Extraccion de Adn

UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA ACADMICA FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO
Fecha: Abril 2011 Cdigo: GRL-006 Pgina 1 de 12 Versin: 4.0
INFORMACIN BSICA NOMBRE DE LA PRCTICA: EXTRACCIN DE ADN PRACTICA No. 11
ASIGNATURA: Biologa TEMA DE LA PRCTICA: Extraccin sencilla de ADN (cido desoxirribonucleico) de material vegetal LABORATORIO A UTILIZAR: Biologa CONTENIDO DE LA GUA
OBJETIVOS DE LA PRCTICA DE LABORATORIO. Extraer ADN de material vegetal Discutir la diferencia entre la molcula de ADN y ARN Reconocer procesos bsicos como claves en el desarrollo de cualquier actividad
INTRODUCCIN. Los cidos nucledos, ADN (cido desoxirribonucleico) y ARN (cido desoxirribonucleico) son polmeros especializados en almacenar, transmitir y expresar la informacin gentica en secuencias de aminocidos, las cuales luego de algunos procesos (Traduccin) conforman las protenas de una clula. MARCO TEORICO Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas formadas por un numeroso grupo de compuestos qumicos llamados nucletidos. Estas cadenas forman una estructura (de escalera retorcida) que se llama doble hlice. Cada nucletido est formado por tres unidades: una molcula de azcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados bases: Adenina (abreviada como A), Guanina (G), estas son Purinas, Timina (T) y Citosina (C), estas son pirimidnicas; La molcula de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y est rodeada por un grupo fosfato a un lado y una base al otro. El grupo fosfato est a su vez unido a la desoxirribosa del nucletido contiguo de la cadena. Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases estn enfrentadas por parejas (Figura 1). Deben considerarse tambin a la hora de seleccionar una metodologa de extraccin los diversos y verstiles sistemas comerciales tipo kits para la extraccin de DNA y RNA existentes en el mercado. Muchos de ellos se basan en procedimientos cromatogrficos para la purificacin. Posteriormente a
la extraccin del cido nucleico de inters es necesario evaluar la cantidad y calidad del mismo. Con una electroforesis en gel de agarosa podemos conocer la calidad de la muestra. Si el DNA no ha sufrido roturas veremos una nica banda de alto peso molecular. Para el caso de muestras de RNA la corrida electrofortica de preparaciones de buena calidad mostrar claramente los diferentes RNAs ribosomales y de transferencia.
(http://www.biol.unlp.edu.ar/bioquimica3/TP4-09.pdf) Bioquimica III Figura 1. Estructura molecular del ADN,y enrollamiento molecular / tomado de:http://3.bp.blogspot.com/ylsJX3a4Koc/TWquit5UmnI/AAAAAAAAAIM/8qpqgT4tn3k/s1600/cromosom_ADN01%255B1%255D .jpg
La estructura del ADN es de doble cadena, lo que probablemente da una mayor proteccin a la informacin contenida en la molcula. La estructura del ARN es monocatenaria aunque, puede presentarse en forma lineal como el ARNm o en forma plegada cruciforme como ARNt y ARNr (Figura 2). Figura 2. Representacin de las cadena de ARN y ADN, tomado de: http://www.biotecnologica.com/wpcontent/imagenes/2007/06/rna.png
Otra diferencia entre ADN y ARN es su componente de pentosa (azcar), el ADN cuenta con desoxirribosa y el ARN con ribosa, el ADN est compuesto por Adenina, Timina Guanina y Citosina, el ARN sustituye la Timina por Uracilo (Figura 3).
CONSULTA PREVIA Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Prctica de Laboratorio. Apyate para ello de las ayudas visuales brindadasDebe responder a la pregunta: Por qu el ADN es la Clave de la diversidad de la Tierra? Elabralo en Cmaptools. http://www.youtube.com/watch?v=nje9i7CRkt8&feature=related El ADN http://www.youtube.com/watch?v=-EGKrYdQEHQ&feature=related Replicacin del ADN
METODOLOGIA Se desarrollara en grupos de cuatro personas como mximo, en los espacios de los laboratorios de Biologa, siguiendo el procedimiento indicado en la gua de trabajo. Esta prctica se realizara para estudiantes del rea de salud e ingenieras incluyendo psicologa El tiempo de extraccin es relativamente corto comparado con procesos de extraccin de ADN Animal. Por ello la descripcin de cada proceso como se describe a lo largo del procedimiento a seguir, involucra la atencin sobre cada uno de los 8 pasos. Los cules sern considerados clave en el anlisis final. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR .
Materiales Y Equipos Mortero y pistilo (6) Beaker 200 ml. (3) Centrfuga. (1) Probeta 25 ml. (5) Cubeta con hielo (1) Pipeta 10 ml. (5) Tubos de Ensayo (21) gradillas (6) Agitador de vidrio (5) Balanza digital (1)
Reactivos Agua destilada (300 ml.) Isopropanol (o Alcohol isoamlico) a 0C. (50 ml.) Azul de metileno. (2 ml.)
Material Estudiante* Marcador para vidrio y colores (anaranjado, azul, morado, rojo, negro, blanco) entre otros (INDISPENSABLE) Cinta de enmascarar Guantes (2 pares por estudiante) Gafas de proteccin, Gorro y Bata Manga larga de material no inflamable. Bistur por grupo Cloruro de Sodio (Sal) (5 gr.) Bicarbonato de Sdio (5 gr.)
Champ (Jabn lquido) (5 ml.) Ojala sin color alguno o blanco. Banano 1 unidad Bistur (1 por grupo) 1 cebolla pequea por grupo Tomate 1 unidad Germen de trigo Arvejas frescas (desgranadas)
Cada uno de los materiales vegetales solicitados deben ser medidos para que no se genere desperdicio del mismo al momento de terminar con la prctica. Los estudiantes que no porten sus implementos de Bioseguridad individuales y materiales por equipo no sern admitidos a la sesin de trabajo prctico. Recuerden traer las cantidades solicitadas en recipientes aislados para no contaminar un contenido mayor al solicitado en el laboratorio. PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO. Con precaucin y cuidado al manipular la balanza digital normal y la balanza de precisin. (Tararla adecuadamente) Al igual que el Bistur evitando cortar hacia el interior. Desechar adecuadamente los excedentes de Alcoholes en los recipientes adecuados (Fenoles) Reactivos y Reaccin Agua destilada: Agua a la que se le han eliminado iones e impurezas mediante destilacin. Isopropanol o acohol isoamlico:H3C-HCOH-CH3.Es un alcohol incoloro, inflamable, de olor intenso, compuesto no polar, en la prctica permite la precipitacin del ADN. Azul de metileno (Cloruro de Metilionina):C16H18ClN3S, es un compuesto de variadas aplicaciones, entre estas la capacidad de teir tejidos viables, en la prctica tie las fibras de ADN.
PROCEDIMIENTO: 1. Preparacin de la solucin tampn. En un beaker de 200 ml mezclar: 120 ml de agua destilada, 4.5 gr de Sal, 5 gr de Bicarbonato de Sodio, 5 ml de Champ.
2. Preparacin del material biolgico Se corta en cuadritos el material vegetal (cebolla), tambin realiza el mismo procedimiento con el banano y cualquier otra muestra. Se le aade un poco de agua destilada y a continuacin se tritura utilizando el mortero, hasta dejar sin partculas el macerado.
3. Mezcla del pur con el tampn fro En una probeta de 25 ml se depositan 5 ml del macerado obtenido en el paso anterior y se aaden10 ml de la Solucin tampn fro. Se agita fuertemente durante 2 min.
10 l 15 ml
5 ml
4. Centrifugacin por 10 minutos a baja velocidad El contenido de la probeta se separa en los dos tubos de ensayo pequeos, de manera que los dos tengan la misma cantidad. A continuacin estos tubos se ponen en la centrfuga durante 5 min.
Nota: Los jabones utilizados como la para lavar la vajilla emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen. 5. Recoger el sobrenadante Tras la centrifugacin se recoge el sobrenadante (con cuidado de no agitar el precipitado) de cada uno de los tubos de ensayo hasta completar 5 ml; para ello nos ayudamos de una pipeta. Este sobrenadante se pone en otro Tubo de ensayo limpio.
Pipeta
6. Aadir el alcohol isoamilico o isopropanol Se aade 10 ml de alcohol isoamlico o isopropanol fro lentamente al tubo que contiene el sobrenadante, se dejacaer el isopropanol o alcohol isoamlico sobre las paredes de la probeta. Se debe dejar escurrir lentamente el el alcohol por la pared interna del tubo, teniendo este inclinado. El alcohol quedara flotando sobre el tampn.
7. Recoger el ADN con una varilla de vidrio Tras aadir el alcohol (isopropanol o isoamlico) en nuestra muestra han quedado dos fases, una superior (contiene el alcohol) y otra inferior. Se introduce la pipeta en la interface entre el alcohol y el resto de la muestra y se va extrayendo con cuidado, en este material se encuentra el ADN Alcohol ADN Sedimento 8. Aadir una gota de azul de metileno El mtodo que hemos utilizado para extraer al ADN no es del todo eficiente, ya que en la muestra todava queda ADN sin extraer. Al aadir el azul de metileno, en la interface, se teirn las fibras de ADN que no hemos conseguido extraer.
BIBLIOGRAFIA MADER, S. 2008. Biologa. 9na Edicin. McGraw Hill. Mxico, D.F. MATTA, N; GARCIA, M. 1997. Curso libre juvenil en Biologa. Facultad de Ciencias. Departamento de Biologa. Universidad Nacional de Colombia. PERSON, 2010.Biologia. Mxico, D.F. Cibergrafa http://www.biol.unlp.edu.ar/bioquimica3/TP4-09.pdf
ELABOR Firma: Docentes Laboratorio de Biologa Nombre: Equipo Laboratorio de Biologa Fecha Enero 2013 - Rediseo
REVIS Firma: Equipo Docente Laboratorio de Biologa Nombre: Equipo Docente Laboratorio de Biologa Fecha: Enero 2013
APROB Firma: Equipo de laboratorio de Biologa Nombre: Equipo de Laboratorio de Biologa y Gerencia de Laboratorios Fecha: Enero 2013
INFORME DE LABORATORIO GRUPO: ESTUDIANTES:

NOTA:
CARRERA:
Formule tres objetivos que desee cumplir con la Prctica de Laboratorio 1. 2. 3. Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Prctica de Laboratorio. Apyate para ello de las ayudas visuales brindadasDebe responder a la pregunta: Por qu el ADN es la Clave de la diversidad de la Tierra? Elabralo en Cmaptools. http://www.youtube.com/watch?v=nje9i7CRkt8&feature=related El ADN http://www.youtube.com/watch?v=-EGKrYdQEHQ&feature=related Replicacin del ADN
RESULTADOS: 1. Analiza y describa lo observado en los procedimientos realizados, desde el paso 3 al 8. deben ser especficos en Cuanto a las pruebas y cada proceso para permitir al final observar la evidencia de la Presencia de ADN Vegetal obtenido.
2. Explica apoyndote adems de un grfico sobre de la accin del detergente (lquido) sobre las clulas vegetales. Qu efecto o fenmeno realizan componentes lipdicos de la membrana al adicionarles detergente?.
CUESTIONARIO 1. Realiza un cuadro comparativo entre ADN y ARN
2. Consulta acerca de la Clonacin como mecanismo de mediacin en pacientes con cncer ante la prdida de algn rgano.
CAUSAS DE ERROR.
CONCLUSIONES
APLICACIN PROFESIONAL DE LA PRCTICA REALIZADA
BIBLIOGRAFIA UTILIZADA

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CUESTIONARIO 1. Realiza un cuadro comparativo entre ADN y ARN

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