Revista del Hospital J. M. Ramos Meja Edicin Electrnica - Volumen XII - N3 - 2007 http://www.ramosmejia.org.

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FUNDAMENTOS DEL TRABAJO CON ANIMALES DE LABORATORIO EN PROYECTOS DE INVESTIGACION

PEREZ, Graciela R.
Mdica Veterinaria del Bioterio que depende del Comit de Docencia e Investigacin del Hospital J. M. Ramos Meja - GCABA.

INTRODUCCION Bioterio es el lugar donde se alojan los animales que actuarn como modelos estandarizados en las investigaciones biomdicas, pruebas diagnsticas y en el control de productos farmaceticos. Los animales de laboratorio, no slo son individuos que nacen y crecen bajo condiciones diferentes a las que encontraran en la naturaleza, sino que adems se enfrentan a las maniobras experimentales. El hecho de atravesar diversas situaciones para las cuales no estn habilitados a responder, genera un nivel de strss que afecta tanto la vida del animal como el resultado de los trabajos de investigacin. En este artculo haremos mencin a caractersticas generales de los animales, del ambiente, y a pautas para evaluar alternativas al momento de disear un trabajo experimental. INTRODUCTION Bioterio is the place where they lodge the animals that will act as models standardized in the biomedical investigations, you prove diagnostic and in the control of products farmaceticos. The laboratory animals, are not only individuals that are born and they grow under conditions different to those that would find in the nature, but rather they also face the experimental maneuvers. The fact of crossing diverse situations for which are not enabled to respond, generates a strss level that affects the life of the animal so much as the result of the investigation works. In this article we will make mention to general characteristics of the atmosphere, of the animals, and to rules to evaluate alternative to the moment to design an experimental work.

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LOS ANIMALES
Entre las especies ms utilizadas, segn podemos observar en el grfico, el ratn es el animal de eleccin con el 51%, seguido de la rata con el 22%. La suma de roedores y conejos, estara superando las tres cuartas partes del total de animales usados con fines experimentales.

Haremos mencin a otras especies que aunque menos utilizadas, son muy buenos modelos para determinadas lneas de investigacin. Citaremos a los cobayos, hamsters, hurones, perros, gatos, ovejas, cerdos, anfibios, reptiles, peces y primates entre otros.

Zebra fish

Guinea pig

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Debemos tener en cuenta que para el buen funcionamiento de un bioterio, es necesario contar con infraestructura, equipamiento y recursos humanos adecuados. Considerando las limitaciones presupuestarias del hospital hoy da, intentaremos adecuar el enfoque hacia las especies ms accesibles conforme a lo dicho anteriormente. Describiremos sintticamente al ratn y la rata como modelos experimentales. ROEDORES DE LABORATORIO Taxonmicamente, los roedores estn comprendidos dentro del Orden Rodentia, el cual es el ms numeroso dentro de los Mamferos, contando con aproximadamente 2.000 especies. El gnero Rattus (rata) y el gnero Mus (ratn), ambos pertenecientes a la Familia Muridae, se separaron hace aproximadamente 10 millones de aos. EL RATON

Como vimos anteriormente, sta es la especie ms utilizada por los investigadores. El hecho de que as sea, se debe principalmente a las caractersticas que presentan, como ser: Buena adaptacin a vivir en animalarios. Mantenimiento sencillo y econmico. Son de talla pequea. Con corto tiempo generacional. Son animales prolficos. Buena performance reproductiva a lo largo de todo el ao. Soportan bien la consanguinidad.

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Dentro de los mamferos, el ratn tiene el honor de compartir con el hombre, el hecho de ser el animal mejor estudiado genticamente. Se dispone de gran cantidad de Lneas de Animales: Consanguneos (Inbred Strains), Congnicas, Mutantes y Transgnicas, como as tambin de Colonias de Animales No Consanguneos (Outbred Stocks) y de Hbridos F1. Contamos con modelos murinos para el estudio de enfermedades hereditarias simples y complejas. Enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Mencionaremos a las comprendidas en desrdenes neurolgicos, neuromusculares, auditivos y visuales; como as tambin el estudio de las enfermedades de huesos y cartlagos; piel y pelo; enfermedades metablicas, anemias e inmunodeficiencias entre otras. Enfermedades hereditarias complejas (multignicas): dentro de ellas incluiremos el estudio del cncer, obesidad y diabetes. LA RATA

Es la segunda especie ms usada en investigaciones biomdicas. Podemos decir que es de eleccin para algunos protocolos, por tener mayor tamao con respecto al ratn. Es un animal modelo para trabajar en inmunogentica de transplante de rganos. Es elegida para trabajar sobre enfermedades cardiovasculares y tambin en epilepsia. Se usa para el estudio de enfermedades de gentica compleja como cncer, diabetes, obesidad e hipertensin.

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EL AMBIENTE
Al momento de concebir un bioterio, tendremos que considerar la eleccin del sitio de emplazamiento y sobre todo en la construccin del mismo, tener en cuenta una correcta distribucin de las diferentes reas de trabajo. Distinguiremos las zonas sucias de las zonas limpias y se contemplarn barreras sanitarias para el personal, los animales y los insumos. En el interior del bioterio se requiere trabajar bajo ambiente controlado, esto significa que debemos estabilizar la mayor cantidad de variables que podamos. Incluiremos aqu: Control de la temperatura, la cual en trminos generales, debe mantenerse entre los 18 y 22 C. Se recomienda una humedad relativa del 50 al 60%. Para el caso de la iluminacin, tendremos en cuenta la duracin del fotoperodo, la intensidad lumnica y la longitud de onda. En general el perodo de horas luz/oscuridad ms utilizado, es el que alterna 12 hs. de luz con 12 hs. de oscuridad. Se recomienda en general el uso de tubos fluorescentes luz da. En lo referente a la aislacin acstica, diremos que hay que evitar los ruidos fuertes y sbitos. Tambin tendremos en cuenta, que los animales perciben frecuencias que nosotros no podemos. Por ejemplo, bisagras de puertas, grifos que gotean, ruedas de sillas y carritos; relojes, timbres y telfonos, inclusive los monitores de computadora son perturbadores y estresantes. La renovacin del aire de las salas debe ser completa, y estar programada para que se renueve de 15 a 17 veces por hora como mnimo. Debe evitarse que se produzcan corrientes de aire. Dado que hay diferentes requerimientos segn la especie, los parmetros se ajustarn para cada caso en particular. EL MICRO-AMBIENTE En lo que respecta al ambiente propio del animal, tendremos que elegir el tipo y tamao de la jaula o caja donde ste se alojar, como as tambin las caractersticas que deben reunir los bebederos y comederos.

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El piso que utilicemos depender de la especie y de la tarea que vayamos a realizar. Para el caso en que optemos por el uso de cama, el material de la misma deber reunir determinadas caractersticas. Por ejemplo, si elegimos la viruta de madera, sta tendr que ser atxica, sin polvillo, blanda y de rboles blancos (conferas); como tratamiento, la viruta ser irradiada o autoclavada. ALIMENTACION Por lo general, se utilizan alimentos balanceados, pudiendo administrarse en algunos casos alimentos naturales. La dieta deber contener los nutrientes necesarios para cubrir los requerimientos del animal. Tendremos en cuenta no solo la formulacin adecuada para la especie, sino tambin la etapa del animal. De ser necesario, se administrar un suplemento dietario. Los controles de calidad del agua para consumo, consisten en el anlisis fsico, qumico y bacteriolgico de la misma.

ANALISIS DE ALTERNATIVAS Principios de las 3 Rs en el uso de animales de experimentacin.

Establecido por Russell y Burch

Al momento de hacer el diseo de un trabajo que involucre animales, es fundamental tener en cuenta el estudio de otras opciones. Para ello contamos con las 3 Rs, basadas en el Reemplazo, el Refinamiento y la Reduccin. 1.- REEMPLAZO: De ser posible usar un sustituto del animal: * Sistema inanimado (programa de computacin, mannequi), * Especie de orden filogentico menor o Invertebrados, * Cultivo de tejidos o clulas. 2.- REFINAMIENTO: Aqu incluimos varios aspectos de la metodologa de trabajo: Entrenamiento en el manejo de la especie y en las prcticas de sujecin. Saber detectar sntomas de dolor, disconfort o strss. El uso de sedantes, anestsicos y analgsicos. Perfeccionamiento de las tcnicas quirrgicas. Asepsia.

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Cuidados post-quirrgicos. Uso de Rx, tomografas para detectar tumores. Uso de tcnicas no invasivas o telemtricas. Mtodos de eutanasia y determinacin temprana del punto final. 3.- REDUCCION: Se intenta disminuir la cantidad de animales a utilizar: Trabajaremos con una muestra que contenga el nmero mnimo necesario para asegurar la significacin estadstica. Coordinar entre los investigadores el uso conjunto de un animal o lote de animales. Se evitarn las duplicaciones innecesarias. Controlar los factores ambientales. Utilizar animales genticamente definidos. Clasificar los animales segn su carga microbiolgica. Sustitucin de DL50 clsica por Fixed Dose o Up and Down (dosis secuenciales). Publicacin de los experimentos con resultados negativos. BIOTERIO DEL HOSPITAL RAMOS MEJIA Se encuentra ubicado en el segundo piso del Pabelln de Anatoma Patolgica. Est diseado en dos plantas. En la planta inferior, se encuentra el quirfano y un sector destinado a la preparacin del material obtenido. Se cuenta con mesadas azulejadas, piletas con agua fra-caliente y buena iluminacin. La planta alta es el sector destinado al alojamiento de los animales. Se ingresa a una sala en la que hay un total de 38 caniles, los cuales estn construdos en dos hileras superpuestas de piso a techo, 19 superiores y 19 inferiores; son de mampostera con puerta de reja. Hay un rea de lavado en la que se realiza la limpieza y desinfeccin de las jaulas. La misma cuenta con un piletn y mesadas, y est provista de agua fra y caliente. A travs de sta sala, se accede a la terraza donde se encuentran tres recintos divididos entre s por una pared. Tienen frente y puerta de alambre tejido, un alero construdo con chapas de fibrocemento, piso de baldosas, comederos y bebederos de mampostera. En uno de estos recintos, se ubican las conejeras con capacidad para albergar a seis animales.

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Dentro del bioterio se encuentran actualmente trabajando una mdica veterinaria y un cuidador. LEGISLACION, ETICA Y ENTES REGULADORES
NACIONALES e INTERNACIONALES para Animales de Laboratorio.

En la Repblica Argentina, los trabajos de investigacin biomdica, deben llevarse a cabo cumpliendo con las regulaciones establecidas en el pas y atendiendo a los principios descriptos en las guas internacionales.
EN ARGENTINA

* Ley Nacional 14346. Proteccin de los Animales. Sobre malos tratos y actos de crueldad. Septiembre 1954. * Disposicin 6344/96 Requisitos para Bioterios de entidades que regula - ANMAT (Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica). * Resolucin 617/02 SENASA (Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria) Requisitos, condiciones y procedimientos para la habilitacin tcnica de laboratorios que posean bioterios de produccin, mantenimiento y local de experimentacin. * Resolucin CD 140/00 Facultad de Ciencias Exactas y Naturales UBA. Reglamento para el cuidado y uso de animales de laboratorio en la facultad. * Resolucin CS 4081/04 Reglamento para el cuidado y uso de animales de laboratorio en la Universidad de Buenos Aires.
INTERNACIONALES

* La Gua del NIH - Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. NCR/USA/1996. * CIOMS - Ginebra 1985 - Comunidad Econmica Europea. * Directiva 86/609/CEE - Comunidad Econmica Europea (CCE).

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CONSIDERACIONES FINALES Hay un compromiso que incluye a toda persona que trabaje dentro de este mbito, y es el respeto por los derechos del animal, garantizando su bienestar general y buen trato. Esto puede lograrse adquiriendo los conocimientos bsicos de manejo y aplicando los principios ticos. Procurar el bienestar de los animales de laboratorio es parte importante de la ciencia.
Correo electrnico Bioterio Hospital Ramos Meja: bioteriohrm@yahoo.com.ar

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BIBLIOGRAFIA
Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council Guide for the Care and Use of Laboratory Animals National Academy Press, Washington, 1996. Directiva 86/609-CEE - Disposiciones legales reglamentarias y administrativas de los estados miembros, respecto a la proteccin de los animales utilizados para experimentacin y otros fines cientficos Consejo de las Comunidades Europeas, 1986. Comisin Honoraria de Experimentacin Animal. Manejo de Animales de Experimentacin: Tradicionales y no tradicionales. FEFMUR, Universidad de la Repblica, Uruguay, 2006. Fernando J. Benavides y Jean-Louis Guenet Manual de Gentica de Roedores de Laboratorio Universidad de Alcal y SECAL. Espaa, 2003. Castillo Menndez R. Animales de Laboratorio en las Investigaciones Biomdicas Editorial Ciencias Mdicas, La Habana, 1985. Fox J.G., Anderson, L.C., Loew, F.M., Quimby, F.W. (Eds.) Laboratory Animal Medicine 2 Ed. ACLAM Series, 2002. Hau J. and van Hoosier G.L. (Eds.) Handbook of Laboratory Animal Science 2 Ed. Vol III; Animal Models. CRC Press, Boca Raton, FL 2005. Gordon J.W. Transgenic technology and Laboratory Animal Science ILAR Journal 38, 1997. ILAR Committee on Laboratory Animal Housing Laboratory Animal Housing National Academy of Sciences, Washington D.C., 1978. Council of International Organizations of Medical Societies. International Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals. CIOMS, Geneva 1985.