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4. ESTRUCTURA FUNCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

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ESTRUCTURA, FUNCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

4.1. CONCEPTOS GENERALES Toda reacción química, biológica o inorgánica, es un proceso en el que una o varias moléculas interactúan entre sí para transformarse en otras moléculas siguiendo una dirección determinada por leyes fisicoquímicas (termodinámicas) hasta llegar a un estado de equilibrio: A+B , ) C+D

Existen sustancias llamadas catalizadores que tienen la capacidad de acelerar las reacciones químicas sin alterarse al final de éstas y sin modificar el equilibrio químico; sólo acortan el tiempo en que se alcanza dicho equilibrio. Los catalizadores se dividen en dos grupos: orgánicos e inorgánicos. Dentro de los primeros tenemos las enzimas y en el segundo los iones H + , OH " o metálicos. Las enzimas son moléculas producidas por las células de los organismos vivos con la función específica de catalizar reacciones químicas, las que sin ellas, ocurrirían muy lentamente. Hasta hace pocos años se consideraba que todas las enzimas eran proteínas. Sin embar-

go, recientes investigaciones realizadas por Cech y colaboradores (Cech, T.R., Science, 236, 1532-39 (1987) han demostrado que moléculas de RNA pueden actuar como enzimas con una elevada actividad catalítica. Se ha comprobado experimentalmente que la molécula de RNA L-19 derivada de un intrón de un precursor de una RNAr de un protozoario ciliado actúa como ribonucleasa y como RNA polimerasa. Esta enzima de RNA o RNA enzimático o ribozima muestra las mismas propiedades cinéticas que las otras enzimas tradicionales, un alto grado de especificidad y susceptibilidad a la inhibición competitiva. Este descubrimiento puede tener importantes implicaciones sobre la evolución de las moléculas y puede contribuir a aclarar el mecanismo de acción de los catalizadores. La vida y el crecimiento celular requieren la continua síntesis de macromoléculas acoplada a procesos proveedores de energía. El acoplamiento controlado de las reacciones químicas mediante la acción de enzimas es propiedad única de las células vivas. Entre las miles de sustancias presentes en una célula, las enzimas constituyen la parte más importante de las proteínas celulares. Esencialmente, todas las reacciones bioquímicas son catalizadas por enzimas.

cia emplean coenzimas del tipo del NAD + , NADP + , FAD, ácido lipoico y CoQ como aceptores de hidrógeno; otros aceptores incluyen al grupo hemo y al oxígeno molecular. En este grupo se incluyen deshidrogenasas y oxidasas de gran importancia en los procesos oxidativos de la respiración celular. La catalasa es única en el sentido de que el peróxido de hidrógeno (H2O2) sirve tanto como donador y como aceptor. La catalasa funciona en la célula eliminando el peróxido de hidrógeno que es tóxico. 2.- Transferasas.- Muchos pasos importantes del metabolismo requieren la transferencia de una molécula a otra de grupos ámino, carboxilo, carbonilo, metilo, ácido, glucosilo, o fosforilo. Las coenzimas utilizadas son el tetrahidrofolato (FH4) coenzima A (CoA-SH) y fosfato de piridoxal (PPal). Las aminotansferasas (transaminasas) transfieren grupos amino de un aminoácido a un cetoácido aceptor, dando lugar a la formación de un nuevo aminoácido y un nuevo cetoácido. Las cinasas catalizan la transferencia de un fosfato del ATP a grupos aceptores, alcohol o ámino, como ejemplo tenemos la glucocinasa que forma glucosa-fosfato. La síntesis de glucógeno depende de glucosiltransferasas. 3.- Hidrolasas.- Catalizan el rompimiento de una molécula, con participación de agua, entre enlaces carbono y cualquier otro átomo. Este grupo de enzimas se puede considerar como una clase especial de transferasas en las que el grupo donador se transfiere al agua. La rotura del enlace peptídico es buen ejemplo de esta reacción llevada a cabo por peptidasas. Nombres triviales de algunas peptidasas incluyen pepsina, tripsina, quimotripsina y dipeptidasa. Otras subclases son las esteraseis como la lipasa, colinesterasa, y colesterol esterasa. Las fosfatasas eliminan grupos fosfatos, como la glucosa6-fosfatasa y las fosfatasas acida y alcalina. 4.- liosas.- Catalizan el rompimiento no hidrolítico entre carbono-carbono, carbonoazufre y algunas carbono-hidrógeno. A este

grupo pertenecen las descarboxilasas. Aldehido nasas como la aldolasa, fumara y otras. 5.- Isomerasas.- Incluye a todas las enzimas que catalizan la interconversión de todo tipo de isómeros ópticos, geométricos, de posición y reacciones de oxidorreducción intramolecular. A este grupo pertenecen las racémosos, epimerasas y mutasas. 6.- Ligasas.- Catalizan la formación de enlaces entre carbono-oxígeno, nitrógeno y otros átomos a expensas de un enlace fosfato de alta energía del ATP. El término de sintetasas se reserva para este grupo particular de enzimas. La piruvato carboxilasa es un buen ejemplo de una ligasa. También la acetil-CoA sintetasa, la aminoacil-RNAt sintetasa, enzimas activadoras de aminoácidos en la síntesis de proteínas. En la Tabla 4.4 se describen algunas enzimas y su clasificación de acuerdo a la comisión de enzimas. 4.4 LOCALIZACIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE LAS ENZIMAS Las enzimas dentro de un organismo se encuentran distribuidas en los diferentes órganos y tejidos donde realizan su función específica. Dentro de una célula, algunas enzimas se encuentran compartamentalizadas y ordenadas; ejemplo: en las células hepáticas, las enzimas de la glicólisis están localizadas en el citoplasma, en tanto que las enzimas del ciclo de Krebs en las mitocondrias. Dentro de la mitocondria, las enzimas del ciclo del ácido cítrico se encuentran dispuestas en forma secuencial, lo cual da al proceso ergopoyético de la célula la máxima eficacia.

4.4.1.

Nivel celular. Sistema microsomal

La localización de una enzima particular en un tejido o célula es el fundamento de una

Tabla 4.4 Clasificación Internacional de las enzimas Número 1. 1.1 1.1.1 1.1.1.1. 1.1.3. 1.1.3.4. 1.2. 1.2.1.12. 1.2.3.2. 1.2.4.1. 1.3. 1.3.1.1. 1.4 1.4.1.2 1.5 1.5.1.5 1.6. 1.6.2.1. 1.9. 1.9.3.1. 1.11. 1.11.1.6 2. 2.1 2.1.1 2.1.1.2 2.1.2 2.1.2.1 Nombre sistemático Oxidorreductasas Grupos CH-OH NAD+ o NADP + aceptor Alcohol NAD + oxidorreductasa: O2 como aceptor p-D-glucosa: oxígeno Oxidorreductasa (FAD) Grupos C = 0 Gliceraldehído 3-P:NAD* Oxidorreductasa (NAD+) Xantina:oxígeno oxidorreductasa. Piruvato: lipoato Oxidoreductasa Grupos CH-CH 4,5-Dihidrouracilo: NAD+ oxidorreductasa Grupos CH-NH2 L-glutamato: NAD+ oxidorreductasa Grupos C-NH5,10-Metilenotetrahidrofolato: NADP + oxidorreductasa Sobre NADH o NADPH como donador NADH: citocromo C oxidorreductasa Sobre grupos hemo donadores. Citocromo C: oxígeno oxidorreductasa Con H2O2 como aceptor Peróxido de hidrógeno: H2O2 oxidorreductosa Transferasas Grupos de 1 carbono metil transferasas S-adenosil-metionina: guanidino-acetato N-metil Transferasa Hidroximetil y fomil transferasa L-serina: FH4 5,10-hidroximetil trasferasa Nombre trivial

Deshidrogenasa Alcohólica Glucosa oxidasa

Triosa-P-deshidrogenasa Xantino oxidasa Piruvato deshidrogenasa Dihidrouracilo deshidrogenasa Glutamato deshidrogenasa Metilen-FH4-deshidrogenasa

Citocromo C reductasa Citocromo oxidasa Catalasa

Guanidometil transferasa

Serina hidroximetil transferasa

CONTINUA TABLA 4.4
Número 2.1.3 2.1.3.2 2.2 2.2.1.1 2.2.1.2 2.6.1 2.6.1.1 2.6.1.2 2.7.1 2.7.1.2 2.7.7.10 3. 3.1 3.1.1 3.1.1.7 3.1.2 3.1.2.1 3.1.3 3.1.3.9 3.2.1 3.2.1.1 3.4.4 3.4.4.1 3.5.1.5 3.6.1.3 4 4.1.1 4.1.1.1 4.1.2 4.1.2.7 Nombre sistemático Carboxil o carbamoil transíerasas Carbamoil-P: L-aspartato transferasa Transferencia de grupos aldehídicos o cetónicos Sedoheptulosa 7-P: gliceraldehido glicolaldehído transferasa Sedoheptulosa: 7-P: gliceraldehido Dihidroxiacetona transferasa Aminotransferasas L-aspartato: 2-oxoglutarato aminotransferasa L-alanina: 2-oxoglutarato aminotransferasa Fosfotransferasas ATP: glucosa 6-P transferasa UTP: galactosa 1-P uridil transferasa Hidrolasas Enlace éster Carboxílico Acetilcolina acetil hidrolasa Tióester Acetil CoA hidrolasa Ester fosfórico Glucosa 6-P fosfohidrolasa Glucósido hidrolasas a l - 4 gluca-4glucano hidrolasa Péptido hidrolasas Pepsina Urea amidohidrolasa ATPfoshidrolasa Liasas Carboxiliasas 2-oxo-ácido carboxil iasa Aldehidoliasas Cetona 1-Paldehidoliasa Ureasa ATPasa Nombre trivial Aspartato transcarbamilasa

Transcetolasa Transaldolasa

Transaminasa glutámico oxalacética Transaminasa glutámico pirúvica Glucocinasa UDP-galactosa pirofosforilasa

Colinesterasa Tiolasa Glucosa 6-fosfatasa a-amilasa

Piruvato descarboxilasa Aldolasa

En la membrana celular se encuentran enzimas que participan en el transporte de metabolitos y . vacuolas.1.5). 3 epimerasa Cis-trans isomerasas Malea to cis-trans isomerasa Aldo-ceto isomerasas D-gliceraldehído 3-P cetol isomerasas Ligasas Aminoácido-RNA L-tirosina: RNAt ligasa(AMP) Acido tiol Acetato: CoA ligasa (AMP) Enlaces C-N UTP: amonio ligasa (ADP) Enlaces C-C Piruvato: C 0 2 ligasa (ADP) Nombre trivial Citrato sintetasa Fumarasa Alanina racemasa Epimerasa Maleato isomerasa Triosa-P isomerasa Tirosil-RNAt sintetasa Acetil CoA sintetasa CTP sintetasa Piruvato carboxilasa las que regulan la acción de hormonas o neurotransmisores sobre los receptores membranales.2.2 6.1 5. En células eucarióticas las enzimas se distribuyen en la membrana celular.1 6.1 5. La distribución de las enzimas en los organelos subcelulares se estudian fraccionando en ultracentrífuga homogeneizados de células.4.1 4.7 4.1 Nombre sistemático Cetoacidoliasas Citrato oxalacetato liasa Hidroliasas L-malatohidroliasa Isomerasas Racemasas y epimerasas Alanina recemasa D-ribulosa 5-P.1.3 4. otras se encuentran fijas ordenadamente en alguna membrana particular y funcionan en forma secuencial.1.3.4 Número 4.1 6.1 6.1. como es el caso de las enzimas oxidativas de la mitocondria.1 5.4 6.2 5 5. etc.4.3.2. En tanto que muchas enzimas se encuentran solubles en el citoplasma. rama de la histoquímica denominada histoenzimología.1.3 6.2.1.1.1 5. mitocondrias (matriz y espacios intermembranas) lisosomas.1 6 6. retículo endoplásmico.1.1.3.1.2 5.2. (tabla 4.1 5.2.3.1. Generalmente las vías anabólicas y catabólicas se localizan en organelos diferentes a fin de maximizar la economía celular.3.CONTINUA TABLA 4.1.1 6.

fosfolipasas y fosfatasas. D-aminoácido oxidasa. Varias de las enzimas señaladas en la tabla son comunes a uno o más organelos membranosos. glucosa 6-fosfatasa Urato oxidasa. arilsulfatasas. incluyendo proteasas. transporte electrónico y fosforilación oxidativa acoplada. fosfaíasa acida. NADH y NADPH citocromo c reductasas. TGP) se localiza en hígado. NADH-citocromo c reductasa. peptidasas. oxidación de aminoácidos. otra variante isoenzimática la LDH-X se localiza en testículo. glucosidasas. síntesis de la urea. a-hidroxiácido oxidasa. y glucuroniltransferasa. oxidasas de función mixta relacionadas con el citocromo b. síntesis de fosfoglicéridos y triacilgliceroles. la aspartato aminotransferas (antes transaminasa glutámico oxalacética. reductasa se ha encontrado en el retículo endoplasmático. esterasa. Lisozima. La amilasa y lipasa pancreáticas ayudan al diagnóstico de pancreatitis aguda cuando se elevan en suero (ver más adelan- . algunas de ellas específicas de determinado órgano. rutas de síntesis de proteínas. condroitina sulfotransferasa. aminoacilsintetasas Ciclo de los ácidos tricarboxílicos. catalasa. nucleasas. síntesis y reducción de esteroides Galactosil y glucosiltransferasa. nucleósido difosfatasa. membrana mitocondrial externa y en la envoltura nuclear. glucosa 6-fosfatasa. 4. hidrolasas. oxidación de ácidos grasos de cadena larga Rutas de biosíntesis de DNA y RNA Mitocondria Lisosomas Retículo endoplasmático (microsomas) Golgi Peroxisomas Núcleo a La NADH-citocromo b. La deshidrogenasa láctica posee varias isoenzimas. y el citocromo P450. P-glucuronidasa. TGO) se localiza princip a l m e n t e en m i o c a r d i o y la a l a n i n a aminotransferasa (antes transaminasa glutá- mico pirúvica. lipasas.5 Localización intracelular de las principales enzimas y rutas metabólicas Citoplasma Glucólisis: ruta de las hexosa monofostato. glucogénesis y glucogenólisis: síntesis de ácidos grasos. oxidación de ácidos grasos. La creatina fosfocinasa se localiza en músculo estriado (esquelético y miocardio). catabolismo de purinas y pirimidinas.2.Tabla 4.4. 5-nucleotidasa. Golgi. Dos subclases de aminotransferasas se localizan en órganos distintos. aminotransferasas. alargamiento de ácidos grasos. A nivel de organismo La localización y distribución de enzimas que funcionan específicamente en determinados órganos es el fundamento de la enzimología clínica. la LDH-1 (H4) se localiza en miocardio y la LDH-5 (M4) se localiza en hígado y músculo esquelético.

los productos tendrán más energía que los reactantes. la fosfatasa acida en próstata y la fosfatasa alcalina en hígado y hueso. Las fosfatasas.5. de la misma magnitud. cuyos conceptos principales se establecen en d o s p r i n c i p i o s de la termodinámica llamados primero y segundo. La realización y extensión de las reacciones bioquímicas están controladas por el flujo energético. que el agua corra por un declive y no suba por una pendiente. determinan la presencia de carcinoma prostético y óseo respectivamente. rama de la fisicoquímica. El estudio de esto. la cual a su vez se rige por la ley de acción de masas. 4. es el campo de las termodinámica. con formación de CO2 y H 2 0 es una reacción exergónica. será endotérmica en sentido inverso. Aspectos termodinámicas. la energía solar permite la síntesis de glucosa (Ce H12 0¿) y es una reacción endergónica. Si en la reacción se absorbe calor. o si la libera y en qué magnitud. Energía C H 6 12°6 + °2 6C0 2 + ÓHjO Energía El segundo principio de la termodinámica determina la dirección de una reacción química.LHf productos . Este principio establece que los procesos espontáneos tienden al equilibrio. las cuales pueden ocurrir aún en ausencia de enzimas pero muy lentamente. AF y AH son negativos y la reacción es exotérmica {exergónica en general). Energía de activación Conviene analizar previamente los conceptos termodinámicos. ejemplo: en la fotosíntesis. Las enzimas no catalizan reacciones que jamás sucederían espontáneamente.1. es decir aquellas termodinámicamente imposibles. cuando se elevan en suero. que determinan el sentido de una reacción y su equilibrio.5 MECANISMO DE ACCIÓN El mecanismo de acción de las enzimas se estudiará primero desde el punto de vista general de la catálisis y luego de cada sistema enzimático en particular. y si hay que suministrarle energía para que ocurra. en virtud de que las enzimas sólo aceleran reacciones espontáneas o metaestables. los cambios de energía libre (AF) y de entalpia (AH) son positivos y se dice que la reacción es endergónica (o endotérmica si es en forma de calor). esto determina que un cuerpo caliente ceda calor a otro más frío y no al revés. Se habla así de calor de formación y calor de reacción. si una reacción procediera de izquierda a derecha. En las reacciones en que se desprende calor.te). termodinámicamente posibles. la degradación metabólica de la glucosa por la célula. AF = LFf productos . los cuales permiten comprender el sentido de las reacciones químicas. Para cualquier reac- .LHf reactantes Una reacción que es exotérmica en sentido directo. si es reversible. La aplicación del primer principio de la termodinámica (principio de conservación de la energía) a las reacciones químicas ha dado origen a la termoquímica que estudia la cantidad de calor que se absorbe o se desprende en una reacción y permite calcular la energía libre (F) y la entalpia o contenido calórico (H). El cambio de energía libre (AF) o energía útil se correlaciona con la constante de equilibrio (Keq).LFf reactantes AH . con su localización particular. 4.

4. expresa la velocidad de la reacción. como la gasolina. no reaccionan con rapidez debido a que la energía cinética que poseen es insuficiente para superar esa barrera de energía. por lo tanto: AF° = -RT lnKeq puestos orgánicos inflamables expuestos al aire. Esto sucede con algunos comTabla4. En un sentido cinético. las enzimas hacen que las reacciones termodinámicamente posibles procedan con rapidez en la célula pero no modifican la constante de equilibrio. la velocidad de la reacción depende de la concentración de enzima y de su sustrato. La velocidad del cambio en la concentración del producto o del sustrato en función del tiempo. Existen sistemas de reacción que se presentan en estado metaestable. temperatura y pH conocidos.6). 4. Si se aumenta progresivamente la concentración . este capítulo tratará de los factores que inciden en la actividad de una enzima. En ausencia de catalizadores enzimáticos. cofactores y enzimas) se añaden a una serie de recipientes en un medio con fuerza iónica. Esa barrera termodinámica es la energía necesaria para alcanzar el estado de transición como energía de activación (fig.6 Relación entre Keq y AF° (a 25°C) Dado que las enzimas modifican la velocidad de las reacciones químicas. En todos los procesos enzimáticos.ción química: la ecuación que determina el cambio de energía libre respecto a la concentración de reactantes y productos es la siguiente: Donde AF° es el cambio de energía libre en condiciones estándar: este valor es equivalente al pKa de la ecuación de HendersonHasselbach (ver unidad 2). la reacción sólo transcurrirá si se le proporciona energía (tabla 4. La energía de activación es la energía necesaria para pasar las moléculas reaccionantes al estado de transición y que de ahí proceda la reacción.5. Al disminuir la energía de activación. los componentes iniciales del sistema enzimático (sustrato (S). Cinética enzimática si AF° es negativo. muchas reacciones químicas proceden excesivamente lentas a la temperatura del organismo. el proceso se desarrollará espontáneamente. pero no espontáneo.1). En el equilibrio.2. La cinética estudia la velocidad de cambio entre el estado inicial de reactantes y productos y su estado final. La velocidad cambia constantemente a medida que se aproxima al equilibrio (estado final) siendo cero en el equilibrio. es decir termodinámicamente posible. si AF° es positivo. no hay cambio de energía libre y AF=0. que necesitan una chispa para su ignición y su transformación en CO2 y H2O. es decir es termodinámicamente posible.

4. 4. Al principio. Después. la velocidad de la reacción decrece progresivamente hasta que permanece constante (Vmax) aun con elevadas concentraciones de sustrato (cinética de orden cero). se le designa como reacción de primer orden en virtud de que la velocidad depende de la concentración del sustrato (S) elevada a la primera potencia.7). ' [ES] K„ • E+P La formación del complejo enzima-sustrato [ES] se dedujo de las siguientes observaciones. la velocidad de la reacción aumenta proporcionalmente a la concentración de sustrato. esto se explica porque la enzima se ha "saturado" con sustrato (fig. seguía degradándose.8). la enzima debe tener un número finito de sitios catalíticos para el sustrato y cuando están todos ocupados ya no puede aumentar la velocidad de la reacción. a) fibrina tratada con tripsina y lavada posteriormente. Modelo de Michaelis-Menten. se obtiene una relación directa y lineal (fig. A concentración fija de enzima y concentraciones crecientes de sustrato se obtiene una segunda relación interesante.de enzima. Para explicar matemáticamente este comportamiento Michaelis y Menten invocaron la existencia de un complejo intermedio enzima-sustrato: K E + S K. b) la enzima sacarasa en presencia de sacarosa resistía la desnaturalización térmica . En otras palabras. manteniéndose constante (pero en exceso) la concentración del sustrato. a este punto.

H J O J ] En presencia de un donador de hidrógenos (colorante oxidable) tiene lugar una reacción posterior: [Peroxidasa . en este sencillo modelo.10. la Km es un valor que indica la afinidad de la enzima por el sustrato. Cuanto más baja sea Km. la Km de la enzima era normal pero la Vmax era tres veces mayor.==? [Peroxidasa .9). Las dos constantes de la ecuación de Michaelis Menten.. Esta naturaleza bifásica se demuestra en el siguiente ejemplo clínico: en una familia Vmax Km La gráfica obtenida se muestra en la fig. v Km Pe- La observación en el espectroscopio de estas dos reacciones resultó una prueba convincente de que es correcta la hipótesis de la formación del complejo [ES]. Así. cuando la velocidad es la mitad de la velocidad máxima. la actividad de la enzima se puede separar en dos fases. Otra transformación a la gráfica de Michaelis-Menten que permite calcular con mayor precisión la Km es la ecuación de Eadie-Hofstee: V v [S] ~~Km + Km.I Al En términos prácticos. Modelo de Lineweaver-Burk.comparada con la sacarasa sola. Por tanto. Debido a que en la práctica la determinación de Km a partir de la curva de saturación de Michaelis-Menten no es muy precisa. Vmax y Km son únicas para cada enzima. Keilin y Mann en 1937 comprobaron que la peroxidasa presenta un desplazamiento de las bandas de absorción cuando se adiciona H2O2: K i Peroxidasa + H J O J . fijación del sustrato seguida de su modificación química. la Km se hace igual a [S] en la ecuación de Michaelis-Menten. es necesario tomar el recíproco de la ecuación y transformarla en una línea recta: i . 1 Vmax [S ] + 1 Vmax y = ax + b La gráfica que se obtiene es la de Lineweaver-Burk o del doble recíproco (fig. donde se puede calcular Km en la intersección negativa de la abscisa. Los ensayos indicaron que la actividad PRPP sintetasa estaba aumentada tres veces. . Nótese que si la velocidad (v) se hace igual a .H 2 0 2 ] + R-H 2 roxidasa + 2 H 2 0 + R K3 aquejada de hiperuricemia y gota. ya que la Vmax se hace asintótica.. en una curva de saturación (fig. resulta de las constantes de velocidad. La ecuación matemática que define la reacción enzimática es una hipérbola que recibe el nombre de ecuación de Michaelis-Menten: _ Vmax [S] Km + [S] El valor de Km (constante de Michaelis) que se expresa en moles/litro. 4. Por otro lado. donde la pendiente negativa es la inversa de Km.Vmax. 4.8) el valor numérico de la Km puede deducirse en la gráfica en concentración de sustrato [S]. Modelo de Eadie-Hofstee. un paciente excretaba tres veces la cantidad normal de ácido úrico por día y tenía también niveles elevados de fosforribosil pirofosfato (PRPP) en eritrocitos. mayor es la afinidad. 4.¿ .

La actividad específica se define como el número de unidades de enzima por miligramos de proteína (U/mg proteína).2. Actividad enzimática La actividad de una enzima se expresa habitualmente en términos de la cantidad de producto formado (o desaparición de sustrato) por cantidad determinada de enzima por unidad de tiempo.1.4. se define como el número .5. Durante la purificación enzimática este valor va aumentando a medida que se van eliminando proteínas contaminantes. El antiguo "número de recambio" recientemente sustituido por actividad molecular o molar. Sin embargo esto no indica si en la muestra la única proteína presente es la enzima. La unidad estándar de actividad enzimática (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto a 25 °C en condiciones óptimas de ensayo.

Concepto de enzima.4. albinismo. como sucede con las vitaminas (procoenzimas) y algunos oligoelementos. Importancia de las enzimas El estudio de las enzimas en medicina es cada vez más importante.2. El diagnóstico de muchas enfermedades se puede'realizar con bastante precisión determinando la actividad de ciertas enzimas o isoenzimas que son indicadores de la destrucción tisular de órganos específicos. Estas determinaciones son tan importantes que han dado lugar a una nueva especialidad: la enzimología clínica. La eficacia del tratamiento terapéutico y la magnitud de las reacciones indeseables (reacciones secundarias. El empleo de enzimas inmovilizadas es otra posibilidad de terapia cuando hay carencia de enzimas en un organismo evitando así las reacciones de intolerancia y asegurando la estabilidad y las condiciones óptimas para la actividad catalítica. sólo se podrán lograr y prevenir en la medida que se conozca el mecanismo de acción de cada fármaco y las múltiples interacciones que pueden ocurrir con las enzimas.1. el sustrato (S) que es la molécula sobre la que actúa la enzima y el producto (P) molécula o moléculas resultantes de la acción de la enzima sobre el sustrato. directa A+B sustratos . interacciones farmacológicas). son ejemplos del uso de enzimas como fármacos. no competitivo. Otras enfermedades se deben a la carencia de cofactores enzimáticos y la administración de ellos produce la rápida curación de estas enfermedades carenciales. pentosuria esencial y muchas otras que se revisarán más adelante). fenilcetonuria. Estos errores están codificados en el genoma y se denominan: "errores innatos del metabolismo". inversa C+D productos En reacciones secuenciales de una vía metabólica. 4. Muchas enfermedades se deben a la carencia o anormalidad en la síntesis de una determinada enzima (galactosemia. ya sea. esta práctica se conoce como enzimoterapia. actuando como inhibidor enzimático competitivo. Otra importante vinculación de las enzimas con la medicina.1.1. secuestrando o liberando cofactores o induciendo la biosíntesis de algunas enzimas. "enfermedades moleculares". sustrato y producto En una reacción enzimática se identifican tres componentes: la enzima (E) específica de la reacción. contraindicaciones. precauciones. el producto de una reacción ca- . En ocasiones son las propias enzimas las que se usan para el tratamiento de enfermedades. "enfermedades hereditarias" o "enfermedades bioquímicas". acompetitivo o mixto. La mayor parte de los fármacos que se utilizan en el tratamiento de enfermedades tienen como mecanismo de acción el modificar la actividad de una o varias enzimas. tratamiento y prevención de enfermedades. los productos de la reacción directa (que procede hacia la derecha) son los sustratos de la reacción inversa (que procede hacia la izquierda). Es indudable que la enzimoterapia tiene un futuro promisorio con las técnicas de ingeniería genética que permiten introducir la información genética para la síntesis de la proteína ausente o defectuosa utilizando plásmidos o partículas viriformes. El empleo de enzimas proteolíticas para el tratamiento de hematomas y de enzimas digestivas en casos de dispepsia. radica en el empleo racional de fármacos. diagnóstico. Son múltiples las implicaciones que tienen las enzimas en el origen. Dado que muchas reacciones son reversibles. que es el área de la medicina que utiliza las enzimas como auxiliares diagnósticos.

Estos efectos son tan importantes in vivo como en condiciones de laboratorio. 4. Factores que afectan la actividad enzimática La actividad enzimática es afectada por una serie de factores externos e internos que pueden ser físicos. 4. La comisión de enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica ha propuesto una nueva unidad. La gráfica de velocidad frente a temperaturas (Fig. 4.5. químicos y biológicos: temperatura. el Katal (Kat) que se define como la conversión de un mol de sustrato por segundo. Debido a que muchas enzimas son oligoméricas. que el médico se familiarice con las reglas locales en el manejo de unidades de actividad enzimática.5. Muchos medicamentos actúan como inhibidores competitivos de ciertas enzimas. es imperativo. por minuto. debido a que la Tabla 4. pH. concentración del sustrato. en el primer caso.7 Actividad molecular de algunas enzimas Enzima Actividad molar (moles de sustrato por mol de enzima por minuto) 36. la velocidad de los procesos metabólicos crece notablemente durante la fiebre.3. fuerza iónica.11). se puede expresar en milika tales (mKat) o microkatales (uKat).11) revela una curva en forma Anhidrasa carbónica Catalasa p-amilasa p-galactosidasa Succinato deshidrogenasa . del producto e inhibidores.100 12 1 000 000 000 000 150 actividad enzimática aumenta con los incrementos de temperatura. con un sitio catalítico en cada subunidad.000 5.600 1.de moles de sustrato transformado por un mol de enzima por minuto (mol/min/mol de enzima) (tabla 4. Por otro lado. Las enzimas a temperaturas bajas muestran un aumento de su actividad al incrementar la temperatura. pero a altas temperaturas la enzima sufre desnaturalización térmica y la velocidad de la reacción disminuye (fig. de la enzima.3. la actividad molar se denomina actividad del centro catalítico: número de moles de sustrato por mol de subunidad activa o por sitio catalítico. si la fiebre continuara indefinidamente sería fatal. Factores físicos y químicos Temperatura. Hasta que todos los laboratorios de análisis clínicos unan esfuerzos para estandarizar sus informes.1. estos factores deben considerarse al realizar los ensayos in vitro para medir actividades enzimáticas en el plasma de un paciente. 4.7).

denominada temperatura óptima.de campana con un óptimo entre 40 y 45 °C para enzimas humanas. alteran la conformación de la proteína y con ello. Sin embargo. El factor que resulta por cada 10°C de incremento en la temperatura se denomina coeficiente térmico (Qio) y en las reacciones químicas habituales es de alrededor de 2. pH. Muchos procesos fisiológicos. por ejemplo. los valores altos o bajos de pH (ácidos o alcalinos) provocan desnaturalización de la enzima (fig. Además de los efectos puramente iónicos.12). las enzimas poseen un punto isoeléctrico en el que su carga eléctrica es cero. la velocidad de reacción decrece por desnaturalización de la e n z i m a . fosfotúngstico y otros para desnaturalizar y precipitar proteínas. sin embargo. Pb. sales y metales pesados (Ag. la labilidad de la mayoTabla 4. no es el pH de máxima actividad de la enzima (pH óptimo). por ejemplo. se duplica la velocidad de la reacción por cada 10°C de aumento en la temperatura. 4. la pepsina o la arginasa son activas a valores depH alejados de este óptimo (Tabla 4. El pH óptimo de la mayoría de las enzimas se localiza entre los valores de 5 y 9. el sitio catalítico. Los cambios de pH afectan profundamente el carácter iónico de los grupos funcionales de la enzima y. o sea. Esta propiedad es útil en el laboratorio clínico. Por ser proteínas.8 Valores óptimos de pH para algunas enzimas . las muestras de sangre son primero tratadas con ácidos como el tncloroacético. Por el contrario en condiciones de hipotermia muchas reacciones enzimáticas están deprimidas lo que explica la baja demanda de oxígeno de algunos organismos durante periodos de hibernación. El incremento de velocidad al acercarse la temperatura óptima se debe a una mayor energía cinética de los reccionantes (sustrato).8). El efecto nocivo de las radiaciones. L a s e n z i m a s de microorganismos adaptados a vivir en aguas termales muestran temperaturas óptimas cercanas al punto de ebullición del agua. por lo tanto. muestran un (Qio) • 2. Hg) sobre la actividad enzimática se debe a la acción desna- turalizante sobre las proteínas en general. el pH del punto isoeléctrico. la frecuencia de contracción de un corazón extirpado. algunas enzimas. Por arriba de la temperatura óptima.

Inhibidores enzimáticos Aunque se requiere la molécula completa de la apoenzima para su actividad catalítica. 4. Un inhibidor enzimático es cualquier agente químico capaz de disminuir la velocidad de una reacción sin desnaturalizar la enzima. Pueden afectarse ciertos aminoáci- dos de una enzima sin que ello altere su actividad catalítica siempre y cuando no se afecten los involucrados en el sitio activo. 4.ría de las enzimas a estos agentes desnaturalizantes permite determinar si una reacción es catalizada por una enzima. Este es un hueco molecular en la estructura terciaria de la enzima con tres puntos de apoyo próximos entre sí (tres aminoácidos) aunque en la estructura primaria no estén próximos (fig.3. El peso molecular de la mayoría de los sustratos es muy pequeño comparado con el de las enzimas. Existen diferentes tipos de inhibidores enzimáticos: competitivos. existe una zona determinada donde se combina con él sustrato al que se llama sitio activo o sitio catalítico. no competitivos e incompetitivos.000) respecto al peróxido de hidrógeno (PM 34). Esta molécula forma un complejo reversible con la enzima (El) que compite continuamente con el sustrato por el sitio catalítico. Por ejemplo. La magnitud de la in- .13). Está dada por una molécula parecida estructuralmente al sustrato (isostérica) que se une al sitio catalítico pero no se transforma.2.5. Los inhibidores son compuestos que tienen la capacidad de unirse a enzimas de tal forma que impiden la combinación enzima-sustrato. Inhibición competitiva. Quizá la prueba más evidente de la localización de sitios activos proviene de estudios con inhibidores. la catalasa (PM 250.

Dado que sustrato e inhibidor compiten por el mismo sitio de la inzima. En . lo utilizan como metabolito para sintetizar ácido fólico.15). 4. sin embargo. la Km muestra un incremento aparente en presencia del inhibidor. las sulfanilamidas no son dañinas a las dosis que inhiben a las bacterias. Los microorganismos que necesitan PABA para su crecimiento. Este tipo de inhibición es irreversible aun cuando se aumente la concentración de sutrato. Otro ejemplo es la inhibición de ciertos tumores por 5-fluorouracilo y la de algunos virus como el herpes labial por yododesoxiuridina.14). Este crecimiento bacteriano puede inhibirse con antimetabolitos como las sulfas. 4. La utilización eficaz de las sulfas para combatir infecciones en el hombre depende de este hecho. Toda o gran parte de la farmacoterapia moderna está basada en los conceptos de inhibición enzimática. Estos compuestos pueden ser aminoácidos. Dado que el hombre adquiere folato en forma exógena. La Km que se obtiene experimentalmente es denominada Km aparente: la Vmax no varía. el succinato y el inhibidor. malonato. Ejemplos de inhibición competitiva es la que se realiza al administrar ciertos fármacos. La investigación de los antimetabolitos se inició con la observación de Woods en 1940. cuyo sustrato natural. Los animales superiores y muchos microorganismos son incapaces de sintetizar algunos compuestos necesarios para su supervivencia. Inhibición no competitiva. estas enzimas pueden inhibirse por medio de antimetabolitos. etc. quien comprobó que la inhibición del crecimiento bacteriano por sulfas era contrarrestado por ácido paraaminobenzoico (PABA). La inhibición solo depende de: a) la concentración del inhibidor y b) la afinidad del inhibidor por la enzima. serán antimetabolitos. aquellos que impiden el aprovechamiento y utilización de los metabolitos naturales debido a su parecido estructural. son parecidos (fig. Los organismos utilizan ciertos metabolitos y enzimas para sintetizar estos compuestos esenciales. Esto se puede ver en la gráfica de Michaelis-Menten y en la de LineweaverBurk (fig. b) la concentración de sustrato y c) las afinidades relativas (Km) entre inhibidor y sustrato por la enzima. El grado de inhibición competitiva es proporcional a la concentración de inhibidor (I).hibición dependerá de: a) la concentración de inhibidor. un aumento en la concentración de sustrato en presencia de una concentración fija del inhibidor llega a superar la inhibición. por lo que estos adquieren la categoría de nutrimentos esenciales. vitaminas. Si denominamos metabolitos a los sustratos fisiológicos presentes o producidos en el metabolismo celular. Muchos antimetabolitos ejercen su acción a nivel de coenzimas o grupos prostéticos como los antifólicos como el metotrexate o alguna antivitaminas como la oxitiamina o la oxipiridoxina. no existe relación entre el grado de inhibición y la concentración de sustrato. ácidos grasos. Un ejemplo muy conocido es la inhibición competitiva de la succinato deshidrogenasa. Es decir. no se afectarán por sulfas. Aquellos organismos que requieren ácido fólico pero que no lo puedan sintetizar a partir de PABA.

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Un ejemplo de inhibición por producto lo tenemos en la deshidrogenasa láctica (LDH) de la cual existen dos isoenzimas particulares: en el músculo predomina la isoenzima M4.18. Estrictamente. En la inhibición no competitiva no se altera la Km pero sí la Vmax (fig. El inhibidor no competitivo puede ser unamólecula(Ii) que no se une en el sitio activo sino cerca de él. el sustrato puede inhibir o activar su propia reacción (fig.19). en corazón predomina la isoenzima H4 que es inhibida por producto (lactato).16). La modificación en la gráfica de Lineweaver-Burk de la inhibición incompetitiva es la que se observa en la fig. o incluso puede ser un análogo del sustrato (I3) pero que no puede ser desplazado por altas concentraciones del sustrato. un agente que reacciona con estos grupos es la yodoacetamida (I-CH2—CO-NH2): E-SH+I-O^-CO-NHj -* E-S-CH^-CO-NHj+HI Enzimas como la peroxidasa y catalasa. En otros casos. pero que provoque un cambio de conformación en la enzima de suerte que ésta pierda su actividad catalítica (fig.contraste con la inhibición competitiva. 4. 4. son inhibidas por compuestos que forman complejos con el metal como el cianuro o el H2S. Los iones fluoruro y oxalato inhiben enzimas que requieren Ca+2 o Mg+2. En ésta. puede unirse a uno de los tres puntos esenciales del sitio activo (I2). Esta particularidad permite que en corazón se in- . la formación del complejo enzima-inhibidor puede o no ocurrir en el sitio activo de la enzima. que contienen hierro como grupo prostético. 4. Es una forma de inhibición no competitiva pero reversible. Inhibición incompetitiva o acompetitiva. El diisopropilfluorofosfato (DIPFP) inhibe enzi- mas con grupos funcionales oxidrilo (SerOH) como la colinesterasa.17). Algunas enzimas tienen grupos sulfhidrilo (-SH) esenciales para su actividad. los productos de la reacción son inhibidores específicos de la reacción enzimática. Se presenta sobre todo cuando hay más de un sustrato en la reacción. que no es inhibida por producto. el inhibidor se puede combinar con la enzima (El) o con el complejo enzima-sustrato ya formado (EIS) y la reacción puede retrasarse pero no impedirse. 4. puede ser un inhibidor (I4) que no intervenga en la formación de ES.

Aunque todas las reacciones catalizadas por enzimas son reversibles en el tubo de ensayo. la característica secuen- . El etanol y ciertos narcóticos son también inhibidores no competitivos de la fosfatasa acida. y los productos de ésta son sustratos de otra enzima y así sucesivamente hasta llegar al llamado producto final. hay una producida por la próstata. desde el punto de vista clínico. La secuencia de reacciones entre un sustrato inicial y su producto final se denomina vía metabólica. la cual puede presentar ramificaciones que constituirán otras vías metabólicas. laelis-Menten (a) y Lineweaver-Burk (b). Esta es una ventaja fisiológica que garantiza que el corazón tenga un aporte constante de energía para la contracción (ver unidad de Bioenergética). inhibe la de eritrocitos. Sin embargo. pero tiene poco efecto sobre las fosfatasas acidas de eritrocitos. las enzimas funcionan en un sistema cerrado y se acumula el producto de la reacción.6 REGULACIÓN ENZIMÁTICA En el tubo de ensayo. 4.17 Inhibición no competitiva. de la inhibición enzimática. Los iones calcio inhiben no competitivamente muchas fosfatasas acidas. pero no a la enzima prostática. los productos de la reacción no se acumulan ya que son utilizados como sustratos de otra enzima. lo cual debe tomarse en cuenta al interpretar los resultados. El formaldehído al contrario. Existen algunas aplicaciones prácticas. de aquí la necesidad de agregar quelantes a muestras de sangre destinadas a este ensayo. El suero contiene enzimas como las fosfatasas acidas producidas por diferentes tejidos.Figura 4. en la célula. El ácido L-tartático inhibe competitivamente la actividad de la enzima prostática. hiba la LDH por lactato y el piruvato se derive al ciclo de Krebs. riñon y bazo. que se eleva en el carcinoma prostético. productor de energía. en la célula. hígado.

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esencial para entender el mecanismo de homeostasis celular y para comprender a nivel molecular las enfermedades. La primera enzima del proceso de síntesis de CTP. La regulación metabólica de una vía tiene lugar mediante la modulación de la actividad enzimática de una o más enzimas clave de la ruta. 3) el ATP. en equilibrio dinámico (estado estacionario). productos finales del proceso. puede impedir la inhibición por CTP o UTP. que indica que los organismos mantienen su medio internoconstante a pesar de las amplias variaciones en alimentación. de . por tanto. estos tienen poca o ninguna semejanza estructural con el sustrato. por retroalimentación o regulación retroactiva ("feedback"). pero que no se modifican por la acción enzimática. como cualesquiera otra. 4. obedecen esta ley. Si a la reacción: Glucosa -6-P + H 2 0 -» Pi + glucosa se le agrega inicialmente glucosa libre o fosfato. efectores alostéricos. que generalmente corresponde a la primera enzima. Jacob. El carácter dinámico de los organismos vivos establece que el verdadero equilibrio metabólico se alcanza sólo con la muerte de la célula. se inhibe específicamente con CTP y UTP. propuesto por Claudio Bernard a finales del siglo XIX. por lo general. modificadores o moduladores. En un sistema tan complejo como la célula debe haber mecanismos de regulación o control de la multitud de reacciones simultáneas que ocurren. la aspartato transcarbamilasa (a). en 1963 observó esta falta de relación estructural inhibidor-sustrato y propuso denominar a este tipo de moléculas. disminuye su velocidad.1.21). reacciones que son. Uno de los primeros ejemplos de regulación fue la síntesis de CTP (citidina trifosfato) a partir de aspartato y carbamilfosfato (fig. 2) la inhibición por CTP o UTP puede abolirse sin pérdida de actividad catalítica. Estas moléculas se denominan efectores. mantenido por un flujo unidireccional de metabolitos. llamada enzima limitante de la vía. catalizadas por enzimas. temperatura externa. Pardee. 4. en su mayoría. de isos=igual). Se considera que la acción de CTP y UTP ocurre en un sitio regulador distinto del sitio catalítico porque: 1) CTP o UTP y aspartato difieren mucho en estructura.cial de las vías metabólicas hace que el flujo del metabolismo celular sea irreversible y permanentemente dinámico. estudiaron este tipo de inhibición y la llamaron inhibición alostérica (allos=otro) en virtud de que el sitio regulador es distinto del sitio activo (isostérico. quizá por competencia con el sitio regulador y 4) pueden fraccionarse dos subunidades una que une aspartato y otra que une CTP o UTP. que no afecta la velocidad enzimática. En todas las áreas de las ciencias biomédicas se encuentran ejemplos de regulación normal o anormal: muchas células cancerosas exhiben anormalidades en la regulación de sus enzimas. El conocimiento de los factores que regulan la acción de las enzimas es.6. Un efector alostérico cambia la conformación de la enzima. Conviene distinguir este tipo de inhibición con la inhibición por producto.20). Monod y Changeaux. Monod. la cual sigue la ley de acción de masas. 4. El estado estacionario equivale al concepto de homeostasis. Las reacciones enzimáticas. esto como ya se mencionó se considera inhibición competitiva o isotérica. A la inhibición alostérica se le llama también inhibición por producto final. (fig. actividad física. La célula viva es un sistema abierto. Regulación alostérica La actividad catalítica de algunas enzimas reguladoras es afectada por ciertas moléculas que producen un cambio en la actividad enzimática. etc. tamaño y distribución de cargas.

El sitio alostérico donde se une el efector positivo se conoce como centro activador. Los efectores alostéricos positivos (+) incrementan la afinidad enzima-sustrato y los efectores alostéricos negativos (-) hacen lo inverso.manera que cambia la afinidad hacia el sustrato. es una en- . Una enzima alostérica. El efector negativo se une a un centro inhibidor.

un sustrato (A) con determinado nivel energético.4. Catálisis enzimática Se ha señalado que una enzima incrementa la velocidad de la reacción química pero sin modificar la constante de equilibrio ni el sentido de la reacción. En un sistema catalizado por una enzima. a diferencia de los catalizadores biológicos. Energía de activación de una reacción no catalizada (I) y una reacción catalizada (II). es decir. La diferencia entre la energía libre de los reactantes y el estado de transición se denomina energía de activación. las moléculas reaccionantes deben alcanzar un nivel de energía suficiente para vencer la barrera energética y entrar al estado de transición. denominado metabolito. Funciones generales 4.3. 4. lo que conduce a acelerar la reacción debido a que los reactantes pueden alcanzar más fácilmente el estado de transición (fig. 4. 4. Catalizadores inorgánicos y biológicos Los catalizadores inorgánicos son generalmente átomos en estado iónico o metales con propiedades similares a las atribuidas a un catalizador biológico pero. se convierte en el sustrato de la subsiguiente reacción B metabolito 4. tiene que alcanzar un nivel energético superior o estado de transición antes de convertirse en un producto (B) con un nivel energético co- rrespondiente al estado final.talizada por una determinada enzima. no poseen la REACCIÓN Figura. .1.1.13. La función de un catalizador (inorgánico o enzima) consiste en disminuir la energía de activación. Para que la reacción tenga lugar.1). conocido como estado inicial. sin variar las propiedades termodinámicas del sistema.1.1.

. Anteriormente se ha discutido. En la clase K.zima cuya actividad en el sitio catalítico puede ser modulada por la presencia de efectores en los sitios alostéricos (fig. La mayoría de las enzimas alostéricas son oligoméricas. Es frecuente la confusión entre los términos de alosterismo y coopera ti vidad. 4. La cinética de interacción entre sustrato. Las enzimas alostéricas permiten el control fino de la actividad metabólica mediante pequeñas fluctuaciones en el nivel de sustratos.22). en el capítulo de proteínas de transporte. S = sustrato. En el ejemplo de la aspartato transcarbamilasa. el efector afecta la Km pero no la Vmax. el efector alostérico abate la Vmax sin afectar la Km aparente. 4. por lo tanto. La cooperatividad se define como la influencia que tiene la fijación de un ligando a un protómero sobre la fijación del ligando a un segundo protómero de una proteína oligomérica. Las enzimas alostéricas se dividen en dos clases según la influencia del efector alostérico sobre la Km y la Vmax. técnicamente no es un efecto alostérico. Figura 4. la cooperatividad en la fijación de oxígeno a la hemoglobina.22 Representación esquemática de la regulación alostérica. el sitio catalítico radica en subunidades diferentes. En presencia de un efector positivo se alcanza la 1/2 Vmax a una concentración menor de sustrato y se desplaza la gráfica de Michaelis-Menten hacia la izquierda (fig. En la hemoglobina el centro de fijación del oxígeno de cada subunidad corresponde al centro del sustrato y no a un sitio alostérico. experimentar efecto alostérico. esta enzima posee dos protómeros catalíticos y tres o cuatro reguladores.23). a las del sitio alostérico. Aunque una enzima monomérica puede. Los efectos alostéricos negativos desplazan la curva hacia la derecha. i = inhibidor. Para las enzimas de la clase V. teóricamente. en la práctica sólo se han encontrado dos enzimas alostéricas monoméricas: ribonucleósido difosfato reductasa y piruvato -UDP-n-acetil-glucosaminatransferasa. el cambio conformacional que induce el oxígeno sobre los protómeros de hemoglobina. enzima e inhibidor alostérico sigue una curva sigmoidea. a = activador. indicando aumento de la Km con pérdida de afinidad enzima-sustrato.

mostraba menor sensibilidad a los inhibidores alostéricos normales AMP. Aparentemente una mutación había producido un cambio en el centro inhibidor (I). Se ha mencionado al inicio de la unidad III que la expresión de la función genética se realiza a través de las enzimas (un gene . El hecho de que los centros inhibidores y activadores alostéricos están separados entre sí como del centro catalítico. Puesto que los inhibidores alostéricos actúan en un sitio diferente (alostérico) el modelo cinético ya no es válido. Represión e inducción El mecanismo de control alostérico de la actividad enzimática es también aplicable a sistemas de regulación a nivel génico. 4. probablemente debido a una re- .24 que ilustra el caso. ADP.6. no es adecuado utilizar los términos competitivos y no competitivos con sistemas enzimáticos absteneos porque el mecanismo del efector de un inhibidor alostérico sobre una enzima V o K es diferente al de un mecanismo competivo o no competitivo sencillo.2. En la fig. y reprimibles. e inhibidores (I).No obstante que las enzimas K dan gráficas parecidas a la inhibición competitiva. Los estudios iniciales sobre la regulación de la síntesis de proteínas enzimáticas permitieron reconocer tres tipos de enzimas: constitutivas. se ilustra en el estudio de un paciente con gota cuyos eritrocitos tenían altos niveles de fosforribosilpirofosfato (PRPP). se muestran los diferentes sitios de unión para sustrato (S) activadores (A). 4.6. Los productos finales endógenos de la ruta (ATP. se encontró que la PRPP sintetasa tenía una Km y Vmax normales.1. En este paciente. GTP) no eran capaces de inhibir alostéricamente a la enzima y se acumulaban el PRPP y el ácido úrico. Sin embargo. inducibles. Enzimas constitutivas y enzimas inducibles Las enzimas constitutivas están presentes en concentraciones constantes durante la vida de la célula.una enzima). 3DPG.2. 4. GDP y 2.

24 Inhibición alostérica o por retroalimentación. La síntesis de estas enzimas se suspende si está presente en abundancia el producto final de la vía metabólica donde funcionan. coli. El tercer tipo de enzimas es el de las reprimibles. la inducción implica síntesis de novo lo cual se ha demostrado puesto que sistemas donde la síntesis de proteínas está bloqueada. el cultivo sólo contiene trazas de P-galactosidasa. . Cuando estos microorganismos se transfieren a un medio con lactosa. El aminoácido histidina se forma por una secuencia de 10 reacciones a partir de PRPP. se suspende la síntesis de dichas enzimas. Usualmente E. Él ejemplo de inducción de síntesis enzimática. no responden al estímulo inductor. Es decir. en breve empiezan a aparecer cantidades apreciables de galactósido permeasa. es el sistema de la P-galactosidasa de E. (3-galactosidasa y tiogalactósidotransacetilasa (fig. Cuando se agrega histidina al medio se reprimen los 15 genes que codifican para 9 enzimas. coli crece en un medio simple.Figura 4. En estas condiciones. que contiene glucosa y sales. generalmente son las enzimas de las principales vías metabóücas como las de la vía glucolítica. son aquéllas cuya concentración en la célula normalmente es baja y a medida que se requiere mayor cantidad de enzima. y puede fabricar todos sus constituyentes esenciales a partir de este medio. más estudiado. El fenómeno se denomina inducción enzimática coordinada. Las enzimas inducibles. 4. Con este tipo de control la célula no invierte energía en sintetizar enzimas para actuar sobre un sustrato no presente. lación constante entre síntesis y degradación de la enzima. como úni- ca fuente de carbono. Uno de los sistemas mejor estudiados es el que conduce a la síntesis de histidina en Salmonella. Si se quita la lactosa del medio y se vuelve a dar glucosa. El fenómeno se denomina represión enzimática coordinada.25). la velocidad de síntesis aumenta con respecto a su degradación.

Así. la regulación de las enzimas involucradas en la inducción y represión tiene lugar a nivel de la transcripción. Monod propusieron un modelo ingenioso para explicar la inducción y represión de la síntesis enzimática. y el operón Lac se transcribe y traduce. Para mayor comprensión de estos aspectos se recomienda revisar los conceptos genéticos de la unidad IX. y este complejo se une al sitio promotor en el DNA de tal manera que la RNA polimerasa puede iniciar la síntesis de RNAm. con un efecto inmediato sobre la ruta metabólica. es distinto de la inhibición por producto final (retroacción o feedback). Este fenómeno de polaridad se ha encontrado para el operón del triptófano (operón Tri) y otros. mientras que la represión necesita más tiempo pero con efectos permanentes al reducir el número de moléculas de enzima. Células con glucosa disponible tienen bajos niveles de AMPc. Otro gene. De acuerdo a su teoría.Debe subrayarse que la inducción y represión son mecanismos de control sobre síntesis de enzima y no sobre actividad de la enzima. 4. en el cromosoma involucrado. la expresión del operón Lac requiere del inductor (lactosa) y de AMPc. el AMP cíclico (AMPc). la síntesis de RNAm transcurre desde el operador a través del operón completo. uno con otro. Coli. de E. se puede localizar en un sitio distante del gene operador (fig. Al inducir con lactosa. F. es uno de los más estudiados. por lo tanto. El control del operón Lac tiene otro elemento efector positivo. La proteína represora que actúa sobre el operador y que impide la acción de la RNA polimerasa y por tanto. Teoría del operan En 1961.26).000 daltones que se sintetiza continuamente. formando una unidad funcional llamada operan. Jacob y J. la retroinhibición es un mecanismo de control ejercido a corto plazo. llamado regulador que codifica para una proteína represora del gene operador. que a su vez codifica para las enzimas coordinada- mente inducidas o reprimidas se denominan genes estructurales. El modelo presupone que la transcripción de genes estructurales está controlada por un gene operador y un sitio promotor (donde se une la enzima RNA polimerasa). . Cuando se dan inductores como la lactosa o análogos se deforma el represor.3.6. Por este trabajo y otras contribuciones recibieron el premio Nobel de medicina 1965. En general. el AMPc se une a una proteína catabólica activadora del gene (CAP.000 daltones. Por "mapeo" genético del cromosoma involucrado se ha demostrado que estos genes estructurales se localizan adyacentes. Los genes que transcriben un RNA mensajero (RNAm) policistrónico. un dímero con PM de 45. 4. Y y A). consta de 3 enzimas inducibles controladas por 3 genes estructurales (Z. Así. El operón Lac. la formación del RNAm de todo el operón Lac es un tetrámero de casi 150. El amino terminal de la p-galactosidasa se sitúa del lado del operador.

participan en la biosíntesis de histidina. C. 4. CAP = proteína catabólica activadora del gene operador. Esto representa también un ahorro de energía para la célula ya que si existe histidina. Cuando se da el correpresor (por ejemplo. Aunque los genes y mecanismos reguladores mencionados sólo han sido demostrados en procariotes. no tiene objeto la producción de enzimas para su síntesis. El operón His. F. En sistemas reprimibles. se combina éste con la proteína y se forma una sustancia efectivamente represora que bloquea al gene operador (fíg. H.Figura 4. E. se supone que también se . de Salmonella typhimurium coordina la expresión de genes estructurales (G. A. La histidina es también un inhibidor alostérico de la primera enzima de la secuencia biosintética. coli. D.27). B. histidina). I. el gene regulador elabora una proteína represora que regularmente no interactúa con el operador. que actuando coordinadamente. L = lactosa.26 Inducción enzimática en el operón LAC de E.) que codifican para 9 enzimas.

En esta última. campo que está en exploración muy activa. posteriormente se vislumbró la posibilidad de emplearlas en el tratamiento de algunas enfermedades. Como reactivos en el laboratorio clínico La disponibilidad de enzimas puras a precios razonables ha convertido a algunas de ellas en reactivos de enorme valor para el laboratorio de análisis. Aspectos Clínicos de las Enzimas La aplicación clínica de las enzimas anteriormente se restringía a su empleo como auxiliares en el diagnóstico.presentan en organismos eucariotes. Puede determinarse enzimáticamente la concentración de un .7.1. hay que ser prudentes en extrapolar los conocimientos adquiridos de una a la otra clase de células (eucariotes). los mecanismos de regulación son más complejos y tienen separados físicamente la transcripción de los genes de la traducción. Las enzimas se utilizan también como reactivos clínicos para detectar otro tipo de moléculas cuyas concentraciones son bajísimas en el plasma o tejidos. los RNAm eucarióticos son monocistrónicos en contraposición a los RNAm policistrónicos de las células procariotas. Sin embargo. 4. Además.

y en algunos tejidos o células sanguíneas. Acoplando la reacción con peroxidasa. La glucosa se determina oxidándola a gluconato en presencia de la enzima glucosa oxidasa.7.) se sintetizan en las células y la mayoría ejerce su función en su interior. 4.7. y en la selectividad y sensibilidad de la respuesta antígeno-anticuerpo.compuesto en una mezcla cuando se dispone de una enzima específica capaz de transformarlo rápidamente en un producto. se ha ideado un método altamente específico llamado enzimoinmunoensayo (EIA). se incrementa proporcionalmente la densidad óptica. basado en el principio de la unión competitiva. Cuando el NAD+ se reduce. Este escape de enzimas de las células al plasma se produce también cuando mueren éstas como ocurre en el infarto . líquido sinovial).28). 4. transaminación. en virtud de que NADH y NADPH absorben a 340nm mientras que NAD+ y NADP+ no absorben a esa longitud. Muchas determinaciones enzimáticas pueden acoplarse con reacciones que utilizan NAD+ o NADP+ como coenzimas. líquido amniótico. como la determinación de enzimas en líquidos extracelulares (plasma y suero. Enzimas órgano específicas En condiciones normales. al acoplar la acción de la enzima ureasa con la glutamato deshidrogenasa (GDH). fosforilación. etc. jugo gástrico. Con este ensayo se puede determinar urea. En los últimos años existen disponibles comercialmente las erizarías inmovilizadas para usarse en sistemas de determinación automatizados. o incluso por el proceso de envejecimiento celular normal. se producen daños en las membranas celulares que permiten el "escape" de enzimas a la circulación. 4. Como elementos diagnósticos Una importante función de un laboratorio clínico. sin embargo. cuando el NADH se oxida. es la de cuantificar las alteraciones bioquímicas en el individuo enfermo. toxinas bacterianas. con H2O2 como subproducto. Aprovechando la especificidad enzimática e inmunológica por un sustrato. Para determinar alcohol etílico. disminuye la densidad óptica (fig. el H2O2 oxida la O-dianisina a un compuesto colorido (principio de la glucocinta). oxidación. se convierte éste en acetaldehído por medio de la enzima deshidrogenasa alcohólica (ADH): el aumento en absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentración de alcohol. las enzimas intracelulares no pasan al torrente sanguíneo. El fundamento de este método es similar al radioinmunoensayo (RÍA). las enzimas involucradas en los procesos metabólicos (glucólisis. líquido cefalorraquídeo. Si las células permanecen intactas. como resultado de una lesión celular producida por agentes infecciosos.2.2. orina.1.

esto es poco probable ya que el metabolismo de muchos órganos es muy parecido. 4. y la fosfatasa alcalina de osteoblastos. la creatinfosfocinasa y la fosfatasa alcalina (revisar subcapítulo 4. lipasa. sueros humanos contenían varias isoenzimas de la deshidrogenasa láctica y que sus proporciones relativas cambian significativamente en ciertos estados patológicos. Una de las aspiraciones del diagnóstico clínico es precisamente lograr la asociación de una enzima específica en plasma o sangre con cada tejido o situación patológica. En el diagnóstico de la alteración de un órgano específico en un proceso patológico sería ideal que se pudiesen identificar enzimas específicas para cada órgano. la fosfatasa acida de próstata. 2) Enzimas elaboradas por células especiales y secretadas a un conducto o dentro de un tejido especial.2. 4. no obstante. la acetilcolinesterasa de eritrocitos. por ejemplo amilasa. Esta correlación ocurre sólo para algunas enzimas. Perfiles enzimáticos El plasma circulante contiene cantidades apreciables de enzimas que tienen su origen en las células de diferentes tejidos del organismo.7. Un grado mayor de conocimiento de esta relación se está consiguiendo con el estudio de determinadas isoenzimas.2. por ejemplo la alcohol deshidrogenasa o la sorbitol deshidrogenasa que son casi exclusivamente de origen hepático.4). disolución de la fibrina (plasmina) y modificación de quilomicrones (lipoproteinlipasa).2. Se encuentran en alta concentración y están involucradas en funciones como la coagulación de la sangre (trombina y otras).2. En personas normales sanas.3. fosfatasa acida y fosfatasa alcalina. las enzimas de origen intracelular están presentes en plasma en cantidades muy bajas pero mensurables. Las isoenzimas que han sido estudiadas para aplicaciones diagnósticas son la deshidrogenasa láctica. éstas pueden dividirse en tres grupos: 1) Enzimas que realizan una función específica en el plasma llamadas también enzimas plasmáticas funcionales. Isoenzimas El interés médico por las isoenzimas fue estimulado por el conocimiento de que los .de miocardio y la hepatitis infecciosa.7.

4. para determinar cuantitativamente el NADPH: ATP + GLUCOSA -+ GLUCOSA-6-P + ADP -» 6-p-glucorolactona + GLUCOSA -6-P+ NADP+ NADPH+H+ La enzima CPK. TGO y CPK a partir del músculo esquelético dañado.7. c) elevaciones artificiales.29). Aun cuando los eritrocitos lisados no contengan la enzima por valorar. moderadamente en lesiones musculares. esquelético y cerebro. ejemplo: hígado y corazón contienen altos niveles de aminotransferasas. Alteraciones enzimáticas como causa de enfermedad Muchas enzimas se encuentran en casi todas las células aunque algunas se encuentran predominantemente en ciertos tejidos. Ciertas drogas como difenilhidantoína y barbitúricos pueden inducir la producción de enzimas. La enzima cataliza la siguiente reacción: CPK CREATINFOSFATO + ADP -* CREATINA + ATP Esta se acopla a otras dos. 4. b) inducidas por drogas. El segundo y tercer grupo de enzimas se denominan también enzimas plasmáticas nojundonales y su presencia en plasma en cifras mayores que las normales sugiere una velocidad aumentada de destrucción celular. niveles elevados de ésta en plasma solo indican daño celular pero no el tipo de proceso patológico. accidentes cerebrovasculares. Creatinfosfocinasa (CPK). En otro ejemplo se utiliza la valoración de isoenzimas de la LDH y CPK para determinar la evolución de un infarto de miocardio (fig. Aun cuando la enzima sea específica de un tejido particular. en la misma proporción que la TGO y en distrofias musculares sobre todo la de tipo Duchenne. contienen otras que interfieren y producen falsas positivas.3) Enzimas que realizan su función en las células que las originan y cuyas actividades constituyen el proceso vital celular. Existen causas de elevación no específica de niveles enzimáticos que pueden ser. después de cirugía mayor o de un trauma extenso. En general las muestras hemolizadas son inadecuadas para valoraciones enzimáticas. ejemplo: las isoenzimas de la LDH (fig. CPK-2 (MB) y CPK-3 (MM) de músculo. como en el recién nacido. Esta enzima se encuentra distribuida en músculo cardiaco. Los niveles de fosfatasa alcalina son altos hasta después de la pubertad por la actividad osteoblástica. antes llamadas transaminasa glutámico pirúvica (TGP) y glutámico oxalacética (TGO) pero el hígado contiene más TGP que TGO mientras que en el corazón sucede al revés.3. a) fisiológicas.30). hipotiroidis- . Su cuantificación constituye para el médico una prueba valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico. Los niveles de gama-glutamiltransferasa se correlacionan con ingestión de alcohol. como la fosfata alcalina. si se presenta insuficiencia circulatoria debida a insuficiencia cardiaca o choque. Puede localizarse el tejido dañado para confirmar un diagnóstico de dos formas: a) Por determinación del perfil isoenzimático. es un dímero que consta de 3 isoenzimas: CPK-1 (BB) de cerebro. ejercicio físico intenso. y especialmente después de paro cardiaco.4. Por ejemplo. se elevan los niveles de LDH-5. Se eleva marcadamente en infarto de miocardio. se elevan notablemente algunas enzimas pero su valoración no permite establecer la causa de la insuficiencia o del paro. cirugía. b) Por valoración de más de una enzima. los niveles de TGO están elevados moderadamente en el periodo neonatal. En el último trimestre del embarazo están elevados los niveles de fosfatas alcalina de origen placentario.

El nivel total de LDH aumenta muy lentamente. B: suero normaj. colecistitis. a la CPK2. obstrucción intesti- Fig. y artificialmente en muestras hemolizadas. plasma u orina sobre amilopectina marcada con un colorante azul. .30. La amilasa se eleva notablemente (5 a 10 veces) en casos de pancreatitis aguda (en ocasiones en carcinoma de páncreas). A: paciente con infarto de miocardio.29 Patrones normal y patológico de las isoenzimas de la LDH en suero humano. Patrón isoenzimático de CPK y LDH después de un infarto de miocardio. La intensidad del color azul liberado es proporcional a la cantidad de enzima. trompas de Falopio y músculo. uremia grave y cetoacidosis diabética severa. dentro de las 12-24 h junto con un incremento de CPK2. La isoenzima CPK2 (MB) aumenta hasta un máximo dentro del primer día del infarto. C: paciente con enfermedad hepática. El ensayo se realiza por acción de suero. Se excreta por orina en virtud de su bajo peso molecular. saliva. a menos que exista insuficiencia renal. Los niveles urinarios se elevan paralelamente a los niveles plasmáticos. La enzima está presente en jugo pancreático. sigue más lenta alrededor de un día. moderadamente en casos de úlcera péptica perforada. mo (la tiroxina afecta el catabolismo de la enzima) alcoholismo (miositis alcohólica) episodios psicóticos agudos. CPK3. 4. a-amilasa (AMS). El incremento de LDH 1 y LDH 2.Figura 4. es diagnóstico del infarto de miocardio.

Cofactores coenzimáticos para disminuir la energía de activación (tabla 4.alta especificidad de éstos ni la capacidad 4.oxidada (deshidrogenada) y una molécula de va. que requiere la enzima pa. Entre las reacciones catalizadas 4. pero en las que los requie. La vitamina C y las cas e inorgánicas. una molécula de sustrato es ren. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS por enzimas que requieren coenzimas están las de oxidorreducción. las de transferencia 4. Las vitaminas del complejo B forman parOtros componentes de la enzima con bajo te de numerosas coenzimas. Holoenzima y apoenzima de grupo. Los nicotkiamida-adenina-dinucleótido (NAD+). de los cofactores se denomina apoenzima. Coenzimas de oxidorreducción.La mayoría de las coenzimas son formas acción 105 veces más que un catalizador modificadas de las vitaminas (ver unidad de inorgánico.2.2). las de isomerización y las que forman enlaces covalentes.2. La coenzima puede considerarse como un No todas las enzimas requieren cofactores cosustrato. . de la apoenzima. de la nicotinamida. si es.vitaminas liposolubles no tienen actividad ra su actividad.1. en las reacciones de para ser activas.1). en las reacciones de completa y activa. do pantoténico.2.2. 4. (fig.2. Una enzima puede acelerar una re. riboflavina. 4.4).oxidorreducción. ácido fólico y cianocobalasi la unión es débil y se separa con facilidad mina. La adición del cofactor a la apoenzima coenzima es reducida (hidrogenada) (fig. por ejemplo. cofactores (coenzima o grupos prostéticos) y el nicotinamida-adenina-dinucleótido-fosson en general moléculas pequeñas. transaminación.2.3). Las reacciones hiLa parte proteica de la enzima desprovista drolíticas no requieren de coenzimas. o sea la enzima De modo similar. orgáni. Cofactores Relación entre vitaminas y coenzimas. áciunidos a la apoenzima se llaman coenzimas. o grupos prostéticos. tiamina.fato (NADP+). 4.1. Tal es el caso peso molecular. nutrición). coenzimática conocida. termostables y no proteicos. la apoenzima es catalíticamente inacti. 4.derivadas de la vitamina nicotinamida son el tán firmemente ligados a la apoenzima. el fosfato de piridoxal (PPal) actúa como segundo sustrato en dos reacciones combinadas (fig. da lugar a la holoenzima.

Se encuentra en próstata. en niños de la fracción ósea por la actividad osteoblástica. Varias enzimas proteolíticas como tripsina y quimotripsina al igual que la estreptocinasa. En el futuro será posible el reemplazo enzimático por ingeniería genética en individuos con deficiencia genética que afecte la síntesis de una enzima dada. La enzima se eleva en enfermedades hepáticas con elementos colestáticos junto con la enzima 5'-nucleotidasa (NTP) que parece tener también origen hepático. pH 8. con asparaginasa los n i v e l e s de asparagina disminuyen sensiblemente lo que lleva a disminuir la viabilidad del tumor. particularmente si es metastásico. Utilizando fibrinolisina y estreptodornasa (una DNAsa) por vía oral o tópico se puede eliminar el material fibrinoso y purulento de heridas infectadas o necrosadas. En el carcinoma . se elevan los niveles de ACP debido al aumento de células prostáticas ectópicas. nucleasa y celulasas). Fosfatasa alcalina (ALP).5-10 p-NITROFENOLFOSFATO — • p-NTTROFENOL + Pi prostático. hiperparatiroidismo. esta fracción tiene la propiedad de ser inhibida por el L-tartrato. su deficiencia o falta de actividad. glándula mamaria lactante y placenta. Se encuentran en hueso. Fosfatasa acida (ACP). 4. osteocarcinoma y osteosarcoma. embarazo ectópico roto. parotiditis. Incluye isoenzimas que hidrolizan fosfatos a pH alcalino. en el raquitismo. administración de morfina (espasmo del esfínter de Oddi) y macro-amilasemia. la fosfatasa se eleva aun antes de que aparezcan síntomas de la enfermedad. En el capítulo de ácidos nucleicos se estudiarán algunas enfermedades en las que está alterada la codificación de algunas enzimas. enfermedad de Paget. amilasa. En huesos se localiza en los osteoblastos (la enzima es necesaria para los depósitos de fosfato en hueso).nal. es útil para disolver coágulos de sangre formados en las extremidades inferiores. hígado. Como agentes terapéuticos Algunas enzimas se han utilizado como medicamentos en la terapia de problemas médicos específicos. es la causa de la enfermedad. preparada a partir de estreptococos. se usan en la deficiencia enzimática por pancreatitis crónica. El principal uso de la valoración es el diagnóstico de carcinoma prostático metastásico. eritrocitos. hígado. Aunque es difícil detectar sólo la fracción prostática. El método usado en la valoración es el de Bassey Lowry-Brock que utiliza la siguiente reacción. se utilizan en el tratamiento de la trombosis. Esta enzima activa el plasminógeno el cual se transforma en plasmina que es una proteasa que ataca la fibrina y la degrada. pancreatectomía y trastornos gastrointestinales. pared intestinal. Los niveles normales en el adulto provienen específicamente de hígado. lipasas.4. En virtud de que las células tumorales tienen un requerimiento nutricional de asparagina. La terapia con asparaginasa se usa en algunos tipos de leucemia adulta. Normalmente. Se eleva también en enfermedades óseas con actividad osteoblástica elevada: osteomalacia y raquitismo. Algunas enzimas digestivas (peptidasas. En el embarazo se elevan los niveles normales debido a la isoenzima termoestable de la placenta. El método de determinación es similar al de las fosfatasas alcalinas excepto el pH óptimo que es de 5. cálculos salivales. La estreptocinasa.7. la fosfatasa acida de la secreción prostática drena a los conductos prostáticos y aparece poco en sangre. plaquetas y hueso.

El NAD (nicotín-adenín-dinucleótido) actuando como cosustrato en una reacción de oxidorreducción COO" I OH-NH9 2 I CH? I CH9 I ¿ COOH Glutamato COO" I CH« I 2 CH« I ¿ COOH oe-Cetaglutarato Fig.C H L .COO" 0 I OH Lactato ( Sustrato reducido C H3. 4.3.C . i COOH CH-NH9 2 I Alanina c=o COOH I C=0 CH3 Piruvato .C H .C O O ~ II O Piruvato ( Sustrato oxidado ) NAD coenzima oxidada NADH + H + ( coenzima reducida ) Fig. 4. Transferencia de grupos ámino con PPal (fosfato de piridoxal) como cosustrato.2. .

a diferencia de las coenzimas. S-adenosil metionina. Otra sería la clasificación funcional que las agrupa en coenzimas vitamínicas y no vitamínicas. . Al primer grupo pertenecen los nucleósidos di y trifosfato que participan en reacciones de transferencia como AMPC. se encuentran firmemente unidos a la apoenzima. FAD y coenzima A.2. AMP.2. NALV.2. ejemplos clásicos de grupos prostéticos son el FAD (flavinadenin-dinucleótido) y el grupo hemo.Clasificación de coenzimas Las coenzimas pueden clasificarse como sigue: Para la transferencia de grupos distintos del H: Uridina difosfato (UDP) Pirofosfato de Tiamina (TPP) Fosfato de Piridoxal (PPal) Coenzima A (CoA-SH) Acido tetrahidrofólico (TH4) Biotina Coenzimas de cobamida (B12) Acido Lipoico S-Adenosil metionina (S AM) Algunos autores clasifican estructuralmente a las coenzimas como: coenzimas nucleotídicas y no nucleotídicas.NADP + FAD. ATP. Grupos prostéticos Funcionan también como cofactores o cosustratos enzimáticos pero. el grupo prostético hemo está unido fuertemente y requiere ácidos fuertes para disociarse del citocromo. El resto serían las coenzimas no nucleotídicas. Para la transferencia de H: NAD + . En los citocromos. ADP.FMN Acido Lipoico Coenzima Q 4. NADP+.

Tipos: Catalíticos. Sin embargo el modelo de Fisher consideraba al sitio catalítico rígido y las proteínas en solución son flexibles Fig. Ajuste inducido por un cambio conformacional en la estructura de la enzima antes y después de la unión del sustrato.5. reguladores El modelo original de sitio catalítico para referirse al sitio activo.3. 4. propuesto por Émil Fisher en 1894 representaba la interacción sustrato-enzima en términos de la analogía entre llave-cerradura. son capaces de adsorber moléculas pequeñas en su superfi- cie. Sitio activo de una enzima. Todas las enzimas.3.1. 4.23. Complementos Algunos cofactores enzimáticos no pertenecen a coenzimas o grupos prostéticos derivados de vitaminas sino que representan elementos minerales por ejemplo. la lisinaoxidasa es una enzima que necesita cobre y la anhidrasa carbónica que requiere cinc.42. por el hecho de ser micelas.2. 4.2. la especificidad reside en una determinada región de la superficie enzimática llamado sitio activo (fig. 4. lo cual favorece la interacción de los sustratos y su reacción. . Sitio activo Una propiedad muy importante de las enzimas es su especificidad. Sin embargo.5).

La diferencia cinética entre estas dos isozimas se explica en otros capítulos. llamados reguladores o aloste'ricos. 4.3).4.por esto. A este grupo pertenecen la lisozima. esto se discutirá más adelante al hablar de efectores alostéricos. la creatina fosfocinasa y la fosfatasa alcalina. al que llamó de ajuste inducido (fig. Estas dos subunidades se combinan de cinco formas diferentes para formar cinco isoenzimas: H4. 4. el sustrato induce un cambio conformacional en la estructura terciaria de la proteína enzimática como hace la mano en el guante. tripsina y otras.3. que posee dos subunidades distintas: H (de corazón) y M (de músculo). enzima tetramérica. Este modelo permite también explicar la influencia de otros sitios. HM 3 y M4 (Fig.2. Otro grupo de enzimas contienen dos o más subunidades asociadas por enlaces no convalentes. 4. Nombres sistemáticos y nombres triviales En un principio se designó a las enzimas con nombres triviales según el sitio anatómico Tabla 4. Las isoenzimas más estudiadas por sus aplicaciones clínicas son la deshidrogenasa Algunas reacciones requieren de múltiples enzimas asociadas que participan secuencialmente para transformar un sustrato. 4.2). En este modelo. ejemplos de este tipo son la piruvato deshidrogenasa con un peso molecular de 4.1. Koshland en 1967 emitió un modelo del sitio catalítico flexible. la izoenzima H4 predomina en miocardio (Tabla 4.2 Enzimas oligoméricas Enzimas Número de subunidades PM de cada subunidad peso molecular Total . las isoenzimas y las enzimas alostéricas (Tabla 4. ribonucleasa. Las isoenzimas difieren en su composición de aminoácidos por lo que sus diferencias están determinadas genéticamente. H2M2. Complejos multienzimáticos Existen enzimas que constan de una sola cadena polipeptídica integrando un monómero.2. Enzimas oligoméricas e isoenzimas láctica.5). El caso más ilustrativo es el de la deshidrogenasa láctica. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS 4. H3M. 4. Las isoenzimas o isozimas son diferentes proteínas con la misma actividad enzimática que se originan en diferentes tejidos y presentan un desplazamiento electroforético diferente.8 millones y la sintetasa de ácidos grasos. que modifican la actividad de la enzima al provocar cambios conformacionales en el sitio catalítico. La isoenzima M4 predomina en músculo esquelético y en hígado.5. A este grupo pertenecen algunas enzimas de la glicólisis.6).3.

proteasas. Con frecuen- . el segundo porque el dador electrónico es un alcohol.) El primer dígito es por ser una oxidorreduetasa.Estas enzimas catalizan reacciones de oxidación y reducción muy importantes en biología. 5. como la ptialina. Según éste.C. el subfíjo asa. etc.2. adiaseis. Más tarde se les dio el nombre según la reacción química catalizada. lipasas.1.. 3. las que hidrolizan las grasas o lípidos.. el tercero porque el aceptor es la coenzima NAD + y el cuarto por el número de orden de la enzima. amilasa..1. ejemplo: deshidrogenaseis. esteraseis. 1. la pepsina.Hidrolasas: 4. el segundo dígito identifica la subclase. Después se les denominó añadiendo al nombre del sustrato sobre el que actuaban.1. cada enzima tiene un número clave de 4 dígitos de manejo interna- cional.C. 1. El primer dígito identifica la clase a la que pertenece la enzima. descarboxilasas.. las que hidrolizan proteínas.Isomerasas: y 6. 2.. 4.Oxidorreductasas.l.) basado en el tipo de reacción química y su mecanismo de acción. Clasificación digital de las enzimas En el año de 1961.Transferasas. así las que hidrolizan el almidón (latín amilum).C.. la deshidrogenasa alcohólica será la enzima E. tripsina pancreática.Ligasas.1.de procedencia. El nombre sistemático de la deshidrogenasa alcohólica es alcohol: NAD+. la Unión Internacional de Bioquímica (UIB) adoptó el sistema de clasificación y nomenclatura propuesto por su Comisión de Enzimas (E. 1. etc.1. el tercero la sub-subclase y el cuarto dígito para la enzima específica.Oxidorreductasas.3. de manera que independientemente del país y el nombre trivial que se le dé en cualquier idioma. oxidaseis.oxidorreduetasa (E.Liasas. Las enzimas se clasifican en las seis clases siguientes: 1.

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