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Practica No.

5 CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA Y COLUMNA Jhon Burbano(28140219) , Marlon Riascos(27140275) Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Nario. Sede Torobajo. Cra 18 Clle 50 , Pasto. Colombia RESUMEN En esta prctica se estudi y se aplic el concepto de cromatografa, tanto de columna como de capa delgada, aplicndolas como tcnicas de separacin de mezclas y como tcnica de anlisis de los componentes de una mezcla a separar o ya separados respectivamente; utilizando la tcnica de cromatografa en columna se logro la separacin de la mezcla de Naranja de metilo y Violeta cristal utilizando como eluyentes etanol y etanol:trietilamina 9:1 respectivamente ; por la tcnica de cromatografa de capa delgada se observo el comportamiento de los colorantes puros y de la mezcla de los dos colorantes , determinndose tambin su Rf : 0.79 y 0.43 para naranja de metilo y violeta cristal respectivamente, utilizando como eluyente etanol:trietilamina 1:9. INTRODUCCION La cromatografa es una tcnica de fraccionamiento que permite separar, aislar e identificar los componentes de una mezcla. La cromatografa constituye un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a separar se distribuyen entre dos fases: una estacionaria (solida o liquida) de gran rea superficial , y una fase mvil (liquida o gaseosa), esta ultima pasa a travs de la fase estacionaria. La cromatografa de capa delgada (C.C.D.) es una tcnica de adsorcin solido-liquido, donde la fase mvil asciende por capilaridad a travs de una capa delgada de adsorbente adherida a un soporte, esta tcnica permite determinar la relacin de frente (Rf), definido por: condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, entre otras.1

Figura No.1. Cromatografa de capa delgada

Este valor se encuentra en el rango de 0 a 1, y es constante para cada compuesto, teniendo en cuenta el conjunto de variables en la cromatografa como son : tipo de adsorbente, eluyente, as como tambin las

La cromatografa de columna (C.C) se emplea para separacin de mezclas y sustancias a escala preparativa; la fase estacionaria es ubicada en una columna y el disolvente pasa a travs de ella por efecto de gravedad. Este mtodo presenta ciertas ventajas frente a la C.C.D. , como por ejemplo, permite sembrar y separar mayor cantidad de muestra, se pueden realizar cambios secuenciales de la polaridad del disolvente de elusin, lo que mejora la eficiencia de la separacin.2 La cromatografa en columna y en capa delgada solo difieren en el medio de

soportar el adsorbente. En ambas se emplea almina (Al2O3) o gel de slice (cido silcico, SiO2.xH2O) como fase estacionaria , y una fase mvil orgnica. Los principios que se aplican a una variante de la tcnica cromatografa, se aplican tambin a las dems variantes. 3

Figura No.3. Proceso separacin C.C.

Figura No.2 . Estructura Silica gel interacciones con 4 algunos compuestos polares

RESULTADOS Y DISCUSION 1.Cromatografia de Columna Para este procedimiento se utilizo como fase estacionaria slica gel, de la cual se peso 3 g , se mezclo con etanol y se trasvaso a la columna, buscando de esta manera obtener la fase estacionaria lo ms compacta posible. Se logr la separacin de la mezcla de tintes, obtenido en primer lugar la fraccin de naranja de metilo, se utilizo como eluyente etanol hasta observar que se ha recogido en su gran mayora el colorante naranja de metilo; seguido de esto se agreg como eluyente la mezcla etanol:trietilamina 9:1, permitiendo as recoger el colorante violeta cristal, como se muestra en la siguiente figura:

Analizando los resultados obtenidos se observa que en el primer paso , donde se utiliza como eluyente etanol, este permite la separacin del colorante naranja de metilo; teniendo en cuenta que la adsorcin se debe a interacciones intermoleculares del tipo dipolo-dipolo, dipolo-dipolo inducido o enlaces de hidrogeno, entre el adsorbente y el soluto, para este caso el naranja de metilo, como se muestra en la figura No.4, tiene tres grupos polares como son SO3Na y 2 aminas , mientras que el violeta cristal tiene 3 aminas ; generndose de esta manera entre el colorante naranja de metilo y la fase estacionaria fuerzas intermoleculares no tan fuertes como las de el colorante azul cristal y la silica gel..

Figura No.4.Estructura Naranja de Metilo

Para extraer el colorante violeta cristal , se utilizo como eluyente etanol:trietilamina 9:1, debido a que segn la estructura del colorante como se muestra en la figura No.5, este tendr ms afinidad con el eluyente que con la silica gel , puesto que el eluyente contiene en cierta proporcin una amina, permitiendo as atraer el colorante por la disminucin de fuerzas intermoleculares mayores entre el colorante y la fase estacionaria.

violeta cristal, el colorante naranja de metilo fue arrastrado por este eluyente mucho ms que el colorante violeta cristal ; la proporcin de trietilamina arrastr hasta cierta posicin el colorante violeta cristal, por la razones ya expuestas. Con los resultados obtenidos de distancia recorrida para cada solucin, se calculo el valor de Rf para cada caso as:
Figura No.5. Estructura Violeta Cristal.
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2.Cromatografia de capa delgada (C.C.D) La mezcla de colorantes, y las fracciones obtenidas de cada colorante por la tcnica de cromatografa de columna, se analizaron en cromatografa de capa delgada , utilizando como adsorbente gel de slice; debido a que los colorantes ya separados, se encontraban muy diluidos en los respectivos eluyentes, no fue posible observar las distancias recorridas por cada uno de los colorantes. Teniendo en cuenta este resultado, se analizaron por esta misma tcnica la mezcla de colorantes y los colorantes puros, obteniendo los siguientes resultados:

Colorante Naranja de metilo: a = 3.1cm b = 3.9cm

Colorante Violeta cristal: a = 1.7cm b = 3.9cm

Teniendo en cuenta estos resultados, se compararon los valores de Rf de los colorantes empleados: Naranja de metilo 0.79 Violeta cristal 0.43

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Por lo tanto se reafirma que el colorante Naranja de metilo es menos polar que el colorante Violeta cristal. CUESTIONARIO 1.Explique con base en las estructuras de los tintes, porque y como se separan los compuestos de la mezcla de tintes? La cromatografa en capa fina y de columna son las tcnicas de separacin e identificacin de sustancias qumicas colorantes, por la diferente retencin que experimentan los componentes de la mezcla de tintes, al ser ms o menos adsorbidos por los componentes de una fase fija, cuando son arrastrados por un disolvente. Este adsorbente, generalmente con un adhesivo,

La cubeta de cromatografa contena etanol:trietilamina en una proporcin 9:1, por lo tanto la proporcin de etanol ser mucho mayor y por la baja polaridad del naranja de metilo en comparacin con el

se deposita sobre una hoja de vidrio o de otro material que acta como soporte inerte de la capa. Intervienen los fenmenos de adsorcin y disolucin, por consiguiente es fundamental tener en cuenta la polaridad, tanto de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si queremos tener una buena separacin.6 2.Cual es el desarrollo mltiple y el desarrollo bidimensional en CCD? El desarrollo mltiple implica la vaporizacin del disolvente despus de que el frente de disolventes ha alcanzado el extremo de la hoja , seguida de la repeticin del desarrollo en la misma direccin. El desarrollo bidimensional , implica el uso de dos disolventes sucesivos, el cromatograma se desarrolla primero en una direccin , se seca luego para evaporar el primer disolvente, se gira 90, y se desarrolla por segunda vez con un segundo disolvente.7 3.En que consiste la cromatografa de CCD preparativa? La cromatografa preparativa se diferencia de la tcnica bsica en muchos aspectos; la preparacin de la capa delgada, debe hacerse con menos agua que de ordinario. Una mezcla ms espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa para una carga de mayor magnitud. El espesor ptimo oscila desde un mnimo de 1 mm. Hasta un mximo de 2 mm. Las placas utilizadas en cromatografa preparativa son placas grandes, de aproximadamente 20x20 cm. que permiten separar aproximadamente 1 g. de mezcla utilizando unos 35 g. de adsorbente. La siembra de la muestras realiza a lo largo de una lnea recta, si al terminar la primera siembra todava queda muestra, se seca la primera siembra y se aplica la segunda, intentando que sta quede sobre la anterior, para as conseguir que el frente sea lo ms

estrecho posible. La siembra debe realizarse a lo ancho de la placa. Una vez sembrada la muestra se desarrolla la cromatografa. Una vez localizados los compuestos, stos se extraen de la fase estacionaria, uno a uno, con la ayuda de una esptula, sobre un papel de filtro u otro soporte. Posteriormente se coloca cada componente en un erlenmeyer, y se mezcla con un disolvente (metanol). Una vez disuelto el compuesto se filtra varias veces para separar el compuesto y la fase estacionaria. Una vez separado se elimina el disolvente (destilacin), con lo cual se obtiene el componente separado.8 4.Que es una resina de intercambio anionica?y una resina cationica? Las resinas de intercambio inico, permiten el intercambio entre los iones presentes en un slido: Resinas Cationicas: Intercambia iones positivos (cationes) Estructura con grupos funcionales cidos (Resina cido fuerte/cido dbil) Ej. Fuerte: Ac. Sulfnica Resinas Anionicas: Intercambia iones negativos (aniones) Estructura con grupos funcionales bsicos (Resina base fuerte/base dbil)9 CONCLUSIONES Segn los resultados obtenidos usando la tcnica de cromatografa de columna y cromatografa de columna, se observ que la separacin de las mezclas de colorantes como este caso , depende de las fuerzas intermoleculares generadas al entrar en contacto con una fase estacionaria como la silica gel , como tambin depender en gran parte de la naturaleza del eluyente, pues su composicin y proporcin en cuanto a mezcla de eluyente , permitir la separacin de los componentes de la mezcla.

Un aspecto importante para tener en cuenta en la separacin de mezclas utilizando la tcnica de cromatografa por columna , la eficiencia del mtodo depender adems de escoger la fase estacionaria y el eluyente adecuado, de la manera en que se empaca la fase estacionaria, pues para este caso , una manera muy efectiva de empaquetamiento fue mezclar la silica gel y el eluyente (etanol), en un beaker y posteriormente trasvasar a la columna, obteniendo una fase estacionaria muy compacta, sin presencia de fisuras, ni burbujas, permitiendo as una optima separacin. Teniendo en cuenta el desarrollo de la prctica, la tcnica de cromatografa por capa delgada permite en gran medida conocer el comportamiento de los constituyentes de una mezcla al ser separados por esta tcnica, a pequea escala, para segn los resultados obtenidos, montar un sistema de cromatografa por columna para as llevar a cabo el proceso de separacin; como tambin la tcnica C.C.D permite verificar si la separacin de los componentes de una mezcla se realizo de manera correcta , pues en el barrido realizado para cada colorante o compuesto mostrara una sola mancha, indicando una separacin efectiva, y dos o varias manchas en el mismo camino de corrido, indicara una separacin fallida. REFERENCIAS [1]. Enlace web: http://organica1.org/1311/1311_6.pdf, visitado el da 29 de Abril de 2012. [2].lamerque, A..Fundamentos teoricopracticos de Qumica Orgnica. Ed.Encuentro Argentina, 2008. 55-64. [3].Durst, H.; Gokel, G..Qumica Orgnica Experimental. Ed. Revert, Espaa, 2007, 79.

[4].Cruz, A.; Padilla, I.; Garca, E..Manual de prcticas. Laboratorio de Qumica Bioorganica, Academia de Qumica, Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa, Mxico, 2009, 121. [5].Manual de Prcticas de Laboratorio de Qumica Orgnica. Departamento de Qumica Orgnica, Facultad de Farmacia, Universidad de Alcal. [6].Enlace web: http://www.panreac.es/spanish/practicas/pr acticas24.htm, visitado el da 29 de Abril de 2012. [7].Harris, W.; Laitinen, H.. Anlisis Qumico, Ed.Reverte S.A., Espaa, 1982, 550. [8]. Enlace web: http://www.textoscientificos.com/quimica/c romatografia/bidimensional, visitado el da 29 de Abril de 2012. [9].Enlace web: http://webdelprofesor.ula.ve/ingenieria/csal as/OPIV/intercambio_ionico.pdf, visitado el da 29 de Abril de 2012.

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