LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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La Habana, 2004

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Datos CIP-Editorial Ciencias Médicas

González Alfaro José Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004 256p. Fig. Incluye índice general. Está dividida en 19 capítulos. Listado de referencias al final de la obra. ISBN 959-212-131-1 1. MICROBIOLOGÍA 2. PERSONAL DE LABORATORIO 3. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. LIBRO DE TEXTO I. González González Boris II. Barrial González Rosa T. QW23

Diseño: Ac. Luciano O. Sánchez Núñez Emplane: Maria Pacheco Gola

© José González Alfaro, Boris González González y Rosa T. Barrial González, 2004 © Sobre la presente edición Editorial Ciencias Médicas, 2004

Editorial Ciencias Médicas Centro Nacional de Información de Ciencias Médicas Calle I No. 202, esquina Línea, Vedado, Ciudad de La Habana, 10400, Cuba Correo electrónico: ecimed@infomed.sld.cu Teléfonos: 55 3375, 832 5338

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"Vivid en la serena paz de los laboratorios y preguntaos cada día: -¿Qué puedo hacer para mejorar la calidad del servicio que presto? -¿Cómo puedo ayudar a mi país? -¿Cómo puedo servir a la humanidad? Luis Pasteur 5 .

Profesor Facultad Tecnológica Dr. Profesor Facultad Tecnológica Dr. Salvador Allende Rosa T. Salvador Allende 6 .AUTORES José González Alfaro Técnico de Microbiología Especializado en Docencia. Barrial González McS en Microbiología Hospital Salvador Allende. Salvador Allende Boris González González Lic. Profesora Facultad Tecnológica Dr. En Microbiología Hospital Salvador Allende.

/ 23 PRINCIPALES CAUSAS / 23 NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO / 23 PRINCIPIOS BÁSICOS / 24 PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE LABORATORIO / 24 EMPLEO SISTEMÁTICO DE EQUIPOS Y MEDIOS DE SEGURIDAD / 25 EL DISEÑO ADECUADO DE LOS LABORATORIOS / 26 MEDIDAS DE PREVENCIÓN / 33 PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA / 33 DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. GENERALIDADES / 18 ACTIVIDADES FUNDAMENTALES / 18 RECURSOS HUMANOS / 18 ESTRUCTURA ADMINISTRATIV A / 18 IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA / 19 ESTRATEGIA ORGANIZATIV A DE TRABAJO / 19 DISPOSICIÓN DE LOS MATERIALES DE TRABAJO / 20 CERTEZA DE LOS MEDIOS REACTIVOS O MEDIOS A EMPLEAR / 20 ORDENAMIENTO DE LAS MUESTRAS / 20 PLANIFICACIÓN DEL TRABAJO A REALIZAR. / 20 CONCENTRACIÓN EN EL TRABAJO / 21 CUESTIONARIO / 21 BIOSEGURIDAD / 22 INTRODUCCIÒN / 22 RIESGOS FÍSICOS / 22 RIESGOS QUÍMICOS / 22 RIESGOS BIOLÓGICOS / 22 BIOSEGURIDAD.ÍNDICE EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA / 17 INTRODUCCIÒN / 17 LABORATORIO CLÍNICO / 17 LABORATORIO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL / 17 LABORATORIO DE RAYOS X / 17 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. CONCEPTO / 22 DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN / 33 INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE / 34 LAV ADO DE MANOS / 35 TIPOS DE LAV ADO DE MANOS / 36 LAV ADO SOCIAL DE LAS MANOS / 36 7 .

LAV ADO HIGIÉNICO O MÉDICO DE LAS MANOS / 36 LAV ADO QUIRÚRGICO DE LAS MANOS / 37 MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS / 38 CUESTIONARIO / 38 ETICA MEDICA / 40 INTRODUCCION / 40 LA MORAL / 40 ETICA / 41 TEORÍA DE LA MORAL / 41 ÉTICA NORMATIV A / 41 ÉTICA MÉDICA / 41 EN RELACIÓN CON EL PACIENTE Y SUS FAMILIARES / 42 EN RELACIÓN CON EL RESTO DE LOS TRABAJADORES DE LA SALUD / 44 EN LAS RELACIONES ENTRE EL DOCENTE Y LOS EDUCANDOS / 44 COMO PARTE DE LA SOCIEDAD / 44 LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA / 45 CUESTIONARIO / 45 EL AGUA / 46 INTRODUCCIÓN / 46 IMPORTANCIA / 46 CALIDAD DEL AGUA / 46 PURIFICACIÓN DEL AGUA / 47 DESTILACIÓN / 47 DESIONIZACIÓN / 48 PH DEL AGUA DESTILADA / 48 CONDUCTIVIDAD DEL AGUA / 48 CUESTIONARIO / 49 CRISTALERÍA DE LABORATORIO / 50 INTRODUCCIÓN / 50 COMPONENTES DEL VIDRIO / 50 SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO / 50 CLASIFICACION / 51 CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS / 52 DE CRISTALERÍA / 52 CRISTALERÍA GENERALDE TRABAJO / 52 CRISTALERÍA DE MEDICIÓN / 59 MATERIALES DE PORCELANA / 63 LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN / 64 PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA / 65 PARA SU ESTERILIZACIÓN / 65 CUESTIONARIO / 67 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN / 68 INTRODUCCIÓN / 68 TÉRMINOS EMPLEADOS RELACIONADOS CON LA ESTERILIZACIÓN Y LA DESINFECCIÓN / 68 8 .

LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO / 119 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 ESTRUCTURA DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 FUNCIONAMIENTO / 123 9 .ESTERILIZACIÓN / 68 EL CALOR / 69 PROTOTIPO STANDARD DEL AUTOCLAVE / 70 MANIPULACIÓN DEL AUTOCLAVE / 71 CALOR HÚMEDO A 1000 C / 72 CALOR HÚMEDO A MENOS DE 1000C / 74 CALOR SECO / 74 USO DEL HORNO / 75 INCINERACIÓN / 76 MECHEROS / 76 LAS RADIACIONES / 79 RADIACIONES IONIZANTES / 79 RADIACIONES NO IONIZANTES / 80 FILTRACIÓN / 81 CARACTERÍSTICAS DE LOS FILTROS / 81 PREPARACIÓN DE LOS FILTROS / 81 DESINFECCIÓN / 83 SELECCIÓN DE LOS DESINFECTANTES / 84 CUESTIONARIO / 85 EQUIPOS CALORIFICOS / 87 INTRODUCCION / 87 INCUBADORA / 87 REQUERIMIENTO DE TEMPERATURAS / 87 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON SUS NECESIDADES DE OXÍGENO / 88 INCUBACIÓN DE BACTERIA ANAEROBIAS / 90 INCUBADORA PARA ANAEROBIOS / 92 BAÑO DE AGUA CALIENTE. (BAÑO DE MARÍA) / 92 CUESTIONARIO / 94 MICROSCOPIO / 95 INTRODUCCIÓN / 95 MICROSCOPIO. CONCEPTO / 96 DIFERENTES TIPOS / 96 MICROSCOPIO ÓPTICO / 96 CLASIFICACIÓN / 97 SISTEMA MECÁNICO / 98 PRINCIPIOS BÁSICOS / 109 INDICACIONES PARA EL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 111 OTRAS V ARIANTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 112 MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO / 117 CUIDADO.

CUESTIONARIO / 124 INSTRUMENTOS MECÁNICOS / 126 INTRODUCCIÓN / 126 PIPETAS MECÁNICAS / 126 PIPETA TIPO MARBURG / 127 EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS / 131 LAS CENTRÍFUGAS / 131 PRINCIPIO TÉCNICO / 133 BALANCE DE LOS TUBOS / 133 FUNCIONAMIENTO / 134 EL ROTOR / 135 DISEÑO DEL EQUIPO / 135 FUNCIONAMIENTO / 136 EL AGITADOR / 136 DISEÑO DEL EQUIPO / 137 FUNCIONAMIENTO / 137 POTENCIOMETROS / 138 ESTRUCTURA / 138 ELECTRODOS / 139 TIPOS DE ELECTRODOS / 139 PRINCIPIO FUNCIONAL / 139 MEDICIÓN DEL PH / 140 PROCEDIMIENTO PARA EL MANEJO DEL POTENCIÓMETRO / 140 CUESTIONARIO / 141 BALANZAS / 143 INTRODUCCIÓN / 143 PRINCIPIO / 143 DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS / 143 BALANZAS GRANATARIAS / 144 FUNCIONAMIENTO / 145 PROCEDIMIENTOS PARA EFECTUAR LA PESADA / 145 CAJA DE PESAS / 146 PRECAUCIONES / 147 BALANXA DE UN SOLO PLATILLO (TIPO OHAUS) / 147 BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA / 147 BALANZA DE PRECISIÓN MECÁNICA / 148 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA / 150 PRECAUCIONES / 151 BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA / 151 FUNCIONAMIENTO / 153 PESADA / 154 DETERMINACIÓN DEL PESO / 155 BALANZA ANALITICA DIGITAL / 156 CUESTIONARIO / 156 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN / 158 10 .

INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y M ATERIALES DE CURACIONES / 162 INTRODUCCION / 162 ACCESORIOS / 162 GRADILLAS / 162 CESTOS / 163 SOPORTE UNIVERSAL / 163 PINZAS DE SUJECCIÓN / 164 TRÍPODE / 164 MALLA DE AMIANTO / 165 INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO / 165 MATERIALES DE CURACIONES / 166 CUESTIONARIO / 167 TOMA DE MUESTRAS / 168 INTRODUCCIÓN / 168 MUESTRA. DIFERENTES TIPOS / 158 RELOJES / 158 TERMÓMETROS / 159 DENSÍMETROS / 160 CUESTIONARIO / 161 ACCCESORIOS.NO VOLUMÉTRICOS / 158 INTRODUCCIÓN / 158 INSTRUMENTOS. CONCEPTO / 168 MUESTRA REPRESENTATIV A / 168 MÉTODOS DE CONSERV ACIÓN / 169 CALIDAD DE LA MUESTRA / 170 INSTRUCCIONES AL PACIENTE / 172 DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS / 172 EXUDADOS / 172 LÍQUIDOS ORGÁNICOS / 179 SANGRE / 181 LINFA / 182 EXCRECIONES / 183 FANERAS / 185 PRODUCTOS PATOLÓGICOS / 185 CUESTIONARIO / 186 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS / 187 INTRODUCCIÓN / 187 DIFERENTES MÉTODOS / 187 PREPARACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXAMEN MICROSCÓPICO EN FRESCO / 187 MÉTODO DE LA GOTA COLGANTE / 188 PREPARACIÓN EN LÁMINAS DE MUESTRAS COLOREADAS / 189 11 .

CUESTIONARIO / 191 COLORANTES Y COLORACIONES / 192 INTRODUCCIÓN / 192 CONCEPTO / 192 FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES / 192 COLORANTES NATURALES / 192 COLORANTES SINTÉTICOS / 193 CLASIFICACIÓN / 193 AFINIDADES TINTORIALES / 194 TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. VENTAJAS Y DESVENTAJAS / 194 METODOS DE COLORACIÓN / 195 COLORACIÓN DE GRAM / 195 COLORACIÓN DE "ZIEHL NEELSEN / 199 CCOLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN (MODIFICADA PARA MYCROBACTERIUM LEPRAE) / 202 COLORACIÓN FRAGELAR DE LEIFSON (MODICFICACIÓN DE CLARK) / 203 COLORACIÓN DE CÁPSULAS / 204 COLORACIÓN DE ESPORAS / 205 CUESTIONARIO / 206 MEDIOS DE CULTIVO / 208 INTRODUCCIÓN / 208 OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA / 208 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 208 CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 212 COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS / 213 ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO / 217 DISTRIBUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 220 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMERCIALES / 222 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS ELABORADOS / 222 COMPROBACIÓN DE LA ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS ELABORADOS / 223 CUESTIONARIO / 223 SIEMBRA E INCUBACIÓN / 225 INTRODUCCIÓN / 225 INSTRUMENTOS DE SIEMBRA / 225 DIFERENTES TIPOS / 226 MÉTODOS DE SIEMBRA / 227 INCUBACIÓN / 232 MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO / 233 EN LOS MEDIOS DE CULTIVO / 233 CULTIVO PURO / 233 CULTIVO MIXTO / 233 RESIEMBRA / 233 CUESTIONARIO / 234 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO / 235 INTRODUCCIÓN / 235 12 .

HIDRATOS DE CARBONO / 235 INDICADORES / 236 SANGRE Y HEMODERIV ADOS / 237 COLORANTES / 237 PRODUCTOS QUÍMICOS / 238 AMINOÁCIDOS / 238 ANTIBIÓTICOS / 238 SUEROS / 240 ANTÍGENOS / 240 LÁTEX / 241 CUESTIONARIO / 241 GARANTÍA DE LA CALIDAD / 243 INTRODUCCIÓN / 243 OBJETIVOS / 243 DIFERENTES TIPOS DE CONTROL / 244 PRUEBAS ESTADÍSTICAS / 245 PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES / 245 MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS / 246 REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD / 247 EN BACTERIOLOGIA / 247 CONTROL DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS / 247 CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO / 248 CONTROL DE COLORANTES Y REACTIVOS / 248 CONTROL DE DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA / 249 CONTROL DE ANTÍGENOS Y ANTISUEROS / 249 CONSERV ACIÓN DE CEPAS PARA EL CONTROL BIOLÓGICO / 249 DEL LABORATORIO DE REFERENCIAALLABORATORIO QUE SERÁ EV ALUADO / 251 DEL LABORATORIO DE LA UNIDAD AL LABORATORIO DE REFERENCIA / 251 CUESTIONARIO / 253 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS / 254 13 .

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para lo cual se tuvo en cuenta precisar la particularidad utilitaria de cada equipo. atendiendo a los contenidos del programa y el perfil de salida de los egresados. el principio de su funcionamiento y el algoritmo de trabajo. todo lo concerniente a su descripción estructural estándar y sus variantes.PREFACIO Como parte de la política del estado cubano de universalizar la enseñanza. hemos editado este libro de texto para que sea utilizado como bibliografía básica en el estudio de la asignatura Fundamentos y Principios Básicos del Laboratorio de Microbiología. los estudiantes pueden realizar sin contratiempos los procederes en cuestión. cada aspecto ha sido explicado pormenorizadamente. en los institutos politécnicos. a partir del curso 2003-2004. bajo la asesoría de profesionales y técnicos de experiencia. creados al efecto en todo el país. la función de cada una de las partes y su interacción con el resto del sistema. Cada tema ha sido abordado con una proyección tecnológica. mediante un nuevo modelo pedagógico que comprende dos niveles de formación intermedia: técnico básico y técnico medio. con lo que se pretende que adquieran la capacitación adecuada para brindar un servicio de excelencia a nuestra población. además de todo lo concerniente a su cuidado y conservación. lo que permite a los estudiantes desarrollar progresivamente las habilidades en los propios escenarios donde se encuentran los diferentes servicios de salud. En los capítulos correspondientes a los procederes de laboratorio. de manera que. así como desempeñarse con eficacia y competitividad en cualquier otro país donde se requiera su colaboración. culminando la formación universitaria como licenciado en tecnología de la salud en diferentes perfiles. siguiendo al pie de la letra las instrucciones que se proporcionan. accesorios y otros materiales de trabajo. instrumento. así como. fueron diseñados como carreras universitarias. 15 . en más de 20 especialidades. Los planes de estudio se han sustentado en la modalidad de estudio-trabajo. Como apoyo al diseño curricular del perfil de microbiología. los cursos de técnicos medios de la salud que durante casi 4 décadas se impartieron.

no solo para alcanzar buenos resultados docentes. el objetivo esencial de tu formación. sino más bien. con el objetivo de que sea utilizado como guía de estudio individual o colectivo. que es. en definitiva. Los autores 16 . Esperamos que este texto te sea de utilidad en el proceso de aprendizaje. sobre el que se sustente tu desempeño profesional.Al finalizar cada tema se ha incluido un cuestionario de preguntas. como una herramienta que te proporciona una capacitación perdurable.

etc. recibe indicaciones y solicitudes médicas. Como parte del Sistema Nacional de Salud. realiza sangrías a donantes. Realiza análisis de urgencia e informa los resultados. recibe indicaciones médicas. para las investigaciones que así lo requiera. existen diferentes tipos de laboratorios. toma y recibe muestras biológicas. realiza exámenes radiológicos convencionales o mediante la utilización de técnicas modernas 17 . reactivos o la obtención de productos biológicos. Laboratorio de Medicina Transfusional El laboratorio de Medicina Trasnfusional. Para determinar sus alteraciones en relación con sus valores de referencia. Y obtiene y procesa componentes de la sangre para uso terapéutico o de investigaciones. para la producción de medicamentos. para la realización de experimentos. administra contraste a los pacientes. etc. serològicos. análisis inmunohematológicos y serológicos e informa los resultados. investigaciones científicas o el análisis de diferentes muestras. tomar y recibir muestras biológicas. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. por ejemplo: Laboratorio Clínico La actividad básica que se realiza en este tipo de laboratorio es la de recibir las ordenes de análisis del médico de asistencia. Transfunde sangre total o sus derivados.CAPITULO 1 EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INTRODUCCIÒN Los laboratorios son edificados especialmente diseñados. hematológicos. tales como: sangre. jugo gástrico. así como. Laboratorio de Rayos X El Laboratorio de Rayos X. líquido cefalorraquídeo. orina. en Cuba. a las cuales se les realizan análisis bioquímicos.

se desempeña como jefe técnico. recibe indicaciones médicas. médicos especialistas de 1er o 2do. ademas de técnicos medios.de imagenología. biólogos y otros tecnólogos. Estructura administrativa Todos los laboratorios están gerenciados por un jefe de servicio. Ms. Recursos humanos El personal de los laboratorios de microbiología clínica. personal de oficina y auxiliares generales entrenados. para detectar alteraciones anatomofibiológicas en partes blandas u óseas del organismo asi como la presencia de cuerpos extraños. así como bioquímicos. En la mayoría de los laboratorios. asumiendo determinadas funciones delegadas por el jefe de servicio. información precisa relacionada con la sensibilidad o resistencia del agente infeccioso a los diferentes antibióticos. proporciona al medico de asistencia. esta compuesto por profesionales universitarios. Las diferentes secciones están dirigidas a su vez por diferentes profesionales. GENERALIDADES Actividades fundamentales El laboratorio de microbiología clínica. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. o Licenciados en microbiología. El servicio de microbiología. 18 . con lo cual aporta un dato de inestimable valor para la indicación del tratamiento También brinda apoyo especializado al Comité de Prevención y Control de las Infecciones Nosocomiales (infecciones intra hospitalarias) originadas en el hospital u otro establecimiento de atención de salud. toma y recibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicas mediante exámenes microscópicos directos y por cultivos. un técnico medio experimentado. especializados o no. con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas. precisar su cuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA.C. cargo que ocupa generalmente un médico especialista o en su defecto otro profesional. grado (microbiólogos).

el perfeccionamiento en la formación de los profesionales del sector y la superación científico-técnica de los graduados a través de diplomados y cursos de post-grado. adquiere cada día mayor protagonismo.IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA Dado el incremento actual de las enfermedades emergentes y reemergentes. Mejorar la calidad del servicio. así como el desarrollo cada vez más creciente de cepas resistentes a los antibióticos de uso tradicional. 2. ESTRATEGIA ORGANIZATIVA DE TRABAJO Para lograr una buena eficacia en la realización de los procederes de laboratorio. al proporcionar datos exactos acerca de la identidad de los microorganismos en estudio. a nivel de la atención primaria. que permita asegurar la calidad de los resultados. así como la toma y preservación de muestras en medios de transporte para su envió a los laboratorios de referencia. así como mediante técnicas serodiagnósticas de alta sensibilidad y por aportar el patrón de susceptibilidad a los antibióticos de los microorganismos en cuestión. incrementar la productividad de las deter19 . La prestación de este servicio a toda la población del país. todo lo cual amplia la capacidad del diagnóstico médico a magnitudes que están fuera del alcance de los métodos clínicos. el trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología. resulta indispensable sistematizar una estrategia de trabajo. El perfeccionamiento del trabajo microbiológico se proyecta en dos direcciones: 1. maestrías y doctorado. casi todos los hospitales y policlínicos cuentan con servicios de microbiología y en la actualidad se esta concretando un proyecto de estaciones microbiológicas destinadas fundamentalmente al diagnostico mediante exámenes directores. en policlínicos. en las investigaciones donde resulte factible. así como en unidades hospitalarias o centros especializados. ya que ha sido y es política de la Revolución que los servicios médicos sean accesibles a todos los ciudadanos. Para ellos. diagnósticados por procedimientos habituales o de diagnósticos rápidos. mediante el acceso a las tecnologías más modernas. posibilitando la indicación de un tratamiento mas eficaz.

etc). turbios. Certeza de los medios reactivos o medios a emplear a) Al seleccionar los reactivos. para aprovechar al máximo el tiempo disponible. En este sentido es importante tener la certeza de que no falte ningún material que implique tener que interrumpir el procedimiento para su localización. tubos. c) Cerciórese de que se le haya hecho control de calidad. Ordenamiento de las muestras Coloque las muestras en la mesa de trabajo por orden numérico de izquierda a derecha. Para el logro de estos propósitos el laboratorista debe cumplir con las siguientes indicaciones: Disposición de los materiales de trabajo Seleccione todos los utensilios (escrupulosamente limpios o estériles) que se requieran para el trabajo a realizar (gradillas. lea cuidadosamente la etiqueta del frasco para evitar errores. ya que además de ocasionar una pérdida de tiempo innecesaria. Planificación del trabajo a realizar. b) Verifique mediante un examen visual que no se encuentran alterados (precipitados. d) Colóquelos en la mesa de trabajo en el orden en que serán utilizados. por alteración del tiempo establecido en algún paso de la técnica y en consecuencia afectarse los resultados. su concentración y que la fecha de vencimiento no haya caducado. introducir causas de errores. Por ejemplo. la discontinuidad de la marcha analítica. pipetas. e) Al destaparlos coloque cada tapa delante del frasco correspondiente para evitar errores al taparlo que impliquen su contaminación. Siempre que resulte pertinente conviene planificar el trabajo a realizar en el laboratorio. etc) y ubíquelos ordenadamente sobre la mesa de trabajo. cerciórese del nombre del reactivo. de manera que queden al alcance de la mano.minaciones y al mismo tiempo que proporcione una adecuada protección contra posibles accidentes. puede en algunos casos. si se 20 .

Refiérase a las actividades fundamentales que se realizan en un laboratorio de microbiología clínica. Explique cada uno de los indicadores establecidos para la estrategia organizativa del puesto de trabajo. 4. lo que facilita la operatoria microscópica sin pérdida de tiempo al no tener que intercambiar láminas. por los métodos eocina y lugol. tenga de lo que es un laboratorio. Especifique El concepto que Ud. 2. ¿En que radica la importancia del trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología? 7. CUESTIONARIO 1. 21 .van a preparar exámenes microscópicos directos de heces fecales. 5. Nombre diferentes laboratorios que pertenezcan al Sistema Nacional de Salud. es conveniente hacer las dos preparaciones por separados en una misma lamina portaobjetos. evite interrupciones innecesarias y absténgase de mantener conversaciones ajenas a lo que esta haciendo. Explique la estructura administrativa de los laboratorios. 3. 6. concentre su atención en cada paso de la técnica. Indique las diferentes categorías ocupacionales del personal que labora en un laboratorio de microbiología. para la búsqueda de protozoos. Trabaje con meticulosidad y esmero y aplique las medidas de asepsia cuando la determinación así lo requiera. Concentración en el trabajo Durante todo el tiempo que dure la ejecución del procedimiento.

directa o indirectamente las personas. etc. traumas. el manejo de productos sépticos y el nivel de contaminación ambiental predominante en el ámbito hospitalario. a diversos riesgos profesionales. BIOSEGURIDAD. Riesgos biológicos Debido a la manipulación frecuente de pacientes infectados. etc. Así como en la industria biotecnológica y el trabajo con organismo transgénicos. en los laboratorios de microbiología. por la naturaleza de su trabajo. tóxicas.CAPÍTULO 2 BIOSEGURIDAD INTRODUCCIÒN Los profesionales y técnicos de la salud que laboran en unidades hospitalarias. los animales y las plantas como consecuencias de accidentes o negligencias. Riesgos químicos Originados por el manejo con sustancia inflamables. exposiciones al calor. las radiaciones. líquidos corporales. excreciones y productos patológicos. clínicos. policlínicos. están expuestos. que pueden clasificarse según su origen en: Riesgos físicos Ocasionados regularmente por. la electricidad. especialmente en los laboratorios donde se realizan exámenes de sangre. 22 . etc o en centros de investigaciones biomédicas. corrosivas. etc. cancerigenas. CONCEPTO Es la disciplina que se ocupa de la prevención y control del riesgo biológico al que están expuestas.

Los niveles de riesgo para un laboratorio básico. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. SU EXPOSICIÓN EN EL LABORATORIO PUEDENPROVOCARINFECCIONESGRA VES. ocasionando diversos grados de afectaciones médicas. puede extenderse al entorno hospitalario o a la comunidad. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS. son los de tipo I y II. son las principales causas del daño individual que bajo determinadas circunstancia. TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE ENTRAÑAR RIESGOS GRAVES PARA EL PERSONAL DEL LABORATORIO. CARACTERIZACIÒN DE LOS AGENTES PATÓGENOS INVOLUCRADOS II MODERADO LIMITADO III ELEV ADO ESCASO IV ELEV ADO ELEV ADO 23 . DIRECTA O INDIRECTAMENTE. LA COMUNIDAD. NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO Cuadro 1: Diferentes niveles de riesgo biológico. PUEDEN PROPAGARSE FÁCILMENTE DE UN INDIVIDUO A OTRO.DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. PRINCIPALES CAUSAS Los accidentes imprevistos y el deficiente desempeño del personal ocupacionalmente expuesto. GENERALMENTE LA INFECCIÓN NO SE PROPAGA DE UN INDIVIDUO A OTRO. RIESGO INDIVIDUAL COMUNITARIO I ESCASO ESCASO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. LOS ANIMALES Y EL MEDIO AMBIENTE. veterinarias o fitosanitarias con el consiguiente perjuicio económico o ecológico.

con las indicaciones y regulaciones a cumplimentar por el personal de laboratorio. cuando se ha centrifugado muestras biológicas o material contaminado. antes y después de su uso. .PRINCIPIOS BÁSICOS Los principios básicos. . Abrir la tapa de la centrífuga antes de que esta se detenga o de inmediato. El empleo sistemático de los equipos y medios de seguridad.Aplicar rigurosamente las medidas de asepsia y antisepsia en todas las ocasiones en que la acción a realizar así lo requiera.Los instrumentos de siembra de platino o nicròn. Flameos de instrumentos de siembra contaminadas con productos biológicos infecciosos. Para la correcta realización de las técnicas de laboratorio a) Regulaciones básicas. . 24 . . El diseño adecuado de los laboratorios. así como los portaobjetos. Retirar la aguja de las jeringuillas que contengan material contaminado. . Pipeteo energético. que serán expuestas resumidamente a continuación. se deben esterilizar a la llama del mechero. . . .Los frotis coloreados. A los efectos de evitar salpicaduras del material residual empleado. Apertura de cultivos liofilizados en ámpulas. Para dar cumplimiento a estos principios se establece en el reglamento un código practico. cubreobjetos y pipetas utilizadas se depositaran en recipientes apropiados que contengan solución desinfectante. el instrumento debe introducirse gradualmente en la llama del mechero hasta ponerse al rojo vivo. 2. . regidos por las normas de bioseguridad para la prevención y control del riesgo biológico son los siguientes: 1. La correcta realización de las técnicas de laboratorio. 3.Los procederes técnicos han de realizarse de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles siendo las causas mas frecuentes las siguientes.

. como: batones. Los guantes se deben retirar asépticamente y ser esterilizados en autoclave. 25 . Nunca pipetear con la boca esos productos peligrosos. b) Higiene del laboratorio y el personal. pantalla facial u otros dispositivos de protección. retirando del mismo material que no tenga relación con el trabajo. o animales y al retirarse del laboratorio (ver mas adelante.Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores. nasobucos.Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato. La caída brusca de las placas o tubos de cultivos. Nunca dejarlos en posición horizontal. beber. fumar. Los cultivos en placas deben mantenerse con la tapa hacia abajo en el interior de la incubadora o sobre la mesa de trabajo. . recurrir al empleo de campanas químicas. deben mantenerse siempre en posición vertical en una gradilla. . botas.Cuando la naturaleza del trabajo a realizar así lo requiera.Emplear guantes quirúrgicos en todo trabajo que entrañe contacto con sangre. guardar alimentos ni aplicar cosméticos. . . .No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua. Empleo sistemático de equipos y medios de seguridad . aún cuando no llegaran a romperse. .Siempre que sea necesario. . . no comer. realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas. gabinetes.. procedimiento para el lavado de manos). humedecer los tapones de algodón y contaminar la mesa de trabajo. Los tubos de ensayo que contengan cultivos. material infecciosos o animales infectados. ya que el agua de condensación puede arrastrar los gérmenes del cultivo.Lavarse las manos después de haber manipulado pacientes.Utilizar pipetas mecánicas para manipular líquidos infecciosos. proteger los ojos y la cara de salpicaduras e impactos mediante gafas de seguridad.Utilizar bata sanitaria u otras prendas apropiadas cuando la envergadura del trabajo así lo requiera. . viseras. material contaminado.En las zonas de trabajo del laboratorio.Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio. etc. o cabinas de seguridad.

3. El diseño adecuado de los laboratorios Debido a los diversos riesgos implícitos en las investigaciones microbiológicas. generalmente empotradas en las paredes o instaladas en el centro del local. Dentro de los requerimientos esenciales del diseño constructivo se encuentran los siguientes. Casi todas las salas o cubículos del laboratorio dispondrán de mesetas. Fig. Las paredes. el cumplimiento estricto de las normas de asepsia y antisepsia establecidas para la manipulación de los pacientes. en especial la parte inferior. el manejo y control de los microorganismos presentes en las diferentes muestras y cultivos durante el proceso de la investigación. que permita al personal del laboratorio.. el de los gérmenes ambientales o contaminantes que por diversas vías pueden tener acceso a las áreas de trabajo. el piso y el techo. Las mesetas deben ser construidas con acero inoxidable u otro material simi26 . 2. Lentes de seguridad.Utilizar incineradas de asas microbiológicas. deben ser lisos. sin grietas o ralladuras donde se pueda acumular la suciedad y el polvo que dificulten su limpieza y desinfección. requiere de condiciones especiales que propicien el establecimiento de una organización de trabajo. así como. b) Guantes de polietileno. la construcción o adaptación de un laboratorio de microbiología clínica. 1 : Equipos y medios de seguridad: a) Incinerador de asas. 1. la construcción de un laboratorio de microbiología se hará en un área separada de locales destinados a otros fines. d) Nasobuco. Como medida de seguridad.

Caracteres estructurales La estructura de un laboratorio de microbiología. Las destinadas para trabajar de pie tendrán una altura de 85 a 90 cm de alto y el mismo ancho que la anterior. destinados a la colocación de la cristalería. atendiendo a la cantidad de personas previstas. 2 : Disposición de las mesetas en el laboratorio. medios de cultivos. de manera que puedan ser desinfectadas o esterilizadas por métodos físicos o químicos sin que se deterioren. mínimo. En aquellos laboratorios que cuenten con sufi27 . que estarán presentes en un turno de trabajo. El grado de iluminación y ventilación se debe adecuar a las normas establecidas para locales cerrados o abiertos. El laboratorio dispondrá de instalaciones de : agua. no debiendo existir ninguna construcción debajo que dificulte la colocación de las piernas y solo de ser necesario podrá disponer de una gaveta. Las ventanas deben estar situadas a unos 30 cm.lar que propicie un terminado de su superficie liso y sin poros y que sea al mismo tiempo muy resistente a la acción de los ácidos. La superficie de estas mesetas no deben reflejar excesivamente la luz para que no interfiera la lectura de algunos exámenes ni afecte con el tiempo la vista del laboratorista. álcalis y sustancias corrosivas. por encima de la altura de las mesetas para evitar la exposición directa del aire y el polvo procedente del exterior. 5. Fig. electricidad. tendrán una altura de 75 a 80 cm de altura por 60 cm de ancho. así como otros materiales e instrumentos. 4. los frascos con reactivos colorantes. aire y gas. dependerá esencialmente de la disponibilidad de espacio.Las que sean destinadas para trabajar sentado. Estas mesetas generalmente están provistas de gavetas y estantes con anaqueles.

Cubículo para la preparación de medios de cultivo. o procedentes de otras unidades de salud vinculadas al centro. el numero. Sala principal de trabajo. sala donde se encuentra hospitalizado o unidad de salud que hace la solicitud). (áreas bio limpias o bio sucias) con esta estrategia. todo lo cual está encaminado a reducir la probabilidad de posibles propagaciones de agentes patógenos por todo el laboratorio y la comunidad. La sala de recepción y archivo. no relacionados con la actividad que se realiza en esas secciones de trabajo. donde se procederá a asentar en el libro de registro de entrada. los datos del paciente (nombre y dos apellidos y número de historia clínica). Cuarto de siembra. de menor a mayor nivel de contaminación. 28 . Fig. la fecha de registro.cientes salas y cubículos. familiares y visitantes no tendrán acceso a las áreas de riesgo. reactivos y colorantes. Cubículo para las tomas de muestras. 3 : Libro de registro. que consecutivamente le corresponde a esa solicitud. las actividades suelen ser compartimentadas en las siguientes áreas o secciones de trabajo: Sala de recepción y archivo. y el tipo de investigación que se indica. un personal de oficina entrenado. siendo limitado para el resto del personal del laboratorio y otros visitantes. Sala de recepción y archivo En esta sección. se ubicará estratégicamente en el interior del laboratorio. la procedencia (consulta externa. Cubículo para la esterilización y preparación de materiales. los pacientes. en caso de pacientes encamados. debe estar a la entrada de la edificación y el resto de las secciones de trabajo. recepciona las órdenes de análisis entregadas por los propios pacientes o enviadas desde las salas de la unidad hospitalaria.

emitir un duplicado. la manipulación ulterior de las ordenes pueden propiciar una vía de contagio. 4 : Orden de análisis. los frascos que contienen muestras no deben estar en contacto con las órdenes de análisis. Las ordenes con los resultados serán enviadas al Dpto. Además de estos datos primarios que se registran diariamente. de archivo de la unidad hospitalaria para que sean archivados en las historias clínicas o en el laboratorio cuando deban ser recogidas por los interesados. quien la firmará y anotara la fecha de realización.En un pequeño cuadrante que se encuentra impreso en el ángulo superior derecho de la orden de análisis se notara el número asignado en el registro de entrada. Concluida la investigación. donde se anotará los datos en el libro de registro de resultados. en la orden de análisis se especificaran las causas (muestras escasa. los resultados serán debidamente informados en la orden de análisis. etc) en los frascos se anota con lápiz cristalográfico. Si el examen no se puede realizar y se solicite su repetición. Si se tratara de un tipo de muestra que deba ser tomada en el laboratorio (exudados. esputo. por el técnico que realizó el examen. el mismo número de registro. Cuando la orden se entrega conjuntamente con la muestra (orina. Fig. Como medida de seguridad. suero hemolizado. debiendo reintegrarla a la sección de recepción y archivo. dada la posibilidad de que se haya producido algún derramamiento durante su recolección en cuyo caso. la orden le será devuelta al paciente. muestra contaminadas. la sección de archivo tiene la función de procesar un resumen bioestadístico mensual con los resul29 . heces. etc). etc) después de registrada. lesiones infecciosas en la piel. quien la entregara al técnico que le vaya a tomar la muestra. lo que permitirá en caso de extravío de la orden.

etc) para la toma de las diferentes muestras (exudado faringeo. Este cuarto esta provisto de mesetas y de todos los materiales e instrumentos para la realización de siembras. tinciones. Sala principal de trabajo Esta sala puede contar de uno o varios cubículos. una sección de trabajo independiente. conjuntival. etc. parasitología. Estas secciones de trabajo deben estar climatizadas. etc. coprocultivo. instrumentos de siembra. Cada sección contará con los recursos necesarios para la realización de esas investigaciones especificas. en la que se realizan determinadas investigaciones. observaciones microscópicas. En algunas unidades. serología. uretral. mechero. misceláneas. baño de María. así como de la cristalería y otros accesorios para estos fines. para la toma del exudado vaginal. etc. 30 . tuberculosis. potenciómetro. leptospirosis. Al igual que la sala principal de trabajo. Cuarto de siembra Generalmente los laboratorios pequeños que disponen de una sala principal en un único local tienen anexado un pequeño cubículo que es donde radica el cuarto de siembra. reactivos y colorantes Este local estará equipado con balanzas. etc). debiendo contar con una colección de cepas microbianas certificadas para la realización del control de calidad. o la superficie del inmueble y el mobiliario. camillas ginecológicas. Cubículos para las tomas de muestras En este local. centros municipales o provinciales. Cubículo para la preparación de medios de cultivos. etc. etc tales como parabanes. etc. medios de cultivos y otros reactivos y colorantes. tales como: preparación y cultivo de las muestras. el laboratorista dispondrá de los recursos necesarios (guantes. etc) debiendo contar con la privacidad requerida y las condiciones necesarias. pueden existir otras secciones especializadas para la investigación de lepra. refrigerador. así como de una lámpara de luz ultravioleta para la esterilización del medio ambiente. resiembras y de aquellas actividades que requieran de una estricta asepsia. debe estar climatizado.. por ejemplo: Urocultivo. hisopos estériles. constituyendo cada uno de ellos. pruebas de identificación. óptico. particularmente.tados de cada tipo de investigación y adicionalmente llevar un control estadístico establecido por los programas de enfermedades de transmisión sexual y tuberculosis. En sus estantes y anaqueles se almacenará el stok de productos químicos.

con agua cruda y en el tercero con agua destilada. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización. . . Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización La cristalería de trabajo y otros materiales que vayan a ser sometidos a un proceso de esterilización. entre las que se encuentran las siguientes. en el primero se friega la cristalería con detergentes especiales y agua abundante empleando hisopo de tamaño apropiado. En un área de este local se situara un recipiente grande con solución desinfectante o sulfocromica con el objetivo de sumergir la cristalería que asi lo requiera. Esterilización. . Destilación de agua. Las pilas de estos fregaderos deben estar lo suficientemente altas como para permitir el enjuague de las pipetas en posición vertical. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. 5 : Hisopo para la limpieza de la cristalería. incluyendo su secado En este local se instala una meseta con tres fregaderos colindantes. incluyendo su secado. En el segundo de enjuaga. en horno o autoclave.Cubículo para la esterilización y preparación de materiales Este local se destina para la realización de diversas actividades. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. deben ser previamente taponados 31 . . Fig.

esterilización. preparación y esterilización del material limpio. los laboratorios que disponen de destiladores metálicos. El área para el tratamiento del material limpio contará al menos con un horno que además de ser utilizado para la esterilización se puede emplear para el secado. una para esterilizar el material limpio y la otra para esterilizar el material sucio.con algodón y/o empaquetados con papel de estraza. 32 . fregado. por las manipulaciones ulteriores y los microorganismos presentes en el medio ambiente. El flujo de trabajo en esta sección es el siguiente: entrada del material sucio. Como se comprenderá se requieren de dos autoclaves. Destilación de agua Generalmente. para evitar su posterior contaminación una vez estériles. los instalan en este lugar (Área limpia) procediendo a la destilación y recolección del agua destilada en botellones con tapón de goma. 6 : Destilador metálico de agua. Esterilización El local debe estar dividido en dos áreas. Fig.

Examinar la aguja y la jeringuilla cerciorándose de que el ajuste de la boquilla de la aguja a la jeringuilla es adecuado y que las marcas volumétricas se mantienen legibles. b) La existencia y localización de un manual de seguridad y de operaciones en el que se identifiquen los riesgos actuales y potenciales y se indiquen los procedimientos para su reducción. 3. en posición horizontal. 2. La manipulación se hará siempre con guantes quirúrgicos estériles observando un cuidado extremo para evitar pinchazos o cortaduras. c) Los riesgos mas probables que pueden ocurrir debido al tipo de investigaciones que se realizan en ese laboratorio. 4. A todos los miembros del personal del laboratorio y demás personas expuestas se les tomara muestras de sangre periódicamente y con el suero se realizaran determinaciones que servirán de referencia en función de los agentes infecciosos manipulados. Dejar las agujas colocadas en la jeringuillas. 4. Enjuagar la jeringuilla y la aguja con agua (llenar y vaciar). Durante el horario de trabajo las puertas del laboratorio permanecerán cerradas y solo tendrán acceso el personal del laboratorio y las personas autorizadas que hayan sido debidamente informadas sobre los posibles riegos y satisfagan cualquier requisito que se exija para tener acceso. 2. 6. Observar que no queden restos de sangre ni manchas. 5. como por ejemplo la inmunización actualizada. en el interior de una bandeja que contenga solución desinfectante y exponerla a su acción por un espacio de tiempo no menor de 20 minutos. a través de su director una minuciosa información acerca de: a) Las medidas de seguridad establecidas.MEDIDAS DE PREVENCIÓN 1. No se permitirá la presencia de niños en las zonas de trabajo del laboratorio. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN 1. Descargar la solución desinfectante contenida en la jeringuilla a través de la aguja. El personal del laboratorio recibirá. PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. 3. No se permitirá tampoco la entrada en el laboratorio de animales que no tengan relación con el trabajo que se esté realizando. 33 . Sumergir la jeringuilla con la aguja ensamblada.

INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE En caso de derrame de muestras biológicas o material contaminado a) Colocarse guantes quirúrgicos. 34 . e) Limpiar nuevamente el área contaminada con el desinfectante y posteriormente con detergente y agua abundante. c) Aplicar solución desinfectante de hipoclorito de calcio o sodio al 1% alrededor del derrame y sobre el material absorbente esperar de 10 a 20 minutos. papel de filtro. b) Cubrir la sustancia derramada con material absorbente (algodón. d)Aplicación nuevamente de desinfectante. 7 : Desinfección de muestras biológicas o material infeccioso derramado accidentalmente: a)Cubrir el área con un material adsorbente.7. e) y f) Limpieza con agua y detergente. Fig. c)Remover el material infeccioso. b)Aplicar solución desinfectante. etc). Secar y proceder a empaquetar las agujas y las jeringuillas por separado con doble envoltura para su esterilización en autoclave. d) Remover el material absorbente y colocarlo en un contenedor destinado para materiales contaminados.

e) En caso de salpicaduras de sangre en los ojos o la boca. lo notificara al Dpto. sobre todo si es acompañado de rash. lesiones o exposiciones con muestras o material contaminado. relacionada con la higiene personal lo constituye sin lugar a dudas el lavado de manos. d) Para continuar el trabajo colóquese un débil o guante. el alta epidemiológica. Si la prueba es negativa. Justificación: La medida básica mas importante. c) Aplicar una solución desinfectante débil de hipoclorito de sodio o calcio. por lo que de no debe aplicarse con sistematisidad estas medidas higiénicas al personal de la salud puede propagar la infección de un paciente a otro y contribuir de esta manera al incremento de las infecciones nosocomiales.En caso de lesiones o contacto no protegido con material contaminado o muestras biológicas a) Lavar de inmediato la lesión con agua y jabón. trae como consecuencia la contaminación de las manos y las muñecas pudiendo extenderse a los antebrazos. punturas. quien registrará el hecho en el libro de control que existe al efecto. El personal accidentado debe ser puesto en observación epidemiológica que incluya pruebas para detectar anticuerpos contra el VIH que serán realizadas 6 semanas después de la exposición. Si al cabo de ese tiempo continua negativa se da. La manipulación de los pacientes o materiales. de Epidemiología y orientará al trabajador que reporte cualquier síntoma febril agudo. Curar y cubrir la lesión. diarreas o adenopatías que ocurra dentro de las 12 semanas con posterioridad a la exposición. deben ser comunicados lo antes posible al jefe del laboratorio. verificara la procedencia de la muestra y si comprueba que el instrumental estaba contaminado con sangre o liquido corporal de un enfermo o portador de VIH. se repite a los 3 meses y con esa periodicidad durante un año. LAVADO DE MANOS Objetivo: Eliminar la micro biota transitoria y disminuir la residente o normal de las manos y los antebrazos. El agua arrastra mecánicamente una parte de los microorganismo presentes en las 35 . g) El jefe de Dpto. f) Los derrames accidentales. En el lavado de manos intervienen elementos mecánicos y químicos. b) Estimular el sangramiento. debe irrigarse de inmediato con cantidades de agua abundantes o solución salina fisiológica. para arrastrar mecánicamente a los agentes infecciosos.

enjuague el jabón y colóquelos en la jabonera. Remoje las manos hasta las muñecas y haga una abundante espuma. Abra la llave del agua y tome el jabón. las que se frotan de forma enérgica se enjuagan abundantemente durante un minuto y después del secado se aplica solución antiséptica. que elimina todo tipo de suciedad visible. Cierre la llave con una de las manos y enjabónelas. evitar infecciones cruzadas y proteger al personal de salud. Lavado social. Empleo: Se utiliza ante las maniobras semicriticas. 2. personales o sociales que lo requiera y antes y después del contacto con pacientes en procederes no invasivos y sin riesgo. TIpos de lavado de manos . 6. conjuntamente con la eliminación de los ácidos grasos y la suciedad. Lavado higiénico o médico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. Abra la llave hasta que salga un chorro abundante de agua y enjuague las manos y manténgalas en un plano horizontal. sin frotárselas. llénelas de agua y enjuague la llave. 3. 4. Lavado quirúrgico. mientras que el jabón emulsiona las materias extrañas y reduce la tensión superficial de los gérmenes presentes lo que facilita su lisis. Cierre la llave y séquese las manos con servilletas. papel o paño para cada una. . 5. Lavado higiénico. al realizar actividades fisiológicas. Junte las manos en forma de recipiente. Con la punta de los dedos. Retire las prendas de las manos y las muñecas. Empleo: Siempre que se perciban las manos sucias.. Procedimiento 1. 8.manos. Lavado social de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. Frote rigurosamente las manos con movimiento rotativo y haga que la espuma se extienda hasta las muñecas. 36 . con el objetivo de arrastrar suciedades. . 7.

b) Palma derecha sobre dorso de la mano izquierda o viceversa. Lavado quirúrgico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua. d) Dorso de los dedos flexionados para cada mano. Empleo: Antes de cualquier maniobra critica. Frote las manos igual que para lavado higiénico incluyendo los antebrazos. j) Aplicar solución antiséptica y déjela actuar sobre las manos por un tiempo no menor de 2 minutos antes de la maniobra semicritica. lechos ungueales y la yema de los dedos. aplíquele jabón y cepille bien las uñas. mantenga las manos siempre levantadas para que el agua corra hacia los codos. 4. g) Frote en forma circular la superficie de los antebrazos 5 cm por encima de las muñecas. 3. con utilización de solución antiséptica después del secado. servilletas o papel estéril (uno para cada mano) apriete suavemente la piel sin restregar. 2. enjabónelos con jabón convencional en forma circular y haga una abundante espuma. comience por las manos y finalice en los codos nunca regrese a las manos. f) Frotación de las yemas de los dedos sobre las palmas. Frote las manos de la siguiente forma: a) Palma con palma.Procedimiento 1. 2. c) Palma con palma intercalando los dedos. Moje las manos y antebrazos hasta 2 pulgadas arriba del codo. h) Realice un enjuague abundante y deje que el agua corra hacia los codos. 5. 3. Procedimiento 1. Realice el lavado social de las manos hasta el paso en que se enjuaga la llave con las manos juntas en forma de recipiente. i) Seque las manos y antebrazos con paños. Tomar un cepillo estéril para cada mano. Enjuague bien sin dejar ningún residuo de jabón. jabón y cepillo. Realice el lavado social de las manos hasta enjuagar la llave con las manos juntas. 37 . e) Pulgar derecho con la mano izquierda y viceversa. Moje las manos y antebrazos (5 cm por encima de las muñecas) enjabónelas con jabón convencional o bacteriostático y haga una abundante espuma.

d) Material contaminado para su eliminación. jeringuillas. Enuncie el concepto de Bioseguridad. Lo mejor es poner los deshechos en un saco plástico que se introduce en una caja de cartón. Material contaminado para eliminación: Todos los cultivos y materiales contaminados suelen esterilizarse en autoclave. Después del tratamiento en autoclave puede colocarse el material en recipientes apropiados para el transporte al incinerador o a otro lugar de evacuación. CUESTIONARIO 1. con lo que se puede incinerar el contenido y el continente. previamente introducidos en recipientes impermiables. b) Objetos aguzados y cortantes (agujas. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar el contenido y antes de devolverlos al laboratorio.antes de proceder a su eliminación. c) Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización. Si se utiliza recipientes especiales concebidos para el transporte. Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización: Este material se coloca en recipientes impermeables poco profundos que contenga una cantidad desinfectante suficiente para cubrir el contenido y se llevan al autoclave. Nombre los diferentes tipos de riesgo a los que están expuestos los profesionales y técnicos de microbiología en el ejercicio de su trabajo. Objetos aguzados y cortantes: Las agujas hipodérmicas deben ser colocadas en recipientes con paredes que no puedan traspasarse fácilmente. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar transporte. incluso cuando las normas de laboratorio consistan en esterilizarlos primero en autoclave. Estos recipientes deben ser impermeables y estar provistos de tapa herméticas. Cuando estos estén llenos se colocaran dentro de otros recipientes para desechos contaminados y se incineran. No se efectúa ninguna acción previa.MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS Se debe establecer un sistema de identificación y separación de los materiales contaminados (y de sus recipientes). etc). 2. cualquier limpieza o reparación que se considere se hará después de esterilizados. a) Deshechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura. 38 .

¿Cómo se clasifican los objetos peligrosos antes de ser deshechos? 19. Caracterice los diferentes niveles de riesgo. Especifique las característica constructivas que debe tener cada una de las salas o cubículo. 16. ¿Qué indicaciones se establecen en caso de accidente?. 14. Describa como debe ser el diseño constructivo de un laboratorio de microbiología. 13. 39 . 18.¿Cuáles son las principales causas del daño individual? Especifique que elemento biológico resultan vulnerables de ser afectados en la comunidad por negligencias o accidentes en un laboratorio que trabaja con agentes biológicos peligrosos. Describa pormenorizadamente las normas establecidas para efectuar las diferentes técnicas de lavado de manos. Explique como usted procede con cada tipo de material u objeto contaminado. 8. ¿Qué instalaciones debe tener el laboratorio para su buen funcionamiento? 11. 6. ¿Cuáles son las indicaciones a seguir en el caso de que se produzcan derrames de muestras biológicas o material contaminado? 17. 4. 3. en cuanto a la afectación individual y comunitaria. 10. Mencione los principios básicos establecidos para la prevención y control del riesgo biológico. y su equipamiento. 12. teniendo en cuenta su reutilización o eliminación. Refiérase a las medidas establecida para evitar la formación de aerosoles. que están encaminadas a evitar la ocurrencia de contagio infecciosos. 15. 7. Indique cuales don las actividades que se realizan en cada sala o cubículo del laboratorio. 9. Nombre las diferentes salas o cubículos con que se estructura un laboratorio de microbiología. Precise las medidas de prevención que debe conocer el personal que labora en los laboratorios. Mencione las prohibiciones establecidas en el código practico o reglamento de estricto cumplimiento para el personal que labora en el laboratorio. 5.

mediante la inculcación de ideas. jurídicas. relacionándose de un modo u otro. la patria y el Estado. su clase social. normas y evaluaciones sobre la regulación de la conducta de los individuos. Y fijándolas en su conciencia como principios o normas morales. En todo sistema social impera un modo de producción que determina la base económica de esa sociedad. que en su conjunto forman la conciencia social. que cada individuo incorpora a su escala de valores.. vestidos. juicios. para obtener los medios de subsistencia necesarios (alimentos. etc. criterios etc. morales. para lo cual crea organizaciones represivas o políticas e instituciones productivas y de servicio que responden a sus intereses económicos o tienen el encargo de influir ideológicamente con iguales propósitos sobre la conciencia común (estado de opinión. lo que dependerá del lugar que ocupen en la escala social y el carácter privado o social de las fuerzas productivas. de honestas o deshonestas etc. debido a influencias socioculturales y que se expresa mediante opiniones. instrumentos de producción. filosóficas. A diferencia de las relaciones de producción que se forman independientemente de la voluntad del hombre.) de la población. fundadas o dogmáticas. las concepciones ideológicas pasan primero por la conciencia. mediante el establecimiento de relaciones de producción basada en la propiedad sobre los medios de producción que va a delimitar el grado de accesibilidad a los bienes materiales y culturales de cada clase y/o capa social existente. una organización política de la clase dominante que tiene como finalidad mantener el orden establecido y aplastar la resistencia de las clases antagónicas. estéticas. como el conjunto de convicciones. de justas o injustas. representaciones. la familia. concepciones políticas. constituyendo obligaciones con respecto a otros individuos. antes de constituirse en patrones del comportamiento. LA MORAL La moral puede definirse. vivienda. La moral está condicionada por la base 40 . cuya estructura responde a los intereses de la clase dominante. religiosas.). Como una necesidad de las sociedades divididas en clases. evaluando estas relaciones de buenas o malas. surge el Estado.CAPITULO 3 ETICA MEDICA INTRODUCCION La sociedad está formada pro un conjunto de seres humanos que conviven dentro un mismo ámbito cultural.

establece el código moral de la conducta. de manera irreversible. A diferencia de la moral.económica el régimen social. ÉTICA MÉDICA La ética médica es una manifestación de la ética general y se refiere específicamente. estableciéndose como hábito o costumbre en la conciencia. Ética normativa Investiga el problema del bien y del mal. Como quiera que en la sociedad dividida en clases los intereses son contradictorios. se incurre en violaciones de la BIOETICA. En los últimos tiempos se ha incorporado una nueva modalidad denominada Metaética. en la autoridad moral de algunas personas o en la opinión publica de determinadas colectividades. que surge y se desarrolla como resultado de las relaciones de producción. su origen y desarrollo. señala que aspiraciones son dignas. a los principios y normas que rigen la conducta de los profesionales y técnicos de la salud. Para su estudio la ética se divide en. con 41 . pero a la vez como otras formas de la conciencia social incide y actúa sobre ella. que conducta es buena y cual es el sentido de la vida. las leyes a que obedece. psíquicas o morales en el paciente. así como de los trabajadores administrativos y de servicio que laboran en instituciones biomédicas. Teoría de la Moral y Ética Normativa. Cuando los actos del personal médico o paramédico dan lugar. existen en aquellas morales diferentes. la ética investiga científicamente las concepciones morales en su sentido mas amplio y establece las regulaciones para su aplicación. a afectaciones somáticas. sus familiares o a la comunidad. la moral no se apoya en leyes formales. sino en la fuerza de la persuasión y el ejemplo. Teoría de la moral Investiga la esencia de la moral. sus normas y carácter histórico. Al cumplir esta función. que investiga los enunciados éticos y su relación con la verdad. ETICA La ética es la ciencia de la moral y de la moralidad.

con el resto de los trabajadores y estudiantes del sector y con la sociedad. por negligencia u omisión. aún en las zonas más apartadas y recónditas.Dedicar nuestros esfuerzos a la prevención. tanto preventiva como curativa en las instituciones de salud. establece la equidad. tales como. El comportamiento bioético. donde se respeta la decisión del paciente de someterse a acciones médicas o experimentales que puedan afectar su integridad físico. debe estar basada en la estricta observancia de los siguientes principios éticos: En relación con el paciente y sus familiares . Es por ello que en el ejército de nuestra función social debemos observar principios éticos . de los recursos y atención que presta la institución y por último. El principio de beneficencia preconiza que todas las acciones y esfuerzos deben estar encaminados a beneficiar al enfermo. 42 . constituye la base material sobre la que se sustenta la moral y la ética de los trabajadores de la salud. En cuanto al principio de justicia. . El carácter socialista del Sistema Nacional de salud de nuestro país. Para brindar su colaboración en cualquier lugar del mundo.independencia de que la acción se haya producido de manera intencional o inconscientemente. Nuestra conducta en relación con el paciente y sus familiares. con el elevado espíritu internacionalista. la justicia.morales de profundo contenido humano. trabajar consecuentemente allí donde la sociedad lo requiera. rehabilitación y promoción de la salud humana. todos los pacientes tienen las mismas oportunidades de beneficiarse por igual.Evitar que se produzcan daños a personas sanas o enfermas en los trabajos de investigación que realicemos. la beneficencia y la autonomía. con independencia del elevado costo que pueda tener para el Estado. psíquica o moral. estar siempre dispuesto a brindar la atención necesaria. basados en los siguientes principios: a) La voluntad política del estado cubano de crear una infraestructura que ha permitido llevar los servicios médicos a todo el país. está regulado básicamente pro 4 principios: la no maleficencia. dedicar todos nuestros esfuerzos y conocimientos científicos y técnicos al mejoramiento de la salud del hombre. no causar daño al paciente de manera intencional. En el primero se establece. c) La disposición los profesionales y técnicos de la salud de participar en misiones internacionalistas. la autonomía. es decir. ideológico y patriótico. b) El carácter gratuito de la atención médica. recuperación.

Abstenerse de realizar trabajos investigativos con los pacientes sin su consentimiento. un lenguaje claro. la conducta adecuada ante el paciente y sus familiares y en el mismo sentido actuar sobre aquellos que. a toda persona que recabe nuestros servicios..Exigir.Los profesionales y técnicos de la salud deben poseer la honestidad necesaria para reconocer sus errores y eliminarlos.Los errores técnicos deben ser conocidos y analizados críticamente en reuniones del departamento con la libertad y profundidad necesaria que permitan derivar de ellas la experiencia que impidan su repetición. . darles la atención requerida y esforzarnos por viabilizar las soluciones posibles. despreocupación e ignorancia. sin alardes de tecnicismos y erradicando cualquier expresión de mal gusto. . . aunque no estén subordinados. 43 . sencillo y comprensible. ni hacer comentarios indiscretos en su presencia. . de aquellos trabajadores que nos están subordinados.Utilizar en todo momento de nuestras relaciones con los pacientes y familiares. intervienen de una forma u otra en el trato con los pacientes. informes de laboratorio o cualquier otro documento que pueda darle indebida o perjudicial información.Atender. .Evitar que lleguen a manos de los pacientes o de sus familiares las historias clínicas. aunque no exista mala fe. . evitando a toda costa que nuestro trabajo se afecte por el apresuramiento.Cuidar de no incurrir en el error técnico que resulta de una equivocación.Propiciar una adecuada relación personal con el paciente que le inspire un buen estado de ánimo y seguridad.No divulgar aspectos de la enfermedad que puedan estar relacionados con la vida intima del paciente o sus familiares.Mantener en los casos de enfermedades de curso fatal absoluta o relativa reserva sobre el diagnóstico y pronóstico en relación con el paciente. . . el pudor y la dignidad de las personas bajo nuestra atención.Conservar el secreto profesional. .Escuchar las preocupaciones y dificultades del paciente y sus familiares. . la superficialidad o la rutina. teniendo en cuenta los intereses del paciente siempre que ello no ocasione un perjuicio social ni ponga en peligro la salud de otras personas. de forma solícita. . . ni elementos de negligencia. sin mostrar prisa o indiferencia hacia sus padecimientos.Respetar el decoro. .

En las relaciones entre el docente y los educandos . utilizando el vestuario adecuado en las diferentes áreas de trabajo.Mantener. Como parte de la sociedad .En relación con el resto de los trabajadores de la salud . teórica y práctica. una actitud crítica y autocrítica sobre los asuntos referidos a la relación con los pacientes. a fin de satisfacer las necesidades de nuestro pueblo y las tareas internacionalistas que se requieran. . . . así como aquellas que.Evitar indiscreciones que menoscaben el prestigio de otros compañeros o instituciones del sistema de salud.El docente debe promover en sus alumnos los principios éticos.Propiciará que las relaciones entre el y sus educandos se enmarquen en la debida autoridad y respeto que se requieren en la actividad docente. subordinando el interés personal al social.Procurar que la información que se ofrezca con propósitos de divulgación científica y educativa sea correcta y adecuada.Comportarse en todo momento con sencillez. tanto de estos principios éticos como de los reglamentos establecidos en las Unidades de Salud Pública.Prestar especial atención a su superación individual. modestia honestidad y dentro de las reglas de una elevada educación formal y política.Inducir en los alumnos la disposición de recibir entrenamiento especializado en aquellas disciplinas que lo demanden.Mantener en todo momento un buen porte y aspecto personal. cuidar que las opiniones y criterios se basen en el mas profundo análisis científico posible. exija el mayor esfuerzo. . para con nosotros mismos y con los demás profesionales y técnicos de la salud. . a través de la palabra y su ejemplo.Estar siempre en disposición de cumplir las obligaciones que le correspondan como ciudadano. 44 . como aspecto esencial para el cumplimiento de sus responsabilidades docentes. . para lograr la optima calidad de los servicios que prestamos a la sociedad. dedicación y sacrificio.Actualizar y perfeccionar los conocimientos de forma continua.Poner en conocimiento de las autoridades correspondientes cualquier violación que nos conste. . .Ejercer con altruismo las actividades propias de su esfera de trabajo. . absteniéndose de emitir conceptos u opiniones que pueden alarmar innecesariamente a la ciudadanía. . por razón del carácter excepcional de nuestro trabajo.

LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA En todas las unidades del Sistema Nacional de Salud se crean las comisiones de Etica Medica. 5. ¿Qué son y cómo se crean las comisiones de ética médica? ¿Cuál es la competencia y el desempeño de los integrantes de las comisiones de ética médica en los centros de Salud? 45 . Esta comisión es la encargada de conocer toda denuncia o quejas sobre violaciones de la ética. CUESTIONARIO 1. moral y político del centro. En su opinión ¿Qué cosa es la ética? ¿Cuáles son los aspectos generales de la ética médica? ¿Qué usted entiende por violaciones de la Bioética? ¿Cúales son los principios que regulan el comportamiento bioético? ¿Cúales son los principios éticos que regulan las relaciones entre el personal de la Salud con los pacientes y familiares? Refiérase a los principios éticos que se ponen de manifiesto en las relaciones con otros trabajadores del sector y con los estudiantes. 4. los que a partir de ese momento actuarán de acuerdo con la legislación laboral vigente. 3 en activo y dos suplentes. que de común acuerdo entre la administración y el sindicato. es elegida para un mandato de 2 años quedando integrado por 5 miembros. ¿Cómo se materializa el comportamiento ético cuando el profesional o técnico se siente parte de la sociedad. En el caso de arribar al criterio de que se incurrió en violación de la ética. 7. realizando las investigaciones pertinentes en el plazo de 20 días. 9. 6. 3. 8. que serán seleccionados entre los compañeros de más prestigio laboral científico. 2. trasladará su criterio a la dirección y al sindicato.

represas o acueductos donde va a parar. ríos. pasando al estado de vapor de agua.CAPÍTULO 4 EL AGUA INTRODUCCIÓN El agua es un líquido transparente. sino angular. como el nitrógeno. Se congela a 00c. pasando al estado sólido y hierve a 1000c. lo que unido al tratamiento con cloro a que es sometida en los acueductos para su potabilización. inodoro e insípido. contaminándose con los diversos compuestos orgánicos e inorgánicos que estén presentes. por lo que se clasifica el enlace como polar. Durante las precipitaciones. desempeñando un protagonismo esencial en las reacciones químicas. el agua es el reactivo más empleado. el agua de lluvia se une a diversos elementos gaseosos presentes en el aire. Posteriormente en los afluentes. En el laboratorio. lo cual propicia que sobre el átomo de oxígeno exista una cierta densidad de cargas negativas y sobre el hidrógeno una densidad de cargas positivas. IMPORTANCIA El agua es indispensable para la vida. formando ácidos y bases con otros compuestos para formar hidratos. CALIDAD DEL AGUA El agua tal y como se encuentra en la naturaleza no es pura. 46 . Al caer se disemina o se filtra en el suelo. etc. pasando a ser un líquido que contiene múltiples sustancias en disolución. continua el proceso de contaminación. por constituir el elemento esencial de todos los tejidos y líquidos orgánicos. siendo considerada como el solvente universal para la disolución de una gran cantidad de solutos y otros compuestos en estado líquido. que variará. hacen que en conjunto pierda su pureza. dependiendo de los compuestos presentes en cada lugar. lo que determina sus propiedades disolventes. Químicamente está compuesta por 2 átomos de hidrógeno unidos a un átomo de oxígeno. incoloro. debido a que al ionizarse se une a muchos óxidos. metano. helio. formando la molécula una configuración especial no lineal. dióxido de carbono.

posee un gran poder de oxidación por lo que puede alterar la composición química de uno o varios compuestos del sustrato empleado. diseñado para que los vapores que se desprendan en este proceso. provocarían efectos indeseables distorsionando la fiabilidad de los resultados. Por ejemplo: el cloro libre. DESTILACIÓN La destilación consiste. Fig. ya que los contaminantes al no tener la capacidad de evaporarse. ya que de lo contrario algunos componentes. haciendo que pasen nuevamente al estado líquido con una mejor calidad. 8 : Destilador de vidrio. Para lograr la purificación del agua se emplean dos métodos: la destilación y la desionización.PURIFICACIÓN DEL AGUA Para las determinaciones de laboratorio. Por su parte el fluor y el cobre inactivan a las enzimas. pasen por un sistema de enfriamiento que los condensan. quedan retenidos en el destilador. en someter al agua a temperatura de ebullición en el interior de un destilador metálico o de vidrio. mientras que las sales de mercurio las activan. resulta indispensable que el agua sea lo más pura posible. 47 .

Después que el agua se ha enfriado. debe ser sometida nuevamente al proceso de destilación con lo que se obtiene el agua bidestilada. tapar el erlenmeyer con un tapón perforado de caucho. Para el trabajo del laboratorio de microbiología. No obstante. obtenida por el procedimiento explicado no es totalmente pura. Se vierte el agua en un erlenmeyer y se somete a temperatura de ebullición por espacio de 3 a 5 minutos. el agua destilada debe ser sometida a un proceso de descarboxilación. lo cual se realiza de la siguiente manera: 1. las cuales captan los aniones y cationes que la contaminan.El agua destilada. debe ser renovada diariamente. el agua destilada. que requieren generalmente. Si se sometiera a una tercera esterilización obtendríamos el agua tridestilada. ya que el vapor de agua que se forma puede arrastrar mecánicamente partículas de agua que no estén en estado de vapor. Antes de apagar la fuente de calor. con lo cual adquiere un buen estado de pureza. debido a la presencia de dióxido de carbono atmosférico disuelto. se verterá en recipientes apropiados. 3. 2. mejor que la del agua bidestilada. un pH neutro o ligeramente alcalino. Si se quiere. Si se desea neutralizar ese pH ácido para que no interfiera en algunos procederes. incluso. como por ejemplo en la preparación de medios de cultivo. el procedimiento comúnmente empleado es la destilación. que como el proceso no lleva implícito su esterilización. CONDUCTIVIDAD DEL AGUA Mediante la conductividad eléctrica se puede determinar el grado de pureza del agua. el agua destilada puede emplearse en el trabajo diario sin que introduzca errores apreciables. aunque tiene la desventaja. para algunas determinaciones. donde se conservará hasta su empleo. una mayor calidad de pureza. provisto de un tubo trampa con perlas de hidróxido de sodio. como se ilustra en la siguiente tabla: 48 . DESIONIZACIÓN La desionización consiste en hacer pasar el agua corriente por una columna de resinas. PH DEL AGUA DESTILADA El ph del agua destilada oscila entre 4 a 5.

TIPO DE AGUA CONDUCTIVIDAD ( ohms -1 cm -1 ) 300 5 1 0. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja de la desionización sobre la esterilización del agua? 10. ¿Mediante que procedimiento se puede determinar el grado de pureza del agua? 49 . ¿Cuál es el pH del agua destilada? 11. ¿Por qué se hace necesario bidestilar o tridestilar el agua? 8. ¿Explique por qué causa el agua empleada en el laboratorio debe ser lo más pura posible? 4. ¿Cuál Es la importancia del agua para los laboratorios? 2.Cuadro 2 : Grado de pureza de los distintos tipos de agua en correspondencia con su conductividad. 9. ¿En que consiste la destilación? 6. ¿Cómo es la calidad del agua. ¿Cuál es la diferencia entre el agua destilada y la bidestilada? 7.2 Corriente Destilada Bidestilada Desionizada CUESTIONARIO 1. Explique el proceso de desionización del agua. tal como se encuentra en la naturaleza? 3. ¿Cómo se denomina el método más empleado en los laboratorios para purificar el agua? 5.

exposiciones a elevadas temperaturas. cuya aleación le confiere una alta resistencia mecánica. 50 . este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecánicos. COMPONENTES DEL VIDRIO El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una temperatura de 1. SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO En la actualidad. copas y otros objetos. 0000c. lo que lo valida como un sustituto eficaz del vidrio. térmica y química. lo que no resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio. Etc. en ese estado líquido.. pueden ser desechadas sin grandes afectaciones económicas para la institución. Como se sabe. así como para la fabricación de vasos. los diversos objetos de vidrio que integran la cristalería de laboratorio. El producto fundido. al conjunto de objetos utilizados en la realización de diferentes procedimientos técnicos. Quedando como un cuerpo sólido. se vierte en diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieran producir. generalmente transparente.. con la ventaja de que dado su bajo costo. especialmente con teflón (tetrafluoruroetileno) un polímero de bajo costo. caracterizado por su dureza. La cristalería fabricada con estos componentes. se identifica por estar rotulada con el nombre de "Pyrex" (Pairex).CAPÍTULO 5 CRISTALERÍA DE LABORATORIO INTRODUCCIÓN Se denomina cristalería de laboratorio. lo que le confiere una alta resistencia contra impactos. debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. además tiene la propiedad de permanecer inerte durante las reacciones químicas. como por ejemplo: las jeringuillas utilizadas. algunos objetos. que independientemente de su forma y tamaño están constituidos solamente por vidrio. De esta manera se obtiene el cristal empleado para cubrir puertas o ventanas. también se fabrican de material plástico.

Expresan magnitudes volumétricas. DE MEDICION VOLUMETRICA Pipetas de : Shali.Están calibradas para trabajar a 200c.Se fabrican de diferentes tamaños. productos químicos .Pueden tener o no rotulada una escala de graduación .Alta resistencia química DIFERENTES TIPOS G E N E R A L Todos los frascos o reciopientes destinados a contener o almace. CLASIFICACION SUB-CLASIFI CACIÓN DE ALMACE NAJE CARACTERIZACIÓN .No revelan magnitudes volumétricas. . Vidrio reloj Placas de Petry Embudos Condensadores Láminas de portaobjetos Láminas cubre objetos Láminas excavadas TC (Para contener) . Pipeta Probetas Beaker (Vaso de precipitado) Matraces Copa cónica Buretas Jeringuillas TD (Para distribuir) 51 .CLASIFICACION La cristalería de laboratorio de clasifica de la siguiente manera: Cuadro 3: Clasificación de la cristalería de laboratorio.Fotorresistencia (materias primas) o soluciones y reactivos elaborados ________________________________________________________ .La mayoría se fabriFrascos goteros TRABAJO can de diferentes Vaso de Koplin tamaños y capaciTubos de ensayo dades.Cierre hermético. Frascos de fondo plano DE . nar. Thoma o Westergreen (No utilizadas en el laboratorio de microbiología) _______________________________________________________ .Utilización para la Frascos erlenmeyer realización de diverFrascos Kitasatos sos procedimientos Frascos para reactivos técnicos. .

Si lo colocamos sobre la mesa de trabajo y lo observamos de arriba hacia abajo podemos percatarnos que en el extremo superior presenta una abertura circular con rebordes. Los más empleados en el laboratorio de microbiología son los de: 100. que corresponde a la boca. seguida de una porción cilíndrica de algunos cm a manera de cuello. Al concluir este espacio se va ensanchando progresivamente de forma oblicua adquiriendo la forma cónica que lo caracteriza. 52 . 250. 9 : Erelenmeyer Los erlenmeyer son recipientes de forma cónica y fondo plano. hace que los vapores se condensen en el cuello. debido a que su forma cónica. que se caracteriza por tener un diámetro 3 ó 5 veces mayor en su porción inferior con respecto a su porción superior.. 300. esta cristalería está diseñada específicamente para la preparación de compuestos que requieran ser sometidos a la acción del calor. lo que propicia que no afecte significativamente el volumen de la preparación.CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS DE CRISTALERÍA CRISTALERÍA GENERAL DE TRABAJO Erlenmeyer Fig. la preparación de medios de cultivo. Aunque los erlenmeyer pueden emplearse para la preparación de diferentes reactivos. como por ejemplo. Los de menor o mayor volumen de capacidad se utilizan con menor frecuencia. Los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños.500 y 1 000 ml.

Frascos para reactivos Fig. La tapa del frasco puede ser de cristal esmerilado o plástica si el cierre es de rosca. Con ambas variantes se consigue el cierre hermético del frasco. 53 .11 : Frasco para reactivos. lo que dependerá del tipo de reactivo que contenga. Al igual que los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños. para soportar las diferencias de presiones externas e internas provocadas por las técnicas de filtración al vacío para los que básicamente son empleados.10 : Frasco de kitasato Los frascos de Kitasatos. son similares a los erlenmeyer con la diferencia de que en el cuello tiene insertado un pequeño tubo corto en dirección horizontal abierto en su porción distal siendo las paredes de vidrio más gruesas. Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener de acuerdo a su tamaño entre 25 ml y 1 litro. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar para la protección de reactivos fotosensibles.Kitasatos Fig.

12 : Frasco de fondo plano Se utilizan para la preparación de determinadas disoluciones. De acuerdo con su capacidad. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular. similar a los empleados en los frascos de medicamentos. que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco. Frascos goteros Fig. en tanto que otro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido. Los de vidrio. 54 . fabricándose de diferentes tamaños. debiendo ser termorresistentes por si se requiere someterlos a la acción del calor. tradicionalmente empleado son incoloros o ámbar. Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón de caucho. utilizado en las pruebas serológicas VDRL.13 : Frascos goteros Existen en el mercado diferentes modelos.Frascos de fondo plano Fig. pueden contener entre 25 y 100 ml. En el trabajo microbiológico se utilizan regularmente para la preparación del antígeno de cardiolipina. el contenido goteará si se inclina el frasco adecuadamente.

Vaso de Koplin Fig.15: Tubos de ensayo Son pequeños recipientes de vidrio o plástico. en tanto que los tubos para cultivo son similares. Tubos de ensayo Fig. 55 .14: Vaso de Koplin Estos vasos se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares. en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente. con capacidad variable. Estos vasos están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas. fabricados de diferentes tamaños. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal. de manera que quedan separados. resina sintética obtenida por polimerización del fenol y el formaldehído. Todos son cilíndricos. pero se diferencian en que están provistos en su extremo superior de aristas helicoidales por donde se enrosca una tapa de baquelita. 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí. Los utilizados comúnmente en análisis cualitativos y cuantitativos tiene el fondo ligeramente cóncavos. pero todos tienen. lo que posibilita la insertación de varias láminas portaobjetos. aunque la forma de sus extremos varía en función de su empleo.

generalmente con estrías longitudinales para facilitar su sujeción cuando se van a desenroscar, mientras que los tubos de centrífuga se caracterizan por tener el fondo cónico, para acoplarse a los portatubos de la centrífuga, pudiendo tener impresa una escala de graduación en ml. Los tubos ordinarios y los empleados para cultivo, mayormente utilizados en los laboratorios de microbiología, son los de 12 x 75, 13 x 100, 15 x 125 y 16 x 150 mm, correspondiendo el primer valor al diámetro y el segundo a la longitud. Se utiliza esencialmente para contener, conservar y procesar muestras biológicas, cultivar microorganismos y realizar pruebas de identificación para el diagnóstico de laboratorio, de las especies investigadas. Vidrio reloj

Fig.16: Vidrio reloj

Es un tipo de cristalería circular y cóncava de aspecto transparentes, similar a las utilizadas para cubrir las esferas de algunos relojes despertadores. Se utilizan regularmente para efectuar pesadas de productos sólidos con excepción de aquellos que sean higroscópicos que absorben la humedad del aire o volátiles. Placas de "Petry"

Fig.17: Placas de "Petry"

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Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diámetro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm de altura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente de vidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro. Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa queda descansando sobre el borde de la caja. En el trabajo microbiológico se utiliza comúnmente para contener algún medio de cultivo sólido. Embudos

Fig.18 : Embudos

Los embudos presentan la porción superior cónica y la posterior en forma de un tubo cilíndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal, pudiendo tener una longitud, menor , igual o mayor que la porción cónica, cuya capacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, según el modelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar líquidos.

Láminas portaobjetos

Fig.19 : Lámina potaobjetos

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Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transparente y forma rectangular. Miden 7,5 cm de largo por 2,5 cm de ancho. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso de coloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Este tipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebas serológicas de aglutinación. Láminas excavadas

Fig.20 : Lámina portaobjetos excavada

Son similares a las láminas portaobjetos ordinarias, con la diferencia de que presentan una excavación cóncava de algo más de 1 cm de diámetro en centro de la lámina en forma de pozuelo. Se utilizan para la preparación de la "gota colgante", una técnica mediante la cual se determina microscópicamente si la bacteria en estudio es o no móvil.

Láminas cubre objetos

Fig. 21: Láminas cubreobjetos

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Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía de cuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuando son rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.

Cristalería de medición
Pipetas

Fig. 22: Pipetas

Son tubos de vidrio rectos, de longitud y grosor variable que se caracterizan por tener el extremo inferior ligeramente cónico. Se fabrican diferentes tipos, que han sido diseñados para diversos procederes de laboratorio, siendo utilizada básicamente para medir y/o transferir volúmenes exactos de líquidos. Las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, son las pipetas graduadas, principalmente las de 1, 2, 5, y 10 ml. Este tipo de pipeta tiene impreso en la parte superior un número que equivale a su capacidad volumétrica y a todo lo largo una escala graduada en ml, que indica numéricamente los espacios en que se divide el volumen total. Cada espacio a su vez se divide en 10 líneas equidistantes que corresponden a las subdivisiones volumétricas. Por ejemplo: En una pipeta de 5 ml de capacidad, la escala queda dividida en 5 espacios iguales, cada uno de los cuales equivale a 1 ml. Cada especio a su vez se subdivide en 10 líneas, equivalente cada una de ellas a 0,1 ml. Las pipetas serológicas, son similares a las graduadas, pero su capacidad es de 1 ml o menos, estando dividida en 0,1 y/o 0,01 ml. En el trabajo microbiológico se utiliza en ocasiones un tipo de pipeta no graduada, denominada pipeta de Pasteur, que puede ser fabricada en el propio 59

laboratorio con tubos de cristal fusible mediante su exposición a la llama del mechero de gas. Este tipo de pipeta suele emplearse cuando no se requiere precisar con exactitud el volumen a pipetear. Procedimientos para el manejo de las pipetas graduadas: 1. Sostenga la pipeta por su parte superior mediante los dedos pulgar y medio.

Fig. 23 : Forma correcta de sostener la pipeta.

2. Haga penetrar la pipeta en el líquido que va a ser aspirado. 3. Introduzca el otro extremo en la boca y aspire suavemente, observando simultáneamente la escala graduada, hasta que la columna de líquido sobrepase ligeramente la marca deseada. 4. Retire la pipeta de la boca y de inmediato tape el orificio con la yema dedo índice, ejerciendo la presión suficiente para evitar que el líquido descienda por gravedad. 5. Manteniendo la presión del dedo índice, proceda a retirar el exceso de líquido de la parte exterior de la pipeta, con un paño, gasa o servilleta limpia. 6. Introduzca la pipeta en el frasco o tubo donde se extrajo el líquido y haga que la punta contacte con la pared interna. Estando la pipeta en posición perpendicular ir aflojando la presión del dedo índice para propiciar que la columna de líquido descienda del por gravedad, hasta observar que la 60

9. se soplarán las que estén marcadas en la parte superior con la letra "D" (to de livery) no debiendo soplarse las marcadas con la letra "C" (to contain). apoyando la punta. En el caso de las pipetas serológicas. Introduzca la punta de la pipeta en el frasco o tubo receptor. En ese momento exacto. evitar incurrir en el error de paralaje. en el extremo de la punta quedará un pequeño volumen residual. afectando la exactitud del volumen pipeteado. pues al retirar la pipeta parte del líquido trasegado quedarán adherido al exterior de la pipeta. tiene una banda esmerilada o coloreada en el extremo superior proceda a soplar para que salga y completar el volumen previsto. Si la pipeta utilizada. en la parte superior de la pared interna y nunca sobre el fondo. 8. Si la pipeta carece de franja esmerilada o coloreada no se debe soplar ya que están diseñadas para desestimar ese residuo sin que se afecte el volumen deseado. Al realizar la lectura volumétrica. ocasionado por no estar el ojo del observador en el mismo plano horizontal con respecto al menisco. Proceda a aflojar la presión del dedo para distribuir el volumen deseado en cada tubo. Fig.curvatura en la superficie del líquido (menisco) contacte justamente sobre la línea correspondiente que marca el volumen deseado. 61 . siendo arrastrado al retirarla. proceda nuevamente a ejercer presión con el dedo índice para evitar que el líquido continúe descendiendo. Al vaciarse el contenido de la pipeta. que ocasionaría errores en la lectura. 24: Ubicación correcta del ojo para efectuar la lectura del menisco 7.

de diámetro y tamaño variable. 25 : Probetas Las probetas son recipientes cilíndricos y alargados de vidrio. que se haya en la parte superior. En el borde del orificio. 26 : Beaker Los Beaker son recipientes transparentes e incoloros que presentan una forma cilíndrica teniendo una longitud de casi el doble de su diámetro. Beaker (Vasos de precipitados) Fig. Están provistas de una base de fondo plano que posibilita que puedan ser colocadas en posición vertical sobre una superficie nivelada.Probetas Fig. y al igual que las pipetas. en correspondencia con su capacidad volumétrica. similar al de las cafeteras. La mayoría tienen rotulado en la parte superior un número que indica su capacidad volumétrica. Se utilizan específicamente para medir volúmenes. la marca de 200C. una escala graduada a todo lo largo que divide y subdivide el volumen total. Algunas probetas están provistas de tapa de vidrio esmerilado o plástica. que es la temperatura de trabajo de este tipo de cristalería. para facilitar verter el líquido que contiene sin que se produzcan derramamientos. Las más utilizadas en el trabajo microbiológico están comprendidas en el rango de 50 a 1. .000 ml. presentan un pico. Al igual 62 .

que las pipetas tienen un pico en el borde la boca que propicia que se pueda verter el líquido que contiene sin que se produzca derramamiento. en los laboratorios se utilizan otros. Al igual que otros tipos de cristalería de medición. Matraces Fig. lo que permite colocarlos en posición vertical. la inferior piriforme con el fondo plano. la temperatura de trabajo (200C) y una línea alrededor del cuello que indica la marca de aforo. Se emplean para preparar disoluciones donde se requiere exactitud. 27 : Matraces Las matraces son frascos de vidrio incoloros y transparentes que tienen una porción superior en forma de un fino tubo cilíndrico y alargado. tienen rotulado. el número que indica su capacidad volumétrica. Al igual que otras cristalerías de medición. Materiales de porcelana Además de los materiales de vidrio o de teflón. al igual que las probetas y las pipetas. 28 : Cápsula de porcelana 63 . Algunos están provistos de tapa de vidrio esmerilado. siendo los más empleados las cápsulas y los morteros. fabricados de porcelana. tienen grabado el número que indica su capacidad volumétrica. Cápsulas Fig. la temperatura de trabajo (200C) pudiendo tener o no una escala graduada en ml.

Después de escurrida se deja secar al aire o si se desea secado con mayor rapidez se puede introducir en una incubadora. Uso: Se utilizan regularmente como recipientes de disoluciones que van a ser sometidas a una medición de pH o para colocar medios de cultivo que se pretenden pesar. El mortero se complementa con una pieza cilíndrica adicional. 64 . caracterizándose generalmente por ser de color blanco y tener las paredes delgadas lisas y muy pulidas. generalmente. Similar a un pequeño bate de pelota. Después se sumerge en una solución de ácido clorhídrico al 1%. debe ser sometida previamente a un proceso de limpieza y desinfección antes de esterilizarla. con el extremo inferior redondeado. fondo redondeado y tamaño variable. Morteros Fig. denominado mazo. A diferencia de las cápsulas. aunque también se fabrican de vidrio. Al igual que las cápsulas presentan un doblez en forma de labio en el borde para verter su contenido. 29 : Mortero Los morteros son recipientes de porcelana. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. del mismo material. pudiendo tener el fondo plano o redondeado. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN La cristalería que vaya a ser utilizada en las investigaciones microbiológicas de laboratorio. dejando actuar el desinfectante por un espacio de tiempo no menor de 4 horas. son de mayor tamaño y están provistos de paredes más gruesas. Si la cristalería es nueva: Debe pasarse previamente por agua caliente para eliminar la presencia de vestigios fábriles.Son pozuelos de borde esférico. sin que se produzca derramamiento.. con un doblez en forma de labio por un punto de su borde para facilitar verter su contenido. Uso: Para triturar compuestos sólidos con ayuda del mazo. Posteriormente se lava con detergente.

Procedimiento: Después de desinfectadas. se friega con detergente. individualmente. o más tiempo si la mezcla ya ha sido utilizada y mermada su efectividad. durante 30 minutos. fabricado específicamente para ese uso. la cristalería se enjuaga para eliminar los restos groseros del material que contenía y se sumerge durante 10 ó 15 minutos en mezcla sulfocrómica. Fig.Cuando la cristalería haya sido utilizada: Si mantiene material infeccioso. o en su defecto. para evitar que el técnico o la persona encargada de la limpieza de la cristalería se contamine con microorganismos patógenos. fregadas y secas: Tubos de ensayos: Se taponean con algodón y se envuelven con papel de estraza en grupos de 5 a 10 tubos. Después de la esterilización. 30 : Taponeamiento de tubos con asa y algodón Placas de Petry: Después de ensambladas (tapa y caja) podrán ser colocadas dentro de un cilíndrico de metal inoxidable con tapa. las placas serán empaquetadas con papel de estraza. en parejas o en grupos de no más de 5 placas. por haber estado en contacto directo con microorganismos o contiene cultivo de ésta. procediendo a su secado en la forma explicada. 65 . se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. debe ser sometida previamente a un proceso de esterilización en autoclave a 1210C. La cristalería así tratada. Desinfectantes más empleados (ver Capítulo 6) PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA PARA SU ESTERILIZACIÓN Objetivo: Evitar que se vuelvan a contaminar con posterioridad a su esterilización y mantenerlas en esas condiciones hasta su utilización.

pero al mismo tiempo impida el paso hacia la boca del material que esté pipeteando. b)Cilíndro de metal inoxidable para colocar las placas Las pipetas: Se taponean de tal manera que no dificulte la succión. 66 . Fig. 31 : Placas de Petry: a)Empaquetadas con papel de estraza. 32 : Pipetas: a)Taponeamiento con algodón. Posteriormente se enrollan en una franja de papel de estraza. probetas y otras cristalerías similares: Se taponean con algodón y se retapan con papel de estraza. b)Empaquetamiento con papel de estraza Los erlenmeyer. el cual se ata fuertemente con un lazo al cuello o porción anterior de la cristalería.Fig.

18. ¿Qué es el teflón y para qué se utiliza? 5. Describa las características de los tubos de ensayo. ¿Cómo son las placas de "Petry"? 16. Precise semejanzas y diferencias entre una cápsula y un mortero. 3. 33 : Erelenmeyer: a)Taponeamiento con gasa y algodón El resto de los materiales se empaquetan igualmente e incluso. 19. ¿Cuánto miden las láminas portaobjetos y las cubreobjetos? 17. Explique las diferentes causas de error en que puede incurrirse durante el pipeteo. como las jeringuillas con doble envoltura. ¿Cómo funcionan los frascos goteros con tapa esmerilada? 13. 14. algunos. 10. ¿ Cuáles son las diferencias entre en erlenmeyer y un frasco de kitasato? 11. Describa cómo Ud. CUESTIONARIO 1. 22. Nombre los diferentes tipos de cristalería de medición volumétrica? 8. 67 . ¿Para qué se utilizan regularmente los vasos de precipitado o Beaker? 20. ¿Qué otros recipientes además de los de vidrios se fabrican de porcelana? 21. ¿Qué Ud. Explique en orden cronológico los pasos que deben efectuarse durante la realización del pipeteo. 23. ¿Cuáles son las características de la cristalería de almacenaje? 7. ¿ Cómo es una bureta? 12. 15. Mencione las cristalerías de medición volumétricas. entiende por cristalería de laboratorio? 2. Explique cuáles son los procederes establecidos para la limpieza y desinfección de la cristalería. prepara la cristalería para que se mantenga estéril después de la esterilización. ¿Cómo se clasifica la cristalería general? 6. ¿Cuáles son las características de la cristalería de medición volumétrica? 9.Fig. 4. Describa el vaso de Koplin. Explique cómo se fabrica el vidrio. Nombre los componentes del vidrio "Pyrex".

CAPITULO 6 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN INTRODUCCIÓN La esterilización y desinfección son los métodos esenciales empleados en los laboratorios de microbiología. donde se requiere su eliminación. los agentes físicos más utilizados son: el calor. inhibir o separar a los microorganismos presentes en los diferentes objetos. etc. Bactericida: agentes destructor de bacterias. no limitándose exclusivamente a la estructura vegetativa. para destruir. en especial por medio de agentes químicos. lo cual a mediano plazo resulta letal para el microorganismo. etc. Términos empleados relacionados con la esterilización y la desinfección Sepsis: infección pútrida (putrefacto. corrompido. Bacteriostático: agente que inhibe las funciones de las bacterias. Aséptico: libre de toda materia séptica o infecciosa. Antisepsia: conjunto de procedimientos prácticos destinados a destruir o alejar los gérmenes patógenos. Asepsia: método encaminado a prevenir la infección mediante la destrucción o evitación de los agentes infectivos. Específicamente mediante el empleo de métodos físicos. Destruyen las diversas estructuras o inhiben su funcionamiento. las radiaciones y la filtración. sino incluyendo además a sus esporas. medio ambiente. compuestos orgánicos. En relación con los agentes quími68 . Diferentes agentes empleados en la esterilización: Para la esterilización se emplean diferentes agentes físicos y químicos..) Séptico: que produce la sepsis. ESTERILIZACIÓN Concepto: Esterilización significa: destrucción o eliminación de todas las formas de vida. ocasionan específicamente la desnaturalización de las proteínas celulares. La mayoría de los métodos y agentes empleados.

el calor generado provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. solamente algunos. son destruidos. El calor se utiliza de tres maneras diferentes: calor húmedo. diseñado para resistir la presión generada por la acumulación de vapor de agua. etc. calor húmedo a 1000 C. de manera similar que cuando se cocina un huevo duro.. Calor húmedo a presión El calor húmedo a presión se obtiene mediante el empleo del autoclave. con lo cual la temperatura aumenta. de doble cámara. Calor húmedo El calor húmedo es la variante más empleada. pero todos tienen en común una estructura similar. Bajo estas condiciones. como aminoácidos. El calor húmedo se emplea en los laboratorios de tres maneras diferentes. potasio. En el mercado se comercializan diferentes modelos de autoclave: verticales. como son: la aplicación del nivel de temperatura requerido y el tiempo de exposición al calor. 69 .cos. Debido a que las bacterias resultan más vulnerables en la medida en que estén más húmedas. inactivando su función osmótica. calor seco y la incineración. un equipo metálico provisto de un cierre hermético. en dependencia de la magnitud del material a esterilizar. en consecuencia los puentes de hidrógeno de la membrana citoplasmática. horizontales. como por ejemplo. que ocasionan la muerte del microorganismo. lo que trae como resultado la emigración incontrolada de los constituyentes intracelulares. siempre y cuando el objeto o producto no sea termolabil. alcanzando valores de 121 C requeridos para la eliminación de las esporas para lograr una adecuada esterilización. El calor El calor resulta un método muy eficaz para lograr una adecuada esterilización. etc. Calor húmedo a presión. y se cumpla con los parámetros de eficacio. El formaldehído y el óxido de etileno ejercen un efecto letal sobre las esporas.

13 y l4. 18. 12.Llave de paso para suministrar agua al tanque. quedando las paredes de ambas separadas entre sí por varios cm.Escape de agua de condensación. 9.Quemador de gas. 16. En este espacio se acumula el vapor de agua procedente de la caldera que posteriormente pasa a la cámara interna. 21.Entrada de aire.Llave de paso de gas.Tanque de agua. 34: Autoclave. 8. siendo el lugar destinado para la colocación de los objetos y materiales que sé desean esterilizar.Termómetro. 19. Llave que controla el nivel del agua. 7. Vista frontal y lateral: 1.Lave de escape de vapor.Puerta de seguridad.Válvula de seguridad.Cámara interna. 2. 20. 3. 17.Cierre hermético de la puerta. 11. Prototipo standard del autoclave Cámara La cámara del autoclave consiste en un cuerpo cilíndrico de aproximadamente un metro de largo x 50 a 60 cm de diámetro.Manómetro que indica la presión de la cámara interna. 15. 5. 4. Algunos modelos disponen de una segunda cámara denominada externa. Respiradero.Válvula termostática.Fig. 6.Llave que comunica la cámara externa con la interna. 10. a unos pocos cm de la cámara interna estando provista de un número variable de metálicas en posición radial que al ser cerrada mediante el de una manivela 70 .Manómetro que indica la presión de la cámara externa. Puerta La puerta está articulada con bisagras en la parte anterior del equipo.Cámara externa. que debido a su mayor diámetro rodea a la cámara interna en toda su longitud.Llave de paso para sacar el agua del tanque.

etc. Manipulación del autoclave a) Revise el nivel del agua de la caldera y en caso de ser insuficiente. d) Proceda a abrir la válvula de salida del aire. e) Encienda la fuente de calor. medios de cultivo. una para extraer el aire que quedó en el interior del equipo al cerrarse y la otra para propulsar la salida del vapor cuando la presión sobrepasa los límites admisibles. 71 . Fuente de calor La fuente de calor empleada para calentar el agua contenida en la caldera y se produzca vapor de agua. y límpiela si estuviera sucia u obstruida. penetran en un reborde periférico situado en la parte frontal del autoclave propiciando un cierre hermético. Válvulas Los autoclaves poseen dos válvulas. la caldera puede estar ubicada junto o separada de la cámara.ubicada centralmente. material quirúrgico. c) Introduzca en la cámara los objetos y materiales que se van a esterilizar y cierre herméticamente la puerta. Uso del autoclave El autoclave se utiliza regularmente para la esterilización de ropas. proceda a echar la cantidad requerida. b) Revise la válvula de seguridad. Instrumentos de medición Estos equipos disponen de un termómetro y un manómetro que permiten ir monitoreando la temperatura y la presión existente en el interior del autoclave. durante su funcionamiento. Caldera Según el modelo de que se trate. En su interior se deposita el agua (destilada) hasta alcanzar el nivel adecuado. puede ser eléctrica o de gas. Esta última se denomina "válvula de seguridad".

asciendan.f) Manténgase atento a la válvula de salida de aire. aunque puede extenderse a 30 minutos si el objeto o producto a esterilizar es demasiado grande. h) Transcurrido el tiempo de esterilización. Cuando el vapor salga mediante un chorro continúo y sin intermitencia. recomendándose en ese caso aumentar un poco la presión para que el equipo alcance la temperatura requerida. etc. si se diera el caso. pueden ocasionar quemaduras al manipulador. de que la temperatura no se corresponde con la presión. mediante este método se logra la destrucción de todas las formas vegetativas y de algunas esporas. A continuación. g) Espere a que el termómetro marque 1210 C y el manómetro 15 lb/pgda3 de presión. ya 72 . urea. al salir por la puerta. se obtiene de dos maneras diferentes: 1. abra la puerta el autoclave con sumo cuidado. con la diferencia de que no es hermético. que consiste en un equipo similar al autoclave. cierre la válvula. gelatina. pues será indicativo de que el aire acumulado dentro del autoclave ha salido y que todo el espacio de la cámara está ocupado exclusivamente por el vapor de agua. siempre que la acción calórica se prolongue por 5 a 10 minutos. ya que los restos de vapor que queden aún dentro de la cámara. Por ebullición: El líquido en cuestión es sometido a la acción del calor hasta alcanzar temperaturas de 100 C. Otras esporas resisten la temperatura de ebullición por más de una hora. ya que esta acción puede provocar que los medios de cultivo que aún tengan más de 100 C al serle retirada abruptamente la presión. por lo que no puede garantizarse una esterilización eficaz con este método. Vapor fluente: El vapor fluente se utiliza para la esterilización de compuestos y medios de cultivo elaborados con determinados azúcares. desconecte la fuente de calor (hay modelos donde la fuente se apaga automáticamente) y espere hasta que el manómetro marque "O". No trate de reducir la presión abriendo la válvula de seguridad o la de salida de aire. para comenzar a contar el tiempo de esterilización. El principio de este método consiste en someter el compuesto o medio de cultivo a esterilizar a una corriente de vapor a 1000C para lo cual se emplea el esterilizador de Arnold. que generalmente es de 15 a 20 minutos. Calor húmedo a 1000 C El calor húmedo a 1000 C. 2. expulsen los tapones de algodón y se derramen dentro del equipo. i) Cuando el termómetro y el manómetro marquen "O" proceda a abrir la válvula de salida de aire y espere a que salga el vapor residual. Que se deterioran a temperaturas superiores a 1000C. no debiendo por lo tanto ser esterilizados en auto clave. es indicativo de que no se sacó todo el aire de la cámara.

por lo que se requiere aplicar la esterilización fraccionada. La exposición al vapor fluente del material a esterilizar será de 20 a 30 minutos. 4.que el vapor producido por el calentamiento del agua. la temperatura de 1000C resulta insuficiente para la destrucción de algunas esporas.Termómetro. Al no acumularse el vapor. 5. no aumenta la presión y por consiguiente la temperatura se mantiene en 1000C.Resistencia eléctrica. siempre que se deje la válvula abierta para que el vapor no se acumule. Como ya se explicó en acápite de ebullición.Recuperador. 3. va saliendo por un condensador que lo traslada en forma de agua. 2. para que las esporas que resistieron la primera exposición germinen en células vegetativas muy vulnerables a la temperatura de 1000C. 6. nuevamente a la caldera.Tuberia de escape de vapor. conocida como "tyndalización".Agua destilada. con lo cual la temperatura se mantiene estable a 1000C.Tapa. 35: Esterilizador de Arnold: 1. que consiste en exponer el material a esterilizar al vapor fluente durante tres días consecutivos por espacio de 30 minutos. El autoclave puede sustituir al equipo de Arnold. De quedar alguna espora germinará y la célula vegetativa será destruida en la 3era. Exposición. 73 . Fig.Soporte. 7.

Salida de aire. 3. donde serán colocados los materiales a esterilizar. 4.Puerta. un mueble metálico de forma rectangular o cuadrada. Bombillo.Fuente de calor. 74 .Ventilador. es utilizado con regularidad en los laboratorios de microbiología. Su acción provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. 6. la cual queda cubierta por una tapa metálica perforada. etc. aunque se comercializan otros de menor o superior tamaño. Sin que pierdan su sabor natural.Calor húmedo a menos de 1000C La aplicación del calor húmedo a menos de 1000 C. 7. seguido de un enfriamiento inmediato.Botón del termostato. por cuyos orificios pasa el calor. con el objetivo de determinados objetos y materiales. que está basado en el efecto de la temperatura sobre los microorganismos y sus enzimas. 2. una resistencia eléctrica que ocupa todo el área del fondo del horno. 5. El calor seco se obtiene por medio del horno. ideado en el siglo XIX por Luis Pasteur.Tapa. así como la oxidación de ciertos componentes de la célula microbiana. Consiste básicamente en calentar el producto de 62 a 650 C durante 30 minutos o a 710 C durante 15 segundos. es un método conocido con el nombre de pasteurización. debido a las bajas temperaturas empleadas y el corto tiempo de exposición. 8. Fig.Termómetro. A diferentes niveles de altura están situadas las parrilladas en posición horizontal. está situada la fuente de calor. En su parte inferior o base. Con este método se eliminan los patógenos que con alguna regularidad puedan estar presentes en productos como la leche y bebidas alcohólicas. 36: Horno: 1. por medio de un ventilador ubicado en una de las paredes laterales. 40 % de aproximadamente 80 cm cúbicos. Calor seco El calor seco. que se disemina por todo el interior del horno.

La esterilización en horno requiere de una temperatura superior a la utilizada con el autoclave. que debido al bajo porciento de agua que contienen no son penetrados suficientemente por la humedad generada por el vapor de agua de los autoclaves. Advertencia Cuando el horno haya alcanzado una elevada temperatura no debe abrirse para introducir o sacar algún material. algodón etc. 3. Empleados 75 . accionando el interruptor y espere hasta que el horno se enfríe para extraer el material. 6. una interna de vidrio que se halla dentro de un marco metálico y otra externa metálica forrada de amianto. el botón para regular el termostato. Manipulación del horno 1. apague la fuente de calor. Cierre firmemente la puerta.En la parte superior externa se encuentra un orificio ocupado por un regulador. 2. con la cual se cierra firmemente el equipo. Casi todos los hornos tienen dos puertas. grasas sólidas o productos en polvo. así como un tiempo de exposición más extenso. Gire el botón del termostato hasta que indique la temperatura deseada y espere a que el termómetro registre de 160 ó 180 C (en ese momento se apagará automáticamente el bombillo piloto). Transcurrido el tiempo de esterilización. ya que el calor seco no se distribuye uniformemente por todo el equipo como lo hace el vapor de agua. el termómetro y un bombillo piloto. encargado de expulsar el exceso de aire del interior del horno. 5. En la parte anterior. debajo o al lado de la puerta presentan un panel donde se encuentra el interruptor. Encienda la fuente de calor (automáticamente el ventilador comenzará a funcionar y el bombillo piloto se encenderá) 4. exista la suficiente para que el material quede estéril. garantizando de esta manera que en el área del horno donde se alcance menos temperatura. que por ser metálicas adquieren un mayor grado de temperatura y pueden quemar el material comburente empleado. objetos de metal. debidamente preparados cuidando de que queden separados entre sí y de las paredes del horno. Comience a contar el tiempo de esterilización. ya que los paños. Coloque en las parrillas los materiales a esterilizar. Uso del horno El horno se utiliza para esterilizar cristalería de laboratorio. y para que el aire caliente circulante. aceites. que en este equipo debe ser de 90 minutos a 2 horas. tenga acceso por igual en toda la superficie del material a esterilizar.

mediante la incineración. para llevar al estado de cenizas materiales contaminados. consisten. Mecheros Los mecheros son instrumentos de laboratorio diseñados para obtener una llama calorífica a partir de la combustión del alcohol o del gas. a los instrumentos de siembra. Una pequeña capucha cilíndrica de metal con el extremo superior redondeado. que por su peligrosidad deben ser destruidos totalmente. con el fondo plano. a los microorganismos contenidos en las muestras y otros materiales contaminados que se determine carbonizar.Tapa. en tanto que los mecheros son utilizados como fuente de calor para diversos propósitos y comúnmente en el trabajo diario para esterilizar. en un pequeño recipiente de vidrio de forma redondeada.pueden inflamarse por la penetración abrupta de oxigeno y ocasionar quemaduras al manipulador. 76 . Los mecheros de alcohol. 2. El incinerador se emplea básicamente. estando provisto por su parte superior de un pequeño saliente cilíndrico por donde se enrosca un pequeño tubo metálico de unos pocos mm de diámetro a través del cual se inserta una mecha cuyo extremo posterior queda en contacto con el alcohol contenido en el recipiente. Incineración La incineración se logra. para este propósito se utilizan el incinerador y el mechero. se utiliza para tapar el mechero y que no se evapore el alcohol. Fig.Alcohol. exponiendo directamente a la acción de la llama. 37 : Mechero de alcohol: 1.

pero todos están estructurados básicamente por tres partes separables: La base. 2. una fina manguera que se inserta por su otro extremo a una llave de gas. 38 : Mechero de gas 1. en dependencia del modelo de que se trate. Tiene un diámetro de 4 a 6 cm y presenta en la parte superior un pequeño tubito en posición horizontal de unos 6 mm de diámetro denominado tobera.Mecheros de gas Son los mas empleados. semejante a una alianza. Tubo quemador: El tubo quemador puede tener un diámetro variable. Está provisto de un orificio circular de un diámetro similar al del tubo quemador. En ambos tipos de mecheros. La base: Es una pieza metálica de forma circular y fondo plano. Existen diferentes modelos. el tubo presenta un orificio de un diámetro similar al del collarín que regula la entrada de aire. El mechero de "Bunsen" convencional. Regulador de aire: El regulador de aire está compuesto por un collarín metálico de forma anular. 77 . Fig. quedando en contacto con la base. que se inserta calibradamente en el extremo inferior el tubo quemador. donde se inserta ajustadamente. 3. tiene aproximadamente 6 ó 7 mm de diámetro x 6 ó 7 cm de largo. el tubo quemador y el regulador de aire. en tanto que el mechero de "Fisher" es mucho más grueso con una longitud también mayor y está provisto en su extremo superior de un quemador que propicia una llama grande e intensa. muy próximo al extremo donde se enrosca a la base. lo que permite mantener el tubo quemador en posición vertical. con una presilla de seguridad.

el gas que atraviesa la manguera y la tobera se dirige al centro de la base. Revise que las diferentes partes del mechero. 39: a) Mechero de Bunsen. Abra ligeramente la llave de gas. b) Mechero de Fisher Manipulación del mechero 1. calibrado a décimas de mm que regula el paso del gas hacia el tubo quemador. luminosa y poco calorífica. obtendremos una llama de color amarillo rojizo. Fig. Ajuste la entrada de aire hasta obtener la llama deseada. Regule la salida del gas en dependencia de la intensidad de la llama. 40: Diferentes zonas de la llama del mechero 78 . Al realizar esta operación. donde hay un dispositivo provisto de un fino orificio. Cuando esta operación se realiza. Una mezcla rica en aire produce una llama azulosa. en mayor o en menor grado se producirá la entrada de aire en el tubo quemador lo que propiciará la mezcla gas . Si empobrecemos la llama cerrando la entrada de aire. estén debidamente acopladas y ajustadas. 5. En la medida en que se enriquezca el gas con el aire. no luminosa y de gran poder calorífico. 4. 3.Fig.aire (combustible y comburente). 2. Aproxima la llama de un fósforo o de una fosforera al orificio del tubo quemador por donde sale el gas para encender el mechero. para lo cual se hará girar al collarín hasta hacer coincidir su orificio con el del tubo quemador. Así será la llama.

Se recomienda retirar de su alrededor.Radiaciones ionizantes.Uso del mechero El mechero tiene una función utilitaria muy diversa: se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de nicrón o platino. 79 . se introduce gradualmente el resto del alambre hasta que también se ponga al rojo vivo. Para flamear la boca de los tubos de ensayo y otras cristalerías estériles. Advertencia . papeles (utilizados para la esterilización de la cristalería) así como. LAS RADIACIONES Las radiaciones empleadas en microbiología como método de esterilización son esencialmente de dos tipos: . por lo que se debe tener sumo cuidado con su manejo. Radiaciones ionizantes Deben su acción a la capacidad de producir partículas que al interaccionarse ceden la energía suficiente para producir ionización. fenómeno mediante el cual. mediante su exposición directa a la llama. potencialmente peligrosos para el manipulador. como paso previo a la realización de siembras. . durante su uso. Por las mismas razones debe mantenerse el pelo recogido y concentrarse totalmente en la actividad que se esté realizando. que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. para introducir previamente el asa. El mechero también es utilizado para fijar frotis en láminas portaobjetos y calentar medios de cultivo durante su preparación. Lo idóneo cuando se trabaja con muestras o cultivos. es disponer de un recipiente con arena humedecida en fenol. antes de flamearla a la llama del mechero.Radiaciones no ionizantes. . líquidos inflamables (alcoholes para coloraciones) y otros materiales similares. Por su parte externa con el objetivo de eliminar los microorganismos contaminantes.El empleo del mechero entraña un peligro potencial de quemaduras en la piel o en la ropa. resiembras. La introducción total del instrumento en la llama tiende a aumentar la intensidad de la formación de aerosoles. con los restos de inoculo. distribución de medios de cultivo en placas y otros procederes.Los instrumentos de siembra (asas o agujas de platino o nicrón) que contengan restos de muestra o de cultivos. deben ser introducidos gradualmente en la llama del mechero de la siguiente manera: de inicio se expondrá el extremo del instrumento a la zona azul de la llama y tan pronto se ponga al rojo.

Los rayos gamma. Las radiaciones no ionizantes más empleadas en los laboratorios de microbiología y en determinadas áreas del ámbito hospitalario. mutación genética o muerte. pues ocasiona daños en la vista e incluso pueden producir quemaduras cuando la exposición es prolongada. Aplicación: El poco poder de penetración de estos rayos lo hacen inefectivos para esterilizar compuestos o medios de cultivo. rayos x y rayos catódicos. el ADN y las proteínas celulares. ejercen una acción letal sobre las diversas estructuras. son las producidas por lámparas de luz ultravioleta cuyo expectro está comprendido en rango de longitud de onda de 2600 a 2700 . equipos médicos. En el trabajo diario la lámpara se debe encender 2 ó 3 horas antes de comenzar a trabajar en el local. Así como para las paredes.una molécula. Su efecto esterilizante depende de que la energía propagada. 80 . para dar lugar a la inactivación de las enzimas. sin embargo su aplicación resulta efectiva para la esterilización del ambiente de quirófanos.Debe chequearse periódicamente la lámpara para determinar su estado de agotamiento. etc. las no ionizantes tienen poca capacidad de penetración. oxidando las proteínas y los ácidos nucleicos. lo que acarrearía numerosos trastornos. catéteres. por lo que el interruptor debe estar ubicado fuera del local. no solo por sus propiedades ionizantes. átomo o ion estrictamente neutro. sino además. Advertencia: La exposición a las radiaciones ionizantes son nocivas para las células del cuerpo humano. cuartos de siembra. por lo que si su empleo es reiterado deben emplearse las medidas de protección radiológicas establecidas.No se debe entrar ni permanecer en ningún local que tenga encendida la lámpara de luz ultravioleta. Aplicación: Se utilizan regularmente para la esterilización de inyectables. . son muy efectivas contra las esporas. procedente de sus radiaciones electromagnéticas (luminosas) sean absorbidas por la célula microbiana. siempre y cuando se cumpla la indicación referida al tiempo de exposición y se tenga en cuenta la distancia entre la ubicación de la lámpara y el objeto o espacio a esterilizar. se ven privados de uno o mas electrones mediante la acción de un campo eléctrico. Advertencias . por su elevada capacidad de penetración. Radiaciones no ionizantes A diferencia de las radiaciones ionizantes. además de que son agentes catalizadores de la oxidación de las grasas. que en caso de ser significativo reduciría su capacidad germicida. piso y techo del inmueble o la parte externa del mobiliario. Las radiaciones de luz ultravioleta además de ser germicidas. jeringuillas plásticas y alimentos.

por lo que de hecho. aunque en la práctica. ya que algunos de los tradicionalmente utilizados no pueden retener el paso de los virus. así como filtros HEPA que se utilizan para retener las partículas presentes en el aire durante la aplicación del flujo laminar. los cuales tienen en común ser muy compactos. etc. La eficacia de este método depende del tipo de filtro empleado. medios azucarados. y provistos de porosidades microscópicas de un diámetro menor que la talla promedio de los microorganismos. En la actualidad se están empleando discos de membrana de celulosa para filtros. algunos como los de amianto se comercializan en forma de discos de algunos cm de diámetro por varios mm de grosor. para los que no debe emplearse el calor como método de esterilización por ser termolábiles. Preparación de los filtros Fig. 41: Filtros: a) Filtro Seitz. vidrio poroso o porcelana. urea.. retienen a la mayoría de los microorganismos. que se fabrican con diámetros tan pequeños que imposibilitan el paso de los virus. Características de los filtros Los filtros se fabrican con diversos materiales: amianto. tipo millipore. con el propósito de que los microorganismos que contiene sean retenidos y el líquido filtrado quede estéril. b) Bujia de Charberland.FILTRACIÓN La filtración es un método mediante el cual. Empleo: La filtración se utiliza para esterilizar compuestos termolábiles como: el plasma. vitaminas. no es una verdadera esterilización. se hace pasar un líquido contaminado a través de un filtro. 81 .

No se debe esterilizar en horno. se le retira la envoltura de papel y se inserta el extremo de una manguera al tubo del frasco de kitasato y el otro extremo se acopla a una de vacío. fino y delgado que se encuentra insertado en el centro de la base presentando una escotadura oblicua en su extremo distal que le proporciona una terminación puntiforme que se utiliza para insertarlo en el orificio de caucho que se encuentra tapando a un frasco de kitasato. en colocarlo en posición horizontal en el interior de un soporte metálico de forma cilindra.Cuando se emplean filtros en forma de disco. originando una pre82 . denominado filtro "Seitz" que presenta en la parte superior una tapa de rosca metálica y en la inferior un tubo recto. procediendo a taparlo con la tapa de rosca. el procedimiento para su montaje consiste. 2. una vez ensamblados se empaquetan con papel de estraza y son esterilizados en autoclave a 1210C durante 20 minutos. El filtro y el frasco de kitasato. Conectar la bomba de vacío: La comprensión centrífuga axial (de su eje) transformará la energía cinética en energía de presión. Destapar el filtro "Seitz" y verter en su interior el líquido que se desea esterilizar. Fig. Procedimiento 1. de unos 6 cm de diámetro aproximadamente 12 cm de largo. ya que el calor seco puede dañar el tapón de caucho. 42 : Filtro Seitz ensamblado en el kitasato Preparación previa Cuando vaya a ser utilizado.

d) Accionar la bomba de vacio para que se produzca la succión y el líquido pase estéril al kitasato Advertencia: Los discos de amianto se utilizan una sola vez. la efectividad de los desinfectantes depende de su accesibilidad sobre el objeto o material a des83 . lo que provocará la succión del líquido. lo que permite su reutilización. quedando retenidos los microorganismos en su superficie acumulándose estéril en el kitasato. el cual pasará a través del filtro. debido a los efectos tóxicos que producen sobre las estructuras y los procesos metabólicos de la célula microbiana. que determinadas concentraciones pueden ser letales. Fig. b) Verter el líquido a filtrar. c) Cerrar el filtro. pero los de vidrio poroso o porcelana se pueden limpiar con facilidad.sión negativa en el interior del frasco de kitasato al serle extraído todo el aire acumulado. 43: Proceso de filtración: a) Ensamblar el kitasato a la bomba de vacio. DESINFECCIÓN La desinfección es un método utilizado en los laboratorios de microbiología para provocar la muerte de los microorganismos. Mediante el empleo de productos químicos denominados desinfectantes.

lo segundo. Los desinfectantes mas empleados en las instituciones de salud. Algunos desinfectantes como por ejemplo.. es la caracterización del objeto. pero solo algunos son capaces de destruir las esporas. removiendo los grupos sulfhídricos libres. Selección de los desinfectantes El hecho de que todos los desinfectantes tengan la capacidad de matar a los microorganismos. debiendo manipularse con sumo cuidado ya que el contacto accidental con algunos de ellos. cerciorarse de que su empleo no produzca deterioro del objeto a desinfectar. cobre. el alcohol y otros compuestos químicos. materia orgánica o ambientes. provocando la ruptura de la membrana citoplasmática o la pared celular. Desnaturalizando las proteínas. etc. zinc. teniendo en cuenta su poca o suficiente capacidad de penetración en el tratamiento de las sustancias orgánicas y tercero. determinado porque siga siendo tóxico para los microorganismos pero que al mismo tiempo. seleccionar el desinfectante que resulte mas eficaz para ese objetivo. no significa que pueda emplearse cualquiera sin una previa selección. son los siguientes: Fenol del 2 al 5 % Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico del 40-80 % Formaldehído al 4 % Gluraldehido al 2 % Peróxido de hidrógeno al 6 % Sales de iones pesados (mercurio.infectar y que las condiciones ambientales sean favorables para la desinfección así como que la exposición se prolongue durante el tiempo predeterminado. siempre y cuando cumplan con el principio de toxicidad . gargarismos o colirios. interfiriendo las reacciones enzimáticas o afectando el funcionamiento de ADN. intoxicación respiratorias o toxemias. estando restringido su empleo para la desinfección de objetos.selectiva. sean relativamente inocuos para las células del paciente.. puede ocasionar lesiones tisulares o dermatitis y su aspiración. La mayoría de los desinfectantes son muy nocivos para los tejidos. 84 . pueden ser empleados como productos tópicos. material o ambiente que se desea desinfectar.) Detergentes catiónicos (compuesto de amonio o cloruro de benzalconio) Bicloruro mercúrico al 1: 1000 Otros. Los desinfectantes actúan sobre la estructura vegetativa de los microorganismos de diferentes maneras. Lo primero que hay que hacerse.

Desinfección por sumersión.La aplicación de estos productos químicos se realiza de manera diferente. 6.: Consiste en sumergir los objetos en un recipiente apropiado hasta cubrirlos con la solución desinfectante. 7. 3. para la desinfección de ambientes especiales. Desinfección por gasificación: Algunos desinfectantes como el formaldehído. de acuerdo con lo que se quiera desinfectar: 1. resulta pertinente que sean removidos previamente del el objeto que se vaya a desinfectar con agua y detergente. Las sustancias antisépticas más utilizadas en el laboratorio para uso externo son las siguientes: Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico al 70 % Formoaldehído al 1 % Hexoclorofeno al 2 % Yodopuvidona al 4 % Hipoclorítico de sodio o calcio al 1 %. 4. gasa o paño. 2. CUESTIONARIO 1. 5. mobiliarios y otros artículos. Desinfección por aplicación directa: Aplicar con ayuda de un algodón. se pueden emplear en su estado gaseoso. Advertencia: Debido a que muchos desinfectantes tienen poca actividad sobre las sustancias orgánicas. el desinfectante a la superficie del objeto de que se trate: mesa. 2. Cuáles son las diferentes formas en que se emplea el calor como agente esterilizante? ¿Cuál es el agente esterilizante que se pone de manifiesto en el calor húmedo a presión? ¿Cómo se denomina el equipo empleado en los laboratorios para producir calor húmedo a presión? Durante la esterilización en autoclave ¿cómo Ud. ropas. ¿Qué es la esterilización? ¿Cuáles son los diferentes efectos que se producen sobre los microorganismos sometidos a procesos de esterilización? Mencione los agentes físicos empleados en la esterilización. 3. determina la temperatura y la presión del equipo? 85 . puesto de trabajo y en menor grado las paredes y el suelo.

16. ¿Que tipo de materiales se deben esterilizar con filtros? 24. Mencione los diferentes métodos de desinfección. 15. ¿Cómo Ud. ¿Cuál es la diferencia entre el mechero de "Bunsen" y el de "Fisher?" 17. 8. 28. ¿Cómo se denomina la lámpara utilizada en los laboratorios para esterilizar? 20. Mencione las diferentes partes del mechero de gas. ¿En qué lugares se aplica la esterilización con luz ultravioleta. ¿De qué depende el efecto esterilizante de las radiaciones no ionizantes? 21. 22. Explique paso a paso el funcionamiento del horno. ¿Qué cuidados debe tenerse en cuenta con el empleo de la luz ultravioleta? 23. ¿Cómo se denomina el equipo a utilizar en la esterilización con calor seco? 12. Para qué se utiliza regularmente el mechero de gas. ¿Cuáles son las precauciones a tener en cuenta al concluir la esterilización en autoclave. 86 . ¿Por qué la temperatura del horno y el tiempo de esterilización deben ser mayores que cuando se emplea el autoclave? 13. Explique cómo usted realiza una esterilización con filtro 25. 19. regula la entrada de aire al mechero? 18. ¿Cuál es la fuente de calor del horno? 14. ¿Cuál es la diferencia entre esterilización y la desinfección? 26. Nombre los desinfectantes empleados con mayor frecuencia y sus respectivas concentraciones. Explique paso a paso el funcionamiento del autoclave 10.¿Por qué causa el agua empleada para la esterilización en autoclave debe ser destilada? 9. ¿Cuáles son los efectos nocivos que provocan los desinfectantes sobre los microorganismos? 27. 11.

el botón para regular la temperatura. pero que son empleados para otros menesteres.CAPÍTULO 7 EQUIPOS CALORIFICOS INTRODUCCION Son equipos diseñados para producir y distribuir calor. el funcionamiento del termostato. El baño de María. Requerimiento de temperaturas Cada especie de microorganismo se desarrolla óptimamente en un rango. en lo referente a su forma. empleados en la esterilización mediante el calor. pero en este capítulo nos referiremos específicamente a otros equipos que también producen y distribuyen calor. siendo ajustada generalmente para que produzca de 35 a 370 C. Entre los mas utilizados en el laboratorio de microbiología se encuentran: 1. donde se colocan los materiales a incubar. En su interior. La diferencia sustancial con respecto al horno radica en que el nivel máximo de temperatura no excede de los 60 a 700 C. Sobre la base de esos requerimientos se clasifican de las siguientes maneras: 87 . el lado o debajo de la puerta externa. INCUBADORA El diseño industrial de las incubadoras es similar al del horno. La incubadora o estufa 2. Se trata de un mueble rectangular o cuadrado de unos 80 cm3 . lo cuál puede comprobarse mediante la observación de un termómetro acoplado al equipo con una escala de 0 -700 C. con excepción de algunos modelos ya en desuso construidos de madera. la interna de cristal y la externa metálica. temperatura específica (termofília). la incubadora está provista de un número variable de parrillas metálicas intercambiables. dispone de un panel donde se encuentra el interruptor. hornos y otros instrumentos similares. el cuál está rodeado de una escala metrada y un bombillo piloto que indica mediante su apagado o encendido de forma automática. Las autoclaves. se incluyen dentro de este concepto. calentadores y doble puerta. estructura y tamaño. provisto de múltiples paneles. Al igual que el horno.

Pueden adaptarse a vivir en presencia o ausencia de oxígeno. microaerofílicos.Cuadro 4: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su termofilia. son mesófilos. así como otros que forman parte de la microbiota residente o transitoria. Además de una temperatura óptima que favorezca el aceleramiento de su crecimiento. CLASIFICACIÓN Aerobios estrictos Microaerofílicos Anaerobios Facultativo AEREACCIÓN Requieren oxígeno a una tensión similar a la del aire ordinario. CLASIFICACIÓN PSICRÓFILOS MESOFILOS TERMOFILOS RANGO DE TEMPERATURA ÓPTIMO PARA EL CRECIMIENTO DE 15 A 20 C DE 30 A 37 C DE 50 A 60 C La mayoría de los microorganismos patógenos al hombre. acorde a las necesidades de oxígeno de cada microorganismo. Requieren de un ambiente privado totalmente de oxígeno. aunque menos óptimamente. mientras que los facultativos son capaces de desarrollarse. Cuadro 5: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxígeno. a que la temperatura corporal resulta compatible con su temperatura optima de desarrollo. 88 . condiciones adecuadas de aereación. disponer de la temperatura que se especifica en cada clasificación. que deban emplearse diferentes métodos de incubación que propicien las necesidades específicas del microorganismo en estudio. debido entre otros factores. por lo que logran establecerse sin grandes dificultades en diferentes áreas anatómicas del organismo. anaerobios y facultativos. En ese sentido se clasifican en: aerobios. Cada uno de estos grupos se subdivide a su vez en obligados y facultativos. la incubación debe proporcionar además. Clasificación de los microorganismos de acuerdo con sus necesidades de oxígeno De ahí. Los primeros requieren obligatoriamente. Requieren de una tensión de oxígeno inferior a la del aire. por debajo o por encima de ese rango.

La llama utilizará como comburente parte del oxigeno que quedó encerrado dentro del frasco. para que mantenga la humedad necesaria y una vela. se le debe suministrar durante la incubación. Consiste en colocar en el interior de un frasco de cristal de tamaño apropiado y provisto de tapa de rosca. Incubación de bacterias microaerofílicas: Como estas bacterias requieren de una baja tensión de oxígeno para poderse desarrollar. Seguidamente el frasco con los cultivos será colocado en el interior de una incubadora ordinaria. 44: Método de la vela 89 . que proporcionan a los microorganismos microaerofílicos una mayor tolerancia al oxígeno. las placas o tubos sembrados. Incubación de bacterias que requieren de CO2 : Todos los microorganismos requieren carbono en forma de CO2 y la mayoría utilizan el que está presente en el aire. metabisulfíto de sodio o piruvato de sodio. la cual se encenderá procediendo de inmediato a cerrar el frasco. Cuando este proceso haya concluido la llama se apagará y en el interior del frasco producto de la combustión quedará una atmósfera con un 10 % de CO2.Incubación de bacterias aerobias estrictas: Las bacterias aerobias estrictas no requieren que la incubadora tenga ninguna adaptación especial. pero aquellas especies que necesitan este elemento en mayor proporción. el método más empleado para propiciar esas condiciones. conjuntamente con los cultivos se introduce un pedacito pequeño de algodón humedecido en agua. consiste en sembrar las muestras en medios de cultivo que contengan Fe2Co4. Fig. ya que ellas utilizan el oxígeno presente en el aire ordinario que se encuentra en el interior del equipo. aunque pueden emplearse procedimientos físicos oxirreductores para este propósito. para lo cual existen diversos todos: a) Método de la vela: Es muy sencillo de realizar.

b) Empleo de la jarra de "Brewer". estableciendo condiciones anaerobias. 45 : Placa de Brewer Realizada la siembra. 90 . se cubre con la apa de "Brewer". En medio de cultivo sólido: Un medio de cultivo especial. Después de realizada la incubación se efectuará en la misma incubadora que se emplea para los cultivos aerobios. Fig. diseñadas para extraer un % de 02 deseado e intercambiarlo por un gas sustituto (CO2). Incubación de bacteria anaerobias La incubación de bacterias anaerobias se puede efectuar por diferentes métodos: a) Siembra en medios oxirreductores. c) Incubadora para anaerobios. estableciendo condiciones anaerobias. agar anaerobio al glicolato u otro similar se vierte sobre la caja de una placa de "Petry" corriente y después de solidificado se le coloca encima una tapa especial de vidrio denominada cubierta de "Brewer". El tioglicolato consume el oxigeno en el pequeño espacio de aire. la cual está diseñada para quedar apoyada sobre los bordes de la caja interior y sobre el perímetro externo del medio de cultivo de manera que en el área central del cultivo queda encerrado un espacio de aire. procediéndose a su incubación en una incubadora común para cultivos aerobios. tioglicolato sódico que consume él oxigeno.b)Incubadora de CO2: Son incubadoras especiales. Siembra en medios de cultivo oxirreductores En medio de cultivo líquido: El medio empleado contiene un compuesto oxireductor.

La tapa tiene instalada un elemento de calefacción rodeado de un catalizador platinado. 46: Jarra de Brewer Funcionamiento Después de introducidas las muestras de cultivos. Por la otra válvula se le suministra el hidrógeno para reemplazar el aire. La tapa dispone de dos válvulas. unas 10 placas con cultivo. para lo cual se enroscará el tornillo lo cual evitará que se produzca una explosión cuando se le suministre hidrógeno. de manera que no quede herméticamente cerrada. 91 . El poco oxigeno que puede quedar aún en el interior de la jarra es eliminado por el catalizador platinado que al activarse hace que se combine con el hidrógeno para formar agua o agua y dióxido de carbono. estableciendo finalmente condiciones anaerobias. La primera dosis de hidrógeno se debe botar para que salga el aire de la manguera. se aprieta el tornillo para hermetizarla. Fig. En una de ellas se instala una manguera conectada a una bomba de vacío para extraer el aire acumulado en el interior de la jarra. no debiendo abrirse antes de las 48 horas. Cuando la capacidad de la jara es completada con este gas. se produce a colocar la tapa. La jarra tiene un diámetro y altura que permite colocar en su interior (una encima de la otra). provisto de una tapa que propicia un cierre hermético mediante un tornillo ubicado en su porción central.Empleo de la jarra de "Brewer": Es un recipiente cilíndrico. En estas condiciones la jarra es colocada en el interior de la incubadora para que le proporcione a los cultivos el calor necesario.

Como se puede apreciar el empleo de este procedimiento es engorroso por lo laborioso que resulta y la imposibilidad de mantener estable el nivel de temperatura de la muestra. Cuando se emplean hornillas eléctricas. Cuando se utiliza el mechero de gas debe situarse sobre el trípode una malla de amianto. 92 . En la práctica el baño de agua sin regulación termostática se emplea casi exclusivamente cuando se requiere temperatura de ebullición. Mediante este método se pueden alcanzar valores por encima de la temperatura ambiente hasta un máximo de 1000 C con o sin regulación termostática. sin ser necesario hacer vacío para extraer el aire ni inyectar hidrógeno. Conjuntamente con la muestra será introducido en el baño un termómetro de mercurio colocado previamente dentro de un tubo de ensayo. Incubadora para anaerobios Se trata de un moderno equipo. En estas condiciones. comúnmente conocido como "baño de Maria" es utilizado en diversos procederes de laboratorio. el recipiente se coloca sobre una fuente de calor. ya que aún después de apagada.En la actualidad se comercializan diversos productos oxirreductores que se introducen en la jarra con los cultivos y suplen la función de esta. de manera. quede por debajo del nivel del agua. (Baño de María) El baño de agua caliente. volviendo a encenderla cuando la columna de mercurio comience a descender manteniendo este control. Baño de agua caliente. que puede ser de gas o eléctrica. faltando 2 ó 30 C. dentro del cual se verterá agua destilada hasta alcanzar el nivel necesario. con similar capacidad que las incubadoras para cultivos aerobios que funciona bajo el mismo principio que la jarra de Brewer. durante todo el tiempo que dure la exposición de la muestra al calor. con la ventaja que nos permite disponer de mas espacio y estudiar una mayor cantidad de cultivos. debiendo bajarse la llama o incluso apagarla cuando el termómetro marque dos o tres grados por debajo de la temperatura deseada. mantiene por algunos momentos la intensidad calorífica. debiendo quedar a la misma altura que la muestra. es decir. para que el calor se distribuya lo mas uniformemente posible por todo el fondo del recipiente. el recipiente puede ser separado de esa fuente de calor. Baño de agua caliente sin regulación termostática Cuando se recurra a esta variante se debe emplear un recipiente metálico o de vidrio de fondo plano. que el material a examinar depositado dentro de un tubo de ensayo.

El calor es suministrado por una resistencia eléctrica. 93 . Algunos modelos están provistos de un aditamento similar a un pequeño ventilador. las cuales deben quedar por debajo del nivel del agua. A continuación se introducen las gradillas con los tubos que contienen las muestras. que va registrando la temperatura del agua. las aspas comienzan a girar agitando constantemente el agua.Baño de agua con regulación termostática Se trata de un equipo diseñado con material inoxidable que tiene la forma de un cajón rectangular. debe ser siempre destilada. En su efecto se debe introducir un termómetro dentro de un tubo de ensayo. Después de accionar el interruptor se gira el botón hasta que indique la temperatura deseada y se hace girar igualmente el botón del "Timer" para indicar el tiempo requerido de exposición al calor. como para permitir la colocación en su interior de varias gradillas. Importante El agua a emplear para el baño de agua caliente. pero con la capacidad suficiente. la cual es regulada por un termostato que mantiene automáticamente el grado de temperatura al nivel deseado. lo que propicia que la temperatura se mantenga homogénea. ya que las sales que el agua cruda al evaporarse tiende a formar capas sobre las paredes internas y el fondo del depósito pueden deteriorar al equipo. sumergido en el agua. Al ser encendido el equipo. ubicada generalmente en la base del equipo. Estos equipos siempre son eléctricos. Algunos modelos cuentan con un termómetro de mercurio acoplado. De acuerdo al modelo su tamaño será variable. ubicado generalmente en el extremo posterior. 47 : Baño de agua Funcionamiento En el interior del equipo se vierte agua destilada hasta alcanzar el nivel pertinente. y colocarlo en la gradilla debiendo quedar el vástago al mismo nivel que las muestras. Fig.

13. 10.Uso El baño de agua caliente. Mencione los diferentes métodos de incubación anaeróbica. 9. 16. ¿Para que se utiliza la jarra de "Brewer?" Explique cómo es el funcionamiento de una jarra de "Brewer" ¿Cuántos tipos de baño de agua Ud. 2. puede proporcionar una atmósfera microaereofílica? ¿Cómo Ud. 17. 15. ¿Para que se utiliza la incubadora? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo al rango de temperatura óptima para su desarrollo? ¿Por qué causa los microorganismos mesófilos son los que con mayor frecuencia infectan al hombre? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxigeno? ¿Cómo Ud. 7. 4. 5. 11. puede proporcionar un 10 % de CO2 a las bacterias que así lo requieran? Describe el método de la vela. En el laboratorio de microbiología se emplea frecuentemente para inactivar el complemento de sueros que van a ser sometidos a procedimientos serológicos. tiene diversos usos. 6. 3. 8. CUESTIONARIO 1. 12. ¿Cuales son las diferencias y semejanzas entre el horno y la incubadora? Describa el diseño o modelo de una incubadora. conoce? ¿Cuál es la fuente de calor de los baños de agua con regulación termostática? ¿Por qué causa se debe emplear agua destilada en los baños de agua? ¿Cuál es la función de las aspas que poseen algunos baños de agua? ¿Cómo se regula la temperatura del baño de agua? 94 . 14.

diseminándose gradualmente en el aire. El microscopio compuesto fue diseñado y construido por el inglés Robert Hooke. estudiar su comportamiento y asociarlos después como los agentes causales de los procesos morbosos y/o letales. italiano. algunos fueron afectados por la acción de diversos agentes mutagénicos que alteraron su expresión fenotipal. A pesar de que los microorganismos ya existían antes que el hombre y de haber sido durante milenios los causantes de diversas enfermedades infecciosas. Galileo Galilei. inventado a principios de ese siglo por el físico-matemático. Con el decursar del tiempo. por el perfeccionamiento de las técnicas microscópicas.CAPITULO 8 MICROSCOPIO INTRODUCCIÓN La tierra se formó hace miles de millones de años y desde sus albores se desarrollaron los primeros microorganismos a partir de las estructuras pre-biológicas existentes. que dio lugar el surgimiento de la microbiología como ciencia. hayan sido durante siglos y sean en la actualidad. de ahí que los microorganismos patógenos. en el año1665. una lente de aumento. grandes epidemias y de pandemias que diezmaron poblaciones enteras. hasta poblar todo el globo terráqueo. originadas por la interacción de los compuestos orgánicos. acerca de las causas que originaban las enfermedades infecciosas eran meramente especulativos y por consiguiente carentes de rigor científico. El invento del microscopio fue el punto de partida. hongos y algas. al que insertó en cada extremo. los conocimientos que el hombre tuvo durante siglos. transformándose en otros tipos de microorganismos más evolucionados. afectando igualmente a la especie humana desde el surgimiento del hombre primitivo hasta nuestros días. debido esencialmente al tamaño microscópico de los diversos gérmenes que imposibilita su observación a simple vista y no disponerse en esas épocas de instrumentos técnicos como el microscopio que dieron esa posibilidad. en gran medida. lo que impidió a los hombres de ciencia ver sus respectivas morfología y estructuras. los agentes infecciosos causales de la morbi-mortalidad en plantas y animales. El tubo a su vez 95 . correspondiendo por lo tanto a los microorganismos haber sido los primeros seres vivos del planeta. los suelos y las aguas. que al evolucionar dieron lugar a la biogénesis de las bacterias primitivas. como: protozoarios. consistió en un tubo cilíndrico de unos 15 cm de longitud. estando su desarrollo ulterior influido. basándose en el principio funcional del telescopio astronómico. El microscopio de Hooke.

que quiere decir. Antón Van Leeuwenhouek.fue acoplado a un soporte previsto de platina para colocar las preparaciones a observar. fabricante de gafas. al proporcionar una imagen aumentada virtualmente del tamaño real a total magnitud que posibilitan su observación a través de su empleo. A pesar de que los lentes empleados por Hooke. que posibilita la observación de los microorganismos. diseñados básicamente con una sola lente o mediante un sistema de lentes de aumentos. no logrando observar a otros más pequeños como protozoarios y bacterias. De cada tipo se comercializan diferentes modelos y aditamentos especiales para proporcionar determinados efectos. no difiere esencialmente de la de los microscopios luminosos que se utilizan en la actualidad. DIFERENTES TIPOS Se fabrican dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. MICROSCOPIO. constituyen los microorganismos de mayor talla. Los microscopios son instrumentos ópticos o electrónicos con un elevado poder resolutivo. etc.. así como bacterias y protozoarios. Este instrumento se complementaba con una fuente de luz accesoria. heces. En 1668. denominando a estos microorganismos en su conjunto como "animálculos". solo logró observar. examinar o ver. así como diversos tejidos vegetales y hongos microscópicos y algas. un comerciante holandés. algunos insectos de ínfimos tamaños. proviene del prefijo micro que significa pequeño y del sufijo skope. células y otras estructuras microscópicas. podían proporcionar una ampliación suficiente. fabricó un microscopio al cual dotó de poderosos lentes de aumentos y empleando técnicas más efectivas. Probablemente sus limitadas observaciones se debieron a imprecisiones técnicas. logró observar todo lo visto por Hooke . aunque todos tienen respectivamente el mismo principio. CONCEPTO La palabra microscopio. Como se puede apreciar la estructura básica del microscopio diseñado por Hooke. relacionadas con el grosor de las preparaciones o el empleo deficiente de iluminación. en muestras examinadas de: sangre. pus. que son ubicados 96 . tomando como referencia el invento de Hooke. semen. que como se sabe. Microscopio óptico Concepto: Son instrumentos de laboratorio.

hasta una distancia focal menor que la empleada si se fuera a observar directamente. etc. como por ejemplo: colonias muy pequeñas. lo que hace posible su observación. Clasificación Los microscopios ópticos se clasifican en: simples y compuestos. como el Necator americanus o el Enterovirus vermicularis. quedando restringido su empleo para el examen de diversas estructuras u organismos microscópicos muy pequeños. forman parte de un sistema óptico.alineadamente en el eje óptico del microscopio para que proporcionen una imagen virtual ampliada de los objetos microscópicos examinados. Microscopios simples Están formados por una sola lente convergente. aproximar el instrumento gradualmente. desarrolladas en los cultivos. varias veces mayor que el tamaño real del objeto observado. Microscopio compuesto A diferencia de los microscopios simples. Entre los dispositivos utilizados se encuentran las lupas empleadas en las prácticas de disección. que tiene como soporte a un 97 . siempre que se utilice una adecuada iluminación. quede hacia el objeto a examinar y observando por la cara opuesta. que proporciona una imagen virtual. los compuestos funcionan mediante la combinación de varias lentes. cuyos detalles escapan a la agudeza visual del ojo humano. se debe colocar la lente de manera que su cara plana o menos curva. que conjuntamente con una fuente de iluminación. vermes de poca longitud. no invertida. no se puede observar con ellos objetos microscópicos. Debido a su limitada capacidad de ampliación. Fig. 48 : Lupa Para su manejo.

3. Tubo óptico. recorrerla y observar la cantidad de campos microscópicos que sean pertinentes. 5. En su trayectoria hacia la parte superior. provisto de diversas piezas y aditamentos que deben ser manipulados para lograr y mantener el enfoque de la preparación. Revolver portaobjetivos. Base o pie.sistema mecánico. Base o pie Es la parte del microscopio que queda en contacto con la superficie de la mesa de trabajo. 4. algunos modelos 98 . Platina 6. Brazo. Fig. Algunos modelos están provistos de una charnela (pasador) que permite la inclinación hacia el observador de la parte superior del microscopio. Su fondo plano y acentuado peso le proporcionan estabilidad al microscopio y constituyen a aminorar los efectos de las vibraciones que causan distorsiones durante la observación. Brazo Es una columna sólida y rectangular que se haya articulada por su extremo inferior a la base. La base es el sostén donde se asientan todas las restantes partes del microscopio. 49 : Microscopio óptico compuesto Sistema mecánico El sistema mecánico consta de las siguientes partes: 1. Tornillos. 2.

El orificio superior se emplea para insertar la lente ocular. que se accionan lateralmente para ampliar o reducir la distancia entre ambos lentes. lo cual se logra cuando éste deje de ver dos campos microscópicos separados o superpuestos y vea uno solo. manualmente el revolver hacia la derecha o hacia la izquierda hasta ubicar el lente deseado 99 . tiene ubicado en el punto de contacto con el tubo óptico un prisma o espejo que refracta la imagen por igual hacia ambas lentes. Revolver portaobjetivos El revolver portaobjetivos es un disco plástico o metálico de unos 7 cm de diámetro que se encuentra atornillado por su eje a una pieza que rodea al tubo óptico denominado fusil. consiste en un tubo cilíndrico de 2. denunciado fusil que articula a la parte superior del brazo. mientras que en el inferior se encuentra acoplado al revolver portaobjetivos. provista de 3 ó 4 orificios de 2 cm de diámetro con rosca interna.3 cm de diámetro donde se insertan los dos lentes oculares. estando provisto de una tapa metálica giratoria de superficie cónica. ubicados equitativamente alrededor de su entorno a menos de un cm de su borde. En algunos modelos. cuya secuencia aproximada será de menor o mayor potencia de aumentos. encontrándose rodeado por un tubo de mayor diámetro. mientras que la porción media de su cara frontal sirve de asiento al extremo posterior de la platina. hasta hacerlos coincidir con la de los ojos del. consistente en dos tapas de corredera. Este cuerpo binocular. un mecanismo de desplazamiento. En cada uno de estos orificios se enroscará un lente objetivo. observador. formando una inclinación oblicua o un ángulo recto de 900. En su parte superior.forman una curvatura. Tubo óptico En los microscopios monoculares.3 cm de diámetro. que consiste en una cajuela rectangular ubicada en posición horizontal que puede estar ligeramente inclinada hacia el observador. Cuando se requiera un mayor o menor aumento se hará girar. mientras que en otros su trayectoria es recta hasta más allá de la mitad de su longitud en que se dobla en dirección frontal. lo cual permite sincronizar la distancia de ambos lentes a las diferencias de potencialidad de cada ojo. es giratorio al ser accionado se desplaza hacia arriba o hacia abajo. con una longitud de varios cm que varía según el modelo. En los microscopios binoculares. sino que forma un cuerpo binocular. el extremo superior del tubo óptico no termina recto. por la misma cara donde se hayan los tubos para insertar los lentes oculares. el brazo está articulado al tubo óptico o al cuerpo binocular. al menos. uno de los tubos. disponiendo además. En la superficie frontal presenta 2 tubos cortos de 2.

sobre el orificio de la platina. El disco fijo tiene en su extremo frontal una pequeña hendidura y el giratorio presenta un pequeño saliente frente al orificio donde se enrosca cada lente objetivo. se encuentran articuladas a un sistema de rodamiento formado por dos cremalleras y dos tornillos. Generalmente es de forma cuadrada y mide unos 15 cm2 de superficie x 1 a 2 cm de grosor. Mediante movimientos de rotación que se imprimen a uno de los tornillos se propicia el desplazamiento de la pinza hacia uno u otro lateral y con el accionar del otro se desplaza la plataforma superior de la platina hacia delante o hacia atrás. Al rotar el disco y ubicar el lente deseado sobre el orificio de la platina. coincide con que el saliente se introduce en la hendidura produciendo un ligero sonido audible al acoplarse que indica que la lente está ubicada correctamente. La platina está provista de pinzas. 100 . por donde pasa la luz procedente de la fuente de iluminación. En algunos modelos el orificio es ovoide. pudiendo en algunos modelos ser circular. en algunos modelos son fijas. Estas pinzas. que se utilizan para sujetar las láminas portaobjetos que contiene la preparación a observar. engranados respectivamente a cada una de ellas. quedando la parte posterior del lente frente al tubo ocular. 50 : Revólver portaobjetivos La platina Fig. mientras que en otros. Fig. Presenta en su porción central un orificio circular de unos 5 cm de diámetro. 5l: Diferentes formas de platinas y pinzas La platina es una doble plataforma metálica de color negro o gris de aspecto mate.

con el borde estriado transversalmente para facilitar el agarre manual al imprimirle movimientos de rotación. lo que no le permite engranarse directamente a la cremallera. lo que facilitará la localización del campo con rapidez sin tener que rastrear toda la preparación. junto con un nonio. el macrométrico. los microscopios están provistos de otros 3 tornillos. Esta diferencia mecánica propicia un desplazamiento muy lento del tubo óptico. el micrométrico y el del elevador del condensador. de similar manera el tornillo micrométrico. lo que propicia al accionar el tornillo. 101 . sino a través de un piñón similar al del tornillo macrométrico que tiene acoplado un uno de sus laterales a otro más pequeño con los dientes a igual distancia que los del tornillo micrométrico. Cuando los tornillos son introducidos en sus orificios respectivos solo quedan externamente sus cabezas.La mayoría de los microscopios que se emplean en la actualidad. Estructuralmente ambos tornillos son iguales. En otros modelos de microscopios el tubo óptico es fijo y la distancia focal se consigue. El piñón del tornillo macrométrico tiene separado los dientes a la misma distancia que los de la cremallera. y en el borde lateral derecho otra con el rango de 80 a 110 mm provista igualmente de un nonio. con el que se logra la nitidez del enfoque. algunos microscopios presentan dos orificios. Estas escalas permiten al microscopista ubicar la posición de un campo microscópico que desea posteriormente volver a ver. transformar el movimiento rotatorio del piñón en movimiento rectilíneo del tubo óptico en dirección ascendente o descendente para hallar la distancia focal. con la única diferencia de que el tornillo micrométrico es más pequeño. uno debajo del otro. En cambio el piñón del tornillo micrométrico tiene los dientes más unidos. tienen grabada sobre el borde frontal de la platina una escala graduada de 0 a 80 mm. que lo atraviesan de lado a lado. En el que está ubicado en la parte superior se inserta el tornillo macrométrico (uno por cada lado) y en el orificio inferior. Tornillos Además de los tornillos de la platina. El vástago helicoidal de cada tornillo que penetra en el orificio termina en un pequeño piñón (rueda dentada) que se engrana a la cremallera del tubo óptico. para lo cual anotará las coordenadas que le proporcionan ambas escalas. lo que propicia imprimirle movimientos rápidos de desplazamiento al tubo óptico con lo que se consigue con prontitud el enfoque grosero de la preparación. Es la parte superior del brazo. las cuales son de forma circular con un tamaño de varios cm de diámetro por 1 ó más de ancho. mediante el desplazamiento ascendente o descendente de la platina.

Este tornillo queda muy próximo al condensador y se acciona en uno u otro sentido según sean los requerimientos de iluminación de acuerdo al tipo de microscopía que se vaya a realizar. Diferentes partes El sistema óptico está formado por las diferentes partes provistas de lentes y de las que intervienen en la iluminación. Sistema óptico. quedando el micrométrico insertado en el centro del macrométrico. 52: Lentes oculares 102 . una de sus dos superficies. convexa. siendo al menos. ambos tornillos están acoplados. El funcionamiento para subir o bajar el condensador tiene el mismo mecanismo que el empleado para los tornillos macrométricos. mediante los tornillos macrométricos y micrométricos. mientras que en otros.por un mecanismo similar. Lentes oculares Fig. Miden desde unos pocos mm hasta varios cm y tienen la propiedad de proporcionar una imagen del objeto observado aumentada de tamaño. siendo las siguientes: _ Lentes oculares _ Lentes objetivos _ Condensador _ Diafragma _ Espejo _ Fuente de luz _ Filtros Los lentes Los lentes empleados en la fabricación de los microscopios son discos pulidos y transparentes.

Los lentes oculares que se utilizan con mayor frecuencia.1 cm de diámetro y está ubicada en el extremo posterior del tubito. la primera es un fino tubito que contiene las lentes. que se haya insertado en la porción media del tubo. son los que proporcionan los siguientes aumentos: 6x. quedando la aber103 . que a diferencia del que porta las lentes oculares. La segunda lente es biconvexa. está calibrado para que pueda ser insertado en el interior del tubo óptico.9 cm. En algunos modelos esta lente se encuentra empotrada en la misma tapa. 8x. están formados por un sistema de varias lentes.. que le sirven de soporte. a pocos mm de su terminación se va estrechando cónicamente. La lente ubicada en el extremo superior mide 1. teniendo el lado plano dirigido hacia el interior del tubo. mide 2. como si se hubiera cortado la punta del cono. lo que significa que esa lente aumenta virtualmente el tamaño real del objeto observado en una imagen 10 veces mayor. Este pequeño tubo. que indica su poder de ampliación.7 cm de diámetro. mediante la combinación de varias lentes con distintos radios de curvatura o suprimiendo por medio del diafragma anular los rayos que atraviesan la porción periférica de la lente.5x y 15x. Por ejemplo: 10x.Antiguamente los lentes oculares disponían de una sola lente. Lentes objetivos Los lentes objetivos constituyen la parte más importante del sistema óptico del microscopio. está formado por tres piezas desarmables. que al ser enroscada suavemente la lente inmovilizándola. mientras que el extremo frontal o inferior. para finalmente terminar plano.. quedando separados entre sí. provisto de rosca en su extremo posterior. la imagen formada ampliada por el lente objetivo y corregir las aberraciones cromáticas y de esferidad debidas a la curvatura de la lente. es plano-convexa. pudiendo ser observada a través del orificio. La tapa tiene grabado en su superficie un número seguido de una "x". ya que mediante su poder de resolución es posible observar separados dos objetos microscópicos muy próximos entre sí. por un diafragma anular en forma de arandela. el cual dispone de una tapa de rosca de color negro provista de un criterio central de 1. portador de las lentes. pero desde hace años se viene utilizando un sistema de 2 lentes colocados en el interior de un pequeño tubito cilíndrico de 2. colcadas en el interior de un pequeño tubito cilíndrico. Al igual que los lentes oculares. Los microscopios monoculares están diseñados para trabajar con un solo lente ocular y los binoculares con dos. quedando retenido en su descenso por el borde de la tapa que tiene un mayor diámetro.2 cm de diámetro x 3 ó más cm de largo. los lentes objetivos. La función de los lentes oculares es la de ampliar virtualmente. 10x. 12.

Debido a su baja potencia de ampliación no es posible observar con este lente a las bacterias. con rosca interna. quedando un espacio de aire entre la lámina cubreobjetos y la lente. aunque todavía insuficiente para observar con nitidez microorganismos 104 . mayor será su capacidad de ampliación. es una cánula cilíndrica que se ensambla a la base por la rosca externa del mismo saliente donde se enroscó el tubito portador de las lentes por su rosca interna. son más largos. protozoarios y otro microorganismos de dimensiones microscópicas muy pequeñas. la cánula rodeará a todo el tubito menos por extremo cónico. mediante la rosca que se encuentra en el lado opuesto. por donde se puede observar la cara plana de la lente plano convexa que está en contacto con el pequeño orificio. proporcionan un aumento mayor que el explorador. Al quedar ensamblado el lente objetivo. por lo que se le conoce también como lente explorador. Este tipo de objetivo se fabrica. los cuales están diseñados con rosca externa y uno solo de ellos. La tercera pieza. una especie de unión universal. con diferentes potencias de aumento. además.2 cm de diámetro x 2 ó 3 mm de grosor. b) Objetivo de imersión Existen dos tipos de lentes objetivos. El de menor aumento (5x ó 6x) es el más corto de todos y se caracteriza por proporcionar la observación de un área extensa de la preparación. En estas condiciones el lente objetivo podrá ser colocado en uno de los orificios del revolver portaobjetivos. estriada transversalmente como algunas monedas. los secos y los de inmersión. Esto se debe a que las lentes oculares deben ser pequeñas. es la base. por donde se enrosca el tubito portador de las lentes. Diferentes tipos de lentes objetivos Fig. ya que entre menor sea su diámetro. La segunda. Los lentes objetivos de 10x ó 20x. Los objetivos secos alcanzan la distancia focal a varios cm por encima de la preparación.tura del tubo con un diámetro reducido de 1 a 5 mm. 53 : Lentes objetivos: a) Objetivos secos. de 2. teniendo por ambos lados un saliente anular adjunto de menor diámetro de 2 ó 3 mm de longitud.

Para evitarlo. resultando aún insuficiente para la observación pormenorizada de bacterias. ya que las demás ubicadas dentro del tubito son de corrección. cuando se utilizan lentes objetivos secos. a pesar de que la distancia que separa a la lente de la preparación sea escasamente de 1 mm. Lente de inmersión se diferencia de los secos. mide escasamente 1 mm de diámetro. El líquido empleado tradicionalmente ha sido el aceite de cedro. En el orificio anterior del tubito. como para permitir la observación detallada de algunos microorganismos como protozoarios y hongos. Al cubrirse el espacio de aire por el aceite los rayos de luz que han atravesado la preparación asciende perpendicularmente hacia la lente sin refractarse significativamente. que abarca un área más reducida de la preparación. se introduzca unos mm dentro de la externo. particularmente de las cocáceas por su íntimo tamaño. está estructurado por dos tubitos de diámetro ligeramente diferentes. no solo por ser más largo. Como el espacio de la distancia focal es tan reducido se corre el riesgo de incurrir en la impericia de presionar la preparación con el lente. sino además. de ahí. disponiendo además de un pequeño resorte que mantiene fija a las dos partes. Para evitar estos accidentes.52. generalmente.muy pequeños como las bacterias. el tubito portador de las lentes se diseña de forma retráctil. El más largo de los tres es el de 40x ó 45x. Los rayos de luz al pasar de un medio a otro con diferente índice de refracción tiende a desviarse por reflexión. Cuando se emplean objetivos de inmersión. una franja de color negro a su alrededor y grabadas en su cánula la sigla HI(Homg Inmersión) u OI(Oil Inmersión). Este lente se conoce también como seco fuerte. ocurre. volviendo a su posición normal cuando cesa la presión. que para poder captar los rayos luminosos procedentes del condensador. provocando no solo la ruptura de la lámina. Este lente se le conoce también como seco débil. pero proporciona un aumento lo suficientemente amplio. aunque pueden ser factibles a microscopistas con experiencia para identificar huevos de helmintos y otros elementos de interés de tamaño similar. en ocasiones irreparables a la propia lente. células. este fenómeno ocurre. se haya la lente frontal. sino además pudiendo ocasionar daños. en el que quede inmersa la lente. así como: huevos y larvas de helmintos. cuyo índice de refracción es de 1.5 mm de la misma. que es de 1. se debe colocar sobre la preparación una gota de un líquido cuyo índice de refracción sea más elevado que el del aire y muy próximo al vidrio de la lente. lo que sí. como si fuera un pistón. que han atravesado la preparación. que tenga que estar situado a 1 ó 1. por tener. pero posibilitando que cuando la parte inferior que contiene la lente frontal sea presionada sobre la lámina. lo que propicia que el ponga las lentes pueda introducirse calibradamente dentro del otro. artefactos y otros elementos de interés de tamaño similar. generalmente. así como su potencia de aumento (90x a 100x) que depende enteramente del grado de ampliación que proporcione la lente frontal.52. 105 .

Por lo tanto el aumento total sería de 200x. siendo de mayor tamaño. con el extremo de su vértice cortado. La función de los lentes objetivos es formar la imagen del objeto observado y ampliarla virtualmente de acuerdo a su potencial de aumento. La segunda lente es biconvexa.El aceite de cedro tiene el inconveniente de oxidarse con el aire.10=200. que con el tiempo afecta la calidad de la lente. donde se encuentra un orificio de menos de 1 cm de diámetro. 54: Condensador luminoso El condensador de campo claro o brillante. ubicadas en el interior de un dispositivo cilíndrico de 3 cm de diámetro. pero dañando menos las lentes. tamaño. por lo que. Aumento total que proporciona el microscopio: Para conocer el número de diámetro en que se amplia virtualmente el objeto observado. 20. encontrándose ubicada por su lado menos curvo a corta distancia de la lente más pequeña. El condensador se introduce de abajo hacia arriba. en la actualidad se emplean otros aceites para microscopios más estables. se procede a multiplicar el valor de ampliación que está grabado en el lente objetivo. Condensador Fig. está compuesto por 2 lentes convergentes de desigual. siendo inmovilizado mediante un fino tornillo. quedando ambas lentes en posición perpendicular 106 . por el valor de ampliación del lente ocular. adquiriendo una consistencia muy viscosa. aunque se limpien adecuadamente después de su uso. dentro de un dispositivo anular. Ejemplo: si la ampliación del lente objetivo fuera de 20x y el del ocular 10x. ocupado por la cara plana de la lente más pequeña que es planoconvexa. que tiene la parte superior ligeramente cónica. que se haya justamente debajo del orificio de la platina. entonces. con las mismas ventajas.

Este dispositivo a su vez.con respecto al lente objetivo. muy próximo a su base. consistente en un fino disco metálico. muy próximo a la base. debajo de la lente biconvexa. a la formación de un orificio de diámetro variable en el centro del diafragma. formando un cono de luz. 55: Diafragma: a) Diafragma iris. por la convergencia de los rayos de luz que al atravesar todo el sistema. estando provisto de un tornillo engranado a una cremallera. sucedería todo lo contrario. está articulado a una pieza angular que lo fija a la parte inferior del brazo. Diafragma de Iris Fig. La función del condensador es hacer los rayos luminosos procedentes directamente de la lámpara e indirectamente por reflexión del espejo. para después atravesarlo y seguir su trayectoria perpendicularmente. encontrándose acoplado en el extremo del orificio posterior del condensador. en cuyo vértice se intensifica un foco luminoso. una ranura que los bordea horizontalmente. El condensador presenta. diseñado con múltiples laminillas planas superpuestas consecutivamente que adoptan el aspecto de un abanico plegable. que puede ser desplazada hacia delante o hacia atrás de la ranura. lo que da lugar. salen paralelos al eje principal incidiendo sobre el objeto a observar. cubriendo todo ese diámetro. se refracten (desvíen) al atravesar las lentes convergentes. al recogerse. con lo que se logra una mayor iluminación que resulta imprescindible cuando se hacen observaciones a grandes aumentos. de cuyo interior sale una pequeña palanquita plana. Cuando el movimiento se produce hacia delante. las laminillas del diafragma se despliegan hacia el entorno del cilindro. b) Diafragma anular. ya que las laminillas se desplazarían 107 . muy próxima a la cara posterior del portaobjetos reduce la divergencia de los rayos de luz. que se utiliza como elevador del condensador al propiciar con su accionar su desplazamiento vertical ascendente o descendente. Su colocación. Es un accesorio del condensador. según sea necesaria una mayor o menor intensidad de luz. hacia la lente frontal del objetivo. Si la palanquita fuera hacia atrás. sino divergen.

dándole un aspecto de horquetilla. para seleccionar la cara a emplear o conjuntamente. 56 : Espejo El espejo de los microscopios es circular. para hallar el ángulo adecuado que propicie la reflexión del espectro luminoso procedente de la lámpara hacia el condensador. donde se encuentra separada. La primera se utiliza cuando la fuente de luz es natural y la segunda cuando se emplea iluminación artificial. deben proporcionar para la microscopía ordinaria. cerrándose. En los microscopios modernos. afectan la calidad de la observación se cierra total o parcialmente el diafragma y cuando necesitamos más intensidad de luz se va abriendo hasta obtener la requerida. uno de los cuales tiene la superficie plana y el otro cóncava. El extremo posterior del vástago se introduce en un orificio presente en el extremo inferior del brazo donde se fija. para reducir progresivamente el diámetro del orificio. lejos de beneficiar. mide unos 5 cm de diámetro y consta de dos espejos adosados por su reverso. teniendo por cada lateral de su línea ecuatorial. mediante la rotación del vástago. la lámpara está acoplada en la base aunque todavía se utilizan modelos. El diafragma se utiliza para regular la cantidad de rayos luminosos que deben pasar al interior del condensador. como parte del módulo del microscopio óptico. En ambos casos la lámpara forma parte de un soporte diseñado para proyectar me108 . Ambos espejos se encuentran montados conjuntamente dentro de un fino aro metálico de unos 5 mm de ancho que les sirven de marco. una luz monocromática de corta longitud de onda. Cuando pretendemos realizar una microscopía donde el exceso de iluminación. mediante las articulaciones laterales. Lámpara Las lámparas utilizadas. De esta manera el espejo puede ser movido por rotación.hacia el centro. un fino orificio de 1 mm de diámetro por donde se articula a dos pequeños salientes puntiformes que se hayan en cada extremo de una planchuela curva acoplada por su centro a un pequeño vástago cilíndrico. Espejo Fig.

de manera similar a como lo hace una linterna.diante un reteden sus emanaciones como un cono de luz. para que los rayos sean dirigidos por reflexión hacia el condensador. Fig. que se caracterizan por ser transparentes. 58 : Filtros Son dispositivos de vidrio. _ La capacidad de formar imágenes. Filtros Fig. diafragma y reóstato. Principios básicos Los principios básicos en que se sustenta el empleo utilitario de los microscopios son esencialmente de: _ Su poder de resolución. debe proyectarse el haz de luz de manera que incida directamente sobre el espejo. La mayoría de dichos soportes se fabrican con diversos aditamentos para optimizar el empleo de la iluminación. 57 : Lámpara Cuando la lámpara está separada del microscopio. tales como: portafiltros. Su función es la de absorber las longitudes de ondas de determinados colores para proporcionar una luz que mejore la observación microscópica. 109 . este último para regular la intensidad de la luz. miden de 2 a 3 cm de diámetro y tienen un determinado color. esféricos y planos.

las limita cuando el tamaño de la longitud de onda de la luz. observándose los elementos que están a la izquierda de la preparación. 110 . entrecruzándose entre sí. Al reunirse en la lente todos los rayos. por lo tanto su poder de resolución es de 0. su poder de resolución será mayor. lo cual está delimitado por la menor distancia entre dos puntos muy próximos entre sí. Como el microscopio está estructurado con lentes que amplían virtualmente la imagen del objeto real. Percepción de la imagen Los rayos del haz de luz empleados en la microscopía. Formación de imágenes En dependencia del grosor y la densidad óptica que tenga cada parte del objeto a observar.2 mm. dispersando o concentrándose. el ojo humano no puede distinguir la separación de dos puntos que estén a menos de 0. Por ejemplo. lo que da lugar a que la imagen del objeto llegue a la retina del ojo con una ubicación invertida. pudiendo alcanzar hasta 0. darán lugar a una diversidad de tonos y matices con los que se produce la formación de imagen. los rayos de luz que lo atraviesan sufren un retraso proporciona en su trayectoria con respecto a los que siguieron directamente hacia el lente objetivo. Si la distancia se acortara y el poder de resolución del observador ya hubiera llegado a su límite . no ascienden perpendicularmente a través del sistema óptico. ya que al atravesar en su trayectoria. que tienen diferentes densidades ópticas se refractan (desvían) en cada ocasión. en dependencia del aumento. no podrá distinguir la separación entre ambos puntos y para su percepción estarán unidos.Poder de resolución El poder de resolución es equivalente a la potencia de observación. así como los espacios de aire. las diferentes lentes y la preparación . a la derecha del campo microscópico y los que están arriba se observan debajo o viceversa. por lo que cualquier objeto con un tamaño inferior a esa medida le resultará imperceptible. en que es posible observarlos separadamente. las sombras producidas por la densidad óptica de cada parte del objeto y la oscuridad proporcionada por su grosor.2 (micrómetros) estando limitada su potencia a esa magnitud.2 mm de distancia. el brillo ocasionado por los que no tuvieron interferencia.

4. 2. Si el microscopio carece de espejo por disponer de una lámpara acoplada en su base. Mueva la palanquita y abra el diafragma. Si el microscopio fuera monocular.. Pasos a seguir 1. lo cual se podrá constatar cuando el campo microscópico se observe completamente iluminado. que resulte cómoda para la manipulación y observación a través del microscopio. 111 . Si fuera un microscopio binocular. proceda a mover convencionalmente el espejo de manera que los rayos de luz procedentes de la fuente de iluminación se reflejen y los desvíen hacia el condensador. 6. 59 : Percepción de la imagen microscópica Indicaciones para el manejo del microscopio óptico El requisito primordial para efectuar una adecuada microscopía es.Si requiere utilizar el espejo. seleccionar la cara plana o cóncava. 5. Cerciorarse de que el aumento del lente ocular es el pertinente para el tipo de microscopía que va a realizar. con lo que afecta la calidad de los resultados . 3.Fig. procediendo a manipular el espejo en la forma explicada. Bastará con encenderla. La silla o banqueta utilizada por el microscopista debe tener un altura adecuada en relación con la mesa. preferentemente de color negro y aspecto mate para que no se refleje la luz. el de disponer de condiciones mínimas de confort para su realización. Cuando éstas no existen o son deficitaria la tendencia es el apresuramiento. Accione el tornillo del elevador y suba el condensador. según sea el tipo de iluminación a emplear (natural o artificial). mirando por la lente ocular. en este sentido la superficie de la mesa o meseta donde esté colocado el microscopio debe ser lisa y sólida. Rote el revolver portaobjetivos y coloque sobre el hueco de la platina el lente objetivo de menor aumento. que logrará con exactitud cuando vea un solo campo. debiendo tener respaldar. previamente. mueva lateralmente los lentes hasta Hacerlos coincidir con la distancia intrapupilar.

Nota. Si el enfoque se realizó con objetivo seco de poco aumento y se requiere un objetivo de más aumento. Ajuste la altura del condensador y la abertura del diafragma a las necesidades de iluminación de la microscopía que vaya a efectuar. Con ayuda de los tornillos de desplazamientos laterales o frontales mueva la preparación hasta situarla debajo del lente objetivo. quedando aproximadamente a 1mm de la lámina. 11. Entre las más empleadas en el laboratorio de microbiología se encuentran las siguientes: _ Microscopía de campo oscuro. Coloque la lámina portaobjetos con la preparación sobre la platina y fíjela con las pinzas. con ayuda del tornillo macrométrico el lente objetivo seco. Si fuera a utilizar el lente de inmersión. pero no siempre resulta eficaz para la realización de determinados exámenes. Si el microscopio está debidamente ajustado. Para recorrer la preparación y observar los campos necesarios. 112 . Ladeando la cabeza. aproxime. alterne los ojos durante la observación y mantenga el que no esté utilizando abierto.7. proceda a separar lentamente el lente objetivo de la preparación con ayuda del tornillo macrométrico hasta que logre avizorar la imagen microscópica. requiriéndose otras variantes microscópicas con las que se pueda obtener los resultados requeridos. hasta que quede a 4 ó 5 mm de la preparación. Otras variantes del microscopio óptico El microscopio óptico de campo brillante es el que se utiliza corrientemente en el trabajo cotidiano del laboratorio. 10. rote el revolver portaobjetivos y sitúe sobre la preparación el lente requerido. accione con su mano derecha los tornillos de la platina y desplace la lámina en diferentes direcciones. Si la microscopía a realizar requiere de filtro. 8. 13. Mirando por el lente ocular. coloque previamente sobre la preparación una gota de aceite de cedro y al aproximar la lente haga que ésta contacte con la gota de aceite. para observar directamente la operación. al cambiar el lente objetivo debe quedar enfocado el mismo campo pero con menos radio de observación. y con su mano izquierda accione el tornillo micrométrico para ir corrigiendo el enfoque cuando la lámina esté en movimiento. 12. 9. Seguidamente gire el tornillo micrométrico hasta que el enfoque sea nítido. utilice el correcto. Si está utilizando un microscopio monocular.

_ Microscopía de fluorescencia. 113 . Cualquier objeto colocado en la trayectoria de los rayos luminosos será atravesado por éstos o iluminados indirectamente. Fig. Los rayos que atraviesan las partículas que se hayan en la preparación. que vera como resultado un campo microscópico de color negro (campo oscuro)._ Microscopía de contraste de fase. no ilumina por lo tanto los ojos del observador. Como el rayo de luz no penetra en el tubo óptico. 60 : Condensador de campo oscuro Este tipo de condensador está provisto de un aditamento circular opaco. diseñados de tal manera que puedan ser intercambiables. el condensador de "Abbe". los que al refractarse en su interior. tubos ópticos. de similar manera. de menor diámetro que el orificio posterior que se encuentra ubicado debajo de la lente. atraviesan la lámina portaobjetos en forma oblicua como un cono hueco de luz con su vértice hacia abajo. comercializan modelos multipropósitos. Microscopía de campo oscuro Para la realización de este tipo de microscopía se procede a retirar del microscopio óptico. o las iluminan indirectamente. En la actualidad las empresas dedicadas a la fabricación de microscopios. colocando en su lugar uno de campo oscuro. etc. teniendo la función de impedir el paso del haz de luz hacia el área central del condensador posibilitando solamente la entrada de los rayos periféricos. crean un efecto que proporcionan la observación de las partículas con un aspecto brillante sobre fondo oscuro. condensadores. que cuando se observan las estrella en la noche.

Al proseguir su trayectoria estos rayos atraviesan el aro 114 . la microscopía ordinaria no posibilita que se pueden detectar las diferencias.La microscopía de campo oscuro se utiliza para la observación de microorganismos y otros elementos de interés que no resultan factibles de ser coloreados. Fig. sí cambian diferenciadamente la fase (dirección) de la onda luminosa. Esta placa se sitúa debajo del lente ocular. b)Placa de cambio de fases Funcionamiento: Debido a la forma anular del diafragma. pero al tener diferencias en la densidad de sus respectivas estructuras. Diafragma anular: Es un disco opaco. Como el ojo no es sensible a los cambios de fase por ser muy imperceptibles. 6l: Aditamentos para la microscopía de contraste de fase: a) Diafragma anular. Placa de cambio de fase: Es una placa transparente de forma circular. de unos 2 cm. que tiene en su diámetro medio un aro de vidrio óptico. prosigue su trayectoria por el tubo óptico hacia el lente ocular. de manera que al haz de luz que lo atraviesa pasa al condensador como un aro hueco de luz. que presenta en su diámetro medio un aro transparente. El método de contraste de fase proporciona que se pongan en evidencia cambios de fase mediante su amplitud lo que hace posible distinguir por contraste las estructuras celulares entre sí y diferenciar a estas de su entorno. Al no sufrir efectos tóxicos de las sustancias colorantes se mantienen viables. no cambian significativamente la amplitud de los rayos de luz que las atraviesan. Este disco se acopla en la parte inferior del condensador. la luz pasa al condensador en forma de aro. Microscopía de contraste de fase Las diferentes partes de las células. lo que permite estudiar su motilidad. mientras que los rayos no pasan alrededor del objeto se dispensan. Al atravesar el objeto. Para la realización de la microscopía de contraste de fase se requiere acoplar dos aditamentos al microscopio ordinario: un diafragma anular y una placa de cambio de fase. obviamente.

Como resultado los rayos que se refractan para luego pasar por el anillo óptico de la placa de cambio de fase. obtenida mediante la aplicación de ciertos compuestos denominados fluocromos. en que no utiliza directamente la luz incidente.de vidrio óptico de la placa de cambio de fase. sin la aplicación de colorantes. difiere del de otras formas de microscopía óptica. sino que emplea fuentes indirectas de energía luminosa. sufren un notable retraso en su velocidad de traslación con respecto a los rayos que transitaron normalmente después de atravesar el objeto. que posibilitan su observación con una microscopía ordinaria. sombra u oscuridad. Empleo: Cuando no existen marcadas diferencias en la densidad óptica de las diversas estructuras celulares o el índice de refracción entre las células y los líquidos circundantes no están suficientemente contrastados en cuanto a brillo. Fig. lo que ocasiona un acentuado contraste de brillo y oscuridad que propicia distinguir por contraste los componentes de la estructura celular. que tienen la propiedad de absorber la luz 115 . para observar microorganismos presentes en líquidos igualmente transparentes. haciendo factible la realización de exámenes directos en fresco. Microscopía de fluorescencia El principio de este método. 62: Trayectoria del haz de luz en la microscopía de contraste de fase La placa de contraste de fase amplía significativamente las diferencias entre las ondas luminosas refractadas y las que no lo están.

dando como resultado que la imagen del objeto enfocado se vea. 2. teniendo la función de absorber la longitud de onda de la luz ultravioleta. donde los rayos ultravioletas son absorbidos por el filtro de barreras. para que no haya pérdida de energía luminosa. fluorescente sobre fondo negro. penetra en el condensador de campo oscuro y al salir se refleja oblicuamente sobre el objeto teñido o conjugado con fluocromo el cual absorbe las radiaciones y posteriormente se propaga en una longitud de onda más larga que es visible (fluorescencia). con un cambio de longitud de onda. que no sirvan para exitarlo. 4. el espejo debe estar debidamente alineado con el eje del microscopio. en forma de luz fluorescente (fosforescente) a mayor longitud de onda. los rayos incidentes de luz ultravioleta como la fluorescencia generada por los fluocromos. Funcionamiento En el caso en que se utilice luz refleja. a través del lente ocular. Fuente de luz: Consiste en una lámpara de mercurio o xenón de alta presión que produce con firmeza y fuerza sostenida ondas luminosas en el espectro ultravioleta. después de haber interactuado con la luz ultravioleta de onda corta. Filtro de barrera: Está situado en el interior del tubo óptico.ultravioleta de onda corta y emitirla posteriormente. atraviesan la lente frontal del objetivo en el tubo ocular. Tanto. Filtro primario: Este filtro se sitúa entre la fuente de luz y el condensador y su selección debe estar en correspondencia con el fluorocromo empleado ya que tiene la función de eliminar las longitudes de ondas de la luz. Entre los fluocromos más empelados se encuentra la auramina y la naranja acridina que se utilizan para la tinción directa de microorganismos y otros como el isotiocinato de fluoresceína que pueden ser conjugados a anticuerpos y se emplean en técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFA). diferenciándose en que dispone de los siguientes aditamentos: 1. después de atravesar el filtro primario seleccionado. Condensador de campo oscuro: Para concentrar la luz ultravioleta sobre la muestra y lograr un mayor grado de Fluorescencia. 3. La luz ultravioleta. procedente de la lámpara. sin interferir el paso de la luz emitida por el objeto. mientras que la luz fluorescente lo atraviesa y la imagen virtual 116 - . La estructura del microscopio de fluorescencia es similar a la del microscopio óptico común. durante algún tiempo. Mediante este filtro se protege la vista del observador de los efectos de la exposición a las Radiaciones ultravioleta.

desde posiciones diferentes. un prototipo de microscopio estereoscópico consistente en el ensamblaje de dos tubos ópticos independientes. microorganismos difíciles de colorear. no solo en su diseño. Observaciones Mediante este tipo de microscopía se pone de manifiesto. en el principio de su poder de aumento y en la finalidad de su empleo. ya que el aceite de cedro es fluorescente. Cryptosporidium sp. Diseño Durante muchos años se ha venido utilizando. por ser los mismos fluorescentes. 117 . Precauciones Se pueden emplear lentes oculares y objetivos de uso común. MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO El microscopio estereoscópico difiere del microscopio óptico convencional. diferencias de coloraciones de diversos tejidos. sino además. desde ángulos diferentes hacia ambas lentes. así como para la detección rápida de antígenos virales. Giardia lamblia y otros. que alterarían los resultados. diseñados para que cada ojo del microscopista observe la imagen ampliada por un lente objetivo común. siempre que se tenga la certeza de que no estén fabricados con material fluorescentes. como las espiroquetas y otros agentes microbianos como: Chlamydia trachomatis. lo que propicia una visión estereoscópica o tridimensional del objeto. provistos de un prisma que refleja la imagen. sin ningún tratamiento con fluorocromo.del objetivo es observado a través de la lente ocular con un aspecto fluorescente. En la actualidad se fabrican modelos más modernos. Empleo Este tipo de microscopio posibilita examinar. Para las observaciones con objetivos de inmersión se debe utilizar un aceite especial.

Estos microscopios no poseen condensador ni diafragma. que se utiliza para aproximar o alejar al lente objetivo del objeto a examinar. en cuya porción central se encuentra un orificio de unos 7 cm de diámetro cubierto por un cristal nevado. proporcionando una iluminación tenue y otra instalada en la articulación que sostiene al sistema de los lentes. Este microscopio está provisto de un tornillo único. articulado a una cremallera. generalmente dos. cuyos rayos atraviesan el cristal nevado de la platina.Fig. no invirtiendo su posición como sucede con el microscopio de uso común. lo que proporciona un aumento potencial total. que proyecta la luz en dirección oblicua sobre el objeto dando la posibilidad de observar cuerpos opacos. Principio El principal funcionamiento del microscopio estereoscópico no está basado como en el microscopio óptico en el poder de resolución. se encuentran montados en el interior de un revolver tubular y se caracteriza por tener un bajo poder de aumento (2x o 4x). entre 10x y 40x. estando estructurado por una base de 4 ó 5 cm de altura que le sirve al mismo tiempo de platina. El sistema de iluminación consiste en dos lámparas. mientras que el de los lentes oculares oscila de 5x a 10x. una que se haya en la base del microscopio. sino en su capacidad directa de aumento. 118 . 63 : Microscopio estereoscópico Los lentes objetivos. por lo que la imagen ampliada se observará en el campo microscópico en el mismo plano que el objeto real.

. se corresponda con el requerido para ese microscopio. .CUIDADO. . . Las causas que afectan con mayor frecuencia su óptimo estado de funcionamiento y por consiguiente su eficacia son: el polvo. No utilice el alcohol para estos menesteres. la humedad y los inadecuados métodos de limpieza. Cuando suceda. 2. reactivos u otros compuestos orgánicos sobre la platina. separe el lente objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico. Al concluir su utilización.Ubique el microscopio sobre una mesa o meseta sólida de superficie nivelada.Antes de retirar la lámina. Durante su empleo .Apague la lámpara. Con esta acción se protege al filamento que puede quebrarse por cambios bruscos de la temperatura si no se toma esa medida. En caso de em119 . ya que un error en este sentido ocasionaría la ruptura de la lámpara y en el mejor de los casos se produce una disminución de la intensidad lumínica con la consiguiente pérdida de nitidez de la imagen. reduzca la luz antes de apagarla. Se utilizó lente de inmersión. cerciórese de que el voltaje de la toma. sino porque resultan imprescindibles en el laboratorio para el examen de diferentes muestras. Si se trata de un modelo con regulador de intensidad. pues pueden desprender la lente del cemento que la fija al dispositivo tubular inutilizable. separándolo ligeramente de la orilla para evitar que accidentalmente pueda caer al piso y dañarse. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO Los microscopios son equipos que requieren de un cuidado esmerado para su buen funcionamiento y prolongación de su vida útil.Si accidentalmente se produce derramamiento de agua. Cuidado 1. remueva el aceite empleado con papel para lentes o un paño de tela fina que no ocasione ralladuras. para evitar roces con la lente frontal que pueden dañarla. la suciedad. no permita que se sequen por evaporación ya que pueden formarse costras o sufrir efectos oxidantes que deterioran su construcción y en consecuencia su funcionamiento. no solo por su elevado costo.Antes de instalarlo a la red eléctrica. los fuertes impactos. seque de inmediato la platina con material absorbente y seguidamente límpiela con un paño de lino fino o gamuza. que no puede ser resuelto por ningún otro procedimiento que no sea la microscopía.

La limpieza de las lentes del condensador se hará. para evitar que se produzca el mismo efecto que con el empleo del alcohol. cuyo soporte no debe abrirse nunca. . que se utilice exclusivamente para eso o un paño de lino fino o gamuza para la suciedad. un pincel fino y plano. . haga rotar el lente sin sacarlo del tubo ocular. de ahí. pues de lo contrario se corre el riesgo de que sufran un daño irreparable. si persisten. . que de manera frecuente está ocasionada por la grasa de la pestañas y los cosméticos. Después de realizada la limpieza de la manera explicada colóquela nuevamente en el tubo ocular y compruebe que las manchas han desaparecido. con igual cuidado externamente. en ese caso. Del sistema mecánico. Cuando se requiera su limpieza se debe emplear. para remover el polvo. no requiriendo cuidados especiales.plear xilol. desenrosque el tubito portador de las lentes y proceda cuidadosamente a su limpieza. las manchas rotan con la lente. basta con observar a través de ellas el campo microscópico. humedezca ligeramente el paño. sin desarmar el dispositivo. que sean muy susceptibles a la erosión. 2. . realizando el traslado todo el tiempo con el equipo en posición vertical. . de ser posible de pelo de camello. Si después de realizada esta operación la suciedad persiste.El espejo se limpiará con un paño fino. puede deberse a una insuficiente limpieza o que el polvo ha penetrado el interior del lente.Para detectar la presencia de polvo o suciedad en las lentes oculares. absteniéndose de contactar con el diafragma anular que se haya en su interior. para evitar que se salgan los lentes oculares y puedan dañarse.Si tuviera que trasladar el microscopio para otro sitio. Limpieza 1. Del sistema óptico. solo a un personal especializado. correspondiendo.El vidrio con que se fabrican las lentes es blando. cerciórese de que el tornillo del cuerpo binocular lo mantiene fijo. por estar muy impregnado el aceite. volviendo a colocar las lentes en la misma posición en que estaban. La remoción del aceite de inmersión ya fue tratada en el acápite de cuidado. no lo empape. es que está sucia. si se detectan manchas. Sujete el microscopio con una mano por la base y con la otra agarre firmemente el brazo. y cubra el microscopio con un tapacete de nylon con el mismo propósito. limpia la lente frontal del lente objetivo. . 120 .Coloque la tapa a cada lente ocular para evitar que se afecte por el polvo.

cerciorarse de que éstas no tenga humedad que creará un ambiente muy propicio para que las lentes se contaminen con hongos que resultan muy difíciles de remover.Lubricar periódicamente las cremalleras con grasa de buena calidad libre de ácidos. brazo. . . a través de una imagen virtual. utilizar un paño fino impregnado ligeramente con aceite de máquina exentos de ácidos. proporcionada mediante una combinación de lentes y luz visible con un alcance máximo de 2000x. deben ser colocados en dispositivos con tapa de rosca para preservarlos del polvo. .La base. Se limpiarán con un paño. platina. con el que se removerá el polvo y la suciedad de sus superficies.Los lentes que no estén en uso. ¿A qué se debe esta limitación?. Sin embargo los electrones de alta energía tienen una longitud de onda muchísimo más corta que no exceden 0. Aunque se emplearan lentes de vidrio.No debe utilizarse alcohol para limpiar el microscopio pues tiende a deteriorar la pintura. etc. pero todos están constituidos básicamente por tres partes: 121 . cuya combinación. proporcionar una imagen ampliada del objeto real para hacer posible su observación a través del ojo humano.El equipo debe recibir asistencia técnica especializada cada 6 meses.Para pulir las partes metálicas lustrosas. la longitud de onda de la luz visible que es de 400 a 700 m/µ . 3. se logra con el microscopio óptico. pudiera proporcionar más de 2000x. removerla con xilol o gasolina. . - MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Como ya se explicó en la parte inicial de este capítulo. Mantenimiento.Si desea guardar los microscopios en sus cajas. limita esa posibilidad. . El principio del microscopio óptico y el electrónico es el mismo. .5 m/µ lo cual le proporciona un poder de resolución que permite la observación de partículas por menos de una millonésima de mm.La grasa vieja que se ha solidificado o adherido. la ampliación del objeto real. Estructura del microscopio electrónico En la actualidad se fabrican diferentes modelos de microscopios electrónicos. ya que partículas separadas por menos de 200 m/µ escapan a su poder de resolución. pero se diferencian en que el microscopio electrónico en lugar de luz incidente o reflejada utiliza electrones y en el de lentes de vidrio campos magnéticos. .

Proyector de imagen intermedia. Por la parte externa. Condensador magnético circular. 64: Microscopio electrónico: a) Filamento de tungsteno. Porta muestra. diversas pa122 . Pantalla fluorescente. Objetivo magnético circular. Tubos de rayos catódicos Consiste en un tubo cilíndrico de más de 1 metro de largo por aproximadamente 50 cm de diámetro.1. i) Panel de mandos. el tubo presenta en el tercio superior un soporte de atril para la colocación de la preparación y en dirección descendente. que se haya colocado en posición vertical. e) Muestra. Un panel de mandos. 2. c) Bomba de vacio. g) Tubo óptico con lente ocular. f) Proyector de imagen intermedia. h) Pantalla fluorescente. Una bomba de vacío. de arriba hacia abajo. Un tubo de rayos catódicos. 3. En su interior se encuentran instalados. Fig. los siguientes componentes que constituyen su sistema funcional: Filamento de tungsteno. d) Portamuestras. b) Condensador magnético circular.

donde ambas partes se encuentran instaladas. El proyector de imagen intermedia. Encender el equipo. amplia la imagen unas 250. penetrando en el condensador magnético. para seguidamente concentrarse sobre el objeto y atravesarlo. Se extrae el aire que se encuentra en el tubo. para hacer factible la movilización de los electrones.1 mm). con lo que se obtiene un aumento total de 1.000x o más. Se coloca la preparación sobre el porta muestras. 4. los cuales se encuentran impedido de desplazarse en su presencia. Bomba de vacío Está instalada en el tercio superior del tubo. con un funcionamiento similar al del lente ocular del microscopio óptico. de lo contrario resultaría opaca a los electrones no pudiendo ser atravesadas por éstos. En la pared frontal presenta una pizarra con diversas escalas metradas que permiten monitorear y ajustar el funcionamiento del equipo. sin pérdida excesiva de detalles. la cual debe ser extremadamente fina (menos de 0. Funcionamiento 1. La imagen formada por la pantalla fluorescente es ampliada de 4 a 6 veces por el anteojos binocular. La imagen puede finalmente observarse directamente sobre la pantalla fluorescente o proyectarse sobre una placa fotográfica si se desea el registro permanente de la imagen. En la parte inferior del tubo. 2. muy próximo a la base.lancas y manivelas que se emplean para corregir el enfoque. para observar la pantalla fluorescente. con lo que se propicia que los electrones generados por el calentamiento del filamento se propaguen. muy próximo a la base del tubo de rayos catódicos. ampliando su imagen hasta 2000x en forma análoga a como lo hace el lente objetivo del microscopio óptico.000. sometiendo el filamento de tungsteno a una potencia de 30 a 150 kv. 123 . 5. se encuentra acoplado un anteojos binocular centelleante. 3. 6. el ajuste de los campos magnéticos y el funcionamiento de la bomba de vacío. Papel de mandos Está ubicado sobre la mesa de trabajo. mediante la bomba de vacío.000 veces o más.

Describa paso a paso. 2. 8. Desventajas En contraposición a su elevado poder de resolución. Describa como se forma la imagen del objeto observado con el microscopio óptico. Sí Ud. Relacione en el mismo orden en que se encuentran. ¿Con qué objetivo se utilizan los filtros? 11. las diferentes partes del sistema óptico. Entiende por poder de resolución? 12. 2. Describa la forma de los lentes que se encuentran en el interior del condensador de campo brillante. ¿Cuál es el poder de resolución del microscopio óptico? 13. ¿Cuál es la función del diafragma? 7. 6. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión? 9. 14. 16. emplea primero un lente objetivo de 20x y posteriormente un lente objetivo de 40x ¿Cuál de los dos le proporcionará un campo microscópico más amplio? Fundamente su respuesta. ¿Cuál es la función del revolver? 4. Para la observación de partículas víricas. ¿Qué Ud. 5. Nombre las diferentes partes del sistema mecánico del microscopio óptico.Empleo 1. CUESTIONARIO 1. 3. monta una preparación en láminas en el microscopio óptico y la enfoca. la microscopía electrónica tiene la ventaja de que la acción de los electrones resulta letal para los microorganismos por lo que no es posible observarlos en estado viable. como Ud. 10. el objeto a observar y los lentes objetivo y ocular.Para la observación de estructuras bacterianas y de otros microorganismos. Describa la trayectoria que específicamente va siguiendo el haz de luz al atravesar el condensador. Precise cuál es la diferencia funcional entre el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Clasifique los diferentes tipos de lentes objetivos. 124 . Describa la forma que tienen las dos caras del espejo y especifique cuando se utiliza cada uno de ellas. 15.

¿Cuál es la ventaja y la desventaja más significativa del empleo de la microscopía electrónica? 125 . 20. ¿Describa las características estructurales y funcionales del condensador de campo oscuro? 18. ¿Cuáles son las funciones que respectivamente tienen el diafragma anular y la placa de cambio de fase en la microscopía de contraste de fase? 19. ¿Con qué particularidad se observa la imagen del objeto a través del microscopio estereoscópico? 22. Explique las funciones del filtro primario y el filtro de barrera que se utiliza en la microscopía de fluorescencia. ¿Cuál es la diferencia estructural entre un microscopio óptico y microscopio electrónico? 24. ¿Con qué finalidad se realiza la observación a través del microscopio estereoscópico? 23. Describa la estructura del microscopio estereoscópico. 21.17.

CAPÍTULO 9
INSTRUMENTOS MECÁNICOS
INTRODUCCIÓN
La cantidad y variedad de investigaciones que se realizan diariamente en los laboratorios de microbiología clínica , han tenido una marcada tendencia a incrementarse progresivamente en los últimos años, en la misma medida en que estos servicios se han ido extendiendo a todas las unidades del sistema Nacional de Salud. La introducción de instrumentos mecanizados y automatizados para la realización de los diferentes procederes han venido a suplir en alguna medida los métodos tradicionales, con lo cual se ha logrado no sólo una mayor productividad, precisión y ahorro de recursos materiales y humanos, sino que su aplicación, interpone una barrera de bioseguridad que reduce significativamente los riesgos potenciales a los que se ven expuestos los manipuladores. La mecanización sustituye la labor del hombre, mediante el empleo de instrumentos técnicos, regulados por éste, mientras que la automatización comprende además un control intrínseco del instrumento mecanizado que ha sido diseñado para que se autorregule. En los laboratorios de microbiología se utilizan diversos instrumentos de este tipo, pero sin lugar a dudas uno de los empleados con mayor frecuencia es la pipeta mecánica.

PIPETAS MECÁNICAS
En la actualidad se comercializan varios tipos y modelos de pipetas mecánicas. Entre las más empleadas en los laboratorios de microbiología se encuentran: la pipeta de pistón clásica del tipo "Marbung", la del tipo "Jena" y la "Multicanal", que forman parte del sistema micro analítico Eppendorf. En estos tipos de pipetas el líquido se carga y descarga, mediante el accionar manual de la pipeta a una boquilla finamente cónica y puntiaguda de material plástico, que se inserta en el extremo inferior de la pipeta, de manera que el líquido aspirado pasa a la boquilla, pero no entra en ningún momento en la pipeta lo que permite su empleo reiterado, mediante el intercambio en cada ocasión de la boquilla plástica deshechable. 126

El índice de error, dado por los fabricantes, para este tipo de pipeta es de sólo un 1%. Estas pipetas se emplean para medir volúmenes de líquidos en el rango de microlitros. Un microlito es equivalente a la millonésima parte de un litro o la centésima parte de 1 mL.

PIpeta tipo Marburg
Este tipo de pipeta es de pistón fijo, estando diseñada para cargar o descargar solamente, un volumen determinado en microlitros, el cual está indicado mediante un número impreso en la parte superior de la pipeta. Como cada pipeta de este tipo, está limitada para aspirar o dispersar exclusivamente, un volumen fijo para el que ha sido diseñada, los fabricantes la comercializan en serie de: 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 900 y 1000 mL. Estructura externa

Fig. 65 : Pipeta mecánica tipo Marburg

Está estructurada con una cánula cilíndrica de material plástico de unos 2 cm de diámetro, estriada transversalmente para facilitar la sujeción manual. La parte superior de la cánula tiene insertada una anilla plástica prevista lateralmente de un pequeño saliente plano en posición horizontal, que sirve de tope al dedo índice, una vez que la pipeta esté empuñada. Por encima de la anilla, la pipeta se estrecha ligeramente en forma de un cono cortado por su vértice, en cuya pared se encuentra impreso un número que indica el volumen fijo que carga esa pipeta y sobre el número una franja que circula su diámetro, de color amarillo o azul, de varios mm de ancho. La franja de color amarillo distingue a las pipetas diseñadas para cargar 100 microlitros o menos y las de 127

color azul a las que se cargan más de 100 y hasta 1000 microlitros, teniendo esta última mayor diámetro. En el extremo superior de la pipeta se encuentra un botón cilíndrico insertado calibradamente en el orificio que se haya en la parte más estrecha del extremo distal cónico. Por debajo de la cánula se encuentra insertado un fino vástago cilíndrico, ligeramente cónico de material plástico, de unos 5 mm de diámetro, por cuyo extremo se inserta la boquilla plástica deshechable, cuyo color será igual al de la franja que circula la parte superior de la pipeta. Estructura interna

Fig. 66: Estructura interna de la pipeta mecánica tipo Marburg: a) Botón; b) Pistón cilíndrico; c) Muelle; d) Cerrador circular; e) Cilíndro; f)Pieza que cierra herméticamente la pipeta

En el interior de la pipeta se encuentra el sistema mecánico que hace posible, al ser accionado, su funcionamiento, interaccionando las diferentes piezas que lo conforman, de la siguiente manera: el botón que se encuentra externamente en la parte superior de la pipeta, contacta internamente con la parte superior de un pistón cilíndrico que se encuentra rodeado por un muelle flexible, cuyo extremo inferior contacta con el cerrador circular, una especie de zapatilla circular, que por su lado opuesto queda junto a una pieza cilíndrica que en las pipetas de menor calibre tiene insertado centralmente un mandril (aguja), para finalmente terminar en una pieza tubular que completa el sistema. Principio de su funcionamiento 1. Se procede a insertar ajustadamente una boquilla plástica deshechable en el extremo del vástago que sea del mismo color (amarillo o azul) que el que tiene la franja que circula el extremo superior de la pipeta. 128

Fig. 67: Ajuste de la boquilla plástica deshechable a la piapeta

2. Se empuña la cánula, de manera que el borde del dedo índice quede en contacto con el saliente de la anilla que se haya sobre la cánula y la yema del dedo pulgar sobre el botón que se encuentra en el extremo superior de la pipeta.

Fig. 68: Manera de empuñar la pipeta

3. Al presionar con el dedo pulgar el botón hacia abajo, hace que se comprima el muelle, lo que provoca, que el pistón y el resto del sistema mecánico desciendan. 4. Sin dejar de presionar el botón, se introduce la punta de boquilla deshechable, varios mm en el interior del líquido que se desea extraer y se procede a aflojar suavemente la presión del dedo. Esta acción hace que todo el sistema asciende hasta ocupar su ubicación normal, provocando la succión que hace que pase al interior de la boquilla, un volumen exacto de líquido, que será específico para cada pipeta de pistón fijo. 129

5. A continuación se introduce la punta de la boquilla en el tubo de ensayo de manera que quede sobre la pared interna del tubo, procediendo a presionar el botón para verter el volumen fijo de líquido. 6. Si se desea tomar una muestra diferente, basta con intercambiar la boquilla deshechable y repetir la operación.

Fig.. 69: Procedimiento para verter el líquido en el tubo receptor Nota: El intercambio de boquilla debe realizarse con la mano enguantada, depositando la utilizada en un vaso de precipitado con solución desinfectante.

Pipeta del tipo Jena

Fig. 70: Pipeta tipo Jena: a) Botón giratorio; b) Ventanilla con escala en microlitros

130

Las centrífugas La centrifugación es un procedimiento mecánico mediante el cual se pueden separar de un líquido. ubicadas unas al lado de las otras. mediante una sedimentación forzada en el fondo de un tubo de ensayo. Pipeta del tipo multicanal Este tipo de pipeta se sustenta en el mismo principio funcional. lo que propicia que se pueda ajustar el grado de succión de la pipeta dentro de un determinado rango. con lo que consigue variar su nivel de ubicación. . Esta pipeta dispone además en su parte superior. etc. que se encuentre en suspensión.El agitador. teniendo en común. partículas sólidas. como 131 . De esta manera se ajusta previamente la pipeta para que trabaje a un volumen deseado en números externos y décimas de microlitros. para que aspire o disperse un volumen deseado. La particularidad estructural que tiene este tipo de pipeta es que está provista de un botón giratorio en su parte superior. células. aunque difieren en el diseño.El principio funcional es similar al de la pipeta del tipo Marburg. están diseñadas para que se le puedan insertar 8 o más boquillas. compactándolos. comercializándose distintos modelos. EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS Los equipos electromecánicos son utilizados en el laboratorio para la preparación de diferentes muestras o como parte de la realización de diversos procederes. de una ventanilla rectangular provista en su interior de una escala numérica que va aumentando o disminuyendo el valor de los dígitos en la medida en que el botón sea girado hacia delante o hacia atrás. que son accionados mediante energía eléctrica. .Las centrífugas. También puede servir para separar líquidos miscibles mezclados entre sí. Cuando se acciona la pipeta.El rotor. pero difieren en que. mediante el cual se hace descender o ascender al sistema mecánico. en lugar de una sola boquilla deshechable. Entre los más empleados se encuentran los siguientes: . con pesos específicos diferentes. lo que le da un aspecto de rastrillo. cada una de las boquillas succiona o dispersa el mismo volumen de líquido de manera simultánea. muy próximo al botón giratorio. microorganismos.

b) Portatubos. En el extremo de cada 132 . Partes de la centrífuga Fig. Como la centrífuga puede estar diseñada para 4. en forma de barra más o menos plana. donde los compuestos que lo forman. formando una cruceta cuando se trata de centrífugas de dos tubos. no pueden ser separados mediante la gravedad (sedimentación) o la filtración. 6. que se inserta mediante un orificio central al eje del motor. Diseño industrial de las centrífugas Fig. 1. 8 ó más tubos (siempre en número par) el cabezal adoptará la forma que tienen los rayos de una carreta con tantas barras fijas en posición horizontal. La mayoría de las centrífugas son eléctricas y solo algunos modelos ya en desuso se accionan manualmente. 72: a) Cabezal.Cabeza: Es una pieza metálica. 71: Esquema de las centrífugas En la actualidad se fabrican diversos modelos de centrífugas. como tubos pueda centrifugar.las emulsiones. pero todas tienen el mismo principio funcional.

Reloj de intervalo: Se utiliza para regular el tiempo de cada centrifugación. por su parte interna. en suspensión. Cuando no se disponga de este instrumento. generalmente de color rojo. quedando en posición oblicua respecto al eje. determinándose la igualdad en peso mediante la sincronización de su equilibrio. Motor eléctrico: Tiene la función de imprimir movimientos de rotación al cabezal mediante velocidades controladas por medio de un reóstato que varía la intensidad del flujo eléctrico. lo que ocasionaría un desbalance que provocaría vibraciones y sacudidas de la centrífuga con la consiguiente ruptura de los tubos y el desajuste del equipo. diseñada para colocar dos tubos. 5. ya que de lo contrario. la cual será directamente proporcional a su masa. Principio técnico Está determinado por la fuerza centrífuga. tengan el mismo peso. Bombillo piloto: Es un pequeño bombillo. que se utilizan para introducir los tubos de vidrio que contienen el material que va a ser centrifugado. la fuerza centrífuga sería desigual. 6. 3. que es una especie de balance. 4.barrera se inserta un porta tubo el cual puede ser de angulación o de suspensión. quedan articulados al cabezal.p. Para lograr un buen balance de los tubos se puede utilizar un nivelador de tubos. Los porta tubos de angulación son fijos. Estos porta tubos tienen colocado en el fondo. lo que le permite adoptar una posición horizontal cuando la centrífuga alcanza altas velocidades. Porta tubos: Son tubos metálicos. que indica cuándo el equipo está encendido. Balance de los tubos Para el buen funcionamiento de la centrífuga es indispensable que los tubos queden colocados en una posición diametralmente opuesta. Si se va a centrifugar una sola muestra. deberá emplearse el mismo tipo de tubo y asegurarse de que el volumen de líquido en ambos sea similar. con similares requisitos y ser colocado en el punta tubo que se encuentra en el lado opuesto que fuerza el que purza la muestra. uno a cada lado. un taco de goma que sirve de amortiguador a los tubos de vidrio durante la centrifugación.m). 2. en tanto que los segundos. se deberá llenar en segundo tubo con agua. que se sustenta que en todo el cuerpo que se mueve en torno a un punto central. 133 . Tacómetro o velocímetro: Se utiliza para ir registrando la velocidad de rotación del cabezal en revoluciones por minutos (r. se desarrolla una fuerza que tiende a separarlo de dicho centro.

6. 4. Extraiga los tubos. 2. Abrir la tapa de la centrífuga. 8. Si se hubiera centrifugado material contaminado. proceda a apagarlas tan pronto concluya el tiempo previsto de centrifugación. desconéctela de la red eléctrica y ciérrela. 7. Introducir los tubos con las muestras en el interior de los porta tubos. 134 . Los tubos colocados en lados apuestos. 9. teniendo especial cuidado de que quedan diametralmente apuestos (uno frente al otro) están debidamente balanceados en peso. 73 : Nivelador de tubos Funcionamiento 1. Girar el botón del reloj de intervalo. 10. hasta que indique el tiempo de centrifugación deseado. para evitar la exposición a los aerosoles. Si la centrífuga no tuviera reloj de intervalo. Llenar los tubos hasta 1 cm por debajo del borde superior. espere 2 ò 3 minutos antes de abrir la tapa.) en el tacómetro hasta alcanzar la deseada. apague la centrífuga. 3. deben tener el mismo tamaño y peso. Medidas de cuidados y conservación 1. de manera que vaya marcando gradualmente la velocidad (r. 2.Fig.m. Cerrar la tapa de la centrífuga.p. Cerciorarse de que el botón que regula la velocidad del tacómetro o velocímetro este en "0". Conectar el equipo a la red eléctrica 5. Accionar el interruptor para encender el equipo. Espere a que la centrífuga se detenga. lo cual se puede determinar observando el velocímetro. 11. Girar el botón del velocímetro lentamente.

que la que se puede conseguir por procedimientos manuales. 5. estando provisto de una superficie plana de unos 35 cm2.R. c) Botón del velocímetro El rotor es un pequeño equipo eléctrico que tiene la forma de un cajón. Mide aproximadamente 30 cm2 x 15 cm de altura.3.L. Cuando se produzcan rupturas de tubos. lográndose una mejor homogenización.D. Diseño del equipo Fig. procediendo a la eliminación de los restos de vidrio y limpiándolos escrupulosamente. Periódicamente debe limpiarse el interior de la centrífuga con un paño húmedo para eliminar el polvo y la suciedad. En el laboratorio de microbiología se utiliza regularmente para mezclar el suero con la emulación de antìgeno para las pruebas serologícas de V. 74: El rotor: a) Superficie plana giratoria. EL ROTOR El rotor se utiliza para mezclar mecánicamente las muestras con los reactivos. 135 . b) Botón del "timer". 4. sobre la cual se encuentra una plataforma giratoria de unos 30 cm2. los porta tubos serán extraídos. Cualquier material que se derrame sobre la centrífuga debe ser eliminando de inmediato.

el primero corresponde al "timer" o reloj de intervalos y el segundo al velocímetro. Muy próximo a estos botones se encuentra un pequeño bombillo. que indica cuando el equipo está encendido. algunos modelos disponen por uno de sus laterales de una presilla. 2. que al ser colocada adecuadamente. Cuando se detecte alguna diferencia se debe engrasar el equipo y si eso no resuelve el problema solicitar el servicio de un especialista. Concluido el tiempo. Funcionamiento 1. 136 . EL AGITADOR El agitador se utiliza para mezclar muestras muy difíciles de homogenizar por procedimientos manuales debido a su densidad o mucosidad. generalmente de color rojo. Cualquier material que se derrame sobre la superficie de la plataforma giratoria o el equipo. 4. procediendo a retirar las muestras. se encuentran insertados dos botones. el equipo se apagara automáticamente.m. rodeados en todo su perímetro por una escala numérica. Coloque la cristalería con la muestra sobre la superficie de la plataforma giratoria.En la pared frontal del equipo. entre las empleadas se encuentra la homogenización de esputos. Se debe verificar sistemáticamente que las rotaciones de la plataforma giratoria se correspondan con la indicada en el velocímetro. llevar el botón del velocímetro a "0" y desconectar el equipo de la red eléctrica. En el laboratorio de microbiología tiene diversas aplicaciones.p.). Accione gradualmente el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir en la escala con la velocidad de rotación por minutos (r. 3. 3. debe limpiarse de inmediato. 2. hasta hacerlo coincidir en la escala numérica con el tiempo deseado de rotación. impide que esa situación ocurra. 5. Cuidado y conservación 1. para evitar su desplazamiento por colisiones accidentales. Conecte el equipo a la red eléctrica. Como la plataforma giratoria no queda fija. Accione el botón del "timer".

2. Funcionamiento 1. 4. Conecte el equipo a la red eléctrica. frontales y de retroceso en forma continua a velocidad regulable. se desplaza con movimientos cortos. 75: El agitador: a) Plataforma oscilante. presenta en su superficie una plataforma. c) Botón del velocímetro Este equipo se fabrica de diferentes tamaños. un velocímetro para determinar el desplazamiento por minuto y un bombillo piloto. lentamente. la mezcla u homogenización de las muestras. el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir con la velocidad deseada. Posee igualmente un "timer". con capacidad suficiente para que puedan ser colocados en su superficie varias gradillas. Al igual que el rotor. Gire el botón del "taimer" hasta hacerlo coincidir con la escala que indique el tiempo de agitación deseado. Concluido el tiempo de agitación. Cuidado y conservación Similar a las que se aplican al rotor. retirar las gradillas de la plataforma. Gire. Coloque las gradillas con las muestras sobre la plataforma oscilatoria y fíjelas con los dispositivos que dispone el equipo para que las gradillas no se vayan a caer cuando se le aplique el movimiento propio del equipo. 137 .Diseño del equipo Fig. La mayoría de los modelos tienen forma rectangular. haga un girar en retroceso el botón del velocímetro hasta ubicarlo en "0" y desconecte el equipo de la red eléctrica. que en lugar de rotar . b) Botón del "timer'. propiciando mediante las sacudidas que ocasiona. 3. 5.

lo que permite conocer con precisión su grado de acidez o basicidad. b) Galvanómetro Los potenciómetros tienen la forma de una caja rectangular. midiendo unos 30 cm2 x 8 cm de ancho. donde el pH debe ser ajustado de acuerdo a los requerimientos de los diferentes grupos y géneros bacterianos que pretendamos cultivar. 3. Este botón se hace girar según se requiera hacia la posición STD. 76 : Potenciómetro: a) Eléctrodos.POTENCIOMETROS Los potenciómetros o pHmetros. para lograr su desarrollo óptimo. Botón para mover la aguja e indicar en la escala el pH de la solución buffer. aunque el tamaño varia de acuerdo al modo comercializado por los diferentes fabricantes. como por ejemplo: en la elaboración de medios de cultivo. la determinación del pH de una disolución. Debajo del galvanómetro se encuentran articulados al menos tres botones giratorios: 1. En la pared frontal o sobre la superficie se haya un galvanómetro provisto de una escala impresa del 0 al 14 que se complementa con una aguja insertada por su parte posterior a un pequeño eje situado en su centro y borde inferior. 2. por estar diseñados para determinar las concentraciones de iones hidronios que posea. son instrumentos eléctricos que se utilizan para medir el pH de una disolución. En el trabajo microbiológico. Botón indicador de la temperatura del potenciómetro. Botón de lectura.BY (En espera) o hacia la posición indicada con la palabra READ (Lectura) 138 . puesto que el grado de tolerancia a la acidez o a la basicidad resulta diferente para cada uno de ellos. resulta primordial en diversos procederes. Estructura Fig.

el galvanómetro ha sido sustituido por una escala digitalizada. Ambos electrodos se unen mediante puentes salinos (K CL o NH4 NO3) cuando se acciona el equipo Principio funcional Se basa en la medición de las fuerzas electromagnéticas (f. como por ejemplo: hidrógeno. el pHmetro tiene articulado en posición vertical un soporte universal metálico.e. en contacto con el alambre se encuentra el material sensible a los cambios de pH. Etc. Tipos de electrodos 1.m. Electrodo indicador: En su extremo distal. para ser convertida y presentada por el galvanómetro con un valor de pH. El otro extremo del alambre queda empalmado a un cable eléctrico que se conecta en el fondo del equipo. mas afinada o en forma de un pequeño bulbo redondeado similar a un densímetro. En los pHmetros modernos.5cm de diámetro. en consecuencia la fuerza electromotriz por la celda electroquímica es comparada con la del potenciómetro y la diferencia es medida en voltios. Electrodo de referencia: Generalmente presenta un mayor diámetro y se fabrica con calomel (Hg2 Cl + K Cl) un material estable. 2. cuya porción terminal inferior puede ser redondeada. permaneciendo inalterado independientemente de la concentración de iones hidrontes o hidroxilos que contengan la disolución. El tubo es atravesado longitudinalmente por un alambre de platino.Por el lateral derecho. Estructura de los electrodos del potenciómetro o pHmetro: Consisten básicamente en un tubo de vidrio de unos 10 ò 12cm de largo x 1 o 1. cuyo extremo terminal queda en contacto con el material sensible o indiferente a los cambios de pH. quinhidrona. mediante el empleo de las pilas voltais preparadas con los electrodos que marcan la diferencia de potenciales entre ambos. El electrodo transforma la energía química en energía eléctrica.() de las disoluciones a investigar. provisto de una presilla habilitada para la colocación y sujeción de dos electrodos. Electrodos Concepto: Los electrodos no son mas que el polo (Positivo: Ánodo-Negativo: cátodo) de una pila eléctrica. 139 .

BY. ya que las sustancias ácidas ceden electrones y por consiguiente retienen hidrógeno en tanto que las básicas son capaces de aceptar protones. Sumerja los electrodos en una solución buffer de pH conocido. Procedimiento para el manejo del potenciómetro Estandarice el aparato 1. Accione el botón y haga coincidir la aguja en el número 7 de la escala de pH. (por ejemplo: pH 7). Una disolución es ácida cuando la cantidad de iones hidrionios (H30+) es mayor que la de iones hidroxilo (0H-) y viceversa. el pH no es otra cosa que el logaritmo inverso de la concentración de iones hidrógenos en una disolución. Solución Buffer: Las soluciones buffer o amortiguadores o tampón como también se les conocen están compuestas por dos o más sustancias que evitan la producción de cambios significativos en la concentraciones de iones hidrionios. Cuadro 6: Gráfico de logaritmo inverso de iones hidrógeno. 2. 3. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 10-14 _________________________10-9________________________10-0 Ácido Alcalino Por lo tanto. Extraiga los electrodos de la solución buffer y proceda a enjuagarlos en un recipiente que contenga agua destilada. Conecte el equipo a la red eléctrica y asegúrese de que el botón se encuentre en la posición STD.Medición del pH La medida del pH es una forma convencional de indicar la concentración de iones hidrionios o de iones hidroxilo en una escala del 0 al 14. 140 . aun cuando a dicha solución se le agregue un ácido o una base fuerte.

Describa la estructura de la pipeta mecánica tipo Marburg. 4. CUESTIONARIO 1. Si se requiere realizar una nueva lectura lave los electrodos previamente con agua destilada. 6.BY a READ. 15. 10. ¿Cuál es la función de tacómetro? ¿Qué requisitos deben tenerse en cuenta al colocar los tubos en la centrífuga? Explique en orden cronológico. Nombre los diferentes tipos de pipetas mecánicas que usted conozca. 2. ¿Cuál es la diferencia funcional entre la pipeta tipo Marburg y la pipeta tipo Jena? ¿Qué característica particular presenta la pipeta multicanal? Fundamente porque causa el empleo de las pipetas mecánicas. 8. 9. 141 . los pasos que usted debe dar para realizar una centrifugación. hacia la izquierda o la derecha indicando en la escala. Proceda a sumergir los electrodos en la solución cuyo pH se desea determinar. ¿Qué relación existe entre la banda coloreada de la parte superior de la pipeta Marburg y el de la boquilla desehechable? Describa como se activa el sistema mecánico de la pipeta cuando se ejerce presión sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. resulta favorable para la bioseguridad del laboratorio. 3. si lo prefiere utilice como referencia la temperatura ambiente. La aguja oscilará. ¿Cuáles son las ventajas de la mecanización y la automatización sobre los métodos tradicionales de laboratorio?. Lectura 1. 5. 11. Accione el botón cambiándolo de la posición STD. 12. 14. 2. en lugar de tomar la de la solución. Describa como opera la pipeta Marburg cuando se retira la presión del dedo sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. ¿Con qué objetivo se utilizan las centrífugas en el laboratorio? ¿En qué radica la fuerza centrífuga? Describa la estructura del cabezal de las centrífugas. 13. Tome la temperatura de la solución donde se medirá el pH y accione el botón indicador de temperatura del potenciómetro. También. 7.4. el pH.

¿Para que se utiliza el rotor en el laboratorio? 18.16. ¿Qué es lo que marca el galvanómetro del pHmetro? 25. ¿Qué mide el velocímetro del rotor? 20. Haga referencia a los cuidados que debemos observar para el buen funcionamiento y cuidado de la centrífuga. ¿Cuál es la diferencia funcional entre los diferentes tipos de electrodos del pHmetro? 24. 17. Explique como usted estandariza el potenciómetro 26. ¿Para qué se utiliza el agitador en el laboratorio? 21. 142 . Describa los pasos que debe efectuar para determinar el pH de una disolución con el empleo del pHmetro. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del agitador? 22. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del rotor? 19. ¿Para qué se utiliza el potenciómetro en el laboratorio? 23.

Unidad básica (Gramo) Unidad micro métrica Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Atogramo Equivalente a la Milésima parte de un . Unidades de medición micrometricas. en las que el punto de apoyo se encuentra exactamente entre el punto de potencia y el punto de resistencia. Existen en el mercado múltiple tipos y modelos de balanzas.. con piezas de peso certificado denominadas pesas.CAPÍTULO 10 BALANZAS INTRODUCCIÓN Las balanzas son instrumentos que se utilizan para medir el peso relativo de los cuerpos. Estructura bacterianas Un virus Una molécula Un átomo PRINCIPIO El funcionamiento de las balanzas se sustentan en el principio físico de las palanca de primer grado. Ejemplo:el cachumbambé. DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS Las balanzas que se utilizan corrientemente en los laboratorios de microbiología clínica son las granatarias y las analíticas digitales... los cuales están diseñados para diversas aplicaciones. Tabletas de medicamentos. 143 . ya que las de precisión o analíticas de tipo mecánico o eléctrica se emplean solo ocasionalmente. Gramo Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Ejemplo para pesar la masa de .. Grano de polvo o gota de un liquido. que van desde las que se utilizan para medir el peso en tonelada hasta las que se emplean para medir con precisión fracciones de Mg. mediante la comparación.

que sirven de soporte para la colocación de los platillos.Balanzas granatarias Se denomina así. queda introducido en un orificio existente en ambos extremos de la base. los resultados que se obtengan serán dudosos. si el peso del objeto es superior al de las pesas que se hayan en el otro platillo. de unos 30 cm de largo. articuladas por sus respectivos extremos a una barra metálica. que al no estar topados en su interior posibilitan que la barra vertical penetre aun mas. Sobre el extremo superior de las barras verticales se encuentran atornilladas dos planchuelas metálicas de unos 2 cm de ancho. en posición vertical. mientras que su extremo inferior. determinados factores como: las corrientes de aire. formando una cruz con los extremos ligeramente curvados hacia arriba. 144 . Balanza de dos platillo (Balanzas de Roberval) Fig. plana o cilíndrica. las vibraciones o el polvo circulante puede influir en la determinación del peso real.1 a 500g o más. como por ejemplo: para determinar el gramaje de un medio de cultivo deshidratado en polvo. al tipo de balanza. que le sirve de punto de apoyo. Las barras horizontales quedan articuladas exactamente por su posición media. Se fabrica dos variantes de balanzas granatarias. Cualquier objeto que se pretenda pesar con este tipo de balanza. con la que se puede determinar mecánicamente. mediante un pasador al extremo superior de una columna sólida. 77: Balanza granataria de dos platillos(Balanza de Roberval) Esta estructurada por dos planchuelas paralelas de acero. las balanzas granatarias son empleadas cuando no se requiere conocer con precisión el peso del objeto. de menos peso que el señalado. ya que por ser demasiado ínfimo. el peso de un cuerpo que se encuentra entre 0. ubicada en el centro de la balanza. las de dos platillos y las de un platillo. formando un paralelogramo rectángular. en posición horizontal.

El fiel en forma de aguja esta articulado por su extremo inferior a las barras horizontales. en lugar de dos barras horizontales tienen una sola carente de grabación en g. que permiten determinar las oscilaciones de la aguja hacia la derecha o la izquierda de la escala. vacíos y colocados correctamente sobre las crucetas. 3.La barra o planchuela que queda frente al manipulador esta grabada con una escala metrada en gramos. Desestime las 2 o 3 primeras oscilaciones y posteriormente compare las que se producen hacia la izquierda del "0". presenta de 5 a 10 líneas verticales equidistantes. utilice un recipiente adecuado (Papel. Si va a pesar algún material en polvo o líquidos. Mueva la pesa deslizante de la barra graduada hacia la extrema izquierda. vidrio reloj. siendo el resto de la estructura similar. Funcionamiento Antes de efectuar la pesada: 1. cápsula de porcelana. por ejemplo 5-5 ò 4-4. hasta que marque "0" g. para lo cual debe observar como la aguja oscila libremente sobre la escala a ambos lados del "0". Si las oscilaciones son coincidentes. Ajuste el fiel de la balanza a "0". para tener en cuenta ese dato al determinar el peso del material (tara). vaso de precipitado. Si las oscilaciones fueran desiguales. Nunca coloque los materiales directamente so145 . hasta conseguir que las oscilaciones sean parejas. Procedimientos para efectuar la pesada Una vez que el fiel de la balanza se haya ajustado a "0" proceda de la siguiente manera: 1. La parte superior de la aguja queda junto a una escala grabada en cuyo centro esta el "0" y hacia ambos lados. provista de una pesa deslizante para ser movida hacia la izquierda o hacia la derecha hasta hacerla coincidir en la escala con el peso que se desea medir. Cerciórese de que los platillos estén limpios. etc) pesándolo previamente. quedando en posición vertical. Algunos modelos de este tipo de balanza. perpendicularmente a la columna de la balanza. la aguja del fiel al detener su movimiento lo hará justamente en el "0". proceda a accionar las tuercas de los tornillos de ajuste que se hayan a ambos extremos de la balanza. 2.

0. hasta que la aguja del fiel marque "0".4.20. por donde se toman con una pinza de disección. A continuación coloque el recipiente seleccionado sobre el platillo del lado izquierdo y vierta poco a poco en su interior el material que desea pesar. Para efectuar la pesada. Internamente se encuentra tapizado de terciopelo.03.0. se colocan las que tienen menor peso que las referidas. Todas estas pesas se fabrican básicamente con latón.3 y 0. por su orden en la caja.2.1.05.2. presentando linealmente unos 20 orificios de diferentes diámetros donde se introducen las pesas.0. En los orificios de la parte anterior del estuche. hasta que indique el peso adecuado. Si fuera insuficiente. mueva hacia la derecha de la barra grabada la pesa deslizante.0. Al igual que las cilíndricas tienen grabado el peso.30.5. etc. pulidas y brillantes. acero inoxidable o aleaciones no magnéticas.2. una barra metálica.01. una sortija.10. Este tipo de pesas consiste en una laminilla plana de metal con forma cuadrada o rectangular.40. a menos de que se trate de sólidos limpios. 146 . bre el platillo.5g). En los orificios que están situados de la mitad hacia atrás del estuche se colocan las de mayor peso.50 o 100g) las cuales pueden combinarse para obtener cualquier peso en ese rango. que como es obvio sera menor (0. que presenta uno de los bordes doblados en un ángulo de 900 por donde se toman con las pinzas. Estas pesas son cilíndricas. como por ejemplo. Cada una de estas pesas tiene grabado el peso (1. colocarlas sobre el platillo y posteriormente reintegrarlas. extraiga de la caja de pesas las necesarias y colóquelas sobre el platillo de la derecha.02. Caja de pesas Fig. estando provistas de una pequeña prominencia en su parte superior. dentro del estuche se encuentra una pinza que es utilizada para extraerlas del estuche.3. 78 : Caja de pesas Consiste en un pequeño cofre cuadrangular provisto de una tapa articulada con bisagras en su parte superior.0. Conjuntamente con las pesas.0.

con la diferencia de que esta balanza no utiliza las piezas certificadas de la caja de pesas. El fiel de estas balanzas . Generalmente estas barras están provistas . las cuales no deben ser colocadas en otro lugar que no sea los platillos. se encuentran debajo de los platillos. esta balanza tiene la columna que sirve de punto de apoyo. y están grabadas con diferentes escalas en gramos.no es en forma de aguja. sino en el extremo izquierdo.en su parte superior . 3.PRECAUCIONES 1. 79 : Balanza granataria de un solo platillo (tipo Ohaus) A diferencia de la balanza de dos platillos. cuyo peso sea de décimas o centésimas de gramos o pocos gramos. 2. BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA Este tipo de balanza se utiliza cuando se requiere determinar con precisión el peso de pequenas cantidades de materiales u objetos.generalmente. Los tornillos de ajustes. El procedimiento para efectuar la pesada es similar. Las barras horizontales son dos o tres. antes de guardarlas en la caja cepíllelas con un pincel de pelo de camello. Coloque la balanza sobre una superficie nivelada en un lugar donde no se produzcan vibraciones y que la temperatura así como la humedad relativa sean estables. no en el centro. teniendo cada una de ellas una pesa deslizante. Conserve limpias las piezas. Mantenga las balanzas escrupulosamente limpias. Cuando se efectúan pesadas de productos en polvo. sino de flecha y la escala se encuentra en el extremo derecho y no arriba con en la de dos platillos. según el modelo. 147 . en especial los platillos.de una muesca sobre cada numero de la escala para fijar la pesa en el punto exacto. parra evitar que el polvo o la su ciedad puedan afectar la fiabilidad del peso. Balanxa de un solo platillo (tipo Ohaus) Fig.

El extremo de su parte superior esta estructurado con una planchuela metálica en posición horizontal. c) Fiel. b) Cruz. que posee en el centro de su parte inferior un pequeño tirador que se utiliza para subir o bajar la puerta por un mecanismo de corredera (similar al de una guillotina) diseñado para que la puerta se quede fija. que se encuentra atornillado por su base en el centro del piso de la urna. en dirección al manipulador. este tipo de balanza se estructura por el fabricante dentro de una vitrina de cristal . 80: Balanza de precisión mecánica: a) Columna. La base está sostenida por un tornillo en cada uno de su ángulos . generalmente es de madera o material plástico. f) Soportaplatillos. Consiste en un tubo de metal inoxidable de unos 20 cm de largo x l. d) Platillos.5cm de diámetro.quedando debidamente nivelado en posición vertical. sobre una base de varios cm de altura. g) Chapa. en cualquier altura en que sea detenida. h) Cuchilla Para evitar inexactitudes durante la pesada.que al igual que los marcos que sirven para fijar las paredes y la parte superior de cristal. que son utilizados para nivelar la balanza. Balanza de precisión mecánica Fig. debido a la influencia de las corrientes de aire. incoloro y transparente. sin caerse. La superficie de la planchuela tiene 148 . e) Dispositivos para subir o bajar la cruz. la cual está provista de un marco independiente. lo cual se comprueba mediante la observación de uno de los dos niveles de agua circulares que se encuentran en la superficie Partes de que consta l. el polvo circulante o la humedad. eléctricas y digitales. Columna: La columna sirve de base al punto de apoyo de la balanza. En la pared anterior que queda frente al manipulador se encuentra incertada la puerta de la vitrina. de unos 40cm cúbicos.De acuerdo a su diseno se clasifican en: mecánicas.

el cual se haya articulado por su porción posterior a un botón giratorio que se encuentra en la parte externa de la base de la urna en su porción central. A todo lo largo del margen superior tiene grabada una escala en mm.forma de cajuela en U . Dispositivos para subir y fijar la cruz : Es una fina planchuela metálica muy rígida que tiene por la superficie de cada lateral. Un medio giro del botón hacia la derecha. suficientes para aligerar su peso sin que por ello pierda rigidez a la flexión. teniendo su superficie plana y muy pulida. que hace que los platillos queden suspendidos. El extremo inferior es puntiforme y oscila como un péndulo.junto a una escala graduada desprovista de números cuyo centro representa al 0. 2. tiene insertado un prisma de ágata de forma triangular. perpendicularmente a la columna. 5. denominado "cuchilla". quedando en posición vertical. el cvual será horizontal cuando el fiel de la balanza esté en 0. 4. donde se observa el 0 en el centro y numeraciones iguales hacia ambos lados. denominada "chapa". cuyas tuercas se utilizan cuando se requiere nivelar la balanza. En el extremo lateral de cada estribo. de forma circular. 3. cuyo vértice se apoya sobre la chapa de la columna. se encuentra articulado un fino tornillo en posición horizontal. Esta barra se caracteriza por tener varias perforaciones simétricas . hace que el eje que atraviesa la columna se eleve. estando unido por su porción media a un eje que se encuentra introducido a todo lo largo de la columna.en cuya cavidad se inserta una placa de acero o ágata .por donde se cuelgan los platillos. de unos l6cm de longitud. Fiel: Sobre el centro de la concavidad de la cruz se encuentra atornillada una chapilla que sostiene por su extremo posterior a una larga y fina aguja que es el FIEL de la balanza. Las aristas de las tres cuchillas deben estar situadas en el mismo plano.provocando que las piezas cilíndricas de la planchuela metálica 149 . Debajo del semicírculo que forma la concavidad. una pequena pieza cilíndrica proyectada hacia fuera y en cada extremo un gancho semicircular del mismo material similar a la forma de las herraduras.provisto de una saliente por cada lateral. La cruz: Es una barra plana . Los salientes ubicados en la parte inferior tienen insertada respectivamente una cuchilla con la arista dispuesta hacia arriba y apoyadas en una pequena placa del mismo material contenidas en los estribos. por donde se inserta un alambre acerado rígido que describe una parábola algo angosta para factibilizar su colocación en los estribos de la cruz.que adopta una forma triangular con el vértice hacia abajo en cuyo extremo distal presenta un corte cóncavo. La cruz en ambos extremos laterales presenta dos salientes en forma de horquetilla angular denominada estribo . caracterizada por su dureza e inalterabilidad al contacto con el aire. quedando de esta forma la cruz en equilibrio. Este dispositivo queda ubicado por debajo y muy próximo a la cruz. Los platillos: Son dos piezas metálicas planas.semejantes a un plato.

Resulta indispensable realizar esta acción cuando no se esté realizando la pesada. con peso cerificado. denominados jinetillos . lo cual afectaría su exactitud. Deposite el material a pesar en un recipiente apropiado (previamente pesado) y colóquelo en el centro del platillo de la izquierda. Del lado izquierdo del botón para fijar la cruz. aproximadamente por lcm . 3.contacten con la parte inferior de la cruz y la eleve. impidiendo que oscilen cuando se le esté añadiendo algún peso.seguidamente tome con la pinza las pesas y situelas por orden de peso (de mayor a menor) sobre el platillo de la derecha.los cuales se deslizan a lo largo de la regla grabada que se encuentra en la cruz. estando separados de estos. baje los portaplatillos y observe las oscilaciones del fiel. Si se quiere determinar el peso de un objeto que tenga un peso inferior al mg. 6. 150 . Soportaplatillos :Son dos discos articulados respectivamente a un fleje metálico recubierto de fieltro. procediendo a quitar o poner las pesas o anadir o quitar producto en dependencia de los objetivos de la pesada.con el cual. Si se encuentra en una posición excéntrica. con el objetivo de que no pierda el filo. Suba los portaplatillos. 2. se bajan los portaplatillos para que oscilen libremente y se pueda determinar el peso. Determine el punto "0" de la balanza. Cerciorese de que la balanza esté nivelada. Si se percata de que son diferentes hacia uno u otro lado del cero. PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA l. se encuentra el utilizado para accionar los portaplatillos. 4. Cierre la balanza. los cuales quedan ubicados debajo de los platillos. proceda a girar convenientemente los tornillos donde se apoya la balanza hasta lograr que la burbuja esté en el centro del nivel.para evitar que la cuchilla esté innecesariamente en contacto con la chapa. de agua que se encuentra en la superficie de la base de la balanza. 5. para lo cual observe la ubicación de la burbuja de aire en el nivel. se consigue que éstos suban y entren en contacto con los platillos. proceda a accionar los tornillos de nivelación de los extremos de la cruz. Cuando el material a pesar y las pesas estén colocados sobre los platillos. que tienen forma de gancho. para lo cual haga bajar la cruz con los platillos vacios y observe las oscilaciones del "fiel" junto a la escala graduada. utilice los hilos de platino.separando la cuchilla de la chapa para finalmente quedar estática debido a la presión del dispositivo.propiciando que el filo de la cuchilla no roce innecesariamente con la chapa durante esta acción. teniendo la precaución de colocar en el centro la pieza de mayor peso y a su alrededor las de menos peso. hasta que las oscilaciones sean iguales.

b) Botón para el ajuste del punto "0".6. . f) Botones de ajustes de las pesas de cambio. Suba la cruz. c) Platillo. como por ejemplo: lana de vidrio embebida en ácido sulfúrico concentrado o pequeños gránulos de cloruro de calcio anhidro.Limpie el interior de la balanza. no las toque con los dedos. . antes y después de su uso.La lectura de las pesadas deben efectuarse siempre con la puerta cerrada.baje los portaplatillos y cierre la balanza. . g) Palanca de retención. . BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA Fig.Cerciorase de que las pesas estén limpias y manipúlelas siempre con la pinza. d) Indicador digital. PRECAUCIONES . 151 .Exclusivamente los sólidos se pueden colocar directamente sobre el platillo. donde no existan vibraciones.retire el material ya pesado y con el empleo de la pinza retire las pesas por su orden de menor a mayor peso. 8l: Balanza de precisión eléctrica: a) Botón para el ajuste de la compensación de tara. cambios de temperaturas o humedad. h) Orientador de la dosificación. Al concluir la pesada procesa a subir los portaplatillos.En los ángulos de la urna coloque un pequeño recipiente que contenga un desecador con el objetivo de que absorba la humedad y mantenga secas la atmósfera en el interior de la urna. . ya que éstos le comunican humedad y suciedades que alteran el peso.Garantice que la balanza sea ubicada sobre una mesa o meseta nivelada. e) Botón para la graduación de la precisión del indicador digital. en especial los platillos.

teniendo la superficie plana provista de una letra "T" impresa. para facilitar su manipulación . Es de formas circular. Indicador de nivel : Consiste en un aditamento circular de no más de 2 cm de diámetro. sin incluir la base. En la parte superior de la periferia donde gira este toirnillo. hasta lograr que la burbuja de aire del agua que contiene quede en el mismo centro del circulo concéntrico. haciendo girar convenientemente en una u otra dirección los tornillos. Las paredes laterales están provistas. de una ventana de corredera. Principales partes de que consta 1. La parte posterior. lo que le da una configuración ligeramente cónica . es de cristal. Aproximadamente. respectivamente.cuando se requiere determinar con precisión el peso de un objeto. estando cubierto por una tapa de vidrio. provista de un círculo concéntrico de unos 7 mm de diámetro. la mitad inferior de la pared frontal. aunque más grueso. la pared de la caja tiene grabada una pequeña linea vertical. tambien de cristal. 3. la superior ocupa aproximadamente un tercio de todo el espacio y en ella se encuentra instalado parte del sistema eléctrico y otros dispositivos interconectados con el resto del sistema que se encuentra en la parte posterior de la balanza. Botón para el ajuste de la compensación óptica de tara : Este botón se encuentra articulado en el ángulo superior derecho de la pared frontal de la balanza. que generalmente se localiza empotrado centralmente en la superficie de la balanza muy próximo al borde anterior.Este tipo de balanza se utiliza al igual que la balanza analítica mecánica. Al igual que la balanza mecánica. Se encuentra articulado en el centro del botón para 152 . la caja o urna donde se encuentra estructurada tiene forma rectángular y se haya en posición vertical sobre su base. pero difiere de ésta. Un tabique en posición horizontal divide la urna internamente en dos partes. Botón de ajuste del punto cero: Es un botón igualmente igualmente cilíndrico de menor tamaño. que sirve para indicar donde ser detenido el giro del botón para hacer coincidir la letra "T"con la línea de referencia. el nivel se regula. que ocupa la mitad del ancho de la caja. tanto en el tamaño como en su diseño. que se caracteriza por tener un diámetro mayor en su base que en la parte anterior. así como la porción inferior de los laterales y la cubierta superior son generalmente de material plástico. generalmente es más pequeña aunque al igual que la mecánica. muy próximo a su borde y un grosor de menos de 2 cm estriado transversalmente. 2. En la parte inferior (Rodeada por la pared de cristal y las ventanas laterales) se encuentra colgado centralmente el único platillo que posee este tipo de balanza.

8. el peso originado por el accionar de los botones de ajustes de las pesas de cambio. 6. en el centro de la base. ya explicado. Orientador para la dosificación : Debajo del indicador de las pesas de cambio se haya una pequeña escala graduada.el ajuste de la compensación óptica de tara. Hacia la izquierda. 7. Funcionamiento Acciones previas l. estando provisto de una tapa.El botón marcado con el # 10. que tiene grabado en su centro un "0"con un (. Indicador de pesas de cambio :Consiste en una pequeña pantalla que se haya en la parte frontal de la base. 30g.. haga girar en uno u otro sentido'los tornillos de la base de la balanza. 2. El ubicado a la izquierda tiene grabado en su tapa un # l0 y el de la derecha un #1 . 30… etc. 20. el # 1. lo que equivale al lg. En el centro de las dos escalas se haya un indicador óptico.. Lo que equivale a 10g. En la parte superior el "0". 4. Al ser girados hacia la derecha van colocando las pesas o al ser girados hacia la izquierda las levantan.…hasta el 9. denominado tambien placa mate. Botones de ajuste de las pesas de cambio : Son dos. Botón para la graduación de la precisión del indicador digital :Tambien denominado botón micrométrico. Es un botón grande. . ubicado en el lateral derecho de la base. provista de una línea oscura que indica aproximadamente el peso.provisto de una escala numérica. por su lado izquierdo. por su lado derecho. . 3g. 2g. 5. produce el cambio de pesas de l en l o sea: l. En esta posición se lee el resultado de la pesada.…etc y el botón marcado con el #1. lo cual se va registrando en el contador o indicador de pesas de cambios que se haya en el lado derecho de la base.no debiendo poner ni quitar del platillo el objeto a pesar.etc. con los números 0. donde se van registrando en una doble escala. de no ser así. En esta posición se puede leer el peso aproximado en gramos en la escala proyectada. Alrededor de la palanca se encuentran grabado 3 números: .) en su periferia. Hacia la derecha se encuentra grabado ½. o sea: 10. Palanca de retención :Es una pieza rígida de forma lanceolada (como la punta de una lanza) que se encuentra articulada por su extremo más grueso. 3. produce el cambio de pesas de l0 en 10. Verifique que la balanza este debidamente nivelada.500 y 1000. En esta posición la balanza se encuentra frenada y la iluminación apagada. 20g. Se encuentran ubicados en la parte frontal de la base. hasta lograr que la 153 .

Mueva lentamente la palanca de retención hacia el # l.Gire la palanca de retención hacia el # 1 y deje oscilar la escala. haciendo girar el botón para la graduación de la precisión. retroceda hasta 40g.Cierre la ventana de la balanza.Proceda igualmente con el botón del ajuste a "0". . En este momento la balanza está frenada y la iluminación apagada. La balanza se iluminará y proyectará la escala numérica. Compensación de tara .Retrase la escala a "0"haciendo girar el botón de compensación de tara. lo que dará lugar a un peso total de 44g. Haga girar la palanca de retención hacia el "0". incluyendo el encendido del bombillo piloto. Detenga la rotación y proceda a girar el botón una graduación hacia atrás . .Gire la palanca de retención en dirección a ½ (semiretención) . Ajuste al punto cero l. retroceda una unidad o sea hasta 4g. Si el indicador de pesas de la izquierda y el contador micrométrico de la derecha no están marcando respectivamente "00". en contra de las manecillas del reloj hasta hacer coincidir la letra "T": con la línea de referencia. . Conecte la balanza a la red eléctrica para propiciar su funcionamiento e iluminación.. PESADA 1. 2. haga girar los botones de ajuste de las pesas de cambio y el botón para la graduación de precisión . Haga coincidir la marca índice con la raya "00" proyectada. . por ejemplo: si la escala marcó 50g.Haga girar el botón para el ajuste de compensación de tara. .Gire hacia la derecha gradualmente el botón de ajuste de las pesas que se encuentra del lado izquierdo (marcado con el # 10) y vaya observando simultáneamente la escala del indicador de la izquierda hasta que aparezca un signo menos (-) o se trabe el avance . Por ejemplo: si la escala se detiene en 5g. Repita la operación con el botón de la derecha (marcado con el # l). 2.Haga girar en contra de las manecillas del reloj.Girar finalmente la palanca de retención hasta el "0" 154 .burbuja de aire del nivel de agua quede ubicada exactamente en el centro del círculo concéntrico. 3. en contra de las manecillas del reloj hasta que marquen "00". . que se encuentra en la parte superior.Abra la ventana lateral y coloque sobre la superficie del platillo el recipiente vacio (tara) donde se va a depositar el material a pesar. . los botones de ajuste de las pesas hasta situar la escala en "00"(de esta manera queda anulado el peso del recipiente (tara) .

Girar la palanca de retención hasta ½ (semi retenida) durante la preselección del peso .Leer el resultado. .Haga girar la palanca de retención hacia el "0"para retener la balanza y seguidamente soltar lentamente la retención haciendo girar la palanca hacia el # 1 . abrir la ventana y extraer el material ya pesado.Cerciorese de que la palanca de retención esté en "0" . 42. . Por ejemplo. el peso será el siguiente .Proceda igual que para determinar el peso de la tara. .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital hasta hacer coincidir la placa mate del indicador óptico con la raya proyectada. .Colocar la palanca de retención en "0". .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital. Fig.accionando el botón para hacerlo coincidir con la raya proyectada.Poner nuevamente todos los elementos de mando en "0" . utilizando los botones de ajuste de las pesas de cambio.Depositar el producto a pesar en el interior del recipiente y cerrar la ventana.DETERMINACIÓN DEL PESO .2014 g. 82 : Lectura de una balanza analítica eléctrica 155 . Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la pesada. si el indicador de pesas de cambio registra 42g . el indicador digital marca 20 y el contador micrométrico de la derecha marca l4. Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la apesada en la escala de la derecha del indicador de pesas de cambio.hasta que la escala quede inmóvil y el trazo inmediato inferior se encuentre exactamente en la rendija de la horquilla índice.

colocar el material a pesar sobre un platillo externo. CUESTIONARIO 1. accionar un botón y el peso podrá observarse digitalizado en una pequeña pantalla. 6. Este tipo de balanza tiene un alto grado de precisión. Con que objetiovo se debe subir y fijar la cruz de la balanza? 156 . Explique en que consiste el principio funcional de las balanzas ¿ A que denominamos pesas ¿ ¿Cual es el rango de pesadas de una balanza granataria? ¿Cuántos tipos de balanzas granatarias Ud. ¿Cuál es la función de la cuchilla de la balanza de precisión 13. conoce? ¿Qué se entiende por peso de tara? ¿A que denominamos fiel de la balanza? Describa en orden cronológicos que Ud.BALANZA ANALITICA DIGITAL Fig. es cuando se produce algún desperfecto. lo cual no puede ser resuelto internamente por el personal del laboratorio experimentado. Explique por que causa las pesas se deben tomar con una pinza de disección y no con la mano. debe efectuar para realizar una pesada en una balanza granataria de un solo platillo? 8. 5. requiriendose de un servicio especializado. 7. ¿Con que objetivo se utilizan las balanzas de precisión? 12. 83 : Balanza analítica digital La balanza analítica digital simplifica todas las operaciones explicadas a los largo de este capítulo. La dificultad que presenta. 10. 2. 4. ¿En que orden se deben colocar las pesas sobre el platillo? 9. ya que basta con conectarla a la red eléctrica. 3. Argumente por que causa los platillos deben estar limpios? 11.

regula el nivel de una balanza de porecisión 17. realiza la depreciación del peso de tara en una balanza de precisión elaéctrica.como Ud. 20. Describa el orden cronológico. Describa paso a paso como usted determina el peo de un objeto en una balanza de presición elaéctrica 22.14. efectua una pesada con una balanza de precisión mecánica. Diga lo que usted sepa en relación con la balanza analítica digital. ¿Cómo se colocan las pesas en la balanza de precisión eléctrica? 19. ¿Cómo Ud. realiza el ajuste al punto cero. Explique lo que indican las tres posiciones que tiene la palanca de retención. 18. 157 . Explique las causas por lo que las balanzas de precisión deben estar en el interior de una urna 15. ¿Cómo Ud.con una balanza de precisión eléctrica? 21. L6. Explique como Ud.

Fig. Empleo: para medir el tiempo en minutos y/o segundos. eléctricos o de cuerda. temperatura o densidad. Relojes de intervalos Estructuralmente son similares a un reloj despertador doméstico y al igual que los cronómetros pueden ser accionados por energía eléctrica o cuerda. b) Reloj de intervalo. INSTRUMENTOS. provistos de uno o dos botones de control que se utilizan para accionarlos o detenerlos.CAPÍTULO 11 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN NO VOLUMÉTRICOS INTRODUCCIÓN Los instrumentos de medición no volumétricos se emplean en las investigaciones de laboratorio para medir específicamente magnitudes de tiempo. DIFERENTES TIPOS Relojes Se emplean dos tipos de relojes: los cronómetros y los de intervalo. 84: Relojes: a) Cronómetros. Cronómetros Son relojes manuales. caracterizándose por hacer sonar una alarma cuando concluye el tiempo previsto. 158 .

haciendo que se detenga automáticamente su funcionamiento al concluir el período de tiempo en que fue ajustado. por lo que hay que "sacudirlos" para que se concentre nuevamente en el reservorio. Diferentes tipos de termómetros Se utilizan dos tipos de termómetros: el clínico y el químico. como por ejemplo.Termómetro clínico: En este tipo de termómetro el reservorio se encuentra lleno de mercurio. en correspondencia con la exposición al calor a que ha sido sometido. Empleo: para medir el tiempo en horas y minutos. Este bulbo se continúa con un fino capilar ubicado a todo lo largo del termómetro. más estrecho está ocupado por un bulbo. Los termómetros empleados en el laboratorio consisten en un tubo de vidrio de paredes gruesas de longitud y diámetro variable. denominado columna indicadora. Centrífuga. ya sea en grados Celsius o Fahrenheit. Al disminuir su intensidad se mantendrá indicando ese valor. lleno de un producto químico dilatable por el calor. Cuando el bulbo es expuesto al calor. paralelamente a la escala. Termómetros Fig. etc. 159 . 1. rotor. provisto de una escala impresa en grados Celsius (ºC y/o grados Fahrenheit º F). Su extremo anterior está sellado como un ámpula. el producto químico que contiene se dilata y asciende por el capilar.Este tipo de reloj se encuentra tambien articulado en algunos equipos de laboratorio. Al detenerse se confrontará con la escala para determinar el grado de calor. y el posterior. Debido a que el capilar que forma la columna indicadora está unido al reservorio por una especie de sifa en forma de "S" cuando la columna de mercurio alcanza el grado máximo. 85: Termómetros. generalmente.

En lugar de mercurio el reservorio de estos termómetros está lleno de alcohol o xilol teñidos. etc. Este tipo de termómetro se encuentra insertado en los equipos termoregulados como: el horno. en g/cm3 o en g/mL es numéricamente igual a sus densidades. Estructura Fig. ascenderá o descenderá. encontrándose sellado como un ámpula en su extremo distal. teniendo impreso a todo lo largo una escala graduada 160 . Por ejemplo: 3200C+273=3020K Para convertir grados Fahrenheit a grados Rankine. ya explicada.0g/mL a 4ºC. la parte superior consiste en un fino tubo de vidrio. Mide aproximadamente algo más de un tercio de la longitud total del densímetro. 0.De grados Fahrenheit a Celsius (ºF-32). que usualmente es el agua. Termómetro químico: La estructura de este tipo de termómetro es similar a la del termómetro clínico. con la diferencia que generalmente tiene una mayor longitud y la escala de temperatura es de un rango mucho mayor. la columna del alcohol o xilol. en el capilar en correspondencia con las oscilaciones de temperatura.2. se procede de igual manera. que son: la Kelvin y la Rankine. estando estructurados por tres partes diferentes entre sí.8)+32=ºF Existen otras dos escalas para medir la temperatura. 1. alargado y cilíndrico. Densímetros Son instrumentos que se emplean para medir la densidad o peso específico de soluciones compuestas por diferentes solutos y solventes. pero empleando la constante 460. el peso específico de los líquidos.De grados Celsius a Fahrenheit (ºC. Para convertir grados Celsius en grados Kelvin basta con adicionar la constante 273 a los grados Celsius obtenidos. pero basada en el mismo principio. pudiendo tener una estructura diferente a l explicada. Los densímetros son tubos de vidrio que miden de 15 a 20 cm de largo. El peso específico es la relación entre el peso de una sustancia con respecto al peso de un volumen igual de una sustancia de referencia. el autoclave. Para convertir temperaturas de una escala a otra se procede de l siguiente manera: . la incubadora. Otro aspecto que lo distingue del clínico es que al carecer de la sifa. Como la densidad del agua es de 1. 86: Densímetro.555=ºC .

en cuya parte superior se puede observar el número 1. Tome el densímetro específico por la parte superior con los dedos índice y pulgar e introdúzcalo en la solución. 6. 2. variará. para lo cual debe observar en qué graduación de la escala se encuentra el nivel de la solución. 2. 11. como por ejemplo: 1.060 en los urodensímetros. que se utilizan para medir la densidad de la orina. 7. CUESTIONARIO 1. colocándolo en el centro del diámetro de la probeta en posición vertical. consistiendo básicamente en un bulbo lleno de aire. lleno de bolitas de metal. 3. 12. Deposite en una probeta de tamaño apropiado (preferentemente no graduada) la solución a la que se le desea medir la densidad y colóquela sobre una superficie nivelada. 8. Haga girar el densímetro. no entre en contacto con las paredes de la probeta. 9. para propiciar que se mantenga en posición vertical cuando sea introducido en el líquido al que se le va a medir la densidad. ¿Cómo usted debe proceder para convertir grados centígrados en grados Fahrenheit y viceversa? ¿Para qué se utilizan los densímetros en el laboratorio? ¿Qué usted entiende por peso específico? ¿Cuál es la densidad del agua? Describa la estructura de un densímetro . semejantes a municiones. 5.000 (que es la densidad del agua). 10. 3. que proporcionan peso al densímetro. En su extremo posterior el bulbo se estrecha y a continuación se dilata. en dependencia del tipo de densímetro de que se trate. ¿Cómo se denominan los dos tipos de relojes empleados para el trabajo de laboratorio? ¿Cuál es el principio funcional de cada uno de los relojes? Describa la estructura de un termómetro clínico y uno químico. ¿Con qué objetivo el bulbo redondeado que se encuentra en la parte inferior de los densímetros se encuentra lleno de municiones? Describa el procedimiento a seguir para determinar la densidad de un líquido? 161 . Espere a que se detenga el movimiento de rotación y proceda a realizar la lectura. Procedimiento 1. mediante el accionar de los dedos y cerciorarse de que al rotar. La porción media es más gruesa y de mayor longitud. 4. cuidando de no incurrir en el error de paralelaje.. La escala va descendiendo dividida en partes iguales y el valor mayor. 4. ¿Cómo se denomina el producto químico que se utiliza en cada tipo de termómetro para llenar sus respectivos reservorios? Especifique las diferencias funcionales entre el termómetro clínico y el químico. formando un bulbo pequeño y redondeado.

las gradillas factibilizan además el que se puedan escurrir los tubos después de ser fregados. se agrupan diversos objetos. 87: Gradilla Gradillas Son soportes diseñados para la colocación de tubos de ensayo u otros tipos de cristalería. Además de facilitar el acceso al tipo de cristalería con que se esté trabajando o el ordenamiento secuencial de las muestras. provistas de perforaciones. lo que permite seleccionar la adecuada para cada tipo de tubo. madera o plástico. separadas entre sí. por donde se coloca la cristalería en cuestión. Generalmente son rectángulares y están estructuradas por dos o tres planchas. mientras que determinados materiales de curaciones son empleados para diversos usos. fábricadas de metal. INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y MATERIALES DE CURACIONES INTRODUCCION Bajo el término de accesorios. los orificios de las gradillas también serán de tamaño variable. se encuentran los siguientes: Fig. ACCESORIOS Entre los accesorios que se utilizan con mayor frecuencia. utilizados con carácter auxiliar en el trabajo de laboratorio al igual que algunos instrumentales quirúrgicos. en posición horizontal.CAPÍTULO 12 ACCCESORIOS. Teniendo en cuenta que los tubos de ensayo tienen diámetros diferentes. insertándolos en los orificios boca abajo. 162 .

Soporte universal Fig. que se utilizan para la colocación de tubos de ensayo y otros tipos de cristalería. Los cestos son utilizados para depositar la cristalería para su secado o esterilización. lo que le proporciona estabilidad. Generalmente son cilíndricos o cuadrangulares y están fabricados de alambres entrelazados o chapas de metal inoxidable perforado. 163 . sobre la que se erige una varilla recta de hierro de 1. no compartimentados. que se utiliza para colocar pinzas de sujección o aros metálicos. 88: Cesto metálico.5cm de diámetro. los cestos son soportes.Cestos Fig. Al igual que las gradillas. 89: Soporte universal Está constituido por una base metálica sólida y pesada.

b) Pinza de bureta. 91: Trípode. el principio de su funcionamiento es similar al de un palito de tendedera. formado por tres varillas metálicas de igual longitud. Trípode Fig. La pinza de Mohr se utiliza para obstruir el paso de un líquido que fluya a través de una manguera de goma flexible de más o menos un cm de diámetro. c) Pinza de Mohr. así como las pinzas para tubos de ensayo y la pinza de Mohr. las respectivas pinzas se abren. es decir. teniendo la punta curva o recta. cuando se aprietan con ayuda de los dedos índice y pulgar. los de vasos de precipitado. Entre las más empleadas se encuentran: los modelos de tres dedos. separadas entre sí a una misma distancia y soldadas por su extremo superior a un aro también de metal. algunas de las cuales. diseñadas para fijarlas a la varilla de fierro del soporte universal y otras para operarlas manualmente. En ambos casos. los de bureta. Cuando el trípode es colocado sobre la mesa de trabajo.Pinzas de sujección Fig. 90: Pinzas de sujeción: a) Pinza de tres dedos. y cuando se retira la presión se cierran. podemos percatarnos de que las patas no quedan en posición 164 . estas dos últimas de utilización manual. Otro tipo de pinzas igualmente empleadas para el manejo de objetos pequeños como las pesas y los diversos especímenes son de acero inoxidable. Se fabrican diferentes tipos de pinzas de sujección. Se trata de un accesorio metálico.

d) Agujas de disección Además de los trocars y las agujas hipodérmicas de diferentes calibres en el trabajo de microbiología. directamente a la llama de mechero. Instrumental quirúrgico Fig. c) Pinzas de disección. bisturí y tijeras de disección. 92: Malla de amianto Es una malla plana de alambre entrejido. 93: Instrumental quirúrgico: a) Bisturí. sino ligeramente oblicuas. así como de charolas. 165 . para lo cual se coloca sobre el aro del trípode. y sobre ésta el frasco de cristal. de forma cuadrangular o circular que mide unos 15cm2 o de diámetro. de manera que el recipiente queda aislado de la llama directa y el calor se distribuye uniformemente a través del amianto. una especie de bandeja donde.vertical. que posee en su centro una circunferencia de unos 10 cm de diámetro de amianto fundido en la malla. con los extremos que contactan con la mesa más separados que los que están soldados en el aro. similar a un colador. se realiza la disección de determinados especímenes de experimentación. Esta malla se utiliza cuando se va a calentar un líquido contenido en frascos de vidrio. Malla de amianto Fig. ocasionalmente se requiere del empleo de diferentes agujas. b) Tijeras.

como por ejemplo: heces fecales. para efectuar la pesada o como sustituto de los aplicadores en las preparaciones de heces en láminas para examen parasitológico. se emplean también para la toma de algunas muestras. además de ser utilizados en la confección de hisopos. 2. Los depresores.MATERIALES DE CURACIONES Entre los materiales de curaciones más empleados en el trabajo microbiológico. se encuentran los siguientes: 1. 4. para su preparación en láminas destinadas a la investigación parasitológica. 5. 166 . Aplicadores y depresores Los aplicadores. se utilizan para deprimir la lengua en la toma de muestras de exudado faríngeo y también. Gasa quirúrgica Se utiliza para la preparación de torúndas que posteriormente son empaquetadas en papel de 3 a 5 unidades para ser esterilizadas en autoclave antes de su empleo. Algodón Gasa quirúrgica Aplicadores Depresores Soluciones y tinturas desinfectantes Algodón El algodón se utiliza para taponear la boca de los tubos y otras cristalerías que van a ser sometidas a un proceso de esterilización y conjuntamente con los aplicadores de madera en la confección de hisopos finos y gruesos. 3. de madera o plástico. pueden emplearse para extraer medio de cultivo de sus frascos.

9. 5. Describa la estructura y el material con que se fabrican las gradillas. Describa la estructura de los cestos y el material con que se fabrica.CUESTIONARIO 1. 3. 8. Especifique los diferentes usos que se les dan a las gradillas en el laboratorio. ¿Para qué se utiliza la malla de amianto? Mencione los instrumentales quirúrgicos que se utilizan en el laboratorio. 2. ¿Para qué se utilizan materiales de curación en el laboratorio? 167 . 6. 10. 7. 4. Describa la estructura de los trípodes. ¿Para qué se utilizan los cestos? ¿Cuál es la finalidad utilitaria del soporte universal? Describa los diferentes tipos de pinzas de sujección que usted conozca.

los inadecuados métodos de conservación. Visto así. CONCEPTO Se denomina MUESTRA a la porción o volumen de: líquidos corporales. se sustenta en el estudio de las muestras obtenidas del paciente o portador. etc. como por ejemplo: sangre. es indispensable entre otros requisitos. resulta suficiente para considerarla como una muestra representativa. pudiera pensarse que esta paridad. la mala calidad de su obtención y la no observancia de las precauciones de asepsia. exudados. que obtenemos del paciente o portador. Muestra representativa Para que el diagnóstico de laboratorio sea fidedigno. del paciente sean las mismas que contiene la muestra y su cuantía relativamente proporcional. etc. orina. la insuficiente o excesiva cantidad de muestras a utilizar para el cultivo. MUESTRA. lo cual aporta al médico de asistencia un dato valioso que le permite indicar un tratamiento antimicrobiano mucho más eficaz. que propicia la identificación directa o indirecta de los agentes casuales de la infección o enfermedad infecciosa y en determinadas investigaciones información complementaria acerca de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en cuestión a la acción de los fármacos antimicrobianos. etc. que son producidos por algunos microorganismos en su interacción con los tejidos. material excrementicio. 168 . heces. además de propiciar contaminaciones que en su conjunto afectan la calidad de los resultados al perder la muestra representativa. donde presuntivamente se encuentran microorganismos patógenos o los anticuerpos inducidos por sus componentes antigénicos. sin embargo determinados factores y procederes como: la demora en realizar la siembra de la muestra. como el esputo y el pus. Además de las fuentes ya referidas se obtienen del paciente muestras de los productos patológicos. que las especies patógenas que se encuentran en los líquidos corporales. pueden en algunos casos afectar la viabilidad del germen y en otros su cuantía. tejidos.CAPÍTULO 13 TOMA DE MUESTRAS INTRODUCCIÓN El diagnóstico microbiológico de laboratorio..

lo que permite identificarlos mediante la observación de su morfología. ocurriendo similar situación con algunos virus. se siembran en este tipo de medio y se envían a la mayor brevedad posible. larvas o huevos de helmintos. para conservar muestras de orina para el urocultivo. como nutrientes. Fundamento: mantener a los microorganismos en una temperatura similar a la corporal. por haberse tomado en lugares distantes. debido a que son muy reductores.R es muy sensible a los cambios de temperatura. Ejemplo: para la conservación de muestras que contienen protozoarios. como los Mixovirus y Hirpesvirus. En este caso la pérdida de representatividad sería por exceso y no por defecto como suele suceder en los ejemplos anteriores. Cuando la muestra no puede ser sembrada de inmediato. d) Medios de transporte. 169 . c) Formol al 10 %. Cuando esto no sea posible. por ejemplo: la Neisseria meningitidis (meningococos) que con elevada frecuencia se aísla en la muestra de L. para la siembra de exudados caracterizándose por mantener la viabilidad del microorganismo. con la muestra de orina (urocultivo) sucede todo lo contrario. En cambio . b) Incubación a 370 C. Fundamento: el frío enlentece el proceso de multiplicación. a temperatura ambiente.C. que no sobreviven mas allá de tres horas si la muestra en que se encuentra no es inoculada antes de ese tiempo en los medios apropiados. que favorecen su desarrollo y multiplicación. los componentes nitrogenados. Fundamento: mata a los microorganismos sin deteriorarlos significativamente. que comúnmente están presentes en la orina.Demora en realizar la siembra En principio todas las muestras deben ser sembradas lo antes posible en los medios de cultivo que favorezcan el desarrollo de las especies patógenas que presuntivamente contienen procediendo a su inmediata y adecuada incubación. Métodos de conservación a) Refrigeración a 4 0C (en las parrillas). al laboratorio de referencia. caracterizándose por inhibir las reacciones enzimáticas autodestructoras y aminorar los efectos de la oxidación. Ejemplo. Los medios de transporte se emplean generalmente. hidratos de carbono y otros residuos minerales presentes en la muestra son utilizados por la mayoría de las especies. por lo que el frío y la temperatura ambiente provocan su lisis. pero al mismo tiempo sin favorecer significativamente su desarrollo. el proceder a seguir dependerá de la muestra de que se trate.

R (bacilos ácido alcohol resistentes) requiriéndose no menos de 2ml. (leptospiuria) debiendo 170 . la Samonella tiphy se encuentra en la circulación sanguínea por lo que resulta procedente tomar muestra de sangre para hemocultivo.A.A. resultaría insuficiente. Por ejemplo: en la fase inicial de la fiebre tifoidea. Momento idóneo En algunas muestras como el esputo. En otras ocasiones. Cantidades menores o mayores son objetables. al levantarse. el momento más adecuado. va a depender del cuadro clínico del paciente y del tiempo de evolución de la enfermedad. resulta indispensable. pero cuando la enfermedad lleva unas dos semanas de evolución el microorganismo emigra al intestino. como por ejemplo. la sangre para hemocultivo o gota gruesa. Otro ejemplo donde la cantidad de muestra a emplear. por lo que en ese momento lo adecuado es obtener muestras de heces fecales para coprocultivo. a de tenerse en cuenta en algunas ocasiones el momento idóneo y en general delimitar con precisión el área anatómica para su obtención. está normado que la cantidad de sangre total a sembrar sea de un 10 % en relación con el volumen de medio de cultivo a utilizar. transcurre por una evolución similar en los primeros 10 días (periodo de leptospiremia) la leptospiras se encuentran en sangre y posteriormente invaden diferentes vísceras y el sistema renal. La lectospirosis. debe ser recogido por el paciente. Si el volumen de sangre fuera menor que el indicado. como por ejemplo: el hemocultivo. es en la de esputo para investigar B. la cantidad de anticoagulante que se adiciona al medio de cultivo. Calidad de la muestra Para que la muestra sea de buena calidad. que es el momento en que mayor cantidad de expectoración se encuentra acumulada y en otras muestras. que es cuando se encuentra en sangre la mayor cantidad de microorganismos.Cantidad de muestras a tomar En algunas determinaciones. ya que afectan la calidad de los resultados. lo que traería como consecuencia la formación indeseable de coágulos de sangre que interfieren delimitan las manifestaciones de crecimiento (turbidez). se recomienda esperar el momento del pico febril. reducirá proporcionalmente la expresión de crecimiento en los cultivos y si fuera mayor. ya que por las características mucoides de este producto patológico los bacilos se encuentran distribuidos desigualmente en la muestra. el agente causal. en ayunas.

será la mas evocadora de contener la mayor cantidad de microorganismos. traen como consecuencia una serie de contratiempo como son: 1. Cuando la muestra ha sido recolectada por el paciente. Se debe remover previamente los m. Molestias innecesarias al paciente que debe someterse nuevamente a la obtención de la muestra. creando confusión en el momento de establecer el diagnóstico. para evitar que estos contaminen la muestra y se desarrollen en el cultivo.C.obtenerse en la primera fase sangre para hemocultivo y en el segundo momento orina para urocultivo. con implicaciones para la evolución del paciente y el cuestionamiento sobre la calidad del servicio. con alcohol etílico al 70 % con yodo. hisopado o raspado.o. Delimitación del área anatómica Una vez determinado en que órgano o tejido se va a realizar la toma de muestra. en el esputo. la información de un diagnóstico erróneo. lesiones en la piel.R. por ejemplo. Afectaciones económicas por gastos de materiales e insumos. se debe delimitar el área exacta para su obtención por ejemplo: la toma de muestra de lesiones purulentas debe realizarse en la región subyacente y no del pus que se encuentra en el orificio de salida. 3. etc. por ejemplo: para obtener muestras de sangre para hemocultivo. que tenia el enfermo o portador en el momento en que fue obtenida la muestra. favorece. Precauciones de asepsia Son las acciones encaminadas a evitar que la muestra se contamine durante su obtención. Y lo que puede ser mas perjudicial. donde la mayoría de los microorganismos están muertos. 2. 4. con especies microbianas ajenas al proceso infeccioso. no la saliva y en las muestras de heces fecales las porciones mucosanguinolentas. L. Demora en la información del diagnóstico al médico de asistencia para iniciar o modificar el tratamiento. se utilizará la parte mas purulenta. la porción que se tomará para el cultivo. El cumplimiento de estos requisitos. del sitio donde se va a realizar la punción. Las deficiencias en este sentido. de la microbiota residente. que el diagnóstico de laboratorio se corresponda con los agentes infecciosos. 171 .

Exudado faríngeo: Indicaciones específicas: antes de concurrir al laboratorio el paciente debe realizar el aseo matutino habitual. lociones etc. Al menos 12 horas antes de la toma de la muestra. que en el momento de su obtención. hemorrágico y seroso. tales como: productos tópicos (pomadas. solicitándole que abra la boca y emita un ¡ahhh! sostenido. Observe la zona faríngea con ayuda de una lámpara de cuello que proporcione 172 . gotas nasales. óvulos. Suspender cualquier tratamiento local con medicamentos antimicrobianos.INSTRUCCIONES AL PACIENTE El paciente que tiene indicado uno o varios exámenes microbiológicos debe ser instruido por su médico de asistencia o por el personal del laboratorio a los efectos de que recojan la muestra con la calidad requerida. Suspender cualquier tratamiento con antibióticos 48 horas antes de la toma de la muestra. Instrucciones generales 1.). para reducir la probabilidad de que la muestra se contamine con la microbiota normal. inclínele ligeramente la cabeza hacia atrás. lo cual favorecerá. Diferentes tipos de exudados a. colirios. 2. Procedimiento: estando el paciente sentado. en los procesos inflamatorios y que se deposita en los intersticios de los tejidos o en la cavidad de una serosa. DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS Exudados Concepto: es la materia mas o menos fluida salida de los vasos pequeños o capilares por exudación. fibroso. gargarismos etc. la cantidad de microorganismos sea suficiente para que puedan ser observados en los exámenes microscópicos y aislados en los cultivos. o concurran al laboratorio en condiciones favorables para su obtención. Instrucciones específicas Variarán en dependencia del tipo de muestra de que se trate. Se clasifican en: albuminoso. Las instrucciones son de dos tipos: generales y específicas.

en cuyo caso la toma de muestra se hará levantando el borde de la angina y pasando el hisopo por debajo de la misma para contactar con los microorganismos diftéricos. el hisopo podrá estar seco si la siembra se hace de inmediato.una luz intensa. como pueden ser: mucosas enrojecidas o edematosas. adheridas a las mucosas) Deprima la lengua con un depresor y con la otra mano introduzca el hisopo en la cavidad bucal. el paciente debe estar sentado y con la cabeza ligeramente flexionada hacia atrás. cuide igualmente de que no entre en contacto con la lengua. de color blanco o blanco grisáceo. marcada exudación o la presencia de anginas (placas de diferentes formas y tamaño. Procedimiento: al igual que para la toma del exudado faríngeo. b) Pared posterior de la faringe b) Exudado nasal: Indicaciones específicas: No instilarse ningún tipo de gotas nasales 12 horas antes de la toma de la muestra. en particular en las áreas con evidencias patológicas. Fig. mediante una orden de análisis que se realice la investigación pertinente. situados en ese lugar. labios u otra zona bucal. de manera que posibilite la obser173 . telurito e introducido después de la toma en medio de transporte para su conservación. Al retirar el hisopo. en caso contrario deberá humedeserse previamente en solución de glicerina. Si el médico presume que el paciente está infectado con Corynebacterium diphteriae (agente causal de la difteria) indicar al laboratorio. con la finalidad de detectar evidencias patológicas. 94: Toma de muestra de exudado faríngeo: a) Amígdalas. los carrillos o la lengua y frótelo sobre cada región amigdalina y la pared posterior de la faringe. Con el dedo índice presione la base de la nariz. cuidando de no tocar los labios.

vación de los dos orificios, para lo cual se auxiliará de una lámpara. Introduzca el hisopo en ambas fosas nasales, imprimiéndole movimientos de rotación en ambos sentidos, para facilitar la recogida de la secreción.

Fig. 95: Toma de muestra de exudado nasal.

c) Exudado nasofaríngeo: Indicaciones específicas: similar a las explicadas para exudado faríngeo y nasal. Procedimiento: para la toma del exudado nasofaríngeo, se utiliza un hisopo especial consistente en un alambre de cromo o acero inoxidable curvado en su extremo terminal. Después de observar la zona faríngea y las fosas nasales con buena iluminación se procede a introducir suavemente el hisopo por una de las fosas nasales hasta la nasofarínge. Si no fuera posible, introducir el hisopo por la cavidad bucal hasta la nasofarínge, con los mismos cuidados ya explicados en al toma del exudado faríngeo.

Fig. 96: Toma de muestra de exudado nasofaríngeo.

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d) Exudado ótico: Indicaciones específicas: no instilarse gotas óticas de ningún tipo, durante las 24 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de indicar al paciente que se siente, el técnico se ubicará por el lateral que corresponda al oído que será objeto de la toma de la muestra, procediendo a ladear ligeramente la cabeza del paciente para el lado opuesto, con una torúnda o algodón estéril humedecido en alcohol etílico al 70 %, limpiar el pabellón auricular, especialmente la entrada del orificio del conducto auditivo. Disponiendo de una buena iluminación, sujetará la oreja por la parte superior con ayuda d los dedos índice y pulgar, imprimiéndole un movimiento hacia arriba y hacia atrás, lo cual favorecerá la observación del conducto auditivo externo. Manteniendo la oreja en esa posición, introducir el hisopo suavemente en el conducto, imprimiéndole movimientos de rotación con el propósito de recoger la mayor cantidad posible de secreción (otorrea)

Fig. 97: Toma de muestra de exudado ótico: a) Manipulación del pabellón auricular; b) Introducción del hisopo en el conducto auditivo externo

e) Exudado conjuntival: Indicaciones específicas: durante las 48 horas precedentes a la toma de la muestra, no irrigar los ojos con colirios, pomadas oftalmológicas ni anestésicos conjuntivales que tienden a desalojar a los microorganismos del saco conjuntival. La noche anterior, el paciente se debe limpiar el ojo afectado con suero fisiológico o agua previamente hervida. Se puede tapar o no, el ojo en cuestión con un apósito estéril fijado con esparadrapo, ya que se ha demostrado que no influye en los resultados la contaminación ambiental, la mañana en que concurra al laboratorio para que le sea tomada la muestra no debe realizarse nigun lavado facial. Procedimiento: para la toma de muestra del exudado conjuntival, se puede utilizar un hisopo de algodón fino (estéril) o un asa de platino empleada exclusivamente para ese fin, esterilizada en autoclave. 175

Indicar al paciente que se siente y retirar el apósito, con ayuda del dedo índice baje el párpado inferior y proceda de inmediato e introducir con sumo cuidado el hisopo o el asa, evitando tocar las pestañas, o el margen de los párpados, hasta la superficie del ángulo interno (próximo al lagrimal) del "culde- sac" fondo del saco inferior deslizando suavemente el instrumento en dirección al ángulo externo del ojo. También se pueden tomar muestras de las márgenes parpebrales (membranas que tapizan los párpados. En el caso de que el paciente presente furúnculos de las glándulas pilosebáceas anexas a una pestaña (orzuelo) se procederá a obtener un poco de pus, mediante la punción con una lanceta estéril.

Fig. 98: Toma de muestra de exudado conjuntival

f) Exudado uretral: Indicaciones específicas: El o la paciente deben de abstenerse de orinar durante las 4 horas que preceden a toma de la muestra, para evitar que los microorganismos sean arrastrados mecánicamente durante la micción. Debiendo concurrir al laboratorio sin previo aseo matutino de los genitales externos. En mujeres: Se le indicará que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste bocarriba en una camilla ginecológica con estribos, adoptando una posición ginecológica, de manera que los glúteos queden muy próximos al extremo de la camilla, en estas condiciones con la palma de la mano hacia arriba se introduce en la vagina el dedo índice el cual se arquea hacia arriba para comprimir la uretra a través de la sínfisis que le separa de la vagina desplazar el dedo, hacia atrás, sin dejar de comprimir la sinfigis para inducir la salida del pus por la uretra. Conjuntamente se introduce el hisopo, 1cm en el interior de la uretra, haciéndolo girar suavemente para que recoja la mayor cantidad posible del exudado. 176

Fig. 99: Toma de muestra de exudado uretral en mujeres.

En los hombres: La muestra se tomará permaneciendo el paciente parado. Se le indicará manualmente el prepucio hacia atrás y a continuación haga presión hacia delante del pene con el objetivo de "ordeñar" la uretra. Seguidamente se le introduce unos mm el asa de platino estéril en la uretra por unos segundos retirándola finalmente.

Fig. 100: Toma de muestra de exudado uretral en hombres.

g. Exudado vaginal. Indicaciones específicas: Suspender cualquier terapéutica por vía local 2 o 3 días antes de que le sea tomada la muestra. Debe concurrir al laboratorio sin previo aso vaginal desde la noche anterior, aunque puede, efectuar lavado matutino de genitales eternos. Se recomienda no realizar coito vaginal en ese periodo de tiempo. Procedimiento: Se le indicará a la paciente que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste en posición de cúbito supino (boca arriba) sobre una camilla con estribos, adoptando una posición ginecológica (las corvas sobre los estribos y los glúteos muy próximos al borde de la camilla. Antes de proceder a la toma de la muestra se hará una inspección de la región vulvar con el objetivo de detectar inflamación o erosión en las glándulas anexas Skéne o Bartholin, la primera, dos pequeñas glándulas situadas dentro del meato de la uretra femenina, consideradas homologas de las vesículas seminales y la segunda, situadas a ambos laterales del 177

orificio vaginal, cuya secreción tiene la función de lubricar el área para facilitar la penetración del pene. Con el empleo de una torúnda estéril humedecida en alcohol al 70 %, sujeta por una pinza de disección, desinfectar la región vulvar. Seguidamente se procederá a insertar un espéculo estéril de tamaño conveniente sin lubricantes, ya que puede ser tóxico para algunos microorganismos.

Fig. 101: Toma de muestra de exudado vaginal. Paciente en posición ginecológica con el espéculo incertado.

En los casos de niñas se realiza un exudado vulvar y en pacientes vírgenes se realiza también un exudado vulvar y si el orificio del himen lo permite se puede emplear un espéculo pequeño. En los casos de pacientes con cistocele (protución de vejiga en la vagina) la incertación del espéculo debe ser realizada por un personal con experiencia. A continuación se procede a introducir un hisopo estéril hasta el fondo del saco posterior de la vagina el cual será embebido con el exudado. Se recomienda utilizar hisopos con algodón sintético, ya que los ácidos grasos presentes en algodón vegetal puede resultar tóxico para algunos microorganismos. Además del hisopo se puede emplear para obtener la muestra una pipeta de Pasteur estéril con un dispositivo en su parte posterior como el que tienen los goteros para factibilizar la aspiración del exudado. Al momento de tomar la muestra se realiza la medición del pH al exudado. h) Exudado endocervical.Indicaciones específicas: Abstenerse de realizar el coito durante las 12 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de colocada la paciente en posición ginecológica e insertado el especulo (sin lubricantes) en forma similar que para exuda178

occipital y los ventrículos cerebrales Delimitado dentro del espacio que separa las dos membranas pleurales que recubren el tejido pulmonar Se encuentra entre las sinovias o membranas que recubren los tendones Se encuentra entre las membranas peritoneales que delimiten al abdomen TOMA DE MUESTRA (por punción) Lumbar PLEURAL Intercostal SINOVIAL Articular ASCITICO Peritoneal 179 . sujeta por una pinza de disección.C. Los líquidos orgánicos que con regularidad se investigan en los laboratorios de microbiología clínica. estos líquidos son normalmente estériles. por tratarse de espacios anatómicos cerrados. el aislamiento de microorganismos en cualquiera de ellos es evocador de infección. Son producidos por las membranas que recubren los diferentes órganos.do vaginal. la región sub . Seguidamente se introduce un hisopo estéril. que recubren la médula espinal. imprimiéndole movimientos de rotación durante varios segundos para que se embeba en el exudado. se procederá a retirar el moco cervical del cuello del útero con ayuda de una torunda estéril. que se hace comprimir suavemente sobre el cervix. son fluidos serosos. portadores de compuestos orgánicos e inorgánicos. son los siguientes. Cuadro 7: Localización de los líquidos orgánicos DIFERENTES LIQUIDOS L. así como de células leucocitarias. por lo que. Líquidos orgánicos Concepto: Los líquidos orgánicos. REGION ANATOMICA DONDE SE LOCALIZA Canal raquídeo (espacio delimitado por las membranas sub aracnoideas o meníngeas.R.

C. Datos para la obtención de las muestras de líquidos orgánicos y características de su aspecto. lo que propiciará que fluya el líquido a través de la cánula o si la punción se realiza con aguja. Realizar la punción con trocar o aguja apropiada hasta donde se encuentra el líquido en cuestión. hemorrágico o satocrómico (amarillento) Turbio y purulento Turbio y purulento PLEURAL 2 a3 Uno con heparina Uno sin heparina Incoloro y transparente Amarillo claro.Cuadro 8. Recolectar el líquido en tubos de ensayo. LÍQUIDOS CANTIDAD DISTRIBUCCIÓN ORGÁNICOS (ml) EN TUBOS ESTERILES L. Procedimiento: Desinfectar con tiomersal (timerosal) u otro desinfectante apropiado el área de la piel. donde se va a efectuar la punción. previo riguroso lavado de manos y colocación asépticas de guantes quirúrgicos estériles. con y sin anticoagulante (heparina) según se trate. 180 - . insertar una jeringuilla y succionar el líquido. transparente y viscoso Seroso SINOVIAL 2a3 ASCITICO 2a3 Uno con heparina Purulento Recolección de la muestras Serán tomadas por un especialista. Retirar el mandril del trocar.R 3 a 10 3 ASPECTO XXX NORMAL PATOLÓGICO Incoloro y transparente TURBIO.

Indicaciones específicas La toma de muestra debe realizarse cuando el paciente presente fiebre superior a 38 C. la sangre fluirá espontáneamente dentro de la jeringuilla. así como una parte líquida denominada plasma. En caso de que la presión de la vena sea baja. Se le pedirá al paciente que abra y cierre la mano varias veces con el objetivo de inducir el aumento de la circulación y le llene las venas. solo eventualmente se procede a tomar la muestra. que contiene diversas sustancias nutritivas e inmunológicas. en el momento que presente hipotermia. se procederá a verificar el pulso. después de comprobar el tiempo de caducidad. Estando formada por elementos figurados como los hematies. 20 estéril. Con la mano opuesta sujete el antebrazo del paciente. leucocito y plaquetas. palpe el área y seleccione la vena mas prominente con ayuda de la inspección visual. Inserte la aguja en la piel adyacente paralelamente a la vena y hágala penetrar en el lumen. retire el émbolo. un ligero cese de la resistencia indicará que la aguja ha penetrado en la vena. mecánicamente. mediante jeringuilla de vidrio estéril y seca (que no esté caliente) a la cual se le acopla una aguja No. para comprobar que la circulación arterial no ha sido interrumpida. venas y capilares. Desinfecte la zona a puncionar. la jeringuilla acoplada a la aguja se colocan posteriormente en el interior de un tubo de ensayo de tamaño apropiado. Deje secar el alcohol y efectúe la punción. Procedimiento La sangre se obtendrá por venipunción. Extraiga la cantidad de sangre necesaria suelte 181 - . pudiendo utilizarse igualmente jeringuillas y agujas estériles desechables. para asegurarse de que la aguja se encuentre en el interior de la vena. unos 5cm por debajo del sitio que puncionará y estire la piel hacia abajo con el pulgar con lo cual se inmovilizará la vena. Después de estar la ligadura por encima del codo del paciente. primero con agua y jabón y químicamente después con tintura de yodo al 1 % en pacientes (no alérgicos) y posteriormente con alcohol etílico al 70 %. para ello solicite al paciente cerrar la mano y extender el brazo. tome la jeringuilla de tal manera que el dedo índice quede colocado sobre el cabo de la aguja para guiarla durante su introducción en la vena.Sangre Concepto: La sangre es un líquido rojo que circula por las arterias.

proceda a recoger con el borde del bisturí la linfa que emane. antes que la sangre infiltre el corte. que llena los vasos linfáticos. Con el empleo de torundas o motas de algodón humedecidas en alcohol al 70 %. Esta operación se debe realizar en ambos lóbulos y en los pliegues cutáneos de los dos codos. Con un bisturí haga una incisión de unos 5mm de largo por 2 mm de ancho y raspe la zona con su superficie. 3. 1. de manera que ejerzan la suficiente presión para que la sangre contenida en los capilares sea excluida. pH alcalino y salobre. lo cual se evidenciará por un aclaramiento de la zona (zona de isquémia). Retire el círculo central de la retapa metálica del frasco que contiene el medio de cultivo. albúmina. Observaciones: Durante el proceso de toma de muestra. Coloque una pinza en cada uno de los lóbulos.la ligadura y coloque una torunda o un pedazo de algodón seco sobre el sitio de la punción y saque la aguja. Cambie la aguja utilizada por otra estéril del mismo calibre. Está constituida por agua. fibrina y sales. Para sembrar la sangre. Indicaciones al paciente: Las generales. después de desinfectada la piel. rápidamente. 4 o 5 veces para que el anticoagulante que contiene el medio impida que se formen coágulos. pídale al paciente que abra la mano y presione la torunda o algodón por espacio de 2 a 3 minutos con el brazo doblado. Puncione la tapa perforable del frasco y empujando el embolo de la jeringuilla vierta un 10% de sangre en relación con el volumen del medio de cultivo empleado. desinfecte con alcohol etílico al 70 % la tapa perforable y flaméela. Procedimiento: La muestra de linfa se obtiene específicamente de los lóbulos de las orejas y de los pliegues de la piel de los codos.Invierta el frasco inoculado. 3. Linfa Concepto: La linfa es un líquido claro. desinfecte ambos lóbulos y los pliegues de la piel de cada codo. depositándola en la lámina portaobjetos habilitada al efecto. y transparente de color ligeramente amarillento. proceda del siguiente modo: 1. 182 . Retirando la jeringuilla con la aguja y el volumen de sangre sobrante. 2. 2. absténgase de palpar la vena seleccionada con los dedos. 4.

lágrimas) o producidos en el reservorio donde se han acumulado (heces.Fig. en el análisis de varias muestras (6 a 8) enviadas al laboratorio en días alternos. provisto con tapa de rosca. sudor. no correspondiéndose este resultado con el cuadro clínico. En todos los casos las heces deben ser recién emitidas. aunque existan en el tracto digestivo. Excreciones Concepto: Compuestos excretados por las glándulas (saliva. ya que en ocasiones los resultados negativos estando el paciente parasitado debido a que diversas especies presentan las llamadas fases negativas. sin vestigios de sustancias antisépticas. algunas mediante la inducción con laxantes y otras. 102: Toma de muestra de la linfa auricular: a) Colocación de la pinza en el lóbulo de la oreja. equivalente a un 1/3 de un tabaco) y sí fueran sólidas unos 30 ml (una onza fluida) en un frasco limpio y seco.) Heces fecales Concepto: Material que se forma en el intestino básicamentea partir de los residuos del material ingerido no digerido. Indicaciones al paciente: las generales. Se indicará al paciente recoger 10 ó 20g de heces sólidas (aproximadamente del tamaño. por lo que el examen de varias muestras en periodos de tiempo diferentes aumentan las probabilidades de localizar e identificar la especie. con el empleo del laxante (sulfato de magnesia) se logra evacuaciones de heces líquidas o al menos blandas que permiten detectar con 183 . orina. b) Incisión con el bisturí en la zona isquémica. consistente. La primera muestra debe recogerse por defecación espontánea y las sucesivas. se debe realizar un examen seriado. durante las cuales no aparecen sus elementos de diagnóstico. Si el examen de una muestra resulta negativo. al igual que la primera de forma espontánea. Procedimiento: En el caso de heces destinadas para examen parasitológico. etc. preferentemente incoloro y transparente.

No orinar después de las doce de la noche. Procedimiento: 1. En todos los casos la muestra debe ser recogida en frascos estériles entregados por el laboratorio. Además de células epiteliales leucocitos y eventualmente hematies. ser ligeramente ácida. que recoja la muestra en un frasco. con similares características que el empleado para el examen parasitológico. Para realizar con efectividad el aseo. 3. En el caso de heces destinadas para coprocultivo: Indicar al paciente. Orina (para urocultivo) Concepto: La orina es un líquido secretado por los riñones. En los casos de niños pequeños. el cual debe ser solicitado en el laboratorio. 2. tener un olor peculiar y un sabor salino. ácido hipúrico. 2. desechando el resto de la orina. pero estéril. como es lo habitual. Comenzar a orinar desechando el primer chorro. contrario a lo que ocurre con las heces sólidas. Tapar el frasco inmediatamente y enviar la muestra al laboratorio antes que transcurran dos horas. Destapar el frasco estéril y depositar con cuidado de 10 a 20ml de la porción media.mayor frecuencia la presencia de quistes y huevos de helmintos. que se caracteriza por tener un color amarillo. glucosa etc. urea. Indicaciones específicas: 1. Está compuesta principalmente por agua en la que se encuentran en disolución diversos compuestos. Nota: Las mujeres deben orinar paradas y recoger la orina "al vuelo". los hombres se deben retirar bien el prepucio y las mujeres separar los labios. las probabilidades de contaminación con los gérmenes procedentes de la microbiota residente o transitoria aumentan. ácido urico. etc. ya que orinar sentadas. Aguantar la micción. y otros componentes como. 184 . Aseo matutino de genitales externos con agua y jabón. se emplean colectores estériles que deben ser cambiados si la misción se demora o si se contamina con heces. como. y enjuagar con agua previamente hervida y yodada.

Con una pinza de disección arrancar varios cabellos que se observen fluorescentes. En los accesos fríos se toma igualmente con aguja y jeringuilla.Faneras Concepto: Término general aplicado a las infecciones persistentes en la superficie de la piel. enjuagándose con solución salina fisiológica estéril cubriendo la lesión con apósito estéril. 185 . g) Observar la cabellera del paciente bajo la luz de una lámpara de Wood. se toma la muestra. tomar la muestra en el entorno del borde sin tocar la piel. Los más comunes son el pus y el esputo: . En los abscesos calientes. Indicaciones específicas: Suspender cualquier tratamiento local. puncionando la lesión con una aguja insertada a una jeringuilla. b) Absceso subcutáneo. (escamosa en piel). La noche anterior a la toma de la muestra. eliminándose por la boca o siendo deglutido. la de muestra de la uña infectada se realiza mediante raspado de la superficie y debajo de la uña con un bisturí. el paciente debe asearse la zona de la lesión con agua y jabón. c) Lesión seca. Con hisopo estéril.Pus (ya explicado en la toma de muestras de piel) . raspar la lesión con un bisturí. y colocarlos en el interior de una placa de Petry estéril. e) Fístula. 48 horas antes de la toma de la muestra. el pelo o las uñas. d) Lesión grasienta o purulenta. Previa desinfección de la zona con una torunda estéril. f) Uñas. Tamponar la lesión con solución salina fisiológica estéril. fino. el cual le será retirado en el laboratorio. recolectando la descamación en el interior de una placa de Petry estéril. que es expectorada por las vías respiratorias superiores. humedecida en alcohol etílico al 70 %. previa desinfección de la piel. recobrando el material en el interior de una placa de Petry estéril. mediante el esfuerzo de tos profunda.Esputo. Materia densa y viscosa. para seguidamente tomar la muestra con hisopo. PRODUCTOS PATOLÓGICOS Concepto: Producto resultante de la actividad de algunos microorganismos al interactuar con los tejidos. Procedimiento: a) Lesión abierta en piel. Al igual que para la toma de muestra de la lesión seca en piel. pero específicamente en el punto mas elevado de la colección purulenta. Desinfectar previamente el orificio y tomar la muestra con hisopo fino estéril en profundidad.

3. Describa el procedimiento a seguir para obtener del paciente una muestra de sangre para hemocultivo. 14. 4. 3. 18. Nombre los diferentes líquidos orgánicos que se obtiene del paciente para investigaciones microbiológicas. Recoger en un frasco estéril con tapa de rosca y color ámbar la primera expectoración de la mañana. retirar las prótesis y realizar aseo matutino bucal. 13. 5. CUESTIONARIO 1. 7.Indicaciones específicas: 1. ¿Como usted procede para obtener una muestra de linfa para el paciente? ¿Cómo se le indica al paciente recoger las muestras de heces fecales para examen parasitológico? ¿ Que instrucciones debe seguir el paciente para recoger muestras de orina para urocultivo? ¿Como usted toma las muestras de las faneras? ¿Que indicaciones le daría al paciente para recolectar una muestra de esputo con calidad? 186 . mediante inspiración. adecuado. 10. Durante la recolección del esputo evitar que se produzca derramamiento del mismo. 16. Al levantarse en horas de la mañana. 8. ¿Que implicaciones puede tener la demora en la realización de la siembra? Explique los diferentes métodos empleados para la conservación de las muestras. 11. seguida de tos profunda. tratando de no recoger saliva. En su opinión que es una muestra? ¿Que usted entiende por muestras representativas? Refiérase a las diferentes causas que pueden afectar la representatividad de una muestra. La cantidad de muestra a tomar? ¿En que momento se debe tomar la muestra? ¿Porque es importante delimitar el área anatómica de donde se va a tomar la muestra? ¿En que consiste las precauciones de asepsia? ¿Que instrucciones generales debemos dar al paciente que tiene indicado un examen microbiológico? ¿Que es un exudado? Nombre los diferentes tipos de exudado que podemos tomar del paciente. 12. 2. Para la recepción ver capítulo de Bioseguridad. 9. ¿Que importancia tiene para usted. 19. 6. 17. por la parte externa del frasco. 2. Enviar lo antes posible la muestra al laboratorio (separada de la orden de análisis). 15. 4.

huevos de hemintos. esencialmente se pretende observar: la morfología de los microorganismos y/o sus diferentes estructuras. 187 . la muestra a emplear se utiliza. El procedimiento a emplear para el montaje de las muestras en láminas. aunque en algunas ocasiones resulta pertinente centrifugarla para concentrar los elementos. la manera de agruparse y sus afinidades tintoriales. sin la adición de ningún reactivo. Procedimiento: 1. así como. el propio tubo que contiene el sedimento o una pipeta estéril. Empleando un asa de platino previamente flameada. etc. tal y como se obtuvo. sin rayaduras ni manchas. las muestras a investigar deben ser preparadas previamente sobre láminas portaobjetos escrupulosamente limpias. los procederes básicos. que presuntivamente contiene y facilitar su localización durante la realización de la microscopía. DIFERENTES MÉTODOS Preparación de muestras en láminas para examen microscópico en fresco Para la realización de este montaje. deposite una gota de la muestra en el centro de la lámina portaobjetos. Para la realización del examen microscópico. En los exámenes microscópicos. variará en dependencia de los objetivos que se pretenden con la microscopía y de la muestra de que se trate. detectar la presencia de células. sobre los cuales se sustenta el diagnóstico microbiológico de laboratorio. constituye junto con el cultivo y las pruebas de identificación. larvas. ni procesamiento previo.CAPÍTULO 14 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS INTRODUCCIÓN La microscopía. leucocitos y otros elementos de interés como pueden ser.

2. Coloque la lámina excavada sobre el cubreobjetos. 2. Si el microorganismo a examinar se hubiera desarrollado en un medio sólido se procederá a colocar previamente sobre la lámina cubreobjetos una gota de suero fisiológico y posteriormente se tomará con asa de platino estéril y fría. tome una asada del cultivo germinado en medio de cultivo líquido y deposítela en el centro de una lámina cubreobjetos. de manera que la preparación quede justamente debajo de la excavación y ambas láminas queden pegadas por el petrolado. Si quedara algún espacio sin cubrir se incurriría en error por defecto. Para evitar que queden espacios con burbujas de aire. b) Colocación encima de la muestra de una lámina cubre objetos. Método de la gota colgante Este método se emplea específicamente para constatar mediante la observación microscópica si el microorganismo en estudio es o no móvil.Fig. 188 . debe quedar. Procedimiento: 1. Si el volumen de la gota fue el adecuado. Proceda a flamear al rojo un asa de platino y una vez fría. la colocación del cubreobjetos debe efectuarse suavemente. En ambos casos se debe repetir el montaje. exactamente debajo de toda el área del cubreobjetos. el error en el montaje sería por exceso. procediendo a emulsionarla en la gota de suero fisiológico. Coloque sobre la gota de la muestra o sedimento una lámina cubreobjetos. debido a insuficiente cantidad de muestra y si se derrama por fuera del cubreobjetos. Coloque sobre la mesa de trabajo una lámina portaobjetos excavada y auxiliándose de un aplicador unte petrolado en todo el perímetro de la excavación. 3. una pequeña porción de la colonia. l03: Preparación de muestras en láminas para exámenes microscópicos: a) Depositar una gota de muestra en el centro del portaobjetos.

Preparación en láminas de muestras coloreadas Este método se utiliza cuando se requiere teñir a los microorganismos y/o su entorno. En estas condiciones se coloca en el microscopio para su observación. Fig. Ejemplo: Examen directo de heces fecales. se requiere en cada caso técnicas de tinción especiales para la coloración de cada una de ellas. Adición de colorantes a la muestra Se procede exactamente igual que para la preparación en fresco con la diferencia de que la muestra es emulsionada con el colorante en cuestión. b) Cubreobjetos con una gota de cultivo. La preparación en láminas se efectúa por dos procederes diferentes: la adición del colorante a la muestra o la preparación de frotis. con el empleo del colorante Eosina. antes de ser colocada la lámina cubreobjetos. para su mejor observación o para determinar sus afinidades tintoriales. d) Viraje de la preparación. Con un movimiento suave voltee sin temor la preparación. 189 .4. c) Ensamblaje de la lámina excavada con el cubreobjetos. Debido al ínfimo tamaño o la composición bioquímica de las diferentes estructuras. de manera que el cubreobjetos quede encima con la preparación la cual quedará colgando. 104: Esquema de una preparación de gota colgante: a) Portaobjetos con una excavación central rodeada de un anillo de petrola to.

Procedimiento: Fig. Si desea acelerar este proceso puede introducirlo en una incubadora pero nunca. La exposición al calor directo provocará que las estructuras de naturaleza proteíca. déjelo sobre la mesa de trabajo hasta que el agua residual que contiene se evapore y se seque. en la llama del mechero para acelerar el proceso ya que los gérmenes pueden deformarse y generar confusiones al microscopista. el frotis debe hacerse muy fino para que se pueda distinguir adecuadamente su agrupación característica. Debe ser grueso. Si la muestra o el cultivo fueran líquidos. deposite sobre la lámina portaobjetos una cantidad suficiente. ya que los microorganismos cuando se hayan en un medio líquido tienden a estar muy dispersos. se debe echar previamente en el centro de la lámina portaobjetos una gota de solución salina fisiológica y posteriormente emulsionar la colonia con un asa de platino estéril con la que se hará la extensión. de manera que la parte posterior de la lámina sea lamida por la llama. tome la lámina por los bordes con los dedos índice y pulgar. Pase la lámina directamente por la llama del mechero dos o tres veces. 105: Preparación de una preparación sobre láminas portaobjetos. se coagulen.Preparación de frotis El frotis consiste en una extensión de la muestra con hisopo o asa de platino sobre la lámina portaobjetos. lo cual dificulta su localización en el examen microsocópico en la medida en que el frotis sea demasiado fino. lo que provocará que la preparación quede adherida a la lámina y no sea desprendida después de la coloración por el agua que se utilice para eliminar el exceso de colorante. los microorganismos están muy conglomerados. Debido a que en las colonias. Si el frotis se fuera hacer empleando una colonia germinada en medio de cultivo sólido. que le permita hacer un frotis grueso con ayuda de un asa de platino estéril. de manera que la extensión quede hacia arriba. de manera que al sacarse quede formando una capa. Después de realizado el frotis. Una vez seco el frotis. 190 .

4. 2.Fig. 106: Fijación de un frotis a la llama del mechero. CUESTIONARIO 1. 5. ¿En qué consiste un frotis? Explique las diferentes maneras de preparar los frotis de acuerdo al tipo de muestra de que se trate. 6. Especifique para qué se realiza el método de la gota colgante. Describa el procedimiento para el montaje de muestras para la observación de examen en fresco ente cubre y portaobjetos. ¿Cómo usted fija los frotis? ¿Con qué objetivo se fijan los frotis? 191 . 3.

3. 192 . por lo que resulta muy difícil su observación en las preparaciones acuosas sobre láminas portaobjetos. los siguientes: 1. CONCEPTO Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico. sometidas a la intensa iluminación que se requiere en los exámenes microscópicos de campo brillante. 2. Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que contiene indican. el cual se fermenta para producir el colorante.CAPÍTULO 15 COLORANTES Y COLORACIONES INTRODUCCIÓN Las bacterias. FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES Atendiendo a la fuente de obtención. pigmentos. teniendo un aspecto semitransparente. siendo necesario colorearlas por diferentes métodos de tinción que factibilicen su observación y distinguir las características morfológicas y estructurales que sirvan de datos para su identificación genérica. Carmín: Se produce. los colorantes se clasifican en naturales y sintéticos. Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenes de los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria. Colorantes naturales Los colorantes naturales son básicamente histológicos. encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia. levaduras y protozoarios. en su estado natural. empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos. mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis". un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir. generalmente tintes. debiendo tener al menos. carecen de color. reactivos u otros compuestos.

o es mas exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno. GRUPO QUINONIMINA SUB-GRUPO TIACINA ACINAS C O LO RAN T E Azul de metileno Toluidina Rojo neutro Safranina C Nigrosina Verde malaquita Verde Brillante Violeta cristal Eosina B e Y Mercuro Cromo 220 FENILMETANO DIAMINOTRIFENILMETANO XANLEIRO FLUORANA Rosa de bengala SULFONSFTALEINA Azul de bromofenol Verde bromocresol Azul de bromotimol Rojo cresol Fenolftaleina Rojo fenol Azul timol Acriflavina Naranja de acridina ACRIDINA CLASIFICACIÓN Los colorantes se clasifican. 193 . ácidos y neutros. Clasificación de los colorantes. Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundo de México y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium campechianum. teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el aniòn o el catiòn de su estructura química. Atendiendo a su estructura química se agrupan de la siguiente manera: Cuadro: 9. Colorantes sintéticos Se obtiene de la anilina.4. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: básicos.

ocurre una combinación de reacciones físicas y químicas. mientras que el catión no tiene propiedad. provocando su inmovilización. que tiene la propiedad tintorial de sus componentes ácidos y básicos.cloruro de azul de metileno+. Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinción se reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador. la sustancia colorante esta a cargo del anión. soluble exclusivamente en alcohol. constituye el colorante neutro. por ejemplo: . por lo tanto el proceso de la tinción generalmente resulta letal para los microorganismos. Reacción química Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fósfato combinándose como colorante básicos cargados positivamente. como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al microorganismo. VENTAJAS Y DESVENTAJAS Los colorantes son sustancias tóxicas.de sodio+ Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de colorantes ácido y básicos. mientras que el anión no tiene esa propiedad. 194 .Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión. por ejemplo: eosinato. lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador según sean los objetivos con la sustancia colorante. empleándose como colorante de contraste para colorear su entrono. pero si el fondo del campo microscópico. por ejemplo: la giemsa. AFINIDADES TINTORIALES En el proceso de la coloración. donde el precipitado resultante. Veamos algunos ejemplos: 1. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula. Colorante ácido: Sucede todo lo contrario. TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular. Reacción física Ocurre un fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas.

formando parte de una solución.2. el más empleado en los laboratorios de bacteriología. los métodos de coloración se clasifican en: Tinción simple. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno. Otros se emplean como desinfectantes microbianos. 4. Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir. 5. etc. Coloración de Gram En 1884. Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador. tinción compuesta y tinción especial. Entre los métodos mas utilizados se encuentran: La coloración de Gram. Los colorantes se aplican. violeta cristal y fuscina fenicada. Ejemplo: rojo fenol. utilizándose fundamentalmente para observar su morfología y tamaño. a la preparación. con fines de microscopia. que es en la actualidad. me195 . En consecuencia se puede determinar algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de los demás. 3. formando parte de la composición de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como consecuencia de su actividad metabólica. ideó un método de coloración. sino como indicadores de pH. por lo que reciben también el nombre de coloraciones diferenciales. algunos incluso han resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del mercado. Por ejemplo: el verde de malaquita. mas que para teñir. entre otros. Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos. Tinción simple En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se tiñe rápidamente el microorganismo. y la de Ziehl Neelsen. por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas. Tinción compuesta En este tipo de tinción. el danés Hans Chistian Gram. METODOS DE COLORACIÓN Atendiendo a los objetivos que se persigan. siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. azul de bromotimol. se utiliza más de una sustancia tintórea. separados o juntos.

...... Agua destilada ....... 2g . Añadir el resto del agua....Alcohol absoluto... ..... Alcohol etílico 95 % ........ 100 mL Preparación ( en un mortero): ..................... Alcohol etílico 95 % o alcohol acetona al 20 % ..... Agregar poco a poco las dos terceras partes del agua destilada...... 3..Violeta de genciana ....diante el cual. ..... Diluir los cristales de violeta de genciana en alcohol..... Acetona .. con ayuda del brazo del mortero..10 mL .. Cristales de yodo .... Revolviendo constantemente..... envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca..... .. en dependencia de la composición químico de la especie.. .............. " Dejar la preparación en reposo durante 24 horas y filtrarla con papel de filtro.....................Cristales de ácido carbólico... Solución violeta de genciana al 1% ....... Echar la mezcla en una probeta graduada de 100 ml de capacidad. hasta enrasar en 100 ml.. 2g .... Rotular.. Después de diluida la acetona en el alcohol............ ....... 80 mL ................ 300 ml Preparación (en un mortero): .......... 1g .................. Agregar poco a poco el agua destilada..... queda teñida de color violeta o de color rojo.. 2..... Colorantes y reactivos 1......... .. Yoduro de potasio . .... Lugol de Gram.... Con el resto del agua. ... ... Agregar los cristales de ácido carbólico y mezclar......... 20 ml Preparación ... 1g ...... la bacteria sometida a esta tinción..................... revolviendo constantemente con el brazo del mortero......... Envasar en frasco ámbar o plástico no transparente con tapa de rosca y rotular...Agua destilada ......... Envasar en frascos de vidrio de color ámbar con tapa de rosca o preferiblemente con tapa de vidrio esmerilado...... enjuagar el mortero y añadir este residuo con cuidado en la probeta.... 196 ..... Mezclar los cristales de yodo con los de yoduro de potasio......

.. hasta que se evidencie que este solvente no extrae mas el colorante violeta. 5. Lavar con agua corriente. 4.4.. Echar sobre la preparación el alcohol etílico 95 % o el alcohol acetona al 20 %. Echar sobre la preparación la solución de safranina... 107: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Gram.. dejando que el colorante actué por espacio de 30 segundos.. 3.... Envasar en frascos de vidrio o plástico. 1g . 2...... 1.. Debe tenerse en cuenta que el agua y en especial... Secado de lámina Al concluir el proceso de coloración..... Agua destilada .... Fig. 8.. Procedimiento Después de fijado el frotis a la llama del mechero. Safranina .. dejándola actuar por espacio de 30 segundo.. hasta cubrir el frotis. hasta cubrir el frotis dejando que actué durante 30 segundo.. 6. Lavar la lámina con agua corriente. 7.... Echar la safranina en un mortero y añadirle poco a poco al agua destilada hasta diluir el colorante.... . la lámina se debe colocar de canto para que se escurra. Lavar la lámina con agua corriente. Lavar la preparación ligeramente con agua corriente. Rotular. Verter la solución de violeta de genciana.. Echar sobre la preparación el lugol de Gram. Esta operación debe durar aproximadamente de 1 a 2 minutos....... 100 ml Preparación ( en un mortero): . . colocar la lámina sobre el puente de coloración.. el agua 197 .. Solución de Safranina al 1 % . Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro.

es un agente decolorante. en tanto que otros son decolorados quedando la bacteria nuevamente incolora. no es igual en todos los géneros. existiendo controversias al respecto.destilada. mantienen la coloración violeta ya que la safrania es un colorante mas débil que la violeta y su adición no influye significativamente en cambio de color. Al echar finalmente la solución de safranina (que es de color rojo ) las especies que no fueron decoloradas. El criterio mas generalizado es que la violeta y el lugol forman un complejo que reacciona con los componentes bioquimicos de la pared celular deshidratada. Teniendo en cuenta que la composición química de la pared. Diagnóstico microscópico Las bacterias que se observan de color violeta se clasifican como Gram positivas y las que se observan de color rojo. en tanto que los géneros que fueron decolorados por el alcohol. para fijar el color en la bacteria. lo que permite al solvente penetrar y extraer el complejo violeta-lugol. que mientras algunos géneros retienen firmemente el colorante al resultar el complejo impenetrable para el decolorante. no se produce ningún cambio de color. sino un mordiente. 198 . adquiriendo un color de rosado o rojo. Lo ideal es escurrir la lamina poniéndola de canto y seguidamente secarla con papel de filtro. aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción. Al adicionar el lugol. dejando a la bacteria nuevamente incolora. se tiñen con la safrina. como Gram negativas. por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo demasiado tiempo quita parte del colorante. que se adiciona con el objetivo de formar un complejo violeta-lugol. la reacción resultante será obviamente diferente. Al adicionar el decolorante (alcohol etilicio o alcohol acetona) algunos géneros no son afectados por estos solventes. Principios A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace mas de un siglo. Fundamento técnico En el primer paso de la coloración. lo que da lugar. todos los géneros que se encuentran en el frotis se tiñen de color violeta. en otros géneros la barrera que se produce es más permeable. reteniendo por consiguiente el color violeta aplicado inicialmente. ya que el lugol no es un colorante. cuando los microorganismos presentes en el frotis son expuestos a la acción colorante de la violeta de genciana. fijándose en esta.

... ... 1. 100 ml Preparación: ... Añadir el resto de la solución de fenol hasta enrasar a 100 ml.. Echar 50 ml de la solución en una probeta graduada de 100 ml de capacidad.. 10 ml .. Envasar en frascos de vidrio de color ámbar y rotular..... Fig. . Ácido clorhídrico concentrado.... 108: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Ziehl Neelsen. con alguna que otra modificación en función de las particularidades de la especie en estudio...... Dejar la preparación en reposo por espacio de 24 horas y filtrar con papel de filtro.... 5g ........ .. tienen la propiedad de retener el colorante con que han sido teñidas.. Moler en un mortero 1g de fucsina y añadir en la probeta que contiene los 50 mml de la solución del fenol. Este método se utiliza hoy en dia.........3 ml 199 .... Alcohol etílico . Colorantes y reactivos ... Fucsina básica ... ........... aunque sean sometidos a la acción de solventes tan fuertes como los ácidos para su decoloración.. el primer método de coloración para este tipo de microorganismo.... fue concebido y aplicado por Robert Koch....... Alcohol clorhidrato al 3 % ... descubridor del agente causal de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis o Bacilo de Koch... Agua destilada ... Fue modificada y perfeccionada posteriormente por Ziehl y Neelsen...... 97 ml . 2.....Coloración de "Ziehl Neelsen Algunos géneros microbianos dentro de los que se incluyen las microbacterias....... Alcohol absoluto .. Disolver los 5g de fenol en 100 ml de agua destilada... 1g ... Cristales de fenol .. ... Lavar el mortero con la solución de fenol y añadir ese residuo en la probeta..

.. Preparación.. 1........ pero sin volver a calentarlo....Preparación .... Envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca.. (Nunca a la inversa). Cloruro de azul de metileno . 200 ... Retirar el mechero y dejar que el colorante actué sobre el frotis por espacio de 5 minutos.... Rotular.. 100...1g .... Solución de ácido sulfúrico al 20 % . Rotular.....0 ml El cloruro de azul de metileno es hidrosoluble.. dejar en reposo por 24 horas y filtrar con papel de filtro... Solución de azul de metileno (Colorante de contraste) ... por lo que su dilución se realiza sin ningún tipo de contratiempo Preparación.. los 20 ml de ácido sulfúrico a los 80 ml de agua destilada... hasta que el colorante calentado comience a emitir vapores........ 0... ....... añadir más..... Envasar en frascos de vidrio con tapa de rosca.... Si en ese tiempo el colorante se secara. Rotular... . Envasar en frasco de vidrio con tapa de rosca. 20 ml...... .. ........ Ácido sulfúrico........... Procedimiento: Después que el frotis se ha secado colocar la lamina sobre el puente de coloración.. 3........ 4...... Agregar los 3ml del ácido clorhídrico a los 97ml de alcohol etílico. Agregar poco a poco.......... con cuidado. ... 80 ml..... Agua destilada... Agua destilada .......... Cubrir el frotis con fucsina fenicada y oscilar suavemente la llama del mechero por debajo de la lamina... Una ves diluido.. .

después de teñidos por la fucsina. pero las especies que si fueron decoloradas. 6. tiñéndose la pared celular. todos los microorganismos. en tanto que las demás se quedan incoloras. el compuesto lipidico impermeabiliza la pared a la acción del decolorante ácido. las especies que posean el ácido micolico en la pared. como el Mycobaccterium tuberculosis y otras especies susceptible de ser coloreadas por esta técnica. resisten la acción decolorante y se mantienen teñidas de rojo. ladeando la lámina y lavarla con agua corriente.A. 3. (Bacilos ácidos alcohol resistentes) 201 .2. hasta que se observe que el solvente no extrae mas colorante de la preparación.R. Lavar la lámina con agua corriente. son decolorados. Añadir la solución acuosa de azul metileno. introducido en este método. se tiñen de azul. se caracterizan por tener una alta proporción de ácido micolico (lípidos) en su pared celular. Echar sobre frotis la solución de alcohol clorhídrico o en su defecto la solución acuosa de ácido sulfúrico. 5. Principio: Las microbacterias. así como las células epiteliales y otros artefactos. independientemente de que dispongan o no de ácido micolico en sus respectivas paredes celulares serán coloreados de rojo. Lavar la lámina con agua corriente. Diagnóstico microscópico Los bacilos que se observan coloreados de rojo están diagnosticados como B. dejando actuar el decolorante. La acción del calor. 4. Dejar que la lámina se seque al aire sin aplicar papel de filtro para acelerar el secado. Verter el exceso de colorante de la lámina. que no disponen de ácido micólico en su pared o membrana. dejando actuar el colorante de 30 segundos a un minuto. 7. Al aplicar el decolorante ácido. hace que la misma se permeabilice y haga accesible la penetración de la fucsina. Esta operación debe durar aproximadamente unos 2 minutos. al igual que las células epiteliales y otros artefactos presentes en la preparación.A. Al aplicar la coloración de contraste (azul de metileno) las bacterias que retuvieron el color proporcionado por la fuscina. no sufren ninguna alteración permaneciendo de color rojo. Al normalizarse la temperatura de la preparación. con lo cual el microorganismo se mantiene teñido. Fundamento técnico Al someter el frotis a la acción de la Fucsina. El resto de las especies.

Tinciones especiales: Existen decenas de metodos de coloraciones especiales. 4. Lavar la lamina con agua cruda. Repetir el paso 3. NOTA: Estos colorantes se comercializan ya elaborados por diferentes empresas. Lavar la lamina con agua corriente escurrir y dejar secar al aire. Dejar actuar el colorante de contraste por espacio de 1 a 2 minutos. granulos. Coloque en el fondo de un vaso de koplin. lo que ha dado lugar a una modificación del metodo de tinciòn clásico. 11. 2.leprae. Coloque la lamina sobre el puente de coloración y cubrala con fuscina basica. 8. esporas. verde de malaquita o hematoxilina. 9. Dejar actuar el decolorante por espacio de 2 minutos. 6. etc. En este tema haremos referencia solo a algunos metodos empleados con mayor frecuencia. Lavar la lamina con agua cruda.tuberculosis. es diferente a la del M. capsulas. Sacar la lamina del vaso de koplin y pasarla nuevamente 3 veces por la llama del mechero. 10. una pequeña mota de algodón impregnado con 3 gotas de formol al 40 % 3.Ccoloración de Ziehl Neelsen (modificada para Mycrobacterium leprae) Justificación: La capacidad de acidorresistencia del M. Colocar la lamina sobre el puente de coloración y cubrirla con azul de metileno. proceda de la siguiente manera: 1. generalmente no susceptible de ser coloreados por los metodos anteriormente explicados. Dejar actuar el colorante por espacio de 20 minutos 7. Intriouzca la lamina en el vaso de Koplin y tapelo. Colocar nuevamente la lamina sobre el puente y cubrirla con alcohol clorhídrico al 1%. Dejar actuar los vapores de formol por espacio de 3 minutos. Pase la lámina 3 veces por la superficie de la llama del mechero. tales como flagelos. 5. Procedimiento: Después que el frotis se ha secado al aire. destinadas a la tinciòn de las diferentes estructuras de la celula microbiana. 202 . para hacer mas efectiva su tinciòn.

......Coloque sobre la mesa de trabajo 3 láminas portaobjetos limpias y acabadas de calentar...... 2.... Las laminas a emplear deben calentarse previamente y enfriarse a la temperatura corporal................ Requisitos a tener en cuenta Para que la tinciòn de los flagelos sea efectiva se requiere cumplir con los siguiente requisitos 1... Procedimiento 1............Acido tanico. Los cultivos tienen que ser jóvenes.. 2...0 ml Preparación: Mezclar a volumen iguales A y la B..2g . cuyo diámetro no excede de los 30mm............ tanto los flagelos como su disposición con respecto al bacilo se hagan visibles al microscopista..........Fuscina basica (certificada para colores flagelos) ........... 3...... Colorantes y reactivos Solución A: .0 ml Mezclar y dejar a temperatura ambiente Solución B ..................... para lo cual se emplea una suspensión de acido tanico que al precipitarse sobre su cubierta forman una capa que aumenta aparentemente su diámetro. 203 ........ Las laminas portaobjetos y cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpias sin el mas minimo vestigio de grasa. 100.... 0.... 100. 1... para que los frotis se sequen con rapidez..Alcohol etílico 95% ... Guardar congelado en refrigeración (Tiempo de conservación: 1 mes).. lo cual esta muy por debajo del poder de rersouciòn del micrososcopico optico...........Coloración Fragelar de Leifson (modicficación de Clark) Los flagelos son estructuras... 1. Ajustar el pH con NaOH/1N............. Los medios de cultivo empleado para el desarrollo de las cepas deben ser adecuados........ 4.. Para hacer visibles a los flagelos se requiere aumentar su grosor.5g ...Agua destilada.Cloruro de sodio.. Envasar en alícuotas de 50 ml.75g .. Lo que propicia que al ser posteriormente coloreado....1..

la segunda por espacio de 10 minutos y la tercera 15 minutos. 3.Espere a que las laminas se sequen al aire.Deposite una gota grande de una suspensaiòn bacteriana joven. Mezclar 5 mL de solución alcohólica satura de violeta de genciana en 95 mL de agua destilada. que después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. 2. 5. 6. Procedimiento. Haga un frotis fino y déjelo secar al aire. Esperar de 5 a 10 segundos. 7. procedente de un cultivo líquido o del agua de condensación de un cultivo sólido. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lámina hasta que el colorante se caliente y empiece a emitir vapores. 4. Sobre una lámina portaobjetos mezcle partes iguales del material a teñir con suero específico. casi al extremo de cada una de las tres láminas e inclínelas suavemente para que la gota se deslice (no extender con asa).000 en solución acuosa 1:2. Coloración de cápsulas La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir de polipéptidos. Coloración de Hiss -Colorante capsular de Hiss. Fije la preparación a la llama del mechero. 204 .Lave con agua corriente.000 de borax y deje actuar el colorante por espacio de 10 minutos. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a coloraciones especiales.Lave con agua corriente y espere a que las preparaciones se sequen al aire.2. 3.Cubra cada frotis con solución de azul de metileno 1:1. polímeros de glucosa u otros aminoazucares que contienen nitrógeno. Cubra el frotis con el colorante de Hiss. Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria.Eche sobre cada lámina portaobjetos 1mL del colorante de Leifson y déjelo actuar con un tiempo diferente para cada preparación. 4. Una de las láminas por espacio de 8 minutos. 1.

........................100 ml Preparación 1. Procedimiento Coloque en el centro de una lámina portaobjetos un asa de la preparación y mézclela con un asa de nicrosina de Dorner.......... Dejar secar y observar a microscopio a 700x con lente de inmersión.... Las células vegetativas no se colorean y el fondo del campo adquiere un tono gris....... 2. en baño de agua de ebullición................Hervir de 10 a 15 minutos...... Dejar que la preparación se seque al aire y examinar al microscopio. Hervir la solución en erlenmeyer durante 30 minutos.... Coloración de Esporas Coloración de Dorner. 4............5 mL de formol al 40 % (como preservo) Filtrar dos veces con papel de filtro doble........ Resultado Las esporas se observan de color rojo. -Nigrosina .. Agregar 0. En un tubo de ensayo haga una suspensión densa del microorganismo en estudio con 3 o 4 gotas de agua destilada.. 3....Agregar 3 o 4 gotas de fucsina fénica de Ziehl Neelsen. Colorante.. haciendo un frotis delgado. Solución de nigrosina de Dorner.. así como otras células y el fondo del campo se tiñen de rojo intenso en tanto que las cápsulas se observan incoloras y en ocasiones con un matiz azul muy tenue................ 10g -Agua destilada .. ...... Lavar el colorante con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%... Resultado Las bacterias.............. Distribuir en tubos de ensayo serológico.... unos 5 mL por tubo procediendo a taponearlos con tapas de corcho......5............... 6.. ..... 205 ... retapándolos finalmente con papel de aluminio.....

1... Azul de metileno..0 mL Preparación Mezclar el azul de metileno en un mortero.......... 2...... ¿Cómo tiene lugar las reacciones químicas en el proceso de tinción? 9. ¿Cuáles son las ventajas y las desventajas de la toxicidad que ocasionan los colorantes a los microorganismos? 10.... Mencione tres tipos de colorantes naturales... CUESTIONARIO 1.. Preparación.... 5.. ¿En qué consiste el método de coloración compuesta? 206 ................ 4................ Procedimiento 1...... 3..... Resultados Los gránulos se tiñen de azul oscuro y el cuerpo de la bacteria de azul claro. Azul de metileno ... 6.... 3.....5g Alcohol etílico 95 % ...... 100.... ¿En qué consiste el método de coloración simple? 11..... Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro.. Lavar con agua corriente. Caracterice a los colorantes de acuerdo a su clasificación.............. En su estado natural ¿qué color y aspecto tienen las bacterias? ¿Qué usted entiende por colorantes? ¿Cuáles son las diferentes fuentes a partir de las cuales se obtienen los colorantes? 4..... Cubrir con el colorante y dejar actuar durante tres minutos . Hacer frotis finos y dejar secar al aire......... Dejar secar al aire y observar con lente de inmersión a 700x.... ¿Cómo tiene lugar la reacción física en el proceso de tinción? 8........... 2. 7.... Nombre los colorantes sintéticos de uso frecuente en microbiología.... añadiendo poco a poco el alcohol y revolviendo.....Coloración de gránulos.... Colorante.

23. Describa el procedimiento para la realización de una coloración de Ziehl Neelsen modificada. antes de aplicar una coloración de flagelos? 21.R. De acuerdo al color con que quedan teñidas después de la coloración de Gram. ¿Para qué se utiliza la coloración de Dorner? 24. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Ziehl Neelsen? 17. ¿Cómo se observan las esporas y las células vegetativas coloreadas con nigrosina? 25. después de ser sometidas a la coloración de Ziehl Neelsen? 19. Describa el procedimiento para la coloración de cápsula. Explique como usted realiza una coloración de gránulos. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Gram? 13. 207 .A. ¿Cómo reacción las bacterias al ser sometidas a la coloración de Gram cuando se le adiciona el alcohol? 15. ¿Por qué se debe calentar la fucsina en el proceso de tinción? 18.A. 20. ¿cómo son clasificadas las bacterias? 16. ¿Qué requisitos han de tenerse en cuenta para realizar una coloración de flagelos? 22. ¿Cuál es la función del lugol en la coloración de Gram? 14. ¿De qué color quedan los B.12. ¿Con qué objetivo son tratadas con ácido tánico las bacterias.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1. se clasifican a su vez en: simples.CAPÍTULO 16 MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCIÓN Los medios de cultivo son compuestos o preparaciones alimenticias elaboradas en los laboratorios de microbiología con los nutrientes requeridos para cada género en particular. existiendo por lo tanto una amplia variedad. tales como respirar. OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA Cuando los microorganismos son colocados en medio de cultivo apropiados. 2. Así como para controlar el paso de los gradientes químicos a través de la actividad osmótica de la membrana celular. sintéticos y vivos. etc. Debido a que existen diferencias en los elementos constitutivos de cada género o especie. Atendiendo a su composición. que conjuntamente con las codiciones ambientales adecuadas propician su desarrollo. Los medios e cultivo se clasifican: Atendiendo a su composición Atendiendo a los objetivos de su empleo. así como en sus actividades metabólicas y los mecanismos para obtener los nutrientes. sus componentes deben responder a las exigencias nutricionales de las especies que se pretenden cultivar. moverse. se comprenderá que no haya un medio de cultivo standard que posibilite el desarrollo de todas las especies. 208 . Para que un medio de cultivo resulte eficaz. reproducirse. metabolizan los nutrientes para sintetizar macromoléculas que suplan el desgaste natural de sus estructuras en cuyo proceso se libera energía que es empleada en el desarrollo de las actividades fisiológicas. constituyendo de hecho el micromundo de los microorganismos en condiciones de laboratorio. Por lo tanto la nutrición microbiana cumple dos objetivos fundamentales: la biosíntesis para la renovación de los compuestos de su estructura celular y la producción de energía.

como por ejemplo: someter la carne o los vegetales a un proceso de cocción para obtener un caldo nutritivo. tal y como se encuentran en la naturaleza. Kligler. Medios sintéticos A diferencia de los medios simples. etc. etc. Agar SS. 110: Frasco con medio de cultivo deshidratado. las carnes. Cuando un medio simple natural sufre algún tipo de modificación. Cada uno de estos medios responde a las necesidades específicas de grupos microbianos determinados. Ejemplo: la leche. Este tipo de medio se comercializa en forma deshidratada por diferentes empresas cubanas y extranjeras que se dedican a la elaboración de medios de cultivo. Se utilizan en su forma natural. La literatura informa cada año un número cada vez mayor de medios sintéticos recomendados para cultivar todo género de microorganismos. Fig. la papa. pierde su condición de medio simple natural y se convierte en un medio simple artificial. lo que permite reproducir el mismo medio de cualquier otro lote con exactitud.Medios simples En este tipo de medio no es posible conocer la proporción exacta de sus componentes nutricionales por ser muy variable. ejemplo: Agar Saboreaud. 209 . jugos vegetales. los sintéticos están compuestos por un conjunto d nutrientes definidos cuyas proporciones son constantes. Se puede decir que son verdaderas fórmulas químicas o recetas de cocina. siendo prácticamente imposible preparar dos lotes idénticos con productos iguales de distinta procedencia. existiendo en la actualidad mas de un centenar de diferentes medios sintéticos.

conjuntamente con otras especies que se hayan en mayor proporción. ya que las que se encuentran predominando consumirían prácticamente casi todos los nutrientes lo que traería como resultado un pobre desarrollo o incluso ningún desarrollo del germen que nos interesa estudiar. Fig. 111: Medios de cultivos vivos: a) Hamster. Ejemplos: hámster (curieles jóvenes). que no se desarrollan en los medios simples o sintéticos por requerir de la presencia de células vivas para reproducirse en su interior (parásitos intracelulares obligados). cultivo de tejidos. huevos fértiles de gallina de 7 a 10 días. Ejemplo: el caldo Selenito utilizado en la investigación del coprocultivo que 210 . medios selectivos y medios diferenciales. etc. al mismo tiempo que no favorecen las necesidades esenciales del resto. medios de aislamiento.Medios vivos Los medios vivos están constituidos por animales o capas de tejidos que son utilizados para el cultivo de virus y rickettsias. que se utilizan con el propósito de favorecer el desarrollo de una especie determinada que por encontrase en pequeñas cantidades en la muestra. Los medios de enriquecimiento satisfacen los requerimientos nutricionales del germen objeto de estudio. b) Huevo de gallina con embrión de pollo de 7 a 10 dias. Estos medios no tienen utilidad práctica para el cultivo de las bacterias y los hongos. Medios de enriquecimiento Son medios generalmente líquidos. ratones blancos lactantes. c) Cultivo de tejidos Atendiendo a los objetivos de su empleo Se clasifican a su vez en: medios de enriquecimiento. donde ambas se puedan desarrollar. se encontrarían en desventaja si la colocamos en un medio de cultivo.

lo cual es determinado por cambios y reacciones evidentes que de manera específica produce cada especie en el medio de cultivo. Este medio se caracteriza porque uno de sus componentes. que generalmente se encuentra predominando en las muestras empleadas. dificultando al mismo tiempo el de otras bacterias entéricas predominantes en el bolo fecal. Medios diferenciales En este tipo de medio de cultivo se pueden desarrollar sin dificultad diferentes especies microbianas. e)Manifestación de formación de gas 211 . Medios de aislamiento Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de germen al no poder desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies. Se utiliza para diferenciar la especie desarrollada por las reacciones bioquímicas que genera su actividad metabólica. Ejemplo: el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado. de rojo a amarillo en la parte inferior o en todo el medio. como el colorante verde brillante. el CI Na. que se utiliza para el aislamiento e identificación de la Salmonella sp/ en materiales patológicos. que es utilizado en la investigación de las enterobacterias. lo que imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con excepción de los Estafilococos. que sin embargo. inhibe el crecimiento de otras enterobacterias. Fig. Ejemplo: el medio Kligler. cuyas diferencias permiten encaminar la investigación hacia su identidad. verde brillante. b) Cambio de color de rojo a amarillo en el fondo del medo. a) Medio sin sembrar (rojo). especialmente la Escherichia coli.favorecen el desarrollo de los géneros Salmonella y Shigella. que puede desarrollarse y multiplicarse en este medio salino. Otro ejemplo lo constituye el medio Agar. En este caso se aprovecha la resistencia de esta especies a ciertos agentes químicos. 112: Medio diferencial (Kligler). d) Formación de manchas de color negro desde el medio hacia abajo. c) Cambio de color de rojo a amarillo en todo el medio. así como la presencia o no de manchas de color negro o evidencias o no de producción de gas. por las características del medio. se encuentra a una elevada concentración. Después de 14 a 16 horas de incubación se puede observar que el medio de cultivo cambia de color.

de un compuesto denominado AGAR. para ser procesadas industrialmente. se mueven con libertad y su desarrollo provoca la formación de un enturbamiento difuso o sedimento visible. caldo lactosado. Bioquímicamente se trata de un éster sulfúrico de una molécula lineal galáctano que es insoluble en agua fría pero soluble en agua caliente. La consistencia del medio de cultivo se logra con la adicción a la fórmula. y Acanthopeltis. Es una sustancia mucilaginosa que se obtiene de algas de color purpúreo. Malasia y California meridional. Medios líquidos Los medios líquidos no contienen agar. Los microorganismos desarrollados en medios líquidos.5 % de agar forma un gel firme entre 32 y 390 C que no se funde por debajo de 850 C. Pteroclaida. agua. Una solución de 1. 113: Diferentes formas de crecimiento en medios de cultivo líquidos. Gracilaria. Perteneciente al grupo Agarofíto que comprende los géneros: Gellidium. siendo trabajados en forma de caldo. de celulosa y otra más eterna de sustancias pécticas. Las paredes de la planta posee una capa interna. Ejemplo: Caldo Selenito. Como lo atacan muy pocas bacterias se emplea básicamente como solidificante. Fig. 212 . que proliferan principalmente a lo largo de las costas de Japón. siendo comercializado en forma deshidratada. Para la producción de agar se extraen las capas pécticas ricas en agarosa y agaropectina. China.CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Atendiendo a su consistencia los medios se clasifican en: líquidos semisólidos y sólidos. etc. peptonada Alcalina. Ceilán. El agar en malayo significa jalea.

Cada género y especie producirá un tipo de colonia con caracteres culturales diferentes. La solidez proporcionada por el agar impide a los microorganismos su migración en el cultivo por lo que se multiplican en un mismo sitio dando lugar a un cúmulo de millones de descendientes que forman sobre el cultivo estructuras macroscópicas denominadas colonias de diferentes formas.Blair" y agar semisólido para motilidad. Ejemplo: Agar Saboreaud Dextrosa. lo que da lugar a la formación de colonias atípicas. etc. c)Después de 24 horas de incubación (presencia de colonias). aunque ocasionalmente pueden desarrollarse a partir de dos especies distintas. De lo anterior expuesto se deduce que la cantidad de Agar añadida al medio de cultivo será directamente proporcional al grado de solidez que adquiera el medio.Medios semisólidos Estos medios contienen un % de agar menor que el empleado para los medios sólidos. uno de los objetivos de la nutrición microbiana es la biosíntesis. Agar Violeta Rojo Bilis. Fig. Agar Sangre. que permitirán al investigador orientarse hacia la identificación ulterior de la especie. Teóricamente cada colonia se genera a partir una o varias bacterias de la misma especie.5 % de agar. Ejemplo: medio de "Cary . aspectos y tamaños. lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad de los gérmenes. COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS Como fue explicado anteriormente. b)Medio sembrado. 114: Medio de cultivo sólido distribuidos en placas de Petra: a) Medio sin sembrar. Medios sólidos Son medios de cultivo que contienen en su composición alrededor de 1. cantidad suficiente para la gelificación del medio. mediante la cual el microorganismo degrada los 213 .

nutrientes presentes en el medio de cultivo y posteriormente lo sintetizan en el interior de la célula.5 0. con los componentes que aporten a la nutrición los elementos químicos de referencia: Fuente de oxigeno e hidrógeno El solvente de todos los medios de cultivo es el agua. coli. los compuestos empleados en la preparación del medio de cultivo deben aportar todos y cada uno de esos elementos. donde se indican pormenorizadamente los componentes químicos de las diferentes estructuras de la Escherichia coli: Cuadro 10. Fuente de carbono Las formas aprovechables van desde el CO2 atmosférico altamente oxidado hasta complejas formas orgánicas. por parte de la bacteria de oxigeno y nitrógeno mediante su ionización y en menor grado a través de la actividad catabólica que desarrollan sobre los compuestos orgánicos. transformándolos en los diferentes compuestos que conforman su estructura.5 0. los lípidos y los carbohidratos. Componentes químicos de las diferentes estructuras de la E.2 0.5 0. Veamos el siguiente ejemplo. ELEMENTOS Carbono Oxigeno Nitrógeno Hidrógeno Fósforo Azufre Potasio % PESO SECO 50 20 14 8 3 1 1 ELEMENTOS Sodio Calcio Magnesio Cloro Hierro otros % PESO SECO 1 0. siendo por lo tanto la principal fuente de obtención. que en el proceso de degradación liberan en alguna proporción estos elementos. por lo tanto los ingredientes con que se elabora un medio de cultivo deben responder a las necesidades específicas de la especie que deseamos que se desarrolle en él. 214 . Algunas bacterias utilizan el oxígeno y el hidrógeno que forman parte de la composición de aire.3 Por lo tanto si pretendemos que se desarrolle una Escherichia coli. A continuación haremos referencia a las distintas fuentes a partir de las cuales se pueden elaborar los medios de cultivos. como las proteínas.

ejemplo: cloruro de calcio. en la composición del medio de cultivo. fosfato de magnesio. NO3 o nitrógeno orgánico debe ser transformado extracorporeamente en amonio para poder ser incorporado a la célula bacteriana. para obtener el carbono que los provea de energía. el nitrógeno debe estar en forma de amonio. magnesio. ejemplo: el azufre lo obtienen de los grupos. utilizan alrededor de 90 compuestos orgánicos diferentes como fuente de carbono y energía. cinc y cobalto. en forma de sales minerales. si está en forma de N2. el cual es empleado para la carboxilación del fosfornolpivurato para formar intermediarios biosintéticos como el carbamilfósfato como precursor de arginina. tales como: carnes. Otros microorganismos (heterótrofos) emplean fuentes orgánicas como las proteínas. sulfhídricos de las proteínas. carbohidratos y lípidos. etc. 215 . potasio. ácido cítrico o glicerina. el cual es utilizado por la mayoría de los microorganismos fotosintéticos. cisteína y del fósforo que está presente en los ácidos nucleicos y los nucleóticos. mas exigentes. tales como: peptonas. huevo etc. pirimidinas y para la síntesis de anillos purínicos. ya sea como cloruros. La mayor proporción del carbono presente en el sustrato orgánico entra en la vía metabólica para producir energía y se excreta como CO2. es decir. Fuente de nitrógeno Es obtenido por los microorganismos de las proteínas y sus derivados. O en forma de peptonas un producto intermedio del metabolismo de las proteínas. urea o compuestos amoniacales así como a partir de fuentes inorgánicas como el nitrato. en tanto que otras. leche. son suministrados a los microorganismos. Fuente de iones inorgánicos Son obtenidos por los microorganismos de la materia orgánica que se encuentra formando parte de la composición del medio de cultivo. Algunos géneros son incapaces de reducir los nitratos. sulfatos o fosfatos. así como productos derivados de estos compuestos como aminoácidos. transformándolas por hidrólisis en aminoácidos. Independientemente de. Hay bacterias que fijan el nitrógeno mediante su reducción preliminar a amoniaco. el CO2 es la única fuente de carbono. Estos dos elementos y otros como: hierro.Para los microorganismos fotosintéticos y litotróficos. sulfato de cobre. específicamente del aminoácido. por lo que deben obtener el nitrógeno a partir de las sales de amonio que se adicionan al medio de cultivo. requieren de la presencia de proteínas. Especies del género Pseudomonas. la fuente de obtención para ser asimilados por la bacteria.

cofactor de algunas enzimas. . fotosintéticos.Constituyentes del agua celular y de transporte.Como aceptor de hidrógeno en las reacciones REDOX .Constituyente de la clorofila.. . . . lo usan como fuente de electrones en forma de donadores de hidrógeno. . .Catión celular.Los gramnegativos lo utilizan para la síntesis de la pared celular. .Como cofactor de varias enzimas.) . .constituyente de los compuestos celulares orgánicos . . . .Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales. a veces remplazando el magnesio.Constituyentes en la síntesis las proteínas. . así como de materias orgánicas celulares. Ej.5 a 8.Participante en la permeabilidad celular. como la metionina.o.Participa en la permeabilidad celular.Constituyentes de ácidos nucleicos.Cuadro 11: función de los elementos químicos en la nutrición microbiana FUNCIONES ESPECÍFICAS DE CADA ELEMENTO ELEMENTOS OXIGENO FUNCION FISIOLOGICA (ACTUA COMO.constituyente del agua celular y de transporte . .Sustancia tampón para mantener el pH del medio en un rango de 4.encimas formadas por la célula bacteriana.Útil en la fijación de nitrógeno y en la reducción de nitratos. coenzimas..Catión celular.Constituyentes de algunos aminoácidos.Componente principal de las esporas. . ácidos nucleicos y co.Estabilizador osmótico.Constituyente de la vitamina B12 y sus coenzimas derivadas. .Constituyentes inorgánicos de determinadas enzimas.sustrato. cofactor inorgánico para reacciones inorgánicas. . y la cisteína derivados del metabolismo de las proteínas. . . . .Regulador del grado de asociación de las partículas ribosómicas. . .Como parte de las hemoproteinas. . .Constituyentes de intermediarios biosintéticos y precursores.Participante en la unión enzima .Componente de algunas coenzimas como Co A y otros. .Cofactor inorgánico de varias enzimas.Activador de determinadas enzimas. . incluyendo aquellas con ATP.Constituyentes de materiales celulares orgánicos.Como aceptor de electrones en la respiración aerobia. cofactor de algunas enzimas. fosfolípidos y ATP.Constituyentes de los citocromos (imprescindible en la respiración celular). Proteínasas.Catión celular. . HIDROGENO CARBONO NITROGENO AZUFRE FOSFORO POTASIO MAGNESIO CALCIO MANGANESO HIERRO COBALTO COBRE / ZINC MOLIBDENO MAGNESIO SODIO / CLORO 216 . . . Los m.Excretor de las enzimas.

a emplear en una balanza adecuada. con todos los efectos negativos que eso entraña.ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO Elaborar un medio de cultivo es un procedimiento relativamente fácil. Con rigurosa precisión. que realicemos en el laboratorio. etc. cambio de color. no solo desde el punto de vista económico. atendiendo a las particularidades del medio de cultivo en cuestión. Como ya se explicó.) de tamaño suficiente aproximadamente a las ¾ partes del volumen de agua contenido en la probeta. La premura. hidratación. cada uno de los cuáles. La variabilidad de los medios responde a los requerimientos nutricionales de los distintos grupos microbianos. por ocasionar demoras evitables en el tratamiento del paciente. precipitación. . se puede elaborar a partir de los componentes que se indican en la fórmula o empleando medios comerciales deshidratados. 2. teniendo especial cuidado en desestimar el peso de "tara". Un medio de cultivo. formado por diversos compuestos en proporciones fijas que constituyen su fórmula particular. Localizar en el formulario existente en el laboratorio. Seleccionar de los estantes cada uno de los componentes del medio serciorandose de que no hayan sobrepasado la fecha de caducidad y que se observen en buen estado sin cambios organolepticos ostensibles como: resequedad. 6. Y proceda a colocarla sobre una fuente de calor con el objetivo de tibiar el agua. la fórmula del medio que se desea preparar (generalmente indicada para un litro). 4. existen centenares de medios de cultivo diferentes. Elaboración a partir de sus componentes 1. por lo que la elección de un determinado medio de cultivo estará en correspondencia con el microorganismo que presuntivamente esperamos que se desarrolle durante la investigación al respecto. 217 3. 5. pese por separado cada uno de los productos sólidos. matraz. los errores en el diagnóstico de laboratorio ocasionado por el empleo de medios deficitarios que menoscaban la fiabilidad de la institución. sino por lo que resulta mas importante. Mida en una probeta graduada el agua destilada a emplear. etc. así como obviar determinados requisitos pre establecidos son causas frecuentes de su mala elaboración. pero su calidad dependerá esencialmente del cumplimiento estricto de los pasos establecidos. la cual debe tener un pH y conductividad adecuada. Vierta en una cristalería (erlenmeyer. Mida con precisión cada uno de los productos líquidos a los volúmenes exactos que se indican en la fórmula. teniendo en cuenta que la mayoría de los medios son de importación.

mientras presenta gránulos es evidente que aún no se ha disuelto. Estos medios se expenden en frascos de tamaño variable con tapa de rosca hermética estando provistos de una etiqueta en la que se encuentran impresos los siguientes datos: 1. Si se observa que los componentes no quedan disueltos. "Mac Conkey" "S. Para determinar que el medio se ha diluido. dándole en cada ocasión un movimiento de rotación al frasco para que los ingredientes se mezclen. 11. Cápsula de porcelana. Retire la cristalería de la fuente de calor una vez que el agua esté tibia y colóquela sobre la mesa de trabajo 8. observe las paredes del recipiente durante su agitación. "Kligler". en el orden que se establece en la fórmula. . El nombre del medio de cultivo.S. donde se relaciona cada uno de sus componentes y las proporciones respectivas.7. en la cristalería donde fue pesado (Ej. 2. Coloque sobre el plato de una balanza granataria una cápsula de porcelana o un vidrio reloj limpio y proceda a determinar su peso (tara) 218 5.) o medido. por unos minutos imprimiendo intermitentemente movimiento de rotación al frasco. etc. se enjuagará con parte del volumen de agua que queda en la probeta. Ejemplo: "Agar Saboreaud Dextrosa". lo comercializan en forma deshidratada (pulverizados) que contienen la totalidad de los ingredientes. Proceda a adicionar en el agua tibia los compuestos pesados y medidos previamente. vidrio reloj. 10." etc. 4. con lo que se evita el tener que pesar o medir previamente cada uno de sus componentes.Adicionar el agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen de medio previsto. La fórmula del medio de cultivo. El pH a que debe ajustarse e medio después de hidratado y antes de su esterilización. someter el medio nuevamente a la acción del calor. procediendo a continuación a verterlo en el resto del medio para que la proporción estipulada en la formula no se altere. Si quedara algún residuo. Elaboración a partir de medios comerciales deshidratados En la actualidad diversas empresas dedicadas a la fabricación de medios de cultivo. En el caso que no se requiera preparar ese volumen se harán los cálculos pertinentes. Las instrucciones para hidratar el medio donde se precisa la cantidad de medios deshidratados que debe pesarse para preparar un litro. 9. 3.

el medio deshidratado ya pesado que se encuentra en la cápsula d porcelana o vidrio reloj. 7. con ayuda de un depresor plástico. Baje el recipiente de la fuente d calor y proceda a verter en su interior. Revuelva con el depresor plástico e incorpora este residuo en el erenmeyer que contiene el medio . imprimiéndole movimientos de rotación cada 30 ó 40 segundos hasta observar que en las paredes de la cristalería no se detecta la presencia de granulaciones lo cual será sugerente de que el medio no se ha diluido adecuadamente. 9. 6. añadiendo el resto del agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen total previsto. Con el empleo de un depresor o cuchara plástica extraiga del frasco el medio de cultivo deshidratado y deposítelo en el recipiente que se encuentra en el plato de la balanza hasta que la punta de la barra coincida con el "fiel". Sume el peso de la "tara" y el de cantidad de medio de cultivo a pesar y mueva las pesas hasta que indiquen en la barra el peso total.Fig. 12. 115 : Datos que se encuentran en la etiqueta de los frascos de medios de cultivo. Debe evitarse el recalentamiento excesivo que provocaría la caramelización de los azúcares y el deterioro de otros compuestos nutritivos básicos. 219 . Deposite un poco del agua destilada que quedó en la probeta en el interior de la cápsula de porcelana. Coloque nuevamente el recipiente sobre la fuente de calor. Mida en una probeta graduada el volumen de agua destilada a emplear y vierta aproximadamente las ¾ partes d ese volumen en un erlenmayer o matraz de tamaño suficiente. Coloque el recipiente sobre una fuente de calor durante dos o tres minutos para que el agua se tibie. con sumo cuidado. 11. 10. 8.

Determinación del pH del medio Una vez que el medio ha sido diluido o fundido se extrae con pipeta una alicuota y se deposita en un tubo de ensayo que será utilizada como muestra representativa de todo el volumen de medio para determinar su pH. Al extraer la tira se compara el color que ha tomado la punta después de contactar el medio con la escala que tiene por sus laterales el carrete cuyos colores se corresponde con pH diferentes. Distribución de los medios de cultivo El medio de cultivo que vaya a ser trabajado en tubos de ensayo se distribuye en los mismos con pipeta. a la cual se le adiciona cuidadosamente gota a gota. la caja que lo contiene se coloca boca abajo sobre el borde de la tapa hasta que se refresque. antes de su esterilización. para lo cual. Si se desea una mayor precisión se empleará el pH metro (ver capitulo 9). en el reverso de la placa. Ajuste de pH En el caso de que el pH medido no se corresponda con el indicado en la fórmula del medio de cultivo deberá ser ajustado para lo cual se emplean soluciones patrones con diferentes niveles de concentración. un volumen determinado. se esteriliza en un erlenmeyer taponeado con algodón y retapado con una capucha de papel de estraza. las utilizadas para acidificar el medio y bajar el pH son generalmente HCL o H2SOA y las utilizadas para alcalinizar el cultivo y subir el pH son NaOH o KOH. siendo distribuido en las placas con posteridad a su esterilización. 1N. Al depositar el medio en las placas la altura del volumen no debe sobrepasar los 3 ó 4 mm. la disolución ácida o alcalina según corresponda hasta obtener el pH deseado. Tanto las soluciones ácidas como las alcalinas se emplean a concentraciones 5N. Para determinar el pH con tira de tornasol se cortan 4 ó 5 cm de la cinta d papel del carrete y se introduce una de las puntas en el medio de cultivo por 4 ó 5 segundos. después que la temperatura del medio haya descendido de 50 a 55 C. Para ajustar el pH se utiliza la alicuota empleada para medirlo. se utiliza tiras de papel tornasol o mediante el empleo del pHmetro. conociendo el volumen de la solución patrón empleada para ajustar el pH de la alicuota se procede a hacer los cálculos pertinentes para determinar la cantidad requerida para todo el volumen del medio de cultivo. para evitar que el exceso de calor produzca agua de condensación que se adhiera. 1N y 0. mientras que el medio que vaya a ser distribuido en placas de "Petry". en que se 220 . Cuando el medio se haya solidificado.

2. en el medio después de autoclaveado. Observaciones 1. por ejemplo en la preparación del medio de cultivo denominado "Agar Sangre". De acuerdo al medio de que se trate la inclinación será mas o menos acentuada en interés de los objetivos que se persiguen con los cultivos que se desa221 . observando minuciosamente todas las precauciones de asepsia. se hacen mas propensos a la precipitación y sufren una disminución en su potencial nutricional.Algunos medios de cultivos elaborados básicamente con hidratos de carbono. debiendo ser apretadas al concluir la esterilización. 116: Manera de colocar la placa. así como otros medios elaborados con sueros no deben ser sometidos a la esterilización en autoclave pues se deterioran. estas deben quedar flojas durante la esterilización. aunque el tubo se coloque en posición vertical. una vez que el medio se ha solidificado hasta que se enfríe.tapa para ser guardado en el refrigerador.Evitar refundir los medios de cultivo pues en la medida en que esto ocurre. imprimiéndole simultáneamente movimientos de rotación al frasco para asegurar una aereación adecuada de la sangre. para que no se acumule en su reverso agua de condensación. mantengan esa forma. Para lograr que estos medios adopten esa forma deben ser colocados oblicuamente sobre la mesa de trabajo estando aún fundidos para que cuando solidifiquen. para permitir el flujo de aire. Fig. Cuando las instrucciones indiquen la adición d un reactivo o compuesto estéril. en estos casos se emplea la Tindalización. Cuñas de medios agaranizados Los medios de cultivo agaranizados (que contienen Agar) distribuidos en tubos generalmente se utilizan en forma de cuña. como el "Dulcitol" 10 %. sin la presencia en el interior de la tapa de agua de condensación. se debe realizar esta operación con sumo cuidado. para adicionar el volumen de sangre lo cual requiere que sea vertida poco a poco. se debe esperar a que la temperatura del medio descienda entre 45 a 50 C. Si el medio es distribuido en tubos con tapas de rosca. al bajar la temperatura.

b) Citrato de Simmons Conservación de medios de cultivo comerciales Los frascos con medios de cultivos nuevos. la inclinación debe ser mas acentuada.l os medios serán conservados de diferentes maneras atendiendo al medio de que se trate. Fig. Una vez abierto el frasco se debe escribir en la etiqueta. Serán colocados en gradillas y mantenidos hasta su empleo a temperatura ambiente. en el caso del medio "Kligler" la inclinación es menos acentuada para propiciar que el fondo del tubo quede lleno de medio de cultivo a una altura aproximada de 2 cm de altura. etc. ya que el objetivo del empleo de este medio es que se produzca el desarrollo bacteriano en toda la superficie de la cuña (slam) por lo tanto al no ser de interés que quede un fondo como en el medio "Kligler". Conservación de medios elaborados Alcanzada la temperatura ambiente después de esterilizados. 222 . Si se tratara el medio "Citrato de Simmons". Por ejemplo. 117: Cuñas de medios agarinizados en tubos de ensayo: a) Kligler. Saboreaud.Los medios distribuidos en placas de "Petry" serán colocados en las parrillas del refrigerador boca abajo tan pronto se hayan solificado. quedando en su superficie una cuña de menos de 2cm. tioglicolato. la fecha en que ocurrió su apertura para que sea de conocimiento de otros que ese frasco está en uso. prácticamente toda la superficie será de slam. Por ejemplo: 1. Deben ser almacenados en lugares frescos y lejos de aparatos térmicos y de ventanas. deben ser ordenados en los estantes por lotes y fecha de vencimiento. 2. Agar semisólido para motilidad.rrollen en los mismos.

antes de su empleo.3. 5. ¿Qué usted entiende por medio de cultivo? Cuales son los objetivos de la nutrición microbiana? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a su composición? ¿Que es un medio artificial? ¿Cómo se denominan los medios de cultivo que están constituidos por una variedad de ingrediente fijos con gramaje y volumen predeterminados? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a los objetivos de su empleo? 223 6. se almacenarán en refrigeración para prolongar su tiempo de duración. CUESTIONARIO 1. 5. Empleo de los medios Los medios preparados que han estado conservados en refrigeración. Cuando se obvia este paso se puede demorar la iniciación del crecimiento al ser colocado el inóculo en una superficie fría. como por ejemplo "selenito" se deben conservar en las parrillas del refrigerador.Jensen. 3. No se deben preparar medios de cultivo en exceso. facilita su contaminación. ya que si están mucho tiempo en almacenamiento se pueden resecar de manera imperceptible y ocasionar reacciones inexactas y fallas en el crecimiento.Los medios como el "Lowestein . 2. al sacarlo de su almacén frío y colocarlo a una temperatura ambiente.Los que contienen colorantes o indicadores se deben proteger de la luz durante su almacenamiento. . 4. 4.Los que tienen propiedades REDOX. Comprobación de la esterilidad de los medios elaborados De cada medio de cultivo preparado y almacenado se seleccionan dos o tres placas o tubos y se colocan en la incubadora durante 24 a 48 horas para comprobar su esterilidad. Observación El agua de condensación y la opacidad que se produce en algunos medios conservados en tubos. deben extraerse varias horas antes e incubarlos durante 30 minutos.

12. 20. Explique como usted realiza la pesada de un medio de cultivo deshidratado. Describa como se hidrata el medio de cultivo una vez pesado. ¿Como se conservan los diferentes medios una vez elaborados? ¿Cómo se comprueba la esterilidad de los medios de cultivo recién elaborados? ¿Que proceder debe seguirse cuando se va a realizar la siembra en un medio que está conservado en refrigeración? 224 . 21. ¿De cuantas maneras se puede ajustar el pH del medio de cultivo? ¿Cómo se distribuye el medio de cultivo antes de su esterilización? Explique como se preparan las cuñas en tubo de medios de cultivo sólidos. ¿Que compuestos podemos incorporar al medio de cultivo que le sirva a la bacteria como fuente de nitrógeno? ¿Que compuesto nutritivo aporta el carbono que le sirve a la bacteria para obtener energía? ¿Que aporta a la nutrición bacteriana el magnesio y el calcio. 14. 9. 11. 18. 19. 10.7. 17. ¿Qué información aportan los medios diferenciales? ¿Cómo se denomina el producto que se añade a los medios de cultivo para sodificarlos? ¿Cuales son los compuestos nutritivos básicos? A partir de que fuentes. las bacterias obtienen el oxigeno y el nitrógeno. 8. 15. 16. 13.

Todo lo cual será equivalente a la obtención de un árbol frondoso. con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente. la que posteriormente se desarrollará hasta convertirse en un árbol con las características de esa especie de naranja el cual fructificará. etc. tales como: el asa. donde la semilla es equivalente a la bacteria y el terreno fértil al medio de cultivo. de la misma manera. analicemos el siguiente ejemplo: Si sembramos una semilla de naranja en un terreno fértil. al transcurrir un período de tiempo determinado. veremos que emerge de ésta una pequeña postura. El número de células microbianas que se encuentran en el volumen o fracción sembrada se denomina inóculo. sin las características físicas de éste. los aperos de labranza. sobre o dentro. en decenas o cientos de naranjas. Este agregado de bacterias se denomina colonia. la bacteria comenzará a multiplicarse. tales como la guataca. por una especie bacteriana y la sembramos en un medio de cultivo apropiado. Para comprender debidamente esta analogía. hasta alcanzar una cifra exorbitante de descendientes que puede calcularse por millones. 225 . portadoras del mismo tipo de semilla que las generó. . Si sustituimos la semilla de naranja. la aguja de platino. INSTRUMENTOS DE SIEMBRA Los instrumentos de siembra son los objetos empleados para tomar el volumen o fracción de la muestra y sembrarla en el medio de cultivo. podremos observar un proceso similar. de uno o varios medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios par las especias que presuntivamente contiene. aunque más dinámico. aunque si. ya que al transcurrir solamente algunas horas. para factibilizar su estudio y posterior identificación. Este tipo de siembra.CAPÍTULO 17 SIEMBRA E INCUBACIÓN INTRODUCCIÓN La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar una pequeña fracción o volumen de la muestra. guarda estrecha relación con la siembra agrícola convencional. colmado de millones de bacterias de la misma especie. son sustituidos por los instrumentos de siembras. el azadón. etc. y llega alcanzar tal magnitud que se hace visible microscópicamente al observador.

e) Hisopo Diferentes tipos 1. b) Aguja de platino. Al igual que la aguja y el asa. La aguja. El método de esterilización es igual al empleado para la aguja. El asa. pero con la particularidad de que el extremo terminal tiene la forma de un triángulo. 3. insertado a un cabo metálico.Fig. consisten en un alambre de platino o de nicrón. Las de vidrio fusible. Es similar en todos los aspectos a la aguja. el cual está doblado por uno de sus extremos en forma 226 . de platino o nicrón. consisten en un tubo fino de varios mm de diámetro por unos 12cm de largo. Consiste en un fino alambre recto. d) Pipeta. La espátula de Drigalski puede ser metálica o de vidrio fusible. c) Espátula de Drigalski. después de haber sido retirados de esa fuente de calor. forma un pequeño círculo en el extremo con un diámetro de 4 a 5 mm. el cual sirve para que el manipulador pueda tomar en su mano este instrumento de siembra. Esta característica se aprovecha en el trabajo diario del laboratorio. Se esteriliza a la llama del mechero de igual manera que la aguja y el asa. que tiene aproximadamente una longitud de 7cm. 118: Instrumentos de siembra: a) Asa de platino. cuando son expuestos directamente la llama del mechero y de enfriarse a los pocos segundos. el cual se encuentra insertado por uno de sus extremos a un cabo metálico. para esterilizar en pocos segundos este instrumento en cada ocasión en que se requiera su uso. en lugar de ser recto. con la diferencia de que el extremo terminal del alambre de platino o nicrón. Tanto el platino como el nicrón tienen la propiedad de calentarse rápidamente y ponerse a al rojo vivo. cuando son metálicas. 2. Espátula de Drigalski.

Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón. Las pipetas utilizadas como instrumentos de siembra. una vez confeccionados. Cuando se emplean para tomar las muestras. 3. similar las empleadas en los goteros. Siembra por estrías. deben ser colocados en el interior de tubos de ensayo de tamaño apropiado. ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva.. por su parte posterior. Cuando la llama se apague. antes y después de realizar la siembra. deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo. que mide unos 2 cm por cada uno de sus lados. Pipeta. con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. 4. Consiste en un fino aplicador. los hisopos. Para su esterilización la parte triangular de la espátula se introduce en un recipiente que contenga alcohol y de inmediato se aproxima a la llama par que se encienda y flamee el triángulo de la espátula. Siembra masiva. casi siempre se utilizan a continuación para realizar la siembra en el medio del cultivo.de un triángulo equilátero. deben ser previamente esterilizadas en autoclave y estar provistas de un bulbo de caucho. los métodos de siembra más empleados son los siguientes: 1.2 mL. MÉTODOS DE SIEMBRA El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo. se debe esperar unos segundos para que se enfríe y en esas condiciones utilizarlas en la realización de la siembra. Hisopos. Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el 227 . que se elaboran con cristal fusible careciendo de escala graduada y las de 0. mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno. 2. Siembra volumétrica. graduadas en centésimas y milésimas de mL. taponeados y retapados antes de proceder a su esterilización en autoclave. generalmente de madera. con una pequeña mota de algodón adherida en uno de sus extremos. 4. 5. Siembra por punción. Las más utilizadas en el trabajo ordinario son: las de "Pasteur".

calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. Siembra por estrías Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña.(Slam) Instrumentos de siembra a emplear. Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. Procedimientos Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón. 1.Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir. 2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto. 3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe. 4. Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado. 5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior. b) Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo) c) Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación. 228

d) Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Fig. 119: Siembra microbiológica en medios de cultivos distribuidos en tubos de ensayo: 1) y 2) Retirar el tapón del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5) Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el tubo.

- Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña, trazando una línea longitudinal. - Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag. - Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo. - Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal. - Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios sólidos en cuñas (tubos de ensayo): a) Trazando una línea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el instrumento con el inóculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c) Roturando el medio

229

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petry, proceda de la siguiente manera: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b) Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie. c) Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento. d) Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo. e) Repita esta operación una o dos veces más.

Fig. 122 : Método de siembra por estrias en medios de cultivo sólidos distribuidos En placas de Petra

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f) Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo. g) Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo. Cuando la muestra es tomada con hisopo. 1. Si la siembra se va a producir en una cuña de agar, se procede en forma similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo. 2. Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas, el primer segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con asa estéril, para lograr una diseminación por agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la diseminación cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a continuación con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminación cruzada: a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z"en la superficie del medio; b) Completar la siembra con un asa de platino estéril, imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la "Z"

Siembra por punción Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. 231

Fig. 124: Siembra por punción

Siembra volumétrica Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado. Siembra masiva Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con espátula de Drigalski

INCUBACIÓN
Una vez realizada la siembra, atendiendo a los requerimientos de los géneros o especies que presuntivamente se encuentran en la muestra, se debe proporcionar a los cultivos la temperatura y las condiciones de aereación que favorezcan su desarrollo, durante un tiempo predeterminado que será variable para cada grupo de microorganismo.. 232

Cultivo mixto Cuando dos o más especies se desarrollan simultáneamente en el medio de cultivo. se procede a extraer una pequeña porción con un asa de platino estéril procediendo a sembrarla en un medio de cultivo idóneo. sus descendiente que alcanzan magnitudes millonarias en menos de 24 horas. nos interesa estudiar un solo tipo de colonia. Resiembra Cuando en el cultivo mixto. por lo que basta con dejar los tubos o las placas sembradas sobre la mesa de trabajo para que se desarrollen sin dificultad Los microorganismos que requieran para su desarrollo una temperatura más elevadas o más bajas que la ambiental. cuyos caracteres serán típicos para cada genero o especies. la cual podrá opacar todo el cultivo o darle un aspecto granuloso o nebuloso. Esta acción se denomina resiembra. denominados colonias bacteriana . 233 .Algunos tipos de microorganismos (como la mayoría de los hongos) se desarrollan sin dificultad a temperatura ambiente y en condiciones de aerobiosis. para de esta manera obtener un cultivo puro. ocasionan agregados bacterianos. aspecto y colores. Cultivo puro El cultivo es puro cuando en el se desarrolla una sola especie. al multiplicarse en un punto especifico. deben ser colocados en una incubadora provista de temperatura regulable o con condiciones especiales como las incubadoras de CO2 y las anaeróbicas. que dan lugar a estructura visibles de diferente formas. (Ver Capitulo 7) MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO EN LOS MEDIOS DE CULTIVO En medios de cultivo líquidos En general el crecimiento se manifiesta por turbidez. En medios de cultivos sólidos Como la bacteria se encuentra impedida de desplazarse por la solidez del medio.

? 8.CUESTIONARIO 1. ¿Cómo se realiza la siembra cuando se utiliza el mismo hisopo con que se toma la muestra? 9. ¿Cuál es la diferencia entre un cultivo puro y uno mixto? 12. 2. ¿Como se manifiesta el crecimiento bacteriano en los medios líquidos y sólidos. 4. ¿Cuales son los aspectos a tener en cuenta para incubar los cultivos. ¿Qué usted entiende por resiembra? 234 .? 10.? 11. 6. 3. ¿Qué usted entiende por siembra microbiológica? ¿Describa los diferentes instrumentos de siembra? ¿Describa el método de siembra por estrías? ¿Cómo se realiza la siembra por punción? ¿Cómo se denomina el método de siembra que se realiza con pipetas? ¿Con que objetivo se utiliza la espátula de Dyigalski? ¿Describa como se realiza la siembra con asa de platino o hisopo en el slam de los medios sólidos en tubos. 7. 5.

sacarosa. se incluyen determinados compuestos con el objetivo de favorecer su desarrollo en detrimento de otras especies contaminantes o no. en la fórmula de algunos medios de cultivo empleados al efecto. Una vez aisladas. fermenta "in vitro" el carbohidrato con formación de sustancias ácidas.CAPÍTULO 18 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO INTRODUCCIÓN Además de los nutrientes básicos y específicos. El objetivo de su empleo. así como a diversos productos biológicos para evidenciar sus reacciones. HIDRATOS DE CARBONO Los carbohidratos comúnmente empleados son diversos. Los más utilizados son los monosacáridos como: glucosa. de la composición de diversos medios. así como. 235 . es determinar. lo cual será detectado por la acción del indicador presente en el medio de cultivo al variar el pH. entre los que se encuentra la rafinosa y polisacáridos como la celulosa y el almidón. entre otros y los disacáridos como: lactosa. como fuente de carbono. como por ejemplo: el ácido láctico. maltosa y celobiosa. si el microorganismo en estudio. para conocer su capacidad metabólica frente a esos sustratos o se enfrentan a otros tipos de compuestos para determinar su resistencia. de los medios bioquímicos destinados para el diagnóstico de las especies. para lo cual se emplean indistintamente productos químicos. para que puedan desarrollarse plenamente a nivel de laboratorio. manosa. principalmente carbohidratos. que le son proporcionados a las especies de interés. las especies deben ser identificadas. Uno o varios de estos carbohidratos suelen formar parte. para el cultivo primario o las resiembras. También algunos trisacáridos. o para distinguir y diferenciar las colonias producidas. galactosa y fructuosas.

3 Amarillo Rojo 5.0 . Los indicadores que forman parte de la fórmula del medio de cultivo.6. para que la determinación del ph se deba exclusivamente a los cambios que tiene lugar en la solución. por lo que el color en esta fase no será definido. a determinado nivel de la escala de pH. Ejemplos de indicadores Cuadro 12.INDICADORES Los indicadores son compuestos químicos elaborados con ácidos o bases débiles.0 . cambian el color del medio o de las colonias. Cuando el indicador está cambiado de color.8 Los indicadores presentes en los medios de cultivo. que se caracterizan por dar lugar al cambio de color de la disolución o sustancia donde se encuentran al variar el pH.8. la mitad se encuentra en estado iónico y la otra mitad en estado molecular. 236 .0 8. Colores a los que dan lugar los indicadores en su rango de pH COLOR ACIDO Amarillo Amarillo Rojo Rojo Incoloro Amarillo I N D I CAD O R ROJO FENOL AZUL BROMOTIMOL ROJO DE METILO ROJO NEUTRO FENOLFTALEINA ROJO CRESOL PÚRPURA DE BROMOCRE.0 7.2 - 6. deben estar en concentraciones muy bajas.0 8.0 7. BASE Rojo Azul Amarillo Amarillo Rojo Rojo púrpura RANGO DE ph 6.4 . debido a su capacidad de ionización mediante la cual. en correspondencia con las variaciones del pH. transforman los iónes o moléculas y viceversa.2 8.2 6. Los indicadores son de dos colores oudiendo ser uno de ellos incoloro.10. sino más bien un color intermedio entre ambos.0 4.8.0 .

coli. Por ejemplo. tiene como objetivo. etc. Este tipo de hemólisis se clasifica como "alpha". destruye a los eritrocitos. El suero sanguíneo se emplea comúnmente para serodiagnósticos y el plasma (sin preservo) es utilizado regularmente para poner en evidencia la capacidad enzimática de especies productoras de coagulosa.. Tanto los eritrocitos de sangre humana. que interfieren el estudio. inhibir el desarrollo de las especies más sensibles. al interferir total o parcialmente el desarrollo de otras especies presentes en la muestra. una enzima que utiliza como sustrato el plasma sanguíneo. reduciéndola a biliverdina. el efecto se evidenciará por la formación de un halo incoloro alrededor de la colonia. si el tipo de hemolisina no destruye a los hematíes. pero actúa sobre la hemoglobina que porta. como por ejemplo: el "Verde brillante" que forma parte de la composición del medio de cultivo del mismo nombre. adquieren un color azul oscuro. Este tipo de hemólisis total se clasifica como "betha". hemolisando a los hematíes total o parcialmente. Citrobacter y P. Otro ejemplo lo constituye la siembra en el medio "Eosina-Azul de Metileno Agar".SANGRE Y HEMODERIVADOS La sangre se emplea en la elaboración de algunos medios de cultivo. utilizado para aislar algunas especies del género Salmonella. sino además. no teniendo como única finalidad proporcionar un nutriente esencial para el desarrollo de determinadas especies. como los obtenidos de diversas especies de animales. Las colonias de Salmonella se observan además en este medio con un color. el efecto se evidenciará por la presencia de un halo de color verde alrededor de la colonia. son utilizadas en diferentes pruebas de hemaglutinación o para detectar diversas reacciones hemolíticas. éstas actúan sobre la sangre que se encuentra en sus inmediaciones. provocando la formación de coágulos. Si el tipo de hemolisina. la sacarosa o ambos azúcares. favoreciendo de esta manera el desarrollo de otras más resistentes de interés en la investigación. Por ejemplo. En cambio. rosado o casi blancas. las colonias de E. cabras. conejos. vulgaris. el permitir evidenciar y diferenciar la actividad hemolítica de algunas de ellas. Estos colorantes inhiben el desarrollo de los gérmenes gramnegativos y al mismo tiempo permiten diferenciar a las especies de enterobacterias fermentadoras de lactosa. de los que no las fermentan. dependiendo de la condiciones de cultivo y el tiempo de incubación. con aspecto metálico (que se evidencia con luz 237 . colonias correspondientes a especies productoras de hemolisinas. cuando se desarrollan en el medio "Agar sangre". como por ejemplo: carneros. Colorantes La edición de determinados colorantes a la fórmula del medio de cultivo.

Antibióticos Para medir la sensibilidad o resistencia de un microorganismo en estudio a los antibióticos. al producirse el cambio de ph. para determinar la identidad de la especie. Al actuar la bacteria sobre el producto químico en cuestión. generalmente lo degradan por acción enzimática a productos más simples.indirecta). Aminoácidos Los aminoácidos: lisina. como parte de las pruebas que se realizan a una cepa en estudio. que contiene además los nutrientes necesarios para el desarrollo de la especie en estudio. formará parte de la fórmula de un medio de cultivo. nitrato. entre otros. mientras que las del resto de los coliformes se tiñen con un tono parduzco. así como diversos tipos de aminoácidos. empleados con mayor frecuencia se encuentran los siguientes: Urea. que proporcionará el cambio de color del medio. la información genética de que dispone cada especie bacteriana. lo que será puesto de manifiesto por la acción del indicador. es parcial o totalmente diferente entre sí. malonato. la mayoría de naturaleza química. cuyas reacciones específicas. nos aportan información acerca de su identidad. ornitina y arginina son utilizados corrientemente en el laboratorio. haciendo factible la lectura de esa prueba. que la capacita para actuar metabólicamente sobre determinados sustratos. lo cual se pondrá en evidencia por la acción del indicador que forma parte del medio de cultivo. Entre los productos químicos. El producto químico que se vaya a emplear. se realiza una técnica denominada antibiograma con el 238 . citrato. De manera similar a la empleada con los productos químicos para igual propósito. se emplean para su diagnóstico diversos sustratos. Productos químicos Teniendo en cuenta. KCN. en una proporción del 1 % a un caldo base que contiene los nutrientes necesarios para el desarrollo del germen y un indicador. caracterizados por tener un ph diferente al del producto reaccionante. cada uno de estos aminoácidos es adicionado por separado. en tanto que las Salmonellas y las Shigellas se mantienen incoloras o ligeramente teñidas. El principio de estas pruebas radica en la capacidad de algunos microorganismos para decarboxilar uno o varios de estos aminoácidos formando una amina con la consiguiente alcalinidad.

Transcurrida 24 horas. en tanto que la optoquina inhibe el desarrollo del S. tan pronto se realiza la siembra. Otras pruebas de resistencia. siendo incubada de inmediato. La bacitracina inhibe el crecimiento de más del 95 % de los Estreptococos del grupo A. por lo que. será indicativo de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en estudio a cada uno de los antibióticos empleados. obtenida en el pico de una terapéutica a dosis habituales. Fig. 239 .empleo de discos de papel de filtro estériles de unos 5 ó 6 mm de diámetro. La interpretación de los resultados se sustentará en el hecho de que los microorganismos sean o no capaces de desarrollarse en presencia de estos compuestos. impregnado en este caso con bacitracina u optoquina. así como mediante la exposición del microorganismo a sustancias de secreción orgánica como la bilis. Estos discos (desecados) se colocan con todas las precauciones de asepsia sobre la superficie del cultivo. impregnados por separado con una carga en g o unidades de un antibiótico determinado. se realizan con el empleo de productos químicos como: el cianuro de potasio o el desoxicolato de sodio. se realizan pruebas específicas con el empleo de un solo disco. equivalente a la concentración sérica media. 126: Discos de papel de filtros para antibiogramas Basado en el mismo principio y por un procedimiento similar. en dependencia del tamaño del diámetro. un halo de inhibición alrededor de cada disco. la lectura de estas pruebas aportaran un importante dato para sus respectivos diagnósticos. pneumoniae (Neumococos).

o ser preparados artificialmente con diversos compuestos. siendo envasados en frascos cuentagotas para su comercialización. darán lugar a reacciones de aglutinación. las que serán perceptibles "in vitro" si este suero es confrontado con un antígeno similar. purificados y preservados. que han sido expuestos de manera controlada a determinadas sustancias antigénicas con el objetivo de que induzca la formación y el incremento de diferentes tipos de inmunoglobulinas. se obtienen a partir de animales sensibilizados. 127: Sueros empleados para serodiagnósticos. el sistema inmunológico del animal producirá los anticuerpos específicos. Los sueros obtenidos. interactuará con él. mediante sangría de animales sensibilizados son procesados industrialmente. Antígenos Los antígenos comerciales empleados para serodiagnóstico. pueden ser elaborados con cepas certificadas de microorganismos portadores del antígeno de interés que reaccione específicamente con los anticuerpos inducidos por él. que se elabora con una cepa de Treponema pallidum (cepa Nichols) cultivad "in vivo" en testículos de conejo. cuya composición química sea similar a la de los antígenos de la célula microbiana. Sueros Los sueros empleados en las técnicas de serodiagnóstico. Los anticuerpos presentes en el suero de un paciente con sífilis al ser confrontados con este antígeno.Fig. debiendo ser almacenados de 2-80c hasta su caducidad. la cual se liofiliza para su comercialización. evidenciándose por microscopía las reacciones resultantes de aglutinación o inmovilización del Treponema. teniendo la propiedad de reaccionar con los anticuerpos presentes en el suero problema de forma similar que cuando se confrontan con antígenos reales. el antígeno troponémico empleado para el serodiagnóstico de la sífilis. lo constituye. Un ejemplo de antígeno elaborado con cepas. por procedimientos de laboratorio. 240 . que al interactuar con el antígeno en cuestión. precipitación o de hemólisis. con las cuales.

conozca que sean empleados con frecuencia en los laboratorios de microbiología. Nombre los indicadores que Ud. aunque no igual. una adormidera verde. impermeables. ¿Qué son los indicadores? 3. lo constituye el denominado antígeno de cardiolipina para pruebas de VDRL (Venereal Disease Research Laboratory). envoltura de cables. CUESTIONARIO 1. a la del antígeno real. Este antígeno se expende en ámpulas selladas de 5 mL. dedicadas a la fabricación de reactivos comercializan diferentes tipos de látex sensibilizados para el serodiagnóstico de diferentes tipos de microorganismos. que hace que la reagina (anticuerpo) presente en el suero problema interactúe con este "antígeno". Investigaciones posteriores demostraron que el látex era muy inerte. 241 . con textura viscosa y elástica. etc. Esta sustancia tratada con sulfuro de carbono. fue utilizada por los laboratorios biomédicos para recubrir las globulinas específicas. dando lugar a reacciones de aglutinación "in vitro". Látex El látex es una resina de aspecto lechoso. Esta prueba es inespecífica. lecitina y colesterol. da lugar a la producción de un material muy resistente que se emplea en la fabricación de neumáticos. que se extrae mediante incisiones (cortes) de determinados vegetales. Desde hace varias décadas. sino por un compuesto formado por: cardiolipina.Un ejemplo de antígeno no treponémico. oriundas de Brasil (de donde se extrae el caucho) y la Gutapercha. Este compuesto tiene una configuración química. diversas empresas farmacéuticas. Esta propiedad unida al ínfimo tamaño de su partícula de 0. el cual no está elaborado con cepas de Treponemas. con lo cual se favorece la observación de la aglutinación pasiva. los anticuerpos inducidos por algunos agentes infecciosos. endémica de Sumatra. natural de Asia. así como del opio. que se utiliza esencialmente como narcótico. ¿Qué datos aportan los carbohidratos utilizados para el diagnóstico de laboratorio? 2. entre los que se encuentran diversas especies pertenecientes a la familia Euforbiáceas. reaccionan con él de forma similar para dar lugar a reacciones positivas aparentes. ya que por tratarse de un antígeno artificial.81 de diámetro.

8. 7. 11.4. cuando son atacados por determinadas especies bacterianas. ornitina y arginina. ¿Para qué se utilizan determinados colorantes en la composición de los medios de cultivo? 6. ¿ De qué manera se emplean algunos antibióticos para identificar especies bacterianas en estudio? 9. ¿Qué le sucede a los cultivos que contienen ciertos aminoácidos como la lisina. ¿Qué información aporta la sangre y el plasma en el diagnóstico de laboratorio? 5. Nombre los productos químicos que son empleados en la composición de medios de cultivo destinados al diagnóstico microbiológico. ¿Cómo se utiliza el látex? 242 . ¿Cuál es la propiedad que tiene el látex que lo hace muy eficaz en las pruebas microbiológicas? 13. ¿Cómo se obtienen los sueros empleados en los sero diagnósticos? 10. ¿Cómo son elaborados los diferentes tipos de antígenos utilizados para el diagnóstico de las diferentes especies. cuya reacciones aportan información acerca de su identidad. ¿Qué es el látex? 12.

El mal montaje de las preparaciones en láminas. así como su deficiente conservación y transporte. incubación incorrecta. 3. 2. deficiente microscopía. originados por impericia.CAPÍTULO 19 GARANTÍA DE LA CALIDAD INTRODUCCIÓN Con independencia de las buenas condiciones técnicas que tenga un laboratorio de microbiología y de la adecuada competencia del personal que en él laboran. negligencia o mal trabajo. el incumplimiento de las normas técnicas establecidas. La falta de cuidado. 243 . se establecen un conjunto de medidas encaminadas a controlar mediante fiscalizaciones regulares todos los factores que inciden en el proceso investigativo. así como la errónea interpretación de las pruebas. así como la mala calidad de los materiales empleados o el deficiente funcionamiento de los equipos o instrumentos contribuyen entre otras causas afectar la calidad de los resultados. desde la toma de la muestra hasta el informe final. debidas generalmente a deficiencias técnicas o errores humanos. son algunos de los factores que inciden en la calidad de los resultados. Por ejemplo: la toma de muestras sin la calidad requerida. Mejorar la fiabilidad de los resultados y con ello optimizar el servicio. Validar la calidad de las pruebas empleadas sobre la base de su factibilidad. A los efectos de evitar o al menos reducir al mínimo estas insuficiencias y asegurar la buena calidad de los diagnósticos de laboratorio . Debe tenerse presente que cada uno de los pasos o etapas del proceso investigativo es susceptible de afectar la calidad del resultado final. Emplear racionalmente las pruebas de elevado costo. el empleo de colorantes vencidos o deteriorados. en cada etapa del ciclo. bajo costo y eficiencia. los resultados de las investigaciones realizadas pueden estar permeadas de imprecisiones. OBJETIVOS Los objetivos del control para la garantía de la calidad son los siguientes: 1. centrando la atención en los ejecutores.

El uso de reactivos y medios de cultivo con la calidad requerida. que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en días diferentes y la repetibilidad. 2. Para la realización de las pruebas de 244 . puede verse afectado por la falta de homogenicidad al estar presente en una misma muestra más de una especie. Esta fiscalización consiste esencialmente en la revisión de: 1. La habilidad y destreza en la realización de las técnicas de acuerdo con las normas. 3. c) El empleo de pruebas estadísticas. desinfección y esterilización del material de vidrio. organizado. que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en serie en el mismo día. ejecutado y controlado por la dirección del laboratorio a través de las siguientes actividades: a) La fiscalización sistemática "in situ". En el servicio de microbiología.Externo Control interno El control interno es planificado. el control mediante la reproductibilidad. La limpieza.DIFERENTES TIPOS DE CONTROL .Interno (Denominado también control de calidad) . La fiscalización sistemática "in situ" Consiste en supervisar la labor que realiza el personal de laboratorio en cada sección de trabajo con la finalidad de detectar errores groseros que puedan incidir en la calidad de los resultados. 4. b) La aplicación de controles de precisión. Para determinar la precisión se emplean dos variantes: la reproductibilidad. La correcta aplicación de los procederes establecidos para la toma de muestras. así como la falta de estabilidad del microorganismo presente en la muestra debido la multiplicación o incremento de las muertes al no procesarse oportunamente. Control de precisión Se denomina precisión a la propiedad que tiene un determinado método de dar resultados lo más iguales posibles cuando se realizan varias determinaciones sobre una misma prueba.

La aplicación de estas pruebas es muy familiar para los estadísticos. por ejemplo: agua destilada con ácido pícrico para simular una muestra de orina o solución salina fisiológica a la que se le añade una o dos gotas de suero sanguíneo y glucosa. que debe recurrir a personas experimentadas en el manejo de estas pruebas cuando resulte necesario. el trabajo realizado por dos técnicos. PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES Como ya se explicó. pero no para el personal técnico de microbiología. Pruebas estadísticas Existen diversas pruebas estadísticas utilizadas en los estudios de precisión y por lo tanto muy ligadas al control de la calidad. debido al mal desempeño del personal de laboratorio. El informe final de ese resultado se compara con los datos conocidos que sirven de control y cuando se detectan resultados incorrectos se toman las medidas de adiestramiento necesarias. la génesis de los malos resultados de las investigaciones de laboratorio.reproductibilidad o repetibilidad se emplean muestras "a ciegas". Las muestras artificiales más que un elemento de control de la calidad. tienen sus principales causas en los errores originados por deficiencias técnicas o humanas. Por su parte las artificiales son muestras simuladas elaboradas con diferentes solventes. cuyas características son conocidas por el jefe del laboratorio y que el técnico no puede diferenciar del resto de las muestras. 245 . Prueba Estadística "T" Esta prueba es utilizada para comprobar si los resultados que se obtienen con un método son cuantitativamente superiores o inferiores en relación con otro o si un grupo de datos de una serie es mayor que los de otra. para simular un líquido cefalorraquídeo. Las muestras empleadas para controlar precisión. Entre las más usuales se encuentran la prueba estadística "F" y la prueba estadística "T". Las reales se estudian previamente y se determinan sus características pudiendo añadírsele diferentes sustancias o elementos. etc. procesándola como una muestra más. constituye una forma de controlar la seriedad y responsabilidad del técnico. pueden ser reales o artificiales. Prueba Estadística "F" Esta prueba es utilizada para comparar la precisión de dos métodos.

Errores humanos a) Deficiente capacitación en su formación. g) Informar de manera incorrecta o incompleta los resultados en la orden de análisis. Las normas de higiene personal. la marcha analítica para su procedimiento. medios de cultivo. las particularidades para la incubación de los cultivos. colorantes y otros medios para el diagnóstico. b) Poca experiencia técnico-laboral en la sección de trabajo donde se desempeña. Las medidas de seguridad para cada sección de trabajo. tales como: los requisitos para la recolección y toma de las diferentes muestras. c) Falta de habilidad para realizar con destreza y precisión los procederes de laboratorio. las indicaciones esenciales para el buen funcionamiento del laboratorio. f) Inadecuada selección de los medios y métodos empleados. d) Empleo de equipos e instrumentos obsoletos o con funcionamiento deficitario. Errores técnicos a) Deficientes condiciones constructivas o estructurales del laboratorio.1. 2. la selección de colonias para las resiembras. Las áreas designadas para comer o fumar. e) Falta de concentración o premuras indebidas durante la realización de: exámenes microscópicos. El manual establece además. la lectura de las pruebas diagnósticas. etc. la selección de los medios de cultivo. relacionadas con: a) b) c) d) La limpieza y/o desinfección del lugar de trabajo. d) Violación arbitraria de las normas técnicas. así como la notificación de los resultados. c) Mal estado de los reactivos. donde se especifica todo lo concerniente al examen microscópico. MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS Todos los laboratorios de microbiología deben disponer de un manual de normas y procedimientos donde se describan las secuencias y regulaciones establecidas para la realización de las diferentes investigaciones. b) Insuficiente disponibilidad de recursos materiales. así como su conservación y transporte. 246 .

En el caso del horno. REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD EN BACTERIOLOGIA Control de equipos e instrumentos Todos los equipos e instrumentos que sean asignados al laboratorio deben estar registrados en una carpeta de medios básicos. b) Balanzas analíticas y técnicas. modelo. simultáneamente con la temperatura. Las balanzas se deben mantener limpias para que la suciedad no interfiera en la pesada. el control se efectuará cada vez que el equipo se vaya a utilizar y en cuanto al autoclave. como: incubadoras. c) Potenciómetros (pHmetros) Antes de su utilización se debe ajustar con soluciones estándar de pH 4 o 7 de acuerdo a la utilización que se les vaya a dar. se comprobará la presión a través de los manómetros y se colocarán junto con el material a esterilizar. a) Equipos térmicos A todos los equipos termorregulados. número de serie y la fecha de su adquisición. baño de María y refrigeradores se le comprobará su buen funcionamiento diariamente. cintas indicadoras o bioindicadores que cambian de color cuando la esterilización no ha resultado óptima. se dictamina su rotura o se repara. f) El cumplimiento del esquema de inmunización acorde con la actividad que se realiza. 247 .e) La manipulación y eliminación de materiales infecciosos. Nota: En todos los casos se debe tener en cuenta la condición de apto para el uso de los equipos emitida por metrología. donde se especifique la marca. antes de comenzar su utilización. anotando los resultados en el registro. habilitado al efecto. A cada equipo se le abrirá una tarjeta. g) El control y cuidado de los equipos e instrumentos. debiendo comprobar su exactitud con pesas certificadas. donde se refleje los datos ya referidos y las fechas en que se les da mantenimiento.

el reactivo de Kovac empleado en la prueba de indol. se enfrentan con cepas stock de características conocidas. procediendo a su incubación de acuerdo a las cepas empleadas. para lo cual se anotará en la etiqueta la fecha de recepción. siendo colocados seguidamente en un lugar ventilado y protegido de la luz solar. procediendo a desechar los que se hallan ennegrecidos o hidratados. como los ingredientes para su preparación o los medios que se adquieran ya listos para su uso. el plasma congelado para la prueba de coagulasa. Las cepas empleadas se suspenden hasta alcanzar una turbidez de 0. Durante su almacenamiento se observan periódicamente y se procede a la eliminación de aquellos que esten precipitados. Clostridium y Candidas albicans. deben ser almacenados tan pronto se reciban en el laboratorio. Los colorantes de uso frecuente como los empleados para las coloraciones de Gram y Ziehl Neelsen. Por ejemplo. Al concluir el período de incubación si se comprueba que el medio preparado permite el desarrollo óptimo de las diferentes cepas controles se considerará con buenas condiciones para su empleo. etc. Para comprobar su funcionamiento se utilizará un 3 % del total de medios preparados en los que se sembrarán cepas controles certificadas salvajes. el peróxido de hidrógeno empleado en la prueba de catalada. Cuando el almacenamiento se prolongue. cada día que se vayan a utilizar estas pruebas. empleado para la prueba de oxidasa.5 % de la escala de McFarland y se siembran pequeños inóculos calibrados en el medio. se prueban con cepas stock cuando se 248 . es recomendable voltear los frascos y colocarlos con la tapa hacia abajo para aminorar los efectos de la hidratación. Durante el tiempo que dure el almacenamiento. Control de colorantes y reactivos Al igual que los medios de cultivo. haemophillus. Pseudomonas.Control de medios de cultivo Tanto los medios deshidratados. los frascos deben ser revisados periódicamente. debiendo almacenarse igualmente en lugares frescos y protegidos de la luz. Vibrios. en la etiqueta de los frascos de colorantes y reactivos se anota la fecha en que se reciben en el laboratorio y se utilizan atendiendo al número del lote y la fecha de vencimiento. Enterobacterias. Al extraer los frascos que serán utilizados. se tendrá en cuenta la fecha de vencimiento y el número de lote para ir utilizando los más viejos. el tertrametil-parafenil endiamina al 1%. aisladas y debidamente identificadas en el laboratorio. Neisserias. Las cepas controles regularmente empleadas son de cocos grampositivos. Al realizar la apertura del frasco se anotará la fecha. El control de los reactivos y los colorantes se debe realizar frecuentemente en dependencia de su estabilidad.

así como otros discos que se utilizan para la realización de diferentes pruebas diagnósticas como: optoquina. Con posteridad a estas comprobaciones el control se realizará una vez por semana. Para ello.etc. El control se realizará cuando se empiece a utilizar un nuevo lote de medios de cultivo. Para comprobar su efectividad se utilizarán cultivos puros recientemente obtenidos. En relación con estos últimos se recomienda dividir el suero en alicuotas para evitar repetidas congelaciones y descongelaciones que pueden afectar el resultado de las pruebas. En cada prueba que se vaya a realizar se empleará en paralelo un suero testigo de reactividad conocida. conjuntamente con los antibiogramas que se realicen ese día. los laboratorios deben disponer de una colección acorde con las investigaciones que realiza. Cada lote que vaya a empezar a utilizarse debe comprobarse con sueros negativos y positivos. esporas. Los colorantes de uso menos frecuente como los empleados para la coloración de cápsulas. etc. 249 . Recomendándose además el empleo de sueros dobles. no debiendo utilizarse después de la fecha de vencimiento. para la comprobación de la eficiencia de los medios de cultivo y colorantes. así como para el control del funcionamiento de los antígenos y los antisueros empleados en el laboratorio se requiere del empleo de cepas microbianas debidamente identificadas o certificadas que hayan sido conservadas sin sufrir ningún cambio genético o fisiológico. se deben conservar en refrigeración (congelación) en los recipientes de fábrica provistos de material desecante. se prueban por igual método cada día que vayan a ser utilizados.preparan y posteriormente una vez por semana. Su eficacia se debe comprobar con cepas controles conocidos con respecto a su sensibilidad o resistencia a los diferentes antibióticos. mientras que otros requieren congelación. Conservación de cepas para el control biológico Como se ha explicado. Control de antígenos y antisueros Para su conservación algunos antígenos y antisueros se almacenan en refrigeración de 2 a 8ºC. de reactividad conocida. Control de discos para antibiograma Los discos para antibiograma. bacitracina.

3. Etiquetear el ámpula con el nombre de la especie. Para la conservación de algunos microorganismos anaerobios se emplea la siembra por punción con aguja en medio agarinizado. Suspender el cultivo en suero inactivado o leche estéril. Los diferentes métodos empleados pueden proporcionar una conservación a corto o a largo plazo. Conservación a corto plazo Este método se sustenta en el empleo de medios de cultivo con bajo potencial nutricional y la conservación de los cultivos en refrigeración. Los cultivos congelados en ámpulas son colocados en una liofilizadora para efectuar su desecación. las ámpulas se sellan al vacío con la llama del mechero que forma parte de este equipo. . conservado en refrigeración. 2. con lo cual se logra mantener la cepa durante varios meses. La mayoría de los microorganismos aerobios se pueden conservar en cultivos sobre agar inclinado. Las especies anaerobias extrictas deben ser sembradas en medio de tioglicolato en tubos de ensayo o caldo con carne picada. 250 2. mediante la cual el agente microbiano se mantiene vivo sin crecer ni reproducirse. 4.Métodos de conservación de cepas Cualquier método que se vaya a emplear debe propiciar microbiostasis. Concluida la deshidratación. procediendo de inmediato a su congelación. pudiendo añadirse después de la siembra una capa de aceite mineral con lo cual se excluye al oxígeno al mismo tiempo que evita la desecación del medio. Procedimiento 1. se emplea la liofilización. que consiste en un método de deshidratación con vacío a muestras congeladas. conservándose igualmente en refrigeración. Conservación a largo plazo Para conservar las cepas durante varios años. debiendo guardarse en refrigeración. en tubos de ensayo. 1. 3. distribuyendo algunas en ámpulas de vidrio. debido al enlentecimiento de su actividad metabólica.

.Frotis de esputo coloreado por el método de Ziehl Neelsen para investigar la presencia de BAAR. examen concentrado y serológico. Este control puede producirse en dos direcciones: Del laboratorio de referencia al laboratorio que será evaluado Para realizar el control con esta variante. o sueros para determinaciones serológicas de diferentes tipos. Los resultados obtenidos serán informados en encuestas que acompañan a las muestras que serán remitidas al laboratorio de referencia para su revisión. provincial o nacional. Control externo Estará a cargo de un laboratorio de referencia de nivel municipal. Cuando se requiera utilizar la cepa. notificándose al laboratorio evaluado los resultados. y procesadas como si se trataran de muestras ordinarias.El material queda dentro del ámpula en forma de una tableta pudiendo en este estado de desecación conservarse durante varios años. así como de cepas que serán sometidas a estudios de comprobación del diagnóstico emitido por la unidad. muestras y cepas predeterminadas para este control son los siguientes: Frotis coloreados a. Además de muestras pueden enviarse cultivos para determinar la sensibilidad o resistencia de la cepa a los diferentes antibióticos. cuyos resultados no son conocidos por el jefe del laboratorio que será evaluado. para estudio por examen directo. siendo introducidas "a ciegas" en la forma y explicada. se rompe asépticamente el ámpula depositando la cepa liofilizada en un medio líquido adecuado. Del laboratorio de la unidad al laboratorio de referencia Se remitirá al laboratorio de referencia un porciento establecido de: frotis coloreados y muestras. procediendo a su incubación de 24 a 48 horas.Envío en menos de 72 horas de todas las láminas con diagnóstico negativo para evaluación de la extensión y la coloración 251 . Los frotis. el laboratorio de referencia enviará muestras cifradas.

Frotis de exudados uretales y endocervicales para investigar la presencia de diplococos arriñonados (intra y extracelulares) . 252 .El 10 % de las muestras donde he hayan identificado huevos o larvas de helmintos. Enviar el 2 % de las muestras no reactivas.R.C. Suero o L. Muestras .Heces fecales Enviar: El 5 % de las muestras donde se hayan identificado especies de protozoarios.Enviar un 5% de los frotis con diagnóstico negativo. .Enviar el 100% de los frotis con diagnóstico positivo. . Enviar el 100 % de las muestras reactivas y débil reactiva empleadas para la prueba de VDRL. Cepas Envío del 100% de las cepas recuperadas en los casos de Síndrome Neurológico Infeccioso y de Infecciones Diarreicas Agudas. .El 25 % de las muestras con diagnóstico negativo.

11. 5. ¿Cómo se controla la precisión de los resultados? ¿Cuáles son las principales fuentes de error? ¿Cuáles son los principales aspectos en cada una de las fuentes de errores? ¿Qué aspectos se describen en el manual de normas y procedimientos? ¿Cómo se controlan los equipos e instrumentos? ¿Qué aspectos han de tenerse en cuenta para el control de los medios de cultivo? Explique cómo se controla el estado de los colorantes y los reactivos. 7. 2. 13. ¿Cómo se deben conservar los discos impregnados en antibióticos? Refiérase a la manera de controlar los antígenos y los antisueros. 9. 12. ¿Cuáles son las principales causas de la falta de calidad en los diagnósticos de laboratorio? ¿Cuáles son los objetivos del control para la garantí de la calidad? Enumere los indicadores del control interno. 10. ¿De cuantas maneras diferentes se puede efectuar el control externo? ¿Cuáles son las muestras que deben remitirse al laboratorio de referencia para su control y con qué periodicidad? 253 . 6.CUESTIONARIO 1. 14. 3. 4. 8.

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