ESTRUCTURA, FUNCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

4.1. CONCEPTOS GENERALES Toda reacción química, biológica o inorgánica, es un proceso en el que una o varias moléculas interactúan entre sí para transformarse en otras moléculas siguiendo una dirección determinada por leyes fisicoquímicas (termodinámicas) hasta llegar a un estado de equilibrio: A+B , ) C+D

Existen sustancias llamadas catalizadores que tienen la capacidad de acelerar las reacciones químicas sin alterarse al final de éstas y sin modificar el equilibrio químico; sólo acortan el tiempo en que se alcanza dicho equilibrio. Los catalizadores se dividen en dos grupos: orgánicos e inorgánicos. Dentro de los primeros tenemos las enzimas y en el segundo los iones H + , OH " o metálicos. Las enzimas son moléculas producidas por las células de los organismos vivos con la función específica de catalizar reacciones químicas, las que sin ellas, ocurrirían muy lentamente. Hasta hace pocos años se consideraba que todas las enzimas eran proteínas. Sin embar-

go, recientes investigaciones realizadas por Cech y colaboradores (Cech, T.R., Science, 236, 1532-39 (1987) han demostrado que moléculas de RNA pueden actuar como enzimas con una elevada actividad catalítica. Se ha comprobado experimentalmente que la molécula de RNA L-19 derivada de un intrón de un precursor de una RNAr de un protozoario ciliado actúa como ribonucleasa y como RNA polimerasa. Esta enzima de RNA o RNA enzimático o ribozima muestra las mismas propiedades cinéticas que las otras enzimas tradicionales, un alto grado de especificidad y susceptibilidad a la inhibición competitiva. Este descubrimiento puede tener importantes implicaciones sobre la evolución de las moléculas y puede contribuir a aclarar el mecanismo de acción de los catalizadores. La vida y el crecimiento celular requieren la continua síntesis de macromoléculas acoplada a procesos proveedores de energía. El acoplamiento controlado de las reacciones químicas mediante la acción de enzimas es propiedad única de las células vivas. Entre las miles de sustancias presentes en una célula, las enzimas constituyen la parte más importante de las proteínas celulares. Esencialmente, todas las reacciones bioquímicas son catalizadas por enzimas.

cia emplean coenzimas del tipo del NAD + , NADP + , FAD, ácido lipoico y CoQ como aceptores de hidrógeno; otros aceptores incluyen al grupo hemo y al oxígeno molecular. En este grupo se incluyen deshidrogenasas y oxidasas de gran importancia en los procesos oxidativos de la respiración celular. La catalasa es única en el sentido de que el peróxido de hidrógeno (H2O2) sirve tanto como donador y como aceptor. La catalasa funciona en la célula eliminando el peróxido de hidrógeno que es tóxico. 2.- Transferasas.- Muchos pasos importantes del metabolismo requieren la transferencia de una molécula a otra de grupos ámino, carboxilo, carbonilo, metilo, ácido, glucosilo, o fosforilo. Las coenzimas utilizadas son el tetrahidrofolato (FH4) coenzima A (CoA-SH) y fosfato de piridoxal (PPal). Las aminotansferasas (transaminasas) transfieren grupos amino de un aminoácido a un cetoácido aceptor, dando lugar a la formación de un nuevo aminoácido y un nuevo cetoácido. Las cinasas catalizan la transferencia de un fosfato del ATP a grupos aceptores, alcohol o ámino, como ejemplo tenemos la glucocinasa que forma glucosa-fosfato. La síntesis de glucógeno depende de glucosiltransferasas. 3.- Hidrolasas.- Catalizan el rompimiento de una molécula, con participación de agua, entre enlaces carbono y cualquier otro átomo. Este grupo de enzimas se puede considerar como una clase especial de transferasas en las que el grupo donador se transfiere al agua. La rotura del enlace peptídico es buen ejemplo de esta reacción llevada a cabo por peptidasas. Nombres triviales de algunas peptidasas incluyen pepsina, tripsina, quimotripsina y dipeptidasa. Otras subclases son las esteraseis como la lipasa, colinesterasa, y colesterol esterasa. Las fosfatasas eliminan grupos fosfatos, como la glucosa6-fosfatasa y las fosfatasas acida y alcalina. 4.- liosas.- Catalizan el rompimiento no hidrolítico entre carbono-carbono, carbonoazufre y algunas carbono-hidrógeno. A este

grupo pertenecen las descarboxilasas. Aldehido nasas como la aldolasa, fumara y otras. 5.- Isomerasas.- Incluye a todas las enzimas que catalizan la interconversión de todo tipo de isómeros ópticos, geométricos, de posición y reacciones de oxidorreducción intramolecular. A este grupo pertenecen las racémosos, epimerasas y mutasas. 6.- Ligasas.- Catalizan la formación de enlaces entre carbono-oxígeno, nitrógeno y otros átomos a expensas de un enlace fosfato de alta energía del ATP. El término de sintetasas se reserva para este grupo particular de enzimas. La piruvato carboxilasa es un buen ejemplo de una ligasa. También la acetil-CoA sintetasa, la aminoacil-RNAt sintetasa, enzimas activadoras de aminoácidos en la síntesis de proteínas. En la Tabla 4.4 se describen algunas enzimas y su clasificación de acuerdo a la comisión de enzimas. 4.4 LOCALIZACIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE LAS ENZIMAS Las enzimas dentro de un organismo se encuentran distribuidas en los diferentes órganos y tejidos donde realizan su función específica. Dentro de una célula, algunas enzimas se encuentran compartamentalizadas y ordenadas; ejemplo: en las células hepáticas, las enzimas de la glicólisis están localizadas en el citoplasma, en tanto que las enzimas del ciclo de Krebs en las mitocondrias. Dentro de la mitocondria, las enzimas del ciclo del ácido cítrico se encuentran dispuestas en forma secuencial, lo cual da al proceso ergopoyético de la célula la máxima eficacia.

4.4.1.

Nivel celular. Sistema microsomal

La localización de una enzima particular en un tejido o célula es el fundamento de una

Tabla 4.4 Clasificación Internacional de las enzimas Número 1. 1.1 1.1.1 1.1.1.1. 1.1.3. 1.1.3.4. 1.2. 1.2.1.12. 1.2.3.2. 1.2.4.1. 1.3. 1.3.1.1. 1.4 1.4.1.2 1.5 1.5.1.5 1.6. 1.6.2.1. 1.9. 1.9.3.1. 1.11. 1.11.1.6 2. 2.1 2.1.1 2.1.1.2 2.1.2 2.1.2.1 Nombre sistemático Oxidorreductasas Grupos CH-OH NAD+ o NADP + aceptor Alcohol NAD + oxidorreductasa: O2 como aceptor p-D-glucosa: oxígeno Oxidorreductasa (FAD) Grupos C = 0 Gliceraldehído 3-P:NAD* Oxidorreductasa (NAD+) Xantina:oxígeno oxidorreductasa. Piruvato: lipoato Oxidoreductasa Grupos CH-CH 4,5-Dihidrouracilo: NAD+ oxidorreductasa Grupos CH-NH2 L-glutamato: NAD+ oxidorreductasa Grupos C-NH5,10-Metilenotetrahidrofolato: NADP + oxidorreductasa Sobre NADH o NADPH como donador NADH: citocromo C oxidorreductasa Sobre grupos hemo donadores. Citocromo C: oxígeno oxidorreductasa Con H2O2 como aceptor Peróxido de hidrógeno: H2O2 oxidorreductosa Transferasas Grupos de 1 carbono metil transferasas S-adenosil-metionina: guanidino-acetato N-metil Transferasa Hidroximetil y fomil transferasa L-serina: FH4 5,10-hidroximetil trasferasa Nombre trivial

Deshidrogenasa Alcohólica Glucosa oxidasa

Triosa-P-deshidrogenasa Xantino oxidasa Piruvato deshidrogenasa Dihidrouracilo deshidrogenasa Glutamato deshidrogenasa Metilen-FH4-deshidrogenasa

Citocromo C reductasa Citocromo oxidasa Catalasa

Guanidometil transferasa

Serina hidroximetil transferasa

CONTINUA TABLA 4.4
Número 2.1.3 2.1.3.2 2.2 2.2.1.1 2.2.1.2 2.6.1 2.6.1.1 2.6.1.2 2.7.1 2.7.1.2 2.7.7.10 3. 3.1 3.1.1 3.1.1.7 3.1.2 3.1.2.1 3.1.3 3.1.3.9 3.2.1 3.2.1.1 3.4.4 3.4.4.1 3.5.1.5 3.6.1.3 4 4.1.1 4.1.1.1 4.1.2 4.1.2.7 Nombre sistemático Carboxil o carbamoil transíerasas Carbamoil-P: L-aspartato transferasa Transferencia de grupos aldehídicos o cetónicos Sedoheptulosa 7-P: gliceraldehido glicolaldehído transferasa Sedoheptulosa: 7-P: gliceraldehido Dihidroxiacetona transferasa Aminotransferasas L-aspartato: 2-oxoglutarato aminotransferasa L-alanina: 2-oxoglutarato aminotransferasa Fosfotransferasas ATP: glucosa 6-P transferasa UTP: galactosa 1-P uridil transferasa Hidrolasas Enlace éster Carboxílico Acetilcolina acetil hidrolasa Tióester Acetil CoA hidrolasa Ester fosfórico Glucosa 6-P fosfohidrolasa Glucósido hidrolasas a l - 4 gluca-4glucano hidrolasa Péptido hidrolasas Pepsina Urea amidohidrolasa ATPfoshidrolasa Liasas Carboxiliasas 2-oxo-ácido carboxil iasa Aldehidoliasas Cetona 1-Paldehidoliasa Ureasa ATPasa Nombre trivial Aspartato transcarbamilasa

Transcetolasa Transaldolasa

Transaminasa glutámico oxalacética Transaminasa glutámico pirúvica Glucocinasa UDP-galactosa pirofosforilasa

Colinesterasa Tiolasa Glucosa 6-fosfatasa a-amilasa

Piruvato descarboxilasa Aldolasa

En células eucarióticas las enzimas se distribuyen en la membrana celular. En la membrana celular se encuentran enzimas que participan en el transporte de metabolitos y .1. 3 epimerasa Cis-trans isomerasas Malea to cis-trans isomerasa Aldo-ceto isomerasas D-gliceraldehído 3-P cetol isomerasas Ligasas Aminoácido-RNA L-tirosina: RNAt ligasa(AMP) Acido tiol Acetato: CoA ligasa (AMP) Enlaces C-N UTP: amonio ligasa (ADP) Enlaces C-C Piruvato: C 0 2 ligasa (ADP) Nombre trivial Citrato sintetasa Fumarasa Alanina racemasa Epimerasa Maleato isomerasa Triosa-P isomerasa Tirosil-RNAt sintetasa Acetil CoA sintetasa CTP sintetasa Piruvato carboxilasa las que regulan la acción de hormonas o neurotransmisores sobre los receptores membranales.4.2.2 6. (tabla 4.2 5 5.1.1 6.1.1 6.1.1.1.3 4.1.1.1.1 4. otras se encuentran fijas ordenadamente en alguna membrana particular y funcionan en forma secuencial.4 6.1 6. mitocondrias (matriz y espacios intermembranas) lisosomas.1 5. La distribución de las enzimas en los organelos subcelulares se estudian fraccionando en ultracentrífuga homogeneizados de células.4. En tanto que muchas enzimas se encuentran solubles en el citoplasma. vacuolas.2 5.1 5.3. retículo endoplásmico.5).1 5.1 6 6.1.7 4.3.2.1 5.4 Número 4.3. Generalmente las vías anabólicas y catabólicas se localizan en organelos diferentes a fin de maximizar la economía celular.1.2.3 6.2. rama de la histoquímica denominada histoenzimología.1 Nombre sistemático Cetoacidoliasas Citrato oxalacetato liasa Hidroliasas L-malatohidroliasa Isomerasas Racemasas y epimerasas Alanina recemasa D-ribulosa 5-P.2.CONTINUA TABLA 4.3.1 5. como es el caso de las enzimas oxidativas de la mitocondria.3.1. etc.1 6.

fosfaíasa acida. catalasa. algunas de ellas específicas de determinado órgano. otra variante isoenzimática la LDH-X se localiza en testículo. glucosidasas. arilsulfatasas. aminoacilsintetasas Ciclo de los ácidos tricarboxílicos.4. catabolismo de purinas y pirimidinas.5 Localización intracelular de las principales enzimas y rutas metabólicas Citoplasma Glucólisis: ruta de las hexosa monofostato. peptidasas. oxidación de aminoácidos. membrana mitocondrial externa y en la envoltura nuclear. nucleasas. alargamiento de ácidos grasos. D-aminoácido oxidasa. La creatina fosfocinasa se localiza en músculo estriado (esquelético y miocardio). fosfolipasas y fosfatasas. glucosa 6-fosfatasa Urato oxidasa. glucogénesis y glucogenólisis: síntesis de ácidos grasos. lipasas. síntesis de fosfoglicéridos y triacilgliceroles. 4. Dos subclases de aminotransferasas se localizan en órganos distintos. La amilasa y lipasa pancreáticas ayudan al diagnóstico de pancreatitis aguda cuando se elevan en suero (ver más adelan- .2. P-glucuronidasa. 5-nucleotidasa. a-hidroxiácido oxidasa. nucleósido difosfatasa. oxidasas de función mixta relacionadas con el citocromo b. esterasa. síntesis y reducción de esteroides Galactosil y glucosiltransferasa. la LDH-1 (H4) se localiza en miocardio y la LDH-5 (M4) se localiza en hígado y músculo esquelético. Lisozima. Golgi. condroitina sulfotransferasa. A nivel de organismo La localización y distribución de enzimas que funcionan específicamente en determinados órganos es el fundamento de la enzimología clínica.Tabla 4. transporte electrónico y fosforilación oxidativa acoplada. oxidación de ácidos grasos de cadena larga Rutas de biosíntesis de DNA y RNA Mitocondria Lisosomas Retículo endoplasmático (microsomas) Golgi Peroxisomas Núcleo a La NADH-citocromo b. glucosa 6-fosfatasa. TGP) se localiza en hígado. síntesis de la urea. NADH-citocromo c reductasa. aminotransferasas. TGO) se localiza princip a l m e n t e en m i o c a r d i o y la a l a n i n a aminotransferasa (antes transaminasa glutá- mico pirúvica. oxidación de ácidos grasos. rutas de síntesis de proteínas. y el citocromo P450. La deshidrogenasa láctica posee varias isoenzimas. reductasa se ha encontrado en el retículo endoplasmático. incluyendo proteasas. y glucuroniltransferasa. la aspartato aminotransferas (antes transaminasa glutámico oxalacética. Varias de las enzimas señaladas en la tabla son comunes a uno o más organelos membranosos. NADH y NADPH citocromo c reductasas. hidrolasas.

El estudio de esto.5. Se habla así de calor de formación y calor de reacción. la energía solar permite la síntesis de glucosa (Ce H12 0¿) y es una reacción endergónica.te). que determinan el sentido de una reacción y su equilibrio. será endotérmica en sentido inverso. con formación de CO2 y H 2 0 es una reacción exergónica. Las enzimas no catalizan reacciones que jamás sucederían espontáneamente. rama de la fisicoquímica. termodinámicamente posibles. los productos tendrán más energía que los reactantes. AF = LFf productos . Aspectos termodinámicas. cuando se elevan en suero. 4. los cuales permiten comprender el sentido de las reacciones químicas. La aplicación del primer principio de la termodinámica (principio de conservación de la energía) a las reacciones químicas ha dado origen a la termoquímica que estudia la cantidad de calor que se absorbe o se desprende en una reacción y permite calcular la energía libre (F) y la entalpia o contenido calórico (H).LFf reactantes AH . Si en la reacción se absorbe calor.5 MECANISMO DE ACCIÓN El mecanismo de acción de las enzimas se estudiará primero desde el punto de vista general de la catálisis y luego de cada sistema enzimático en particular. Las fosfatasas.1. las cuales pueden ocurrir aún en ausencia de enzimas pero muy lentamente. o si la libera y en qué magnitud. la fosfatasa acida en próstata y la fosfatasa alcalina en hígado y hueso. AF y AH son negativos y la reacción es exotérmica {exergónica en general). la degradación metabólica de la glucosa por la célula. cuyos conceptos principales se establecen en d o s p r i n c i p i o s de la termodinámica llamados primero y segundo.LHf productos . Energía de activación Conviene analizar previamente los conceptos termodinámicos. ejemplo: en la fotosíntesis. de la misma magnitud. determinan la presencia de carcinoma prostético y óseo respectivamente. La realización y extensión de las reacciones bioquímicas están controladas por el flujo energético. y si hay que suministrarle energía para que ocurra.LHf reactantes Una reacción que es exotérmica en sentido directo. si una reacción procediera de izquierda a derecha. El cambio de energía libre (AF) o energía útil se correlaciona con la constante de equilibrio (Keq). es decir aquellas termodinámicamente imposibles. los cambios de energía libre (AF) y de entalpia (AH) son positivos y se dice que la reacción es endergónica (o endotérmica si es en forma de calor). si es reversible. en virtud de que las enzimas sólo aceleran reacciones espontáneas o metaestables. 4. Este principio establece que los procesos espontáneos tienden al equilibrio. Para cualquier reac- . En las reacciones en que se desprende calor. que el agua corra por un declive y no suba por una pendiente. esto determina que un cuerpo caliente ceda calor a otro más frío y no al revés. Energía C H 6 12°6 + °2 6C0 2 + ÓHjO Energía El segundo principio de la termodinámica determina la dirección de una reacción química. con su localización particular. es el campo de las termodinámica. la cual a su vez se rige por la ley de acción de masas.

ción química: la ecuación que determina el cambio de energía libre respecto a la concentración de reactantes y productos es la siguiente: Donde AF° es el cambio de energía libre en condiciones estándar: este valor es equivalente al pKa de la ecuación de HendersonHasselbach (ver unidad 2). Al disminuir la energía de activación. muchas reacciones químicas proceden excesivamente lentas a la temperatura del organismo. Existen sistemas de reacción que se presentan en estado metaestable. En el equilibrio. es decir es termodinámicamente posible. En todos los procesos enzimáticos. el proceso se desarrollará espontáneamente. las enzimas hacen que las reacciones termodinámicamente posibles procedan con rapidez en la célula pero no modifican la constante de equilibrio. En un sentido cinético. expresa la velocidad de la reacción. La velocidad del cambio en la concentración del producto o del sustrato en función del tiempo. La energía de activación es la energía necesaria para pasar las moléculas reaccionantes al estado de transición y que de ahí proceda la reacción.2. si AF° es positivo. es decir termodinámicamente posible.6). los componentes iniciales del sistema enzimático (sustrato (S). 4. Esa barrera termodinámica es la energía necesaria para alcanzar el estado de transición como energía de activación (fig.1).5. En ausencia de catalizadores enzimáticos. Cinética enzimática si AF° es negativo. por lo tanto: AF° = -RT lnKeq puestos orgánicos inflamables expuestos al aire. pero no espontáneo.4. La velocidad cambia constantemente a medida que se aproxima al equilibrio (estado final) siendo cero en el equilibrio. temperatura y pH conocidos. la reacción sólo transcurrirá si se le proporciona energía (tabla 4. como la gasolina. Esto sucede con algunos comTabla4. la velocidad de la reacción depende de la concentración de enzima y de su sustrato. este capítulo tratará de los factores que inciden en la actividad de una enzima. cofactores y enzimas) se añaden a una serie de recipientes en un medio con fuerza iónica. La cinética estudia la velocidad de cambio entre el estado inicial de reactantes y productos y su estado final.6 Relación entre Keq y AF° (a 25°C) Dado que las enzimas modifican la velocidad de las reacciones químicas. Si se aumenta progresivamente la concentración . no hay cambio de energía libre y AF=0. que necesitan una chispa para su ignición y su transformación en CO2 y H2O. no reaccionan con rapidez debido a que la energía cinética que poseen es insuficiente para superar esa barrera de energía.

Modelo de Michaelis-Menten. b) la enzima sacarasa en presencia de sacarosa resistía la desnaturalización térmica . 4. manteniéndose constante (pero en exceso) la concentración del sustrato. 4. seguía degradándose. A concentración fija de enzima y concentraciones crecientes de sustrato se obtiene una segunda relación interesante. la enzima debe tener un número finito de sitios catalíticos para el sustrato y cuando están todos ocupados ya no puede aumentar la velocidad de la reacción. esto se explica porque la enzima se ha "saturado" con sustrato (fig. se le designa como reacción de primer orden en virtud de que la velocidad depende de la concentración del sustrato (S) elevada a la primera potencia.8). se obtiene una relación directa y lineal (fig. Al principio. En otras palabras. Para explicar matemáticamente este comportamiento Michaelis y Menten invocaron la existencia de un complejo intermedio enzima-sustrato: K E + S K. a este punto. Después. la velocidad de la reacción aumenta proporcionalmente a la concentración de sustrato.7). la velocidad de la reacción decrece progresivamente hasta que permanece constante (Vmax) aun con elevadas concentraciones de sustrato (cinética de orden cero). ' [ES] K„ • E+P La formación del complejo enzima-sustrato [ES] se dedujo de las siguientes observaciones. a) fibrina tratada con tripsina y lavada posteriormente.de enzima.

10. Keilin y Mann en 1937 comprobaron que la peroxidasa presenta un desplazamiento de las bandas de absorción cuando se adiciona H2O2: K i Peroxidasa + H J O J . Cuanto más baja sea Km. la Km de la enzima era normal pero la Vmax era tres veces mayor. Modelo de Eadie-Hofstee. donde la pendiente negativa es la inversa de Km. la Km es un valor que indica la afinidad de la enzima por el sustrato.8) el valor numérico de la Km puede deducirse en la gráfica en concentración de sustrato [S].9).==? [Peroxidasa . en una curva de saturación (fig. Nótese que si la velocidad (v) se hace igual a . v Km Pe- La observación en el espectroscopio de estas dos reacciones resultó una prueba convincente de que es correcta la hipótesis de la formación del complejo [ES].comparada con la sacarasa sola.H J O J ] En presencia de un donador de hidrógenos (colorante oxidable) tiene lugar una reacción posterior: [Peroxidasa . La ecuación matemática que define la reacción enzimática es una hipérbola que recibe el nombre de ecuación de Michaelis-Menten: _ Vmax [S] Km + [S] El valor de Km (constante de Michaelis) que se expresa en moles/litro. Por otro lado. Debido a que en la práctica la determinación de Km a partir de la curva de saturación de Michaelis-Menten no es muy precisa.H 2 0 2 ] + R-H 2 roxidasa + 2 H 2 0 + R K3 aquejada de hiperuricemia y gota. en este sencillo modelo.¿ . Así.I Al En términos prácticos. Otra transformación a la gráfica de Michaelis-Menten que permite calcular con mayor precisión la Km es la ecuación de Eadie-Hofstee: V v [S] ~~Km + Km. un paciente excretaba tres veces la cantidad normal de ácido úrico por día y tenía también niveles elevados de fosforribosil pirofosfato (PRPP) en eritrocitos. 4. la actividad de la enzima se puede separar en dos fases. 4. Esta naturaleza bifásica se demuestra en el siguiente ejemplo clínico: en una familia Vmax Km La gráfica obtenida se muestra en la fig. Las dos constantes de la ecuación de Michaelis Menten. mayor es la afinidad. ya que la Vmax se hace asintótica. . resulta de las constantes de velocidad. Por tanto.. 4. la Km se hace igual a [S] en la ecuación de Michaelis-Menten. 1 Vmax [S ] + 1 Vmax y = ax + b La gráfica que se obtiene es la de Lineweaver-Burk o del doble recíproco (fig. es necesario tomar el recíproco de la ecuación y transformarla en una línea recta: i . fijación del sustrato seguida de su modificación química.Vmax. cuando la velocidad es la mitad de la velocidad máxima. Los ensayos indicaron que la actividad PRPP sintetasa estaba aumentada tres veces. donde se puede calcular Km en la intersección negativa de la abscisa.. Vmax y Km son únicas para cada enzima. Modelo de Lineweaver-Burk.

1.5. Sin embargo esto no indica si en la muestra la única proteína presente es la enzima. Actividad enzimática La actividad de una enzima se expresa habitualmente en términos de la cantidad de producto formado (o desaparición de sustrato) por cantidad determinada de enzima por unidad de tiempo. La actividad específica se define como el número de unidades de enzima por miligramos de proteína (U/mg proteína). se define como el número .4. Durante la purificación enzimática este valor va aumentando a medida que se van eliminando proteínas contaminantes.2. La unidad estándar de actividad enzimática (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto a 25 °C en condiciones óptimas de ensayo. El antiguo "número de recambio" recientemente sustituido por actividad molecular o molar.

Importancia de las enzimas El estudio de las enzimas en medicina es cada vez más importante. radica en el empleo racional de fármacos. Son múltiples las implicaciones que tienen las enzimas en el origen. Estas determinaciones son tan importantes que han dado lugar a una nueva especialidad: la enzimología clínica. La mayor parte de los fármacos que se utilizan en el tratamiento de enfermedades tienen como mecanismo de acción el modificar la actividad de una o varias enzimas. interacciones farmacológicas). Otras enfermedades se deben a la carencia de cofactores enzimáticos y la administración de ellos produce la rápida curación de estas enfermedades carenciales. sólo se podrán lograr y prevenir en la medida que se conozca el mecanismo de acción de cada fármaco y las múltiples interacciones que pueden ocurrir con las enzimas. pentosuria esencial y muchas otras que se revisarán más adelante). El diagnóstico de muchas enfermedades se puede'realizar con bastante precisión determinando la actividad de ciertas enzimas o isoenzimas que son indicadores de la destrucción tisular de órganos específicos. "enfermedades moleculares".1. ya sea. como sucede con las vitaminas (procoenzimas) y algunos oligoelementos. esta práctica se conoce como enzimoterapia. 4. Concepto de enzima. directa A+B sustratos . La eficacia del tratamiento terapéutico y la magnitud de las reacciones indeseables (reacciones secundarias. En ocasiones son las propias enzimas las que se usan para el tratamiento de enfermedades. fenilcetonuria. no competitivo. los productos de la reacción directa (que procede hacia la derecha) son los sustratos de la reacción inversa (que procede hacia la izquierda). Estos errores están codificados en el genoma y se denominan: "errores innatos del metabolismo". Otra importante vinculación de las enzimas con la medicina. actuando como inhibidor enzimático competitivo. contraindicaciones. son ejemplos del uso de enzimas como fármacos. El empleo de enzimas proteolíticas para el tratamiento de hematomas y de enzimas digestivas en casos de dispepsia. "enfermedades hereditarias" o "enfermedades bioquímicas". el producto de una reacción ca- . El empleo de enzimas inmovilizadas es otra posibilidad de terapia cuando hay carencia de enzimas en un organismo evitando así las reacciones de intolerancia y asegurando la estabilidad y las condiciones óptimas para la actividad catalítica. secuestrando o liberando cofactores o induciendo la biosíntesis de algunas enzimas.1. Dado que muchas reacciones son reversibles. el sustrato (S) que es la molécula sobre la que actúa la enzima y el producto (P) molécula o moléculas resultantes de la acción de la enzima sobre el sustrato. diagnóstico.4. tratamiento y prevención de enfermedades. sustrato y producto En una reacción enzimática se identifican tres componentes: la enzima (E) específica de la reacción. inversa C+D productos En reacciones secuenciales de una vía metabólica. precauciones. acompetitivo o mixto. Es indudable que la enzimoterapia tiene un futuro promisorio con las técnicas de ingeniería genética que permiten introducir la información genética para la síntesis de la proteína ausente o defectuosa utilizando plásmidos o partículas viriformes.1. albinismo. que es el área de la medicina que utiliza las enzimas como auxiliares diagnósticos.2. Muchas enfermedades se deben a la carencia o anormalidad en la síntesis de una determinada enzima (galactosemia.

600 1.1. con un sitio catalítico en cada subunidad. concentración del sustrato. 4. de la enzima. 4.de moles de sustrato transformado por un mol de enzima por minuto (mol/min/mol de enzima) (tabla 4.7 Actividad molecular de algunas enzimas Enzima Actividad molar (moles de sustrato por mol de enzima por minuto) 36. La gráfica de velocidad frente a temperaturas (Fig. por minuto. Debido a que muchas enzimas son oligoméricas. Por otro lado.000 5. 4. pero a altas temperaturas la enzima sufre desnaturalización térmica y la velocidad de la reacción disminuye (fig.3.5. Factores físicos y químicos Temperatura. estos factores deben considerarse al realizar los ensayos in vitro para medir actividades enzimáticas en el plasma de un paciente. es imperativo.100 12 1 000 000 000 000 150 actividad enzimática aumenta con los incrementos de temperatura. fuerza iónica. si la fiebre continuara indefinidamente sería fatal. se puede expresar en milika tales (mKat) o microkatales (uKat).11) revela una curva en forma Anhidrasa carbónica Catalasa p-amilasa p-galactosidasa Succinato deshidrogenasa . Hasta que todos los laboratorios de análisis clínicos unan esfuerzos para estandarizar sus informes. Las enzimas a temperaturas bajas muestran un aumento de su actividad al incrementar la temperatura.3. debido a que la Tabla 4. el Katal (Kat) que se define como la conversión de un mol de sustrato por segundo. químicos y biológicos: temperatura. Estos efectos son tan importantes in vivo como en condiciones de laboratorio. Factores que afectan la actividad enzimática La actividad enzimática es afectada por una serie de factores externos e internos que pueden ser físicos.11). Muchos medicamentos actúan como inhibidores competitivos de ciertas enzimas.7). 4. pH.5. la actividad molar se denomina actividad del centro catalítico: número de moles de sustrato por mol de subunidad activa o por sitio catalítico. del producto e inhibidores. La comisión de enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica ha propuesto una nueva unidad. que el médico se familiarice con las reglas locales en el manejo de unidades de actividad enzimática. en el primer caso. la velocidad de los procesos metabólicos crece notablemente durante la fiebre.

El incremento de velocidad al acercarse la temperatura óptima se debe a una mayor energía cinética de los reccionantes (sustrato). Sin embargo. Por el contrario en condiciones de hipotermia muchas reacciones enzimáticas están deprimidas lo que explica la baja demanda de oxígeno de algunos organismos durante periodos de hibernación.12). sin embargo. por ejemplo. la velocidad de reacción decrece por desnaturalización de la e n z i m a . alteran la conformación de la proteína y con ello. los valores altos o bajos de pH (ácidos o alcalinos) provocan desnaturalización de la enzima (fig.8 Valores óptimos de pH para algunas enzimas . se duplica la velocidad de la reacción por cada 10°C de aumento en la temperatura. la labilidad de la mayoTabla 4.de campana con un óptimo entre 40 y 45 °C para enzimas humanas. las muestras de sangre son primero tratadas con ácidos como el tncloroacético. muestran un (Qio) • 2. las enzimas poseen un punto isoeléctrico en el que su carga eléctrica es cero. pH. Muchos procesos fisiológicos. El pH óptimo de la mayoría de las enzimas se localiza entre los valores de 5 y 9. la pepsina o la arginasa son activas a valores depH alejados de este óptimo (Tabla 4. no es el pH de máxima actividad de la enzima (pH óptimo). Pb. El factor que resulta por cada 10°C de incremento en la temperatura se denomina coeficiente térmico (Qio) y en las reacciones químicas habituales es de alrededor de 2. Los cambios de pH afectan profundamente el carácter iónico de los grupos funcionales de la enzima y. por lo tanto. Por arriba de la temperatura óptima. Además de los efectos puramente iónicos. algunas enzimas. o sea. el sitio catalítico.8). Esta propiedad es útil en el laboratorio clínico. el pH del punto isoeléctrico. Por ser proteínas. Hg) sobre la actividad enzimática se debe a la acción desna- turalizante sobre las proteínas en general. la frecuencia de contracción de un corazón extirpado. denominada temperatura óptima. L a s e n z i m a s de microorganismos adaptados a vivir en aguas termales muestran temperaturas óptimas cercanas al punto de ebullición del agua. por ejemplo. sales y metales pesados (Ag. fosfotúngstico y otros para desnaturalizar y precipitar proteínas. El efecto nocivo de las radiaciones. 4.

13). 4. Este es un hueco molecular en la estructura terciaria de la enzima con tres puntos de apoyo próximos entre sí (tres aminoácidos) aunque en la estructura primaria no estén próximos (fig. existe una zona determinada donde se combina con él sustrato al que se llama sitio activo o sitio catalítico. Por ejemplo. Inhibición competitiva. Quizá la prueba más evidente de la localización de sitios activos proviene de estudios con inhibidores.5. Inhibidores enzimáticos Aunque se requiere la molécula completa de la apoenzima para su actividad catalítica. Está dada por una molécula parecida estructuralmente al sustrato (isostérica) que se une al sitio catalítico pero no se transforma.000) respecto al peróxido de hidrógeno (PM 34). Pueden afectarse ciertos aminoáci- dos de una enzima sin que ello altere su actividad catalítica siempre y cuando no se afecten los involucrados en el sitio activo. Existen diferentes tipos de inhibidores enzimáticos: competitivos.3. Un inhibidor enzimático es cualquier agente químico capaz de disminuir la velocidad de una reacción sin desnaturalizar la enzima.2.ría de las enzimas a estos agentes desnaturalizantes permite determinar si una reacción es catalizada por una enzima. no competitivos e incompetitivos. La magnitud de la in- . Los inhibidores son compuestos que tienen la capacidad de unirse a enzimas de tal forma que impiden la combinación enzima-sustrato. El peso molecular de la mayoría de los sustratos es muy pequeño comparado con el de las enzimas. Esta molécula forma un complejo reversible con la enzima (El) que compite continuamente con el sustrato por el sitio catalítico. 4. la catalasa (PM 250.

Los animales superiores y muchos microorganismos son incapaces de sintetizar algunos compuestos necesarios para su supervivencia. Si denominamos metabolitos a los sustratos fisiológicos presentes o producidos en el metabolismo celular. el succinato y el inhibidor. Esto se puede ver en la gráfica de Michaelis-Menten y en la de LineweaverBurk (fig. son parecidos (fig. Es decir. serán antimetabolitos. Aquellos organismos que requieren ácido fólico pero que no lo puedan sintetizar a partir de PABA. Inhibición no competitiva. sin embargo. Estos compuestos pueden ser aminoácidos. vitaminas. cuyo sustrato natural. La investigación de los antimetabolitos se inició con la observación de Woods en 1940. La inhibición solo depende de: a) la concentración del inhibidor y b) la afinidad del inhibidor por la enzima. Este crecimiento bacteriano puede inhibirse con antimetabolitos como las sulfas.hibición dependerá de: a) la concentración de inhibidor. Dado que sustrato e inhibidor compiten por el mismo sitio de la inzima. no se afectarán por sulfas. por lo que estos adquieren la categoría de nutrimentos esenciales. Los organismos utilizan ciertos metabolitos y enzimas para sintetizar estos compuestos esenciales. Ejemplos de inhibición competitiva es la que se realiza al administrar ciertos fármacos.15). Toda o gran parte de la farmacoterapia moderna está basada en los conceptos de inhibición enzimática. b) la concentración de sustrato y c) las afinidades relativas (Km) entre inhibidor y sustrato por la enzima. etc. La utilización eficaz de las sulfas para combatir infecciones en el hombre depende de este hecho. lo utilizan como metabolito para sintetizar ácido fólico. La Km que se obtiene experimentalmente es denominada Km aparente: la Vmax no varía. 4. 4. quien comprobó que la inhibición del crecimiento bacteriano por sulfas era contrarrestado por ácido paraaminobenzoico (PABA). En . la Km muestra un incremento aparente en presencia del inhibidor. Los microorganismos que necesitan PABA para su crecimiento. ácidos grasos. aquellos que impiden el aprovechamiento y utilización de los metabolitos naturales debido a su parecido estructural. Otro ejemplo es la inhibición de ciertos tumores por 5-fluorouracilo y la de algunos virus como el herpes labial por yododesoxiuridina. las sulfanilamidas no son dañinas a las dosis que inhiben a las bacterias. malonato. Dado que el hombre adquiere folato en forma exógena. Un ejemplo muy conocido es la inhibición competitiva de la succinato deshidrogenasa. Este tipo de inhibición es irreversible aun cuando se aumente la concentración de sutrato. estas enzimas pueden inhibirse por medio de antimetabolitos. Muchos antimetabolitos ejercen su acción a nivel de coenzimas o grupos prostéticos como los antifólicos como el metotrexate o alguna antivitaminas como la oxitiamina o la oxipiridoxina. no existe relación entre el grado de inhibición y la concentración de sustrato.14). El grado de inhibición competitiva es proporcional a la concentración de inhibidor (I). un aumento en la concentración de sustrato en presencia de una concentración fija del inhibidor llega a superar la inhibición.

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4. En la inhibición no competitiva no se altera la Km pero sí la Vmax (fig. Los iones fluoruro y oxalato inhiben enzimas que requieren Ca+2 o Mg+2. 4. En otros casos. El inhibidor no competitivo puede ser unamólecula(Ii) que no se une en el sitio activo sino cerca de él. Estrictamente. La modificación en la gráfica de Lineweaver-Burk de la inhibición incompetitiva es la que se observa en la fig. Se presenta sobre todo cuando hay más de un sustrato en la reacción. Inhibición incompetitiva o acompetitiva.16). son inhibidas por compuestos que forman complejos con el metal como el cianuro o el H2S. los productos de la reacción son inhibidores específicos de la reacción enzimática. 4. Un ejemplo de inhibición por producto lo tenemos en la deshidrogenasa láctica (LDH) de la cual existen dos isoenzimas particulares: en el músculo predomina la isoenzima M4. o incluso puede ser un análogo del sustrato (I3) pero que no puede ser desplazado por altas concentraciones del sustrato. el sustrato puede inhibir o activar su propia reacción (fig. que contienen hierro como grupo prostético. El diisopropilfluorofosfato (DIPFP) inhibe enzi- mas con grupos funcionales oxidrilo (SerOH) como la colinesterasa.18. En ésta.19). la formación del complejo enzima-inhibidor puede o no ocurrir en el sitio activo de la enzima. en corazón predomina la isoenzima H4 que es inhibida por producto (lactato). un agente que reacciona con estos grupos es la yodoacetamida (I-CH2—CO-NH2): E-SH+I-O^-CO-NHj -* E-S-CH^-CO-NHj+HI Enzimas como la peroxidasa y catalasa. 4. que no es inhibida por producto. Algunas enzimas tienen grupos sulfhidrilo (-SH) esenciales para su actividad. pero que provoque un cambio de conformación en la enzima de suerte que ésta pierda su actividad catalítica (fig. puede ser un inhibidor (I4) que no intervenga en la formación de ES.17). puede unirse a uno de los tres puntos esenciales del sitio activo (I2). el inhibidor se puede combinar con la enzima (El) o con el complejo enzima-sustrato ya formado (EIS) y la reacción puede retrasarse pero no impedirse. Esta particularidad permite que en corazón se in- .contraste con la inhibición competitiva. Es una forma de inhibición no competitiva pero reversible.

y los productos de ésta son sustratos de otra enzima y así sucesivamente hasta llegar al llamado producto final. Los iones calcio inhiben no competitivamente muchas fosfatasas acidas. pero no a la enzima prostática. la característica secuen- .6 REGULACIÓN ENZIMÁTICA En el tubo de ensayo. productor de energía. desde el punto de vista clínico. riñon y bazo. Sin embargo. Esta es una ventaja fisiológica que garantiza que el corazón tenga un aporte constante de energía para la contracción (ver unidad de Bioenergética). Aunque todas las reacciones catalizadas por enzimas son reversibles en el tubo de ensayo. en la célula. de aquí la necesidad de agregar quelantes a muestras de sangre destinadas a este ensayo. 4. pero tiene poco efecto sobre las fosfatasas acidas de eritrocitos. El ácido L-tartático inhibe competitivamente la actividad de la enzima prostática. las enzimas funcionan en un sistema cerrado y se acumula el producto de la reacción. El suero contiene enzimas como las fosfatasas acidas producidas por diferentes tejidos. la cual puede presentar ramificaciones que constituirán otras vías metabólicas. hiba la LDH por lactato y el piruvato se derive al ciclo de Krebs. El formaldehído al contrario. La secuencia de reacciones entre un sustrato inicial y su producto final se denomina vía metabólica. El etanol y ciertos narcóticos son también inhibidores no competitivos de la fosfatasa acida. hay una producida por la próstata.Figura 4. inhibe la de eritrocitos. lo cual debe tomarse en cuenta al interpretar los resultados. que se eleva en el carcinoma prostético. en la célula. Existen algunas aplicaciones prácticas. laelis-Menten (a) y Lineweaver-Burk (b). los productos de la reacción no se acumulan ya que son utilizados como sustratos de otra enzima. de la inhibición enzimática. hígado.17 Inhibición no competitiva.

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A la inhibición alostérica se le llama también inhibición por producto final. El estado estacionario equivale al concepto de homeostasis. de . reacciones que son.21). como cualesquiera otra. en equilibrio dinámico (estado estacionario). Uno de los primeros ejemplos de regulación fue la síntesis de CTP (citidina trifosfato) a partir de aspartato y carbamilfosfato (fig. de isos=igual). llamada enzima limitante de la vía.6. Estas moléculas se denominan efectores. temperatura externa. por tanto. Pardee. tamaño y distribución de cargas. en su mayoría. modificadores o moduladores. por lo general. que no afecta la velocidad enzimática. efectores alostéricos. 4.1. esencial para entender el mecanismo de homeostasis celular y para comprender a nivel molecular las enfermedades. actividad física. por retroalimentación o regulación retroactiva ("feedback"). etc. puede impedir la inhibición por CTP o UTP. 4. la cual sigue la ley de acción de masas. El carácter dinámico de los organismos vivos establece que el verdadero equilibrio metabólico se alcanza sólo con la muerte de la célula. Jacob. pero que no se modifican por la acción enzimática. catalizadas por enzimas. La regulación metabólica de una vía tiene lugar mediante la modulación de la actividad enzimática de una o más enzimas clave de la ruta. Regulación alostérica La actividad catalítica de algunas enzimas reguladoras es afectada por ciertas moléculas que producen un cambio en la actividad enzimática. 3) el ATP. la aspartato transcarbamilasa (a). (fig. propuesto por Claudio Bernard a finales del siglo XIX. Monod. estos tienen poca o ninguna semejanza estructural con el sustrato. esto como ya se mencionó se considera inhibición competitiva o isotérica. que indica que los organismos mantienen su medio internoconstante a pesar de las amplias variaciones en alimentación. en 1963 observó esta falta de relación estructural inhibidor-sustrato y propuso denominar a este tipo de moléculas. disminuye su velocidad.cial de las vías metabólicas hace que el flujo del metabolismo celular sea irreversible y permanentemente dinámico. se inhibe específicamente con CTP y UTP. Un efector alostérico cambia la conformación de la enzima. estudiaron este tipo de inhibición y la llamaron inhibición alostérica (allos=otro) en virtud de que el sitio regulador es distinto del sitio activo (isostérico. Se considera que la acción de CTP y UTP ocurre en un sitio regulador distinto del sitio catalítico porque: 1) CTP o UTP y aspartato difieren mucho en estructura. 4. productos finales del proceso. La célula viva es un sistema abierto. Conviene distinguir este tipo de inhibición con la inhibición por producto. quizá por competencia con el sitio regulador y 4) pueden fraccionarse dos subunidades una que une aspartato y otra que une CTP o UTP. obedecen esta ley. Si a la reacción: Glucosa -6-P + H 2 0 -» Pi + glucosa se le agrega inicialmente glucosa libre o fosfato. mantenido por un flujo unidireccional de metabolitos.20). En un sistema tan complejo como la célula debe haber mecanismos de regulación o control de la multitud de reacciones simultáneas que ocurren. Monod y Changeaux. En todas las áreas de las ciencias biomédicas se encuentran ejemplos de regulación normal o anormal: muchas células cancerosas exhiben anormalidades en la regulación de sus enzimas. que generalmente corresponde a la primera enzima. 2) la inhibición por CTP o UTP puede abolirse sin pérdida de actividad catalítica. El conocimiento de los factores que regulan la acción de las enzimas es. Las reacciones enzimáticas. La primera enzima del proceso de síntesis de CTP.

Los efectores alostéricos positivos (+) incrementan la afinidad enzima-sustrato y los efectores alostéricos negativos (-) hacen lo inverso. El sitio alostérico donde se une el efector positivo se conoce como centro activador. Una enzima alostérica. es una en- . El efector negativo se une a un centro inhibidor.manera que cambia la afinidad hacia el sustrato.

no poseen la REACCIÓN Figura. se convierte en el sustrato de la subsiguiente reacción B metabolito 4. denominado metabolito.1). 4.1. sin variar las propiedades termodinámicas del sistema.4. La función de un catalizador (inorgánico o enzima) consiste en disminuir la energía de activación. tiene que alcanzar un nivel energético superior o estado de transición antes de convertirse en un producto (B) con un nivel energético co- rrespondiente al estado final.13. un sustrato (A) con determinado nivel energético. 4. las moléculas reaccionantes deben alcanzar un nivel de energía suficiente para vencer la barrera energética y entrar al estado de transición. Catálisis enzimática Se ha señalado que una enzima incrementa la velocidad de la reacción química pero sin modificar la constante de equilibrio ni el sentido de la reacción. lo que conduce a acelerar la reacción debido a que los reactantes pueden alcanzar más fácilmente el estado de transición (fig.1. conocido como estado inicial. . a diferencia de los catalizadores biológicos. En un sistema catalizado por una enzima.talizada por una determinada enzima. Energía de activación de una reacción no catalizada (I) y una reacción catalizada (II).1. 4. Funciones generales 4. Para que la reacción tenga lugar.1.3. Catalizadores inorgánicos y biológicos Los catalizadores inorgánicos son generalmente átomos en estado iónico o metales con propiedades similares a las atribuidas a un catalizador biológico pero. es decir. La diferencia entre la energía libre de los reactantes y el estado de transición se denomina energía de activación.

22 Representación esquemática de la regulación alostérica. a las del sitio alostérico. La mayoría de las enzimas alostéricas son oligoméricas. el efector afecta la Km pero no la Vmax. . Las enzimas alostéricas se dividen en dos clases según la influencia del efector alostérico sobre la Km y la Vmax. Las enzimas alostéricas permiten el control fino de la actividad metabólica mediante pequeñas fluctuaciones en el nivel de sustratos. esta enzima posee dos protómeros catalíticos y tres o cuatro reguladores. En la clase K. La cinética de interacción entre sustrato. Anteriormente se ha discutido. a = activador. 4. En la hemoglobina el centro de fijación del oxígeno de cada subunidad corresponde al centro del sustrato y no a un sitio alostérico. indicando aumento de la Km con pérdida de afinidad enzima-sustrato. el efector alostérico abate la Vmax sin afectar la Km aparente. en el capítulo de proteínas de transporte. Es frecuente la confusión entre los términos de alosterismo y coopera ti vidad. En el ejemplo de la aspartato transcarbamilasa. S = sustrato. enzima e inhibidor alostérico sigue una curva sigmoidea. Figura 4. teóricamente. en la práctica sólo se han encontrado dos enzimas alostéricas monoméricas: ribonucleósido difosfato reductasa y piruvato -UDP-n-acetil-glucosaminatransferasa. La cooperatividad se define como la influencia que tiene la fijación de un ligando a un protómero sobre la fijación del ligando a un segundo protómero de una proteína oligomérica. i = inhibidor. En presencia de un efector positivo se alcanza la 1/2 Vmax a una concentración menor de sustrato y se desplaza la gráfica de Michaelis-Menten hacia la izquierda (fig. el cambio conformacional que induce el oxígeno sobre los protómeros de hemoglobina. Aunque una enzima monomérica puede. por lo tanto.zima cuya actividad en el sitio catalítico puede ser modulada por la presencia de efectores en los sitios alostéricos (fig. el sitio catalítico radica en subunidades diferentes.23). Para las enzimas de la clase V. Los efectos alostéricos negativos desplazan la curva hacia la derecha. técnicamente no es un efecto alostérico. 4.22). la cooperatividad en la fijación de oxígeno a la hemoglobina. experimentar efecto alostérico.

e inhibidores (I). 4. 4.una enzima). se muestran los diferentes sitios de unión para sustrato (S) activadores (A). 4. En este paciente. inducibles. Los estudios iniciales sobre la regulación de la síntesis de proteínas enzimáticas permitieron reconocer tres tipos de enzimas: constitutivas. GDP y 2. se encontró que la PRPP sintetasa tenía una Km y Vmax normales. se ilustra en el estudio de un paciente con gota cuyos eritrocitos tenían altos niveles de fosforribosilpirofosfato (PRPP).2. El hecho de que los centros inhibidores y activadores alostéricos están separados entre sí como del centro catalítico. Puesto que los inhibidores alostéricos actúan en un sitio diferente (alostérico) el modelo cinético ya no es válido. y reprimibles.2. En la fig.24 que ilustra el caso. no es adecuado utilizar los términos competitivos y no competitivos con sistemas enzimáticos absteneos porque el mecanismo del efector de un inhibidor alostérico sobre una enzima V o K es diferente al de un mecanismo competivo o no competitivo sencillo. Los productos finales endógenos de la ruta (ATP. probablemente debido a una re- .1. Enzimas constitutivas y enzimas inducibles Las enzimas constitutivas están presentes en concentraciones constantes durante la vida de la célula. Aparentemente una mutación había producido un cambio en el centro inhibidor (I). Sin embargo. Se ha mencionado al inicio de la unidad III que la expresión de la función genética se realiza a través de las enzimas (un gene . ADP.No obstante que las enzimas K dan gráficas parecidas a la inhibición competitiva. Represión e inducción El mecanismo de control alostérico de la actividad enzimática es también aplicable a sistemas de regulación a nivel génico. GTP) no eran capaces de inhibir alostéricamente a la enzima y se acumulaban el PRPP y el ácido úrico. mostraba menor sensibilidad a los inhibidores alostéricos normales AMP.6.6. 3DPG.

y puede fabricar todos sus constituyentes esenciales a partir de este medio. (3-galactosidasa y tiogalactósidotransacetilasa (fig. Cuando estos microorganismos se transfieren a un medio con lactosa. El fenómeno se denomina represión enzimática coordinada. Uno de los sistemas mejor estudiados es el que conduce a la síntesis de histidina en Salmonella. el cultivo sólo contiene trazas de P-galactosidasa.24 Inhibición alostérica o por retroalimentación. no responden al estímulo inductor. Con este tipo de control la célula no invierte energía en sintetizar enzimas para actuar sobre un sustrato no presente. en breve empiezan a aparecer cantidades apreciables de galactósido permeasa. que contiene glucosa y sales. El tercer tipo de enzimas es el de las reprimibles. coli crece en un medio simple. La síntesis de estas enzimas se suspende si está presente en abundancia el producto final de la vía metabólica donde funcionan. coli. son aquéllas cuya concentración en la célula normalmente es baja y a medida que se requiere mayor cantidad de enzima. como úni- ca fuente de carbono. 4. . En estas condiciones. Es decir. la velocidad de síntesis aumenta con respecto a su degradación. generalmente son las enzimas de las principales vías metabóücas como las de la vía glucolítica. la inducción implica síntesis de novo lo cual se ha demostrado puesto que sistemas donde la síntesis de proteínas está bloqueada. más estudiado. El aminoácido histidina se forma por una secuencia de 10 reacciones a partir de PRPP. lación constante entre síntesis y degradación de la enzima. Las enzimas inducibles.Figura 4. Si se quita la lactosa del medio y se vuelve a dar glucosa. es el sistema de la P-galactosidasa de E. Usualmente E. se suspende la síntesis de dichas enzimas.25). Él ejemplo de inducción de síntesis enzimática. El fenómeno se denomina inducción enzimática coordinada. Cuando se agrega histidina al medio se reprimen los 15 genes que codifican para 9 enzimas.

Cuando se dan inductores como la lactosa o análogos se deforma el represor. con un efecto inmediato sobre la ruta metabólica. F. Y y A). En general. Así. por lo tanto. 4. un dímero con PM de 45.Debe subrayarse que la inducción y represión son mecanismos de control sobre síntesis de enzima y no sobre actividad de la enzima. y este complejo se une al sitio promotor en el DNA de tal manera que la RNA polimerasa puede iniciar la síntesis de RNAm. Así. Teoría del operan En 1961. la síntesis de RNAm transcurre desde el operador a través del operón completo. Células con glucosa disponible tienen bajos niveles de AMPc. el AMPc se une a una proteína catabólica activadora del gene (CAP. El amino terminal de la p-galactosidasa se sitúa del lado del operador. Por este trabajo y otras contribuciones recibieron el premio Nobel de medicina 1965. llamado regulador que codifica para una proteína represora del gene operador. y el operón Lac se transcribe y traduce. Coli.000 daltones que se sintetiza continuamente. la expresión del operón Lac requiere del inductor (lactosa) y de AMPc. es distinto de la inhibición por producto final (retroacción o feedback). la regulación de las enzimas involucradas en la inducción y represión tiene lugar a nivel de la transcripción. de E. el AMP cíclico (AMPc). Para mayor comprensión de estos aspectos se recomienda revisar los conceptos genéticos de la unidad IX.3. Al inducir con lactosa. que a su vez codifica para las enzimas coordinada- mente inducidas o reprimidas se denominan genes estructurales. Los genes que transcriben un RNA mensajero (RNAm) policistrónico. en el cromosoma involucrado. consta de 3 enzimas inducibles controladas por 3 genes estructurales (Z. Este fenómeno de polaridad se ha encontrado para el operón del triptófano (operón Tri) y otros. El control del operón Lac tiene otro elemento efector positivo. De acuerdo a su teoría. La proteína represora que actúa sobre el operador y que impide la acción de la RNA polimerasa y por tanto. la retroinhibición es un mecanismo de control ejercido a corto plazo. la formación del RNAm de todo el operón Lac es un tetrámero de casi 150.26). mientras que la represión necesita más tiempo pero con efectos permanentes al reducir el número de moléculas de enzima. El modelo presupone que la transcripción de genes estructurales está controlada por un gene operador y un sitio promotor (donde se une la enzima RNA polimerasa). uno con otro.000 daltones. Jacob y J. se puede localizar en un sitio distante del gene operador (fig. Otro gene. Por "mapeo" genético del cromosoma involucrado se ha demostrado que estos genes estructurales se localizan adyacentes.6. El operón Lac. formando una unidad funcional llamada operan. 4. Monod propusieron un modelo ingenioso para explicar la inducción y represión de la síntesis enzimática. . es uno de los más estudiados.

C. El operón His. Esto representa también un ahorro de energía para la célula ya que si existe histidina. En sistemas reprimibles. L = lactosa. E. histidina).27).Figura 4. A. coli. 4. que actuando coordinadamente. se supone que también se .) que codifican para 9 enzimas.26 Inducción enzimática en el operón LAC de E. CAP = proteína catabólica activadora del gene operador. D. de Salmonella typhimurium coordina la expresión de genes estructurales (G. se combina éste con la proteína y se forma una sustancia efectivamente represora que bloquea al gene operador (fíg. Cuando se da el correpresor (por ejemplo. el gene regulador elabora una proteína represora que regularmente no interactúa con el operador. La histidina es también un inhibidor alostérico de la primera enzima de la secuencia biosintética. F. B. participan en la biosíntesis de histidina. I. no tiene objeto la producción de enzimas para su síntesis. H. Aunque los genes y mecanismos reguladores mencionados sólo han sido demostrados en procariotes.

posteriormente se vislumbró la posibilidad de emplearlas en el tratamiento de algunas enfermedades. En esta última. Como reactivos en el laboratorio clínico La disponibilidad de enzimas puras a precios razonables ha convertido a algunas de ellas en reactivos de enorme valor para el laboratorio de análisis. los mecanismos de regulación son más complejos y tienen separados físicamente la transcripción de los genes de la traducción. Aspectos Clínicos de las Enzimas La aplicación clínica de las enzimas anteriormente se restringía a su empleo como auxiliares en el diagnóstico.1. campo que está en exploración muy activa. Las enzimas se utilizan también como reactivos clínicos para detectar otro tipo de moléculas cuyas concentraciones son bajísimas en el plasma o tejidos. Sin embargo. Además.7. 4. los RNAm eucarióticos son monocistrónicos en contraposición a los RNAm policistrónicos de las células procariotas. hay que ser prudentes en extrapolar los conocimientos adquiridos de una a la otra clase de células (eucariotes). Puede determinarse enzimáticamente la concentración de un .presentan en organismos eucariotes.

Este escape de enzimas de las células al plasma se produce también cuando mueren éstas como ocurre en el infarto . 4. Para determinar alcohol etílico. líquido amniótico. jugo gástrico.7. Cuando el NAD+ se reduce. como la determinación de enzimas en líquidos extracelulares (plasma y suero. Si las células permanecen intactas. se producen daños en las membranas celulares que permiten el "escape" de enzimas a la circulación. Como elementos diagnósticos Una importante función de un laboratorio clínico.7. En los últimos años existen disponibles comercialmente las erizarías inmovilizadas para usarse en sistemas de determinación automatizados. cuando el NADH se oxida. etc. 4. 4. o incluso por el proceso de envejecimiento celular normal. en virtud de que NADH y NADPH absorben a 340nm mientras que NAD+ y NADP+ no absorben a esa longitud. oxidación. Muchas determinaciones enzimáticas pueden acoplarse con reacciones que utilizan NAD+ o NADP+ como coenzimas.2. y en la selectividad y sensibilidad de la respuesta antígeno-anticuerpo. se ha ideado un método altamente específico llamado enzimoinmunoensayo (EIA).) se sintetizan en las células y la mayoría ejerce su función en su interior. Enzimas órgano específicas En condiciones normales.1. Con este ensayo se puede determinar urea. y en algunos tejidos o células sanguíneas. líquido cefalorraquídeo. Aprovechando la especificidad enzimática e inmunológica por un sustrato. La glucosa se determina oxidándola a gluconato en presencia de la enzima glucosa oxidasa. es la de cuantificar las alteraciones bioquímicas en el individuo enfermo. sin embargo. orina. las enzimas intracelulares no pasan al torrente sanguíneo. transaminación.2. líquido sinovial). el H2O2 oxida la O-dianisina a un compuesto colorido (principio de la glucocinta). toxinas bacterianas. con H2O2 como subproducto. basado en el principio de la unión competitiva. se convierte éste en acetaldehído por medio de la enzima deshidrogenasa alcohólica (ADH): el aumento en absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentración de alcohol. como resultado de una lesión celular producida por agentes infecciosos. disminuye la densidad óptica (fig. al acoplar la acción de la enzima ureasa con la glutamato deshidrogenasa (GDH).28). El fundamento de este método es similar al radioinmunoensayo (RÍA).compuesto en una mezcla cuando se dispone de una enzima específica capaz de transformarlo rápidamente en un producto. Acoplando la reacción con peroxidasa. se incrementa proporcionalmente la densidad óptica. las enzimas involucradas en los procesos metabólicos (glucólisis. fosforilación.

Una de las aspiraciones del diagnóstico clínico es precisamente lograr la asociación de una enzima específica en plasma o sangre con cada tejido o situación patológica. la creatinfosfocinasa y la fosfatasa alcalina (revisar subcapítulo 4. Las isoenzimas que han sido estudiadas para aplicaciones diagnósticas son la deshidrogenasa láctica. la fosfatasa acida de próstata. disolución de la fibrina (plasmina) y modificación de quilomicrones (lipoproteinlipasa). esto es poco probable ya que el metabolismo de muchos órganos es muy parecido.4).2. Isoenzimas El interés médico por las isoenzimas fue estimulado por el conocimiento de que los . Perfiles enzimáticos El plasma circulante contiene cantidades apreciables de enzimas que tienen su origen en las células de diferentes tejidos del organismo. éstas pueden dividirse en tres grupos: 1) Enzimas que realizan una función específica en el plasma llamadas también enzimas plasmáticas funcionales.2.3. no obstante. 4. fosfatasa acida y fosfatasa alcalina. y la fosfatasa alcalina de osteoblastos.2. 2) Enzimas elaboradas por células especiales y secretadas a un conducto o dentro de un tejido especial.7. Se encuentran en alta concentración y están involucradas en funciones como la coagulación de la sangre (trombina y otras).de miocardio y la hepatitis infecciosa. por ejemplo amilasa. En el diagnóstico de la alteración de un órgano específico en un proceso patológico sería ideal que se pudiesen identificar enzimas específicas para cada órgano. 4. Un grado mayor de conocimiento de esta relación se está consiguiendo con el estudio de determinadas isoenzimas. lipasa. sueros humanos contenían varias isoenzimas de la deshidrogenasa láctica y que sus proporciones relativas cambian significativamente en ciertos estados patológicos. la acetilcolinesterasa de eritrocitos.2. En personas normales sanas. las enzimas de origen intracelular están presentes en plasma en cantidades muy bajas pero mensurables.7. Esta correlación ocurre sólo para algunas enzimas. por ejemplo la alcohol deshidrogenasa o la sorbitol deshidrogenasa que son casi exclusivamente de origen hepático.

29). En el último trimestre del embarazo están elevados los niveles de fosfatas alcalina de origen placentario. En otro ejemplo se utiliza la valoración de isoenzimas de la LDH y CPK para determinar la evolución de un infarto de miocardio (fig.3. si se presenta insuficiencia circulatoria debida a insuficiencia cardiaca o choque. Esta enzima se encuentra distribuida en músculo cardiaco. Los niveles de gama-glutamiltransferasa se correlacionan con ingestión de alcohol. ejemplo: hígado y corazón contienen altos niveles de aminotransferasas. esquelético y cerebro.3) Enzimas que realizan su función en las células que las originan y cuyas actividades constituyen el proceso vital celular. Ciertas drogas como difenilhidantoína y barbitúricos pueden inducir la producción de enzimas.4. se elevan notablemente algunas enzimas pero su valoración no permite establecer la causa de la insuficiencia o del paro. ejemplo: las isoenzimas de la LDH (fig. 4. los niveles de TGO están elevados moderadamente en el periodo neonatal. Puede localizarse el tejido dañado para confirmar un diagnóstico de dos formas: a) Por determinación del perfil isoenzimático. a) fisiológicas. como en el recién nacido. contienen otras que interfieren y producen falsas positivas. Se eleva marcadamente en infarto de miocardio. como la fosfata alcalina. Aun cuando los eritrocitos lisados no contengan la enzima por valorar.30). Su cuantificación constituye para el médico una prueba valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico. ejercicio físico intenso. La enzima cataliza la siguiente reacción: CPK CREATINFOSFATO + ADP -* CREATINA + ATP Esta se acopla a otras dos. Aun cuando la enzima sea específica de un tejido particular. Creatinfosfocinasa (CPK). Por ejemplo. y especialmente después de paro cardiaco. accidentes cerebrovasculares. después de cirugía mayor o de un trauma extenso. b) Por valoración de más de una enzima. CPK-2 (MB) y CPK-3 (MM) de músculo. b) inducidas por drogas. Existen causas de elevación no específica de niveles enzimáticos que pueden ser. antes llamadas transaminasa glutámico pirúvica (TGP) y glutámico oxalacética (TGO) pero el hígado contiene más TGP que TGO mientras que en el corazón sucede al revés.7. 4. El segundo y tercer grupo de enzimas se denominan también enzimas plasmáticas nojundonales y su presencia en plasma en cifras mayores que las normales sugiere una velocidad aumentada de destrucción celular. hipotiroidis- . en la misma proporción que la TGO y en distrofias musculares sobre todo la de tipo Duchenne. es un dímero que consta de 3 isoenzimas: CPK-1 (BB) de cerebro. c) elevaciones artificiales. En general las muestras hemolizadas son inadecuadas para valoraciones enzimáticas. se elevan los niveles de LDH-5. cirugía. moderadamente en lesiones musculares. TGO y CPK a partir del músculo esquelético dañado. niveles elevados de ésta en plasma solo indican daño celular pero no el tipo de proceso patológico. Los niveles de fosfatasa alcalina son altos hasta después de la pubertad por la actividad osteoblástica. Alteraciones enzimáticas como causa de enfermedad Muchas enzimas se encuentran en casi todas las células aunque algunas se encuentran predominantemente en ciertos tejidos. para determinar cuantitativamente el NADPH: ATP + GLUCOSA -+ GLUCOSA-6-P + ADP -» 6-p-glucorolactona + GLUCOSA -6-P+ NADP+ NADPH+H+ La enzima CPK.

B: suero normaj. El nivel total de LDH aumenta muy lentamente. trompas de Falopio y músculo. C: paciente con enfermedad hepática. A: paciente con infarto de miocardio. a la CPK2. plasma u orina sobre amilopectina marcada con un colorante azul. moderadamente en casos de úlcera péptica perforada. La enzima está presente en jugo pancreático. . Patrón isoenzimático de CPK y LDH después de un infarto de miocardio.29 Patrones normal y patológico de las isoenzimas de la LDH en suero humano. La amilasa se eleva notablemente (5 a 10 veces) en casos de pancreatitis aguda (en ocasiones en carcinoma de páncreas). Los niveles urinarios se elevan paralelamente a los niveles plasmáticos.Figura 4. CPK3. La isoenzima CPK2 (MB) aumenta hasta un máximo dentro del primer día del infarto. a menos que exista insuficiencia renal. uremia grave y cetoacidosis diabética severa. y artificialmente en muestras hemolizadas. dentro de las 12-24 h junto con un incremento de CPK2. a-amilasa (AMS). mo (la tiroxina afecta el catabolismo de la enzima) alcoholismo (miositis alcohólica) episodios psicóticos agudos.30. Se excreta por orina en virtud de su bajo peso molecular. obstrucción intesti- Fig. El incremento de LDH 1 y LDH 2. 4. El ensayo se realiza por acción de suero. es diagnóstico del infarto de miocardio. colecistitis. sigue más lenta alrededor de un día. saliva. La intensidad del color azul liberado es proporcional a la cantidad de enzima.

nutrición). Cofactores Relación entre vitaminas y coenzimas. Las vitaminas del complejo B forman parOtros componentes de la enzima con bajo te de numerosas coenzimas. Coenzimas de oxidorreducción. Los nicotkiamida-adenina-dinucleótido (NAD+). la apoenzima es catalíticamente inacti. áciunidos a la apoenzima se llaman coenzimas.2.2. en las reacciones de para ser activas. 4.vitaminas liposolubles no tienen actividad ra su actividad. una molécula de sustrato es ren. de la nicotinamida.2. (fig.2.1.2). Entre las reacciones catalizadas 4.oxidada (deshidrogenada) y una molécula de va. riboflavina. transaminación. Una enzima puede acelerar una re.2. de los cofactores se denomina apoenzima.alta especificidad de éstos ni la capacidad 4.derivadas de la vitamina nicotinamida son el tán firmemente ligados a la apoenzima. do pantoténico. La coenzima puede considerarse como un No todas las enzimas requieren cofactores cosustrato. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS por enzimas que requieren coenzimas están las de oxidorreducción. .fato (NADP+). da lugar a la holoenzima. pero en las que los requie. 4. cofactores (coenzima o grupos prostéticos) y el nicotinamida-adenina-dinucleótido-fosson en general moléculas pequeñas.4). en las reacciones de completa y activa. 4. Holoenzima y apoenzima de grupo. termostables y no proteicos. que requiere la enzima pa. si es. por ejemplo.2.1. La vitamina C y las cas e inorgánicas. La adición del cofactor a la apoenzima coenzima es reducida (hidrogenada) (fig.1). Cofactores coenzimáticos para disminuir la energía de activación (tabla 4. Las reacciones hiLa parte proteica de la enzima desprovista drolíticas no requieren de coenzimas. tiamina. ácido fólico y cianocobalasi la unión es débil y se separa con facilidad mina. las de transferencia 4. Tal es el caso peso molecular.La mayoría de las coenzimas son formas acción 105 veces más que un catalizador modificadas de las vitaminas (ver unidad de inorgánico. orgáni. de la apoenzima. o grupos prostéticos. coenzimática conocida. las de isomerización y las que forman enlaces covalentes. o sea la enzima De modo similar. el fosfato de piridoxal (PPal) actúa como segundo sustrato en dos reacciones combinadas (fig. 4.oxidorreducción.3).

pH 8. lipasas. En el futuro será posible el reemplazo enzimático por ingeniería genética en individuos con deficiencia genética que afecte la síntesis de una enzima dada. hiperparatiroidismo. osteocarcinoma y osteosarcoma. administración de morfina (espasmo del esfínter de Oddi) y macro-amilasemia. amilasa. En el embarazo se elevan los niveles normales debido a la isoenzima termoestable de la placenta. pancreatectomía y trastornos gastrointestinales. La terapia con asparaginasa se usa en algunos tipos de leucemia adulta. En el carcinoma . Los niveles normales en el adulto provienen específicamente de hígado. glándula mamaria lactante y placenta. eritrocitos. 4. hígado. El principal uso de la valoración es el diagnóstico de carcinoma prostático metastásico. particularmente si es metastásico.4. preparada a partir de estreptococos. se usan en la deficiencia enzimática por pancreatitis crónica. El método usado en la valoración es el de Bassey Lowry-Brock que utiliza la siguiente reacción. en el raquitismo. Normalmente. parotiditis. se elevan los niveles de ACP debido al aumento de células prostáticas ectópicas. Esta enzima activa el plasminógeno el cual se transforma en plasmina que es una proteasa que ataca la fibrina y la degrada. En el capítulo de ácidos nucleicos se estudiarán algunas enfermedades en las que está alterada la codificación de algunas enzimas. con asparaginasa los n i v e l e s de asparagina disminuyen sensiblemente lo que lleva a disminuir la viabilidad del tumor. Fosfatasa acida (ACP). Utilizando fibrinolisina y estreptodornasa (una DNAsa) por vía oral o tópico se puede eliminar el material fibrinoso y purulento de heridas infectadas o necrosadas. cálculos salivales. Aunque es difícil detectar sólo la fracción prostática. Se eleva también en enfermedades óseas con actividad osteoblástica elevada: osteomalacia y raquitismo. En huesos se localiza en los osteoblastos (la enzima es necesaria para los depósitos de fosfato en hueso). en niños de la fracción ósea por la actividad osteoblástica. Varias enzimas proteolíticas como tripsina y quimotripsina al igual que la estreptocinasa. Fosfatasa alcalina (ALP). El método de determinación es similar al de las fosfatasas alcalinas excepto el pH óptimo que es de 5. es útil para disolver coágulos de sangre formados en las extremidades inferiores. su deficiencia o falta de actividad. Se encuentran en hueso. la fosfatasa acida de la secreción prostática drena a los conductos prostáticos y aparece poco en sangre. plaquetas y hueso. enfermedad de Paget. Se encuentra en próstata. embarazo ectópico roto.7. Como agentes terapéuticos Algunas enzimas se han utilizado como medicamentos en la terapia de problemas médicos específicos. es la causa de la enfermedad.5-10 p-NITROFENOLFOSFATO — • p-NTTROFENOL + Pi prostático. hígado. esta fracción tiene la propiedad de ser inhibida por el L-tartrato. La enzima se eleva en enfermedades hepáticas con elementos colestáticos junto con la enzima 5'-nucleotidasa (NTP) que parece tener también origen hepático. nucleasa y celulasas). se utilizan en el tratamiento de la trombosis. Incluye isoenzimas que hidrolizan fosfatos a pH alcalino. pared intestinal. la fosfatasa se eleva aun antes de que aparezcan síntomas de la enfermedad. En virtud de que las células tumorales tienen un requerimiento nutricional de asparagina.nal. Algunas enzimas digestivas (peptidasas. La estreptocinasa.

El NAD (nicotín-adenín-dinucleótido) actuando como cosustrato en una reacción de oxidorreducción COO" I OH-NH9 2 I CH? I CH9 I ¿ COOH Glutamato COO" I CH« I 2 CH« I ¿ COOH oe-Cetaglutarato Fig. i COOH CH-NH9 2 I Alanina c=o COOH I C=0 CH3 Piruvato . 4.3.2.C .C O O ~ II O Piruvato ( Sustrato oxidado ) NAD coenzima oxidada NADH + H + ( coenzima reducida ) Fig.C H L .COO" 0 I OH Lactato ( Sustrato reducido C H3. Transferencia de grupos ámino con PPal (fosfato de piridoxal) como cosustrato. 4. .C H .

se encuentran firmemente unidos a la apoenzima.2.NADP + FAD. el grupo prostético hemo está unido fuertemente y requiere ácidos fuertes para disociarse del citocromo.2. AMP. En los citocromos. Grupos prostéticos Funcionan también como cofactores o cosustratos enzimáticos pero. S-adenosil metionina. ATP. a diferencia de las coenzimas.FMN Acido Lipoico Coenzima Q 4. ADP. El resto serían las coenzimas no nucleotídicas. NADP+. Para la transferencia de H: NAD + . FAD y coenzima A.Clasificación de coenzimas Las coenzimas pueden clasificarse como sigue: Para la transferencia de grupos distintos del H: Uridina difosfato (UDP) Pirofosfato de Tiamina (TPP) Fosfato de Piridoxal (PPal) Coenzima A (CoA-SH) Acido tetrahidrofólico (TH4) Biotina Coenzimas de cobamida (B12) Acido Lipoico S-Adenosil metionina (S AM) Algunos autores clasifican estructuralmente a las coenzimas como: coenzimas nucleotídicas y no nucleotídicas.2. NALV. Otra sería la clasificación funcional que las agrupa en coenzimas vitamínicas y no vitamínicas. Al primer grupo pertenecen los nucleósidos di y trifosfato que participan en reacciones de transferencia como AMPC. ejemplos clásicos de grupos prostéticos son el FAD (flavinadenin-dinucleótido) y el grupo hemo. .

4. son capaces de adsorber moléculas pequeñas en su superfi- cie. lo cual favorece la interacción de los sustratos y su reacción. Tipos: Catalíticos.3. Sin embargo el modelo de Fisher consideraba al sitio catalítico rígido y las proteínas en solución son flexibles Fig.23. propuesto por Émil Fisher en 1894 representaba la interacción sustrato-enzima en términos de la analogía entre llave-cerradura.5. Complementos Algunos cofactores enzimáticos no pertenecen a coenzimas o grupos prostéticos derivados de vitaminas sino que representan elementos minerales por ejemplo. Todas las enzimas. 4.42. la especificidad reside en una determinada región de la superficie enzimática llamado sitio activo (fig. 4. Ajuste inducido por un cambio conformacional en la estructura de la enzima antes y después de la unión del sustrato. .2.3.5).1. 4. Sitio activo de una enzima. Sin embargo. la lisinaoxidasa es una enzima que necesita cobre y la anhidrasa carbónica que requiere cinc. reguladores El modelo original de sitio catalítico para referirse al sitio activo. Sitio activo Una propiedad muy importante de las enzimas es su especificidad.2. por el hecho de ser micelas.

3). enzima tetramérica. 4. la izoenzima H4 predomina en miocardio (Tabla 4. HM 3 y M4 (Fig. La diferencia cinética entre estas dos isozimas se explica en otros capítulos. las isoenzimas y las enzimas alostéricas (Tabla 4.3. ejemplos de este tipo son la piruvato deshidrogenasa con un peso molecular de 4. 4.2. Enzimas oligoméricas e isoenzimas láctica.1. esto se discutirá más adelante al hablar de efectores alostéricos. El caso más ilustrativo es el de la deshidrogenasa láctica. H2M2. Las isoenzimas más estudiadas por sus aplicaciones clínicas son la deshidrogenasa Algunas reacciones requieren de múltiples enzimas asociadas que participan secuencialmente para transformar un sustrato. que modifican la actividad de la enzima al provocar cambios conformacionales en el sitio catalítico. Estas dos subunidades se combinan de cinco formas diferentes para formar cinco isoenzimas: H4. La isoenzima M4 predomina en músculo esquelético y en hígado.3. A este grupo pertenecen algunas enzimas de la glicólisis. Complejos multienzimáticos Existen enzimas que constan de una sola cadena polipeptídica integrando un monómero. H3M. 4. Otro grupo de enzimas contienen dos o más subunidades asociadas por enlaces no convalentes.2. En este modelo. ribonucleasa. al que llamó de ajuste inducido (fig. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS 4.5). tripsina y otras. Este modelo permite también explicar la influencia de otros sitios.8 millones y la sintetasa de ácidos grasos. Nombres sistemáticos y nombres triviales En un principio se designó a las enzimas con nombres triviales según el sitio anatómico Tabla 4. Las isoenzimas difieren en su composición de aminoácidos por lo que sus diferencias están determinadas genéticamente. A este grupo pertenecen la lisozima. 4.2).2 Enzimas oligoméricas Enzimas Número de subunidades PM de cada subunidad peso molecular Total . Las isoenzimas o isozimas son diferentes proteínas con la misma actividad enzimática que se originan en diferentes tejidos y presentan un desplazamiento electroforético diferente. llamados reguladores o aloste'ricos.por esto.4.5. la creatina fosfocinasa y la fosfatasa alcalina. 4. que posee dos subunidades distintas: H (de corazón) y M (de músculo). Koshland en 1967 emitió un modelo del sitio catalítico flexible.6). el sustrato induce un cambio conformacional en la estructura terciaria de la proteína enzimática como hace la mano en el guante.

descarboxilasas.3.1.Estas enzimas catalizan reacciones de oxidación y reducción muy importantes en biología.. el subfíjo asa. proteasas.Isomerasas: y 6.1. la deshidrogenasa alcohólica será la enzima E.C. etc.oxidorreduetasa (E. Más tarde se les dio el nombre según la reacción química catalizada. 1.Transferasas.l.Liasas.. el segundo dígito identifica la subclase. de manera que independientemente del país y el nombre trivial que se le dé en cualquier idioma. cada enzima tiene un número clave de 4 dígitos de manejo interna- cional.C. esteraseis..Ligasas. así las que hidrolizan el almidón (latín amilum).Oxidorreductasas. 1. Después se les denominó añadiendo al nombre del sustrato sobre el que actuaban. El primer dígito identifica la clase a la que pertenece la enzima. la pepsina.de procedencia. El nombre sistemático de la deshidrogenasa alcohólica es alcohol: NAD+. las que hidrolizan proteínas. 4. el segundo porque el dador electrónico es un alcohol. Las enzimas se clasifican en las seis clases siguientes: 1.2.1. Según éste.. tripsina pancreática. etc.1.Hidrolasas: 4.C. 3. 5..) El primer dígito es por ser una oxidorreduetasa.. 2.) basado en el tipo de reacción química y su mecanismo de acción. Clasificación digital de las enzimas En el año de 1961. lipasas. 1. oxidaseis. el tercero la sub-subclase y el cuarto dígito para la enzima específica. adiaseis. las que hidrolizan las grasas o lípidos. amilasa. Con frecuen- . el tercero porque el aceptor es la coenzima NAD + y el cuarto por el número de orden de la enzima.Oxidorreductasas. la Unión Internacional de Bioquímica (UIB) adoptó el sistema de clasificación y nomenclatura propuesto por su Comisión de Enzimas (E.1. como la ptialina. ejemplo: deshidrogenaseis.

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