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Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible
Tema 3 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ULTRAVIOLETA-VISIBLE
La espectrofotometra de absorcin en las regiones ultravioleta y visible del espectro electromagntico es, posiblemente, la ms utilizada en la prctica del anlisis cuantitativo de todas las tcnicas espectroscpicas. Asimismo, puede resultar de utilidad como tcnica auxiliar para la determinacin de estructuras de especies qumicas. Se basa en la absorcin de radiacin ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energa en forma de calor, en un proceso que esquemticamente puede representarse as: X + h > X* > X + calor La cantidad de calor disipado es muy pequeo, por lo que el mtodo tiene la ventaja de originar un trastorno mnimo en el sistema que se estudia. El trmino generalmente empleado en la medida de la radiacin absorbida es el de absorciometra, si bien, normalmente se utiliza la denominacin de colorimetra cuando se trabaja en la region visible del espectro electromagntico y se emplean aparatos que utilizan filtros (ver ms adelante) para seleccionar la radiacin utilizada*. Por otra parte, el trmino espectrofotometra suele aplicarse cuando la radiacin utilizada se extiende a las regiones ultravioleta e infrarroja, y adems, se utilizan monocromadores en lugar de filtros, as como sistemas de deteccin ms sensibles, como tubos fotomultiplicadores.
* En sentido estricto, un colormetro es un instrumento que compara el color de una sustancia con el de
una disolucin de referencia usando el ojo humano como detector, si bien, en la prctica, esta denominacin suele aplicarse a muchos fotmetros de filtro con sistemas de deteccin elctricos.
Claudio Gonzlez Prez
En cuanto a la regin ultravioleta, hay que indicar que la zona de mayor inters en la prctica analtica ordinaria es la denominada como ultravioleta prximo (longitud de onda entre 200 y 400 nm), pues el ultravioleta lejano o ultravioleta de vaco (de 10 a 200 nm) presenta el inconveniente de que oxgeno atmosfrico absorbe en esa regin, siendo necesario eliminarlo del instrumento de medida. Debido a ello, la espectrofotometra en esa regin espectral no se ha desarrollado suficientemente.
LEYES DE LA ABSORCION DE RADIACION

Cuando un haz de radiacin monocromtica de una determinada longitud de onda atraviesa una capa de disolucin conteniendo una especie absorbente, la potencia (energa por unidad de tiempo y unidad de rea) del haz incidente Po se atena, disminuyendo hasta P (figura 3.1.) Se define la transmitancia, T, como la fraccin de radiacin incidente que consigue atravesar la muestra. Vara de 0 a 1 y puede expresarse tambin como porcentaje: P P x T= ; %T= 100 Po Po
Un parmetro de mayor utilidad prctica es la absorbancia, A, definida como
A = log T = log Po P
Po
PdP
db
Figura 3.1. Absorcin de radiacin
Obsrvese que cuando no hay absorcin de radiacin, P=Po y entonces, A=0, mientras que si se absorbe el 99 %, solo se transmite el 1%, con lo que A=2.
Para una capa de disolucin absorbente de espesor infinitamente pequeo, db, (Figura 3.1.) la disminucin de la potencia radiante, dP, es proporcional a la propia potencia incidente, P, a la concentracin de la especie absorbente, C, y al espesor db: dP = k P C db donde k es una constante de proporcionalidad. Reagrupando la ecuacin anterior e integrando, se obtiene:
dP = k C db P
P
dP = P
Po
k C db
0
ln
P P = k C b = 2.3 log Po Po
log
P = log T = A = b C Po
donde, = k/2.3. La expresin,
A = b C
se denomina ley de Beer. Es fundamental en anlisis cuantitativo al relacionar la absorbancia con la concentracin. La constante recibe el nombre de absortividad molar, cuando la concentracin se expresa en moles/litro y el camino ptico, b, en centmetros. La absortividad es una propiedad caracterstica de la sustancia absorbente y depende de la longitud de onda. Por ello, para aplicar la ley de Beer debe seleccionarse una determinada longitud de onda, y para este propsito se utiliza el espectro de absorcin, siendo ste una grfica que indica la variacin de la absorbancia, o de la absortividad, con la longitud de onda.
DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

La proporcionalidad entre la absorbancia y la concentracin nicamente se cumple para disoluciones muy diluidas, observndose desviaciones ms o menos acusadas al aumentar la concentracin (figura 3.2.).
Desviaciones positivas
Desviaciones negativas
C
Figura 3.2. Desviaciones de la ley de Beer
Las desviaciones de la ley de Beer pueden clasificarse de la forma siguiente:
Reales Instrumentales Radiacin no monocromtica Radiacin parsita Errores de lectura
Qumicas
Dimerizaciones Influencia del equilibrio Acido-base Complejos Influencia del disolvente Influencia de la temperatura Impurezas en los reactivos Interaccin entre especies absorbentes
Personales
DESVIACIONES REALES. En la deduccin de la ley de Beer que se hizo anteriormente, no se ha considerado que la absortividad depende del ndice de refraccin, n, segn la expresin: = verdadero
2
n
2
n +2
Como, a su vez, el ndice de refraccin vara con la concentracin, la absortividad no es rigurosamente constante para cualquier concentracin, provocando desviaciones
negativas. De todas formas, en la prctica, para concentraciones inferiores a 103 M puede prescindirse de la influencia de este factor, al ser el ndice de refraccin esencialmente constante.
DESVIACIONES INSTRUMENTALES. Las fluctuaciones producidas en la corriente elctrica, la inestabilidad de algunas fuentes de radiacin o la respuesta no lineal del detector pueden originar el funcionamiento incorrecto de un determinado aparato. Adems de stos, pueden considerarse los siguientes factores de tipo instrumental como causas de desviaciones de la ley de Beer: a) Uso de radiacin no monocromtica. La deduccin de la ley de Beer se hizo sobre la base de utilizar radiacin monocromtica, lo cual, en sentido estricto, nunca se cumple, pues en la prctica, todos los dispositivos seleccionan una banda ms o menos ancha en torno a una determinada longitud de onda. La influencia de la radiacin policromtica sobre la ley de Beer puede mostrarse del siguiente modo: Supngase un haz formado por las longitudes de onda 1 y 2 (banda M en la figura 3.3.a.).
N A M A
N M
a)
b)
Figura 3.3. Influencia de la radiacin policromtica sobre la ley de Beer.
Aplicando la ley de Beer a cada una de ellas, se tiene:
A1 = log A2 = log
P 01 b C = 1 b C ; P 1 = P 01 10 1 P1 P 02 b C = 2 b C ; P 2 = P 02 10 2 P2
Cuando este haz constituido por las dos radiaciones atraviesa una disolucin conteniendo especies absorbentes, la potencia del haz emergente es P1+P2, mientras que la del haz incidente sobre la muestra es P01 + P02. Segn esto, la absorbancia medida ser:
A M = log
P 01 + P 02 = log P1 + P2 P 01 + P 02 P 01 10
1 b C
+ P 02 10
2 b C
AM = log (P01 + P02) log (P01 101 a AM = 1 b C
bC
+ P02 10 2b C )
En el caso particular de que 1 = 2 la ecuacin anterior se simplifica, reducindose
que es la ley de Beer. Sin embargo, cuando 1 es distinto de 2, la relacin entre AM y la concentracin deja de ser lineal. Evidentemente, cuanto mayor sea la diferencia entre 1 y 2, mayores sern las desviaciones de la linealidad. Por eso mismo, an cuando la anchura de banda sea relativamente grande, si las diferencias en los valores de la absortividad son pequeos, la utilizacin de un haz policromtico no implica diferencias significativas respecto a uno monocromtico (ver Fig. 3.3.a., banda N). b) Presencia de radiacin parsita. El haz de radiacin que sale de un monocromador suele estar contaminado con pequeas cantidades de radiacin parsita o dispersada originada por reflexin de los distintos componentes pticos, dispersin por partculas de polvo atmosfrico, etc. Por otra parte, la propia muestra puede originar dispersiones. Con frecuencia, la radiacin dispersada tiene una longitud de onda diferente respecto a la radiacin principal, pudiendo adems, en ocasiones, llegar al detector sin haber atravesado la muestra. Por todo ello, la absorbancia medida en presencia de radiacin parsita es:
AM = log
P0 + Ps P + Ps
donde Ps es la potencia del haz dispersado. Al aumentar la concentracin de sustancias absorbentes, disminuye P, con lo que este trmino puede ser lo suficientemente pequeo respecto a Ps como para que la expresin anterior se transforme en:
AM = log
P0 + Ps P + Ps - log 0 P + Ps Ps
lo cual indica la presencia de desviaciones negativas en la ley de Beer debido a este factor. c) Errores de lectura. Los errores indeterminados en la lectura de la transmitancia o absorbancia son errores que potencialmente siempre estn presentes y es necesario tenerlos en cuenta. En ocasiones, pequeos errores en la lectura de la transmitancia o de la absorbancia pueden ocasionar errores grandes en la concentracin cuando se opera en los extremos de la escala. Esto se ilustra en la figura 3.4.
%T
2
Figura 3.4. Errores de lectura.
En 1, figura 3.4., el error absoluto cometido en la determinacin de la concentracin, para un cierto error de lectura de transmitancia, es pequeo, pero al ser pequea la concentracin, el error relativo puede ser grande. En 3, la incertidumbre en la determinacin de la concentracin es alta, y en 2, hacia la mitad de la escala, parece que se trata de la situacin ms favorable. Puede demostrarse, como se indica a continuacin, que el mnimo error relativo se obtiene para una absorbancia de 0.434. La primera derivada de la ley de Beer es: A = b C = log T ;
b dC = log e
dT T
donde dT representa el error indeterminado en la lectura de la escala de transmitancia y dC indica la incertidumbre en la concentracin. Como log e = 0.434 y b = log T/C, se obtiene, dC 0.434 = dT C T(log T)
Derivando esta ecuacin de nuevo e igualando a cero, se obtiene que la transmitancia ptima corresponde a 36.8 %, que equivale a una absorbancia de 0.434.
Claudio Gonzlez Prez DESVIACIONES QUIMICAS
Se incluyen en este apartado toda una serie de desviaciones aparentes de la ley de Beer producidas como consecuencia de procesos qumicos en los que participan las especies absorbentes. a) Influencia del equilibrio. Cuando la sustancia problema interviene o forma parte de un sistema en equilibrio con otras especies, el desplazamiento del equilibrio implica una modificacin en la concentracin, y, en consecuencia, en la absorbancia. Algunas situaciones que pueden producirse son las siguientes:
Dimerizaciones. Cuando una disolucin de dicromato potsico no tamponada se diluye, ocurre una transformacin parcial en cromato, como consecuencia del equilibrio dmero-monmero: (max = 350, 450 nm)
Cr2O72 + H2O <> 2 CrO42 + 2 H+

(max = 372 nm)
Acidobase. En la figura 3.5. se muestran los espectros de absorcin de un indicador cido-base.

4 1 2
A
3
punto isosbstico
3 2 1 4
HIn <> In + H+
rojo amarillo
Figura 3.5. Espectros de absorcin de un indicador cido-base.

Es evidente que cuando las especies absorbentes estn implicadas en un equilibrio cido-base, la ley de Beer no se cumple, al menos que el pH o la fuerza inica sean constantes, o se opere a la longitud de onda del punto isobstico, esto es, la longitud de onda a la cual las dos especies absorbentes en equilibrio presenten la misma absortividad. En este sentido hay que mencionar que los puntos isosbsticos se toman frecuentemente como criterio para la existencia de dos especies absorbentes interconvertibles de un compuesto determinado.
Complejos. Cuando se mide la absorbancia de un complejo, por ejemplo Fe(SCN)63, para que se cumpla la ley de Beer hay que mantener constante la concentracin de ligando libre, lo cual se consigue frecuentemente operando en gran exceso de ligando respecto al metal.
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b) Influencia del disolvente. Como consecuencia de las interacciones soluto disolvente se originan con frecuencia desplazamientos espectrales, ensanchamientos de bandas y otros fenmenos que pueden provocar desviaciones en la ley de Beer. En este sentido, no es posible hacer predicciones de forma general. Unicamente mencionar algunos trminos relacionados con los desplazamientos espectrales: desplazamiento batocrmico o desplazamiento hacia el rojo, consiste en un desplazamiento del mximo de absorcin hacia longitudes de onda mayores (este efecto suele producirse en disolventes de alta constante dielctrica). Desplazamiento hipsocrmico o desplazamiento hacia el azul, es el desplazamiento hacia longitudes de onda ms cortas. c) Influencia de la temperatura. La temperatura puede influir modificando el equilibrio qumico de algunos sistemas, as como, en ocasiones, dar lugar a desplazamientos batocrmicos. De todas formas, la temperatura no suele ser un factor a considerar en la mayor parte de los sistemas absorbentes sencillos. d) Presencia de impurezas en los reactivos. Muchos mtodos espectrofotomtricos son lo suficientemente sensibles como para detectar cantidades a nivel de trazas, por lo que la presencia de impurezas absorbentes en los mismos reactivos pueden originar errores considerables. Debido a ello, en la prctica analtica ordinaria, las medidas espectrofotomtricas se llevan a cabo frente a un blanco constituido por la propia clula, el disolvente y los reactivos. En este sentido interesa que la absorbancia del blanco sea pequea, pues si es grande, un pequeo error en su medida puede implicar un gran error relativo en el resultado final. e) Interacciones entre especies absorbentes. Cuando en una disolucin existen varias especies absorbentes, la ley de Beer se cumple para cada una de ellas, si todas actan independientemente. Sin embargo, la interaccin entre ellas puede producir alteraciones en la distribucin de cargas, como consecuencia de lo cual puede modificarse la energa requerida para la absorcin y, en consecuencia, variaciones en la posicin, forma y altura de las bandas de absorcin. Por otra parte, estas alteraciones en la distribucin de cargas tambin pueden ser originadas por la presencia de sales inertes, con el consiguiente aumento de la fuerza inica de la disolucin.
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f) Interacciones solutoradiacin electromagntica. Aunque en sentido estricto no son factores de tipo qumico, tambin deben considerarse otros tipos de interaccin entre la radiacin y la materia, distintos de los que intervienen en el proceso de absorcin. As, la posible emisin de resonancia y la presencia de fenmenos fluorescentes y fosforescentes pueden originar desviaciones aparentes en la ley de Beer. ERRORES PERSONALES En este sentido, los mayores errores suelen cometerse por el uso inadecuado de las cubetas de absorcin. Resultan de utilidad las recomendaciones siguientes: * Es necesario asegurarse de que las cubetas estn perfectamente limpias, no rayadas y exentas de huellas o adherencias en las paredes por las que ha de pasar la radiacin. * Las cubetas de vidrio y cuarzo pueden limpiarse con cido ntrico o con agua regia en fro, pero no con mezcla crmica. * Una vez limpias, las cubetas deben enjuagarse con agua destilada y con varias porciones de la disolucin a medir. * No deben secarse interiormente, mientras que el exterior debe secarse con papel suave, comprobando, adems, que, una vez llena con la disolucin problema, no contiene burbujas de aire. * Aunque se debe trabajar con cubetas idnticas para la muestra y la referencia (blanco), es buena prctica utilizar siempre la misma disolucin en cada una de ellas.
ABSORCION DE RADIACION
Como se indic en el captulo anterior, cuando una molcula absorbe un fotn, se incrementa su energa, pasando a un estado excitado. En relacin con esto, pueden hacerse las siguientes preguntas: qu pasa con la energa absorbida? en qu se invierte?, etc. Seguidamente se intentar dar respuesta a ellas. La absorcin de radiacin ultravioleta y visible origina transiciones entre distintos niveles de energa electrnicos, as como simultneamente transiciones
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vibracionales y rotacionales, de forma que el cambio en la energa molecular de una determinada especie como consecuencia de la absorcin de energa radiante puede representarse as:
E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional + Etraslacional

De todos los trminos que figuran en la expresin anterior, el ms importante es Eelectrnica, pues la diferencia de energa entre dos estados vibracionales es unas 10 veces menos, y Erotacional es, a su vez, entre 10 y 100 veces menor que Evibracional. Por otro lado, el ltimo trmino es tan pequeo que prcticamente puede prescindirse de su influencia. Debido a lo anteriormente expuesto, suele ser de utilidad clasificar las especies absorbentes en base al tipo de transiciones electrnicas que pueden tener lugar. Asimismo, esto permite correlacionar el comportamiento espectral de una determinada especie con sus caractersticas qumicas, lo cual es importante en orden a determinar estructuras moleculares y para la identificacin de ciertos grupos funcionales.
Tipos de transiciones electrnicas

Las molculas orgnicas, y una gran cantidad de aniones inorgnicos, contienen electrones en orbitales moleculares y , as como en orbitales no enlazantes, n, por lo que cuando estas especies absorben fotones de contenido energtico adecuado se pueden producir transiciones a los correspondientes orbitales moleculares antienlazantes, * y *, tal como se indica en la figura 3.6., donde se muestra la estructura de Lewis para una molcula orgnica sencilla y las transiciones electrnicas correspondientes.
* *
H C H
++ O+ +
+n
Figura 3.6. Transiciones electrnicas entre niveles de energa moleculares.
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Como se representa en la figura 3.6., pueden tener lugar cuatro tipos de transiciones: >*, >*, n>* y n>*. Asimismo, tambin pueden producirse transiciones denominadas de transferencia de carga y de campo ligando. Seguidamente se comentarn algunas peculiaridades de cada una de las transiciones mencionadas. Transiciones >*. Estas transiciones entre orbitales moleculares sigma enlazantes y antienlazantes implican energas relativamente grandes (ver fig. 3.6.), de forma que las bandas de absorcin se observan en el ultravioleta lejano, a longitudes de onda inferiores a 200 nm (Figura 3.7.). Esta regin del espectro se denomina frecuentemente ultravioleta de vaco, debido a que los constituyentes normales del aire, nitrgeno y oxgeno, absorben fuertemente a 160 y 200 nm respectivamente, por lo que los espectros en esta zona deben obtenerse operando en el "vaco".
UV lejano UV prximo Visible
> *
Intensidad
transferencia de carga
> * n > *
n > *
.
campo ligando 200 400 , nm 750
Figura 3.7. Bandas de absorcin originadas por diferentes transiciones electrnicas.
En los hidrocarburos saturados, en los que solamente hay enlaces sencillos CH se producen estas transiciones; as el metano presenta mximos de absorcin a 125 nm y el etano a 135 nm. Desde el punto de vista analtico, estas bandas tienen poco inters, debido a dificultades de tipo instrumental. Transiciones n>*. Las especies qumicas saturadas que contengan tomos con pares electrnicos en orbitales no enlazantes pueden dar lugar a que se produzcan transiciones n>*. Esto sucede, por ejemplo, en compuestos saturados conteniendo heterotomos de oxgeno, azufre y halgenos.
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Estas transiciones requieren bastante energa, si bien en menor grado que las >*, por lo que las bandas correspondientes se presentan fundamentalmente en el ultravioleta lejano. Por otra parte, la intensidad de las absorciones asociadas con estas bandas suelen ser de pequea magnitud. Los mximos de absorcin correspondientes a esta transiciones n>* tienden a desplazarse hacia longitudes de onda menores al aumentar la electronegatividad del heterotomo. De hecho, la mayor parte de los compuestos saturados que contienen oxgeno absorben a longitudes de onda inferiores a 200 nm, lo cual hace posible que compuestos tales como el agua, o los alcoholes, puedan utilizarse como disolventes en el ultravioleta prximo. Transiciones n>* y >*. Estas transiciones se consideran juntas debido a que muchos grupos qumicos contienen electrones en orbitales y no enlazantes. Como se aprecia en la Figura 3.6., las transiciones >* requieren la absorcin de una cantidad de energa relativamente grande, por lo que suelen aparecer en el ultravioleta lejano, mientras que las n>* necesitan menor cantidad de energa, como consecuencia de lo cual se originan bandas en las zonas ultravioleta prximo y visible. En lo que respecta a la intensidad de la absorcin, las absortividades molares de los picos asociados a las transiciones n>* son generalmente bajos, mientras que los correspondientes a los >* son considerablemente mayores. De cualquier forma, el comportamiento mencionado puede alterarse, como se ver posteriormente, por la presencia de determinadas agrupaciones atmicas, o por el tipo de disolvente. Para que tengan lugar las transiciones consideradas en este apartado, es evidente que la especie qumica tendr que contener algn grupo funcional con enlaces , esto es, la estructura molecular deber presentar centros absorbentes no saturados. A estos grupos de tomos responsables de la absorcin en las regiones ultravioleta y visible se les denomina grupos cromforos (por extensin, se considera que los sistemas con electrones s son cromforos en el ultravioleta lejano). En la tabla 3.1. se muestran algunos grupos cromforos y las transiciones implicadas en espectrofotometra ultravioleta-visible. Por otra parte, existen determinadas agrupaciones atmicas que por s mismas no comunican color a la molcula que pertenecen, pero son capaces de reforzar la accin de un cromforo. Estos grupos se denominan auxocromos.

Tabla 3.1.
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Grupos cromforos y transiciones electrnicas
Grupo cromforo Etilnico

Acetilnico
Carbonilo
Carboxilato
Ester
Amida
Estructura
C C
Transicin
C
C
C
O
> >
> n > > n > > n > > n >
> n > > n >
O O O C OR O C NH2 C
NO2
Nitro Oxima
Los grupos auxocromos suelen contener grupos funcionales con electrones en orbitales no enlazantes y que, en consecuencia, pueden absorber nicamente en el ultravioleta lejano, como consecuencia de transiciones n>*. Sin embargo, si un auxocromo y un cromforo se encuentran en la misma molcula, la absorcin del cromforo se desplaza hacia longitudes de onda ms largas, a la vez que se produce un incremento en la intensidad de la absorcin. Este efecto se atribuye normalmente a la posibilidad de que se den transiciones n>*. En relacin con las modificaciones de las intensidades de absorcin se definen los siguientes trminos: efecto hipercrmico (aumento de la intensidad de la absorcin) y efecto hipocrmico (disminucin de la intensidad de la absorcin). Cuando una molcula contiene dos o ms grupos cromforos pueden darse las siguientes posibilidades:
a) Si los cromforos estn separados por dos o ms enlaces sencillos se dice que estn aislados, y, en estos casos, la absorcin es la suma de todos los grupos cromforos presentes. Ejemplo: max (nm) 184 185 max 10000 20000
CH3CH2CH2CH=CH2 CH2=CHCH2CH2CH=CH2
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b) Cuando los cromforos estn conjugados, esto es, separados por un enlace sencillo, se produce un desplazamiento batocrmico acompaado de un efecto hipercrmico. max (nm) 170 220 260 max 16000 21000 35000
C=C C=CC=C C=CC=CC=C
La razn de estos desplazamientos se considera que es debida a que la conjugacin hace que se produzca una deslocalizacin de los electrones sobre, al menos, cuatro tomos, como consecuencia de lo cual se rebaja el nivel de energa del orbital *, con lo que al ser menor la energa requerida para las transiciones, los mximos de absorcin se desplazan hacia mayores longitudes de onda, aumentando adems las probabilidades de que tengan lugar las mencionadas transiciones, lo que origina un aumento simultneo en la intensidad de la absorcin. Sin embargo, cuando existe algn enlace triple, se observa una disminucin de la intensidad de absorcin (efecto hipocrmico)
max
CH2 = CH CH = CH 2 CH2 = CH C CH 219 219
max
21000 6500
c) Cuando los cromforos estn unidos directamente, el espectro resultante normalmente es distinto del que presentan ambos cromforos cuando estn aislados, ya que en realidad se forma un nuevo cromforo. max 170 225 max 10000 500
CH2=CH2 CH2=C=CH2
En cuanto a la influencia del disolvente, puede decirse que al aumentar la polaridad del disolvente se produce un desplazamiento hipsocrmico (hacia menor longitud de onda) de las bandas n>* y un desplazamiento batocrmico (hacia longitudes de onda mayores) de las bandas >*. Esto puede explicarse teniendo en cuenta que el estado excitado es ms polar que el estado fundamental, por lo cual, la presencia de un disolvente polar tiende a estabilizar los estados excitados, rebajando su nivel energtico. De todas formas, si nicamente tuviera lugar este efecto, en ambas transiciones ocurriran desplazamientos batocrmicos. Sin embargo, en el caso de las transiciones n>* se produce un aumento de solvatacin del par de electrones no enlazados, lo cual rebaja la energa del orbital no enlazante en mayor medida que lo que disminuye la energa del orbital *. En consecuencia, se produce un
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aumento de la energa requerida para la transicin n>* y el consiguiente desplazamiento hipsocrmico.
Bandas de transferencia de carga. Estas bandas se originan cuando se produce transferencia de electrones de una parte a otra de un sistema. Para ello es necesario que uno de sus componentes tenga caractersticas de dador de electrones y otro de aceptor. Como consecuencia de esta transferencia de electrones se origina un estado excitado que es el resultado de un proceso de oxidacin-reduccin interna. As, por ejemplo, la absorcin de un fotn por el complejo Fe(III)SCN da lugar a la transferencia de un electrn desde el tiocianato hasta uno de los orbitales del hierro, originndose una especie excitada consistente en Fe(II) y SCN neutro: Fe(III)SCN + h > Fe(II)SCN Lo mismo que sucede con otros tipos de excitacin electrnica, el electrn que ha experimentado la transferencia vuelve a su estado original, si bien, ocasionalmente puede tener lugar la disociacin del estado excitado, teniendo lugar, en este caso, una reaccin fotoqumica. Algunas molculas orgnicas pueden transferencia de carga intramolecular: originar bandas de absorcin por
R C = O + h
=CO
Las bandas de absorcin originadas por estos procesos de transferencia de carga son particularmente importantes en anlisis qumico, ya que muchos compuestos orgnicos e inorgnicos las presentan en el ultravioleta (a veces tambin en el visible) y las absortividades molares suelen ser muy altas (superiores a 10000), por lo cual se obtienen lmites de deteccin muy bajos para estas especies.
Bandas de campo ligando. El color que presentan muchos iones y compuestos de metales de transicin normalmente se deben a absorciones denominadas de campo ligando (junto a stas, suelen presentarse las intensas bandas de transferencia de carga anteriormente mencionadas). Estas absorciones suelen ser de baja intensidad y
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aparecen en la regin visible, llegando en ocasiones hasta el ultravioleta prximo y el infrarrojo prximo. El origen de las bandas de campo ligando puede explicarse del siguiente modo: los cinco orbitales d de un tomo o un in de un elemento de transicin, cuya representacin se muestra en la figura 3.8., en ausencia de un campo magntico o elctrico externo estn degenerados, no siendo necesaria la absorcin de radiacin para promover un electrn de un orbital a otro. segn los ejes de coordenadas x, y y z. Estos orbitales forman el grupo eg. Por su parte, los orbitales dxy, dyz y dxz, llamados orbitales t2g, se orientan segn las bisectrices a dichos ejes. Como puede verse en la figura 3.8., los orbitales dx2y2 y dz2 estn orientados
Al formarse un complejo octadrico entre el in metlico y el agua, o algn otro ligando, los tomos dadores de los ligandos se aproximan al in metlico central a lo largo de los ejes, por lo que habr una mayor repulsin entre los electrones de los ligandos y los electrones de los orbitales eg del ion central, que entre los de los ligandos y los de los orbitales t2g.
z
y x y x
dxy
z y
d yz
y x
dxz
d x2y 2
Figura 3.8. Representacin esquemtica de los cinco orbitales atmicos d.
dz 2
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Como consecuencia de las repulsiones mencionadas, la aproximacin de los seis tomos dadores (cargas puntuales) a lo largo de los ejes produce un campo elctrico que elimina la degeneracin existente en el grupo de orbitales d y los divide en dos grupos, los t2g con energa inferior y los eg con energa superior (figura 3.9.) *
dx 2y 2 d z2
xy
dxz dyz dx2 y 2 d z2
oct.
xy
dxz dyz
Figura 3.9. Desdoblamiento de los orbitales d por efecto del campo ligando.
La energa de separacin entre los dos grupos, representada por oct depende de las caractersticas del in metlico (carga y nmero cuntico principal del orbital d) y del ligando (distribucin de su densidad de carga y polarizabilidad). En este sentido, es posible ordenar los ligandos ms comunes en orden creciente de (serie espectroqumica): I<Br<Cl<F<OH<C2O42 H2O<SCN<NH3<etilendiamina<NO2<CN
medio amoniacal, Cu(NH3)42+, el color es azul violeta muy intenso. Esto es debido al aumento que experimenta el campo ligando cuando se sustituye el H2O por NH3.
Ejemplo: Las disoluciones acuosas de Cu2+, Cu(H2O)42+ son de color azul plido, mientras que en
Las consideraciones tericas anteriormente expuestas permiten deducir si una determinada especie qumica absorber radiacin electromagntica en las regiones ultravioleta y visible. Desde el punto de vista prctico es interesante poder predecir la longitud de onda aproximada a la que se producir la absorcin mxima. Para esto, se han propuesto toda una serie de reglas empricas obtenidas de la observacin de los espectros de absorcin de una gran variedad de sustancias orgnicas. Las reglas que seguidamente se presentan de forma resumida** se han desarrollado para los siguientes tipos de compuestos: dienos conjugados, anillos bencnicos sustituidos, compuestos carbonlicos no saturados y cidos, esteres, nitrilos y amidas no saturados. Cada uno de esos grupos funcionales absorbe a una cierta longitud de onda,
* Cuando se forman complejos tetradricos o con simetra cuadrada plana, se originan desdoblamientos que pueden deducirse con razonamientos similares a los utilizados para la estructura octadrica. ** Para profundizar en el tema pueden consultarse las siguientes publicaciones: Scott, "Interpretation of the ultraviolet Spectra of Natural Products". Pergamon, Oxford (1964. H.H. Jaffe y M. Orchin, "Theory and Applications of Ultraviolet Spectroscopy", Willey, Nuw York (1962).
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y a este valor hay que adicionarle determinadas cantidades en funcin de la presencia de otras agrupaciones atmicas presentes en la molcula. En la tabla 3.2 se muestran dichas cantidades, correspondientes a algunos casos concretos.
Tabla 3.2.
Longitudes de onda de mxima absorcin

Dienos
conjugados
Bencenos monosutituidos 203 +45 +20 +7 +7 +27 +27 +17 +8 +16 +19 +26 254
Comp. carbonlicos C=CCO

C=CCHO
Ac. y esteres
insaturados
base, nm
Doble enlace adicional Grupo alquilo Cl, Br OH COOH NH2
217 + 30 +5 +5
215 +30
+10 +12 +18
210 +30
+10 +12 +18
197 +30 +10
+35 +30 +50
+35 +30 +50
Algunas consideraciones respecto al color

Los cuerpos luminosos, como el Sol o una lmpara, emiten radiaciones en un amplio espectro que comprende muchas longitudes de onda. Aquellas longitudes de onda que estn comprendidas entre unos 400 y 700 nm son capaces de afectar la retina del ojo humano y con ello dar origen a las impresiones subjetivas de la visin. Se hace mencin de impresiones subjetivas, debido a que en la percepcin del color influyen factores qumicos, fisiolgicos y fsicos; de hecho, la respuesta humana al color vara de una persona a otra. Las personas que tienen una visin normal del color son capaces de correlacionar aproximadamente la longitud de onda de la radiacin visible que llega al ojo con la subjetiva sensacin del color, y ste, a veces se utiliza para designar ciertas porciones del espectro.
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Cuando incide radiacin electromagntica visible sobre la materia puede ser absorbida total o parcialmente; si la absorcin es total, el objeto aparece de color negro, y si se reflejan todas las radiaciones, de color blanco. Nosotros percibimos los objetos por medio de la luz emitida o reflejada, de forma que cuando la luz blanca (conteniendo todas las longitudes de onda) pasa a travs de un medio que es transparente a ciertas longitudes de onda, pero que absorbe otras, para el observador ese medio aparece coloreado. Debido a que solo las radiaciones no absorbidas llegan al ojo, sus longitudes de onda indican el color del medio. Se dice que este color es complementario al color que se percibira si la luz absorbida se pudiera detectar, debido a que la luz emitida y absorbida juntas forman la luz blanca original. Anlogamente, los objetos de color que son opacos absorben algunas longitudes de onda y reflejan otras cuando son iluminadas por luz blanca. En la tabla 3.1. se indican los valores que corresponden a determinadas zonas del espectro visible.
Tabla 3.1. Colores del espectro visible
absorbida (nm)
380420 420440 440470 470500 500520 520550 550580 580620 620680 680780
Color absorbido violeta azulvioleta azul verdeazulado verde amarilloverdoso amarillo anaranjado rojo prpura
Color observado (complementario) amarillo-verdoso amarillo anaranjado rojo prpura violeta azulvioleta azul verdeazulado verde
INSTRUMENTACION
El instrumento que normalmente se utiliza para medir la transmitancia o la absorbancia de una muestra en funcin de la longitud de onda es el espectrofotmetro. Antes de pasar a describir sus componentes bsicos, es conveniente indicar algunos trminos relacionados con la nomenclatura utilizada a propsito de la instrumentacin en los mtodos pticos de anlisis. Las definiciones
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que se indican no pueden considerarse universales, pero s estn en razonable acuerdo con el uso popular y son las que se utilizan en las principales obras dedicadas al tema*. FOTOMETRO: Cualquier dispositivo utilizado para medir la intensidad de radiacin. Normalmente se utiliza para designar un instrumento sencillo provisto de filtros para seleccionar una banda de longitudes de onda y de una fotoclula o un fototubo para medir la intensidad de radiacin. ESPECTROFOTOMETRO: Instrumento ms sofisticado que posee un monocromador en lugar de filtros. Adems, el sistema de deteccin normalmente es un fotomultiplicador, ms sensible que una fotoclula. COLORIMETRO: Instrumento muy simple que compara, usando el ojo humano como detector, el color de la sustancia problema con el de una disolucin patrn. (El nombre de colormetro suele aplicarse en la prctica a cualquier instrumento apropiado para medir en la region visible, y, en realidad, as se conocen muchos fotmetros de filtro comerciales). ESPECTROSCOPIO: Aparato diseado para detectar detectar lneas espectrales a simple vista. Su aplicacin est restringida al anlisis cualitativo y para elementos con lneas de emisin en la zona visible del espectro. ESPECTROGRAFO: Instrumento que registra lneas espectrales sobre una placa fotogrfica. ESPECTROMETRO: Denominacin general que se aplica a instrumentos que poseen sistemas de deteccin elctricos. Segn las definiciones anteriores, un espectrofotmetro es un espectrmetro que mide fotones. Su utilizacin suele limitarse, en la prctica, a la regin untravioleta, visible e infrarroja.
* Eugene D. Olsen. "Mtodos Opticos de Anlisis". Ed. Revert. Barcelona.
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Los componentes bsicos de un espectrofotmetro son: una fuente de radiacin, un monocromador, que seleccione una banda estrecha de longitudes de onda, una cubeta, o recipiente que contenga la muestra, un detector de radiacin y un sistema de tratamiento y lectura de la seal detectada (figura 3.10.)
espejo
Fuente de radiacin
monocromador
Filtro o
Detector
Muestra
Medidor o registro
Referencia Figura 3.10. Espectrofotmetro de doble haz.
Fuentes de radiacin
Las fuentes de radiacin utilizadas en espectrofotometra ultravioleta y visible deben ser continuas en una amplia zona del espectro, de intensidad elevada y ser esencialmente constante con la longitud de onda. En la zona ultravioleta y visible, la fuentes ms utilizadas son de dos tipos: fuentes trmicas, basadas en la emisin de radiacin por efecto de la temperatura, y fuentes cuya radiacin se debe a descargas elctricas producidas en el seno de gases. Entre las primeras, la ms comn es la lmpara de filamento de volframio. En condiciones ordinarias de operacin, esta lmpara resulta til entre unos 350 nm y unos 3000 nm. (figura 3.11.)
deuterio volframio (- 3000K)
visible
.
Energia
200
, nm Figura 3.11. Curvas de distribucin espectral de las lmparas de deuterio y volframio.
400
700
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Como puede observarse en la figura 3.11., la mayor parte de la energa emitida corresponde a la zona infrarroja. La distribucin de la energa depende de la temperatura del filamento, la cual depende, a su vez, del voltaje; un incremento en la temperatura de operacin aumenta la energa total emitida y desplaza el mximo de intensidad hacia longitudes de onda ms cortas. Sin embargo, en la prctica, esto no se utiliza para obtener mayor cantidad de radiacin ultravioleta, ya que se acorta considerablemente el tiempo de vida de la lmpara. Debido a que la radiacin emitida depende nicamente del voltaje suministrado, ste tiene que ser muy estable, por lo cual los instrumentos llevan incorporado un sistema para la estabilizacin de la corriente. Por otra parte, el calor producido por la lmpara puede constituir un problema, por lo que, con frecuencia, en el lugar donde se coloca la lmpara se instala un ventilador con objeto de evitar el calentamiento de la muestra y de los dems componentes del instrumento. Por debajo de 350 nm, la potencia de una lmpara de volframio es inadecuada, debindose emplear una fuente diferente. La ms comn es una lmpara de descarga de hidrgeno, o de deuterio. Cuando se produce una descarga elctrica entre dos electrodos en el seno de un gas, como hidrgeno, las colisiones entre los electrones de la descarga y las molculas gaseosas provocan la excitacin electrnica, vibracional y rotacional de dichas molculas, con lo que se obtiene un espectro de lneas que es caracterstico del gas, siempre que la presin sea baja. Al aumentar la presin, las lneas se ensanchan, llegando a superponerse, hasta que, a presiones relativamente altas (0.25 mm) se produce un espectro continuo. Tanto la lmpara de hidrgeno como la de deuterio tienen un intervalo de utilizacin comprendido entre 175 y 350 nm (figura 3.11.). Tambin se utilizan con la misma finalidad la lmpara de descarga de xenon y la de vapor de mercurio. Finalmente, indicar que, puesto que el vidrio absorbe fuertemente a longitudes de onda inferiores a unos 350 nm, las lmparas de ultravioleta deben utilizar ventanas de cuarzo.
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Filtros y monocromadores
La misin de los filtros y de los monocromadores es seleccionar un haz de radiacin "monocromtica"*. Con este fin se utilizan los siguientes dispositivos: De corte Absorcin De banda Filtros Interferencia Seleccin de la longitud de onda
Prismas Monocromadores Redes De transmisin De reflexin
Los filtros de absorcin se utilizan en la regin visible y se basan en la absorcin selectiva de ciertas longitudes de onda. Normalmente consisten en un vidrio coloreado o una suspensin de un colorante en gelatina que se coloca entre dos placas de vidrio. Los filtros de banda (figura 3.12. A) se caracterizan por su anchura de banda (anchura a la mitad de la altura) que puede oscilar entre 30 y 250 nm.
100 B (filtro naranja) A (filtro verde)
%T
50
anchura de banda
combinacin de los dos filtros
400
500
600
700
, nm
800
Figura 3.12. Transmitancia de algunos filtros.
Los filtros de corte tienen transmitancias de casi el 100 % en una zona del espectro visible, pero luego disminuye rpidamente hasta un valor de transmitancia cero (figura 3.12.B). Por combinacin de diferentes filtros pueden seleccionarse bandas espectrales relativamente estrechas (figura 3.12.).
* La radiacin monocromtica es la radiacin de una sola longitud de onda. Por supuesto, es imposible producir radiacin monocromtica verdadera, en sentido estricto. Sin embargo, cuanto mejor sea el monocromador, tanto ms estrecho ser el intervalo de longitudes de onda.
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Los filtros de interferencia consisten en un dielctrico transparente (frecuentemente, fluoruro clcico o magnsico) recubierto en ambos lados con dos finas capas de plata semirreflectante. (figura 3.13.)
Figura 3.13. Filtro de interferencia.
Cuando un haz de radiacin incide sobre este dispositivo, una fraccin atraviesa la primera capa metlica, mientras que la restante se refleja. La parte que ha pasado sufre una escisin similar al llegar a la segunda capa metlica. Si la parte reflejada en la segunda interaccin es de longitud de onda adecuada, se refleja, en parte, desde la cara interior de la primera capa en fase con la radiacin incidente de la misma longitud de onda. El resultado es que se refuerza esa determinada longitud de onda, mientras que la mayora de las otras, fuera de fase, sufren una interferencia destructiva. Estos filtros proporcionan anchuras de banda menores y transmitancias de pico mayores que los filtros de absorcin. Se dispone de filtros de interferencia para todas las zonas de las regiones ultravioleta y visible, as como parte del infrarrojo. Un monocromador se caracteriza por producir un haz de radiacin de gran pureza espectral y permitir variar, de forma continua y en un amplio intervalo, la longitud de onda de la radiacin. Los componentes bsicos de un monocromador son una rendija de entrada, que selecciona un haz de radiacin policromtica entrante, un elemento dispersante, prisma o red, que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales, y una rendija de salida, que asla la banda espectral deseada (figura 3.14.) La dispersin de radiacin por un prisma se basa en el fenmeno de la refraccin; esto es, el cambio de direccin que experimenta un haz de radiacin al pasar de un medio a otro con distinto ndice de refraccin. El grado de desviacin depende de la longitud de onda; as, los azules se desvan ms que los rojos.
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El material de que est construido el prisma depende del tipo de radiacin a dispersar; en la regin visible se usan prismas de vidrio, mientras que en el ultravioleta es necesario usarlos de cuarzo.
rendija de salida rendija de entrada
1+2
1 2
.
Figura 3.14. Dispersin de radiacin por un prisma.
Los prismas presentan las ventajas de su gran pureza espectral (no hay rdenes de dispersin superiores, como en las redes), mientras que el principal inconveniente reside en que la dispersin no es lineal; esto es, las longitudes de onda no se dispersan de manera uniforme: es mayor para las longitudes de onda ms cortas. Las redes de reflexin*, que son las ms utilizadas, consisten en una superficie dura, pulida, sobre la que se ha grabado un gran nmero de surcos paralelos y muy prximos entre s (entre 300 y 2000 surcos por milmetro para las regiones ultravioleta y visible).
Figura 3.15. Difraccin de radiacin por una red de reflexin.
Cuando un haz de radiacin incide sobre una red de reflexin con un ngulo i (figura 3.15.) se refleja segn un ngulo , diferente del incidente. En la Figura 3.15. se muestran los haces paralelos 1 y 2. La mxima interferencia constructiva entre ambos se produce cuando la diferencia de caminos recorridos por ellos sea un mltiplo entero de la longitud de onda, y esta diferencia es AB CD. Los segmentos AB y CD pueden expresarse en funcin de d y de los ngulos i y .
* Tambien existen las redes de transmisin, que normalmente se construyen trazando una serie de surcos
paralelos sobre una placa de vidrio, con una punta de diamante.
Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible AB = d sen i por lo cual, n = d (sen i + sen ) donde n, nmero entero, se denomina orden de difraccin. CD = d sen **
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Segn la ecuacin anterior, existen distintos valores de para unos determinados ngulos i y , por lo que junto con la lnea de primer orden (n=1) aparecen lneas de rdenes superiores. Ordinariamente, la lnea de primer orden es la ms intensa. Las lneas de rdenes superiores pueden eliminarse mediante filtros. El fenmeno de la difraccin de una radiacin policromtica por una red se representa esquemticamente en la figura 3.16. Para seleccionar la radiacin de una determinada longitud de onda, se hace girar la red hasta hacer que la radiacin que interesa coincida con la rendija de salida, eliminando los rdenes superiores mediante filtros.
3er orden 267 2 orden 400 1er orden 800 600 400 200 300 200 200
radiacin incidente (200800 nm)
Figura 3.16. Difraccin de una radiacin policromtica por una red.
En cuanto a la anchura de rendija de salida debe tenerse en cuenta lo siguiente: a medida que disminuye la anchura de rendija se reduce la anchura de banda, siendo posible aumentar la resolucin, pero solo hasta un cierto lmite, ya que, a partir de un determinado valor, la difraccin por la propia rendija comienza a ser apreciable. Adems, es necesario considerar que al disminuir la anchura de rendija, disminuye tambin la intensidad del haz de radiacin, por lo que hay que tener en cuenta la sensibilidad del detector, la cual puede limitar el estrechamiento de la rendija.
** El signo menos indica que el ngulo de reflexin, , cae en el lado opuesto al ngulo de incidencia, i.
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En resumen, y comparando con los prismas, las redes de difraccin presentan las ventajas de su elevada resolucin, dispersin lineal y pocas prdidas de radiacin por absorcin. Posiblemente, el mayor inconveniente est relacionado con la presencia de rdenes de difraccin superiores.
Recipientes para las muestras

En espectrofotometra analtica, casi siempre se trabaja con disoluciones, por lo cual la mayora de los recipientes para las muestras son celdas o cubetas para colocar lquidos en el haz del espectrmetro. Estos recipientes deben estar fabricados con un material que permita el paso de radiacin de la regin espectral de inters. As, el vidrio puede emplearse entre 350 y 2000 nm, mientras que en la regin ultravioleta se necesita cuarzo o slice fundida (ambas sustancias tambin son transparentes en la regin visible). En algunos instrumentos baratos se utilizan a veces tubos de ensayo cilndricos como recipientes para las muestras. Es importante que estos tubos siempre se coloquen igual, para lo que se marcan en un lado, y la marca siempre se pone en la misma direccin cuando se coloca el tubo en el compartimento de cubetas del instrumento. Las celdas se deben llenar de tal forma que el haz de radiacin pase a travs de la disolucin, con el menisco por encima del haz. Las celdas tpicas para las regiones ultravioleta y visible tienen 1 cm de paso ptico, si bien existe una gran variedad en cuanto a tamao, forma y otras peculiaridades, como se muestra en la figura 3.17.
.
estndar (1 cm) .
cilndrica
microcelda
. de flujo trmica 2 cm
Figura 3.17. Celdas para espectrofotometra.
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Detectores
Los detectores usados en espectrofotometra ultravioleta y visible son transductores que convierten la energa radiante en una seal elctrica*. Un detector ideal deber presentar las caractersticas siguientes: * * * * * * * Sensibilidad elevada en la regin espectral de inters. Respuesta lineal para la energa radiante. Tiempo de respuesta pequeo. Utilizable en un amplio intervalo de longitudes de onda. Elevada relacin seal/ruido. Mnima seal de salida en ausencia de radiacin. Buena disponibilidad para la amplificacin.
Sin embargo, no existe el detector ideal, por lo que en la prctica, se evalan todos los factores anteriores y se selecciona algn detector que resulte adecuado al caso. Los ms utilizados son: clulas fotovoltaicas, fototubos y tubos fotomultiplicadores. Clulas fotovoltaicas. Consisten en una placa de hierro, que acta de electrodo positivo, sobre la que se deposita una fina capa de un material semiconductor, como selenio, y ste se recubre de una capa muy fina de oro o plata, que acta como segundo electrodo o electrodo colector (figura 3.18.)
Plata
Selenio
Hierro
Figura 3.18. Clula fotovoltaica.
Cuando la radiacin electromagntica incide sobre el selenio, se promocionan electrones a las bandas de conduccin, haciendo que pasen electrones desde la superficie del selenio hasta el electrodo colector de plata, producindose un aumento de la conductividad proporcional al nmero de fotones que inciden sobre la superficie del semiconductor. Las clulas fotovoltaicas presentan las siguientes caractersticas: son sencillas de construir, relativamente baratas y no requieren una fuente de energa externa, por lo que pueden conectarse directamente a un galvanmetro o un ampermetro. En cuanto a los inconvenientes, su uso limitado a la regin visible (su mxima sensibilidad
* En espectrofotometra infrarroja suelen utilizarse detectores trmicos, que responden al calor.
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se presenta hacia los 550 mn, mientras que la respuesta a 350 y a 750 nm disminuye hasta un 10 % de la mxima), presentan dificultades para la amplificacin, y fenmenos de fatiga, de forma que la corriente de salida disminuye gradualmente con el tiempo. Fototubos. Consisten en un ctodo semicilndrico recubierto interiormente de un material fotosensible, y un nodo, en el interior de un recipiente en el que se ha hecho el vaco (figura 3.19.).
. h (+) ()
e
Figura 3.19. Fototubo.
Cuando la radiacin incide sobre el ctodo, se produce una emisin de fotoelectrones que se dirigen al nodo, originndose una corriente que posteriormente se amplifica. La emisin de electrones depende de la naturaleza de la superficie del ctodo y de la frecuencia de la radiacin. En el comercio existen fototubos que difieren en el material con el que est construida la superficie del ctodo, siendo, por tanto, diferente su respuesta a la radiacin de diversas frecuencias. Muchos espectrofotmetros estn provistos de detectores intercambiables que permiten mantener una buena respuesta en un amplio margen de longitudes de onda. En general, puede concluirse que los fototubos son ms sensibles que las clulas fotovoltaicas, por la posibilidad de poder amplificar la corriente inicialmente generada. Tubos fotomultiplicadores. Este tipo de detector consiste en un ctodo fotosensible y una serie de electrodos (dnodos), cada uno a un potencial menos negativo que el que le precede (figura 3.20.)
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dnodos C
550 V.
600 V.
500 V.
C: ctodo
Figura 3.20. Tubo fotomultiplicador.
A: nodo
La radiacin que llega al fotoctodo provoca la emisin de electrones primarios, que son acelerados hasta el primer dnodo. Al incidir en l, cada fotoelectrn origina la emisin de varios electrones adicionales; stos, a su vez, son acelerados hasta el dnodo 2, y as sucesivamente, hasta que al final, la corriente as producida se recoge en el nodo, se amplifica electrnicamente y se mide. Normalmente, los tubos fotomultiplicadores contienen 9 10 dnodos, los cuales originan de 106 a 107 electrones por cada fotn. Este sistema de deteccin se caracteriza por su respuesta rpida y elevada sensibilidad. El lmite de deteccin viene condicionado por el ruido de fondo que se origina como consecuencia de la emisin termoinica, la cual puede reducirse enfriando. De hecho, estas corrientes pueden eliminarse virtualmente enfriando el detector a 30 C, si bien esto no se lleva a cabo en el trabajo espectrofotomtrico ordinario.
INSTRUMENTOS DE HAZ SENCILLO Y DE HAZ DOBLE

Las medidas de absorcin de radiacin ultravioleta y visible son, por su propia naturaleza, de carcter relativo; debe de compararse, continuamente, la absorcin de la muestra, conteniendo el analito, con la de una referencia o blanco conteniendo las mismas especies que la muestra, excepto el analito. En los instrumentos de haz sencillo hay solamente un haz de radiacin que, despus de pasar a travs de la muestra llega al detector. De esta forma, para comparar la absorcin del blanco, debe sustituir ste a la muestra en cada lectura, lo cual implica varios segundos entre cada medida. Alternativamente, la muestra y la referencia pueden compararse varias veces por segundo usando un instrumento de doble haz. En l, (figura 3.10.) la radiacin pasa
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alternativamente a travs de la muestra y de la referencia, lo cual se lleva a cabo mediante un motor que hace girar un espejo ("chopper") dentro y fuera de la trayectoria de la radiacin. Cuando el espejo obturador intermitente no desva el haz, ste pasa a travs de la muestra y el detector mide la potencia radiante P. Cuando dicho espejo desva el haz a travs de la celda de referencia, el detector mide Po. De esta forma la radiacin es desviada varias veces por segundo, y el circuito compara automticamente P y Po para obtener la absorbancia. La operacin con el sistema de doble haz presenta, fundamentalmente, las dos ventajas siguientes: la comparacin muy rpida de muestra y referencia ayuda a eliminar errores debidos a fluctuaciones en la intensidad de la fuente y del detector, inestabilidad electrnica y cambios en el sistema ptico. Por otra parte, se facilita la posible automatizacin.
APLICACIONES
En principio, cualquier especie qumica que absorba radiacin electromagntica en las regiones ultravioleta o visible es susceptible de poder ser determinada por tcnicas espectrofotomtricas. El mayor campo de aplicacin se encuentra en el anlisis cuantitativo, siendo la espectrofotometra una de las herramientas ms usadas.
Anlisis cualitativo
Los espectros de absorcin ultravioleta y visible son, en general, menos tiles con fines cualitativos que los espectros en la regin infrarroja, debido a que en aquellos las bandas son ms anchas y, por consiguiente, menos caractersticas. La identificacin de un compuesto puro requiere la comparacin emprica de los detalles del espectro (mximos, mnimos y puntos de inflexin) de la sustancia problema con los del compuesto puro. Adems, la intensidad de la absorcin, expresada en trminos de la absortividad molar, , se usa con frecuencia como criterio adicional para la identificacin, sobre todo si tiene un valor elevado a determinadas longitudes de onda. Cuando se trata de identificar sustancias orgnicas, es conveniente operar en fase de vapor y a presin baja, ya que en estas condiciones, el espectro observado es
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debido a molculas aisladas y, generalmente es posible resolver la estructura fina vibracional y rotacional, lo que proporciona detalles caractersticos para la identificacin. En disolucin y, sobre todo, en presencia de disolventes polares como el agua, alcoholes, steres y cetonas, las molculas no se encuentran aisladas, sino solvatadas, como consecuencia de lo cual se limita la rotacin. Adems, los campos del disolvente pueden modificar de forma irregular los niveles de energa vibracionales y, cuando el nmero de molculas es grande, los niveles de energa son poco definidos, obteniendose como resultado la aparicin de una banda. Una de las pocas sustancias orgnicas con espectro de absorcin caracterstico en disolucin es el benceno. Su espectro se usa frecuentemente en test de especificaciones de pureza, donde el contenido en benceno debe ser cuidadosamente controlado, por ejemplo, en alcohol absoluto o en ciclohexano. Aun cuando la identificacin de un compuesto orgnico de forma inequvoca con este tcnica, no es posible normalmente, el espectro de absorcin en las regiones ultravioleta y visible puede ser de utilidad para la deteccin de ciertos grupos funcionales. As, por ejemplo, la presencia de una banda dbil entre 280 y 290 nm, que se desplaza hacia menores longitudes de onda al aumentar la polaridad del disolvente, indica la presencia de un grupo carbonilo. De cualquier forma, y para mayor seguridad, estos datos deben usarse siempre en combinacin con los obtenidos a partir de espectros infrarrojos, de resonancia magntica nuclear o cualquier otra informacin analtica de que se disponga. En resumen, el espectro de absorcin ultravioleta y visible no es una prueba infalible de la identidad de una especie qumica, pero s representa otra herramienta disponible para aplicarla de forma inteligente. En cuanto a sustancias inorgnicas, casi las nicas que tienen espectro de absorcin ultravioleta y visible caracterstico son los iones trivalentes de las tierras raras. De hecho, el Ho2O3 se utiliza en ocasiones para comprobar el calibrado de la longitud de onda de algunos instrumentos.
Anlisis cuantitativo
Ya se ha comentado que la espectrofotometra de absorcin ultravioleta y visible es una de las tcnicas ms usadas en anlisis cuantitativo. Se ha estimado que solo en el campo biosanitario, un 95 % de las determinaciones cuantitativas se llevan a cabo por espectrofotometra*.
* Douglas A. Skoog y James J. Leary. "Anlisis Instrumental". Ed. Mc GrawHill. Madrid (1993)
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En relacin con los mtodos clsicos de anlisis (gravimtricos y volumtricos), los mtodos espectrofotomtricos son menos exactos, si bien su mayor sensibilidad (104106 M) y rapidez los hace competir ventajosamente con aquellos en muchas ocasiones. La precisin puede considerarse aceptable, ya que, normalmente se obtienen incertidumbres relativas entre 1 y 2 %, aunque con determinadas precauciones pueden reducirse considerablemente. La base de la aplicacin de los mtodos espectrofotomtricos al anlisis cuantitativo es la ley de Beer. El procedimiento a seguir para llevar a cabo una determinacin analtica consta de una serie de etapas encaminadas a establecer las condiciones de trabajo y la preparacin de la curva de calibrado. a) Seleccin de la longitud de onda. Las medidas de absorbancia se llevan a cabo normalmente a la longitud de onda correspondiente al mximo de absorcin, ya que de esta forma se obtienen mximas sensibilidades. Por otra parte, en esa zona, la curva espectral suele ser bastante plana, por lo que el cumplimiento de la ley de Beer es normalmente satisfactorio (ver anteriormente: "Uso de radiacin no monocromtica" en las "Desviaciones de la ley de Beer"). A veces no es posible operar a la longitud de onda del mximo de absorbancia cuando a esa longitud de onda absorbe apreciablemente alguna especie (distinta del analito) presente, incluso, en ocasiones, el propio reactivo. b) Preparacin de las muestras para el anlisis. Muchos compuestos orgnicos absorben en la regin ultravioleta y el tratamiento de la muestra solo implica la separacin de las posibles interferencias. Por otra parte, algunos elementos inorgnicos absorben intensamente en la regin visible, pero solo en ciertos estados de oxidacin. En estos casos, una etapa previa (adems de la disolucin si se trata de muestras slidas) debe incluir un proceso redox para llevar el elemento al estado de oxidacin adecuado. As, por ejemplo, el manganeso se determina frecuentemente en forma de permanganato, previa oxidacin con persulfato: 2 Mn2+ + 5 S2O82 + 8 H2O > 2 MnO4 + 10 SO42 + 16 H+ La disolucin violeta de permanganato presenta un mximo de absorbancia a 525 nm. En otras ocasiones es posible desarrollar un color por medio de reactivos orgnicos o inorgnicos. As, por ejemplo, el Fe3+ puede determinarse mediante el
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color rojo de los complejos formados con SCN; el Ni2+ por el color rosa de su quelato con dimetilglioxima, etc. En relacin con estudios medioambientales, es importante la determinacin de SO2 en el aire, para lo cual suele utilizarse pararosanilina como reactivo, midiendo a 560 nm la absorbancia del compuesto rojo obtenido. Asimismo, la determinacin rutinaria de amoniaco, nitritos y nitratos en aguas para consumo pblico suele hacerse espectrofotomtricamente. Para el amoniaco se utiliza el reactivo de Nessler, operando en presencia de AEDT para evitar las interferencias de Ca, Mg y Al, mientras que para el nitrito suele utilizarse la clsica reaccin de diazotacin con aminas aromticas y posterior reaccin con cido naftilamino-7-sulfnico, midiendo la absorbancia a 520 nm. Por su parte, el nitrato se reduce previamente a nitrito y se determina ste por el procedimiento indicado anteriormente. Estas especias, NH3, NO3 y NO2 pueden representar peligro para la salud cuando estn presentes en aguas de consumo a niveles superiores a 500, 50 y 0.1 g/mL respectivamente. La formacin de especies absorbentes mediante el uso de reactivos adecuados hace necesario considerar toda una serie de factores, entre los que cabe mencionar:
pH. Esta variable suele jugar un papel muy importante en las reacciones de formacin de complejos. La importancia del pH y su influencia sobre los iones metlicos y los ligandos se discute detalladamente en las obras que tratan el tema correspondiente a equilibrios en disolucin. Concentracin de los reactivos. Previamente a cualquier nueva determinacin espectrofotomtrica es necesario establecer los mrgenes de concentraciones adecuados de los reactivos, ya que cantidades demasiado grandes o demasiado pequeas pueden originar desviaciones de la ley de Beer. Tiempo adecuado para la medida. Cuando la especie absorbente es estable y su formacin es rpida, no es necesario controlar el tiempo al que realizar las medidas, mientras que si se incumple alguna de las premisas anteriores, esta variable ser necesario tomarla en consideracin. Temperatura. Determinadas reacciones requieren operar a temperatura elevada para aumentar la cintica de formacin de un determinado complejo. En estas ocasiones la temperatura de trabajo deber especificarse en el procedimiento. Orden de adicin de los reactivos. A veces, es importante aadir los reactivos segn una determinada secuencia. Por ejemplo, la determinacin de cobalto mediante la formacin del complejo entre Co(III) y nitrilotriacetato implica la formacin previa del correspondiente
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complejo con Co(II), por lo cual el perxido de hidrgeno (oxidante) debe aadirse en ltimo lugar. Eliminacin de interferencias. Existen muy pocas reacciones que sean totalmente especficas, por lo que en muchas ocasiones es necesario eliminar las interferencias de determinadas especies, lo cual muy frecuentemente se consigue por enmascaramiento. Extraccin con disolventes orgnicos. La eliminacin de sustancias interferentes puede llevarse a cabo en ocasiones mediante extraccin con algn disolvente orgnico inmiscible con el agua, aunque tambien puede recurrirse a esta tcnica cuando la especie absorbente es poco soluble en agua. Concentracin de sales. Altas concentraciones de electrlitos influyen frecuentemente sobre la absorcin de determinados compuestos, debido a la formacin de asociaciones inicas que originan desplazamientos del mximo de absorbancia.
Los efectos de las variables mencionadas deben conocerse y, en consecuencia, escogerse un conjunto de condiciones de trabajo de forma que la absorbancia no sea afectada apreciablemente por pequeas variaciones incontroladas en sus magnitudes. c) Determinacin de la relacin absorbanciaconcentracin. Una vez conocida la absorbancia de una determinada especie, en principio, se podra obtener la concentracin a partir de la ley de Beer: A = b C. Sin embargo, como se coment, no es prudente asumir el cumplimiento de dicha ley y utilizar un solo patrn para determinar la absortividad molar, . Asimismo, tampoco es conveniente basar los resultados de un anlisis en un valor de la bibliografa para obtener . Por ello, el mtodo normal de trabajo consiste en la preparacin de un calibrado a partir de una serie de disoluciones patrn, preparadas en las mismas condiciones que la muestra y obtener los resultados por interpolacin. Cuando se trata de analizar materiales complejos, es muy difcil, si no imposible, reproducir en los patrones las condiciones de las muestras. En estas ocasiones suele ser de utilidad el mtodo de adicin estndar, con objeto de contrarrestar los efectos de la matriz. Este mtodo, en anlisis espectrofotomtrico, se suele aplicar de la siguiente manera: a varias alcuotas idnticas de la muestra se adicionan volmenes variables de una disolucin estndar del analito, de concentracin conocida. Se aaden entonces los reactivos correspondientes al mtodo empleado y cada disolucin se enrasa a un
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volumen fijo, antes de medir la absorbancia*. Si se cumple la ley de Beer, los datos se representan como en la figura 3.21., a partir de la cual se obtiene el punto de corte de la recta (obtenida, si es necesario, por ajuste por mnimos cuadrados) con el eje horizontal y, a partir de ah la concentracin de la muestra original.
0.6
A
0.4
o o
0.2o
5.0
10.0
V, ml
15.0
Figura 3.21. Mtodo de adicin estndar para anlisis espectrofotomtrico.
Anlisis de mezclas de sustancias absorbentes

Cuando en una disolucin hay varias sustancias que absorben radiacin, es posible, en muchos casos, llevar a cabo su determinacin sin necesidad de separar previamente los distintos componentes. Se va a considerar el caso de que la muestra est constituida por los componentes M y N. La forma de proceder depende de los espectros de absorcin de ambas especies, y pueden presentarse los siguientes casos: Espectros no superpuestos. En estas ocasiones, como se muestra en la figura 3.22, es posible encontrar algunas longitudes de onda a las que absorba solo una de las especies; 1 para determinar M y 2 para determinar N.
A M N
1 2 Figura 3.22. Anlisis de mezclas. Espectros no superpuestos.
* Cuando la cantidad de muestra es limitada, las adiciones estndar pueden llevarse a cabo por sucesivas adiciones de incrementos de una disolucin patrn de concentracin conocida a una nica alcuota del problema. Las medidas de la absorbancia se hacen en el original y despues de cada adicin.
39
Espectros superpuestos parcialmente. Cuando la situacin es como se muestra en la figura 3.23., la especie N no interfiere en la medida de M a la longitud de onda 1, por lo que la determinacin de esta especie puede hacerse directamente a 1. A continuacin se determina la absorbancia de M a la longitud de onda 2 a partir de la absortividad molar (en una experiencia previa) y finalmente, se resta esta contribucin de la absorbancia medida a 2. Con ello se obtiene la absorbancia del componente N, cuya concentracin se calcula posteriormente de la forma acostumbrada.
M+N A M N
Figura 3.23. Anlisis de mezclas. Superposicin parcial de espectros.
Espectros completamente superpuestos. Como se indica en la figura 3.24. no es posible encontrar una longitud de onda en la que M y N absorban de forma exclusiva.
M+N
N M
Figura 3.24. Anlisis de mezclas. Superposicin completa de espectros.
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En este caso, el problema se resuelve midiendo las absorbancias A1 y A2 a las longitudes de onda 1 y 2 respectivamente, y planteando las ecuaciones siguientes: A1 = M1 b CM + N1 b CN (a 1) A2 = M2 b CM + N2 b CN (a 2) Esto es posible porque la ley de Beer establece que la absorbancia es una propiedad aditiva, de forma que la absorbancia total de una disolucin a una longitud de onda dada es igual a la suma de las absorbancias de los componentes individuales presentes. En las ecuaciones anteriores, b representa el camino ptico y M1, M2, N1 y N2 las absortividades molares de M y N a las longitudes de onda 1 y 2, que deben ser determinadas previamente a partir de disoluciones patrn, o mejor, a partir de las pendientes de sus representaciones de la ley de Beer. Esta forma de proceder es vlida solo si se cumple la ley de Beer y si los dos componentes se comportan independientemente uno del otro. La mayor precisin se alcanza cuando se eligen longitudes de onda en las que las diferencias entre las absortividades molares sean grandes: a 1, M grande y N pequea, y a 2, M pequea y N grande. Sin embargo, no todos los sistemas se comportan de este modo. Puede ocurrir que exista solapamiento a todas las longitudes de onda y que, para cada , M>N. Un procedimiento alternativo para analizar estas muestras consiste en un mtodo grfico, cuyo fundamento es el siguiente: la primera de las ecuaciones anteriores puede escribirse as:
A1 M1 b = CM +
N1 M1 CN
En lugar de medir A, M y N solamente a dos longitudes de onda, se miden estas magnitudes a varias, para lo cual es necesario disponer de los espectros correspondientes a los componentes puros y a la mezcla desconocida. Para un cierto nmero de medidas, se representan grficamente los valores de A/M b frente a N/M, obtenindose una lnea recta. La pendiente de la recta permite obtener CN y la ordenada en el origen, CM. El mtodo puede extenderse con facilidad a sistemas de tres componentes. La principal ventaja del mtodo es que el uso de mltiples puntos a lo largo de todo el espectro, en lugar de utilizar solamente dos, permite alcanzar un grado superior de precisin y exactitud.
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Valoraciones fotomtricas
En las valoraciones convencionales, el punto de equivalencia se detecta por medio de la observacin visual del cambio de color, ya sea inherente a uno de los reactivos (por ejemplo, el permanganato) o producido por un indicador. Los operadores con vista normal, en condiciones favorables, obtienen fcilmente una precisin de unas cuantas dcimas por ciento. Sin embargo, es difcil o imposible obtener buenos resultados en casos donde el cambio de color es gradual, o donde los colores de las dos formas no contrastan claramente. En estos casos puede detectarse el punto final fotomtricamente. En las valoraciones fotomtricas se miden las cambios de absorbancia de una disolucin durante la valoracin. Estos cambios de absorbancia indican cambios en la concentracin de alguna especie absorbente de radiacin. Para llevar a cabo esta tcnica, el recipiente de valoracin puede colocarse directamente en el camino ptico del instrumento, si bien, esto requiere normalmente alguna modificacin del compartimento de la muestra. Por ello, lo ms corriente es la utilizacin de clulas de flujo. La absorbancia medida, a la longitud de onda ptima, despus de cada adicin de valorante, se representa frente al volumen de reactivo. Las curvas de valoracin consisten, si la reaccin es completa, en dos lneas rectas que se cortan en el punto final. Para las que son apreciablemente incompletas se produce una curvatura en las proximidades del punto de equivalencia. En estos casos, el punto final se obtiene por prolongacin de los dos tramos rectos. En la figura 3.25. se muestra la forma de algunas curvas de valoracin fotomtrica. La curva a) es tpica de la valoracin donde solo absorbe el reactivo valorante, como en la valoracin de As(III) con BrO3Br leyendo la absorbancia a la longitud de onda del bromo. La curva b) es caracterstica de sistemas donde absorbe el producto de la reaccin; por ejemplo, en la valoracin de Cu(II) con AEDT. Por otra parte, cuando el analito se convierte en una especie no absorbente, se obtiene la curva c). Este es el caso, por ejemplo, de la valoracin de p-toluidina en butanol con cido perclrico, midiendo a 290 nm. Cuando un analito coloreado se transforma en un producto incoloro al tratar con un reactivo valorante que tambin absorbe, se obtienen curvas como la d). Finalmente, las curvas e) y f) pueden representar la adicin de ligandos para formar dos complejos sucesivos de diferente absortividad.
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Figura 3.25. Curvas de valoraciones fotomtricas.
En la figura 3.26. se muestra la curva de valoracin fotomtrica de una mezcla de Bi(III) y Cu(II) con AEDT.
A
Punto final del Cu
Punto final del Bi
vol. de AEDT
Figura 3.26. Valoracin de una mezcla de Bi(III) y Cu(II) con AEDT.
A la longitud de onda de medida (745 nm), ninguno de los cationes ni el reactivo absorben, as como tampoco el complejo Bi(III)AEDT. Este complejo es ms estable que el de Cu(II)AEDT y se forma en la primera parte de la valoracin. Cuando se ha terminado de formar el complejo Bi(III)AEDT, comienza la formacin del complejo de Cu(II), aumentando la absorbancia hasta que ste se forma completamente. Se obtienen dos puntos finales bien definidos.
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Las valoraciones fotomtricas presentan las siguientes ventajas sobre las convencionales: * Con ellas es posible la determinacin de sustancias no absorbentes, puesto que solo es necesario que absorba alguna de estas tres especies: reactivo valorante, sustancia a valorar o producto de la reaccin. * La presencia de otras sustancias que absorban a la longitud de onda a la que se mide no origina necesariamente interferencia, ya que solo importa el cambio que se observa en los valores de la absorbancia. * Los datos experimentales que realmente interesan se toman muy alejados del punto de equivalencia. De esta forma, las reacciones empleadas no necesitan tener constantes de equilibrio tan favorables como las requeridas para una valoracin convencional, que depende de observaciones cerca del punto de equivalencia. Por la misma razn pueden utilizarse disoluciones ms diluidas.
Determinacin de constantes de disociacin de cidos y bases.

La determinacin espectrofotomtrica de constantes de disociacin de cidos y bases se basa en que el espectro de absorcin de molculas orgnicas con grupos funcionales cidos o bsicos depende del pH del medio. Para un cido dbil,
HA <> A + H
Ka =
H HA
pK a = pH + log
HA
Para determinar el valor de pKa es necesario conocer el pH y las concentraciones (en sentido estricto, las actividades) de las formas cida (HA) y bsica (A). La relacin [HA]/[A] puede obtenerse espectrofotomtricamente si se conocen las correspondientes absortividades molares, HA y A, las cuales, a su vez, pueden obtenerse desplazando el equilibrio de forma virtualmente completa hacia la derecha y hacia la izquierda mediante la adicin de un exceso de base y de cido respectivamente. Segn la ecuacin anterior, cuando [HA] = [A], pKa = pH y este valor de pH corresponde a la mitad de la curva de valoracin fotomtrica, esto es, al 50 % de la
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valoracin del cido HA. Este punto puede obtenerse representando grficamente la absorbancia a una determinada longitud de onda frente al pH. En la figura 3.27. se han representado los espectros de absorcin de un indicador cido-base a distintos valores de pH.
615 nm
9 8 7.5 7 6.5 6 400 500 600
700
pH
Figura 3.27. Espectros a varios pH y variacin de la absorbancia con el pH a =625 nm
El punto donde se cruzan los espectros se denomina punto isosbstico. La presencia de un punto isobstico evidencia que el equilibrio en cuestin implica solo dos especies absorbentes. Cuando se representa la absorbancia a 615 nm frente al pH (curva de la derecha en la figura 2.27.) se obtiene una curva en forma de S. La parte izquierda corresponde a la forma cida del indicador, mientras que la parte superior derecha corresponde a la conversin casi total en la forma bsica. Debido a que el pKa se define como el valor de pH en el cual una mitad del indicador est en la forma cida y la otra mitad en la forma bsica, dicho pKa se determina por el punto de inflexin.
Determinacin de la estequiometra de complejos

El principal inters de la tcnica espectrofotomtrica para determinar la composicin de complejos en disolucin reside en el hecho de que pueden efectuarse medidas sin perturbar los equilibrios que se consideran. Con esta finalidad se utilizan fundamentalmente los siguientes mtodos: Mtodo de las variaciones continuas. Considrese que pueden formarse varios complejos,
Claudio Gonzlez Prez M + L <> ML M + 2 L <> ML2 etc
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pero que en ciertas condiciones predomina uno. Para determinar la estequiometra del complejo predominante por el mtodo de las variaciones continuas, el procedimiento a seguir consiste en preparar mezclas de diferentes concentraciones de M y L, pero manteniendo constante la concentracin final (en la prctica, se preparan disoluciones del catin y del ligando de concentraciones idnticas y se mezclan en distintas relaciones de volumen, pero de modo que el volumen total sea constante). La absorbancia de cada disolucin se mide a una longitud de onda apropiada y se representa grficamente la absorbancia corregida (absorbancia medida menos las absorbancias de M y L libres*) frente a la fraccin molar de L. Se obtiene una grfica donde la absorbancia mxima se corresponde con la estequiometra del complejo predominante. En la figura 3.28. se muestra la variacin de la absorbancia para dos complejos de estequiometra ML2.La curvatura de las lneas experimentales es el resultado de no haberse completado la reaccin de formacin del complejo (de hecho, se ha desarrollado algn mtodo para la determinacin de constantes de formacin de complejos, basado en la medida de las desviaciones con relacin a las lneas rectas tericas indicadas en la figura). Cuando se forma un complejo muy estable se obtiene una curva como la B, y cuando es poco estable, como la curva C. Por otra parte, la representacin dar un mnimo si el complejo absorbe menos que los reactivos.
Figura 3.28. Variaciones continuas para dos complejos ML2.
necesaria la correccin.
* En muchas ocasiones, M L (o ambos) no absorben a la longitud de onda de inters, de manera que no es
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Mtodo de la relacin molar. Este mtodo es similar al anterior, excepto que aqu se mantiene constante la concentracin de uno de los componentes (a menudo, el in metlico) mientras que el otro se hace variar. Al representar la absorbancia del complejo frente a la relacin en moles de los reactivos, se obtienen lneas rectas de diferente pendiente, producindose la interseccin en una relacin que corresponde a la estequiometra del complejo (figura 3.29.) En el complejo ML representado en la figura 3.29. el catin metlico absorbe a la longitud de onda de medida, puesto que el punto inicial tiene una absorbancia mayor que cero. Por su parte, en el complejo ML2 el ligando absorbe a la longitud de onda a la que se midi, por lo que la pendiente del segundo tramo es mayor que cero. .
1.2
ML
A
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2
ML2
[L] /[M]
Figura 3.29. Mtodo de la relacin molar.
El mtodo de la relacin molar presenta sobre el de las variaciones continuas las siguientes ventajas: en primer lugar distingue mejor entre complejos de nmeros de coordinacin altos; por ejemplo, entre ML5 y ML6 (xL=0.83 y xL=0.87). Adems, y en otro orden de cosas, los datos experimentales indican claramente el exceso de reactivo necesario para que el complejamiento sea total, lo cual es muy til en procedimientos analticos. Por otra parte, y esto puede considerarse una desventaja, el gran exceso de reactivo puede conducir a formar complejos de orden superior.
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ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS
La espectrofotometra de derivadas es una tcnica que se conoce desde hace mucho tiempo, pero que se ha desarrollado en poca relativamente reciente, sobre todo por la falta de instrumentacin a un precio razonable. Actualmente, la utilizacin de sistemas electrnicos de diferenciacin mediante el empleo de un micro ordenador acoplado en serie con el espectrofotmetro permite la representacin de derivadas de primero, segundo e incluso rdenes superiores de la absorbancia frente a la longitud de onda:
dA para la primera derivada d

d A d
2 2
para la segunda derivada
siendo A la absorbancia y la longitud de onda. La primera derivada de un espectro original tambin puede definirse como la representacin grfica de la pendiente de la curva de absorcin a cada longitud de onda. En la figura 3.30. se muestran las caractersticas del espectro de la primera y de la segunda derivada para el caso de un pico de absorcin simtrico.
1 derivada
2 derivada
En el espectro de la primera o de la segunda derivada, la seal de ordenadas no es proporcional al valor de absorcin, sino a la pendiente del espectro normal. Por ello, como la pendiente en el espectro normal puede tener valores positivos y negativos, el
Figura 3.30. Pico de absorbancia simtrico y su primera y segunda derivada.
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espectro de derivadas presenta valores positivos y negativos en la escala de ordenadas, o bien, mximos y mnimos, segn el carcter de la pendiente. Para una sustancia absorbente, la posicin de la longitud de onda y la relacin entre los valores de los extremos (mximos y mnimos) representa una magnitud caracterstica. La utilizacin de la espectrofotometra de derivadas presenta las siguientes ventajas: * Medida exacta de max. Mientras que en el espectro normal, especialmente en el caso de bandas de absorcin anchas, la posicin correspondiente a la longitud de onda del mximo solo puede ser fijada de manera aproximada, mientras que en la primera derivada del espectro, la posicin del mximo viene definida exactamente por el paso de la curva por el valor cero. * Mejor resolucin de los espectros. En el espectro normal, la estructura fina puede ser difcil de ver. En estos casos, es ms conveniente emplear la segunda derivada, ya que los mximos y mnimos del espectro normal y de la segunda derivada aparecen prcticamente a las mismas longitudes de onda y la estructura fina del espectro normal se pone de manifiesto mejor que en la primera derivada. En la prctica analtica normal esto tiene gran importancia, ya sea con fines de identificacin, como criterio de pureza o para control de calidad. * Determinaciones en presencia de turbidez. Las disoluciones turbias presentan en general un aumento continuo de la absorbancia hacia longitudes de onda ms cortas y no ocasionan, por consiguiente, ninguna variacin espectral importante en la primera y segunda derivada, al menos para un nivel de turbidez no demasiado elevado. * Determinaciones cuantitativas en presencia de dos o ms componentes. La determinacin cuantitativa de componentes con bandas de absorcin relativamente estrechas y que estn solapadas con una banda ancha de un segundo componente es uno de los campos de aplicacin ms extensos de esta tcnica. Cuando el componente que se desea determinar solo es visible en el espectro total por un pequeo pico o por un hombro, la utilizacin de mtodos convencionales puede implicar grandes errores. Sin embargo, la primera o segunda derivadas de un espectro de dos componentes permite, bajo ciertas condiciones, ver claramente los diferentes compuestos y hacer determinaciones cuantitativas con errores sistemticos muy pequeos o incluso despreciables (figura 3.31.)
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Espectro normal
1 derivada
a)
b)
Figura 3.31. Espectro normal y primera derivada. a) un componente. b) dos componentes.
En la figura 3.31. se han representado los espectros normales y la primera derivada de un componente caracterizado por una pequea banda a) y el mismo componente "oscurecido" por la presencia de otra especie con una banda de absorcin ms ancha.
EJERCICIOS
1. Dadas las siguientes sustancias: pentano, pentanol, clorohexano, butadieno, benceno, fenol, amoniaco, butilamina, cido actico, benzopireno, ozono, Absorbern radiacin visible?. Cules absorbern radiacin ultravioleta?. Justifquelo. 2. Se determin la absortividad molar de un compuesto qumico midiendo la absorbancia de una disolucin de concentracin conocida utilizando una cubeta de 1 cm. Se obtuvo el valor de 2.2x104 L mol1 cm1. Qu valor se obtendra si se utilizase una cubeta de 10 cm?. Qu espesor (camino ptico) debera tener la cubeta para que la misma disolucin presente una transmitancia del 8.42 %? 3. En disoluciones acuosas neutras, el fenol tiene una absortividad molar de 1.8x104.mol1.cm1. Qu intervalo de concentraciones de fenol pueden determinarse si los valores de las absorbancias en cubetas de 10 cm deben limitarse a valores de 0.2 a 0.9 unidades de absorbancia?. 4. Se trata de determinar la concentracin de Fe(III) en un agua mineral. Para ello, se pipetean alcuotas de 10 mL de la muestra en matraces aforados de 50 mL. Se adicionan a cada uno exactamente 0, 5, 10, 15 y 20 mL de una disolucin patrn que
50
contiene 11.1 p.p.m. de Fe(III), seguido de un exceso de ion tiocianato, para formar complejo rojo Fe(SCN)2+. Despus de enrasar a 50 mL, las absorbancias de las cinco disoluciones medidas a 580 nm (longitud de onda de mxima absorcin) fueron 0.240, 0.437, 0.621, 0.809 y 1.009 respectivamente (cubetas de 1 cm). Obtener la concentracin de Fe(III) en la muestra de agua. 5. Se analiz espectrofotomtricamente una mezcla de dicromato y permanganato, en medio cido sulfrico 1 M y utilizando cubetas de 1 cm. Para ello, se midieron las absorbancias a 440 y a 545 nm, obteniendo los valores de 0.385 y 0.653 respectivamente. Previamente, se encontr que la absorbancia de una disolucin de dicromato 8.33x104 M era de 0.308 a 440 nm y de 0.009 a 545 nm. Anlogamente, una disolucin de permanganato 3.77x104 M present una absorbancia de 0.035 a 440 nm y de 0.886 a 545 nm. Calcular las concentraciones de permanganato y de dicromato en la mezcla analizada. 6. Se determin la estequiometra de un complejo MLn por el mtodo de las variaciones continuas y el de la relacin molar, partiendo de disoluciones de M y de L 0.0100 molar. Para aplicar el primer mtodo se mezclaron los volmenes de cada una de ellas que se indican en la tabla, obteniendo los correspondientes valores de absorbancia. Para el mtodo de la relacin molar, se aadieron los volmenes de L indicados en la tabla a 5.0 mL de la disolucin de M, enrasando al mismo volumen en todos los casos. Variaciones continuas mL de M 10.0 9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 mL de L 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.0 A 0.000 0.130 0.261 0.399 0.530 0.660 0.799 0.750 0.500 0.252 0.000 Relacin molar mL de L 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 12.0 14.0 A 0.000 0.080 0.181 0.269 0.360 0.447 0,540 0.628 0.720 0.900 0.900
Obtener la estequiometra del complejo MLn.

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Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Tema 3 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Claudio Gonzlez Prez

LEYES DE LA ABSORCION DE RADIACION

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

donde, = k/2.3. La expresin,

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

Claudio Gonzlez Prez

Las desviaciones de la ley de Beer pueden clasificarse de la forma siguiente:

Reales Instrumentales Radiacin no monocromtica Radiacin parsita Errores de lectura

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Figura 3.3. Influencia de la radiacin policromtica sobre la ley de Beer.

Aplicando la ley de Beer a cada una de ellas, se tiene:

Claudio Gonzlez Prez

AM = log (P01 + P02) log (P01 101 a AM = 1 b C

En el caso particular de que 1 = 2 la ecuacin anterior se simplifica, reducindose

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Claudio Gonzlez Prez DESVIACIONES QUIMICAS

Cr2O72 + H2O <> 2 CrO42 + 2 H+

Acidobase. En la figura 3.5. se muestran los espectros de absorcin de un indicador cido-base.

Figura 3.5. Espectros de absorcin de un indicador cido-base.

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Claudio Gonzlez Prez

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional + Etraslacional

Tipos de transiciones electrnicas

Figura 3.6. Transiciones electrnicas entre niveles de energa moleculares.

Claudio Gonzlez Prez

campo ligando 200 400 , nm 750

Figura 3.7. Bandas de absorcin originadas por diferentes transiciones electrnicas.

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Claudio Gonzlez Prez

Grupos cromforos y transiciones electrnicas

Grupo cromforo Etilnico

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

C=C C=CC=C C=CC=CC=C

Claudio Gonzlez Prez

aumento de la energa requerida para la transicin n>* y el consiguiente desplazamiento hipsocrmico.

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Figura 3.8. Representacin esquemtica de los cinco orbitales atmicos d.

Claudio Gonzlez Prez

dxz dyz dx2 y 2 d z2

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Longitudes de onda de mxima absorcin

Comp. carbonlicos C=CCO

197 +30 +10

+35 +30 +50

+35 +30 +50

Algunas consideraciones respecto al color

Claudio Gonzlez Prez

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

* Eugene D. Olsen. "Mtodos Opticos de Anlisis". Ed. Revert. Barcelona.

Claudio Gonzlez Prez

Referencia Figura 3.10. Espectrofotmetro de doble haz.

, nm Figura 3.11. Curvas de distribucin espectral de las lmparas de deuterio y volframio.

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Claudio Gonzlez Prez

combinacin de los dos filtros

Figura 3.12. Transmitancia de algunos filtros.

Espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible

Figura 3.13. Filtro de interferencia.

Claudio Gonzlez Prez

Figura 3.15. Difraccin de radiacin por una red de reflexin.