LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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La Habana, 2004

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Datos CIP-Editorial Ciencias Médicas

González Alfaro José Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004 256p. Fig. Incluye índice general. Está dividida en 19 capítulos. Listado de referencias al final de la obra. ISBN 959-212-131-1 1. MICROBIOLOGÍA 2. PERSONAL DE LABORATORIO 3. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. LIBRO DE TEXTO I. González González Boris II. Barrial González Rosa T. QW23

Diseño: Ac. Luciano O. Sánchez Núñez Emplane: Maria Pacheco Gola

© José González Alfaro, Boris González González y Rosa T. Barrial González, 2004 © Sobre la presente edición Editorial Ciencias Médicas, 2004

Editorial Ciencias Médicas Centro Nacional de Información de Ciencias Médicas Calle I No. 202, esquina Línea, Vedado, Ciudad de La Habana, 10400, Cuba Correo electrónico: ecimed@infomed.sld.cu Teléfonos: 55 3375, 832 5338

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"Vivid en la serena paz de los laboratorios y preguntaos cada día: -¿Qué puedo hacer para mejorar la calidad del servicio que presto? -¿Cómo puedo ayudar a mi país? -¿Cómo puedo servir a la humanidad? Luis Pasteur 5 .

Barrial González McS en Microbiología Hospital Salvador Allende. Profesor Facultad Tecnológica Dr. Salvador Allende Boris González González Lic. Profesora Facultad Tecnológica Dr. Salvador Allende 6 . En Microbiología Hospital Salvador Allende. Salvador Allende Rosa T.AUTORES José González Alfaro Técnico de Microbiología Especializado en Docencia. Profesor Facultad Tecnológica Dr.

ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN / 33 INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE / 34 LAV ADO DE MANOS / 35 TIPOS DE LAV ADO DE MANOS / 36 LAV ADO SOCIAL DE LAS MANOS / 36 7 . GENERALIDADES / 18 ACTIVIDADES FUNDAMENTALES / 18 RECURSOS HUMANOS / 18 ESTRUCTURA ADMINISTRATIV A / 18 IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA / 19 ESTRATEGIA ORGANIZATIV A DE TRABAJO / 19 DISPOSICIÓN DE LOS MATERIALES DE TRABAJO / 20 CERTEZA DE LOS MEDIOS REACTIVOS O MEDIOS A EMPLEAR / 20 ORDENAMIENTO DE LAS MUESTRAS / 20 PLANIFICACIÓN DEL TRABAJO A REALIZAR.ÍNDICE EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA / 17 INTRODUCCIÒN / 17 LABORATORIO CLÍNICO / 17 LABORATORIO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL / 17 LABORATORIO DE RAYOS X / 17 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. CONCEPTO / 22 DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. / 23 PRINCIPALES CAUSAS / 23 NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO / 23 PRINCIPIOS BÁSICOS / 24 PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE LABORATORIO / 24 EMPLEO SISTEMÁTICO DE EQUIPOS Y MEDIOS DE SEGURIDAD / 25 EL DISEÑO ADECUADO DE LOS LABORATORIOS / 26 MEDIDAS DE PREVENCIÓN / 33 PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA / 33 DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. / 20 CONCENTRACIÓN EN EL TRABAJO / 21 CUESTIONARIO / 21 BIOSEGURIDAD / 22 INTRODUCCIÒN / 22 RIESGOS FÍSICOS / 22 RIESGOS QUÍMICOS / 22 RIESGOS BIOLÓGICOS / 22 BIOSEGURIDAD.

LAV ADO HIGIÉNICO O MÉDICO DE LAS MANOS / 36 LAV ADO QUIRÚRGICO DE LAS MANOS / 37 MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS / 38 CUESTIONARIO / 38 ETICA MEDICA / 40 INTRODUCCION / 40 LA MORAL / 40 ETICA / 41 TEORÍA DE LA MORAL / 41 ÉTICA NORMATIV A / 41 ÉTICA MÉDICA / 41 EN RELACIÓN CON EL PACIENTE Y SUS FAMILIARES / 42 EN RELACIÓN CON EL RESTO DE LOS TRABAJADORES DE LA SALUD / 44 EN LAS RELACIONES ENTRE EL DOCENTE Y LOS EDUCANDOS / 44 COMO PARTE DE LA SOCIEDAD / 44 LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA / 45 CUESTIONARIO / 45 EL AGUA / 46 INTRODUCCIÓN / 46 IMPORTANCIA / 46 CALIDAD DEL AGUA / 46 PURIFICACIÓN DEL AGUA / 47 DESTILACIÓN / 47 DESIONIZACIÓN / 48 PH DEL AGUA DESTILADA / 48 CONDUCTIVIDAD DEL AGUA / 48 CUESTIONARIO / 49 CRISTALERÍA DE LABORATORIO / 50 INTRODUCCIÓN / 50 COMPONENTES DEL VIDRIO / 50 SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO / 50 CLASIFICACION / 51 CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS / 52 DE CRISTALERÍA / 52 CRISTALERÍA GENERALDE TRABAJO / 52 CRISTALERÍA DE MEDICIÓN / 59 MATERIALES DE PORCELANA / 63 LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN / 64 PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA / 65 PARA SU ESTERILIZACIÓN / 65 CUESTIONARIO / 67 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN / 68 INTRODUCCIÓN / 68 TÉRMINOS EMPLEADOS RELACIONADOS CON LA ESTERILIZACIÓN Y LA DESINFECCIÓN / 68 8 .

(BAÑO DE MARÍA) / 92 CUESTIONARIO / 94 MICROSCOPIO / 95 INTRODUCCIÓN / 95 MICROSCOPIO. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO / 119 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 ESTRUCTURA DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 FUNCIONAMIENTO / 123 9 . CONCEPTO / 96 DIFERENTES TIPOS / 96 MICROSCOPIO ÓPTICO / 96 CLASIFICACIÓN / 97 SISTEMA MECÁNICO / 98 PRINCIPIOS BÁSICOS / 109 INDICACIONES PARA EL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 111 OTRAS V ARIANTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 112 MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO / 117 CUIDADO.ESTERILIZACIÓN / 68 EL CALOR / 69 PROTOTIPO STANDARD DEL AUTOCLAVE / 70 MANIPULACIÓN DEL AUTOCLAVE / 71 CALOR HÚMEDO A 1000 C / 72 CALOR HÚMEDO A MENOS DE 1000C / 74 CALOR SECO / 74 USO DEL HORNO / 75 INCINERACIÓN / 76 MECHEROS / 76 LAS RADIACIONES / 79 RADIACIONES IONIZANTES / 79 RADIACIONES NO IONIZANTES / 80 FILTRACIÓN / 81 CARACTERÍSTICAS DE LOS FILTROS / 81 PREPARACIÓN DE LOS FILTROS / 81 DESINFECCIÓN / 83 SELECCIÓN DE LOS DESINFECTANTES / 84 CUESTIONARIO / 85 EQUIPOS CALORIFICOS / 87 INTRODUCCION / 87 INCUBADORA / 87 REQUERIMIENTO DE TEMPERATURAS / 87 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON SUS NECESIDADES DE OXÍGENO / 88 INCUBACIÓN DE BACTERIA ANAEROBIAS / 90 INCUBADORA PARA ANAEROBIOS / 92 BAÑO DE AGUA CALIENTE.

CUESTIONARIO / 124 INSTRUMENTOS MECÁNICOS / 126 INTRODUCCIÓN / 126 PIPETAS MECÁNICAS / 126 PIPETA TIPO MARBURG / 127 EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS / 131 LAS CENTRÍFUGAS / 131 PRINCIPIO TÉCNICO / 133 BALANCE DE LOS TUBOS / 133 FUNCIONAMIENTO / 134 EL ROTOR / 135 DISEÑO DEL EQUIPO / 135 FUNCIONAMIENTO / 136 EL AGITADOR / 136 DISEÑO DEL EQUIPO / 137 FUNCIONAMIENTO / 137 POTENCIOMETROS / 138 ESTRUCTURA / 138 ELECTRODOS / 139 TIPOS DE ELECTRODOS / 139 PRINCIPIO FUNCIONAL / 139 MEDICIÓN DEL PH / 140 PROCEDIMIENTO PARA EL MANEJO DEL POTENCIÓMETRO / 140 CUESTIONARIO / 141 BALANZAS / 143 INTRODUCCIÓN / 143 PRINCIPIO / 143 DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS / 143 BALANZAS GRANATARIAS / 144 FUNCIONAMIENTO / 145 PROCEDIMIENTOS PARA EFECTUAR LA PESADA / 145 CAJA DE PESAS / 146 PRECAUCIONES / 147 BALANXA DE UN SOLO PLATILLO (TIPO OHAUS) / 147 BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA / 147 BALANZA DE PRECISIÓN MECÁNICA / 148 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA / 150 PRECAUCIONES / 151 BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA / 151 FUNCIONAMIENTO / 153 PESADA / 154 DETERMINACIÓN DEL PESO / 155 BALANZA ANALITICA DIGITAL / 156 CUESTIONARIO / 156 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN / 158 10 .

INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y M ATERIALES DE CURACIONES / 162 INTRODUCCION / 162 ACCESORIOS / 162 GRADILLAS / 162 CESTOS / 163 SOPORTE UNIVERSAL / 163 PINZAS DE SUJECCIÓN / 164 TRÍPODE / 164 MALLA DE AMIANTO / 165 INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO / 165 MATERIALES DE CURACIONES / 166 CUESTIONARIO / 167 TOMA DE MUESTRAS / 168 INTRODUCCIÓN / 168 MUESTRA. DIFERENTES TIPOS / 158 RELOJES / 158 TERMÓMETROS / 159 DENSÍMETROS / 160 CUESTIONARIO / 161 ACCCESORIOS. CONCEPTO / 168 MUESTRA REPRESENTATIV A / 168 MÉTODOS DE CONSERV ACIÓN / 169 CALIDAD DE LA MUESTRA / 170 INSTRUCCIONES AL PACIENTE / 172 DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS / 172 EXUDADOS / 172 LÍQUIDOS ORGÁNICOS / 179 SANGRE / 181 LINFA / 182 EXCRECIONES / 183 FANERAS / 185 PRODUCTOS PATOLÓGICOS / 185 CUESTIONARIO / 186 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS / 187 INTRODUCCIÓN / 187 DIFERENTES MÉTODOS / 187 PREPARACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXAMEN MICROSCÓPICO EN FRESCO / 187 MÉTODO DE LA GOTA COLGANTE / 188 PREPARACIÓN EN LÁMINAS DE MUESTRAS COLOREADAS / 189 11 .NO VOLUMÉTRICOS / 158 INTRODUCCIÓN / 158 INSTRUMENTOS.

CUESTIONARIO / 191 COLORANTES Y COLORACIONES / 192 INTRODUCCIÓN / 192 CONCEPTO / 192 FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES / 192 COLORANTES NATURALES / 192 COLORANTES SINTÉTICOS / 193 CLASIFICACIÓN / 193 AFINIDADES TINTORIALES / 194 TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. VENTAJAS Y DESVENTAJAS / 194 METODOS DE COLORACIÓN / 195 COLORACIÓN DE GRAM / 195 COLORACIÓN DE "ZIEHL NEELSEN / 199 CCOLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN (MODIFICADA PARA MYCROBACTERIUM LEPRAE) / 202 COLORACIÓN FRAGELAR DE LEIFSON (MODICFICACIÓN DE CLARK) / 203 COLORACIÓN DE CÁPSULAS / 204 COLORACIÓN DE ESPORAS / 205 CUESTIONARIO / 206 MEDIOS DE CULTIVO / 208 INTRODUCCIÓN / 208 OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA / 208 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 208 CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 212 COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS / 213 ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO / 217 DISTRIBUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 220 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMERCIALES / 222 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS ELABORADOS / 222 COMPROBACIÓN DE LA ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS ELABORADOS / 223 CUESTIONARIO / 223 SIEMBRA E INCUBACIÓN / 225 INTRODUCCIÓN / 225 INSTRUMENTOS DE SIEMBRA / 225 DIFERENTES TIPOS / 226 MÉTODOS DE SIEMBRA / 227 INCUBACIÓN / 232 MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO / 233 EN LOS MEDIOS DE CULTIVO / 233 CULTIVO PURO / 233 CULTIVO MIXTO / 233 RESIEMBRA / 233 CUESTIONARIO / 234 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO / 235 INTRODUCCIÓN / 235 12 .

HIDRATOS DE CARBONO / 235 INDICADORES / 236 SANGRE Y HEMODERIV ADOS / 237 COLORANTES / 237 PRODUCTOS QUÍMICOS / 238 AMINOÁCIDOS / 238 ANTIBIÓTICOS / 238 SUEROS / 240 ANTÍGENOS / 240 LÁTEX / 241 CUESTIONARIO / 241 GARANTÍA DE LA CALIDAD / 243 INTRODUCCIÓN / 243 OBJETIVOS / 243 DIFERENTES TIPOS DE CONTROL / 244 PRUEBAS ESTADÍSTICAS / 245 PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES / 245 MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS / 246 REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD / 247 EN BACTERIOLOGIA / 247 CONTROL DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS / 247 CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO / 248 CONTROL DE COLORANTES Y REACTIVOS / 248 CONTROL DE DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA / 249 CONTROL DE ANTÍGENOS Y ANTISUEROS / 249 CONSERV ACIÓN DE CEPAS PARA EL CONTROL BIOLÓGICO / 249 DEL LABORATORIO DE REFERENCIAALLABORATORIO QUE SERÁ EV ALUADO / 251 DEL LABORATORIO DE LA UNIDAD AL LABORATORIO DE REFERENCIA / 251 CUESTIONARIO / 253 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS / 254 13 .

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Los planes de estudio se han sustentado en la modalidad de estudio-trabajo.PREFACIO Como parte de la política del estado cubano de universalizar la enseñanza. cada aspecto ha sido explicado pormenorizadamente. así como desempeñarse con eficacia y competitividad en cualquier otro país donde se requiera su colaboración. así como. lo que permite a los estudiantes desarrollar progresivamente las habilidades en los propios escenarios donde se encuentran los diferentes servicios de salud. en los institutos politécnicos. para lo cual se tuvo en cuenta precisar la particularidad utilitaria de cada equipo. bajo la asesoría de profesionales y técnicos de experiencia. a partir del curso 2003-2004. accesorios y otros materiales de trabajo. fueron diseñados como carreras universitarias. En los capítulos correspondientes a los procederes de laboratorio. 15 . el principio de su funcionamiento y el algoritmo de trabajo. todo lo concerniente a su descripción estructural estándar y sus variantes. hemos editado este libro de texto para que sea utilizado como bibliografía básica en el estudio de la asignatura Fundamentos y Principios Básicos del Laboratorio de Microbiología. mediante un nuevo modelo pedagógico que comprende dos niveles de formación intermedia: técnico básico y técnico medio. atendiendo a los contenidos del programa y el perfil de salida de los egresados. además de todo lo concerniente a su cuidado y conservación. culminando la formación universitaria como licenciado en tecnología de la salud en diferentes perfiles. Cada tema ha sido abordado con una proyección tecnológica. con lo que se pretende que adquieran la capacitación adecuada para brindar un servicio de excelencia a nuestra población. la función de cada una de las partes y su interacción con el resto del sistema. instrumento. en más de 20 especialidades. Como apoyo al diseño curricular del perfil de microbiología. los estudiantes pueden realizar sin contratiempos los procederes en cuestión. de manera que. creados al efecto en todo el país. siguiendo al pie de la letra las instrucciones que se proporcionan. los cursos de técnicos medios de la salud que durante casi 4 décadas se impartieron.

Los autores 16 . que es. en definitiva. sino más bien. el objetivo esencial de tu formación. sobre el que se sustente tu desempeño profesional. con el objetivo de que sea utilizado como guía de estudio individual o colectivo. no solo para alcanzar buenos resultados docentes. Esperamos que este texto te sea de utilidad en el proceso de aprendizaje. como una herramienta que te proporciona una capacitación perdurable.Al finalizar cada tema se ha incluido un cuestionario de preguntas.

tales como: sangre. Realiza análisis de urgencia e informa los resultados. serològicos. para las investigaciones que así lo requiera. realiza exámenes radiológicos convencionales o mediante la utilización de técnicas modernas 17 . así como. Laboratorio de Rayos X El Laboratorio de Rayos X. Para determinar sus alteraciones en relación con sus valores de referencia. Como parte del Sistema Nacional de Salud. jugo gástrico. existen diferentes tipos de laboratorios. tomar y recibir muestras biológicas. por ejemplo: Laboratorio Clínico La actividad básica que se realiza en este tipo de laboratorio es la de recibir las ordenes de análisis del médico de asistencia. hematológicos. toma y recibe muestras biológicas. Y obtiene y procesa componentes de la sangre para uso terapéutico o de investigaciones. líquido cefalorraquídeo. administra contraste a los pacientes. recibe indicaciones y solicitudes médicas. análisis inmunohematológicos y serológicos e informa los resultados. orina. para la realización de experimentos. Laboratorio de Medicina Transfusional El laboratorio de Medicina Trasnfusional. Transfunde sangre total o sus derivados. reactivos o la obtención de productos biológicos. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. investigaciones científicas o el análisis de diferentes muestras. en Cuba. etc. recibe indicaciones médicas. a las cuales se les realizan análisis bioquímicos. para la producción de medicamentos. etc. realiza sangrías a donantes.CAPITULO 1 EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INTRODUCCIÒN Los laboratorios son edificados especialmente diseñados.

El servicio de microbiología. proporciona al medico de asistencia. se desempeña como jefe técnico. especializados o no. un técnico medio experimentado. ademas de técnicos medios. recibe indicaciones médicas. personal de oficina y auxiliares generales entrenados. biólogos y otros tecnólogos. cargo que ocupa generalmente un médico especialista o en su defecto otro profesional. o Licenciados en microbiología. En la mayoría de los laboratorios. información precisa relacionada con la sensibilidad o resistencia del agente infeccioso a los diferentes antibióticos. con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas. asumiendo determinadas funciones delegadas por el jefe de servicio. con lo cual aporta un dato de inestimable valor para la indicación del tratamiento También brinda apoyo especializado al Comité de Prevención y Control de las Infecciones Nosocomiales (infecciones intra hospitalarias) originadas en el hospital u otro establecimiento de atención de salud. Las diferentes secciones están dirigidas a su vez por diferentes profesionales.C. precisar su cuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. así como bioquímicos. 18 . para detectar alteraciones anatomofibiológicas en partes blandas u óseas del organismo asi como la presencia de cuerpos extraños. esta compuesto por profesionales universitarios. médicos especialistas de 1er o 2do.de imagenología. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. grado (microbiólogos). GENERALIDADES Actividades fundamentales El laboratorio de microbiología clínica. toma y recibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicas mediante exámenes microscópicos directos y por cultivos. Ms. Estructura administrativa Todos los laboratorios están gerenciados por un jefe de servicio. Recursos humanos El personal de los laboratorios de microbiología clínica.

ya que ha sido y es política de la Revolución que los servicios médicos sean accesibles a todos los ciudadanos. al proporcionar datos exactos acerca de la identidad de los microorganismos en estudio. casi todos los hospitales y policlínicos cuentan con servicios de microbiología y en la actualidad se esta concretando un proyecto de estaciones microbiológicas destinadas fundamentalmente al diagnostico mediante exámenes directores. La prestación de este servicio a toda la población del país. así como la toma y preservación de muestras en medios de transporte para su envió a los laboratorios de referencia. resulta indispensable sistematizar una estrategia de trabajo. El perfeccionamiento del trabajo microbiológico se proyecta en dos direcciones: 1. así como en unidades hospitalarias o centros especializados. el trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología. diagnósticados por procedimientos habituales o de diagnósticos rápidos. en policlínicos. ESTRATEGIA ORGANIZATIVA DE TRABAJO Para lograr una buena eficacia en la realización de los procederes de laboratorio. incrementar la productividad de las deter19 . en las investigaciones donde resulte factible. posibilitando la indicación de un tratamiento mas eficaz. adquiere cada día mayor protagonismo. así como el desarrollo cada vez más creciente de cepas resistentes a los antibióticos de uso tradicional. mediante el acceso a las tecnologías más modernas. así como mediante técnicas serodiagnósticas de alta sensibilidad y por aportar el patrón de susceptibilidad a los antibióticos de los microorganismos en cuestión.IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA Dado el incremento actual de las enfermedades emergentes y reemergentes. Mejorar la calidad del servicio. a nivel de la atención primaria. 2. que permita asegurar la calidad de los resultados. Para ellos. maestrías y doctorado. todo lo cual amplia la capacidad del diagnóstico médico a magnitudes que están fuera del alcance de los métodos clínicos. el perfeccionamiento en la formación de los profesionales del sector y la superación científico-técnica de los graduados a través de diplomados y cursos de post-grado.

turbios. etc). c) Cerciórese de que se le haya hecho control de calidad. En este sentido es importante tener la certeza de que no falte ningún material que implique tener que interrumpir el procedimiento para su localización. para aprovechar al máximo el tiempo disponible. introducir causas de errores. lea cuidadosamente la etiqueta del frasco para evitar errores. pipetas. tubos. su concentración y que la fecha de vencimiento no haya caducado. Planificación del trabajo a realizar. ya que además de ocasionar una pérdida de tiempo innecesaria.minaciones y al mismo tiempo que proporcione una adecuada protección contra posibles accidentes. e) Al destaparlos coloque cada tapa delante del frasco correspondiente para evitar errores al taparlo que impliquen su contaminación. Certeza de los medios reactivos o medios a emplear a) Al seleccionar los reactivos. cerciórese del nombre del reactivo. Para el logro de estos propósitos el laboratorista debe cumplir con las siguientes indicaciones: Disposición de los materiales de trabajo Seleccione todos los utensilios (escrupulosamente limpios o estériles) que se requieran para el trabajo a realizar (gradillas. de manera que queden al alcance de la mano. si se 20 . por alteración del tiempo establecido en algún paso de la técnica y en consecuencia afectarse los resultados. la discontinuidad de la marcha analítica. Siempre que resulte pertinente conviene planificar el trabajo a realizar en el laboratorio. Por ejemplo. etc) y ubíquelos ordenadamente sobre la mesa de trabajo. Ordenamiento de las muestras Coloque las muestras en la mesa de trabajo por orden numérico de izquierda a derecha. d) Colóquelos en la mesa de trabajo en el orden en que serán utilizados. puede en algunos casos. b) Verifique mediante un examen visual que no se encuentran alterados (precipitados.

Especifique El concepto que Ud. tenga de lo que es un laboratorio. evite interrupciones innecesarias y absténgase de mantener conversaciones ajenas a lo que esta haciendo. Nombre diferentes laboratorios que pertenezcan al Sistema Nacional de Salud. 3. 4.van a preparar exámenes microscópicos directos de heces fecales. es conveniente hacer las dos preparaciones por separados en una misma lamina portaobjetos. Concentración en el trabajo Durante todo el tiempo que dure la ejecución del procedimiento. ¿En que radica la importancia del trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología? 7. CUESTIONARIO 1. para la búsqueda de protozoos. Refiérase a las actividades fundamentales que se realizan en un laboratorio de microbiología clínica. Trabaje con meticulosidad y esmero y aplique las medidas de asepsia cuando la determinación así lo requiera. Explique la estructura administrativa de los laboratorios. Explique cada uno de los indicadores establecidos para la estrategia organizativa del puesto de trabajo. por los métodos eocina y lugol. lo que facilita la operatoria microscópica sin pérdida de tiempo al no tener que intercambiar láminas. Indique las diferentes categorías ocupacionales del personal que labora en un laboratorio de microbiología. concentre su atención en cada paso de la técnica. 5. 6. 21 . 2.

clínicos. excreciones y productos patológicos. Así como en la industria biotecnológica y el trabajo con organismo transgénicos. especialmente en los laboratorios donde se realizan exámenes de sangre. Riesgos biológicos Debido a la manipulación frecuente de pacientes infectados. los animales y las plantas como consecuencias de accidentes o negligencias. a diversos riesgos profesionales. etc. CONCEPTO Es la disciplina que se ocupa de la prevención y control del riesgo biológico al que están expuestas. líquidos corporales. exposiciones al calor. etc. que pueden clasificarse según su origen en: Riesgos físicos Ocasionados regularmente por. el manejo de productos sépticos y el nivel de contaminación ambiental predominante en el ámbito hospitalario. etc. Riesgos químicos Originados por el manejo con sustancia inflamables. las radiaciones. policlínicos. la electricidad.CAPÍTULO 2 BIOSEGURIDAD INTRODUCCIÒN Los profesionales y técnicos de la salud que laboran en unidades hospitalarias. están expuestos. tóxicas. directa o indirectamente las personas. traumas. etc o en centros de investigaciones biomédicas. en los laboratorios de microbiología. corrosivas. por la naturaleza de su trabajo. 22 . BIOSEGURIDAD. cancerigenas.

RIESGO INDIVIDUAL COMUNITARIO I ESCASO ESCASO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. SU EXPOSICIÓN EN EL LABORATORIO PUEDENPROVOCARINFECCIONESGRA VES. ocasionando diversos grados de afectaciones médicas. Los niveles de riesgo para un laboratorio básico.DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO Cuadro 1: Diferentes niveles de riesgo biológico. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. PUEDEN PROPAGARSE FÁCILMENTE DE UN INDIVIDUO A OTRO. son los de tipo I y II. GENERALMENTE LA INFECCIÓN NO SE PROPAGA DE UN INDIVIDUO A OTRO. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS. CARACTERIZACIÒN DE LOS AGENTES PATÓGENOS INVOLUCRADOS II MODERADO LIMITADO III ELEV ADO ESCASO IV ELEV ADO ELEV ADO 23 . son las principales causas del daño individual que bajo determinadas circunstancia. PRINCIPALES CAUSAS Los accidentes imprevistos y el deficiente desempeño del personal ocupacionalmente expuesto. LOS ANIMALES Y EL MEDIO AMBIENTE. TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE ENTRAÑAR RIESGOS GRAVES PARA EL PERSONAL DEL LABORATORIO. veterinarias o fitosanitarias con el consiguiente perjuicio económico o ecológico. puede extenderse al entorno hospitalario o a la comunidad. DIRECTA O INDIRECTAMENTE. LA COMUNIDAD.

se deben esterilizar a la llama del mechero. con las indicaciones y regulaciones a cumplimentar por el personal de laboratorio. . Abrir la tapa de la centrífuga antes de que esta se detenga o de inmediato. Flameos de instrumentos de siembra contaminadas con productos biológicos infecciosos. 3. 2.PRINCIPIOS BÁSICOS Los principios básicos. . Retirar la aguja de las jeringuillas que contengan material contaminado. El empleo sistemático de los equipos y medios de seguridad. A los efectos de evitar salpicaduras del material residual empleado. antes y después de su uso.Aplicar rigurosamente las medidas de asepsia y antisepsia en todas las ocasiones en que la acción a realizar así lo requiera.Los frotis coloreados. regidos por las normas de bioseguridad para la prevención y control del riesgo biológico son los siguientes: 1. el instrumento debe introducirse gradualmente en la llama del mechero hasta ponerse al rojo vivo. que serán expuestas resumidamente a continuación. La correcta realización de las técnicas de laboratorio. El diseño adecuado de los laboratorios. cubreobjetos y pipetas utilizadas se depositaran en recipientes apropiados que contengan solución desinfectante. Apertura de cultivos liofilizados en ámpulas. cuando se ha centrifugado muestras biológicas o material contaminado. . .Los instrumentos de siembra de platino o nicròn. . así como los portaobjetos. Pipeteo energético. . Para la correcta realización de las técnicas de laboratorio a) Regulaciones básicas. . . Para dar cumplimiento a estos principios se establece en el reglamento un código practico. .Los procederes técnicos han de realizarse de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles siendo las causas mas frecuentes las siguientes. 24 .

. . recurrir al empleo de campanas químicas. nasobucos. o animales y al retirarse del laboratorio (ver mas adelante. humedecer los tapones de algodón y contaminar la mesa de trabajo. Los cultivos en placas deben mantenerse con la tapa hacia abajo en el interior de la incubadora o sobre la mesa de trabajo. Los tubos de ensayo que contengan cultivos. etc. gabinetes. retirando del mismo material que no tenga relación con el trabajo.Cuando la naturaleza del trabajo a realizar así lo requiera. fumar. botas. . no comer. La caída brusca de las placas o tubos de cultivos.Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores. realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas. Nunca pipetear con la boca esos productos peligrosos.No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua. material contaminado. o cabinas de seguridad. ya que el agua de condensación puede arrastrar los gérmenes del cultivo. Los guantes se deben retirar asépticamente y ser esterilizados en autoclave.Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato..Lavarse las manos después de haber manipulado pacientes. . . Nunca dejarlos en posición horizontal. . . proteger los ojos y la cara de salpicaduras e impactos mediante gafas de seguridad.Emplear guantes quirúrgicos en todo trabajo que entrañe contacto con sangre. pantalla facial u otros dispositivos de protección. procedimiento para el lavado de manos). b) Higiene del laboratorio y el personal. guardar alimentos ni aplicar cosméticos. 25 .Siempre que sea necesario. Empleo sistemático de equipos y medios de seguridad . aún cuando no llegaran a romperse.Utilizar pipetas mecánicas para manipular líquidos infecciosos.En las zonas de trabajo del laboratorio. deben mantenerse siempre en posición vertical en una gradilla. como: batones. material infecciosos o animales infectados.Utilizar bata sanitaria u otras prendas apropiadas cuando la envergadura del trabajo así lo requiera. . .Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio. beber. viseras. .

generalmente empotradas en las paredes o instaladas en el centro del local. en especial la parte inferior. la construcción de un laboratorio de microbiología se hará en un área separada de locales destinados a otros fines. 1. el de los gérmenes ambientales o contaminantes que por diversas vías pueden tener acceso a las áreas de trabajo. Casi todas las salas o cubículos del laboratorio dispondrán de mesetas.Utilizar incineradas de asas microbiológicas. el cumplimiento estricto de las normas de asepsia y antisepsia establecidas para la manipulación de los pacientes.. requiere de condiciones especiales que propicien el establecimiento de una organización de trabajo. Lentes de seguridad. 2. Dentro de los requerimientos esenciales del diseño constructivo se encuentran los siguientes. 3. deben ser lisos. que permita al personal del laboratorio. sin grietas o ralladuras donde se pueda acumular la suciedad y el polvo que dificulten su limpieza y desinfección. d) Nasobuco. Como medida de seguridad. Las mesetas deben ser construidas con acero inoxidable u otro material simi26 . 1 : Equipos y medios de seguridad: a) Incinerador de asas. la construcción o adaptación de un laboratorio de microbiología clínica. Fig. Las paredes. b) Guantes de polietileno. así como. el piso y el techo. El diseño adecuado de los laboratorios Debido a los diversos riesgos implícitos en las investigaciones microbiológicas. el manejo y control de los microorganismos presentes en las diferentes muestras y cultivos durante el proceso de la investigación.

mínimo. 4. Caracteres estructurales La estructura de un laboratorio de microbiología. que estarán presentes en un turno de trabajo. de manera que puedan ser desinfectadas o esterilizadas por métodos físicos o químicos sin que se deterioren.Las que sean destinadas para trabajar sentado. Las destinadas para trabajar de pie tendrán una altura de 85 a 90 cm de alto y el mismo ancho que la anterior. Las ventanas deben estar situadas a unos 30 cm. El laboratorio dispondrá de instalaciones de : agua. los frascos con reactivos colorantes. medios de cultivos. no debiendo existir ninguna construcción debajo que dificulte la colocación de las piernas y solo de ser necesario podrá disponer de una gaveta. 5. atendiendo a la cantidad de personas previstas. así como otros materiales e instrumentos. El grado de iluminación y ventilación se debe adecuar a las normas establecidas para locales cerrados o abiertos. La superficie de estas mesetas no deben reflejar excesivamente la luz para que no interfiera la lectura de algunos exámenes ni afecte con el tiempo la vista del laboratorista. por encima de la altura de las mesetas para evitar la exposición directa del aire y el polvo procedente del exterior. Estas mesetas generalmente están provistas de gavetas y estantes con anaqueles. destinados a la colocación de la cristalería. aire y gas. electricidad. álcalis y sustancias corrosivas. dependerá esencialmente de la disponibilidad de espacio. 2 : Disposición de las mesetas en el laboratorio. Fig.lar que propicie un terminado de su superficie liso y sin poros y que sea al mismo tiempo muy resistente a la acción de los ácidos. En aquellos laboratorios que cuenten con sufi27 . tendrán una altura de 75 a 80 cm de altura por 60 cm de ancho.

siendo limitado para el resto del personal del laboratorio y otros visitantes. un personal de oficina entrenado. sala donde se encuentra hospitalizado o unidad de salud que hace la solicitud). todo lo cual está encaminado a reducir la probabilidad de posibles propagaciones de agentes patógenos por todo el laboratorio y la comunidad. reactivos y colorantes. los datos del paciente (nombre y dos apellidos y número de historia clínica). de menor a mayor nivel de contaminación. debe estar a la entrada de la edificación y el resto de las secciones de trabajo. y el tipo de investigación que se indica. 3 : Libro de registro. el numero. recepciona las órdenes de análisis entregadas por los propios pacientes o enviadas desde las salas de la unidad hospitalaria. Sala principal de trabajo. Sala de recepción y archivo En esta sección. La sala de recepción y archivo. en caso de pacientes encamados. 28 . Cuarto de siembra. la fecha de registro. las actividades suelen ser compartimentadas en las siguientes áreas o secciones de trabajo: Sala de recepción y archivo. Fig. Cubículo para la preparación de medios de cultivo. Cubículo para la esterilización y preparación de materiales. se ubicará estratégicamente en el interior del laboratorio.cientes salas y cubículos. la procedencia (consulta externa. no relacionados con la actividad que se realiza en esas secciones de trabajo. o procedentes de otras unidades de salud vinculadas al centro. (áreas bio limpias o bio sucias) con esta estrategia. los pacientes. Cubículo para las tomas de muestras. donde se procederá a asentar en el libro de registro de entrada. familiares y visitantes no tendrán acceso a las áreas de riesgo. que consecutivamente le corresponde a esa solicitud.

En un pequeño cuadrante que se encuentra impreso en el ángulo superior derecho de la orden de análisis se notara el número asignado en el registro de entrada. Concluida la investigación. en la orden de análisis se especificaran las causas (muestras escasa. quien la firmará y anotara la fecha de realización. etc) después de registrada. los resultados serán debidamente informados en la orden de análisis. por el técnico que realizó el examen. Fig. la orden le será devuelta al paciente. los frascos que contienen muestras no deben estar en contacto con las órdenes de análisis. Si el examen no se puede realizar y se solicite su repetición. Además de estos datos primarios que se registran diariamente. Como medida de seguridad. Cuando la orden se entrega conjuntamente con la muestra (orina. Si se tratara de un tipo de muestra que deba ser tomada en el laboratorio (exudados. la sección de archivo tiene la función de procesar un resumen bioestadístico mensual con los resul29 . emitir un duplicado. suero hemolizado. heces. muestra contaminadas. dada la posibilidad de que se haya producido algún derramamiento durante su recolección en cuyo caso. esputo. 4 : Orden de análisis. lesiones infecciosas en la piel. debiendo reintegrarla a la sección de recepción y archivo. la manipulación ulterior de las ordenes pueden propiciar una vía de contagio. Las ordenes con los resultados serán enviadas al Dpto. lo que permitirá en caso de extravío de la orden. quien la entregara al técnico que le vaya a tomar la muestra. el mismo número de registro. etc). donde se anotará los datos en el libro de registro de resultados. etc) en los frascos se anota con lápiz cristalográfico. de archivo de la unidad hospitalaria para que sean archivados en las historias clínicas o en el laboratorio cuando deban ser recogidas por los interesados.

o la superficie del inmueble y el mobiliario. etc tales como parabanes. conjuntival. Cuarto de siembra Generalmente los laboratorios pequeños que disponen de una sala principal en un único local tienen anexado un pequeño cubículo que es donde radica el cuarto de siembra. observaciones microscópicas. coprocultivo. refrigerador. una sección de trabajo independiente. etc. tuberculosis. etc). parasitología. constituyendo cada uno de ellos. etc) debiendo contar con la privacidad requerida y las condiciones necesarias. Cada sección contará con los recursos necesarios para la realización de esas investigaciones especificas. óptico. así como de una lámpara de luz ultravioleta para la esterilización del medio ambiente. potenciómetro. en la que se realizan determinadas investigaciones. para la toma del exudado vaginal. particularmente. medios de cultivos y otros reactivos y colorantes. etc) para la toma de las diferentes muestras (exudado faringeo. debiendo contar con una colección de cepas microbianas certificadas para la realización del control de calidad. debe estar climatizado. serología. resiembras y de aquellas actividades que requieran de una estricta asepsia. pruebas de identificación. leptospirosis. misceláneas. Estas secciones de trabajo deben estar climatizadas. pueden existir otras secciones especializadas para la investigación de lepra. mechero. uretral.tados de cada tipo de investigación y adicionalmente llevar un control estadístico establecido por los programas de enfermedades de transmisión sexual y tuberculosis. 30 . En algunas unidades. etc. camillas ginecológicas. así como de la cristalería y otros accesorios para estos fines.. centros municipales o provinciales. Sala principal de trabajo Esta sala puede contar de uno o varios cubículos. etc. instrumentos de siembra. Este cuarto esta provisto de mesetas y de todos los materiales e instrumentos para la realización de siembras. En sus estantes y anaqueles se almacenará el stok de productos químicos. etc. el laboratorista dispondrá de los recursos necesarios (guantes. hisopos estériles. etc. por ejemplo: Urocultivo. Al igual que la sala principal de trabajo. Cubículos para las tomas de muestras En este local. tinciones. Cubículo para la preparación de medios de cultivos. tales como: preparación y cultivo de las muestras. baño de María. reactivos y colorantes Este local estará equipado con balanzas.

Esterilización. En un área de este local se situara un recipiente grande con solución desinfectante o sulfocromica con el objetivo de sumergir la cristalería que asi lo requiera. . en horno o autoclave. incluyendo su secado En este local se instala una meseta con tres fregaderos colindantes. . . Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. En el segundo de enjuaga. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización La cristalería de trabajo y otros materiales que vayan a ser sometidos a un proceso de esterilización. incluyendo su secado. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. Destilación de agua. entre las que se encuentran las siguientes. deben ser previamente taponados 31 . en el primero se friega la cristalería con detergentes especiales y agua abundante empleando hisopo de tamaño apropiado.Cubículo para la esterilización y preparación de materiales Este local se destina para la realización de diversas actividades. Fig. Las pilas de estos fregaderos deben estar lo suficientemente altas como para permitir el enjuague de las pipetas en posición vertical. . con agua cruda y en el tercero con agua destilada. 5 : Hisopo para la limpieza de la cristalería.

los laboratorios que disponen de destiladores metálicos.con algodón y/o empaquetados con papel de estraza. Como se comprenderá se requieren de dos autoclaves. por las manipulaciones ulteriores y los microorganismos presentes en el medio ambiente. 6 : Destilador metálico de agua. Esterilización El local debe estar dividido en dos áreas. Destilación de agua Generalmente. esterilización. Fig. El área para el tratamiento del material limpio contará al menos con un horno que además de ser utilizado para la esterilización se puede emplear para el secado. preparación y esterilización del material limpio. para evitar su posterior contaminación una vez estériles. una para esterilizar el material limpio y la otra para esterilizar el material sucio. 32 . fregado. El flujo de trabajo en esta sección es el siguiente: entrada del material sucio. los instalan en este lugar (Área limpia) procediendo a la destilación y recolección del agua destilada en botellones con tapón de goma.

Sumergir la jeringuilla con la aguja ensamblada. El personal del laboratorio recibirá. a través de su director una minuciosa información acerca de: a) Las medidas de seguridad establecidas. 5. La manipulación se hará siempre con guantes quirúrgicos estériles observando un cuidado extremo para evitar pinchazos o cortaduras. c) Los riesgos mas probables que pueden ocurrir debido al tipo de investigaciones que se realizan en ese laboratorio. 3. 4. Descargar la solución desinfectante contenida en la jeringuilla a través de la aguja. b) La existencia y localización de un manual de seguridad y de operaciones en el que se identifiquen los riesgos actuales y potenciales y se indiquen los procedimientos para su reducción.MEDIDAS DE PREVENCIÓN 1. Enjuagar la jeringuilla y la aguja con agua (llenar y vaciar). Examinar la aguja y la jeringuilla cerciorándose de que el ajuste de la boquilla de la aguja a la jeringuilla es adecuado y que las marcas volumétricas se mantienen legibles. Durante el horario de trabajo las puertas del laboratorio permanecerán cerradas y solo tendrán acceso el personal del laboratorio y las personas autorizadas que hayan sido debidamente informadas sobre los posibles riegos y satisfagan cualquier requisito que se exija para tener acceso. Observar que no queden restos de sangre ni manchas. 4. en el interior de una bandeja que contenga solución desinfectante y exponerla a su acción por un espacio de tiempo no menor de 20 minutos. en posición horizontal. No se permitirá tampoco la entrada en el laboratorio de animales que no tengan relación con el trabajo que se esté realizando. 6. 33 . Dejar las agujas colocadas en la jeringuillas. 3. 2. como por ejemplo la inmunización actualizada. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN 1. PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. A todos los miembros del personal del laboratorio y demás personas expuestas se les tomara muestras de sangre periódicamente y con el suero se realizaran determinaciones que servirán de referencia en función de los agentes infecciosos manipulados. 2. No se permitirá la presencia de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.

e) Limpiar nuevamente el área contaminada con el desinfectante y posteriormente con detergente y agua abundante. d)Aplicación nuevamente de desinfectante. c)Remover el material infeccioso. etc). b)Aplicar solución desinfectante. Fig. papel de filtro. Secar y proceder a empaquetar las agujas y las jeringuillas por separado con doble envoltura para su esterilización en autoclave. INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE En caso de derrame de muestras biológicas o material contaminado a) Colocarse guantes quirúrgicos. b) Cubrir la sustancia derramada con material absorbente (algodón.7. d) Remover el material absorbente y colocarlo en un contenedor destinado para materiales contaminados. 7 : Desinfección de muestras biológicas o material infeccioso derramado accidentalmente: a)Cubrir el área con un material adsorbente. 34 . c) Aplicar solución desinfectante de hipoclorito de calcio o sodio al 1% alrededor del derrame y sobre el material absorbente esperar de 10 a 20 minutos. e) y f) Limpieza con agua y detergente.

d) Para continuar el trabajo colóquese un débil o guante. lesiones o exposiciones con muestras o material contaminado. Si la prueba es negativa. de Epidemiología y orientará al trabajador que reporte cualquier síntoma febril agudo.En caso de lesiones o contacto no protegido con material contaminado o muestras biológicas a) Lavar de inmediato la lesión con agua y jabón. se repite a los 3 meses y con esa periodicidad durante un año. El agua arrastra mecánicamente una parte de los microorganismo presentes en las 35 . deben ser comunicados lo antes posible al jefe del laboratorio. punturas. f) Los derrames accidentales. El personal accidentado debe ser puesto en observación epidemiológica que incluya pruebas para detectar anticuerpos contra el VIH que serán realizadas 6 semanas después de la exposición. Justificación: La medida básica mas importante. debe irrigarse de inmediato con cantidades de agua abundantes o solución salina fisiológica. Curar y cubrir la lesión. trae como consecuencia la contaminación de las manos y las muñecas pudiendo extenderse a los antebrazos. relacionada con la higiene personal lo constituye sin lugar a dudas el lavado de manos. c) Aplicar una solución desinfectante débil de hipoclorito de sodio o calcio. el alta epidemiológica. g) El jefe de Dpto. Si al cabo de ese tiempo continua negativa se da. e) En caso de salpicaduras de sangre en los ojos o la boca. lo notificara al Dpto. En el lavado de manos intervienen elementos mecánicos y químicos. sobre todo si es acompañado de rash. verificara la procedencia de la muestra y si comprueba que el instrumental estaba contaminado con sangre o liquido corporal de un enfermo o portador de VIH. La manipulación de los pacientes o materiales. para arrastrar mecánicamente a los agentes infecciosos. diarreas o adenopatías que ocurra dentro de las 12 semanas con posterioridad a la exposición. quien registrará el hecho en el libro de control que existe al efecto. b) Estimular el sangramiento. LAVADO DE MANOS Objetivo: Eliminar la micro biota transitoria y disminuir la residente o normal de las manos y los antebrazos. por lo que de no debe aplicarse con sistematisidad estas medidas higiénicas al personal de la salud puede propagar la infección de un paciente a otro y contribuir de esta manera al incremento de las infecciones nosocomiales.

. 36 . Lavado higiénico o médico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. evitar infecciones cruzadas y proteger al personal de salud. 8. conjuntamente con la eliminación de los ácidos grasos y la suciedad. . 6. con el objetivo de arrastrar suciedades. Lavado higiénico. llénelas de agua y enjuague la llave. Remoje las manos hasta las muñecas y haga una abundante espuma.. 5. Abra la llave hasta que salga un chorro abundante de agua y enjuague las manos y manténgalas en un plano horizontal. mientras que el jabón emulsiona las materias extrañas y reduce la tensión superficial de los gérmenes presentes lo que facilita su lisis. Cierre la llave con una de las manos y enjabónelas. 2. personales o sociales que lo requiera y antes y después del contacto con pacientes en procederes no invasivos y sin riesgo. Lavado social. que elimina todo tipo de suciedad visible. Lavado quirúrgico. TIpos de lavado de manos . Retire las prendas de las manos y las muñecas. Abra la llave del agua y tome el jabón. Cierre la llave y séquese las manos con servilletas. Con la punta de los dedos. 4. 7. Empleo: Siempre que se perciban las manos sucias. Frote rigurosamente las manos con movimiento rotativo y haga que la espuma se extienda hasta las muñecas. papel o paño para cada una. las que se frotan de forma enérgica se enjuagan abundantemente durante un minuto y después del secado se aplica solución antiséptica. enjuague el jabón y colóquelos en la jabonera. 3. Empleo: Se utiliza ante las maniobras semicriticas. sin frotárselas.manos. al realizar actividades fisiológicas. Lavado social de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. Procedimiento 1. Junte las manos en forma de recipiente.

Frote las manos de la siguiente forma: a) Palma con palma. Enjuague bien sin dejar ningún residuo de jabón. comience por las manos y finalice en los codos nunca regrese a las manos. i) Seque las manos y antebrazos con paños. c) Palma con palma intercalando los dedos. g) Frote en forma circular la superficie de los antebrazos 5 cm por encima de las muñecas. f) Frotación de las yemas de los dedos sobre las palmas.Procedimiento 1. Realice el lavado social de las manos hasta enjuagar la llave con las manos juntas. d) Dorso de los dedos flexionados para cada mano. 3. 5. Moje las manos y antebrazos (5 cm por encima de las muñecas) enjabónelas con jabón convencional o bacteriostático y haga una abundante espuma. j) Aplicar solución antiséptica y déjela actuar sobre las manos por un tiempo no menor de 2 minutos antes de la maniobra semicritica. Frote las manos igual que para lavado higiénico incluyendo los antebrazos. 2. Empleo: Antes de cualquier maniobra critica. enjabónelos con jabón convencional en forma circular y haga una abundante espuma. Moje las manos y antebrazos hasta 2 pulgadas arriba del codo. Realice el lavado social de las manos hasta el paso en que se enjuaga la llave con las manos juntas en forma de recipiente. 3. mantenga las manos siempre levantadas para que el agua corra hacia los codos. 2. con utilización de solución antiséptica después del secado. Lavado quirúrgico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua. jabón y cepillo. 4. Tomar un cepillo estéril para cada mano. servilletas o papel estéril (uno para cada mano) apriete suavemente la piel sin restregar. e) Pulgar derecho con la mano izquierda y viceversa. h) Realice un enjuague abundante y deje que el agua corra hacia los codos. 37 . lechos ungueales y la yema de los dedos. aplíquele jabón y cepille bien las uñas. b) Palma derecha sobre dorso de la mano izquierda o viceversa. Procedimiento 1.

c) Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización. Estos recipientes deben ser impermeables y estar provistos de tapa herméticas. Cuando estos estén llenos se colocaran dentro de otros recipientes para desechos contaminados y se incineran. 2. etc). Si se utiliza recipientes especiales concebidos para el transporte. a) Deshechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura. Después del tratamiento en autoclave puede colocarse el material en recipientes apropiados para el transporte al incinerador o a otro lugar de evacuación. Lo mejor es poner los deshechos en un saco plástico que se introduce en una caja de cartón. 38 . con lo que se puede incinerar el contenido y el continente. Nombre los diferentes tipos de riesgo a los que están expuestos los profesionales y técnicos de microbiología en el ejercicio de su trabajo. Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización: Este material se coloca en recipientes impermeables poco profundos que contenga una cantidad desinfectante suficiente para cubrir el contenido y se llevan al autoclave. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar transporte.MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS Se debe establecer un sistema de identificación y separación de los materiales contaminados (y de sus recipientes). No se efectúa ninguna acción previa. Objetos aguzados y cortantes: Las agujas hipodérmicas deben ser colocadas en recipientes con paredes que no puedan traspasarse fácilmente. b) Objetos aguzados y cortantes (agujas. CUESTIONARIO 1. Enuncie el concepto de Bioseguridad. previamente introducidos en recipientes impermiables. incluso cuando las normas de laboratorio consistan en esterilizarlos primero en autoclave. d) Material contaminado para su eliminación.antes de proceder a su eliminación. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar el contenido y antes de devolverlos al laboratorio. cualquier limpieza o reparación que se considere se hará después de esterilizados. Material contaminado para eliminación: Todos los cultivos y materiales contaminados suelen esterilizarse en autoclave. jeringuillas.

Indique cuales don las actividades que se realizan en cada sala o cubículo del laboratorio. Caracterice los diferentes niveles de riesgo. 8. Describa como debe ser el diseño constructivo de un laboratorio de microbiología. 39 .¿Cuáles son las principales causas del daño individual? Especifique que elemento biológico resultan vulnerables de ser afectados en la comunidad por negligencias o accidentes en un laboratorio que trabaja con agentes biológicos peligrosos. 4. que están encaminadas a evitar la ocurrencia de contagio infecciosos. ¿Qué instalaciones debe tener el laboratorio para su buen funcionamiento? 11. Refiérase a las medidas establecida para evitar la formación de aerosoles. 9. Nombre las diferentes salas o cubículos con que se estructura un laboratorio de microbiología. Explique como usted procede con cada tipo de material u objeto contaminado. 10. Mencione las prohibiciones establecidas en el código practico o reglamento de estricto cumplimiento para el personal que labora en el laboratorio. y su equipamiento. teniendo en cuenta su reutilización o eliminación. 3. Precise las medidas de prevención que debe conocer el personal que labora en los laboratorios. Describa pormenorizadamente las normas establecidas para efectuar las diferentes técnicas de lavado de manos. 6. ¿Cómo se clasifican los objetos peligrosos antes de ser deshechos? 19. Especifique las característica constructivas que debe tener cada una de las salas o cubículo. 14. ¿Qué indicaciones se establecen en caso de accidente?. 7. Mencione los principios básicos establecidos para la prevención y control del riesgo biológico. 13. 16. 15. en cuanto a la afectación individual y comunitaria. 12. ¿Cuáles son las indicaciones a seguir en el caso de que se produzcan derrames de muestras biológicas o material contaminado? 17. 18. 5.

normas y evaluaciones sobre la regulación de la conducta de los individuos. para obtener los medios de subsistencia necesarios (alimentos.CAPITULO 3 ETICA MEDICA INTRODUCCION La sociedad está formada pro un conjunto de seres humanos que conviven dentro un mismo ámbito cultural. Y fijándolas en su conciencia como principios o normas morales. para lo cual crea organizaciones represivas o políticas e instituciones productivas y de servicio que responden a sus intereses económicos o tienen el encargo de influir ideológicamente con iguales propósitos sobre la conciencia común (estado de opinión.) de la población. constituyendo obligaciones con respecto a otros individuos. mediante la inculcación de ideas. instrumentos de producción. la patria y el Estado. lo que dependerá del lugar que ocupen en la escala social y el carácter privado o social de las fuerzas productivas. su clase social.. fundadas o dogmáticas. estéticas. que en su conjunto forman la conciencia social. evaluando estas relaciones de buenas o malas. mediante el establecimiento de relaciones de producción basada en la propiedad sobre los medios de producción que va a delimitar el grado de accesibilidad a los bienes materiales y culturales de cada clase y/o capa social existente. una organización política de la clase dominante que tiene como finalidad mantener el orden establecido y aplastar la resistencia de las clases antagónicas. debido a influencias socioculturales y que se expresa mediante opiniones. A diferencia de las relaciones de producción que se forman independientemente de la voluntad del hombre. la familia. las concepciones ideológicas pasan primero por la conciencia. morales. surge el Estado. religiosas. etc. La moral está condicionada por la base 40 . criterios etc. LA MORAL La moral puede definirse.). vestidos. filosóficas. antes de constituirse en patrones del comportamiento. juicios. como el conjunto de convicciones. representaciones. de honestas o deshonestas etc. relacionándose de un modo u otro. de justas o injustas. jurídicas. que cada individuo incorpora a su escala de valores. cuya estructura responde a los intereses de la clase dominante. En todo sistema social impera un modo de producción que determina la base económica de esa sociedad. concepciones políticas. vivienda. Como una necesidad de las sociedades divididas en clases.

Cuando los actos del personal médico o paramédico dan lugar. existen en aquellas morales diferentes. ETICA La ética es la ciencia de la moral y de la moralidad. las leyes a que obedece. la moral no se apoya en leyes formales. así como de los trabajadores administrativos y de servicio que laboran en instituciones biomédicas. señala que aspiraciones son dignas. con 41 . Para su estudio la ética se divide en. ÉTICA MÉDICA La ética médica es una manifestación de la ética general y se refiere específicamente. psíquicas o morales en el paciente. que investiga los enunciados éticos y su relación con la verdad. en la autoridad moral de algunas personas o en la opinión publica de determinadas colectividades. sus familiares o a la comunidad. establece el código moral de la conducta. sino en la fuerza de la persuasión y el ejemplo. que conducta es buena y cual es el sentido de la vida. A diferencia de la moral. estableciéndose como hábito o costumbre en la conciencia. su origen y desarrollo. Al cumplir esta función. que surge y se desarrolla como resultado de las relaciones de producción. la ética investiga científicamente las concepciones morales en su sentido mas amplio y establece las regulaciones para su aplicación. a afectaciones somáticas. sus normas y carácter histórico. pero a la vez como otras formas de la conciencia social incide y actúa sobre ella. Teoría de la moral Investiga la esencia de la moral. Ética normativa Investiga el problema del bien y del mal. a los principios y normas que rigen la conducta de los profesionales y técnicos de la salud. En los últimos tiempos se ha incorporado una nueva modalidad denominada Metaética. se incurre en violaciones de la BIOETICA.económica el régimen social. Teoría de la Moral y Ética Normativa. de manera irreversible. Como quiera que en la sociedad dividida en clases los intereses son contradictorios.

no causar daño al paciente de manera intencional. El principio de beneficencia preconiza que todas las acciones y esfuerzos deben estar encaminados a beneficiar al enfermo. El carácter socialista del Sistema Nacional de salud de nuestro país. El comportamiento bioético. En el primero se establece. con independencia del elevado costo que pueda tener para el Estado. estar siempre dispuesto a brindar la atención necesaria. Nuestra conducta en relación con el paciente y sus familiares. c) La disposición los profesionales y técnicos de la salud de participar en misiones internacionalistas.Dedicar nuestros esfuerzos a la prevención. es decir. constituye la base material sobre la que se sustenta la moral y la ética de los trabajadores de la salud. de los recursos y atención que presta la institución y por último. aún en las zonas más apartadas y recónditas. recuperación. establece la equidad. ideológico y patriótico.independencia de que la acción se haya producido de manera intencional o inconscientemente. debe estar basada en la estricta observancia de los siguientes principios éticos: En relación con el paciente y sus familiares . por negligencia u omisión. basados en los siguientes principios: a) La voluntad política del estado cubano de crear una infraestructura que ha permitido llevar los servicios médicos a todo el país. con el elevado espíritu internacionalista.Evitar que se produzcan daños a personas sanas o enfermas en los trabajos de investigación que realicemos. con el resto de los trabajadores y estudiantes del sector y con la sociedad. tanto preventiva como curativa en las instituciones de salud. la justicia. Para brindar su colaboración en cualquier lugar del mundo. está regulado básicamente pro 4 principios: la no maleficencia. tales como. la autonomía. Es por ello que en el ejército de nuestra función social debemos observar principios éticos . la beneficencia y la autonomía. En cuanto al principio de justicia. dedicar todos nuestros esfuerzos y conocimientos científicos y técnicos al mejoramiento de la salud del hombre. donde se respeta la decisión del paciente de someterse a acciones médicas o experimentales que puedan afectar su integridad físico. b) El carácter gratuito de la atención médica. trabajar consecuentemente allí donde la sociedad lo requiera.morales de profundo contenido humano. 42 . psíquica o moral. rehabilitación y promoción de la salud humana. . todos los pacientes tienen las mismas oportunidades de beneficiarse por igual.

la superficialidad o la rutina. . de aquellos trabajadores que nos están subordinados.Escuchar las preocupaciones y dificultades del paciente y sus familiares.Utilizar en todo momento de nuestras relaciones con los pacientes y familiares.Mantener en los casos de enfermedades de curso fatal absoluta o relativa reserva sobre el diagnóstico y pronóstico en relación con el paciente. intervienen de una forma u otra en el trato con los pacientes.Abstenerse de realizar trabajos investigativos con los pacientes sin su consentimiento.Evitar que lleguen a manos de los pacientes o de sus familiares las historias clínicas. . .Los errores técnicos deben ser conocidos y analizados críticamente en reuniones del departamento con la libertad y profundidad necesaria que permitan derivar de ellas la experiencia que impidan su repetición.Cuidar de no incurrir en el error técnico que resulta de una equivocación. aunque no estén subordinados. sencillo y comprensible. . .No divulgar aspectos de la enfermedad que puedan estar relacionados con la vida intima del paciente o sus familiares. a toda persona que recabe nuestros servicios.Conservar el secreto profesional. informes de laboratorio o cualquier otro documento que pueda darle indebida o perjudicial información.Respetar el decoro. teniendo en cuenta los intereses del paciente siempre que ello no ocasione un perjuicio social ni ponga en peligro la salud de otras personas. . 43 . evitando a toda costa que nuestro trabajo se afecte por el apresuramiento. sin alardes de tecnicismos y erradicando cualquier expresión de mal gusto.Atender. . sin mostrar prisa o indiferencia hacia sus padecimientos. el pudor y la dignidad de las personas bajo nuestra atención.Los profesionales y técnicos de la salud deben poseer la honestidad necesaria para reconocer sus errores y eliminarlos. ni hacer comentarios indiscretos en su presencia.Exigir.Propiciar una adecuada relación personal con el paciente que le inspire un buen estado de ánimo y seguridad. ni elementos de negligencia.. . darles la atención requerida y esforzarnos por viabilizar las soluciones posibles. de forma solícita. . un lenguaje claro. aunque no exista mala fe. . la conducta adecuada ante el paciente y sus familiares y en el mismo sentido actuar sobre aquellos que. . . . despreocupación e ignorancia.

Como parte de la sociedad . como aspecto esencial para el cumplimiento de sus responsabilidades docentes.El docente debe promover en sus alumnos los principios éticos. . modestia honestidad y dentro de las reglas de una elevada educación formal y política. subordinando el interés personal al social. a fin de satisfacer las necesidades de nuestro pueblo y las tareas internacionalistas que se requieran. .Inducir en los alumnos la disposición de recibir entrenamiento especializado en aquellas disciplinas que lo demanden. . a través de la palabra y su ejemplo. exija el mayor esfuerzo. . . cuidar que las opiniones y criterios se basen en el mas profundo análisis científico posible.Evitar indiscreciones que menoscaben el prestigio de otros compañeros o instituciones del sistema de salud. por razón del carácter excepcional de nuestro trabajo. . 44 .Propiciará que las relaciones entre el y sus educandos se enmarquen en la debida autoridad y respeto que se requieren en la actividad docente. .Prestar especial atención a su superación individual.Poner en conocimiento de las autoridades correspondientes cualquier violación que nos conste. . una actitud crítica y autocrítica sobre los asuntos referidos a la relación con los pacientes.Estar siempre en disposición de cumplir las obligaciones que le correspondan como ciudadano. dedicación y sacrificio.En relación con el resto de los trabajadores de la salud . teórica y práctica. . absteniéndose de emitir conceptos u opiniones que pueden alarmar innecesariamente a la ciudadanía.Mantener. .Mantener en todo momento un buen porte y aspecto personal. En las relaciones entre el docente y los educandos . así como aquellas que.Actualizar y perfeccionar los conocimientos de forma continua. para con nosotros mismos y con los demás profesionales y técnicos de la salud.Ejercer con altruismo las actividades propias de su esfera de trabajo.Procurar que la información que se ofrezca con propósitos de divulgación científica y educativa sea correcta y adecuada.Comportarse en todo momento con sencillez. para lograr la optima calidad de los servicios que prestamos a la sociedad. utilizando el vestuario adecuado en las diferentes áreas de trabajo. tanto de estos principios éticos como de los reglamentos establecidos en las Unidades de Salud Pública.

¿Qué son y cómo se crean las comisiones de ética médica? ¿Cuál es la competencia y el desempeño de los integrantes de las comisiones de ética médica en los centros de Salud? 45 . CUESTIONARIO 1. Esta comisión es la encargada de conocer toda denuncia o quejas sobre violaciones de la ética. que serán seleccionados entre los compañeros de más prestigio laboral científico. los que a partir de ese momento actuarán de acuerdo con la legislación laboral vigente. 2. 9. 6. realizando las investigaciones pertinentes en el plazo de 20 días. que de común acuerdo entre la administración y el sindicato.LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA En todas las unidades del Sistema Nacional de Salud se crean las comisiones de Etica Medica. moral y político del centro. 3. ¿Cómo se materializa el comportamiento ético cuando el profesional o técnico se siente parte de la sociedad. es elegida para un mandato de 2 años quedando integrado por 5 miembros. 8. 5. En su opinión ¿Qué cosa es la ética? ¿Cuáles son los aspectos generales de la ética médica? ¿Qué usted entiende por violaciones de la Bioética? ¿Cúales son los principios que regulan el comportamiento bioético? ¿Cúales son los principios éticos que regulan las relaciones entre el personal de la Salud con los pacientes y familiares? Refiérase a los principios éticos que se ponen de manifiesto en las relaciones con otros trabajadores del sector y con los estudiantes. 4. 3 en activo y dos suplentes. trasladará su criterio a la dirección y al sindicato. En el caso de arribar al criterio de que se incurrió en violación de la ética. 7.

CAPÍTULO 4 EL AGUA INTRODUCCIÓN El agua es un líquido transparente. Se congela a 00c. pasando al estado sólido y hierve a 1000c. hacen que en conjunto pierda su pureza. etc. por constituir el elemento esencial de todos los tejidos y líquidos orgánicos. inodoro e insípido. por lo que se clasifica el enlace como polar. En el laboratorio. siendo considerada como el solvente universal para la disolución de una gran cantidad de solutos y otros compuestos en estado líquido. incoloro. IMPORTANCIA El agua es indispensable para la vida. formando la molécula una configuración especial no lineal. dióxido de carbono. sino angular. como el nitrógeno. contaminándose con los diversos compuestos orgánicos e inorgánicos que estén presentes. el agua de lluvia se une a diversos elementos gaseosos presentes en el aire. Químicamente está compuesta por 2 átomos de hidrógeno unidos a un átomo de oxígeno. Al caer se disemina o se filtra en el suelo. continua el proceso de contaminación. lo que unido al tratamiento con cloro a que es sometida en los acueductos para su potabilización. 46 . dependiendo de los compuestos presentes en cada lugar. formando ácidos y bases con otros compuestos para formar hidratos. Durante las precipitaciones. pasando a ser un líquido que contiene múltiples sustancias en disolución. pasando al estado de vapor de agua. desempeñando un protagonismo esencial en las reacciones químicas. lo cual propicia que sobre el átomo de oxígeno exista una cierta densidad de cargas negativas y sobre el hidrógeno una densidad de cargas positivas. Posteriormente en los afluentes. debido a que al ionizarse se une a muchos óxidos. helio. lo que determina sus propiedades disolventes. ríos. el agua es el reactivo más empleado. CALIDAD DEL AGUA El agua tal y como se encuentra en la naturaleza no es pura. represas o acueductos donde va a parar. metano. que variará.

pasen por un sistema de enfriamiento que los condensan. ya que de lo contrario algunos componentes. Para lograr la purificación del agua se emplean dos métodos: la destilación y la desionización.PURIFICACIÓN DEL AGUA Para las determinaciones de laboratorio. Por ejemplo: el cloro libre. en someter al agua a temperatura de ebullición en el interior de un destilador metálico o de vidrio. 47 . mientras que las sales de mercurio las activan. resulta indispensable que el agua sea lo más pura posible. Fig. DESTILACIÓN La destilación consiste. ya que los contaminantes al no tener la capacidad de evaporarse. diseñado para que los vapores que se desprendan en este proceso. posee un gran poder de oxidación por lo que puede alterar la composición química de uno o varios compuestos del sustrato empleado. 8 : Destilador de vidrio. provocarían efectos indeseables distorsionando la fiabilidad de los resultados. Por su parte el fluor y el cobre inactivan a las enzimas. haciendo que pasen nuevamente al estado líquido con una mejor calidad. quedan retenidos en el destilador.

lo cual se realiza de la siguiente manera: 1. Después que el agua se ha enfriado. Para el trabajo del laboratorio de microbiología. una mayor calidad de pureza. como por ejemplo en la preparación de medios de cultivo. debe ser renovada diariamente. 2. 3. debido a la presencia de dióxido de carbono atmosférico disuelto. DESIONIZACIÓN La desionización consiste en hacer pasar el agua corriente por una columna de resinas. CONDUCTIVIDAD DEL AGUA Mediante la conductividad eléctrica se puede determinar el grado de pureza del agua. donde se conservará hasta su empleo. incluso. que requieren generalmente. obtenida por el procedimiento explicado no es totalmente pura. Se vierte el agua en un erlenmeyer y se somete a temperatura de ebullición por espacio de 3 a 5 minutos. aunque tiene la desventaja. el agua destilada debe ser sometida a un proceso de descarboxilación. Antes de apagar la fuente de calor. PH DEL AGUA DESTILADA El ph del agua destilada oscila entre 4 a 5. debe ser sometida nuevamente al proceso de destilación con lo que se obtiene el agua bidestilada. Si se desea neutralizar ese pH ácido para que no interfiera en algunos procederes.El agua destilada. se verterá en recipientes apropiados. Si se quiere. con lo cual adquiere un buen estado de pureza. como se ilustra en la siguiente tabla: 48 . las cuales captan los aniones y cationes que la contaminan. tapar el erlenmeyer con un tapón perforado de caucho. el agua destilada. mejor que la del agua bidestilada. el procedimiento comúnmente empleado es la destilación. para algunas determinaciones. No obstante. ya que el vapor de agua que se forma puede arrastrar mecánicamente partículas de agua que no estén en estado de vapor. provisto de un tubo trampa con perlas de hidróxido de sodio. el agua destilada puede emplearse en el trabajo diario sin que introduzca errores apreciables. que como el proceso no lleva implícito su esterilización. Si se sometiera a una tercera esterilización obtendríamos el agua tridestilada. un pH neutro o ligeramente alcalino.

¿Cuál es la diferencia entre el agua destilada y la bidestilada? 7. 9. ¿Cómo es la calidad del agua. ¿En que consiste la destilación? 6. ¿Cómo se denomina el método más empleado en los laboratorios para purificar el agua? 5. tal como se encuentra en la naturaleza? 3.Cuadro 2 : Grado de pureza de los distintos tipos de agua en correspondencia con su conductividad. ¿Cuál es el pH del agua destilada? 11. Explique el proceso de desionización del agua. ¿Por qué se hace necesario bidestilar o tridestilar el agua? 8. ¿Explique por qué causa el agua empleada en el laboratorio debe ser lo más pura posible? 4. ¿Mediante que procedimiento se puede determinar el grado de pureza del agua? 49 . ¿Cuál Es la importancia del agua para los laboratorios? 2. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja de la desionización sobre la esterilización del agua? 10. TIPO DE AGUA CONDUCTIVIDAD ( ohms -1 cm -1 ) 300 5 1 0.2 Corriente Destilada Bidestilada Desionizada CUESTIONARIO 1.

se identifica por estar rotulada con el nombre de "Pyrex" (Pairex). se vierte en diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieran producir. exposiciones a elevadas temperaturas. además tiene la propiedad de permanecer inerte durante las reacciones químicas..CAPÍTULO 5 CRISTALERÍA DE LABORATORIO INTRODUCCIÓN Se denomina cristalería de laboratorio. 50 . este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecánicos. COMPONENTES DEL VIDRIO El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una temperatura de 1. SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO En la actualidad. generalmente transparente. los diversos objetos de vidrio que integran la cristalería de laboratorio. algunos objetos. caracterizado por su dureza. La cristalería fabricada con estos componentes. con la ventaja de que dado su bajo costo. El producto fundido. lo que le confiere una alta resistencia contra impactos. debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. al conjunto de objetos utilizados en la realización de diferentes procedimientos técnicos. también se fabrican de material plástico. pueden ser desechadas sin grandes afectaciones económicas para la institución. que independientemente de su forma y tamaño están constituidos solamente por vidrio. De esta manera se obtiene el cristal empleado para cubrir puertas o ventanas. cuya aleación le confiere una alta resistencia mecánica. así como para la fabricación de vasos. copas y otros objetos. térmica y química. 0000c. especialmente con teflón (tetrafluoruroetileno) un polímero de bajo costo. lo que lo valida como un sustituto eficaz del vidrio.. en ese estado líquido. como por ejemplo: las jeringuillas utilizadas. Etc. Quedando como un cuerpo sólido. Como se sabe. lo que no resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio.

nar.Expresan magnitudes volumétricas.Están calibradas para trabajar a 200c.Se fabrican de diferentes tamaños. DE MEDICION VOLUMETRICA Pipetas de : Shali. Frascos de fondo plano DE .CLASIFICACION La cristalería de laboratorio de clasifica de la siguiente manera: Cuadro 3: Clasificación de la cristalería de laboratorio. Pipeta Probetas Beaker (Vaso de precipitado) Matraces Copa cónica Buretas Jeringuillas TD (Para distribuir) 51 .La mayoría se fabriFrascos goteros TRABAJO can de diferentes Vaso de Koplin tamaños y capaciTubos de ensayo dades. Thoma o Westergreen (No utilizadas en el laboratorio de microbiología) _______________________________________________________ . .Fotorresistencia (materias primas) o soluciones y reactivos elaborados ________________________________________________________ . .Utilización para la Frascos erlenmeyer realización de diverFrascos Kitasatos sos procedimientos Frascos para reactivos técnicos.Alta resistencia química DIFERENTES TIPOS G E N E R A L Todos los frascos o reciopientes destinados a contener o almace.Pueden tener o no rotulada una escala de graduación .No revelan magnitudes volumétricas. Vidrio reloj Placas de Petry Embudos Condensadores Láminas de portaobjetos Láminas cubre objetos Láminas excavadas TC (Para contener) . CLASIFICACION SUB-CLASIFI CACIÓN DE ALMACE NAJE CARACTERIZACIÓN .Cierre hermético. productos químicos .

Aunque los erlenmeyer pueden emplearse para la preparación de diferentes reactivos. 300. Si lo colocamos sobre la mesa de trabajo y lo observamos de arriba hacia abajo podemos percatarnos que en el extremo superior presenta una abertura circular con rebordes.. como por ejemplo. hace que los vapores se condensen en el cuello. lo que propicia que no afecte significativamente el volumen de la preparación. 250. que se caracteriza por tener un diámetro 3 ó 5 veces mayor en su porción inferior con respecto a su porción superior. la preparación de medios de cultivo. Los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños.500 y 1 000 ml. seguida de una porción cilíndrica de algunos cm a manera de cuello. que corresponde a la boca. 52 . 9 : Erelenmeyer Los erlenmeyer son recipientes de forma cónica y fondo plano.CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS DE CRISTALERÍA CRISTALERÍA GENERAL DE TRABAJO Erlenmeyer Fig. Los más empleados en el laboratorio de microbiología son los de: 100. esta cristalería está diseñada específicamente para la preparación de compuestos que requieran ser sometidos a la acción del calor. debido a que su forma cónica. Al concluir este espacio se va ensanchando progresivamente de forma oblicua adquiriendo la forma cónica que lo caracteriza. Los de menor o mayor volumen de capacidad se utilizan con menor frecuencia.

para soportar las diferencias de presiones externas e internas provocadas por las técnicas de filtración al vacío para los que básicamente son empleados. Al igual que los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños.11 : Frasco para reactivos. son similares a los erlenmeyer con la diferencia de que en el cuello tiene insertado un pequeño tubo corto en dirección horizontal abierto en su porción distal siendo las paredes de vidrio más gruesas. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar para la protección de reactivos fotosensibles.10 : Frasco de kitasato Los frascos de Kitasatos. 53 . Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener de acuerdo a su tamaño entre 25 ml y 1 litro. Frascos para reactivos Fig. lo que dependerá del tipo de reactivo que contenga. Con ambas variantes se consigue el cierre hermético del frasco.Kitasatos Fig. La tapa del frasco puede ser de cristal esmerilado o plástica si el cierre es de rosca.

De acuerdo con su capacidad. pueden contener entre 25 y 100 ml. Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón de caucho. Los de vidrio.13 : Frascos goteros Existen en el mercado diferentes modelos. que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco. 54 . fabricándose de diferentes tamaños. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular. Frascos goteros Fig. similar a los empleados en los frascos de medicamentos. En el trabajo microbiológico se utilizan regularmente para la preparación del antígeno de cardiolipina. el contenido goteará si se inclina el frasco adecuadamente. debiendo ser termorresistentes por si se requiere someterlos a la acción del calor. utilizado en las pruebas serológicas VDRL. en tanto que otro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido.Frascos de fondo plano Fig.12 : Frasco de fondo plano Se utilizan para la preparación de determinadas disoluciones. tradicionalmente empleado son incoloros o ámbar.

Los utilizados comúnmente en análisis cualitativos y cuantitativos tiene el fondo ligeramente cóncavos. de manera que quedan separados. pero se diferencian en que están provistos en su extremo superior de aristas helicoidales por donde se enrosca una tapa de baquelita. Estos vasos están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas. en tanto que los tubos para cultivo son similares. Tubos de ensayo Fig. pero todos tienen. con capacidad variable. fabricados de diferentes tamaños. aunque la forma de sus extremos varía en función de su empleo.14: Vaso de Koplin Estos vasos se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares.15: Tubos de ensayo Son pequeños recipientes de vidrio o plástico.Vaso de Koplin Fig. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal. lo que posibilita la insertación de varias láminas portaobjetos. 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí. en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente. Todos son cilíndricos. 55 . resina sintética obtenida por polimerización del fenol y el formaldehído.

generalmente con estrías longitudinales para facilitar su sujeción cuando se van a desenroscar, mientras que los tubos de centrífuga se caracterizan por tener el fondo cónico, para acoplarse a los portatubos de la centrífuga, pudiendo tener impresa una escala de graduación en ml. Los tubos ordinarios y los empleados para cultivo, mayormente utilizados en los laboratorios de microbiología, son los de 12 x 75, 13 x 100, 15 x 125 y 16 x 150 mm, correspondiendo el primer valor al diámetro y el segundo a la longitud. Se utiliza esencialmente para contener, conservar y procesar muestras biológicas, cultivar microorganismos y realizar pruebas de identificación para el diagnóstico de laboratorio, de las especies investigadas. Vidrio reloj

Fig.16: Vidrio reloj

Es un tipo de cristalería circular y cóncava de aspecto transparentes, similar a las utilizadas para cubrir las esferas de algunos relojes despertadores. Se utilizan regularmente para efectuar pesadas de productos sólidos con excepción de aquellos que sean higroscópicos que absorben la humedad del aire o volátiles. Placas de "Petry"

Fig.17: Placas de "Petry"

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Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diámetro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm de altura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente de vidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro. Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa queda descansando sobre el borde de la caja. En el trabajo microbiológico se utiliza comúnmente para contener algún medio de cultivo sólido. Embudos

Fig.18 : Embudos

Los embudos presentan la porción superior cónica y la posterior en forma de un tubo cilíndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal, pudiendo tener una longitud, menor , igual o mayor que la porción cónica, cuya capacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, según el modelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar líquidos.

Láminas portaobjetos

Fig.19 : Lámina potaobjetos

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Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transparente y forma rectangular. Miden 7,5 cm de largo por 2,5 cm de ancho. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso de coloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Este tipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebas serológicas de aglutinación. Láminas excavadas

Fig.20 : Lámina portaobjetos excavada

Son similares a las láminas portaobjetos ordinarias, con la diferencia de que presentan una excavación cóncava de algo más de 1 cm de diámetro en centro de la lámina en forma de pozuelo. Se utilizan para la preparación de la "gota colgante", una técnica mediante la cual se determina microscópicamente si la bacteria en estudio es o no móvil.

Láminas cubre objetos

Fig. 21: Láminas cubreobjetos

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Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía de cuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuando son rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.

Cristalería de medición
Pipetas

Fig. 22: Pipetas

Son tubos de vidrio rectos, de longitud y grosor variable que se caracterizan por tener el extremo inferior ligeramente cónico. Se fabrican diferentes tipos, que han sido diseñados para diversos procederes de laboratorio, siendo utilizada básicamente para medir y/o transferir volúmenes exactos de líquidos. Las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, son las pipetas graduadas, principalmente las de 1, 2, 5, y 10 ml. Este tipo de pipeta tiene impreso en la parte superior un número que equivale a su capacidad volumétrica y a todo lo largo una escala graduada en ml, que indica numéricamente los espacios en que se divide el volumen total. Cada espacio a su vez se divide en 10 líneas equidistantes que corresponden a las subdivisiones volumétricas. Por ejemplo: En una pipeta de 5 ml de capacidad, la escala queda dividida en 5 espacios iguales, cada uno de los cuales equivale a 1 ml. Cada especio a su vez se subdivide en 10 líneas, equivalente cada una de ellas a 0,1 ml. Las pipetas serológicas, son similares a las graduadas, pero su capacidad es de 1 ml o menos, estando dividida en 0,1 y/o 0,01 ml. En el trabajo microbiológico se utiliza en ocasiones un tipo de pipeta no graduada, denominada pipeta de Pasteur, que puede ser fabricada en el propio 59

laboratorio con tubos de cristal fusible mediante su exposición a la llama del mechero de gas. Este tipo de pipeta suele emplearse cuando no se requiere precisar con exactitud el volumen a pipetear. Procedimientos para el manejo de las pipetas graduadas: 1. Sostenga la pipeta por su parte superior mediante los dedos pulgar y medio.

Fig. 23 : Forma correcta de sostener la pipeta.

2. Haga penetrar la pipeta en el líquido que va a ser aspirado. 3. Introduzca el otro extremo en la boca y aspire suavemente, observando simultáneamente la escala graduada, hasta que la columna de líquido sobrepase ligeramente la marca deseada. 4. Retire la pipeta de la boca y de inmediato tape el orificio con la yema dedo índice, ejerciendo la presión suficiente para evitar que el líquido descienda por gravedad. 5. Manteniendo la presión del dedo índice, proceda a retirar el exceso de líquido de la parte exterior de la pipeta, con un paño, gasa o servilleta limpia. 6. Introduzca la pipeta en el frasco o tubo donde se extrajo el líquido y haga que la punta contacte con la pared interna. Estando la pipeta en posición perpendicular ir aflojando la presión del dedo índice para propiciar que la columna de líquido descienda del por gravedad, hasta observar que la 60

Introduzca la punta de la pipeta en el frasco o tubo receptor. 61 . ocasionado por no estar el ojo del observador en el mismo plano horizontal con respecto al menisco.curvatura en la superficie del líquido (menisco) contacte justamente sobre la línea correspondiente que marca el volumen deseado. afectando la exactitud del volumen pipeteado. 8. en la parte superior de la pared interna y nunca sobre el fondo. Si la pipeta utilizada. 24: Ubicación correcta del ojo para efectuar la lectura del menisco 7. apoyando la punta. proceda nuevamente a ejercer presión con el dedo índice para evitar que el líquido continúe descendiendo. tiene una banda esmerilada o coloreada en el extremo superior proceda a soplar para que salga y completar el volumen previsto. 9. Al vaciarse el contenido de la pipeta. Fig. evitar incurrir en el error de paralaje. Si la pipeta carece de franja esmerilada o coloreada no se debe soplar ya que están diseñadas para desestimar ese residuo sin que se afecte el volumen deseado. Al realizar la lectura volumétrica. Proceda a aflojar la presión del dedo para distribuir el volumen deseado en cada tubo. En ese momento exacto. que ocasionaría errores en la lectura. se soplarán las que estén marcadas en la parte superior con la letra "D" (to de livery) no debiendo soplarse las marcadas con la letra "C" (to contain). pues al retirar la pipeta parte del líquido trasegado quedarán adherido al exterior de la pipeta. siendo arrastrado al retirarla. en el extremo de la punta quedará un pequeño volumen residual. En el caso de las pipetas serológicas.

En el borde del orificio. y al igual que las pipetas. Las más utilizadas en el trabajo microbiológico están comprendidas en el rango de 50 a 1. similar al de las cafeteras. Se utilizan específicamente para medir volúmenes. 25 : Probetas Las probetas son recipientes cilíndricos y alargados de vidrio. Al igual 62 . Algunas probetas están provistas de tapa de vidrio esmerilado o plástica. presentan un pico. 26 : Beaker Los Beaker son recipientes transparentes e incoloros que presentan una forma cilíndrica teniendo una longitud de casi el doble de su diámetro. La mayoría tienen rotulado en la parte superior un número que indica su capacidad volumétrica. una escala graduada a todo lo largo que divide y subdivide el volumen total. en correspondencia con su capacidad volumétrica.000 ml. la marca de 200C. Están provistas de una base de fondo plano que posibilita que puedan ser colocadas en posición vertical sobre una superficie nivelada.Probetas Fig. que es la temperatura de trabajo de este tipo de cristalería. . para facilitar verter el líquido que contiene sin que se produzcan derramamientos. que se haya en la parte superior. Beaker (Vasos de precipitados) Fig. de diámetro y tamaño variable.

lo que permite colocarlos en posición vertical. tienen rotulado. la temperatura de trabajo (200C) pudiendo tener o no una escala graduada en ml. 27 : Matraces Las matraces son frascos de vidrio incoloros y transparentes que tienen una porción superior en forma de un fino tubo cilíndrico y alargado. Materiales de porcelana Además de los materiales de vidrio o de teflón. en los laboratorios se utilizan otros. Cápsulas Fig. Se emplean para preparar disoluciones donde se requiere exactitud. el número que indica su capacidad volumétrica. Matraces Fig. la temperatura de trabajo (200C) y una línea alrededor del cuello que indica la marca de aforo. 28 : Cápsula de porcelana 63 . fabricados de porcelana.que las pipetas tienen un pico en el borde la boca que propicia que se pueda verter el líquido que contiene sin que se produzca derramamiento. Al igual que otras cristalerías de medición. siendo los más empleados las cápsulas y los morteros. Al igual que otros tipos de cristalería de medición. al igual que las probetas y las pipetas. Algunos están provistos de tapa de vidrio esmerilado. la inferior piriforme con el fondo plano. tienen grabado el número que indica su capacidad volumétrica.

. dejando actuar el desinfectante por un espacio de tiempo no menor de 4 horas. son de mayor tamaño y están provistos de paredes más gruesas. Al igual que las cápsulas presentan un doblez en forma de labio en el borde para verter su contenido. Morteros Fig. 64 . A diferencia de las cápsulas. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN La cristalería que vaya a ser utilizada en las investigaciones microbiológicas de laboratorio. con un doblez en forma de labio por un punto de su borde para facilitar verter su contenido. caracterizándose generalmente por ser de color blanco y tener las paredes delgadas lisas y muy pulidas. sin que se produzca derramamiento. Después se sumerge en una solución de ácido clorhídrico al 1%. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. generalmente. pudiendo tener el fondo plano o redondeado. Posteriormente se lava con detergente. fondo redondeado y tamaño variable. Si la cristalería es nueva: Debe pasarse previamente por agua caliente para eliminar la presencia de vestigios fábriles. Después de escurrida se deja secar al aire o si se desea secado con mayor rapidez se puede introducir en una incubadora. debe ser sometida previamente a un proceso de limpieza y desinfección antes de esterilizarla. El mortero se complementa con una pieza cilíndrica adicional. denominado mazo. aunque también se fabrican de vidrio. con el extremo inferior redondeado. Similar a un pequeño bate de pelota. 29 : Mortero Los morteros son recipientes de porcelana.Son pozuelos de borde esférico. Uso: Se utilizan regularmente como recipientes de disoluciones que van a ser sometidas a una medición de pH o para colocar medios de cultivo que se pretenden pesar. del mismo material. Uso: Para triturar compuestos sólidos con ayuda del mazo.

las placas serán empaquetadas con papel de estraza. para evitar que el técnico o la persona encargada de la limpieza de la cristalería se contamine con microorganismos patógenos. en parejas o en grupos de no más de 5 placas. procediendo a su secado en la forma explicada. o en su defecto. fregadas y secas: Tubos de ensayos: Se taponean con algodón y se envuelven con papel de estraza en grupos de 5 a 10 tubos. fabricado específicamente para ese uso. 30 : Taponeamiento de tubos con asa y algodón Placas de Petry: Después de ensambladas (tapa y caja) podrán ser colocadas dentro de un cilíndrico de metal inoxidable con tapa. o más tiempo si la mezcla ya ha sido utilizada y mermada su efectividad. por haber estado en contacto directo con microorganismos o contiene cultivo de ésta. La cristalería así tratada. Desinfectantes más empleados (ver Capítulo 6) PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA PARA SU ESTERILIZACIÓN Objetivo: Evitar que se vuelvan a contaminar con posterioridad a su esterilización y mantenerlas en esas condiciones hasta su utilización. Procedimiento: Después de desinfectadas. individualmente.Cuando la cristalería haya sido utilizada: Si mantiene material infeccioso. 65 . debe ser sometida previamente a un proceso de esterilización en autoclave a 1210C. la cristalería se enjuaga para eliminar los restos groseros del material que contenía y se sumerge durante 10 ó 15 minutos en mezcla sulfocrómica. Después de la esterilización. durante 30 minutos. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. Fig. se friega con detergente.

32 : Pipetas: a)Taponeamiento con algodón. Fig.Fig. pero al mismo tiempo impida el paso hacia la boca del material que esté pipeteando. b)Empaquetamiento con papel de estraza Los erlenmeyer. 66 . probetas y otras cristalerías similares: Se taponean con algodón y se retapan con papel de estraza. b)Cilíndro de metal inoxidable para colocar las placas Las pipetas: Se taponean de tal manera que no dificulte la succión. Posteriormente se enrollan en una franja de papel de estraza. el cual se ata fuertemente con un lazo al cuello o porción anterior de la cristalería. 31 : Placas de Petry: a)Empaquetadas con papel de estraza.

19. 33 : Erelenmeyer: a)Taponeamiento con gasa y algodón El resto de los materiales se empaquetan igualmente e incluso. ¿Cómo son las placas de "Petry"? 16. Mencione las cristalerías de medición volumétricas. ¿Qué Ud. 14. 67 . ¿Qué es el teflón y para qué se utiliza? 5. ¿Qué otros recipientes además de los de vidrios se fabrican de porcelana? 21. Describa las características de los tubos de ensayo. algunos. ¿Cuáles son las características de la cristalería de medición volumétrica? 9. CUESTIONARIO 1. como las jeringuillas con doble envoltura. Describa el vaso de Koplin. 23. ¿Cuáles son las características de la cristalería de almacenaje? 7. Precise semejanzas y diferencias entre una cápsula y un mortero. ¿Para qué se utilizan regularmente los vasos de precipitado o Beaker? 20. 22. entiende por cristalería de laboratorio? 2. 15. ¿Cómo se clasifica la cristalería general? 6. prepara la cristalería para que se mantenga estéril después de la esterilización. Explique las diferentes causas de error en que puede incurrirse durante el pipeteo. ¿Cuánto miden las láminas portaobjetos y las cubreobjetos? 17. ¿ Cómo es una bureta? 12.Fig. Explique en orden cronológico los pasos que deben efectuarse durante la realización del pipeteo. 4. Explique cómo se fabrica el vidrio. 18. 10. ¿Cómo funcionan los frascos goteros con tapa esmerilada? 13. 3. Explique cuáles son los procederes establecidos para la limpieza y desinfección de la cristalería. Describa cómo Ud. Nombre los diferentes tipos de cristalería de medición volumétrica? 8. ¿ Cuáles son las diferencias entre en erlenmeyer y un frasco de kitasato? 11. Nombre los componentes del vidrio "Pyrex".

En relación con los agentes quími68 . Bactericida: agentes destructor de bacterias. Términos empleados relacionados con la esterilización y la desinfección Sepsis: infección pútrida (putrefacto. lo cual a mediano plazo resulta letal para el microorganismo. Antisepsia: conjunto de procedimientos prácticos destinados a destruir o alejar los gérmenes patógenos. Destruyen las diversas estructuras o inhiben su funcionamiento.) Séptico: que produce la sepsis. no limitándose exclusivamente a la estructura vegetativa. las radiaciones y la filtración. compuestos orgánicos. La mayoría de los métodos y agentes empleados. Asepsia: método encaminado a prevenir la infección mediante la destrucción o evitación de los agentes infectivos. para destruir. etc.. Bacteriostático: agente que inhibe las funciones de las bacterias. corrompido. medio ambiente. Diferentes agentes empleados en la esterilización: Para la esterilización se emplean diferentes agentes físicos y químicos. sino incluyendo además a sus esporas. Específicamente mediante el empleo de métodos físicos.CAPITULO 6 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN INTRODUCCIÓN La esterilización y desinfección son los métodos esenciales empleados en los laboratorios de microbiología. ocasionan específicamente la desnaturalización de las proteínas celulares. inhibir o separar a los microorganismos presentes en los diferentes objetos. Aséptico: libre de toda materia séptica o infecciosa. ESTERILIZACIÓN Concepto: Esterilización significa: destrucción o eliminación de todas las formas de vida. los agentes físicos más utilizados son: el calor. etc. en especial por medio de agentes químicos. donde se requiere su eliminación.

El calor húmedo se emplea en los laboratorios de tres maneras diferentes. Calor húmedo a presión El calor húmedo a presión se obtiene mediante el empleo del autoclave. de doble cámara. solamente algunos. como por ejemplo. etc. que ocasionan la muerte del microorganismo. de manera similar que cuando se cocina un huevo duro. como son: la aplicación del nivel de temperatura requerido y el tiempo de exposición al calor. Bajo estas condiciones. El formaldehído y el óxido de etileno ejercen un efecto letal sobre las esporas. lo que trae como resultado la emigración incontrolada de los constituyentes intracelulares.cos. en dependencia de la magnitud del material a esterilizar. en consecuencia los puentes de hidrógeno de la membrana citoplasmática. etc. y se cumpla con los parámetros de eficacio. Calor húmedo El calor húmedo es la variante más empleada. horizontales. inactivando su función osmótica. calor seco y la incineración. potasio. calor húmedo a 1000 C. Debido a que las bacterias resultan más vulnerables en la medida en que estén más húmedas. 69 . Calor húmedo a presión. el calor generado provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. El calor se utiliza de tres maneras diferentes: calor húmedo. con lo cual la temperatura aumenta. como aminoácidos. En el mercado se comercializan diferentes modelos de autoclave: verticales. El calor El calor resulta un método muy eficaz para lograr una adecuada esterilización. siempre y cuando el objeto o producto no sea termolabil. son destruidos. diseñado para resistir la presión generada por la acumulación de vapor de agua. pero todos tienen en común una estructura similar.. un equipo metálico provisto de un cierre hermético. alcanzando valores de 121 C requeridos para la eliminación de las esporas para lograr una adecuada esterilización.

3.Termómetro. Algunos modelos disponen de una segunda cámara denominada externa.Válvula de seguridad.Entrada de aire. 21. 19. 17. 9. En este espacio se acumula el vapor de agua procedente de la caldera que posteriormente pasa a la cámara interna.Puerta de seguridad. 16. Vista frontal y lateral: 1. Prototipo standard del autoclave Cámara La cámara del autoclave consiste en un cuerpo cilíndrico de aproximadamente un metro de largo x 50 a 60 cm de diámetro. 5. 10. 6.Llave que comunica la cámara externa con la interna. siendo el lugar destinado para la colocación de los objetos y materiales que sé desean esterilizar. que debido a su mayor diámetro rodea a la cámara interna en toda su longitud.Llave de paso para suministrar agua al tanque. 4. 12.Cámara interna.Lave de escape de vapor. 2.Cámara externa. Puerta La puerta está articulada con bisagras en la parte anterior del equipo.Manómetro que indica la presión de la cámara interna. Llave que controla el nivel del agua. 15. 8. quedando las paredes de ambas separadas entre sí por varios cm. 18.Quemador de gas. Respiradero.Tanque de agua. 11. 7.Llave de paso para sacar el agua del tanque.Cierre hermético de la puerta.Escape de agua de condensación.Válvula termostática. a unos pocos cm de la cámara interna estando provista de un número variable de metálicas en posición radial que al ser cerrada mediante el de una manivela 70 . 20. 13 y l4. 34: Autoclave.Manómetro que indica la presión de la cámara externa.Fig.Llave de paso de gas.

puede ser eléctrica o de gas. penetran en un reborde periférico situado en la parte frontal del autoclave propiciando un cierre hermético. una para extraer el aire que quedó en el interior del equipo al cerrarse y la otra para propulsar la salida del vapor cuando la presión sobrepasa los límites admisibles. 71 . material quirúrgico. d) Proceda a abrir la válvula de salida del aire. Instrumentos de medición Estos equipos disponen de un termómetro y un manómetro que permiten ir monitoreando la temperatura y la presión existente en el interior del autoclave. En su interior se deposita el agua (destilada) hasta alcanzar el nivel adecuado. etc. la caldera puede estar ubicada junto o separada de la cámara. Uso del autoclave El autoclave se utiliza regularmente para la esterilización de ropas. Válvulas Los autoclaves poseen dos válvulas. durante su funcionamiento.ubicada centralmente. Esta última se denomina "válvula de seguridad". Caldera Según el modelo de que se trate. e) Encienda la fuente de calor. y límpiela si estuviera sucia u obstruida. medios de cultivo. b) Revise la válvula de seguridad. Manipulación del autoclave a) Revise el nivel del agua de la caldera y en caso de ser insuficiente. c) Introduzca en la cámara los objetos y materiales que se van a esterilizar y cierre herméticamente la puerta. proceda a echar la cantidad requerida. Fuente de calor La fuente de calor empleada para calentar el agua contenida en la caldera y se produzca vapor de agua.

recomendándose en ese caso aumentar un poco la presión para que el equipo alcance la temperatura requerida. g) Espere a que el termómetro marque 1210 C y el manómetro 15 lb/pgda3 de presión. Que se deterioran a temperaturas superiores a 1000C. siempre que la acción calórica se prolongue por 5 a 10 minutos. de que la temperatura no se corresponde con la presión. 2. Calor húmedo a 1000 C El calor húmedo a 1000 C. abra la puerta el autoclave con sumo cuidado. ya 72 . i) Cuando el termómetro y el manómetro marquen "O" proceda a abrir la válvula de salida de aire y espere a que salga el vapor residual. se obtiene de dos maneras diferentes: 1. cierre la válvula. Cuando el vapor salga mediante un chorro continúo y sin intermitencia. no debiendo por lo tanto ser esterilizados en auto clave.f) Manténgase atento a la válvula de salida de aire. que generalmente es de 15 a 20 minutos. ya que esta acción puede provocar que los medios de cultivo que aún tengan más de 100 C al serle retirada abruptamente la presión. para comenzar a contar el tiempo de esterilización. si se diera el caso. h) Transcurrido el tiempo de esterilización. aunque puede extenderse a 30 minutos si el objeto o producto a esterilizar es demasiado grande. pueden ocasionar quemaduras al manipulador. urea. etc. asciendan. desconecte la fuente de calor (hay modelos donde la fuente se apaga automáticamente) y espere hasta que el manómetro marque "O". Por ebullición: El líquido en cuestión es sometido a la acción del calor hasta alcanzar temperaturas de 100 C. es indicativo de que no se sacó todo el aire de la cámara. gelatina. No trate de reducir la presión abriendo la válvula de seguridad o la de salida de aire. El principio de este método consiste en someter el compuesto o medio de cultivo a esterilizar a una corriente de vapor a 1000C para lo cual se emplea el esterilizador de Arnold. al salir por la puerta. pues será indicativo de que el aire acumulado dentro del autoclave ha salido y que todo el espacio de la cámara está ocupado exclusivamente por el vapor de agua. con la diferencia de que no es hermético. Otras esporas resisten la temperatura de ebullición por más de una hora. que consiste en un equipo similar al autoclave. expulsen los tapones de algodón y se derramen dentro del equipo. mediante este método se logra la destrucción de todas las formas vegetativas y de algunas esporas. A continuación. por lo que no puede garantizarse una esterilización eficaz con este método. Vapor fluente: El vapor fluente se utiliza para la esterilización de compuestos y medios de cultivo elaborados con determinados azúcares. ya que los restos de vapor que queden aún dentro de la cámara.

Agua destilada.Recuperador. La exposición al vapor fluente del material a esterilizar será de 20 a 30 minutos. Como ya se explicó en acápite de ebullición. para que las esporas que resistieron la primera exposición germinen en células vegetativas muy vulnerables a la temperatura de 1000C. 4.que el vapor producido por el calentamiento del agua.Tapa. siempre que se deje la válvula abierta para que el vapor no se acumule.Resistencia eléctrica. con lo cual la temperatura se mantiene estable a 1000C. por lo que se requiere aplicar la esterilización fraccionada. que consiste en exponer el material a esterilizar al vapor fluente durante tres días consecutivos por espacio de 30 minutos. 73 . 3. 35: Esterilizador de Arnold: 1. va saliendo por un condensador que lo traslada en forma de agua. 7. Exposición.Soporte.Termómetro. 5. El autoclave puede sustituir al equipo de Arnold. nuevamente a la caldera. 6. la temperatura de 1000C resulta insuficiente para la destrucción de algunas esporas. conocida como "tyndalización".Tuberia de escape de vapor. no aumenta la presión y por consiguiente la temperatura se mantiene en 1000C. Fig. 2. Al no acumularse el vapor. De quedar alguna espora germinará y la célula vegetativa será destruida en la 3era.

por medio de un ventilador ubicado en una de las paredes laterales. es utilizado con regularidad en los laboratorios de microbiología. 74 . Bombillo. Su acción provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. Sin que pierdan su sabor natural. 36: Horno: 1. 6.Calor húmedo a menos de 1000C La aplicación del calor húmedo a menos de 1000 C. está situada la fuente de calor. ideado en el siglo XIX por Luis Pasteur. 8. Consiste básicamente en calentar el producto de 62 a 650 C durante 30 minutos o a 710 C durante 15 segundos. que está basado en el efecto de la temperatura sobre los microorganismos y sus enzimas. un mueble metálico de forma rectangular o cuadrada. A diferentes niveles de altura están situadas las parrilladas en posición horizontal.Puerta. En su parte inferior o base. donde serán colocados los materiales a esterilizar.Termómetro. 5. 40 % de aproximadamente 80 cm cúbicos. es un método conocido con el nombre de pasteurización. Fig. Con este método se eliminan los patógenos que con alguna regularidad puedan estar presentes en productos como la leche y bebidas alcohólicas. la cual queda cubierta por una tapa metálica perforada. así como la oxidación de ciertos componentes de la célula microbiana. por cuyos orificios pasa el calor. 7. 2. una resistencia eléctrica que ocupa todo el área del fondo del horno. 3. El calor seco se obtiene por medio del horno. 4.Ventilador. seguido de un enfriamiento inmediato. Calor seco El calor seco. aunque se comercializan otros de menor o superior tamaño.Fuente de calor.Salida de aire. con el objetivo de determinados objetos y materiales. que se disemina por todo el interior del horno.Tapa.Botón del termostato. debido a las bajas temperaturas empleadas y el corto tiempo de exposición. etc.

grasas sólidas o productos en polvo. 5. 2. 6. tenga acceso por igual en toda la superficie del material a esterilizar. La esterilización en horno requiere de una temperatura superior a la utilizada con el autoclave. así como un tiempo de exposición más extenso. objetos de metal. Coloque en las parrillas los materiales a esterilizar. Empleados 75 . el botón para regular el termostato. Casi todos los hornos tienen dos puertas. una interna de vidrio que se halla dentro de un marco metálico y otra externa metálica forrada de amianto. y para que el aire caliente circulante. Cierre firmemente la puerta. Uso del horno El horno se utiliza para esterilizar cristalería de laboratorio. debidamente preparados cuidando de que queden separados entre sí y de las paredes del horno. con la cual se cierra firmemente el equipo. exista la suficiente para que el material quede estéril. que debido al bajo porciento de agua que contienen no son penetrados suficientemente por la humedad generada por el vapor de agua de los autoclaves. algodón etc. aceites. Manipulación del horno 1. Encienda la fuente de calor (automáticamente el ventilador comenzará a funcionar y el bombillo piloto se encenderá) 4.En la parte superior externa se encuentra un orificio ocupado por un regulador. 3. En la parte anterior. accionando el interruptor y espere hasta que el horno se enfríe para extraer el material. Gire el botón del termostato hasta que indique la temperatura deseada y espere a que el termómetro registre de 160 ó 180 C (en ese momento se apagará automáticamente el bombillo piloto). que por ser metálicas adquieren un mayor grado de temperatura y pueden quemar el material comburente empleado. que en este equipo debe ser de 90 minutos a 2 horas. ya que los paños. Comience a contar el tiempo de esterilización. Transcurrido el tiempo de esterilización. garantizando de esta manera que en el área del horno donde se alcance menos temperatura. apague la fuente de calor. debajo o al lado de la puerta presentan un panel donde se encuentra el interruptor. el termómetro y un bombillo piloto. ya que el calor seco no se distribuye uniformemente por todo el equipo como lo hace el vapor de agua. encargado de expulsar el exceso de aire del interior del horno. Advertencia Cuando el horno haya alcanzado una elevada temperatura no debe abrirse para introducir o sacar algún material.

76 . que por su peligrosidad deben ser destruidos totalmente. a los instrumentos de siembra. para llevar al estado de cenizas materiales contaminados. El incinerador se emplea básicamente.pueden inflamarse por la penetración abrupta de oxigeno y ocasionar quemaduras al manipulador. estando provisto por su parte superior de un pequeño saliente cilíndrico por donde se enrosca un pequeño tubo metálico de unos pocos mm de diámetro a través del cual se inserta una mecha cuyo extremo posterior queda en contacto con el alcohol contenido en el recipiente. Una pequeña capucha cilíndrica de metal con el extremo superior redondeado. Incineración La incineración se logra. 37 : Mechero de alcohol: 1. para este propósito se utilizan el incinerador y el mechero. 2. en tanto que los mecheros son utilizados como fuente de calor para diversos propósitos y comúnmente en el trabajo diario para esterilizar.Alcohol. Los mecheros de alcohol. se utiliza para tapar el mechero y que no se evapore el alcohol. en un pequeño recipiente de vidrio de forma redondeada. exponiendo directamente a la acción de la llama. con el fondo plano. mediante la incineración. Mecheros Los mecheros son instrumentos de laboratorio diseñados para obtener una llama calorífica a partir de la combustión del alcohol o del gas.Tapa. consisten. Fig. a los microorganismos contenidos en las muestras y otros materiales contaminados que se determine carbonizar.

lo que permite mantener el tubo quemador en posición vertical. pero todos están estructurados básicamente por tres partes separables: La base. muy próximo al extremo donde se enrosca a la base. en dependencia del modelo de que se trate. 77 . La base: Es una pieza metálica de forma circular y fondo plano. en tanto que el mechero de "Fisher" es mucho más grueso con una longitud también mayor y está provisto en su extremo superior de un quemador que propicia una llama grande e intensa. Existen diferentes modelos.Mecheros de gas Son los mas empleados. Regulador de aire: El regulador de aire está compuesto por un collarín metálico de forma anular. semejante a una alianza. Tubo quemador: El tubo quemador puede tener un diámetro variable. que se inserta calibradamente en el extremo inferior el tubo quemador. 2. el tubo presenta un orificio de un diámetro similar al del collarín que regula la entrada de aire. 3. 38 : Mechero de gas 1. una fina manguera que se inserta por su otro extremo a una llave de gas. El mechero de "Bunsen" convencional. Está provisto de un orificio circular de un diámetro similar al del tubo quemador. quedando en contacto con la base. donde se inserta ajustadamente. Fig. En ambos tipos de mecheros. el tubo quemador y el regulador de aire. tiene aproximadamente 6 ó 7 mm de diámetro x 6 ó 7 cm de largo. Tiene un diámetro de 4 a 6 cm y presenta en la parte superior un pequeño tubito en posición horizontal de unos 6 mm de diámetro denominado tobera. con una presilla de seguridad.

Revise que las diferentes partes del mechero. Aproxima la llama de un fósforo o de una fosforera al orificio del tubo quemador por donde sale el gas para encender el mechero. el gas que atraviesa la manguera y la tobera se dirige al centro de la base. Abra ligeramente la llave de gas. luminosa y poco calorífica. Fig. para lo cual se hará girar al collarín hasta hacer coincidir su orificio con el del tubo quemador. 4. 5. Cuando esta operación se realiza. estén debidamente acopladas y ajustadas. donde hay un dispositivo provisto de un fino orificio. 39: a) Mechero de Bunsen.Fig. calibrado a décimas de mm que regula el paso del gas hacia el tubo quemador. Regule la salida del gas en dependencia de la intensidad de la llama. no luminosa y de gran poder calorífico. Si empobrecemos la llama cerrando la entrada de aire. Así será la llama. Una mezcla rica en aire produce una llama azulosa. 3. 40: Diferentes zonas de la llama del mechero 78 . 2. en mayor o en menor grado se producirá la entrada de aire en el tubo quemador lo que propiciará la mezcla gas . b) Mechero de Fisher Manipulación del mechero 1.aire (combustible y comburente). obtendremos una llama de color amarillo rojizo. Al realizar esta operación. Ajuste la entrada de aire hasta obtener la llama deseada. En la medida en que se enriquezca el gas con el aire.

El empleo del mechero entraña un peligro potencial de quemaduras en la piel o en la ropa. fenómeno mediante el cual.Uso del mechero El mechero tiene una función utilitaria muy diversa: se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de nicrón o platino. La introducción total del instrumento en la llama tiende a aumentar la intensidad de la formación de aerosoles. para introducir previamente el asa. Advertencia . durante su uso. por lo que se debe tener sumo cuidado con su manejo. es disponer de un recipiente con arena humedecida en fenol. líquidos inflamables (alcoholes para coloraciones) y otros materiales similares. Por las mismas razones debe mantenerse el pelo recogido y concentrarse totalmente en la actividad que se esté realizando. . que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. Por su parte externa con el objetivo de eliminar los microorganismos contaminantes. mediante su exposición directa a la llama. Para flamear la boca de los tubos de ensayo y otras cristalerías estériles. distribución de medios de cultivo en placas y otros procederes.Radiaciones no ionizantes.Los instrumentos de siembra (asas o agujas de platino o nicrón) que contengan restos de muestra o de cultivos. con los restos de inoculo. antes de flamearla a la llama del mechero. resiembras. como paso previo a la realización de siembras. papeles (utilizados para la esterilización de la cristalería) así como. . deben ser introducidos gradualmente en la llama del mechero de la siguiente manera: de inicio se expondrá el extremo del instrumento a la zona azul de la llama y tan pronto se ponga al rojo. Se recomienda retirar de su alrededor. potencialmente peligrosos para el manipulador. Lo idóneo cuando se trabaja con muestras o cultivos. El mechero también es utilizado para fijar frotis en láminas portaobjetos y calentar medios de cultivo durante su preparación. Radiaciones ionizantes Deben su acción a la capacidad de producir partículas que al interaccionarse ceden la energía suficiente para producir ionización. LAS RADIACIONES Las radiaciones empleadas en microbiología como método de esterilización son esencialmente de dos tipos: . 79 .Radiaciones ionizantes. se introduce gradualmente el resto del alambre hasta que también se ponga al rojo vivo.

oxidando las proteínas y los ácidos nucleicos. mutación genética o muerte. el ADN y las proteínas celulares. por su elevada capacidad de penetración. son muy efectivas contra las esporas. jeringuillas plásticas y alimentos. por lo que si su empleo es reiterado deben emplearse las medidas de protección radiológicas establecidas. 80 . Aplicación: El poco poder de penetración de estos rayos lo hacen inefectivos para esterilizar compuestos o medios de cultivo. Las radiaciones de luz ultravioleta además de ser germicidas. Su efecto esterilizante depende de que la energía propagada. las no ionizantes tienen poca capacidad de penetración. pues ocasiona daños en la vista e incluso pueden producir quemaduras cuando la exposición es prolongada. Así como para las paredes. catéteres. por lo que el interruptor debe estar ubicado fuera del local. sin embargo su aplicación resulta efectiva para la esterilización del ambiente de quirófanos. son las producidas por lámparas de luz ultravioleta cuyo expectro está comprendido en rango de longitud de onda de 2600 a 2700 . lo que acarrearía numerosos trastornos. piso y techo del inmueble o la parte externa del mobiliario. rayos x y rayos catódicos. procedente de sus radiaciones electromagnéticas (luminosas) sean absorbidas por la célula microbiana. átomo o ion estrictamente neutro.No se debe entrar ni permanecer en ningún local que tenga encendida la lámpara de luz ultravioleta. no solo por sus propiedades ionizantes. se ven privados de uno o mas electrones mediante la acción de un campo eléctrico. sino además. Las radiaciones no ionizantes más empleadas en los laboratorios de microbiología y en determinadas áreas del ámbito hospitalario. etc. además de que son agentes catalizadores de la oxidación de las grasas. En el trabajo diario la lámpara se debe encender 2 ó 3 horas antes de comenzar a trabajar en el local. cuartos de siembra. ejercen una acción letal sobre las diversas estructuras. Aplicación: Se utilizan regularmente para la esterilización de inyectables.una molécula. siempre y cuando se cumpla la indicación referida al tiempo de exposición y se tenga en cuenta la distancia entre la ubicación de la lámpara y el objeto o espacio a esterilizar. Advertencias . equipos médicos. . para dar lugar a la inactivación de las enzimas.Debe chequearse periódicamente la lámpara para determinar su estado de agotamiento. Los rayos gamma. que en caso de ser significativo reduciría su capacidad germicida. Advertencia: La exposición a las radiaciones ionizantes son nocivas para las células del cuerpo humano. Radiaciones no ionizantes A diferencia de las radiaciones ionizantes.

81 . retienen a la mayoría de los microorganismos. por lo que de hecho. y provistos de porosidades microscópicas de un diámetro menor que la talla promedio de los microorganismos. En la actualidad se están empleando discos de membrana de celulosa para filtros. así como filtros HEPA que se utilizan para retener las partículas presentes en el aire durante la aplicación del flujo laminar. algunos como los de amianto se comercializan en forma de discos de algunos cm de diámetro por varios mm de grosor. Preparación de los filtros Fig. tipo millipore. etc. los cuales tienen en común ser muy compactos. La eficacia de este método depende del tipo de filtro empleado. b) Bujia de Charberland. Empleo: La filtración se utiliza para esterilizar compuestos termolábiles como: el plasma. ya que algunos de los tradicionalmente utilizados no pueden retener el paso de los virus. para los que no debe emplearse el calor como método de esterilización por ser termolábiles. medios azucarados.. con el propósito de que los microorganismos que contiene sean retenidos y el líquido filtrado quede estéril.FILTRACIÓN La filtración es un método mediante el cual. que se fabrican con diámetros tan pequeños que imposibilitan el paso de los virus. no es una verdadera esterilización. Características de los filtros Los filtros se fabrican con diversos materiales: amianto. se hace pasar un líquido contaminado a través de un filtro. 41: Filtros: a) Filtro Seitz. vidrio poroso o porcelana. aunque en la práctica. urea. vitaminas.

2. El filtro y el frasco de kitasato. No se debe esterilizar en horno. originando una pre82 . una vez ensamblados se empaquetan con papel de estraza y son esterilizados en autoclave a 1210C durante 20 minutos. Procedimiento 1. Destapar el filtro "Seitz" y verter en su interior el líquido que se desea esterilizar. el procedimiento para su montaje consiste. de unos 6 cm de diámetro aproximadamente 12 cm de largo. en colocarlo en posición horizontal en el interior de un soporte metálico de forma cilindra. ya que el calor seco puede dañar el tapón de caucho. procediendo a taparlo con la tapa de rosca. fino y delgado que se encuentra insertado en el centro de la base presentando una escotadura oblicua en su extremo distal que le proporciona una terminación puntiforme que se utiliza para insertarlo en el orificio de caucho que se encuentra tapando a un frasco de kitasato. denominado filtro "Seitz" que presenta en la parte superior una tapa de rosca metálica y en la inferior un tubo recto. se le retira la envoltura de papel y se inserta el extremo de una manguera al tubo del frasco de kitasato y el otro extremo se acopla a una de vacío. Fig.Cuando se emplean filtros en forma de disco. 42 : Filtro Seitz ensamblado en el kitasato Preparación previa Cuando vaya a ser utilizado. Conectar la bomba de vacío: La comprensión centrífuga axial (de su eje) transformará la energía cinética en energía de presión.

pero los de vidrio poroso o porcelana se pueden limpiar con facilidad. d) Accionar la bomba de vacio para que se produzca la succión y el líquido pase estéril al kitasato Advertencia: Los discos de amianto se utilizan una sola vez. el cual pasará a través del filtro.sión negativa en el interior del frasco de kitasato al serle extraído todo el aire acumulado. quedando retenidos los microorganismos en su superficie acumulándose estéril en el kitasato. DESINFECCIÓN La desinfección es un método utilizado en los laboratorios de microbiología para provocar la muerte de los microorganismos. Fig. Mediante el empleo de productos químicos denominados desinfectantes. la efectividad de los desinfectantes depende de su accesibilidad sobre el objeto o material a des83 . c) Cerrar el filtro. lo que provocará la succión del líquido. que determinadas concentraciones pueden ser letales. b) Verter el líquido a filtrar. lo que permite su reutilización. 43: Proceso de filtración: a) Ensamblar el kitasato a la bomba de vacio. debido a los efectos tóxicos que producen sobre las estructuras y los procesos metabólicos de la célula microbiana.

pueden ser empleados como productos tópicos. sean relativamente inocuos para las células del paciente. gargarismos o colirios. zinc. determinado porque siga siendo tóxico para los microorganismos pero que al mismo tiempo.) Detergentes catiónicos (compuesto de amonio o cloruro de benzalconio) Bicloruro mercúrico al 1: 1000 Otros. interfiriendo las reacciones enzimáticas o afectando el funcionamiento de ADN. Algunos desinfectantes como por ejemplo. puede ocasionar lesiones tisulares o dermatitis y su aspiración.. siempre y cuando cumplan con el principio de toxicidad . lo segundo. cobre. Desnaturalizando las proteínas. materia orgánica o ambientes.selectiva. material o ambiente que se desea desinfectar.. Selección de los desinfectantes El hecho de que todos los desinfectantes tengan la capacidad de matar a los microorganismos. cerciorarse de que su empleo no produzca deterioro del objeto a desinfectar. intoxicación respiratorias o toxemias. 84 . provocando la ruptura de la membrana citoplasmática o la pared celular. seleccionar el desinfectante que resulte mas eficaz para ese objetivo. removiendo los grupos sulfhídricos libres. son los siguientes: Fenol del 2 al 5 % Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico del 40-80 % Formaldehído al 4 % Gluraldehido al 2 % Peróxido de hidrógeno al 6 % Sales de iones pesados (mercurio.infectar y que las condiciones ambientales sean favorables para la desinfección así como que la exposición se prolongue durante el tiempo predeterminado. el alcohol y otros compuestos químicos. es la caracterización del objeto. etc. estando restringido su empleo para la desinfección de objetos. La mayoría de los desinfectantes son muy nocivos para los tejidos. teniendo en cuenta su poca o suficiente capacidad de penetración en el tratamiento de las sustancias orgánicas y tercero. pero solo algunos son capaces de destruir las esporas. Los desinfectantes actúan sobre la estructura vegetativa de los microorganismos de diferentes maneras. debiendo manipularse con sumo cuidado ya que el contacto accidental con algunos de ellos. Los desinfectantes mas empleados en las instituciones de salud. Lo primero que hay que hacerse. no significa que pueda emplearse cualquiera sin una previa selección.

¿Qué es la esterilización? ¿Cuáles son los diferentes efectos que se producen sobre los microorganismos sometidos a procesos de esterilización? Mencione los agentes físicos empleados en la esterilización. 3. puesto de trabajo y en menor grado las paredes y el suelo. determina la temperatura y la presión del equipo? 85 . mobiliarios y otros artículos. Desinfección por sumersión. gasa o paño. CUESTIONARIO 1. el desinfectante a la superficie del objeto de que se trate: mesa. Las sustancias antisépticas más utilizadas en el laboratorio para uso externo son las siguientes: Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico al 70 % Formoaldehído al 1 % Hexoclorofeno al 2 % Yodopuvidona al 4 % Hipoclorítico de sodio o calcio al 1 %. 7. 6. Cuáles son las diferentes formas en que se emplea el calor como agente esterilizante? ¿Cuál es el agente esterilizante que se pone de manifiesto en el calor húmedo a presión? ¿Cómo se denomina el equipo empleado en los laboratorios para producir calor húmedo a presión? Durante la esterilización en autoclave ¿cómo Ud. Desinfección por gasificación: Algunos desinfectantes como el formaldehído. para la desinfección de ambientes especiales. 4.: Consiste en sumergir los objetos en un recipiente apropiado hasta cubrirlos con la solución desinfectante. Advertencia: Debido a que muchos desinfectantes tienen poca actividad sobre las sustancias orgánicas. 2. resulta pertinente que sean removidos previamente del el objeto que se vaya a desinfectar con agua y detergente. 3. ropas. 5.La aplicación de estos productos químicos se realiza de manera diferente. de acuerdo con lo que se quiera desinfectar: 1. 2. se pueden emplear en su estado gaseoso. Desinfección por aplicación directa: Aplicar con ayuda de un algodón.

¿Cuáles son las precauciones a tener en cuenta al concluir la esterilización en autoclave. 8. ¿Que tipo de materiales se deben esterilizar con filtros? 24. Mencione los diferentes métodos de desinfección. Nombre los desinfectantes empleados con mayor frecuencia y sus respectivas concentraciones. regula la entrada de aire al mechero? 18. 86 . 22. 15. 11. ¿En qué lugares se aplica la esterilización con luz ultravioleta. ¿Cómo se denomina el equipo a utilizar en la esterilización con calor seco? 12. ¿Por qué la temperatura del horno y el tiempo de esterilización deben ser mayores que cuando se emplea el autoclave? 13. Mencione las diferentes partes del mechero de gas. ¿Cómo Ud. ¿Cuál es la diferencia entre el mechero de "Bunsen" y el de "Fisher?" 17. Explique cómo usted realiza una esterilización con filtro 25. Explique paso a paso el funcionamiento del horno. Para qué se utiliza regularmente el mechero de gas. 28. 19. ¿Cuál es la diferencia entre esterilización y la desinfección? 26. 16. ¿Qué cuidados debe tenerse en cuenta con el empleo de la luz ultravioleta? 23. ¿Cuál es la fuente de calor del horno? 14. ¿De qué depende el efecto esterilizante de las radiaciones no ionizantes? 21. Explique paso a paso el funcionamiento del autoclave 10. ¿Cómo se denomina la lámpara utilizada en los laboratorios para esterilizar? 20.¿Por qué causa el agua empleada para la esterilización en autoclave debe ser destilada? 9. ¿Cuáles son los efectos nocivos que provocan los desinfectantes sobre los microorganismos? 27.

Entre los mas utilizados en el laboratorio de microbiología se encuentran: 1. INCUBADORA El diseño industrial de las incubadoras es similar al del horno. Sobre la base de esos requerimientos se clasifican de las siguientes maneras: 87 . el cuál está rodeado de una escala metrada y un bombillo piloto que indica mediante su apagado o encendido de forma automática. pero que son empleados para otros menesteres. dispone de un panel donde se encuentra el interruptor. El baño de María. empleados en la esterilización mediante el calor. la incubadora está provista de un número variable de parrillas metálicas intercambiables.CAPÍTULO 7 EQUIPOS CALORIFICOS INTRODUCCION Son equipos diseñados para producir y distribuir calor. La diferencia sustancial con respecto al horno radica en que el nivel máximo de temperatura no excede de los 60 a 700 C. el botón para regular la temperatura. En su interior. siendo ajustada generalmente para que produzca de 35 a 370 C. calentadores y doble puerta. en lo referente a su forma. estructura y tamaño. el lado o debajo de la puerta externa. lo cuál puede comprobarse mediante la observación de un termómetro acoplado al equipo con una escala de 0 -700 C. con excepción de algunos modelos ya en desuso construidos de madera. donde se colocan los materiales a incubar. Las autoclaves. pero en este capítulo nos referiremos específicamente a otros equipos que también producen y distribuyen calor. La incubadora o estufa 2. Requerimiento de temperaturas Cada especie de microorganismo se desarrolla óptimamente en un rango. temperatura específica (termofília). Al igual que el horno. se incluyen dentro de este concepto. la interna de cristal y la externa metálica. hornos y otros instrumentos similares. Se trata de un mueble rectangular o cuadrado de unos 80 cm3 . provisto de múltiples paneles. el funcionamiento del termostato.

condiciones adecuadas de aereación. Pueden adaptarse a vivir en presencia o ausencia de oxígeno. la incubación debe proporcionar además. aunque menos óptimamente. En ese sentido se clasifican en: aerobios. por debajo o por encima de ese rango. Además de una temperatura óptima que favorezca el aceleramiento de su crecimiento. anaerobios y facultativos. son mesófilos. a que la temperatura corporal resulta compatible con su temperatura optima de desarrollo. así como otros que forman parte de la microbiota residente o transitoria. microaerofílicos. acorde a las necesidades de oxígeno de cada microorganismo. CLASIFICACIÓN Aerobios estrictos Microaerofílicos Anaerobios Facultativo AEREACCIÓN Requieren oxígeno a una tensión similar a la del aire ordinario. 88 . disponer de la temperatura que se especifica en cada clasificación. que deban emplearse diferentes métodos de incubación que propicien las necesidades específicas del microorganismo en estudio. CLASIFICACIÓN PSICRÓFILOS MESOFILOS TERMOFILOS RANGO DE TEMPERATURA ÓPTIMO PARA EL CRECIMIENTO DE 15 A 20 C DE 30 A 37 C DE 50 A 60 C La mayoría de los microorganismos patógenos al hombre. mientras que los facultativos son capaces de desarrollarse. Clasificación de los microorganismos de acuerdo con sus necesidades de oxígeno De ahí.Cuadro 4: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su termofilia. Cuadro 5: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxígeno. por lo que logran establecerse sin grandes dificultades en diferentes áreas anatómicas del organismo. debido entre otros factores. Requieren de un ambiente privado totalmente de oxígeno. Los primeros requieren obligatoriamente. Requieren de una tensión de oxígeno inferior a la del aire. Cada uno de estos grupos se subdivide a su vez en obligados y facultativos.

se le debe suministrar durante la incubación. la cual se encenderá procediendo de inmediato a cerrar el frasco. Fig. para lo cual existen diversos todos: a) Método de la vela: Es muy sencillo de realizar.Incubación de bacterias aerobias estrictas: Las bacterias aerobias estrictas no requieren que la incubadora tenga ninguna adaptación especial. Incubación de bacterias microaerofílicas: Como estas bacterias requieren de una baja tensión de oxígeno para poderse desarrollar. el método más empleado para propiciar esas condiciones. que proporcionan a los microorganismos microaerofílicos una mayor tolerancia al oxígeno. Cuando este proceso haya concluido la llama se apagará y en el interior del frasco producto de la combustión quedará una atmósfera con un 10 % de CO2. para que mantenga la humedad necesaria y una vela. La llama utilizará como comburente parte del oxigeno que quedó encerrado dentro del frasco. 44: Método de la vela 89 . Seguidamente el frasco con los cultivos será colocado en el interior de una incubadora ordinaria. ya que ellas utilizan el oxígeno presente en el aire ordinario que se encuentra en el interior del equipo. aunque pueden emplearse procedimientos físicos oxirreductores para este propósito. conjuntamente con los cultivos se introduce un pedacito pequeño de algodón humedecido en agua. Consiste en colocar en el interior de un frasco de cristal de tamaño apropiado y provisto de tapa de rosca. las placas o tubos sembrados. Incubación de bacterias que requieren de CO2 : Todos los microorganismos requieren carbono en forma de CO2 y la mayoría utilizan el que está presente en el aire. pero aquellas especies que necesitan este elemento en mayor proporción. consiste en sembrar las muestras en medios de cultivo que contengan Fe2Co4. metabisulfíto de sodio o piruvato de sodio.

tioglicolato sódico que consume él oxigeno. Después de realizada la incubación se efectuará en la misma incubadora que se emplea para los cultivos aerobios. Incubación de bacteria anaerobias La incubación de bacterias anaerobias se puede efectuar por diferentes métodos: a) Siembra en medios oxirreductores. En medio de cultivo sólido: Un medio de cultivo especial. 45 : Placa de Brewer Realizada la siembra. b) Empleo de la jarra de "Brewer". estableciendo condiciones anaerobias. c) Incubadora para anaerobios. agar anaerobio al glicolato u otro similar se vierte sobre la caja de una placa de "Petry" corriente y después de solidificado se le coloca encima una tapa especial de vidrio denominada cubierta de "Brewer". Siembra en medios de cultivo oxirreductores En medio de cultivo líquido: El medio empleado contiene un compuesto oxireductor. procediéndose a su incubación en una incubadora común para cultivos aerobios. Fig. 90 . El tioglicolato consume el oxigeno en el pequeño espacio de aire. la cual está diseñada para quedar apoyada sobre los bordes de la caja interior y sobre el perímetro externo del medio de cultivo de manera que en el área central del cultivo queda encerrado un espacio de aire. se cubre con la apa de "Brewer". estableciendo condiciones anaerobias.b)Incubadora de CO2: Son incubadoras especiales. diseñadas para extraer un % de 02 deseado e intercambiarlo por un gas sustituto (CO2).

se produce a colocar la tapa. no debiendo abrirse antes de las 48 horas. La tapa dispone de dos válvulas. provisto de una tapa que propicia un cierre hermético mediante un tornillo ubicado en su porción central. 91 . unas 10 placas con cultivo. Por la otra válvula se le suministra el hidrógeno para reemplazar el aire. En una de ellas se instala una manguera conectada a una bomba de vacío para extraer el aire acumulado en el interior de la jarra. estableciendo finalmente condiciones anaerobias. En estas condiciones la jarra es colocada en el interior de la incubadora para que le proporcione a los cultivos el calor necesario.Empleo de la jarra de "Brewer": Es un recipiente cilíndrico. se aprieta el tornillo para hermetizarla. Cuando la capacidad de la jara es completada con este gas. El poco oxigeno que puede quedar aún en el interior de la jarra es eliminado por el catalizador platinado que al activarse hace que se combine con el hidrógeno para formar agua o agua y dióxido de carbono. de manera que no quede herméticamente cerrada. La tapa tiene instalada un elemento de calefacción rodeado de un catalizador platinado. para lo cual se enroscará el tornillo lo cual evitará que se produzca una explosión cuando se le suministre hidrógeno. Fig. 46: Jarra de Brewer Funcionamiento Después de introducidas las muestras de cultivos. La primera dosis de hidrógeno se debe botar para que salga el aire de la manguera. La jarra tiene un diámetro y altura que permite colocar en su interior (una encima de la otra).

Conjuntamente con la muestra será introducido en el baño un termómetro de mercurio colocado previamente dentro de un tubo de ensayo. 92 . con la ventaja que nos permite disponer de mas espacio y estudiar una mayor cantidad de cultivos. debiendo bajarse la llama o incluso apagarla cuando el termómetro marque dos o tres grados por debajo de la temperatura deseada. volviendo a encenderla cuando la columna de mercurio comience a descender manteniendo este control. para que el calor se distribuya lo mas uniformemente posible por todo el fondo del recipiente. faltando 2 ó 30 C. el recipiente se coloca sobre una fuente de calor. Baño de agua caliente sin regulación termostática Cuando se recurra a esta variante se debe emplear un recipiente metálico o de vidrio de fondo plano. debiendo quedar a la misma altura que la muestra. es decir. ya que aún después de apagada. Incubadora para anaerobios Se trata de un moderno equipo. que el material a examinar depositado dentro de un tubo de ensayo. de manera. el recipiente puede ser separado de esa fuente de calor. En la práctica el baño de agua sin regulación termostática se emplea casi exclusivamente cuando se requiere temperatura de ebullición.En la actualidad se comercializan diversos productos oxirreductores que se introducen en la jarra con los cultivos y suplen la función de esta. con similar capacidad que las incubadoras para cultivos aerobios que funciona bajo el mismo principio que la jarra de Brewer. quede por debajo del nivel del agua. Como se puede apreciar el empleo de este procedimiento es engorroso por lo laborioso que resulta y la imposibilidad de mantener estable el nivel de temperatura de la muestra. comúnmente conocido como "baño de Maria" es utilizado en diversos procederes de laboratorio. sin ser necesario hacer vacío para extraer el aire ni inyectar hidrógeno. que puede ser de gas o eléctrica. durante todo el tiempo que dure la exposición de la muestra al calor. mantiene por algunos momentos la intensidad calorífica. Mediante este método se pueden alcanzar valores por encima de la temperatura ambiente hasta un máximo de 1000 C con o sin regulación termostática. Cuando se emplean hornillas eléctricas. dentro del cual se verterá agua destilada hasta alcanzar el nivel necesario. Baño de agua caliente. Cuando se utiliza el mechero de gas debe situarse sobre el trípode una malla de amianto. (Baño de María) El baño de agua caliente. En estas condiciones.

A continuación se introducen las gradillas con los tubos que contienen las muestras. lo que propicia que la temperatura se mantenga homogénea. ubicada generalmente en la base del equipo. Al ser encendido el equipo. debe ser siempre destilada. 47 : Baño de agua Funcionamiento En el interior del equipo se vierte agua destilada hasta alcanzar el nivel pertinente. 93 . como para permitir la colocación en su interior de varias gradillas. De acuerdo al modelo su tamaño será variable. la cual es regulada por un termostato que mantiene automáticamente el grado de temperatura al nivel deseado. y colocarlo en la gradilla debiendo quedar el vástago al mismo nivel que las muestras. En su efecto se debe introducir un termómetro dentro de un tubo de ensayo.Baño de agua con regulación termostática Se trata de un equipo diseñado con material inoxidable que tiene la forma de un cajón rectangular. que va registrando la temperatura del agua. ya que las sales que el agua cruda al evaporarse tiende a formar capas sobre las paredes internas y el fondo del depósito pueden deteriorar al equipo. las aspas comienzan a girar agitando constantemente el agua. las cuales deben quedar por debajo del nivel del agua. sumergido en el agua. pero con la capacidad suficiente. Después de accionar el interruptor se gira el botón hasta que indique la temperatura deseada y se hace girar igualmente el botón del "Timer" para indicar el tiempo requerido de exposición al calor. Fig. Algunos modelos están provistos de un aditamento similar a un pequeño ventilador. El calor es suministrado por una resistencia eléctrica. Estos equipos siempre son eléctricos. Importante El agua a emplear para el baño de agua caliente. Algunos modelos cuentan con un termómetro de mercurio acoplado. ubicado generalmente en el extremo posterior.

15.Uso El baño de agua caliente. tiene diversos usos. 13. 7. 2. puede proporcionar un 10 % de CO2 a las bacterias que así lo requieran? Describe el método de la vela. 10. ¿Para que se utiliza la incubadora? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo al rango de temperatura óptima para su desarrollo? ¿Por qué causa los microorganismos mesófilos son los que con mayor frecuencia infectan al hombre? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxigeno? ¿Cómo Ud. 17. 8. 14. 16. ¿Para que se utiliza la jarra de "Brewer?" Explique cómo es el funcionamiento de una jarra de "Brewer" ¿Cuántos tipos de baño de agua Ud. 11. En el laboratorio de microbiología se emplea frecuentemente para inactivar el complemento de sueros que van a ser sometidos a procedimientos serológicos. conoce? ¿Cuál es la fuente de calor de los baños de agua con regulación termostática? ¿Por qué causa se debe emplear agua destilada en los baños de agua? ¿Cuál es la función de las aspas que poseen algunos baños de agua? ¿Cómo se regula la temperatura del baño de agua? 94 . puede proporcionar una atmósfera microaereofílica? ¿Cómo Ud. Mencione los diferentes métodos de incubación anaeróbica. 12. 6. 4. CUESTIONARIO 1. 3. 9. 5. ¿Cuales son las diferencias y semejanzas entre el horno y la incubadora? Describa el diseño o modelo de una incubadora.

italiano. A pesar de que los microorganismos ya existían antes que el hombre y de haber sido durante milenios los causantes de diversas enfermedades infecciosas. hayan sido durante siglos y sean en la actualidad.CAPITULO 8 MICROSCOPIO INTRODUCCIÓN La tierra se formó hace miles de millones de años y desde sus albores se desarrollaron los primeros microorganismos a partir de las estructuras pre-biológicas existentes. originadas por la interacción de los compuestos orgánicos. El microscopio de Hooke. como: protozoarios. por el perfeccionamiento de las técnicas microscópicas. de ahí que los microorganismos patógenos. Con el decursar del tiempo. afectando igualmente a la especie humana desde el surgimiento del hombre primitivo hasta nuestros días. una lente de aumento. inventado a principios de ese siglo por el físico-matemático. que dio lugar el surgimiento de la microbiología como ciencia. que al evolucionar dieron lugar a la biogénesis de las bacterias primitivas. lo que impidió a los hombres de ciencia ver sus respectivas morfología y estructuras. hasta poblar todo el globo terráqueo. correspondiendo por lo tanto a los microorganismos haber sido los primeros seres vivos del planeta. los conocimientos que el hombre tuvo durante siglos. en el año1665. estudiar su comportamiento y asociarlos después como los agentes causales de los procesos morbosos y/o letales. al que insertó en cada extremo. basándose en el principio funcional del telescopio astronómico. El tubo a su vez 95 . hongos y algas. El invento del microscopio fue el punto de partida. diseminándose gradualmente en el aire. en gran medida. Galileo Galilei. los suelos y las aguas. El microscopio compuesto fue diseñado y construido por el inglés Robert Hooke. debido esencialmente al tamaño microscópico de los diversos gérmenes que imposibilita su observación a simple vista y no disponerse en esas épocas de instrumentos técnicos como el microscopio que dieron esa posibilidad. algunos fueron afectados por la acción de diversos agentes mutagénicos que alteraron su expresión fenotipal. acerca de las causas que originaban las enfermedades infecciosas eran meramente especulativos y por consiguiente carentes de rigor científico. grandes epidemias y de pandemias que diezmaron poblaciones enteras. consistió en un tubo cilíndrico de unos 15 cm de longitud. transformándose en otros tipos de microorganismos más evolucionados. estando su desarrollo ulterior influido. los agentes infecciosos causales de la morbi-mortalidad en plantas y animales.

heces. En 1668. así como bacterias y protozoarios. no difiere esencialmente de la de los microscopios luminosos que se utilizan en la actualidad. Como se puede apreciar la estructura básica del microscopio diseñado por Hooke.fue acoplado a un soporte previsto de platina para colocar las preparaciones a observar. un comerciante holandés. Este instrumento se complementaba con una fuente de luz accesoria.. Microscopio óptico Concepto: Son instrumentos de laboratorio. que posibilita la observación de los microorganismos. solo logró observar. Probablemente sus limitadas observaciones se debieron a imprecisiones técnicas. al proporcionar una imagen aumentada virtualmente del tamaño real a total magnitud que posibilitan su observación a través de su empleo. constituyen los microorganismos de mayor talla. A pesar de que los lentes empleados por Hooke. aunque todos tienen respectivamente el mismo principio. Antón Van Leeuwenhouek. etc. logró observar todo lo visto por Hooke . así como diversos tejidos vegetales y hongos microscópicos y algas. que quiere decir. fabricante de gafas. diseñados básicamente con una sola lente o mediante un sistema de lentes de aumentos. examinar o ver. MICROSCOPIO. podían proporcionar una ampliación suficiente. algunos insectos de ínfimos tamaños. proviene del prefijo micro que significa pequeño y del sufijo skope. pus. De cada tipo se comercializan diferentes modelos y aditamentos especiales para proporcionar determinados efectos. Los microscopios son instrumentos ópticos o electrónicos con un elevado poder resolutivo. DIFERENTES TIPOS Se fabrican dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. que son ubicados 96 . tomando como referencia el invento de Hooke. en muestras examinadas de: sangre. no logrando observar a otros más pequeños como protozoarios y bacterias. que como se sabe. células y otras estructuras microscópicas. relacionadas con el grosor de las preparaciones o el empleo deficiente de iluminación. fabricó un microscopio al cual dotó de poderosos lentes de aumentos y empleando técnicas más efectivas. semen. denominando a estos microorganismos en su conjunto como "animálculos". CONCEPTO La palabra microscopio.

quedando restringido su empleo para el examen de diversas estructuras u organismos microscópicos muy pequeños. desarrolladas en los cultivos. que conjuntamente con una fuente de iluminación. vermes de poca longitud. que tiene como soporte a un 97 . 48 : Lupa Para su manejo. Fig. hasta una distancia focal menor que la empleada si se fuera a observar directamente. forman parte de un sistema óptico. etc. los compuestos funcionan mediante la combinación de varias lentes. cuyos detalles escapan a la agudeza visual del ojo humano. se debe colocar la lente de manera que su cara plana o menos curva. lo que hace posible su observación. Microscopio compuesto A diferencia de los microscopios simples. Debido a su limitada capacidad de ampliación. quede hacia el objeto a examinar y observando por la cara opuesta. como por ejemplo: colonias muy pequeñas. no invertida. siempre que se utilice una adecuada iluminación. Entre los dispositivos utilizados se encuentran las lupas empleadas en las prácticas de disección. no se puede observar con ellos objetos microscópicos. Microscopios simples Están formados por una sola lente convergente. como el Necator americanus o el Enterovirus vermicularis. que proporciona una imagen virtual.alineadamente en el eje óptico del microscopio para que proporcionen una imagen virtual ampliada de los objetos microscópicos examinados. varias veces mayor que el tamaño real del objeto observado. Clasificación Los microscopios ópticos se clasifican en: simples y compuestos. aproximar el instrumento gradualmente.

Brazo Es una columna sólida y rectangular que se haya articulada por su extremo inferior a la base. provisto de diversas piezas y aditamentos que deben ser manipulados para lograr y mantener el enfoque de la preparación. En su trayectoria hacia la parte superior. Revolver portaobjetivos. 5. Base o pie Es la parte del microscopio que queda en contacto con la superficie de la mesa de trabajo. 3. La base es el sostén donde se asientan todas las restantes partes del microscopio. Base o pie. Tornillos. 49 : Microscopio óptico compuesto Sistema mecánico El sistema mecánico consta de las siguientes partes: 1. algunos modelos 98 . Brazo. 2. Tubo óptico. Su fondo plano y acentuado peso le proporcionan estabilidad al microscopio y constituyen a aminorar los efectos de las vibraciones que causan distorsiones durante la observación. Algunos modelos están provistos de una charnela (pasador) que permite la inclinación hacia el observador de la parte superior del microscopio.sistema mecánico. recorrerla y observar la cantidad de campos microscópicos que sean pertinentes. Fig. Platina 6. 4.

En algunos modelos. hasta hacerlos coincidir con la de los ojos del. En cada uno de estos orificios se enroscará un lente objetivo. uno de los tubos. denunciado fusil que articula a la parte superior del brazo. es giratorio al ser accionado se desplaza hacia arriba o hacia abajo. un mecanismo de desplazamiento. cuya secuencia aproximada será de menor o mayor potencia de aumentos. formando una inclinación oblicua o un ángulo recto de 900. Cuando se requiera un mayor o menor aumento se hará girar. provista de 3 ó 4 orificios de 2 cm de diámetro con rosca interna. mientras que la porción media de su cara frontal sirve de asiento al extremo posterior de la platina. mientras que en el inferior se encuentra acoplado al revolver portaobjetivos. En su parte superior.forman una curvatura.3 cm de diámetro donde se insertan los dos lentes oculares. lo cual permite sincronizar la distancia de ambos lentes a las diferencias de potencialidad de cada ojo. observador. que se accionan lateralmente para ampliar o reducir la distancia entre ambos lentes. consistente en dos tapas de corredera. sino que forma un cuerpo binocular.3 cm de diámetro. tiene ubicado en el punto de contacto con el tubo óptico un prisma o espejo que refracta la imagen por igual hacia ambas lentes. mientras que en otros su trayectoria es recta hasta más allá de la mitad de su longitud en que se dobla en dirección frontal. que consiste en una cajuela rectangular ubicada en posición horizontal que puede estar ligeramente inclinada hacia el observador. Tubo óptico En los microscopios monoculares. disponiendo además. ubicados equitativamente alrededor de su entorno a menos de un cm de su borde. por la misma cara donde se hayan los tubos para insertar los lentes oculares. consiste en un tubo cilíndrico de 2. lo cual se logra cuando éste deje de ver dos campos microscópicos separados o superpuestos y vea uno solo. En la superficie frontal presenta 2 tubos cortos de 2. con una longitud de varios cm que varía según el modelo. Este cuerpo binocular. Revolver portaobjetivos El revolver portaobjetivos es un disco plástico o metálico de unos 7 cm de diámetro que se encuentra atornillado por su eje a una pieza que rodea al tubo óptico denominado fusil. al menos. En los microscopios binoculares. manualmente el revolver hacia la derecha o hacia la izquierda hasta ubicar el lente deseado 99 . el brazo está articulado al tubo óptico o al cuerpo binocular. el extremo superior del tubo óptico no termina recto. El orificio superior se emplea para insertar la lente ocular. estando provisto de una tapa metálica giratoria de superficie cónica. encontrándose rodeado por un tubo de mayor diámetro.

La platina está provista de pinzas. mientras que en otros. El disco fijo tiene en su extremo frontal una pequeña hendidura y el giratorio presenta un pequeño saliente frente al orificio donde se enrosca cada lente objetivo. Al rotar el disco y ubicar el lente deseado sobre el orificio de la platina. quedando la parte posterior del lente frente al tubo ocular. Generalmente es de forma cuadrada y mide unos 15 cm2 de superficie x 1 a 2 cm de grosor. coincide con que el saliente se introduce en la hendidura produciendo un ligero sonido audible al acoplarse que indica que la lente está ubicada correctamente. se encuentran articuladas a un sistema de rodamiento formado por dos cremalleras y dos tornillos. 50 : Revólver portaobjetivos La platina Fig. Fig. Mediante movimientos de rotación que se imprimen a uno de los tornillos se propicia el desplazamiento de la pinza hacia uno u otro lateral y con el accionar del otro se desplaza la plataforma superior de la platina hacia delante o hacia atrás. En algunos modelos el orificio es ovoide. engranados respectivamente a cada una de ellas.sobre el orificio de la platina. Presenta en su porción central un orificio circular de unos 5 cm de diámetro. 5l: Diferentes formas de platinas y pinzas La platina es una doble plataforma metálica de color negro o gris de aspecto mate. que se utilizan para sujetar las láminas portaobjetos que contiene la preparación a observar. Estas pinzas. pudiendo en algunos modelos ser circular. 100 . por donde pasa la luz procedente de la fuente de iluminación. en algunos modelos son fijas.

mediante el desplazamiento ascendente o descendente de la platina. En el que está ubicado en la parte superior se inserta el tornillo macrométrico (uno por cada lado) y en el orificio inferior. junto con un nonio. Estructuralmente ambos tornillos son iguales. En otros modelos de microscopios el tubo óptico es fijo y la distancia focal se consigue. Cuando los tornillos son introducidos en sus orificios respectivos solo quedan externamente sus cabezas. lo que no le permite engranarse directamente a la cremallera. las cuales son de forma circular con un tamaño de varios cm de diámetro por 1 ó más de ancho. de similar manera el tornillo micrométrico. los microscopios están provistos de otros 3 tornillos. El vástago helicoidal de cada tornillo que penetra en el orificio termina en un pequeño piñón (rueda dentada) que se engrana a la cremallera del tubo óptico. para lo cual anotará las coordenadas que le proporcionan ambas escalas. Es la parte superior del brazo. el macrométrico. sino a través de un piñón similar al del tornillo macrométrico que tiene acoplado un uno de sus laterales a otro más pequeño con los dientes a igual distancia que los del tornillo micrométrico. con el que se logra la nitidez del enfoque. lo que facilitará la localización del campo con rapidez sin tener que rastrear toda la preparación. algunos microscopios presentan dos orificios. uno debajo del otro. y en el borde lateral derecho otra con el rango de 80 a 110 mm provista igualmente de un nonio. lo que propicia imprimirle movimientos rápidos de desplazamiento al tubo óptico con lo que se consigue con prontitud el enfoque grosero de la preparación. el micrométrico y el del elevador del condensador. que lo atraviesan de lado a lado. Esta diferencia mecánica propicia un desplazamiento muy lento del tubo óptico. con la única diferencia de que el tornillo micrométrico es más pequeño. 101 . Tornillos Además de los tornillos de la platina. transformar el movimiento rotatorio del piñón en movimiento rectilíneo del tubo óptico en dirección ascendente o descendente para hallar la distancia focal. En cambio el piñón del tornillo micrométrico tiene los dientes más unidos. con el borde estriado transversalmente para facilitar el agarre manual al imprimirle movimientos de rotación. El piñón del tornillo macrométrico tiene separado los dientes a la misma distancia que los de la cremallera. lo que propicia al accionar el tornillo.La mayoría de los microscopios que se emplean en la actualidad. tienen grabada sobre el borde frontal de la platina una escala graduada de 0 a 80 mm. Estas escalas permiten al microscopista ubicar la posición de un campo microscópico que desea posteriormente volver a ver.

convexa. Este tornillo queda muy próximo al condensador y se acciona en uno u otro sentido según sean los requerimientos de iluminación de acuerdo al tipo de microscopía que se vaya a realizar. El funcionamiento para subir o bajar el condensador tiene el mismo mecanismo que el empleado para los tornillos macrométricos. mediante los tornillos macrométricos y micrométricos. siendo al menos. Sistema óptico. quedando el micrométrico insertado en el centro del macrométrico. Diferentes partes El sistema óptico está formado por las diferentes partes provistas de lentes y de las que intervienen en la iluminación.por un mecanismo similar. Miden desde unos pocos mm hasta varios cm y tienen la propiedad de proporcionar una imagen del objeto observado aumentada de tamaño. Lentes oculares Fig. ambos tornillos están acoplados. siendo las siguientes: _ Lentes oculares _ Lentes objetivos _ Condensador _ Diafragma _ Espejo _ Fuente de luz _ Filtros Los lentes Los lentes empleados en la fabricación de los microscopios son discos pulidos y transparentes. mientras que en otros. una de sus dos superficies. 52: Lentes oculares 102 .

que le sirven de soporte. quedando retenido en su descenso por el borde de la tapa que tiene un mayor diámetro. son los que proporcionan los siguientes aumentos: 6x. está calibrado para que pueda ser insertado en el interior del tubo óptico. colcadas en el interior de un pequeño tubito cilíndrico. pero desde hace años se viene utilizando un sistema de 2 lentes colocados en el interior de un pequeño tubito cilíndrico de 2. Lentes objetivos Los lentes objetivos constituyen la parte más importante del sistema óptico del microscopio. están formados por un sistema de varias lentes. está formado por tres piezas desarmables. que se haya insertado en la porción media del tubo. el cual dispone de una tapa de rosca de color negro provista de un criterio central de 1.5x y 15x.. La segunda lente es biconvexa.1 cm de diámetro y está ubicada en el extremo posterior del tubito. que a diferencia del que porta las lentes oculares. ya que mediante su poder de resolución es posible observar separados dos objetos microscópicos muy próximos entre sí. por un diafragma anular en forma de arandela. 8x. Este pequeño tubo.7 cm de diámetro.2 cm de diámetro x 3 ó más cm de largo. 12.Antiguamente los lentes oculares disponían de una sola lente. Los lentes oculares que se utilizan con mayor frecuencia. mediante la combinación de varias lentes con distintos radios de curvatura o suprimiendo por medio del diafragma anular los rayos que atraviesan la porción periférica de la lente. La función de los lentes oculares es la de ampliar virtualmente. mientras que el extremo frontal o inferior. para finalmente terminar plano. Por ejemplo: 10x. 10x. la primera es un fino tubito que contiene las lentes. En algunos modelos esta lente se encuentra empotrada en la misma tapa. quedando la aber103 . los lentes objetivos. como si se hubiera cortado la punta del cono. la imagen formada ampliada por el lente objetivo y corregir las aberraciones cromáticas y de esferidad debidas a la curvatura de la lente. que al ser enroscada suavemente la lente inmovilizándola. Los microscopios monoculares están diseñados para trabajar con un solo lente ocular y los binoculares con dos. La tapa tiene grabado en su superficie un número seguido de una "x".. es plano-convexa. Al igual que los lentes oculares. La lente ubicada en el extremo superior mide 1. que indica su poder de ampliación. pudiendo ser observada a través del orificio. lo que significa que esa lente aumenta virtualmente el tamaño real del objeto observado en una imagen 10 veces mayor.9 cm. teniendo el lado plano dirigido hacia el interior del tubo. quedando separados entre sí. provisto de rosca en su extremo posterior. mide 2. portador de las lentes. a pocos mm de su terminación se va estrechando cónicamente.

b) Objetivo de imersión Existen dos tipos de lentes objetivos. La segunda. El de menor aumento (5x ó 6x) es el más corto de todos y se caracteriza por proporcionar la observación de un área extensa de la preparación. es la base. Esto se debe a que las lentes oculares deben ser pequeñas. aunque todavía insuficiente para observar con nitidez microorganismos 104 . protozoarios y otro microorganismos de dimensiones microscópicas muy pequeñas. es una cánula cilíndrica que se ensambla a la base por la rosca externa del mismo saliente donde se enroscó el tubito portador de las lentes por su rosca interna. con rosca interna. mediante la rosca que se encuentra en el lado opuesto. los cuales están diseñados con rosca externa y uno solo de ellos. ya que entre menor sea su diámetro. por donde se enrosca el tubito portador de las lentes. mayor será su capacidad de ampliación. los secos y los de inmersión. Este tipo de objetivo se fabrica. proporcionan un aumento mayor que el explorador. En estas condiciones el lente objetivo podrá ser colocado en uno de los orificios del revolver portaobjetivos. además. Al quedar ensamblado el lente objetivo. por lo que se le conoce también como lente explorador. con diferentes potencias de aumento.2 cm de diámetro x 2 ó 3 mm de grosor. por donde se puede observar la cara plana de la lente plano convexa que está en contacto con el pequeño orificio. quedando un espacio de aire entre la lámina cubreobjetos y la lente. de 2. 53 : Lentes objetivos: a) Objetivos secos. teniendo por ambos lados un saliente anular adjunto de menor diámetro de 2 ó 3 mm de longitud. La tercera pieza. Debido a su baja potencia de ampliación no es posible observar con este lente a las bacterias. Los lentes objetivos de 10x ó 20x. estriada transversalmente como algunas monedas. una especie de unión universal. son más largos. la cánula rodeará a todo el tubito menos por extremo cónico. Diferentes tipos de lentes objetivos Fig. Los objetivos secos alcanzan la distancia focal a varios cm por encima de la preparación.tura del tubo con un diámetro reducido de 1 a 5 mm.

así como su potencia de aumento (90x a 100x) que depende enteramente del grado de ampliación que proporcione la lente frontal. está estructurado por dos tubitos de diámetro ligeramente diferentes. El líquido empleado tradicionalmente ha sido el aceite de cedro. el tubito portador de las lentes se diseña de forma retráctil. sino además pudiendo ocasionar daños. pero posibilitando que cuando la parte inferior que contiene la lente frontal sea presionada sobre la lámina. de ahí. sino además. resultando aún insuficiente para la observación pormenorizada de bacterias. a pesar de que la distancia que separa a la lente de la preparación sea escasamente de 1 mm. así como: huevos y larvas de helmintos. provocando no solo la ruptura de la lámina. En el orificio anterior del tubito. ya que las demás ubicadas dentro del tubito son de corrección. se haya la lente frontal. Este lente se le conoce también como seco débil. como si fuera un pistón. generalmente. no solo por ser más largo. que es de 1. mide escasamente 1 mm de diámetro.52. ocurre. se debe colocar sobre la preparación una gota de un líquido cuyo índice de refracción sea más elevado que el del aire y muy próximo al vidrio de la lente. pero proporciona un aumento lo suficientemente amplio. disponiendo además de un pequeño resorte que mantiene fija a las dos partes. como para permitir la observación detallada de algunos microorganismos como protozoarios y hongos. que para poder captar los rayos luminosos procedentes del condensador. células.52. que abarca un área más reducida de la preparación. que tenga que estar situado a 1 ó 1.5 mm de la misma. particularmente de las cocáceas por su íntimo tamaño. en ocasiones irreparables a la propia lente. Los rayos de luz al pasar de un medio a otro con diferente índice de refracción tiende a desviarse por reflexión. volviendo a su posición normal cuando cesa la presión. Cuando se emplean objetivos de inmersión. artefactos y otros elementos de interés de tamaño similar. lo que sí. generalmente. en el que quede inmersa la lente. este fenómeno ocurre. que han atravesado la preparación. aunque pueden ser factibles a microscopistas con experiencia para identificar huevos de helmintos y otros elementos de interés de tamaño similar. Como el espacio de la distancia focal es tan reducido se corre el riesgo de incurrir en la impericia de presionar la preparación con el lente. una franja de color negro a su alrededor y grabadas en su cánula la sigla HI(Homg Inmersión) u OI(Oil Inmersión). Al cubrirse el espacio de aire por el aceite los rayos de luz que han atravesado la preparación asciende perpendicularmente hacia la lente sin refractarse significativamente. Para evitarlo. cuando se utilizan lentes objetivos secos.muy pequeños como las bacterias. se introduzca unos mm dentro de la externo. El más largo de los tres es el de 40x ó 45x. Lente de inmersión se diferencia de los secos. 105 . Para evitar estos accidentes. cuyo índice de refracción es de 1. lo que propicia que el ponga las lentes pueda introducirse calibradamente dentro del otro. por tener. Este lente se conoce también como seco fuerte.

pero dañando menos las lentes. se procede a multiplicar el valor de ampliación que está grabado en el lente objetivo. que tiene la parte superior ligeramente cónica. dentro de un dispositivo anular. con las mismas ventajas. con el extremo de su vértice cortado. por el valor de ampliación del lente ocular. siendo inmovilizado mediante un fino tornillo. 54: Condensador luminoso El condensador de campo claro o brillante. que con el tiempo afecta la calidad de la lente. donde se encuentra un orificio de menos de 1 cm de diámetro. ubicadas en el interior de un dispositivo cilíndrico de 3 cm de diámetro.El aceite de cedro tiene el inconveniente de oxidarse con el aire. La función de los lentes objetivos es formar la imagen del objeto observado y ampliarla virtualmente de acuerdo a su potencial de aumento. en la actualidad se emplean otros aceites para microscopios más estables. siendo de mayor tamaño. está compuesto por 2 lentes convergentes de desigual. Por lo tanto el aumento total sería de 200x. aunque se limpien adecuadamente después de su uso. La segunda lente es biconvexa. encontrándose ubicada por su lado menos curvo a corta distancia de la lente más pequeña. quedando ambas lentes en posición perpendicular 106 . Condensador Fig. ocupado por la cara plana de la lente más pequeña que es planoconvexa. entonces.10=200. Aumento total que proporciona el microscopio: Para conocer el número de diámetro en que se amplia virtualmente el objeto observado. por lo que. El condensador se introduce de abajo hacia arriba. adquiriendo una consistencia muy viscosa. que se haya justamente debajo del orificio de la platina. Ejemplo: si la ampliación del lente objetivo fuera de 20x y el del ocular 10x. 20. tamaño.

hacia la lente frontal del objetivo. cubriendo todo ese diámetro. a la formación de un orificio de diámetro variable en el centro del diafragma. que se utiliza como elevador del condensador al propiciar con su accionar su desplazamiento vertical ascendente o descendente. de cuyo interior sale una pequeña palanquita plana. ya que las laminillas se desplazarían 107 . está articulado a una pieza angular que lo fija a la parte inferior del brazo. muy próximo a su base. debajo de la lente biconvexa. El condensador presenta. al recogerse. muy próxima a la cara posterior del portaobjetos reduce la divergencia de los rayos de luz. encontrándose acoplado en el extremo del orificio posterior del condensador. estando provisto de un tornillo engranado a una cremallera. salen paralelos al eje principal incidiendo sobre el objeto a observar. para después atravesarlo y seguir su trayectoria perpendicularmente. en cuyo vértice se intensifica un foco luminoso. con lo que se logra una mayor iluminación que resulta imprescindible cuando se hacen observaciones a grandes aumentos. consistente en un fino disco metálico. muy próximo a la base. que puede ser desplazada hacia delante o hacia atrás de la ranura. b) Diafragma anular. Este dispositivo a su vez. lo que da lugar. formando un cono de luz. Cuando el movimiento se produce hacia delante. Es un accesorio del condensador. Si la palanquita fuera hacia atrás. La función del condensador es hacer los rayos luminosos procedentes directamente de la lámpara e indirectamente por reflexión del espejo. según sea necesaria una mayor o menor intensidad de luz. sucedería todo lo contrario. una ranura que los bordea horizontalmente. Diafragma de Iris Fig.con respecto al lente objetivo. diseñado con múltiples laminillas planas superpuestas consecutivamente que adoptan el aspecto de un abanico plegable. sino divergen. se refracten (desvíen) al atravesar las lentes convergentes. por la convergencia de los rayos de luz que al atravesar todo el sistema. Su colocación. 55: Diafragma: a) Diafragma iris. las laminillas del diafragma se despliegan hacia el entorno del cilindro.

Cuando pretendemos realizar una microscopía donde el exceso de iluminación. Lámpara Las lámparas utilizadas. mide unos 5 cm de diámetro y consta de dos espejos adosados por su reverso. uno de los cuales tiene la superficie plana y el otro cóncava. la lámpara está acoplada en la base aunque todavía se utilizan modelos. para seleccionar la cara a emplear o conjuntamente. un fino orificio de 1 mm de diámetro por donde se articula a dos pequeños salientes puntiformes que se hayan en cada extremo de una planchuela curva acoplada por su centro a un pequeño vástago cilíndrico. una luz monocromática de corta longitud de onda. mediante las articulaciones laterales. El extremo posterior del vástago se introduce en un orificio presente en el extremo inferior del brazo donde se fija. afectan la calidad de la observación se cierra total o parcialmente el diafragma y cuando necesitamos más intensidad de luz se va abriendo hasta obtener la requerida. mediante la rotación del vástago. Espejo Fig.hacia el centro. cerrándose. Ambos espejos se encuentran montados conjuntamente dentro de un fino aro metálico de unos 5 mm de ancho que les sirven de marco. como parte del módulo del microscopio óptico. donde se encuentra separada. En ambos casos la lámpara forma parte de un soporte diseñado para proyectar me108 . teniendo por cada lateral de su línea ecuatorial. para hallar el ángulo adecuado que propicie la reflexión del espectro luminoso procedente de la lámpara hacia el condensador. La primera se utiliza cuando la fuente de luz es natural y la segunda cuando se emplea iluminación artificial. lejos de beneficiar. deben proporcionar para la microscopía ordinaria. para reducir progresivamente el diámetro del orificio. 56 : Espejo El espejo de los microscopios es circular. El diafragma se utiliza para regular la cantidad de rayos luminosos que deben pasar al interior del condensador. En los microscopios modernos. dándole un aspecto de horquetilla. De esta manera el espejo puede ser movido por rotación.

Filtros Fig. 57 : Lámpara Cuando la lámpara está separada del microscopio. para que los rayos sean dirigidos por reflexión hacia el condensador. de manera similar a como lo hace una linterna. Principios básicos Los principios básicos en que se sustenta el empleo utilitario de los microscopios son esencialmente de: _ Su poder de resolución. debe proyectarse el haz de luz de manera que incida directamente sobre el espejo. 109 .diante un reteden sus emanaciones como un cono de luz. esféricos y planos. 58 : Filtros Son dispositivos de vidrio. tales como: portafiltros. diafragma y reóstato. miden de 2 a 3 cm de diámetro y tienen un determinado color. La mayoría de dichos soportes se fabrican con diversos aditamentos para optimizar el empleo de la iluminación. _ La capacidad de formar imágenes. Su función es la de absorber las longitudes de ondas de determinados colores para proporcionar una luz que mejore la observación microscópica. que se caracterizan por ser transparentes. este último para regular la intensidad de la luz. Fig.

Percepción de la imagen Los rayos del haz de luz empleados en la microscopía.2 (micrómetros) estando limitada su potencia a esa magnitud. Si la distancia se acortara y el poder de resolución del observador ya hubiera llegado a su límite .2 mm. las limita cuando el tamaño de la longitud de onda de la luz. en dependencia del aumento. pudiendo alcanzar hasta 0. el brillo ocasionado por los que no tuvieron interferencia. las sombras producidas por la densidad óptica de cada parte del objeto y la oscuridad proporcionada por su grosor.Poder de resolución El poder de resolución es equivalente a la potencia de observación. Formación de imágenes En dependencia del grosor y la densidad óptica que tenga cada parte del objeto a observar. dispersando o concentrándose. observándose los elementos que están a la izquierda de la preparación. por lo que cualquier objeto con un tamaño inferior a esa medida le resultará imperceptible. lo cual está delimitado por la menor distancia entre dos puntos muy próximos entre sí. el ojo humano no puede distinguir la separación de dos puntos que estén a menos de 0. su poder de resolución será mayor. que tienen diferentes densidades ópticas se refractan (desvían) en cada ocasión. no ascienden perpendicularmente a través del sistema óptico.2 mm de distancia. en que es posible observarlos separadamente. lo que da lugar a que la imagen del objeto llegue a la retina del ojo con una ubicación invertida. no podrá distinguir la separación entre ambos puntos y para su percepción estarán unidos. Como el microscopio está estructurado con lentes que amplían virtualmente la imagen del objeto real. las diferentes lentes y la preparación . Por ejemplo. así como los espacios de aire. por lo tanto su poder de resolución es de 0. ya que al atravesar en su trayectoria. a la derecha del campo microscópico y los que están arriba se observan debajo o viceversa. 110 . darán lugar a una diversidad de tonos y matices con los que se produce la formación de imagen. entrecruzándose entre sí. los rayos de luz que lo atraviesan sufren un retraso proporciona en su trayectoria con respecto a los que siguieron directamente hacia el lente objetivo. Al reunirse en la lente todos los rayos.

Pasos a seguir 1. que logrará con exactitud cuando vea un solo campo. Accione el tornillo del elevador y suba el condensador. La silla o banqueta utilizada por el microscopista debe tener un altura adecuada en relación con la mesa. Bastará con encenderla. seleccionar la cara plana o cóncava. lo cual se podrá constatar cuando el campo microscópico se observe completamente iluminado. Si el microscopio fuera monocular. 5. según sea el tipo de iluminación a emplear (natural o artificial).. 4. mueva lateralmente los lentes hasta Hacerlos coincidir con la distancia intrapupilar. Mueva la palanquita y abra el diafragma. proceda a mover convencionalmente el espejo de manera que los rayos de luz procedentes de la fuente de iluminación se reflejen y los desvíen hacia el condensador. 2. 3. preferentemente de color negro y aspecto mate para que no se refleje la luz. debiendo tener respaldar. con lo que afecta la calidad de los resultados . en este sentido la superficie de la mesa o meseta donde esté colocado el microscopio debe ser lisa y sólida. el de disponer de condiciones mínimas de confort para su realización. Cuando éstas no existen o son deficitaria la tendencia es el apresuramiento. 6.Fig. Cerciorarse de que el aumento del lente ocular es el pertinente para el tipo de microscopía que va a realizar.Si requiere utilizar el espejo. Rote el revolver portaobjetivos y coloque sobre el hueco de la platina el lente objetivo de menor aumento. 111 . Si el microscopio carece de espejo por disponer de una lámpara acoplada en su base. Si fuera un microscopio binocular. 59 : Percepción de la imagen microscópica Indicaciones para el manejo del microscopio óptico El requisito primordial para efectuar una adecuada microscopía es. mirando por la lente ocular. procediendo a manipular el espejo en la forma explicada. previamente. que resulte cómoda para la manipulación y observación a través del microscopio.

al cambiar el lente objetivo debe quedar enfocado el mismo campo pero con menos radio de observación. alterne los ojos durante la observación y mantenga el que no esté utilizando abierto. requiriéndose otras variantes microscópicas con las que se pueda obtener los resultados requeridos. Ladeando la cabeza. Para recorrer la preparación y observar los campos necesarios. Ajuste la altura del condensador y la abertura del diafragma a las necesidades de iluminación de la microscopía que vaya a efectuar. quedando aproximadamente a 1mm de la lámina. Si el microscopio está debidamente ajustado.7. hasta que quede a 4 ó 5 mm de la preparación. Si está utilizando un microscopio monocular. y con su mano izquierda accione el tornillo micrométrico para ir corrigiendo el enfoque cuando la lámina esté en movimiento. pero no siempre resulta eficaz para la realización de determinados exámenes. Coloque la lámina portaobjetos con la preparación sobre la platina y fíjela con las pinzas. aproxime. Seguidamente gire el tornillo micrométrico hasta que el enfoque sea nítido. 10. con ayuda del tornillo macrométrico el lente objetivo seco. Nota. Si el enfoque se realizó con objetivo seco de poco aumento y se requiere un objetivo de más aumento. 13. Si fuera a utilizar el lente de inmersión. proceda a separar lentamente el lente objetivo de la preparación con ayuda del tornillo macrométrico hasta que logre avizorar la imagen microscópica. 8. 9. para observar directamente la operación. rote el revolver portaobjetivos y sitúe sobre la preparación el lente requerido. 12. 112 . 11. coloque previamente sobre la preparación una gota de aceite de cedro y al aproximar la lente haga que ésta contacte con la gota de aceite. Entre las más empleadas en el laboratorio de microbiología se encuentran las siguientes: _ Microscopía de campo oscuro. Con ayuda de los tornillos de desplazamientos laterales o frontales mueva la preparación hasta situarla debajo del lente objetivo. Si la microscopía a realizar requiere de filtro. utilice el correcto. Otras variantes del microscopio óptico El microscopio óptico de campo brillante es el que se utiliza corrientemente en el trabajo cotidiano del laboratorio. Mirando por el lente ocular. accione con su mano derecha los tornillos de la platina y desplace la lámina en diferentes direcciones.

Fig. En la actualidad las empresas dedicadas a la fabricación de microscopios. de similar manera. Microscopía de campo oscuro Para la realización de este tipo de microscopía se procede a retirar del microscopio óptico. el condensador de "Abbe". comercializan modelos multipropósitos. Los rayos que atraviesan las partículas que se hayan en la preparación. _ Microscopía de fluorescencia. Como el rayo de luz no penetra en el tubo óptico. que vera como resultado un campo microscópico de color negro (campo oscuro)._ Microscopía de contraste de fase. tubos ópticos. no ilumina por lo tanto los ojos del observador. diseñados de tal manera que puedan ser intercambiables. atraviesan la lámina portaobjetos en forma oblicua como un cono hueco de luz con su vértice hacia abajo. 113 . o las iluminan indirectamente. que cuando se observan las estrella en la noche. crean un efecto que proporcionan la observación de las partículas con un aspecto brillante sobre fondo oscuro. teniendo la función de impedir el paso del haz de luz hacia el área central del condensador posibilitando solamente la entrada de los rayos periféricos. 60 : Condensador de campo oscuro Este tipo de condensador está provisto de un aditamento circular opaco. colocando en su lugar uno de campo oscuro. condensadores. Cualquier objeto colocado en la trayectoria de los rayos luminosos será atravesado por éstos o iluminados indirectamente. los que al refractarse en su interior. etc. de menor diámetro que el orificio posterior que se encuentra ubicado debajo de la lente.

prosigue su trayectoria por el tubo óptico hacia el lente ocular. El método de contraste de fase proporciona que se pongan en evidencia cambios de fase mediante su amplitud lo que hace posible distinguir por contraste las estructuras celulares entre sí y diferenciar a estas de su entorno. Placa de cambio de fase: Es una placa transparente de forma circular. Al no sufrir efectos tóxicos de las sustancias colorantes se mantienen viables.La microscopía de campo oscuro se utiliza para la observación de microorganismos y otros elementos de interés que no resultan factibles de ser coloreados. sí cambian diferenciadamente la fase (dirección) de la onda luminosa. 6l: Aditamentos para la microscopía de contraste de fase: a) Diafragma anular. mientras que los rayos no pasan alrededor del objeto se dispensan. b)Placa de cambio de fases Funcionamiento: Debido a la forma anular del diafragma. no cambian significativamente la amplitud de los rayos de luz que las atraviesan. la luz pasa al condensador en forma de aro. Esta placa se sitúa debajo del lente ocular. pero al tener diferencias en la densidad de sus respectivas estructuras. que tiene en su diámetro medio un aro de vidrio óptico. Diafragma anular: Es un disco opaco. que presenta en su diámetro medio un aro transparente. de manera que al haz de luz que lo atraviesa pasa al condensador como un aro hueco de luz. de unos 2 cm. Al proseguir su trayectoria estos rayos atraviesan el aro 114 . Fig. Microscopía de contraste de fase Las diferentes partes de las células. Este disco se acopla en la parte inferior del condensador. Para la realización de la microscopía de contraste de fase se requiere acoplar dos aditamentos al microscopio ordinario: un diafragma anular y una placa de cambio de fase. la microscopía ordinaria no posibilita que se pueden detectar las diferencias. Como el ojo no es sensible a los cambios de fase por ser muy imperceptibles. obviamente. lo que permite estudiar su motilidad. Al atravesar el objeto.

haciendo factible la realización de exámenes directos en fresco. que tienen la propiedad de absorber la luz 115 . difiere del de otras formas de microscopía óptica. sino que emplea fuentes indirectas de energía luminosa. obtenida mediante la aplicación de ciertos compuestos denominados fluocromos. sombra u oscuridad. Microscopía de fluorescencia El principio de este método. sufren un notable retraso en su velocidad de traslación con respecto a los rayos que transitaron normalmente después de atravesar el objeto. Empleo: Cuando no existen marcadas diferencias en la densidad óptica de las diversas estructuras celulares o el índice de refracción entre las células y los líquidos circundantes no están suficientemente contrastados en cuanto a brillo. en que no utiliza directamente la luz incidente. que posibilitan su observación con una microscopía ordinaria. lo que ocasiona un acentuado contraste de brillo y oscuridad que propicia distinguir por contraste los componentes de la estructura celular. 62: Trayectoria del haz de luz en la microscopía de contraste de fase La placa de contraste de fase amplía significativamente las diferencias entre las ondas luminosas refractadas y las que no lo están. Como resultado los rayos que se refractan para luego pasar por el anillo óptico de la placa de cambio de fase. Fig.de vidrio óptico de la placa de cambio de fase. para observar microorganismos presentes en líquidos igualmente transparentes. sin la aplicación de colorantes.

sin interferir el paso de la luz emitida por el objeto. el espejo debe estar debidamente alineado con el eje del microscopio. 3. mientras que la luz fluorescente lo atraviesa y la imagen virtual 116 - . después de atravesar el filtro primario seleccionado. Condensador de campo oscuro: Para concentrar la luz ultravioleta sobre la muestra y lograr un mayor grado de Fluorescencia. Fuente de luz: Consiste en una lámpara de mercurio o xenón de alta presión que produce con firmeza y fuerza sostenida ondas luminosas en el espectro ultravioleta. con un cambio de longitud de onda. Filtro de barrera: Está situado en el interior del tubo óptico.ultravioleta de onda corta y emitirla posteriormente. en forma de luz fluorescente (fosforescente) a mayor longitud de onda. Filtro primario: Este filtro se sitúa entre la fuente de luz y el condensador y su selección debe estar en correspondencia con el fluorocromo empleado ya que tiene la función de eliminar las longitudes de ondas de la luz. que no sirvan para exitarlo. los rayos incidentes de luz ultravioleta como la fluorescencia generada por los fluocromos. La luz ultravioleta. procedente de la lámpara. Entre los fluocromos más empelados se encuentra la auramina y la naranja acridina que se utilizan para la tinción directa de microorganismos y otros como el isotiocinato de fluoresceína que pueden ser conjugados a anticuerpos y se emplean en técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFA). a través del lente ocular. teniendo la función de absorber la longitud de onda de la luz ultravioleta. Funcionamiento En el caso en que se utilice luz refleja. Mediante este filtro se protege la vista del observador de los efectos de la exposición a las Radiaciones ultravioleta. después de haber interactuado con la luz ultravioleta de onda corta. para que no haya pérdida de energía luminosa. penetra en el condensador de campo oscuro y al salir se refleja oblicuamente sobre el objeto teñido o conjugado con fluocromo el cual absorbe las radiaciones y posteriormente se propaga en una longitud de onda más larga que es visible (fluorescencia). durante algún tiempo. 4. 2. Tanto. La estructura del microscopio de fluorescencia es similar a la del microscopio óptico común. fluorescente sobre fondo negro. atraviesan la lente frontal del objetivo en el tubo ocular. diferenciándose en que dispone de los siguientes aditamentos: 1. donde los rayos ultravioletas son absorbidos por el filtro de barreras. dando como resultado que la imagen del objeto enfocado se vea.

ya que el aceite de cedro es fluorescente. lo que propicia una visión estereoscópica o tridimensional del objeto. MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO El microscopio estereoscópico difiere del microscopio óptico convencional. Precauciones Se pueden emplear lentes oculares y objetivos de uso común. sin ningún tratamiento con fluorocromo. como las espiroquetas y otros agentes microbianos como: Chlamydia trachomatis. microorganismos difíciles de colorear. En la actualidad se fabrican modelos más modernos. Para las observaciones con objetivos de inmersión se debe utilizar un aceite especial. diferencias de coloraciones de diversos tejidos. sino además. no solo en su diseño. provistos de un prisma que refleja la imagen. 117 . así como para la detección rápida de antígenos virales. Diseño Durante muchos años se ha venido utilizando. diseñados para que cada ojo del microscopista observe la imagen ampliada por un lente objetivo común. por ser los mismos fluorescentes. un prototipo de microscopio estereoscópico consistente en el ensamblaje de dos tubos ópticos independientes. siempre que se tenga la certeza de que no estén fabricados con material fluorescentes. desde ángulos diferentes hacia ambas lentes. Cryptosporidium sp. Empleo Este tipo de microscopio posibilita examinar. Giardia lamblia y otros. en el principio de su poder de aumento y en la finalidad de su empleo. Observaciones Mediante este tipo de microscopía se pone de manifiesto.del objetivo es observado a través de la lente ocular con un aspecto fluorescente. desde posiciones diferentes. que alterarían los resultados.

Estos microscopios no poseen condensador ni diafragma. por lo que la imagen ampliada se observará en el campo microscópico en el mismo plano que el objeto real. Principio El principal funcionamiento del microscopio estereoscópico no está basado como en el microscopio óptico en el poder de resolución. proporcionando una iluminación tenue y otra instalada en la articulación que sostiene al sistema de los lentes. no invirtiendo su posición como sucede con el microscopio de uso común. 63 : Microscopio estereoscópico Los lentes objetivos. en cuya porción central se encuentra un orificio de unos 7 cm de diámetro cubierto por un cristal nevado. entre 10x y 40x. generalmente dos. estando estructurado por una base de 4 ó 5 cm de altura que le sirve al mismo tiempo de platina. mientras que el de los lentes oculares oscila de 5x a 10x. lo que proporciona un aumento potencial total. sino en su capacidad directa de aumento. que se utiliza para aproximar o alejar al lente objetivo del objeto a examinar. 118 . una que se haya en la base del microscopio. Este microscopio está provisto de un tornillo único. El sistema de iluminación consiste en dos lámparas. cuyos rayos atraviesan el cristal nevado de la platina. se encuentran montados en el interior de un revolver tubular y se caracteriza por tener un bajo poder de aumento (2x o 4x). articulado a una cremallera. que proyecta la luz en dirección oblicua sobre el objeto dando la posibilidad de observar cuerpos opacos.Fig.

pues pueden desprender la lente del cemento que la fija al dispositivo tubular inutilizable. En caso de em119 .CUIDADO. se corresponda con el requerido para ese microscopio. Cuidado 1. Durante su empleo .Antes de instalarlo a la red eléctrica. que no puede ser resuelto por ningún otro procedimiento que no sea la microscopía. . la suciedad. . seque de inmediato la platina con material absorbente y seguidamente límpiela con un paño de lino fino o gamuza.Ubique el microscopio sobre una mesa o meseta sólida de superficie nivelada. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO Los microscopios son equipos que requieren de un cuidado esmerado para su buen funcionamiento y prolongación de su vida útil. Con esta acción se protege al filamento que puede quebrarse por cambios bruscos de la temperatura si no se toma esa medida. separe el lente objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico. no solo por su elevado costo. Se utilizó lente de inmersión. Las causas que afectan con mayor frecuencia su óptimo estado de funcionamiento y por consiguiente su eficacia son: el polvo. ya que un error en este sentido ocasionaría la ruptura de la lámpara y en el mejor de los casos se produce una disminución de la intensidad lumínica con la consiguiente pérdida de nitidez de la imagen. No utilice el alcohol para estos menesteres.Antes de retirar la lámina. . no permita que se sequen por evaporación ya que pueden formarse costras o sufrir efectos oxidantes que deterioran su construcción y en consecuencia su funcionamiento. Si se trata de un modelo con regulador de intensidad.Si accidentalmente se produce derramamiento de agua. para evitar roces con la lente frontal que pueden dañarla. remueva el aceite empleado con papel para lentes o un paño de tela fina que no ocasione ralladuras. 2.Apague la lámpara. Al concluir su utilización. reduzca la luz antes de apagarla. los fuertes impactos. cerciórese de que el voltaje de la toma. la humedad y los inadecuados métodos de limpieza. . reactivos u otros compuestos orgánicos sobre la platina. Cuando suceda. separándolo ligeramente de la orilla para evitar que accidentalmente pueda caer al piso y dañarse. sino porque resultan imprescindibles en el laboratorio para el examen de diferentes muestras.

limpia la lente frontal del lente objetivo. Del sistema mecánico. un pincel fino y plano. y cubra el microscopio con un tapacete de nylon con el mismo propósito. .El espejo se limpiará con un paño fino. . de ser posible de pelo de camello. no requiriendo cuidados especiales. cerciórese de que el tornillo del cuerpo binocular lo mantiene fijo. si se detectan manchas. que de manera frecuente está ocasionada por la grasa de la pestañas y los cosméticos. que sean muy susceptibles a la erosión. . para remover el polvo. Después de realizada la limpieza de la manera explicada colóquela nuevamente en el tubo ocular y compruebe que las manchas han desaparecido. es que está sucia. de ahí. en ese caso. solo a un personal especializado. si persisten. con igual cuidado externamente. las manchas rotan con la lente. desenrosque el tubito portador de las lentes y proceda cuidadosamente a su limpieza. sin desarmar el dispositivo. volviendo a colocar las lentes en la misma posición en que estaban.plear xilol. Si después de realizada esta operación la suciedad persiste.La limpieza de las lentes del condensador se hará.Para detectar la presencia de polvo o suciedad en las lentes oculares. correspondiendo. por estar muy impregnado el aceite. Sujete el microscopio con una mano por la base y con la otra agarre firmemente el brazo. humedezca ligeramente el paño.El vidrio con que se fabrican las lentes es blando. Cuando se requiera su limpieza se debe emplear. 2.Si tuviera que trasladar el microscopio para otro sitio. basta con observar a través de ellas el campo microscópico. . . para evitar que se salgan los lentes oculares y puedan dañarse.Coloque la tapa a cada lente ocular para evitar que se afecte por el polvo. realizando el traslado todo el tiempo con el equipo en posición vertical. 120 . Del sistema óptico. pues de lo contrario se corre el riesgo de que sufran un daño irreparable. que se utilice exclusivamente para eso o un paño de lino fino o gamuza para la suciedad. La remoción del aceite de inmersión ya fue tratada en el acápite de cuidado. puede deberse a una insuficiente limpieza o que el polvo ha penetrado el interior del lente. . no lo empape. absteniéndose de contactar con el diafragma anular que se haya en su interior. Limpieza 1. cuyo soporte no debe abrirse nunca. haga rotar el lente sin sacarlo del tubo ocular. para evitar que se produzca el mismo efecto que con el empleo del alcohol.

a través de una imagen virtual. pudiera proporcionar más de 2000x. ¿A qué se debe esta limitación?.Si desea guardar los microscopios en sus cajas. - MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Como ya se explicó en la parte inicial de este capítulo. limita esa posibilidad. la ampliación del objeto real. .La base. pero se diferencian en que el microscopio electrónico en lugar de luz incidente o reflejada utiliza electrones y en el de lentes de vidrio campos magnéticos. ya que partículas separadas por menos de 200 m/µ escapan a su poder de resolución. El principio del microscopio óptico y el electrónico es el mismo. proporcionar una imagen ampliada del objeto real para hacer posible su observación a través del ojo humano.No debe utilizarse alcohol para limpiar el microscopio pues tiende a deteriorar la pintura. se logra con el microscopio óptico. . Se limpiarán con un paño. Aunque se emplearan lentes de vidrio. platina. removerla con xilol o gasolina. Sin embargo los electrones de alta energía tienen una longitud de onda muchísimo más corta que no exceden 0. deben ser colocados en dispositivos con tapa de rosca para preservarlos del polvo. etc.5 m/µ lo cual le proporciona un poder de resolución que permite la observación de partículas por menos de una millonésima de mm. proporcionada mediante una combinación de lentes y luz visible con un alcance máximo de 2000x. Estructura del microscopio electrónico En la actualidad se fabrican diferentes modelos de microscopios electrónicos. .El equipo debe recibir asistencia técnica especializada cada 6 meses. . utilizar un paño fino impregnado ligeramente con aceite de máquina exentos de ácidos. brazo. . con el que se removerá el polvo y la suciedad de sus superficies. . .Para pulir las partes metálicas lustrosas.Lubricar periódicamente las cremalleras con grasa de buena calidad libre de ácidos. la longitud de onda de la luz visible que es de 400 a 700 m/µ . 3.Los lentes que no estén en uso. pero todos están constituidos básicamente por tres partes: 121 . cerciorarse de que éstas no tenga humedad que creará un ambiente muy propicio para que las lentes se contaminen con hongos que resultan muy difíciles de remover.La grasa vieja que se ha solidificado o adherido. Mantenimiento. cuya combinación.

64: Microscopio electrónico: a) Filamento de tungsteno. Una bomba de vacío. 2. de arriba hacia abajo. Un tubo de rayos catódicos. Por la parte externa. e) Muestra. diversas pa122 . g) Tubo óptico con lente ocular. d) Portamuestras. los siguientes componentes que constituyen su sistema funcional: Filamento de tungsteno. el tubo presenta en el tercio superior un soporte de atril para la colocación de la preparación y en dirección descendente. c) Bomba de vacio. Pantalla fluorescente. b) Condensador magnético circular. i) Panel de mandos. f) Proyector de imagen intermedia. h) Pantalla fluorescente. Fig. Proyector de imagen intermedia. Condensador magnético circular. Un panel de mandos. En su interior se encuentran instalados. Tubos de rayos catódicos Consiste en un tubo cilíndrico de más de 1 metro de largo por aproximadamente 50 cm de diámetro.1. Porta muestra. Objetivo magnético circular. que se haya colocado en posición vertical. 3.

sometiendo el filamento de tungsteno a una potencia de 30 a 150 kv. muy próximo a la base del tubo de rayos catódicos. 123 .000x o más. Bomba de vacío Está instalada en el tercio superior del tubo. para seguidamente concentrarse sobre el objeto y atravesarlo. mediante la bomba de vacío. para observar la pantalla fluorescente. para hacer factible la movilización de los electrones. se encuentra acoplado un anteojos binocular centelleante. Se coloca la preparación sobre el porta muestras. 5. 2. sin pérdida excesiva de detalles. El proyector de imagen intermedia.000 veces o más. Funcionamiento 1. Se extrae el aire que se encuentra en el tubo. con lo que se propicia que los electrones generados por el calentamiento del filamento se propaguen. donde ambas partes se encuentran instaladas. los cuales se encuentran impedido de desplazarse en su presencia. amplia la imagen unas 250. Encender el equipo. 6.000. 3.1 mm). muy próximo a la base. el ajuste de los campos magnéticos y el funcionamiento de la bomba de vacío. penetrando en el condensador magnético.lancas y manivelas que se emplean para corregir el enfoque. la cual debe ser extremadamente fina (menos de 0. En la pared frontal presenta una pizarra con diversas escalas metradas que permiten monitorear y ajustar el funcionamiento del equipo. ampliando su imagen hasta 2000x en forma análoga a como lo hace el lente objetivo del microscopio óptico. con un funcionamiento similar al del lente ocular del microscopio óptico. de lo contrario resultaría opaca a los electrones no pudiendo ser atravesadas por éstos. 4. Papel de mandos Está ubicado sobre la mesa de trabajo. La imagen puede finalmente observarse directamente sobre la pantalla fluorescente o proyectarse sobre una placa fotográfica si se desea el registro permanente de la imagen. con lo que se obtiene un aumento total de 1. En la parte inferior del tubo. La imagen formada por la pantalla fluorescente es ampliada de 4 a 6 veces por el anteojos binocular.

Desventajas En contraposición a su elevado poder de resolución.Empleo 1.Para la observación de estructuras bacterianas y de otros microorganismos. 3. 10. 6. Sí Ud. ¿Cuál es la función del diafragma? 7. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión? 9. CUESTIONARIO 1. Entiende por poder de resolución? 12. ¿Con qué objetivo se utilizan los filtros? 11. Para la observación de partículas víricas. monta una preparación en láminas en el microscopio óptico y la enfoca. emplea primero un lente objetivo de 20x y posteriormente un lente objetivo de 40x ¿Cuál de los dos le proporcionará un campo microscópico más amplio? Fundamente su respuesta. 16. 2. Precise cuál es la diferencia funcional entre el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. 14. ¿Qué Ud. 124 . Describa paso a paso. 5. 15. Clasifique los diferentes tipos de lentes objetivos. ¿Cuál es la función del revolver? 4. Describa como se forma la imagen del objeto observado con el microscopio óptico. ¿Cuál es el poder de resolución del microscopio óptico? 13. la microscopía electrónica tiene la ventaja de que la acción de los electrones resulta letal para los microorganismos por lo que no es posible observarlos en estado viable. Nombre las diferentes partes del sistema mecánico del microscopio óptico. Describa la forma de los lentes que se encuentran en el interior del condensador de campo brillante. Describa la trayectoria que específicamente va siguiendo el haz de luz al atravesar el condensador. como Ud. 2. Relacione en el mismo orden en que se encuentran. las diferentes partes del sistema óptico. Describa la forma que tienen las dos caras del espejo y especifique cuando se utiliza cada uno de ellas. 8. el objeto a observar y los lentes objetivo y ocular.

¿Describa las características estructurales y funcionales del condensador de campo oscuro? 18. ¿Con qué finalidad se realiza la observación a través del microscopio estereoscópico? 23. 20.17. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja más significativa del empleo de la microscopía electrónica? 125 . Describa la estructura del microscopio estereoscópico. ¿Con qué particularidad se observa la imagen del objeto a través del microscopio estereoscópico? 22. 21. ¿Cuál es la diferencia estructural entre un microscopio óptico y microscopio electrónico? 24. Explique las funciones del filtro primario y el filtro de barrera que se utiliza en la microscopía de fluorescencia. ¿Cuáles son las funciones que respectivamente tienen el diafragma anular y la placa de cambio de fase en la microscopía de contraste de fase? 19.

CAPÍTULO 9
INSTRUMENTOS MECÁNICOS
INTRODUCCIÓN
La cantidad y variedad de investigaciones que se realizan diariamente en los laboratorios de microbiología clínica , han tenido una marcada tendencia a incrementarse progresivamente en los últimos años, en la misma medida en que estos servicios se han ido extendiendo a todas las unidades del sistema Nacional de Salud. La introducción de instrumentos mecanizados y automatizados para la realización de los diferentes procederes han venido a suplir en alguna medida los métodos tradicionales, con lo cual se ha logrado no sólo una mayor productividad, precisión y ahorro de recursos materiales y humanos, sino que su aplicación, interpone una barrera de bioseguridad que reduce significativamente los riesgos potenciales a los que se ven expuestos los manipuladores. La mecanización sustituye la labor del hombre, mediante el empleo de instrumentos técnicos, regulados por éste, mientras que la automatización comprende además un control intrínseco del instrumento mecanizado que ha sido diseñado para que se autorregule. En los laboratorios de microbiología se utilizan diversos instrumentos de este tipo, pero sin lugar a dudas uno de los empleados con mayor frecuencia es la pipeta mecánica.

PIPETAS MECÁNICAS
En la actualidad se comercializan varios tipos y modelos de pipetas mecánicas. Entre las más empleadas en los laboratorios de microbiología se encuentran: la pipeta de pistón clásica del tipo "Marbung", la del tipo "Jena" y la "Multicanal", que forman parte del sistema micro analítico Eppendorf. En estos tipos de pipetas el líquido se carga y descarga, mediante el accionar manual de la pipeta a una boquilla finamente cónica y puntiaguda de material plástico, que se inserta en el extremo inferior de la pipeta, de manera que el líquido aspirado pasa a la boquilla, pero no entra en ningún momento en la pipeta lo que permite su empleo reiterado, mediante el intercambio en cada ocasión de la boquilla plástica deshechable. 126

El índice de error, dado por los fabricantes, para este tipo de pipeta es de sólo un 1%. Estas pipetas se emplean para medir volúmenes de líquidos en el rango de microlitros. Un microlito es equivalente a la millonésima parte de un litro o la centésima parte de 1 mL.

PIpeta tipo Marburg
Este tipo de pipeta es de pistón fijo, estando diseñada para cargar o descargar solamente, un volumen determinado en microlitros, el cual está indicado mediante un número impreso en la parte superior de la pipeta. Como cada pipeta de este tipo, está limitada para aspirar o dispersar exclusivamente, un volumen fijo para el que ha sido diseñada, los fabricantes la comercializan en serie de: 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 900 y 1000 mL. Estructura externa

Fig. 65 : Pipeta mecánica tipo Marburg

Está estructurada con una cánula cilíndrica de material plástico de unos 2 cm de diámetro, estriada transversalmente para facilitar la sujeción manual. La parte superior de la cánula tiene insertada una anilla plástica prevista lateralmente de un pequeño saliente plano en posición horizontal, que sirve de tope al dedo índice, una vez que la pipeta esté empuñada. Por encima de la anilla, la pipeta se estrecha ligeramente en forma de un cono cortado por su vértice, en cuya pared se encuentra impreso un número que indica el volumen fijo que carga esa pipeta y sobre el número una franja que circula su diámetro, de color amarillo o azul, de varios mm de ancho. La franja de color amarillo distingue a las pipetas diseñadas para cargar 100 microlitros o menos y las de 127

color azul a las que se cargan más de 100 y hasta 1000 microlitros, teniendo esta última mayor diámetro. En el extremo superior de la pipeta se encuentra un botón cilíndrico insertado calibradamente en el orificio que se haya en la parte más estrecha del extremo distal cónico. Por debajo de la cánula se encuentra insertado un fino vástago cilíndrico, ligeramente cónico de material plástico, de unos 5 mm de diámetro, por cuyo extremo se inserta la boquilla plástica deshechable, cuyo color será igual al de la franja que circula la parte superior de la pipeta. Estructura interna

Fig. 66: Estructura interna de la pipeta mecánica tipo Marburg: a) Botón; b) Pistón cilíndrico; c) Muelle; d) Cerrador circular; e) Cilíndro; f)Pieza que cierra herméticamente la pipeta

En el interior de la pipeta se encuentra el sistema mecánico que hace posible, al ser accionado, su funcionamiento, interaccionando las diferentes piezas que lo conforman, de la siguiente manera: el botón que se encuentra externamente en la parte superior de la pipeta, contacta internamente con la parte superior de un pistón cilíndrico que se encuentra rodeado por un muelle flexible, cuyo extremo inferior contacta con el cerrador circular, una especie de zapatilla circular, que por su lado opuesto queda junto a una pieza cilíndrica que en las pipetas de menor calibre tiene insertado centralmente un mandril (aguja), para finalmente terminar en una pieza tubular que completa el sistema. Principio de su funcionamiento 1. Se procede a insertar ajustadamente una boquilla plástica deshechable en el extremo del vástago que sea del mismo color (amarillo o azul) que el que tiene la franja que circula el extremo superior de la pipeta. 128

Fig. 67: Ajuste de la boquilla plástica deshechable a la piapeta

2. Se empuña la cánula, de manera que el borde del dedo índice quede en contacto con el saliente de la anilla que se haya sobre la cánula y la yema del dedo pulgar sobre el botón que se encuentra en el extremo superior de la pipeta.

Fig. 68: Manera de empuñar la pipeta

3. Al presionar con el dedo pulgar el botón hacia abajo, hace que se comprima el muelle, lo que provoca, que el pistón y el resto del sistema mecánico desciendan. 4. Sin dejar de presionar el botón, se introduce la punta de boquilla deshechable, varios mm en el interior del líquido que se desea extraer y se procede a aflojar suavemente la presión del dedo. Esta acción hace que todo el sistema asciende hasta ocupar su ubicación normal, provocando la succión que hace que pase al interior de la boquilla, un volumen exacto de líquido, que será específico para cada pipeta de pistón fijo. 129

5. A continuación se introduce la punta de la boquilla en el tubo de ensayo de manera que quede sobre la pared interna del tubo, procediendo a presionar el botón para verter el volumen fijo de líquido. 6. Si se desea tomar una muestra diferente, basta con intercambiar la boquilla deshechable y repetir la operación.

Fig.. 69: Procedimiento para verter el líquido en el tubo receptor Nota: El intercambio de boquilla debe realizarse con la mano enguantada, depositando la utilizada en un vaso de precipitado con solución desinfectante.

Pipeta del tipo Jena

Fig. 70: Pipeta tipo Jena: a) Botón giratorio; b) Ventanilla con escala en microlitros

130

La particularidad estructural que tiene este tipo de pipeta es que está provista de un botón giratorio en su parte superior. con pesos específicos diferentes. aunque difieren en el diseño. . de una ventanilla rectangular provista en su interior de una escala numérica que va aumentando o disminuyendo el valor de los dígitos en la medida en que el botón sea girado hacia delante o hacia atrás. ubicadas unas al lado de las otras. para que aspire o disperse un volumen deseado.El principio funcional es similar al de la pipeta del tipo Marburg. lo que le da un aspecto de rastrillo. lo que propicia que se pueda ajustar el grado de succión de la pipeta dentro de un determinado rango. que se encuentre en suspensión. microorganismos. Esta pipeta dispone además en su parte superior. Cuando se acciona la pipeta. con lo que consigue variar su nivel de ubicación.El agitador. etc. mediante el cual se hace descender o ascender al sistema mecánico. en lugar de una sola boquilla deshechable. . están diseñadas para que se le puedan insertar 8 o más boquillas. que son accionados mediante energía eléctrica.Las centrífugas. partículas sólidas. De esta manera se ajusta previamente la pipeta para que trabaje a un volumen deseado en números externos y décimas de microlitros. También puede servir para separar líquidos miscibles mezclados entre sí. muy próximo al botón giratorio. pero difieren en que. células. teniendo en común. como 131 . Entre los más empleados se encuentran los siguientes: . mediante una sedimentación forzada en el fondo de un tubo de ensayo. Las centrífugas La centrifugación es un procedimiento mecánico mediante el cual se pueden separar de un líquido. comercializándose distintos modelos. EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS Los equipos electromecánicos son utilizados en el laboratorio para la preparación de diferentes muestras o como parte de la realización de diversos procederes.El rotor. cada una de las boquillas succiona o dispersa el mismo volumen de líquido de manera simultánea. compactándolos. Pipeta del tipo multicanal Este tipo de pipeta se sustenta en el mismo principio funcional.

En el extremo de cada 132 . b) Portatubos. donde los compuestos que lo forman. pero todas tienen el mismo principio funcional. Diseño industrial de las centrífugas Fig.Cabeza: Es una pieza metálica. 1.las emulsiones. como tubos pueda centrifugar. en forma de barra más o menos plana. Como la centrífuga puede estar diseñada para 4. Partes de la centrífuga Fig. 71: Esquema de las centrífugas En la actualidad se fabrican diversos modelos de centrífugas. no pueden ser separados mediante la gravedad (sedimentación) o la filtración. 8 ó más tubos (siempre en número par) el cabezal adoptará la forma que tienen los rayos de una carreta con tantas barras fijas en posición horizontal. que se inserta mediante un orificio central al eje del motor. formando una cruceta cuando se trata de centrífugas de dos tubos. 6. 72: a) Cabezal. La mayoría de las centrífugas son eléctricas y solo algunos modelos ya en desuso se accionan manualmente.

tengan el mismo peso. lo que le permite adoptar una posición horizontal cuando la centrífuga alcanza altas velocidades. que se sustenta que en todo el cuerpo que se mueve en torno a un punto central.p. Cuando no se disponga de este instrumento. la cual será directamente proporcional a su masa. quedando en posición oblicua respecto al eje. generalmente de color rojo. lo que ocasionaría un desbalance que provocaría vibraciones y sacudidas de la centrífuga con la consiguiente ruptura de los tubos y el desajuste del equipo. un taco de goma que sirve de amortiguador a los tubos de vidrio durante la centrifugación. que indica cuándo el equipo está encendido. uno a cada lado. se desarrolla una fuerza que tiende a separarlo de dicho centro. la fuerza centrífuga sería desigual. 3. Balance de los tubos Para el buen funcionamiento de la centrífuga es indispensable que los tubos queden colocados en una posición diametralmente opuesta. Los porta tubos de angulación son fijos. por su parte interna. Principio técnico Está determinado por la fuerza centrífuga. ya que de lo contrario. Para lograr un buen balance de los tubos se puede utilizar un nivelador de tubos. Reloj de intervalo: Se utiliza para regular el tiempo de cada centrifugación.m). 133 . deberá emplearse el mismo tipo de tubo y asegurarse de que el volumen de líquido en ambos sea similar. se deberá llenar en segundo tubo con agua. determinándose la igualdad en peso mediante la sincronización de su equilibrio.barrera se inserta un porta tubo el cual puede ser de angulación o de suspensión. 2. quedan articulados al cabezal. con similares requisitos y ser colocado en el punta tubo que se encuentra en el lado opuesto que fuerza el que purza la muestra. 6. Bombillo piloto: Es un pequeño bombillo. 5. en suspensión. Si se va a centrifugar una sola muestra. diseñada para colocar dos tubos. que se utilizan para introducir los tubos de vidrio que contienen el material que va a ser centrifugado. en tanto que los segundos. Porta tubos: Son tubos metálicos. Estos porta tubos tienen colocado en el fondo. que es una especie de balance. Motor eléctrico: Tiene la función de imprimir movimientos de rotación al cabezal mediante velocidades controladas por medio de un reóstato que varía la intensidad del flujo eléctrico. Tacómetro o velocímetro: Se utiliza para ir registrando la velocidad de rotación del cabezal en revoluciones por minutos (r. 4.

para evitar la exposición a los aerosoles. Conectar el equipo a la red eléctrica 5. Cerrar la tapa de la centrífuga. Los tubos colocados en lados apuestos. Medidas de cuidados y conservación 1. 10. 9. Introducir los tubos con las muestras en el interior de los porta tubos. lo cual se puede determinar observando el velocímetro. Accionar el interruptor para encender el equipo. 73 : Nivelador de tubos Funcionamiento 1.p. teniendo especial cuidado de que quedan diametralmente apuestos (uno frente al otro) están debidamente balanceados en peso. desconéctela de la red eléctrica y ciérrela. 3. 2. Extraiga los tubos. 4. Girar el botón del reloj de intervalo. apague la centrífuga.Fig. proceda a apagarlas tan pronto concluya el tiempo previsto de centrifugación. Si se hubiera centrifugado material contaminado. espere 2 ò 3 minutos antes de abrir la tapa. Si la centrífuga no tuviera reloj de intervalo. Girar el botón del velocímetro lentamente. 2. 8. 134 . hasta que indique el tiempo de centrifugación deseado. Cerciorarse de que el botón que regula la velocidad del tacómetro o velocímetro este en "0". de manera que vaya marcando gradualmente la velocidad (r. Llenar los tubos hasta 1 cm por debajo del borde superior.m. 7. deben tener el mismo tamaño y peso. Espere a que la centrífuga se detenga. 6. Abrir la tapa de la centrífuga. 11.) en el tacómetro hasta alcanzar la deseada.

Diseño del equipo Fig. Mide aproximadamente 30 cm2 x 15 cm de altura. estando provisto de una superficie plana de unos 35 cm2. sobre la cual se encuentra una plataforma giratoria de unos 30 cm2.3. que la que se puede conseguir por procedimientos manuales. En el laboratorio de microbiología se utiliza regularmente para mezclar el suero con la emulación de antìgeno para las pruebas serologícas de V. 4.R. 74: El rotor: a) Superficie plana giratoria. lográndose una mejor homogenización. 135 . Cuando se produzcan rupturas de tubos. procediendo a la eliminación de los restos de vidrio y limpiándolos escrupulosamente. 5. los porta tubos serán extraídos. EL ROTOR El rotor se utiliza para mezclar mecánicamente las muestras con los reactivos.L.D. Cualquier material que se derrame sobre la centrífuga debe ser eliminando de inmediato. Periódicamente debe limpiarse el interior de la centrífuga con un paño húmedo para eliminar el polvo y la suciedad. b) Botón del "timer". c) Botón del velocímetro El rotor es un pequeño equipo eléctrico que tiene la forma de un cajón.

el primero corresponde al "timer" o reloj de intervalos y el segundo al velocímetro.En la pared frontal del equipo. procediendo a retirar las muestras. 3. 2. para evitar su desplazamiento por colisiones accidentales. impide que esa situación ocurra. generalmente de color rojo. rodeados en todo su perímetro por una escala numérica. 4.m. Cuidado y conservación 1.). Concluido el tiempo. Cualquier material que se derrame sobre la superficie de la plataforma giratoria o el equipo. En el laboratorio de microbiología tiene diversas aplicaciones. Cuando se detecte alguna diferencia se debe engrasar el equipo y si eso no resuelve el problema solicitar el servicio de un especialista. Conecte el equipo a la red eléctrica. 5. se encuentran insertados dos botones. 3. entre las empleadas se encuentra la homogenización de esputos. EL AGITADOR El agitador se utiliza para mezclar muestras muy difíciles de homogenizar por procedimientos manuales debido a su densidad o mucosidad. Se debe verificar sistemáticamente que las rotaciones de la plataforma giratoria se correspondan con la indicada en el velocímetro. Funcionamiento 1. Muy próximo a estos botones se encuentra un pequeño bombillo. que al ser colocada adecuadamente. hasta hacerlo coincidir en la escala numérica con el tiempo deseado de rotación. 136 . llevar el botón del velocímetro a "0" y desconectar el equipo de la red eléctrica. Como la plataforma giratoria no queda fija. que indica cuando el equipo está encendido. algunos modelos disponen por uno de sus laterales de una presilla.p. Coloque la cristalería con la muestra sobre la superficie de la plataforma giratoria. Accione gradualmente el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir en la escala con la velocidad de rotación por minutos (r. 2. el equipo se apagara automáticamente. Accione el botón del "timer". debe limpiarse de inmediato.

frontales y de retroceso en forma continua a velocidad regulable. 4. Al igual que el rotor. un velocímetro para determinar el desplazamiento por minuto y un bombillo piloto. propiciando mediante las sacudidas que ocasiona. Coloque las gradillas con las muestras sobre la plataforma oscilatoria y fíjelas con los dispositivos que dispone el equipo para que las gradillas no se vayan a caer cuando se le aplique el movimiento propio del equipo. con capacidad suficiente para que puedan ser colocados en su superficie varias gradillas. Concluido el tiempo de agitación. retirar las gradillas de la plataforma. el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir con la velocidad deseada. Funcionamiento 1.Diseño del equipo Fig. 3. Gire el botón del "taimer" hasta hacerlo coincidir con la escala que indique el tiempo de agitación deseado. presenta en su superficie una plataforma. c) Botón del velocímetro Este equipo se fabrica de diferentes tamaños. 2. La mayoría de los modelos tienen forma rectangular. se desplaza con movimientos cortos. 5. Cuidado y conservación Similar a las que se aplican al rotor. haga un girar en retroceso el botón del velocímetro hasta ubicarlo en "0" y desconecte el equipo de la red eléctrica. lentamente. que en lugar de rotar . Conecte el equipo a la red eléctrica. Gire. la mezcla u homogenización de las muestras. Posee igualmente un "timer". b) Botón del "timer'. 137 . 75: El agitador: a) Plataforma oscilante.

POTENCIOMETROS Los potenciómetros o pHmetros. para lograr su desarrollo óptimo. En el trabajo microbiológico. aunque el tamaño varia de acuerdo al modo comercializado por los diferentes fabricantes. donde el pH debe ser ajustado de acuerdo a los requerimientos de los diferentes grupos y géneros bacterianos que pretendamos cultivar. Botón para mover la aguja e indicar en la escala el pH de la solución buffer. En la pared frontal o sobre la superficie se haya un galvanómetro provisto de una escala impresa del 0 al 14 que se complementa con una aguja insertada por su parte posterior a un pequeño eje situado en su centro y borde inferior. por estar diseñados para determinar las concentraciones de iones hidronios que posea. Debajo del galvanómetro se encuentran articulados al menos tres botones giratorios: 1. 3. Este botón se hace girar según se requiera hacia la posición STD. puesto que el grado de tolerancia a la acidez o a la basicidad resulta diferente para cada uno de ellos. resulta primordial en diversos procederes. 2. como por ejemplo: en la elaboración de medios de cultivo. 76 : Potenciómetro: a) Eléctrodos.BY (En espera) o hacia la posición indicada con la palabra READ (Lectura) 138 . Botón indicador de la temperatura del potenciómetro. b) Galvanómetro Los potenciómetros tienen la forma de una caja rectangular. son instrumentos eléctricos que se utilizan para medir el pH de una disolución. Botón de lectura. lo que permite conocer con precisión su grado de acidez o basicidad. la determinación del pH de una disolución. Estructura Fig. midiendo unos 30 cm2 x 8 cm de ancho.

permaneciendo inalterado independientemente de la concentración de iones hidrontes o hidroxilos que contengan la disolución. el pHmetro tiene articulado en posición vertical un soporte universal metálico. Electrodos Concepto: Los electrodos no son mas que el polo (Positivo: Ánodo-Negativo: cátodo) de una pila eléctrica. Electrodo de referencia: Generalmente presenta un mayor diámetro y se fabrica con calomel (Hg2 Cl + K Cl) un material estable. en contacto con el alambre se encuentra el material sensible a los cambios de pH. cuya porción terminal inferior puede ser redondeada. mediante el empleo de las pilas voltais preparadas con los electrodos que marcan la diferencia de potenciales entre ambos. Electrodo indicador: En su extremo distal.() de las disoluciones a investigar. 2. cuyo extremo terminal queda en contacto con el material sensible o indiferente a los cambios de pH. provisto de una presilla habilitada para la colocación y sujeción de dos electrodos. En los pHmetros modernos.5cm de diámetro. quinhidrona. mas afinada o en forma de un pequeño bulbo redondeado similar a un densímetro. Tipos de electrodos 1. Estructura de los electrodos del potenciómetro o pHmetro: Consisten básicamente en un tubo de vidrio de unos 10 ò 12cm de largo x 1 o 1.Por el lateral derecho. 139 . El otro extremo del alambre queda empalmado a un cable eléctrico que se conecta en el fondo del equipo.m. El electrodo transforma la energía química en energía eléctrica.e. El tubo es atravesado longitudinalmente por un alambre de platino. en consecuencia la fuerza electromotriz por la celda electroquímica es comparada con la del potenciómetro y la diferencia es medida en voltios. como por ejemplo: hidrógeno. para ser convertida y presentada por el galvanómetro con un valor de pH. Ambos electrodos se unen mediante puentes salinos (K CL o NH4 NO3) cuando se acciona el equipo Principio funcional Se basa en la medición de las fuerzas electromagnéticas (f. el galvanómetro ha sido sustituido por una escala digitalizada. Etc.

Solución Buffer: Las soluciones buffer o amortiguadores o tampón como también se les conocen están compuestas por dos o más sustancias que evitan la producción de cambios significativos en la concentraciones de iones hidrionios. Procedimiento para el manejo del potenciómetro Estandarice el aparato 1. 3. Sumerja los electrodos en una solución buffer de pH conocido. Una disolución es ácida cuando la cantidad de iones hidrionios (H30+) es mayor que la de iones hidroxilo (0H-) y viceversa. Accione el botón y haga coincidir la aguja en el número 7 de la escala de pH. (por ejemplo: pH 7). aun cuando a dicha solución se le agregue un ácido o una base fuerte. Conecte el equipo a la red eléctrica y asegúrese de que el botón se encuentre en la posición STD. Extraiga los electrodos de la solución buffer y proceda a enjuagarlos en un recipiente que contenga agua destilada. el pH no es otra cosa que el logaritmo inverso de la concentración de iones hidrógenos en una disolución. ya que las sustancias ácidas ceden electrones y por consiguiente retienen hidrógeno en tanto que las básicas son capaces de aceptar protones. Cuadro 6: Gráfico de logaritmo inverso de iones hidrógeno.BY.Medición del pH La medida del pH es una forma convencional de indicar la concentración de iones hidrionios o de iones hidroxilo en una escala del 0 al 14. 140 . 2. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 10-14 _________________________10-9________________________10-0 Ácido Alcalino Por lo tanto.

13. CUESTIONARIO 1. 5. ¿Cuál es la diferencia funcional entre la pipeta tipo Marburg y la pipeta tipo Jena? ¿Qué característica particular presenta la pipeta multicanal? Fundamente porque causa el empleo de las pipetas mecánicas. La aguja oscilará. el pH. resulta favorable para la bioseguridad del laboratorio. 8. Tome la temperatura de la solución donde se medirá el pH y accione el botón indicador de temperatura del potenciómetro. 141 . ¿Cuál es la función de tacómetro? ¿Qué requisitos deben tenerse en cuenta al colocar los tubos en la centrífuga? Explique en orden cronológico. 12.BY a READ. 6. Accione el botón cambiándolo de la posición STD. Nombre los diferentes tipos de pipetas mecánicas que usted conozca. si lo prefiere utilice como referencia la temperatura ambiente. en lugar de tomar la de la solución. 9. ¿Cuáles son las ventajas de la mecanización y la automatización sobre los métodos tradicionales de laboratorio?. los pasos que usted debe dar para realizar una centrifugación. Lectura 1. 15. 7. Si se requiere realizar una nueva lectura lave los electrodos previamente con agua destilada. ¿Qué relación existe entre la banda coloreada de la parte superior de la pipeta Marburg y el de la boquilla desehechable? Describa como se activa el sistema mecánico de la pipeta cuando se ejerce presión sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. 14. 10. 4. 2. ¿Con qué objetivo se utilizan las centrífugas en el laboratorio? ¿En qué radica la fuerza centrífuga? Describa la estructura del cabezal de las centrífugas. 11. 2. hacia la izquierda o la derecha indicando en la escala. También. Describa la estructura de la pipeta mecánica tipo Marburg. 3. Describa como opera la pipeta Marburg cuando se retira la presión del dedo sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta.4. Proceda a sumergir los electrodos en la solución cuyo pH se desea determinar.

¿Para qué se utiliza el potenciómetro en el laboratorio? 23. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del agitador? 22. Explique como usted estandariza el potenciómetro 26. ¿Qué es lo que marca el galvanómetro del pHmetro? 25. ¿Para que se utiliza el rotor en el laboratorio? 18. 17. ¿Para qué se utiliza el agitador en el laboratorio? 21. Haga referencia a los cuidados que debemos observar para el buen funcionamiento y cuidado de la centrífuga. 142 .16. Describa los pasos que debe efectuar para determinar el pH de una disolución con el empleo del pHmetro. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del rotor? 19. ¿Cuál es la diferencia funcional entre los diferentes tipos de electrodos del pHmetro? 24. ¿Qué mide el velocímetro del rotor? 20.

que van desde las que se utilizan para medir el peso en tonelada hasta las que se emplean para medir con precisión fracciones de Mg. Gramo Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Ejemplo para pesar la masa de . Estructura bacterianas Un virus Una molécula Un átomo PRINCIPIO El funcionamiento de las balanzas se sustentan en el principio físico de las palanca de primer grado. Tabletas de medicamentos.. Grano de polvo o gota de un liquido. Unidades de medición micrometricas. Unidad básica (Gramo) Unidad micro métrica Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Atogramo Equivalente a la Milésima parte de un .. Existen en el mercado múltiple tipos y modelos de balanzas.. en las que el punto de apoyo se encuentra exactamente entre el punto de potencia y el punto de resistencia. DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS Las balanzas que se utilizan corrientemente en los laboratorios de microbiología clínica son las granatarias y las analíticas digitales. Ejemplo:el cachumbambé. mediante la comparación. 143 .. con piezas de peso certificado denominadas pesas. los cuales están diseñados para diversas aplicaciones. ya que las de precisión o analíticas de tipo mecánico o eléctrica se emplean solo ocasionalmente.CAPÍTULO 10 BALANZAS INTRODUCCIÓN Las balanzas son instrumentos que se utilizan para medir el peso relativo de los cuerpos.

que al no estar topados en su interior posibilitan que la barra vertical penetre aun mas. las vibraciones o el polvo circulante puede influir en la determinación del peso real. que le sirve de punto de apoyo. plana o cilíndrica. en posición horizontal. Sobre el extremo superior de las barras verticales se encuentran atornilladas dos planchuelas metálicas de unos 2 cm de ancho. 77: Balanza granataria de dos platillos(Balanza de Roberval) Esta estructurada por dos planchuelas paralelas de acero. Balanza de dos platillo (Balanzas de Roberval) Fig. las balanzas granatarias son empleadas cuando no se requiere conocer con precisión el peso del objeto. determinados factores como: las corrientes de aire. si el peso del objeto es superior al de las pesas que se hayan en el otro platillo. con la que se puede determinar mecánicamente. los resultados que se obtengan serán dudosos. Se fabrica dos variantes de balanzas granatarias. de unos 30 cm de largo. formando una cruz con los extremos ligeramente curvados hacia arriba. de menos peso que el señalado. 144 .1 a 500g o más. queda introducido en un orificio existente en ambos extremos de la base. Cualquier objeto que se pretenda pesar con este tipo de balanza. ubicada en el centro de la balanza. el peso de un cuerpo que se encuentra entre 0. mientras que su extremo inferior. al tipo de balanza. Las barras horizontales quedan articuladas exactamente por su posición media. que sirven de soporte para la colocación de los platillos. como por ejemplo: para determinar el gramaje de un medio de cultivo deshidratado en polvo. en posición vertical. las de dos platillos y las de un platillo. ya que por ser demasiado ínfimo.Balanzas granatarias Se denomina así. formando un paralelogramo rectángular. mediante un pasador al extremo superior de una columna sólida. articuladas por sus respectivos extremos a una barra metálica.

Ajuste el fiel de la balanza a "0".La barra o planchuela que queda frente al manipulador esta grabada con una escala metrada en gramos. vidrio reloj. etc) pesándolo previamente. por ejemplo 5-5 ò 4-4. para lo cual debe observar como la aguja oscila libremente sobre la escala a ambos lados del "0". vaso de precipitado. siendo el resto de la estructura similar. Funcionamiento Antes de efectuar la pesada: 1. El fiel en forma de aguja esta articulado por su extremo inferior a las barras horizontales. Cerciórese de que los platillos estén limpios. 3. utilice un recipiente adecuado (Papel. perpendicularmente a la columna de la balanza. cápsula de porcelana. quedando en posición vertical. Algunos modelos de este tipo de balanza. para tener en cuenta ese dato al determinar el peso del material (tara). que permiten determinar las oscilaciones de la aguja hacia la derecha o la izquierda de la escala. proceda a accionar las tuercas de los tornillos de ajuste que se hayan a ambos extremos de la balanza. Procedimientos para efectuar la pesada Una vez que el fiel de la balanza se haya ajustado a "0" proceda de la siguiente manera: 1. Si va a pesar algún material en polvo o líquidos. hasta conseguir que las oscilaciones sean parejas. Si las oscilaciones fueran desiguales. La parte superior de la aguja queda junto a una escala grabada en cuyo centro esta el "0" y hacia ambos lados. hasta que marque "0" g. Si las oscilaciones son coincidentes. Desestime las 2 o 3 primeras oscilaciones y posteriormente compare las que se producen hacia la izquierda del "0". en lugar de dos barras horizontales tienen una sola carente de grabación en g. Nunca coloque los materiales directamente so145 . vacíos y colocados correctamente sobre las crucetas. provista de una pesa deslizante para ser movida hacia la izquierda o hacia la derecha hasta hacerla coincidir en la escala con el peso que se desea medir. Mueva la pesa deslizante de la barra graduada hacia la extrema izquierda. 2. la aguja del fiel al detener su movimiento lo hará justamente en el "0". presenta de 5 a 10 líneas verticales equidistantes.

una barra metálica. A continuación coloque el recipiente seleccionado sobre el platillo del lado izquierdo y vierta poco a poco en su interior el material que desea pesar. Si fuera insuficiente. Internamente se encuentra tapizado de terciopelo. dentro del estuche se encuentra una pinza que es utilizada para extraerlas del estuche. pulidas y brillantes.30. Este tipo de pesas consiste en una laminilla plana de metal con forma cuadrada o rectangular. En los orificios que están situados de la mitad hacia atrás del estuche se colocan las de mayor peso.2.01.5g).10.0.02. extraiga de la caja de pesas las necesarias y colóquelas sobre el platillo de la derecha.3.5. se colocan las que tienen menor peso que las referidas. colocarlas sobre el platillo y posteriormente reintegrarlas. Todas estas pesas se fabrican básicamente con latón. a menos de que se trate de sólidos limpios.50 o 100g) las cuales pueden combinarse para obtener cualquier peso en ese rango.0.40.0.0.05. Caja de pesas Fig. 146 .3 y 0. Conjuntamente con las pesas. como por ejemplo. bre el platillo. una sortija.0.2.03. etc.20. Al igual que las cilíndricas tienen grabado el peso. hasta que la aguja del fiel marque "0". mueva hacia la derecha de la barra grabada la pesa deslizante.1. que como es obvio sera menor (0. por su orden en la caja.0. presentando linealmente unos 20 orificios de diferentes diámetros donde se introducen las pesas. hasta que indique el peso adecuado. 78 : Caja de pesas Consiste en un pequeño cofre cuadrangular provisto de una tapa articulada con bisagras en su parte superior. estando provistas de una pequeña prominencia en su parte superior. que presenta uno de los bordes doblados en un ángulo de 900 por donde se toman con las pinzas.2. Estas pesas son cilíndricas. por donde se toman con una pinza de disección.4. Cada una de estas pesas tiene grabado el peso (1. acero inoxidable o aleaciones no magnéticas. Para efectuar la pesada. En los orificios de la parte anterior del estuche.

3. con la diferencia de que esta balanza no utiliza las piezas certificadas de la caja de pesas.generalmente. Las barras horizontales son dos o tres. se encuentran debajo de los platillos.no es en forma de aguja. Mantenga las balanzas escrupulosamente limpias. antes de guardarlas en la caja cepíllelas con un pincel de pelo de camello.PRECAUCIONES 1. según el modelo. esta balanza tiene la columna que sirve de punto de apoyo. 2. en especial los platillos. no en el centro. teniendo cada una de ellas una pesa deslizante. Generalmente estas barras están provistas . Coloque la balanza sobre una superficie nivelada en un lugar donde no se produzcan vibraciones y que la temperatura así como la humedad relativa sean estables. sino en el extremo izquierdo. cuyo peso sea de décimas o centésimas de gramos o pocos gramos. 79 : Balanza granataria de un solo platillo (tipo Ohaus) A diferencia de la balanza de dos platillos. sino de flecha y la escala se encuentra en el extremo derecho y no arriba con en la de dos platillos. las cuales no deben ser colocadas en otro lugar que no sea los platillos. Cuando se efectúan pesadas de productos en polvo. El fiel de estas balanzas . parra evitar que el polvo o la su ciedad puedan afectar la fiabilidad del peso. 147 .de una muesca sobre cada numero de la escala para fijar la pesa en el punto exacto. El procedimiento para efectuar la pesada es similar. Balanxa de un solo platillo (tipo Ohaus) Fig. Conserve limpias las piezas. Los tornillos de ajustes. y están grabadas con diferentes escalas en gramos.en su parte superior . BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA Este tipo de balanza se utiliza cuando se requiere determinar con precisión el peso de pequenas cantidades de materiales u objetos.

este tipo de balanza se estructura por el fabricante dentro de una vitrina de cristal . f) Soportaplatillos. g) Chapa. sin caerse. El extremo de su parte superior esta estructurado con una planchuela metálica en posición horizontal. que se encuentra atornillado por su base en el centro del piso de la urna. sobre una base de varios cm de altura. Columna: La columna sirve de base al punto de apoyo de la balanza. que posee en el centro de su parte inferior un pequeño tirador que se utiliza para subir o bajar la puerta por un mecanismo de corredera (similar al de una guillotina) diseñado para que la puerta se quede fija.quedando debidamente nivelado en posición vertical. La superficie de la planchuela tiene 148 . generalmente es de madera o material plástico. la cual está provista de un marco independiente. d) Platillos. La base está sostenida por un tornillo en cada uno de su ángulos . e) Dispositivos para subir o bajar la cruz. Balanza de precisión mecánica Fig.5cm de diámetro. b) Cruz. el polvo circulante o la humedad.que al igual que los marcos que sirven para fijar las paredes y la parte superior de cristal. en cualquier altura en que sea detenida. c) Fiel. 80: Balanza de precisión mecánica: a) Columna. de unos 40cm cúbicos. en dirección al manipulador. En la pared anterior que queda frente al manipulador se encuentra incertada la puerta de la vitrina. Consiste en un tubo de metal inoxidable de unos 20 cm de largo x l.De acuerdo a su diseno se clasifican en: mecánicas. que son utilizados para nivelar la balanza. debido a la influencia de las corrientes de aire. incoloro y transparente. h) Cuchilla Para evitar inexactitudes durante la pesada. eléctricas y digitales. lo cual se comprueba mediante la observación de uno de los dos niveles de agua circulares que se encuentran en la superficie Partes de que consta l.

Los salientes ubicados en la parte inferior tienen insertada respectivamente una cuchilla con la arista dispuesta hacia arriba y apoyadas en una pequena placa del mismo material contenidas en los estribos. cuyo vértice se apoya sobre la chapa de la columna. el cual se haya articulado por su porción posterior a un botón giratorio que se encuentra en la parte externa de la base de la urna en su porción central. una pequena pieza cilíndrica proyectada hacia fuera y en cada extremo un gancho semicircular del mismo material similar a la forma de las herraduras. 2.junto a una escala graduada desprovista de números cuyo centro representa al 0. Este dispositivo queda ubicado por debajo y muy próximo a la cruz. denominado "cuchilla". de forma circular.por donde se cuelgan los platillos.semejantes a un plato. La cruz en ambos extremos laterales presenta dos salientes en forma de horquetilla angular denominada estribo . el cvual será horizontal cuando el fiel de la balanza esté en 0. teniendo su superficie plana y muy pulida. Los platillos: Son dos piezas metálicas planas. quedando en posición vertical. hace que el eje que atraviesa la columna se eleve. tiene insertado un prisma de ágata de forma triangular. de unos l6cm de longitud. Debajo del semicírculo que forma la concavidad. cuyas tuercas se utilizan cuando se requiere nivelar la balanza. suficientes para aligerar su peso sin que por ello pierda rigidez a la flexión. 4. A todo lo largo del margen superior tiene grabada una escala en mm. La cruz: Es una barra plana .forma de cajuela en U . que hace que los platillos queden suspendidos. Las aristas de las tres cuchillas deben estar situadas en el mismo plano. perpendicularmente a la columna. 5. En el extremo lateral de cada estribo. por donde se inserta un alambre acerado rígido que describe una parábola algo angosta para factibilizar su colocación en los estribos de la cruz. 3. quedando de esta forma la cruz en equilibrio.que adopta una forma triangular con el vértice hacia abajo en cuyo extremo distal presenta un corte cóncavo. caracterizada por su dureza e inalterabilidad al contacto con el aire. estando unido por su porción media a un eje que se encuentra introducido a todo lo largo de la columna. El extremo inferior es puntiforme y oscila como un péndulo. se encuentra articulado un fino tornillo en posición horizontal. Dispositivos para subir y fijar la cruz : Es una fina planchuela metálica muy rígida que tiene por la superficie de cada lateral.en cuya cavidad se inserta una placa de acero o ágata . donde se observa el 0 en el centro y numeraciones iguales hacia ambos lados. Fiel: Sobre el centro de la concavidad de la cruz se encuentra atornillada una chapilla que sostiene por su extremo posterior a una larga y fina aguja que es el FIEL de la balanza. Esta barra se caracteriza por tener varias perforaciones simétricas . Un medio giro del botón hacia la derecha.provisto de una saliente por cada lateral.provocando que las piezas cilíndricas de la planchuela metálica 149 . denominada "chapa".

separando la cuchilla de la chapa para finalmente quedar estática debido a la presión del dispositivo. Determine el punto "0" de la balanza. 150 .con el cual. proceda a girar convenientemente los tornillos donde se apoya la balanza hasta lograr que la burbuja esté en el centro del nivel. se bajan los portaplatillos para que oscilen libremente y se pueda determinar el peso. los cuales quedan ubicados debajo de los platillos. de agua que se encuentra en la superficie de la base de la balanza. hasta que las oscilaciones sean iguales. se consigue que éstos suban y entren en contacto con los platillos. Suba los portaplatillos. Si se encuentra en una posición excéntrica.propiciando que el filo de la cuchilla no roce innecesariamente con la chapa durante esta acción. Cierre la balanza. baje los portaplatillos y observe las oscilaciones del fiel. Soportaplatillos :Son dos discos articulados respectivamente a un fleje metálico recubierto de fieltro. utilice los hilos de platino.contacten con la parte inferior de la cruz y la eleve.seguidamente tome con la pinza las pesas y situelas por orden de peso (de mayor a menor) sobre el platillo de la derecha.los cuales se deslizan a lo largo de la regla grabada que se encuentra en la cruz. para lo cual observe la ubicación de la burbuja de aire en el nivel.para evitar que la cuchilla esté innecesariamente en contacto con la chapa. Cerciorese de que la balanza esté nivelada. estando separados de estos. aproximadamente por lcm . con el objetivo de que no pierda el filo. que tienen forma de gancho. 2. con peso cerificado. 3. 5. PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA l. se encuentra el utilizado para accionar los portaplatillos. Si se percata de que son diferentes hacia uno u otro lado del cero. 4. Si se quiere determinar el peso de un objeto que tenga un peso inferior al mg. Del lado izquierdo del botón para fijar la cruz. Resulta indispensable realizar esta acción cuando no se esté realizando la pesada. proceda a accionar los tornillos de nivelación de los extremos de la cruz. lo cual afectaría su exactitud. impidiendo que oscilen cuando se le esté añadiendo algún peso. teniendo la precaución de colocar en el centro la pieza de mayor peso y a su alrededor las de menos peso. denominados jinetillos . 6. para lo cual haga bajar la cruz con los platillos vacios y observe las oscilaciones del "fiel" junto a la escala graduada. procediendo a quitar o poner las pesas o anadir o quitar producto en dependencia de los objetivos de la pesada. Deposite el material a pesar en un recipiente apropiado (previamente pesado) y colóquelo en el centro del platillo de la izquierda. Cuando el material a pesar y las pesas estén colocados sobre los platillos.

.Exclusivamente los sólidos se pueden colocar directamente sobre el platillo. antes y después de su uso. cambios de temperaturas o humedad. h) Orientador de la dosificación. Suba la cruz. c) Platillo.La lectura de las pesadas deben efectuarse siempre con la puerta cerrada. .baje los portaplatillos y cierre la balanza. g) Palanca de retención.Cerciorase de que las pesas estén limpias y manipúlelas siempre con la pinza. no las toque con los dedos. . donde no existan vibraciones. d) Indicador digital. Al concluir la pesada procesa a subir los portaplatillos.6. ya que éstos le comunican humedad y suciedades que alteran el peso.Garantice que la balanza sea ubicada sobre una mesa o meseta nivelada.retire el material ya pesado y con el empleo de la pinza retire las pesas por su orden de menor a mayor peso. BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA Fig. como por ejemplo: lana de vidrio embebida en ácido sulfúrico concentrado o pequeños gránulos de cloruro de calcio anhidro. f) Botones de ajustes de las pesas de cambio. b) Botón para el ajuste del punto "0". 151 . en especial los platillos. . PRECAUCIONES .Limpie el interior de la balanza. e) Botón para la graduación de la precisión del indicador digital. 8l: Balanza de precisión eléctrica: a) Botón para el ajuste de la compensación de tara.En los ángulos de la urna coloque un pequeño recipiente que contenga un desecador con el objetivo de que absorba la humedad y mantenga secas la atmósfera en el interior de la urna. .

que se caracteriza por tener un diámetro mayor en su base que en la parte anterior. de una ventana de corredera. que generalmente se localiza empotrado centralmente en la superficie de la balanza muy próximo al borde anterior. la pared de la caja tiene grabada una pequeña linea vertical. la mitad inferior de la pared frontal. aunque más grueso. haciendo girar convenientemente en una u otra dirección los tornillos. muy próximo a su borde y un grosor de menos de 2 cm estriado transversalmente. teniendo la superficie plana provista de una letra "T" impresa. que sirve para indicar donde ser detenido el giro del botón para hacer coincidir la letra "T"con la línea de referencia. 2. estando cubierto por una tapa de vidrio. La parte posterior. Es de formas circular. provista de un círculo concéntrico de unos 7 mm de diámetro. Indicador de nivel : Consiste en un aditamento circular de no más de 2 cm de diámetro. tanto en el tamaño como en su diseño. Principales partes de que consta 1. Las paredes laterales están provistas. la caja o urna donde se encuentra estructurada tiene forma rectángular y se haya en posición vertical sobre su base. así como la porción inferior de los laterales y la cubierta superior son generalmente de material plástico. para facilitar su manipulación . la superior ocupa aproximadamente un tercio de todo el espacio y en ella se encuentra instalado parte del sistema eléctrico y otros dispositivos interconectados con el resto del sistema que se encuentra en la parte posterior de la balanza. 3. En la parte inferior (Rodeada por la pared de cristal y las ventanas laterales) se encuentra colgado centralmente el único platillo que posee este tipo de balanza. sin incluir la base. Botón para el ajuste de la compensación óptica de tara : Este botón se encuentra articulado en el ángulo superior derecho de la pared frontal de la balanza. el nivel se regula.cuando se requiere determinar con precisión el peso de un objeto. que ocupa la mitad del ancho de la caja. pero difiere de ésta. Se encuentra articulado en el centro del botón para 152 . En la parte superior de la periferia donde gira este toirnillo. lo que le da una configuración ligeramente cónica . respectivamente. hasta lograr que la burbuja de aire del agua que contiene quede en el mismo centro del circulo concéntrico. Aproximadamente. Un tabique en posición horizontal divide la urna internamente en dos partes. tambien de cristal.Este tipo de balanza se utiliza al igual que la balanza analítica mecánica. generalmente es más pequeña aunque al igual que la mecánica. Botón de ajuste del punto cero: Es un botón igualmente igualmente cilíndrico de menor tamaño. es de cristal. Al igual que la balanza mecánica.

ubicado en el lateral derecho de la base. Lo que equivale a 10g. Botones de ajuste de las pesas de cambio : Son dos. denominado tambien placa mate. donde se van registrando en una doble escala. Verifique que la balanza este debidamente nivelada.el ajuste de la compensación óptica de tara. En esta posición se lee el resultado de la pesada. Hacia la derecha se encuentra grabado ½. 4.. hasta lograr que la 153 . 2. en el centro de la base.) en su periferia.. Hacia la izquierda. 5. Al ser girados hacia la derecha van colocando las pesas o al ser girados hacia la izquierda las levantan. En la parte superior el "0". estando provisto de una tapa. el # 1. produce el cambio de pesas de l0 en 10. 7. 30… etc. por su lado derecho.etc. Funcionamiento Acciones previas l. Se encuentran ubicados en la parte frontal de la base. . con los números 0. lo que equivale al lg. 3g. provista de una línea oscura que indica aproximadamente el peso. que tiene grabado en su centro un "0"con un (. 20g. 30g. 8. Es un botón grande.El botón marcado con el # 10. Alrededor de la palanca se encuentran grabado 3 números: .provisto de una escala numérica. por su lado izquierdo. ya explicado. Orientador para la dosificación : Debajo del indicador de las pesas de cambio se haya una pequeña escala graduada. 3. 20.500 y 1000. 2g. 6.no debiendo poner ni quitar del platillo el objeto a pesar. produce el cambio de pesas de l en l o sea: l. Botón para la graduación de la precisión del indicador digital :Tambien denominado botón micrométrico. el peso originado por el accionar de los botones de ajustes de las pesas de cambio. haga girar en uno u otro sentido'los tornillos de la base de la balanza. El ubicado a la izquierda tiene grabado en su tapa un # l0 y el de la derecha un #1 . . lo cual se va registrando en el contador o indicador de pesas de cambios que se haya en el lado derecho de la base. En el centro de las dos escalas se haya un indicador óptico. de no ser así. Palanca de retención :Es una pieza rígida de forma lanceolada (como la punta de una lanza) que se encuentra articulada por su extremo más grueso.…etc y el botón marcado con el #1. Indicador de pesas de cambio :Consiste en una pequeña pantalla que se haya en la parte frontal de la base. En esta posición la balanza se encuentra frenada y la iluminación apagada. En esta posición se puede leer el peso aproximado en gramos en la escala proyectada.…hasta el 9. o sea: 10.

Proceda igualmente con el botón del ajuste a "0". PESADA 1.Abra la ventana lateral y coloque sobre la superficie del platillo el recipiente vacio (tara) donde se va a depositar el material a pesar.Gire la palanca de retención en dirección a ½ (semiretención) . Detenga la rotación y proceda a girar el botón una graduación hacia atrás . haciendo girar el botón para la graduación de la precisión. retroceda hasta 40g.Haga girar en contra de las manecillas del reloj..Haga girar el botón para el ajuste de compensación de tara. Por ejemplo: si la escala se detiene en 5g. en contra de las manecillas del reloj hasta hacer coincidir la letra "T": con la línea de referencia. 2. 2.Girar finalmente la palanca de retención hasta el "0" 154 . Compensación de tara . . . . . Conecte la balanza a la red eléctrica para propiciar su funcionamiento e iluminación. 3. . incluyendo el encendido del bombillo piloto. los botones de ajuste de las pesas hasta situar la escala en "00"(de esta manera queda anulado el peso del recipiente (tara) . La balanza se iluminará y proyectará la escala numérica.burbuja de aire del nivel de agua quede ubicada exactamente en el centro del círculo concéntrico.Cierre la ventana de la balanza. Repita la operación con el botón de la derecha (marcado con el # l). lo que dará lugar a un peso total de 44g. .Retrase la escala a "0"haciendo girar el botón de compensación de tara. que se encuentra en la parte superior. Haga coincidir la marca índice con la raya "00" proyectada. Haga girar la palanca de retención hacia el "0".Gire hacia la derecha gradualmente el botón de ajuste de las pesas que se encuentra del lado izquierdo (marcado con el # 10) y vaya observando simultáneamente la escala del indicador de la izquierda hasta que aparezca un signo menos (-) o se trabe el avance . Ajuste al punto cero l. por ejemplo: si la escala marcó 50g.Gire la palanca de retención hacia el # 1 y deje oscilar la escala. En este momento la balanza está frenada y la iluminación apagada. . retroceda una unidad o sea hasta 4g. haga girar los botones de ajuste de las pesas de cambio y el botón para la graduación de precisión . Si el indicador de pesas de la izquierda y el contador micrométrico de la derecha no están marcando respectivamente "00". en contra de las manecillas del reloj hasta que marquen "00". Mueva lentamente la palanca de retención hacia el # l.

el indicador digital marca 20 y el contador micrométrico de la derecha marca l4.hasta que la escala quede inmóvil y el trazo inmediato inferior se encuentre exactamente en la rendija de la horquilla índice. 42.Depositar el producto a pesar en el interior del recipiente y cerrar la ventana.Proceda igual que para determinar el peso de la tara. .2014 g.DETERMINACIÓN DEL PESO .accionando el botón para hacerlo coincidir con la raya proyectada.Haga girar la palanca de retención hacia el "0"para retener la balanza y seguidamente soltar lentamente la retención haciendo girar la palanca hacia el # 1 . abrir la ventana y extraer el material ya pesado. 82 : Lectura de una balanza analítica eléctrica 155 . Por ejemplo. si el indicador de pesas de cambio registra 42g .Girar la palanca de retención hasta ½ (semi retenida) durante la preselección del peso . Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la apesada en la escala de la derecha del indicador de pesas de cambio.Colocar la palanca de retención en "0".Cerciorese de que la palanca de retención esté en "0" . . utilizando los botones de ajuste de las pesas de cambio. .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital hasta hacer coincidir la placa mate del indicador óptico con la raya proyectada.Leer el resultado. .Poner nuevamente todos los elementos de mando en "0" . Fig. .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital. Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la pesada. el peso será el siguiente .

6. Este tipo de balanza tiene un alto grado de precisión. ya que basta con conectarla a la red eléctrica. Argumente por que causa los platillos deben estar limpios? 11. 2. Con que objetiovo se debe subir y fijar la cruz de la balanza? 156 . lo cual no puede ser resuelto internamente por el personal del laboratorio experimentado. 83 : Balanza analítica digital La balanza analítica digital simplifica todas las operaciones explicadas a los largo de este capítulo. ¿Cuál es la función de la cuchilla de la balanza de precisión 13. ¿En que orden se deben colocar las pesas sobre el platillo? 9. 5. debe efectuar para realizar una pesada en una balanza granataria de un solo platillo? 8. CUESTIONARIO 1. 4. requiriendose de un servicio especializado. 3. Explique por que causa las pesas se deben tomar con una pinza de disección y no con la mano. ¿Con que objetivo se utilizan las balanzas de precisión? 12. Explique en que consiste el principio funcional de las balanzas ¿ A que denominamos pesas ¿ ¿Cual es el rango de pesadas de una balanza granataria? ¿Cuántos tipos de balanzas granatarias Ud. 10. La dificultad que presenta. colocar el material a pesar sobre un platillo externo.BALANZA ANALITICA DIGITAL Fig. conoce? ¿Qué se entiende por peso de tara? ¿A que denominamos fiel de la balanza? Describa en orden cronológicos que Ud. 7. es cuando se produce algún desperfecto. accionar un botón y el peso podrá observarse digitalizado en una pequeña pantalla.

regula el nivel de una balanza de porecisión 17. Explique las causas por lo que las balanzas de precisión deben estar en el interior de una urna 15. ¿Cómo se colocan las pesas en la balanza de precisión eléctrica? 19. ¿Cómo Ud. 20. efectua una pesada con una balanza de precisión mecánica.con una balanza de precisión eléctrica? 21. ¿Cómo Ud.14. realiza el ajuste al punto cero. Explique lo que indican las tres posiciones que tiene la palanca de retención. realiza la depreciación del peso de tara en una balanza de precisión elaéctrica. Diga lo que usted sepa en relación con la balanza analítica digital. Explique como Ud. Describa el orden cronológico. L6. Describa paso a paso como usted determina el peo de un objeto en una balanza de presición elaéctrica 22. 157 .como Ud. 18.

Fig. Empleo: para medir el tiempo en minutos y/o segundos. Cronómetros Son relojes manuales. DIFERENTES TIPOS Relojes Se emplean dos tipos de relojes: los cronómetros y los de intervalo. b) Reloj de intervalo. provistos de uno o dos botones de control que se utilizan para accionarlos o detenerlos.CAPÍTULO 11 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN NO VOLUMÉTRICOS INTRODUCCIÓN Los instrumentos de medición no volumétricos se emplean en las investigaciones de laboratorio para medir específicamente magnitudes de tiempo. temperatura o densidad. INSTRUMENTOS. 158 . eléctricos o de cuerda. Relojes de intervalos Estructuralmente son similares a un reloj despertador doméstico y al igual que los cronómetros pueden ser accionados por energía eléctrica o cuerda. 84: Relojes: a) Cronómetros. caracterizándose por hacer sonar una alarma cuando concluye el tiempo previsto.

Centrífuga. lleno de un producto químico dilatable por el calor. Debido a que el capilar que forma la columna indicadora está unido al reservorio por una especie de sifa en forma de "S" cuando la columna de mercurio alcanza el grado máximo. Cuando el bulbo es expuesto al calor. como por ejemplo. 159 . en correspondencia con la exposición al calor a que ha sido sometido. paralelamente a la escala.Este tipo de reloj se encuentra tambien articulado en algunos equipos de laboratorio. el producto químico que contiene se dilata y asciende por el capilar. haciendo que se detenga automáticamente su funcionamiento al concluir el período de tiempo en que fue ajustado. ya sea en grados Celsius o Fahrenheit. Diferentes tipos de termómetros Se utilizan dos tipos de termómetros: el clínico y el químico. Su extremo anterior está sellado como un ámpula. provisto de una escala impresa en grados Celsius (ºC y/o grados Fahrenheit º F). más estrecho está ocupado por un bulbo.Termómetro clínico: En este tipo de termómetro el reservorio se encuentra lleno de mercurio. 1. denominado columna indicadora. Los termómetros empleados en el laboratorio consisten en un tubo de vidrio de paredes gruesas de longitud y diámetro variable. por lo que hay que "sacudirlos" para que se concentre nuevamente en el reservorio. rotor. Este bulbo se continúa con un fino capilar ubicado a todo lo largo del termómetro. Al detenerse se confrontará con la escala para determinar el grado de calor. Termómetros Fig. Al disminuir su intensidad se mantendrá indicando ese valor. Empleo: para medir el tiempo en horas y minutos. etc. generalmente. 85: Termómetros. y el posterior.

2. Otro aspecto que lo distingue del clínico es que al carecer de la sifa. que usualmente es el agua. estando estructurados por tres partes diferentes entre sí. ya explicada. Los densímetros son tubos de vidrio que miden de 15 a 20 cm de largo. alargado y cilíndrico. 0. que son: la Kelvin y la Rankine.8)+32=ºF Existen otras dos escalas para medir la temperatura. en el capilar en correspondencia con las oscilaciones de temperatura. la incubadora. 86: Densímetro. el peso específico de los líquidos. Este tipo de termómetro se encuentra insertado en los equipos termoregulados como: el horno. en g/cm3 o en g/mL es numéricamente igual a sus densidades. El peso específico es la relación entre el peso de una sustancia con respecto al peso de un volumen igual de una sustancia de referencia. la parte superior consiste en un fino tubo de vidrio. Por ejemplo: 3200C+273=3020K Para convertir grados Fahrenheit a grados Rankine. con la diferencia que generalmente tiene una mayor longitud y la escala de temperatura es de un rango mucho mayor. la columna del alcohol o xilol. Mide aproximadamente algo más de un tercio de la longitud total del densímetro. 1.555=ºC . pero empleando la constante 460.0g/mL a 4ºC.De grados Celsius a Fahrenheit (ºC. Para convertir temperaturas de una escala a otra se procede de l siguiente manera: . Para convertir grados Celsius en grados Kelvin basta con adicionar la constante 273 a los grados Celsius obtenidos. encontrándose sellado como un ámpula en su extremo distal. Densímetros Son instrumentos que se emplean para medir la densidad o peso específico de soluciones compuestas por diferentes solutos y solventes. ascenderá o descenderá. Estructura Fig. se procede de igual manera. Termómetro químico: La estructura de este tipo de termómetro es similar a la del termómetro clínico.De grados Fahrenheit a Celsius (ºF-32). el autoclave. En lugar de mercurio el reservorio de estos termómetros está lleno de alcohol o xilol teñidos. Como la densidad del agua es de 1. pudiendo tener una estructura diferente a l explicada. etc. pero basada en el mismo principio. teniendo impreso a todo lo largo una escala graduada 160 .

lleno de bolitas de metal. cuidando de no incurrir en el error de paralelaje. 2. como por ejemplo: 1. variará. En su extremo posterior el bulbo se estrecha y a continuación se dilata. 9. Espere a que se detenga el movimiento de rotación y proceda a realizar la lectura.000 (que es la densidad del agua). 10. que se utilizan para medir la densidad de la orina. 12.. formando un bulbo pequeño y redondeado. Procedimiento 1. colocándolo en el centro del diámetro de la probeta en posición vertical. ¿Cómo se denomina el producto químico que se utiliza en cada tipo de termómetro para llenar sus respectivos reservorios? Especifique las diferencias funcionales entre el termómetro clínico y el químico. 3. que proporcionan peso al densímetro. en dependencia del tipo de densímetro de que se trate. 5.en cuya parte superior se puede observar el número 1. consistiendo básicamente en un bulbo lleno de aire. Tome el densímetro específico por la parte superior con los dedos índice y pulgar e introdúzcalo en la solución. 3. 4. semejantes a municiones. 8. 7. Haga girar el densímetro. La porción media es más gruesa y de mayor longitud. CUESTIONARIO 1. no entre en contacto con las paredes de la probeta. 6. ¿Con qué objetivo el bulbo redondeado que se encuentra en la parte inferior de los densímetros se encuentra lleno de municiones? Describa el procedimiento a seguir para determinar la densidad de un líquido? 161 .060 en los urodensímetros. La escala va descendiendo dividida en partes iguales y el valor mayor. Deposite en una probeta de tamaño apropiado (preferentemente no graduada) la solución a la que se le desea medir la densidad y colóquela sobre una superficie nivelada. 11. 2. para lo cual debe observar en qué graduación de la escala se encuentra el nivel de la solución. ¿Cómo se denominan los dos tipos de relojes empleados para el trabajo de laboratorio? ¿Cuál es el principio funcional de cada uno de los relojes? Describa la estructura de un termómetro clínico y uno químico. 4. mediante el accionar de los dedos y cerciorarse de que al rotar. para propiciar que se mantenga en posición vertical cuando sea introducido en el líquido al que se le va a medir la densidad. ¿Cómo usted debe proceder para convertir grados centígrados en grados Fahrenheit y viceversa? ¿Para qué se utilizan los densímetros en el laboratorio? ¿Qué usted entiende por peso específico? ¿Cuál es la densidad del agua? Describa la estructura de un densímetro .

se agrupan diversos objetos. lo que permite seleccionar la adecuada para cada tipo de tubo. Además de facilitar el acceso al tipo de cristalería con que se esté trabajando o el ordenamiento secuencial de las muestras. ACCESORIOS Entre los accesorios que se utilizan con mayor frecuencia. Generalmente son rectángulares y están estructuradas por dos o tres planchas. las gradillas factibilizan además el que se puedan escurrir los tubos después de ser fregados. provistas de perforaciones. madera o plástico. los orificios de las gradillas también serán de tamaño variable. separadas entre sí. Teniendo en cuenta que los tubos de ensayo tienen diámetros diferentes. por donde se coloca la cristalería en cuestión. 162 . 87: Gradilla Gradillas Son soportes diseñados para la colocación de tubos de ensayo u otros tipos de cristalería.CAPÍTULO 12 ACCCESORIOS. insertándolos en los orificios boca abajo. mientras que determinados materiales de curaciones son empleados para diversos usos. utilizados con carácter auxiliar en el trabajo de laboratorio al igual que algunos instrumentales quirúrgicos. en posición horizontal. INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y MATERIALES DE CURACIONES INTRODUCCION Bajo el término de accesorios. fábricadas de metal. se encuentran los siguientes: Fig.

163 . no compartimentados. sobre la que se erige una varilla recta de hierro de 1. que se utiliza para colocar pinzas de sujección o aros metálicos. Soporte universal Fig.Cestos Fig. lo que le proporciona estabilidad. Los cestos son utilizados para depositar la cristalería para su secado o esterilización. que se utilizan para la colocación de tubos de ensayo y otros tipos de cristalería. Al igual que las gradillas. los cestos son soportes. Generalmente son cilíndricos o cuadrangulares y están fabricados de alambres entrelazados o chapas de metal inoxidable perforado.5cm de diámetro. 89: Soporte universal Está constituido por una base metálica sólida y pesada. 88: Cesto metálico.

las respectivas pinzas se abren. diseñadas para fijarlas a la varilla de fierro del soporte universal y otras para operarlas manualmente. Entre las más empleadas se encuentran: los modelos de tres dedos. algunas de las cuales. c) Pinza de Mohr. cuando se aprietan con ayuda de los dedos índice y pulgar. es decir. así como las pinzas para tubos de ensayo y la pinza de Mohr. Otro tipo de pinzas igualmente empleadas para el manejo de objetos pequeños como las pesas y los diversos especímenes son de acero inoxidable. En ambos casos. 91: Trípode. teniendo la punta curva o recta. b) Pinza de bureta. Cuando el trípode es colocado sobre la mesa de trabajo. Se fabrican diferentes tipos de pinzas de sujección. La pinza de Mohr se utiliza para obstruir el paso de un líquido que fluya a través de una manguera de goma flexible de más o menos un cm de diámetro.Pinzas de sujección Fig. estas dos últimas de utilización manual. formado por tres varillas metálicas de igual longitud. los de bureta. podemos percatarnos de que las patas no quedan en posición 164 . y cuando se retira la presión se cierran. los de vasos de precipitado. Trípode Fig. Se trata de un accesorio metálico. el principio de su funcionamiento es similar al de un palito de tendedera. separadas entre sí a una misma distancia y soldadas por su extremo superior a un aro también de metal. 90: Pinzas de sujeción: a) Pinza de tres dedos.

para lo cual se coloca sobre el aro del trípode. ocasionalmente se requiere del empleo de diferentes agujas. de forma cuadrangular o circular que mide unos 15cm2 o de diámetro. Esta malla se utiliza cuando se va a calentar un líquido contenido en frascos de vidrio. y sobre ésta el frasco de cristal. bisturí y tijeras de disección. con los extremos que contactan con la mesa más separados que los que están soldados en el aro. Malla de amianto Fig. 165 . una especie de bandeja donde. sino ligeramente oblicuas. b) Tijeras. así como de charolas. directamente a la llama de mechero. 92: Malla de amianto Es una malla plana de alambre entrejido. 93: Instrumental quirúrgico: a) Bisturí. de manera que el recipiente queda aislado de la llama directa y el calor se distribuye uniformemente a través del amianto.vertical. que posee en su centro una circunferencia de unos 10 cm de diámetro de amianto fundido en la malla. Instrumental quirúrgico Fig. d) Agujas de disección Además de los trocars y las agujas hipodérmicas de diferentes calibres en el trabajo de microbiología. se realiza la disección de determinados especímenes de experimentación. similar a un colador. c) Pinzas de disección.

4. 3. para su preparación en láminas destinadas a la investigación parasitológica. 5. se emplean también para la toma de algunas muestras. se utilizan para deprimir la lengua en la toma de muestras de exudado faríngeo y también.MATERIALES DE CURACIONES Entre los materiales de curaciones más empleados en el trabajo microbiológico. 2. de madera o plástico. Aplicadores y depresores Los aplicadores. se encuentran los siguientes: 1. como por ejemplo: heces fecales. Algodón Gasa quirúrgica Aplicadores Depresores Soluciones y tinturas desinfectantes Algodón El algodón se utiliza para taponear la boca de los tubos y otras cristalerías que van a ser sometidas a un proceso de esterilización y conjuntamente con los aplicadores de madera en la confección de hisopos finos y gruesos. pueden emplearse para extraer medio de cultivo de sus frascos. además de ser utilizados en la confección de hisopos. Gasa quirúrgica Se utiliza para la preparación de torúndas que posteriormente son empaquetadas en papel de 3 a 5 unidades para ser esterilizadas en autoclave antes de su empleo. para efectuar la pesada o como sustituto de los aplicadores en las preparaciones de heces en láminas para examen parasitológico. 166 . Los depresores.

4. ¿Para qué se utiliza la malla de amianto? Mencione los instrumentales quirúrgicos que se utilizan en el laboratorio. 9. 5. 6. 2. Describa la estructura de los trípodes. ¿Para qué se utilizan los cestos? ¿Cuál es la finalidad utilitaria del soporte universal? Describa los diferentes tipos de pinzas de sujección que usted conozca. 3. Especifique los diferentes usos que se les dan a las gradillas en el laboratorio. ¿Para qué se utilizan materiales de curación en el laboratorio? 167 . 10. Describa la estructura y el material con que se fabrican las gradillas. 8. Describa la estructura de los cestos y el material con que se fabrica. 7.CUESTIONARIO 1.

MUESTRA. la insuficiente o excesiva cantidad de muestras a utilizar para el cultivo. heces. como el esputo y el pus. etc. Muestra representativa Para que el diagnóstico de laboratorio sea fidedigno. además de propiciar contaminaciones que en su conjunto afectan la calidad de los resultados al perder la muestra representativa. que propicia la identificación directa o indirecta de los agentes casuales de la infección o enfermedad infecciosa y en determinadas investigaciones información complementaria acerca de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en cuestión a la acción de los fármacos antimicrobianos. donde presuntivamente se encuentran microorganismos patógenos o los anticuerpos inducidos por sus componentes antigénicos. se sustenta en el estudio de las muestras obtenidas del paciente o portador. pudiera pensarse que esta paridad. Visto así. que son producidos por algunos microorganismos en su interacción con los tejidos. orina. etc. 168 . que las especies patógenas que se encuentran en los líquidos corporales. material excrementicio. es indispensable entre otros requisitos. del paciente sean las mismas que contiene la muestra y su cuantía relativamente proporcional. pueden en algunos casos afectar la viabilidad del germen y en otros su cuantía.CAPÍTULO 13 TOMA DE MUESTRAS INTRODUCCIÓN El diagnóstico microbiológico de laboratorio. Además de las fuentes ya referidas se obtienen del paciente muestras de los productos patológicos. resulta suficiente para considerarla como una muestra representativa. la mala calidad de su obtención y la no observancia de las precauciones de asepsia. CONCEPTO Se denomina MUESTRA a la porción o volumen de: líquidos corporales. los inadecuados métodos de conservación. sin embargo determinados factores y procederes como: la demora en realizar la siembra de la muestra. etc. que obtenemos del paciente o portador. tejidos. exudados. como por ejemplo: sangre. lo cual aporta al médico de asistencia un dato valioso que le permite indicar un tratamiento antimicrobiano mucho más eficaz..

a temperatura ambiente. los componentes nitrogenados. como nutrientes.C. por lo que el frío y la temperatura ambiente provocan su lisis. por haberse tomado en lugares distantes. 169 . Cuando esto no sea posible. Fundamento: mata a los microorganismos sin deteriorarlos significativamente. Ejemplo: para la conservación de muestras que contienen protozoarios. el proceder a seguir dependerá de la muestra de que se trate. Los medios de transporte se emplean generalmente. b) Incubación a 370 C. Fundamento: el frío enlentece el proceso de multiplicación. debido a que son muy reductores. larvas o huevos de helmintos. En cambio . hidratos de carbono y otros residuos minerales presentes en la muestra son utilizados por la mayoría de las especies.R es muy sensible a los cambios de temperatura.Demora en realizar la siembra En principio todas las muestras deben ser sembradas lo antes posible en los medios de cultivo que favorezcan el desarrollo de las especies patógenas que presuntivamente contienen procediendo a su inmediata y adecuada incubación. pero al mismo tiempo sin favorecer significativamente su desarrollo. lo que permite identificarlos mediante la observación de su morfología. Cuando la muestra no puede ser sembrada de inmediato. se siembran en este tipo de medio y se envían a la mayor brevedad posible. En este caso la pérdida de representatividad sería por exceso y no por defecto como suele suceder en los ejemplos anteriores. que no sobreviven mas allá de tres horas si la muestra en que se encuentra no es inoculada antes de ese tiempo en los medios apropiados. Métodos de conservación a) Refrigeración a 4 0C (en las parrillas). como los Mixovirus y Hirpesvirus. Fundamento: mantener a los microorganismos en una temperatura similar a la corporal. d) Medios de transporte. que favorecen su desarrollo y multiplicación. al laboratorio de referencia. Ejemplo. c) Formol al 10 %. con la muestra de orina (urocultivo) sucede todo lo contrario. ocurriendo similar situación con algunos virus. caracterizándose por inhibir las reacciones enzimáticas autodestructoras y aminorar los efectos de la oxidación. para la siembra de exudados caracterizándose por mantener la viabilidad del microorganismo. por ejemplo: la Neisseria meningitidis (meningococos) que con elevada frecuencia se aísla en la muestra de L. para conservar muestras de orina para el urocultivo. que comúnmente están presentes en la orina.

En otras ocasiones. la cantidad de anticoagulante que se adiciona al medio de cultivo. Si el volumen de sangre fuera menor que el indicado. por lo que en ese momento lo adecuado es obtener muestras de heces fecales para coprocultivo. la Samonella tiphy se encuentra en la circulación sanguínea por lo que resulta procedente tomar muestra de sangre para hemocultivo. ya que afectan la calidad de los resultados. como por ejemplo: el hemocultivo. Por ejemplo: en la fase inicial de la fiebre tifoidea. al levantarse. a de tenerse en cuenta en algunas ocasiones el momento idóneo y en general delimitar con precisión el área anatómica para su obtención. Cantidades menores o mayores son objetables. va a depender del cuadro clínico del paciente y del tiempo de evolución de la enfermedad. reducirá proporcionalmente la expresión de crecimiento en los cultivos y si fuera mayor. Otro ejemplo donde la cantidad de muestra a emplear. pero cuando la enfermedad lleva unas dos semanas de evolución el microorganismo emigra al intestino. se recomienda esperar el momento del pico febril. Momento idóneo En algunas muestras como el esputo. (leptospiuria) debiendo 170 . como por ejemplo. la sangre para hemocultivo o gota gruesa. La lectospirosis.R (bacilos ácido alcohol resistentes) requiriéndose no menos de 2ml. transcurre por una evolución similar en los primeros 10 días (periodo de leptospiremia) la leptospiras se encuentran en sangre y posteriormente invaden diferentes vísceras y el sistema renal. lo que traería como consecuencia la formación indeseable de coágulos de sangre que interfieren delimitan las manifestaciones de crecimiento (turbidez). Calidad de la muestra Para que la muestra sea de buena calidad. está normado que la cantidad de sangre total a sembrar sea de un 10 % en relación con el volumen de medio de cultivo a utilizar. que es cuando se encuentra en sangre la mayor cantidad de microorganismos. el momento más adecuado. resultaría insuficiente. resulta indispensable. es en la de esputo para investigar B. el agente causal. debe ser recogido por el paciente.A. en ayunas.Cantidad de muestras a tomar En algunas determinaciones.A. que es el momento en que mayor cantidad de expectoración se encuentra acumulada y en otras muestras. ya que por las características mucoides de este producto patológico los bacilos se encuentran distribuidos desigualmente en la muestra.

Demora en la información del diagnóstico al médico de asistencia para iniciar o modificar el tratamiento. la información de un diagnóstico erróneo. 4. Cuando la muestra ha sido recolectada por el paciente. con implicaciones para la evolución del paciente y el cuestionamiento sobre la calidad del servicio. del sitio donde se va a realizar la punción. creando confusión en el momento de establecer el diagnóstico. Molestias innecesarias al paciente que debe someterse nuevamente a la obtención de la muestra. no la saliva y en las muestras de heces fecales las porciones mucosanguinolentas. que el diagnóstico de laboratorio se corresponda con los agentes infecciosos. para evitar que estos contaminen la muestra y se desarrollen en el cultivo. de la microbiota residente. Las deficiencias en este sentido. hisopado o raspado. lesiones en la piel. por ejemplo. con alcohol etílico al 70 % con yodo.o. donde la mayoría de los microorganismos están muertos. favorece.obtenerse en la primera fase sangre para hemocultivo y en el segundo momento orina para urocultivo. 2. traen como consecuencia una serie de contratiempo como son: 1. por ejemplo: para obtener muestras de sangre para hemocultivo.R. con especies microbianas ajenas al proceso infeccioso. en el esputo. L. Y lo que puede ser mas perjudicial. Afectaciones económicas por gastos de materiales e insumos. 3. Precauciones de asepsia Son las acciones encaminadas a evitar que la muestra se contamine durante su obtención. que tenia el enfermo o portador en el momento en que fue obtenida la muestra. etc. 171 . la porción que se tomará para el cultivo. El cumplimiento de estos requisitos.C. se utilizará la parte mas purulenta. será la mas evocadora de contener la mayor cantidad de microorganismos. se debe delimitar el área exacta para su obtención por ejemplo: la toma de muestra de lesiones purulentas debe realizarse en la región subyacente y no del pus que se encuentra en el orificio de salida. Delimitación del área anatómica Una vez determinado en que órgano o tejido se va a realizar la toma de muestra. Se debe remover previamente los m.

Se clasifican en: albuminoso. gotas nasales. en los procesos inflamatorios y que se deposita en los intersticios de los tejidos o en la cavidad de una serosa.INSTRUCCIONES AL PACIENTE El paciente que tiene indicado uno o varios exámenes microbiológicos debe ser instruido por su médico de asistencia o por el personal del laboratorio a los efectos de que recojan la muestra con la calidad requerida. inclínele ligeramente la cabeza hacia atrás. DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS Exudados Concepto: es la materia mas o menos fluida salida de los vasos pequeños o capilares por exudación. Suspender cualquier tratamiento local con medicamentos antimicrobianos. para reducir la probabilidad de que la muestra se contamine con la microbiota normal. Las instrucciones son de dos tipos: generales y específicas. Instrucciones generales 1. solicitándole que abra la boca y emita un ¡ahhh! sostenido. hemorrágico y seroso. colirios. Diferentes tipos de exudados a. lo cual favorecerá. fibroso. o concurran al laboratorio en condiciones favorables para su obtención. que en el momento de su obtención. óvulos. la cantidad de microorganismos sea suficiente para que puedan ser observados en los exámenes microscópicos y aislados en los cultivos. gargarismos etc. Instrucciones específicas Variarán en dependencia del tipo de muestra de que se trate. Suspender cualquier tratamiento con antibióticos 48 horas antes de la toma de la muestra.). Observe la zona faríngea con ayuda de una lámpara de cuello que proporcione 172 . Procedimiento: estando el paciente sentado. 2. lociones etc. Al menos 12 horas antes de la toma de la muestra. tales como: productos tópicos (pomadas. Exudado faríngeo: Indicaciones específicas: antes de concurrir al laboratorio el paciente debe realizar el aseo matutino habitual.

Si el médico presume que el paciente está infectado con Corynebacterium diphteriae (agente causal de la difteria) indicar al laboratorio. de color blanco o blanco grisáceo. con la finalidad de detectar evidencias patológicas. el paciente debe estar sentado y con la cabeza ligeramente flexionada hacia atrás. Fig. en caso contrario deberá humedeserse previamente en solución de glicerina. 94: Toma de muestra de exudado faríngeo: a) Amígdalas. marcada exudación o la presencia de anginas (placas de diferentes formas y tamaño. el hisopo podrá estar seco si la siembra se hace de inmediato. labios u otra zona bucal. Procedimiento: al igual que para la toma del exudado faríngeo. cuidando de no tocar los labios. Al retirar el hisopo. en cuyo caso la toma de muestra se hará levantando el borde de la angina y pasando el hisopo por debajo de la misma para contactar con los microorganismos diftéricos. Con el dedo índice presione la base de la nariz. mediante una orden de análisis que se realice la investigación pertinente. telurito e introducido después de la toma en medio de transporte para su conservación.una luz intensa. adheridas a las mucosas) Deprima la lengua con un depresor y con la otra mano introduzca el hisopo en la cavidad bucal. como pueden ser: mucosas enrojecidas o edematosas. de manera que posibilite la obser173 . situados en ese lugar. en particular en las áreas con evidencias patológicas. los carrillos o la lengua y frótelo sobre cada región amigdalina y la pared posterior de la faringe. cuide igualmente de que no entre en contacto con la lengua. b) Pared posterior de la faringe b) Exudado nasal: Indicaciones específicas: No instilarse ningún tipo de gotas nasales 12 horas antes de la toma de la muestra.

vación de los dos orificios, para lo cual se auxiliará de una lámpara. Introduzca el hisopo en ambas fosas nasales, imprimiéndole movimientos de rotación en ambos sentidos, para facilitar la recogida de la secreción.

Fig. 95: Toma de muestra de exudado nasal.

c) Exudado nasofaríngeo: Indicaciones específicas: similar a las explicadas para exudado faríngeo y nasal. Procedimiento: para la toma del exudado nasofaríngeo, se utiliza un hisopo especial consistente en un alambre de cromo o acero inoxidable curvado en su extremo terminal. Después de observar la zona faríngea y las fosas nasales con buena iluminación se procede a introducir suavemente el hisopo por una de las fosas nasales hasta la nasofarínge. Si no fuera posible, introducir el hisopo por la cavidad bucal hasta la nasofarínge, con los mismos cuidados ya explicados en al toma del exudado faríngeo.

Fig. 96: Toma de muestra de exudado nasofaríngeo.

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d) Exudado ótico: Indicaciones específicas: no instilarse gotas óticas de ningún tipo, durante las 24 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de indicar al paciente que se siente, el técnico se ubicará por el lateral que corresponda al oído que será objeto de la toma de la muestra, procediendo a ladear ligeramente la cabeza del paciente para el lado opuesto, con una torúnda o algodón estéril humedecido en alcohol etílico al 70 %, limpiar el pabellón auricular, especialmente la entrada del orificio del conducto auditivo. Disponiendo de una buena iluminación, sujetará la oreja por la parte superior con ayuda d los dedos índice y pulgar, imprimiéndole un movimiento hacia arriba y hacia atrás, lo cual favorecerá la observación del conducto auditivo externo. Manteniendo la oreja en esa posición, introducir el hisopo suavemente en el conducto, imprimiéndole movimientos de rotación con el propósito de recoger la mayor cantidad posible de secreción (otorrea)

Fig. 97: Toma de muestra de exudado ótico: a) Manipulación del pabellón auricular; b) Introducción del hisopo en el conducto auditivo externo

e) Exudado conjuntival: Indicaciones específicas: durante las 48 horas precedentes a la toma de la muestra, no irrigar los ojos con colirios, pomadas oftalmológicas ni anestésicos conjuntivales que tienden a desalojar a los microorganismos del saco conjuntival. La noche anterior, el paciente se debe limpiar el ojo afectado con suero fisiológico o agua previamente hervida. Se puede tapar o no, el ojo en cuestión con un apósito estéril fijado con esparadrapo, ya que se ha demostrado que no influye en los resultados la contaminación ambiental, la mañana en que concurra al laboratorio para que le sea tomada la muestra no debe realizarse nigun lavado facial. Procedimiento: para la toma de muestra del exudado conjuntival, se puede utilizar un hisopo de algodón fino (estéril) o un asa de platino empleada exclusivamente para ese fin, esterilizada en autoclave. 175

Indicar al paciente que se siente y retirar el apósito, con ayuda del dedo índice baje el párpado inferior y proceda de inmediato e introducir con sumo cuidado el hisopo o el asa, evitando tocar las pestañas, o el margen de los párpados, hasta la superficie del ángulo interno (próximo al lagrimal) del "culde- sac" fondo del saco inferior deslizando suavemente el instrumento en dirección al ángulo externo del ojo. También se pueden tomar muestras de las márgenes parpebrales (membranas que tapizan los párpados. En el caso de que el paciente presente furúnculos de las glándulas pilosebáceas anexas a una pestaña (orzuelo) se procederá a obtener un poco de pus, mediante la punción con una lanceta estéril.

Fig. 98: Toma de muestra de exudado conjuntival

f) Exudado uretral: Indicaciones específicas: El o la paciente deben de abstenerse de orinar durante las 4 horas que preceden a toma de la muestra, para evitar que los microorganismos sean arrastrados mecánicamente durante la micción. Debiendo concurrir al laboratorio sin previo aseo matutino de los genitales externos. En mujeres: Se le indicará que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste bocarriba en una camilla ginecológica con estribos, adoptando una posición ginecológica, de manera que los glúteos queden muy próximos al extremo de la camilla, en estas condiciones con la palma de la mano hacia arriba se introduce en la vagina el dedo índice el cual se arquea hacia arriba para comprimir la uretra a través de la sínfisis que le separa de la vagina desplazar el dedo, hacia atrás, sin dejar de comprimir la sinfigis para inducir la salida del pus por la uretra. Conjuntamente se introduce el hisopo, 1cm en el interior de la uretra, haciéndolo girar suavemente para que recoja la mayor cantidad posible del exudado. 176

Fig. 99: Toma de muestra de exudado uretral en mujeres.

En los hombres: La muestra se tomará permaneciendo el paciente parado. Se le indicará manualmente el prepucio hacia atrás y a continuación haga presión hacia delante del pene con el objetivo de "ordeñar" la uretra. Seguidamente se le introduce unos mm el asa de platino estéril en la uretra por unos segundos retirándola finalmente.

Fig. 100: Toma de muestra de exudado uretral en hombres.

g. Exudado vaginal. Indicaciones específicas: Suspender cualquier terapéutica por vía local 2 o 3 días antes de que le sea tomada la muestra. Debe concurrir al laboratorio sin previo aso vaginal desde la noche anterior, aunque puede, efectuar lavado matutino de genitales eternos. Se recomienda no realizar coito vaginal en ese periodo de tiempo. Procedimiento: Se le indicará a la paciente que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste en posición de cúbito supino (boca arriba) sobre una camilla con estribos, adoptando una posición ginecológica (las corvas sobre los estribos y los glúteos muy próximos al borde de la camilla. Antes de proceder a la toma de la muestra se hará una inspección de la región vulvar con el objetivo de detectar inflamación o erosión en las glándulas anexas Skéne o Bartholin, la primera, dos pequeñas glándulas situadas dentro del meato de la uretra femenina, consideradas homologas de las vesículas seminales y la segunda, situadas a ambos laterales del 177

orificio vaginal, cuya secreción tiene la función de lubricar el área para facilitar la penetración del pene. Con el empleo de una torúnda estéril humedecida en alcohol al 70 %, sujeta por una pinza de disección, desinfectar la región vulvar. Seguidamente se procederá a insertar un espéculo estéril de tamaño conveniente sin lubricantes, ya que puede ser tóxico para algunos microorganismos.

Fig. 101: Toma de muestra de exudado vaginal. Paciente en posición ginecológica con el espéculo incertado.

En los casos de niñas se realiza un exudado vulvar y en pacientes vírgenes se realiza también un exudado vulvar y si el orificio del himen lo permite se puede emplear un espéculo pequeño. En los casos de pacientes con cistocele (protución de vejiga en la vagina) la incertación del espéculo debe ser realizada por un personal con experiencia. A continuación se procede a introducir un hisopo estéril hasta el fondo del saco posterior de la vagina el cual será embebido con el exudado. Se recomienda utilizar hisopos con algodón sintético, ya que los ácidos grasos presentes en algodón vegetal puede resultar tóxico para algunos microorganismos. Además del hisopo se puede emplear para obtener la muestra una pipeta de Pasteur estéril con un dispositivo en su parte posterior como el que tienen los goteros para factibilizar la aspiración del exudado. Al momento de tomar la muestra se realiza la medición del pH al exudado. h) Exudado endocervical.Indicaciones específicas: Abstenerse de realizar el coito durante las 12 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de colocada la paciente en posición ginecológica e insertado el especulo (sin lubricantes) en forma similar que para exuda178

el aislamiento de microorganismos en cualquiera de ellos es evocador de infección. son los siguientes. imprimiéndole movimientos de rotación durante varios segundos para que se embeba en el exudado. por lo que. Líquidos orgánicos Concepto: Los líquidos orgánicos. sujeta por una pinza de disección. estos líquidos son normalmente estériles. que recubren la médula espinal. Seguidamente se introduce un hisopo estéril. portadores de compuestos orgánicos e inorgánicos.do vaginal. se procederá a retirar el moco cervical del cuello del útero con ayuda de una torunda estéril.occipital y los ventrículos cerebrales Delimitado dentro del espacio que separa las dos membranas pleurales que recubren el tejido pulmonar Se encuentra entre las sinovias o membranas que recubren los tendones Se encuentra entre las membranas peritoneales que delimiten al abdomen TOMA DE MUESTRA (por punción) Lumbar PLEURAL Intercostal SINOVIAL Articular ASCITICO Peritoneal 179 . son fluidos serosos.C. así como de células leucocitarias. la región sub . Cuadro 7: Localización de los líquidos orgánicos DIFERENTES LIQUIDOS L.R. Los líquidos orgánicos que con regularidad se investigan en los laboratorios de microbiología clínica. Son producidos por las membranas que recubren los diferentes órganos. que se hace comprimir suavemente sobre el cervix. por tratarse de espacios anatómicos cerrados. REGION ANATOMICA DONDE SE LOCALIZA Canal raquídeo (espacio delimitado por las membranas sub aracnoideas o meníngeas.

Procedimiento: Desinfectar con tiomersal (timerosal) u otro desinfectante apropiado el área de la piel. donde se va a efectuar la punción.Cuadro 8. Realizar la punción con trocar o aguja apropiada hasta donde se encuentra el líquido en cuestión. LÍQUIDOS CANTIDAD DISTRIBUCCIÓN ORGÁNICOS (ml) EN TUBOS ESTERILES L. insertar una jeringuilla y succionar el líquido. hemorrágico o satocrómico (amarillento) Turbio y purulento Turbio y purulento PLEURAL 2 a3 Uno con heparina Uno sin heparina Incoloro y transparente Amarillo claro. previo riguroso lavado de manos y colocación asépticas de guantes quirúrgicos estériles. transparente y viscoso Seroso SINOVIAL 2a3 ASCITICO 2a3 Uno con heparina Purulento Recolección de la muestras Serán tomadas por un especialista. 180 - . con y sin anticoagulante (heparina) según se trate. Retirar el mandril del trocar. Datos para la obtención de las muestras de líquidos orgánicos y características de su aspecto.C.R 3 a 10 3 ASPECTO XXX NORMAL PATOLÓGICO Incoloro y transparente TURBIO. lo que propiciará que fluya el líquido a través de la cánula o si la punción se realiza con aguja. Recolectar el líquido en tubos de ensayo.

se procederá a verificar el pulso. leucocito y plaquetas. pudiendo utilizarse igualmente jeringuillas y agujas estériles desechables. en el momento que presente hipotermia. para asegurarse de que la aguja se encuentre en el interior de la vena. Indicaciones específicas La toma de muestra debe realizarse cuando el paciente presente fiebre superior a 38 C. tome la jeringuilla de tal manera que el dedo índice quede colocado sobre el cabo de la aguja para guiarla durante su introducción en la vena. Estando formada por elementos figurados como los hematies. un ligero cese de la resistencia indicará que la aguja ha penetrado en la vena.Sangre Concepto: La sangre es un líquido rojo que circula por las arterias. Deje secar el alcohol y efectúe la punción. mediante jeringuilla de vidrio estéril y seca (que no esté caliente) a la cual se le acopla una aguja No. retire el émbolo. mecánicamente. Se le pedirá al paciente que abra y cierre la mano varias veces con el objetivo de inducir el aumento de la circulación y le llene las venas. para ello solicite al paciente cerrar la mano y extender el brazo. que contiene diversas sustancias nutritivas e inmunológicas. venas y capilares. Extraiga la cantidad de sangre necesaria suelte 181 - . unos 5cm por debajo del sitio que puncionará y estire la piel hacia abajo con el pulgar con lo cual se inmovilizará la vena. la sangre fluirá espontáneamente dentro de la jeringuilla. solo eventualmente se procede a tomar la muestra. Desinfecte la zona a puncionar. después de comprobar el tiempo de caducidad. así como una parte líquida denominada plasma. Inserte la aguja en la piel adyacente paralelamente a la vena y hágala penetrar en el lumen. Con la mano opuesta sujete el antebrazo del paciente. palpe el área y seleccione la vena mas prominente con ayuda de la inspección visual. Procedimiento La sangre se obtendrá por venipunción. Después de estar la ligadura por encima del codo del paciente. primero con agua y jabón y químicamente después con tintura de yodo al 1 % en pacientes (no alérgicos) y posteriormente con alcohol etílico al 70 %. En caso de que la presión de la vena sea baja. para comprobar que la circulación arterial no ha sido interrumpida. 20 estéril. la jeringuilla acoplada a la aguja se colocan posteriormente en el interior de un tubo de ensayo de tamaño apropiado.

desinfecte ambos lóbulos y los pliegues de la piel de cada codo. depositándola en la lámina portaobjetos habilitada al efecto. Cambie la aguja utilizada por otra estéril del mismo calibre. Coloque una pinza en cada uno de los lóbulos. antes que la sangre infiltre el corte. 4. de manera que ejerzan la suficiente presión para que la sangre contenida en los capilares sea excluida. 2. Está constituida por agua. Linfa Concepto: La linfa es un líquido claro. Retire el círculo central de la retapa metálica del frasco que contiene el medio de cultivo. lo cual se evidenciará por un aclaramiento de la zona (zona de isquémia). 3. 4 o 5 veces para que el anticoagulante que contiene el medio impida que se formen coágulos. Indicaciones al paciente: Las generales. Esta operación se debe realizar en ambos lóbulos y en los pliegues cutáneos de los dos codos. Para sembrar la sangre. albúmina. Puncione la tapa perforable del frasco y empujando el embolo de la jeringuilla vierta un 10% de sangre en relación con el volumen del medio de cultivo empleado. después de desinfectada la piel. que llena los vasos linfáticos. Procedimiento: La muestra de linfa se obtiene específicamente de los lóbulos de las orejas y de los pliegues de la piel de los codos. desinfecte con alcohol etílico al 70 % la tapa perforable y flaméela. proceda del siguiente modo: 1. pídale al paciente que abra la mano y presione la torunda o algodón por espacio de 2 a 3 minutos con el brazo doblado. fibrina y sales. 182 . rápidamente.Invierta el frasco inoculado. Retirando la jeringuilla con la aguja y el volumen de sangre sobrante. y transparente de color ligeramente amarillento. proceda a recoger con el borde del bisturí la linfa que emane. 1. 3. absténgase de palpar la vena seleccionada con los dedos. 2.la ligadura y coloque una torunda o un pedazo de algodón seco sobre el sitio de la punción y saque la aguja. Observaciones: Durante el proceso de toma de muestra. pH alcalino y salobre. Con el empleo de torundas o motas de algodón humedecidas en alcohol al 70 %. Con un bisturí haga una incisión de unos 5mm de largo por 2 mm de ancho y raspe la zona con su superficie.

se debe realizar un examen seriado. Procedimiento: En el caso de heces destinadas para examen parasitológico. sin vestigios de sustancias antisépticas. b) Incisión con el bisturí en la zona isquémica. Se indicará al paciente recoger 10 ó 20g de heces sólidas (aproximadamente del tamaño. 102: Toma de muestra de la linfa auricular: a) Colocación de la pinza en el lóbulo de la oreja. La primera muestra debe recogerse por defecación espontánea y las sucesivas. al igual que la primera de forma espontánea. Indicaciones al paciente: las generales. consistente.Fig. por lo que el examen de varias muestras en periodos de tiempo diferentes aumentan las probabilidades de localizar e identificar la especie. provisto con tapa de rosca. lágrimas) o producidos en el reservorio donde se han acumulado (heces. en el análisis de varias muestras (6 a 8) enviadas al laboratorio en días alternos. orina. algunas mediante la inducción con laxantes y otras. aunque existan en el tracto digestivo. sudor. Si el examen de una muestra resulta negativo. etc. En todos los casos las heces deben ser recién emitidas. preferentemente incoloro y transparente. Excreciones Concepto: Compuestos excretados por las glándulas (saliva.) Heces fecales Concepto: Material que se forma en el intestino básicamentea partir de los residuos del material ingerido no digerido. equivalente a un 1/3 de un tabaco) y sí fueran sólidas unos 30 ml (una onza fluida) en un frasco limpio y seco. no correspondiéndose este resultado con el cuadro clínico. ya que en ocasiones los resultados negativos estando el paciente parasitado debido a que diversas especies presentan las llamadas fases negativas. con el empleo del laxante (sulfato de magnesia) se logra evacuaciones de heces líquidas o al menos blandas que permiten detectar con 183 . durante las cuales no aparecen sus elementos de diagnóstico.

se emplean colectores estériles que deben ser cambiados si la misción se demora o si se contamina con heces. urea. ácido urico. 2. Aseo matutino de genitales externos con agua y jabón.mayor frecuencia la presencia de quistes y huevos de helmintos. ser ligeramente ácida. el cual debe ser solicitado en el laboratorio. ácido hipúrico. las probabilidades de contaminación con los gérmenes procedentes de la microbiota residente o transitoria aumentan. con similares características que el empleado para el examen parasitológico. desechando el resto de la orina. contrario a lo que ocurre con las heces sólidas. En todos los casos la muestra debe ser recogida en frascos estériles entregados por el laboratorio. tener un olor peculiar y un sabor salino. y otros componentes como. ya que orinar sentadas. como es lo habitual. Además de células epiteliales leucocitos y eventualmente hematies. que recoja la muestra en un frasco. como. En los casos de niños pequeños. Orina (para urocultivo) Concepto: La orina es un líquido secretado por los riñones. Para realizar con efectividad el aseo. glucosa etc. Está compuesta principalmente por agua en la que se encuentran en disolución diversos compuestos. Destapar el frasco estéril y depositar con cuidado de 10 a 20ml de la porción media. Comenzar a orinar desechando el primer chorro. En el caso de heces destinadas para coprocultivo: Indicar al paciente. 184 . Tapar el frasco inmediatamente y enviar la muestra al laboratorio antes que transcurran dos horas. No orinar después de las doce de la noche. Procedimiento: 1. 3. Indicaciones específicas: 1. y enjuagar con agua previamente hervida y yodada. 2. Aguantar la micción. los hombres se deben retirar bien el prepucio y las mujeres separar los labios. pero estéril. Nota: Las mujeres deben orinar paradas y recoger la orina "al vuelo". que se caracteriza por tener un color amarillo. etc.

que es expectorada por las vías respiratorias superiores. Los más comunes son el pus y el esputo: . el paciente debe asearse la zona de la lesión con agua y jabón. d) Lesión grasienta o purulenta. (escamosa en piel). raspar la lesión con un bisturí. fino. PRODUCTOS PATOLÓGICOS Concepto: Producto resultante de la actividad de algunos microorganismos al interactuar con los tejidos. Indicaciones específicas: Suspender cualquier tratamiento local. tomar la muestra en el entorno del borde sin tocar la piel. Materia densa y viscosa. Con hisopo estéril. humedecida en alcohol etílico al 70 %. previa desinfección de la piel. Al igual que para la toma de muestra de la lesión seca en piel. En los accesos fríos se toma igualmente con aguja y jeringuilla. 185 . se toma la muestra. recolectando la descamación en el interior de una placa de Petry estéril. Desinfectar previamente el orificio y tomar la muestra con hisopo fino estéril en profundidad.Pus (ya explicado en la toma de muestras de piel) . la de muestra de la uña infectada se realiza mediante raspado de la superficie y debajo de la uña con un bisturí. el pelo o las uñas.Esputo. Procedimiento: a) Lesión abierta en piel. mediante el esfuerzo de tos profunda. y colocarlos en el interior de una placa de Petry estéril. pero específicamente en el punto mas elevado de la colección purulenta. g) Observar la cabellera del paciente bajo la luz de una lámpara de Wood.Faneras Concepto: Término general aplicado a las infecciones persistentes en la superficie de la piel. b) Absceso subcutáneo. e) Fístula. La noche anterior a la toma de la muestra. enjuagándose con solución salina fisiológica estéril cubriendo la lesión con apósito estéril. 48 horas antes de la toma de la muestra. recobrando el material en el interior de una placa de Petry estéril. el cual le será retirado en el laboratorio. c) Lesión seca. En los abscesos calientes. f) Uñas. Con una pinza de disección arrancar varios cabellos que se observen fluorescentes. eliminándose por la boca o siendo deglutido. puncionando la lesión con una aguja insertada a una jeringuilla. Tamponar la lesión con solución salina fisiológica estéril. Previa desinfección de la zona con una torunda estéril. para seguidamente tomar la muestra con hisopo.

12. 18. CUESTIONARIO 1. 4. 3.Indicaciones específicas: 1. mediante inspiración. 9. Para la recepción ver capítulo de Bioseguridad. ¿Que implicaciones puede tener la demora en la realización de la siembra? Explique los diferentes métodos empleados para la conservación de las muestras. 15. adecuado. 10. 13. 6. 17. 3. 16. seguida de tos profunda. 8. tratando de no recoger saliva. 5. por la parte externa del frasco. Durante la recolección del esputo evitar que se produzca derramamiento del mismo. 7. Recoger en un frasco estéril con tapa de rosca y color ámbar la primera expectoración de la mañana. 14. 2. retirar las prótesis y realizar aseo matutino bucal. Nombre los diferentes líquidos orgánicos que se obtiene del paciente para investigaciones microbiológicas. La cantidad de muestra a tomar? ¿En que momento se debe tomar la muestra? ¿Porque es importante delimitar el área anatómica de donde se va a tomar la muestra? ¿En que consiste las precauciones de asepsia? ¿Que instrucciones generales debemos dar al paciente que tiene indicado un examen microbiológico? ¿Que es un exudado? Nombre los diferentes tipos de exudado que podemos tomar del paciente. 4. 19. 11. Al levantarse en horas de la mañana. En su opinión que es una muestra? ¿Que usted entiende por muestras representativas? Refiérase a las diferentes causas que pueden afectar la representatividad de una muestra. Describa el procedimiento a seguir para obtener del paciente una muestra de sangre para hemocultivo. ¿Como usted procede para obtener una muestra de linfa para el paciente? ¿Cómo se le indica al paciente recoger las muestras de heces fecales para examen parasitológico? ¿ Que instrucciones debe seguir el paciente para recoger muestras de orina para urocultivo? ¿Como usted toma las muestras de las faneras? ¿Que indicaciones le daría al paciente para recolectar una muestra de esputo con calidad? 186 . Enviar lo antes posible la muestra al laboratorio (separada de la orden de análisis). 2. ¿Que importancia tiene para usted.

leucocitos y otros elementos de interés como pueden ser. que presuntivamente contiene y facilitar su localización durante la realización de la microscopía. los procederes básicos. detectar la presencia de células. sin la adición de ningún reactivo. esencialmente se pretende observar: la morfología de los microorganismos y/o sus diferentes estructuras. aunque en algunas ocasiones resulta pertinente centrifugarla para concentrar los elementos. larvas. En los exámenes microscópicos. las muestras a investigar deben ser preparadas previamente sobre láminas portaobjetos escrupulosamente limpias. tal y como se obtuvo. la muestra a emplear se utiliza. etc. Procedimiento: 1. el propio tubo que contiene el sedimento o una pipeta estéril. El procedimiento a emplear para el montaje de las muestras en láminas. DIFERENTES MÉTODOS Preparación de muestras en láminas para examen microscópico en fresco Para la realización de este montaje. 187 . deposite una gota de la muestra en el centro de la lámina portaobjetos. sobre los cuales se sustenta el diagnóstico microbiológico de laboratorio. la manera de agruparse y sus afinidades tintoriales. ni procesamiento previo. Empleando un asa de platino previamente flameada.CAPÍTULO 14 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS INTRODUCCIÓN La microscopía. sin rayaduras ni manchas. constituye junto con el cultivo y las pruebas de identificación. así como. Para la realización del examen microscópico. variará en dependencia de los objetivos que se pretenden con la microscopía y de la muestra de que se trate. huevos de hemintos.

b) Colocación encima de la muestra de una lámina cubre objetos. exactamente debajo de toda el área del cubreobjetos. Coloque sobre la gota de la muestra o sedimento una lámina cubreobjetos. tome una asada del cultivo germinado en medio de cultivo líquido y deposítela en el centro de una lámina cubreobjetos. Procedimiento: 1. 188 . debido a insuficiente cantidad de muestra y si se derrama por fuera del cubreobjetos. una pequeña porción de la colonia. l03: Preparación de muestras en láminas para exámenes microscópicos: a) Depositar una gota de muestra en el centro del portaobjetos. la colocación del cubreobjetos debe efectuarse suavemente. procediendo a emulsionarla en la gota de suero fisiológico. de manera que la preparación quede justamente debajo de la excavación y ambas láminas queden pegadas por el petrolado. debe quedar. Coloque sobre la mesa de trabajo una lámina portaobjetos excavada y auxiliándose de un aplicador unte petrolado en todo el perímetro de la excavación. Para evitar que queden espacios con burbujas de aire. Si el microorganismo a examinar se hubiera desarrollado en un medio sólido se procederá a colocar previamente sobre la lámina cubreobjetos una gota de suero fisiológico y posteriormente se tomará con asa de platino estéril y fría. 2. 3. Proceda a flamear al rojo un asa de platino y una vez fría.Fig. Coloque la lámina excavada sobre el cubreobjetos. Si el volumen de la gota fue el adecuado. el error en el montaje sería por exceso. Método de la gota colgante Este método se emplea específicamente para constatar mediante la observación microscópica si el microorganismo en estudio es o no móvil. Si quedara algún espacio sin cubrir se incurriría en error por defecto. En ambos casos se debe repetir el montaje. 2.

para su mejor observación o para determinar sus afinidades tintoriales. c) Ensamblaje de la lámina excavada con el cubreobjetos. Debido al ínfimo tamaño o la composición bioquímica de las diferentes estructuras. b) Cubreobjetos con una gota de cultivo. Fig. se requiere en cada caso técnicas de tinción especiales para la coloración de cada una de ellas. antes de ser colocada la lámina cubreobjetos. 189 . Ejemplo: Examen directo de heces fecales. Preparación en láminas de muestras coloreadas Este método se utiliza cuando se requiere teñir a los microorganismos y/o su entorno. Adición de colorantes a la muestra Se procede exactamente igual que para la preparación en fresco con la diferencia de que la muestra es emulsionada con el colorante en cuestión. En estas condiciones se coloca en el microscopio para su observación. de manera que el cubreobjetos quede encima con la preparación la cual quedará colgando. Con un movimiento suave voltee sin temor la preparación. con el empleo del colorante Eosina.4. La preparación en láminas se efectúa por dos procederes diferentes: la adición del colorante a la muestra o la preparación de frotis. 104: Esquema de una preparación de gota colgante: a) Portaobjetos con una excavación central rodeada de un anillo de petrola to. d) Viraje de la preparación.

lo que provocará que la preparación quede adherida a la lámina y no sea desprendida después de la coloración por el agua que se utilice para eliminar el exceso de colorante. de manera que al sacarse quede formando una capa. los microorganismos están muy conglomerados. Si la muestra o el cultivo fueran líquidos. lo cual dificulta su localización en el examen microsocópico en la medida en que el frotis sea demasiado fino. Pase la lámina directamente por la llama del mechero dos o tres veces. se debe echar previamente en el centro de la lámina portaobjetos una gota de solución salina fisiológica y posteriormente emulsionar la colonia con un asa de platino estéril con la que se hará la extensión. Una vez seco el frotis. 190 . de manera que la parte posterior de la lámina sea lamida por la llama.Preparación de frotis El frotis consiste en una extensión de la muestra con hisopo o asa de platino sobre la lámina portaobjetos. tome la lámina por los bordes con los dedos índice y pulgar. en la llama del mechero para acelerar el proceso ya que los gérmenes pueden deformarse y generar confusiones al microscopista. 105: Preparación de una preparación sobre láminas portaobjetos. se coagulen. Después de realizado el frotis. Debido a que en las colonias. Si desea acelerar este proceso puede introducirlo en una incubadora pero nunca. que le permita hacer un frotis grueso con ayuda de un asa de platino estéril. déjelo sobre la mesa de trabajo hasta que el agua residual que contiene se evapore y se seque. el frotis debe hacerse muy fino para que se pueda distinguir adecuadamente su agrupación característica. deposite sobre la lámina portaobjetos una cantidad suficiente. La exposición al calor directo provocará que las estructuras de naturaleza proteíca. Debe ser grueso. de manera que la extensión quede hacia arriba. ya que los microorganismos cuando se hayan en un medio líquido tienden a estar muy dispersos. Procedimiento: Fig. Si el frotis se fuera hacer empleando una colonia germinada en medio de cultivo sólido.

¿En qué consiste un frotis? Explique las diferentes maneras de preparar los frotis de acuerdo al tipo de muestra de que se trate. ¿Cómo usted fija los frotis? ¿Con qué objetivo se fijan los frotis? 191 . Especifique para qué se realiza el método de la gota colgante.Fig. 5. 4. 3. 6. 2. CUESTIONARIO 1. 106: Fijación de un frotis a la llama del mechero. Describa el procedimiento para el montaje de muestras para la observación de examen en fresco ente cubre y portaobjetos.

mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis". generalmente tintes. teniendo un aspecto semitransparente. Colorantes naturales Los colorantes naturales son básicamente histológicos. debiendo tener al menos. los siguientes: 1. Carmín: Se produce. 192 . FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES Atendiendo a la fuente de obtención. pigmentos. los colorantes se clasifican en naturales y sintéticos. levaduras y protozoarios. empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos. siendo necesario colorearlas por diferentes métodos de tinción que factibilicen su observación y distinguir las características morfológicas y estructurales que sirvan de datos para su identificación genérica. el cual se fermenta para producir el colorante. reactivos u otros compuestos. Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que contiene indican. en su estado natural. un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir. encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia. sometidas a la intensa iluminación que se requiere en los exámenes microscópicos de campo brillante.CAPÍTULO 15 COLORANTES Y COLORACIONES INTRODUCCIÓN Las bacterias. 2. por lo que resulta muy difícil su observación en las preparaciones acuosas sobre láminas portaobjetos. carecen de color. Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenes de los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria. CONCEPTO Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico. 3.

Atendiendo a su estructura química se agrupan de la siguiente manera: Cuadro: 9. Clasificación de los colorantes. ácidos y neutros. Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundo de México y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium campechianum. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: básicos. Colorantes sintéticos Se obtiene de la anilina. GRUPO QUINONIMINA SUB-GRUPO TIACINA ACINAS C O LO RAN T E Azul de metileno Toluidina Rojo neutro Safranina C Nigrosina Verde malaquita Verde Brillante Violeta cristal Eosina B e Y Mercuro Cromo 220 FENILMETANO DIAMINOTRIFENILMETANO XANLEIRO FLUORANA Rosa de bengala SULFONSFTALEINA Azul de bromofenol Verde bromocresol Azul de bromotimol Rojo cresol Fenolftaleina Rojo fenol Azul timol Acriflavina Naranja de acridina ACRIDINA CLASIFICACIÓN Los colorantes se clasifican. teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el aniòn o el catiòn de su estructura química.4. 193 . o es mas exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno.

Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinción se reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador. AFINIDADES TINTORIALES En el proceso de la coloración. soluble exclusivamente en alcohol. por ejemplo: eosinato. por ejemplo: .de sodio+ Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de colorantes ácido y básicos. empleándose como colorante de contraste para colorear su entrono. ocurre una combinación de reacciones físicas y químicas. considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular. Reacción física Ocurre un fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas. la sustancia colorante esta a cargo del anión. por lo tanto el proceso de la tinción generalmente resulta letal para los microorganismos. Colorante ácido: Sucede todo lo contrario. 194 . Reacción química Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fósfato combinándose como colorante básicos cargados positivamente. donde el precipitado resultante. VENTAJAS Y DESVENTAJAS Los colorantes son sustancias tóxicas. constituye el colorante neutro.cloruro de azul de metileno+. TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. pero si el fondo del campo microscópico.Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión. mientras que el anión no tiene esa propiedad. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula. provocando su inmovilización. lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador según sean los objetivos con la sustancia colorante. que tiene la propiedad tintorial de sus componentes ácidos y básicos. mientras que el catión no tiene propiedad. por ejemplo: la giemsa. Veamos algunos ejemplos: 1. como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al microorganismo.

Por ejemplo: el verde de malaquita. Los colorantes se aplican. entre otros. con fines de microscopia. Entre los métodos mas utilizados se encuentran: La coloración de Gram. violeta cristal y fuscina fenicada. sino como indicadores de pH. Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir. Tinción simple En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se tiñe rápidamente el microorganismo. y la de Ziehl Neelsen. Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador. Tinción compuesta En este tipo de tinción. ideó un método de coloración. separados o juntos. utilizándose fundamentalmente para observar su morfología y tamaño. se utiliza más de una sustancia tintórea. Ejemplo: rojo fenol. etc. el danés Hans Chistian Gram. 3. 5. me195 . formando parte de una solución. En consecuencia se puede determinar algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de los demás. el más empleado en los laboratorios de bacteriología. METODOS DE COLORACIÓN Atendiendo a los objetivos que se persigan. Coloración de Gram En 1884. azul de bromotimol. formando parte de la composición de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como consecuencia de su actividad metabólica. 4. Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos. algunos incluso han resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del mercado. tinción compuesta y tinción especial. que es en la actualidad. mas que para teñir. a la preparación. Otros se emplean como desinfectantes microbianos. por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno. por lo que reciben también el nombre de coloraciones diferenciales.2. los métodos de coloración se clasifican en: Tinción simple. siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar.

... 80 mL .. con ayuda del brazo del mortero... en dependencia de la composición químico de la especie..........diante el cual.. Agregar poco a poco el agua destilada.... Lugol de Gram........ 300 ml Preparación (en un mortero): ..... .. 196 ... . 2g ........ Acetona . .......... Yoduro de potasio . Revolviendo constantemente...... Agua destilada ............. Con el resto del agua............ Después de diluida la acetona en el alcohol. la bacteria sometida a esta tinción.......10 mL ... 100 mL Preparación ( en un mortero): . Cristales de yodo . .. Agregar poco a poco las dos terceras partes del agua destilada.... Agregar los cristales de ácido carbólico y mezclar.......... ...... 2....Agua destilada ..... 20 ml Preparación .. Colorantes y reactivos 1........ 3...... enjuagar el mortero y añadir este residuo con cuidado en la probeta..... " Dejar la preparación en reposo durante 24 horas y filtrarla con papel de filtro.......... 1g ....... 1g ........ Echar la mezcla en una probeta graduada de 100 ml de capacidad. Diluir los cristales de violeta de genciana en alcohol.Cristales de ácido carbólico...... Solución violeta de genciana al 1% ... ......... Envasar en frascos de vidrio de color ámbar con tapa de rosca o preferiblemente con tapa de vidrio esmerilado...................Violeta de genciana . Mezclar los cristales de yodo con los de yoduro de potasio. Envasar en frasco ámbar o plástico no transparente con tapa de rosca y rotular................ hasta enrasar en 100 ml. Alcohol etílico 95 % . Alcohol etílico 95 % o alcohol acetona al 20 % .. envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca.. ....... Añadir el resto del agua........................ Rotular.................... ..... ....... revolviendo constantemente con el brazo del mortero.......Alcohol absoluto.................. 2g .... queda teñida de color violeta o de color rojo.....

.. Fig....... Procedimiento Después de fijado el frotis a la llama del mechero... Safranina .. 7. hasta que se evidencie que este solvente no extrae mas el colorante violeta. . Echar sobre la preparación el alcohol etílico 95 % o el alcohol acetona al 20 %.. 1..... Agua destilada .. Solución de Safranina al 1 % .. la lámina se debe colocar de canto para que se escurra. 107: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Gram.... el agua 197 . 1g .. Echar sobre la preparación la solución de safranina. Rotular. Lavar la lámina con agua corriente. 6.. dejándola actuar por espacio de 30 segundo. hasta cubrir el frotis. Envasar en frascos de vidrio o plástico. 100 ml Preparación ( en un mortero): .. Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro.. ...... Echar la safranina en un mortero y añadirle poco a poco al agua destilada hasta diluir el colorante.....4. Lavar con agua corriente.. Lavar la lámina con agua corriente. 2. Esta operación debe durar aproximadamente de 1 a 2 minutos. Debe tenerse en cuenta que el agua y en especial. 4. dejando que el colorante actué por espacio de 30 segundos... 3. Verter la solución de violeta de genciana... Echar sobre la preparación el lugol de Gram.... 5. Secado de lámina Al concluir el proceso de coloración. Lavar la preparación ligeramente con agua corriente. colocar la lámina sobre el puente de coloración.. 8.. hasta cubrir el frotis dejando que actué durante 30 segundo.

mantienen la coloración violeta ya que la safrania es un colorante mas débil que la violeta y su adición no influye significativamente en cambio de color. Al adicionar el lugol. cuando los microorganismos presentes en el frotis son expuestos a la acción colorante de la violeta de genciana. en tanto que otros son decolorados quedando la bacteria nuevamente incolora. lo que permite al solvente penetrar y extraer el complejo violeta-lugol. que mientras algunos géneros retienen firmemente el colorante al resultar el complejo impenetrable para el decolorante. Fundamento técnico En el primer paso de la coloración. ya que el lugol no es un colorante. Diagnóstico microscópico Las bacterias que se observan de color violeta se clasifican como Gram positivas y las que se observan de color rojo. para fijar el color en la bacteria. lo que da lugar. en tanto que los géneros que fueron decolorados por el alcohol. El criterio mas generalizado es que la violeta y el lugol forman un complejo que reacciona con los componentes bioquimicos de la pared celular deshidratada. fijándose en esta. existiendo controversias al respecto. reteniendo por consiguiente el color violeta aplicado inicialmente. Al echar finalmente la solución de safranina (que es de color rojo ) las especies que no fueron decoloradas. Principios A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace mas de un siglo.destilada. todos los géneros que se encuentran en el frotis se tiñen de color violeta. aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción. como Gram negativas. es un agente decolorante. por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo demasiado tiempo quita parte del colorante. dejando a la bacteria nuevamente incolora. en otros géneros la barrera que se produce es más permeable. Al adicionar el decolorante (alcohol etilicio o alcohol acetona) algunos géneros no son afectados por estos solventes. la reacción resultante será obviamente diferente. sino un mordiente. 198 . no es igual en todos los géneros. Teniendo en cuenta que la composición química de la pared. adquiriendo un color de rosado o rojo. que se adiciona con el objetivo de formar un complejo violeta-lugol. no se produce ningún cambio de color. se tiñen con la safrina. Lo ideal es escurrir la lamina poniéndola de canto y seguidamente secarla con papel de filtro.

.. Fig.... Disolver los 5g de fenol en 100 ml de agua destilada.... aunque sean sometidos a la acción de solventes tan fuertes como los ácidos para su decoloración...... . .. 2... 100 ml Preparación: ............ 1g ... Dejar la preparación en reposo por espacio de 24 horas y filtrar con papel de filtro.. Echar 50 ml de la solución en una probeta graduada de 100 ml de capacidad. Agua destilada .. el primer método de coloración para este tipo de microorganismo. Envasar en frascos de vidrio de color ámbar y rotular... Ácido clorhídrico concentrado........Coloración de "Ziehl Neelsen Algunos géneros microbianos dentro de los que se incluyen las microbacterias.. Añadir el resto de la solución de fenol hasta enrasar a 100 ml.. ... 5g .. Fucsina básica . fue concebido y aplicado por Robert Koch.. Fue modificada y perfeccionada posteriormente por Ziehl y Neelsen. ........ Lavar el mortero con la solución de fenol y añadir ese residuo en la probeta........ 108: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Ziehl Neelsen.. . Alcohol absoluto ... Cristales de fenol ..3 ml 199 ........ Moler en un mortero 1g de fucsina y añadir en la probeta que contiene los 50 mml de la solución del fenol. 1. Este método se utiliza hoy en dia... con alguna que otra modificación en función de las particularidades de la especie en estudio.. 97 ml . Colorantes y reactivos ........ 10 ml . Alcohol clorhidrato al 3 % ..... descubridor del agente causal de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis o Bacilo de Koch.... tienen la propiedad de retener el colorante con que han sido teñidas........... Alcohol etílico ..

........ los 20 ml de ácido sulfúrico a los 80 ml de agua destilada. 200 ... hasta que el colorante calentado comience a emitir vapores. .......... Procedimiento: Después que el frotis se ha secado colocar la lamina sobre el puente de coloración.. Rotular. Envasar en frascos de vidrio con tapa de rosca.......... . Retirar el mechero y dejar que el colorante actué sobre el frotis por espacio de 5 minutos..... 4....... Si en ese tiempo el colorante se secara.... 20 ml. .. dejar en reposo por 24 horas y filtrar con papel de filtro. 3....... 0.. Agua destilada .. Una ves diluido..........1g ... Rotular...... Preparación.. Agua destilada..... con cuidado. Cubrir el frotis con fucsina fenicada y oscilar suavemente la llama del mechero por debajo de la lamina.. por lo que su dilución se realiza sin ningún tipo de contratiempo Preparación. . . 1.... Envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca... Agregar los 3ml del ácido clorhídrico a los 97ml de alcohol etílico..0 ml El cloruro de azul de metileno es hidrosoluble... 80 ml.. ..... Cloruro de azul de metileno .......... Solución de ácido sulfúrico al 20 % .. (Nunca a la inversa).... Ácido sulfúrico... Solución de azul de metileno (Colorante de contraste) ... 100. Rotular......... añadir más.... pero sin volver a calentarlo...........Preparación .... Envasar en frasco de vidrio con tapa de rosca... Agregar poco a poco.

7. 6. que no disponen de ácido micólico en su pared o membrana. se caracterizan por tener una alta proporción de ácido micolico (lípidos) en su pared celular. después de teñidos por la fucsina. Echar sobre frotis la solución de alcohol clorhídrico o en su defecto la solución acuosa de ácido sulfúrico. La acción del calor.A. todos los microorganismos. Añadir la solución acuosa de azul metileno. como el Mycobaccterium tuberculosis y otras especies susceptible de ser coloreadas por esta técnica. dejando actuar el colorante de 30 segundos a un minuto. Fundamento técnico Al someter el frotis a la acción de la Fucsina. en tanto que las demás se quedan incoloras. ladeando la lámina y lavarla con agua corriente. las especies que posean el ácido micolico en la pared.A. independientemente de que dispongan o no de ácido micolico en sus respectivas paredes celulares serán coloreados de rojo. Dejar que la lámina se seque al aire sin aplicar papel de filtro para acelerar el secado. 5. Al aplicar la coloración de contraste (azul de metileno) las bacterias que retuvieron el color proporcionado por la fuscina. el compuesto lipidico impermeabiliza la pared a la acción del decolorante ácido. Lavar la lámina con agua corriente. (Bacilos ácidos alcohol resistentes) 201 . al igual que las células epiteliales y otros artefactos presentes en la preparación. El resto de las especies. no sufren ninguna alteración permaneciendo de color rojo. pero las especies que si fueron decoloradas.2. así como las células epiteliales y otros artefactos. 3. son decolorados. Esta operación debe durar aproximadamente unos 2 minutos. introducido en este método. con lo cual el microorganismo se mantiene teñido. Verter el exceso de colorante de la lámina. Al normalizarse la temperatura de la preparación. dejando actuar el decolorante. 4. hace que la misma se permeabilice y haga accesible la penetración de la fucsina. Principio: Las microbacterias. Lavar la lámina con agua corriente.R. tiñéndose la pared celular. resisten la acción decolorante y se mantienen teñidas de rojo. hasta que se observe que el solvente no extrae mas colorante de la preparación. Al aplicar el decolorante ácido. se tiñen de azul. Diagnóstico microscópico Los bacilos que se observan coloreados de rojo están diagnosticados como B.

5. 4. 202 . Dejar actuar el colorante por espacio de 20 minutos 7. Tinciones especiales: Existen decenas de metodos de coloraciones especiales. 6. Sacar la lamina del vaso de koplin y pasarla nuevamente 3 veces por la llama del mechero. 2. Lavar la lamina con agua cruda. lo que ha dado lugar a una modificación del metodo de tinciòn clásico. Intriouzca la lamina en el vaso de Koplin y tapelo. Coloque la lamina sobre el puente de coloración y cubrala con fuscina basica. Dejar actuar el colorante de contraste por espacio de 1 a 2 minutos. generalmente no susceptible de ser coloreados por los metodos anteriormente explicados. 8. En este tema haremos referencia solo a algunos metodos empleados con mayor frecuencia. 11. NOTA: Estos colorantes se comercializan ya elaborados por diferentes empresas. granulos. Dejar actuar los vapores de formol por espacio de 3 minutos. Colocar la lamina sobre el puente de coloración y cubrirla con azul de metileno. Coloque en el fondo de un vaso de koplin. capsulas. 10. Procedimiento: Después que el frotis se ha secado al aire. Dejar actuar el decolorante por espacio de 2 minutos. Pase la lámina 3 veces por la superficie de la llama del mechero. destinadas a la tinciòn de las diferentes estructuras de la celula microbiana. tales como flagelos. Lavar la lamina con agua corriente escurrir y dejar secar al aire. verde de malaquita o hematoxilina. 9. Lavar la lamina con agua cruda. Colocar nuevamente la lamina sobre el puente y cubrirla con alcohol clorhídrico al 1%. para hacer mas efectiva su tinciòn.leprae. es diferente a la del M. proceda de la siguiente manera: 1. Repetir el paso 3. esporas.tuberculosis. etc.Ccoloración de Ziehl Neelsen (modificada para Mycrobacterium leprae) Justificación: La capacidad de acidorresistencia del M. una pequeña mota de algodón impregnado con 3 gotas de formol al 40 % 3.

...... 2..0 ml Mezclar y dejar a temperatura ambiente Solución B .......Coloque sobre la mesa de trabajo 3 láminas portaobjetos limpias y acabadas de calentar......... Las laminas a emplear deben calentarse previamente y enfriarse a la temperatura corporal. 4.... Requisitos a tener en cuenta Para que la tinciòn de los flagelos sea efectiva se requiere cumplir con los siguiente requisitos 1.. 1........... Los medios de cultivo empleado para el desarrollo de las cepas deben ser adecuados.Alcohol etílico 95% . Guardar congelado en refrigeración (Tiempo de conservación: 1 mes). 100.. para que los frotis se sequen con rapidez........1... 203 . 0... Colorantes y reactivos Solución A: ... Lo que propicia que al ser posteriormente coloreado... tanto los flagelos como su disposición con respecto al bacilo se hagan visibles al microscopista....Fuscina basica (certificada para colores flagelos) .... Los cultivos tienen que ser jóvenes.... cuyo diámetro no excede de los 30mm........ 2.... 100............ 3.. Ajustar el pH con NaOH/1N...0 ml Preparación: Mezclar a volumen iguales A y la B..... lo cual esta muy por debajo del poder de rersouciòn del micrososcopico optico...........2g ........Agua destilada...... 1.Acido tanico.. Para hacer visibles a los flagelos se requiere aumentar su grosor.........Coloración Fragelar de Leifson (modicficación de Clark) Los flagelos son estructuras...... Las laminas portaobjetos y cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpias sin el mas minimo vestigio de grasa..Cloruro de sodio....... Procedimiento 1.........5g ........75g ......... Envasar en alícuotas de 50 ml...... para lo cual se emplea una suspensión de acido tanico que al precipitarse sobre su cubierta forman una capa que aumenta aparentemente su diámetro..

casi al extremo de cada una de las tres láminas e inclínelas suavemente para que la gota se deslice (no extender con asa).Cubra cada frotis con solución de azul de metileno 1:1. polímeros de glucosa u otros aminoazucares que contienen nitrógeno. Mezclar 5 mL de solución alcohólica satura de violeta de genciana en 95 mL de agua destilada. 4. Procedimiento.000 de borax y deje actuar el colorante por espacio de 10 minutos. Sobre una lámina portaobjetos mezcle partes iguales del material a teñir con suero específico. 5. Cubra el frotis con el colorante de Hiss. procedente de un cultivo líquido o del agua de condensación de un cultivo sólido. Una de las láminas por espacio de 8 minutos.Deposite una gota grande de una suspensaiòn bacteriana joven. 6.000 en solución acuosa 1:2. que después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. Coloración de cápsulas La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir de polipéptidos. 2. Fije la preparación a la llama del mechero. 3. Esperar de 5 a 10 segundos. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lámina hasta que el colorante se caliente y empiece a emitir vapores. la segunda por espacio de 10 minutos y la tercera 15 minutos.Espere a que las laminas se sequen al aire. Coloración de Hiss -Colorante capsular de Hiss.2. 3.Lave con agua corriente y espere a que las preparaciones se sequen al aire. Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria. 4. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a coloraciones especiales. 1. 204 .Lave con agua corriente.Eche sobre cada lámina portaobjetos 1mL del colorante de Leifson y déjelo actuar con un tiempo diferente para cada preparación. 7. Haga un frotis fino y déjelo secar al aire.

.... 4... 10g -Agua destilada .... Coloración de Esporas Coloración de Dorner...100 ml Preparación 1........ 205 .......5.. Colorante. 6........ ...... En un tubo de ensayo haga una suspensión densa del microorganismo en estudio con 3 o 4 gotas de agua destilada................ Hervir la solución en erlenmeyer durante 30 minutos............ en baño de agua de ebullición............... Agregar 0. ... Lavar el colorante con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%....... 3...... así como otras células y el fondo del campo se tiñen de rojo intenso en tanto que las cápsulas se observan incoloras y en ocasiones con un matiz azul muy tenue...... Dejar secar y observar a microscopio a 700x con lente de inmersión.... Distribuir en tubos de ensayo serológico.. unos 5 mL por tubo procediendo a taponearlos con tapas de corcho.. Resultado Las esporas se observan de color rojo.. retapándolos finalmente con papel de aluminio......Agregar 3 o 4 gotas de fucsina fénica de Ziehl Neelsen...... Procedimiento Coloque en el centro de una lámina portaobjetos un asa de la preparación y mézclela con un asa de nicrosina de Dorner. 2...Hervir de 10 a 15 minutos..................5 mL de formol al 40 % (como preservo) Filtrar dos veces con papel de filtro doble...... -Nigrosina .. Resultado Las bacterias......... Las células vegetativas no se colorean y el fondo del campo adquiere un tono gris....... haciendo un frotis delgado....... Solución de nigrosina de Dorner.... Dejar que la preparación se seque al aire y examinar al microscopio.

......... Cubrir con el colorante y dejar actuar durante tres minutos ............. Resultados Los gránulos se tiñen de azul oscuro y el cuerpo de la bacteria de azul claro... 3.. 3... 4.. Caracterice a los colorantes de acuerdo a su clasificación.... 6. Lavar con agua corriente........ 5..... ¿Cómo tiene lugar la reacción física en el proceso de tinción? 8. 2.. ¿En qué consiste el método de coloración compuesta? 206 ...... Azul de metileno . ¿Cuáles son las ventajas y las desventajas de la toxicidad que ocasionan los colorantes a los microorganismos? 10.......... añadiendo poco a poco el alcohol y revolviendo....5g Alcohol etílico 95 % ... Nombre los colorantes sintéticos de uso frecuente en microbiología.. ¿En qué consiste el método de coloración simple? 11. Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro....... En su estado natural ¿qué color y aspecto tienen las bacterias? ¿Qué usted entiende por colorantes? ¿Cuáles son las diferentes fuentes a partir de las cuales se obtienen los colorantes? 4. Mencione tres tipos de colorantes naturales.. 1.. Preparación.. 2...... Azul de metileno..... CUESTIONARIO 1. 100...Coloración de gránulos............ Colorante............ Dejar secar al aire y observar con lente de inmersión a 700x.............. 7. Procedimiento 1..0 mL Preparación Mezclar el azul de metileno en un mortero.......... Hacer frotis finos y dejar secar al aire........... ¿Cómo tiene lugar las reacciones químicas en el proceso de tinción? 9...

¿cómo son clasificadas las bacterias? 16. ¿De qué color quedan los B.12. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Gram? 13. ¿Con qué objetivo son tratadas con ácido tánico las bacterias. 23. ¿Cuál es la función del lugol en la coloración de Gram? 14. 20.R. De acuerdo al color con que quedan teñidas después de la coloración de Gram. antes de aplicar una coloración de flagelos? 21. Describa el procedimiento para la coloración de cápsula. después de ser sometidas a la coloración de Ziehl Neelsen? 19. Explique como usted realiza una coloración de gránulos. ¿Cómo reacción las bacterias al ser sometidas a la coloración de Gram cuando se le adiciona el alcohol? 15. ¿Cómo se observan las esporas y las células vegetativas coloreadas con nigrosina? 25. ¿Para qué se utiliza la coloración de Dorner? 24. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Ziehl Neelsen? 17.A. Describa el procedimiento para la realización de una coloración de Ziehl Neelsen modificada. 207 .A. ¿Qué requisitos han de tenerse en cuenta para realizar una coloración de flagelos? 22. ¿Por qué se debe calentar la fucsina en el proceso de tinción? 18.

OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA Cuando los microorganismos son colocados en medio de cultivo apropiados. tales como respirar. moverse.CAPÍTULO 16 MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCIÓN Los medios de cultivo son compuestos o preparaciones alimenticias elaboradas en los laboratorios de microbiología con los nutrientes requeridos para cada género en particular. Así como para controlar el paso de los gradientes químicos a través de la actividad osmótica de la membrana celular. sus componentes deben responder a las exigencias nutricionales de las especies que se pretenden cultivar. Para que un medio de cultivo resulte eficaz. Los medios e cultivo se clasifican: Atendiendo a su composición Atendiendo a los objetivos de su empleo. etc. se comprenderá que no haya un medio de cultivo standard que posibilite el desarrollo de todas las especies. 2. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1. constituyendo de hecho el micromundo de los microorganismos en condiciones de laboratorio. reproducirse. existiendo por lo tanto una amplia variedad. 208 . Debido a que existen diferencias en los elementos constitutivos de cada género o especie. metabolizan los nutrientes para sintetizar macromoléculas que suplan el desgaste natural de sus estructuras en cuyo proceso se libera energía que es empleada en el desarrollo de las actividades fisiológicas. así como en sus actividades metabólicas y los mecanismos para obtener los nutrientes. que conjuntamente con las codiciones ambientales adecuadas propician su desarrollo. se clasifican a su vez en: simples. Atendiendo a su composición. sintéticos y vivos. Por lo tanto la nutrición microbiana cumple dos objetivos fundamentales: la biosíntesis para la renovación de los compuestos de su estructura celular y la producción de energía.

como por ejemplo: someter la carne o los vegetales a un proceso de cocción para obtener un caldo nutritivo. etc. la papa. Cada uno de estos medios responde a las necesidades específicas de grupos microbianos determinados. 209 . La literatura informa cada año un número cada vez mayor de medios sintéticos recomendados para cultivar todo género de microorganismos. Agar SS. etc. 110: Frasco con medio de cultivo deshidratado. Cuando un medio simple natural sufre algún tipo de modificación. Este tipo de medio se comercializa en forma deshidratada por diferentes empresas cubanas y extranjeras que se dedican a la elaboración de medios de cultivo. siendo prácticamente imposible preparar dos lotes idénticos con productos iguales de distinta procedencia. existiendo en la actualidad mas de un centenar de diferentes medios sintéticos. jugos vegetales. Ejemplo: la leche. Se utilizan en su forma natural. los sintéticos están compuestos por un conjunto d nutrientes definidos cuyas proporciones son constantes. ejemplo: Agar Saboreaud. lo que permite reproducir el mismo medio de cualquier otro lote con exactitud.Medios simples En este tipo de medio no es posible conocer la proporción exacta de sus componentes nutricionales por ser muy variable. Medios sintéticos A diferencia de los medios simples. tal y como se encuentran en la naturaleza. las carnes. Kligler. Se puede decir que son verdaderas fórmulas químicas o recetas de cocina. Fig. pierde su condición de medio simple natural y se convierte en un medio simple artificial.

Medios vivos Los medios vivos están constituidos por animales o capas de tejidos que son utilizados para el cultivo de virus y rickettsias. ya que las que se encuentran predominando consumirían prácticamente casi todos los nutrientes lo que traería como resultado un pobre desarrollo o incluso ningún desarrollo del germen que nos interesa estudiar. b) Huevo de gallina con embrión de pollo de 7 a 10 dias. 111: Medios de cultivos vivos: a) Hamster. c) Cultivo de tejidos Atendiendo a los objetivos de su empleo Se clasifican a su vez en: medios de enriquecimiento. se encontrarían en desventaja si la colocamos en un medio de cultivo. cultivo de tejidos. donde ambas se puedan desarrollar. Ejemplo: el caldo Selenito utilizado en la investigación del coprocultivo que 210 . que no se desarrollan en los medios simples o sintéticos por requerir de la presencia de células vivas para reproducirse en su interior (parásitos intracelulares obligados). que se utilizan con el propósito de favorecer el desarrollo de una especie determinada que por encontrase en pequeñas cantidades en la muestra. Ejemplos: hámster (curieles jóvenes). huevos fértiles de gallina de 7 a 10 días. al mismo tiempo que no favorecen las necesidades esenciales del resto. Los medios de enriquecimiento satisfacen los requerimientos nutricionales del germen objeto de estudio. Medios de enriquecimiento Son medios generalmente líquidos. ratones blancos lactantes. etc. medios selectivos y medios diferenciales. Fig. medios de aislamiento. conjuntamente con otras especies que se hayan en mayor proporción. Estos medios no tienen utilidad práctica para el cultivo de las bacterias y los hongos.

que puede desarrollarse y multiplicarse en este medio salino. lo cual es determinado por cambios y reacciones evidentes que de manera específica produce cada especie en el medio de cultivo. En este caso se aprovecha la resistencia de esta especies a ciertos agentes químicos. Medios de aislamiento Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de germen al no poder desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies. como el colorante verde brillante. Ejemplo: el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado. d) Formación de manchas de color negro desde el medio hacia abajo. cuyas diferencias permiten encaminar la investigación hacia su identidad. b) Cambio de color de rojo a amarillo en el fondo del medo. el CI Na. Se utiliza para diferenciar la especie desarrollada por las reacciones bioquímicas que genera su actividad metabólica. por las características del medio. a) Medio sin sembrar (rojo). que generalmente se encuentra predominando en las muestras empleadas. verde brillante. Fig. Este medio se caracteriza porque uno de sus componentes. Otro ejemplo lo constituye el medio Agar.favorecen el desarrollo de los géneros Salmonella y Shigella. Ejemplo: el medio Kligler. que es utilizado en la investigación de las enterobacterias. que se utiliza para el aislamiento e identificación de la Salmonella sp/ en materiales patológicos. así como la presencia o no de manchas de color negro o evidencias o no de producción de gas. especialmente la Escherichia coli. inhibe el crecimiento de otras enterobacterias. lo que imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con excepción de los Estafilococos. que sin embargo. se encuentra a una elevada concentración. e)Manifestación de formación de gas 211 . de rojo a amarillo en la parte inferior o en todo el medio. Después de 14 a 16 horas de incubación se puede observar que el medio de cultivo cambia de color. Medios diferenciales En este tipo de medio de cultivo se pueden desarrollar sin dificultad diferentes especies microbianas. c) Cambio de color de rojo a amarillo en todo el medio. dificultando al mismo tiempo el de otras bacterias entéricas predominantes en el bolo fecal. 112: Medio diferencial (Kligler).

Como lo atacan muy pocas bacterias se emplea básicamente como solidificante. que proliferan principalmente a lo largo de las costas de Japón. Fig. La consistencia del medio de cultivo se logra con la adicción a la fórmula. 212 . etc. Medios líquidos Los medios líquidos no contienen agar. Una solución de 1. El agar en malayo significa jalea. 113: Diferentes formas de crecimiento en medios de cultivo líquidos. Bioquímicamente se trata de un éster sulfúrico de una molécula lineal galáctano que es insoluble en agua fría pero soluble en agua caliente. Perteneciente al grupo Agarofíto que comprende los géneros: Gellidium. Es una sustancia mucilaginosa que se obtiene de algas de color purpúreo. agua.CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Atendiendo a su consistencia los medios se clasifican en: líquidos semisólidos y sólidos. China. siendo comercializado en forma deshidratada. para ser procesadas industrialmente. de celulosa y otra más eterna de sustancias pécticas. Pteroclaida. Las paredes de la planta posee una capa interna. y Acanthopeltis. caldo lactosado. se mueven con libertad y su desarrollo provoca la formación de un enturbamiento difuso o sedimento visible. Gracilaria. Malasia y California meridional. Ejemplo: Caldo Selenito. Para la producción de agar se extraen las capas pécticas ricas en agarosa y agaropectina.5 % de agar forma un gel firme entre 32 y 390 C que no se funde por debajo de 850 C. siendo trabajados en forma de caldo. Ceilán. peptonada Alcalina. de un compuesto denominado AGAR. Los microorganismos desarrollados en medios líquidos.

aunque ocasionalmente pueden desarrollarse a partir de dos especies distintas. uno de los objetivos de la nutrición microbiana es la biosíntesis. lo que da lugar a la formación de colonias atípicas. Teóricamente cada colonia se genera a partir una o varias bacterias de la misma especie.Medios semisólidos Estos medios contienen un % de agar menor que el empleado para los medios sólidos. La solidez proporcionada por el agar impide a los microorganismos su migración en el cultivo por lo que se multiplican en un mismo sitio dando lugar a un cúmulo de millones de descendientes que forman sobre el cultivo estructuras macroscópicas denominadas colonias de diferentes formas. COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS Como fue explicado anteriormente. Ejemplo: medio de "Cary .5 % de agar. De lo anterior expuesto se deduce que la cantidad de Agar añadida al medio de cultivo será directamente proporcional al grado de solidez que adquiera el medio. c)Después de 24 horas de incubación (presencia de colonias). Ejemplo: Agar Saboreaud Dextrosa. Medios sólidos Son medios de cultivo que contienen en su composición alrededor de 1. aspectos y tamaños. 114: Medio de cultivo sólido distribuidos en placas de Petra: a) Medio sin sembrar. Agar Sangre. Agar Violeta Rojo Bilis.Blair" y agar semisólido para motilidad. cantidad suficiente para la gelificación del medio. etc. mediante la cual el microorganismo degrada los 213 . Cada género y especie producirá un tipo de colonia con caracteres culturales diferentes. lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad de los gérmenes. Fig. que permitirán al investigador orientarse hacia la identificación ulterior de la especie. b)Medio sembrado.

5 0.5 0. con los componentes que aporten a la nutrición los elementos químicos de referencia: Fuente de oxigeno e hidrógeno El solvente de todos los medios de cultivo es el agua. siendo por lo tanto la principal fuente de obtención. A continuación haremos referencia a las distintas fuentes a partir de las cuales se pueden elaborar los medios de cultivos. Fuente de carbono Las formas aprovechables van desde el CO2 atmosférico altamente oxidado hasta complejas formas orgánicas.5 0. 214 . los lípidos y los carbohidratos. coli. que en el proceso de degradación liberan en alguna proporción estos elementos. como las proteínas. Componentes químicos de las diferentes estructuras de la E. Algunas bacterias utilizan el oxígeno y el hidrógeno que forman parte de la composición de aire. Veamos el siguiente ejemplo. los compuestos empleados en la preparación del medio de cultivo deben aportar todos y cada uno de esos elementos. por lo tanto los ingredientes con que se elabora un medio de cultivo deben responder a las necesidades específicas de la especie que deseamos que se desarrolle en él. por parte de la bacteria de oxigeno y nitrógeno mediante su ionización y en menor grado a través de la actividad catabólica que desarrollan sobre los compuestos orgánicos.3 Por lo tanto si pretendemos que se desarrolle una Escherichia coli.2 0. transformándolos en los diferentes compuestos que conforman su estructura. donde se indican pormenorizadamente los componentes químicos de las diferentes estructuras de la Escherichia coli: Cuadro 10.nutrientes presentes en el medio de cultivo y posteriormente lo sintetizan en el interior de la célula. ELEMENTOS Carbono Oxigeno Nitrógeno Hidrógeno Fósforo Azufre Potasio % PESO SECO 50 20 14 8 3 1 1 ELEMENTOS Sodio Calcio Magnesio Cloro Hierro otros % PESO SECO 1 0.

cisteína y del fósforo que está presente en los ácidos nucleicos y los nucleóticos. ejemplo: cloruro de calcio. específicamente del aminoácido. ya sea como cloruros. potasio. ácido cítrico o glicerina. NO3 o nitrógeno orgánico debe ser transformado extracorporeamente en amonio para poder ser incorporado a la célula bacteriana. Especies del género Pseudomonas. Estos dos elementos y otros como: hierro. el cual es empleado para la carboxilación del fosfornolpivurato para formar intermediarios biosintéticos como el carbamilfósfato como precursor de arginina. el nitrógeno debe estar en forma de amonio. si está en forma de N2. Otros microorganismos (heterótrofos) emplean fuentes orgánicas como las proteínas. Independientemente de. sulfato de cobre. fosfato de magnesio. en tanto que otras. La mayor proporción del carbono presente en el sustrato orgánico entra en la vía metabólica para producir energía y se excreta como CO2. urea o compuestos amoniacales así como a partir de fuentes inorgánicas como el nitrato. la fuente de obtención para ser asimilados por la bacteria. sulfhídricos de las proteínas. mas exigentes. huevo etc. en la composición del medio de cultivo. Fuente de nitrógeno Es obtenido por los microorganismos de las proteínas y sus derivados. transformándolas por hidrólisis en aminoácidos. ejemplo: el azufre lo obtienen de los grupos. sulfatos o fosfatos. es decir. son suministrados a los microorganismos. O en forma de peptonas un producto intermedio del metabolismo de las proteínas.Para los microorganismos fotosintéticos y litotróficos. leche. el CO2 es la única fuente de carbono. 215 . Algunos géneros son incapaces de reducir los nitratos. requieren de la presencia de proteínas. pirimidinas y para la síntesis de anillos purínicos. carbohidratos y lípidos. para obtener el carbono que los provea de energía. etc. en forma de sales minerales. así como productos derivados de estos compuestos como aminoácidos. tales como: peptonas. tales como: carnes. el cual es utilizado por la mayoría de los microorganismos fotosintéticos. utilizan alrededor de 90 compuestos orgánicos diferentes como fuente de carbono y energía. Hay bacterias que fijan el nitrógeno mediante su reducción preliminar a amoniaco. Fuente de iones inorgánicos Son obtenidos por los microorganismos de la materia orgánica que se encuentra formando parte de la composición del medio de cultivo. por lo que deben obtener el nitrógeno a partir de las sales de amonio que se adicionan al medio de cultivo. magnesio. cinc y cobalto.

Como aceptor de hidrógeno en las reacciones REDOX . cofactor inorgánico para reacciones inorgánicas.Constituyentes de intermediarios biosintéticos y precursores. .Participa en la permeabilidad celular. .Componente de algunas coenzimas como Co A y otros. . .Como cofactor de varias enzimas.5 a 8. . .Constituyente de la clorofila.Constituyentes de algunos aminoácidos. fosfolípidos y ATP. . . . . .Constituyentes inorgánicos de determinadas enzimas. . HIDROGENO CARBONO NITROGENO AZUFRE FOSFORO POTASIO MAGNESIO CALCIO MANGANESO HIERRO COBALTO COBRE / ZINC MOLIBDENO MAGNESIO SODIO / CLORO 216 .Constituyentes de los citocromos (imprescindible en la respiración celular).Los gramnegativos lo utilizan para la síntesis de la pared celular.Constituyentes de materiales celulares orgánicos. . y la cisteína derivados del metabolismo de las proteínas.Útil en la fijación de nitrógeno y en la reducción de nitratos..Sustancia tampón para mantener el pH del medio en un rango de 4. .Regulador del grado de asociación de las partículas ribosómicas. Proteínasas. . . fotosintéticos. lo usan como fuente de electrones en forma de donadores de hidrógeno. . . Ej. .Constituyente de la vitamina B12 y sus coenzimas derivadas. . Los m. .Activador de determinadas enzimas.Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales. . .constituyente del agua celular y de transporte ..encimas formadas por la célula bacteriana. .Catión celular.Participante en la unión enzima . a veces remplazando el magnesio.) . como la metionina. . . cofactor de algunas enzimas. así como de materias orgánicas celulares.Constituyentes en la síntesis las proteínas.Catión celular. incluyendo aquellas con ATP.Como aceptor de electrones en la respiración aerobia.Constituyentes del agua celular y de transporte.Participante en la permeabilidad celular. . coenzimas.Catión celular. cofactor de algunas enzimas.Estabilizador osmótico.Cuadro 11: función de los elementos químicos en la nutrición microbiana FUNCIONES ESPECÍFICAS DE CADA ELEMENTO ELEMENTOS OXIGENO FUNCION FISIOLOGICA (ACTUA COMO.Como parte de las hemoproteinas.Cofactor inorgánico de varias enzimas.sustrato.constituyente de los compuestos celulares orgánicos .Componente principal de las esporas. ácidos nucleicos y co.Constituyentes de ácidos nucleicos.Excretor de las enzimas.o. . .

2. Mida en una probeta graduada el agua destilada a emplear. Y proceda a colocarla sobre una fuente de calor con el objetivo de tibiar el agua. la cual debe tener un pH y conductividad adecuada. por lo que la elección de un determinado medio de cultivo estará en correspondencia con el microorganismo que presuntivamente esperamos que se desarrolle durante la investigación al respecto. precipitación. Seleccionar de los estantes cada uno de los componentes del medio serciorandose de que no hayan sobrepasado la fecha de caducidad y que se observen en buen estado sin cambios organolepticos ostensibles como: resequedad. Con rigurosa precisión. Elaboración a partir de sus componentes 1. 217 3. Como ya se explicó. Un medio de cultivo. teniendo especial cuidado en desestimar el peso de "tara". cada uno de los cuáles. teniendo en cuenta que la mayoría de los medios son de importación. . pese por separado cada uno de los productos sólidos. no solo desde el punto de vista económico. 4. sino por lo que resulta mas importante.ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO Elaborar un medio de cultivo es un procedimiento relativamente fácil. por ocasionar demoras evitables en el tratamiento del paciente. 6. etc. matraz. los errores en el diagnóstico de laboratorio ocasionado por el empleo de medios deficitarios que menoscaban la fiabilidad de la institución. La variabilidad de los medios responde a los requerimientos nutricionales de los distintos grupos microbianos. formado por diversos compuestos en proporciones fijas que constituyen su fórmula particular. con todos los efectos negativos que eso entraña. que realicemos en el laboratorio. Vierta en una cristalería (erlenmeyer. así como obviar determinados requisitos pre establecidos son causas frecuentes de su mala elaboración. la fórmula del medio que se desea preparar (generalmente indicada para un litro). Localizar en el formulario existente en el laboratorio. se puede elaborar a partir de los componentes que se indican en la fórmula o empleando medios comerciales deshidratados. 5. existen centenares de medios de cultivo diferentes. La premura. hidratación. a emplear en una balanza adecuada. pero su calidad dependerá esencialmente del cumplimiento estricto de los pasos establecidos. cambio de color.) de tamaño suficiente aproximadamente a las ¾ partes del volumen de agua contenido en la probeta. Mida con precisión cada uno de los productos líquidos a los volúmenes exactos que se indican en la fórmula. etc. atendiendo a las particularidades del medio de cultivo en cuestión.

Coloque sobre el plato de una balanza granataria una cápsula de porcelana o un vidrio reloj limpio y proceda a determinar su peso (tara) 218 5. procediendo a continuación a verterlo en el resto del medio para que la proporción estipulada en la formula no se altere. por unos minutos imprimiendo intermitentemente movimiento de rotación al frasco. Retire la cristalería de la fuente de calor una vez que el agua esté tibia y colóquela sobre la mesa de trabajo 8. El nombre del medio de cultivo. observe las paredes del recipiente durante su agitación.Adicionar el agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen de medio previsto. Cápsula de porcelana. 9.7.S. . con lo que se evita el tener que pesar o medir previamente cada uno de sus componentes. en el orden que se establece en la fórmula. en la cristalería donde fue pesado (Ej. Elaboración a partir de medios comerciales deshidratados En la actualidad diversas empresas dedicadas a la fabricación de medios de cultivo. mientras presenta gránulos es evidente que aún no se ha disuelto. La fórmula del medio de cultivo. vidrio reloj. Para determinar que el medio se ha diluido. Las instrucciones para hidratar el medio donde se precisa la cantidad de medios deshidratados que debe pesarse para preparar un litro. 3. "Mac Conkey" "S. 10. dándole en cada ocasión un movimiento de rotación al frasco para que los ingredientes se mezclen.) o medido. En el caso que no se requiera preparar ese volumen se harán los cálculos pertinentes. Si quedara algún residuo. lo comercializan en forma deshidratada (pulverizados) que contienen la totalidad de los ingredientes. 2. someter el medio nuevamente a la acción del calor. Estos medios se expenden en frascos de tamaño variable con tapa de rosca hermética estando provistos de una etiqueta en la que se encuentran impresos los siguientes datos: 1. etc. Ejemplo: "Agar Saboreaud Dextrosa". 11. "Kligler". 4. se enjuagará con parte del volumen de agua que queda en la probeta. Si se observa que los componentes no quedan disueltos. Proceda a adicionar en el agua tibia los compuestos pesados y medidos previamente. El pH a que debe ajustarse e medio después de hidratado y antes de su esterilización." etc. donde se relaciona cada uno de sus componentes y las proporciones respectivas.

añadiendo el resto del agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen total previsto. Baje el recipiente de la fuente d calor y proceda a verter en su interior. Coloque el recipiente sobre una fuente de calor durante dos o tres minutos para que el agua se tibie.Fig. 7. Debe evitarse el recalentamiento excesivo que provocaría la caramelización de los azúcares y el deterioro de otros compuestos nutritivos básicos. Sume el peso de la "tara" y el de cantidad de medio de cultivo a pesar y mueva las pesas hasta que indiquen en la barra el peso total. 9. Coloque nuevamente el recipiente sobre la fuente de calor. el medio deshidratado ya pesado que se encuentra en la cápsula d porcelana o vidrio reloj. 219 . 12. imprimiéndole movimientos de rotación cada 30 ó 40 segundos hasta observar que en las paredes de la cristalería no se detecta la presencia de granulaciones lo cual será sugerente de que el medio no se ha diluido adecuadamente. 10. 11. Revuelva con el depresor plástico e incorpora este residuo en el erenmeyer que contiene el medio . Con el empleo de un depresor o cuchara plástica extraiga del frasco el medio de cultivo deshidratado y deposítelo en el recipiente que se encuentra en el plato de la balanza hasta que la punta de la barra coincida con el "fiel". Deposite un poco del agua destilada que quedó en la probeta en el interior de la cápsula de porcelana. 6. Mida en una probeta graduada el volumen de agua destilada a emplear y vierta aproximadamente las ¾ partes d ese volumen en un erlenmayer o matraz de tamaño suficiente. 115 : Datos que se encuentran en la etiqueta de los frascos de medios de cultivo. con ayuda de un depresor plástico. con sumo cuidado. 8.

siendo distribuido en las placas con posteridad a su esterilización. 1N. Al depositar el medio en las placas la altura del volumen no debe sobrepasar los 3 ó 4 mm.Determinación del pH del medio Una vez que el medio ha sido diluido o fundido se extrae con pipeta una alicuota y se deposita en un tubo de ensayo que será utilizada como muestra representativa de todo el volumen de medio para determinar su pH. Ajuste de pH En el caso de que el pH medido no se corresponda con el indicado en la fórmula del medio de cultivo deberá ser ajustado para lo cual se emplean soluciones patrones con diferentes niveles de concentración. Si se desea una mayor precisión se empleará el pH metro (ver capitulo 9). Para determinar el pH con tira de tornasol se cortan 4 ó 5 cm de la cinta d papel del carrete y se introduce una de las puntas en el medio de cultivo por 4 ó 5 segundos. Tanto las soluciones ácidas como las alcalinas se emplean a concentraciones 5N. después que la temperatura del medio haya descendido de 50 a 55 C. la caja que lo contiene se coloca boca abajo sobre el borde de la tapa hasta que se refresque. un volumen determinado. 1N y 0. antes de su esterilización. Cuando el medio se haya solidificado. a la cual se le adiciona cuidadosamente gota a gota. se esteriliza en un erlenmeyer taponeado con algodón y retapado con una capucha de papel de estraza. en el reverso de la placa. Para ajustar el pH se utiliza la alicuota empleada para medirlo. la disolución ácida o alcalina según corresponda hasta obtener el pH deseado. las utilizadas para acidificar el medio y bajar el pH son generalmente HCL o H2SOA y las utilizadas para alcalinizar el cultivo y subir el pH son NaOH o KOH. en que se 220 . conociendo el volumen de la solución patrón empleada para ajustar el pH de la alicuota se procede a hacer los cálculos pertinentes para determinar la cantidad requerida para todo el volumen del medio de cultivo. se utiliza tiras de papel tornasol o mediante el empleo del pHmetro. Al extraer la tira se compara el color que ha tomado la punta después de contactar el medio con la escala que tiene por sus laterales el carrete cuyos colores se corresponde con pH diferentes. mientras que el medio que vaya a ser distribuido en placas de "Petry". para lo cual. Distribución de los medios de cultivo El medio de cultivo que vaya a ser trabajado en tubos de ensayo se distribuye en los mismos con pipeta. para evitar que el exceso de calor produzca agua de condensación que se adhiera.

tapa para ser guardado en el refrigerador. al bajar la temperatura. para que no se acumule en su reverso agua de condensación. así como otros medios elaborados con sueros no deben ser sometidos a la esterilización en autoclave pues se deterioran. aunque el tubo se coloque en posición vertical. Observaciones 1. en el medio después de autoclaveado. se hacen mas propensos a la precipitación y sufren una disminución en su potencial nutricional. sin la presencia en el interior de la tapa de agua de condensación. como el "Dulcitol" 10 %. por ejemplo en la preparación del medio de cultivo denominado "Agar Sangre". estas deben quedar flojas durante la esterilización. para adicionar el volumen de sangre lo cual requiere que sea vertida poco a poco. Fig. se debe esperar a que la temperatura del medio descienda entre 45 a 50 C. De acuerdo al medio de que se trate la inclinación será mas o menos acentuada en interés de los objetivos que se persiguen con los cultivos que se desa221 . se debe realizar esta operación con sumo cuidado. debiendo ser apretadas al concluir la esterilización. Cuando las instrucciones indiquen la adición d un reactivo o compuesto estéril. mantengan esa forma. Cuñas de medios agaranizados Los medios de cultivo agaranizados (que contienen Agar) distribuidos en tubos generalmente se utilizan en forma de cuña. 116: Manera de colocar la placa. una vez que el medio se ha solidificado hasta que se enfríe.Evitar refundir los medios de cultivo pues en la medida en que esto ocurre. imprimiéndole simultáneamente movimientos de rotación al frasco para asegurar una aereación adecuada de la sangre. observando minuciosamente todas las precauciones de asepsia.Algunos medios de cultivos elaborados básicamente con hidratos de carbono. para permitir el flujo de aire. Si el medio es distribuido en tubos con tapas de rosca. Para lograr que estos medios adopten esa forma deben ser colocados oblicuamente sobre la mesa de trabajo estando aún fundidos para que cuando solidifiquen. 2. en estos casos se emplea la Tindalización.

ya que el objetivo del empleo de este medio es que se produzca el desarrollo bacteriano en toda la superficie de la cuña (slam) por lo tanto al no ser de interés que quede un fondo como en el medio "Kligler". en el caso del medio "Kligler" la inclinación es menos acentuada para propiciar que el fondo del tubo quede lleno de medio de cultivo a una altura aproximada de 2 cm de altura. Agar semisólido para motilidad. Serán colocados en gradillas y mantenidos hasta su empleo a temperatura ambiente. 2.Los medios distribuidos en placas de "Petry" serán colocados en las parrillas del refrigerador boca abajo tan pronto se hayan solificado. Por ejemplo. tioglicolato. Si se tratara el medio "Citrato de Simmons". Fig. 117: Cuñas de medios agarinizados en tubos de ensayo: a) Kligler. etc. Una vez abierto el frasco se debe escribir en la etiqueta. la inclinación debe ser mas acentuada. Saboreaud. Conservación de medios elaborados Alcanzada la temperatura ambiente después de esterilizados. deben ser ordenados en los estantes por lotes y fecha de vencimiento. quedando en su superficie una cuña de menos de 2cm. prácticamente toda la superficie será de slam. 222 . la fecha en que ocurrió su apertura para que sea de conocimiento de otros que ese frasco está en uso. b) Citrato de Simmons Conservación de medios de cultivo comerciales Los frascos con medios de cultivos nuevos.rrollen en los mismos. Deben ser almacenados en lugares frescos y lejos de aparatos térmicos y de ventanas. Por ejemplo: 1.l os medios serán conservados de diferentes maneras atendiendo al medio de que se trate.

.Los medios como el "Lowestein . 5. al sacarlo de su almacén frío y colocarlo a una temperatura ambiente.Los que contienen colorantes o indicadores se deben proteger de la luz durante su almacenamiento. ya que si están mucho tiempo en almacenamiento se pueden resecar de manera imperceptible y ocasionar reacciones inexactas y fallas en el crecimiento.Los que tienen propiedades REDOX. 4. antes de su empleo. Empleo de los medios Los medios preparados que han estado conservados en refrigeración. No se deben preparar medios de cultivo en exceso. facilita su contaminación. como por ejemplo "selenito" se deben conservar en las parrillas del refrigerador. 4. Comprobación de la esterilidad de los medios elaborados De cada medio de cultivo preparado y almacenado se seleccionan dos o tres placas o tubos y se colocan en la incubadora durante 24 a 48 horas para comprobar su esterilidad. CUESTIONARIO 1. 3. Observación El agua de condensación y la opacidad que se produce en algunos medios conservados en tubos. ¿Qué usted entiende por medio de cultivo? Cuales son los objetivos de la nutrición microbiana? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a su composición? ¿Que es un medio artificial? ¿Cómo se denominan los medios de cultivo que están constituidos por una variedad de ingrediente fijos con gramaje y volumen predeterminados? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a los objetivos de su empleo? 223 6. deben extraerse varias horas antes e incubarlos durante 30 minutos. Cuando se obvia este paso se puede demorar la iniciación del crecimiento al ser colocado el inóculo en una superficie fría.Jensen. se almacenarán en refrigeración para prolongar su tiempo de duración. 2. 5.3.

14. ¿De cuantas maneras se puede ajustar el pH del medio de cultivo? ¿Cómo se distribuye el medio de cultivo antes de su esterilización? Explique como se preparan las cuñas en tubo de medios de cultivo sólidos. 11. 16. ¿Qué información aportan los medios diferenciales? ¿Cómo se denomina el producto que se añade a los medios de cultivo para sodificarlos? ¿Cuales son los compuestos nutritivos básicos? A partir de que fuentes. 18. las bacterias obtienen el oxigeno y el nitrógeno.7. Describa como se hidrata el medio de cultivo una vez pesado. Explique como usted realiza la pesada de un medio de cultivo deshidratado. 15. ¿Como se conservan los diferentes medios una vez elaborados? ¿Cómo se comprueba la esterilidad de los medios de cultivo recién elaborados? ¿Que proceder debe seguirse cuando se va a realizar la siembra en un medio que está conservado en refrigeración? 224 . ¿Que compuestos podemos incorporar al medio de cultivo que le sirva a la bacteria como fuente de nitrógeno? ¿Que compuesto nutritivo aporta el carbono que le sirve a la bacteria para obtener energía? ¿Que aporta a la nutrición bacteriana el magnesio y el calcio. 21. 10. 19. 17. 12. 8. 13. 9. 20.

El número de células microbianas que se encuentran en el volumen o fracción sembrada se denomina inóculo. tales como: el asa. tales como la guataca. guarda estrecha relación con la siembra agrícola convencional. de la misma manera. etc. con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente. sobre o dentro. colmado de millones de bacterias de la misma especie. podremos observar un proceso similar. sin las características físicas de éste. aunque más dinámico. Para comprender debidamente esta analogía. INSTRUMENTOS DE SIEMBRA Los instrumentos de siembra son los objetos empleados para tomar el volumen o fracción de la muestra y sembrarla en el medio de cultivo. y llega alcanzar tal magnitud que se hace visible microscópicamente al observador. Este agregado de bacterias se denomina colonia. son sustituidos por los instrumentos de siembras. para factibilizar su estudio y posterior identificación.CAPÍTULO 17 SIEMBRA E INCUBACIÓN INTRODUCCIÓN La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar una pequeña fracción o volumen de la muestra. Si sustituimos la semilla de naranja. hasta alcanzar una cifra exorbitante de descendientes que puede calcularse por millones. la aguja de platino. . la que posteriormente se desarrollará hasta convertirse en un árbol con las características de esa especie de naranja el cual fructificará. por una especie bacteriana y la sembramos en un medio de cultivo apropiado. aunque si. Este tipo de siembra. analicemos el siguiente ejemplo: Si sembramos una semilla de naranja en un terreno fértil. el azadón. Todo lo cual será equivalente a la obtención de un árbol frondoso. ya que al transcurrir solamente algunas horas. los aperos de labranza. la bacteria comenzará a multiplicarse. al transcurrir un período de tiempo determinado. portadoras del mismo tipo de semilla que las generó. 225 . de uno o varios medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios par las especias que presuntivamente contiene. en decenas o cientos de naranjas. veremos que emerge de ésta una pequeña postura. donde la semilla es equivalente a la bacteria y el terreno fértil al medio de cultivo. etc.

consisten en un alambre de platino o de nicrón. 2. insertado a un cabo metálico. en lugar de ser recto. Las de vidrio fusible. el cual sirve para que el manipulador pueda tomar en su mano este instrumento de siembra. El método de esterilización es igual al empleado para la aguja. d) Pipeta. Espátula de Drigalski. el cual está doblado por uno de sus extremos en forma 226 . consisten en un tubo fino de varios mm de diámetro por unos 12cm de largo. e) Hisopo Diferentes tipos 1. después de haber sido retirados de esa fuente de calor. pero con la particularidad de que el extremo terminal tiene la forma de un triángulo. La espátula de Drigalski puede ser metálica o de vidrio fusible. cuando son metálicas. Tanto el platino como el nicrón tienen la propiedad de calentarse rápidamente y ponerse a al rojo vivo. Es similar en todos los aspectos a la aguja. 3.Fig. El asa. c) Espátula de Drigalski. Se esteriliza a la llama del mechero de igual manera que la aguja y el asa. de platino o nicrón. cuando son expuestos directamente la llama del mechero y de enfriarse a los pocos segundos. el cual se encuentra insertado por uno de sus extremos a un cabo metálico. con la diferencia de que el extremo terminal del alambre de platino o nicrón. que tiene aproximadamente una longitud de 7cm. 118: Instrumentos de siembra: a) Asa de platino. b) Aguja de platino. Consiste en un fino alambre recto. Esta característica se aprovecha en el trabajo diario del laboratorio. forma un pequeño círculo en el extremo con un diámetro de 4 a 5 mm. La aguja. para esterilizar en pocos segundos este instrumento en cada ocasión en que se requiera su uso. Al igual que la aguja y el asa.

Pipeta. Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el 227 . 4. Siembra por estrías. se debe esperar unos segundos para que se enfríe y en esas condiciones utilizarlas en la realización de la siembra. 5. Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón. graduadas en centésimas y milésimas de mL.2 mL. Siembra por punción. Las más utilizadas en el trabajo ordinario son: las de "Pasteur". 4. con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno. Consiste en un fino aplicador. Para su esterilización la parte triangular de la espátula se introduce en un recipiente que contenga alcohol y de inmediato se aproxima a la llama par que se encienda y flamee el triángulo de la espátula. casi siempre se utilizan a continuación para realizar la siembra en el medio del cultivo. Hisopos. MÉTODOS DE SIEMBRA El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo. deben ser colocados en el interior de tubos de ensayo de tamaño apropiado. Las pipetas utilizadas como instrumentos de siembra. los hisopos. 3. por su parte posterior. taponeados y retapados antes de proceder a su esterilización en autoclave. los métodos de siembra más empleados son los siguientes: 1. antes y después de realizar la siembra. una vez confeccionados. deben ser previamente esterilizadas en autoclave y estar provistas de un bulbo de caucho. con una pequeña mota de algodón adherida en uno de sus extremos. que se elaboran con cristal fusible careciendo de escala graduada y las de 0. Cuando la llama se apague. generalmente de madera. similar las empleadas en los goteros. que mide unos 2 cm por cada uno de sus lados. ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva.. Siembra volumétrica. Cuando se emplean para tomar las muestras. Siembra masiva.de un triángulo equilátero. 2. deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo.

calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. Siembra por estrías Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña.(Slam) Instrumentos de siembra a emplear. Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. Procedimientos Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón. 1.Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir. 2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto. 3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe. 4. Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado. 5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior. b) Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo) c) Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación. 228

d) Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Fig. 119: Siembra microbiológica en medios de cultivos distribuidos en tubos de ensayo: 1) y 2) Retirar el tapón del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5) Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el tubo.

- Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña, trazando una línea longitudinal. - Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag. - Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo. - Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal. - Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios sólidos en cuñas (tubos de ensayo): a) Trazando una línea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el instrumento con el inóculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c) Roturando el medio

229

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petry, proceda de la siguiente manera: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b) Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie. c) Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento. d) Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo. e) Repita esta operación una o dos veces más.

Fig. 122 : Método de siembra por estrias en medios de cultivo sólidos distribuidos En placas de Petra

230

f) Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo. g) Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo. Cuando la muestra es tomada con hisopo. 1. Si la siembra se va a producir en una cuña de agar, se procede en forma similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo. 2. Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas, el primer segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con asa estéril, para lograr una diseminación por agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la diseminación cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a continuación con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminación cruzada: a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z"en la superficie del medio; b) Completar la siembra con un asa de platino estéril, imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la "Z"

Siembra por punción Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. 231

Fig. 124: Siembra por punción

Siembra volumétrica Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado. Siembra masiva Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con espátula de Drigalski

INCUBACIÓN
Una vez realizada la siembra, atendiendo a los requerimientos de los géneros o especies que presuntivamente se encuentran en la muestra, se debe proporcionar a los cultivos la temperatura y las condiciones de aereación que favorezcan su desarrollo, durante un tiempo predeterminado que será variable para cada grupo de microorganismo.. 232

la cual podrá opacar todo el cultivo o darle un aspecto granuloso o nebuloso. Cultivo mixto Cuando dos o más especies se desarrollan simultáneamente en el medio de cultivo. por lo que basta con dejar los tubos o las placas sembradas sobre la mesa de trabajo para que se desarrollen sin dificultad Los microorganismos que requieran para su desarrollo una temperatura más elevadas o más bajas que la ambiental. denominados colonias bacteriana . ocasionan agregados bacterianos. deben ser colocados en una incubadora provista de temperatura regulable o con condiciones especiales como las incubadoras de CO2 y las anaeróbicas. (Ver Capitulo 7) MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO EN LOS MEDIOS DE CULTIVO En medios de cultivo líquidos En general el crecimiento se manifiesta por turbidez. Cultivo puro El cultivo es puro cuando en el se desarrolla una sola especie. cuyos caracteres serán típicos para cada genero o especies.Algunos tipos de microorganismos (como la mayoría de los hongos) se desarrollan sin dificultad a temperatura ambiente y en condiciones de aerobiosis. Esta acción se denomina resiembra. En medios de cultivos sólidos Como la bacteria se encuentra impedida de desplazarse por la solidez del medio. 233 . para de esta manera obtener un cultivo puro. nos interesa estudiar un solo tipo de colonia. Resiembra Cuando en el cultivo mixto. sus descendiente que alcanzan magnitudes millonarias en menos de 24 horas. se procede a extraer una pequeña porción con un asa de platino estéril procediendo a sembrarla en un medio de cultivo idóneo. que dan lugar a estructura visibles de diferente formas. aspecto y colores. al multiplicarse en un punto especifico.

CUESTIONARIO 1.? 10. 5. 2.? 11. ¿Como se manifiesta el crecimiento bacteriano en los medios líquidos y sólidos. 3. ¿Qué usted entiende por resiembra? 234 . ¿Cómo se realiza la siembra cuando se utiliza el mismo hisopo con que se toma la muestra? 9. 4. 6. 7. ¿Cuál es la diferencia entre un cultivo puro y uno mixto? 12. ¿Cuales son los aspectos a tener en cuenta para incubar los cultivos.? 8. ¿Qué usted entiende por siembra microbiológica? ¿Describa los diferentes instrumentos de siembra? ¿Describa el método de siembra por estrías? ¿Cómo se realiza la siembra por punción? ¿Cómo se denomina el método de siembra que se realiza con pipetas? ¿Con que objetivo se utiliza la espátula de Dyigalski? ¿Describa como se realiza la siembra con asa de platino o hisopo en el slam de los medios sólidos en tubos.

para lo cual se emplean indistintamente productos químicos. es determinar. HIDRATOS DE CARBONO Los carbohidratos comúnmente empleados son diversos. para conocer su capacidad metabólica frente a esos sustratos o se enfrentan a otros tipos de compuestos para determinar su resistencia. en la fórmula de algunos medios de cultivo empleados al efecto. se incluyen determinados compuestos con el objetivo de favorecer su desarrollo en detrimento de otras especies contaminantes o no. de la composición de diversos medios. entre otros y los disacáridos como: lactosa. Los más utilizados son los monosacáridos como: glucosa. galactosa y fructuosas. principalmente carbohidratos. así como a diversos productos biológicos para evidenciar sus reacciones. Uno o varios de estos carbohidratos suelen formar parte. como por ejemplo: el ácido láctico. o para distinguir y diferenciar las colonias producidas. que le son proporcionados a las especies de interés. sacarosa. fermenta "in vitro" el carbohidrato con formación de sustancias ácidas. si el microorganismo en estudio. entre los que se encuentra la rafinosa y polisacáridos como la celulosa y el almidón. El objetivo de su empleo. para el cultivo primario o las resiembras. las especies deben ser identificadas. para que puedan desarrollarse plenamente a nivel de laboratorio. 235 . así como. de los medios bioquímicos destinados para el diagnóstico de las especies. También algunos trisacáridos. como fuente de carbono. maltosa y celobiosa. Una vez aisladas.CAPÍTULO 18 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO INTRODUCCIÓN Además de los nutrientes básicos y específicos. lo cual será detectado por la acción del indicador presente en el medio de cultivo al variar el pH. manosa.

deben estar en concentraciones muy bajas.0 .2 6.4 . por lo que el color en esta fase no será definido.0 7. Los indicadores que forman parte de la fórmula del medio de cultivo. Los indicadores son de dos colores oudiendo ser uno de ellos incoloro. Cuando el indicador está cambiado de color.0 8.2 8.8 Los indicadores presentes en los medios de cultivo.8. para que la determinación del ph se deba exclusivamente a los cambios que tiene lugar en la solución.0 . 236 . debido a su capacidad de ionización mediante la cual. a determinado nivel de la escala de pH. la mitad se encuentra en estado iónico y la otra mitad en estado molecular. sino más bien un color intermedio entre ambos. cambian el color del medio o de las colonias. en correspondencia con las variaciones del pH.0 7.3 Amarillo Rojo 5.6.8. transforman los iónes o moléculas y viceversa.10.INDICADORES Los indicadores son compuestos químicos elaborados con ácidos o bases débiles. que se caracterizan por dar lugar al cambio de color de la disolución o sustancia donde se encuentran al variar el pH.2 - 6. BASE Rojo Azul Amarillo Amarillo Rojo Rojo púrpura RANGO DE ph 6. Ejemplos de indicadores Cuadro 12.0 8.0 . Colores a los que dan lugar los indicadores en su rango de pH COLOR ACIDO Amarillo Amarillo Rojo Rojo Incoloro Amarillo I N D I CAD O R ROJO FENOL AZUL BROMOTIMOL ROJO DE METILO ROJO NEUTRO FENOLFTALEINA ROJO CRESOL PÚRPURA DE BROMOCRE.0 4.

reduciéndola a biliverdina. dependiendo de la condiciones de cultivo y el tiempo de incubación. favoreciendo de esta manera el desarrollo de otras más resistentes de interés en la investigación. En cambio. la sacarosa o ambos azúcares. Si el tipo de hemolisina. las colonias de E. al interferir total o parcialmente el desarrollo de otras especies presentes en la muestra. como por ejemplo: carneros. tiene como objetivo. pero actúa sobre la hemoglobina que porta. El suero sanguíneo se emplea comúnmente para serodiagnósticos y el plasma (sin preservo) es utilizado regularmente para poner en evidencia la capacidad enzimática de especies productoras de coagulosa. Por ejemplo. el efecto se evidenciará por la presencia de un halo de color verde alrededor de la colonia. Este tipo de hemólisis se clasifica como "alpha". Colorantes La edición de determinados colorantes a la fórmula del medio de cultivo.. con aspecto metálico (que se evidencia con luz 237 . coli. conejos. el permitir evidenciar y diferenciar la actividad hemolítica de algunas de ellas. inhibir el desarrollo de las especies más sensibles. colonias correspondientes a especies productoras de hemolisinas. Por ejemplo. provocando la formación de coágulos. Tanto los eritrocitos de sangre humana. que interfieren el estudio. sino además. Citrobacter y P. utilizado para aislar algunas especies del género Salmonella. Estos colorantes inhiben el desarrollo de los gérmenes gramnegativos y al mismo tiempo permiten diferenciar a las especies de enterobacterias fermentadoras de lactosa. adquieren un color azul oscuro. cabras. destruye a los eritrocitos. etc. cuando se desarrollan en el medio "Agar sangre". el efecto se evidenciará por la formación de un halo incoloro alrededor de la colonia. Otro ejemplo lo constituye la siembra en el medio "Eosina-Azul de Metileno Agar". como los obtenidos de diversas especies de animales. no teniendo como única finalidad proporcionar un nutriente esencial para el desarrollo de determinadas especies.SANGRE Y HEMODERIVADOS La sangre se emplea en la elaboración de algunos medios de cultivo. Este tipo de hemólisis total se clasifica como "betha". una enzima que utiliza como sustrato el plasma sanguíneo. rosado o casi blancas. son utilizadas en diferentes pruebas de hemaglutinación o para detectar diversas reacciones hemolíticas. si el tipo de hemolisina no destruye a los hematíes. hemolisando a los hematíes total o parcialmente. Las colonias de Salmonella se observan además en este medio con un color. como por ejemplo: el "Verde brillante" que forma parte de la composición del medio de cultivo del mismo nombre. éstas actúan sobre la sangre que se encuentra en sus inmediaciones. vulgaris. de los que no las fermentan.

entre otros. El principio de estas pruebas radica en la capacidad de algunos microorganismos para decarboxilar uno o varios de estos aminoácidos formando una amina con la consiguiente alcalinidad. cuyas reacciones específicas. la mayoría de naturaleza química. así como diversos tipos de aminoácidos. lo cual se pondrá en evidencia por la acción del indicador que forma parte del medio de cultivo. se emplean para su diagnóstico diversos sustratos. se realiza una técnica denominada antibiograma con el 238 . formará parte de la fórmula de un medio de cultivo. De manera similar a la empleada con los productos químicos para igual propósito. citrato. Entre los productos químicos. cada uno de estos aminoácidos es adicionado por separado. que contiene además los nutrientes necesarios para el desarrollo de la especie en estudio. ornitina y arginina son utilizados corrientemente en el laboratorio. que proporcionará el cambio de color del medio. KCN. como parte de las pruebas que se realizan a una cepa en estudio. al producirse el cambio de ph. que la capacita para actuar metabólicamente sobre determinados sustratos. El producto químico que se vaya a emplear. nitrato. la información genética de que dispone cada especie bacteriana. nos aportan información acerca de su identidad. malonato. para determinar la identidad de la especie. en una proporción del 1 % a un caldo base que contiene los nutrientes necesarios para el desarrollo del germen y un indicador. generalmente lo degradan por acción enzimática a productos más simples. empleados con mayor frecuencia se encuentran los siguientes: Urea. Productos químicos Teniendo en cuenta. es parcial o totalmente diferente entre sí.indirecta). mientras que las del resto de los coliformes se tiñen con un tono parduzco. haciendo factible la lectura de esa prueba. Aminoácidos Los aminoácidos: lisina. en tanto que las Salmonellas y las Shigellas se mantienen incoloras o ligeramente teñidas. Al actuar la bacteria sobre el producto químico en cuestión. Antibióticos Para medir la sensibilidad o resistencia de un microorganismo en estudio a los antibióticos. lo que será puesto de manifiesto por la acción del indicador. caracterizados por tener un ph diferente al del producto reaccionante.

equivalente a la concentración sérica media. en dependencia del tamaño del diámetro. 126: Discos de papel de filtros para antibiogramas Basado en el mismo principio y por un procedimiento similar. Estos discos (desecados) se colocan con todas las precauciones de asepsia sobre la superficie del cultivo. impregnados por separado con una carga en g o unidades de un antibiótico determinado. se realizan pruebas específicas con el empleo de un solo disco. Otras pruebas de resistencia. así como mediante la exposición del microorganismo a sustancias de secreción orgánica como la bilis. la lectura de estas pruebas aportaran un importante dato para sus respectivos diagnósticos. impregnado en este caso con bacitracina u optoquina. La interpretación de los resultados se sustentará en el hecho de que los microorganismos sean o no capaces de desarrollarse en presencia de estos compuestos. Transcurrida 24 horas. un halo de inhibición alrededor de cada disco. se realizan con el empleo de productos químicos como: el cianuro de potasio o el desoxicolato de sodio. tan pronto se realiza la siembra. siendo incubada de inmediato. pneumoniae (Neumococos). en tanto que la optoquina inhibe el desarrollo del S. Fig. obtenida en el pico de una terapéutica a dosis habituales. por lo que.empleo de discos de papel de filtro estériles de unos 5 ó 6 mm de diámetro. será indicativo de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en estudio a cada uno de los antibióticos empleados. La bacitracina inhibe el crecimiento de más del 95 % de los Estreptococos del grupo A. 239 .

Antígenos Los antígenos comerciales empleados para serodiagnóstico. el sistema inmunológico del animal producirá los anticuerpos específicos. las que serán perceptibles "in vitro" si este suero es confrontado con un antígeno similar. Los anticuerpos presentes en el suero de un paciente con sífilis al ser confrontados con este antígeno. lo constituye. o ser preparados artificialmente con diversos compuestos. pueden ser elaborados con cepas certificadas de microorganismos portadores del antígeno de interés que reaccione específicamente con los anticuerpos inducidos por él. 127: Sueros empleados para serodiagnósticos. precipitación o de hemólisis. 240 . Un ejemplo de antígeno elaborado con cepas. el antígeno troponémico empleado para el serodiagnóstico de la sífilis. que al interactuar con el antígeno en cuestión. Sueros Los sueros empleados en las técnicas de serodiagnóstico. evidenciándose por microscopía las reacciones resultantes de aglutinación o inmovilización del Treponema. la cual se liofiliza para su comercialización.Fig. mediante sangría de animales sensibilizados son procesados industrialmente. darán lugar a reacciones de aglutinación. interactuará con él. que han sido expuestos de manera controlada a determinadas sustancias antigénicas con el objetivo de que induzca la formación y el incremento de diferentes tipos de inmunoglobulinas. teniendo la propiedad de reaccionar con los anticuerpos presentes en el suero problema de forma similar que cuando se confrontan con antígenos reales. debiendo ser almacenados de 2-80c hasta su caducidad. que se elabora con una cepa de Treponema pallidum (cepa Nichols) cultivad "in vivo" en testículos de conejo. purificados y preservados. por procedimientos de laboratorio. con las cuales. se obtienen a partir de animales sensibilizados. siendo envasados en frascos cuentagotas para su comercialización. cuya composición química sea similar a la de los antígenos de la célula microbiana. Los sueros obtenidos.

¿Qué son los indicadores? 3. sino por un compuesto formado por: cardiolipina. dando lugar a reacciones de aglutinación "in vitro". Este antígeno se expende en ámpulas selladas de 5 mL. endémica de Sumatra. da lugar a la producción de un material muy resistente que se emplea en la fabricación de neumáticos. el cual no está elaborado con cepas de Treponemas. 241 . ya que por tratarse de un antígeno artificial. una adormidera verde. lecitina y colesterol. Esta propiedad unida al ínfimo tamaño de su partícula de 0. Investigaciones posteriores demostraron que el látex era muy inerte. natural de Asia.Un ejemplo de antígeno no treponémico. a la del antígeno real. oriundas de Brasil (de donde se extrae el caucho) y la Gutapercha. fue utilizada por los laboratorios biomédicos para recubrir las globulinas específicas. ¿Qué datos aportan los carbohidratos utilizados para el diagnóstico de laboratorio? 2. etc. CUESTIONARIO 1. con lo cual se favorece la observación de la aglutinación pasiva. dedicadas a la fabricación de reactivos comercializan diferentes tipos de látex sensibilizados para el serodiagnóstico de diferentes tipos de microorganismos. Este compuesto tiene una configuración química. aunque no igual. con textura viscosa y elástica. conozca que sean empleados con frecuencia en los laboratorios de microbiología. entre los que se encuentran diversas especies pertenecientes a la familia Euforbiáceas. diversas empresas farmacéuticas.81 de diámetro. los anticuerpos inducidos por algunos agentes infecciosos. que se utiliza esencialmente como narcótico. que se extrae mediante incisiones (cortes) de determinados vegetales. que hace que la reagina (anticuerpo) presente en el suero problema interactúe con este "antígeno". lo constituye el denominado antígeno de cardiolipina para pruebas de VDRL (Venereal Disease Research Laboratory). reaccionan con él de forma similar para dar lugar a reacciones positivas aparentes. impermeables. Esta sustancia tratada con sulfuro de carbono. Nombre los indicadores que Ud. Látex El látex es una resina de aspecto lechoso. Desde hace varias décadas. Esta prueba es inespecífica. así como del opio. envoltura de cables.

¿Cuál es la propiedad que tiene el látex que lo hace muy eficaz en las pruebas microbiológicas? 13. ¿Qué información aporta la sangre y el plasma en el diagnóstico de laboratorio? 5. cuando son atacados por determinadas especies bacterianas. ¿Para qué se utilizan determinados colorantes en la composición de los medios de cultivo? 6.4. 7. ¿Cómo se obtienen los sueros empleados en los sero diagnósticos? 10. ¿Cómo se utiliza el látex? 242 . cuya reacciones aportan información acerca de su identidad. Nombre los productos químicos que son empleados en la composición de medios de cultivo destinados al diagnóstico microbiológico. 11. ¿Qué es el látex? 12. ¿ De qué manera se emplean algunos antibióticos para identificar especies bacterianas en estudio? 9. ornitina y arginina. 8. ¿Cómo son elaborados los diferentes tipos de antígenos utilizados para el diagnóstico de las diferentes especies. ¿Qué le sucede a los cultivos que contienen ciertos aminoácidos como la lisina.

deficiente microscopía. Por ejemplo: la toma de muestras sin la calidad requerida. Mejorar la fiabilidad de los resultados y con ello optimizar el servicio. en cada etapa del ciclo. 3. el empleo de colorantes vencidos o deteriorados.CAPÍTULO 19 GARANTÍA DE LA CALIDAD INTRODUCCIÓN Con independencia de las buenas condiciones técnicas que tenga un laboratorio de microbiología y de la adecuada competencia del personal que en él laboran. así como la mala calidad de los materiales empleados o el deficiente funcionamiento de los equipos o instrumentos contribuyen entre otras causas afectar la calidad de los resultados. incubación incorrecta. OBJETIVOS Los objetivos del control para la garantía de la calidad son los siguientes: 1. 2. los resultados de las investigaciones realizadas pueden estar permeadas de imprecisiones. El mal montaje de las preparaciones en láminas. Emplear racionalmente las pruebas de elevado costo. originados por impericia. A los efectos de evitar o al menos reducir al mínimo estas insuficiencias y asegurar la buena calidad de los diagnósticos de laboratorio . son algunos de los factores que inciden en la calidad de los resultados. así como su deficiente conservación y transporte. así como la errónea interpretación de las pruebas. Validar la calidad de las pruebas empleadas sobre la base de su factibilidad. desde la toma de la muestra hasta el informe final. centrando la atención en los ejecutores. negligencia o mal trabajo. debidas generalmente a deficiencias técnicas o errores humanos. el incumplimiento de las normas técnicas establecidas. 243 . se establecen un conjunto de medidas encaminadas a controlar mediante fiscalizaciones regulares todos los factores que inciden en el proceso investigativo. bajo costo y eficiencia. La falta de cuidado. Debe tenerse presente que cada uno de los pasos o etapas del proceso investigativo es susceptible de afectar la calidad del resultado final.

que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en días diferentes y la repetibilidad. el control mediante la reproductibilidad. En el servicio de microbiología. 3. organizado.DIFERENTES TIPOS DE CONTROL . La habilidad y destreza en la realización de las técnicas de acuerdo con las normas. 2. ejecutado y controlado por la dirección del laboratorio a través de las siguientes actividades: a) La fiscalización sistemática "in situ". que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en serie en el mismo día. Esta fiscalización consiste esencialmente en la revisión de: 1. La limpieza. 4. Control de precisión Se denomina precisión a la propiedad que tiene un determinado método de dar resultados lo más iguales posibles cuando se realizan varias determinaciones sobre una misma prueba. Para determinar la precisión se emplean dos variantes: la reproductibilidad.Externo Control interno El control interno es planificado. La fiscalización sistemática "in situ" Consiste en supervisar la labor que realiza el personal de laboratorio en cada sección de trabajo con la finalidad de detectar errores groseros que puedan incidir en la calidad de los resultados. b) La aplicación de controles de precisión. así como la falta de estabilidad del microorganismo presente en la muestra debido la multiplicación o incremento de las muertes al no procesarse oportunamente. puede verse afectado por la falta de homogenicidad al estar presente en una misma muestra más de una especie. desinfección y esterilización del material de vidrio. Para la realización de las pruebas de 244 . El uso de reactivos y medios de cultivo con la calidad requerida. La correcta aplicación de los procederes establecidos para la toma de muestras.Interno (Denominado también control de calidad) . c) El empleo de pruebas estadísticas.

la génesis de los malos resultados de las investigaciones de laboratorio. Pruebas estadísticas Existen diversas pruebas estadísticas utilizadas en los estudios de precisión y por lo tanto muy ligadas al control de la calidad. pero no para el personal técnico de microbiología. PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES Como ya se explicó. por ejemplo: agua destilada con ácido pícrico para simular una muestra de orina o solución salina fisiológica a la que se le añade una o dos gotas de suero sanguíneo y glucosa. constituye una forma de controlar la seriedad y responsabilidad del técnico. debido al mal desempeño del personal de laboratorio.reproductibilidad o repetibilidad se emplean muestras "a ciegas". cuyas características son conocidas por el jefe del laboratorio y que el técnico no puede diferenciar del resto de las muestras. Entre las más usuales se encuentran la prueba estadística "F" y la prueba estadística "T". Las muestras artificiales más que un elemento de control de la calidad. El informe final de ese resultado se compara con los datos conocidos que sirven de control y cuando se detectan resultados incorrectos se toman las medidas de adiestramiento necesarias. Por su parte las artificiales son muestras simuladas elaboradas con diferentes solventes. para simular un líquido cefalorraquídeo. Prueba Estadística "T" Esta prueba es utilizada para comprobar si los resultados que se obtienen con un método son cuantitativamente superiores o inferiores en relación con otro o si un grupo de datos de una serie es mayor que los de otra. La aplicación de estas pruebas es muy familiar para los estadísticos. Las reales se estudian previamente y se determinan sus características pudiendo añadírsele diferentes sustancias o elementos. 245 . pueden ser reales o artificiales. que debe recurrir a personas experimentadas en el manejo de estas pruebas cuando resulte necesario. el trabajo realizado por dos técnicos. Prueba Estadística "F" Esta prueba es utilizada para comparar la precisión de dos métodos. tienen sus principales causas en los errores originados por deficiencias técnicas o humanas. Las muestras empleadas para controlar precisión. etc. procesándola como una muestra más.

la selección de los medios de cultivo. la selección de colonias para las resiembras. g) Informar de manera incorrecta o incompleta los resultados en la orden de análisis. Las medidas de seguridad para cada sección de trabajo. Las áreas designadas para comer o fumar. la lectura de las pruebas diagnósticas. las particularidades para la incubación de los cultivos. tales como: los requisitos para la recolección y toma de las diferentes muestras. 2. medios de cultivo. colorantes y otros medios para el diagnóstico. MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS Todos los laboratorios de microbiología deben disponer de un manual de normas y procedimientos donde se describan las secuencias y regulaciones establecidas para la realización de las diferentes investigaciones. d) Violación arbitraria de las normas técnicas. así como la notificación de los resultados.1. c) Falta de habilidad para realizar con destreza y precisión los procederes de laboratorio. b) Poca experiencia técnico-laboral en la sección de trabajo donde se desempeña. así como su conservación y transporte. b) Insuficiente disponibilidad de recursos materiales. donde se especifica todo lo concerniente al examen microscópico. f) Inadecuada selección de los medios y métodos empleados. Las normas de higiene personal. c) Mal estado de los reactivos. la marcha analítica para su procedimiento. relacionadas con: a) b) c) d) La limpieza y/o desinfección del lugar de trabajo. 246 . Errores humanos a) Deficiente capacitación en su formación. Errores técnicos a) Deficientes condiciones constructivas o estructurales del laboratorio. e) Falta de concentración o premuras indebidas durante la realización de: exámenes microscópicos. El manual establece además. las indicaciones esenciales para el buen funcionamiento del laboratorio. d) Empleo de equipos e instrumentos obsoletos o con funcionamiento deficitario. etc.

se comprobará la presión a través de los manómetros y se colocarán junto con el material a esterilizar.e) La manipulación y eliminación de materiales infecciosos. Las balanzas se deben mantener limpias para que la suciedad no interfiera en la pesada. 247 . donde se refleje los datos ya referidos y las fechas en que se les da mantenimiento. A cada equipo se le abrirá una tarjeta. f) El cumplimiento del esquema de inmunización acorde con la actividad que se realiza. modelo. habilitado al efecto. simultáneamente con la temperatura. En el caso del horno. antes de comenzar su utilización. número de serie y la fecha de su adquisición. cintas indicadoras o bioindicadores que cambian de color cuando la esterilización no ha resultado óptima. el control se efectuará cada vez que el equipo se vaya a utilizar y en cuanto al autoclave. b) Balanzas analíticas y técnicas. donde se especifique la marca. Nota: En todos los casos se debe tener en cuenta la condición de apto para el uso de los equipos emitida por metrología. baño de María y refrigeradores se le comprobará su buen funcionamiento diariamente. como: incubadoras. a) Equipos térmicos A todos los equipos termorregulados. anotando los resultados en el registro. debiendo comprobar su exactitud con pesas certificadas. c) Potenciómetros (pHmetros) Antes de su utilización se debe ajustar con soluciones estándar de pH 4 o 7 de acuerdo a la utilización que se les vaya a dar. REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD EN BACTERIOLOGIA Control de equipos e instrumentos Todos los equipos e instrumentos que sean asignados al laboratorio deben estar registrados en una carpeta de medios básicos. se dictamina su rotura o se repara. g) El control y cuidado de los equipos e instrumentos.

Al extraer los frascos que serán utilizados. como los ingredientes para su preparación o los medios que se adquieran ya listos para su uso. Las cepas controles regularmente empleadas son de cocos grampositivos. el plasma congelado para la prueba de coagulasa. Durante su almacenamiento se observan periódicamente y se procede a la eliminación de aquellos que esten precipitados. siendo colocados seguidamente en un lugar ventilado y protegido de la luz solar. Cuando el almacenamiento se prolongue. Las cepas empleadas se suspenden hasta alcanzar una turbidez de 0. Para comprobar su funcionamiento se utilizará un 3 % del total de medios preparados en los que se sembrarán cepas controles certificadas salvajes. Neisserias. debiendo almacenarse igualmente en lugares frescos y protegidos de la luz. los frascos deben ser revisados periódicamente. se tendrá en cuenta la fecha de vencimiento y el número de lote para ir utilizando los más viejos. procediendo a su incubación de acuerdo a las cepas empleadas. haemophillus. en la etiqueta de los frascos de colorantes y reactivos se anota la fecha en que se reciben en el laboratorio y se utilizan atendiendo al número del lote y la fecha de vencimiento. Pseudomonas. procediendo a desechar los que se hallan ennegrecidos o hidratados. Enterobacterias. se prueban con cepas stock cuando se 248 . el peróxido de hidrógeno empleado en la prueba de catalada. Los colorantes de uso frecuente como los empleados para las coloraciones de Gram y Ziehl Neelsen. es recomendable voltear los frascos y colocarlos con la tapa hacia abajo para aminorar los efectos de la hidratación. empleado para la prueba de oxidasa. deben ser almacenados tan pronto se reciban en el laboratorio. El control de los reactivos y los colorantes se debe realizar frecuentemente en dependencia de su estabilidad. aisladas y debidamente identificadas en el laboratorio. Por ejemplo. Al realizar la apertura del frasco se anotará la fecha. cada día que se vayan a utilizar estas pruebas.Control de medios de cultivo Tanto los medios deshidratados. Vibrios. para lo cual se anotará en la etiqueta la fecha de recepción. Al concluir el período de incubación si se comprueba que el medio preparado permite el desarrollo óptimo de las diferentes cepas controles se considerará con buenas condiciones para su empleo. etc. el reactivo de Kovac empleado en la prueba de indol. se enfrentan con cepas stock de características conocidas. Durante el tiempo que dure el almacenamiento.5 % de la escala de McFarland y se siembran pequeños inóculos calibrados en el medio. Clostridium y Candidas albicans. el tertrametil-parafenil endiamina al 1%. Control de colorantes y reactivos Al igual que los medios de cultivo.

Cada lote que vaya a empezar a utilizarse debe comprobarse con sueros negativos y positivos. así como para el control del funcionamiento de los antígenos y los antisueros empleados en el laboratorio se requiere del empleo de cepas microbianas debidamente identificadas o certificadas que hayan sido conservadas sin sufrir ningún cambio genético o fisiológico. se prueban por igual método cada día que vayan a ser utilizados. los laboratorios deben disponer de una colección acorde con las investigaciones que realiza. Los colorantes de uso menos frecuente como los empleados para la coloración de cápsulas. 249 . se deben conservar en refrigeración (congelación) en los recipientes de fábrica provistos de material desecante. de reactividad conocida. conjuntamente con los antibiogramas que se realicen ese día. Recomendándose además el empleo de sueros dobles. Su eficacia se debe comprobar con cepas controles conocidos con respecto a su sensibilidad o resistencia a los diferentes antibióticos. no debiendo utilizarse después de la fecha de vencimiento. etc. Control de antígenos y antisueros Para su conservación algunos antígenos y antisueros se almacenan en refrigeración de 2 a 8ºC. Conservación de cepas para el control biológico Como se ha explicado.preparan y posteriormente una vez por semana. En relación con estos últimos se recomienda dividir el suero en alicuotas para evitar repetidas congelaciones y descongelaciones que pueden afectar el resultado de las pruebas. Control de discos para antibiograma Los discos para antibiograma. Con posteridad a estas comprobaciones el control se realizará una vez por semana. para la comprobación de la eficiencia de los medios de cultivo y colorantes. bacitracina. El control se realizará cuando se empiece a utilizar un nuevo lote de medios de cultivo. mientras que otros requieren congelación.etc. En cada prueba que se vaya a realizar se empleará en paralelo un suero testigo de reactividad conocida. Para comprobar su efectividad se utilizarán cultivos puros recientemente obtenidos. esporas. así como otros discos que se utilizan para la realización de diferentes pruebas diagnósticas como: optoquina. Para ello.

procediendo de inmediato a su congelación. Etiquetear el ámpula con el nombre de la especie. Concluida la deshidratación. La mayoría de los microorganismos aerobios se pueden conservar en cultivos sobre agar inclinado. en tubos de ensayo. . se emplea la liofilización. Los diferentes métodos empleados pueden proporcionar una conservación a corto o a largo plazo. Para la conservación de algunos microorganismos anaerobios se emplea la siembra por punción con aguja en medio agarinizado. 2. Conservación a largo plazo Para conservar las cepas durante varios años. 4. debiendo guardarse en refrigeración. debido al enlentecimiento de su actividad metabólica. distribuyendo algunas en ámpulas de vidrio. 1. que consiste en un método de deshidratación con vacío a muestras congeladas. Los cultivos congelados en ámpulas son colocados en una liofilizadora para efectuar su desecación. conservándose igualmente en refrigeración. las ámpulas se sellan al vacío con la llama del mechero que forma parte de este equipo. con lo cual se logra mantener la cepa durante varios meses. 3. 250 2. mediante la cual el agente microbiano se mantiene vivo sin crecer ni reproducirse. Las especies anaerobias extrictas deben ser sembradas en medio de tioglicolato en tubos de ensayo o caldo con carne picada. pudiendo añadirse después de la siembra una capa de aceite mineral con lo cual se excluye al oxígeno al mismo tiempo que evita la desecación del medio. 3. Suspender el cultivo en suero inactivado o leche estéril. Procedimiento 1.Métodos de conservación de cepas Cualquier método que se vaya a emplear debe propiciar microbiostasis. conservado en refrigeración. Conservación a corto plazo Este método se sustenta en el empleo de medios de cultivo con bajo potencial nutricional y la conservación de los cultivos en refrigeración.

para estudio por examen directo. y procesadas como si se trataran de muestras ordinarias. el laboratorio de referencia enviará muestras cifradas. cuyos resultados no son conocidos por el jefe del laboratorio que será evaluado. Control externo Estará a cargo de un laboratorio de referencia de nivel municipal. Los resultados obtenidos serán informados en encuestas que acompañan a las muestras que serán remitidas al laboratorio de referencia para su revisión. Además de muestras pueden enviarse cultivos para determinar la sensibilidad o resistencia de la cepa a los diferentes antibióticos. notificándose al laboratorio evaluado los resultados. provincial o nacional. .El material queda dentro del ámpula en forma de una tableta pudiendo en este estado de desecación conservarse durante varios años. muestras y cepas predeterminadas para este control son los siguientes: Frotis coloreados a. se rompe asépticamente el ámpula depositando la cepa liofilizada en un medio líquido adecuado. Del laboratorio de la unidad al laboratorio de referencia Se remitirá al laboratorio de referencia un porciento establecido de: frotis coloreados y muestras. Este control puede producirse en dos direcciones: Del laboratorio de referencia al laboratorio que será evaluado Para realizar el control con esta variante. siendo introducidas "a ciegas" en la forma y explicada. o sueros para determinaciones serológicas de diferentes tipos. procediendo a su incubación de 24 a 48 horas. examen concentrado y serológico. así como de cepas que serán sometidas a estudios de comprobación del diagnóstico emitido por la unidad. Los frotis. Cuando se requiera utilizar la cepa.Envío en menos de 72 horas de todas las láminas con diagnóstico negativo para evaluación de la extensión y la coloración 251 .Frotis de esputo coloreado por el método de Ziehl Neelsen para investigar la presencia de BAAR.

Suero o L.R. 252 .C. Enviar el 100 % de las muestras reactivas y débil reactiva empleadas para la prueba de VDRL.El 25 % de las muestras con diagnóstico negativo.Frotis de exudados uretales y endocervicales para investigar la presencia de diplococos arriñonados (intra y extracelulares) . Cepas Envío del 100% de las cepas recuperadas en los casos de Síndrome Neurológico Infeccioso y de Infecciones Diarreicas Agudas.Enviar un 5% de los frotis con diagnóstico negativo.El 10 % de las muestras donde he hayan identificado huevos o larvas de helmintos.Heces fecales Enviar: El 5 % de las muestras donde se hayan identificado especies de protozoarios. Enviar el 2 % de las muestras no reactivas. Muestras . . .Enviar el 100% de los frotis con diagnóstico positivo. .

3. ¿Cómo se deben conservar los discos impregnados en antibióticos? Refiérase a la manera de controlar los antígenos y los antisueros. 2. 13. 7. 6. 9. ¿Cuáles son las principales causas de la falta de calidad en los diagnósticos de laboratorio? ¿Cuáles son los objetivos del control para la garantí de la calidad? Enumere los indicadores del control interno. ¿De cuantas maneras diferentes se puede efectuar el control externo? ¿Cuáles son las muestras que deben remitirse al laboratorio de referencia para su control y con qué periodicidad? 253 . 11.CUESTIONARIO 1. 10. 4. 14. 12. 5. ¿Cómo se controla la precisión de los resultados? ¿Cuáles son las principales fuentes de error? ¿Cuáles son los principales aspectos en cada una de las fuentes de errores? ¿Qué aspectos se describen en el manual de normas y procedimientos? ¿Cómo se controlan los equipos e instrumentos? ¿Qué aspectos han de tenerse en cuenta para el control de los medios de cultivo? Explique cómo se controla el estado de los colorantes y los reactivos. 8.

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