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CULTIVO CONTINUO (SISTEMAS ABIERTOS).

QUIMIOSTATO
El cultivo continuo es un cultivo balanceado mantenido por tiempo indefinido por un sistema abierto de flujo que se compone de: una cmara de cultivo de volumen constante, a la que llega un suministro de nutrientes, y de la que se eliminan o separan los productos txicos de desecho (por un dispositivo de rebosadero). Una vez que el sistema alcanza el equilibrio, el nmero de clulas y la concentracin de nutrientes en la cmara permanecen constantes, y entonces se dice que el sistema est en estado estacionario, con las clulas creciendo exponencialmente. Los parmetros a tener en cuenta son: flujo (f), medido en ml/h volumen de la cmara de cultivo (v, en ml) densidad celular en la cmara (x) factor de dilucin D = f/v (en h-1). Existe una prdida de clulas por el rebosadero: -dx/dt = xD El crecimiento bruto es dx/dt = x Por lo tanto, el crecimiento neto es dx/dt = x - xD = x( - D) Si logramos que el coeficiente de crecimiento () se haga igual al factor de dilucin (D), entonces dx/dt = 0, y por lo tanto la concentracin de clulas se hace constante (x= x). El cultivo se encuentra entonces en estado dinmico de equilibrio. Las prdidas de clulas por drenaje se compensan con las ganancias por crecimiento.

Una de las maneras de lograr un cultivo continuo es mediante el llamado quimiostato: en el quimiostato podemos controlar de modo independiente la densidad de la poblacin celular y la velocidad de crecimiento del cultivo. La densidad celular en el equilibrio se controla ajustando el factor de dilucin (D), mientras que la velocidad de crecimiento se controla variando la concentracin del nutriente limitante en la cmara reservorio (SR). En un quimiostato, los microorganismos pueden cultivarse a una amplia variedad de tasas de crecimiento exponencial El quimiostato permite crecimientos balanceados restringidos debido a que existe un nutriente o sustrato presente en una concentracin suficientemente baja como para limitar la densidad de poblacin. As pues, el quimiostato tambin permite elegir la densidad de clulas a la que se quiere trabajar.

Algunos comentarios sobre el grfico: La densidad del cultivo es muy similar en un amplio margen de tasas de dilucin (D). Este margen es el ms adecuado para hacer estudios en el quimiostato. En cambio, el valor de tiempo de generacin (g) vara ampliamente. O sea, el quimiostato puede obtener tasas de crecimiento muy diferentes, sin que se afecte la densidad celular.Sin embargo, a valores extremos de dilucin, se puede ver que el equilibrio se rompe: A altas tasas de dilucin la concentracin microbiana cambia rpidamente, y en un margen estrecho el cultivo puede drenarse totalmente (DC: dilucin crtica). Es decir, el cultivo se lava porque su velocidad de crecimiento es inferior a la tasa de dilucin. A muy bajas diluciones (DM) el quimiostato no funciona si el nutriente limitante es la fuente de energa. Ello se debe a que en esas condiciones, la fuente de energa slo se usa para reacciones de mantenimiento de la integridad celular, pero no queda para el crecimiento. A este valor lo llamamos energa de mantenimiento. Los procesos relacionados con esta energa de mantenimiento son el potencial de membrana, el transporte de solutos y la renovacin de protenas. Aplicaciones del cultivo continuo en quimiostato: Aportan una fuente continua de clulas en fase exponencial, lo que se aplica a procesos industriales de fermentacin (produccin de bebidas alcohlicas, de antibiticos, de aminocidos, etc). En el quimiostato, el crecimiento a bajas concentraciones de sustrato permite estudiar:

aspectos fisiolgicos (por ejemplo, catabolismo del sustrato limitante); seleccin de mutantes estudios ecolgicos.