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Qc Manual de Quimica clinica laboratorio

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MANUAL DE QUIMICA CLINICA III ESPECIAL LABORATORIO
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FACULTAD DE BIOANALISIS XALAPA LABORATORIO DE QUIMICA CLINICA III

MANUAL DE LABORATORIO

DE QUIMICA CLINICA III

ALUMNO: WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ SEMESTRE OCTAVO CATEDRATICO: Q.C MARIO ALBERTO ORTIZ GRUPO: 802 JULIO DEL 2003 XALAPA, VERACRUZ
1 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

FACULTAD DE BIOANALISIS REGION XALAPA LABORATORIO DE QUIMICA CLINICA III PRACTICA 1 POTASIO INTRODUCCIÓN: SIGNIFICADO CLÍNICO La dieta contiene, normalmente, entre 50 y 150 mmol de K+ por día. Los riñones excretan entre 80 y 90% de la cantidad ingerida de potasio y contrariamente a lo que sucede con el sodio, no existe un umbral renal para el K+, por lo que éste continúa excretándose en la orina aún en estados de depleción. UTILIDAD CLÍNICA Se utiliza en la evaluación del balance electrolítico, especialmente, en pacientes mayores con alimentación intravenosa, pacientes con tratamiento diurético, pacientes con falla renal aguda, pacientes con hemodiálisis y pacientes con nefritis intersticial o nefropatía. Evaluación de hipertensión arterial donde pueda ocurrir hiperpotasemia y ser causa de falla renal aguda. El K+ debe ser monitoreado en el tratamiento de las acidosis, incluyendo cetoacidosis en la diabetes. Evaluación de debilidad muscular e irritabilidad, confusión mental, seguimientos de leucemia, enfermedades gastrointestinales, encefalopatía hepática, vómitos, fístula, tubos de drenaje; evaluación y prevención de arritmias. Evaluación de alcoholismo con "delirium tremens". Detección, diagnóstico y seguimiento de hipermineralo-corticismos (aldosteronismo primario, síndrome de Cushing, tumor productor de ACTH ectópica, algunos casos de hiperplasia adrenal congénita); golpe de calor, efecto de la ingestión de regaliz. (6,5)

Principal catión del líquido intracelular Es el amortiguador más importante dentro de la célula misma( cerca del 90% se encuentra concentrado aquí) 2 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

FUNCIÓN En la conducción nerviosa, función muscular. En el equilibrio ácido-base por que estos sustituyen a los iones H en el tubulo renal Es el principal amortiguador inorgánico intracelular Cuando hay una deficiencia de K+, se produce una disminución relativa de bicarbonato del K+ intracelular y el pH es ácido.(2) El centro respiratorio responde a la acidosis intracelular y disminuye la Pco2, a través de la hiperventilación. La [ ] K+ también depende en gran medida de las hormonas suprarrenales y si hay una reducción considerable K+ hay déficit de la síntesis proteica. CAUSAS DE HIPOPOTASEMIA Disminución de ingestión Desplazamiento al interior de la célula Aumento en la secreción de insulina posprandial Alcalosis Traumatismo Parálisis periódica Perdida renal de potasio Aumento de los efectos de la aldosterona: aldosteronismo primario y secundario. Hipertensión renovascular y maligna Tumor ectópico productor de ACTH Síndrome de bartter, Cushig, fanconi. Tumor productor de renina Anomalía congénita del metabolismo esteroide Hipomagnesemia Acidosis tubulo renal , nefritis intersticial.

Perdida extrarrenal de K+ Vómito, diarrea, abuso de laxantes Adenoma velloso, síndrome de Zollinger ellison.(1,3,4) 1)Disminución de la entrada de potasio: Dilución del potasio extracelular durante la administración prolongada de fluidos pobres en potasio cuando no se añaden sus sales. 2) Pérdida de potasio orgánico: En secreciones intestinales: Vómitos prolongados (estenosis pilórica, obstrucción intestinal), diarrea (cólera, esteatorrea, síndrome de Werner-Morrison), pérdidas por fístulas (intestinal, biliar, pancreática), adenoma velloso intestinal

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3)Redistribución en el organismo (disminución dentro de las células), glucosa, y terapia con insulina. (6) HIPERPOTASEMIA FALSAS Trombocitosis o leucocitosis de grado muy manifiesto con liberación de K+ Puño apretado y desapretado repetidamente durante la flebotomía Suplementos de potasio.: Infusión rápida de K+. Redistribución del K+ corporal Hemólisis masiva Daños tisulares severos EXCRECIÓN RENAL REDUCIDA DE K+: Insuficiencia renal aguda con oliguria o anuria y acidosis, Falla renal crónica con oliguria (filtración glomerular menor de 3-5 ml/min), enfermedad de Addison, hipofunción del eje reninaangiotensina-aldosterona, pseudohipoaldosteronismo Otros estados con depleción de sodio, después de ejercicios fuertes (sobre todo en individuos que toman betabloqueantes), en shock, en isquemia tisular. con liberación de K+ de los músculos del antebrazo Hemólisis debido al escape de los eritrocitos si se retarda la separación del suero del coágulo. anorexia nerviosa, hipercinética, hiperpirexia después de la anestesia, periódica hiperpotasémica, deshidratación. actividad maligna parálisis acidosis,

DISMINUCIÓN DE LA EXCRECIÓN Insuficiencia renal, aguda y crónica Defectos secretores renales: transplante renal, nefritis intersticial, LES. Hipoaldosteronismo Heparina Fármacos que inhiben la excreción de potasio( trimertropin,espironolactona, triamtereno) DEPLAZAMIENTO DE K+ DEL INTERIOR DE LA CELULA Quemaduras, rabdomiólisis, hemólisis, infección grave, ejercicio enérgico. Acidosis metabólica ene el caso de acumulación de ácidos orgánicos. Hipertonicidad, deficiencia de insulina, parálisis hiperpotasémica Fármacos: succinilcolina , arginina, antagonistas β adrenérgicos. INGESTA EXCESIVA DE K+ OBJETIVO: Evaluar la hipopotasemia y hiperpotasemia sus trastornos que se llevan a cabo. FUNDAMENTO: 4 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

Los átomos de potasio son excitados en la llama a un nivel de energía mayor, al regresar a su estado fundamental emiten energía en forma de luz de una longitud de onda de 768 nm que es específica para el análisis de este elemento. La luz pasa a través de un filtro o un monocromador, que selecciona la longitud de onda de la luz emitida por los átomos del potasio. La luz pasa a un detector de tipo fototubo integrado al sistema de lectura que puede ser digital o analógico. La intensidad de la luz emitida y la respuesta eléctrica del detector, son directamente proporcionales a la concentración del potasio. MÉTODO Espectrofotometría de llama MUESTRA Suero o plasma con heparina diluida 1/20. Condiciones de almacenamiento: Temperatura ambiente. MATERIAL Espectofotómetro de llama, ya sea de lectura directa o de estandar interno Matraz aforado de 1000 ml y matraces de 100 ml Cápsula de porcelana Pipetas volumétricas de 10 ml, 5 ml y de 1 ml. Bureta de precisión de 25 ml Para evitar la contaminación por potasio, todo el material de vidrio deberá ser lavado con una solución diluida de ácido nítrico 1:25 y enjuagada varias veces con agua destilada. REACTIVOS Solución patrón de K+ Se prepara una serie de diluciones de la solución patrón con agua destilada, de acuerdo a la siguiente tabla: Aforar a ml 100 CURVA DE CALIBRACIÓN: 1. Preparar una curva de calibración con los siguientes puntos : 0, 2, 4, 6, 8, y 10 ppm de K+ 2. Ajustar el 0 % de lectura con agua destilada y los botones de Blanc. 3. Ajustar a 100 % de lectura con la solución de 10 ppm de K+ con los botones de la sensibilidad (fine and coarse) . 4. Ya calibrada a 0 y 100 % de lectura, leer las soluciones restantes. 5. Graficar el % Lectura contra las ppm de K+

5 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

TÉCNICA POR FOTOMETRIA LLAMA 1. 2. 3. 4. Calibrar el fotómetro a 0 % lectura con agua destilada. Calibrar el fotómetro a 100 % lectura con la solución de 10 ppp de K+ Introducir la muestra o su dilución y leer el % de lectura. Determinar las partes por millón de K+ con la ayuda de la curva de calibración.

CÁLCULOS: Determine los meq/lt de K+ ( miliequivalentes por litro) de acuerdo a la siguiente fórmula: meq/lt K+ = ( ppm )*( FD ) / peso equiv del K+ ppm: ppm de la muestra de la curva de calibración FD : Factor de dilución Peso equiv. del K+ = 39.10

VALOR DE REFERENCIA SUERO: Adultos: 3,2-5,5 meq/l Cordón umbilical: 5,5-11,5 meq/l Neonatos: 3,8-5,8 meq/l Lactantes: 4,0-5,5 meq/l Niños: 3,5-4,8 meq/l En el plasma, los valores son ligeramente inferiores a los del suero. En el recién nacido, los valores son más elevados que en el adulto (el límite superior es más alto). (6) INTERFERENCIAS: Las partículas que contiene la muestra pueden tapar el mechero, por lo que se recomienda filtrar esta antes de su análisis. El sodio y el calcio pueden causar interferencias si se encuentran en mayor cantidad que el potasio, 5:1 en el caso del sodio y 10:1 en el caso del calcio. La administración IV de penicilina potásica causa en ocasiones hipercalcemia, la penicilina sódica aumenta la excreción de potasio. La glucosa administrada durante la prueba de la tolerancia, o la ingestión y administración de grandes volúmenes de glucosa en pacientes cardiópatas, puede provocar una reducción hasta 0.4 meq/L en la cifra de potasio. El consumo excesivo de orozuz interfiere con las cifras.

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INTRODUCCIÓN: El sodio es el catión más abundante en el organismo, con un promedio aproximado de 60 mEq/kg de peso corporal, o cerca de 4200 mEq en una persona de 70 kilogramos, como porcentaje del peso , el sodio total no varia de manera significativa en función del sexo o la edad del adulto. Cerca del 30% del sodio se encuentra confinado en los huesos, este sodio es inaccesible para la difusión del intercambio con otros sitios de almacenamiento y es fisiológicamente inactivo. El sodio intercambiable se encuentra principalmente en 3 subunidades de espacio extracelular interdependientes como se observa en la figura siguiente(2) Utilidad clínica Evaluación de electrolitos, balance ácido-base, balance hídrico, intoxicación acuosa, deshidratación. AUMENTADO TRASTORNOS QUE CAUSAN PERDIDA DE SODIO Diarrea o vómito se pierde más sodio que agua, es posible la pérdida isotónica de sodio y agua y la depleción de ambos por igual. Una perdida mayor que agua tiene mayor probabilidad de producirse en: 1. Diarrea que ocurre una ileostomía 2. Vómito prolongado en donde hay perdida intestinales además de gástricos. 7 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

3. Lactantes, quienes están en riesgo particular de perder sodio y también líquido debido a que tienden excretar grandes cantidades de sodio a través de su piel aun cuando están sanos y sus riñones no concentran la orina de manera adecuada Drenado de fístulas intestinales Uso prolongado de diuréticos con restricción inadecuada de electrólitos o reemplazo sólo con agua simple. Enfermedad de addison Insuficiencia renal crónica con acidosis.(5) TRASTORNOS QUE PRODUCEN EXCESO DE AGUA Hepatopatías con ascitis debido a una excreción de agua y sodio consistente Insuficiencia cardiaca congestiva con edema, insuficiencia renal con anuria Valores de glucosa debido al aumento de la extracción osmótica de glucosa. INGESTA EXCESIVA DE AGUA Y RESTITUCIÓN INADECUADA DE SAL Sobrecalentamiento del Ingesta de diuréticos cuerpo por ejercicio extenuante, Vómito fiebre alta o incremento de la Aberraciones mentales. temperatura ambiental OTRAS CAUSAS: Deshidratación simple o pura Hiperelectrolitemia cerebral Hemoconcentración del shock Coma diabético Síndrome de conn hiperosmolar(1) Enfermedad de cushing y en el síndrome de hiperfunción corticosuprarrenal primario HIPERSODEMIA Insuficiencia renal aguda en fase anúrica u oligúrica Uremia extrarrenal Shock transfusional por hemólisis intravascular masiva Coma diabético por liberación de potasio intracelular Intoxicación por grave por digitálicos Tratamiento con heparina Trombocitopenia esencial (1) TRASTORNOS QUE CURSAN CON PERDIDA DE AGUA: Vómito profuso prolongado Succión nasogástrica, que remueve más agua y cloruro que sodio Algunas enfermedades infecciosas, como la traqueobronquitis Diarrea acuosa profunda por cualquier causa 8 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

Diabetes insípida , a causa de la secreción inadecuada dela ADH o ausencia total de esta.(5,4) TRASTORNOS QUE CAUSAN INCREMENTO DE SODIO: Ingestión de agua inadecuada Alimentos con alto contenido de solutos como alimentación por sonda rica en proteínas o formulas con un contenido alto en sal.(5) INTERFERENCIAS Variables por drogas:. Aumentado: En suero: sobredosificación de esteroides de sodio, amilorida, aminoácidos, andrógenos, angiotensina, betametasona, bicarbonatos, carbenoxolona, clonidina, corticosteroides, corticotropina, cortisona, desoxicorticosterona, etanol, glucocorticoides, hidrocortisona, metildopa, anticonceptivos orales, prednisolona, progesterona, prolactina, tetraciclina. Disminuido: En suero: anfotericina B, arginina, carbamacepina, clorpropamida, cisplatino, captotril, ciclofosfamida, furosemida, glicerina, ketoconazol, laxantes, componentes mercuriales, oxitocina, somatostatina, espironolactona, sulfonilurea, dapsona, tiazidas, vasopresina. VARIABLES PREANALÍTICAS: Aumentado: En suero: ingreso insuficiente de agua (ancianos, parálisis, pérdida de conciencia, deshidratación), soluciones salinas hipertónicas, ingesta de alcohol, ácido bórico. Ejercicio. Menopausia. En orina: reposo; menstruación, embarazo. Viaje espacial, inmersión en agua. Xantina. Disminuido: En suero: drenajes, sudoraciones profusas; menstruación, embarazo. Hemólisis. Viaje espacial. En orina: dieta baja en sodio. Post parto; sueño; anestesia espinal.

FUNDAMENTO En el análisis de sodio por fotometría de llama, la muestra es aspirada por medio de un nebulizador que descarga la muestra en forma de aerosol (atomizada) a una llama. Los átomos de sodio son excitados dicha llama a un nivel de energía mayor. Al regresar a su estado fundamental emiten energía en forma de luz de una longitud de onda de 589 nm que es específica para el análisis de este elemento. La luz pasa a través de un filtro o un monocromador, que selecciona la longitud de onda de la luz emitida por los átomos del sodio. La luz pasa a un detector de tipo fototubo integrado al sistema de lectura que puede ser digital o analógico. 9 http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/default.aspx Q.C WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

La intensidad de la luz emitida y la respuesta eléctrica del detector, son directamente proporcionales a la concentración del sodio.

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OBJETIVO: Evaluar el desequilibrio del sodio MATERIAL Espectrofotómetro de llama ( lectura directa o de estándar interno) Matraz aforado de 1000 ml y matraces de 100 ml. Cápsula de porcelana Pipetas volumétricas de 10 ml, 5 ml y de 1 ml. Bureta de precisión de 25 ml

Para evitar la contaminación por sodio, todo el material de vidrio deberá ser lavado con una solución diluida de ácido nítrico 1:25 Enjuagada varias veces con agua destilada. REACTIVOS Solución patrón de Na + Disolver 0.2543 gr. de NaCl secado a 140o C. durante 2 horas y aforar a 1000 ml. Con agua destilada. NORMALIZACIÓN Esta solución contiene 0.1 mg de Na + por cada ml.

Se prepara una serie de diluciones de la solución patrón con agua destilada, de acuerdo a la siguiente tabla: Ppm Na + Ml sol. patrón Aforar a ml 0 0 100 1 1 100 2 2 100 3 3 4 4 5 5 100 6 6 100

100 100

CURVA DE CALIBRACIÓN: Preparar una curva de calibración con los siguientes puntos : 0, 1, 3, 4, 5, y 6 ppm de Na+ Ajustar el 0 % de lectura con agua destilada y los botones de Blanco. Ajustar a 60 % de lectura con la solución de 6 ppm de Na+ con los botones de la sensibilidad (fine and coarse) . Ya calibrada a 0 y 60 % de lectura, leer las soluciones restantes. Graficar el % lectura. contra las ppm de Na+

1. 2. 3. 4.

Calibrar el fotómetro de llama a 0 % Lectura con agua destilada TECNICA Calibrar el flamómetro a 60 % Lectura con la solución de 6 ppp de Na + Introducir la muestra o su dilución y leer el % de Lectura Determinar las partes por millón de Na + con la ayuda de la curva de calibración.

CÁLCULOS Determine los meq/lt de Na+ ( miliequivalentes por litro ) de acuerdo a la siguiente fórmula: meq/lt Na + = ( ppm )*( FD ) / peso equiv del Na+ ppm: ppm de sodio en la muestra, de la curva de calibración FD: Factor de dilución Peso equiv. del Na + = 22.99

Las partículas que contiene la muestra pueden tapar el mechero, por lo que se recomienda filtrar esta antes de su análisis. El calcio y el potasio pueden causar interferencias si se encuentran en mayor cantidad que el sodio, 5:1 en el caso del potasio y 10:1 en el caso del calcio. VALOR DE REFERENCIA o Suero: Adultos: 135-146 meq/l o Lactantes: 136-144 meq/l o o Niños: 131-144 meq/l o Recién nacidos: 134-150 meq/l (8)

FACULTAD DE BIOANALISIS REGION XALAPA LABORATORIO DE QUIMICA CLINICA III

PRACTICA DETERMINACIÓN DE CLORURO INTRODUCCIÓN: El cloruro es un anión que existe principalmente en el espacio extracelular combinado en forma de cloruro de sodio o HCL. FUNCIONES Mantiene la integridad celular al influir sobre la presión osmótica y el equilibrio hídrico y el ácido base. Tiene la propiedad recíproca de aumentar o disminuir su [ ] como respuesta a la concentración de otros aniones. Cuando el nivel sérico de cloruros es menor de 100 ,meq/L, la excreción urinaria también será baja. Los cloruros se excretan con cationes durante la diuresis masiva, por cualquier causa y desaparecen del aparato GI cuando hay vómitos, diarrea o fístulas intestinales.

IMPORTANCIA DE LA MEDICION DE CLORURO Los cloruros son útiles para dx de alteraciones ene l equilibrio hídrico y ácido-base Debido a que el jugo gástrico tiene una concentración relativamente elevada de cloruro, los vómitos prolongados pueden provocar pérdida considerable de cloruros con disminución de este en suero. FISIOPATOLOGÍA Los cambios en la concentración de cloruro son proporcionales a los cambios de sodio, indican variaciones en el equilibrio hídrico. Cuando los valores de cloruro se modifican independientemente del contenido de sodio, por lo común se trata de un desequilibrio ácido básico. Una perdida mayor de cloruro requiere un incremento en el bicarbonato sérico para conservar la concentración total de aniones en el líquido extracelular y para combinarse con el sodio. Un incremento en la retención o ingestión de iones cloruro causa la excreción proporcional de bicarbonato en orina, lo cual, a su vez reduce la concentración del bicarbonato base y ocasiona un estado de acidosis metabólica hiperclorémica. HIPOCLOREMIA TRANSTORNOS QUE CUSEN ACIDOSIS RESPIRATORIA: Enfisema pulmonar Neumonía, neumotórax, edema e hiperventilación secundario, anestesia TRANSTORNOS QUE CAUSAN INGESTIÓN REDUCIDA DE CLORURO: Iniciación o restricción estricta de cloruro de sodio para el tratamiento de una enfermedad cardiaca, renal o hepática. TRANSTORNOS QUE CONDUCEN A UAN PERDIDA EXCESIVA DE CLORURO: Vómito, succión nasogástrica, diarrea secundaria a infecciones bacterianas o se cunadria a cloridorrea congénita, uso excesivo de diuréticos, enfermedad de addison. Aldosteronismo primario, pielonefritis crónica, cetoacidosis diabética. Trastornos que conducen a la retención de líquido en el espacio vascular y trastornos como insuficiencia renal aguda con anuria. OTROS: Quemaduras extensas Hiperparatiroidismo grave Intoxicación espontánea Enfermedades perdedoras de sal Sobrehidratación Ciertos tratamientos con diuréticos. HIPERCLOREMIA Trastornos que conducen a la reducción de líquido intravascular, los cuales causan una aumento relativo más real del cloruro sérico. Algunos tipos de acidosis metabólica como la secundaria a: Intoxicación farmacológica Acidosis tubular renal por deficiencia de bicarbonato base Deshidratación

Síndrome de cushing Alteraciones metabólicas Hipertiroidismo Ácidosis tubular renal Diabetes insípida Hiperventilación Hipoparatiroidismo

INTERFERENCIAS La [ ] plasmática de cloruro en el lactante es mayor que en los niños y los adultos. Ciertos medicamentos alteran el nivel de cloruro La administración IV excesiva de solución salina lo eleva OBJETIVO: Detectar el desequilibrio ácido básico y evaluar el estado hídrico y el equilibrio extracelular y de cationes -aniones FUNDAMENTO: El cloruro desplaza el tiocianato de las formaciones de mercurio no ionizadas del cloruro de mercurio. El tiocianato reacciona con iones ferrosos para formar un complejo de color rojo que puede ser medido a 480 nm. La intensidad de color es proporcional a la concentración de cloruro.

MATERIAL Y REACTIVOS: Espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 480 nm. REACTIVO DE CLORURO (Cat. No. 2451), BLANCO DE CLORURO (Cat. No. 2452), y CALIBRADOR DE CLORURO (Cat. No. 2453). 0.02 mL micropipeta 2. 4.00 mL pipeta o dosificador Cronómetro Tubos de cultivo y tablero MUESTRA Plasma con heparina RECOMENDACIONES DE LA MUESTRA 1. Separe el suero no hemolizado del cuágulo de sangre tan pronto como sea posible. Puede usarse plasma. 2. Las muestras hemolizadas o lipémicas no deben usarse. 3. No tome sangre de un miembro que reciba una infusión. 4. Puede usarse el fluído cerebroespinal.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA o El suero de cloruro aparece estable por 7 días a 2-8° C y tres meses de congelación. Almacénese en un contenedor sellado. ADITIVOS: No se requieren aditivos o preservativos especiales. SUSTANCIAS INTERFERENTES: Los pacientes que reciben bromuro pueden mostrar niveles de cloruro falsamente elevados. Young et al (4) ha revisado los efectos del medicamento en el suero de cloruro. TÉCNICA: 1. Coloque 4.00 mL del reactivo en tubos etiquetados Blanco de Cloruro, Calibrador, Control, Muestra 1, etc. 2. Coloque 0.020 mL de muestra en un tubo debidamente etiquetado. 3. Permita a las muestras de prueba permanecer a temperatura ambiente (15 - 30° C) por 5 minutos. 4. Ajuste el aparato a cero absorbencia a 480 nm usando Blanco de Cloruro. 5. Lea y registre los valores de absorbencia del Calibrador, los Controles y Desconocidos. CALCULOS: Use la siguiente ecuación para obtener las concentraciones Desconocidas: Desconocido (mEq/L) = Abs. Desc. -------------- X Cal. Conc. (mEq/L) Abs. Cal. EJEMPLO: Un Calibrador 100 mEq/L tuvo una Abs. = 0.820 mientras la Abs. Desconocida = 0.780. La concentración de cloruro del Desconocido es: 0.780 -------- X 100 mEq/L = 95 mEq/L 0.820

LIMITACIONES 1. Tenga precaución de no tocar la punta de la pipeta con los dedos pues puede contaminarse el cloruro. 2. La exposición de las muestras o el reactivo a los vapores de ácido hidroclorídrico pueden ocasionar resultados elevados.

VALORES REFERENCIA 96 - 106 mEq/L CSF (Adulto) 118 - 132 mEq/L CSF (Niño) 110 - 130 mEq/L Este intervalo representa el 95% de confianza obtenido de pacientes clinicamente normales. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia. CARACTERISTICAS DE REALIZACION LINEARIDAD: Este método es lineal en una variación de 70 - 140 mEq/L. VALORES DE REFERENCIA: o En suero o plasma fresco (método de Shales y Shales): o Adultos (hombres y mujeres): 98,7-107 mEq/l o Lactantes: 105-115 mEq/l

INTRODUCCIÓN: El fósforo se encuentra en el organismo formando parte de compuestos orgánicos (proteínas, lípidos, carbohidratos, ácidos nucleicos, etc.) o como fosfatos inorgánicos .(4) Anion con predominio intracelular ocupa el: 1% del peso corporal 80% se halla combinado con el calcio en los huesos y los dientes, solo el 10% se incorpora combinado con proteínas, lípidos,ch y otros compuestos del músculo y la sangre Es importante elemento constitutivo del hueso y es crucial en la transferencia de energía y en el metabolismo celular(2)

las principales funciones del la [ ] de fosfato inorgánico del plasma es: absorción intestinal, excreción renal e intercambios entre los espacios intracelular y extracelular transporte de energía, como en la estructura de los tejidos Mantenimiento del ph de los líquidos corporales. TODOS ESTOS PROCESOS SE REGULAN POR LA: acción de las hormonas PTH, calcitonina y la vitamina d. Utilidad clínica evaluar el equilibrio de fósforo en el organismo. por aumento de ingresos: admón excesiva de sales de fósforo por vía oral(productos lácteos) intoxicación por vitamina d, admón. laxantes, hiperrreabsorción intestinal de calcio con hipercalcemia. por reducción de la eliminación renal disminución de absorción alimentación parenteral con contenido inadecuado de fosfato, síndrome de mala absorción, bloqueo de la absorción por hidróxido de aluminio, osteomalacia por deficiencia o resistencia a vitamina d. aumento de la perdida: fármacos fosfotúiricos, dm, hiperparatiroidismo, raquitismo hipofosfatémico, osteomalacia congénita, oh. desplazamiento intracelular de fósforo: admón. glucosa, fructosa, esteroides anabólicos perdida anormal después de repleción (1,4,5)

disminuido: hiperparatiroidismo déficit de vitamina d
DISMINUIDO

defectos en la reabsorción de fósforo a nivel renal septicemia neoplasma maligno de próstata feocromocitoma

acidosis diabética(2,3,4,5) osteomalacia, gota, talasemia mayor y menor cirrosis hepática, pancreatitis aguda, malabsorción de causa inespecífica, osteomielitis, acidosis tubular renal proximal y distal.

variables por drogas: aumentado: andrógenos ergocalciferol furosemida hormona de crecimiento . disminuido: acetazolamida, antiácidos alcalinos aminoácidos agentes anestésicos . anticonvulsivantes epinefrina, fructosa, levonongestral, litio, teofilina medroxiprogesterona meticilina, xilitol ergocalciferol, etanol

variables preanalíticas: aumentado: enfermedad aguda uremia. menopausia neonatos pérdida de peso hemólisis . disminuido hiperventilación obesidad cetoacidosis menstruación trauma hospitalización cafeína; glucosa. Luz(6)

OBJETIVO: Facilitar el diagnostico de los trastornos renales y desequilibrio ácido básico Descartar trastornos endocrinos, esqueléticos y de calcio FUNDAMENTO: En un ácido mediano, el molibdeno reacciona con fosfato inorgánico para formar fosfomolibdeno. La absorbencia a 340 nm es directamente proporcional al a concentración fosfórica inorgánica. MATERIAL Y REACTIVOS: Espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 340 nm. REACTIVO DE FOSFORO RAPIDO 340 (Cat. No. 0111) y CALIBRADOR DE FOSFORO (Cat. No. 0112) Micropipeta de 0.01 mL Pipeta de 1.00 mL Tubos de ensayo, tablero y cronómetro. RECOMENDACIONES PÁRA LA MUESTRA 1. Se recomienda separar el suero de ayuno del coagulo de la sangre lo más pronto posible. 2. 2. El plasma no deberá usarse ya que los anticoagulantes pueden producir valores bajo falsos. 3. Las muestras hemolizadas pueden dar valores altos falsos. 5. Las pruebas de ictericia y lipémicas requieren un blanco de suero. ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA o El fósforo aparece estable en suero por 7 días a 2 - 8° C y congelado por 6 meses. ADITIVOS: o No se necesitan aditivos o preservativos especiales. TÉCNICA 1. Coloque 1.00 mL de REACTIVO DE FOSFORO RAPIDO 340 dentro de tubos etiquetados como Blanco de Reaactivo, Control, Muestra 1, etc. 2. Coloque 0.01 mL de muestra dentro de tubos apropiados y mezcle bien. Use agua destilada como muestra para blanco de reactivo. 3. Permita reposar la muestra de la prueba por un minuto a temperatura ambiente.

4. Ajuste el instrumento a cero absorbencia a 340 nm usando el blanco del reactivo. 5. Lea y registre las absorbencias para el Calibrador, Control, y Desconocidos. BLANCO DE SUERO: Las muestras ictéricas o lipémicas requieren un blanco de suero. Los sueros de control lifolizado son generalmente turbios después de la reconstitución y deben ser enblanquecidos. 1. Coloque 1.00 nm de 0.9% de solución de cloruro de sodio en un tubo. 2. Añada 0.01 mL de la muestra. Mezcle bien. 3. Ajuste el instrumento a cero de absorbencia a 340 nm con 0.9% de solución de cloruro de sodio. 4. Lea y registre la absorbencia del blanco de suero. 5. Sustraiga la absorbencia del blanco de suero de la absorbencia de la muestra obtenida en EL PASO 5 DEL MANUAL DE PROCEDIMIENTOS. Use este valor en el cálculo de la concentración desconocida. ESTABILIDAD DEL PRODUCTO DE LA REACCION FINAL: o Las muestras de la prueba deben leerse dentro de 60 minutos. CALCULO DE RESULTADOS

La siguiente ecuación se usa para determinar concentraciones Desconocidas: Desconocido (mg/dL) = o Abs.Desc. o -------------- X Cal. Conc. (mg/dL) o Abs. Cal. EJEMPLO: Un calibrador de 10 mg/dL tuvo Abs. = 0.540 mientras la Abs. Desconocida = 0.178. La concentración desconocida de la Desconocida es: 0.178 -------- X 10 mg/dL = 3.3 mg/dL 0.540 VALORES REFERENCIA 2.8 - 5.0 mg/dL (7)

REFERENCIAS: 1. Balcellls, interpretación clínica por el laboratorio, 18ª edición, 2001, Editorial masson, paginas:101,108, 111, 114, 121 2. Cogan, M, Líquidos y electrólitos, fisiología y patología, 1era reimpresión, 2001, Editorial Manual moderno, pagina:4,5,9,10 3. Fischbach.T.F., Manual De pruebas diagnósticas, Editorial Mc graw Hill, quinta edición, 1997, pagina: 4. Tierney, M.l., Diagnostico clínico y tratamiento, 37ª edición 2002, editorial el manual moderno, pagina: 875,876,879,880,882,883,884. 5. Treseler, M.K, Laboratorio clínico y pruebas de diagnostico, 1era edición , Editorial el manual moderno, pagina:8,9,10,14,19,282,283, 6. www.farestare.com.av 7. www.cimascientifica.com (Técnicas de cloruro y fósforo) 8. CAHESA INDUSTRIA QUÍMICA ( Técnicas de sodio y potasio por fotometria)

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INTRODUCCION:

Las concentraciones séricas dependen de las partes de los valores séricos de proteínas, en particular albúmina, cuando la concentración de calcio disminuye de manera secundaria a

la disminución en los valores de proteínas séricas, rara vez se presenta la tetania debido a que tal decremento involucra sólo la fracción metabólicamente inactiva, o calcio unido. Cation extracelular y es él + abundante Constituye 2% del peso corporal El 1% del calcio total del cuerpo se encuentra en solución en los líquidos del cuerpo En suero el 50% se encuentra como calcio ionizado, el resto forma un complejo con proteína con la albúmina 40% o aniones , incluso citrato, bicarbonato y fosfato. Es indispensable para formación, conservación y reparación hueso Mantenimiento grado de excatibilidad y tono muscular Permeabilidad de membranas celulares y poros

La [ ] normal de Ca total en suero es 9-10.3 mg/dl, esto es calcio ionizado 4.7-5.3 mg/dl, el cual bajo la regulación fisiológica (contracción muscular y la función nerviosa). La [ ] normal de Ca total en suero es 9-10.3 mg/dl, esto es calcio ionizado 4.7-5.3 mg/dl, el cual bajo la regulación fisiológica (contracción muscular y la función nerviosa).(4) OBJETIVO: Esclarecer los diagnósticos de diferentes trastornos neuromusculares, esquelético, endocrino, arritmias, deterioro del equilibrio ácido base. FUNDAMENTO:

El ácido cloroanidrico este precipita al calcio en forma de cloronidrato (se disuelve con solución EDTA) esta solución va formar cloronidrato de sodio (color rosa) y esta intensidad de color es proporcional a la concentración de calcio en la muestra
HIPERCALCEMIA Puede ocurrir por 2 mecanismos principales por movilización del calcio óseo o por aumento en la absorción intestinal de Ca2+. Todos los procesos que cursan por con hiproproteinemia ocasionan hipercalcemia Hiperparatiroidismo primario, mieloma múltiple, enfermedad de cushing Enfermedad de paget Insuficiencia suprarrenal Tiroxicosis grave, acromegalia SITUACIONES QUE CAUSAN AUMENTO EN LA RESORCIÓN ÓSEA: Enfermedad ósea masiva Atroifia ósea invasiva Osteoporosis o osteomalacia Neoplasias óseas Atrofia ósea aguda Procesos que cursan con hipoxemia, enfisema, neumonía, insuficiencia cardiaca. Intoxicación por vitamina D o A Hipercalcemia familiar benigna Carcinoma con producción de PTH Síndrome de burnett Infecciones fúngicas y cólera pancreático.(1,4)

La HIPOCALCEMIA crónica suele coexistir con hiperfosfatemia e hipomagnesemia. CAUSAS FISIOLÓGICAS: Disminución albúmina , hiperfosfatemia, inducida por aminoglucósidos, diuréticos de asa, plicamicina,etc. ENFERMEDADES ENDOCRINAS: Hipoparatiroidismo, hipocalemia familiar, sepsis, Insuficiencia partiroidea AUMENTO EN LA ABSORCIÓN: Síndrome de malabsorción: enfermedad celíaca, esprue y estatorreas , intestino corto, déficit de vitamina D. Raquitismo, osteomalacia y , tetania. Uremia por insuficiencia renal terminal, síndrome nefrotico Hipocalcemia medicamentosa, por administración de sales parenterales de magnesio. Pancreatitis aguda.(3,4) MATERIAL Y EQUIPO Tubos de 13x 100 Pipetas Espectrofotómetro TÉCNICA 1. En un tubo de ensaye coloque 1 ml de suero y añada 1 ml de ácido cloranidrico y deje reposar 30 minutos, después centrifugue a 800 rpm por 10 minutos y decante el sobrenadante deje reposar 3 minutos sobre el borde del tubo y seque el borde del tubo con el papel filtro. 2. Lavar el precipitado con 5 ml de alcohol isopropilico , centrifugue 3 minutos a 1500 rpm y elimine el sobrenadante de la misma forma anterior. 3. Añadir al precipitado gotas de agua destilada y resuspenda añadiendo 6 ml de EDTA, se tapa el tubo y se agita por inversión, hasta solubilisar el precipitado totalmente. 4. Leer a 520 nm ajustando a 100 de transmitancia o absorbancia con agua destilad CALCULOS : no se realizo RESULATADOS : no se realizo VALORES DE REFERENCIA 8.5-10.5 MG / 100 ML

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES: Es importante llevar cabo una determinación de calcio en el laboratorio para vigilar los diferentes trastornos que se pueden presentar como endocrinos o neuromusculares.

Debido al tiempo que se nos acumulo , ya no pudimos realizar en la práctica por eso es importante programar nuestro tiempo para las actividades que realizamos en el laboratorio. REFERENCIAS 1. Balcells, G.A., La clínica y el laboratorio, 18ª edición, Editorial Masson, 2001, pagina: 2. Fischbach.T.F., Manual De pruebas diagnósticas, Editorial Mc graw Hill, quinta edición, 1997, pagina: 3. Tierner, M.L., Diagnóstico clínico y tratamiento, 37ª edición, 2002, Editorial manual moderno, página:885,886 4. Treseler, M.K, Laboratorio clínico y pruebas de diagnostico, 1era edición , Editorial el manual moderno, pagina:2
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PRACTICA

INTRODUCCION: El Mg2+ se concentra en hueso, cartílago, células que permite utilizar el ATP Cation + abundante y es intracelular La deficiencia de Mg2+ provoca salida de Ca2+ de los huesos que resulta una calcificación anormal en aorta y riñón SIGNIFICADO CLÍNICO Es uno de los principales cationes inorgánicos, sus niveles son mantenidos por la dieta e influenciados por la hormona calciotrópica. Las concentraciones intracelulares son superiores a las extracelulares (séricas), las cuales pueden permanecer normales con una depleción hasta del 20% del magnesio corporal total. El magnesio actúa como cofactor en más de 300 reacciones enzimáticas. Es útil para determinar deficiencia o exceso de magnesio. La hipermagnesemia potencia el efecto cardíaco de la hiperpotasemia. (5)

FUNCIONES El Mg2+ ion activador que participa en la función de muchas enzimas implicadas en la transferencia de fosfato. Ejerce efectos fisiológicos en el SN que semejan a los del Ca2+ que actúan directamente en la unión mioneural. El 50% de magnesio total del cuerpo se encuentra en estado insoluble en los huesos 5% se encuentra como catión extracelular y el resto esta contenido como catión intracelular La concentración alterada de Mg2+ en plasma suele provocar una alteración concomitante del Ca2. La hipermagnesemia suprime la secreción de PTH con la hipocalcemia presentada(3)

SE OBSERVAN AUMENTOS EN: FISIOLÓGICAMENTE: embarazo y lactancia prolongada Ingesta o admón. De sales de magnesio(antiácidos o laxantes) HIPERPARATIROIDISMO( eleva un 25% total de un 50-60) Y hipoparatiroidismo Insuficiencia renal, enfermedad de addison, acidosis diabética, infecciones crónicas, OSTEOARTRIRIS, EN PROCESOS DE RABDOMIÓLISIS Deshidratación, insuficiencia renal (aguda o crónica), diabetes mellitus incontrolada, insuficiencia adrenocortical, trauma tisular, hipotiroidismo, lupus eritematoso sistémico, mieloma múltiple.(1,4,5)

DESCENSO DE MAGNESEMIA Se pude provocar a la vez hipocalcemia e hipopotasemia Disminución de absorción: Malabsorción,laxantes,desnutrición,OH, admón. Parenteral Mg2+ AUMENTO EN PERDIDAS RENALES Hiperparatiroidismo, Hipercalcemia, expansión de volumen, fármacos, etc Hepatitis viral, porfiria intermitente aguda y epilepsia, absorción anómala (síndrome de malabsorción Kwashiorkor), pancreatitis aguda, alcoholismo crónico, delirium, cirrosis, trastornos neuro-musculares, osteoporosis, eclampsia, pielonefritis, enfermedad de Addison. (3,4,1)

INTERFERENCIAS: Tx prolongado con salicilatos, gluconato de Ca2+litio y Mg2+ ↑ de manera artificial las cifras. La hemólisis invalida los resultados debido al 75% de Mg2+ en sangre se encuentra localizada dentro de los eritrocitos.(2)

OBJETIVO: El alumno evaluara la magnesemia evaluara la función neuromuscular o renal

FUNDAMENTO: El magnesio se valora con amarillo titán, este es un polímero de alto peso molecular( goma gutta, hidroxilamina, gelatina, alcohol polivinil, goma arábiga) como coloide protector, lo que permite una estabilización de la coloración durante 2 horas. Para eliminar la interferencia del calcio se usa como blanco una solución de cloruro de calcio. MATERIAL Y EQUIPO Solución de coloide al 0.1% en agua destilada Solución amarillo de titán de 50 mg % en agua destilada Solución testigo de Mg de 1 mg/ml MgCl2 845.8 mg. y 6 H2O disolver en 1oo ml agua destilada Solución para la curva de calibración Solución de cloruro de calcio: se disuelve 13.88 de esta sal en 100 ml de agua destilada y se obtiene una centrifugación de 0.05 mg de Ca/ml Solución de tungastato de sodio al 10% Ácido sulfúrico 0.66 N Hidróxido de sodio 4N TÉCNICA 1. En un tubo de ensaye coloque: 1 ml de suero añadir 5 ml de agua destilada 2 ml de Tungstato 2 ml de H2SO4 2/3 N mezcle y centrifuge a 2500 rpm durante 5 minutos 2. A 5 ml del sobrenadante agregue: 1 ml agua destilada 1 ml de solución de coloide 1 ml de amarillo de titán 2 ml de NaOH 3. Mezcle , lea contra blanco de CaCl2 tratando de la misma forma que el problema 4. La c. De c se prepara con las soluciones de calibración como si fueran los 5 ml de desproteinizado, como blanco utilize 5 ml de agua destilada 5. Lea con filtro verde o 530 nm CALCULOS Abs Pb / Abs standard x factor: 0.307 / 0.271 X 0.0125= RESULATADOS 288 mg%

VALORES DE REFERENCIA: 1.9-277 MG% OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES Es adecuado llevar un buen control a la hora de realizar pruebas electrolíticas como estas que realizamos en el laboratorio por que si se nos pasa un detalle se puede llevar a cabo un error en la prueba por eso es importante llevar a cabo observaciones al agregar el reactivo y al pipetear el reactivo, en la manera que se agrega el suero sea bien, por que si no se toma esto en cuenta se pude llegar a obtener resultados falsos positivos. REFERENCIAS 1. Balcells, G.A., La clínica y el laboratorio, 18ª edición, Editorial Masson, 2001, pagina: 2. Fischbach.T.F., Manual De pruebas diagnósticas, Editorial Mc graw Hill, quinta edición, 1997, pagina: 3. Tierner,M.L.,Diagnóstico clínico y tratamiento, 37ª edición,2002, Editorial manual moderno, página:1178 4. www.farestare.com.av

TÉCNICA TITULACION DE LA SOLUCION MERCÚRICA 1. En un matraz erlemmeyer de 25 ml colocar 1.8 ml dela solución de tipo cloro y se le agregan 3- 4 gotas de indicador s-difenilcarbazona y titular con nitrato d mercurio, hasta aparición de color azul violáceo.La normalidad de la solución es igual a 0.02 ml de la solución de nitrato mercúrico gastados. CUNATIFICACIÓN EN SUERO: 2. Se colocan 0.2 ml de suero en un matraz erlenmeyer con 1.8 ml de agua destilada y agregar 4 gotas de indicador, titular con solución de mercurio hasta la parición de color azul violáceo. CALCULOS: STANDARD: TÉCNICA PREPARACIONES PLASMA, SUERO Agua destilada Estandard Solución de urea VERDE MALAQUITA 1.0 ml 5.0 ml 1.0 ml 5.0 ml MEZCLAR 5.0 ml MUESTRA 0.02 ml 0.02 ml 0.02 ml 1.0 ml BLANCO ESTANDAR

CALCULOS [ ] EP –EB / EE- EB X 5 MG % RESULATADOS 1.82-5.76 MG%

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGION XALAPA PRACTICA 6 BICARBONATO PLASMATICO INTRODUCCIÓN: Los gases arteriales su cuantifican para determinar qué tan adecuada es la: Oxigenación y la ventilación Valorar el equilibrio ácido –base midiendo los componentes respiratorios y no respiratorios Vigilar la efectividad del tratamiento.(3)

COMPORTAMIENTO DE LOS GASES Son dos aspectos básicos respecto a los gases, la presión parcial y el volumen. Las propiedades de los gases dan origen a varias leyes. LEY DE BOYLE Si la temperatura de un gas permanece constante, el volumen y la presión son inversamente proporcionales. Pa x Va = Pb x Vb

LEY DE GAY LUSSAC Si el volumen es constante la presión aumenta con los incrementos de temperatura (1) EXPRESIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UN GAS Se puede expresar en mL o en forma de presión parcial. En forma de mL es la cantidad de un gas en mL presente en un contenedor. El plasma contiene normalmrente de 24-34 mEq/l, para su medición directa es preciso retirer la sangre del enfermo con garantías de anaerobiosis. Si se quiere deducir a partir de la reserva alcalina expresada en vol/100 de Co2 bastará multiplicarlos por 10 y luego dividirlos por 22.4. (2)

HIPOVENTILACIÓN se denomina también insuficiencia respiratoria. El factor de ventilación pulmonar se ve disminuido por un sinnúmero de causas:  Por cuerpos extraños o traumatismo de vías aéreas, bronquitis, broncoespasmo, etc. Este proceso lleva a la disminución del intercambio de gases en los pulmones, lo cual tiene como consecuencia que disminuya la Po2. Su falla total es incompatible con la vida. HIPERVENTILACIÓN PULMONAR Se establece como consecuencia a una taquipnea por meningitis, encefalopatías, histeria, ansiedad, neurosis, intoxicación por antihistamínicos, aspirina, o en el curso de una respiración asistida, ya sea en una anestesia o en terapia intensiva. Esta situación disminuye la Pco2 y aumenta la PO2. La sangre arterial proporciona información acerca de la capacidad que tienen los pulmones para regular el equilibrio ácido-base reteniendo o liberando Co2. También se puede valorar la efectividad de los pulmones para mantener un nivel adecuado de bicarbonato.(4) GASOMETRÍA ARTERIAL La medición de los gases contenidos en la sangre arterial es la prueba funcional pulmonar más importante realizada a pacientes que están en estado crítico. Existen numerosos factores que afectan a los gases obtenidos en sangre y que es preciso conocer para valorar los cambios sufridos después de cualquier intervención. VALORES NORMALES DE LA G.A.

o o o o o

pH 7.35-7.45. PaO 2 80-100 mmHg PaCO 2 35-45 mmHg SatO 2 95-100% HCO3-22-26 mEq/litro EL EQUILIBRIO ÁCIDO-BASE

La principal función del sistema cardiorrespiratorio, como hemos visto, es suministrar a cada célula del organismo un flujo de sangre en cantidad y calidad apropiadas para que se puedan vivir en condiciones ideales. Esto se logra proporcionando materiales esenciales y retirando los productos nocivos, uno de los principales es el CO2, que es transportado por la sangre venosa y eliminado su exceso a través de los pulmones. El CO2 al unirse con el agua forma el ácido carbónico, según la fórmula: CO2 + H2O = H2CO3, ÁCIDO CARBÓNICO. Los dos órganos capaces de eliminar ácidos que en exceso son nocivos para el organismo, son el pulmón, que elimina ácidos volátiles como el CO2 del ácido carbónico, y el riñón que se encarga de eliminar ácidos no volátiles. Cuantitativamente el pulmón el que mayor importancia tiene puesto que puede llegar a eliminar hasta 13.000 mEq/día, mientras que el riñón sólo alcanza a eliminar de 40 a 80 mEq/día. El pH se puede definir como el resultado de la relación existente en un líquido entre la concentraciones de ácidos y de bases o álcalis que se encuentran en el mismo. En un intento de simplificar este concepto podemos representar un quebrado en el que el numerador se representen las bases o álcalis cuyo principal exponente es el bicarbonato (HCO3), y en el denominador se representen los ácidos como CO2. El resultado de esta división se denomina pH, siendo su valor normal en sangre de 7.357.45. HCO3 / CO2 = pH = 7.35-7.45.

Luego, el organismo tenderá a conservar este equilibrio, eliminando la cantidad necesaria de ácidos o bases para que el resultado de esta relación sea normal y constante. Si resumimos más esto podemos cambiar los numeradores y denominadores de la anterior ecuación por los principales órganos encargados de su eliminación, en cuyo caso nos queda: RIÑON / PULMON = pH = 7.35-7.45. Si el pH aumenta por encima de 7.45 se dice que es un pH alcalino y el enfermo presenta una alcalosis. Si por el contrario disminuye por debajo de 7.35 se dice que es un pH ácido y el paciente presenta una acidosis. ALCALOSIS METABÓLICA Aumento en la [ ] de bicarbonato (+ de 40-45 mm Hg) y pH ↑ Esta causada por una perdida no respiratoria de ácido por el cuerpo Ingestión excesiva de fármacos alcalinos

CAUSAS DE ALCALOSIS METABÓLICA

Asociada a depleción de volumen (Cl) Vómito y succión gástrica Uso de diuréticos de asa y tiazidas Alcalosis posthipercápnica

Asociada a hipercorticismo Síndrome de Cushing Aldosteronismo primario Síndrome de Bartter Depleción grave de potasio Ingestión excesiva de alcalinos

ALCALOSIS RESPIRATORIA grave, enfisema, edema agudo Inhibición del centro pulmonar, asfixia. respiratorio bulbar. Hipoxemia Drogas: opiáceos, anestésicos, Enfermedades pulmonares: sedantes, oxígeno en hipercapnia atelectasia, embolia pulmonar, crónica. enfermedad intersticial pulmonar Lesiones de SNC (raras) y Residencia a grandes altitudes paro cardíaco. Insuficiencia cardíaca Trastornos de músculos congestiva respiratorios y pared torácica. Enfermedad congénita del Debilidad muscular: miastenia corazón con fístula derechagravis, parálisis periódica familiar, izquierda poliomielitis, esclerosis lateral Síndrome de hiperventilación amiotrófica, aminoglucósidos. psicogénica Trastornos de intercambio Trastornos del SNC gaseoso en pared alveolar. Hemorragia subaracnoidea Enfermedad pulmonar Trastorno del centro intrínseca difusa: bronquitis, asma respiratorio bulbar ACIDOSIS METABÓLICA Disminución de la [ ] de bicarbonato (- 22 mEq/l) y pH ↓ Se provoca pérdida de bicarbonato Salida H+ al extracelular: (diarrea grave o alteración de la hipercalemia función renal) Pérdidas de HCO3-: > producción: cetoacidosis, digestivas: diarrea profusa acidosis láctica urinarias: acidosis tubular < Excreción renal: insuficiencia proximal renal, acidosis tubular distal (3) Metabolismo toxinas exógenas ( eje: AAS)

ACIDEMIA RESPIRATORIA Insuficiencia respiratoria aguda y crónica, insuficiencia ventilatoria, depresión neuromuscular.

Obesidad, edema pulmonar, paro cardiopulmonar(2) RECOMENDACIONES DE LA MUESTRA El sitio de punción debe llenar tres criterios: 1. Tener flujo colateral 2. Ser superficial o de acceso sencillo 3. Que los tejidos que lo rodean sean poco sensibles. El sitio de elección suele ser la arteria radial, aunque también se utiliza la braquial y la femoral. La muestra se puede obtener incluso a partir de un catéter existente. 1. Se utilizan jeringas preferentemente de vidrio ya que con las de plástico es necesario arrastrar el émbolo, maniobra que puede permitir la entrada de burbujas de aire.

2. Las muestras para determinación de gases arteriales se transportan en hielo y agua, ya que la sangre, como tejido vivo, sigue consumiendo oxígeno y formando anhídrido carbónico aunque ya esté en la jeringa. 3. Al reducir la temperatura se deprime el metabolismo celular y no hay cambios considerables, por lo que puede retardarse el procesamiento de la muestra hasta por una hora. 4. La cantidad de heparina de 1,000 unidades que queda en el espacio muerto de la jeringa es suficiente para anticoagular de 4 a 5ml de sangre.

5. El exceso de heparina altera las determinaciones de pH, oxígeno y bióxido de carbono.

6. Invariablemente se debe utilizar una aguja para picar el tapón de hule del frasco de heparina y otra para puncionar la arteria. 7. La sangre destinada a este tipo de estudio es sangre total y obtenida en forma anaeróbica.(2,4) OBJETIVO: Evaluar la eficacia del intercambio de gases por pulmones Evaluar la integridad del sistema de control ventilatorio Cuantificar el nivel ácido básico de la sangre Vigilar la inhaloterapia

FUNDAMENTO: A una cantidad medida de plasma se le adiciona un volumen exacto de solución de ácido nítrico de título conocido: el carbonato reacciona en descomposición y producción de anhídrido carbónico, la acidez se titula con solución de hidróxido de sodio. REACTIVOS: Ácido nítrico 0.1 N Hidróxido de sodio 0.1 N Indicador de rojo de fenol MATERIAL: 2 tubos de ensaye de 13 x 100 mm TÉCNICA 1. Se agrega a 1 ml de plasma 1 ml de ácido nítrico 0.1 N8 si la solución de HNO3 no corresponde exactamente con la de NaOH agregar la cantidad equivalente que iguale a un ml de NaOH 0.1 N 2. Agregue 2 gotas de rojo de fenol, agitar con suavidad, evitando la formación d espuma y titular con solución de NaOH en exceso de ácido hasta lograr el viraje del indicador CALCULOS 1-ml de NaOH gastados x 100 = mEq/lt de bicarbonato =1-.68x 100=32 VALORES DE REFERENCIA: 25- 27 mEq/ lt 2 pipetas graduadas de 1 ml 1 microbureta 2 matraz erlenmeyer BIOLÓGICO: Plasma

RESULATADOS : 32 mEq/L

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES

Es importante determinar el bicarbonato plasmático en el laboratorio para vigilar el estado de algún tipo de alcalosis o acidosis respiratoria o metabólica. Nuestro resultado salio un poco aumentado debido a que se formo una burbuja ala hora de titular . Por eso es importante realizar una buena determinación de esta prueba por que si nos falla en algo puede haber un mal diagnostico y al paciente le pueden dar un tratamiento inadecuado.

REFERENCIAS 1. Barry,A, Manejo clínico de gases sanguíneos,4ª edición, 199, Editorial panamericana, pagina:223 2. Farias, M.G, Gasometría equilibrio ácido –base en la clínica , 1era reimpresión, 1999, Editorial el manual moderno, México, pagina:2,83,84. 3. Fischbach. T.F., Manual De pruebas diagnósticas, Editorial Mc graw Hill, quinta edición, 1997, pagina: 954,955,968,969970. 4. Patiño, J.F, Gases sanguíneos, fisiología de la respiración e insuficiencia respiratoria aguda, 6ª edición, 1998, Editorial medica panamericana,pagina:19,22,39,159.

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGION XALAPA Practica 7 ANALISIS CUALITATIVO DE CALCULOS BILIARES INTRODCUCCIÓN SIGNIFICADO CLÍNICO Los cálculos son estructuras cristalinas formadas por concreción de los constituyentes normales o anormales de la bilis. Se dividen en tres tipos principales: los de colesterol y mixtos que representan el 80% del total y los pigmentarios, que representan el 20% restante. 1. CALCULOS DE COLESTEROL: lisos y de color claro 2. CALCULOS DE PIUGMENTOS BILIARES: por lo general son pequeños, duros y ásperos 3. MEZCLAS DE COLESTEROL: son pigmentos y de calcio.(1 )

Los cálculos mixtos y los de colesterol suelen contener más de 70% de monohidrato de colesterol, además de sales de calcio, ácidos y pigmentos biliares, proteínas, ácidos grasos y fosfolípidos. Los cálculos pigmentarios se componen de bilirrubinato de calcio y contienen menos del 10% de colesterol. CÁLCULOS MIXTOS Y DE COLESTEROL: el mecanismo más importante para la producción de bilis litógena (formadora de cálculos) es la secreción biliar aumentada de colesterol.

También se produce bilis litógena al disminuir la secreción hepática de sales biliares y fosfolípidos por un defecto en la síntesis hepática. La persistencia de una concentración alta de bilirrubina sugiere colédocolitiasis. UTILIDAD CLÍNICA: Asociación de la composición química con el desarreglo metabólico.

VARIABLES POR ENFERMEDAD: Se producen cálculos de colesterol y mixto por diabetes sacarina. Se producen cálculos pigmentarios por hemólisis crónica, cirrosis alcohólica, infección crónica de vías biliares, infestación con parásitos. VARIABLES POR DROGAS: Cálculos de colesterol y mixtos: por tratamiento con clofibrato, anticonceptivos orales, y otros estrógenos. VARIABLES PREANALÍTICAS: Cálculos de colesterol y mixtos: por obesidad; ocurren más en mujeres después de la pubertad que en varones; edad, sobre todo en varones; embarazo; grasas poliinsaturadas en la dieta; alimentación parenteral prolongada. ( 2) CÁLCULOS PIGMENTARIOS: CUANDO AUMENTA LA EDAD. LITIASIS VESICAL Los cálculos vesicales pueden alcanzar gran tamaño y se originan bien en la propia cavidad vesical o bien son de origen renoureteral pero que han quedado retenidos en la vejiga; dado que la porción más angosta de la vía urinaria es la porción intramural del uréter, la aparición de un cálculo vesical siempre indica una obstrucción urinaria distal, por ejemplo una hipertrofia prostática o una estenosis uretral. Para el diagnóstico se emplea la radiología simple de abdomen y los estudios con contraste para poner de manifiesto la presencia del cálculo en la luz vesical. También se emplean la ecografía y la cistoscopia, muy útiles si la litiasis posee una opacidad radiológica escasa o nula.

Cálculos biliares Es la presencia de cálculos en la vesícula biliar sin ningún síntoma asociado. Síntomas Dolor abdominal en el cuadrante superior derecho o en el centro del abdomen superior puede ser recurrente agudo, tipo cólico o sordo puede irradiarse a la espalda o debajo de la escápula del hombro derecho Nota: Por lo general no hay síntomas. Síntomas adicionales que pueden estar asociados con esta enfermedad: empeora con la ingestión de alimentos altos en grasas se presenta pocos minutos después de las comidas Ictericia Fiebre

Heces color arcilla Náuseas y vómitos Acidez estomacal SIGNOS Y EXÁMENES

Flatulencia excesiva Indigestión abdominal Llenura abdominal (gases)

Exámenes para detectar la presencia de cálculos biliares e inflamación: Ultrasonido abdominal TC abdominal Rayos X del abdomen Colecistograma Escaneo de la vesícula biliar con radionúclidos CPRE (colangiopancreatografía retrógrada endoscópica)

Esta enfermedad también puede alterar los resultados de los siguientes exámenes: Grasa fecal Bilirrubina; orina IRM abdominal COMPLICACIONES Colecistitis aguda Colangitis Colecistitis crónica PREVENCIÓN No existe ninguna forma de prevenir los cálculos biliares. Cuando se presentan síntomas de cálculos biliares, ingerir una dieta baja en grasa y perder peso ayudan a controlarlos.(2,3) OBJETIVO: Observar , conocer y realizar exámenes de distintos tipos de cálculos con el fin de comprender las distintas patologías que privocan al ser humano, lo que conlleva a un problema de salud publica. FUNDAMENTO: Colesterol: Se detecta mediante la reacción de Libermann-Burchard que se basa en la extracción clorofórmica del colesterol de material biológico y al tratarse con anhídrido acético-ácido sulfúrico concentrado produce un color verde. CALCIO: se identifica por un precipitado blanco que se obtiene al ajustar la solución a un pH entre 3 y 4 como oxalato potásico. Coledocolitiasis Pancreatitis

FOSFATOS: se precipita en forma de fosfomolibdato amónico de coloración amarilla. BILIRRUBINA: se detecta mediante la reacción coloreada disocia de erlich, que consiste en reaccionar al pigmento con ácido sulfanilico diazotado en medio ácido, una coloración violeta. REACTIVOS 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Éter Cloroformo Ácido nítrico concentrado Ácido sulfúrico concentrado Anhídrido acético Metanol Etanol 8. Solución saturada de acetato sodico 9. Oxalato potasico al 10% 10. Agua destilada 11. Ácido clorhídrico 2.0 N 12. Reactivo para fosfatos 13. diazoreactivo

MATERIAL 3 Tubos de ensaye de 15 x 150 5 tubos de 13 x 100 1 pipeta graduada de 5 ml 7 pipetas graduadas de 1 ml 1 Embudo mediano 1 mechero bunsen 1 pinzas para tubo de ensaye 1 gradilla Papel filtro Papel pH Parilla eléctrica

TÉCNICA El calculo recién extraído se lava con agua destilada suficiente para eliminar el material adherido ala superficie y se seca 1. Describir siempre que se posible características físicas como forma, tamaño, color, número, dureza y brillantez de los cálculos. 2. Pulverizar el cálculo en un tubo de ensaye y procurar conservar una cierta cantidad del mismo como reserva. 3. Extraer varias veces el polvo con proporciones de 3 ml de éter, filtrarlo y combinar los extractos desecado. 4. Enseguida agréguele 2 ml de anhídrido acético y 2 gotas de H2SO4 concentrado y colocar en la oscuridad durante 40 ml ( la aparición de un color verde traduce la presencia de colesterol). 5. Al residuo que queda ene l tubo después de la extracción etérea , agregar 3 ml de HCL 2N, mezcle y vierta a través del papel filtro empleando en la extracción etérea( repetir el tratamiento con ácido, este filtrado se rotula como filtrado ácido). 6. Utilizar 0.5 ml del filtrado ácido para comprobar la existencia de calcio añadiendo acetato sódico saturado hasta conseguir un pH de 4.o aproximadamente( compruebe con papel el PH), añadir 2 gotas de oxalato potásico al 10% y deje en reposos 10 minutos , la presencia de un p.p blanco indica la presencia de calcio. 7. Utilizar 0.5 ml de filtrado para la determinación de fosfatos , agregando a un tubo 0.5 ml de ácido nítrico concentrado y hervir suavemente durante 5 segundos, enseguida agregar 1.0 ml del reactivo de fosfatos y hervir suavemente durante 3-4 segundos, la presencia de un color y un p.p amarillo indica la presencia de fosfatos. 8. Lavar el papel filtro con agua y secarlo , extraerlo varia veces con cloroformo caliente. Guardar el papel para otro paso posterior 9. El filtrado cloroformico debe tener un color amarillo dorado si hay bilirrubina Evaporar el extracto y comprobar la presencia de bilirrubina mediante la diazoreacción: disolverlo para ello el extracto en 5 ml de metanol y agregar 1.0 ml de diazoreactivo( la aparición de un color rosa-violeta indica la presencia de bilirrubina). 10. Extraer el papel filtro tal como ha quedado en el paso con etanol caliente ( si hay bilirrubina el filtrado debe tener color verde). INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

OBSERVACIONES COLESTEROL

FOSFATOS

CALCIO

BILIRRUBINAS

RESULATADOS EXAMEN FISICO Número Tamaño Peso Color Aspecto Superficie Forma piriforme Friabilidad Dureza 3 3 cm 4.5 g Café Irregular Lisa + ++ +++ EXAMEN QUIMICO Colesterol Calcio Fosfato Bilirrubina + + + +

IMPORTANCIA CLINICA: Es importante analizar un calculó en el laboratorio para poder informar que tipo de cálculo es y como se va a proceder a dar un seguimiento al apaciente, por eso el químico clínico colabora cona la examinación del calculo biliar para que puedan dar un tto adecuado. Por eso es adecuado verificar todas sus características físicas y químicas para saber sus componentes por los que se forma.

REFERENCIAS

1. Lynch, M-.J., Métodos de laboratorio, 2da edición, 1972, Editorial interamericana, pagina: 379 2. Tierner,M.L.,Diagnóstico clínico y tratamiento, 37ª edición,2002, Editorial manual moderno, página: 3. www.farestare.com.av

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGION XALAPA PRACTICA 8 ANALISIS CUALITATIVO DE CALCULOS RENALES

INTRODUCCIÓN: SIGNIFICADO CLÍNICO La edad media de inicio de la litiasis cálcica es la tercera década. La mayoría de los cálculos son de oxalato cálcico y muy pequeños; algunos son de fosfato, cistina y ácido úrico. La hematuria es un hallazgo corriente cuando hay síntomas de litiasis. La infección es una consecuencia habitual. Los cálculos urinarios son los que se han recibido la máxima atención, quizá a causa de su frecuencia y ala variabilidad de su composición.(4) WINER ENUMERA 7 FACTORES QUE PUEDEN CONSTITUIR A LA FORMACIÓN DE CALCULOS:

1. 2. 3.

Trastornos metabólicos como cistinuria y gota. Endocrinopatías como hiperparatiroidismo Obstrucción urinaria

4. -Metaplasia de mucosal 5. - Condiciones extrínsecas como deshidratación, excesos en la dieta, exceso en drogas o quimioterapia. 6. Isohidruria, que es la perdida de las mareas ácido alcalinas normales. 7. Infecciones

La presencia de 2 o más de estos hallazgos está de ordinario asociada con la formación de cálculos y entre los siete más frecuente es la isohidruria. El tipo de cálculo formado dependerá del pH.

Muchos cálculos contienen un núcleo claramente definido sobre los cuales precipitan las sustancias químicas, se han adelantado teorías en cuanto ala manera que esto ocurre , pero dice que ciertos cálculos tienen alguna identificación en una superficie, con una estructura ene el fondo, lo cual sugiere una identificación en la superficie, con una estructura en el fondo, lo cual ha desde una superficie, como una papila renal.

Los núcleos de cálculos que tienen en el centro definido se cree que surgen por precipitación local de sales de orina sobresaturada. Bacterias coágulos de sangre o células epiteliales pueden servir también como núcleos para la cristalización.

El crecimiento del cálculo depende del pH dela orina , la solubilidad de cada sustancia y la disponibilidad dela s diversas sales.(2)

DOLOR CON CALCULOS RENALES Localización del dolor Puede no presentarse,o hacerlo en la espalda Espalda, abdomen o ambas regiones Abdominal Angulo costo vertebral al flanco, al área suprapúbica y a los órganos genitales externos Tipo Cuando no este presente, es sordo Sordo a tipo cólico Intenso, de tipo cólico Intenso, puede ser de tipo cólico Localización probable del cálculo Pelvis y cálices renales Cáliz o unión ureteropélvica Cálculos que se desplazan a lo largo del uréter Cálculos que producen una obstrucción dentro del riñón. ( 3)

El componente que aparece con mayor frecuencia en los cálculos urinarios es el oxalato cálcico, que precipita a un pH ácido o neutro. El fosfato cálcico forma cálculos al pH urinario normal de 6 a 6,5. EL FOSFATO AMÓNICO magnésico forma cálculos a pH alcalino cuando el nivel de amoníaco es elevado.
ACIDO URICO: Son los de mas frecuencia y pueden ocurrir en algunos casos en los cuales hay excesiva eliminación de ácido úrico. A pH debajo de 5.7 están presentes como ácido libre, es insoluble en orina

EN LA CISTINURIA, enfermedad hereditaria del transporte tubular renal se forma cálculos de cistina.

LOS CÁLCULOS DE XANTINA son raros y pueden asociarse con un trastorno genético en el que se halla ausente la xantinoxidasa hepática. (3)

Por

En la acidosis tubular renal se forman cálculos de fosfato cálcico mientras que los pacientes con nefrocalcinosis renal y cálculos, pueden desarrollar una lesión tubular subsiguiente que da lugar a una acidosis tubular renal.

La nefrolitiasis se clasifican de la siguiente manera: A- NEFROLITIASIS POR HIPERCALCIURIA 1- hipercalciuria resortiva 2- hipercalciuria absortiva tipo 1 y 2 3- hipercalciuria renal 4- otras causas: pérdida renal de fosfato, aumento primario de síntesis de 1,25dihidroxi D, disturbio renal tubular combinado.

B- NEFROLITIASIS NORMOCALCIÚRICA: nefrolitiasis oxalocálcica hiperuricosúrica 3- nefrolitiasis hipocitratúrica 2- hiperoxaluria entérica 4- diátesis gotosa.

FACTORES PREDISPONENETES A LA FORMACIÓN DE CALCULOS: VARIABLES POR ENFERMEDAD: La gota, hiperparatiroidismo, colitis ulcerosa, enfermedad de Crhön, úlcera y el by pass intestinal producen cálculos. VARIABLES POR DROGAS: Producen cálculos: tiazidas, fosfatos, magnesio, antiácidos, vitamina D, vitamina C, calcio, triamtereno. VARIABLES PREANALÍTICAS: Los hombres se ven afectados más a menudo por los cálculos cálcicos que las mujeres. ESTUDIO METABÓLICO El estudio metabólico de la litiasis renal es un protocolo de laboratorio dinámico que apunta a establecer una o varias causas por las cuales el paciente produce cálculos. Cada una de ellas tiene aparejado un tratamiento dietario, medicamentoso o quirúrgico. El estudio involucra también una consulta clínica con un nefrólogo y un dietista del equipo de trabajo, a efectos de averiguar antecedentes de enfermedades preexistentes, antecedentes familiares, agresividad de la enfermedad, medicación a la que está sometido el paciente, dieta, ejercicios físicos, etc.

La litiasis renal ( también denominada urolitiasis o nefrolitiasis) es una enfermedad causada por la presencia de cálculos o piedras en el interior de los riñones o de las vías urinarias (uréteres, vejiga). Los cálculos renales se componen de sustancias normales de la orina, pero por diferentes razones se han concentrado y solidificado en fragmentos de mayor o menor tamaño.

Es una afectación frecuente que afecta a más del 10% de la población, en edad media de la vida y más frecuente en los hombres. Predomina en personas con hábitos sedentarios o en personas con gran exposición al calor. SÍNTOMAS Los cálculos renales pueden causar diferentes síntomas, dependiendo de su tamaño, composición y de su situación en el aparato urinario. Algunos por su tamaño pequeño pueden pasar desapercibidos.

SÍNDROMES QUE SE PUEDEN PRODUCIR EN LA LITIASIS RENAL:

Dolor lumbar. Es un dolor persistente y más solapado en la zona lumbar Hematuria. Que es la aparición de sangre en la orina. Puede ser visible a simple vista o a veces tan solo microscópica. Se produce por las lesiones que produce el calculo en su paso por las estructuras del riñón.

CÓLICO NEFRÍTICO

Al salir los cálculos del riñón producen un taponamiento de la salida de orina del riñón produciéndose un dolor intensisimo, que aparece en la zona renal (lumbar ó espalda baja) y se irradia hacia el abdomen anterior hacia los genitales.

Es un dolor intermitente que no se alivia y se asocia a nauseas, vómitos, sudoración y sensación de hinchazón abdominal. No suele dar fiebre.

EL CONTENIDO DE LOS CÁLCULOS PUEDE SER:

Oxalato cálcico Y Fosfato cálcico de la mezcla de ambas sales que es la composición más frecuente de los cálculos.

Las causas de su producción pueden ser una o varias a la vez (beber poca agua, exceso de calcio en las comidas o por herencia familiar) .

Los cálculos de ácido úrico son menos frecuentes y se producen cuando la orina se acidifica.

Los cálculos de fosfato amónico magnésico, son muy agresivos por crecer muy rápidamente, se suelen asociar a infecciones renales.

Los cálculos de cistina aparecen en la infancia si existen enfermedades asociadas con alteraciones del metabolismo de la cistina. (5)

DIAGNÓSTICO DEL LABORATORIO EGO: Hematuria y eritrocituria en intervalos, con cilindruria y escasos leucocitos. Sedimento urinario hay cristales de oxalato, carbonato, fosfato y cistina o urato, según los casos. BACTERIOLOGÍA: Aparte de las causas metabólicas, los cálculos pueden tener origen bacteriano: Proteus, Klebsiella, Staphylococcus, Pseudomonas, Haemophilus, como fuente de producción de urea. Actualmente se insiste en e l papel del Corynebacterium urealyticum y Ureaplasma urealyticum. (1)

Es necesario saber la situación y tamaño de los cálculos, su composición y la posible existencia de enfermedades que se asocien a su formación. LA SITUACIÓN Y TAMAÑO SE REALIZA MEDIANTE: Radiografías simples Urografías con contraste Ecografías La composición de los cálculos expulsados se realiza mediante análisis específicos. La presencia de enfermedades asociadas se realiza posteriormente y dependiendo de la composición de los cálculos.(6)

UTILIDAD CLÍNICA DEL ANÁLISIS DE CALCULOS URINARIOS: Asociación de la composición química del cálculo con el desarreglo metabólico que lo origina.

OBJETIVO: Observar , conocer y realizar distintos exámenes con el fin de comprender distintas patologías que provocan al ser humano lo que conlleva a un problema de salud publica. FUNDAMENTO: Los uratos se detectan por reducción del fosfotunsgato alcalino a azul de tungsteno, la cisitna por el color rojo que forma en la prueba del cianuro nitroputasio, el carbonato por liberación de CO2 después de acidificación. El oxalato calcio por precipitación a pH de 3 –4, otros tipos de calcio por precipitación con oxalato después de eliminar el oxalato cálcico intrínseco, el fosfato por precipitación como fosfomolibdato amónico. El magnesio mediante la reacción de amarillo de titán y la xantina mediante la reacción de la murexida y estudiando su espectro de absorción ultravioleta.

La presencia del ión amonio viene indicado por la aparición de un color azul en la reacción del hipoclorito de sodio. REACTIVOS Carbonato de sodio al 14% Amonio en solución concentrada Cianuro de sodio al 5% Acido clorhídrico concentrado Acetato potásico Oxalato potásico Acido nitrico concentrado Amarillo titán al 0.05% (conseva en refrigeración) Hidroxido de sodio 20% MATERIAL 12 tubos de ensaye 18 pipetas graduadas de 1 ml 1 varilla de vidrio 1 placa plana 1 mechero bunsen 1 mortero de porcelana con pistilo TÉCNICA 1. El calculo se lava con agua destilada para eliminar cualquier coágulo sanguíneo o fibrina y se seca. 2. Se describen características físicas como forma, estructura superficial, dureza, friabilidad, tamaño y peso. 3. Pulverizar el cálculo e un tubo de ensaye con una varilla de vidrio y transferir 2 mg del calculo pulverizado a otro tubo de ensaye para el análisis de amonio. 4. Transferir 5-10 mg de calculo pulverizado a un tubo de ensaye y agregar 1 ml de NaOH 0.1 N y calentar en un baño de agua a 60°C durante 5 minutos. Agitar el tubo 2-3 veces durante ese periodo. Centrifugar y decantar el sobrenadante a otro tubo de ensaye del mismo tamaño. Reservar el sobrenadante para las pruebas de uratos y cistina (paso 5) Enjuagar las paredes del tubo que contienen la muestra con un ml de agua, mezclar y centrifugar y decantar el sobrenadante, repetir este lavado una vez más y guardar el residuo para otra prueba (paso 6). 5. Transferir una gota del extracto de NaOH obtenido en el paso anterior a una placa plana y agregar 1 gota Na2CO3 y mezclar con una varilla de vidrio y agregar 1 gota ácido fostofungstico y mezclar. INTERPRETACIÓN: La presencia de un color azul oscuro indica la presencia de ácido úrico / o uratos , un azul débil no es significativo.

Agua destilada REACTIVO PARA LA PRUEBA DE FIOSFATO Hidroxido de sodio 0.1 Nitroputasio sódico Reactivo de color de fenol Reactivo de hipoclorito alcalino Hidroxido de potasio 1 N Acido fosfotungstico 1 baño de agua a 60°c y otro a 30°c 1 Balanza analítica 1 pinzas para tubo ensaye 1 gradilla 1 centrifuga

5.1-Transferir una gota del extracto en NaOH ene l paso 4 a una palca agregar 1 gota de amonio y cianuro sodico, se deja reposar durante 5 minutos y se agrega 1 gota del reactivo de nitroputasio. INTERPRETACIÓN: Un color púrpura oscura indica la presencia de cistina. 6. Agitar el tubo que contiene el residuo después de la extracción con NaOH ( paso 4) y dejar hacer en el mismo resbalando por l a pared 1 gota de HCL concentrado. Mirar atentamente ene el tubo ene el momento en que hace contacto con al gota con el residuo sódico. INTERPRETACIÓN: L aparición de burbujas de gas, momentáneamente pero abundante indica la presencia de carbonato. Agregar luego 0.2 ml de HCL y 0.5 ml de agua destilada y hervir suavemente durante unos pocos segundos, se enfría y se centrífuga. 7. Transferir 0.3 ml del sobrenadante obtenido ene el paso 6 a un tubo de ensaye de 13 x 100 mm y agregar al mismo reactivo d e acetato potásico a pH de 3-4. Deje en reposo 10 minutos . INTERPRETACIÓN: Un p.p o enturbamiento traduce la presencia de oxalato cálcico ( la cistina puede dar un falso) y centrifugue. 8. Transferir el sobrenadante del paso 7 a otro tubo de 13 x 100 mm agregando 2 gotas de solución de oxalato potasio y suficiente cantidad de agua para aproximadamente duplicar el contenido del tubo y deje en reposo durante 10 minutos y centrifugue. INTERPRETACIÓN: Un p.p o enturbiamento fuerte ello indica la presencia de calcio distinto al oxalato. 9. Transferir 2 gotas del sobrenadante del paso 6 a otro tubo de 13 x 100mm , agregando 2 gotas de ácido nítrico concentrado y hervir suavemente durante 5 segundos. a) Cuidadosamente añada 2 gotas de reactivo de fosfomolibdato y hervir suavemente 3-4 segundos. INTERPRETACIÓN: Si aparece un p.p amarillo indica la presencia de fosfato. 10. Transferir el resto del sobrenadante del paso 8 a otro tubo y agregue al tubo 2 gotas de amarillo de titán y 0.5 ml de la solución NaOH al 20% INTERPRETACIÓN: Un color rojo en 1-2 minutos, apareciendo un p.p del mismo color indica la presencia de magnesio.

11. Si una notable porción del calculo se disuelve en sosa (paso 4) y la prueba del ácido úrico son -, entonces se comprueba la eventual presencia de xantina en los extractos obtenidos con el hidróxido de sodio en formas siguientes: a) Transferir 4 gotas del extracto obtenido con NaOH en un pequeño mortero de porcelana limpio y agregar al mismo 2 gotas de ácido nítrico concentrado, evapore a sequedad en un baño de agua. b) Agregar 1 gota de HNO3 concentrado y volver a evaporar a sequedad y se le agrega 2 gotas KOH 1 N. INTERPRETACIÓN: Un color púrpura indica la presencia de uratos. Calentar en e l mortero sobre el baño de agua durante aproximadamente 1 minuto. INTERPRETACIÓN: Si solo hay uratos, el color púrpura desaparecerá, si hay xantina se presenta un color amarillo antes del calentamiento y después del mismo color rojo púrpura. 12. Agregar al cálculo pulverizado contenido en el tubo 0.1 ml de HCL concentrado cuidadosamente y agregue 0.3 ml de agua, mezclar y hervir. a) Transferir 2 gotas de este extracto ácido a otro tubo de ensaye y añadir al mismo 0.5 ml de agua, 3 gotas de NaOH al 20% y 0.1 ml de reactivo de fenol y mezclar. b) Añadir 0.1 ml de la solución de hipoclorito alcalino y mezclar. c) Incubar a 37°C durante 20 minutos. d) Analizar también un blanco omitiendo el extracto ácido y el NaOH al 20%. INTERPRETACIÓN: Un color azul ligero incluso si es poco más azul que el blanco no debe considerarse. RESULATADOS EXAMEN FISICO Número Tamaño Peso Color Superficie Forma piriforme Friabilidad 1 2 mm 2 mg Naranja rugosa Amorfa +++ EXAMEN QUIMICO Ácido úrico Uratos Cistina Carbonato Calcio diferente al oxalato Fosfato Xantina + + + + + -

Dureza

++

Oxalato de calcio NH4

+ +

OBSERVACIONES:

CONCLUSIONES El cálculo que examinamos posee una pequeño tamaño y es de tipo mixto, debido a que esta formado por carbonato , ca, oxalato de calcio, de acuerdo al examen químico. El cálculo analizado fue de mujer y de acuerdo a sus características es de un tamaño muy pequeño, pero presento una u friabilidad y dureza muy dura. Por eso es importante que dentro del laboratorio de química clínica se lleve acabo un buena organización dentro de cada una de nuestras pruebas a realizar y tomar en cuenta el control de calidad a la hora de realizar estas tipo de análisis que son muy laboriosos. REFERENCIAS 1. Balcells, G.A., La clínica y el laboratorio, 18ª edición, Editorial Masson, 2001, pagina: 517 2. Hamilton, R.B, Diagnóstico clínico, 1 edición, editorial interamericana, México, 1985, pagina:920,921,922 3. Tierner, M.L., Diagnóstico clínico y tratamiento, 37ª edición,2002, Editorial manual moderno, página:945,946, 4. Treseler, M.K, Laboratorio clínico y pruebas de diagnostico, 1era edición , Editorial el manual moderno, pagina:307 5. www.tuotromedico.com 6. www.farestare.com.av

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANALISIS REGION XALAPA

PRACTICA 9 EXUDADOS Y TRASUDADOS

INTRODUCCIÓN:

Acumulan como resultado de la inflamación. FORMACIÓN DEL EXUDADO El exudado se forma por: aumento de la permeabilidad capilar o disfunción de la reabsorción linfática. Son líquidos que no están relacionados con la inflamación. CON FRECUENCIA LOS TRASUDADOS SON EL RESULTADO DEL : Aumento de la presión hidrostática capilar como se ve en la insuficiencia cardiaca congestiva Disminución de la presión oncótica del plasma que se observa en la hipoproteinemia.(3 ) EXUDADOS Se acumulan en las actividades del organismo y los tejidos por cáncer o inflamación. Se acompaña de procesos inflamatorios Es viscoso Tiene un elevado contenido en proteínas, células y materiales. Contiene abundantes leucocitos Se coagula espontáneamente por la [ ] elevada de fibrinógeno. Se detectan células malignas y bacterias. Su densidad es mayor 1.015 TRASUDADO Se acumula en la cavidades del cuerpo por alteraciones en la circulación

No se acompaña de procesos inflamatorios Altamente líquido Tiene un bajo contenido de proteínas, células o material sólido derivado a partir de las células. Contiene escasos leucocitos No se coagula Puede contener células malignas Su densidad es – 1.015 ( 2 ) LIQUIDO PLEURAL ASPIRACIÓN DE LÍQUIDO PLEURAL ( TORACENTESIS ) EXAMEN FISICO EL DERRAME DE QUILO Tiene aspecto lechoso opaco característico, que permanece en el líquido sobrenadante después de la centrifugación Estos resultan de escapes de los vasos linfáticos . INTERPRETACIÓN CLINICA: En la cavidad pleural se debe a un escape del conducto torácico mayor. La cavidad peritoneal los derrames resultan más frecuente de malignidad, como linfoma o carcinoma o traumatismo. DERRAME SEUDOQUILOSO También es lechoso y resulta de un derrame crónico de larga duración a causa de tuberculosis, pleuritis reumatoide, etc EXAMEN MICROSCOPICO INTERPRETACIÓN CLINICA: Linfocitos elevados: derrames debidos a tuberculosis, linfomas, quilotoxar verdadero, infección subaguda, pleuritis reumática, lupus eritematosis sitemico, Eosinofilos: eosinofilia plueral, lesión pleural inespecífica, derrames postoperatorio, infarto pulmonar, insuficiencia cardiaca congestiva, enfermedades parasitarias, pleuritis reumática. EXAMEN QUIMICO PROTEÍNAS La concentración total de proteínas del líquido pleural normal es de 1 – 2 g / dl. GLUCOSA: su disminución se ha definido como valores menores de 60 mg / dl o un cociente pleural sérico inferior a 0,5

Una disminución de glucosa en el líquido plerual puede producirse en artritis reumática, derrame neoplásico, pleuritis tuberculosa, pleuritis lúpica, rotusa esofágica. LA AMILASA en el líquido pleural es el doble que el suero. Los líquido con un colesterol mayo de 60 mg / dl o un cociente de colesterol en líquido pleural / sérico mayo de 0,3 se considera exudado. ESTUDIOS MICROBIOLOGICO Las bacterias asociadas con más frecuencia a derrames paraneumónicos son estafilococos aureus y especies coliformes. Dado que las bacterias anaerobias pueden observarse en el 35 al 40% de estos derrames, deben llevarse a cabo tanto cultivos aerobios como anaerobios. ESTUDIO CITOLÓGICO DE LÍQUIDO PLEURAL. Indicaciones de estudio citológico de líquido pleural: Todo paciente con derrame pleural que tiene antecedentes o es portador de una neoplasia. Paciente que presenta derrame pleural persistente Hallazgo de líquido hemorrágico en una tóracocentesis Derrame pleural en manipuladores de asbesto(2,4) TUMORES METASTÁSICOS. En líneas generales, el aspecto morfológico de las células neoplásicas en derrames serosos son similares a las encontradas en el examen de expectoración. Estas se conservan bien en líquido seroso e incluso proliferan. Las células del carcinoma epidermoide tienen un aspecto mucho más inmaduro y por lo tanto su identificación es difícil. Las células del adenocarcinoma presentan variaciones de tamaño y se distribuyen formando pseudoacinos o papilas y sus núcleos presentan uno o dos nucléolos prominentes. El adenocarcinoma bronquíolo-alveolar aparece formando múltiples grupos celulares compactos de forma ovalada o esférica. Los contornos celulares son definidos y presentan poco pleomorfismo celular. El carcinoma neoplásico de células pequeñas generalmente se acompaña de líquido pleural hemorragico con abundante material necrótico e inflamatorio. Sus células pequeñas destacan por sus núcleos hipercromáticos. El carcinoma de células grandes exfolia células voluminosas con enormes núcleos y generalmente nucléolos múltiples bien definidos. MESOTELIOMA. El tumor primitivo de las serosas puede ser benigno o maligno. Estas neoplasias generalmente exfolian gran cantidad de células que se disponen en forma aislada o en grupos papilares. CARACTERÍSTICAS INMUNOCITOQUÍMICAS DE LAS NEOPLASIAS DEL TRACTO RESPIRATORIO.

Adenocarcinoma. Se tiñe selectivamente con el anticuerpo monoclonal B72.3, presenta queratina y antígeno carcinoembrionario, es vimentina y desmina negativo. Se diferencia del mesotelioma porque esta neoplasia no fija inmunoglobulina B72.3. Carcinoma escamoso. Posee queratina, tiene menor afinidad que los adenocarcinoma por la inmunoglobulina monoclonal B72.3 ( se tiñe una menor proporción de células y la demarcación es leve), no presenta antígeno carcinoembrionario y es desmina y vimentina negativo. Carcinoma de células pequeñas. La mayoría de estos tumores son enolasa neuroespecífica y Leu-7 positivos y no fijan el anticuerpo monoclonal B72.3. Una menor proporción de tumores presentan diferenciación escamosa evidenciada por la presencia de queratina, o glandular manifestada por la expresión de antígeno carcinoembrionario. La coexistencia de marcadores neuroendocrinos y epiteliales también puede ocurrir. LIQUIDO PERITONEAL EXAMEN MACROSCÓPICO COLOR Y VOLUMEN  Es claro , de color amarillo pálido y de escasa cantidad inferior a 50 ml. INTERPRETACIÓN CLINICA: UN LÍQUIDO TEÑIDO DE SANGRE: Debe distinguirse de una punción traumática. UN LÍQUIDO OPACO O TURBIO: Puede deberse a una pancreatitis Estrangulación o infarto intestinal Perforación intestinal tras un traumatismo o infección bacteriana espontánea. UN LÍQUIDO LECHOSO Puede ser debido a un derrame quiloso o seudoquiloso. Los derrames quilosos verdaderos puede ser causados por una lesión o un bloqueo de del conducto torácico, debido a un linfoma, carcinoma, tuberculosis, infección parasitaria. Causa Cirrosis Insuficiencia cardíaca Síndrome nefrótico Peritonitis bacteriana espontánea Peritonitis bacteriana secundaria Peritonitis tuberculosa Pancreatitis Aspecto Rosado Rosado Rosado Turbio, purulento o quiloso Turbio, purulento o quilosos Claro, sanguinoliento o quilosos Turbio

Carcinomamatosis peritoneal

Rosado sanguinoliento,mucoso o quilosos

EXAMEN MICROSCÓPICO Durante la diuresis, el recuento leucocitario puede aumentar desde 300 / µ l hasta más de 1,000 / µ l. La diuresis también puede producir cambios en el gradiente albúmina serica líquido seroso. INTERPRETACIÓN CLINICA: La eosinofilia es líquido peritoneal no es frecuente aunque se ha llegado a asociar con insuficiencia cardiaca congestiva, diálisis peritoneal crónica, vasculitis y rotura de quiste hidatídico.

Enfermedad de hodking en L PL

Célula mesotelial para constrastar con célula maligna

Células malignas Adenocarcinoma en líquido pleural Carcinoma de células pequeñas enliquido pleural

Carcinoma de células escamosas maligno

Tumor de células germinales

Melanoma

(2,3). ANÁLISIS QUÍMICO PROTEÍNAS: la relativamente bajo. concentración es AMONIACO Un aumento de amoníaco en el líquido ( al doble que en plasma ) en la úlcera péptica perforada, en la apendicitis perforada y en la estrangulación del intestino delgado y grueso. CREATININA Y UREA Puede observarse un aumento de la creatinina y de la urea en líquido ascítico en caso de rotura de la vejiga urinaria y de extravasación de orina a la cavidad peritoneal.

AMILASA Se va encontrar elevada en un 90% de los casos por pancreatitis, traumatismo pancreático o seudoquiste pancreático. LA FOSFATASA ALCALINA: Esta elevada al doble en relación a la concentración serica

EXAMEN MICROBIOLOGICO En la Peritonitis bacteriana espontánea la sensibilidad de la tinción de gram es de 25 a 50%. Los cultivos de líquido ascítico son positivos alrededor del 90%. En la peritonitis tuberculosa, la sensibilidad de la tinción ácido alcohol resistente es de l 20 al 30 % y la de cultivo es de 50 al 70 % ETILIOGÍA DE LOS DERRAMES PERICÁRDICOS Infección Neoplasias Carcinoma metastásico Pericarditis bacteriana Linfoma Tuberculosis Infarto al miocardio Pericarditis micótica Hemorragias Pericarditis vírica o por Traumatismos micoplasma Anticoagulantes

Extravasación de aneurisma aórtico Metabolica Uremia Mixedema

Enfermedades reumáticas Lupus eritematoso sistémico (tierney)

EXAMEN MACROSCOPICO COLOR Y VOLUMEN El líquido pericárdico es claro, de color amarillo pálido varía de 10 a 50 ml de volumen El recuento de hematíes y el hematocrito se utiliza para diagnosticar derrames hemorrágicos. INTERPRETACION CLINICA El recuento leucocitario sirve para el diagnostico diferencial, recuento mayores que 10,000 / µ l sugiere: Pericarditis bacteriana Tuberculosa o neoplásica, el recuento diferencial posee escaso valor diagnostico. (2) ANÁLISIS QUÍMICO PROTEINAS: Valor diagnostico diferencial de los derrames cardiacos. LA GLUCOSA puede estar disminuida ( inferior a 40 mg / dl ) por un derrames debido a infección bacteriana o tuberculosa, enfermedad reumática y neoplasias, sin embargo carece de valor diagnostico. pH de menos de 7.0 suele encontrarse en derrames purolentes o en efermedad reumatica.

EXAMEN MICROBIOLOGICO Mediante la tinción de gram para valorar la pericarditis bacteriana, la sensibilidad al ácido alcohol resistente para valorar la pericarditis tuberculosa.

OBJETIVO: Observar si existen condiciones patológicas de líquidos acumulados en cavidades. FUNDAMENTO:

TRASUDADO: Aquél líquido que resulta de procesos no inflamatorios de origen mecánico, y que generalmente son producidos por trastornos circulantes con congestión pasiva y edema, como la insuficiencia cardiaca congestiva, obstrucción del flujo venoso o disminución de las proteínas sanguíneas. Los trasudados que tenemos en nuestro organismo son: líquido pericardico, líquido sinovial, líquido peritoneal o de ascitis y Líquido pleural. EXUDADO: Acumulan como resultado de la inflamación. Tanto el estudio de exudados y trasudados consisten básicamente de cinco etapas que son el examen físico, químico, microscópico, citológico y bacteriológico. EXAMEN FISICO DE EXUDADOS MATERIAL: 1 tubo ensaye de 13 x 100 mm estéril con anticoagulante 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm estéril sin anticoagulante 1 refractómetro Papel pH ASPECTO CEROSO: cuando contiene pocas células, serofibrionosos o hemorrágicos. Suelen coagular parcialmente por la presencia de fibrinógeno procedente de la inflamación. SEROPURULENTO: Contiene Abundante células y purulento cuando contiene pus pura. COLOR AMARILLO PÁLIDO AL PAJIZO: cuando no contiene sangre Amarillo verdoso: presencia de pseudomonas OLOR. INODOROS : o expiden un color dulzón, excepto cuando son retenidos por mucho tiempo y muestran alteraciones putrefactas. CONSISTENCIA Fibrinosa o mucoide, fácilmente coagulables por su riqueza en fibrinógeno. COAGULACIÓN Para comprobar se coloca una pequeña cantidad de liquido una vez extraído, en un tubo que no contenga anticoagulante y observar si la coagulación ocurre espontáneamente.

Si la coagulación no procede se ven usualmente grandes flóculos. Se presenta después de haber hecho la aspiración parcial o completa, particularmente en el caso de infecciones neumocócicas, el hecho que no presentre la coagulación se debe a la destrucción de la fibrina por enzimas tisulares bacterianas. PH Alcalino o débilmente ácido DENSIDAD Se utiliza el refractómetro o densímetros para oprina Peso especifico de exudados es mayor que los trasudados y varia entre 1.018-1.025 debido ala mayor cantidad de proteínas existente EXAMEN QUÍMICO DE EXUDADOS PROTEINAS: Debido a que los exudados contiene una alta [ ] de proteínas, es conveniente realizar una dilución previa de los mismos (1:10-1.15) con solución fisiológica multiplicandoise el resultado obtenido por el factor de dilución empleado EXUDADOS CONSECUTIVOS A INFLAMACIÓN GRAVE: En donde hay formación o derrame de pus como ene l caso del epipema,la proteína total De la porción serosa sobrepasa por lo regular 3g/100 ml y llega a ser aproximadamente igual que en plasma sanguíneo. En exudados consecutivos a procesos inflamatorios de menor intensidad la proteína total es por lo general de 0.1-0.5 g/100 ml REACCION CUALITATIVA DE RIVALTA PARA MUCOPROTEINAS FUNDAMNENTO: Se basa en la desnaturalización de la proteínas en presencia de un ácido débil. REACTIVOS: Ácido acético glacial Agua destilada MATERIAL: 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm 1 pipeta graduada de 1 ml estéril 1 pipeta pasteur para la prueba: 1 probeta de 100 m TÉCNICA: 1. En una probeta de 100 ml se coloca 0.1 ml de ácido acético glacial y se completa a un volumen con agua destilada. 2. Sobre esta solución se dejan caer unas gotas de líquido y si se observa una nubécula parecida al humo de cigarrillo. 3. La intensidad se mide en cruces VALORES DE REFERENCIA En los exudados se forma una nubécula y en los trasudados no aparece. DTERMINACION DE GLUCOSA

La glucosa en exudados no existe o es mucho menor que en el caso de la glucosa sanguínea DETERMINACIÓN DE CLORUROS Igual en plasma o suero. la [ ] es menor en exudados que en trasudados, pero muy parecida a la de plasma sanguíneo El grado de disminución depende del aumento de proteínas, de acuerdo con las leyes que regulan la [ ] de sustancias fácilmente di fusibles a través de una membrana semipermeable. DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS Son los mismos que en suero. Puede haber en los exudados grasa neutras y ácidos grasos, la colesterina se presenta sobre todo en los exudados retenidos durante mucho tiempo. En algunos casos, si la cantidad de colesterina es causada por tener aproximadamente la misma permeabilidad que las proteínas en los capilares, ocasionando que el contenido de lípidos sea paralela a su contenido proteico. DETERMINACIÓN DE CALCIO Ayuda diferenciar los exudados ( tiene una concentración mayor) de los trasudados, se realiza igual que en suero. Esto es valido también para la concentración de Mg a causa del incremento de la concentración de la proteínas. EXAMEN MICROSCOPICO 1. OBSERVACIÓN DIRECTA (Solución salina) 2. TINCION: ayuda a diferenciar los procesos crónicos de los agudos REACTIVOS: Citrato de sodio Maygrunweld giemsa MATERIAL: Isopos, cubreobjetos, portaobjetos, microscopio, aceite de imnmersión. TINCION: 1. Se deposita una pequeña gota de material a estudiar sobre el portaobjeto limpio y seco. 2. Se hace un extendido delgado utilizando un isopo 3. Se deja secar y se tiñe con may granwel giemsa, para efectuar la diferenciación celular. EXAMEN BACTERIOLÓGICO Se usan las tinciones de gram y ziel-neelsen para teñir lo frotis

TRASUDADOS EXAMEN FISICO COLOR AMARILLO OBSCURO : en ictericias, debido a la presencia de bilirrubinas Los pleurales son lechosos al igual que los peritoneales. ASPECTO NORMAL: Transparente a opaco de color suele ser de verde a amarillo a menos que tenga sangre será de tono Rosado-rojizo. COAGULACIÓN: MATERIAL 1 tubo de ensaye TÉCNICA: 1. Se toman 1-2 ml de líquido recién extraído y se coloca en un tubo de ensaye de 13 x 100 mm y se observa con que rapidez coagulan. INTERPRETACIÓN: Coagulación. – o ligera y es más lenta que en los exudados, excepto trasudados hematicos y quiloides, especialmente cuando se deben a tumores malignos. DENSIDAD TÉCNICA Se determina igual que en la orina y varia de 1.006-1.015 teniendo en cuenta que en trasudados tumorales se eleva hasta 1.025 INTERPRETACIÓN: La densidad de los trasudados es inferior a los exudados y nos ayuda a diferenciar. Los trasudados pleurales y peritoneales contienen mayor cantidad de proteínas y por consiguiente son de mayor densidad. PH TÉCNICA Se sumerge en papel pH, inmediatamente se quita el exceso de liquido y se lee a escala calorimétrica.

Si sé utiliza potenciómetro la técnica a seguir de acuerdo al aparato. INTERPRETACIÓN: Es alcalino EXAMEM QUÍMICO DE TRASUDADOS

a) DETERMINACIÓN DE PROTEINAS
Esta determinación es de valor para diferenciar los trasudados de los exudados.

Esta prueba se hace con los mismos métodos que se usan para la orina efectuándose diluciones multiplicándose la cifra obtenida por el factor de dilución y los resultados se expresa g / litro. INTERPRETACIÓN CLÍNICA: En los trasudados pleurales y peritoneales, en caso de insuficiencia cardíaca congestiva, cirrosis, nefrosis pueden mostrar de 0.1 a 1 g/ 100 ml en la concentración de proteínas. Si estos trasudados permanecen algún tiempo, el líquido se reabsorbe más rápidamente que un sólido, por lo que la concentración de proteínas en estos casos esta aumentada, llegándose a confundir algunas veces con los exudados ( que a diferencia de los exudados son de origen inflamatorios ).

b) DETERMINACIÓN DE CLORUROS
La determinación de cloruros se hace igual que en suero. El cloruro en los trasudados suele ser mayor que el cloruro plasmático, varían de 720 a 750 mg por 100ml de cloruro de sodio. Esta diferencia se debe al equilibrio Donnan el cual depende de la mayor concentración de poteínas en el plasma que en los trasudados.

c) OTRAS DETERMINACIONES
DETERMINACIONES DE GLUCOSA, CRETININA, ÁCIDO ÚRICO, UREA, FÓSFORO inorgánico teniendo concentraciones iguales que en el suero. EL CONTENIDO DE CALCIO se encuentra más elevado en los trasudados y exudados que en el plasma debido a las proteínas presentes los valores de sodio, magnesio, potasio se encuentran disminuidas con respecto a los plasmáticos. LA PRESENCIA DE BILIRRUBINAS se ve en los trasudados pleurales y peritoneales sin que exista aumento en la sangre. Por lo general, no contienen lípidos pero el aspecto quiloso es debido a la presencia de pequeñas cantidades de lecitina y colesterol. LA DETERMINACIÓN DE MUCOPROTEÍNAS es importante por que se elevan en procesos neoplasícos o disminuyen en cirróticos, los valores de referencia se encuentra entre 60 y 100 mg / 100 ml LA DETERMINACIÓN DE LA DESHIDROGENASA LÁCTICA es útil en el diagnóstico de tumores metastásicos, pleurales o ascíticos. Todas estas determinaciones son los mismos que se realizan en sangre. EXAMEN CITOLOGICO DE TRASUDADOS Reactivos 1 frasco de May – Greenwald y Giemsa 1 frasco de anticoagulante Material 2 tubos de 13 X 100mm 1 portaobjetos 1 cubreobjetos 1 microscopio

Técnica De la muestra con anticoagulante se centrifuga una parte y del sedimento se hace frotis. El frotis se fija y se tiñe por May – Greenwald y Giemsa Interpretación clínica Puede poseer escasas células de las que se diferencian. Células mesoteliales ( con abundante proteoplasma y con un o dos núcleos ) Línfocitos pequeños, neutrófilos segmentados, monocitos, eritrocitos que normalmente no debe haber, pero estos se presentan por efecto de la puntuación Células tumorales que no se logran diferenciar, pero la presencia de células con alteraciones mitóticas sugieren estas. Si es así se tiñen por el método de papanicolau. Estos procesos crónicos ( tuberculosis, sífilis, tumores ) se observa predominio de linfocitos pequeños. En procesos infecciosos: se observan neutrofilos y los eosinofilos sugieren procesos alérgicos. EXAMEN BACTERIOLÓGICO Normalmente deben ser negativos TECNICA: A partir del tubo estéril donde se recoge la muestra se efectua la marcha siguiente: 1. Se hace un frotis que se tiñe por Gram y/o tinción de Ziehl – Neelsen tinta china ( C. Neoformans ) 2. Se hacen cultivos por indicación médica 3. Se puede hacer inoculaciones en animales. MEDIOS DE CULTIVOS RECOMENDADOS

a) Con el sedimento se inocularan
Placas de gelosa sangre ( de carnero ) Placa de gelosa chocolate Placa de agar Mc. Conkey Tubo De tioglicolato ( con 2 gotas de sedimento ) OPCIONALES Tubo de Lowenstein / Gensen Tubo de caldo Tubo de Saboureaud Tubo de medio BHI bifásico ( infusión cerebro – corazón ) En cultivos positivos se realiza susceptibilidad a los antibióticos correspondiente.

RESULTADOS EXUDADO:VAGINAL EXAMEN FISICO: ASPECTO: turbio COLOR: amarillo claro OLOR: putrefacto CONSISTENCIA: mucoide COAGULACIÓN: PH= 7 DENSIDAD: 1.020 EXAMEN QUÍMICO: Mucoproteinas: + EXAMEN MICROSCOPICO: TINCION: Bacilos gram - : 0 Bacilos gram+: 0 Cocos gram +: 3 p/c

TRASUDADO LIQUIDO PLEURAL EXAMEN FISICO: ASPECTO: poco turbio COLOR: cristalino OLOR: COAGULACIÓN: + DENSIDAD: 1.010 OBSERVACIONES EXAMEN QUÍMICO PROTEINAS: + EXAMEN MICROSCOPICO: Células mesoteliales: 3

Exudado Trasudado CONCLUSIONES: Es importante el estudio de exudados y trasudados en el laboratorio clínico, por que con su análisis podemos identificar sus características anormales y este evaluación tiene un importante criterio clínico para la valoración de paciente, ya que si encontramos cambios anormales ya sea físicos, químicos o citológicos de los exudados o trasudados, proporcionamos información PATRA el tipo de diagnostico que se sugiere. REFERENCIAS 9. Balcellls, Interpretación clínica por el laboratorio, 18ª edición, 2001, editorial Masson, paginas: 281,284,285,287. 10. Fisbach, Manual de pruebas diagnósticas, 5ª Edición, 1997, Editorial Mc graw Hill, Paginas: 813

11. McKenzie, B.S.,Hematología clínica, 2ª edición, 2000, Editorial manual moderno, paginas:547,554,560,561. 12. Tierney, M.L., Diagnostico clínico y tratamiento, 37ª edición 2002, Editorial el manual moderno, Pagina: 341,343 UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGION XALAPA LABORATORIO DE QUÍMICA CLINICA III LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO PRACTICA 10 INTRODUCCION El líquido cefalorraquídeo es: Un líquido de transporte e incoloro que se produce dentro de las cavidades o ventrículos del cerebro por el plexo coroides y el plasma sanguíneo que se derrama. Su producción es aproximadamente 500 ml diarios, aunque el sistema sólo cuente con 120 a 150 ml, el LCR es sustituido en su totalidad tres veces diarias. CLASIFICACIÓN ETIOLÓGICA Las infecciones del SNC se dividen en varias categorías que pueden difererenciarse fácilmente entre sí mediante el examen del LCR. CLASIFICACIÓN MENINGITIS PURULENTA MENINGITIS CRÓNICA. MENINGITIS ASÉPTICA ENCEFALITIS. MENINGITIS BACTERIANA TRATADA PARCIALMENTE: REACCIÓN DE ÁREAS VECINAS IRRITACIÓN MENÍNGEA NO INFECCIOSA ABSCESO CEREBRAL: MENINGOENCEFALITIS AMEBIANA. TÉCNICA DE LA PUNCIÓN LUMBAR 1. Se selecciona el sitio de punción , generalmente en la L-4 Y L-5 o más abajo, en el espacio L-5 se observa una pequeña saliente ósea que ayuda localizar el sitio de punción, en este sitio se limpia con alguna solución antiséptica y el área circundante se cubre con una sabana estéril de manera que no obstruya el campo visual 2. A continuación se inyecta un anestésico local lentamente en la dermis alrededor del sitio elegido para la punción.

3. Posteriormente se introduce una aguja especial con estilete en la línea media entre ambas apófisis del espacio lumbar hasta que penetre en el espacio subracnoideo. 4. Con la aguja adentro del espacio, se extrae el estilete y se coloca en su lugar un manómetro para medir la presión LCR. 5. Se extraen de 10-20 ML de LCR que se dividen en 3 muestras de 2 a 3ml cada una en tubos distintos estériles y con rótulos secuenciales: • El # 1 se utiliza para química y serología El # 2 para microbiología El # 3 para cuente hematológica. 6. Al retirar la aguja se mide nuevamente la presión, en caso de encontrar hipertensión intracraneana se extrae muy poco líquido por el riesgo de que el tallo cerebral quede fuera de lugar. 7. Se coloca una curación estéril en el sitio de punción. 8. Los tubos se rotulan con el # secuencial 1,2,3 y el nombre del paciente y la fecha enviándose inmediatamente al laboratorio.

Normalmente límpido, cristalino, transparente, como “ agua de roca”. Cuando es anormal, es turbio, nebuloso, ahumado o hemático Puede ser claro en procesos crónicos y en los agudos no esta demasiado aumentado el contenido celular: Poliomielitis Encefalitis Meningitis linfocitarias benignas y muchos casos de meningitis tuberculosa o sifilítica. PATOLÓGICAMENTE: Se enturbia en la meningitis purulentas de cualquier etiología, es estos casos es francamente turbio. Poliomielitis graves y en la fase de comienzo o de declinación de las meningitis purulentas, el LCR es sólo ligeramente turbio Meningitis tuberculosa habitualmente es claro y transparente, pero a menudo es esmerilado, opalescente , y tras su extracción( 2 a 3 hrs) puede dar lugar a un fino retículo fibrinosos en la tela de araña. Esto también ocurre , menos frecuente en la lúes nerviosa y en los tumores del sistema nervioso.(1) La turbidez se clasifica en grados de 1+ a 4+ y se debea : Leucocitos, eritrocitos, microorganismos, como hongos y bacterias. Medios de constraste Grasa epidural aspirada(rosa pálido o amarillo oscuro).(2)

El liquido normal es totalmente incoloro PATOLÓGICAMENTE ADQUIERE COLORACIÓN EN LOS SIGUIENTES CASOS: HEMORRÁGICO: Hemorragia del interior del SN( fracturas óseas, hemorragias cerebrales y medulares, diátesis hemorrágica, rotura de un aneurisma, hemorragia meníngea, o bien a hemorragia por la propia punción. XANTROCRÓMICO(color amarillo) Alteración de la Hb en él vertida y aparece en los mismos procesos hemorrágicos antes citados a medida que pasa el tiempo. En ictericias, el liquor es amarillo(billirrubinorraquia) sin previa hemorragia local, este color es por exceso de carotenosis es excepcional. Es característica la xantocromía del llamado “ síndrome de frion” xantocromica, coagulación espontánea y disociación albuminicitológica, patognomónica de un bloqueo espinal.(1) CAMBIOS EN COLOR DEL LCR SUGESTIVOS DE PATOLOGÍA ASPECTO Opalescente, ligeramente amarillo con coágulo fino Opalescente o purulento, ligeramente amarillo con coágulo burdo. Ligeramente amarillo, es transparente u opalescente con coágulo fino. Hemático, purulento, en ocasiones turbio. Generalmente transparente, pero puede ser xantocrómico Xantocrómico PATOLOGÍA Meningitis tuberculosa Meningitis piógena aguda Poliomelitis anterior aguda Meningoencefalitis amibiana primaria Tumor de cerebro o médula espinal Toxoplasmosis (2)

La cifra es normal en un adulto acostado es de 1000 a 200 mm H2O En posición sentada es aproximadamente el doble

AUMENTA FISILOGICAMENTE: Por llanto, Tos, esfuerzos, sonarse, defecación, presión de yugulares, inyecciones de soluciones hipotónicas, etc. EXISTE HIPERTENSIÓN SI LA PRESIÓN EXCEDE POR ENCIMA 200 MM H2O EN LOS SIGUIENTES CASOS: Procesos meníngeos cerebrales( meningitis, hemorragias subaracnoidea), tumoraciones cerebrales(abscesos, neoplasias) por encima de una obstrucción medular y en las encefalitis y edemas cerebrales. LOS MECANISMOS VARIAN EN: a) EDEMA CEREBRAL: traumático, inflamatorio(encefalitis, abscesos) o peritumoral. La hipertensión hallada en caso de tumor cerebral presentada en la particularidad de que sola extracción de 5-10 ml de liquor de termina un notable descenso de la presión. b) HIPERSECRECIÓN: c) En procesos irritativos de los plexos coroideos, en las meningitis, en la compresión tumoral de la vena de galeno y en la hipertensión arterial. d) HIPORREABSORCIÓN: Resulta de las meningitis anterior. HIPOTENSIÓN DE LIQUOR , TIENE LUGAR EN: Por debajo de toda obstrucción, en especial si ésta es medular, a la par este caso se presenta en el síndrome de Froin y en la maniobra de Queckenstedt. También da hipotensión en obstrucciones altas8 agujero occipital, agujero de Luschka, conducto de silvio). En las deshidrataciones marcadas. Tras las inyecciones en el torrente circulatorio de disoluciones hipertónicas. En algunas infecciones crónicas degerativas del SNC. Irridación de los plexos coroideos Aliquorrea En las liquorragias con pérdida de liquor fuera de las meníngeas(traumatismos craneales abiertos o cerrados). VALORES DE REFERENCIA DEL LCR Volumen Aspecto Presión Densidad 90-150 ml ,niños de 60-100 ml Transparente , incoloro 50-180 mm H 2O 1.006-1.008

Osmolalidad

280-290 mOsm /kg

VALORES DE REFERECNCIA: 700-750 MG EN 100 ML La variaciones patológicas de interés clínico son sobre todo las HIPOCLORURORRAQUIAS AUMENTO: Procesos que existen retención de clorurada en sangre En nefritis con insuficiencia renal e hipercloremia o en las deshidrataciones “puras” sin pérdida de electrólitos. DISMINUCIÓN En hipocloremias: por ejemplo, en la neumonía geninua por neumococos o en la obstrucción pilórica o duodenal. En la meningitis tuberculosa, llega acifras inferiores a 500 mg/100 ml. Tiene valor como signo de mejoría su ascenso y normalización. Un descenso rápido en los primeros días es de garvedad, no debemos considerar curada aún meningitis tuberculosa con una cifra de cloruros baja, aun cuando exista aparente mejoría clínica. En la meningitis de líquido turbio(meningitis purulentas), aunque no desciende tanto como en la forma anterior, quedando habitualmente alrededor de 600 mg. Se observa un discreto descenso de clorororraquia en la enfermedad de HeineMedin, sífilis nerviosa, etc.

Valores de referencia: 50-75 y hasta 80 mg/100 ml en el adulto En niños. 70-90 mg/100 ml AUMENTA (HIPERGLUCORRAQUIA) Diabetes mellitus. Encefalitis epidémica , poliomielitis, este es un buen dato para el Dx diferencial con la meningitis que cursa con hipoglucorraquia más o menos intensa y nunca con hiperglucorraquia. Meningitis serosas y urémicas. Hipertensión endocranenana y diversos procesos que determinan tumor y abceso cerebral.

En la lúes nerviosa, especialmente en las formas vasculares y en cambio suele ser normal en las parenquimatosas.

DISMINUYE(HIPOGLUCORRAQUIA) Hipoglucemia, meningitis purulentas acompañada de pleocitosis y turbidez, su descenso es precoz y intenso, llegando al desaparecer en la acmé de la enfermedad, su ascenso es un signo de regresión. Meningitis tuberculosa, carcinomatosis, síndrome de reye, cistecircosis con meningoencefalitis, meningitis granulomatosa por sarcoidosis. Hemorragia subaracnoidea

Meningitis rematoide y mielitis lúpica. VALORES DEREFERENCIA: 15-40 MG/100 ML El liquor obtenido por punción cisternal contiene cifras menores 10-25 mg/100 ml Líquido ventricular 5-15 mg/100 ml, de ellas tan sólo 1/5 es globulina La presencia de sangre en LCR da imendiatamente lugar a una elevación de la cifras de proteínas VARIACIONES PATOLÓGICAS AUMENTO LIGERO EN: Permeabilidad de la barrera hematoencefálica, tal sucede en la epilepsia después del acceso, neumonía, uremia, etc. Procesos inflamatorios y degenerativos del neuroeje y meninges. En esclerosis múltiple, siringomielia, tabes dorsal, sífilis congénita, poliomielitis, otras mielitis, encefalitis epidémica, tumores cerebrales, abscesos cerebrales no abiertos. Afecciones vasculares del SN como son hemorragias, trombosis y embolia cerebral. Mixedema, y en hipercalcemias. AUMENTOS NOTABLES SE DAN: Meningitis supuradas(125-300 mg/100 ml) y meningitis tuberculosa y sifilítica. Hemorragia cerebral, parálisis general progresiva, abceso cerebral abierto y en ciertos tumores. Procesos que cursan con obstrucción del espacio subaracnoideo.

En el bloque espinal o no todavía el síndrome de compresión medular. Tumores medulares, fracturas, mal de pott, hernia discal, aracnoiditis adhesivas. Síndrome de Froin y de Guillain Barré GLOBULINAS: Su aumento se detecta por reacciones cuantitativas cuya positividad es siempre anormal: Reacción de Nonne-Apelt,Pandy,Ross-Jones,etc. El grado de positividad se expresa en cruces y corresponde a la cantidad de globulinas. RELACION A/G Normales son de 8:1 PRCESOS AGUDOS COMO MENINGITIS ESPECIALMENTE 12:1 Afecciones Crónicas tiende a disminuir 09:1(parálisis general y tumores medulares. PRUEBAS CLINICAS Glucosa Proteínas Lumbar Ácido láctico Glutamina Albúmina Nitrógeno de urea Creatinina Colesterol Acido úrico Bilirrubina LDH 40-70 MG/100 ml Neonatos: 15-100 mg /100 ml 3 meses a 60 años 15-45 mg/ 100 ml >60 años 15-60 mg / 100 ml 10 –24 mg / 100 ml 0.4-1.1 μmol / ml 10-30 mg /100 ml 5-24 mg / 100 ml 0.5-1.2 mg /100 ml 0.2-0.6 mg 7100 ml 0.5 – 4.5 mg /100 ml 0 1 / 10 de LDH sérico

SEROLOGIA Y MICROBIOLOGIA VDRL NEGATIVO Bacterias Negativo Virus Negativo La observación microscópica del sedimento del LCR teñido adecuadamente permite visualizar el germen causal en las meningitis por piógenos y en la meningitis tuberculosa, lo cual tiene valor patognomónico y decide la terapéutica específica.

CITOLOGIA DEL LCR
El número total de las células por milímetro cúbico en un LCR normal es de 0-8 (en los niños hasta 10), siendo casi todos linfocitos.

Es interesante recordar la normalidad del contenido celular del líquido en procesos neurológicos que puedan ofrecer dificultades en el dx diferencial de epilepsia, tétanos, comprensión medular. AUMENTO DEL # DE CELULAS (PLEOCITOSIS) El recuento en cámara de las células en suspensión en liquor puede dar el siguiente resultado. PLEOCITOSIS LIGERA (10-30/MM3 ) y moderada (30-100/mm3), se encuentra: Reacciones meníngeas, por ejemplo: absceso cerebral y meningitis localizadas y en las asépticas. Meningitis tuberculosa, encefalitis epidémica (se eleva la glucosa y hay predominio linfocitario. Poliomielitis, diversas neurosífilis, tumores cerebrales y medulares y en el herpes zoster.

PLEOCITOSIS ACENTUADA O MARCADA (100-500, O MÁS) En todas las formas de meningitis supuradas existe marcada pleocitosis o de predomino polinuclear. Meningitis linfocitarias benignas, en formas graves de meningitis tuberculosa y en la rotura de abscesos cerebrales. Cuenta Celular Adultos RECIEN NACIDO(0total 14 días) Leucocitos 0-5 células 0-30 células Linfocitos 40-80% 5-35% Monocitos 15-45% 50-90% Polimorfos 0-6% 0-8%

CITODIAGNOSTICO CUANTITATIVO
Consiste en determinar los tipos celulares hallados en el sedimento de LCR después de centrifugarlo y su proporción relativa. • Si la pleocitosis no pasa de 300 células por mm3 suele ser linfocitaria y cuando el número de células es extraordinario, suele tratarse de neutrófilos y piocitos.

SIGNIFICACION DE LOS DISTINTOS TIPOS DE CELULAS
LINFOCITOSIS: Es típica de procesos subagudos o crónicos: meningitis tuberculosa, sífilis nerviosa, esclerosis múltiple. Linfocitaria a pleocitosis que acompaña ciertas infecciones agudas: meningitis linfocitaria benigna, leptospirosis, fiebre recurrente. POLINUCLEOSIS NEUTRÓFILA: Se encuentra en procesos sépticos agudos como: Meningitis purulentas, meningocócicas, estreptocócicas, abscesos meningoencefálicos y en fase inicial de afecciones que cursan con pleocitosis linfocitaria. POLINUCLEOSIS EOSINÓFILA: Se debe a parasitosis, tiene gran diagnóstico en la cisticercosis cerebral y en la misáis. CUSAS DE INCREMENTO DE LOS LINFOCITOS EN LCR MENINGITIS

Meningoencefalitis viral Meningitis aséptica, tuberculosa, leptoespírica, micótica Meningoencefalitis sifilítica, enfermedad parasitaria TRANSTORNOS DEGENERATIVOS Esclerosis múltiple Síndrome de Guillan Barré CAUSAS DE AUMENTO DE MONOCITOS Meningitis tuberculosa crónica, bacteriana tratada, micótica, leptoespírica, por toxoplasma. Encefalomielitis amibiana Rotura de absceso encefálico OTROS ESTADOS Inflamatoria, Polineuritis, sarcoidosis, terapéutica medicamentosa CAUSA DE AUMENTO DE EOSINOFILOS EN LCR CAUSAS COMUNES Infección parasitaria, micótica. Meningitis eosinofílica idiopática Polineuritis aguda CAUSAS RARAS Síndrome hipereosinofilico Meningitis viral, infección rickettsias, Malignidad hematopoyética, tumor del SNC

EXAMEN MICROBIOLOGICO
El examen bacteriológico del LCR meningitis. forma parte indispensable del diagnóstico de

En las meningitis bacterianas, que puede deberse a una gran cantidad de bacterias, el LCR muestra las siguientes características: Purulento Mayor número de leucocitos Predominio de polimorfonucleares Disminución de glucosa Elevación de proteínas En la meningitis producida por bacilo tuberculoso, virus, hongos o protozoarios, en el LCR tiene las siguientes características: No purulento Reducción en el número de mononucleares y mayor de linfocitos Glucosa normal o reducida

MEDIOS DE CULTIVOS Loweistwn jeinsen Agar chocolate Tayer martín modificado Sal y manitol MICROORGANISMOS PATÓGENOS QUE SE OBSERVAN EN LCR Bacilos coliformes Cryptococcus y otros hongos Haemophilus influenzae Especies de Leptospira Virus generalmente enterovirus Listeria monocytogenes Mycobacterium tuberculosis Neisseria meningitidis Neumococos OBJETIVO: El alumno evaluara los cambios normales y anormales en él liquido cefalorraquídeo. EXAMEN FISICO MATERIAL: 1 Tubo de ensaye de 13 x 100 mm estéril 1 gradilla 1 centrifuga VOLUMEN Y PRECISION: El volumen varia de 100-150ml COLOR NORMAL: Claro, un incoloro e inodoro Las coloraciones que puede adquirir generalmente son producidas por alteraciones patológicas excepto cuando la coloración es debida a la presencia de sangre como resultado de una punción traumática. XANTOCROMIA: Coloración rosa pálido o anaranjado pálido, se puede acompañar a veces de una coagulación espontánea después dela recolección. CAUSAS POSIBLES DE XANTOCROMIA: Proteínas que sobrepasan 100 mg/100 ml Punción traumática con lisis de eritrocitos Bilirrubina, hemorragia intracerebral, contaminación de mertiolato que se empleo para la desinfección de la piel. Oxihemoglobinemia, presencia de tumores en las últimas vértebras lumbares.

ASPECTO: Trasparente Aparece enturbimiento como resultado de cantidades elevadas de elementos celulares o por contaminación bacteriana. TURBIEDAD: Varía desde una ligera opalescencia típica de meningitis tuberculosa, hasta aspecto de más o menos purulento con algunos casos de meningitis piógena. COAGULACIÓN: Carece de coagulación Puede ocurrir en una punción traumática o a un nivel elevado de proteínas en el liquido o asociado a meningitis tuberculosa. La presencia de fibrina se detecta por la presencia de un retículo: En meningitis tuberculosa parece dicha película Meningitis purulenta aparecen coágulos poco después de obtenida la muestra . EXAMEN QUÍMICO: MATERIAL: 1 Tubo de ensaye 13 x 100 Gradilla 1 Centrifuga DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE GLUCOSA

B AGUA 2.0 ML DESTILADA STANDARD MUESTRA

STD 2.O ML O.O2 ML

P 2.0 ML

20 ML

VALORES DE REFERENCIA: 50-75 MG/100 ML NIÑOS: 70-90 MG/ ML DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS REACTIVOS: Reactivo precipitante Reactivo básico Reactivo de biuret MATERIAL:

TUBOS DE 13 X 100 6 pipetas graduadas de 1 ml 1 pipeta graduada de 0.2 ml 1 gradilla espectrofotómetro TÉCNICA 1. EN 3 TUBOS DE ENSAYE COLOQUE: P ACIDO FOSFOTUNGSTICO LCR Estándar 0.5 ml 0.5 ml E 0.5 ml 0.5 ml B -

2. Mezclar durante aproximadamente 1 minuto continuamente, deje reposando 15 minutos hasta que el precipitado comienza a asentarse y centrifugue enérgicamente durante 5 minutos y tire el sobrenadante Precipitado Agua destilada Reactivo básico 0.5 ml 0.5 ml 0.02 ml 0.5 ml

3. Mezcle el precipitado el tiempo necesario para lograr una resolución del precipitado 4. Agregue a cada uno delos tubos 0.5 ml del reactivo de biuret 5. Mezcle y deje reposando durante 30 minutos a temperatura ambiente, la extinción se lee respecto al agua a 546 nm. CALCULO: Mg/100 ml= EP-EB/EE-EB X 50 VALORES DEREFERENCIA: RECIEN NACIDOS: 100 mg/100 ml Adultos:7-44 mg/100 ml

DETERMINACIÓN DE GLOBULINAS FUNDAMENTO. Las globulinas son insolubles en agua pura, pero solubles en soluciones neutras diluidas de sales de álcalis y ácidos y coagulan por el calor. MATERIAL.

Solución saturada de sulfato de amonio 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm 1 pipeta graduada de 5 ml pipetas de 1 ml 1 gradilla TÉCNICA: 1. Homogenizar muy bien la muestra de LCR y en un tubo de ensaye colocar 1 ml de reactivo de solución saturada de sulfato de amonio 2. Sobre este se deposita con precaución por la s paredes sin que se mezcle 1 ml de LCR y se reposa 5 minutos. INTERPRETACIÓN: Cuando existe un exceso de globulinas aparece un anillo blanco o gris en la zona de contacto entre los 2 líquidos VALORES DE REFERENCIA: LCR globulinas – DETERMINACIÓN DE GLOBULINAS POR LA REACCION DE PANDY FUNDAMENTO: Una solución saturada con agua precipita las globulinas REACTIVOS: Solución saturada de fenol MATERIAL: 1 tubo de ensaye de 15 x 75 mm 1 pipeta graduada de 5 ml 1 pipeta pasteur con bulbo 1 vidrio de reloj 1 gradilla TECNICA 1. En un tubo coloque 1 ml de reactivo y coloque 1 gota de LCR 2. Si el líquido es normal no parece enturbimiento o bien solo se origina ligera opanilidad 3. Si la opanilidad es marcada o parece enturbimiento débil, marcado o lechoso se establece 4 grados de positividad correspondiente a +,++ +++, +++++ en ese orden VALORES DE REFERENCIA. Negativo

DETERMINACIONES ENZIMATICAS Son LDH, TGO, CPK, se realizan cuando las solicita el medico. DETERMINACIÓN CUANTITATIVADE CLORUROS PBA DE MOHR

FUNDAMENTO: Se basa en el papel del ion cloro presente en LCR o desproteinizado como cloruro de plata, después de reaccionar con una solución de nitrato de plata uniéndose como indicador de cromato de potasio, el exceso de AgNo3 se identifica por el cambio de color con el indicador. REACTIVOS: Solución de nitrato de palta 0.0342 N Solución de cromato de potasio al 48.3% Solución de tunsgato de sodio al 10% Solución de ácido sulfúrico 2/3 N MATERIAL: Pipetas de 2,5 ,10 ml 1 Embudo de tallo corto 1 soporte universal 1 pinzas universales 1 gradilla papel filtro TÉCNICA: 1. En un matraz coloque 2 ml de LCR, con 14 ml de agua destilada, 2ml de solución de tunsgato de sodio al 10% y 2 ml de ácido sulfúrico 2/3 N se agita y se filtra. 2. Se miden 10 ml del filtrado y se añaden 10 gotitas de cromato y 20 ml de agua destilada 3. Se titula con una solución de nitrato de palta hasta una coloración roja CALCULOS. Los mililitros gastados de la solución de nitrato de palta se multiplican por 0.002 y x 2000 para obtener el valor por mg por ml VALORES DE REFERENCIA: 125-135 mEq/L EXAMEN CITOLOGICO RECUENTO CELULAR Se realiza dentro de 2 hrs de obtenido el LCR debido a que loe elementos celulares sufren modificaciones importantes El recuento proporciona un dato diagnostico diferencial en casos de meningitis tuberculosa, poliomielitis aguda, sífilis del sistema nervioso REACTIVOS. Líquido de dilución MATERIAL: Cámara de neubauer Pipeta de thoma 1 microscopio

TÉCNICA: 1. Se aspira líquido hasta la dilución hasta que marque 0.5, de ahí se aspira LCR hasta la señal 11 y se agita y se desechan 2 0 3 gotas 2. Se carga la cámara de neubauer y se esperan 5 minutos para que sedimente las células y se efectúa el recuento. CALCULOS. Todas las células contenidas en 9 cuadros grandes, se dividen entre 9 y se multiplica por 10 para obtener el valor correspondiente a 1 mm3 VALORES DEREFERENCIA. 0-5 CÉLULAS / MM3 RECUENTO DIFERENCIAL: La formación de muchos casos proporciona datos de importancia diagnostica a este recuento se le denomina citodiagnóstico. REACTIVOS: Colorante de wright MATERIAL: 1 tubo de 13 x 100 mm 1 pipeta graduada de 5 ml 5 portaobjetos 1 centrifuga 1 microscopio TÉCNICA: 1. Inmediatamente obtenido el LCR se centrífuga 5 ml a 2000 rpm durante 5 minutos 2. Decantar el sobrenadante y con el sedimento se hacen finas extensiones sobre portaobjetos desengrasados y se dejan secar a temperatura ambiente 3. Se procede a teñir con wright y se realiza una tinción de Gram. 4. Examine la preparación al microscopio con objetivo de inmersión y contar 100 leucocitos o menos, si él número de leucocitos es escaso. VALORES DE REFERENCIA: Generalmente solo sé encuentran linfocitos y algunas células epiteliales. OBSERVACIONES:

Globulinas POR PANDY +

METODO NONNE APLPET: + Cloruros:

CALCULOS: GLUCOSA: ABP / ABS ST X 100: 0.01/0.66 X 100= 1.5 mg/dl PROTEINAS: EP-EB / EE- EB X 50= .494-180 / .255 / .180=210 mg/100 ml CLORUROS: recuento de células: Células contadas (30) x 20 x 10 / 4= 1500 células / mm3 RESULATADOS LCR EXAMEN FISICO: Color. Incoloro Aspecto: transparente Densidad. 1.018 Volumen: 3 ml PH. 7 Coagulación: EXAMEN QUÍMICO: Glucosa: 1.5 mg/dl Cloruros: Proteínas: 210 mg / 100 ml Globulinas positivo ++++ EXAMEN MICROSCOPICO: Células contadas por método A.: 1500 células por mm3 Bacterias : cocos gram – 3 p/c CONCLUSIONES: Es importante en el laboratorio de química clínica especial llevar acabo un buen análisis en tipo de muestras de líquido cefalorraquídeo, por que aporta mucha información a cerca de las diferentes tipo de meningitis que se pueda llevar acabo ya sea de tipo viral, bacteriana o por hongos, por eso es adecuado llevar a cabo una buena examinación, como nos podimos dar cuenta en nuestros resultados obtuvimos valores bajos de glucosa debido a que hay presencia de bacterias en nuestra muestra, también observamos que hay presencia de globulinas el LCR y hay un aumento de proteínas, que puede ser a causa de procesos inflamatorios. REFERENCIAS: 1. Balcellls, Interpretación clínica por el laboratorio, 18ª edición, 2001, editorial Masson, paginas:267,269,271,272,273,274. 2. Fisbach, Manual de pruebas diagnósticas, 5ª Edición, 1997, Editorial Mc graw Hill, Paginas: 294,295,296,297,299,300,301,302,303,306,307,311,312. 3. McKenzie, B.S.,Hematología clínica, 2ª edición, 2000, Editorial manual moderno, paginas:562,563,564,565. 4. Tierney, M.L., Diagnostico clínico y tratamiento, 37ª edición 2002, Editorial el manual moderno, Pagina:1027,1028.

ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA VOLUMEN: ASPECTO:
NORMAL: 1.5-6.0 ML CUANDO LA CANTIDAD ES B: < 1.5 ml con cuentas bajas de espermatozoides 0.5 ml o menos

HETEROGÉNEO (recién emitido) ya que se encuentra en forma de coagulo, muy viscoso, opacó y se hace homogéneo después de transcurrida la licuación.

TURBIEDAD: se relaciona con él # de espermatozoides y en casos que se encuentren leucocitos, eritrocitos y algunos m.o.

COLOR:
NORMAL: Blanco grisáceo Amarillo: Abstinencia prolongada AMARILLO INTENSO: Piospermia Café rojizo: Sangre hemolizada en casos de vesiculitis seminal y prostática ROJO: Presencia de sangre en casos de prostatitis y traumatismos

OLOR

VERDOSO: X Pseudomonas

CARACTERÍSTICO. Suirgenesis un olor mohoso o acre

VELOCIDAD
NORMAL: 2-5 mm

 

5 mm < 2mm cuando los Interfieren con la motilidad espermatozoides presentan del esperma, y como motilidad la vitalidad disminuida lo normal y prostatitis a crónica vesiculitis seminal

LICUEFACCIÓN LICUEFACCION 15-30 MINMUTOS ADQUIERE ASPECTO HOMOGÉNEO 7.3-7.8 NORMAL 7.8 Sospecha de infección > 8 no se practica inmediatamente ya que con el ambiente el semen se alcaliniza pH< 7.0
Proporciones altas de liquido prostatico a seminal produce un Ph ácido Muestras con azoospermia puede habver disgenesia del conducto deferente de las vesículas seminales o epidídimo

DENSIDAD 1.020-1.040 EXAMEN MICROSCOPICO

MOVILIDAD (pba entre porta y porta y cubreobjetos) 60-70% después de 2 hrs presenta movilidad y progresión INMOVILES (aquinesia): + del 60% de a las 4 hrs las formas móviles disminuyen 5% por hora después de la cuarta hora dela recolección MOTILIDAD IN SITU(disquinesia) 25-40% de 6-8 hrs. MOVILIDAD DE PROGRESIÓN: (rápidos-normoquinesia) + del 10% a las 24 hrs Cuando la motilidad es elevada pero esta reducida a espermatozoides móviles in situ o con movimientos progresivos lentos, no existiendo espermatozoides con movimientos progresivos rápidos ASTENOZOOSPERMIA el semen no tiene capacidad fecundante y valores menores de 30%. ADROMOZZOSPERMIA: ausencia de motilidad

CONTEO EN 5 CAMPOS: % movilidad= N espermas móviles + N de espermas in situ x 100 / total % migración= Nde espermas in situ móviles x 100 / total TOTAL: N de espermas móviles + N de espermas in situ + N de espermas muertos A la vez que determina la movilidad se clasifica el tipo de traslación que presenta los espermatozoides móviles o que se desplazan su se designa por el # o-4 CRITERIOS DE LA OMS: A: si el espermatozoide tiene modalidad progresiva rápida y lineal B: movimiento lineal o no lineal lento o perezoso C: Tiene una mortilidad no progresiva D: espermatozoide inmóvil CRITERIOS DELA OMS PARA CUANTIFICAR CADA TIPO CELULAR C= N X S / 100 EJEMPLO: Si la cantidad de células germinales inmaduras contadas desde 10 en 100 espermatozoides contados y si el recuento del semen es de 120 millones de espermatozoides Cual será la [ ] de células germinales inmaduras 10 x 120 x 106 / 100 = 12 x 10 6 VALORACIÓN MORFOLÓGICA DEL ESPERMA RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES PBADE MACOMBER 1. Homogeniza al muestra por la presencia de espermatozoides móviles e inmóviles 2. Pipeta thoma ( G.B) se carga hasta 0.5 con líquido seminal y luego con líquido de dilución de macomber hasta la marca 11 3. Se agita homogéneamente la pipeta hasta que sea homogéneo en la porción ampular 4. Se desechan 2 primeras gotas 5. Se cuentas espermas en 1 mm cuadrado y se multiplica por dilución y por la corrección de la profundidad de la cámara , para obtener la cifra por mmm3 y x 1000 para obtener la cifra por ml. # espermatozoides: N (10) (20) (1000) / 4 = N espermatozoides VALORES DE REFERENCIA: 50 millones de espermatozoides en eyaculación completa. PBA DE LA VITALIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES

PBA DE HURGO Y Di paola REACTIVO DE EOSINA n soluciones acuosas de nigrosina al 10% y eosina 5% Cuentan 200 células 1. Espermatozoides muertos coloreados 2. Espermatozoides vivos inmóviles o no coloreados 3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados. Después de 30 min de la eyaculación Normal 80% de espermatozoides móviles 20 % espermatozoides inmoviles 16% son coloreados (muertos) ( 4% no son coloreados 8vivos inmoviles) el aum ento de espermatozoides vivos con movimiento in situ y de espermatozoides muertos se relaciona con: SUBFERTILIDAD MASCULINA Debido a que loe espermatozoides tiene que atravesar el moco cervical a los pocos minutos de la eyaculación y si hay un aumento de espermatozoos móviles al atravesar el moco cervcial va a disminuir el ph bajo las secreciones d la vagina. EXAMEN QUIMICO DETRMINACION DE LA CAPACIDAD FECUNDANTE
NORMAL: Decoloración total

15-30 min fertilidad optima

60 minutos fertilidad moderada

FOSFATSA ACIDA capacidad secretora de la próstata Normal: 55000-137,500 mUI/ML FRUCTOSA (200-400 mg/dl) Evalúa: Capacidad secretoria vesículas seminales
FRUCTOSA DISMINUYE EN:

Procesos infecciosos de las vesículas seminales acompañada de un aumento relativo de los marcadores prostáticos

Ausencia podría indicar agenesia de las mismas.

ÁCIDO CÍTRICO (2.1-7.3 MG/ML)
EL ÁCIDO CÍTRICO Y LA FOSFATASA ÁCIDA DISMINUYEN:

Evalúa: Capacidad secretoria próstata

Casos de prostatitis o neoplasias.

ESPERMATOBIOSCOPIA INDIRECTA FUNCIONAL ( PBA POSTCOITAL DE SIMS-huhner) CONSIDERACIONES: Selección del día optimo dentro del ciclo menstrual Descripción de la técnica para la recolección de la muestra semivaginal Sistematización del horario par recoger esta muestra y la secreción endocervical Enumeración delos estudios microscópicos que se practicaran. REPOSO SEXUAL EDAD Y FRECUENCIA SEXUAL: FSP= FST + FSR /2 FSP= frecuencia sexual practicada ( # días que se darán de reposo previo a la prueba) FST= frecuencia sexual teórica ( # máximo de días que deben transcurrir entre una relación sexual y la siguiente de acuerdo con la edad del varón) FSR= frecuencia sexual ( # de días que se separan una relación sexual de la siguiente) EPOCA OVULATORIA Fase del ciclo menstrual cuando la secreción endocervical es más receptiva a los espermatozoides, tanto en penetración como la viabilidad intramoco cervical de los mismos. CARACTERÍSTICA DE LA PRUEBA 1. El matrimonio efectuará la relación sexual base la prueba en su propio domicilio y no aun ahora fija, sino entre las 7 y 10 de la mañana. 2. Bajo las mismas condiciones de normalidad y naturalidad con la que realizan el acto sexual, desencadenándose por estimulación mutua, dando origen a la primera de las 4 fases que integren un coito normal de la excitación. 3. El acto lo realizan en posición supina 4. Terminada la eyaculación seminal y de ser posible con el orgasmo femenino, la mujer continuara en dicha posición a fin de favorecer durante ese tiempo la permanencia del semen dentro de la vagiana con el fin de realizar una prueba in vivo de resistencia delos espermatozoides a los factores externos . 5. Se instruirá al marido para que al retirarse de la esposa, le facilite 2 almohadas, una encima dela otra para que se coloque debajo de la pelvis a fin de levantar un poco en relación con el dorso.

6. Al término de los 15 minutos de reposo postcoital, la mujer se levantara, se pondrá en posición semisenatda y separando los músculos se colocará directamente debajo de la vulva una caja de petri estéril y dejar que escurra dentro de la caja por gravedad el semen que retuvo durante 15 minutos. 7. Una vez recolectada la muestra, por la mujer y no por el clínico, se trasladara inmediatamente al laboratorio a manera de llegar entre 1 hora y 1 ½ después de concluir el coito, sin haber efectuado ningún aseo vulvar, baño general, sin haber orinado o defecado después del coito y sin aplicarse ninguna toalla o protección sanitaria semejante, únicamente su ropa intima y la caja de petri que deberá mantener en todo momento en posición horizontal a efecto de prevenir la salida de su contenido. 8. La toma de la muestra endocervical se realizara alrededor de 2 horas después de efectuada el coito, para lo cual se colocara a la paciente en posición ginecológica. 9. Se insertara un espejo vaginal sin lubricación y visualizando el orificio del cuello uterino, se introducirá en el canal la extremidad de una cánula maleable ajustada en el otra extremidad a una jeringa por medio de la cual se aspirara para la secreción endocervical postcoital. 10. Finalmente se tomara muestra del semen residual presente en el fondo del saco posterior dela vagina. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS: PBA NORMAL: a) La cantidad biológica de los espermatozoides presentes en el contenido vaginal son normales. Esto indica que la eyaculación seminal- vaginal es normal y por tanto el coito fue efectivo. b) La cantidad y la calidad biológica de los espermatozoides presentes ene el contenido endocervical son normales, esto indica que la migración espermática – vagina cervical es activa y por tanto normal.

PBA SUBNORMAL DE ORIGEN FEMENINO a) Igual que el inciso a b) Dela prueba normal La cantidad de espoermatozoides presentes en el contenido endocervical es excesivamente baja y en ocasiones definitivamente nula o bien l calidad espermática muestra acentuada deficiencia: Encontrándose inmovilización total de los espermatozoides o bien necrozoospermia y en algunas ocasiones aglutinación de los zoospermos. Esto indica que la migración espermática es cuantitativa y cualitativamente anormal. Baja calidad biológica de moco cervical o isoanticuerpos antiespermáticos. PRUEBAS SUBNORMALES DE ORIGEN MASCULINO OLIGOSPERMIA

La cantidad de espermatozoides presentes en el contenido vaginal es marcadamente baja Calidad es deficiente ( DISZOOSPERMIA que es aumento considerable de las formas anormales) encontrándose antisozoospermia que es la presencia de espermatozoides de distintos tamaños. POIQUILOZOOSPERMIA: que son diferentes formas de espermatozoos TERTATOZOOSPERMIA: presencia de espermatozoides altamente deformes Calidad deficiente: bradiquinesia, astenozoospermia DISQUINESIA: espermatozoides con movimientos in situ AQUINESIA: espermatozoides inmóviles NECROZOOSPERMIA: espermatozoides muertos En algunos casos se detecta la presencia de escasos espermatozoides móviles en el contenido endocervical, apareciéndose un menor número de formas nivel de comparación con el encontrado en el contenido vaginal. Existe por tanto, una buena receptividad y la selectividad espermática es anormal a nivel del contenido endocervical. Esto indica que la migración espermática muy baja existe y que su deficiencia espermática muy baja existe y que su deficiencia no es imputable a causas femeninas. PBA ANORMAL ASPECTOS MASCULINOS: La cantidad de los espermatozoides presentes en relativamente baja ene l contenido vaginal. La calidad morfológica y funcional son deficientes (oligoastenozoospermia). INTERPRETACIÓN: La eyaculación seminal intravaginal es cuantitativamente o cualitativamente anormal, en casos en que no se detecta semen en el contenido de fondo de saco posterior de la vagina es que el coito no fue efectivo. ASPECTOS FEMENINOS. 1. El coito no se realiza por ser imposible la penetración peneana, debido a deformaciones vulvares o a vaginismo invencible. 2. El coito se realiza pero el semen sale inmediatamente de la vagina por la excesiva amplitud de la misma. En cualquiera de los 2 casos no se detecta semen en la vagina. El coito se realiza y se detecta semen en el contenido vaginal pero aparte de la mala calidad y calidad espermática no hay posibilidad de que la migración espermática no hay posibilidades de que la migración espermática vaginocervical se efectué. AZOOSPERMIA Hay contenido vaginal postcoito en ocasiones cuantitativamante abundante, pero en el canal, después de un estudio minucioso no se detectan zoospermos, tampoco ene l contenido cervical, ni ene l contenido de fondo del saco posterior de la vagina.

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD REGION XALAPA FACULTAD DE BIOANALISIS QUÍMICA CLINICA III LAB PRASCTICA 11 LIQUIDO SEMINAL INTRODUCCION PROTOCOLO PARA EL ESTUDIO DE MUESTRAS DE SEMEN         ESPERMOGRAMA BASICO ESPERMOGRAMA DE FERTILIDAD ANTICUERPOS ANTIESPERMATICOS TEST DE NARANJA DE ACRIDINA PROTOCOLO PARA EL ESTUDIO DEL FACTOR CERVICAL TEST POST COITAL O SIMS HUBNER TEST DE KREMER TEST DE PORTAOBJETO Y DE CONTACTO MOCO-SEMEN ( 6)

El semen fresco es un coagulo que experimenta licuefacción a los 5-30 minutos después

de la eyaculación. Las vesículas seminales contribuyen con factores de coagulación en tanto que los factores proteolíticos se derivan de la próstata (5) Consta de espermatozoides suspendidos en plasma seminal.

 Solución compuesta formada por los testículos y órganos reproductores masculinos accesorios.

 El 60% de su contenido es líquido seminal, 30% líquido prostático y 10% lo constituyen los espermatozoides.  Además, el líquido seminal contiene ácido ascórbico , ácido cítrico , fructosa y glicerilfosforilcolina . Una eyaculación generalmente produce de 1,5 a 5 cms cúbicos de semen.(6)

FUNCIÓN PLASMA SEMINAL:  Activa a los espermatozoides una mayor  Facilita un medio nutritivo de osmolalidad y volumen adecuado para vehiculizar los espermatozoides hacia el moco cervical. FRACCIONES DEL SEMEN 1era fracción  Pequeña, que procede de las glándulas uretrales y bulbouretrale 2da fracción:  Secreción prostática, junto con la mayoría de los espermatozoides y cantidades pequeñas provenientes del epidídimo y conductos deferentes 3era fracción:  Secreción mucoide que proviene de las vesículas seminales

FISIOLOGÍA DEL LIQUIDO SEMINAL TESTÍCULOS:  Depositan en las porciones ampollares de los conductos deferentes hasta el momento de la eyaculación.  VESÍCULAS SEMINALES:  Fuente principal de fructosa del semen  60% volumen deriva v.s.  Liquido viscoso, neutro o ligeramente alcalino  Es a menudo amarillo o incluso muy pigmentado( como resultado de su ↑ flavina) PRÓSTATA:  Constituye 20% volumen total  pH 6.5  Contiene enzimas proteolíticas y fosfatasa ácida EPIDÍDIMO, CONDUCTOS DEFERENTES, GALNDULAS COWPER Y URETRALES  Contribuyen – 10-15% del volumen del semen  Espermatozoides almacenados en el epidídimo son inactivos por la ↑ [ ] de carnitina y gliceril-fosofricolina y de ↓ del suministro de O2 .( 2) EXAMEN FISICO SIGNIFICADO CLINICO: AUMENTOS DEL VOLUMEN SE RELACIONAN A: Procesos infecciosos-inflamatorios y su disminución a procesos obstructivos, acompañados con alteraciones de pH. ALTERACIONES EN LA LICUACIÓN, TIEMPO DE LICUACIÓN O VISCOSIDAD, PODRÍAN INDICAN:  Mal funcionamiento de las vesículas seminales o próstata que participan en el fenómeno de coagulación-licuación del semen ASPECTO Y COLOR: SEMEN RECIEN EYACULADO  Coágulo muy viscoso, opaco, blanco o grisáceo  Tiene un olor mohoso o acre  Marrón cuando tiene g.r  Con un pH 7.7 DESPUÉS DE 10-20 MINUTOS Coágulo se licua espontáneamente para formar un:  Líquido translucido, turbio y viscoso TURBIDEZ  Un ↑ o ↓ tiene poco significado

 Excepto cuando es por leucocitosis en procesos inflamatorios VISCOSIDAD  Se determina mientras se pasa la muestra liquificada desde el recipiente de la recogida a la copa graduada donde se mide el volumen. VOLUMEN: NORMAL:  1-5 ml LICUEFACCIÓN  El retraso de la licuefacción de mas de 2 hrs sugiere una inflamación de glándulas sexuales accesorias o defectos de enzimas de los productos de secreción delas glándulas. MOTILIDAD Se refiere al % de motilidad del espermatozoide y la calidad del movimiento(hacia delante y en forma progresiva.  MOTILIDAD PROGRESIVA RAPIDA  MOTILIDAD PROGRESIVA LENTA  MOTILIDAD NO PROGRESIVA (<5MM/S)  INMOVILES (4) EXAMEN QUIMICO  Fructosa : Capacidad secretoria vesículas seminales  Ácido cítrico : Capacidad secretoria próstata  IgA : Detección infección / inflamación  Fosfatasa ácida: capacidad secretora de la próstata  Test hiposmótico : Integridad de membrana  Swim-up : Capacidad de migración y capacitación espermática (6) SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:
FRUCTOSA DISMINUYE EN:

Procesos infecciosos de las vesículas seminales acompañada de un aumento relativo de los marcadores prostáticos

EL ÁCIDO CÍTRICO Y LA FOSFATASA ÁCIDA DISMINUYEN:

Casos de prostatitis o neoplasias.

ANÁLISIS DE LAS CARACTERISTICAS MORFOLÓGICA ESPERMATOZOIDES DEFECTOS DE CABEZA DEFECTOS DEL CUELLO Y PIEZA EMDIANA DEFECTOS DE COLA

DE

LOS

VITALIDADA ESPERMATICA POR EXCLUSIÓN DE COLORANTE Es la proporción de espermatozoides vivos de acuerdo al criterio de exclusión de algún colorante vital mediante la expresión de su capacidad osmoreguladora cuando se le expone a condiciones hipoosmóticas. Esto debe ser determinado el % de espermatozoides inmóviles superen el 50%.

CONTEO MORFOLÓGICO DE ESPERMATOZOIDES  Utiliza objetivo de 100x de campo claro o oscuro  Cuentan 200 espermatozoides consecutivos.

LEUCOCITOS:  Casos de leucocitospermioa sugieren infección y pobre de calidad del semen AGLUTINACIÓN: INTERPRETACIÓN:  Consiste en que los espermatozoides se adhieren entre ellos.  Se debe a la existencia de una causa inmunológica de infertilidad SE EVALÚA TAMBIÉN PARA DETERMIANR LA MOTILIDAD La aglutinación debe ser informada: Por ejemplo:

Cabeza, con cabeza, cola con cola como ESACALA SEMICUANTITATIVA:  Sin aglutinación  +++ agrupamiento masivo CONTAJE DE CELULAS DIFERENTES DE LOS ESPERMATOZOIDES  Células germinales  Leucocitos Que se calculan en forma relativa a la [ ] de espermatozoides  N: cantidad de tipo celular contada en los mismos campos que 100 espermatozoides  S:recuento de espermatozoides en millones por mL [ ] de celulas en millones: =N X S /100

Adherencia de espermatozoides inmóviles o móviles a filamentos de moco a celulas o detritos no se considera aglutinación, sino AGREGACIÓN INESPECÍFICA Y SE DEBE ANOTAR. PBAS PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS UNIDO IMNUNOBEADS  Ac´s presentes en lasuperficie  Son esferas de policrilamida que tienen Agh  Esta pba explora la presencia de anticuerpos IgG , como IgA. PBA MIXTA DE ANTIGLOBULINAS  Para IgG y Ig A se mezclan con semen fresco, se utilizan partículas de latex  Formación de aglutinados máximos entre la partículas  Dx de infertilidad inmunológica es probable cundo en 50% de espermatozoides tienen partículas adheridas.

1. PBA DE HINCHAZÓN

Se basa en la semipermeabilidad de la membrana celular intacta que causa que los espermatozoides se hinchen en condiciones hipoosmoticas, cuando la entrada de agua produce expansión ene l volumen de la célula.

2. ANALIAIA SEMINAL POR COMPUTADORA VENTAJAS:  Alta precisión  Provisión de datos cuantitativos sobre la cinética de loe espermatozoides 3. CULTIVO DE SEMEN TEST DE NARANJA DE ACRIDINA SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:  se basa en el principio que la naranja de acridina se enlaza al DNA doble cadena normal dando fluorescencia verde y al DNA simple cadena desnaturalizado dando fluorescencia roja.  Un alto porcentaje de cabezas espermáticas rojas puede asociarse a un potencial de fertilidad disminuido. UTILIDAD CLÍNICA: Control de calidad de donantes de semen para bancos de esperma. Diagnóstico en pacientes con fertilidad reducida y espermograma aparentemente normal. Chequeo espermático para procedimientos de FIV. Evaluación de causas posibles en abortos recurrentes. VALOR DE REFERENCIA: ³ 45% de células verdes

PRUEBAS FUNCIONALES DEL ESPERMATOZOIDE: 1. ESPECIES DE OXIGENO REACTIVO E INFERTILIDAD MASCULINA

2. PRUEBA DE UNION A LA ZONA PELLUCIDA HUMANA 3. PBA PENETRACIÓN DEL OVOCITO DE HÁMSTER SIN ZONA PELLUCIDA RECOLECCION DE MUESTRA SEGÚN LA OMS DATOS MUESTRA:  Nombre del paciente  Periodo de abstinencia, fecha, hora de recolección  Se analizan 2 muestras de semen ( tiempo transcurrido no debe ser menor 7 ni mayor de 3 semanas. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA: MASTURBACIÓN  Recoge en un consultorio o en el laboratorio  Después de 48 hrs de abstinencia sexual Se recoge en un frasco de: Vidrio de boca ancha, limpio, facilitado por el laboratorio La muestra debe recibirse lo antes posible En ningún momento depuse de más de 2 o 3 hrs de su toma Se coloca en recipiente (debe estar tibio el recipiente para evitar la motilidad de los espermatozoides) Condones específicos (no de látex, alteran la viabilidad de los espermatozoides) CARACTERÍSTICA DE LA MUESTRA: La muestra debe ser completa Se protege de temperaturas extremas (-20°C ni + 40°C) AZZOESPERMIA: Por autolisis espontánea de testículos, atrofia y hialinización de túbulos seminniferos, obstrucción de los conductos deferentes, variocele, etc. OLIGOSPERMIA: Atrofia y hialinización unilateral de túbulos seminiferos, insuficiencia nutricional, fibrosis parcial peritubular, traumatismo unilateral, irradiación de testículos por rayos x. ESTERILIDAD: exceso de # de espermatozoides que sean anormales, acidez excesiva, tensión nerviosa, acto sexual excesivo.(3) VALORES DE REEFERENCIA
MORFOLOGÍA. Normales: Mayor de 50 % Macrocéfalos: Menor a 0.5% Microcéfalos : Menor a 1.5% Cabezas dobles : Menor a 1.5% Cabezas dobles : Menor a 1.5% Cabezas ausentes :: Menor a 5% Amorfos : Menor a 40% AGLUTINACIÓN Menor a 10% LICUEFACCIÓN Normal

INTERFERENCIAS: VARIABLES POR ENFERMEDAD ENFERMEDAD EFECTO Diabetes : Desórdenes eyaculatorios, impotencia y daño en la espermatogénesis y función de glándulas anexas. VOLUMEN 2.0 mL o más PH 7.2 o más CONCENTRACIÓN ESPERMATICA: 20 x 106 espermatozoides/ml NÚMERO TOTAL DE ESPERMATOZOIDES: 40 x 106 espermatozoides por eyaculación MOTILIDAD: 50% más con progresión 25% o más con progresión lineal rápida VIABILIDAD: 50% vivos LEUCOCITOS: Menos de 1 x106 PRUEBA DE INMUNOBEADS - 50% espermas móviles con partículas adheribles PRUEBA DE MAR - 50% espermatozoides con partículas adheribles.(4)

Tuberculosis: epididimitis, prostatitis Del tracto respiratorio: Bronquioectasis ,sinusitis crónicas ,bronquitis crónicas: disturbios secretorios de epidídimo Inmovilidad: Desórdenes en cilias espermáticas Fibroquística del páncreas Presenta incidencia incrementada con disgenesia por ausencia de vaso deferente. Herpes:Daño testicular Temperaturas mayores a 38° C: supresión de espermatogénesis hasta 6 meses DROGAS

SUPRESIÓN ESPERMATOGÉNESIS Cimetidina : Inhibidor competitivo de andrógeno sobre receptor Sulphasalazine Tóxico: Altera la calidad del semen Spironolactona : Antagonista acción androgénica Nitrofurantoína Tóxico: Altera la calidad del semen Niradozole : Podría causar depresión temporaria de la fertilidad Colchicina Tóxico: Depresión temporaria de fertilidad (actúa sobre la espermatogénesis) Tranquilizantes y antihipertensivos: Afectan la potencia

VARIABLE Y EFECTO Factores Ambientales / Ocupacionales: Calor : depresión de la espermatogenesis Metales pesados (plomo, cadmio, mercurio) ,Pesticidas/herbicidas :Reducción de la fertilidad Alcohol : interferencia con la espermatogenesis Reducción de la función sexual por inhibición de biosíntesis de testosterona. Tabaco:Disminución del volumen eyaculado. Café :Aumento de la densidad espermática y los espermatozoides anormales Marihuana: Reducción de fertilidad Sobrepeso: Reducción del volumen testículos (4)

UTILIDAD CLINICA: Demostrar L.S de un individuo sospechoso es diferente del que se había obtenido de la victima. PRESENCIAD ESPERMATOZOIDES Se preparan extensiones obtenidas de la vagina para la tinción de papanicolau, antes del aparición o de lavado O lavados procedentes de manchas de tejidos *El líquido lavado puede concentrarse primeramente por centrifugación y se realiza después tinciones de hematoxilina y eosina con el sedimento. TIPOS DE PRUEBAS DETECCIÓN DE SUSTANCIAS QUE CONSTITUYAN A LOS S GRUPOS SANGUÍNEOS DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ÁCIDA: PRUEBA DE FLORENCE(2) ESTUDIO DEL FACTOR CERVICAL MOCO CERVICAL: Es un sistema fibrilar que consiste formado por subunidades constituidas por un centro peptídico y cadenas laterales de oligosacáridos. TIENE PROPIEDADES REOLÓGICAS: CONSISTENCIA: Influenciada por la disposición molecular y por la [ ] de proteínas y iones de moco cervical SPINNBARKEIT: Describe la fibrosidad, la filancia o características de elasticidad del moco cervical HELECHOS: Son el grado y característica de los patrones de cristalización que se observan al secar al mococ en una superficie de vidrio. EVALUACION DEL MOCO CERVICAL Puntuación máxima es 15 Puntuación < 10 es un buen moco cervical  10 es un moco cervical desfavorable(6) OBJETIVO: Evaluar la fertilidad del varón en un apareja infecunda Corroborar la eficacia dela vasectomía Fines medicolegales Detectar semen ene l cuerpo o ropas de una supuesta víctima de violación o por otras causas, en las escenas del delito

Identificar sustancias solubles de grupo sanguíneo para exponer o culpar a un delincuente sospechoso Excluir la paternidad con base en esterilidad completa EXAMEN FISICO: MATERIAL: 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm 1 pipeta graduada de 5 ml 1 probeta graduada de 10 ml 1 varilla de vidrio 1 palillo de madera papel pH VOLUMEN: La mayoría de liquido seminal esta constituido por secreción prostática y la de vesículas seminales y en menor porcentaje por las glándulas accesorias. TÉCNICA: 1. La determinación de volumen se hace ocupando una probeta graduada de 10 ml 2. Cuando la cantidad de liquido seminal es muy escasa se reporta como menos de o.5 ml o unas pocas gotas

INTERPRETACIÓN: INFÉRTILES: Volúmenes menores de 1.5 ml, aunque la prueba de morfología y motilidad se encuentren normales ESTÉRILES: Volúmenes elevados de los que # de espermatozoides cae por debajo de 60 millones COLOR:
NORMAL: Blanco grisáceo Amarillo: Abstinencia prolongada AMARILLO INTENSO: Piospermia

Café rojizo: Sangre hemolizada en casos de vesiculitis seminal y prostática ROJO: Presencia de sangre en casos de prostatitis y traumatismos

ASPECTO: Recién emitido tiene un aspecto heterogéneo ya que forma un coagulo, muy viscoso y opaco, esto se hace homogéneo después de transcurrida la licuación. La turbiedad se relaciona con el numero de espermatozoos y en los casos en que se encuentra leucocitos, eritrocitos y algunos microorganismos. VISCOSISDAD Y LICUEFACCIÓN: La secreción espermática recién eyaculada muestra una gran viscosidad, seguida de una licuefacción que se completa entre 15 y 30 minutos adquiriendo un aspecto homogéneo.(1)

TÉCNICA 1 Se agita el esperma contenido ene l frasco con una varilla de vidrio y se retira la varilla suavemente calculando al levantar la longitud del filamento formado. TÉCNICA 2 Se coloca una gota se semen sobre un portaobjetos y ayudándonos de un palillo se prosigue como sigue: Se considera normal una viscosidad de 2 –5 mm La licuación depende de la fibrosina potente presente en condiciones normales. INTERPRETACIÓN: Viscosidad disminuida: Sémenes con muy pocos espermatozoides Viscosidad aumentada: Interfiere en la motilidad de espermatozoides y se observa en prostatitis crónica PH El esperma recién emitido tiene un pH alcalino que varia de 7.3-7.5 EXAMEN QUÍMICO PRUEBA DE MOVILIDAD MATERIAL: 5 portaobjetos

5 cubreobjetos 1 microscopio TÉCNICA: 1. Después de la licuefacción se coloca una gota de semen entre un portaobjeto y cubreobjeto, previendo mezclar por inversión antes de tomar la gota de la muestra. 2. Utilizando el objetivo de seco fuerte se cuenta por separado el número de espermatozoides, inmóviles o acinéticos, con motilidad in situ y con movilidad de progresión ( la que puede ser rápida o lenta), presente en 10 campos . 3. Se informa en porciento el promedio de espermatozoides en cada una de la s 3 categorías mencionadas. 4. Además de observar la movilidad de los espermatozoides en cada una de las 3 categorías mencionadas. 5. Además de observar la movilidad de espermatozoides se busca la presencia de leucocitos, eritrocitos, células, piocitos, parasitos y hongos. VALORES DE REFERENCIA: Después de 2 hrs de la eyaculación un 60-70 % de espermatozoides muestran intensidad progresiva. 6-8 hrs las movilidades es de un 25-40% las formas inmóviles disminuyen de un 5% por hora después de la cuarta hora de recogida. INTERPRETACIÓN: La motilidad elevada pero reducida a espermatozoides móviles in situ o con movimientos progresivos rápidos, el semen no tiene capacidadfecundante y se habla de una astenozoospermia absoluta menores del 30%. VALORACIÓN DE LA MORFOLOGÍA DEL ESPERMA REACTIVOS: Solución de shaudin ( bicloruro d emercurio): Alcohol al 50% Solución de tintura de yodo Solución acuosa de eosina al 5% Solución de acido clorhídrico Hematoxilina Solución de acido acético glacial Agua destilada TÉCNICA: 1. Se hacen frotis delgados sobre portaobjetos, la mejor manera para prepararlos es seguir la técnica de suspensiones bacterianas utilizando un palillo el lugar de un asa de platino. 2. Los frotis preparados por las extensiones de sangre no son muy satisfactorios.

3. Fijar con solución de sachaudin sumergiendo 1 minuto en solución de bicloruro de mercurio y secar. 4. Sumergir durante un medio minuto en alcohol al 50% y secar y sumergir durante medio minuto en solución de yodo. 5. Lavar con agua corriente 6. El frotis se colorea sumergiendo medio minuto en una solución acuosa de eosina al 5%. 7. Secar y sumergir 1 minuto en una solución de ácido clorhídrico y lavar con agua destilada y sumergir 2 minutos y medio en hematoxilina. 8. Secar y sumergir en una solución de ácido acético glacial y lavar con agua destilada, secar y observar al microscopio. 9. Se cuenta de 1000- 200 espermatoozides que con este método se coloreándose núcleo azulado y citoplasma rojizo. 10. Se establece el % de formas anormales con respecto al tamaño, forma y disposición nuclear.

VALORES DE REFERENCIA: No se deben encontrar anormalidades morfológicas en más del 25% total de los espermatozoides. INTERPRETACIÓN: Más del 25% que tenga anormalidades tiene importancia en la relación con la esterilidad y subfertilidad. VALORACIÓN MORFOLÓGICA DEL ESPERMA RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES PBADE MACOMBER FUNDAMENTO: La cuantificación de espermatozoides se obtiene de la misma forma como se hace para leucocitos. REACTIVOS: Liquido de macomber y sauders: MATERIAL: 2 pipetas de thoma 1 cámara de neubauer 1 microscopio TÉCNICA: 1. Homogeniza a la muestra por la presencia de espermatozoides móviles e inmóviles 2. Pipeta thoma ( G.B) se carga hasta 0.5 con líquido seminal y luego con líquido de dilución de macomber hasta la marca 11 3. Se agita homogéneamente la pipeta hasta que sea homogéneo en la porción ampular

4. Se desechan 2 primeras gotas 5. Se cuentas espermas en 1 mm cuadrado y se multiplica por dilución y por la corrección de la profundidad de la cámara, para obtener la cifra por mmm3 y x 1000 para obtener la cifra por ml.

# espermatozoides: N (10) (20) (1000) / 4 = N spermatozoides

EXAMEN QUÍMICO
DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD FECUNDANTE FUNDAMNETO: Los espermatozoides consumen oxígeno y producen sustancias reductoras que disminuyen el potencial oxido-reducción hasta valores negativos: El grado de variación depende de # espermatozoides y la intensidad del metabolismo de los mismos La variación se añadiendo indicador como azul metileno que en estado oxidado es azul y al reducir se vuelve incoloro.

TÉCNICA: 1. 1 ml de colorante + 1 ml de esperma con no + de 1 hora de emitido y se mezcla

2. Utilizan 2 capilares y se coloca uno en la mezcla anterior y otro se usa como testigo con solución de colorante

3. Se sella con plastilina los extremos de los 2 tubos y se colocan en estufa a 37°C, se anota la hora y se hacen observaciones cada 5 minutos hasta determinar cuando comienza la coloración. 4. Se anota el tiempo y se continúa las observaciones hasta que se complete la decoloración total 5. Se informa el tiempo del comienzo de decoloración y tiempo de decoloración total. VALOR DE REFERENCIA: Decoloración total:15-30 minutos INTERPRETACIÓN CLINICA: Fertilidad optima de la decoloración es de 15-30 min Moderada 60 minutos aprox. FOSFATASA ACIDA: REACTIVOS: Solución tamponada de ácido cítrico-citrato de sodio 0.05 M Sustrato tamponado Hidróxido de sodio 0.02 N Solución estándar de p-nitrofenol MATERIAL: 7 tubos de ensaye de 15 x 150 mm 1 pipeta graduada de 10 y 5 ml 6 pipetas de 1 ml 1 matraz aforado de 100 ml 1 gradilla 1 baño de agua 37°C Espectrofotómetro TÉCNICA: 1. Diluir el esperma y se marcan 2 tubos uno como P y B 2. Agregar 1 ml de sustrato tamponado y llevar a baño de agua unos minutos 3. Agregar al problema 0.2 ml de la dilución del esperma e incubar 37°C durante 30 minutos 4. Retirar del baño y agregar a cada tubo 10 ml de NaOH 0.02 N y en ese momento agregar 0.2 ml de la solución de la dilución del semen al tubo blanco y se mezclas inversión 5. Leer absorbancia llevando a cero con el blanco a 405 nm 6. Interpolar en la curva de calibración 7. Multiplicar por el factor e dilución

DEETRMINACION DE FRUCTOSA PBA DE ROE ADAP´TADO FUNDAMENTO: Esta basado en el calentamiento de la fructosa en presencia de ácido clorhídrico resorcinol produciendo el oxi-metil-furfural que con la reorcina produce un complejo coloreado. REACTIVOS: Solución de resorcina al 0.1% Solución de clorhídrica al 30% Solución de testigo de fructosa MATERIAL: 6 tubos de ensaye de 15 x 150 mm 3 pipetas graduadas de 10 ml 5 pipetas graduadas de 10 ml 1 pipeta graduada de 1 ml 1 gradilla 1 baño de agua a 80°C TÉCNICA: 1. Se diluye el esperma y en el tubo problema colocar 2 ml de la dilución 2. En el tubo blanco se colocan 2 ml agua 3. 3 tubos diferentes se marcan con T1,T2,T3 y colocar 2ml de cada dilución testigo 4. A cada tubo se le agrega 2 ml de la solución de resorcina y 6 ml de solución clorhídrica y se agitan 5. Colocan todos los tubos a baño maría a 80°C durante 8 minutos, se retiran y se enfrían 6. Lee a 520 nm ajustando a 100% de transmitancia con el blanco 7. Graficar en papel milimétrico las lecturas obtenidas de los testigos VALORES DEREFERENCIA: 200-400 mg/ 100 ml

CALCULOS: 129 X 20X 1000 / 4= 645 OOO mm3 RESULTADOS: EXAMEN FÍSICO:

Volumen Aspecto: Color: Olor: viscosidad Licuefacción

1.0 ml homogéneo Gris blanco Característico 3.5 mm 45 minutos

EXAMEN MICROSCOPICO: RECUENTO ESPERMATOZOIDES (PBA MACOMBER) ϕ 64 x 106 PBA WILLIAMS ϕ Moviles:9 ϕ Moviles progresivo: 75 ϕ MOVILES IN SI TU: 16 PBA HURGO Y DI PAOLA ϕ ESPERMATOZOIDES VIVIOS INMOVILES NO COLOREADOS:36 ϕ ESPERMATOZOIDES MUERTOS COLOREADOS: 84 ϕ ESPERMATOZOIDES VIVOS MOVILES NO COLOREADO:81% EXAMEN QUÍMICO: ϕ DETERMINACIÓN DELA CAPACIDAD FECUNDANTE: 25 MINUTOS ϕ FRUCTOSA: ϕ FOSFATASA ACIDA:

CONCLUSIONES: ϕ El análisis del liquido seminal es importante en el laboratorio para llevar a cabo si un hombre causa de esterilidad, por eso es adecuado llevar a cabo el examen de semen. A través de este podemos observar sus características físicas y

químicas del semen , así podremos diagnosticar si no se encuentran anormalidades en su morfología u otro componente, por eso es adecuado , por eso es importante llevar su análisis inmediatamente después de llegada la muestra al laboratorio.

REFERENCIAS: 1. Federico, Aiquel, Manual De análisis clínicos, 4ª edición, 1997, Editorial medica panamericana, paginas: 451,452,453. 2. Henry J.B., Diagnostico clínico y tratamiento clínico, 9ª edición, 2000, Edutorial masson, México, pagina: 3. Kolmer,J.A, Diagnostico clínico por análisis del laboratorio, 3ª edición, 1963, Editorial interamericana, pagina: 270 4. Manual de laboratorio de la OMS para el examen de semen humano y interacción entre semen y moco cervical, 4ª edición , 2001, editorial panamericana. 5. Tanagho, E.A, Urología general de Smith, 12ª edición, 2001,Editorial el manual moderno, México, pagina:767. 6. www.forastare.com

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD REGION XALAPA FACULTAD DE BIOANALISIS QUÍMICA CLINICA III LABORATORIO PRACTICA 12 INTRODUCCIÓN:

Es un líquido claro y ligeramente amarillento que rodea el bebé dentro del útero (feto) durante el embarazo y que está contenido en el saco amniótico. El feto flota en el líquido amniótico. Durante el embarazo, el líquido amniótico aumenta en volumen a medida que el feto crece y cuando el feto está a término (a la semana 40 de la

gestación), el bebé se encuentra rodeado por aproximadamente 1000 ml de líquido amniótico.

El líquido es reciclado por el feto cada 3 horas. FUNCIONES DEL LIQUIDO AMNIOTICO  Protege al feto de las lesiones externas al amortiguar golpes o movimientos súbitos  Le permite al feto moverse con libertad, lo cual ayuda en su desarrollo músculoesquelético  Mantiene al feto a una temperatura relativamente constante para el medio ambiente que lo rodea  Protege al feto de la pérdida de calor  Es una fuente de líquido oral para el feto  Permite el crecimiento y desarrollo simétricos del feto

TOMA DE MUESTRA
El líquido amniótico se aspira mediante una aguja que se introduce a través de la pared abdominal y uterina hasta el saco amniótico.

De preferencia se realiza antes de la decimoquinta semana de embarazo( en este momento existen 150 ml de líquido amniótico. 1. La paciente se coloca en decúbito dorsal con los brazos debajo de la cabeza para que no se toque el abdomen ni el campo estéril durante el procedimiento Se hace un rastreo preliminar para buscar el número de fetos, su viabilidad y posición. Además se localiza una colección adecuada de líquido amniótico. El sitio de punción debe ser lejos al feto, a la inserción del cordón umbilical y a cualquier segmento grueso de la placenta. 2. Se limpia la piel con un antiséptico y se cubre con campos estériles, enseguida se inyecta un anestésico local en el sitio de punción. 3. Posteriormente se introduce una aguja espinal de 9 cm (calibre 20-22) con estilete a través de la pared abdominal y uterina, hasta ala cavidad amniótica, pero siempre lejos del feto y cuando se a posible de la placenta. 4. Los primeros 0.5 ml se desechan para evitar contaminación por células o sangre materna. 5. Ya retirada la aguja se coloca una cinta adhesiva sobre el sitio de punción y mediante ultrasonido se confirma la viabilidad del feto.

MANEJO DE LA MUESTRA La recolección de la muestra se recolecta en un recipiente de silicón estéril de color marrón o cubierto con papel aluminio para protegerlo de la luz y prevenir la degradación de la bilirrubina Se aspira con seguridad una muestra de 10 ml, cuando la amniocentesis se lleva acabo para determinar la madures fetal.

UTILIDAD CLINICA: La amnióncentesis permite detectar anormalidades como:  Afecciones hematológicas  Infecciones fetales

 del metabolismo y enfermedades ligadas al sexo.

Errores

congénitos

INTERFERENCIAS  La contaminación de la sangre fetal origina niveles falsos + de AFP.  Pueden ocurrir errores tanto falsos – como falsos + en el cariotipo.  El polihidramnio reduce de manera artificial los valores de la bilirrubina por dilución.  La hemólisis de la muestra altera ante los resultados.  El oligohidramnios eleva de manera artificial ciertas cifras del líquido amniótico, especialmente de la bilirrubina EXAMEN FISICO

VOLUMEN TOTAL DE LÍQUIDO AMNIÓTICO VALOR DE REFERENCIA:      350 ML a las 15 semanas de gestación 450 ml a las 20 semanas 750 a las 25 semanas 1500 ml entre la semana 30 y 35 Disminuye hasta llegar 1 250 al término del embarazo

La medición de volumen de líquido amniótico es útil para calcular los cambios que se producen en ciertas sustancias que circulan en este líquido. , Incluyendo pigmentos de bilirrubina, creatinina y surfactante. Es importante conocer el volumen del líquido amniótico debido a que si éste cambia en forma acentuada, disminuye el valor predicativo de las concentraciones seriadas de determinada sustancia, esta cuantificación es + importante cuando los resultados no concuerdan con el cuadro clínico. TÉCNICA Se analiza una muestra de líquido amniótico utilizando una solución de ácido para-aminohipúrico para absorbencia y dilución, para calcular el volumen probable en ml El nivel corregido de LAM es igual a la [ ] de determinada sustancia por el volumen real dividido entre el volumen promedio. COLOR DE LIQUIDO AMNIÓTICO VALOR DE REFERENCIA: Es incoloro o de color amarillo claro Las muestras de líquido amniótico son transparentes o color amarillo, en ocasiones contiene partículas blancas de vérmix caseoso proveniente de la piel del feto y lanugo. Algunas patologías como el aborto diferido, ciertas anormalidades del feto y la anacefalia alteran el color. EXAMEN QUIMICO CREATININA ÉL LIQUIDO AMNIÓTICO

La creatinina indica madurez física fetal y se correlaciona bastante bien con la madurez pulmonar. Conforme evoluciona el embarazo, se eleva la creatinina, cuando la cifra es de 2 mg/100 ml, indica que la gestación es de 37 semanas o más. DENSIDAD OPTICA DE LA BILIRRUBINA EN LAMT Pba que se utiliza para vigilar el estado del feto en una mujer Rh -, en que en titulación de Ac´s anti Rh aumenta en forma progresiva. VALORES DE REFERENCIA: OD: 0.02 menos indica madurez AFP FETOPROTEINA ALFA-1
Es sintetizada en el hígado del embrión y constituye la proteína principal del suero fetal. Es semejante a la albúmina en cuanto a su PM, secuencia de a.a y características inmunológicas. Sin embargo, no suele detectarse después del nacimiento.

 Este estudio prenatal del líquido amniótico se utiliza para diagnosticar defectos del tuboneural, durante el embarazo el feto que tiene un defecto en el tubo neural, la fetoproteína escurre hacia el líquido amniótico, donde eleva su [ ]. En casos de anacefalia y espina bífida abierta, la cifra de AFP tanto en sangre como en líquido amniótico es anormal desde la 18ª semana de gestación. Además la cuantificación de AFP se utiliza como indicador de sufrimiento fetal, ya que se eleva tanto en líquido amniótico como en suero de la madre. INTERFERENCIAS  Contaminación de sangre fetal eleva la AFP.  AFP se eleva en emabrazo múltiple.  Puede haber resultados falsos + de 0.1%-0.2% en muerte fetal, gemelos o anormalidades genéticas. REALACION LECITINA / ESFINGOMIELINA EN LIQUIDO AMNIÓTICO(L/S) La relación existente entre los fosfolípidos y las sustancias tensoactivas, lecitina y esfingomielina, se utiliza como índice de madurez pulmonar fetal. Cuando se anticipa que el embarazo se deberá interrumpir antes de tiempo por alguna enfermedad como : Diabetes Rotura prematura de membranas, hipertensión materna, insuficiencia placentaria o eritroblastosis fetal, se utilizara la relación L/S para pronosticar si los pulmones del feto funcionarán adecuadamente.

PBA DE AGITACIÓN DE LIQUIDO AMNIÓTICO VALORES NORMALES: Cuando La prueba de agitación tiene una dilución 1:2 indica madurez pulmonar. La pba de agitación mide la cantidad de surfactante pulmonar contenido en el líquido amniótico desde el punto de vista cualitativo. Es un estudio rápido que se puede realizar en la habitación del paciente y es barato. Esta pbas e basa en la formación d en anillo completo de burbujas en la superficie del líquido amniótico debido a la presencia de surfactante y etanol al 95%. Se coloca una cantidad exacta d etanol al 95%, solución salina isotónica y líquido amniótico en un recipiente y se agita durante 15 segundos.

INDICE DE ESTABILIDAD DE LA ESPUMA DE LIQUIDO AMNIÓTICO  Es similar a la pba de agitación, en esta se añaden 0.5 ml de líquido amniótico a distintas concentraciones de etanol 95%, enseguida la muestra se agita y se busca espuma, que indica madurez, esta prueba es tan confiable como la relación L/S en el embarazo normal y tiene menos resultados falsos + que la prueba de la gitación.  La FSI de 0.48 o + se denomina madura, de 0.46 o – es inmadura. INTERFERENCIAS  La contaminación con sangre o meconio produce resultados falsos “maduros”. EXAMEN MICROSCOPICO EXAMEN CITOLOGICO DE CELULAS FETALES PARA DETERMINAR LA MADUREZ (LÍPIDOS) VALORES NORMALES  El reporte se realiza con base en los siguientes el porcentaje de células grasas se eleva conforme el feto madura PRUEBA DEL HELECHO DEL LIQUIDO AMNIÓTICO

VALOR NORMAL  Pba + para líquido amniótico  La formación de helechos es el resultado de la actividad electrolítica en las glándulas cervicales y se encuentra bajo el control de los estrógenos. Cerca del término del embarazo, el líquido amniótico forma un patrón típico de helecho similar al que se observa en el moco cervical que indica un efecto predominante estrogénico, la orina no produce patrón de helecho. Esta prueba sirve para diferenciar la orina del líquido amniótico y se realiza para precisar si el líquido que se expulsa es orina. INTERPRETACIÓN CLINICA: VOLUMEN: SI SE SOSPECHA DE POLIHIDRAMNIOS O ↑ LÍQUIDO ( > 2000 ml) Se calcula que el 18-20% de los fetos polihidramnios padecen alguna enfermedad congénita, las más frecuentes son:     Atresia esofágica Anacefalia Inmunización Rh Diabetes

SOSPECHA DE OLIGOHIDRAMNIOS(volumen –300 ml) Debido a una: Función renal debida a agenesia o atresia renal. La causa mas frecuente son ruptura de membranas, retraso del crecimiento intrauterino y embarazo de postérmino. INTERPRETACIÓN CLINICA: COLOR: COLOR AMARILLO: Indica incompatibilidad sanguínea , eritroblastosis fetal o presencia d pigmentos biliares liberados por hemólisis eritrocitaria. AMARILLO OSCURO: Posible Afección fetal ROJO: Indica sangre, en este caso hay que determinar si la sangre proviene de la madre o el feto. VERDE OPACO

Indica Contaminación con el meconio. El feto excreta meconio por hiperperistalsis como respuesta a alguna tensión, que puede ser transitoria o bien más prolongada como la hipoxia. Entre más meconio exista , más grave e inmediata es la tensión AMARILLO MARRÓN OPACO: Indica muerte intrauterina y maceración fetal EXAMEN QUIMICO CREATININA ELEVADA  La ceratinina elevada refleja la masa muscular fetal. El feto con pequeño retraso en el crecimiento intrauterino hijo de una madre hipertensa padece creatinina baja por reducción de la masa muscular. DISMINUIDA  Ciclo gestacional temprano  Feto más pequeño que lo normal  Anormalidades del riñón fetal AFP ELEVACIÓN:  Defectos del tubo neural, como anacefalia en un 100%, encefaloce, espina bífida y mielomeningocele(confiabilidad de 90%).  Nefrosis congénita de Finnish  Onfalocele  Síndrome de turner con higromas quísticos  Obstrucción del aparato gastrointestinal, amenaza de aborto, sufrimiento fetal, muerte fetal.  Atresia esofágica y duodenal, necrosis hepática fetal secundaria a infección por virus herpes, trisomía 13,aborto espontáneo, obstrucción urinaria.

EXAMEN MICROSCOPICO PBA DE AGITACIÓN DE LIQUIDO AMNIÓTICO

INTERPRETACIÓN CLINICA  La formación de un anillo completo de burbujas indica que es el resultado es +.  Si no se forma un anillo de burbujas el resultado es -. CELULAS FETALES PARA DETRMINAR MADUREZ FETAL INTERPRETACIÓN CLINICA  Cuando el 3 d glándulas sebáceas es – 2% la tasa de prematurez es de 85%.  Si mas 20% de las células se tiñen de color naranja, significa que el peso pesa cuando – 2500 g y tiene una edad gestacional de 35% semanas o más.  Si el 10% de las células en el líquido se tiñeñe de color naranja, la edad gestacional es – de 35 semanas. OBJETIVO:        Evaluar al feto en desarrollo o con posibles anormalidades cromosómicas Todas las anormalidades cromosómicas posibles Igual que la anormalidad cromosómica de sangre o feto Detectar enfermedad hemolítica del neonato Diagnosticar trastornos metabólicos y aminoácidos y mucopolisacáridos Determinar la edad y madurez fetal, en especial la madurez pulmonar Evaluar el estado general del feto al detectar las presencia de meconio o sangre, o medir niveles de estradiol y hormona tiroidea fetal en liquido amniótico

MATERIAL:  Tubos de 13 x 100  Espectrofotómetro  Centrífuga  Agua destilada  Pipetas de 1 , 5, 10 ml  Pipetas pasteur  Baño maría REACTIVOS LISTOS PARA USARSE:  Creatinina  Bilirrubina  proteínas MATERIAL BIOLÓGICO:  Líquido amniótico

TÉCNICA: DETRMINACIÓN DE CREATININA 1. A 3 tubos 13 x 100 agregue: 2. B Agua destilada Muestra Standard Reactivo trabajo 1 ml 0.1 ml S 0.1 ml 1 ml D 0.1 ml 1 ml

3. Mezclar e incubar 10 minutos a 37°C, dentro los 15 minutos de retirado del baño, leer el satndard y el desconocido a 510 nm y agregar: Stoper 50 μL μ50 L 50 μL Leer a 520 nm con filtro verde la absornbancia. DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINAS 1. A dos 2 tubos de ensaye agregue: P Ácido sulfanílico Nitrito de sodio Acelerador Suero 0.2 ML 0.01 ML 1 ML 0.2 ML B 0.2 ML 1 ML 0.2 ML

2. Mezclar y dejar reposar de 10-60 minutos a temperatura ambiente y agregar: P Solución fhelling 1 ml B 1 ml

3. Mezclar y medir extinciones de absorbancia problemas después de 5-30 minutos a 510 nm.

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

B Suero patrón Muestra Reactivo 3.0 ml

S 50 ul 3.0 ml

P 50 ul 3.0 ml

 Leer la absorbancia de los tubos a 540 nm y realice sus calculos:

CALCULOS:  CREATININA:D1-D2 X factor (20 mg)= 0.21-0.37 x 20=3.2  BILIRRUBINA TOTAL: 0.21-0.0151 x 10.5=0.05  PROTEINAS: Absorbancia del problema / absorbancia standard x 5= 0.38/.177 x 5 = 3.3

RESULTADOS:  CREATININA: 3.2 mg / 100 ml  BILIRRUBINA TOTAL: 0.05  PROTEINAS:3.3 mg g /dl

VALORES DE REFERENCIA:  CREATININA: 1.8-4.0 mg/100 ml  BILIRRUBINA TOTAL: 0.025 mg / 100 ml  PROTEINAS: 6.2-5.8 g/dl

CONCLUSIONES:  Es adecuado llevar a cabo un buen análisis del líquido amniótico dentro del laboratorio de química clínica por que a través de el podemos determinar si se esta llevando adecuadamente la evolución del feto y a través de análisis del líquido amniótico lo podemos observar de acuerdo a sus resultados de las distintas pruebas que se el realizan.  Por ejemplo la determinación de creatinina nos oriento para evaluar el estado de madurez física y pulmonar del feto, otra prueba que se le realiza comúnmente es la determinación de bilirrubinas para determinar si no existe pasando por causas de inmunización materno fetal.  Es importante llevar acabo un buen control de calidad cuando se realizan este tipo de pruebas en el laboratorio clínico, por que de nosotros va depender un tratamiento que se de . REFERENCIAS: 1. Balcells,A., La clínica y el laboratorio, 18ª edición, 2001, editorial Masson, paginas: 291,292. 2. Fisbach, Manual de pruebas diagnosticas, 5ª edición, editorial Mc graw –Hill Interamericana,1997, paginas:1053,1054,1058,1059,1061,1062,1064,1065,1066,1067,1070. 3. www.adam.com

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