UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES “ZARAGOZA”

AUTORES María Teresa Griselda Fuentes Lara Esperanza Jiménez Castañeda Juana Rosado Pérez Estela Valencia Platas

COLABORADORES
Adrian Flores Barrera Sandy Isabel Hernández Ortega Guadalupe Nélida Ortega Soto Javier de Jesús Piñón Ortega

Séptimo Semestre

2012

Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II

Tabla de Contenido
A Manera de Prologo Introducción Práctica No. 1: Valoración del Efecto Analgésico Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Procedimiento 1 Procedimiento 2 Cuestionario Referencias Práctica No. 2: Bloqueadores de la Placa Neuromuscular Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Cuestionario Referencias Práctica No. 3: Anestésicos Locales Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Método 1: Uso del Simulador Método 2: Uso de Lombrices de Tierra Cuestionario Referencias Práctica No. 4: Anestésicos Generales Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Cuestionario Referencias Práctica No. 5: Valoración del Efecto Anticonvulsivante Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Cuestionario Página 3 4 5 6 7 7 8 8 9 10 10 11 12 12 12 13 14 14 15 16 17 17 17 17 18 19 19 20 21 23 23 23 24 24 25 26 27 27 28 29

Tabla de Contenido
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Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II
Referencias Práctica No. 6: Fármacos Cardiotónicos Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Método 1: Uso del Simulador Método 2: Uso de la Pulga de Agua Cuestionario Referencias Práctica No. 7: Diuréticos Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Cuestionario Referencias Práctica No. 8: Efecto de los Fármacos Hipoglucemiantes Introducción Objetivos Material, Equipo y Reactivos Metodología Cuestionario Referencias Anexos Anexo Práctica No.3: Simulador Anexo Práctica No.6: Simulador Anexo Práctica No.7: Valoración 29 30 31 32 32 33 33 33 34 34 35 36 38 38 38 40 40 41 42 43 43 44 45 45 46 46 55 63

Tabla de Contenido
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Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II

A Manera de Prólogo
Generalmente esta parte la escribe una persona reconocida en el ámbito a tratar en el texto, pero a menudo a los lectores, y sobre todo a los estudiantes, esta persona nos parece completamente lejana o ajena a nosotros y sus palabras no llegan a tener gran influencia. Es por esto que decidimos aclarar que también somos o fuimos estudiantes de la UNAM, tus compañeros de la FES Zaragoza, que cursamos la materia justo como estás a punto de hacerlo tú. El Manual de Prácticas de Laboratorio de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II que ahora tienes en tus manos contiene un acercamiento general a la información que como profesionista requerirás y es resultado de la exigencia de científicos mejor preparados pero con una conciencia más responsable con el planeta Hoy en día, los científicos tenemos que estar al día en la legislación nacional e internacional y en esta se han dado grandes avances conforme al uso y manejo adecuado de animales de experimentación en donde destaca la Regla de las 3R (Remplazar, Reducir y Refinar). Es por esto que en el presente manual encontrarás nuevas técnicas de experimentación como simuladores computacionales, manejo de organismos de órdenes menores y lotes experimentales de menor tamaño que hoy se emplean con mayor frecuencia en la vida profesional. En cada práctica encontrarás una pequeña introducción cuya única finalidad es guiarte en la búsqueda de información. Es fundamental comprender que todo el tiempo necesitarás buscar profundizar en el tema lo mayor posible con la idea de que “tu educación depende principalmente de ti y de lo que quieras lograr”. De la misma manera recomendamos que tus fuentes de información sean lo más actuales posible ya que la ciencia es un mundo en constante construcción y lo que es cierto hoy puede no serlo del todo mañana. Uno de los objetivos primordiales de este manual es que realices toda esa búsqueda de información antes de la actividad en el laboratorio para que no trabajes a ciegas, por lo cual se proponen una serie de cuestionarios que junto con la introducción te guiarán en la información básica que debes conocer del tema. Con toda la nueva filosofía de trabajo y una serie de pensamientos de personajes célebres al inicio de cada práctica se pretende que el estudiante genere una educación universal y responsable haciendo honor al lema de la UNAM de José Vasconcelos “POR MI RAZA HABLARÁ EL ESPÍRITU” recordando que los estudiantes de hoy serán los profesionistas del mañana que moldearán al país y a la sociedad. Sabemos que la carrera es pesada pero, aunque no lo creas, la humanidad depende de ti así que no te rindas. TUS COMPAÑEROS FES Zaragoza, UNAM México 2012

A Manera de Prologo
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Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II

Introducción
En la presente edición del Manual de Prácticas de Laboratorio de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II de la carrera de QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA, se ha tratado de mantener los criterios que en un inicio tuvieron los profesores del modulo, respetando su valioso trabajo, pero a su vez, se implementaron algunos cambios que, a nuestro criterio, van de acuerdo a la actualidad, sin que con ello el alumno se pierda en un mar de información. El principal objetivo de este manual, fue el crear una guía que constituyera una herramienta eficaz para el aprendizaje, para lo cual, se tuvo el cuidado de que en cada práctica se incluyeran los siguientes puntos:        Introducción: Que sustenta los principios básicos de cada práctica. Objetivos: Proporcionan directrices a los estudiantes sobre lo que deberían saber para desarrollar adecuadamente las prácticas. Metodología: Clara y precisa que facilita las actividades a realizar. Figuras, Esquemas y Tablas: Que dan un diseño más didáctico y sencillo. Cuestionario: Cuya función es indicadora del grado de conocimiento adquiridos previos a la práctica. Referencias: Útil como guía para la búsqueda de información adicional. Anexos: Contienen suplementos de los simuladores computacionales así como el tratamiento de los datos obtenidos. Se ha procurado que todo el manual tenga el mismo formato para un mejor uso del mismo, por todo lo anterior, desde nuestro punto de vista, el manual cumple con su cometido, ser un texto básico para estudiantes.

Introducción
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LOS AUTORES FES Zaragoza, UNAM México 2012

Práctica No. 1
Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II

LA DUDA NO ES SOLO BALUARTE DE LA CORDURA, SINO HABILIDAD SUTIL DE LA MODESTIA.

Valoración del Efecto Analgésico

Santiago Ramón y Cajal

Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II
Introducción Al considerar que el término Analgesia proviene de los vocablos griegos, An que significa sin y ÁLGESIS dolor, es fácil deducir que un analgésico es cualquier fármaco que administrado de manera adecuada disminuye o calma la Sensación de Dolor. En general, los analgésicos se pueden dividir en dos grandes categorías, según su naturaleza química, los opioides y los no opioides (o no esteroideos). Los opioides son de exclusiva prescripción médica y su uso es más frecuente en el paciente hospitalizado, un ejemplo es la morfina. El único de éstos que puede ser parte del botiquín es la codeína. Dicha sustancia es muy efectiva en dolores agudos de los huesos y las articulaciones, sobre todo después de una cirugía. Los analgésicos no esteroideos comprenden una amplia lista de sustancias. Estos son los calmantes adecuados para el botiquín por su utilidad en diversos tipos de dolor y la seguridad con que pueden ser usados a las dosis recomendadas. El prototipo de éstos es la aspirina, este grupo también recibe el nombre de Analgésicos Antiinflamatorios No Esteroideos (AINES).

Valoración del Efecto Analgésico
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DERIVADOS DE:
Ácido Salicilico p-aminofenol Ácido acético Ácido propionico Fenamatos Ácidos enólicos Alcanonas

Tabla 1.1 Ejemplos de AINES EJEMPLOS
Ácido acetil-salicilico (aspirina). Acetaminofén. Indometacina, ketorolaco y diclofenaco. Ibuprofeno, naproxén y oxaprozina. Ácido mefenámico y ácido meclofenámico Piroxicam, fenilbutazona y dipirona Nabumetona

La mayoría de los AINES, son fármacos que tienen otras propiedades como antiinflamatorios y/o antipiréticos (reducen la fiebre). Los analgésicos Opioides incluyen los derivados de los alcaloides, ya sean naturales o sintéticos. El prototipo de estos es la Morfina, obtenida a partir de la amapola, también se encuentra la Metadona, Meperidina y Propoxifeno (analgésico débil).

Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II
Definición del Dolor Para poder entender cómo es que actúan estos fármacos, es necesario tener una idea de lo significa el Dolor, aunque es muy difícil hacerlo, pues es subjetivo. La definición más comúnmente aceptada del dolor es la proporcionada por la Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (Internacional Association for the Study of Pain, IASP): "El dolor es una experiencia sensorial y emocional no placentera relacionada con daño potencial o real del tejido, o descripta en términos de tal daño. El dolor siempre es subjetivo". La cuestión de que el dolor siempre es subjetivo es muy importante y enfatiza que el dolor es una experiencia somatopsíquica. Aristóteles se refirió a esto cuando describió al dolor como una "pasión del alma". Esto enfatiza que una variedad de factores diversos pueden causar o agravar el dolor, lo cual debe considerarse en la evaluación y tratamiento. Una definición clínica más práctica es: "El dolor es lo que el paciente dice que es. Es lo que el paciente describe y no lo que los demás piensan que debe ser. Por lo que el dolor es una respuesta del organismo ante el daño, leve o severo y se convierte así en un signo de alerta. La sensación se desencadena cuando, se producen ciertas sustancias llamadas Prostaglandinas estas sustancias a su vez generan la acción de enzimas que actúan sobre otros componentes de las células. Una de las enzimas que favorece la producción de prostaglandinas es la llamada Ciclooxigenasa, de las cuales existe la I y la II. La primera se encuentra en todos los tejidos mientras que la segunda solo está en el riñon y en los sitios en que ocurre inflamación y dolor es a este nivel donde actúan los AINES. Acción de los Analgésicos Los analgésicos bloquean la producción de las prostaglandinas necesarias para desencadenar la sensación del dolor, gracias a que inhiben la acción de las enzimas denominadas ciclooxigenasas Por eso mismo, los analgésicos tienen también propiedades antiinflamatorias y antipiréticas (controlan la fiebre). El Acetaminofén es el único cuya forma de acción no afecta las prostaglandinas. El otro mecanismo de acción es mediante la fijación a los receptores opiáceos produciendo analgesia; a nivel del SNC bloqueando y modulando las señales dolorosas a los cordones espinales y cerebro, esta acción es característica del el D-Propoxifeno (dextropropoxifeno) Objetivo  Observar y valorar el efecto analgésico del Propoxifeno en ratón, administrado en dosis variadas por vía intraperitoneal (I.P.) valorando el efecto a diferentes tiempos. Material, Equipo y Reactivos MATERIAL BIOLÓGICO  Cinco ratones adultos (20-30gramos) MATERIAL Y EQUIPO  Una pinza de mosco con mango de hule (tipo caimán)  Dos jeringas de 1 mL (tipo insulina)  Una balanza granataria con canastilla para pesar animales.  Un reloj REACTIVOS

Valoración del Efecto Analgésico
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  Analgésico (Propoxifeno u otro similar) Solución salina

Metodología El método que se utilizará, se basa en producir dolor experimentalmente en los animales de laboratorio, y medir el tiempo en que tarda en aparecer una conducta o síntoma indicativo del dolor. Este procedimiento se lleva a cabo en ausencia y en presencia del analgésico. Los mecanismos para producir dolor son físicos (se aplica una pinza sobre la cola del animal, se coloca al animal sobre una placa caliente o bien se sumerge la cola en agua a 50° C), y químicos (se inyecta un agente químico al animal). Procedimiento 1 1. Colocar la pinza de mosco (o caimán) a 1 cm de la base de la cola del ratón.

Valoración del Efecto Analgésico
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Imagen 1. Forma correcta de colocar el caimán en la base de la cola del ratón.

2. La respuesta positiva al dolor se caracteriza por vocalización y/o movimientos para alcanzar o morder la pinza, en un lapso de 10 segundos. En caso contrario, deseche al anormal y tome otro. 3. Enseguida pese y numere a cada ratón. 4. Administre a cada ratón por I.P. la dosis del fármaco (asignada aleatoriamente) de acuerdo a la siguiente tabla: Tabla 1.2 Dosis de Administración
RATÓN
1 2 3

Dosis (mg/Kg)
100 (solución 10 mg/mL) 70 (solución 7 mg/mL) 50 (solución 5 mg/mL) 35 (solución 3.5 mg/mL) 0.1 mL Solución Salina/ 10g

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5 Control

Preparar soluciones a partir de la solución madre de 10 mg/mL, para inyectar 0.1 mL de cada solución por 10 g de peso. 5. Una vez administrado el fármaco, mida el tiempo.

Imagen 2. Administración Intraperitoneal en ratón.

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6. Aplique nuevamente la pinza arterial de la manera antes descrita, a los 15', 30', 60', y 90', y evalúe la respuesta de cada ratón. 7. Si muerde la pinza (positivo al dolor) no existe analgesia. 8. Si no muerde la pinza (negativo al dolor) existe analgesia. 9. Anote sus resultados en la siguiente tabla:
RATÓN 1 2 3 4 5
Tabla 1.3 Resultados por Equipo DOSIS MG/KG VALORACIÓN DEL EFECTO 15' 30' 60'

90'

10. Los resultados de todos los equipos se anotarán en la tabla 1.4.
Tabla 1.4 Resultados por Grupo DOSIS MG/KG

LOG Dosis

Animales (sin dolor) Animales Probados
15' 30' 60' 90'

% RESPUESTA

15'

30'

60'

90'

100 70 50 35

11. Con los resultados obtenidos construya una curva de tiempo vs efecto para cada dosis. 12. Si los resultados lo permiten, calcule la dosis efectiva media (DE50) con el tiempo de efecto máxime

Procedimiento 2
Existe una variante del método 1, que consiste en lo siguiente: 1. Calentar aproximadamente 100 mL de agua a 50° C. 2. Colocar un ratón dentro de un cono (o algo parecido), de tal manera que la cola salga del mismo. Imagen 3. Ratón en cono con cola saliendo

Valoración del Efecto Analgésico
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3. Introducir la mitad de la cola por 10 segundos en el agua. 4. La respuesta positiva al dolor se caracteriza por vocalización y/o movimientos bruscos para extraer la cola del agua o salir del cono. En caso contrario, deseche al

Valoración del Efecto Analgésico
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animal y tome otro. 5. Enseguida pese y numere a cada ratón. 6. Administre a cada ratón por vía I.P. la dosis del fármaco (asignada aleatoriamente) de acuerdo a la tabla 1.2. 7. Una vez administrado el fármaco, mida el tiempo. 8. Repita los pasos del 1 al 3 a los 15', 30', 60', y 90', 9. Evalúe la respuesta de cada ratón. 10. Si su actitud no es agresiva, es decir, si no le afecta el agua caliente, existe analgesia. 11. Anote sus resultados en la tabla 1.3. 12. Los resultados de todos los equipos se anotarán en al tabla 1.4. 13. Con los resultados obtenidos construya una curva de tiempo vs efecto para cada dosis. 14. Si los resultados lo permiten, calcule la dosis efectiva media (DE50) con el tiempo de efecto máximo. Cuestionario 1. Describa el papel que juegan las prostaglandinas en el dolor. 2. ¿Cuál es el mecanismo de acción analgésica de la aspirina, naproxeno y piroxicam? 3. ¿Cuál es el mecanismo de acción del Propoxifeno? 4. ¿Qué función tienen las Ciclo-oxigenasas 1 y 2, y como afectan al organismo? 5. ¿Cuáles son las teorías del dolor y que dice cada una de ellas? 6. ¿Cuál es la norma oficial mexicana que aborda el manejo y sacrificio correcto de los animales empleados en el laboratorio? 7. Realice una guía de manejo y sacrificio para ratas, ratones, conejos y ranas. Referencias 1. Goodman L.S.& Gilman A. 1996. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9a. edición. McGraw Hill. U.S.A. 2. Barastegui, AC, Esquemas y Prácticas de Farmacología. Espaxs, España 1976. 3. Bertrand G. Katzung, Farmacología Básica y Clínica, 8a ed. Manual Moderno, México 2002. 4. NOM-062-Z00-1999 Especificaciones Técnicas para la Producción, Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio. Imagen 4. Ratón en agua caliente

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Práctica No. 2

Bloqueadores de la Placa Neuromuscular

LA BELLEZA DE LAS COSAS EXISTE EN LA BELLEZA DE QUIÉN LAS CONTEMPLA

D. Hume

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Introducción Durante el siglo XVI los exploradores europeos encontraron que los nativos de la cuenca del Amazonas usaban un veneno en la punta de sus flechas que producía la muerte. Después de muchas investigaciones se encontró que el curare es el extracto crudo activo de varias especies de plantas cuyo principio activo es la D-tubocurarina. El músculo esquelético voluntario está inervado por neuronas motoras cuyos axones son capaces de conducir potenciales de acción a altas velocidades. Al área del músculo que yace junto a la terminación axónica se le conoce como placa motora y a la sinápsis química que existe entre ambas como unión neuromuscular. Los fármacos que actúan en la unión neuromuscular pertenecen a dos grupos: PRESTNÁPTICOS:  Fármacos que inhiben la síntesis de acetilcolina por ejemplo hemicolinio.  Fármacos que inhiben et almacenamiento de la acetilcolina en las vesículas por ejemplo el AH5183.  Fármacos que inhiben la liberación de acetilcolina por ejemplo la estreptomicina. POSTSINÁPTICOS  Fármacos no despolarizantes. Antagonistas competitivos de los receptores nicotínicos de la acetilcolina. Ejemplo la D-tubocurarina'  Fármacos despolarizantes. Activan los receptores nicotínicos produciendo una despolarización inicial, pero bloquean la acción subsecuente de los receptores. Ejemplo la succinilcolina.

Bloqueadores de la Placa Neuromuscular
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Estructura de la Succinilcolina

Objetivo  Demostrar experimentalmente el efecto de la succinilcolina en la unión neuromuscular de ratones balb/c. Material, Equipo y Reactivos. MATERIAL BIOLÓGICO  4 ratones balb/c. MATERIAL Y EQUIPO  2 cajas para ratones.  1 rejilla para caja de ratones  4 jeringas de 1mL  Vaso de precipitados de 1L

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     Mechero Bunsen con manguera Tripie Toalla o trapo absorbente Balanza granataria con canastilla para pesar animales Cronometro

REACTIVOS  Solución de succinilcolina  Solución salina Metodología Prueba de escalada. 1- Por equipo tomar 4 ratones balb/c en una caja con tapa (reja). 2- Pesar cada uno de los ratones en una balanza con canastilla y registrar los valores marcando la cola de cada ratón para su posterior identificación (del 1 al 4). 3- Inclinar la tapa de la caja de los ratones para que forme un ángulo de 80° con respecto a la mesa y poner a escalar cada uno de los ratones. Prueba de nado. 4- En una segunda caja para ratones colocar agua hasta a mitad. 5- Calentar agua con un mechero bunsen en un tripié y mezclar con el agua de la caja, midiendo la temperatura hasta obtener un valor entre 35°C y 38°C. 6- Tomar el ratón marcado con el número 1, que previamente ya escaló la reja, e introducirlo con cuidado al agua para que nade 30 segundos aproximadamente. 7- Sacar de la caja y secar al ratón perfectamente con una toalla, cuidando mantenerlo caliente para evitar que muera por hipotermia. Administración del fármaco y pruebas. 8- Por medio del peso del ratón y la concentración de la solución de succinilcolina hacer el ajuste para administrar al ratón 1 una dosis de 0.7 mg/Kg vía intramuscular. 9- Inmediatamente después repetir la prueba de escalada y registrar el tiempo que tarda el ratón en caer por no poderse sujetar correctamente.

Imagen 1. Prueba de escalada con rejilla a 80° de inclinación.

Imagen 2. Prueba de nado en caja con agua a 35-38°C.

Imagen 3. Administración intramuscular en ratón.

Bloqueadores de la Placa Neuromuscular
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10- Sucedido lo anterior repetir la prueba de nado y registrar el tiempo que tarda el ratón en no poder nadar más. 11- Repetir la prueba de escalada y de nado hasta que el efecto pasé y registrar el tiempo transcurrido. 12- Continuar de la misma forma con los ratones 2 a 4 uno tras otro (No realizar las pruebas simultáneamente) administrando dosis de 0.9 mg/Kg y 1.1 mg/Kg a los ratones 2 y 3. Al ratón 4 se le administra 0.1 mL/g de peso de solución salina (Control). 13- Reportar los resultados en la siguiente tabla: Ratón 1 2 3 Control Dosis (mg/kg) Tiempo de latencia Tiempo de duración del efecto Tiempo de recuperación

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Cuestionario 1. Haga un esquema de la placa neuromuscular. 2. ¿Cómo se clasifican los fármacos que actúan en la unión neuromuscular? Indique cada grupo. 3. Describa el mecanismo de acción dé la succinilcolina. 4. Menciona el perfil farmacocinético de la succinilcolina. 5. Usos clínicos y efectos adversos de la succinilcolina. 6. lnvestiga las interacciones farmacológicas de la succinilcolina. 7. ¿Qué pasa al estimular directamente el músculo?, ¿Por qué? Referencias

1. Goodman, L.S. & Gilman A. 1996. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9a. edition. McGraw HiII. U.S.A. 2. Flores J. 2000. Farmacología Humana. Masson Barcelona. 3. Rang H, Dale M. y Ritter J. 2000. Farmacología. 4a. edición., Harcourt. España 4. Taylor M. y Reide P. 1999. Harcourt. España. 5. Velascó A. 2003. Farmacología. McGraw Hill. España.

Práctica No. 3
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Anestésicos Locales

LAS GRANDES MENTES SIEMPRE HAN ENFRENTADO LA OPOSICIÓN VIOLENTA DE MENTES MEDIOCRES.

Albert Einstein

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Introducción. Los anestésicos locales son fármacos que previenen o alivian el dolor al interrumpir la conducción nerviosa. Cuando se aplica de manera local en el tejido nervioso en concentraciones apropiadas, actúan en cualquier parte del sistema nervioso en cualquier tipo de fibra nerviosa. Este grupo de fármacos no produce inconciencia y su sitio de acción es la membrana celular de las células excitables, como la membrana nerviosa. El uso efectivo y seguro de los anestésicos locales requiere no solo que los fármacos bloqueen la conducción de algunos nervios, sino también que esta acción sea rápida y totalmente reversible y que no tenga efectos tóxico sistémicos mayores. Mecanismo de acción: El aspecto singularmente mas importante de las acciones de los anestésicos locales es la reducción del aumento transitorio de la permeabilidad al sodio asociada con la fase de ascenso –es decir la despolarización- del potencial de acción. Esta reducción de la permeabilidad al sodio se debe a los efectos de los fármacos sobre los canales de la membrana del sodio sensibles al voltaje. Los anestésicos locales son aminas de pKa que varia entre 8 y 9. Por lo tanto puede existir en solución como la especie cargada (catiónica) o no cargada, y el pH dependerá del medio, Fig. 3.1. La lidocaína (xilocaína) y la procaína (novocaína) se consideran agentes prototipo de los anestésicos locales. La lidocaína introducida en 1948, actualmente es uno de los anestésicos locales más ampliamente utilizados. La estructura se muestra en la Fig. 3.1. se utiliza como anestésico local en procedimientos odontológicos, en el tratamiento de disritmias ventriculares (especialmente cuando estas se presentan ene le infarto de miocardio o en cirugía cardiaca), atenuación de la respuesta vaspresora (presión arterial sistémica/presión intracraneana) en la intubación y en la atenuación de las fasciculaciones provocadas por succinilcolina.

Anestésicos Locales
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Fig. 3.1. Estructura química de un anestésico local
FARMACOCINETICA DE LA LIDOCAÍNA: inicio, rápido: duración, moderada (60-120 min); T1/2 1.6 h; Vd de 91 L; depuración, 91 L/min; unión a proteína del 65%. Efecto: antiarrítmico. Sedación, bloqueo nervioso; disminuye la conducción de los canales de sodio. Su eliminación es por metabolismo hepático produciendo metabolitos activos y tóxicos; eliminación renal (10% sin metabolizar). Toxicidad: los efectos adversos de la lidocaína que se observan al aumentar la dosis consisten en vértigo, convulsiones, desorientación, bloqueo cardiaco o hipotensión arterial. Concentración sérica terapéutica = 1.5 mg/L

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Objetivos  Por medio del uso de un programa de simulación que el alumno aprenda el efecto de los anestésicos locales al aplicar un estimulo nervioso.  Demostrar el bloqueo del impulso nervioso por la acción de un anestésico local, al aplicar un estímulo en una preparación ciático-gastrocnemio por medio del uso de un programa de simulación.  Que el alumno de manera practica conozca el efecto de los anestésicos locales al aplicar un estimulo nervioso (químico, físico o térmico). Material, Equipo y Reactivos. PARTE 1 (1° Sesión) MATERIAL BIOLÓGICO  NO

REACTIVOS  NO PARTE 2 (2° Sesión) MATERIAL BIOLÓGICO  Lombrices de tierra. MATERIAL Y EQUIPO  Termómetro  Mechero  Tripié  Vaso de precipitados de 600 ml  Aguja REACTIVOS  Lidocaína 2%  Acido clorhídrico 0.1 N Metodología Método 1: Uso del Simulador

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MATERIAL Y EQUIPO  Computadora personal con simulador instalado

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1. DETERMINACION DEL ESTIMULO UMBRAL 1.1Seleccionar “Fisiología del impulso nervioso”. 1.2Seleccionar en menú EXPERIMENTO: “Inhibir efecto nervioso”. 1.3Fijar el voltaje a 1.0 V. 1.4Pulsar ESTIMULAR. 1.5Aumentar el voltaje en 0.5 V hasta obtener respuesta. 1.6Guardar el valor umbral. INHIBICIÓN CON LIDOCAINA 2.1Borrar gráfica anterior. 2.2Seleccionar gotero con lidocaína. 2.3Aplicar lidocaína entre los electrodos. 2.4Pulsar ESTIMULAR y guardar. 2.5Presionar el botón LAVAR. 2.6Presionar ESTIMULAR y guardar.

2.

Anestésicos Locales
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REPETIR EL MISMO PROCEDIMIENTO EN EL SIMULADOR CON EL CURARE Y EL ETHER, REGISTRAR Y OBSERVAR LOS CAMBIOS QUE SE EFECTUAN AL ADICIONAR CADA SOLUCION. Método 2: Uso de lombrices de tierra. 3. 3.1EFECTO DE LA LIDOCAÍNA EN LOMBRIZ DE TIERRA. ESTÍMULO QUIMICO. 3.1.1- Tomar tres lombrices y colocarlas en una caja Petri. 3.1.2- Colocarles tres gotas de HCL 1.0N en la cola de la lombriz (zona más anillada), observar la reacción de la lombriz. 3.1.3- Después de haber observado la reacción de la lombriz colocarle unas gotas de lidocaína dejar reaccionar aproximadamente 5 min. 3.1.4- Pasados los 5 min de efecto de la lidocaína adicionar nuevamente unas gotas de HCl 0.1 N observar y registrar los resultados. ESTÍMULO TÉRMICO. 3.2.1- Calentar agua a 40°C. 3.2.2- Colocar tres lombrices en una caja Petri. 3.2.3- Dejar caer de manera continua y con ayuda de una pipeta pasteur agua previamente calentada a 40 °C y observar si reaccionan, de no ser así intentarlo con otras lombrices hasta ver que reaccionen. 3.2.4- Seguir calentando el agua hasta los 50 °C. 3.2.5- Colocar unas gotas de lidocaína e la cola de las lombrices dejar 5 min a que haga el efecto anestésico. 3.2.6- Pasados los 5 min verter de manera contante un poco de agua previamente calentada a 50 °C. 3.2.7- Observar si reaccionan o no y registrarlo.

3.2-

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3.3ESTÍMULO FÍSICO. 3.3.1- Colocar tres lombrices en una caja Petri. 3.3.2- Picar la cola de la lombriz (la zona más anillada y móvil) con una aguja, observar la reacción de la lombriz. 3.3.3- Adicionar unas gotas de lidocaína y dejar hacer efecto por un aproximado de 5 min. 3.3.4- Tras pasar los 5 min volver a picar la cola de la lombriz con la misma aguja observar y registrar si hubo o no reacción.

Referencias 1. William Catterall y Kenneth Mackie. Anestésicos locales. In Goodman and Gilman, las bases farmacológicas de la terapéutica, 9th ed. (Ardian JUL, Limbird LE, Molinoff PB, Rudon RW Eds). Ed. McGrawn-Hill. Inc., New York 1996. 2. Cedric M. Anestésia local y anestésicos locales. In farmacología, 1ª. Ed. (Smith, CM., Reynard, AM Eds). Buenso Aires, Argentina, 1993, pp. 219-230 3. Mary J, Myce, Sheldon B, Gertner, Maria Mena Perper. In farmacology, Lippincott´s illustrated Reviews. (Harvey RA., Champe PC Eds) J.B. Lippincott Company, 1992.

Anestésicos Locales
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Cuestionario 1. Mencione brevemente el mecanismo de acción de un anestésico local. 2. La estructura química de un anestésico local consta de: 3. En la preparación ciático-gastrocnemio, menciona el sitio de acción del anestésico local. 4. ¿Que se observa al colocar los electrodos directamente en el músculo? 5. Usos clínicos de los anestésicos locales. 6. ¿Por qué se tiene que descerebrar y desmedular a la rana en la preparación ciático-gastrocnemio? 7. Defina “Umbral de excitacion” 8. Al añadir un vasoconstrictor, como la adrenalina a un anestésico loca, la absorción aumenta o disminuye.

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Práctica No. 4 Anestésicos Generales

DIME Y LO OLVIDO, ENSEÑAME Y LO RECUERDO, INVOLUCRAME Y LO APRENDO.

Benjamin Franklin

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Introducción La definición de anestesia general ha sufrido pocas modificaciones desde su descubrimiento en 1845, con las experiencias de Wells con óxido nitroso y de Morton en 1846 con éter. Clásicamente, se la ha definido como una depresión descendente y controlada de las funciones del SNC inducidas farmacológicamente. Otra forma más práctica de definir la anestesia general es en función de los objetivos que persigue, como un estado reversible de depresión del SNC, caracterizado por pérdida de la conciencia (hipnosis), de la sensibilidad (analgesia), de la actividad refleja (protección neurovegetativa) y de la motilidad (relajación muscular). En la actualidad se habla de «estado anestésico», que se define como el resultado de la acción combinada y dinámica de diversos efectos farmacológicos que pueden aparecer por la activación de diversos grupos de receptores, dando lugar a hipnosis, analgesia, bloqueo de la unión neuromuscular, amnesia y bloqueo de la respuesta vegetativa al estrés. Dinamismo (cambio de las necesidades de efecto farmacológico) y sinergia (potenciación de los efectos) son dos aspectos fundamentales en la combinación necesaria para mantener este «estado anestésico». Al obtener mayor información sobre el mecanismo de acción de los anestésicos generales, se han diferenciando dos componentes fundamentales en la representación gráfica del concepto de anestesia moderna. Un componente sería el cortical, que integraría inconsciencia y amnesia, y el segundo o subcortical, que correspondería a la antinocicepción (analgesia) y la estabilidad motora y autónoma (relajación muscular y protección neuro vegetativa).  A pesar de las investigaciones realizadas, aún no está claro el mecanismo de acción de los anestésicos generales. Se ha considerado que los agentes anestésicos generales eran fármacos de acción inespecífica que modificaban las propiedades fisicoquímicas de la membrana neuronal.  Meyer y Overton postularon la teoría de un lugar de acción lipofilo y relacionaron la potencia del anestésico con su solubilidad lipídica.  En la actualidad se piensa que los anestésicos generales ejercen su efecto en la transmisión sináptica y no en la conducción axonal. Actuarían fundamentalmente sobre proteínas y no sobre lípidos, de forma que los estudios que se realizan en la actualidad se dirigen a los mecanismos moleculares de la anestesia.  Una serie de receptores, canales de iones (Ca2+, K+) dependiente de voltaje, canales de iones dependientes de ligando (GABA, NMDA) y neurotransmisores se han considerado lugares específicos en los que actuarían los anestésicos generales. Coeficiente de partición sangre/gas. El agente inhalatorio pasa desde el alvéolo a la sangre para luego llegar al cerebro. Este coeficiente informa de la solubilidad en sangre (agua) del fármaco y es, por lo tanto, inversamente proporcional a la rapidez de su acción. Coeficiente de partición aceite/gas. El tejido cerebral es rico en lípidos. Cuanto más liposoluble sea el agente, más se retendrá en el SNC. Por lo tanto, es un índice directamente proporcional a la potencia del agente anestésico.

Anestésicos Generales
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Etapas de la anestesia Período I: inducción-analgesia. Abarca desde el inicio de la anestesia hasta la pérdida de conciencia. Se comprueba la ausencia de respuesta a las órdenes verbales, no hay pérdida de respuesta al dolor, aunque el grado de analgesia depende del tipo de anestésico empleado. Período II: excitación o delirio. La respiración es irregular, hay retención de la respiración, posibilidad de laringospasmo y secreciones. El ritmo cardíaco aumenta e incluso puede haber arritmias. La respuesta a estímulos físicos está aumentada. Es el periodo de mayor peligro para el paciente porque pueden aparecer complicaciones, como obstrucción de las vías respiratorias superiores por relajación de la musculatura de la faringe, laringospasmo, regurgitación o aspiración del contenido gástrico, acumulación excesiva de secreciones e hipotensión secundaria a una depresión miocárdica o a vasodilatación periférica. Los dos primeros períodos constituyen la inducción, que se caracteriza por la pérdida rápida de la conciencia y el paso al plano superficial de la anestesia quirúrgica. Período III: anestesia quirúrgica propiamente dicha: En este periodo, que incluye cuatro planos, la respuesta somática a los estímulos disminuye progresivamente hasta ser nula en la anestesia profunda. Al principio, el ritmo cardíaco y la frecuencia respiratoria son regulares, pero ésta va deprimiéndose hasta presentar apnea. La frecuencia cardíaca se mantiene estable en cuanto al ritmo, pero se inicia un ligero descenso de la presión arterial; se produce relajación muscular. Período IV: parálisis bulbar. Se produce por depresión de los centros bulbares hasta el paro respiratorio, coma y muerte. Esta situación puede ocurrir por un accidente anestésico al profundizar la anestesia. Tipos de anestesia general Según el tipo de fármaco empleado para garantizar la hipnosis, se distinguen los siguientes tipos de anestesia:  Monoanestesia. Se empleaba un solo fármaco. Este tipo era característico en las anestesias con éter y cloroformo.  Anestesia general balanceada. Generalmente se utiliza un inductor hipnótico intravenoso, se mantiene con un agente inhalatorio y se combinan con opioides y relajantes musculares.  Anestesia intravenosa total. Se emplea propofol como inductor y en perfusión para el mantenimiento de la hipnosis. Se prescinde por completo de los inhalatorios y se emplean analgésicos y relajantes musculares.  Anestesia con inducción y mantenimiento inhalatorio total. Se emplea un agente inhalatorio para la inducción anestésica (generalmente sevoflurano) y se mantiene la hipnosis con él. No se utiliza propofol ni otros hipnóticos intravenosos. Se combina con analgésicos centrales y relajantes musculares.  Neuroleptoanestesia. Se empleaban neurolepticos (deshidrobenzoperidol) asociados a opiáceos. Mayor efecto antiemético, despertar más lento. En desuso.  Anestesia analgésica. Se basa en el efecto hipnótico colateral de los opioides cuando se emplean en dosis muy altas. Muy empleada en cirugía cardíaca.

Anestésicos Generales
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 Anestesia disociativa. Se emplea ketamina como hipnótico. No tiene efecto depresor cardiorrespiratorio y proporciona una analgesia eficaz.

Objetivo  Demostrar la anestesia general en camarones, producida por fármacos o sustancias con propiedades anestésicas.  Identificar las etapas de la anestesia general  Identificar el tiempo en que produce su efecto el fármaco, y el tiempo de recuperación del camarón Material, Equipo y Reactivos

MATERIAL Y EQUIPO • Dos Peceras • Bomba para oxigenación • Vaso de precipitados 500 mL • Jeringas de 1 mL REACTIVOS

Halotano

Metodología 1. Colocar los camarones en una pecera con oxigenación, para observar su comportamiento inicial, si es necesario inducir el movimiento con ayuda de una varilla de vidrio, picando en los costados del camarón. 2. En otra pecera colocar 0.25 ml de Halotano en 500 mL de agua. 3. Colocar uno de los camarones en la pecera con halotano y picar de la misma forma con la varilla de vidrio. Registrar el tiempo de latencia. 4. Seguir registrando el tiempo de excitación (sobrerreacción al estímulo), hipnosis (movimiento pero no reacción al estímulo) y anestesia (se voltea completamente de cabeza y se encorva) 5. Cambiar al camarón a la pecera con oxigenación y registrar el tiempo de recuperación. Imagen 2. Estimulo con varilla de vidrio.

Imagen 1. Camarón mediano y 3 camarones pequeños en pecera.

Anestésicos Generales
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MATERIAL BIOLÓGICO • Cuatro camarones de tamaño mediano.

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6. A la pecera con halotano agregar otros 0.25 ml de este ANESTESICO y colocar al otro camarón. 7. Realizar el mismo procedimiento que con el primer camarón. Cuestionario 1. ¿Cuál es el mecanismo de acción de los anestésicos generales? 2. Mencione las etapas de la anestesia general. 3. ¿Qué otros fármacos además del halotano existen como anestésicos generales? 4. ¿Qué otras sustancias se administran en conjunto con los anestésicos generales y cómo funcionan? 5. ¿A qué se refiere el CAM de un anestésico general y que representa? 6. ¿Qué es el coeficiente de partición? Referencias 1. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacológicas de La terapéutica, 10a ed., Me. Graw Hill, México 2003 2. BertrandG. Katzung, Farmacología Basica y Clínica, 8a ed., Manual Moderno, México 2002 3. C. Barastegui Almagro. Esquemas y Prácticas de Farmacología. Editorial Espax, 1976, Barcelona, España.

Anestésicos Generales
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Práctica No. 5

Valoración del Efecto Anticonvulsivante

LA ENFERMEDAD DEL IGNORANTE ES IGNORAR SU PROPIA IGNORANCIA.

Amos Bronson Alcott

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Introducción El término epilepsia, es una enfermedad crónica que se refiere a un grupo de síndromes del SNC, caracterizado por accesos de descargas neuronales sincrónicas sostenidas, los cuales son súbitos, transitorios y recurrentes. Afectan los siguientes sistemas: autonómico, psíquico, sensitivo y motor, creando gran variedad de signos y síntomas. El término convulsión se utiliza como sinónimo de epilepsia. La etiología es multifactorial (causas metabólicas, defectos cerebrales congénitos, prenatales, perinatales (durante el parto), postnatales y convulsiones provocadas por agentes químicos). Como ejemplos tenemos: hipoglucemia, hidrocefalia, infecciones, daño cerebral por parto prolongado, cisticercosis y las provocadas por pentilentetrazol, etc. Son varios los mecanismos neurofisiológicos y bioquímicos que intervienen en la enfermedad: cambios bioquímicos locales, isquemia, pérdida de sistemas inhibitorios vulnerables, descargas sincrónicas de otras células, etc. Las crisis epilépticas se clasifican en: 1- Parciales (focales y locales) a. Parciales simples b. Parciales complejas c. Parciales generalizadas de tipo secundario 2- Crisis Generalizadas Convulsivas o No Convulsivas a. Crisis de ausencia b. Crisis de ausencia atípicas c. Mioclónicas d. Clónicas e. Tónicas f. Tonico clónicas (Gran Mal) status epiléptico g. Atónicas Por lo tanto, para tratar la epilepsia se debe descartar si hay un solo tipo de crisis o si se presentan varios tipos ya que de eso depende un buen tratamiento. Los anticonvulsivos se clasifican en varios grupos para tratar los diferentes tipos de crisis: 1- Hidantoinas: hidantoina (Canales de Na+) 2- Iminoestilbenos: carbamazepina (Canales de Na+) 3- Barbitúricos: fenobarbital (Mediadores GABA) 4- Desoxibarbitúricos: primidona 5- Succimidas: etosuccimida (Canales de Ca2+) 6- Oxazolindionas: parametadiona (Canales de Na+) 7- Benzodiacepinas: diacepam (Mediadores GABA) 8- Otros grupos: ácido valproico (Canales de Na+)

Valoración del Efecto Anticonvulsivante
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Los más utilizados para crisis generalizada son las hidantoinas y la carbamazepina y para las ausencias la etosuccimida. Para el estado epiléptico el más recomendable es el Diazepam.

Estructura del Diazepam El mecanismo de acción de los anticonvulsivos (del tipo benzodiacepinas) es disminuir la entrada de calcio por bloqueo de los conductos de sodio (despolarización) y potenciar los efectos inhibitorios debido a la estimulación de vías GABAergicas por aumento de descargas de abertura de los canales de cloro. Para la valoración de nuevos medicamentos, se utiliza el pentilentetrazol para crear crisis convulsivas. Esto provoca hipoxia por espasmo vascular lo que ocasiona cambios degenerativos en la corteza cerebral debido al antagonismo fisiológico.

Objetivos   Demostrar el efecto anticonvulsivante del diazepam en las convulsiones producidas por el pentilentetrazol, Observar que tipo de convulsiones produce el pentilentetrazol.

Material, Equipo y Reactivos MATERIAL BIOLÓGICO  Dos ratas Wistar MATERIAL Y EQUIPO  Dos jeringas para insulina REACTIVOS  Solución de Pentilentetrazol de 65 mg/mL  Diazepam de 5 mg/mL

Valoración del Efecto Anticonvulsivante
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Metodología 1. Pesar cada rata y marcarlas, una se usará para probar el efecto preventivo y en la otra el efecto curativo del diazepam. 2. En la rata marcada como 1,administrar diazepam 2mg/kg vía intraperitoneal 3. Esperar 20 minutos. 4. Aplicar una dosis de pentilentetrazol 64mg/kg vía intraperitoneal. 5. Observar si se presenta algún tipo de convulsión. 6. En caso de que ocurra se anota la latencia del pentilentetrazol y tipo de convulsión. 7. Para observar el efecto curativo del diazepam, administrar a la rata marcada como 2, una dosis de 64mg/kg de pentilentetrazol vía intraperitoneal. 8. En cuanto aparezca la convulsión aplicar la dosis de diazepam 2mg/ kg vía intraperitoneal. 9. Tomar el tiempo de latencia para el inicio del efecto del diazepam. 10. Realizar el sacrificio de los animales con ayuda de cloroformo. 11. Anote sus resultados en las siguientes tablas Tabla 1: Análisis del efecto Preventivo Equipo 1 2 3 4 5 6 Tabla 2: Análisis del efecto Anticonvulsivo Equipo 1 2 3 4 5 6 Tiempo de latencia del Diazepam No Convulsionó Tiempo de latencia del Pentilentatrazol No Convulsionó

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Cuestionario 1. Defina estado epiléptico 2. Escriba la clasificación de las crisis convulsivas 3. Escriba la clasificación de los anticonvulsivos 4. Escriba y analice el mecanismo de acción de los anticonvulsivos 5. ¿Cuáles son los efectos adversos generales de los anticonvulsivantes? 6. Describa la farmacocinética del Diazepam 7. ¿Cuáles son los efectos adversos del Diazepam? 8. ¿Cuáles son los usos clínicos del Diazapam y del Pentilentetrazol? 9. ¿Cuáles son las interacciones del Diazepam? Referencias 1. Hardman, J. Limbird L. Molinof P. Ruddon R. and Goodman A. 1996. Goodman & Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. 9° Edición. Vol. 1. Ed. McGraw Hill Interamericana. E.U. 2. Katzung, B. 2001. Farmacología Básica y Clínica. 8° Edición. Ed. Manual Moderno, México. 3. Smith, C. Reynard A. 1993. Farmacología. Ed. Médica Panamericana. Argentina.

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Práctica No. 6
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Fármacos Cardiotónicos

UNA COSA ES DEMOSTRAR A ALGUIEN QUE ESTÁ EQUIVOCADO Y OTRA MUY DISTINTA, ENSEÑARLE LA VERDAD

J. Locke

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Introducción Los digitálicos son los cardiotónicos más antiguos utilizados en el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva (lCC). Son sustancias de origen natural, cuya fuente importante de obtención es la Digitalis purpúrea o Digitalis lanata y el prototipo es la digoxina, medicamento compuesto por un núcleo esteroidado con un anillo lactona de cinco miembros no saturados en posición 17 y una serie de azúcares unidos al carbono 3 del núcleo, cuya relación estructura-actividad le confiere las actividades farmacocinéticas y farmacodinámicas. Siendo el núcleo esteroide y la lactona responsables de su actividad cardiotónica, los residuos glucosídicos influyen en la absorción, la vida media y su biotransformación.

Actividad Farmacocinética Actividad Farmacológica

Digoxina La digoxina tiene un margen de seguridad muy estrecho, lo que lleva a presentar con facilidad efectos tóxicos. Su mecanismo de acción molecular lo ejerce inhibiendo la Na+, K+ ATPasa lo que se manifiesta en múltiples efectos cardiovasculares tanto directos como indirectos, asi como modificación del funcionamiento mecánico y eléctrico del corazón lo que se traduce en aumento de la fuerza de contracción o inotropismo positivo y una disminución del automatismo y decremento en la velocidad de conducción del sistema de Purkinje o conotropismo negativo. Los efectos tóxicos de estas sustancias son en gran medida consecuencia de una manifestación exagerada de su mecanismo de acción como sería: bradicardia y paro sinusal, bigeminismo, bloqueo aurículo-ventricular de segundo grado y otros tipos de arritmias cardiacas, hasta llegar al paro cardiaco. Todas estas manifestaciones, tienden a ser compensadas o antagonizadas por el Sistema Nervioso Autónomo del organismo como el sistema Simpático y Parasimpático.

Fármacos Cardiotónicos
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Objetivo  Se alcanzará y demostrará el efecto tóxico de un glucósido cardiaco (digoxina) aplicado al corazón de la pulga de agua  Se demostrarán los efectos inotrópicos positivos y cronotrópico negativos de la digoxina aplicada al corazón de la pulga de agua  Se compararan los efectos producidos de la digoxina con otras substancias cardiotónicas administradas a la pulga de agua Material, Equipo y Reactivos. PARTE 1 (1° Sesión) MATERIAL BIOLÓGICO  NO MATERIAL Y EQUIPO  Computadora personal con simulador instalado REACTIVOS  NO PARTE 2 (2° Sesión) MATERIAL BIOLÓGICO  Pulgas de agua (1 bolsa por grupo) MATERIAL Y EQUIPO  Microscopio  Cronometro  1 Caja de Petri  2 Pipetas Pasteur  6 jeringas de 1 ml  2 Portaobjetos REACTIVOS  Digoxina  Epinefrina  Atropina  Pilocarpina  Solución de cloruro de sodio al 2% p/v  Solución de cloruro de potasio al 2% p/v  Solución de cloruro de calcio al 2% p/v

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Metodología Método 1: Uso del Simulador 1.1.Estimulación eléctrica 1.1.1 Seleccionar el ejercicio de Fisiología cardiovascular de rana en el menú principal 1.1.2 En la barra superior dar click a experimento y seleccionar Estimulación eléctrica 1.1.3 Tomar el electrodo para la estimulación directa, y colocarlo en el soporte 1.1.4 Observar el ritmo cardiaco basal y proceder a estimular el corazón Ensayar para estimulos simples y múltiples. 1.1.5 Una vez visualizados los efectos proseguir con la estimulación del nervio vago con el otro electrodo. 1.2. Modificadores de la frecuencia cardiaca 1.2.1 Seleccionar el experimento de frecuencia cardiaca en la barra superior 1.2.1 observar la frecuencia cardiaca y guardar datos 1.2.2 Seleccionar una solución y aplicar sobre el corazón de la rana 1.2.3 Dejar actuar y guardar datos hasta que el ritmo se marque como estable 1.2.4 Enjuagar con la solución Ringer a 23°C 1.2.5 Ensayar con las otras soluciones y con el efecto de la temperatura Método 2: Uso del Simulador 2.1 Coloque suficiente agua que contenga a las pulgas de agua en una caja de Petri y con una pipeta Pasteur tome una pulga de agua. 2.2 Deposite la pulga de agua sobre un portaobjeto cuidando de no dejar un excedente de agua. 2.3 Enfoque a la pulga de tal manera que pueda observar claramente los latidos del corazón. 2.4 Cuente los latidos durante quince segundos y tómelo como una medida basal; el conteo se realiza entre dos personas, la primera indicara el inicio y fin de los 15 segundos y la segunda Imagen 1. persona contara los latidos. Pulga de agua vista a 10x en el 2.5 Añada una gota de una de las microscopio. En la parte trasera substancias a evaluar, deje que se puede observar fácilmente el actúe por un minuto y proceda a corazón.

Fármacos Cardiotónicos
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contar los latidos por 15 segundos. 2.6 Evalúe cada substancia con una pulga diferente y registre el efecto presentado en una tabla indicando si el efecto fue positivo o negativo. Substancia Efecto Digoxina Epinefrina Atropina Pilocarpina Calcio Sodio Potasio Cuestionario 1. ¿Qué es un cardiotónico y que un glucósido cardioactivo, anotar ejemplos? 2. ¿Cuál es la relación estructura -actividad de los glucósidos cardioactivos? 3. ¿Qué diferencias farmacocinéticas existen entre los digitálicos? 4. ¿Qué parte de la estructura del digitálico le da las propiedades farmacocinéticas? 5. ¿Cuál es el mecanismo de acción de los glucósidos cardioactivos y como se manifiesta en la función cardiaca? 6.¿Cuáles son los efectos tóxicos de los glucósidos cardioactívos? 7.¿Cuáles serán los usos o indicaciones de los glucósidos cardioactivos? 8. Haga un esquema de la anatomía de la pulga de agua, localice el corazón e indique cuántos latidos realiza por minuto Referencias 1. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacológicas de La terapéutica, 10" ed., Mc. Graw Hill, México 2003 2. Bertrand G. Katzung, Farmacología Básica y Clínica, 8a ed., Manual Moderno, México 2002 3. Barastegui, AC, Esquemas y prácticas de Farmacología. Espaxs, España 1976. Inotropismo Cronotropismo

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Práctica No. 7
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Diuréticos

TRISTE ES LA OCIOSIDAD, DAÑOSA LA INTEMPERANCIA, PESADA LA IGNORANCIA.

Filosofía Griega

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Introducción Los diuréticos (o saluréticos) son fármacos que incrementan la producción de orina (diuresis) y la excreción de sodio (Na). Actúan principalmente sobre el riñón, inhibiendo la reabsorción de NaCI y agua, aumentando por tanto la excreción urinaria de estas sustancias. Se utilizan principalmente para el tratamiento del EDEMA. Fisiología De La Nefrona Los riñones controlan el volumen del fluido extracelular ajustando la excreción de NaCI y H20. Diariamente los riñones filtran más de 22 moles de Na+, los cuales se reabsorben por los túbulos renales, para mantener el equilibrio. El cuerpo mantiene la presión sanguínea a expensas del volumen del fluido extracelular. Cuando la ingesta de NaCI es mayor que su eliminación (p.ej. en falla congestiva cardiaca o falla renal) se desarrolla edema. La reabsorción de sodio se debe primeramente a la adenosin trifosfatasa (ATPasa) localizada en la parte lateral de la membrana de las células epiteliales del nefrón. La bomba de Na+/K+ necesita energía para intercambiar un Na+ por cada dos K+, manteniendo una baja concentración de Na+ y alta concentración de K+ en el interior de la célula. En el lado de la luz tubular, existen vías pasivas para el movimiento del Na + electroquímico del lumen a la célula. Esas células son las bases fisiológicas de la acción diurética. Farmacología De Los Diuréticos. EL primer acierto de los diuréticos es la reducción del edema por reducción del volumen del fluido extracelular, y para que esto ocurra, la secreción de Na+ deberá exceder a su ingesta. En principio, los diuréticos previenen la entrada de Na+ a las células tubulares. Una vez que el diurético entra al fluido tubular, el sitio de la nefrona donde actúa determina su efecto. Es decir, el sitio de acción determina también que otros electrolitos, además del Na+, serán afectados. Todos los diuréticos, excepto la ESPIRONOLACTONA, ejercen sus efectos en el lado luminal de la nefrona. Por eso deben alcanzar el fluido tubular para tener efecto. Por ejemplo, el manitol lo hace por filtración en los glomérulos; los demás diuréticos, como están fuertemente enlazados a las proteínas, se filtran escasamente, llegando al lumen por secreción a través del túbulo proximal (vía secretoria de bases y ácidos orgánicos). El bajo flujo sanguíneo renal o falla renal, disminuyen la eficacia de los diuréticos, así como drogas que compiten por la bomba secretoria como el PROBENECID para las drogas ácidas, o la CIMETIDINA para drogas básicas. Diuréticos Con Acción En El Túbulo Contorneado Proximal. El túbulo proximal determina el grado de liberación de Na+ y H20 a zonas más lejanas de la nefrona. Una amplia variedad de transportadores acoplan el paso del Na+ al interior de la célula, al movimiento de aminoácidos, glucosa, fosfato, y otros solutos, MANITOL: ES un diurético osmótico no metabolizable y es filtrado hacía el espacio tubular incrementando la osmolalidad del fluido tubular. Esto trae como consecuencia

Diuréticos
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reabsorción aumentada de fluido resultando en excreción aumentada de agua acompañada de un poco de Na+. Inhibidores De La Anhidrasa Carbónica (Acetazolamida) El bicarbonato se reabsorbe en el túbulo proximal. El ión H+ es secretado al lumen en donde se une con bicarbonato filtrado (HC03+) para formar H2C03 el cual es convertido en H20 y C02 por acción de la anhidrasa carbónica. EL C02 difunde al túbulo proximal en donde se combina con H20 para formar H2C03, el cual a su vez forma H+ y HC03+. Este último sale del túbulo hacia la sangre, mientras H+ es secretado nuevamente a la luz tubular, resultando en reabsorción de HC03+. Si la actividad de la anhidrasa carbónica se reduce, la reabsorción de HC03+ también disminuye y la sale al túbulo proximal en cantidades mucho más grandes. Aunque el Na+ es el principal catión que acompaña la salida del HC03+ del túbulo proximal, se reabsorbe ampliamente en el túbulo distal el intercambiado por K+. Por lo tanto, la ACETOLAMIDA causa principalmente un incremento de HC03+\ K+ y H20 urinario. Diuréticos De Asa Actúan principalmente bloqueando el co-transportador de Na+/K+/Cr en la membrana apical de la rama ascendente del asa de Henle. Como en este sitio se concentra y diluye la orina, los diuréticos de asa disminuyen al máximo la concentración y dilución urinaria. En esta parte ascendente del asa se reabsorbe Ca++ y Mg++, proceso dependiente de la reabsorción normal de Na+ y CI-. Por lo tanto los diuréticos de asa incrementan la excreción urinaria de agua, Na+, K+, Ca++ y Mg++. EJEMPLOS: Furosemida, bumetanida y ácido etacrinico.

Diuréticos De Túbulo Contorneado Distal. Tiazidas y drogas análogas inhiben el transporte de Na+ y CI- a nivel de túbulo distal. A comparación de los diuréticos de asa, poseen acción diurética suave o moderada debido a que en esta parte del glomérulo se reabsorbe menos Na+. Además, si los rangos de filtración glomerular declinan, menos fluido llegará al túbulo distal y las tiazidas tendrán un impacto mínimo sobre la excreción de agua y Na+. EL uso de la tiazidas incrementa la reabsorción de fluidos y solutos en el túbulo proximal. Se manifiesta un incremento de la absorción de Ca++ y ácido úrico en el túbulo proximal. Diuréticos de Túbulos Colectores. ESPIRONOLACTONA: ES un antagonista competitivo de la aldosterona. Bloquea la reabsorción de Na estimulada por aldosterona y la excreción de K+ y H+ en túbulos distal

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y colector. También reduce la amoniogénesis estimulada por aldosterona a lo largo del nefrón. AMILORIDE Y TRIAMTERENE: Inhiben el canal de Na+ en la membranas apicales de los túbulos distal y colector. Debido a que en esta zona de la neurona la secreción de K + y H+ se explican principalmente por los gradientes electroquímicos generados por la reabsorción de Na+, se reduce el transporte de K+ e H+ hacía la orina. El estudio de estos fármacos generalmente se basa en la determinación de la diuresis y en los electrolitos eliminados al administrar estos fármacos en animales de experimentación. Para ello se recomienda usar ratas o perros debido a que su patrón de excreción urinaria es más regular. Los métodos que únicamente miden diuresis son cualitativos, como el usado en esta práctica. Existen otros métodos para estudiar mecanismos y sitio de acción de estos medicamentos (métodos de aclaración renal, métodos de diuresis interrumpida, métodos de micropunción y métodos de microperfusión en segmentos de la nefrona). Objetivo  Demostrar la diuresis en ratas producida por fármacos o sustancias con propiedades diuréticas.

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Material, Equipo y Reactivos MATERIAL BIOLÓGIO  1 Rata Wistar de 150-200 gramos de peso, de preferencia del mismo sexo y edad. MATERIAL Y EQUIPO  Jaula Metabólica  Probeta Graduada  Balanza Granataria  Jeringas de 1 y 5 mL REACTIVOS  Solución fisiológica (NaCI 0.9 %), que se utiliza como control negativo.  Furosemida (Control positivo) Metodología Pesar e identificar a cada animal de experimentación. 2. Al grupo control negativo (sin tratamiento) se administra 25 mL/kg de solución salina vía I.P. 3. Al grupo control positivo (con tratamiento) se le administrará por vía I.P. 25 mL/kg de solución salina más una dosis de furosemida (20 mg/kg de peso).
1.

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4. 5. 6. 7. 8.

Se colocan las ratas en jaulas metabólicas durante 2.5 horas. Se mide el pH y el volumen de orina excretada cada 15 minutos, durante las 2.5 horas. Se determina la orina acumulada durante las 2.5 horas. Terminado el experimento, se retiran los animales de las jaulas metabólicas. Determinar y tabular: pH, densidad y volumen de cada una de las muestras.

CÁLCULOS: Realizarlos siguientes cálculos para cada animal de experimentación: • Excreción urinaria:

• Acción Diurética:

Diuréticos
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Cuestionario
1.

2. 3. 4. 5.

El método usado en este experimento permite determinar la diuresis de diferentes fármacos, ¿es suficiente para evaluar el efecto diurético? Diga que otro tipo de análisis realizaría y porqué. ¿Qué otros métodos existen para investigar el mecanismo de acción de los diuréticos? La elección de la rata como animal de experimentación, ¿es correcta? Fundamente su respuesta. Esquematice el mecanismo de acción de la furosemida. Indica los factores fisicoquímicos involucrados en la acción de los diuréticos en general.

Referencias
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Diuréticos
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Manual de Evaluación de Fármacos y Medicamentos II

Práctica No. 8

Efecto de los Fármacos Hipoglucemiantes

NO TENGO NINGÚN TALENTO ESPECIAL. LO QUE SOY ES APASIONADAMENTE CURIOSO.

Albert Einstein

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Introducción Una de las enfermedades más importantes a nivel mundial, que es un serio problema de salud publica y que ataca a toda sociedad sin importar su estado de desarrollo de la DIABETES MELLITUS, el 8.2% de la población entre los 20 y 69 años de edad la padecen y cerca del 30% de estos individuos afectados desconoce si es diabético. Además ocupa el tercer lugar de la mortalidad. En condiciones normales el control del metabolismo de los carbohidratos se da por un antagonismo fisiológico entre dos hormonas: la insulina, que disminuye la glucemia mientras que el glucagón la aumenta. Ambas son secretadas por el páncreas en lugares diferentes, la insulina en las células β y el glucagón en las células α de los islotes de Langerhans. La DIABETES MELLITUS TIPO I (Diabetes Juvenil), se desencadena por la destrucción de las células β produciendo carencia de insulina y por lo tanto hiperglucemia, por lo que, quienes la padecen son candidatos a la administración de insulina como terapia de sustitución. La Diabetes Mellitus tipo II se desencadena por factores metabólicos incluyendo una función deficiente de las células beta y la resistencia a la insulina en musculo esquelético, tejido adiposo e hígado, actualmente se sabe que su origen es genético. El tratamiento en este caso se sabe que es con el uso de hipoglucemiantes orales con diferentes mecanismos de acción.   Secretagogos de insulina: nitaglenida, repaglinida y sulfonilureas (estimulan a las células beta del páncreas para incrementar la liberación de insulina) Antihiperglucemiantes: inhibidores de alfa glucosidasas, (retrasan la absorción de los carbohidratos en la luz intestinal), las biguadinas y las tiazolidinedionas (aumenta la sensibilidad de la insulina).

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En el caso de la práctica nos enfocaremos a dar las características generales de la insulina que es el fármaco a evaluar como hipoglucemiante. La insulina es una proteína sintetizada en las células beta en los islotes de Langerhans en el páncreas y está formada por dos cadenas peptídicas (A con 21 aminoácidos, B con 30) unidas por dos puentes disulfuro. Su función fisiológica es promover la captación de glucosa por las células de todos lo órganos, pero los sitios especiales para el almacenamiento de ésta, es el hígado, tejido adiposo y musculo esquelético. Su mecanismo de acción se da cuando se une a un receptor en la membrana celular, desencadenándose una seria de fosforilaciones incluyendo la del transporte de glucosa que al estar fosforilado promueve la captación de ésta al interior de la celular.

Fig.7.1 Mecanismo de acción de la insulina a nivel celular y molecular

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Antiguamente se utilizaban insulinas de origen bovino y porcino que hasta ahora ya han desaparecido del mercado. Hoy en día todas las insulinas humanas sintetizadas por ingeniería genética (DNA reconbinante) por lo que están purificadas y solo contiene una fracción proteica de la insulina. El único factor que las diferencia es la duración de acción, razón por la cual se adquieren en preparaciones inyectables que retardan la liberación. Dicho retardo se logra:   Mediante la unión a otras proteínas (protamina) Mediante una cristalización

Dependiendo de cada sistema de retardo de su acción las insulinas pueden ser rápidas, intermedias y lentas. La vía de administración adecuada para pacientes ambulatorios es la subcutánea, solo en coma diabético se usa la vía intravenosa y es recomendable la acción rápida en estos casos. Como una alternativa a un futuro corto, se esta evaluando la administración por vía inhalatoria; ya se están realizando estudios donde se observa que la tendencia de preferencia de los pacientes varia en un 10% con respecto a la vía de administración convencional.

Objetivo  Demostrar el efecto hipoglucemiante de la insulina en ratas hiperglucemicas, determinando la concentración de glucosa en sangre.

Material, Equipo y Reactivos MATERIAL BIOLÓGICO  1 Rata MATERIAL Y EQUIPO  3 jeringas de insulina  3 jeringas de 10 mL  Reloj  Equipo para baño María REACTIVOS  Tiras reactivas para la medición de glucosa en sangre.

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Metodología En este procedimiento la evaluación del fármaco (insulina) se lleva acabo comparando el efecto hipoglucémico en el animal experimental contra controles, un positivo (previamente cargado de solución glucosada) y un negativo manipulado igual que el de experimentación y C+, en vez de solución glucosada se le administra el mismo volumen de solución salina. A ningún control se le administra insulina. Esto es con el fin de que se vea el efecto del fármaco administrado exógenamente contra el efecto más lento que se observará de la insulina endógena previa estimulación por la carga de glucosa (control (+) ) y el control (-) servirá como referencia de la concentración de glucosa normal y para asegurar que la disminución de glucosa en sangre del animal experimental se debe al fármaco y no a la manipulación. 1.- Marcar las ratas del 1 al 4. Tomar una muestra a tiempo cero antes de manipular al animal, para obtener el valor basal de glucosa. La muestra se toma realizando una incisión en la arteria caudal de la cola de la rata. 2.- La rata marcada será utilizada según la siguiente indicación  Rata 1 (control -): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución salina.  Rata 2 (control +): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución glucosada.  Rata 3 (experimental): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución glucosada.  Rata 4 (experimental): Administrar por vía intraperitoneal 7mL de solución glucosada. 3.- Tomar muestra cada 10 minutos hasta los treinta minutos. 4.- Para observar la absorción de glucosa; después de la última toma administrar el volumen correspondiente de solución salina, insulina o matarique, dependiendo del número de rata: Rata 1: Administrar el volumen correspondiente de solución salina vía subcutánea.  Rata 2: Administrar el volumen correspondiente de solución glucosada vía subcutánea.  Rata 3: Administrar 3 unidades de insulina vía subcutánea.  Rata 4: Administrar el volumen correspondiente de la infusión de matarique. 5.- Posterior a esta administración tomar muestras cada 15 minutos hasta los 90 minutos o hasta alcanzar el nivel basal de glucosa. 6.- La determinación de la concentración de glucosa se realiza por medio de tiras reactivas (ver las instrucciones para correcta lectura del resultado), la lectura la deberá realizar una sola persona. Con los resultados obtenidos construya una gráfica de concentración de glucosa contra el tiempo. 

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Nota: conjuntar los resultados de todo el grupo para sacar promedio y graficar como se indica anteriormente. Cuestionario 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Indica la clasificación de la Diabetes Mellitus. Qué es la insulina? Qué son los hipoglucemiantes orales? Cuáles son las vías de administración de la insulina? Explique el mecanismo de acción de la insulina? Por qué razón la insulina no se administra por vía oral A qué se refiere el término de antagonismo fisiológico entre la insulina y el glucagón? 8. Qué importancia tienen los controles utilizados en la práctica? Referencias    Tébar Massó F J y Escobar Jiménez F. Diabetes mellitus en la práctica clínica. Argentina; Medica panamericana. 2009. Goodman Luis S y Gilman Alfres. Bases farmacológicas de la terapéutica. 5 ed. México; Interamericana.1978. 1281- 1285 Rang H.P et al. Farmacología 6ª ed. España: Elsevier. 2008. 397- 408

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 3: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 6: Simulador

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Anexo Práctica 7: Valoración
Janet Edith Santamaría Víquez

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Anexo Práctica 7: Valoración

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