ESTRUCTURA, FUNCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

4.1. CONCEPTOS GENERALES Toda reacción química, biológica o inorgánica, es un proceso en el que una o varias moléculas interactúan entre sí para transformarse en otras moléculas siguiendo una dirección determinada por leyes fisicoquímicas (termodinámicas) hasta llegar a un estado de equilibrio: A+B , ) C+D

Existen sustancias llamadas catalizadores que tienen la capacidad de acelerar las reacciones químicas sin alterarse al final de éstas y sin modificar el equilibrio químico; sólo acortan el tiempo en que se alcanza dicho equilibrio. Los catalizadores se dividen en dos grupos: orgánicos e inorgánicos. Dentro de los primeros tenemos las enzimas y en el segundo los iones H + , OH " o metálicos. Las enzimas son moléculas producidas por las células de los organismos vivos con la función específica de catalizar reacciones químicas, las que sin ellas, ocurrirían muy lentamente. Hasta hace pocos años se consideraba que todas las enzimas eran proteínas. Sin embar-

go, recientes investigaciones realizadas por Cech y colaboradores (Cech, T.R., Science, 236, 1532-39 (1987) han demostrado que moléculas de RNA pueden actuar como enzimas con una elevada actividad catalítica. Se ha comprobado experimentalmente que la molécula de RNA L-19 derivada de un intrón de un precursor de una RNAr de un protozoario ciliado actúa como ribonucleasa y como RNA polimerasa. Esta enzima de RNA o RNA enzimático o ribozima muestra las mismas propiedades cinéticas que las otras enzimas tradicionales, un alto grado de especificidad y susceptibilidad a la inhibición competitiva. Este descubrimiento puede tener importantes implicaciones sobre la evolución de las moléculas y puede contribuir a aclarar el mecanismo de acción de los catalizadores. La vida y el crecimiento celular requieren la continua síntesis de macromoléculas acoplada a procesos proveedores de energía. El acoplamiento controlado de las reacciones químicas mediante la acción de enzimas es propiedad única de las células vivas. Entre las miles de sustancias presentes en una célula, las enzimas constituyen la parte más importante de las proteínas celulares. Esencialmente, todas las reacciones bioquímicas son catalizadas por enzimas.

cia emplean coenzimas del tipo del NAD + , NADP + , FAD, ácido lipoico y CoQ como aceptores de hidrógeno; otros aceptores incluyen al grupo hemo y al oxígeno molecular. En este grupo se incluyen deshidrogenasas y oxidasas de gran importancia en los procesos oxidativos de la respiración celular. La catalasa es única en el sentido de que el peróxido de hidrógeno (H2O2) sirve tanto como donador y como aceptor. La catalasa funciona en la célula eliminando el peróxido de hidrógeno que es tóxico. 2.- Transferasas.- Muchos pasos importantes del metabolismo requieren la transferencia de una molécula a otra de grupos ámino, carboxilo, carbonilo, metilo, ácido, glucosilo, o fosforilo. Las coenzimas utilizadas son el tetrahidrofolato (FH4) coenzima A (CoA-SH) y fosfato de piridoxal (PPal). Las aminotansferasas (transaminasas) transfieren grupos amino de un aminoácido a un cetoácido aceptor, dando lugar a la formación de un nuevo aminoácido y un nuevo cetoácido. Las cinasas catalizan la transferencia de un fosfato del ATP a grupos aceptores, alcohol o ámino, como ejemplo tenemos la glucocinasa que forma glucosa-fosfato. La síntesis de glucógeno depende de glucosiltransferasas. 3.- Hidrolasas.- Catalizan el rompimiento de una molécula, con participación de agua, entre enlaces carbono y cualquier otro átomo. Este grupo de enzimas se puede considerar como una clase especial de transferasas en las que el grupo donador se transfiere al agua. La rotura del enlace peptídico es buen ejemplo de esta reacción llevada a cabo por peptidasas. Nombres triviales de algunas peptidasas incluyen pepsina, tripsina, quimotripsina y dipeptidasa. Otras subclases son las esteraseis como la lipasa, colinesterasa, y colesterol esterasa. Las fosfatasas eliminan grupos fosfatos, como la glucosa6-fosfatasa y las fosfatasas acida y alcalina. 4.- liosas.- Catalizan el rompimiento no hidrolítico entre carbono-carbono, carbonoazufre y algunas carbono-hidrógeno. A este

grupo pertenecen las descarboxilasas. Aldehido nasas como la aldolasa, fumara y otras. 5.- Isomerasas.- Incluye a todas las enzimas que catalizan la interconversión de todo tipo de isómeros ópticos, geométricos, de posición y reacciones de oxidorreducción intramolecular. A este grupo pertenecen las racémosos, epimerasas y mutasas. 6.- Ligasas.- Catalizan la formación de enlaces entre carbono-oxígeno, nitrógeno y otros átomos a expensas de un enlace fosfato de alta energía del ATP. El término de sintetasas se reserva para este grupo particular de enzimas. La piruvato carboxilasa es un buen ejemplo de una ligasa. También la acetil-CoA sintetasa, la aminoacil-RNAt sintetasa, enzimas activadoras de aminoácidos en la síntesis de proteínas. En la Tabla 4.4 se describen algunas enzimas y su clasificación de acuerdo a la comisión de enzimas. 4.4 LOCALIZACIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE LAS ENZIMAS Las enzimas dentro de un organismo se encuentran distribuidas en los diferentes órganos y tejidos donde realizan su función específica. Dentro de una célula, algunas enzimas se encuentran compartamentalizadas y ordenadas; ejemplo: en las células hepáticas, las enzimas de la glicólisis están localizadas en el citoplasma, en tanto que las enzimas del ciclo de Krebs en las mitocondrias. Dentro de la mitocondria, las enzimas del ciclo del ácido cítrico se encuentran dispuestas en forma secuencial, lo cual da al proceso ergopoyético de la célula la máxima eficacia.

4.4.1.

Nivel celular. Sistema microsomal

La localización de una enzima particular en un tejido o célula es el fundamento de una

Tabla 4.4 Clasificación Internacional de las enzimas Número 1. 1.1 1.1.1 1.1.1.1. 1.1.3. 1.1.3.4. 1.2. 1.2.1.12. 1.2.3.2. 1.2.4.1. 1.3. 1.3.1.1. 1.4 1.4.1.2 1.5 1.5.1.5 1.6. 1.6.2.1. 1.9. 1.9.3.1. 1.11. 1.11.1.6 2. 2.1 2.1.1 2.1.1.2 2.1.2 2.1.2.1 Nombre sistemático Oxidorreductasas Grupos CH-OH NAD+ o NADP + aceptor Alcohol NAD + oxidorreductasa: O2 como aceptor p-D-glucosa: oxígeno Oxidorreductasa (FAD) Grupos C = 0 Gliceraldehído 3-P:NAD* Oxidorreductasa (NAD+) Xantina:oxígeno oxidorreductasa. Piruvato: lipoato Oxidoreductasa Grupos CH-CH 4,5-Dihidrouracilo: NAD+ oxidorreductasa Grupos CH-NH2 L-glutamato: NAD+ oxidorreductasa Grupos C-NH5,10-Metilenotetrahidrofolato: NADP + oxidorreductasa Sobre NADH o NADPH como donador NADH: citocromo C oxidorreductasa Sobre grupos hemo donadores. Citocromo C: oxígeno oxidorreductasa Con H2O2 como aceptor Peróxido de hidrógeno: H2O2 oxidorreductosa Transferasas Grupos de 1 carbono metil transferasas S-adenosil-metionina: guanidino-acetato N-metil Transferasa Hidroximetil y fomil transferasa L-serina: FH4 5,10-hidroximetil trasferasa Nombre trivial

Deshidrogenasa Alcohólica Glucosa oxidasa

Triosa-P-deshidrogenasa Xantino oxidasa Piruvato deshidrogenasa Dihidrouracilo deshidrogenasa Glutamato deshidrogenasa Metilen-FH4-deshidrogenasa

Citocromo C reductasa Citocromo oxidasa Catalasa

Guanidometil transferasa

Serina hidroximetil transferasa

CONTINUA TABLA 4.4
Número 2.1.3 2.1.3.2 2.2 2.2.1.1 2.2.1.2 2.6.1 2.6.1.1 2.6.1.2 2.7.1 2.7.1.2 2.7.7.10 3. 3.1 3.1.1 3.1.1.7 3.1.2 3.1.2.1 3.1.3 3.1.3.9 3.2.1 3.2.1.1 3.4.4 3.4.4.1 3.5.1.5 3.6.1.3 4 4.1.1 4.1.1.1 4.1.2 4.1.2.7 Nombre sistemático Carboxil o carbamoil transíerasas Carbamoil-P: L-aspartato transferasa Transferencia de grupos aldehídicos o cetónicos Sedoheptulosa 7-P: gliceraldehido glicolaldehído transferasa Sedoheptulosa: 7-P: gliceraldehido Dihidroxiacetona transferasa Aminotransferasas L-aspartato: 2-oxoglutarato aminotransferasa L-alanina: 2-oxoglutarato aminotransferasa Fosfotransferasas ATP: glucosa 6-P transferasa UTP: galactosa 1-P uridil transferasa Hidrolasas Enlace éster Carboxílico Acetilcolina acetil hidrolasa Tióester Acetil CoA hidrolasa Ester fosfórico Glucosa 6-P fosfohidrolasa Glucósido hidrolasas a l - 4 gluca-4glucano hidrolasa Péptido hidrolasas Pepsina Urea amidohidrolasa ATPfoshidrolasa Liasas Carboxiliasas 2-oxo-ácido carboxil iasa Aldehidoliasas Cetona 1-Paldehidoliasa Ureasa ATPasa Nombre trivial Aspartato transcarbamilasa

Transcetolasa Transaldolasa

Transaminasa glutámico oxalacética Transaminasa glutámico pirúvica Glucocinasa UDP-galactosa pirofosforilasa

Colinesterasa Tiolasa Glucosa 6-fosfatasa a-amilasa

Piruvato descarboxilasa Aldolasa

mitocondrias (matriz y espacios intermembranas) lisosomas.1.1 5.1 6.3.4 Número 4.1.1 5.1 6 6. 3 epimerasa Cis-trans isomerasas Malea to cis-trans isomerasa Aldo-ceto isomerasas D-gliceraldehído 3-P cetol isomerasas Ligasas Aminoácido-RNA L-tirosina: RNAt ligasa(AMP) Acido tiol Acetato: CoA ligasa (AMP) Enlaces C-N UTP: amonio ligasa (ADP) Enlaces C-C Piruvato: C 0 2 ligasa (ADP) Nombre trivial Citrato sintetasa Fumarasa Alanina racemasa Epimerasa Maleato isomerasa Triosa-P isomerasa Tirosil-RNAt sintetasa Acetil CoA sintetasa CTP sintetasa Piruvato carboxilasa las que regulan la acción de hormonas o neurotransmisores sobre los receptores membranales.1.1 4. En tanto que muchas enzimas se encuentran solubles en el citoplasma.3.3. otras se encuentran fijas ordenadamente en alguna membrana particular y funcionan en forma secuencial.2 6.1.1 5. En la membrana celular se encuentran enzimas que participan en el transporte de metabolitos y .4.1 6.2 5 5. etc. retículo endoplásmico.1.1. La distribución de las enzimas en los organelos subcelulares se estudian fraccionando en ultracentrífuga homogeneizados de células.2.3 6. rama de la histoquímica denominada histoenzimología. vacuolas.2.1.1.CONTINUA TABLA 4.2 5.1.1 5.1 6. como es el caso de las enzimas oxidativas de la mitocondria.1 Nombre sistemático Cetoacidoliasas Citrato oxalacetato liasa Hidroliasas L-malatohidroliasa Isomerasas Racemasas y epimerasas Alanina recemasa D-ribulosa 5-P.2.2.3.7 4.3.2. Generalmente las vías anabólicas y catabólicas se localizan en organelos diferentes a fin de maximizar la economía celular.1 5.3 4.1 6.1.4 6.1.5).4. En células eucarióticas las enzimas se distribuyen en la membrana celular.1. (tabla 4.

síntesis de fosfoglicéridos y triacilgliceroles. TGP) se localiza en hígado.4. glucosidasas. TGO) se localiza princip a l m e n t e en m i o c a r d i o y la a l a n i n a aminotransferasa (antes transaminasa glutá- mico pirúvica. La deshidrogenasa láctica posee varias isoenzimas. NADH-citocromo c reductasa. nucleasas. catalasa. fosfolipasas y fosfatasas. alargamiento de ácidos grasos. condroitina sulfotransferasa. Lisozima.2. peptidasas. oxidación de ácidos grasos. membrana mitocondrial externa y en la envoltura nuclear. aminotransferasas. Varias de las enzimas señaladas en la tabla son comunes a uno o más organelos membranosos. y glucuroniltransferasa. glucosa 6-fosfatasa. D-aminoácido oxidasa. NADH y NADPH citocromo c reductasas. 5-nucleotidasa.5 Localización intracelular de las principales enzimas y rutas metabólicas Citoplasma Glucólisis: ruta de las hexosa monofostato. la LDH-1 (H4) se localiza en miocardio y la LDH-5 (M4) se localiza en hígado y músculo esquelético. esterasa. reductasa se ha encontrado en el retículo endoplasmático. lipasas. Dos subclases de aminotransferasas se localizan en órganos distintos. y el citocromo P450. La creatina fosfocinasa se localiza en músculo estriado (esquelético y miocardio).Tabla 4. aminoacilsintetasas Ciclo de los ácidos tricarboxílicos. arilsulfatasas. algunas de ellas específicas de determinado órgano. A nivel de organismo La localización y distribución de enzimas que funcionan específicamente en determinados órganos es el fundamento de la enzimología clínica. oxidasas de función mixta relacionadas con el citocromo b. nucleósido difosfatasa. a-hidroxiácido oxidasa. síntesis de la urea. glucogénesis y glucogenólisis: síntesis de ácidos grasos. la aspartato aminotransferas (antes transaminasa glutámico oxalacética. síntesis y reducción de esteroides Galactosil y glucosiltransferasa. otra variante isoenzimática la LDH-X se localiza en testículo. oxidación de ácidos grasos de cadena larga Rutas de biosíntesis de DNA y RNA Mitocondria Lisosomas Retículo endoplasmático (microsomas) Golgi Peroxisomas Núcleo a La NADH-citocromo b. Golgi. La amilasa y lipasa pancreáticas ayudan al diagnóstico de pancreatitis aguda cuando se elevan en suero (ver más adelan- . oxidación de aminoácidos. rutas de síntesis de proteínas. P-glucuronidasa. transporte electrónico y fosforilación oxidativa acoplada. glucosa 6-fosfatasa Urato oxidasa. catabolismo de purinas y pirimidinas. hidrolasas. incluyendo proteasas. fosfaíasa acida. 4.

de la misma magnitud. Energía de activación Conviene analizar previamente los conceptos termodinámicos. Se habla así de calor de formación y calor de reacción. Las fosfatasas. determinan la presencia de carcinoma prostético y óseo respectivamente. El cambio de energía libre (AF) o energía útil se correlaciona con la constante de equilibrio (Keq). es decir aquellas termodinámicamente imposibles. cuyos conceptos principales se establecen en d o s p r i n c i p i o s de la termodinámica llamados primero y segundo. los cuales permiten comprender el sentido de las reacciones químicas. los cambios de energía libre (AF) y de entalpia (AH) son positivos y se dice que la reacción es endergónica (o endotérmica si es en forma de calor). Aspectos termodinámicas. con formación de CO2 y H 2 0 es una reacción exergónica. en virtud de que las enzimas sólo aceleran reacciones espontáneas o metaestables. La aplicación del primer principio de la termodinámica (principio de conservación de la energía) a las reacciones químicas ha dado origen a la termoquímica que estudia la cantidad de calor que se absorbe o se desprende en una reacción y permite calcular la energía libre (F) y la entalpia o contenido calórico (H). El estudio de esto. si una reacción procediera de izquierda a derecha. los productos tendrán más energía que los reactantes. AF y AH son negativos y la reacción es exotérmica {exergónica en general).LFf reactantes AH . 4.5 MECANISMO DE ACCIÓN El mecanismo de acción de las enzimas se estudiará primero desde el punto de vista general de la catálisis y luego de cada sistema enzimático en particular. o si la libera y en qué magnitud. es el campo de las termodinámica.LHf productos . ejemplo: en la fotosíntesis. la degradación metabólica de la glucosa por la célula. Las enzimas no catalizan reacciones que jamás sucederían espontáneamente.LHf reactantes Una reacción que es exotérmica en sentido directo. las cuales pueden ocurrir aún en ausencia de enzimas pero muy lentamente. En las reacciones en que se desprende calor. Si en la reacción se absorbe calor. si es reversible.5. rama de la fisicoquímica.te). con su localización particular. Energía C H 6 12°6 + °2 6C0 2 + ÓHjO Energía El segundo principio de la termodinámica determina la dirección de una reacción química. cuando se elevan en suero. la energía solar permite la síntesis de glucosa (Ce H12 0¿) y es una reacción endergónica. que determinan el sentido de una reacción y su equilibrio. AF = LFf productos . que el agua corra por un declive y no suba por una pendiente. Este principio establece que los procesos espontáneos tienden al equilibrio. y si hay que suministrarle energía para que ocurra. esto determina que un cuerpo caliente ceda calor a otro más frío y no al revés. termodinámicamente posibles. la cual a su vez se rige por la ley de acción de masas. La realización y extensión de las reacciones bioquímicas están controladas por el flujo energético. 4. Para cualquier reac- .1. la fosfatasa acida en próstata y la fosfatasa alcalina en hígado y hueso. será endotérmica en sentido inverso.

este capítulo tratará de los factores que inciden en la actividad de una enzima.6 Relación entre Keq y AF° (a 25°C) Dado que las enzimas modifican la velocidad de las reacciones químicas. por lo tanto: AF° = -RT lnKeq puestos orgánicos inflamables expuestos al aire. es decir termodinámicamente posible. pero no espontáneo. como la gasolina. En un sentido cinético. la reacción sólo transcurrirá si se le proporciona energía (tabla 4. La velocidad cambia constantemente a medida que se aproxima al equilibrio (estado final) siendo cero en el equilibrio. La velocidad del cambio en la concentración del producto o del sustrato en función del tiempo. la velocidad de la reacción depende de la concentración de enzima y de su sustrato. que necesitan una chispa para su ignición y su transformación en CO2 y H2O.ción química: la ecuación que determina el cambio de energía libre respecto a la concentración de reactantes y productos es la siguiente: Donde AF° es el cambio de energía libre en condiciones estándar: este valor es equivalente al pKa de la ecuación de HendersonHasselbach (ver unidad 2). En ausencia de catalizadores enzimáticos. Esto sucede con algunos comTabla4. Existen sistemas de reacción que se presentan en estado metaestable. 4.4. el proceso se desarrollará espontáneamente. si AF° es positivo. expresa la velocidad de la reacción. En todos los procesos enzimáticos. las enzimas hacen que las reacciones termodinámicamente posibles procedan con rapidez en la célula pero no modifican la constante de equilibrio. Si se aumenta progresivamente la concentración . los componentes iniciales del sistema enzimático (sustrato (S).1). no hay cambio de energía libre y AF=0. Esa barrera termodinámica es la energía necesaria para alcanzar el estado de transición como energía de activación (fig. Cinética enzimática si AF° es negativo. muchas reacciones químicas proceden excesivamente lentas a la temperatura del organismo. temperatura y pH conocidos. En el equilibrio. La cinética estudia la velocidad de cambio entre el estado inicial de reactantes y productos y su estado final.2. La energía de activación es la energía necesaria para pasar las moléculas reaccionantes al estado de transición y que de ahí proceda la reacción. cofactores y enzimas) se añaden a una serie de recipientes en un medio con fuerza iónica.5. es decir es termodinámicamente posible. no reaccionan con rapidez debido a que la energía cinética que poseen es insuficiente para superar esa barrera de energía.6). Al disminuir la energía de activación.

se obtiene una relación directa y lineal (fig. la velocidad de la reacción decrece progresivamente hasta que permanece constante (Vmax) aun con elevadas concentraciones de sustrato (cinética de orden cero). b) la enzima sacarasa en presencia de sacarosa resistía la desnaturalización térmica . 4.7). 4.8). la enzima debe tener un número finito de sitios catalíticos para el sustrato y cuando están todos ocupados ya no puede aumentar la velocidad de la reacción. la velocidad de la reacción aumenta proporcionalmente a la concentración de sustrato.de enzima. Después. Modelo de Michaelis-Menten. a) fibrina tratada con tripsina y lavada posteriormente. manteniéndose constante (pero en exceso) la concentración del sustrato. seguía degradándose. Al principio. Para explicar matemáticamente este comportamiento Michaelis y Menten invocaron la existencia de un complejo intermedio enzima-sustrato: K E + S K. a este punto. ' [ES] K„ • E+P La formación del complejo enzima-sustrato [ES] se dedujo de las siguientes observaciones. se le designa como reacción de primer orden en virtud de que la velocidad depende de la concentración del sustrato (S) elevada a la primera potencia. En otras palabras. A concentración fija de enzima y concentraciones crecientes de sustrato se obtiene una segunda relación interesante. esto se explica porque la enzima se ha "saturado" con sustrato (fig.

4. Por otro lado. Nótese que si la velocidad (v) se hace igual a . mayor es la afinidad. la Km se hace igual a [S] en la ecuación de Michaelis-Menten. La ecuación matemática que define la reacción enzimática es una hipérbola que recibe el nombre de ecuación de Michaelis-Menten: _ Vmax [S] Km + [S] El valor de Km (constante de Michaelis) que se expresa en moles/litro. es necesario tomar el recíproco de la ecuación y transformarla en una línea recta: i . 4. Vmax y Km son únicas para cada enzima.Vmax. Los ensayos indicaron que la actividad PRPP sintetasa estaba aumentada tres veces. v Km Pe- La observación en el espectroscopio de estas dos reacciones resultó una prueba convincente de que es correcta la hipótesis de la formación del complejo [ES]. Otra transformación a la gráfica de Michaelis-Menten que permite calcular con mayor precisión la Km es la ecuación de Eadie-Hofstee: V v [S] ~~Km + Km. la actividad de la enzima se puede separar en dos fases. Cuanto más baja sea Km. Esta naturaleza bifásica se demuestra en el siguiente ejemplo clínico: en una familia Vmax Km La gráfica obtenida se muestra en la fig.H 2 0 2 ] + R-H 2 roxidasa + 2 H 2 0 + R K3 aquejada de hiperuricemia y gota. fijación del sustrato seguida de su modificación química. en una curva de saturación (fig. la Km de la enzima era normal pero la Vmax era tres veces mayor. en este sencillo modelo.H J O J ] En presencia de un donador de hidrógenos (colorante oxidable) tiene lugar una reacción posterior: [Peroxidasa . Así. la Km es un valor que indica la afinidad de la enzima por el sustrato. Debido a que en la práctica la determinación de Km a partir de la curva de saturación de Michaelis-Menten no es muy precisa.9).==? [Peroxidasa . donde la pendiente negativa es la inversa de Km. Modelo de Eadie-Hofstee.I Al En términos prácticos. resulta de las constantes de velocidad.8) el valor numérico de la Km puede deducirse en la gráfica en concentración de sustrato [S].. Por tanto.10. Modelo de Lineweaver-Burk. cuando la velocidad es la mitad de la velocidad máxima. donde se puede calcular Km en la intersección negativa de la abscisa.¿ . Las dos constantes de la ecuación de Michaelis Menten. Keilin y Mann en 1937 comprobaron que la peroxidasa presenta un desplazamiento de las bandas de absorción cuando se adiciona H2O2: K i Peroxidasa + H J O J . . 4.comparada con la sacarasa sola.. un paciente excretaba tres veces la cantidad normal de ácido úrico por día y tenía también niveles elevados de fosforribosil pirofosfato (PRPP) en eritrocitos. ya que la Vmax se hace asintótica. 1 Vmax [S ] + 1 Vmax y = ax + b La gráfica que se obtiene es la de Lineweaver-Burk o del doble recíproco (fig.

La unidad estándar de actividad enzimática (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto a 25 °C en condiciones óptimas de ensayo.5. El antiguo "número de recambio" recientemente sustituido por actividad molecular o molar. Sin embargo esto no indica si en la muestra la única proteína presente es la enzima.4.2. Actividad enzimática La actividad de una enzima se expresa habitualmente en términos de la cantidad de producto formado (o desaparición de sustrato) por cantidad determinada de enzima por unidad de tiempo. Durante la purificación enzimática este valor va aumentando a medida que se van eliminando proteínas contaminantes. se define como el número .1. La actividad específica se define como el número de unidades de enzima por miligramos de proteína (U/mg proteína).

2. interacciones farmacológicas). el producto de una reacción ca- . fenilcetonuria. Es indudable que la enzimoterapia tiene un futuro promisorio con las técnicas de ingeniería genética que permiten introducir la información genética para la síntesis de la proteína ausente o defectuosa utilizando plásmidos o partículas viriformes. pentosuria esencial y muchas otras que se revisarán más adelante). 4.4. El empleo de enzimas inmovilizadas es otra posibilidad de terapia cuando hay carencia de enzimas en un organismo evitando así las reacciones de intolerancia y asegurando la estabilidad y las condiciones óptimas para la actividad catalítica. que es el área de la medicina que utiliza las enzimas como auxiliares diagnósticos.1. "enfermedades hereditarias" o "enfermedades bioquímicas".1. contraindicaciones. albinismo. directa A+B sustratos . En ocasiones son las propias enzimas las que se usan para el tratamiento de enfermedades. actuando como inhibidor enzimático competitivo. Otras enfermedades se deben a la carencia de cofactores enzimáticos y la administración de ellos produce la rápida curación de estas enfermedades carenciales.1. son ejemplos del uso de enzimas como fármacos. Dado que muchas reacciones son reversibles. El diagnóstico de muchas enfermedades se puede'realizar con bastante precisión determinando la actividad de ciertas enzimas o isoenzimas que son indicadores de la destrucción tisular de órganos específicos. el sustrato (S) que es la molécula sobre la que actúa la enzima y el producto (P) molécula o moléculas resultantes de la acción de la enzima sobre el sustrato. sustrato y producto En una reacción enzimática se identifican tres componentes: la enzima (E) específica de la reacción. radica en el empleo racional de fármacos. El empleo de enzimas proteolíticas para el tratamiento de hematomas y de enzimas digestivas en casos de dispepsia. Muchas enfermedades se deben a la carencia o anormalidad en la síntesis de una determinada enzima (galactosemia. Son múltiples las implicaciones que tienen las enzimas en el origen. acompetitivo o mixto. Concepto de enzima. Otra importante vinculación de las enzimas con la medicina. sólo se podrán lograr y prevenir en la medida que se conozca el mecanismo de acción de cada fármaco y las múltiples interacciones que pueden ocurrir con las enzimas. La eficacia del tratamiento terapéutico y la magnitud de las reacciones indeseables (reacciones secundarias. los productos de la reacción directa (que procede hacia la derecha) son los sustratos de la reacción inversa (que procede hacia la izquierda). secuestrando o liberando cofactores o induciendo la biosíntesis de algunas enzimas. como sucede con las vitaminas (procoenzimas) y algunos oligoelementos. Estos errores están codificados en el genoma y se denominan: "errores innatos del metabolismo". La mayor parte de los fármacos que se utilizan en el tratamiento de enfermedades tienen como mecanismo de acción el modificar la actividad de una o varias enzimas. no competitivo. ya sea. "enfermedades moleculares". Importancia de las enzimas El estudio de las enzimas en medicina es cada vez más importante. Estas determinaciones son tan importantes que han dado lugar a una nueva especialidad: la enzimología clínica. tratamiento y prevención de enfermedades. inversa C+D productos En reacciones secuenciales de una vía metabólica. precauciones. diagnóstico. esta práctica se conoce como enzimoterapia.

que el médico se familiarice con las reglas locales en el manejo de unidades de actividad enzimática. si la fiebre continuara indefinidamente sería fatal.5. La gráfica de velocidad frente a temperaturas (Fig. químicos y biológicos: temperatura. debido a que la Tabla 4.de moles de sustrato transformado por un mol de enzima por minuto (mol/min/mol de enzima) (tabla 4.7). Factores físicos y químicos Temperatura.5. del producto e inhibidores. Por otro lado.000 5. Estos efectos son tan importantes in vivo como en condiciones de laboratorio.600 1. fuerza iónica. Factores que afectan la actividad enzimática La actividad enzimática es afectada por una serie de factores externos e internos que pueden ser físicos. pero a altas temperaturas la enzima sufre desnaturalización térmica y la velocidad de la reacción disminuye (fig. el Katal (Kat) que se define como la conversión de un mol de sustrato por segundo. es imperativo.11) revela una curva en forma Anhidrasa carbónica Catalasa p-amilasa p-galactosidasa Succinato deshidrogenasa . de la enzima. la actividad molar se denomina actividad del centro catalítico: número de moles de sustrato por mol de subunidad activa o por sitio catalítico. 4.3. 4. Las enzimas a temperaturas bajas muestran un aumento de su actividad al incrementar la temperatura. Hasta que todos los laboratorios de análisis clínicos unan esfuerzos para estandarizar sus informes.7 Actividad molecular de algunas enzimas Enzima Actividad molar (moles de sustrato por mol de enzima por minuto) 36. pH. Debido a que muchas enzimas son oligoméricas. con un sitio catalítico en cada subunidad. estos factores deben considerarse al realizar los ensayos in vitro para medir actividades enzimáticas en el plasma de un paciente. concentración del sustrato. La comisión de enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica ha propuesto una nueva unidad. la velocidad de los procesos metabólicos crece notablemente durante la fiebre.100 12 1 000 000 000 000 150 actividad enzimática aumenta con los incrementos de temperatura.11).1.3. por minuto. Muchos medicamentos actúan como inhibidores competitivos de ciertas enzimas. se puede expresar en milika tales (mKat) o microkatales (uKat). 4. 4. en el primer caso.

Esta propiedad es útil en el laboratorio clínico. Muchos procesos fisiológicos. El efecto nocivo de las radiaciones. sales y metales pesados (Ag. denominada temperatura óptima. sin embargo. alteran la conformación de la proteína y con ello. El factor que resulta por cada 10°C de incremento en la temperatura se denomina coeficiente térmico (Qio) y en las reacciones químicas habituales es de alrededor de 2. o sea. la velocidad de reacción decrece por desnaturalización de la e n z i m a .8 Valores óptimos de pH para algunas enzimas . no es el pH de máxima actividad de la enzima (pH óptimo). las enzimas poseen un punto isoeléctrico en el que su carga eléctrica es cero. Además de los efectos puramente iónicos. Por el contrario en condiciones de hipotermia muchas reacciones enzimáticas están deprimidas lo que explica la baja demanda de oxígeno de algunos organismos durante periodos de hibernación. fosfotúngstico y otros para desnaturalizar y precipitar proteínas. muestran un (Qio) • 2. por ejemplo. Pb. Hg) sobre la actividad enzimática se debe a la acción desna- turalizante sobre las proteínas en general. el sitio catalítico. Por ser proteínas. algunas enzimas. la pepsina o la arginasa son activas a valores depH alejados de este óptimo (Tabla 4.12). El incremento de velocidad al acercarse la temperatura óptima se debe a una mayor energía cinética de los reccionantes (sustrato). la frecuencia de contracción de un corazón extirpado. L a s e n z i m a s de microorganismos adaptados a vivir en aguas termales muestran temperaturas óptimas cercanas al punto de ebullición del agua. El pH óptimo de la mayoría de las enzimas se localiza entre los valores de 5 y 9.de campana con un óptimo entre 40 y 45 °C para enzimas humanas.8). por ejemplo. Los cambios de pH afectan profundamente el carácter iónico de los grupos funcionales de la enzima y. Sin embargo. el pH del punto isoeléctrico. Por arriba de la temperatura óptima. pH. por lo tanto. las muestras de sangre son primero tratadas con ácidos como el tncloroacético. los valores altos o bajos de pH (ácidos o alcalinos) provocan desnaturalización de la enzima (fig. se duplica la velocidad de la reacción por cada 10°C de aumento en la temperatura. la labilidad de la mayoTabla 4. 4.

13). 4. Inhibición competitiva.ría de las enzimas a estos agentes desnaturalizantes permite determinar si una reacción es catalizada por una enzima. 4.2. Quizá la prueba más evidente de la localización de sitios activos proviene de estudios con inhibidores. existe una zona determinada donde se combina con él sustrato al que se llama sitio activo o sitio catalítico. Inhibidores enzimáticos Aunque se requiere la molécula completa de la apoenzima para su actividad catalítica.000) respecto al peróxido de hidrógeno (PM 34).5. Por ejemplo. Los inhibidores son compuestos que tienen la capacidad de unirse a enzimas de tal forma que impiden la combinación enzima-sustrato. El peso molecular de la mayoría de los sustratos es muy pequeño comparado con el de las enzimas. Este es un hueco molecular en la estructura terciaria de la enzima con tres puntos de apoyo próximos entre sí (tres aminoácidos) aunque en la estructura primaria no estén próximos (fig. Esta molécula forma un complejo reversible con la enzima (El) que compite continuamente con el sustrato por el sitio catalítico. Existen diferentes tipos de inhibidores enzimáticos: competitivos. no competitivos e incompetitivos. Está dada por una molécula parecida estructuralmente al sustrato (isostérica) que se une al sitio catalítico pero no se transforma. Pueden afectarse ciertos aminoáci- dos de una enzima sin que ello altere su actividad catalítica siempre y cuando no se afecten los involucrados en el sitio activo. la catalasa (PM 250. Un inhibidor enzimático es cualquier agente químico capaz de disminuir la velocidad de una reacción sin desnaturalizar la enzima. La magnitud de la in- .3.

14). Aquellos organismos que requieren ácido fólico pero que no lo puedan sintetizar a partir de PABA. Este tipo de inhibición es irreversible aun cuando se aumente la concentración de sutrato. Un ejemplo muy conocido es la inhibición competitiva de la succinato deshidrogenasa.15). Toda o gran parte de la farmacoterapia moderna está basada en los conceptos de inhibición enzimática. cuyo sustrato natural. Es decir. no se afectarán por sulfas. vitaminas. La Km que se obtiene experimentalmente es denominada Km aparente: la Vmax no varía. quien comprobó que la inhibición del crecimiento bacteriano por sulfas era contrarrestado por ácido paraaminobenzoico (PABA). Dado que el hombre adquiere folato en forma exógena. Otro ejemplo es la inhibición de ciertos tumores por 5-fluorouracilo y la de algunos virus como el herpes labial por yododesoxiuridina. Muchos antimetabolitos ejercen su acción a nivel de coenzimas o grupos prostéticos como los antifólicos como el metotrexate o alguna antivitaminas como la oxitiamina o la oxipiridoxina. Los organismos utilizan ciertos metabolitos y enzimas para sintetizar estos compuestos esenciales. Dado que sustrato e inhibidor compiten por el mismo sitio de la inzima. ácidos grasos. el succinato y el inhibidor. aquellos que impiden el aprovechamiento y utilización de los metabolitos naturales debido a su parecido estructural. estas enzimas pueden inhibirse por medio de antimetabolitos. malonato. serán antimetabolitos. son parecidos (fig. etc. sin embargo. un aumento en la concentración de sustrato en presencia de una concentración fija del inhibidor llega a superar la inhibición. la Km muestra un incremento aparente en presencia del inhibidor. Si denominamos metabolitos a los sustratos fisiológicos presentes o producidos en el metabolismo celular. La utilización eficaz de las sulfas para combatir infecciones en el hombre depende de este hecho.hibición dependerá de: a) la concentración de inhibidor. El grado de inhibición competitiva es proporcional a la concentración de inhibidor (I). por lo que estos adquieren la categoría de nutrimentos esenciales. La inhibición solo depende de: a) la concentración del inhibidor y b) la afinidad del inhibidor por la enzima. Este crecimiento bacteriano puede inhibirse con antimetabolitos como las sulfas. Esto se puede ver en la gráfica de Michaelis-Menten y en la de LineweaverBurk (fig. En . b) la concentración de sustrato y c) las afinidades relativas (Km) entre inhibidor y sustrato por la enzima. Ejemplos de inhibición competitiva es la que se realiza al administrar ciertos fármacos. lo utilizan como metabolito para sintetizar ácido fólico. La investigación de los antimetabolitos se inició con la observación de Woods en 1940. 4. Inhibición no competitiva. Los microorganismos que necesitan PABA para su crecimiento. Estos compuestos pueden ser aminoácidos. 4. no existe relación entre el grado de inhibición y la concentración de sustrato. Los animales superiores y muchos microorganismos son incapaces de sintetizar algunos compuestos necesarios para su supervivencia. las sulfanilamidas no son dañinas a las dosis que inhiben a las bacterias.

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Es una forma de inhibición no competitiva pero reversible. Algunas enzimas tienen grupos sulfhidrilo (-SH) esenciales para su actividad. El inhibidor no competitivo puede ser unamólecula(Ii) que no se une en el sitio activo sino cerca de él. o incluso puede ser un análogo del sustrato (I3) pero que no puede ser desplazado por altas concentraciones del sustrato. La modificación en la gráfica de Lineweaver-Burk de la inhibición incompetitiva es la que se observa en la fig. 4.16). Los iones fluoruro y oxalato inhiben enzimas que requieren Ca+2 o Mg+2. En la inhibición no competitiva no se altera la Km pero sí la Vmax (fig. los productos de la reacción son inhibidores específicos de la reacción enzimática.17). que no es inhibida por producto. En ésta. Esta particularidad permite que en corazón se in- . en corazón predomina la isoenzima H4 que es inhibida por producto (lactato). puede unirse a uno de los tres puntos esenciales del sitio activo (I2). El diisopropilfluorofosfato (DIPFP) inhibe enzi- mas con grupos funcionales oxidrilo (SerOH) como la colinesterasa.contraste con la inhibición competitiva. Se presenta sobre todo cuando hay más de un sustrato en la reacción. En otros casos. 4. el sustrato puede inhibir o activar su propia reacción (fig. Un ejemplo de inhibición por producto lo tenemos en la deshidrogenasa láctica (LDH) de la cual existen dos isoenzimas particulares: en el músculo predomina la isoenzima M4. 4. un agente que reacciona con estos grupos es la yodoacetamida (I-CH2—CO-NH2): E-SH+I-O^-CO-NHj -* E-S-CH^-CO-NHj+HI Enzimas como la peroxidasa y catalasa. que contienen hierro como grupo prostético.19). 4. puede ser un inhibidor (I4) que no intervenga en la formación de ES. Estrictamente. el inhibidor se puede combinar con la enzima (El) o con el complejo enzima-sustrato ya formado (EIS) y la reacción puede retrasarse pero no impedirse. la formación del complejo enzima-inhibidor puede o no ocurrir en el sitio activo de la enzima.18. Inhibición incompetitiva o acompetitiva. pero que provoque un cambio de conformación en la enzima de suerte que ésta pierda su actividad catalítica (fig. son inhibidas por compuestos que forman complejos con el metal como el cianuro o el H2S.

El suero contiene enzimas como las fosfatasas acidas producidas por diferentes tejidos. El etanol y ciertos narcóticos son también inhibidores no competitivos de la fosfatasa acida. pero tiene poco efecto sobre las fosfatasas acidas de eritrocitos. hígado. Existen algunas aplicaciones prácticas. de la inhibición enzimática. las enzimas funcionan en un sistema cerrado y se acumula el producto de la reacción. pero no a la enzima prostática. 4. la característica secuen- .Figura 4. los productos de la reacción no se acumulan ya que son utilizados como sustratos de otra enzima. laelis-Menten (a) y Lineweaver-Burk (b). lo cual debe tomarse en cuenta al interpretar los resultados. y los productos de ésta son sustratos de otra enzima y así sucesivamente hasta llegar al llamado producto final. desde el punto de vista clínico. El ácido L-tartático inhibe competitivamente la actividad de la enzima prostática. El formaldehído al contrario. de aquí la necesidad de agregar quelantes a muestras de sangre destinadas a este ensayo. hay una producida por la próstata.6 REGULACIÓN ENZIMÁTICA En el tubo de ensayo. Los iones calcio inhiben no competitivamente muchas fosfatasas acidas.17 Inhibición no competitiva. inhibe la de eritrocitos. en la célula. Esta es una ventaja fisiológica que garantiza que el corazón tenga un aporte constante de energía para la contracción (ver unidad de Bioenergética). que se eleva en el carcinoma prostético. en la célula. riñon y bazo. La secuencia de reacciones entre un sustrato inicial y su producto final se denomina vía metabólica. productor de energía. hiba la LDH por lactato y el piruvato se derive al ciclo de Krebs. la cual puede presentar ramificaciones que constituirán otras vías metabólicas. Sin embargo. Aunque todas las reacciones catalizadas por enzimas son reversibles en el tubo de ensayo.

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Las reacciones enzimáticas. Se considera que la acción de CTP y UTP ocurre en un sitio regulador distinto del sitio catalítico porque: 1) CTP o UTP y aspartato difieren mucho en estructura. en equilibrio dinámico (estado estacionario). Conviene distinguir este tipo de inhibición con la inhibición por producto. mantenido por un flujo unidireccional de metabolitos. efectores alostéricos. temperatura externa. En un sistema tan complejo como la célula debe haber mecanismos de regulación o control de la multitud de reacciones simultáneas que ocurren.cial de las vías metabólicas hace que el flujo del metabolismo celular sea irreversible y permanentemente dinámico.6. El conocimiento de los factores que regulan la acción de las enzimas es. estudiaron este tipo de inhibición y la llamaron inhibición alostérica (allos=otro) en virtud de que el sitio regulador es distinto del sitio activo (isostérico. en su mayoría. 3) el ATP. por lo general. quizá por competencia con el sitio regulador y 4) pueden fraccionarse dos subunidades una que une aspartato y otra que une CTP o UTP. como cualesquiera otra. llamada enzima limitante de la vía. por retroalimentación o regulación retroactiva ("feedback"). Regulación alostérica La actividad catalítica de algunas enzimas reguladoras es afectada por ciertas moléculas que producen un cambio en la actividad enzimática. pero que no se modifican por la acción enzimática. A la inhibición alostérica se le llama también inhibición por producto final. obedecen esta ley. tamaño y distribución de cargas.1. de isos=igual). en 1963 observó esta falta de relación estructural inhibidor-sustrato y propuso denominar a este tipo de moléculas.21). por tanto. Jacob. El carácter dinámico de los organismos vivos establece que el verdadero equilibrio metabólico se alcanza sólo con la muerte de la célula. Monod y Changeaux. de . Si a la reacción: Glucosa -6-P + H 2 0 -» Pi + glucosa se le agrega inicialmente glucosa libre o fosfato. 4. En todas las áreas de las ciencias biomédicas se encuentran ejemplos de regulación normal o anormal: muchas células cancerosas exhiben anormalidades en la regulación de sus enzimas. La regulación metabólica de una vía tiene lugar mediante la modulación de la actividad enzimática de una o más enzimas clave de la ruta. la aspartato transcarbamilasa (a). que indica que los organismos mantienen su medio internoconstante a pesar de las amplias variaciones en alimentación. La primera enzima del proceso de síntesis de CTP. Monod. El estado estacionario equivale al concepto de homeostasis. 4. modificadores o moduladores.20). (fig. propuesto por Claudio Bernard a finales del siglo XIX. Estas moléculas se denominan efectores. Uno de los primeros ejemplos de regulación fue la síntesis de CTP (citidina trifosfato) a partir de aspartato y carbamilfosfato (fig. que generalmente corresponde a la primera enzima. esto como ya se mencionó se considera inhibición competitiva o isotérica. estos tienen poca o ninguna semejanza estructural con el sustrato. reacciones que son. productos finales del proceso. 4. Pardee. se inhibe específicamente con CTP y UTP. que no afecta la velocidad enzimática. La célula viva es un sistema abierto. 2) la inhibición por CTP o UTP puede abolirse sin pérdida de actividad catalítica. actividad física. catalizadas por enzimas. esencial para entender el mecanismo de homeostasis celular y para comprender a nivel molecular las enfermedades. disminuye su velocidad. puede impedir la inhibición por CTP o UTP. Un efector alostérico cambia la conformación de la enzima. la cual sigue la ley de acción de masas. etc.

es una en- . El efector negativo se une a un centro inhibidor.manera que cambia la afinidad hacia el sustrato. El sitio alostérico donde se une el efector positivo se conoce como centro activador. Una enzima alostérica. Los efectores alostéricos positivos (+) incrementan la afinidad enzima-sustrato y los efectores alostéricos negativos (-) hacen lo inverso.

3. La diferencia entre la energía libre de los reactantes y el estado de transición se denomina energía de activación. sin variar las propiedades termodinámicas del sistema. .talizada por una determinada enzima.13. Energía de activación de una reacción no catalizada (I) y una reacción catalizada (II). Catalizadores inorgánicos y biológicos Los catalizadores inorgánicos son generalmente átomos en estado iónico o metales con propiedades similares a las atribuidas a un catalizador biológico pero. tiene que alcanzar un nivel energético superior o estado de transición antes de convertirse en un producto (B) con un nivel energético co- rrespondiente al estado final. 4. lo que conduce a acelerar la reacción debido a que los reactantes pueden alcanzar más fácilmente el estado de transición (fig. Para que la reacción tenga lugar. las moléculas reaccionantes deben alcanzar un nivel de energía suficiente para vencer la barrera energética y entrar al estado de transición. La función de un catalizador (inorgánico o enzima) consiste en disminuir la energía de activación. 4.1. conocido como estado inicial.1. no poseen la REACCIÓN Figura.1. un sustrato (A) con determinado nivel energético. a diferencia de los catalizadores biológicos.1. Catálisis enzimática Se ha señalado que una enzima incrementa la velocidad de la reacción química pero sin modificar la constante de equilibrio ni el sentido de la reacción.4. 4. denominado metabolito.1). se convierte en el sustrato de la subsiguiente reacción B metabolito 4. En un sistema catalizado por una enzima. es decir. Funciones generales 4.

Las enzimas alostéricas permiten el control fino de la actividad metabólica mediante pequeñas fluctuaciones en el nivel de sustratos. En la hemoglobina el centro de fijación del oxígeno de cada subunidad corresponde al centro del sustrato y no a un sitio alostérico. Aunque una enzima monomérica puede. En el ejemplo de la aspartato transcarbamilasa. la cooperatividad en la fijación de oxígeno a la hemoglobina. Anteriormente se ha discutido.zima cuya actividad en el sitio catalítico puede ser modulada por la presencia de efectores en los sitios alostéricos (fig. La cooperatividad se define como la influencia que tiene la fijación de un ligando a un protómero sobre la fijación del ligando a un segundo protómero de una proteína oligomérica. S = sustrato. esta enzima posee dos protómeros catalíticos y tres o cuatro reguladores. experimentar efecto alostérico.23). en la práctica sólo se han encontrado dos enzimas alostéricas monoméricas: ribonucleósido difosfato reductasa y piruvato -UDP-n-acetil-glucosaminatransferasa. indicando aumento de la Km con pérdida de afinidad enzima-sustrato. Para las enzimas de la clase V. a = activador.22 Representación esquemática de la regulación alostérica. i = inhibidor. 4. a las del sitio alostérico. en el capítulo de proteínas de transporte. enzima e inhibidor alostérico sigue una curva sigmoidea. el cambio conformacional que induce el oxígeno sobre los protómeros de hemoglobina. Los efectos alostéricos negativos desplazan la curva hacia la derecha. el sitio catalítico radica en subunidades diferentes. teóricamente. por lo tanto. el efector afecta la Km pero no la Vmax. 4. técnicamente no es un efecto alostérico. La cinética de interacción entre sustrato. En la clase K. Figura 4.22). Es frecuente la confusión entre los términos de alosterismo y coopera ti vidad. el efector alostérico abate la Vmax sin afectar la Km aparente. . En presencia de un efector positivo se alcanza la 1/2 Vmax a una concentración menor de sustrato y se desplaza la gráfica de Michaelis-Menten hacia la izquierda (fig. La mayoría de las enzimas alostéricas son oligoméricas. Las enzimas alostéricas se dividen en dos clases según la influencia del efector alostérico sobre la Km y la Vmax.

4. Puesto que los inhibidores alostéricos actúan en un sitio diferente (alostérico) el modelo cinético ya no es válido. no es adecuado utilizar los términos competitivos y no competitivos con sistemas enzimáticos absteneos porque el mecanismo del efector de un inhibidor alostérico sobre una enzima V o K es diferente al de un mecanismo competivo o no competitivo sencillo. 3DPG.una enzima).6.2. Los estudios iniciales sobre la regulación de la síntesis de proteínas enzimáticas permitieron reconocer tres tipos de enzimas: constitutivas. El hecho de que los centros inhibidores y activadores alostéricos están separados entre sí como del centro catalítico. e inhibidores (I). GTP) no eran capaces de inhibir alostéricamente a la enzima y se acumulaban el PRPP y el ácido úrico. Se ha mencionado al inicio de la unidad III que la expresión de la función genética se realiza a través de las enzimas (un gene . y reprimibles. ADP. GDP y 2. probablemente debido a una re- . se ilustra en el estudio de un paciente con gota cuyos eritrocitos tenían altos niveles de fosforribosilpirofosfato (PRPP). Enzimas constitutivas y enzimas inducibles Las enzimas constitutivas están presentes en concentraciones constantes durante la vida de la célula. mostraba menor sensibilidad a los inhibidores alostéricos normales AMP. inducibles. se encontró que la PRPP sintetasa tenía una Km y Vmax normales. En la fig. Aparentemente una mutación había producido un cambio en el centro inhibidor (I).No obstante que las enzimas K dan gráficas parecidas a la inhibición competitiva. 4. 4. se muestran los diferentes sitios de unión para sustrato (S) activadores (A).1.6. Represión e inducción El mecanismo de control alostérico de la actividad enzimática es también aplicable a sistemas de regulación a nivel génico. Los productos finales endógenos de la ruta (ATP. En este paciente.2. Sin embargo.24 que ilustra el caso.

4.24 Inhibición alostérica o por retroalimentación. (3-galactosidasa y tiogalactósidotransacetilasa (fig. Las enzimas inducibles. y puede fabricar todos sus constituyentes esenciales a partir de este medio. El fenómeno se denomina represión enzimática coordinada. que contiene glucosa y sales. El tercer tipo de enzimas es el de las reprimibles. El aminoácido histidina se forma por una secuencia de 10 reacciones a partir de PRPP. En estas condiciones. Cuando se agrega histidina al medio se reprimen los 15 genes que codifican para 9 enzimas. en breve empiezan a aparecer cantidades apreciables de galactósido permeasa. . la inducción implica síntesis de novo lo cual se ha demostrado puesto que sistemas donde la síntesis de proteínas está bloqueada. Usualmente E. generalmente son las enzimas de las principales vías metabóücas como las de la vía glucolítica. se suspende la síntesis de dichas enzimas. El fenómeno se denomina inducción enzimática coordinada. La síntesis de estas enzimas se suspende si está presente en abundancia el producto final de la vía metabólica donde funcionan. el cultivo sólo contiene trazas de P-galactosidasa.Figura 4. la velocidad de síntesis aumenta con respecto a su degradación. Si se quita la lactosa del medio y se vuelve a dar glucosa. Uno de los sistemas mejor estudiados es el que conduce a la síntesis de histidina en Salmonella. Con este tipo de control la célula no invierte energía en sintetizar enzimas para actuar sobre un sustrato no presente. lación constante entre síntesis y degradación de la enzima. Es decir. es el sistema de la P-galactosidasa de E. coli.25). Él ejemplo de inducción de síntesis enzimática. coli crece en un medio simple. son aquéllas cuya concentración en la célula normalmente es baja y a medida que se requiere mayor cantidad de enzima. Cuando estos microorganismos se transfieren a un medio con lactosa. no responden al estímulo inductor. como úni- ca fuente de carbono. más estudiado.

el AMPc se une a una proteína catabólica activadora del gene (CAP. la síntesis de RNAm transcurre desde el operador a través del operón completo. F.Debe subrayarse que la inducción y represión son mecanismos de control sobre síntesis de enzima y no sobre actividad de la enzima. de E. Monod propusieron un modelo ingenioso para explicar la inducción y represión de la síntesis enzimática.000 daltones. 4. Este fenómeno de polaridad se ha encontrado para el operón del triptófano (operón Tri) y otros. Y y A). es uno de los más estudiados. llamado regulador que codifica para una proteína represora del gene operador. Por este trabajo y otras contribuciones recibieron el premio Nobel de medicina 1965. uno con otro. El modelo presupone que la transcripción de genes estructurales está controlada por un gene operador y un sitio promotor (donde se une la enzima RNA polimerasa). El amino terminal de la p-galactosidasa se sitúa del lado del operador. Para mayor comprensión de estos aspectos se recomienda revisar los conceptos genéticos de la unidad IX.3. Los genes que transcriben un RNA mensajero (RNAm) policistrónico. que a su vez codifica para las enzimas coordinada- mente inducidas o reprimidas se denominan genes estructurales. formando una unidad funcional llamada operan. y el operón Lac se transcribe y traduce. es distinto de la inhibición por producto final (retroacción o feedback). Al inducir con lactosa. se puede localizar en un sitio distante del gene operador (fig. Así. . la retroinhibición es un mecanismo de control ejercido a corto plazo. la formación del RNAm de todo el operón Lac es un tetrámero de casi 150. con un efecto inmediato sobre la ruta metabólica. el AMP cíclico (AMPc). Cuando se dan inductores como la lactosa o análogos se deforma el represor.26). El operón Lac.6. El control del operón Lac tiene otro elemento efector positivo. De acuerdo a su teoría. Por "mapeo" genético del cromosoma involucrado se ha demostrado que estos genes estructurales se localizan adyacentes. y este complejo se une al sitio promotor en el DNA de tal manera que la RNA polimerasa puede iniciar la síntesis de RNAm. la regulación de las enzimas involucradas en la inducción y represión tiene lugar a nivel de la transcripción. un dímero con PM de 45. Jacob y J. por lo tanto. mientras que la represión necesita más tiempo pero con efectos permanentes al reducir el número de moléculas de enzima. 4. la expresión del operón Lac requiere del inductor (lactosa) y de AMPc. Otro gene.000 daltones que se sintetiza continuamente. Coli. La proteína represora que actúa sobre el operador y que impide la acción de la RNA polimerasa y por tanto. Así. Teoría del operan En 1961. en el cromosoma involucrado. consta de 3 enzimas inducibles controladas por 3 genes estructurales (Z. En general. Células con glucosa disponible tienen bajos niveles de AMPc.

H. D. La histidina es también un inhibidor alostérico de la primera enzima de la secuencia biosintética. E. B.27). I. El operón His. F. se supone que también se . C. CAP = proteína catabólica activadora del gene operador. se combina éste con la proteína y se forma una sustancia efectivamente represora que bloquea al gene operador (fíg. En sistemas reprimibles. que actuando coordinadamente.Figura 4. participan en la biosíntesis de histidina. no tiene objeto la producción de enzimas para su síntesis. histidina). Cuando se da el correpresor (por ejemplo. A. 4.26 Inducción enzimática en el operón LAC de E. Esto representa también un ahorro de energía para la célula ya que si existe histidina.) que codifican para 9 enzimas. coli. L = lactosa. el gene regulador elabora una proteína represora que regularmente no interactúa con el operador. Aunque los genes y mecanismos reguladores mencionados sólo han sido demostrados en procariotes. de Salmonella typhimurium coordina la expresión de genes estructurales (G.

1. Las enzimas se utilizan también como reactivos clínicos para detectar otro tipo de moléculas cuyas concentraciones son bajísimas en el plasma o tejidos. Sin embargo. los RNAm eucarióticos son monocistrónicos en contraposición a los RNAm policistrónicos de las células procariotas. Como reactivos en el laboratorio clínico La disponibilidad de enzimas puras a precios razonables ha convertido a algunas de ellas en reactivos de enorme valor para el laboratorio de análisis. Aspectos Clínicos de las Enzimas La aplicación clínica de las enzimas anteriormente se restringía a su empleo como auxiliares en el diagnóstico. los mecanismos de regulación son más complejos y tienen separados físicamente la transcripción de los genes de la traducción. Además. Puede determinarse enzimáticamente la concentración de un . posteriormente se vislumbró la posibilidad de emplearlas en el tratamiento de algunas enfermedades. 4. campo que está en exploración muy activa. En esta última. hay que ser prudentes en extrapolar los conocimientos adquiridos de una a la otra clase de células (eucariotes).presentan en organismos eucariotes.7.

el H2O2 oxida la O-dianisina a un compuesto colorido (principio de la glucocinta).compuesto en una mezcla cuando se dispone de una enzima específica capaz de transformarlo rápidamente en un producto. las enzimas intracelulares no pasan al torrente sanguíneo. fosforilación.2. las enzimas involucradas en los procesos metabólicos (glucólisis.28). etc. como resultado de una lesión celular producida por agentes infecciosos. 4. disminuye la densidad óptica (fig.2.7. líquido amniótico. 4. al acoplar la acción de la enzima ureasa con la glutamato deshidrogenasa (GDH). oxidación.1. se ha ideado un método altamente específico llamado enzimoinmunoensayo (EIA). y en la selectividad y sensibilidad de la respuesta antígeno-anticuerpo. Para determinar alcohol etílico. Este escape de enzimas de las células al plasma se produce también cuando mueren éstas como ocurre en el infarto . En los últimos años existen disponibles comercialmente las erizarías inmovilizadas para usarse en sistemas de determinación automatizados. Como elementos diagnósticos Una importante función de un laboratorio clínico. 4. con H2O2 como subproducto. líquido sinovial). toxinas bacterianas. es la de cuantificar las alteraciones bioquímicas en el individuo enfermo. líquido cefalorraquídeo. se incrementa proporcionalmente la densidad óptica. Acoplando la reacción con peroxidasa. sin embargo. Muchas determinaciones enzimáticas pueden acoplarse con reacciones que utilizan NAD+ o NADP+ como coenzimas. El fundamento de este método es similar al radioinmunoensayo (RÍA). Con este ensayo se puede determinar urea. y en algunos tejidos o células sanguíneas. Aprovechando la especificidad enzimática e inmunológica por un sustrato. jugo gástrico. se convierte éste en acetaldehído por medio de la enzima deshidrogenasa alcohólica (ADH): el aumento en absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentración de alcohol. basado en el principio de la unión competitiva.) se sintetizan en las células y la mayoría ejerce su función en su interior. La glucosa se determina oxidándola a gluconato en presencia de la enzima glucosa oxidasa. orina. en virtud de que NADH y NADPH absorben a 340nm mientras que NAD+ y NADP+ no absorben a esa longitud. cuando el NADH se oxida. Cuando el NAD+ se reduce. como la determinación de enzimas en líquidos extracelulares (plasma y suero. Si las células permanecen intactas.7. se producen daños en las membranas celulares que permiten el "escape" de enzimas a la circulación. Enzimas órgano específicas En condiciones normales. o incluso por el proceso de envejecimiento celular normal. transaminación.

Isoenzimas El interés médico por las isoenzimas fue estimulado por el conocimiento de que los . no obstante. Un grado mayor de conocimiento de esta relación se está consiguiendo con el estudio de determinadas isoenzimas. la fosfatasa acida de próstata. Esta correlación ocurre sólo para algunas enzimas. disolución de la fibrina (plasmina) y modificación de quilomicrones (lipoproteinlipasa).2. éstas pueden dividirse en tres grupos: 1) Enzimas que realizan una función específica en el plasma llamadas también enzimas plasmáticas funcionales. las enzimas de origen intracelular están presentes en plasma en cantidades muy bajas pero mensurables. sueros humanos contenían varias isoenzimas de la deshidrogenasa láctica y que sus proporciones relativas cambian significativamente en ciertos estados patológicos.4). fosfatasa acida y fosfatasa alcalina. por ejemplo amilasa. 2) Enzimas elaboradas por células especiales y secretadas a un conducto o dentro de un tejido especial. 4.2.7. Perfiles enzimáticos El plasma circulante contiene cantidades apreciables de enzimas que tienen su origen en las células de diferentes tejidos del organismo. y la fosfatasa alcalina de osteoblastos.7. 4. Se encuentran en alta concentración y están involucradas en funciones como la coagulación de la sangre (trombina y otras). esto es poco probable ya que el metabolismo de muchos órganos es muy parecido. En personas normales sanas. En el diagnóstico de la alteración de un órgano específico en un proceso patológico sería ideal que se pudiesen identificar enzimas específicas para cada órgano. por ejemplo la alcohol deshidrogenasa o la sorbitol deshidrogenasa que son casi exclusivamente de origen hepático. Una de las aspiraciones del diagnóstico clínico es precisamente lograr la asociación de una enzima específica en plasma o sangre con cada tejido o situación patológica. lipasa. la acetilcolinesterasa de eritrocitos.2. la creatinfosfocinasa y la fosfatasa alcalina (revisar subcapítulo 4.2.de miocardio y la hepatitis infecciosa.3. Las isoenzimas que han sido estudiadas para aplicaciones diagnósticas son la deshidrogenasa láctica.

Alteraciones enzimáticas como causa de enfermedad Muchas enzimas se encuentran en casi todas las células aunque algunas se encuentran predominantemente en ciertos tejidos.4. es un dímero que consta de 3 isoenzimas: CPK-1 (BB) de cerebro. para determinar cuantitativamente el NADPH: ATP + GLUCOSA -+ GLUCOSA-6-P + ADP -» 6-p-glucorolactona + GLUCOSA -6-P+ NADP+ NADPH+H+ La enzima CPK. Aun cuando los eritrocitos lisados no contengan la enzima por valorar.7. b) inducidas por drogas. y especialmente después de paro cardiaco. si se presenta insuficiencia circulatoria debida a insuficiencia cardiaca o choque. en la misma proporción que la TGO y en distrofias musculares sobre todo la de tipo Duchenne. como en el recién nacido. a) fisiológicas. Existen causas de elevación no específica de niveles enzimáticos que pueden ser. después de cirugía mayor o de un trauma extenso. ejercicio físico intenso. se elevan notablemente algunas enzimas pero su valoración no permite establecer la causa de la insuficiencia o del paro. Puede localizarse el tejido dañado para confirmar un diagnóstico de dos formas: a) Por determinación del perfil isoenzimático. antes llamadas transaminasa glutámico pirúvica (TGP) y glutámico oxalacética (TGO) pero el hígado contiene más TGP que TGO mientras que en el corazón sucede al revés. CPK-2 (MB) y CPK-3 (MM) de músculo. Por ejemplo. c) elevaciones artificiales. 4. contienen otras que interfieren y producen falsas positivas. TGO y CPK a partir del músculo esquelético dañado.30). Creatinfosfocinasa (CPK). esquelético y cerebro. ejemplo: hígado y corazón contienen altos niveles de aminotransferasas. b) Por valoración de más de una enzima. Los niveles de gama-glutamiltransferasa se correlacionan con ingestión de alcohol. En general las muestras hemolizadas son inadecuadas para valoraciones enzimáticas. Se eleva marcadamente en infarto de miocardio. se elevan los niveles de LDH-5.3. En otro ejemplo se utiliza la valoración de isoenzimas de la LDH y CPK para determinar la evolución de un infarto de miocardio (fig. Su cuantificación constituye para el médico una prueba valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico. moderadamente en lesiones musculares. La enzima cataliza la siguiente reacción: CPK CREATINFOSFATO + ADP -* CREATINA + ATP Esta se acopla a otras dos. Los niveles de fosfatasa alcalina son altos hasta después de la pubertad por la actividad osteoblástica. como la fosfata alcalina. ejemplo: las isoenzimas de la LDH (fig. cirugía. Aun cuando la enzima sea específica de un tejido particular. El segundo y tercer grupo de enzimas se denominan también enzimas plasmáticas nojundonales y su presencia en plasma en cifras mayores que las normales sugiere una velocidad aumentada de destrucción celular. Ciertas drogas como difenilhidantoína y barbitúricos pueden inducir la producción de enzimas. hipotiroidis- . 4. En el último trimestre del embarazo están elevados los niveles de fosfatas alcalina de origen placentario. niveles elevados de ésta en plasma solo indican daño celular pero no el tipo de proceso patológico. accidentes cerebrovasculares.29).3) Enzimas que realizan su función en las células que las originan y cuyas actividades constituyen el proceso vital celular. Esta enzima se encuentra distribuida en músculo cardiaco. los niveles de TGO están elevados moderadamente en el periodo neonatal.

B: suero normaj. sigue más lenta alrededor de un día. El nivel total de LDH aumenta muy lentamente. El incremento de LDH 1 y LDH 2. plasma u orina sobre amilopectina marcada con un colorante azul. uremia grave y cetoacidosis diabética severa. La isoenzima CPK2 (MB) aumenta hasta un máximo dentro del primer día del infarto. Se excreta por orina en virtud de su bajo peso molecular. moderadamente en casos de úlcera péptica perforada. y artificialmente en muestras hemolizadas. saliva. CPK3. A: paciente con infarto de miocardio. trompas de Falopio y músculo. . colecistitis. La amilasa se eleva notablemente (5 a 10 veces) en casos de pancreatitis aguda (en ocasiones en carcinoma de páncreas).Figura 4. obstrucción intesti- Fig. La intensidad del color azul liberado es proporcional a la cantidad de enzima. a-amilasa (AMS). Patrón isoenzimático de CPK y LDH después de un infarto de miocardio. a la CPK2. C: paciente con enfermedad hepática. 4.30.29 Patrones normal y patológico de las isoenzimas de la LDH en suero humano. es diagnóstico del infarto de miocardio. La enzima está presente en jugo pancreático. dentro de las 12-24 h junto con un incremento de CPK2. a menos que exista insuficiencia renal. Los niveles urinarios se elevan paralelamente a los niveles plasmáticos. mo (la tiroxina afecta el catabolismo de la enzima) alcoholismo (miositis alcohólica) episodios psicóticos agudos. El ensayo se realiza por acción de suero.

una molécula de sustrato es ren. o sea la enzima De modo similar. cofactores (coenzima o grupos prostéticos) y el nicotinamida-adenina-dinucleótido-fosson en general moléculas pequeñas. Coenzimas de oxidorreducción.oxidorreducción.2). que requiere la enzima pa. termostables y no proteicos. Holoenzima y apoenzima de grupo. la apoenzima es catalíticamente inacti.4). Una enzima puede acelerar una re.oxidada (deshidrogenada) y una molécula de va. las de isomerización y las que forman enlaces covalentes.2. riboflavina. La adición del cofactor a la apoenzima coenzima es reducida (hidrogenada) (fig. da lugar a la holoenzima. de los cofactores se denomina apoenzima. Cofactores coenzimáticos para disminuir la energía de activación (tabla 4.2. 4. de la nicotinamida. Cofactores Relación entre vitaminas y coenzimas.alta especificidad de éstos ni la capacidad 4. tiamina. 4. si es. de la apoenzima. en las reacciones de para ser activas. do pantoténico. Tal es el caso peso molecular.1.fato (NADP+). nutrición). por ejemplo. La vitamina C y las cas e inorgánicas.vitaminas liposolubles no tienen actividad ra su actividad. Los nicotkiamida-adenina-dinucleótido (NAD+). coenzimática conocida. . ácido fólico y cianocobalasi la unión es débil y se separa con facilidad mina.2. pero en las que los requie.2.2. Entre las reacciones catalizadas 4.1. el fosfato de piridoxal (PPal) actúa como segundo sustrato en dos reacciones combinadas (fig. Las vitaminas del complejo B forman parOtros componentes de la enzima con bajo te de numerosas coenzimas.2. (fig. 4.derivadas de la vitamina nicotinamida son el tán firmemente ligados a la apoenzima. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS por enzimas que requieren coenzimas están las de oxidorreducción. orgáni.1). áciunidos a la apoenzima se llaman coenzimas. Las reacciones hiLa parte proteica de la enzima desprovista drolíticas no requieren de coenzimas.La mayoría de las coenzimas son formas acción 105 veces más que un catalizador modificadas de las vitaminas (ver unidad de inorgánico. transaminación. 4. o grupos prostéticos. La coenzima puede considerarse como un No todas las enzimas requieren cofactores cosustrato.3). las de transferencia 4. en las reacciones de completa y activa.

5-10 p-NITROFENOLFOSFATO — • p-NTTROFENOL + Pi prostático. eritrocitos. hígado. se elevan los niveles de ACP debido al aumento de células prostáticas ectópicas. Como agentes terapéuticos Algunas enzimas se han utilizado como medicamentos en la terapia de problemas médicos específicos. Fosfatasa alcalina (ALP). pancreatectomía y trastornos gastrointestinales. en niños de la fracción ósea por la actividad osteoblástica. es útil para disolver coágulos de sangre formados en las extremidades inferiores. es la causa de la enfermedad. particularmente si es metastásico. Normalmente. Varias enzimas proteolíticas como tripsina y quimotripsina al igual que la estreptocinasa. El método usado en la valoración es el de Bassey Lowry-Brock que utiliza la siguiente reacción. amilasa. En el capítulo de ácidos nucleicos se estudiarán algunas enfermedades en las que está alterada la codificación de algunas enzimas. plaquetas y hueso. en el raquitismo. Se encuentran en hueso. la fosfatasa acida de la secreción prostática drena a los conductos prostáticos y aparece poco en sangre. glándula mamaria lactante y placenta. hígado. Fosfatasa acida (ACP). La terapia con asparaginasa se usa en algunos tipos de leucemia adulta. pared intestinal. su deficiencia o falta de actividad. En huesos se localiza en los osteoblastos (la enzima es necesaria para los depósitos de fosfato en hueso). embarazo ectópico roto. Esta enzima activa el plasminógeno el cual se transforma en plasmina que es una proteasa que ataca la fibrina y la degrada. parotiditis. Algunas enzimas digestivas (peptidasas.nal. hiperparatiroidismo. la fosfatasa se eleva aun antes de que aparezcan síntomas de la enfermedad. La enzima se eleva en enfermedades hepáticas con elementos colestáticos junto con la enzima 5'-nucleotidasa (NTP) que parece tener también origen hepático. Incluye isoenzimas que hidrolizan fosfatos a pH alcalino. nucleasa y celulasas). Se encuentra en próstata. preparada a partir de estreptococos.4. esta fracción tiene la propiedad de ser inhibida por el L-tartrato. Los niveles normales en el adulto provienen específicamente de hígado. Aunque es difícil detectar sólo la fracción prostática. El método de determinación es similar al de las fosfatasas alcalinas excepto el pH óptimo que es de 5. En el carcinoma . pH 8. osteocarcinoma y osteosarcoma. La estreptocinasa. Se eleva también en enfermedades óseas con actividad osteoblástica elevada: osteomalacia y raquitismo. cálculos salivales. enfermedad de Paget. administración de morfina (espasmo del esfínter de Oddi) y macro-amilasemia. El principal uso de la valoración es el diagnóstico de carcinoma prostático metastásico. En el embarazo se elevan los niveles normales debido a la isoenzima termoestable de la placenta. Utilizando fibrinolisina y estreptodornasa (una DNAsa) por vía oral o tópico se puede eliminar el material fibrinoso y purulento de heridas infectadas o necrosadas. lipasas. 4. se utilizan en el tratamiento de la trombosis.7. En el futuro será posible el reemplazo enzimático por ingeniería genética en individuos con deficiencia genética que afecte la síntesis de una enzima dada. con asparaginasa los n i v e l e s de asparagina disminuyen sensiblemente lo que lleva a disminuir la viabilidad del tumor. se usan en la deficiencia enzimática por pancreatitis crónica. En virtud de que las células tumorales tienen un requerimiento nutricional de asparagina.

COO" 0 I OH Lactato ( Sustrato reducido C H3. .C H L . i COOH CH-NH9 2 I Alanina c=o COOH I C=0 CH3 Piruvato . Transferencia de grupos ámino con PPal (fosfato de piridoxal) como cosustrato. El NAD (nicotín-adenín-dinucleótido) actuando como cosustrato en una reacción de oxidorreducción COO" I OH-NH9 2 I CH? I CH9 I ¿ COOH Glutamato COO" I CH« I 2 CH« I ¿ COOH oe-Cetaglutarato Fig.C .C H . 4.2.3. 4.C O O ~ II O Piruvato ( Sustrato oxidado ) NAD coenzima oxidada NADH + H + ( coenzima reducida ) Fig.

En los citocromos. AMP. el grupo prostético hemo está unido fuertemente y requiere ácidos fuertes para disociarse del citocromo. ADP. FAD y coenzima A. ejemplos clásicos de grupos prostéticos son el FAD (flavinadenin-dinucleótido) y el grupo hemo.FMN Acido Lipoico Coenzima Q 4.2. El resto serían las coenzimas no nucleotídicas. Al primer grupo pertenecen los nucleósidos di y trifosfato que participan en reacciones de transferencia como AMPC. ATP. . S-adenosil metionina.Clasificación de coenzimas Las coenzimas pueden clasificarse como sigue: Para la transferencia de grupos distintos del H: Uridina difosfato (UDP) Pirofosfato de Tiamina (TPP) Fosfato de Piridoxal (PPal) Coenzima A (CoA-SH) Acido tetrahidrofólico (TH4) Biotina Coenzimas de cobamida (B12) Acido Lipoico S-Adenosil metionina (S AM) Algunos autores clasifican estructuralmente a las coenzimas como: coenzimas nucleotídicas y no nucleotídicas. Otra sería la clasificación funcional que las agrupa en coenzimas vitamínicas y no vitamínicas. Para la transferencia de H: NAD + .2. Grupos prostéticos Funcionan también como cofactores o cosustratos enzimáticos pero.NADP + FAD. se encuentran firmemente unidos a la apoenzima. NADP+.2. a diferencia de las coenzimas. NALV.

5). son capaces de adsorber moléculas pequeñas en su superfi- cie. Complementos Algunos cofactores enzimáticos no pertenecen a coenzimas o grupos prostéticos derivados de vitaminas sino que representan elementos minerales por ejemplo. Sin embargo el modelo de Fisher consideraba al sitio catalítico rígido y las proteínas en solución son flexibles Fig. 4. Sitio activo de una enzima.42. la especificidad reside en una determinada región de la superficie enzimática llamado sitio activo (fig. .5. propuesto por Émil Fisher en 1894 representaba la interacción sustrato-enzima en términos de la analogía entre llave-cerradura.2. reguladores El modelo original de sitio catalítico para referirse al sitio activo. lo cual favorece la interacción de los sustratos y su reacción. 4.3.1.3. la lisinaoxidasa es una enzima que necesita cobre y la anhidrasa carbónica que requiere cinc.23. Sin embargo. Ajuste inducido por un cambio conformacional en la estructura de la enzima antes y después de la unión del sustrato. Tipos: Catalíticos. 4. 4. Todas las enzimas. por el hecho de ser micelas.2. Sitio activo Una propiedad muy importante de las enzimas es su especificidad.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS 4. Complejos multienzimáticos Existen enzimas que constan de una sola cadena polipeptídica integrando un monómero. Este modelo permite también explicar la influencia de otros sitios.por esto. que posee dos subunidades distintas: H (de corazón) y M (de músculo). 4. ribonucleasa. Nombres sistemáticos y nombres triviales En un principio se designó a las enzimas con nombres triviales según el sitio anatómico Tabla 4. llamados reguladores o aloste'ricos.2 Enzimas oligoméricas Enzimas Número de subunidades PM de cada subunidad peso molecular Total . esto se discutirá más adelante al hablar de efectores alostéricos.3. el sustrato induce un cambio conformacional en la estructura terciaria de la proteína enzimática como hace la mano en el guante.1. La isoenzima M4 predomina en músculo esquelético y en hígado.6). 4. 4.2. la izoenzima H4 predomina en miocardio (Tabla 4. tripsina y otras.2.5).5. 4.8 millones y la sintetasa de ácidos grasos. ejemplos de este tipo son la piruvato deshidrogenasa con un peso molecular de 4. La diferencia cinética entre estas dos isozimas se explica en otros capítulos. A este grupo pertenecen la lisozima. En este modelo. H2M2. H3M. al que llamó de ajuste inducido (fig. que modifican la actividad de la enzima al provocar cambios conformacionales en el sitio catalítico.3). Las isoenzimas o isozimas son diferentes proteínas con la misma actividad enzimática que se originan en diferentes tejidos y presentan un desplazamiento electroforético diferente.2). las isoenzimas y las enzimas alostéricas (Tabla 4. Koshland en 1967 emitió un modelo del sitio catalítico flexible. Enzimas oligoméricas e isoenzimas láctica. Estas dos subunidades se combinan de cinco formas diferentes para formar cinco isoenzimas: H4. Otro grupo de enzimas contienen dos o más subunidades asociadas por enlaces no convalentes. A este grupo pertenecen algunas enzimas de la glicólisis.4. El caso más ilustrativo es el de la deshidrogenasa láctica. Las isoenzimas difieren en su composición de aminoácidos por lo que sus diferencias están determinadas genéticamente. HM 3 y M4 (Fig. la creatina fosfocinasa y la fosfatasa alcalina.3. 4. enzima tetramérica. Las isoenzimas más estudiadas por sus aplicaciones clínicas son la deshidrogenasa Algunas reacciones requieren de múltiples enzimas asociadas que participan secuencialmente para transformar un sustrato.

1. la deshidrogenasa alcohólica será la enzima E.. esteraseis.Isomerasas: y 6.Ligasas.1. proteasas.Hidrolasas: 4. El primer dígito identifica la clase a la que pertenece la enzima. como la ptialina. 3. etc. Según éste. 1.Estas enzimas catalizan reacciones de oxidación y reducción muy importantes en biología. así las que hidrolizan el almidón (latín amilum). amilasa. 1. adiaseis.C.l. 1. ejemplo: deshidrogenaseis.3. la Unión Internacional de Bioquímica (UIB) adoptó el sistema de clasificación y nomenclatura propuesto por su Comisión de Enzimas (E. las que hidrolizan las grasas o lípidos. Las enzimas se clasifican en las seis clases siguientes: 1. oxidaseis. el segundo porque el dador electrónico es un alcohol.) basado en el tipo de reacción química y su mecanismo de acción.de procedencia.Liasas.) El primer dígito es por ser una oxidorreduetasa. de manera que independientemente del país y el nombre trivial que se le dé en cualquier idioma. las que hidrolizan proteínas.. el tercero la sub-subclase y el cuarto dígito para la enzima específica. etc. el subfíjo asa.1. tripsina pancreática. cada enzima tiene un número clave de 4 dígitos de manejo interna- cional.Oxidorreductasas. descarboxilasas.. el segundo dígito identifica la subclase.Oxidorreductasas. Clasificación digital de las enzimas En el año de 1961.oxidorreduetasa (E. 4.C.2.1.. 5. 2.Transferasas... el tercero porque el aceptor es la coenzima NAD + y el cuarto por el número de orden de la enzima.C. Más tarde se les dio el nombre según la reacción química catalizada. la pepsina. El nombre sistemático de la deshidrogenasa alcohólica es alcohol: NAD+.1. Después se les denominó añadiendo al nombre del sustrato sobre el que actuaban. lipasas. Con frecuen- .

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