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Informe 3 Cultivo in Vitro de Violeta Africana

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Cultivo in vitro de hojas Violeta Africana (Saintpaulia ionantha) para la inducción a organogénesis directa.

Mosquera D. Katherine1

Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales, Carrera de Ingeniería en Biotecnología, Departamento de Ciencias de la Vida, Escuela Politécnica del Ejército, Sangolquí-Ecuador

RESUMEN En el presente trabajo se estudió el desarrollo de organogénesis directa en violeta africana (Saintpaulia ionantha) para la obtención de brotes. La metodología utilizada durante este estudio consistió en tomar explantes de hoja de Saintpaulia ionantha, los cuales fueron desinfectados con una solución al 1% de detergente más tres gotas de Tween durante 20 minutos y una solución de cloro al 0,5% más 3 gotas de Tween durante 10 minutos. Para la siembra se utilizó medio MS enriquecido con: 0.8mg/L de tiamina, 0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de azúcar y 7.5g/L de agar. Después de una semana de incubación en luz natural y a temperatura ambiente se observó la presencia de contaminación fúngica en uno de los frascos utilizados en este ensayo.

INTRODUCCIÓN Las plantas ornamentales han sido de interés para el hombre desde tiempos antiguos, para la ornamentación de casas, parques y otros lugares; además, de su valor ornamental estas plantas proporcionan bienestar social y psicológico (Pereira, C. et al., 2004). La violeta africana (Saintpaulia ionantha) fue descubierta por el Barón Walter von Saint Paul-Illaire en Tanganyika (ahora Tanzania) en 1892, quien envió las semillas a su padre en Alemania, un botánico aficionado. Fue cultivada por primera vez como planta de interior y actualmente es una de las plantas de flor de interior más populares (Pasqual, M. et al. 1996). Inicialmente se reproducía por semilla o, sobre todo, por esqueje foliar. Hoy la forma más habitual de reproducirla es el cultivo in vitro de secciones de peciolo (Bianchini, F. & Pantano, A. 1991.). La obtención de plantas cultivadas in vitro surge como una alternativa para la producción a gran escala de material vegetal de alta calidad genética y fitosanitaria en cortos periodo de tiempo, respondiendo de esta forma a las demandas de los productores (Pereira, C. et al., 2004). Estas plantas resultan libres de gérmenes patógenos e incluso es posible eliminar virus endémicos (García, L. et al., 2002).

dos veces con agua destilada y una con agua estéril. Los explantes fueron sembrados en frascos con medio MS ajustado a un pH de 5. después de lo cual se observaron los resultados obtenidos. Siembra e Incubación Después de realizados los tres lavados dentro de la cámara. L. frotando el haz y el envés con las manos. se eliminó el agua y se las sumergió en una solución de cloro al 0. Finalmente se procedió a realizar tres lavados con agua estéril dentro de la cámara de siembra.5% más 3 gotas de Tween 20. W. para la obtención de brotes.7–5. Mediante este proceso se da la formación de brotes adventicios o de raíz a partir de un explante de un órgano. se aspergearon con etanol 90% y se flamearon. Desinfección del explante Se lavó las muestras con agua corriente para retirar todas las impurezas. 0. tomando en cuenta que se hayan eliminado tejidos necrosados. El objetivo del presente trabajo fue inducir organogénesis directa en explantes tomados de las hojas de violeta africana (Saintpaulia ionantha) utilizando medio MS enriquecido con ciertos reguladores de crecimiento. Posterior a esto se las sumergió en una solución al 1% de detergente más tres gotas de Tween 20 durante 20 minutos en agitación.La regeneración in vitro de plantas mediante organogénesis directa es altamente deseable en los trabajos de micropropagación y de conservación de germoplasma. . durante 10 minutos más en agitación. Se colocó la muestra sobre la superficie estéril. METODOLOGÍA Muestreo Como material experimental se utilizaron hojas (incluyendo el peciolo) de violeta africana (Saintpaulia ionantha). después de lo cual se procedió a realizar cortes pequeños en forma de cuadrado (>1cm). tomando en cuenta que las muestras presenten buen color y aspecto en general. Se enjuagó las muestras. y Mroginski. 20g/L de azúcar y 7. 1993).8mg/L de tiamina.5g/L de agar.2mg/L de KIN. Se incubó en luz natural y a temperatura ambiente durante una semana. este proceso no implica la formación de callo (Roca.8 y enriquecido con 0. 2mg/L de AIA. en el primer recipiente se colocaron dos explantes con el haz en contacto con el medio y en el segundo recipiente se colocaron dos explantes con el envés en contacto con el medio. los explantes más utilizados para este procedimiento son partes de la plantas con rudimentos de yemas o potencial para producción de meristemos adventicios. se colocaron los instrumentos metálicos sobre la superficie.

Tabla 1. Contaminación bacteriana (No. obteniendo como resultado contaminación fúngica en uno de los explantes que fueron colocados con el haz en contacto con el medio. La tabla muestra en cantidades la contaminación que existió en los medios de cultivo y explantes de hojas de violeta africana (Saintpaulia ionantha). de explantes contaminados) Frasco 1 (envés en contacto con el medio) Frasco 2 (haz en contacto con el medio) 0 0 Contaminación fúngica (No.RESULTADOS Figura 1. de explantes contaminados) 0 1 . La figura muestra: A) Ausencia total de contaminación en el frasco en el que los explantes fueron colocados con el envés en contacto con el medio y B) Presencia de contaminación fúngica en el frasco en el que los explantes fueron colocados con el haz en contacto con el medio.

Danby et al. Y. reducir el nivel de nitrato en el medio y sumergir el explante en medio líquido por un día (Swartz. 1986). Curvularia y Fusarium como los microorganismos fungosos más comúnmente introducidos al cultivo de tejidos. La presencia de microorganismos contaminantes ocurre principalmente cuando la planta donante crece directamente en el campo y está expuesta a plagas. principalmente por hongos es una de las limitantes en el éxito del establecimiento aséptico de los cultivos in vitro. . a pesar de ello cabe mencionar que no existió la presencia de contaminación bacteriana en este ensayo. 1998). polvo y otros agentes. bacterias. y Lindstrom. 1979) o puede deberse a técnicas inadecuadas de trabajo del operador (Alvarado. Penicillium. enfermedades.et al. (1994) y Alvarado.. esporas de hongos y otros (Barker. Contaminación bacteriana (Porcentaje de contaminación) Frasco 1 (envés en contacto con el medio) Frasco 2 (haz en contacto con el medio) 0% 0% Contaminación fúngica (Porcentaje de contaminación) 0% 50% DISCUSIÓN La contaminación microbiana. agregar antioxidantes al medio y al explante. E. H. incrementar las sales de calcio. La tabla muestra en porcentajes la contaminación que existió en los medios de cultivo y explantes de hojas de violeta africana (Saintpaulia ionantha).Tabla 2. sin ningún tipo de control ambiental (Ramírez-Villalobos. 1998). 1997). y Salazar. subcultivar con frecuencia. También es importante citar que existió un 100% de viabilidad en los explantes. Este tipo de contaminación se favorece por las características anatómicas propias de la violeta africana (Saintpaulia ionantha) como la presencia de pelos en las hojas que impiden la penetración de los desinfectantes lo cual dificulta la eliminación de contaminantes como el polvo. E. Y. (1998) citaron a los géneros Cladosporium. pero hay que tener en cuenta que a futuro puede presentarse ennegrecimiento del tejido y necrosis. obteniendo como resultado contaminación fúngica en el 50% de los explantes que fueron colocados con el haz en contacto con el medio. Aspergillus. M. Para evitar estos inconvenientes es recomendable disminuir la intensidad de luz. P. Estos resultados corroboraron el criterio de que para el establecimiento de material vegetal en condiciones in vitro se requiere de la existencia de un banco de donantes que garantice su calidad fitosanitaria (Jiménez. J.

3 Ramírez-Villalobos. “Cultivo de ápices y meristemos”. 2: 4749. 6 Pasqual. Los resultados obtenidos en este trabajo indican la necesidad de atender esta problemática en el cultivo in vitro de plantas y de desarrollar estrategias para su control. E. R. 2002.T. 5 Swartz.) cv. L. M. como la utilización de muestras producidas en condiciones in vitro. 8 Baker. En: Pérez Ponce. 1991. et al. Santa Clara. H. Fac. J. Cap 5 pp 81-104 2 7 Pereira. 1997. 1998. Fossard. 2004. et al.CONCLUSIONES Se determinó que la contaminación fúngica tuvo una incidencia del 25% en la inducción de organogénesis directa utilizando explantes tomados de las hojas de violeta africana (Saintpaulia ionantha) y que los contaminantes fungosos predominaron sobre otros grupos microbianos. 1986. y Pantano. 20 (4):462-467. Instituto de Biotecnología de las Plantas. “Progress towards clonal propagation of Eucalyptus species by tissue culture techniques”. Guía de plantas e flores”. “Efeito de la concentracao salina da solucao nutritiva na aclimatacao de plantas micropropagadas de Violeta Africana (Saintpaulia ionnatha Wendl)”. P. Sao Paulo: Mehloramentos. Biotecnología Vegetal. (LUZ). 1998. “Contaminación microbiana en el cultivo in vitro de plantas”. “Enraizamiento de rotacoes de Violeta Africana (Saintpaulia ionnatha Weld): Efecio da incubacao em acido indolbutirico”. “Desarrollo de yemas adventicias en banano (Musa sp. E. L. y Bourne. Y.N. W. C. Rev. Agrom. Mroginski. J. Ciencia e Agrotecnología. 1997. “Establecimiento in vitro de segmentos nodales de guayabo (Psidium guajava L. “Small fruit and grape tissue culture from 1980 to 1985: Commercialization of the technique”. Colombia. 201-220 p. et al. R. 10 García. 1993 “Cultivo de Tejidos en la Agricultura Fundamentos y Aplicaciones”. J. Santa Clara. 1979. “Tudo verde. Jiménez.)”. (Ed). Revista de Biologia e Ciências da Terra 4(2):44-49. . 4 Roca. M. y Lindstrom. 135 p. Gran Enano (AAA)”. F. Propagación y Mejora Genética de Plantas por Biotecnología. A. BIBLIOGRAFÍA 1 Alvarado. 14: 497-506 9 Bianchini. 1996. y Salazar. Propagación y mejora genética de plantas por biotecnología.

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