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50566864-NTC5732

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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA

NTC 5732
2009-12-16

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS. ENSAYO CUANTITATIVO DE SUSPENSIÓN PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA DE PRODUCTOS PARA EL TRATAMIENTO POR FROTACIÓN Y LAVADO HIGIÉNICO Y QUIRÚRGICO DE LAS MANOS. MÉTODO DE ENSAYO. REQUISITOS (FASE 2/ETAPA 1)

E:

CHEMICAL DESINFECTANTS AND ANTISEPTICSQUANTITATIVE SUSPENSION TEST FOR THE EVALUATION OF BACTERICIDAL ACTIVITY OF PRODUCTS FOR HYGIENIC AND SURGICAL HANDRUB AND HANDWASH USED IN HUMAN MEDICINE –TEST METHOD AND REQUIREMENTS (PHASE 2/STEP1).

CORRESPONDENCIA:

esta norma es una adopción idéntica (IDT) de la EN 12054:2001. investigación; desarrollo; innovación; proyectos; requisitos; planificación; beneficios.

DESCRIPTORES:

I.C.S.: 11.080.20
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproducción

Editada 2009-12-24

PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La NTC 5732 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2009-12-16. Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 81 Desinfectantes y productos afines para uso hospitalario.

3M DE COLOMBIA S.A. ALKAMEDICA B BRAUN MÉDICAL BIOCONTROL LTDA. CENTRO DE MEDICINA NAVAL CLÍNICA SHAIO COMPENSAR ELECTROQUÍMICA WEST, ELECTROWEST GRUPO CENTRALES DE ESTERILIZACIÓN HOSPITAL DE LA VICTORIA HOSPITAL SANTA CLARA INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS -INVIMA JOHNSON & JOHNSON DE COLOMBIA

JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. JONSON DIVERSEY COLOMBIA LAB EUFAR LABORATORIO SFC LTDA. LAOREM INTERNACIONAL LABORATORIO NULAB LTDA PRODUCTOS PERFEX LTDA Y FULLER MANTENIMIENTO S.A. QUIRUMÉDICAS SOPSALUD-SOCIEDAD DE PROFESIONALES DE LA SALUD LTDA. SOPSALUD-SOCIEDAD DE PROFESIONALES DE LA SALUD LTDA. TEJADA TRADING

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: ASOCIACIÓN COLOMBIANA ENFERMEROS EN CONTROL INFECCIONES-ACECI CLÍNICA DEL CAMPESTRE ELECTROWEST ELECTROQUÍMICA WEST S.A. DE DE INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMAJOHNSON & JOHNSON DE COLOMBIA S.A. JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.

LABORATORIO SFC LTDA. LABORATORIOS EUFAR S.A. LAOREM INTERNATIONAL LTDA.

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados. DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

..............4 4.....3 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS ....................... ALCANCE ...................3 5................4 MÉTODO DE ENSAYO PRINCIPIO......8 PROCEDIMIENTO...NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 CONTENIDO Página 1...................................................................................8 ..................1 5..............2 5................................................................................................................................................................................................................................................5 4............................................ REFERENCIAS NORMATIVAS .................1 2...........................2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS.........................................................................................3 4.........................3 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS .........4 EQUIPOS Y MATERIALES DE VIDRIO .......................................................... TÉRMINOS Y DEFINICIONES ................ 5........................................ 5........................................2 GENERALIDADES.........7 5.....................................3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS..................................................................................................................... 4...............6 5.......2 4............................6 REQUISITOS.........1 4....................................................................2 4.................10 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS ............................................................................................................................................1 3........................5 5............................................................7 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES PARA ENSAYO.................................................................................................................................18 5.....................14 CONCLUSIÓN............17 INFORME DE ENSAYO ..........................................3 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVDO HIGIÉNICO DE MANOS.......................................3 MATERIALES Y REACTIVOS ..

.......................................................................................27 ANEXO D (Informativo) EJEMPLO DE UN INFORME DE ENSAYO TÍPICO....................................................................................30 ANEXO F (Informativo) INFORMACIÓN SOBRE LA APLICACIÓN Y LA INTERPRETACIÓN DE LAS NORMAS EUROPEAS SOBRE LOS DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS....................................................................................................................31 Tabla 1............................20 ANEXO B (Informativo) NEUTRALIZADORES ..............26 ANEXO C (Informativo) LÍQUIDOS DE ENJUAGUE ..................NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Página ANEXOS ANEXO A (Normativo) MÉTODO DE ENSAYO PARA LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DILUCIÓN-NEUTRALIZACIÓN Y FILTRACIÓN PORM MEMBRANA ...................................................... Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto ..........................28 ANEXO E (Informativo) CEPAS DE REFERENCIA CORRESPONDIENTE EN OTRAS COLECCIONES DE CULTIVO .................

o para la desinfección quirúrgica de las manos. Es aplicable en los sitios de trabajo y del hogar. 2. Conservación de las cepas microbianas utilizadas para la determinación de la actividad bactericida y fungicida. Actividad bactericida básica.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS. Igualmente se pueden incluir servicios como lavanderías y cocinas que suministran productos directamente a los pacientes. jardines infantiles y hogares geriátricos. (EN 1040) NTC 5593. se aplica la última edición del documento normativo referenciado. Para referencias fechadas. por ejemplo: en hospitales. (EN 12353) 1 de 33 . se aplica únicamente la edición citada. Campo de aplicación: se emplea en las áreas y situaciones donde se indica médicamente la desinfección de las manos. MÉTODO DE ENSAYO REQUISITOS (FASE 2/ETAPA 1) 1. para el tratamiento poscontaminación de las manos. Tales indicaciones se presentan en el cuidado del paciente. ENSAYO CUANTITATIVO DE SUSPENSIÓN PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA DE PRODUCTOS PARA EL TRATAMIENTO POR FRICCION Y LAVADO HIGIÉNICO Y QUIRÚRGICO DE LAS MANOS. Método de ensayo y requisitos (fase 1). dado que siempre se produce algún grado de dilución al añadir el inóculo. Por lo tanto. Antisépticos y desinfectantes químicos. (incluida cualquier corrección). Antisépticos y desinfectantes químicos. Para referencias no fechadas. NTC 5150. No es posible determinar la actividad bactericida del producto para FRICCION de manos no diluido usando esta norma . REFERENCIAS NORMATIVAS Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de este documento normativo. ALCANCE Esta norma establece un método de ensayo y los requisitos para determinar la actividad bactericida mínima de productos para fricción (sin agua) y lavado de las manos. en instalaciones médicas comunitarias y en instituciones odontológicas en clínicas de escuelas. no es posible el ensayo confiable de productos que contienen 5% de agua o menos.

Hygienic Handwash . sin tener en cuenta la flora residente en la piel (EN 1499) 3.1 Producto (para desinfección y/o antisepsia química). 4.Surgical hand disinfectants . Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus. 3.2 Bactericida. Capacidad de un producto para reducir la cantidad de células bacterianas viables de los organismos pertinentes bajo las condiciones definidas por esta norma (en concordancia con la NTC 5150).4 Fricción higiénica de manos. 3.4 o 4.3.6 Fricción quirúrgica de manos. Chemical disinfectants and antiseptics. Pseudomonas aeruginosa. Producto que destruye las bacterias vegetativas bajo condiciones definidas. Chemical Disinfectants and Antiseptics . 3. Procedimiento poscontaminación que implica la frotación de las manos. 4.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 EN 1499. sin adición de agua. utilizando un producto bactericida dirigido a la reducción de la flora microbiana de las manos para evitar la transmisión de los microorganismos en procedimientos invasivos. Procedimiento prequirúrgico que implica la frotación de las manos sin la adición de agua.2.Hygienic Handrub . 4.5 para cada uno de los siguientes organismos de ensayo: Eschericia coli.Test Method and Requirements (phase 2/step 2). EN 1500. se aplican los siguientes términos y definiciones. utilizando un producto bactericida dirigido contra microorganismos transitorios para evitar su transmisión. cuando se somete a ensayo según lo indicado en el numeral 5.7 Lavado quirúrgico de manos. prEN 12791.Test Method and Requirements (phase 2/step 2).3 Actividad bactericida (en esta norma). utilizando un producto bactericida dirigido contra microorganismos transitorios para evitar su transmisión. sin tener en cuenta la flora residente en la piel ( UNE EN 1500). debe demostrar una reducción en los recuentos viables tal como se indica en los numerales 4.1 REQUISITOS GENERALIDADES El producto. Procedimiento prequirúrgico que implica el lavado de las manos con agua.Test method and requirements (phase 2/step 2). 3. utilizando un producto bactericida dirigido a la reducción de la flora microbiana de las manos con el fin de evitar la transmisión de los microorganismos durante procedimientos invasivos . 2 . 3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES Para los propósitos de esta norma. 4.5 Lavado higiénico de manos Procedimiento poscontaminación que implica el lavado de las manos con agua. Chemical Disinfectants and Antiseptics . Agente o formulación química que se utiliza como desinfectante o antiséptico químico (NTC 5150 ). 3. 3.

Además. 4 min ± 10 s. 4 min ± 10 s.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Este método corresponde a un ensayo de fase 2/etapa 1. el producto debe demostrar una reducción similar en el recuento viable en 30 s ± 5 s.1 MÉTODO DE ENSAYO PRINCIPIO Una suspensión de bacterias para el ensayo se adiciona a una muestra preparada del producto que se somete a prueba. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min. el producto debe demostrar una reducción similar en el recuento viable en 30 s ± 5 s.6 de acuerdo con su aplicación. o de lavado higiénico de manos. 4.2 o 4. 3 min ± 10 s. Únicamente para productos de lavado de manos.2 a 4. 2 min ± 10 s. el producto debe satisfacer el requisito de la Tabla 1 para uno de los siguientes tiempos de contacto opcional: 1 min ± 5 s. 3 min ± 10 s. Además. por lo cual es necesario un ensayo adicional de fase 2/etapa 2 (EN 1499: año.2. 4.5 se aplican a productos utilizados únicamente para desinfección quirúrgica de manos y que no se han sometido a ensayo previamente según lo indicado en los numerales 4.2 o 4. 5.EN 1500) antes de que se pueda cumplir la declaración del rótulo que indica desinfectante quirúrgico de manos de fricción higiénica de manos. 4.3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 103 en el recuento viable en 1 min ± 5 s. la muestra se prepara en agua dura (véase el numeral 5. UNE. no requieren de ensayo adicional en la fase 2/etapa 1 (para el ensayo de fase 2/etapa 1. Además. El tiempo adecuado de contacto no debe ser superior al tiempo de exposición recomendado por el fabricante. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min.4 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 5 min ± 10 s.7). 4.6 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS Los productos que cumplen con los requisitos según lo indicado en los numerales 4. Además. 2 min ± 10 s. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min. La mezcla se conserva a una temperatura de 3 .3 y se van a utilizar adicionalmente para la desinfección quirúrgica de manos.5 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 103 en el recuento viable en 5 min ± 10 s. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min.2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 1 min ± 5 s. 4.4 y 4.2. el producto debe satisfacer el requisito de la Tabla 1 para uno de los siguientes tiempos de contacto opcional: 1 min ± 5 s. El tiempo adecuado de contacto no debe ser superior al tiempo de exposición recomendado por el fabricante. El producto debe cumplir con los requisitos que se indican en los numerales 4. véase Anexo F). Los requisitos de los numerales 4. 5. Nota.3.

A intervalos de tiempo especificados. Las cepas correspondientes suministradas por otras colecciones se pueden utilizar si se puede demostrar que producen los mismos resultados.2. 2 min ± 10 s. Pseudomonas aeruginosa.1 Generalidades 1) NCTC 10538.2 Medios de cultivo y reactivos 5. se utiliza la filtración por membrana.2. El método de elección es el de diluciónneutralización. ATCC 15442. Tabla 1. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus. Sin embargo. ATCC 6538 y ATCC 10541 son los números de colección de la cepas suministradas por la colección nacional de cultivos tipo y la colección estadounidense de cultivos tipo.2 5. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s quirúrgico de El ensayo se lleva a cabo utilizando Escherichia coli. Se deben utilizar las siguientes cepas: Escherichia coli (K12) Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Enterococcus hirae 1 NCTC1) 10538 ATCC1) 15442 ATCC1) 6538 ATCC1) 10541 5. incluyendo todos los períodos indicados en las instrucciones del fabricante. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s 5 min ± 10 s 5 min ± 10 s y opcional: 1 min ± 5 s.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 20 °C. 1 4 . 5. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación por parte de ICONTEC del producto mencionado. Se determina la cantidad de bacterias sobrevivientes.1 MATERIALES Y REACTIVOS Organismos de ensayo La actividad bactericida se debe evaluar utilizando cuatro cepas. La cantidad de bacterias en la suspensión de ensayo también se determina y se calcula la reducción en el recuento viable. si no se puede establecer un medio de neutralización adecuado. NOTA Véase el Anexo E para el número de cepa correspondiente en algunas otras colecciones de cultivos. pero siempre en los intervalos establecidos en la Tabla 1. 2 min ± 10 s.2. Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto Tiempo de contacto recomendado por el fabricante 1 minuto < 1 minuto 1 minuto < 1 minuto 5 minuto < 5 minuto 5 minuto < 5 minuto Procedimiento Fricción manos Lavado manos Fricción manos Lavado manos higiénica higiénico quirúrgica de de de Tiempo de contacto “t” usado en el ensayo 1 min ± 5 s 1 min ± 5 sy 30 s ± 5 s 1 min ± 5 s 1 min ± 5 s y 30 s ± 5 s 5 min ± 10 s 5 min ± 10 s y opcional: 1 min ± 5 s. la acción bactericida de esta porción se neutraliza o suprime inmediatamente mediante un método validado. se toma una porción alícuota.2.

el pH del medio debe ser equivalente a 7. se puede utilizar agua para preparaciones inyectables (véase la Farmacopea Oficial).2) 1.0 g 15.2 cuando se mide a 20 °C.2.0 g 5.2.2.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Los reactivos deben tener grado analítico y deben ser apropiados para los propósitos microbiológicos.0 g 8.2. El agua debe estar destilada en vidrio recientemente y no desmineralizada.0 ml Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.3. Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.0.2. NOTA 1 Si el agua se esteriliza durante la esterilización de los reactivos.0 +/. 5.2.5 g 1 000. El neutralizador debe estar estéril.1).1). se recomienda la utilización de material deshidratado disponible en el comercio para la preparación de los medios de cultivo.4 Diluyente Solución de cloruro de sodio y triptona: Triptona. Después de la esterilización.2. digerido pancreático de caseína NaCl Agua (véase el numeral 5.3 Agar tripticasa de Soya (TSA) Para la conservación de las cepas bacterianas y la realización de los recuentos viables. digerido papaínico de harina de soya NaCl Agar Agua (5. el pH del medio debe ser equivalente a 7.2 cuando se mide a 20 °C. 5. 5. 5 . Después de la esterilización.2 Agua El agua debe estar libre de sustancias que sean tóxicas o inhibitorias para las bacterias.2. NOTA 2 Si el agua destilada con calidad adecuada no está disponible. Se recomienda cumplir rigurosamente las instrucciones del fabricante relacionadas con la preparación de estos productos.3. este paso no es necesario.1).0 g 5.0 ml Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.3.5 Neutralizador El neutralizador se debe validar para el producto que se somete a ensayo. Triptona.2. NOTA Para mejorar la reproducibilidad.2. digerido pancreático de caseína Peptona de soya.0. 5. de acuerdo con lo indicado en el Anexo A.0 g 1 000.2 +/.2) 15.2.2. NOTA En el Anexo B se presenta información sobre los neutralizadores adecuados para algunas categorías de productos.

Esterilice mediante filtración por membrana (véase el numeral 5.24 g de cloruro de calcio anhidro (CaCl2) o un cloruro de calcio hidratado equivalente en agua (véase el numeral 5. ajuste el pH utilizando una solución de aproximadamente 40 g/l (cerca de 1 mol/l) de hidróxido de sodio (NaOH) o aproximadamente 36.3. Almacene la solución a una temperatura entre 2 °C y 8 °C durante un período no superior a una semana.0 ml de la solución B.2).02 g de bicarbonato de sodio (NaHCO3) en agua (véase el numeral 5.2. Almacene la solución a una temperatura entre 2°C y 8°C durante un período no superior a un mes. Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.5 g/l (cerca de 1 mol/l) de ácido clorhídrico (HCl). Mezcle y diluya hasta completar 1 000 ml con agua (véase el numeral 5.2.2.2.2. Solución B: Disuelva 35. compatible con la membrana filtrante y con capacidad para la filtración a través de la membrana.6 Solución de enjuague (para filtración por membrana) La solución debe ser estéril.2.0 ml de la solución A. luego 8.0 +/. vierta por lo menos 600 ml de agua (véase el numeral 5. El agua dura debe ser de preparación reciente bajo condiciones asépticas y se debe utilizar en un período de 12 h.7).2. En todo caso la dureza final es inferior a 300 mg/kg de carbonato de calcio (CaCO3) en el tubo de ensayo.7 Agua dura para la dilución del producto de lavado de manos El agua dura para la dilución de los productos se debe preparar de la siguiente manera: Prepare: Solución A: Disuelva 19.0.3.2.2. NOTA En el Anexo C se presenta información sobre las soluciones de enjuague adecuadas para algunas categorías de productos. 6 .2) en un matraz volumétrico de 1 000 ml (véase el numeral 5.2. El pH del agua dura debe ser de 7.2.2). NOTA Cuando se preparan las soluciones de ensayo del producto (véase el numeral 5.2.2) y diluya hasta completar 1 000 ml. 5.2.4.84 g de cloruro de magnesio anhidro (MgCl2) o un cloruro de magnesio hidratado equivalente y 46. bajo las condiciones de ensayo que se describen en el Anexo A.3.1).2.2. Agua dura: Para la preparación de 1 litro. Si es necesario.2) y diluya hasta completar 1 000 ml. la adición del producto a esta agua dura produce una dureza final del agua diferente en cada uno de los tubos de ensayo.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 5.12) y adicione 6.

con capacidad para controlar la temperatura a 20 °C ± 1 °C y 45 °C ± 1 °C. excepto aquellos que se suministran estériles. VORTEX ® es un ejemplo de un producto adecuado que se encuentra en el comercio. con capacidad para controlar la temperatura a 36 °C ± 1 °C o 37 °C ± 1 °C.2.7 Equipo para filtración por membrana construido con un material compatible con el producto que se somete a ensayo.3 5. con un porta filtro de volumen utilizable mínimo de 50 ml y adecuado para utilizar con filtros de diámetro entre 47 mm y 50 mm.1) conservando una temperatura de 121+30 °C durante un tiempo continuo mínimo de 15 min. Para esterilización con calor seco.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5.3. un autoclave con capacidad para conservar una temperatura de 121+30 °C para un tiempo continuo mínimo de 15 min. como el mezclador Vortex ®.6 Agitador (agitador electromecánico. en un esterilizador de calor seco (véase el numeral 5.45 μm (para el método de filtración por membrana) y tamaño de poro de 0. en particular. mediante uno de los siguientes métodos: a) en un autoclave (véase el numeral 5.2 Baños de agua o de maría.2. un horno de aire caliente con capacidad para conservar una temperatura de 180 °C durante un tiempo continuo mínimo de 30 min.1 Equipos para esterilización a) Para esterilización con calor húmedo.2.2.2 5. 170 °C para un tiempo continuo mínimo de 1 h o 160 °C para un tiempo continuo mínimo de 2 h. 5. con tamaño de poro 0.2.1) conservando una temperatura de 180 °C durante un tiempo continuo mínimo de 30 min. Con el fin de obtener una distribución uniforme de los microorganismos sobre la membrana en el método 2) El equipo desechable es una alternativa aceptable para el material de vidrio reusable.3.3. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de ICONTEC. La fuente de vacío utilizada debe suministrar una tasa de flujo de filtración uniforme. 5.2. Se puede utilizar una incubadora a 37 °C ± 1 °C si no se dispone de una incubadora a 36 °C ± 1 °C.3.1 NTC 5732 EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRIO Generalidades Esterilice el material de vidrio y las partes del equipo que tendrán contacto con el medio de cultivo y los reactivos o la muestra.3 5.3.3.2 5. Equipo microbiológico de laboratorio común2) y.3.3.2.3.1 unidades de pH a 25 °C. el siguiente: b) 5.3.3 Incubadora.5 Cronómetro 5. 3 7 .3. 170 °C para un tiempo continuo mínimo de 1 hora o 160 °C para un tiempo continuo mínimo de 2 h.2. b) 5.4 Medidor de pH con una exactitud de calibración de ± 0.22 μm (para esterilización por filtración).2.

9 Pipetas graduadas.3. se puede utilizar un subcultivo de 48 h para el cultivo posterior. A partir de este segundo subcultivo se puede producir de la misma manera un tercer subcultivo.4.3). 5.2.1 Cultivos iniciales de los microorganismos de ensayo Los cultivos iniciales se deben conservar de acuerdo con los requisitos de la NTC 5593:2008 5.8 Recipiente: tubos de ensayo.2.2. realice un subcultivo a partir del cultivo inicial (véase el numeral 5.4 5.1 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES PARA ENSAYO Suspensiones bacterianas 5.2.2.1.2.10 Cajas de Petri que tengan un diámetro entre 90 mm y 100 mm.4.1.1 ml.2. 1 ml y 0. Si no es posible preparar el segundo subcultivo en un día particular.2 Cultivo de trabajo de los microorganismos Con el fin de preparar el cultivo de trabajo de las cepas (véase el numeral 5. prepare un cultivo de 24 h adicionales después del procesamiento.3. el dispositivo se debe ajustar de manera tal que se obtenga la filtración de 100 ml del líquido de enjuague en un período entre 20 s y 40 s.3 Suspensión bacteriana para ensayo Tome 10 ml del diluyente (véase el numeral 5.11). prepare de la misma manera un segundo subcultivo a partir del primero y lleve a incubación durante 18 h a 24 h. se pueden utilizar cajas de tamaño superior (140 mm).1) mediante trazos en los cultivos inclinados de TSA (véase el numeral 5. El segundo y/o tercer subcultivos representan el cultivo de trabajo.12 Matraces volumétricos calibrados a 20 °C.3) e incube (véase el numeral 5. con capacidades nominales de 10 ml. Después de un período entre 18 h y 24 h.1).1. se pueden utilizar pipetas calibradas automáticas.3. Agite el matraz durante 3 min utilizando un agitador mecánico (véase el numeral 5. 5.4) y colóquelo en un matraz de 100 ml con cinco gramos de perlas de vidrio (véase el numeral 5. sumergiendo el asa en éste y frotándola contra la pared lateral del matraz para desprender las células. 5.2. 5.2. En estas circunstancias. Las células se deben suspender en el diluyente.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 de ensayo de filtración por membrana y para evitar una filtración excesivamente prolongada.2.3. frascos o matraces de cultivo con capacidad adecuada.3.4. NOTA Para el método de recuento de caja.13 Agitador mecánico 5.11 Perlas de vidrio con diámetro entre 3 mm y 4 mm. Aspire la suspensión de las perlas de vidrio y transfiera a otro tubo.13). Nota.2) y transfiera con el asa redonda las células hacia el diluyente.2. No tome un cuarto subcultivo.3.2. 5. 5. Ajuste el número de células en la suspensiones hasta un 8 .1. por el método de dispersión.3.4.1.2. siempre que el subcultivo se haya conservado en una incubadora durante un periodo de 48 h.4.3. 5. Tome los cultivos de trabajo (véase el numeral 5.2.4.3.

Conserve esta suspensión en el baño de agua o maría a 20 °C ± 1 °C y utilice dentro de las 2 h siguientes.4. estimando la cantidad de unidades mediante algún método adecuado.2.0 ml de cada dilución en duplicado e inocule usando la técnica de siembra en caja o de dispersión en caja.2. Calcule el número de ufc/ml en la suspensión para ensayo (N) utilizando el método que se indica en el numeral 5.4. 5.1 Soluciones de ensayo para fricción de manos El producto para fricción de manos se utiliza sin diluir como solución del producto para ensayo.2.6.3.5 x 108 ufc/ml y 5 x 108 ufc / ml 4 utilizando el diluyente.4.4 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 ºC ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.) como diluyente. Si se utiliza la técnica de dispersión en caja. Deseche las cajas que. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.3).1.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 valor entre 1. Para el recuento de la suspensión bacteriana para ensayo.3.2.2.2 Solución de ensayo para lavado de manos Utilizando agua dura (véase el numeral 5. prepare una dilución al 55 % (V/V) de la preparación del producto de lavado de manos para ensayo. (Siembra en superficie) Si se utiliza la técnica de siembra en caja. prepare diluciones de 10-6 y 10-7 de la suspensión de ensayo utilizando el diluyente (véase el numeral 5.2.2. Prepare cuatro suspensiones bacterianas para ensayo.4) y mezcle (véase el numeral 5. una con Pseudomonas aeruginosa.2. Determine el mayor número de colonias para cada muestra de 1. una utilizando Escherichia coli. La solución del producto para ensayo debe ser de preparación reciente y se debe utilizar durante un día de trabajo máximo (o menos si tiene baja estabilidad).3. por cualquier razón.3. otra con Enterococcus hirae y otra con Staphylococcus aureus. 5.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.1. no se puedan contar.2. Tome una muestra de 1.2.2.) durante 24 h.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5. (siembra en profundidad) vierta con pipeta cada muestra de 1.1.2.4.2. Vuelva a contar las cajas restantes.0 ml. Se deben registrar los detalles de las muestras de producto tal como se reciben.0 ml sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5. disperse cada muestra de 1.0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5. 4 ufc/ml = unidades formadoras de colonias por mililitro 9 . 5.6).7. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2 Solución del producto para ensayo 5.

2. usados para el tratamiento poscontaminación de las manos Vierta con pipeta 9. repita el ensayo de validación utilizando un neutralizador alterno que contenga una combinación de: polisorbato 80 (30 g/l). Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro.2. NOTA Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente. Mezcle y coloque en el baño de agua o maría controlado a 20 °C ± 1 °C.1 Generalidades Antes del ensayo.4. prepare una dilución de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada en el 10 b) . Añada 1. 5. L-histidina (1 g/l). prepare una dilución de 10-1 de la mezcla neutralizada en el diluyente (véase el numeral 5. En el tiempo de contacto seleccionado.2.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.4.0 ml de agua (véase el numeral 5.2).2. 5. Si este neutralizador no es válido.002 5 mol/l de solución amortiguadora de fosfatos. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s. vierta con pipeta 1.5 5.2. mezcle y coloque el recipiente en un baño de agua o maría controlado a 20 °C ± 1.2.3).4).2.3.1 PROCEDIMIENTO Generalidades NTC 5732 El método de elección es el de dilución-neutralización. suspensión bacteriana para ensayo.0 ml de la mezcla para ensayo en un tubo que contenga 8. Para determinar un neutralizador adecuado.4. neutralizador) a la temperatura de ensayo de 20°C ± 1°C utilizando el baño de agua o maría (véase el numeral 5. tiosulfato de sodio (5 g/l) bien sea en diluyente (véase el numeral 5.2. Tome una muestra de 1. seleccionado de acuerdo con la experiencia del laboratorio y los datos publicados. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min.2 Método de dilución-neutralización 5.5.5) y 1.2.0 ml de la mezcla y su dilución de 10-1 en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en caja o dispersión en caja.0 ml de neutralizador (véase el numeral 5.3.2). Si ambos neutralizadores no son válidos.1.5.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C. se debe adoptar el siguiente procedimiento.2.2.0 ml de la solución de ensayo para fricción higiénica de manos (véase el numeral 5. se puede utilizar el método de filtración por membrana en lugar del método de diluciónneutralización. el producto también se debe ensayar en un tiempo de contacto de 30 s ± 5 s.4. a) Los productos de ensayo para fricción de manos: después del tiempo de neutralización de 1 min ± 5 s. La validación del método de diluciónneutralización (véase el literal A.2. Los productos de ensayo para lavado de manos: después del tiempo de neutralización de 1 min ± 5 s.1) o de la solución de ensayo para lavado de manos (véase el numeral 5.1) se deben llevar a cabo utilizando un neutralizador adecuado. saponina (30 g/l).2 Procedimiento de ensayo para determinar la actividad bactericida de los productos para fricción higiénica de manos o lavado higiénico de manos. equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo.2.2. lecitina (3 g/l).5.4) o en 0.6) justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado.5.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. Mezcle (véase el numeral 5.

el producto también se debe ensayar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s.1.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA fundido (véase el numeral 5.0 ml de la solución de ensayo para fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 5. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro.5. Añada 1.3. 2 min ± 10 s.4.2.3. prepare una serie de diluciones decimales de la mezcla neutralizada en el diluyente (véase el numeral 5.0 ml de la mezcla para ensayo en un tubo que contenga 8.4.0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5.0 ml de la mezcla y su dilución de 10-1 por duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad en caja o siembra en superficie. Incube las cajas durante 24 h adicionales. 11 .6) y coloque en el baño de agua o maría (véase el numeral 5.2.2.2.3. Si se utiliza la técnica de dispersión en caja. mezcle (véase el numeral 5.2. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.2. Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 5 min ± 10 s. a) Los productos de ensayo para fricción de manos: después del tiempo de neutralización de 5 min ± 10 s.3 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5. Tome una muestra de 1.4.3. Para calcular el recuento viable de la mezcla de ensayo. el factor de dilución es 10-1 (para fricción de manos) o 10-2 y 10-3 (para lavado de manos).3).2.6) y coloque el recipiente en un baño de agua o maría (véase numeral 5.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C.2.2.3).2.2.0 ml de agua (véase el numeral 5. por cualquier razón.4).2.2.3. Deseche las cajas que.3. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5.3. vierta con pipeta cada muestra de 1.4 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos para fricción quirúrgica de manos y lavado quirúrgico de manos Vierta con pipeta 9. Determine el mayor número de colonias para cada caja. Vuelva a contar las cajas restantes.1) o de la solución de ensayo para lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 5. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min.5) y 1.2.2. 5.6.0 ml de las diluciones de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en caja o dispersión en caja ( siembra en superficie) Si se utiliza la técnica de siembra en caja (siembra en profundidad).3) y enfriado a 45 °C ± 1 °C.0 ml de neutralizador (véase numeral 5. disperse cada muestra de 1.2.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.0 ml sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5. Mezcle (véase el numeral 5. 5.2.5.2).2) controlado a 20 °C ± 1 °C.6). Tome una muestra de 1.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 diluyente (véase el numeral 5. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. vierta con pipeta 1. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.2.) durante 24 h.2. Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase numeral 5.4).2.2. En el tiempo de contacto seleccionado.2.1. no se puedan contar. NOTA Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.2.

1.2.2. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. el producto también se debe ensayar en un tiempo de contacto de 30 s ± 5 s.0 ml de la solución de ensayo para fricción higiénica de manos (véase el numeral 5. Determine el mayor número de colonias para cada caja. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo.3. por cualquier razón.3. Incube las cajas durante 24 h adicionales. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 minuto.0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5.2.0 ml de las diluciones de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada por duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad en caja o siembra en superficie. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C. mezcle y coloque el recipiente en un baño de agua o maría controlado a 20 °C. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.0 ml de la mezcla 12 .3 Método de filtración por membrana 5. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5.3.2. vierta con pipeta cada muestra de 1. Tome una muestra de 1. prepare una serie de diluciones de decimales de a mezcla neutralizada en el diluyente (véase el numeral 5. suspensión bacteriana para ensayo.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA fundido (véase el numeral 5.5.2.1. Deseche las cajas que.0 ml sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.2.4.2. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente. Para calcular el recuento viable de la mezcla de ensayo.2) y controle la temperatura a 20 °C ± 1 °C.5 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.4. Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase el numeral 5.1 Generalidades Antes del ensayo. 5.2.3) durante 24 h.6.5.6).5.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA b) NTC 5732 Los productos de ensayo para lavado de manos: después del tiempo de neutralización de 5 min ± 10 s.3).2. En el tiempo de contacto seleccionado.3) y enfriado a temperatura de 45°C ± 1°C.2. Añada 1. no se puedan contar. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro. solución de enjuague) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C utilizando el baño de agua o maría (véase el numeral 5. vierta con pipeta dos muestras de 1. disperse cada muestra de 1.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.3.1) o de la solución de ensayo para lavado de manos (véase el numeral 5. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s.3. Vuelva a contar las cajas restantes.5.4. el factor de diluciones es 10-1 (para fricción de manos) o 10-2 y 10-3 (para lavado de manos). Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.2.3.3).2. 5. 5.2.2 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos para fricción higiénica de manos o lavado higiénico de manos Vierta con pipeta 9. lleve todos los reactivos (solución del producto para ensayo.2.4).

Enjuague con 150 ml como mínimo pero no más de 500 ml de solución de enjuague (véase el numeral 5.6). este tiempo se debe registrar en el informe del ensayo.6) y coloque el recipiente en un baño de agua o maría (véase el numeral 5.2. Añada 1.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.2.2. Deseche las cajas que.1.2. Determine el mayor número de colonias para cada caja.2.10). Si es superior a 1 minuto. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 5 min ± 10 s.2. el producto también se debe ensayar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s.3).6).2.0 ml de la solución de ensayo para fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 5.2. vierta con pipeta dos muestras de 1. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro.4. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 minuto. 2 min ± 10 s. 5.2. Vuelva a contar las cajas restantes.2.2. NOTA 2 Al realizar la transferencia.3. Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.3). por cualquier razón. no se puedan contar.3. mezcle (véase el numeral 5.4 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos de fricción quirúrgica de manos y lavado quirúrgico de manos Vierta con pipeta 9. Enjuague con 150 ml como mínimo pero no más de 500 ml de solución de enjuague (véase el numeral 5.3. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min.2.1. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.2. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s. Filtre inmediatamente. En el tiempo de contacto seleccionado. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y la superficie de agar. Incube las cajas durante 24 h adicionales.10).2. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y la superficie de agar. Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase el numeral 5.2. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min.6).3.2. 13 .5. NOTA 2 Al realizar la transferencia. Filtre inmediatamente.6.5. Luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5. Luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.3.4.2.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml.4.3.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 para ensayo y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana independiente que disponga de una membrana y que contenga 50 ml de la solución de enjuague (véase el numeral 5. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.0 ml de la mezcla para ensayo y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana independiente que disponga de una membrana y que contenga 50 ml de solución de enjuague (véase el numeral 5.6). 5. este tiempo se debe registrar en el informe del ensayo.3.3.6).2) controlado a 20 °C ± 1 °C.1) o de la solución de ensayo para lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 5. Si es superior a 1 min.3 Recuento de la mezcla de ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h (véase el numeral 5.

Si las cajas provenientes de una sola dilución están dentro de este rango.5.1. según se indica en el Anexo A.3) durante 24 h. Determine el mayor número de colonias para cada caja. Incube las cajas durante 24 h adicionales.1 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS Cálculo de los recuentos viables (ufc/ml) 5. agua dura si se utiliza y neutralizador o solución de enjuague) usadas en el ensayo (Véanse los numerales 5.1 Suspensión bacteriana para ensayo Los recuentos viables de la suspensión bacteriana para ensayo (véase el numeral 5.1.5) utilizando las mismas condiciones (suspensiones bacterianas para ensayo. Para que un resultado sea válido. Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.2. solución del producto para ensayo. es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución considerada. por cualquier razón. Deseche las cajas que.2 y 5. no se puedan contar.4 Validación del método de dilución-neutralización y del método de filtración por membrana Los métodos de dilución-neutralización y de filtración por membrana se deben validar para cada uno de los de los cuatro microorganismos de ensayo (véase el Anexo E).6 5. Para el cálculo del recuento medio ponderado (en ufc/ml) se utiliza la fórmula (1): c d ( n1 + 0.5.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 5.3). (1) 14 .2.6.3. 5. es el número de cajas consideradas en la segunda dilución. se calcula el número de ufc/ml como el recuento recuento medio ponderado.5. en las cuales una o ambas cajas contengan más de 15 colonias y ambas contengan menos de 300 colonias. se calcula la media aritmética. Si las cajas provenientes de dos diluciones están dentro de este rango. El ensayo de validación (véase el Anexo A) también se debe realizar al mismo tiempo que el procedimiento (véase el numeral 5.5.1 n2 ) en donde c n1 n2 d es el número de colonias contadas en todas las cajas consideradas.4. es recomendable calcular los recuentos viables utilizando por lo menos un par de cajas.6. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5. por lo menos una caja debe contener 15 o más colonias.3.6. 5. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. es el número de cajas consideradas en la primera dilución.4) se deben calcular según los principios que se describen a continuación: a) Se deben tener en cuenta únicamente los recuentos de colonias inferiores a 300 ufc/caja para el cálculo de los recuentos viables. Vuelva a contar las cajas restantes.1.5 Recuento de la mezcla de ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.

2.1 − 2 ) 10 −6 = 422 2. la cifra precedente se incrementa en una unidad. el volumen de la muestra es de 1.5.5 x 101 ufc/ml (<1. se utiliza la siguiente fórmula (2) para el cálculo de los recuentos viables (en ufc/ml): c n − d− V (2) en donde: c n d es la suma de las colonias contadas en ambas cajas.5.0 ml.9 x 108 (en ufc / ml ) (1) 5.2.5.3.5) cuando el número de ufc en todas las cajas contadas es inferior a 15.2) el volumen de la muestra es de 0.2) el recuento viable se debería calcular utilizando el siguiente método. 5. Cuando el número de ufc en todas las cajas contadas es superior a 300. si la última cifra está por debajo de cinco.5. es la cantidad de cajas consideradas.3 y 5. la cantidad de ufc/ml se expresa con un número entre 1. si la última cifra es igual a cinco. Prosiga por pasos hasta obtener dos cifras decimales.918 2 x 108 → 1.1) y la suspensión bacteriana (véase el Anexo A.4 y Anexo A.6.2. A.3. V Para el procedimiento de ensayo (véase el numeral 5.2.2).9 multiplicado por la potencia de 10 adecuada.2) el factor de dilución es 10-1. Para el procedimiento de ensayo de dilución-neutralización (véanse los numerales 5.3.2. la cifra anterior no se modifica.2.2 y 5. 5.5 x 101 ufc/ml).NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Los resultados calculados se aproximan hasta dos cifras decimales. 5.5.4 y Anexo A literal A.5) y la suspensión bacteriana (véase el literal A. a) como resultado.4. Para ello.0 y 9.2. es el factor de dilución que corresponde a la dilución considerada.2.4.5.5. es el volumen de la muestra.5.2 Procedimiento y validación del ensayo Para el procedimiento de ensayo (véanse los numerales 5. EJEMPLO: 168 + 215 + 14 + 25 ( 2 + 0. Para el método filtración por membrana y el procedimiento de validación (véanse los numerales 5.5.1 ml. registre el recuento viable de la muestra de ensayo como superior a 3 x 102 ufc/ml (> 3 x 102 ufc/ml).4. si la última cifra está por encima de 5.4. se aproxima la cifra precedente hasta la cifra superior más próxima.4) y el ensayo para la validación (véanse los literales A. 15 .2 − 10 − 6 = 1. Para el método de dilución-neutralización y el procedimiento de validación (véanse los numerales 5.1 y A.1.4.5. Tales recuentos se deberían calcular utilizando las colonias provenientes de ambas cajas. 5. Se recomienda utilizar únicamente los recuentos de colonias inferiores a 300 ufc por caja para el cálculo de los recuentos viables. registre la cantidad de recuentos viables de la mezcla de ensayo como inferior a 1.3.2.2. Cuando por lo menos una caja contienen 15 o más colonias.

es el recuento promedio de la caja de no toxicidad del control del neutralizador (en ufc/ml) (véase el Anexo A A. es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo para la validación de las condiciones experimentales (agua dura) (en ufc/ml) (véase el Anexo A A. C es igual o superior a 0.3).2). b) c) en donde N es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo (en ufc/ml) (véase el numeral 5.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5.1. B y A son iguales o superiores a 0.4).3).5 veces B.4.2.4.2). b) c) d) en donde N es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo (en ufc/ml) (véase el numeral 5.1 Método de dilución-neutralización Asegúrese de lo siguiente: a) ningún recuento de caja individual utilizado para calcular el valor de N.1.2.2.4. es el recuento promedio de la caja del control del método de dilución-neutralización (en ufc/ml) (véase el Anexo A A.4.4).1. es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo para la validación de las condiciones experimentales (agua dura) (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A. ningún recuento de caja individual empleado para el cálculo de B es superior a 150 ufc/ml y que B está entre 50 ufc/ml y 150 ufc/ml.2 Verificación de la metodología NTC 5732 5.5 veces B.6. A B C 16 . C es igual o superior a 0. A y B están entre 100 ufc/ml y 300 ufc/ml. 4.2 Método de filtración por membrana Asegúrese de lo siguiente: a) ningún recuento de caja individual empleado para el cálculo de N y A es superior a 300 ufc/ml y que N y A están entre 100 ufc/ml y 300 ufc/ml.4.1. es el recuento promedio de la caja del control del método de filtración por membrana (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A.6.4).2. N.4.1.4) A B C 5.6.4.2. es el recuento promedio del control de filtración (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A.5 veces N. A y B debe ser superior a 300 ufc/ml.

5 Se considera que los productos que han cumplido con los requisitos para ficción higiénica de manos ( véase el numeral 4. 2 min ± 10 s. Pseudomonas aeruginosa.2 Se considera que los productos para lavado higiénico de manos que demuestran una reducción de 103 en los recuentos viables en un periodo de 1 min ± 5 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli.3) también se consideran conformes con los requisitos para el lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 4.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5. se considera que el producto ha aprobado el ensayo si logra una reducción similar en 1 min ± 5 s. Pseudomonas aeruginosa. 2 min ± 10 s. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus. Pseudomonas aeruginosa. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 5 min. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 5 min.7. se considera que el producto ha aprobado el ensayo si logra una reducción similar en 1 min ± 5 s. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección quirúrgica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso EN 12791).7 CONCLUSIÓN NTC 5732 5. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.7. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección higiénica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso (EN 1499) 5.1 Se considera que los productos para la fricción higiénica de manos que demuestran una reducción de 105 en los recuentos viables en un periodo de 1 minuto ± 5 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli. 17 . Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección higiénica de manos y se puede proseguir a la evaluación adicional para calificar su eficacia en las condiciones que simulan su uso sobre las manos –UNE.7. 5.7.5).3 Se considera que los productos para fricción quirúrgica de manos que demuestran una reducción de 105 en los recuentos viables en un periodo de 5 min ± 10 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 1 minuto. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el ensayo. se considera aprobado el ensayo. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el ensayo. Pseudomonas aeruginosa. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el ensayo. se considera que el producto ha pasado la prueba si se logra una reducción similar en 30 s ± 5 s. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 1 minuto.7. Los productos que han cumplido con los requisitos para lavado higiénico de manos (véase el numeral 4.4 Se considera que los productos para lavado quirúrgico de manos que demuestran una reducción de 103 en los recuentos viables en un periodo de 5 min ± 10 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli. 5.4). Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección quirúrgica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso (EN 12791).EN 1500).2) también han cumplido con los requisitos para fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 4. se considera que el producto ha aprobado el ensayo si se logra una reducción similar en 30 s ± 5 s. 5. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.

número del lote. fecha de entrega. El informe de ensayo debe indicar como mínimo la siguiente información: a) b) Identificación del laboratorio que realiza el ensayo.2).8 INFORME DE ENSAYO NTC 5732 El informe debe hacer referencia a esta norma.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5. Identificación de la muestra: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) c) nombre del producto. si se utilizó el método de filtración por membrana. e) Resultados de ensayo: ensayos de validación. procedimiento de recuento. tiempos de contacto. 18 . principios activos y sus concentraciones . También se deben indicar todos los detalles de procedimiento que se realizaron para justificar el uso del método de filtración por membrana. condiciones de almacenamiento. se deben suministrar detalles completos de los ensayos para la validación del neutralizador. concentraciones del producto para ensayo. temperatura de incubación. temperatura de ensayo. - d) Condiciones experimentales: 1) 2) 3) 4) 5) 6) período de análisis. Método de ensayo y su validación: si se utilizó el método de dilución-neutralización. diluyente para usar con el producto recomendado por el fabricante.1 y D. valuación de la actividad bactericida (véanse también las Tablas D. fabricante. se deben suministrar detalles completos de los ensayos para la validación del método.

19 . Localidad.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA f) g) NOTA NTC 5732 Conclusión. fecha y firma identificada. En el Anexo D se suministra un ejemplo de un informe de ensayo típico.

1. Deseche las cajas que.2. agua.2.1. disperse cada muestra de 1. Tome una muestra de 1. Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad. Vuelva a contar las cajas restantes.1 Generalidades Antes del ensayo. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.2.1 (véase el numeral 5.0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.1 Método de dilución-neutralización A.1 PRINCIPIO Para cada producto se selecciona un neutralizador según las indicaciones de véase el Anexo A literal A.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml. equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo. neutralizador) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C 20 .2.0 ml de la dilución de 10-1 en duplicado e inocule usando la técnica de siembra en profundidad o siembra en superficie. el producto se utiliza sin diluir como la solución de producto para ensayo.2. A. suspensión bacteriana para ensayo.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5. Determine el mayor número de colonias para cada caja. prepare una dilución de 10-1 con el diluyente (véase el numeral 5. Para el recuento de la suspensión. A.4) para obtener la suspensión bacteriana de 4.6).4.3).2 Preparación de la suspensión bacteriana Para preparar la suspensión bacteriana. vierta con pipeta cada muestra de 1.4) y mezcle (véase el numeral 5. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO A (Normativo) MÉTODO DE ENSAYO PARA LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DILUCIÓNNEUTRALIZACIÓN Y FILTRACIÓN POR MEMBRANA A.4.3. se usa el método de filtración por membrana según las indicaciones de véase el Anexo A literal A.2. diluya la suspensión bacteriana para ensayo (véase el numeral 5.5).4.4. Para productos de lavado de manos.3) con el diluyente (véase el numeral 5.4 ENSAYO PARA VALIDACIÓN A. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.2.3 PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DEL PRODUCTO PARA ENSAYO Véase el numeral 5.2.2.2. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.1.2.4.6. no se puedan contar. Calcule el número de ufc/ml en la suspensión bacteriana (Nv) utilizando el método que se indica en el numeral 5. Para productos de fricción de manos.2.4. Si no se puede encontrar un neutralizador adecuado.7) como solución del producto para ensayo A. prepare una dilución al 55% (V/V) del producto de lavado de manos de ensayo en agua dura (véase numeral 5.2.2. por cualquier razón.3.

0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5. A.4.6. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase numeral 5. Calcule el número de ufc/ml en el control de las condiciones experimentales (agua dura) (A) utilizando el método que se describe en el numeral 5.3) fundido y enfriado a 45°C ± 1°C. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.6) durante unos s. Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad.3.2. A.2. Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado higiénico de manos o fricción higiénica de manos) o 5 min ± 10 s (lavado quirúrgico de manos o fricción de manos quirúrgica).2) controlado a 20 °C ± 1 °C.5) en un tubo de ensayo estéril. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. Adicione 1. NOTA 2 Los productos destinados para uso tanto en lavado higiénico de manos como lavado quirúrgico de manos se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min. 21 .0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4.2.2.0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4.3.2.1.3. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.3. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.2. Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado higiénico de manos) o 5 min ± 10 se (lavado quirúrgico de manos.2.2.1. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.2. disperse cada muestra de 1.2. Vuelva a contar las cajas restantes.4.2.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 utilizando el baño de agua (véase el numeral 5.7) en un tubo de ensayo estéril.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5. Adicione 1.3 Validación de no toxicidad del neutralizador (B) Coloque 9. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo. Deseche las cajas que.0 ml de neutralizador (véase el numeral 5.2 Validación de las condiciones experimentales (agua dura) seleccionadas (A) Este ensayo de validación se lleva a cabo para productos de lavado de manos únicamente.0 ml de agua dura (véase el numeral 5.3. Coloque 9. no se puedan contar. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. Incube las cajas durante 24 h adicionales. Tome una muestra de 1. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente. literal A.2.1. los cuales se deben someter a ensayo en una dilución de 55 % (V/V) en agua dura.2.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A literal A.2.3). Determine el mayor número de colonias para cada caja.2. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.2.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A.6) durante unos s. vierta con pipeta cada muestra de 1.6) durante unos s. por cualquier razón.0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad o de siembra en superficie.

A.0 ml de la solución del producto para ensayo (véase el numeral 5. no se puedan contar.2. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. Tome una muestra de 1. 22 . Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.6) durante unos s. vierta con pipeta cada muestra de 1.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5. Deje en el baño de agua a 20°C ± 1°C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado higiénico de manos o fricción higiénica de manos)) o 5 min ± 10 s (desinfección quirúrgica de manos).0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo literal A A.1. Tome una muestra de 1. Determine el mayor número de colonias para cada caja.2.2.4 Validación de la neutralización del método de dilución-neutralización (C) Coloque 1.2. Deje en el baño de agua a 20 °C durante 5 min ± 10 s.6) durante unos s.0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad o de siembra en superficie.4.2.2. transfiera 1. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5. Después.0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad o de siembra en superficie Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad.3.2. NOTA 2 Los productos de fricción y lavado de manos destinados para uso tanto de tratamiento de las manos poscontaminación como para desinfección de manos quirúrgica se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min.4.2. Deje en el baño de agua durante 5 min ± 10 s.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5. vierta con pipeta cada muestra de 1. Deseche las cajas que. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5.0 ml de diluyente para la suspensiones bacterianas (véase el numeral 5.2.3.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.0 ml de una suspensión bacteriana que contengan de 4.1.2. Vuelva a contar las cajas restantes.4) en un tubo estéril y luego.6. encienda el cronómetro y adicione 9. Adicione 1. por cualquier razón.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.0 ml de la mezcla en un tubo de ensayo que contenga 8.2.5) que se ha mantenido previamente en un baño de agua a 20 °C ± 1 °C. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5.3.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 NOTA 2 Los productos de fricción y lavado de manos destinados para uso tanto de tratamiento poscontaminación como para desinfección de manos quirúrgica se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5.2.2. . Calcule el número de ufc/ml en el control de no toxicidad del neutralizador (B) utilizando el método que se describe en el numeral 5.3). No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5. Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad.3. disperse cada muestra de 1.0 ml de neutralizador (véase el numeral 5.2.6) durante unos s.3.2.2.2). Incube las cajas durante 24 h adicionales. simultáneamente.

23 . Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.2. A.0 ml de agua dura (véase el numeral 5.2 Método de filtración por membrana A. Calcule el número de ufc/ml en el control del método de dilución-neutralización (C ) utilizando el método que se describe en el numeral 5. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.3. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no queda aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar.6) durante unos segundos. mezcle (véase el numeral 5. Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.2) controlado a 20 °C ± 1 °C.1 ml de la suspensión bacteriana y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana independiente.2.2.0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4. Determine el mayor número de colonias para cada caja.5). los cuales se deben someter a ensayo en una dilución de 55 % (V/V) en agua dura.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A literal A. Filtre y enjuague con 50 ml del líquido de enjuague (véase el numeral 5. no se puedan contar. Deseche las cajas que. Al final del tiempo de contacto. Nota 1. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.3). Adicione 1. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2. Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 minuto ± 5 s (lavado higiénico de manos) o 5 min ± 10 s (lavado quirúrgico de manos). Vuelva a contar las cajas restantes.4. suspensión bacteriana para ensayo.2.3.2. NOTA 3 Al realizar la transferencia. equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo.2. por cualquier razón.4.2.3. Los productos destinados para uso tanto en lavado higiénico de manos como lavado quirúrgico de manos se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min.2.2. este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo.0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.2.1. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. Tome dos muestras de 0.7) en un tubo de ensayo estéril. Coloque 9. líquido de enjuague) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C utilizando el baño de agua (véase el numeral 5. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min. agua.6) durante unos s.3). Si es superior a 1 min. A. que disponga de una membrana y que contenga 50 ml del líquido de enjuague (véase el numeral 5.2.2. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. disperse cada muestra de 1.1 Generalidades Antes del ensayo.2.2 Validación de las condiciones experimentales (agua dura) seleccionadas (A) Este ensayo de validación se lleva a cabo para productos de lavado de manos únicamente.6.6) y luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5. Nota 2.2.2. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.4.2.

A.2. Nota. Realice el recuento recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.3). Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5. Calcule el número de ufc/ml en el control del procedimiento de filtración (B) utilizando el método que se describe en el numeral 5. Filtre y enjuague la membrana con no menos de 150 ml y no más de 500 ml del líquido de enjuague (véanse los numerales 5.4.2. Vuelva a contar las cajas restantes. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.2. Repita el procedimiento anterior para cada organismo ensayo A. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 minuto.4. Determine el mayor número de colonias para cada caja.1 ml de la suspensión bacteriana diluida que contenga de 1 x 102 ufc/ml a 3 x 102 ufc/ml preparada según se indica en el literal A. Calcule el número de ufc/ml en el control de las condiciones experimentales (agua dura) (A) utilizando el método que se describe en el numeral 5.2. Mezcle y deje en el baño de maría a 20 °C durante 5 min ± 10 s.4.6. Incube las cajas durante 24 h adicionales. no se puedan contar. Al realizar la transferencia.2. 24 .5 y 5. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.2.0 ml de la solución del producto para ensayo (véase el numeral 5. por cualquier razón.1.2.3) en un tubo estéril y luego.2. Deseche las cajas que. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.3. que disponga de una membrana independiente .2.2. Luego cubra las membranas con 150 ml de líquido de enjuague y adicione 0.6) y luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5. Filtre y enjuague con 50 ml del líquido de enjuague (véanse los numerales 5. Tome dos muestras de 0.2.6) durante unos s. este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el literal A.0 ml de diluyente para las suspensiones bacterianas (véase el numeral 5.2.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Incube las cajas a temperatura de 36 C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. Deseche las cajas que.2.2.1 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4. por cualquier razón.6.3 Control del procedimiento de filtración (B) Tome dos muestras de 0. que disponga de una membrana independiente.1.6). Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.2.2 y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración con una capacidad mínima de 50 ml. Determine el mayor número de colonias para cada caja. Incube las cajas durante 24 h adicionales. no se puedan contar. simultáneamente.2).1 ml de la mezcla y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración con una capacidad mínima de 50 ml. Si es superior a 1 minuto.2. Vuelva a contar las cajas restantes.4 Validación de la neutralización mediante el método de filtración por membrana (procedimiento de filtración) Coloque 1.5 y 5. active el cronómetro y adicione 9.2. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.2. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar.

2.6. Determine el mayor número de colonias para cada caja. NOTA Al realizar la transferencia.5 Validación Verifique que los resultados de ensayo cumplen con los requisitos correspondientes de los numerales 5.2. por cualquier razón.2. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.3). Incube las cajas durante 24 h adicionales. Si es superior a 1 minuto.6. Vuelva a contar las cajas restantes. A. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no queda aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar.2. este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. no se puedan contar. Calcule el número de ufc/ml en el control del método de filtración por membrana (C) utilizando el método que se describe en el numeral 5. Deseche las cajas que.1.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.2 o 5. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min.6.1. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. 25 .

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO B (Informativo) NEUTRALIZADORES Cuando se especifica un neutralizador. para la neutralización completa) polisorbato 80 a) (30 ml) + lecitina de huevo (3 g) + histidina (1 g) + tiosulfato de sodio (5 g) + albúmina de suero bovino. liofilizada (1 g) polisorbato 80 a) (30 ml) + lecitina de huevo (3 g) + histidina (1 g) + tiosulfato de sodio (5 g) amonio polisorbato 80 a) (30 ml) + saponina (30 g) + histidina (1 g) + cisteína (1 g) Compuestos de cloro y yodo povidona Compuestos fenólicos Compuestos cuaternario de a) Con grado analítico. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de ICONTEC 26 . se puede utilizar cualquiera de los que se indican a continuación.1. hasta cinco veces. Ejemplos de neutralizadores Desinfectante Gluconato de clorhexidina Neutralizadores (concentración por litro de fluido o diluyente de muestreo) polisorbato 80 a) (30 ml) + lecitina de huevo (3 g) + histidina (1 g) (puede ser necesario utilizar concentraciones superiores. NOTA La siguiente lista no es exhaustiva y se pueden probar otros medios. no hidrolizado según el documento Farmacopea Europea volumen 1 TWEEN 80® es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Tabla B.

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO C (Informativo) LÍQUIDOS DE ENJUAGUE Se puede utilizar cualquiera de los siguientes líquidos de enjuague: NOTA agua (véase el numeral 5.4).2). solución acuosa al 0. diluyente (véase el numeral 5.1 % (V/V) de polisorbato 80 5).2.2.2.5 % (V/V) de polisorbato 80 5). 5) Con grado analítico. solución acuosa al 0.2.5).2. soluciones amortiguadoras. Esta lista no es exhaustiva y se pueden probar otros líquidos de enjuague.5 % (V/V) de polisorbato 805) 5) y 0.07 % de lecitina. no hidrolizado según el documento Farmacopea Europea volumen 1 TWEEN 80® es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de ICONTEC 27 . solución acuosa al 0. neutralizador (véase el numeral 5.2.

......................... Identificación del laboratorio de ensayo Besson Test House 2.......................... Identificación de la muestra Nombre del producto..................................................................................... esterilizada en autoclave 4................................ 36 °C ± 1 °C 5............................................................ Método de ensayo y su validación Método ...... el número de lote y el fabricante se suministran únicamente como ejemplos imaginarios........................................ siembra en superficie Temperatura de incubación ............................. Resultados de ensayo Véanse las Tablas D..... fecha y firma identificada NOTA El producto.. agua dura 3....... el lote 96-71-51 del producto "lavado de manos Bacticen" tiene una actividad bactericida para las cepas indicadas de Escherichia coli (K 12) NCTC 10538....1 y D......................................... Condiciones experimentales Período de análisis . Conclusión Según el documento EN 12054.... Fecha de entrega ............. producto diluido al 55 % (V/V) en agua dura Temperatura de ensayo .................................................................... 30 g/l....... Lavado de manos Bacticen Número de lote ........................ 1 minuto Procedimiento de recuento .. 7.................. 6..................... Staphylococcus aureus ATCC 6538 y Enterococcus hirae ATCC 10541 en un tiempo de contacto de 1 minuto acorde con los requisitos para un producto de lavado higiénico de manos.................. 20 °C ± 1 °C Tiempo de contacto .. Centipede Formulations Inc.............................................................................................. aquellas del fabricante Sustancias activas y sus concentraciones (opcional) . 1996-02-20 a 1996-03-12 Concentración del producto para ensayo........... 1996-05-11 Condiciones de almacenamiento . lecitina....... Localidad............... dilución-neutralización Neutralizador .............NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO D (Informativo) EJEMPLO DE UN INFORME DE ENSAYO TÍPICO Actividad bactericida de un producto de lavado higiénico de manos destinado para el tratamiento postcontaminación de las manos 1...................................................2............................. 96-71-51 Fabricante ........................... no se indican Diluyente para uso con el producto recomendado por el fabricante ........ 28 ...... Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442................

149 139. 147 142. 131 Enterococcus hirae (N = 145) (B = 137) (C = 137) Para las cepas sometidas a ensayo: N y B están entre 100 ufc y 300 ufc. A es mayor a 0. 142 Escherichia coli (N = 146) (A = 144) 149.5 veces N. 9 143 .2. 131 Pseudomonas aeruginosa (N = 146) (B = 137) (C = 130) 142.4. 121 Staphylococcus aureus (N = 148) (B = 139) (C = 125) 143. C es mayor a 0. >300 29 . El método se valida para la condiciones experimentales de la dilución del producto al 55 % (V/V) en agua corriente.1. 147 135. Verificación de la metodología y la validación del método de dilución-neutralización A) validación del método de dilución-neutralización Organismo de ensayo Recuentos de colonias por caja (cantidad promedio de ufc) Suspensión bacteriana Validación de la neutralización para ensayo (véase el numeral 5. 148 Staphylococcus aureus (N = 148) (A = 145) 143.04 x 103 2.4.41 x 103 29 . 141 139.4) 149. Tabla D. 139 120. 11 1. Resultados de ensayo para el producto de lavado de manos diluido al 55% en agua dura Organismo de ensayo Muestra de ensayo Recuento de colonias por caja después de 1 min de contacto ufc/ml de la mezcla de ensayo Recuento inicial (N) En tiempo de contacto de 1 min (C) 1. La neutralización se valida con el neutralizador que se ensaya. 29 114 . 149 134. 141 133. 124 Escherichia coli (N = 146) (B = 137) (C = 122) 149. 150 135. 150 146.1.46 x 10 7 Enterococcus hirae 1. B es mayor a 0.5 veces B. 110 10 .5 veces N. 145 Enterococcus hirae (N = 145) (A = 142) Para las cepas sometidas a ensayo: N y A está entre 100 ufc y 300 ufc. 140 143.0 >300 .45 x 10 7 1.4) Control Ensayo 149.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Tabla D.1.139 19 . 147 Pseudomonas aeruginosa (N = 146) (A = 143) 142.48 x 10 7 1. B) Validación de las condiciones experimentales (agua dura) Organismo de ensayo Recuentos de colonias por caja (cantidad promedio de ufc) Suspensión bacteriana para Ensayo experimental con ensayo (véase el numeral agua dura 5. 140 128. 143 129.46 x 107 1.12 x 103 Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli dilución 10-2 dilución 10-3 dilución 10 -3 dilución 10 dilución 10-2 dilución 10-3 dilución 10-2 dilución10-3 -2 110 .8 x 1 03 1. 98 2.

83 799 10788 9518 10541 58.117 10538 10083 6538 4.55 3320 8192 Escherichia coli: Staphylococcus aureus: Enterococcus hirae: 30 .NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO E (Informativo) CEPAS DE REFERENCIA CORRESPONDIENTE EN OTRAS COLECCIONES DE CULTIVO Pseudomonas aeruginosa: ATCC CIP DSM NCIMB ClP NCTC NCIMB ATCC CIP DSM NCTC NCIMB ATCC CIP DSM NCIMB 15442 103467 939 10421 54.

Se recomienda tener en cuenta esta información cuando se utilizan las Normas Europeas sobre desinfectantes y antisépticos químicos. esporicidas y virucidas de EN que sean adecuados para el campo y el método de aplicación previstos. los cuales son apropiados para el campo de aplicación y el método de aplicación. se recomienda indicar la justificación para omitir los ensayos de fase 1. fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2. F. Tales aplicaciones estarán indicadas en la propia norma o en la norma adicional que especifica las directrices para la aplicación e interpretación de los ensayos. f) y g). a) b) c) d) - e) Se acepta que para algunas aplicaciones. 31 . otros ensayos de laboratorio de fase 2/etapa 2. los ensayos de fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos adicionales de fase 1 pueden no ser pertinentes. ensayo de suspensión de fase 2/etapa 1 bajo las condiciones representativas del uso práctico. ensayos de campo de fase 3 bajo condiciones prácticas. excepto para las situaciones que se indican en los ítems e). fungicidas. por ejemplo ensayos de superficies. Las diversas fases y etapas se definen así: ensayo de suspensión de fase 1 para la actividad básica del producto. “Las recomendaciones de uso” deben estar soportadas por los resultados de los ensayos en fase 3. los productos desinfectantes y antisépticos químicos se deberían someter a un programa específico de ensayo que incluya ensayos de fase 1. Para tal fin. de lavado y fricción de manos que simulen las condiciones prácticas.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO F (Informativo) INFORMACIÓN SOBRE LA APLICACIÓN Y LA INTERPRETACIÓN DE LAS NORMAS EUROPEAS SOBRE DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS El comité CEN/TC 216 quiere llamar la atención del lector de esta norma a los acuerdos logrados con respecto a la relación entre esta norma y normas futuras. Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2 sin ensayos de fase 1 para sustentar las recomendaciones de uso.1 GUÍA GENERAL PARA LA APLICACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ENSAYO SEGÚN LAS NORMAS EUROPEAS PARA DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS Todas las "recomendaciones de uso" para los productos desinfectantes y antisépticos químicos deberán estar sustentadas por los resultados de ensayos bactericidas.

fungicidas. el propósito de esta norma será especificar en detalle la relación entre los diversos ensayos entre sí y con las recomendaciones de uso. h) Todas las declaraciones de bactericidas. se recomienda indicar la justificación para omitir los ensayos de fase 2/etapa 1. se recomienda indicar la justificación para omitir los ensayos de fase 2/etapa 2. Tales aplicaciones pueden estar indicadas en el "método estandar" o en la norma para la aplicación e interpretación de los ensayos. F. esporicidas como "sustancias bioactivas" deben estar sustentadas por ensayos de fase 1 adecuados. Tales aplicaciones estarán indicadas en la propia norma o en la norma adicional que especifica las directrices para la aplicación e interpretación de los ensayos. 32 . Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 2 sin ensayos de fase 2/etapa 1 para sustentar las recomendaciones de uso.2 Guía para la interpretación de los ensayos para desinfectantes y antisépticos químicos Se elaborará una norma (o normas) independiente que será utilizada como "guía para la interpretación de los ensayos para desinfectantes y antisépticos químicos" después de que se pacten los métodos de ensayo normales. Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 1 sin ensayos de fase 2/etapa 2 para sustentar las recomendaciones de uso. los ensayos de suspensión de fase 2/etapa 1 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos adicionales de fase 2/etapa 2 pueden no ser pertinentes. g) Se acepta que para algunas aplicaciones los ensayos de fase 2/etapa 2 junto con ensayos de fase 1 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos adicionales de fase 2/etapa 1 pueden no ser pertinentes.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA f) NTC 5732 Se acepta que para algunas aplicaciones.

31 p. 2001. EUROPEAN STANDARD. Bruselas.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA DOCUMENTO DE REFERENCIA NTC 5732 EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION. Chemical Disinfectants and Antiseptics. Quantitative Suspension Test for the Evaluation of Bactericidal Activity of Products for Hygienic and Surgical Handrub and Handwash Used in Human Medicine. Test Method and Requirements (Phase 2/step 1). (prEN 12054:2001 E) 33 . Bélgica.

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