LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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La Habana, 2004

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Datos CIP-Editorial Ciencias Médicas

González Alfaro José Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004 256p. Fig. Incluye índice general. Está dividida en 19 capítulos. Listado de referencias al final de la obra. ISBN 959-212-131-1 1. MICROBIOLOGÍA 2. PERSONAL DE LABORATORIO 3. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. LIBRO DE TEXTO I. González González Boris II. Barrial González Rosa T. QW23

Diseño: Ac. Luciano O. Sánchez Núñez Emplane: Maria Pacheco Gola

© José González Alfaro, Boris González González y Rosa T. Barrial González, 2004 © Sobre la presente edición Editorial Ciencias Médicas, 2004

Editorial Ciencias Médicas Centro Nacional de Información de Ciencias Médicas Calle I No. 202, esquina Línea, Vedado, Ciudad de La Habana, 10400, Cuba Correo electrónico: ecimed@infomed.sld.cu Teléfonos: 55 3375, 832 5338

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"Vivid en la serena paz de los laboratorios y preguntaos cada día: -¿Qué puedo hacer para mejorar la calidad del servicio que presto? -¿Cómo puedo ayudar a mi país? -¿Cómo puedo servir a la humanidad? Luis Pasteur 5 .

Salvador Allende Boris González González Lic. Profesor Facultad Tecnológica Dr. En Microbiología Hospital Salvador Allende. Profesor Facultad Tecnológica Dr. Salvador Allende Rosa T. Profesora Facultad Tecnológica Dr.AUTORES José González Alfaro Técnico de Microbiología Especializado en Docencia. Salvador Allende 6 . Barrial González McS en Microbiología Hospital Salvador Allende.

GENERALIDADES / 18 ACTIVIDADES FUNDAMENTALES / 18 RECURSOS HUMANOS / 18 ESTRUCTURA ADMINISTRATIV A / 18 IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA / 19 ESTRATEGIA ORGANIZATIV A DE TRABAJO / 19 DISPOSICIÓN DE LOS MATERIALES DE TRABAJO / 20 CERTEZA DE LOS MEDIOS REACTIVOS O MEDIOS A EMPLEAR / 20 ORDENAMIENTO DE LAS MUESTRAS / 20 PLANIFICACIÓN DEL TRABAJO A REALIZAR. CONCEPTO / 22 DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN / 33 INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE / 34 LAV ADO DE MANOS / 35 TIPOS DE LAV ADO DE MANOS / 36 LAV ADO SOCIAL DE LAS MANOS / 36 7 .ÍNDICE EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA / 17 INTRODUCCIÒN / 17 LABORATORIO CLÍNICO / 17 LABORATORIO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL / 17 LABORATORIO DE RAYOS X / 17 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. / 23 PRINCIPALES CAUSAS / 23 NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO / 23 PRINCIPIOS BÁSICOS / 24 PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE LABORATORIO / 24 EMPLEO SISTEMÁTICO DE EQUIPOS Y MEDIOS DE SEGURIDAD / 25 EL DISEÑO ADECUADO DE LOS LABORATORIOS / 26 MEDIDAS DE PREVENCIÓN / 33 PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA / 33 DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. / 20 CONCENTRACIÓN EN EL TRABAJO / 21 CUESTIONARIO / 21 BIOSEGURIDAD / 22 INTRODUCCIÒN / 22 RIESGOS FÍSICOS / 22 RIESGOS QUÍMICOS / 22 RIESGOS BIOLÓGICOS / 22 BIOSEGURIDAD.

LAV ADO HIGIÉNICO O MÉDICO DE LAS MANOS / 36 LAV ADO QUIRÚRGICO DE LAS MANOS / 37 MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS / 38 CUESTIONARIO / 38 ETICA MEDICA / 40 INTRODUCCION / 40 LA MORAL / 40 ETICA / 41 TEORÍA DE LA MORAL / 41 ÉTICA NORMATIV A / 41 ÉTICA MÉDICA / 41 EN RELACIÓN CON EL PACIENTE Y SUS FAMILIARES / 42 EN RELACIÓN CON EL RESTO DE LOS TRABAJADORES DE LA SALUD / 44 EN LAS RELACIONES ENTRE EL DOCENTE Y LOS EDUCANDOS / 44 COMO PARTE DE LA SOCIEDAD / 44 LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA / 45 CUESTIONARIO / 45 EL AGUA / 46 INTRODUCCIÓN / 46 IMPORTANCIA / 46 CALIDAD DEL AGUA / 46 PURIFICACIÓN DEL AGUA / 47 DESTILACIÓN / 47 DESIONIZACIÓN / 48 PH DEL AGUA DESTILADA / 48 CONDUCTIVIDAD DEL AGUA / 48 CUESTIONARIO / 49 CRISTALERÍA DE LABORATORIO / 50 INTRODUCCIÓN / 50 COMPONENTES DEL VIDRIO / 50 SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO / 50 CLASIFICACION / 51 CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS / 52 DE CRISTALERÍA / 52 CRISTALERÍA GENERALDE TRABAJO / 52 CRISTALERÍA DE MEDICIÓN / 59 MATERIALES DE PORCELANA / 63 LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN / 64 PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA / 65 PARA SU ESTERILIZACIÓN / 65 CUESTIONARIO / 67 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN / 68 INTRODUCCIÓN / 68 TÉRMINOS EMPLEADOS RELACIONADOS CON LA ESTERILIZACIÓN Y LA DESINFECCIÓN / 68 8 .

ESTERILIZACIÓN / 68 EL CALOR / 69 PROTOTIPO STANDARD DEL AUTOCLAVE / 70 MANIPULACIÓN DEL AUTOCLAVE / 71 CALOR HÚMEDO A 1000 C / 72 CALOR HÚMEDO A MENOS DE 1000C / 74 CALOR SECO / 74 USO DEL HORNO / 75 INCINERACIÓN / 76 MECHEROS / 76 LAS RADIACIONES / 79 RADIACIONES IONIZANTES / 79 RADIACIONES NO IONIZANTES / 80 FILTRACIÓN / 81 CARACTERÍSTICAS DE LOS FILTROS / 81 PREPARACIÓN DE LOS FILTROS / 81 DESINFECCIÓN / 83 SELECCIÓN DE LOS DESINFECTANTES / 84 CUESTIONARIO / 85 EQUIPOS CALORIFICOS / 87 INTRODUCCION / 87 INCUBADORA / 87 REQUERIMIENTO DE TEMPERATURAS / 87 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON SUS NECESIDADES DE OXÍGENO / 88 INCUBACIÓN DE BACTERIA ANAEROBIAS / 90 INCUBADORA PARA ANAEROBIOS / 92 BAÑO DE AGUA CALIENTE. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO / 119 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 ESTRUCTURA DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 FUNCIONAMIENTO / 123 9 . (BAÑO DE MARÍA) / 92 CUESTIONARIO / 94 MICROSCOPIO / 95 INTRODUCCIÓN / 95 MICROSCOPIO. CONCEPTO / 96 DIFERENTES TIPOS / 96 MICROSCOPIO ÓPTICO / 96 CLASIFICACIÓN / 97 SISTEMA MECÁNICO / 98 PRINCIPIOS BÁSICOS / 109 INDICACIONES PARA EL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 111 OTRAS V ARIANTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 112 MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO / 117 CUIDADO.

CUESTIONARIO / 124 INSTRUMENTOS MECÁNICOS / 126 INTRODUCCIÓN / 126 PIPETAS MECÁNICAS / 126 PIPETA TIPO MARBURG / 127 EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS / 131 LAS CENTRÍFUGAS / 131 PRINCIPIO TÉCNICO / 133 BALANCE DE LOS TUBOS / 133 FUNCIONAMIENTO / 134 EL ROTOR / 135 DISEÑO DEL EQUIPO / 135 FUNCIONAMIENTO / 136 EL AGITADOR / 136 DISEÑO DEL EQUIPO / 137 FUNCIONAMIENTO / 137 POTENCIOMETROS / 138 ESTRUCTURA / 138 ELECTRODOS / 139 TIPOS DE ELECTRODOS / 139 PRINCIPIO FUNCIONAL / 139 MEDICIÓN DEL PH / 140 PROCEDIMIENTO PARA EL MANEJO DEL POTENCIÓMETRO / 140 CUESTIONARIO / 141 BALANZAS / 143 INTRODUCCIÓN / 143 PRINCIPIO / 143 DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS / 143 BALANZAS GRANATARIAS / 144 FUNCIONAMIENTO / 145 PROCEDIMIENTOS PARA EFECTUAR LA PESADA / 145 CAJA DE PESAS / 146 PRECAUCIONES / 147 BALANXA DE UN SOLO PLATILLO (TIPO OHAUS) / 147 BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA / 147 BALANZA DE PRECISIÓN MECÁNICA / 148 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA / 150 PRECAUCIONES / 151 BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA / 151 FUNCIONAMIENTO / 153 PESADA / 154 DETERMINACIÓN DEL PESO / 155 BALANZA ANALITICA DIGITAL / 156 CUESTIONARIO / 156 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN / 158 10 .

NO VOLUMÉTRICOS / 158 INTRODUCCIÓN / 158 INSTRUMENTOS. DIFERENTES TIPOS / 158 RELOJES / 158 TERMÓMETROS / 159 DENSÍMETROS / 160 CUESTIONARIO / 161 ACCCESORIOS. INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y M ATERIALES DE CURACIONES / 162 INTRODUCCION / 162 ACCESORIOS / 162 GRADILLAS / 162 CESTOS / 163 SOPORTE UNIVERSAL / 163 PINZAS DE SUJECCIÓN / 164 TRÍPODE / 164 MALLA DE AMIANTO / 165 INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO / 165 MATERIALES DE CURACIONES / 166 CUESTIONARIO / 167 TOMA DE MUESTRAS / 168 INTRODUCCIÓN / 168 MUESTRA. CONCEPTO / 168 MUESTRA REPRESENTATIV A / 168 MÉTODOS DE CONSERV ACIÓN / 169 CALIDAD DE LA MUESTRA / 170 INSTRUCCIONES AL PACIENTE / 172 DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS / 172 EXUDADOS / 172 LÍQUIDOS ORGÁNICOS / 179 SANGRE / 181 LINFA / 182 EXCRECIONES / 183 FANERAS / 185 PRODUCTOS PATOLÓGICOS / 185 CUESTIONARIO / 186 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS / 187 INTRODUCCIÓN / 187 DIFERENTES MÉTODOS / 187 PREPARACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXAMEN MICROSCÓPICO EN FRESCO / 187 MÉTODO DE LA GOTA COLGANTE / 188 PREPARACIÓN EN LÁMINAS DE MUESTRAS COLOREADAS / 189 11 .

VENTAJAS Y DESVENTAJAS / 194 METODOS DE COLORACIÓN / 195 COLORACIÓN DE GRAM / 195 COLORACIÓN DE "ZIEHL NEELSEN / 199 CCOLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN (MODIFICADA PARA MYCROBACTERIUM LEPRAE) / 202 COLORACIÓN FRAGELAR DE LEIFSON (MODICFICACIÓN DE CLARK) / 203 COLORACIÓN DE CÁPSULAS / 204 COLORACIÓN DE ESPORAS / 205 CUESTIONARIO / 206 MEDIOS DE CULTIVO / 208 INTRODUCCIÓN / 208 OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA / 208 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 208 CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 212 COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS / 213 ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO / 217 DISTRIBUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 220 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMERCIALES / 222 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS ELABORADOS / 222 COMPROBACIÓN DE LA ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS ELABORADOS / 223 CUESTIONARIO / 223 SIEMBRA E INCUBACIÓN / 225 INTRODUCCIÓN / 225 INSTRUMENTOS DE SIEMBRA / 225 DIFERENTES TIPOS / 226 MÉTODOS DE SIEMBRA / 227 INCUBACIÓN / 232 MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO / 233 EN LOS MEDIOS DE CULTIVO / 233 CULTIVO PURO / 233 CULTIVO MIXTO / 233 RESIEMBRA / 233 CUESTIONARIO / 234 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO / 235 INTRODUCCIÓN / 235 12 .CUESTIONARIO / 191 COLORANTES Y COLORACIONES / 192 INTRODUCCIÓN / 192 CONCEPTO / 192 FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES / 192 COLORANTES NATURALES / 192 COLORANTES SINTÉTICOS / 193 CLASIFICACIÓN / 193 AFINIDADES TINTORIALES / 194 TOXICIDAD DE LOS COLORANTES.

HIDRATOS DE CARBONO / 235 INDICADORES / 236 SANGRE Y HEMODERIV ADOS / 237 COLORANTES / 237 PRODUCTOS QUÍMICOS / 238 AMINOÁCIDOS / 238 ANTIBIÓTICOS / 238 SUEROS / 240 ANTÍGENOS / 240 LÁTEX / 241 CUESTIONARIO / 241 GARANTÍA DE LA CALIDAD / 243 INTRODUCCIÓN / 243 OBJETIVOS / 243 DIFERENTES TIPOS DE CONTROL / 244 PRUEBAS ESTADÍSTICAS / 245 PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES / 245 MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS / 246 REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD / 247 EN BACTERIOLOGIA / 247 CONTROL DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS / 247 CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO / 248 CONTROL DE COLORANTES Y REACTIVOS / 248 CONTROL DE DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA / 249 CONTROL DE ANTÍGENOS Y ANTISUEROS / 249 CONSERV ACIÓN DE CEPAS PARA EL CONTROL BIOLÓGICO / 249 DEL LABORATORIO DE REFERENCIAALLABORATORIO QUE SERÁ EV ALUADO / 251 DEL LABORATORIO DE LA UNIDAD AL LABORATORIO DE REFERENCIA / 251 CUESTIONARIO / 253 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS / 254 13 .

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instrumento. en más de 20 especialidades. los cursos de técnicos medios de la salud que durante casi 4 décadas se impartieron. fueron diseñados como carreras universitarias.PREFACIO Como parte de la política del estado cubano de universalizar la enseñanza. Cada tema ha sido abordado con una proyección tecnológica. lo que permite a los estudiantes desarrollar progresivamente las habilidades en los propios escenarios donde se encuentran los diferentes servicios de salud. todo lo concerniente a su descripción estructural estándar y sus variantes. los estudiantes pueden realizar sin contratiempos los procederes en cuestión. además de todo lo concerniente a su cuidado y conservación. bajo la asesoría de profesionales y técnicos de experiencia. con lo que se pretende que adquieran la capacitación adecuada para brindar un servicio de excelencia a nuestra población. culminando la formación universitaria como licenciado en tecnología de la salud en diferentes perfiles. Los planes de estudio se han sustentado en la modalidad de estudio-trabajo. así como desempeñarse con eficacia y competitividad en cualquier otro país donde se requiera su colaboración. a partir del curso 2003-2004. así como. atendiendo a los contenidos del programa y el perfil de salida de los egresados. la función de cada una de las partes y su interacción con el resto del sistema. en los institutos politécnicos. de manera que. hemos editado este libro de texto para que sea utilizado como bibliografía básica en el estudio de la asignatura Fundamentos y Principios Básicos del Laboratorio de Microbiología. creados al efecto en todo el país. En los capítulos correspondientes a los procederes de laboratorio. 15 . Como apoyo al diseño curricular del perfil de microbiología. cada aspecto ha sido explicado pormenorizadamente. siguiendo al pie de la letra las instrucciones que se proporcionan. accesorios y otros materiales de trabajo. mediante un nuevo modelo pedagógico que comprende dos niveles de formación intermedia: técnico básico y técnico medio. el principio de su funcionamiento y el algoritmo de trabajo. para lo cual se tuvo en cuenta precisar la particularidad utilitaria de cada equipo.

el objetivo esencial de tu formación. sino más bien. que es. sobre el que se sustente tu desempeño profesional. Esperamos que este texto te sea de utilidad en el proceso de aprendizaje. como una herramienta que te proporciona una capacitación perdurable. con el objetivo de que sea utilizado como guía de estudio individual o colectivo. Los autores 16 . en definitiva. no solo para alcanzar buenos resultados docentes.Al finalizar cada tema se ha incluido un cuestionario de preguntas.

Y obtiene y procesa componentes de la sangre para uso terapéutico o de investigaciones. análisis inmunohematológicos y serológicos e informa los resultados. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. a las cuales se les realizan análisis bioquímicos. por ejemplo: Laboratorio Clínico La actividad básica que se realiza en este tipo de laboratorio es la de recibir las ordenes de análisis del médico de asistencia. Realiza análisis de urgencia e informa los resultados. tales como: sangre. administra contraste a los pacientes. recibe indicaciones y solicitudes médicas. Como parte del Sistema Nacional de Salud. Laboratorio de Medicina Transfusional El laboratorio de Medicina Trasnfusional. investigaciones científicas o el análisis de diferentes muestras. reactivos o la obtención de productos biológicos. recibe indicaciones médicas. para la producción de medicamentos. hematológicos.CAPITULO 1 EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INTRODUCCIÒN Los laboratorios son edificados especialmente diseñados. Transfunde sangre total o sus derivados. realiza exámenes radiológicos convencionales o mediante la utilización de técnicas modernas 17 . etc. tomar y recibir muestras biológicas. orina. toma y recibe muestras biológicas. Para determinar sus alteraciones en relación con sus valores de referencia. en Cuba. existen diferentes tipos de laboratorios. realiza sangrías a donantes. para las investigaciones que así lo requiera. líquido cefalorraquídeo. etc. serològicos. jugo gástrico. así como. Laboratorio de Rayos X El Laboratorio de Rayos X. para la realización de experimentos.

médicos especialistas de 1er o 2do. así como bioquímicos. un técnico medio experimentado.C. cargo que ocupa generalmente un médico especialista o en su defecto otro profesional. especializados o no. biólogos y otros tecnólogos. con lo cual aporta un dato de inestimable valor para la indicación del tratamiento También brinda apoyo especializado al Comité de Prevención y Control de las Infecciones Nosocomiales (infecciones intra hospitalarias) originadas en el hospital u otro establecimiento de atención de salud. Recursos humanos El personal de los laboratorios de microbiología clínica. personal de oficina y auxiliares generales entrenados. ademas de técnicos medios. GENERALIDADES Actividades fundamentales El laboratorio de microbiología clínica. toma y recibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicas mediante exámenes microscópicos directos y por cultivos. El servicio de microbiología. para detectar alteraciones anatomofibiológicas en partes blandas u óseas del organismo asi como la presencia de cuerpos extraños.de imagenología. 18 . información precisa relacionada con la sensibilidad o resistencia del agente infeccioso a los diferentes antibióticos. Estructura administrativa Todos los laboratorios están gerenciados por un jefe de servicio. Las diferentes secciones están dirigidas a su vez por diferentes profesionales. recibe indicaciones médicas. asumiendo determinadas funciones delegadas por el jefe de servicio. grado (microbiólogos). Ms. esta compuesto por profesionales universitarios. se desempeña como jefe técnico. En la mayoría de los laboratorios. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. proporciona al medico de asistencia. con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas. precisar su cuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. o Licenciados en microbiología.

mediante el acceso a las tecnologías más modernas. ya que ha sido y es política de la Revolución que los servicios médicos sean accesibles a todos los ciudadanos. resulta indispensable sistematizar una estrategia de trabajo. Mejorar la calidad del servicio. adquiere cada día mayor protagonismo. casi todos los hospitales y policlínicos cuentan con servicios de microbiología y en la actualidad se esta concretando un proyecto de estaciones microbiológicas destinadas fundamentalmente al diagnostico mediante exámenes directores. el trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología. El perfeccionamiento del trabajo microbiológico se proyecta en dos direcciones: 1. incrementar la productividad de las deter19 . en policlínicos.IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA Dado el incremento actual de las enfermedades emergentes y reemergentes. así como la toma y preservación de muestras en medios de transporte para su envió a los laboratorios de referencia. al proporcionar datos exactos acerca de la identidad de los microorganismos en estudio. a nivel de la atención primaria. Para ellos. que permita asegurar la calidad de los resultados. el perfeccionamiento en la formación de los profesionales del sector y la superación científico-técnica de los graduados a través de diplomados y cursos de post-grado. así como en unidades hospitalarias o centros especializados. posibilitando la indicación de un tratamiento mas eficaz. diagnósticados por procedimientos habituales o de diagnósticos rápidos. todo lo cual amplia la capacidad del diagnóstico médico a magnitudes que están fuera del alcance de los métodos clínicos. ESTRATEGIA ORGANIZATIVA DE TRABAJO Para lograr una buena eficacia en la realización de los procederes de laboratorio. en las investigaciones donde resulte factible. así como mediante técnicas serodiagnósticas de alta sensibilidad y por aportar el patrón de susceptibilidad a los antibióticos de los microorganismos en cuestión. maestrías y doctorado. La prestación de este servicio a toda la población del país. 2. así como el desarrollo cada vez más creciente de cepas resistentes a los antibióticos de uso tradicional.

por alteración del tiempo establecido en algún paso de la técnica y en consecuencia afectarse los resultados. e) Al destaparlos coloque cada tapa delante del frasco correspondiente para evitar errores al taparlo que impliquen su contaminación. etc) y ubíquelos ordenadamente sobre la mesa de trabajo.minaciones y al mismo tiempo que proporcione una adecuada protección contra posibles accidentes. Certeza de los medios reactivos o medios a emplear a) Al seleccionar los reactivos. la discontinuidad de la marcha analítica. Para el logro de estos propósitos el laboratorista debe cumplir con las siguientes indicaciones: Disposición de los materiales de trabajo Seleccione todos los utensilios (escrupulosamente limpios o estériles) que se requieran para el trabajo a realizar (gradillas. su concentración y que la fecha de vencimiento no haya caducado. Siempre que resulte pertinente conviene planificar el trabajo a realizar en el laboratorio. puede en algunos casos. lea cuidadosamente la etiqueta del frasco para evitar errores. c) Cerciórese de que se le haya hecho control de calidad. Ordenamiento de las muestras Coloque las muestras en la mesa de trabajo por orden numérico de izquierda a derecha. ya que además de ocasionar una pérdida de tiempo innecesaria. si se 20 . de manera que queden al alcance de la mano. d) Colóquelos en la mesa de trabajo en el orden en que serán utilizados. b) Verifique mediante un examen visual que no se encuentran alterados (precipitados. para aprovechar al máximo el tiempo disponible. tubos. introducir causas de errores. Planificación del trabajo a realizar. etc). pipetas. cerciórese del nombre del reactivo. turbios. En este sentido es importante tener la certeza de que no falte ningún material que implique tener que interrumpir el procedimiento para su localización. Por ejemplo.

4. Indique las diferentes categorías ocupacionales del personal que labora en un laboratorio de microbiología. 3. Especifique El concepto que Ud. Refiérase a las actividades fundamentales que se realizan en un laboratorio de microbiología clínica. Nombre diferentes laboratorios que pertenezcan al Sistema Nacional de Salud. ¿En que radica la importancia del trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología? 7. 2. Concentración en el trabajo Durante todo el tiempo que dure la ejecución del procedimiento. 6. concentre su atención en cada paso de la técnica. lo que facilita la operatoria microscópica sin pérdida de tiempo al no tener que intercambiar láminas. por los métodos eocina y lugol. Explique cada uno de los indicadores establecidos para la estrategia organizativa del puesto de trabajo. Trabaje con meticulosidad y esmero y aplique las medidas de asepsia cuando la determinación así lo requiera. evite interrupciones innecesarias y absténgase de mantener conversaciones ajenas a lo que esta haciendo. para la búsqueda de protozoos. CUESTIONARIO 1. Explique la estructura administrativa de los laboratorios. es conveniente hacer las dos preparaciones por separados en una misma lamina portaobjetos. 5. 21 .van a preparar exámenes microscópicos directos de heces fecales. tenga de lo que es un laboratorio.

líquidos corporales. especialmente en los laboratorios donde se realizan exámenes de sangre. a diversos riesgos profesionales. 22 . traumas. Así como en la industria biotecnológica y el trabajo con organismo transgénicos. Riesgos químicos Originados por el manejo con sustancia inflamables. excreciones y productos patológicos. BIOSEGURIDAD. etc. que pueden clasificarse según su origen en: Riesgos físicos Ocasionados regularmente por. por la naturaleza de su trabajo. clínicos. directa o indirectamente las personas. exposiciones al calor. las radiaciones. Riesgos biológicos Debido a la manipulación frecuente de pacientes infectados. los animales y las plantas como consecuencias de accidentes o negligencias.CAPÍTULO 2 BIOSEGURIDAD INTRODUCCIÒN Los profesionales y técnicos de la salud que laboran en unidades hospitalarias. corrosivas. policlínicos. CONCEPTO Es la disciplina que se ocupa de la prevención y control del riesgo biológico al que están expuestas. en los laboratorios de microbiología. tóxicas. etc. están expuestos. etc. el manejo de productos sépticos y el nivel de contaminación ambiental predominante en el ámbito hospitalario. la electricidad. cancerigenas. etc o en centros de investigaciones biomédicas.

CARACTERIZACIÒN DE LOS AGENTES PATÓGENOS INVOLUCRADOS II MODERADO LIMITADO III ELEV ADO ESCASO IV ELEV ADO ELEV ADO 23 . son los de tipo I y II. PUEDEN PROPAGARSE FÁCILMENTE DE UN INDIVIDUO A OTRO. GENERALMENTE LA INFECCIÓN NO SE PROPAGA DE UN INDIVIDUO A OTRO. RIESGO INDIVIDUAL COMUNITARIO I ESCASO ESCASO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. puede extenderse al entorno hospitalario o a la comunidad. veterinarias o fitosanitarias con el consiguiente perjuicio económico o ecológico. SU EXPOSICIÓN EN EL LABORATORIO PUEDENPROVOCARINFECCIONESGRA VES. TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE ENTRAÑAR RIESGOS GRAVES PARA EL PERSONAL DEL LABORATORIO. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO Cuadro 1: Diferentes niveles de riesgo biológico. ocasionando diversos grados de afectaciones médicas. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS. LA COMUNIDAD. DIRECTA O INDIRECTAMENTE. LOS ANIMALES Y EL MEDIO AMBIENTE. son las principales causas del daño individual que bajo determinadas circunstancia. Los niveles de riesgo para un laboratorio básico.DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. PRINCIPALES CAUSAS Los accidentes imprevistos y el deficiente desempeño del personal ocupacionalmente expuesto.

cubreobjetos y pipetas utilizadas se depositaran en recipientes apropiados que contengan solución desinfectante. . El diseño adecuado de los laboratorios. . A los efectos de evitar salpicaduras del material residual empleado. . así como los portaobjetos. Abrir la tapa de la centrífuga antes de que esta se detenga o de inmediato. se deben esterilizar a la llama del mechero. 3.PRINCIPIOS BÁSICOS Los principios básicos. 2. 24 . Flameos de instrumentos de siembra contaminadas con productos biológicos infecciosos. . Pipeteo energético. antes y después de su uso. . regidos por las normas de bioseguridad para la prevención y control del riesgo biológico son los siguientes: 1.Los frotis coloreados. . . Para la correcta realización de las técnicas de laboratorio a) Regulaciones básicas. .Los instrumentos de siembra de platino o nicròn. Apertura de cultivos liofilizados en ámpulas. . El empleo sistemático de los equipos y medios de seguridad. La correcta realización de las técnicas de laboratorio. con las indicaciones y regulaciones a cumplimentar por el personal de laboratorio.Los procederes técnicos han de realizarse de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles siendo las causas mas frecuentes las siguientes. que serán expuestas resumidamente a continuación.Aplicar rigurosamente las medidas de asepsia y antisepsia en todas las ocasiones en que la acción a realizar así lo requiera. el instrumento debe introducirse gradualmente en la llama del mechero hasta ponerse al rojo vivo. Retirar la aguja de las jeringuillas que contengan material contaminado. Para dar cumplimiento a estos principios se establece en el reglamento un código practico. cuando se ha centrifugado muestras biológicas o material contaminado.

humedecer los tapones de algodón y contaminar la mesa de trabajo.Cuando la naturaleza del trabajo a realizar así lo requiera.Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores. . . nasobucos.En las zonas de trabajo del laboratorio. gabinetes. . recurrir al empleo de campanas químicas. retirando del mismo material que no tenga relación con el trabajo. etc. . Empleo sistemático de equipos y medios de seguridad . . viseras. . Nunca dejarlos en posición horizontal. pantalla facial u otros dispositivos de protección.Utilizar pipetas mecánicas para manipular líquidos infecciosos. material infecciosos o animales infectados. . .Emplear guantes quirúrgicos en todo trabajo que entrañe contacto con sangre.No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua. realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas. La caída brusca de las placas o tubos de cultivos.Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio. fumar. botas. Los tubos de ensayo que contengan cultivos.Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato. beber. ya que el agua de condensación puede arrastrar los gérmenes del cultivo. no comer. deben mantenerse siempre en posición vertical en una gradilla. . material contaminado.Siempre que sea necesario.Utilizar bata sanitaria u otras prendas apropiadas cuando la envergadura del trabajo así lo requiera. o animales y al retirarse del laboratorio (ver mas adelante. como: batones. procedimiento para el lavado de manos). o cabinas de seguridad. b) Higiene del laboratorio y el personal. guardar alimentos ni aplicar cosméticos. proteger los ojos y la cara de salpicaduras e impactos mediante gafas de seguridad.. . aún cuando no llegaran a romperse. Nunca pipetear con la boca esos productos peligrosos. Los guantes se deben retirar asépticamente y ser esterilizados en autoclave. 25 . Los cultivos en placas deben mantenerse con la tapa hacia abajo en el interior de la incubadora o sobre la mesa de trabajo.Lavarse las manos después de haber manipulado pacientes.

que permita al personal del laboratorio. Lentes de seguridad. requiere de condiciones especiales que propicien el establecimiento de una organización de trabajo. Dentro de los requerimientos esenciales del diseño constructivo se encuentran los siguientes. sin grietas o ralladuras donde se pueda acumular la suciedad y el polvo que dificulten su limpieza y desinfección. d) Nasobuco. Fig. 1 : Equipos y medios de seguridad: a) Incinerador de asas. Las mesetas deben ser construidas con acero inoxidable u otro material simi26 .Utilizar incineradas de asas microbiológicas. 2. así como. el piso y el techo. Como medida de seguridad.. El diseño adecuado de los laboratorios Debido a los diversos riesgos implícitos en las investigaciones microbiológicas. deben ser lisos. la construcción de un laboratorio de microbiología se hará en un área separada de locales destinados a otros fines. la construcción o adaptación de un laboratorio de microbiología clínica. el cumplimiento estricto de las normas de asepsia y antisepsia establecidas para la manipulación de los pacientes. el de los gérmenes ambientales o contaminantes que por diversas vías pueden tener acceso a las áreas de trabajo. Casi todas las salas o cubículos del laboratorio dispondrán de mesetas. el manejo y control de los microorganismos presentes en las diferentes muestras y cultivos durante el proceso de la investigación. generalmente empotradas en las paredes o instaladas en el centro del local. 1. 3. Las paredes. b) Guantes de polietileno. en especial la parte inferior.

electricidad. que estarán presentes en un turno de trabajo. 5. El grado de iluminación y ventilación se debe adecuar a las normas establecidas para locales cerrados o abiertos. no debiendo existir ninguna construcción debajo que dificulte la colocación de las piernas y solo de ser necesario podrá disponer de una gaveta. Estas mesetas generalmente están provistas de gavetas y estantes con anaqueles. los frascos con reactivos colorantes. tendrán una altura de 75 a 80 cm de altura por 60 cm de ancho. destinados a la colocación de la cristalería. por encima de la altura de las mesetas para evitar la exposición directa del aire y el polvo procedente del exterior. La superficie de estas mesetas no deben reflejar excesivamente la luz para que no interfiera la lectura de algunos exámenes ni afecte con el tiempo la vista del laboratorista. de manera que puedan ser desinfectadas o esterilizadas por métodos físicos o químicos sin que se deterioren. Las ventanas deben estar situadas a unos 30 cm. dependerá esencialmente de la disponibilidad de espacio. Caracteres estructurales La estructura de un laboratorio de microbiología. álcalis y sustancias corrosivas. Fig. 2 : Disposición de las mesetas en el laboratorio.lar que propicie un terminado de su superficie liso y sin poros y que sea al mismo tiempo muy resistente a la acción de los ácidos. 4. medios de cultivos. El laboratorio dispondrá de instalaciones de : agua. mínimo.Las que sean destinadas para trabajar sentado. atendiendo a la cantidad de personas previstas. Las destinadas para trabajar de pie tendrán una altura de 85 a 90 cm de alto y el mismo ancho que la anterior. así como otros materiales e instrumentos. En aquellos laboratorios que cuenten con sufi27 . aire y gas.

La sala de recepción y archivo. las actividades suelen ser compartimentadas en las siguientes áreas o secciones de trabajo: Sala de recepción y archivo. donde se procederá a asentar en el libro de registro de entrada. todo lo cual está encaminado a reducir la probabilidad de posibles propagaciones de agentes patógenos por todo el laboratorio y la comunidad. un personal de oficina entrenado. se ubicará estratégicamente en el interior del laboratorio. Cuarto de siembra. los datos del paciente (nombre y dos apellidos y número de historia clínica). Sala principal de trabajo. debe estar a la entrada de la edificación y el resto de las secciones de trabajo. recepciona las órdenes de análisis entregadas por los propios pacientes o enviadas desde las salas de la unidad hospitalaria. Fig. 28 . de menor a mayor nivel de contaminación. y el tipo de investigación que se indica. Cubículo para la esterilización y preparación de materiales. no relacionados con la actividad que se realiza en esas secciones de trabajo. Cubículo para la preparación de medios de cultivo. los pacientes. familiares y visitantes no tendrán acceso a las áreas de riesgo. reactivos y colorantes. la fecha de registro. Cubículo para las tomas de muestras.cientes salas y cubículos. el numero. que consecutivamente le corresponde a esa solicitud. o procedentes de otras unidades de salud vinculadas al centro. siendo limitado para el resto del personal del laboratorio y otros visitantes. 3 : Libro de registro. en caso de pacientes encamados. la procedencia (consulta externa. sala donde se encuentra hospitalizado o unidad de salud que hace la solicitud). Sala de recepción y archivo En esta sección. (áreas bio limpias o bio sucias) con esta estrategia.

etc) después de registrada. lesiones infecciosas en la piel. Como medida de seguridad. debiendo reintegrarla a la sección de recepción y archivo. los frascos que contienen muestras no deben estar en contacto con las órdenes de análisis. el mismo número de registro. Fig. lo que permitirá en caso de extravío de la orden. etc). Las ordenes con los resultados serán enviadas al Dpto. muestra contaminadas. 4 : Orden de análisis. la sección de archivo tiene la función de procesar un resumen bioestadístico mensual con los resul29 . quien la entregara al técnico que le vaya a tomar la muestra. la manipulación ulterior de las ordenes pueden propiciar una vía de contagio. quien la firmará y anotara la fecha de realización. donde se anotará los datos en el libro de registro de resultados. los resultados serán debidamente informados en la orden de análisis.En un pequeño cuadrante que se encuentra impreso en el ángulo superior derecho de la orden de análisis se notara el número asignado en el registro de entrada. Concluida la investigación. emitir un duplicado. Cuando la orden se entrega conjuntamente con la muestra (orina. esputo. dada la posibilidad de que se haya producido algún derramamiento durante su recolección en cuyo caso. Si se tratara de un tipo de muestra que deba ser tomada en el laboratorio (exudados. etc) en los frascos se anota con lápiz cristalográfico. por el técnico que realizó el examen. Además de estos datos primarios que se registran diariamente. en la orden de análisis se especificaran las causas (muestras escasa. suero hemolizado. de archivo de la unidad hospitalaria para que sean archivados en las historias clínicas o en el laboratorio cuando deban ser recogidas por los interesados. heces. Si el examen no se puede realizar y se solicite su repetición. la orden le será devuelta al paciente.

para la toma del exudado vaginal. Al igual que la sala principal de trabajo. etc tales como parabanes. En algunas unidades. una sección de trabajo independiente. tuberculosis. así como de la cristalería y otros accesorios para estos fines. etc) debiendo contar con la privacidad requerida y las condiciones necesarias. constituyendo cada uno de ellos. refrigerador. debiendo contar con una colección de cepas microbianas certificadas para la realización del control de calidad. tales como: preparación y cultivo de las muestras. leptospirosis. medios de cultivos y otros reactivos y colorantes. centros municipales o provinciales. Cubículos para las tomas de muestras En este local. parasitología. coprocultivo. etc. en la que se realizan determinadas investigaciones.. etc). óptico. debe estar climatizado. pruebas de identificación. resiembras y de aquellas actividades que requieran de una estricta asepsia. serología. Cubículo para la preparación de medios de cultivos. etc. o la superficie del inmueble y el mobiliario. 30 . etc) para la toma de las diferentes muestras (exudado faringeo. misceláneas. potenciómetro. camillas ginecológicas. hisopos estériles. por ejemplo: Urocultivo. observaciones microscópicas. mechero. Cada sección contará con los recursos necesarios para la realización de esas investigaciones especificas. uretral. etc. pueden existir otras secciones especializadas para la investigación de lepra. En sus estantes y anaqueles se almacenará el stok de productos químicos. instrumentos de siembra. Sala principal de trabajo Esta sala puede contar de uno o varios cubículos. baño de María. Estas secciones de trabajo deben estar climatizadas. Cuarto de siembra Generalmente los laboratorios pequeños que disponen de una sala principal en un único local tienen anexado un pequeño cubículo que es donde radica el cuarto de siembra. reactivos y colorantes Este local estará equipado con balanzas. Este cuarto esta provisto de mesetas y de todos los materiales e instrumentos para la realización de siembras.tados de cada tipo de investigación y adicionalmente llevar un control estadístico establecido por los programas de enfermedades de transmisión sexual y tuberculosis. tinciones. así como de una lámpara de luz ultravioleta para la esterilización del medio ambiente. conjuntival. etc. particularmente. el laboratorista dispondrá de los recursos necesarios (guantes. etc.

En un área de este local se situara un recipiente grande con solución desinfectante o sulfocromica con el objetivo de sumergir la cristalería que asi lo requiera. deben ser previamente taponados 31 . Destilación de agua. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización La cristalería de trabajo y otros materiales que vayan a ser sometidos a un proceso de esterilización. Esterilización.Cubículo para la esterilización y preparación de materiales Este local se destina para la realización de diversas actividades. . En el segundo de enjuaga. en el primero se friega la cristalería con detergentes especiales y agua abundante empleando hisopo de tamaño apropiado. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización. . Fig. . incluyendo su secado. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. con agua cruda y en el tercero con agua destilada. . Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. 5 : Hisopo para la limpieza de la cristalería. incluyendo su secado En este local se instala una meseta con tres fregaderos colindantes. entre las que se encuentran las siguientes. Las pilas de estos fregaderos deben estar lo suficientemente altas como para permitir el enjuague de las pipetas en posición vertical. en horno o autoclave.

los laboratorios que disponen de destiladores metálicos. Esterilización El local debe estar dividido en dos áreas. Fig. por las manipulaciones ulteriores y los microorganismos presentes en el medio ambiente. los instalan en este lugar (Área limpia) procediendo a la destilación y recolección del agua destilada en botellones con tapón de goma. Destilación de agua Generalmente. El área para el tratamiento del material limpio contará al menos con un horno que además de ser utilizado para la esterilización se puede emplear para el secado.con algodón y/o empaquetados con papel de estraza. El flujo de trabajo en esta sección es el siguiente: entrada del material sucio. fregado. para evitar su posterior contaminación una vez estériles. 6 : Destilador metálico de agua. esterilización. una para esterilizar el material limpio y la otra para esterilizar el material sucio. Como se comprenderá se requieren de dos autoclaves. 32 . preparación y esterilización del material limpio.

Sumergir la jeringuilla con la aguja ensamblada. Examinar la aguja y la jeringuilla cerciorándose de que el ajuste de la boquilla de la aguja a la jeringuilla es adecuado y que las marcas volumétricas se mantienen legibles. a través de su director una minuciosa información acerca de: a) Las medidas de seguridad establecidas. La manipulación se hará siempre con guantes quirúrgicos estériles observando un cuidado extremo para evitar pinchazos o cortaduras. Descargar la solución desinfectante contenida en la jeringuilla a través de la aguja. 4. 5. 3. Durante el horario de trabajo las puertas del laboratorio permanecerán cerradas y solo tendrán acceso el personal del laboratorio y las personas autorizadas que hayan sido debidamente informadas sobre los posibles riegos y satisfagan cualquier requisito que se exija para tener acceso. como por ejemplo la inmunización actualizada. PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES.MEDIDAS DE PREVENCIÓN 1. No se permitirá la presencia de niños en las zonas de trabajo del laboratorio. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN 1. Enjuagar la jeringuilla y la aguja con agua (llenar y vaciar). No se permitirá tampoco la entrada en el laboratorio de animales que no tengan relación con el trabajo que se esté realizando. 3. 6. en posición horizontal. 2. 2. en el interior de una bandeja que contenga solución desinfectante y exponerla a su acción por un espacio de tiempo no menor de 20 minutos. El personal del laboratorio recibirá. Observar que no queden restos de sangre ni manchas. 33 . 4. A todos los miembros del personal del laboratorio y demás personas expuestas se les tomara muestras de sangre periódicamente y con el suero se realizaran determinaciones que servirán de referencia en función de los agentes infecciosos manipulados. c) Los riesgos mas probables que pueden ocurrir debido al tipo de investigaciones que se realizan en ese laboratorio. Dejar las agujas colocadas en la jeringuillas. b) La existencia y localización de un manual de seguridad y de operaciones en el que se identifiquen los riesgos actuales y potenciales y se indiquen los procedimientos para su reducción.

INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE En caso de derrame de muestras biológicas o material contaminado a) Colocarse guantes quirúrgicos. c)Remover el material infeccioso. d) Remover el material absorbente y colocarlo en un contenedor destinado para materiales contaminados. b)Aplicar solución desinfectante. etc). Secar y proceder a empaquetar las agujas y las jeringuillas por separado con doble envoltura para su esterilización en autoclave.7. d)Aplicación nuevamente de desinfectante. 34 . b) Cubrir la sustancia derramada con material absorbente (algodón. 7 : Desinfección de muestras biológicas o material infeccioso derramado accidentalmente: a)Cubrir el área con un material adsorbente. papel de filtro. e) y f) Limpieza con agua y detergente. e) Limpiar nuevamente el área contaminada con el desinfectante y posteriormente con detergente y agua abundante. c) Aplicar solución desinfectante de hipoclorito de calcio o sodio al 1% alrededor del derrame y sobre el material absorbente esperar de 10 a 20 minutos. Fig.

quien registrará el hecho en el libro de control que existe al efecto. c) Aplicar una solución desinfectante débil de hipoclorito de sodio o calcio. diarreas o adenopatías que ocurra dentro de las 12 semanas con posterioridad a la exposición. lesiones o exposiciones con muestras o material contaminado. b) Estimular el sangramiento. debe irrigarse de inmediato con cantidades de agua abundantes o solución salina fisiológica. deben ser comunicados lo antes posible al jefe del laboratorio. sobre todo si es acompañado de rash. El personal accidentado debe ser puesto en observación epidemiológica que incluya pruebas para detectar anticuerpos contra el VIH que serán realizadas 6 semanas después de la exposición. trae como consecuencia la contaminación de las manos y las muñecas pudiendo extenderse a los antebrazos. El agua arrastra mecánicamente una parte de los microorganismo presentes en las 35 . para arrastrar mecánicamente a los agentes infecciosos. d) Para continuar el trabajo colóquese un débil o guante. f) Los derrames accidentales.En caso de lesiones o contacto no protegido con material contaminado o muestras biológicas a) Lavar de inmediato la lesión con agua y jabón. g) El jefe de Dpto. LAVADO DE MANOS Objetivo: Eliminar la micro biota transitoria y disminuir la residente o normal de las manos y los antebrazos. Curar y cubrir la lesión. relacionada con la higiene personal lo constituye sin lugar a dudas el lavado de manos. por lo que de no debe aplicarse con sistematisidad estas medidas higiénicas al personal de la salud puede propagar la infección de un paciente a otro y contribuir de esta manera al incremento de las infecciones nosocomiales. de Epidemiología y orientará al trabajador que reporte cualquier síntoma febril agudo. La manipulación de los pacientes o materiales. lo notificara al Dpto. punturas. Si la prueba es negativa. Si al cabo de ese tiempo continua negativa se da. e) En caso de salpicaduras de sangre en los ojos o la boca. En el lavado de manos intervienen elementos mecánicos y químicos. verificara la procedencia de la muestra y si comprueba que el instrumental estaba contaminado con sangre o liquido corporal de un enfermo o portador de VIH. se repite a los 3 meses y con esa periodicidad durante un año. el alta epidemiológica. Justificación: La medida básica mas importante.

Lavado higiénico.. Empleo: Se utiliza ante las maniobras semicriticas. personales o sociales que lo requiera y antes y después del contacto con pacientes en procederes no invasivos y sin riesgo. al realizar actividades fisiológicas. sin frotárselas. Con la punta de los dedos. papel o paño para cada una. llénelas de agua y enjuague la llave. 3.manos. con el objetivo de arrastrar suciedades. Frote rigurosamente las manos con movimiento rotativo y haga que la espuma se extienda hasta las muñecas. Empleo: Siempre que se perciban las manos sucias. 4. TIpos de lavado de manos . 8. Lavado social de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. Lavado higiénico o médico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. Lavado quirúrgico. 5. . Cierre la llave con una de las manos y enjabónelas. . evitar infecciones cruzadas y proteger al personal de salud. 7. enjuague el jabón y colóquelos en la jabonera. mientras que el jabón emulsiona las materias extrañas y reduce la tensión superficial de los gérmenes presentes lo que facilita su lisis. Remoje las manos hasta las muñecas y haga una abundante espuma. que elimina todo tipo de suciedad visible. Procedimiento 1. Retire las prendas de las manos y las muñecas. Abra la llave del agua y tome el jabón. 36 . 2. Lavado social. conjuntamente con la eliminación de los ácidos grasos y la suciedad. Junte las manos en forma de recipiente. las que se frotan de forma enérgica se enjuagan abundantemente durante un minuto y después del secado se aplica solución antiséptica. Cierre la llave y séquese las manos con servilletas. 6. Abra la llave hasta que salga un chorro abundante de agua y enjuague las manos y manténgalas en un plano horizontal.

Procedimiento 1. servilletas o papel estéril (uno para cada mano) apriete suavemente la piel sin restregar. Moje las manos y antebrazos (5 cm por encima de las muñecas) enjabónelas con jabón convencional o bacteriostático y haga una abundante espuma. 3. h) Realice un enjuague abundante y deje que el agua corra hacia los codos. d) Dorso de los dedos flexionados para cada mano. Enjuague bien sin dejar ningún residuo de jabón. aplíquele jabón y cepille bien las uñas. con utilización de solución antiséptica después del secado. b) Palma derecha sobre dorso de la mano izquierda o viceversa. Moje las manos y antebrazos hasta 2 pulgadas arriba del codo. 4. c) Palma con palma intercalando los dedos. 3. 37 . j) Aplicar solución antiséptica y déjela actuar sobre las manos por un tiempo no menor de 2 minutos antes de la maniobra semicritica. mantenga las manos siempre levantadas para que el agua corra hacia los codos. Empleo: Antes de cualquier maniobra critica. f) Frotación de las yemas de los dedos sobre las palmas. Lavado quirúrgico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua. Frote las manos igual que para lavado higiénico incluyendo los antebrazos. Procedimiento 1. Realice el lavado social de las manos hasta enjuagar la llave con las manos juntas. Realice el lavado social de las manos hasta el paso en que se enjuaga la llave con las manos juntas en forma de recipiente. Tomar un cepillo estéril para cada mano. i) Seque las manos y antebrazos con paños. Frote las manos de la siguiente forma: a) Palma con palma. enjabónelos con jabón convencional en forma circular y haga una abundante espuma. lechos ungueales y la yema de los dedos. 5. e) Pulgar derecho con la mano izquierda y viceversa. jabón y cepillo. 2. 2. comience por las manos y finalice en los codos nunca regrese a las manos. g) Frote en forma circular la superficie de los antebrazos 5 cm por encima de las muñecas.

cualquier limpieza o reparación que se considere se hará después de esterilizados. Lo mejor es poner los deshechos en un saco plástico que se introduce en una caja de cartón. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar el contenido y antes de devolverlos al laboratorio. d) Material contaminado para su eliminación.antes de proceder a su eliminación. jeringuillas. previamente introducidos en recipientes impermiables. Objetos aguzados y cortantes: Las agujas hipodérmicas deben ser colocadas en recipientes con paredes que no puedan traspasarse fácilmente. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar transporte. Material contaminado para eliminación: Todos los cultivos y materiales contaminados suelen esterilizarse en autoclave. c) Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización. a) Deshechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura. incluso cuando las normas de laboratorio consistan en esterilizarlos primero en autoclave. etc). Enuncie el concepto de Bioseguridad. Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización: Este material se coloca en recipientes impermeables poco profundos que contenga una cantidad desinfectante suficiente para cubrir el contenido y se llevan al autoclave. Si se utiliza recipientes especiales concebidos para el transporte. Estos recipientes deben ser impermeables y estar provistos de tapa herméticas. 38 . 2. CUESTIONARIO 1. Cuando estos estén llenos se colocaran dentro de otros recipientes para desechos contaminados y se incineran. Después del tratamiento en autoclave puede colocarse el material en recipientes apropiados para el transporte al incinerador o a otro lugar de evacuación. No se efectúa ninguna acción previa. Nombre los diferentes tipos de riesgo a los que están expuestos los profesionales y técnicos de microbiología en el ejercicio de su trabajo.MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS Se debe establecer un sistema de identificación y separación de los materiales contaminados (y de sus recipientes). con lo que se puede incinerar el contenido y el continente. b) Objetos aguzados y cortantes (agujas.

3. Mencione los principios básicos establecidos para la prevención y control del riesgo biológico. que están encaminadas a evitar la ocurrencia de contagio infecciosos. ¿Cuáles son las indicaciones a seguir en el caso de que se produzcan derrames de muestras biológicas o material contaminado? 17. Refiérase a las medidas establecida para evitar la formación de aerosoles. 9. ¿Cómo se clasifican los objetos peligrosos antes de ser deshechos? 19. 10. 6. Mencione las prohibiciones establecidas en el código practico o reglamento de estricto cumplimiento para el personal que labora en el laboratorio. y su equipamiento. Indique cuales don las actividades que se realizan en cada sala o cubículo del laboratorio. ¿Qué instalaciones debe tener el laboratorio para su buen funcionamiento? 11. Caracterice los diferentes niveles de riesgo. Nombre las diferentes salas o cubículos con que se estructura un laboratorio de microbiología. Especifique las característica constructivas que debe tener cada una de las salas o cubículo. 14. 13. 5. Describa pormenorizadamente las normas establecidas para efectuar las diferentes técnicas de lavado de manos. 12. teniendo en cuenta su reutilización o eliminación. ¿Qué indicaciones se establecen en caso de accidente?. 7.¿Cuáles son las principales causas del daño individual? Especifique que elemento biológico resultan vulnerables de ser afectados en la comunidad por negligencias o accidentes en un laboratorio que trabaja con agentes biológicos peligrosos. 18. 15. Explique como usted procede con cada tipo de material u objeto contaminado. 39 . Describa como debe ser el diseño constructivo de un laboratorio de microbiología. 4. 16. 8. Precise las medidas de prevención que debe conocer el personal que labora en los laboratorios. en cuanto a la afectación individual y comunitaria.

juicios. constituyendo obligaciones con respecto a otros individuos. su clase social. de honestas o deshonestas etc.. vestidos. La moral está condicionada por la base 40 . criterios etc. fundadas o dogmáticas. Y fijándolas en su conciencia como principios o normas morales. debido a influencias socioculturales y que se expresa mediante opiniones. cuya estructura responde a los intereses de la clase dominante. Como una necesidad de las sociedades divididas en clases. concepciones políticas. de justas o injustas. etc. las concepciones ideológicas pasan primero por la conciencia. la familia.) de la población. A diferencia de las relaciones de producción que se forman independientemente de la voluntad del hombre. para obtener los medios de subsistencia necesarios (alimentos.CAPITULO 3 ETICA MEDICA INTRODUCCION La sociedad está formada pro un conjunto de seres humanos que conviven dentro un mismo ámbito cultural. para lo cual crea organizaciones represivas o políticas e instituciones productivas y de servicio que responden a sus intereses económicos o tienen el encargo de influir ideológicamente con iguales propósitos sobre la conciencia común (estado de opinión. una organización política de la clase dominante que tiene como finalidad mantener el orden establecido y aplastar la resistencia de las clases antagónicas. evaluando estas relaciones de buenas o malas. LA MORAL La moral puede definirse. vivienda. la patria y el Estado. mediante el establecimiento de relaciones de producción basada en la propiedad sobre los medios de producción que va a delimitar el grado de accesibilidad a los bienes materiales y culturales de cada clase y/o capa social existente. estéticas. normas y evaluaciones sobre la regulación de la conducta de los individuos. que cada individuo incorpora a su escala de valores. representaciones. instrumentos de producción.). filosóficas. mediante la inculcación de ideas. En todo sistema social impera un modo de producción que determina la base económica de esa sociedad. morales. como el conjunto de convicciones. jurídicas. religiosas. antes de constituirse en patrones del comportamiento. lo que dependerá del lugar que ocupen en la escala social y el carácter privado o social de las fuerzas productivas. que en su conjunto forman la conciencia social. relacionándose de un modo u otro. surge el Estado.

estableciéndose como hábito o costumbre en la conciencia. psíquicas o morales en el paciente. con 41 . sus familiares o a la comunidad. ÉTICA MÉDICA La ética médica es una manifestación de la ética general y se refiere específicamente. A diferencia de la moral. que conducta es buena y cual es el sentido de la vida. Como quiera que en la sociedad dividida en clases los intereses son contradictorios. a afectaciones somáticas. Teoría de la moral Investiga la esencia de la moral.económica el régimen social. Al cumplir esta función. a los principios y normas que rigen la conducta de los profesionales y técnicos de la salud. Para su estudio la ética se divide en. pero a la vez como otras formas de la conciencia social incide y actúa sobre ella. se incurre en violaciones de la BIOETICA. establece el código moral de la conducta. la moral no se apoya en leyes formales. la ética investiga científicamente las concepciones morales en su sentido mas amplio y establece las regulaciones para su aplicación. en la autoridad moral de algunas personas o en la opinión publica de determinadas colectividades. ETICA La ética es la ciencia de la moral y de la moralidad. Cuando los actos del personal médico o paramédico dan lugar. que surge y se desarrolla como resultado de las relaciones de producción. sus normas y carácter histórico. su origen y desarrollo. existen en aquellas morales diferentes. señala que aspiraciones son dignas. así como de los trabajadores administrativos y de servicio que laboran en instituciones biomédicas. Ética normativa Investiga el problema del bien y del mal. de manera irreversible. las leyes a que obedece. Teoría de la Moral y Ética Normativa. En los últimos tiempos se ha incorporado una nueva modalidad denominada Metaética. sino en la fuerza de la persuasión y el ejemplo. que investiga los enunciados éticos y su relación con la verdad.

establece la equidad. está regulado básicamente pro 4 principios: la no maleficencia. con el elevado espíritu internacionalista. de los recursos y atención que presta la institución y por último.independencia de que la acción se haya producido de manera intencional o inconscientemente. . tanto preventiva como curativa en las instituciones de salud. c) La disposición los profesionales y técnicos de la salud de participar en misiones internacionalistas. la autonomía. En cuanto al principio de justicia. psíquica o moral. basados en los siguientes principios: a) La voluntad política del estado cubano de crear una infraestructura que ha permitido llevar los servicios médicos a todo el país. constituye la base material sobre la que se sustenta la moral y la ética de los trabajadores de la salud. El principio de beneficencia preconiza que todas las acciones y esfuerzos deben estar encaminados a beneficiar al enfermo. la justicia. aún en las zonas más apartadas y recónditas. Es por ello que en el ejército de nuestra función social debemos observar principios éticos . con el resto de los trabajadores y estudiantes del sector y con la sociedad. b) El carácter gratuito de la atención médica. El carácter socialista del Sistema Nacional de salud de nuestro país. En el primero se establece. por negligencia u omisión.Dedicar nuestros esfuerzos a la prevención. debe estar basada en la estricta observancia de los siguientes principios éticos: En relación con el paciente y sus familiares . dedicar todos nuestros esfuerzos y conocimientos científicos y técnicos al mejoramiento de la salud del hombre. donde se respeta la decisión del paciente de someterse a acciones médicas o experimentales que puedan afectar su integridad físico. con independencia del elevado costo que pueda tener para el Estado. tales como. Para brindar su colaboración en cualquier lugar del mundo. rehabilitación y promoción de la salud humana.Evitar que se produzcan daños a personas sanas o enfermas en los trabajos de investigación que realicemos. todos los pacientes tienen las mismas oportunidades de beneficiarse por igual. recuperación.morales de profundo contenido humano. trabajar consecuentemente allí donde la sociedad lo requiera. es decir. 42 . Nuestra conducta en relación con el paciente y sus familiares. ideológico y patriótico. El comportamiento bioético. no causar daño al paciente de manera intencional. estar siempre dispuesto a brindar la atención necesaria. la beneficencia y la autonomía.

Escuchar las preocupaciones y dificultades del paciente y sus familiares.Abstenerse de realizar trabajos investigativos con los pacientes sin su consentimiento. aunque no estén subordinados. teniendo en cuenta los intereses del paciente siempre que ello no ocasione un perjuicio social ni ponga en peligro la salud de otras personas. . la conducta adecuada ante el paciente y sus familiares y en el mismo sentido actuar sobre aquellos que.Conservar el secreto profesional. la superficialidad o la rutina.Los profesionales y técnicos de la salud deben poseer la honestidad necesaria para reconocer sus errores y eliminarlos. .Cuidar de no incurrir en el error técnico que resulta de una equivocación.Respetar el decoro. de aquellos trabajadores que nos están subordinados.Exigir. evitando a toda costa que nuestro trabajo se afecte por el apresuramiento.Atender. .Propiciar una adecuada relación personal con el paciente que le inspire un buen estado de ánimo y seguridad. .Evitar que lleguen a manos de los pacientes o de sus familiares las historias clínicas. . aunque no exista mala fe. despreocupación e ignorancia.. .Utilizar en todo momento de nuestras relaciones con los pacientes y familiares. ni elementos de negligencia. . de forma solícita. 43 . el pudor y la dignidad de las personas bajo nuestra atención. informes de laboratorio o cualquier otro documento que pueda darle indebida o perjudicial información.No divulgar aspectos de la enfermedad que puedan estar relacionados con la vida intima del paciente o sus familiares. . . ni hacer comentarios indiscretos en su presencia. intervienen de una forma u otra en el trato con los pacientes. . sencillo y comprensible. un lenguaje claro. . . sin alardes de tecnicismos y erradicando cualquier expresión de mal gusto.Mantener en los casos de enfermedades de curso fatal absoluta o relativa reserva sobre el diagnóstico y pronóstico en relación con el paciente. . sin mostrar prisa o indiferencia hacia sus padecimientos. a toda persona que recabe nuestros servicios. darles la atención requerida y esforzarnos por viabilizar las soluciones posibles.Los errores técnicos deben ser conocidos y analizados críticamente en reuniones del departamento con la libertad y profundidad necesaria que permitan derivar de ellas la experiencia que impidan su repetición.

Como parte de la sociedad . modestia honestidad y dentro de las reglas de una elevada educación formal y política.Mantener en todo momento un buen porte y aspecto personal. a través de la palabra y su ejemplo.El docente debe promover en sus alumnos los principios éticos. . así como aquellas que.Evitar indiscreciones que menoscaben el prestigio de otros compañeros o instituciones del sistema de salud. 44 . como aspecto esencial para el cumplimiento de sus responsabilidades docentes. . por razón del carácter excepcional de nuestro trabajo. una actitud crítica y autocrítica sobre los asuntos referidos a la relación con los pacientes.Inducir en los alumnos la disposición de recibir entrenamiento especializado en aquellas disciplinas que lo demanden.Mantener. exija el mayor esfuerzo.En relación con el resto de los trabajadores de la salud .Prestar especial atención a su superación individual. . teórica y práctica.Poner en conocimiento de las autoridades correspondientes cualquier violación que nos conste.Actualizar y perfeccionar los conocimientos de forma continua.Comportarse en todo momento con sencillez. subordinando el interés personal al social. En las relaciones entre el docente y los educandos . . utilizando el vestuario adecuado en las diferentes áreas de trabajo. . dedicación y sacrificio.Ejercer con altruismo las actividades propias de su esfera de trabajo.Procurar que la información que se ofrezca con propósitos de divulgación científica y educativa sea correcta y adecuada. absteniéndose de emitir conceptos u opiniones que pueden alarmar innecesariamente a la ciudadanía. . tanto de estos principios éticos como de los reglamentos establecidos en las Unidades de Salud Pública. . .Propiciará que las relaciones entre el y sus educandos se enmarquen en la debida autoridad y respeto que se requieren en la actividad docente. . cuidar que las opiniones y criterios se basen en el mas profundo análisis científico posible. a fin de satisfacer las necesidades de nuestro pueblo y las tareas internacionalistas que se requieran. .Estar siempre en disposición de cumplir las obligaciones que le correspondan como ciudadano. para con nosotros mismos y con los demás profesionales y técnicos de la salud. para lograr la optima calidad de los servicios que prestamos a la sociedad.

9. 3 en activo y dos suplentes. los que a partir de ese momento actuarán de acuerdo con la legislación laboral vigente. moral y político del centro. trasladará su criterio a la dirección y al sindicato. Esta comisión es la encargada de conocer toda denuncia o quejas sobre violaciones de la ética. realizando las investigaciones pertinentes en el plazo de 20 días. 8. En su opinión ¿Qué cosa es la ética? ¿Cuáles son los aspectos generales de la ética médica? ¿Qué usted entiende por violaciones de la Bioética? ¿Cúales son los principios que regulan el comportamiento bioético? ¿Cúales son los principios éticos que regulan las relaciones entre el personal de la Salud con los pacientes y familiares? Refiérase a los principios éticos que se ponen de manifiesto en las relaciones con otros trabajadores del sector y con los estudiantes. 6. es elegida para un mandato de 2 años quedando integrado por 5 miembros. que serán seleccionados entre los compañeros de más prestigio laboral científico. CUESTIONARIO 1. que de común acuerdo entre la administración y el sindicato. ¿Cómo se materializa el comportamiento ético cuando el profesional o técnico se siente parte de la sociedad. ¿Qué son y cómo se crean las comisiones de ética médica? ¿Cuál es la competencia y el desempeño de los integrantes de las comisiones de ética médica en los centros de Salud? 45 . En el caso de arribar al criterio de que se incurrió en violación de la ética. 5. 7.LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA En todas las unidades del Sistema Nacional de Salud se crean las comisiones de Etica Medica. 2. 4. 3.

pasando a ser un líquido que contiene múltiples sustancias en disolución. helio. Posteriormente en los afluentes. inodoro e insípido. hacen que en conjunto pierda su pureza. siendo considerada como el solvente universal para la disolución de una gran cantidad de solutos y otros compuestos en estado líquido. represas o acueductos donde va a parar. el agua de lluvia se une a diversos elementos gaseosos presentes en el aire. formando la molécula una configuración especial no lineal. continua el proceso de contaminación. pasando al estado sólido y hierve a 1000c. lo que determina sus propiedades disolventes. sino angular. metano. incoloro. etc. debido a que al ionizarse se une a muchos óxidos.CAPÍTULO 4 EL AGUA INTRODUCCIÓN El agua es un líquido transparente. 46 . En el laboratorio. dióxido de carbono. por constituir el elemento esencial de todos los tejidos y líquidos orgánicos. que variará. como el nitrógeno. formando ácidos y bases con otros compuestos para formar hidratos. IMPORTANCIA El agua es indispensable para la vida. lo cual propicia que sobre el átomo de oxígeno exista una cierta densidad de cargas negativas y sobre el hidrógeno una densidad de cargas positivas. contaminándose con los diversos compuestos orgánicos e inorgánicos que estén presentes. Al caer se disemina o se filtra en el suelo. desempeñando un protagonismo esencial en las reacciones químicas. pasando al estado de vapor de agua. CALIDAD DEL AGUA El agua tal y como se encuentra en la naturaleza no es pura. ríos. dependiendo de los compuestos presentes en cada lugar. por lo que se clasifica el enlace como polar. Durante las precipitaciones. lo que unido al tratamiento con cloro a que es sometida en los acueductos para su potabilización. Se congela a 00c. el agua es el reactivo más empleado. Químicamente está compuesta por 2 átomos de hidrógeno unidos a un átomo de oxígeno.

PURIFICACIÓN DEL AGUA Para las determinaciones de laboratorio. diseñado para que los vapores que se desprendan en este proceso. pasen por un sistema de enfriamiento que los condensan. Fig. Por ejemplo: el cloro libre. quedan retenidos en el destilador. 8 : Destilador de vidrio. resulta indispensable que el agua sea lo más pura posible. provocarían efectos indeseables distorsionando la fiabilidad de los resultados. mientras que las sales de mercurio las activan. Por su parte el fluor y el cobre inactivan a las enzimas. haciendo que pasen nuevamente al estado líquido con una mejor calidad. ya que de lo contrario algunos componentes. posee un gran poder de oxidación por lo que puede alterar la composición química de uno o varios compuestos del sustrato empleado. 47 . ya que los contaminantes al no tener la capacidad de evaporarse. Para lograr la purificación del agua se emplean dos métodos: la destilación y la desionización. en someter al agua a temperatura de ebullición en el interior de un destilador metálico o de vidrio. DESTILACIÓN La destilación consiste.

aunque tiene la desventaja. donde se conservará hasta su empleo. incluso. como se ilustra en la siguiente tabla: 48 . obtenida por el procedimiento explicado no es totalmente pura. DESIONIZACIÓN La desionización consiste en hacer pasar el agua corriente por una columna de resinas. debe ser renovada diariamente. con lo cual adquiere un buen estado de pureza. Si se desea neutralizar ese pH ácido para que no interfiera en algunos procederes. Antes de apagar la fuente de calor. CONDUCTIVIDAD DEL AGUA Mediante la conductividad eléctrica se puede determinar el grado de pureza del agua. un pH neutro o ligeramente alcalino. debido a la presencia de dióxido de carbono atmosférico disuelto. Si se quiere. que como el proceso no lleva implícito su esterilización. el agua destilada debe ser sometida a un proceso de descarboxilación. PH DEL AGUA DESTILADA El ph del agua destilada oscila entre 4 a 5. se verterá en recipientes apropiados. el agua destilada. tapar el erlenmeyer con un tapón perforado de caucho. ya que el vapor de agua que se forma puede arrastrar mecánicamente partículas de agua que no estén en estado de vapor. 3. para algunas determinaciones.El agua destilada. una mayor calidad de pureza. lo cual se realiza de la siguiente manera: 1. el agua destilada puede emplearse en el trabajo diario sin que introduzca errores apreciables. provisto de un tubo trampa con perlas de hidróxido de sodio. que requieren generalmente. las cuales captan los aniones y cationes que la contaminan. mejor que la del agua bidestilada. como por ejemplo en la preparación de medios de cultivo. No obstante. 2. Después que el agua se ha enfriado. debe ser sometida nuevamente al proceso de destilación con lo que se obtiene el agua bidestilada. Se vierte el agua en un erlenmeyer y se somete a temperatura de ebullición por espacio de 3 a 5 minutos. Si se sometiera a una tercera esterilización obtendríamos el agua tridestilada. el procedimiento comúnmente empleado es la destilación. Para el trabajo del laboratorio de microbiología.

¿Cuál es la ventaja y la desventaja de la desionización sobre la esterilización del agua? 10. 9. Explique el proceso de desionización del agua. TIPO DE AGUA CONDUCTIVIDAD ( ohms -1 cm -1 ) 300 5 1 0. ¿Cuál Es la importancia del agua para los laboratorios? 2. ¿Mediante que procedimiento se puede determinar el grado de pureza del agua? 49 .Cuadro 2 : Grado de pureza de los distintos tipos de agua en correspondencia con su conductividad. ¿Cómo es la calidad del agua. ¿En que consiste la destilación? 6.2 Corriente Destilada Bidestilada Desionizada CUESTIONARIO 1. tal como se encuentra en la naturaleza? 3. ¿Cuál es la diferencia entre el agua destilada y la bidestilada? 7. ¿Cuál es el pH del agua destilada? 11. ¿Por qué se hace necesario bidestilar o tridestilar el agua? 8. ¿Cómo se denomina el método más empleado en los laboratorios para purificar el agua? 5. ¿Explique por qué causa el agua empleada en el laboratorio debe ser lo más pura posible? 4.

además tiene la propiedad de permanecer inerte durante las reacciones químicas. se vierte en diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieran producir. 50 . especialmente con teflón (tetrafluoruroetileno) un polímero de bajo costo. El producto fundido. en ese estado líquido.. Como se sabe. como por ejemplo: las jeringuillas utilizadas. SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO En la actualidad. caracterizado por su dureza. así como para la fabricación de vasos. que independientemente de su forma y tamaño están constituidos solamente por vidrio. al conjunto de objetos utilizados en la realización de diferentes procedimientos técnicos. cuya aleación le confiere una alta resistencia mecánica. térmica y química.CAPÍTULO 5 CRISTALERÍA DE LABORATORIO INTRODUCCIÓN Se denomina cristalería de laboratorio.. COMPONENTES DEL VIDRIO El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una temperatura de 1. Quedando como un cuerpo sólido. pueden ser desechadas sin grandes afectaciones económicas para la institución. generalmente transparente. los diversos objetos de vidrio que integran la cristalería de laboratorio. con la ventaja de que dado su bajo costo. debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. 0000c. se identifica por estar rotulada con el nombre de "Pyrex" (Pairex). lo que le confiere una alta resistencia contra impactos. Etc. exposiciones a elevadas temperaturas. lo que no resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio. algunos objetos. copas y otros objetos. también se fabrican de material plástico. este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecánicos. lo que lo valida como un sustituto eficaz del vidrio. De esta manera se obtiene el cristal empleado para cubrir puertas o ventanas. La cristalería fabricada con estos componentes.

Utilización para la Frascos erlenmeyer realización de diverFrascos Kitasatos sos procedimientos Frascos para reactivos técnicos.Alta resistencia química DIFERENTES TIPOS G E N E R A L Todos los frascos o reciopientes destinados a contener o almace.Se fabrican de diferentes tamaños. Pipeta Probetas Beaker (Vaso de precipitado) Matraces Copa cónica Buretas Jeringuillas TD (Para distribuir) 51 .Expresan magnitudes volumétricas. Vidrio reloj Placas de Petry Embudos Condensadores Láminas de portaobjetos Láminas cubre objetos Láminas excavadas TC (Para contener) .Cierre hermético.Fotorresistencia (materias primas) o soluciones y reactivos elaborados ________________________________________________________ . . CLASIFICACION SUB-CLASIFI CACIÓN DE ALMACE NAJE CARACTERIZACIÓN . DE MEDICION VOLUMETRICA Pipetas de : Shali. Thoma o Westergreen (No utilizadas en el laboratorio de microbiología) _______________________________________________________ . Frascos de fondo plano DE .Están calibradas para trabajar a 200c.La mayoría se fabriFrascos goteros TRABAJO can de diferentes Vaso de Koplin tamaños y capaciTubos de ensayo dades. productos químicos .No revelan magnitudes volumétricas.Pueden tener o no rotulada una escala de graduación .CLASIFICACION La cristalería de laboratorio de clasifica de la siguiente manera: Cuadro 3: Clasificación de la cristalería de laboratorio. . nar.

Aunque los erlenmeyer pueden emplearse para la preparación de diferentes reactivos. que corresponde a la boca. 300. esta cristalería está diseñada específicamente para la preparación de compuestos que requieran ser sometidos a la acción del calor. seguida de una porción cilíndrica de algunos cm a manera de cuello. la preparación de medios de cultivo. Al concluir este espacio se va ensanchando progresivamente de forma oblicua adquiriendo la forma cónica que lo caracteriza. Los más empleados en el laboratorio de microbiología son los de: 100. que se caracteriza por tener un diámetro 3 ó 5 veces mayor en su porción inferior con respecto a su porción superior. Los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños. Si lo colocamos sobre la mesa de trabajo y lo observamos de arriba hacia abajo podemos percatarnos que en el extremo superior presenta una abertura circular con rebordes. lo que propicia que no afecte significativamente el volumen de la preparación. 250. Los de menor o mayor volumen de capacidad se utilizan con menor frecuencia.CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS DE CRISTALERÍA CRISTALERÍA GENERAL DE TRABAJO Erlenmeyer Fig. 52 . 9 : Erelenmeyer Los erlenmeyer son recipientes de forma cónica y fondo plano. debido a que su forma cónica. como por ejemplo.500 y 1 000 ml. hace que los vapores se condensen en el cuello..

10 : Frasco de kitasato Los frascos de Kitasatos. Al igual que los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños.Kitasatos Fig.11 : Frasco para reactivos. 53 . Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener de acuerdo a su tamaño entre 25 ml y 1 litro. La tapa del frasco puede ser de cristal esmerilado o plástica si el cierre es de rosca. son similares a los erlenmeyer con la diferencia de que en el cuello tiene insertado un pequeño tubo corto en dirección horizontal abierto en su porción distal siendo las paredes de vidrio más gruesas. Con ambas variantes se consigue el cierre hermético del frasco. para soportar las diferencias de presiones externas e internas provocadas por las técnicas de filtración al vacío para los que básicamente son empleados. Frascos para reactivos Fig. lo que dependerá del tipo de reactivo que contenga. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar para la protección de reactivos fotosensibles.

De acuerdo con su capacidad. fabricándose de diferentes tamaños. Frascos goteros Fig.13 : Frascos goteros Existen en el mercado diferentes modelos. el contenido goteará si se inclina el frasco adecuadamente. 54 . Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón de caucho. En el trabajo microbiológico se utilizan regularmente para la preparación del antígeno de cardiolipina. utilizado en las pruebas serológicas VDRL. Los de vidrio. debiendo ser termorresistentes por si se requiere someterlos a la acción del calor.12 : Frasco de fondo plano Se utilizan para la preparación de determinadas disoluciones. en tanto que otro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido. tradicionalmente empleado son incoloros o ámbar. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular. similar a los empleados en los frascos de medicamentos. pueden contener entre 25 y 100 ml. que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco.Frascos de fondo plano Fig.

Los utilizados comúnmente en análisis cualitativos y cuantitativos tiene el fondo ligeramente cóncavos. resina sintética obtenida por polimerización del fenol y el formaldehído. 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí. Estos vasos están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas. Tubos de ensayo Fig.14: Vaso de Koplin Estos vasos se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares. Todos son cilíndricos. lo que posibilita la insertación de varias láminas portaobjetos. fabricados de diferentes tamaños. de manera que quedan separados. aunque la forma de sus extremos varía en función de su empleo. en tanto que los tubos para cultivo son similares. pero todos tienen. 55 .Vaso de Koplin Fig. en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente. con capacidad variable.15: Tubos de ensayo Son pequeños recipientes de vidrio o plástico. pero se diferencian en que están provistos en su extremo superior de aristas helicoidales por donde se enrosca una tapa de baquelita. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal.

generalmente con estrías longitudinales para facilitar su sujeción cuando se van a desenroscar, mientras que los tubos de centrífuga se caracterizan por tener el fondo cónico, para acoplarse a los portatubos de la centrífuga, pudiendo tener impresa una escala de graduación en ml. Los tubos ordinarios y los empleados para cultivo, mayormente utilizados en los laboratorios de microbiología, son los de 12 x 75, 13 x 100, 15 x 125 y 16 x 150 mm, correspondiendo el primer valor al diámetro y el segundo a la longitud. Se utiliza esencialmente para contener, conservar y procesar muestras biológicas, cultivar microorganismos y realizar pruebas de identificación para el diagnóstico de laboratorio, de las especies investigadas. Vidrio reloj

Fig.16: Vidrio reloj

Es un tipo de cristalería circular y cóncava de aspecto transparentes, similar a las utilizadas para cubrir las esferas de algunos relojes despertadores. Se utilizan regularmente para efectuar pesadas de productos sólidos con excepción de aquellos que sean higroscópicos que absorben la humedad del aire o volátiles. Placas de "Petry"

Fig.17: Placas de "Petry"

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Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diámetro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm de altura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente de vidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro. Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa queda descansando sobre el borde de la caja. En el trabajo microbiológico se utiliza comúnmente para contener algún medio de cultivo sólido. Embudos

Fig.18 : Embudos

Los embudos presentan la porción superior cónica y la posterior en forma de un tubo cilíndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal, pudiendo tener una longitud, menor , igual o mayor que la porción cónica, cuya capacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, según el modelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar líquidos.

Láminas portaobjetos

Fig.19 : Lámina potaobjetos

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Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transparente y forma rectangular. Miden 7,5 cm de largo por 2,5 cm de ancho. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso de coloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Este tipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebas serológicas de aglutinación. Láminas excavadas

Fig.20 : Lámina portaobjetos excavada

Son similares a las láminas portaobjetos ordinarias, con la diferencia de que presentan una excavación cóncava de algo más de 1 cm de diámetro en centro de la lámina en forma de pozuelo. Se utilizan para la preparación de la "gota colgante", una técnica mediante la cual se determina microscópicamente si la bacteria en estudio es o no móvil.

Láminas cubre objetos

Fig. 21: Láminas cubreobjetos

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Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía de cuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuando son rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.

Cristalería de medición
Pipetas

Fig. 22: Pipetas

Son tubos de vidrio rectos, de longitud y grosor variable que se caracterizan por tener el extremo inferior ligeramente cónico. Se fabrican diferentes tipos, que han sido diseñados para diversos procederes de laboratorio, siendo utilizada básicamente para medir y/o transferir volúmenes exactos de líquidos. Las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, son las pipetas graduadas, principalmente las de 1, 2, 5, y 10 ml. Este tipo de pipeta tiene impreso en la parte superior un número que equivale a su capacidad volumétrica y a todo lo largo una escala graduada en ml, que indica numéricamente los espacios en que se divide el volumen total. Cada espacio a su vez se divide en 10 líneas equidistantes que corresponden a las subdivisiones volumétricas. Por ejemplo: En una pipeta de 5 ml de capacidad, la escala queda dividida en 5 espacios iguales, cada uno de los cuales equivale a 1 ml. Cada especio a su vez se subdivide en 10 líneas, equivalente cada una de ellas a 0,1 ml. Las pipetas serológicas, son similares a las graduadas, pero su capacidad es de 1 ml o menos, estando dividida en 0,1 y/o 0,01 ml. En el trabajo microbiológico se utiliza en ocasiones un tipo de pipeta no graduada, denominada pipeta de Pasteur, que puede ser fabricada en el propio 59

laboratorio con tubos de cristal fusible mediante su exposición a la llama del mechero de gas. Este tipo de pipeta suele emplearse cuando no se requiere precisar con exactitud el volumen a pipetear. Procedimientos para el manejo de las pipetas graduadas: 1. Sostenga la pipeta por su parte superior mediante los dedos pulgar y medio.

Fig. 23 : Forma correcta de sostener la pipeta.

2. Haga penetrar la pipeta en el líquido que va a ser aspirado. 3. Introduzca el otro extremo en la boca y aspire suavemente, observando simultáneamente la escala graduada, hasta que la columna de líquido sobrepase ligeramente la marca deseada. 4. Retire la pipeta de la boca y de inmediato tape el orificio con la yema dedo índice, ejerciendo la presión suficiente para evitar que el líquido descienda por gravedad. 5. Manteniendo la presión del dedo índice, proceda a retirar el exceso de líquido de la parte exterior de la pipeta, con un paño, gasa o servilleta limpia. 6. Introduzca la pipeta en el frasco o tubo donde se extrajo el líquido y haga que la punta contacte con la pared interna. Estando la pipeta en posición perpendicular ir aflojando la presión del dedo índice para propiciar que la columna de líquido descienda del por gravedad, hasta observar que la 60

Fig. Introduzca la punta de la pipeta en el frasco o tubo receptor. 9. Si la pipeta carece de franja esmerilada o coloreada no se debe soplar ya que están diseñadas para desestimar ese residuo sin que se afecte el volumen deseado. siendo arrastrado al retirarla. Al realizar la lectura volumétrica. En el caso de las pipetas serológicas. 24: Ubicación correcta del ojo para efectuar la lectura del menisco 7. pues al retirar la pipeta parte del líquido trasegado quedarán adherido al exterior de la pipeta. proceda nuevamente a ejercer presión con el dedo índice para evitar que el líquido continúe descendiendo. afectando la exactitud del volumen pipeteado. se soplarán las que estén marcadas en la parte superior con la letra "D" (to de livery) no debiendo soplarse las marcadas con la letra "C" (to contain). evitar incurrir en el error de paralaje. 61 . que ocasionaría errores en la lectura. en el extremo de la punta quedará un pequeño volumen residual.curvatura en la superficie del líquido (menisco) contacte justamente sobre la línea correspondiente que marca el volumen deseado. En ese momento exacto. Proceda a aflojar la presión del dedo para distribuir el volumen deseado en cada tubo. ocasionado por no estar el ojo del observador en el mismo plano horizontal con respecto al menisco. en la parte superior de la pared interna y nunca sobre el fondo. tiene una banda esmerilada o coloreada en el extremo superior proceda a soplar para que salga y completar el volumen previsto. Si la pipeta utilizada. Al vaciarse el contenido de la pipeta. apoyando la punta. 8.

la marca de 200C. Están provistas de una base de fondo plano que posibilita que puedan ser colocadas en posición vertical sobre una superficie nivelada.000 ml. Algunas probetas están provistas de tapa de vidrio esmerilado o plástica.Probetas Fig. Beaker (Vasos de precipitados) Fig. presentan un pico. La mayoría tienen rotulado en la parte superior un número que indica su capacidad volumétrica. de diámetro y tamaño variable. y al igual que las pipetas. que se haya en la parte superior. En el borde del orificio. para facilitar verter el líquido que contiene sin que se produzcan derramamientos. Al igual 62 . . Se utilizan específicamente para medir volúmenes. similar al de las cafeteras. en correspondencia con su capacidad volumétrica. 25 : Probetas Las probetas son recipientes cilíndricos y alargados de vidrio. 26 : Beaker Los Beaker son recipientes transparentes e incoloros que presentan una forma cilíndrica teniendo una longitud de casi el doble de su diámetro. Las más utilizadas en el trabajo microbiológico están comprendidas en el rango de 50 a 1. que es la temperatura de trabajo de este tipo de cristalería. una escala graduada a todo lo largo que divide y subdivide el volumen total.

Cápsulas Fig. tienen rotulado. 28 : Cápsula de porcelana 63 . 27 : Matraces Las matraces son frascos de vidrio incoloros y transparentes que tienen una porción superior en forma de un fino tubo cilíndrico y alargado. Matraces Fig. el número que indica su capacidad volumétrica. siendo los más empleados las cápsulas y los morteros. la temperatura de trabajo (200C) y una línea alrededor del cuello que indica la marca de aforo. al igual que las probetas y las pipetas. la inferior piriforme con el fondo plano. Se emplean para preparar disoluciones donde se requiere exactitud. fabricados de porcelana. en los laboratorios se utilizan otros. Al igual que otras cristalerías de medición. Algunos están provistos de tapa de vidrio esmerilado. tienen grabado el número que indica su capacidad volumétrica. la temperatura de trabajo (200C) pudiendo tener o no una escala graduada en ml. Materiales de porcelana Además de los materiales de vidrio o de teflón.que las pipetas tienen un pico en el borde la boca que propicia que se pueda verter el líquido que contiene sin que se produzca derramamiento. Al igual que otros tipos de cristalería de medición. lo que permite colocarlos en posición vertical.

Si la cristalería es nueva: Debe pasarse previamente por agua caliente para eliminar la presencia de vestigios fábriles. Morteros Fig. del mismo material. denominado mazo. son de mayor tamaño y están provistos de paredes más gruesas. Uso: Para triturar compuestos sólidos con ayuda del mazo. con un doblez en forma de labio por un punto de su borde para facilitar verter su contenido. con el extremo inferior redondeado. generalmente. Al igual que las cápsulas presentan un doblez en forma de labio en el borde para verter su contenido. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN La cristalería que vaya a ser utilizada en las investigaciones microbiológicas de laboratorio. caracterizándose generalmente por ser de color blanco y tener las paredes delgadas lisas y muy pulidas.. debe ser sometida previamente a un proceso de limpieza y desinfección antes de esterilizarla. Después se sumerge en una solución de ácido clorhídrico al 1%. Similar a un pequeño bate de pelota. El mortero se complementa con una pieza cilíndrica adicional. fondo redondeado y tamaño variable. A diferencia de las cápsulas. Después de escurrida se deja secar al aire o si se desea secado con mayor rapidez se puede introducir en una incubadora. 29 : Mortero Los morteros son recipientes de porcelana.Son pozuelos de borde esférico. Posteriormente se lava con detergente. Uso: Se utilizan regularmente como recipientes de disoluciones que van a ser sometidas a una medición de pH o para colocar medios de cultivo que se pretenden pesar. sin que se produzca derramamiento. pudiendo tener el fondo plano o redondeado. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. dejando actuar el desinfectante por un espacio de tiempo no menor de 4 horas. aunque también se fabrican de vidrio. 64 .

30 : Taponeamiento de tubos con asa y algodón Placas de Petry: Después de ensambladas (tapa y caja) podrán ser colocadas dentro de un cilíndrico de metal inoxidable con tapa. o más tiempo si la mezcla ya ha sido utilizada y mermada su efectividad. individualmente. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. para evitar que el técnico o la persona encargada de la limpieza de la cristalería se contamine con microorganismos patógenos. Después de la esterilización. fregadas y secas: Tubos de ensayos: Se taponean con algodón y se envuelven con papel de estraza en grupos de 5 a 10 tubos. durante 30 minutos. procediendo a su secado en la forma explicada. la cristalería se enjuaga para eliminar los restos groseros del material que contenía y se sumerge durante 10 ó 15 minutos en mezcla sulfocrómica. fabricado específicamente para ese uso. 65 . por haber estado en contacto directo con microorganismos o contiene cultivo de ésta. o en su defecto. las placas serán empaquetadas con papel de estraza. en parejas o en grupos de no más de 5 placas. Fig.Cuando la cristalería haya sido utilizada: Si mantiene material infeccioso. Procedimiento: Después de desinfectadas. se friega con detergente. La cristalería así tratada. debe ser sometida previamente a un proceso de esterilización en autoclave a 1210C. Desinfectantes más empleados (ver Capítulo 6) PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA PARA SU ESTERILIZACIÓN Objetivo: Evitar que se vuelvan a contaminar con posterioridad a su esterilización y mantenerlas en esas condiciones hasta su utilización.

66 .Fig. b)Empaquetamiento con papel de estraza Los erlenmeyer. 32 : Pipetas: a)Taponeamiento con algodón. b)Cilíndro de metal inoxidable para colocar las placas Las pipetas: Se taponean de tal manera que no dificulte la succión. Fig. probetas y otras cristalerías similares: Se taponean con algodón y se retapan con papel de estraza. el cual se ata fuertemente con un lazo al cuello o porción anterior de la cristalería. Posteriormente se enrollan en una franja de papel de estraza. pero al mismo tiempo impida el paso hacia la boca del material que esté pipeteando. 31 : Placas de Petry: a)Empaquetadas con papel de estraza.

Explique las diferentes causas de error en que puede incurrirse durante el pipeteo. ¿Qué es el teflón y para qué se utiliza? 5. Nombre los diferentes tipos de cristalería de medición volumétrica? 8. Explique cuáles son los procederes establecidos para la limpieza y desinfección de la cristalería. algunos. 3. ¿Cómo se clasifica la cristalería general? 6.Fig. 14. ¿Cuáles son las características de la cristalería de medición volumétrica? 9. 19. Explique cómo se fabrica el vidrio. Explique en orden cronológico los pasos que deben efectuarse durante la realización del pipeteo. 23. 33 : Erelenmeyer: a)Taponeamiento con gasa y algodón El resto de los materiales se empaquetan igualmente e incluso. Describa el vaso de Koplin. prepara la cristalería para que se mantenga estéril después de la esterilización. 18. 67 . ¿Qué otros recipientes además de los de vidrios se fabrican de porcelana? 21. ¿Qué Ud. ¿Cómo son las placas de "Petry"? 16. 4. ¿Cuáles son las características de la cristalería de almacenaje? 7. 10. CUESTIONARIO 1. Nombre los componentes del vidrio "Pyrex". 22. Describa las características de los tubos de ensayo. 15. como las jeringuillas con doble envoltura. Mencione las cristalerías de medición volumétricas. Precise semejanzas y diferencias entre una cápsula y un mortero. ¿Para qué se utilizan regularmente los vasos de precipitado o Beaker? 20. ¿Cómo funcionan los frascos goteros con tapa esmerilada? 13. entiende por cristalería de laboratorio? 2. ¿Cuánto miden las láminas portaobjetos y las cubreobjetos? 17. Describa cómo Ud. ¿ Cuáles son las diferencias entre en erlenmeyer y un frasco de kitasato? 11. ¿ Cómo es una bureta? 12.

ocasionan específicamente la desnaturalización de las proteínas celulares.. sino incluyendo además a sus esporas. no limitándose exclusivamente a la estructura vegetativa. Bacteriostático: agente que inhibe las funciones de las bacterias. Bactericida: agentes destructor de bacterias. Destruyen las diversas estructuras o inhiben su funcionamiento.) Séptico: que produce la sepsis. las radiaciones y la filtración. en especial por medio de agentes químicos. los agentes físicos más utilizados son: el calor. etc. inhibir o separar a los microorganismos presentes en los diferentes objetos. lo cual a mediano plazo resulta letal para el microorganismo. para destruir. Diferentes agentes empleados en la esterilización: Para la esterilización se emplean diferentes agentes físicos y químicos. Asepsia: método encaminado a prevenir la infección mediante la destrucción o evitación de los agentes infectivos. Términos empleados relacionados con la esterilización y la desinfección Sepsis: infección pútrida (putrefacto. donde se requiere su eliminación. Específicamente mediante el empleo de métodos físicos. medio ambiente. ESTERILIZACIÓN Concepto: Esterilización significa: destrucción o eliminación de todas las formas de vida. Antisepsia: conjunto de procedimientos prácticos destinados a destruir o alejar los gérmenes patógenos. En relación con los agentes quími68 . etc. Aséptico: libre de toda materia séptica o infecciosa. corrompido.CAPITULO 6 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN INTRODUCCIÓN La esterilización y desinfección son los métodos esenciales empleados en los laboratorios de microbiología. compuestos orgánicos. La mayoría de los métodos y agentes empleados.

como por ejemplo. El calor se utiliza de tres maneras diferentes: calor húmedo. pero todos tienen en común una estructura similar. inactivando su función osmótica. 69 . que ocasionan la muerte del microorganismo. solamente algunos. diseñado para resistir la presión generada por la acumulación de vapor de agua.cos. El calor El calor resulta un método muy eficaz para lograr una adecuada esterilización. El calor húmedo se emplea en los laboratorios de tres maneras diferentes. Bajo estas condiciones. etc. Calor húmedo a presión. como aminoácidos. un equipo metálico provisto de un cierre hermético. el calor generado provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. en dependencia de la magnitud del material a esterilizar. Calor húmedo a presión El calor húmedo a presión se obtiene mediante el empleo del autoclave. y se cumpla con los parámetros de eficacio. de doble cámara. como son: la aplicación del nivel de temperatura requerido y el tiempo de exposición al calor. Calor húmedo El calor húmedo es la variante más empleada. alcanzando valores de 121 C requeridos para la eliminación de las esporas para lograr una adecuada esterilización. Debido a que las bacterias resultan más vulnerables en la medida en que estén más húmedas. lo que trae como resultado la emigración incontrolada de los constituyentes intracelulares. de manera similar que cuando se cocina un huevo duro. con lo cual la temperatura aumenta. El formaldehído y el óxido de etileno ejercen un efecto letal sobre las esporas.. En el mercado se comercializan diferentes modelos de autoclave: verticales. en consecuencia los puentes de hidrógeno de la membrana citoplasmática. siempre y cuando el objeto o producto no sea termolabil. son destruidos. etc. potasio. horizontales. calor húmedo a 1000 C. calor seco y la incineración.

Termómetro. 16. 7. Llave que controla el nivel del agua.Llave de paso de gas.Puerta de seguridad. 20. que debido a su mayor diámetro rodea a la cámara interna en toda su longitud.Cierre hermético de la puerta.Lave de escape de vapor. 10. Respiradero.Fig.Llave de paso para sacar el agua del tanque. Puerta La puerta está articulada con bisagras en la parte anterior del equipo. 8. 18. 9.Manómetro que indica la presión de la cámara externa. Prototipo standard del autoclave Cámara La cámara del autoclave consiste en un cuerpo cilíndrico de aproximadamente un metro de largo x 50 a 60 cm de diámetro. 11. 3. 15.Válvula de seguridad.Llave de paso para suministrar agua al tanque. 17. Vista frontal y lateral: 1.Cámara externa. 4. a unos pocos cm de la cámara interna estando provista de un número variable de metálicas en posición radial que al ser cerrada mediante el de una manivela 70 . En este espacio se acumula el vapor de agua procedente de la caldera que posteriormente pasa a la cámara interna.Quemador de gas. siendo el lugar destinado para la colocación de los objetos y materiales que sé desean esterilizar.Escape de agua de condensación. quedando las paredes de ambas separadas entre sí por varios cm. 6. 12. 21. 19. 34: Autoclave.Llave que comunica la cámara externa con la interna. 2. 13 y l4.Manómetro que indica la presión de la cámara interna.Válvula termostática. 5. Algunos modelos disponen de una segunda cámara denominada externa.Cámara interna.Tanque de agua.Entrada de aire.

71 . Esta última se denomina "válvula de seguridad". medios de cultivo. la caldera puede estar ubicada junto o separada de la cámara. Uso del autoclave El autoclave se utiliza regularmente para la esterilización de ropas. Fuente de calor La fuente de calor empleada para calentar el agua contenida en la caldera y se produzca vapor de agua. c) Introduzca en la cámara los objetos y materiales que se van a esterilizar y cierre herméticamente la puerta.ubicada centralmente. Válvulas Los autoclaves poseen dos válvulas. etc. b) Revise la válvula de seguridad. En su interior se deposita el agua (destilada) hasta alcanzar el nivel adecuado. Instrumentos de medición Estos equipos disponen de un termómetro y un manómetro que permiten ir monitoreando la temperatura y la presión existente en el interior del autoclave. d) Proceda a abrir la válvula de salida del aire. Caldera Según el modelo de que se trate. y límpiela si estuviera sucia u obstruida. puede ser eléctrica o de gas. proceda a echar la cantidad requerida. durante su funcionamiento. material quirúrgico. penetran en un reborde periférico situado en la parte frontal del autoclave propiciando un cierre hermético. una para extraer el aire que quedó en el interior del equipo al cerrarse y la otra para propulsar la salida del vapor cuando la presión sobrepasa los límites admisibles. Manipulación del autoclave a) Revise el nivel del agua de la caldera y en caso de ser insuficiente. e) Encienda la fuente de calor.

con la diferencia de que no es hermético. abra la puerta el autoclave con sumo cuidado. cierre la válvula. recomendándose en ese caso aumentar un poco la presión para que el equipo alcance la temperatura requerida. no debiendo por lo tanto ser esterilizados en auto clave. siempre que la acción calórica se prolongue por 5 a 10 minutos. Cuando el vapor salga mediante un chorro continúo y sin intermitencia. g) Espere a que el termómetro marque 1210 C y el manómetro 15 lb/pgda3 de presión. asciendan. Por ebullición: El líquido en cuestión es sometido a la acción del calor hasta alcanzar temperaturas de 100 C. que consiste en un equipo similar al autoclave. mediante este método se logra la destrucción de todas las formas vegetativas y de algunas esporas. gelatina. al salir por la puerta. El principio de este método consiste en someter el compuesto o medio de cultivo a esterilizar a una corriente de vapor a 1000C para lo cual se emplea el esterilizador de Arnold. ya que los restos de vapor que queden aún dentro de la cámara. pues será indicativo de que el aire acumulado dentro del autoclave ha salido y que todo el espacio de la cámara está ocupado exclusivamente por el vapor de agua. pueden ocasionar quemaduras al manipulador. desconecte la fuente de calor (hay modelos donde la fuente se apaga automáticamente) y espere hasta que el manómetro marque "O". Otras esporas resisten la temperatura de ebullición por más de una hora. de que la temperatura no se corresponde con la presión. No trate de reducir la presión abriendo la válvula de seguridad o la de salida de aire. i) Cuando el termómetro y el manómetro marquen "O" proceda a abrir la válvula de salida de aire y espere a que salga el vapor residual. Calor húmedo a 1000 C El calor húmedo a 1000 C. etc.f) Manténgase atento a la válvula de salida de aire. es indicativo de que no se sacó todo el aire de la cámara. Que se deterioran a temperaturas superiores a 1000C. para comenzar a contar el tiempo de esterilización. por lo que no puede garantizarse una esterilización eficaz con este método. 2. A continuación. ya que esta acción puede provocar que los medios de cultivo que aún tengan más de 100 C al serle retirada abruptamente la presión. ya 72 . aunque puede extenderse a 30 minutos si el objeto o producto a esterilizar es demasiado grande. expulsen los tapones de algodón y se derramen dentro del equipo. urea. h) Transcurrido el tiempo de esterilización. que generalmente es de 15 a 20 minutos. Vapor fluente: El vapor fluente se utiliza para la esterilización de compuestos y medios de cultivo elaborados con determinados azúcares. se obtiene de dos maneras diferentes: 1. si se diera el caso.

Al no acumularse el vapor.Tapa. La exposición al vapor fluente del material a esterilizar será de 20 a 30 minutos. no aumenta la presión y por consiguiente la temperatura se mantiene en 1000C.Agua destilada. 4. 2. 73 .Termómetro. Fig. 3. para que las esporas que resistieron la primera exposición germinen en células vegetativas muy vulnerables a la temperatura de 1000C. va saliendo por un condensador que lo traslada en forma de agua. por lo que se requiere aplicar la esterilización fraccionada.Resistencia eléctrica. nuevamente a la caldera. El autoclave puede sustituir al equipo de Arnold. con lo cual la temperatura se mantiene estable a 1000C. que consiste en exponer el material a esterilizar al vapor fluente durante tres días consecutivos por espacio de 30 minutos.Tuberia de escape de vapor.Recuperador. 35: Esterilizador de Arnold: 1.Soporte. 5. De quedar alguna espora germinará y la célula vegetativa será destruida en la 3era. 7. la temperatura de 1000C resulta insuficiente para la destrucción de algunas esporas. conocida como "tyndalización". 6.que el vapor producido por el calentamiento del agua. siempre que se deje la válvula abierta para que el vapor no se acumule. Como ya se explicó en acápite de ebullición. Exposición.

Fig. así como la oxidación de ciertos componentes de la célula microbiana. etc. la cual queda cubierta por una tapa metálica perforada.Salida de aire. es utilizado con regularidad en los laboratorios de microbiología.Tapa.Botón del termostato. A diferentes niveles de altura están situadas las parrilladas en posición horizontal. está situada la fuente de calor. 36: Horno: 1. 40 % de aproximadamente 80 cm cúbicos. es un método conocido con el nombre de pasteurización. 6. 4.Termómetro. por cuyos orificios pasa el calor. 3.Calor húmedo a menos de 1000C La aplicación del calor húmedo a menos de 1000 C. 7. Su acción provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. 8. 74 . Bombillo. una resistencia eléctrica que ocupa todo el área del fondo del horno. Consiste básicamente en calentar el producto de 62 a 650 C durante 30 minutos o a 710 C durante 15 segundos. Sin que pierdan su sabor natural.Puerta.Fuente de calor. debido a las bajas temperaturas empleadas y el corto tiempo de exposición. seguido de un enfriamiento inmediato. donde serán colocados los materiales a esterilizar. 2. que se disemina por todo el interior del horno.Ventilador. que está basado en el efecto de la temperatura sobre los microorganismos y sus enzimas. un mueble metálico de forma rectangular o cuadrada. 5. En su parte inferior o base. con el objetivo de determinados objetos y materiales. Calor seco El calor seco. El calor seco se obtiene por medio del horno. por medio de un ventilador ubicado en una de las paredes laterales. Con este método se eliminan los patógenos que con alguna regularidad puedan estar presentes en productos como la leche y bebidas alcohólicas. ideado en el siglo XIX por Luis Pasteur. aunque se comercializan otros de menor o superior tamaño.

accionando el interruptor y espere hasta que el horno se enfríe para extraer el material.En la parte superior externa se encuentra un orificio ocupado por un regulador. 5. grasas sólidas o productos en polvo. debidamente preparados cuidando de que queden separados entre sí y de las paredes del horno. 3. Transcurrido el tiempo de esterilización. que por ser metálicas adquieren un mayor grado de temperatura y pueden quemar el material comburente empleado. ya que el calor seco no se distribuye uniformemente por todo el equipo como lo hace el vapor de agua. Advertencia Cuando el horno haya alcanzado una elevada temperatura no debe abrirse para introducir o sacar algún material. el botón para regular el termostato. ya que los paños. Gire el botón del termostato hasta que indique la temperatura deseada y espere a que el termómetro registre de 160 ó 180 C (en ese momento se apagará automáticamente el bombillo piloto). Casi todos los hornos tienen dos puertas. garantizando de esta manera que en el área del horno donde se alcance menos temperatura. 2. con la cual se cierra firmemente el equipo. Uso del horno El horno se utiliza para esterilizar cristalería de laboratorio. encargado de expulsar el exceso de aire del interior del horno. Coloque en las parrillas los materiales a esterilizar. La esterilización en horno requiere de una temperatura superior a la utilizada con el autoclave. En la parte anterior. Empleados 75 . tenga acceso por igual en toda la superficie del material a esterilizar. que debido al bajo porciento de agua que contienen no son penetrados suficientemente por la humedad generada por el vapor de agua de los autoclaves. que en este equipo debe ser de 90 minutos a 2 horas. Comience a contar el tiempo de esterilización. y para que el aire caliente circulante. Manipulación del horno 1. objetos de metal. apague la fuente de calor. una interna de vidrio que se halla dentro de un marco metálico y otra externa metálica forrada de amianto. así como un tiempo de exposición más extenso. debajo o al lado de la puerta presentan un panel donde se encuentra el interruptor. 6. exista la suficiente para que el material quede estéril. algodón etc. aceites. Encienda la fuente de calor (automáticamente el ventilador comenzará a funcionar y el bombillo piloto se encenderá) 4. el termómetro y un bombillo piloto. Cierre firmemente la puerta.

Tapa. Fig. en tanto que los mecheros son utilizados como fuente de calor para diversos propósitos y comúnmente en el trabajo diario para esterilizar. 2. para este propósito se utilizan el incinerador y el mechero. se utiliza para tapar el mechero y que no se evapore el alcohol. Una pequeña capucha cilíndrica de metal con el extremo superior redondeado.pueden inflamarse por la penetración abrupta de oxigeno y ocasionar quemaduras al manipulador. exponiendo directamente a la acción de la llama. a los instrumentos de siembra. Incineración La incineración se logra. estando provisto por su parte superior de un pequeño saliente cilíndrico por donde se enrosca un pequeño tubo metálico de unos pocos mm de diámetro a través del cual se inserta una mecha cuyo extremo posterior queda en contacto con el alcohol contenido en el recipiente. El incinerador se emplea básicamente. Los mecheros de alcohol. a los microorganismos contenidos en las muestras y otros materiales contaminados que se determine carbonizar. consisten. 37 : Mechero de alcohol: 1.Alcohol. mediante la incineración. en un pequeño recipiente de vidrio de forma redondeada. Mecheros Los mecheros son instrumentos de laboratorio diseñados para obtener una llama calorífica a partir de la combustión del alcohol o del gas. para llevar al estado de cenizas materiales contaminados. con el fondo plano. que por su peligrosidad deben ser destruidos totalmente. 76 .

77 . El mechero de "Bunsen" convencional. donde se inserta ajustadamente. Tiene un diámetro de 4 a 6 cm y presenta en la parte superior un pequeño tubito en posición horizontal de unos 6 mm de diámetro denominado tobera. Está provisto de un orificio circular de un diámetro similar al del tubo quemador. 2. en tanto que el mechero de "Fisher" es mucho más grueso con una longitud también mayor y está provisto en su extremo superior de un quemador que propicia una llama grande e intensa. quedando en contacto con la base. tiene aproximadamente 6 ó 7 mm de diámetro x 6 ó 7 cm de largo. el tubo quemador y el regulador de aire. el tubo presenta un orificio de un diámetro similar al del collarín que regula la entrada de aire. Fig. Regulador de aire: El regulador de aire está compuesto por un collarín metálico de forma anular. Existen diferentes modelos. La base: Es una pieza metálica de forma circular y fondo plano. que se inserta calibradamente en el extremo inferior el tubo quemador. con una presilla de seguridad.Mecheros de gas Son los mas empleados. En ambos tipos de mecheros. semejante a una alianza. lo que permite mantener el tubo quemador en posición vertical. muy próximo al extremo donde se enrosca a la base. pero todos están estructurados básicamente por tres partes separables: La base. 3. 38 : Mechero de gas 1. una fina manguera que se inserta por su otro extremo a una llave de gas. en dependencia del modelo de que se trate. Tubo quemador: El tubo quemador puede tener un diámetro variable.

aire (combustible y comburente). Revise que las diferentes partes del mechero. 3. Una mezcla rica en aire produce una llama azulosa. b) Mechero de Fisher Manipulación del mechero 1. no luminosa y de gran poder calorífico. luminosa y poco calorífica. calibrado a décimas de mm que regula el paso del gas hacia el tubo quemador. obtendremos una llama de color amarillo rojizo. en mayor o en menor grado se producirá la entrada de aire en el tubo quemador lo que propiciará la mezcla gas . donde hay un dispositivo provisto de un fino orificio. Así será la llama. Abra ligeramente la llave de gas. Cuando esta operación se realiza. Si empobrecemos la llama cerrando la entrada de aire. Fig.Fig. 5. 40: Diferentes zonas de la llama del mechero 78 . En la medida en que se enriquezca el gas con el aire. 39: a) Mechero de Bunsen. Al realizar esta operación. el gas que atraviesa la manguera y la tobera se dirige al centro de la base. Regule la salida del gas en dependencia de la intensidad de la llama. estén debidamente acopladas y ajustadas. Ajuste la entrada de aire hasta obtener la llama deseada. para lo cual se hará girar al collarín hasta hacer coincidir su orificio con el del tubo quemador. 4. Aproxima la llama de un fósforo o de una fosforera al orificio del tubo quemador por donde sale el gas para encender el mechero. 2.

mediante su exposición directa a la llama.Radiaciones no ionizantes. es disponer de un recipiente con arena humedecida en fenol.Los instrumentos de siembra (asas o agujas de platino o nicrón) que contengan restos de muestra o de cultivos.Radiaciones ionizantes. fenómeno mediante el cual. Para flamear la boca de los tubos de ensayo y otras cristalerías estériles. Lo idóneo cuando se trabaja con muestras o cultivos. La introducción total del instrumento en la llama tiende a aumentar la intensidad de la formación de aerosoles. . líquidos inflamables (alcoholes para coloraciones) y otros materiales similares. Advertencia . distribución de medios de cultivo en placas y otros procederes. que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. potencialmente peligrosos para el manipulador. 79 . deben ser introducidos gradualmente en la llama del mechero de la siguiente manera: de inicio se expondrá el extremo del instrumento a la zona azul de la llama y tan pronto se ponga al rojo. durante su uso. LAS RADIACIONES Las radiaciones empleadas en microbiología como método de esterilización son esencialmente de dos tipos: . papeles (utilizados para la esterilización de la cristalería) así como. Por su parte externa con el objetivo de eliminar los microorganismos contaminantes. Por las mismas razones debe mantenerse el pelo recogido y concentrarse totalmente en la actividad que se esté realizando.El empleo del mechero entraña un peligro potencial de quemaduras en la piel o en la ropa. Se recomienda retirar de su alrededor. se introduce gradualmente el resto del alambre hasta que también se ponga al rojo vivo. antes de flamearla a la llama del mechero. para introducir previamente el asa. con los restos de inoculo.Uso del mechero El mechero tiene una función utilitaria muy diversa: se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de nicrón o platino. . El mechero también es utilizado para fijar frotis en láminas portaobjetos y calentar medios de cultivo durante su preparación. por lo que se debe tener sumo cuidado con su manejo. Radiaciones ionizantes Deben su acción a la capacidad de producir partículas que al interaccionarse ceden la energía suficiente para producir ionización. como paso previo a la realización de siembras. resiembras.

para dar lugar a la inactivación de las enzimas. ejercen una acción letal sobre las diversas estructuras. catéteres. . son muy efectivas contra las esporas. Radiaciones no ionizantes A diferencia de las radiaciones ionizantes. por lo que si su empleo es reiterado deben emplearse las medidas de protección radiológicas establecidas. mutación genética o muerte. pues ocasiona daños en la vista e incluso pueden producir quemaduras cuando la exposición es prolongada. que en caso de ser significativo reduciría su capacidad germicida. Aplicación: Se utilizan regularmente para la esterilización de inyectables. Los rayos gamma. En el trabajo diario la lámpara se debe encender 2 ó 3 horas antes de comenzar a trabajar en el local. rayos x y rayos catódicos. Las radiaciones de luz ultravioleta además de ser germicidas. etc.Debe chequearse periódicamente la lámpara para determinar su estado de agotamiento. se ven privados de uno o mas electrones mediante la acción de un campo eléctrico. Su efecto esterilizante depende de que la energía propagada. Advertencia: La exposición a las radiaciones ionizantes son nocivas para las células del cuerpo humano. 80 . oxidando las proteínas y los ácidos nucleicos. Aplicación: El poco poder de penetración de estos rayos lo hacen inefectivos para esterilizar compuestos o medios de cultivo. no solo por sus propiedades ionizantes.No se debe entrar ni permanecer en ningún local que tenga encendida la lámpara de luz ultravioleta. siempre y cuando se cumpla la indicación referida al tiempo de exposición y se tenga en cuenta la distancia entre la ubicación de la lámpara y el objeto o espacio a esterilizar. el ADN y las proteínas celulares. por lo que el interruptor debe estar ubicado fuera del local. cuartos de siembra. sino además. Así como para las paredes. átomo o ion estrictamente neutro. jeringuillas plásticas y alimentos. además de que son agentes catalizadores de la oxidación de las grasas. Las radiaciones no ionizantes más empleadas en los laboratorios de microbiología y en determinadas áreas del ámbito hospitalario. piso y techo del inmueble o la parte externa del mobiliario. son las producidas por lámparas de luz ultravioleta cuyo expectro está comprendido en rango de longitud de onda de 2600 a 2700 . lo que acarrearía numerosos trastornos.una molécula. equipos médicos. las no ionizantes tienen poca capacidad de penetración. Advertencias . sin embargo su aplicación resulta efectiva para la esterilización del ambiente de quirófanos. procedente de sus radiaciones electromagnéticas (luminosas) sean absorbidas por la célula microbiana. por su elevada capacidad de penetración.

por lo que de hecho.. La eficacia de este método depende del tipo de filtro empleado. para los que no debe emplearse el calor como método de esterilización por ser termolábiles.FILTRACIÓN La filtración es un método mediante el cual. etc. 41: Filtros: a) Filtro Seitz. que se fabrican con diámetros tan pequeños que imposibilitan el paso de los virus. Empleo: La filtración se utiliza para esterilizar compuestos termolábiles como: el plasma. Preparación de los filtros Fig. vidrio poroso o porcelana. 81 . algunos como los de amianto se comercializan en forma de discos de algunos cm de diámetro por varios mm de grosor. aunque en la práctica. ya que algunos de los tradicionalmente utilizados no pueden retener el paso de los virus. vitaminas. b) Bujia de Charberland. retienen a la mayoría de los microorganismos. no es una verdadera esterilización. En la actualidad se están empleando discos de membrana de celulosa para filtros. medios azucarados. los cuales tienen en común ser muy compactos. así como filtros HEPA que se utilizan para retener las partículas presentes en el aire durante la aplicación del flujo laminar. tipo millipore. Características de los filtros Los filtros se fabrican con diversos materiales: amianto. urea. con el propósito de que los microorganismos que contiene sean retenidos y el líquido filtrado quede estéril. y provistos de porosidades microscópicas de un diámetro menor que la talla promedio de los microorganismos. se hace pasar un líquido contaminado a través de un filtro.

de unos 6 cm de diámetro aproximadamente 12 cm de largo. denominado filtro "Seitz" que presenta en la parte superior una tapa de rosca metálica y en la inferior un tubo recto. No se debe esterilizar en horno. originando una pre82 . ya que el calor seco puede dañar el tapón de caucho. Conectar la bomba de vacío: La comprensión centrífuga axial (de su eje) transformará la energía cinética en energía de presión. se le retira la envoltura de papel y se inserta el extremo de una manguera al tubo del frasco de kitasato y el otro extremo se acopla a una de vacío. procediendo a taparlo con la tapa de rosca. una vez ensamblados se empaquetan con papel de estraza y son esterilizados en autoclave a 1210C durante 20 minutos. Destapar el filtro "Seitz" y verter en su interior el líquido que se desea esterilizar. Procedimiento 1. 42 : Filtro Seitz ensamblado en el kitasato Preparación previa Cuando vaya a ser utilizado. fino y delgado que se encuentra insertado en el centro de la base presentando una escotadura oblicua en su extremo distal que le proporciona una terminación puntiforme que se utiliza para insertarlo en el orificio de caucho que se encuentra tapando a un frasco de kitasato. El filtro y el frasco de kitasato.Cuando se emplean filtros en forma de disco. en colocarlo en posición horizontal en el interior de un soporte metálico de forma cilindra. Fig. el procedimiento para su montaje consiste. 2.

que determinadas concentraciones pueden ser letales. el cual pasará a través del filtro. 43: Proceso de filtración: a) Ensamblar el kitasato a la bomba de vacio. lo que provocará la succión del líquido. c) Cerrar el filtro. Fig. Mediante el empleo de productos químicos denominados desinfectantes. debido a los efectos tóxicos que producen sobre las estructuras y los procesos metabólicos de la célula microbiana. la efectividad de los desinfectantes depende de su accesibilidad sobre el objeto o material a des83 . pero los de vidrio poroso o porcelana se pueden limpiar con facilidad. lo que permite su reutilización. b) Verter el líquido a filtrar. d) Accionar la bomba de vacio para que se produzca la succión y el líquido pase estéril al kitasato Advertencia: Los discos de amianto se utilizan una sola vez. quedando retenidos los microorganismos en su superficie acumulándose estéril en el kitasato. DESINFECCIÓN La desinfección es un método utilizado en los laboratorios de microbiología para provocar la muerte de los microorganismos.sión negativa en el interior del frasco de kitasato al serle extraído todo el aire acumulado.

Algunos desinfectantes como por ejemplo. pero solo algunos son capaces de destruir las esporas. zinc. intoxicación respiratorias o toxemias. material o ambiente que se desea desinfectar.. Los desinfectantes mas empleados en las instituciones de salud. 84 . cobre. lo segundo. Desnaturalizando las proteínas. es la caracterización del objeto.) Detergentes catiónicos (compuesto de amonio o cloruro de benzalconio) Bicloruro mercúrico al 1: 1000 Otros. La mayoría de los desinfectantes son muy nocivos para los tejidos. removiendo los grupos sulfhídricos libres. Lo primero que hay que hacerse. determinado porque siga siendo tóxico para los microorganismos pero que al mismo tiempo. no significa que pueda emplearse cualquiera sin una previa selección. sean relativamente inocuos para las células del paciente. gargarismos o colirios. Los desinfectantes actúan sobre la estructura vegetativa de los microorganismos de diferentes maneras.. etc.infectar y que las condiciones ambientales sean favorables para la desinfección así como que la exposición se prolongue durante el tiempo predeterminado. materia orgánica o ambientes. estando restringido su empleo para la desinfección de objetos. son los siguientes: Fenol del 2 al 5 % Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico del 40-80 % Formaldehído al 4 % Gluraldehido al 2 % Peróxido de hidrógeno al 6 % Sales de iones pesados (mercurio. provocando la ruptura de la membrana citoplasmática o la pared celular. teniendo en cuenta su poca o suficiente capacidad de penetración en el tratamiento de las sustancias orgánicas y tercero. puede ocasionar lesiones tisulares o dermatitis y su aspiración. el alcohol y otros compuestos químicos. debiendo manipularse con sumo cuidado ya que el contacto accidental con algunos de ellos. siempre y cuando cumplan con el principio de toxicidad . cerciorarse de que su empleo no produzca deterioro del objeto a desinfectar. pueden ser empleados como productos tópicos. Selección de los desinfectantes El hecho de que todos los desinfectantes tengan la capacidad de matar a los microorganismos. interfiriendo las reacciones enzimáticas o afectando el funcionamiento de ADN.selectiva. seleccionar el desinfectante que resulte mas eficaz para ese objetivo.

3. Desinfección por aplicación directa: Aplicar con ayuda de un algodón. 2. se pueden emplear en su estado gaseoso. 5. Cuáles son las diferentes formas en que se emplea el calor como agente esterilizante? ¿Cuál es el agente esterilizante que se pone de manifiesto en el calor húmedo a presión? ¿Cómo se denomina el equipo empleado en los laboratorios para producir calor húmedo a presión? Durante la esterilización en autoclave ¿cómo Ud. resulta pertinente que sean removidos previamente del el objeto que se vaya a desinfectar con agua y detergente. ropas. CUESTIONARIO 1. el desinfectante a la superficie del objeto de que se trate: mesa. Desinfección por sumersión. 3. gasa o paño. puesto de trabajo y en menor grado las paredes y el suelo. Desinfección por gasificación: Algunos desinfectantes como el formaldehído. 7. ¿Qué es la esterilización? ¿Cuáles son los diferentes efectos que se producen sobre los microorganismos sometidos a procesos de esterilización? Mencione los agentes físicos empleados en la esterilización.La aplicación de estos productos químicos se realiza de manera diferente. Advertencia: Debido a que muchos desinfectantes tienen poca actividad sobre las sustancias orgánicas. para la desinfección de ambientes especiales. mobiliarios y otros artículos. Las sustancias antisépticas más utilizadas en el laboratorio para uso externo son las siguientes: Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico al 70 % Formoaldehído al 1 % Hexoclorofeno al 2 % Yodopuvidona al 4 % Hipoclorítico de sodio o calcio al 1 %. 2. 4. de acuerdo con lo que se quiera desinfectar: 1.: Consiste en sumergir los objetos en un recipiente apropiado hasta cubrirlos con la solución desinfectante. 6. determina la temperatura y la presión del equipo? 85 .

¿Por qué causa el agua empleada para la esterilización en autoclave debe ser destilada? 9. Mencione los diferentes métodos de desinfección. Para qué se utiliza regularmente el mechero de gas. Mencione las diferentes partes del mechero de gas. Explique paso a paso el funcionamiento del horno. 19. ¿Cuáles son las precauciones a tener en cuenta al concluir la esterilización en autoclave. Explique cómo usted realiza una esterilización con filtro 25. 16. ¿Cómo se denomina el equipo a utilizar en la esterilización con calor seco? 12. ¿En qué lugares se aplica la esterilización con luz ultravioleta. ¿De qué depende el efecto esterilizante de las radiaciones no ionizantes? 21. ¿Cómo se denomina la lámpara utilizada en los laboratorios para esterilizar? 20. ¿Cuál es la diferencia entre el mechero de "Bunsen" y el de "Fisher?" 17. 11. 28. ¿Cuáles son los efectos nocivos que provocan los desinfectantes sobre los microorganismos? 27. 15. Explique paso a paso el funcionamiento del autoclave 10. ¿Cuál es la fuente de calor del horno? 14. ¿Qué cuidados debe tenerse en cuenta con el empleo de la luz ultravioleta? 23. regula la entrada de aire al mechero? 18. ¿Por qué la temperatura del horno y el tiempo de esterilización deben ser mayores que cuando se emplea el autoclave? 13. 22. 8. ¿Cómo Ud. Nombre los desinfectantes empleados con mayor frecuencia y sus respectivas concentraciones. ¿Cuál es la diferencia entre esterilización y la desinfección? 26. ¿Que tipo de materiales se deben esterilizar con filtros? 24. 86 .

La incubadora o estufa 2. se incluyen dentro de este concepto. hornos y otros instrumentos similares. siendo ajustada generalmente para que produzca de 35 a 370 C. con excepción de algunos modelos ya en desuso construidos de madera. INCUBADORA El diseño industrial de las incubadoras es similar al del horno. el cuál está rodeado de una escala metrada y un bombillo piloto que indica mediante su apagado o encendido de forma automática. empleados en la esterilización mediante el calor. provisto de múltiples paneles. estructura y tamaño. Sobre la base de esos requerimientos se clasifican de las siguientes maneras: 87 . El baño de María. calentadores y doble puerta. el funcionamiento del termostato. el botón para regular la temperatura. el lado o debajo de la puerta externa. Al igual que el horno. donde se colocan los materiales a incubar. en lo referente a su forma. dispone de un panel donde se encuentra el interruptor. Se trata de un mueble rectangular o cuadrado de unos 80 cm3 . Las autoclaves. la incubadora está provista de un número variable de parrillas metálicas intercambiables. pero que son empleados para otros menesteres. La diferencia sustancial con respecto al horno radica en que el nivel máximo de temperatura no excede de los 60 a 700 C. la interna de cristal y la externa metálica. temperatura específica (termofília). En su interior. lo cuál puede comprobarse mediante la observación de un termómetro acoplado al equipo con una escala de 0 -700 C. Requerimiento de temperaturas Cada especie de microorganismo se desarrolla óptimamente en un rango.CAPÍTULO 7 EQUIPOS CALORIFICOS INTRODUCCION Son equipos diseñados para producir y distribuir calor. pero en este capítulo nos referiremos específicamente a otros equipos que también producen y distribuyen calor. Entre los mas utilizados en el laboratorio de microbiología se encuentran: 1.

Cada uno de estos grupos se subdivide a su vez en obligados y facultativos. Requieren de una tensión de oxígeno inferior a la del aire. son mesófilos. microaerofílicos. condiciones adecuadas de aereación. que deban emplearse diferentes métodos de incubación que propicien las necesidades específicas del microorganismo en estudio. En ese sentido se clasifican en: aerobios. Cuadro 5: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxígeno. acorde a las necesidades de oxígeno de cada microorganismo. disponer de la temperatura que se especifica en cada clasificación. Requieren de un ambiente privado totalmente de oxígeno. así como otros que forman parte de la microbiota residente o transitoria. por lo que logran establecerse sin grandes dificultades en diferentes áreas anatómicas del organismo. debido entre otros factores. por debajo o por encima de ese rango. 88 . Clasificación de los microorganismos de acuerdo con sus necesidades de oxígeno De ahí. CLASIFICACIÓN Aerobios estrictos Microaerofílicos Anaerobios Facultativo AEREACCIÓN Requieren oxígeno a una tensión similar a la del aire ordinario. anaerobios y facultativos. Además de una temperatura óptima que favorezca el aceleramiento de su crecimiento. la incubación debe proporcionar además. CLASIFICACIÓN PSICRÓFILOS MESOFILOS TERMOFILOS RANGO DE TEMPERATURA ÓPTIMO PARA EL CRECIMIENTO DE 15 A 20 C DE 30 A 37 C DE 50 A 60 C La mayoría de los microorganismos patógenos al hombre. Pueden adaptarse a vivir en presencia o ausencia de oxígeno.Cuadro 4: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su termofilia. aunque menos óptimamente. a que la temperatura corporal resulta compatible con su temperatura optima de desarrollo. Los primeros requieren obligatoriamente. mientras que los facultativos son capaces de desarrollarse.

para que mantenga la humedad necesaria y una vela. la cual se encenderá procediendo de inmediato a cerrar el frasco. aunque pueden emplearse procedimientos físicos oxirreductores para este propósito. el método más empleado para propiciar esas condiciones. Seguidamente el frasco con los cultivos será colocado en el interior de una incubadora ordinaria. conjuntamente con los cultivos se introduce un pedacito pequeño de algodón humedecido en agua. consiste en sembrar las muestras en medios de cultivo que contengan Fe2Co4. ya que ellas utilizan el oxígeno presente en el aire ordinario que se encuentra en el interior del equipo. Incubación de bacterias microaerofílicas: Como estas bacterias requieren de una baja tensión de oxígeno para poderse desarrollar. Consiste en colocar en el interior de un frasco de cristal de tamaño apropiado y provisto de tapa de rosca. las placas o tubos sembrados. Incubación de bacterias que requieren de CO2 : Todos los microorganismos requieren carbono en forma de CO2 y la mayoría utilizan el que está presente en el aire. pero aquellas especies que necesitan este elemento en mayor proporción. 44: Método de la vela 89 . metabisulfíto de sodio o piruvato de sodio. Cuando este proceso haya concluido la llama se apagará y en el interior del frasco producto de la combustión quedará una atmósfera con un 10 % de CO2. se le debe suministrar durante la incubación. Fig. La llama utilizará como comburente parte del oxigeno que quedó encerrado dentro del frasco.Incubación de bacterias aerobias estrictas: Las bacterias aerobias estrictas no requieren que la incubadora tenga ninguna adaptación especial. para lo cual existen diversos todos: a) Método de la vela: Es muy sencillo de realizar. que proporcionan a los microorganismos microaerofílicos una mayor tolerancia al oxígeno.

tioglicolato sódico que consume él oxigeno. agar anaerobio al glicolato u otro similar se vierte sobre la caja de una placa de "Petry" corriente y después de solidificado se le coloca encima una tapa especial de vidrio denominada cubierta de "Brewer". estableciendo condiciones anaerobias. b) Empleo de la jarra de "Brewer".b)Incubadora de CO2: Son incubadoras especiales. se cubre con la apa de "Brewer". Después de realizada la incubación se efectuará en la misma incubadora que se emplea para los cultivos aerobios. procediéndose a su incubación en una incubadora común para cultivos aerobios. En medio de cultivo sólido: Un medio de cultivo especial. Fig. 90 . El tioglicolato consume el oxigeno en el pequeño espacio de aire. estableciendo condiciones anaerobias. 45 : Placa de Brewer Realizada la siembra. Incubación de bacteria anaerobias La incubación de bacterias anaerobias se puede efectuar por diferentes métodos: a) Siembra en medios oxirreductores. diseñadas para extraer un % de 02 deseado e intercambiarlo por un gas sustituto (CO2). Siembra en medios de cultivo oxirreductores En medio de cultivo líquido: El medio empleado contiene un compuesto oxireductor. la cual está diseñada para quedar apoyada sobre los bordes de la caja interior y sobre el perímetro externo del medio de cultivo de manera que en el área central del cultivo queda encerrado un espacio de aire. c) Incubadora para anaerobios.

para lo cual se enroscará el tornillo lo cual evitará que se produzca una explosión cuando se le suministre hidrógeno. de manera que no quede herméticamente cerrada. El poco oxigeno que puede quedar aún en el interior de la jarra es eliminado por el catalizador platinado que al activarse hace que se combine con el hidrógeno para formar agua o agua y dióxido de carbono. no debiendo abrirse antes de las 48 horas. provisto de una tapa que propicia un cierre hermético mediante un tornillo ubicado en su porción central. se produce a colocar la tapa. 91 .Empleo de la jarra de "Brewer": Es un recipiente cilíndrico. unas 10 placas con cultivo. La primera dosis de hidrógeno se debe botar para que salga el aire de la manguera. En una de ellas se instala una manguera conectada a una bomba de vacío para extraer el aire acumulado en el interior de la jarra. La tapa dispone de dos válvulas. En estas condiciones la jarra es colocada en el interior de la incubadora para que le proporcione a los cultivos el calor necesario. 46: Jarra de Brewer Funcionamiento Después de introducidas las muestras de cultivos. Cuando la capacidad de la jara es completada con este gas. Por la otra válvula se le suministra el hidrógeno para reemplazar el aire. La jarra tiene un diámetro y altura que permite colocar en su interior (una encima de la otra). Fig. La tapa tiene instalada un elemento de calefacción rodeado de un catalizador platinado. se aprieta el tornillo para hermetizarla. estableciendo finalmente condiciones anaerobias.

En estas condiciones. quede por debajo del nivel del agua. de manera. Baño de agua caliente sin regulación termostática Cuando se recurra a esta variante se debe emplear un recipiente metálico o de vidrio de fondo plano. que el material a examinar depositado dentro de un tubo de ensayo. Como se puede apreciar el empleo de este procedimiento es engorroso por lo laborioso que resulta y la imposibilidad de mantener estable el nivel de temperatura de la muestra. 92 . Mediante este método se pueden alcanzar valores por encima de la temperatura ambiente hasta un máximo de 1000 C con o sin regulación termostática. dentro del cual se verterá agua destilada hasta alcanzar el nivel necesario. durante todo el tiempo que dure la exposición de la muestra al calor. con la ventaja que nos permite disponer de mas espacio y estudiar una mayor cantidad de cultivos. Conjuntamente con la muestra será introducido en el baño un termómetro de mercurio colocado previamente dentro de un tubo de ensayo. es decir. En la práctica el baño de agua sin regulación termostática se emplea casi exclusivamente cuando se requiere temperatura de ebullición. Cuando se utiliza el mechero de gas debe situarse sobre el trípode una malla de amianto. que puede ser de gas o eléctrica.En la actualidad se comercializan diversos productos oxirreductores que se introducen en la jarra con los cultivos y suplen la función de esta. faltando 2 ó 30 C. comúnmente conocido como "baño de Maria" es utilizado en diversos procederes de laboratorio. el recipiente se coloca sobre una fuente de calor. Cuando se emplean hornillas eléctricas. Baño de agua caliente. (Baño de María) El baño de agua caliente. con similar capacidad que las incubadoras para cultivos aerobios que funciona bajo el mismo principio que la jarra de Brewer. debiendo bajarse la llama o incluso apagarla cuando el termómetro marque dos o tres grados por debajo de la temperatura deseada. volviendo a encenderla cuando la columna de mercurio comience a descender manteniendo este control. sin ser necesario hacer vacío para extraer el aire ni inyectar hidrógeno. debiendo quedar a la misma altura que la muestra. Incubadora para anaerobios Se trata de un moderno equipo. ya que aún después de apagada. el recipiente puede ser separado de esa fuente de calor. para que el calor se distribuya lo mas uniformemente posible por todo el fondo del recipiente. mantiene por algunos momentos la intensidad calorífica.

El calor es suministrado por una resistencia eléctrica. Algunos modelos están provistos de un aditamento similar a un pequeño ventilador. la cual es regulada por un termostato que mantiene automáticamente el grado de temperatura al nivel deseado. 47 : Baño de agua Funcionamiento En el interior del equipo se vierte agua destilada hasta alcanzar el nivel pertinente. Fig. como para permitir la colocación en su interior de varias gradillas. que va registrando la temperatura del agua. y colocarlo en la gradilla debiendo quedar el vástago al mismo nivel que las muestras. Importante El agua a emplear para el baño de agua caliente. A continuación se introducen las gradillas con los tubos que contienen las muestras. las aspas comienzan a girar agitando constantemente el agua. Después de accionar el interruptor se gira el botón hasta que indique la temperatura deseada y se hace girar igualmente el botón del "Timer" para indicar el tiempo requerido de exposición al calor. pero con la capacidad suficiente. lo que propicia que la temperatura se mantenga homogénea. 93 . De acuerdo al modelo su tamaño será variable. Al ser encendido el equipo. ubicado generalmente en el extremo posterior. sumergido en el agua. debe ser siempre destilada. las cuales deben quedar por debajo del nivel del agua.Baño de agua con regulación termostática Se trata de un equipo diseñado con material inoxidable que tiene la forma de un cajón rectangular. En su efecto se debe introducir un termómetro dentro de un tubo de ensayo. Algunos modelos cuentan con un termómetro de mercurio acoplado. ya que las sales que el agua cruda al evaporarse tiende a formar capas sobre las paredes internas y el fondo del depósito pueden deteriorar al equipo. Estos equipos siempre son eléctricos. ubicada generalmente en la base del equipo.

17. 5. Mencione los diferentes métodos de incubación anaeróbica. 4. 16. 8. 14. 12. conoce? ¿Cuál es la fuente de calor de los baños de agua con regulación termostática? ¿Por qué causa se debe emplear agua destilada en los baños de agua? ¿Cuál es la función de las aspas que poseen algunos baños de agua? ¿Cómo se regula la temperatura del baño de agua? 94 . ¿Para que se utiliza la jarra de "Brewer?" Explique cómo es el funcionamiento de una jarra de "Brewer" ¿Cuántos tipos de baño de agua Ud. 15. 9. 6. 7.Uso El baño de agua caliente. puede proporcionar un 10 % de CO2 a las bacterias que así lo requieran? Describe el método de la vela. ¿Para que se utiliza la incubadora? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo al rango de temperatura óptima para su desarrollo? ¿Por qué causa los microorganismos mesófilos son los que con mayor frecuencia infectan al hombre? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxigeno? ¿Cómo Ud. tiene diversos usos. ¿Cuales son las diferencias y semejanzas entre el horno y la incubadora? Describa el diseño o modelo de una incubadora. 13. 10. 3. CUESTIONARIO 1. En el laboratorio de microbiología se emplea frecuentemente para inactivar el complemento de sueros que van a ser sometidos a procedimientos serológicos. puede proporcionar una atmósfera microaereofílica? ¿Cómo Ud. 11. 2.

El microscopio de Hooke. al que insertó en cada extremo. El tubo a su vez 95 . estando su desarrollo ulterior influido. los agentes infecciosos causales de la morbi-mortalidad en plantas y animales.CAPITULO 8 MICROSCOPIO INTRODUCCIÓN La tierra se formó hace miles de millones de años y desde sus albores se desarrollaron los primeros microorganismos a partir de las estructuras pre-biológicas existentes. en gran medida. acerca de las causas que originaban las enfermedades infecciosas eran meramente especulativos y por consiguiente carentes de rigor científico. en el año1665. debido esencialmente al tamaño microscópico de los diversos gérmenes que imposibilita su observación a simple vista y no disponerse en esas épocas de instrumentos técnicos como el microscopio que dieron esa posibilidad. Galileo Galilei. lo que impidió a los hombres de ciencia ver sus respectivas morfología y estructuras. diseminándose gradualmente en el aire. que dio lugar el surgimiento de la microbiología como ciencia. hayan sido durante siglos y sean en la actualidad. originadas por la interacción de los compuestos orgánicos. inventado a principios de ese siglo por el físico-matemático. italiano. que al evolucionar dieron lugar a la biogénesis de las bacterias primitivas. los suelos y las aguas. basándose en el principio funcional del telescopio astronómico. hasta poblar todo el globo terráqueo. grandes epidemias y de pandemias que diezmaron poblaciones enteras. Con el decursar del tiempo. A pesar de que los microorganismos ya existían antes que el hombre y de haber sido durante milenios los causantes de diversas enfermedades infecciosas. de ahí que los microorganismos patógenos. estudiar su comportamiento y asociarlos después como los agentes causales de los procesos morbosos y/o letales. una lente de aumento. los conocimientos que el hombre tuvo durante siglos. afectando igualmente a la especie humana desde el surgimiento del hombre primitivo hasta nuestros días. por el perfeccionamiento de las técnicas microscópicas. algunos fueron afectados por la acción de diversos agentes mutagénicos que alteraron su expresión fenotipal. como: protozoarios. El microscopio compuesto fue diseñado y construido por el inglés Robert Hooke. transformándose en otros tipos de microorganismos más evolucionados. El invento del microscopio fue el punto de partida. consistió en un tubo cilíndrico de unos 15 cm de longitud. correspondiendo por lo tanto a los microorganismos haber sido los primeros seres vivos del planeta. hongos y algas.

constituyen los microorganismos de mayor talla. denominando a estos microorganismos en su conjunto como "animálculos". heces. A pesar de que los lentes empleados por Hooke. pus. Este instrumento se complementaba con una fuente de luz accesoria. no difiere esencialmente de la de los microscopios luminosos que se utilizan en la actualidad. relacionadas con el grosor de las preparaciones o el empleo deficiente de iluminación. fabricante de gafas. solo logró observar. que son ubicados 96 . que posibilita la observación de los microorganismos. que como se sabe. así como bacterias y protozoarios. Microscopio óptico Concepto: Son instrumentos de laboratorio.fue acoplado a un soporte previsto de platina para colocar las preparaciones a observar. De cada tipo se comercializan diferentes modelos y aditamentos especiales para proporcionar determinados efectos. Los microscopios son instrumentos ópticos o electrónicos con un elevado poder resolutivo. al proporcionar una imagen aumentada virtualmente del tamaño real a total magnitud que posibilitan su observación a través de su empleo. MICROSCOPIO. examinar o ver. semen.. algunos insectos de ínfimos tamaños. Probablemente sus limitadas observaciones se debieron a imprecisiones técnicas. no logrando observar a otros más pequeños como protozoarios y bacterias. logró observar todo lo visto por Hooke . así como diversos tejidos vegetales y hongos microscópicos y algas. proviene del prefijo micro que significa pequeño y del sufijo skope. en muestras examinadas de: sangre. CONCEPTO La palabra microscopio. fabricó un microscopio al cual dotó de poderosos lentes de aumentos y empleando técnicas más efectivas. Como se puede apreciar la estructura básica del microscopio diseñado por Hooke. Antón Van Leeuwenhouek. células y otras estructuras microscópicas. podían proporcionar una ampliación suficiente. En 1668. que quiere decir. aunque todos tienen respectivamente el mismo principio. un comerciante holandés. etc. DIFERENTES TIPOS Se fabrican dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. tomando como referencia el invento de Hooke. diseñados básicamente con una sola lente o mediante un sistema de lentes de aumentos.

Microscopios simples Están formados por una sola lente convergente. no se puede observar con ellos objetos microscópicos. Entre los dispositivos utilizados se encuentran las lupas empleadas en las prácticas de disección. que tiene como soporte a un 97 . cuyos detalles escapan a la agudeza visual del ojo humano. como el Necator americanus o el Enterovirus vermicularis. hasta una distancia focal menor que la empleada si se fuera a observar directamente. 48 : Lupa Para su manejo. Fig. quedando restringido su empleo para el examen de diversas estructuras u organismos microscópicos muy pequeños. como por ejemplo: colonias muy pequeñas. no invertida. los compuestos funcionan mediante la combinación de varias lentes. que proporciona una imagen virtual. desarrolladas en los cultivos. vermes de poca longitud. lo que hace posible su observación. siempre que se utilice una adecuada iluminación. varias veces mayor que el tamaño real del objeto observado. quede hacia el objeto a examinar y observando por la cara opuesta. etc. aproximar el instrumento gradualmente.alineadamente en el eje óptico del microscopio para que proporcionen una imagen virtual ampliada de los objetos microscópicos examinados. forman parte de un sistema óptico. Microscopio compuesto A diferencia de los microscopios simples. se debe colocar la lente de manera que su cara plana o menos curva. que conjuntamente con una fuente de iluminación. Clasificación Los microscopios ópticos se clasifican en: simples y compuestos. Debido a su limitada capacidad de ampliación.

2. Algunos modelos están provistos de una charnela (pasador) que permite la inclinación hacia el observador de la parte superior del microscopio. provisto de diversas piezas y aditamentos que deben ser manipulados para lograr y mantener el enfoque de la preparación.sistema mecánico. 49 : Microscopio óptico compuesto Sistema mecánico El sistema mecánico consta de las siguientes partes: 1. 4. 5. Su fondo plano y acentuado peso le proporcionan estabilidad al microscopio y constituyen a aminorar los efectos de las vibraciones que causan distorsiones durante la observación. En su trayectoria hacia la parte superior. Brazo. Base o pie. Tornillos. Brazo Es una columna sólida y rectangular que se haya articulada por su extremo inferior a la base. 3. La base es el sostén donde se asientan todas las restantes partes del microscopio. Fig. recorrerla y observar la cantidad de campos microscópicos que sean pertinentes. Revolver portaobjetivos. Platina 6. algunos modelos 98 . Base o pie Es la parte del microscopio que queda en contacto con la superficie de la mesa de trabajo. Tubo óptico.

manualmente el revolver hacia la derecha o hacia la izquierda hasta ubicar el lente deseado 99 . ubicados equitativamente alrededor de su entorno a menos de un cm de su borde. sino que forma un cuerpo binocular. el extremo superior del tubo óptico no termina recto. mientras que en otros su trayectoria es recta hasta más allá de la mitad de su longitud en que se dobla en dirección frontal. consistente en dos tapas de corredera. formando una inclinación oblicua o un ángulo recto de 900. Cuando se requiera un mayor o menor aumento se hará girar. denunciado fusil que articula a la parte superior del brazo. observador. es giratorio al ser accionado se desplaza hacia arriba o hacia abajo. consiste en un tubo cilíndrico de 2. con una longitud de varios cm que varía según el modelo. Tubo óptico En los microscopios monoculares.3 cm de diámetro donde se insertan los dos lentes oculares. lo cual permite sincronizar la distancia de ambos lentes a las diferencias de potencialidad de cada ojo. lo cual se logra cuando éste deje de ver dos campos microscópicos separados o superpuestos y vea uno solo.forman una curvatura. hasta hacerlos coincidir con la de los ojos del. al menos. estando provisto de una tapa metálica giratoria de superficie cónica. Este cuerpo binocular. mientras que la porción media de su cara frontal sirve de asiento al extremo posterior de la platina. encontrándose rodeado por un tubo de mayor diámetro. Revolver portaobjetivos El revolver portaobjetivos es un disco plástico o metálico de unos 7 cm de diámetro que se encuentra atornillado por su eje a una pieza que rodea al tubo óptico denominado fusil. disponiendo además. que se accionan lateralmente para ampliar o reducir la distancia entre ambos lentes. cuya secuencia aproximada será de menor o mayor potencia de aumentos. En su parte superior. el brazo está articulado al tubo óptico o al cuerpo binocular. mientras que en el inferior se encuentra acoplado al revolver portaobjetivos. tiene ubicado en el punto de contacto con el tubo óptico un prisma o espejo que refracta la imagen por igual hacia ambas lentes. por la misma cara donde se hayan los tubos para insertar los lentes oculares. uno de los tubos. un mecanismo de desplazamiento. provista de 3 ó 4 orificios de 2 cm de diámetro con rosca interna.3 cm de diámetro. En la superficie frontal presenta 2 tubos cortos de 2. En los microscopios binoculares. En algunos modelos. El orificio superior se emplea para insertar la lente ocular. que consiste en una cajuela rectangular ubicada en posición horizontal que puede estar ligeramente inclinada hacia el observador. En cada uno de estos orificios se enroscará un lente objetivo.

engranados respectivamente a cada una de ellas. 5l: Diferentes formas de platinas y pinzas La platina es una doble plataforma metálica de color negro o gris de aspecto mate. por donde pasa la luz procedente de la fuente de iluminación. Al rotar el disco y ubicar el lente deseado sobre el orificio de la platina.sobre el orificio de la platina. Presenta en su porción central un orificio circular de unos 5 cm de diámetro. que se utilizan para sujetar las láminas portaobjetos que contiene la preparación a observar. La platina está provista de pinzas. Mediante movimientos de rotación que se imprimen a uno de los tornillos se propicia el desplazamiento de la pinza hacia uno u otro lateral y con el accionar del otro se desplaza la plataforma superior de la platina hacia delante o hacia atrás. quedando la parte posterior del lente frente al tubo ocular. se encuentran articuladas a un sistema de rodamiento formado por dos cremalleras y dos tornillos. coincide con que el saliente se introduce en la hendidura produciendo un ligero sonido audible al acoplarse que indica que la lente está ubicada correctamente. 50 : Revólver portaobjetivos La platina Fig. mientras que en otros. 100 . pudiendo en algunos modelos ser circular. en algunos modelos son fijas. En algunos modelos el orificio es ovoide. El disco fijo tiene en su extremo frontal una pequeña hendidura y el giratorio presenta un pequeño saliente frente al orificio donde se enrosca cada lente objetivo. Fig. Estas pinzas. Generalmente es de forma cuadrada y mide unos 15 cm2 de superficie x 1 a 2 cm de grosor.

de similar manera el tornillo micrométrico. Cuando los tornillos son introducidos en sus orificios respectivos solo quedan externamente sus cabezas. En cambio el piñón del tornillo micrométrico tiene los dientes más unidos. algunos microscopios presentan dos orificios. y en el borde lateral derecho otra con el rango de 80 a 110 mm provista igualmente de un nonio. con el borde estriado transversalmente para facilitar el agarre manual al imprimirle movimientos de rotación. los microscopios están provistos de otros 3 tornillos. lo que propicia imprimirle movimientos rápidos de desplazamiento al tubo óptico con lo que se consigue con prontitud el enfoque grosero de la preparación. junto con un nonio. Esta diferencia mecánica propicia un desplazamiento muy lento del tubo óptico. para lo cual anotará las coordenadas que le proporcionan ambas escalas. En el que está ubicado en la parte superior se inserta el tornillo macrométrico (uno por cada lado) y en el orificio inferior. lo que no le permite engranarse directamente a la cremallera. el micrométrico y el del elevador del condensador. el macrométrico. mediante el desplazamiento ascendente o descendente de la platina. El vástago helicoidal de cada tornillo que penetra en el orificio termina en un pequeño piñón (rueda dentada) que se engrana a la cremallera del tubo óptico. uno debajo del otro. tienen grabada sobre el borde frontal de la platina una escala graduada de 0 a 80 mm. Estructuralmente ambos tornillos son iguales. 101 . con el que se logra la nitidez del enfoque. Estas escalas permiten al microscopista ubicar la posición de un campo microscópico que desea posteriormente volver a ver. que lo atraviesan de lado a lado. En otros modelos de microscopios el tubo óptico es fijo y la distancia focal se consigue. sino a través de un piñón similar al del tornillo macrométrico que tiene acoplado un uno de sus laterales a otro más pequeño con los dientes a igual distancia que los del tornillo micrométrico. con la única diferencia de que el tornillo micrométrico es más pequeño. las cuales son de forma circular con un tamaño de varios cm de diámetro por 1 ó más de ancho. Es la parte superior del brazo. lo que facilitará la localización del campo con rapidez sin tener que rastrear toda la preparación.La mayoría de los microscopios que se emplean en la actualidad. Tornillos Además de los tornillos de la platina. lo que propicia al accionar el tornillo. El piñón del tornillo macrométrico tiene separado los dientes a la misma distancia que los de la cremallera. transformar el movimiento rotatorio del piñón en movimiento rectilíneo del tubo óptico en dirección ascendente o descendente para hallar la distancia focal.

El funcionamiento para subir o bajar el condensador tiene el mismo mecanismo que el empleado para los tornillos macrométricos. mediante los tornillos macrométricos y micrométricos. Sistema óptico. quedando el micrométrico insertado en el centro del macrométrico. convexa. 52: Lentes oculares 102 . Miden desde unos pocos mm hasta varios cm y tienen la propiedad de proporcionar una imagen del objeto observado aumentada de tamaño. Diferentes partes El sistema óptico está formado por las diferentes partes provistas de lentes y de las que intervienen en la iluminación. Este tornillo queda muy próximo al condensador y se acciona en uno u otro sentido según sean los requerimientos de iluminación de acuerdo al tipo de microscopía que se vaya a realizar. Lentes oculares Fig. siendo al menos. ambos tornillos están acoplados. siendo las siguientes: _ Lentes oculares _ Lentes objetivos _ Condensador _ Diafragma _ Espejo _ Fuente de luz _ Filtros Los lentes Los lentes empleados en la fabricación de los microscopios son discos pulidos y transparentes.por un mecanismo similar. una de sus dos superficies. mientras que en otros.

a pocos mm de su terminación se va estrechando cónicamente. para finalmente terminar plano. por un diafragma anular en forma de arandela. la primera es un fino tubito que contiene las lentes. son los que proporcionan los siguientes aumentos: 6x.2 cm de diámetro x 3 ó más cm de largo. la imagen formada ampliada por el lente objetivo y corregir las aberraciones cromáticas y de esferidad debidas a la curvatura de la lente. mide 2. Lentes objetivos Los lentes objetivos constituyen la parte más importante del sistema óptico del microscopio. que se haya insertado en la porción media del tubo.Antiguamente los lentes oculares disponían de una sola lente. que le sirven de soporte.9 cm. ya que mediante su poder de resolución es posible observar separados dos objetos microscópicos muy próximos entre sí. 8x.. el cual dispone de una tapa de rosca de color negro provista de un criterio central de 1. Los lentes oculares que se utilizan con mayor frecuencia. Este pequeño tubo. está calibrado para que pueda ser insertado en el interior del tubo óptico. Al igual que los lentes oculares.. que a diferencia del que porta las lentes oculares. lo que significa que esa lente aumenta virtualmente el tamaño real del objeto observado en una imagen 10 veces mayor. es plano-convexa. En algunos modelos esta lente se encuentra empotrada en la misma tapa. como si se hubiera cortado la punta del cono. La segunda lente es biconvexa. Por ejemplo: 10x. quedando retenido en su descenso por el borde de la tapa que tiene un mayor diámetro.1 cm de diámetro y está ubicada en el extremo posterior del tubito. los lentes objetivos. Los microscopios monoculares están diseñados para trabajar con un solo lente ocular y los binoculares con dos. que indica su poder de ampliación. La tapa tiene grabado en su superficie un número seguido de una "x". provisto de rosca en su extremo posterior. 10x. está formado por tres piezas desarmables. La lente ubicada en el extremo superior mide 1. 12. La función de los lentes oculares es la de ampliar virtualmente. portador de las lentes. quedando la aber103 . colcadas en el interior de un pequeño tubito cilíndrico. mediante la combinación de varias lentes con distintos radios de curvatura o suprimiendo por medio del diafragma anular los rayos que atraviesan la porción periférica de la lente. pudiendo ser observada a través del orificio. pero desde hace años se viene utilizando un sistema de 2 lentes colocados en el interior de un pequeño tubito cilíndrico de 2. que al ser enroscada suavemente la lente inmovilizándola. mientras que el extremo frontal o inferior.7 cm de diámetro.5x y 15x. están formados por un sistema de varias lentes. quedando separados entre sí. teniendo el lado plano dirigido hacia el interior del tubo.

Los lentes objetivos de 10x ó 20x. La tercera pieza. quedando un espacio de aire entre la lámina cubreobjetos y la lente.2 cm de diámetro x 2 ó 3 mm de grosor. b) Objetivo de imersión Existen dos tipos de lentes objetivos. los secos y los de inmersión. con rosca interna. Diferentes tipos de lentes objetivos Fig. es la base. Al quedar ensamblado el lente objetivo. por donde se enrosca el tubito portador de las lentes. En estas condiciones el lente objetivo podrá ser colocado en uno de los orificios del revolver portaobjetivos. una especie de unión universal. con diferentes potencias de aumento. Los objetivos secos alcanzan la distancia focal a varios cm por encima de la preparación. es una cánula cilíndrica que se ensambla a la base por la rosca externa del mismo saliente donde se enroscó el tubito portador de las lentes por su rosca interna. mediante la rosca que se encuentra en el lado opuesto. mayor será su capacidad de ampliación. El de menor aumento (5x ó 6x) es el más corto de todos y se caracteriza por proporcionar la observación de un área extensa de la preparación.tura del tubo con un diámetro reducido de 1 a 5 mm. los cuales están diseñados con rosca externa y uno solo de ellos. por donde se puede observar la cara plana de la lente plano convexa que está en contacto con el pequeño orificio. además. ya que entre menor sea su diámetro. protozoarios y otro microorganismos de dimensiones microscópicas muy pequeñas. de 2. por lo que se le conoce también como lente explorador. son más largos. 53 : Lentes objetivos: a) Objetivos secos. aunque todavía insuficiente para observar con nitidez microorganismos 104 . la cánula rodeará a todo el tubito menos por extremo cónico. Esto se debe a que las lentes oculares deben ser pequeñas. proporcionan un aumento mayor que el explorador. estriada transversalmente como algunas monedas. Debido a su baja potencia de ampliación no es posible observar con este lente a las bacterias. Este tipo de objetivo se fabrica. teniendo por ambos lados un saliente anular adjunto de menor diámetro de 2 ó 3 mm de longitud. La segunda.

volviendo a su posición normal cuando cesa la presión. que para poder captar los rayos luminosos procedentes del condensador. Para evitar estos accidentes. pero posibilitando que cuando la parte inferior que contiene la lente frontal sea presionada sobre la lámina.5 mm de la misma. Cuando se emplean objetivos de inmersión. aunque pueden ser factibles a microscopistas con experiencia para identificar huevos de helmintos y otros elementos de interés de tamaño similar. no solo por ser más largo. provocando no solo la ruptura de la lámina. Lente de inmersión se diferencia de los secos. así como: huevos y larvas de helmintos. se introduzca unos mm dentro de la externo. que han atravesado la preparación. a pesar de que la distancia que separa a la lente de la preparación sea escasamente de 1 mm. por tener. pero proporciona un aumento lo suficientemente amplio. células. en ocasiones irreparables a la propia lente. en el que quede inmersa la lente.52. particularmente de las cocáceas por su íntimo tamaño. resultando aún insuficiente para la observación pormenorizada de bacterias. lo que sí. Como el espacio de la distancia focal es tan reducido se corre el riesgo de incurrir en la impericia de presionar la preparación con el lente. En el orificio anterior del tubito. que abarca un área más reducida de la preparación.52. Este lente se le conoce también como seco débil. Al cubrirse el espacio de aire por el aceite los rayos de luz que han atravesado la preparación asciende perpendicularmente hacia la lente sin refractarse significativamente. ocurre. El líquido empleado tradicionalmente ha sido el aceite de cedro. lo que propicia que el ponga las lentes pueda introducirse calibradamente dentro del otro. está estructurado por dos tubitos de diámetro ligeramente diferentes. generalmente. sino además pudiendo ocasionar daños. se haya la lente frontal. ya que las demás ubicadas dentro del tubito son de corrección. este fenómeno ocurre. sino además. cuando se utilizan lentes objetivos secos. de ahí. generalmente. una franja de color negro a su alrededor y grabadas en su cánula la sigla HI(Homg Inmersión) u OI(Oil Inmersión). disponiendo además de un pequeño resorte que mantiene fija a las dos partes. Este lente se conoce también como seco fuerte. Para evitarlo. mide escasamente 1 mm de diámetro. artefactos y otros elementos de interés de tamaño similar. así como su potencia de aumento (90x a 100x) que depende enteramente del grado de ampliación que proporcione la lente frontal. como si fuera un pistón. 105 . el tubito portador de las lentes se diseña de forma retráctil. que es de 1. El más largo de los tres es el de 40x ó 45x. se debe colocar sobre la preparación una gota de un líquido cuyo índice de refracción sea más elevado que el del aire y muy próximo al vidrio de la lente. cuyo índice de refracción es de 1. que tenga que estar situado a 1 ó 1. Los rayos de luz al pasar de un medio a otro con diferente índice de refracción tiende a desviarse por reflexión.muy pequeños como las bacterias. como para permitir la observación detallada de algunos microorganismos como protozoarios y hongos.

Por lo tanto el aumento total sería de 200x. El condensador se introduce de abajo hacia arriba. Aumento total que proporciona el microscopio: Para conocer el número de diámetro en que se amplia virtualmente el objeto observado. 54: Condensador luminoso El condensador de campo claro o brillante. aunque se limpien adecuadamente después de su uso. que tiene la parte superior ligeramente cónica. encontrándose ubicada por su lado menos curvo a corta distancia de la lente más pequeña. ubicadas en el interior de un dispositivo cilíndrico de 3 cm de diámetro. con el extremo de su vértice cortado. en la actualidad se emplean otros aceites para microscopios más estables. ocupado por la cara plana de la lente más pequeña que es planoconvexa. por lo que. tamaño. 20. por el valor de ampliación del lente ocular. siendo inmovilizado mediante un fino tornillo.10=200. La segunda lente es biconvexa. quedando ambas lentes en posición perpendicular 106 . que con el tiempo afecta la calidad de la lente. entonces. La función de los lentes objetivos es formar la imagen del objeto observado y ampliarla virtualmente de acuerdo a su potencial de aumento. que se haya justamente debajo del orificio de la platina. adquiriendo una consistencia muy viscosa. pero dañando menos las lentes. se procede a multiplicar el valor de ampliación que está grabado en el lente objetivo. donde se encuentra un orificio de menos de 1 cm de diámetro. siendo de mayor tamaño.El aceite de cedro tiene el inconveniente de oxidarse con el aire. Ejemplo: si la ampliación del lente objetivo fuera de 20x y el del ocular 10x. dentro de un dispositivo anular. con las mismas ventajas. está compuesto por 2 lentes convergentes de desigual. Condensador Fig.

por la convergencia de los rayos de luz que al atravesar todo el sistema. al recogerse. Diafragma de Iris Fig. 55: Diafragma: a) Diafragma iris. estando provisto de un tornillo engranado a una cremallera. encontrándose acoplado en el extremo del orificio posterior del condensador.con respecto al lente objetivo. diseñado con múltiples laminillas planas superpuestas consecutivamente que adoptan el aspecto de un abanico plegable. muy próxima a la cara posterior del portaobjetos reduce la divergencia de los rayos de luz. las laminillas del diafragma se despliegan hacia el entorno del cilindro. que puede ser desplazada hacia delante o hacia atrás de la ranura. Este dispositivo a su vez. de cuyo interior sale una pequeña palanquita plana. una ranura que los bordea horizontalmente. a la formación de un orificio de diámetro variable en el centro del diafragma. La función del condensador es hacer los rayos luminosos procedentes directamente de la lámpara e indirectamente por reflexión del espejo. salen paralelos al eje principal incidiendo sobre el objeto a observar. El condensador presenta. según sea necesaria una mayor o menor intensidad de luz. sino divergen. para después atravesarlo y seguir su trayectoria perpendicularmente. Cuando el movimiento se produce hacia delante. en cuyo vértice se intensifica un foco luminoso. hacia la lente frontal del objetivo. Su colocación. está articulado a una pieza angular que lo fija a la parte inferior del brazo. b) Diafragma anular. muy próximo a su base. Es un accesorio del condensador. sucedería todo lo contrario. formando un cono de luz. lo que da lugar. consistente en un fino disco metálico. ya que las laminillas se desplazarían 107 . se refracten (desvíen) al atravesar las lentes convergentes. debajo de la lente biconvexa. muy próximo a la base. con lo que se logra una mayor iluminación que resulta imprescindible cuando se hacen observaciones a grandes aumentos. que se utiliza como elevador del condensador al propiciar con su accionar su desplazamiento vertical ascendente o descendente. cubriendo todo ese diámetro. Si la palanquita fuera hacia atrás.

donde se encuentra separada. 56 : Espejo El espejo de los microscopios es circular. En ambos casos la lámpara forma parte de un soporte diseñado para proyectar me108 .hacia el centro. La primera se utiliza cuando la fuente de luz es natural y la segunda cuando se emplea iluminación artificial. cerrándose. para seleccionar la cara a emplear o conjuntamente. dándole un aspecto de horquetilla. Lámpara Las lámparas utilizadas. la lámpara está acoplada en la base aunque todavía se utilizan modelos. mide unos 5 cm de diámetro y consta de dos espejos adosados por su reverso. una luz monocromática de corta longitud de onda. mediante la rotación del vástago. mediante las articulaciones laterales. un fino orificio de 1 mm de diámetro por donde se articula a dos pequeños salientes puntiformes que se hayan en cada extremo de una planchuela curva acoplada por su centro a un pequeño vástago cilíndrico. para reducir progresivamente el diámetro del orificio. El extremo posterior del vástago se introduce en un orificio presente en el extremo inferior del brazo donde se fija. como parte del módulo del microscopio óptico. En los microscopios modernos. Ambos espejos se encuentran montados conjuntamente dentro de un fino aro metálico de unos 5 mm de ancho que les sirven de marco. El diafragma se utiliza para regular la cantidad de rayos luminosos que deben pasar al interior del condensador. De esta manera el espejo puede ser movido por rotación. lejos de beneficiar. uno de los cuales tiene la superficie plana y el otro cóncava. teniendo por cada lateral de su línea ecuatorial. Espejo Fig. afectan la calidad de la observación se cierra total o parcialmente el diafragma y cuando necesitamos más intensidad de luz se va abriendo hasta obtener la requerida. deben proporcionar para la microscopía ordinaria. para hallar el ángulo adecuado que propicie la reflexión del espectro luminoso procedente de la lámpara hacia el condensador. Cuando pretendemos realizar una microscopía donde el exceso de iluminación.

para que los rayos sean dirigidos por reflexión hacia el condensador. 57 : Lámpara Cuando la lámpara está separada del microscopio. esféricos y planos. debe proyectarse el haz de luz de manera que incida directamente sobre el espejo. Principios básicos Los principios básicos en que se sustenta el empleo utilitario de los microscopios son esencialmente de: _ Su poder de resolución. miden de 2 a 3 cm de diámetro y tienen un determinado color. 58 : Filtros Son dispositivos de vidrio. 109 .diante un reteden sus emanaciones como un cono de luz. que se caracterizan por ser transparentes. este último para regular la intensidad de la luz. de manera similar a como lo hace una linterna. Filtros Fig. Su función es la de absorber las longitudes de ondas de determinados colores para proporcionar una luz que mejore la observación microscópica. _ La capacidad de formar imágenes. tales como: portafiltros. La mayoría de dichos soportes se fabrican con diversos aditamentos para optimizar el empleo de la iluminación. Fig. diafragma y reóstato.

los rayos de luz que lo atraviesan sufren un retraso proporciona en su trayectoria con respecto a los que siguieron directamente hacia el lente objetivo. entrecruzándose entre sí. observándose los elementos que están a la izquierda de la preparación. las limita cuando el tamaño de la longitud de onda de la luz. por lo que cualquier objeto con un tamaño inferior a esa medida le resultará imperceptible.2 mm. su poder de resolución será mayor. lo que da lugar a que la imagen del objeto llegue a la retina del ojo con una ubicación invertida. dispersando o concentrándose. que tienen diferentes densidades ópticas se refractan (desvían) en cada ocasión. en que es posible observarlos separadamente. Por ejemplo. Si la distancia se acortara y el poder de resolución del observador ya hubiera llegado a su límite . en dependencia del aumento.2 mm de distancia. pudiendo alcanzar hasta 0. el brillo ocasionado por los que no tuvieron interferencia. el ojo humano no puede distinguir la separación de dos puntos que estén a menos de 0. Percepción de la imagen Los rayos del haz de luz empleados en la microscopía. darán lugar a una diversidad de tonos y matices con los que se produce la formación de imagen. las sombras producidas por la densidad óptica de cada parte del objeto y la oscuridad proporcionada por su grosor. Formación de imágenes En dependencia del grosor y la densidad óptica que tenga cada parte del objeto a observar.2 (micrómetros) estando limitada su potencia a esa magnitud. las diferentes lentes y la preparación . así como los espacios de aire. por lo tanto su poder de resolución es de 0. 110 . no podrá distinguir la separación entre ambos puntos y para su percepción estarán unidos. Como el microscopio está estructurado con lentes que amplían virtualmente la imagen del objeto real. Al reunirse en la lente todos los rayos. lo cual está delimitado por la menor distancia entre dos puntos muy próximos entre sí. no ascienden perpendicularmente a través del sistema óptico. a la derecha del campo microscópico y los que están arriba se observan debajo o viceversa. ya que al atravesar en su trayectoria.Poder de resolución El poder de resolución es equivalente a la potencia de observación.

mueva lateralmente los lentes hasta Hacerlos coincidir con la distancia intrapupilar. procediendo a manipular el espejo en la forma explicada.. Cuando éstas no existen o son deficitaria la tendencia es el apresuramiento. lo cual se podrá constatar cuando el campo microscópico se observe completamente iluminado. 6. 2.Si requiere utilizar el espejo. proceda a mover convencionalmente el espejo de manera que los rayos de luz procedentes de la fuente de iluminación se reflejen y los desvíen hacia el condensador. seleccionar la cara plana o cóncava. con lo que afecta la calidad de los resultados . el de disponer de condiciones mínimas de confort para su realización.Fig. Cerciorarse de que el aumento del lente ocular es el pertinente para el tipo de microscopía que va a realizar. mirando por la lente ocular. Mueva la palanquita y abra el diafragma. que resulte cómoda para la manipulación y observación a través del microscopio. Si el microscopio fuera monocular. previamente. 111 . Si el microscopio carece de espejo por disponer de una lámpara acoplada en su base. Si fuera un microscopio binocular. Accione el tornillo del elevador y suba el condensador. 5. Bastará con encenderla. preferentemente de color negro y aspecto mate para que no se refleje la luz. 3. Pasos a seguir 1. 4. debiendo tener respaldar. en este sentido la superficie de la mesa o meseta donde esté colocado el microscopio debe ser lisa y sólida. La silla o banqueta utilizada por el microscopista debe tener un altura adecuada en relación con la mesa. que logrará con exactitud cuando vea un solo campo. según sea el tipo de iluminación a emplear (natural o artificial). 59 : Percepción de la imagen microscópica Indicaciones para el manejo del microscopio óptico El requisito primordial para efectuar una adecuada microscopía es. Rote el revolver portaobjetivos y coloque sobre el hueco de la platina el lente objetivo de menor aumento.

112 . Mirando por el lente ocular. quedando aproximadamente a 1mm de la lámina. proceda a separar lentamente el lente objetivo de la preparación con ayuda del tornillo macrométrico hasta que logre avizorar la imagen microscópica. Para recorrer la preparación y observar los campos necesarios.7. Coloque la lámina portaobjetos con la preparación sobre la platina y fíjela con las pinzas. Si el microscopio está debidamente ajustado. 12. para observar directamente la operación. 13. aproxime. 11. 9. Si la microscopía a realizar requiere de filtro. Otras variantes del microscopio óptico El microscopio óptico de campo brillante es el que se utiliza corrientemente en el trabajo cotidiano del laboratorio. Seguidamente gire el tornillo micrométrico hasta que el enfoque sea nítido. Ajuste la altura del condensador y la abertura del diafragma a las necesidades de iluminación de la microscopía que vaya a efectuar. 8. con ayuda del tornillo macrométrico el lente objetivo seco. pero no siempre resulta eficaz para la realización de determinados exámenes. 10. Si fuera a utilizar el lente de inmersión. hasta que quede a 4 ó 5 mm de la preparación. requiriéndose otras variantes microscópicas con las que se pueda obtener los resultados requeridos. coloque previamente sobre la preparación una gota de aceite de cedro y al aproximar la lente haga que ésta contacte con la gota de aceite. Con ayuda de los tornillos de desplazamientos laterales o frontales mueva la preparación hasta situarla debajo del lente objetivo. accione con su mano derecha los tornillos de la platina y desplace la lámina en diferentes direcciones. Si el enfoque se realizó con objetivo seco de poco aumento y se requiere un objetivo de más aumento. Entre las más empleadas en el laboratorio de microbiología se encuentran las siguientes: _ Microscopía de campo oscuro. rote el revolver portaobjetivos y sitúe sobre la preparación el lente requerido. al cambiar el lente objetivo debe quedar enfocado el mismo campo pero con menos radio de observación. Nota. alterne los ojos durante la observación y mantenga el que no esté utilizando abierto. Si está utilizando un microscopio monocular. y con su mano izquierda accione el tornillo micrométrico para ir corrigiendo el enfoque cuando la lámina esté en movimiento. Ladeando la cabeza. utilice el correcto.

Fig. de similar manera. _ Microscopía de fluorescencia. condensadores. 113 . atraviesan la lámina portaobjetos en forma oblicua como un cono hueco de luz con su vértice hacia abajo. colocando en su lugar uno de campo oscuro. no ilumina por lo tanto los ojos del observador. Microscopía de campo oscuro Para la realización de este tipo de microscopía se procede a retirar del microscopio óptico. o las iluminan indirectamente. que vera como resultado un campo microscópico de color negro (campo oscuro). tubos ópticos. de menor diámetro que el orificio posterior que se encuentra ubicado debajo de la lente. los que al refractarse en su interior. el condensador de "Abbe". que cuando se observan las estrella en la noche._ Microscopía de contraste de fase. etc. crean un efecto que proporcionan la observación de las partículas con un aspecto brillante sobre fondo oscuro. 60 : Condensador de campo oscuro Este tipo de condensador está provisto de un aditamento circular opaco. teniendo la función de impedir el paso del haz de luz hacia el área central del condensador posibilitando solamente la entrada de los rayos periféricos. diseñados de tal manera que puedan ser intercambiables. Cualquier objeto colocado en la trayectoria de los rayos luminosos será atravesado por éstos o iluminados indirectamente. comercializan modelos multipropósitos. En la actualidad las empresas dedicadas a la fabricación de microscopios. Los rayos que atraviesan las partículas que se hayan en la preparación. Como el rayo de luz no penetra en el tubo óptico.

Este disco se acopla en la parte inferior del condensador. prosigue su trayectoria por el tubo óptico hacia el lente ocular. que tiene en su diámetro medio un aro de vidrio óptico. de unos 2 cm.La microscopía de campo oscuro se utiliza para la observación de microorganismos y otros elementos de interés que no resultan factibles de ser coloreados. Al proseguir su trayectoria estos rayos atraviesan el aro 114 . la microscopía ordinaria no posibilita que se pueden detectar las diferencias. Como el ojo no es sensible a los cambios de fase por ser muy imperceptibles. Para la realización de la microscopía de contraste de fase se requiere acoplar dos aditamentos al microscopio ordinario: un diafragma anular y una placa de cambio de fase. lo que permite estudiar su motilidad. obviamente. El método de contraste de fase proporciona que se pongan en evidencia cambios de fase mediante su amplitud lo que hace posible distinguir por contraste las estructuras celulares entre sí y diferenciar a estas de su entorno. Placa de cambio de fase: Es una placa transparente de forma circular. 6l: Aditamentos para la microscopía de contraste de fase: a) Diafragma anular. la luz pasa al condensador en forma de aro. que presenta en su diámetro medio un aro transparente. Fig. pero al tener diferencias en la densidad de sus respectivas estructuras. no cambian significativamente la amplitud de los rayos de luz que las atraviesan. de manera que al haz de luz que lo atraviesa pasa al condensador como un aro hueco de luz. b)Placa de cambio de fases Funcionamiento: Debido a la forma anular del diafragma. sí cambian diferenciadamente la fase (dirección) de la onda luminosa. Esta placa se sitúa debajo del lente ocular. Diafragma anular: Es un disco opaco. Al no sufrir efectos tóxicos de las sustancias colorantes se mantienen viables. Microscopía de contraste de fase Las diferentes partes de las células. Al atravesar el objeto. mientras que los rayos no pasan alrededor del objeto se dispensan.

de vidrio óptico de la placa de cambio de fase. haciendo factible la realización de exámenes directos en fresco. sufren un notable retraso en su velocidad de traslación con respecto a los rayos que transitaron normalmente después de atravesar el objeto. difiere del de otras formas de microscopía óptica. 62: Trayectoria del haz de luz en la microscopía de contraste de fase La placa de contraste de fase amplía significativamente las diferencias entre las ondas luminosas refractadas y las que no lo están. sin la aplicación de colorantes. en que no utiliza directamente la luz incidente. que tienen la propiedad de absorber la luz 115 . lo que ocasiona un acentuado contraste de brillo y oscuridad que propicia distinguir por contraste los componentes de la estructura celular. que posibilitan su observación con una microscopía ordinaria. Fig. para observar microorganismos presentes en líquidos igualmente transparentes. Empleo: Cuando no existen marcadas diferencias en la densidad óptica de las diversas estructuras celulares o el índice de refracción entre las células y los líquidos circundantes no están suficientemente contrastados en cuanto a brillo. obtenida mediante la aplicación de ciertos compuestos denominados fluocromos. Como resultado los rayos que se refractan para luego pasar por el anillo óptico de la placa de cambio de fase. Microscopía de fluorescencia El principio de este método. sino que emplea fuentes indirectas de energía luminosa. sombra u oscuridad.

ultravioleta de onda corta y emitirla posteriormente. La estructura del microscopio de fluorescencia es similar a la del microscopio óptico común. después de haber interactuado con la luz ultravioleta de onda corta. para que no haya pérdida de energía luminosa. Filtro de barrera: Está situado en el interior del tubo óptico. donde los rayos ultravioletas son absorbidos por el filtro de barreras. con un cambio de longitud de onda. teniendo la función de absorber la longitud de onda de la luz ultravioleta. después de atravesar el filtro primario seleccionado. Fuente de luz: Consiste en una lámpara de mercurio o xenón de alta presión que produce con firmeza y fuerza sostenida ondas luminosas en el espectro ultravioleta. dando como resultado que la imagen del objeto enfocado se vea. mientras que la luz fluorescente lo atraviesa y la imagen virtual 116 - . el espejo debe estar debidamente alineado con el eje del microscopio. 3. procedente de la lámpara. a través del lente ocular. 4. Filtro primario: Este filtro se sitúa entre la fuente de luz y el condensador y su selección debe estar en correspondencia con el fluorocromo empleado ya que tiene la función de eliminar las longitudes de ondas de la luz. Funcionamiento En el caso en que se utilice luz refleja. sin interferir el paso de la luz emitida por el objeto. diferenciándose en que dispone de los siguientes aditamentos: 1. 2. penetra en el condensador de campo oscuro y al salir se refleja oblicuamente sobre el objeto teñido o conjugado con fluocromo el cual absorbe las radiaciones y posteriormente se propaga en una longitud de onda más larga que es visible (fluorescencia). Tanto. fluorescente sobre fondo negro. durante algún tiempo. atraviesan la lente frontal del objetivo en el tubo ocular. Mediante este filtro se protege la vista del observador de los efectos de la exposición a las Radiaciones ultravioleta. La luz ultravioleta. los rayos incidentes de luz ultravioleta como la fluorescencia generada por los fluocromos. Condensador de campo oscuro: Para concentrar la luz ultravioleta sobre la muestra y lograr un mayor grado de Fluorescencia. Entre los fluocromos más empelados se encuentra la auramina y la naranja acridina que se utilizan para la tinción directa de microorganismos y otros como el isotiocinato de fluoresceína que pueden ser conjugados a anticuerpos y se emplean en técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFA). en forma de luz fluorescente (fosforescente) a mayor longitud de onda. que no sirvan para exitarlo.

Observaciones Mediante este tipo de microscopía se pone de manifiesto. que alterarían los resultados. desde posiciones diferentes. Para las observaciones con objetivos de inmersión se debe utilizar un aceite especial. sino además. Cryptosporidium sp. no solo en su diseño. Empleo Este tipo de microscopio posibilita examinar. MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO El microscopio estereoscópico difiere del microscopio óptico convencional. lo que propicia una visión estereoscópica o tridimensional del objeto. Giardia lamblia y otros. microorganismos difíciles de colorear. diseñados para que cada ojo del microscopista observe la imagen ampliada por un lente objetivo común. desde ángulos diferentes hacia ambas lentes.del objetivo es observado a través de la lente ocular con un aspecto fluorescente. un prototipo de microscopio estereoscópico consistente en el ensamblaje de dos tubos ópticos independientes. como las espiroquetas y otros agentes microbianos como: Chlamydia trachomatis. siempre que se tenga la certeza de que no estén fabricados con material fluorescentes. así como para la detección rápida de antígenos virales. ya que el aceite de cedro es fluorescente. 117 . En la actualidad se fabrican modelos más modernos. diferencias de coloraciones de diversos tejidos. por ser los mismos fluorescentes. Precauciones Se pueden emplear lentes oculares y objetivos de uso común. en el principio de su poder de aumento y en la finalidad de su empleo. sin ningún tratamiento con fluorocromo. Diseño Durante muchos años se ha venido utilizando. provistos de un prisma que refleja la imagen.

63 : Microscopio estereoscópico Los lentes objetivos. Este microscopio está provisto de un tornillo único. generalmente dos. una que se haya en la base del microscopio. por lo que la imagen ampliada se observará en el campo microscópico en el mismo plano que el objeto real. lo que proporciona un aumento potencial total. Estos microscopios no poseen condensador ni diafragma. estando estructurado por una base de 4 ó 5 cm de altura que le sirve al mismo tiempo de platina. El sistema de iluminación consiste en dos lámparas. que proyecta la luz en dirección oblicua sobre el objeto dando la posibilidad de observar cuerpos opacos. articulado a una cremallera. sino en su capacidad directa de aumento.Fig. en cuya porción central se encuentra un orificio de unos 7 cm de diámetro cubierto por un cristal nevado. 118 . que se utiliza para aproximar o alejar al lente objetivo del objeto a examinar. mientras que el de los lentes oculares oscila de 5x a 10x. cuyos rayos atraviesan el cristal nevado de la platina. Principio El principal funcionamiento del microscopio estereoscópico no está basado como en el microscopio óptico en el poder de resolución. no invirtiendo su posición como sucede con el microscopio de uso común. proporcionando una iluminación tenue y otra instalada en la articulación que sostiene al sistema de los lentes. se encuentran montados en el interior de un revolver tubular y se caracteriza por tener un bajo poder de aumento (2x o 4x). entre 10x y 40x.

reduzca la luz antes de apagarla. Durante su empleo . los fuertes impactos. Cuando suceda. separándolo ligeramente de la orilla para evitar que accidentalmente pueda caer al piso y dañarse. reactivos u otros compuestos orgánicos sobre la platina.Ubique el microscopio sobre una mesa o meseta sólida de superficie nivelada. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO Los microscopios son equipos que requieren de un cuidado esmerado para su buen funcionamiento y prolongación de su vida útil.Apague la lámpara. no solo por su elevado costo. No utilice el alcohol para estos menesteres. seque de inmediato la platina con material absorbente y seguidamente límpiela con un paño de lino fino o gamuza. Cuidado 1. . la humedad y los inadecuados métodos de limpieza.Antes de instalarlo a la red eléctrica. Se utilizó lente de inmersión. En caso de em119 . Si se trata de un modelo con regulador de intensidad. . ya que un error en este sentido ocasionaría la ruptura de la lámpara y en el mejor de los casos se produce una disminución de la intensidad lumínica con la consiguiente pérdida de nitidez de la imagen. remueva el aceite empleado con papel para lentes o un paño de tela fina que no ocasione ralladuras.CUIDADO. para evitar roces con la lente frontal que pueden dañarla.Antes de retirar la lámina. 2. la suciedad. Con esta acción se protege al filamento que puede quebrarse por cambios bruscos de la temperatura si no se toma esa medida. pues pueden desprender la lente del cemento que la fija al dispositivo tubular inutilizable. Al concluir su utilización. se corresponda con el requerido para ese microscopio. sino porque resultan imprescindibles en el laboratorio para el examen de diferentes muestras.Si accidentalmente se produce derramamiento de agua. . . que no puede ser resuelto por ningún otro procedimiento que no sea la microscopía. separe el lente objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico. Las causas que afectan con mayor frecuencia su óptimo estado de funcionamiento y por consiguiente su eficacia son: el polvo. cerciórese de que el voltaje de la toma. no permita que se sequen por evaporación ya que pueden formarse costras o sufrir efectos oxidantes que deterioran su construcción y en consecuencia su funcionamiento.

Si después de realizada esta operación la suciedad persiste. para evitar que se salgan los lentes oculares y puedan dañarse. volviendo a colocar las lentes en la misma posición en que estaban. Del sistema mecánico. cerciórese de que el tornillo del cuerpo binocular lo mantiene fijo. haga rotar el lente sin sacarlo del tubo ocular. Sujete el microscopio con una mano por la base y con la otra agarre firmemente el brazo. .El vidrio con que se fabrican las lentes es blando. por estar muy impregnado el aceite. correspondiendo. las manchas rotan con la lente. para remover el polvo. Limpieza 1. 120 .El espejo se limpiará con un paño fino. no requiriendo cuidados especiales. basta con observar a través de ellas el campo microscópico. 2. La remoción del aceite de inmersión ya fue tratada en el acápite de cuidado. solo a un personal especializado. y cubra el microscopio con un tapacete de nylon con el mismo propósito. con igual cuidado externamente. que se utilice exclusivamente para eso o un paño de lino fino o gamuza para la suciedad. .Coloque la tapa a cada lente ocular para evitar que se afecte por el polvo.Para detectar la presencia de polvo o suciedad en las lentes oculares. Cuando se requiera su limpieza se debe emplear. si se detectan manchas. si persisten. que sean muy susceptibles a la erosión. Después de realizada la limpieza de la manera explicada colóquela nuevamente en el tubo ocular y compruebe que las manchas han desaparecido. de ser posible de pelo de camello.Si tuviera que trasladar el microscopio para otro sitio. para evitar que se produzca el mismo efecto que con el empleo del alcohol. es que está sucia. absteniéndose de contactar con el diafragma anular que se haya en su interior. . que de manera frecuente está ocasionada por la grasa de la pestañas y los cosméticos. sin desarmar el dispositivo.La limpieza de las lentes del condensador se hará. limpia la lente frontal del lente objetivo. Del sistema óptico. . en ese caso. realizando el traslado todo el tiempo con el equipo en posición vertical. . cuyo soporte no debe abrirse nunca.plear xilol. puede deberse a una insuficiente limpieza o que el polvo ha penetrado el interior del lente. desenrosque el tubito portador de las lentes y proceda cuidadosamente a su limpieza. . no lo empape. un pincel fino y plano. humedezca ligeramente el paño. de ahí. pues de lo contrario se corre el riesgo de que sufran un daño irreparable.

Aunque se emplearan lentes de vidrio.Los lentes que no estén en uso. a través de una imagen virtual. proporcionar una imagen ampliada del objeto real para hacer posible su observación a través del ojo humano. . .Para pulir las partes metálicas lustrosas. . removerla con xilol o gasolina. Estructura del microscopio electrónico En la actualidad se fabrican diferentes modelos de microscopios electrónicos. la ampliación del objeto real. platina. - MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Como ya se explicó en la parte inicial de este capítulo. ¿A qué se debe esta limitación?.No debe utilizarse alcohol para limpiar el microscopio pues tiende a deteriorar la pintura. proporcionada mediante una combinación de lentes y luz visible con un alcance máximo de 2000x. la longitud de onda de la luz visible que es de 400 a 700 m/µ . brazo. pero se diferencian en que el microscopio electrónico en lugar de luz incidente o reflejada utiliza electrones y en el de lentes de vidrio campos magnéticos. pudiera proporcionar más de 2000x.Si desea guardar los microscopios en sus cajas. Mantenimiento. . 3. deben ser colocados en dispositivos con tapa de rosca para preservarlos del polvo. ya que partículas separadas por menos de 200 m/µ escapan a su poder de resolución. Se limpiarán con un paño. utilizar un paño fino impregnado ligeramente con aceite de máquina exentos de ácidos. cerciorarse de que éstas no tenga humedad que creará un ambiente muy propicio para que las lentes se contaminen con hongos que resultan muy difíciles de remover. Sin embargo los electrones de alta energía tienen una longitud de onda muchísimo más corta que no exceden 0. . etc.La grasa vieja que se ha solidificado o adherido.El equipo debe recibir asistencia técnica especializada cada 6 meses.Lubricar periódicamente las cremalleras con grasa de buena calidad libre de ácidos. se logra con el microscopio óptico. . cuya combinación.5 m/µ lo cual le proporciona un poder de resolución que permite la observación de partículas por menos de una millonésima de mm. . limita esa posibilidad.La base. con el que se removerá el polvo y la suciedad de sus superficies. pero todos están constituidos básicamente por tres partes: 121 . El principio del microscopio óptico y el electrónico es el mismo.

g) Tubo óptico con lente ocular. Fig. los siguientes componentes que constituyen su sistema funcional: Filamento de tungsteno. h) Pantalla fluorescente. i) Panel de mandos. Objetivo magnético circular. que se haya colocado en posición vertical.1. el tubo presenta en el tercio superior un soporte de atril para la colocación de la preparación y en dirección descendente. c) Bomba de vacio. Pantalla fluorescente. En su interior se encuentran instalados. Una bomba de vacío. Un tubo de rayos catódicos. Un panel de mandos. Porta muestra. b) Condensador magnético circular. 2. diversas pa122 . 64: Microscopio electrónico: a) Filamento de tungsteno. Tubos de rayos catódicos Consiste en un tubo cilíndrico de más de 1 metro de largo por aproximadamente 50 cm de diámetro. Proyector de imagen intermedia. e) Muestra. Por la parte externa. 3. Condensador magnético circular. f) Proyector de imagen intermedia. d) Portamuestras. de arriba hacia abajo.

La imagen puede finalmente observarse directamente sobre la pantalla fluorescente o proyectarse sobre una placa fotográfica si se desea el registro permanente de la imagen. de lo contrario resultaría opaca a los electrones no pudiendo ser atravesadas por éstos. el ajuste de los campos magnéticos y el funcionamiento de la bomba de vacío. penetrando en el condensador magnético. se encuentra acoplado un anteojos binocular centelleante. 3. sin pérdida excesiva de detalles. Encender el equipo. 2. muy próximo a la base del tubo de rayos catódicos. los cuales se encuentran impedido de desplazarse en su presencia.000x o más. 6. Papel de mandos Está ubicado sobre la mesa de trabajo.000. para hacer factible la movilización de los electrones. ampliando su imagen hasta 2000x en forma análoga a como lo hace el lente objetivo del microscopio óptico.1 mm). con lo que se propicia que los electrones generados por el calentamiento del filamento se propaguen. 4.000 veces o más. Se coloca la preparación sobre el porta muestras. sometiendo el filamento de tungsteno a una potencia de 30 a 150 kv. En la parte inferior del tubo.lancas y manivelas que se emplean para corregir el enfoque. Funcionamiento 1. En la pared frontal presenta una pizarra con diversas escalas metradas que permiten monitorear y ajustar el funcionamiento del equipo. Se extrae el aire que se encuentra en el tubo. 5. Bomba de vacío Está instalada en el tercio superior del tubo. muy próximo a la base. mediante la bomba de vacío. con lo que se obtiene un aumento total de 1. para seguidamente concentrarse sobre el objeto y atravesarlo. para observar la pantalla fluorescente. donde ambas partes se encuentran instaladas. 123 . El proyector de imagen intermedia. La imagen formada por la pantalla fluorescente es ampliada de 4 a 6 veces por el anteojos binocular. la cual debe ser extremadamente fina (menos de 0. amplia la imagen unas 250. con un funcionamiento similar al del lente ocular del microscopio óptico.

Describa la forma de los lentes que se encuentran en el interior del condensador de campo brillante. 2. Desventajas En contraposición a su elevado poder de resolución. el objeto a observar y los lentes objetivo y ocular. 15. las diferentes partes del sistema óptico. Describa paso a paso. 3. CUESTIONARIO 1. Entiende por poder de resolución? 12. monta una preparación en láminas en el microscopio óptico y la enfoca. emplea primero un lente objetivo de 20x y posteriormente un lente objetivo de 40x ¿Cuál de los dos le proporcionará un campo microscópico más amplio? Fundamente su respuesta. 14. ¿Cuál es la función del revolver? 4. Describa como se forma la imagen del objeto observado con el microscopio óptico. 124 . 5. Clasifique los diferentes tipos de lentes objetivos. Sí Ud. Describa la trayectoria que específicamente va siguiendo el haz de luz al atravesar el condensador. como Ud. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión? 9. la microscopía electrónica tiene la ventaja de que la acción de los electrones resulta letal para los microorganismos por lo que no es posible observarlos en estado viable. 16. Nombre las diferentes partes del sistema mecánico del microscopio óptico. Para la observación de partículas víricas. ¿Con qué objetivo se utilizan los filtros? 11. Describa la forma que tienen las dos caras del espejo y especifique cuando se utiliza cada uno de ellas. 6. 2. Relacione en el mismo orden en que se encuentran. ¿Qué Ud. ¿Cuál es el poder de resolución del microscopio óptico? 13.Para la observación de estructuras bacterianas y de otros microorganismos. Precise cuál es la diferencia funcional entre el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. 10.Empleo 1. ¿Cuál es la función del diafragma? 7. 8.

¿Cuáles son las funciones que respectivamente tienen el diafragma anular y la placa de cambio de fase en la microscopía de contraste de fase? 19.17. ¿Cuál es la diferencia estructural entre un microscopio óptico y microscopio electrónico? 24. ¿Con qué finalidad se realiza la observación a través del microscopio estereoscópico? 23. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja más significativa del empleo de la microscopía electrónica? 125 . ¿Con qué particularidad se observa la imagen del objeto a través del microscopio estereoscópico? 22. ¿Describa las características estructurales y funcionales del condensador de campo oscuro? 18. 21. Explique las funciones del filtro primario y el filtro de barrera que se utiliza en la microscopía de fluorescencia. Describa la estructura del microscopio estereoscópico. 20.

CAPÍTULO 9
INSTRUMENTOS MECÁNICOS
INTRODUCCIÓN
La cantidad y variedad de investigaciones que se realizan diariamente en los laboratorios de microbiología clínica , han tenido una marcada tendencia a incrementarse progresivamente en los últimos años, en la misma medida en que estos servicios se han ido extendiendo a todas las unidades del sistema Nacional de Salud. La introducción de instrumentos mecanizados y automatizados para la realización de los diferentes procederes han venido a suplir en alguna medida los métodos tradicionales, con lo cual se ha logrado no sólo una mayor productividad, precisión y ahorro de recursos materiales y humanos, sino que su aplicación, interpone una barrera de bioseguridad que reduce significativamente los riesgos potenciales a los que se ven expuestos los manipuladores. La mecanización sustituye la labor del hombre, mediante el empleo de instrumentos técnicos, regulados por éste, mientras que la automatización comprende además un control intrínseco del instrumento mecanizado que ha sido diseñado para que se autorregule. En los laboratorios de microbiología se utilizan diversos instrumentos de este tipo, pero sin lugar a dudas uno de los empleados con mayor frecuencia es la pipeta mecánica.

PIPETAS MECÁNICAS
En la actualidad se comercializan varios tipos y modelos de pipetas mecánicas. Entre las más empleadas en los laboratorios de microbiología se encuentran: la pipeta de pistón clásica del tipo "Marbung", la del tipo "Jena" y la "Multicanal", que forman parte del sistema micro analítico Eppendorf. En estos tipos de pipetas el líquido se carga y descarga, mediante el accionar manual de la pipeta a una boquilla finamente cónica y puntiaguda de material plástico, que se inserta en el extremo inferior de la pipeta, de manera que el líquido aspirado pasa a la boquilla, pero no entra en ningún momento en la pipeta lo que permite su empleo reiterado, mediante el intercambio en cada ocasión de la boquilla plástica deshechable. 126

El índice de error, dado por los fabricantes, para este tipo de pipeta es de sólo un 1%. Estas pipetas se emplean para medir volúmenes de líquidos en el rango de microlitros. Un microlito es equivalente a la millonésima parte de un litro o la centésima parte de 1 mL.

PIpeta tipo Marburg
Este tipo de pipeta es de pistón fijo, estando diseñada para cargar o descargar solamente, un volumen determinado en microlitros, el cual está indicado mediante un número impreso en la parte superior de la pipeta. Como cada pipeta de este tipo, está limitada para aspirar o dispersar exclusivamente, un volumen fijo para el que ha sido diseñada, los fabricantes la comercializan en serie de: 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 900 y 1000 mL. Estructura externa

Fig. 65 : Pipeta mecánica tipo Marburg

Está estructurada con una cánula cilíndrica de material plástico de unos 2 cm de diámetro, estriada transversalmente para facilitar la sujeción manual. La parte superior de la cánula tiene insertada una anilla plástica prevista lateralmente de un pequeño saliente plano en posición horizontal, que sirve de tope al dedo índice, una vez que la pipeta esté empuñada. Por encima de la anilla, la pipeta se estrecha ligeramente en forma de un cono cortado por su vértice, en cuya pared se encuentra impreso un número que indica el volumen fijo que carga esa pipeta y sobre el número una franja que circula su diámetro, de color amarillo o azul, de varios mm de ancho. La franja de color amarillo distingue a las pipetas diseñadas para cargar 100 microlitros o menos y las de 127

color azul a las que se cargan más de 100 y hasta 1000 microlitros, teniendo esta última mayor diámetro. En el extremo superior de la pipeta se encuentra un botón cilíndrico insertado calibradamente en el orificio que se haya en la parte más estrecha del extremo distal cónico. Por debajo de la cánula se encuentra insertado un fino vástago cilíndrico, ligeramente cónico de material plástico, de unos 5 mm de diámetro, por cuyo extremo se inserta la boquilla plástica deshechable, cuyo color será igual al de la franja que circula la parte superior de la pipeta. Estructura interna

Fig. 66: Estructura interna de la pipeta mecánica tipo Marburg: a) Botón; b) Pistón cilíndrico; c) Muelle; d) Cerrador circular; e) Cilíndro; f)Pieza que cierra herméticamente la pipeta

En el interior de la pipeta se encuentra el sistema mecánico que hace posible, al ser accionado, su funcionamiento, interaccionando las diferentes piezas que lo conforman, de la siguiente manera: el botón que se encuentra externamente en la parte superior de la pipeta, contacta internamente con la parte superior de un pistón cilíndrico que se encuentra rodeado por un muelle flexible, cuyo extremo inferior contacta con el cerrador circular, una especie de zapatilla circular, que por su lado opuesto queda junto a una pieza cilíndrica que en las pipetas de menor calibre tiene insertado centralmente un mandril (aguja), para finalmente terminar en una pieza tubular que completa el sistema. Principio de su funcionamiento 1. Se procede a insertar ajustadamente una boquilla plástica deshechable en el extremo del vástago que sea del mismo color (amarillo o azul) que el que tiene la franja que circula el extremo superior de la pipeta. 128

Fig. 67: Ajuste de la boquilla plástica deshechable a la piapeta

2. Se empuña la cánula, de manera que el borde del dedo índice quede en contacto con el saliente de la anilla que se haya sobre la cánula y la yema del dedo pulgar sobre el botón que se encuentra en el extremo superior de la pipeta.

Fig. 68: Manera de empuñar la pipeta

3. Al presionar con el dedo pulgar el botón hacia abajo, hace que se comprima el muelle, lo que provoca, que el pistón y el resto del sistema mecánico desciendan. 4. Sin dejar de presionar el botón, se introduce la punta de boquilla deshechable, varios mm en el interior del líquido que se desea extraer y se procede a aflojar suavemente la presión del dedo. Esta acción hace que todo el sistema asciende hasta ocupar su ubicación normal, provocando la succión que hace que pase al interior de la boquilla, un volumen exacto de líquido, que será específico para cada pipeta de pistón fijo. 129

5. A continuación se introduce la punta de la boquilla en el tubo de ensayo de manera que quede sobre la pared interna del tubo, procediendo a presionar el botón para verter el volumen fijo de líquido. 6. Si se desea tomar una muestra diferente, basta con intercambiar la boquilla deshechable y repetir la operación.

Fig.. 69: Procedimiento para verter el líquido en el tubo receptor Nota: El intercambio de boquilla debe realizarse con la mano enguantada, depositando la utilizada en un vaso de precipitado con solución desinfectante.

Pipeta del tipo Jena

Fig. 70: Pipeta tipo Jena: a) Botón giratorio; b) Ventanilla con escala en microlitros

130

teniendo en común. . para que aspire o disperse un volumen deseado. partículas sólidas. células. cada una de las boquillas succiona o dispersa el mismo volumen de líquido de manera simultánea.El principio funcional es similar al de la pipeta del tipo Marburg. Esta pipeta dispone además en su parte superior. pero difieren en que. como 131 .El rotor. con pesos específicos diferentes. etc. Entre los más empleados se encuentran los siguientes: . que se encuentre en suspensión. compactándolos. ubicadas unas al lado de las otras. de una ventanilla rectangular provista en su interior de una escala numérica que va aumentando o disminuyendo el valor de los dígitos en la medida en que el botón sea girado hacia delante o hacia atrás. También puede servir para separar líquidos miscibles mezclados entre sí. De esta manera se ajusta previamente la pipeta para que trabaje a un volumen deseado en números externos y décimas de microlitros. microorganismos. en lugar de una sola boquilla deshechable. lo que le da un aspecto de rastrillo. aunque difieren en el diseño. . con lo que consigue variar su nivel de ubicación. que son accionados mediante energía eléctrica. Cuando se acciona la pipeta. Las centrífugas La centrifugación es un procedimiento mecánico mediante el cual se pueden separar de un líquido. lo que propicia que se pueda ajustar el grado de succión de la pipeta dentro de un determinado rango.El agitador. comercializándose distintos modelos. EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS Los equipos electromecánicos son utilizados en el laboratorio para la preparación de diferentes muestras o como parte de la realización de diversos procederes. Pipeta del tipo multicanal Este tipo de pipeta se sustenta en el mismo principio funcional.Las centrífugas. están diseñadas para que se le puedan insertar 8 o más boquillas. mediante una sedimentación forzada en el fondo de un tubo de ensayo. La particularidad estructural que tiene este tipo de pipeta es que está provista de un botón giratorio en su parte superior. mediante el cual se hace descender o ascender al sistema mecánico. muy próximo al botón giratorio.

1. en forma de barra más o menos plana. b) Portatubos. La mayoría de las centrífugas son eléctricas y solo algunos modelos ya en desuso se accionan manualmente. 72: a) Cabezal. Partes de la centrífuga Fig.Cabeza: Es una pieza metálica. 71: Esquema de las centrífugas En la actualidad se fabrican diversos modelos de centrífugas. formando una cruceta cuando se trata de centrífugas de dos tubos. 8 ó más tubos (siempre en número par) el cabezal adoptará la forma que tienen los rayos de una carreta con tantas barras fijas en posición horizontal. pero todas tienen el mismo principio funcional. donde los compuestos que lo forman. como tubos pueda centrifugar. En el extremo de cada 132 .las emulsiones. 6. Diseño industrial de las centrífugas Fig. Como la centrífuga puede estar diseñada para 4. que se inserta mediante un orificio central al eje del motor. no pueden ser separados mediante la gravedad (sedimentación) o la filtración.

que indica cuándo el equipo está encendido. en suspensión. en tanto que los segundos. Estos porta tubos tienen colocado en el fondo. la fuerza centrífuga sería desigual. 6. Bombillo piloto: Es un pequeño bombillo. por su parte interna. 5. que se sustenta que en todo el cuerpo que se mueve en torno a un punto central. se deberá llenar en segundo tubo con agua. Principio técnico Está determinado por la fuerza centrífuga. Los porta tubos de angulación son fijos. con similares requisitos y ser colocado en el punta tubo que se encuentra en el lado opuesto que fuerza el que purza la muestra. Si se va a centrifugar una sola muestra.m). diseñada para colocar dos tubos. generalmente de color rojo. ya que de lo contrario. quedan articulados al cabezal. Motor eléctrico: Tiene la función de imprimir movimientos de rotación al cabezal mediante velocidades controladas por medio de un reóstato que varía la intensidad del flujo eléctrico.p. Tacómetro o velocímetro: Se utiliza para ir registrando la velocidad de rotación del cabezal en revoluciones por minutos (r. lo que le permite adoptar una posición horizontal cuando la centrífuga alcanza altas velocidades. que se utilizan para introducir los tubos de vidrio que contienen el material que va a ser centrifugado. Para lograr un buen balance de los tubos se puede utilizar un nivelador de tubos. lo que ocasionaría un desbalance que provocaría vibraciones y sacudidas de la centrífuga con la consiguiente ruptura de los tubos y el desajuste del equipo. tengan el mismo peso.barrera se inserta un porta tubo el cual puede ser de angulación o de suspensión. Reloj de intervalo: Se utiliza para regular el tiempo de cada centrifugación. deberá emplearse el mismo tipo de tubo y asegurarse de que el volumen de líquido en ambos sea similar. la cual será directamente proporcional a su masa. se desarrolla una fuerza que tiende a separarlo de dicho centro. un taco de goma que sirve de amortiguador a los tubos de vidrio durante la centrifugación. quedando en posición oblicua respecto al eje. 2. Balance de los tubos Para el buen funcionamiento de la centrífuga es indispensable que los tubos queden colocados en una posición diametralmente opuesta. 3. Porta tubos: Son tubos metálicos. determinándose la igualdad en peso mediante la sincronización de su equilibrio. Cuando no se disponga de este instrumento. uno a cada lado. que es una especie de balance. 4. 133 .

para evitar la exposición a los aerosoles. Si la centrífuga no tuviera reloj de intervalo. de manera que vaya marcando gradualmente la velocidad (r. Espere a que la centrífuga se detenga. 7. deben tener el mismo tamaño y peso. 2. Cerciorarse de que el botón que regula la velocidad del tacómetro o velocímetro este en "0". 4. hasta que indique el tiempo de centrifugación deseado. Conectar el equipo a la red eléctrica 5. Llenar los tubos hasta 1 cm por debajo del borde superior. espere 2 ò 3 minutos antes de abrir la tapa. 3. Abrir la tapa de la centrífuga.Fig. 11. Girar el botón del velocímetro lentamente.m. desconéctela de la red eléctrica y ciérrela. Accionar el interruptor para encender el equipo. 6. 10. apague la centrífuga. Introducir los tubos con las muestras en el interior de los porta tubos.) en el tacómetro hasta alcanzar la deseada.p. Si se hubiera centrifugado material contaminado. lo cual se puede determinar observando el velocímetro. Cerrar la tapa de la centrífuga. 9. 73 : Nivelador de tubos Funcionamiento 1. 2. teniendo especial cuidado de que quedan diametralmente apuestos (uno frente al otro) están debidamente balanceados en peso. Medidas de cuidados y conservación 1. Los tubos colocados en lados apuestos. 134 . Extraiga los tubos. Girar el botón del reloj de intervalo. 8. proceda a apagarlas tan pronto concluya el tiempo previsto de centrifugación.

Cuando se produzcan rupturas de tubos. los porta tubos serán extraídos.D. 5. En el laboratorio de microbiología se utiliza regularmente para mezclar el suero con la emulación de antìgeno para las pruebas serologícas de V. 74: El rotor: a) Superficie plana giratoria. sobre la cual se encuentra una plataforma giratoria de unos 30 cm2. Diseño del equipo Fig. b) Botón del "timer". 4.L. EL ROTOR El rotor se utiliza para mezclar mecánicamente las muestras con los reactivos. Periódicamente debe limpiarse el interior de la centrífuga con un paño húmedo para eliminar el polvo y la suciedad.R. Cualquier material que se derrame sobre la centrífuga debe ser eliminando de inmediato.3. 135 . Mide aproximadamente 30 cm2 x 15 cm de altura. procediendo a la eliminación de los restos de vidrio y limpiándolos escrupulosamente. lográndose una mejor homogenización. estando provisto de una superficie plana de unos 35 cm2. que la que se puede conseguir por procedimientos manuales. c) Botón del velocímetro El rotor es un pequeño equipo eléctrico que tiene la forma de un cajón.

Cualquier material que se derrame sobre la superficie de la plataforma giratoria o el equipo. Cuidado y conservación 1. rodeados en todo su perímetro por una escala numérica. En el laboratorio de microbiología tiene diversas aplicaciones. que indica cuando el equipo está encendido. entre las empleadas se encuentra la homogenización de esputos. que al ser colocada adecuadamente. Como la plataforma giratoria no queda fija. EL AGITADOR El agitador se utiliza para mezclar muestras muy difíciles de homogenizar por procedimientos manuales debido a su densidad o mucosidad. 3. algunos modelos disponen por uno de sus laterales de una presilla. Concluido el tiempo. Accione gradualmente el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir en la escala con la velocidad de rotación por minutos (r.m. Se debe verificar sistemáticamente que las rotaciones de la plataforma giratoria se correspondan con la indicada en el velocímetro. Coloque la cristalería con la muestra sobre la superficie de la plataforma giratoria.p. hasta hacerlo coincidir en la escala numérica con el tiempo deseado de rotación. debe limpiarse de inmediato. Funcionamiento 1. Muy próximo a estos botones se encuentra un pequeño bombillo. impide que esa situación ocurra. Cuando se detecte alguna diferencia se debe engrasar el equipo y si eso no resuelve el problema solicitar el servicio de un especialista. 4. llevar el botón del velocímetro a "0" y desconectar el equipo de la red eléctrica. Accione el botón del "timer". Conecte el equipo a la red eléctrica. 5. el primero corresponde al "timer" o reloj de intervalos y el segundo al velocímetro. 2. se encuentran insertados dos botones. el equipo se apagara automáticamente.En la pared frontal del equipo. generalmente de color rojo. 136 . 2. para evitar su desplazamiento por colisiones accidentales.). 3. procediendo a retirar las muestras.

haga un girar en retroceso el botón del velocímetro hasta ubicarlo en "0" y desconecte el equipo de la red eléctrica. 75: El agitador: a) Plataforma oscilante. lentamente. Posee igualmente un "timer". 2. retirar las gradillas de la plataforma. 3. el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir con la velocidad deseada. se desplaza con movimientos cortos. Cuidado y conservación Similar a las que se aplican al rotor. la mezcla u homogenización de las muestras. Coloque las gradillas con las muestras sobre la plataforma oscilatoria y fíjelas con los dispositivos que dispone el equipo para que las gradillas no se vayan a caer cuando se le aplique el movimiento propio del equipo. propiciando mediante las sacudidas que ocasiona. 5. Gire el botón del "taimer" hasta hacerlo coincidir con la escala que indique el tiempo de agitación deseado. 137 . que en lugar de rotar . b) Botón del "timer'. Funcionamiento 1. c) Botón del velocímetro Este equipo se fabrica de diferentes tamaños. Gire. frontales y de retroceso en forma continua a velocidad regulable.Diseño del equipo Fig. Concluido el tiempo de agitación. Conecte el equipo a la red eléctrica. Al igual que el rotor. con capacidad suficiente para que puedan ser colocados en su superficie varias gradillas. presenta en su superficie una plataforma. La mayoría de los modelos tienen forma rectangular. un velocímetro para determinar el desplazamiento por minuto y un bombillo piloto. 4.

Estructura Fig. Botón indicador de la temperatura del potenciómetro. como por ejemplo: en la elaboración de medios de cultivo. donde el pH debe ser ajustado de acuerdo a los requerimientos de los diferentes grupos y géneros bacterianos que pretendamos cultivar. En el trabajo microbiológico. lo que permite conocer con precisión su grado de acidez o basicidad. En la pared frontal o sobre la superficie se haya un galvanómetro provisto de una escala impresa del 0 al 14 que se complementa con una aguja insertada por su parte posterior a un pequeño eje situado en su centro y borde inferior. Debajo del galvanómetro se encuentran articulados al menos tres botones giratorios: 1. la determinación del pH de una disolución. Este botón se hace girar según se requiera hacia la posición STD. por estar diseñados para determinar las concentraciones de iones hidronios que posea. midiendo unos 30 cm2 x 8 cm de ancho. Botón para mover la aguja e indicar en la escala el pH de la solución buffer. Botón de lectura. resulta primordial en diversos procederes. 2. para lograr su desarrollo óptimo.BY (En espera) o hacia la posición indicada con la palabra READ (Lectura) 138 . 3. son instrumentos eléctricos que se utilizan para medir el pH de una disolución. aunque el tamaño varia de acuerdo al modo comercializado por los diferentes fabricantes. b) Galvanómetro Los potenciómetros tienen la forma de una caja rectangular.POTENCIOMETROS Los potenciómetros o pHmetros. 76 : Potenciómetro: a) Eléctrodos. puesto que el grado de tolerancia a la acidez o a la basicidad resulta diferente para cada uno de ellos.

e. Electrodo de referencia: Generalmente presenta un mayor diámetro y se fabrica con calomel (Hg2 Cl + K Cl) un material estable. Estructura de los electrodos del potenciómetro o pHmetro: Consisten básicamente en un tubo de vidrio de unos 10 ò 12cm de largo x 1 o 1. permaneciendo inalterado independientemente de la concentración de iones hidrontes o hidroxilos que contengan la disolución. cuyo extremo terminal queda en contacto con el material sensible o indiferente a los cambios de pH. provisto de una presilla habilitada para la colocación y sujeción de dos electrodos. 139 . Etc. 2.() de las disoluciones a investigar.Por el lateral derecho.m. para ser convertida y presentada por el galvanómetro con un valor de pH. El tubo es atravesado longitudinalmente por un alambre de platino. El electrodo transforma la energía química en energía eléctrica. En los pHmetros modernos. cuya porción terminal inferior puede ser redondeada. El otro extremo del alambre queda empalmado a un cable eléctrico que se conecta en el fondo del equipo. como por ejemplo: hidrógeno.5cm de diámetro. quinhidrona. el pHmetro tiene articulado en posición vertical un soporte universal metálico. en consecuencia la fuerza electromotriz por la celda electroquímica es comparada con la del potenciómetro y la diferencia es medida en voltios. Electrodo indicador: En su extremo distal. mediante el empleo de las pilas voltais preparadas con los electrodos que marcan la diferencia de potenciales entre ambos. en contacto con el alambre se encuentra el material sensible a los cambios de pH. mas afinada o en forma de un pequeño bulbo redondeado similar a un densímetro. Ambos electrodos se unen mediante puentes salinos (K CL o NH4 NO3) cuando se acciona el equipo Principio funcional Se basa en la medición de las fuerzas electromagnéticas (f. Tipos de electrodos 1. Electrodos Concepto: Los electrodos no son mas que el polo (Positivo: Ánodo-Negativo: cátodo) de una pila eléctrica. el galvanómetro ha sido sustituido por una escala digitalizada.

BY. Una disolución es ácida cuando la cantidad de iones hidrionios (H30+) es mayor que la de iones hidroxilo (0H-) y viceversa. Conecte el equipo a la red eléctrica y asegúrese de que el botón se encuentre en la posición STD. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 10-14 _________________________10-9________________________10-0 Ácido Alcalino Por lo tanto. Extraiga los electrodos de la solución buffer y proceda a enjuagarlos en un recipiente que contenga agua destilada. Sumerja los electrodos en una solución buffer de pH conocido. 140 . Procedimiento para el manejo del potenciómetro Estandarice el aparato 1. Accione el botón y haga coincidir la aguja en el número 7 de la escala de pH. aun cuando a dicha solución se le agregue un ácido o una base fuerte. (por ejemplo: pH 7). 3. el pH no es otra cosa que el logaritmo inverso de la concentración de iones hidrógenos en una disolución. Cuadro 6: Gráfico de logaritmo inverso de iones hidrógeno.Medición del pH La medida del pH es una forma convencional de indicar la concentración de iones hidrionios o de iones hidroxilo en una escala del 0 al 14. Solución Buffer: Las soluciones buffer o amortiguadores o tampón como también se les conocen están compuestas por dos o más sustancias que evitan la producción de cambios significativos en la concentraciones de iones hidrionios. 2. ya que las sustancias ácidas ceden electrones y por consiguiente retienen hidrógeno en tanto que las básicas son capaces de aceptar protones.

15. resulta favorable para la bioseguridad del laboratorio. 14. 6. ¿Qué relación existe entre la banda coloreada de la parte superior de la pipeta Marburg y el de la boquilla desehechable? Describa como se activa el sistema mecánico de la pipeta cuando se ejerce presión sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. La aguja oscilará. 3. el pH. en lugar de tomar la de la solución. Describa como opera la pipeta Marburg cuando se retira la presión del dedo sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. 2. 2.BY a READ. 12. Nombre los diferentes tipos de pipetas mecánicas que usted conozca. Si se requiere realizar una nueva lectura lave los electrodos previamente con agua destilada. ¿Cuál es la diferencia funcional entre la pipeta tipo Marburg y la pipeta tipo Jena? ¿Qué característica particular presenta la pipeta multicanal? Fundamente porque causa el empleo de las pipetas mecánicas. si lo prefiere utilice como referencia la temperatura ambiente. 7. ¿Cuál es la función de tacómetro? ¿Qué requisitos deben tenerse en cuenta al colocar los tubos en la centrífuga? Explique en orden cronológico. CUESTIONARIO 1. Describa la estructura de la pipeta mecánica tipo Marburg. los pasos que usted debe dar para realizar una centrifugación. 10. 5. Accione el botón cambiándolo de la posición STD. 13. 141 . hacia la izquierda o la derecha indicando en la escala. Lectura 1. ¿Cuáles son las ventajas de la mecanización y la automatización sobre los métodos tradicionales de laboratorio?. También. 9. Tome la temperatura de la solución donde se medirá el pH y accione el botón indicador de temperatura del potenciómetro. 4. 11. 8.4. Proceda a sumergir los electrodos en la solución cuyo pH se desea determinar. ¿Con qué objetivo se utilizan las centrífugas en el laboratorio? ¿En qué radica la fuerza centrífuga? Describa la estructura del cabezal de las centrífugas.

16. ¿Cuál es la diferencia funcional entre los diferentes tipos de electrodos del pHmetro? 24. ¿Para qué se utiliza el agitador en el laboratorio? 21. ¿Qué mide el velocímetro del rotor? 20. 142 . Explique como usted estandariza el potenciómetro 26. ¿Qué es lo que marca el galvanómetro del pHmetro? 25. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del agitador? 22. Describa los pasos que debe efectuar para determinar el pH de una disolución con el empleo del pHmetro. ¿Para que se utiliza el rotor en el laboratorio? 18. Haga referencia a los cuidados que debemos observar para el buen funcionamiento y cuidado de la centrífuga. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del rotor? 19. 17. ¿Para qué se utiliza el potenciómetro en el laboratorio? 23.

DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS Las balanzas que se utilizan corrientemente en los laboratorios de microbiología clínica son las granatarias y las analíticas digitales. Unidades de medición micrometricas. Existen en el mercado múltiple tipos y modelos de balanzas. en las que el punto de apoyo se encuentra exactamente entre el punto de potencia y el punto de resistencia.CAPÍTULO 10 BALANZAS INTRODUCCIÓN Las balanzas son instrumentos que se utilizan para medir el peso relativo de los cuerpos... Gramo Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Ejemplo para pesar la masa de . con piezas de peso certificado denominadas pesas. Tabletas de medicamentos. Grano de polvo o gota de un liquido. que van desde las que se utilizan para medir el peso en tonelada hasta las que se emplean para medir con precisión fracciones de Mg. Estructura bacterianas Un virus Una molécula Un átomo PRINCIPIO El funcionamiento de las balanzas se sustentan en el principio físico de las palanca de primer grado. 143 . ya que las de precisión o analíticas de tipo mecánico o eléctrica se emplean solo ocasionalmente. Ejemplo:el cachumbambé. Unidad básica (Gramo) Unidad micro métrica Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Atogramo Equivalente a la Milésima parte de un .. los cuales están diseñados para diversas aplicaciones. mediante la comparación..

que al no estar topados en su interior posibilitan que la barra vertical penetre aun mas. Las barras horizontales quedan articuladas exactamente por su posición media. las vibraciones o el polvo circulante puede influir en la determinación del peso real. que le sirve de punto de apoyo.1 a 500g o más. articuladas por sus respectivos extremos a una barra metálica. las balanzas granatarias son empleadas cuando no se requiere conocer con precisión el peso del objeto. plana o cilíndrica. con la que se puede determinar mecánicamente. formando una cruz con los extremos ligeramente curvados hacia arriba. 77: Balanza granataria de dos platillos(Balanza de Roberval) Esta estructurada por dos planchuelas paralelas de acero. de menos peso que el señalado. las de dos platillos y las de un platillo. queda introducido en un orificio existente en ambos extremos de la base. 144 . en posición vertical. de unos 30 cm de largo. determinados factores como: las corrientes de aire. Cualquier objeto que se pretenda pesar con este tipo de balanza. en posición horizontal. Balanza de dos platillo (Balanzas de Roberval) Fig. los resultados que se obtengan serán dudosos. como por ejemplo: para determinar el gramaje de un medio de cultivo deshidratado en polvo. mientras que su extremo inferior. que sirven de soporte para la colocación de los platillos. si el peso del objeto es superior al de las pesas que se hayan en el otro platillo. Se fabrica dos variantes de balanzas granatarias. ubicada en el centro de la balanza. ya que por ser demasiado ínfimo. al tipo de balanza. el peso de un cuerpo que se encuentra entre 0.Balanzas granatarias Se denomina así. mediante un pasador al extremo superior de una columna sólida. formando un paralelogramo rectángular. Sobre el extremo superior de las barras verticales se encuentran atornilladas dos planchuelas metálicas de unos 2 cm de ancho.

que permiten determinar las oscilaciones de la aguja hacia la derecha o la izquierda de la escala. presenta de 5 a 10 líneas verticales equidistantes. quedando en posición vertical. cápsula de porcelana. proceda a accionar las tuercas de los tornillos de ajuste que se hayan a ambos extremos de la balanza.La barra o planchuela que queda frente al manipulador esta grabada con una escala metrada en gramos. etc) pesándolo previamente. la aguja del fiel al detener su movimiento lo hará justamente en el "0". Cerciórese de que los platillos estén limpios. La parte superior de la aguja queda junto a una escala grabada en cuyo centro esta el "0" y hacia ambos lados. por ejemplo 5-5 ò 4-4. Si las oscilaciones fueran desiguales. vidrio reloj. vaso de precipitado. vacíos y colocados correctamente sobre las crucetas. provista de una pesa deslizante para ser movida hacia la izquierda o hacia la derecha hasta hacerla coincidir en la escala con el peso que se desea medir. Mueva la pesa deslizante de la barra graduada hacia la extrema izquierda. hasta conseguir que las oscilaciones sean parejas. 2. hasta que marque "0" g. siendo el resto de la estructura similar. utilice un recipiente adecuado (Papel. Nunca coloque los materiales directamente so145 . El fiel en forma de aguja esta articulado por su extremo inferior a las barras horizontales. Si las oscilaciones son coincidentes. en lugar de dos barras horizontales tienen una sola carente de grabación en g. 3. Ajuste el fiel de la balanza a "0". Desestime las 2 o 3 primeras oscilaciones y posteriormente compare las que se producen hacia la izquierda del "0". para tener en cuenta ese dato al determinar el peso del material (tara). Algunos modelos de este tipo de balanza. para lo cual debe observar como la aguja oscila libremente sobre la escala a ambos lados del "0". Procedimientos para efectuar la pesada Una vez que el fiel de la balanza se haya ajustado a "0" proceda de la siguiente manera: 1. Funcionamiento Antes de efectuar la pesada: 1. perpendicularmente a la columna de la balanza. Si va a pesar algún material en polvo o líquidos.

por donde se toman con una pinza de disección.5. Caja de pesas Fig. Para efectuar la pesada. hasta que la aguja del fiel marque "0". Internamente se encuentra tapizado de terciopelo. acero inoxidable o aleaciones no magnéticas.4. etc. En los orificios de la parte anterior del estuche. Este tipo de pesas consiste en una laminilla plana de metal con forma cuadrada o rectangular. 78 : Caja de pesas Consiste en un pequeño cofre cuadrangular provisto de una tapa articulada con bisagras en su parte superior. bre el platillo.0.05. se colocan las que tienen menor peso que las referidas. mueva hacia la derecha de la barra grabada la pesa deslizante.3.0. a menos de que se trate de sólidos limpios. Conjuntamente con las pesas. dentro del estuche se encuentra una pinza que es utilizada para extraerlas del estuche. colocarlas sobre el platillo y posteriormente reintegrarlas.20. pulidas y brillantes. hasta que indique el peso adecuado. que como es obvio sera menor (0.0.0.2. 146 . una barra metálica.1. una sortija.2. como por ejemplo.02.30. extraiga de la caja de pesas las necesarias y colóquelas sobre el platillo de la derecha.0. que presenta uno de los bordes doblados en un ángulo de 900 por donde se toman con las pinzas. Si fuera insuficiente. presentando linealmente unos 20 orificios de diferentes diámetros donde se introducen las pesas.0. Al igual que las cilíndricas tienen grabado el peso. En los orificios que están situados de la mitad hacia atrás del estuche se colocan las de mayor peso.10. Estas pesas son cilíndricas.2.01. A continuación coloque el recipiente seleccionado sobre el platillo del lado izquierdo y vierta poco a poco en su interior el material que desea pesar. estando provistas de una pequeña prominencia en su parte superior.03. Todas estas pesas se fabrican básicamente con latón.3 y 0.50 o 100g) las cuales pueden combinarse para obtener cualquier peso en ese rango.5g). por su orden en la caja. Cada una de estas pesas tiene grabado el peso (1.40.

2.generalmente. según el modelo. sino en el extremo izquierdo. Conserve limpias las piezas.de una muesca sobre cada numero de la escala para fijar la pesa en el punto exacto. teniendo cada una de ellas una pesa deslizante. 79 : Balanza granataria de un solo platillo (tipo Ohaus) A diferencia de la balanza de dos platillos. sino de flecha y la escala se encuentra en el extremo derecho y no arriba con en la de dos platillos. BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA Este tipo de balanza se utiliza cuando se requiere determinar con precisión el peso de pequenas cantidades de materiales u objetos. El procedimiento para efectuar la pesada es similar. 147 . Coloque la balanza sobre una superficie nivelada en un lugar donde no se produzcan vibraciones y que la temperatura así como la humedad relativa sean estables. se encuentran debajo de los platillos. y están grabadas con diferentes escalas en gramos. no en el centro. antes de guardarlas en la caja cepíllelas con un pincel de pelo de camello. Las barras horizontales son dos o tres. las cuales no deben ser colocadas en otro lugar que no sea los platillos. con la diferencia de que esta balanza no utiliza las piezas certificadas de la caja de pesas. Cuando se efectúan pesadas de productos en polvo. Mantenga las balanzas escrupulosamente limpias. parra evitar que el polvo o la su ciedad puedan afectar la fiabilidad del peso. 3.en su parte superior . Balanxa de un solo platillo (tipo Ohaus) Fig. Los tornillos de ajustes. El fiel de estas balanzas . en especial los platillos. cuyo peso sea de décimas o centésimas de gramos o pocos gramos. Generalmente estas barras están provistas .no es en forma de aguja. esta balanza tiene la columna que sirve de punto de apoyo.PRECAUCIONES 1.

el polvo circulante o la humedad. b) Cruz. Columna: La columna sirve de base al punto de apoyo de la balanza. d) Platillos. 80: Balanza de precisión mecánica: a) Columna.quedando debidamente nivelado en posición vertical. incoloro y transparente. Consiste en un tubo de metal inoxidable de unos 20 cm de largo x l.5cm de diámetro. que posee en el centro de su parte inferior un pequeño tirador que se utiliza para subir o bajar la puerta por un mecanismo de corredera (similar al de una guillotina) diseñado para que la puerta se quede fija.De acuerdo a su diseno se clasifican en: mecánicas. eléctricas y digitales.que al igual que los marcos que sirven para fijar las paredes y la parte superior de cristal. e) Dispositivos para subir o bajar la cruz. sobre una base de varios cm de altura. en cualquier altura en que sea detenida. El extremo de su parte superior esta estructurado con una planchuela metálica en posición horizontal. h) Cuchilla Para evitar inexactitudes durante la pesada. lo cual se comprueba mediante la observación de uno de los dos niveles de agua circulares que se encuentran en la superficie Partes de que consta l. g) Chapa. que se encuentra atornillado por su base en el centro del piso de la urna. que son utilizados para nivelar la balanza. este tipo de balanza se estructura por el fabricante dentro de una vitrina de cristal . c) Fiel. f) Soportaplatillos. La base está sostenida por un tornillo en cada uno de su ángulos . debido a la influencia de las corrientes de aire. sin caerse. generalmente es de madera o material plástico. Balanza de precisión mecánica Fig. En la pared anterior que queda frente al manipulador se encuentra incertada la puerta de la vitrina. la cual está provista de un marco independiente. de unos 40cm cúbicos. en dirección al manipulador. La superficie de la planchuela tiene 148 .

perpendicularmente a la columna. 2. donde se observa el 0 en el centro y numeraciones iguales hacia ambos lados.que adopta una forma triangular con el vértice hacia abajo en cuyo extremo distal presenta un corte cóncavo. Las aristas de las tres cuchillas deben estar situadas en el mismo plano. de forma circular. suficientes para aligerar su peso sin que por ello pierda rigidez a la flexión. de unos l6cm de longitud.por donde se cuelgan los platillos. Un medio giro del botón hacia la derecha. cuyas tuercas se utilizan cuando se requiere nivelar la balanza. tiene insertado un prisma de ágata de forma triangular. que hace que los platillos queden suspendidos.en cuya cavidad se inserta una placa de acero o ágata . el cual se haya articulado por su porción posterior a un botón giratorio que se encuentra en la parte externa de la base de la urna en su porción central. denominada "chapa".junto a una escala graduada desprovista de números cuyo centro representa al 0. Este dispositivo queda ubicado por debajo y muy próximo a la cruz. Los salientes ubicados en la parte inferior tienen insertada respectivamente una cuchilla con la arista dispuesta hacia arriba y apoyadas en una pequena placa del mismo material contenidas en los estribos. En el extremo lateral de cada estribo. teniendo su superficie plana y muy pulida. quedando en posición vertical. estando unido por su porción media a un eje que se encuentra introducido a todo lo largo de la columna. El extremo inferior es puntiforme y oscila como un péndulo. La cruz en ambos extremos laterales presenta dos salientes en forma de horquetilla angular denominada estribo . La cruz: Es una barra plana . 3. hace que el eje que atraviesa la columna se eleve. quedando de esta forma la cruz en equilibrio. se encuentra articulado un fino tornillo en posición horizontal.semejantes a un plato. el cvual será horizontal cuando el fiel de la balanza esté en 0. 4. Los platillos: Son dos piezas metálicas planas. denominado "cuchilla".provisto de una saliente por cada lateral. Debajo del semicírculo que forma la concavidad.forma de cajuela en U . Esta barra se caracteriza por tener varias perforaciones simétricas . por donde se inserta un alambre acerado rígido que describe una parábola algo angosta para factibilizar su colocación en los estribos de la cruz. Fiel: Sobre el centro de la concavidad de la cruz se encuentra atornillada una chapilla que sostiene por su extremo posterior a una larga y fina aguja que es el FIEL de la balanza.provocando que las piezas cilíndricas de la planchuela metálica 149 . una pequena pieza cilíndrica proyectada hacia fuera y en cada extremo un gancho semicircular del mismo material similar a la forma de las herraduras. A todo lo largo del margen superior tiene grabada una escala en mm. 5. Dispositivos para subir y fijar la cruz : Es una fina planchuela metálica muy rígida que tiene por la superficie de cada lateral. caracterizada por su dureza e inalterabilidad al contacto con el aire. cuyo vértice se apoya sobre la chapa de la columna.

Soportaplatillos :Son dos discos articulados respectivamente a un fleje metálico recubierto de fieltro. estando separados de estos.con el cual. procediendo a quitar o poner las pesas o anadir o quitar producto en dependencia de los objetivos de la pesada. denominados jinetillos . proceda a accionar los tornillos de nivelación de los extremos de la cruz. aproximadamente por lcm . Cerciorese de que la balanza esté nivelada.para evitar que la cuchilla esté innecesariamente en contacto con la chapa. PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA l. hasta que las oscilaciones sean iguales. Suba los portaplatillos. para lo cual observe la ubicación de la burbuja de aire en el nivel. teniendo la precaución de colocar en el centro la pieza de mayor peso y a su alrededor las de menos peso. Resulta indispensable realizar esta acción cuando no se esté realizando la pesada. para lo cual haga bajar la cruz con los platillos vacios y observe las oscilaciones del "fiel" junto a la escala graduada. se consigue que éstos suban y entren en contacto con los platillos. que tienen forma de gancho. 2. 3. se encuentra el utilizado para accionar los portaplatillos.seguidamente tome con la pinza las pesas y situelas por orden de peso (de mayor a menor) sobre el platillo de la derecha. se bajan los portaplatillos para que oscilen libremente y se pueda determinar el peso.los cuales se deslizan a lo largo de la regla grabada que se encuentra en la cruz. los cuales quedan ubicados debajo de los platillos. 4. baje los portaplatillos y observe las oscilaciones del fiel.propiciando que el filo de la cuchilla no roce innecesariamente con la chapa durante esta acción. proceda a girar convenientemente los tornillos donde se apoya la balanza hasta lograr que la burbuja esté en el centro del nivel. 5. Si se percata de que son diferentes hacia uno u otro lado del cero. Cuando el material a pesar y las pesas estén colocados sobre los platillos. Deposite el material a pesar en un recipiente apropiado (previamente pesado) y colóquelo en el centro del platillo de la izquierda. con el objetivo de que no pierda el filo. lo cual afectaría su exactitud. impidiendo que oscilen cuando se le esté añadiendo algún peso. Determine el punto "0" de la balanza. utilice los hilos de platino. 6. Si se quiere determinar el peso de un objeto que tenga un peso inferior al mg. de agua que se encuentra en la superficie de la base de la balanza. Si se encuentra en una posición excéntrica. con peso cerificado.contacten con la parte inferior de la cruz y la eleve. Del lado izquierdo del botón para fijar la cruz. Cierre la balanza.separando la cuchilla de la chapa para finalmente quedar estática debido a la presión del dispositivo. 150 .

. ya que éstos le comunican humedad y suciedades que alteran el peso. como por ejemplo: lana de vidrio embebida en ácido sulfúrico concentrado o pequeños gránulos de cloruro de calcio anhidro. PRECAUCIONES . Suba la cruz. . e) Botón para la graduación de la precisión del indicador digital. b) Botón para el ajuste del punto "0".6. BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA Fig.En los ángulos de la urna coloque un pequeño recipiente que contenga un desecador con el objetivo de que absorba la humedad y mantenga secas la atmósfera en el interior de la urna.retire el material ya pesado y con el empleo de la pinza retire las pesas por su orden de menor a mayor peso.Exclusivamente los sólidos se pueden colocar directamente sobre el platillo. donde no existan vibraciones. d) Indicador digital. 151 . cambios de temperaturas o humedad.Limpie el interior de la balanza. Al concluir la pesada procesa a subir los portaplatillos. . h) Orientador de la dosificación.baje los portaplatillos y cierre la balanza. en especial los platillos. g) Palanca de retención. antes y después de su uso. . c) Platillo.Garantice que la balanza sea ubicada sobre una mesa o meseta nivelada. 8l: Balanza de precisión eléctrica: a) Botón para el ajuste de la compensación de tara. .Cerciorase de que las pesas estén limpias y manipúlelas siempre con la pinza.La lectura de las pesadas deben efectuarse siempre con la puerta cerrada. f) Botones de ajustes de las pesas de cambio. no las toque con los dedos.

de una ventana de corredera. teniendo la superficie plana provista de una letra "T" impresa. que se caracteriza por tener un diámetro mayor en su base que en la parte anterior. lo que le da una configuración ligeramente cónica . para facilitar su manipulación . Botón para el ajuste de la compensación óptica de tara : Este botón se encuentra articulado en el ángulo superior derecho de la pared frontal de la balanza. La parte posterior. Se encuentra articulado en el centro del botón para 152 . provista de un círculo concéntrico de unos 7 mm de diámetro. haciendo girar convenientemente en una u otra dirección los tornillos. aunque más grueso. sin incluir la base. que sirve para indicar donde ser detenido el giro del botón para hacer coincidir la letra "T"con la línea de referencia. pero difiere de ésta. tanto en el tamaño como en su diseño. hasta lograr que la burbuja de aire del agua que contiene quede en el mismo centro del circulo concéntrico. que generalmente se localiza empotrado centralmente en la superficie de la balanza muy próximo al borde anterior. es de cristal. Botón de ajuste del punto cero: Es un botón igualmente igualmente cilíndrico de menor tamaño. la superior ocupa aproximadamente un tercio de todo el espacio y en ella se encuentra instalado parte del sistema eléctrico y otros dispositivos interconectados con el resto del sistema que se encuentra en la parte posterior de la balanza. Aproximadamente. generalmente es más pequeña aunque al igual que la mecánica. 3. así como la porción inferior de los laterales y la cubierta superior son generalmente de material plástico.cuando se requiere determinar con precisión el peso de un objeto. la caja o urna donde se encuentra estructurada tiene forma rectángular y se haya en posición vertical sobre su base. Las paredes laterales están provistas. Indicador de nivel : Consiste en un aditamento circular de no más de 2 cm de diámetro. Un tabique en posición horizontal divide la urna internamente en dos partes. 2. Principales partes de que consta 1. respectivamente. Es de formas circular. muy próximo a su borde y un grosor de menos de 2 cm estriado transversalmente. la pared de la caja tiene grabada una pequeña linea vertical. estando cubierto por una tapa de vidrio. Al igual que la balanza mecánica. la mitad inferior de la pared frontal. el nivel se regula.Este tipo de balanza se utiliza al igual que la balanza analítica mecánica. En la parte superior de la periferia donde gira este toirnillo. que ocupa la mitad del ancho de la caja. tambien de cristal. En la parte inferior (Rodeada por la pared de cristal y las ventanas laterales) se encuentra colgado centralmente el único platillo que posee este tipo de balanza.

el ajuste de la compensación óptica de tara.. Palanca de retención :Es una pieza rígida de forma lanceolada (como la punta de una lanza) que se encuentra articulada por su extremo más grueso. el peso originado por el accionar de los botones de ajustes de las pesas de cambio. Funcionamiento Acciones previas l. produce el cambio de pesas de l0 en 10. donde se van registrando en una doble escala. 7. 20.. 2g. Lo que equivale a 10g. por su lado izquierdo. provista de una línea oscura que indica aproximadamente el peso. En esta posición la balanza se encuentra frenada y la iluminación apagada. que tiene grabado en su centro un "0"con un (. 8.provisto de una escala numérica. 30… etc. El ubicado a la izquierda tiene grabado en su tapa un # l0 y el de la derecha un #1 . 6. ubicado en el lateral derecho de la base. el # 1. por su lado derecho.etc. lo cual se va registrando en el contador o indicador de pesas de cambios que se haya en el lado derecho de la base. denominado tambien placa mate. 4. 30g. de no ser así. 2. con los números 0. haga girar en uno u otro sentido'los tornillos de la base de la balanza. estando provisto de una tapa. Botones de ajuste de las pesas de cambio : Son dos. Al ser girados hacia la derecha van colocando las pesas o al ser girados hacia la izquierda las levantan. en el centro de la base. 20g. o sea: 10. Alrededor de la palanca se encuentran grabado 3 números: .El botón marcado con el # 10.no debiendo poner ni quitar del platillo el objeto a pesar. . ya explicado. lo que equivale al lg.…hasta el 9. En esta posición se lee el resultado de la pesada. Botón para la graduación de la precisión del indicador digital :Tambien denominado botón micrométrico. Indicador de pesas de cambio :Consiste en una pequeña pantalla que se haya en la parte frontal de la base. En la parte superior el "0". En el centro de las dos escalas se haya un indicador óptico. 3. 3g. En esta posición se puede leer el peso aproximado en gramos en la escala proyectada. . Es un botón grande.) en su periferia. Se encuentran ubicados en la parte frontal de la base. Hacia la derecha se encuentra grabado ½.500 y 1000. Orientador para la dosificación : Debajo del indicador de las pesas de cambio se haya una pequeña escala graduada. produce el cambio de pesas de l en l o sea: l. hasta lograr que la 153 . Verifique que la balanza este debidamente nivelada. Hacia la izquierda. 5.…etc y el botón marcado con el #1.

2. Mueva lentamente la palanca de retención hacia el # l. . .Gire la palanca de retención en dirección a ½ (semiretención) . haga girar los botones de ajuste de las pesas de cambio y el botón para la graduación de precisión .. .Abra la ventana lateral y coloque sobre la superficie del platillo el recipiente vacio (tara) donde se va a depositar el material a pesar. los botones de ajuste de las pesas hasta situar la escala en "00"(de esta manera queda anulado el peso del recipiente (tara) . . PESADA 1.Cierre la ventana de la balanza. Repita la operación con el botón de la derecha (marcado con el # l). incluyendo el encendido del bombillo piloto. Compensación de tara . por ejemplo: si la escala marcó 50g. Conecte la balanza a la red eléctrica para propiciar su funcionamiento e iluminación.Proceda igualmente con el botón del ajuste a "0". . haciendo girar el botón para la graduación de la precisión. Por ejemplo: si la escala se detiene en 5g.Gire hacia la derecha gradualmente el botón de ajuste de las pesas que se encuentra del lado izquierdo (marcado con el # 10) y vaya observando simultáneamente la escala del indicador de la izquierda hasta que aparezca un signo menos (-) o se trabe el avance . retroceda hasta 40g. lo que dará lugar a un peso total de 44g.Haga girar el botón para el ajuste de compensación de tara. que se encuentra en la parte superior. Si el indicador de pesas de la izquierda y el contador micrométrico de la derecha no están marcando respectivamente "00".Retrase la escala a "0"haciendo girar el botón de compensación de tara. en contra de las manecillas del reloj hasta que marquen "00". retroceda una unidad o sea hasta 4g. 2. Haga coincidir la marca índice con la raya "00" proyectada.Haga girar en contra de las manecillas del reloj. . en contra de las manecillas del reloj hasta hacer coincidir la letra "T": con la línea de referencia. Detenga la rotación y proceda a girar el botón una graduación hacia atrás . En este momento la balanza está frenada y la iluminación apagada. . 3.burbuja de aire del nivel de agua quede ubicada exactamente en el centro del círculo concéntrico. La balanza se iluminará y proyectará la escala numérica.Girar finalmente la palanca de retención hasta el "0" 154 . Ajuste al punto cero l.Gire la palanca de retención hacia el # 1 y deje oscilar la escala. Haga girar la palanca de retención hacia el "0".

.Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital hasta hacer coincidir la placa mate del indicador óptico con la raya proyectada.Haga girar la palanca de retención hacia el "0"para retener la balanza y seguidamente soltar lentamente la retención haciendo girar la palanca hacia el # 1 . el peso será el siguiente .Leer el resultado.hasta que la escala quede inmóvil y el trazo inmediato inferior se encuentre exactamente en la rendija de la horquilla índice.Depositar el producto a pesar en el interior del recipiente y cerrar la ventana. Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la pesada.2014 g. . 42.Proceda igual que para determinar el peso de la tara.Colocar la palanca de retención en "0". Por ejemplo.Girar la palanca de retención hasta ½ (semi retenida) durante la preselección del peso . si el indicador de pesas de cambio registra 42g . utilizando los botones de ajuste de las pesas de cambio. 82 : Lectura de una balanza analítica eléctrica 155 .DETERMINACIÓN DEL PESO .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital. abrir la ventana y extraer el material ya pesado.accionando el botón para hacerlo coincidir con la raya proyectada. . Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la apesada en la escala de la derecha del indicador de pesas de cambio. . el indicador digital marca 20 y el contador micrométrico de la derecha marca l4.Poner nuevamente todos los elementos de mando en "0" .Cerciorese de que la palanca de retención esté en "0" . Fig. .

BALANZA ANALITICA DIGITAL Fig. colocar el material a pesar sobre un platillo externo. requiriendose de un servicio especializado. 2. debe efectuar para realizar una pesada en una balanza granataria de un solo platillo? 8. 3. Con que objetiovo se debe subir y fijar la cruz de la balanza? 156 . Este tipo de balanza tiene un alto grado de precisión. es cuando se produce algún desperfecto. 10. Explique en que consiste el principio funcional de las balanzas ¿ A que denominamos pesas ¿ ¿Cual es el rango de pesadas de una balanza granataria? ¿Cuántos tipos de balanzas granatarias Ud. 7. ¿Con que objetivo se utilizan las balanzas de precisión? 12. 6. ya que basta con conectarla a la red eléctrica. La dificultad que presenta. ¿En que orden se deben colocar las pesas sobre el platillo? 9. Explique por que causa las pesas se deben tomar con una pinza de disección y no con la mano. 4. Argumente por que causa los platillos deben estar limpios? 11. 5. accionar un botón y el peso podrá observarse digitalizado en una pequeña pantalla. CUESTIONARIO 1. conoce? ¿Qué se entiende por peso de tara? ¿A que denominamos fiel de la balanza? Describa en orden cronológicos que Ud. lo cual no puede ser resuelto internamente por el personal del laboratorio experimentado. 83 : Balanza analítica digital La balanza analítica digital simplifica todas las operaciones explicadas a los largo de este capítulo. ¿Cuál es la función de la cuchilla de la balanza de precisión 13.

18. realiza el ajuste al punto cero. L6. efectua una pesada con una balanza de precisión mecánica. 157 . 20. Describa el orden cronológico. ¿Cómo se colocan las pesas en la balanza de precisión eléctrica? 19. Explique lo que indican las tres posiciones que tiene la palanca de retención. realiza la depreciación del peso de tara en una balanza de precisión elaéctrica. Describa paso a paso como usted determina el peo de un objeto en una balanza de presición elaéctrica 22. Explique las causas por lo que las balanzas de precisión deben estar en el interior de una urna 15. regula el nivel de una balanza de porecisión 17. Explique como Ud. ¿Cómo Ud. ¿Cómo Ud.con una balanza de precisión eléctrica? 21.14. Diga lo que usted sepa en relación con la balanza analítica digital.como Ud.

CAPÍTULO 11 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN NO VOLUMÉTRICOS INTRODUCCIÓN Los instrumentos de medición no volumétricos se emplean en las investigaciones de laboratorio para medir específicamente magnitudes de tiempo. Cronómetros Son relojes manuales. 84: Relojes: a) Cronómetros. 158 . Fig. b) Reloj de intervalo. INSTRUMENTOS. temperatura o densidad. DIFERENTES TIPOS Relojes Se emplean dos tipos de relojes: los cronómetros y los de intervalo. eléctricos o de cuerda. caracterizándose por hacer sonar una alarma cuando concluye el tiempo previsto. Empleo: para medir el tiempo en minutos y/o segundos. Relojes de intervalos Estructuralmente son similares a un reloj despertador doméstico y al igual que los cronómetros pueden ser accionados por energía eléctrica o cuerda. provistos de uno o dos botones de control que se utilizan para accionarlos o detenerlos.

paralelamente a la escala. Al detenerse se confrontará con la escala para determinar el grado de calor. generalmente. rotor. el producto químico que contiene se dilata y asciende por el capilar. 159 . Cuando el bulbo es expuesto al calor. Al disminuir su intensidad se mantendrá indicando ese valor. lleno de un producto químico dilatable por el calor. y el posterior. por lo que hay que "sacudirlos" para que se concentre nuevamente en el reservorio. provisto de una escala impresa en grados Celsius (ºC y/o grados Fahrenheit º F). en correspondencia con la exposición al calor a que ha sido sometido.Este tipo de reloj se encuentra tambien articulado en algunos equipos de laboratorio. ya sea en grados Celsius o Fahrenheit.Termómetro clínico: En este tipo de termómetro el reservorio se encuentra lleno de mercurio. Su extremo anterior está sellado como un ámpula. Diferentes tipos de termómetros Se utilizan dos tipos de termómetros: el clínico y el químico. Este bulbo se continúa con un fino capilar ubicado a todo lo largo del termómetro. Empleo: para medir el tiempo en horas y minutos. 1. Termómetros Fig. etc. 85: Termómetros. Centrífuga. denominado columna indicadora. más estrecho está ocupado por un bulbo. Los termómetros empleados en el laboratorio consisten en un tubo de vidrio de paredes gruesas de longitud y diámetro variable. haciendo que se detenga automáticamente su funcionamiento al concluir el período de tiempo en que fue ajustado. Debido a que el capilar que forma la columna indicadora está unido al reservorio por una especie de sifa en forma de "S" cuando la columna de mercurio alcanza el grado máximo. como por ejemplo.

la parte superior consiste en un fino tubo de vidrio. 1. ascenderá o descenderá. Mide aproximadamente algo más de un tercio de la longitud total del densímetro. Por ejemplo: 3200C+273=3020K Para convertir grados Fahrenheit a grados Rankine. Otro aspecto que lo distingue del clínico es que al carecer de la sifa. Densímetros Son instrumentos que se emplean para medir la densidad o peso específico de soluciones compuestas por diferentes solutos y solventes. Los densímetros son tubos de vidrio que miden de 15 a 20 cm de largo.555=ºC . Termómetro químico: La estructura de este tipo de termómetro es similar a la del termómetro clínico. Como la densidad del agua es de 1. 86: Densímetro. alargado y cilíndrico. la incubadora.De grados Fahrenheit a Celsius (ºF-32). Este tipo de termómetro se encuentra insertado en los equipos termoregulados como: el horno. en g/cm3 o en g/mL es numéricamente igual a sus densidades. Para convertir temperaturas de una escala a otra se procede de l siguiente manera: . En lugar de mercurio el reservorio de estos termómetros está lleno de alcohol o xilol teñidos.2. en el capilar en correspondencia con las oscilaciones de temperatura. El peso específico es la relación entre el peso de una sustancia con respecto al peso de un volumen igual de una sustancia de referencia.8)+32=ºF Existen otras dos escalas para medir la temperatura. que usualmente es el agua. encontrándose sellado como un ámpula en su extremo distal. la columna del alcohol o xilol. Estructura Fig. que son: la Kelvin y la Rankine. teniendo impreso a todo lo largo una escala graduada 160 .De grados Celsius a Fahrenheit (ºC. Para convertir grados Celsius en grados Kelvin basta con adicionar la constante 273 a los grados Celsius obtenidos. con la diferencia que generalmente tiene una mayor longitud y la escala de temperatura es de un rango mucho mayor.0g/mL a 4ºC. 0. el peso específico de los líquidos. el autoclave. estando estructurados por tres partes diferentes entre sí. pudiendo tener una estructura diferente a l explicada. etc. pero empleando la constante 460. pero basada en el mismo principio. ya explicada. se procede de igual manera.

CUESTIONARIO 1. lleno de bolitas de metal. Espere a que se detenga el movimiento de rotación y proceda a realizar la lectura. Haga girar el densímetro. La porción media es más gruesa y de mayor longitud.060 en los urodensímetros. ¿Cómo se denominan los dos tipos de relojes empleados para el trabajo de laboratorio? ¿Cuál es el principio funcional de cada uno de los relojes? Describa la estructura de un termómetro clínico y uno químico.000 (que es la densidad del agua).. variará. 4. que se utilizan para medir la densidad de la orina. ¿Con qué objetivo el bulbo redondeado que se encuentra en la parte inferior de los densímetros se encuentra lleno de municiones? Describa el procedimiento a seguir para determinar la densidad de un líquido? 161 . En su extremo posterior el bulbo se estrecha y a continuación se dilata. 4. 10. semejantes a municiones.en cuya parte superior se puede observar el número 1. para propiciar que se mantenga en posición vertical cuando sea introducido en el líquido al que se le va a medir la densidad. 3. ¿Cómo se denomina el producto químico que se utiliza en cada tipo de termómetro para llenar sus respectivos reservorios? Especifique las diferencias funcionales entre el termómetro clínico y el químico. 2. ¿Cómo usted debe proceder para convertir grados centígrados en grados Fahrenheit y viceversa? ¿Para qué se utilizan los densímetros en el laboratorio? ¿Qué usted entiende por peso específico? ¿Cuál es la densidad del agua? Describa la estructura de un densímetro . mediante el accionar de los dedos y cerciorarse de que al rotar. 11. 9. Tome el densímetro específico por la parte superior con los dedos índice y pulgar e introdúzcalo en la solución. no entre en contacto con las paredes de la probeta. Deposite en una probeta de tamaño apropiado (preferentemente no graduada) la solución a la que se le desea medir la densidad y colóquela sobre una superficie nivelada. 5. colocándolo en el centro del diámetro de la probeta en posición vertical. que proporcionan peso al densímetro. formando un bulbo pequeño y redondeado. 6. como por ejemplo: 1. Procedimiento 1. cuidando de no incurrir en el error de paralelaje. 2. en dependencia del tipo de densímetro de que se trate. 8. consistiendo básicamente en un bulbo lleno de aire. La escala va descendiendo dividida en partes iguales y el valor mayor. para lo cual debe observar en qué graduación de la escala se encuentra el nivel de la solución. 12. 3. 7.

INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y MATERIALES DE CURACIONES INTRODUCCION Bajo el término de accesorios. se agrupan diversos objetos. se encuentran los siguientes: Fig. madera o plástico. por donde se coloca la cristalería en cuestión. los orificios de las gradillas también serán de tamaño variable. separadas entre sí. utilizados con carácter auxiliar en el trabajo de laboratorio al igual que algunos instrumentales quirúrgicos. provistas de perforaciones. lo que permite seleccionar la adecuada para cada tipo de tubo. 162 . Teniendo en cuenta que los tubos de ensayo tienen diámetros diferentes. insertándolos en los orificios boca abajo. Generalmente son rectángulares y están estructuradas por dos o tres planchas.CAPÍTULO 12 ACCCESORIOS. en posición horizontal. ACCESORIOS Entre los accesorios que se utilizan con mayor frecuencia. 87: Gradilla Gradillas Son soportes diseñados para la colocación de tubos de ensayo u otros tipos de cristalería. fábricadas de metal. Además de facilitar el acceso al tipo de cristalería con que se esté trabajando o el ordenamiento secuencial de las muestras. mientras que determinados materiales de curaciones son empleados para diversos usos. las gradillas factibilizan además el que se puedan escurrir los tubos después de ser fregados.

Cestos Fig. lo que le proporciona estabilidad.5cm de diámetro. los cestos son soportes. 88: Cesto metálico. 89: Soporte universal Está constituido por una base metálica sólida y pesada. sobre la que se erige una varilla recta de hierro de 1. Soporte universal Fig. no compartimentados. que se utiliza para colocar pinzas de sujección o aros metálicos. Generalmente son cilíndricos o cuadrangulares y están fabricados de alambres entrelazados o chapas de metal inoxidable perforado. 163 . Al igual que las gradillas. Los cestos son utilizados para depositar la cristalería para su secado o esterilización. que se utilizan para la colocación de tubos de ensayo y otros tipos de cristalería.

algunas de las cuales. es decir. formado por tres varillas metálicas de igual longitud. cuando se aprietan con ayuda de los dedos índice y pulgar. Entre las más empleadas se encuentran: los modelos de tres dedos. el principio de su funcionamiento es similar al de un palito de tendedera. separadas entre sí a una misma distancia y soldadas por su extremo superior a un aro también de metal. así como las pinzas para tubos de ensayo y la pinza de Mohr. los de vasos de precipitado. En ambos casos. La pinza de Mohr se utiliza para obstruir el paso de un líquido que fluya a través de una manguera de goma flexible de más o menos un cm de diámetro. Trípode Fig. Otro tipo de pinzas igualmente empleadas para el manejo de objetos pequeños como las pesas y los diversos especímenes son de acero inoxidable. Se trata de un accesorio metálico. c) Pinza de Mohr. los de bureta. podemos percatarnos de que las patas no quedan en posición 164 . 91: Trípode.Pinzas de sujección Fig. y cuando se retira la presión se cierran. diseñadas para fijarlas a la varilla de fierro del soporte universal y otras para operarlas manualmente. Se fabrican diferentes tipos de pinzas de sujección. b) Pinza de bureta. teniendo la punta curva o recta. Cuando el trípode es colocado sobre la mesa de trabajo. 90: Pinzas de sujeción: a) Pinza de tres dedos. estas dos últimas de utilización manual. las respectivas pinzas se abren.

así como de charolas. similar a un colador. para lo cual se coloca sobre el aro del trípode. y sobre ésta el frasco de cristal. con los extremos que contactan con la mesa más separados que los que están soldados en el aro. una especie de bandeja donde. bisturí y tijeras de disección. sino ligeramente oblicuas. directamente a la llama de mechero. d) Agujas de disección Además de los trocars y las agujas hipodérmicas de diferentes calibres en el trabajo de microbiología. se realiza la disección de determinados especímenes de experimentación. que posee en su centro una circunferencia de unos 10 cm de diámetro de amianto fundido en la malla. 93: Instrumental quirúrgico: a) Bisturí. Instrumental quirúrgico Fig. b) Tijeras.vertical. ocasionalmente se requiere del empleo de diferentes agujas. 92: Malla de amianto Es una malla plana de alambre entrejido. Esta malla se utiliza cuando se va a calentar un líquido contenido en frascos de vidrio. 165 . de manera que el recipiente queda aislado de la llama directa y el calor se distribuye uniformemente a través del amianto. c) Pinzas de disección. de forma cuadrangular o circular que mide unos 15cm2 o de diámetro. Malla de amianto Fig.

además de ser utilizados en la confección de hisopos. para efectuar la pesada o como sustituto de los aplicadores en las preparaciones de heces en láminas para examen parasitológico. como por ejemplo: heces fecales. de madera o plástico. se emplean también para la toma de algunas muestras. 5. 4. se utilizan para deprimir la lengua en la toma de muestras de exudado faríngeo y también. 2. pueden emplearse para extraer medio de cultivo de sus frascos.MATERIALES DE CURACIONES Entre los materiales de curaciones más empleados en el trabajo microbiológico. Gasa quirúrgica Se utiliza para la preparación de torúndas que posteriormente son empaquetadas en papel de 3 a 5 unidades para ser esterilizadas en autoclave antes de su empleo. Aplicadores y depresores Los aplicadores. se encuentran los siguientes: 1. Algodón Gasa quirúrgica Aplicadores Depresores Soluciones y tinturas desinfectantes Algodón El algodón se utiliza para taponear la boca de los tubos y otras cristalerías que van a ser sometidas a un proceso de esterilización y conjuntamente con los aplicadores de madera en la confección de hisopos finos y gruesos. para su preparación en láminas destinadas a la investigación parasitológica. Los depresores. 3. 166 .

9. 6. 3. ¿Para qué se utilizan materiales de curación en el laboratorio? 167 .CUESTIONARIO 1. 5. Describa la estructura de los cestos y el material con que se fabrica. 4. ¿Para qué se utiliza la malla de amianto? Mencione los instrumentales quirúrgicos que se utilizan en el laboratorio. 10. Especifique los diferentes usos que se les dan a las gradillas en el laboratorio. Describa la estructura de los trípodes. Describa la estructura y el material con que se fabrican las gradillas. ¿Para qué se utilizan los cestos? ¿Cuál es la finalidad utilitaria del soporte universal? Describa los diferentes tipos de pinzas de sujección que usted conozca. 2. 7. 8.

que obtenemos del paciente o portador. pudiera pensarse que esta paridad. 168 . Visto así.CAPÍTULO 13 TOMA DE MUESTRAS INTRODUCCIÓN El diagnóstico microbiológico de laboratorio. que son producidos por algunos microorganismos en su interacción con los tejidos. etc. pueden en algunos casos afectar la viabilidad del germen y en otros su cuantía. orina. sin embargo determinados factores y procederes como: la demora en realizar la siembra de la muestra. material excrementicio. Además de las fuentes ya referidas se obtienen del paciente muestras de los productos patológicos. como por ejemplo: sangre. exudados. se sustenta en el estudio de las muestras obtenidas del paciente o portador. Muestra representativa Para que el diagnóstico de laboratorio sea fidedigno. es indispensable entre otros requisitos. que las especies patógenas que se encuentran en los líquidos corporales. lo cual aporta al médico de asistencia un dato valioso que le permite indicar un tratamiento antimicrobiano mucho más eficaz. la mala calidad de su obtención y la no observancia de las precauciones de asepsia. heces. del paciente sean las mismas que contiene la muestra y su cuantía relativamente proporcional. etc.. donde presuntivamente se encuentran microorganismos patógenos o los anticuerpos inducidos por sus componentes antigénicos. además de propiciar contaminaciones que en su conjunto afectan la calidad de los resultados al perder la muestra representativa. la insuficiente o excesiva cantidad de muestras a utilizar para el cultivo. como el esputo y el pus. MUESTRA. los inadecuados métodos de conservación. etc. que propicia la identificación directa o indirecta de los agentes casuales de la infección o enfermedad infecciosa y en determinadas investigaciones información complementaria acerca de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en cuestión a la acción de los fármacos antimicrobianos. tejidos. CONCEPTO Se denomina MUESTRA a la porción o volumen de: líquidos corporales. resulta suficiente para considerarla como una muestra representativa.

a temperatura ambiente. con la muestra de orina (urocultivo) sucede todo lo contrario. el proceder a seguir dependerá de la muestra de que se trate. al laboratorio de referencia. Fundamento: mata a los microorganismos sin deteriorarlos significativamente. caracterizándose por inhibir las reacciones enzimáticas autodestructoras y aminorar los efectos de la oxidación. por ejemplo: la Neisseria meningitidis (meningococos) que con elevada frecuencia se aísla en la muestra de L. 169 . como nutrientes.C.R es muy sensible a los cambios de temperatura. debido a que son muy reductores. lo que permite identificarlos mediante la observación de su morfología. En cambio . como los Mixovirus y Hirpesvirus. pero al mismo tiempo sin favorecer significativamente su desarrollo.Demora en realizar la siembra En principio todas las muestras deben ser sembradas lo antes posible en los medios de cultivo que favorezcan el desarrollo de las especies patógenas que presuntivamente contienen procediendo a su inmediata y adecuada incubación. que comúnmente están presentes en la orina. hidratos de carbono y otros residuos minerales presentes en la muestra son utilizados por la mayoría de las especies. Los medios de transporte se emplean generalmente. ocurriendo similar situación con algunos virus. Cuando la muestra no puede ser sembrada de inmediato. que favorecen su desarrollo y multiplicación. larvas o huevos de helmintos. En este caso la pérdida de representatividad sería por exceso y no por defecto como suele suceder en los ejemplos anteriores. para la siembra de exudados caracterizándose por mantener la viabilidad del microorganismo. se siembran en este tipo de medio y se envían a la mayor brevedad posible. los componentes nitrogenados. Métodos de conservación a) Refrigeración a 4 0C (en las parrillas). Ejemplo: para la conservación de muestras que contienen protozoarios. Fundamento: mantener a los microorganismos en una temperatura similar a la corporal. c) Formol al 10 %. para conservar muestras de orina para el urocultivo. por lo que el frío y la temperatura ambiente provocan su lisis. que no sobreviven mas allá de tres horas si la muestra en que se encuentra no es inoculada antes de ese tiempo en los medios apropiados. Ejemplo. d) Medios de transporte. Cuando esto no sea posible. por haberse tomado en lugares distantes. b) Incubación a 370 C. Fundamento: el frío enlentece el proceso de multiplicación.

transcurre por una evolución similar en los primeros 10 días (periodo de leptospiremia) la leptospiras se encuentran en sangre y posteriormente invaden diferentes vísceras y el sistema renal. la cantidad de anticoagulante que se adiciona al medio de cultivo. como por ejemplo. Por ejemplo: en la fase inicial de la fiebre tifoidea. resultaría insuficiente. Calidad de la muestra Para que la muestra sea de buena calidad. Otro ejemplo donde la cantidad de muestra a emplear.Cantidad de muestras a tomar En algunas determinaciones. se recomienda esperar el momento del pico febril. resulta indispensable. por lo que en ese momento lo adecuado es obtener muestras de heces fecales para coprocultivo. es en la de esputo para investigar B. Si el volumen de sangre fuera menor que el indicado.R (bacilos ácido alcohol resistentes) requiriéndose no menos de 2ml. que es el momento en que mayor cantidad de expectoración se encuentra acumulada y en otras muestras.A. la Samonella tiphy se encuentra en la circulación sanguínea por lo que resulta procedente tomar muestra de sangre para hemocultivo. el agente causal. (leptospiuria) debiendo 170 . el momento más adecuado. En otras ocasiones.A. ya que por las características mucoides de este producto patológico los bacilos se encuentran distribuidos desigualmente en la muestra. a de tenerse en cuenta en algunas ocasiones el momento idóneo y en general delimitar con precisión el área anatómica para su obtención. como por ejemplo: el hemocultivo. la sangre para hemocultivo o gota gruesa. reducirá proporcionalmente la expresión de crecimiento en los cultivos y si fuera mayor. lo que traería como consecuencia la formación indeseable de coágulos de sangre que interfieren delimitan las manifestaciones de crecimiento (turbidez). Momento idóneo En algunas muestras como el esputo. ya que afectan la calidad de los resultados. Cantidades menores o mayores son objetables. va a depender del cuadro clínico del paciente y del tiempo de evolución de la enfermedad. pero cuando la enfermedad lleva unas dos semanas de evolución el microorganismo emigra al intestino. debe ser recogido por el paciente. La lectospirosis. en ayunas. al levantarse. que es cuando se encuentra en sangre la mayor cantidad de microorganismos. está normado que la cantidad de sangre total a sembrar sea de un 10 % en relación con el volumen de medio de cultivo a utilizar.

creando confusión en el momento de establecer el diagnóstico.R. Y lo que puede ser mas perjudicial. etc. no la saliva y en las muestras de heces fecales las porciones mucosanguinolentas. Cuando la muestra ha sido recolectada por el paciente. donde la mayoría de los microorganismos están muertos. Precauciones de asepsia Son las acciones encaminadas a evitar que la muestra se contamine durante su obtención. traen como consecuencia una serie de contratiempo como son: 1.obtenerse en la primera fase sangre para hemocultivo y en el segundo momento orina para urocultivo. será la mas evocadora de contener la mayor cantidad de microorganismos. 4.o. 3. la información de un diagnóstico erróneo. por ejemplo: para obtener muestras de sangre para hemocultivo. Afectaciones económicas por gastos de materiales e insumos. El cumplimiento de estos requisitos. Delimitación del área anatómica Una vez determinado en que órgano o tejido se va a realizar la toma de muestra. Se debe remover previamente los m. en el esputo. para evitar que estos contaminen la muestra y se desarrollen en el cultivo. 2. de la microbiota residente. del sitio donde se va a realizar la punción. con implicaciones para la evolución del paciente y el cuestionamiento sobre la calidad del servicio. L. hisopado o raspado.C. Demora en la información del diagnóstico al médico de asistencia para iniciar o modificar el tratamiento. con alcohol etílico al 70 % con yodo. que el diagnóstico de laboratorio se corresponda con los agentes infecciosos. con especies microbianas ajenas al proceso infeccioso. lesiones en la piel. por ejemplo. favorece. 171 . Molestias innecesarias al paciente que debe someterse nuevamente a la obtención de la muestra. se utilizará la parte mas purulenta. Las deficiencias en este sentido. la porción que se tomará para el cultivo. se debe delimitar el área exacta para su obtención por ejemplo: la toma de muestra de lesiones purulentas debe realizarse en la región subyacente y no del pus que se encuentra en el orificio de salida. que tenia el enfermo o portador en el momento en que fue obtenida la muestra.

que en el momento de su obtención. Suspender cualquier tratamiento con antibióticos 48 horas antes de la toma de la muestra. inclínele ligeramente la cabeza hacia atrás. solicitándole que abra la boca y emita un ¡ahhh! sostenido. tales como: productos tópicos (pomadas. Observe la zona faríngea con ayuda de una lámpara de cuello que proporcione 172 . para reducir la probabilidad de que la muestra se contamine con la microbiota normal. o concurran al laboratorio en condiciones favorables para su obtención. Exudado faríngeo: Indicaciones específicas: antes de concurrir al laboratorio el paciente debe realizar el aseo matutino habitual. Suspender cualquier tratamiento local con medicamentos antimicrobianos. hemorrágico y seroso. Las instrucciones son de dos tipos: generales y específicas. lociones etc. colirios. Al menos 12 horas antes de la toma de la muestra.INSTRUCCIONES AL PACIENTE El paciente que tiene indicado uno o varios exámenes microbiológicos debe ser instruido por su médico de asistencia o por el personal del laboratorio a los efectos de que recojan la muestra con la calidad requerida. Instrucciones específicas Variarán en dependencia del tipo de muestra de que se trate. Se clasifican en: albuminoso.). Procedimiento: estando el paciente sentado. DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS Exudados Concepto: es la materia mas o menos fluida salida de los vasos pequeños o capilares por exudación. 2. Diferentes tipos de exudados a. gotas nasales. óvulos. Instrucciones generales 1. fibroso. lo cual favorecerá. gargarismos etc. la cantidad de microorganismos sea suficiente para que puedan ser observados en los exámenes microscópicos y aislados en los cultivos. en los procesos inflamatorios y que se deposita en los intersticios de los tejidos o en la cavidad de una serosa.

Al retirar el hisopo.una luz intensa. de color blanco o blanco grisáceo. en caso contrario deberá humedeserse previamente en solución de glicerina. marcada exudación o la presencia de anginas (placas de diferentes formas y tamaño. cuide igualmente de que no entre en contacto con la lengua. como pueden ser: mucosas enrojecidas o edematosas. el paciente debe estar sentado y con la cabeza ligeramente flexionada hacia atrás. labios u otra zona bucal. Si el médico presume que el paciente está infectado con Corynebacterium diphteriae (agente causal de la difteria) indicar al laboratorio. situados en ese lugar. en particular en las áreas con evidencias patológicas. Con el dedo índice presione la base de la nariz. Fig. Procedimiento: al igual que para la toma del exudado faríngeo. con la finalidad de detectar evidencias patológicas. el hisopo podrá estar seco si la siembra se hace de inmediato. adheridas a las mucosas) Deprima la lengua con un depresor y con la otra mano introduzca el hisopo en la cavidad bucal. de manera que posibilite la obser173 . en cuyo caso la toma de muestra se hará levantando el borde de la angina y pasando el hisopo por debajo de la misma para contactar con los microorganismos diftéricos. b) Pared posterior de la faringe b) Exudado nasal: Indicaciones específicas: No instilarse ningún tipo de gotas nasales 12 horas antes de la toma de la muestra. cuidando de no tocar los labios. los carrillos o la lengua y frótelo sobre cada región amigdalina y la pared posterior de la faringe. mediante una orden de análisis que se realice la investigación pertinente. telurito e introducido después de la toma en medio de transporte para su conservación. 94: Toma de muestra de exudado faríngeo: a) Amígdalas.

vación de los dos orificios, para lo cual se auxiliará de una lámpara. Introduzca el hisopo en ambas fosas nasales, imprimiéndole movimientos de rotación en ambos sentidos, para facilitar la recogida de la secreción.

Fig. 95: Toma de muestra de exudado nasal.

c) Exudado nasofaríngeo: Indicaciones específicas: similar a las explicadas para exudado faríngeo y nasal. Procedimiento: para la toma del exudado nasofaríngeo, se utiliza un hisopo especial consistente en un alambre de cromo o acero inoxidable curvado en su extremo terminal. Después de observar la zona faríngea y las fosas nasales con buena iluminación se procede a introducir suavemente el hisopo por una de las fosas nasales hasta la nasofarínge. Si no fuera posible, introducir el hisopo por la cavidad bucal hasta la nasofarínge, con los mismos cuidados ya explicados en al toma del exudado faríngeo.

Fig. 96: Toma de muestra de exudado nasofaríngeo.

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d) Exudado ótico: Indicaciones específicas: no instilarse gotas óticas de ningún tipo, durante las 24 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de indicar al paciente que se siente, el técnico se ubicará por el lateral que corresponda al oído que será objeto de la toma de la muestra, procediendo a ladear ligeramente la cabeza del paciente para el lado opuesto, con una torúnda o algodón estéril humedecido en alcohol etílico al 70 %, limpiar el pabellón auricular, especialmente la entrada del orificio del conducto auditivo. Disponiendo de una buena iluminación, sujetará la oreja por la parte superior con ayuda d los dedos índice y pulgar, imprimiéndole un movimiento hacia arriba y hacia atrás, lo cual favorecerá la observación del conducto auditivo externo. Manteniendo la oreja en esa posición, introducir el hisopo suavemente en el conducto, imprimiéndole movimientos de rotación con el propósito de recoger la mayor cantidad posible de secreción (otorrea)

Fig. 97: Toma de muestra de exudado ótico: a) Manipulación del pabellón auricular; b) Introducción del hisopo en el conducto auditivo externo

e) Exudado conjuntival: Indicaciones específicas: durante las 48 horas precedentes a la toma de la muestra, no irrigar los ojos con colirios, pomadas oftalmológicas ni anestésicos conjuntivales que tienden a desalojar a los microorganismos del saco conjuntival. La noche anterior, el paciente se debe limpiar el ojo afectado con suero fisiológico o agua previamente hervida. Se puede tapar o no, el ojo en cuestión con un apósito estéril fijado con esparadrapo, ya que se ha demostrado que no influye en los resultados la contaminación ambiental, la mañana en que concurra al laboratorio para que le sea tomada la muestra no debe realizarse nigun lavado facial. Procedimiento: para la toma de muestra del exudado conjuntival, se puede utilizar un hisopo de algodón fino (estéril) o un asa de platino empleada exclusivamente para ese fin, esterilizada en autoclave. 175

Indicar al paciente que se siente y retirar el apósito, con ayuda del dedo índice baje el párpado inferior y proceda de inmediato e introducir con sumo cuidado el hisopo o el asa, evitando tocar las pestañas, o el margen de los párpados, hasta la superficie del ángulo interno (próximo al lagrimal) del "culde- sac" fondo del saco inferior deslizando suavemente el instrumento en dirección al ángulo externo del ojo. También se pueden tomar muestras de las márgenes parpebrales (membranas que tapizan los párpados. En el caso de que el paciente presente furúnculos de las glándulas pilosebáceas anexas a una pestaña (orzuelo) se procederá a obtener un poco de pus, mediante la punción con una lanceta estéril.

Fig. 98: Toma de muestra de exudado conjuntival

f) Exudado uretral: Indicaciones específicas: El o la paciente deben de abstenerse de orinar durante las 4 horas que preceden a toma de la muestra, para evitar que los microorganismos sean arrastrados mecánicamente durante la micción. Debiendo concurrir al laboratorio sin previo aseo matutino de los genitales externos. En mujeres: Se le indicará que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste bocarriba en una camilla ginecológica con estribos, adoptando una posición ginecológica, de manera que los glúteos queden muy próximos al extremo de la camilla, en estas condiciones con la palma de la mano hacia arriba se introduce en la vagina el dedo índice el cual se arquea hacia arriba para comprimir la uretra a través de la sínfisis que le separa de la vagina desplazar el dedo, hacia atrás, sin dejar de comprimir la sinfigis para inducir la salida del pus por la uretra. Conjuntamente se introduce el hisopo, 1cm en el interior de la uretra, haciéndolo girar suavemente para que recoja la mayor cantidad posible del exudado. 176

Fig. 99: Toma de muestra de exudado uretral en mujeres.

En los hombres: La muestra se tomará permaneciendo el paciente parado. Se le indicará manualmente el prepucio hacia atrás y a continuación haga presión hacia delante del pene con el objetivo de "ordeñar" la uretra. Seguidamente se le introduce unos mm el asa de platino estéril en la uretra por unos segundos retirándola finalmente.

Fig. 100: Toma de muestra de exudado uretral en hombres.

g. Exudado vaginal. Indicaciones específicas: Suspender cualquier terapéutica por vía local 2 o 3 días antes de que le sea tomada la muestra. Debe concurrir al laboratorio sin previo aso vaginal desde la noche anterior, aunque puede, efectuar lavado matutino de genitales eternos. Se recomienda no realizar coito vaginal en ese periodo de tiempo. Procedimiento: Se le indicará a la paciente que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste en posición de cúbito supino (boca arriba) sobre una camilla con estribos, adoptando una posición ginecológica (las corvas sobre los estribos y los glúteos muy próximos al borde de la camilla. Antes de proceder a la toma de la muestra se hará una inspección de la región vulvar con el objetivo de detectar inflamación o erosión en las glándulas anexas Skéne o Bartholin, la primera, dos pequeñas glándulas situadas dentro del meato de la uretra femenina, consideradas homologas de las vesículas seminales y la segunda, situadas a ambos laterales del 177

orificio vaginal, cuya secreción tiene la función de lubricar el área para facilitar la penetración del pene. Con el empleo de una torúnda estéril humedecida en alcohol al 70 %, sujeta por una pinza de disección, desinfectar la región vulvar. Seguidamente se procederá a insertar un espéculo estéril de tamaño conveniente sin lubricantes, ya que puede ser tóxico para algunos microorganismos.

Fig. 101: Toma de muestra de exudado vaginal. Paciente en posición ginecológica con el espéculo incertado.

En los casos de niñas se realiza un exudado vulvar y en pacientes vírgenes se realiza también un exudado vulvar y si el orificio del himen lo permite se puede emplear un espéculo pequeño. En los casos de pacientes con cistocele (protución de vejiga en la vagina) la incertación del espéculo debe ser realizada por un personal con experiencia. A continuación se procede a introducir un hisopo estéril hasta el fondo del saco posterior de la vagina el cual será embebido con el exudado. Se recomienda utilizar hisopos con algodón sintético, ya que los ácidos grasos presentes en algodón vegetal puede resultar tóxico para algunos microorganismos. Además del hisopo se puede emplear para obtener la muestra una pipeta de Pasteur estéril con un dispositivo en su parte posterior como el que tienen los goteros para factibilizar la aspiración del exudado. Al momento de tomar la muestra se realiza la medición del pH al exudado. h) Exudado endocervical.Indicaciones específicas: Abstenerse de realizar el coito durante las 12 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de colocada la paciente en posición ginecológica e insertado el especulo (sin lubricantes) en forma similar que para exuda178

portadores de compuestos orgánicos e inorgánicos. por tratarse de espacios anatómicos cerrados. Son producidos por las membranas que recubren los diferentes órganos. REGION ANATOMICA DONDE SE LOCALIZA Canal raquídeo (espacio delimitado por las membranas sub aracnoideas o meníngeas. estos líquidos son normalmente estériles. sujeta por una pinza de disección. son los siguientes. el aislamiento de microorganismos en cualquiera de ellos es evocador de infección. Cuadro 7: Localización de los líquidos orgánicos DIFERENTES LIQUIDOS L. Los líquidos orgánicos que con regularidad se investigan en los laboratorios de microbiología clínica. que se hace comprimir suavemente sobre el cervix. se procederá a retirar el moco cervical del cuello del útero con ayuda de una torunda estéril.R. Seguidamente se introduce un hisopo estéril. son fluidos serosos. por lo que. así como de células leucocitarias.do vaginal.occipital y los ventrículos cerebrales Delimitado dentro del espacio que separa las dos membranas pleurales que recubren el tejido pulmonar Se encuentra entre las sinovias o membranas que recubren los tendones Se encuentra entre las membranas peritoneales que delimiten al abdomen TOMA DE MUESTRA (por punción) Lumbar PLEURAL Intercostal SINOVIAL Articular ASCITICO Peritoneal 179 . que recubren la médula espinal. la región sub .C. Líquidos orgánicos Concepto: Los líquidos orgánicos. imprimiéndole movimientos de rotación durante varios segundos para que se embeba en el exudado.

Datos para la obtención de las muestras de líquidos orgánicos y características de su aspecto. previo riguroso lavado de manos y colocación asépticas de guantes quirúrgicos estériles. 180 - . Realizar la punción con trocar o aguja apropiada hasta donde se encuentra el líquido en cuestión.Cuadro 8. transparente y viscoso Seroso SINOVIAL 2a3 ASCITICO 2a3 Uno con heparina Purulento Recolección de la muestras Serán tomadas por un especialista.R 3 a 10 3 ASPECTO XXX NORMAL PATOLÓGICO Incoloro y transparente TURBIO. Retirar el mandril del trocar. insertar una jeringuilla y succionar el líquido. donde se va a efectuar la punción. con y sin anticoagulante (heparina) según se trate. lo que propiciará que fluya el líquido a través de la cánula o si la punción se realiza con aguja.C. LÍQUIDOS CANTIDAD DISTRIBUCCIÓN ORGÁNICOS (ml) EN TUBOS ESTERILES L. Procedimiento: Desinfectar con tiomersal (timerosal) u otro desinfectante apropiado el área de la piel. Recolectar el líquido en tubos de ensayo. hemorrágico o satocrómico (amarillento) Turbio y purulento Turbio y purulento PLEURAL 2 a3 Uno con heparina Uno sin heparina Incoloro y transparente Amarillo claro.

venas y capilares. Se le pedirá al paciente que abra y cierre la mano varias veces con el objetivo de inducir el aumento de la circulación y le llene las venas. leucocito y plaquetas. Inserte la aguja en la piel adyacente paralelamente a la vena y hágala penetrar en el lumen.Sangre Concepto: La sangre es un líquido rojo que circula por las arterias. Indicaciones específicas La toma de muestra debe realizarse cuando el paciente presente fiebre superior a 38 C. En caso de que la presión de la vena sea baja. Deje secar el alcohol y efectúe la punción. se procederá a verificar el pulso. solo eventualmente se procede a tomar la muestra. 20 estéril. pudiendo utilizarse igualmente jeringuillas y agujas estériles desechables. Estando formada por elementos figurados como los hematies. retire el émbolo. palpe el área y seleccione la vena mas prominente con ayuda de la inspección visual. unos 5cm por debajo del sitio que puncionará y estire la piel hacia abajo con el pulgar con lo cual se inmovilizará la vena. un ligero cese de la resistencia indicará que la aguja ha penetrado en la vena. para asegurarse de que la aguja se encuentre en el interior de la vena. Desinfecte la zona a puncionar. Después de estar la ligadura por encima del codo del paciente. que contiene diversas sustancias nutritivas e inmunológicas. Con la mano opuesta sujete el antebrazo del paciente. Extraiga la cantidad de sangre necesaria suelte 181 - . tome la jeringuilla de tal manera que el dedo índice quede colocado sobre el cabo de la aguja para guiarla durante su introducción en la vena. después de comprobar el tiempo de caducidad. la sangre fluirá espontáneamente dentro de la jeringuilla. la jeringuilla acoplada a la aguja se colocan posteriormente en el interior de un tubo de ensayo de tamaño apropiado. en el momento que presente hipotermia. así como una parte líquida denominada plasma. para comprobar que la circulación arterial no ha sido interrumpida. mecánicamente. Procedimiento La sangre se obtendrá por venipunción. mediante jeringuilla de vidrio estéril y seca (que no esté caliente) a la cual se le acopla una aguja No. para ello solicite al paciente cerrar la mano y extender el brazo. primero con agua y jabón y químicamente después con tintura de yodo al 1 % en pacientes (no alérgicos) y posteriormente con alcohol etílico al 70 %.

Procedimiento: La muestra de linfa se obtiene específicamente de los lóbulos de las orejas y de los pliegues de la piel de los codos. 4 o 5 veces para que el anticoagulante que contiene el medio impida que se formen coágulos. proceda del siguiente modo: 1. desinfecte con alcohol etílico al 70 % la tapa perforable y flaméela. Observaciones: Durante el proceso de toma de muestra. 1. después de desinfectada la piel. Con el empleo de torundas o motas de algodón humedecidas en alcohol al 70 %. pH alcalino y salobre. que llena los vasos linfáticos. fibrina y sales. lo cual se evidenciará por un aclaramiento de la zona (zona de isquémia).Invierta el frasco inoculado. Puncione la tapa perforable del frasco y empujando el embolo de la jeringuilla vierta un 10% de sangre en relación con el volumen del medio de cultivo empleado. Esta operación se debe realizar en ambos lóbulos y en los pliegues cutáneos de los dos codos. antes que la sangre infiltre el corte. pídale al paciente que abra la mano y presione la torunda o algodón por espacio de 2 a 3 minutos con el brazo doblado. y transparente de color ligeramente amarillento.la ligadura y coloque una torunda o un pedazo de algodón seco sobre el sitio de la punción y saque la aguja. Linfa Concepto: La linfa es un líquido claro. Con un bisturí haga una incisión de unos 5mm de largo por 2 mm de ancho y raspe la zona con su superficie. Coloque una pinza en cada uno de los lóbulos. Está constituida por agua. de manera que ejerzan la suficiente presión para que la sangre contenida en los capilares sea excluida. rápidamente. Retire el círculo central de la retapa metálica del frasco que contiene el medio de cultivo. 2. 2. 182 . Para sembrar la sangre. 4. Indicaciones al paciente: Las generales. Cambie la aguja utilizada por otra estéril del mismo calibre. depositándola en la lámina portaobjetos habilitada al efecto. 3. albúmina. proceda a recoger con el borde del bisturí la linfa que emane. Retirando la jeringuilla con la aguja y el volumen de sangre sobrante. 3. desinfecte ambos lóbulos y los pliegues de la piel de cada codo. absténgase de palpar la vena seleccionada con los dedos.

equivalente a un 1/3 de un tabaco) y sí fueran sólidas unos 30 ml (una onza fluida) en un frasco limpio y seco. en el análisis de varias muestras (6 a 8) enviadas al laboratorio en días alternos. Indicaciones al paciente: las generales. no correspondiéndose este resultado con el cuadro clínico. ya que en ocasiones los resultados negativos estando el paciente parasitado debido a que diversas especies presentan las llamadas fases negativas. 102: Toma de muestra de la linfa auricular: a) Colocación de la pinza en el lóbulo de la oreja. se debe realizar un examen seriado. Si el examen de una muestra resulta negativo.) Heces fecales Concepto: Material que se forma en el intestino básicamentea partir de los residuos del material ingerido no digerido. con el empleo del laxante (sulfato de magnesia) se logra evacuaciones de heces líquidas o al menos blandas que permiten detectar con 183 . Procedimiento: En el caso de heces destinadas para examen parasitológico. etc. La primera muestra debe recogerse por defecación espontánea y las sucesivas. lágrimas) o producidos en el reservorio donde se han acumulado (heces. algunas mediante la inducción con laxantes y otras. por lo que el examen de varias muestras en periodos de tiempo diferentes aumentan las probabilidades de localizar e identificar la especie. provisto con tapa de rosca. consistente. sudor. aunque existan en el tracto digestivo. Excreciones Concepto: Compuestos excretados por las glándulas (saliva. Se indicará al paciente recoger 10 ó 20g de heces sólidas (aproximadamente del tamaño. al igual que la primera de forma espontánea. sin vestigios de sustancias antisépticas. En todos los casos las heces deben ser recién emitidas. orina.Fig. durante las cuales no aparecen sus elementos de diagnóstico. b) Incisión con el bisturí en la zona isquémica. preferentemente incoloro y transparente.

Orina (para urocultivo) Concepto: La orina es un líquido secretado por los riñones. Comenzar a orinar desechando el primer chorro. con similares características que el empleado para el examen parasitológico. desechando el resto de la orina. En todos los casos la muestra debe ser recogida en frascos estériles entregados por el laboratorio. el cual debe ser solicitado en el laboratorio. las probabilidades de contaminación con los gérmenes procedentes de la microbiota residente o transitoria aumentan. Procedimiento: 1.mayor frecuencia la presencia de quistes y huevos de helmintos. Además de células epiteliales leucocitos y eventualmente hematies. Tapar el frasco inmediatamente y enviar la muestra al laboratorio antes que transcurran dos horas. ácido hipúrico. ya que orinar sentadas. los hombres se deben retirar bien el prepucio y las mujeres separar los labios. 3. Aseo matutino de genitales externos con agua y jabón. ácido urico. Destapar el frasco estéril y depositar con cuidado de 10 a 20ml de la porción media. glucosa etc. contrario a lo que ocurre con las heces sólidas. que recoja la muestra en un frasco. 2. 184 . Nota: Las mujeres deben orinar paradas y recoger la orina "al vuelo". y otros componentes como. ser ligeramente ácida. Indicaciones específicas: 1. En los casos de niños pequeños. que se caracteriza por tener un color amarillo. y enjuagar con agua previamente hervida y yodada. Aguantar la micción. se emplean colectores estériles que deben ser cambiados si la misción se demora o si se contamina con heces. Está compuesta principalmente por agua en la que se encuentran en disolución diversos compuestos. tener un olor peculiar y un sabor salino. urea. Para realizar con efectividad el aseo. etc. No orinar después de las doce de la noche. como. como es lo habitual. En el caso de heces destinadas para coprocultivo: Indicar al paciente. 2. pero estéril.

Pus (ya explicado en la toma de muestras de piel) . Al igual que para la toma de muestra de la lesión seca en piel. humedecida en alcohol etílico al 70 %. tomar la muestra en el entorno del borde sin tocar la piel. Procedimiento: a) Lesión abierta en piel. fino. recolectando la descamación en el interior de una placa de Petry estéril. Los más comunes son el pus y el esputo: . d) Lesión grasienta o purulenta. que es expectorada por las vías respiratorias superiores.Esputo. puncionando la lesión con una aguja insertada a una jeringuilla. Indicaciones específicas: Suspender cualquier tratamiento local. el cual le será retirado en el laboratorio. (escamosa en piel). el paciente debe asearse la zona de la lesión con agua y jabón. Con hisopo estéril. e) Fístula. pero específicamente en el punto mas elevado de la colección purulenta. y colocarlos en el interior de una placa de Petry estéril. b) Absceso subcutáneo. c) Lesión seca. g) Observar la cabellera del paciente bajo la luz de una lámpara de Wood. raspar la lesión con un bisturí.Faneras Concepto: Término general aplicado a las infecciones persistentes en la superficie de la piel. PRODUCTOS PATOLÓGICOS Concepto: Producto resultante de la actividad de algunos microorganismos al interactuar con los tejidos. En los accesos fríos se toma igualmente con aguja y jeringuilla. Desinfectar previamente el orificio y tomar la muestra con hisopo fino estéril en profundidad. Materia densa y viscosa. previa desinfección de la piel. En los abscesos calientes. se toma la muestra. el pelo o las uñas. 185 . La noche anterior a la toma de la muestra. eliminándose por la boca o siendo deglutido. f) Uñas. recobrando el material en el interior de una placa de Petry estéril. Previa desinfección de la zona con una torunda estéril. enjuagándose con solución salina fisiológica estéril cubriendo la lesión con apósito estéril. 48 horas antes de la toma de la muestra. mediante el esfuerzo de tos profunda. Tamponar la lesión con solución salina fisiológica estéril. la de muestra de la uña infectada se realiza mediante raspado de la superficie y debajo de la uña con un bisturí. Con una pinza de disección arrancar varios cabellos que se observen fluorescentes. para seguidamente tomar la muestra con hisopo.

por la parte externa del frasco. 3. 19. 2. 5. 4. seguida de tos profunda. 10. retirar las prótesis y realizar aseo matutino bucal. 18. Nombre los diferentes líquidos orgánicos que se obtiene del paciente para investigaciones microbiológicas.Indicaciones específicas: 1. Enviar lo antes posible la muestra al laboratorio (separada de la orden de análisis). 14. Recoger en un frasco estéril con tapa de rosca y color ámbar la primera expectoración de la mañana. 13. 12. mediante inspiración. 7. 15. ¿Que implicaciones puede tener la demora en la realización de la siembra? Explique los diferentes métodos empleados para la conservación de las muestras. 17. Durante la recolección del esputo evitar que se produzca derramamiento del mismo. En su opinión que es una muestra? ¿Que usted entiende por muestras representativas? Refiérase a las diferentes causas que pueden afectar la representatividad de una muestra. adecuado. 6. Para la recepción ver capítulo de Bioseguridad. 3. 2. 16. Al levantarse en horas de la mañana. 11. 4. La cantidad de muestra a tomar? ¿En que momento se debe tomar la muestra? ¿Porque es importante delimitar el área anatómica de donde se va a tomar la muestra? ¿En que consiste las precauciones de asepsia? ¿Que instrucciones generales debemos dar al paciente que tiene indicado un examen microbiológico? ¿Que es un exudado? Nombre los diferentes tipos de exudado que podemos tomar del paciente. ¿Como usted procede para obtener una muestra de linfa para el paciente? ¿Cómo se le indica al paciente recoger las muestras de heces fecales para examen parasitológico? ¿ Que instrucciones debe seguir el paciente para recoger muestras de orina para urocultivo? ¿Como usted toma las muestras de las faneras? ¿Que indicaciones le daría al paciente para recolectar una muestra de esputo con calidad? 186 . 8. Describa el procedimiento a seguir para obtener del paciente una muestra de sangre para hemocultivo. tratando de no recoger saliva. 9. CUESTIONARIO 1. ¿Que importancia tiene para usted.

El procedimiento a emplear para el montaje de las muestras en láminas. Para la realización del examen microscópico. la muestra a emplear se utiliza. etc. aunque en algunas ocasiones resulta pertinente centrifugarla para concentrar los elementos. sin rayaduras ni manchas. variará en dependencia de los objetivos que se pretenden con la microscopía y de la muestra de que se trate. el propio tubo que contiene el sedimento o una pipeta estéril. la manera de agruparse y sus afinidades tintoriales. así como. los procederes básicos.CAPÍTULO 14 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS INTRODUCCIÓN La microscopía. deposite una gota de la muestra en el centro de la lámina portaobjetos. huevos de hemintos. En los exámenes microscópicos. DIFERENTES MÉTODOS Preparación de muestras en láminas para examen microscópico en fresco Para la realización de este montaje. leucocitos y otros elementos de interés como pueden ser. Empleando un asa de platino previamente flameada. sin la adición de ningún reactivo. constituye junto con el cultivo y las pruebas de identificación. larvas. ni procesamiento previo. detectar la presencia de células. 187 . las muestras a investigar deben ser preparadas previamente sobre láminas portaobjetos escrupulosamente limpias. esencialmente se pretende observar: la morfología de los microorganismos y/o sus diferentes estructuras. Procedimiento: 1. que presuntivamente contiene y facilitar su localización durante la realización de la microscopía. tal y como se obtuvo. sobre los cuales se sustenta el diagnóstico microbiológico de laboratorio.

Si el volumen de la gota fue el adecuado. debido a insuficiente cantidad de muestra y si se derrama por fuera del cubreobjetos. procediendo a emulsionarla en la gota de suero fisiológico. Para evitar que queden espacios con burbujas de aire. 188 . Proceda a flamear al rojo un asa de platino y una vez fría. debe quedar. b) Colocación encima de la muestra de una lámina cubre objetos. Método de la gota colgante Este método se emplea específicamente para constatar mediante la observación microscópica si el microorganismo en estudio es o no móvil. exactamente debajo de toda el área del cubreobjetos. una pequeña porción de la colonia. el error en el montaje sería por exceso. la colocación del cubreobjetos debe efectuarse suavemente. l03: Preparación de muestras en láminas para exámenes microscópicos: a) Depositar una gota de muestra en el centro del portaobjetos. 2. En ambos casos se debe repetir el montaje. 2. Procedimiento: 1. tome una asada del cultivo germinado en medio de cultivo líquido y deposítela en el centro de una lámina cubreobjetos. Coloque la lámina excavada sobre el cubreobjetos. Si quedara algún espacio sin cubrir se incurriría en error por defecto. Coloque sobre la mesa de trabajo una lámina portaobjetos excavada y auxiliándose de un aplicador unte petrolado en todo el perímetro de la excavación. Si el microorganismo a examinar se hubiera desarrollado en un medio sólido se procederá a colocar previamente sobre la lámina cubreobjetos una gota de suero fisiológico y posteriormente se tomará con asa de platino estéril y fría. 3.Fig. de manera que la preparación quede justamente debajo de la excavación y ambas láminas queden pegadas por el petrolado. Coloque sobre la gota de la muestra o sedimento una lámina cubreobjetos.

189 .4. de manera que el cubreobjetos quede encima con la preparación la cual quedará colgando. d) Viraje de la preparación. Debido al ínfimo tamaño o la composición bioquímica de las diferentes estructuras. Ejemplo: Examen directo de heces fecales. La preparación en láminas se efectúa por dos procederes diferentes: la adición del colorante a la muestra o la preparación de frotis. con el empleo del colorante Eosina. antes de ser colocada la lámina cubreobjetos. 104: Esquema de una preparación de gota colgante: a) Portaobjetos con una excavación central rodeada de un anillo de petrola to. Preparación en láminas de muestras coloreadas Este método se utiliza cuando se requiere teñir a los microorganismos y/o su entorno. c) Ensamblaje de la lámina excavada con el cubreobjetos. para su mejor observación o para determinar sus afinidades tintoriales. Adición de colorantes a la muestra Se procede exactamente igual que para la preparación en fresco con la diferencia de que la muestra es emulsionada con el colorante en cuestión. se requiere en cada caso técnicas de tinción especiales para la coloración de cada una de ellas. En estas condiciones se coloca en el microscopio para su observación. b) Cubreobjetos con una gota de cultivo. Fig. Con un movimiento suave voltee sin temor la preparación.

de manera que la parte posterior de la lámina sea lamida por la llama. La exposición al calor directo provocará que las estructuras de naturaleza proteíca. ya que los microorganismos cuando se hayan en un medio líquido tienden a estar muy dispersos. se debe echar previamente en el centro de la lámina portaobjetos una gota de solución salina fisiológica y posteriormente emulsionar la colonia con un asa de platino estéril con la que se hará la extensión. lo que provocará que la preparación quede adherida a la lámina y no sea desprendida después de la coloración por el agua que se utilice para eliminar el exceso de colorante. Si el frotis se fuera hacer empleando una colonia germinada en medio de cultivo sólido. Debe ser grueso. deposite sobre la lámina portaobjetos una cantidad suficiente. déjelo sobre la mesa de trabajo hasta que el agua residual que contiene se evapore y se seque.Preparación de frotis El frotis consiste en una extensión de la muestra con hisopo o asa de platino sobre la lámina portaobjetos. Si la muestra o el cultivo fueran líquidos. 105: Preparación de una preparación sobre láminas portaobjetos. 190 . de manera que al sacarse quede formando una capa. que le permita hacer un frotis grueso con ayuda de un asa de platino estéril. el frotis debe hacerse muy fino para que se pueda distinguir adecuadamente su agrupación característica. se coagulen. los microorganismos están muy conglomerados. Procedimiento: Fig. Debido a que en las colonias. Una vez seco el frotis. Si desea acelerar este proceso puede introducirlo en una incubadora pero nunca. en la llama del mechero para acelerar el proceso ya que los gérmenes pueden deformarse y generar confusiones al microscopista. de manera que la extensión quede hacia arriba. Después de realizado el frotis. tome la lámina por los bordes con los dedos índice y pulgar. lo cual dificulta su localización en el examen microsocópico en la medida en que el frotis sea demasiado fino. Pase la lámina directamente por la llama del mechero dos o tres veces.

Especifique para qué se realiza el método de la gota colgante.Fig. Describa el procedimiento para el montaje de muestras para la observación de examen en fresco ente cubre y portaobjetos. 3. 106: Fijación de un frotis a la llama del mechero. CUESTIONARIO 1. 6. ¿En qué consiste un frotis? Explique las diferentes maneras de preparar los frotis de acuerdo al tipo de muestra de que se trate. 2. 4. 5. ¿Cómo usted fija los frotis? ¿Con qué objetivo se fijan los frotis? 191 .

Carmín: Se produce. los siguientes: 1. un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir. los colorantes se clasifican en naturales y sintéticos. encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia. CONCEPTO Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico. 192 . levaduras y protozoarios. en su estado natural. generalmente tintes. siendo necesario colorearlas por diferentes métodos de tinción que factibilicen su observación y distinguir las características morfológicas y estructurales que sirvan de datos para su identificación genérica. pigmentos. 2. por lo que resulta muy difícil su observación en las preparaciones acuosas sobre láminas portaobjetos. sometidas a la intensa iluminación que se requiere en los exámenes microscópicos de campo brillante.CAPÍTULO 15 COLORANTES Y COLORACIONES INTRODUCCIÓN Las bacterias. carecen de color. Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que contiene indican. reactivos u otros compuestos. el cual se fermenta para producir el colorante. FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES Atendiendo a la fuente de obtención. empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos. debiendo tener al menos. mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis". teniendo un aspecto semitransparente. 3. Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenes de los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria. Colorantes naturales Los colorantes naturales son básicamente histológicos.

Clasificación de los colorantes. Colorantes sintéticos Se obtiene de la anilina. ácidos y neutros. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: básicos.4. 193 . GRUPO QUINONIMINA SUB-GRUPO TIACINA ACINAS C O LO RAN T E Azul de metileno Toluidina Rojo neutro Safranina C Nigrosina Verde malaquita Verde Brillante Violeta cristal Eosina B e Y Mercuro Cromo 220 FENILMETANO DIAMINOTRIFENILMETANO XANLEIRO FLUORANA Rosa de bengala SULFONSFTALEINA Azul de bromofenol Verde bromocresol Azul de bromotimol Rojo cresol Fenolftaleina Rojo fenol Azul timol Acriflavina Naranja de acridina ACRIDINA CLASIFICACIÓN Los colorantes se clasifican. Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundo de México y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium campechianum. Atendiendo a su estructura química se agrupan de la siguiente manera: Cuadro: 9. teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el aniòn o el catiòn de su estructura química. o es mas exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno.

cloruro de azul de metileno+. mientras que el catión no tiene propiedad. Reacción física Ocurre un fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas. Reacción química Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fósfato combinándose como colorante básicos cargados positivamente. constituye el colorante neutro. donde el precipitado resultante. AFINIDADES TINTORIALES En el proceso de la coloración. por lo tanto el proceso de la tinción generalmente resulta letal para los microorganismos. lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador según sean los objetivos con la sustancia colorante. 194 .de sodio+ Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de colorantes ácido y básicos. que tiene la propiedad tintorial de sus componentes ácidos y básicos. como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al microorganismo. por ejemplo: la giemsa. pero si el fondo del campo microscópico. soluble exclusivamente en alcohol. por ejemplo: eosinato.Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión. provocando su inmovilización. Veamos algunos ejemplos: 1. considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula. Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinción se reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador. por ejemplo: . mientras que el anión no tiene esa propiedad. la sustancia colorante esta a cargo del anión. TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. ocurre una combinación de reacciones físicas y químicas. empleándose como colorante de contraste para colorear su entrono. Colorante ácido: Sucede todo lo contrario. VENTAJAS Y DESVENTAJAS Los colorantes son sustancias tóxicas.

y la de Ziehl Neelsen. Entre los métodos mas utilizados se encuentran: La coloración de Gram. En consecuencia se puede determinar algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de los demás. etc. siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. me195 . Los colorantes se aplican. violeta cristal y fuscina fenicada. entre otros. Tinción compuesta En este tipo de tinción. 4. azul de bromotimol. Ejemplo: rojo fenol. por lo que reciben también el nombre de coloraciones diferenciales. Coloración de Gram En 1884. Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador. ideó un método de coloración. Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir. a la preparación. algunos incluso han resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del mercado. el más empleado en los laboratorios de bacteriología. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno.2. utilizándose fundamentalmente para observar su morfología y tamaño. el danés Hans Chistian Gram. formando parte de la composición de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como consecuencia de su actividad metabólica. por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas. Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos. mas que para teñir. los métodos de coloración se clasifican en: Tinción simple. sino como indicadores de pH. que es en la actualidad. METODOS DE COLORACIÓN Atendiendo a los objetivos que se persigan. Tinción simple En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se tiñe rápidamente el microorganismo. con fines de microscopia. tinción compuesta y tinción especial. separados o juntos. se utiliza más de una sustancia tintórea. Por ejemplo: el verde de malaquita. Otros se emplean como desinfectantes microbianos. 3. formando parte de una solución. 5.

.. hasta enrasar en 100 ml.. 196 .. Rotular.. .... 80 mL ...... revolviendo constantemente con el brazo del mortero..... queda teñida de color violeta o de color rojo.... 300 ml Preparación (en un mortero): .... Agregar poco a poco el agua destilada........ Envasar en frasco ámbar o plástico no transparente con tapa de rosca y rotular.......Violeta de genciana ................. " Dejar la preparación en reposo durante 24 horas y filtrarla con papel de filtro. Agregar los cristales de ácido carbólico y mezclar..... ................. 2. Con el resto del agua........................... Mezclar los cristales de yodo con los de yoduro de potasio.......... .10 mL . enjuagar el mortero y añadir este residuo con cuidado en la probeta. Lugol de Gram........ ........ 2g ... Diluir los cristales de violeta de genciana en alcohol.......... 1g ............ Cristales de yodo ... 100 mL Preparación ( en un mortero): ... Echar la mezcla en una probeta graduada de 100 ml de capacidad.. ................... Yoduro de potasio ... la bacteria sometida a esta tinción.. 1g . ....... Colorantes y reactivos 1........... Acetona . Alcohol etílico 95 % . Revolviendo constantemente. ......... .................... Solución violeta de genciana al 1% ..... .....Cristales de ácido carbólico... envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca......................Agua destilada ... Después de diluida la acetona en el alcohol..........Alcohol absoluto..... 20 ml Preparación . Añadir el resto del agua. en dependencia de la composición químico de la especie. Agua destilada .. Agregar poco a poco las dos terceras partes del agua destilada.... Envasar en frascos de vidrio de color ámbar con tapa de rosca o preferiblemente con tapa de vidrio esmerilado.. 3...diante el cual...... 2g ..... Alcohol etílico 95 % o alcohol acetona al 20 % ...... con ayuda del brazo del mortero.........

100 ml Preparación ( en un mortero): . Echar sobre la preparación el alcohol etílico 95 % o el alcohol acetona al 20 %.... Solución de Safranina al 1 % .. hasta cubrir el frotis dejando que actué durante 30 segundo. el agua 197 . Secado de lámina Al concluir el proceso de coloración... 1. Esta operación debe durar aproximadamente de 1 a 2 minutos. Lavar con agua corriente. Lavar la lámina con agua corriente. Verter la solución de violeta de genciana. Lavar la lámina con agua corriente.. Procedimiento Después de fijado el frotis a la llama del mechero. Envasar en frascos de vidrio o plástico. 7. .. hasta que se evidencie que este solvente no extrae mas el colorante violeta.. Lavar la preparación ligeramente con agua corriente. 6. 8. 4. 3...... 107: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Gram.. .... 5.. Echar sobre la preparación el lugol de Gram. dejando que el colorante actué por espacio de 30 segundos... la lámina se debe colocar de canto para que se escurra... Fig... Echar sobre la preparación la solución de safranina. Debe tenerse en cuenta que el agua y en especial.. Safranina . Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro. 2. 1g .. dejándola actuar por espacio de 30 segundo...... Agua destilada . hasta cubrir el frotis. colocar la lámina sobre el puente de coloración..4... Echar la safranina en un mortero y añadirle poco a poco al agua destilada hasta diluir el colorante....... Rotular....

Principios A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace mas de un siglo. Al adicionar el decolorante (alcohol etilicio o alcohol acetona) algunos géneros no son afectados por estos solventes. cuando los microorganismos presentes en el frotis son expuestos a la acción colorante de la violeta de genciana. lo que permite al solvente penetrar y extraer el complejo violeta-lugol. existiendo controversias al respecto. dejando a la bacteria nuevamente incolora. El criterio mas generalizado es que la violeta y el lugol forman un complejo que reacciona con los componentes bioquimicos de la pared celular deshidratada.destilada. por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo demasiado tiempo quita parte del colorante. fijándose en esta. que se adiciona con el objetivo de formar un complejo violeta-lugol. Al echar finalmente la solución de safranina (que es de color rojo ) las especies que no fueron decoloradas. en otros géneros la barrera que se produce es más permeable. en tanto que los géneros que fueron decolorados por el alcohol. todos los géneros que se encuentran en el frotis se tiñen de color violeta. sino un mordiente. Lo ideal es escurrir la lamina poniéndola de canto y seguidamente secarla con papel de filtro. mantienen la coloración violeta ya que la safrania es un colorante mas débil que la violeta y su adición no influye significativamente en cambio de color. en tanto que otros son decolorados quedando la bacteria nuevamente incolora. es un agente decolorante. para fijar el color en la bacteria. no se produce ningún cambio de color. Diagnóstico microscópico Las bacterias que se observan de color violeta se clasifican como Gram positivas y las que se observan de color rojo. como Gram negativas. Al adicionar el lugol. lo que da lugar. Fundamento técnico En el primer paso de la coloración. la reacción resultante será obviamente diferente. adquiriendo un color de rosado o rojo. se tiñen con la safrina. aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción. no es igual en todos los géneros. 198 . ya que el lugol no es un colorante. Teniendo en cuenta que la composición química de la pared. que mientras algunos géneros retienen firmemente el colorante al resultar el complejo impenetrable para el decolorante. reteniendo por consiguiente el color violeta aplicado inicialmente.

... 1g ..... . Añadir el resto de la solución de fenol hasta enrasar a 100 ml... con alguna que otra modificación en función de las particularidades de la especie en estudio..... Fig... tienen la propiedad de retener el colorante con que han sido teñidas.... Colorantes y reactivos . Alcohol clorhidrato al 3 % . .... 100 ml Preparación: . Envasar en frascos de vidrio de color ámbar y rotular.. ..3 ml 199 . Moler en un mortero 1g de fucsina y añadir en la probeta que contiene los 50 mml de la solución del fenol.. 5g .. 108: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Ziehl Neelsen... Fucsina básica ....... Este método se utiliza hoy en dia.... Dejar la preparación en reposo por espacio de 24 horas y filtrar con papel de filtro.... Lavar el mortero con la solución de fenol y añadir ese residuo en la probeta.... 1. Cristales de fenol .. Fue modificada y perfeccionada posteriormente por Ziehl y Neelsen. 2... Ácido clorhídrico concentrado.Coloración de "Ziehl Neelsen Algunos géneros microbianos dentro de los que se incluyen las microbacterias.. Disolver los 5g de fenol en 100 ml de agua destilada...... Alcohol absoluto ..... aunque sean sometidos a la acción de solventes tan fuertes como los ácidos para su decoloración.... 97 ml . descubridor del agente causal de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis o Bacilo de Koch. Agua destilada . ........... el primer método de coloración para este tipo de microorganismo..... fue concebido y aplicado por Robert Koch. Alcohol etílico ............ Echar 50 ml de la solución en una probeta graduada de 100 ml de capacidad. 10 ml .. ................

Agregar poco a poco... Agua destilada. 3. 4...Preparación .......... ..0 ml El cloruro de azul de metileno es hidrosoluble.. ..... Rotular.. por lo que su dilución se realiza sin ningún tipo de contratiempo Preparación.............. 200 ....... Rotular.... Una ves diluido...1g . 1...... Rotular..... .... Solución de ácido sulfúrico al 20 % .. 100....... ............ Envasar en frasco de vidrio con tapa de rosca.. los 20 ml de ácido sulfúrico a los 80 ml de agua destilada.. Agua destilada ........ Envasar en frascos de vidrio con tapa de rosca. Retirar el mechero y dejar que el colorante actué sobre el frotis por espacio de 5 minutos. . con cuidado..... Cubrir el frotis con fucsina fenicada y oscilar suavemente la llama del mechero por debajo de la lamina.... Agregar los 3ml del ácido clorhídrico a los 97ml de alcohol etílico. Envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca....... Solución de azul de metileno (Colorante de contraste) .. Si en ese tiempo el colorante se secara... Preparación. pero sin volver a calentarlo.. Ácido sulfúrico...... 80 ml.. Cloruro de azul de metileno ..... (Nunca a la inversa)....... . añadir más.. Procedimiento: Después que el frotis se ha secado colocar la lamina sobre el puente de coloración.... 0.. hasta que el colorante calentado comience a emitir vapores. dejar en reposo por 24 horas y filtrar con papel de filtro...... 20 ml....

pero las especies que si fueron decoloradas. Lavar la lámina con agua corriente. se tiñen de azul. con lo cual el microorganismo se mantiene teñido. hasta que se observe que el solvente no extrae mas colorante de la preparación. al igual que las células epiteliales y otros artefactos presentes en la preparación. no sufren ninguna alteración permaneciendo de color rojo. Principio: Las microbacterias.A. después de teñidos por la fucsina. el compuesto lipidico impermeabiliza la pared a la acción del decolorante ácido. 4. Esta operación debe durar aproximadamente unos 2 minutos. independientemente de que dispongan o no de ácido micolico en sus respectivas paredes celulares serán coloreados de rojo. Al normalizarse la temperatura de la preparación. hace que la misma se permeabilice y haga accesible la penetración de la fucsina. 6. Diagnóstico microscópico Los bacilos que se observan coloreados de rojo están diagnosticados como B. dejando actuar el colorante de 30 segundos a un minuto. El resto de las especies. las especies que posean el ácido micolico en la pared. Añadir la solución acuosa de azul metileno. que no disponen de ácido micólico en su pared o membrana.R. ladeando la lámina y lavarla con agua corriente. todos los microorganismos. (Bacilos ácidos alcohol resistentes) 201 . así como las células epiteliales y otros artefactos. tiñéndose la pared celular. 3. Dejar que la lámina se seque al aire sin aplicar papel de filtro para acelerar el secado. 5. 7. La acción del calor. resisten la acción decolorante y se mantienen teñidas de rojo. Verter el exceso de colorante de la lámina. se caracterizan por tener una alta proporción de ácido micolico (lípidos) en su pared celular. Echar sobre frotis la solución de alcohol clorhídrico o en su defecto la solución acuosa de ácido sulfúrico. introducido en este método.2. Fundamento técnico Al someter el frotis a la acción de la Fucsina. Al aplicar el decolorante ácido. Lavar la lámina con agua corriente. Al aplicar la coloración de contraste (azul de metileno) las bacterias que retuvieron el color proporcionado por la fuscina. dejando actuar el decolorante.A. como el Mycobaccterium tuberculosis y otras especies susceptible de ser coloreadas por esta técnica. son decolorados. en tanto que las demás se quedan incoloras.

11. granulos. tales como flagelos. 8. 5. Lavar la lamina con agua corriente escurrir y dejar secar al aire.tuberculosis. Repetir el paso 3. destinadas a la tinciòn de las diferentes estructuras de la celula microbiana. Dejar actuar el colorante de contraste por espacio de 1 a 2 minutos. para hacer mas efectiva su tinciòn. Colocar la lamina sobre el puente de coloración y cubrirla con azul de metileno. Dejar actuar el decolorante por espacio de 2 minutos. Dejar actuar los vapores de formol por espacio de 3 minutos. es diferente a la del M. Pase la lámina 3 veces por la superficie de la llama del mechero. etc. 202 . Colocar nuevamente la lamina sobre el puente y cubrirla con alcohol clorhídrico al 1%. Lavar la lamina con agua cruda. En este tema haremos referencia solo a algunos metodos empleados con mayor frecuencia. Sacar la lamina del vaso de koplin y pasarla nuevamente 3 veces por la llama del mechero. 6. lo que ha dado lugar a una modificación del metodo de tinciòn clásico. proceda de la siguiente manera: 1. Coloque la lamina sobre el puente de coloración y cubrala con fuscina basica. verde de malaquita o hematoxilina. NOTA: Estos colorantes se comercializan ya elaborados por diferentes empresas. Lavar la lamina con agua cruda. una pequeña mota de algodón impregnado con 3 gotas de formol al 40 % 3. esporas.leprae. Procedimiento: Después que el frotis se ha secado al aire. Coloque en el fondo de un vaso de koplin. generalmente no susceptible de ser coloreados por los metodos anteriormente explicados. 10.Ccoloración de Ziehl Neelsen (modificada para Mycrobacterium leprae) Justificación: La capacidad de acidorresistencia del M. capsulas. 4. 2. Tinciones especiales: Existen decenas de metodos de coloraciones especiales. Intriouzca la lamina en el vaso de Koplin y tapelo. 9. Dejar actuar el colorante por espacio de 20 minutos 7.

...Fuscina basica (certificada para colores flagelos) . Lo que propicia que al ser posteriormente coloreado.........Alcohol etílico 95% . Colorantes y reactivos Solución A: .... 100............ Los cultivos tienen que ser jóvenes..0 ml Preparación: Mezclar a volumen iguales A y la B........... 0...... Las laminas portaobjetos y cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpias sin el mas minimo vestigio de grasa......... 2.. para lo cual se emplea una suspensión de acido tanico que al precipitarse sobre su cubierta forman una capa que aumenta aparentemente su diámetro.. Envasar en alícuotas de 50 ml................. Ajustar el pH con NaOH/1N....... 100........ cuyo diámetro no excede de los 30mm..1.Coloque sobre la mesa de trabajo 3 láminas portaobjetos limpias y acabadas de calentar....... lo cual esta muy por debajo del poder de rersouciòn del micrososcopico optico....... 1.Cloruro de sodio. tanto los flagelos como su disposición con respecto al bacilo se hagan visibles al microscopista............75g .. Los medios de cultivo empleado para el desarrollo de las cepas deben ser adecuados...... 203 ..........Coloración Fragelar de Leifson (modicficación de Clark) Los flagelos son estructuras..Acido tanico. Guardar congelado en refrigeración (Tiempo de conservación: 1 mes)..... Las laminas a emplear deben calentarse previamente y enfriarse a la temperatura corporal..... para que los frotis se sequen con rapidez.......2g . 2....... 4.... 3. Procedimiento 1..... Para hacer visibles a los flagelos se requiere aumentar su grosor.. Requisitos a tener en cuenta Para que la tinciòn de los flagelos sea efectiva se requiere cumplir con los siguiente requisitos 1....0 ml Mezclar y dejar a temperatura ambiente Solución B ..5g .......Agua destilada... 1.

Sobre una lámina portaobjetos mezcle partes iguales del material a teñir con suero específico. Esperar de 5 a 10 segundos. Cubra el frotis con el colorante de Hiss. 6. 1.Cubra cada frotis con solución de azul de metileno 1:1. Fije la preparación a la llama del mechero. Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria.Lave con agua corriente y espere a que las preparaciones se sequen al aire. 3. Procedimiento.000 en solución acuosa 1:2. 3.Lave con agua corriente. 7. 4. 204 . casi al extremo de cada una de las tres láminas e inclínelas suavemente para que la gota se deslice (no extender con asa). polímeros de glucosa u otros aminoazucares que contienen nitrógeno. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lámina hasta que el colorante se caliente y empiece a emitir vapores. Haga un frotis fino y déjelo secar al aire.Eche sobre cada lámina portaobjetos 1mL del colorante de Leifson y déjelo actuar con un tiempo diferente para cada preparación.2.000 de borax y deje actuar el colorante por espacio de 10 minutos. Coloración de Hiss -Colorante capsular de Hiss.Deposite una gota grande de una suspensaiòn bacteriana joven.Espere a que las laminas se sequen al aire. Coloración de cápsulas La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir de polipéptidos. 2. la segunda por espacio de 10 minutos y la tercera 15 minutos. Mezclar 5 mL de solución alcohólica satura de violeta de genciana en 95 mL de agua destilada. que después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. Una de las láminas por espacio de 8 minutos. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a coloraciones especiales. 5. procedente de un cultivo líquido o del agua de condensación de un cultivo sólido. 4.

.... Coloración de Esporas Coloración de Dorner.......... Solución de nigrosina de Dorner.. en baño de agua de ebullición........ así como otras células y el fondo del campo se tiñen de rojo intenso en tanto que las cápsulas se observan incoloras y en ocasiones con un matiz azul muy tenue....... Agregar 0......... .... Hervir la solución en erlenmeyer durante 30 minutos........ Distribuir en tubos de ensayo serológico...........5 mL de formol al 40 % (como preservo) Filtrar dos veces con papel de filtro doble. En un tubo de ensayo haga una suspensión densa del microorganismo en estudio con 3 o 4 gotas de agua destilada.........5.. 3........ Dejar que la preparación se seque al aire y examinar al microscopio..Hervir de 10 a 15 minutos............ unos 5 mL por tubo procediendo a taponearlos con tapas de corcho............100 ml Preparación 1.. Dejar secar y observar a microscopio a 700x con lente de inmersión........... Las células vegetativas no se colorean y el fondo del campo adquiere un tono gris. Resultado Las bacterias...... -Nigrosina .. Lavar el colorante con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%.... 6. haciendo un frotis delgado...Agregar 3 o 4 gotas de fucsina fénica de Ziehl Neelsen..... retapándolos finalmente con papel de aluminio.... Procedimiento Coloque en el centro de una lámina portaobjetos un asa de la preparación y mézclela con un asa de nicrosina de Dorner.... 2.......... 4.. 205 ...... 10g -Agua destilada ........ Colorante. Resultado Las esporas se observan de color rojo........... ..

............. 2.......... Mencione tres tipos de colorantes naturales.. 5.. Nombre los colorantes sintéticos de uso frecuente en microbiología........ ¿En qué consiste el método de coloración simple? 11..... 3. Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro.. Procedimiento 1....... 2........ Caracterice a los colorantes de acuerdo a su clasificación. 6... 3... 4. Azul de metileno . ¿En qué consiste el método de coloración compuesta? 206 .....0 mL Preparación Mezclar el azul de metileno en un mortero... ¿Cómo tiene lugar la reacción física en el proceso de tinción? 8.. Azul de metileno............. ¿Cuáles son las ventajas y las desventajas de la toxicidad que ocasionan los colorantes a los microorganismos? 10. 1........... Lavar con agua corriente. Resultados Los gránulos se tiñen de azul oscuro y el cuerpo de la bacteria de azul claro........ CUESTIONARIO 1.. Dejar secar al aire y observar con lente de inmersión a 700x. Cubrir con el colorante y dejar actuar durante tres minutos ... ¿Cómo tiene lugar las reacciones químicas en el proceso de tinción? 9......Coloración de gránulos............... En su estado natural ¿qué color y aspecto tienen las bacterias? ¿Qué usted entiende por colorantes? ¿Cuáles son las diferentes fuentes a partir de las cuales se obtienen los colorantes? 4..5g Alcohol etílico 95 % ... 7... 100... Colorante...... Hacer frotis finos y dejar secar al aire..... añadiendo poco a poco el alcohol y revolviendo.... Preparación..........

A.A. ¿Cómo reacción las bacterias al ser sometidas a la coloración de Gram cuando se le adiciona el alcohol? 15. ¿Qué requisitos han de tenerse en cuenta para realizar una coloración de flagelos? 22.12. 23. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Gram? 13. De acuerdo al color con que quedan teñidas después de la coloración de Gram. ¿Con qué objetivo son tratadas con ácido tánico las bacterias. ¿cómo son clasificadas las bacterias? 16. ¿Por qué se debe calentar la fucsina en el proceso de tinción? 18.R. Describa el procedimiento para la realización de una coloración de Ziehl Neelsen modificada. antes de aplicar una coloración de flagelos? 21. 207 . ¿De qué color quedan los B. 20. ¿Cuál es la función del lugol en la coloración de Gram? 14. Describa el procedimiento para la coloración de cápsula. después de ser sometidas a la coloración de Ziehl Neelsen? 19. ¿Cómo se observan las esporas y las células vegetativas coloreadas con nigrosina? 25. Explique como usted realiza una coloración de gránulos. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Ziehl Neelsen? 17. ¿Para qué se utiliza la coloración de Dorner? 24.

208 . Por lo tanto la nutrición microbiana cumple dos objetivos fundamentales: la biosíntesis para la renovación de los compuestos de su estructura celular y la producción de energía. se comprenderá que no haya un medio de cultivo standard que posibilite el desarrollo de todas las especies. OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA Cuando los microorganismos son colocados en medio de cultivo apropiados. Para que un medio de cultivo resulte eficaz. se clasifican a su vez en: simples. Así como para controlar el paso de los gradientes químicos a través de la actividad osmótica de la membrana celular. sintéticos y vivos. tales como respirar. constituyendo de hecho el micromundo de los microorganismos en condiciones de laboratorio. reproducirse. que conjuntamente con las codiciones ambientales adecuadas propician su desarrollo. sus componentes deben responder a las exigencias nutricionales de las especies que se pretenden cultivar. Debido a que existen diferencias en los elementos constitutivos de cada género o especie. así como en sus actividades metabólicas y los mecanismos para obtener los nutrientes. etc. existiendo por lo tanto una amplia variedad. moverse. 2. Los medios e cultivo se clasifican: Atendiendo a su composición Atendiendo a los objetivos de su empleo. metabolizan los nutrientes para sintetizar macromoléculas que suplan el desgaste natural de sus estructuras en cuyo proceso se libera energía que es empleada en el desarrollo de las actividades fisiológicas.CAPÍTULO 16 MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCIÓN Los medios de cultivo son compuestos o preparaciones alimenticias elaboradas en los laboratorios de microbiología con los nutrientes requeridos para cada género en particular. Atendiendo a su composición. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1.

Medios sintéticos A diferencia de los medios simples. 110: Frasco con medio de cultivo deshidratado. los sintéticos están compuestos por un conjunto d nutrientes definidos cuyas proporciones son constantes. Cada uno de estos medios responde a las necesidades específicas de grupos microbianos determinados. Agar SS. jugos vegetales. etc. lo que permite reproducir el mismo medio de cualquier otro lote con exactitud. ejemplo: Agar Saboreaud. La literatura informa cada año un número cada vez mayor de medios sintéticos recomendados para cultivar todo género de microorganismos. Este tipo de medio se comercializa en forma deshidratada por diferentes empresas cubanas y extranjeras que se dedican a la elaboración de medios de cultivo. etc. Se utilizan en su forma natural. la papa. existiendo en la actualidad mas de un centenar de diferentes medios sintéticos. pierde su condición de medio simple natural y se convierte en un medio simple artificial. Ejemplo: la leche. Se puede decir que son verdaderas fórmulas químicas o recetas de cocina. las carnes. Fig. como por ejemplo: someter la carne o los vegetales a un proceso de cocción para obtener un caldo nutritivo. Kligler. tal y como se encuentran en la naturaleza. Cuando un medio simple natural sufre algún tipo de modificación.Medios simples En este tipo de medio no es posible conocer la proporción exacta de sus componentes nutricionales por ser muy variable. siendo prácticamente imposible preparar dos lotes idénticos con productos iguales de distinta procedencia. 209 .

ratones blancos lactantes. Los medios de enriquecimiento satisfacen los requerimientos nutricionales del germen objeto de estudio. c) Cultivo de tejidos Atendiendo a los objetivos de su empleo Se clasifican a su vez en: medios de enriquecimiento. se encontrarían en desventaja si la colocamos en un medio de cultivo. etc. medios de aislamiento. b) Huevo de gallina con embrión de pollo de 7 a 10 dias. conjuntamente con otras especies que se hayan en mayor proporción. 111: Medios de cultivos vivos: a) Hamster. ya que las que se encuentran predominando consumirían prácticamente casi todos los nutrientes lo que traería como resultado un pobre desarrollo o incluso ningún desarrollo del germen que nos interesa estudiar. cultivo de tejidos. donde ambas se puedan desarrollar. que se utilizan con el propósito de favorecer el desarrollo de una especie determinada que por encontrase en pequeñas cantidades en la muestra. que no se desarrollan en los medios simples o sintéticos por requerir de la presencia de células vivas para reproducirse en su interior (parásitos intracelulares obligados). al mismo tiempo que no favorecen las necesidades esenciales del resto. medios selectivos y medios diferenciales. Estos medios no tienen utilidad práctica para el cultivo de las bacterias y los hongos. Fig.Medios vivos Los medios vivos están constituidos por animales o capas de tejidos que son utilizados para el cultivo de virus y rickettsias. Ejemplos: hámster (curieles jóvenes). huevos fértiles de gallina de 7 a 10 días. Ejemplo: el caldo Selenito utilizado en la investigación del coprocultivo que 210 . Medios de enriquecimiento Son medios generalmente líquidos.

b) Cambio de color de rojo a amarillo en el fondo del medo. dificultando al mismo tiempo el de otras bacterias entéricas predominantes en el bolo fecal. Fig. el CI Na. verde brillante. como el colorante verde brillante. En este caso se aprovecha la resistencia de esta especies a ciertos agentes químicos. 112: Medio diferencial (Kligler). que puede desarrollarse y multiplicarse en este medio salino. lo cual es determinado por cambios y reacciones evidentes que de manera específica produce cada especie en el medio de cultivo. por las características del medio. que generalmente se encuentra predominando en las muestras empleadas. especialmente la Escherichia coli. Ejemplo: el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado. que se utiliza para el aislamiento e identificación de la Salmonella sp/ en materiales patológicos. de rojo a amarillo en la parte inferior o en todo el medio. que es utilizado en la investigación de las enterobacterias. Medios de aislamiento Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de germen al no poder desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies. c) Cambio de color de rojo a amarillo en todo el medio. e)Manifestación de formación de gas 211 . lo que imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con excepción de los Estafilococos.favorecen el desarrollo de los géneros Salmonella y Shigella. cuyas diferencias permiten encaminar la investigación hacia su identidad. inhibe el crecimiento de otras enterobacterias. Otro ejemplo lo constituye el medio Agar. Este medio se caracteriza porque uno de sus componentes. que sin embargo. a) Medio sin sembrar (rojo). así como la presencia o no de manchas de color negro o evidencias o no de producción de gas. Ejemplo: el medio Kligler. d) Formación de manchas de color negro desde el medio hacia abajo. Medios diferenciales En este tipo de medio de cultivo se pueden desarrollar sin dificultad diferentes especies microbianas. Después de 14 a 16 horas de incubación se puede observar que el medio de cultivo cambia de color. se encuentra a una elevada concentración. Se utiliza para diferenciar la especie desarrollada por las reacciones bioquímicas que genera su actividad metabólica.

212 . Los microorganismos desarrollados en medios líquidos. La consistencia del medio de cultivo se logra con la adicción a la fórmula. 113: Diferentes formas de crecimiento en medios de cultivo líquidos. agua.5 % de agar forma un gel firme entre 32 y 390 C que no se funde por debajo de 850 C. Para la producción de agar se extraen las capas pécticas ricas en agarosa y agaropectina. de un compuesto denominado AGAR. Es una sustancia mucilaginosa que se obtiene de algas de color purpúreo. El agar en malayo significa jalea. y Acanthopeltis. Perteneciente al grupo Agarofíto que comprende los géneros: Gellidium. para ser procesadas industrialmente. Pteroclaida. Ejemplo: Caldo Selenito. Fig. China. se mueven con libertad y su desarrollo provoca la formación de un enturbamiento difuso o sedimento visible. siendo trabajados en forma de caldo. Bioquímicamente se trata de un éster sulfúrico de una molécula lineal galáctano que es insoluble en agua fría pero soluble en agua caliente. Malasia y California meridional. Gracilaria. siendo comercializado en forma deshidratada. que proliferan principalmente a lo largo de las costas de Japón. etc.CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Atendiendo a su consistencia los medios se clasifican en: líquidos semisólidos y sólidos. peptonada Alcalina. caldo lactosado. Las paredes de la planta posee una capa interna. Ceilán. Medios líquidos Los medios líquidos no contienen agar. Una solución de 1. Como lo atacan muy pocas bacterias se emplea básicamente como solidificante. de celulosa y otra más eterna de sustancias pécticas.

COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS Como fue explicado anteriormente. La solidez proporcionada por el agar impide a los microorganismos su migración en el cultivo por lo que se multiplican en un mismo sitio dando lugar a un cúmulo de millones de descendientes que forman sobre el cultivo estructuras macroscópicas denominadas colonias de diferentes formas. 114: Medio de cultivo sólido distribuidos en placas de Petra: a) Medio sin sembrar. que permitirán al investigador orientarse hacia la identificación ulterior de la especie. Agar Violeta Rojo Bilis.5 % de agar. cantidad suficiente para la gelificación del medio. aunque ocasionalmente pueden desarrollarse a partir de dos especies distintas. Ejemplo: medio de "Cary . Medios sólidos Son medios de cultivo que contienen en su composición alrededor de 1. Fig. etc. Agar Sangre.Medios semisólidos Estos medios contienen un % de agar menor que el empleado para los medios sólidos. c)Después de 24 horas de incubación (presencia de colonias). aspectos y tamaños. uno de los objetivos de la nutrición microbiana es la biosíntesis. De lo anterior expuesto se deduce que la cantidad de Agar añadida al medio de cultivo será directamente proporcional al grado de solidez que adquiera el medio. lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad de los gérmenes. Teóricamente cada colonia se genera a partir una o varias bacterias de la misma especie.Blair" y agar semisólido para motilidad. mediante la cual el microorganismo degrada los 213 . b)Medio sembrado. Cada género y especie producirá un tipo de colonia con caracteres culturales diferentes. Ejemplo: Agar Saboreaud Dextrosa. lo que da lugar a la formación de colonias atípicas.

con los componentes que aporten a la nutrición los elementos químicos de referencia: Fuente de oxigeno e hidrógeno El solvente de todos los medios de cultivo es el agua. coli.3 Por lo tanto si pretendemos que se desarrolle una Escherichia coli.nutrientes presentes en el medio de cultivo y posteriormente lo sintetizan en el interior de la célula. siendo por lo tanto la principal fuente de obtención.5 0. por lo tanto los ingredientes con que se elabora un medio de cultivo deben responder a las necesidades específicas de la especie que deseamos que se desarrolle en él. los lípidos y los carbohidratos. por parte de la bacteria de oxigeno y nitrógeno mediante su ionización y en menor grado a través de la actividad catabólica que desarrollan sobre los compuestos orgánicos. los compuestos empleados en la preparación del medio de cultivo deben aportar todos y cada uno de esos elementos. Fuente de carbono Las formas aprovechables van desde el CO2 atmosférico altamente oxidado hasta complejas formas orgánicas. ELEMENTOS Carbono Oxigeno Nitrógeno Hidrógeno Fósforo Azufre Potasio % PESO SECO 50 20 14 8 3 1 1 ELEMENTOS Sodio Calcio Magnesio Cloro Hierro otros % PESO SECO 1 0. que en el proceso de degradación liberan en alguna proporción estos elementos. transformándolos en los diferentes compuestos que conforman su estructura.5 0.5 0. Veamos el siguiente ejemplo. donde se indican pormenorizadamente los componentes químicos de las diferentes estructuras de la Escherichia coli: Cuadro 10.2 0. Componentes químicos de las diferentes estructuras de la E. como las proteínas. 214 . A continuación haremos referencia a las distintas fuentes a partir de las cuales se pueden elaborar los medios de cultivos. Algunas bacterias utilizan el oxígeno y el hidrógeno que forman parte de la composición de aire.

pirimidinas y para la síntesis de anillos purínicos. el nitrógeno debe estar en forma de amonio. etc. huevo etc. específicamente del aminoácido. leche. Independientemente de. requieren de la presencia de proteínas. ejemplo: el azufre lo obtienen de los grupos. La mayor proporción del carbono presente en el sustrato orgánico entra en la vía metabólica para producir energía y se excreta como CO2. ejemplo: cloruro de calcio. si está en forma de N2. mas exigentes. tales como: peptonas. Otros microorganismos (heterótrofos) emplean fuentes orgánicas como las proteínas. el CO2 es la única fuente de carbono. carbohidratos y lípidos. el cual es utilizado por la mayoría de los microorganismos fotosintéticos. utilizan alrededor de 90 compuestos orgánicos diferentes como fuente de carbono y energía. 215 . O en forma de peptonas un producto intermedio del metabolismo de las proteínas. ácido cítrico o glicerina. fosfato de magnesio. transformándolas por hidrólisis en aminoácidos. Especies del género Pseudomonas. en forma de sales minerales. son suministrados a los microorganismos. el cual es empleado para la carboxilación del fosfornolpivurato para formar intermediarios biosintéticos como el carbamilfósfato como precursor de arginina. tales como: carnes. por lo que deben obtener el nitrógeno a partir de las sales de amonio que se adicionan al medio de cultivo. para obtener el carbono que los provea de energía. ya sea como cloruros. es decir. la fuente de obtención para ser asimilados por la bacteria. Estos dos elementos y otros como: hierro. Algunos géneros son incapaces de reducir los nitratos. Fuente de nitrógeno Es obtenido por los microorganismos de las proteínas y sus derivados. sulfatos o fosfatos. Fuente de iones inorgánicos Son obtenidos por los microorganismos de la materia orgánica que se encuentra formando parte de la composición del medio de cultivo. en tanto que otras. magnesio. sulfhídricos de las proteínas.Para los microorganismos fotosintéticos y litotróficos. urea o compuestos amoniacales así como a partir de fuentes inorgánicas como el nitrato. sulfato de cobre. Hay bacterias que fijan el nitrógeno mediante su reducción preliminar a amoniaco. así como productos derivados de estos compuestos como aminoácidos. cisteína y del fósforo que está presente en los ácidos nucleicos y los nucleóticos. cinc y cobalto. NO3 o nitrógeno orgánico debe ser transformado extracorporeamente en amonio para poder ser incorporado a la célula bacteriana. potasio. en la composición del medio de cultivo.

. Los m. . lo usan como fuente de electrones en forma de donadores de hidrógeno.Constituyentes de ácidos nucleicos. .Participa en la permeabilidad celular.Constituyentes del agua celular y de transporte. . .Constituyentes de los citocromos (imprescindible en la respiración celular). . . fosfolípidos y ATP. ..o. .Útil en la fijación de nitrógeno y en la reducción de nitratos.constituyente de los compuestos celulares orgánicos . .sustrato. . . .Como cofactor de varias enzimas.Regulador del grado de asociación de las partículas ribosómicas.Como aceptor de electrones en la respiración aerobia. .Participante en la unión enzima .Excretor de las enzimas.Cofactor inorgánico de varias enzimas. HIDROGENO CARBONO NITROGENO AZUFRE FOSFORO POTASIO MAGNESIO CALCIO MANGANESO HIERRO COBALTO COBRE / ZINC MOLIBDENO MAGNESIO SODIO / CLORO 216 . .Sustancia tampón para mantener el pH del medio en un rango de 4.Componente de algunas coenzimas como Co A y otros.Catión celular.Componente principal de las esporas. cofactor de algunas enzimas. . como la metionina.Catión celular. coenzimas.Constituyentes de algunos aminoácidos.Cuadro 11: función de los elementos químicos en la nutrición microbiana FUNCIONES ESPECÍFICAS DE CADA ELEMENTO ELEMENTOS OXIGENO FUNCION FISIOLOGICA (ACTUA COMO.Como parte de las hemoproteinas. cofactor de algunas enzimas.Constituyente de la clorofila. Ej.5 a 8.encimas formadas por la célula bacteriana.Los gramnegativos lo utilizan para la síntesis de la pared celular. . fotosintéticos.Constituyentes en la síntesis las proteínas. a veces remplazando el magnesio.Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales.Catión celular. . .. incluyendo aquellas con ATP. . . cofactor inorgánico para reacciones inorgánicas.Constituyentes de materiales celulares orgánicos. .Como aceptor de hidrógeno en las reacciones REDOX . .constituyente del agua celular y de transporte . Proteínasas.Constituyentes de intermediarios biosintéticos y precursores.Participante en la permeabilidad celular.Activador de determinadas enzimas.Constituyentes inorgánicos de determinadas enzimas. .Estabilizador osmótico. ácidos nucleicos y co. . . así como de materias orgánicas celulares.) . . . .Constituyente de la vitamina B12 y sus coenzimas derivadas. y la cisteína derivados del metabolismo de las proteínas.

2. teniendo en cuenta que la mayoría de los medios son de importación. Vierta en una cristalería (erlenmeyer. por lo que la elección de un determinado medio de cultivo estará en correspondencia con el microorganismo que presuntivamente esperamos que se desarrolle durante la investigación al respecto. cada uno de los cuáles. Con rigurosa precisión. atendiendo a las particularidades del medio de cultivo en cuestión. Localizar en el formulario existente en el laboratorio. 4. existen centenares de medios de cultivo diferentes. se puede elaborar a partir de los componentes que se indican en la fórmula o empleando medios comerciales deshidratados. la cual debe tener un pH y conductividad adecuada. 6. etc. Seleccionar de los estantes cada uno de los componentes del medio serciorandose de que no hayan sobrepasado la fecha de caducidad y que se observen en buen estado sin cambios organolepticos ostensibles como: resequedad. no solo desde el punto de vista económico. por ocasionar demoras evitables en el tratamiento del paciente. precipitación. Un medio de cultivo.) de tamaño suficiente aproximadamente a las ¾ partes del volumen de agua contenido en la probeta. formado por diversos compuestos en proporciones fijas que constituyen su fórmula particular. la fórmula del medio que se desea preparar (generalmente indicada para un litro). Elaboración a partir de sus componentes 1. Mida en una probeta graduada el agua destilada a emplear. pero su calidad dependerá esencialmente del cumplimiento estricto de los pasos establecidos. etc. cambio de color. Y proceda a colocarla sobre una fuente de calor con el objetivo de tibiar el agua. hidratación. Como ya se explicó. teniendo especial cuidado en desestimar el peso de "tara". 217 3. . sino por lo que resulta mas importante. los errores en el diagnóstico de laboratorio ocasionado por el empleo de medios deficitarios que menoscaban la fiabilidad de la institución. con todos los efectos negativos que eso entraña. a emplear en una balanza adecuada. La variabilidad de los medios responde a los requerimientos nutricionales de los distintos grupos microbianos. Mida con precisión cada uno de los productos líquidos a los volúmenes exactos que se indican en la fórmula. matraz. 5.ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO Elaborar un medio de cultivo es un procedimiento relativamente fácil. que realicemos en el laboratorio. así como obviar determinados requisitos pre establecidos son causas frecuentes de su mala elaboración. pese por separado cada uno de los productos sólidos. La premura.

El nombre del medio de cultivo." etc. en la cristalería donde fue pesado (Ej.7. Coloque sobre el plato de una balanza granataria una cápsula de porcelana o un vidrio reloj limpio y proceda a determinar su peso (tara) 218 5. 10. Ejemplo: "Agar Saboreaud Dextrosa". Si se observa que los componentes no quedan disueltos.) o medido. Para determinar que el medio se ha diluido. Estos medios se expenden en frascos de tamaño variable con tapa de rosca hermética estando provistos de una etiqueta en la que se encuentran impresos los siguientes datos: 1. El pH a que debe ajustarse e medio después de hidratado y antes de su esterilización. lo comercializan en forma deshidratada (pulverizados) que contienen la totalidad de los ingredientes. "Kligler". . 9. Las instrucciones para hidratar el medio donde se precisa la cantidad de medios deshidratados que debe pesarse para preparar un litro. procediendo a continuación a verterlo en el resto del medio para que la proporción estipulada en la formula no se altere. Proceda a adicionar en el agua tibia los compuestos pesados y medidos previamente.S. 11. Elaboración a partir de medios comerciales deshidratados En la actualidad diversas empresas dedicadas a la fabricación de medios de cultivo. con lo que se evita el tener que pesar o medir previamente cada uno de sus componentes. por unos minutos imprimiendo intermitentemente movimiento de rotación al frasco. etc. donde se relaciona cada uno de sus componentes y las proporciones respectivas. En el caso que no se requiera preparar ese volumen se harán los cálculos pertinentes. se enjuagará con parte del volumen de agua que queda en la probeta. observe las paredes del recipiente durante su agitación. someter el medio nuevamente a la acción del calor. dándole en cada ocasión un movimiento de rotación al frasco para que los ingredientes se mezclen. "Mac Conkey" "S. 4. 2. La fórmula del medio de cultivo. en el orden que se establece en la fórmula. mientras presenta gránulos es evidente que aún no se ha disuelto. Cápsula de porcelana. Retire la cristalería de la fuente de calor una vez que el agua esté tibia y colóquela sobre la mesa de trabajo 8.Adicionar el agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen de medio previsto. 3. vidrio reloj. Si quedara algún residuo.

Baje el recipiente de la fuente d calor y proceda a verter en su interior. 115 : Datos que se encuentran en la etiqueta de los frascos de medios de cultivo. 7. Debe evitarse el recalentamiento excesivo que provocaría la caramelización de los azúcares y el deterioro de otros compuestos nutritivos básicos. 11. añadiendo el resto del agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen total previsto. Coloque nuevamente el recipiente sobre la fuente de calor. 10. Mida en una probeta graduada el volumen de agua destilada a emplear y vierta aproximadamente las ¾ partes d ese volumen en un erlenmayer o matraz de tamaño suficiente. imprimiéndole movimientos de rotación cada 30 ó 40 segundos hasta observar que en las paredes de la cristalería no se detecta la presencia de granulaciones lo cual será sugerente de que el medio no se ha diluido adecuadamente. Coloque el recipiente sobre una fuente de calor durante dos o tres minutos para que el agua se tibie. 8. con sumo cuidado. 9. Revuelva con el depresor plástico e incorpora este residuo en el erenmeyer que contiene el medio . 12. 6. Con el empleo de un depresor o cuchara plástica extraiga del frasco el medio de cultivo deshidratado y deposítelo en el recipiente que se encuentra en el plato de la balanza hasta que la punta de la barra coincida con el "fiel". el medio deshidratado ya pesado que se encuentra en la cápsula d porcelana o vidrio reloj. 219 .Fig. Sume el peso de la "tara" y el de cantidad de medio de cultivo a pesar y mueva las pesas hasta que indiquen en la barra el peso total. con ayuda de un depresor plástico. Deposite un poco del agua destilada que quedó en la probeta en el interior de la cápsula de porcelana.

conociendo el volumen de la solución patrón empleada para ajustar el pH de la alicuota se procede a hacer los cálculos pertinentes para determinar la cantidad requerida para todo el volumen del medio de cultivo. Cuando el medio se haya solidificado. 1N. en el reverso de la placa. a la cual se le adiciona cuidadosamente gota a gota. la caja que lo contiene se coloca boca abajo sobre el borde de la tapa hasta que se refresque. Distribución de los medios de cultivo El medio de cultivo que vaya a ser trabajado en tubos de ensayo se distribuye en los mismos con pipeta. Al depositar el medio en las placas la altura del volumen no debe sobrepasar los 3 ó 4 mm. antes de su esterilización. para evitar que el exceso de calor produzca agua de condensación que se adhiera. las utilizadas para acidificar el medio y bajar el pH son generalmente HCL o H2SOA y las utilizadas para alcalinizar el cultivo y subir el pH son NaOH o KOH.Determinación del pH del medio Una vez que el medio ha sido diluido o fundido se extrae con pipeta una alicuota y se deposita en un tubo de ensayo que será utilizada como muestra representativa de todo el volumen de medio para determinar su pH. Para ajustar el pH se utiliza la alicuota empleada para medirlo. Al extraer la tira se compara el color que ha tomado la punta después de contactar el medio con la escala que tiene por sus laterales el carrete cuyos colores se corresponde con pH diferentes. para lo cual. se esteriliza en un erlenmeyer taponeado con algodón y retapado con una capucha de papel de estraza. 1N y 0. después que la temperatura del medio haya descendido de 50 a 55 C. siendo distribuido en las placas con posteridad a su esterilización. un volumen determinado. Para determinar el pH con tira de tornasol se cortan 4 ó 5 cm de la cinta d papel del carrete y se introduce una de las puntas en el medio de cultivo por 4 ó 5 segundos. en que se 220 . la disolución ácida o alcalina según corresponda hasta obtener el pH deseado. Ajuste de pH En el caso de que el pH medido no se corresponda con el indicado en la fórmula del medio de cultivo deberá ser ajustado para lo cual se emplean soluciones patrones con diferentes niveles de concentración. se utiliza tiras de papel tornasol o mediante el empleo del pHmetro. Si se desea una mayor precisión se empleará el pH metro (ver capitulo 9). Tanto las soluciones ácidas como las alcalinas se emplean a concentraciones 5N. mientras que el medio que vaya a ser distribuido en placas de "Petry".

Fig. por ejemplo en la preparación del medio de cultivo denominado "Agar Sangre". aunque el tubo se coloque en posición vertical. Si el medio es distribuido en tubos con tapas de rosca. se debe esperar a que la temperatura del medio descienda entre 45 a 50 C. Cuñas de medios agaranizados Los medios de cultivo agaranizados (que contienen Agar) distribuidos en tubos generalmente se utilizan en forma de cuña. imprimiéndole simultáneamente movimientos de rotación al frasco para asegurar una aereación adecuada de la sangre. Para lograr que estos medios adopten esa forma deben ser colocados oblicuamente sobre la mesa de trabajo estando aún fundidos para que cuando solidifiquen.tapa para ser guardado en el refrigerador.Algunos medios de cultivos elaborados básicamente con hidratos de carbono. 116: Manera de colocar la placa. en estos casos se emplea la Tindalización.Evitar refundir los medios de cultivo pues en la medida en que esto ocurre. mantengan esa forma. Cuando las instrucciones indiquen la adición d un reactivo o compuesto estéril. debiendo ser apretadas al concluir la esterilización. al bajar la temperatura. para adicionar el volumen de sangre lo cual requiere que sea vertida poco a poco. se debe realizar esta operación con sumo cuidado. en el medio después de autoclaveado. De acuerdo al medio de que se trate la inclinación será mas o menos acentuada en interés de los objetivos que se persiguen con los cultivos que se desa221 . Observaciones 1. estas deben quedar flojas durante la esterilización. se hacen mas propensos a la precipitación y sufren una disminución en su potencial nutricional. como el "Dulcitol" 10 %. sin la presencia en el interior de la tapa de agua de condensación. una vez que el medio se ha solidificado hasta que se enfríe. así como otros medios elaborados con sueros no deben ser sometidos a la esterilización en autoclave pues se deterioran. para permitir el flujo de aire. observando minuciosamente todas las precauciones de asepsia. 2. para que no se acumule en su reverso agua de condensación.

ya que el objetivo del empleo de este medio es que se produzca el desarrollo bacteriano en toda la superficie de la cuña (slam) por lo tanto al no ser de interés que quede un fondo como en el medio "Kligler".l os medios serán conservados de diferentes maneras atendiendo al medio de que se trate. b) Citrato de Simmons Conservación de medios de cultivo comerciales Los frascos con medios de cultivos nuevos. en el caso del medio "Kligler" la inclinación es menos acentuada para propiciar que el fondo del tubo quede lleno de medio de cultivo a una altura aproximada de 2 cm de altura. Conservación de medios elaborados Alcanzada la temperatura ambiente después de esterilizados. la inclinación debe ser mas acentuada. quedando en su superficie una cuña de menos de 2cm. Saboreaud. Una vez abierto el frasco se debe escribir en la etiqueta. Por ejemplo.Los medios distribuidos en placas de "Petry" serán colocados en las parrillas del refrigerador boca abajo tan pronto se hayan solificado. Fig. tioglicolato. 117: Cuñas de medios agarinizados en tubos de ensayo: a) Kligler. deben ser ordenados en los estantes por lotes y fecha de vencimiento. 2. Serán colocados en gradillas y mantenidos hasta su empleo a temperatura ambiente. Agar semisólido para motilidad. Si se tratara el medio "Citrato de Simmons". la fecha en que ocurrió su apertura para que sea de conocimiento de otros que ese frasco está en uso. prácticamente toda la superficie será de slam. Por ejemplo: 1. Deben ser almacenados en lugares frescos y lejos de aparatos térmicos y de ventanas.rrollen en los mismos. 222 . etc.

5. antes de su empleo. se almacenarán en refrigeración para prolongar su tiempo de duración. al sacarlo de su almacén frío y colocarlo a una temperatura ambiente.Los medios como el "Lowestein . 2.Los que tienen propiedades REDOX. Empleo de los medios Los medios preparados que han estado conservados en refrigeración.Los que contienen colorantes o indicadores se deben proteger de la luz durante su almacenamiento. deben extraerse varias horas antes e incubarlos durante 30 minutos.3. ¿Qué usted entiende por medio de cultivo? Cuales son los objetivos de la nutrición microbiana? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a su composición? ¿Que es un medio artificial? ¿Cómo se denominan los medios de cultivo que están constituidos por una variedad de ingrediente fijos con gramaje y volumen predeterminados? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a los objetivos de su empleo? 223 6. ya que si están mucho tiempo en almacenamiento se pueden resecar de manera imperceptible y ocasionar reacciones inexactas y fallas en el crecimiento. . 4.Jensen. Cuando se obvia este paso se puede demorar la iniciación del crecimiento al ser colocado el inóculo en una superficie fría. 5. 4. 3. Comprobación de la esterilidad de los medios elaborados De cada medio de cultivo preparado y almacenado se seleccionan dos o tres placas o tubos y se colocan en la incubadora durante 24 a 48 horas para comprobar su esterilidad. No se deben preparar medios de cultivo en exceso. CUESTIONARIO 1. facilita su contaminación. como por ejemplo "selenito" se deben conservar en las parrillas del refrigerador. Observación El agua de condensación y la opacidad que se produce en algunos medios conservados en tubos.

16. ¿De cuantas maneras se puede ajustar el pH del medio de cultivo? ¿Cómo se distribuye el medio de cultivo antes de su esterilización? Explique como se preparan las cuñas en tubo de medios de cultivo sólidos. 11. 20. 18.7. 8. 14. 12. Explique como usted realiza la pesada de un medio de cultivo deshidratado. 21. ¿Qué información aportan los medios diferenciales? ¿Cómo se denomina el producto que se añade a los medios de cultivo para sodificarlos? ¿Cuales son los compuestos nutritivos básicos? A partir de que fuentes. 17. las bacterias obtienen el oxigeno y el nitrógeno. ¿Que compuestos podemos incorporar al medio de cultivo que le sirva a la bacteria como fuente de nitrógeno? ¿Que compuesto nutritivo aporta el carbono que le sirve a la bacteria para obtener energía? ¿Que aporta a la nutrición bacteriana el magnesio y el calcio. 19. ¿Como se conservan los diferentes medios una vez elaborados? ¿Cómo se comprueba la esterilidad de los medios de cultivo recién elaborados? ¿Que proceder debe seguirse cuando se va a realizar la siembra en un medio que está conservado en refrigeración? 224 . 9. 13. 10. Describa como se hidrata el medio de cultivo una vez pesado. 15.

al transcurrir un período de tiempo determinado. analicemos el siguiente ejemplo: Si sembramos una semilla de naranja en un terreno fértil. etc. para factibilizar su estudio y posterior identificación. la que posteriormente se desarrollará hasta convertirse en un árbol con las características de esa especie de naranja el cual fructificará. donde la semilla es equivalente a la bacteria y el terreno fértil al medio de cultivo. Si sustituimos la semilla de naranja. tales como: el asa. aunque si. Este tipo de siembra. los aperos de labranza. Para comprender debidamente esta analogía. guarda estrecha relación con la siembra agrícola convencional. colmado de millones de bacterias de la misma especie. INSTRUMENTOS DE SIEMBRA Los instrumentos de siembra son los objetos empleados para tomar el volumen o fracción de la muestra y sembrarla en el medio de cultivo. con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente. etc. el azadón. aunque más dinámico. en decenas o cientos de naranjas. y llega alcanzar tal magnitud que se hace visible microscópicamente al observador. portadoras del mismo tipo de semilla que las generó. de uno o varios medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios par las especias que presuntivamente contiene. Este agregado de bacterias se denomina colonia. hasta alcanzar una cifra exorbitante de descendientes que puede calcularse por millones. podremos observar un proceso similar. . veremos que emerge de ésta una pequeña postura. son sustituidos por los instrumentos de siembras. sin las características físicas de éste. ya que al transcurrir solamente algunas horas. de la misma manera. 225 . la bacteria comenzará a multiplicarse. Todo lo cual será equivalente a la obtención de un árbol frondoso. tales como la guataca. El número de células microbianas que se encuentran en el volumen o fracción sembrada se denomina inóculo.CAPÍTULO 17 SIEMBRA E INCUBACIÓN INTRODUCCIÓN La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar una pequeña fracción o volumen de la muestra. sobre o dentro. por una especie bacteriana y la sembramos en un medio de cultivo apropiado. la aguja de platino.

insertado a un cabo metálico. cuando son metálicas. de platino o nicrón. Al igual que la aguja y el asa. El asa. Se esteriliza a la llama del mechero de igual manera que la aguja y el asa. 2. el cual sirve para que el manipulador pueda tomar en su mano este instrumento de siembra. con la diferencia de que el extremo terminal del alambre de platino o nicrón. Es similar en todos los aspectos a la aguja. Espátula de Drigalski. consisten en un tubo fino de varios mm de diámetro por unos 12cm de largo. Las de vidrio fusible. consisten en un alambre de platino o de nicrón. b) Aguja de platino. Tanto el platino como el nicrón tienen la propiedad de calentarse rápidamente y ponerse a al rojo vivo. 3. El método de esterilización es igual al empleado para la aguja. La aguja. para esterilizar en pocos segundos este instrumento en cada ocasión en que se requiera su uso. después de haber sido retirados de esa fuente de calor. que tiene aproximadamente una longitud de 7cm. pero con la particularidad de que el extremo terminal tiene la forma de un triángulo. c) Espátula de Drigalski. el cual está doblado por uno de sus extremos en forma 226 . 118: Instrumentos de siembra: a) Asa de platino. el cual se encuentra insertado por uno de sus extremos a un cabo metálico. Esta característica se aprovecha en el trabajo diario del laboratorio.Fig. d) Pipeta. La espátula de Drigalski puede ser metálica o de vidrio fusible. cuando son expuestos directamente la llama del mechero y de enfriarse a los pocos segundos. Consiste en un fino alambre recto. forma un pequeño círculo en el extremo con un diámetro de 4 a 5 mm. en lugar de ser recto. e) Hisopo Diferentes tipos 1.

. por su parte posterior. Las más utilizadas en el trabajo ordinario son: las de "Pasteur". ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva. 2. los métodos de siembra más empleados son los siguientes: 1. Las pipetas utilizadas como instrumentos de siembra. que se elaboran con cristal fusible careciendo de escala graduada y las de 0. Hisopos. con una pequeña mota de algodón adherida en uno de sus extremos. Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón. Cuando se emplean para tomar las muestras. Siembra volumétrica. los hisopos. 5. Siembra masiva. MÉTODOS DE SIEMBRA El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo. 3. generalmente de madera. Para su esterilización la parte triangular de la espátula se introduce en un recipiente que contenga alcohol y de inmediato se aproxima a la llama par que se encienda y flamee el triángulo de la espátula. deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo. deben ser previamente esterilizadas en autoclave y estar provistas de un bulbo de caucho. con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. Consiste en un fino aplicador. 4. Siembra por punción. Siembra por estrías.2 mL. se debe esperar unos segundos para que se enfríe y en esas condiciones utilizarlas en la realización de la siembra. graduadas en centésimas y milésimas de mL. 4. una vez confeccionados. similar las empleadas en los goteros. deben ser colocados en el interior de tubos de ensayo de tamaño apropiado. Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el 227 . casi siempre se utilizan a continuación para realizar la siembra en el medio del cultivo. mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno. antes y después de realizar la siembra.de un triángulo equilátero. Pipeta. Cuando la llama se apague. taponeados y retapados antes de proceder a su esterilización en autoclave. que mide unos 2 cm por cada uno de sus lados.

calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. Siembra por estrías Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña.(Slam) Instrumentos de siembra a emplear. Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. Procedimientos Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón. 1.Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir. 2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto. 3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe. 4. Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado. 5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior. b) Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo) c) Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación. 228

d) Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Fig. 119: Siembra microbiológica en medios de cultivos distribuidos en tubos de ensayo: 1) y 2) Retirar el tapón del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5) Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el tubo.

- Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña, trazando una línea longitudinal. - Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag. - Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo. - Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal. - Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios sólidos en cuñas (tubos de ensayo): a) Trazando una línea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el instrumento con el inóculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c) Roturando el medio

229

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petry, proceda de la siguiente manera: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b) Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie. c) Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento. d) Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo. e) Repita esta operación una o dos veces más.

Fig. 122 : Método de siembra por estrias en medios de cultivo sólidos distribuidos En placas de Petra

230

f) Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo. g) Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo. Cuando la muestra es tomada con hisopo. 1. Si la siembra se va a producir en una cuña de agar, se procede en forma similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo. 2. Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas, el primer segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con asa estéril, para lograr una diseminación por agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la diseminación cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a continuación con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminación cruzada: a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z"en la superficie del medio; b) Completar la siembra con un asa de platino estéril, imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la "Z"

Siembra por punción Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. 231

Fig. 124: Siembra por punción

Siembra volumétrica Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado. Siembra masiva Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con espátula de Drigalski

INCUBACIÓN
Una vez realizada la siembra, atendiendo a los requerimientos de los géneros o especies que presuntivamente se encuentran en la muestra, se debe proporcionar a los cultivos la temperatura y las condiciones de aereación que favorezcan su desarrollo, durante un tiempo predeterminado que será variable para cada grupo de microorganismo.. 232

En medios de cultivos sólidos Como la bacteria se encuentra impedida de desplazarse por la solidez del medio. deben ser colocados en una incubadora provista de temperatura regulable o con condiciones especiales como las incubadoras de CO2 y las anaeróbicas. nos interesa estudiar un solo tipo de colonia. ocasionan agregados bacterianos. sus descendiente que alcanzan magnitudes millonarias en menos de 24 horas. por lo que basta con dejar los tubos o las placas sembradas sobre la mesa de trabajo para que se desarrollen sin dificultad Los microorganismos que requieran para su desarrollo una temperatura más elevadas o más bajas que la ambiental. 233 . se procede a extraer una pequeña porción con un asa de platino estéril procediendo a sembrarla en un medio de cultivo idóneo. que dan lugar a estructura visibles de diferente formas. (Ver Capitulo 7) MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO EN LOS MEDIOS DE CULTIVO En medios de cultivo líquidos En general el crecimiento se manifiesta por turbidez. aspecto y colores. Cultivo puro El cultivo es puro cuando en el se desarrolla una sola especie. denominados colonias bacteriana . la cual podrá opacar todo el cultivo o darle un aspecto granuloso o nebuloso. al multiplicarse en un punto especifico. Esta acción se denomina resiembra.Algunos tipos de microorganismos (como la mayoría de los hongos) se desarrollan sin dificultad a temperatura ambiente y en condiciones de aerobiosis. Cultivo mixto Cuando dos o más especies se desarrollan simultáneamente en el medio de cultivo. Resiembra Cuando en el cultivo mixto. cuyos caracteres serán típicos para cada genero o especies. para de esta manera obtener un cultivo puro.

3. ¿Cuál es la diferencia entre un cultivo puro y uno mixto? 12. ¿Qué usted entiende por resiembra? 234 . 4. 6.? 11.CUESTIONARIO 1. ¿Como se manifiesta el crecimiento bacteriano en los medios líquidos y sólidos. 2. 5.? 8.? 10. ¿Cuales son los aspectos a tener en cuenta para incubar los cultivos. ¿Qué usted entiende por siembra microbiológica? ¿Describa los diferentes instrumentos de siembra? ¿Describa el método de siembra por estrías? ¿Cómo se realiza la siembra por punción? ¿Cómo se denomina el método de siembra que se realiza con pipetas? ¿Con que objetivo se utiliza la espátula de Dyigalski? ¿Describa como se realiza la siembra con asa de platino o hisopo en el slam de los medios sólidos en tubos. ¿Cómo se realiza la siembra cuando se utiliza el mismo hisopo con que se toma la muestra? 9. 7.

si el microorganismo en estudio. lo cual será detectado por la acción del indicador presente en el medio de cultivo al variar el pH. fermenta "in vitro" el carbohidrato con formación de sustancias ácidas. las especies deben ser identificadas. manosa. en la fórmula de algunos medios de cultivo empleados al efecto. entre otros y los disacáridos como: lactosa. para que puedan desarrollarse plenamente a nivel de laboratorio. entre los que se encuentra la rafinosa y polisacáridos como la celulosa y el almidón. HIDRATOS DE CARBONO Los carbohidratos comúnmente empleados son diversos. como fuente de carbono. de la composición de diversos medios. que le son proporcionados a las especies de interés. galactosa y fructuosas. principalmente carbohidratos. así como. maltosa y celobiosa. de los medios bioquímicos destinados para el diagnóstico de las especies. así como a diversos productos biológicos para evidenciar sus reacciones. para lo cual se emplean indistintamente productos químicos. se incluyen determinados compuestos con el objetivo de favorecer su desarrollo en detrimento de otras especies contaminantes o no. El objetivo de su empleo. También algunos trisacáridos. es determinar.CAPÍTULO 18 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO INTRODUCCIÓN Además de los nutrientes básicos y específicos. sacarosa. Una vez aisladas. Uno o varios de estos carbohidratos suelen formar parte. para conocer su capacidad metabólica frente a esos sustratos o se enfrentan a otros tipos de compuestos para determinar su resistencia. como por ejemplo: el ácido láctico. Los más utilizados son los monosacáridos como: glucosa. o para distinguir y diferenciar las colonias producidas. 235 . para el cultivo primario o las resiembras.

0 . BASE Rojo Azul Amarillo Amarillo Rojo Rojo púrpura RANGO DE ph 6.2 8. debido a su capacidad de ionización mediante la cual. para que la determinación del ph se deba exclusivamente a los cambios que tiene lugar en la solución.2 - 6. que se caracterizan por dar lugar al cambio de color de la disolución o sustancia donde se encuentran al variar el pH.0 8.0 7. sino más bien un color intermedio entre ambos.0 4. transforman los iónes o moléculas y viceversa. Los indicadores son de dos colores oudiendo ser uno de ellos incoloro.0 . Los indicadores que forman parte de la fórmula del medio de cultivo.0 7. Ejemplos de indicadores Cuadro 12. a determinado nivel de la escala de pH.INDICADORES Los indicadores son compuestos químicos elaborados con ácidos o bases débiles.0 . por lo que el color en esta fase no será definido. deben estar en concentraciones muy bajas. Cuando el indicador está cambiado de color. 236 .3 Amarillo Rojo 5.10.0 8.8 Los indicadores presentes en los medios de cultivo.4 .6.8.8. la mitad se encuentra en estado iónico y la otra mitad en estado molecular. cambian el color del medio o de las colonias. Colores a los que dan lugar los indicadores en su rango de pH COLOR ACIDO Amarillo Amarillo Rojo Rojo Incoloro Amarillo I N D I CAD O R ROJO FENOL AZUL BROMOTIMOL ROJO DE METILO ROJO NEUTRO FENOLFTALEINA ROJO CRESOL PÚRPURA DE BROMOCRE. en correspondencia con las variaciones del pH.2 6.

adquieren un color azul oscuro. tiene como objetivo. El suero sanguíneo se emplea comúnmente para serodiagnósticos y el plasma (sin preservo) es utilizado regularmente para poner en evidencia la capacidad enzimática de especies productoras de coagulosa. Por ejemplo. Tanto los eritrocitos de sangre humana. una enzima que utiliza como sustrato el plasma sanguíneo.. provocando la formación de coágulos. pero actúa sobre la hemoglobina que porta. colonias correspondientes a especies productoras de hemolisinas. cabras. Las colonias de Salmonella se observan además en este medio con un color. En cambio. utilizado para aislar algunas especies del género Salmonella. éstas actúan sobre la sangre que se encuentra en sus inmediaciones. el efecto se evidenciará por la presencia de un halo de color verde alrededor de la colonia. al interferir total o parcialmente el desarrollo de otras especies presentes en la muestra. como por ejemplo: carneros. con aspecto metálico (que se evidencia con luz 237 . que interfieren el estudio. de los que no las fermentan. la sacarosa o ambos azúcares. coli. son utilizadas en diferentes pruebas de hemaglutinación o para detectar diversas reacciones hemolíticas. reduciéndola a biliverdina. conejos. si el tipo de hemolisina no destruye a los hematíes. Estos colorantes inhiben el desarrollo de los gérmenes gramnegativos y al mismo tiempo permiten diferenciar a las especies de enterobacterias fermentadoras de lactosa. Este tipo de hemólisis se clasifica como "alpha".SANGRE Y HEMODERIVADOS La sangre se emplea en la elaboración de algunos medios de cultivo. Por ejemplo. Citrobacter y P. hemolisando a los hematíes total o parcialmente. vulgaris. dependiendo de la condiciones de cultivo y el tiempo de incubación. el efecto se evidenciará por la formación de un halo incoloro alrededor de la colonia. como por ejemplo: el "Verde brillante" que forma parte de la composición del medio de cultivo del mismo nombre. Si el tipo de hemolisina. el permitir evidenciar y diferenciar la actividad hemolítica de algunas de ellas. como los obtenidos de diversas especies de animales. Este tipo de hemólisis total se clasifica como "betha". sino además. Otro ejemplo lo constituye la siembra en el medio "Eosina-Azul de Metileno Agar". favoreciendo de esta manera el desarrollo de otras más resistentes de interés en la investigación. las colonias de E. Colorantes La edición de determinados colorantes a la fórmula del medio de cultivo. destruye a los eritrocitos. cuando se desarrollan en el medio "Agar sangre". rosado o casi blancas. no teniendo como única finalidad proporcionar un nutriente esencial para el desarrollo de determinadas especies. etc. inhibir el desarrollo de las especies más sensibles.

mientras que las del resto de los coliformes se tiñen con un tono parduzco. De manera similar a la empleada con los productos químicos para igual propósito. lo que será puesto de manifiesto por la acción del indicador. que contiene además los nutrientes necesarios para el desarrollo de la especie en estudio. entre otros. nitrato. así como diversos tipos de aminoácidos.indirecta). generalmente lo degradan por acción enzimática a productos más simples. cuyas reacciones específicas. empleados con mayor frecuencia se encuentran los siguientes: Urea. al producirse el cambio de ph. El producto químico que se vaya a emplear. que la capacita para actuar metabólicamente sobre determinados sustratos. Productos químicos Teniendo en cuenta. Antibióticos Para medir la sensibilidad o resistencia de un microorganismo en estudio a los antibióticos. en tanto que las Salmonellas y las Shigellas se mantienen incoloras o ligeramente teñidas. Aminoácidos Los aminoácidos: lisina. haciendo factible la lectura de esa prueba. es parcial o totalmente diferente entre sí. la mayoría de naturaleza química. cada uno de estos aminoácidos es adicionado por separado. como parte de las pruebas que se realizan a una cepa en estudio. caracterizados por tener un ph diferente al del producto reaccionante. ornitina y arginina son utilizados corrientemente en el laboratorio. formará parte de la fórmula de un medio de cultivo. que proporcionará el cambio de color del medio. malonato. Entre los productos químicos. KCN. nos aportan información acerca de su identidad. la información genética de que dispone cada especie bacteriana. se emplean para su diagnóstico diversos sustratos. para determinar la identidad de la especie. Al actuar la bacteria sobre el producto químico en cuestión. lo cual se pondrá en evidencia por la acción del indicador que forma parte del medio de cultivo. El principio de estas pruebas radica en la capacidad de algunos microorganismos para decarboxilar uno o varios de estos aminoácidos formando una amina con la consiguiente alcalinidad. en una proporción del 1 % a un caldo base que contiene los nutrientes necesarios para el desarrollo del germen y un indicador. se realiza una técnica denominada antibiograma con el 238 . citrato.

La bacitracina inhibe el crecimiento de más del 95 % de los Estreptococos del grupo A. impregnados por separado con una carga en g o unidades de un antibiótico determinado. en dependencia del tamaño del diámetro. Transcurrida 24 horas. será indicativo de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en estudio a cada uno de los antibióticos empleados. se realizan pruebas específicas con el empleo de un solo disco. Estos discos (desecados) se colocan con todas las precauciones de asepsia sobre la superficie del cultivo. por lo que. 239 .empleo de discos de papel de filtro estériles de unos 5 ó 6 mm de diámetro. se realizan con el empleo de productos químicos como: el cianuro de potasio o el desoxicolato de sodio. tan pronto se realiza la siembra. La interpretación de los resultados se sustentará en el hecho de que los microorganismos sean o no capaces de desarrollarse en presencia de estos compuestos. impregnado en este caso con bacitracina u optoquina. Fig. 126: Discos de papel de filtros para antibiogramas Basado en el mismo principio y por un procedimiento similar. así como mediante la exposición del microorganismo a sustancias de secreción orgánica como la bilis. la lectura de estas pruebas aportaran un importante dato para sus respectivos diagnósticos. en tanto que la optoquina inhibe el desarrollo del S. equivalente a la concentración sérica media. obtenida en el pico de una terapéutica a dosis habituales. pneumoniae (Neumococos). siendo incubada de inmediato. Otras pruebas de resistencia. un halo de inhibición alrededor de cada disco.

la cual se liofiliza para su comercialización. que se elabora con una cepa de Treponema pallidum (cepa Nichols) cultivad "in vivo" en testículos de conejo. por procedimientos de laboratorio. con las cuales. Sueros Los sueros empleados en las técnicas de serodiagnóstico. darán lugar a reacciones de aglutinación. mediante sangría de animales sensibilizados son procesados industrialmente. siendo envasados en frascos cuentagotas para su comercialización. que han sido expuestos de manera controlada a determinadas sustancias antigénicas con el objetivo de que induzca la formación y el incremento de diferentes tipos de inmunoglobulinas. evidenciándose por microscopía las reacciones resultantes de aglutinación o inmovilización del Treponema. 240 . Los anticuerpos presentes en el suero de un paciente con sífilis al ser confrontados con este antígeno. cuya composición química sea similar a la de los antígenos de la célula microbiana. lo constituye. pueden ser elaborados con cepas certificadas de microorganismos portadores del antígeno de interés que reaccione específicamente con los anticuerpos inducidos por él. el sistema inmunológico del animal producirá los anticuerpos específicos. Un ejemplo de antígeno elaborado con cepas. se obtienen a partir de animales sensibilizados. teniendo la propiedad de reaccionar con los anticuerpos presentes en el suero problema de forma similar que cuando se confrontan con antígenos reales.Fig. precipitación o de hemólisis. Antígenos Los antígenos comerciales empleados para serodiagnóstico. debiendo ser almacenados de 2-80c hasta su caducidad. el antígeno troponémico empleado para el serodiagnóstico de la sífilis. que al interactuar con el antígeno en cuestión. Los sueros obtenidos. purificados y preservados. las que serán perceptibles "in vitro" si este suero es confrontado con un antígeno similar. o ser preparados artificialmente con diversos compuestos. 127: Sueros empleados para serodiagnósticos. interactuará con él.

dedicadas a la fabricación de reactivos comercializan diferentes tipos de látex sensibilizados para el serodiagnóstico de diferentes tipos de microorganismos. Látex El látex es una resina de aspecto lechoso. a la del antígeno real. que se utiliza esencialmente como narcótico. reaccionan con él de forma similar para dar lugar a reacciones positivas aparentes. los anticuerpos inducidos por algunos agentes infecciosos. aunque no igual. lo constituye el denominado antígeno de cardiolipina para pruebas de VDRL (Venereal Disease Research Laboratory).81 de diámetro. con lo cual se favorece la observación de la aglutinación pasiva. ¿Qué son los indicadores? 3. lecitina y colesterol. con textura viscosa y elástica. entre los que se encuentran diversas especies pertenecientes a la familia Euforbiáceas. Este compuesto tiene una configuración química. endémica de Sumatra. conozca que sean empleados con frecuencia en los laboratorios de microbiología. Desde hace varias décadas. una adormidera verde. Este antígeno se expende en ámpulas selladas de 5 mL. etc. 241 . diversas empresas farmacéuticas. oriundas de Brasil (de donde se extrae el caucho) y la Gutapercha. envoltura de cables. ¿Qué datos aportan los carbohidratos utilizados para el diagnóstico de laboratorio? 2. da lugar a la producción de un material muy resistente que se emplea en la fabricación de neumáticos. el cual no está elaborado con cepas de Treponemas. así como del opio. impermeables. sino por un compuesto formado por: cardiolipina. Investigaciones posteriores demostraron que el látex era muy inerte. fue utilizada por los laboratorios biomédicos para recubrir las globulinas específicas. que se extrae mediante incisiones (cortes) de determinados vegetales. Esta sustancia tratada con sulfuro de carbono. natural de Asia. Esta propiedad unida al ínfimo tamaño de su partícula de 0. dando lugar a reacciones de aglutinación "in vitro". CUESTIONARIO 1. Nombre los indicadores que Ud. Esta prueba es inespecífica. que hace que la reagina (anticuerpo) presente en el suero problema interactúe con este "antígeno".Un ejemplo de antígeno no treponémico. ya que por tratarse de un antígeno artificial.

4. ¿ De qué manera se emplean algunos antibióticos para identificar especies bacterianas en estudio? 9. cuando son atacados por determinadas especies bacterianas. 11. ¿Para qué se utilizan determinados colorantes en la composición de los medios de cultivo? 6. ¿Cuál es la propiedad que tiene el látex que lo hace muy eficaz en las pruebas microbiológicas? 13. 8. ¿Cómo se utiliza el látex? 242 . ¿Cómo son elaborados los diferentes tipos de antígenos utilizados para el diagnóstico de las diferentes especies. ornitina y arginina. cuya reacciones aportan información acerca de su identidad. 7. ¿Qué es el látex? 12. ¿Cómo se obtienen los sueros empleados en los sero diagnósticos? 10. ¿Qué le sucede a los cultivos que contienen ciertos aminoácidos como la lisina. ¿Qué información aporta la sangre y el plasma en el diagnóstico de laboratorio? 5. Nombre los productos químicos que son empleados en la composición de medios de cultivo destinados al diagnóstico microbiológico.

CAPÍTULO 19 GARANTÍA DE LA CALIDAD INTRODUCCIÓN Con independencia de las buenas condiciones técnicas que tenga un laboratorio de microbiología y de la adecuada competencia del personal que en él laboran. La falta de cuidado. El mal montaje de las preparaciones en láminas. en cada etapa del ciclo. así como la errónea interpretación de las pruebas. centrando la atención en los ejecutores. Por ejemplo: la toma de muestras sin la calidad requerida. se establecen un conjunto de medidas encaminadas a controlar mediante fiscalizaciones regulares todos los factores que inciden en el proceso investigativo. Validar la calidad de las pruebas empleadas sobre la base de su factibilidad. A los efectos de evitar o al menos reducir al mínimo estas insuficiencias y asegurar la buena calidad de los diagnósticos de laboratorio . el incumplimiento de las normas técnicas establecidas. 3. negligencia o mal trabajo. debidas generalmente a deficiencias técnicas o errores humanos. OBJETIVOS Los objetivos del control para la garantía de la calidad son los siguientes: 1. el empleo de colorantes vencidos o deteriorados. Debe tenerse presente que cada uno de los pasos o etapas del proceso investigativo es susceptible de afectar la calidad del resultado final. los resultados de las investigaciones realizadas pueden estar permeadas de imprecisiones. así como la mala calidad de los materiales empleados o el deficiente funcionamiento de los equipos o instrumentos contribuyen entre otras causas afectar la calidad de los resultados. 243 . son algunos de los factores que inciden en la calidad de los resultados. Emplear racionalmente las pruebas de elevado costo. así como su deficiente conservación y transporte. originados por impericia. incubación incorrecta. deficiente microscopía. desde la toma de la muestra hasta el informe final. Mejorar la fiabilidad de los resultados y con ello optimizar el servicio. 2. bajo costo y eficiencia.

Para la realización de las pruebas de 244 . El uso de reactivos y medios de cultivo con la calidad requerida. 3.Interno (Denominado también control de calidad) . La fiscalización sistemática "in situ" Consiste en supervisar la labor que realiza el personal de laboratorio en cada sección de trabajo con la finalidad de detectar errores groseros que puedan incidir en la calidad de los resultados. Esta fiscalización consiste esencialmente en la revisión de: 1. organizado. b) La aplicación de controles de precisión. Para determinar la precisión se emplean dos variantes: la reproductibilidad. 2.DIFERENTES TIPOS DE CONTROL . que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en serie en el mismo día. En el servicio de microbiología. La habilidad y destreza en la realización de las técnicas de acuerdo con las normas.Externo Control interno El control interno es planificado. puede verse afectado por la falta de homogenicidad al estar presente en una misma muestra más de una especie. desinfección y esterilización del material de vidrio. ejecutado y controlado por la dirección del laboratorio a través de las siguientes actividades: a) La fiscalización sistemática "in situ". Control de precisión Se denomina precisión a la propiedad que tiene un determinado método de dar resultados lo más iguales posibles cuando se realizan varias determinaciones sobre una misma prueba. c) El empleo de pruebas estadísticas. el control mediante la reproductibilidad. La correcta aplicación de los procederes establecidos para la toma de muestras. que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en días diferentes y la repetibilidad. así como la falta de estabilidad del microorganismo presente en la muestra debido la multiplicación o incremento de las muertes al no procesarse oportunamente. La limpieza. 4.

Las reales se estudian previamente y se determinan sus características pudiendo añadírsele diferentes sustancias o elementos. tienen sus principales causas en los errores originados por deficiencias técnicas o humanas. etc.reproductibilidad o repetibilidad se emplean muestras "a ciegas". pueden ser reales o artificiales. Por su parte las artificiales son muestras simuladas elaboradas con diferentes solventes. procesándola como una muestra más. Las muestras artificiales más que un elemento de control de la calidad. por ejemplo: agua destilada con ácido pícrico para simular una muestra de orina o solución salina fisiológica a la que se le añade una o dos gotas de suero sanguíneo y glucosa. la génesis de los malos resultados de las investigaciones de laboratorio. debido al mal desempeño del personal de laboratorio. Prueba Estadística "F" Esta prueba es utilizada para comparar la precisión de dos métodos. La aplicación de estas pruebas es muy familiar para los estadísticos. pero no para el personal técnico de microbiología. que debe recurrir a personas experimentadas en el manejo de estas pruebas cuando resulte necesario. constituye una forma de controlar la seriedad y responsabilidad del técnico. Entre las más usuales se encuentran la prueba estadística "F" y la prueba estadística "T". para simular un líquido cefalorraquídeo. Pruebas estadísticas Existen diversas pruebas estadísticas utilizadas en los estudios de precisión y por lo tanto muy ligadas al control de la calidad. el trabajo realizado por dos técnicos. 245 . Prueba Estadística "T" Esta prueba es utilizada para comprobar si los resultados que se obtienen con un método son cuantitativamente superiores o inferiores en relación con otro o si un grupo de datos de una serie es mayor que los de otra. PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES Como ya se explicó. El informe final de ese resultado se compara con los datos conocidos que sirven de control y cuando se detectan resultados incorrectos se toman las medidas de adiestramiento necesarias. cuyas características son conocidas por el jefe del laboratorio y que el técnico no puede diferenciar del resto de las muestras. Las muestras empleadas para controlar precisión.

Las áreas designadas para comer o fumar. d) Empleo de equipos e instrumentos obsoletos o con funcionamiento deficitario. Las normas de higiene personal. la selección de los medios de cultivo. 246 .1. etc. f) Inadecuada selección de los medios y métodos empleados. Errores humanos a) Deficiente capacitación en su formación. la marcha analítica para su procedimiento. d) Violación arbitraria de las normas técnicas. c) Falta de habilidad para realizar con destreza y precisión los procederes de laboratorio. Errores técnicos a) Deficientes condiciones constructivas o estructurales del laboratorio. MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS Todos los laboratorios de microbiología deben disponer de un manual de normas y procedimientos donde se describan las secuencias y regulaciones establecidas para la realización de las diferentes investigaciones. donde se especifica todo lo concerniente al examen microscópico. e) Falta de concentración o premuras indebidas durante la realización de: exámenes microscópicos. Las medidas de seguridad para cada sección de trabajo. colorantes y otros medios para el diagnóstico. medios de cultivo. así como la notificación de los resultados. c) Mal estado de los reactivos. b) Poca experiencia técnico-laboral en la sección de trabajo donde se desempeña. El manual establece además. g) Informar de manera incorrecta o incompleta los resultados en la orden de análisis. b) Insuficiente disponibilidad de recursos materiales. las indicaciones esenciales para el buen funcionamiento del laboratorio. tales como: los requisitos para la recolección y toma de las diferentes muestras. la selección de colonias para las resiembras. la lectura de las pruebas diagnósticas. 2. así como su conservación y transporte. las particularidades para la incubación de los cultivos. relacionadas con: a) b) c) d) La limpieza y/o desinfección del lugar de trabajo.

g) El control y cuidado de los equipos e instrumentos. como: incubadoras. se dictamina su rotura o se repara. REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD EN BACTERIOLOGIA Control de equipos e instrumentos Todos los equipos e instrumentos que sean asignados al laboratorio deben estar registrados en una carpeta de medios básicos. simultáneamente con la temperatura. el control se efectuará cada vez que el equipo se vaya a utilizar y en cuanto al autoclave. modelo. antes de comenzar su utilización. cintas indicadoras o bioindicadores que cambian de color cuando la esterilización no ha resultado óptima. habilitado al efecto. A cada equipo se le abrirá una tarjeta. donde se refleje los datos ya referidos y las fechas en que se les da mantenimiento. número de serie y la fecha de su adquisición. se comprobará la presión a través de los manómetros y se colocarán junto con el material a esterilizar. En el caso del horno. donde se especifique la marca. 247 . Las balanzas se deben mantener limpias para que la suciedad no interfiera en la pesada. debiendo comprobar su exactitud con pesas certificadas. Nota: En todos los casos se debe tener en cuenta la condición de apto para el uso de los equipos emitida por metrología. c) Potenciómetros (pHmetros) Antes de su utilización se debe ajustar con soluciones estándar de pH 4 o 7 de acuerdo a la utilización que se les vaya a dar. a) Equipos térmicos A todos los equipos termorregulados. anotando los resultados en el registro. baño de María y refrigeradores se le comprobará su buen funcionamiento diariamente. b) Balanzas analíticas y técnicas.e) La manipulación y eliminación de materiales infecciosos. f) El cumplimiento del esquema de inmunización acorde con la actividad que se realiza.

se enfrentan con cepas stock de características conocidas. Enterobacterias. en la etiqueta de los frascos de colorantes y reactivos se anota la fecha en que se reciben en el laboratorio y se utilizan atendiendo al número del lote y la fecha de vencimiento. Al realizar la apertura del frasco se anotará la fecha. siendo colocados seguidamente en un lugar ventilado y protegido de la luz solar. Las cepas empleadas se suspenden hasta alcanzar una turbidez de 0. Vibrios. el plasma congelado para la prueba de coagulasa. haemophillus. debiendo almacenarse igualmente en lugares frescos y protegidos de la luz. Al concluir el período de incubación si se comprueba que el medio preparado permite el desarrollo óptimo de las diferentes cepas controles se considerará con buenas condiciones para su empleo. es recomendable voltear los frascos y colocarlos con la tapa hacia abajo para aminorar los efectos de la hidratación. Neisserias. el peróxido de hidrógeno empleado en la prueba de catalada. Las cepas controles regularmente empleadas son de cocos grampositivos. Cuando el almacenamiento se prolongue. El control de los reactivos y los colorantes se debe realizar frecuentemente en dependencia de su estabilidad. Para comprobar su funcionamiento se utilizará un 3 % del total de medios preparados en los que se sembrarán cepas controles certificadas salvajes. deben ser almacenados tan pronto se reciban en el laboratorio. se tendrá en cuenta la fecha de vencimiento y el número de lote para ir utilizando los más viejos. Los colorantes de uso frecuente como los empleados para las coloraciones de Gram y Ziehl Neelsen. empleado para la prueba de oxidasa. cada día que se vayan a utilizar estas pruebas. procediendo a su incubación de acuerdo a las cepas empleadas. Por ejemplo. como los ingredientes para su preparación o los medios que se adquieran ya listos para su uso. Clostridium y Candidas albicans. Al extraer los frascos que serán utilizados.Control de medios de cultivo Tanto los medios deshidratados.5 % de la escala de McFarland y se siembran pequeños inóculos calibrados en el medio. Control de colorantes y reactivos Al igual que los medios de cultivo. los frascos deben ser revisados periódicamente. procediendo a desechar los que se hallan ennegrecidos o hidratados. para lo cual se anotará en la etiqueta la fecha de recepción. el reactivo de Kovac empleado en la prueba de indol. se prueban con cepas stock cuando se 248 . Durante el tiempo que dure el almacenamiento. etc. Durante su almacenamiento se observan periódicamente y se procede a la eliminación de aquellos que esten precipitados. aisladas y debidamente identificadas en el laboratorio. Pseudomonas. el tertrametil-parafenil endiamina al 1%.

bacitracina.etc. El control se realizará cuando se empiece a utilizar un nuevo lote de medios de cultivo. Para ello. 249 . Cada lote que vaya a empezar a utilizarse debe comprobarse con sueros negativos y positivos. de reactividad conocida. así como otros discos que se utilizan para la realización de diferentes pruebas diagnósticas como: optoquina. Su eficacia se debe comprobar con cepas controles conocidos con respecto a su sensibilidad o resistencia a los diferentes antibióticos. Para comprobar su efectividad se utilizarán cultivos puros recientemente obtenidos. En relación con estos últimos se recomienda dividir el suero en alicuotas para evitar repetidas congelaciones y descongelaciones que pueden afectar el resultado de las pruebas. Los colorantes de uso menos frecuente como los empleados para la coloración de cápsulas. mientras que otros requieren congelación. esporas. se deben conservar en refrigeración (congelación) en los recipientes de fábrica provistos de material desecante. los laboratorios deben disponer de una colección acorde con las investigaciones que realiza. no debiendo utilizarse después de la fecha de vencimiento. Conservación de cepas para el control biológico Como se ha explicado. Control de antígenos y antisueros Para su conservación algunos antígenos y antisueros se almacenan en refrigeración de 2 a 8ºC.preparan y posteriormente una vez por semana. se prueban por igual método cada día que vayan a ser utilizados. Control de discos para antibiograma Los discos para antibiograma. Con posteridad a estas comprobaciones el control se realizará una vez por semana. etc. En cada prueba que se vaya a realizar se empleará en paralelo un suero testigo de reactividad conocida. conjuntamente con los antibiogramas que se realicen ese día. así como para el control del funcionamiento de los antígenos y los antisueros empleados en el laboratorio se requiere del empleo de cepas microbianas debidamente identificadas o certificadas que hayan sido conservadas sin sufrir ningún cambio genético o fisiológico. Recomendándose además el empleo de sueros dobles. para la comprobación de la eficiencia de los medios de cultivo y colorantes.

con lo cual se logra mantener la cepa durante varios meses. Las especies anaerobias extrictas deben ser sembradas en medio de tioglicolato en tubos de ensayo o caldo con carne picada. conservado en refrigeración. conservándose igualmente en refrigeración. Para la conservación de algunos microorganismos anaerobios se emplea la siembra por punción con aguja en medio agarinizado. . se emplea la liofilización. Conservación a corto plazo Este método se sustenta en el empleo de medios de cultivo con bajo potencial nutricional y la conservación de los cultivos en refrigeración. en tubos de ensayo. Suspender el cultivo en suero inactivado o leche estéril. Concluida la deshidratación. 2. 250 2. procediendo de inmediato a su congelación. 3. 3. las ámpulas se sellan al vacío con la llama del mechero que forma parte de este equipo. Los diferentes métodos empleados pueden proporcionar una conservación a corto o a largo plazo. distribuyendo algunas en ámpulas de vidrio. 1. Procedimiento 1. La mayoría de los microorganismos aerobios se pueden conservar en cultivos sobre agar inclinado. Los cultivos congelados en ámpulas son colocados en una liofilizadora para efectuar su desecación.Métodos de conservación de cepas Cualquier método que se vaya a emplear debe propiciar microbiostasis. mediante la cual el agente microbiano se mantiene vivo sin crecer ni reproducirse. Etiquetear el ámpula con el nombre de la especie. Conservación a largo plazo Para conservar las cepas durante varios años. que consiste en un método de deshidratación con vacío a muestras congeladas. debido al enlentecimiento de su actividad metabólica. debiendo guardarse en refrigeración. pudiendo añadirse después de la siembra una capa de aceite mineral con lo cual se excluye al oxígeno al mismo tiempo que evita la desecación del medio. 4.

Control externo Estará a cargo de un laboratorio de referencia de nivel municipal. Los frotis. notificándose al laboratorio evaluado los resultados. Los resultados obtenidos serán informados en encuestas que acompañan a las muestras que serán remitidas al laboratorio de referencia para su revisión.Envío en menos de 72 horas de todas las láminas con diagnóstico negativo para evaluación de la extensión y la coloración 251 . para estudio por examen directo. y procesadas como si se trataran de muestras ordinarias. Cuando se requiera utilizar la cepa. Del laboratorio de la unidad al laboratorio de referencia Se remitirá al laboratorio de referencia un porciento establecido de: frotis coloreados y muestras. cuyos resultados no son conocidos por el jefe del laboratorio que será evaluado. .Frotis de esputo coloreado por el método de Ziehl Neelsen para investigar la presencia de BAAR.El material queda dentro del ámpula en forma de una tableta pudiendo en este estado de desecación conservarse durante varios años. muestras y cepas predeterminadas para este control son los siguientes: Frotis coloreados a. Además de muestras pueden enviarse cultivos para determinar la sensibilidad o resistencia de la cepa a los diferentes antibióticos. o sueros para determinaciones serológicas de diferentes tipos. provincial o nacional. Este control puede producirse en dos direcciones: Del laboratorio de referencia al laboratorio que será evaluado Para realizar el control con esta variante. el laboratorio de referencia enviará muestras cifradas. así como de cepas que serán sometidas a estudios de comprobación del diagnóstico emitido por la unidad. siendo introducidas "a ciegas" en la forma y explicada. procediendo a su incubación de 24 a 48 horas. examen concentrado y serológico. se rompe asépticamente el ámpula depositando la cepa liofilizada en un medio líquido adecuado.

Cepas Envío del 100% de las cepas recuperadas en los casos de Síndrome Neurológico Infeccioso y de Infecciones Diarreicas Agudas. Enviar el 2 % de las muestras no reactivas.El 25 % de las muestras con diagnóstico negativo.Enviar el 100% de los frotis con diagnóstico positivo.C. . Muestras . Suero o L.El 10 % de las muestras donde he hayan identificado huevos o larvas de helmintos. Enviar el 100 % de las muestras reactivas y débil reactiva empleadas para la prueba de VDRL.Frotis de exudados uretales y endocervicales para investigar la presencia de diplococos arriñonados (intra y extracelulares) .Enviar un 5% de los frotis con diagnóstico negativo.Heces fecales Enviar: El 5 % de las muestras donde se hayan identificado especies de protozoarios. .R. 252 . .

3. 5. ¿De cuantas maneras diferentes se puede efectuar el control externo? ¿Cuáles son las muestras que deben remitirse al laboratorio de referencia para su control y con qué periodicidad? 253 . ¿Cómo se deben conservar los discos impregnados en antibióticos? Refiérase a la manera de controlar los antígenos y los antisueros. 10. 14. 9. 13.CUESTIONARIO 1. 2. ¿Cómo se controla la precisión de los resultados? ¿Cuáles son las principales fuentes de error? ¿Cuáles son los principales aspectos en cada una de las fuentes de errores? ¿Qué aspectos se describen en el manual de normas y procedimientos? ¿Cómo se controlan los equipos e instrumentos? ¿Qué aspectos han de tenerse en cuenta para el control de los medios de cultivo? Explique cómo se controla el estado de los colorantes y los reactivos. 12. 8. 11. 6. ¿Cuáles son las principales causas de la falta de calidad en los diagnósticos de laboratorio? ¿Cuáles son los objetivos del control para la garantí de la calidad? Enumere los indicadores del control interno. 4. 7.

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