN con la hibridación tipo Southern. Marcadores Basados en PCR: la técnica de PCR. Dentro de esta metodología se encuentran los marcadores llamados RAPD (ADN polimórfico amplificado al azar). los principales pasos del PCR son los siguientes: se extrae el ADN del material a analizar. para después realizar por capilaridad o al vacío la transferencia de los fragmentos a una membrana de papel de nitrocelulosa o de nylon (transferencia tipo Southern). Los ciclos se repiten la cantidad de veces que sea necesario. es una tecnología utilizada para multiplicar (sintetizar) in vitro fragmentos específicos de ADN con la finalidad de detectar una secuencia o gen de interés en el genoma del individuo en estudio. entre otros. que se encarga de realizar los cambios de temperatura necesarios para que se desarrollen las etapas o ciclos anteriormente mencionados. las que se pueden agrupar en tres categorías: las de hibridación tipo Southern. son universales. Esta técnica comprende las siguientes etapas: primero se extrae el ADN del material que deseamos estudiar. Se basa en la amplificación de fragmentos de ADN a partir de secuencias de nucleótidos denominadas “cebador” (primer). Marcadores ADN / Hibridación: la hibridación consiste en la formación de una molécula de doble cadena mediante el apareamiento o unión de bases complementarias de dos moléculas de una sola cadena. Este proceso se realiza en un termociclador. muy abundantes. hasta obtener la cantidad de copias de ADN que se requieran. permiten una detección temprana.Los marcadores de ADN constituyen la nueva generación de marcadores moleculares y solucionaron el problema de la carencia de marcadores que tenían las isoenzimas. y por medio de la enzima Taq polimerasa se lleva a cabo la extensión o alargamiento de la molécula iniciadora (cebador). están presentes en cualquier estadio del individuo. que son capaces de reconocer una secuencia blanco para la cual es complementaria. Existen varias técnicas para identificar marcadores de ADN. pues son capaces de generar una cantidad virtualmente infinita de marcadores. se requiere poca cantidad de ADN para los análisis y el ADN es muy estable y específico para cada individuo (huella . dentro de las metodologías que combinan la PCR o sus productos de ADN más la hibridación tipo Southern. se separa la molécula del ADN en dos hebras (desnaturalización). Ventajas y aplicaciones de los marcadores de ADN. estos fragmentos son separados en geles de agarosa. o reacción en cadena de la polimerasa. En forma general. se induce el alineamiento o reconocimiento del cebador con las secuencias blanco complementarias o molde del ADN. PCR iniciada con microsatélites (MP-PCR). luego se le adicionan enzimas de restricción (endonucleasas). Dentro de esta técnica se encuentran los marcadores RFLP (polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción) y los VNTR (secuencias adyacentes que se repiten en número variable). están los RAHM y RAMPO (amplificación aleatoria del polimorfismo de microsatélites). Son muy ventajosos los marcadores de ADN ya que no son afectados por el ambiente. se hibridizan los fragmentos de la membrana con sondas marcadas (radiactiva o no radiactivamente) para visualizar y detectar las bandas hibridadas.

Selección de la metodología a utilizar. las sondas en los RFLP). el equipo. si se requiere elaborar el mapa genético de una especie. se debe ser realista y desarrollar las técnicas moleculares más adecuadas para nuestro estudio. Es siempre recomendable analizar qué tanto trabajo previo es necesario para llevar a cabo una técnica (por ejemplo. Facilidad en la expresión. . Ausencia de efectos en el desarrollo de la planta. es decir comportamiento como un gen neutro. Co-dominancia. son relativamente costosos. y por tanto no tienen una presencia suficientemente densa en todas las regiones del genoma. Los isoenzimas y los RFLPs son los que más se acercan a estos atributos ideales. necesitan personal entrenado. la construcción de mapas genéticos de alta cobertura genómica y la localización de genes de interés económico. aunque no siempre es bueno limitarse. los reactivos y las instalaciones de laboratorio y condiciones de seguridad que requiere cada técnica (por ejemplo. Finalmente. el análisis de la estructura y diversidad genética en poblaciones naturales y de mejoramiento y bancos de germoplasma. por lo que no es recomendable emplear una técnica más costosa o complicada. Sin embargo. Posibilidad de detección en las primeras fases de desarrollo de la planta. la necesidad de personal capacitado. y simplicidad en la identificación y análisis. Las principales aplicaciones incluyen la obtención de “huellas genéticas” (fingerprinting) genómicas de individuos. la cantidad y precisión de la información requerida es mayor. La selección de la metodología para obtener los marcadores moleculares no es cosa de moda. depende más bien de los objetivos y necesidades del trabajo. Fundamentos y características de los marcadores.génica). el establecimiento de relaciones filogenéticas entre diferentes individuos y especies. Los atributos ideales de un gen marcador son: a) b) c) d) e) f) g) Polimorfismo Herencia mendeliana y no epistasia. Por ejemplo. mapeo de características de herencia cuantitativa QTL (Quantitative Trait Loci ) y selección MAS auxiliada por marcadores (Marker Asisted Selection). Insensibilidad a la influencia y efectos ambientales. por lo que necesariamente se debe recurrir a los marcadores de ADN. quizás con un simple análisis de isoenzimas se pueda obtener la información necesaria. No obstante. equipos sofisticados y un estricto control de la contaminación. El uso de marcadores moleculares en los análisis genéticos y en el mejoramiento de las plantas ha tenido una difusión extremadamente rápida. para determinar la variación de una población. También se debe considerar el costo en sí de la técnica que se va a desarrollar. que además se puedan realizar bajo las condiciones del laboratorio que disponemos. Los isoenzimas tienen el inconveniente de que su número es limitado. variedades y poblaciones. en el caso de RFLP se necesita un depósito de desechos radiactivos).

Estimación de distancias genéticas entre poblaciones. Establecimiento de relaciones de parentesco o "pedigree" entre líneas o variedades para realizar estudios genéticos. 3. líneas puras e híbridos. 200 son morfológicos y 70 isoenzimáticos. para amplificación y separación electroforética) y al igual que los RFLPs pueden cubrir densamente el genoma. Localización e identificación de genes cualitativos o mayores y también de genes con efectos pequeños afectando a caracteres cuantitativos (los así llamados QTLs). especialmente RFLPs y RAPDs. En el maíz como en otros cultivos. Esto permite: a) La clasificación taxonómica de ecotipos o muestras que acceden a los Bancos de Germoplasma como un complemento de los datos morfológicos que han sido utilizados desde los tiempos de Linneaus. b) La asignación de líneas puras a grupos heteróticos con objeto de predecir el valor de los híbridos resultantes del cruce. Identificación y distinción de variedades. Sin embargo. En el genoma del maíz existen actualmente descritos más de 700 marcadores. Los RAPDs son muy fáciles de analizar (después de la extracción del DNA solo necesitan de 4-6 h. tienen sin embargo el inconveniente de que no poseen el atributo de co-dominancia. El método es similar al utilizado en las pruebas de paternidad y parentesco en genética humana. 4. por lo que no es posible distinguir el genotipo homocigótico dominante del heterocigótico. de los cuales aproximadamente unos 450 son RFLPs. Las distancias genéticas más usadas son la modificada de Rogers utilizada con poblaciones segregantes y la de Nei-Li utilizada con líneas puras e híbridos. continuamente se van descubriendo nuevos marcadores. Los marcadores moleculares se han utilizado o se pueden utilizar en los siguientes aspectos de la mejora genética de plantas: 1. aún cuando los costos están reduciéndose progresivamente y nuevas técnicas limpias de fluorescencia pueden sustituir a los isótopos radiactivos. variedades.Los RFLPs son unos buenos marcadores moleculares permitiendo una densidad de mapeo alta en todo el genoma. Esta distinción es imprescindible para realizar la separación de individuos en la generación F2. Uso de los marcadores. Los marcadores de DNA permiten una distinción más precisa de genotipos que los "descriptores" morfológicos requeridos hoy día. Sin embargo estos marcadores moleculares no han sido todavía adoptados por los organismos oficiales encargados de la protección de variedades. . líneas puras e híbridos para proteger los derechos del obtentor vegetal en el Registro de Variedades Protegidas. tienen el inconveniente de que su análisis en el laboratorio es actualmente costoso y frecuentemente necesitan isótopos radiactivos para su resolución. 2.

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