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UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTNOMA DE MXICO
Doctorado en Ciencias Biomdicas

Proyecto de Investigacin:
Funcin del sistema endocanabinoide en el ncleo entopeduncular de la rata en el proceso de extincin a la auto-administracin de ketamina.

Presenta:
Lic. Seraid Caynas Rojas

Introduccin. Se ha sugerido en humanos un circuito que va desde la circunvolucin frontal inferior derecha al ncleo subtlamico y termina en el globo plido interno, el cual ha demostrado estar activo cuando participantes en un estudio tuvieron que detener un movimiento previamente iniciado (stop-signal task; Arn etal. 2006). En monos que se auto-administraron cocana crnicamente se encontr que se les dificultaba ms detener un movimiento previamente iniciado con respecto a monos controles, esto es relevante ya que investigadores clnicos han definido a la adiccin como un desorden crnico de la recada que se caracteriza por (1) la compulsin por la bsqueda y el consumo de frmacos de abuso (sustancias que el humano llega a consumir en cantidades intoxicantes), (2) la perdida de control sobre el comienzo, terminacin o cantidad del consumo de estos frmacos y (3) el surgimiento de estados emocionales negativos (eje. ansiedad, irritabilidad, anhedonia) que refleja un sndrome motivacional de abstinencia (no confundir con el sndrome fsico de abstinencia) cuando el acceso a la droga es evitado (Koob etal., 2010). Segn estos

investigadores el uso crnico de la sustancia de abuso va agravando los sntomas, siendo el relevante aqu el de la perdida de control sobre el consumo de el frmaco de abuso, esto de acuerdo con la presente propuesta de que el circuito que permite detener un movimiento previamente iniciado se ve afectado por la administracin crnica de frmacos de abuso y que este circuito media el control sobre el consumo de frmacos de abuso. Se ha sugerido un circuito similar en la rata (del cual depende el detener exitosamente un movimiento ya iniciado), siendo las estructuras participantes la corteza orbito frontal, el caudado putamen medial (Eagle etal., 2008, Eagle etal., 2003), y sus proyecciones al EP. Por otra parte se ha reportado que la administracin forzada crnica de morfina en ratas reduce la expresin del mRNA del receptor CB1 (el receptor a travs del cual la marihuana hace su efecto en el cerebro humano y de la rata) en el caudado-putamen (medial y lateral; Gonzlez etal., 2002), este dato sugiere una regulacin a la baja del receptor CB1 debido a la administracin crnica del frmaco de abuso en el EP, ya que este ncleo recibe proyecciones que presentan el receptor CB1 provenientes del caudadoputamen (Tsou etal., 1998). De los ncleos que forman parte del circuito que permite detener un movimiento previamente iniciado en la rata, el EP es el que mayor densidad del receptor CB1 presenta (Herkenham etal., 1991). Planteamiento del problema: Dado que el sistema que permite detener un movimiento previamente iniciado se ve afectado por el uso crnico de frmacos de abuso, que la administracin crnica de frmacos de abuso causa una reduccin en la expresin del mRNA que codifica para el receptor CB1, y que el uso crnico de frmacos de abuso agrava el sntoma de la perdida de control sobre el consumo de estos frmacos, por lo tanto el presente trabajo se propone dar evidencia a favor de que el sistema endocanabinoide en el ncleo entopeduncular (EP; tambin llamado globo plido interno o globo plido medial) de la rata participa en el control de la bsqueda por un frmaco de abuso. Nuestra hiptesis aqu es que el bloqueo farmacolgico del receptor CB1 en el EP de ratas previamente entrenadas para auto-administrarse un frmaco de abuso (ketamina) incrementara la conducta de bsqueda de esta sustancia, mientras que su activacin artificial reducir esta conducta. Mtodo. Sujetos: ratas Wistar macho de entre 250 y 300g de peso, con agua y alimento ad libitum y bajo un ciclo de luz-oscuridad 12/12 (las luces se encienden a las 8:00 am). Ciruga: los sujetos bajo anestesia fueron implantados con cnulas en el EP (a travs de las cuales se llevo acab la manipulacin farmacolgica del receptor CB1), una semana despus se llev a cabo la implantacin de un catter en la yugular a travs de la cual los sujetos se autoadministraron la droga de abuso (ketamina). Protocolo de autoadministracin con extincin: la cmara de condicionamiento operante consta de dos palancas, una activa y una inactiva. La palanca activa (la cual tiene una luz arriba para indicar que es la activa y que el reforzador esta disponible) al ser presionada enciende una bomba de administracin que libera un volumen constante (40L, dosis: 500g/kg) a travs del catter implantado en la yugular y despus de 4 segundos se apaga la luz, dejando al sujeto a oscuras por

40 segundo (tiempo fuera). La palanca inactiva no genera ninguna respuesta. Se cuantifica el nmero de veces que la rata presiona la palanca activa y se calcula la dosis administrada en sesiones de tres horas. Las ratas fueron entrenadas a auto-administrarse en un programa de reforzamiento de razn fija 1, es decir, por cada presin de la palanca activa recibirn una dosis de la droga. Una vez lograda la instalacin de la adiccin (esto es, cuando el sujeto presiono ms de 10 veces por hora la palanca activa por tres sesiones seguidas) se dejo descansar a los sujeto por 24 hrs. y se comprobo la permeabilidad del catter administrando una dosis de 13mg/kg de ketamina a travs del catter. Si el sujeto presentaba signos de intoxicacin (problemas en la marcha o atona muscular) dentro de los primeros 30s con esta dosis, entonces el catter estaba permeable, de lo contrario se excluyo a este sujeto del resto del experimento. 24 hrs. despus de que se comprob la permeabilidad del catter se administraron los tratamientos (DMSO al grupo control, ANA 0.5g por lado al grupo ANA y AM251 1g por lado al grupo AM251) y 15 min. despus los sujetos fueron expuestos a las dos palancas, pero en esta ocasin tanto presionar la palanca activa como la inactiva no acarreaba ninguna consecuencia, esto con la finalidad de que el sujeto extinguiera la asociacin entre la respuesta y la droga. Ha este tipo de sesiones se les llama de extincin, las cuales se repitieron diariamente por una semana. Resultados. Hasta el momento se han conseguido 4 sujetos (2 de DMSO, 1 de ANA y 1 AM251) que cumplan con los criterios de inclusin (que se hayan auto-administrado >10 infusiones por hora en 3 sesiones seguidas y que tengan el catter permeable). El promedio de infusiones en el total de la sesin de 3 hrs. de los 4 sujetos antes de ser asignados a los diferentes grupos fue de 78.5 con una dosis promedio de 8.02mg/kg de peso. El da de la sesin de administracin de frmacos es donde se muestra el efecto farmacolgico de los diferentes tratamientos (TX), mientras que las 24 horas posteriores sirven como la referencia para saber si los tratamientos estn incrementando o disminuyendo la bsqueda por la droga (E1). La sesin de extincin en el da 7 (E7) nos sirve para mostrar cual es la conducta del sujeto una vez que ha extinguido. En la figura 1 se ilustran el nmero de presiones a ambas palancas (presiones totales) para los 3 grupos en porcentaje, siendo el 100% las presiones totales en E1. A pesar de lo escasa de la muestra, este resultado sugiere (no de manera concluyente) que el vehculo tiene efecto en la conducta. Se propone incrementar la muestra y de ser necesario emplear otro vehculo. Referencias. Aron, A.R. & Poldrack, R.A. (2006). Cortical and subcortical contributions to stop signal response inhibition: Role of the subthalamic nucleus. The Journal of Neuroscience. 26(9): 2424-2433. Eagle, D.M. & Robbins, T.W. (2003). Inhibitory Control in Rats Performing a Stop-Signal ReactionTime Task: Effects of Lesions of the Medial Striatum and d-Amphetamine. 117(6): 1302-1317. Eagle, D.M., Baunez, C., Hutcheson, D.M., Lehmann, O., Shah, A.P. & Robbins, T.W. (2008). StopSignal Reaction-Time Task Performance: Role of Prefrontal Cortex and Subthalamic Nucleus. Cerebral cortex. 18; 178-188.

Gonzlez, S., Fernndez-Ruiz, J., Sparpaglione, V., Parolaro, D. & Ramos, J.A. (2002). Chronic exposure to morphine, cocaine or ethanol in rats produced different effects in brain cannabinoid CB1 receptor binding and mRNA levels. Drug and alcohol dependence. 66: 77-84. Herkenham, M., Lynn, A.B., Johnson, M.R., Melvin, L.S., de Costa, B.R. & Rice, K.C. (1991). Characterization and localization of cannabinoid receptors in rat brain: A quantitative in vitro autoradiographic study. The journal of neuroscience. 11(2): 563-583. Koob, G.F. & Volkow, N.D. (2010). Neurocircuitry of addiction. Neuropsychopharmacology. 35: 217-238. Tsuo, K., Brown, S., Saudo-Pea, M.C., Mackie, K. & Walker, J.M. (1998). Immunohistochemical distribution of cannabinoid CB1 receptors in the rat central nervous system. Neuroscience. 83(2): 393-411.