Asignatura: Anlisis Qumico Grado: Bioqumica Curso acadmico: 2011/12

N. Campillo Seva

 1. Generalidades:
Anlisis Cualitativo y Anlisis Cuantitativo

2. Conceptos bsicos en Anlisis Qumico 3. Clasificacin de los mtodos de Anlisis 4. El proceso analtico

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1. GENERALIDADES

QUMICA ANALTICA

CIENCIA DE LA MEDICIN: separa, identifica y cuantifica los componentes de una muestra de materia. Para ello desarrolla y mejora mtodos e instrumentos

ANLISIS QUMICO
Parte prctica de la Qumica Analtica que aplica los mtodos de anlisis para resolver problemas

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ANLISIS QUMICO

Anlisis Cualitativo

Anlisis Cuantitativo

Identificacin de las especies que componen la muestra

Sangre
Glucosa, colesterol total, triglicridos, hierro, ferritina, albmina, acido rico.

Determinacin de la cantidad relativa de los componentes de la muestra en trminos numricos

Glucosa 100 mg/dL Colesterol total 200 mg/dL Triglicridos 160 mg/dL cido rico 5 mg/dL Fe 150 g/dL Ferritina 200 g/dL Albmina 5 g/dL
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F1 N. Campillo Seva

IMPORTANCIA DE LA QUMICA ANALTICA

Geologa Ciencias Ambientales

Biologa

Qumica

Agricultura

QUMICA ANALTICA

Ingeniera

Ciencias Sociales

Medicina Ciencias de los materiales Fsica

2. CONCEPTOS BSICOS EN ANLISIS QUMICO

MUESTRA: Parte representativa de la materia objeto de anlisis. ALCUOTA: Fraccin o porcin de muestra. ANALITO: Especie qumica objeto del anlisis. MATRIZ DE LA MUESTRA: Especies qumicas que acompaan al analito en la muestra. TCNICA ANALTICA: Medio empleado para obtener informacin sobre el analito. MTODO ANALTICO: Secuencia de operaciones y tcnicas aplicadas para el anlisis de una muestra.

EJEMPLO: Anlisis de glucosa en sangre.

Muestra: Sangre Analito: Glucosa Matriz: Protenas, sales minerales, colesterol Tcnica analtica: Espectrofotometra de absorcin molecular visible Mtodo analtico: Implica desde la toma de muestra hasta la obtencin del resultado final.
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OTROS CONCEPTOS IMPORTANTES

INTERFERENTE: Especie qumica distinta del analito que aumenta o disminuye la respuesta del analito bajo el mtodo aplicado. (Ej. Analito: Ca2+, Al3+ es un interferente si la determinacin se lleva a cabo por valoracin con EDTA. Interferencia positiva) ENMASCARAMIENTO: Transformacin del interferente en otra especie qumica que no es detectada con la tcnica analtica empleada. (Ej. Al3+ + 3OH- Al(OH)3) DISOLUCIN ESTNDAR: Disolucin conteniendo el analito en concentracin perfectamente conocida. (Ej. Disolucin acuosa conteniendo glucosa en una concentracin exacta de 75 mg/dL) CURVA DE CALIBRADO: Grfica que representa la seal analtica monitorizada frente a la concentracin del analito.

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Mediciones en Anlisis Cuantitativo

- Peso o volumen de muestra - Cantidad proporcional a la cantidad de analito en la muestra

3. CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE ANLISIS

Mtodos clsicos: se basan en propiedades qumicas de los analitos.
Volumetras y gravimetras.

Mtodos instrumentales: se basan en propiedades qumico-fsicas de los analitos.

Se clasifican segn la propiedad que se mide (espectroscpicos, electroqumicos, miscelneos)

Mtodos de separacin: la finalidad inicial de estos mtodos era separar

interferentes antes de proceder a aplicar la tcnica analtica seleccionada. En la actualidad, existen mtodos de separacin que son mtodos de anlisis en s mismos, como por ejemplo la cromatografa.
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4. EL PROCESO ANALTICO
El Anlisis Qumico alcanza sus objetivos mediante el PROCESO ANALTICO, que es la aplicacin del mtodo cientfico, implicando el proceso de la figura: Problema Eleccin del mtodo analtico Toma de muestra Tratamiento de la muestra

MTODO ANALTICO
Proceso de medida Tratamiento de los datos Valoracin de los resultados Informe y conclusiones
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ETAPAS DEL PROCESO ANALTICO

4.1. Definicin del problema:
En esta 1 etapa se plantea el tipo de anlisis requerido y la escala de trabajo.
producto farmacutico con el valor suministrado por el fabricante

Ejemplo: Se pretende contrastar el contenido real de acido acetilsaliclico (AAS) en un

4.2. Seleccin del mtodo de anlisis:

Consideraciones importantes:
Exactitud requerida en los resultados Disponibilidad de tiempo y de dinero Nmero de muestras a analizar Concentracin esperada del analito en la muestra Complejidad de la muestra bajo anlisis

Etapa crucial para el xito de los resultados finales

Volumetra cido-base
F1

NaOH

Buscar en la bibliografa procedimientos apropiados o, si es necesario, poner a punto nuevos procedimientos analticos para llevar a cabo el anlisis

AAS

F2

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4.3. Toma de muestra o muestreo

Plan de muestreo: estrategia a seguir para garantizar que los resultados obtenidos reflejen la realidad del material analizado. Caractersticas que ha de cumplir la muestra: ser representativa del material a analizar ser homognea, lo que significa que debe ser igual en todas sus partes.

Se reduce el error en los resultados

F1

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4.4. Tratamiento de la muestra

Son escasos los problemas que se resuelven sin necesidad de tratamiento de la muestra Lo habitual, es que la muestra necesite algn tipo de tratamiento, con el fin de: 1. Preparar la forma y tamao de la muestra, as como la concentracin del analito(s), ms adecuada para la tcnica analtica seleccionada 2. Eliminar interferencias matriciales

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Consideraciones importantes durante la etapa de preparacin de muestra

1) La preparacin de la muestra no puede implicar prdidas de analito, ni tampoco contaminaciones. 2) Se debe transformar el analito en la mejor forma qumica para el mtodo analtico seleccionado. 3) Si es necesario, se eliminarn las interferencias de la matriz, mejorando as la selectividad del mtodo. 4) No se deben introducir nuevas interferencias. 5) Debe considerarse la dilucin o preconcentracin del analito, de manera que se halle en el intervalo de linealidad del mtodo seleccionado.

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La mayora de las tcnicas analticas: MUESTRA EN ESTADO LQUIDO Si la muestra es slida

Molienda: Disminucin tamao de partcula
Maza

Si el anlisis no va a ser inmediato

Almacenamiento: luz, T, tipo de recipientes

Mortero

F4

F1

F2 F3

F5

Liofilizacin previa Si la muestra es lquida

Evaporacin del disolvente

Si el analito es un gas disuelto en un lquido

Doble recipiente sellado para su almacenamiento 14

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MUESTRA EN ESTADO LQUIDO Eleccin del mtodo Obtencin de la muestra Preparacin de la muestra

Extraccin del analito a una fase lquida

No

Se encuentra el analito disuelto? S Es mensurable la propiedad analtica?

Agitaci n Disolvent e (H2O, EtOH, MeOH Muestra slida

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Centrifuga cin
Lquido sobrenadante

Decantac in

Recogemos el lquido el sobrenadante

Suspensi n del slido en el disolvent e

Residuo slido

Resid uo slido

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Para la determinacin de AAS en producto farmacutico mediante volumetra cido-base Trituracin del frmaco y disolucin en etanol
F1 F2 F3

- En ocasiones, se requieren condiciones ms enrgicas para la extraccin del analito a la fase lquida: Disoluciones acuosas de:
- cidos fuertes - bases fuertes - agentes oxidantes - agentes reductores - combinaciones de reactivos

F4

Aplicacin de energa externa:

- microondas - ultrasonidos
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Eleccin del mtodo

Obtencin de la muestra

Preparacin de la muestra

Extraccin del analito a la fase lquida

No

Se encuentra el analito disuelto? S Es mensurable la propiedad analtica? S Eliminar interferencias si las hubiere

Especie fluorescente

Cambio de la forma qumica del analito

No

Ej. Sulfonamida

Adicionamos reactivos (para la determinacin mediante fluorimetra)

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MTODOS DE SEPARACIN
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DEFINICIN DE RPLICAS DE MUESTRAS

El proceso de medida debe llevarse a cabo en varias alcuotas idnticas de la muestra 1 mL 1 mL 110 mg/dL Finalidad 109,6 mg/dL
1.Establecer la variabilidad del anlisis 2.Evitar un error grave LA INCERTIDUMBRE ES TAN IMPORTANTE COMO LA MEDIDA MISMA

F2

F1

1 mL

187,5 mg/dL

1mL

110,3 mg/dL

X SD
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4.5. Proceso de medida

La mayora de los mtodos necesitan de disoluciones estndar o patrn VOLUMETRAS: Se mide la cantidad de equivalentes qumicos de valorante en el punto final de la valoracin Seal analtica = K x CA Disolucin patrn CA = 80 mg/dL S = 0,199
F1 F2

K= constante de proporcionalidad CA= concentracin de analito

Disolucin problema CA = ? S = 0,261

0,199 = K 80 K = 0,0025 dL/mg

0,261 = 0,0025 CA CA = 104,4 mg/dL

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4.6. Tratamiento de los datos a travs de ecuaciones de calibracin

Curva de calibracin con patrones externos
Concentracin, mg/dl Seal analtica
0.6 0.5

0 40 80 120 160 200

0,001
Seal analtica

0,101 0,199 0,303 0,401 0,498

0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0 50 100 150 200 250

Concentracin, ppm mg/dl

Seal analtica = ordenada origen + K x CA Seal analtica = 0,00129 + 0,0024 x CA

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CLCULO DE CA EN LA MUESTRA A TRAVS DE LA CURVA DE CALIBRADO

0.6 0.5

Seal analtica = 0,0013 + 0,0024 x CA

Seal analtica

0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0 50 100 150 200 250

0,261 = 0,0013 + 0,0024 x CA

CA = 108,2 mg/dL

Aplicacin de factores de dilucin preconcentracin, si procede

Concentracin, ppm mg/dl

El mtodo de calibracin frente a patrones externos es vlido si una determinada CA tanto en la muestra como en la disolucin estndar proporciona la misma respuesta analtica.
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Si las respuestas analticas para un mismo valor de CA en la disolucin estndar y en la muestra son diferentes:

Mtodo del estndar interno

El patrn interno es una especie de referencia (R), con propiedades qumicas y fsicas parecidas a las del analito (A)

Mtodo de adiciones estndar

Se agregan cantidades conocidas de analito a la muestra

SA/SR

SA

CA
Concentracin de analito en la muestra

CA aadida a la muestra

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4.7. Evaluacin de los resultados, informe y conclusiones

Los resultados han de ser evaluados por estimacin de su fiabilidad
El informe dirigido al solicitante del anlisis ha de: 1.Indicar claramente los resultados 2.Las condiciones experimentales empleadas 3.Limitaciones concretas de la tcnica analtica empleada

1. Concentracin de glucosa obtenida: x SD 1. Tcnica espectrofotomtrica 2. Intervalo de linealidad, LD, LQ

As en orina
1. ND (no detectado) 2. Espectrometra de absrcin atmica con atomizacin electrotrmica (ETAAS) 3. LD (Lmite de deteccin): 50 ppt

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Conclusiones El analista puede o no implicarse en lo que se vaya a hacer con su informacin. Como mnimo debera asegurarse que las conclusiones que se extraigan de sus datos sean coherentes con los mismos.
1. Concentracin de glucosa: 520 1 mg/dL 1. Tcnica espectrofotomtrica 2. Intervalo de linealidad, LD, LQ

Ingreso hospitalario del individuo

1. Concentracin de As en orina: 403 2 ng/L 2. Tcnica HG-AAS 3. Intervalo de linealidad, LD, LQ

Envenenamiento crnico del individuo

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Eleccin del mtodo

Obtencin de la muestra

Preparacin de la muestra

Extraccin del analito a la fase lquida

No

Se encuentra el analito disuelto? S Es mensurable la propiedad analtica? S Eliminar interferencias si las hubiere

Cambio de la forma qumica del analito

No

Estimar la fiabilidad de los resultados Informe

Calcular los resultados Conclusiones

Medir la propiedad analtica

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CRDITOS DE LAS ILUSTRACIONES PICTURES COPYRIGHTS

-Logo Portada OCW-UM. Autor: Universidad de Murcia. Direccin web: http://ocw.um.es. -Pgina 5, F1. Direccin web: http://blogdelcancer.blogspot.com/ -Pgina 10, F1. Autor: Mysid (original by Quantockgoblin). Direccin web: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:burette.svg -Pgina 10, F2. Direccin web: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Chemistry_flask_matthew_02.svg -Pgina 11, F1. Direccin web: http://maikelnai.elcomercio.es/wp-content/uploads/2008/04/farmaco_radiacion.jpg -Pgina 14, F1. Fuente: Quantitative Chemical Analysis, Seventh Edition, 2007 W.H. Freeman and Company. -Pgina 14, F2. Direccin web: http://profesores.elo.utfsm.cl/~agv/elo323/2s06/projects/GerardoAlvarez/proyecto_final_archivos/image009.gif -Pgina 14, F3. Direccin web: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Eppendorf_tubes.jpg -Pgina 14, F4. Direccin web: http://www.sunbox.es/es/envases-industriales-3/botes-5/frascos-roscados-111.html -Pgina 14, F5. Direccin web: http://www.adendorf.net/ -Pgina 15, F1. Fuente: Quantitative Chemical Analysis, Seventh Edition, 2007 W.H. Freeman and Company. -Pgina 16, F1. Autor: Hannes Grobe. Direccin web: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mortar_achat_hg.jpg -Pgina 16, F2. Autor. User:Ruhrfisch. Direccin web: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Magnetic_Stirrer.JPG -Pgina 16, F3. Autor: Hannes Grobe. Direccin web: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Volumetric_flask_hg.jpg -Pgina 16, F4. Direccin web: http://www.inilab.es/media/catalog/product/cache/1/small_image/160x/9df78eab33525d08d6e5fb8d27136e95/2/2/22001.png -Pgina 16, F5. Direccin web: http://www.icb.csic.es/fileadmin/grupos/ProcesosQuimicosAvanzados/HornoDeMicroondas-m.jpg -Pgina 18, F1. Direccin web: http://newsimg.bbc.co.uk/media/images/41203000/jpg/_41203257_050531vihbody.jpg -Pgina 18, F2. Direccin web: http://us.cdn3.123rf.com/168nwm/dusanzidar/dusanzidar0801/dusanzidar080100075/2443753-parte-la-celebraci-n-de-sangre-en-tubo-de-e -Pgina 19, F1 y F2. Fuente: Quantitative Chemical Analysis, Seventh Edition, 2007 W.H. Freeman and Company.

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