PRACTICA No.

Coloracin de Gram Objetivos: 1. Conocer los fundamentos de la Coloracin de GRAM y la interpretacin de la misma.

2. Aprender a diferenciar las distintas formas bacterianas y algunos modos de agrupacin de las mismas.

Materiales:

1. Cultivos de : a. Stapylococcus y Streptococcus, ya sea en caldo nutritivo o en agar sangre b. Escherichia coli en caldo nutritivo o en agar sangre 2. Portaobjetos 3. Mechero 4. Asa de platino 5. Agua corriente 6. Serie de colorantes para Gram (Violeta de Genciana, Lugol, Alcoholacetona y Fucsina bsica o Safranina)

Tcnicas:

1. Se realizan todos los pasos descritos en la practica No.1 y en sus partes A y B. 2. Vierta sobre el portaobjetos ya preparado violeta de genciana y djela actuar por un minuto. 3. Lave con agua corriente. 4. Cubrir la preparacin con lugol (mordiente) por un minuto.

5. Lave con agua corriente. 6. Vierta sobre la preparacin alcohol-acetona (decolorante), hasta cuando no salga ms colorante. (Evite excesos de alcohol-acetona). 7. Lave con agua corriente. 8. Vierta Safranina o Fucsina diluida sobre la preparacin y djela actuar por 30 segundos. 9. Lave con agua corriente 10. Coloque el portaobjetos ya preparado en la forma anteriormente indicada en el Microscopio, enfoque en 10X, luego coloque una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin y observe con objetivo 100X.

Las bacterias Gram positivas retienen el color azul y las Gram negativas retienen el color rojo

Preguntas:

1. Cual es el objetivo primordial de esta coloracin? 2. Qu pasa si no se utiliza el mordiente? 3. Qu pasa si no se utiliza el alcohol-acetona? 4. Qu pasa si no se utiliza la Safranina o la Fucsina Bsica?

Dibujar las bacterias que observo y las formas de agruparse

Nota: cualquier duda al respecto, hgala saber oportunamente