Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgicos Laboratorio de Diagnstico Clnico.

2 curso

Cocos Gram Negativos - 1 U.T. 12 - 5 Bloque temtico III

Familia Neisseriaceae
Introduccin Dentro de esta familia encontramos principalmente 2 gneros, semejantes en cuanto a morfologa, actividad metablica y habitat acostumbrado, pero difieren en su potencial patgeno y caractersticas genticas. Los 2 gneros son : Neisseria y Branhamella, a este ltimo por estudio genticos, se considera subgnero de otro de esta familia que es la Moraxella, aunque antiguamente se incluan en Neisserias, siendo la especie ms comn la Branhamella catarrhalis. Morfologa Son cocos gram (-), se presentan en pares como forma de grano de caf, por tener los lados adyacentes aplanados, no presentan esporas, inmvil, hay cepas encapsuladas y otras producen un pigmento verde amarillento, aerobios estrictos, catalas y oxidasa positivo, poco fermentadores. Cultivo Crecen a 35-37C, luego son mesfilas, en una atmsfera de 10% de CO2, la cual se consigue mediante el sistema de la vela o en medios de cultivo que llevan un sobre con una sustancia capaz de crear esa atmsfera. Son bacterias muy susceptibles a influencias ambientales desfavorables como temperatura alta y sequedad; por lo que es conveniente sembrar inmediatamente en un medio adecuado; si esto no fuera posible se utiliza un medio de transporte como el Stuart, que no es nutritivo, pero conservar las bacterias para una posterior recuperacin. Tambin puede emplearse un medio de cultivo de transporte nutritivo para desarrollo de las bacterias. Como medios primarios y de aislamiento puede utilizarse el agar chocolate, siendo ms selectivos y especficos el Thayer-Martin y el TM modificado que son las botellas Tg (Transgrow).El medio Thayer-Martin, lleva una mezcla de antibiticos (vancomicina, colistina, nistatina y trimetoprim,que lo hace selectivo para Neisserias. Neisseria gonorrhoeae. Esta bacteria produce la enfermedad denominada gonorrea, la cual se transmite por contacto directo generalmente sexual que en la mujer es asintomtica, mientras que en el hombre cursa sin sintomas un 3-10%. El perodo de incubacin es de 3 a 4 das y se manifiesta con uretritis en el hombre y como cervicitis en la mujer, tambin puede producir infecciones anorectal y bucofaringea, sobre todo en homosexuales. De todos los pacientes con gonorrea, un bajo porcentaje presentan una infeccin gonoccica diseminada (IGD), por que las bacterias hayan difundido a sangre. Es frecuente e importante la oftalma gonoccica en RN, pudiendo darse tambin en mujeres. Muestras: Toma de endocervix, uretra, anorectal, conjuntiva, faringe y sangre, lesiones cutneas y lquidos articulares en el caso de IGD. Diagnstico. Primeramente mediante un frotis bien de cultivo, bien de la muestra, para observar morfologa, apareciendo los cocos intra y extracelulares. Se debe informar de la celularidad existente como mucha o escasa. Tambin puede realizarse una oxidasa, para comprobar la existencia de un enzima oxidativo, pues son oxidasa positivo.

M Isabel Fernndez Cerezo. I. E. S. Jaime Ferrn Cla.

Profesor Tcnico de Formacin Profesional. San Fernando de Henares. (28830 Madrid)

Curso 2003-2004 Cdigo 28038616

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Cocos Gram Negativos - 2 U.T. 12 - 5 Bloque temtico III

Esto sera una identificacin presuntiva, para realizar una identificacin definitiva, podemos hacer un estudio de fermentacin de H. de C. , son glucosa positivo con porduccin de cido pero no de gas. O podemos realizar la tincin de anticuerpo fluorescente (AF), siempre con controles positivos y negativos,se marca el Ac con fluorescena dando lugar a un conjugado que es capaz de reaccionar con el Ag para el cual se hizo el Ac. Los conjugados fluorescentes se observan al microscopio para ver si existe o no fluorescencia, por ver las bacterias de color amarillo verdoso. Puede hacerse por mtodo directo (Ac. para detectar Ag) o indirecto (Ac. que se comportan como antgenos y se enfrentan a antiinmunoglobulinas. Sensibilidad a los antimicrobianos. Los gonococos, son sensibles a la penicilina, aunque actualmente ha aumentado la CMI y se han observado algunas cepas resistentes, como consecuencia de la presencia del enzima beta-lactamasa. Por ello se puede usar tetraciclinas como alternativa. Neisseria meningitidis Esta bacteria se encuentra en nasofaringe de portadores sanos en un 3% de la poblacin aunque en invierno puede aumentar esta cifra. Es el causante de la meningitis, septicimia, endocarditis y neumona. Puede confundirse con otra Neisseria que tiene el mismo habitat, pero se diferencia por la fermentacin de H. de C. Muestras. LCR, sangre, muestras nasofaringeas y de las petequias que se producen en la piel. Diagnstico. Se realiza una tincin Gram, observando los cocos Gram (-), diplococos intracelulares o extracelulares. Normalmente tambin suelen alterarse unos parmetros bioqumicos, como la glucosa que disminuye y las protenas que aumentan. La oxidasa como prueba presuntiva, que da positiva. Como pruebas confirmativas la fermentacin de H. de C. siendo maltosa y glucosa positivo.Serolgicamente se puede indentificar utilizando sueros polivalentes, mediante pruebas de aglutinacin. Pero como mtodo especfico y altamente sensible el la contrainmunoelectroforesis, la cual puede hacerse para identificar Ag. o Ac. donde en un medio alcalino se enfrenta Ag. de la bacteria cargado negativo y Ac especficos para ese Ag, neutros o ligera carga positiva. Se realiza una electroforesis y cada uno migra hacia el otro hasta que llegan a encontrarse dando lugar a una banda de precipitacin entre los dos pocillos donde estn Ag y Ac. Tb. se realiza para neumococo y Haemophilus, ambos causantes tambin de meningitis bacteriana. La virulencia del meningococo es debida a una endotoxina lipopolisacrida . Sensibilidad antimicrobiana. Los meningococos han permanecido sensibles hasta ahora a penicilina y cloramfenicol, pero debe realizarse la actividad inhibitoria de las sulfamidas al aparecer resistencias en algunos casos, pero son sensibles a rifampicina, el cual debe utilizarse en familiares que han estado en contacto con el enfermo y no son sensibles a penicilina. La prevencin se basa en la vacunacin, pero esta debe ser slo a personas de riesgo que han podido estar en contacto con la bacteria. Adems slo existe vacuna para el meningococo tipo A y C no para el B. El tipo A se asocia con epidemias y los tipos B y C son ocasionales

M Isabel Fernndez Cerezo. I. E. S. Jaime Ferrn Cla.

Profesor Tcnico de Formacin Profesional. San Fernando de Henares. (28830 Madrid)

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