CALIDAD DE METODOS ANALITICOS

Julia Vinagre

INTRODUCCION
Los mtodos analticos que se apliquen para producir datos de composicin qumica de alimentos deben ser apropiados, utilizar tcnicas analticas exactas y ser realizados por analistas entrenados. La seleccin de un mtodo analtico debe ser realizada por el consejero cientfico del programa de base de datos, pero esta responsabilidad debe ser compartida con el analista. Si se considera que el principal objetivo de la base de datos de composicin de alimentos es nutricional, es evidente que el mtodo de anlisis seleccionado para un nutriente debe reflejar lo ms fielmente posible el valor nutritivo del alimento. En esta eleccin de un mtodo particular, se debe conocer, en primer lugar la qumica del nutriente, la naturaleza del sustrato alimenticio a ser analizado, el efecto del procesamiento y la preparacin sobre la matriz del alimento y en el nutriente, y el rango esperado de concentracin del nutriente. El segundo requisito es comprender las implicancias nutricionales del nutriente, lo cual incluye su rol, su distribucin en los alimentos y su importancia relativa en alimentos individuales en el suministro dietario total del nutriente. El proceso analtico se puede considerar dividido en 3 etapas: i)operaciones previas (muestreo, acondicionamiento, disolucin, separaciones, reacciones analticas y otras); ii) Medicin y traduccin de la seal analtica mediante el uso de instrumentos y; iii) toma y tratamiento de datos. La calidad de los resultados depende de la calidad de las diferentes etapas del proceso analtico. En la eleccin de un mtodo se debe focalizar la atencin en los principios analticos involucrados, ms bien que en el grado de sofisticacin del instrumento. Muchas veces un mtodo con uso de instrumentos modernos puede producir valores menos confiables que el mtodo tradicional que pretende reemplazar y es preferible desarrollar programas que aseguren la calidad de los datos obtenidos. Suele suceder tambin que las legislaciones de alimentos se basen en un mtodo estandarizado oficial que puede no ser el ms adecuado desde el punto de vista nutricional y, por tal motivo, se deben tomar decisiones individuales en cada caso.

CRITERIOS PARA LA ELECCION DE UN METODO

Basndose en las consideraciones de Egan, la eleccin de mtodos debe considerar: a. Dar preferencia a mtodos cuya calidad y confianza se ha establecido en estudios colaborativos, o similares en varios laboratorios (ISO / REMCO, 1993)

b. Preferir mtodos documentados o adoptados por organizaciones internacionales reconocidas. c. Preferir mtodos de anlisis que se aplican en forma uniforme a varios tipos de alimentos sobre aquellos que se aplican a alimentos especficos. Entre los atributos a considerar en la calidad de un mtodo se deben mencionar aquellas caractersticas que son bsicas: confiabilidad, aplicabilidad, especifidad, exactitud, precisin, detectabilidad y sensibilidad.

Confiabilidad
Es un trmino general cualitativo que expresa el grado de cumplimiento satisfactorio de un mtodo analtico en trminos de sus variados atributos tcnicos (aplicabilidad, exactitud, precisin, sensibilidad y detectabilidad), siendo por lo tanto, un concepto compuesto. El objetivo del anlisis es determinar cul de estos atributos es importante y cul puede estar comprometido. Ejemplo: si se desea analizar un componente mayor no se requiere un bajo lmite de deteccin.

Aplicabilidad
En la aplicabilidad de un mtodo se debe considerar que est libre de interferencias producidas por otros materiales presentes en la muestra alimenticia, asimismo influye el rango en que se va a usar el mtodo.

Especificidad o selectividad
Es la habilidad de un mtodo para responder exclusivamente a la sustancia que se desea analizar. Sin embargo, en algunas ocasiones se aceptan mtodos con una pobre especificidad cuando el propsito del anlisis es captar compuestos similares dentro de un grupo (Ejemplo: grasa total, cenizas) La especificidad se refiere a la propiedad del mtodo de producir una seal medible debida slo a la presencia del analito, libre de interferencia de otros componentes en la matriz de la muestra.

Exactitud
Es la cercana del valor analtico al "valor verdadero" de concentracin del compuesto de inters en el material bajo examen. Es la concordancia entre la mejor estimacin de una cantidad y su valor real. La inexactitud es la diferencia numrica entre el valor promedio de un conjunto de repeticiones y el valor verdadero. En la prctica la cercana a un estndar de algn tipo se toma como medida de exactitud. Matemticamente se expresa: Desviacin:

Desviacin relativa:

Recuperacin:

X = valor promedio = valor verdadero De todas ellas, sin lugar a dudas, la ms utilizada es la recuperacin. Si bien el valor verdadero de la concentracin no se conoce sino que slo puede estimarse, es posible preparar una muestra por un procedimiento ms exacto que el evaluado (por pesada, dilucin en peso, etc.) y utilizarla como referencia. La exactitud o mejor dicho la inexactitud debe ser tan pequea como sea posible para que el valor medido se aproxime al de referencia, o sea, la recuperacin debe acercarse al 100%. En el anlisis de macrocomponentes, en general se requiere que el valor medido no difiera significativamente del aceptado como referencia. Para determinarlo, se utiliza un ensayo t de Student, efectuando varias determinaciones de la muestra de concentracin conocida y calculando el t experimental (tob) que se compara con tablas t para n-1 grados de libertad en el nivel de confianza escogido, generalmente p=0,05.

Si el tob es menor que el valor tabulado el mtodo tiene la exactitud requerida para ese mbito de confianza. Si el tob resulta mayor que el valor tabulado, el mtodo tiene un error sistemtico, del signo resultante, para ese mbito de confianza.

Precisin

En trminos reales ms bien se debe considerar la imprecisin que corresponde, aproximadamente, al trmino dispersin y variabilidad analtica. La imprecisin se determina haciendo ensayos repetitivos de una misma muestra analtica. o de cada. conjunto de muestras analticas y luego se calcula la desviacin estndar, siendo muy importante en este caso la homogeneidad del sustrato. La precisin tiene la desventaja que requiere que los valores se distribuyan normalmente, que enfatiza los valores extremos de una serie de mediciones y que en muchos mtodos aumenta la desviacin estndar cuando aumenta la concentracin. Para evaluar datos de un amplio rango de concentracin es ms til calcular la desviacin estndar relativa (RSD) o bien el coeficiente de variacin por ciento (CV%). La precisin est relacionada con la disposicin de las medidas alrededor de su valor medio o central y corresponde al grado de concordancia entre ensayos individuales cuando el mtodo se aplica repetidamente a mltiples alcuotas de una muestra homognea. La precisin se expresa matemticamente por "S" o ms comnmente por RSD o CV.

Los estimadores desviacin estndar y desviacin estndar relativa permiten evaluar la incertidumbre en. la estimacin de la medida (error aleatorio, correspodiente a la dispersin de datos alrededor. de la.media). La precisin de un mtodo analtico debe estudiarse sobre: a. El sistema, evaluando la dispersin de al menos 6 inyecciones del estndar por ejemplo en tcnica HPLC b. El mtodo, evaluando la dispersin de varias preparaciones de la muestra final homognea. La evaluacin corresponde a todo el procedimiento, desde la preparacin de la muestra hasta la medicin del analito por parte del instrumento. La imprecisin causada por las diluciones es un factor que con frecuencia se olvida. La precisin se puede medir en condiciones repetitivas (mismo analista, mismo da, mismo instrumento) y en condiciones reproducibles (diferente analista, diferente da, diferente instrumento). En muchos casos debe indicarse el lmite o intervalo de confianza de la medida el cual corresponde al rango en el cual puede definirse la probabilidad de capturar el parmetro con la probabilidad indicada.

Cuando el nmero de muestras es pequeo (menos de 30), las medidas independientes y la distribucin normal se calculan de acuerdo a la distribucin t de Student:

Student tabulado para n mediciones con v=n-l grados de libertad y para varios niveles a de significancia (el ms aplicado es p=0,05 correspondiente a un intervalo de confianza del 95%).

Detectabilidad
Es la cantidad mnima de una sustancia (definida en trmino de cantidad absoluta o concentracin) que proporciona una respuesta medible para un mtodo descrito.

Sensibilidad
Es la pendiente de la curva respuesta -concentracin, o el cambio de respuesta por unidad de concentracin. Si la pendiente es empinada el mtodo tiene alta sensibilidad y si la pendiente es poco empinada, el mtodo posee una baja sensibilidad. En estudios de composicin de nutrientes el anlisis de elementos trazas requiere alta sensibilidad, lo que en la prctica se puede lograr mediante amplificacin electrnica o por concentracin qumica del analito. En la Grfico 1 se resumen los atributos a considerar en la calidad.

VALIDACION DE METODOS
An los mtodos bien establecidos necesitan ser validados por los analistas usando el personal, reactivos y equipos del laboratorio cuyo mtodo se quiere validar. La validacin puede hacerse analizando un conjunto de muestras que han sido analizadas por otro mtodo o por otro laboratorio. El analista debe familiarizarse con un mtodo y asegurarse que ha alcanzado el grado deseado de recuperacin y precisin despus de haber analizado un conjunto de blanco y muestras analticas sintticas o fortificadas. Grfico 1 Respuesta en funcin de la concentracin del analito Atributos de los mtodos

Si un mtodo particular sobre un alimento, o realizado en otro laboratorio, ha dado un cumplimiento adecuado est indicando que el mtodo es adecuado, pero esto no significa que se pueda asumir que si el mtodo se ha realizado satisfactoriamente con un alimento determinado opere exactamente igual con un alimento diferente sino muy por el contrario, se debe asumir la posicin opuesta hasta comprobarlo. As por ejemplo, alimentos procesados y formulados, especialmente si contienen emulsificantes, pueden constituirse en un problema especial cuando se analiza, con un mtodo de anlisis desarrollando para un alimento primario. La validacin consiste, en esencia, en confirmar y documentar que los resultados emanados de la aplicacin de un mtodo de anlisis son confiables. Evidentemente todo nuevo mtodo analtico debe validarse para demostrar su idoneidad, pero generalmente existen metodologas antiguas aplicadas durante mucho tiempo y entonces tiene poco sentido validar como si fuera una metodologa desconocida. Se habla entonces de una validacin retrospectiva, donde se pueden combinar los nuevos criterios de validacin con toda la experiencia ya adquirida. En cambio, se conoce como validacin prospectiva a la que se realiza frente a un producto nuevo. En muchos casos un mtodo analtico es desarrollado y validado por un grupo de trabajo y aplicado por otro grupo y para asegurar que este ltimo sea a su vez capaz de entregar resultados confiables, es conveniente realizar una transferencia de validacin. Si se trata, por ejemplo, de un mtodo cromatogrfico consiste en la comparacin de resultados de las pruebas de adecuacin y anlisis en paralelo, al menos dos muestras homogneas de concentraciones conocidas, dentro del rango de aceptacin del producto o dentro del rango de aplicacin de la metodologa.

En un ensayo de validacin deben considerarse los siguientes parmetros:

- selectividad - linealidad - precisin - exactitud - sensibilidad robustez

La selectividad, precisin, exactitud y sensibilidad, fueron descritas con anterioridad y en lo que respecta a la linealidad de un mtodo analtico se refiere a la proporcionalidad entre la concentracin de analito y su respuesta. Este paso de la validacin es necesario si se va a trabajar con un solo estndar en las determinaciones de rutina, aunque pueden aceptarse mtodos no lineales, si se opera con estndares mltiples cada vez. Adems, conjuntamente se determina el rango lineal, es decir, el intervalo comprendido entre la concentracin mnima y mxima de analito para el cual el mtodo ha sido probado y dentro del cual se puede efectuar el dosaje por interpolacin en una curva estndar. Para su determinacin se prepara una serie de mnimo cinco diluciones de un estndar comprendiendo los mbitos estimados de trabajo con un exceso de al menos 50% sobre el lmite superior y un defecto de 50% debajo del lmite inferior. Estas soluciones se inyectan, al menos por duplicado, y se determina la curva de regresin Y = bX+a sobre los puntos individuales sin promedios por el mtodo de los cuadrados mnimos y se grafica para su documentacin. En muchos casos es interesante comparar los resultados de la recta de regresin obtenida sobre el analito puro, con la correspondiente a analito + matriz (en el Grfico 2, se seala para HPLC el efecto de la matriz). Grfico 2 Rectas de regresin del analito y analito ms matriz para HPLC

La no correspondencia de las rectas indica problemas por efecto de la matriz y est relacionada con la exactitud del mtodo en cuestin. Estos efectos de matriz pueden clasificarse de acuerdo a su naturaleza en aditivos y multiplicativos. Los aditivos se refieren a un desplazamiento positivo del cero en presencia de la matriz y los multiplicativos a un cambio de la pendiente. Independiente de la apariencia de la recta, resulta conveniente evaluar los estimadores de regresin en un intervalo de confianza dado (por ejemplo p=0,05):
- Del coeficiente de regresin lineal (r). Se determina para evaluar el ajuste al modelo lineal propuesto, Y=bX+a. - De la pendiente (b). Se determina como parmetro indicativo de la sensibilidad del mtodo, para evaluar la correlacin de diferentes mtodos. El lmite de confianza para el estimador de la pendiente (b) se calcula en funcin de su varianza Sb. - De la ordenada al origen (a). Se determina para evaluar la proporcionalidad de la funcin analtica, es decir, que la recta pase por el origen y que cualquier desviacin pueda adjudicarse nicamente a un error aleatorio. El lmite de confianza del estimador de la ordenada al origen (a) se calcula en funcin de su varianza Sa.

El mejor indicador del modelo lineal, en reemplazo de r es el clculo del valor tr con n-2 grados de libertad el cual se compara con el valor t tabulado para el nivel de confianza requerido. La hiptesis nula es "no existe correlacin entre X e Y", si el valor observado de tr es mayor que t tabla se rechaza la hiptesis y existe correlacin lineal significativa con la probabilidad calculada.

BIBLIOGRAFIA
1. Quattrocchi, O.A.; Abelaira, S. L. and Laba, R.F. 1992. Introduccin a la HPLC; Aplicacin y prctica. Buenos Aires, Argentina, Artes Grficas Farro 2. Euchem and Welac. 1993. Acreditation for Chemical LaboTatories. 3. Miller, J.C. and Miller, J.N. 1988. Statistic of Analytical Chemistry. John Wiley & Sons. 4. Garfield, F.M. 1991. Quality Assurance Principies for Analytical Laboratories. AOAC International.

Conocers

La Qumica Analtica y su metodologa

Definicin La Qumica Analtica puede definirse como la ciencia que desarrolla y mejora mtodos e instrumentos para obtener informacin sobre la composicin y naturaleza qumica de la materia. Dentro de la Qumica Analtica se incluye el Anlisis Qumico que es la parte prctica que aplica los mtodos de anlisis para resolver problemas relativos a la composicin y naturaleza qumica de la materia. Los mbitos de aplicacin del Anlisis Qumicos son muy variados, en la industria destaca el control de calidad de materias primas y productos acabados; en el comercio los laboratorios certificados de anlisis aseguran las especificaciones de calidad de las mercancas; en el campo mdico los anlisis clnicos facilitan el diagnostico de enfermedades. Es interesante realizar una definicin de trminos ligados al anlisis: Muestra: Parte representativa de la materia objeto del anlisis. Analito: Especie qumica que se analiza. Tcnica: Medio de obtener informacin sobre el analito. Mtodo: Conjunto de operaciones y tcnicas aplicadas al anlisis de una muestra. Anlisis: Estudio de una muestra para determinar sus composicin o naturaleza qumica. Dentro de la Qumica Analtica tambin pueden diferenciarse diversas reas segn la informacin que se desea obtener. As, la Qumica Analtica Cualitativa se centra en identificar la presencia o ausencia de un analito, mientras que la Qumica Analtica Cuantitativa desarrolla mtodos para determinar su concentracin.

Mtodos de anlisis Mtodos clsicos, que se basaban en propiedades qumicas del analito. Se incluyen las gravimetras, las volumetras y los mtodos de anlisis cualitativo clsico. Mtodos instrumentales, basados en propiedades qumico-fsicas. La clasificacin de los mtodos instrumentales se realiza en base a la propiedad que se mide (espectroscpicos, electroanalticos, trmicos...). Mtodos de separacin. Se incluyen en este grupo los mtodos cuya finalidad es la separacin de compuestos para eliminar las interferencias y facilitar las medidas

Metodologa del proceso analtico

La Qumica Analtica alcanza sus objetivos mediante una metodologa que se fundamenta en la aplicacin del mtodo cientfico. Desde un punto de vista formal, esta metodologa es comn a todas las ciencias experimentales y sigue el proceso mostrado en la figura:

Particular de la Qumica Analtica es la metodologa del Anlisis Qumico, que puede resumirse en un proceso analtico general consistente en un conjunto de procedimientos realizados para solucionar un determinado problema analtico. En la figura se esquematiza este proceso:

La definicin del problema es la primera etapa, en ella se plantea el tipo de anlisis que se necesita y la escala de trabajo. Tras ello, debe realizarse

la eleccin del mtodo analtico, aspecto clave para una resolucin adecuada del problema. Una vez elegido el mtodo, se procede a su ejecucin. Posteriormente, se pasa a valorar los resultados obtenidos para establecer si el problema ha sido resuelto de forma satisfactoria. Si no es as, se debera reiniciar el proceso analtico y replantear el problema. El desarrollo prctico del mtodo analtico consta de tres etapas: Las operaciones previas o preliminares, pueden descomponerse en dos subetapas. En la primera, se realiza una toma de muestrarepresentativa del material a analizar. En la segunda, se lleva a cabo una transformacin de la muestra o parte de la misma, de forma que la especie o especies qumicas de inters pasen a una forma medible inequvocamente. Esta transformacin, de ser necesaria, podra requerir etapas de separacin de sustancias interferentes y etapas de reaccin qu&icute;mica que hagan ms sensible y especfica la medicin de la seal debida al analito. En la etapa de adquisicin de datos tiene cada vez ms importancia la instrumentacin analtica. El proceso de medida instrumental bsico puede separarse en tres etapas: la generacin de un flujo de energa, la interaccin de este flujo con la muestra y la medicin y procesado de la seal procedente de la muestra. Por ltimo, la etapa de tratamiento de datos consiste en el procesado matemtico de los datos para obtener unos resultados que den el valor ms probable de la informacin buscada, as como la incertidumbre que la acompaa. Caractersticas de calidad de los mtodos analticos

Exactitud: Grado de concordancia entre el resultado y un valor de referencia certificado. En ausencia de exactitud se tiene error sistemtico. Precisin: Grado de concordancia entre los datos obtenidos de una serie. Refleja el efecto de los errores aleatorios producidos durante el proceso analtico. Sensibilidad: Capacidad para discriminar entre pequeas diferencias de concentracin del analito. Se evala mediante la sensibilidad de calibracin, que es la pendiente de la curva de calibracin a la concentracin de inters. Lmite de deteccin: Concentracin correspondiente a una seal de magnitud igual al blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco. Intervalo dinmico: Intervalo de concentraciones entre el lmite de cuantificacin (LOQ) y el lmite de linealidad (LOL). Selectividad: Cuantifica el grado de ausencia de interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz. Seguridad: Amplitud de condiciones experimentales en las que puede realizarse un anlisis.

Adems, habr que considerar otro tipo de parmetros asociados y de gran importancia prctica como son la rapidez, costo, seguridad del proceso, peligrosidad de los residuos, etc.

Un mecanismo muy indicado para conocer la calidad del mtodo analtico es participar en programas de intercomparacin con otros laboratorios. En ellos, un organismo independiente evala los resultados, tanto en exactitud como en precisin, sobre muestras enviadas a los laboratorios participantes. Los resultados de la intercomparacin permiten corregir los errores de funcionamiento del mtodo analtico y, una vez comprobada la calidad del mismo, obtener la homologacin del laboratorio para realizar los anlisis. La homologacin requiere la puesta en marcha de un programa de garanta de calidad, que permita controlar el funcionamiento global del laboratorio.

Trazabilidad de los resultados analticos

La calidad de los resultados analticos exige que estos sean trazables, esto es que puedan relacionarse directamente con las unidades patrones del sistema internacional de medida (amperio, kilogramo, mol, metro y segundo). La trazabilidad exige una cadena ininterrumpida de comparaciones que une el resultado obtenido con los estndares del sistema internacional y que, en anlisis qumico, pasa por las sustancias de referencia, los patrones qumicos tipo primario y secundario, los estndares fsicos, los pesos atmicos, etc. El concepto de trazabilidad se aplica tanto al resultado de un anlisis, como a una medida cualquiera, al instrumento con el que se obtiene, el mtodo que se aplica y el laboratorio mismo. Cuando un resultado es trazable implica que ha sido obtenido en un laboratorio trazable, aplicando instrumentos trazables y un mtodo trazable. En un mtodo absoluto como la gravimetra la cadena de trazabilidad es corta: Muestra---precipitado---masas atmicas----mol, Kg En un mtodo relativo como una volumetra la cadena es ms larga:

Muestra---patrn secundario---patrn primario---masas atmicas----mol, Kg

Psycho - pass 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Fatima Hatake Uchiha kuroshitsuji 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Denise Iero Lee Kobato 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Fatima Hatake Uchiha toradora 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Enzeru San KUROKO NO BASKET 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta 1

Ana Gabriela Genocyber 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Carlos Garcia Chacon sao 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Mauricio Montiel full metal alchemist 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta 1

Gianfranco Jose Vega Quionez deadman wonderland 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Santiago Casas naruto 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Karina Maricela Kuchiki Kurosaki amnesia 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Eriol Shaoran Kinomoto Daidojy rosario vampire 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Luis Gerardo Zuiga binbougami ga 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Jesus Alcantara inuyasha 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta 1

Ernesto Torres another 24 de Marzo a la(s) 13:58 a travs del celular Me gusta 1

MAnuel Chino GMz k-on! 24 de Marzo a la(s) 13:58 Me gusta

Roxy Garza mirai nikki 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta 1

Nicolas Uchiha Martinez Ranma 1/2 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta 1

Karla L Flores Carrasco death note 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta 1

SAm Addiictiion lovely complex 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Jose Santiago 11eyes 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Alastor Ish D Gray Man 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Fernando Roman Martinez FLCL 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Santiago Longueira Chuk norris 24 de Marzo a la(s) 13:59 Editado Me gusta

Marijose Claire Gasai Kennedy fma brotherhood 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

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Luis David Velasquez Agapito grils bravo 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Homura Shimizu Moriyama ao no exorcist 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Jxssy Neira Carrasco 11 eyes 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Sukkari Katsura Kotonoha Samurai x 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Carli Powotita Black Rock Shooter! 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Marifer Picado fruits basket 24 de Marzo a la(s) 13:59 Me gusta

Jatakaele DuraCumana Dacaduragon samuray champloo 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

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Axel Dark evangelion 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

Carlos Alberto Alcantar Bleach 24 de Marzo a la(s) 14:00 a travs del celular Me gusta

Kyon Kun Poblete Hirugashi Btooom! 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

Juan Torres Cora Gantz 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

Miguel Angel Solis Benalcazar nagasarete airantau 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

Ikuto'Kuun Tsukiyomi' Shugo Chara 24 de Marzo a la(s) 14:00 a travs del celular Me gusta

Axel Yecid Berdeja Apaza KIBA 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

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Diego Thrash Mustaine Moreno beelzebub 24 de Marzo a la(s) 14:00 Me gusta

Cristian Orlando Barrientos Loera beck mongolian chop squad 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

Eduardo Villarreal Quionez kamisama hajimemashita 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

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Alfredo Zuiga Rivera dragon ball 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

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Angello Az E Red Data Girl 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

Jael Charlotte Mondaiji tachi ga isekai kara kuru sou desu yo 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

Nyan Miku-Senpai k-on 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

Erza D. Hime One piece. 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

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Marcos Videla otaku no musume san 24 de Marzo a la(s) 14:01 Me gusta

Kevin Sneyder Blandon Alvarez monster 24 de Marzo a la(s) 14:02 Me gusta

Nicolas Alberti Perez BLEACH 24 de Marzo a la(s) 14:02 Me gusta

Rover Andr Muoz durarara 24 de Marzo a la(s) 14:02 Me gusta

Nicolas Pacheco soranotoshimono 24 de Marzo a la(s) 14:02 Me gusta

Flor Priscila Espinoza Mejia kaichou wa maid sama c: 24 de Marzo a la(s) 14:03 Me gusta

Viry Estrada Seikon No Qwaser 24 de Marzo a la(s) 14:03 Me gusta

Csar smodes Get Backers 24 de Marzo a la(s) 14:03 Me gusta

Grace Corzo Sakura 24 de Marzo a la(s) 14:03 Me gusta

Pamela Biersack one piece 24 de Marzo a la(s) 14:03 Me gusta

Zuriithaa Sst Muexa Full Metal Panic 24 de Marzo a la(s) 14:03 Me gusta

Igarashi Ganta Kun Jigoku shoujo 24 de Marzo a la(s) 14:04 a travs del celular Me gusta

Yerson Silva Fernandez BLACK CAT 24 de Marzo a la(s) 14:04 Me gusta

Alejandra Burchardt Kimi ni todoke 24 de Marzo a la(s) 14:04 Me gusta

Ariana Gamez final fantasy unlimited 24 de Marzo a la(s) 14:04 Me gusta

Ray Macuaga Steins Gate 24 de Marzo a la(s) 14:04 Me gusta

Eddy Panda Lopez fate zeo 24 de Marzo a la(s) 14:04 Me gusta

Zuleima Mendez uta no prince sama maji love 1000% 24 de Marzo a la(s) 14:05 Me gusta

Diana Victoria Rodriguez Quiroz XXX Holic 24 de Marzo a la(s) 14:05 a travs del celular Me gusta

Gabriela Surez death note 24 de Marzo a la(s) 14:05 Me gusta

Manuel Icaro Medabots 24 de Marzo a la(s) 14:05 Me gusta

Sergio Victoria kaichou wa maid sama 24 de Marzo a la(s) 14:06 Me gusta

Brandon Domingo Hernandez Maya beet the vandel buster 24 de Marzo a la(s) 14:06 Me gusta

Dubanne Muoz Muoz Slam Dunk 24 de Marzo a la(s) 14:07 Me gusta

Rene Miguel Kuylen Gundam Seed 24 de Marzo a la(s) 14:07 Me gusta

Ruben Francisco full metal 24 de Marzo a la(s) 14:07 Me gusta

Naxo Kiba Koduro-chan,naruto, ranma, inuyasha 24 de Marzo a la(s) 14:08 Me gusta

Joao Mijhael Benites Vilchez sakurasu no pet no kanojo .. ! 24 de Marzo a la(s) 14:08 Me gusta

Briana Garcia evangelion 24 de Marzo a la(s) 14:08 Me gusta

Jozhy Kaulitz ouran host club 24 de Marzo a la(s) 14:08 Me gusta

Leandro Gomez get backers 24 de Marzo a la(s) 14:08 Me gusta

Luz Dimartino Zamacononski pokemon y clannad 24 de Marzo a la(s) 14:08 Me gusta

Berenice Hueerta School Days 24 de Marzo a la(s) 14:09 Me gusta

Cristian Paz keroro 24 de Marzo a la(s) 14:09 Me gusta

Adriana Loveless Martinez Blandon Dartania 24 de Marzo a la(s) 14:10 Me gusta

Valeria Olarte sakura 24 de Marzo a la(s) 14:10 Me gusta

Erick Trejo Anguila Trejo sakura card cptor 24 de Marzo a la(s) 14:11 Me gusta

Carolina Beln i aquarion evol 24 de Marzo a la(s) 14:11 Me gusta

Charl's Alejandro Yushohakusho, samuray x y Fairy Tail. 24 de Marzo a la(s) 14:12 Me gusta

Edwin Gael Sampayo yuno 24 de Marzo a la(s) 14:12 Me gusta

PaLooma Potter clannad 24 de Marzo a la(s) 14:13 Me gusta

Mary Tborrer Kissxsis 24 de Marzo a la(s) 14:13 a travs del celular Me gusta

Jose Arturo Hernandez Perez Ano hi mita hana no namae 24 de Marzo a la(s) 14:13 a travs del celular Me gusta

Katherinne Harcora Zavala beck 24 de Marzo a la(s) 14:14 Me gusta

Melissa Madonia Serrano Kaichou Wa Maid Sama 24 de Marzo a la(s) 14:15 Me gusta

Zts Eskeleton FAIRY TAIL 24 de Marzo a la(s) 14:19 Me gusta

Kyokaori Akiharu acchi kiicchi 24 de Marzo a la(s) 14:21 Me gusta

Cesar Mendivil blood c 24 de Marzo a la(s) 14:23 Me gusta

Karoliinaa Aguancha Un io le prengunto a su novia: Me quieres? Y ella le contesto que no. Piensas que soy lindo? y ella contesto que no. Me tienes en tu corazn?y ella contesto que no. ... .......Si me fuera, lloraras por mi? y tambin contesto que no . ..............El triste nio se dio media vuelta para irse y ella le agarro del brazo y le dijo: ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ......... ... ... ...... ... ... ... ... ... ..........No no te quiero, TE AMO, No pienso que eres lindo, pienso que eres HERMOSO, No estas en mi corazn, ERES mi corazn. No llorara por ti, MORRIA por ti. Hoy a media noche t amor se va a dar cuenta de que te ama. Algo bonito te va a pasar Maana entre la 1 y las 4 de la tarde.. Da igual donde ests: en Internet, en el colegio, en el trabajo si rompes esta cadena tendrs mala suerte en10 relaciones durante 10 aos

As que pega esto en 20 comentarios y luego presiona F9 Aparecer la letra inicial del chico o chica que te ama 24 de Marzo a la(s) 14:23 Me gusta

Rolando Burguillo seikon no qwaser xD 24 de Marzo a la(s) 14:23 Me gusta

Carlooz Fernandezz Devil May Cry x3 24 de Marzo a la(s) 14:23 Me gusta

Cheshire Cat Pandora Hearts 24 de Marzo a la(s) 14:30 a travs del celular Me gusta

Noctis Lucis Caelum Angel Beats 24 de Marzo a la(s) 14:36 a travs del celular Me gusta

Roxana Alejandra Jimenes school days 24 de Marzo a la(s) 14:37 Me gusta

Jhordi Rg Miray niki 24 de Marzo a la(s) 14:37 Me gusta

Jonhy Garcia Cortez fairiy tail 24 de Marzo a la(s) 14:37 Me gusta


Sacra Schaddai Death note 24 de Marzo a la(s) 14:41 Me gusta

Leonel Medina Ao no exorcist 24 de Marzo a la(s) 14:43 a travs del celular Me gusta

Miguel Yagami to aru kagaku no railgun 24 de Marzo a la(s) 14:48 Me gusta

Xiomara Chavez Guerrero kaichou wa maid - sama 24 de Marzo a la(s) 14:50 Me gusta

Pauly Gomez Kotoura-san 24 de Marzo a la(s) 15:02 Me gusta

Filemon Soto Highschool of the dead 24 de Marzo a la(s) 15:02 a travs del celular Me gusta

Baleri Maidana sekaiichi hatsukoi 24 de Marzo a la(s) 15:14 Me gusta

Andres Veroes days school 24 de Marzo a la(s) 15:18 Me gusta


Lelouch Vi Biritannia Bautista trigun 24 de Marzo a la(s) 15:22 Me gusta

Fercho Rive Cas boku wa tomadachida sukanai 24 de Marzo a la(s) 15:44 Me gusta

Saito Baka DEMON BANE 24 de Marzo a la(s) 15:54 Me gusta

Franco Carpio Gonzlez Zero no tsukaima 24 de Marzo a la(s) 15:56 a travs del celular Me gusta

Yury Katherin Beltran Lozano ranma 24 de Marzo a la(s) 15:58 Me gusta

Isra Sayan Bros Kore wa zombie desu ka 24 de Marzo a la(s) 15:59 a travs del celular Me gusta

Alan Daniel Villalobos Huizar Blood+ 24 de Marzo a la(s) 16:35 Me gusta

Daniel Hernndez Lucky Star 24 de Marzo a la(s) 16:37 a travs del celular Me gusta


Sanntiago Diaz Trevio Kiba 24 de Marzo a la(s) 16:38 Me gusta

Artes Odett Vampire Princess Miyu 24 de Marzo a la(s) 17:18 Me gusta

Josue Espinoza katekyo hitman reborn 24 de Marzo a la(s) 18:37 Me gusta

Erick Quekas Ramirez naruto 24 de Marzo a la(s) 19:28 Me gusta

Muriel Peralta Soliz death note 24 de Marzo a la(s) 19:32 Me gusta

Muriel Peralta Soliz motto to love ru 24 de Marzo a la(s) 19:33 Me gusta

Gianfranco Quispe Cutti full metal alchemist 24 de Marzo a la(s) 19:50 Me gusta

Alejandra Quintana Abundiz Murder princess 24 de Marzo a la(s) 21:01 a travs del celular Me gusta


Xiomara Maite Paez k-on 24 de Marzo a la(s) 22:24 Me gusta

Hades Ewootaku Black cat 24 de Marzo a la(s) 23:06 Me gusta

Erving Josue Espinoza Huter x Huter 25 de Marzo a la(s) 3:59 Me gusta

Elias Gonzalez Kurosaki shuffle! 25 de Marzo a la(s) 5:06 Me gusta

Ricardo Maximan Rubio gokuuuuuuuu o q? 25 de Marzo a la(s) 6:54 Me gusta

Shirley Jazmin Ccompi Taype one piece 25 de Marzo a la(s) 8:11 Me gusta

Lokithaa Maz Na fvvll metal panic 25 de Marzo a la(s) 8:23 Me gusta

Juliocesar Pocasangrerivas pokemon 25 de Marzo a la(s) 8:41 Me gusta


Nekoo Nekito Valerio Miranda Eligen lied *-* el primer gore qe vi :'D 25 de Marzo a la(s) 11:48 a travs del celular Me gusta

Link Negas Aquimichi naruto shippuden 25 de Marzo a la(s) 14:23 Me gusta

Karu Saru school rumble 25 de Marzo a la(s) 14:48 Me gusta

Elvis Bellido Cori gundam 00 25 de Marzo a la(s) 14:51 Me gusta

Antony Alexsander Aguilar ******* 25 de Marzo a la(s) 14:51 Me gusta

Miriam Jese Moron Corrales zacura 25 de Marzo a la(s) 15:07 Me gusta

Carolina Ivaez Naruto? o.o 25 de Marzo a la(s) 15:12 Me gusta

EXACTITUD Y PRECISIN DEL MTODO ANALTICO

DETERMINACIN DE LA EXACTITUD DE UN MTODO ANALTICO:

La exactitud se refiere a la desviacin de un resultado analtico respecto al valor verdadero, por tanto, se relaciona con la existencia de un error sistemtico que haga que los resultados se desven de forma constante respecto a los valores esperados; es decir, que la media experimental difiera del valor verdadero.

Existe material de referencia para la determinacin de nandrolona en la muestra, que se usan en los protocolos propuestos por la agencia mundial antidoping (WADA), para la verificacin de la calidad de la metodologa analtica utilizada. Nosotros encontramos el material siguiente, que es nombrado en varios artculos referidos a anlisis de nandrolona en orina:

19-Norandrosterone (2.13 ng/g) en orina humana liofilizada (freeze-dried) (20 mL) n de referencia MX002

Adems de este ejemplo, existe material de referencia para todos los dems esteroides anabolizantes prohibidos en competicin cuya produccin es financiada por el WADA (World Anti-Doping Agency) y el COI (Comit Olmpico Internacional). Podemos consultar algunos de ellos en la siguiente lista:

Adems, como curiosidad, cabe mencionar que slo la WADA tiene la capacidad de acreditar el material de referencia certificado referido a estas sustancias y que controla el acceso a los mismos a travs de acreditaciones: slo los laboratorios reconocidos por este organismo tienen acceso a dicho material.

El anlisis de este material de referencia certificado, nos permitir determinar si nuestro mtodo analtico es exacto o no comparando el valor verdadero (la concentracin certificada) con la media experimental que hayamos obtenido aplicando el test estadstico t de student.

En cuanto a los mtodos oficiales, el WADA publica criterios de validacin de los mtodos analticos, que usan los laboratorios para valorar la calidad de su metodologa. Se suele usar el documento tcnico TD2003IDCR, que podemos consultar en el siguiente link:http://www.wada-ama.org/rtecontent/document/criteria_1_2.pdf

DETERMINACIN DE LA PRECISIN DEL MTODO ANALTICO:

Una vez vistos los mtodos de anlisis que podemos emplear en la determinacin de anabolizantes en orina, realizaremos un estudio para comprobar la precisin de stos (y si hay varios mtodos determinar cul de ellos es ms preciso).

La precisin es el nivel de concordancia entre los resultados obtenidos cuando aplicamos varias veces el mismo mtodo analtico a la misma muestra. Cunto menor es el grado de concordancia, menor es la precisin, y esto es indicativo de que el mtodo presenta errores aleatorios, que hacen que el resultado se desve del valor medio. Por el contrario, cuanto mayor sea el grado de concordancia entre los resultados, mayor precisin presentar el mtodo analtico, lo que indica que el mtodo no presenta errores aleatorios, o que estos errores son aceptables.

Para determinar la precisin debemos conocer la varianza de los resultados. Con ella podremos calcular el coeficiente de variacin. Por norma general, si ste es menor del 5% el mtodo se puede considerar preciso.

El coeficiente de variacin se calcula mediante la siguiente expresin matemtica:

La varianza tambin permite comparar dos mtodos analticos, siendo ms preciso el que presente menor varianza. Adems, para comprobar si existe una diferencia real entre las varianzas de los dos mtodos, es decir, para determinar si son igual de precisos o no, podemos aplicar el test F de dos colas utilizando los resultados obtenidos para la desviacin tpica o estndar. Esto nos permite, por ejemplo, determinar si un mtodo es preciso o no testndolo con otro del que sabemos que s lo es. La medida de la desviacin estndar puede ser subdividida en 3 categoras:

- Repetibilidad: Da una idea del tipo de variabilidad que se puede esperar cuando el mtodo es desarrollado por un mismo analista, en un mismo laboratorio con un mismo instrumento analtico y en un periodo corto de tiempo. Por ejemplo, la variabilidad esperada entre los resultados cuando la muestra es analizada por duplicado.

- Reproducibilidad: Se obtienen resultados independientes mediante el mismo mtodo aplicado a la muestra en diferentes condiciones (diferentes laboratorios, diferentes instrumentos analticos, diferente analista, periodos largos de tiempo).

- Precisin intermedia: ha sido definida por la ICH como la variabilidad obtenida en un anlisis realizado en un mismo laboratorio en un periodo de tiempo prolongado. La repetibilidad y la reproducibilidad dependen de la concentracin de analito y, en consecuencia, debieran determinarse para varias concentraciones. Lo ms comn es hacer 11 rplicas del analito en una disolucin patrn, aunque este nmero de rplicas se puede variar en funcin de diversos factores.

Por ejemplo, en el texto: "The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A laboratory guide to method validation and related topics. Eurachem Guide, 1998 y Gua para la validacin de mtodos de ensayo. OAA.DC-LE-05", encontramos esta tabla que muestra el nmero de rplicas que consideran que se deberan elaborar relacionadas con repetibilidad y reproducibilidad.

El criterio de aceptacin utilizado depende del tipo de anlisis que se est realizando. Por ejemplo, en anlisis farmacolgicos, se suele considerar preciso un mtodo si su CV es menor del 1%; sin embargo, lo ms comn en muestras biolgicas como es el caso de la orina, se

suele aceptar una CV menor al 15% a concentracin lmite o al 10% a otras concentraciones. Aunque como ya hemos dicho, por norma general se acepta que un mtodo es preciso cuando su CV es menor al 5%.

Como ejemplo del clculo de la precisin de un mtodo analtico, vamos a considerar el caso real de la determinacin de 19-norandrosterona en orina humana por Cromatografa de Gases acoplada a Espectrometra de Masas de Trampa de Iones realizada por Juan Francisco Snchez Bruzn, Rodny Montes de Oca Porto, Mirta Torres Castellanos, Roberto Oropesa Rodrguez y Mario Jos Granda Fraga para el Instituto de Medicina del Deporte, Laboratorio Antidoping, de la Ciudad de La Habana. El artculo completo puede leerse en este linkhttp://www.cnic.edu.cu/revista%20CENIC/revista/files/CQ-2004-2-059-068.pdf : Precisin intra-ensayo (repetibilidad) En este caso, la precisin se estudi a dos niveles de concentracin (una ms baja de 0,5 ng/mL y una de mayor concentracin de 10 ng/mL). Se procesaron cuatro rplicas de cada nivel de concentracin en un mismo da y se calcul el coeficiente de variacin de los tiempos de retencin relativos (TRR) y el CV de la relacin entre los iones. Como criterio de aceptacin, se tuvo en cuenta que el CV para el nivel inferior fuese menor al 20 % y en el nivel superior menor de un 10 % para ambos parmetros.

Adems, se aplic la prueba de Dixon para descartar errores groseros (r10 de la tabla de Dixon para una probabilidad del 5 %).

Los resultados que obtuvieron se reflejan en las dos tablas inferiores: se observa que el mtodo cumple con los lmites de aceptacin establecidos previamente.

PUBLICADO POR YOLANDA, MIGUEL, LAURA, SONIA Y LETICIA EN 05:06

1 COMENTARIO:

1. Yolanda, Miguel, Laura, Sonia y Leticia24 de abril de 2010 14:41 Si os interesa saber ms acerca de la precisin, hemos encontrado adems una tabla obtenida de "AOAC Peer-Verified Methods Program, Manual on policies and procedures, Arlington, Va., USA (1998)" en la que relaciona la concentracin del analito en nuestra muestra con la precisin que podemos esperar. Analyte%-----Analyte 100................1.................100%.....1.3 10................10-1...............10%.......2.8 1.................10-2...............1 0.1...............10-3..............0.1%......3.7 0.01..............10-4..............100 0.001............10-5..............10 0.0001..........10-6..............1 0.00001.........10-7..............100 0.000001........10-8..............10 0.0000001.......10-9..............1 Ratio-----Unit-----RSD% %.......2.7 ppm..5.3 ppm...7.3 ppm....11 ppb..15 ppb...21 ppb....30

El link de la pgina oficial de la AOAC que hemos encontrado est inactivo, pero se puede consultar esta tabla as como otros grficos relacionados y mucha informacin extra acerca de la precisin y exactitud en esta pgina web (en ingls): http://www.labcompliance.com/tutorial/methods/default.aspx Se trata de una pgina web de una organizacin privada relacionada con la FDA (Food and Drug Administration) y el control de calidad de los mtodos analticos en la industria bio/farmacutica y contiene varios datos interesantes.

Titulacin amperomtrica
Las titulaciones amperomtricas son una clase de titulaciones en donde el punto de equivalencia es determinado a travs de la medicin de una corriente elctrica generada por una reaccin redox. Forma parte de la gran familia de los mtodos dinmicos de titulaciones electroqumicas.
ndice
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1 Fundamento 2 Ventajas del mtodo 3 Aplicaciones 4 Vase tambin 5 Referencias

[editar]Fundamento
En este tipo de titulacin es necesario que circule una corriente apreciable a travs de la celda electroqumica. El pasaje de corriente a travs de esta celda jams implica un equilibrio. Considerar adems al ctodo como electrodo trabajo donde se aloja la solucin y al nodo (electrodo de Ag/AgCl por ejemplo) como electrodo de referencia. Es importante en este punto mencionar la diferencia entre corriente faradaica y corriente no faradaica. La primera se refiere al pasaje de electrones en interfase electrodo-solucin, que genera una corriente elctrica, proporcional a la cantidad de electrones intercambiados. La segunda no est relacionada con una circulacin de corriente en la interfase electrodo solucin, sino a la circulacin de una corriente externa a dicho circuito por acumulacin de cargas debido a la aplicacin de un potencial, de forma anloga a un capacitor. Si el potencial aplicado a un electrodo al electrodo de trabajo es suficiente para reducir al analito, entonces la concentracin de analito cerca del electrodo de trabajo ir decayendo. Si el potencial aplicado es lo suficientemente grande (un sobrepotencial), entonces la concentracin de analito

depender completamente del grado de difusin del analito en la interfase electrodo-solucin, se dice entonces que est limitada por la difusin. En esta condiciones se podr establecer una relacin entre la corriente monitoreada y la concentracin de analito, tcnica que recibe el nombre de amperometra simple. Qu sucedera si colocramos una especie que reaccione con el analito (especie valorante)? Luego de un pequeo volumen de valorante aadido, disminuir la concentracin de analito debido a una reaccin con dicho valorante. Con el aadido de ms valorante, se podra confiscar una curva corriente en funcin de la concentracin la cual arrojara una curva muy similar a la correspondiente a valoracin cido-base. Ms all del punto de equivalencia, habr un exceso de valorante. Este exceso de valorante har la reaccin de reduccin en el electrodo de trabajo (si la especie valorante es capaz de reducirse, caso contrario no se producira dicha reaccin). Por lo tanto en la franja correspondiente al punto de equivalencia habr un cambio brusco en la corriente medida, debido al cambio de concentracin de analito o valorante. Esta tcnica es conocida como titulacin por punto muerto.

[editar]Ventajas

del mtodo

Es un mtodo bastante ms sensible al cambio de concentracin que una reaccin colorimtrica, en dnde el punto de equivalencia es visualizado por una reaccin de color que percibe el ojo del analista. Con el instrumento adecuado es posible adems medir concentraciones del orden 10-3 y 10-8.

[editar]Aplicaciones
El biosensor de glucosa en sangre basa su funcionamiento en una titulacin amperomtrica. Se utiliza a la enzima glucosa oxidasa, que cataliza una reaccin de oxidacin con la glucosa. En presencia de glucosa, esta enzima se reduce. Al volver a su estado normal oxidado, reduce a un mediador (ferroceno), el cual al volver a su estado oxidado desprende electrones al electrodo de trabajo, generndose una corriente proporcional a la cantidad de glucosa que haya en solucin. La enzima se encuentra inmovilizada al mediador por DCC (una carbo diimida, compuesto que permite que se establezcan uniones cruzadas de la capa enzimtica con la capa del mediador). Esto provoca una buena respuesta lineal frente a bajas concentraciones de glucosa e insensibilidad al oxgeno molecular (presente en la sangre) que compite con el ferroceno para reoxidar a la enzima.

[editar]Vase

tambin

Valoracin redox. Electroqumica. Punto de equivalencia.

[editar]Referencias

Cap. 25: Voltamperometra. Principios de anlisis instrumental, 5 edicin. Skoog/Holler/Crouch. Editorial M

POTENCIOMETRA
Lorena Garca Pindado Silvia Iglesias Gutierrez Miriam Isasi Velarde Carlos Montes Ramrez Vicky Vilaclara Manuel IES Merc Rodoreda Curso 2002-2003

El objetivo de una medicin potenciomtrica es obtener informacin acerca de la composicin de una disolucin mediante el potencial que aparece entre dos electrodos. La medicin del potencial se determina bajo condiciones reversibles, en forma termodinmica, y esto implica que se debe dejar pasar el tiempo suficiente para llegar al equilibrio, extrayendo la mnima cantidad de intensidad, para no influir sobre el equilibrio que se establece entre la membrana y la disolucin muestra. Para obtener mediciones analticas vlidas en potenciometra, uno de los electrodos deber ser de potencial constante y que no sufra cambios entre uno y otro experimento. El electrodo que cumple esta condicin se conoce como electrodo de referencia. Debido a la estabilidad del electrodo de referencia, cualquier cambio en el potencial del sistema se deber a la contribucin del otro electrodo, llamado electrodo indicador o de trabajo. El potencial registrado es en realidad la suma de todos los potenciales individuales, con su signo correspondiente, producidos por los electrodos indicador y referencia.

ELECTRODOS DE REFERENCIA Son aquellos que miden el mismo potencial cualquiera que sea la naturaleza de la disolucin en que se introduzcan y por tanto dan una referencia a la medida del electrodo indicador. Estn constituidos por un conductor metlico en contacto con una sal poco soluble de su metal, y una disolucin de composicin constante y alta concentracin llamado electrolito de referencia. El electrolito de referencia contacta con la disolucin a analizar a travs del diafragma, que es una pared porosa que permite una unin lquida. La unin lquida permite un pequeo y constante flujo del electrolito de referencia a la muestra. Donde se encuentran ste electrolito y la disolucin de anlisis, aparece un potencial de unin lquida que debe su origen a las diferentes movilidades de los aniones y cationes. Si los aniones y cationes del electrolito de referencia tienen distintas movilidades, se difunden a diferentes velocidades a travs del diafragma. Esto produce una separacin de carga local en el diafragma y por tanto una diferencia de potencial. Este potencial depende del tipo, concentracin y de la temperatura del electrolito de referencia. Para que la contribucin de ste potencial se mantenga tan pequeo y constante como sea posible, se pueden tomar las siguientes medidas: Seleccionar electrolitos de referencia, con aniones y cationes de similares movilidades: KCl , KNO3, etc. La concentracin del electrolito de referencia ser de 5 a 10 veces superior a la esperada en las muestras y tampones. La velocidad de agitacin debe mantenerse constante durante la

medida. El diafragma debe ser el adecuado al tipo de anlisis. Diafragma Flujo KCl sat. 25C Aplicacin Cermico Tipo Z 14 ul / h Disoluciones acuosas con conductividad > 10 u+S/ cm Cermico Tipo D 2,5...5 ul / h Disoluciones acuosas con conductividad > 10 uS/ cm Esmerilado 0,5...2mL / h Para medios con conductividad baja < 10 uS/ cm Disoluciones muy concentradas o muy contaminantes Vidrio Fritado 1,5...4mL/ h Para medios orgnicos Los diafragmas sucios son la causa ms frecuente de errores en las medidas potenciomtricas. Cuando los iones del electrolito de referencia reaccionan con la disolucin a analizar, pueden formarse precipitados y bloquear el diafragma Por ejemplo, con electrolitos de KCl pueden precipitar: Cl04- : KClO4 es poco soluble Hg+2 , Ag + , Pb +2 , Cu +2 : Cloruros poco solubles Si la disolucin a analizar contiene iones incompatibles con el electrolito de referencia debe elegirse otro sistema de referencia un electrodo de referencia de doble unin lquida. Los dos electrolitos deben ser compatibles. Para medidas a bajas temperaturas hay que tener en cuenta que la solubilidad de las sales disminuye con la temperatura. En estos casos hay que usar sales de menor concentracin. En caso de sistemas no acuosos, los dos electrolitos deben ser no acuosos para que no haya sales solubles en medios acuosos que cristalicen en medio no acuoso en la zona lmite entre los dos diafragmas. Un electrolito que se usa mucho en estos casos es LiCl saturado en Etanol. En la prctica los sistemas de referencia ms usados son el de Calomelanos y el de Ag/AgCl, aunque por razones medioambientales, el electrodo de Calomelanos ya no se fabrica (ISO-9001). ELECTRODOS INDICADORES Es como ya se ha dicho aquel que es sensible a la especie electroactiva.

Como electrodo indicador encontramos el electrodo de in selectivo. Es aquel que responde selectivamente a una especie presente en la solucin. Estos electrodos tienen una membrana prima que separa la muestra del interior del electrodo. La parte interna del electrodo contiene una solucin del in de inters con actividad constante, mientras que la parte externa esta en contacto con muestras de composicin variable. La diferencia de potencial a travs de la membrana depende de la diferencia de la actividad del analito entre la parte interna y la muestra.

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