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TRABAJO CIENTIFICO
EXTRACCION DE SAPONINAS DE Chenopodium quinoa PARA SU UTILIZACIN EN LA ELABORACIN DE PRODUCTOS COSMTICOS TARANCO M, SOLIS C, CHAVEZ N, PEA A, Facultad de Farmacia y Bioqumica Universidad Nacional Mayor de San Marcos Lima - Per Objetivo del trabajo: Obtencin de extractos de saponinas a partir de la cascarilla de la quinua, para su uso como tensoactivo en la formulacin de productos cosmticos como shampoos Desarrollo del trabajo: RESUMEN Las saponinas son componentes tensoactivos naturales que pueden ser obtenidos de numerosas plantas. Una fuente natural para obtencin de estas sustancias y que no esta siendo utilizada es el Chenopodium quinoa Quinua. Las saponinas en la quinua se localizan en su cascarilla, el que hasta ahora es un recurso no utilizado y desechado por no poseer su contenido valor alimentario. El desarrollo de mtodo sencillo y econmico para el aprovechamiento de este recurso permitir su aprovechamiento incrementando el valor comercial de la quinua no solo como fuente alimenticia sino como fuente de principios activos con usos potenciales. Por ello, con tal fin usando un sistema de extraccin con Soxhlet, se obtuvo un extracto acuoso, en donde la presencia de saponinas fue evaluada por mtodos como el afrosimtrico, para posteriormente elaborar productos cosmticos como shampoo y jabn lquido, cuya formulacin se realizo de modo que mantuviera sus propiedades detergentes de las saponinas as como que se ajustaran a las normas de ITINTEC que rigen la fabricacin de dichos productos. Palabras Clave: Chenopodium quinoa, Saponinas, Shampoo, extraccin. INTRODUCCIN Las saponinas son componentes tensoactivos naturales que pueden ser obtenidos de numerosas plantas. Qumicamente las saponinas son metabolitos secundarios, ampliamente distribuidos en las plantas superiores, en las que se presentan en forma de glucsidos. Sus soluciones acuosas al ser agitadas forman una espuma estable y abundante, hecho este que dio origen etimolgicamente, al nombre genrico de estas sustancias provenientes del latn sapon (Mendez, 1992). Las saponinas se han utilizado por ms de 100 aos como elementos espumosos en alimentos y bebidas, produccin de pelculas fotogrficas, vacunas, cosmticos, jabn para el cabello, ropa etc. Los efectos principales de las saponinas son: Reduccin de la tensin superficial, formacin de espuma persistente, emulsificacin de grasas y aceites, celulares y humorales, permeabilidad de la membrana celular, reduccin de amonaco, activacin del crecimiento microbiano (Hernndez, 1997). Una fuente natural para la extraccin de saponinas con fines industriales y que no esta siendo utilizada con tal fin es el Chenopodium quinoa Willd. Esta planta se cultiva tradicionalmente en pases sudamericanos, a una altitud de 2 000-4 000 metros sobre el nivel del mar, en Chile, Argentina, Ecuador y Colombia, en pequeas parcelas, y en Per y Bolivia en grandes extensiones con un rendimiento de hasta 3 Ton mtricas por hectrea (Romero et al, 1985). Tambin se cultiva en Asia, principalmente en Vietnam. El pericarpio del grano de la Quinua contiene las saponinas. Estas saponinas imparten un sabor amargo y tienen la tendencia de
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producir espuma en soluciones acuosas. Koziol (1992) reporta concentraciones que varan de 0.01% a 4.65% para las saponinas (peso en seco) en la Quinua. Las saponinas en la Quinua son consideradas un componente no deseado por el mal sabor que le da a la quinua, habindose incluso buscado su reduccin por procedimientos de Ingeniera gentica. Incluso se tiene ya desarrollado operaciones con el objetivo de despojar al grano de quinua de sus saponinas, proceso que recibe globalmente el nombre de "desaponificacin de la Quinua", e incluyen normalmente la "va seca", que consiste bsicamente en un raspado y pelado de la Quinua en grano, la "va hmeda" que es una extraccin que comnmente utiliza agua como solvente, y la "va combinada" que comprende operaciones correspondientes a las dos anteriores (Valdivieso & Rivadeneira, 1998). Estudios sobre las saponinas de la Quinua ya se han desarrollado en cuanto a su obtencin con fines de caracterizacin qumica. As tenemos que Wall et al. (1958) extrajeron saponinas con etanol acuoso al 80 % v\v. (300 mL de etanol/ 50 g de droga seca) con un reflujo de 1 hora. Hostettmann y Marston (1995) han hecho un listado de por lo menos 518 saponinas triterpenoides, de las cuales la mayora contiene como base a las sapogeninas cido Oleanlico y Hederagenina. MATERIAL Y MTODOS 1. Material Biolgico: Cascarilla (epiesperma) del grano de la Quinua, obtenida luego del cultivo de la quinua en la regin del Antiplano Peruano (Puno) 2. Extraccin de Saponinas: La extraccin de las saponinas se realiz tomndose en cuenta la metodologa desarrollada por nosotros previamente extrayendo las saponinas en medio acuoso (Solis et.al, 2005). Se realiz la infusin de 30 G de cascarilla de quinua en 330 ml de agua destilada, con agitacin por 5 minutos. Posteriormente se filtro el extracto por extrusin, seguido de una filtracin con papel filtro. El extracto obtenido se concentro por Bao Mara a 70 oC por 2 das. Las soponinas fueron identificas por la reaccin de Lieberman Burchard (Idler & Baumann, 1953). El contenido de saponinas se cuantifico por espectroscopia de absorcin a 281 nm, usando para la cuantificacin una curva patrn obtenida usando saponinas patrn (Sigma). 3. Formulacin de productos cosmticos: se realizaron dos formulaciones. La primera inclua solo como tensoactivo al extracto de saponinas obtenido, la segunda inclua a otro tensoactivo adicional. FORMULACION 1 - Saponinas 30 %. - Carbopol 1% - Propilenglicol 1% - Metil parabeno 0.3% - Propil parabeno 0.6% - Agua destilada C.S.P 100 ml FORMULACIN 2 - Saponinas 30 %. - Texapon 2% - Cloruro de Sodio1% - Propilenglicol 1% - Metil parabeno 0.3% - Propil parabeno 0.6% - Agua destilada C.S.P 100 ml

La formulacin del jabn lquido se realiz elevando la concentracin del extracto slido de saponinas a 80 %.

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4. Evaluacin de las formulaciones 4.1 Prueba de lavado: Para ello se diseo un mtodo que consisti en obtener varias muestras de un gramo de cabello liso, los que fueron untados con aproximadamente 0.5 G de manteca obtenindose un peso de grasa inicial. Posteriormente se suspendieron las muestras de cabello por 5 minutos con agitacin, en 20 ml de diferentes medios; las soluciones correspondientes a las formulaciones se diluyeron 1/5, como control negativo se tuvo al agua destilada y como control positivo una solucin 1/10 de un shampoo comercial. Posteriormente las muestras de cabello se lavaron con agua estilada, dejndose secar a temperatura ambiente por 36 horas. La capacidad de lavado se evalu como el porcentaje de peso de grasa perdido luego de la prueba. 4.2 ndice afrosimtrico: Se uso para evaluar la capacidad espumante de las formulaciones, se la altura de la espuma luego de seguir el mtodo de Kosiol (1991). 4.3 Parmetros fisicoqumicos: Se evalu el pH, viscosidad, color y aspecto de acuerdo a las normas que rigen su fabricacin (Itintec, 1984). RESULTADOS 1. Extraccin de las Saponinas: Siguiendo los procedimientos descritos se obtuvo un extracto seco en el que se identifico saponinas triterpenoides por el color amarillo anaranjado evidenciado luego de la reaccin de Lieberman Burchard y por el mximo de absorcin obtenido a 280 nm luego de hacer un barrido espectral de una solucin 10 % del extracto slido obtenido (figura 1). La cuantificacin revelo un rendimiento de 10 % expresado como gramos de saponina obtenidos de 100 gramos iniciales de muestra.

Figura 1. Barrido espectral de una solucin del extracto slido de saponinas obtenido 2. Evaluacin del shampoo: La formulacin 1 y 2 presentaron una capacidad de lavado del 51.16 y 74.22 %, el control positivo de shampoo comercial presento un valor de 91.93 %. La formulacin1 y 2 presentaron inicialmente los valores de pH de 4.5 y 4.7 respectivamente y posteriormente se ajusto en ambas formulaciones el pH a 6.5 , el color de ambos shampoos fue marrn claro y el aspecto homogneo.
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DISCUSIN DE RESULTADOS Para la extraccin de las saponinas usamos como fuente biolgica la cascarilla de la quinua; esto se debi a que la mayor cantidad de saponinas se encuentra en la cascarilla respecto al grano y otras partes de la planta. Sobre la razn de ello se pueden hacer interesantes especulaciones, Papadopoulou K y Col (1999), encontraron que las plantas deficientes en saponinas eran ms sensibles al ataque por los hongos, en cambio las que presentaban alto porcentaje de saponinas eran ms saludables, robustez y resistentes a estos patgenos. Esta resistencia tiene un origen gentico ya que se refiere a los genes involucrados en la expresin de las enzimas que participan en la biosntesis y regulacin de la actividad de las saponinas. Los resultados de la extraccin nos muestran que las saponinas presentes en el grano de la quinua se pueden extraer directamente de la cascarilla por el mtodo descrito. El barrido espectral para la solucin del extracto seco no fue similar a los reportados para saponinas extraidas de otras fuentes como las del fruto de Sapindus saponaria (Palacios & Paredes, 1996), esto puede deberse a que la naturaleza qumica de las saponinas de la quinua es diferente a las del boliche, o que no se ha obtenido una purificacin total que evidencie ms el espectro caracterstico de las saponinas. No obstante, la solucin del extracto presento un pico de absorcin a 280 nm caracterstico de las saponinas ( ). Adems las saponinas extradas fueron identificadas por cromatografa en capa fina usando como revelador el reactivo de Lieberman Buchard y la luz ultravioleta que dio el caracterstico color violeta para las saponinas triterpenoides. La razn de elegir la extraccin en medio acuoso se debi que en anteriores investigaciones se ha demostrado que puede usarse de forma indistinta respecto a otros solventes como metanol 80% y agua-metanol relacin 1:1 (Solis et.al, 2005). Esto se explica debido a que las saponinas son solubles en agua, debido no slo a los residuos de azcar con sus mltiples grupos oxidrilo capaces de establecer puentes hidrgeno con el agua sino a que muchas saponinas triterpenoides presentan en su esqueleto hidrocarbonado sustituyentes polares como los grupos carboxilo que tambin pueden establecer este tipo de interacciones y quedar solvatados por el agua. Adems la extraccin en medio acuoso es un procedimiento seguro y econmico respecto a productos potencialmente txicos como metanol, butanol u otros solventes orgnicos. El diseo de un procedimiento de extraccin que sea eficiente y a la vez econmico es importante por su potencial de uso a nivel industrial para la obtencin de extractos de saponinas que puedan ser usadas como componentes de formulaciones de productos cosmticos. Respecto a la formulacin para la elaboracin del shampoo, la formulacin 1 que inclua solo como detergente al extracto seco de saponinas de la quinua, mostr un menor poder de lavado 51.16 %) respecto a la formulacin 2 que inclua texapon 2% (74.22 %, ), ello porque las saponinas por si solas poseen un poder detergente pero su naturaleza anfiptica de detergente no esta sustentada en ningn grupo ionizable a diferencia del lauril sulfato de sodio del texapn,.Para incrementar el poder de lavado del shampoo una alternativa es incrementar la concentracin del extracto de saponinas en la formulacin, y el otro es agregar a la formulacin otro tensoactivo en este caso el texapn pero en una concentracin inferior (2 %) a la que comnmente es usado (20 %). El pH inicial de las formulaciones fueron ligeramente cidos (4.5 y 4.7), pero se pudo equilibrar fcilmente hasta pH 6.5. usando una solucin buffer.

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Nuestro trabajo ha pretendido mostrar a la quinua como una fuente potencial de saponinas para la elaboracin de productos cosmticos como shampoos. Hay concluidos muchos estudios cientficos y patentes internacionales que describen el uso de saponinas pero de fuentes diferentes a la quinua, siendo las dos fuentes de saponinas ms citadas las correspondientes a Sapindus saponaria y Yucca schidigera. Pero respecto a una planta como Chenopodium quinoa quinua poco se ha reportado y menos patentado. El uso de la quinua como fuente de saponinas a ser usadas como componentes de formulaciones de productos cosmticos presenta algunas ventajes respecto al boliche y la yuca, fundamentalmente porque se trata de un especie que puede ser cultivada anualmente con rendimientos que oscilan entre los 21 a 105 Kg de saponinas por hectrea (Romero et al, 1985), sin considerar el mejoramiento que se pueda producir e estos valores por seleccin de lneas con altos contenidos de saponinas, lo que eventualmente pudiera elevar los rendimientos en u 55 %. Hay que agregar que las saponinas presentes en la cascarilla de la quinua han sido un recurso no aprovechado, por ello nuestra propuesta de uso de las saponinas de la cascarilla de la quinua con fines cosmticos contribuir de ejecutarse a nivel industrial, a incrementar valor agregado de este productos agrcola, importante para la economa de las regiones ms deprimidas del Per donde se cultiva la Quinua. Es ms, la produccin de la fuente de las saponinas no tiene que establecerse pues ya existe, simplemente consistir en recoger la cascarilla de la semilla de la quinua, la que actualmente esta siendo desechada sin darle ninguna utilidad. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS HERNNDEZ R 1997. Obtencin de crudos de saponinas hipocolesteromizantes del Chenopodium quinoa Willd. Rev Cubana Med Milit ; 26(1):55-62 HOSTETTMANN K. & MARSTON A. 1995. Saponins, Cambridge University Press, Cambridge. IDLER, D.R. & BAUMANN, C.A. 1953. Sterol structure and the Liebermann-Burchard reaction. J. Biol. Chem. 203, 389395. ITINTEC. 1986. Normalizacin tcnica - certificacin de calidad y metrologa en el Per. pp 11-12 KOZIOL M.J. 1990. Afrosimetric stimation of theshold saponin concentration for bitterness in quinoa. (Chenopodium quinoa Willd). J.Agric. Foos Sci. 54: 211-219 MENDEZ M. 1992. Champ de Sapindus saponaria "Boliche". Tesis para optar al ttulo profesional de Qumico farmacutico. Facultad de Farmacia y Bioqumica . UNMSM. PALACIOS G. & PAREDES Y. 1996. Uso de las saponinas de Quillaja saponaria M. (Quillay) en la formulacin de champes. Tesis para optar al ttulo profesional de Qumico farmacutico. Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Catlica Santa Mara. ROMERO A, BACIGALUPO A, BRESSANI R. 1985. "Efecto de la extrusin sobre las caractersticas funcionales y la calidad protenica de la quinua". Arch Latinoam Nutr ;35:14862.

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SOLIS C, CHAVEZ N, CERNA M., & MUOZ L. 2005. Extraccin y estudio fitoqumico de saponinas de Chenopodium quinoa "Quinua". Libro de resmenes del V Congreso Mundial de Medicina Tradicional, Centro de Investigacin de Medicina Tradicional Universidad San Martn de Porres, 22 al 24 de Abril del 2005, p 164. VALDIVIESO J. & RIVADENEIRA V. 1998. Diseo y construccin de una escarificadora de quinua por va seca en un flujo continuo. CIID: Biblioteca: Produccin y Procesamiento de Quinua en Ecuador. WALL M.E. 1952. Detection and estimation of steroidal sapogenins in plant tissue. Anal Chem; 24:1337-41. Resumen de los resultados obtenidos Se obtuvo un extracto seco a partir de la cascarilla de la quinua luego de un proceso de infusin seguida de etapas de filtracin y concentracin en bao Mara, en el que se identifico saponinas triterpenoides mediante la reaccin de Lieberman Burchard y por el mximo de absorcin obtenido a 280 nm luego de hacer un barrido espectral de una solucin 10 % del extracto slido obtenido. La cuantificacin revelo un rendimiento de 10 % expresado como gramos de saponina obtenidos de 100 gramos iniciales de muestra. Se realizaron dos formulaciones de shampoo teniendo como tensoactivo al extracto seco de saponinas, las que presentaron una capacidad de lavado del 51.16 y 74.22 % respecto a un control positivo de shampoo comercial que presento un valor de 91.93 %. Los valores de pH para los shampoos elaborados fueron 4.5 y 4.7, ajustndose a pH a 6.5 posteriormente, el color de los shampoos fue marrn claro y el aspecto homogneo. Conclusiones La cascarilla de semillas de la quinua son una fuente valiosa de Saponinas, compuestos qumicos que por su capacidad natural de detergenca puede ser usado como componente en la formulacin de productos cosmticos como shampoos. La extraccin y el aislamiento de estos principios activos se puede hacer de un modo muy sencillo, con un mayor rendimiento y a un menor costo a partir de la cascarilla de la semilla de la quinua por los mtodos descritos en el presente trabajo.

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