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Qué son las pruebas bioquímicas

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Índice

 Introducción I. Indol 1. Géneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioquímico 3. Características generales 4. Interpretación 5. Controles de calidad

II.

Rojo de Metilo 1. Géneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioquímico 3. Características generales 4. Interpretación 5. Controles de calidad

III.

Voges -Proskauer 1. Géneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioquímico 3. Características generales 4. Interpretación 5. Controles de calidad

IV.

Citrato 1. Géneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioquímico 3. Características generales 4. Interpretación 5. Controles de calidad

V.

Conclusión

VI.

Bibliografía

Rojo de Metilo Estudia la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo. Voges Proskauer Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro. IMVIC El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol. amalonaticus y del biogrupo 1. La prueba del Indol PRINCIPIO Estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos II. 1. V-). conocida su reacción. Citrato Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono. 2. nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.  Ayuda en la diferenciación de especies junto con otras pruebas bioquímicas. Citrobacter freundii (-) de C. PRUEBA I. PRINCIPIO PRUEBA DE INDOL Para determinar la capacidad de un microorganismo para separar el indol a partir del triptófano. III. IV. fergusonii (+) de E. Hafnia (-). Escherichia coli (+). ornithinolytica (+) de otras especies de Klebsiella (V-) . hermanii (+) y E. OBJETIVO  Ayuda a diferenciación entre géneros 1. agglomerans (-). P. blattae (-). I. E. Sirven de gran apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias. Enterobacter (V-). Rojo de metilo. 4. Klebsiella oxytoca (+) y K. 3. Voges-Proskauer y Citrato. Paenibacillus alvei (+) de otras especies de Bacillus (por lo general -).Pruebas bioquímicas Consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos. Serratia (V-) y una especie de Pantoea. por lo común negativos. koseri (+) y de C. vulneris (-) y E. Separación de Escherichia coli (+) de los miembros de los géneros Klebsiella (variables. los cuales.

FUNDAMENTO El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos indólicos principales: escatol (metil indol) y ácido indolacético (IAA. multocida subesp. indolicus (+) de otras especies de Peptostreptococcus (-) que pueden causar infecciones humanas. multocida subesp. 12. pneumotropica (+) de P. OBJETIVO. Las diversas enzimas intracelulares involucradas se denominan colectivamente “triptofanasa”. P. gallicida (+) y P. Prueba de indol en mancha 11. Propionibacterium acnes (+) de las especies de Propionibacterium (-) aisladas con mayor frecuencia. La desaminación y la hidrólisis tienen lugar con el agregado de una molécula de agua en presencia de la triptofanasa y de la conenzima fosfato de piridoxal. 1. Ésta prueba cuantitativa para la producción de ácido (determinación de pH). P. multocida (+). Ayudan a la diferenciación entre géneros o la diferenciación de especies dentro de un género de la familia Enterobacteriaceae. 8. La triptofanasa cataliza la reacción de desaminación atacando la molécula de triptófano sólo en su cadena lateral y dejando el anillo aromático intacto como indo. dagmatis sbesp. macerans (-) y P.5. haemolytica (-) y de Actinobacillus ureae (-) 7. 9. algunos microorganismos producen más ácidos que otros. P. Escherichia coli (MR+) Enterobacter cloacae (MR-). PRINCIPIO. Los resultados de rojo de metilo son características valiosas para la identificación de especies de bacterias que producen ácidos fuertes a partir de glucosa. II. Junto con la sialidasa. PRUEBA DE ROJO DE METILO Probar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos finales ácidos a partir de la fermentación de la glucosa y para vencer la capacidad buffer del sistema. inconstans (+) de otras especies de Proteus (-) 6. polymgxa (-). Proteous vulgaris (+). Paenibacillus alvei (+) de las especies aisladas con mayor frecuencia P. Peptostreptococcus asaccharolyticus (+) y P. diferencia entre los aerobios con pigmento negro. indolacetato). alfa. Pasteurella dagmatis (+).y beta-glucosidasas y alfa-fructosidasa. 10. de Enterobacter aerogenes (MR-) y . Septica (V+) Pasteurella multocida (+). Junto con otras pruebas (ureasa y ornitina) subdivide Haemophilus influenzae a Haemophilus parainfluenzae en biotipos. P.

el rojo de metilo. salmonicida La prueba de rojo de metilo (MR) es una prueba cuantitativa basada en el uso de un indicado de pH. La concentración del ion Hidrógeno depende de la relación de gases (CO2 y H2). Pneumoniae (ambas V.  Aerococcus urinae  Todas las especies Shigella  Ewingella americana  Especies Kluyvera  Lecrercia adecarboxylata  Especies Citrobacter. Los organismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días a 35- . Diferenciar Klebsiella oxytoca y K. 5. (MR+) Budvicia aquatica (MR+) de otros miembros de familia Enterobacteriaceae con resultados KIA/TSI Ácido/Ácido. Otros microorganismos que son rojo de metilo positivos. Diferenciar Edwardsiella ictaluri (MR-) de E. Especies de Yersinia (V. pneumoniae subesp. HS2. Reacción global del metabolismo de:  E. cuando un microorganismo fermenta glucosa. por lo común +) de otros bacilos gramnegativos no entéricos (MR-). Buttiauxella agrestis Las pruebas de rojo de metilo y Voges-Proskauer identifican: o Aeromonas veronni o Especies de Listeria o Vibrio metschnikovii o Aeromonas hydrophila o Aeromonas subesp. Diferenciar Leminorella richardii (MR-) de L.coli 2 Ácido láctico + ácido acético + etanol + 2 CO2 + 2 2Glucosa + H2O  H2 (Ácido fórmico  H2 + CO2) Klebsiella-Enterobacter  2.3-butanodiol) Glucosa + ½ O (Acetoìna La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. por lo común MR-) y K. 3. grimontii (MR+).2. variable.3-butanodiol + H2O + 2 CO2 2. hoshinae (MR+) y E. para determinar la concentración del ion Hidrógeno. Los diferentes patrones de fermentación se deben a las variaciones en las enzimas relacionadas con el metabolismo del ácido piruvico en el organismo.masoucida FUNDAMENTO. lo que a su vez es un índice de las diferentes vías metabólicas de la glucosa exhibidas por los diversos microorganismos. tarda del biogrupo 1 (MR+) 4. terrigena (V) de otras especies o subespecies de Klebsiella.

las bacterias pueden seguir muchos caminos metabólicos.  Fórmula Polipeptona o peptona de carne tamponada O digerido pancreático de caseína Y digerido péptico de tejidos animales Glucosa (dextrosa) Buffer fosfato dipotásico (K2HPO4) Agua desionizada MÈTODO DE PREPARACIÒN. 2) Rehidratar con agua destilada o desmineralizada. La glucosa es metabolizada a ácido pirúvico. • MICROORGANISMOS UTILIZADOS PARA EL CONTROL DE CALIDAD ATCC 25922 ATCC 13048 Medio de Clark y Lubs A. PRUEBA DE VOGES. 121°C. 4) Fraccionar alrededor de 5ml por tubo(26x125mm) Método de esterilización: autoclave. Inoculación. la producción de acetoína es una de las vías metabólicas de la degradación de la glucosa en las bacterias. Enfriar antes de usar y refrigerar para la conservación (4-10°C). 15lb. a las 6-8 semanas.aunque otros miembros de la familia Enterobacteriaceae pueden producir un resultado positivo de VP. lo que permite que todos los organismos con baja proporción gaseosa(MR+) muestren su limite en la concentración de iones H limitante. El acetil-metil-carbinol o acetoína es un producto intermediario en la producción de butanodiol esta se forma por la .37°C. En esta prueba se determina la vía de fermentación del butanodiol descrita anteriormente en la prueba rojo de metilo. MR-negativo (-)/VP positivo(+): Enterobacter aerogenes III. 1) Pesar la cantidad exacta como indica el rótulo. vencimiento. La prueba de Voges-Proskauer para la acetoína se utiliza sobre todo para separa Escherichia coli de los grupos KlebsiellaEnterobacter. MR-positivo (+)/VP negativo(-): Escherichia coli B.PROSKAUER La prueba de Voges-Proskauer (VP) se basa en la detección de acetoína. un producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. mientras que todos los que tienen relaciones altas de gas (MR-) mostraran una concentración del ion H más baja. Los productos de las diferentes compañías pueden presentar leves variaciones. 3) Calentar con suavidad la solución. Incubación. MEDIO DE CULTIVO UTILIZADO. 15min.

La prueba de Indol Degradación de Triptófano con producción de Indol. De acuerdo a sus vías metabólicas. VP positivo (+) color rosado-rojo en la superficie del medio (acetoína presente)  Enterobacter cloacae ATCC 13047 VP negativo (-) color amarillo en la superficie del medio. tanto la acetoína como el 2. Citrato Como única fuente de carbono BIBLIOGRAFÍA . Rojo de Metilo. Cada una denota su fundamento. y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.2ml de alfa naftolal 5% en etanol al 95%.6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto y 0.descarboxilación de dos moléculas de ácido purúvico.3-butanodiol son productos neutros en la fermentación de la glucosa.  Escherichia coli ATCC 11775 CONCLUSIÓN Las pruebas IMViC son suma importancia dentro de la búsqueda de un agente patógeno causal.5 ml de cultivo. Acidificación del medio. Reactivos empleados:  Reactivos VP de Barrit Añadir 0. éstas identifican enterobacterias en su mayoría.3% en KOH al 40%. las cuales pueden ser aerobias o anaerobias. creatina al 0.2 ml de hidróxido de potasio al 40% a 2. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo este se revela en presencia de α-naftol dando un color rojo-fucsia. puede formarse un color cobrizo pero es un resultado negativo. es decir y comparten una característica importante. Observar el color de la superficie del medio. Agitar vigorosamente el tubo.  Reactivos VP de Coblentz Añadir 0. Voges Proskauer Fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.

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