Actividad 3. Obtencin del espectro de absorcin de la clorofila.

Desarrollo El espectro de absorcin de la clorofila fue determinado a partir de hojas de espinaca, las cuales se trabajaron de la siguiente manera:
1. 50 gramos de hojas fueron finamente cortadas y maceradas en un mortero, hasta la obtencin de una pasta. 2. Posteriormente se adicionaron 50 ml de acetona y la mezcla fue transferida a un tubo de propileno, el cual se cubri con papel aluminio para evitar la exposicin a la luz, y por ende la descomposicin de la clorofila. 3. Se agit la mezcla durante dos minutos, para extraer la mayor parte de la clorofila. 4. La mezcla fue centrifugada a 12C a 3000 rpm (revoluciones por minuto) durante 15 minutos. 5. El sobrenadante fue transferido a otro tubo, el cual fue cubierto y sellado rpidamente con papel aluminio, para proteger la muestra de la exposicin a la luz y evitar la evaporacin del disolvente. 6. La absorcin de la clorofilas a, fueron determinadas en un espectrofotmetro Milton Roy Spectronic 20D. 7. El extracto fue colocado en 30 diferentes cubetas (tubos de vidrio especiales para el espectrofotmetro), las cuales fueron cubiertas y selladas con papel aluminio. 8. Las muestras fueron ledas en un rango de 400 a 700 nm, variando la longitud en 10 unidades, cambiando la cubeta en cada medida y utilizando como blanco acetona. 9. Es importante mencionar que cada vez que se variaba la longitud de onda, el aparato era calibrado a cero de absorbancia, utilizando el blanco.

Tabla 1. Absorbancias de clorofila de espinaca a diferentes longitudes de onda Longitud de onda (nm) 400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 540 550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660 670 680 690 700 Absorbancia 0.72 0.75 0.85 0.91 0.86 0.65 0.6 0.55 0.38 0.27 0.11 0.05 0.04 0.04 0.04 0.05 0.07 0.09 0.11 0.11 0.12 0.13 0.15 0.16 0.22 0.32 0.28 0.13 0.04 0.01

Grafiquen los datos, utilizando Excel o papel milimtrico.

Absorbancia
1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 300 400
Longitud de onda de mxima absorbancia

Absorbancia

500

600

700

800

A qu longitud de onda corresponde?

La longitud de onda de mxima absorbancia corresponde a un valor de 430 nm con una absorbancia de .91

De acuerdo a la longitud de onda, que color del espectro absorbe mejor?

Absorbe mejor el color azul-violeta

Interpreten qu importancia tiene la obtencin de espectro de absorcin de la clorofila dentro de tu preparacin acadmica.
Las tcnicas espectrofotomtricas -Visible han recibido gran aceptacin, de tal forma que se utilizan de manera rutinaria en casi todos los laboratorios de anlisis (Hernndez y Gonzlez, 2002). Algunas de sus ventajas son: Tienen un amplio campo de aplicacin: gran parte de los analitos son coloridos o son capaces de formar algn complejo colorido, el cual es cuantificable en la regin visible. De igual manera, existe una gran cantidad de sustancias que absorben en la regin. Buena exactitud y precisin: en la realizacin de estas metodologas ocurren errores relativos del 1% al 3%, por lo cual se puede considerar que se tendrn resultados analticos con un mnimo de incertidumbre si se procede en forma adecuada. En nuestra carrera no ayudara bastante para la identificacin y cuantificacin de sustancias, mediante las tcnicas espectrofotomtricas en la regin visible y poder tener una informacin ms confiable para tomar decisiones ms acertadas con respecto a las muestras obtenidas en ciertos problemas.