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DESCRIPCIÓN BIOQUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS (1)

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DESCRIPCIÓN BIOQUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS: reacciones de color para aminoácidos, destinado a la identificación de sus propiedades moleculares.

Junior Álvarez Ortega1, Enrique Dávila Ochoa1, y Elkin Monterrosa Berrio1

RESUMEN Los aminoácidos forman la estructura primaria de las proteínas, y existen diferentes métodos o pruebas, que mediante serie de reacciones específicas, propias de cada reacción, permitan identificar aminoácidos con propiedades diferentes. Los aminoácidos se clasifican, esencialmente, según la estructura de su cadena lateral, es decir, la estructura de la cadena lateral va a determinar qué tipo de aminoácido es, y las propiedades químicas que posee. En las pruebas se utilizaron diferentes reactivos que intervinieron en cada una de las reacciones de diferentes pruebas de identificación. La prueba xantoproteica identifica aminoácidos con grupos bencénicos en su cadena lateral, como la tirosina o el triptófano, que generan tinción amarilla al reaccionar con el ácido nítrico o anaranjada al reaccionar con un álcali durante la neutralización, este último confirma la prueba. La prueba de Ehrlich identifica a los aminoácidos con grupos aromáticos que reaccionaron con el ácido Sulfanílico y nitrito de Sodio. La prueba de Hopkins- cole identifica proteínas que contenga
triptófano en su estructura, es decir, la prueba identifica el triptófano es por eso que solo se experimentó con el triptófano y no con otros aminoácidos. La prueba de azufre reducido busca identificar a sustancias con azufre en su estructura, que mediante diferentes pasos permite separar el azufre y formar una sal. La prueba de Sakaguchi identifica el grupo guanido o guanodino, el cual se encuentra en la arginina, por ende es una prueba para identificar arginina en una sustancia.

Palabras Claves: Reactivo, solución, soluto, aminoácidos, proteínas, hidróxido de sodio, ácido nítrico hidróxido de amonio, ácido clorhídrico, formaldehido, ácido sulfúrico.

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Estudiantes de medicina, III semestre, participantes del Experimento Bioquímica # 1

valina (Val. prolina (Pro. Q). W) (ya incluidos en los grupos neutros polares y neutros no polares). treonina (Thr. en los ribosomas. Y) y glicina (Gly. sucesivamente. E). o básicos: lisina (Lys. o específicos en los aminoácidos. a este carbono alfa se unen un hidrógeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de estructura variable. G).  Según las propiedades de su cadena: •Neutros polares. W). L). apolares o hidrófobos: alanina (Ala. Las propiedades de estos aminoácidos determinan muchas de sus propiedades y reacciones frente a otros compuestos y biomoleculas. los últimos fueron descubiertos en el año 2002) forman parte de las proteínas y tienen codones específicos en el código genético. fenilalanina (Phe. tirosina (Tyr. I). Todos los aminoácidos componentes de las proteínas son L-alfa-aminoácidos. A). pero sólo 20 (actualmente se consideran 22. Dos aminoácidos se combinan en una reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro. F). Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de las proteínas. isoleucina (Ile. polares o hidrófilos: serina (Ser. asparagina (Asn. leucina (Leu. metionina (Met. •Con carga negativa. los cuales por ejemplo al reaccionar con ácido nítrico se crean nitroderivados que cambian el color del aminoácido permitiendo detectar la presencia de grupos aromáticos en los mismos. glutamina (Gln. R) e histidina (His. estos dos "residuos" de aminoácido forman un dipéptido. Y) y triptófano (Trp. •Neutros no polares. Existen muchas formas de clasificar los aminoácidos. está entre otras reacciones pueden llevarse a cabo para detección de grupos funcionales. •Aromáticos: fenilalanina (Phe. •Con carga positiva. cisteína (Cys. Existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos de aminoácidos diferentes. F) y triptófano (Trp. H).INTRODUCCION Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (COOH). T). liberándose una molécula de agua y formando un enlace amida que se denomina enlace peptídico. . tirosina (Tyr. dicho de otro modo. C). además. Esto significa que el grupo amino está unido al carbono contiguo al grupo carboxilo (carbono alfa) o. Si se une un tercer aminoácido se forma un tripéptido y así. tal es el caso de los aminoácidos aromáticos. o ácidos: ácido aspártico (Asp. V). N). Esta reacción tiene lugar de manera natural dentro de las células. que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los diferentes aminoácidos. P). arginina (Arg. hasta formar un polipéptido. las dos que se presentan a continuación son las más comunes. principalmente aquellos que afectan sus propiedades químicas y se ubican en sus cadenas laterales. S). D) y ácido glutámico (Glu. que tanto el carboxilo como el amino están unidos al mismo carbono. M). K).

es decir.5% (C6H7NO3S) en Ácido Clorhídrico (HCl) (al 2%) o Agua (H2O) o Ácido Sulfúrico (H2SO4) o Hidróxido de Sodio (NaOH 6N) o Acetato de Plomo (CH3COOPb) o Hipoclorito de Sodio (NaClO) o α – Naftol o Nitrito de sodio (NaNO2)  2 Método y diseño del experimento El experimento tuvo como método la determinación de tipo cualitativa. un beaker de 800ml y 600ml de agua . y más específicamente de los aminoácidos. 4 Se usó para su calentamiento un trípode.MATERIALES Y METODOS Materiales y reactivos Instrumentos           Tubos de ensayo Gradilla Beakers Mechero Soporte Universal Aro Metálico Rejilla de asbesto Pinzas Hielo Llama una de sus pruebas. que resalte por medio de colores las propiedades de las proteínas. Fenilalanina y Triptófano 3 En tubos de ensayo separados. Para este experimento se agregaron 2ml de solución de aminoácidos (entre ellas Tirosina. de cinco aminoácidos. Esta prueba va a determinar cuál o cuáles de los aminoácidos (presentes en proteínas) utilizados. con el uso de reacciones de identificación cromática. el uso de colorantes determinados por reactivos. un álcali. cada solución de aminoácidos en su respectivo recipiente. Se realizaron cinco tipos de prueba para determinar las propiedades químicas. luego se calentó lentamente en baño de maría 4 . cuales poseen un grupo aromático en su estructura. Reactivos  Aminoácidos: o Histidina (al 2%) o Tirosina (al 2%) o Triptófano (al 2%) o Cisteína (al 2%) o Arginina (al 2%) Reactivos y soluciones o Ácido nítrico (HNO3) o Hidróxido de Amonio (NH4OH) o Ácido Sulfanílico 0. Prueba xantoproteica: es un método que se utiliza para determinar proteínas solubles en una solución. y luego se neutraliza con un álcali. es decir. poseen propiedades químicas aromáticas. un mechero de bunsen. Y posteriormente la solución. Estas fueron las siguientes: 1. es decir. se retiró del calor y se añadieron 8 gotas de Hidróxido de Amonio (NH4OH). en cada Por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina. Histidina y Triptófano3) en un tubo de ensayo y se procedió a agregar 1ml de Ácido nítrico (HNO3). empleando ácido nítrico concentrado que da origen a compuestos nitroderivados de color amarillo o anaranjado2.

. Prueba de Hopkins-Cole: La reacción de Hopkins cole se usa principalmente para identificar en una sustancia o una proteína la presencia de un aminoácido específico. Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Histidina o Tirosina) y agregar 1ml de nitrito de sodio y luego se le agregan ocho gotas de ácido sulfanilico 4.5% y 2 ml de NH4OH. 3. Prueba de Azufre reducido: Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Cisteína) y agregar 2 ml de NaOH 6N y 1 ml CH3COOPb. luego colocar en baño de hielo por un tiempo de 3 minutos y luego adicionar 1ml de NaNO2 0. aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados. colocar en un baño de hielo durante 5 minutos y por ultimo añadir ocho gotas de hipoclorito de sodio. con lo cual se desarrollara un color rojo intenso. El desarrollo del color se altera o se previene por completo por la presencia de amino. histidina o triptófano. el triptófano. De ahí que se dé una indicación de la presencia de arginina libre de proteínas que contengan arginina. Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Histidina o Tirosina) y agregar 1ml de ácido Sulfanílico 0. La arginina libre de la prueba positiva.) que reacciona con un buen número de compuestos orgánicos tales como indoles. colocar en un baño de hielo durante 5 minutos y por ultimo añadir ocho gotas de hipoclorito de sodio.5% en HCl 2%. La prueba consiste en tratar la muestra con alfa-naftol e hipoclorito de sodio. 5.2.5ml de NaOH6 N y 1 ml de α – naftol. Prueba de Ehrlich: de composición (pdimetilaminobenzaldehído al 10% en HCl concentrado. Prueba de Sakaguchi: Es una reacción de los compuestos que contengan grupo guanido o guanodino. Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Arginina) y agregar 0.

y tras el calentamiento el color de la sustancia cambio a un verde limón y 5 6 Fig. . se clasifica como un aminoácido no esencial en los mamíferos ya que su síntesis se produce a partir de la hidroxilación de otro aminoácido: la fenilalanina. y tras el añadido de hidróxido de amonio reaccionó creando una nube espesa sobre la solución y en su color no hubo ningún cambio. Cabe resaltar que apreciando detenidamente la solución se observaron dos fases una densa de líquido claro y otra sobrenadante de líquido turbio y aceitoso ambas de color transparente.RESULTADOS 1 PRUEBA XANTOPROTEICA Sustancia: Histidina 2% La histidina es un aminoácido transparente al cual se le agregó ácido nítrico. se clasifica entre los aminoácidos apolares. no hubo cambio de calor ni mucho menos después de agregarles las 8 gotas de hidróxido de amonio Color inicial: Transparente Color final: Transparente Observación: No hubo cambio le adicionó el ácido nítrico. ni tiempo después mostro cambio apreciable en su color. 6 En la reacción con el ácido nítrico la solución cambió a un color amarrillo parecido al aceite de oliva. Se considera un aminoácido polar y protonable. 2 Sustancia: Tirosina 2% La tirosina es un aminoácido liquido con partículas sólidas que forma cristales y que generalmente presenta un color blanquecino5. 1 Sustancia: Triptófano 2% El triptófano es un aminoácido de color blancuzco con grumos blancos. la solución continuó con ese mismo estado. al momento de mezclar los componentes las solución libera calor. se generó un color ocre dorado. Luego con la adición de calor la solución cambio de color a un naranja claro. Y al igual que el anterior proceso. Color inicial: Blanco o semitransparente Color final: Naranja claro Observación: Hubo cambio de color Fig. por lo tanto es una reacción exotérmica. Al cabo de la aplicación de calor. ni en el momento de la aplicación. se Aunque también puede ser incoloro Aunque normalmente se clasifica como aminoácido hidrofóbico a causa de su anillo aromático. y creó una reacción exotérmica. también llamados hidrófobos. con la diferencia de que al momento de mezclarse las sustancias.

4 . 3 2 PRUEBA DE EHRLICH La prueba de Ehrlich se encarga de identificar la presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido Sulfanílico y nitrito de Sodio. Conservando su degradante cromático más oscuro en el fondo Color inicial: Transparente con grumos blancos Color final: Canela oscuro Observación: El fondo del tubo de ensayo aun después del calentamiento permaneció con una coloración oscura al igual que el sobrenadante Fig. Color inicial: Blanco Color final: Miel claro Observación: Hubieron diversos cambios de color (De amarillo a verde y de este último. de igual manera ocurrió con la tirosina exceptuando el hecho de que el color inicial de esta última es semitransparente con grumos blancuzcos Fig. cambio el color de toda la solución a un color canela oscuro. el cual era agregar el NH4OH. que tenía un degradado que se aclaraba hacia el final del tubo de ensayo y luego con el posterior baño de maría.luego de que se terminara el último pasó de la prueba. la solución cambio de color nuevamente a un miel claro. el agua destilada más las gotas de formaldehido se creó un granulo sobrenadante blanco sobre una solución rojiza. Sustancia: Histidina y Tirosina 2% En el proceso que se llevó a cabo la reacción de la histidina y la tirosina genero cambios de color. desde el inicial que es el que posee la histidina que es transparente. a color miel) 3 PRUEBA DE HOPKINS-COLE Sustancia: Triptófano 2% Al agregarle a la solución. hasta el color ferroso (gris) que era el color final.

luego al agregarle el acetato de plomo se genera una solución espesa sobrenadante parecida a la espuma.4 PRUEBA DE AZUFRE REDUCIDO 5 PRUEBA DE SAKAGUCHI Sustancia n: Cisteína 2% La cisteína es un aminoácido de color blanco hueso. En la reacción se crearon dos fases una de color naranja rojizo que se encontró en el sobrenadante y una solución más densa de color transparente . a una mezcla heterogénea entre una sustancia blanca y transparente) Sustancia: Arginina 2% A la arginina que es de color transparente se le añadió. al agregarle el Hidróxido de sodio ese color pasa a ser transparente. Color inicial: Blanco Color final: Transparente en la porción más densa de la solución y sustancia espumosa Observación: Hubieron diversos cambios de color (De blanco a transparente y de este último. hidróxido de sodio que es una sustancia también transparente. luego a esta mezcla se le enfría por cinco minutos y se le agrega el alfanaftol que es una solución rosa más ocho gotas de hipoclorito de sodio.

especialmente en presencia de tirosina. aunque el El indol es un compuesto orgánico heterocíclico. Gracias a la nitración del anillo bencénico presente en este tipo de aminoácidos se obtienen 7 3 PRUEBA DE HOPKINS-COLE Sustancia: Triptófano 2% En la prueba de Hopkins-Cole. el color es debido a la presencia del grupo triptófano. lo que no le brinda a este la propiedad aromática. Sustancia: Histidina 2% En la histidina no hay cambio de color puesto que este aminoácido. que luego de añadirse un álcali (Base) se torna aun color más anaranjado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos. 2 PRUEBA DE EHRLICH Cuando se formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando péptido y proteínas En el experimento se observó que la solución se coloreó de gris debido a la presencia de grupos fenólicos que reacción con el reactivo y forman el color gris La estructura de este aminoácido contiene un grupo indol7. no posee en su estructura un grupo benceno. cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. este grupo lo hace un aminoácido aromático por lo tanto la reacción debe dar positiva para esta sustancia. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. que consiste en un benceno unido a un pirrol . Por eso al agregarle el ácido nítrico reacciona formando un color más anaranjado que el formado antes en el triptófano.ANALISIS DE RESULTADO 1 PRUEBA XANTOPROTEICA nitrocompuestos de color amarillo. En la reacción del grupo fenilo del aminoácido demarca por acción del ácido nítrico coloreando la solución de un amarillo parecido al color miel Sustancia: Triptófano 2% El triptófano es un aminoácido cuya fórmula es la siguiente: Aquí se observa que la tirosina posee un grupo fenólico este le da la propiedad de aromático. Sustancia: Tirosina 2% Al igual que el triptófano la tirosina es un aminoácido aromático cuya fórmula es la siguiente: En la prueba xantoproteica el cambio de color en ciertos aminoácidos es debido a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo.

Al añadir una sal soluble en agua. De todo esto podemos decir que esta reacción es solo para aquellas sustancias o aminoácidos que contengan azufre en su estructura.naftol y pierde el grupo imino por oxidación. el cual permite la separación del azufre de la estructura del aminoácido. el azufre se combina con el plomo para producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo.triptófano puro no da la prueba excepto en presencia de trazas de iones férricos o cúpricos. Para la cisteína este tipo de prueba es positiva debido a que estos aminoácidos poseen azufre en su estructura. o inclusive en el aminoácido libre existe el cambio de color que es siempre característicos por su gradiente rojo . La reacción se lleva a cabo en un medio alcalino. En cualquier proteína que contenga aminoácidos de triptófano. La arginina oxidada reaccionó con otra molécula de alfa-naftol cuando se le adiciona un compuesto alcalino formando un complejo coloreado rojo. la prueba de Hopkins cole. es decir en presencia de . como lo fue el acetato de plomo. dará positiva.oscuro NaOH. 4 PRUEBA DE AZUFRE REDUCIDO 5 PRUEBA DE SAKAGUCHI Sustancia: Cisteína 2% Sustancia: Arginina 2% La prueba es positiva para la arginina porque esta presenta a el grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina esta cadena reacciona con el alfa .

ya que la arginina está presente en la estructura de la mayoría de las proteínas. Experimentos de Química Orgánica. (2007). El triptófano y la tirosina dan positiva esta prueba (tienen grupos aromáticos en su estructura). como la prueba xantoproteica.es/experiencia-3pruebas-cualitativas-para-aminoacidosy-proteinas#. La prueba de Ehrlich identifica a la histidina y a la tirosina. La arginina está compuesta por el grupo guanidinio. G.bligoo. (2011). la prueba de Ehrlich o la prueba de Hopkins-cole. Obtenido de http://kathy-bioquimicaguialaboratorios09. ya que estos aminoácidos presentan en su estructura un grupo fenol. Existen pruebas que permiten identificar a los aminoácidos. Mexico: Editorial medica Panamerica. permite separar el azufre y así identificarlo mediante la reacción con una sal. L. A. lo cual permite clasificarlos. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Franco. Cada prueba identifica ciertas propiedades de los aminoácidos. La prueba de Hopkins-cole identifica sustancias que presenten en su estructura el aminoácido triptófano. Generalmente la prueba se utiliza para identificar proteínas en distintas sustancias. (2006). que al reaccionar con el ácido nítrico forman compuestos nitroderivados y así dar positiva la prueba. mientras que la histidina da negativa a la prueba. Lol Kathy. esto debido a la diferente naturaleza de diferentes aminoácidos.UUJ71hzNmwg .  En la prueba xantoproteica se busca identificar los aminoácidos que en su estructura presentan grupos aromáticos.      Estas pruebas se utilizaron con una variedad de reactivos e instrumentos. lo que les confieres propiedades que los caracterizan. Laboratorio Kathy. Análisis de orina: atlas color. La prueba de azufre reducido identifica a loa aminoácidos que en su estructura llevan azufre. Graff. el cual es identificado en la prueba.CONCLUSIÓN Los aminoácidos se pueden clasificar según la estructura de su cadena lateral. que en medio alcalino.

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