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Laboratorio de microbiologia OK.pdf

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  • DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS
  • COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS
  • PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES
  • Control de medios de cultivo

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

d

La Habana, 2004

3

Datos CIP-Editorial Ciencias Médicas

González Alfaro José Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004 256p. Fig. Incluye índice general. Está dividida en 19 capítulos. Listado de referencias al final de la obra. ISBN 959-212-131-1 1. MICROBIOLOGÍA 2. PERSONAL DE LABORATORIO 3. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. LIBRO DE TEXTO I. González González Boris II. Barrial González Rosa T. QW23

Diseño: Ac. Luciano O. Sánchez Núñez Emplane: Maria Pacheco Gola

© José González Alfaro, Boris González González y Rosa T. Barrial González, 2004 © Sobre la presente edición Editorial Ciencias Médicas, 2004

Editorial Ciencias Médicas Centro Nacional de Información de Ciencias Médicas Calle I No. 202, esquina Línea, Vedado, Ciudad de La Habana, 10400, Cuba Correo electrónico: ecimed@infomed.sld.cu Teléfonos: 55 3375, 832 5338

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"Vivid en la serena paz de los laboratorios y preguntaos cada día: -¿Qué puedo hacer para mejorar la calidad del servicio que presto? -¿Cómo puedo ayudar a mi país? -¿Cómo puedo servir a la humanidad? Luis Pasteur 5 .

Barrial González McS en Microbiología Hospital Salvador Allende. Salvador Allende Rosa T. Profesor Facultad Tecnológica Dr. Profesor Facultad Tecnológica Dr.AUTORES José González Alfaro Técnico de Microbiología Especializado en Docencia. Salvador Allende Boris González González Lic. Profesora Facultad Tecnológica Dr. En Microbiología Hospital Salvador Allende. Salvador Allende 6 .

/ 20 CONCENTRACIÓN EN EL TRABAJO / 21 CUESTIONARIO / 21 BIOSEGURIDAD / 22 INTRODUCCIÒN / 22 RIESGOS FÍSICOS / 22 RIESGOS QUÍMICOS / 22 RIESGOS BIOLÓGICOS / 22 BIOSEGURIDAD.ÍNDICE EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA / 17 INTRODUCCIÒN / 17 LABORATORIO CLÍNICO / 17 LABORATORIO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL / 17 LABORATORIO DE RAYOS X / 17 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. CONCEPTO / 22 DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN / 33 INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE / 34 LAV ADO DE MANOS / 35 TIPOS DE LAV ADO DE MANOS / 36 LAV ADO SOCIAL DE LAS MANOS / 36 7 . / 23 PRINCIPALES CAUSAS / 23 NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO / 23 PRINCIPIOS BÁSICOS / 24 PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE LABORATORIO / 24 EMPLEO SISTEMÁTICO DE EQUIPOS Y MEDIOS DE SEGURIDAD / 25 EL DISEÑO ADECUADO DE LOS LABORATORIOS / 26 MEDIDAS DE PREVENCIÓN / 33 PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA / 33 DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. GENERALIDADES / 18 ACTIVIDADES FUNDAMENTALES / 18 RECURSOS HUMANOS / 18 ESTRUCTURA ADMINISTRATIV A / 18 IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA / 19 ESTRATEGIA ORGANIZATIV A DE TRABAJO / 19 DISPOSICIÓN DE LOS MATERIALES DE TRABAJO / 20 CERTEZA DE LOS MEDIOS REACTIVOS O MEDIOS A EMPLEAR / 20 ORDENAMIENTO DE LAS MUESTRAS / 20 PLANIFICACIÓN DEL TRABAJO A REALIZAR.

LAV ADO HIGIÉNICO O MÉDICO DE LAS MANOS / 36 LAV ADO QUIRÚRGICO DE LAS MANOS / 37 MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS / 38 CUESTIONARIO / 38 ETICA MEDICA / 40 INTRODUCCION / 40 LA MORAL / 40 ETICA / 41 TEORÍA DE LA MORAL / 41 ÉTICA NORMATIV A / 41 ÉTICA MÉDICA / 41 EN RELACIÓN CON EL PACIENTE Y SUS FAMILIARES / 42 EN RELACIÓN CON EL RESTO DE LOS TRABAJADORES DE LA SALUD / 44 EN LAS RELACIONES ENTRE EL DOCENTE Y LOS EDUCANDOS / 44 COMO PARTE DE LA SOCIEDAD / 44 LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA / 45 CUESTIONARIO / 45 EL AGUA / 46 INTRODUCCIÓN / 46 IMPORTANCIA / 46 CALIDAD DEL AGUA / 46 PURIFICACIÓN DEL AGUA / 47 DESTILACIÓN / 47 DESIONIZACIÓN / 48 PH DEL AGUA DESTILADA / 48 CONDUCTIVIDAD DEL AGUA / 48 CUESTIONARIO / 49 CRISTALERÍA DE LABORATORIO / 50 INTRODUCCIÓN / 50 COMPONENTES DEL VIDRIO / 50 SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO / 50 CLASIFICACION / 51 CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS / 52 DE CRISTALERÍA / 52 CRISTALERÍA GENERALDE TRABAJO / 52 CRISTALERÍA DE MEDICIÓN / 59 MATERIALES DE PORCELANA / 63 LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN / 64 PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA / 65 PARA SU ESTERILIZACIÓN / 65 CUESTIONARIO / 67 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN / 68 INTRODUCCIÓN / 68 TÉRMINOS EMPLEADOS RELACIONADOS CON LA ESTERILIZACIÓN Y LA DESINFECCIÓN / 68 8 .

CONCEPTO / 96 DIFERENTES TIPOS / 96 MICROSCOPIO ÓPTICO / 96 CLASIFICACIÓN / 97 SISTEMA MECÁNICO / 98 PRINCIPIOS BÁSICOS / 109 INDICACIONES PARA EL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 111 OTRAS V ARIANTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 112 MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO / 117 CUIDADO.ESTERILIZACIÓN / 68 EL CALOR / 69 PROTOTIPO STANDARD DEL AUTOCLAVE / 70 MANIPULACIÓN DEL AUTOCLAVE / 71 CALOR HÚMEDO A 1000 C / 72 CALOR HÚMEDO A MENOS DE 1000C / 74 CALOR SECO / 74 USO DEL HORNO / 75 INCINERACIÓN / 76 MECHEROS / 76 LAS RADIACIONES / 79 RADIACIONES IONIZANTES / 79 RADIACIONES NO IONIZANTES / 80 FILTRACIÓN / 81 CARACTERÍSTICAS DE LOS FILTROS / 81 PREPARACIÓN DE LOS FILTROS / 81 DESINFECCIÓN / 83 SELECCIÓN DE LOS DESINFECTANTES / 84 CUESTIONARIO / 85 EQUIPOS CALORIFICOS / 87 INTRODUCCION / 87 INCUBADORA / 87 REQUERIMIENTO DE TEMPERATURAS / 87 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON SUS NECESIDADES DE OXÍGENO / 88 INCUBACIÓN DE BACTERIA ANAEROBIAS / 90 INCUBADORA PARA ANAEROBIOS / 92 BAÑO DE AGUA CALIENTE. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO / 119 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 ESTRUCTURA DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 FUNCIONAMIENTO / 123 9 . (BAÑO DE MARÍA) / 92 CUESTIONARIO / 94 MICROSCOPIO / 95 INTRODUCCIÓN / 95 MICROSCOPIO.

CUESTIONARIO / 124 INSTRUMENTOS MECÁNICOS / 126 INTRODUCCIÓN / 126 PIPETAS MECÁNICAS / 126 PIPETA TIPO MARBURG / 127 EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS / 131 LAS CENTRÍFUGAS / 131 PRINCIPIO TÉCNICO / 133 BALANCE DE LOS TUBOS / 133 FUNCIONAMIENTO / 134 EL ROTOR / 135 DISEÑO DEL EQUIPO / 135 FUNCIONAMIENTO / 136 EL AGITADOR / 136 DISEÑO DEL EQUIPO / 137 FUNCIONAMIENTO / 137 POTENCIOMETROS / 138 ESTRUCTURA / 138 ELECTRODOS / 139 TIPOS DE ELECTRODOS / 139 PRINCIPIO FUNCIONAL / 139 MEDICIÓN DEL PH / 140 PROCEDIMIENTO PARA EL MANEJO DEL POTENCIÓMETRO / 140 CUESTIONARIO / 141 BALANZAS / 143 INTRODUCCIÓN / 143 PRINCIPIO / 143 DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS / 143 BALANZAS GRANATARIAS / 144 FUNCIONAMIENTO / 145 PROCEDIMIENTOS PARA EFECTUAR LA PESADA / 145 CAJA DE PESAS / 146 PRECAUCIONES / 147 BALANXA DE UN SOLO PLATILLO (TIPO OHAUS) / 147 BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA / 147 BALANZA DE PRECISIÓN MECÁNICA / 148 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA / 150 PRECAUCIONES / 151 BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA / 151 FUNCIONAMIENTO / 153 PESADA / 154 DETERMINACIÓN DEL PESO / 155 BALANZA ANALITICA DIGITAL / 156 CUESTIONARIO / 156 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN / 158 10 .

NO VOLUMÉTRICOS / 158 INTRODUCCIÓN / 158 INSTRUMENTOS. INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y M ATERIALES DE CURACIONES / 162 INTRODUCCION / 162 ACCESORIOS / 162 GRADILLAS / 162 CESTOS / 163 SOPORTE UNIVERSAL / 163 PINZAS DE SUJECCIÓN / 164 TRÍPODE / 164 MALLA DE AMIANTO / 165 INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO / 165 MATERIALES DE CURACIONES / 166 CUESTIONARIO / 167 TOMA DE MUESTRAS / 168 INTRODUCCIÓN / 168 MUESTRA. CONCEPTO / 168 MUESTRA REPRESENTATIV A / 168 MÉTODOS DE CONSERV ACIÓN / 169 CALIDAD DE LA MUESTRA / 170 INSTRUCCIONES AL PACIENTE / 172 DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS / 172 EXUDADOS / 172 LÍQUIDOS ORGÁNICOS / 179 SANGRE / 181 LINFA / 182 EXCRECIONES / 183 FANERAS / 185 PRODUCTOS PATOLÓGICOS / 185 CUESTIONARIO / 186 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS / 187 INTRODUCCIÓN / 187 DIFERENTES MÉTODOS / 187 PREPARACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXAMEN MICROSCÓPICO EN FRESCO / 187 MÉTODO DE LA GOTA COLGANTE / 188 PREPARACIÓN EN LÁMINAS DE MUESTRAS COLOREADAS / 189 11 . DIFERENTES TIPOS / 158 RELOJES / 158 TERMÓMETROS / 159 DENSÍMETROS / 160 CUESTIONARIO / 161 ACCCESORIOS.

CUESTIONARIO / 191 COLORANTES Y COLORACIONES / 192 INTRODUCCIÓN / 192 CONCEPTO / 192 FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES / 192 COLORANTES NATURALES / 192 COLORANTES SINTÉTICOS / 193 CLASIFICACIÓN / 193 AFINIDADES TINTORIALES / 194 TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. VENTAJAS Y DESVENTAJAS / 194 METODOS DE COLORACIÓN / 195 COLORACIÓN DE GRAM / 195 COLORACIÓN DE "ZIEHL NEELSEN / 199 CCOLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN (MODIFICADA PARA MYCROBACTERIUM LEPRAE) / 202 COLORACIÓN FRAGELAR DE LEIFSON (MODICFICACIÓN DE CLARK) / 203 COLORACIÓN DE CÁPSULAS / 204 COLORACIÓN DE ESPORAS / 205 CUESTIONARIO / 206 MEDIOS DE CULTIVO / 208 INTRODUCCIÓN / 208 OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA / 208 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 208 CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 212 COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS / 213 ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO / 217 DISTRIBUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 220 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMERCIALES / 222 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS ELABORADOS / 222 COMPROBACIÓN DE LA ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS ELABORADOS / 223 CUESTIONARIO / 223 SIEMBRA E INCUBACIÓN / 225 INTRODUCCIÓN / 225 INSTRUMENTOS DE SIEMBRA / 225 DIFERENTES TIPOS / 226 MÉTODOS DE SIEMBRA / 227 INCUBACIÓN / 232 MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO / 233 EN LOS MEDIOS DE CULTIVO / 233 CULTIVO PURO / 233 CULTIVO MIXTO / 233 RESIEMBRA / 233 CUESTIONARIO / 234 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO / 235 INTRODUCCIÓN / 235 12 .

HIDRATOS DE CARBONO / 235 INDICADORES / 236 SANGRE Y HEMODERIV ADOS / 237 COLORANTES / 237 PRODUCTOS QUÍMICOS / 238 AMINOÁCIDOS / 238 ANTIBIÓTICOS / 238 SUEROS / 240 ANTÍGENOS / 240 LÁTEX / 241 CUESTIONARIO / 241 GARANTÍA DE LA CALIDAD / 243 INTRODUCCIÓN / 243 OBJETIVOS / 243 DIFERENTES TIPOS DE CONTROL / 244 PRUEBAS ESTADÍSTICAS / 245 PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES / 245 MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS / 246 REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD / 247 EN BACTERIOLOGIA / 247 CONTROL DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS / 247 CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO / 248 CONTROL DE COLORANTES Y REACTIVOS / 248 CONTROL DE DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA / 249 CONTROL DE ANTÍGENOS Y ANTISUEROS / 249 CONSERV ACIÓN DE CEPAS PARA EL CONTROL BIOLÓGICO / 249 DEL LABORATORIO DE REFERENCIAALLABORATORIO QUE SERÁ EV ALUADO / 251 DEL LABORATORIO DE LA UNIDAD AL LABORATORIO DE REFERENCIA / 251 CUESTIONARIO / 253 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS / 254 13 .

14 .

Como apoyo al diseño curricular del perfil de microbiología. la función de cada una de las partes y su interacción con el resto del sistema. atendiendo a los contenidos del programa y el perfil de salida de los egresados. Los planes de estudio se han sustentado en la modalidad de estudio-trabajo. con lo que se pretende que adquieran la capacitación adecuada para brindar un servicio de excelencia a nuestra población. además de todo lo concerniente a su cuidado y conservación. a partir del curso 2003-2004. creados al efecto en todo el país. 15 . el principio de su funcionamiento y el algoritmo de trabajo. para lo cual se tuvo en cuenta precisar la particularidad utilitaria de cada equipo.PREFACIO Como parte de la política del estado cubano de universalizar la enseñanza. instrumento. en más de 20 especialidades. En los capítulos correspondientes a los procederes de laboratorio. hemos editado este libro de texto para que sea utilizado como bibliografía básica en el estudio de la asignatura Fundamentos y Principios Básicos del Laboratorio de Microbiología. los cursos de técnicos medios de la salud que durante casi 4 décadas se impartieron. bajo la asesoría de profesionales y técnicos de experiencia. lo que permite a los estudiantes desarrollar progresivamente las habilidades en los propios escenarios donde se encuentran los diferentes servicios de salud. los estudiantes pueden realizar sin contratiempos los procederes en cuestión. de manera que. así como desempeñarse con eficacia y competitividad en cualquier otro país donde se requiera su colaboración. así como. siguiendo al pie de la letra las instrucciones que se proporcionan. fueron diseñados como carreras universitarias. culminando la formación universitaria como licenciado en tecnología de la salud en diferentes perfiles. en los institutos politécnicos. todo lo concerniente a su descripción estructural estándar y sus variantes. mediante un nuevo modelo pedagógico que comprende dos niveles de formación intermedia: técnico básico y técnico medio. cada aspecto ha sido explicado pormenorizadamente. accesorios y otros materiales de trabajo. Cada tema ha sido abordado con una proyección tecnológica.

como una herramienta que te proporciona una capacitación perdurable. no solo para alcanzar buenos resultados docentes. Esperamos que este texto te sea de utilidad en el proceso de aprendizaje. sobre el que se sustente tu desempeño profesional. con el objetivo de que sea utilizado como guía de estudio individual o colectivo.Al finalizar cada tema se ha incluido un cuestionario de preguntas. que es. el objetivo esencial de tu formación. en definitiva. Los autores 16 . sino más bien.

Como parte del Sistema Nacional de Salud. Y obtiene y procesa componentes de la sangre para uso terapéutico o de investigaciones. tomar y recibir muestras biológicas. a las cuales se les realizan análisis bioquímicos. tales como: sangre. análisis inmunohematológicos y serológicos e informa los resultados. Laboratorio de Rayos X El Laboratorio de Rayos X. hematológicos. investigaciones científicas o el análisis de diferentes muestras. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. así como. administra contraste a los pacientes. Transfunde sangre total o sus derivados. recibe indicaciones y solicitudes médicas. toma y recibe muestras biológicas. Laboratorio de Medicina Transfusional El laboratorio de Medicina Trasnfusional. en Cuba. serològicos. líquido cefalorraquídeo. etc. orina. para las investigaciones que así lo requiera. jugo gástrico. etc. Para determinar sus alteraciones en relación con sus valores de referencia.CAPITULO 1 EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INTRODUCCIÒN Los laboratorios son edificados especialmente diseñados. recibe indicaciones médicas. realiza exámenes radiológicos convencionales o mediante la utilización de técnicas modernas 17 . para la realización de experimentos. por ejemplo: Laboratorio Clínico La actividad básica que se realiza en este tipo de laboratorio es la de recibir las ordenes de análisis del médico de asistencia. para la producción de medicamentos. existen diferentes tipos de laboratorios. Realiza análisis de urgencia e informa los resultados. reactivos o la obtención de productos biológicos. realiza sangrías a donantes.

Las diferentes secciones están dirigidas a su vez por diferentes profesionales. un técnico medio experimentado. esta compuesto por profesionales universitarios. grado (microbiólogos). así como bioquímicos. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. con lo cual aporta un dato de inestimable valor para la indicación del tratamiento También brinda apoyo especializado al Comité de Prevención y Control de las Infecciones Nosocomiales (infecciones intra hospitalarias) originadas en el hospital u otro establecimiento de atención de salud. toma y recibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicas mediante exámenes microscópicos directos y por cultivos. recibe indicaciones médicas. precisar su cuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. El servicio de microbiología. ademas de técnicos medios. para detectar alteraciones anatomofibiológicas en partes blandas u óseas del organismo asi como la presencia de cuerpos extraños.C. Recursos humanos El personal de los laboratorios de microbiología clínica. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. personal de oficina y auxiliares generales entrenados. En la mayoría de los laboratorios. con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas. especializados o no. biólogos y otros tecnólogos. asumiendo determinadas funciones delegadas por el jefe de servicio. cargo que ocupa generalmente un médico especialista o en su defecto otro profesional. 18 . médicos especialistas de 1er o 2do. proporciona al medico de asistencia.de imagenología. información precisa relacionada con la sensibilidad o resistencia del agente infeccioso a los diferentes antibióticos. Ms. GENERALIDADES Actividades fundamentales El laboratorio de microbiología clínica. se desempeña como jefe técnico. Estructura administrativa Todos los laboratorios están gerenciados por un jefe de servicio. o Licenciados en microbiología.

IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA Dado el incremento actual de las enfermedades emergentes y reemergentes. 2. el perfeccionamiento en la formación de los profesionales del sector y la superación científico-técnica de los graduados a través de diplomados y cursos de post-grado. el trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología. así como la toma y preservación de muestras en medios de transporte para su envió a los laboratorios de referencia. diagnósticados por procedimientos habituales o de diagnósticos rápidos. La prestación de este servicio a toda la población del país. maestrías y doctorado. adquiere cada día mayor protagonismo. ESTRATEGIA ORGANIZATIVA DE TRABAJO Para lograr una buena eficacia en la realización de los procederes de laboratorio. casi todos los hospitales y policlínicos cuentan con servicios de microbiología y en la actualidad se esta concretando un proyecto de estaciones microbiológicas destinadas fundamentalmente al diagnostico mediante exámenes directores. al proporcionar datos exactos acerca de la identidad de los microorganismos en estudio. mediante el acceso a las tecnologías más modernas. posibilitando la indicación de un tratamiento mas eficaz. que permita asegurar la calidad de los resultados. incrementar la productividad de las deter19 . todo lo cual amplia la capacidad del diagnóstico médico a magnitudes que están fuera del alcance de los métodos clínicos. Mejorar la calidad del servicio. así como mediante técnicas serodiagnósticas de alta sensibilidad y por aportar el patrón de susceptibilidad a los antibióticos de los microorganismos en cuestión. resulta indispensable sistematizar una estrategia de trabajo. en las investigaciones donde resulte factible. así como el desarrollo cada vez más creciente de cepas resistentes a los antibióticos de uso tradicional. El perfeccionamiento del trabajo microbiológico se proyecta en dos direcciones: 1. ya que ha sido y es política de la Revolución que los servicios médicos sean accesibles a todos los ciudadanos. Para ellos. en policlínicos. así como en unidades hospitalarias o centros especializados. a nivel de la atención primaria.

Planificación del trabajo a realizar. Para el logro de estos propósitos el laboratorista debe cumplir con las siguientes indicaciones: Disposición de los materiales de trabajo Seleccione todos los utensilios (escrupulosamente limpios o estériles) que se requieran para el trabajo a realizar (gradillas. su concentración y que la fecha de vencimiento no haya caducado. En este sentido es importante tener la certeza de que no falte ningún material que implique tener que interrumpir el procedimiento para su localización. cerciórese del nombre del reactivo. Por ejemplo. e) Al destaparlos coloque cada tapa delante del frasco correspondiente para evitar errores al taparlo que impliquen su contaminación. por alteración del tiempo establecido en algún paso de la técnica y en consecuencia afectarse los resultados. puede en algunos casos. tubos. lea cuidadosamente la etiqueta del frasco para evitar errores.minaciones y al mismo tiempo que proporcione una adecuada protección contra posibles accidentes. Certeza de los medios reactivos o medios a emplear a) Al seleccionar los reactivos. si se 20 . etc). b) Verifique mediante un examen visual que no se encuentran alterados (precipitados. Ordenamiento de las muestras Coloque las muestras en la mesa de trabajo por orden numérico de izquierda a derecha. de manera que queden al alcance de la mano. c) Cerciórese de que se le haya hecho control de calidad. pipetas. d) Colóquelos en la mesa de trabajo en el orden en que serán utilizados. la discontinuidad de la marcha analítica. Siempre que resulte pertinente conviene planificar el trabajo a realizar en el laboratorio. introducir causas de errores. turbios. etc) y ubíquelos ordenadamente sobre la mesa de trabajo. ya que además de ocasionar una pérdida de tiempo innecesaria. para aprovechar al máximo el tiempo disponible.

para la búsqueda de protozoos. lo que facilita la operatoria microscópica sin pérdida de tiempo al no tener que intercambiar láminas. Concentración en el trabajo Durante todo el tiempo que dure la ejecución del procedimiento. 5. Especifique El concepto que Ud. 6.van a preparar exámenes microscópicos directos de heces fecales. es conveniente hacer las dos preparaciones por separados en una misma lamina portaobjetos. concentre su atención en cada paso de la técnica. Trabaje con meticulosidad y esmero y aplique las medidas de asepsia cuando la determinación así lo requiera. tenga de lo que es un laboratorio. Explique la estructura administrativa de los laboratorios. 3. Nombre diferentes laboratorios que pertenezcan al Sistema Nacional de Salud. 4. ¿En que radica la importancia del trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología? 7. 2. Refiérase a las actividades fundamentales que se realizan en un laboratorio de microbiología clínica. Indique las diferentes categorías ocupacionales del personal que labora en un laboratorio de microbiología. CUESTIONARIO 1. 21 . Explique cada uno de los indicadores establecidos para la estrategia organizativa del puesto de trabajo. evite interrupciones innecesarias y absténgase de mantener conversaciones ajenas a lo que esta haciendo. por los métodos eocina y lugol.

excreciones y productos patológicos. 22 . etc. que pueden clasificarse según su origen en: Riesgos físicos Ocasionados regularmente por. corrosivas. traumas. a diversos riesgos profesionales. por la naturaleza de su trabajo. etc o en centros de investigaciones biomédicas. Riesgos químicos Originados por el manejo con sustancia inflamables. directa o indirectamente las personas. en los laboratorios de microbiología. etc. Riesgos biológicos Debido a la manipulación frecuente de pacientes infectados. cancerigenas. policlínicos. el manejo de productos sépticos y el nivel de contaminación ambiental predominante en el ámbito hospitalario. las radiaciones. BIOSEGURIDAD. Así como en la industria biotecnológica y el trabajo con organismo transgénicos. CONCEPTO Es la disciplina que se ocupa de la prevención y control del riesgo biológico al que están expuestas.CAPÍTULO 2 BIOSEGURIDAD INTRODUCCIÒN Los profesionales y técnicos de la salud que laboran en unidades hospitalarias. especialmente en los laboratorios donde se realizan exámenes de sangre. están expuestos. los animales y las plantas como consecuencias de accidentes o negligencias. etc. la electricidad. líquidos corporales. tóxicas. clínicos. exposiciones al calor.

puede extenderse al entorno hospitalario o a la comunidad. RIESGO INDIVIDUAL COMUNITARIO I ESCASO ESCASO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. Los niveles de riesgo para un laboratorio básico. son las principales causas del daño individual que bajo determinadas circunstancia. CARACTERIZACIÒN DE LOS AGENTES PATÓGENOS INVOLUCRADOS II MODERADO LIMITADO III ELEV ADO ESCASO IV ELEV ADO ELEV ADO 23 . PUEDEN PROPAGARSE FÁCILMENTE DE UN INDIVIDUO A OTRO. TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE ENTRAÑAR RIESGOS GRAVES PARA EL PERSONAL DEL LABORATORIO.DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. son los de tipo I y II. veterinarias o fitosanitarias con el consiguiente perjuicio económico o ecológico. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS. LOS ANIMALES Y EL MEDIO AMBIENTE. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. ocasionando diversos grados de afectaciones médicas. PRINCIPALES CAUSAS Los accidentes imprevistos y el deficiente desempeño del personal ocupacionalmente expuesto. GENERALMENTE LA INFECCIÓN NO SE PROPAGA DE UN INDIVIDUO A OTRO. NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO Cuadro 1: Diferentes niveles de riesgo biológico. LA COMUNIDAD. DIRECTA O INDIRECTAMENTE. SU EXPOSICIÓN EN EL LABORATORIO PUEDENPROVOCARINFECCIONESGRA VES.

Aplicar rigurosamente las medidas de asepsia y antisepsia en todas las ocasiones en que la acción a realizar así lo requiera. Apertura de cultivos liofilizados en ámpulas. . cuando se ha centrifugado muestras biológicas o material contaminado. . La correcta realización de las técnicas de laboratorio. Abrir la tapa de la centrífuga antes de que esta se detenga o de inmediato. cubreobjetos y pipetas utilizadas se depositaran en recipientes apropiados que contengan solución desinfectante. 3. 2. . Retirar la aguja de las jeringuillas que contengan material contaminado. El diseño adecuado de los laboratorios. . con las indicaciones y regulaciones a cumplimentar por el personal de laboratorio. Para la correcta realización de las técnicas de laboratorio a) Regulaciones básicas.PRINCIPIOS BÁSICOS Los principios básicos. .Los frotis coloreados. Pipeteo energético. . así como los portaobjetos. .Los instrumentos de siembra de platino o nicròn. que serán expuestas resumidamente a continuación. el instrumento debe introducirse gradualmente en la llama del mechero hasta ponerse al rojo vivo. . Flameos de instrumentos de siembra contaminadas con productos biológicos infecciosos. 24 . antes y después de su uso. regidos por las normas de bioseguridad para la prevención y control del riesgo biológico son los siguientes: 1.Los procederes técnicos han de realizarse de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles siendo las causas mas frecuentes las siguientes. A los efectos de evitar salpicaduras del material residual empleado. . El empleo sistemático de los equipos y medios de seguridad. Para dar cumplimiento a estos principios se establece en el reglamento un código practico. se deben esterilizar a la llama del mechero.

realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas. pantalla facial u otros dispositivos de protección. recurrir al empleo de campanas químicas. Nunca dejarlos en posición horizontal.Siempre que sea necesario.Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores.Lavarse las manos después de haber manipulado pacientes. retirando del mismo material que no tenga relación con el trabajo.No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua. o cabinas de seguridad.Emplear guantes quirúrgicos en todo trabajo que entrañe contacto con sangre. aún cuando no llegaran a romperse. beber. .Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio. ya que el agua de condensación puede arrastrar los gérmenes del cultivo. proteger los ojos y la cara de salpicaduras e impactos mediante gafas de seguridad. . Los cultivos en placas deben mantenerse con la tapa hacia abajo en el interior de la incubadora o sobre la mesa de trabajo. o animales y al retirarse del laboratorio (ver mas adelante. fumar. . .En las zonas de trabajo del laboratorio. La caída brusca de las placas o tubos de cultivos. material contaminado. material infecciosos o animales infectados. guardar alimentos ni aplicar cosméticos. nasobucos. Nunca pipetear con la boca esos productos peligrosos. . b) Higiene del laboratorio y el personal. botas. viseras. . deben mantenerse siempre en posición vertical en una gradilla. .. 25 . como: batones.Utilizar bata sanitaria u otras prendas apropiadas cuando la envergadura del trabajo así lo requiera. humedecer los tapones de algodón y contaminar la mesa de trabajo. . Los guantes se deben retirar asépticamente y ser esterilizados en autoclave. no comer.Cuando la naturaleza del trabajo a realizar así lo requiera. . gabinetes.Utilizar pipetas mecánicas para manipular líquidos infecciosos. Empleo sistemático de equipos y medios de seguridad . . Los tubos de ensayo que contengan cultivos.Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato. procedimiento para el lavado de manos). etc.

1 : Equipos y medios de seguridad: a) Incinerador de asas. Lentes de seguridad. Como medida de seguridad. el manejo y control de los microorganismos presentes en las diferentes muestras y cultivos durante el proceso de la investigación. la construcción o adaptación de un laboratorio de microbiología clínica. generalmente empotradas en las paredes o instaladas en el centro del local. Fig. que permita al personal del laboratorio. requiere de condiciones especiales que propicien el establecimiento de una organización de trabajo. 1. Casi todas las salas o cubículos del laboratorio dispondrán de mesetas. en especial la parte inferior. Dentro de los requerimientos esenciales del diseño constructivo se encuentran los siguientes. sin grietas o ralladuras donde se pueda acumular la suciedad y el polvo que dificulten su limpieza y desinfección. la construcción de un laboratorio de microbiología se hará en un área separada de locales destinados a otros fines. d) Nasobuco. Las mesetas deben ser construidas con acero inoxidable u otro material simi26 . el cumplimiento estricto de las normas de asepsia y antisepsia establecidas para la manipulación de los pacientes. así como. b) Guantes de polietileno. 3. Las paredes. El diseño adecuado de los laboratorios Debido a los diversos riesgos implícitos en las investigaciones microbiológicas. deben ser lisos. el de los gérmenes ambientales o contaminantes que por diversas vías pueden tener acceso a las áreas de trabajo. 2. el piso y el techo..Utilizar incineradas de asas microbiológicas.

5. En aquellos laboratorios que cuenten con sufi27 . mínimo.lar que propicie un terminado de su superficie liso y sin poros y que sea al mismo tiempo muy resistente a la acción de los ácidos. El grado de iluminación y ventilación se debe adecuar a las normas establecidas para locales cerrados o abiertos. Las destinadas para trabajar de pie tendrán una altura de 85 a 90 cm de alto y el mismo ancho que la anterior. Caracteres estructurales La estructura de un laboratorio de microbiología. de manera que puedan ser desinfectadas o esterilizadas por métodos físicos o químicos sin que se deterioren.Las que sean destinadas para trabajar sentado. destinados a la colocación de la cristalería. dependerá esencialmente de la disponibilidad de espacio. La superficie de estas mesetas no deben reflejar excesivamente la luz para que no interfiera la lectura de algunos exámenes ni afecte con el tiempo la vista del laboratorista. medios de cultivos. Las ventanas deben estar situadas a unos 30 cm. álcalis y sustancias corrosivas. 4. por encima de la altura de las mesetas para evitar la exposición directa del aire y el polvo procedente del exterior. que estarán presentes en un turno de trabajo. Estas mesetas generalmente están provistas de gavetas y estantes con anaqueles. los frascos con reactivos colorantes. 2 : Disposición de las mesetas en el laboratorio. aire y gas. no debiendo existir ninguna construcción debajo que dificulte la colocación de las piernas y solo de ser necesario podrá disponer de una gaveta. así como otros materiales e instrumentos. Fig. El laboratorio dispondrá de instalaciones de : agua. electricidad. atendiendo a la cantidad de personas previstas. tendrán una altura de 75 a 80 cm de altura por 60 cm de ancho.

Fig. 3 : Libro de registro. Sala de recepción y archivo En esta sección. Cubículo para las tomas de muestras. La sala de recepción y archivo. todo lo cual está encaminado a reducir la probabilidad de posibles propagaciones de agentes patógenos por todo el laboratorio y la comunidad. el numero. que consecutivamente le corresponde a esa solicitud. donde se procederá a asentar en el libro de registro de entrada. (áreas bio limpias o bio sucias) con esta estrategia. familiares y visitantes no tendrán acceso a las áreas de riesgo. no relacionados con la actividad que se realiza en esas secciones de trabajo. debe estar a la entrada de la edificación y el resto de las secciones de trabajo. la fecha de registro. Cubículo para la preparación de medios de cultivo. sala donde se encuentra hospitalizado o unidad de salud que hace la solicitud). un personal de oficina entrenado. y el tipo de investigación que se indica. la procedencia (consulta externa. 28 . siendo limitado para el resto del personal del laboratorio y otros visitantes. los datos del paciente (nombre y dos apellidos y número de historia clínica). Sala principal de trabajo. las actividades suelen ser compartimentadas en las siguientes áreas o secciones de trabajo: Sala de recepción y archivo. Cuarto de siembra. de menor a mayor nivel de contaminación.cientes salas y cubículos. se ubicará estratégicamente en el interior del laboratorio. o procedentes de otras unidades de salud vinculadas al centro. Cubículo para la esterilización y preparación de materiales. los pacientes. en caso de pacientes encamados. reactivos y colorantes. recepciona las órdenes de análisis entregadas por los propios pacientes o enviadas desde las salas de la unidad hospitalaria.

muestra contaminadas. etc). de archivo de la unidad hospitalaria para que sean archivados en las historias clínicas o en el laboratorio cuando deban ser recogidas por los interesados. quien la entregara al técnico que le vaya a tomar la muestra. esputo. la sección de archivo tiene la función de procesar un resumen bioestadístico mensual con los resul29 . Si se tratara de un tipo de muestra que deba ser tomada en el laboratorio (exudados.En un pequeño cuadrante que se encuentra impreso en el ángulo superior derecho de la orden de análisis se notara el número asignado en el registro de entrada. Además de estos datos primarios que se registran diariamente. Si el examen no se puede realizar y se solicite su repetición. en la orden de análisis se especificaran las causas (muestras escasa. Cuando la orden se entrega conjuntamente con la muestra (orina. donde se anotará los datos en el libro de registro de resultados. 4 : Orden de análisis. Las ordenes con los resultados serán enviadas al Dpto. etc) en los frascos se anota con lápiz cristalográfico. el mismo número de registro. la manipulación ulterior de las ordenes pueden propiciar una vía de contagio. etc) después de registrada. la orden le será devuelta al paciente. Como medida de seguridad. Concluida la investigación. debiendo reintegrarla a la sección de recepción y archivo. quien la firmará y anotara la fecha de realización. heces. suero hemolizado. emitir un duplicado. lo que permitirá en caso de extravío de la orden. Fig. lesiones infecciosas en la piel. por el técnico que realizó el examen. los resultados serán debidamente informados en la orden de análisis. los frascos que contienen muestras no deben estar en contacto con las órdenes de análisis. dada la posibilidad de que se haya producido algún derramamiento durante su recolección en cuyo caso.

etc. etc. leptospirosis. uretral. etc). etc) debiendo contar con la privacidad requerida y las condiciones necesarias. óptico. en la que se realizan determinadas investigaciones. debe estar climatizado. etc. tuberculosis. pueden existir otras secciones especializadas para la investigación de lepra. reactivos y colorantes Este local estará equipado con balanzas. debiendo contar con una colección de cepas microbianas certificadas para la realización del control de calidad. mechero. Sala principal de trabajo Esta sala puede contar de uno o varios cubículos. etc. para la toma del exudado vaginal. camillas ginecológicas. Cubículo para la preparación de medios de cultivos. una sección de trabajo independiente. hisopos estériles. baño de María. así como de una lámpara de luz ultravioleta para la esterilización del medio ambiente. Cuarto de siembra Generalmente los laboratorios pequeños que disponen de una sala principal en un único local tienen anexado un pequeño cubículo que es donde radica el cuarto de siembra. conjuntival. 30 . parasitología. Cada sección contará con los recursos necesarios para la realización de esas investigaciones especificas.. por ejemplo: Urocultivo. particularmente. constituyendo cada uno de ellos. potenciómetro. Este cuarto esta provisto de mesetas y de todos los materiales e instrumentos para la realización de siembras. serología. En algunas unidades. pruebas de identificación. etc. así como de la cristalería y otros accesorios para estos fines. resiembras y de aquellas actividades que requieran de una estricta asepsia. tales como: preparación y cultivo de las muestras. el laboratorista dispondrá de los recursos necesarios (guantes. Al igual que la sala principal de trabajo. tinciones. misceláneas.tados de cada tipo de investigación y adicionalmente llevar un control estadístico establecido por los programas de enfermedades de transmisión sexual y tuberculosis. coprocultivo. medios de cultivos y otros reactivos y colorantes. refrigerador. Cubículos para las tomas de muestras En este local. observaciones microscópicas. centros municipales o provinciales. o la superficie del inmueble y el mobiliario. Estas secciones de trabajo deben estar climatizadas. instrumentos de siembra. etc) para la toma de las diferentes muestras (exudado faringeo. En sus estantes y anaqueles se almacenará el stok de productos químicos. etc tales como parabanes.

. Destilación de agua. deben ser previamente taponados 31 . incluyendo su secado. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización La cristalería de trabajo y otros materiales que vayan a ser sometidos a un proceso de esterilización. Esterilización. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. en horno o autoclave.Cubículo para la esterilización y preparación de materiales Este local se destina para la realización de diversas actividades. En el segundo de enjuaga. incluyendo su secado En este local se instala una meseta con tres fregaderos colindantes. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización. en el primero se friega la cristalería con detergentes especiales y agua abundante empleando hisopo de tamaño apropiado. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. . Las pilas de estos fregaderos deben estar lo suficientemente altas como para permitir el enjuague de las pipetas en posición vertical. En un área de este local se situara un recipiente grande con solución desinfectante o sulfocromica con el objetivo de sumergir la cristalería que asi lo requiera. Fig. 5 : Hisopo para la limpieza de la cristalería. . entre las que se encuentran las siguientes. . con agua cruda y en el tercero con agua destilada.

preparación y esterilización del material limpio. para evitar su posterior contaminación una vez estériles. 6 : Destilador metálico de agua. fregado. 32 . Como se comprenderá se requieren de dos autoclaves. los laboratorios que disponen de destiladores metálicos. El flujo de trabajo en esta sección es el siguiente: entrada del material sucio. Esterilización El local debe estar dividido en dos áreas. por las manipulaciones ulteriores y los microorganismos presentes en el medio ambiente. esterilización. los instalan en este lugar (Área limpia) procediendo a la destilación y recolección del agua destilada en botellones con tapón de goma. Destilación de agua Generalmente.con algodón y/o empaquetados con papel de estraza. una para esterilizar el material limpio y la otra para esterilizar el material sucio. El área para el tratamiento del material limpio contará al menos con un horno que además de ser utilizado para la esterilización se puede emplear para el secado. Fig.

en posición horizontal. Dejar las agujas colocadas en la jeringuillas. PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. 2. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN 1. La manipulación se hará siempre con guantes quirúrgicos estériles observando un cuidado extremo para evitar pinchazos o cortaduras. 3. b) La existencia y localización de un manual de seguridad y de operaciones en el que se identifiquen los riesgos actuales y potenciales y se indiquen los procedimientos para su reducción. Enjuagar la jeringuilla y la aguja con agua (llenar y vaciar). 4.MEDIDAS DE PREVENCIÓN 1. 3. 5. Examinar la aguja y la jeringuilla cerciorándose de que el ajuste de la boquilla de la aguja a la jeringuilla es adecuado y que las marcas volumétricas se mantienen legibles. 6. c) Los riesgos mas probables que pueden ocurrir debido al tipo de investigaciones que se realizan en ese laboratorio. como por ejemplo la inmunización actualizada. Observar que no queden restos de sangre ni manchas. Descargar la solución desinfectante contenida en la jeringuilla a través de la aguja. No se permitirá tampoco la entrada en el laboratorio de animales que no tengan relación con el trabajo que se esté realizando. 33 . en el interior de una bandeja que contenga solución desinfectante y exponerla a su acción por un espacio de tiempo no menor de 20 minutos. El personal del laboratorio recibirá. 2. Durante el horario de trabajo las puertas del laboratorio permanecerán cerradas y solo tendrán acceso el personal del laboratorio y las personas autorizadas que hayan sido debidamente informadas sobre los posibles riegos y satisfagan cualquier requisito que se exija para tener acceso. Sumergir la jeringuilla con la aguja ensamblada. a través de su director una minuciosa información acerca de: a) Las medidas de seguridad establecidas. 4. A todos los miembros del personal del laboratorio y demás personas expuestas se les tomara muestras de sangre periódicamente y con el suero se realizaran determinaciones que servirán de referencia en función de los agentes infecciosos manipulados. No se permitirá la presencia de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.

papel de filtro. c) Aplicar solución desinfectante de hipoclorito de calcio o sodio al 1% alrededor del derrame y sobre el material absorbente esperar de 10 a 20 minutos. d) Remover el material absorbente y colocarlo en un contenedor destinado para materiales contaminados. 7 : Desinfección de muestras biológicas o material infeccioso derramado accidentalmente: a)Cubrir el área con un material adsorbente. 34 . INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE En caso de derrame de muestras biológicas o material contaminado a) Colocarse guantes quirúrgicos. b) Cubrir la sustancia derramada con material absorbente (algodón. e) Limpiar nuevamente el área contaminada con el desinfectante y posteriormente con detergente y agua abundante. Secar y proceder a empaquetar las agujas y las jeringuillas por separado con doble envoltura para su esterilización en autoclave. d)Aplicación nuevamente de desinfectante. c)Remover el material infeccioso. etc). b)Aplicar solución desinfectante. Fig. e) y f) Limpieza con agua y detergente.7.

Curar y cubrir la lesión. En el lavado de manos intervienen elementos mecánicos y químicos. verificara la procedencia de la muestra y si comprueba que el instrumental estaba contaminado con sangre o liquido corporal de un enfermo o portador de VIH. e) En caso de salpicaduras de sangre en los ojos o la boca. punturas. g) El jefe de Dpto. relacionada con la higiene personal lo constituye sin lugar a dudas el lavado de manos. LAVADO DE MANOS Objetivo: Eliminar la micro biota transitoria y disminuir la residente o normal de las manos y los antebrazos. lesiones o exposiciones con muestras o material contaminado. d) Para continuar el trabajo colóquese un débil o guante. lo notificara al Dpto. f) Los derrames accidentales. Justificación: La medida básica mas importante. El personal accidentado debe ser puesto en observación epidemiológica que incluya pruebas para detectar anticuerpos contra el VIH que serán realizadas 6 semanas después de la exposición. c) Aplicar una solución desinfectante débil de hipoclorito de sodio o calcio. el alta epidemiológica. La manipulación de los pacientes o materiales. b) Estimular el sangramiento. El agua arrastra mecánicamente una parte de los microorganismo presentes en las 35 . diarreas o adenopatías que ocurra dentro de las 12 semanas con posterioridad a la exposición. de Epidemiología y orientará al trabajador que reporte cualquier síntoma febril agudo. sobre todo si es acompañado de rash. deben ser comunicados lo antes posible al jefe del laboratorio. debe irrigarse de inmediato con cantidades de agua abundantes o solución salina fisiológica. Si la prueba es negativa. Si al cabo de ese tiempo continua negativa se da. por lo que de no debe aplicarse con sistematisidad estas medidas higiénicas al personal de la salud puede propagar la infección de un paciente a otro y contribuir de esta manera al incremento de las infecciones nosocomiales. para arrastrar mecánicamente a los agentes infecciosos. se repite a los 3 meses y con esa periodicidad durante un año. trae como consecuencia la contaminación de las manos y las muñecas pudiendo extenderse a los antebrazos.En caso de lesiones o contacto no protegido con material contaminado o muestras biológicas a) Lavar de inmediato la lesión con agua y jabón. quien registrará el hecho en el libro de control que existe al efecto.

Junte las manos en forma de recipiente. . Procedimiento 1. papel o paño para cada una. llénelas de agua y enjuague la llave. Retire las prendas de las manos y las muñecas. personales o sociales que lo requiera y antes y después del contacto con pacientes en procederes no invasivos y sin riesgo. Cierre la llave con una de las manos y enjabónelas. . Empleo: Siempre que se perciban las manos sucias. 5. Lavado quirúrgico. 6. mientras que el jabón emulsiona las materias extrañas y reduce la tensión superficial de los gérmenes presentes lo que facilita su lisis. 4. Abra la llave hasta que salga un chorro abundante de agua y enjuague las manos y manténgalas en un plano horizontal. 36 . enjuague el jabón y colóquelos en la jabonera. las que se frotan de forma enérgica se enjuagan abundantemente durante un minuto y después del secado se aplica solución antiséptica. con el objetivo de arrastrar suciedades. Empleo: Se utiliza ante las maniobras semicriticas. conjuntamente con la eliminación de los ácidos grasos y la suciedad. TIpos de lavado de manos . Lavado social.. Frote rigurosamente las manos con movimiento rotativo y haga que la espuma se extienda hasta las muñecas. Con la punta de los dedos. al realizar actividades fisiológicas. Abra la llave del agua y tome el jabón. 3. Lavado social de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. Lavado higiénico. Cierre la llave y séquese las manos con servilletas. 7. evitar infecciones cruzadas y proteger al personal de salud.manos. Remoje las manos hasta las muñecas y haga una abundante espuma. 8. sin frotárselas. que elimina todo tipo de suciedad visible. Lavado higiénico o médico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. 2.

c) Palma con palma intercalando los dedos. 3. Lavado quirúrgico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua. aplíquele jabón y cepille bien las uñas. f) Frotación de las yemas de los dedos sobre las palmas. Moje las manos y antebrazos (5 cm por encima de las muñecas) enjabónelas con jabón convencional o bacteriostático y haga una abundante espuma. j) Aplicar solución antiséptica y déjela actuar sobre las manos por un tiempo no menor de 2 minutos antes de la maniobra semicritica. servilletas o papel estéril (uno para cada mano) apriete suavemente la piel sin restregar. 37 . 2. lechos ungueales y la yema de los dedos. Tomar un cepillo estéril para cada mano. enjabónelos con jabón convencional en forma circular y haga una abundante espuma. jabón y cepillo. Procedimiento 1. Frote las manos de la siguiente forma: a) Palma con palma. g) Frote en forma circular la superficie de los antebrazos 5 cm por encima de las muñecas. 4. 2. Frote las manos igual que para lavado higiénico incluyendo los antebrazos. 5. comience por las manos y finalice en los codos nunca regrese a las manos. Empleo: Antes de cualquier maniobra critica. e) Pulgar derecho con la mano izquierda y viceversa. Realice el lavado social de las manos hasta enjuagar la llave con las manos juntas. b) Palma derecha sobre dorso de la mano izquierda o viceversa. d) Dorso de los dedos flexionados para cada mano. con utilización de solución antiséptica después del secado. Moje las manos y antebrazos hasta 2 pulgadas arriba del codo. mantenga las manos siempre levantadas para que el agua corra hacia los codos. Realice el lavado social de las manos hasta el paso en que se enjuaga la llave con las manos juntas en forma de recipiente. 3. Enjuague bien sin dejar ningún residuo de jabón.Procedimiento 1. h) Realice un enjuague abundante y deje que el agua corra hacia los codos. i) Seque las manos y antebrazos con paños.

Si se utiliza recipientes especiales concebidos para el transporte.antes de proceder a su eliminación. Objetos aguzados y cortantes: Las agujas hipodérmicas deben ser colocadas en recipientes con paredes que no puedan traspasarse fácilmente. previamente introducidos en recipientes impermiables. Después del tratamiento en autoclave puede colocarse el material en recipientes apropiados para el transporte al incinerador o a otro lugar de evacuación. a) Deshechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura. b) Objetos aguzados y cortantes (agujas. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar el contenido y antes de devolverlos al laboratorio. cualquier limpieza o reparación que se considere se hará después de esterilizados. con lo que se puede incinerar el contenido y el continente. incluso cuando las normas de laboratorio consistan en esterilizarlos primero en autoclave. Material contaminado para eliminación: Todos los cultivos y materiales contaminados suelen esterilizarse en autoclave. Estos recipientes deben ser impermeables y estar provistos de tapa herméticas. 2. c) Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización. Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización: Este material se coloca en recipientes impermeables poco profundos que contenga una cantidad desinfectante suficiente para cubrir el contenido y se llevan al autoclave. Enuncie el concepto de Bioseguridad. 38 . habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar transporte. d) Material contaminado para su eliminación. CUESTIONARIO 1. jeringuillas. No se efectúa ninguna acción previa. Cuando estos estén llenos se colocaran dentro de otros recipientes para desechos contaminados y se incineran. etc).MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS Se debe establecer un sistema de identificación y separación de los materiales contaminados (y de sus recipientes). Nombre los diferentes tipos de riesgo a los que están expuestos los profesionales y técnicos de microbiología en el ejercicio de su trabajo. Lo mejor es poner los deshechos en un saco plástico que se introduce en una caja de cartón.

Refiérase a las medidas establecida para evitar la formación de aerosoles. Mencione las prohibiciones establecidas en el código practico o reglamento de estricto cumplimiento para el personal que labora en el laboratorio. 16. en cuanto a la afectación individual y comunitaria. ¿Cómo se clasifican los objetos peligrosos antes de ser deshechos? 19. Especifique las característica constructivas que debe tener cada una de las salas o cubículo. Describa como debe ser el diseño constructivo de un laboratorio de microbiología. teniendo en cuenta su reutilización o eliminación. 18. y su equipamiento. Describa pormenorizadamente las normas establecidas para efectuar las diferentes técnicas de lavado de manos. Explique como usted procede con cada tipo de material u objeto contaminado. 15. Precise las medidas de prevención que debe conocer el personal que labora en los laboratorios. Caracterice los diferentes niveles de riesgo. ¿Qué instalaciones debe tener el laboratorio para su buen funcionamiento? 11. 12. 14. 7. 4. 5. Indique cuales don las actividades que se realizan en cada sala o cubículo del laboratorio. Nombre las diferentes salas o cubículos con que se estructura un laboratorio de microbiología. 13. 6. Mencione los principios básicos establecidos para la prevención y control del riesgo biológico. 9. 39 . ¿Qué indicaciones se establecen en caso de accidente?. que están encaminadas a evitar la ocurrencia de contagio infecciosos.¿Cuáles son las principales causas del daño individual? Especifique que elemento biológico resultan vulnerables de ser afectados en la comunidad por negligencias o accidentes en un laboratorio que trabaja con agentes biológicos peligrosos. 3. ¿Cuáles son las indicaciones a seguir en el caso de que se produzcan derrames de muestras biológicas o material contaminado? 17. 10. 8.

que cada individuo incorpora a su escala de valores. concepciones políticas. normas y evaluaciones sobre la regulación de la conducta de los individuos. antes de constituirse en patrones del comportamiento. la patria y el Estado. religiosas. constituyendo obligaciones con respecto a otros individuos. su clase social. que en su conjunto forman la conciencia social. la familia. En todo sistema social impera un modo de producción que determina la base económica de esa sociedad. para obtener los medios de subsistencia necesarios (alimentos. Como una necesidad de las sociedades divididas en clases. filosóficas. instrumentos de producción. vestidos. debido a influencias socioculturales y que se expresa mediante opiniones. mediante la inculcación de ideas. etc. criterios etc. morales. LA MORAL La moral puede definirse.. A diferencia de las relaciones de producción que se forman independientemente de la voluntad del hombre. cuya estructura responde a los intereses de la clase dominante. de justas o injustas. juicios. fundadas o dogmáticas. representaciones. para lo cual crea organizaciones represivas o políticas e instituciones productivas y de servicio que responden a sus intereses económicos o tienen el encargo de influir ideológicamente con iguales propósitos sobre la conciencia común (estado de opinión. una organización política de la clase dominante que tiene como finalidad mantener el orden establecido y aplastar la resistencia de las clases antagónicas. estéticas. Y fijándolas en su conciencia como principios o normas morales. relacionándose de un modo u otro. de honestas o deshonestas etc.CAPITULO 3 ETICA MEDICA INTRODUCCION La sociedad está formada pro un conjunto de seres humanos que conviven dentro un mismo ámbito cultural.). surge el Estado. las concepciones ideológicas pasan primero por la conciencia.) de la población. La moral está condicionada por la base 40 . como el conjunto de convicciones. lo que dependerá del lugar que ocupen en la escala social y el carácter privado o social de las fuerzas productivas. evaluando estas relaciones de buenas o malas. vivienda. mediante el establecimiento de relaciones de producción basada en la propiedad sobre los medios de producción que va a delimitar el grado de accesibilidad a los bienes materiales y culturales de cada clase y/o capa social existente. jurídicas.

su origen y desarrollo. de manera irreversible. se incurre en violaciones de la BIOETICA. a afectaciones somáticas. psíquicas o morales en el paciente. A diferencia de la moral. Cuando los actos del personal médico o paramédico dan lugar. Teoría de la moral Investiga la esencia de la moral. en la autoridad moral de algunas personas o en la opinión publica de determinadas colectividades. Para su estudio la ética se divide en. sino en la fuerza de la persuasión y el ejemplo. las leyes a que obedece.económica el régimen social. ETICA La ética es la ciencia de la moral y de la moralidad. ÉTICA MÉDICA La ética médica es una manifestación de la ética general y se refiere específicamente. la moral no se apoya en leyes formales. con 41 . Al cumplir esta función. a los principios y normas que rigen la conducta de los profesionales y técnicos de la salud. sus familiares o a la comunidad. estableciéndose como hábito o costumbre en la conciencia. que investiga los enunciados éticos y su relación con la verdad. señala que aspiraciones son dignas. Ética normativa Investiga el problema del bien y del mal. la ética investiga científicamente las concepciones morales en su sentido mas amplio y establece las regulaciones para su aplicación. así como de los trabajadores administrativos y de servicio que laboran en instituciones biomédicas. existen en aquellas morales diferentes. sus normas y carácter histórico. En los últimos tiempos se ha incorporado una nueva modalidad denominada Metaética. establece el código moral de la conducta. pero a la vez como otras formas de la conciencia social incide y actúa sobre ella. Como quiera que en la sociedad dividida en clases los intereses son contradictorios. que surge y se desarrolla como resultado de las relaciones de producción. que conducta es buena y cual es el sentido de la vida. Teoría de la Moral y Ética Normativa.

de los recursos y atención que presta la institución y por último. tanto preventiva como curativa en las instituciones de salud. trabajar consecuentemente allí donde la sociedad lo requiera. la justicia. El comportamiento bioético. con independencia del elevado costo que pueda tener para el Estado. debe estar basada en la estricta observancia de los siguientes principios éticos: En relación con el paciente y sus familiares . por negligencia u omisión. En el primero se establece. El principio de beneficencia preconiza que todas las acciones y esfuerzos deben estar encaminados a beneficiar al enfermo. no causar daño al paciente de manera intencional.morales de profundo contenido humano. rehabilitación y promoción de la salud humana. Para brindar su colaboración en cualquier lugar del mundo. El carácter socialista del Sistema Nacional de salud de nuestro país. tales como. recuperación. En cuanto al principio de justicia. c) La disposición los profesionales y técnicos de la salud de participar en misiones internacionalistas. todos los pacientes tienen las mismas oportunidades de beneficiarse por igual.Dedicar nuestros esfuerzos a la prevención. está regulado básicamente pro 4 principios: la no maleficencia. Es por ello que en el ejército de nuestra función social debemos observar principios éticos . Nuestra conducta en relación con el paciente y sus familiares. con el elevado espíritu internacionalista. b) El carácter gratuito de la atención médica. con el resto de los trabajadores y estudiantes del sector y con la sociedad. la beneficencia y la autonomía. donde se respeta la decisión del paciente de someterse a acciones médicas o experimentales que puedan afectar su integridad físico. establece la equidad. dedicar todos nuestros esfuerzos y conocimientos científicos y técnicos al mejoramiento de la salud del hombre. basados en los siguientes principios: a) La voluntad política del estado cubano de crear una infraestructura que ha permitido llevar los servicios médicos a todo el país. 42 . . psíquica o moral.Evitar que se produzcan daños a personas sanas o enfermas en los trabajos de investigación que realicemos. estar siempre dispuesto a brindar la atención necesaria.independencia de que la acción se haya producido de manera intencional o inconscientemente. ideológico y patriótico. es decir. aún en las zonas más apartadas y recónditas. la autonomía. constituye la base material sobre la que se sustenta la moral y la ética de los trabajadores de la salud.

teniendo en cuenta los intereses del paciente siempre que ello no ocasione un perjuicio social ni ponga en peligro la salud de otras personas.Abstenerse de realizar trabajos investigativos con los pacientes sin su consentimiento. sencillo y comprensible. darles la atención requerida y esforzarnos por viabilizar las soluciones posibles. . .No divulgar aspectos de la enfermedad que puedan estar relacionados con la vida intima del paciente o sus familiares. .Exigir. sin mostrar prisa o indiferencia hacia sus padecimientos.Evitar que lleguen a manos de los pacientes o de sus familiares las historias clínicas. la conducta adecuada ante el paciente y sus familiares y en el mismo sentido actuar sobre aquellos que. .Propiciar una adecuada relación personal con el paciente que le inspire un buen estado de ánimo y seguridad.Cuidar de no incurrir en el error técnico que resulta de una equivocación. . aunque no exista mala fe.Respetar el decoro. a toda persona que recabe nuestros servicios. . 43 . .Mantener en los casos de enfermedades de curso fatal absoluta o relativa reserva sobre el diagnóstico y pronóstico en relación con el paciente. informes de laboratorio o cualquier otro documento que pueda darle indebida o perjudicial información. .Conservar el secreto profesional. intervienen de una forma u otra en el trato con los pacientes. . ni elementos de negligencia. de forma solícita. de aquellos trabajadores que nos están subordinados..Atender. .Escuchar las preocupaciones y dificultades del paciente y sus familiares. ni hacer comentarios indiscretos en su presencia. el pudor y la dignidad de las personas bajo nuestra atención. sin alardes de tecnicismos y erradicando cualquier expresión de mal gusto. un lenguaje claro. aunque no estén subordinados.Los errores técnicos deben ser conocidos y analizados críticamente en reuniones del departamento con la libertad y profundidad necesaria que permitan derivar de ellas la experiencia que impidan su repetición. despreocupación e ignorancia. evitando a toda costa que nuestro trabajo se afecte por el apresuramiento. la superficialidad o la rutina. . . .Los profesionales y técnicos de la salud deben poseer la honestidad necesaria para reconocer sus errores y eliminarlos.Utilizar en todo momento de nuestras relaciones con los pacientes y familiares.

cuidar que las opiniones y criterios se basen en el mas profundo análisis científico posible. modestia honestidad y dentro de las reglas de una elevada educación formal y política. utilizando el vestuario adecuado en las diferentes áreas de trabajo. así como aquellas que. por razón del carácter excepcional de nuestro trabajo. teórica y práctica. tanto de estos principios éticos como de los reglamentos establecidos en las Unidades de Salud Pública.Mantener. a través de la palabra y su ejemplo. exija el mayor esfuerzo. .Poner en conocimiento de las autoridades correspondientes cualquier violación que nos conste.Procurar que la información que se ofrezca con propósitos de divulgación científica y educativa sea correcta y adecuada. como aspecto esencial para el cumplimiento de sus responsabilidades docentes. para con nosotros mismos y con los demás profesionales y técnicos de la salud. . . subordinando el interés personal al social.Prestar especial atención a su superación individual.Evitar indiscreciones que menoscaben el prestigio de otros compañeros o instituciones del sistema de salud. . 44 . dedicación y sacrificio. .Actualizar y perfeccionar los conocimientos de forma continua. . absteniéndose de emitir conceptos u opiniones que pueden alarmar innecesariamente a la ciudadanía. a fin de satisfacer las necesidades de nuestro pueblo y las tareas internacionalistas que se requieran.En relación con el resto de los trabajadores de la salud . .El docente debe promover en sus alumnos los principios éticos. .Mantener en todo momento un buen porte y aspecto personal. Como parte de la sociedad . . para lograr la optima calidad de los servicios que prestamos a la sociedad.Propiciará que las relaciones entre el y sus educandos se enmarquen en la debida autoridad y respeto que se requieren en la actividad docente. .Inducir en los alumnos la disposición de recibir entrenamiento especializado en aquellas disciplinas que lo demanden. una actitud crítica y autocrítica sobre los asuntos referidos a la relación con los pacientes. En las relaciones entre el docente y los educandos .Estar siempre en disposición de cumplir las obligaciones que le correspondan como ciudadano.Ejercer con altruismo las actividades propias de su esfera de trabajo.Comportarse en todo momento con sencillez.

9. moral y político del centro.LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA En todas las unidades del Sistema Nacional de Salud se crean las comisiones de Etica Medica. CUESTIONARIO 1. 2. 7. ¿Qué son y cómo se crean las comisiones de ética médica? ¿Cuál es la competencia y el desempeño de los integrantes de las comisiones de ética médica en los centros de Salud? 45 . 6. En el caso de arribar al criterio de que se incurrió en violación de la ética. los que a partir de ese momento actuarán de acuerdo con la legislación laboral vigente. trasladará su criterio a la dirección y al sindicato. 3 en activo y dos suplentes. En su opinión ¿Qué cosa es la ética? ¿Cuáles son los aspectos generales de la ética médica? ¿Qué usted entiende por violaciones de la Bioética? ¿Cúales son los principios que regulan el comportamiento bioético? ¿Cúales son los principios éticos que regulan las relaciones entre el personal de la Salud con los pacientes y familiares? Refiérase a los principios éticos que se ponen de manifiesto en las relaciones con otros trabajadores del sector y con los estudiantes. ¿Cómo se materializa el comportamiento ético cuando el profesional o técnico se siente parte de la sociedad. 4. 3. Esta comisión es la encargada de conocer toda denuncia o quejas sobre violaciones de la ética. 8. que serán seleccionados entre los compañeros de más prestigio laboral científico. que de común acuerdo entre la administración y el sindicato. es elegida para un mandato de 2 años quedando integrado por 5 miembros. realizando las investigaciones pertinentes en el plazo de 20 días. 5.

pasando al estado sólido y hierve a 1000c. Durante las precipitaciones. dióxido de carbono. por lo que se clasifica el enlace como polar. helio. hacen que en conjunto pierda su pureza. incoloro. CALIDAD DEL AGUA El agua tal y como se encuentra en la naturaleza no es pura. IMPORTANCIA El agua es indispensable para la vida.CAPÍTULO 4 EL AGUA INTRODUCCIÓN El agua es un líquido transparente. metano. pasando al estado de vapor de agua. ríos. el agua de lluvia se une a diversos elementos gaseosos presentes en el aire. contaminándose con los diversos compuestos orgánicos e inorgánicos que estén presentes. pasando a ser un líquido que contiene múltiples sustancias en disolución. inodoro e insípido. Químicamente está compuesta por 2 átomos de hidrógeno unidos a un átomo de oxígeno. debido a que al ionizarse se une a muchos óxidos. continua el proceso de contaminación. el agua es el reactivo más empleado. formando ácidos y bases con otros compuestos para formar hidratos. En el laboratorio. Posteriormente en los afluentes. desempeñando un protagonismo esencial en las reacciones químicas. lo que determina sus propiedades disolventes. lo cual propicia que sobre el átomo de oxígeno exista una cierta densidad de cargas negativas y sobre el hidrógeno una densidad de cargas positivas. por constituir el elemento esencial de todos los tejidos y líquidos orgánicos. dependiendo de los compuestos presentes en cada lugar. Al caer se disemina o se filtra en el suelo. sino angular. 46 . Se congela a 00c. etc. formando la molécula una configuración especial no lineal. siendo considerada como el solvente universal para la disolución de una gran cantidad de solutos y otros compuestos en estado líquido. que variará. lo que unido al tratamiento con cloro a que es sometida en los acueductos para su potabilización. como el nitrógeno. represas o acueductos donde va a parar.

DESTILACIÓN La destilación consiste. Por su parte el fluor y el cobre inactivan a las enzimas. 8 : Destilador de vidrio. provocarían efectos indeseables distorsionando la fiabilidad de los resultados. posee un gran poder de oxidación por lo que puede alterar la composición química de uno o varios compuestos del sustrato empleado. Fig. ya que de lo contrario algunos componentes. quedan retenidos en el destilador. mientras que las sales de mercurio las activan.PURIFICACIÓN DEL AGUA Para las determinaciones de laboratorio. Para lograr la purificación del agua se emplean dos métodos: la destilación y la desionización. diseñado para que los vapores que se desprendan en este proceso. 47 . Por ejemplo: el cloro libre. resulta indispensable que el agua sea lo más pura posible. ya que los contaminantes al no tener la capacidad de evaporarse. en someter al agua a temperatura de ebullición en el interior de un destilador metálico o de vidrio. pasen por un sistema de enfriamiento que los condensan. haciendo que pasen nuevamente al estado líquido con una mejor calidad.

el agua destilada debe ser sometida a un proceso de descarboxilación. No obstante. Si se desea neutralizar ese pH ácido para que no interfiera en algunos procederes. mejor que la del agua bidestilada. un pH neutro o ligeramente alcalino. lo cual se realiza de la siguiente manera: 1. que requieren generalmente. CONDUCTIVIDAD DEL AGUA Mediante la conductividad eléctrica se puede determinar el grado de pureza del agua.El agua destilada. DESIONIZACIÓN La desionización consiste en hacer pasar el agua corriente por una columna de resinas. debe ser renovada diariamente. Antes de apagar la fuente de calor. Si se sometiera a una tercera esterilización obtendríamos el agua tridestilada. el agua destilada puede emplearse en el trabajo diario sin que introduzca errores apreciables. las cuales captan los aniones y cationes que la contaminan. Después que el agua se ha enfriado. que como el proceso no lleva implícito su esterilización. con lo cual adquiere un buen estado de pureza. para algunas determinaciones. provisto de un tubo trampa con perlas de hidróxido de sodio. el agua destilada. el procedimiento comúnmente empleado es la destilación. donde se conservará hasta su empleo. Si se quiere. debido a la presencia de dióxido de carbono atmosférico disuelto. Se vierte el agua en un erlenmeyer y se somete a temperatura de ebullición por espacio de 3 a 5 minutos. se verterá en recipientes apropiados. tapar el erlenmeyer con un tapón perforado de caucho. obtenida por el procedimiento explicado no es totalmente pura. una mayor calidad de pureza. Para el trabajo del laboratorio de microbiología. incluso. como se ilustra en la siguiente tabla: 48 . 3. como por ejemplo en la preparación de medios de cultivo. ya que el vapor de agua que se forma puede arrastrar mecánicamente partículas de agua que no estén en estado de vapor. PH DEL AGUA DESTILADA El ph del agua destilada oscila entre 4 a 5. debe ser sometida nuevamente al proceso de destilación con lo que se obtiene el agua bidestilada. 2. aunque tiene la desventaja.

¿Explique por qué causa el agua empleada en el laboratorio debe ser lo más pura posible? 4. TIPO DE AGUA CONDUCTIVIDAD ( ohms -1 cm -1 ) 300 5 1 0. Explique el proceso de desionización del agua. ¿Mediante que procedimiento se puede determinar el grado de pureza del agua? 49 . ¿Cuál es la ventaja y la desventaja de la desionización sobre la esterilización del agua? 10. ¿Cómo es la calidad del agua. ¿Por qué se hace necesario bidestilar o tridestilar el agua? 8. ¿Cómo se denomina el método más empleado en los laboratorios para purificar el agua? 5.2 Corriente Destilada Bidestilada Desionizada CUESTIONARIO 1. tal como se encuentra en la naturaleza? 3.Cuadro 2 : Grado de pureza de los distintos tipos de agua en correspondencia con su conductividad. ¿Cuál es el pH del agua destilada? 11. ¿Cuál es la diferencia entre el agua destilada y la bidestilada? 7. ¿En que consiste la destilación? 6. ¿Cuál Es la importancia del agua para los laboratorios? 2. 9.

CAPÍTULO 5 CRISTALERÍA DE LABORATORIO INTRODUCCIÓN Se denomina cristalería de laboratorio. lo que no resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio. así como para la fabricación de vasos. algunos objetos. La cristalería fabricada con estos componentes. exposiciones a elevadas temperaturas.. Quedando como un cuerpo sólido. se vierte en diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieran producir. lo que le confiere una alta resistencia contra impactos. De esta manera se obtiene el cristal empleado para cubrir puertas o ventanas. con la ventaja de que dado su bajo costo. se identifica por estar rotulada con el nombre de "Pyrex" (Pairex).. debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. también se fabrican de material plástico. COMPONENTES DEL VIDRIO El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una temperatura de 1. El producto fundido. térmica y química. además tiene la propiedad de permanecer inerte durante las reacciones químicas. Como se sabe. SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO En la actualidad. lo que lo valida como un sustituto eficaz del vidrio. especialmente con teflón (tetrafluoruroetileno) un polímero de bajo costo. pueden ser desechadas sin grandes afectaciones económicas para la institución. 50 . copas y otros objetos. en ese estado líquido. que independientemente de su forma y tamaño están constituidos solamente por vidrio. Etc. este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecánicos. como por ejemplo: las jeringuillas utilizadas. cuya aleación le confiere una alta resistencia mecánica. caracterizado por su dureza. generalmente transparente. al conjunto de objetos utilizados en la realización de diferentes procedimientos técnicos. 0000c. los diversos objetos de vidrio que integran la cristalería de laboratorio.

Pipeta Probetas Beaker (Vaso de precipitado) Matraces Copa cónica Buretas Jeringuillas TD (Para distribuir) 51 . . DE MEDICION VOLUMETRICA Pipetas de : Shali.Pueden tener o no rotulada una escala de graduación .La mayoría se fabriFrascos goteros TRABAJO can de diferentes Vaso de Koplin tamaños y capaciTubos de ensayo dades.Expresan magnitudes volumétricas.Utilización para la Frascos erlenmeyer realización de diverFrascos Kitasatos sos procedimientos Frascos para reactivos técnicos.CLASIFICACION La cristalería de laboratorio de clasifica de la siguiente manera: Cuadro 3: Clasificación de la cristalería de laboratorio. CLASIFICACION SUB-CLASIFI CACIÓN DE ALMACE NAJE CARACTERIZACIÓN . .Alta resistencia química DIFERENTES TIPOS G E N E R A L Todos los frascos o reciopientes destinados a contener o almace.Cierre hermético. productos químicos . nar.Se fabrican de diferentes tamaños.No revelan magnitudes volumétricas. Frascos de fondo plano DE . Thoma o Westergreen (No utilizadas en el laboratorio de microbiología) _______________________________________________________ .Están calibradas para trabajar a 200c.Fotorresistencia (materias primas) o soluciones y reactivos elaborados ________________________________________________________ . Vidrio reloj Placas de Petry Embudos Condensadores Láminas de portaobjetos Láminas cubre objetos Láminas excavadas TC (Para contener) .

Al concluir este espacio se va ensanchando progresivamente de forma oblicua adquiriendo la forma cónica que lo caracteriza. que se caracteriza por tener un diámetro 3 ó 5 veces mayor en su porción inferior con respecto a su porción superior. 9 : Erelenmeyer Los erlenmeyer son recipientes de forma cónica y fondo plano.. Los de menor o mayor volumen de capacidad se utilizan con menor frecuencia. como por ejemplo. Si lo colocamos sobre la mesa de trabajo y lo observamos de arriba hacia abajo podemos percatarnos que en el extremo superior presenta una abertura circular con rebordes. Los más empleados en el laboratorio de microbiología son los de: 100.500 y 1 000 ml.CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS DE CRISTALERÍA CRISTALERÍA GENERAL DE TRABAJO Erlenmeyer Fig. 300. la preparación de medios de cultivo. Aunque los erlenmeyer pueden emplearse para la preparación de diferentes reactivos. esta cristalería está diseñada específicamente para la preparación de compuestos que requieran ser sometidos a la acción del calor. Los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños. debido a que su forma cónica. 250. seguida de una porción cilíndrica de algunos cm a manera de cuello. que corresponde a la boca. lo que propicia que no afecte significativamente el volumen de la preparación. 52 . hace que los vapores se condensen en el cuello.

para soportar las diferencias de presiones externas e internas provocadas por las técnicas de filtración al vacío para los que básicamente son empleados. Al igual que los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños.Kitasatos Fig. son similares a los erlenmeyer con la diferencia de que en el cuello tiene insertado un pequeño tubo corto en dirección horizontal abierto en su porción distal siendo las paredes de vidrio más gruesas.10 : Frasco de kitasato Los frascos de Kitasatos. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar para la protección de reactivos fotosensibles. 53 . Con ambas variantes se consigue el cierre hermético del frasco. lo que dependerá del tipo de reactivo que contenga. La tapa del frasco puede ser de cristal esmerilado o plástica si el cierre es de rosca.11 : Frasco para reactivos. Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener de acuerdo a su tamaño entre 25 ml y 1 litro. Frascos para reactivos Fig.

54 . Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón de caucho. En el trabajo microbiológico se utilizan regularmente para la preparación del antígeno de cardiolipina.13 : Frascos goteros Existen en el mercado diferentes modelos. De acuerdo con su capacidad. el contenido goteará si se inclina el frasco adecuadamente. Los de vidrio. en tanto que otro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido. debiendo ser termorresistentes por si se requiere someterlos a la acción del calor. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular. tradicionalmente empleado son incoloros o ámbar.Frascos de fondo plano Fig.12 : Frasco de fondo plano Se utilizan para la preparación de determinadas disoluciones. Frascos goteros Fig. similar a los empleados en los frascos de medicamentos. que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco. pueden contener entre 25 y 100 ml. utilizado en las pruebas serológicas VDRL. fabricándose de diferentes tamaños.

15: Tubos de ensayo Son pequeños recipientes de vidrio o plástico. 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí. de manera que quedan separados. pero todos tienen. Todos son cilíndricos. Estos vasos están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas. Los utilizados comúnmente en análisis cualitativos y cuantitativos tiene el fondo ligeramente cóncavos. en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente. en tanto que los tubos para cultivo son similares. aunque la forma de sus extremos varía en función de su empleo. fabricados de diferentes tamaños. Tubos de ensayo Fig. pero se diferencian en que están provistos en su extremo superior de aristas helicoidales por donde se enrosca una tapa de baquelita. lo que posibilita la insertación de varias láminas portaobjetos. resina sintética obtenida por polimerización del fenol y el formaldehído.Vaso de Koplin Fig. 55 . Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal. con capacidad variable.14: Vaso de Koplin Estos vasos se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares.

generalmente con estrías longitudinales para facilitar su sujeción cuando se van a desenroscar, mientras que los tubos de centrífuga se caracterizan por tener el fondo cónico, para acoplarse a los portatubos de la centrífuga, pudiendo tener impresa una escala de graduación en ml. Los tubos ordinarios y los empleados para cultivo, mayormente utilizados en los laboratorios de microbiología, son los de 12 x 75, 13 x 100, 15 x 125 y 16 x 150 mm, correspondiendo el primer valor al diámetro y el segundo a la longitud. Se utiliza esencialmente para contener, conservar y procesar muestras biológicas, cultivar microorganismos y realizar pruebas de identificación para el diagnóstico de laboratorio, de las especies investigadas. Vidrio reloj

Fig.16: Vidrio reloj

Es un tipo de cristalería circular y cóncava de aspecto transparentes, similar a las utilizadas para cubrir las esferas de algunos relojes despertadores. Se utilizan regularmente para efectuar pesadas de productos sólidos con excepción de aquellos que sean higroscópicos que absorben la humedad del aire o volátiles. Placas de "Petry"

Fig.17: Placas de "Petry"

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Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diámetro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm de altura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente de vidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro. Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa queda descansando sobre el borde de la caja. En el trabajo microbiológico se utiliza comúnmente para contener algún medio de cultivo sólido. Embudos

Fig.18 : Embudos

Los embudos presentan la porción superior cónica y la posterior en forma de un tubo cilíndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal, pudiendo tener una longitud, menor , igual o mayor que la porción cónica, cuya capacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, según el modelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar líquidos.

Láminas portaobjetos

Fig.19 : Lámina potaobjetos

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Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transparente y forma rectangular. Miden 7,5 cm de largo por 2,5 cm de ancho. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso de coloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Este tipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebas serológicas de aglutinación. Láminas excavadas

Fig.20 : Lámina portaobjetos excavada

Son similares a las láminas portaobjetos ordinarias, con la diferencia de que presentan una excavación cóncava de algo más de 1 cm de diámetro en centro de la lámina en forma de pozuelo. Se utilizan para la preparación de la "gota colgante", una técnica mediante la cual se determina microscópicamente si la bacteria en estudio es o no móvil.

Láminas cubre objetos

Fig. 21: Láminas cubreobjetos

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Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía de cuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuando son rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.

Cristalería de medición
Pipetas

Fig. 22: Pipetas

Son tubos de vidrio rectos, de longitud y grosor variable que se caracterizan por tener el extremo inferior ligeramente cónico. Se fabrican diferentes tipos, que han sido diseñados para diversos procederes de laboratorio, siendo utilizada básicamente para medir y/o transferir volúmenes exactos de líquidos. Las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, son las pipetas graduadas, principalmente las de 1, 2, 5, y 10 ml. Este tipo de pipeta tiene impreso en la parte superior un número que equivale a su capacidad volumétrica y a todo lo largo una escala graduada en ml, que indica numéricamente los espacios en que se divide el volumen total. Cada espacio a su vez se divide en 10 líneas equidistantes que corresponden a las subdivisiones volumétricas. Por ejemplo: En una pipeta de 5 ml de capacidad, la escala queda dividida en 5 espacios iguales, cada uno de los cuales equivale a 1 ml. Cada especio a su vez se subdivide en 10 líneas, equivalente cada una de ellas a 0,1 ml. Las pipetas serológicas, son similares a las graduadas, pero su capacidad es de 1 ml o menos, estando dividida en 0,1 y/o 0,01 ml. En el trabajo microbiológico se utiliza en ocasiones un tipo de pipeta no graduada, denominada pipeta de Pasteur, que puede ser fabricada en el propio 59

laboratorio con tubos de cristal fusible mediante su exposición a la llama del mechero de gas. Este tipo de pipeta suele emplearse cuando no se requiere precisar con exactitud el volumen a pipetear. Procedimientos para el manejo de las pipetas graduadas: 1. Sostenga la pipeta por su parte superior mediante los dedos pulgar y medio.

Fig. 23 : Forma correcta de sostener la pipeta.

2. Haga penetrar la pipeta en el líquido que va a ser aspirado. 3. Introduzca el otro extremo en la boca y aspire suavemente, observando simultáneamente la escala graduada, hasta que la columna de líquido sobrepase ligeramente la marca deseada. 4. Retire la pipeta de la boca y de inmediato tape el orificio con la yema dedo índice, ejerciendo la presión suficiente para evitar que el líquido descienda por gravedad. 5. Manteniendo la presión del dedo índice, proceda a retirar el exceso de líquido de la parte exterior de la pipeta, con un paño, gasa o servilleta limpia. 6. Introduzca la pipeta en el frasco o tubo donde se extrajo el líquido y haga que la punta contacte con la pared interna. Estando la pipeta en posición perpendicular ir aflojando la presión del dedo índice para propiciar que la columna de líquido descienda del por gravedad, hasta observar que la 60

Introduzca la punta de la pipeta en el frasco o tubo receptor. siendo arrastrado al retirarla. Al realizar la lectura volumétrica. Si la pipeta utilizada. Si la pipeta carece de franja esmerilada o coloreada no se debe soplar ya que están diseñadas para desestimar ese residuo sin que se afecte el volumen deseado. se soplarán las que estén marcadas en la parte superior con la letra "D" (to de livery) no debiendo soplarse las marcadas con la letra "C" (to contain). pues al retirar la pipeta parte del líquido trasegado quedarán adherido al exterior de la pipeta. En el caso de las pipetas serológicas. Fig. 61 . en la parte superior de la pared interna y nunca sobre el fondo. Proceda a aflojar la presión del dedo para distribuir el volumen deseado en cada tubo. evitar incurrir en el error de paralaje. tiene una banda esmerilada o coloreada en el extremo superior proceda a soplar para que salga y completar el volumen previsto. 9.curvatura en la superficie del líquido (menisco) contacte justamente sobre la línea correspondiente que marca el volumen deseado. proceda nuevamente a ejercer presión con el dedo índice para evitar que el líquido continúe descendiendo. que ocasionaría errores en la lectura. 24: Ubicación correcta del ojo para efectuar la lectura del menisco 7. En ese momento exacto. apoyando la punta. afectando la exactitud del volumen pipeteado. en el extremo de la punta quedará un pequeño volumen residual. Al vaciarse el contenido de la pipeta. 8. ocasionado por no estar el ojo del observador en el mismo plano horizontal con respecto al menisco.

. de diámetro y tamaño variable. en correspondencia con su capacidad volumétrica.000 ml.Probetas Fig. una escala graduada a todo lo largo que divide y subdivide el volumen total. Al igual 62 . Las más utilizadas en el trabajo microbiológico están comprendidas en el rango de 50 a 1. que se haya en la parte superior. 26 : Beaker Los Beaker son recipientes transparentes e incoloros que presentan una forma cilíndrica teniendo una longitud de casi el doble de su diámetro. En el borde del orificio. Están provistas de una base de fondo plano que posibilita que puedan ser colocadas en posición vertical sobre una superficie nivelada. la marca de 200C. y al igual que las pipetas. La mayoría tienen rotulado en la parte superior un número que indica su capacidad volumétrica. que es la temperatura de trabajo de este tipo de cristalería. similar al de las cafeteras. Se utilizan específicamente para medir volúmenes. presentan un pico. Beaker (Vasos de precipitados) Fig. 25 : Probetas Las probetas son recipientes cilíndricos y alargados de vidrio. Algunas probetas están provistas de tapa de vidrio esmerilado o plástica. para facilitar verter el líquido que contiene sin que se produzcan derramamientos.

tienen rotulado. el número que indica su capacidad volumétrica. la temperatura de trabajo (200C) y una línea alrededor del cuello que indica la marca de aforo. siendo los más empleados las cápsulas y los morteros. la inferior piriforme con el fondo plano. en los laboratorios se utilizan otros. tienen grabado el número que indica su capacidad volumétrica. fabricados de porcelana.que las pipetas tienen un pico en el borde la boca que propicia que se pueda verter el líquido que contiene sin que se produzca derramamiento. al igual que las probetas y las pipetas. Al igual que otros tipos de cristalería de medición. lo que permite colocarlos en posición vertical. Materiales de porcelana Además de los materiales de vidrio o de teflón. 27 : Matraces Las matraces son frascos de vidrio incoloros y transparentes que tienen una porción superior en forma de un fino tubo cilíndrico y alargado. la temperatura de trabajo (200C) pudiendo tener o no una escala graduada en ml. Se emplean para preparar disoluciones donde se requiere exactitud. Algunos están provistos de tapa de vidrio esmerilado. 28 : Cápsula de porcelana 63 . Matraces Fig. Al igual que otras cristalerías de medición. Cápsulas Fig.

Si la cristalería es nueva: Debe pasarse previamente por agua caliente para eliminar la presencia de vestigios fábriles. Al igual que las cápsulas presentan un doblez en forma de labio en el borde para verter su contenido. del mismo material.Son pozuelos de borde esférico. Después de escurrida se deja secar al aire o si se desea secado con mayor rapidez se puede introducir en una incubadora. Uso: Se utilizan regularmente como recipientes de disoluciones que van a ser sometidas a una medición de pH o para colocar medios de cultivo que se pretenden pesar. A diferencia de las cápsulas.. sin que se produzca derramamiento. 64 . fondo redondeado y tamaño variable. generalmente. con el extremo inferior redondeado. dejando actuar el desinfectante por un espacio de tiempo no menor de 4 horas. pudiendo tener el fondo plano o redondeado. Similar a un pequeño bate de pelota. son de mayor tamaño y están provistos de paredes más gruesas. Uso: Para triturar compuestos sólidos con ayuda del mazo. Después se sumerge en una solución de ácido clorhídrico al 1%. 29 : Mortero Los morteros son recipientes de porcelana. El mortero se complementa con una pieza cilíndrica adicional. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN La cristalería que vaya a ser utilizada en las investigaciones microbiológicas de laboratorio. Morteros Fig. aunque también se fabrican de vidrio. debe ser sometida previamente a un proceso de limpieza y desinfección antes de esterilizarla. con un doblez en forma de labio por un punto de su borde para facilitar verter su contenido. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. caracterizándose generalmente por ser de color blanco y tener las paredes delgadas lisas y muy pulidas. Posteriormente se lava con detergente. denominado mazo.

Cuando la cristalería haya sido utilizada: Si mantiene material infeccioso. Desinfectantes más empleados (ver Capítulo 6) PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA PARA SU ESTERILIZACIÓN Objetivo: Evitar que se vuelvan a contaminar con posterioridad a su esterilización y mantenerlas en esas condiciones hasta su utilización. individualmente. 65 . Después de la esterilización. Procedimiento: Después de desinfectadas. o en su defecto. o más tiempo si la mezcla ya ha sido utilizada y mermada su efectividad. fabricado específicamente para ese uso. las placas serán empaquetadas con papel de estraza. 30 : Taponeamiento de tubos con asa y algodón Placas de Petry: Después de ensambladas (tapa y caja) podrán ser colocadas dentro de un cilíndrico de metal inoxidable con tapa. procediendo a su secado en la forma explicada. Fig. durante 30 minutos. fregadas y secas: Tubos de ensayos: Se taponean con algodón y se envuelven con papel de estraza en grupos de 5 a 10 tubos. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. para evitar que el técnico o la persona encargada de la limpieza de la cristalería se contamine con microorganismos patógenos. debe ser sometida previamente a un proceso de esterilización en autoclave a 1210C. por haber estado en contacto directo con microorganismos o contiene cultivo de ésta. se friega con detergente. La cristalería así tratada. la cristalería se enjuaga para eliminar los restos groseros del material que contenía y se sumerge durante 10 ó 15 minutos en mezcla sulfocrómica. en parejas o en grupos de no más de 5 placas.

Posteriormente se enrollan en una franja de papel de estraza. Fig. 31 : Placas de Petry: a)Empaquetadas con papel de estraza. pero al mismo tiempo impida el paso hacia la boca del material que esté pipeteando. 32 : Pipetas: a)Taponeamiento con algodón. probetas y otras cristalerías similares: Se taponean con algodón y se retapan con papel de estraza. b)Empaquetamiento con papel de estraza Los erlenmeyer.Fig. 66 . b)Cilíndro de metal inoxidable para colocar las placas Las pipetas: Se taponean de tal manera que no dificulte la succión. el cual se ata fuertemente con un lazo al cuello o porción anterior de la cristalería.

¿Qué Ud. 3. ¿ Cuáles son las diferencias entre en erlenmeyer y un frasco de kitasato? 11. ¿Cómo funcionan los frascos goteros con tapa esmerilada? 13. 67 . Explique en orden cronológico los pasos que deben efectuarse durante la realización del pipeteo. 4. ¿ Cómo es una bureta? 12. ¿Cuáles son las características de la cristalería de medición volumétrica? 9. ¿Cómo se clasifica la cristalería general? 6. entiende por cristalería de laboratorio? 2. Describa el vaso de Koplin. 19. 23. Describa las características de los tubos de ensayo. 10. como las jeringuillas con doble envoltura. 22. Describa cómo Ud. CUESTIONARIO 1. ¿Para qué se utilizan regularmente los vasos de precipitado o Beaker? 20. ¿Qué otros recipientes además de los de vidrios se fabrican de porcelana? 21. ¿Cómo son las placas de "Petry"? 16. Explique cómo se fabrica el vidrio. ¿Cuáles son las características de la cristalería de almacenaje? 7. 15. Explique cuáles son los procederes establecidos para la limpieza y desinfección de la cristalería. prepara la cristalería para que se mantenga estéril después de la esterilización. Nombre los diferentes tipos de cristalería de medición volumétrica? 8. ¿Qué es el teflón y para qué se utiliza? 5. Precise semejanzas y diferencias entre una cápsula y un mortero. 33 : Erelenmeyer: a)Taponeamiento con gasa y algodón El resto de los materiales se empaquetan igualmente e incluso. Nombre los componentes del vidrio "Pyrex". algunos. Mencione las cristalerías de medición volumétricas. ¿Cuánto miden las láminas portaobjetos y las cubreobjetos? 17.Fig. 14. 18. Explique las diferentes causas de error en que puede incurrirse durante el pipeteo.

) Séptico: que produce la sepsis. los agentes físicos más utilizados son: el calor. sino incluyendo además a sus esporas. donde se requiere su eliminación. para destruir. compuestos orgánicos. Diferentes agentes empleados en la esterilización: Para la esterilización se emplean diferentes agentes físicos y químicos. ESTERILIZACIÓN Concepto: Esterilización significa: destrucción o eliminación de todas las formas de vida. Aséptico: libre de toda materia séptica o infecciosa. Bacteriostático: agente que inhibe las funciones de las bacterias. Términos empleados relacionados con la esterilización y la desinfección Sepsis: infección pútrida (putrefacto. Específicamente mediante el empleo de métodos físicos. en especial por medio de agentes químicos.CAPITULO 6 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN INTRODUCCIÓN La esterilización y desinfección son los métodos esenciales empleados en los laboratorios de microbiología. ocasionan específicamente la desnaturalización de las proteínas celulares. En relación con los agentes quími68 . corrompido. inhibir o separar a los microorganismos presentes en los diferentes objetos. las radiaciones y la filtración. Antisepsia: conjunto de procedimientos prácticos destinados a destruir o alejar los gérmenes patógenos. etc. Asepsia: método encaminado a prevenir la infección mediante la destrucción o evitación de los agentes infectivos. La mayoría de los métodos y agentes empleados. Bactericida: agentes destructor de bacterias. medio ambiente. Destruyen las diversas estructuras o inhiben su funcionamiento. lo cual a mediano plazo resulta letal para el microorganismo.. no limitándose exclusivamente a la estructura vegetativa. etc.

Debido a que las bacterias resultan más vulnerables en la medida en que estén más húmedas. Calor húmedo El calor húmedo es la variante más empleada. y se cumpla con los parámetros de eficacio.cos. inactivando su función osmótica. como por ejemplo. un equipo metálico provisto de un cierre hermético. diseñado para resistir la presión generada por la acumulación de vapor de agua. en consecuencia los puentes de hidrógeno de la membrana citoplasmática. calor húmedo a 1000 C. horizontales. Calor húmedo a presión El calor húmedo a presión se obtiene mediante el empleo del autoclave. El calor se utiliza de tres maneras diferentes: calor húmedo. etc. alcanzando valores de 121 C requeridos para la eliminación de las esporas para lograr una adecuada esterilización. solamente algunos. son destruidos. pero todos tienen en común una estructura similar. El formaldehído y el óxido de etileno ejercen un efecto letal sobre las esporas. 69 . El calor húmedo se emplea en los laboratorios de tres maneras diferentes. en dependencia de la magnitud del material a esterilizar. Calor húmedo a presión. con lo cual la temperatura aumenta. siempre y cuando el objeto o producto no sea termolabil. el calor generado provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. de manera similar que cuando se cocina un huevo duro. lo que trae como resultado la emigración incontrolada de los constituyentes intracelulares. etc. potasio. que ocasionan la muerte del microorganismo. como son: la aplicación del nivel de temperatura requerido y el tiempo de exposición al calor. de doble cámara. El calor El calor resulta un método muy eficaz para lograr una adecuada esterilización. como aminoácidos. calor seco y la incineración. Bajo estas condiciones.. En el mercado se comercializan diferentes modelos de autoclave: verticales.

quedando las paredes de ambas separadas entre sí por varios cm. 4. 8.Válvula termostática.Llave de paso para sacar el agua del tanque.Cámara externa. 20.Llave de paso de gas. 11.Llave de paso para suministrar agua al tanque. 12.Manómetro que indica la presión de la cámara interna. 34: Autoclave. siendo el lugar destinado para la colocación de los objetos y materiales que sé desean esterilizar. 18. Respiradero. En este espacio se acumula el vapor de agua procedente de la caldera que posteriormente pasa a la cámara interna. 9.Lave de escape de vapor. 3. 19. 7.Cámara interna. Prototipo standard del autoclave Cámara La cámara del autoclave consiste en un cuerpo cilíndrico de aproximadamente un metro de largo x 50 a 60 cm de diámetro.Llave que comunica la cámara externa con la interna.Termómetro.Quemador de gas. Puerta La puerta está articulada con bisagras en la parte anterior del equipo. 13 y l4.Cierre hermético de la puerta. 5. 2. 21. Vista frontal y lateral: 1. Llave que controla el nivel del agua.Puerta de seguridad.Fig.Válvula de seguridad. 15. que debido a su mayor diámetro rodea a la cámara interna en toda su longitud.Manómetro que indica la presión de la cámara externa. 10.Entrada de aire.Tanque de agua. 17. 16. Algunos modelos disponen de una segunda cámara denominada externa. a unos pocos cm de la cámara interna estando provista de un número variable de metálicas en posición radial que al ser cerrada mediante el de una manivela 70 . 6.Escape de agua de condensación.

medios de cultivo. etc. una para extraer el aire que quedó en el interior del equipo al cerrarse y la otra para propulsar la salida del vapor cuando la presión sobrepasa los límites admisibles. puede ser eléctrica o de gas. 71 . b) Revise la válvula de seguridad. y límpiela si estuviera sucia u obstruida. durante su funcionamiento. Fuente de calor La fuente de calor empleada para calentar el agua contenida en la caldera y se produzca vapor de agua. Válvulas Los autoclaves poseen dos válvulas. material quirúrgico. Esta última se denomina "válvula de seguridad". la caldera puede estar ubicada junto o separada de la cámara. En su interior se deposita el agua (destilada) hasta alcanzar el nivel adecuado. Manipulación del autoclave a) Revise el nivel del agua de la caldera y en caso de ser insuficiente. proceda a echar la cantidad requerida.ubicada centralmente. Caldera Según el modelo de que se trate. e) Encienda la fuente de calor. penetran en un reborde periférico situado en la parte frontal del autoclave propiciando un cierre hermético. Uso del autoclave El autoclave se utiliza regularmente para la esterilización de ropas. Instrumentos de medición Estos equipos disponen de un termómetro y un manómetro que permiten ir monitoreando la temperatura y la presión existente en el interior del autoclave. c) Introduzca en la cámara los objetos y materiales que se van a esterilizar y cierre herméticamente la puerta. d) Proceda a abrir la válvula de salida del aire.

es indicativo de que no se sacó todo el aire de la cámara. cierre la válvula. urea. ya que los restos de vapor que queden aún dentro de la cámara. al salir por la puerta. i) Cuando el termómetro y el manómetro marquen "O" proceda a abrir la válvula de salida de aire y espere a que salga el vapor residual. que consiste en un equipo similar al autoclave. para comenzar a contar el tiempo de esterilización. pueden ocasionar quemaduras al manipulador. asciendan. ya que esta acción puede provocar que los medios de cultivo que aún tengan más de 100 C al serle retirada abruptamente la presión. no debiendo por lo tanto ser esterilizados en auto clave. por lo que no puede garantizarse una esterilización eficaz con este método. recomendándose en ese caso aumentar un poco la presión para que el equipo alcance la temperatura requerida. No trate de reducir la presión abriendo la válvula de seguridad o la de salida de aire. Otras esporas resisten la temperatura de ebullición por más de una hora. que generalmente es de 15 a 20 minutos. desconecte la fuente de calor (hay modelos donde la fuente se apaga automáticamente) y espere hasta que el manómetro marque "O". Que se deterioran a temperaturas superiores a 1000C. A continuación. Calor húmedo a 1000 C El calor húmedo a 1000 C. se obtiene de dos maneras diferentes: 1. aunque puede extenderse a 30 minutos si el objeto o producto a esterilizar es demasiado grande. mediante este método se logra la destrucción de todas las formas vegetativas y de algunas esporas.f) Manténgase atento a la válvula de salida de aire. h) Transcurrido el tiempo de esterilización. abra la puerta el autoclave con sumo cuidado. Por ebullición: El líquido en cuestión es sometido a la acción del calor hasta alcanzar temperaturas de 100 C. expulsen los tapones de algodón y se derramen dentro del equipo. si se diera el caso. Cuando el vapor salga mediante un chorro continúo y sin intermitencia. siempre que la acción calórica se prolongue por 5 a 10 minutos. pues será indicativo de que el aire acumulado dentro del autoclave ha salido y que todo el espacio de la cámara está ocupado exclusivamente por el vapor de agua. El principio de este método consiste en someter el compuesto o medio de cultivo a esterilizar a una corriente de vapor a 1000C para lo cual se emplea el esterilizador de Arnold. Vapor fluente: El vapor fluente se utiliza para la esterilización de compuestos y medios de cultivo elaborados con determinados azúcares. con la diferencia de que no es hermético. ya 72 . gelatina. etc. g) Espere a que el termómetro marque 1210 C y el manómetro 15 lb/pgda3 de presión. de que la temperatura no se corresponde con la presión. 2.

2. Como ya se explicó en acápite de ebullición. la temperatura de 1000C resulta insuficiente para la destrucción de algunas esporas. 35: Esterilizador de Arnold: 1.Soporte.Agua destilada. De quedar alguna espora germinará y la célula vegetativa será destruida en la 3era. 7. para que las esporas que resistieron la primera exposición germinen en células vegetativas muy vulnerables a la temperatura de 1000C. 4. La exposición al vapor fluente del material a esterilizar será de 20 a 30 minutos. que consiste en exponer el material a esterilizar al vapor fluente durante tres días consecutivos por espacio de 30 minutos.Tuberia de escape de vapor.que el vapor producido por el calentamiento del agua.Termómetro. Fig. 73 . Al no acumularse el vapor. siempre que se deje la válvula abierta para que el vapor no se acumule. Exposición. 3.Resistencia eléctrica.Recuperador. nuevamente a la caldera. no aumenta la presión y por consiguiente la temperatura se mantiene en 1000C. 6. El autoclave puede sustituir al equipo de Arnold. con lo cual la temperatura se mantiene estable a 1000C. 5. conocida como "tyndalización". va saliendo por un condensador que lo traslada en forma de agua.Tapa. por lo que se requiere aplicar la esterilización fraccionada.

Calor seco El calor seco. Sin que pierdan su sabor natural. es un método conocido con el nombre de pasteurización. Su acción provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. 8. Con este método se eliminan los patógenos que con alguna regularidad puedan estar presentes en productos como la leche y bebidas alcohólicas. una resistencia eléctrica que ocupa todo el área del fondo del horno. 7.Fuente de calor. por cuyos orificios pasa el calor. 4.Ventilador.Puerta. 6. A diferentes niveles de altura están situadas las parrilladas en posición horizontal.Calor húmedo a menos de 1000C La aplicación del calor húmedo a menos de 1000 C. seguido de un enfriamiento inmediato. ideado en el siglo XIX por Luis Pasteur. etc. la cual queda cubierta por una tapa metálica perforada. Consiste básicamente en calentar el producto de 62 a 650 C durante 30 minutos o a 710 C durante 15 segundos. Fig.Tapa. donde serán colocados los materiales a esterilizar. aunque se comercializan otros de menor o superior tamaño. debido a las bajas temperaturas empleadas y el corto tiempo de exposición. es utilizado con regularidad en los laboratorios de microbiología.Termómetro. 5. así como la oxidación de ciertos componentes de la célula microbiana. que se disemina por todo el interior del horno.Salida de aire. El calor seco se obtiene por medio del horno. Bombillo. 36: Horno: 1. que está basado en el efecto de la temperatura sobre los microorganismos y sus enzimas.Botón del termostato. 3. con el objetivo de determinados objetos y materiales. por medio de un ventilador ubicado en una de las paredes laterales. 40 % de aproximadamente 80 cm cúbicos. un mueble metálico de forma rectangular o cuadrada. está situada la fuente de calor. 2. En su parte inferior o base. 74 .

así como un tiempo de exposición más extenso. 2. que debido al bajo porciento de agua que contienen no son penetrados suficientemente por la humedad generada por el vapor de agua de los autoclaves. Encienda la fuente de calor (automáticamente el ventilador comenzará a funcionar y el bombillo piloto se encenderá) 4. el termómetro y un bombillo piloto. ya que el calor seco no se distribuye uniformemente por todo el equipo como lo hace el vapor de agua. tenga acceso por igual en toda la superficie del material a esterilizar. Uso del horno El horno se utiliza para esterilizar cristalería de laboratorio. el botón para regular el termostato. encargado de expulsar el exceso de aire del interior del horno. Advertencia Cuando el horno haya alcanzado una elevada temperatura no debe abrirse para introducir o sacar algún material. Casi todos los hornos tienen dos puertas. Manipulación del horno 1. garantizando de esta manera que en el área del horno donde se alcance menos temperatura. Cierre firmemente la puerta. que en este equipo debe ser de 90 minutos a 2 horas. y para que el aire caliente circulante. aceites.En la parte superior externa se encuentra un orificio ocupado por un regulador. algodón etc. En la parte anterior. 3. 6. debidamente preparados cuidando de que queden separados entre sí y de las paredes del horno. Comience a contar el tiempo de esterilización. 5. una interna de vidrio que se halla dentro de un marco metálico y otra externa metálica forrada de amianto. Coloque en las parrillas los materiales a esterilizar. que por ser metálicas adquieren un mayor grado de temperatura y pueden quemar el material comburente empleado. Empleados 75 . objetos de metal. debajo o al lado de la puerta presentan un panel donde se encuentra el interruptor. accionando el interruptor y espere hasta que el horno se enfríe para extraer el material. La esterilización en horno requiere de una temperatura superior a la utilizada con el autoclave. apague la fuente de calor. Transcurrido el tiempo de esterilización. Gire el botón del termostato hasta que indique la temperatura deseada y espere a que el termómetro registre de 160 ó 180 C (en ese momento se apagará automáticamente el bombillo piloto). grasas sólidas o productos en polvo. ya que los paños. con la cual se cierra firmemente el equipo. exista la suficiente para que el material quede estéril.

Los mecheros de alcohol. a los microorganismos contenidos en las muestras y otros materiales contaminados que se determine carbonizar. en tanto que los mecheros son utilizados como fuente de calor para diversos propósitos y comúnmente en el trabajo diario para esterilizar. Mecheros Los mecheros son instrumentos de laboratorio diseñados para obtener una llama calorífica a partir de la combustión del alcohol o del gas. consisten. para este propósito se utilizan el incinerador y el mechero. Incineración La incineración se logra. en un pequeño recipiente de vidrio de forma redondeada. exponiendo directamente a la acción de la llama. 2. Fig. mediante la incineración. se utiliza para tapar el mechero y que no se evapore el alcohol. 37 : Mechero de alcohol: 1. Una pequeña capucha cilíndrica de metal con el extremo superior redondeado. El incinerador se emplea básicamente. para llevar al estado de cenizas materiales contaminados. a los instrumentos de siembra.Alcohol.Tapa. 76 . que por su peligrosidad deben ser destruidos totalmente.pueden inflamarse por la penetración abrupta de oxigeno y ocasionar quemaduras al manipulador. estando provisto por su parte superior de un pequeño saliente cilíndrico por donde se enrosca un pequeño tubo metálico de unos pocos mm de diámetro a través del cual se inserta una mecha cuyo extremo posterior queda en contacto con el alcohol contenido en el recipiente. con el fondo plano.

muy próximo al extremo donde se enrosca a la base. donde se inserta ajustadamente. 3. una fina manguera que se inserta por su otro extremo a una llave de gas. En ambos tipos de mecheros. con una presilla de seguridad. semejante a una alianza. tiene aproximadamente 6 ó 7 mm de diámetro x 6 ó 7 cm de largo. pero todos están estructurados básicamente por tres partes separables: La base. Existen diferentes modelos. en dependencia del modelo de que se trate. Regulador de aire: El regulador de aire está compuesto por un collarín metálico de forma anular. Tiene un diámetro de 4 a 6 cm y presenta en la parte superior un pequeño tubito en posición horizontal de unos 6 mm de diámetro denominado tobera. el tubo quemador y el regulador de aire. La base: Es una pieza metálica de forma circular y fondo plano. lo que permite mantener el tubo quemador en posición vertical. Está provisto de un orificio circular de un diámetro similar al del tubo quemador. 77 . quedando en contacto con la base. El mechero de "Bunsen" convencional.Mecheros de gas Son los mas empleados. Fig. Tubo quemador: El tubo quemador puede tener un diámetro variable. en tanto que el mechero de "Fisher" es mucho más grueso con una longitud también mayor y está provisto en su extremo superior de un quemador que propicia una llama grande e intensa. el tubo presenta un orificio de un diámetro similar al del collarín que regula la entrada de aire. 38 : Mechero de gas 1. que se inserta calibradamente en el extremo inferior el tubo quemador. 2.

Aproxima la llama de un fósforo o de una fosforera al orificio del tubo quemador por donde sale el gas para encender el mechero. para lo cual se hará girar al collarín hasta hacer coincidir su orificio con el del tubo quemador. b) Mechero de Fisher Manipulación del mechero 1. Si empobrecemos la llama cerrando la entrada de aire. 39: a) Mechero de Bunsen. en mayor o en menor grado se producirá la entrada de aire en el tubo quemador lo que propiciará la mezcla gas . calibrado a décimas de mm que regula el paso del gas hacia el tubo quemador. Revise que las diferentes partes del mechero. 2. no luminosa y de gran poder calorífico. Regule la salida del gas en dependencia de la intensidad de la llama. 4. el gas que atraviesa la manguera y la tobera se dirige al centro de la base. 40: Diferentes zonas de la llama del mechero 78 . luminosa y poco calorífica. En la medida en que se enriquezca el gas con el aire. obtendremos una llama de color amarillo rojizo. Una mezcla rica en aire produce una llama azulosa. 5.Fig. estén debidamente acopladas y ajustadas. Fig. Al realizar esta operación.aire (combustible y comburente). 3. Abra ligeramente la llave de gas. donde hay un dispositivo provisto de un fino orificio. Ajuste la entrada de aire hasta obtener la llama deseada. Cuando esta operación se realiza. Así será la llama.

Se recomienda retirar de su alrededor. para introducir previamente el asa. La introducción total del instrumento en la llama tiende a aumentar la intensidad de la formación de aerosoles. con los restos de inoculo.Los instrumentos de siembra (asas o agujas de platino o nicrón) que contengan restos de muestra o de cultivos. resiembras.Radiaciones ionizantes. fenómeno mediante el cual. Por su parte externa con el objetivo de eliminar los microorganismos contaminantes. durante su uso. mediante su exposición directa a la llama. Radiaciones ionizantes Deben su acción a la capacidad de producir partículas que al interaccionarse ceden la energía suficiente para producir ionización. Advertencia . . deben ser introducidos gradualmente en la llama del mechero de la siguiente manera: de inicio se expondrá el extremo del instrumento a la zona azul de la llama y tan pronto se ponga al rojo. que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. . potencialmente peligrosos para el manipulador. Por las mismas razones debe mantenerse el pelo recogido y concentrarse totalmente en la actividad que se esté realizando. LAS RADIACIONES Las radiaciones empleadas en microbiología como método de esterilización son esencialmente de dos tipos: . como paso previo a la realización de siembras. Lo idóneo cuando se trabaja con muestras o cultivos. líquidos inflamables (alcoholes para coloraciones) y otros materiales similares. 79 .Uso del mechero El mechero tiene una función utilitaria muy diversa: se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de nicrón o platino. es disponer de un recipiente con arena humedecida en fenol. papeles (utilizados para la esterilización de la cristalería) así como. El mechero también es utilizado para fijar frotis en láminas portaobjetos y calentar medios de cultivo durante su preparación. se introduce gradualmente el resto del alambre hasta que también se ponga al rojo vivo.Radiaciones no ionizantes. Para flamear la boca de los tubos de ensayo y otras cristalerías estériles. distribución de medios de cultivo en placas y otros procederes.El empleo del mechero entraña un peligro potencial de quemaduras en la piel o en la ropa. por lo que se debe tener sumo cuidado con su manejo. antes de flamearla a la llama del mechero.

son muy efectivas contra las esporas. cuartos de siembra. Advertencia: La exposición a las radiaciones ionizantes son nocivas para las células del cuerpo humano. 80 . .Debe chequearse periódicamente la lámpara para determinar su estado de agotamiento. se ven privados de uno o mas electrones mediante la acción de un campo eléctrico. por lo que si su empleo es reiterado deben emplearse las medidas de protección radiológicas establecidas. siempre y cuando se cumpla la indicación referida al tiempo de exposición y se tenga en cuenta la distancia entre la ubicación de la lámpara y el objeto o espacio a esterilizar. son las producidas por lámparas de luz ultravioleta cuyo expectro está comprendido en rango de longitud de onda de 2600 a 2700 . pues ocasiona daños en la vista e incluso pueden producir quemaduras cuando la exposición es prolongada. piso y techo del inmueble o la parte externa del mobiliario. además de que son agentes catalizadores de la oxidación de las grasas. sin embargo su aplicación resulta efectiva para la esterilización del ambiente de quirófanos. equipos médicos. lo que acarrearía numerosos trastornos. por lo que el interruptor debe estar ubicado fuera del local. sino además. Advertencias . Su efecto esterilizante depende de que la energía propagada. por su elevada capacidad de penetración. que en caso de ser significativo reduciría su capacidad germicida. las no ionizantes tienen poca capacidad de penetración. Radiaciones no ionizantes A diferencia de las radiaciones ionizantes. ejercen una acción letal sobre las diversas estructuras. catéteres. átomo o ion estrictamente neutro. Las radiaciones de luz ultravioleta además de ser germicidas. Así como para las paredes. el ADN y las proteínas celulares. Los rayos gamma. mutación genética o muerte. procedente de sus radiaciones electromagnéticas (luminosas) sean absorbidas por la célula microbiana. rayos x y rayos catódicos. jeringuillas plásticas y alimentos. etc. En el trabajo diario la lámpara se debe encender 2 ó 3 horas antes de comenzar a trabajar en el local.una molécula. oxidando las proteínas y los ácidos nucleicos. Aplicación: El poco poder de penetración de estos rayos lo hacen inefectivos para esterilizar compuestos o medios de cultivo.No se debe entrar ni permanecer en ningún local que tenga encendida la lámpara de luz ultravioleta. Las radiaciones no ionizantes más empleadas en los laboratorios de microbiología y en determinadas áreas del ámbito hospitalario. Aplicación: Se utilizan regularmente para la esterilización de inyectables. no solo por sus propiedades ionizantes. para dar lugar a la inactivación de las enzimas.

con el propósito de que los microorganismos que contiene sean retenidos y el líquido filtrado quede estéril. retienen a la mayoría de los microorganismos. medios azucarados. ya que algunos de los tradicionalmente utilizados no pueden retener el paso de los virus. tipo millipore. Preparación de los filtros Fig. que se fabrican con diámetros tan pequeños que imposibilitan el paso de los virus. Características de los filtros Los filtros se fabrican con diversos materiales: amianto. En la actualidad se están empleando discos de membrana de celulosa para filtros.. 41: Filtros: a) Filtro Seitz. b) Bujia de Charberland. y provistos de porosidades microscópicas de un diámetro menor que la talla promedio de los microorganismos. Empleo: La filtración se utiliza para esterilizar compuestos termolábiles como: el plasma. para los que no debe emplearse el calor como método de esterilización por ser termolábiles. no es una verdadera esterilización. por lo que de hecho. algunos como los de amianto se comercializan en forma de discos de algunos cm de diámetro por varios mm de grosor. se hace pasar un líquido contaminado a través de un filtro. urea. los cuales tienen en común ser muy compactos. La eficacia de este método depende del tipo de filtro empleado. etc. 81 . así como filtros HEPA que se utilizan para retener las partículas presentes en el aire durante la aplicación del flujo laminar. vitaminas. vidrio poroso o porcelana. aunque en la práctica.FILTRACIÓN La filtración es un método mediante el cual.

procediendo a taparlo con la tapa de rosca. Conectar la bomba de vacío: La comprensión centrífuga axial (de su eje) transformará la energía cinética en energía de presión. 2.Cuando se emplean filtros en forma de disco. se le retira la envoltura de papel y se inserta el extremo de una manguera al tubo del frasco de kitasato y el otro extremo se acopla a una de vacío. denominado filtro "Seitz" que presenta en la parte superior una tapa de rosca metálica y en la inferior un tubo recto. en colocarlo en posición horizontal en el interior de un soporte metálico de forma cilindra. No se debe esterilizar en horno. originando una pre82 . 42 : Filtro Seitz ensamblado en el kitasato Preparación previa Cuando vaya a ser utilizado. el procedimiento para su montaje consiste. una vez ensamblados se empaquetan con papel de estraza y son esterilizados en autoclave a 1210C durante 20 minutos. Destapar el filtro "Seitz" y verter en su interior el líquido que se desea esterilizar. Procedimiento 1. El filtro y el frasco de kitasato. Fig. fino y delgado que se encuentra insertado en el centro de la base presentando una escotadura oblicua en su extremo distal que le proporciona una terminación puntiforme que se utiliza para insertarlo en el orificio de caucho que se encuentra tapando a un frasco de kitasato. ya que el calor seco puede dañar el tapón de caucho. de unos 6 cm de diámetro aproximadamente 12 cm de largo.

d) Accionar la bomba de vacio para que se produzca la succión y el líquido pase estéril al kitasato Advertencia: Los discos de amianto se utilizan una sola vez. b) Verter el líquido a filtrar.sión negativa en el interior del frasco de kitasato al serle extraído todo el aire acumulado. DESINFECCIÓN La desinfección es un método utilizado en los laboratorios de microbiología para provocar la muerte de los microorganismos. Fig. el cual pasará a través del filtro. lo que permite su reutilización. c) Cerrar el filtro. la efectividad de los desinfectantes depende de su accesibilidad sobre el objeto o material a des83 . lo que provocará la succión del líquido. 43: Proceso de filtración: a) Ensamblar el kitasato a la bomba de vacio. quedando retenidos los microorganismos en su superficie acumulándose estéril en el kitasato. debido a los efectos tóxicos que producen sobre las estructuras y los procesos metabólicos de la célula microbiana. pero los de vidrio poroso o porcelana se pueden limpiar con facilidad. que determinadas concentraciones pueden ser letales. Mediante el empleo de productos químicos denominados desinfectantes.

gargarismos o colirios. Desnaturalizando las proteínas. intoxicación respiratorias o toxemias.) Detergentes catiónicos (compuesto de amonio o cloruro de benzalconio) Bicloruro mercúrico al 1: 1000 Otros.selectiva. estando restringido su empleo para la desinfección de objetos. material o ambiente que se desea desinfectar. interfiriendo las reacciones enzimáticas o afectando el funcionamiento de ADN. Lo primero que hay que hacerse. materia orgánica o ambientes. teniendo en cuenta su poca o suficiente capacidad de penetración en el tratamiento de las sustancias orgánicas y tercero. seleccionar el desinfectante que resulte mas eficaz para ese objetivo. removiendo los grupos sulfhídricos libres. son los siguientes: Fenol del 2 al 5 % Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico del 40-80 % Formaldehído al 4 % Gluraldehido al 2 % Peróxido de hidrógeno al 6 % Sales de iones pesados (mercurio. Selección de los desinfectantes El hecho de que todos los desinfectantes tengan la capacidad de matar a los microorganismos. Los desinfectantes actúan sobre la estructura vegetativa de los microorganismos de diferentes maneras. 84 . Algunos desinfectantes como por ejemplo. determinado porque siga siendo tóxico para los microorganismos pero que al mismo tiempo. zinc.. pero solo algunos son capaces de destruir las esporas. siempre y cuando cumplan con el principio de toxicidad . no significa que pueda emplearse cualquiera sin una previa selección. pueden ser empleados como productos tópicos. cerciorarse de que su empleo no produzca deterioro del objeto a desinfectar. debiendo manipularse con sumo cuidado ya que el contacto accidental con algunos de ellos. provocando la ruptura de la membrana citoplasmática o la pared celular. puede ocasionar lesiones tisulares o dermatitis y su aspiración. cobre. etc. lo segundo. La mayoría de los desinfectantes son muy nocivos para los tejidos. es la caracterización del objeto.infectar y que las condiciones ambientales sean favorables para la desinfección así como que la exposición se prolongue durante el tiempo predeterminado. sean relativamente inocuos para las células del paciente. Los desinfectantes mas empleados en las instituciones de salud. el alcohol y otros compuestos químicos..

6. 4. determina la temperatura y la presión del equipo? 85 . CUESTIONARIO 1. ¿Qué es la esterilización? ¿Cuáles son los diferentes efectos que se producen sobre los microorganismos sometidos a procesos de esterilización? Mencione los agentes físicos empleados en la esterilización.La aplicación de estos productos químicos se realiza de manera diferente. Desinfección por aplicación directa: Aplicar con ayuda de un algodón. 5. Advertencia: Debido a que muchos desinfectantes tienen poca actividad sobre las sustancias orgánicas.: Consiste en sumergir los objetos en un recipiente apropiado hasta cubrirlos con la solución desinfectante. 2. Las sustancias antisépticas más utilizadas en el laboratorio para uso externo son las siguientes: Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico al 70 % Formoaldehído al 1 % Hexoclorofeno al 2 % Yodopuvidona al 4 % Hipoclorítico de sodio o calcio al 1 %. para la desinfección de ambientes especiales. puesto de trabajo y en menor grado las paredes y el suelo. 2. 7. el desinfectante a la superficie del objeto de que se trate: mesa. ropas. Desinfección por gasificación: Algunos desinfectantes como el formaldehído. de acuerdo con lo que se quiera desinfectar: 1. se pueden emplear en su estado gaseoso. 3. Desinfección por sumersión. 3. mobiliarios y otros artículos. gasa o paño. Cuáles son las diferentes formas en que se emplea el calor como agente esterilizante? ¿Cuál es el agente esterilizante que se pone de manifiesto en el calor húmedo a presión? ¿Cómo se denomina el equipo empleado en los laboratorios para producir calor húmedo a presión? Durante la esterilización en autoclave ¿cómo Ud. resulta pertinente que sean removidos previamente del el objeto que se vaya a desinfectar con agua y detergente.

¿Qué cuidados debe tenerse en cuenta con el empleo de la luz ultravioleta? 23. Mencione las diferentes partes del mechero de gas. 22. Nombre los desinfectantes empleados con mayor frecuencia y sus respectivas concentraciones. 15. regula la entrada de aire al mechero? 18. ¿Cómo Ud. Mencione los diferentes métodos de desinfección. Para qué se utiliza regularmente el mechero de gas. 8. 19. 16. ¿Que tipo de materiales se deben esterilizar con filtros? 24. 11. Explique paso a paso el funcionamiento del horno. ¿Cómo se denomina la lámpara utilizada en los laboratorios para esterilizar? 20. ¿De qué depende el efecto esterilizante de las radiaciones no ionizantes? 21. ¿En qué lugares se aplica la esterilización con luz ultravioleta. ¿Cuáles son los efectos nocivos que provocan los desinfectantes sobre los microorganismos? 27. ¿Cuál es la diferencia entre el mechero de "Bunsen" y el de "Fisher?" 17. Explique cómo usted realiza una esterilización con filtro 25. ¿Cuál es la fuente de calor del horno? 14. ¿Cuáles son las precauciones a tener en cuenta al concluir la esterilización en autoclave.¿Por qué causa el agua empleada para la esterilización en autoclave debe ser destilada? 9. ¿Cómo se denomina el equipo a utilizar en la esterilización con calor seco? 12. Explique paso a paso el funcionamiento del autoclave 10. 86 . ¿Por qué la temperatura del horno y el tiempo de esterilización deben ser mayores que cuando se emplea el autoclave? 13. 28. ¿Cuál es la diferencia entre esterilización y la desinfección? 26.

Requerimiento de temperaturas Cada especie de microorganismo se desarrolla óptimamente en un rango. el lado o debajo de la puerta externa. lo cuál puede comprobarse mediante la observación de un termómetro acoplado al equipo con una escala de 0 -700 C. provisto de múltiples paneles. La diferencia sustancial con respecto al horno radica en que el nivel máximo de temperatura no excede de los 60 a 700 C. se incluyen dentro de este concepto. El baño de María. dispone de un panel donde se encuentra el interruptor. temperatura específica (termofília). Entre los mas utilizados en el laboratorio de microbiología se encuentran: 1. con excepción de algunos modelos ya en desuso construidos de madera. INCUBADORA El diseño industrial de las incubadoras es similar al del horno. calentadores y doble puerta. la incubadora está provista de un número variable de parrillas metálicas intercambiables. el cuál está rodeado de una escala metrada y un bombillo piloto que indica mediante su apagado o encendido de forma automática. donde se colocan los materiales a incubar. En su interior. Se trata de un mueble rectangular o cuadrado de unos 80 cm3 . el funcionamiento del termostato. empleados en la esterilización mediante el calor. en lo referente a su forma. La incubadora o estufa 2. el botón para regular la temperatura. Las autoclaves. la interna de cristal y la externa metálica. Al igual que el horno. Sobre la base de esos requerimientos se clasifican de las siguientes maneras: 87 . pero en este capítulo nos referiremos específicamente a otros equipos que también producen y distribuyen calor.CAPÍTULO 7 EQUIPOS CALORIFICOS INTRODUCCION Son equipos diseñados para producir y distribuir calor. siendo ajustada generalmente para que produzca de 35 a 370 C. pero que son empleados para otros menesteres. hornos y otros instrumentos similares. estructura y tamaño.

aunque menos óptimamente. Cuadro 5: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxígeno. CLASIFICACIÓN Aerobios estrictos Microaerofílicos Anaerobios Facultativo AEREACCIÓN Requieren oxígeno a una tensión similar a la del aire ordinario. Pueden adaptarse a vivir en presencia o ausencia de oxígeno. CLASIFICACIÓN PSICRÓFILOS MESOFILOS TERMOFILOS RANGO DE TEMPERATURA ÓPTIMO PARA EL CRECIMIENTO DE 15 A 20 C DE 30 A 37 C DE 50 A 60 C La mayoría de los microorganismos patógenos al hombre. 88 . acorde a las necesidades de oxígeno de cada microorganismo. Cada uno de estos grupos se subdivide a su vez en obligados y facultativos. Requieren de una tensión de oxígeno inferior a la del aire. mientras que los facultativos son capaces de desarrollarse. microaerofílicos. Requieren de un ambiente privado totalmente de oxígeno.Cuadro 4: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su termofilia. Clasificación de los microorganismos de acuerdo con sus necesidades de oxígeno De ahí. que deban emplearse diferentes métodos de incubación que propicien las necesidades específicas del microorganismo en estudio. por lo que logran establecerse sin grandes dificultades en diferentes áreas anatómicas del organismo. debido entre otros factores. condiciones adecuadas de aereación. Los primeros requieren obligatoriamente. son mesófilos. Además de una temperatura óptima que favorezca el aceleramiento de su crecimiento. así como otros que forman parte de la microbiota residente o transitoria. a que la temperatura corporal resulta compatible con su temperatura optima de desarrollo. la incubación debe proporcionar además. anaerobios y facultativos. por debajo o por encima de ese rango. disponer de la temperatura que se especifica en cada clasificación. En ese sentido se clasifican en: aerobios.

ya que ellas utilizan el oxígeno presente en el aire ordinario que se encuentra en el interior del equipo. Incubación de bacterias que requieren de CO2 : Todos los microorganismos requieren carbono en forma de CO2 y la mayoría utilizan el que está presente en el aire. las placas o tubos sembrados. Fig. que proporcionan a los microorganismos microaerofílicos una mayor tolerancia al oxígeno. para que mantenga la humedad necesaria y una vela. la cual se encenderá procediendo de inmediato a cerrar el frasco. conjuntamente con los cultivos se introduce un pedacito pequeño de algodón humedecido en agua. La llama utilizará como comburente parte del oxigeno que quedó encerrado dentro del frasco. se le debe suministrar durante la incubación. el método más empleado para propiciar esas condiciones. Incubación de bacterias microaerofílicas: Como estas bacterias requieren de una baja tensión de oxígeno para poderse desarrollar. Cuando este proceso haya concluido la llama se apagará y en el interior del frasco producto de la combustión quedará una atmósfera con un 10 % de CO2. 44: Método de la vela 89 .Incubación de bacterias aerobias estrictas: Las bacterias aerobias estrictas no requieren que la incubadora tenga ninguna adaptación especial. consiste en sembrar las muestras en medios de cultivo que contengan Fe2Co4. para lo cual existen diversos todos: a) Método de la vela: Es muy sencillo de realizar. aunque pueden emplearse procedimientos físicos oxirreductores para este propósito. pero aquellas especies que necesitan este elemento en mayor proporción. Consiste en colocar en el interior de un frasco de cristal de tamaño apropiado y provisto de tapa de rosca. metabisulfíto de sodio o piruvato de sodio. Seguidamente el frasco con los cultivos será colocado en el interior de una incubadora ordinaria.

Después de realizada la incubación se efectuará en la misma incubadora que se emplea para los cultivos aerobios. Incubación de bacteria anaerobias La incubación de bacterias anaerobias se puede efectuar por diferentes métodos: a) Siembra en medios oxirreductores. b) Empleo de la jarra de "Brewer". diseñadas para extraer un % de 02 deseado e intercambiarlo por un gas sustituto (CO2). tioglicolato sódico que consume él oxigeno. se cubre con la apa de "Brewer". agar anaerobio al glicolato u otro similar se vierte sobre la caja de una placa de "Petry" corriente y después de solidificado se le coloca encima una tapa especial de vidrio denominada cubierta de "Brewer". Siembra en medios de cultivo oxirreductores En medio de cultivo líquido: El medio empleado contiene un compuesto oxireductor. El tioglicolato consume el oxigeno en el pequeño espacio de aire. estableciendo condiciones anaerobias. 90 . En medio de cultivo sólido: Un medio de cultivo especial. 45 : Placa de Brewer Realizada la siembra. c) Incubadora para anaerobios. procediéndose a su incubación en una incubadora común para cultivos aerobios. Fig. estableciendo condiciones anaerobias. la cual está diseñada para quedar apoyada sobre los bordes de la caja interior y sobre el perímetro externo del medio de cultivo de manera que en el área central del cultivo queda encerrado un espacio de aire.b)Incubadora de CO2: Son incubadoras especiales.

En una de ellas se instala una manguera conectada a una bomba de vacío para extraer el aire acumulado en el interior de la jarra. de manera que no quede herméticamente cerrada. se produce a colocar la tapa. provisto de una tapa que propicia un cierre hermético mediante un tornillo ubicado en su porción central. Cuando la capacidad de la jara es completada con este gas. 91 . unas 10 placas con cultivo. no debiendo abrirse antes de las 48 horas. La tapa dispone de dos válvulas. se aprieta el tornillo para hermetizarla. para lo cual se enroscará el tornillo lo cual evitará que se produzca una explosión cuando se le suministre hidrógeno. En estas condiciones la jarra es colocada en el interior de la incubadora para que le proporcione a los cultivos el calor necesario. El poco oxigeno que puede quedar aún en el interior de la jarra es eliminado por el catalizador platinado que al activarse hace que se combine con el hidrógeno para formar agua o agua y dióxido de carbono. La tapa tiene instalada un elemento de calefacción rodeado de un catalizador platinado. Fig. La primera dosis de hidrógeno se debe botar para que salga el aire de la manguera. 46: Jarra de Brewer Funcionamiento Después de introducidas las muestras de cultivos.Empleo de la jarra de "Brewer": Es un recipiente cilíndrico. La jarra tiene un diámetro y altura que permite colocar en su interior (una encima de la otra). estableciendo finalmente condiciones anaerobias. Por la otra válvula se le suministra el hidrógeno para reemplazar el aire.

En la práctica el baño de agua sin regulación termostática se emplea casi exclusivamente cuando se requiere temperatura de ebullición. 92 . comúnmente conocido como "baño de Maria" es utilizado en diversos procederes de laboratorio. Como se puede apreciar el empleo de este procedimiento es engorroso por lo laborioso que resulta y la imposibilidad de mantener estable el nivel de temperatura de la muestra. quede por debajo del nivel del agua. dentro del cual se verterá agua destilada hasta alcanzar el nivel necesario. En estas condiciones. durante todo el tiempo que dure la exposición de la muestra al calor. debiendo quedar a la misma altura que la muestra. que el material a examinar depositado dentro de un tubo de ensayo. (Baño de María) El baño de agua caliente. para que el calor se distribuya lo mas uniformemente posible por todo el fondo del recipiente. mantiene por algunos momentos la intensidad calorífica. el recipiente se coloca sobre una fuente de calor. Cuando se emplean hornillas eléctricas. volviendo a encenderla cuando la columna de mercurio comience a descender manteniendo este control. Baño de agua caliente sin regulación termostática Cuando se recurra a esta variante se debe emplear un recipiente metálico o de vidrio de fondo plano. debiendo bajarse la llama o incluso apagarla cuando el termómetro marque dos o tres grados por debajo de la temperatura deseada. ya que aún después de apagada. de manera. el recipiente puede ser separado de esa fuente de calor. con la ventaja que nos permite disponer de mas espacio y estudiar una mayor cantidad de cultivos. Cuando se utiliza el mechero de gas debe situarse sobre el trípode una malla de amianto. Conjuntamente con la muestra será introducido en el baño un termómetro de mercurio colocado previamente dentro de un tubo de ensayo. Baño de agua caliente. Mediante este método se pueden alcanzar valores por encima de la temperatura ambiente hasta un máximo de 1000 C con o sin regulación termostática. con similar capacidad que las incubadoras para cultivos aerobios que funciona bajo el mismo principio que la jarra de Brewer.En la actualidad se comercializan diversos productos oxirreductores que se introducen en la jarra con los cultivos y suplen la función de esta. que puede ser de gas o eléctrica. faltando 2 ó 30 C. es decir. sin ser necesario hacer vacío para extraer el aire ni inyectar hidrógeno. Incubadora para anaerobios Se trata de un moderno equipo.

las cuales deben quedar por debajo del nivel del agua. ubicada generalmente en la base del equipo. De acuerdo al modelo su tamaño será variable. Importante El agua a emplear para el baño de agua caliente. pero con la capacidad suficiente.Baño de agua con regulación termostática Se trata de un equipo diseñado con material inoxidable que tiene la forma de un cajón rectangular. Algunos modelos cuentan con un termómetro de mercurio acoplado. Fig. como para permitir la colocación en su interior de varias gradillas. En su efecto se debe introducir un termómetro dentro de un tubo de ensayo. Estos equipos siempre son eléctricos. ubicado generalmente en el extremo posterior. Algunos modelos están provistos de un aditamento similar a un pequeño ventilador. lo que propicia que la temperatura se mantenga homogénea. Al ser encendido el equipo. Después de accionar el interruptor se gira el botón hasta que indique la temperatura deseada y se hace girar igualmente el botón del "Timer" para indicar el tiempo requerido de exposición al calor. las aspas comienzan a girar agitando constantemente el agua. la cual es regulada por un termostato que mantiene automáticamente el grado de temperatura al nivel deseado. debe ser siempre destilada. A continuación se introducen las gradillas con los tubos que contienen las muestras. El calor es suministrado por una resistencia eléctrica. ya que las sales que el agua cruda al evaporarse tiende a formar capas sobre las paredes internas y el fondo del depósito pueden deteriorar al equipo. que va registrando la temperatura del agua. 47 : Baño de agua Funcionamiento En el interior del equipo se vierte agua destilada hasta alcanzar el nivel pertinente. 93 . y colocarlo en la gradilla debiendo quedar el vástago al mismo nivel que las muestras. sumergido en el agua.

2. 12. 9. 17. 15. 6. puede proporcionar una atmósfera microaereofílica? ¿Cómo Ud. ¿Para que se utiliza la incubadora? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo al rango de temperatura óptima para su desarrollo? ¿Por qué causa los microorganismos mesófilos son los que con mayor frecuencia infectan al hombre? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxigeno? ¿Cómo Ud. 4. ¿Cuales son las diferencias y semejanzas entre el horno y la incubadora? Describa el diseño o modelo de una incubadora. Mencione los diferentes métodos de incubación anaeróbica. 10. ¿Para que se utiliza la jarra de "Brewer?" Explique cómo es el funcionamiento de una jarra de "Brewer" ¿Cuántos tipos de baño de agua Ud. 11. puede proporcionar un 10 % de CO2 a las bacterias que así lo requieran? Describe el método de la vela. En el laboratorio de microbiología se emplea frecuentemente para inactivar el complemento de sueros que van a ser sometidos a procedimientos serológicos.Uso El baño de agua caliente. 13. tiene diversos usos. 8. 14. 7. 5. conoce? ¿Cuál es la fuente de calor de los baños de agua con regulación termostática? ¿Por qué causa se debe emplear agua destilada en los baños de agua? ¿Cuál es la función de las aspas que poseen algunos baños de agua? ¿Cómo se regula la temperatura del baño de agua? 94 . 16. 3. CUESTIONARIO 1.

una lente de aumento. lo que impidió a los hombres de ciencia ver sus respectivas morfología y estructuras. diseminándose gradualmente en el aire. acerca de las causas que originaban las enfermedades infecciosas eran meramente especulativos y por consiguiente carentes de rigor científico. basándose en el principio funcional del telescopio astronómico. como: protozoarios. en gran medida. originadas por la interacción de los compuestos orgánicos. que al evolucionar dieron lugar a la biogénesis de las bacterias primitivas. hayan sido durante siglos y sean en la actualidad. El microscopio compuesto fue diseñado y construido por el inglés Robert Hooke. italiano. los suelos y las aguas. afectando igualmente a la especie humana desde el surgimiento del hombre primitivo hasta nuestros días. estudiar su comportamiento y asociarlos después como los agentes causales de los procesos morbosos y/o letales. consistió en un tubo cilíndrico de unos 15 cm de longitud. al que insertó en cada extremo. transformándose en otros tipos de microorganismos más evolucionados. de ahí que los microorganismos patógenos. inventado a principios de ese siglo por el físico-matemático.CAPITULO 8 MICROSCOPIO INTRODUCCIÓN La tierra se formó hace miles de millones de años y desde sus albores se desarrollaron los primeros microorganismos a partir de las estructuras pre-biológicas existentes. El microscopio de Hooke. A pesar de que los microorganismos ya existían antes que el hombre y de haber sido durante milenios los causantes de diversas enfermedades infecciosas. los agentes infecciosos causales de la morbi-mortalidad en plantas y animales. debido esencialmente al tamaño microscópico de los diversos gérmenes que imposibilita su observación a simple vista y no disponerse en esas épocas de instrumentos técnicos como el microscopio que dieron esa posibilidad. que dio lugar el surgimiento de la microbiología como ciencia. por el perfeccionamiento de las técnicas microscópicas. Con el decursar del tiempo. los conocimientos que el hombre tuvo durante siglos. estando su desarrollo ulterior influido. Galileo Galilei. algunos fueron afectados por la acción de diversos agentes mutagénicos que alteraron su expresión fenotipal. correspondiendo por lo tanto a los microorganismos haber sido los primeros seres vivos del planeta. hasta poblar todo el globo terráqueo. hongos y algas. El invento del microscopio fue el punto de partida. en el año1665. grandes epidemias y de pandemias que diezmaron poblaciones enteras. El tubo a su vez 95 .

DIFERENTES TIPOS Se fabrican dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. relacionadas con el grosor de las preparaciones o el empleo deficiente de iluminación. podían proporcionar una ampliación suficiente. En 1668. así como bacterias y protozoarios. pus. Este instrumento se complementaba con una fuente de luz accesoria. tomando como referencia el invento de Hooke. CONCEPTO La palabra microscopio. A pesar de que los lentes empleados por Hooke. Los microscopios son instrumentos ópticos o electrónicos con un elevado poder resolutivo. que son ubicados 96 . Antón Van Leeuwenhouek. etc. diseñados básicamente con una sola lente o mediante un sistema de lentes de aumentos. en muestras examinadas de: sangre. células y otras estructuras microscópicas.. De cada tipo se comercializan diferentes modelos y aditamentos especiales para proporcionar determinados efectos. que quiere decir. fabricó un microscopio al cual dotó de poderosos lentes de aumentos y empleando técnicas más efectivas.fue acoplado a un soporte previsto de platina para colocar las preparaciones a observar. algunos insectos de ínfimos tamaños. Microscopio óptico Concepto: Son instrumentos de laboratorio. semen. solo logró observar. aunque todos tienen respectivamente el mismo principio. Como se puede apreciar la estructura básica del microscopio diseñado por Hooke. no difiere esencialmente de la de los microscopios luminosos que se utilizan en la actualidad. que posibilita la observación de los microorganismos. Probablemente sus limitadas observaciones se debieron a imprecisiones técnicas. constituyen los microorganismos de mayor talla. denominando a estos microorganismos en su conjunto como "animálculos". proviene del prefijo micro que significa pequeño y del sufijo skope. al proporcionar una imagen aumentada virtualmente del tamaño real a total magnitud que posibilitan su observación a través de su empleo. un comerciante holandés. examinar o ver. logró observar todo lo visto por Hooke . no logrando observar a otros más pequeños como protozoarios y bacterias. MICROSCOPIO. así como diversos tejidos vegetales y hongos microscópicos y algas. fabricante de gafas. que como se sabe. heces.

varias veces mayor que el tamaño real del objeto observado. etc. lo que hace posible su observación. como por ejemplo: colonias muy pequeñas. no invertida. Microscopios simples Están formados por una sola lente convergente. que conjuntamente con una fuente de iluminación. desarrolladas en los cultivos. que tiene como soporte a un 97 . 48 : Lupa Para su manejo. Clasificación Los microscopios ópticos se clasifican en: simples y compuestos. aproximar el instrumento gradualmente. los compuestos funcionan mediante la combinación de varias lentes. forman parte de un sistema óptico. cuyos detalles escapan a la agudeza visual del ojo humano. no se puede observar con ellos objetos microscópicos. se debe colocar la lente de manera que su cara plana o menos curva. vermes de poca longitud. como el Necator americanus o el Enterovirus vermicularis.alineadamente en el eje óptico del microscopio para que proporcionen una imagen virtual ampliada de los objetos microscópicos examinados. hasta una distancia focal menor que la empleada si se fuera a observar directamente. Microscopio compuesto A diferencia de los microscopios simples. siempre que se utilice una adecuada iluminación. que proporciona una imagen virtual. Fig. quedando restringido su empleo para el examen de diversas estructuras u organismos microscópicos muy pequeños. quede hacia el objeto a examinar y observando por la cara opuesta. Debido a su limitada capacidad de ampliación. Entre los dispositivos utilizados se encuentran las lupas empleadas en las prácticas de disección.

Brazo Es una columna sólida y rectangular que se haya articulada por su extremo inferior a la base. Revolver portaobjetivos. 49 : Microscopio óptico compuesto Sistema mecánico El sistema mecánico consta de las siguientes partes: 1. Algunos modelos están provistos de una charnela (pasador) que permite la inclinación hacia el observador de la parte superior del microscopio. Base o pie.sistema mecánico. Base o pie Es la parte del microscopio que queda en contacto con la superficie de la mesa de trabajo. algunos modelos 98 . 3. Su fondo plano y acentuado peso le proporcionan estabilidad al microscopio y constituyen a aminorar los efectos de las vibraciones que causan distorsiones durante la observación. En su trayectoria hacia la parte superior. Tornillos. Tubo óptico. Fig. 4. Brazo. provisto de diversas piezas y aditamentos que deben ser manipulados para lograr y mantener el enfoque de la preparación. Platina 6. 2. recorrerla y observar la cantidad de campos microscópicos que sean pertinentes. 5. La base es el sostén donde se asientan todas las restantes partes del microscopio.

un mecanismo de desplazamiento. Tubo óptico En los microscopios monoculares. hasta hacerlos coincidir con la de los ojos del. ubicados equitativamente alrededor de su entorno a menos de un cm de su borde. es giratorio al ser accionado se desplaza hacia arriba o hacia abajo. observador. En los microscopios binoculares.3 cm de diámetro donde se insertan los dos lentes oculares. Este cuerpo binocular. manualmente el revolver hacia la derecha o hacia la izquierda hasta ubicar el lente deseado 99 . En cada uno de estos orificios se enroscará un lente objetivo. provista de 3 ó 4 orificios de 2 cm de diámetro con rosca interna. lo cual se logra cuando éste deje de ver dos campos microscópicos separados o superpuestos y vea uno solo. lo cual permite sincronizar la distancia de ambos lentes a las diferencias de potencialidad de cada ojo. En la superficie frontal presenta 2 tubos cortos de 2. consiste en un tubo cilíndrico de 2. al menos. con una longitud de varios cm que varía según el modelo. uno de los tubos. que consiste en una cajuela rectangular ubicada en posición horizontal que puede estar ligeramente inclinada hacia el observador. el brazo está articulado al tubo óptico o al cuerpo binocular. mientras que la porción media de su cara frontal sirve de asiento al extremo posterior de la platina. sino que forma un cuerpo binocular. Cuando se requiera un mayor o menor aumento se hará girar. El orificio superior se emplea para insertar la lente ocular. que se accionan lateralmente para ampliar o reducir la distancia entre ambos lentes. por la misma cara donde se hayan los tubos para insertar los lentes oculares. En algunos modelos. cuya secuencia aproximada será de menor o mayor potencia de aumentos. mientras que en el inferior se encuentra acoplado al revolver portaobjetivos. consistente en dos tapas de corredera.forman una curvatura. estando provisto de una tapa metálica giratoria de superficie cónica. Revolver portaobjetivos El revolver portaobjetivos es un disco plástico o metálico de unos 7 cm de diámetro que se encuentra atornillado por su eje a una pieza que rodea al tubo óptico denominado fusil.3 cm de diámetro. disponiendo además. tiene ubicado en el punto de contacto con el tubo óptico un prisma o espejo que refracta la imagen por igual hacia ambas lentes. el extremo superior del tubo óptico no termina recto. mientras que en otros su trayectoria es recta hasta más allá de la mitad de su longitud en que se dobla en dirección frontal. denunciado fusil que articula a la parte superior del brazo. formando una inclinación oblicua o un ángulo recto de 900. En su parte superior. encontrándose rodeado por un tubo de mayor diámetro.

pudiendo en algunos modelos ser circular. coincide con que el saliente se introduce en la hendidura produciendo un ligero sonido audible al acoplarse que indica que la lente está ubicada correctamente. 50 : Revólver portaobjetivos La platina Fig. Mediante movimientos de rotación que se imprimen a uno de los tornillos se propicia el desplazamiento de la pinza hacia uno u otro lateral y con el accionar del otro se desplaza la plataforma superior de la platina hacia delante o hacia atrás. Fig. 5l: Diferentes formas de platinas y pinzas La platina es una doble plataforma metálica de color negro o gris de aspecto mate. 100 . En algunos modelos el orificio es ovoide. Presenta en su porción central un orificio circular de unos 5 cm de diámetro.sobre el orificio de la platina. El disco fijo tiene en su extremo frontal una pequeña hendidura y el giratorio presenta un pequeño saliente frente al orificio donde se enrosca cada lente objetivo. Generalmente es de forma cuadrada y mide unos 15 cm2 de superficie x 1 a 2 cm de grosor. Estas pinzas. por donde pasa la luz procedente de la fuente de iluminación. que se utilizan para sujetar las láminas portaobjetos que contiene la preparación a observar. engranados respectivamente a cada una de ellas. se encuentran articuladas a un sistema de rodamiento formado por dos cremalleras y dos tornillos. mientras que en otros. La platina está provista de pinzas. quedando la parte posterior del lente frente al tubo ocular. Al rotar el disco y ubicar el lente deseado sobre el orificio de la platina. en algunos modelos son fijas.

La mayoría de los microscopios que se emplean en la actualidad. Estructuralmente ambos tornillos son iguales. El vástago helicoidal de cada tornillo que penetra en el orificio termina en un pequeño piñón (rueda dentada) que se engrana a la cremallera del tubo óptico. El piñón del tornillo macrométrico tiene separado los dientes a la misma distancia que los de la cremallera. los microscopios están provistos de otros 3 tornillos. En otros modelos de microscopios el tubo óptico es fijo y la distancia focal se consigue. que lo atraviesan de lado a lado. Tornillos Además de los tornillos de la platina. transformar el movimiento rotatorio del piñón en movimiento rectilíneo del tubo óptico en dirección ascendente o descendente para hallar la distancia focal. con el borde estriado transversalmente para facilitar el agarre manual al imprimirle movimientos de rotación. uno debajo del otro. con el que se logra la nitidez del enfoque. mediante el desplazamiento ascendente o descendente de la platina. lo que propicia al accionar el tornillo. lo que propicia imprimirle movimientos rápidos de desplazamiento al tubo óptico con lo que se consigue con prontitud el enfoque grosero de la preparación. Esta diferencia mecánica propicia un desplazamiento muy lento del tubo óptico. para lo cual anotará las coordenadas que le proporcionan ambas escalas. de similar manera el tornillo micrométrico. Cuando los tornillos son introducidos en sus orificios respectivos solo quedan externamente sus cabezas. y en el borde lateral derecho otra con el rango de 80 a 110 mm provista igualmente de un nonio. En el que está ubicado en la parte superior se inserta el tornillo macrométrico (uno por cada lado) y en el orificio inferior. con la única diferencia de que el tornillo micrométrico es más pequeño. el macrométrico. algunos microscopios presentan dos orificios. En cambio el piñón del tornillo micrométrico tiene los dientes más unidos. lo que facilitará la localización del campo con rapidez sin tener que rastrear toda la preparación. el micrométrico y el del elevador del condensador. las cuales son de forma circular con un tamaño de varios cm de diámetro por 1 ó más de ancho. tienen grabada sobre el borde frontal de la platina una escala graduada de 0 a 80 mm. lo que no le permite engranarse directamente a la cremallera. Estas escalas permiten al microscopista ubicar la posición de un campo microscópico que desea posteriormente volver a ver. Es la parte superior del brazo. 101 . junto con un nonio. sino a través de un piñón similar al del tornillo macrométrico que tiene acoplado un uno de sus laterales a otro más pequeño con los dientes a igual distancia que los del tornillo micrométrico.

siendo las siguientes: _ Lentes oculares _ Lentes objetivos _ Condensador _ Diafragma _ Espejo _ Fuente de luz _ Filtros Los lentes Los lentes empleados en la fabricación de los microscopios son discos pulidos y transparentes. quedando el micrométrico insertado en el centro del macrométrico. Lentes oculares Fig. mientras que en otros. mediante los tornillos macrométricos y micrométricos. Este tornillo queda muy próximo al condensador y se acciona en uno u otro sentido según sean los requerimientos de iluminación de acuerdo al tipo de microscopía que se vaya a realizar.por un mecanismo similar. Sistema óptico. Miden desde unos pocos mm hasta varios cm y tienen la propiedad de proporcionar una imagen del objeto observado aumentada de tamaño. Diferentes partes El sistema óptico está formado por las diferentes partes provistas de lentes y de las que intervienen en la iluminación. convexa. El funcionamiento para subir o bajar el condensador tiene el mismo mecanismo que el empleado para los tornillos macrométricos. una de sus dos superficies. 52: Lentes oculares 102 . ambos tornillos están acoplados. siendo al menos.

. La segunda lente es biconvexa. mediante la combinación de varias lentes con distintos radios de curvatura o suprimiendo por medio del diafragma anular los rayos que atraviesan la porción periférica de la lente. 8x.Antiguamente los lentes oculares disponían de una sola lente. La lente ubicada en el extremo superior mide 1. son los que proporcionan los siguientes aumentos: 6x. que le sirven de soporte. Los lentes oculares que se utilizan con mayor frecuencia. Este pequeño tubo. Al igual que los lentes oculares. la primera es un fino tubito que contiene las lentes. quedando la aber103 . que a diferencia del que porta las lentes oculares. que indica su poder de ampliación. como si se hubiera cortado la punta del cono. Por ejemplo: 10x.2 cm de diámetro x 3 ó más cm de largo. está calibrado para que pueda ser insertado en el interior del tubo óptico. La tapa tiene grabado en su superficie un número seguido de una "x". a pocos mm de su terminación se va estrechando cónicamente. el cual dispone de una tapa de rosca de color negro provista de un criterio central de 1. es plano-convexa. En algunos modelos esta lente se encuentra empotrada en la misma tapa. están formados por un sistema de varias lentes. lo que significa que esa lente aumenta virtualmente el tamaño real del objeto observado en una imagen 10 veces mayor.5x y 15x. Lentes objetivos Los lentes objetivos constituyen la parte más importante del sistema óptico del microscopio. mide 2. portador de las lentes. provisto de rosca en su extremo posterior. 12.7 cm de diámetro. colcadas en el interior de un pequeño tubito cilíndrico. que al ser enroscada suavemente la lente inmovilizándola. los lentes objetivos. para finalmente terminar plano. 10x. pudiendo ser observada a través del orificio. ya que mediante su poder de resolución es posible observar separados dos objetos microscópicos muy próximos entre sí. quedando separados entre sí. la imagen formada ampliada por el lente objetivo y corregir las aberraciones cromáticas y de esferidad debidas a la curvatura de la lente. mientras que el extremo frontal o inferior. La función de los lentes oculares es la de ampliar virtualmente. que se haya insertado en la porción media del tubo. pero desde hace años se viene utilizando un sistema de 2 lentes colocados en el interior de un pequeño tubito cilíndrico de 2. Los microscopios monoculares están diseñados para trabajar con un solo lente ocular y los binoculares con dos. por un diafragma anular en forma de arandela. teniendo el lado plano dirigido hacia el interior del tubo. está formado por tres piezas desarmables.9 cm. quedando retenido en su descenso por el borde de la tapa que tiene un mayor diámetro..1 cm de diámetro y está ubicada en el extremo posterior del tubito.

además. Los lentes objetivos de 10x ó 20x. Debido a su baja potencia de ampliación no es posible observar con este lente a las bacterias. es la base. es una cánula cilíndrica que se ensambla a la base por la rosca externa del mismo saliente donde se enroscó el tubito portador de las lentes por su rosca interna. los cuales están diseñados con rosca externa y uno solo de ellos. La tercera pieza. Al quedar ensamblado el lente objetivo. por donde se puede observar la cara plana de la lente plano convexa que está en contacto con el pequeño orificio. proporcionan un aumento mayor que el explorador. una especie de unión universal. El de menor aumento (5x ó 6x) es el más corto de todos y se caracteriza por proporcionar la observación de un área extensa de la preparación. los secos y los de inmersión. mayor será su capacidad de ampliación. ya que entre menor sea su diámetro. mediante la rosca que se encuentra en el lado opuesto. aunque todavía insuficiente para observar con nitidez microorganismos 104 . Esto se debe a que las lentes oculares deben ser pequeñas. de 2. Este tipo de objetivo se fabrica.tura del tubo con un diámetro reducido de 1 a 5 mm. Los objetivos secos alcanzan la distancia focal a varios cm por encima de la preparación. con rosca interna. b) Objetivo de imersión Existen dos tipos de lentes objetivos. 53 : Lentes objetivos: a) Objetivos secos. En estas condiciones el lente objetivo podrá ser colocado en uno de los orificios del revolver portaobjetivos. protozoarios y otro microorganismos de dimensiones microscópicas muy pequeñas. quedando un espacio de aire entre la lámina cubreobjetos y la lente. Diferentes tipos de lentes objetivos Fig. por donde se enrosca el tubito portador de las lentes. la cánula rodeará a todo el tubito menos por extremo cónico. estriada transversalmente como algunas monedas. La segunda. por lo que se le conoce también como lente explorador. con diferentes potencias de aumento. son más largos. teniendo por ambos lados un saliente anular adjunto de menor diámetro de 2 ó 3 mm de longitud.2 cm de diámetro x 2 ó 3 mm de grosor.

este fenómeno ocurre. así como: huevos y larvas de helmintos.52. Como el espacio de la distancia focal es tan reducido se corre el riesgo de incurrir en la impericia de presionar la preparación con el lente. así como su potencia de aumento (90x a 100x) que depende enteramente del grado de ampliación que proporcione la lente frontal. generalmente.52. Para evitarlo. de ahí. Al cubrirse el espacio de aire por el aceite los rayos de luz que han atravesado la preparación asciende perpendicularmente hacia la lente sin refractarse significativamente.5 mm de la misma. ocurre. aunque pueden ser factibles a microscopistas con experiencia para identificar huevos de helmintos y otros elementos de interés de tamaño similar. cuando se utilizan lentes objetivos secos. en el que quede inmersa la lente. volviendo a su posición normal cuando cesa la presión. disponiendo además de un pequeño resorte que mantiene fija a las dos partes. células. que han atravesado la preparación. Para evitar estos accidentes. en ocasiones irreparables a la propia lente. se debe colocar sobre la preparación una gota de un líquido cuyo índice de refracción sea más elevado que el del aire y muy próximo al vidrio de la lente. Cuando se emplean objetivos de inmersión. como para permitir la observación detallada de algunos microorganismos como protozoarios y hongos. está estructurado por dos tubitos de diámetro ligeramente diferentes. generalmente. El más largo de los tres es el de 40x ó 45x. se haya la lente frontal. El líquido empleado tradicionalmente ha sido el aceite de cedro. sino además. 105 . una franja de color negro a su alrededor y grabadas en su cánula la sigla HI(Homg Inmersión) u OI(Oil Inmersión). ya que las demás ubicadas dentro del tubito son de corrección. lo que sí. que tenga que estar situado a 1 ó 1. se introduzca unos mm dentro de la externo. lo que propicia que el ponga las lentes pueda introducirse calibradamente dentro del otro. resultando aún insuficiente para la observación pormenorizada de bacterias. Lente de inmersión se diferencia de los secos. En el orificio anterior del tubito. que para poder captar los rayos luminosos procedentes del condensador. pero posibilitando que cuando la parte inferior que contiene la lente frontal sea presionada sobre la lámina. no solo por ser más largo. particularmente de las cocáceas por su íntimo tamaño. pero proporciona un aumento lo suficientemente amplio. a pesar de que la distancia que separa a la lente de la preparación sea escasamente de 1 mm. cuyo índice de refracción es de 1. sino además pudiendo ocasionar daños. Este lente se conoce también como seco fuerte. que abarca un área más reducida de la preparación. Este lente se le conoce también como seco débil. el tubito portador de las lentes se diseña de forma retráctil. artefactos y otros elementos de interés de tamaño similar. provocando no solo la ruptura de la lámina. Los rayos de luz al pasar de un medio a otro con diferente índice de refracción tiende a desviarse por reflexión. que es de 1. por tener.muy pequeños como las bacterias. como si fuera un pistón. mide escasamente 1 mm de diámetro.

con las mismas ventajas. siendo de mayor tamaño. ubicadas en el interior de un dispositivo cilíndrico de 3 cm de diámetro. Por lo tanto el aumento total sería de 200x. dentro de un dispositivo anular. por lo que. Ejemplo: si la ampliación del lente objetivo fuera de 20x y el del ocular 10x. aunque se limpien adecuadamente después de su uso. que con el tiempo afecta la calidad de la lente. encontrándose ubicada por su lado menos curvo a corta distancia de la lente más pequeña. Condensador Fig. 20. adquiriendo una consistencia muy viscosa. que tiene la parte superior ligeramente cónica. La segunda lente es biconvexa. Aumento total que proporciona el microscopio: Para conocer el número de diámetro en que se amplia virtualmente el objeto observado. con el extremo de su vértice cortado. 54: Condensador luminoso El condensador de campo claro o brillante. tamaño. siendo inmovilizado mediante un fino tornillo. quedando ambas lentes en posición perpendicular 106 . pero dañando menos las lentes. donde se encuentra un orificio de menos de 1 cm de diámetro. que se haya justamente debajo del orificio de la platina. ocupado por la cara plana de la lente más pequeña que es planoconvexa. La función de los lentes objetivos es formar la imagen del objeto observado y ampliarla virtualmente de acuerdo a su potencial de aumento.10=200. por el valor de ampliación del lente ocular. El condensador se introduce de abajo hacia arriba. entonces.El aceite de cedro tiene el inconveniente de oxidarse con el aire. se procede a multiplicar el valor de ampliación que está grabado en el lente objetivo. está compuesto por 2 lentes convergentes de desigual. en la actualidad se emplean otros aceites para microscopios más estables.

El condensador presenta. lo que da lugar. muy próximo a la base. muy próximo a su base. encontrándose acoplado en el extremo del orificio posterior del condensador. salen paralelos al eje principal incidiendo sobre el objeto a observar. La función del condensador es hacer los rayos luminosos procedentes directamente de la lámpara e indirectamente por reflexión del espejo. Este dispositivo a su vez. formando un cono de luz. debajo de la lente biconvexa. sino divergen. Cuando el movimiento se produce hacia delante. de cuyo interior sale una pequeña palanquita plana. hacia la lente frontal del objetivo. al recogerse. b) Diafragma anular. 55: Diafragma: a) Diafragma iris. sucedería todo lo contrario. ya que las laminillas se desplazarían 107 .con respecto al lente objetivo. se refracten (desvíen) al atravesar las lentes convergentes. Su colocación. consistente en un fino disco metálico. a la formación de un orificio de diámetro variable en el centro del diafragma. Es un accesorio del condensador. por la convergencia de los rayos de luz que al atravesar todo el sistema. está articulado a una pieza angular que lo fija a la parte inferior del brazo. en cuyo vértice se intensifica un foco luminoso. cubriendo todo ese diámetro. una ranura que los bordea horizontalmente. muy próxima a la cara posterior del portaobjetos reduce la divergencia de los rayos de luz. las laminillas del diafragma se despliegan hacia el entorno del cilindro. Diafragma de Iris Fig. diseñado con múltiples laminillas planas superpuestas consecutivamente que adoptan el aspecto de un abanico plegable. con lo que se logra una mayor iluminación que resulta imprescindible cuando se hacen observaciones a grandes aumentos. según sea necesaria una mayor o menor intensidad de luz. estando provisto de un tornillo engranado a una cremallera. que puede ser desplazada hacia delante o hacia atrás de la ranura. para después atravesarlo y seguir su trayectoria perpendicularmente. Si la palanquita fuera hacia atrás. que se utiliza como elevador del condensador al propiciar con su accionar su desplazamiento vertical ascendente o descendente.

lejos de beneficiar. cerrándose. Lámpara Las lámparas utilizadas. deben proporcionar para la microscopía ordinaria. la lámpara está acoplada en la base aunque todavía se utilizan modelos. dándole un aspecto de horquetilla.hacia el centro. En los microscopios modernos. donde se encuentra separada. El diafragma se utiliza para regular la cantidad de rayos luminosos que deben pasar al interior del condensador. mediante las articulaciones laterales. 56 : Espejo El espejo de los microscopios es circular. para hallar el ángulo adecuado que propicie la reflexión del espectro luminoso procedente de la lámpara hacia el condensador. mide unos 5 cm de diámetro y consta de dos espejos adosados por su reverso. El extremo posterior del vástago se introduce en un orificio presente en el extremo inferior del brazo donde se fija. para seleccionar la cara a emplear o conjuntamente. De esta manera el espejo puede ser movido por rotación. Espejo Fig. una luz monocromática de corta longitud de onda. La primera se utiliza cuando la fuente de luz es natural y la segunda cuando se emplea iluminación artificial. un fino orificio de 1 mm de diámetro por donde se articula a dos pequeños salientes puntiformes que se hayan en cada extremo de una planchuela curva acoplada por su centro a un pequeño vástago cilíndrico. para reducir progresivamente el diámetro del orificio. afectan la calidad de la observación se cierra total o parcialmente el diafragma y cuando necesitamos más intensidad de luz se va abriendo hasta obtener la requerida. Cuando pretendemos realizar una microscopía donde el exceso de iluminación. mediante la rotación del vástago. teniendo por cada lateral de su línea ecuatorial. uno de los cuales tiene la superficie plana y el otro cóncava. como parte del módulo del microscopio óptico. En ambos casos la lámpara forma parte de un soporte diseñado para proyectar me108 . Ambos espejos se encuentran montados conjuntamente dentro de un fino aro metálico de unos 5 mm de ancho que les sirven de marco.

Su función es la de absorber las longitudes de ondas de determinados colores para proporcionar una luz que mejore la observación microscópica. debe proyectarse el haz de luz de manera que incida directamente sobre el espejo. tales como: portafiltros. miden de 2 a 3 cm de diámetro y tienen un determinado color. Principios básicos Los principios básicos en que se sustenta el empleo utilitario de los microscopios son esencialmente de: _ Su poder de resolución. este último para regular la intensidad de la luz. Filtros Fig. que se caracterizan por ser transparentes. 57 : Lámpara Cuando la lámpara está separada del microscopio. para que los rayos sean dirigidos por reflexión hacia el condensador. La mayoría de dichos soportes se fabrican con diversos aditamentos para optimizar el empleo de la iluminación. diafragma y reóstato. 58 : Filtros Son dispositivos de vidrio. de manera similar a como lo hace una linterna. 109 . Fig. _ La capacidad de formar imágenes. esféricos y planos.diante un reteden sus emanaciones como un cono de luz.

110 . Formación de imágenes En dependencia del grosor y la densidad óptica que tenga cada parte del objeto a observar. en dependencia del aumento. las sombras producidas por la densidad óptica de cada parte del objeto y la oscuridad proporcionada por su grosor. las diferentes lentes y la preparación . Percepción de la imagen Los rayos del haz de luz empleados en la microscopía. no ascienden perpendicularmente a través del sistema óptico. darán lugar a una diversidad de tonos y matices con los que se produce la formación de imagen. el brillo ocasionado por los que no tuvieron interferencia. los rayos de luz que lo atraviesan sufren un retraso proporciona en su trayectoria con respecto a los que siguieron directamente hacia el lente objetivo. lo cual está delimitado por la menor distancia entre dos puntos muy próximos entre sí.2 mm. su poder de resolución será mayor. Por ejemplo. ya que al atravesar en su trayectoria. que tienen diferentes densidades ópticas se refractan (desvían) en cada ocasión. las limita cuando el tamaño de la longitud de onda de la luz. por lo que cualquier objeto con un tamaño inferior a esa medida le resultará imperceptible. observándose los elementos que están a la izquierda de la preparación. en que es posible observarlos separadamente. por lo tanto su poder de resolución es de 0. dispersando o concentrándose.2 (micrómetros) estando limitada su potencia a esa magnitud. Como el microscopio está estructurado con lentes que amplían virtualmente la imagen del objeto real. lo que da lugar a que la imagen del objeto llegue a la retina del ojo con una ubicación invertida. Si la distancia se acortara y el poder de resolución del observador ya hubiera llegado a su límite . pudiendo alcanzar hasta 0.Poder de resolución El poder de resolución es equivalente a la potencia de observación.2 mm de distancia. el ojo humano no puede distinguir la separación de dos puntos que estén a menos de 0. no podrá distinguir la separación entre ambos puntos y para su percepción estarán unidos. Al reunirse en la lente todos los rayos. a la derecha del campo microscópico y los que están arriba se observan debajo o viceversa. así como los espacios de aire. entrecruzándose entre sí.

Accione el tornillo del elevador y suba el condensador. Cuando éstas no existen o son deficitaria la tendencia es el apresuramiento. 3. 111 . 59 : Percepción de la imagen microscópica Indicaciones para el manejo del microscopio óptico El requisito primordial para efectuar una adecuada microscopía es. Pasos a seguir 1. en este sentido la superficie de la mesa o meseta donde esté colocado el microscopio debe ser lisa y sólida. mirando por la lente ocular. mueva lateralmente los lentes hasta Hacerlos coincidir con la distancia intrapupilar. 4. La silla o banqueta utilizada por el microscopista debe tener un altura adecuada en relación con la mesa. 6. Si el microscopio carece de espejo por disponer de una lámpara acoplada en su base. Si el microscopio fuera monocular. según sea el tipo de iluminación a emplear (natural o artificial). que resulte cómoda para la manipulación y observación a través del microscopio. procediendo a manipular el espejo en la forma explicada. preferentemente de color negro y aspecto mate para que no se refleje la luz. Rote el revolver portaobjetivos y coloque sobre el hueco de la platina el lente objetivo de menor aumento. Cerciorarse de que el aumento del lente ocular es el pertinente para el tipo de microscopía que va a realizar. lo cual se podrá constatar cuando el campo microscópico se observe completamente iluminado.Si requiere utilizar el espejo. 5. proceda a mover convencionalmente el espejo de manera que los rayos de luz procedentes de la fuente de iluminación se reflejen y los desvíen hacia el condensador. previamente. Bastará con encenderla.. que logrará con exactitud cuando vea un solo campo.Fig. el de disponer de condiciones mínimas de confort para su realización. debiendo tener respaldar. 2. con lo que afecta la calidad de los resultados . seleccionar la cara plana o cóncava. Si fuera un microscopio binocular. Mueva la palanquita y abra el diafragma.

Mirando por el lente ocular. utilice el correcto. Nota. Si el enfoque se realizó con objetivo seco de poco aumento y se requiere un objetivo de más aumento. Con ayuda de los tornillos de desplazamientos laterales o frontales mueva la preparación hasta situarla debajo del lente objetivo. Coloque la lámina portaobjetos con la preparación sobre la platina y fíjela con las pinzas. aproxime. Otras variantes del microscopio óptico El microscopio óptico de campo brillante es el que se utiliza corrientemente en el trabajo cotidiano del laboratorio. al cambiar el lente objetivo debe quedar enfocado el mismo campo pero con menos radio de observación. coloque previamente sobre la preparación una gota de aceite de cedro y al aproximar la lente haga que ésta contacte con la gota de aceite.7. 11. Ajuste la altura del condensador y la abertura del diafragma a las necesidades de iluminación de la microscopía que vaya a efectuar. hasta que quede a 4 ó 5 mm de la preparación. 12. Seguidamente gire el tornillo micrométrico hasta que el enfoque sea nítido. 13. proceda a separar lentamente el lente objetivo de la preparación con ayuda del tornillo macrométrico hasta que logre avizorar la imagen microscópica. para observar directamente la operación. quedando aproximadamente a 1mm de la lámina. 9. rote el revolver portaobjetivos y sitúe sobre la preparación el lente requerido. 8. Entre las más empleadas en el laboratorio de microbiología se encuentran las siguientes: _ Microscopía de campo oscuro. Ladeando la cabeza. alterne los ojos durante la observación y mantenga el que no esté utilizando abierto. Si está utilizando un microscopio monocular. con ayuda del tornillo macrométrico el lente objetivo seco. 112 . Si el microscopio está debidamente ajustado. y con su mano izquierda accione el tornillo micrométrico para ir corrigiendo el enfoque cuando la lámina esté en movimiento. Si fuera a utilizar el lente de inmersión. Para recorrer la preparación y observar los campos necesarios. requiriéndose otras variantes microscópicas con las que se pueda obtener los resultados requeridos. Si la microscopía a realizar requiere de filtro. pero no siempre resulta eficaz para la realización de determinados exámenes. accione con su mano derecha los tornillos de la platina y desplace la lámina en diferentes direcciones. 10.

60 : Condensador de campo oscuro Este tipo de condensador está provisto de un aditamento circular opaco. tubos ópticos. Cualquier objeto colocado en la trayectoria de los rayos luminosos será atravesado por éstos o iluminados indirectamente. de similar manera. o las iluminan indirectamente. los que al refractarse en su interior._ Microscopía de contraste de fase. comercializan modelos multipropósitos. no ilumina por lo tanto los ojos del observador. atraviesan la lámina portaobjetos en forma oblicua como un cono hueco de luz con su vértice hacia abajo. colocando en su lugar uno de campo oscuro. En la actualidad las empresas dedicadas a la fabricación de microscopios. teniendo la función de impedir el paso del haz de luz hacia el área central del condensador posibilitando solamente la entrada de los rayos periféricos. 113 . que cuando se observan las estrella en la noche. el condensador de "Abbe". crean un efecto que proporcionan la observación de las partículas con un aspecto brillante sobre fondo oscuro. _ Microscopía de fluorescencia. que vera como resultado un campo microscópico de color negro (campo oscuro). Microscopía de campo oscuro Para la realización de este tipo de microscopía se procede a retirar del microscopio óptico. etc. Como el rayo de luz no penetra en el tubo óptico. Los rayos que atraviesan las partículas que se hayan en la preparación. Fig. condensadores. diseñados de tal manera que puedan ser intercambiables. de menor diámetro que el orificio posterior que se encuentra ubicado debajo de la lente.

Este disco se acopla en la parte inferior del condensador. 6l: Aditamentos para la microscopía de contraste de fase: a) Diafragma anular. Fig. prosigue su trayectoria por el tubo óptico hacia el lente ocular. mientras que los rayos no pasan alrededor del objeto se dispensan. de manera que al haz de luz que lo atraviesa pasa al condensador como un aro hueco de luz. la luz pasa al condensador en forma de aro. Al atravesar el objeto.La microscopía de campo oscuro se utiliza para la observación de microorganismos y otros elementos de interés que no resultan factibles de ser coloreados. lo que permite estudiar su motilidad. de unos 2 cm. Esta placa se sitúa debajo del lente ocular. Diafragma anular: Es un disco opaco. Al proseguir su trayectoria estos rayos atraviesan el aro 114 . no cambian significativamente la amplitud de los rayos de luz que las atraviesan. que tiene en su diámetro medio un aro de vidrio óptico. Placa de cambio de fase: Es una placa transparente de forma circular. El método de contraste de fase proporciona que se pongan en evidencia cambios de fase mediante su amplitud lo que hace posible distinguir por contraste las estructuras celulares entre sí y diferenciar a estas de su entorno. Para la realización de la microscopía de contraste de fase se requiere acoplar dos aditamentos al microscopio ordinario: un diafragma anular y una placa de cambio de fase. sí cambian diferenciadamente la fase (dirección) de la onda luminosa. Al no sufrir efectos tóxicos de las sustancias colorantes se mantienen viables. la microscopía ordinaria no posibilita que se pueden detectar las diferencias. pero al tener diferencias en la densidad de sus respectivas estructuras. Como el ojo no es sensible a los cambios de fase por ser muy imperceptibles. obviamente. Microscopía de contraste de fase Las diferentes partes de las células. b)Placa de cambio de fases Funcionamiento: Debido a la forma anular del diafragma. que presenta en su diámetro medio un aro transparente.

obtenida mediante la aplicación de ciertos compuestos denominados fluocromos. difiere del de otras formas de microscopía óptica. en que no utiliza directamente la luz incidente. Empleo: Cuando no existen marcadas diferencias en la densidad óptica de las diversas estructuras celulares o el índice de refracción entre las células y los líquidos circundantes no están suficientemente contrastados en cuanto a brillo. sin la aplicación de colorantes. lo que ocasiona un acentuado contraste de brillo y oscuridad que propicia distinguir por contraste los componentes de la estructura celular. Microscopía de fluorescencia El principio de este método. sufren un notable retraso en su velocidad de traslación con respecto a los rayos que transitaron normalmente después de atravesar el objeto. para observar microorganismos presentes en líquidos igualmente transparentes. Fig. que posibilitan su observación con una microscopía ordinaria.de vidrio óptico de la placa de cambio de fase. sino que emplea fuentes indirectas de energía luminosa. haciendo factible la realización de exámenes directos en fresco. que tienen la propiedad de absorber la luz 115 . sombra u oscuridad. 62: Trayectoria del haz de luz en la microscopía de contraste de fase La placa de contraste de fase amplía significativamente las diferencias entre las ondas luminosas refractadas y las que no lo están. Como resultado los rayos que se refractan para luego pasar por el anillo óptico de la placa de cambio de fase.

durante algún tiempo. procedente de la lámpara. 3. donde los rayos ultravioletas son absorbidos por el filtro de barreras. fluorescente sobre fondo negro. 4. La luz ultravioleta. para que no haya pérdida de energía luminosa. después de atravesar el filtro primario seleccionado. penetra en el condensador de campo oscuro y al salir se refleja oblicuamente sobre el objeto teñido o conjugado con fluocromo el cual absorbe las radiaciones y posteriormente se propaga en una longitud de onda más larga que es visible (fluorescencia). Filtro primario: Este filtro se sitúa entre la fuente de luz y el condensador y su selección debe estar en correspondencia con el fluorocromo empleado ya que tiene la función de eliminar las longitudes de ondas de la luz. Funcionamiento En el caso en que se utilice luz refleja. 2. Fuente de luz: Consiste en una lámpara de mercurio o xenón de alta presión que produce con firmeza y fuerza sostenida ondas luminosas en el espectro ultravioleta. atraviesan la lente frontal del objetivo en el tubo ocular. que no sirvan para exitarlo.ultravioleta de onda corta y emitirla posteriormente. a través del lente ocular. mientras que la luz fluorescente lo atraviesa y la imagen virtual 116 - . Entre los fluocromos más empelados se encuentra la auramina y la naranja acridina que se utilizan para la tinción directa de microorganismos y otros como el isotiocinato de fluoresceína que pueden ser conjugados a anticuerpos y se emplean en técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFA). La estructura del microscopio de fluorescencia es similar a la del microscopio óptico común. Tanto. Condensador de campo oscuro: Para concentrar la luz ultravioleta sobre la muestra y lograr un mayor grado de Fluorescencia. sin interferir el paso de la luz emitida por el objeto. teniendo la función de absorber la longitud de onda de la luz ultravioleta. después de haber interactuado con la luz ultravioleta de onda corta. dando como resultado que la imagen del objeto enfocado se vea. el espejo debe estar debidamente alineado con el eje del microscopio. Mediante este filtro se protege la vista del observador de los efectos de la exposición a las Radiaciones ultravioleta. en forma de luz fluorescente (fosforescente) a mayor longitud de onda. Filtro de barrera: Está situado en el interior del tubo óptico. los rayos incidentes de luz ultravioleta como la fluorescencia generada por los fluocromos. diferenciándose en que dispone de los siguientes aditamentos: 1. con un cambio de longitud de onda.

Precauciones Se pueden emplear lentes oculares y objetivos de uso común. Empleo Este tipo de microscopio posibilita examinar. que alterarían los resultados. Giardia lamblia y otros. provistos de un prisma que refleja la imagen. En la actualidad se fabrican modelos más modernos. como las espiroquetas y otros agentes microbianos como: Chlamydia trachomatis. sin ningún tratamiento con fluorocromo. lo que propicia una visión estereoscópica o tridimensional del objeto. diferencias de coloraciones de diversos tejidos. en el principio de su poder de aumento y en la finalidad de su empleo. sino además. Para las observaciones con objetivos de inmersión se debe utilizar un aceite especial. Diseño Durante muchos años se ha venido utilizando. diseñados para que cada ojo del microscopista observe la imagen ampliada por un lente objetivo común. ya que el aceite de cedro es fluorescente. 117 . desde posiciones diferentes.del objetivo es observado a través de la lente ocular con un aspecto fluorescente. no solo en su diseño. Observaciones Mediante este tipo de microscopía se pone de manifiesto. siempre que se tenga la certeza de que no estén fabricados con material fluorescentes. un prototipo de microscopio estereoscópico consistente en el ensamblaje de dos tubos ópticos independientes. desde ángulos diferentes hacia ambas lentes. por ser los mismos fluorescentes. Cryptosporidium sp. microorganismos difíciles de colorear. así como para la detección rápida de antígenos virales. MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO El microscopio estereoscópico difiere del microscopio óptico convencional.

Fig. 63 : Microscopio estereoscópico Los lentes objetivos. Este microscopio está provisto de un tornillo único. que se utiliza para aproximar o alejar al lente objetivo del objeto a examinar. El sistema de iluminación consiste en dos lámparas. cuyos rayos atraviesan el cristal nevado de la platina. mientras que el de los lentes oculares oscila de 5x a 10x. se encuentran montados en el interior de un revolver tubular y se caracteriza por tener un bajo poder de aumento (2x o 4x). lo que proporciona un aumento potencial total. Principio El principal funcionamiento del microscopio estereoscópico no está basado como en el microscopio óptico en el poder de resolución. sino en su capacidad directa de aumento. proporcionando una iluminación tenue y otra instalada en la articulación que sostiene al sistema de los lentes. entre 10x y 40x. 118 . estando estructurado por una base de 4 ó 5 cm de altura que le sirve al mismo tiempo de platina. no invirtiendo su posición como sucede con el microscopio de uso común. por lo que la imagen ampliada se observará en el campo microscópico en el mismo plano que el objeto real. generalmente dos. articulado a una cremallera. Estos microscopios no poseen condensador ni diafragma. una que se haya en la base del microscopio. que proyecta la luz en dirección oblicua sobre el objeto dando la posibilidad de observar cuerpos opacos. en cuya porción central se encuentra un orificio de unos 7 cm de diámetro cubierto por un cristal nevado.

Antes de instalarlo a la red eléctrica. No utilice el alcohol para estos menesteres. se corresponda con el requerido para ese microscopio. no solo por su elevado costo. para evitar roces con la lente frontal que pueden dañarla. la suciedad. cerciórese de que el voltaje de la toma. . no permita que se sequen por evaporación ya que pueden formarse costras o sufrir efectos oxidantes que deterioran su construcción y en consecuencia su funcionamiento.CUIDADO. reduzca la luz antes de apagarla. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO Los microscopios son equipos que requieren de un cuidado esmerado para su buen funcionamiento y prolongación de su vida útil. separándolo ligeramente de la orilla para evitar que accidentalmente pueda caer al piso y dañarse. ya que un error en este sentido ocasionaría la ruptura de la lámpara y en el mejor de los casos se produce una disminución de la intensidad lumínica con la consiguiente pérdida de nitidez de la imagen. sino porque resultan imprescindibles en el laboratorio para el examen de diferentes muestras. Con esta acción se protege al filamento que puede quebrarse por cambios bruscos de la temperatura si no se toma esa medida. Cuidado 1. la humedad y los inadecuados métodos de limpieza.Antes de retirar la lámina. Si se trata de un modelo con regulador de intensidad. Se utilizó lente de inmersión. pues pueden desprender la lente del cemento que la fija al dispositivo tubular inutilizable. remueva el aceite empleado con papel para lentes o un paño de tela fina que no ocasione ralladuras. Cuando suceda. seque de inmediato la platina con material absorbente y seguidamente límpiela con un paño de lino fino o gamuza. 2. . Las causas que afectan con mayor frecuencia su óptimo estado de funcionamiento y por consiguiente su eficacia son: el polvo. los fuertes impactos. En caso de em119 . .Si accidentalmente se produce derramamiento de agua.Ubique el microscopio sobre una mesa o meseta sólida de superficie nivelada. Durante su empleo . reactivos u otros compuestos orgánicos sobre la platina.Apague la lámpara. que no puede ser resuelto por ningún otro procedimiento que no sea la microscopía. . Al concluir su utilización. separe el lente objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico.

Coloque la tapa a cada lente ocular para evitar que se afecte por el polvo. limpia la lente frontal del lente objetivo. realizando el traslado todo el tiempo con el equipo en posición vertical. para remover el polvo. y cubra el microscopio con un tapacete de nylon con el mismo propósito. humedezca ligeramente el paño. absteniéndose de contactar con el diafragma anular que se haya en su interior. que se utilice exclusivamente para eso o un paño de lino fino o gamuza para la suciedad. . cerciórese de que el tornillo del cuerpo binocular lo mantiene fijo. no lo empape. . no requiriendo cuidados especiales. Del sistema óptico. pues de lo contrario se corre el riesgo de que sufran un daño irreparable. en ese caso. es que está sucia. solo a un personal especializado. correspondiendo. . sin desarmar el dispositivo. La remoción del aceite de inmersión ya fue tratada en el acápite de cuidado.Para detectar la presencia de polvo o suciedad en las lentes oculares. si se detectan manchas. 120 . . desenrosque el tubito portador de las lentes y proceda cuidadosamente a su limpieza. con igual cuidado externamente. que de manera frecuente está ocasionada por la grasa de la pestañas y los cosméticos. puede deberse a una insuficiente limpieza o que el polvo ha penetrado el interior del lente. Después de realizada la limpieza de la manera explicada colóquela nuevamente en el tubo ocular y compruebe que las manchas han desaparecido.Si tuviera que trasladar el microscopio para otro sitio. 2. Sujete el microscopio con una mano por la base y con la otra agarre firmemente el brazo.El vidrio con que se fabrican las lentes es blando.plear xilol. Cuando se requiera su limpieza se debe emplear. basta con observar a través de ellas el campo microscópico. las manchas rotan con la lente. Limpieza 1. un pincel fino y plano. si persisten.La limpieza de las lentes del condensador se hará.El espejo se limpiará con un paño fino. . cuyo soporte no debe abrirse nunca. de ser posible de pelo de camello. por estar muy impregnado el aceite. para evitar que se salgan los lentes oculares y puedan dañarse. de ahí. para evitar que se produzca el mismo efecto que con el empleo del alcohol. . haga rotar el lente sin sacarlo del tubo ocular. que sean muy susceptibles a la erosión. Del sistema mecánico. volviendo a colocar las lentes en la misma posición en que estaban. Si después de realizada esta operación la suciedad persiste.

pudiera proporcionar más de 2000x. . se logra con el microscopio óptico.La grasa vieja que se ha solidificado o adherido. proporcionar una imagen ampliada del objeto real para hacer posible su observación a través del ojo humano. la longitud de onda de la luz visible que es de 400 a 700 m/µ . .Si desea guardar los microscopios en sus cajas. . pero todos están constituidos básicamente por tres partes: 121 . platina. con el que se removerá el polvo y la suciedad de sus superficies. removerla con xilol o gasolina. deben ser colocados en dispositivos con tapa de rosca para preservarlos del polvo. cuya combinación.5 m/µ lo cual le proporciona un poder de resolución que permite la observación de partículas por menos de una millonésima de mm. limita esa posibilidad. Se limpiarán con un paño. Sin embargo los electrones de alta energía tienen una longitud de onda muchísimo más corta que no exceden 0.Lubricar periódicamente las cremalleras con grasa de buena calidad libre de ácidos. ¿A qué se debe esta limitación?. . Estructura del microscopio electrónico En la actualidad se fabrican diferentes modelos de microscopios electrónicos. brazo.Para pulir las partes metálicas lustrosas. utilizar un paño fino impregnado ligeramente con aceite de máquina exentos de ácidos. Aunque se emplearan lentes de vidrio.La base. Mantenimiento. . - MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Como ya se explicó en la parte inicial de este capítulo. ya que partículas separadas por menos de 200 m/µ escapan a su poder de resolución. pero se diferencian en que el microscopio electrónico en lugar de luz incidente o reflejada utiliza electrones y en el de lentes de vidrio campos magnéticos. 3.No debe utilizarse alcohol para limpiar el microscopio pues tiende a deteriorar la pintura.Los lentes que no estén en uso. . a través de una imagen virtual.El equipo debe recibir asistencia técnica especializada cada 6 meses. El principio del microscopio óptico y el electrónico es el mismo. la ampliación del objeto real. proporcionada mediante una combinación de lentes y luz visible con un alcance máximo de 2000x. cerciorarse de que éstas no tenga humedad que creará un ambiente muy propicio para que las lentes se contaminen con hongos que resultan muy difíciles de remover. . etc.

1. Una bomba de vacío. Proyector de imagen intermedia. Por la parte externa. b) Condensador magnético circular. Porta muestra. e) Muestra. Un panel de mandos. 3. Objetivo magnético circular. Pantalla fluorescente. En su interior se encuentran instalados. Un tubo de rayos catódicos. diversas pa122 . g) Tubo óptico con lente ocular. de arriba hacia abajo. d) Portamuestras. 2. los siguientes componentes que constituyen su sistema funcional: Filamento de tungsteno. 64: Microscopio electrónico: a) Filamento de tungsteno. i) Panel de mandos. Condensador magnético circular. f) Proyector de imagen intermedia. el tubo presenta en el tercio superior un soporte de atril para la colocación de la preparación y en dirección descendente. Fig. que se haya colocado en posición vertical. c) Bomba de vacio. h) Pantalla fluorescente. Tubos de rayos catódicos Consiste en un tubo cilíndrico de más de 1 metro de largo por aproximadamente 50 cm de diámetro.

Funcionamiento 1. 3.000 veces o más. con un funcionamiento similar al del lente ocular del microscopio óptico.lancas y manivelas que se emplean para corregir el enfoque. 2. sin pérdida excesiva de detalles. de lo contrario resultaría opaca a los electrones no pudiendo ser atravesadas por éstos. para seguidamente concentrarse sobre el objeto y atravesarlo. Se extrae el aire que se encuentra en el tubo. En la parte inferior del tubo. Bomba de vacío Está instalada en el tercio superior del tubo. muy próximo a la base. sometiendo el filamento de tungsteno a una potencia de 30 a 150 kv. El proyector de imagen intermedia. Encender el equipo. La imagen puede finalmente observarse directamente sobre la pantalla fluorescente o proyectarse sobre una placa fotográfica si se desea el registro permanente de la imagen. 123 .000. muy próximo a la base del tubo de rayos catódicos. Se coloca la preparación sobre el porta muestras. ampliando su imagen hasta 2000x en forma análoga a como lo hace el lente objetivo del microscopio óptico. la cual debe ser extremadamente fina (menos de 0. La imagen formada por la pantalla fluorescente es ampliada de 4 a 6 veces por el anteojos binocular.1 mm). con lo que se obtiene un aumento total de 1. 5.000x o más. los cuales se encuentran impedido de desplazarse en su presencia. se encuentra acoplado un anteojos binocular centelleante. para hacer factible la movilización de los electrones. con lo que se propicia que los electrones generados por el calentamiento del filamento se propaguen. mediante la bomba de vacío. para observar la pantalla fluorescente. donde ambas partes se encuentran instaladas. En la pared frontal presenta una pizarra con diversas escalas metradas que permiten monitorear y ajustar el funcionamiento del equipo. Papel de mandos Está ubicado sobre la mesa de trabajo. 6. 4. el ajuste de los campos magnéticos y el funcionamiento de la bomba de vacío. penetrando en el condensador magnético. amplia la imagen unas 250.

¿Cuál es la función del revolver? 4. CUESTIONARIO 1. ¿Cuál es el poder de resolución del microscopio óptico? 13.Empleo 1.Para la observación de estructuras bacterianas y de otros microorganismos. Clasifique los diferentes tipos de lentes objetivos. Describa paso a paso. Sí Ud. 16. Relacione en el mismo orden en que se encuentran. 6. Desventajas En contraposición a su elevado poder de resolución. la microscopía electrónica tiene la ventaja de que la acción de los electrones resulta letal para los microorganismos por lo que no es posible observarlos en estado viable. Para la observación de partículas víricas. Describa la forma que tienen las dos caras del espejo y especifique cuando se utiliza cada uno de ellas. 15. 2. Precise cuál es la diferencia funcional entre el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. como Ud. las diferentes partes del sistema óptico. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión? 9. el objeto a observar y los lentes objetivo y ocular. 10. monta una preparación en láminas en el microscopio óptico y la enfoca. emplea primero un lente objetivo de 20x y posteriormente un lente objetivo de 40x ¿Cuál de los dos le proporcionará un campo microscópico más amplio? Fundamente su respuesta. 5. 124 . ¿Qué Ud. Describa la forma de los lentes que se encuentran en el interior del condensador de campo brillante. Describa como se forma la imagen del objeto observado con el microscopio óptico. 2. Entiende por poder de resolución? 12. 14. ¿Cuál es la función del diafragma? 7. Nombre las diferentes partes del sistema mecánico del microscopio óptico. 8. 3. Describa la trayectoria que específicamente va siguiendo el haz de luz al atravesar el condensador. ¿Con qué objetivo se utilizan los filtros? 11.

20. ¿Con qué finalidad se realiza la observación a través del microscopio estereoscópico? 23. Describa la estructura del microscopio estereoscópico. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja más significativa del empleo de la microscopía electrónica? 125 . ¿Con qué particularidad se observa la imagen del objeto a través del microscopio estereoscópico? 22.17. Explique las funciones del filtro primario y el filtro de barrera que se utiliza en la microscopía de fluorescencia. 21. ¿Describa las características estructurales y funcionales del condensador de campo oscuro? 18. ¿Cuáles son las funciones que respectivamente tienen el diafragma anular y la placa de cambio de fase en la microscopía de contraste de fase? 19. ¿Cuál es la diferencia estructural entre un microscopio óptico y microscopio electrónico? 24.

CAPÍTULO 9
INSTRUMENTOS MECÁNICOS
INTRODUCCIÓN
La cantidad y variedad de investigaciones que se realizan diariamente en los laboratorios de microbiología clínica , han tenido una marcada tendencia a incrementarse progresivamente en los últimos años, en la misma medida en que estos servicios se han ido extendiendo a todas las unidades del sistema Nacional de Salud. La introducción de instrumentos mecanizados y automatizados para la realización de los diferentes procederes han venido a suplir en alguna medida los métodos tradicionales, con lo cual se ha logrado no sólo una mayor productividad, precisión y ahorro de recursos materiales y humanos, sino que su aplicación, interpone una barrera de bioseguridad que reduce significativamente los riesgos potenciales a los que se ven expuestos los manipuladores. La mecanización sustituye la labor del hombre, mediante el empleo de instrumentos técnicos, regulados por éste, mientras que la automatización comprende además un control intrínseco del instrumento mecanizado que ha sido diseñado para que se autorregule. En los laboratorios de microbiología se utilizan diversos instrumentos de este tipo, pero sin lugar a dudas uno de los empleados con mayor frecuencia es la pipeta mecánica.

PIPETAS MECÁNICAS
En la actualidad se comercializan varios tipos y modelos de pipetas mecánicas. Entre las más empleadas en los laboratorios de microbiología se encuentran: la pipeta de pistón clásica del tipo "Marbung", la del tipo "Jena" y la "Multicanal", que forman parte del sistema micro analítico Eppendorf. En estos tipos de pipetas el líquido se carga y descarga, mediante el accionar manual de la pipeta a una boquilla finamente cónica y puntiaguda de material plástico, que se inserta en el extremo inferior de la pipeta, de manera que el líquido aspirado pasa a la boquilla, pero no entra en ningún momento en la pipeta lo que permite su empleo reiterado, mediante el intercambio en cada ocasión de la boquilla plástica deshechable. 126

El índice de error, dado por los fabricantes, para este tipo de pipeta es de sólo un 1%. Estas pipetas se emplean para medir volúmenes de líquidos en el rango de microlitros. Un microlito es equivalente a la millonésima parte de un litro o la centésima parte de 1 mL.

PIpeta tipo Marburg
Este tipo de pipeta es de pistón fijo, estando diseñada para cargar o descargar solamente, un volumen determinado en microlitros, el cual está indicado mediante un número impreso en la parte superior de la pipeta. Como cada pipeta de este tipo, está limitada para aspirar o dispersar exclusivamente, un volumen fijo para el que ha sido diseñada, los fabricantes la comercializan en serie de: 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 900 y 1000 mL. Estructura externa

Fig. 65 : Pipeta mecánica tipo Marburg

Está estructurada con una cánula cilíndrica de material plástico de unos 2 cm de diámetro, estriada transversalmente para facilitar la sujeción manual. La parte superior de la cánula tiene insertada una anilla plástica prevista lateralmente de un pequeño saliente plano en posición horizontal, que sirve de tope al dedo índice, una vez que la pipeta esté empuñada. Por encima de la anilla, la pipeta se estrecha ligeramente en forma de un cono cortado por su vértice, en cuya pared se encuentra impreso un número que indica el volumen fijo que carga esa pipeta y sobre el número una franja que circula su diámetro, de color amarillo o azul, de varios mm de ancho. La franja de color amarillo distingue a las pipetas diseñadas para cargar 100 microlitros o menos y las de 127

color azul a las que se cargan más de 100 y hasta 1000 microlitros, teniendo esta última mayor diámetro. En el extremo superior de la pipeta se encuentra un botón cilíndrico insertado calibradamente en el orificio que se haya en la parte más estrecha del extremo distal cónico. Por debajo de la cánula se encuentra insertado un fino vástago cilíndrico, ligeramente cónico de material plástico, de unos 5 mm de diámetro, por cuyo extremo se inserta la boquilla plástica deshechable, cuyo color será igual al de la franja que circula la parte superior de la pipeta. Estructura interna

Fig. 66: Estructura interna de la pipeta mecánica tipo Marburg: a) Botón; b) Pistón cilíndrico; c) Muelle; d) Cerrador circular; e) Cilíndro; f)Pieza que cierra herméticamente la pipeta

En el interior de la pipeta se encuentra el sistema mecánico que hace posible, al ser accionado, su funcionamiento, interaccionando las diferentes piezas que lo conforman, de la siguiente manera: el botón que se encuentra externamente en la parte superior de la pipeta, contacta internamente con la parte superior de un pistón cilíndrico que se encuentra rodeado por un muelle flexible, cuyo extremo inferior contacta con el cerrador circular, una especie de zapatilla circular, que por su lado opuesto queda junto a una pieza cilíndrica que en las pipetas de menor calibre tiene insertado centralmente un mandril (aguja), para finalmente terminar en una pieza tubular que completa el sistema. Principio de su funcionamiento 1. Se procede a insertar ajustadamente una boquilla plástica deshechable en el extremo del vástago que sea del mismo color (amarillo o azul) que el que tiene la franja que circula el extremo superior de la pipeta. 128

Fig. 67: Ajuste de la boquilla plástica deshechable a la piapeta

2. Se empuña la cánula, de manera que el borde del dedo índice quede en contacto con el saliente de la anilla que se haya sobre la cánula y la yema del dedo pulgar sobre el botón que se encuentra en el extremo superior de la pipeta.

Fig. 68: Manera de empuñar la pipeta

3. Al presionar con el dedo pulgar el botón hacia abajo, hace que se comprima el muelle, lo que provoca, que el pistón y el resto del sistema mecánico desciendan. 4. Sin dejar de presionar el botón, se introduce la punta de boquilla deshechable, varios mm en el interior del líquido que se desea extraer y se procede a aflojar suavemente la presión del dedo. Esta acción hace que todo el sistema asciende hasta ocupar su ubicación normal, provocando la succión que hace que pase al interior de la boquilla, un volumen exacto de líquido, que será específico para cada pipeta de pistón fijo. 129

5. A continuación se introduce la punta de la boquilla en el tubo de ensayo de manera que quede sobre la pared interna del tubo, procediendo a presionar el botón para verter el volumen fijo de líquido. 6. Si se desea tomar una muestra diferente, basta con intercambiar la boquilla deshechable y repetir la operación.

Fig.. 69: Procedimiento para verter el líquido en el tubo receptor Nota: El intercambio de boquilla debe realizarse con la mano enguantada, depositando la utilizada en un vaso de precipitado con solución desinfectante.

Pipeta del tipo Jena

Fig. 70: Pipeta tipo Jena: a) Botón giratorio; b) Ventanilla con escala en microlitros

130

.El principio funcional es similar al de la pipeta del tipo Marburg. partículas sólidas. lo que propicia que se pueda ajustar el grado de succión de la pipeta dentro de un determinado rango. EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS Los equipos electromecánicos son utilizados en el laboratorio para la preparación de diferentes muestras o como parte de la realización de diversos procederes. etc. mediante una sedimentación forzada en el fondo de un tubo de ensayo. como 131 . cada una de las boquillas succiona o dispersa el mismo volumen de líquido de manera simultánea.El agitador. que se encuentre en suspensión. aunque difieren en el diseño. ubicadas unas al lado de las otras. que son accionados mediante energía eléctrica. Cuando se acciona la pipeta. muy próximo al botón giratorio. Entre los más empleados se encuentran los siguientes: .El rotor. Pipeta del tipo multicanal Este tipo de pipeta se sustenta en el mismo principio funcional. están diseñadas para que se le puedan insertar 8 o más boquillas. lo que le da un aspecto de rastrillo.Las centrífugas. en lugar de una sola boquilla deshechable. pero difieren en que. . teniendo en común. La particularidad estructural que tiene este tipo de pipeta es que está provista de un botón giratorio en su parte superior. comercializándose distintos modelos. Las centrífugas La centrifugación es un procedimiento mecánico mediante el cual se pueden separar de un líquido. De esta manera se ajusta previamente la pipeta para que trabaje a un volumen deseado en números externos y décimas de microlitros. También puede servir para separar líquidos miscibles mezclados entre sí. con lo que consigue variar su nivel de ubicación. microorganismos. mediante el cual se hace descender o ascender al sistema mecánico. para que aspire o disperse un volumen deseado. células. Esta pipeta dispone además en su parte superior. compactándolos. con pesos específicos diferentes. de una ventanilla rectangular provista en su interior de una escala numérica que va aumentando o disminuyendo el valor de los dígitos en la medida en que el botón sea girado hacia delante o hacia atrás.

1. b) Portatubos. Como la centrífuga puede estar diseñada para 4. Partes de la centrífuga Fig. no pueden ser separados mediante la gravedad (sedimentación) o la filtración. pero todas tienen el mismo principio funcional. En el extremo de cada 132 . 71: Esquema de las centrífugas En la actualidad se fabrican diversos modelos de centrífugas.las emulsiones. formando una cruceta cuando se trata de centrífugas de dos tubos. 6. en forma de barra más o menos plana. como tubos pueda centrifugar. La mayoría de las centrífugas son eléctricas y solo algunos modelos ya en desuso se accionan manualmente. donde los compuestos que lo forman. que se inserta mediante un orificio central al eje del motor. Diseño industrial de las centrífugas Fig. 8 ó más tubos (siempre en número par) el cabezal adoptará la forma que tienen los rayos de una carreta con tantas barras fijas en posición horizontal. 72: a) Cabezal.Cabeza: Es una pieza metálica.

la cual será directamente proporcional a su masa. lo que ocasionaría un desbalance que provocaría vibraciones y sacudidas de la centrífuga con la consiguiente ruptura de los tubos y el desajuste del equipo. Reloj de intervalo: Se utiliza para regular el tiempo de cada centrifugación. deberá emplearse el mismo tipo de tubo y asegurarse de que el volumen de líquido en ambos sea similar. Balance de los tubos Para el buen funcionamiento de la centrífuga es indispensable que los tubos queden colocados en una posición diametralmente opuesta. quedan articulados al cabezal. quedando en posición oblicua respecto al eje. que se utilizan para introducir los tubos de vidrio que contienen el material que va a ser centrifugado. Estos porta tubos tienen colocado en el fondo. Los porta tubos de angulación son fijos. con similares requisitos y ser colocado en el punta tubo que se encuentra en el lado opuesto que fuerza el que purza la muestra. 6. 3. Si se va a centrifugar una sola muestra. tengan el mismo peso. generalmente de color rojo. uno a cada lado. en suspensión. Motor eléctrico: Tiene la función de imprimir movimientos de rotación al cabezal mediante velocidades controladas por medio de un reóstato que varía la intensidad del flujo eléctrico. determinándose la igualdad en peso mediante la sincronización de su equilibrio.m).barrera se inserta un porta tubo el cual puede ser de angulación o de suspensión. se deberá llenar en segundo tubo con agua. Porta tubos: Son tubos metálicos. ya que de lo contrario. la fuerza centrífuga sería desigual. Principio técnico Está determinado por la fuerza centrífuga. lo que le permite adoptar una posición horizontal cuando la centrífuga alcanza altas velocidades. Bombillo piloto: Es un pequeño bombillo. 2. un taco de goma que sirve de amortiguador a los tubos de vidrio durante la centrifugación. se desarrolla una fuerza que tiende a separarlo de dicho centro. Para lograr un buen balance de los tubos se puede utilizar un nivelador de tubos. Tacómetro o velocímetro: Se utiliza para ir registrando la velocidad de rotación del cabezal en revoluciones por minutos (r. 4. por su parte interna. en tanto que los segundos.p. Cuando no se disponga de este instrumento. 133 . que se sustenta que en todo el cuerpo que se mueve en torno a un punto central. diseñada para colocar dos tubos. 5. que indica cuándo el equipo está encendido. que es una especie de balance.

134 . Si la centrífuga no tuviera reloj de intervalo. Conectar el equipo a la red eléctrica 5. 11. 8. 73 : Nivelador de tubos Funcionamiento 1.m. 6. Abrir la tapa de la centrífuga. Llenar los tubos hasta 1 cm por debajo del borde superior.) en el tacómetro hasta alcanzar la deseada. 7. Si se hubiera centrifugado material contaminado. Cerciorarse de que el botón que regula la velocidad del tacómetro o velocímetro este en "0". Girar el botón del velocímetro lentamente. espere 2 ò 3 minutos antes de abrir la tapa. apague la centrífuga. desconéctela de la red eléctrica y ciérrela. para evitar la exposición a los aerosoles. 4. teniendo especial cuidado de que quedan diametralmente apuestos (uno frente al otro) están debidamente balanceados en peso.Fig. 3. 2. proceda a apagarlas tan pronto concluya el tiempo previsto de centrifugación. 10. 9. de manera que vaya marcando gradualmente la velocidad (r. hasta que indique el tiempo de centrifugación deseado. lo cual se puede determinar observando el velocímetro. Extraiga los tubos. deben tener el mismo tamaño y peso.p. Los tubos colocados en lados apuestos. Medidas de cuidados y conservación 1. Cerrar la tapa de la centrífuga. Introducir los tubos con las muestras en el interior de los porta tubos. 2. Girar el botón del reloj de intervalo. Espere a que la centrífuga se detenga. Accionar el interruptor para encender el equipo.

L. que la que se puede conseguir por procedimientos manuales. sobre la cual se encuentra una plataforma giratoria de unos 30 cm2. c) Botón del velocímetro El rotor es un pequeño equipo eléctrico que tiene la forma de un cajón. 135 . los porta tubos serán extraídos. 74: El rotor: a) Superficie plana giratoria. Diseño del equipo Fig. Cualquier material que se derrame sobre la centrífuga debe ser eliminando de inmediato. Cuando se produzcan rupturas de tubos.R.3. procediendo a la eliminación de los restos de vidrio y limpiándolos escrupulosamente. EL ROTOR El rotor se utiliza para mezclar mecánicamente las muestras con los reactivos. Periódicamente debe limpiarse el interior de la centrífuga con un paño húmedo para eliminar el polvo y la suciedad. estando provisto de una superficie plana de unos 35 cm2. 4. lográndose una mejor homogenización. b) Botón del "timer".D. 5. En el laboratorio de microbiología se utiliza regularmente para mezclar el suero con la emulación de antìgeno para las pruebas serologícas de V. Mide aproximadamente 30 cm2 x 15 cm de altura.

se encuentran insertados dos botones. rodeados en todo su perímetro por una escala numérica.p. Cuidado y conservación 1.m. llevar el botón del velocímetro a "0" y desconectar el equipo de la red eléctrica. algunos modelos disponen por uno de sus laterales de una presilla. 3. 5. Cualquier material que se derrame sobre la superficie de la plataforma giratoria o el equipo. que indica cuando el equipo está encendido. 2. Coloque la cristalería con la muestra sobre la superficie de la plataforma giratoria. Cuando se detecte alguna diferencia se debe engrasar el equipo y si eso no resuelve el problema solicitar el servicio de un especialista. 136 . Accione gradualmente el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir en la escala con la velocidad de rotación por minutos (r. En el laboratorio de microbiología tiene diversas aplicaciones.En la pared frontal del equipo. hasta hacerlo coincidir en la escala numérica con el tiempo deseado de rotación. 2. impide que esa situación ocurra.). Conecte el equipo a la red eléctrica. que al ser colocada adecuadamente. Concluido el tiempo. para evitar su desplazamiento por colisiones accidentales. Como la plataforma giratoria no queda fija. generalmente de color rojo. debe limpiarse de inmediato. 4. entre las empleadas se encuentra la homogenización de esputos. el primero corresponde al "timer" o reloj de intervalos y el segundo al velocímetro. Se debe verificar sistemáticamente que las rotaciones de la plataforma giratoria se correspondan con la indicada en el velocímetro. 3. el equipo se apagara automáticamente. procediendo a retirar las muestras. Accione el botón del "timer". EL AGITADOR El agitador se utiliza para mezclar muestras muy difíciles de homogenizar por procedimientos manuales debido a su densidad o mucosidad. Muy próximo a estos botones se encuentra un pequeño bombillo. Funcionamiento 1.

Posee igualmente un "timer". La mayoría de los modelos tienen forma rectangular. Gire el botón del "taimer" hasta hacerlo coincidir con la escala que indique el tiempo de agitación deseado. presenta en su superficie una plataforma.Diseño del equipo Fig. el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir con la velocidad deseada. b) Botón del "timer'. haga un girar en retroceso el botón del velocímetro hasta ubicarlo en "0" y desconecte el equipo de la red eléctrica. retirar las gradillas de la plataforma. 2. un velocímetro para determinar el desplazamiento por minuto y un bombillo piloto. Al igual que el rotor. 4. propiciando mediante las sacudidas que ocasiona. con capacidad suficiente para que puedan ser colocados en su superficie varias gradillas. Gire. lentamente. Coloque las gradillas con las muestras sobre la plataforma oscilatoria y fíjelas con los dispositivos que dispone el equipo para que las gradillas no se vayan a caer cuando se le aplique el movimiento propio del equipo. Conecte el equipo a la red eléctrica. Cuidado y conservación Similar a las que se aplican al rotor. frontales y de retroceso en forma continua a velocidad regulable. c) Botón del velocímetro Este equipo se fabrica de diferentes tamaños. 137 . 75: El agitador: a) Plataforma oscilante. se desplaza con movimientos cortos. 5. Concluido el tiempo de agitación. que en lugar de rotar . 3. la mezcla u homogenización de las muestras. Funcionamiento 1.

Este botón se hace girar según se requiera hacia la posición STD. como por ejemplo: en la elaboración de medios de cultivo. 2.BY (En espera) o hacia la posición indicada con la palabra READ (Lectura) 138 . aunque el tamaño varia de acuerdo al modo comercializado por los diferentes fabricantes. son instrumentos eléctricos que se utilizan para medir el pH de una disolución. midiendo unos 30 cm2 x 8 cm de ancho. 76 : Potenciómetro: a) Eléctrodos. b) Galvanómetro Los potenciómetros tienen la forma de una caja rectangular. la determinación del pH de una disolución. donde el pH debe ser ajustado de acuerdo a los requerimientos de los diferentes grupos y géneros bacterianos que pretendamos cultivar. Botón indicador de la temperatura del potenciómetro. puesto que el grado de tolerancia a la acidez o a la basicidad resulta diferente para cada uno de ellos. resulta primordial en diversos procederes. 3. En el trabajo microbiológico. Botón de lectura. para lograr su desarrollo óptimo. Botón para mover la aguja e indicar en la escala el pH de la solución buffer. En la pared frontal o sobre la superficie se haya un galvanómetro provisto de una escala impresa del 0 al 14 que se complementa con una aguja insertada por su parte posterior a un pequeño eje situado en su centro y borde inferior. Estructura Fig.POTENCIOMETROS Los potenciómetros o pHmetros. Debajo del galvanómetro se encuentran articulados al menos tres botones giratorios: 1. por estar diseñados para determinar las concentraciones de iones hidronios que posea. lo que permite conocer con precisión su grado de acidez o basicidad.

e. 2. Ambos electrodos se unen mediante puentes salinos (K CL o NH4 NO3) cuando se acciona el equipo Principio funcional Se basa en la medición de las fuerzas electromagnéticas (f.Por el lateral derecho.m. cuyo extremo terminal queda en contacto con el material sensible o indiferente a los cambios de pH.() de las disoluciones a investigar. El tubo es atravesado longitudinalmente por un alambre de platino. para ser convertida y presentada por el galvanómetro con un valor de pH. cuya porción terminal inferior puede ser redondeada. El electrodo transforma la energía química en energía eléctrica. En los pHmetros modernos. el pHmetro tiene articulado en posición vertical un soporte universal metálico. Electrodos Concepto: Los electrodos no son mas que el polo (Positivo: Ánodo-Negativo: cátodo) de una pila eléctrica. como por ejemplo: hidrógeno. mas afinada o en forma de un pequeño bulbo redondeado similar a un densímetro. Estructura de los electrodos del potenciómetro o pHmetro: Consisten básicamente en un tubo de vidrio de unos 10 ò 12cm de largo x 1 o 1. 139 . Electrodo indicador: En su extremo distal. quinhidrona. Tipos de electrodos 1. permaneciendo inalterado independientemente de la concentración de iones hidrontes o hidroxilos que contengan la disolución.5cm de diámetro. Electrodo de referencia: Generalmente presenta un mayor diámetro y se fabrica con calomel (Hg2 Cl + K Cl) un material estable. Etc. mediante el empleo de las pilas voltais preparadas con los electrodos que marcan la diferencia de potenciales entre ambos. en consecuencia la fuerza electromotriz por la celda electroquímica es comparada con la del potenciómetro y la diferencia es medida en voltios. en contacto con el alambre se encuentra el material sensible a los cambios de pH. el galvanómetro ha sido sustituido por una escala digitalizada. provisto de una presilla habilitada para la colocación y sujeción de dos electrodos. El otro extremo del alambre queda empalmado a un cable eléctrico que se conecta en el fondo del equipo.

Procedimiento para el manejo del potenciómetro Estandarice el aparato 1. Extraiga los electrodos de la solución buffer y proceda a enjuagarlos en un recipiente que contenga agua destilada. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 10-14 _________________________10-9________________________10-0 Ácido Alcalino Por lo tanto. Solución Buffer: Las soluciones buffer o amortiguadores o tampón como también se les conocen están compuestas por dos o más sustancias que evitan la producción de cambios significativos en la concentraciones de iones hidrionios.BY. Sumerja los electrodos en una solución buffer de pH conocido. Una disolución es ácida cuando la cantidad de iones hidrionios (H30+) es mayor que la de iones hidroxilo (0H-) y viceversa. Conecte el equipo a la red eléctrica y asegúrese de que el botón se encuentre en la posición STD. Accione el botón y haga coincidir la aguja en el número 7 de la escala de pH. aun cuando a dicha solución se le agregue un ácido o una base fuerte. 3. 140 .Medición del pH La medida del pH es una forma convencional de indicar la concentración de iones hidrionios o de iones hidroxilo en una escala del 0 al 14. 2. Cuadro 6: Gráfico de logaritmo inverso de iones hidrógeno. el pH no es otra cosa que el logaritmo inverso de la concentración de iones hidrógenos en una disolución. ya que las sustancias ácidas ceden electrones y por consiguiente retienen hidrógeno en tanto que las básicas son capaces de aceptar protones. (por ejemplo: pH 7).

141 . si lo prefiere utilice como referencia la temperatura ambiente.BY a READ. Describa como opera la pipeta Marburg cuando se retira la presión del dedo sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. 6. CUESTIONARIO 1. Si se requiere realizar una nueva lectura lave los electrodos previamente con agua destilada. 5. 8. Accione el botón cambiándolo de la posición STD. el pH. 9. 3. La aguja oscilará. en lugar de tomar la de la solución. 4. ¿Cuál es la función de tacómetro? ¿Qué requisitos deben tenerse en cuenta al colocar los tubos en la centrífuga? Explique en orden cronológico. También. ¿Cuál es la diferencia funcional entre la pipeta tipo Marburg y la pipeta tipo Jena? ¿Qué característica particular presenta la pipeta multicanal? Fundamente porque causa el empleo de las pipetas mecánicas. resulta favorable para la bioseguridad del laboratorio. 14.4. Lectura 1. Nombre los diferentes tipos de pipetas mecánicas que usted conozca. 15. 7. ¿Qué relación existe entre la banda coloreada de la parte superior de la pipeta Marburg y el de la boquilla desehechable? Describa como se activa el sistema mecánico de la pipeta cuando se ejerce presión sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. Tome la temperatura de la solución donde se medirá el pH y accione el botón indicador de temperatura del potenciómetro. 12. hacia la izquierda o la derecha indicando en la escala. 2. 13. Proceda a sumergir los electrodos en la solución cuyo pH se desea determinar. Describa la estructura de la pipeta mecánica tipo Marburg. 11. 2. ¿Cuáles son las ventajas de la mecanización y la automatización sobre los métodos tradicionales de laboratorio?. ¿Con qué objetivo se utilizan las centrífugas en el laboratorio? ¿En qué radica la fuerza centrífuga? Describa la estructura del cabezal de las centrífugas. los pasos que usted debe dar para realizar una centrifugación. 10.

¿Qué es lo que marca el galvanómetro del pHmetro? 25. ¿Qué mide el velocímetro del rotor? 20. ¿Para qué se utiliza el potenciómetro en el laboratorio? 23. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del agitador? 22.16. ¿Cuál es la diferencia funcional entre los diferentes tipos de electrodos del pHmetro? 24. 17. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del rotor? 19. Describa los pasos que debe efectuar para determinar el pH de una disolución con el empleo del pHmetro. Haga referencia a los cuidados que debemos observar para el buen funcionamiento y cuidado de la centrífuga. ¿Para qué se utiliza el agitador en el laboratorio? 21. 142 . Explique como usted estandariza el potenciómetro 26. ¿Para que se utiliza el rotor en el laboratorio? 18.

Ejemplo:el cachumbambé.. Existen en el mercado múltiple tipos y modelos de balanzas.CAPÍTULO 10 BALANZAS INTRODUCCIÓN Las balanzas son instrumentos que se utilizan para medir el peso relativo de los cuerpos.. que van desde las que se utilizan para medir el peso en tonelada hasta las que se emplean para medir con precisión fracciones de Mg. Unidades de medición micrometricas. Estructura bacterianas Un virus Una molécula Un átomo PRINCIPIO El funcionamiento de las balanzas se sustentan en el principio físico de las palanca de primer grado. Gramo Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Ejemplo para pesar la masa de . Tabletas de medicamentos.. en las que el punto de apoyo se encuentra exactamente entre el punto de potencia y el punto de resistencia. Grano de polvo o gota de un liquido. 143 .. DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS Las balanzas que se utilizan corrientemente en los laboratorios de microbiología clínica son las granatarias y las analíticas digitales. mediante la comparación. los cuales están diseñados para diversas aplicaciones. con piezas de peso certificado denominadas pesas. ya que las de precisión o analíticas de tipo mecánico o eléctrica se emplean solo ocasionalmente. Unidad básica (Gramo) Unidad micro métrica Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Atogramo Equivalente a la Milésima parte de un .

1 a 500g o más. las de dos platillos y las de un platillo. al tipo de balanza. formando una cruz con los extremos ligeramente curvados hacia arriba. 144 . ya que por ser demasiado ínfimo. queda introducido en un orificio existente en ambos extremos de la base. Las barras horizontales quedan articuladas exactamente por su posición media. Sobre el extremo superior de las barras verticales se encuentran atornilladas dos planchuelas metálicas de unos 2 cm de ancho. plana o cilíndrica. con la que se puede determinar mecánicamente. Balanza de dos platillo (Balanzas de Roberval) Fig. los resultados que se obtengan serán dudosos. de unos 30 cm de largo. las vibraciones o el polvo circulante puede influir en la determinación del peso real. que sirven de soporte para la colocación de los platillos. articuladas por sus respectivos extremos a una barra metálica. que le sirve de punto de apoyo. 77: Balanza granataria de dos platillos(Balanza de Roberval) Esta estructurada por dos planchuelas paralelas de acero. en posición vertical. Cualquier objeto que se pretenda pesar con este tipo de balanza. si el peso del objeto es superior al de las pesas que se hayan en el otro platillo. mediante un pasador al extremo superior de una columna sólida. Se fabrica dos variantes de balanzas granatarias.Balanzas granatarias Se denomina así. mientras que su extremo inferior. las balanzas granatarias son empleadas cuando no se requiere conocer con precisión el peso del objeto. determinados factores como: las corrientes de aire. formando un paralelogramo rectángular. como por ejemplo: para determinar el gramaje de un medio de cultivo deshidratado en polvo. en posición horizontal. ubicada en el centro de la balanza. de menos peso que el señalado. el peso de un cuerpo que se encuentra entre 0. que al no estar topados en su interior posibilitan que la barra vertical penetre aun mas.

para tener en cuenta ese dato al determinar el peso del material (tara). Cerciórese de que los platillos estén limpios. en lugar de dos barras horizontales tienen una sola carente de grabación en g. etc) pesándolo previamente. quedando en posición vertical. proceda a accionar las tuercas de los tornillos de ajuste que se hayan a ambos extremos de la balanza. hasta conseguir que las oscilaciones sean parejas. Desestime las 2 o 3 primeras oscilaciones y posteriormente compare las que se producen hacia la izquierda del "0". Procedimientos para efectuar la pesada Una vez que el fiel de la balanza se haya ajustado a "0" proceda de la siguiente manera: 1. para lo cual debe observar como la aguja oscila libremente sobre la escala a ambos lados del "0". Si las oscilaciones son coincidentes. La parte superior de la aguja queda junto a una escala grabada en cuyo centro esta el "0" y hacia ambos lados. siendo el resto de la estructura similar. Mueva la pesa deslizante de la barra graduada hacia la extrema izquierda. El fiel en forma de aguja esta articulado por su extremo inferior a las barras horizontales. Ajuste el fiel de la balanza a "0". vidrio reloj. vaso de precipitado. provista de una pesa deslizante para ser movida hacia la izquierda o hacia la derecha hasta hacerla coincidir en la escala con el peso que se desea medir.La barra o planchuela que queda frente al manipulador esta grabada con una escala metrada en gramos. Si va a pesar algún material en polvo o líquidos. perpendicularmente a la columna de la balanza. hasta que marque "0" g. Algunos modelos de este tipo de balanza. por ejemplo 5-5 ò 4-4. vacíos y colocados correctamente sobre las crucetas. Nunca coloque los materiales directamente so145 . que permiten determinar las oscilaciones de la aguja hacia la derecha o la izquierda de la escala. Funcionamiento Antes de efectuar la pesada: 1. 3. Si las oscilaciones fueran desiguales. 2. utilice un recipiente adecuado (Papel. presenta de 5 a 10 líneas verticales equidistantes. cápsula de porcelana. la aguja del fiel al detener su movimiento lo hará justamente en el "0".

0.2. dentro del estuche se encuentra una pinza que es utilizada para extraerlas del estuche. como por ejemplo.0.1. mueva hacia la derecha de la barra grabada la pesa deslizante.5. Este tipo de pesas consiste en una laminilla plana de metal con forma cuadrada o rectangular. que como es obvio sera menor (0. pulidas y brillantes.01.0. 146 .10.0.2. extraiga de la caja de pesas las necesarias y colóquelas sobre el platillo de la derecha. Caja de pesas Fig. colocarlas sobre el platillo y posteriormente reintegrarlas. bre el platillo.3. hasta que la aguja del fiel marque "0".3 y 0. 78 : Caja de pesas Consiste en un pequeño cofre cuadrangular provisto de una tapa articulada con bisagras en su parte superior. a menos de que se trate de sólidos limpios. En los orificios que están situados de la mitad hacia atrás del estuche se colocan las de mayor peso. se colocan las que tienen menor peso que las referidas.50 o 100g) las cuales pueden combinarse para obtener cualquier peso en ese rango. acero inoxidable o aleaciones no magnéticas. En los orificios de la parte anterior del estuche. Al igual que las cilíndricas tienen grabado el peso.20. Para efectuar la pesada. Todas estas pesas se fabrican básicamente con latón.2.30. A continuación coloque el recipiente seleccionado sobre el platillo del lado izquierdo y vierta poco a poco en su interior el material que desea pesar.0.4. una sortija.5g). una barra metálica. presentando linealmente unos 20 orificios de diferentes diámetros donde se introducen las pesas.03.02. etc. que presenta uno de los bordes doblados en un ángulo de 900 por donde se toman con las pinzas. por donde se toman con una pinza de disección.40. Conjuntamente con las pesas. Estas pesas son cilíndricas.0. hasta que indique el peso adecuado. por su orden en la caja. Cada una de estas pesas tiene grabado el peso (1. Si fuera insuficiente. Internamente se encuentra tapizado de terciopelo.05. estando provistas de una pequeña prominencia en su parte superior.

2. esta balanza tiene la columna que sirve de punto de apoyo. Conserve limpias las piezas.PRECAUCIONES 1. y están grabadas con diferentes escalas en gramos. Mantenga las balanzas escrupulosamente limpias. Balanxa de un solo platillo (tipo Ohaus) Fig.generalmente. con la diferencia de que esta balanza no utiliza las piezas certificadas de la caja de pesas. según el modelo. 147 . antes de guardarlas en la caja cepíllelas con un pincel de pelo de camello. Los tornillos de ajustes. Coloque la balanza sobre una superficie nivelada en un lugar donde no se produzcan vibraciones y que la temperatura así como la humedad relativa sean estables. sino de flecha y la escala se encuentra en el extremo derecho y no arriba con en la de dos platillos. en especial los platillos. Las barras horizontales son dos o tres. sino en el extremo izquierdo.no es en forma de aguja. parra evitar que el polvo o la su ciedad puedan afectar la fiabilidad del peso. teniendo cada una de ellas una pesa deslizante. se encuentran debajo de los platillos. las cuales no deben ser colocadas en otro lugar que no sea los platillos. BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA Este tipo de balanza se utiliza cuando se requiere determinar con precisión el peso de pequenas cantidades de materiales u objetos. 79 : Balanza granataria de un solo platillo (tipo Ohaus) A diferencia de la balanza de dos platillos. El fiel de estas balanzas .de una muesca sobre cada numero de la escala para fijar la pesa en el punto exacto. El procedimiento para efectuar la pesada es similar. no en el centro. 3. cuyo peso sea de décimas o centésimas de gramos o pocos gramos. Generalmente estas barras están provistas .en su parte superior . Cuando se efectúan pesadas de productos en polvo.

sin caerse. d) Platillos. que son utilizados para nivelar la balanza.De acuerdo a su diseno se clasifican en: mecánicas.5cm de diámetro.quedando debidamente nivelado en posición vertical. que posee en el centro de su parte inferior un pequeño tirador que se utiliza para subir o bajar la puerta por un mecanismo de corredera (similar al de una guillotina) diseñado para que la puerta se quede fija. en dirección al manipulador.que al igual que los marcos que sirven para fijar las paredes y la parte superior de cristal. b) Cruz. Balanza de precisión mecánica Fig. este tipo de balanza se estructura por el fabricante dentro de una vitrina de cristal . Consiste en un tubo de metal inoxidable de unos 20 cm de largo x l. e) Dispositivos para subir o bajar la cruz. Columna: La columna sirve de base al punto de apoyo de la balanza. g) Chapa. generalmente es de madera o material plástico. El extremo de su parte superior esta estructurado con una planchuela metálica en posición horizontal. debido a la influencia de las corrientes de aire. La base está sostenida por un tornillo en cada uno de su ángulos . incoloro y transparente. En la pared anterior que queda frente al manipulador se encuentra incertada la puerta de la vitrina. que se encuentra atornillado por su base en el centro del piso de la urna. de unos 40cm cúbicos. h) Cuchilla Para evitar inexactitudes durante la pesada. f) Soportaplatillos. sobre una base de varios cm de altura. lo cual se comprueba mediante la observación de uno de los dos niveles de agua circulares que se encuentran en la superficie Partes de que consta l. 80: Balanza de precisión mecánica: a) Columna. La superficie de la planchuela tiene 148 . el polvo circulante o la humedad. c) Fiel. en cualquier altura en que sea detenida. eléctricas y digitales. la cual está provista de un marco independiente.

Las aristas de las tres cuchillas deben estar situadas en el mismo plano. Fiel: Sobre el centro de la concavidad de la cruz se encuentra atornillada una chapilla que sostiene por su extremo posterior a una larga y fina aguja que es el FIEL de la balanza. denominada "chapa".provocando que las piezas cilíndricas de la planchuela metálica 149 . Los platillos: Son dos piezas metálicas planas. tiene insertado un prisma de ágata de forma triangular. que hace que los platillos queden suspendidos. 4. una pequena pieza cilíndrica proyectada hacia fuera y en cada extremo un gancho semicircular del mismo material similar a la forma de las herraduras. teniendo su superficie plana y muy pulida. el cual se haya articulado por su porción posterior a un botón giratorio que se encuentra en la parte externa de la base de la urna en su porción central. Esta barra se caracteriza por tener varias perforaciones simétricas .en cuya cavidad se inserta una placa de acero o ágata .provisto de una saliente por cada lateral. 3. Este dispositivo queda ubicado por debajo y muy próximo a la cruz. caracterizada por su dureza e inalterabilidad al contacto con el aire. El extremo inferior es puntiforme y oscila como un péndulo. donde se observa el 0 en el centro y numeraciones iguales hacia ambos lados. Los salientes ubicados en la parte inferior tienen insertada respectivamente una cuchilla con la arista dispuesta hacia arriba y apoyadas en una pequena placa del mismo material contenidas en los estribos.que adopta una forma triangular con el vértice hacia abajo en cuyo extremo distal presenta un corte cóncavo.por donde se cuelgan los platillos. A todo lo largo del margen superior tiene grabada una escala en mm.forma de cajuela en U . Un medio giro del botón hacia la derecha. estando unido por su porción media a un eje que se encuentra introducido a todo lo largo de la columna.junto a una escala graduada desprovista de números cuyo centro representa al 0. el cvual será horizontal cuando el fiel de la balanza esté en 0. cuyas tuercas se utilizan cuando se requiere nivelar la balanza. suficientes para aligerar su peso sin que por ello pierda rigidez a la flexión. hace que el eje que atraviesa la columna se eleve. La cruz: Es una barra plana . se encuentra articulado un fino tornillo en posición horizontal.semejantes a un plato. cuyo vértice se apoya sobre la chapa de la columna. denominado "cuchilla". quedando en posición vertical. 2. perpendicularmente a la columna. quedando de esta forma la cruz en equilibrio. de unos l6cm de longitud. En el extremo lateral de cada estribo. por donde se inserta un alambre acerado rígido que describe una parábola algo angosta para factibilizar su colocación en los estribos de la cruz. de forma circular. Debajo del semicírculo que forma la concavidad. 5. Dispositivos para subir y fijar la cruz : Es una fina planchuela metálica muy rígida que tiene por la superficie de cada lateral. La cruz en ambos extremos laterales presenta dos salientes en forma de horquetilla angular denominada estribo .

proceda a girar convenientemente los tornillos donde se apoya la balanza hasta lograr que la burbuja esté en el centro del nivel.con el cual. Si se percata de que son diferentes hacia uno u otro lado del cero. Si se quiere determinar el peso de un objeto que tenga un peso inferior al mg. para lo cual observe la ubicación de la burbuja de aire en el nivel. con el objetivo de que no pierda el filo. aproximadamente por lcm .contacten con la parte inferior de la cruz y la eleve. se consigue que éstos suban y entren en contacto con los platillos. los cuales quedan ubicados debajo de los platillos. Del lado izquierdo del botón para fijar la cruz. impidiendo que oscilen cuando se le esté añadiendo algún peso. procediendo a quitar o poner las pesas o anadir o quitar producto en dependencia de los objetivos de la pesada.los cuales se deslizan a lo largo de la regla grabada que se encuentra en la cruz. denominados jinetillos . PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA l. 5. baje los portaplatillos y observe las oscilaciones del fiel. lo cual afectaría su exactitud. de agua que se encuentra en la superficie de la base de la balanza.para evitar que la cuchilla esté innecesariamente en contacto con la chapa. para lo cual haga bajar la cruz con los platillos vacios y observe las oscilaciones del "fiel" junto a la escala graduada. estando separados de estos. 3. hasta que las oscilaciones sean iguales. se encuentra el utilizado para accionar los portaplatillos. Determine el punto "0" de la balanza. Cierre la balanza.propiciando que el filo de la cuchilla no roce innecesariamente con la chapa durante esta acción. utilice los hilos de platino. teniendo la precaución de colocar en el centro la pieza de mayor peso y a su alrededor las de menos peso. Resulta indispensable realizar esta acción cuando no se esté realizando la pesada. 2. 6. Suba los portaplatillos. proceda a accionar los tornillos de nivelación de los extremos de la cruz. Cerciorese de que la balanza esté nivelada. Si se encuentra en una posición excéntrica. Cuando el material a pesar y las pesas estén colocados sobre los platillos. Soportaplatillos :Son dos discos articulados respectivamente a un fleje metálico recubierto de fieltro. se bajan los portaplatillos para que oscilen libremente y se pueda determinar el peso.separando la cuchilla de la chapa para finalmente quedar estática debido a la presión del dispositivo. que tienen forma de gancho. con peso cerificado.seguidamente tome con la pinza las pesas y situelas por orden de peso (de mayor a menor) sobre el platillo de la derecha. 150 . Deposite el material a pesar en un recipiente apropiado (previamente pesado) y colóquelo en el centro del platillo de la izquierda. 4.

antes y después de su uso.Cerciorase de que las pesas estén limpias y manipúlelas siempre con la pinza. d) Indicador digital. g) Palanca de retención. c) Platillo. f) Botones de ajustes de las pesas de cambio. .6. . donde no existan vibraciones. b) Botón para el ajuste del punto "0".Limpie el interior de la balanza. . BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA Fig. PRECAUCIONES .Garantice que la balanza sea ubicada sobre una mesa o meseta nivelada. Al concluir la pesada procesa a subir los portaplatillos. no las toque con los dedos.En los ángulos de la urna coloque un pequeño recipiente que contenga un desecador con el objetivo de que absorba la humedad y mantenga secas la atmósfera en el interior de la urna. como por ejemplo: lana de vidrio embebida en ácido sulfúrico concentrado o pequeños gránulos de cloruro de calcio anhidro. 8l: Balanza de precisión eléctrica: a) Botón para el ajuste de la compensación de tara. e) Botón para la graduación de la precisión del indicador digital. .baje los portaplatillos y cierre la balanza.retire el material ya pesado y con el empleo de la pinza retire las pesas por su orden de menor a mayor peso. en especial los platillos. .Exclusivamente los sólidos se pueden colocar directamente sobre el platillo. cambios de temperaturas o humedad.La lectura de las pesadas deben efectuarse siempre con la puerta cerrada. h) Orientador de la dosificación. Suba la cruz. 151 . ya que éstos le comunican humedad y suciedades que alteran el peso.

Es de formas circular. tambien de cristal. generalmente es más pequeña aunque al igual que la mecánica. que se caracteriza por tener un diámetro mayor en su base que en la parte anterior. Botón para el ajuste de la compensación óptica de tara : Este botón se encuentra articulado en el ángulo superior derecho de la pared frontal de la balanza. Aproximadamente. pero difiere de ésta. En la parte inferior (Rodeada por la pared de cristal y las ventanas laterales) se encuentra colgado centralmente el único platillo que posee este tipo de balanza.Este tipo de balanza se utiliza al igual que la balanza analítica mecánica. el nivel se regula. es de cristal. Botón de ajuste del punto cero: Es un botón igualmente igualmente cilíndrico de menor tamaño. estando cubierto por una tapa de vidrio. la mitad inferior de la pared frontal. 2. la caja o urna donde se encuentra estructurada tiene forma rectángular y se haya en posición vertical sobre su base. Al igual que la balanza mecánica.cuando se requiere determinar con precisión el peso de un objeto. que sirve para indicar donde ser detenido el giro del botón para hacer coincidir la letra "T"con la línea de referencia. sin incluir la base. que ocupa la mitad del ancho de la caja. teniendo la superficie plana provista de una letra "T" impresa. que generalmente se localiza empotrado centralmente en la superficie de la balanza muy próximo al borde anterior. de una ventana de corredera. aunque más grueso. Indicador de nivel : Consiste en un aditamento circular de no más de 2 cm de diámetro. hasta lograr que la burbuja de aire del agua que contiene quede en el mismo centro del circulo concéntrico. Se encuentra articulado en el centro del botón para 152 . haciendo girar convenientemente en una u otra dirección los tornillos. En la parte superior de la periferia donde gira este toirnillo. tanto en el tamaño como en su diseño. Las paredes laterales están provistas. respectivamente. para facilitar su manipulación . muy próximo a su borde y un grosor de menos de 2 cm estriado transversalmente. Principales partes de que consta 1. provista de un círculo concéntrico de unos 7 mm de diámetro. Un tabique en posición horizontal divide la urna internamente en dos partes. lo que le da una configuración ligeramente cónica . la superior ocupa aproximadamente un tercio de todo el espacio y en ella se encuentra instalado parte del sistema eléctrico y otros dispositivos interconectados con el resto del sistema que se encuentra en la parte posterior de la balanza. así como la porción inferior de los laterales y la cubierta superior son generalmente de material plástico. 3. la pared de la caja tiene grabada una pequeña linea vertical. La parte posterior.

estando provisto de una tapa. 4. .no debiendo poner ni quitar del platillo el objeto a pesar. 2g. Botón para la graduación de la precisión del indicador digital :Tambien denominado botón micrométrico. ubicado en el lateral derecho de la base. 7. denominado tambien placa mate.…etc y el botón marcado con el #1. 5. En esta posición se lee el resultado de la pesada. Hacia la derecha se encuentra grabado ½. Al ser girados hacia la derecha van colocando las pesas o al ser girados hacia la izquierda las levantan. 30g. 3.500 y 1000..el ajuste de la compensación óptica de tara. 30… etc. 6. 20. Es un botón grande. lo cual se va registrando en el contador o indicador de pesas de cambios que se haya en el lado derecho de la base. En el centro de las dos escalas se haya un indicador óptico. Verifique que la balanza este debidamente nivelada. Indicador de pesas de cambio :Consiste en una pequeña pantalla que se haya en la parte frontal de la base. por su lado derecho. en el centro de la base. En la parte superior el "0". Funcionamiento Acciones previas l. el peso originado por el accionar de los botones de ajustes de las pesas de cambio. En esta posición la balanza se encuentra frenada y la iluminación apagada. En esta posición se puede leer el peso aproximado en gramos en la escala proyectada. Palanca de retención :Es una pieza rígida de forma lanceolada (como la punta de una lanza) que se encuentra articulada por su extremo más grueso.) en su periferia. lo que equivale al lg. hasta lograr que la 153 . provista de una línea oscura que indica aproximadamente el peso. 2. ya explicado. Lo que equivale a 10g. El ubicado a la izquierda tiene grabado en su tapa un # l0 y el de la derecha un #1 . o sea: 10. 8. Se encuentran ubicados en la parte frontal de la base. produce el cambio de pesas de l0 en 10. 20g. produce el cambio de pesas de l en l o sea: l.…hasta el 9. de no ser así. Hacia la izquierda. . por su lado izquierdo. donde se van registrando en una doble escala.. haga girar en uno u otro sentido'los tornillos de la base de la balanza.etc.provisto de una escala numérica. 3g. con los números 0. que tiene grabado en su centro un "0"con un (. Orientador para la dosificación : Debajo del indicador de las pesas de cambio se haya una pequeña escala graduada. Alrededor de la palanca se encuentran grabado 3 números: .El botón marcado con el # 10. Botones de ajuste de las pesas de cambio : Son dos. el # 1.

haciendo girar el botón para la graduación de la precisión. 2. que se encuentra en la parte superior. incluyendo el encendido del bombillo piloto. . Haga girar la palanca de retención hacia el "0".Retrase la escala a "0"haciendo girar el botón de compensación de tara. Ajuste al punto cero l. En este momento la balanza está frenada y la iluminación apagada. . haga girar los botones de ajuste de las pesas de cambio y el botón para la graduación de precisión . 3. 2. . .Abra la ventana lateral y coloque sobre la superficie del platillo el recipiente vacio (tara) donde se va a depositar el material a pesar. lo que dará lugar a un peso total de 44g.Gire la palanca de retención hacia el # 1 y deje oscilar la escala. Por ejemplo: si la escala se detiene en 5g. Repita la operación con el botón de la derecha (marcado con el # l). retroceda una unidad o sea hasta 4g. Detenga la rotación y proceda a girar el botón una graduación hacia atrás . La balanza se iluminará y proyectará la escala numérica. PESADA 1.Girar finalmente la palanca de retención hasta el "0" 154 . .. los botones de ajuste de las pesas hasta situar la escala en "00"(de esta manera queda anulado el peso del recipiente (tara) .Gire la palanca de retención en dirección a ½ (semiretención) .burbuja de aire del nivel de agua quede ubicada exactamente en el centro del círculo concéntrico.Gire hacia la derecha gradualmente el botón de ajuste de las pesas que se encuentra del lado izquierdo (marcado con el # 10) y vaya observando simultáneamente la escala del indicador de la izquierda hasta que aparezca un signo menos (-) o se trabe el avance . en contra de las manecillas del reloj hasta que marquen "00". por ejemplo: si la escala marcó 50g. Conecte la balanza a la red eléctrica para propiciar su funcionamiento e iluminación. . Haga coincidir la marca índice con la raya "00" proyectada. retroceda hasta 40g.Haga girar en contra de las manecillas del reloj.Haga girar el botón para el ajuste de compensación de tara. Si el indicador de pesas de la izquierda y el contador micrométrico de la derecha no están marcando respectivamente "00". Compensación de tara . Mueva lentamente la palanca de retención hacia el # l. .Cierre la ventana de la balanza. en contra de las manecillas del reloj hasta hacer coincidir la letra "T": con la línea de referencia.Proceda igualmente con el botón del ajuste a "0".

Haga girar la palanca de retención hacia el "0"para retener la balanza y seguidamente soltar lentamente la retención haciendo girar la palanca hacia el # 1 . utilizando los botones de ajuste de las pesas de cambio. Fig.Depositar el producto a pesar en el interior del recipiente y cerrar la ventana. Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la apesada en la escala de la derecha del indicador de pesas de cambio.Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital hasta hacer coincidir la placa mate del indicador óptico con la raya proyectada.2014 g. Por ejemplo. el indicador digital marca 20 y el contador micrométrico de la derecha marca l4. . abrir la ventana y extraer el material ya pesado.DETERMINACIÓN DEL PESO . . .Colocar la palanca de retención en "0".Leer el resultado. .Cerciorese de que la palanca de retención esté en "0" . . Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la pesada. si el indicador de pesas de cambio registra 42g . 82 : Lectura de una balanza analítica eléctrica 155 .accionando el botón para hacerlo coincidir con la raya proyectada.Proceda igual que para determinar el peso de la tara.Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital.Girar la palanca de retención hasta ½ (semi retenida) durante la preselección del peso .Poner nuevamente todos los elementos de mando en "0" . 42. el peso será el siguiente .hasta que la escala quede inmóvil y el trazo inmediato inferior se encuentre exactamente en la rendija de la horquilla índice.

¿Con que objetivo se utilizan las balanzas de precisión? 12. lo cual no puede ser resuelto internamente por el personal del laboratorio experimentado. 10. requiriendose de un servicio especializado. 5. ya que basta con conectarla a la red eléctrica. ¿Cuál es la función de la cuchilla de la balanza de precisión 13. 3. conoce? ¿Qué se entiende por peso de tara? ¿A que denominamos fiel de la balanza? Describa en orden cronológicos que Ud. Con que objetiovo se debe subir y fijar la cruz de la balanza? 156 . 2. 83 : Balanza analítica digital La balanza analítica digital simplifica todas las operaciones explicadas a los largo de este capítulo. debe efectuar para realizar una pesada en una balanza granataria de un solo platillo? 8.BALANZA ANALITICA DIGITAL Fig. La dificultad que presenta. es cuando se produce algún desperfecto. Argumente por que causa los platillos deben estar limpios? 11. Este tipo de balanza tiene un alto grado de precisión. CUESTIONARIO 1. accionar un botón y el peso podrá observarse digitalizado en una pequeña pantalla. Explique en que consiste el principio funcional de las balanzas ¿ A que denominamos pesas ¿ ¿Cual es el rango de pesadas de una balanza granataria? ¿Cuántos tipos de balanzas granatarias Ud. Explique por que causa las pesas se deben tomar con una pinza de disección y no con la mano. colocar el material a pesar sobre un platillo externo. 6. 4. 7. ¿En que orden se deben colocar las pesas sobre el platillo? 9.

¿Cómo se colocan las pesas en la balanza de precisión eléctrica? 19. ¿Cómo Ud.con una balanza de precisión eléctrica? 21. Explique las causas por lo que las balanzas de precisión deben estar en el interior de una urna 15. Diga lo que usted sepa en relación con la balanza analítica digital.como Ud. realiza la depreciación del peso de tara en una balanza de precisión elaéctrica. Describa paso a paso como usted determina el peo de un objeto en una balanza de presición elaéctrica 22. efectua una pesada con una balanza de precisión mecánica. 20. 157 . Explique como Ud. ¿Cómo Ud. Describa el orden cronológico. Explique lo que indican las tres posiciones que tiene la palanca de retención. 18. realiza el ajuste al punto cero. regula el nivel de una balanza de porecisión 17. L6.14.

DIFERENTES TIPOS Relojes Se emplean dos tipos de relojes: los cronómetros y los de intervalo. Relojes de intervalos Estructuralmente son similares a un reloj despertador doméstico y al igual que los cronómetros pueden ser accionados por energía eléctrica o cuerda.CAPÍTULO 11 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN NO VOLUMÉTRICOS INTRODUCCIÓN Los instrumentos de medición no volumétricos se emplean en las investigaciones de laboratorio para medir específicamente magnitudes de tiempo. b) Reloj de intervalo. temperatura o densidad. Empleo: para medir el tiempo en minutos y/o segundos. eléctricos o de cuerda. 84: Relojes: a) Cronómetros. Fig. caracterizándose por hacer sonar una alarma cuando concluye el tiempo previsto. 158 . INSTRUMENTOS. provistos de uno o dos botones de control que se utilizan para accionarlos o detenerlos. Cronómetros Son relojes manuales.

denominado columna indicadora.Termómetro clínico: En este tipo de termómetro el reservorio se encuentra lleno de mercurio. Su extremo anterior está sellado como un ámpula. Centrífuga. etc. Al disminuir su intensidad se mantendrá indicando ese valor. lleno de un producto químico dilatable por el calor. como por ejemplo. el producto químico que contiene se dilata y asciende por el capilar. Este bulbo se continúa con un fino capilar ubicado a todo lo largo del termómetro. Cuando el bulbo es expuesto al calor. Debido a que el capilar que forma la columna indicadora está unido al reservorio por una especie de sifa en forma de "S" cuando la columna de mercurio alcanza el grado máximo. por lo que hay que "sacudirlos" para que se concentre nuevamente en el reservorio. 159 . ya sea en grados Celsius o Fahrenheit. 85: Termómetros. más estrecho está ocupado por un bulbo. Al detenerse se confrontará con la escala para determinar el grado de calor. paralelamente a la escala. en correspondencia con la exposición al calor a que ha sido sometido. haciendo que se detenga automáticamente su funcionamiento al concluir el período de tiempo en que fue ajustado.Este tipo de reloj se encuentra tambien articulado en algunos equipos de laboratorio. Termómetros Fig. Empleo: para medir el tiempo en horas y minutos. 1. generalmente. rotor. Diferentes tipos de termómetros Se utilizan dos tipos de termómetros: el clínico y el químico. y el posterior. Los termómetros empleados en el laboratorio consisten en un tubo de vidrio de paredes gruesas de longitud y diámetro variable. provisto de una escala impresa en grados Celsius (ºC y/o grados Fahrenheit º F).

Este tipo de termómetro se encuentra insertado en los equipos termoregulados como: el horno. la incubadora. se procede de igual manera. ascenderá o descenderá. pudiendo tener una estructura diferente a l explicada. la columna del alcohol o xilol. con la diferencia que generalmente tiene una mayor longitud y la escala de temperatura es de un rango mucho mayor. en g/cm3 o en g/mL es numéricamente igual a sus densidades. el peso específico de los líquidos.0g/mL a 4ºC. Para convertir grados Celsius en grados Kelvin basta con adicionar la constante 273 a los grados Celsius obtenidos. encontrándose sellado como un ámpula en su extremo distal. Estructura Fig. la parte superior consiste en un fino tubo de vidrio. Como la densidad del agua es de 1. 0. pero empleando la constante 460. estando estructurados por tres partes diferentes entre sí. Densímetros Son instrumentos que se emplean para medir la densidad o peso específico de soluciones compuestas por diferentes solutos y solventes. teniendo impreso a todo lo largo una escala graduada 160 . el autoclave. 86: Densímetro. Mide aproximadamente algo más de un tercio de la longitud total del densímetro.8)+32=ºF Existen otras dos escalas para medir la temperatura. El peso específico es la relación entre el peso de una sustancia con respecto al peso de un volumen igual de una sustancia de referencia. Termómetro químico: La estructura de este tipo de termómetro es similar a la del termómetro clínico.De grados Fahrenheit a Celsius (ºF-32).De grados Celsius a Fahrenheit (ºC. ya explicada. Otro aspecto que lo distingue del clínico es que al carecer de la sifa. Para convertir temperaturas de una escala a otra se procede de l siguiente manera: . 1. que son: la Kelvin y la Rankine. etc.555=ºC . Los densímetros son tubos de vidrio que miden de 15 a 20 cm de largo. En lugar de mercurio el reservorio de estos termómetros está lleno de alcohol o xilol teñidos. alargado y cilíndrico. pero basada en el mismo principio. en el capilar en correspondencia con las oscilaciones de temperatura.2. que usualmente es el agua. Por ejemplo: 3200C+273=3020K Para convertir grados Fahrenheit a grados Rankine.

semejantes a municiones. como por ejemplo: 1. ¿Cómo usted debe proceder para convertir grados centígrados en grados Fahrenheit y viceversa? ¿Para qué se utilizan los densímetros en el laboratorio? ¿Qué usted entiende por peso específico? ¿Cuál es la densidad del agua? Describa la estructura de un densímetro . variará. 2. La escala va descendiendo dividida en partes iguales y el valor mayor. ¿Con qué objetivo el bulbo redondeado que se encuentra en la parte inferior de los densímetros se encuentra lleno de municiones? Describa el procedimiento a seguir para determinar la densidad de un líquido? 161 . 4. ¿Cómo se denominan los dos tipos de relojes empleados para el trabajo de laboratorio? ¿Cuál es el principio funcional de cada uno de los relojes? Describa la estructura de un termómetro clínico y uno químico. 2. 7. para lo cual debe observar en qué graduación de la escala se encuentra el nivel de la solución. La porción media es más gruesa y de mayor longitud.. 6. cuidando de no incurrir en el error de paralelaje. 3. en dependencia del tipo de densímetro de que se trate. formando un bulbo pequeño y redondeado.000 (que es la densidad del agua). colocándolo en el centro del diámetro de la probeta en posición vertical. 9. Espere a que se detenga el movimiento de rotación y proceda a realizar la lectura. que proporcionan peso al densímetro. Tome el densímetro específico por la parte superior con los dedos índice y pulgar e introdúzcalo en la solución. 4. no entre en contacto con las paredes de la probeta. 11. Haga girar el densímetro. Procedimiento 1. 8. mediante el accionar de los dedos y cerciorarse de que al rotar. 3. 12.060 en los urodensímetros. CUESTIONARIO 1. 10. que se utilizan para medir la densidad de la orina. consistiendo básicamente en un bulbo lleno de aire. En su extremo posterior el bulbo se estrecha y a continuación se dilata. ¿Cómo se denomina el producto químico que se utiliza en cada tipo de termómetro para llenar sus respectivos reservorios? Especifique las diferencias funcionales entre el termómetro clínico y el químico. lleno de bolitas de metal. 5. Deposite en una probeta de tamaño apropiado (preferentemente no graduada) la solución a la que se le desea medir la densidad y colóquela sobre una superficie nivelada.en cuya parte superior se puede observar el número 1. para propiciar que se mantenga en posición vertical cuando sea introducido en el líquido al que se le va a medir la densidad.

INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y MATERIALES DE CURACIONES INTRODUCCION Bajo el término de accesorios. en posición horizontal. se agrupan diversos objetos. Además de facilitar el acceso al tipo de cristalería con que se esté trabajando o el ordenamiento secuencial de las muestras. los orificios de las gradillas también serán de tamaño variable.CAPÍTULO 12 ACCCESORIOS. fábricadas de metal. provistas de perforaciones. utilizados con carácter auxiliar en el trabajo de laboratorio al igual que algunos instrumentales quirúrgicos. mientras que determinados materiales de curaciones son empleados para diversos usos. por donde se coloca la cristalería en cuestión. Teniendo en cuenta que los tubos de ensayo tienen diámetros diferentes. Generalmente son rectángulares y están estructuradas por dos o tres planchas. separadas entre sí. madera o plástico. 162 . lo que permite seleccionar la adecuada para cada tipo de tubo. ACCESORIOS Entre los accesorios que se utilizan con mayor frecuencia. 87: Gradilla Gradillas Son soportes diseñados para la colocación de tubos de ensayo u otros tipos de cristalería. insertándolos en los orificios boca abajo. las gradillas factibilizan además el que se puedan escurrir los tubos después de ser fregados. se encuentran los siguientes: Fig.

Soporte universal Fig. 88: Cesto metálico. los cestos son soportes.Cestos Fig. que se utiliza para colocar pinzas de sujección o aros metálicos. no compartimentados. 89: Soporte universal Está constituido por una base metálica sólida y pesada. Al igual que las gradillas. sobre la que se erige una varilla recta de hierro de 1. Generalmente son cilíndricos o cuadrangulares y están fabricados de alambres entrelazados o chapas de metal inoxidable perforado. que se utilizan para la colocación de tubos de ensayo y otros tipos de cristalería. lo que le proporciona estabilidad. Los cestos son utilizados para depositar la cristalería para su secado o esterilización.5cm de diámetro. 163 .

el principio de su funcionamiento es similar al de un palito de tendedera. Trípode Fig. así como las pinzas para tubos de ensayo y la pinza de Mohr. y cuando se retira la presión se cierran. separadas entre sí a una misma distancia y soldadas por su extremo superior a un aro también de metal. c) Pinza de Mohr. b) Pinza de bureta. Entre las más empleadas se encuentran: los modelos de tres dedos. diseñadas para fijarlas a la varilla de fierro del soporte universal y otras para operarlas manualmente. cuando se aprietan con ayuda de los dedos índice y pulgar. algunas de las cuales.Pinzas de sujección Fig. Se trata de un accesorio metálico. formado por tres varillas metálicas de igual longitud. En ambos casos. estas dos últimas de utilización manual. 90: Pinzas de sujeción: a) Pinza de tres dedos. los de vasos de precipitado. Otro tipo de pinzas igualmente empleadas para el manejo de objetos pequeños como las pesas y los diversos especímenes son de acero inoxidable. Cuando el trípode es colocado sobre la mesa de trabajo. La pinza de Mohr se utiliza para obstruir el paso de un líquido que fluya a través de una manguera de goma flexible de más o menos un cm de diámetro. las respectivas pinzas se abren. podemos percatarnos de que las patas no quedan en posición 164 . Se fabrican diferentes tipos de pinzas de sujección. es decir. los de bureta. 91: Trípode. teniendo la punta curva o recta.

Malla de amianto Fig. con los extremos que contactan con la mesa más separados que los que están soldados en el aro. 92: Malla de amianto Es una malla plana de alambre entrejido. 165 . de forma cuadrangular o circular que mide unos 15cm2 o de diámetro. Instrumental quirúrgico Fig. b) Tijeras. de manera que el recipiente queda aislado de la llama directa y el calor se distribuye uniformemente a través del amianto. sino ligeramente oblicuas. Esta malla se utiliza cuando se va a calentar un líquido contenido en frascos de vidrio. así como de charolas.vertical. directamente a la llama de mechero. para lo cual se coloca sobre el aro del trípode. se realiza la disección de determinados especímenes de experimentación. similar a un colador. 93: Instrumental quirúrgico: a) Bisturí. c) Pinzas de disección. ocasionalmente se requiere del empleo de diferentes agujas. bisturí y tijeras de disección. una especie de bandeja donde. d) Agujas de disección Además de los trocars y las agujas hipodérmicas de diferentes calibres en el trabajo de microbiología. y sobre ésta el frasco de cristal. que posee en su centro una circunferencia de unos 10 cm de diámetro de amianto fundido en la malla.

5. como por ejemplo: heces fecales. Gasa quirúrgica Se utiliza para la preparación de torúndas que posteriormente son empaquetadas en papel de 3 a 5 unidades para ser esterilizadas en autoclave antes de su empleo. Algodón Gasa quirúrgica Aplicadores Depresores Soluciones y tinturas desinfectantes Algodón El algodón se utiliza para taponear la boca de los tubos y otras cristalerías que van a ser sometidas a un proceso de esterilización y conjuntamente con los aplicadores de madera en la confección de hisopos finos y gruesos. para efectuar la pesada o como sustituto de los aplicadores en las preparaciones de heces en láminas para examen parasitológico. 4. se utilizan para deprimir la lengua en la toma de muestras de exudado faríngeo y también. se encuentran los siguientes: 1. Los depresores.MATERIALES DE CURACIONES Entre los materiales de curaciones más empleados en el trabajo microbiológico. 3. 166 . se emplean también para la toma de algunas muestras. además de ser utilizados en la confección de hisopos. 2. pueden emplearse para extraer medio de cultivo de sus frascos. de madera o plástico. Aplicadores y depresores Los aplicadores. para su preparación en láminas destinadas a la investigación parasitológica.

Describa la estructura y el material con que se fabrican las gradillas. ¿Para qué se utilizan los cestos? ¿Cuál es la finalidad utilitaria del soporte universal? Describa los diferentes tipos de pinzas de sujección que usted conozca. 6. ¿Para qué se utilizan materiales de curación en el laboratorio? 167 . 3. Describa la estructura de los cestos y el material con que se fabrica.CUESTIONARIO 1. 10. 5. Especifique los diferentes usos que se les dan a las gradillas en el laboratorio. ¿Para qué se utiliza la malla de amianto? Mencione los instrumentales quirúrgicos que se utilizan en el laboratorio. 4. Describa la estructura de los trípodes. 2. 8. 7. 9.

etc. la mala calidad de su obtención y la no observancia de las precauciones de asepsia. como el esputo y el pus. orina. lo cual aporta al médico de asistencia un dato valioso que le permite indicar un tratamiento antimicrobiano mucho más eficaz. que las especies patógenas que se encuentran en los líquidos corporales. donde presuntivamente se encuentran microorganismos patógenos o los anticuerpos inducidos por sus componentes antigénicos. tejidos. material excrementicio.. la insuficiente o excesiva cantidad de muestras a utilizar para el cultivo. pueden en algunos casos afectar la viabilidad del germen y en otros su cuantía. pudiera pensarse que esta paridad. etc. 168 . Además de las fuentes ya referidas se obtienen del paciente muestras de los productos patológicos. Visto así. resulta suficiente para considerarla como una muestra representativa. se sustenta en el estudio de las muestras obtenidas del paciente o portador. es indispensable entre otros requisitos. exudados. sin embargo determinados factores y procederes como: la demora en realizar la siembra de la muestra. los inadecuados métodos de conservación. heces. que obtenemos del paciente o portador.CAPÍTULO 13 TOMA DE MUESTRAS INTRODUCCIÓN El diagnóstico microbiológico de laboratorio. etc. MUESTRA. CONCEPTO Se denomina MUESTRA a la porción o volumen de: líquidos corporales. además de propiciar contaminaciones que en su conjunto afectan la calidad de los resultados al perder la muestra representativa. Muestra representativa Para que el diagnóstico de laboratorio sea fidedigno. como por ejemplo: sangre. del paciente sean las mismas que contiene la muestra y su cuantía relativamente proporcional. que propicia la identificación directa o indirecta de los agentes casuales de la infección o enfermedad infecciosa y en determinadas investigaciones información complementaria acerca de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en cuestión a la acción de los fármacos antimicrobianos. que son producidos por algunos microorganismos en su interacción con los tejidos.

Ejemplo. En cambio . se siembran en este tipo de medio y se envían a la mayor brevedad posible. que favorecen su desarrollo y multiplicación. Cuando la muestra no puede ser sembrada de inmediato.C. a temperatura ambiente. con la muestra de orina (urocultivo) sucede todo lo contrario. En este caso la pérdida de representatividad sería por exceso y no por defecto como suele suceder en los ejemplos anteriores. c) Formol al 10 %. 169 . que comúnmente están presentes en la orina.Demora en realizar la siembra En principio todas las muestras deben ser sembradas lo antes posible en los medios de cultivo que favorezcan el desarrollo de las especies patógenas que presuntivamente contienen procediendo a su inmediata y adecuada incubación. para la siembra de exudados caracterizándose por mantener la viabilidad del microorganismo. por haberse tomado en lugares distantes. como los Mixovirus y Hirpesvirus. Fundamento: el frío enlentece el proceso de multiplicación. que no sobreviven mas allá de tres horas si la muestra en que se encuentra no es inoculada antes de ese tiempo en los medios apropiados. lo que permite identificarlos mediante la observación de su morfología. los componentes nitrogenados. al laboratorio de referencia. larvas o huevos de helmintos. d) Medios de transporte. Fundamento: mantener a los microorganismos en una temperatura similar a la corporal. Fundamento: mata a los microorganismos sin deteriorarlos significativamente. por lo que el frío y la temperatura ambiente provocan su lisis.R es muy sensible a los cambios de temperatura. pero al mismo tiempo sin favorecer significativamente su desarrollo. Métodos de conservación a) Refrigeración a 4 0C (en las parrillas). por ejemplo: la Neisseria meningitidis (meningococos) que con elevada frecuencia se aísla en la muestra de L. para conservar muestras de orina para el urocultivo. b) Incubación a 370 C. Cuando esto no sea posible. caracterizándose por inhibir las reacciones enzimáticas autodestructoras y aminorar los efectos de la oxidación. Los medios de transporte se emplean generalmente. ocurriendo similar situación con algunos virus. hidratos de carbono y otros residuos minerales presentes en la muestra son utilizados por la mayoría de las especies. Ejemplo: para la conservación de muestras que contienen protozoarios. como nutrientes. el proceder a seguir dependerá de la muestra de que se trate. debido a que son muy reductores.

Por ejemplo: en la fase inicial de la fiebre tifoidea. Momento idóneo En algunas muestras como el esputo. que es el momento en que mayor cantidad de expectoración se encuentra acumulada y en otras muestras. el agente causal. está normado que la cantidad de sangre total a sembrar sea de un 10 % en relación con el volumen de medio de cultivo a utilizar. pero cuando la enfermedad lleva unas dos semanas de evolución el microorganismo emigra al intestino. transcurre por una evolución similar en los primeros 10 días (periodo de leptospiremia) la leptospiras se encuentran en sangre y posteriormente invaden diferentes vísceras y el sistema renal.R (bacilos ácido alcohol resistentes) requiriéndose no menos de 2ml. como por ejemplo: el hemocultivo. ya que por las características mucoides de este producto patológico los bacilos se encuentran distribuidos desigualmente en la muestra. Si el volumen de sangre fuera menor que el indicado. que es cuando se encuentra en sangre la mayor cantidad de microorganismos. resulta indispensable. la cantidad de anticoagulante que se adiciona al medio de cultivo. va a depender del cuadro clínico del paciente y del tiempo de evolución de la enfermedad. resultaría insuficiente. debe ser recogido por el paciente. Cantidades menores o mayores son objetables.A. al levantarse. Calidad de la muestra Para que la muestra sea de buena calidad.A. el momento más adecuado.Cantidad de muestras a tomar En algunas determinaciones. lo que traería como consecuencia la formación indeseable de coágulos de sangre que interfieren delimitan las manifestaciones de crecimiento (turbidez). la Samonella tiphy se encuentra en la circulación sanguínea por lo que resulta procedente tomar muestra de sangre para hemocultivo. se recomienda esperar el momento del pico febril. a de tenerse en cuenta en algunas ocasiones el momento idóneo y en general delimitar con precisión el área anatómica para su obtención. (leptospiuria) debiendo 170 . La lectospirosis. reducirá proporcionalmente la expresión de crecimiento en los cultivos y si fuera mayor. en ayunas. la sangre para hemocultivo o gota gruesa. Otro ejemplo donde la cantidad de muestra a emplear. por lo que en ese momento lo adecuado es obtener muestras de heces fecales para coprocultivo. En otras ocasiones. ya que afectan la calidad de los resultados. como por ejemplo. es en la de esputo para investigar B.

en el esputo. 3. no la saliva y en las muestras de heces fecales las porciones mucosanguinolentas. lesiones en la piel. favorece. 171 . la información de un diagnóstico erróneo. El cumplimiento de estos requisitos. Y lo que puede ser mas perjudicial. se debe delimitar el área exacta para su obtención por ejemplo: la toma de muestra de lesiones purulentas debe realizarse en la región subyacente y no del pus que se encuentra en el orificio de salida. donde la mayoría de los microorganismos están muertos. Cuando la muestra ha sido recolectada por el paciente.obtenerse en la primera fase sangre para hemocultivo y en el segundo momento orina para urocultivo. se utilizará la parte mas purulenta. del sitio donde se va a realizar la punción.C. Las deficiencias en este sentido. Precauciones de asepsia Son las acciones encaminadas a evitar que la muestra se contamine durante su obtención.o. 4. que el diagnóstico de laboratorio se corresponda con los agentes infecciosos. hisopado o raspado. que tenia el enfermo o portador en el momento en que fue obtenida la muestra. Delimitación del área anatómica Una vez determinado en que órgano o tejido se va a realizar la toma de muestra. con implicaciones para la evolución del paciente y el cuestionamiento sobre la calidad del servicio. para evitar que estos contaminen la muestra y se desarrollen en el cultivo. por ejemplo. será la mas evocadora de contener la mayor cantidad de microorganismos. con alcohol etílico al 70 % con yodo. la porción que se tomará para el cultivo. Demora en la información del diagnóstico al médico de asistencia para iniciar o modificar el tratamiento. L. creando confusión en el momento de establecer el diagnóstico. con especies microbianas ajenas al proceso infeccioso. etc. 2. Se debe remover previamente los m. de la microbiota residente. traen como consecuencia una serie de contratiempo como son: 1. Afectaciones económicas por gastos de materiales e insumos. Molestias innecesarias al paciente que debe someterse nuevamente a la obtención de la muestra.R. por ejemplo: para obtener muestras de sangre para hemocultivo.

colirios. Al menos 12 horas antes de la toma de la muestra. o concurran al laboratorio en condiciones favorables para su obtención. en los procesos inflamatorios y que se deposita en los intersticios de los tejidos o en la cavidad de una serosa. lo cual favorecerá. Instrucciones generales 1. hemorrágico y seroso. Observe la zona faríngea con ayuda de una lámpara de cuello que proporcione 172 . lociones etc. Suspender cualquier tratamiento con antibióticos 48 horas antes de la toma de la muestra. Instrucciones específicas Variarán en dependencia del tipo de muestra de que se trate. Suspender cualquier tratamiento local con medicamentos antimicrobianos.INSTRUCCIONES AL PACIENTE El paciente que tiene indicado uno o varios exámenes microbiológicos debe ser instruido por su médico de asistencia o por el personal del laboratorio a los efectos de que recojan la muestra con la calidad requerida. 2. Exudado faríngeo: Indicaciones específicas: antes de concurrir al laboratorio el paciente debe realizar el aseo matutino habitual. gotas nasales. que en el momento de su obtención. DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS Exudados Concepto: es la materia mas o menos fluida salida de los vasos pequeños o capilares por exudación. fibroso. tales como: productos tópicos (pomadas. inclínele ligeramente la cabeza hacia atrás. Las instrucciones son de dos tipos: generales y específicas. Se clasifican en: albuminoso. Diferentes tipos de exudados a. Procedimiento: estando el paciente sentado. la cantidad de microorganismos sea suficiente para que puedan ser observados en los exámenes microscópicos y aislados en los cultivos.). óvulos. solicitándole que abra la boca y emita un ¡ahhh! sostenido. para reducir la probabilidad de que la muestra se contamine con la microbiota normal. gargarismos etc.

como pueden ser: mucosas enrojecidas o edematosas. de manera que posibilite la obser173 . cuide igualmente de que no entre en contacto con la lengua. marcada exudación o la presencia de anginas (placas de diferentes formas y tamaño. los carrillos o la lengua y frótelo sobre cada región amigdalina y la pared posterior de la faringe. labios u otra zona bucal. en caso contrario deberá humedeserse previamente en solución de glicerina. el hisopo podrá estar seco si la siembra se hace de inmediato. situados en ese lugar. Con el dedo índice presione la base de la nariz. el paciente debe estar sentado y con la cabeza ligeramente flexionada hacia atrás. cuidando de no tocar los labios. Si el médico presume que el paciente está infectado con Corynebacterium diphteriae (agente causal de la difteria) indicar al laboratorio.una luz intensa. de color blanco o blanco grisáceo. Fig. mediante una orden de análisis que se realice la investigación pertinente. Procedimiento: al igual que para la toma del exudado faríngeo. telurito e introducido después de la toma en medio de transporte para su conservación. adheridas a las mucosas) Deprima la lengua con un depresor y con la otra mano introduzca el hisopo en la cavidad bucal. 94: Toma de muestra de exudado faríngeo: a) Amígdalas. con la finalidad de detectar evidencias patológicas. en particular en las áreas con evidencias patológicas. en cuyo caso la toma de muestra se hará levantando el borde de la angina y pasando el hisopo por debajo de la misma para contactar con los microorganismos diftéricos. Al retirar el hisopo. b) Pared posterior de la faringe b) Exudado nasal: Indicaciones específicas: No instilarse ningún tipo de gotas nasales 12 horas antes de la toma de la muestra.

vación de los dos orificios, para lo cual se auxiliará de una lámpara. Introduzca el hisopo en ambas fosas nasales, imprimiéndole movimientos de rotación en ambos sentidos, para facilitar la recogida de la secreción.

Fig. 95: Toma de muestra de exudado nasal.

c) Exudado nasofaríngeo: Indicaciones específicas: similar a las explicadas para exudado faríngeo y nasal. Procedimiento: para la toma del exudado nasofaríngeo, se utiliza un hisopo especial consistente en un alambre de cromo o acero inoxidable curvado en su extremo terminal. Después de observar la zona faríngea y las fosas nasales con buena iluminación se procede a introducir suavemente el hisopo por una de las fosas nasales hasta la nasofarínge. Si no fuera posible, introducir el hisopo por la cavidad bucal hasta la nasofarínge, con los mismos cuidados ya explicados en al toma del exudado faríngeo.

Fig. 96: Toma de muestra de exudado nasofaríngeo.

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d) Exudado ótico: Indicaciones específicas: no instilarse gotas óticas de ningún tipo, durante las 24 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de indicar al paciente que se siente, el técnico se ubicará por el lateral que corresponda al oído que será objeto de la toma de la muestra, procediendo a ladear ligeramente la cabeza del paciente para el lado opuesto, con una torúnda o algodón estéril humedecido en alcohol etílico al 70 %, limpiar el pabellón auricular, especialmente la entrada del orificio del conducto auditivo. Disponiendo de una buena iluminación, sujetará la oreja por la parte superior con ayuda d los dedos índice y pulgar, imprimiéndole un movimiento hacia arriba y hacia atrás, lo cual favorecerá la observación del conducto auditivo externo. Manteniendo la oreja en esa posición, introducir el hisopo suavemente en el conducto, imprimiéndole movimientos de rotación con el propósito de recoger la mayor cantidad posible de secreción (otorrea)

Fig. 97: Toma de muestra de exudado ótico: a) Manipulación del pabellón auricular; b) Introducción del hisopo en el conducto auditivo externo

e) Exudado conjuntival: Indicaciones específicas: durante las 48 horas precedentes a la toma de la muestra, no irrigar los ojos con colirios, pomadas oftalmológicas ni anestésicos conjuntivales que tienden a desalojar a los microorganismos del saco conjuntival. La noche anterior, el paciente se debe limpiar el ojo afectado con suero fisiológico o agua previamente hervida. Se puede tapar o no, el ojo en cuestión con un apósito estéril fijado con esparadrapo, ya que se ha demostrado que no influye en los resultados la contaminación ambiental, la mañana en que concurra al laboratorio para que le sea tomada la muestra no debe realizarse nigun lavado facial. Procedimiento: para la toma de muestra del exudado conjuntival, se puede utilizar un hisopo de algodón fino (estéril) o un asa de platino empleada exclusivamente para ese fin, esterilizada en autoclave. 175

Indicar al paciente que se siente y retirar el apósito, con ayuda del dedo índice baje el párpado inferior y proceda de inmediato e introducir con sumo cuidado el hisopo o el asa, evitando tocar las pestañas, o el margen de los párpados, hasta la superficie del ángulo interno (próximo al lagrimal) del "culde- sac" fondo del saco inferior deslizando suavemente el instrumento en dirección al ángulo externo del ojo. También se pueden tomar muestras de las márgenes parpebrales (membranas que tapizan los párpados. En el caso de que el paciente presente furúnculos de las glándulas pilosebáceas anexas a una pestaña (orzuelo) se procederá a obtener un poco de pus, mediante la punción con una lanceta estéril.

Fig. 98: Toma de muestra de exudado conjuntival

f) Exudado uretral: Indicaciones específicas: El o la paciente deben de abstenerse de orinar durante las 4 horas que preceden a toma de la muestra, para evitar que los microorganismos sean arrastrados mecánicamente durante la micción. Debiendo concurrir al laboratorio sin previo aseo matutino de los genitales externos. En mujeres: Se le indicará que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste bocarriba en una camilla ginecológica con estribos, adoptando una posición ginecológica, de manera que los glúteos queden muy próximos al extremo de la camilla, en estas condiciones con la palma de la mano hacia arriba se introduce en la vagina el dedo índice el cual se arquea hacia arriba para comprimir la uretra a través de la sínfisis que le separa de la vagina desplazar el dedo, hacia atrás, sin dejar de comprimir la sinfigis para inducir la salida del pus por la uretra. Conjuntamente se introduce el hisopo, 1cm en el interior de la uretra, haciéndolo girar suavemente para que recoja la mayor cantidad posible del exudado. 176

Fig. 99: Toma de muestra de exudado uretral en mujeres.

En los hombres: La muestra se tomará permaneciendo el paciente parado. Se le indicará manualmente el prepucio hacia atrás y a continuación haga presión hacia delante del pene con el objetivo de "ordeñar" la uretra. Seguidamente se le introduce unos mm el asa de platino estéril en la uretra por unos segundos retirándola finalmente.

Fig. 100: Toma de muestra de exudado uretral en hombres.

g. Exudado vaginal. Indicaciones específicas: Suspender cualquier terapéutica por vía local 2 o 3 días antes de que le sea tomada la muestra. Debe concurrir al laboratorio sin previo aso vaginal desde la noche anterior, aunque puede, efectuar lavado matutino de genitales eternos. Se recomienda no realizar coito vaginal en ese periodo de tiempo. Procedimiento: Se le indicará a la paciente que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste en posición de cúbito supino (boca arriba) sobre una camilla con estribos, adoptando una posición ginecológica (las corvas sobre los estribos y los glúteos muy próximos al borde de la camilla. Antes de proceder a la toma de la muestra se hará una inspección de la región vulvar con el objetivo de detectar inflamación o erosión en las glándulas anexas Skéne o Bartholin, la primera, dos pequeñas glándulas situadas dentro del meato de la uretra femenina, consideradas homologas de las vesículas seminales y la segunda, situadas a ambos laterales del 177

orificio vaginal, cuya secreción tiene la función de lubricar el área para facilitar la penetración del pene. Con el empleo de una torúnda estéril humedecida en alcohol al 70 %, sujeta por una pinza de disección, desinfectar la región vulvar. Seguidamente se procederá a insertar un espéculo estéril de tamaño conveniente sin lubricantes, ya que puede ser tóxico para algunos microorganismos.

Fig. 101: Toma de muestra de exudado vaginal. Paciente en posición ginecológica con el espéculo incertado.

En los casos de niñas se realiza un exudado vulvar y en pacientes vírgenes se realiza también un exudado vulvar y si el orificio del himen lo permite se puede emplear un espéculo pequeño. En los casos de pacientes con cistocele (protución de vejiga en la vagina) la incertación del espéculo debe ser realizada por un personal con experiencia. A continuación se procede a introducir un hisopo estéril hasta el fondo del saco posterior de la vagina el cual será embebido con el exudado. Se recomienda utilizar hisopos con algodón sintético, ya que los ácidos grasos presentes en algodón vegetal puede resultar tóxico para algunos microorganismos. Además del hisopo se puede emplear para obtener la muestra una pipeta de Pasteur estéril con un dispositivo en su parte posterior como el que tienen los goteros para factibilizar la aspiración del exudado. Al momento de tomar la muestra se realiza la medición del pH al exudado. h) Exudado endocervical.Indicaciones específicas: Abstenerse de realizar el coito durante las 12 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de colocada la paciente en posición ginecológica e insertado el especulo (sin lubricantes) en forma similar que para exuda178

R. Los líquidos orgánicos que con regularidad se investigan en los laboratorios de microbiología clínica. la región sub . se procederá a retirar el moco cervical del cuello del útero con ayuda de una torunda estéril. son los siguientes. portadores de compuestos orgánicos e inorgánicos. el aislamiento de microorganismos en cualquiera de ellos es evocador de infección. Cuadro 7: Localización de los líquidos orgánicos DIFERENTES LIQUIDOS L. estos líquidos son normalmente estériles. por tratarse de espacios anatómicos cerrados. sujeta por una pinza de disección. imprimiéndole movimientos de rotación durante varios segundos para que se embeba en el exudado. Líquidos orgánicos Concepto: Los líquidos orgánicos. Seguidamente se introduce un hisopo estéril. por lo que.C.do vaginal.occipital y los ventrículos cerebrales Delimitado dentro del espacio que separa las dos membranas pleurales que recubren el tejido pulmonar Se encuentra entre las sinovias o membranas que recubren los tendones Se encuentra entre las membranas peritoneales que delimiten al abdomen TOMA DE MUESTRA (por punción) Lumbar PLEURAL Intercostal SINOVIAL Articular ASCITICO Peritoneal 179 . REGION ANATOMICA DONDE SE LOCALIZA Canal raquídeo (espacio delimitado por las membranas sub aracnoideas o meníngeas. son fluidos serosos. que recubren la médula espinal. así como de células leucocitarias. Son producidos por las membranas que recubren los diferentes órganos. que se hace comprimir suavemente sobre el cervix.

donde se va a efectuar la punción. hemorrágico o satocrómico (amarillento) Turbio y purulento Turbio y purulento PLEURAL 2 a3 Uno con heparina Uno sin heparina Incoloro y transparente Amarillo claro.R 3 a 10 3 ASPECTO XXX NORMAL PATOLÓGICO Incoloro y transparente TURBIO. lo que propiciará que fluya el líquido a través de la cánula o si la punción se realiza con aguja. previo riguroso lavado de manos y colocación asépticas de guantes quirúrgicos estériles. LÍQUIDOS CANTIDAD DISTRIBUCCIÓN ORGÁNICOS (ml) EN TUBOS ESTERILES L.C. 180 - .Cuadro 8. Recolectar el líquido en tubos de ensayo. transparente y viscoso Seroso SINOVIAL 2a3 ASCITICO 2a3 Uno con heparina Purulento Recolección de la muestras Serán tomadas por un especialista. insertar una jeringuilla y succionar el líquido. Datos para la obtención de las muestras de líquidos orgánicos y características de su aspecto. Procedimiento: Desinfectar con tiomersal (timerosal) u otro desinfectante apropiado el área de la piel. con y sin anticoagulante (heparina) según se trate. Retirar el mandril del trocar. Realizar la punción con trocar o aguja apropiada hasta donde se encuentra el líquido en cuestión.

en el momento que presente hipotermia. 20 estéril.Sangre Concepto: La sangre es un líquido rojo que circula por las arterias. Desinfecte la zona a puncionar. tome la jeringuilla de tal manera que el dedo índice quede colocado sobre el cabo de la aguja para guiarla durante su introducción en la vena. Deje secar el alcohol y efectúe la punción. un ligero cese de la resistencia indicará que la aguja ha penetrado en la vena. así como una parte líquida denominada plasma. palpe el área y seleccione la vena mas prominente con ayuda de la inspección visual. Con la mano opuesta sujete el antebrazo del paciente. la jeringuilla acoplada a la aguja se colocan posteriormente en el interior de un tubo de ensayo de tamaño apropiado. Después de estar la ligadura por encima del codo del paciente. leucocito y plaquetas. la sangre fluirá espontáneamente dentro de la jeringuilla. Indicaciones específicas La toma de muestra debe realizarse cuando el paciente presente fiebre superior a 38 C. unos 5cm por debajo del sitio que puncionará y estire la piel hacia abajo con el pulgar con lo cual se inmovilizará la vena. Extraiga la cantidad de sangre necesaria suelte 181 - . En caso de que la presión de la vena sea baja. para comprobar que la circulación arterial no ha sido interrumpida. solo eventualmente se procede a tomar la muestra. primero con agua y jabón y químicamente después con tintura de yodo al 1 % en pacientes (no alérgicos) y posteriormente con alcohol etílico al 70 %. Inserte la aguja en la piel adyacente paralelamente a la vena y hágala penetrar en el lumen. Se le pedirá al paciente que abra y cierre la mano varias veces con el objetivo de inducir el aumento de la circulación y le llene las venas. venas y capilares. mecánicamente. Procedimiento La sangre se obtendrá por venipunción. que contiene diversas sustancias nutritivas e inmunológicas. para asegurarse de que la aguja se encuentre en el interior de la vena. después de comprobar el tiempo de caducidad. para ello solicite al paciente cerrar la mano y extender el brazo. mediante jeringuilla de vidrio estéril y seca (que no esté caliente) a la cual se le acopla una aguja No. se procederá a verificar el pulso. Estando formada por elementos figurados como los hematies. retire el émbolo. pudiendo utilizarse igualmente jeringuillas y agujas estériles desechables.

Esta operación se debe realizar en ambos lóbulos y en los pliegues cutáneos de los dos codos.Invierta el frasco inoculado.la ligadura y coloque una torunda o un pedazo de algodón seco sobre el sitio de la punción y saque la aguja. 3. y transparente de color ligeramente amarillento. pídale al paciente que abra la mano y presione la torunda o algodón por espacio de 2 a 3 minutos con el brazo doblado. Procedimiento: La muestra de linfa se obtiene específicamente de los lóbulos de las orejas y de los pliegues de la piel de los codos. 182 . desinfecte con alcohol etílico al 70 % la tapa perforable y flaméela. que llena los vasos linfáticos. Indicaciones al paciente: Las generales. 1. Está constituida por agua. Con un bisturí haga una incisión de unos 5mm de largo por 2 mm de ancho y raspe la zona con su superficie. 4. Con el empleo de torundas o motas de algodón humedecidas en alcohol al 70 %. 3. después de desinfectada la piel. Retire el círculo central de la retapa metálica del frasco que contiene el medio de cultivo. Puncione la tapa perforable del frasco y empujando el embolo de la jeringuilla vierta un 10% de sangre en relación con el volumen del medio de cultivo empleado. Coloque una pinza en cada uno de los lóbulos. 2. Para sembrar la sangre. Retirando la jeringuilla con la aguja y el volumen de sangre sobrante. Linfa Concepto: La linfa es un líquido claro. Cambie la aguja utilizada por otra estéril del mismo calibre. lo cual se evidenciará por un aclaramiento de la zona (zona de isquémia). 2. antes que la sangre infiltre el corte. absténgase de palpar la vena seleccionada con los dedos. albúmina. depositándola en la lámina portaobjetos habilitada al efecto. desinfecte ambos lóbulos y los pliegues de la piel de cada codo. fibrina y sales. 4 o 5 veces para que el anticoagulante que contiene el medio impida que se formen coágulos. Observaciones: Durante el proceso de toma de muestra. pH alcalino y salobre. proceda del siguiente modo: 1. de manera que ejerzan la suficiente presión para que la sangre contenida en los capilares sea excluida. proceda a recoger con el borde del bisturí la linfa que emane. rápidamente.

Se indicará al paciente recoger 10 ó 20g de heces sólidas (aproximadamente del tamaño. se debe realizar un examen seriado. lágrimas) o producidos en el reservorio donde se han acumulado (heces. La primera muestra debe recogerse por defecación espontánea y las sucesivas. Indicaciones al paciente: las generales. Excreciones Concepto: Compuestos excretados por las glándulas (saliva. consistente. provisto con tapa de rosca. preferentemente incoloro y transparente.Fig. etc. 102: Toma de muestra de la linfa auricular: a) Colocación de la pinza en el lóbulo de la oreja. ya que en ocasiones los resultados negativos estando el paciente parasitado debido a que diversas especies presentan las llamadas fases negativas. b) Incisión con el bisturí en la zona isquémica. Procedimiento: En el caso de heces destinadas para examen parasitológico. no correspondiéndose este resultado con el cuadro clínico.) Heces fecales Concepto: Material que se forma en el intestino básicamentea partir de los residuos del material ingerido no digerido. durante las cuales no aparecen sus elementos de diagnóstico. con el empleo del laxante (sulfato de magnesia) se logra evacuaciones de heces líquidas o al menos blandas que permiten detectar con 183 . aunque existan en el tracto digestivo. algunas mediante la inducción con laxantes y otras. Si el examen de una muestra resulta negativo. al igual que la primera de forma espontánea. sudor. por lo que el examen de varias muestras en periodos de tiempo diferentes aumentan las probabilidades de localizar e identificar la especie. equivalente a un 1/3 de un tabaco) y sí fueran sólidas unos 30 ml (una onza fluida) en un frasco limpio y seco. en el análisis de varias muestras (6 a 8) enviadas al laboratorio en días alternos. sin vestigios de sustancias antisépticas. orina. En todos los casos las heces deben ser recién emitidas.

las probabilidades de contaminación con los gérmenes procedentes de la microbiota residente o transitoria aumentan. pero estéril. que se caracteriza por tener un color amarillo. En todos los casos la muestra debe ser recogida en frascos estériles entregados por el laboratorio. Orina (para urocultivo) Concepto: La orina es un líquido secretado por los riñones. 184 . Nota: Las mujeres deben orinar paradas y recoger la orina "al vuelo". ácido hipúrico. ácido urico. se emplean colectores estériles que deben ser cambiados si la misción se demora o si se contamina con heces. el cual debe ser solicitado en el laboratorio. y otros componentes como. No orinar después de las doce de la noche. Comenzar a orinar desechando el primer chorro. 3. etc. como es lo habitual. Procedimiento: 1. desechando el resto de la orina. Indicaciones específicas: 1. En los casos de niños pequeños. contrario a lo que ocurre con las heces sólidas. Aguantar la micción. Aseo matutino de genitales externos con agua y jabón. ser ligeramente ácida. como. Destapar el frasco estéril y depositar con cuidado de 10 a 20ml de la porción media. los hombres se deben retirar bien el prepucio y las mujeres separar los labios. y enjuagar con agua previamente hervida y yodada. Está compuesta principalmente por agua en la que se encuentran en disolución diversos compuestos. Tapar el frasco inmediatamente y enviar la muestra al laboratorio antes que transcurran dos horas. Para realizar con efectividad el aseo. con similares características que el empleado para el examen parasitológico. 2.mayor frecuencia la presencia de quistes y huevos de helmintos. tener un olor peculiar y un sabor salino. 2. urea. glucosa etc. Además de células epiteliales leucocitos y eventualmente hematies. que recoja la muestra en un frasco. En el caso de heces destinadas para coprocultivo: Indicar al paciente. ya que orinar sentadas.

Con hisopo estéril. el cual le será retirado en el laboratorio. Previa desinfección de la zona con una torunda estéril. mediante el esfuerzo de tos profunda. Tamponar la lesión con solución salina fisiológica estéril. Con una pinza de disección arrancar varios cabellos que se observen fluorescentes.Faneras Concepto: Término general aplicado a las infecciones persistentes en la superficie de la piel. pero específicamente en el punto mas elevado de la colección purulenta. La noche anterior a la toma de la muestra. PRODUCTOS PATOLÓGICOS Concepto: Producto resultante de la actividad de algunos microorganismos al interactuar con los tejidos. Al igual que para la toma de muestra de la lesión seca en piel. el pelo o las uñas.Esputo. d) Lesión grasienta o purulenta. Procedimiento: a) Lesión abierta en piel. puncionando la lesión con una aguja insertada a una jeringuilla. Desinfectar previamente el orificio y tomar la muestra con hisopo fino estéril en profundidad. tomar la muestra en el entorno del borde sin tocar la piel. enjuagándose con solución salina fisiológica estéril cubriendo la lesión con apósito estéril. la de muestra de la uña infectada se realiza mediante raspado de la superficie y debajo de la uña con un bisturí. recobrando el material en el interior de una placa de Petry estéril. Materia densa y viscosa. e) Fístula. g) Observar la cabellera del paciente bajo la luz de una lámpara de Wood. 185 . fino. el paciente debe asearse la zona de la lesión con agua y jabón. Indicaciones específicas: Suspender cualquier tratamiento local. c) Lesión seca. previa desinfección de la piel. humedecida en alcohol etílico al 70 %. eliminándose por la boca o siendo deglutido. para seguidamente tomar la muestra con hisopo. En los abscesos calientes. b) Absceso subcutáneo.Pus (ya explicado en la toma de muestras de piel) . f) Uñas. Los más comunes son el pus y el esputo: . (escamosa en piel). y colocarlos en el interior de una placa de Petry estéril. recolectando la descamación en el interior de una placa de Petry estéril. raspar la lesión con un bisturí. En los accesos fríos se toma igualmente con aguja y jeringuilla. que es expectorada por las vías respiratorias superiores. 48 horas antes de la toma de la muestra. se toma la muestra.

17. ¿Como usted procede para obtener una muestra de linfa para el paciente? ¿Cómo se le indica al paciente recoger las muestras de heces fecales para examen parasitológico? ¿ Que instrucciones debe seguir el paciente para recoger muestras de orina para urocultivo? ¿Como usted toma las muestras de las faneras? ¿Que indicaciones le daría al paciente para recolectar una muestra de esputo con calidad? 186 . 16.Indicaciones específicas: 1. 11. La cantidad de muestra a tomar? ¿En que momento se debe tomar la muestra? ¿Porque es importante delimitar el área anatómica de donde se va a tomar la muestra? ¿En que consiste las precauciones de asepsia? ¿Que instrucciones generales debemos dar al paciente que tiene indicado un examen microbiológico? ¿Que es un exudado? Nombre los diferentes tipos de exudado que podemos tomar del paciente. tratando de no recoger saliva. 8. Describa el procedimiento a seguir para obtener del paciente una muestra de sangre para hemocultivo. 19. Nombre los diferentes líquidos orgánicos que se obtiene del paciente para investigaciones microbiológicas. Durante la recolección del esputo evitar que se produzca derramamiento del mismo. ¿Que importancia tiene para usted. CUESTIONARIO 1. 3. 12. Al levantarse en horas de la mañana. 2. por la parte externa del frasco. 4. 2. 4. En su opinión que es una muestra? ¿Que usted entiende por muestras representativas? Refiérase a las diferentes causas que pueden afectar la representatividad de una muestra. seguida de tos profunda. 10. retirar las prótesis y realizar aseo matutino bucal. 14. adecuado. 18. 7. ¿Que implicaciones puede tener la demora en la realización de la siembra? Explique los diferentes métodos empleados para la conservación de las muestras. 5. 13. 6. Enviar lo antes posible la muestra al laboratorio (separada de la orden de análisis). Para la recepción ver capítulo de Bioseguridad. 9. 15. mediante inspiración. 3. Recoger en un frasco estéril con tapa de rosca y color ámbar la primera expectoración de la mañana.

las muestras a investigar deben ser preparadas previamente sobre láminas portaobjetos escrupulosamente limpias. Empleando un asa de platino previamente flameada. larvas. huevos de hemintos.CAPÍTULO 14 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS INTRODUCCIÓN La microscopía. que presuntivamente contiene y facilitar su localización durante la realización de la microscopía. Para la realización del examen microscópico. la muestra a emplear se utiliza. variará en dependencia de los objetivos que se pretenden con la microscopía y de la muestra de que se trate. leucocitos y otros elementos de interés como pueden ser. sin rayaduras ni manchas. Procedimiento: 1. la manera de agruparse y sus afinidades tintoriales. aunque en algunas ocasiones resulta pertinente centrifugarla para concentrar los elementos. los procederes básicos. constituye junto con el cultivo y las pruebas de identificación. sobre los cuales se sustenta el diagnóstico microbiológico de laboratorio. deposite una gota de la muestra en el centro de la lámina portaobjetos. tal y como se obtuvo. ni procesamiento previo. En los exámenes microscópicos. 187 . DIFERENTES MÉTODOS Preparación de muestras en láminas para examen microscópico en fresco Para la realización de este montaje. el propio tubo que contiene el sedimento o una pipeta estéril. esencialmente se pretende observar: la morfología de los microorganismos y/o sus diferentes estructuras. El procedimiento a emplear para el montaje de las muestras en láminas. sin la adición de ningún reactivo. así como. detectar la presencia de células. etc.

Procedimiento: 1. Proceda a flamear al rojo un asa de platino y una vez fría. En ambos casos se debe repetir el montaje. exactamente debajo de toda el área del cubreobjetos. procediendo a emulsionarla en la gota de suero fisiológico. Coloque la lámina excavada sobre el cubreobjetos. l03: Preparación de muestras en láminas para exámenes microscópicos: a) Depositar una gota de muestra en el centro del portaobjetos. la colocación del cubreobjetos debe efectuarse suavemente. Método de la gota colgante Este método se emplea específicamente para constatar mediante la observación microscópica si el microorganismo en estudio es o no móvil. b) Colocación encima de la muestra de una lámina cubre objetos. una pequeña porción de la colonia. 2. 2. de manera que la preparación quede justamente debajo de la excavación y ambas láminas queden pegadas por el petrolado. debe quedar. el error en el montaje sería por exceso. Coloque sobre la mesa de trabajo una lámina portaobjetos excavada y auxiliándose de un aplicador unte petrolado en todo el perímetro de la excavación. Si el volumen de la gota fue el adecuado. Si quedara algún espacio sin cubrir se incurriría en error por defecto. 188 . Si el microorganismo a examinar se hubiera desarrollado en un medio sólido se procederá a colocar previamente sobre la lámina cubreobjetos una gota de suero fisiológico y posteriormente se tomará con asa de platino estéril y fría. debido a insuficiente cantidad de muestra y si se derrama por fuera del cubreobjetos. tome una asada del cultivo germinado en medio de cultivo líquido y deposítela en el centro de una lámina cubreobjetos.Fig. Para evitar que queden espacios con burbujas de aire. 3. Coloque sobre la gota de la muestra o sedimento una lámina cubreobjetos.

Fig. con el empleo del colorante Eosina. Adición de colorantes a la muestra Se procede exactamente igual que para la preparación en fresco con la diferencia de que la muestra es emulsionada con el colorante en cuestión. de manera que el cubreobjetos quede encima con la preparación la cual quedará colgando. Preparación en láminas de muestras coloreadas Este método se utiliza cuando se requiere teñir a los microorganismos y/o su entorno. b) Cubreobjetos con una gota de cultivo.4. c) Ensamblaje de la lámina excavada con el cubreobjetos. se requiere en cada caso técnicas de tinción especiales para la coloración de cada una de ellas. antes de ser colocada la lámina cubreobjetos. 104: Esquema de una preparación de gota colgante: a) Portaobjetos con una excavación central rodeada de un anillo de petrola to. Debido al ínfimo tamaño o la composición bioquímica de las diferentes estructuras. En estas condiciones se coloca en el microscopio para su observación. d) Viraje de la preparación. Ejemplo: Examen directo de heces fecales. Con un movimiento suave voltee sin temor la preparación. La preparación en láminas se efectúa por dos procederes diferentes: la adición del colorante a la muestra o la preparación de frotis. para su mejor observación o para determinar sus afinidades tintoriales. 189 .

los microorganismos están muy conglomerados. Procedimiento: Fig. Después de realizado el frotis. déjelo sobre la mesa de trabajo hasta que el agua residual que contiene se evapore y se seque. se coagulen. se debe echar previamente en el centro de la lámina portaobjetos una gota de solución salina fisiológica y posteriormente emulsionar la colonia con un asa de platino estéril con la que se hará la extensión. Debe ser grueso. de manera que al sacarse quede formando una capa. 105: Preparación de una preparación sobre láminas portaobjetos. Si la muestra o el cultivo fueran líquidos. el frotis debe hacerse muy fino para que se pueda distinguir adecuadamente su agrupación característica. tome la lámina por los bordes con los dedos índice y pulgar. que le permita hacer un frotis grueso con ayuda de un asa de platino estéril. en la llama del mechero para acelerar el proceso ya que los gérmenes pueden deformarse y generar confusiones al microscopista. de manera que la extensión quede hacia arriba. lo que provocará que la preparación quede adherida a la lámina y no sea desprendida después de la coloración por el agua que se utilice para eliminar el exceso de colorante. La exposición al calor directo provocará que las estructuras de naturaleza proteíca. Una vez seco el frotis. deposite sobre la lámina portaobjetos una cantidad suficiente. Si el frotis se fuera hacer empleando una colonia germinada en medio de cultivo sólido. de manera que la parte posterior de la lámina sea lamida por la llama.Preparación de frotis El frotis consiste en una extensión de la muestra con hisopo o asa de platino sobre la lámina portaobjetos. Si desea acelerar este proceso puede introducirlo en una incubadora pero nunca. Pase la lámina directamente por la llama del mechero dos o tres veces. lo cual dificulta su localización en el examen microsocópico en la medida en que el frotis sea demasiado fino. 190 . ya que los microorganismos cuando se hayan en un medio líquido tienden a estar muy dispersos. Debido a que en las colonias.

3. Describa el procedimiento para el montaje de muestras para la observación de examen en fresco ente cubre y portaobjetos. 6. 5. ¿En qué consiste un frotis? Explique las diferentes maneras de preparar los frotis de acuerdo al tipo de muestra de que se trate. Especifique para qué se realiza el método de la gota colgante. ¿Cómo usted fija los frotis? ¿Con qué objetivo se fijan los frotis? 191 . 2. CUESTIONARIO 1. 4. 106: Fijación de un frotis a la llama del mechero.Fig.

generalmente tintes. FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES Atendiendo a la fuente de obtención. encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia. sometidas a la intensa iluminación que se requiere en los exámenes microscópicos de campo brillante. 2. pigmentos. un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir. Carmín: Se produce. el cual se fermenta para producir el colorante. teniendo un aspecto semitransparente. Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que contiene indican. los colorantes se clasifican en naturales y sintéticos. en su estado natural. mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis". siendo necesario colorearlas por diferentes métodos de tinción que factibilicen su observación y distinguir las características morfológicas y estructurales que sirvan de datos para su identificación genérica. 192 . Colorantes naturales Los colorantes naturales son básicamente histológicos. CONCEPTO Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico. Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenes de los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria. 3. levaduras y protozoarios. los siguientes: 1.CAPÍTULO 15 COLORANTES Y COLORACIONES INTRODUCCIÓN Las bacterias. debiendo tener al menos. carecen de color. empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos. reactivos u otros compuestos. por lo que resulta muy difícil su observación en las preparaciones acuosas sobre láminas portaobjetos.

teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el aniòn o el catiòn de su estructura química. Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundo de México y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium campechianum. 193 . Clasificación de los colorantes. GRUPO QUINONIMINA SUB-GRUPO TIACINA ACINAS C O LO RAN T E Azul de metileno Toluidina Rojo neutro Safranina C Nigrosina Verde malaquita Verde Brillante Violeta cristal Eosina B e Y Mercuro Cromo 220 FENILMETANO DIAMINOTRIFENILMETANO XANLEIRO FLUORANA Rosa de bengala SULFONSFTALEINA Azul de bromofenol Verde bromocresol Azul de bromotimol Rojo cresol Fenolftaleina Rojo fenol Azul timol Acriflavina Naranja de acridina ACRIDINA CLASIFICACIÓN Los colorantes se clasifican. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: básicos. Atendiendo a su estructura química se agrupan de la siguiente manera: Cuadro: 9. Colorantes sintéticos Se obtiene de la anilina. o es mas exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno. ácidos y neutros.4.

Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión. 194 . la sustancia colorante esta a cargo del anión. ocurre una combinación de reacciones físicas y químicas. VENTAJAS Y DESVENTAJAS Los colorantes son sustancias tóxicas.de sodio+ Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de colorantes ácido y básicos. donde el precipitado resultante. pero si el fondo del campo microscópico. por ejemplo: la giemsa. constituye el colorante neutro. Reacción química Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fósfato combinándose como colorante básicos cargados positivamente. TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. Veamos algunos ejemplos: 1. por ejemplo: . mientras que el catión no tiene propiedad. lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador según sean los objetivos con la sustancia colorante. como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al microorganismo. Colorante ácido: Sucede todo lo contrario. Reacción física Ocurre un fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas. provocando su inmovilización. soluble exclusivamente en alcohol.cloruro de azul de metileno+. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula. empleándose como colorante de contraste para colorear su entrono. Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinción se reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador. por ejemplo: eosinato. considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular. que tiene la propiedad tintorial de sus componentes ácidos y básicos. por lo tanto el proceso de la tinción generalmente resulta letal para los microorganismos. mientras que el anión no tiene esa propiedad. AFINIDADES TINTORIALES En el proceso de la coloración.

y la de Ziehl Neelsen. violeta cristal y fuscina fenicada. Otros se emplean como desinfectantes microbianos. Coloración de Gram En 1884. que es en la actualidad. Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos. con fines de microscopia. utilizándose fundamentalmente para observar su morfología y tamaño. Entre los métodos mas utilizados se encuentran: La coloración de Gram. azul de bromotimol. Ejemplo: rojo fenol. Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno. METODOS DE COLORACIÓN Atendiendo a los objetivos que se persigan. me195 . por lo que reciben también el nombre de coloraciones diferenciales. En consecuencia se puede determinar algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de los demás. 5. por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas. el danés Hans Chistian Gram. Tinción compuesta En este tipo de tinción.2. se utiliza más de una sustancia tintórea. formando parte de la composición de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como consecuencia de su actividad metabólica. formando parte de una solución. 4. a la preparación. Los colorantes se aplican. entre otros. mas que para teñir. los métodos de coloración se clasifican en: Tinción simple. algunos incluso han resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del mercado. Tinción simple En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se tiñe rápidamente el microorganismo. Por ejemplo: el verde de malaquita. tinción compuesta y tinción especial. separados o juntos. etc. 3. el más empleado en los laboratorios de bacteriología. sino como indicadores de pH. ideó un método de coloración. siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir.

... Envasar en frasco ámbar o plástico no transparente con tapa de rosca y rotular.. Después de diluida la acetona en el alcohol. Agregar poco a poco el agua destilada..........Violeta de genciana .............. Cristales de yodo .......... Acetona ..... revolviendo constantemente con el brazo del mortero..........Agua destilada . . Alcohol etílico 95 % .... Echar la mezcla en una probeta graduada de 100 ml de capacidad. Colorantes y reactivos 1........... ........ 80 mL ......10 mL . ..... Solución violeta de genciana al 1% ... " Dejar la preparación en reposo durante 24 horas y filtrarla con papel de filtro..... Agregar poco a poco las dos terceras partes del agua destilada.. ..Cristales de ácido carbólico. Revolviendo constantemente.. Yoduro de potasio .. Añadir el resto del agua............. 2................. Alcohol etílico 95 % o alcohol acetona al 20 % ........ .... queda teñida de color violeta o de color rojo........ . Rotular............... Mezclar los cristales de yodo con los de yoduro de potasio. .. enjuagar el mortero y añadir este residuo con cuidado en la probeta.. 20 ml Preparación .. 196 ...... Agua destilada . ............. .... en dependencia de la composición químico de la especie.. 2g ........ con ayuda del brazo del mortero........... Envasar en frascos de vidrio de color ámbar con tapa de rosca o preferiblemente con tapa de vidrio esmerilado.. Con el resto del agua................Alcohol absoluto.. 1g ................ Agregar los cristales de ácido carbólico y mezclar...... Diluir los cristales de violeta de genciana en alcohol.... Lugol de Gram............... 2g ... envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca..... la bacteria sometida a esta tinción.... 300 ml Preparación (en un mortero): ... 3........ 100 mL Preparación ( en un mortero): .......... 1g ....... hasta enrasar en 100 ml..........diante el cual.....

1g . Secado de lámina Al concluir el proceso de coloración.. 2.4.. Solución de Safranina al 1 % . . 107: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Gram. 4... Echar la safranina en un mortero y añadirle poco a poco al agua destilada hasta diluir el colorante. 6. Echar sobre la preparación el lugol de Gram. dejando que el colorante actué por espacio de 30 segundos... Lavar la lámina con agua corriente.. Envasar en frascos de vidrio o plástico. 100 ml Preparación ( en un mortero): . colocar la lámina sobre el puente de coloración.. hasta cubrir el frotis dejando que actué durante 30 segundo. Echar sobre la preparación el alcohol etílico 95 % o el alcohol acetona al 20 %. Rotular.. Echar sobre la preparación la solución de safranina. Verter la solución de violeta de genciana. Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro... Lavar la lámina con agua corriente......... 1.. hasta cubrir el frotis. 5... la lámina se debe colocar de canto para que se escurra.... Debe tenerse en cuenta que el agua y en especial... Safranina . el agua 197 . Agua destilada .. 7.. hasta que se evidencie que este solvente no extrae mas el colorante violeta.... dejándola actuar por espacio de 30 segundo. 3.. 8.. Lavar la preparación ligeramente con agua corriente. Lavar con agua corriente... Esta operación debe durar aproximadamente de 1 a 2 minutos... Procedimiento Después de fijado el frotis a la llama del mechero.. ..... Fig..

la reacción resultante será obviamente diferente. Diagnóstico microscópico Las bacterias que se observan de color violeta se clasifican como Gram positivas y las que se observan de color rojo.destilada. existiendo controversias al respecto. Al adicionar el lugol. Al echar finalmente la solución de safranina (que es de color rojo ) las especies que no fueron decoloradas. aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción. no es igual en todos los géneros. en tanto que otros son decolorados quedando la bacteria nuevamente incolora. es un agente decolorante. sino un mordiente. se tiñen con la safrina. Principios A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace mas de un siglo. lo que da lugar. fijándose en esta. en otros géneros la barrera que se produce es más permeable. dejando a la bacteria nuevamente incolora. Lo ideal es escurrir la lamina poniéndola de canto y seguidamente secarla con papel de filtro. todos los géneros que se encuentran en el frotis se tiñen de color violeta. no se produce ningún cambio de color. Teniendo en cuenta que la composición química de la pared. como Gram negativas. en tanto que los géneros que fueron decolorados por el alcohol. El criterio mas generalizado es que la violeta y el lugol forman un complejo que reacciona con los componentes bioquimicos de la pared celular deshidratada. mantienen la coloración violeta ya que la safrania es un colorante mas débil que la violeta y su adición no influye significativamente en cambio de color. que mientras algunos géneros retienen firmemente el colorante al resultar el complejo impenetrable para el decolorante. Al adicionar el decolorante (alcohol etilicio o alcohol acetona) algunos géneros no son afectados por estos solventes. adquiriendo un color de rosado o rojo. por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo demasiado tiempo quita parte del colorante. ya que el lugol no es un colorante. Fundamento técnico En el primer paso de la coloración. que se adiciona con el objetivo de formar un complejo violeta-lugol. 198 . reteniendo por consiguiente el color violeta aplicado inicialmente. para fijar el color en la bacteria. cuando los microorganismos presentes en el frotis son expuestos a la acción colorante de la violeta de genciana. lo que permite al solvente penetrar y extraer el complejo violeta-lugol.

5g .......... Disolver los 5g de fenol en 100 ml de agua destilada.. 100 ml Preparación: .... Echar 50 ml de la solución en una probeta graduada de 100 ml de capacidad. Dejar la preparación en reposo por espacio de 24 horas y filtrar con papel de filtro.. aunque sean sometidos a la acción de solventes tan fuertes como los ácidos para su decoloración.. el primer método de coloración para este tipo de microorganismo... Colorantes y reactivos . fue concebido y aplicado por Robert Koch..................... Añadir el resto de la solución de fenol hasta enrasar a 100 ml.. Este método se utiliza hoy en dia.. Lavar el mortero con la solución de fenol y añadir ese residuo en la probeta.. 2.. 1g . Fucsina básica ..3 ml 199 .... 108: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Ziehl Neelsen.... Alcohol etílico . .. Cristales de fenol ... Moler en un mortero 1g de fucsina y añadir en la probeta que contiene los 50 mml de la solución del fenol... Alcohol clorhidrato al 3 % ........ ... Ácido clorhídrico concentrado. Alcohol absoluto ................ Agua destilada ... Envasar en frascos de vidrio de color ámbar y rotular. . tienen la propiedad de retener el colorante con que han sido teñidas... Fue modificada y perfeccionada posteriormente por Ziehl y Neelsen...... 1. Fig.... . 10 ml .. descubridor del agente causal de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis o Bacilo de Koch. ....Coloración de "Ziehl Neelsen Algunos géneros microbianos dentro de los que se incluyen las microbacterias.... con alguna que otra modificación en función de las particularidades de la especie en estudio... 97 ml ..

Cubrir el frotis con fucsina fenicada y oscilar suavemente la llama del mechero por debajo de la lamina..0 ml El cloruro de azul de metileno es hidrosoluble..... Agregar poco a poco. . .... Si en ese tiempo el colorante se secara............. 100................... 20 ml.. Envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca.......... 1. Agregar los 3ml del ácido clorhídrico a los 97ml de alcohol etílico.... Rotular... Ácido sulfúrico.... con cuidado. Retirar el mechero y dejar que el colorante actué sobre el frotis por espacio de 5 minutos.... Preparación..... hasta que el colorante calentado comience a emitir vapores.... Agua destilada ... ..... Solución de azul de metileno (Colorante de contraste) . por lo que su dilución se realiza sin ningún tipo de contratiempo Preparación.... Envasar en frascos de vidrio con tapa de rosca....... 0..... Solución de ácido sulfúrico al 20 % ..... 4. Cloruro de azul de metileno .... .....Preparación .1g . dejar en reposo por 24 horas y filtrar con papel de filtro... Rotular... ... ...... 3.. añadir más... Procedimiento: Después que el frotis se ha secado colocar la lamina sobre el puente de coloración. Rotular. Agua destilada... 200 ... pero sin volver a calentarlo... Envasar en frasco de vidrio con tapa de rosca. (Nunca a la inversa)......... Una ves diluido.. los 20 ml de ácido sulfúrico a los 80 ml de agua destilada. 80 ml.....

Lavar la lámina con agua corriente. Echar sobre frotis la solución de alcohol clorhídrico o en su defecto la solución acuosa de ácido sulfúrico. introducido en este método. Al aplicar la coloración de contraste (azul de metileno) las bacterias que retuvieron el color proporcionado por la fuscina. con lo cual el microorganismo se mantiene teñido. al igual que las células epiteliales y otros artefactos presentes en la preparación. independientemente de que dispongan o no de ácido micolico en sus respectivas paredes celulares serán coloreados de rojo. La acción del calor. Esta operación debe durar aproximadamente unos 2 minutos. El resto de las especies. hasta que se observe que el solvente no extrae mas colorante de la preparación. hace que la misma se permeabilice y haga accesible la penetración de la fucsina. todos los microorganismos.R. Al aplicar el decolorante ácido.A. son decolorados. 3. resisten la acción decolorante y se mantienen teñidas de rojo. Al normalizarse la temperatura de la preparación. (Bacilos ácidos alcohol resistentes) 201 . después de teñidos por la fucsina. no sufren ninguna alteración permaneciendo de color rojo.A. 4. tiñéndose la pared celular. Dejar que la lámina se seque al aire sin aplicar papel de filtro para acelerar el secado. como el Mycobaccterium tuberculosis y otras especies susceptible de ser coloreadas por esta técnica. pero las especies que si fueron decoloradas. Añadir la solución acuosa de azul metileno. 5. 7. dejando actuar el colorante de 30 segundos a un minuto.2. 6. Fundamento técnico Al someter el frotis a la acción de la Fucsina. Verter el exceso de colorante de la lámina. en tanto que las demás se quedan incoloras. que no disponen de ácido micólico en su pared o membrana. Principio: Las microbacterias. dejando actuar el decolorante. el compuesto lipidico impermeabiliza la pared a la acción del decolorante ácido. se caracterizan por tener una alta proporción de ácido micolico (lípidos) en su pared celular. Diagnóstico microscópico Los bacilos que se observan coloreados de rojo están diagnosticados como B. se tiñen de azul. Lavar la lámina con agua corriente. ladeando la lámina y lavarla con agua corriente. así como las células epiteliales y otros artefactos. las especies que posean el ácido micolico en la pared.

generalmente no susceptible de ser coloreados por los metodos anteriormente explicados.leprae. capsulas. esporas. etc. tales como flagelos. Dejar actuar el colorante de contraste por espacio de 1 a 2 minutos. Dejar actuar el decolorante por espacio de 2 minutos. Procedimiento: Después que el frotis se ha secado al aire. 202 .tuberculosis. 9. Intriouzca la lamina en el vaso de Koplin y tapelo. Colocar nuevamente la lamina sobre el puente y cubrirla con alcohol clorhídrico al 1%. verde de malaquita o hematoxilina. destinadas a la tinciòn de las diferentes estructuras de la celula microbiana. Coloque en el fondo de un vaso de koplin. Coloque la lamina sobre el puente de coloración y cubrala con fuscina basica. 8. 2.Ccoloración de Ziehl Neelsen (modificada para Mycrobacterium leprae) Justificación: La capacidad de acidorresistencia del M. 10. Lavar la lamina con agua cruda. es diferente a la del M. Tinciones especiales: Existen decenas de metodos de coloraciones especiales. 5. NOTA: Estos colorantes se comercializan ya elaborados por diferentes empresas. Lavar la lamina con agua cruda. Dejar actuar el colorante por espacio de 20 minutos 7. Repetir el paso 3. 6. para hacer mas efectiva su tinciòn. Dejar actuar los vapores de formol por espacio de 3 minutos. Pase la lámina 3 veces por la superficie de la llama del mechero. En este tema haremos referencia solo a algunos metodos empleados con mayor frecuencia. una pequeña mota de algodón impregnado con 3 gotas de formol al 40 % 3. Lavar la lamina con agua corriente escurrir y dejar secar al aire. 11. Colocar la lamina sobre el puente de coloración y cubrirla con azul de metileno. 4. proceda de la siguiente manera: 1. granulos. Sacar la lamina del vaso de koplin y pasarla nuevamente 3 veces por la llama del mechero. lo que ha dado lugar a una modificación del metodo de tinciòn clásico.

.. 3...............Coloque sobre la mesa de trabajo 3 láminas portaobjetos limpias y acabadas de calentar.............Coloración Fragelar de Leifson (modicficación de Clark) Los flagelos son estructuras. Las laminas portaobjetos y cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpias sin el mas minimo vestigio de grasa.. cuyo diámetro no excede de los 30mm.... para que los frotis se sequen con rapidez....Cloruro de sodio... Ajustar el pH con NaOH/1N.... Los cultivos tienen que ser jóvenes... Colorantes y reactivos Solución A: ..... Procedimiento 1.... Para hacer visibles a los flagelos se requiere aumentar su grosor....1.. lo cual esta muy por debajo del poder de rersouciòn del micrososcopico optico.. 100.............Acido tanico.. Las laminas a emplear deben calentarse previamente y enfriarse a la temperatura corporal.Fuscina basica (certificada para colores flagelos) . Envasar en alícuotas de 50 ml.......................Agua destilada..... Guardar congelado en refrigeración (Tiempo de conservación: 1 mes)....... 2.5g . Requisitos a tener en cuenta Para que la tinciòn de los flagelos sea efectiva se requiere cumplir con los siguiente requisitos 1.. 0.0 ml Preparación: Mezclar a volumen iguales A y la B....... Lo que propicia que al ser posteriormente coloreado...75g ......0 ml Mezclar y dejar a temperatura ambiente Solución B ... 203 .. 2.. 1.. 100... Los medios de cultivo empleado para el desarrollo de las cepas deben ser adecuados............. 1..Alcohol etílico 95% .... 4.... tanto los flagelos como su disposición con respecto al bacilo se hagan visibles al microscopista.......... para lo cual se emplea una suspensión de acido tanico que al precipitarse sobre su cubierta forman una capa que aumenta aparentemente su diámetro.....2g .........

000 de borax y deje actuar el colorante por espacio de 10 minutos. polímeros de glucosa u otros aminoazucares que contienen nitrógeno.2. Mezclar 5 mL de solución alcohólica satura de violeta de genciana en 95 mL de agua destilada. Procedimiento. 7. casi al extremo de cada una de las tres láminas e inclínelas suavemente para que la gota se deslice (no extender con asa). Cubra el frotis con el colorante de Hiss. Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lámina hasta que el colorante se caliente y empiece a emitir vapores.Cubra cada frotis con solución de azul de metileno 1:1.000 en solución acuosa 1:2.Lave con agua corriente y espere a que las preparaciones se sequen al aire.Eche sobre cada lámina portaobjetos 1mL del colorante de Leifson y déjelo actuar con un tiempo diferente para cada preparación. 204 . 3.Lave con agua corriente. Coloración de cápsulas La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir de polipéptidos. 5. 1. que después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a coloraciones especiales. 3.Espere a que las laminas se sequen al aire. Haga un frotis fino y déjelo secar al aire. 4. Coloración de Hiss -Colorante capsular de Hiss. Una de las láminas por espacio de 8 minutos. 4. 2. procedente de un cultivo líquido o del agua de condensación de un cultivo sólido. Sobre una lámina portaobjetos mezcle partes iguales del material a teñir con suero específico. Fije la preparación a la llama del mechero. Esperar de 5 a 10 segundos. la segunda por espacio de 10 minutos y la tercera 15 minutos. 6.Deposite una gota grande de una suspensaiòn bacteriana joven.

. Resultado Las bacterias......... Las células vegetativas no se colorean y el fondo del campo adquiere un tono gris..... Distribuir en tubos de ensayo serológico. retapándolos finalmente con papel de aluminio.. Colorante.... En un tubo de ensayo haga una suspensión densa del microorganismo en estudio con 3 o 4 gotas de agua destilada... -Nigrosina ... Agregar 0..Hervir de 10 a 15 minutos...... 6.. 10g -Agua destilada ..Agregar 3 o 4 gotas de fucsina fénica de Ziehl Neelsen.................. Procedimiento Coloque en el centro de una lámina portaobjetos un asa de la preparación y mézclela con un asa de nicrosina de Dorner......... Coloración de Esporas Coloración de Dorner. Solución de nigrosina de Dorner. unos 5 mL por tubo procediendo a taponearlos con tapas de corcho....... Dejar que la preparación se seque al aire y examinar al microscopio.. Dejar secar y observar a microscopio a 700x con lente de inmersión.... ..... 4... ......... Resultado Las esporas se observan de color rojo....... Lavar el colorante con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%..... 3.......... 2.....100 ml Preparación 1......... haciendo un frotis delgado.. 205 ...... así como otras células y el fondo del campo se tiñen de rojo intenso en tanto que las cápsulas se observan incoloras y en ocasiones con un matiz azul muy tenue.. en baño de agua de ebullición................................. Hervir la solución en erlenmeyer durante 30 minutos..5......5 mL de formol al 40 % (como preservo) Filtrar dos veces con papel de filtro doble......

. Hacer frotis finos y dejar secar al aire. añadiendo poco a poco el alcohol y revolviendo. 1... Preparación........ ¿En qué consiste el método de coloración compuesta? 206 .. ¿Cuáles son las ventajas y las desventajas de la toxicidad que ocasionan los colorantes a los microorganismos? 10... Dejar secar al aire y observar con lente de inmersión a 700x.. 7............. 2..0 mL Preparación Mezclar el azul de metileno en un mortero... En su estado natural ¿qué color y aspecto tienen las bacterias? ¿Qué usted entiende por colorantes? ¿Cuáles son las diferentes fuentes a partir de las cuales se obtienen los colorantes? 4..... Nombre los colorantes sintéticos de uso frecuente en microbiología...Coloración de gránulos.. ¿Cómo tiene lugar la reacción física en el proceso de tinción? 8...... 2........................ Azul de metileno. Procedimiento 1..... Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro... Lavar con agua corriente....... Colorante.... Resultados Los gránulos se tiñen de azul oscuro y el cuerpo de la bacteria de azul claro.. 100.. 5................. ¿Cómo tiene lugar las reacciones químicas en el proceso de tinción? 9... 4....... Mencione tres tipos de colorantes naturales.......... ¿En qué consiste el método de coloración simple? 11.5g Alcohol etílico 95 % . 3. 3......... Cubrir con el colorante y dejar actuar durante tres minutos .. CUESTIONARIO 1......... Caracterice a los colorantes de acuerdo a su clasificación. Azul de metileno ...... 6....

¿De qué color quedan los B. después de ser sometidas a la coloración de Ziehl Neelsen? 19. ¿Qué requisitos han de tenerse en cuenta para realizar una coloración de flagelos? 22. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Ziehl Neelsen? 17. 20. Describa el procedimiento para la realización de una coloración de Ziehl Neelsen modificada. ¿cómo son clasificadas las bacterias? 16. Explique como usted realiza una coloración de gránulos. De acuerdo al color con que quedan teñidas después de la coloración de Gram.A. ¿Para qué se utiliza la coloración de Dorner? 24.A. 207 . ¿Con qué objetivo son tratadas con ácido tánico las bacterias. ¿Cuál es la función del lugol en la coloración de Gram? 14. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Gram? 13.R. ¿Cómo reacción las bacterias al ser sometidas a la coloración de Gram cuando se le adiciona el alcohol? 15. ¿Por qué se debe calentar la fucsina en el proceso de tinción? 18. 23. antes de aplicar una coloración de flagelos? 21. ¿Cómo se observan las esporas y las células vegetativas coloreadas con nigrosina? 25. Describa el procedimiento para la coloración de cápsula.12.

CAPÍTULO 16 MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCIÓN Los medios de cultivo son compuestos o preparaciones alimenticias elaboradas en los laboratorios de microbiología con los nutrientes requeridos para cada género en particular. Debido a que existen diferencias en los elementos constitutivos de cada género o especie. 2. Para que un medio de cultivo resulte eficaz. existiendo por lo tanto una amplia variedad. se clasifican a su vez en: simples. se comprenderá que no haya un medio de cultivo standard que posibilite el desarrollo de todas las especies. reproducirse. Atendiendo a su composición. 208 . metabolizan los nutrientes para sintetizar macromoléculas que suplan el desgaste natural de sus estructuras en cuyo proceso se libera energía que es empleada en el desarrollo de las actividades fisiológicas. Así como para controlar el paso de los gradientes químicos a través de la actividad osmótica de la membrana celular. OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA Cuando los microorganismos son colocados en medio de cultivo apropiados. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1. Los medios e cultivo se clasifican: Atendiendo a su composición Atendiendo a los objetivos de su empleo. sintéticos y vivos. etc. moverse. constituyendo de hecho el micromundo de los microorganismos en condiciones de laboratorio. que conjuntamente con las codiciones ambientales adecuadas propician su desarrollo. sus componentes deben responder a las exigencias nutricionales de las especies que se pretenden cultivar. tales como respirar. Por lo tanto la nutrición microbiana cumple dos objetivos fundamentales: la biosíntesis para la renovación de los compuestos de su estructura celular y la producción de energía. así como en sus actividades metabólicas y los mecanismos para obtener los nutrientes.

etc. Se puede decir que son verdaderas fórmulas químicas o recetas de cocina. Cuando un medio simple natural sufre algún tipo de modificación. pierde su condición de medio simple natural y se convierte en un medio simple artificial. Cada uno de estos medios responde a las necesidades específicas de grupos microbianos determinados. Ejemplo: la leche. jugos vegetales. la papa. Se utilizan en su forma natural. como por ejemplo: someter la carne o los vegetales a un proceso de cocción para obtener un caldo nutritivo. 110: Frasco con medio de cultivo deshidratado. Agar SS. lo que permite reproducir el mismo medio de cualquier otro lote con exactitud. 209 . La literatura informa cada año un número cada vez mayor de medios sintéticos recomendados para cultivar todo género de microorganismos. siendo prácticamente imposible preparar dos lotes idénticos con productos iguales de distinta procedencia. Fig. tal y como se encuentran en la naturaleza.Medios simples En este tipo de medio no es posible conocer la proporción exacta de sus componentes nutricionales por ser muy variable. etc. Kligler. los sintéticos están compuestos por un conjunto d nutrientes definidos cuyas proporciones son constantes. existiendo en la actualidad mas de un centenar de diferentes medios sintéticos. Este tipo de medio se comercializa en forma deshidratada por diferentes empresas cubanas y extranjeras que se dedican a la elaboración de medios de cultivo. las carnes. ejemplo: Agar Saboreaud. Medios sintéticos A diferencia de los medios simples.

medios selectivos y medios diferenciales. Fig. que se utilizan con el propósito de favorecer el desarrollo de una especie determinada que por encontrase en pequeñas cantidades en la muestra. Ejemplo: el caldo Selenito utilizado en la investigación del coprocultivo que 210 . que no se desarrollan en los medios simples o sintéticos por requerir de la presencia de células vivas para reproducirse en su interior (parásitos intracelulares obligados). conjuntamente con otras especies que se hayan en mayor proporción. b) Huevo de gallina con embrión de pollo de 7 a 10 dias. medios de aislamiento. etc. cultivo de tejidos.Medios vivos Los medios vivos están constituidos por animales o capas de tejidos que son utilizados para el cultivo de virus y rickettsias. donde ambas se puedan desarrollar. Medios de enriquecimiento Son medios generalmente líquidos. al mismo tiempo que no favorecen las necesidades esenciales del resto. 111: Medios de cultivos vivos: a) Hamster. ya que las que se encuentran predominando consumirían prácticamente casi todos los nutrientes lo que traería como resultado un pobre desarrollo o incluso ningún desarrollo del germen que nos interesa estudiar. huevos fértiles de gallina de 7 a 10 días. Ejemplos: hámster (curieles jóvenes). Estos medios no tienen utilidad práctica para el cultivo de las bacterias y los hongos. c) Cultivo de tejidos Atendiendo a los objetivos de su empleo Se clasifican a su vez en: medios de enriquecimiento. Los medios de enriquecimiento satisfacen los requerimientos nutricionales del germen objeto de estudio. se encontrarían en desventaja si la colocamos en un medio de cultivo. ratones blancos lactantes.

a) Medio sin sembrar (rojo). especialmente la Escherichia coli. d) Formación de manchas de color negro desde el medio hacia abajo. Se utiliza para diferenciar la especie desarrollada por las reacciones bioquímicas que genera su actividad metabólica. Otro ejemplo lo constituye el medio Agar. como el colorante verde brillante. lo que imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con excepción de los Estafilococos. Fig. Medios de aislamiento Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de germen al no poder desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies. En este caso se aprovecha la resistencia de esta especies a ciertos agentes químicos. inhibe el crecimiento de otras enterobacterias. b) Cambio de color de rojo a amarillo en el fondo del medo. lo cual es determinado por cambios y reacciones evidentes que de manera específica produce cada especie en el medio de cultivo. cuyas diferencias permiten encaminar la investigación hacia su identidad. se encuentra a una elevada concentración. c) Cambio de color de rojo a amarillo en todo el medio. verde brillante. Medios diferenciales En este tipo de medio de cultivo se pueden desarrollar sin dificultad diferentes especies microbianas. dificultando al mismo tiempo el de otras bacterias entéricas predominantes en el bolo fecal. Ejemplo: el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado. que generalmente se encuentra predominando en las muestras empleadas. que sin embargo. Este medio se caracteriza porque uno de sus componentes. de rojo a amarillo en la parte inferior o en todo el medio. por las características del medio.favorecen el desarrollo de los géneros Salmonella y Shigella. que puede desarrollarse y multiplicarse en este medio salino. que es utilizado en la investigación de las enterobacterias. así como la presencia o no de manchas de color negro o evidencias o no de producción de gas. el CI Na. 112: Medio diferencial (Kligler). Después de 14 a 16 horas de incubación se puede observar que el medio de cultivo cambia de color. Ejemplo: el medio Kligler. e)Manifestación de formación de gas 211 . que se utiliza para el aislamiento e identificación de la Salmonella sp/ en materiales patológicos.

caldo lactosado. Malasia y California meridional. siendo comercializado en forma deshidratada. 212 . de celulosa y otra más eterna de sustancias pécticas.5 % de agar forma un gel firme entre 32 y 390 C que no se funde por debajo de 850 C. Para la producción de agar se extraen las capas pécticas ricas en agarosa y agaropectina. 113: Diferentes formas de crecimiento en medios de cultivo líquidos. que proliferan principalmente a lo largo de las costas de Japón. Como lo atacan muy pocas bacterias se emplea básicamente como solidificante. Ceilán. Bioquímicamente se trata de un éster sulfúrico de una molécula lineal galáctano que es insoluble en agua fría pero soluble en agua caliente. etc.CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Atendiendo a su consistencia los medios se clasifican en: líquidos semisólidos y sólidos. peptonada Alcalina. Los microorganismos desarrollados en medios líquidos. Ejemplo: Caldo Selenito. Medios líquidos Los medios líquidos no contienen agar. Es una sustancia mucilaginosa que se obtiene de algas de color purpúreo. Fig. Las paredes de la planta posee una capa interna. Una solución de 1. Perteneciente al grupo Agarofíto que comprende los géneros: Gellidium. Pteroclaida. China. Gracilaria. La consistencia del medio de cultivo se logra con la adicción a la fórmula. se mueven con libertad y su desarrollo provoca la formación de un enturbamiento difuso o sedimento visible. siendo trabajados en forma de caldo. para ser procesadas industrialmente. de un compuesto denominado AGAR. agua. El agar en malayo significa jalea. y Acanthopeltis.

COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS Como fue explicado anteriormente. uno de los objetivos de la nutrición microbiana es la biosíntesis. Ejemplo: medio de "Cary .Blair" y agar semisólido para motilidad. Teóricamente cada colonia se genera a partir una o varias bacterias de la misma especie. c)Después de 24 horas de incubación (presencia de colonias). La solidez proporcionada por el agar impide a los microorganismos su migración en el cultivo por lo que se multiplican en un mismo sitio dando lugar a un cúmulo de millones de descendientes que forman sobre el cultivo estructuras macroscópicas denominadas colonias de diferentes formas. Agar Sangre. Fig. mediante la cual el microorganismo degrada los 213 . cantidad suficiente para la gelificación del medio. Medios sólidos Son medios de cultivo que contienen en su composición alrededor de 1. lo que da lugar a la formación de colonias atípicas. lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad de los gérmenes. Agar Violeta Rojo Bilis. aspectos y tamaños. b)Medio sembrado. que permitirán al investigador orientarse hacia la identificación ulterior de la especie. Cada género y especie producirá un tipo de colonia con caracteres culturales diferentes. etc. 114: Medio de cultivo sólido distribuidos en placas de Petra: a) Medio sin sembrar. aunque ocasionalmente pueden desarrollarse a partir de dos especies distintas.Medios semisólidos Estos medios contienen un % de agar menor que el empleado para los medios sólidos. De lo anterior expuesto se deduce que la cantidad de Agar añadida al medio de cultivo será directamente proporcional al grado de solidez que adquiera el medio. Ejemplo: Agar Saboreaud Dextrosa.5 % de agar.

Componentes químicos de las diferentes estructuras de la E. coli. que en el proceso de degradación liberan en alguna proporción estos elementos. Algunas bacterias utilizan el oxígeno y el hidrógeno que forman parte de la composición de aire. con los componentes que aporten a la nutrición los elementos químicos de referencia: Fuente de oxigeno e hidrógeno El solvente de todos los medios de cultivo es el agua. donde se indican pormenorizadamente los componentes químicos de las diferentes estructuras de la Escherichia coli: Cuadro 10. los lípidos y los carbohidratos.3 Por lo tanto si pretendemos que se desarrolle una Escherichia coli. A continuación haremos referencia a las distintas fuentes a partir de las cuales se pueden elaborar los medios de cultivos. por lo tanto los ingredientes con que se elabora un medio de cultivo deben responder a las necesidades específicas de la especie que deseamos que se desarrolle en él.5 0. siendo por lo tanto la principal fuente de obtención.nutrientes presentes en el medio de cultivo y posteriormente lo sintetizan en el interior de la célula. Fuente de carbono Las formas aprovechables van desde el CO2 atmosférico altamente oxidado hasta complejas formas orgánicas.2 0. como las proteínas. Veamos el siguiente ejemplo. transformándolos en los diferentes compuestos que conforman su estructura.5 0.5 0. ELEMENTOS Carbono Oxigeno Nitrógeno Hidrógeno Fósforo Azufre Potasio % PESO SECO 50 20 14 8 3 1 1 ELEMENTOS Sodio Calcio Magnesio Cloro Hierro otros % PESO SECO 1 0. por parte de la bacteria de oxigeno y nitrógeno mediante su ionización y en menor grado a través de la actividad catabólica que desarrollan sobre los compuestos orgánicos. 214 . los compuestos empleados en la preparación del medio de cultivo deben aportar todos y cada uno de esos elementos.

ácido cítrico o glicerina. específicamente del aminoácido. cinc y cobalto. urea o compuestos amoniacales así como a partir de fuentes inorgánicas como el nitrato. ejemplo: el azufre lo obtienen de los grupos.Para los microorganismos fotosintéticos y litotróficos. el nitrógeno debe estar en forma de amonio. son suministrados a los microorganismos. leche. ejemplo: cloruro de calcio. Otros microorganismos (heterótrofos) emplean fuentes orgánicas como las proteínas. por lo que deben obtener el nitrógeno a partir de las sales de amonio que se adicionan al medio de cultivo. pirimidinas y para la síntesis de anillos purínicos. Fuente de nitrógeno Es obtenido por los microorganismos de las proteínas y sus derivados. mas exigentes. tales como: carnes. requieren de la presencia de proteínas. en tanto que otras. para obtener el carbono que los provea de energía. cisteína y del fósforo que está presente en los ácidos nucleicos y los nucleóticos. en la composición del medio de cultivo. Independientemente de. potasio. La mayor proporción del carbono presente en el sustrato orgánico entra en la vía metabólica para producir energía y se excreta como CO2. la fuente de obtención para ser asimilados por la bacteria. NO3 o nitrógeno orgánico debe ser transformado extracorporeamente en amonio para poder ser incorporado a la célula bacteriana. tales como: peptonas. en forma de sales minerales. es decir. sulfatos o fosfatos. el cual es empleado para la carboxilación del fosfornolpivurato para formar intermediarios biosintéticos como el carbamilfósfato como precursor de arginina. el cual es utilizado por la mayoría de los microorganismos fotosintéticos. Estos dos elementos y otros como: hierro. fosfato de magnesio. O en forma de peptonas un producto intermedio del metabolismo de las proteínas. ya sea como cloruros. magnesio. 215 . carbohidratos y lípidos. etc. sulfhídricos de las proteínas. Algunos géneros son incapaces de reducir los nitratos. así como productos derivados de estos compuestos como aminoácidos. utilizan alrededor de 90 compuestos orgánicos diferentes como fuente de carbono y energía. transformándolas por hidrólisis en aminoácidos. Fuente de iones inorgánicos Son obtenidos por los microorganismos de la materia orgánica que se encuentra formando parte de la composición del medio de cultivo. si está en forma de N2. huevo etc. el CO2 es la única fuente de carbono. sulfato de cobre. Especies del género Pseudomonas. Hay bacterias que fijan el nitrógeno mediante su reducción preliminar a amoniaco.

. .. .Regulador del grado de asociación de las partículas ribosómicas. como la metionina. . .Constituyentes de ácidos nucleicos.Participante en la unión enzima . . Proteínasas.Constituyente de la clorofila.Sustancia tampón para mantener el pH del medio en un rango de 4.5 a 8. . . .Componente de algunas coenzimas como Co A y otros. .Estabilizador osmótico. .Constituyentes de algunos aminoácidos. y la cisteína derivados del metabolismo de las proteínas.Como parte de las hemoproteinas.Cofactor inorgánico de varias enzimas.Catión celular.Como aceptor de electrones en la respiración aerobia.. .Activador de determinadas enzimas. . . . cofactor inorgánico para reacciones inorgánicas. .Constituyentes de materiales celulares orgánicos. lo usan como fuente de electrones en forma de donadores de hidrógeno.Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales.Componente principal de las esporas. . .constituyente de los compuestos celulares orgánicos .Excretor de las enzimas. . cofactor de algunas enzimas. . . .Participa en la permeabilidad celular. .Catión celular.Constituyentes inorgánicos de determinadas enzimas. coenzimas.Útil en la fijación de nitrógeno y en la reducción de nitratos. . . .Constituyentes de los citocromos (imprescindible en la respiración celular).Los gramnegativos lo utilizan para la síntesis de la pared celular.constituyente del agua celular y de transporte . . . fosfolípidos y ATP.Participante en la permeabilidad celular. Los m. cofactor de algunas enzimas. así como de materias orgánicas celulares.Catión celular. ácidos nucleicos y co.sustrato. . incluyendo aquellas con ATP.Constituyente de la vitamina B12 y sus coenzimas derivadas. fotosintéticos. a veces remplazando el magnesio. Ej.Como cofactor de varias enzimas.Constituyentes en la síntesis las proteínas.o.encimas formadas por la célula bacteriana. HIDROGENO CARBONO NITROGENO AZUFRE FOSFORO POTASIO MAGNESIO CALCIO MANGANESO HIERRO COBALTO COBRE / ZINC MOLIBDENO MAGNESIO SODIO / CLORO 216 .) .Cuadro 11: función de los elementos químicos en la nutrición microbiana FUNCIONES ESPECÍFICAS DE CADA ELEMENTO ELEMENTOS OXIGENO FUNCION FISIOLOGICA (ACTUA COMO.Como aceptor de hidrógeno en las reacciones REDOX .Constituyentes del agua celular y de transporte.Constituyentes de intermediarios biosintéticos y precursores.

no solo desde el punto de vista económico. pero su calidad dependerá esencialmente del cumplimiento estricto de los pasos establecidos. atendiendo a las particularidades del medio de cultivo en cuestión. a emplear en una balanza adecuada. La premura. Vierta en una cristalería (erlenmeyer. que realicemos en el laboratorio. los errores en el diagnóstico de laboratorio ocasionado por el empleo de medios deficitarios que menoscaban la fiabilidad de la institución. se puede elaborar a partir de los componentes que se indican en la fórmula o empleando medios comerciales deshidratados. 4. sino por lo que resulta mas importante. matraz. Un medio de cultivo. 6. Con rigurosa precisión. Mida en una probeta graduada el agua destilada a emplear. así como obviar determinados requisitos pre establecidos son causas frecuentes de su mala elaboración. 217 3. La variabilidad de los medios responde a los requerimientos nutricionales de los distintos grupos microbianos.) de tamaño suficiente aproximadamente a las ¾ partes del volumen de agua contenido en la probeta. precipitación. etc. cada uno de los cuáles. cambio de color. Mida con precisión cada uno de los productos líquidos a los volúmenes exactos que se indican en la fórmula. teniendo especial cuidado en desestimar el peso de "tara". . etc. pese por separado cada uno de los productos sólidos. la fórmula del medio que se desea preparar (generalmente indicada para un litro). 2. formado por diversos compuestos en proporciones fijas que constituyen su fórmula particular. teniendo en cuenta que la mayoría de los medios son de importación. Seleccionar de los estantes cada uno de los componentes del medio serciorandose de que no hayan sobrepasado la fecha de caducidad y que se observen en buen estado sin cambios organolepticos ostensibles como: resequedad. por lo que la elección de un determinado medio de cultivo estará en correspondencia con el microorganismo que presuntivamente esperamos que se desarrolle durante la investigación al respecto. Elaboración a partir de sus componentes 1. la cual debe tener un pH y conductividad adecuada. Localizar en el formulario existente en el laboratorio. hidratación. existen centenares de medios de cultivo diferentes. por ocasionar demoras evitables en el tratamiento del paciente. con todos los efectos negativos que eso entraña.ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO Elaborar un medio de cultivo es un procedimiento relativamente fácil. 5. Como ya se explicó. Y proceda a colocarla sobre una fuente de calor con el objetivo de tibiar el agua.

procediendo a continuación a verterlo en el resto del medio para que la proporción estipulada en la formula no se altere. Si quedara algún residuo. El pH a que debe ajustarse e medio después de hidratado y antes de su esterilización. se enjuagará con parte del volumen de agua que queda en la probeta. vidrio reloj. Si se observa que los componentes no quedan disueltos. en la cristalería donde fue pesado (Ej. Ejemplo: "Agar Saboreaud Dextrosa". observe las paredes del recipiente durante su agitación. La fórmula del medio de cultivo. "Kligler". 2.7. Elaboración a partir de medios comerciales deshidratados En la actualidad diversas empresas dedicadas a la fabricación de medios de cultivo. dándole en cada ocasión un movimiento de rotación al frasco para que los ingredientes se mezclen. Para determinar que el medio se ha diluido. Proceda a adicionar en el agua tibia los compuestos pesados y medidos previamente. lo comercializan en forma deshidratada (pulverizados) que contienen la totalidad de los ingredientes. 3. en el orden que se establece en la fórmula. por unos minutos imprimiendo intermitentemente movimiento de rotación al frasco.Adicionar el agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen de medio previsto. etc. Cápsula de porcelana.S. Las instrucciones para hidratar el medio donde se precisa la cantidad de medios deshidratados que debe pesarse para preparar un litro. . someter el medio nuevamente a la acción del calor. con lo que se evita el tener que pesar o medir previamente cada uno de sus componentes.) o medido. 11. 9. En el caso que no se requiera preparar ese volumen se harán los cálculos pertinentes. Estos medios se expenden en frascos de tamaño variable con tapa de rosca hermética estando provistos de una etiqueta en la que se encuentran impresos los siguientes datos: 1. Retire la cristalería de la fuente de calor una vez que el agua esté tibia y colóquela sobre la mesa de trabajo 8. "Mac Conkey" "S. El nombre del medio de cultivo. Coloque sobre el plato de una balanza granataria una cápsula de porcelana o un vidrio reloj limpio y proceda a determinar su peso (tara) 218 5. 10. 4. mientras presenta gránulos es evidente que aún no se ha disuelto." etc. donde se relaciona cada uno de sus componentes y las proporciones respectivas.

añadiendo el resto del agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen total previsto. Baje el recipiente de la fuente d calor y proceda a verter en su interior. Coloque el recipiente sobre una fuente de calor durante dos o tres minutos para que el agua se tibie. Mida en una probeta graduada el volumen de agua destilada a emplear y vierta aproximadamente las ¾ partes d ese volumen en un erlenmayer o matraz de tamaño suficiente. Revuelva con el depresor plástico e incorpora este residuo en el erenmeyer que contiene el medio . 7. con ayuda de un depresor plástico. imprimiéndole movimientos de rotación cada 30 ó 40 segundos hasta observar que en las paredes de la cristalería no se detecta la presencia de granulaciones lo cual será sugerente de que el medio no se ha diluido adecuadamente. Deposite un poco del agua destilada que quedó en la probeta en el interior de la cápsula de porcelana. con sumo cuidado. 8. 11. 6. Coloque nuevamente el recipiente sobre la fuente de calor. 115 : Datos que se encuentran en la etiqueta de los frascos de medios de cultivo. 9. Debe evitarse el recalentamiento excesivo que provocaría la caramelización de los azúcares y el deterioro de otros compuestos nutritivos básicos.Fig. el medio deshidratado ya pesado que se encuentra en la cápsula d porcelana o vidrio reloj. Sume el peso de la "tara" y el de cantidad de medio de cultivo a pesar y mueva las pesas hasta que indiquen en la barra el peso total. 12. 10. Con el empleo de un depresor o cuchara plástica extraiga del frasco el medio de cultivo deshidratado y deposítelo en el recipiente que se encuentra en el plato de la balanza hasta que la punta de la barra coincida con el "fiel". 219 .

Tanto las soluciones ácidas como las alcalinas se emplean a concentraciones 5N. para evitar que el exceso de calor produzca agua de condensación que se adhiera. se utiliza tiras de papel tornasol o mediante el empleo del pHmetro. Cuando el medio se haya solidificado. después que la temperatura del medio haya descendido de 50 a 55 C. en que se 220 . la disolución ácida o alcalina según corresponda hasta obtener el pH deseado. a la cual se le adiciona cuidadosamente gota a gota. Al extraer la tira se compara el color que ha tomado la punta después de contactar el medio con la escala que tiene por sus laterales el carrete cuyos colores se corresponde con pH diferentes. antes de su esterilización. se esteriliza en un erlenmeyer taponeado con algodón y retapado con una capucha de papel de estraza. Al depositar el medio en las placas la altura del volumen no debe sobrepasar los 3 ó 4 mm. un volumen determinado. Para ajustar el pH se utiliza la alicuota empleada para medirlo. la caja que lo contiene se coloca boca abajo sobre el borde de la tapa hasta que se refresque. conociendo el volumen de la solución patrón empleada para ajustar el pH de la alicuota se procede a hacer los cálculos pertinentes para determinar la cantidad requerida para todo el volumen del medio de cultivo. en el reverso de la placa. mientras que el medio que vaya a ser distribuido en placas de "Petry". 1N. Si se desea una mayor precisión se empleará el pH metro (ver capitulo 9). para lo cual. Ajuste de pH En el caso de que el pH medido no se corresponda con el indicado en la fórmula del medio de cultivo deberá ser ajustado para lo cual se emplean soluciones patrones con diferentes niveles de concentración.Determinación del pH del medio Una vez que el medio ha sido diluido o fundido se extrae con pipeta una alicuota y se deposita en un tubo de ensayo que será utilizada como muestra representativa de todo el volumen de medio para determinar su pH. las utilizadas para acidificar el medio y bajar el pH son generalmente HCL o H2SOA y las utilizadas para alcalinizar el cultivo y subir el pH son NaOH o KOH. Para determinar el pH con tira de tornasol se cortan 4 ó 5 cm de la cinta d papel del carrete y se introduce una de las puntas en el medio de cultivo por 4 ó 5 segundos. Distribución de los medios de cultivo El medio de cultivo que vaya a ser trabajado en tubos de ensayo se distribuye en los mismos con pipeta. siendo distribuido en las placas con posteridad a su esterilización. 1N y 0.

Observaciones 1. una vez que el medio se ha solidificado hasta que se enfríe. observando minuciosamente todas las precauciones de asepsia. Si el medio es distribuido en tubos con tapas de rosca. De acuerdo al medio de que se trate la inclinación será mas o menos acentuada en interés de los objetivos que se persiguen con los cultivos que se desa221 . Para lograr que estos medios adopten esa forma deben ser colocados oblicuamente sobre la mesa de trabajo estando aún fundidos para que cuando solidifiquen. para que no se acumule en su reverso agua de condensación. así como otros medios elaborados con sueros no deben ser sometidos a la esterilización en autoclave pues se deterioran.tapa para ser guardado en el refrigerador. sin la presencia en el interior de la tapa de agua de condensación. estas deben quedar flojas durante la esterilización.Evitar refundir los medios de cultivo pues en la medida en que esto ocurre. como el "Dulcitol" 10 %. se debe realizar esta operación con sumo cuidado. aunque el tubo se coloque en posición vertical. para adicionar el volumen de sangre lo cual requiere que sea vertida poco a poco. 116: Manera de colocar la placa. por ejemplo en la preparación del medio de cultivo denominado "Agar Sangre". mantengan esa forma.Algunos medios de cultivos elaborados básicamente con hidratos de carbono. Cuñas de medios agaranizados Los medios de cultivo agaranizados (que contienen Agar) distribuidos en tubos generalmente se utilizan en forma de cuña. 2. se hacen mas propensos a la precipitación y sufren una disminución en su potencial nutricional. Cuando las instrucciones indiquen la adición d un reactivo o compuesto estéril. imprimiéndole simultáneamente movimientos de rotación al frasco para asegurar una aereación adecuada de la sangre. Fig. para permitir el flujo de aire. debiendo ser apretadas al concluir la esterilización. al bajar la temperatura. se debe esperar a que la temperatura del medio descienda entre 45 a 50 C. en el medio después de autoclaveado. en estos casos se emplea la Tindalización.

prácticamente toda la superficie será de slam. b) Citrato de Simmons Conservación de medios de cultivo comerciales Los frascos con medios de cultivos nuevos. Serán colocados en gradillas y mantenidos hasta su empleo a temperatura ambiente. deben ser ordenados en los estantes por lotes y fecha de vencimiento. Deben ser almacenados en lugares frescos y lejos de aparatos térmicos y de ventanas. Por ejemplo: 1. 222 . Por ejemplo. Agar semisólido para motilidad. Saboreaud. ya que el objetivo del empleo de este medio es que se produzca el desarrollo bacteriano en toda la superficie de la cuña (slam) por lo tanto al no ser de interés que quede un fondo como en el medio "Kligler". Fig. Una vez abierto el frasco se debe escribir en la etiqueta. en el caso del medio "Kligler" la inclinación es menos acentuada para propiciar que el fondo del tubo quede lleno de medio de cultivo a una altura aproximada de 2 cm de altura.l os medios serán conservados de diferentes maneras atendiendo al medio de que se trate.Los medios distribuidos en placas de "Petry" serán colocados en las parrillas del refrigerador boca abajo tan pronto se hayan solificado. etc. quedando en su superficie una cuña de menos de 2cm. la fecha en que ocurrió su apertura para que sea de conocimiento de otros que ese frasco está en uso. 2. Si se tratara el medio "Citrato de Simmons". tioglicolato. 117: Cuñas de medios agarinizados en tubos de ensayo: a) Kligler.rrollen en los mismos. Conservación de medios elaborados Alcanzada la temperatura ambiente después de esterilizados. la inclinación debe ser mas acentuada.

Observación El agua de condensación y la opacidad que se produce en algunos medios conservados en tubos. 5.Los que tienen propiedades REDOX. 2. se almacenarán en refrigeración para prolongar su tiempo de duración. No se deben preparar medios de cultivo en exceso. ya que si están mucho tiempo en almacenamiento se pueden resecar de manera imperceptible y ocasionar reacciones inexactas y fallas en el crecimiento. ¿Qué usted entiende por medio de cultivo? Cuales son los objetivos de la nutrición microbiana? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a su composición? ¿Que es un medio artificial? ¿Cómo se denominan los medios de cultivo que están constituidos por una variedad de ingrediente fijos con gramaje y volumen predeterminados? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a los objetivos de su empleo? 223 6. al sacarlo de su almacén frío y colocarlo a una temperatura ambiente. 5. antes de su empleo.Los que contienen colorantes o indicadores se deben proteger de la luz durante su almacenamiento. Cuando se obvia este paso se puede demorar la iniciación del crecimiento al ser colocado el inóculo en una superficie fría. como por ejemplo "selenito" se deben conservar en las parrillas del refrigerador. facilita su contaminación. 4.3. . 3.Los medios como el "Lowestein . deben extraerse varias horas antes e incubarlos durante 30 minutos. Comprobación de la esterilidad de los medios elaborados De cada medio de cultivo preparado y almacenado se seleccionan dos o tres placas o tubos y se colocan en la incubadora durante 24 a 48 horas para comprobar su esterilidad. Empleo de los medios Los medios preparados que han estado conservados en refrigeración. 4. CUESTIONARIO 1.Jensen.

13. ¿De cuantas maneras se puede ajustar el pH del medio de cultivo? ¿Cómo se distribuye el medio de cultivo antes de su esterilización? Explique como se preparan las cuñas en tubo de medios de cultivo sólidos. 8. 17. 15. 21. 12. Explique como usted realiza la pesada de un medio de cultivo deshidratado. ¿Como se conservan los diferentes medios una vez elaborados? ¿Cómo se comprueba la esterilidad de los medios de cultivo recién elaborados? ¿Que proceder debe seguirse cuando se va a realizar la siembra en un medio que está conservado en refrigeración? 224 .7. Describa como se hidrata el medio de cultivo una vez pesado. 11. 20. ¿Que compuestos podemos incorporar al medio de cultivo que le sirva a la bacteria como fuente de nitrógeno? ¿Que compuesto nutritivo aporta el carbono que le sirve a la bacteria para obtener energía? ¿Que aporta a la nutrición bacteriana el magnesio y el calcio. 18. 19. 10. 9. 14. 16. ¿Qué información aportan los medios diferenciales? ¿Cómo se denomina el producto que se añade a los medios de cultivo para sodificarlos? ¿Cuales son los compuestos nutritivos básicos? A partir de que fuentes. las bacterias obtienen el oxigeno y el nitrógeno.

hasta alcanzar una cifra exorbitante de descendientes que puede calcularse por millones. tales como: el asa. El número de células microbianas que se encuentran en el volumen o fracción sembrada se denomina inóculo. los aperos de labranza.CAPÍTULO 17 SIEMBRA E INCUBACIÓN INTRODUCCIÓN La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar una pequeña fracción o volumen de la muestra. colmado de millones de bacterias de la misma especie. sobre o dentro. veremos que emerge de ésta una pequeña postura. son sustituidos por los instrumentos de siembras. INSTRUMENTOS DE SIEMBRA Los instrumentos de siembra son los objetos empleados para tomar el volumen o fracción de la muestra y sembrarla en el medio de cultivo. tales como la guataca. analicemos el siguiente ejemplo: Si sembramos una semilla de naranja en un terreno fértil. podremos observar un proceso similar. guarda estrecha relación con la siembra agrícola convencional. para factibilizar su estudio y posterior identificación. y llega alcanzar tal magnitud que se hace visible microscópicamente al observador. Este tipo de siembra. Todo lo cual será equivalente a la obtención de un árbol frondoso. etc. aunque si. 225 . la aguja de platino. de uno o varios medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios par las especias que presuntivamente contiene. al transcurrir un período de tiempo determinado. sin las características físicas de éste. de la misma manera. la bacteria comenzará a multiplicarse. la que posteriormente se desarrollará hasta convertirse en un árbol con las características de esa especie de naranja el cual fructificará. con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente. . portadoras del mismo tipo de semilla que las generó. Si sustituimos la semilla de naranja. ya que al transcurrir solamente algunas horas. el azadón. etc. Para comprender debidamente esta analogía. por una especie bacteriana y la sembramos en un medio de cultivo apropiado. Este agregado de bacterias se denomina colonia. en decenas o cientos de naranjas. aunque más dinámico. donde la semilla es equivalente a la bacteria y el terreno fértil al medio de cultivo.

pero con la particularidad de que el extremo terminal tiene la forma de un triángulo. cuando son metálicas. Se esteriliza a la llama del mechero de igual manera que la aguja y el asa. para esterilizar en pocos segundos este instrumento en cada ocasión en que se requiera su uso. de platino o nicrón. La aguja. insertado a un cabo metálico. Espátula de Drigalski. Esta característica se aprovecha en el trabajo diario del laboratorio. El método de esterilización es igual al empleado para la aguja. el cual se encuentra insertado por uno de sus extremos a un cabo metálico. c) Espátula de Drigalski. e) Hisopo Diferentes tipos 1. Consiste en un fino alambre recto. El asa. Tanto el platino como el nicrón tienen la propiedad de calentarse rápidamente y ponerse a al rojo vivo. en lugar de ser recto. 2. La espátula de Drigalski puede ser metálica o de vidrio fusible. consisten en un tubo fino de varios mm de diámetro por unos 12cm de largo. consisten en un alambre de platino o de nicrón. 118: Instrumentos de siembra: a) Asa de platino. Es similar en todos los aspectos a la aguja. el cual está doblado por uno de sus extremos en forma 226 . cuando son expuestos directamente la llama del mechero y de enfriarse a los pocos segundos. con la diferencia de que el extremo terminal del alambre de platino o nicrón. d) Pipeta. b) Aguja de platino. forma un pequeño círculo en el extremo con un diámetro de 4 a 5 mm.Fig. que tiene aproximadamente una longitud de 7cm. Al igual que la aguja y el asa. el cual sirve para que el manipulador pueda tomar en su mano este instrumento de siembra. 3. después de haber sido retirados de esa fuente de calor. Las de vidrio fusible.

4. Siembra masiva. 3. Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el 227 . Cuando la llama se apague. con una pequeña mota de algodón adherida en uno de sus extremos. antes y después de realizar la siembra..de un triángulo equilátero. Siembra por punción. 4. por su parte posterior. Pipeta. MÉTODOS DE SIEMBRA El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo. ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva. Cuando se emplean para tomar las muestras. generalmente de madera.2 mL. con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. taponeados y retapados antes de proceder a su esterilización en autoclave. deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo. Hisopos. mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno. Para su esterilización la parte triangular de la espátula se introduce en un recipiente que contenga alcohol y de inmediato se aproxima a la llama par que se encienda y flamee el triángulo de la espátula. Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón. Siembra por estrías. 2. similar las empleadas en los goteros. se debe esperar unos segundos para que se enfríe y en esas condiciones utilizarlas en la realización de la siembra. Consiste en un fino aplicador. graduadas en centésimas y milésimas de mL. Las pipetas utilizadas como instrumentos de siembra. casi siempre se utilizan a continuación para realizar la siembra en el medio del cultivo. que se elaboran con cristal fusible careciendo de escala graduada y las de 0. los hisopos. deben ser colocados en el interior de tubos de ensayo de tamaño apropiado. los métodos de siembra más empleados son los siguientes: 1. Las más utilizadas en el trabajo ordinario son: las de "Pasteur". Siembra volumétrica. que mide unos 2 cm por cada uno de sus lados. 5. deben ser previamente esterilizadas en autoclave y estar provistas de un bulbo de caucho. una vez confeccionados.

calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. Siembra por estrías Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña.(Slam) Instrumentos de siembra a emplear. Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. Procedimientos Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón. 1.Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir. 2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto. 3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe. 4. Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado. 5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior. b) Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo) c) Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación. 228

d) Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Fig. 119: Siembra microbiológica en medios de cultivos distribuidos en tubos de ensayo: 1) y 2) Retirar el tapón del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5) Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el tubo.

- Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña, trazando una línea longitudinal. - Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag. - Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo. - Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal. - Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios sólidos en cuñas (tubos de ensayo): a) Trazando una línea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el instrumento con el inóculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c) Roturando el medio

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Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petry, proceda de la siguiente manera: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b) Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie. c) Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento. d) Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo. e) Repita esta operación una o dos veces más.

Fig. 122 : Método de siembra por estrias en medios de cultivo sólidos distribuidos En placas de Petra

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f) Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo. g) Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo. Cuando la muestra es tomada con hisopo. 1. Si la siembra se va a producir en una cuña de agar, se procede en forma similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo. 2. Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas, el primer segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con asa estéril, para lograr una diseminación por agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la diseminación cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a continuación con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminación cruzada: a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z"en la superficie del medio; b) Completar la siembra con un asa de platino estéril, imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la "Z"

Siembra por punción Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. 231

Fig. 124: Siembra por punción

Siembra volumétrica Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado. Siembra masiva Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con espátula de Drigalski

INCUBACIÓN
Una vez realizada la siembra, atendiendo a los requerimientos de los géneros o especies que presuntivamente se encuentran en la muestra, se debe proporcionar a los cultivos la temperatura y las condiciones de aereación que favorezcan su desarrollo, durante un tiempo predeterminado que será variable para cada grupo de microorganismo.. 232

por lo que basta con dejar los tubos o las placas sembradas sobre la mesa de trabajo para que se desarrollen sin dificultad Los microorganismos que requieran para su desarrollo una temperatura más elevadas o más bajas que la ambiental. denominados colonias bacteriana . la cual podrá opacar todo el cultivo o darle un aspecto granuloso o nebuloso. En medios de cultivos sólidos Como la bacteria se encuentra impedida de desplazarse por la solidez del medio. al multiplicarse en un punto especifico. ocasionan agregados bacterianos. que dan lugar a estructura visibles de diferente formas. cuyos caracteres serán típicos para cada genero o especies. Cultivo puro El cultivo es puro cuando en el se desarrolla una sola especie. sus descendiente que alcanzan magnitudes millonarias en menos de 24 horas. para de esta manera obtener un cultivo puro. Cultivo mixto Cuando dos o más especies se desarrollan simultáneamente en el medio de cultivo. (Ver Capitulo 7) MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO EN LOS MEDIOS DE CULTIVO En medios de cultivo líquidos En general el crecimiento se manifiesta por turbidez. 233 . deben ser colocados en una incubadora provista de temperatura regulable o con condiciones especiales como las incubadoras de CO2 y las anaeróbicas. Esta acción se denomina resiembra. nos interesa estudiar un solo tipo de colonia. aspecto y colores. se procede a extraer una pequeña porción con un asa de platino estéril procediendo a sembrarla en un medio de cultivo idóneo. Resiembra Cuando en el cultivo mixto.Algunos tipos de microorganismos (como la mayoría de los hongos) se desarrollan sin dificultad a temperatura ambiente y en condiciones de aerobiosis.

¿Cuál es la diferencia entre un cultivo puro y uno mixto? 12.? 10. 6. ¿Qué usted entiende por siembra microbiológica? ¿Describa los diferentes instrumentos de siembra? ¿Describa el método de siembra por estrías? ¿Cómo se realiza la siembra por punción? ¿Cómo se denomina el método de siembra que se realiza con pipetas? ¿Con que objetivo se utiliza la espátula de Dyigalski? ¿Describa como se realiza la siembra con asa de platino o hisopo en el slam de los medios sólidos en tubos. ¿Como se manifiesta el crecimiento bacteriano en los medios líquidos y sólidos. ¿Cómo se realiza la siembra cuando se utiliza el mismo hisopo con que se toma la muestra? 9. ¿Cuales son los aspectos a tener en cuenta para incubar los cultivos. ¿Qué usted entiende por resiembra? 234 . 5. 4.? 11.? 8. 7. 3. 2.CUESTIONARIO 1.

como por ejemplo: el ácido láctico. Los más utilizados son los monosacáridos como: glucosa. También algunos trisacáridos. galactosa y fructuosas. es determinar. manosa. El objetivo de su empleo. principalmente carbohidratos. lo cual será detectado por la acción del indicador presente en el medio de cultivo al variar el pH. maltosa y celobiosa. sacarosa. en la fórmula de algunos medios de cultivo empleados al efecto. para lo cual se emplean indistintamente productos químicos. las especies deben ser identificadas. se incluyen determinados compuestos con el objetivo de favorecer su desarrollo en detrimento de otras especies contaminantes o no. de la composición de diversos medios. para conocer su capacidad metabólica frente a esos sustratos o se enfrentan a otros tipos de compuestos para determinar su resistencia. HIDRATOS DE CARBONO Los carbohidratos comúnmente empleados son diversos. fermenta "in vitro" el carbohidrato con formación de sustancias ácidas. que le son proporcionados a las especies de interés. de los medios bioquímicos destinados para el diagnóstico de las especies. así como. entre otros y los disacáridos como: lactosa. para que puedan desarrollarse plenamente a nivel de laboratorio. 235 . así como a diversos productos biológicos para evidenciar sus reacciones. como fuente de carbono. Una vez aisladas. entre los que se encuentra la rafinosa y polisacáridos como la celulosa y el almidón. Uno o varios de estos carbohidratos suelen formar parte. para el cultivo primario o las resiembras.CAPÍTULO 18 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO INTRODUCCIÓN Además de los nutrientes básicos y específicos. o para distinguir y diferenciar las colonias producidas. si el microorganismo en estudio.

10. BASE Rojo Azul Amarillo Amarillo Rojo Rojo púrpura RANGO DE ph 6. sino más bien un color intermedio entre ambos.8. a determinado nivel de la escala de pH.0 8. para que la determinación del ph se deba exclusivamente a los cambios que tiene lugar en la solución.0 .8 Los indicadores presentes en los medios de cultivo. deben estar en concentraciones muy bajas. por lo que el color en esta fase no será definido.0 8.0 .2 6.4 . Cuando el indicador está cambiado de color.0 .INDICADORES Los indicadores son compuestos químicos elaborados con ácidos o bases débiles.8.2 8. Los indicadores que forman parte de la fórmula del medio de cultivo. la mitad se encuentra en estado iónico y la otra mitad en estado molecular. en correspondencia con las variaciones del pH. cambian el color del medio o de las colonias.0 7.0 4. debido a su capacidad de ionización mediante la cual.2 - 6. transforman los iónes o moléculas y viceversa.0 7.3 Amarillo Rojo 5. que se caracterizan por dar lugar al cambio de color de la disolución o sustancia donde se encuentran al variar el pH. 236 . Colores a los que dan lugar los indicadores en su rango de pH COLOR ACIDO Amarillo Amarillo Rojo Rojo Incoloro Amarillo I N D I CAD O R ROJO FENOL AZUL BROMOTIMOL ROJO DE METILO ROJO NEUTRO FENOLFTALEINA ROJO CRESOL PÚRPURA DE BROMOCRE. Ejemplos de indicadores Cuadro 12.6. Los indicadores son de dos colores oudiendo ser uno de ellos incoloro.

Por ejemplo. etc. hemolisando a los hematíes total o parcialmente. Si el tipo de hemolisina. coli. Las colonias de Salmonella se observan además en este medio con un color. como por ejemplo: el "Verde brillante" que forma parte de la composición del medio de cultivo del mismo nombre. éstas actúan sobre la sangre que se encuentra en sus inmediaciones. El suero sanguíneo se emplea comúnmente para serodiagnósticos y el plasma (sin preservo) es utilizado regularmente para poner en evidencia la capacidad enzimática de especies productoras de coagulosa. Este tipo de hemólisis total se clasifica como "betha". destruye a los eritrocitos. Por ejemplo. favoreciendo de esta manera el desarrollo de otras más resistentes de interés en la investigación. Colorantes La edición de determinados colorantes a la fórmula del medio de cultivo. como los obtenidos de diversas especies de animales. Citrobacter y P. con aspecto metálico (que se evidencia con luz 237 . utilizado para aislar algunas especies del género Salmonella. son utilizadas en diferentes pruebas de hemaglutinación o para detectar diversas reacciones hemolíticas. rosado o casi blancas. conejos. de los que no las fermentan. Tanto los eritrocitos de sangre humana.SANGRE Y HEMODERIVADOS La sangre se emplea en la elaboración de algunos medios de cultivo. En cambio. vulgaris.. el efecto se evidenciará por la formación de un halo incoloro alrededor de la colonia. inhibir el desarrollo de las especies más sensibles. al interferir total o parcialmente el desarrollo de otras especies presentes en la muestra. una enzima que utiliza como sustrato el plasma sanguíneo. cuando se desarrollan en el medio "Agar sangre". el efecto se evidenciará por la presencia de un halo de color verde alrededor de la colonia. adquieren un color azul oscuro. que interfieren el estudio. Otro ejemplo lo constituye la siembra en el medio "Eosina-Azul de Metileno Agar". como por ejemplo: carneros. reduciéndola a biliverdina. Estos colorantes inhiben el desarrollo de los gérmenes gramnegativos y al mismo tiempo permiten diferenciar a las especies de enterobacterias fermentadoras de lactosa. colonias correspondientes a especies productoras de hemolisinas. provocando la formación de coágulos. cabras. pero actúa sobre la hemoglobina que porta. tiene como objetivo. no teniendo como única finalidad proporcionar un nutriente esencial para el desarrollo de determinadas especies. dependiendo de la condiciones de cultivo y el tiempo de incubación. el permitir evidenciar y diferenciar la actividad hemolítica de algunas de ellas. Este tipo de hemólisis se clasifica como "alpha". sino además. si el tipo de hemolisina no destruye a los hematíes. la sacarosa o ambos azúcares. las colonias de E.

que contiene además los nutrientes necesarios para el desarrollo de la especie en estudio. mientras que las del resto de los coliformes se tiñen con un tono parduzco. que la capacita para actuar metabólicamente sobre determinados sustratos. se realiza una técnica denominada antibiograma con el 238 . KCN. Al actuar la bacteria sobre el producto químico en cuestión. Productos químicos Teniendo en cuenta. en una proporción del 1 % a un caldo base que contiene los nutrientes necesarios para el desarrollo del germen y un indicador. la mayoría de naturaleza química. haciendo factible la lectura de esa prueba. como parte de las pruebas que se realizan a una cepa en estudio. El principio de estas pruebas radica en la capacidad de algunos microorganismos para decarboxilar uno o varios de estos aminoácidos formando una amina con la consiguiente alcalinidad. formará parte de la fórmula de un medio de cultivo. citrato. cada uno de estos aminoácidos es adicionado por separado. De manera similar a la empleada con los productos químicos para igual propósito. cuyas reacciones específicas. nitrato. generalmente lo degradan por acción enzimática a productos más simples. que proporcionará el cambio de color del medio. es parcial o totalmente diferente entre sí. entre otros. empleados con mayor frecuencia se encuentran los siguientes: Urea. Antibióticos Para medir la sensibilidad o resistencia de un microorganismo en estudio a los antibióticos. lo que será puesto de manifiesto por la acción del indicador. Entre los productos químicos. al producirse el cambio de ph. en tanto que las Salmonellas y las Shigellas se mantienen incoloras o ligeramente teñidas. El producto químico que se vaya a emplear. Aminoácidos Los aminoácidos: lisina. se emplean para su diagnóstico diversos sustratos. para determinar la identidad de la especie. nos aportan información acerca de su identidad. así como diversos tipos de aminoácidos. ornitina y arginina son utilizados corrientemente en el laboratorio.indirecta). la información genética de que dispone cada especie bacteriana. malonato. lo cual se pondrá en evidencia por la acción del indicador que forma parte del medio de cultivo. caracterizados por tener un ph diferente al del producto reaccionante.

será indicativo de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en estudio a cada uno de los antibióticos empleados. impregnado en este caso con bacitracina u optoquina. 239 . La bacitracina inhibe el crecimiento de más del 95 % de los Estreptococos del grupo A. pneumoniae (Neumococos). siendo incubada de inmediato. Fig. se realizan con el empleo de productos químicos como: el cianuro de potasio o el desoxicolato de sodio. obtenida en el pico de una terapéutica a dosis habituales. Transcurrida 24 horas. en tanto que la optoquina inhibe el desarrollo del S. se realizan pruebas específicas con el empleo de un solo disco. Otras pruebas de resistencia. 126: Discos de papel de filtros para antibiogramas Basado en el mismo principio y por un procedimiento similar. tan pronto se realiza la siembra.empleo de discos de papel de filtro estériles de unos 5 ó 6 mm de diámetro. un halo de inhibición alrededor de cada disco. la lectura de estas pruebas aportaran un importante dato para sus respectivos diagnósticos. La interpretación de los resultados se sustentará en el hecho de que los microorganismos sean o no capaces de desarrollarse en presencia de estos compuestos. equivalente a la concentración sérica media. Estos discos (desecados) se colocan con todas las precauciones de asepsia sobre la superficie del cultivo. en dependencia del tamaño del diámetro. por lo que. así como mediante la exposición del microorganismo a sustancias de secreción orgánica como la bilis. impregnados por separado con una carga en g o unidades de un antibiótico determinado.

la cual se liofiliza para su comercialización. o ser preparados artificialmente con diversos compuestos. se obtienen a partir de animales sensibilizados. 127: Sueros empleados para serodiagnósticos. Los anticuerpos presentes en el suero de un paciente con sífilis al ser confrontados con este antígeno. que se elabora con una cepa de Treponema pallidum (cepa Nichols) cultivad "in vivo" en testículos de conejo. cuya composición química sea similar a la de los antígenos de la célula microbiana. debiendo ser almacenados de 2-80c hasta su caducidad.Fig. que al interactuar con el antígeno en cuestión. el sistema inmunológico del animal producirá los anticuerpos específicos. con las cuales. Sueros Los sueros empleados en las técnicas de serodiagnóstico. evidenciándose por microscopía las reacciones resultantes de aglutinación o inmovilización del Treponema. interactuará con él. purificados y preservados. pueden ser elaborados con cepas certificadas de microorganismos portadores del antígeno de interés que reaccione específicamente con los anticuerpos inducidos por él. el antígeno troponémico empleado para el serodiagnóstico de la sífilis. que han sido expuestos de manera controlada a determinadas sustancias antigénicas con el objetivo de que induzca la formación y el incremento de diferentes tipos de inmunoglobulinas. lo constituye. darán lugar a reacciones de aglutinación. mediante sangría de animales sensibilizados son procesados industrialmente. 240 . Antígenos Los antígenos comerciales empleados para serodiagnóstico. siendo envasados en frascos cuentagotas para su comercialización. Los sueros obtenidos. las que serán perceptibles "in vitro" si este suero es confrontado con un antígeno similar. por procedimientos de laboratorio. Un ejemplo de antígeno elaborado con cepas. precipitación o de hemólisis. teniendo la propiedad de reaccionar con los anticuerpos presentes en el suero problema de forma similar que cuando se confrontan con antígenos reales.

sino por un compuesto formado por: cardiolipina. dedicadas a la fabricación de reactivos comercializan diferentes tipos de látex sensibilizados para el serodiagnóstico de diferentes tipos de microorganismos. una adormidera verde. natural de Asia. con lo cual se favorece la observación de la aglutinación pasiva. 241 . ¿Qué datos aportan los carbohidratos utilizados para el diagnóstico de laboratorio? 2. etc. a la del antígeno real.Un ejemplo de antígeno no treponémico. Este antígeno se expende en ámpulas selladas de 5 mL. lo constituye el denominado antígeno de cardiolipina para pruebas de VDRL (Venereal Disease Research Laboratory). ¿Qué son los indicadores? 3. el cual no está elaborado con cepas de Treponemas. que se extrae mediante incisiones (cortes) de determinados vegetales. endémica de Sumatra. aunque no igual. con textura viscosa y elástica. envoltura de cables. Látex El látex es una resina de aspecto lechoso. oriundas de Brasil (de donde se extrae el caucho) y la Gutapercha.81 de diámetro. dando lugar a reacciones de aglutinación "in vitro". reaccionan con él de forma similar para dar lugar a reacciones positivas aparentes. fue utilizada por los laboratorios biomédicos para recubrir las globulinas específicas. que hace que la reagina (anticuerpo) presente en el suero problema interactúe con este "antígeno". impermeables. los anticuerpos inducidos por algunos agentes infecciosos. Este compuesto tiene una configuración química. que se utiliza esencialmente como narcótico. conozca que sean empleados con frecuencia en los laboratorios de microbiología. CUESTIONARIO 1. Esta sustancia tratada con sulfuro de carbono. Esta prueba es inespecífica. Investigaciones posteriores demostraron que el látex era muy inerte. Desde hace varias décadas. da lugar a la producción de un material muy resistente que se emplea en la fabricación de neumáticos. así como del opio. entre los que se encuentran diversas especies pertenecientes a la familia Euforbiáceas. lecitina y colesterol. Esta propiedad unida al ínfimo tamaño de su partícula de 0. diversas empresas farmacéuticas. Nombre los indicadores que Ud. ya que por tratarse de un antígeno artificial.

¿Cuál es la propiedad que tiene el látex que lo hace muy eficaz en las pruebas microbiológicas? 13. 8. ¿Qué es el látex? 12. ¿Para qué se utilizan determinados colorantes en la composición de los medios de cultivo? 6. 7. ¿Cómo se obtienen los sueros empleados en los sero diagnósticos? 10. 11. ¿ De qué manera se emplean algunos antibióticos para identificar especies bacterianas en estudio? 9. ¿Cómo son elaborados los diferentes tipos de antígenos utilizados para el diagnóstico de las diferentes especies. ¿Qué información aporta la sangre y el plasma en el diagnóstico de laboratorio? 5. Nombre los productos químicos que son empleados en la composición de medios de cultivo destinados al diagnóstico microbiológico. ¿Cómo se utiliza el látex? 242 . ¿Qué le sucede a los cultivos que contienen ciertos aminoácidos como la lisina. cuando son atacados por determinadas especies bacterianas.4. ornitina y arginina. cuya reacciones aportan información acerca de su identidad.

originados por impericia. son algunos de los factores que inciden en la calidad de los resultados. el incumplimiento de las normas técnicas establecidas. debidas generalmente a deficiencias técnicas o errores humanos. 3. así como la mala calidad de los materiales empleados o el deficiente funcionamiento de los equipos o instrumentos contribuyen entre otras causas afectar la calidad de los resultados. el empleo de colorantes vencidos o deteriorados. así como la errónea interpretación de las pruebas. 243 . en cada etapa del ciclo. negligencia o mal trabajo. centrando la atención en los ejecutores. así como su deficiente conservación y transporte. Debe tenerse presente que cada uno de los pasos o etapas del proceso investigativo es susceptible de afectar la calidad del resultado final. 2. Emplear racionalmente las pruebas de elevado costo. incubación incorrecta. los resultados de las investigaciones realizadas pueden estar permeadas de imprecisiones. La falta de cuidado.CAPÍTULO 19 GARANTÍA DE LA CALIDAD INTRODUCCIÓN Con independencia de las buenas condiciones técnicas que tenga un laboratorio de microbiología y de la adecuada competencia del personal que en él laboran. Mejorar la fiabilidad de los resultados y con ello optimizar el servicio. deficiente microscopía. OBJETIVOS Los objetivos del control para la garantía de la calidad son los siguientes: 1. bajo costo y eficiencia. Por ejemplo: la toma de muestras sin la calidad requerida. A los efectos de evitar o al menos reducir al mínimo estas insuficiencias y asegurar la buena calidad de los diagnósticos de laboratorio . se establecen un conjunto de medidas encaminadas a controlar mediante fiscalizaciones regulares todos los factores que inciden en el proceso investigativo. El mal montaje de las preparaciones en láminas. desde la toma de la muestra hasta el informe final. Validar la calidad de las pruebas empleadas sobre la base de su factibilidad.

Externo Control interno El control interno es planificado. Esta fiscalización consiste esencialmente en la revisión de: 1. que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en días diferentes y la repetibilidad. el control mediante la reproductibilidad. 3. La limpieza. La correcta aplicación de los procederes establecidos para la toma de muestras. Control de precisión Se denomina precisión a la propiedad que tiene un determinado método de dar resultados lo más iguales posibles cuando se realizan varias determinaciones sobre una misma prueba. organizado. 2. En el servicio de microbiología. Para determinar la precisión se emplean dos variantes: la reproductibilidad. b) La aplicación de controles de precisión.DIFERENTES TIPOS DE CONTROL . c) El empleo de pruebas estadísticas. puede verse afectado por la falta de homogenicidad al estar presente en una misma muestra más de una especie. 4. Para la realización de las pruebas de 244 . que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en serie en el mismo día. desinfección y esterilización del material de vidrio. La fiscalización sistemática "in situ" Consiste en supervisar la labor que realiza el personal de laboratorio en cada sección de trabajo con la finalidad de detectar errores groseros que puedan incidir en la calidad de los resultados. así como la falta de estabilidad del microorganismo presente en la muestra debido la multiplicación o incremento de las muertes al no procesarse oportunamente. El uso de reactivos y medios de cultivo con la calidad requerida. ejecutado y controlado por la dirección del laboratorio a través de las siguientes actividades: a) La fiscalización sistemática "in situ".Interno (Denominado también control de calidad) . La habilidad y destreza en la realización de las técnicas de acuerdo con las normas.

reproductibilidad o repetibilidad se emplean muestras "a ciegas". La aplicación de estas pruebas es muy familiar para los estadísticos. Por su parte las artificiales son muestras simuladas elaboradas con diferentes solventes. El informe final de ese resultado se compara con los datos conocidos que sirven de control y cuando se detectan resultados incorrectos se toman las medidas de adiestramiento necesarias. Pruebas estadísticas Existen diversas pruebas estadísticas utilizadas en los estudios de precisión y por lo tanto muy ligadas al control de la calidad. Las muestras artificiales más que un elemento de control de la calidad. 245 . pueden ser reales o artificiales. tienen sus principales causas en los errores originados por deficiencias técnicas o humanas. PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES Como ya se explicó. la génesis de los malos resultados de las investigaciones de laboratorio. que debe recurrir a personas experimentadas en el manejo de estas pruebas cuando resulte necesario. Las reales se estudian previamente y se determinan sus características pudiendo añadírsele diferentes sustancias o elementos. por ejemplo: agua destilada con ácido pícrico para simular una muestra de orina o solución salina fisiológica a la que se le añade una o dos gotas de suero sanguíneo y glucosa. etc. constituye una forma de controlar la seriedad y responsabilidad del técnico. cuyas características son conocidas por el jefe del laboratorio y que el técnico no puede diferenciar del resto de las muestras. Prueba Estadística "F" Esta prueba es utilizada para comparar la precisión de dos métodos. para simular un líquido cefalorraquídeo. Entre las más usuales se encuentran la prueba estadística "F" y la prueba estadística "T". procesándola como una muestra más. pero no para el personal técnico de microbiología. Las muestras empleadas para controlar precisión. el trabajo realizado por dos técnicos. debido al mal desempeño del personal de laboratorio. Prueba Estadística "T" Esta prueba es utilizada para comprobar si los resultados que se obtienen con un método son cuantitativamente superiores o inferiores en relación con otro o si un grupo de datos de una serie es mayor que los de otra.

las particularidades para la incubación de los cultivos. medios de cultivo. la selección de colonias para las resiembras. d) Empleo de equipos e instrumentos obsoletos o con funcionamiento deficitario. d) Violación arbitraria de las normas técnicas. Las áreas designadas para comer o fumar. así como la notificación de los resultados. las indicaciones esenciales para el buen funcionamiento del laboratorio. Las medidas de seguridad para cada sección de trabajo. donde se especifica todo lo concerniente al examen microscópico.1. b) Poca experiencia técnico-laboral en la sección de trabajo donde se desempeña. El manual establece además. Las normas de higiene personal. etc. f) Inadecuada selección de los medios y métodos empleados. g) Informar de manera incorrecta o incompleta los resultados en la orden de análisis. tales como: los requisitos para la recolección y toma de las diferentes muestras. la selección de los medios de cultivo. c) Falta de habilidad para realizar con destreza y precisión los procederes de laboratorio. la marcha analítica para su procedimiento. b) Insuficiente disponibilidad de recursos materiales. 2. Errores técnicos a) Deficientes condiciones constructivas o estructurales del laboratorio. 246 . MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS Todos los laboratorios de microbiología deben disponer de un manual de normas y procedimientos donde se describan las secuencias y regulaciones establecidas para la realización de las diferentes investigaciones. Errores humanos a) Deficiente capacitación en su formación. relacionadas con: a) b) c) d) La limpieza y/o desinfección del lugar de trabajo. c) Mal estado de los reactivos. colorantes y otros medios para el diagnóstico. así como su conservación y transporte. la lectura de las pruebas diagnósticas. e) Falta de concentración o premuras indebidas durante la realización de: exámenes microscópicos.

A cada equipo se le abrirá una tarjeta. 247 . En el caso del horno. como: incubadoras. baño de María y refrigeradores se le comprobará su buen funcionamiento diariamente. anotando los resultados en el registro. donde se especifique la marca. f) El cumplimiento del esquema de inmunización acorde con la actividad que se realiza. REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD EN BACTERIOLOGIA Control de equipos e instrumentos Todos los equipos e instrumentos que sean asignados al laboratorio deben estar registrados en una carpeta de medios básicos. debiendo comprobar su exactitud con pesas certificadas. simultáneamente con la temperatura. a) Equipos térmicos A todos los equipos termorregulados. Las balanzas se deben mantener limpias para que la suciedad no interfiera en la pesada.e) La manipulación y eliminación de materiales infecciosos. antes de comenzar su utilización. b) Balanzas analíticas y técnicas. Nota: En todos los casos se debe tener en cuenta la condición de apto para el uso de los equipos emitida por metrología. c) Potenciómetros (pHmetros) Antes de su utilización se debe ajustar con soluciones estándar de pH 4 o 7 de acuerdo a la utilización que se les vaya a dar. número de serie y la fecha de su adquisición. cintas indicadoras o bioindicadores que cambian de color cuando la esterilización no ha resultado óptima. habilitado al efecto. se dictamina su rotura o se repara. se comprobará la presión a través de los manómetros y se colocarán junto con el material a esterilizar. modelo. donde se refleje los datos ya referidos y las fechas en que se les da mantenimiento. el control se efectuará cada vez que el equipo se vaya a utilizar y en cuanto al autoclave. g) El control y cuidado de los equipos e instrumentos.

Vibrios. debiendo almacenarse igualmente en lugares frescos y protegidos de la luz. se enfrentan con cepas stock de características conocidas. en la etiqueta de los frascos de colorantes y reactivos se anota la fecha en que se reciben en el laboratorio y se utilizan atendiendo al número del lote y la fecha de vencimiento. Al extraer los frascos que serán utilizados. Durante su almacenamiento se observan periódicamente y se procede a la eliminación de aquellos que esten precipitados. deben ser almacenados tan pronto se reciban en el laboratorio. Durante el tiempo que dure el almacenamiento. se prueban con cepas stock cuando se 248 . Al realizar la apertura del frasco se anotará la fecha.Control de medios de cultivo Tanto los medios deshidratados. procediendo a desechar los que se hallan ennegrecidos o hidratados. Enterobacterias. el peróxido de hidrógeno empleado en la prueba de catalada. los frascos deben ser revisados periódicamente. procediendo a su incubación de acuerdo a las cepas empleadas. El control de los reactivos y los colorantes se debe realizar frecuentemente en dependencia de su estabilidad. el reactivo de Kovac empleado en la prueba de indol. Para comprobar su funcionamiento se utilizará un 3 % del total de medios preparados en los que se sembrarán cepas controles certificadas salvajes. para lo cual se anotará en la etiqueta la fecha de recepción. Cuando el almacenamiento se prolongue. el tertrametil-parafenil endiamina al 1%. etc. Los colorantes de uso frecuente como los empleados para las coloraciones de Gram y Ziehl Neelsen. el plasma congelado para la prueba de coagulasa. es recomendable voltear los frascos y colocarlos con la tapa hacia abajo para aminorar los efectos de la hidratación. Control de colorantes y reactivos Al igual que los medios de cultivo. haemophillus. Al concluir el período de incubación si se comprueba que el medio preparado permite el desarrollo óptimo de las diferentes cepas controles se considerará con buenas condiciones para su empleo.5 % de la escala de McFarland y se siembran pequeños inóculos calibrados en el medio. como los ingredientes para su preparación o los medios que se adquieran ya listos para su uso. Las cepas empleadas se suspenden hasta alcanzar una turbidez de 0. Clostridium y Candidas albicans. Las cepas controles regularmente empleadas son de cocos grampositivos. Por ejemplo. empleado para la prueba de oxidasa. aisladas y debidamente identificadas en el laboratorio. cada día que se vayan a utilizar estas pruebas. siendo colocados seguidamente en un lugar ventilado y protegido de la luz solar. Neisserias. se tendrá en cuenta la fecha de vencimiento y el número de lote para ir utilizando los más viejos. Pseudomonas.

conjuntamente con los antibiogramas que se realicen ese día. mientras que otros requieren congelación. En relación con estos últimos se recomienda dividir el suero en alicuotas para evitar repetidas congelaciones y descongelaciones que pueden afectar el resultado de las pruebas. no debiendo utilizarse después de la fecha de vencimiento. Con posteridad a estas comprobaciones el control se realizará una vez por semana. Conservación de cepas para el control biológico Como se ha explicado. Cada lote que vaya a empezar a utilizarse debe comprobarse con sueros negativos y positivos. esporas.etc. El control se realizará cuando se empiece a utilizar un nuevo lote de medios de cultivo. para la comprobación de la eficiencia de los medios de cultivo y colorantes. así como otros discos que se utilizan para la realización de diferentes pruebas diagnósticas como: optoquina. etc.preparan y posteriormente una vez por semana. Para comprobar su efectividad se utilizarán cultivos puros recientemente obtenidos. los laboratorios deben disponer de una colección acorde con las investigaciones que realiza. Control de antígenos y antisueros Para su conservación algunos antígenos y antisueros se almacenan en refrigeración de 2 a 8ºC. Su eficacia se debe comprobar con cepas controles conocidos con respecto a su sensibilidad o resistencia a los diferentes antibióticos. se prueban por igual método cada día que vayan a ser utilizados. se deben conservar en refrigeración (congelación) en los recipientes de fábrica provistos de material desecante. Para ello. así como para el control del funcionamiento de los antígenos y los antisueros empleados en el laboratorio se requiere del empleo de cepas microbianas debidamente identificadas o certificadas que hayan sido conservadas sin sufrir ningún cambio genético o fisiológico. En cada prueba que se vaya a realizar se empleará en paralelo un suero testigo de reactividad conocida. Recomendándose además el empleo de sueros dobles. de reactividad conocida. Control de discos para antibiograma Los discos para antibiograma. bacitracina. 249 . Los colorantes de uso menos frecuente como los empleados para la coloración de cápsulas.

250 2. Conservación a largo plazo Para conservar las cepas durante varios años. pudiendo añadirse después de la siembra una capa de aceite mineral con lo cual se excluye al oxígeno al mismo tiempo que evita la desecación del medio.Métodos de conservación de cepas Cualquier método que se vaya a emplear debe propiciar microbiostasis. Suspender el cultivo en suero inactivado o leche estéril. procediendo de inmediato a su congelación. Las especies anaerobias extrictas deben ser sembradas en medio de tioglicolato en tubos de ensayo o caldo con carne picada. las ámpulas se sellan al vacío con la llama del mechero que forma parte de este equipo. debiendo guardarse en refrigeración. debido al enlentecimiento de su actividad metabólica. 3. 2. Procedimiento 1. Etiquetear el ámpula con el nombre de la especie. Los cultivos congelados en ámpulas son colocados en una liofilizadora para efectuar su desecación. mediante la cual el agente microbiano se mantiene vivo sin crecer ni reproducirse. se emplea la liofilización. La mayoría de los microorganismos aerobios se pueden conservar en cultivos sobre agar inclinado. 4. Concluida la deshidratación. con lo cual se logra mantener la cepa durante varios meses. distribuyendo algunas en ámpulas de vidrio. 3. que consiste en un método de deshidratación con vacío a muestras congeladas. en tubos de ensayo. Conservación a corto plazo Este método se sustenta en el empleo de medios de cultivo con bajo potencial nutricional y la conservación de los cultivos en refrigeración. conservado en refrigeración. Los diferentes métodos empleados pueden proporcionar una conservación a corto o a largo plazo. Para la conservación de algunos microorganismos anaerobios se emplea la siembra por punción con aguja en medio agarinizado. conservándose igualmente en refrigeración. 1. .

cuyos resultados no son conocidos por el jefe del laboratorio que será evaluado. . Los frotis. y procesadas como si se trataran de muestras ordinarias. para estudio por examen directo. examen concentrado y serológico. Control externo Estará a cargo de un laboratorio de referencia de nivel municipal. Del laboratorio de la unidad al laboratorio de referencia Se remitirá al laboratorio de referencia un porciento establecido de: frotis coloreados y muestras. así como de cepas que serán sometidas a estudios de comprobación del diagnóstico emitido por la unidad.Frotis de esputo coloreado por el método de Ziehl Neelsen para investigar la presencia de BAAR.Envío en menos de 72 horas de todas las láminas con diagnóstico negativo para evaluación de la extensión y la coloración 251 . o sueros para determinaciones serológicas de diferentes tipos. notificándose al laboratorio evaluado los resultados. Los resultados obtenidos serán informados en encuestas que acompañan a las muestras que serán remitidas al laboratorio de referencia para su revisión. Cuando se requiera utilizar la cepa. Este control puede producirse en dos direcciones: Del laboratorio de referencia al laboratorio que será evaluado Para realizar el control con esta variante. procediendo a su incubación de 24 a 48 horas. siendo introducidas "a ciegas" en la forma y explicada.El material queda dentro del ámpula en forma de una tableta pudiendo en este estado de desecación conservarse durante varios años. muestras y cepas predeterminadas para este control son los siguientes: Frotis coloreados a. Además de muestras pueden enviarse cultivos para determinar la sensibilidad o resistencia de la cepa a los diferentes antibióticos. el laboratorio de referencia enviará muestras cifradas. se rompe asépticamente el ámpula depositando la cepa liofilizada en un medio líquido adecuado. provincial o nacional.

Enviar el 2 % de las muestras no reactivas.Heces fecales Enviar: El 5 % de las muestras donde se hayan identificado especies de protozoarios.Enviar un 5% de los frotis con diagnóstico negativo. 252 .El 25 % de las muestras con diagnóstico negativo. . Enviar el 100 % de las muestras reactivas y débil reactiva empleadas para la prueba de VDRL.Enviar el 100% de los frotis con diagnóstico positivo.Frotis de exudados uretales y endocervicales para investigar la presencia de diplococos arriñonados (intra y extracelulares) .R.C. .El 10 % de las muestras donde he hayan identificado huevos o larvas de helmintos. Cepas Envío del 100% de las cepas recuperadas en los casos de Síndrome Neurológico Infeccioso y de Infecciones Diarreicas Agudas. Muestras . . Suero o L.

4. 5. 6. 11. ¿Cómo se controla la precisión de los resultados? ¿Cuáles son las principales fuentes de error? ¿Cuáles son los principales aspectos en cada una de las fuentes de errores? ¿Qué aspectos se describen en el manual de normas y procedimientos? ¿Cómo se controlan los equipos e instrumentos? ¿Qué aspectos han de tenerse en cuenta para el control de los medios de cultivo? Explique cómo se controla el estado de los colorantes y los reactivos. 13. 14. 7. ¿Cómo se deben conservar los discos impregnados en antibióticos? Refiérase a la manera de controlar los antígenos y los antisueros. 3. 9. ¿Cuáles son las principales causas de la falta de calidad en los diagnósticos de laboratorio? ¿Cuáles son los objetivos del control para la garantí de la calidad? Enumere los indicadores del control interno.CUESTIONARIO 1. ¿De cuantas maneras diferentes se puede efectuar el control externo? ¿Cuáles son las muestras que deben remitirse al laboratorio de referencia para su control y con qué periodicidad? 253 . 10. 12. 2. 8.

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