LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Instrumentación y principios básicos

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La Habana, 2004

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Datos CIP-Editorial Ciencias Médicas

González Alfaro José Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004 256p. Fig. Incluye índice general. Está dividida en 19 capítulos. Listado de referencias al final de la obra. ISBN 959-212-131-1 1. MICROBIOLOGÍA 2. PERSONAL DE LABORATORIO 3. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. LIBRO DE TEXTO I. González González Boris II. Barrial González Rosa T. QW23

Diseño: Ac. Luciano O. Sánchez Núñez Emplane: Maria Pacheco Gola

© José González Alfaro, Boris González González y Rosa T. Barrial González, 2004 © Sobre la presente edición Editorial Ciencias Médicas, 2004

Editorial Ciencias Médicas Centro Nacional de Información de Ciencias Médicas Calle I No. 202, esquina Línea, Vedado, Ciudad de La Habana, 10400, Cuba Correo electrónico: ecimed@infomed.sld.cu Teléfonos: 55 3375, 832 5338

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"Vivid en la serena paz de los laboratorios y preguntaos cada día: -¿Qué puedo hacer para mejorar la calidad del servicio que presto? -¿Cómo puedo ayudar a mi país? -¿Cómo puedo servir a la humanidad? Luis Pasteur 5 .

Profesora Facultad Tecnológica Dr. Salvador Allende Rosa T.AUTORES José González Alfaro Técnico de Microbiología Especializado en Docencia. Profesor Facultad Tecnológica Dr. Barrial González McS en Microbiología Hospital Salvador Allende. Salvador Allende 6 . Profesor Facultad Tecnológica Dr. Salvador Allende Boris González González Lic. En Microbiología Hospital Salvador Allende.

/ 20 CONCENTRACIÓN EN EL TRABAJO / 21 CUESTIONARIO / 21 BIOSEGURIDAD / 22 INTRODUCCIÒN / 22 RIESGOS FÍSICOS / 22 RIESGOS QUÍMICOS / 22 RIESGOS BIOLÓGICOS / 22 BIOSEGURIDAD. GENERALIDADES / 18 ACTIVIDADES FUNDAMENTALES / 18 RECURSOS HUMANOS / 18 ESTRUCTURA ADMINISTRATIV A / 18 IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA / 19 ESTRATEGIA ORGANIZATIV A DE TRABAJO / 19 DISPOSICIÓN DE LOS MATERIALES DE TRABAJO / 20 CERTEZA DE LOS MEDIOS REACTIVOS O MEDIOS A EMPLEAR / 20 ORDENAMIENTO DE LAS MUESTRAS / 20 PLANIFICACIÓN DEL TRABAJO A REALIZAR.ÍNDICE EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA / 17 INTRODUCCIÒN / 17 LABORATORIO CLÍNICO / 17 LABORATORIO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL / 17 LABORATORIO DE RAYOS X / 17 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. CONCEPTO / 22 DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN / 33 INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE / 34 LAV ADO DE MANOS / 35 TIPOS DE LAV ADO DE MANOS / 36 LAV ADO SOCIAL DE LAS MANOS / 36 7 . / 23 PRINCIPALES CAUSAS / 23 NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO / 23 PRINCIPIOS BÁSICOS / 24 PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE LABORATORIO / 24 EMPLEO SISTEMÁTICO DE EQUIPOS Y MEDIOS DE SEGURIDAD / 25 EL DISEÑO ADECUADO DE LOS LABORATORIOS / 26 MEDIDAS DE PREVENCIÓN / 33 PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA / 33 DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES.

LAV ADO HIGIÉNICO O MÉDICO DE LAS MANOS / 36 LAV ADO QUIRÚRGICO DE LAS MANOS / 37 MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS / 38 CUESTIONARIO / 38 ETICA MEDICA / 40 INTRODUCCION / 40 LA MORAL / 40 ETICA / 41 TEORÍA DE LA MORAL / 41 ÉTICA NORMATIV A / 41 ÉTICA MÉDICA / 41 EN RELACIÓN CON EL PACIENTE Y SUS FAMILIARES / 42 EN RELACIÓN CON EL RESTO DE LOS TRABAJADORES DE LA SALUD / 44 EN LAS RELACIONES ENTRE EL DOCENTE Y LOS EDUCANDOS / 44 COMO PARTE DE LA SOCIEDAD / 44 LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA / 45 CUESTIONARIO / 45 EL AGUA / 46 INTRODUCCIÓN / 46 IMPORTANCIA / 46 CALIDAD DEL AGUA / 46 PURIFICACIÓN DEL AGUA / 47 DESTILACIÓN / 47 DESIONIZACIÓN / 48 PH DEL AGUA DESTILADA / 48 CONDUCTIVIDAD DEL AGUA / 48 CUESTIONARIO / 49 CRISTALERÍA DE LABORATORIO / 50 INTRODUCCIÓN / 50 COMPONENTES DEL VIDRIO / 50 SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO / 50 CLASIFICACION / 51 CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS / 52 DE CRISTALERÍA / 52 CRISTALERÍA GENERALDE TRABAJO / 52 CRISTALERÍA DE MEDICIÓN / 59 MATERIALES DE PORCELANA / 63 LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN / 64 PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA / 65 PARA SU ESTERILIZACIÓN / 65 CUESTIONARIO / 67 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN / 68 INTRODUCCIÓN / 68 TÉRMINOS EMPLEADOS RELACIONADOS CON LA ESTERILIZACIÓN Y LA DESINFECCIÓN / 68 8 .

(BAÑO DE MARÍA) / 92 CUESTIONARIO / 94 MICROSCOPIO / 95 INTRODUCCIÓN / 95 MICROSCOPIO.ESTERILIZACIÓN / 68 EL CALOR / 69 PROTOTIPO STANDARD DEL AUTOCLAVE / 70 MANIPULACIÓN DEL AUTOCLAVE / 71 CALOR HÚMEDO A 1000 C / 72 CALOR HÚMEDO A MENOS DE 1000C / 74 CALOR SECO / 74 USO DEL HORNO / 75 INCINERACIÓN / 76 MECHEROS / 76 LAS RADIACIONES / 79 RADIACIONES IONIZANTES / 79 RADIACIONES NO IONIZANTES / 80 FILTRACIÓN / 81 CARACTERÍSTICAS DE LOS FILTROS / 81 PREPARACIÓN DE LOS FILTROS / 81 DESINFECCIÓN / 83 SELECCIÓN DE LOS DESINFECTANTES / 84 CUESTIONARIO / 85 EQUIPOS CALORIFICOS / 87 INTRODUCCION / 87 INCUBADORA / 87 REQUERIMIENTO DE TEMPERATURAS / 87 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON SUS NECESIDADES DE OXÍGENO / 88 INCUBACIÓN DE BACTERIA ANAEROBIAS / 90 INCUBADORA PARA ANAEROBIOS / 92 BAÑO DE AGUA CALIENTE. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO / 119 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 ESTRUCTURA DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121 FUNCIONAMIENTO / 123 9 . CONCEPTO / 96 DIFERENTES TIPOS / 96 MICROSCOPIO ÓPTICO / 96 CLASIFICACIÓN / 97 SISTEMA MECÁNICO / 98 PRINCIPIOS BÁSICOS / 109 INDICACIONES PARA EL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 111 OTRAS V ARIANTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 112 MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO / 117 CUIDADO.

CUESTIONARIO / 124 INSTRUMENTOS MECÁNICOS / 126 INTRODUCCIÓN / 126 PIPETAS MECÁNICAS / 126 PIPETA TIPO MARBURG / 127 EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS / 131 LAS CENTRÍFUGAS / 131 PRINCIPIO TÉCNICO / 133 BALANCE DE LOS TUBOS / 133 FUNCIONAMIENTO / 134 EL ROTOR / 135 DISEÑO DEL EQUIPO / 135 FUNCIONAMIENTO / 136 EL AGITADOR / 136 DISEÑO DEL EQUIPO / 137 FUNCIONAMIENTO / 137 POTENCIOMETROS / 138 ESTRUCTURA / 138 ELECTRODOS / 139 TIPOS DE ELECTRODOS / 139 PRINCIPIO FUNCIONAL / 139 MEDICIÓN DEL PH / 140 PROCEDIMIENTO PARA EL MANEJO DEL POTENCIÓMETRO / 140 CUESTIONARIO / 141 BALANZAS / 143 INTRODUCCIÓN / 143 PRINCIPIO / 143 DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS / 143 BALANZAS GRANATARIAS / 144 FUNCIONAMIENTO / 145 PROCEDIMIENTOS PARA EFECTUAR LA PESADA / 145 CAJA DE PESAS / 146 PRECAUCIONES / 147 BALANXA DE UN SOLO PLATILLO (TIPO OHAUS) / 147 BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA / 147 BALANZA DE PRECISIÓN MECÁNICA / 148 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA / 150 PRECAUCIONES / 151 BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA / 151 FUNCIONAMIENTO / 153 PESADA / 154 DETERMINACIÓN DEL PESO / 155 BALANZA ANALITICA DIGITAL / 156 CUESTIONARIO / 156 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN / 158 10 .

INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y M ATERIALES DE CURACIONES / 162 INTRODUCCION / 162 ACCESORIOS / 162 GRADILLAS / 162 CESTOS / 163 SOPORTE UNIVERSAL / 163 PINZAS DE SUJECCIÓN / 164 TRÍPODE / 164 MALLA DE AMIANTO / 165 INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO / 165 MATERIALES DE CURACIONES / 166 CUESTIONARIO / 167 TOMA DE MUESTRAS / 168 INTRODUCCIÓN / 168 MUESTRA. DIFERENTES TIPOS / 158 RELOJES / 158 TERMÓMETROS / 159 DENSÍMETROS / 160 CUESTIONARIO / 161 ACCCESORIOS. CONCEPTO / 168 MUESTRA REPRESENTATIV A / 168 MÉTODOS DE CONSERV ACIÓN / 169 CALIDAD DE LA MUESTRA / 170 INSTRUCCIONES AL PACIENTE / 172 DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS / 172 EXUDADOS / 172 LÍQUIDOS ORGÁNICOS / 179 SANGRE / 181 LINFA / 182 EXCRECIONES / 183 FANERAS / 185 PRODUCTOS PATOLÓGICOS / 185 CUESTIONARIO / 186 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS / 187 INTRODUCCIÓN / 187 DIFERENTES MÉTODOS / 187 PREPARACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXAMEN MICROSCÓPICO EN FRESCO / 187 MÉTODO DE LA GOTA COLGANTE / 188 PREPARACIÓN EN LÁMINAS DE MUESTRAS COLOREADAS / 189 11 .NO VOLUMÉTRICOS / 158 INTRODUCCIÓN / 158 INSTRUMENTOS.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS / 194 METODOS DE COLORACIÓN / 195 COLORACIÓN DE GRAM / 195 COLORACIÓN DE "ZIEHL NEELSEN / 199 CCOLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN (MODIFICADA PARA MYCROBACTERIUM LEPRAE) / 202 COLORACIÓN FRAGELAR DE LEIFSON (MODICFICACIÓN DE CLARK) / 203 COLORACIÓN DE CÁPSULAS / 204 COLORACIÓN DE ESPORAS / 205 CUESTIONARIO / 206 MEDIOS DE CULTIVO / 208 INTRODUCCIÓN / 208 OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA / 208 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 208 CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 212 COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS / 213 ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO / 217 DISTRIBUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 220 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMERCIALES / 222 CONSERV ACIÓN DE MEDIOS ELABORADOS / 222 COMPROBACIÓN DE LA ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS ELABORADOS / 223 CUESTIONARIO / 223 SIEMBRA E INCUBACIÓN / 225 INTRODUCCIÓN / 225 INSTRUMENTOS DE SIEMBRA / 225 DIFERENTES TIPOS / 226 MÉTODOS DE SIEMBRA / 227 INCUBACIÓN / 232 MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO / 233 EN LOS MEDIOS DE CULTIVO / 233 CULTIVO PURO / 233 CULTIVO MIXTO / 233 RESIEMBRA / 233 CUESTIONARIO / 234 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO / 235 INTRODUCCIÓN / 235 12 .CUESTIONARIO / 191 COLORANTES Y COLORACIONES / 192 INTRODUCCIÓN / 192 CONCEPTO / 192 FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES / 192 COLORANTES NATURALES / 192 COLORANTES SINTÉTICOS / 193 CLASIFICACIÓN / 193 AFINIDADES TINTORIALES / 194 TOXICIDAD DE LOS COLORANTES.

HIDRATOS DE CARBONO / 235 INDICADORES / 236 SANGRE Y HEMODERIV ADOS / 237 COLORANTES / 237 PRODUCTOS QUÍMICOS / 238 AMINOÁCIDOS / 238 ANTIBIÓTICOS / 238 SUEROS / 240 ANTÍGENOS / 240 LÁTEX / 241 CUESTIONARIO / 241 GARANTÍA DE LA CALIDAD / 243 INTRODUCCIÓN / 243 OBJETIVOS / 243 DIFERENTES TIPOS DE CONTROL / 244 PRUEBAS ESTADÍSTICAS / 245 PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES / 245 MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS / 246 REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD / 247 EN BACTERIOLOGIA / 247 CONTROL DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS / 247 CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO / 248 CONTROL DE COLORANTES Y REACTIVOS / 248 CONTROL DE DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA / 249 CONTROL DE ANTÍGENOS Y ANTISUEROS / 249 CONSERV ACIÓN DE CEPAS PARA EL CONTROL BIOLÓGICO / 249 DEL LABORATORIO DE REFERENCIAALLABORATORIO QUE SERÁ EV ALUADO / 251 DEL LABORATORIO DE LA UNIDAD AL LABORATORIO DE REFERENCIA / 251 CUESTIONARIO / 253 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS / 254 13 .

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en los institutos politécnicos. creados al efecto en todo el país. atendiendo a los contenidos del programa y el perfil de salida de los egresados. todo lo concerniente a su descripción estructural estándar y sus variantes. siguiendo al pie de la letra las instrucciones que se proporcionan. Cada tema ha sido abordado con una proyección tecnológica. a partir del curso 2003-2004. los cursos de técnicos medios de la salud que durante casi 4 décadas se impartieron. En los capítulos correspondientes a los procederes de laboratorio. 15 . cada aspecto ha sido explicado pormenorizadamente. con lo que se pretende que adquieran la capacitación adecuada para brindar un servicio de excelencia a nuestra población. mediante un nuevo modelo pedagógico que comprende dos niveles de formación intermedia: técnico básico y técnico medio. los estudiantes pueden realizar sin contratiempos los procederes en cuestión. el principio de su funcionamiento y el algoritmo de trabajo. además de todo lo concerniente a su cuidado y conservación. para lo cual se tuvo en cuenta precisar la particularidad utilitaria de cada equipo. la función de cada una de las partes y su interacción con el resto del sistema. Los planes de estudio se han sustentado en la modalidad de estudio-trabajo. fueron diseñados como carreras universitarias. bajo la asesoría de profesionales y técnicos de experiencia. así como desempeñarse con eficacia y competitividad en cualquier otro país donde se requiera su colaboración. accesorios y otros materiales de trabajo. lo que permite a los estudiantes desarrollar progresivamente las habilidades en los propios escenarios donde se encuentran los diferentes servicios de salud. así como. de manera que. culminando la formación universitaria como licenciado en tecnología de la salud en diferentes perfiles. Como apoyo al diseño curricular del perfil de microbiología. en más de 20 especialidades. instrumento. hemos editado este libro de texto para que sea utilizado como bibliografía básica en el estudio de la asignatura Fundamentos y Principios Básicos del Laboratorio de Microbiología.PREFACIO Como parte de la política del estado cubano de universalizar la enseñanza.

Esperamos que este texto te sea de utilidad en el proceso de aprendizaje. no solo para alcanzar buenos resultados docentes. como una herramienta que te proporciona una capacitación perdurable.Al finalizar cada tema se ha incluido un cuestionario de preguntas. Los autores 16 . el objetivo esencial de tu formación. con el objetivo de que sea utilizado como guía de estudio individual o colectivo. sobre el que se sustente tu desempeño profesional. sino más bien. en definitiva. que es.

recibe indicaciones y solicitudes médicas. para la producción de medicamentos. realiza exámenes radiológicos convencionales o mediante la utilización de técnicas modernas 17 . para las investigaciones que así lo requiera. jugo gástrico. Transfunde sangre total o sus derivados. realiza sangrías a donantes. tales como: sangre. Como parte del Sistema Nacional de Salud. recibe indicaciones médicas. líquido cefalorraquídeo. así como. serològicos. etc. hematológicos. investigaciones científicas o el análisis de diferentes muestras. orina. análisis inmunohematológicos y serológicos e informa los resultados. por ejemplo: Laboratorio Clínico La actividad básica que se realiza en este tipo de laboratorio es la de recibir las ordenes de análisis del médico de asistencia. tomar y recibir muestras biológicas. administra contraste a los pacientes.CAPITULO 1 EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INTRODUCCIÒN Los laboratorios son edificados especialmente diseñados. existen diferentes tipos de laboratorios. a las cuales se les realizan análisis bioquímicos. Laboratorio de Medicina Transfusional El laboratorio de Medicina Trasnfusional. Laboratorio de Rayos X El Laboratorio de Rayos X. para la realización de experimentos. en Cuba. Para determinar sus alteraciones en relación con sus valores de referencia. etc. toma y recibe muestras biológicas. Realiza análisis de urgencia e informa los resultados. reactivos o la obtención de productos biológicos. Y obtiene y procesa componentes de la sangre para uso terapéutico o de investigaciones. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados.

para detectar alteraciones anatomofibiológicas en partes blandas u óseas del organismo asi como la presencia de cuerpos extraños. 18 . Ms. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. ademas de técnicos medios. un técnico medio experimentado. con lo cual aporta un dato de inestimable valor para la indicación del tratamiento También brinda apoyo especializado al Comité de Prevención y Control de las Infecciones Nosocomiales (infecciones intra hospitalarias) originadas en el hospital u otro establecimiento de atención de salud. En la mayoría de los laboratorios. con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas. asumiendo determinadas funciones delegadas por el jefe de servicio. se desempeña como jefe técnico. cargo que ocupa generalmente un médico especialista o en su defecto otro profesional. médicos especialistas de 1er o 2do. así como bioquímicos.de imagenología. toma y recibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicas mediante exámenes microscópicos directos y por cultivos. Estructura administrativa Todos los laboratorios están gerenciados por un jefe de servicio. precisar su cuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. proporciona al medico de asistencia. esta compuesto por profesionales universitarios. o Licenciados en microbiología. grado (microbiólogos). GENERALIDADES Actividades fundamentales El laboratorio de microbiología clínica. Cumple indicaciones de urgencia e informa los resultados. recibe indicaciones médicas. Recursos humanos El personal de los laboratorios de microbiología clínica. Las diferentes secciones están dirigidas a su vez por diferentes profesionales. información precisa relacionada con la sensibilidad o resistencia del agente infeccioso a los diferentes antibióticos. especializados o no. biólogos y otros tecnólogos.C. El servicio de microbiología. personal de oficina y auxiliares generales entrenados.

incrementar la productividad de las deter19 . así como en unidades hospitalarias o centros especializados. al proporcionar datos exactos acerca de la identidad de los microorganismos en estudio. maestrías y doctorado. casi todos los hospitales y policlínicos cuentan con servicios de microbiología y en la actualidad se esta concretando un proyecto de estaciones microbiológicas destinadas fundamentalmente al diagnostico mediante exámenes directores. resulta indispensable sistematizar una estrategia de trabajo. así como la toma y preservación de muestras en medios de transporte para su envió a los laboratorios de referencia. posibilitando la indicación de un tratamiento mas eficaz.IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DE MICROBIOLOGIA Dado el incremento actual de las enfermedades emergentes y reemergentes. Mejorar la calidad del servicio. el perfeccionamiento en la formación de los profesionales del sector y la superación científico-técnica de los graduados a través de diplomados y cursos de post-grado. todo lo cual amplia la capacidad del diagnóstico médico a magnitudes que están fuera del alcance de los métodos clínicos. ESTRATEGIA ORGANIZATIVA DE TRABAJO Para lograr una buena eficacia en la realización de los procederes de laboratorio. a nivel de la atención primaria. mediante el acceso a las tecnologías más modernas. 2. en policlínicos. Para ellos. el trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología. ya que ha sido y es política de la Revolución que los servicios médicos sean accesibles a todos los ciudadanos. así como mediante técnicas serodiagnósticas de alta sensibilidad y por aportar el patrón de susceptibilidad a los antibióticos de los microorganismos en cuestión. La prestación de este servicio a toda la población del país. así como el desarrollo cada vez más creciente de cepas resistentes a los antibióticos de uso tradicional. que permita asegurar la calidad de los resultados. El perfeccionamiento del trabajo microbiológico se proyecta en dos direcciones: 1. diagnósticados por procedimientos habituales o de diagnósticos rápidos. adquiere cada día mayor protagonismo. en las investigaciones donde resulte factible.

introducir causas de errores. Siempre que resulte pertinente conviene planificar el trabajo a realizar en el laboratorio. por alteración del tiempo establecido en algún paso de la técnica y en consecuencia afectarse los resultados. Planificación del trabajo a realizar. e) Al destaparlos coloque cada tapa delante del frasco correspondiente para evitar errores al taparlo que impliquen su contaminación. d) Colóquelos en la mesa de trabajo en el orden en que serán utilizados. ya que además de ocasionar una pérdida de tiempo innecesaria. puede en algunos casos. Ordenamiento de las muestras Coloque las muestras en la mesa de trabajo por orden numérico de izquierda a derecha. lea cuidadosamente la etiqueta del frasco para evitar errores. etc) y ubíquelos ordenadamente sobre la mesa de trabajo. tubos. pipetas. turbios. Para el logro de estos propósitos el laboratorista debe cumplir con las siguientes indicaciones: Disposición de los materiales de trabajo Seleccione todos los utensilios (escrupulosamente limpios o estériles) que se requieran para el trabajo a realizar (gradillas. para aprovechar al máximo el tiempo disponible. En este sentido es importante tener la certeza de que no falte ningún material que implique tener que interrumpir el procedimiento para su localización. cerciórese del nombre del reactivo. c) Cerciórese de que se le haya hecho control de calidad. Por ejemplo. Certeza de los medios reactivos o medios a emplear a) Al seleccionar los reactivos. si se 20 . de manera que queden al alcance de la mano. la discontinuidad de la marcha analítica. etc).minaciones y al mismo tiempo que proporcione una adecuada protección contra posibles accidentes. su concentración y que la fecha de vencimiento no haya caducado. b) Verifique mediante un examen visual que no se encuentran alterados (precipitados.

4. tenga de lo que es un laboratorio. por los métodos eocina y lugol. evite interrupciones innecesarias y absténgase de mantener conversaciones ajenas a lo que esta haciendo. ¿En que radica la importancia del trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología? 7. CUESTIONARIO 1. Indique las diferentes categorías ocupacionales del personal que labora en un laboratorio de microbiología. Especifique El concepto que Ud. 2. Concentración en el trabajo Durante todo el tiempo que dure la ejecución del procedimiento. concentre su atención en cada paso de la técnica. Explique cada uno de los indicadores establecidos para la estrategia organizativa del puesto de trabajo. Trabaje con meticulosidad y esmero y aplique las medidas de asepsia cuando la determinación así lo requiera. es conveniente hacer las dos preparaciones por separados en una misma lamina portaobjetos. 3. Refiérase a las actividades fundamentales que se realizan en un laboratorio de microbiología clínica. 21 . 5.van a preparar exámenes microscópicos directos de heces fecales. lo que facilita la operatoria microscópica sin pérdida de tiempo al no tener que intercambiar láminas. Explique la estructura administrativa de los laboratorios. Nombre diferentes laboratorios que pertenezcan al Sistema Nacional de Salud. para la búsqueda de protozoos. 6.

tóxicas. 22 . la electricidad. líquidos corporales. Riesgos químicos Originados por el manejo con sustancia inflamables. en los laboratorios de microbiología. clínicos. etc. a diversos riesgos profesionales. especialmente en los laboratorios donde se realizan exámenes de sangre. las radiaciones. etc. excreciones y productos patológicos.CAPÍTULO 2 BIOSEGURIDAD INTRODUCCIÒN Los profesionales y técnicos de la salud que laboran en unidades hospitalarias. corrosivas. están expuestos. CONCEPTO Es la disciplina que se ocupa de la prevención y control del riesgo biológico al que están expuestas. los animales y las plantas como consecuencias de accidentes o negligencias. policlínicos. etc o en centros de investigaciones biomédicas. Riesgos biológicos Debido a la manipulación frecuente de pacientes infectados. por la naturaleza de su trabajo. Así como en la industria biotecnológica y el trabajo con organismo transgénicos. etc. BIOSEGURIDAD. cancerigenas. traumas. el manejo de productos sépticos y el nivel de contaminación ambiental predominante en el ámbito hospitalario. que pueden clasificarse según su origen en: Riesgos físicos Ocasionados regularmente por. exposiciones al calor. directa o indirectamente las personas.

DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. DIRECTA O INDIRECTAMENTE. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS. son las principales causas del daño individual que bajo determinadas circunstancia. SU EXPOSICIÓN EN EL LABORATORIO PUEDENPROVOCARINFECCIONESGRA VES. veterinarias o fitosanitarias con el consiguiente perjuicio económico o ecológico. LA COMUNIDAD. NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO Cuadro 1: Diferentes niveles de riesgo biológico. CARACTERIZACIÒN DE LOS AGENTES PATÓGENOS INVOLUCRADOS II MODERADO LIMITADO III ELEV ADO ESCASO IV ELEV ADO ELEV ADO 23 . LOS ANIMALES Y EL MEDIO AMBIENTE. Los niveles de riesgo para un laboratorio básico. GENERALMENTE LA INFECCIÓN NO SE PROPAGA DE UN INDIVIDUO A OTRO. PUEDEN PROPAGARSE FÁCILMENTE DE UN INDIVIDUO A OTRO. son los de tipo I y II. RIESGO INDIVIDUAL COMUNITARIO I ESCASO ESCASO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. puede extenderse al entorno hospitalario o a la comunidad. PRINCIPALES CAUSAS Los accidentes imprevistos y el deficiente desempeño del personal ocupacionalmente expuesto. ocasionando diversos grados de afectaciones médicas. TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE ENTRAÑAR RIESGOS GRAVES PARA EL PERSONAL DEL LABORATORIO.

que serán expuestas resumidamente a continuación. . . Flameos de instrumentos de siembra contaminadas con productos biológicos infecciosos. cubreobjetos y pipetas utilizadas se depositaran en recipientes apropiados que contengan solución desinfectante.Aplicar rigurosamente las medidas de asepsia y antisepsia en todas las ocasiones en que la acción a realizar así lo requiera. Abrir la tapa de la centrífuga antes de que esta se detenga o de inmediato. El diseño adecuado de los laboratorios. Para dar cumplimiento a estos principios se establece en el reglamento un código practico. el instrumento debe introducirse gradualmente en la llama del mechero hasta ponerse al rojo vivo. Retirar la aguja de las jeringuillas que contengan material contaminado. La correcta realización de las técnicas de laboratorio. El empleo sistemático de los equipos y medios de seguridad. se deben esterilizar a la llama del mechero. 24 . así como los portaobjetos. . Apertura de cultivos liofilizados en ámpulas. 2. . Para la correcta realización de las técnicas de laboratorio a) Regulaciones básicas. . con las indicaciones y regulaciones a cumplimentar por el personal de laboratorio.PRINCIPIOS BÁSICOS Los principios básicos.Los procederes técnicos han de realizarse de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles siendo las causas mas frecuentes las siguientes. . . regidos por las normas de bioseguridad para la prevención y control del riesgo biológico son los siguientes: 1. . antes y después de su uso. 3.Los instrumentos de siembra de platino o nicròn. A los efectos de evitar salpicaduras del material residual empleado.Los frotis coloreados. . cuando se ha centrifugado muestras biológicas o material contaminado. Pipeteo energético.

humedecer los tapones de algodón y contaminar la mesa de trabajo. material contaminado. Los cultivos en placas deben mantenerse con la tapa hacia abajo en el interior de la incubadora o sobre la mesa de trabajo. ya que el agua de condensación puede arrastrar los gérmenes del cultivo.Utilizar bata sanitaria u otras prendas apropiadas cuando la envergadura del trabajo así lo requiera. aún cuando no llegaran a romperse. La caída brusca de las placas o tubos de cultivos. Empleo sistemático de equipos y medios de seguridad . retirando del mismo material que no tenga relación con el trabajo. . nasobucos. .Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio. realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas.Lavarse las manos después de haber manipulado pacientes.Emplear guantes quirúrgicos en todo trabajo que entrañe contacto con sangre. .Utilizar pipetas mecánicas para manipular líquidos infecciosos. . viseras. Nunca pipetear con la boca esos productos peligrosos. beber.. Los guantes se deben retirar asépticamente y ser esterilizados en autoclave. o cabinas de seguridad. guardar alimentos ni aplicar cosméticos. . b) Higiene del laboratorio y el personal. . . como: batones.Cuando la naturaleza del trabajo a realizar así lo requiera. 25 . material infecciosos o animales infectados. botas. proteger los ojos y la cara de salpicaduras e impactos mediante gafas de seguridad. etc. pantalla facial u otros dispositivos de protección. gabinetes.En las zonas de trabajo del laboratorio. . Nunca dejarlos en posición horizontal.No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua. . . o animales y al retirarse del laboratorio (ver mas adelante.Siempre que sea necesario. deben mantenerse siempre en posición vertical en una gradilla.Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato. no comer. recurrir al empleo de campanas químicas. Los tubos de ensayo que contengan cultivos.Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores. fumar. procedimiento para el lavado de manos).

el de los gérmenes ambientales o contaminantes que por diversas vías pueden tener acceso a las áreas de trabajo. el manejo y control de los microorganismos presentes en las diferentes muestras y cultivos durante el proceso de la investigación. Casi todas las salas o cubículos del laboratorio dispondrán de mesetas. que permita al personal del laboratorio. 1 : Equipos y medios de seguridad: a) Incinerador de asas. El diseño adecuado de los laboratorios Debido a los diversos riesgos implícitos en las investigaciones microbiológicas. b) Guantes de polietileno. la construcción o adaptación de un laboratorio de microbiología clínica.Utilizar incineradas de asas microbiológicas. 3. Lentes de seguridad. 2. requiere de condiciones especiales que propicien el establecimiento de una organización de trabajo. la construcción de un laboratorio de microbiología se hará en un área separada de locales destinados a otros fines. en especial la parte inferior. el piso y el techo. generalmente empotradas en las paredes o instaladas en el centro del local.. así como. d) Nasobuco. 1. Dentro de los requerimientos esenciales del diseño constructivo se encuentran los siguientes. Las paredes. el cumplimiento estricto de las normas de asepsia y antisepsia establecidas para la manipulación de los pacientes. deben ser lisos. Como medida de seguridad. Fig. sin grietas o ralladuras donde se pueda acumular la suciedad y el polvo que dificulten su limpieza y desinfección. Las mesetas deben ser construidas con acero inoxidable u otro material simi26 .

Las ventanas deben estar situadas a unos 30 cm. así como otros materiales e instrumentos. no debiendo existir ninguna construcción debajo que dificulte la colocación de las piernas y solo de ser necesario podrá disponer de una gaveta. que estarán presentes en un turno de trabajo. La superficie de estas mesetas no deben reflejar excesivamente la luz para que no interfiera la lectura de algunos exámenes ni afecte con el tiempo la vista del laboratorista. electricidad. álcalis y sustancias corrosivas. Fig. los frascos con reactivos colorantes.lar que propicie un terminado de su superficie liso y sin poros y que sea al mismo tiempo muy resistente a la acción de los ácidos. dependerá esencialmente de la disponibilidad de espacio. atendiendo a la cantidad de personas previstas. 4. 5.Las que sean destinadas para trabajar sentado. por encima de la altura de las mesetas para evitar la exposición directa del aire y el polvo procedente del exterior. Caracteres estructurales La estructura de un laboratorio de microbiología. Estas mesetas generalmente están provistas de gavetas y estantes con anaqueles. mínimo. medios de cultivos. En aquellos laboratorios que cuenten con sufi27 . El grado de iluminación y ventilación se debe adecuar a las normas establecidas para locales cerrados o abiertos. destinados a la colocación de la cristalería. de manera que puedan ser desinfectadas o esterilizadas por métodos físicos o químicos sin que se deterioren. tendrán una altura de 75 a 80 cm de altura por 60 cm de ancho. El laboratorio dispondrá de instalaciones de : agua. 2 : Disposición de las mesetas en el laboratorio. Las destinadas para trabajar de pie tendrán una altura de 85 a 90 cm de alto y el mismo ancho que la anterior. aire y gas.

28 . (áreas bio limpias o bio sucias) con esta estrategia. en caso de pacientes encamados. Cubículo para la esterilización y preparación de materiales. Cubículo para la preparación de medios de cultivo. de menor a mayor nivel de contaminación. familiares y visitantes no tendrán acceso a las áreas de riesgo. todo lo cual está encaminado a reducir la probabilidad de posibles propagaciones de agentes patógenos por todo el laboratorio y la comunidad. la fecha de registro. Cubículo para las tomas de muestras. Sala principal de trabajo. o procedentes de otras unidades de salud vinculadas al centro. sala donde se encuentra hospitalizado o unidad de salud que hace la solicitud). las actividades suelen ser compartimentadas en las siguientes áreas o secciones de trabajo: Sala de recepción y archivo. 3 : Libro de registro. los datos del paciente (nombre y dos apellidos y número de historia clínica). un personal de oficina entrenado. La sala de recepción y archivo. siendo limitado para el resto del personal del laboratorio y otros visitantes. Cuarto de siembra. los pacientes. y el tipo de investigación que se indica. debe estar a la entrada de la edificación y el resto de las secciones de trabajo. el numero. la procedencia (consulta externa.cientes salas y cubículos. reactivos y colorantes. Sala de recepción y archivo En esta sección. donde se procederá a asentar en el libro de registro de entrada. se ubicará estratégicamente en el interior del laboratorio. Fig. no relacionados con la actividad que se realiza en esas secciones de trabajo. recepciona las órdenes de análisis entregadas por los propios pacientes o enviadas desde las salas de la unidad hospitalaria. que consecutivamente le corresponde a esa solicitud.

heces.En un pequeño cuadrante que se encuentra impreso en el ángulo superior derecho de la orden de análisis se notara el número asignado en el registro de entrada. Si el examen no se puede realizar y se solicite su repetición. quien la firmará y anotara la fecha de realización. emitir un duplicado. suero hemolizado. Si se tratara de un tipo de muestra que deba ser tomada en el laboratorio (exudados. quien la entregara al técnico que le vaya a tomar la muestra. los resultados serán debidamente informados en la orden de análisis. muestra contaminadas. de archivo de la unidad hospitalaria para que sean archivados en las historias clínicas o en el laboratorio cuando deban ser recogidas por los interesados. la sección de archivo tiene la función de procesar un resumen bioestadístico mensual con los resul29 . Las ordenes con los resultados serán enviadas al Dpto. por el técnico que realizó el examen. la manipulación ulterior de las ordenes pueden propiciar una vía de contagio. la orden le será devuelta al paciente. etc) después de registrada. Concluida la investigación. debiendo reintegrarla a la sección de recepción y archivo. el mismo número de registro. donde se anotará los datos en el libro de registro de resultados. los frascos que contienen muestras no deben estar en contacto con las órdenes de análisis. lesiones infecciosas en la piel. Además de estos datos primarios que se registran diariamente. Como medida de seguridad. esputo. dada la posibilidad de que se haya producido algún derramamiento durante su recolección en cuyo caso. 4 : Orden de análisis. en la orden de análisis se especificaran las causas (muestras escasa. etc). Cuando la orden se entrega conjuntamente con la muestra (orina. lo que permitirá en caso de extravío de la orden. etc) en los frascos se anota con lápiz cristalográfico. Fig.

reactivos y colorantes Este local estará equipado con balanzas. resiembras y de aquellas actividades que requieran de una estricta asepsia. tinciones. potenciómetro. etc. parasitología. Cubículo para la preparación de medios de cultivos. refrigerador. etc) para la toma de las diferentes muestras (exudado faringeo. camillas ginecológicas. Estas secciones de trabajo deben estar climatizadas. 30 . etc. coprocultivo. En sus estantes y anaqueles se almacenará el stok de productos químicos. etc. así como de una lámpara de luz ultravioleta para la esterilización del medio ambiente. observaciones microscópicas. Cada sección contará con los recursos necesarios para la realización de esas investigaciones especificas. el laboratorista dispondrá de los recursos necesarios (guantes. o la superficie del inmueble y el mobiliario. Cubículos para las tomas de muestras En este local. constituyendo cada uno de ellos. Cuarto de siembra Generalmente los laboratorios pequeños que disponen de una sala principal en un único local tienen anexado un pequeño cubículo que es donde radica el cuarto de siembra. debe estar climatizado. una sección de trabajo independiente. centros municipales o provinciales. conjuntival. Este cuarto esta provisto de mesetas y de todos los materiales e instrumentos para la realización de siembras. etc). medios de cultivos y otros reactivos y colorantes. en la que se realizan determinadas investigaciones. Al igual que la sala principal de trabajo. para la toma del exudado vaginal. óptico. leptospirosis. mechero. instrumentos de siembra. baño de María. particularmente. así como de la cristalería y otros accesorios para estos fines.tados de cada tipo de investigación y adicionalmente llevar un control estadístico establecido por los programas de enfermedades de transmisión sexual y tuberculosis. debiendo contar con una colección de cepas microbianas certificadas para la realización del control de calidad. tuberculosis. En algunas unidades. etc) debiendo contar con la privacidad requerida y las condiciones necesarias. por ejemplo: Urocultivo. uretral. misceláneas.. Sala principal de trabajo Esta sala puede contar de uno o varios cubículos. pueden existir otras secciones especializadas para la investigación de lepra. pruebas de identificación. etc. tales como: preparación y cultivo de las muestras. serología. hisopos estériles. etc. etc tales como parabanes.

Destilación de agua. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. En el segundo de enjuaga. deben ser previamente taponados 31 . Las pilas de estos fregaderos deben estar lo suficientemente altas como para permitir el enjuague de las pipetas en posición vertical. . 5 : Hisopo para la limpieza de la cristalería. . incluyendo su secado En este local se instala una meseta con tres fregaderos colindantes. En un área de este local se situara un recipiente grande con solución desinfectante o sulfocromica con el objetivo de sumergir la cristalería que asi lo requiera. Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales. . incluyendo su secado. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización La cristalería de trabajo y otros materiales que vayan a ser sometidos a un proceso de esterilización. Fig. . Esterilización. con agua cruda y en el tercero con agua destilada. en horno o autoclave. entre las que se encuentran las siguientes.Cubículo para la esterilización y preparación de materiales Este local se destina para la realización de diversas actividades. Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización. en el primero se friega la cristalería con detergentes especiales y agua abundante empleando hisopo de tamaño apropiado.

con algodón y/o empaquetados con papel de estraza. Fig. 32 . para evitar su posterior contaminación una vez estériles. una para esterilizar el material limpio y la otra para esterilizar el material sucio. los instalan en este lugar (Área limpia) procediendo a la destilación y recolección del agua destilada en botellones con tapón de goma. esterilización. Destilación de agua Generalmente. El flujo de trabajo en esta sección es el siguiente: entrada del material sucio. fregado. El área para el tratamiento del material limpio contará al menos con un horno que además de ser utilizado para la esterilización se puede emplear para el secado. preparación y esterilización del material limpio. 6 : Destilador metálico de agua. los laboratorios que disponen de destiladores metálicos. por las manipulaciones ulteriores y los microorganismos presentes en el medio ambiente. Esterilización El local debe estar dividido en dos áreas. Como se comprenderá se requieren de dos autoclaves.

No se permitirá la presencia de niños en las zonas de trabajo del laboratorio. 3. ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN 1. 4. en posición horizontal. No se permitirá tampoco la entrada en el laboratorio de animales que no tengan relación con el trabajo que se esté realizando. 5. 2. 6. como por ejemplo la inmunización actualizada. 33 . b) La existencia y localización de un manual de seguridad y de operaciones en el que se identifiquen los riesgos actuales y potenciales y se indiquen los procedimientos para su reducción. c) Los riesgos mas probables que pueden ocurrir debido al tipo de investigaciones que se realizan en ese laboratorio. La manipulación se hará siempre con guantes quirúrgicos estériles observando un cuidado extremo para evitar pinchazos o cortaduras. 2. Descargar la solución desinfectante contenida en la jeringuilla a través de la aguja. Observar que no queden restos de sangre ni manchas. a través de su director una minuciosa información acerca de: a) Las medidas de seguridad establecidas. Examinar la aguja y la jeringuilla cerciorándose de que el ajuste de la boquilla de la aguja a la jeringuilla es adecuado y que las marcas volumétricas se mantienen legibles. El personal del laboratorio recibirá. A todos los miembros del personal del laboratorio y demás personas expuestas se les tomara muestras de sangre periódicamente y con el suero se realizaran determinaciones que servirán de referencia en función de los agentes infecciosos manipulados. 3. Enjuagar la jeringuilla y la aguja con agua (llenar y vaciar). Dejar las agujas colocadas en la jeringuillas. PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES. Durante el horario de trabajo las puertas del laboratorio permanecerán cerradas y solo tendrán acceso el personal del laboratorio y las personas autorizadas que hayan sido debidamente informadas sobre los posibles riegos y satisfagan cualquier requisito que se exija para tener acceso. Sumergir la jeringuilla con la aguja ensamblada. en el interior de una bandeja que contenga solución desinfectante y exponerla a su acción por un espacio de tiempo no menor de 20 minutos. 4.MEDIDAS DE PREVENCIÓN 1.

34 . Secar y proceder a empaquetar las agujas y las jeringuillas por separado con doble envoltura para su esterilización en autoclave. d) Remover el material absorbente y colocarlo en un contenedor destinado para materiales contaminados. e) y f) Limpieza con agua y detergente. b)Aplicar solución desinfectante. b) Cubrir la sustancia derramada con material absorbente (algodón. d)Aplicación nuevamente de desinfectante. papel de filtro. c) Aplicar solución desinfectante de hipoclorito de calcio o sodio al 1% alrededor del derrame y sobre el material absorbente esperar de 10 a 20 minutos. Fig. INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE En caso de derrame de muestras biológicas o material contaminado a) Colocarse guantes quirúrgicos. etc). c)Remover el material infeccioso.7. e) Limpiar nuevamente el área contaminada con el desinfectante y posteriormente con detergente y agua abundante. 7 : Desinfección de muestras biológicas o material infeccioso derramado accidentalmente: a)Cubrir el área con un material adsorbente.

En el lavado de manos intervienen elementos mecánicos y químicos. El personal accidentado debe ser puesto en observación epidemiológica que incluya pruebas para detectar anticuerpos contra el VIH que serán realizadas 6 semanas después de la exposición. quien registrará el hecho en el libro de control que existe al efecto. d) Para continuar el trabajo colóquese un débil o guante. trae como consecuencia la contaminación de las manos y las muñecas pudiendo extenderse a los antebrazos. El agua arrastra mecánicamente una parte de los microorganismo presentes en las 35 . verificara la procedencia de la muestra y si comprueba que el instrumental estaba contaminado con sangre o liquido corporal de un enfermo o portador de VIH. debe irrigarse de inmediato con cantidades de agua abundantes o solución salina fisiológica. f) Los derrames accidentales. el alta epidemiológica. diarreas o adenopatías que ocurra dentro de las 12 semanas con posterioridad a la exposición. lesiones o exposiciones con muestras o material contaminado. b) Estimular el sangramiento. de Epidemiología y orientará al trabajador que reporte cualquier síntoma febril agudo.En caso de lesiones o contacto no protegido con material contaminado o muestras biológicas a) Lavar de inmediato la lesión con agua y jabón. Justificación: La medida básica mas importante. La manipulación de los pacientes o materiales. punturas. por lo que de no debe aplicarse con sistematisidad estas medidas higiénicas al personal de la salud puede propagar la infección de un paciente a otro y contribuir de esta manera al incremento de las infecciones nosocomiales. Si la prueba es negativa. Curar y cubrir la lesión. sobre todo si es acompañado de rash. para arrastrar mecánicamente a los agentes infecciosos. se repite a los 3 meses y con esa periodicidad durante un año. LAVADO DE MANOS Objetivo: Eliminar la micro biota transitoria y disminuir la residente o normal de las manos y los antebrazos. deben ser comunicados lo antes posible al jefe del laboratorio. lo notificara al Dpto. relacionada con la higiene personal lo constituye sin lugar a dudas el lavado de manos. Si al cabo de ese tiempo continua negativa se da. e) En caso de salpicaduras de sangre en los ojos o la boca. g) El jefe de Dpto. c) Aplicar una solución desinfectante débil de hipoclorito de sodio o calcio.

Cierre la llave con una de las manos y enjabónelas. 4.manos. Lavado higiénico o médico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. . Lavado quirúrgico. 6. Empleo: Se utiliza ante las maniobras semicriticas. enjuague el jabón y colóquelos en la jabonera. Cierre la llave y séquese las manos con servilletas. 36 . llénelas de agua y enjuague la llave. Abra la llave hasta que salga un chorro abundante de agua y enjuague las manos y manténgalas en un plano horizontal. Retire las prendas de las manos y las muñecas. Lavado social. papel o paño para cada una. evitar infecciones cruzadas y proteger al personal de salud.. Frote rigurosamente las manos con movimiento rotativo y haga que la espuma se extienda hasta las muñecas. Junte las manos en forma de recipiente. Con la punta de los dedos. personales o sociales que lo requiera y antes y después del contacto con pacientes en procederes no invasivos y sin riesgo. 5. sin frotárselas. TIpos de lavado de manos . Procedimiento 1. mientras que el jabón emulsiona las materias extrañas y reduce la tensión superficial de los gérmenes presentes lo que facilita su lisis. 8. Abra la llave del agua y tome el jabón. Empleo: Siempre que se perciban las manos sucias. Lavado social de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón convencional. 2. conjuntamente con la eliminación de los ácidos grasos y la suciedad. que elimina todo tipo de suciedad visible. Lavado higiénico. con el objetivo de arrastrar suciedades. 7. 3. al realizar actividades fisiológicas. las que se frotan de forma enérgica se enjuagan abundantemente durante un minuto y después del secado se aplica solución antiséptica. . Remoje las manos hasta las muñecas y haga una abundante espuma.

f) Frotación de las yemas de los dedos sobre las palmas. Frote las manos de la siguiente forma: a) Palma con palma. i) Seque las manos y antebrazos con paños. 4. e) Pulgar derecho con la mano izquierda y viceversa. b) Palma derecha sobre dorso de la mano izquierda o viceversa. Realice el lavado social de las manos hasta enjuagar la llave con las manos juntas. Procedimiento 1. Lavado quirúrgico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua. Moje las manos y antebrazos hasta 2 pulgadas arriba del codo. 37 . enjabónelos con jabón convencional en forma circular y haga una abundante espuma. jabón y cepillo.Procedimiento 1. d) Dorso de los dedos flexionados para cada mano. 5. c) Palma con palma intercalando los dedos. con utilización de solución antiséptica después del secado. comience por las manos y finalice en los codos nunca regrese a las manos. lechos ungueales y la yema de los dedos. Realice el lavado social de las manos hasta el paso en que se enjuaga la llave con las manos juntas en forma de recipiente. 3. 3. aplíquele jabón y cepille bien las uñas. mantenga las manos siempre levantadas para que el agua corra hacia los codos. Empleo: Antes de cualquier maniobra critica. 2. Tomar un cepillo estéril para cada mano. h) Realice un enjuague abundante y deje que el agua corra hacia los codos. Moje las manos y antebrazos (5 cm por encima de las muñecas) enjabónelas con jabón convencional o bacteriostático y haga una abundante espuma. 2. j) Aplicar solución antiséptica y déjela actuar sobre las manos por un tiempo no menor de 2 minutos antes de la maniobra semicritica. Enjuague bien sin dejar ningún residuo de jabón. Frote las manos igual que para lavado higiénico incluyendo los antebrazos. g) Frote en forma circular la superficie de los antebrazos 5 cm por encima de las muñecas. servilletas o papel estéril (uno para cada mano) apriete suavemente la piel sin restregar.

2. cualquier limpieza o reparación que se considere se hará después de esterilizados. Objetos aguzados y cortantes: Las agujas hipodérmicas deben ser colocadas en recipientes con paredes que no puedan traspasarse fácilmente. Lo mejor es poner los deshechos en un saco plástico que se introduce en una caja de cartón. Si se utiliza recipientes especiales concebidos para el transporte.MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS Se debe establecer un sistema de identificación y separación de los materiales contaminados (y de sus recipientes). habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar transporte. Nombre los diferentes tipos de riesgo a los que están expuestos los profesionales y técnicos de microbiología en el ejercicio de su trabajo. d) Material contaminado para su eliminación. etc). b) Objetos aguzados y cortantes (agujas. Después del tratamiento en autoclave puede colocarse el material en recipientes apropiados para el transporte al incinerador o a otro lugar de evacuación. a) Deshechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura. Enuncie el concepto de Bioseguridad. con lo que se puede incinerar el contenido y el continente. c) Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización. No se efectúa ninguna acción previa. CUESTIONARIO 1. Material contaminado para eliminación: Todos los cultivos y materiales contaminados suelen esterilizarse en autoclave. Cuando estos estén llenos se colocaran dentro de otros recipientes para desechos contaminados y se incineran.antes de proceder a su eliminación. incluso cuando las normas de laboratorio consistan en esterilizarlos primero en autoclave. Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización: Este material se coloca en recipientes impermeables poco profundos que contenga una cantidad desinfectante suficiente para cubrir el contenido y se llevan al autoclave. habrá que limpiarlos y desinfectarlos después de descargar el contenido y antes de devolverlos al laboratorio. jeringuillas. previamente introducidos en recipientes impermiables. Estos recipientes deben ser impermeables y estar provistos de tapa herméticas. 38 .

14. 13. 15. ¿Cuáles son las indicaciones a seguir en el caso de que se produzcan derrames de muestras biológicas o material contaminado? 17. Especifique las característica constructivas que debe tener cada una de las salas o cubículo. Caracterice los diferentes niveles de riesgo. 3. 5. que están encaminadas a evitar la ocurrencia de contagio infecciosos. teniendo en cuenta su reutilización o eliminación. 12. 16. Explique como usted procede con cada tipo de material u objeto contaminado. ¿Qué instalaciones debe tener el laboratorio para su buen funcionamiento? 11. Mencione las prohibiciones establecidas en el código practico o reglamento de estricto cumplimiento para el personal que labora en el laboratorio. ¿Qué indicaciones se establecen en caso de accidente?. en cuanto a la afectación individual y comunitaria. Refiérase a las medidas establecida para evitar la formación de aerosoles. 39 . 18. 6. 4. Nombre las diferentes salas o cubículos con que se estructura un laboratorio de microbiología. Indique cuales don las actividades que se realizan en cada sala o cubículo del laboratorio. 10. Describa como debe ser el diseño constructivo de un laboratorio de microbiología. Mencione los principios básicos establecidos para la prevención y control del riesgo biológico. 9. Describa pormenorizadamente las normas establecidas para efectuar las diferentes técnicas de lavado de manos. 7. y su equipamiento.¿Cuáles son las principales causas del daño individual? Especifique que elemento biológico resultan vulnerables de ser afectados en la comunidad por negligencias o accidentes en un laboratorio que trabaja con agentes biológicos peligrosos. Precise las medidas de prevención que debe conocer el personal que labora en los laboratorios. 8. ¿Cómo se clasifican los objetos peligrosos antes de ser deshechos? 19.

instrumentos de producción. para obtener los medios de subsistencia necesarios (alimentos. la patria y el Estado. antes de constituirse en patrones del comportamiento. como el conjunto de convicciones. representaciones. de honestas o deshonestas etc. LA MORAL La moral puede definirse. Como una necesidad de las sociedades divididas en clases. religiosas. para lo cual crea organizaciones represivas o políticas e instituciones productivas y de servicio que responden a sus intereses económicos o tienen el encargo de influir ideológicamente con iguales propósitos sobre la conciencia común (estado de opinión. fundadas o dogmáticas.) de la población. La moral está condicionada por la base 40 . evaluando estas relaciones de buenas o malas. vivienda. En todo sistema social impera un modo de producción que determina la base económica de esa sociedad. mediante el establecimiento de relaciones de producción basada en la propiedad sobre los medios de producción que va a delimitar el grado de accesibilidad a los bienes materiales y culturales de cada clase y/o capa social existente. normas y evaluaciones sobre la regulación de la conducta de los individuos. su clase social. que en su conjunto forman la conciencia social. la familia.CAPITULO 3 ETICA MEDICA INTRODUCCION La sociedad está formada pro un conjunto de seres humanos que conviven dentro un mismo ámbito cultural.. A diferencia de las relaciones de producción que se forman independientemente de la voluntad del hombre. debido a influencias socioculturales y que se expresa mediante opiniones. surge el Estado. jurídicas. etc. estéticas. de justas o injustas. las concepciones ideológicas pasan primero por la conciencia. juicios. Y fijándolas en su conciencia como principios o normas morales. cuya estructura responde a los intereses de la clase dominante. lo que dependerá del lugar que ocupen en la escala social y el carácter privado o social de las fuerzas productivas. vestidos. una organización política de la clase dominante que tiene como finalidad mantener el orden establecido y aplastar la resistencia de las clases antagónicas. filosóficas. que cada individuo incorpora a su escala de valores. relacionándose de un modo u otro. constituyendo obligaciones con respecto a otros individuos. morales. criterios etc. concepciones políticas.). mediante la inculcación de ideas.

de manera irreversible. señala que aspiraciones son dignas. sus familiares o a la comunidad. sus normas y carácter histórico. Teoría de la moral Investiga la esencia de la moral. que investiga los enunciados éticos y su relación con la verdad. Al cumplir esta función. las leyes a que obedece. así como de los trabajadores administrativos y de servicio que laboran en instituciones biomédicas. que conducta es buena y cual es el sentido de la vida. establece el código moral de la conducta. psíquicas o morales en el paciente. su origen y desarrollo. existen en aquellas morales diferentes. con 41 . la ética investiga científicamente las concepciones morales en su sentido mas amplio y establece las regulaciones para su aplicación. ÉTICA MÉDICA La ética médica es una manifestación de la ética general y se refiere específicamente. a afectaciones somáticas.económica el régimen social. la moral no se apoya en leyes formales. ETICA La ética es la ciencia de la moral y de la moralidad. Como quiera que en la sociedad dividida en clases los intereses son contradictorios. estableciéndose como hábito o costumbre en la conciencia. Cuando los actos del personal médico o paramédico dan lugar. que surge y se desarrolla como resultado de las relaciones de producción. en la autoridad moral de algunas personas o en la opinión publica de determinadas colectividades. Ética normativa Investiga el problema del bien y del mal. En los últimos tiempos se ha incorporado una nueva modalidad denominada Metaética. se incurre en violaciones de la BIOETICA. sino en la fuerza de la persuasión y el ejemplo. a los principios y normas que rigen la conducta de los profesionales y técnicos de la salud. Teoría de la Moral y Ética Normativa. A diferencia de la moral. pero a la vez como otras formas de la conciencia social incide y actúa sobre ella. Para su estudio la ética se divide en.

la justicia. b) El carácter gratuito de la atención médica. En cuanto al principio de justicia. psíquica o moral. 42 . basados en los siguientes principios: a) La voluntad política del estado cubano de crear una infraestructura que ha permitido llevar los servicios médicos a todo el país. ideológico y patriótico. con independencia del elevado costo que pueda tener para el Estado. debe estar basada en la estricta observancia de los siguientes principios éticos: En relación con el paciente y sus familiares . Es por ello que en el ejército de nuestra función social debemos observar principios éticos . la beneficencia y la autonomía. tanto preventiva como curativa en las instituciones de salud. está regulado básicamente pro 4 principios: la no maleficencia. El comportamiento bioético. Para brindar su colaboración en cualquier lugar del mundo. trabajar consecuentemente allí donde la sociedad lo requiera. dedicar todos nuestros esfuerzos y conocimientos científicos y técnicos al mejoramiento de la salud del hombre. Nuestra conducta en relación con el paciente y sus familiares.Dedicar nuestros esfuerzos a la prevención. con el elevado espíritu internacionalista. aún en las zonas más apartadas y recónditas. donde se respeta la decisión del paciente de someterse a acciones médicas o experimentales que puedan afectar su integridad físico. todos los pacientes tienen las mismas oportunidades de beneficiarse por igual.morales de profundo contenido humano.Evitar que se produzcan daños a personas sanas o enfermas en los trabajos de investigación que realicemos. El carácter socialista del Sistema Nacional de salud de nuestro país. rehabilitación y promoción de la salud humana.independencia de que la acción se haya producido de manera intencional o inconscientemente. En el primero se establece. recuperación. no causar daño al paciente de manera intencional. la autonomía. establece la equidad. con el resto de los trabajadores y estudiantes del sector y con la sociedad. por negligencia u omisión. de los recursos y atención que presta la institución y por último. tales como. estar siempre dispuesto a brindar la atención necesaria. El principio de beneficencia preconiza que todas las acciones y esfuerzos deben estar encaminados a beneficiar al enfermo. . c) La disposición los profesionales y técnicos de la salud de participar en misiones internacionalistas. constituye la base material sobre la que se sustenta la moral y la ética de los trabajadores de la salud. es decir.

de forma solícita.Los profesionales y técnicos de la salud deben poseer la honestidad necesaria para reconocer sus errores y eliminarlos.Escuchar las preocupaciones y dificultades del paciente y sus familiares.No divulgar aspectos de la enfermedad que puedan estar relacionados con la vida intima del paciente o sus familiares. darles la atención requerida y esforzarnos por viabilizar las soluciones posibles.Abstenerse de realizar trabajos investigativos con los pacientes sin su consentimiento. el pudor y la dignidad de las personas bajo nuestra atención. . evitando a toda costa que nuestro trabajo se afecte por el apresuramiento.Propiciar una adecuada relación personal con el paciente que le inspire un buen estado de ánimo y seguridad.Los errores técnicos deben ser conocidos y analizados críticamente en reuniones del departamento con la libertad y profundidad necesaria que permitan derivar de ellas la experiencia que impidan su repetición.Cuidar de no incurrir en el error técnico que resulta de una equivocación. aunque no estén subordinados. un lenguaje claro. . de aquellos trabajadores que nos están subordinados. aunque no exista mala fe.Exigir. sencillo y comprensible. intervienen de una forma u otra en el trato con los pacientes.Evitar que lleguen a manos de los pacientes o de sus familiares las historias clínicas. . .. . . sin mostrar prisa o indiferencia hacia sus padecimientos. ni elementos de negligencia. sin alardes de tecnicismos y erradicando cualquier expresión de mal gusto.Mantener en los casos de enfermedades de curso fatal absoluta o relativa reserva sobre el diagnóstico y pronóstico en relación con el paciente. informes de laboratorio o cualquier otro documento que pueda darle indebida o perjudicial información. 43 . .Atender. teniendo en cuenta los intereses del paciente siempre que ello no ocasione un perjuicio social ni ponga en peligro la salud de otras personas. la superficialidad o la rutina. .Conservar el secreto profesional.Utilizar en todo momento de nuestras relaciones con los pacientes y familiares. . ni hacer comentarios indiscretos en su presencia. . la conducta adecuada ante el paciente y sus familiares y en el mismo sentido actuar sobre aquellos que. . despreocupación e ignorancia. . a toda persona que recabe nuestros servicios. .Respetar el decoro.

utilizando el vestuario adecuado en las diferentes áreas de trabajo.Mantener en todo momento un buen porte y aspecto personal. para lograr la optima calidad de los servicios que prestamos a la sociedad. tanto de estos principios éticos como de los reglamentos establecidos en las Unidades de Salud Pública.Inducir en los alumnos la disposición de recibir entrenamiento especializado en aquellas disciplinas que lo demanden. .Poner en conocimiento de las autoridades correspondientes cualquier violación que nos conste.Actualizar y perfeccionar los conocimientos de forma continua. .Procurar que la información que se ofrezca con propósitos de divulgación científica y educativa sea correcta y adecuada. . exija el mayor esfuerzo.Mantener. . . a través de la palabra y su ejemplo.En relación con el resto de los trabajadores de la salud . En las relaciones entre el docente y los educandos . . .Evitar indiscreciones que menoscaben el prestigio de otros compañeros o instituciones del sistema de salud.Propiciará que las relaciones entre el y sus educandos se enmarquen en la debida autoridad y respeto que se requieren en la actividad docente. para con nosotros mismos y con los demás profesionales y técnicos de la salud.Estar siempre en disposición de cumplir las obligaciones que le correspondan como ciudadano. como aspecto esencial para el cumplimiento de sus responsabilidades docentes. absteniéndose de emitir conceptos u opiniones que pueden alarmar innecesariamente a la ciudadanía. teórica y práctica. una actitud crítica y autocrítica sobre los asuntos referidos a la relación con los pacientes.Comportarse en todo momento con sencillez. Como parte de la sociedad . 44 . . .Ejercer con altruismo las actividades propias de su esfera de trabajo. por razón del carácter excepcional de nuestro trabajo.El docente debe promover en sus alumnos los principios éticos. así como aquellas que. a fin de satisfacer las necesidades de nuestro pueblo y las tareas internacionalistas que se requieran. subordinando el interés personal al social.Prestar especial atención a su superación individual. . modestia honestidad y dentro de las reglas de una elevada educación formal y política. cuidar que las opiniones y criterios se basen en el mas profundo análisis científico posible. dedicación y sacrificio.

que serán seleccionados entre los compañeros de más prestigio laboral científico. los que a partir de ese momento actuarán de acuerdo con la legislación laboral vigente. Esta comisión es la encargada de conocer toda denuncia o quejas sobre violaciones de la ética. 3 en activo y dos suplentes. 3. moral y político del centro. En el caso de arribar al criterio de que se incurrió en violación de la ética. ¿Qué son y cómo se crean las comisiones de ética médica? ¿Cuál es la competencia y el desempeño de los integrantes de las comisiones de ética médica en los centros de Salud? 45 . trasladará su criterio a la dirección y al sindicato. realizando las investigaciones pertinentes en el plazo de 20 días. es elegida para un mandato de 2 años quedando integrado por 5 miembros. 4.LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA En todas las unidades del Sistema Nacional de Salud se crean las comisiones de Etica Medica. En su opinión ¿Qué cosa es la ética? ¿Cuáles son los aspectos generales de la ética médica? ¿Qué usted entiende por violaciones de la Bioética? ¿Cúales son los principios que regulan el comportamiento bioético? ¿Cúales son los principios éticos que regulan las relaciones entre el personal de la Salud con los pacientes y familiares? Refiérase a los principios éticos que se ponen de manifiesto en las relaciones con otros trabajadores del sector y con los estudiantes. 9. CUESTIONARIO 1. 8. 5. 7. 6. 2. ¿Cómo se materializa el comportamiento ético cuando el profesional o técnico se siente parte de la sociedad. que de común acuerdo entre la administración y el sindicato.

pasando a ser un líquido que contiene múltiples sustancias en disolución. contaminándose con los diversos compuestos orgánicos e inorgánicos que estén presentes. formando la molécula una configuración especial no lineal. incoloro. IMPORTANCIA El agua es indispensable para la vida. siendo considerada como el solvente universal para la disolución de una gran cantidad de solutos y otros compuestos en estado líquido. el agua de lluvia se une a diversos elementos gaseosos presentes en el aire. inodoro e insípido. Químicamente está compuesta por 2 átomos de hidrógeno unidos a un átomo de oxígeno. por constituir el elemento esencial de todos los tejidos y líquidos orgánicos. helio. pasando al estado de vapor de agua. represas o acueductos donde va a parar. pasando al estado sólido y hierve a 1000c. Se congela a 00c. lo cual propicia que sobre el átomo de oxígeno exista una cierta densidad de cargas negativas y sobre el hidrógeno una densidad de cargas positivas. desempeñando un protagonismo esencial en las reacciones químicas. formando ácidos y bases con otros compuestos para formar hidratos. CALIDAD DEL AGUA El agua tal y como se encuentra en la naturaleza no es pura. como el nitrógeno. el agua es el reactivo más empleado. dióxido de carbono. Posteriormente en los afluentes.CAPÍTULO 4 EL AGUA INTRODUCCIÓN El agua es un líquido transparente. debido a que al ionizarse se une a muchos óxidos. dependiendo de los compuestos presentes en cada lugar. sino angular. hacen que en conjunto pierda su pureza. lo que determina sus propiedades disolventes. ríos. etc. por lo que se clasifica el enlace como polar. Al caer se disemina o se filtra en el suelo. 46 . lo que unido al tratamiento con cloro a que es sometida en los acueductos para su potabilización. Durante las precipitaciones. que variará. metano. continua el proceso de contaminación. En el laboratorio.

ya que los contaminantes al no tener la capacidad de evaporarse. Para lograr la purificación del agua se emplean dos métodos: la destilación y la desionización. quedan retenidos en el destilador. en someter al agua a temperatura de ebullición en el interior de un destilador metálico o de vidrio. Por su parte el fluor y el cobre inactivan a las enzimas. 47 . mientras que las sales de mercurio las activan. DESTILACIÓN La destilación consiste. pasen por un sistema de enfriamiento que los condensan. Por ejemplo: el cloro libre. posee un gran poder de oxidación por lo que puede alterar la composición química de uno o varios compuestos del sustrato empleado. ya que de lo contrario algunos componentes.PURIFICACIÓN DEL AGUA Para las determinaciones de laboratorio. resulta indispensable que el agua sea lo más pura posible. diseñado para que los vapores que se desprendan en este proceso. haciendo que pasen nuevamente al estado líquido con una mejor calidad. provocarían efectos indeseables distorsionando la fiabilidad de los resultados. 8 : Destilador de vidrio. Fig.

mejor que la del agua bidestilada. Para el trabajo del laboratorio de microbiología. debido a la presencia de dióxido de carbono atmosférico disuelto. el agua destilada. se verterá en recipientes apropiados. debe ser sometida nuevamente al proceso de destilación con lo que se obtiene el agua bidestilada. para algunas determinaciones. No obstante. lo cual se realiza de la siguiente manera: 1. el procedimiento comúnmente empleado es la destilación. el agua destilada debe ser sometida a un proceso de descarboxilación. una mayor calidad de pureza. aunque tiene la desventaja.El agua destilada. donde se conservará hasta su empleo. debe ser renovada diariamente. obtenida por el procedimiento explicado no es totalmente pura. provisto de un tubo trampa con perlas de hidróxido de sodio. como se ilustra en la siguiente tabla: 48 . con lo cual adquiere un buen estado de pureza. tapar el erlenmeyer con un tapón perforado de caucho. Si se quiere. CONDUCTIVIDAD DEL AGUA Mediante la conductividad eléctrica se puede determinar el grado de pureza del agua. DESIONIZACIÓN La desionización consiste en hacer pasar el agua corriente por una columna de resinas. ya que el vapor de agua que se forma puede arrastrar mecánicamente partículas de agua que no estén en estado de vapor. las cuales captan los aniones y cationes que la contaminan. un pH neutro o ligeramente alcalino. Si se sometiera a una tercera esterilización obtendríamos el agua tridestilada. que como el proceso no lleva implícito su esterilización. Se vierte el agua en un erlenmeyer y se somete a temperatura de ebullición por espacio de 3 a 5 minutos. incluso. como por ejemplo en la preparación de medios de cultivo. Si se desea neutralizar ese pH ácido para que no interfiera en algunos procederes. PH DEL AGUA DESTILADA El ph del agua destilada oscila entre 4 a 5. Después que el agua se ha enfriado. que requieren generalmente. 2. 3. el agua destilada puede emplearse en el trabajo diario sin que introduzca errores apreciables. Antes de apagar la fuente de calor.

2 Corriente Destilada Bidestilada Desionizada CUESTIONARIO 1. ¿Cuál es la diferencia entre el agua destilada y la bidestilada? 7. 9.Cuadro 2 : Grado de pureza de los distintos tipos de agua en correspondencia con su conductividad. Explique el proceso de desionización del agua. ¿Cómo es la calidad del agua. ¿Explique por qué causa el agua empleada en el laboratorio debe ser lo más pura posible? 4. ¿En que consiste la destilación? 6. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja de la desionización sobre la esterilización del agua? 10. tal como se encuentra en la naturaleza? 3. ¿Mediante que procedimiento se puede determinar el grado de pureza del agua? 49 . ¿Cuál es el pH del agua destilada? 11. ¿Por qué se hace necesario bidestilar o tridestilar el agua? 8. TIPO DE AGUA CONDUCTIVIDAD ( ohms -1 cm -1 ) 300 5 1 0. ¿Cómo se denomina el método más empleado en los laboratorios para purificar el agua? 5. ¿Cuál Es la importancia del agua para los laboratorios? 2.

La cristalería fabricada con estos componentes. Etc. El producto fundido. COMPONENTES DEL VIDRIO El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una temperatura de 1. algunos objetos. al conjunto de objetos utilizados en la realización de diferentes procedimientos técnicos. también se fabrican de material plástico... que independientemente de su forma y tamaño están constituidos solamente por vidrio. Como se sabe. exposiciones a elevadas temperaturas. térmica y química. con la ventaja de que dado su bajo costo. los diversos objetos de vidrio que integran la cristalería de laboratorio. pueden ser desechadas sin grandes afectaciones económicas para la institución. en ese estado líquido. SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO En la actualidad. generalmente transparente. se vierte en diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieran producir. se identifica por estar rotulada con el nombre de "Pyrex" (Pairex). Quedando como un cuerpo sólido.CAPÍTULO 5 CRISTALERÍA DE LABORATORIO INTRODUCCIÓN Se denomina cristalería de laboratorio. como por ejemplo: las jeringuillas utilizadas. además tiene la propiedad de permanecer inerte durante las reacciones químicas. lo que le confiere una alta resistencia contra impactos. lo que no resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio. así como para la fabricación de vasos. debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. lo que lo valida como un sustituto eficaz del vidrio. De esta manera se obtiene el cristal empleado para cubrir puertas o ventanas. cuya aleación le confiere una alta resistencia mecánica. copas y otros objetos. 50 . este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecánicos. caracterizado por su dureza. 0000c. especialmente con teflón (tetrafluoruroetileno) un polímero de bajo costo.

Thoma o Westergreen (No utilizadas en el laboratorio de microbiología) _______________________________________________________ . DE MEDICION VOLUMETRICA Pipetas de : Shali. productos químicos . . . Vidrio reloj Placas de Petry Embudos Condensadores Láminas de portaobjetos Láminas cubre objetos Láminas excavadas TC (Para contener) . Pipeta Probetas Beaker (Vaso de precipitado) Matraces Copa cónica Buretas Jeringuillas TD (Para distribuir) 51 . CLASIFICACION SUB-CLASIFI CACIÓN DE ALMACE NAJE CARACTERIZACIÓN .No revelan magnitudes volumétricas. nar.Pueden tener o no rotulada una escala de graduación .Cierre hermético.Están calibradas para trabajar a 200c.Se fabrican de diferentes tamaños. Frascos de fondo plano DE .La mayoría se fabriFrascos goteros TRABAJO can de diferentes Vaso de Koplin tamaños y capaciTubos de ensayo dades.Alta resistencia química DIFERENTES TIPOS G E N E R A L Todos los frascos o reciopientes destinados a contener o almace.Fotorresistencia (materias primas) o soluciones y reactivos elaborados ________________________________________________________ .Utilización para la Frascos erlenmeyer realización de diverFrascos Kitasatos sos procedimientos Frascos para reactivos técnicos.Expresan magnitudes volumétricas.CLASIFICACION La cristalería de laboratorio de clasifica de la siguiente manera: Cuadro 3: Clasificación de la cristalería de laboratorio.

. lo que propicia que no afecte significativamente el volumen de la preparación. la preparación de medios de cultivo. 9 : Erelenmeyer Los erlenmeyer son recipientes de forma cónica y fondo plano. como por ejemplo. Los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños. seguida de una porción cilíndrica de algunos cm a manera de cuello. 52 . que corresponde a la boca. 250. Si lo colocamos sobre la mesa de trabajo y lo observamos de arriba hacia abajo podemos percatarnos que en el extremo superior presenta una abertura circular con rebordes. 300. que se caracteriza por tener un diámetro 3 ó 5 veces mayor en su porción inferior con respecto a su porción superior. Los más empleados en el laboratorio de microbiología son los de: 100. Al concluir este espacio se va ensanchando progresivamente de forma oblicua adquiriendo la forma cónica que lo caracteriza. hace que los vapores se condensen en el cuello. Aunque los erlenmeyer pueden emplearse para la preparación de diferentes reactivos. Los de menor o mayor volumen de capacidad se utilizan con menor frecuencia.500 y 1 000 ml. esta cristalería está diseñada específicamente para la preparación de compuestos que requieran ser sometidos a la acción del calor. debido a que su forma cónica.CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS DE CRISTALERÍA CRISTALERÍA GENERAL DE TRABAJO Erlenmeyer Fig.

La tapa del frasco puede ser de cristal esmerilado o plástica si el cierre es de rosca. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar para la protección de reactivos fotosensibles. son similares a los erlenmeyer con la diferencia de que en el cuello tiene insertado un pequeño tubo corto en dirección horizontal abierto en su porción distal siendo las paredes de vidrio más gruesas. para soportar las diferencias de presiones externas e internas provocadas por las técnicas de filtración al vacío para los que básicamente son empleados. Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener de acuerdo a su tamaño entre 25 ml y 1 litro.11 : Frasco para reactivos.Kitasatos Fig. Con ambas variantes se consigue el cierre hermético del frasco. Al igual que los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños. lo que dependerá del tipo de reactivo que contenga. 53 . Frascos para reactivos Fig.10 : Frasco de kitasato Los frascos de Kitasatos.

pueden contener entre 25 y 100 ml.13 : Frascos goteros Existen en el mercado diferentes modelos. en tanto que otro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido. debiendo ser termorresistentes por si se requiere someterlos a la acción del calor. Los de vidrio. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular. Frascos goteros Fig. similar a los empleados en los frascos de medicamentos. tradicionalmente empleado son incoloros o ámbar.Frascos de fondo plano Fig. que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco. Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón de caucho. De acuerdo con su capacidad. el contenido goteará si se inclina el frasco adecuadamente. utilizado en las pruebas serológicas VDRL.12 : Frasco de fondo plano Se utilizan para la preparación de determinadas disoluciones. fabricándose de diferentes tamaños. 54 . En el trabajo microbiológico se utilizan regularmente para la preparación del antígeno de cardiolipina.

15: Tubos de ensayo Son pequeños recipientes de vidrio o plástico. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal. Estos vasos están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas. 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí. aunque la forma de sus extremos varía en función de su empleo. en tanto que los tubos para cultivo son similares. pero todos tienen. fabricados de diferentes tamaños. Los utilizados comúnmente en análisis cualitativos y cuantitativos tiene el fondo ligeramente cóncavos. en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente. 55 .14: Vaso de Koplin Estos vasos se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares.Vaso de Koplin Fig. con capacidad variable. Tubos de ensayo Fig. resina sintética obtenida por polimerización del fenol y el formaldehído. Todos son cilíndricos. de manera que quedan separados. pero se diferencian en que están provistos en su extremo superior de aristas helicoidales por donde se enrosca una tapa de baquelita. lo que posibilita la insertación de varias láminas portaobjetos.

generalmente con estrías longitudinales para facilitar su sujeción cuando se van a desenroscar, mientras que los tubos de centrífuga se caracterizan por tener el fondo cónico, para acoplarse a los portatubos de la centrífuga, pudiendo tener impresa una escala de graduación en ml. Los tubos ordinarios y los empleados para cultivo, mayormente utilizados en los laboratorios de microbiología, son los de 12 x 75, 13 x 100, 15 x 125 y 16 x 150 mm, correspondiendo el primer valor al diámetro y el segundo a la longitud. Se utiliza esencialmente para contener, conservar y procesar muestras biológicas, cultivar microorganismos y realizar pruebas de identificación para el diagnóstico de laboratorio, de las especies investigadas. Vidrio reloj

Fig.16: Vidrio reloj

Es un tipo de cristalería circular y cóncava de aspecto transparentes, similar a las utilizadas para cubrir las esferas de algunos relojes despertadores. Se utilizan regularmente para efectuar pesadas de productos sólidos con excepción de aquellos que sean higroscópicos que absorben la humedad del aire o volátiles. Placas de "Petry"

Fig.17: Placas de "Petry"

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Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diámetro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm de altura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente de vidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro. Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa queda descansando sobre el borde de la caja. En el trabajo microbiológico se utiliza comúnmente para contener algún medio de cultivo sólido. Embudos

Fig.18 : Embudos

Los embudos presentan la porción superior cónica y la posterior en forma de un tubo cilíndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal, pudiendo tener una longitud, menor , igual o mayor que la porción cónica, cuya capacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, según el modelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar líquidos.

Láminas portaobjetos

Fig.19 : Lámina potaobjetos

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Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transparente y forma rectangular. Miden 7,5 cm de largo por 2,5 cm de ancho. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso de coloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Este tipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebas serológicas de aglutinación. Láminas excavadas

Fig.20 : Lámina portaobjetos excavada

Son similares a las láminas portaobjetos ordinarias, con la diferencia de que presentan una excavación cóncava de algo más de 1 cm de diámetro en centro de la lámina en forma de pozuelo. Se utilizan para la preparación de la "gota colgante", una técnica mediante la cual se determina microscópicamente si la bacteria en estudio es o no móvil.

Láminas cubre objetos

Fig. 21: Láminas cubreobjetos

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Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía de cuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuando son rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.

Cristalería de medición
Pipetas

Fig. 22: Pipetas

Son tubos de vidrio rectos, de longitud y grosor variable que se caracterizan por tener el extremo inferior ligeramente cónico. Se fabrican diferentes tipos, que han sido diseñados para diversos procederes de laboratorio, siendo utilizada básicamente para medir y/o transferir volúmenes exactos de líquidos. Las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, son las pipetas graduadas, principalmente las de 1, 2, 5, y 10 ml. Este tipo de pipeta tiene impreso en la parte superior un número que equivale a su capacidad volumétrica y a todo lo largo una escala graduada en ml, que indica numéricamente los espacios en que se divide el volumen total. Cada espacio a su vez se divide en 10 líneas equidistantes que corresponden a las subdivisiones volumétricas. Por ejemplo: En una pipeta de 5 ml de capacidad, la escala queda dividida en 5 espacios iguales, cada uno de los cuales equivale a 1 ml. Cada especio a su vez se subdivide en 10 líneas, equivalente cada una de ellas a 0,1 ml. Las pipetas serológicas, son similares a las graduadas, pero su capacidad es de 1 ml o menos, estando dividida en 0,1 y/o 0,01 ml. En el trabajo microbiológico se utiliza en ocasiones un tipo de pipeta no graduada, denominada pipeta de Pasteur, que puede ser fabricada en el propio 59

laboratorio con tubos de cristal fusible mediante su exposición a la llama del mechero de gas. Este tipo de pipeta suele emplearse cuando no se requiere precisar con exactitud el volumen a pipetear. Procedimientos para el manejo de las pipetas graduadas: 1. Sostenga la pipeta por su parte superior mediante los dedos pulgar y medio.

Fig. 23 : Forma correcta de sostener la pipeta.

2. Haga penetrar la pipeta en el líquido que va a ser aspirado. 3. Introduzca el otro extremo en la boca y aspire suavemente, observando simultáneamente la escala graduada, hasta que la columna de líquido sobrepase ligeramente la marca deseada. 4. Retire la pipeta de la boca y de inmediato tape el orificio con la yema dedo índice, ejerciendo la presión suficiente para evitar que el líquido descienda por gravedad. 5. Manteniendo la presión del dedo índice, proceda a retirar el exceso de líquido de la parte exterior de la pipeta, con un paño, gasa o servilleta limpia. 6. Introduzca la pipeta en el frasco o tubo donde se extrajo el líquido y haga que la punta contacte con la pared interna. Estando la pipeta en posición perpendicular ir aflojando la presión del dedo índice para propiciar que la columna de líquido descienda del por gravedad, hasta observar que la 60

se soplarán las que estén marcadas en la parte superior con la letra "D" (to de livery) no debiendo soplarse las marcadas con la letra "C" (to contain). 9. Al realizar la lectura volumétrica. en la parte superior de la pared interna y nunca sobre el fondo.curvatura en la superficie del líquido (menisco) contacte justamente sobre la línea correspondiente que marca el volumen deseado. que ocasionaría errores en la lectura. Al vaciarse el contenido de la pipeta. proceda nuevamente a ejercer presión con el dedo índice para evitar que el líquido continúe descendiendo. pues al retirar la pipeta parte del líquido trasegado quedarán adherido al exterior de la pipeta. Fig. ocasionado por no estar el ojo del observador en el mismo plano horizontal con respecto al menisco. apoyando la punta. en el extremo de la punta quedará un pequeño volumen residual. 61 . En el caso de las pipetas serológicas. tiene una banda esmerilada o coloreada en el extremo superior proceda a soplar para que salga y completar el volumen previsto. En ese momento exacto. Introduzca la punta de la pipeta en el frasco o tubo receptor. Si la pipeta utilizada. 8. 24: Ubicación correcta del ojo para efectuar la lectura del menisco 7. evitar incurrir en el error de paralaje. Proceda a aflojar la presión del dedo para distribuir el volumen deseado en cada tubo. afectando la exactitud del volumen pipeteado. siendo arrastrado al retirarla. Si la pipeta carece de franja esmerilada o coloreada no se debe soplar ya que están diseñadas para desestimar ese residuo sin que se afecte el volumen deseado.

25 : Probetas Las probetas son recipientes cilíndricos y alargados de vidrio. la marca de 200C. una escala graduada a todo lo largo que divide y subdivide el volumen total. presentan un pico. que es la temperatura de trabajo de este tipo de cristalería. similar al de las cafeteras. Al igual 62 . Están provistas de una base de fondo plano que posibilita que puedan ser colocadas en posición vertical sobre una superficie nivelada. Las más utilizadas en el trabajo microbiológico están comprendidas en el rango de 50 a 1. Beaker (Vasos de precipitados) Fig.000 ml. La mayoría tienen rotulado en la parte superior un número que indica su capacidad volumétrica.Probetas Fig. . 26 : Beaker Los Beaker son recipientes transparentes e incoloros que presentan una forma cilíndrica teniendo una longitud de casi el doble de su diámetro. Se utilizan específicamente para medir volúmenes. Algunas probetas están provistas de tapa de vidrio esmerilado o plástica. En el borde del orificio. que se haya en la parte superior. para facilitar verter el líquido que contiene sin que se produzcan derramamientos. y al igual que las pipetas. de diámetro y tamaño variable. en correspondencia con su capacidad volumétrica.

siendo los más empleados las cápsulas y los morteros. 28 : Cápsula de porcelana 63 . Al igual que otros tipos de cristalería de medición. fabricados de porcelana. Materiales de porcelana Además de los materiales de vidrio o de teflón. tienen grabado el número que indica su capacidad volumétrica. en los laboratorios se utilizan otros. Al igual que otras cristalerías de medición. la temperatura de trabajo (200C) pudiendo tener o no una escala graduada en ml. Algunos están provistos de tapa de vidrio esmerilado. al igual que las probetas y las pipetas. Matraces Fig. tienen rotulado. la temperatura de trabajo (200C) y una línea alrededor del cuello que indica la marca de aforo. Se emplean para preparar disoluciones donde se requiere exactitud. 27 : Matraces Las matraces son frascos de vidrio incoloros y transparentes que tienen una porción superior en forma de un fino tubo cilíndrico y alargado. el número que indica su capacidad volumétrica. lo que permite colocarlos en posición vertical. Cápsulas Fig.que las pipetas tienen un pico en el borde la boca que propicia que se pueda verter el líquido que contiene sin que se produzca derramamiento. la inferior piriforme con el fondo plano.

caracterizándose generalmente por ser de color blanco y tener las paredes delgadas lisas y muy pulidas. con un doblez en forma de labio por un punto de su borde para facilitar verter su contenido. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN La cristalería que vaya a ser utilizada en las investigaciones microbiológicas de laboratorio. Después de escurrida se deja secar al aire o si se desea secado con mayor rapidez se puede introducir en una incubadora. son de mayor tamaño y están provistos de paredes más gruesas. dejando actuar el desinfectante por un espacio de tiempo no menor de 4 horas. sin que se produzca derramamiento. generalmente. 64 . aunque también se fabrican de vidrio. pudiendo tener el fondo plano o redondeado. Posteriormente se lava con detergente.. denominado mazo. El mortero se complementa con una pieza cilíndrica adicional. Uso: Para triturar compuestos sólidos con ayuda del mazo. Si la cristalería es nueva: Debe pasarse previamente por agua caliente para eliminar la presencia de vestigios fábriles.Son pozuelos de borde esférico. del mismo material. Uso: Se utilizan regularmente como recipientes de disoluciones que van a ser sometidas a una medición de pH o para colocar medios de cultivo que se pretenden pesar. Morteros Fig. Después se sumerge en una solución de ácido clorhídrico al 1%. fondo redondeado y tamaño variable. 29 : Mortero Los morteros son recipientes de porcelana. debe ser sometida previamente a un proceso de limpieza y desinfección antes de esterilizarla. A diferencia de las cápsulas. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. Similar a un pequeño bate de pelota. con el extremo inferior redondeado. Al igual que las cápsulas presentan un doblez en forma de labio en el borde para verter su contenido.

se friega con detergente. Procedimiento: Después de desinfectadas. 30 : Taponeamiento de tubos con asa y algodón Placas de Petry: Después de ensambladas (tapa y caja) podrán ser colocadas dentro de un cilíndrico de metal inoxidable con tapa. debe ser sometida previamente a un proceso de esterilización en autoclave a 1210C.Cuando la cristalería haya sido utilizada: Si mantiene material infeccioso. Fig. fabricado específicamente para ese uso. procediendo a su secado en la forma explicada. la cristalería se enjuaga para eliminar los restos groseros del material que contenía y se sumerge durante 10 ó 15 minutos en mezcla sulfocrómica. en parejas o en grupos de no más de 5 placas. por haber estado en contacto directo con microorganismos o contiene cultivo de ésta. 65 . durante 30 minutos. o en su defecto. Después de la esterilización. Desinfectantes más empleados (ver Capítulo 6) PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA PARA SU ESTERILIZACIÓN Objetivo: Evitar que se vuelvan a contaminar con posterioridad a su esterilización y mantenerlas en esas condiciones hasta su utilización. para evitar que el técnico o la persona encargada de la limpieza de la cristalería se contamine con microorganismos patógenos. las placas serán empaquetadas con papel de estraza. se enjuaga con agua corriente y finalmente con agua destilada. fregadas y secas: Tubos de ensayos: Se taponean con algodón y se envuelven con papel de estraza en grupos de 5 a 10 tubos. La cristalería así tratada. o más tiempo si la mezcla ya ha sido utilizada y mermada su efectividad. individualmente.

b)Empaquetamiento con papel de estraza Los erlenmeyer. probetas y otras cristalerías similares: Se taponean con algodón y se retapan con papel de estraza. 31 : Placas de Petry: a)Empaquetadas con papel de estraza. 32 : Pipetas: a)Taponeamiento con algodón. el cual se ata fuertemente con un lazo al cuello o porción anterior de la cristalería.Fig. Posteriormente se enrollan en una franja de papel de estraza. 66 . b)Cilíndro de metal inoxidable para colocar las placas Las pipetas: Se taponean de tal manera que no dificulte la succión. pero al mismo tiempo impida el paso hacia la boca del material que esté pipeteando. Fig.

Nombre los diferentes tipos de cristalería de medición volumétrica? 8. Explique cuáles son los procederes establecidos para la limpieza y desinfección de la cristalería. como las jeringuillas con doble envoltura. Describa cómo Ud. ¿ Cómo es una bureta? 12. ¿Qué otros recipientes además de los de vidrios se fabrican de porcelana? 21. 19. 22. 10. Nombre los componentes del vidrio "Pyrex". entiende por cristalería de laboratorio? 2. 3. ¿Cómo son las placas de "Petry"? 16. Describa el vaso de Koplin. Explique las diferentes causas de error en que puede incurrirse durante el pipeteo. ¿Cuánto miden las láminas portaobjetos y las cubreobjetos? 17. algunos. 14. ¿Qué Ud. prepara la cristalería para que se mantenga estéril después de la esterilización. 23. Explique cómo se fabrica el vidrio. 18. Describa las características de los tubos de ensayo. ¿Cómo funcionan los frascos goteros con tapa esmerilada? 13. 33 : Erelenmeyer: a)Taponeamiento con gasa y algodón El resto de los materiales se empaquetan igualmente e incluso. CUESTIONARIO 1. Precise semejanzas y diferencias entre una cápsula y un mortero. 67 . ¿Cómo se clasifica la cristalería general? 6. 4. ¿Para qué se utilizan regularmente los vasos de precipitado o Beaker? 20. ¿ Cuáles son las diferencias entre en erlenmeyer y un frasco de kitasato? 11. Mencione las cristalerías de medición volumétricas.Fig. Explique en orden cronológico los pasos que deben efectuarse durante la realización del pipeteo. ¿Cuáles son las características de la cristalería de medición volumétrica? 9. ¿Qué es el teflón y para qué se utiliza? 5. 15. ¿Cuáles son las características de la cristalería de almacenaje? 7.

lo cual a mediano plazo resulta letal para el microorganismo. Asepsia: método encaminado a prevenir la infección mediante la destrucción o evitación de los agentes infectivos. medio ambiente. corrompido. los agentes físicos más utilizados son: el calor. Aséptico: libre de toda materia séptica o infecciosa. Bactericida: agentes destructor de bacterias. ESTERILIZACIÓN Concepto: Esterilización significa: destrucción o eliminación de todas las formas de vida. Bacteriostático: agente que inhibe las funciones de las bacterias. donde se requiere su eliminación. Destruyen las diversas estructuras o inhiben su funcionamiento. Términos empleados relacionados con la esterilización y la desinfección Sepsis: infección pútrida (putrefacto. en especial por medio de agentes químicos. inhibir o separar a los microorganismos presentes en los diferentes objetos. para destruir. Diferentes agentes empleados en la esterilización: Para la esterilización se emplean diferentes agentes físicos y químicos. La mayoría de los métodos y agentes empleados. Específicamente mediante el empleo de métodos físicos.CAPITULO 6 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN INTRODUCCIÓN La esterilización y desinfección son los métodos esenciales empleados en los laboratorios de microbiología. ocasionan específicamente la desnaturalización de las proteínas celulares.. sino incluyendo además a sus esporas. Antisepsia: conjunto de procedimientos prácticos destinados a destruir o alejar los gérmenes patógenos. En relación con los agentes quími68 . compuestos orgánicos. no limitándose exclusivamente a la estructura vegetativa. etc.) Séptico: que produce la sepsis. etc. las radiaciones y la filtración.

inactivando su función osmótica. etc. de doble cámara. Debido a que las bacterias resultan más vulnerables en la medida en que estén más húmedas. etc. como aminoácidos. El calor se utiliza de tres maneras diferentes: calor húmedo. En el mercado se comercializan diferentes modelos de autoclave: verticales. que ocasionan la muerte del microorganismo. de manera similar que cuando se cocina un huevo duro.cos. diseñado para resistir la presión generada por la acumulación de vapor de agua. como son: la aplicación del nivel de temperatura requerido y el tiempo de exposición al calor. lo que trae como resultado la emigración incontrolada de los constituyentes intracelulares. calor húmedo a 1000 C. son destruidos. El calor El calor resulta un método muy eficaz para lograr una adecuada esterilización. 69 . potasio.. alcanzando valores de 121 C requeridos para la eliminación de las esporas para lograr una adecuada esterilización. El calor húmedo se emplea en los laboratorios de tres maneras diferentes. Calor húmedo El calor húmedo es la variante más empleada. horizontales. Calor húmedo a presión El calor húmedo a presión se obtiene mediante el empleo del autoclave. siempre y cuando el objeto o producto no sea termolabil. con lo cual la temperatura aumenta. El formaldehído y el óxido de etileno ejercen un efecto letal sobre las esporas. calor seco y la incineración. en consecuencia los puentes de hidrógeno de la membrana citoplasmática. y se cumpla con los parámetros de eficacio. el calor generado provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. en dependencia de la magnitud del material a esterilizar. solamente algunos. Bajo estas condiciones. pero todos tienen en común una estructura similar. Calor húmedo a presión. un equipo metálico provisto de un cierre hermético. como por ejemplo.

Lave de escape de vapor. 21.Fig. 19. a unos pocos cm de la cámara interna estando provista de un número variable de metálicas en posición radial que al ser cerrada mediante el de una manivela 70 . Respiradero. 4.Llave de paso para suministrar agua al tanque. Puerta La puerta está articulada con bisagras en la parte anterior del equipo.Quemador de gas. 18. Vista frontal y lateral: 1.Escape de agua de condensación. 13 y l4.Manómetro que indica la presión de la cámara externa. 9.Cierre hermético de la puerta.Cámara externa.Cámara interna. quedando las paredes de ambas separadas entre sí por varios cm. 12. En este espacio se acumula el vapor de agua procedente de la caldera que posteriormente pasa a la cámara interna. Prototipo standard del autoclave Cámara La cámara del autoclave consiste en un cuerpo cilíndrico de aproximadamente un metro de largo x 50 a 60 cm de diámetro. 11. 7. 16. 34: Autoclave. 20. 6. siendo el lugar destinado para la colocación de los objetos y materiales que sé desean esterilizar.Tanque de agua. que debido a su mayor diámetro rodea a la cámara interna en toda su longitud. 8.Manómetro que indica la presión de la cámara interna.Llave que comunica la cámara externa con la interna.Entrada de aire.Termómetro. 2.Llave de paso para sacar el agua del tanque.Válvula de seguridad. Algunos modelos disponen de una segunda cámara denominada externa. 3. 15.Puerta de seguridad. Llave que controla el nivel del agua. 10.Llave de paso de gas. 17.Válvula termostática. 5.

medios de cultivo. Válvulas Los autoclaves poseen dos válvulas. En su interior se deposita el agua (destilada) hasta alcanzar el nivel adecuado. Fuente de calor La fuente de calor empleada para calentar el agua contenida en la caldera y se produzca vapor de agua. b) Revise la válvula de seguridad. la caldera puede estar ubicada junto o separada de la cámara. Caldera Según el modelo de que se trate. c) Introduzca en la cámara los objetos y materiales que se van a esterilizar y cierre herméticamente la puerta. penetran en un reborde periférico situado en la parte frontal del autoclave propiciando un cierre hermético. y límpiela si estuviera sucia u obstruida. material quirúrgico. d) Proceda a abrir la válvula de salida del aire. Uso del autoclave El autoclave se utiliza regularmente para la esterilización de ropas.ubicada centralmente. una para extraer el aire que quedó en el interior del equipo al cerrarse y la otra para propulsar la salida del vapor cuando la presión sobrepasa los límites admisibles. etc. durante su funcionamiento. Manipulación del autoclave a) Revise el nivel del agua de la caldera y en caso de ser insuficiente. 71 . proceda a echar la cantidad requerida. Esta última se denomina "válvula de seguridad". e) Encienda la fuente de calor. puede ser eléctrica o de gas. Instrumentos de medición Estos equipos disponen de un termómetro y un manómetro que permiten ir monitoreando la temperatura y la presión existente en el interior del autoclave.

g) Espere a que el termómetro marque 1210 C y el manómetro 15 lb/pgda3 de presión. si se diera el caso. A continuación. El principio de este método consiste en someter el compuesto o medio de cultivo a esterilizar a una corriente de vapor a 1000C para lo cual se emplea el esterilizador de Arnold. gelatina. asciendan. es indicativo de que no se sacó todo el aire de la cámara. No trate de reducir la presión abriendo la válvula de seguridad o la de salida de aire. i) Cuando el termómetro y el manómetro marquen "O" proceda a abrir la válvula de salida de aire y espere a que salga el vapor residual. cierre la válvula. aunque puede extenderse a 30 minutos si el objeto o producto a esterilizar es demasiado grande. recomendándose en ese caso aumentar un poco la presión para que el equipo alcance la temperatura requerida. que consiste en un equipo similar al autoclave. pueden ocasionar quemaduras al manipulador. 2. se obtiene de dos maneras diferentes: 1. por lo que no puede garantizarse una esterilización eficaz con este método. mediante este método se logra la destrucción de todas las formas vegetativas y de algunas esporas. Calor húmedo a 1000 C El calor húmedo a 1000 C. urea. ya 72 . de que la temperatura no se corresponde con la presión.f) Manténgase atento a la válvula de salida de aire. abra la puerta el autoclave con sumo cuidado. pues será indicativo de que el aire acumulado dentro del autoclave ha salido y que todo el espacio de la cámara está ocupado exclusivamente por el vapor de agua. ya que esta acción puede provocar que los medios de cultivo que aún tengan más de 100 C al serle retirada abruptamente la presión. Por ebullición: El líquido en cuestión es sometido a la acción del calor hasta alcanzar temperaturas de 100 C. que generalmente es de 15 a 20 minutos. expulsen los tapones de algodón y se derramen dentro del equipo. para comenzar a contar el tiempo de esterilización. ya que los restos de vapor que queden aún dentro de la cámara. no debiendo por lo tanto ser esterilizados en auto clave. desconecte la fuente de calor (hay modelos donde la fuente se apaga automáticamente) y espere hasta que el manómetro marque "O". Vapor fluente: El vapor fluente se utiliza para la esterilización de compuestos y medios de cultivo elaborados con determinados azúcares. Que se deterioran a temperaturas superiores a 1000C. etc. siempre que la acción calórica se prolongue por 5 a 10 minutos. Cuando el vapor salga mediante un chorro continúo y sin intermitencia. h) Transcurrido el tiempo de esterilización. al salir por la puerta. con la diferencia de que no es hermético. Otras esporas resisten la temperatura de ebullición por más de una hora.

por lo que se requiere aplicar la esterilización fraccionada.Agua destilada. 6. 73 . El autoclave puede sustituir al equipo de Arnold. la temperatura de 1000C resulta insuficiente para la destrucción de algunas esporas. conocida como "tyndalización". La exposición al vapor fluente del material a esterilizar será de 20 a 30 minutos. 4. con lo cual la temperatura se mantiene estable a 1000C.Soporte. Como ya se explicó en acápite de ebullición.que el vapor producido por el calentamiento del agua. 35: Esterilizador de Arnold: 1.Tuberia de escape de vapor. siempre que se deje la válvula abierta para que el vapor no se acumule. Al no acumularse el vapor. va saliendo por un condensador que lo traslada en forma de agua. 5. De quedar alguna espora germinará y la célula vegetativa será destruida en la 3era. 7.Resistencia eléctrica. Fig. para que las esporas que resistieron la primera exposición germinen en células vegetativas muy vulnerables a la temperatura de 1000C. 3. nuevamente a la caldera.Termómetro.Tapa. que consiste en exponer el material a esterilizar al vapor fluente durante tres días consecutivos por espacio de 30 minutos. Exposición. no aumenta la presión y por consiguiente la temperatura se mantiene en 1000C. 2.Recuperador.

36: Horno: 1. seguido de un enfriamiento inmediato. por cuyos orificios pasa el calor. aunque se comercializan otros de menor o superior tamaño. etc. es un método conocido con el nombre de pasteurización. está situada la fuente de calor.Puerta. 2. donde serán colocados los materiales a esterilizar. 6.Fuente de calor.Termómetro. Sin que pierdan su sabor natural. ideado en el siglo XIX por Luis Pasteur. 4. A diferentes niveles de altura están situadas las parrilladas en posición horizontal. 40 % de aproximadamente 80 cm cúbicos. En su parte inferior o base. Bombillo. 8. que se disemina por todo el interior del horno. 74 . 7.Ventilador. por medio de un ventilador ubicado en una de las paredes laterales. Consiste básicamente en calentar el producto de 62 a 650 C durante 30 minutos o a 710 C durante 15 segundos.Botón del termostato. 5. es utilizado con regularidad en los laboratorios de microbiología.Calor húmedo a menos de 1000C La aplicación del calor húmedo a menos de 1000 C. que está basado en el efecto de la temperatura sobre los microorganismos y sus enzimas. así como la oxidación de ciertos componentes de la célula microbiana. Fig. debido a las bajas temperaturas empleadas y el corto tiempo de exposición. un mueble metálico de forma rectangular o cuadrada.Tapa. 3. Calor seco El calor seco. la cual queda cubierta por una tapa metálica perforada. Su acción provoca la desnaturalización y coagulación de las proteínas. Con este método se eliminan los patógenos que con alguna regularidad puedan estar presentes en productos como la leche y bebidas alcohólicas. El calor seco se obtiene por medio del horno.Salida de aire. con el objetivo de determinados objetos y materiales. una resistencia eléctrica que ocupa todo el área del fondo del horno.

objetos de metal. Encienda la fuente de calor (automáticamente el ventilador comenzará a funcionar y el bombillo piloto se encenderá) 4. algodón etc. ya que el calor seco no se distribuye uniformemente por todo el equipo como lo hace el vapor de agua. En la parte anterior. así como un tiempo de exposición más extenso. ya que los paños. apague la fuente de calor. 6. Casi todos los hornos tienen dos puertas. Comience a contar el tiempo de esterilización. Empleados 75 . grasas sólidas o productos en polvo. encargado de expulsar el exceso de aire del interior del horno. Gire el botón del termostato hasta que indique la temperatura deseada y espere a que el termómetro registre de 160 ó 180 C (en ese momento se apagará automáticamente el bombillo piloto). y para que el aire caliente circulante. el botón para regular el termostato. La esterilización en horno requiere de una temperatura superior a la utilizada con el autoclave. el termómetro y un bombillo piloto. exista la suficiente para que el material quede estéril. que por ser metálicas adquieren un mayor grado de temperatura y pueden quemar el material comburente empleado. tenga acceso por igual en toda la superficie del material a esterilizar. 3. accionando el interruptor y espere hasta que el horno se enfríe para extraer el material. debidamente preparados cuidando de que queden separados entre sí y de las paredes del horno. Advertencia Cuando el horno haya alcanzado una elevada temperatura no debe abrirse para introducir o sacar algún material. garantizando de esta manera que en el área del horno donde se alcance menos temperatura. Cierre firmemente la puerta.En la parte superior externa se encuentra un orificio ocupado por un regulador. con la cual se cierra firmemente el equipo. Transcurrido el tiempo de esterilización. aceites. 2. Manipulación del horno 1. que en este equipo debe ser de 90 minutos a 2 horas. debajo o al lado de la puerta presentan un panel donde se encuentra el interruptor. que debido al bajo porciento de agua que contienen no son penetrados suficientemente por la humedad generada por el vapor de agua de los autoclaves. Coloque en las parrillas los materiales a esterilizar. una interna de vidrio que se halla dentro de un marco metálico y otra externa metálica forrada de amianto. 5. Uso del horno El horno se utiliza para esterilizar cristalería de laboratorio.

se utiliza para tapar el mechero y que no se evapore el alcohol. a los instrumentos de siembra. mediante la incineración. en un pequeño recipiente de vidrio de forma redondeada. Los mecheros de alcohol. Una pequeña capucha cilíndrica de metal con el extremo superior redondeado. Fig. a los microorganismos contenidos en las muestras y otros materiales contaminados que se determine carbonizar. para este propósito se utilizan el incinerador y el mechero. que por su peligrosidad deben ser destruidos totalmente.pueden inflamarse por la penetración abrupta de oxigeno y ocasionar quemaduras al manipulador. 76 . Incineración La incineración se logra. El incinerador se emplea básicamente.Tapa. 2. en tanto que los mecheros son utilizados como fuente de calor para diversos propósitos y comúnmente en el trabajo diario para esterilizar. con el fondo plano. estando provisto por su parte superior de un pequeño saliente cilíndrico por donde se enrosca un pequeño tubo metálico de unos pocos mm de diámetro a través del cual se inserta una mecha cuyo extremo posterior queda en contacto con el alcohol contenido en el recipiente. 37 : Mechero de alcohol: 1. Mecheros Los mecheros son instrumentos de laboratorio diseñados para obtener una llama calorífica a partir de la combustión del alcohol o del gas.Alcohol. exponiendo directamente a la acción de la llama. consisten. para llevar al estado de cenizas materiales contaminados.

donde se inserta ajustadamente. Tubo quemador: El tubo quemador puede tener un diámetro variable. con una presilla de seguridad. el tubo quemador y el regulador de aire. que se inserta calibradamente en el extremo inferior el tubo quemador. muy próximo al extremo donde se enrosca a la base. Existen diferentes modelos. 3. pero todos están estructurados básicamente por tres partes separables: La base. Tiene un diámetro de 4 a 6 cm y presenta en la parte superior un pequeño tubito en posición horizontal de unos 6 mm de diámetro denominado tobera. 38 : Mechero de gas 1. en dependencia del modelo de que se trate. Fig. quedando en contacto con la base.Mecheros de gas Son los mas empleados. una fina manguera que se inserta por su otro extremo a una llave de gas. 2. en tanto que el mechero de "Fisher" es mucho más grueso con una longitud también mayor y está provisto en su extremo superior de un quemador que propicia una llama grande e intensa. El mechero de "Bunsen" convencional. tiene aproximadamente 6 ó 7 mm de diámetro x 6 ó 7 cm de largo. La base: Es una pieza metálica de forma circular y fondo plano. En ambos tipos de mecheros. Regulador de aire: El regulador de aire está compuesto por un collarín metálico de forma anular. Está provisto de un orificio circular de un diámetro similar al del tubo quemador. 77 . lo que permite mantener el tubo quemador en posición vertical. el tubo presenta un orificio de un diámetro similar al del collarín que regula la entrada de aire. semejante a una alianza.

luminosa y poco calorífica. 40: Diferentes zonas de la llama del mechero 78 . 3.aire (combustible y comburente).Fig. Revise que las diferentes partes del mechero. calibrado a décimas de mm que regula el paso del gas hacia el tubo quemador. el gas que atraviesa la manguera y la tobera se dirige al centro de la base. Si empobrecemos la llama cerrando la entrada de aire. Regule la salida del gas en dependencia de la intensidad de la llama. b) Mechero de Fisher Manipulación del mechero 1. Aproxima la llama de un fósforo o de una fosforera al orificio del tubo quemador por donde sale el gas para encender el mechero. obtendremos una llama de color amarillo rojizo. estén debidamente acopladas y ajustadas. Al realizar esta operación. donde hay un dispositivo provisto de un fino orificio. para lo cual se hará girar al collarín hasta hacer coincidir su orificio con el del tubo quemador. 4. Ajuste la entrada de aire hasta obtener la llama deseada. En la medida en que se enriquezca el gas con el aire. no luminosa y de gran poder calorífico. 39: a) Mechero de Bunsen. 5. 2. Cuando esta operación se realiza. Una mezcla rica en aire produce una llama azulosa. Abra ligeramente la llave de gas. Fig. en mayor o en menor grado se producirá la entrada de aire en el tubo quemador lo que propiciará la mezcla gas . Así será la llama.

Se recomienda retirar de su alrededor. se introduce gradualmente el resto del alambre hasta que también se ponga al rojo vivo. por lo que se debe tener sumo cuidado con su manejo.El empleo del mechero entraña un peligro potencial de quemaduras en la piel o en la ropa.Radiaciones ionizantes. Para flamear la boca de los tubos de ensayo y otras cristalerías estériles. mediante su exposición directa a la llama. líquidos inflamables (alcoholes para coloraciones) y otros materiales similares. . LAS RADIACIONES Las radiaciones empleadas en microbiología como método de esterilización son esencialmente de dos tipos: .Uso del mechero El mechero tiene una función utilitaria muy diversa: se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de nicrón o platino. que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. La introducción total del instrumento en la llama tiende a aumentar la intensidad de la formación de aerosoles. resiembras. Radiaciones ionizantes Deben su acción a la capacidad de producir partículas que al interaccionarse ceden la energía suficiente para producir ionización. Advertencia . distribución de medios de cultivo en placas y otros procederes. Por su parte externa con el objetivo de eliminar los microorganismos contaminantes.Los instrumentos de siembra (asas o agujas de platino o nicrón) que contengan restos de muestra o de cultivos. antes de flamearla a la llama del mechero. fenómeno mediante el cual. durante su uso. Por las mismas razones debe mantenerse el pelo recogido y concentrarse totalmente en la actividad que se esté realizando. . deben ser introducidos gradualmente en la llama del mechero de la siguiente manera: de inicio se expondrá el extremo del instrumento a la zona azul de la llama y tan pronto se ponga al rojo. potencialmente peligrosos para el manipulador. para introducir previamente el asa. Lo idóneo cuando se trabaja con muestras o cultivos. con los restos de inoculo. papeles (utilizados para la esterilización de la cristalería) así como. El mechero también es utilizado para fijar frotis en láminas portaobjetos y calentar medios de cultivo durante su preparación.Radiaciones no ionizantes. 79 . como paso previo a la realización de siembras. es disponer de un recipiente con arena humedecida en fenol.

se ven privados de uno o mas electrones mediante la acción de un campo eléctrico. Su efecto esterilizante depende de que la energía propagada. son muy efectivas contra las esporas. Aplicación: Se utilizan regularmente para la esterilización de inyectables. Los rayos gamma. equipos médicos.una molécula. no solo por sus propiedades ionizantes. son las producidas por lámparas de luz ultravioleta cuyo expectro está comprendido en rango de longitud de onda de 2600 a 2700 . por lo que si su empleo es reiterado deben emplearse las medidas de protección radiológicas establecidas. sin embargo su aplicación resulta efectiva para la esterilización del ambiente de quirófanos. Advertencia: La exposición a las radiaciones ionizantes son nocivas para las células del cuerpo humano. procedente de sus radiaciones electromagnéticas (luminosas) sean absorbidas por la célula microbiana. oxidando las proteínas y los ácidos nucleicos. pues ocasiona daños en la vista e incluso pueden producir quemaduras cuando la exposición es prolongada. cuartos de siembra. jeringuillas plásticas y alimentos. catéteres. sino además. por su elevada capacidad de penetración.Debe chequearse periódicamente la lámpara para determinar su estado de agotamiento. por lo que el interruptor debe estar ubicado fuera del local. las no ionizantes tienen poca capacidad de penetración. . Las radiaciones de luz ultravioleta además de ser germicidas. que en caso de ser significativo reduciría su capacidad germicida. En el trabajo diario la lámpara se debe encender 2 ó 3 horas antes de comenzar a trabajar en el local. siempre y cuando se cumpla la indicación referida al tiempo de exposición y se tenga en cuenta la distancia entre la ubicación de la lámpara y el objeto o espacio a esterilizar. Aplicación: El poco poder de penetración de estos rayos lo hacen inefectivos para esterilizar compuestos o medios de cultivo. piso y techo del inmueble o la parte externa del mobiliario. Las radiaciones no ionizantes más empleadas en los laboratorios de microbiología y en determinadas áreas del ámbito hospitalario. átomo o ion estrictamente neutro. rayos x y rayos catódicos.No se debe entrar ni permanecer en ningún local que tenga encendida la lámpara de luz ultravioleta. mutación genética o muerte. para dar lugar a la inactivación de las enzimas. ejercen una acción letal sobre las diversas estructuras. 80 . además de que son agentes catalizadores de la oxidación de las grasas. Así como para las paredes. Advertencias . el ADN y las proteínas celulares. Radiaciones no ionizantes A diferencia de las radiaciones ionizantes. etc. lo que acarrearía numerosos trastornos.

y provistos de porosidades microscópicas de un diámetro menor que la talla promedio de los microorganismos. vidrio poroso o porcelana. medios azucarados. que se fabrican con diámetros tan pequeños que imposibilitan el paso de los virus.FILTRACIÓN La filtración es un método mediante el cual. se hace pasar un líquido contaminado a través de un filtro. con el propósito de que los microorganismos que contiene sean retenidos y el líquido filtrado quede estéril. 81 . En la actualidad se están empleando discos de membrana de celulosa para filtros. los cuales tienen en común ser muy compactos. La eficacia de este método depende del tipo de filtro empleado. algunos como los de amianto se comercializan en forma de discos de algunos cm de diámetro por varios mm de grosor. urea. Preparación de los filtros Fig. etc. por lo que de hecho.. para los que no debe emplearse el calor como método de esterilización por ser termolábiles. no es una verdadera esterilización. 41: Filtros: a) Filtro Seitz. Características de los filtros Los filtros se fabrican con diversos materiales: amianto. aunque en la práctica. Empleo: La filtración se utiliza para esterilizar compuestos termolábiles como: el plasma. retienen a la mayoría de los microorganismos. b) Bujia de Charberland. vitaminas. así como filtros HEPA que se utilizan para retener las partículas presentes en el aire durante la aplicación del flujo laminar. ya que algunos de los tradicionalmente utilizados no pueden retener el paso de los virus. tipo millipore.

originando una pre82 . en colocarlo en posición horizontal en el interior de un soporte metálico de forma cilindra. Fig. denominado filtro "Seitz" que presenta en la parte superior una tapa de rosca metálica y en la inferior un tubo recto. fino y delgado que se encuentra insertado en el centro de la base presentando una escotadura oblicua en su extremo distal que le proporciona una terminación puntiforme que se utiliza para insertarlo en el orificio de caucho que se encuentra tapando a un frasco de kitasato. El filtro y el frasco de kitasato. Conectar la bomba de vacío: La comprensión centrífuga axial (de su eje) transformará la energía cinética en energía de presión. Procedimiento 1. el procedimiento para su montaje consiste. se le retira la envoltura de papel y se inserta el extremo de una manguera al tubo del frasco de kitasato y el otro extremo se acopla a una de vacío. No se debe esterilizar en horno. de unos 6 cm de diámetro aproximadamente 12 cm de largo. una vez ensamblados se empaquetan con papel de estraza y son esterilizados en autoclave a 1210C durante 20 minutos. Destapar el filtro "Seitz" y verter en su interior el líquido que se desea esterilizar.Cuando se emplean filtros en forma de disco. 2. 42 : Filtro Seitz ensamblado en el kitasato Preparación previa Cuando vaya a ser utilizado. procediendo a taparlo con la tapa de rosca. ya que el calor seco puede dañar el tapón de caucho.

quedando retenidos los microorganismos en su superficie acumulándose estéril en el kitasato. que determinadas concentraciones pueden ser letales. DESINFECCIÓN La desinfección es un método utilizado en los laboratorios de microbiología para provocar la muerte de los microorganismos. Fig. c) Cerrar el filtro. la efectividad de los desinfectantes depende de su accesibilidad sobre el objeto o material a des83 . lo que permite su reutilización. pero los de vidrio poroso o porcelana se pueden limpiar con facilidad.sión negativa en el interior del frasco de kitasato al serle extraído todo el aire acumulado. lo que provocará la succión del líquido. el cual pasará a través del filtro. b) Verter el líquido a filtrar. d) Accionar la bomba de vacio para que se produzca la succión y el líquido pase estéril al kitasato Advertencia: Los discos de amianto se utilizan una sola vez. Mediante el empleo de productos químicos denominados desinfectantes. 43: Proceso de filtración: a) Ensamblar el kitasato a la bomba de vacio. debido a los efectos tóxicos que producen sobre las estructuras y los procesos metabólicos de la célula microbiana.

cobre. es la caracterización del objeto.. son los siguientes: Fenol del 2 al 5 % Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico del 40-80 % Formaldehído al 4 % Gluraldehido al 2 % Peróxido de hidrógeno al 6 % Sales de iones pesados (mercurio. 84 . lo segundo.infectar y que las condiciones ambientales sean favorables para la desinfección así como que la exposición se prolongue durante el tiempo predeterminado. intoxicación respiratorias o toxemias. no significa que pueda emplearse cualquiera sin una previa selección. Selección de los desinfectantes El hecho de que todos los desinfectantes tengan la capacidad de matar a los microorganismos. estando restringido su empleo para la desinfección de objetos. Lo primero que hay que hacerse. Los desinfectantes mas empleados en las instituciones de salud. pueden ser empleados como productos tópicos. sean relativamente inocuos para las células del paciente. material o ambiente que se desea desinfectar. Algunos desinfectantes como por ejemplo. Los desinfectantes actúan sobre la estructura vegetativa de los microorganismos de diferentes maneras. cerciorarse de que su empleo no produzca deterioro del objeto a desinfectar.. La mayoría de los desinfectantes son muy nocivos para los tejidos. interfiriendo las reacciones enzimáticas o afectando el funcionamiento de ADN. zinc. gargarismos o colirios. removiendo los grupos sulfhídricos libres. puede ocasionar lesiones tisulares o dermatitis y su aspiración.selectiva. etc. pero solo algunos son capaces de destruir las esporas.) Detergentes catiónicos (compuesto de amonio o cloruro de benzalconio) Bicloruro mercúrico al 1: 1000 Otros. seleccionar el desinfectante que resulte mas eficaz para ese objetivo. teniendo en cuenta su poca o suficiente capacidad de penetración en el tratamiento de las sustancias orgánicas y tercero. debiendo manipularse con sumo cuidado ya que el contacto accidental con algunos de ellos. Desnaturalizando las proteínas. provocando la ruptura de la membrana citoplasmática o la pared celular. el alcohol y otros compuestos químicos. materia orgánica o ambientes. siempre y cuando cumplan con el principio de toxicidad . determinado porque siga siendo tóxico para los microorganismos pero que al mismo tiempo.

se pueden emplear en su estado gaseoso. 6. 3. 2. 5. gasa o paño. Cuáles son las diferentes formas en que se emplea el calor como agente esterilizante? ¿Cuál es el agente esterilizante que se pone de manifiesto en el calor húmedo a presión? ¿Cómo se denomina el equipo empleado en los laboratorios para producir calor húmedo a presión? Durante la esterilización en autoclave ¿cómo Ud. Desinfección por gasificación: Algunos desinfectantes como el formaldehído. Desinfección por aplicación directa: Aplicar con ayuda de un algodón. ¿Qué es la esterilización? ¿Cuáles son los diferentes efectos que se producen sobre los microorganismos sometidos a procesos de esterilización? Mencione los agentes físicos empleados en la esterilización.: Consiste en sumergir los objetos en un recipiente apropiado hasta cubrirlos con la solución desinfectante. resulta pertinente que sean removidos previamente del el objeto que se vaya a desinfectar con agua y detergente. determina la temperatura y la presión del equipo? 85 . Las sustancias antisépticas más utilizadas en el laboratorio para uso externo son las siguientes: Alcohol etílico de 70-90 % Alcohol isopropílico al 70 % Formoaldehído al 1 % Hexoclorofeno al 2 % Yodopuvidona al 4 % Hipoclorítico de sodio o calcio al 1 %. 4. el desinfectante a la superficie del objeto de que se trate: mesa. mobiliarios y otros artículos. Advertencia: Debido a que muchos desinfectantes tienen poca actividad sobre las sustancias orgánicas. puesto de trabajo y en menor grado las paredes y el suelo. 7. ropas. Desinfección por sumersión. CUESTIONARIO 1. 3.La aplicación de estos productos químicos se realiza de manera diferente. para la desinfección de ambientes especiales. de acuerdo con lo que se quiera desinfectar: 1. 2.

11. Explique paso a paso el funcionamiento del autoclave 10. 8. regula la entrada de aire al mechero? 18. ¿Qué cuidados debe tenerse en cuenta con el empleo de la luz ultravioleta? 23. ¿Que tipo de materiales se deben esterilizar con filtros? 24. 16. ¿Cuál es la fuente de calor del horno? 14. Mencione las diferentes partes del mechero de gas. 19. ¿Cuál es la diferencia entre el mechero de "Bunsen" y el de "Fisher?" 17. 22. ¿Por qué la temperatura del horno y el tiempo de esterilización deben ser mayores que cuando se emplea el autoclave? 13. Nombre los desinfectantes empleados con mayor frecuencia y sus respectivas concentraciones. ¿Cómo se denomina el equipo a utilizar en la esterilización con calor seco? 12. 15. Para qué se utiliza regularmente el mechero de gas. 86 . ¿Cuáles son los efectos nocivos que provocan los desinfectantes sobre los microorganismos? 27. ¿De qué depende el efecto esterilizante de las radiaciones no ionizantes? 21. Explique paso a paso el funcionamiento del horno. ¿Cuáles son las precauciones a tener en cuenta al concluir la esterilización en autoclave. 28. ¿Cuál es la diferencia entre esterilización y la desinfección? 26. ¿Cómo Ud. ¿Cómo se denomina la lámpara utilizada en los laboratorios para esterilizar? 20.¿Por qué causa el agua empleada para la esterilización en autoclave debe ser destilada? 9. ¿En qué lugares se aplica la esterilización con luz ultravioleta. Mencione los diferentes métodos de desinfección. Explique cómo usted realiza una esterilización con filtro 25.

la interna de cristal y la externa metálica. Entre los mas utilizados en el laboratorio de microbiología se encuentran: 1. pero que son empleados para otros menesteres. siendo ajustada generalmente para que produzca de 35 a 370 C. Las autoclaves. la incubadora está provista de un número variable de parrillas metálicas intercambiables. Se trata de un mueble rectangular o cuadrado de unos 80 cm3 . en lo referente a su forma. hornos y otros instrumentos similares. Sobre la base de esos requerimientos se clasifican de las siguientes maneras: 87 . con excepción de algunos modelos ya en desuso construidos de madera. En su interior. El baño de María. Al igual que el horno. el cuál está rodeado de una escala metrada y un bombillo piloto que indica mediante su apagado o encendido de forma automática. el funcionamiento del termostato. estructura y tamaño. provisto de múltiples paneles. el botón para regular la temperatura. se incluyen dentro de este concepto. La diferencia sustancial con respecto al horno radica en que el nivel máximo de temperatura no excede de los 60 a 700 C. La incubadora o estufa 2. empleados en la esterilización mediante el calor. el lado o debajo de la puerta externa. calentadores y doble puerta. pero en este capítulo nos referiremos específicamente a otros equipos que también producen y distribuyen calor.CAPÍTULO 7 EQUIPOS CALORIFICOS INTRODUCCION Son equipos diseñados para producir y distribuir calor. dispone de un panel donde se encuentra el interruptor. lo cuál puede comprobarse mediante la observación de un termómetro acoplado al equipo con una escala de 0 -700 C. Requerimiento de temperaturas Cada especie de microorganismo se desarrolla óptimamente en un rango. temperatura específica (termofília). donde se colocan los materiales a incubar. INCUBADORA El diseño industrial de las incubadoras es similar al del horno.

Clasificación de los microorganismos de acuerdo con sus necesidades de oxígeno De ahí. aunque menos óptimamente. son mesófilos. la incubación debe proporcionar además. CLASIFICACIÓN Aerobios estrictos Microaerofílicos Anaerobios Facultativo AEREACCIÓN Requieren oxígeno a una tensión similar a la del aire ordinario. que deban emplearse diferentes métodos de incubación que propicien las necesidades específicas del microorganismo en estudio. En ese sentido se clasifican en: aerobios. por debajo o por encima de ese rango. Requieren de una tensión de oxígeno inferior a la del aire. 88 . así como otros que forman parte de la microbiota residente o transitoria. Pueden adaptarse a vivir en presencia o ausencia de oxígeno. Cada uno de estos grupos se subdivide a su vez en obligados y facultativos. Cuadro 5: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxígeno. a que la temperatura corporal resulta compatible con su temperatura optima de desarrollo. anaerobios y facultativos. condiciones adecuadas de aereación. disponer de la temperatura que se especifica en cada clasificación.Cuadro 4: Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su termofilia. acorde a las necesidades de oxígeno de cada microorganismo. por lo que logran establecerse sin grandes dificultades en diferentes áreas anatómicas del organismo. Requieren de un ambiente privado totalmente de oxígeno. mientras que los facultativos son capaces de desarrollarse. Además de una temperatura óptima que favorezca el aceleramiento de su crecimiento. microaerofílicos. CLASIFICACIÓN PSICRÓFILOS MESOFILOS TERMOFILOS RANGO DE TEMPERATURA ÓPTIMO PARA EL CRECIMIENTO DE 15 A 20 C DE 30 A 37 C DE 50 A 60 C La mayoría de los microorganismos patógenos al hombre. debido entre otros factores. Los primeros requieren obligatoriamente.

aunque pueden emplearse procedimientos físicos oxirreductores para este propósito. Fig. para lo cual existen diversos todos: a) Método de la vela: Es muy sencillo de realizar. pero aquellas especies que necesitan este elemento en mayor proporción. La llama utilizará como comburente parte del oxigeno que quedó encerrado dentro del frasco. que proporcionan a los microorganismos microaerofílicos una mayor tolerancia al oxígeno. Incubación de bacterias que requieren de CO2 : Todos los microorganismos requieren carbono en forma de CO2 y la mayoría utilizan el que está presente en el aire. Incubación de bacterias microaerofílicas: Como estas bacterias requieren de una baja tensión de oxígeno para poderse desarrollar. consiste en sembrar las muestras en medios de cultivo que contengan Fe2Co4. la cual se encenderá procediendo de inmediato a cerrar el frasco. Consiste en colocar en el interior de un frasco de cristal de tamaño apropiado y provisto de tapa de rosca. las placas o tubos sembrados. ya que ellas utilizan el oxígeno presente en el aire ordinario que se encuentra en el interior del equipo. conjuntamente con los cultivos se introduce un pedacito pequeño de algodón humedecido en agua. el método más empleado para propiciar esas condiciones. 44: Método de la vela 89 .Incubación de bacterias aerobias estrictas: Las bacterias aerobias estrictas no requieren que la incubadora tenga ninguna adaptación especial. se le debe suministrar durante la incubación. para que mantenga la humedad necesaria y una vela. Cuando este proceso haya concluido la llama se apagará y en el interior del frasco producto de la combustión quedará una atmósfera con un 10 % de CO2. Seguidamente el frasco con los cultivos será colocado en el interior de una incubadora ordinaria. metabisulfíto de sodio o piruvato de sodio.

c) Incubadora para anaerobios. tioglicolato sódico que consume él oxigeno. estableciendo condiciones anaerobias. se cubre con la apa de "Brewer". diseñadas para extraer un % de 02 deseado e intercambiarlo por un gas sustituto (CO2). Fig. Siembra en medios de cultivo oxirreductores En medio de cultivo líquido: El medio empleado contiene un compuesto oxireductor. Después de realizada la incubación se efectuará en la misma incubadora que se emplea para los cultivos aerobios. Incubación de bacteria anaerobias La incubación de bacterias anaerobias se puede efectuar por diferentes métodos: a) Siembra en medios oxirreductores. El tioglicolato consume el oxigeno en el pequeño espacio de aire. estableciendo condiciones anaerobias. 90 . b) Empleo de la jarra de "Brewer". procediéndose a su incubación en una incubadora común para cultivos aerobios. 45 : Placa de Brewer Realizada la siembra. En medio de cultivo sólido: Un medio de cultivo especial.b)Incubadora de CO2: Son incubadoras especiales. la cual está diseñada para quedar apoyada sobre los bordes de la caja interior y sobre el perímetro externo del medio de cultivo de manera que en el área central del cultivo queda encerrado un espacio de aire. agar anaerobio al glicolato u otro similar se vierte sobre la caja de una placa de "Petry" corriente y después de solidificado se le coloca encima una tapa especial de vidrio denominada cubierta de "Brewer".

Empleo de la jarra de "Brewer": Es un recipiente cilíndrico. La jarra tiene un diámetro y altura que permite colocar en su interior (una encima de la otra). En estas condiciones la jarra es colocada en el interior de la incubadora para que le proporcione a los cultivos el calor necesario. La tapa tiene instalada un elemento de calefacción rodeado de un catalizador platinado. de manera que no quede herméticamente cerrada. El poco oxigeno que puede quedar aún en el interior de la jarra es eliminado por el catalizador platinado que al activarse hace que se combine con el hidrógeno para formar agua o agua y dióxido de carbono. En una de ellas se instala una manguera conectada a una bomba de vacío para extraer el aire acumulado en el interior de la jarra. estableciendo finalmente condiciones anaerobias. Fig. La primera dosis de hidrógeno se debe botar para que salga el aire de la manguera. 91 . se aprieta el tornillo para hermetizarla. Por la otra válvula se le suministra el hidrógeno para reemplazar el aire. se produce a colocar la tapa. Cuando la capacidad de la jara es completada con este gas. unas 10 placas con cultivo. 46: Jarra de Brewer Funcionamiento Después de introducidas las muestras de cultivos. para lo cual se enroscará el tornillo lo cual evitará que se produzca una explosión cuando se le suministre hidrógeno. provisto de una tapa que propicia un cierre hermético mediante un tornillo ubicado en su porción central. La tapa dispone de dos válvulas. no debiendo abrirse antes de las 48 horas.

el recipiente puede ser separado de esa fuente de calor. debiendo quedar a la misma altura que la muestra. En la práctica el baño de agua sin regulación termostática se emplea casi exclusivamente cuando se requiere temperatura de ebullición. (Baño de María) El baño de agua caliente.En la actualidad se comercializan diversos productos oxirreductores que se introducen en la jarra con los cultivos y suplen la función de esta. Incubadora para anaerobios Se trata de un moderno equipo. con la ventaja que nos permite disponer de mas espacio y estudiar una mayor cantidad de cultivos. durante todo el tiempo que dure la exposición de la muestra al calor. dentro del cual se verterá agua destilada hasta alcanzar el nivel necesario. Baño de agua caliente sin regulación termostática Cuando se recurra a esta variante se debe emplear un recipiente metálico o de vidrio de fondo plano. Conjuntamente con la muestra será introducido en el baño un termómetro de mercurio colocado previamente dentro de un tubo de ensayo. mantiene por algunos momentos la intensidad calorífica. Como se puede apreciar el empleo de este procedimiento es engorroso por lo laborioso que resulta y la imposibilidad de mantener estable el nivel de temperatura de la muestra. es decir. faltando 2 ó 30 C. Baño de agua caliente. Cuando se utiliza el mechero de gas debe situarse sobre el trípode una malla de amianto. con similar capacidad que las incubadoras para cultivos aerobios que funciona bajo el mismo principio que la jarra de Brewer. comúnmente conocido como "baño de Maria" es utilizado en diversos procederes de laboratorio. Cuando se emplean hornillas eléctricas. sin ser necesario hacer vacío para extraer el aire ni inyectar hidrógeno. el recipiente se coloca sobre una fuente de calor. Mediante este método se pueden alcanzar valores por encima de la temperatura ambiente hasta un máximo de 1000 C con o sin regulación termostática. que el material a examinar depositado dentro de un tubo de ensayo. de manera. En estas condiciones. para que el calor se distribuya lo mas uniformemente posible por todo el fondo del recipiente. quede por debajo del nivel del agua. ya que aún después de apagada. debiendo bajarse la llama o incluso apagarla cuando el termómetro marque dos o tres grados por debajo de la temperatura deseada. que puede ser de gas o eléctrica. 92 . volviendo a encenderla cuando la columna de mercurio comience a descender manteniendo este control.

lo que propicia que la temperatura se mantenga homogénea. debe ser siempre destilada. Algunos modelos están provistos de un aditamento similar a un pequeño ventilador. la cual es regulada por un termostato que mantiene automáticamente el grado de temperatura al nivel deseado. ya que las sales que el agua cruda al evaporarse tiende a formar capas sobre las paredes internas y el fondo del depósito pueden deteriorar al equipo. pero con la capacidad suficiente. A continuación se introducen las gradillas con los tubos que contienen las muestras. ubicado generalmente en el extremo posterior. sumergido en el agua. De acuerdo al modelo su tamaño será variable. Después de accionar el interruptor se gira el botón hasta que indique la temperatura deseada y se hace girar igualmente el botón del "Timer" para indicar el tiempo requerido de exposición al calor. Fig.Baño de agua con regulación termostática Se trata de un equipo diseñado con material inoxidable que tiene la forma de un cajón rectangular. Estos equipos siempre son eléctricos. Al ser encendido el equipo. las aspas comienzan a girar agitando constantemente el agua. En su efecto se debe introducir un termómetro dentro de un tubo de ensayo. como para permitir la colocación en su interior de varias gradillas. y colocarlo en la gradilla debiendo quedar el vástago al mismo nivel que las muestras. 93 . que va registrando la temperatura del agua. 47 : Baño de agua Funcionamiento En el interior del equipo se vierte agua destilada hasta alcanzar el nivel pertinente. Algunos modelos cuentan con un termómetro de mercurio acoplado. El calor es suministrado por una resistencia eléctrica. Importante El agua a emplear para el baño de agua caliente. las cuales deben quedar por debajo del nivel del agua. ubicada generalmente en la base del equipo.

13. 17. ¿Cuales son las diferencias y semejanzas entre el horno y la incubadora? Describa el diseño o modelo de una incubadora. 12. 6. 8. 3. 7. tiene diversos usos. ¿Para que se utiliza la jarra de "Brewer?" Explique cómo es el funcionamiento de una jarra de "Brewer" ¿Cuántos tipos de baño de agua Ud. 11. puede proporcionar una atmósfera microaereofílica? ¿Cómo Ud. 15. CUESTIONARIO 1. conoce? ¿Cuál es la fuente de calor de los baños de agua con regulación termostática? ¿Por qué causa se debe emplear agua destilada en los baños de agua? ¿Cuál es la función de las aspas que poseen algunos baños de agua? ¿Cómo se regula la temperatura del baño de agua? 94 . 9. 2. 4. 5. 10. En el laboratorio de microbiología se emplea frecuentemente para inactivar el complemento de sueros que van a ser sometidos a procedimientos serológicos. Mencione los diferentes métodos de incubación anaeróbica. 16. ¿Para que se utiliza la incubadora? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo al rango de temperatura óptima para su desarrollo? ¿Por qué causa los microorganismos mesófilos son los que con mayor frecuencia infectan al hombre? ¿Cómo se clasifican los microorganismos de acuerdo a sus necesidades de oxigeno? ¿Cómo Ud. 14. puede proporcionar un 10 % de CO2 a las bacterias que así lo requieran? Describe el método de la vela.Uso El baño de agua caliente.

hongos y algas. lo que impidió a los hombres de ciencia ver sus respectivas morfología y estructuras. que dio lugar el surgimiento de la microbiología como ciencia. basándose en el principio funcional del telescopio astronómico. Galileo Galilei. que al evolucionar dieron lugar a la biogénesis de las bacterias primitivas. por el perfeccionamiento de las técnicas microscópicas. estudiar su comportamiento y asociarlos después como los agentes causales de los procesos morbosos y/o letales. diseminándose gradualmente en el aire. hasta poblar todo el globo terráqueo. A pesar de que los microorganismos ya existían antes que el hombre y de haber sido durante milenios los causantes de diversas enfermedades infecciosas. hayan sido durante siglos y sean en la actualidad. El tubo a su vez 95 . en el año1665. El microscopio de Hooke. Con el decursar del tiempo. debido esencialmente al tamaño microscópico de los diversos gérmenes que imposibilita su observación a simple vista y no disponerse en esas épocas de instrumentos técnicos como el microscopio que dieron esa posibilidad. los agentes infecciosos causales de la morbi-mortalidad en plantas y animales. consistió en un tubo cilíndrico de unos 15 cm de longitud. El invento del microscopio fue el punto de partida. de ahí que los microorganismos patógenos. correspondiendo por lo tanto a los microorganismos haber sido los primeros seres vivos del planeta. inventado a principios de ese siglo por el físico-matemático. los suelos y las aguas. como: protozoarios. algunos fueron afectados por la acción de diversos agentes mutagénicos que alteraron su expresión fenotipal. originadas por la interacción de los compuestos orgánicos. al que insertó en cada extremo. en gran medida. transformándose en otros tipos de microorganismos más evolucionados. grandes epidemias y de pandemias que diezmaron poblaciones enteras. los conocimientos que el hombre tuvo durante siglos. una lente de aumento. El microscopio compuesto fue diseñado y construido por el inglés Robert Hooke.CAPITULO 8 MICROSCOPIO INTRODUCCIÓN La tierra se formó hace miles de millones de años y desde sus albores se desarrollaron los primeros microorganismos a partir de las estructuras pre-biológicas existentes. estando su desarrollo ulterior influido. afectando igualmente a la especie humana desde el surgimiento del hombre primitivo hasta nuestros días. italiano. acerca de las causas que originaban las enfermedades infecciosas eran meramente especulativos y por consiguiente carentes de rigor científico.

logró observar todo lo visto por Hooke . pus. En 1668. constituyen los microorganismos de mayor talla. examinar o ver. así como bacterias y protozoarios. fabricante de gafas. DIFERENTES TIPOS Se fabrican dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. semen. heces. relacionadas con el grosor de las preparaciones o el empleo deficiente de iluminación. no difiere esencialmente de la de los microscopios luminosos que se utilizan en la actualidad. Microscopio óptico Concepto: Son instrumentos de laboratorio. Antón Van Leeuwenhouek. que posibilita la observación de los microorganismos. Probablemente sus limitadas observaciones se debieron a imprecisiones técnicas. A pesar de que los lentes empleados por Hooke. en muestras examinadas de: sangre. un comerciante holandés. proviene del prefijo micro que significa pequeño y del sufijo skope. que como se sabe. al proporcionar una imagen aumentada virtualmente del tamaño real a total magnitud que posibilitan su observación a través de su empleo. Como se puede apreciar la estructura básica del microscopio diseñado por Hooke.. podían proporcionar una ampliación suficiente. que quiere decir. denominando a estos microorganismos en su conjunto como "animálculos". fabricó un microscopio al cual dotó de poderosos lentes de aumentos y empleando técnicas más efectivas.fue acoplado a un soporte previsto de platina para colocar las preparaciones a observar. algunos insectos de ínfimos tamaños. MICROSCOPIO. no logrando observar a otros más pequeños como protozoarios y bacterias. solo logró observar. De cada tipo se comercializan diferentes modelos y aditamentos especiales para proporcionar determinados efectos. tomando como referencia el invento de Hooke. CONCEPTO La palabra microscopio. diseñados básicamente con una sola lente o mediante un sistema de lentes de aumentos. Este instrumento se complementaba con una fuente de luz accesoria. así como diversos tejidos vegetales y hongos microscópicos y algas. que son ubicados 96 . Los microscopios son instrumentos ópticos o electrónicos con un elevado poder resolutivo. aunque todos tienen respectivamente el mismo principio. etc. células y otras estructuras microscópicas.

los compuestos funcionan mediante la combinación de varias lentes. siempre que se utilice una adecuada iluminación. hasta una distancia focal menor que la empleada si se fuera a observar directamente. Debido a su limitada capacidad de ampliación. lo que hace posible su observación. no invertida. cuyos detalles escapan a la agudeza visual del ojo humano. como el Necator americanus o el Enterovirus vermicularis. quede hacia el objeto a examinar y observando por la cara opuesta. que proporciona una imagen virtual. quedando restringido su empleo para el examen de diversas estructuras u organismos microscópicos muy pequeños. se debe colocar la lente de manera que su cara plana o menos curva. Entre los dispositivos utilizados se encuentran las lupas empleadas en las prácticas de disección. no se puede observar con ellos objetos microscópicos.alineadamente en el eje óptico del microscopio para que proporcionen una imagen virtual ampliada de los objetos microscópicos examinados. que tiene como soporte a un 97 . Microscopio compuesto A diferencia de los microscopios simples. aproximar el instrumento gradualmente. desarrolladas en los cultivos. varias veces mayor que el tamaño real del objeto observado. como por ejemplo: colonias muy pequeñas. Microscopios simples Están formados por una sola lente convergente. etc. Fig. 48 : Lupa Para su manejo. forman parte de un sistema óptico. vermes de poca longitud. Clasificación Los microscopios ópticos se clasifican en: simples y compuestos. que conjuntamente con una fuente de iluminación.

3. provisto de diversas piezas y aditamentos que deben ser manipulados para lograr y mantener el enfoque de la preparación. Tornillos. La base es el sostén donde se asientan todas las restantes partes del microscopio. 5. 49 : Microscopio óptico compuesto Sistema mecánico El sistema mecánico consta de las siguientes partes: 1. En su trayectoria hacia la parte superior. algunos modelos 98 . Base o pie. Brazo Es una columna sólida y rectangular que se haya articulada por su extremo inferior a la base. Tubo óptico. 2. Fig.sistema mecánico. recorrerla y observar la cantidad de campos microscópicos que sean pertinentes. Brazo. Base o pie Es la parte del microscopio que queda en contacto con la superficie de la mesa de trabajo. Revolver portaobjetivos. Su fondo plano y acentuado peso le proporcionan estabilidad al microscopio y constituyen a aminorar los efectos de las vibraciones que causan distorsiones durante la observación. 4. Algunos modelos están provistos de una charnela (pasador) que permite la inclinación hacia el observador de la parte superior del microscopio. Platina 6.

un mecanismo de desplazamiento. formando una inclinación oblicua o un ángulo recto de 900. En su parte superior. sino que forma un cuerpo binocular. consiste en un tubo cilíndrico de 2. disponiendo además. mientras que la porción media de su cara frontal sirve de asiento al extremo posterior de la platina. mientras que en otros su trayectoria es recta hasta más allá de la mitad de su longitud en que se dobla en dirección frontal. el extremo superior del tubo óptico no termina recto. hasta hacerlos coincidir con la de los ojos del. es giratorio al ser accionado se desplaza hacia arriba o hacia abajo. En cada uno de estos orificios se enroscará un lente objetivo. estando provisto de una tapa metálica giratoria de superficie cónica. observador. cuya secuencia aproximada será de menor o mayor potencia de aumentos. En los microscopios binoculares. por la misma cara donde se hayan los tubos para insertar los lentes oculares. tiene ubicado en el punto de contacto con el tubo óptico un prisma o espejo que refracta la imagen por igual hacia ambas lentes. consistente en dos tapas de corredera. uno de los tubos. con una longitud de varios cm que varía según el modelo. En algunos modelos. mientras que en el inferior se encuentra acoplado al revolver portaobjetivos.forman una curvatura. El orificio superior se emplea para insertar la lente ocular. que se accionan lateralmente para ampliar o reducir la distancia entre ambos lentes. lo cual se logra cuando éste deje de ver dos campos microscópicos separados o superpuestos y vea uno solo. que consiste en una cajuela rectangular ubicada en posición horizontal que puede estar ligeramente inclinada hacia el observador. al menos. Tubo óptico En los microscopios monoculares. encontrándose rodeado por un tubo de mayor diámetro. lo cual permite sincronizar la distancia de ambos lentes a las diferencias de potencialidad de cada ojo. Este cuerpo binocular. Revolver portaobjetivos El revolver portaobjetivos es un disco plástico o metálico de unos 7 cm de diámetro que se encuentra atornillado por su eje a una pieza que rodea al tubo óptico denominado fusil. denunciado fusil que articula a la parte superior del brazo. manualmente el revolver hacia la derecha o hacia la izquierda hasta ubicar el lente deseado 99 .3 cm de diámetro donde se insertan los dos lentes oculares. provista de 3 ó 4 orificios de 2 cm de diámetro con rosca interna. ubicados equitativamente alrededor de su entorno a menos de un cm de su borde.3 cm de diámetro. el brazo está articulado al tubo óptico o al cuerpo binocular. En la superficie frontal presenta 2 tubos cortos de 2. Cuando se requiera un mayor o menor aumento se hará girar.

coincide con que el saliente se introduce en la hendidura produciendo un ligero sonido audible al acoplarse que indica que la lente está ubicada correctamente. Mediante movimientos de rotación que se imprimen a uno de los tornillos se propicia el desplazamiento de la pinza hacia uno u otro lateral y con el accionar del otro se desplaza la plataforma superior de la platina hacia delante o hacia atrás. quedando la parte posterior del lente frente al tubo ocular. En algunos modelos el orificio es ovoide. La platina está provista de pinzas. Al rotar el disco y ubicar el lente deseado sobre el orificio de la platina. Presenta en su porción central un orificio circular de unos 5 cm de diámetro. Fig. engranados respectivamente a cada una de ellas. 100 . que se utilizan para sujetar las láminas portaobjetos que contiene la preparación a observar. se encuentran articuladas a un sistema de rodamiento formado por dos cremalleras y dos tornillos. pudiendo en algunos modelos ser circular. 50 : Revólver portaobjetivos La platina Fig. El disco fijo tiene en su extremo frontal una pequeña hendidura y el giratorio presenta un pequeño saliente frente al orificio donde se enrosca cada lente objetivo. Estas pinzas. por donde pasa la luz procedente de la fuente de iluminación. mientras que en otros.sobre el orificio de la platina. Generalmente es de forma cuadrada y mide unos 15 cm2 de superficie x 1 a 2 cm de grosor. en algunos modelos son fijas. 5l: Diferentes formas de platinas y pinzas La platina es una doble plataforma metálica de color negro o gris de aspecto mate.

lo que propicia imprimirle movimientos rápidos de desplazamiento al tubo óptico con lo que se consigue con prontitud el enfoque grosero de la preparación. En el que está ubicado en la parte superior se inserta el tornillo macrométrico (uno por cada lado) y en el orificio inferior. Cuando los tornillos son introducidos en sus orificios respectivos solo quedan externamente sus cabezas. Estructuralmente ambos tornillos son iguales. de similar manera el tornillo micrométrico. Esta diferencia mecánica propicia un desplazamiento muy lento del tubo óptico. transformar el movimiento rotatorio del piñón en movimiento rectilíneo del tubo óptico en dirección ascendente o descendente para hallar la distancia focal. Estas escalas permiten al microscopista ubicar la posición de un campo microscópico que desea posteriormente volver a ver. con el que se logra la nitidez del enfoque. el macrométrico. tienen grabada sobre el borde frontal de la platina una escala graduada de 0 a 80 mm. lo que facilitará la localización del campo con rapidez sin tener que rastrear toda la preparación.La mayoría de los microscopios que se emplean en la actualidad. lo que propicia al accionar el tornillo. junto con un nonio. El vástago helicoidal de cada tornillo que penetra en el orificio termina en un pequeño piñón (rueda dentada) que se engrana a la cremallera del tubo óptico. y en el borde lateral derecho otra con el rango de 80 a 110 mm provista igualmente de un nonio. El piñón del tornillo macrométrico tiene separado los dientes a la misma distancia que los de la cremallera. 101 . lo que no le permite engranarse directamente a la cremallera. Tornillos Además de los tornillos de la platina. mediante el desplazamiento ascendente o descendente de la platina. con el borde estriado transversalmente para facilitar el agarre manual al imprimirle movimientos de rotación. En cambio el piñón del tornillo micrométrico tiene los dientes más unidos. las cuales son de forma circular con un tamaño de varios cm de diámetro por 1 ó más de ancho. los microscopios están provistos de otros 3 tornillos. En otros modelos de microscopios el tubo óptico es fijo y la distancia focal se consigue. que lo atraviesan de lado a lado. para lo cual anotará las coordenadas que le proporcionan ambas escalas. sino a través de un piñón similar al del tornillo macrométrico que tiene acoplado un uno de sus laterales a otro más pequeño con los dientes a igual distancia que los del tornillo micrométrico. algunos microscopios presentan dos orificios. uno debajo del otro. con la única diferencia de que el tornillo micrométrico es más pequeño. Es la parte superior del brazo. el micrométrico y el del elevador del condensador.

siendo al menos. El funcionamiento para subir o bajar el condensador tiene el mismo mecanismo que el empleado para los tornillos macrométricos. Diferentes partes El sistema óptico está formado por las diferentes partes provistas de lentes y de las que intervienen en la iluminación. una de sus dos superficies. convexa.por un mecanismo similar. Miden desde unos pocos mm hasta varios cm y tienen la propiedad de proporcionar una imagen del objeto observado aumentada de tamaño. 52: Lentes oculares 102 . mediante los tornillos macrométricos y micrométricos. Lentes oculares Fig. quedando el micrométrico insertado en el centro del macrométrico. Este tornillo queda muy próximo al condensador y se acciona en uno u otro sentido según sean los requerimientos de iluminación de acuerdo al tipo de microscopía que se vaya a realizar. siendo las siguientes: _ Lentes oculares _ Lentes objetivos _ Condensador _ Diafragma _ Espejo _ Fuente de luz _ Filtros Los lentes Los lentes empleados en la fabricación de los microscopios son discos pulidos y transparentes. mientras que en otros. ambos tornillos están acoplados. Sistema óptico.

mientras que el extremo frontal o inferior.Antiguamente los lentes oculares disponían de una sola lente.5x y 15x. 12. que a diferencia del que porta las lentes oculares. mediante la combinación de varias lentes con distintos radios de curvatura o suprimiendo por medio del diafragma anular los rayos que atraviesan la porción periférica de la lente. como si se hubiera cortado la punta del cono. teniendo el lado plano dirigido hacia el interior del tubo.2 cm de diámetro x 3 ó más cm de largo. ya que mediante su poder de resolución es posible observar separados dos objetos microscópicos muy próximos entre sí. quedando retenido en su descenso por el borde de la tapa que tiene un mayor diámetro. que indica su poder de ampliación. La lente ubicada en el extremo superior mide 1. que le sirven de soporte.1 cm de diámetro y está ubicada en el extremo posterior del tubito.. que al ser enroscada suavemente la lente inmovilizándola. Por ejemplo: 10x. La función de los lentes oculares es la de ampliar virtualmente. Lentes objetivos Los lentes objetivos constituyen la parte más importante del sistema óptico del microscopio. para finalmente terminar plano. quedando la aber103 . quedando separados entre sí. portador de las lentes. colcadas en el interior de un pequeño tubito cilíndrico.7 cm de diámetro. La tapa tiene grabado en su superficie un número seguido de una "x". el cual dispone de una tapa de rosca de color negro provista de un criterio central de 1. está formado por tres piezas desarmables. mide 2. Los microscopios monoculares están diseñados para trabajar con un solo lente ocular y los binoculares con dos. 10x. la imagen formada ampliada por el lente objetivo y corregir las aberraciones cromáticas y de esferidad debidas a la curvatura de la lente. Este pequeño tubo. lo que significa que esa lente aumenta virtualmente el tamaño real del objeto observado en una imagen 10 veces mayor. Los lentes oculares que se utilizan con mayor frecuencia. los lentes objetivos. la primera es un fino tubito que contiene las lentes. por un diafragma anular en forma de arandela. que se haya insertado en la porción media del tubo.9 cm. pudiendo ser observada a través del orificio. a pocos mm de su terminación se va estrechando cónicamente. pero desde hace años se viene utilizando un sistema de 2 lentes colocados en el interior de un pequeño tubito cilíndrico de 2. 8x. está calibrado para que pueda ser insertado en el interior del tubo óptico. Al igual que los lentes oculares. En algunos modelos esta lente se encuentra empotrada en la misma tapa. provisto de rosca en su extremo posterior. La segunda lente es biconvexa. están formados por un sistema de varias lentes. es plano-convexa.. son los que proporcionan los siguientes aumentos: 6x.

mayor será su capacidad de ampliación.tura del tubo con un diámetro reducido de 1 a 5 mm. además. la cánula rodeará a todo el tubito menos por extremo cónico. mediante la rosca que se encuentra en el lado opuesto. es una cánula cilíndrica que se ensambla a la base por la rosca externa del mismo saliente donde se enroscó el tubito portador de las lentes por su rosca interna. quedando un espacio de aire entre la lámina cubreobjetos y la lente. por donde se enrosca el tubito portador de las lentes. La segunda. estriada transversalmente como algunas monedas. Al quedar ensamblado el lente objetivo. En estas condiciones el lente objetivo podrá ser colocado en uno de los orificios del revolver portaobjetivos. Diferentes tipos de lentes objetivos Fig. los cuales están diseñados con rosca externa y uno solo de ellos. La tercera pieza. protozoarios y otro microorganismos de dimensiones microscópicas muy pequeñas. Esto se debe a que las lentes oculares deben ser pequeñas. una especie de unión universal. El de menor aumento (5x ó 6x) es el más corto de todos y se caracteriza por proporcionar la observación de un área extensa de la preparación. por lo que se le conoce también como lente explorador. con diferentes potencias de aumento. proporcionan un aumento mayor que el explorador. ya que entre menor sea su diámetro. Este tipo de objetivo se fabrica. los secos y los de inmersión. con rosca interna. Los objetivos secos alcanzan la distancia focal a varios cm por encima de la preparación. es la base. son más largos. por donde se puede observar la cara plana de la lente plano convexa que está en contacto con el pequeño orificio. Los lentes objetivos de 10x ó 20x.2 cm de diámetro x 2 ó 3 mm de grosor. aunque todavía insuficiente para observar con nitidez microorganismos 104 . b) Objetivo de imersión Existen dos tipos de lentes objetivos. de 2. Debido a su baja potencia de ampliación no es posible observar con este lente a las bacterias. 53 : Lentes objetivos: a) Objetivos secos. teniendo por ambos lados un saliente anular adjunto de menor diámetro de 2 ó 3 mm de longitud.

a pesar de que la distancia que separa a la lente de la preparación sea escasamente de 1 mm. por tener. que abarca un área más reducida de la preparación. en el que quede inmersa la lente. células. Para evitarlo. Cuando se emplean objetivos de inmersión. resultando aún insuficiente para la observación pormenorizada de bacterias. que tenga que estar situado a 1 ó 1. de ahí. como para permitir la observación detallada de algunos microorganismos como protozoarios y hongos. Al cubrirse el espacio de aire por el aceite los rayos de luz que han atravesado la preparación asciende perpendicularmente hacia la lente sin refractarse significativamente. está estructurado por dos tubitos de diámetro ligeramente diferentes. sino además. Este lente se conoce también como seco fuerte. Lente de inmersión se diferencia de los secos. artefactos y otros elementos de interés de tamaño similar.muy pequeños como las bacterias. cuyo índice de refracción es de 1. provocando no solo la ruptura de la lámina. pero posibilitando que cuando la parte inferior que contiene la lente frontal sea presionada sobre la lámina. que es de 1. Este lente se le conoce también como seco débil. así como su potencia de aumento (90x a 100x) que depende enteramente del grado de ampliación que proporcione la lente frontal. Para evitar estos accidentes. cuando se utilizan lentes objetivos secos. se introduzca unos mm dentro de la externo. se debe colocar sobre la preparación una gota de un líquido cuyo índice de refracción sea más elevado que el del aire y muy próximo al vidrio de la lente. En el orificio anterior del tubito.52. el tubito portador de las lentes se diseña de forma retráctil. aunque pueden ser factibles a microscopistas con experiencia para identificar huevos de helmintos y otros elementos de interés de tamaño similar. Como el espacio de la distancia focal es tan reducido se corre el riesgo de incurrir en la impericia de presionar la preparación con el lente. se haya la lente frontal. pero proporciona un aumento lo suficientemente amplio. lo que sí. lo que propicia que el ponga las lentes pueda introducirse calibradamente dentro del otro. que para poder captar los rayos luminosos procedentes del condensador. El más largo de los tres es el de 40x ó 45x. mide escasamente 1 mm de diámetro. en ocasiones irreparables a la propia lente. disponiendo además de un pequeño resorte que mantiene fija a las dos partes. este fenómeno ocurre. no solo por ser más largo. que han atravesado la preparación. ya que las demás ubicadas dentro del tubito son de corrección. El líquido empleado tradicionalmente ha sido el aceite de cedro. generalmente. ocurre.5 mm de la misma. así como: huevos y larvas de helmintos. como si fuera un pistón. sino además pudiendo ocasionar daños. Los rayos de luz al pasar de un medio a otro con diferente índice de refracción tiende a desviarse por reflexión. generalmente. volviendo a su posición normal cuando cesa la presión.52. particularmente de las cocáceas por su íntimo tamaño. una franja de color negro a su alrededor y grabadas en su cánula la sigla HI(Homg Inmersión) u OI(Oil Inmersión). 105 .

ocupado por la cara plana de la lente más pequeña que es planoconvexa. Aumento total que proporciona el microscopio: Para conocer el número de diámetro en que se amplia virtualmente el objeto observado.El aceite de cedro tiene el inconveniente de oxidarse con el aire. con el extremo de su vértice cortado. encontrándose ubicada por su lado menos curvo a corta distancia de la lente más pequeña. tamaño. 54: Condensador luminoso El condensador de campo claro o brillante. que con el tiempo afecta la calidad de la lente. donde se encuentra un orificio de menos de 1 cm de diámetro. que tiene la parte superior ligeramente cónica. dentro de un dispositivo anular. El condensador se introduce de abajo hacia arriba. siendo de mayor tamaño. con las mismas ventajas. se procede a multiplicar el valor de ampliación que está grabado en el lente objetivo. siendo inmovilizado mediante un fino tornillo. por el valor de ampliación del lente ocular. pero dañando menos las lentes. ubicadas en el interior de un dispositivo cilíndrico de 3 cm de diámetro. que se haya justamente debajo del orificio de la platina. está compuesto por 2 lentes convergentes de desigual. en la actualidad se emplean otros aceites para microscopios más estables.10=200. quedando ambas lentes en posición perpendicular 106 . 20. adquiriendo una consistencia muy viscosa. La función de los lentes objetivos es formar la imagen del objeto observado y ampliarla virtualmente de acuerdo a su potencial de aumento. La segunda lente es biconvexa. Ejemplo: si la ampliación del lente objetivo fuera de 20x y el del ocular 10x. Condensador Fig. por lo que. aunque se limpien adecuadamente después de su uso. Por lo tanto el aumento total sería de 200x. entonces.

muy próximo a su base. salen paralelos al eje principal incidiendo sobre el objeto a observar. Es un accesorio del condensador. está articulado a una pieza angular que lo fija a la parte inferior del brazo. consistente en un fino disco metálico. sino divergen. hacia la lente frontal del objetivo. con lo que se logra una mayor iluminación que resulta imprescindible cuando se hacen observaciones a grandes aumentos. se refracten (desvíen) al atravesar las lentes convergentes. sucedería todo lo contrario. para después atravesarlo y seguir su trayectoria perpendicularmente. encontrándose acoplado en el extremo del orificio posterior del condensador. Cuando el movimiento se produce hacia delante. La función del condensador es hacer los rayos luminosos procedentes directamente de la lámpara e indirectamente por reflexión del espejo. diseñado con múltiples laminillas planas superpuestas consecutivamente que adoptan el aspecto de un abanico plegable. El condensador presenta. en cuyo vértice se intensifica un foco luminoso. Si la palanquita fuera hacia atrás. que puede ser desplazada hacia delante o hacia atrás de la ranura. cubriendo todo ese diámetro. muy próximo a la base. formando un cono de luz. lo que da lugar. 55: Diafragma: a) Diafragma iris. según sea necesaria una mayor o menor intensidad de luz. estando provisto de un tornillo engranado a una cremallera. por la convergencia de los rayos de luz que al atravesar todo el sistema. ya que las laminillas se desplazarían 107 . b) Diafragma anular. a la formación de un orificio de diámetro variable en el centro del diafragma. Su colocación. al recogerse. que se utiliza como elevador del condensador al propiciar con su accionar su desplazamiento vertical ascendente o descendente. de cuyo interior sale una pequeña palanquita plana. muy próxima a la cara posterior del portaobjetos reduce la divergencia de los rayos de luz. Este dispositivo a su vez.con respecto al lente objetivo. las laminillas del diafragma se despliegan hacia el entorno del cilindro. una ranura que los bordea horizontalmente. debajo de la lente biconvexa. Diafragma de Iris Fig.

Espejo Fig. El diafragma se utiliza para regular la cantidad de rayos luminosos que deben pasar al interior del condensador. un fino orificio de 1 mm de diámetro por donde se articula a dos pequeños salientes puntiformes que se hayan en cada extremo de una planchuela curva acoplada por su centro a un pequeño vástago cilíndrico. En los microscopios modernos. En ambos casos la lámpara forma parte de un soporte diseñado para proyectar me108 . Cuando pretendemos realizar una microscopía donde el exceso de iluminación. para reducir progresivamente el diámetro del orificio. donde se encuentra separada. como parte del módulo del microscopio óptico. una luz monocromática de corta longitud de onda. teniendo por cada lateral de su línea ecuatorial. El extremo posterior del vástago se introduce en un orificio presente en el extremo inferior del brazo donde se fija. mediante la rotación del vástago. De esta manera el espejo puede ser movido por rotación. para seleccionar la cara a emplear o conjuntamente.hacia el centro. Lámpara Las lámparas utilizadas. dándole un aspecto de horquetilla. Ambos espejos se encuentran montados conjuntamente dentro de un fino aro metálico de unos 5 mm de ancho que les sirven de marco. para hallar el ángulo adecuado que propicie la reflexión del espectro luminoso procedente de la lámpara hacia el condensador. mediante las articulaciones laterales. la lámpara está acoplada en la base aunque todavía se utilizan modelos. 56 : Espejo El espejo de los microscopios es circular. cerrándose. La primera se utiliza cuando la fuente de luz es natural y la segunda cuando se emplea iluminación artificial. uno de los cuales tiene la superficie plana y el otro cóncava. lejos de beneficiar. afectan la calidad de la observación se cierra total o parcialmente el diafragma y cuando necesitamos más intensidad de luz se va abriendo hasta obtener la requerida. deben proporcionar para la microscopía ordinaria. mide unos 5 cm de diámetro y consta de dos espejos adosados por su reverso.

debe proyectarse el haz de luz de manera que incida directamente sobre el espejo. 109 . Fig. La mayoría de dichos soportes se fabrican con diversos aditamentos para optimizar el empleo de la iluminación. 57 : Lámpara Cuando la lámpara está separada del microscopio. Su función es la de absorber las longitudes de ondas de determinados colores para proporcionar una luz que mejore la observación microscópica.diante un reteden sus emanaciones como un cono de luz. que se caracterizan por ser transparentes. diafragma y reóstato. 58 : Filtros Son dispositivos de vidrio. miden de 2 a 3 cm de diámetro y tienen un determinado color. este último para regular la intensidad de la luz. Principios básicos Los principios básicos en que se sustenta el empleo utilitario de los microscopios son esencialmente de: _ Su poder de resolución. esféricos y planos. tales como: portafiltros. de manera similar a como lo hace una linterna. para que los rayos sean dirigidos por reflexión hacia el condensador. Filtros Fig. _ La capacidad de formar imágenes.

pudiendo alcanzar hasta 0. las sombras producidas por la densidad óptica de cada parte del objeto y la oscuridad proporcionada por su grosor. así como los espacios de aire. 110 . Por ejemplo. lo que da lugar a que la imagen del objeto llegue a la retina del ojo con una ubicación invertida. el ojo humano no puede distinguir la separación de dos puntos que estén a menos de 0. Formación de imágenes En dependencia del grosor y la densidad óptica que tenga cada parte del objeto a observar. Si la distancia se acortara y el poder de resolución del observador ya hubiera llegado a su límite . Como el microscopio está estructurado con lentes que amplían virtualmente la imagen del objeto real. entrecruzándose entre sí. no ascienden perpendicularmente a través del sistema óptico. lo cual está delimitado por la menor distancia entre dos puntos muy próximos entre sí. ya que al atravesar en su trayectoria.2 (micrómetros) estando limitada su potencia a esa magnitud. en que es posible observarlos separadamente.2 mm. las diferentes lentes y la preparación . los rayos de luz que lo atraviesan sufren un retraso proporciona en su trayectoria con respecto a los que siguieron directamente hacia el lente objetivo. Al reunirse en la lente todos los rayos. dispersando o concentrándose. las limita cuando el tamaño de la longitud de onda de la luz. Percepción de la imagen Los rayos del haz de luz empleados en la microscopía. por lo que cualquier objeto con un tamaño inferior a esa medida le resultará imperceptible. que tienen diferentes densidades ópticas se refractan (desvían) en cada ocasión. no podrá distinguir la separación entre ambos puntos y para su percepción estarán unidos. por lo tanto su poder de resolución es de 0. a la derecha del campo microscópico y los que están arriba se observan debajo o viceversa.Poder de resolución El poder de resolución es equivalente a la potencia de observación. en dependencia del aumento. su poder de resolución será mayor. el brillo ocasionado por los que no tuvieron interferencia.2 mm de distancia. darán lugar a una diversidad de tonos y matices con los que se produce la formación de imagen. observándose los elementos que están a la izquierda de la preparación.

seleccionar la cara plana o cóncava. Accione el tornillo del elevador y suba el condensador. en este sentido la superficie de la mesa o meseta donde esté colocado el microscopio debe ser lisa y sólida.Si requiere utilizar el espejo. el de disponer de condiciones mínimas de confort para su realización. procediendo a manipular el espejo en la forma explicada. mirando por la lente ocular. Si el microscopio fuera monocular. Pasos a seguir 1. que resulte cómoda para la manipulación y observación a través del microscopio. según sea el tipo de iluminación a emplear (natural o artificial). proceda a mover convencionalmente el espejo de manera que los rayos de luz procedentes de la fuente de iluminación se reflejen y los desvíen hacia el condensador. debiendo tener respaldar. 2. lo cual se podrá constatar cuando el campo microscópico se observe completamente iluminado. Si fuera un microscopio binocular. 4. 3. Rote el revolver portaobjetivos y coloque sobre el hueco de la platina el lente objetivo de menor aumento. La silla o banqueta utilizada por el microscopista debe tener un altura adecuada en relación con la mesa. Cerciorarse de que el aumento del lente ocular es el pertinente para el tipo de microscopía que va a realizar. previamente. Bastará con encenderla. mueva lateralmente los lentes hasta Hacerlos coincidir con la distancia intrapupilar. 6. 111 . Si el microscopio carece de espejo por disponer de una lámpara acoplada en su base.. preferentemente de color negro y aspecto mate para que no se refleje la luz. 5. 59 : Percepción de la imagen microscópica Indicaciones para el manejo del microscopio óptico El requisito primordial para efectuar una adecuada microscopía es. Mueva la palanquita y abra el diafragma. que logrará con exactitud cuando vea un solo campo. con lo que afecta la calidad de los resultados . Cuando éstas no existen o son deficitaria la tendencia es el apresuramiento.Fig.

Si está utilizando un microscopio monocular. 13. 9.7. Entre las más empleadas en el laboratorio de microbiología se encuentran las siguientes: _ Microscopía de campo oscuro. Ajuste la altura del condensador y la abertura del diafragma a las necesidades de iluminación de la microscopía que vaya a efectuar. al cambiar el lente objetivo debe quedar enfocado el mismo campo pero con menos radio de observación. Si el enfoque se realizó con objetivo seco de poco aumento y se requiere un objetivo de más aumento. accione con su mano derecha los tornillos de la platina y desplace la lámina en diferentes direcciones. Mirando por el lente ocular. Seguidamente gire el tornillo micrométrico hasta que el enfoque sea nítido. 11. Si el microscopio está debidamente ajustado. hasta que quede a 4 ó 5 mm de la preparación. 112 . quedando aproximadamente a 1mm de la lámina. y con su mano izquierda accione el tornillo micrométrico para ir corrigiendo el enfoque cuando la lámina esté en movimiento. para observar directamente la operación. requiriéndose otras variantes microscópicas con las que se pueda obtener los resultados requeridos. Nota. rote el revolver portaobjetivos y sitúe sobre la preparación el lente requerido. Para recorrer la preparación y observar los campos necesarios. aproxime. Si fuera a utilizar el lente de inmersión. utilice el correcto. Otras variantes del microscopio óptico El microscopio óptico de campo brillante es el que se utiliza corrientemente en el trabajo cotidiano del laboratorio. con ayuda del tornillo macrométrico el lente objetivo seco. 10. alterne los ojos durante la observación y mantenga el que no esté utilizando abierto. Si la microscopía a realizar requiere de filtro. 8. Con ayuda de los tornillos de desplazamientos laterales o frontales mueva la preparación hasta situarla debajo del lente objetivo. pero no siempre resulta eficaz para la realización de determinados exámenes. proceda a separar lentamente el lente objetivo de la preparación con ayuda del tornillo macrométrico hasta que logre avizorar la imagen microscópica. 12. Coloque la lámina portaobjetos con la preparación sobre la platina y fíjela con las pinzas. Ladeando la cabeza. coloque previamente sobre la preparación una gota de aceite de cedro y al aproximar la lente haga que ésta contacte con la gota de aceite.

60 : Condensador de campo oscuro Este tipo de condensador está provisto de un aditamento circular opaco. no ilumina por lo tanto los ojos del observador. teniendo la función de impedir el paso del haz de luz hacia el área central del condensador posibilitando solamente la entrada de los rayos periféricos. En la actualidad las empresas dedicadas a la fabricación de microscopios. condensadores. atraviesan la lámina portaobjetos en forma oblicua como un cono hueco de luz con su vértice hacia abajo. o las iluminan indirectamente. los que al refractarse en su interior. Los rayos que atraviesan las partículas que se hayan en la preparación. crean un efecto que proporcionan la observación de las partículas con un aspecto brillante sobre fondo oscuro. de menor diámetro que el orificio posterior que se encuentra ubicado debajo de la lente. tubos ópticos._ Microscopía de contraste de fase. Cualquier objeto colocado en la trayectoria de los rayos luminosos será atravesado por éstos o iluminados indirectamente. Como el rayo de luz no penetra en el tubo óptico. Fig. que vera como resultado un campo microscópico de color negro (campo oscuro). de similar manera. que cuando se observan las estrella en la noche. Microscopía de campo oscuro Para la realización de este tipo de microscopía se procede a retirar del microscopio óptico. 113 . colocando en su lugar uno de campo oscuro. el condensador de "Abbe". diseñados de tal manera que puedan ser intercambiables. _ Microscopía de fluorescencia. etc. comercializan modelos multipropósitos.

Para la realización de la microscopía de contraste de fase se requiere acoplar dos aditamentos al microscopio ordinario: un diafragma anular y una placa de cambio de fase. que tiene en su diámetro medio un aro de vidrio óptico. Microscopía de contraste de fase Las diferentes partes de las células. Como el ojo no es sensible a los cambios de fase por ser muy imperceptibles. mientras que los rayos no pasan alrededor del objeto se dispensan. Placa de cambio de fase: Es una placa transparente de forma circular. pero al tener diferencias en la densidad de sus respectivas estructuras. lo que permite estudiar su motilidad. Al proseguir su trayectoria estos rayos atraviesan el aro 114 .La microscopía de campo oscuro se utiliza para la observación de microorganismos y otros elementos de interés que no resultan factibles de ser coloreados. El método de contraste de fase proporciona que se pongan en evidencia cambios de fase mediante su amplitud lo que hace posible distinguir por contraste las estructuras celulares entre sí y diferenciar a estas de su entorno. b)Placa de cambio de fases Funcionamiento: Debido a la forma anular del diafragma. que presenta en su diámetro medio un aro transparente. Al no sufrir efectos tóxicos de las sustancias colorantes se mantienen viables. de manera que al haz de luz que lo atraviesa pasa al condensador como un aro hueco de luz. la microscopía ordinaria no posibilita que se pueden detectar las diferencias. la luz pasa al condensador en forma de aro. Este disco se acopla en la parte inferior del condensador. Fig. 6l: Aditamentos para la microscopía de contraste de fase: a) Diafragma anular. obviamente. no cambian significativamente la amplitud de los rayos de luz que las atraviesan. prosigue su trayectoria por el tubo óptico hacia el lente ocular. sí cambian diferenciadamente la fase (dirección) de la onda luminosa. Esta placa se sitúa debajo del lente ocular. de unos 2 cm. Diafragma anular: Es un disco opaco. Al atravesar el objeto.

Empleo: Cuando no existen marcadas diferencias en la densidad óptica de las diversas estructuras celulares o el índice de refracción entre las células y los líquidos circundantes no están suficientemente contrastados en cuanto a brillo. 62: Trayectoria del haz de luz en la microscopía de contraste de fase La placa de contraste de fase amplía significativamente las diferencias entre las ondas luminosas refractadas y las que no lo están. que tienen la propiedad de absorber la luz 115 . para observar microorganismos presentes en líquidos igualmente transparentes. Microscopía de fluorescencia El principio de este método. sin la aplicación de colorantes. Como resultado los rayos que se refractan para luego pasar por el anillo óptico de la placa de cambio de fase. que posibilitan su observación con una microscopía ordinaria. sombra u oscuridad. sufren un notable retraso en su velocidad de traslación con respecto a los rayos que transitaron normalmente después de atravesar el objeto. en que no utiliza directamente la luz incidente. obtenida mediante la aplicación de ciertos compuestos denominados fluocromos. difiere del de otras formas de microscopía óptica. sino que emplea fuentes indirectas de energía luminosa.de vidrio óptico de la placa de cambio de fase. lo que ocasiona un acentuado contraste de brillo y oscuridad que propicia distinguir por contraste los componentes de la estructura celular. haciendo factible la realización de exámenes directos en fresco. Fig.

fluorescente sobre fondo negro. teniendo la función de absorber la longitud de onda de la luz ultravioleta. Funcionamiento En el caso en que se utilice luz refleja.ultravioleta de onda corta y emitirla posteriormente. los rayos incidentes de luz ultravioleta como la fluorescencia generada por los fluocromos. procedente de la lámpara. después de atravesar el filtro primario seleccionado. Filtro primario: Este filtro se sitúa entre la fuente de luz y el condensador y su selección debe estar en correspondencia con el fluorocromo empleado ya que tiene la función de eliminar las longitudes de ondas de la luz. después de haber interactuado con la luz ultravioleta de onda corta. La estructura del microscopio de fluorescencia es similar a la del microscopio óptico común. con un cambio de longitud de onda. 2. para que no haya pérdida de energía luminosa. penetra en el condensador de campo oscuro y al salir se refleja oblicuamente sobre el objeto teñido o conjugado con fluocromo el cual absorbe las radiaciones y posteriormente se propaga en una longitud de onda más larga que es visible (fluorescencia). Entre los fluocromos más empelados se encuentra la auramina y la naranja acridina que se utilizan para la tinción directa de microorganismos y otros como el isotiocinato de fluoresceína que pueden ser conjugados a anticuerpos y se emplean en técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFA). en forma de luz fluorescente (fosforescente) a mayor longitud de onda. Condensador de campo oscuro: Para concentrar la luz ultravioleta sobre la muestra y lograr un mayor grado de Fluorescencia. durante algún tiempo. 3. dando como resultado que la imagen del objeto enfocado se vea. atraviesan la lente frontal del objetivo en el tubo ocular. Fuente de luz: Consiste en una lámpara de mercurio o xenón de alta presión que produce con firmeza y fuerza sostenida ondas luminosas en el espectro ultravioleta. que no sirvan para exitarlo. Filtro de barrera: Está situado en el interior del tubo óptico. diferenciándose en que dispone de los siguientes aditamentos: 1. a través del lente ocular. La luz ultravioleta. sin interferir el paso de la luz emitida por el objeto. mientras que la luz fluorescente lo atraviesa y la imagen virtual 116 - . donde los rayos ultravioletas son absorbidos por el filtro de barreras. Mediante este filtro se protege la vista del observador de los efectos de la exposición a las Radiaciones ultravioleta. Tanto. el espejo debe estar debidamente alineado con el eje del microscopio. 4.

En la actualidad se fabrican modelos más modernos. diferencias de coloraciones de diversos tejidos. Para las observaciones con objetivos de inmersión se debe utilizar un aceite especial. siempre que se tenga la certeza de que no estén fabricados con material fluorescentes. Observaciones Mediante este tipo de microscopía se pone de manifiesto. microorganismos difíciles de colorear. ya que el aceite de cedro es fluorescente. un prototipo de microscopio estereoscópico consistente en el ensamblaje de dos tubos ópticos independientes.del objetivo es observado a través de la lente ocular con un aspecto fluorescente. Precauciones Se pueden emplear lentes oculares y objetivos de uso común. lo que propicia una visión estereoscópica o tridimensional del objeto. Giardia lamblia y otros. no solo en su diseño. Empleo Este tipo de microscopio posibilita examinar. Diseño Durante muchos años se ha venido utilizando. provistos de un prisma que refleja la imagen. así como para la detección rápida de antígenos virales. diseñados para que cada ojo del microscopista observe la imagen ampliada por un lente objetivo común. por ser los mismos fluorescentes. 117 . como las espiroquetas y otros agentes microbianos como: Chlamydia trachomatis. MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO El microscopio estereoscópico difiere del microscopio óptico convencional. Cryptosporidium sp. en el principio de su poder de aumento y en la finalidad de su empleo. sin ningún tratamiento con fluorocromo. que alterarían los resultados. sino además. desde ángulos diferentes hacia ambas lentes. desde posiciones diferentes.

63 : Microscopio estereoscópico Los lentes objetivos. cuyos rayos atraviesan el cristal nevado de la platina. estando estructurado por una base de 4 ó 5 cm de altura que le sirve al mismo tiempo de platina. se encuentran montados en el interior de un revolver tubular y se caracteriza por tener un bajo poder de aumento (2x o 4x). sino en su capacidad directa de aumento. mientras que el de los lentes oculares oscila de 5x a 10x. proporcionando una iluminación tenue y otra instalada en la articulación que sostiene al sistema de los lentes. Principio El principal funcionamiento del microscopio estereoscópico no está basado como en el microscopio óptico en el poder de resolución. lo que proporciona un aumento potencial total. generalmente dos. no invirtiendo su posición como sucede con el microscopio de uso común. El sistema de iluminación consiste en dos lámparas. articulado a una cremallera. por lo que la imagen ampliada se observará en el campo microscópico en el mismo plano que el objeto real.Fig. entre 10x y 40x. Estos microscopios no poseen condensador ni diafragma. que proyecta la luz en dirección oblicua sobre el objeto dando la posibilidad de observar cuerpos opacos. 118 . una que se haya en la base del microscopio. en cuya porción central se encuentra un orificio de unos 7 cm de diámetro cubierto por un cristal nevado. que se utiliza para aproximar o alejar al lente objetivo del objeto a examinar. Este microscopio está provisto de un tornillo único.

Durante su empleo . la humedad y los inadecuados métodos de limpieza. . LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO Los microscopios son equipos que requieren de un cuidado esmerado para su buen funcionamiento y prolongación de su vida útil.Ubique el microscopio sobre una mesa o meseta sólida de superficie nivelada. . ya que un error en este sentido ocasionaría la ruptura de la lámpara y en el mejor de los casos se produce una disminución de la intensidad lumínica con la consiguiente pérdida de nitidez de la imagen. Al concluir su utilización.Apague la lámpara. Cuando suceda. los fuertes impactos. pues pueden desprender la lente del cemento que la fija al dispositivo tubular inutilizable. separándolo ligeramente de la orilla para evitar que accidentalmente pueda caer al piso y dañarse. .Antes de instalarlo a la red eléctrica.Si accidentalmente se produce derramamiento de agua. Con esta acción se protege al filamento que puede quebrarse por cambios bruscos de la temperatura si no se toma esa medida. . Las causas que afectan con mayor frecuencia su óptimo estado de funcionamiento y por consiguiente su eficacia son: el polvo. 2. Se utilizó lente de inmersión. cerciórese de que el voltaje de la toma. seque de inmediato la platina con material absorbente y seguidamente límpiela con un paño de lino fino o gamuza. que no puede ser resuelto por ningún otro procedimiento que no sea la microscopía. reactivos u otros compuestos orgánicos sobre la platina. no permita que se sequen por evaporación ya que pueden formarse costras o sufrir efectos oxidantes que deterioran su construcción y en consecuencia su funcionamiento. No utilice el alcohol para estos menesteres. para evitar roces con la lente frontal que pueden dañarla. Si se trata de un modelo con regulador de intensidad.Antes de retirar la lámina. remueva el aceite empleado con papel para lentes o un paño de tela fina que no ocasione ralladuras. se corresponda con el requerido para ese microscopio. la suciedad. sino porque resultan imprescindibles en el laboratorio para el examen de diferentes muestras. reduzca la luz antes de apagarla. no solo por su elevado costo.CUIDADO. Cuidado 1. separe el lente objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico. En caso de em119 .

puede deberse a una insuficiente limpieza o que el polvo ha penetrado el interior del lente. Del sistema óptico. humedezca ligeramente el paño. de ser posible de pelo de camello.Si tuviera que trasladar el microscopio para otro sitio. solo a un personal especializado. realizando el traslado todo el tiempo con el equipo en posición vertical.plear xilol. es que está sucia. volviendo a colocar las lentes en la misma posición en que estaban. Sujete el microscopio con una mano por la base y con la otra agarre firmemente el brazo. haga rotar el lente sin sacarlo del tubo ocular. que sean muy susceptibles a la erosión. 2. un pincel fino y plano.Para detectar la presencia de polvo o suciedad en las lentes oculares. Del sistema mecánico. cuyo soporte no debe abrirse nunca. Limpieza 1. 120 . desenrosque el tubito portador de las lentes y proceda cuidadosamente a su limpieza. . que se utilice exclusivamente para eso o un paño de lino fino o gamuza para la suciedad. las manchas rotan con la lente. . no lo empape. basta con observar a través de ellas el campo microscópico. . y cubra el microscopio con un tapacete de nylon con el mismo propósito. de ahí. . con igual cuidado externamente. La remoción del aceite de inmersión ya fue tratada en el acápite de cuidado. sin desarmar el dispositivo. Después de realizada la limpieza de la manera explicada colóquela nuevamente en el tubo ocular y compruebe que las manchas han desaparecido. no requiriendo cuidados especiales. si persisten. limpia la lente frontal del lente objetivo. .El vidrio con que se fabrican las lentes es blando. por estar muy impregnado el aceite. para remover el polvo. para evitar que se produzca el mismo efecto que con el empleo del alcohol. Cuando se requiera su limpieza se debe emplear. Si después de realizada esta operación la suciedad persiste. . si se detectan manchas. pues de lo contrario se corre el riesgo de que sufran un daño irreparable. cerciórese de que el tornillo del cuerpo binocular lo mantiene fijo.Coloque la tapa a cada lente ocular para evitar que se afecte por el polvo.La limpieza de las lentes del condensador se hará. para evitar que se salgan los lentes oculares y puedan dañarse.El espejo se limpiará con un paño fino. en ese caso. correspondiendo. absteniéndose de contactar con el diafragma anular que se haya en su interior. que de manera frecuente está ocasionada por la grasa de la pestañas y los cosméticos.

Se limpiarán con un paño. utilizar un paño fino impregnado ligeramente con aceite de máquina exentos de ácidos. Mantenimiento. cerciorarse de que éstas no tenga humedad que creará un ambiente muy propicio para que las lentes se contaminen con hongos que resultan muy difíciles de remover. removerla con xilol o gasolina. pero todos están constituidos básicamente por tres partes: 121 .Para pulir las partes metálicas lustrosas. brazo. ¿A qué se debe esta limitación?.La grasa vieja que se ha solidificado o adherido. proporcionar una imagen ampliada del objeto real para hacer posible su observación a través del ojo humano.Si desea guardar los microscopios en sus cajas. . ya que partículas separadas por menos de 200 m/µ escapan a su poder de resolución. con el que se removerá el polvo y la suciedad de sus superficies. Aunque se emplearan lentes de vidrio. pudiera proporcionar más de 2000x.Lubricar periódicamente las cremalleras con grasa de buena calidad libre de ácidos. etc.Los lentes que no estén en uso. limita esa posibilidad. cuya combinación.5 m/µ lo cual le proporciona un poder de resolución que permite la observación de partículas por menos de una millonésima de mm. .La base. se logra con el microscopio óptico. platina. deben ser colocados en dispositivos con tapa de rosca para preservarlos del polvo. 3. . proporcionada mediante una combinación de lentes y luz visible con un alcance máximo de 2000x. a través de una imagen virtual.El equipo debe recibir asistencia técnica especializada cada 6 meses. la longitud de onda de la luz visible que es de 400 a 700 m/µ . . Sin embargo los electrones de alta energía tienen una longitud de onda muchísimo más corta que no exceden 0. la ampliación del objeto real. Estructura del microscopio electrónico En la actualidad se fabrican diferentes modelos de microscopios electrónicos. pero se diferencian en que el microscopio electrónico en lugar de luz incidente o reflejada utiliza electrones y en el de lentes de vidrio campos magnéticos. - MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Como ya se explicó en la parte inicial de este capítulo.No debe utilizarse alcohol para limpiar el microscopio pues tiende a deteriorar la pintura. . El principio del microscopio óptico y el electrónico es el mismo. . .

de arriba hacia abajo. Pantalla fluorescente. b) Condensador magnético circular. 2. los siguientes componentes que constituyen su sistema funcional: Filamento de tungsteno. Tubos de rayos catódicos Consiste en un tubo cilíndrico de más de 1 metro de largo por aproximadamente 50 cm de diámetro. 3. c) Bomba de vacio. Porta muestra. Un tubo de rayos catódicos. 64: Microscopio electrónico: a) Filamento de tungsteno. e) Muestra. Proyector de imagen intermedia. el tubo presenta en el tercio superior un soporte de atril para la colocación de la preparación y en dirección descendente. Una bomba de vacío. i) Panel de mandos. f) Proyector de imagen intermedia.1. h) Pantalla fluorescente. g) Tubo óptico con lente ocular. Objetivo magnético circular. d) Portamuestras. En su interior se encuentran instalados. que se haya colocado en posición vertical. Un panel de mandos. Por la parte externa. Fig. Condensador magnético circular. diversas pa122 .

se encuentra acoplado un anteojos binocular centelleante. sometiendo el filamento de tungsteno a una potencia de 30 a 150 kv. Se extrae el aire que se encuentra en el tubo. la cual debe ser extremadamente fina (menos de 0. Bomba de vacío Está instalada en el tercio superior del tubo. con lo que se propicia que los electrones generados por el calentamiento del filamento se propaguen.lancas y manivelas que se emplean para corregir el enfoque. para observar la pantalla fluorescente. donde ambas partes se encuentran instaladas. Papel de mandos Está ubicado sobre la mesa de trabajo. El proyector de imagen intermedia. En la pared frontal presenta una pizarra con diversas escalas metradas que permiten monitorear y ajustar el funcionamiento del equipo. muy próximo a la base del tubo de rayos catódicos. 6. En la parte inferior del tubo. penetrando en el condensador magnético. Se coloca la preparación sobre el porta muestras. La imagen formada por la pantalla fluorescente es ampliada de 4 a 6 veces por el anteojos binocular. para hacer factible la movilización de los electrones.000x o más.000. 5. de lo contrario resultaría opaca a los electrones no pudiendo ser atravesadas por éstos. para seguidamente concentrarse sobre el objeto y atravesarlo. Funcionamiento 1. ampliando su imagen hasta 2000x en forma análoga a como lo hace el lente objetivo del microscopio óptico. 123 . La imagen puede finalmente observarse directamente sobre la pantalla fluorescente o proyectarse sobre una placa fotográfica si se desea el registro permanente de la imagen.1 mm). Encender el equipo. con lo que se obtiene un aumento total de 1. el ajuste de los campos magnéticos y el funcionamiento de la bomba de vacío. 4. los cuales se encuentran impedido de desplazarse en su presencia. amplia la imagen unas 250. mediante la bomba de vacío. muy próximo a la base. sin pérdida excesiva de detalles. 3. con un funcionamiento similar al del lente ocular del microscopio óptico. 2.000 veces o más.

Desventajas En contraposición a su elevado poder de resolución. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión? 9. 8. el objeto a observar y los lentes objetivo y ocular. monta una preparación en láminas en el microscopio óptico y la enfoca. 5. Nombre las diferentes partes del sistema mecánico del microscopio óptico. CUESTIONARIO 1. 6. 3. 124 . como Ud. la microscopía electrónica tiene la ventaja de que la acción de los electrones resulta letal para los microorganismos por lo que no es posible observarlos en estado viable. ¿Cuál es la función del revolver? 4. Para la observación de partículas víricas. ¿Con qué objetivo se utilizan los filtros? 11. 2. ¿Cuál es la función del diafragma? 7. 10. las diferentes partes del sistema óptico. 15. Entiende por poder de resolución? 12.Para la observación de estructuras bacterianas y de otros microorganismos. 16. Clasifique los diferentes tipos de lentes objetivos. Describa como se forma la imagen del objeto observado con el microscopio óptico. ¿Qué Ud. ¿Cuál es el poder de resolución del microscopio óptico? 13. 14. Describa paso a paso. Describa la trayectoria que específicamente va siguiendo el haz de luz al atravesar el condensador. emplea primero un lente objetivo de 20x y posteriormente un lente objetivo de 40x ¿Cuál de los dos le proporcionará un campo microscópico más amplio? Fundamente su respuesta. 2.Empleo 1. Describa la forma de los lentes que se encuentran en el interior del condensador de campo brillante. Describa la forma que tienen las dos caras del espejo y especifique cuando se utiliza cada uno de ellas. Relacione en el mismo orden en que se encuentran. Precise cuál es la diferencia funcional entre el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Sí Ud.

Describa la estructura del microscopio estereoscópico. Explique las funciones del filtro primario y el filtro de barrera que se utiliza en la microscopía de fluorescencia. ¿Con qué finalidad se realiza la observación a través del microscopio estereoscópico? 23. 21. ¿Con qué particularidad se observa la imagen del objeto a través del microscopio estereoscópico? 22. ¿Describa las características estructurales y funcionales del condensador de campo oscuro? 18. 20. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja más significativa del empleo de la microscopía electrónica? 125 . ¿Cuál es la diferencia estructural entre un microscopio óptico y microscopio electrónico? 24.17. ¿Cuáles son las funciones que respectivamente tienen el diafragma anular y la placa de cambio de fase en la microscopía de contraste de fase? 19.

CAPÍTULO 9
INSTRUMENTOS MECÁNICOS
INTRODUCCIÓN
La cantidad y variedad de investigaciones que se realizan diariamente en los laboratorios de microbiología clínica , han tenido una marcada tendencia a incrementarse progresivamente en los últimos años, en la misma medida en que estos servicios se han ido extendiendo a todas las unidades del sistema Nacional de Salud. La introducción de instrumentos mecanizados y automatizados para la realización de los diferentes procederes han venido a suplir en alguna medida los métodos tradicionales, con lo cual se ha logrado no sólo una mayor productividad, precisión y ahorro de recursos materiales y humanos, sino que su aplicación, interpone una barrera de bioseguridad que reduce significativamente los riesgos potenciales a los que se ven expuestos los manipuladores. La mecanización sustituye la labor del hombre, mediante el empleo de instrumentos técnicos, regulados por éste, mientras que la automatización comprende además un control intrínseco del instrumento mecanizado que ha sido diseñado para que se autorregule. En los laboratorios de microbiología se utilizan diversos instrumentos de este tipo, pero sin lugar a dudas uno de los empleados con mayor frecuencia es la pipeta mecánica.

PIPETAS MECÁNICAS
En la actualidad se comercializan varios tipos y modelos de pipetas mecánicas. Entre las más empleadas en los laboratorios de microbiología se encuentran: la pipeta de pistón clásica del tipo "Marbung", la del tipo "Jena" y la "Multicanal", que forman parte del sistema micro analítico Eppendorf. En estos tipos de pipetas el líquido se carga y descarga, mediante el accionar manual de la pipeta a una boquilla finamente cónica y puntiaguda de material plástico, que se inserta en el extremo inferior de la pipeta, de manera que el líquido aspirado pasa a la boquilla, pero no entra en ningún momento en la pipeta lo que permite su empleo reiterado, mediante el intercambio en cada ocasión de la boquilla plástica deshechable. 126

El índice de error, dado por los fabricantes, para este tipo de pipeta es de sólo un 1%. Estas pipetas se emplean para medir volúmenes de líquidos en el rango de microlitros. Un microlito es equivalente a la millonésima parte de un litro o la centésima parte de 1 mL.

PIpeta tipo Marburg
Este tipo de pipeta es de pistón fijo, estando diseñada para cargar o descargar solamente, un volumen determinado en microlitros, el cual está indicado mediante un número impreso en la parte superior de la pipeta. Como cada pipeta de este tipo, está limitada para aspirar o dispersar exclusivamente, un volumen fijo para el que ha sido diseñada, los fabricantes la comercializan en serie de: 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 900 y 1000 mL. Estructura externa

Fig. 65 : Pipeta mecánica tipo Marburg

Está estructurada con una cánula cilíndrica de material plástico de unos 2 cm de diámetro, estriada transversalmente para facilitar la sujeción manual. La parte superior de la cánula tiene insertada una anilla plástica prevista lateralmente de un pequeño saliente plano en posición horizontal, que sirve de tope al dedo índice, una vez que la pipeta esté empuñada. Por encima de la anilla, la pipeta se estrecha ligeramente en forma de un cono cortado por su vértice, en cuya pared se encuentra impreso un número que indica el volumen fijo que carga esa pipeta y sobre el número una franja que circula su diámetro, de color amarillo o azul, de varios mm de ancho. La franja de color amarillo distingue a las pipetas diseñadas para cargar 100 microlitros o menos y las de 127

color azul a las que se cargan más de 100 y hasta 1000 microlitros, teniendo esta última mayor diámetro. En el extremo superior de la pipeta se encuentra un botón cilíndrico insertado calibradamente en el orificio que se haya en la parte más estrecha del extremo distal cónico. Por debajo de la cánula se encuentra insertado un fino vástago cilíndrico, ligeramente cónico de material plástico, de unos 5 mm de diámetro, por cuyo extremo se inserta la boquilla plástica deshechable, cuyo color será igual al de la franja que circula la parte superior de la pipeta. Estructura interna

Fig. 66: Estructura interna de la pipeta mecánica tipo Marburg: a) Botón; b) Pistón cilíndrico; c) Muelle; d) Cerrador circular; e) Cilíndro; f)Pieza que cierra herméticamente la pipeta

En el interior de la pipeta se encuentra el sistema mecánico que hace posible, al ser accionado, su funcionamiento, interaccionando las diferentes piezas que lo conforman, de la siguiente manera: el botón que se encuentra externamente en la parte superior de la pipeta, contacta internamente con la parte superior de un pistón cilíndrico que se encuentra rodeado por un muelle flexible, cuyo extremo inferior contacta con el cerrador circular, una especie de zapatilla circular, que por su lado opuesto queda junto a una pieza cilíndrica que en las pipetas de menor calibre tiene insertado centralmente un mandril (aguja), para finalmente terminar en una pieza tubular que completa el sistema. Principio de su funcionamiento 1. Se procede a insertar ajustadamente una boquilla plástica deshechable en el extremo del vástago que sea del mismo color (amarillo o azul) que el que tiene la franja que circula el extremo superior de la pipeta. 128

Fig. 67: Ajuste de la boquilla plástica deshechable a la piapeta

2. Se empuña la cánula, de manera que el borde del dedo índice quede en contacto con el saliente de la anilla que se haya sobre la cánula y la yema del dedo pulgar sobre el botón que se encuentra en el extremo superior de la pipeta.

Fig. 68: Manera de empuñar la pipeta

3. Al presionar con el dedo pulgar el botón hacia abajo, hace que se comprima el muelle, lo que provoca, que el pistón y el resto del sistema mecánico desciendan. 4. Sin dejar de presionar el botón, se introduce la punta de boquilla deshechable, varios mm en el interior del líquido que se desea extraer y se procede a aflojar suavemente la presión del dedo. Esta acción hace que todo el sistema asciende hasta ocupar su ubicación normal, provocando la succión que hace que pase al interior de la boquilla, un volumen exacto de líquido, que será específico para cada pipeta de pistón fijo. 129

5. A continuación se introduce la punta de la boquilla en el tubo de ensayo de manera que quede sobre la pared interna del tubo, procediendo a presionar el botón para verter el volumen fijo de líquido. 6. Si se desea tomar una muestra diferente, basta con intercambiar la boquilla deshechable y repetir la operación.

Fig.. 69: Procedimiento para verter el líquido en el tubo receptor Nota: El intercambio de boquilla debe realizarse con la mano enguantada, depositando la utilizada en un vaso de precipitado con solución desinfectante.

Pipeta del tipo Jena

Fig. 70: Pipeta tipo Jena: a) Botón giratorio; b) Ventanilla con escala en microlitros

130

compactándolos. EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS Los equipos electromecánicos son utilizados en el laboratorio para la preparación de diferentes muestras o como parte de la realización de diversos procederes.El agitador. mediante el cual se hace descender o ascender al sistema mecánico. están diseñadas para que se le puedan insertar 8 o más boquillas. lo que propicia que se pueda ajustar el grado de succión de la pipeta dentro de un determinado rango. como 131 . partículas sólidas. Pipeta del tipo multicanal Este tipo de pipeta se sustenta en el mismo principio funcional. . etc. Esta pipeta dispone además en su parte superior. en lugar de una sola boquilla deshechable. Entre los más empleados se encuentran los siguientes: . para que aspire o disperse un volumen deseado. mediante una sedimentación forzada en el fondo de un tubo de ensayo. . Cuando se acciona la pipeta.El rotor. cada una de las boquillas succiona o dispersa el mismo volumen de líquido de manera simultánea. También puede servir para separar líquidos miscibles mezclados entre sí. células. que se encuentre en suspensión.Las centrífugas.El principio funcional es similar al de la pipeta del tipo Marburg. comercializándose distintos modelos. que son accionados mediante energía eléctrica. Las centrífugas La centrifugación es un procedimiento mecánico mediante el cual se pueden separar de un líquido. microorganismos. ubicadas unas al lado de las otras. La particularidad estructural que tiene este tipo de pipeta es que está provista de un botón giratorio en su parte superior. con lo que consigue variar su nivel de ubicación. muy próximo al botón giratorio. con pesos específicos diferentes. pero difieren en que. de una ventanilla rectangular provista en su interior de una escala numérica que va aumentando o disminuyendo el valor de los dígitos en la medida en que el botón sea girado hacia delante o hacia atrás. De esta manera se ajusta previamente la pipeta para que trabaje a un volumen deseado en números externos y décimas de microlitros. teniendo en común. lo que le da un aspecto de rastrillo. aunque difieren en el diseño.

1. 72: a) Cabezal. En el extremo de cada 132 . Partes de la centrífuga Fig. no pueden ser separados mediante la gravedad (sedimentación) o la filtración. 8 ó más tubos (siempre en número par) el cabezal adoptará la forma que tienen los rayos de una carreta con tantas barras fijas en posición horizontal. que se inserta mediante un orificio central al eje del motor.Cabeza: Es una pieza metálica. b) Portatubos. Como la centrífuga puede estar diseñada para 4. La mayoría de las centrífugas son eléctricas y solo algunos modelos ya en desuso se accionan manualmente. en forma de barra más o menos plana. como tubos pueda centrifugar. pero todas tienen el mismo principio funcional. 71: Esquema de las centrífugas En la actualidad se fabrican diversos modelos de centrífugas. 6. Diseño industrial de las centrífugas Fig. donde los compuestos que lo forman.las emulsiones. formando una cruceta cuando se trata de centrífugas de dos tubos.

5. Porta tubos: Son tubos metálicos. que indica cuándo el equipo está encendido. ya que de lo contrario. que se sustenta que en todo el cuerpo que se mueve en torno a un punto central. Reloj de intervalo: Se utiliza para regular el tiempo de cada centrifugación. por su parte interna. un taco de goma que sirve de amortiguador a los tubos de vidrio durante la centrifugación. uno a cada lado.p. 6. generalmente de color rojo. diseñada para colocar dos tubos. Principio técnico Está determinado por la fuerza centrífuga. se deberá llenar en segundo tubo con agua. quedan articulados al cabezal. Balance de los tubos Para el buen funcionamiento de la centrífuga es indispensable que los tubos queden colocados en una posición diametralmente opuesta. 133 . deberá emplearse el mismo tipo de tubo y asegurarse de que el volumen de líquido en ambos sea similar. Los porta tubos de angulación son fijos. en tanto que los segundos. quedando en posición oblicua respecto al eje. la cual será directamente proporcional a su masa. lo que ocasionaría un desbalance que provocaría vibraciones y sacudidas de la centrífuga con la consiguiente ruptura de los tubos y el desajuste del equipo. Motor eléctrico: Tiene la función de imprimir movimientos de rotación al cabezal mediante velocidades controladas por medio de un reóstato que varía la intensidad del flujo eléctrico. en suspensión. 4. Tacómetro o velocímetro: Se utiliza para ir registrando la velocidad de rotación del cabezal en revoluciones por minutos (r. tengan el mismo peso. la fuerza centrífuga sería desigual. Cuando no se disponga de este instrumento.barrera se inserta un porta tubo el cual puede ser de angulación o de suspensión. 3. que se utilizan para introducir los tubos de vidrio que contienen el material que va a ser centrifugado. Para lograr un buen balance de los tubos se puede utilizar un nivelador de tubos.m). se desarrolla una fuerza que tiende a separarlo de dicho centro. 2. Bombillo piloto: Es un pequeño bombillo. Estos porta tubos tienen colocado en el fondo. determinándose la igualdad en peso mediante la sincronización de su equilibrio. lo que le permite adoptar una posición horizontal cuando la centrífuga alcanza altas velocidades. con similares requisitos y ser colocado en el punta tubo que se encuentra en el lado opuesto que fuerza el que purza la muestra. que es una especie de balance. Si se va a centrifugar una sola muestra.

Cerciorarse de que el botón que regula la velocidad del tacómetro o velocímetro este en "0". Abrir la tapa de la centrífuga. Extraiga los tubos. Introducir los tubos con las muestras en el interior de los porta tubos. 6. 2. teniendo especial cuidado de que quedan diametralmente apuestos (uno frente al otro) están debidamente balanceados en peso. deben tener el mismo tamaño y peso.) en el tacómetro hasta alcanzar la deseada. 11. Accionar el interruptor para encender el equipo. 10. lo cual se puede determinar observando el velocímetro. 7. Girar el botón del reloj de intervalo.Fig. 73 : Nivelador de tubos Funcionamiento 1. 134 . Medidas de cuidados y conservación 1. apague la centrífuga. 9.p. Girar el botón del velocímetro lentamente. 4. Conectar el equipo a la red eléctrica 5. 3. Llenar los tubos hasta 1 cm por debajo del borde superior. para evitar la exposición a los aerosoles. 8. desconéctela de la red eléctrica y ciérrela. Espere a que la centrífuga se detenga.m. 2. Los tubos colocados en lados apuestos. de manera que vaya marcando gradualmente la velocidad (r. Si la centrífuga no tuviera reloj de intervalo. Cerrar la tapa de la centrífuga. proceda a apagarlas tan pronto concluya el tiempo previsto de centrifugación. espere 2 ò 3 minutos antes de abrir la tapa. hasta que indique el tiempo de centrifugación deseado. Si se hubiera centrifugado material contaminado.

c) Botón del velocímetro El rotor es un pequeño equipo eléctrico que tiene la forma de un cajón.L. 5. 135 . Cuando se produzcan rupturas de tubos. EL ROTOR El rotor se utiliza para mezclar mecánicamente las muestras con los reactivos.3. los porta tubos serán extraídos. sobre la cual se encuentra una plataforma giratoria de unos 30 cm2. estando provisto de una superficie plana de unos 35 cm2. 4.D.R. En el laboratorio de microbiología se utiliza regularmente para mezclar el suero con la emulación de antìgeno para las pruebas serologícas de V. lográndose una mejor homogenización. Mide aproximadamente 30 cm2 x 15 cm de altura. que la que se puede conseguir por procedimientos manuales. procediendo a la eliminación de los restos de vidrio y limpiándolos escrupulosamente. Diseño del equipo Fig. b) Botón del "timer". 74: El rotor: a) Superficie plana giratoria. Periódicamente debe limpiarse el interior de la centrífuga con un paño húmedo para eliminar el polvo y la suciedad. Cualquier material que se derrame sobre la centrífuga debe ser eliminando de inmediato.

debe limpiarse de inmediato. que indica cuando el equipo está encendido. Se debe verificar sistemáticamente que las rotaciones de la plataforma giratoria se correspondan con la indicada en el velocímetro. hasta hacerlo coincidir en la escala numérica con el tiempo deseado de rotación. entre las empleadas se encuentra la homogenización de esputos. llevar el botón del velocímetro a "0" y desconectar el equipo de la red eléctrica.En la pared frontal del equipo. rodeados en todo su perímetro por una escala numérica. generalmente de color rojo. 2. Funcionamiento 1. Conecte el equipo a la red eléctrica. Coloque la cristalería con la muestra sobre la superficie de la plataforma giratoria. Cuando se detecte alguna diferencia se debe engrasar el equipo y si eso no resuelve el problema solicitar el servicio de un especialista. 5. algunos modelos disponen por uno de sus laterales de una presilla. Como la plataforma giratoria no queda fija. el primero corresponde al "timer" o reloj de intervalos y el segundo al velocímetro. que al ser colocada adecuadamente. para evitar su desplazamiento por colisiones accidentales.p. Accione gradualmente el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir en la escala con la velocidad de rotación por minutos (r. En el laboratorio de microbiología tiene diversas aplicaciones. 136 . Concluido el tiempo. 4. impide que esa situación ocurra. EL AGITADOR El agitador se utiliza para mezclar muestras muy difíciles de homogenizar por procedimientos manuales debido a su densidad o mucosidad. Cualquier material que se derrame sobre la superficie de la plataforma giratoria o el equipo. 2. el equipo se apagara automáticamente.). Accione el botón del "timer". procediendo a retirar las muestras.m. Muy próximo a estos botones se encuentra un pequeño bombillo. 3. Cuidado y conservación 1. se encuentran insertados dos botones. 3.

2. lentamente. 3. 137 . haga un girar en retroceso el botón del velocímetro hasta ubicarlo en "0" y desconecte el equipo de la red eléctrica. Posee igualmente un "timer". se desplaza con movimientos cortos. la mezcla u homogenización de las muestras. con capacidad suficiente para que puedan ser colocados en su superficie varias gradillas. propiciando mediante las sacudidas que ocasiona. 5. Gire. 4. Funcionamiento 1. c) Botón del velocímetro Este equipo se fabrica de diferentes tamaños. b) Botón del "timer'. Concluido el tiempo de agitación. Al igual que el rotor. presenta en su superficie una plataforma. Cuidado y conservación Similar a las que se aplican al rotor. un velocímetro para determinar el desplazamiento por minuto y un bombillo piloto. Gire el botón del "taimer" hasta hacerlo coincidir con la escala que indique el tiempo de agitación deseado. Coloque las gradillas con las muestras sobre la plataforma oscilatoria y fíjelas con los dispositivos que dispone el equipo para que las gradillas no se vayan a caer cuando se le aplique el movimiento propio del equipo. La mayoría de los modelos tienen forma rectangular. Conecte el equipo a la red eléctrica. el botón del velocímetro hasta hacerlo coincidir con la velocidad deseada. retirar las gradillas de la plataforma. 75: El agitador: a) Plataforma oscilante. frontales y de retroceso en forma continua a velocidad regulable. que en lugar de rotar .Diseño del equipo Fig.

puesto que el grado de tolerancia a la acidez o a la basicidad resulta diferente para cada uno de ellos. son instrumentos eléctricos que se utilizan para medir el pH de una disolución. En el trabajo microbiológico.POTENCIOMETROS Los potenciómetros o pHmetros.BY (En espera) o hacia la posición indicada con la palabra READ (Lectura) 138 . midiendo unos 30 cm2 x 8 cm de ancho. la determinación del pH de una disolución. para lograr su desarrollo óptimo. Estructura Fig. 2. como por ejemplo: en la elaboración de medios de cultivo. lo que permite conocer con precisión su grado de acidez o basicidad. 3. Debajo del galvanómetro se encuentran articulados al menos tres botones giratorios: 1. aunque el tamaño varia de acuerdo al modo comercializado por los diferentes fabricantes. donde el pH debe ser ajustado de acuerdo a los requerimientos de los diferentes grupos y géneros bacterianos que pretendamos cultivar. En la pared frontal o sobre la superficie se haya un galvanómetro provisto de una escala impresa del 0 al 14 que se complementa con una aguja insertada por su parte posterior a un pequeño eje situado en su centro y borde inferior. Botón de lectura. Este botón se hace girar según se requiera hacia la posición STD. b) Galvanómetro Los potenciómetros tienen la forma de una caja rectangular. por estar diseñados para determinar las concentraciones de iones hidronios que posea. resulta primordial en diversos procederes. Botón indicador de la temperatura del potenciómetro. Botón para mover la aguja e indicar en la escala el pH de la solución buffer. 76 : Potenciómetro: a) Eléctrodos.

El electrodo transforma la energía química en energía eléctrica.Por el lateral derecho. en contacto con el alambre se encuentra el material sensible a los cambios de pH.5cm de diámetro. provisto de una presilla habilitada para la colocación y sujeción de dos electrodos. Electrodo de referencia: Generalmente presenta un mayor diámetro y se fabrica con calomel (Hg2 Cl + K Cl) un material estable. Electrodos Concepto: Los electrodos no son mas que el polo (Positivo: Ánodo-Negativo: cátodo) de una pila eléctrica. Etc.e. permaneciendo inalterado independientemente de la concentración de iones hidrontes o hidroxilos que contengan la disolución. El otro extremo del alambre queda empalmado a un cable eléctrico que se conecta en el fondo del equipo. Estructura de los electrodos del potenciómetro o pHmetro: Consisten básicamente en un tubo de vidrio de unos 10 ò 12cm de largo x 1 o 1. 139 . el pHmetro tiene articulado en posición vertical un soporte universal metálico. para ser convertida y presentada por el galvanómetro con un valor de pH. el galvanómetro ha sido sustituido por una escala digitalizada. El tubo es atravesado longitudinalmente por un alambre de platino. cuya porción terminal inferior puede ser redondeada. 2. En los pHmetros modernos. mas afinada o en forma de un pequeño bulbo redondeado similar a un densímetro. en consecuencia la fuerza electromotriz por la celda electroquímica es comparada con la del potenciómetro y la diferencia es medida en voltios. mediante el empleo de las pilas voltais preparadas con los electrodos que marcan la diferencia de potenciales entre ambos. Ambos electrodos se unen mediante puentes salinos (K CL o NH4 NO3) cuando se acciona el equipo Principio funcional Se basa en la medición de las fuerzas electromagnéticas (f. como por ejemplo: hidrógeno. Electrodo indicador: En su extremo distal.() de las disoluciones a investigar. Tipos de electrodos 1. cuyo extremo terminal queda en contacto con el material sensible o indiferente a los cambios de pH. quinhidrona.m.

Procedimiento para el manejo del potenciómetro Estandarice el aparato 1. el pH no es otra cosa que el logaritmo inverso de la concentración de iones hidrógenos en una disolución.BY. Cuadro 6: Gráfico de logaritmo inverso de iones hidrógeno. Una disolución es ácida cuando la cantidad de iones hidrionios (H30+) es mayor que la de iones hidroxilo (0H-) y viceversa. 2. 140 . 3. Sumerja los electrodos en una solución buffer de pH conocido. Conecte el equipo a la red eléctrica y asegúrese de que el botón se encuentre en la posición STD. (por ejemplo: pH 7). ya que las sustancias ácidas ceden electrones y por consiguiente retienen hidrógeno en tanto que las básicas son capaces de aceptar protones.Medición del pH La medida del pH es una forma convencional de indicar la concentración de iones hidrionios o de iones hidroxilo en una escala del 0 al 14. Solución Buffer: Las soluciones buffer o amortiguadores o tampón como también se les conocen están compuestas por dos o más sustancias que evitan la producción de cambios significativos en la concentraciones de iones hidrionios. Extraiga los electrodos de la solución buffer y proceda a enjuagarlos en un recipiente que contenga agua destilada. aun cuando a dicha solución se le agregue un ácido o una base fuerte. Accione el botón y haga coincidir la aguja en el número 7 de la escala de pH. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 10-14 _________________________10-9________________________10-0 Ácido Alcalino Por lo tanto.

13. resulta favorable para la bioseguridad del laboratorio. Nombre los diferentes tipos de pipetas mecánicas que usted conozca. 14. 15. ¿Qué relación existe entre la banda coloreada de la parte superior de la pipeta Marburg y el de la boquilla desehechable? Describa como se activa el sistema mecánico de la pipeta cuando se ejerce presión sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. el pH. CUESTIONARIO 1. 2. ¿Cuál es la diferencia funcional entre la pipeta tipo Marburg y la pipeta tipo Jena? ¿Qué característica particular presenta la pipeta multicanal? Fundamente porque causa el empleo de las pipetas mecánicas. en lugar de tomar la de la solución. ¿Cuáles son las ventajas de la mecanización y la automatización sobre los métodos tradicionales de laboratorio?.4. los pasos que usted debe dar para realizar una centrifugación. ¿Con qué objetivo se utilizan las centrífugas en el laboratorio? ¿En qué radica la fuerza centrífuga? Describa la estructura del cabezal de las centrífugas. 11. La aguja oscilará. Proceda a sumergir los electrodos en la solución cuyo pH se desea determinar. Accione el botón cambiándolo de la posición STD. Describa como opera la pipeta Marburg cuando se retira la presión del dedo sobre el botón que se haya en la parte superior de la pipeta. 7. 9. 4. si lo prefiere utilice como referencia la temperatura ambiente. 141 . Tome la temperatura de la solución donde se medirá el pH y accione el botón indicador de temperatura del potenciómetro. 5. hacia la izquierda o la derecha indicando en la escala. 6. 3. 8. ¿Cuál es la función de tacómetro? ¿Qué requisitos deben tenerse en cuenta al colocar los tubos en la centrífuga? Explique en orden cronológico. Describa la estructura de la pipeta mecánica tipo Marburg. 10.BY a READ. 12. Si se requiere realizar una nueva lectura lave los electrodos previamente con agua destilada. También. 2. Lectura 1.

¿Qué es lo que marca el galvanómetro del pHmetro? 25.16. ¿Qué mide el velocímetro del rotor? 20. Explique como usted estandariza el potenciómetro 26. ¿Para que se utiliza el rotor en el laboratorio? 18. ¿Cuál es la diferencia funcional entre los diferentes tipos de electrodos del pHmetro? 24. 17. ¿Para qué se utiliza el agitador en el laboratorio? 21. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del agitador? 22. 142 . ¿Para qué se utiliza el potenciómetro en el laboratorio? 23. ¿Cómo es el movimiento de la plataforma del rotor? 19. Describa los pasos que debe efectuar para determinar el pH de una disolución con el empleo del pHmetro. Haga referencia a los cuidados que debemos observar para el buen funcionamiento y cuidado de la centrífuga.

con piezas de peso certificado denominadas pesas. los cuales están diseñados para diversas aplicaciones.CAPÍTULO 10 BALANZAS INTRODUCCIÓN Las balanzas son instrumentos que se utilizan para medir el peso relativo de los cuerpos.. mediante la comparación. Unidad básica (Gramo) Unidad micro métrica Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Atogramo Equivalente a la Milésima parte de un .. Estructura bacterianas Un virus Una molécula Un átomo PRINCIPIO El funcionamiento de las balanzas se sustentan en el principio físico de las palanca de primer grado. 143 . Unidades de medición micrometricas. Existen en el mercado múltiple tipos y modelos de balanzas. ya que las de precisión o analíticas de tipo mecánico o eléctrica se emplean solo ocasionalmente.. DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS Las balanzas que se utilizan corrientemente en los laboratorios de microbiología clínica son las granatarias y las analíticas digitales. Tabletas de medicamentos. en las que el punto de apoyo se encuentra exactamente entre el punto de potencia y el punto de resistencia.. Gramo Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Fentogramo Ejemplo para pesar la masa de . Grano de polvo o gota de un liquido. que van desde las que se utilizan para medir el peso en tonelada hasta las que se emplean para medir con precisión fracciones de Mg. Ejemplo:el cachumbambé.

144 . plana o cilíndrica. formando un paralelogramo rectángular. de unos 30 cm de largo. articuladas por sus respectivos extremos a una barra metálica.1 a 500g o más. al tipo de balanza. formando una cruz con los extremos ligeramente curvados hacia arriba. las vibraciones o el polvo circulante puede influir en la determinación del peso real. Las barras horizontales quedan articuladas exactamente por su posición media. que al no estar topados en su interior posibilitan que la barra vertical penetre aun mas. mediante un pasador al extremo superior de una columna sólida. el peso de un cuerpo que se encuentra entre 0. de menos peso que el señalado. Sobre el extremo superior de las barras verticales se encuentran atornilladas dos planchuelas metálicas de unos 2 cm de ancho. como por ejemplo: para determinar el gramaje de un medio de cultivo deshidratado en polvo. las balanzas granatarias son empleadas cuando no se requiere conocer con precisión el peso del objeto. ubicada en el centro de la balanza. ya que por ser demasiado ínfimo. mientras que su extremo inferior. Balanza de dos platillo (Balanzas de Roberval) Fig. Cualquier objeto que se pretenda pesar con este tipo de balanza. 77: Balanza granataria de dos platillos(Balanza de Roberval) Esta estructurada por dos planchuelas paralelas de acero. que sirven de soporte para la colocación de los platillos. en posición vertical. queda introducido en un orificio existente en ambos extremos de la base. si el peso del objeto es superior al de las pesas que se hayan en el otro platillo. que le sirve de punto de apoyo.Balanzas granatarias Se denomina así. determinados factores como: las corrientes de aire. en posición horizontal. con la que se puede determinar mecánicamente. las de dos platillos y las de un platillo. Se fabrica dos variantes de balanzas granatarias. los resultados que se obtengan serán dudosos.

El fiel en forma de aguja esta articulado por su extremo inferior a las barras horizontales. la aguja del fiel al detener su movimiento lo hará justamente en el "0". proceda a accionar las tuercas de los tornillos de ajuste que se hayan a ambos extremos de la balanza. para lo cual debe observar como la aguja oscila libremente sobre la escala a ambos lados del "0". La parte superior de la aguja queda junto a una escala grabada en cuyo centro esta el "0" y hacia ambos lados. 3. Desestime las 2 o 3 primeras oscilaciones y posteriormente compare las que se producen hacia la izquierda del "0". provista de una pesa deslizante para ser movida hacia la izquierda o hacia la derecha hasta hacerla coincidir en la escala con el peso que se desea medir. hasta conseguir que las oscilaciones sean parejas. vacíos y colocados correctamente sobre las crucetas. siendo el resto de la estructura similar. Algunos modelos de este tipo de balanza. 2. Procedimientos para efectuar la pesada Una vez que el fiel de la balanza se haya ajustado a "0" proceda de la siguiente manera: 1. Cerciórese de que los platillos estén limpios. Nunca coloque los materiales directamente so145 . utilice un recipiente adecuado (Papel. Si las oscilaciones fueran desiguales. Ajuste el fiel de la balanza a "0". por ejemplo 5-5 ò 4-4. que permiten determinar las oscilaciones de la aguja hacia la derecha o la izquierda de la escala. Funcionamiento Antes de efectuar la pesada: 1. presenta de 5 a 10 líneas verticales equidistantes. Si va a pesar algún material en polvo o líquidos. para tener en cuenta ese dato al determinar el peso del material (tara). quedando en posición vertical. hasta que marque "0" g. vidrio reloj. Si las oscilaciones son coincidentes. en lugar de dos barras horizontales tienen una sola carente de grabación en g.La barra o planchuela que queda frente al manipulador esta grabada con una escala metrada en gramos. perpendicularmente a la columna de la balanza. Mueva la pesa deslizante de la barra graduada hacia la extrema izquierda. etc) pesándolo previamente. cápsula de porcelana. vaso de precipitado.

0.3 y 0.05. 78 : Caja de pesas Consiste en un pequeño cofre cuadrangular provisto de una tapa articulada con bisagras en su parte superior. una sortija. por su orden en la caja. Este tipo de pesas consiste en una laminilla plana de metal con forma cuadrada o rectangular.0. hasta que la aguja del fiel marque "0".0.02. a menos de que se trate de sólidos limpios. Si fuera insuficiente. dentro del estuche se encuentra una pinza que es utilizada para extraerlas del estuche. se colocan las que tienen menor peso que las referidas.5. por donde se toman con una pinza de disección. bre el platillo. que presenta uno de los bordes doblados en un ángulo de 900 por donde se toman con las pinzas. que como es obvio sera menor (0.1. Para efectuar la pesada. etc. Estas pesas son cilíndricas. presentando linealmente unos 20 orificios de diferentes diámetros donde se introducen las pesas.3. Internamente se encuentra tapizado de terciopelo.0. hasta que indique el peso adecuado.20.4. Al igual que las cilíndricas tienen grabado el peso.0.50 o 100g) las cuales pueden combinarse para obtener cualquier peso en ese rango.2. como por ejemplo.03. colocarlas sobre el platillo y posteriormente reintegrarlas. En los orificios de la parte anterior del estuche.5g).40. acero inoxidable o aleaciones no magnéticas.2. mueva hacia la derecha de la barra grabada la pesa deslizante. A continuación coloque el recipiente seleccionado sobre el platillo del lado izquierdo y vierta poco a poco en su interior el material que desea pesar. Cada una de estas pesas tiene grabado el peso (1.10. Caja de pesas Fig.0. una barra metálica. Todas estas pesas se fabrican básicamente con latón. En los orificios que están situados de la mitad hacia atrás del estuche se colocan las de mayor peso. estando provistas de una pequeña prominencia en su parte superior. Conjuntamente con las pesas. pulidas y brillantes.01.30. extraiga de la caja de pesas las necesarias y colóquelas sobre el platillo de la derecha. 146 .2.

parra evitar que el polvo o la su ciedad puedan afectar la fiabilidad del peso. esta balanza tiene la columna que sirve de punto de apoyo. se encuentran debajo de los platillos.PRECAUCIONES 1. Las barras horizontales son dos o tres. 147 . Generalmente estas barras están provistas . antes de guardarlas en la caja cepíllelas con un pincel de pelo de camello. en especial los platillos. El procedimiento para efectuar la pesada es similar. y están grabadas con diferentes escalas en gramos. Los tornillos de ajustes. las cuales no deben ser colocadas en otro lugar que no sea los platillos. con la diferencia de que esta balanza no utiliza las piezas certificadas de la caja de pesas. teniendo cada una de ellas una pesa deslizante. 3.en su parte superior . Conserve limpias las piezas. Cuando se efectúan pesadas de productos en polvo.generalmente. sino de flecha y la escala se encuentra en el extremo derecho y no arriba con en la de dos platillos. Balanxa de un solo platillo (tipo Ohaus) Fig.de una muesca sobre cada numero de la escala para fijar la pesa en el punto exacto. sino en el extremo izquierdo. El fiel de estas balanzas . 2. según el modelo. no en el centro. Mantenga las balanzas escrupulosamente limpias. BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA Este tipo de balanza se utiliza cuando se requiere determinar con precisión el peso de pequenas cantidades de materiales u objetos. cuyo peso sea de décimas o centésimas de gramos o pocos gramos. 79 : Balanza granataria de un solo platillo (tipo Ohaus) A diferencia de la balanza de dos platillos. Coloque la balanza sobre una superficie nivelada en un lugar donde no se produzcan vibraciones y que la temperatura así como la humedad relativa sean estables.no es en forma de aguja.

c) Fiel. en dirección al manipulador.De acuerdo a su diseno se clasifican en: mecánicas.que al igual que los marcos que sirven para fijar las paredes y la parte superior de cristal. lo cual se comprueba mediante la observación de uno de los dos niveles de agua circulares que se encuentran en la superficie Partes de que consta l. d) Platillos. en cualquier altura en que sea detenida. La base está sostenida por un tornillo en cada uno de su ángulos . sin caerse. Columna: La columna sirve de base al punto de apoyo de la balanza. eléctricas y digitales. Consiste en un tubo de metal inoxidable de unos 20 cm de largo x l. que se encuentra atornillado por su base en el centro del piso de la urna. h) Cuchilla Para evitar inexactitudes durante la pesada. La superficie de la planchuela tiene 148 . En la pared anterior que queda frente al manipulador se encuentra incertada la puerta de la vitrina. b) Cruz.quedando debidamente nivelado en posición vertical. f) Soportaplatillos. Balanza de precisión mecánica Fig. el polvo circulante o la humedad. que posee en el centro de su parte inferior un pequeño tirador que se utiliza para subir o bajar la puerta por un mecanismo de corredera (similar al de una guillotina) diseñado para que la puerta se quede fija. este tipo de balanza se estructura por el fabricante dentro de una vitrina de cristal . la cual está provista de un marco independiente.5cm de diámetro. que son utilizados para nivelar la balanza. 80: Balanza de precisión mecánica: a) Columna. de unos 40cm cúbicos. El extremo de su parte superior esta estructurado con una planchuela metálica en posición horizontal. g) Chapa. e) Dispositivos para subir o bajar la cruz. incoloro y transparente. sobre una base de varios cm de altura. debido a la influencia de las corrientes de aire. generalmente es de madera o material plástico.

2. el cual se haya articulado por su porción posterior a un botón giratorio que se encuentra en la parte externa de la base de la urna en su porción central. el cvual será horizontal cuando el fiel de la balanza esté en 0. por donde se inserta un alambre acerado rígido que describe una parábola algo angosta para factibilizar su colocación en los estribos de la cruz. denominado "cuchilla". caracterizada por su dureza e inalterabilidad al contacto con el aire. quedando de esta forma la cruz en equilibrio.provisto de una saliente por cada lateral. de unos l6cm de longitud. Los salientes ubicados en la parte inferior tienen insertada respectivamente una cuchilla con la arista dispuesta hacia arriba y apoyadas en una pequena placa del mismo material contenidas en los estribos. La cruz en ambos extremos laterales presenta dos salientes en forma de horquetilla angular denominada estribo .provocando que las piezas cilíndricas de la planchuela metálica 149 . tiene insertado un prisma de ágata de forma triangular. quedando en posición vertical.en cuya cavidad se inserta una placa de acero o ágata .forma de cajuela en U . estando unido por su porción media a un eje que se encuentra introducido a todo lo largo de la columna. 4. perpendicularmente a la columna. hace que el eje que atraviesa la columna se eleve. una pequena pieza cilíndrica proyectada hacia fuera y en cada extremo un gancho semicircular del mismo material similar a la forma de las herraduras. Dispositivos para subir y fijar la cruz : Es una fina planchuela metálica muy rígida que tiene por la superficie de cada lateral. donde se observa el 0 en el centro y numeraciones iguales hacia ambos lados. que hace que los platillos queden suspendidos. teniendo su superficie plana y muy pulida. suficientes para aligerar su peso sin que por ello pierda rigidez a la flexión. Fiel: Sobre el centro de la concavidad de la cruz se encuentra atornillada una chapilla que sostiene por su extremo posterior a una larga y fina aguja que es el FIEL de la balanza. Un medio giro del botón hacia la derecha. La cruz: Es una barra plana . En el extremo lateral de cada estribo. de forma circular. El extremo inferior es puntiforme y oscila como un péndulo. cuyo vértice se apoya sobre la chapa de la columna. Este dispositivo queda ubicado por debajo y muy próximo a la cruz.semejantes a un plato. denominada "chapa".por donde se cuelgan los platillos. Esta barra se caracteriza por tener varias perforaciones simétricas .que adopta una forma triangular con el vértice hacia abajo en cuyo extremo distal presenta un corte cóncavo. Las aristas de las tres cuchillas deben estar situadas en el mismo plano. 3. Debajo del semicírculo que forma la concavidad. Los platillos: Son dos piezas metálicas planas. se encuentra articulado un fino tornillo en posición horizontal. A todo lo largo del margen superior tiene grabada una escala en mm. 5. cuyas tuercas se utilizan cuando se requiere nivelar la balanza.junto a una escala graduada desprovista de números cuyo centro representa al 0.

denominados jinetillos . 3. baje los portaplatillos y observe las oscilaciones del fiel. Cerciorese de que la balanza esté nivelada. Cierre la balanza.seguidamente tome con la pinza las pesas y situelas por orden de peso (de mayor a menor) sobre el platillo de la derecha.separando la cuchilla de la chapa para finalmente quedar estática debido a la presión del dispositivo.con el cual. se bajan los portaplatillos para que oscilen libremente y se pueda determinar el peso. impidiendo que oscilen cuando se le esté añadiendo algún peso. aproximadamente por lcm . para lo cual observe la ubicación de la burbuja de aire en el nivel. Deposite el material a pesar en un recipiente apropiado (previamente pesado) y colóquelo en el centro del platillo de la izquierda. para lo cual haga bajar la cruz con los platillos vacios y observe las oscilaciones del "fiel" junto a la escala graduada. lo cual afectaría su exactitud. 6.contacten con la parte inferior de la cruz y la eleve. Del lado izquierdo del botón para fijar la cruz. los cuales quedan ubicados debajo de los platillos. se encuentra el utilizado para accionar los portaplatillos. Si se percata de que son diferentes hacia uno u otro lado del cero.los cuales se deslizan a lo largo de la regla grabada que se encuentra en la cruz. 150 . Soportaplatillos :Son dos discos articulados respectivamente a un fleje metálico recubierto de fieltro. con peso cerificado. Cuando el material a pesar y las pesas estén colocados sobre los platillos. teniendo la precaución de colocar en el centro la pieza de mayor peso y a su alrededor las de menos peso. proceda a accionar los tornillos de nivelación de los extremos de la cruz.propiciando que el filo de la cuchilla no roce innecesariamente con la chapa durante esta acción. con el objetivo de que no pierda el filo. Resulta indispensable realizar esta acción cuando no se esté realizando la pesada. Si se quiere determinar el peso de un objeto que tenga un peso inferior al mg. Suba los portaplatillos. Si se encuentra en una posición excéntrica. que tienen forma de gancho. 2. se consigue que éstos suban y entren en contacto con los platillos. 5. estando separados de estos. procediendo a quitar o poner las pesas o anadir o quitar producto en dependencia de los objetivos de la pesada.para evitar que la cuchilla esté innecesariamente en contacto con la chapa. de agua que se encuentra en la superficie de la base de la balanza. utilice los hilos de platino. PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA l. Determine el punto "0" de la balanza. hasta que las oscilaciones sean iguales. proceda a girar convenientemente los tornillos donde se apoya la balanza hasta lograr que la burbuja esté en el centro del nivel. 4.

baje los portaplatillos y cierre la balanza. f) Botones de ajustes de las pesas de cambio. . .Limpie el interior de la balanza. e) Botón para la graduación de la precisión del indicador digital. . cambios de temperaturas o humedad. BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA Fig. PRECAUCIONES .6. Suba la cruz. h) Orientador de la dosificación. donde no existan vibraciones.Cerciorase de que las pesas estén limpias y manipúlelas siempre con la pinza.Exclusivamente los sólidos se pueden colocar directamente sobre el platillo. Al concluir la pesada procesa a subir los portaplatillos. c) Platillo. no las toque con los dedos.retire el material ya pesado y con el empleo de la pinza retire las pesas por su orden de menor a mayor peso. . 8l: Balanza de precisión eléctrica: a) Botón para el ajuste de la compensación de tara. . como por ejemplo: lana de vidrio embebida en ácido sulfúrico concentrado o pequeños gránulos de cloruro de calcio anhidro.La lectura de las pesadas deben efectuarse siempre con la puerta cerrada. 151 . ya que éstos le comunican humedad y suciedades que alteran el peso. g) Palanca de retención. antes y después de su uso. b) Botón para el ajuste del punto "0". d) Indicador digital.En los ángulos de la urna coloque un pequeño recipiente que contenga un desecador con el objetivo de que absorba la humedad y mantenga secas la atmósfera en el interior de la urna.Garantice que la balanza sea ubicada sobre una mesa o meseta nivelada. en especial los platillos.

que sirve para indicar donde ser detenido el giro del botón para hacer coincidir la letra "T"con la línea de referencia. Indicador de nivel : Consiste en un aditamento circular de no más de 2 cm de diámetro. que ocupa la mitad del ancho de la caja. 3. Se encuentra articulado en el centro del botón para 152 . generalmente es más pequeña aunque al igual que la mecánica. la pared de la caja tiene grabada una pequeña linea vertical. de una ventana de corredera. muy próximo a su borde y un grosor de menos de 2 cm estriado transversalmente. estando cubierto por una tapa de vidrio. En la parte superior de la periferia donde gira este toirnillo. lo que le da una configuración ligeramente cónica . la mitad inferior de la pared frontal.Este tipo de balanza se utiliza al igual que la balanza analítica mecánica. que se caracteriza por tener un diámetro mayor en su base que en la parte anterior.cuando se requiere determinar con precisión el peso de un objeto. Un tabique en posición horizontal divide la urna internamente en dos partes. teniendo la superficie plana provista de una letra "T" impresa. así como la porción inferior de los laterales y la cubierta superior son generalmente de material plástico. hasta lograr que la burbuja de aire del agua que contiene quede en el mismo centro del circulo concéntrico. Principales partes de que consta 1. Botón de ajuste del punto cero: Es un botón igualmente igualmente cilíndrico de menor tamaño. La parte posterior. el nivel se regula. la caja o urna donde se encuentra estructurada tiene forma rectángular y se haya en posición vertical sobre su base. aunque más grueso. es de cristal. haciendo girar convenientemente en una u otra dirección los tornillos. En la parte inferior (Rodeada por la pared de cristal y las ventanas laterales) se encuentra colgado centralmente el único platillo que posee este tipo de balanza. Las paredes laterales están provistas. Al igual que la balanza mecánica. provista de un círculo concéntrico de unos 7 mm de diámetro. que generalmente se localiza empotrado centralmente en la superficie de la balanza muy próximo al borde anterior. tambien de cristal. Botón para el ajuste de la compensación óptica de tara : Este botón se encuentra articulado en el ángulo superior derecho de la pared frontal de la balanza. para facilitar su manipulación . sin incluir la base. Es de formas circular. la superior ocupa aproximadamente un tercio de todo el espacio y en ella se encuentra instalado parte del sistema eléctrico y otros dispositivos interconectados con el resto del sistema que se encuentra en la parte posterior de la balanza. respectivamente. tanto en el tamaño como en su diseño. Aproximadamente. pero difiere de ésta. 2.

etc. en el centro de la base. ubicado en el lateral derecho de la base. con los números 0. que tiene grabado en su centro un "0"con un (.…hasta el 9. Es un botón grande. denominado tambien placa mate. por su lado derecho. 8.provisto de una escala numérica. produce el cambio de pesas de l0 en 10. Alrededor de la palanca se encuentran grabado 3 números: . 30… etc.. lo que equivale al lg. En esta posición la balanza se encuentra frenada y la iluminación apagada. Botón para la graduación de la precisión del indicador digital :Tambien denominado botón micrométrico. Hacia la derecha se encuentra grabado ½. Orientador para la dosificación : Debajo del indicador de las pesas de cambio se haya una pequeña escala graduada. 2. donde se van registrando en una doble escala. 3. ya explicado.…etc y el botón marcado con el #1.no debiendo poner ni quitar del platillo el objeto a pesar. 6. 30g. En esta posición se lee el resultado de la pesada. En el centro de las dos escalas se haya un indicador óptico. 4. 20. provista de una línea oscura que indica aproximadamente el peso. o sea: 10. por su lado izquierdo. hasta lograr que la 153 . 5. 20g.500 y 1000. El ubicado a la izquierda tiene grabado en su tapa un # l0 y el de la derecha un #1 . 3g.. de no ser así. Indicador de pesas de cambio :Consiste en una pequeña pantalla que se haya en la parte frontal de la base. el # 1. Palanca de retención :Es una pieza rígida de forma lanceolada (como la punta de una lanza) que se encuentra articulada por su extremo más grueso. lo cual se va registrando en el contador o indicador de pesas de cambios que se haya en el lado derecho de la base. haga girar en uno u otro sentido'los tornillos de la base de la balanza. . estando provisto de una tapa. Lo que equivale a 10g. Se encuentran ubicados en la parte frontal de la base. . 2g. Al ser girados hacia la derecha van colocando las pesas o al ser girados hacia la izquierda las levantan. produce el cambio de pesas de l en l o sea: l.) en su periferia. En esta posición se puede leer el peso aproximado en gramos en la escala proyectada. Botones de ajuste de las pesas de cambio : Son dos. Verifique que la balanza este debidamente nivelada. Funcionamiento Acciones previas l. En la parte superior el "0". Hacia la izquierda.El botón marcado con el # 10. 7.el ajuste de la compensación óptica de tara. el peso originado por el accionar de los botones de ajustes de las pesas de cambio.

. 2. haciendo girar el botón para la graduación de la precisión. PESADA 1.burbuja de aire del nivel de agua quede ubicada exactamente en el centro del círculo concéntrico. 3. Haga girar la palanca de retención hacia el "0".Gire hacia la derecha gradualmente el botón de ajuste de las pesas que se encuentra del lado izquierdo (marcado con el # 10) y vaya observando simultáneamente la escala del indicador de la izquierda hasta que aparezca un signo menos (-) o se trabe el avance .Retrase la escala a "0"haciendo girar el botón de compensación de tara. los botones de ajuste de las pesas hasta situar la escala en "00"(de esta manera queda anulado el peso del recipiente (tara) .Abra la ventana lateral y coloque sobre la superficie del platillo el recipiente vacio (tara) donde se va a depositar el material a pesar.Gire la palanca de retención hacia el # 1 y deje oscilar la escala. haga girar los botones de ajuste de las pesas de cambio y el botón para la graduación de precisión . . . Conecte la balanza a la red eléctrica para propiciar su funcionamiento e iluminación. incluyendo el encendido del bombillo piloto. Por ejemplo: si la escala se detiene en 5g. en contra de las manecillas del reloj hasta que marquen "00". en contra de las manecillas del reloj hasta hacer coincidir la letra "T": con la línea de referencia. retroceda hasta 40g. Haga coincidir la marca índice con la raya "00" proyectada. que se encuentra en la parte superior.Proceda igualmente con el botón del ajuste a "0".Cierre la ventana de la balanza. lo que dará lugar a un peso total de 44g. . 2. Repita la operación con el botón de la derecha (marcado con el # l). En este momento la balanza está frenada y la iluminación apagada. retroceda una unidad o sea hasta 4g.Haga girar el botón para el ajuste de compensación de tara. Si el indicador de pesas de la izquierda y el contador micrométrico de la derecha no están marcando respectivamente "00"..Haga girar en contra de las manecillas del reloj. Compensación de tara . Mueva lentamente la palanca de retención hacia el # l. La balanza se iluminará y proyectará la escala numérica. por ejemplo: si la escala marcó 50g.Girar finalmente la palanca de retención hasta el "0" 154 . . Detenga la rotación y proceda a girar el botón una graduación hacia atrás .Gire la palanca de retención en dirección a ½ (semiretención) . . Ajuste al punto cero l. .

82 : Lectura de una balanza analítica eléctrica 155 .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital. Fig.Cerciorese de que la palanca de retención esté en "0" .Poner nuevamente todos los elementos de mando en "0" . el peso será el siguiente .Leer el resultado.Haga girar la palanca de retención hacia el "0"para retener la balanza y seguidamente soltar lentamente la retención haciendo girar la palanca hacia el # 1 .Haga girar hacia atrás el botón para la graduación de la precisión del indicador digital hasta hacer coincidir la placa mate del indicador óptico con la raya proyectada. 42. utilizando los botones de ajuste de las pesas de cambio.Depositar el producto a pesar en el interior del recipiente y cerrar la ventana. el indicador digital marca 20 y el contador micrométrico de la derecha marca l4.Girar la palanca de retención hasta ½ (semi retenida) durante la preselección del peso . Por ejemplo. abrir la ventana y extraer el material ya pesado.2014 g.accionando el botón para hacerlo coincidir con la raya proyectada. . .hasta que la escala quede inmóvil y el trazo inmediato inferior se encuentre exactamente en la rendija de la horquilla índice. . Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la pesada. si el indicador de pesas de cambio registra 42g . Al mismo tiempo el contador micrométrico registrará las dos últimas cifras del resultado de la apesada en la escala de la derecha del indicador de pesas de cambio.Colocar la palanca de retención en "0".Proceda igual que para determinar el peso de la tara.DETERMINACIÓN DEL PESO . . .

2. La dificultad que presenta. 4. Este tipo de balanza tiene un alto grado de precisión. lo cual no puede ser resuelto internamente por el personal del laboratorio experimentado. Argumente por que causa los platillos deben estar limpios? 11. es cuando se produce algún desperfecto. colocar el material a pesar sobre un platillo externo. 7.BALANZA ANALITICA DIGITAL Fig. ¿En que orden se deben colocar las pesas sobre el platillo? 9. ¿Cuál es la función de la cuchilla de la balanza de precisión 13. Explique en que consiste el principio funcional de las balanzas ¿ A que denominamos pesas ¿ ¿Cual es el rango de pesadas de una balanza granataria? ¿Cuántos tipos de balanzas granatarias Ud. CUESTIONARIO 1. 83 : Balanza analítica digital La balanza analítica digital simplifica todas las operaciones explicadas a los largo de este capítulo. 3. ¿Con que objetivo se utilizan las balanzas de precisión? 12. accionar un botón y el peso podrá observarse digitalizado en una pequeña pantalla. 10. requiriendose de un servicio especializado. 6. Con que objetiovo se debe subir y fijar la cruz de la balanza? 156 . ya que basta con conectarla a la red eléctrica. debe efectuar para realizar una pesada en una balanza granataria de un solo platillo? 8. Explique por que causa las pesas se deben tomar con una pinza de disección y no con la mano. 5. conoce? ¿Qué se entiende por peso de tara? ¿A que denominamos fiel de la balanza? Describa en orden cronológicos que Ud.

Diga lo que usted sepa en relación con la balanza analítica digital. realiza la depreciación del peso de tara en una balanza de precisión elaéctrica.como Ud. ¿Cómo se colocan las pesas en la balanza de precisión eléctrica? 19. regula el nivel de una balanza de porecisión 17. realiza el ajuste al punto cero. efectua una pesada con una balanza de precisión mecánica. ¿Cómo Ud. Explique como Ud. L6. 157 .14. 20. ¿Cómo Ud. Describa paso a paso como usted determina el peo de un objeto en una balanza de presición elaéctrica 22. Describa el orden cronológico. Explique lo que indican las tres posiciones que tiene la palanca de retención. 18.con una balanza de precisión eléctrica? 21. Explique las causas por lo que las balanzas de precisión deben estar en el interior de una urna 15.

158 . provistos de uno o dos botones de control que se utilizan para accionarlos o detenerlos. eléctricos o de cuerda. DIFERENTES TIPOS Relojes Se emplean dos tipos de relojes: los cronómetros y los de intervalo. temperatura o densidad. Cronómetros Son relojes manuales. INSTRUMENTOS. caracterizándose por hacer sonar una alarma cuando concluye el tiempo previsto. b) Reloj de intervalo. Relojes de intervalos Estructuralmente son similares a un reloj despertador doméstico y al igual que los cronómetros pueden ser accionados por energía eléctrica o cuerda.CAPÍTULO 11 INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN NO VOLUMÉTRICOS INTRODUCCIÓN Los instrumentos de medición no volumétricos se emplean en las investigaciones de laboratorio para medir específicamente magnitudes de tiempo. Empleo: para medir el tiempo en minutos y/o segundos. 84: Relojes: a) Cronómetros. Fig.

Termómetro clínico: En este tipo de termómetro el reservorio se encuentra lleno de mercurio. etc. por lo que hay que "sacudirlos" para que se concentre nuevamente en el reservorio. Debido a que el capilar que forma la columna indicadora está unido al reservorio por una especie de sifa en forma de "S" cuando la columna de mercurio alcanza el grado máximo. denominado columna indicadora. haciendo que se detenga automáticamente su funcionamiento al concluir el período de tiempo en que fue ajustado. rotor. lleno de un producto químico dilatable por el calor. provisto de una escala impresa en grados Celsius (ºC y/o grados Fahrenheit º F). 1. Empleo: para medir el tiempo en horas y minutos. ya sea en grados Celsius o Fahrenheit. Al disminuir su intensidad se mantendrá indicando ese valor. más estrecho está ocupado por un bulbo. Al detenerse se confrontará con la escala para determinar el grado de calor. como por ejemplo. en correspondencia con la exposición al calor a que ha sido sometido. 85: Termómetros. el producto químico que contiene se dilata y asciende por el capilar. Diferentes tipos de termómetros Se utilizan dos tipos de termómetros: el clínico y el químico. paralelamente a la escala. Este bulbo se continúa con un fino capilar ubicado a todo lo largo del termómetro. Los termómetros empleados en el laboratorio consisten en un tubo de vidrio de paredes gruesas de longitud y diámetro variable.Este tipo de reloj se encuentra tambien articulado en algunos equipos de laboratorio. Cuando el bulbo es expuesto al calor. Termómetros Fig. generalmente. Centrífuga. 159 . y el posterior. Su extremo anterior está sellado como un ámpula.

encontrándose sellado como un ámpula en su extremo distal. que son: la Kelvin y la Rankine. el autoclave. Este tipo de termómetro se encuentra insertado en los equipos termoregulados como: el horno. Termómetro químico: La estructura de este tipo de termómetro es similar a la del termómetro clínico. etc. Estructura Fig.De grados Fahrenheit a Celsius (ºF-32). en el capilar en correspondencia con las oscilaciones de temperatura. Por ejemplo: 3200C+273=3020K Para convertir grados Fahrenheit a grados Rankine. en g/cm3 o en g/mL es numéricamente igual a sus densidades. se procede de igual manera. 1. Mide aproximadamente algo más de un tercio de la longitud total del densímetro. con la diferencia que generalmente tiene una mayor longitud y la escala de temperatura es de un rango mucho mayor. Otro aspecto que lo distingue del clínico es que al carecer de la sifa. El peso específico es la relación entre el peso de una sustancia con respecto al peso de un volumen igual de una sustancia de referencia. la incubadora. pero empleando la constante 460. Para convertir grados Celsius en grados Kelvin basta con adicionar la constante 273 a los grados Celsius obtenidos. la parte superior consiste en un fino tubo de vidrio. Como la densidad del agua es de 1.555=ºC . que usualmente es el agua. ascenderá o descenderá.8)+32=ºF Existen otras dos escalas para medir la temperatura.De grados Celsius a Fahrenheit (ºC. estando estructurados por tres partes diferentes entre sí.0g/mL a 4ºC.2. En lugar de mercurio el reservorio de estos termómetros está lleno de alcohol o xilol teñidos. alargado y cilíndrico. la columna del alcohol o xilol. 86: Densímetro. teniendo impreso a todo lo largo una escala graduada 160 . Para convertir temperaturas de una escala a otra se procede de l siguiente manera: . 0. Densímetros Son instrumentos que se emplean para medir la densidad o peso específico de soluciones compuestas por diferentes solutos y solventes. pudiendo tener una estructura diferente a l explicada. el peso específico de los líquidos. Los densímetros son tubos de vidrio que miden de 15 a 20 cm de largo. pero basada en el mismo principio. ya explicada.

5. 11. ¿Cómo se denominan los dos tipos de relojes empleados para el trabajo de laboratorio? ¿Cuál es el principio funcional de cada uno de los relojes? Describa la estructura de un termómetro clínico y uno químico. 6. 10. La escala va descendiendo dividida en partes iguales y el valor mayor. 7. que proporcionan peso al densímetro. 2.060 en los urodensímetros. para propiciar que se mantenga en posición vertical cuando sea introducido en el líquido al que se le va a medir la densidad. como por ejemplo: 1. La porción media es más gruesa y de mayor longitud. 4. ¿Con qué objetivo el bulbo redondeado que se encuentra en la parte inferior de los densímetros se encuentra lleno de municiones? Describa el procedimiento a seguir para determinar la densidad de un líquido? 161 . En su extremo posterior el bulbo se estrecha y a continuación se dilata. CUESTIONARIO 1. Deposite en una probeta de tamaño apropiado (preferentemente no graduada) la solución a la que se le desea medir la densidad y colóquela sobre una superficie nivelada. lleno de bolitas de metal. 12. 3. no entre en contacto con las paredes de la probeta. ¿Cómo se denomina el producto químico que se utiliza en cada tipo de termómetro para llenar sus respectivos reservorios? Especifique las diferencias funcionales entre el termómetro clínico y el químico.000 (que es la densidad del agua). en dependencia del tipo de densímetro de que se trate. para lo cual debe observar en qué graduación de la escala se encuentra el nivel de la solución. 2. que se utilizan para medir la densidad de la orina. 4.. cuidando de no incurrir en el error de paralelaje.en cuya parte superior se puede observar el número 1. Haga girar el densímetro. semejantes a municiones. Procedimiento 1. ¿Cómo usted debe proceder para convertir grados centígrados en grados Fahrenheit y viceversa? ¿Para qué se utilizan los densímetros en el laboratorio? ¿Qué usted entiende por peso específico? ¿Cuál es la densidad del agua? Describa la estructura de un densímetro . Espere a que se detenga el movimiento de rotación y proceda a realizar la lectura. colocándolo en el centro del diámetro de la probeta en posición vertical. consistiendo básicamente en un bulbo lleno de aire. 3. variará. mediante el accionar de los dedos y cerciorarse de que al rotar. 8. Tome el densímetro específico por la parte superior con los dedos índice y pulgar e introdúzcalo en la solución. 9. formando un bulbo pequeño y redondeado.

INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y MATERIALES DE CURACIONES INTRODUCCION Bajo el término de accesorios. Además de facilitar el acceso al tipo de cristalería con que se esté trabajando o el ordenamiento secuencial de las muestras. se agrupan diversos objetos. por donde se coloca la cristalería en cuestión. los orificios de las gradillas también serán de tamaño variable. provistas de perforaciones. fábricadas de metal. insertándolos en los orificios boca abajo. mientras que determinados materiales de curaciones son empleados para diversos usos. Generalmente son rectángulares y están estructuradas por dos o tres planchas. ACCESORIOS Entre los accesorios que se utilizan con mayor frecuencia. madera o plástico.CAPÍTULO 12 ACCCESORIOS. lo que permite seleccionar la adecuada para cada tipo de tubo. 162 . Teniendo en cuenta que los tubos de ensayo tienen diámetros diferentes. 87: Gradilla Gradillas Son soportes diseñados para la colocación de tubos de ensayo u otros tipos de cristalería. en posición horizontal. se encuentran los siguientes: Fig. las gradillas factibilizan además el que se puedan escurrir los tubos después de ser fregados. separadas entre sí. utilizados con carácter auxiliar en el trabajo de laboratorio al igual que algunos instrumentales quirúrgicos.

Al igual que las gradillas.Cestos Fig. no compartimentados. lo que le proporciona estabilidad. que se utiliza para colocar pinzas de sujección o aros metálicos. los cestos son soportes. sobre la que se erige una varilla recta de hierro de 1. Soporte universal Fig. 89: Soporte universal Está constituido por una base metálica sólida y pesada. que se utilizan para la colocación de tubos de ensayo y otros tipos de cristalería. Generalmente son cilíndricos o cuadrangulares y están fabricados de alambres entrelazados o chapas de metal inoxidable perforado. 88: Cesto metálico. 163 .5cm de diámetro. Los cestos son utilizados para depositar la cristalería para su secado o esterilización.

Otro tipo de pinzas igualmente empleadas para el manejo de objetos pequeños como las pesas y los diversos especímenes son de acero inoxidable. formado por tres varillas metálicas de igual longitud. Se trata de un accesorio metálico. b) Pinza de bureta. el principio de su funcionamiento es similar al de un palito de tendedera. Cuando el trípode es colocado sobre la mesa de trabajo. La pinza de Mohr se utiliza para obstruir el paso de un líquido que fluya a través de una manguera de goma flexible de más o menos un cm de diámetro. Entre las más empleadas se encuentran: los modelos de tres dedos. diseñadas para fijarlas a la varilla de fierro del soporte universal y otras para operarlas manualmente. algunas de las cuales. los de vasos de precipitado.Pinzas de sujección Fig. c) Pinza de Mohr. teniendo la punta curva o recta. En ambos casos. Trípode Fig. es decir. así como las pinzas para tubos de ensayo y la pinza de Mohr. las respectivas pinzas se abren. 91: Trípode. los de bureta. Se fabrican diferentes tipos de pinzas de sujección. y cuando se retira la presión se cierran. podemos percatarnos de que las patas no quedan en posición 164 . estas dos últimas de utilización manual. cuando se aprietan con ayuda de los dedos índice y pulgar. 90: Pinzas de sujeción: a) Pinza de tres dedos. separadas entre sí a una misma distancia y soldadas por su extremo superior a un aro también de metal.

165 . ocasionalmente se requiere del empleo de diferentes agujas. con los extremos que contactan con la mesa más separados que los que están soldados en el aro. directamente a la llama de mechero. que posee en su centro una circunferencia de unos 10 cm de diámetro de amianto fundido en la malla. b) Tijeras. para lo cual se coloca sobre el aro del trípode. 92: Malla de amianto Es una malla plana de alambre entrejido. Esta malla se utiliza cuando se va a calentar un líquido contenido en frascos de vidrio. Instrumental quirúrgico Fig. 93: Instrumental quirúrgico: a) Bisturí. Malla de amianto Fig. y sobre ésta el frasco de cristal. de manera que el recipiente queda aislado de la llama directa y el calor se distribuye uniformemente a través del amianto. c) Pinzas de disección.vertical. sino ligeramente oblicuas. se realiza la disección de determinados especímenes de experimentación. similar a un colador. bisturí y tijeras de disección. así como de charolas. d) Agujas de disección Además de los trocars y las agujas hipodérmicas de diferentes calibres en el trabajo de microbiología. de forma cuadrangular o circular que mide unos 15cm2 o de diámetro. una especie de bandeja donde.

3. Gasa quirúrgica Se utiliza para la preparación de torúndas que posteriormente son empaquetadas en papel de 3 a 5 unidades para ser esterilizadas en autoclave antes de su empleo. 4. 2. de madera o plástico. 166 . pueden emplearse para extraer medio de cultivo de sus frascos. como por ejemplo: heces fecales. se utilizan para deprimir la lengua en la toma de muestras de exudado faríngeo y también. Los depresores. para efectuar la pesada o como sustituto de los aplicadores en las preparaciones de heces en láminas para examen parasitológico. se emplean también para la toma de algunas muestras. 5. Aplicadores y depresores Los aplicadores. para su preparación en láminas destinadas a la investigación parasitológica.MATERIALES DE CURACIONES Entre los materiales de curaciones más empleados en el trabajo microbiológico. se encuentran los siguientes: 1. Algodón Gasa quirúrgica Aplicadores Depresores Soluciones y tinturas desinfectantes Algodón El algodón se utiliza para taponear la boca de los tubos y otras cristalerías que van a ser sometidas a un proceso de esterilización y conjuntamente con los aplicadores de madera en la confección de hisopos finos y gruesos. además de ser utilizados en la confección de hisopos.

3. 9.CUESTIONARIO 1. Describa la estructura y el material con que se fabrican las gradillas. 2. 8. ¿Para qué se utilizan materiales de curación en el laboratorio? 167 . ¿Para qué se utilizan los cestos? ¿Cuál es la finalidad utilitaria del soporte universal? Describa los diferentes tipos de pinzas de sujección que usted conozca. 6. 10. Especifique los diferentes usos que se les dan a las gradillas en el laboratorio. 7. Describa la estructura de los cestos y el material con que se fabrica. 5. Describa la estructura de los trípodes. 4. ¿Para qué se utiliza la malla de amianto? Mencione los instrumentales quirúrgicos que se utilizan en el laboratorio.

Además de las fuentes ya referidas se obtienen del paciente muestras de los productos patológicos. que obtenemos del paciente o portador. sin embargo determinados factores y procederes como: la demora en realizar la siembra de la muestra. pueden en algunos casos afectar la viabilidad del germen y en otros su cuantía. Visto así. etc. MUESTRA.CAPÍTULO 13 TOMA DE MUESTRAS INTRODUCCIÓN El diagnóstico microbiológico de laboratorio. que propicia la identificación directa o indirecta de los agentes casuales de la infección o enfermedad infecciosa y en determinadas investigaciones información complementaria acerca de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en cuestión a la acción de los fármacos antimicrobianos. resulta suficiente para considerarla como una muestra representativa. Muestra representativa Para que el diagnóstico de laboratorio sea fidedigno. además de propiciar contaminaciones que en su conjunto afectan la calidad de los resultados al perder la muestra representativa. pudiera pensarse que esta paridad. que son producidos por algunos microorganismos en su interacción con los tejidos. etc. tejidos. lo cual aporta al médico de asistencia un dato valioso que le permite indicar un tratamiento antimicrobiano mucho más eficaz. que las especies patógenas que se encuentran en los líquidos corporales.. heces. 168 . CONCEPTO Se denomina MUESTRA a la porción o volumen de: líquidos corporales. orina. es indispensable entre otros requisitos. etc. como por ejemplo: sangre. del paciente sean las mismas que contiene la muestra y su cuantía relativamente proporcional. material excrementicio. la insuficiente o excesiva cantidad de muestras a utilizar para el cultivo. la mala calidad de su obtención y la no observancia de las precauciones de asepsia. como el esputo y el pus. donde presuntivamente se encuentran microorganismos patógenos o los anticuerpos inducidos por sus componentes antigénicos. los inadecuados métodos de conservación. se sustenta en el estudio de las muestras obtenidas del paciente o portador. exudados.

para conservar muestras de orina para el urocultivo. a temperatura ambiente. por haberse tomado en lugares distantes. Fundamento: mantener a los microorganismos en una temperatura similar a la corporal. En este caso la pérdida de representatividad sería por exceso y no por defecto como suele suceder en los ejemplos anteriores. Ejemplo. larvas o huevos de helmintos. debido a que son muy reductores. lo que permite identificarlos mediante la observación de su morfología. que favorecen su desarrollo y multiplicación. ocurriendo similar situación con algunos virus. el proceder a seguir dependerá de la muestra de que se trate. como nutrientes. Cuando esto no sea posible. caracterizándose por inhibir las reacciones enzimáticas autodestructoras y aminorar los efectos de la oxidación. hidratos de carbono y otros residuos minerales presentes en la muestra son utilizados por la mayoría de las especies. para la siembra de exudados caracterizándose por mantener la viabilidad del microorganismo. pero al mismo tiempo sin favorecer significativamente su desarrollo. Ejemplo: para la conservación de muestras que contienen protozoarios. que no sobreviven mas allá de tres horas si la muestra en que se encuentra no es inoculada antes de ese tiempo en los medios apropiados. por ejemplo: la Neisseria meningitidis (meningococos) que con elevada frecuencia se aísla en la muestra de L.C. Los medios de transporte se emplean generalmente. Fundamento: mata a los microorganismos sin deteriorarlos significativamente. Fundamento: el frío enlentece el proceso de multiplicación. se siembran en este tipo de medio y se envían a la mayor brevedad posible. por lo que el frío y la temperatura ambiente provocan su lisis.Demora en realizar la siembra En principio todas las muestras deben ser sembradas lo antes posible en los medios de cultivo que favorezcan el desarrollo de las especies patógenas que presuntivamente contienen procediendo a su inmediata y adecuada incubación. que comúnmente están presentes en la orina. Cuando la muestra no puede ser sembrada de inmediato. los componentes nitrogenados. c) Formol al 10 %. como los Mixovirus y Hirpesvirus. al laboratorio de referencia. d) Medios de transporte. 169 . En cambio . Métodos de conservación a) Refrigeración a 4 0C (en las parrillas). con la muestra de orina (urocultivo) sucede todo lo contrario.R es muy sensible a los cambios de temperatura. b) Incubación a 370 C.

pero cuando la enfermedad lleva unas dos semanas de evolución el microorganismo emigra al intestino. al levantarse. por lo que en ese momento lo adecuado es obtener muestras de heces fecales para coprocultivo. se recomienda esperar el momento del pico febril. transcurre por una evolución similar en los primeros 10 días (periodo de leptospiremia) la leptospiras se encuentran en sangre y posteriormente invaden diferentes vísceras y el sistema renal.Cantidad de muestras a tomar En algunas determinaciones. en ayunas. Si el volumen de sangre fuera menor que el indicado. La lectospirosis.R (bacilos ácido alcohol resistentes) requiriéndose no menos de 2ml. el momento más adecuado. el agente causal. debe ser recogido por el paciente. Cantidades menores o mayores son objetables. lo que traería como consecuencia la formación indeseable de coágulos de sangre que interfieren delimitan las manifestaciones de crecimiento (turbidez). Por ejemplo: en la fase inicial de la fiebre tifoidea. a de tenerse en cuenta en algunas ocasiones el momento idóneo y en general delimitar con precisión el área anatómica para su obtención. la Samonella tiphy se encuentra en la circulación sanguínea por lo que resulta procedente tomar muestra de sangre para hemocultivo. como por ejemplo: el hemocultivo. Momento idóneo En algunas muestras como el esputo. que es el momento en que mayor cantidad de expectoración se encuentra acumulada y en otras muestras. que es cuando se encuentra en sangre la mayor cantidad de microorganismos. la sangre para hemocultivo o gota gruesa.A. resultaría insuficiente. la cantidad de anticoagulante que se adiciona al medio de cultivo. va a depender del cuadro clínico del paciente y del tiempo de evolución de la enfermedad. reducirá proporcionalmente la expresión de crecimiento en los cultivos y si fuera mayor.A. está normado que la cantidad de sangre total a sembrar sea de un 10 % en relación con el volumen de medio de cultivo a utilizar. ya que afectan la calidad de los resultados. Otro ejemplo donde la cantidad de muestra a emplear. como por ejemplo. (leptospiuria) debiendo 170 . resulta indispensable. ya que por las características mucoides de este producto patológico los bacilos se encuentran distribuidos desigualmente en la muestra. En otras ocasiones. Calidad de la muestra Para que la muestra sea de buena calidad. es en la de esputo para investigar B.

en el esputo. con alcohol etílico al 70 % con yodo. la información de un diagnóstico erróneo. para evitar que estos contaminen la muestra y se desarrollen en el cultivo. del sitio donde se va a realizar la punción. con implicaciones para la evolución del paciente y el cuestionamiento sobre la calidad del servicio. lesiones en la piel. Las deficiencias en este sentido. Y lo que puede ser mas perjudicial. Demora en la información del diagnóstico al médico de asistencia para iniciar o modificar el tratamiento.o. El cumplimiento de estos requisitos. L. 171 .R. será la mas evocadora de contener la mayor cantidad de microorganismos. no la saliva y en las muestras de heces fecales las porciones mucosanguinolentas. que el diagnóstico de laboratorio se corresponda con los agentes infecciosos. creando confusión en el momento de establecer el diagnóstico. 4. por ejemplo: para obtener muestras de sangre para hemocultivo. que tenia el enfermo o portador en el momento en que fue obtenida la muestra. favorece. hisopado o raspado. la porción que se tomará para el cultivo. 3. traen como consecuencia una serie de contratiempo como son: 1. donde la mayoría de los microorganismos están muertos.obtenerse en la primera fase sangre para hemocultivo y en el segundo momento orina para urocultivo. Precauciones de asepsia Son las acciones encaminadas a evitar que la muestra se contamine durante su obtención. se utilizará la parte mas purulenta. se debe delimitar el área exacta para su obtención por ejemplo: la toma de muestra de lesiones purulentas debe realizarse en la región subyacente y no del pus que se encuentra en el orificio de salida. Delimitación del área anatómica Una vez determinado en que órgano o tejido se va a realizar la toma de muestra. Afectaciones económicas por gastos de materiales e insumos. por ejemplo. Molestias innecesarias al paciente que debe someterse nuevamente a la obtención de la muestra. etc. Cuando la muestra ha sido recolectada por el paciente. 2. con especies microbianas ajenas al proceso infeccioso.C. de la microbiota residente. Se debe remover previamente los m.

Suspender cualquier tratamiento con antibióticos 48 horas antes de la toma de la muestra. fibroso. Suspender cualquier tratamiento local con medicamentos antimicrobianos. lo cual favorecerá. solicitándole que abra la boca y emita un ¡ahhh! sostenido. Instrucciones específicas Variarán en dependencia del tipo de muestra de que se trate. que en el momento de su obtención. la cantidad de microorganismos sea suficiente para que puedan ser observados en los exámenes microscópicos y aislados en los cultivos. DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS Exudados Concepto: es la materia mas o menos fluida salida de los vasos pequeños o capilares por exudación. colirios. gotas nasales. Diferentes tipos de exudados a. Las instrucciones son de dos tipos: generales y específicas. Se clasifican en: albuminoso. Procedimiento: estando el paciente sentado.INSTRUCCIONES AL PACIENTE El paciente que tiene indicado uno o varios exámenes microbiológicos debe ser instruido por su médico de asistencia o por el personal del laboratorio a los efectos de que recojan la muestra con la calidad requerida. Al menos 12 horas antes de la toma de la muestra. inclínele ligeramente la cabeza hacia atrás. o concurran al laboratorio en condiciones favorables para su obtención. Exudado faríngeo: Indicaciones específicas: antes de concurrir al laboratorio el paciente debe realizar el aseo matutino habitual. gargarismos etc. hemorrágico y seroso. Observe la zona faríngea con ayuda de una lámpara de cuello que proporcione 172 . óvulos. Instrucciones generales 1. 2. lociones etc. en los procesos inflamatorios y que se deposita en los intersticios de los tejidos o en la cavidad de una serosa.). tales como: productos tópicos (pomadas. para reducir la probabilidad de que la muestra se contamine con la microbiota normal.

los carrillos o la lengua y frótelo sobre cada región amigdalina y la pared posterior de la faringe. con la finalidad de detectar evidencias patológicas. marcada exudación o la presencia de anginas (placas de diferentes formas y tamaño. cuide igualmente de que no entre en contacto con la lengua. Con el dedo índice presione la base de la nariz. el hisopo podrá estar seco si la siembra se hace de inmediato. de color blanco o blanco grisáceo. situados en ese lugar. adheridas a las mucosas) Deprima la lengua con un depresor y con la otra mano introduzca el hisopo en la cavidad bucal. Procedimiento: al igual que para la toma del exudado faríngeo. 94: Toma de muestra de exudado faríngeo: a) Amígdalas. Si el médico presume que el paciente está infectado con Corynebacterium diphteriae (agente causal de la difteria) indicar al laboratorio. en caso contrario deberá humedeserse previamente en solución de glicerina. de manera que posibilite la obser173 . Al retirar el hisopo. como pueden ser: mucosas enrojecidas o edematosas. Fig. telurito e introducido después de la toma en medio de transporte para su conservación. en particular en las áreas con evidencias patológicas. el paciente debe estar sentado y con la cabeza ligeramente flexionada hacia atrás. b) Pared posterior de la faringe b) Exudado nasal: Indicaciones específicas: No instilarse ningún tipo de gotas nasales 12 horas antes de la toma de la muestra. labios u otra zona bucal. en cuyo caso la toma de muestra se hará levantando el borde de la angina y pasando el hisopo por debajo de la misma para contactar con los microorganismos diftéricos. cuidando de no tocar los labios. mediante una orden de análisis que se realice la investigación pertinente.una luz intensa.

vación de los dos orificios, para lo cual se auxiliará de una lámpara. Introduzca el hisopo en ambas fosas nasales, imprimiéndole movimientos de rotación en ambos sentidos, para facilitar la recogida de la secreción.

Fig. 95: Toma de muestra de exudado nasal.

c) Exudado nasofaríngeo: Indicaciones específicas: similar a las explicadas para exudado faríngeo y nasal. Procedimiento: para la toma del exudado nasofaríngeo, se utiliza un hisopo especial consistente en un alambre de cromo o acero inoxidable curvado en su extremo terminal. Después de observar la zona faríngea y las fosas nasales con buena iluminación se procede a introducir suavemente el hisopo por una de las fosas nasales hasta la nasofarínge. Si no fuera posible, introducir el hisopo por la cavidad bucal hasta la nasofarínge, con los mismos cuidados ya explicados en al toma del exudado faríngeo.

Fig. 96: Toma de muestra de exudado nasofaríngeo.

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d) Exudado ótico: Indicaciones específicas: no instilarse gotas óticas de ningún tipo, durante las 24 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de indicar al paciente que se siente, el técnico se ubicará por el lateral que corresponda al oído que será objeto de la toma de la muestra, procediendo a ladear ligeramente la cabeza del paciente para el lado opuesto, con una torúnda o algodón estéril humedecido en alcohol etílico al 70 %, limpiar el pabellón auricular, especialmente la entrada del orificio del conducto auditivo. Disponiendo de una buena iluminación, sujetará la oreja por la parte superior con ayuda d los dedos índice y pulgar, imprimiéndole un movimiento hacia arriba y hacia atrás, lo cual favorecerá la observación del conducto auditivo externo. Manteniendo la oreja en esa posición, introducir el hisopo suavemente en el conducto, imprimiéndole movimientos de rotación con el propósito de recoger la mayor cantidad posible de secreción (otorrea)

Fig. 97: Toma de muestra de exudado ótico: a) Manipulación del pabellón auricular; b) Introducción del hisopo en el conducto auditivo externo

e) Exudado conjuntival: Indicaciones específicas: durante las 48 horas precedentes a la toma de la muestra, no irrigar los ojos con colirios, pomadas oftalmológicas ni anestésicos conjuntivales que tienden a desalojar a los microorganismos del saco conjuntival. La noche anterior, el paciente se debe limpiar el ojo afectado con suero fisiológico o agua previamente hervida. Se puede tapar o no, el ojo en cuestión con un apósito estéril fijado con esparadrapo, ya que se ha demostrado que no influye en los resultados la contaminación ambiental, la mañana en que concurra al laboratorio para que le sea tomada la muestra no debe realizarse nigun lavado facial. Procedimiento: para la toma de muestra del exudado conjuntival, se puede utilizar un hisopo de algodón fino (estéril) o un asa de platino empleada exclusivamente para ese fin, esterilizada en autoclave. 175

Indicar al paciente que se siente y retirar el apósito, con ayuda del dedo índice baje el párpado inferior y proceda de inmediato e introducir con sumo cuidado el hisopo o el asa, evitando tocar las pestañas, o el margen de los párpados, hasta la superficie del ángulo interno (próximo al lagrimal) del "culde- sac" fondo del saco inferior deslizando suavemente el instrumento en dirección al ángulo externo del ojo. También se pueden tomar muestras de las márgenes parpebrales (membranas que tapizan los párpados. En el caso de que el paciente presente furúnculos de las glándulas pilosebáceas anexas a una pestaña (orzuelo) se procederá a obtener un poco de pus, mediante la punción con una lanceta estéril.

Fig. 98: Toma de muestra de exudado conjuntival

f) Exudado uretral: Indicaciones específicas: El o la paciente deben de abstenerse de orinar durante las 4 horas que preceden a toma de la muestra, para evitar que los microorganismos sean arrastrados mecánicamente durante la micción. Debiendo concurrir al laboratorio sin previo aseo matutino de los genitales externos. En mujeres: Se le indicará que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste bocarriba en una camilla ginecológica con estribos, adoptando una posición ginecológica, de manera que los glúteos queden muy próximos al extremo de la camilla, en estas condiciones con la palma de la mano hacia arriba se introduce en la vagina el dedo índice el cual se arquea hacia arriba para comprimir la uretra a través de la sínfisis que le separa de la vagina desplazar el dedo, hacia atrás, sin dejar de comprimir la sinfigis para inducir la salida del pus por la uretra. Conjuntamente se introduce el hisopo, 1cm en el interior de la uretra, haciéndolo girar suavemente para que recoja la mayor cantidad posible del exudado. 176

Fig. 99: Toma de muestra de exudado uretral en mujeres.

En los hombres: La muestra se tomará permaneciendo el paciente parado. Se le indicará manualmente el prepucio hacia atrás y a continuación haga presión hacia delante del pene con el objetivo de "ordeñar" la uretra. Seguidamente se le introduce unos mm el asa de platino estéril en la uretra por unos segundos retirándola finalmente.

Fig. 100: Toma de muestra de exudado uretral en hombres.

g. Exudado vaginal. Indicaciones específicas: Suspender cualquier terapéutica por vía local 2 o 3 días antes de que le sea tomada la muestra. Debe concurrir al laboratorio sin previo aso vaginal desde la noche anterior, aunque puede, efectuar lavado matutino de genitales eternos. Se recomienda no realizar coito vaginal en ese periodo de tiempo. Procedimiento: Se le indicará a la paciente que se desnude de la cintura hacia abajo y se acueste en posición de cúbito supino (boca arriba) sobre una camilla con estribos, adoptando una posición ginecológica (las corvas sobre los estribos y los glúteos muy próximos al borde de la camilla. Antes de proceder a la toma de la muestra se hará una inspección de la región vulvar con el objetivo de detectar inflamación o erosión en las glándulas anexas Skéne o Bartholin, la primera, dos pequeñas glándulas situadas dentro del meato de la uretra femenina, consideradas homologas de las vesículas seminales y la segunda, situadas a ambos laterales del 177

orificio vaginal, cuya secreción tiene la función de lubricar el área para facilitar la penetración del pene. Con el empleo de una torúnda estéril humedecida en alcohol al 70 %, sujeta por una pinza de disección, desinfectar la región vulvar. Seguidamente se procederá a insertar un espéculo estéril de tamaño conveniente sin lubricantes, ya que puede ser tóxico para algunos microorganismos.

Fig. 101: Toma de muestra de exudado vaginal. Paciente en posición ginecológica con el espéculo incertado.

En los casos de niñas se realiza un exudado vulvar y en pacientes vírgenes se realiza también un exudado vulvar y si el orificio del himen lo permite se puede emplear un espéculo pequeño. En los casos de pacientes con cistocele (protución de vejiga en la vagina) la incertación del espéculo debe ser realizada por un personal con experiencia. A continuación se procede a introducir un hisopo estéril hasta el fondo del saco posterior de la vagina el cual será embebido con el exudado. Se recomienda utilizar hisopos con algodón sintético, ya que los ácidos grasos presentes en algodón vegetal puede resultar tóxico para algunos microorganismos. Además del hisopo se puede emplear para obtener la muestra una pipeta de Pasteur estéril con un dispositivo en su parte posterior como el que tienen los goteros para factibilizar la aspiración del exudado. Al momento de tomar la muestra se realiza la medición del pH al exudado. h) Exudado endocervical.Indicaciones específicas: Abstenerse de realizar el coito durante las 12 horas precedentes a la toma de la muestra. Procedimiento. Después de colocada la paciente en posición ginecológica e insertado el especulo (sin lubricantes) en forma similar que para exuda178

la región sub . por lo que. que se hace comprimir suavemente sobre el cervix. son los siguientes. son fluidos serosos. sujeta por una pinza de disección. imprimiéndole movimientos de rotación durante varios segundos para que se embeba en el exudado.do vaginal. por tratarse de espacios anatómicos cerrados. así como de células leucocitarias. portadores de compuestos orgánicos e inorgánicos. REGION ANATOMICA DONDE SE LOCALIZA Canal raquídeo (espacio delimitado por las membranas sub aracnoideas o meníngeas. Cuadro 7: Localización de los líquidos orgánicos DIFERENTES LIQUIDOS L. el aislamiento de microorganismos en cualquiera de ellos es evocador de infección.R. Los líquidos orgánicos que con regularidad se investigan en los laboratorios de microbiología clínica. que recubren la médula espinal. se procederá a retirar el moco cervical del cuello del útero con ayuda de una torunda estéril. Líquidos orgánicos Concepto: Los líquidos orgánicos.C. Seguidamente se introduce un hisopo estéril. Son producidos por las membranas que recubren los diferentes órganos.occipital y los ventrículos cerebrales Delimitado dentro del espacio que separa las dos membranas pleurales que recubren el tejido pulmonar Se encuentra entre las sinovias o membranas que recubren los tendones Se encuentra entre las membranas peritoneales que delimiten al abdomen TOMA DE MUESTRA (por punción) Lumbar PLEURAL Intercostal SINOVIAL Articular ASCITICO Peritoneal 179 . estos líquidos son normalmente estériles.

insertar una jeringuilla y succionar el líquido. 180 - . lo que propiciará que fluya el líquido a través de la cánula o si la punción se realiza con aguja. donde se va a efectuar la punción.Cuadro 8. con y sin anticoagulante (heparina) según se trate. transparente y viscoso Seroso SINOVIAL 2a3 ASCITICO 2a3 Uno con heparina Purulento Recolección de la muestras Serán tomadas por un especialista. Realizar la punción con trocar o aguja apropiada hasta donde se encuentra el líquido en cuestión. hemorrágico o satocrómico (amarillento) Turbio y purulento Turbio y purulento PLEURAL 2 a3 Uno con heparina Uno sin heparina Incoloro y transparente Amarillo claro. Procedimiento: Desinfectar con tiomersal (timerosal) u otro desinfectante apropiado el área de la piel. Recolectar el líquido en tubos de ensayo. previo riguroso lavado de manos y colocación asépticas de guantes quirúrgicos estériles.C. LÍQUIDOS CANTIDAD DISTRIBUCCIÓN ORGÁNICOS (ml) EN TUBOS ESTERILES L.R 3 a 10 3 ASPECTO XXX NORMAL PATOLÓGICO Incoloro y transparente TURBIO. Retirar el mandril del trocar. Datos para la obtención de las muestras de líquidos orgánicos y características de su aspecto.

para asegurarse de que la aguja se encuentre en el interior de la vena. Desinfecte la zona a puncionar. mediante jeringuilla de vidrio estéril y seca (que no esté caliente) a la cual se le acopla una aguja No. Extraiga la cantidad de sangre necesaria suelte 181 - . Procedimiento La sangre se obtendrá por venipunción. se procederá a verificar el pulso. Inserte la aguja en la piel adyacente paralelamente a la vena y hágala penetrar en el lumen. palpe el área y seleccione la vena mas prominente con ayuda de la inspección visual. un ligero cese de la resistencia indicará que la aguja ha penetrado en la vena. unos 5cm por debajo del sitio que puncionará y estire la piel hacia abajo con el pulgar con lo cual se inmovilizará la vena. en el momento que presente hipotermia. que contiene diversas sustancias nutritivas e inmunológicas. la sangre fluirá espontáneamente dentro de la jeringuilla. Después de estar la ligadura por encima del codo del paciente. pudiendo utilizarse igualmente jeringuillas y agujas estériles desechables. tome la jeringuilla de tal manera que el dedo índice quede colocado sobre el cabo de la aguja para guiarla durante su introducción en la vena. mecánicamente. Deje secar el alcohol y efectúe la punción. la jeringuilla acoplada a la aguja se colocan posteriormente en el interior de un tubo de ensayo de tamaño apropiado. solo eventualmente se procede a tomar la muestra. 20 estéril. Estando formada por elementos figurados como los hematies. primero con agua y jabón y químicamente después con tintura de yodo al 1 % en pacientes (no alérgicos) y posteriormente con alcohol etílico al 70 %. para comprobar que la circulación arterial no ha sido interrumpida. así como una parte líquida denominada plasma. Se le pedirá al paciente que abra y cierre la mano varias veces con el objetivo de inducir el aumento de la circulación y le llene las venas. después de comprobar el tiempo de caducidad.Sangre Concepto: La sangre es un líquido rojo que circula por las arterias. Indicaciones específicas La toma de muestra debe realizarse cuando el paciente presente fiebre superior a 38 C. venas y capilares. retire el émbolo. para ello solicite al paciente cerrar la mano y extender el brazo. leucocito y plaquetas. Con la mano opuesta sujete el antebrazo del paciente. En caso de que la presión de la vena sea baja.

pídale al paciente que abra la mano y presione la torunda o algodón por espacio de 2 a 3 minutos con el brazo doblado.Invierta el frasco inoculado. Cambie la aguja utilizada por otra estéril del mismo calibre. de manera que ejerzan la suficiente presión para que la sangre contenida en los capilares sea excluida. Está constituida por agua. y transparente de color ligeramente amarillento. 4 o 5 veces para que el anticoagulante que contiene el medio impida que se formen coágulos. depositándola en la lámina portaobjetos habilitada al efecto. Procedimiento: La muestra de linfa se obtiene específicamente de los lóbulos de las orejas y de los pliegues de la piel de los codos. Puncione la tapa perforable del frasco y empujando el embolo de la jeringuilla vierta un 10% de sangre en relación con el volumen del medio de cultivo empleado. Para sembrar la sangre. proceda a recoger con el borde del bisturí la linfa que emane. Indicaciones al paciente: Las generales. Retirando la jeringuilla con la aguja y el volumen de sangre sobrante. después de desinfectada la piel. Con el empleo de torundas o motas de algodón humedecidas en alcohol al 70 %. 182 . absténgase de palpar la vena seleccionada con los dedos.la ligadura y coloque una torunda o un pedazo de algodón seco sobre el sitio de la punción y saque la aguja. 3. desinfecte con alcohol etílico al 70 % la tapa perforable y flaméela. lo cual se evidenciará por un aclaramiento de la zona (zona de isquémia). fibrina y sales. albúmina. que llena los vasos linfáticos. pH alcalino y salobre. 2. 1. rápidamente. proceda del siguiente modo: 1. Observaciones: Durante el proceso de toma de muestra. desinfecte ambos lóbulos y los pliegues de la piel de cada codo. Con un bisturí haga una incisión de unos 5mm de largo por 2 mm de ancho y raspe la zona con su superficie. 3. Coloque una pinza en cada uno de los lóbulos. 2. Retire el círculo central de la retapa metálica del frasco que contiene el medio de cultivo. antes que la sangre infiltre el corte. 4. Linfa Concepto: La linfa es un líquido claro. Esta operación se debe realizar en ambos lóbulos y en los pliegues cutáneos de los dos codos.

equivalente a un 1/3 de un tabaco) y sí fueran sólidas unos 30 ml (una onza fluida) en un frasco limpio y seco. Si el examen de una muestra resulta negativo. 102: Toma de muestra de la linfa auricular: a) Colocación de la pinza en el lóbulo de la oreja. se debe realizar un examen seriado. algunas mediante la inducción con laxantes y otras. La primera muestra debe recogerse por defecación espontánea y las sucesivas. Indicaciones al paciente: las generales. por lo que el examen de varias muestras en periodos de tiempo diferentes aumentan las probabilidades de localizar e identificar la especie. En todos los casos las heces deben ser recién emitidas. sudor. orina. lágrimas) o producidos en el reservorio donde se han acumulado (heces. en el análisis de varias muestras (6 a 8) enviadas al laboratorio en días alternos. no correspondiéndose este resultado con el cuadro clínico.Fig. durante las cuales no aparecen sus elementos de diagnóstico. Procedimiento: En el caso de heces destinadas para examen parasitológico. consistente. Excreciones Concepto: Compuestos excretados por las glándulas (saliva. con el empleo del laxante (sulfato de magnesia) se logra evacuaciones de heces líquidas o al menos blandas que permiten detectar con 183 . b) Incisión con el bisturí en la zona isquémica.) Heces fecales Concepto: Material que se forma en el intestino básicamentea partir de los residuos del material ingerido no digerido. aunque existan en el tracto digestivo. etc. preferentemente incoloro y transparente. al igual que la primera de forma espontánea. Se indicará al paciente recoger 10 ó 20g de heces sólidas (aproximadamente del tamaño. provisto con tapa de rosca. sin vestigios de sustancias antisépticas. ya que en ocasiones los resultados negativos estando el paciente parasitado debido a que diversas especies presentan las llamadas fases negativas.

Está compuesta principalmente por agua en la que se encuentran en disolución diversos compuestos. tener un olor peculiar y un sabor salino. En el caso de heces destinadas para coprocultivo: Indicar al paciente. Nota: Las mujeres deben orinar paradas y recoger la orina "al vuelo". como. y otros componentes como. Comenzar a orinar desechando el primer chorro. 2. 3. 2. ya que orinar sentadas. con similares características que el empleado para el examen parasitológico. y enjuagar con agua previamente hervida y yodada. desechando el resto de la orina. se emplean colectores estériles que deben ser cambiados si la misción se demora o si se contamina con heces. Procedimiento: 1. que recoja la muestra en un frasco. pero estéril. No orinar después de las doce de la noche. que se caracteriza por tener un color amarillo. Aseo matutino de genitales externos con agua y jabón. ácido hipúrico. los hombres se deben retirar bien el prepucio y las mujeres separar los labios. En los casos de niños pequeños. Destapar el frasco estéril y depositar con cuidado de 10 a 20ml de la porción media.mayor frecuencia la presencia de quistes y huevos de helmintos. 184 . Orina (para urocultivo) Concepto: La orina es un líquido secretado por los riñones. las probabilidades de contaminación con los gérmenes procedentes de la microbiota residente o transitoria aumentan. contrario a lo que ocurre con las heces sólidas. Aguantar la micción. como es lo habitual. En todos los casos la muestra debe ser recogida en frascos estériles entregados por el laboratorio. glucosa etc. Indicaciones específicas: 1. Para realizar con efectividad el aseo. Además de células epiteliales leucocitos y eventualmente hematies. Tapar el frasco inmediatamente y enviar la muestra al laboratorio antes que transcurran dos horas. ser ligeramente ácida. urea. ácido urico. etc. el cual debe ser solicitado en el laboratorio.

mediante el esfuerzo de tos profunda.Pus (ya explicado en la toma de muestras de piel) .Faneras Concepto: Término general aplicado a las infecciones persistentes en la superficie de la piel. Indicaciones específicas: Suspender cualquier tratamiento local. Tamponar la lesión con solución salina fisiológica estéril. eliminándose por la boca o siendo deglutido. d) Lesión grasienta o purulenta. Al igual que para la toma de muestra de la lesión seca en piel. f) Uñas. Los más comunes son el pus y el esputo: . previa desinfección de la piel. que es expectorada por las vías respiratorias superiores. Procedimiento: a) Lesión abierta en piel. (escamosa en piel). e) Fístula. fino. c) Lesión seca. Con hisopo estéril. Desinfectar previamente el orificio y tomar la muestra con hisopo fino estéril en profundidad. PRODUCTOS PATOLÓGICOS Concepto: Producto resultante de la actividad de algunos microorganismos al interactuar con los tejidos. g) Observar la cabellera del paciente bajo la luz de una lámpara de Wood. la de muestra de la uña infectada se realiza mediante raspado de la superficie y debajo de la uña con un bisturí. 48 horas antes de la toma de la muestra. se toma la muestra. el cual le será retirado en el laboratorio. enjuagándose con solución salina fisiológica estéril cubriendo la lesión con apósito estéril. el paciente debe asearse la zona de la lesión con agua y jabón. y colocarlos en el interior de una placa de Petry estéril. En los accesos fríos se toma igualmente con aguja y jeringuilla. En los abscesos calientes. puncionando la lesión con una aguja insertada a una jeringuilla. b) Absceso subcutáneo. tomar la muestra en el entorno del borde sin tocar la piel. 185 . pero específicamente en el punto mas elevado de la colección purulenta. humedecida en alcohol etílico al 70 %. para seguidamente tomar la muestra con hisopo. Previa desinfección de la zona con una torunda estéril. recobrando el material en el interior de una placa de Petry estéril. Con una pinza de disección arrancar varios cabellos que se observen fluorescentes. Materia densa y viscosa. recolectando la descamación en el interior de una placa de Petry estéril. La noche anterior a la toma de la muestra. raspar la lesión con un bisturí.Esputo. el pelo o las uñas.

retirar las prótesis y realizar aseo matutino bucal. 3. 15. 16. La cantidad de muestra a tomar? ¿En que momento se debe tomar la muestra? ¿Porque es importante delimitar el área anatómica de donde se va a tomar la muestra? ¿En que consiste las precauciones de asepsia? ¿Que instrucciones generales debemos dar al paciente que tiene indicado un examen microbiológico? ¿Que es un exudado? Nombre los diferentes tipos de exudado que podemos tomar del paciente. Nombre los diferentes líquidos orgánicos que se obtiene del paciente para investigaciones microbiológicas. Durante la recolección del esputo evitar que se produzca derramamiento del mismo. Para la recepción ver capítulo de Bioseguridad. 2. 17. 12. 14. 8. En su opinión que es una muestra? ¿Que usted entiende por muestras representativas? Refiérase a las diferentes causas que pueden afectar la representatividad de una muestra. mediante inspiración. ¿Que importancia tiene para usted. 7. 4. 18. Enviar lo antes posible la muestra al laboratorio (separada de la orden de análisis). seguida de tos profunda. 4. ¿Como usted procede para obtener una muestra de linfa para el paciente? ¿Cómo se le indica al paciente recoger las muestras de heces fecales para examen parasitológico? ¿ Que instrucciones debe seguir el paciente para recoger muestras de orina para urocultivo? ¿Como usted toma las muestras de las faneras? ¿Que indicaciones le daría al paciente para recolectar una muestra de esputo con calidad? 186 . 2. Al levantarse en horas de la mañana. 5. 10. tratando de no recoger saliva. 9. CUESTIONARIO 1. adecuado. 19. Recoger en un frasco estéril con tapa de rosca y color ámbar la primera expectoración de la mañana.Indicaciones específicas: 1. ¿Que implicaciones puede tener la demora en la realización de la siembra? Explique los diferentes métodos empleados para la conservación de las muestras. 3. 11. 13. Describa el procedimiento a seguir para obtener del paciente una muestra de sangre para hemocultivo. por la parte externa del frasco. 6.

sin la adición de ningún reactivo. ni procesamiento previo. sin rayaduras ni manchas. la manera de agruparse y sus afinidades tintoriales. etc. que presuntivamente contiene y facilitar su localización durante la realización de la microscopía. aunque en algunas ocasiones resulta pertinente centrifugarla para concentrar los elementos. Procedimiento: 1.CAPÍTULO 14 PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS INTRODUCCIÓN La microscopía. variará en dependencia de los objetivos que se pretenden con la microscopía y de la muestra de que se trate. sobre los cuales se sustenta el diagnóstico microbiológico de laboratorio. constituye junto con el cultivo y las pruebas de identificación. los procederes básicos. el propio tubo que contiene el sedimento o una pipeta estéril. larvas. huevos de hemintos. leucocitos y otros elementos de interés como pueden ser. la muestra a emplear se utiliza. 187 . deposite una gota de la muestra en el centro de la lámina portaobjetos. detectar la presencia de células. El procedimiento a emplear para el montaje de las muestras en láminas. así como. Para la realización del examen microscópico. DIFERENTES MÉTODOS Preparación de muestras en láminas para examen microscópico en fresco Para la realización de este montaje. esencialmente se pretende observar: la morfología de los microorganismos y/o sus diferentes estructuras. tal y como se obtuvo. En los exámenes microscópicos. Empleando un asa de platino previamente flameada. las muestras a investigar deben ser preparadas previamente sobre láminas portaobjetos escrupulosamente limpias.

b) Colocación encima de la muestra de una lámina cubre objetos. 2. una pequeña porción de la colonia. Procedimiento: 1. Método de la gota colgante Este método se emplea específicamente para constatar mediante la observación microscópica si el microorganismo en estudio es o no móvil. Si el volumen de la gota fue el adecuado. tome una asada del cultivo germinado en medio de cultivo líquido y deposítela en el centro de una lámina cubreobjetos. 3. 2. Coloque la lámina excavada sobre el cubreobjetos. l03: Preparación de muestras en láminas para exámenes microscópicos: a) Depositar una gota de muestra en el centro del portaobjetos. procediendo a emulsionarla en la gota de suero fisiológico. En ambos casos se debe repetir el montaje. la colocación del cubreobjetos debe efectuarse suavemente. de manera que la preparación quede justamente debajo de la excavación y ambas láminas queden pegadas por el petrolado.Fig. Proceda a flamear al rojo un asa de platino y una vez fría. Coloque sobre la gota de la muestra o sedimento una lámina cubreobjetos. debe quedar. 188 . Coloque sobre la mesa de trabajo una lámina portaobjetos excavada y auxiliándose de un aplicador unte petrolado en todo el perímetro de la excavación. debido a insuficiente cantidad de muestra y si se derrama por fuera del cubreobjetos. Si quedara algún espacio sin cubrir se incurriría en error por defecto. Si el microorganismo a examinar se hubiera desarrollado en un medio sólido se procederá a colocar previamente sobre la lámina cubreobjetos una gota de suero fisiológico y posteriormente se tomará con asa de platino estéril y fría. el error en el montaje sería por exceso. exactamente debajo de toda el área del cubreobjetos. Para evitar que queden espacios con burbujas de aire.

189 . d) Viraje de la preparación. antes de ser colocada la lámina cubreobjetos. Preparación en láminas de muestras coloreadas Este método se utiliza cuando se requiere teñir a los microorganismos y/o su entorno. 104: Esquema de una preparación de gota colgante: a) Portaobjetos con una excavación central rodeada de un anillo de petrola to. Adición de colorantes a la muestra Se procede exactamente igual que para la preparación en fresco con la diferencia de que la muestra es emulsionada con el colorante en cuestión. de manera que el cubreobjetos quede encima con la preparación la cual quedará colgando. La preparación en láminas se efectúa por dos procederes diferentes: la adición del colorante a la muestra o la preparación de frotis. Debido al ínfimo tamaño o la composición bioquímica de las diferentes estructuras. se requiere en cada caso técnicas de tinción especiales para la coloración de cada una de ellas. En estas condiciones se coloca en el microscopio para su observación. b) Cubreobjetos con una gota de cultivo. Ejemplo: Examen directo de heces fecales. Con un movimiento suave voltee sin temor la preparación. c) Ensamblaje de la lámina excavada con el cubreobjetos. con el empleo del colorante Eosina. para su mejor observación o para determinar sus afinidades tintoriales. Fig.4.

Si la muestra o el cultivo fueran líquidos. el frotis debe hacerse muy fino para que se pueda distinguir adecuadamente su agrupación característica. Si el frotis se fuera hacer empleando una colonia germinada en medio de cultivo sólido. 190 . Procedimiento: Fig. de manera que la parte posterior de la lámina sea lamida por la llama. déjelo sobre la mesa de trabajo hasta que el agua residual que contiene se evapore y se seque. ya que los microorganismos cuando se hayan en un medio líquido tienden a estar muy dispersos. tome la lámina por los bordes con los dedos índice y pulgar. los microorganismos están muy conglomerados. Después de realizado el frotis. de manera que la extensión quede hacia arriba. que le permita hacer un frotis grueso con ayuda de un asa de platino estéril. 105: Preparación de una preparación sobre láminas portaobjetos. La exposición al calor directo provocará que las estructuras de naturaleza proteíca. Pase la lámina directamente por la llama del mechero dos o tres veces. lo cual dificulta su localización en el examen microsocópico en la medida en que el frotis sea demasiado fino. se debe echar previamente en el centro de la lámina portaobjetos una gota de solución salina fisiológica y posteriormente emulsionar la colonia con un asa de platino estéril con la que se hará la extensión. se coagulen. en la llama del mechero para acelerar el proceso ya que los gérmenes pueden deformarse y generar confusiones al microscopista. Una vez seco el frotis. de manera que al sacarse quede formando una capa. deposite sobre la lámina portaobjetos una cantidad suficiente. Debido a que en las colonias. Debe ser grueso.Preparación de frotis El frotis consiste en una extensión de la muestra con hisopo o asa de platino sobre la lámina portaobjetos. lo que provocará que la preparación quede adherida a la lámina y no sea desprendida después de la coloración por el agua que se utilice para eliminar el exceso de colorante. Si desea acelerar este proceso puede introducirlo en una incubadora pero nunca.

4. ¿En qué consiste un frotis? Explique las diferentes maneras de preparar los frotis de acuerdo al tipo de muestra de que se trate.Fig. Describa el procedimiento para el montaje de muestras para la observación de examen en fresco ente cubre y portaobjetos. CUESTIONARIO 1. Especifique para qué se realiza el método de la gota colgante. 106: Fijación de un frotis a la llama del mechero. 2. 6. 5. ¿Cómo usted fija los frotis? ¿Con qué objetivo se fijan los frotis? 191 . 3.

CAPÍTULO 15 COLORANTES Y COLORACIONES INTRODUCCIÓN Las bacterias. carecen de color. teniendo un aspecto semitransparente. empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos. debiendo tener al menos. Carmín: Se produce. pigmentos. mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis". los colorantes se clasifican en naturales y sintéticos. CONCEPTO Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico. en su estado natural. encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia. Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenes de los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria. generalmente tintes. el cual se fermenta para producir el colorante. 3. los siguientes: 1. levaduras y protozoarios. siendo necesario colorearlas por diferentes métodos de tinción que factibilicen su observación y distinguir las características morfológicas y estructurales que sirvan de datos para su identificación genérica. reactivos u otros compuestos. Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que contiene indican. Colorantes naturales Los colorantes naturales son básicamente histológicos. sometidas a la intensa iluminación que se requiere en los exámenes microscópicos de campo brillante. FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES Atendiendo a la fuente de obtención. 2. un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir. por lo que resulta muy difícil su observación en las preparaciones acuosas sobre láminas portaobjetos. 192 .

Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundo de México y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium campechianum. Colorantes sintéticos Se obtiene de la anilina. 193 . Atendiendo a su estructura química se agrupan de la siguiente manera: Cuadro: 9. Clasificación de los colorantes. GRUPO QUINONIMINA SUB-GRUPO TIACINA ACINAS C O LO RAN T E Azul de metileno Toluidina Rojo neutro Safranina C Nigrosina Verde malaquita Verde Brillante Violeta cristal Eosina B e Y Mercuro Cromo 220 FENILMETANO DIAMINOTRIFENILMETANO XANLEIRO FLUORANA Rosa de bengala SULFONSFTALEINA Azul de bromofenol Verde bromocresol Azul de bromotimol Rojo cresol Fenolftaleina Rojo fenol Azul timol Acriflavina Naranja de acridina ACRIDINA CLASIFICACIÓN Los colorantes se clasifican. teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el aniòn o el catiòn de su estructura química.4. ácidos y neutros. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: básicos. o es mas exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno.

Colorante ácido: Sucede todo lo contrario. empleándose como colorante de contraste para colorear su entrono. Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinción se reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador. por ejemplo: la giemsa.cloruro de azul de metileno+. ocurre una combinación de reacciones físicas y químicas. provocando su inmovilización. que tiene la propiedad tintorial de sus componentes ácidos y básicos.de sodio+ Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de colorantes ácido y básicos. la sustancia colorante esta a cargo del anión. mientras que el anión no tiene esa propiedad. lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador según sean los objetivos con la sustancia colorante. AFINIDADES TINTORIALES En el proceso de la coloración. por lo tanto el proceso de la tinción generalmente resulta letal para los microorganismos.Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión. por ejemplo: . considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular. Veamos algunos ejemplos: 1. VENTAJAS Y DESVENTAJAS Los colorantes son sustancias tóxicas. Reacción química Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fósfato combinándose como colorante básicos cargados positivamente. Reacción física Ocurre un fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas. TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al microorganismo. constituye el colorante neutro. 194 . soluble exclusivamente en alcohol. por ejemplo: eosinato. pero si el fondo del campo microscópico. donde el precipitado resultante. mientras que el catión no tiene propiedad. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula.

con fines de microscopia. que es en la actualidad. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno. 4. por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas. Los colorantes se aplican. el danés Hans Chistian Gram. ideó un método de coloración. algunos incluso han resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del mercado. Entre los métodos mas utilizados se encuentran: La coloración de Gram. a la preparación. Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador. Otros se emplean como desinfectantes microbianos. por lo que reciben también el nombre de coloraciones diferenciales. entre otros. Tinción compuesta En este tipo de tinción. azul de bromotimol. 5. el más empleado en los laboratorios de bacteriología. Tinción simple En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se tiñe rápidamente el microorganismo. y la de Ziehl Neelsen. etc. violeta cristal y fuscina fenicada. formando parte de la composición de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como consecuencia de su actividad metabólica. tinción compuesta y tinción especial. 3. Ejemplo: rojo fenol. me195 . En consecuencia se puede determinar algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de los demás. los métodos de coloración se clasifican en: Tinción simple. Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos. formando parte de una solución. Por ejemplo: el verde de malaquita.2. Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir. se utiliza más de una sustancia tintórea. mas que para teñir. sino como indicadores de pH. METODOS DE COLORACIÓN Atendiendo a los objetivos que se persigan. Coloración de Gram En 1884. utilizándose fundamentalmente para observar su morfología y tamaño. separados o juntos. siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar.

.. Agregar poco a poco las dos terceras partes del agua destilada... 2........ queda teñida de color violeta o de color rojo.. Mezclar los cristales de yodo con los de yoduro de potasio...... .... Envasar en frasco ámbar o plástico no transparente con tapa de rosca y rotular...................... la bacteria sometida a esta tinción............ Después de diluida la acetona en el alcohol... Lugol de Gram...... enjuagar el mortero y añadir este residuo con cuidado en la probeta.... Echar la mezcla en una probeta graduada de 100 ml de capacidad.. 196 ............ Envasar en frascos de vidrio de color ámbar con tapa de rosca o preferiblemente con tapa de vidrio esmerilado........ .. Solución violeta de genciana al 1% ....... 2g . ................. envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca.......diante el cual........ Diluir los cristales de violeta de genciana en alcohol........ revolviendo constantemente con el brazo del mortero....... ... Con el resto del agua...10 mL ... .... Agregar los cristales de ácido carbólico y mezclar.... Yoduro de potasio ......... 2g ............ hasta enrasar en 100 ml............. Cristales de yodo ...... Añadir el resto del agua. Agregar poco a poco el agua destilada.......................... 3..... Colorantes y reactivos 1........ 20 ml Preparación .. Alcohol etílico 95 % . con ayuda del brazo del mortero.... Alcohol etílico 95 % o alcohol acetona al 20 % .. en dependencia de la composición químico de la especie...... 80 mL . 300 ml Preparación (en un mortero): ....... Acetona ............. . ... Rotular.........Violeta de genciana .Agua destilada ....Cristales de ácido carbólico......... .. 1g .... 100 mL Preparación ( en un mortero): ... Agua destilada ......Alcohol absoluto.. 1g ... " Dejar la preparación en reposo durante 24 horas y filtrarla con papel de filtro....... . Revolviendo constantemente.....

..... .. Lavar con agua corriente.. 8. Verter la solución de violeta de genciana... hasta que se evidencie que este solvente no extrae mas el colorante violeta. 4.4. 1g . Rotular... Echar sobre la preparación el lugol de Gram. ... Safranina .. Procedimiento Después de fijado el frotis a la llama del mechero. Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro. Echar sobre la preparación la solución de safranina. Solución de Safranina al 1 % .. 1. Esta operación debe durar aproximadamente de 1 a 2 minutos.. la lámina se debe colocar de canto para que se escurra.. Secado de lámina Al concluir el proceso de coloración... 7.... Agua destilada ... hasta cubrir el frotis.. 5. hasta cubrir el frotis dejando que actué durante 30 segundo.. dejándola actuar por espacio de 30 segundo. colocar la lámina sobre el puente de coloración.. Lavar la preparación ligeramente con agua corriente.. 3.. 107: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Gram..... Lavar la lámina con agua corriente.. 2... 100 ml Preparación ( en un mortero): . Debe tenerse en cuenta que el agua y en especial.. Echar la safranina en un mortero y añadirle poco a poco al agua destilada hasta diluir el colorante.. Fig. Envasar en frascos de vidrio o plástico.. Lavar la lámina con agua corriente. dejando que el colorante actué por espacio de 30 segundos.. 6.. Echar sobre la preparación el alcohol etílico 95 % o el alcohol acetona al 20 %. el agua 197 ....

que se adiciona con el objetivo de formar un complejo violeta-lugol. Lo ideal es escurrir la lamina poniéndola de canto y seguidamente secarla con papel de filtro. no es igual en todos los géneros. que mientras algunos géneros retienen firmemente el colorante al resultar el complejo impenetrable para el decolorante. lo que permite al solvente penetrar y extraer el complejo violeta-lugol. aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción. existiendo controversias al respecto. Al adicionar el decolorante (alcohol etilicio o alcohol acetona) algunos géneros no son afectados por estos solventes. 198 . en otros géneros la barrera que se produce es más permeable. El criterio mas generalizado es que la violeta y el lugol forman un complejo que reacciona con los componentes bioquimicos de la pared celular deshidratada. como Gram negativas. lo que da lugar. ya que el lugol no es un colorante. no se produce ningún cambio de color. adquiriendo un color de rosado o rojo. reteniendo por consiguiente el color violeta aplicado inicialmente. mantienen la coloración violeta ya que la safrania es un colorante mas débil que la violeta y su adición no influye significativamente en cambio de color. Diagnóstico microscópico Las bacterias que se observan de color violeta se clasifican como Gram positivas y las que se observan de color rojo. por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo demasiado tiempo quita parte del colorante. Al echar finalmente la solución de safranina (que es de color rojo ) las especies que no fueron decoloradas. en tanto que los géneros que fueron decolorados por el alcohol. Teniendo en cuenta que la composición química de la pared. sino un mordiente. todos los géneros que se encuentran en el frotis se tiñen de color violeta. para fijar el color en la bacteria. dejando a la bacteria nuevamente incolora. fijándose en esta. en tanto que otros son decolorados quedando la bacteria nuevamente incolora. se tiñen con la safrina. Al adicionar el lugol. Fundamento técnico En el primer paso de la coloración. cuando los microorganismos presentes en el frotis son expuestos a la acción colorante de la violeta de genciana. la reacción resultante será obviamente diferente.destilada. es un agente decolorante. Principios A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace mas de un siglo.

.. aunque sean sometidos a la acción de solventes tan fuertes como los ácidos para su decoloración......... Alcohol etílico .3 ml 199 ...... 100 ml Preparación: . 10 ml .... Alcohol absoluto .... .... tienen la propiedad de retener el colorante con que han sido teñidas. Echar 50 ml de la solución en una probeta graduada de 100 ml de capacidad... 2.. Lavar el mortero con la solución de fenol y añadir ese residuo en la probeta. Alcohol clorhidrato al 3 % ..... Ácido clorhídrico concentrado. Agua destilada ................ 1g ..... Dejar la preparación en reposo por espacio de 24 horas y filtrar con papel de filtro.. Añadir el resto de la solución de fenol hasta enrasar a 100 ml. ..... con alguna que otra modificación en función de las particularidades de la especie en estudio. Fue modificada y perfeccionada posteriormente por Ziehl y Neelsen.. Fig. Colorantes y reactivos .. 97 ml ... Envasar en frascos de vidrio de color ámbar y rotular.. fue concebido y aplicado por Robert Koch....... Este método se utiliza hoy en dia. 1.... 5g .. Disolver los 5g de fenol en 100 ml de agua destilada.... . descubridor del agente causal de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis o Bacilo de Koch..... . Fucsina básica .... Moler en un mortero 1g de fucsina y añadir en la probeta que contiene los 50 mml de la solución del fenol...... 108: Juego de colorantes y reactivos empleados en la coloración de Ziehl Neelsen... el primer método de coloración para este tipo de microorganismo...Coloración de "Ziehl Neelsen Algunos géneros microbianos dentro de los que se incluyen las microbacterias....... Cristales de fenol .... ..

.. 4.............. Preparación.. los 20 ml de ácido sulfúrico a los 80 ml de agua destilada...... Agregar los 3ml del ácido clorhídrico a los 97ml de alcohol etílico. Agregar poco a poco.... Si en ese tiempo el colorante se secara.1g . pero sin volver a calentarlo.. añadir más.. Solución de azul de metileno (Colorante de contraste) . por lo que su dilución se realiza sin ningún tipo de contratiempo Preparación..... Rotular.. (Nunca a la inversa).. Cubrir el frotis con fucsina fenicada y oscilar suavemente la llama del mechero por debajo de la lamina.... 0.... Envasar en frasco de vidrio con tapa de rosca...... 80 ml... ... hasta que el colorante calentado comience a emitir vapores...... 1.. 200 ... Retirar el mechero y dejar que el colorante actué sobre el frotis por espacio de 5 minutos. Agua destilada .. ...... .. Agua destilada... ..... Procedimiento: Después que el frotis se ha secado colocar la lamina sobre el puente de coloración. 20 ml.. Rotular...... Solución de ácido sulfúrico al 20 % . Cloruro de azul de metileno ........ ...... Una ves diluido. Envasar en frascos de vidrio con tapa de rosca. Envasar en frascos de vidrio o plástico con tapa de rosca....0 ml El cloruro de azul de metileno es hidrosoluble........... . Ácido sulfúrico.......Preparación ........ 100... dejar en reposo por 24 horas y filtrar con papel de filtro.... Rotular.... con cuidado.. 3.........

así como las células epiteliales y otros artefactos.2. 3. en tanto que las demás se quedan incoloras. Echar sobre frotis la solución de alcohol clorhídrico o en su defecto la solución acuosa de ácido sulfúrico. resisten la acción decolorante y se mantienen teñidas de rojo. no sufren ninguna alteración permaneciendo de color rojo. se caracterizan por tener una alta proporción de ácido micolico (lípidos) en su pared celular. Diagnóstico microscópico Los bacilos que se observan coloreados de rojo están diagnosticados como B. Al aplicar la coloración de contraste (azul de metileno) las bacterias que retuvieron el color proporcionado por la fuscina. 6. Esta operación debe durar aproximadamente unos 2 minutos. Lavar la lámina con agua corriente. (Bacilos ácidos alcohol resistentes) 201 . hasta que se observe que el solvente no extrae mas colorante de la preparación. hace que la misma se permeabilice y haga accesible la penetración de la fucsina. que no disponen de ácido micólico en su pared o membrana. El resto de las especies. dejando actuar el colorante de 30 segundos a un minuto. son decolorados. 7. con lo cual el microorganismo se mantiene teñido. tiñéndose la pared celular. 4. La acción del calor.A.R. pero las especies que si fueron decoloradas. Principio: Las microbacterias. todos los microorganismos. Al normalizarse la temperatura de la preparación. se tiñen de azul. Añadir la solución acuosa de azul metileno. dejando actuar el decolorante. después de teñidos por la fucsina. Fundamento técnico Al someter el frotis a la acción de la Fucsina. al igual que las células epiteliales y otros artefactos presentes en la preparación. Al aplicar el decolorante ácido.A. como el Mycobaccterium tuberculosis y otras especies susceptible de ser coloreadas por esta técnica. ladeando la lámina y lavarla con agua corriente. Dejar que la lámina se seque al aire sin aplicar papel de filtro para acelerar el secado. introducido en este método. el compuesto lipidico impermeabiliza la pared a la acción del decolorante ácido. las especies que posean el ácido micolico en la pared. Verter el exceso de colorante de la lámina. Lavar la lámina con agua corriente. 5. independientemente de que dispongan o no de ácido micolico en sus respectivas paredes celulares serán coloreados de rojo.

Lavar la lamina con agua corriente escurrir y dejar secar al aire. verde de malaquita o hematoxilina. 4. proceda de la siguiente manera: 1. 10. tales como flagelos. 6. 11. Coloque en el fondo de un vaso de koplin. generalmente no susceptible de ser coloreados por los metodos anteriormente explicados. lo que ha dado lugar a una modificación del metodo de tinciòn clásico. Sacar la lamina del vaso de koplin y pasarla nuevamente 3 veces por la llama del mechero.leprae. Colocar la lamina sobre el puente de coloración y cubrirla con azul de metileno. 2. Pase la lámina 3 veces por la superficie de la llama del mechero. esporas. Colocar nuevamente la lamina sobre el puente y cubrirla con alcohol clorhídrico al 1%. 5. capsulas. Dejar actuar el colorante de contraste por espacio de 1 a 2 minutos. es diferente a la del M. etc. Intriouzca la lamina en el vaso de Koplin y tapelo.Ccoloración de Ziehl Neelsen (modificada para Mycrobacterium leprae) Justificación: La capacidad de acidorresistencia del M. Dejar actuar el decolorante por espacio de 2 minutos. Dejar actuar el colorante por espacio de 20 minutos 7. Repetir el paso 3. 8. Lavar la lamina con agua cruda. 202 . granulos.tuberculosis. Dejar actuar los vapores de formol por espacio de 3 minutos. Coloque la lamina sobre el puente de coloración y cubrala con fuscina basica. 9. una pequeña mota de algodón impregnado con 3 gotas de formol al 40 % 3. En este tema haremos referencia solo a algunos metodos empleados con mayor frecuencia. Tinciones especiales: Existen decenas de metodos de coloraciones especiales. para hacer mas efectiva su tinciòn. NOTA: Estos colorantes se comercializan ya elaborados por diferentes empresas. Lavar la lamina con agua cruda. destinadas a la tinciòn de las diferentes estructuras de la celula microbiana. Procedimiento: Después que el frotis se ha secado al aire.

......0 ml Mezclar y dejar a temperatura ambiente Solución B .. 203 ....75g ......Fuscina basica (certificada para colores flagelos) ... 100... para lo cual se emplea una suspensión de acido tanico que al precipitarse sobre su cubierta forman una capa que aumenta aparentemente su diámetro....... 3... Envasar en alícuotas de 50 ml.... Colorantes y reactivos Solución A: .... lo cual esta muy por debajo del poder de rersouciòn del micrososcopico optico. Guardar congelado en refrigeración (Tiempo de conservación: 1 mes)....Acido tanico.......Agua destilada... Ajustar el pH con NaOH/1N..5g ............... cuyo diámetro no excede de los 30mm..2g ...0 ml Preparación: Mezclar a volumen iguales A y la B........... 4....... Los medios de cultivo empleado para el desarrollo de las cepas deben ser adecuados.. Las laminas a emplear deben calentarse previamente y enfriarse a la temperatura corporal.....Alcohol etílico 95% ........ 2.... para que los frotis se sequen con rapidez.Cloruro de sodio..Coloración Fragelar de Leifson (modicficación de Clark) Los flagelos son estructuras..... tanto los flagelos como su disposición con respecto al bacilo se hagan visibles al microscopista....Coloque sobre la mesa de trabajo 3 láminas portaobjetos limpias y acabadas de calentar. Procedimiento 1.. 1... Las laminas portaobjetos y cubreobjetos deben estar escrupulosamente limpias sin el mas minimo vestigio de grasa...... 1..... Lo que propicia que al ser posteriormente coloreado.......... 0................ Para hacer visibles a los flagelos se requiere aumentar su grosor....... Los cultivos tienen que ser jóvenes..... 100.1... 2.. Requisitos a tener en cuenta Para que la tinciòn de los flagelos sea efectiva se requiere cumplir con los siguiente requisitos 1...........

Procedimiento. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a coloraciones especiales. 2. Cubra el frotis con el colorante de Hiss. 7. Una de las láminas por espacio de 8 minutos.Lave con agua corriente. Mezclar 5 mL de solución alcohólica satura de violeta de genciana en 95 mL de agua destilada. la segunda por espacio de 10 minutos y la tercera 15 minutos. Coloración de Hiss -Colorante capsular de Hiss. 4. casi al extremo de cada una de las tres láminas e inclínelas suavemente para que la gota se deslice (no extender con asa). Esperar de 5 a 10 segundos. Fije la preparación a la llama del mechero. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lámina hasta que el colorante se caliente y empiece a emitir vapores. procedente de un cultivo líquido o del agua de condensación de un cultivo sólido. polímeros de glucosa u otros aminoazucares que contienen nitrógeno. 3.Cubra cada frotis con solución de azul de metileno 1:1. 4. Coloración de cápsulas La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir de polipéptidos.Espere a que las laminas se sequen al aire.000 en solución acuosa 1:2.2. que después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. 1.Eche sobre cada lámina portaobjetos 1mL del colorante de Leifson y déjelo actuar con un tiempo diferente para cada preparación. 204 . Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria. 5. Haga un frotis fino y déjelo secar al aire. Sobre una lámina portaobjetos mezcle partes iguales del material a teñir con suero específico.Deposite una gota grande de una suspensaiòn bacteriana joven.Lave con agua corriente y espere a que las preparaciones se sequen al aire.000 de borax y deje actuar el colorante por espacio de 10 minutos. 3. 6.

.. Lavar el colorante con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%. 4......... Las células vegetativas no se colorean y el fondo del campo adquiere un tono gris.5.......... unos 5 mL por tubo procediendo a taponearlos con tapas de corcho. 205 .......100 ml Preparación 1..... ....Hervir de 10 a 15 minutos...Agregar 3 o 4 gotas de fucsina fénica de Ziehl Neelsen..... Dejar que la preparación se seque al aire y examinar al microscopio....... .. retapándolos finalmente con papel de aluminio.5 mL de formol al 40 % (como preservo) Filtrar dos veces con papel de filtro doble....... Procedimiento Coloque en el centro de una lámina portaobjetos un asa de la preparación y mézclela con un asa de nicrosina de Dorner. Agregar 0............. Solución de nigrosina de Dorner.................. 2....... Resultado Las esporas se observan de color rojo........... 6..... así como otras células y el fondo del campo se tiñen de rojo intenso en tanto que las cápsulas se observan incoloras y en ocasiones con un matiz azul muy tenue.... En un tubo de ensayo haga una suspensión densa del microorganismo en estudio con 3 o 4 gotas de agua destilada...... 3..... en baño de agua de ebullición................. haciendo un frotis delgado.... Coloración de Esporas Coloración de Dorner..... -Nigrosina ..... Resultado Las bacterias. Colorante... Dejar secar y observar a microscopio a 700x con lente de inmersión.. Distribuir en tubos de ensayo serológico.... Hervir la solución en erlenmeyer durante 30 minutos........ 10g -Agua destilada ........

...Coloración de gránulos. Caracterice a los colorantes de acuerdo a su clasificación..... ¿En qué consiste el método de coloración simple? 11...................... Colorante. Procedimiento 1.. ¿Cuáles son las ventajas y las desventajas de la toxicidad que ocasionan los colorantes a los microorganismos? 10. añadiendo poco a poco el alcohol y revolviendo.......... 3......... Cubrir con el colorante y dejar actuar durante tres minutos ....... 2........ Lavar con agua corriente.. Preparación..... Nombre los colorantes sintéticos de uso frecuente en microbiología...... 6.. Hacer frotis finos y dejar secar al aire.. ¿Cómo tiene lugar las reacciones químicas en el proceso de tinción? 9.. Mencione tres tipos de colorantes naturales.. Resultados Los gránulos se tiñen de azul oscuro y el cuerpo de la bacteria de azul claro. 3... Dejar secar al aire y observar con lente de inmersión a 700x.....0 mL Preparación Mezclar el azul de metileno en un mortero...... 1..... En su estado natural ¿qué color y aspecto tienen las bacterias? ¿Qué usted entiende por colorantes? ¿Cuáles son las diferentes fuentes a partir de las cuales se obtienen los colorantes? 4. Azul de metileno ...... 100........... 7......... CUESTIONARIO 1.... Azul de metileno.. 2......... 5..........5g Alcohol etílico 95 % . 4..... ¿Cómo tiene lugar la reacción física en el proceso de tinción? 8.... ¿En qué consiste el método de coloración compuesta? 206 . Dejar en reposo durante 24 horas y filtrar con papel de filtro.

¿Qué requisitos han de tenerse en cuenta para realizar una coloración de flagelos? 22. ¿Cómo reacción las bacterias al ser sometidas a la coloración de Gram cuando se le adiciona el alcohol? 15. ¿Por qué se debe calentar la fucsina en el proceso de tinción? 18. 23. después de ser sometidas a la coloración de Ziehl Neelsen? 19. ¿De qué color quedan los B. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Gram? 13. ¿Cuál es la función del lugol en la coloración de Gram? 14. ¿Cómo se denominan los colorantes empleados en la coloración de Ziehl Neelsen? 17. ¿Cómo se observan las esporas y las células vegetativas coloreadas con nigrosina? 25. Describa el procedimiento para la coloración de cápsula. ¿cómo son clasificadas las bacterias? 16. 207 . Describa el procedimiento para la realización de una coloración de Ziehl Neelsen modificada. De acuerdo al color con que quedan teñidas después de la coloración de Gram.A.A. 20.12. Explique como usted realiza una coloración de gránulos.R. ¿Para qué se utiliza la coloración de Dorner? 24. antes de aplicar una coloración de flagelos? 21. ¿Con qué objetivo son tratadas con ácido tánico las bacterias.

sus componentes deben responder a las exigencias nutricionales de las especies que se pretenden cultivar. Así como para controlar el paso de los gradientes químicos a través de la actividad osmótica de la membrana celular. reproducirse. tales como respirar.CAPÍTULO 16 MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCIÓN Los medios de cultivo son compuestos o preparaciones alimenticias elaboradas en los laboratorios de microbiología con los nutrientes requeridos para cada género en particular. que conjuntamente con las codiciones ambientales adecuadas propician su desarrollo. OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA Cuando los microorganismos son colocados en medio de cultivo apropiados. metabolizan los nutrientes para sintetizar macromoléculas que suplan el desgaste natural de sus estructuras en cuyo proceso se libera energía que es empleada en el desarrollo de las actividades fisiológicas. se comprenderá que no haya un medio de cultivo standard que posibilite el desarrollo de todas las especies. Para que un medio de cultivo resulte eficaz. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1. así como en sus actividades metabólicas y los mecanismos para obtener los nutrientes. 208 . existiendo por lo tanto una amplia variedad. etc. Atendiendo a su composición. sintéticos y vivos. 2. Debido a que existen diferencias en los elementos constitutivos de cada género o especie. Los medios e cultivo se clasifican: Atendiendo a su composición Atendiendo a los objetivos de su empleo. constituyendo de hecho el micromundo de los microorganismos en condiciones de laboratorio. moverse. Por lo tanto la nutrición microbiana cumple dos objetivos fundamentales: la biosíntesis para la renovación de los compuestos de su estructura celular y la producción de energía. se clasifican a su vez en: simples.

Fig. La literatura informa cada año un número cada vez mayor de medios sintéticos recomendados para cultivar todo género de microorganismos. las carnes. etc. Cada uno de estos medios responde a las necesidades específicas de grupos microbianos determinados. 209 . jugos vegetales. ejemplo: Agar Saboreaud. Se puede decir que son verdaderas fórmulas químicas o recetas de cocina. Kligler. Medios sintéticos A diferencia de los medios simples. Se utilizan en su forma natural. Agar SS. 110: Frasco con medio de cultivo deshidratado. pierde su condición de medio simple natural y se convierte en un medio simple artificial. existiendo en la actualidad mas de un centenar de diferentes medios sintéticos. como por ejemplo: someter la carne o los vegetales a un proceso de cocción para obtener un caldo nutritivo. tal y como se encuentran en la naturaleza. etc. la papa. lo que permite reproducir el mismo medio de cualquier otro lote con exactitud. Este tipo de medio se comercializa en forma deshidratada por diferentes empresas cubanas y extranjeras que se dedican a la elaboración de medios de cultivo. siendo prácticamente imposible preparar dos lotes idénticos con productos iguales de distinta procedencia.Medios simples En este tipo de medio no es posible conocer la proporción exacta de sus componentes nutricionales por ser muy variable. Ejemplo: la leche. los sintéticos están compuestos por un conjunto d nutrientes definidos cuyas proporciones son constantes. Cuando un medio simple natural sufre algún tipo de modificación.

Medios vivos Los medios vivos están constituidos por animales o capas de tejidos que son utilizados para el cultivo de virus y rickettsias. Ejemplos: hámster (curieles jóvenes). etc. cultivo de tejidos. ya que las que se encuentran predominando consumirían prácticamente casi todos los nutrientes lo que traería como resultado un pobre desarrollo o incluso ningún desarrollo del germen que nos interesa estudiar. conjuntamente con otras especies que se hayan en mayor proporción. que no se desarrollan en los medios simples o sintéticos por requerir de la presencia de células vivas para reproducirse en su interior (parásitos intracelulares obligados). medios selectivos y medios diferenciales. 111: Medios de cultivos vivos: a) Hamster. b) Huevo de gallina con embrión de pollo de 7 a 10 dias. c) Cultivo de tejidos Atendiendo a los objetivos de su empleo Se clasifican a su vez en: medios de enriquecimiento. medios de aislamiento. Estos medios no tienen utilidad práctica para el cultivo de las bacterias y los hongos. al mismo tiempo que no favorecen las necesidades esenciales del resto. que se utilizan con el propósito de favorecer el desarrollo de una especie determinada que por encontrase en pequeñas cantidades en la muestra. Fig. ratones blancos lactantes. donde ambas se puedan desarrollar. huevos fértiles de gallina de 7 a 10 días. Ejemplo: el caldo Selenito utilizado en la investigación del coprocultivo que 210 . Los medios de enriquecimiento satisfacen los requerimientos nutricionales del germen objeto de estudio. Medios de enriquecimiento Son medios generalmente líquidos. se encontrarían en desventaja si la colocamos en un medio de cultivo.

que es utilizado en la investigación de las enterobacterias. Fig. Otro ejemplo lo constituye el medio Agar. se encuentra a una elevada concentración. de rojo a amarillo en la parte inferior o en todo el medio. d) Formación de manchas de color negro desde el medio hacia abajo. especialmente la Escherichia coli. que puede desarrollarse y multiplicarse en este medio salino. Medios diferenciales En este tipo de medio de cultivo se pueden desarrollar sin dificultad diferentes especies microbianas. que se utiliza para el aislamiento e identificación de la Salmonella sp/ en materiales patológicos. Después de 14 a 16 horas de incubación se puede observar que el medio de cultivo cambia de color. Se utiliza para diferenciar la especie desarrollada por las reacciones bioquímicas que genera su actividad metabólica. lo cual es determinado por cambios y reacciones evidentes que de manera específica produce cada especie en el medio de cultivo. por las características del medio. dificultando al mismo tiempo el de otras bacterias entéricas predominantes en el bolo fecal. En este caso se aprovecha la resistencia de esta especies a ciertos agentes químicos. así como la presencia o no de manchas de color negro o evidencias o no de producción de gas. inhibe el crecimiento de otras enterobacterias. Este medio se caracteriza porque uno de sus componentes. el CI Na. Ejemplo: el medio Kligler. 112: Medio diferencial (Kligler). e)Manifestación de formación de gas 211 . a) Medio sin sembrar (rojo). verde brillante. Medios de aislamiento Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de germen al no poder desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies. como el colorante verde brillante. que generalmente se encuentra predominando en las muestras empleadas. Ejemplo: el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado. c) Cambio de color de rojo a amarillo en todo el medio. que sin embargo.favorecen el desarrollo de los géneros Salmonella y Shigella. b) Cambio de color de rojo a amarillo en el fondo del medo. lo que imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con excepción de los Estafilococos. cuyas diferencias permiten encaminar la investigación hacia su identidad.

Bioquímicamente se trata de un éster sulfúrico de una molécula lineal galáctano que es insoluble en agua fría pero soluble en agua caliente. Fig. China. siendo comercializado en forma deshidratada. Para la producción de agar se extraen las capas pécticas ricas en agarosa y agaropectina. Ceilán. peptonada Alcalina. Perteneciente al grupo Agarofíto que comprende los géneros: Gellidium. se mueven con libertad y su desarrollo provoca la formación de un enturbamiento difuso o sedimento visible. caldo lactosado. para ser procesadas industrialmente. El agar en malayo significa jalea. Los microorganismos desarrollados en medios líquidos. 113: Diferentes formas de crecimiento en medios de cultivo líquidos. agua. Malasia y California meridional. 212 . Medios líquidos Los medios líquidos no contienen agar. Gracilaria. siendo trabajados en forma de caldo. de un compuesto denominado AGAR. Pteroclaida.5 % de agar forma un gel firme entre 32 y 390 C que no se funde por debajo de 850 C. que proliferan principalmente a lo largo de las costas de Japón. y Acanthopeltis. Es una sustancia mucilaginosa que se obtiene de algas de color purpúreo. La consistencia del medio de cultivo se logra con la adicción a la fórmula. Ejemplo: Caldo Selenito. de celulosa y otra más eterna de sustancias pécticas.CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Atendiendo a su consistencia los medios se clasifican en: líquidos semisólidos y sólidos. Como lo atacan muy pocas bacterias se emplea básicamente como solidificante. etc. Una solución de 1. Las paredes de la planta posee una capa interna.

Fig. cantidad suficiente para la gelificación del medio. COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS Como fue explicado anteriormente. aunque ocasionalmente pueden desarrollarse a partir de dos especies distintas. Medios sólidos Son medios de cultivo que contienen en su composición alrededor de 1. De lo anterior expuesto se deduce que la cantidad de Agar añadida al medio de cultivo será directamente proporcional al grado de solidez que adquiera el medio. 114: Medio de cultivo sólido distribuidos en placas de Petra: a) Medio sin sembrar. La solidez proporcionada por el agar impide a los microorganismos su migración en el cultivo por lo que se multiplican en un mismo sitio dando lugar a un cúmulo de millones de descendientes que forman sobre el cultivo estructuras macroscópicas denominadas colonias de diferentes formas. lo que da lugar a la formación de colonias atípicas. que permitirán al investigador orientarse hacia la identificación ulterior de la especie.Medios semisólidos Estos medios contienen un % de agar menor que el empleado para los medios sólidos. Ejemplo: Agar Saboreaud Dextrosa.Blair" y agar semisólido para motilidad. Teóricamente cada colonia se genera a partir una o varias bacterias de la misma especie. Cada género y especie producirá un tipo de colonia con caracteres culturales diferentes. Agar Sangre. Agar Violeta Rojo Bilis. lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad de los gérmenes. b)Medio sembrado. Ejemplo: medio de "Cary . etc. mediante la cual el microorganismo degrada los 213 .5 % de agar. c)Después de 24 horas de incubación (presencia de colonias). uno de los objetivos de la nutrición microbiana es la biosíntesis. aspectos y tamaños.

como las proteínas.5 0. siendo por lo tanto la principal fuente de obtención. ELEMENTOS Carbono Oxigeno Nitrógeno Hidrógeno Fósforo Azufre Potasio % PESO SECO 50 20 14 8 3 1 1 ELEMENTOS Sodio Calcio Magnesio Cloro Hierro otros % PESO SECO 1 0. Fuente de carbono Las formas aprovechables van desde el CO2 atmosférico altamente oxidado hasta complejas formas orgánicas.3 Por lo tanto si pretendemos que se desarrolle una Escherichia coli. los lípidos y los carbohidratos. donde se indican pormenorizadamente los componentes químicos de las diferentes estructuras de la Escherichia coli: Cuadro 10. transformándolos en los diferentes compuestos que conforman su estructura.5 0. por parte de la bacteria de oxigeno y nitrógeno mediante su ionización y en menor grado a través de la actividad catabólica que desarrollan sobre los compuestos orgánicos. Componentes químicos de las diferentes estructuras de la E. A continuación haremos referencia a las distintas fuentes a partir de las cuales se pueden elaborar los medios de cultivos.5 0. que en el proceso de degradación liberan en alguna proporción estos elementos. coli. por lo tanto los ingredientes con que se elabora un medio de cultivo deben responder a las necesidades específicas de la especie que deseamos que se desarrolle en él. con los componentes que aporten a la nutrición los elementos químicos de referencia: Fuente de oxigeno e hidrógeno El solvente de todos los medios de cultivo es el agua. Veamos el siguiente ejemplo. Algunas bacterias utilizan el oxígeno y el hidrógeno que forman parte de la composición de aire.2 0. 214 .nutrientes presentes en el medio de cultivo y posteriormente lo sintetizan en el interior de la célula. los compuestos empleados en la preparación del medio de cultivo deben aportar todos y cada uno de esos elementos.

La mayor proporción del carbono presente en el sustrato orgánico entra en la vía metabólica para producir energía y se excreta como CO2. ejemplo: el azufre lo obtienen de los grupos. tales como: peptonas. Otros microorganismos (heterótrofos) emplean fuentes orgánicas como las proteínas. tales como: carnes. leche. NO3 o nitrógeno orgánico debe ser transformado extracorporeamente en amonio para poder ser incorporado a la célula bacteriana. el CO2 es la única fuente de carbono. en la composición del medio de cultivo. sulfato de cobre. O en forma de peptonas un producto intermedio del metabolismo de las proteínas. en tanto que otras. Especies del género Pseudomonas. es decir. carbohidratos y lípidos. 215 . el cual es utilizado por la mayoría de los microorganismos fotosintéticos. en forma de sales minerales. el nitrógeno debe estar en forma de amonio. ejemplo: cloruro de calcio. huevo etc. transformándolas por hidrólisis en aminoácidos. requieren de la presencia de proteínas. Fuente de nitrógeno Es obtenido por los microorganismos de las proteínas y sus derivados. mas exigentes. magnesio. etc. cisteína y del fósforo que está presente en los ácidos nucleicos y los nucleóticos. el cual es empleado para la carboxilación del fosfornolpivurato para formar intermediarios biosintéticos como el carbamilfósfato como precursor de arginina. Algunos géneros son incapaces de reducir los nitratos. Estos dos elementos y otros como: hierro. cinc y cobalto. Hay bacterias que fijan el nitrógeno mediante su reducción preliminar a amoniaco.Para los microorganismos fotosintéticos y litotróficos. pirimidinas y para la síntesis de anillos purínicos. por lo que deben obtener el nitrógeno a partir de las sales de amonio que se adicionan al medio de cultivo. Fuente de iones inorgánicos Son obtenidos por los microorganismos de la materia orgánica que se encuentra formando parte de la composición del medio de cultivo. potasio. Independientemente de. ya sea como cloruros. fosfato de magnesio. ácido cítrico o glicerina. para obtener el carbono que los provea de energía. son suministrados a los microorganismos. así como productos derivados de estos compuestos como aminoácidos. sulfhídricos de las proteínas. la fuente de obtención para ser asimilados por la bacteria. utilizan alrededor de 90 compuestos orgánicos diferentes como fuente de carbono y energía. urea o compuestos amoniacales así como a partir de fuentes inorgánicas como el nitrato. específicamente del aminoácido. si está en forma de N2. sulfatos o fosfatos.

Como aceptor de hidrógeno en las reacciones REDOX . incluyendo aquellas con ATP. fosfolípidos y ATP.Participa en la permeabilidad celular.) .Catión celular.Componente principal de las esporas.Participante en la unión enzima . fotosintéticos. .Constituyentes de los citocromos (imprescindible en la respiración celular). .Excretor de las enzimas. .Regulador del grado de asociación de las partículas ribosómicas.Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales.Componente de algunas coenzimas como Co A y otros. ...Los gramnegativos lo utilizan para la síntesis de la pared celular.Como parte de las hemoproteinas. .Constituyentes en la síntesis las proteínas. .Participante en la permeabilidad celular.5 a 8. .Constituyentes de intermediarios biosintéticos y precursores. HIDROGENO CARBONO NITROGENO AZUFRE FOSFORO POTASIO MAGNESIO CALCIO MANGANESO HIERRO COBALTO COBRE / ZINC MOLIBDENO MAGNESIO SODIO / CLORO 216 . cofactor de algunas enzimas.Cofactor inorgánico de varias enzimas.o. . . . . . Los m. cofactor de algunas enzimas.constituyente de los compuestos celulares orgánicos .Constituyente de la clorofila. y la cisteína derivados del metabolismo de las proteínas.Cuadro 11: función de los elementos químicos en la nutrición microbiana FUNCIONES ESPECÍFICAS DE CADA ELEMENTO ELEMENTOS OXIGENO FUNCION FISIOLOGICA (ACTUA COMO.encimas formadas por la célula bacteriana. coenzimas.Sustancia tampón para mantener el pH del medio en un rango de 4. .Como cofactor de varias enzimas. . .Catión celular.Constituyente de la vitamina B12 y sus coenzimas derivadas. . . . .Como aceptor de electrones en la respiración aerobia.Catión celular.Constituyentes de algunos aminoácidos. lo usan como fuente de electrones en forma de donadores de hidrógeno. . cofactor inorgánico para reacciones inorgánicas. a veces remplazando el magnesio. Ej. . .Estabilizador osmótico. . ácidos nucleicos y co.Constituyentes inorgánicos de determinadas enzimas.Constituyentes de materiales celulares orgánicos.Constituyentes del agua celular y de transporte. así como de materias orgánicas celulares. . como la metionina. .Útil en la fijación de nitrógeno y en la reducción de nitratos.Constituyentes de ácidos nucleicos.constituyente del agua celular y de transporte .sustrato.Activador de determinadas enzimas. . . . Proteínasas. .

cambio de color. 4. Mida en una probeta graduada el agua destilada a emplear. pero su calidad dependerá esencialmente del cumplimiento estricto de los pasos establecidos. Con rigurosa precisión. Y proceda a colocarla sobre una fuente de calor con el objetivo de tibiar el agua. matraz. Elaboración a partir de sus componentes 1. Vierta en una cristalería (erlenmeyer. 217 3. los errores en el diagnóstico de laboratorio ocasionado por el empleo de medios deficitarios que menoscaban la fiabilidad de la institución. teniendo en cuenta que la mayoría de los medios son de importación. Seleccionar de los estantes cada uno de los componentes del medio serciorandose de que no hayan sobrepasado la fecha de caducidad y que se observen en buen estado sin cambios organolepticos ostensibles como: resequedad. teniendo especial cuidado en desestimar el peso de "tara". precipitación.ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO Elaborar un medio de cultivo es un procedimiento relativamente fácil. 6. la fórmula del medio que se desea preparar (generalmente indicada para un litro). no solo desde el punto de vista económico. 2. existen centenares de medios de cultivo diferentes. con todos los efectos negativos que eso entraña. 5.) de tamaño suficiente aproximadamente a las ¾ partes del volumen de agua contenido en la probeta. formado por diversos compuestos en proporciones fijas que constituyen su fórmula particular. se puede elaborar a partir de los componentes que se indican en la fórmula o empleando medios comerciales deshidratados. etc. La premura. por lo que la elección de un determinado medio de cultivo estará en correspondencia con el microorganismo que presuntivamente esperamos que se desarrolle durante la investigación al respecto. a emplear en una balanza adecuada. cada uno de los cuáles. etc. Mida con precisión cada uno de los productos líquidos a los volúmenes exactos que se indican en la fórmula. por ocasionar demoras evitables en el tratamiento del paciente. hidratación. pese por separado cada uno de los productos sólidos. sino por lo que resulta mas importante. Como ya se explicó. así como obviar determinados requisitos pre establecidos son causas frecuentes de su mala elaboración. la cual debe tener un pH y conductividad adecuada. Un medio de cultivo. que realicemos en el laboratorio. atendiendo a las particularidades del medio de cultivo en cuestión. Localizar en el formulario existente en el laboratorio. . La variabilidad de los medios responde a los requerimientos nutricionales de los distintos grupos microbianos.

La fórmula del medio de cultivo. 4. El pH a que debe ajustarse e medio después de hidratado y antes de su esterilización. Ejemplo: "Agar Saboreaud Dextrosa". lo comercializan en forma deshidratada (pulverizados) que contienen la totalidad de los ingredientes. Para determinar que el medio se ha diluido.) o medido. mientras presenta gránulos es evidente que aún no se ha disuelto. dándole en cada ocasión un movimiento de rotación al frasco para que los ingredientes se mezclen. por unos minutos imprimiendo intermitentemente movimiento de rotación al frasco. Elaboración a partir de medios comerciales deshidratados En la actualidad diversas empresas dedicadas a la fabricación de medios de cultivo. Proceda a adicionar en el agua tibia los compuestos pesados y medidos previamente. "Mac Conkey" "S. con lo que se evita el tener que pesar o medir previamente cada uno de sus componentes. 10. procediendo a continuación a verterlo en el resto del medio para que la proporción estipulada en la formula no se altere. 3. Si quedara algún residuo. El nombre del medio de cultivo. 9. . donde se relaciona cada uno de sus componentes y las proporciones respectivas. someter el medio nuevamente a la acción del calor. En el caso que no se requiera preparar ese volumen se harán los cálculos pertinentes. Si se observa que los componentes no quedan disueltos. vidrio reloj. observe las paredes del recipiente durante su agitación. Cápsula de porcelana. en la cristalería donde fue pesado (Ej. 2. etc.7. 11. se enjuagará con parte del volumen de agua que queda en la probeta.Adicionar el agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen de medio previsto. Retire la cristalería de la fuente de calor una vez que el agua esté tibia y colóquela sobre la mesa de trabajo 8. Estos medios se expenden en frascos de tamaño variable con tapa de rosca hermética estando provistos de una etiqueta en la que se encuentran impresos los siguientes datos: 1. en el orden que se establece en la fórmula." etc. Coloque sobre el plato de una balanza granataria una cápsula de porcelana o un vidrio reloj limpio y proceda a determinar su peso (tara) 218 5. Las instrucciones para hidratar el medio donde se precisa la cantidad de medios deshidratados que debe pesarse para preparar un litro.S. "Kligler".

Con el empleo de un depresor o cuchara plástica extraiga del frasco el medio de cultivo deshidratado y deposítelo en el recipiente que se encuentra en el plato de la balanza hasta que la punta de la barra coincida con el "fiel". Coloque nuevamente el recipiente sobre la fuente de calor. el medio deshidratado ya pesado que se encuentra en la cápsula d porcelana o vidrio reloj. añadiendo el resto del agua que pudiera quedar en la probeta para completar el volumen total previsto. 11. 10. Sume el peso de la "tara" y el de cantidad de medio de cultivo a pesar y mueva las pesas hasta que indiquen en la barra el peso total. 219 . con sumo cuidado. 8.Fig. 12. 6. 7. Deposite un poco del agua destilada que quedó en la probeta en el interior de la cápsula de porcelana. Revuelva con el depresor plástico e incorpora este residuo en el erenmeyer que contiene el medio . Baje el recipiente de la fuente d calor y proceda a verter en su interior. 9. 115 : Datos que se encuentran en la etiqueta de los frascos de medios de cultivo. con ayuda de un depresor plástico. imprimiéndole movimientos de rotación cada 30 ó 40 segundos hasta observar que en las paredes de la cristalería no se detecta la presencia de granulaciones lo cual será sugerente de que el medio no se ha diluido adecuadamente. Mida en una probeta graduada el volumen de agua destilada a emplear y vierta aproximadamente las ¾ partes d ese volumen en un erlenmayer o matraz de tamaño suficiente. Coloque el recipiente sobre una fuente de calor durante dos o tres minutos para que el agua se tibie. Debe evitarse el recalentamiento excesivo que provocaría la caramelización de los azúcares y el deterioro de otros compuestos nutritivos básicos.

las utilizadas para acidificar el medio y bajar el pH son generalmente HCL o H2SOA y las utilizadas para alcalinizar el cultivo y subir el pH son NaOH o KOH. en el reverso de la placa. siendo distribuido en las placas con posteridad a su esterilización. para evitar que el exceso de calor produzca agua de condensación que se adhiera. para lo cual. un volumen determinado. a la cual se le adiciona cuidadosamente gota a gota. Tanto las soluciones ácidas como las alcalinas se emplean a concentraciones 5N. 1N. conociendo el volumen de la solución patrón empleada para ajustar el pH de la alicuota se procede a hacer los cálculos pertinentes para determinar la cantidad requerida para todo el volumen del medio de cultivo.Determinación del pH del medio Una vez que el medio ha sido diluido o fundido se extrae con pipeta una alicuota y se deposita en un tubo de ensayo que será utilizada como muestra representativa de todo el volumen de medio para determinar su pH. 1N y 0. Distribución de los medios de cultivo El medio de cultivo que vaya a ser trabajado en tubos de ensayo se distribuye en los mismos con pipeta. se utiliza tiras de papel tornasol o mediante el empleo del pHmetro. Al extraer la tira se compara el color que ha tomado la punta después de contactar el medio con la escala que tiene por sus laterales el carrete cuyos colores se corresponde con pH diferentes. Al depositar el medio en las placas la altura del volumen no debe sobrepasar los 3 ó 4 mm. Ajuste de pH En el caso de que el pH medido no se corresponda con el indicado en la fórmula del medio de cultivo deberá ser ajustado para lo cual se emplean soluciones patrones con diferentes niveles de concentración. Cuando el medio se haya solidificado. Para determinar el pH con tira de tornasol se cortan 4 ó 5 cm de la cinta d papel del carrete y se introduce una de las puntas en el medio de cultivo por 4 ó 5 segundos. se esteriliza en un erlenmeyer taponeado con algodón y retapado con una capucha de papel de estraza. Para ajustar el pH se utiliza la alicuota empleada para medirlo. antes de su esterilización. la disolución ácida o alcalina según corresponda hasta obtener el pH deseado. Si se desea una mayor precisión se empleará el pH metro (ver capitulo 9). en que se 220 . después que la temperatura del medio haya descendido de 50 a 55 C. mientras que el medio que vaya a ser distribuido en placas de "Petry". la caja que lo contiene se coloca boca abajo sobre el borde de la tapa hasta que se refresque.

estas deben quedar flojas durante la esterilización. Cuando las instrucciones indiquen la adición d un reactivo o compuesto estéril. para que no se acumule en su reverso agua de condensación.tapa para ser guardado en el refrigerador. al bajar la temperatura. una vez que el medio se ha solidificado hasta que se enfríe. debiendo ser apretadas al concluir la esterilización. imprimiéndole simultáneamente movimientos de rotación al frasco para asegurar una aereación adecuada de la sangre. se hacen mas propensos a la precipitación y sufren una disminución en su potencial nutricional. 116: Manera de colocar la placa. para permitir el flujo de aire. Observaciones 1. Si el medio es distribuido en tubos con tapas de rosca. se debe esperar a que la temperatura del medio descienda entre 45 a 50 C. en el medio después de autoclaveado. observando minuciosamente todas las precauciones de asepsia. 2. sin la presencia en el interior de la tapa de agua de condensación. De acuerdo al medio de que se trate la inclinación será mas o menos acentuada en interés de los objetivos que se persiguen con los cultivos que se desa221 . se debe realizar esta operación con sumo cuidado. en estos casos se emplea la Tindalización.Evitar refundir los medios de cultivo pues en la medida en que esto ocurre. así como otros medios elaborados con sueros no deben ser sometidos a la esterilización en autoclave pues se deterioran. mantengan esa forma. por ejemplo en la preparación del medio de cultivo denominado "Agar Sangre".Algunos medios de cultivos elaborados básicamente con hidratos de carbono. aunque el tubo se coloque en posición vertical. como el "Dulcitol" 10 %. Para lograr que estos medios adopten esa forma deben ser colocados oblicuamente sobre la mesa de trabajo estando aún fundidos para que cuando solidifiquen. Fig. para adicionar el volumen de sangre lo cual requiere que sea vertida poco a poco. Cuñas de medios agaranizados Los medios de cultivo agaranizados (que contienen Agar) distribuidos en tubos generalmente se utilizan en forma de cuña.

ya que el objetivo del empleo de este medio es que se produzca el desarrollo bacteriano en toda la superficie de la cuña (slam) por lo tanto al no ser de interés que quede un fondo como en el medio "Kligler". la fecha en que ocurrió su apertura para que sea de conocimiento de otros que ese frasco está en uso. 117: Cuñas de medios agarinizados en tubos de ensayo: a) Kligler. Agar semisólido para motilidad. Serán colocados en gradillas y mantenidos hasta su empleo a temperatura ambiente. prácticamente toda la superficie será de slam.Los medios distribuidos en placas de "Petry" serán colocados en las parrillas del refrigerador boca abajo tan pronto se hayan solificado. Deben ser almacenados en lugares frescos y lejos de aparatos térmicos y de ventanas. Una vez abierto el frasco se debe escribir en la etiqueta. la inclinación debe ser mas acentuada. quedando en su superficie una cuña de menos de 2cm. Por ejemplo: 1. 222 . Conservación de medios elaborados Alcanzada la temperatura ambiente después de esterilizados. 2. etc. tioglicolato. b) Citrato de Simmons Conservación de medios de cultivo comerciales Los frascos con medios de cultivos nuevos.l os medios serán conservados de diferentes maneras atendiendo al medio de que se trate. deben ser ordenados en los estantes por lotes y fecha de vencimiento. Por ejemplo. en el caso del medio "Kligler" la inclinación es menos acentuada para propiciar que el fondo del tubo quede lleno de medio de cultivo a una altura aproximada de 2 cm de altura. Saboreaud. Si se tratara el medio "Citrato de Simmons". Fig.rrollen en los mismos.

3.Los medios como el "Lowestein .Jensen. 2.Los que contienen colorantes o indicadores se deben proteger de la luz durante su almacenamiento. 5. al sacarlo de su almacén frío y colocarlo a una temperatura ambiente. facilita su contaminación. se almacenarán en refrigeración para prolongar su tiempo de duración. Comprobación de la esterilidad de los medios elaborados De cada medio de cultivo preparado y almacenado se seleccionan dos o tres placas o tubos y se colocan en la incubadora durante 24 a 48 horas para comprobar su esterilidad. . 4. 5. antes de su empleo. como por ejemplo "selenito" se deben conservar en las parrillas del refrigerador. deben extraerse varias horas antes e incubarlos durante 30 minutos.Los que tienen propiedades REDOX. ya que si están mucho tiempo en almacenamiento se pueden resecar de manera imperceptible y ocasionar reacciones inexactas y fallas en el crecimiento. Cuando se obvia este paso se puede demorar la iniciación del crecimiento al ser colocado el inóculo en una superficie fría. No se deben preparar medios de cultivo en exceso. CUESTIONARIO 1. ¿Qué usted entiende por medio de cultivo? Cuales son los objetivos de la nutrición microbiana? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a su composición? ¿Que es un medio artificial? ¿Cómo se denominan los medios de cultivo que están constituidos por una variedad de ingrediente fijos con gramaje y volumen predeterminados? ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo atendiendo a los objetivos de su empleo? 223 6. Observación El agua de condensación y la opacidad que se produce en algunos medios conservados en tubos. 4. Empleo de los medios Los medios preparados que han estado conservados en refrigeración.3.

8. 21. Explique como usted realiza la pesada de un medio de cultivo deshidratado.7. 9. 15. 19. 16. 10. 11. las bacterias obtienen el oxigeno y el nitrógeno. ¿Como se conservan los diferentes medios una vez elaborados? ¿Cómo se comprueba la esterilidad de los medios de cultivo recién elaborados? ¿Que proceder debe seguirse cuando se va a realizar la siembra en un medio que está conservado en refrigeración? 224 . 14. 20. ¿Qué información aportan los medios diferenciales? ¿Cómo se denomina el producto que se añade a los medios de cultivo para sodificarlos? ¿Cuales son los compuestos nutritivos básicos? A partir de que fuentes. 18. Describa como se hidrata el medio de cultivo una vez pesado. ¿Que compuestos podemos incorporar al medio de cultivo que le sirva a la bacteria como fuente de nitrógeno? ¿Que compuesto nutritivo aporta el carbono que le sirve a la bacteria para obtener energía? ¿Que aporta a la nutrición bacteriana el magnesio y el calcio. 17. 13. 12. ¿De cuantas maneras se puede ajustar el pH del medio de cultivo? ¿Cómo se distribuye el medio de cultivo antes de su esterilización? Explique como se preparan las cuñas en tubo de medios de cultivo sólidos.

Si sustituimos la semilla de naranja. para factibilizar su estudio y posterior identificación. al transcurrir un período de tiempo determinado. etc. Este agregado de bacterias se denomina colonia. sin las características físicas de éste. sobre o dentro.CAPÍTULO 17 SIEMBRA E INCUBACIÓN INTRODUCCIÓN La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar una pequeña fracción o volumen de la muestra. . colmado de millones de bacterias de la misma especie. INSTRUMENTOS DE SIEMBRA Los instrumentos de siembra son los objetos empleados para tomar el volumen o fracción de la muestra y sembrarla en el medio de cultivo. aunque si. son sustituidos por los instrumentos de siembras. tales como: el asa. analicemos el siguiente ejemplo: Si sembramos una semilla de naranja en un terreno fértil. de la misma manera. el azadón. El número de células microbianas que se encuentran en el volumen o fracción sembrada se denomina inóculo. donde la semilla es equivalente a la bacteria y el terreno fértil al medio de cultivo. y llega alcanzar tal magnitud que se hace visible microscópicamente al observador. Todo lo cual será equivalente a la obtención de un árbol frondoso. la bacteria comenzará a multiplicarse. por una especie bacteriana y la sembramos en un medio de cultivo apropiado. ya que al transcurrir solamente algunas horas. los aperos de labranza. la que posteriormente se desarrollará hasta convertirse en un árbol con las características de esa especie de naranja el cual fructificará. la aguja de platino. veremos que emerge de ésta una pequeña postura. Este tipo de siembra. Para comprender debidamente esta analogía. de uno o varios medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios par las especias que presuntivamente contiene. hasta alcanzar una cifra exorbitante de descendientes que puede calcularse por millones. con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente. 225 . guarda estrecha relación con la siembra agrícola convencional. portadoras del mismo tipo de semilla que las generó. en decenas o cientos de naranjas. tales como la guataca. aunque más dinámico. etc. podremos observar un proceso similar.

de platino o nicrón. el cual sirve para que el manipulador pueda tomar en su mano este instrumento de siembra. insertado a un cabo metálico. Espátula de Drigalski. que tiene aproximadamente una longitud de 7cm. b) Aguja de platino. d) Pipeta. para esterilizar en pocos segundos este instrumento en cada ocasión en que se requiera su uso. 118: Instrumentos de siembra: a) Asa de platino.Fig. Se esteriliza a la llama del mechero de igual manera que la aguja y el asa. e) Hisopo Diferentes tipos 1. en lugar de ser recto. Consiste en un fino alambre recto. La espátula de Drigalski puede ser metálica o de vidrio fusible. cuando son expuestos directamente la llama del mechero y de enfriarse a los pocos segundos. Esta característica se aprovecha en el trabajo diario del laboratorio. El asa. consisten en un tubo fino de varios mm de diámetro por unos 12cm de largo. consisten en un alambre de platino o de nicrón. c) Espátula de Drigalski. Tanto el platino como el nicrón tienen la propiedad de calentarse rápidamente y ponerse a al rojo vivo. 3. después de haber sido retirados de esa fuente de calor. El método de esterilización es igual al empleado para la aguja. 2. con la diferencia de que el extremo terminal del alambre de platino o nicrón. el cual se encuentra insertado por uno de sus extremos a un cabo metálico. el cual está doblado por uno de sus extremos en forma 226 . Es similar en todos los aspectos a la aguja. La aguja. Las de vidrio fusible. cuando son metálicas. pero con la particularidad de que el extremo terminal tiene la forma de un triángulo. forma un pequeño círculo en el extremo con un diámetro de 4 a 5 mm. Al igual que la aguja y el asa.

graduadas en centésimas y milésimas de mL. deben ser previamente esterilizadas en autoclave y estar provistas de un bulbo de caucho. MÉTODOS DE SIEMBRA El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo. Las pipetas utilizadas como instrumentos de siembra. que se elaboran con cristal fusible careciendo de escala graduada y las de 0. deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo. 4. los métodos de siembra más empleados son los siguientes: 1. 5. con una pequeña mota de algodón adherida en uno de sus extremos. taponeados y retapados antes de proceder a su esterilización en autoclave.de un triángulo equilátero. 4. Siembra por punción. Hisopos. Siembra volumétrica. Para su esterilización la parte triangular de la espátula se introduce en un recipiente que contenga alcohol y de inmediato se aproxima a la llama par que se encienda y flamee el triángulo de la espátula. Cuando la llama se apague. los hisopos. con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. deben ser colocados en el interior de tubos de ensayo de tamaño apropiado. 2. Las más utilizadas en el trabajo ordinario son: las de "Pasteur". Consiste en un fino aplicador. Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el 227 . casi siempre se utilizan a continuación para realizar la siembra en el medio del cultivo. generalmente de madera. que mide unos 2 cm por cada uno de sus lados. Siembra masiva. se debe esperar unos segundos para que se enfríe y en esas condiciones utilizarlas en la realización de la siembra. antes y después de realizar la siembra. una vez confeccionados. ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva.. Siembra por estrías. Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón. mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno.2 mL. por su parte posterior. Pipeta. Cuando se emplean para tomar las muestras. similar las empleadas en los goteros. 3.

calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. Siembra por estrías Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña.(Slam) Instrumentos de siembra a emplear. Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. Procedimientos Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón. 1.Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir. 2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto. 3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe. 4. Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado. 5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior. b) Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo) c) Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación. 228

d) Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Fig. 119: Siembra microbiológica en medios de cultivos distribuidos en tubos de ensayo: 1) y 2) Retirar el tapón del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5) Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el tubo.

- Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña, trazando una línea longitudinal. - Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag. - Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo. - Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal. - Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios sólidos en cuñas (tubos de ensayo): a) Trazando una línea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el instrumento con el inóculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c) Roturando el medio

229

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petry, proceda de la siguiente manera: a) Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b) Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie. c) Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento. d) Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo. e) Repita esta operación una o dos veces más.

Fig. 122 : Método de siembra por estrias en medios de cultivo sólidos distribuidos En placas de Petra

230

f) Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo. g) Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo. Cuando la muestra es tomada con hisopo. 1. Si la siembra se va a producir en una cuña de agar, se procede en forma similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo. 2. Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas, el primer segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con asa estéril, para lograr una diseminación por agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la diseminación cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a continuación con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminación cruzada: a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z"en la superficie del medio; b) Completar la siembra con un asa de platino estéril, imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la "Z"

Siembra por punción Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. 231

Fig. 124: Siembra por punción

Siembra volumétrica Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado. Siembra masiva Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con espátula de Drigalski

INCUBACIÓN
Una vez realizada la siembra, atendiendo a los requerimientos de los géneros o especies que presuntivamente se encuentran en la muestra, se debe proporcionar a los cultivos la temperatura y las condiciones de aereación que favorezcan su desarrollo, durante un tiempo predeterminado que será variable para cada grupo de microorganismo.. 232

En medios de cultivos sólidos Como la bacteria se encuentra impedida de desplazarse por la solidez del medio. denominados colonias bacteriana . sus descendiente que alcanzan magnitudes millonarias en menos de 24 horas. deben ser colocados en una incubadora provista de temperatura regulable o con condiciones especiales como las incubadoras de CO2 y las anaeróbicas. por lo que basta con dejar los tubos o las placas sembradas sobre la mesa de trabajo para que se desarrollen sin dificultad Los microorganismos que requieran para su desarrollo una temperatura más elevadas o más bajas que la ambiental. (Ver Capitulo 7) MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO EN LOS MEDIOS DE CULTIVO En medios de cultivo líquidos En general el crecimiento se manifiesta por turbidez. cuyos caracteres serán típicos para cada genero o especies. 233 . Cultivo puro El cultivo es puro cuando en el se desarrolla una sola especie. aspecto y colores. al multiplicarse en un punto especifico. Resiembra Cuando en el cultivo mixto.Algunos tipos de microorganismos (como la mayoría de los hongos) se desarrollan sin dificultad a temperatura ambiente y en condiciones de aerobiosis. para de esta manera obtener un cultivo puro. que dan lugar a estructura visibles de diferente formas. Cultivo mixto Cuando dos o más especies se desarrollan simultáneamente en el medio de cultivo. nos interesa estudiar un solo tipo de colonia. se procede a extraer una pequeña porción con un asa de platino estéril procediendo a sembrarla en un medio de cultivo idóneo. ocasionan agregados bacterianos. la cual podrá opacar todo el cultivo o darle un aspecto granuloso o nebuloso. Esta acción se denomina resiembra.

? 10.? 11. 7. 6. ¿Qué usted entiende por siembra microbiológica? ¿Describa los diferentes instrumentos de siembra? ¿Describa el método de siembra por estrías? ¿Cómo se realiza la siembra por punción? ¿Cómo se denomina el método de siembra que se realiza con pipetas? ¿Con que objetivo se utiliza la espátula de Dyigalski? ¿Describa como se realiza la siembra con asa de platino o hisopo en el slam de los medios sólidos en tubos. ¿Cuál es la diferencia entre un cultivo puro y uno mixto? 12.? 8.CUESTIONARIO 1. ¿Qué usted entiende por resiembra? 234 . 3. ¿Como se manifiesta el crecimiento bacteriano en los medios líquidos y sólidos. 2. ¿Cuales son los aspectos a tener en cuenta para incubar los cultivos. ¿Cómo se realiza la siembra cuando se utiliza el mismo hisopo con que se toma la muestra? 9. 5. 4.

si el microorganismo en estudio. El objetivo de su empleo. manosa. que le son proporcionados a las especies de interés. Uno o varios de estos carbohidratos suelen formar parte. de los medios bioquímicos destinados para el diagnóstico de las especies. lo cual será detectado por la acción del indicador presente en el medio de cultivo al variar el pH. así como. sacarosa. para lo cual se emplean indistintamente productos químicos. entre los que se encuentra la rafinosa y polisacáridos como la celulosa y el almidón. galactosa y fructuosas. 235 . es determinar. en la fórmula de algunos medios de cultivo empleados al efecto. para conocer su capacidad metabólica frente a esos sustratos o se enfrentan a otros tipos de compuestos para determinar su resistencia. se incluyen determinados compuestos con el objetivo de favorecer su desarrollo en detrimento de otras especies contaminantes o no. entre otros y los disacáridos como: lactosa. fermenta "in vitro" el carbohidrato con formación de sustancias ácidas. HIDRATOS DE CARBONO Los carbohidratos comúnmente empleados son diversos. de la composición de diversos medios. para que puedan desarrollarse plenamente a nivel de laboratorio. También algunos trisacáridos. maltosa y celobiosa. así como a diversos productos biológicos para evidenciar sus reacciones. las especies deben ser identificadas.CAPÍTULO 18 PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO INTRODUCCIÓN Además de los nutrientes básicos y específicos. como fuente de carbono. principalmente carbohidratos. para el cultivo primario o las resiembras. Los más utilizados son los monosacáridos como: glucosa. como por ejemplo: el ácido láctico. Una vez aisladas. o para distinguir y diferenciar las colonias producidas.

Cuando el indicador está cambiado de color.0 4.0 .10.2 8.0 7. sino más bien un color intermedio entre ambos. deben estar en concentraciones muy bajas. a determinado nivel de la escala de pH.0 8.2 - 6.0 8.0 .8.0 7. transforman los iónes o moléculas y viceversa.2 6. Ejemplos de indicadores Cuadro 12. BASE Rojo Azul Amarillo Amarillo Rojo Rojo púrpura RANGO DE ph 6. cambian el color del medio o de las colonias. Los indicadores que forman parte de la fórmula del medio de cultivo.8.6.0 . Colores a los que dan lugar los indicadores en su rango de pH COLOR ACIDO Amarillo Amarillo Rojo Rojo Incoloro Amarillo I N D I CAD O R ROJO FENOL AZUL BROMOTIMOL ROJO DE METILO ROJO NEUTRO FENOLFTALEINA ROJO CRESOL PÚRPURA DE BROMOCRE. por lo que el color en esta fase no será definido. 236 . que se caracterizan por dar lugar al cambio de color de la disolución o sustancia donde se encuentran al variar el pH. la mitad se encuentra en estado iónico y la otra mitad en estado molecular. Los indicadores son de dos colores oudiendo ser uno de ellos incoloro.INDICADORES Los indicadores son compuestos químicos elaborados con ácidos o bases débiles. debido a su capacidad de ionización mediante la cual. en correspondencia con las variaciones del pH.3 Amarillo Rojo 5.8 Los indicadores presentes en los medios de cultivo. para que la determinación del ph se deba exclusivamente a los cambios que tiene lugar en la solución.4 .

hemolisando a los hematíes total o parcialmente. el efecto se evidenciará por la formación de un halo incoloro alrededor de la colonia. que interfieren el estudio. Tanto los eritrocitos de sangre humana. de los que no las fermentan. son utilizadas en diferentes pruebas de hemaglutinación o para detectar diversas reacciones hemolíticas. En cambio. dependiendo de la condiciones de cultivo y el tiempo de incubación. tiene como objetivo. utilizado para aislar algunas especies del género Salmonella. Otro ejemplo lo constituye la siembra en el medio "Eosina-Azul de Metileno Agar". destruye a los eritrocitos. la sacarosa o ambos azúcares. las colonias de E. rosado o casi blancas. Citrobacter y P. si el tipo de hemolisina no destruye a los hematíes. el efecto se evidenciará por la presencia de un halo de color verde alrededor de la colonia. Las colonias de Salmonella se observan además en este medio con un color. no teniendo como única finalidad proporcionar un nutriente esencial para el desarrollo de determinadas especies. Este tipo de hemólisis total se clasifica como "betha". sino además. provocando la formación de coágulos. Este tipo de hemólisis se clasifica como "alpha". coli. favoreciendo de esta manera el desarrollo de otras más resistentes de interés en la investigación. cabras. inhibir el desarrollo de las especies más sensibles. el permitir evidenciar y diferenciar la actividad hemolítica de algunas de ellas. pero actúa sobre la hemoglobina que porta. una enzima que utiliza como sustrato el plasma sanguíneo.SANGRE Y HEMODERIVADOS La sangre se emplea en la elaboración de algunos medios de cultivo. Si el tipo de hemolisina. El suero sanguíneo se emplea comúnmente para serodiagnósticos y el plasma (sin preservo) es utilizado regularmente para poner en evidencia la capacidad enzimática de especies productoras de coagulosa. Por ejemplo. como por ejemplo: carneros. vulgaris. como por ejemplo: el "Verde brillante" que forma parte de la composición del medio de cultivo del mismo nombre. adquieren un color azul oscuro. Por ejemplo. etc. como los obtenidos de diversas especies de animales.. conejos. colonias correspondientes a especies productoras de hemolisinas. al interferir total o parcialmente el desarrollo de otras especies presentes en la muestra. con aspecto metálico (que se evidencia con luz 237 . cuando se desarrollan en el medio "Agar sangre". Estos colorantes inhiben el desarrollo de los gérmenes gramnegativos y al mismo tiempo permiten diferenciar a las especies de enterobacterias fermentadoras de lactosa. reduciéndola a biliverdina. Colorantes La edición de determinados colorantes a la fórmula del medio de cultivo. éstas actúan sobre la sangre que se encuentra en sus inmediaciones.

la mayoría de naturaleza química. la información genética de que dispone cada especie bacteriana. que proporcionará el cambio de color del medio. cada uno de estos aminoácidos es adicionado por separado. haciendo factible la lectura de esa prueba. lo que será puesto de manifiesto por la acción del indicador. KCN. que contiene además los nutrientes necesarios para el desarrollo de la especie en estudio. en una proporción del 1 % a un caldo base que contiene los nutrientes necesarios para el desarrollo del germen y un indicador. Al actuar la bacteria sobre el producto químico en cuestión. se emplean para su diagnóstico diversos sustratos. empleados con mayor frecuencia se encuentran los siguientes: Urea. caracterizados por tener un ph diferente al del producto reaccionante. El producto químico que se vaya a emplear. Antibióticos Para medir la sensibilidad o resistencia de un microorganismo en estudio a los antibióticos. malonato. Entre los productos químicos. cuyas reacciones específicas. generalmente lo degradan por acción enzimática a productos más simples. en tanto que las Salmonellas y las Shigellas se mantienen incoloras o ligeramente teñidas. para determinar la identidad de la especie.indirecta). nitrato. lo cual se pondrá en evidencia por la acción del indicador que forma parte del medio de cultivo. El principio de estas pruebas radica en la capacidad de algunos microorganismos para decarboxilar uno o varios de estos aminoácidos formando una amina con la consiguiente alcalinidad. así como diversos tipos de aminoácidos. Productos químicos Teniendo en cuenta. ornitina y arginina son utilizados corrientemente en el laboratorio. se realiza una técnica denominada antibiograma con el 238 . nos aportan información acerca de su identidad. formará parte de la fórmula de un medio de cultivo. al producirse el cambio de ph. mientras que las del resto de los coliformes se tiñen con un tono parduzco. Aminoácidos Los aminoácidos: lisina. que la capacita para actuar metabólicamente sobre determinados sustratos. es parcial o totalmente diferente entre sí. citrato. como parte de las pruebas que se realizan a una cepa en estudio. entre otros. De manera similar a la empleada con los productos químicos para igual propósito.

126: Discos de papel de filtros para antibiogramas Basado en el mismo principio y por un procedimiento similar. en dependencia del tamaño del diámetro. Transcurrida 24 horas.empleo de discos de papel de filtro estériles de unos 5 ó 6 mm de diámetro. impregnado en este caso con bacitracina u optoquina. así como mediante la exposición del microorganismo a sustancias de secreción orgánica como la bilis. Fig. en tanto que la optoquina inhibe el desarrollo del S. La bacitracina inhibe el crecimiento de más del 95 % de los Estreptococos del grupo A. tan pronto se realiza la siembra. la lectura de estas pruebas aportaran un importante dato para sus respectivos diagnósticos. un halo de inhibición alrededor de cada disco. obtenida en el pico de una terapéutica a dosis habituales. Estos discos (desecados) se colocan con todas las precauciones de asepsia sobre la superficie del cultivo. La interpretación de los resultados se sustentará en el hecho de que los microorganismos sean o no capaces de desarrollarse en presencia de estos compuestos. se realizan pruebas específicas con el empleo de un solo disco. 239 . será indicativo de la sensibilidad o resistencia del microorganismo en estudio a cada uno de los antibióticos empleados. se realizan con el empleo de productos químicos como: el cianuro de potasio o el desoxicolato de sodio. pneumoniae (Neumococos). Otras pruebas de resistencia. impregnados por separado con una carga en g o unidades de un antibiótico determinado. por lo que. equivalente a la concentración sérica media. siendo incubada de inmediato.

que han sido expuestos de manera controlada a determinadas sustancias antigénicas con el objetivo de que induzca la formación y el incremento de diferentes tipos de inmunoglobulinas. Los sueros obtenidos. que se elabora con una cepa de Treponema pallidum (cepa Nichols) cultivad "in vivo" en testículos de conejo. interactuará con él. pueden ser elaborados con cepas certificadas de microorganismos portadores del antígeno de interés que reaccione específicamente con los anticuerpos inducidos por él. darán lugar a reacciones de aglutinación. se obtienen a partir de animales sensibilizados. cuya composición química sea similar a la de los antígenos de la célula microbiana. 127: Sueros empleados para serodiagnósticos. siendo envasados en frascos cuentagotas para su comercialización. por procedimientos de laboratorio. la cual se liofiliza para su comercialización. el sistema inmunológico del animal producirá los anticuerpos específicos. con las cuales. 240 . mediante sangría de animales sensibilizados son procesados industrialmente. evidenciándose por microscopía las reacciones resultantes de aglutinación o inmovilización del Treponema. lo constituye. precipitación o de hemólisis. debiendo ser almacenados de 2-80c hasta su caducidad. purificados y preservados. Un ejemplo de antígeno elaborado con cepas. las que serán perceptibles "in vitro" si este suero es confrontado con un antígeno similar. que al interactuar con el antígeno en cuestión. teniendo la propiedad de reaccionar con los anticuerpos presentes en el suero problema de forma similar que cuando se confrontan con antígenos reales. o ser preparados artificialmente con diversos compuestos. Sueros Los sueros empleados en las técnicas de serodiagnóstico. Los anticuerpos presentes en el suero de un paciente con sífilis al ser confrontados con este antígeno.Fig. el antígeno troponémico empleado para el serodiagnóstico de la sífilis. Antígenos Los antígenos comerciales empleados para serodiagnóstico.

lecitina y colesterol. una adormidera verde. entre los que se encuentran diversas especies pertenecientes a la familia Euforbiáceas. Investigaciones posteriores demostraron que el látex era muy inerte. da lugar a la producción de un material muy resistente que se emplea en la fabricación de neumáticos. el cual no está elaborado con cepas de Treponemas. natural de Asia.81 de diámetro. Esta prueba es inespecífica. ya que por tratarse de un antígeno artificial. aunque no igual. CUESTIONARIO 1. los anticuerpos inducidos por algunos agentes infecciosos. etc. lo constituye el denominado antígeno de cardiolipina para pruebas de VDRL (Venereal Disease Research Laboratory). ¿Qué datos aportan los carbohidratos utilizados para el diagnóstico de laboratorio? 2. endémica de Sumatra. Nombre los indicadores que Ud. dando lugar a reacciones de aglutinación "in vitro". 241 . ¿Qué son los indicadores? 3. Este compuesto tiene una configuración química. Desde hace varias décadas. a la del antígeno real. reaccionan con él de forma similar para dar lugar a reacciones positivas aparentes. Esta propiedad unida al ínfimo tamaño de su partícula de 0. con textura viscosa y elástica. que se utiliza esencialmente como narcótico.Un ejemplo de antígeno no treponémico. fue utilizada por los laboratorios biomédicos para recubrir las globulinas específicas. conozca que sean empleados con frecuencia en los laboratorios de microbiología. Esta sustancia tratada con sulfuro de carbono. oriundas de Brasil (de donde se extrae el caucho) y la Gutapercha. que hace que la reagina (anticuerpo) presente en el suero problema interactúe con este "antígeno". Látex El látex es una resina de aspecto lechoso. Este antígeno se expende en ámpulas selladas de 5 mL. impermeables. dedicadas a la fabricación de reactivos comercializan diferentes tipos de látex sensibilizados para el serodiagnóstico de diferentes tipos de microorganismos. diversas empresas farmacéuticas. sino por un compuesto formado por: cardiolipina. envoltura de cables. con lo cual se favorece la observación de la aglutinación pasiva. que se extrae mediante incisiones (cortes) de determinados vegetales. así como del opio.

¿Para qué se utilizan determinados colorantes en la composición de los medios de cultivo? 6. cuando son atacados por determinadas especies bacterianas. 7. ¿ De qué manera se emplean algunos antibióticos para identificar especies bacterianas en estudio? 9. ¿Qué información aporta la sangre y el plasma en el diagnóstico de laboratorio? 5. ¿Cuál es la propiedad que tiene el látex que lo hace muy eficaz en las pruebas microbiológicas? 13. ¿Cómo se utiliza el látex? 242 .4. ¿Qué le sucede a los cultivos que contienen ciertos aminoácidos como la lisina. ¿Cómo son elaborados los diferentes tipos de antígenos utilizados para el diagnóstico de las diferentes especies. Nombre los productos químicos que son empleados en la composición de medios de cultivo destinados al diagnóstico microbiológico. ornitina y arginina. 8. ¿Cómo se obtienen los sueros empleados en los sero diagnósticos? 10. cuya reacciones aportan información acerca de su identidad. ¿Qué es el látex? 12. 11.

3. El mal montaje de las preparaciones en láminas. en cada etapa del ciclo. OBJETIVOS Los objetivos del control para la garantía de la calidad son los siguientes: 1. desde la toma de la muestra hasta el informe final. incubación incorrecta. Por ejemplo: la toma de muestras sin la calidad requerida. Emplear racionalmente las pruebas de elevado costo. así como su deficiente conservación y transporte. debidas generalmente a deficiencias técnicas o errores humanos. bajo costo y eficiencia. 243 . los resultados de las investigaciones realizadas pueden estar permeadas de imprecisiones. el empleo de colorantes vencidos o deteriorados. deficiente microscopía. el incumplimiento de las normas técnicas establecidas. Validar la calidad de las pruebas empleadas sobre la base de su factibilidad. 2. son algunos de los factores que inciden en la calidad de los resultados. así como la mala calidad de los materiales empleados o el deficiente funcionamiento de los equipos o instrumentos contribuyen entre otras causas afectar la calidad de los resultados. A los efectos de evitar o al menos reducir al mínimo estas insuficiencias y asegurar la buena calidad de los diagnósticos de laboratorio . originados por impericia. así como la errónea interpretación de las pruebas. negligencia o mal trabajo.CAPÍTULO 19 GARANTÍA DE LA CALIDAD INTRODUCCIÓN Con independencia de las buenas condiciones técnicas que tenga un laboratorio de microbiología y de la adecuada competencia del personal que en él laboran. Mejorar la fiabilidad de los resultados y con ello optimizar el servicio. La falta de cuidado. se establecen un conjunto de medidas encaminadas a controlar mediante fiscalizaciones regulares todos los factores que inciden en el proceso investigativo. Debe tenerse presente que cada uno de los pasos o etapas del proceso investigativo es susceptible de afectar la calidad del resultado final. centrando la atención en los ejecutores.

puede verse afectado por la falta de homogenicidad al estar presente en una misma muestra más de una especie. Control de precisión Se denomina precisión a la propiedad que tiene un determinado método de dar resultados lo más iguales posibles cuando se realizan varias determinaciones sobre una misma prueba. En el servicio de microbiología. desinfección y esterilización del material de vidrio. La fiscalización sistemática "in situ" Consiste en supervisar la labor que realiza el personal de laboratorio en cada sección de trabajo con la finalidad de detectar errores groseros que puedan incidir en la calidad de los resultados. Para determinar la precisión se emplean dos variantes: la reproductibilidad. organizado. el control mediante la reproductibilidad. que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en serie en el mismo día. 4. b) La aplicación de controles de precisión. así como la falta de estabilidad del microorganismo presente en la muestra debido la multiplicación o incremento de las muertes al no procesarse oportunamente. 3. c) El empleo de pruebas estadísticas. ejecutado y controlado por la dirección del laboratorio a través de las siguientes actividades: a) La fiscalización sistemática "in situ". 2. La correcta aplicación de los procederes establecidos para la toma de muestras. La limpieza. El uso de reactivos y medios de cultivo con la calidad requerida.Externo Control interno El control interno es planificado.Interno (Denominado también control de calidad) . Esta fiscalización consiste esencialmente en la revisión de: 1.DIFERENTES TIPOS DE CONTROL . Para la realización de las pruebas de 244 . que es la precisión de muestras idénticas cuando se procesan en días diferentes y la repetibilidad. La habilidad y destreza en la realización de las técnicas de acuerdo con las normas.

el trabajo realizado por dos técnicos. para simular un líquido cefalorraquídeo. Las reales se estudian previamente y se determinan sus características pudiendo añadírsele diferentes sustancias o elementos. Entre las más usuales se encuentran la prueba estadística "F" y la prueba estadística "T". El informe final de ese resultado se compara con los datos conocidos que sirven de control y cuando se detectan resultados incorrectos se toman las medidas de adiestramiento necesarias. cuyas características son conocidas por el jefe del laboratorio y que el técnico no puede diferenciar del resto de las muestras. Prueba Estadística "T" Esta prueba es utilizada para comprobar si los resultados que se obtienen con un método son cuantitativamente superiores o inferiores en relación con otro o si un grupo de datos de una serie es mayor que los de otra. Las muestras empleadas para controlar precisión. debido al mal desempeño del personal de laboratorio. PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES Como ya se explicó. etc. Prueba Estadística "F" Esta prueba es utilizada para comparar la precisión de dos métodos. pueden ser reales o artificiales. 245 . pero no para el personal técnico de microbiología. que debe recurrir a personas experimentadas en el manejo de estas pruebas cuando resulte necesario. tienen sus principales causas en los errores originados por deficiencias técnicas o humanas. Las muestras artificiales más que un elemento de control de la calidad. la génesis de los malos resultados de las investigaciones de laboratorio. Pruebas estadísticas Existen diversas pruebas estadísticas utilizadas en los estudios de precisión y por lo tanto muy ligadas al control de la calidad.reproductibilidad o repetibilidad se emplean muestras "a ciegas". constituye una forma de controlar la seriedad y responsabilidad del técnico. La aplicación de estas pruebas es muy familiar para los estadísticos. procesándola como una muestra más. por ejemplo: agua destilada con ácido pícrico para simular una muestra de orina o solución salina fisiológica a la que se le añade una o dos gotas de suero sanguíneo y glucosa. Por su parte las artificiales son muestras simuladas elaboradas con diferentes solventes.

la lectura de las pruebas diagnósticas. b) Poca experiencia técnico-laboral en la sección de trabajo donde se desempeña. g) Informar de manera incorrecta o incompleta los resultados en la orden de análisis. 2. MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS Todos los laboratorios de microbiología deben disponer de un manual de normas y procedimientos donde se describan las secuencias y regulaciones establecidas para la realización de las diferentes investigaciones. Las áreas designadas para comer o fumar. así como su conservación y transporte. relacionadas con: a) b) c) d) La limpieza y/o desinfección del lugar de trabajo.1. Errores humanos a) Deficiente capacitación en su formación. Las normas de higiene personal. la selección de los medios de cultivo. Errores técnicos a) Deficientes condiciones constructivas o estructurales del laboratorio. las particularidades para la incubación de los cultivos. El manual establece además. colorantes y otros medios para el diagnóstico. medios de cultivo. tales como: los requisitos para la recolección y toma de las diferentes muestras. f) Inadecuada selección de los medios y métodos empleados. etc. e) Falta de concentración o premuras indebidas durante la realización de: exámenes microscópicos. b) Insuficiente disponibilidad de recursos materiales. d) Empleo de equipos e instrumentos obsoletos o con funcionamiento deficitario. donde se especifica todo lo concerniente al examen microscópico. las indicaciones esenciales para el buen funcionamiento del laboratorio. así como la notificación de los resultados. c) Falta de habilidad para realizar con destreza y precisión los procederes de laboratorio. Las medidas de seguridad para cada sección de trabajo. d) Violación arbitraria de las normas técnicas. la selección de colonias para las resiembras. la marcha analítica para su procedimiento. 246 . c) Mal estado de los reactivos.

el control se efectuará cada vez que el equipo se vaya a utilizar y en cuanto al autoclave. baño de María y refrigeradores se le comprobará su buen funcionamiento diariamente. número de serie y la fecha de su adquisición. donde se refleje los datos ya referidos y las fechas en que se les da mantenimiento. se comprobará la presión a través de los manómetros y se colocarán junto con el material a esterilizar. f) El cumplimiento del esquema de inmunización acorde con la actividad que se realiza. anotando los resultados en el registro. En el caso del horno. antes de comenzar su utilización. debiendo comprobar su exactitud con pesas certificadas. se dictamina su rotura o se repara. g) El control y cuidado de los equipos e instrumentos. donde se especifique la marca. 247 . cintas indicadoras o bioindicadores que cambian de color cuando la esterilización no ha resultado óptima. REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD EN BACTERIOLOGIA Control de equipos e instrumentos Todos los equipos e instrumentos que sean asignados al laboratorio deben estar registrados en una carpeta de medios básicos. Las balanzas se deben mantener limpias para que la suciedad no interfiera en la pesada. A cada equipo se le abrirá una tarjeta. como: incubadoras. Nota: En todos los casos se debe tener en cuenta la condición de apto para el uso de los equipos emitida por metrología. c) Potenciómetros (pHmetros) Antes de su utilización se debe ajustar con soluciones estándar de pH 4 o 7 de acuerdo a la utilización que se les vaya a dar. b) Balanzas analíticas y técnicas. simultáneamente con la temperatura. a) Equipos térmicos A todos los equipos termorregulados.e) La manipulación y eliminación de materiales infecciosos. modelo. habilitado al efecto.

Durante el tiempo que dure el almacenamiento. cada día que se vayan a utilizar estas pruebas. para lo cual se anotará en la etiqueta la fecha de recepción. El control de los reactivos y los colorantes se debe realizar frecuentemente en dependencia de su estabilidad. debiendo almacenarse igualmente en lugares frescos y protegidos de la luz. Los colorantes de uso frecuente como los empleados para las coloraciones de Gram y Ziehl Neelsen. Al realizar la apertura del frasco se anotará la fecha. Neisserias. Por ejemplo. Al extraer los frascos que serán utilizados. Control de colorantes y reactivos Al igual que los medios de cultivo. procediendo a desechar los que se hallan ennegrecidos o hidratados. el reactivo de Kovac empleado en la prueba de indol. deben ser almacenados tan pronto se reciban en el laboratorio. aisladas y debidamente identificadas en el laboratorio.Control de medios de cultivo Tanto los medios deshidratados. en la etiqueta de los frascos de colorantes y reactivos se anota la fecha en que se reciben en el laboratorio y se utilizan atendiendo al número del lote y la fecha de vencimiento. como los ingredientes para su preparación o los medios que se adquieran ya listos para su uso. empleado para la prueba de oxidasa. Clostridium y Candidas albicans. etc.5 % de la escala de McFarland y se siembran pequeños inóculos calibrados en el medio. haemophillus. Para comprobar su funcionamiento se utilizará un 3 % del total de medios preparados en los que se sembrarán cepas controles certificadas salvajes. se enfrentan con cepas stock de características conocidas. se tendrá en cuenta la fecha de vencimiento y el número de lote para ir utilizando los más viejos. procediendo a su incubación de acuerdo a las cepas empleadas. se prueban con cepas stock cuando se 248 . Las cepas controles regularmente empleadas son de cocos grampositivos. Vibrios. el peróxido de hidrógeno empleado en la prueba de catalada. Enterobacterias. el plasma congelado para la prueba de coagulasa. los frascos deben ser revisados periódicamente. Al concluir el período de incubación si se comprueba que el medio preparado permite el desarrollo óptimo de las diferentes cepas controles se considerará con buenas condiciones para su empleo. siendo colocados seguidamente en un lugar ventilado y protegido de la luz solar. Cuando el almacenamiento se prolongue. es recomendable voltear los frascos y colocarlos con la tapa hacia abajo para aminorar los efectos de la hidratación. Pseudomonas. el tertrametil-parafenil endiamina al 1%. Las cepas empleadas se suspenden hasta alcanzar una turbidez de 0. Durante su almacenamiento se observan periódicamente y se procede a la eliminación de aquellos que esten precipitados.

Conservación de cepas para el control biológico Como se ha explicado. etc. esporas. así como otros discos que se utilizan para la realización de diferentes pruebas diagnósticas como: optoquina. Su eficacia se debe comprobar con cepas controles conocidos con respecto a su sensibilidad o resistencia a los diferentes antibióticos. 249 . El control se realizará cuando se empiece a utilizar un nuevo lote de medios de cultivo. conjuntamente con los antibiogramas que se realicen ese día. así como para el control del funcionamiento de los antígenos y los antisueros empleados en el laboratorio se requiere del empleo de cepas microbianas debidamente identificadas o certificadas que hayan sido conservadas sin sufrir ningún cambio genético o fisiológico.etc. Los colorantes de uso menos frecuente como los empleados para la coloración de cápsulas. Cada lote que vaya a empezar a utilizarse debe comprobarse con sueros negativos y positivos. Con posteridad a estas comprobaciones el control se realizará una vez por semana. para la comprobación de la eficiencia de los medios de cultivo y colorantes. Para ello. los laboratorios deben disponer de una colección acorde con las investigaciones que realiza. En cada prueba que se vaya a realizar se empleará en paralelo un suero testigo de reactividad conocida. de reactividad conocida. En relación con estos últimos se recomienda dividir el suero en alicuotas para evitar repetidas congelaciones y descongelaciones que pueden afectar el resultado de las pruebas. bacitracina.preparan y posteriormente una vez por semana. Control de discos para antibiograma Los discos para antibiograma. Recomendándose además el empleo de sueros dobles. no debiendo utilizarse después de la fecha de vencimiento. mientras que otros requieren congelación. se prueban por igual método cada día que vayan a ser utilizados. se deben conservar en refrigeración (congelación) en los recipientes de fábrica provistos de material desecante. Control de antígenos y antisueros Para su conservación algunos antígenos y antisueros se almacenan en refrigeración de 2 a 8ºC. Para comprobar su efectividad se utilizarán cultivos puros recientemente obtenidos.

conservándose igualmente en refrigeración. mediante la cual el agente microbiano se mantiene vivo sin crecer ni reproducirse.Métodos de conservación de cepas Cualquier método que se vaya a emplear debe propiciar microbiostasis. 2. pudiendo añadirse después de la siembra una capa de aceite mineral con lo cual se excluye al oxígeno al mismo tiempo que evita la desecación del medio. Concluida la deshidratación. 3. distribuyendo algunas en ámpulas de vidrio. Conservación a corto plazo Este método se sustenta en el empleo de medios de cultivo con bajo potencial nutricional y la conservación de los cultivos en refrigeración. Procedimiento 1. Los cultivos congelados en ámpulas son colocados en una liofilizadora para efectuar su desecación. que consiste en un método de deshidratación con vacío a muestras congeladas. Las especies anaerobias extrictas deben ser sembradas en medio de tioglicolato en tubos de ensayo o caldo con carne picada. conservado en refrigeración. 250 2. procediendo de inmediato a su congelación. Suspender el cultivo en suero inactivado o leche estéril. con lo cual se logra mantener la cepa durante varios meses. 1. 3. se emplea la liofilización. Etiquetear el ámpula con el nombre de la especie. debiendo guardarse en refrigeración. 4. debido al enlentecimiento de su actividad metabólica. La mayoría de los microorganismos aerobios se pueden conservar en cultivos sobre agar inclinado. Para la conservación de algunos microorganismos anaerobios se emplea la siembra por punción con aguja en medio agarinizado. Los diferentes métodos empleados pueden proporcionar una conservación a corto o a largo plazo. en tubos de ensayo. las ámpulas se sellan al vacío con la llama del mechero que forma parte de este equipo. . Conservación a largo plazo Para conservar las cepas durante varios años.

el laboratorio de referencia enviará muestras cifradas. Del laboratorio de la unidad al laboratorio de referencia Se remitirá al laboratorio de referencia un porciento establecido de: frotis coloreados y muestras. examen concentrado y serológico. Control externo Estará a cargo de un laboratorio de referencia de nivel municipal.Frotis de esputo coloreado por el método de Ziehl Neelsen para investigar la presencia de BAAR. siendo introducidas "a ciegas" en la forma y explicada.El material queda dentro del ámpula en forma de una tableta pudiendo en este estado de desecación conservarse durante varios años. Además de muestras pueden enviarse cultivos para determinar la sensibilidad o resistencia de la cepa a los diferentes antibióticos. para estudio por examen directo. muestras y cepas predeterminadas para este control son los siguientes: Frotis coloreados a.Envío en menos de 72 horas de todas las láminas con diagnóstico negativo para evaluación de la extensión y la coloración 251 . Cuando se requiera utilizar la cepa. Este control puede producirse en dos direcciones: Del laboratorio de referencia al laboratorio que será evaluado Para realizar el control con esta variante. notificándose al laboratorio evaluado los resultados. Los resultados obtenidos serán informados en encuestas que acompañan a las muestras que serán remitidas al laboratorio de referencia para su revisión. Los frotis. y procesadas como si se trataran de muestras ordinarias. o sueros para determinaciones serológicas de diferentes tipos. provincial o nacional. procediendo a su incubación de 24 a 48 horas. así como de cepas que serán sometidas a estudios de comprobación del diagnóstico emitido por la unidad. . cuyos resultados no son conocidos por el jefe del laboratorio que será evaluado. se rompe asépticamente el ámpula depositando la cepa liofilizada en un medio líquido adecuado.

C. . .El 10 % de las muestras donde he hayan identificado huevos o larvas de helmintos. Suero o L. Cepas Envío del 100% de las cepas recuperadas en los casos de Síndrome Neurológico Infeccioso y de Infecciones Diarreicas Agudas. Muestras .Heces fecales Enviar: El 5 % de las muestras donde se hayan identificado especies de protozoarios. Enviar el 100 % de las muestras reactivas y débil reactiva empleadas para la prueba de VDRL. 252 .R.Enviar un 5% de los frotis con diagnóstico negativo.Frotis de exudados uretales y endocervicales para investigar la presencia de diplococos arriñonados (intra y extracelulares) . Enviar el 2 % de las muestras no reactivas.El 25 % de las muestras con diagnóstico negativo. .Enviar el 100% de los frotis con diagnóstico positivo.

4. 6. 11. ¿De cuantas maneras diferentes se puede efectuar el control externo? ¿Cuáles son las muestras que deben remitirse al laboratorio de referencia para su control y con qué periodicidad? 253 . 12. 8. 7. ¿Cómo se controla la precisión de los resultados? ¿Cuáles son las principales fuentes de error? ¿Cuáles son los principales aspectos en cada una de las fuentes de errores? ¿Qué aspectos se describen en el manual de normas y procedimientos? ¿Cómo se controlan los equipos e instrumentos? ¿Qué aspectos han de tenerse en cuenta para el control de los medios de cultivo? Explique cómo se controla el estado de los colorantes y los reactivos. 10. ¿Cuáles son las principales causas de la falta de calidad en los diagnósticos de laboratorio? ¿Cuáles son los objetivos del control para la garantí de la calidad? Enumere los indicadores del control interno. 5. 3. 2. 13. 14.CUESTIONARIO 1. 9. ¿Cómo se deben conservar los discos impregnados en antibióticos? Refiérase a la manera de controlar los antígenos y los antisueros.

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