ESTRUCTURA, FUNCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

4.1. CONCEPTOS GENERALES Toda reacción química, biológica o inorgánica, es un proceso en el que una o varias moléculas interactúan entre sí para transformarse en otras moléculas siguiendo una dirección determinada por leyes fisicoquímicas (termodinámicas) hasta llegar a un estado de equilibrio: A+B , ) C+D

Existen sustancias llamadas catalizadores que tienen la capacidad de acelerar las reacciones químicas sin alterarse al final de éstas y sin modificar el equilibrio químico; sólo acortan el tiempo en que se alcanza dicho equilibrio. Los catalizadores se dividen en dos grupos: orgánicos e inorgánicos. Dentro de los primeros tenemos las enzimas y en el segundo los iones H + , OH " o metálicos. Las enzimas son moléculas producidas por las células de los organismos vivos con la función específica de catalizar reacciones químicas, las que sin ellas, ocurrirían muy lentamente. Hasta hace pocos años se consideraba que todas las enzimas eran proteínas. Sin embar-

go, recientes investigaciones realizadas por Cech y colaboradores (Cech, T.R., Science, 236, 1532-39 (1987) han demostrado que moléculas de RNA pueden actuar como enzimas con una elevada actividad catalítica. Se ha comprobado experimentalmente que la molécula de RNA L-19 derivada de un intrón de un precursor de una RNAr de un protozoario ciliado actúa como ribonucleasa y como RNA polimerasa. Esta enzima de RNA o RNA enzimático o ribozima muestra las mismas propiedades cinéticas que las otras enzimas tradicionales, un alto grado de especificidad y susceptibilidad a la inhibición competitiva. Este descubrimiento puede tener importantes implicaciones sobre la evolución de las moléculas y puede contribuir a aclarar el mecanismo de acción de los catalizadores. La vida y el crecimiento celular requieren la continua síntesis de macromoléculas acoplada a procesos proveedores de energía. El acoplamiento controlado de las reacciones químicas mediante la acción de enzimas es propiedad única de las células vivas. Entre las miles de sustancias presentes en una célula, las enzimas constituyen la parte más importante de las proteínas celulares. Esencialmente, todas las reacciones bioquímicas son catalizadas por enzimas.

cia emplean coenzimas del tipo del NAD + , NADP + , FAD, ácido lipoico y CoQ como aceptores de hidrógeno; otros aceptores incluyen al grupo hemo y al oxígeno molecular. En este grupo se incluyen deshidrogenasas y oxidasas de gran importancia en los procesos oxidativos de la respiración celular. La catalasa es única en el sentido de que el peróxido de hidrógeno (H2O2) sirve tanto como donador y como aceptor. La catalasa funciona en la célula eliminando el peróxido de hidrógeno que es tóxico. 2.- Transferasas.- Muchos pasos importantes del metabolismo requieren la transferencia de una molécula a otra de grupos ámino, carboxilo, carbonilo, metilo, ácido, glucosilo, o fosforilo. Las coenzimas utilizadas son el tetrahidrofolato (FH4) coenzima A (CoA-SH) y fosfato de piridoxal (PPal). Las aminotansferasas (transaminasas) transfieren grupos amino de un aminoácido a un cetoácido aceptor, dando lugar a la formación de un nuevo aminoácido y un nuevo cetoácido. Las cinasas catalizan la transferencia de un fosfato del ATP a grupos aceptores, alcohol o ámino, como ejemplo tenemos la glucocinasa que forma glucosa-fosfato. La síntesis de glucógeno depende de glucosiltransferasas. 3.- Hidrolasas.- Catalizan el rompimiento de una molécula, con participación de agua, entre enlaces carbono y cualquier otro átomo. Este grupo de enzimas se puede considerar como una clase especial de transferasas en las que el grupo donador se transfiere al agua. La rotura del enlace peptídico es buen ejemplo de esta reacción llevada a cabo por peptidasas. Nombres triviales de algunas peptidasas incluyen pepsina, tripsina, quimotripsina y dipeptidasa. Otras subclases son las esteraseis como la lipasa, colinesterasa, y colesterol esterasa. Las fosfatasas eliminan grupos fosfatos, como la glucosa6-fosfatasa y las fosfatasas acida y alcalina. 4.- liosas.- Catalizan el rompimiento no hidrolítico entre carbono-carbono, carbonoazufre y algunas carbono-hidrógeno. A este

grupo pertenecen las descarboxilasas. Aldehido nasas como la aldolasa, fumara y otras. 5.- Isomerasas.- Incluye a todas las enzimas que catalizan la interconversión de todo tipo de isómeros ópticos, geométricos, de posición y reacciones de oxidorreducción intramolecular. A este grupo pertenecen las racémosos, epimerasas y mutasas. 6.- Ligasas.- Catalizan la formación de enlaces entre carbono-oxígeno, nitrógeno y otros átomos a expensas de un enlace fosfato de alta energía del ATP. El término de sintetasas se reserva para este grupo particular de enzimas. La piruvato carboxilasa es un buen ejemplo de una ligasa. También la acetil-CoA sintetasa, la aminoacil-RNAt sintetasa, enzimas activadoras de aminoácidos en la síntesis de proteínas. En la Tabla 4.4 se describen algunas enzimas y su clasificación de acuerdo a la comisión de enzimas. 4.4 LOCALIZACIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE LAS ENZIMAS Las enzimas dentro de un organismo se encuentran distribuidas en los diferentes órganos y tejidos donde realizan su función específica. Dentro de una célula, algunas enzimas se encuentran compartamentalizadas y ordenadas; ejemplo: en las células hepáticas, las enzimas de la glicólisis están localizadas en el citoplasma, en tanto que las enzimas del ciclo de Krebs en las mitocondrias. Dentro de la mitocondria, las enzimas del ciclo del ácido cítrico se encuentran dispuestas en forma secuencial, lo cual da al proceso ergopoyético de la célula la máxima eficacia.

4.4.1.

Nivel celular. Sistema microsomal

La localización de una enzima particular en un tejido o célula es el fundamento de una

Tabla 4.4 Clasificación Internacional de las enzimas Número 1. 1.1 1.1.1 1.1.1.1. 1.1.3. 1.1.3.4. 1.2. 1.2.1.12. 1.2.3.2. 1.2.4.1. 1.3. 1.3.1.1. 1.4 1.4.1.2 1.5 1.5.1.5 1.6. 1.6.2.1. 1.9. 1.9.3.1. 1.11. 1.11.1.6 2. 2.1 2.1.1 2.1.1.2 2.1.2 2.1.2.1 Nombre sistemático Oxidorreductasas Grupos CH-OH NAD+ o NADP + aceptor Alcohol NAD + oxidorreductasa: O2 como aceptor p-D-glucosa: oxígeno Oxidorreductasa (FAD) Grupos C = 0 Gliceraldehído 3-P:NAD* Oxidorreductasa (NAD+) Xantina:oxígeno oxidorreductasa. Piruvato: lipoato Oxidoreductasa Grupos CH-CH 4,5-Dihidrouracilo: NAD+ oxidorreductasa Grupos CH-NH2 L-glutamato: NAD+ oxidorreductasa Grupos C-NH5,10-Metilenotetrahidrofolato: NADP + oxidorreductasa Sobre NADH o NADPH como donador NADH: citocromo C oxidorreductasa Sobre grupos hemo donadores. Citocromo C: oxígeno oxidorreductasa Con H2O2 como aceptor Peróxido de hidrógeno: H2O2 oxidorreductosa Transferasas Grupos de 1 carbono metil transferasas S-adenosil-metionina: guanidino-acetato N-metil Transferasa Hidroximetil y fomil transferasa L-serina: FH4 5,10-hidroximetil trasferasa Nombre trivial

Deshidrogenasa Alcohólica Glucosa oxidasa

Triosa-P-deshidrogenasa Xantino oxidasa Piruvato deshidrogenasa Dihidrouracilo deshidrogenasa Glutamato deshidrogenasa Metilen-FH4-deshidrogenasa

Citocromo C reductasa Citocromo oxidasa Catalasa

Guanidometil transferasa

Serina hidroximetil transferasa

CONTINUA TABLA 4.4
Número 2.1.3 2.1.3.2 2.2 2.2.1.1 2.2.1.2 2.6.1 2.6.1.1 2.6.1.2 2.7.1 2.7.1.2 2.7.7.10 3. 3.1 3.1.1 3.1.1.7 3.1.2 3.1.2.1 3.1.3 3.1.3.9 3.2.1 3.2.1.1 3.4.4 3.4.4.1 3.5.1.5 3.6.1.3 4 4.1.1 4.1.1.1 4.1.2 4.1.2.7 Nombre sistemático Carboxil o carbamoil transíerasas Carbamoil-P: L-aspartato transferasa Transferencia de grupos aldehídicos o cetónicos Sedoheptulosa 7-P: gliceraldehido glicolaldehído transferasa Sedoheptulosa: 7-P: gliceraldehido Dihidroxiacetona transferasa Aminotransferasas L-aspartato: 2-oxoglutarato aminotransferasa L-alanina: 2-oxoglutarato aminotransferasa Fosfotransferasas ATP: glucosa 6-P transferasa UTP: galactosa 1-P uridil transferasa Hidrolasas Enlace éster Carboxílico Acetilcolina acetil hidrolasa Tióester Acetil CoA hidrolasa Ester fosfórico Glucosa 6-P fosfohidrolasa Glucósido hidrolasas a l - 4 gluca-4glucano hidrolasa Péptido hidrolasas Pepsina Urea amidohidrolasa ATPfoshidrolasa Liasas Carboxiliasas 2-oxo-ácido carboxil iasa Aldehidoliasas Cetona 1-Paldehidoliasa Ureasa ATPasa Nombre trivial Aspartato transcarbamilasa

Transcetolasa Transaldolasa

Transaminasa glutámico oxalacética Transaminasa glutámico pirúvica Glucocinasa UDP-galactosa pirofosforilasa

Colinesterasa Tiolasa Glucosa 6-fosfatasa a-amilasa

Piruvato descarboxilasa Aldolasa

3.1 5.1.4.1 4.2. En células eucarióticas las enzimas se distribuyen en la membrana celular. (tabla 4.2. En la membrana celular se encuentran enzimas que participan en el transporte de metabolitos y . mitocondrias (matriz y espacios intermembranas) lisosomas.1 6.1.4.1 6.1. rama de la histoquímica denominada histoenzimología.3. La distribución de las enzimas en los organelos subcelulares se estudian fraccionando en ultracentrífuga homogeneizados de células.4 6.1 5. Generalmente las vías anabólicas y catabólicas se localizan en organelos diferentes a fin de maximizar la economía celular.1. como es el caso de las enzimas oxidativas de la mitocondria.5).2.3.1 5.2 5 5.1 6 6.1.1. etc.1. retículo endoplásmico.2.4 Número 4.1. otras se encuentran fijas ordenadamente en alguna membrana particular y funcionan en forma secuencial.1. 3 epimerasa Cis-trans isomerasas Malea to cis-trans isomerasa Aldo-ceto isomerasas D-gliceraldehído 3-P cetol isomerasas Ligasas Aminoácido-RNA L-tirosina: RNAt ligasa(AMP) Acido tiol Acetato: CoA ligasa (AMP) Enlaces C-N UTP: amonio ligasa (ADP) Enlaces C-C Piruvato: C 0 2 ligasa (ADP) Nombre trivial Citrato sintetasa Fumarasa Alanina racemasa Epimerasa Maleato isomerasa Triosa-P isomerasa Tirosil-RNAt sintetasa Acetil CoA sintetasa CTP sintetasa Piruvato carboxilasa las que regulan la acción de hormonas o neurotransmisores sobre los receptores membranales.2.7 4.1.2 6.3.1 Nombre sistemático Cetoacidoliasas Citrato oxalacetato liasa Hidroliasas L-malatohidroliasa Isomerasas Racemasas y epimerasas Alanina recemasa D-ribulosa 5-P.2 5.1 6.1.3 4.1 5.1 5. vacuolas.1 6.3. En tanto que muchas enzimas se encuentran solubles en el citoplasma.3 6.1.CONTINUA TABLA 4.

TGP) se localiza en hígado. síntesis de fosfoglicéridos y triacilgliceroles.4. otra variante isoenzimática la LDH-X se localiza en testículo.Tabla 4. La amilasa y lipasa pancreáticas ayudan al diagnóstico de pancreatitis aguda cuando se elevan en suero (ver más adelan- . fosfolipasas y fosfatasas. arilsulfatasas. rutas de síntesis de proteínas. oxidación de ácidos grasos. la aspartato aminotransferas (antes transaminasa glutámico oxalacética. algunas de ellas específicas de determinado órgano. TGO) se localiza princip a l m e n t e en m i o c a r d i o y la a l a n i n a aminotransferasa (antes transaminasa glutá- mico pirúvica. NADH y NADPH citocromo c reductasas. lipasas. síntesis de la urea. y glucuroniltransferasa. aminoacilsintetasas Ciclo de los ácidos tricarboxílicos. síntesis y reducción de esteroides Galactosil y glucosiltransferasa. oxidación de aminoácidos. oxidasas de función mixta relacionadas con el citocromo b. reductasa se ha encontrado en el retículo endoplasmático. peptidasas. Varias de las enzimas señaladas en la tabla son comunes a uno o más organelos membranosos. glucogénesis y glucogenólisis: síntesis de ácidos grasos.5 Localización intracelular de las principales enzimas y rutas metabólicas Citoplasma Glucólisis: ruta de las hexosa monofostato. oxidación de ácidos grasos de cadena larga Rutas de biosíntesis de DNA y RNA Mitocondria Lisosomas Retículo endoplasmático (microsomas) Golgi Peroxisomas Núcleo a La NADH-citocromo b. membrana mitocondrial externa y en la envoltura nuclear. y el citocromo P450. NADH-citocromo c reductasa. catabolismo de purinas y pirimidinas. glucosa 6-fosfatasa Urato oxidasa. alargamiento de ácidos grasos. A nivel de organismo La localización y distribución de enzimas que funcionan específicamente en determinados órganos es el fundamento de la enzimología clínica. incluyendo proteasas. la LDH-1 (H4) se localiza en miocardio y la LDH-5 (M4) se localiza en hígado y músculo esquelético. D-aminoácido oxidasa. 5-nucleotidasa. Lisozima. Dos subclases de aminotransferasas se localizan en órganos distintos.2. La creatina fosfocinasa se localiza en músculo estriado (esquelético y miocardio). aminotransferasas. a-hidroxiácido oxidasa. P-glucuronidasa. transporte electrónico y fosforilación oxidativa acoplada. catalasa. La deshidrogenasa láctica posee varias isoenzimas. hidrolasas. nucleasas. condroitina sulfotransferasa. 4. fosfaíasa acida. nucleósido difosfatasa. glucosidasas. esterasa. Golgi. glucosa 6-fosfatasa.

4. Si en la reacción se absorbe calor.te). las cuales pueden ocurrir aún en ausencia de enzimas pero muy lentamente. El estudio de esto. los cuales permiten comprender el sentido de las reacciones químicas. La realización y extensión de las reacciones bioquímicas están controladas por el flujo energético. esto determina que un cuerpo caliente ceda calor a otro más frío y no al revés. es el campo de las termodinámica. Este principio establece que los procesos espontáneos tienden al equilibrio. que el agua corra por un declive y no suba por una pendiente. cuyos conceptos principales se establecen en d o s p r i n c i p i o s de la termodinámica llamados primero y segundo.1. AF = LFf productos . rama de la fisicoquímica. termodinámicamente posibles.LHf reactantes Una reacción que es exotérmica en sentido directo. es decir aquellas termodinámicamente imposibles. determinan la presencia de carcinoma prostético y óseo respectivamente. Aspectos termodinámicas. con formación de CO2 y H 2 0 es una reacción exergónica. los productos tendrán más energía que los reactantes. Las enzimas no catalizan reacciones que jamás sucederían espontáneamente. En las reacciones en que se desprende calor. y si hay que suministrarle energía para que ocurra. en virtud de que las enzimas sólo aceleran reacciones espontáneas o metaestables. ejemplo: en la fotosíntesis. Energía C H 6 12°6 + °2 6C0 2 + ÓHjO Energía El segundo principio de la termodinámica determina la dirección de una reacción química. La aplicación del primer principio de la termodinámica (principio de conservación de la energía) a las reacciones químicas ha dado origen a la termoquímica que estudia la cantidad de calor que se absorbe o se desprende en una reacción y permite calcular la energía libre (F) y la entalpia o contenido calórico (H). si una reacción procediera de izquierda a derecha. la degradación metabólica de la glucosa por la célula. Energía de activación Conviene analizar previamente los conceptos termodinámicos. la cual a su vez se rige por la ley de acción de masas. El cambio de energía libre (AF) o energía útil se correlaciona con la constante de equilibrio (Keq).LHf productos . Para cualquier reac- . Se habla así de calor de formación y calor de reacción. será endotérmica en sentido inverso.LFf reactantes AH . la energía solar permite la síntesis de glucosa (Ce H12 0¿) y es una reacción endergónica. si es reversible. Las fosfatasas. la fosfatasa acida en próstata y la fosfatasa alcalina en hígado y hueso. cuando se elevan en suero. 4. que determinan el sentido de una reacción y su equilibrio.5.5 MECANISMO DE ACCIÓN El mecanismo de acción de las enzimas se estudiará primero desde el punto de vista general de la catálisis y luego de cada sistema enzimático en particular. AF y AH son negativos y la reacción es exotérmica {exergónica en general). de la misma magnitud. los cambios de energía libre (AF) y de entalpia (AH) son positivos y se dice que la reacción es endergónica (o endotérmica si es en forma de calor). con su localización particular. o si la libera y en qué magnitud.

1). la reacción sólo transcurrirá si se le proporciona energía (tabla 4. las enzimas hacen que las reacciones termodinámicamente posibles procedan con rapidez en la célula pero no modifican la constante de equilibrio. Existen sistemas de reacción que se presentan en estado metaestable. por lo tanto: AF° = -RT lnKeq puestos orgánicos inflamables expuestos al aire. La cinética estudia la velocidad de cambio entre el estado inicial de reactantes y productos y su estado final. pero no espontáneo. no hay cambio de energía libre y AF=0.6). como la gasolina. es decir es termodinámicamente posible. La velocidad del cambio en la concentración del producto o del sustrato en función del tiempo. cofactores y enzimas) se añaden a una serie de recipientes en un medio con fuerza iónica. Esa barrera termodinámica es la energía necesaria para alcanzar el estado de transición como energía de activación (fig. En todos los procesos enzimáticos. es decir termodinámicamente posible. Cinética enzimática si AF° es negativo.6 Relación entre Keq y AF° (a 25°C) Dado que las enzimas modifican la velocidad de las reacciones químicas. el proceso se desarrollará espontáneamente. que necesitan una chispa para su ignición y su transformación en CO2 y H2O. Si se aumenta progresivamente la concentración . si AF° es positivo. temperatura y pH conocidos. este capítulo tratará de los factores que inciden en la actividad de una enzima.5. En un sentido cinético.ción química: la ecuación que determina el cambio de energía libre respecto a la concentración de reactantes y productos es la siguiente: Donde AF° es el cambio de energía libre en condiciones estándar: este valor es equivalente al pKa de la ecuación de HendersonHasselbach (ver unidad 2).4. expresa la velocidad de la reacción. 4. La energía de activación es la energía necesaria para pasar las moléculas reaccionantes al estado de transición y que de ahí proceda la reacción. muchas reacciones químicas proceden excesivamente lentas a la temperatura del organismo. la velocidad de la reacción depende de la concentración de enzima y de su sustrato. En ausencia de catalizadores enzimáticos. La velocidad cambia constantemente a medida que se aproxima al equilibrio (estado final) siendo cero en el equilibrio. los componentes iniciales del sistema enzimático (sustrato (S). Esto sucede con algunos comTabla4. no reaccionan con rapidez debido a que la energía cinética que poseen es insuficiente para superar esa barrera de energía.2. En el equilibrio. Al disminuir la energía de activación.

manteniéndose constante (pero en exceso) la concentración del sustrato. la enzima debe tener un número finito de sitios catalíticos para el sustrato y cuando están todos ocupados ya no puede aumentar la velocidad de la reacción. Para explicar matemáticamente este comportamiento Michaelis y Menten invocaron la existencia de un complejo intermedio enzima-sustrato: K E + S K. A concentración fija de enzima y concentraciones crecientes de sustrato se obtiene una segunda relación interesante. la velocidad de la reacción aumenta proporcionalmente a la concentración de sustrato. b) la enzima sacarasa en presencia de sacarosa resistía la desnaturalización térmica . ' [ES] K„ • E+P La formación del complejo enzima-sustrato [ES] se dedujo de las siguientes observaciones.8).7). 4. Modelo de Michaelis-Menten. a este punto. Después. Al principio. se le designa como reacción de primer orden en virtud de que la velocidad depende de la concentración del sustrato (S) elevada a la primera potencia. esto se explica porque la enzima se ha "saturado" con sustrato (fig. 4.de enzima. la velocidad de la reacción decrece progresivamente hasta que permanece constante (Vmax) aun con elevadas concentraciones de sustrato (cinética de orden cero). En otras palabras. seguía degradándose. se obtiene una relación directa y lineal (fig. a) fibrina tratada con tripsina y lavada posteriormente.

un paciente excretaba tres veces la cantidad normal de ácido úrico por día y tenía también niveles elevados de fosforribosil pirofosfato (PRPP) en eritrocitos.. fijación del sustrato seguida de su modificación química. en este sencillo modelo.10. 4.Vmax. 4.¿ .9). Keilin y Mann en 1937 comprobaron que la peroxidasa presenta un desplazamiento de las bandas de absorción cuando se adiciona H2O2: K i Peroxidasa + H J O J . Cuanto más baja sea Km. es necesario tomar el recíproco de la ecuación y transformarla en una línea recta: i . mayor es la afinidad. Modelo de Eadie-Hofstee.comparada con la sacarasa sola. en una curva de saturación (fig. ya que la Vmax se hace asintótica. . Nótese que si la velocidad (v) se hace igual a .. Así.==? [Peroxidasa . 1 Vmax [S ] + 1 Vmax y = ax + b La gráfica que se obtiene es la de Lineweaver-Burk o del doble recíproco (fig. la actividad de la enzima se puede separar en dos fases.H 2 0 2 ] + R-H 2 roxidasa + 2 H 2 0 + R K3 aquejada de hiperuricemia y gota.8) el valor numérico de la Km puede deducirse en la gráfica en concentración de sustrato [S]. Los ensayos indicaron que la actividad PRPP sintetasa estaba aumentada tres veces. Las dos constantes de la ecuación de Michaelis Menten. Otra transformación a la gráfica de Michaelis-Menten que permite calcular con mayor precisión la Km es la ecuación de Eadie-Hofstee: V v [S] ~~Km + Km. Vmax y Km son únicas para cada enzima.I Al En términos prácticos. La ecuación matemática que define la reacción enzimática es una hipérbola que recibe el nombre de ecuación de Michaelis-Menten: _ Vmax [S] Km + [S] El valor de Km (constante de Michaelis) que se expresa en moles/litro. la Km es un valor que indica la afinidad de la enzima por el sustrato. resulta de las constantes de velocidad. la Km se hace igual a [S] en la ecuación de Michaelis-Menten. donde se puede calcular Km en la intersección negativa de la abscisa. cuando la velocidad es la mitad de la velocidad máxima. v Km Pe- La observación en el espectroscopio de estas dos reacciones resultó una prueba convincente de que es correcta la hipótesis de la formación del complejo [ES]. Debido a que en la práctica la determinación de Km a partir de la curva de saturación de Michaelis-Menten no es muy precisa.H J O J ] En presencia de un donador de hidrógenos (colorante oxidable) tiene lugar una reacción posterior: [Peroxidasa . Esta naturaleza bifásica se demuestra en el siguiente ejemplo clínico: en una familia Vmax Km La gráfica obtenida se muestra en la fig. Por tanto. donde la pendiente negativa es la inversa de Km. la Km de la enzima era normal pero la Vmax era tres veces mayor. Por otro lado. 4. Modelo de Lineweaver-Burk.

1. La actividad específica se define como el número de unidades de enzima por miligramos de proteína (U/mg proteína). El antiguo "número de recambio" recientemente sustituido por actividad molecular o molar. se define como el número . Sin embargo esto no indica si en la muestra la única proteína presente es la enzima.4. Durante la purificación enzimática este valor va aumentando a medida que se van eliminando proteínas contaminantes.5. Actividad enzimática La actividad de una enzima se expresa habitualmente en términos de la cantidad de producto formado (o desaparición de sustrato) por cantidad determinada de enzima por unidad de tiempo.2. La unidad estándar de actividad enzimática (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto a 25 °C en condiciones óptimas de ensayo.

Otra importante vinculación de las enzimas con la medicina.4. La eficacia del tratamiento terapéutico y la magnitud de las reacciones indeseables (reacciones secundarias. tratamiento y prevención de enfermedades. El empleo de enzimas inmovilizadas es otra posibilidad de terapia cuando hay carencia de enzimas en un organismo evitando así las reacciones de intolerancia y asegurando la estabilidad y las condiciones óptimas para la actividad catalítica. Estas determinaciones son tan importantes que han dado lugar a una nueva especialidad: la enzimología clínica. Concepto de enzima. pentosuria esencial y muchas otras que se revisarán más adelante).1. que es el área de la medicina que utiliza las enzimas como auxiliares diagnósticos. diagnóstico. esta práctica se conoce como enzimoterapia. precauciones. Importancia de las enzimas El estudio de las enzimas en medicina es cada vez más importante. El diagnóstico de muchas enfermedades se puede'realizar con bastante precisión determinando la actividad de ciertas enzimas o isoenzimas que son indicadores de la destrucción tisular de órganos específicos.1. "enfermedades moleculares". los productos de la reacción directa (que procede hacia la derecha) son los sustratos de la reacción inversa (que procede hacia la izquierda). contraindicaciones. Muchas enfermedades se deben a la carencia o anormalidad en la síntesis de una determinada enzima (galactosemia. Dado que muchas reacciones son reversibles. son ejemplos del uso de enzimas como fármacos. el sustrato (S) que es la molécula sobre la que actúa la enzima y el producto (P) molécula o moléculas resultantes de la acción de la enzima sobre el sustrato. acompetitivo o mixto. inversa C+D productos En reacciones secuenciales de una vía metabólica. como sucede con las vitaminas (procoenzimas) y algunos oligoelementos. directa A+B sustratos . actuando como inhibidor enzimático competitivo. Otras enfermedades se deben a la carencia de cofactores enzimáticos y la administración de ellos produce la rápida curación de estas enfermedades carenciales.1. ya sea. no competitivo. el producto de una reacción ca- . sólo se podrán lograr y prevenir en la medida que se conozca el mecanismo de acción de cada fármaco y las múltiples interacciones que pueden ocurrir con las enzimas.2. La mayor parte de los fármacos que se utilizan en el tratamiento de enfermedades tienen como mecanismo de acción el modificar la actividad de una o varias enzimas. Son múltiples las implicaciones que tienen las enzimas en el origen. sustrato y producto En una reacción enzimática se identifican tres componentes: la enzima (E) específica de la reacción. Es indudable que la enzimoterapia tiene un futuro promisorio con las técnicas de ingeniería genética que permiten introducir la información genética para la síntesis de la proteína ausente o defectuosa utilizando plásmidos o partículas viriformes. El empleo de enzimas proteolíticas para el tratamiento de hematomas y de enzimas digestivas en casos de dispepsia. "enfermedades hereditarias" o "enfermedades bioquímicas". albinismo. secuestrando o liberando cofactores o induciendo la biosíntesis de algunas enzimas. radica en el empleo racional de fármacos. interacciones farmacológicas). 4. fenilcetonuria. En ocasiones son las propias enzimas las que se usan para el tratamiento de enfermedades. Estos errores están codificados en el genoma y se denominan: "errores innatos del metabolismo".

4. estos factores deben considerarse al realizar los ensayos in vitro para medir actividades enzimáticas en el plasma de un paciente.1. Muchos medicamentos actúan como inhibidores competitivos de ciertas enzimas. si la fiebre continuara indefinidamente sería fatal.7 Actividad molecular de algunas enzimas Enzima Actividad molar (moles de sustrato por mol de enzima por minuto) 36.000 5.5. Debido a que muchas enzimas son oligoméricas. La gráfica de velocidad frente a temperaturas (Fig. químicos y biológicos: temperatura. Hasta que todos los laboratorios de análisis clínicos unan esfuerzos para estandarizar sus informes.11) revela una curva en forma Anhidrasa carbónica Catalasa p-amilasa p-galactosidasa Succinato deshidrogenasa . que el médico se familiarice con las reglas locales en el manejo de unidades de actividad enzimática.100 12 1 000 000 000 000 150 actividad enzimática aumenta con los incrementos de temperatura. Estos efectos son tan importantes in vivo como en condiciones de laboratorio. Las enzimas a temperaturas bajas muestran un aumento de su actividad al incrementar la temperatura.5. Factores que afectan la actividad enzimática La actividad enzimática es afectada por una serie de factores externos e internos que pueden ser físicos. por minuto.3. fuerza iónica. 4. pero a altas temperaturas la enzima sufre desnaturalización térmica y la velocidad de la reacción disminuye (fig. La comisión de enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica ha propuesto una nueva unidad. se puede expresar en milika tales (mKat) o microkatales (uKat).7). Factores físicos y químicos Temperatura. 4.600 1. Por otro lado. la actividad molar se denomina actividad del centro catalítico: número de moles de sustrato por mol de subunidad activa o por sitio catalítico. el Katal (Kat) que se define como la conversión de un mol de sustrato por segundo. concentración del sustrato. pH. con un sitio catalítico en cada subunidad. del producto e inhibidores. es imperativo. la velocidad de los procesos metabólicos crece notablemente durante la fiebre.de moles de sustrato transformado por un mol de enzima por minuto (mol/min/mol de enzima) (tabla 4. de la enzima.3. en el primer caso.11). 4. debido a que la Tabla 4.

no es el pH de máxima actividad de la enzima (pH óptimo). por lo tanto. Muchos procesos fisiológicos. El factor que resulta por cada 10°C de incremento en la temperatura se denomina coeficiente térmico (Qio) y en las reacciones químicas habituales es de alrededor de 2. El pH óptimo de la mayoría de las enzimas se localiza entre los valores de 5 y 9. 4. Por el contrario en condiciones de hipotermia muchas reacciones enzimáticas están deprimidas lo que explica la baja demanda de oxígeno de algunos organismos durante periodos de hibernación. Además de los efectos puramente iónicos. Hg) sobre la actividad enzimática se debe a la acción desna- turalizante sobre las proteínas en general. Los cambios de pH afectan profundamente el carácter iónico de los grupos funcionales de la enzima y. el pH del punto isoeléctrico. sin embargo. Por ser proteínas. Por arriba de la temperatura óptima.8). la frecuencia de contracción de un corazón extirpado. El incremento de velocidad al acercarse la temperatura óptima se debe a una mayor energía cinética de los reccionantes (sustrato). alteran la conformación de la proteína y con ello. El efecto nocivo de las radiaciones. por ejemplo. las enzimas poseen un punto isoeléctrico en el que su carga eléctrica es cero. la pepsina o la arginasa son activas a valores depH alejados de este óptimo (Tabla 4. las muestras de sangre son primero tratadas con ácidos como el tncloroacético. la velocidad de reacción decrece por desnaturalización de la e n z i m a . la labilidad de la mayoTabla 4.de campana con un óptimo entre 40 y 45 °C para enzimas humanas. muestran un (Qio) • 2. L a s e n z i m a s de microorganismos adaptados a vivir en aguas termales muestran temperaturas óptimas cercanas al punto de ebullición del agua. los valores altos o bajos de pH (ácidos o alcalinos) provocan desnaturalización de la enzima (fig. fosfotúngstico y otros para desnaturalizar y precipitar proteínas. algunas enzimas. Esta propiedad es útil en el laboratorio clínico. Sin embargo. por ejemplo.8 Valores óptimos de pH para algunas enzimas . o sea. denominada temperatura óptima. se duplica la velocidad de la reacción por cada 10°C de aumento en la temperatura. el sitio catalítico. pH. Pb. sales y metales pesados (Ag.12).

Los inhibidores son compuestos que tienen la capacidad de unirse a enzimas de tal forma que impiden la combinación enzima-sustrato. la catalasa (PM 250. 4. La magnitud de la in- .5. Inhibidores enzimáticos Aunque se requiere la molécula completa de la apoenzima para su actividad catalítica. Esta molécula forma un complejo reversible con la enzima (El) que compite continuamente con el sustrato por el sitio catalítico. Pueden afectarse ciertos aminoáci- dos de una enzima sin que ello altere su actividad catalítica siempre y cuando no se afecten los involucrados en el sitio activo.13). Existen diferentes tipos de inhibidores enzimáticos: competitivos. 4. Este es un hueco molecular en la estructura terciaria de la enzima con tres puntos de apoyo próximos entre sí (tres aminoácidos) aunque en la estructura primaria no estén próximos (fig.000) respecto al peróxido de hidrógeno (PM 34).3. no competitivos e incompetitivos. El peso molecular de la mayoría de los sustratos es muy pequeño comparado con el de las enzimas.ría de las enzimas a estos agentes desnaturalizantes permite determinar si una reacción es catalizada por una enzima.2. Inhibición competitiva. existe una zona determinada donde se combina con él sustrato al que se llama sitio activo o sitio catalítico. Está dada por una molécula parecida estructuralmente al sustrato (isostérica) que se une al sitio catalítico pero no se transforma. Un inhibidor enzimático es cualquier agente químico capaz de disminuir la velocidad de una reacción sin desnaturalizar la enzima. Quizá la prueba más evidente de la localización de sitios activos proviene de estudios con inhibidores. Por ejemplo.

Dado que el hombre adquiere folato en forma exógena. Es decir.hibición dependerá de: a) la concentración de inhibidor. quien comprobó que la inhibición del crecimiento bacteriano por sulfas era contrarrestado por ácido paraaminobenzoico (PABA). Un ejemplo muy conocido es la inhibición competitiva de la succinato deshidrogenasa. Inhibición no competitiva. las sulfanilamidas no son dañinas a las dosis que inhiben a las bacterias. 4. ácidos grasos. 4. no se afectarán por sulfas. Este tipo de inhibición es irreversible aun cuando se aumente la concentración de sutrato. La investigación de los antimetabolitos se inició con la observación de Woods en 1940. Estos compuestos pueden ser aminoácidos. serán antimetabolitos. no existe relación entre el grado de inhibición y la concentración de sustrato.14). La inhibición solo depende de: a) la concentración del inhibidor y b) la afinidad del inhibidor por la enzima. b) la concentración de sustrato y c) las afinidades relativas (Km) entre inhibidor y sustrato por la enzima. Otro ejemplo es la inhibición de ciertos tumores por 5-fluorouracilo y la de algunos virus como el herpes labial por yododesoxiuridina. vitaminas. la Km muestra un incremento aparente en presencia del inhibidor. son parecidos (fig. La Km que se obtiene experimentalmente es denominada Km aparente: la Vmax no varía. el succinato y el inhibidor. La utilización eficaz de las sulfas para combatir infecciones en el hombre depende de este hecho. En . Los microorganismos que necesitan PABA para su crecimiento. Muchos antimetabolitos ejercen su acción a nivel de coenzimas o grupos prostéticos como los antifólicos como el metotrexate o alguna antivitaminas como la oxitiamina o la oxipiridoxina. El grado de inhibición competitiva es proporcional a la concentración de inhibidor (I). cuyo sustrato natural. Aquellos organismos que requieren ácido fólico pero que no lo puedan sintetizar a partir de PABA. Esto se puede ver en la gráfica de Michaelis-Menten y en la de LineweaverBurk (fig. estas enzimas pueden inhibirse por medio de antimetabolitos. Los organismos utilizan ciertos metabolitos y enzimas para sintetizar estos compuestos esenciales. aquellos que impiden el aprovechamiento y utilización de los metabolitos naturales debido a su parecido estructural. Los animales superiores y muchos microorganismos son incapaces de sintetizar algunos compuestos necesarios para su supervivencia. Toda o gran parte de la farmacoterapia moderna está basada en los conceptos de inhibición enzimática. un aumento en la concentración de sustrato en presencia de una concentración fija del inhibidor llega a superar la inhibición. Ejemplos de inhibición competitiva es la que se realiza al administrar ciertos fármacos. Si denominamos metabolitos a los sustratos fisiológicos presentes o producidos en el metabolismo celular. lo utilizan como metabolito para sintetizar ácido fólico. etc. por lo que estos adquieren la categoría de nutrimentos esenciales. Este crecimiento bacteriano puede inhibirse con antimetabolitos como las sulfas. sin embargo. malonato. Dado que sustrato e inhibidor compiten por el mismo sitio de la inzima.15).

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Estrictamente. En la inhibición no competitiva no se altera la Km pero sí la Vmax (fig. En otros casos. pero que provoque un cambio de conformación en la enzima de suerte que ésta pierda su actividad catalítica (fig. los productos de la reacción son inhibidores específicos de la reacción enzimática. un agente que reacciona con estos grupos es la yodoacetamida (I-CH2—CO-NH2): E-SH+I-O^-CO-NHj -* E-S-CH^-CO-NHj+HI Enzimas como la peroxidasa y catalasa. Es una forma de inhibición no competitiva pero reversible. Esta particularidad permite que en corazón se in- . el inhibidor se puede combinar con la enzima (El) o con el complejo enzima-sustrato ya formado (EIS) y la reacción puede retrasarse pero no impedirse. que contienen hierro como grupo prostético. el sustrato puede inhibir o activar su propia reacción (fig. la formación del complejo enzima-inhibidor puede o no ocurrir en el sitio activo de la enzima. Se presenta sobre todo cuando hay más de un sustrato en la reacción.contraste con la inhibición competitiva. que no es inhibida por producto. El inhibidor no competitivo puede ser unamólecula(Ii) que no se une en el sitio activo sino cerca de él. Un ejemplo de inhibición por producto lo tenemos en la deshidrogenasa láctica (LDH) de la cual existen dos isoenzimas particulares: en el músculo predomina la isoenzima M4. 4.19). puede ser un inhibidor (I4) que no intervenga en la formación de ES. 4. El diisopropilfluorofosfato (DIPFP) inhibe enzi- mas con grupos funcionales oxidrilo (SerOH) como la colinesterasa. En ésta. son inhibidas por compuestos que forman complejos con el metal como el cianuro o el H2S.16). Inhibición incompetitiva o acompetitiva.17). 4. Algunas enzimas tienen grupos sulfhidrilo (-SH) esenciales para su actividad. La modificación en la gráfica de Lineweaver-Burk de la inhibición incompetitiva es la que se observa en la fig. puede unirse a uno de los tres puntos esenciales del sitio activo (I2). Los iones fluoruro y oxalato inhiben enzimas que requieren Ca+2 o Mg+2. o incluso puede ser un análogo del sustrato (I3) pero que no puede ser desplazado por altas concentraciones del sustrato. en corazón predomina la isoenzima H4 que es inhibida por producto (lactato). 4.18.

la cual puede presentar ramificaciones que constituirán otras vías metabólicas. 4. en la célula. laelis-Menten (a) y Lineweaver-Burk (b). Los iones calcio inhiben no competitivamente muchas fosfatasas acidas. La secuencia de reacciones entre un sustrato inicial y su producto final se denomina vía metabólica.6 REGULACIÓN ENZIMÁTICA En el tubo de ensayo. Sin embargo. que se eleva en el carcinoma prostético. pero tiene poco efecto sobre las fosfatasas acidas de eritrocitos. El etanol y ciertos narcóticos son también inhibidores no competitivos de la fosfatasa acida. inhibe la de eritrocitos. las enzimas funcionan en un sistema cerrado y se acumula el producto de la reacción. y los productos de ésta son sustratos de otra enzima y así sucesivamente hasta llegar al llamado producto final. El suero contiene enzimas como las fosfatasas acidas producidas por diferentes tejidos. productor de energía. desde el punto de vista clínico.Figura 4. pero no a la enzima prostática. hígado. riñon y bazo. hiba la LDH por lactato y el piruvato se derive al ciclo de Krebs. de la inhibición enzimática. de aquí la necesidad de agregar quelantes a muestras de sangre destinadas a este ensayo.17 Inhibición no competitiva. El ácido L-tartático inhibe competitivamente la actividad de la enzima prostática. lo cual debe tomarse en cuenta al interpretar los resultados. Existen algunas aplicaciones prácticas. El formaldehído al contrario. Aunque todas las reacciones catalizadas por enzimas son reversibles en el tubo de ensayo. Esta es una ventaja fisiológica que garantiza que el corazón tenga un aporte constante de energía para la contracción (ver unidad de Bioenergética). los productos de la reacción no se acumulan ya que son utilizados como sustratos de otra enzima. en la célula. hay una producida por la próstata. la característica secuen- .

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se inhibe específicamente con CTP y UTP. llamada enzima limitante de la vía. quizá por competencia con el sitio regulador y 4) pueden fraccionarse dos subunidades una que une aspartato y otra que une CTP o UTP. esencial para entender el mecanismo de homeostasis celular y para comprender a nivel molecular las enfermedades.21). mantenido por un flujo unidireccional de metabolitos. actividad física.1. estudiaron este tipo de inhibición y la llamaron inhibición alostérica (allos=otro) en virtud de que el sitio regulador es distinto del sitio activo (isostérico. por lo general. tamaño y distribución de cargas. 3) el ATP. por tanto. que no afecta la velocidad enzimática. En todas las áreas de las ciencias biomédicas se encuentran ejemplos de regulación normal o anormal: muchas células cancerosas exhiben anormalidades en la regulación de sus enzimas. puede impedir la inhibición por CTP o UTP. El conocimiento de los factores que regulan la acción de las enzimas es. catalizadas por enzimas. Conviene distinguir este tipo de inhibición con la inhibición por producto. Estas moléculas se denominan efectores. obedecen esta ley. por retroalimentación o regulación retroactiva ("feedback"). en su mayoría. etc. 4. Un efector alostérico cambia la conformación de la enzima. como cualesquiera otra. Jacob.6. que indica que los organismos mantienen su medio internoconstante a pesar de las amplias variaciones en alimentación. 4. Regulación alostérica La actividad catalítica de algunas enzimas reguladoras es afectada por ciertas moléculas que producen un cambio en la actividad enzimática. reacciones que son. Monod. efectores alostéricos. pero que no se modifican por la acción enzimática. esto como ya se mencionó se considera inhibición competitiva o isotérica. La regulación metabólica de una vía tiene lugar mediante la modulación de la actividad enzimática de una o más enzimas clave de la ruta. Monod y Changeaux. El estado estacionario equivale al concepto de homeostasis. productos finales del proceso. Uno de los primeros ejemplos de regulación fue la síntesis de CTP (citidina trifosfato) a partir de aspartato y carbamilfosfato (fig. temperatura externa. Se considera que la acción de CTP y UTP ocurre en un sitio regulador distinto del sitio catalítico porque: 1) CTP o UTP y aspartato difieren mucho en estructura. Las reacciones enzimáticas. A la inhibición alostérica se le llama también inhibición por producto final. La célula viva es un sistema abierto. (fig. en 1963 observó esta falta de relación estructural inhibidor-sustrato y propuso denominar a este tipo de moléculas. modificadores o moduladores. La primera enzima del proceso de síntesis de CTP. que generalmente corresponde a la primera enzima. de isos=igual). Pardee. Si a la reacción: Glucosa -6-P + H 2 0 -» Pi + glucosa se le agrega inicialmente glucosa libre o fosfato. 2) la inhibición por CTP o UTP puede abolirse sin pérdida de actividad catalítica. la aspartato transcarbamilasa (a). propuesto por Claudio Bernard a finales del siglo XIX. de . estos tienen poca o ninguna semejanza estructural con el sustrato.cial de las vías metabólicas hace que el flujo del metabolismo celular sea irreversible y permanentemente dinámico. 4. en equilibrio dinámico (estado estacionario). El carácter dinámico de los organismos vivos establece que el verdadero equilibrio metabólico se alcanza sólo con la muerte de la célula. disminuye su velocidad. la cual sigue la ley de acción de masas.20). En un sistema tan complejo como la célula debe haber mecanismos de regulación o control de la multitud de reacciones simultáneas que ocurren.

Una enzima alostérica.manera que cambia la afinidad hacia el sustrato. Los efectores alostéricos positivos (+) incrementan la afinidad enzima-sustrato y los efectores alostéricos negativos (-) hacen lo inverso. El efector negativo se une a un centro inhibidor. es una en- . El sitio alostérico donde se une el efector positivo se conoce como centro activador.

La función de un catalizador (inorgánico o enzima) consiste en disminuir la energía de activación.1. no poseen la REACCIÓN Figura.3.13. Energía de activación de una reacción no catalizada (I) y una reacción catalizada (II). conocido como estado inicial.1. un sustrato (A) con determinado nivel energético. sin variar las propiedades termodinámicas del sistema. lo que conduce a acelerar la reacción debido a que los reactantes pueden alcanzar más fácilmente el estado de transición (fig. las moléculas reaccionantes deben alcanzar un nivel de energía suficiente para vencer la barrera energética y entrar al estado de transición.1). En un sistema catalizado por una enzima. Catálisis enzimática Se ha señalado que una enzima incrementa la velocidad de la reacción química pero sin modificar la constante de equilibrio ni el sentido de la reacción.1.1. se convierte en el sustrato de la subsiguiente reacción B metabolito 4.talizada por una determinada enzima. La diferencia entre la energía libre de los reactantes y el estado de transición se denomina energía de activación. tiene que alcanzar un nivel energético superior o estado de transición antes de convertirse en un producto (B) con un nivel energético co- rrespondiente al estado final. 4.4. a diferencia de los catalizadores biológicos. 4. . 4. Catalizadores inorgánicos y biológicos Los catalizadores inorgánicos son generalmente átomos en estado iónico o metales con propiedades similares a las atribuidas a un catalizador biológico pero. denominado metabolito. Funciones generales 4. Para que la reacción tenga lugar. es decir.

el efector alostérico abate la Vmax sin afectar la Km aparente. el cambio conformacional que induce el oxígeno sobre los protómeros de hemoglobina. el sitio catalítico radica en subunidades diferentes. experimentar efecto alostérico. Los efectos alostéricos negativos desplazan la curva hacia la derecha. en la práctica sólo se han encontrado dos enzimas alostéricas monoméricas: ribonucleósido difosfato reductasa y piruvato -UDP-n-acetil-glucosaminatransferasa. 4. En presencia de un efector positivo se alcanza la 1/2 Vmax a una concentración menor de sustrato y se desplaza la gráfica de Michaelis-Menten hacia la izquierda (fig. S = sustrato. En la clase K. La mayoría de las enzimas alostéricas son oligoméricas. Para las enzimas de la clase V. el efector afecta la Km pero no la Vmax. Las enzimas alostéricas permiten el control fino de la actividad metabólica mediante pequeñas fluctuaciones en el nivel de sustratos. técnicamente no es un efecto alostérico. enzima e inhibidor alostérico sigue una curva sigmoidea. i = inhibidor. Figura 4. indicando aumento de la Km con pérdida de afinidad enzima-sustrato. a las del sitio alostérico. Anteriormente se ha discutido. en el capítulo de proteínas de transporte. la cooperatividad en la fijación de oxígeno a la hemoglobina. La cooperatividad se define como la influencia que tiene la fijación de un ligando a un protómero sobre la fijación del ligando a un segundo protómero de una proteína oligomérica. a = activador. Las enzimas alostéricas se dividen en dos clases según la influencia del efector alostérico sobre la Km y la Vmax. En el ejemplo de la aspartato transcarbamilasa.23).22). Aunque una enzima monomérica puede. En la hemoglobina el centro de fijación del oxígeno de cada subunidad corresponde al centro del sustrato y no a un sitio alostérico. Es frecuente la confusión entre los términos de alosterismo y coopera ti vidad. teóricamente. . La cinética de interacción entre sustrato. por lo tanto. 4.zima cuya actividad en el sitio catalítico puede ser modulada por la presencia de efectores en los sitios alostéricos (fig. esta enzima posee dos protómeros catalíticos y tres o cuatro reguladores.22 Representación esquemática de la regulación alostérica.

una enzima). Represión e inducción El mecanismo de control alostérico de la actividad enzimática es también aplicable a sistemas de regulación a nivel génico.6. no es adecuado utilizar los términos competitivos y no competitivos con sistemas enzimáticos absteneos porque el mecanismo del efector de un inhibidor alostérico sobre una enzima V o K es diferente al de un mecanismo competivo o no competitivo sencillo. Los productos finales endógenos de la ruta (ATP.6. En este paciente. GDP y 2. 4. Los estudios iniciales sobre la regulación de la síntesis de proteínas enzimáticas permitieron reconocer tres tipos de enzimas: constitutivas. inducibles. y reprimibles. e inhibidores (I). ADP. El hecho de que los centros inhibidores y activadores alostéricos están separados entre sí como del centro catalítico. probablemente debido a una re- .2. se encontró que la PRPP sintetasa tenía una Km y Vmax normales. Enzimas constitutivas y enzimas inducibles Las enzimas constitutivas están presentes en concentraciones constantes durante la vida de la célula. 4. se muestran los diferentes sitios de unión para sustrato (S) activadores (A). 3DPG. En la fig. 4. Sin embargo.1.No obstante que las enzimas K dan gráficas parecidas a la inhibición competitiva.2. GTP) no eran capaces de inhibir alostéricamente a la enzima y se acumulaban el PRPP y el ácido úrico. se ilustra en el estudio de un paciente con gota cuyos eritrocitos tenían altos niveles de fosforribosilpirofosfato (PRPP). mostraba menor sensibilidad a los inhibidores alostéricos normales AMP. Puesto que los inhibidores alostéricos actúan en un sitio diferente (alostérico) el modelo cinético ya no es válido. Se ha mencionado al inicio de la unidad III que la expresión de la función genética se realiza a través de las enzimas (un gene .24 que ilustra el caso. Aparentemente una mutación había producido un cambio en el centro inhibidor (I).

Cuando se agrega histidina al medio se reprimen los 15 genes que codifican para 9 enzimas. que contiene glucosa y sales. coli crece en un medio simple. el cultivo sólo contiene trazas de P-galactosidasa. Las enzimas inducibles. Es decir. la inducción implica síntesis de novo lo cual se ha demostrado puesto que sistemas donde la síntesis de proteínas está bloqueada. generalmente son las enzimas de las principales vías metabóücas como las de la vía glucolítica.24 Inhibición alostérica o por retroalimentación. es el sistema de la P-galactosidasa de E. El aminoácido histidina se forma por una secuencia de 10 reacciones a partir de PRPP. Cuando estos microorganismos se transfieren a un medio con lactosa. El fenómeno se denomina inducción enzimática coordinada. Con este tipo de control la célula no invierte energía en sintetizar enzimas para actuar sobre un sustrato no presente. El tercer tipo de enzimas es el de las reprimibles. Uno de los sistemas mejor estudiados es el que conduce a la síntesis de histidina en Salmonella. Él ejemplo de inducción de síntesis enzimática. como úni- ca fuente de carbono. coli. son aquéllas cuya concentración en la célula normalmente es baja y a medida que se requiere mayor cantidad de enzima. en breve empiezan a aparecer cantidades apreciables de galactósido permeasa. y puede fabricar todos sus constituyentes esenciales a partir de este medio. En estas condiciones. la velocidad de síntesis aumenta con respecto a su degradación. (3-galactosidasa y tiogalactósidotransacetilasa (fig. lación constante entre síntesis y degradación de la enzima. . Usualmente E. La síntesis de estas enzimas se suspende si está presente en abundancia el producto final de la vía metabólica donde funcionan. se suspende la síntesis de dichas enzimas. no responden al estímulo inductor. 4.25).Figura 4. Si se quita la lactosa del medio y se vuelve a dar glucosa. El fenómeno se denomina represión enzimática coordinada. más estudiado.

formando una unidad funcional llamada operan. Coli. es uno de los más estudiados.000 daltones. El modelo presupone que la transcripción de genes estructurales está controlada por un gene operador y un sitio promotor (donde se une la enzima RNA polimerasa). el AMPc se une a una proteína catabólica activadora del gene (CAP.000 daltones que se sintetiza continuamente. 4. F.6. Otro gene. Jacob y J. por lo tanto. el AMP cíclico (AMPc). En general. . consta de 3 enzimas inducibles controladas por 3 genes estructurales (Z.3. Así. y este complejo se une al sitio promotor en el DNA de tal manera que la RNA polimerasa puede iniciar la síntesis de RNAm. Monod propusieron un modelo ingenioso para explicar la inducción y represión de la síntesis enzimática. la retroinhibición es un mecanismo de control ejercido a corto plazo. Así. Por este trabajo y otras contribuciones recibieron el premio Nobel de medicina 1965. y el operón Lac se transcribe y traduce. con un efecto inmediato sobre la ruta metabólica. es distinto de la inhibición por producto final (retroacción o feedback). Teoría del operan En 1961. La proteína represora que actúa sobre el operador y que impide la acción de la RNA polimerasa y por tanto. un dímero con PM de 45. se puede localizar en un sitio distante del gene operador (fig. de E. Este fenómeno de polaridad se ha encontrado para el operón del triptófano (operón Tri) y otros. la expresión del operón Lac requiere del inductor (lactosa) y de AMPc. Al inducir con lactosa. El operón Lac. Para mayor comprensión de estos aspectos se recomienda revisar los conceptos genéticos de la unidad IX. El control del operón Lac tiene otro elemento efector positivo. Y y A). la regulación de las enzimas involucradas en la inducción y represión tiene lugar a nivel de la transcripción. 4. en el cromosoma involucrado. El amino terminal de la p-galactosidasa se sitúa del lado del operador. la síntesis de RNAm transcurre desde el operador a través del operón completo. que a su vez codifica para las enzimas coordinada- mente inducidas o reprimidas se denominan genes estructurales. mientras que la represión necesita más tiempo pero con efectos permanentes al reducir el número de moléculas de enzima. Los genes que transcriben un RNA mensajero (RNAm) policistrónico. la formación del RNAm de todo el operón Lac es un tetrámero de casi 150. Células con glucosa disponible tienen bajos niveles de AMPc. De acuerdo a su teoría.Debe subrayarse que la inducción y represión son mecanismos de control sobre síntesis de enzima y no sobre actividad de la enzima. uno con otro. llamado regulador que codifica para una proteína represora del gene operador. Cuando se dan inductores como la lactosa o análogos se deforma el represor. Por "mapeo" genético del cromosoma involucrado se ha demostrado que estos genes estructurales se localizan adyacentes.26).

se combina éste con la proteína y se forma una sustancia efectivamente represora que bloquea al gene operador (fíg. H. C. 4. La histidina es también un inhibidor alostérico de la primera enzima de la secuencia biosintética. se supone que también se . El operón His. L = lactosa. E. D. que actuando coordinadamente. de Salmonella typhimurium coordina la expresión de genes estructurales (G.Figura 4. B. F. Cuando se da el correpresor (por ejemplo.27).) que codifican para 9 enzimas. el gene regulador elabora una proteína represora que regularmente no interactúa con el operador. no tiene objeto la producción de enzimas para su síntesis. CAP = proteína catabólica activadora del gene operador. I. participan en la biosíntesis de histidina. histidina).26 Inducción enzimática en el operón LAC de E. coli. Aunque los genes y mecanismos reguladores mencionados sólo han sido demostrados en procariotes. En sistemas reprimibles. Esto representa también un ahorro de energía para la célula ya que si existe histidina. A.

los mecanismos de regulación son más complejos y tienen separados físicamente la transcripción de los genes de la traducción. Además. Aspectos Clínicos de las Enzimas La aplicación clínica de las enzimas anteriormente se restringía a su empleo como auxiliares en el diagnóstico. los RNAm eucarióticos son monocistrónicos en contraposición a los RNAm policistrónicos de las células procariotas. posteriormente se vislumbró la posibilidad de emplearlas en el tratamiento de algunas enfermedades. En esta última. Como reactivos en el laboratorio clínico La disponibilidad de enzimas puras a precios razonables ha convertido a algunas de ellas en reactivos de enorme valor para el laboratorio de análisis. hay que ser prudentes en extrapolar los conocimientos adquiridos de una a la otra clase de células (eucariotes).1. 4. Puede determinarse enzimáticamente la concentración de un . Sin embargo.presentan en organismos eucariotes. campo que está en exploración muy activa. Las enzimas se utilizan también como reactivos clínicos para detectar otro tipo de moléculas cuyas concentraciones son bajísimas en el plasma o tejidos.7.

como resultado de una lesión celular producida por agentes infecciosos. En los últimos años existen disponibles comercialmente las erizarías inmovilizadas para usarse en sistemas de determinación automatizados. orina. 4. o incluso por el proceso de envejecimiento celular normal. basado en el principio de la unión competitiva. y en la selectividad y sensibilidad de la respuesta antígeno-anticuerpo. se ha ideado un método altamente específico llamado enzimoinmunoensayo (EIA). fosforilación. Como elementos diagnósticos Una importante función de un laboratorio clínico. se producen daños en las membranas celulares que permiten el "escape" de enzimas a la circulación. La glucosa se determina oxidándola a gluconato en presencia de la enzima glucosa oxidasa. Para determinar alcohol etílico. jugo gástrico. toxinas bacterianas.2. en virtud de que NADH y NADPH absorben a 340nm mientras que NAD+ y NADP+ no absorben a esa longitud. Si las células permanecen intactas. líquido sinovial). como la determinación de enzimas en líquidos extracelulares (plasma y suero. Acoplando la reacción con peroxidasa. disminuye la densidad óptica (fig.1. etc. El fundamento de este método es similar al radioinmunoensayo (RÍA). líquido amniótico. las enzimas intracelulares no pasan al torrente sanguíneo. Con este ensayo se puede determinar urea. se incrementa proporcionalmente la densidad óptica. Este escape de enzimas de las células al plasma se produce también cuando mueren éstas como ocurre en el infarto .2.compuesto en una mezcla cuando se dispone de una enzima específica capaz de transformarlo rápidamente en un producto. al acoplar la acción de la enzima ureasa con la glutamato deshidrogenasa (GDH). transaminación.28). es la de cuantificar las alteraciones bioquímicas en el individuo enfermo. Muchas determinaciones enzimáticas pueden acoplarse con reacciones que utilizan NAD+ o NADP+ como coenzimas.7. las enzimas involucradas en los procesos metabólicos (glucólisis. y en algunos tejidos o células sanguíneas.) se sintetizan en las células y la mayoría ejerce su función en su interior. con H2O2 como subproducto. se convierte éste en acetaldehído por medio de la enzima deshidrogenasa alcohólica (ADH): el aumento en absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentración de alcohol.7. líquido cefalorraquídeo. Enzimas órgano específicas En condiciones normales. oxidación. Cuando el NAD+ se reduce. Aprovechando la especificidad enzimática e inmunológica por un sustrato. 4. sin embargo. cuando el NADH se oxida. 4. el H2O2 oxida la O-dianisina a un compuesto colorido (principio de la glucocinta).

En personas normales sanas. por ejemplo la alcohol deshidrogenasa o la sorbitol deshidrogenasa que son casi exclusivamente de origen hepático.2. disolución de la fibrina (plasmina) y modificación de quilomicrones (lipoproteinlipasa). por ejemplo amilasa. y la fosfatasa alcalina de osteoblastos. la acetilcolinesterasa de eritrocitos. 2) Enzimas elaboradas por células especiales y secretadas a un conducto o dentro de un tejido especial. 4. Se encuentran en alta concentración y están involucradas en funciones como la coagulación de la sangre (trombina y otras). la fosfatasa acida de próstata.4). Esta correlación ocurre sólo para algunas enzimas.2. Perfiles enzimáticos El plasma circulante contiene cantidades apreciables de enzimas que tienen su origen en las células de diferentes tejidos del organismo. esto es poco probable ya que el metabolismo de muchos órganos es muy parecido. no obstante. éstas pueden dividirse en tres grupos: 1) Enzimas que realizan una función específica en el plasma llamadas también enzimas plasmáticas funcionales.7.3. 4. Las isoenzimas que han sido estudiadas para aplicaciones diagnósticas son la deshidrogenasa láctica. fosfatasa acida y fosfatasa alcalina.7.2. Una de las aspiraciones del diagnóstico clínico es precisamente lograr la asociación de una enzima específica en plasma o sangre con cada tejido o situación patológica. la creatinfosfocinasa y la fosfatasa alcalina (revisar subcapítulo 4. Isoenzimas El interés médico por las isoenzimas fue estimulado por el conocimiento de que los . En el diagnóstico de la alteración de un órgano específico en un proceso patológico sería ideal que se pudiesen identificar enzimas específicas para cada órgano.de miocardio y la hepatitis infecciosa.2. lipasa. sueros humanos contenían varias isoenzimas de la deshidrogenasa láctica y que sus proporciones relativas cambian significativamente en ciertos estados patológicos. Un grado mayor de conocimiento de esta relación se está consiguiendo con el estudio de determinadas isoenzimas. las enzimas de origen intracelular están presentes en plasma en cantidades muy bajas pero mensurables.

Alteraciones enzimáticas como causa de enfermedad Muchas enzimas se encuentran en casi todas las células aunque algunas se encuentran predominantemente en ciertos tejidos.7. los niveles de TGO están elevados moderadamente en el periodo neonatal. CPK-2 (MB) y CPK-3 (MM) de músculo. 4. como en el recién nacido. como la fosfata alcalina. Los niveles de gama-glutamiltransferasa se correlacionan con ingestión de alcohol. Su cuantificación constituye para el médico una prueba valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico. esquelético y cerebro. hipotiroidis- . El segundo y tercer grupo de enzimas se denominan también enzimas plasmáticas nojundonales y su presencia en plasma en cifras mayores que las normales sugiere una velocidad aumentada de destrucción celular. Creatinfosfocinasa (CPK).3. Aun cuando los eritrocitos lisados no contengan la enzima por valorar. accidentes cerebrovasculares.4. En otro ejemplo se utiliza la valoración de isoenzimas de la LDH y CPK para determinar la evolución de un infarto de miocardio (fig. Los niveles de fosfatasa alcalina son altos hasta después de la pubertad por la actividad osteoblástica.3) Enzimas que realizan su función en las células que las originan y cuyas actividades constituyen el proceso vital celular. antes llamadas transaminasa glutámico pirúvica (TGP) y glutámico oxalacética (TGO) pero el hígado contiene más TGP que TGO mientras que en el corazón sucede al revés. después de cirugía mayor o de un trauma extenso. La enzima cataliza la siguiente reacción: CPK CREATINFOSFATO + ADP -* CREATINA + ATP Esta se acopla a otras dos. cirugía. moderadamente en lesiones musculares. Puede localizarse el tejido dañado para confirmar un diagnóstico de dos formas: a) Por determinación del perfil isoenzimático. para determinar cuantitativamente el NADPH: ATP + GLUCOSA -+ GLUCOSA-6-P + ADP -» 6-p-glucorolactona + GLUCOSA -6-P+ NADP+ NADPH+H+ La enzima CPK. En el último trimestre del embarazo están elevados los niveles de fosfatas alcalina de origen placentario. ejemplo: las isoenzimas de la LDH (fig. Esta enzima se encuentra distribuida en músculo cardiaco. ejercicio físico intenso. b) Por valoración de más de una enzima. 4. se elevan notablemente algunas enzimas pero su valoración no permite establecer la causa de la insuficiencia o del paro. es un dímero que consta de 3 isoenzimas: CPK-1 (BB) de cerebro. c) elevaciones artificiales. ejemplo: hígado y corazón contienen altos niveles de aminotransferasas. niveles elevados de ésta en plasma solo indican daño celular pero no el tipo de proceso patológico. Por ejemplo. en la misma proporción que la TGO y en distrofias musculares sobre todo la de tipo Duchenne. b) inducidas por drogas. Ciertas drogas como difenilhidantoína y barbitúricos pueden inducir la producción de enzimas.29). TGO y CPK a partir del músculo esquelético dañado. si se presenta insuficiencia circulatoria debida a insuficiencia cardiaca o choque.30). se elevan los niveles de LDH-5. contienen otras que interfieren y producen falsas positivas. Existen causas de elevación no específica de niveles enzimáticos que pueden ser. Se eleva marcadamente en infarto de miocardio. Aun cuando la enzima sea específica de un tejido particular. a) fisiológicas. y especialmente después de paro cardiaco. En general las muestras hemolizadas son inadecuadas para valoraciones enzimáticas.

dentro de las 12-24 h junto con un incremento de CPK2. La intensidad del color azul liberado es proporcional a la cantidad de enzima.29 Patrones normal y patológico de las isoenzimas de la LDH en suero humano. saliva. plasma u orina sobre amilopectina marcada con un colorante azul. a la CPK2. es diagnóstico del infarto de miocardio. A: paciente con infarto de miocardio. y artificialmente en muestras hemolizadas. moderadamente en casos de úlcera péptica perforada. C: paciente con enfermedad hepática. a menos que exista insuficiencia renal.Figura 4. colecistitis. obstrucción intesti- Fig. La isoenzima CPK2 (MB) aumenta hasta un máximo dentro del primer día del infarto.30. mo (la tiroxina afecta el catabolismo de la enzima) alcoholismo (miositis alcohólica) episodios psicóticos agudos. a-amilasa (AMS). El nivel total de LDH aumenta muy lentamente. El incremento de LDH 1 y LDH 2. La amilasa se eleva notablemente (5 a 10 veces) en casos de pancreatitis aguda (en ocasiones en carcinoma de páncreas). Los niveles urinarios se elevan paralelamente a los niveles plasmáticos. B: suero normaj. . sigue más lenta alrededor de un día. CPK3. La enzima está presente en jugo pancreático. Se excreta por orina en virtud de su bajo peso molecular. El ensayo se realiza por acción de suero. uremia grave y cetoacidosis diabética severa. trompas de Falopio y músculo. Patrón isoenzimático de CPK y LDH después de un infarto de miocardio. 4.

Cofactores coenzimáticos para disminuir la energía de activación (tabla 4. Holoenzima y apoenzima de grupo. las de transferencia 4.2.2. Entre las reacciones catalizadas 4.oxidorreducción.fato (NADP+). Tal es el caso peso molecular. termostables y no proteicos.2.2. pero en las que los requie. 4. orgáni. de los cofactores se denomina apoenzima. tiamina. las de isomerización y las que forman enlaces covalentes.1).1. por ejemplo. (fig. Una enzima puede acelerar una re. riboflavina. transaminación. La adición del cofactor a la apoenzima coenzima es reducida (hidrogenada) (fig. la apoenzima es catalíticamente inacti. coenzimática conocida.alta especificidad de éstos ni la capacidad 4. Los nicotkiamida-adenina-dinucleótido (NAD+). de la nicotinamida.2). Las reacciones hiLa parte proteica de la enzima desprovista drolíticas no requieren de coenzimas.3). nutrición).oxidada (deshidrogenada) y una molécula de va. que requiere la enzima pa. el fosfato de piridoxal (PPal) actúa como segundo sustrato en dos reacciones combinadas (fig.vitaminas liposolubles no tienen actividad ra su actividad. cofactores (coenzima o grupos prostéticos) y el nicotinamida-adenina-dinucleótido-fosson en general moléculas pequeñas. una molécula de sustrato es ren.4). . en las reacciones de para ser activas.2.La mayoría de las coenzimas son formas acción 105 veces más que un catalizador modificadas de las vitaminas (ver unidad de inorgánico. da lugar a la holoenzima. La coenzima puede considerarse como un No todas las enzimas requieren cofactores cosustrato. 4. Cofactores Relación entre vitaminas y coenzimas. Las vitaminas del complejo B forman parOtros componentes de la enzima con bajo te de numerosas coenzimas. ácido fólico y cianocobalasi la unión es débil y se separa con facilidad mina. o grupos prostéticos. La vitamina C y las cas e inorgánicas.derivadas de la vitamina nicotinamida son el tán firmemente ligados a la apoenzima. de la apoenzima. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS por enzimas que requieren coenzimas están las de oxidorreducción.2. si es. do pantoténico. áciunidos a la apoenzima se llaman coenzimas. Coenzimas de oxidorreducción. 4. 4. en las reacciones de completa y activa.1. o sea la enzima De modo similar.

Los niveles normales en el adulto provienen específicamente de hígado. En el futuro será posible el reemplazo enzimático por ingeniería genética en individuos con deficiencia genética que afecte la síntesis de una enzima dada. se utilizan en el tratamiento de la trombosis. es útil para disolver coágulos de sangre formados en las extremidades inferiores. En el embarazo se elevan los niveles normales debido a la isoenzima termoestable de la placenta. parotiditis. hígado. glándula mamaria lactante y placenta. con asparaginasa los n i v e l e s de asparagina disminuyen sensiblemente lo que lleva a disminuir la viabilidad del tumor. amilasa. es la causa de la enfermedad. En huesos se localiza en los osteoblastos (la enzima es necesaria para los depósitos de fosfato en hueso). Se encuentran en hueso. enfermedad de Paget. El método usado en la valoración es el de Bassey Lowry-Brock que utiliza la siguiente reacción. particularmente si es metastásico. Varias enzimas proteolíticas como tripsina y quimotripsina al igual que la estreptocinasa. Algunas enzimas digestivas (peptidasas. la fosfatasa se eleva aun antes de que aparezcan síntomas de la enfermedad. se elevan los niveles de ACP debido al aumento de células prostáticas ectópicas. hígado. Utilizando fibrinolisina y estreptodornasa (una DNAsa) por vía oral o tópico se puede eliminar el material fibrinoso y purulento de heridas infectadas o necrosadas. Esta enzima activa el plasminógeno el cual se transforma en plasmina que es una proteasa que ataca la fibrina y la degrada. preparada a partir de estreptococos. eritrocitos. en el raquitismo. La enzima se eleva en enfermedades hepáticas con elementos colestáticos junto con la enzima 5'-nucleotidasa (NTP) que parece tener también origen hepático. lipasas.4. En el carcinoma . pancreatectomía y trastornos gastrointestinales. En el capítulo de ácidos nucleicos se estudiarán algunas enfermedades en las que está alterada la codificación de algunas enzimas. esta fracción tiene la propiedad de ser inhibida por el L-tartrato. Aunque es difícil detectar sólo la fracción prostática. Fosfatasa alcalina (ALP). 4. pared intestinal. Fosfatasa acida (ACP). hiperparatiroidismo. El principal uso de la valoración es el diagnóstico de carcinoma prostático metastásico. Incluye isoenzimas que hidrolizan fosfatos a pH alcalino.nal. La estreptocinasa. El método de determinación es similar al de las fosfatasas alcalinas excepto el pH óptimo que es de 5. su deficiencia o falta de actividad. plaquetas y hueso. Se encuentra en próstata. embarazo ectópico roto.7. en niños de la fracción ósea por la actividad osteoblástica. nucleasa y celulasas). cálculos salivales. Se eleva también en enfermedades óseas con actividad osteoblástica elevada: osteomalacia y raquitismo. la fosfatasa acida de la secreción prostática drena a los conductos prostáticos y aparece poco en sangre. La terapia con asparaginasa se usa en algunos tipos de leucemia adulta. se usan en la deficiencia enzimática por pancreatitis crónica.5-10 p-NITROFENOLFOSFATO — • p-NTTROFENOL + Pi prostático. Normalmente. pH 8. Como agentes terapéuticos Algunas enzimas se han utilizado como medicamentos en la terapia de problemas médicos específicos. En virtud de que las células tumorales tienen un requerimiento nutricional de asparagina. administración de morfina (espasmo del esfínter de Oddi) y macro-amilasemia. osteocarcinoma y osteosarcoma.

C O O ~ II O Piruvato ( Sustrato oxidado ) NAD coenzima oxidada NADH + H + ( coenzima reducida ) Fig.COO" 0 I OH Lactato ( Sustrato reducido C H3.2. i COOH CH-NH9 2 I Alanina c=o COOH I C=0 CH3 Piruvato .3. El NAD (nicotín-adenín-dinucleótido) actuando como cosustrato en una reacción de oxidorreducción COO" I OH-NH9 2 I CH? I CH9 I ¿ COOH Glutamato COO" I CH« I 2 CH« I ¿ COOH oe-Cetaglutarato Fig. 4.C H L . 4.C .C H . . Transferencia de grupos ámino con PPal (fosfato de piridoxal) como cosustrato.

Otra sería la clasificación funcional que las agrupa en coenzimas vitamínicas y no vitamínicas. a diferencia de las coenzimas. S-adenosil metionina. Grupos prostéticos Funcionan también como cofactores o cosustratos enzimáticos pero. NADP+. ejemplos clásicos de grupos prostéticos son el FAD (flavinadenin-dinucleótido) y el grupo hemo.2.2. se encuentran firmemente unidos a la apoenzima.NADP + FAD. el grupo prostético hemo está unido fuertemente y requiere ácidos fuertes para disociarse del citocromo. ADP. El resto serían las coenzimas no nucleotídicas.Clasificación de coenzimas Las coenzimas pueden clasificarse como sigue: Para la transferencia de grupos distintos del H: Uridina difosfato (UDP) Pirofosfato de Tiamina (TPP) Fosfato de Piridoxal (PPal) Coenzima A (CoA-SH) Acido tetrahidrofólico (TH4) Biotina Coenzimas de cobamida (B12) Acido Lipoico S-Adenosil metionina (S AM) Algunos autores clasifican estructuralmente a las coenzimas como: coenzimas nucleotídicas y no nucleotídicas. NALV. ATP.2. . AMP. Al primer grupo pertenecen los nucleósidos di y trifosfato que participan en reacciones de transferencia como AMPC. FAD y coenzima A.FMN Acido Lipoico Coenzima Q 4. En los citocromos. Para la transferencia de H: NAD + .

5). la lisinaoxidasa es una enzima que necesita cobre y la anhidrasa carbónica que requiere cinc. Tipos: Catalíticos. Ajuste inducido por un cambio conformacional en la estructura de la enzima antes y después de la unión del sustrato. la especificidad reside en una determinada región de la superficie enzimática llamado sitio activo (fig. Sitio activo de una enzima. .23. 4. por el hecho de ser micelas.3. 4. 4.2. 4.42. Sin embargo el modelo de Fisher consideraba al sitio catalítico rígido y las proteínas en solución son flexibles Fig. Sin embargo. Sitio activo Una propiedad muy importante de las enzimas es su especificidad.3.2. lo cual favorece la interacción de los sustratos y su reacción. reguladores El modelo original de sitio catalítico para referirse al sitio activo. propuesto por Émil Fisher en 1894 representaba la interacción sustrato-enzima en términos de la analogía entre llave-cerradura.1. son capaces de adsorber moléculas pequeñas en su superfi- cie.5. Complementos Algunos cofactores enzimáticos no pertenecen a coenzimas o grupos prostéticos derivados de vitaminas sino que representan elementos minerales por ejemplo. Todas las enzimas.

La diferencia cinética entre estas dos isozimas se explica en otros capítulos. esto se discutirá más adelante al hablar de efectores alostéricos.2.6).8 millones y la sintetasa de ácidos grasos. 4.5. al que llamó de ajuste inducido (fig. En este modelo. el sustrato induce un cambio conformacional en la estructura terciaria de la proteína enzimática como hace la mano en el guante. la izoenzima H4 predomina en miocardio (Tabla 4.2).1. ejemplos de este tipo son la piruvato deshidrogenasa con un peso molecular de 4.3.por esto. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS 4. Enzimas oligoméricas e isoenzimas láctica.5). enzima tetramérica. ribonucleasa.2. Complejos multienzimáticos Existen enzimas que constan de una sola cadena polipeptídica integrando un monómero. H3M. Otro grupo de enzimas contienen dos o más subunidades asociadas por enlaces no convalentes. A este grupo pertenecen la lisozima. tripsina y otras. Las isoenzimas más estudiadas por sus aplicaciones clínicas son la deshidrogenasa Algunas reacciones requieren de múltiples enzimas asociadas que participan secuencialmente para transformar un sustrato. Las isoenzimas difieren en su composición de aminoácidos por lo que sus diferencias están determinadas genéticamente.3. Las isoenzimas o isozimas son diferentes proteínas con la misma actividad enzimática que se originan en diferentes tejidos y presentan un desplazamiento electroforético diferente. Koshland en 1967 emitió un modelo del sitio catalítico flexible. que posee dos subunidades distintas: H (de corazón) y M (de músculo). llamados reguladores o aloste'ricos. que modifican la actividad de la enzima al provocar cambios conformacionales en el sitio catalítico.3). La isoenzima M4 predomina en músculo esquelético y en hígado.4. la creatina fosfocinasa y la fosfatasa alcalina. Este modelo permite también explicar la influencia de otros sitios. 4. Nombres sistemáticos y nombres triviales En un principio se designó a las enzimas con nombres triviales según el sitio anatómico Tabla 4. 4. 4. Estas dos subunidades se combinan de cinco formas diferentes para formar cinco isoenzimas: H4. HM 3 y M4 (Fig. H2M2. 4. A este grupo pertenecen algunas enzimas de la glicólisis.2 Enzimas oligoméricas Enzimas Número de subunidades PM de cada subunidad peso molecular Total . las isoenzimas y las enzimas alostéricas (Tabla 4. El caso más ilustrativo es el de la deshidrogenasa láctica.

1.2. 1.Liasas.Isomerasas: y 6. amilasa.) El primer dígito es por ser una oxidorreduetasa.Estas enzimas catalizan reacciones de oxidación y reducción muy importantes en biología.l. lipasas. Clasificación digital de las enzimas En el año de 1961. esteraseis..1. El nombre sistemático de la deshidrogenasa alcohólica es alcohol: NAD+. la Unión Internacional de Bioquímica (UIB) adoptó el sistema de clasificación y nomenclatura propuesto por su Comisión de Enzimas (E.1. descarboxilasas. Según éste. Con frecuen- . cada enzima tiene un número clave de 4 dígitos de manejo interna- cional. el segundo dígito identifica la subclase.1.C. ejemplo: deshidrogenaseis.. las que hidrolizan proteínas.3. etc. así las que hidrolizan el almidón (latín amilum). Las enzimas se clasifican en las seis clases siguientes: 1. 2. El primer dígito identifica la clase a la que pertenece la enzima.Ligasas.de procedencia. Después se les denominó añadiendo al nombre del sustrato sobre el que actuaban.1.Transferasas. el tercero porque el aceptor es la coenzima NAD + y el cuarto por el número de orden de la enzima.C. la deshidrogenasa alcohólica será la enzima E. oxidaseis. 1. de manera que independientemente del país y el nombre trivial que se le dé en cualquier idioma.) basado en el tipo de reacción química y su mecanismo de acción.Oxidorreductasas.. Más tarde se les dio el nombre según la reacción química catalizada. tripsina pancreática. adiaseis. 3. 1. como la ptialina.C. etc. 5.Hidrolasas: 4.Oxidorreductasas. el subfíjo asa. el tercero la sub-subclase y el cuarto dígito para la enzima específica. las que hidrolizan las grasas o lípidos.. proteasas.. el segundo porque el dador electrónico es un alcohol..oxidorreduetasa (E. 4. la pepsina.

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