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Bioquímica de Harper
Índice de Capítulos
Capítulo 1: Bioquímica y medicina Capítulo 2: Biomoléculas y métodos bioquímicos Capítulo 3: Agua y pH

Sección I

Estructura y funciones de proteínas y enzimas
Capitulo 4: Aminoácidos Capítulo 5: Péptidos Capítulo 6: Proteínas. Estructura y función Capítulo 7: Proteínas. Mioglobina y Hemoglobina Capítulo 8: Enzimas. Propiedades generales Capítulo 9: Enzimas. Cinética Capítulo 10: Enzimas. Mecanismos de acción Capítulo 11: Enzimas. Regulación de la actividad enzimática

Sección II

Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos
Capítulo 12: Bioenergenética. La función del ATP Capítulo 13: Oxidación biológica Capítulo 14: Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Capítulo 15: Carbohidratos de importancia fisiológica Capítulo 16: Lípidos de importancia fisiológica Capítulo 17: Panorama del metabolismo intermediario Capítulo 18: El ciclo del ácido cítrico. Catabolismo de la acetil-CoA Capítulo 19: Glucólisis y oxidación del piruvato Capítulo 20: Metabolismo del glucógeno Capítulo 21: Gluconeogénesis y control de la glucosa sanguínea Capítulo 22: Vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de las hexosas Capítulo 23: Biosíntesis de ácidos grasos Capítulo 24: Oxidación de los ácidos grasos. Cetogénesis Capítulo 25: Metabolismo de ácidos grasos insaturados y de los eicosanoides Capítulo 26: Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos Capítulo 27: Transporte y almacenamiento de lípidos Capítulo 28: Síntesis, transporte y excreción del colesterol Capítulo 29: Integración del metabolismo y el suministro de energéticos tisulares

Sección III

Metabolismo de proteínas y aminoácidos

Capítulo 30: Biosíntesis de aminoácidos no esenciales en la nutrición Capítulo 31: Catabolismo de proteínas y del nitrógeno de aminoácidos Capítulo 32: Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos Capítulo 33: Conversión de aminoácidos en productos especializados Capítulo 34: Porfirinas y pigmentos biliares

Sección IV

Estructura, función y replicación de las macromoléculas informativas
Capítulo 35: Nucleótidos Capítulo 36: Metabolismo de los nucleótidos de purina y pirimidina Capítulo 37: Estructura y función de los ácidos nucleicos Capítulo 38: Organización y replicación del DNA Capítulo 39: Síntesis, procesamiento y metabolismo del RNA Capítulo 40: Síntesis de proteínas y el código genético Capítulo 41: Regulación de la expresión genética Capítulo 42: Tecnología del DNA recombinante

Sección V

Bioquímica de la comunicación extracelular e intracelular
Capítulo 44: Acción de las hormonas Capítulo 45: Hormonas de hipófisis e hipotálamo Capítulo 46: Hormonas tiroideas

Capítulo 43: Membranas. Estructura, ensamble y función

Capítulo 47: Hormonas que regulan el metabolismo del calcio Capítulo 48: Hormonas de la corteza suprarrenal Capítulo 49: Hormonas de la médula suprarrenal Capítulo 50: Hormonas de las gónadas Capítulo 51: Hormonas del páncreas y vías gastrointestinales

Sección VI

Tópicos especiales

Capítulo 52: Estructura y función de las vitaminas hidrosolubles Capítulo 53: Estructura y función de las vitaminas liposolubles Capítulo 54: Nutrición Capítulo 55: Digestión y absorción Capítulo 56: Glucoproteínas Capítulo 57: Matriz extracelular Capítulo 58: Músculo Capítulo 59: Proteínas plasmáticas, inmunoglobulinas y coagulación sanguínea Capítulo 60: Eritrocitos y leucocitos Capítulo 61: Metabolismo de xenobióticos Capítulo 62: Cáncer, oncogenes y factores de crecimiento

Bioquímica y medicina
Roberf K. Murray, MD, PhD

INTRODUCCIÓN
La bioquirnica es la ciencia que estudia las diversas moliculas que ce presentan en las células y organismos vivos, asi como las reacciones quimicas que tienen lugar en los mismos. Una comprensibn más completa de todas 1% manifestaciones de la vida, demanda el conocimiento de la bioquímica. AdemBs, los estudiantes de que adquieren una base siilida de la bioquimica estarhn en una posición firme para enfrentarse, en la práctica y la investigación, a los dos intereses centrales de las ciencias de la salud: 1 ) la comprensión y conservación de la salud y 2) la apreciación y tratamiento eficaz de la enfermedad.

La bioquímica es la química de la vida
La bioquimica puede definirse de manera más forma1
como la ciencia que se ocupa de la base química de la vida (del griego, bios: vida). La cblula es la unidad estructural de los sistemas vivientes. La concfderaci0n de este concepto conduce

a una definicion funcional de la bioquímica como la ciencia que se ocupa de los constituyentes químicos de las células vivas y de las reacciones y procesos que experimentan. Con esta definición, la bioquimica abarca extensas heac de la biología celular, la biología molecular y la genkitica moIecular.

El objetivo de la bioquímica es describir y explicar, en términos moleculares, todos los procesos químicos de las células vivas
El interés principal de la bioquimica es la comprensión completa a nivel rnolecular de todos los procesos

químicos relacionados con las células vivas. Para lograr este objetivo, los bioquimicos han necesitado aislar las numerosa moléculas de que se componen las cé1u]a1 determinar sus e s t ~ - ~ c t u Y a analizar la r forma en que funcionan. Para dar un e j e m ~ l o ~ 10s e~füerms numerosos bioquímicos Para comprender de la base mOlecular de la -proceso quc acompaiia de preferencia, pero no de manera exclusiva, a las células musculares- han emprendido la purificación de muchas moléculas, siniples y complejas, seguida por detallados estudios de esh-uctura-funcibn. A iraves de estos esfuerzos, se han encontrado algunas de los fundamentos muleculares de la contracción muscular. Un obietivo adicional de la bioqliímica es intentar la comprensión del origen de la vida; este fascinante tema aún se encuentra en la etapa embrionaria. El campo de la bioquimica es tan amplio como la vida misma. Dondequiera que hay vida, se prodiicm procesos quimicos. Los bioquimicos los estudian en microorganismos, vegetales, insectos, peces, aves, mamíferos y en el ser humano. Es lbgico que los estudiantes de ciencias biomédicas centren su interes en la bioquimica de los dos últimos grupos. No obstante, una apreciaci6n respecto a formas de vida menos complejas tiene a menudo relevancia directa con la bioquimica humana. Por ejemplo, las teorías contemporaneas sobre la regulación de las actividades de genes y enzima5 en el ser humano provienen de estiidios pioneros en pan enmohecido y bacterias. El campo del DNA recombinante surgió de estudios en bacterias y sus virus; su rapidez para la multiplicacibn y la facilidad para extraer su material genético los hace adecuados para análisis y manipulaciones gentticas. El cor,ocimiento logrado por el estudio de genes virales causantes de ciertos tipos de cáncer en animales (oncogenes viraIes) ha permitido avanzar profundamente-en el modo en que la célula humana se torna cancerosa.

2

Bioquim icu d~ JIarper

(Capitulo I )

El: conocimiento de la bioquímica es esencial en todas las ciencias de la vida, incluyendo la medicina
Los fundamentos de la genética se apoyan en la bloquímica de los ácidos nucleicos; a su vez, los enfoques geneticos han dilucidado numerosas áreas de la bioquímica. La fisiologia, estudio de la función corporal, se traslapa casi por completo con la bioquimica. La inmunoIogía, por su parte, emplea numerosas técnicas bioquimicas y muchos de los aspectos inmunol0gicos han encontrado uso extenso eiitre bioquimicos. Asimismo, la farmacologia y la farmacia se apoyan en un co~iocimiento sblido dc bioquimica y Ilsiologia; en particular, la mayoría de los firmacos son metabolizados por reacciones catalizadas por enzimas y las comple,jas interacciones entre fármacos se comprenden mejor desdc el punto de vista bioquimico. También los venenos actúan por medio de rcaccjones o procesos bioquimicos y este es el terna de la toxicologia. Cada vez más se emplean enfoques bioquimicos en el estudio de aspectos básicos de la patología (estudio de la enfermedad}, como inflamación, lesión celular y cancer. Muchos profesionales en rnicrobiologia, 7001ogía y botanica emplean métodos bioquímicos casi de manera exclusiva. Estas relaciones 1 0 sorprenden, debido a que la vida como se conoce 1 dcpende de reacciones y procesos bioquirnicos. De hecho, han caído las viejas barreras entre las ciencias de la vida y la bioquirnica se toma cada vez mas su lenguaje común.

Una relación recíproca entre la bioquímica y la medicina ha estimulado adelantos mutuos
Como se estableciii al principio de este capítulo, las dos preocupaciones principales de los estudiosos de

las ciencias de la salud, en particular médicos, son la comprensión y mnservacibn de la salud y la comprensión y tratamiento eficaz de las enfcmedades. !,a hioquimica tiene un impacto tremendo en ambos. De hecho, la interrelación entre bioquimica y medicina es un amplio camino de doble sentido. Los estudios bioquimicos han ilurriinado numerosos aspectos de salud y enfermedad y, de manera inversa, cl estudio de éstas ha abierto areas nuevas en bioquimica. En la figura 1-1 se muestran algunos casos de esta via de doble dirección. Por ejemplo, fue necesario el conocimiento de la estructura y Ilinción de las proteinas para dilucidar la sencilla diferencia bioquimica entre la hcmoglnbina normal y la de las células falcifonnes. Por otra parte, el analisis de esta última ha conwibuido de mancra significativa a la comprensibn de la estructura y función dc la hemoglobina normal y de otras proteínas. Podrian citarsc ejemplos análogos del beneficio reciproco entre bioquimica y medicina para los demhs pares de conceptos mostrados en la figura 1 -1 . Otro ejemplo es el trabajo pionero de Garrod, mkdico inglCs, a principios de este siglo. Estudió pacientes con cierto número de trastornos relativamente raros (alcaptonuria. alhinismo, pentosuria y cistinuria; descritos en loc últimos capítulos) y estableció que su origen era genciico. Garrod designb a estas enfemcdades como errores congdnitos del metabolismo. Sus punros de vista proporcionaron una base importante para el desarrollo del campo de la genktica bioquímica humana. La relaciún entre medicina y bioquímica tiene implicaciones filosóficas importantes para la primera. Hasta donde el tratamiento medjco se asiente en el conocimiento de la bioquimica y otras ciencias básicas pertinentes (como fisiología, microbiologia y nutricibn), la práctica de la medicina tendrá una base racional que puede acomodar nuevos conocimientos. Esto contrasta con culros de saliid no ortodoxos, que a menudo se elevan a poco más que un mito sin fundamento intelectual alguno.

Actdos nucEelc05

Proteína

t
I t
MEDICINA

Lípidos

Carbohidratos

geneticas

Anemia de células
falciforme5

Aterosclerosis

Diabetes

sacarina

Figura 1-1. Ejemplos de la via de doble dirección (interrelación) que existe entre la bioquímica y medicina. El conocimiento de los Compuestosmostradosen la porci6n superior del diagrama ha esclarecido las enfermedades mencionadas en la porcion inferior; de manera inversa, análisis de los trastornos mostrados abajo han despejado numerosas áreas de la bioquimica Debe aclararse que la anemia de cklulas falciformes es una enfermedad genetica y que tanto la aterosclerosiscomo la diabetes sacarina tienen componentes geneticos

Bioquímicuy medicina

3

LOS PROCESOS BIOQU~MICOS NORMALES SON LA BASE DE LA SALUD
La Organización Mundial de la Salud (OMS) define a la salud como un estado de "bienestar fisico, mental y social completo y no unicamente fa ausencia de enferrnedad o dolencia". Desde un punto de vista bioquimico estricto, puede considerarse a la salud como la situación en donde las miles de reaccioiies intra y extracelulares que tienen lugar en el cuerpo proceden a velocidades adecuadas a su supervivencia máxima en el estado fisialogico. Sin embargo, este es un concepto sumamente reduccionista; es necesario enfatizar que atender la salud de los pacientes no sólo requiere de un extenso conocimiento de los fundamentos biológicos sino tambien de principios sociales y psicolbgicos.

Cuadro 1-1. Principales causas de enfermedad. Tcd a s las cairsiisenunieradas actiian bajo tia dt! varios rnecanisnl o s bioquírnicos t la o t:n el cuerpo*
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3.
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Agcnt cs f i s i c o s - ~ r a i i a t i s m or n e c á n i c o ~ tcinper aturas extremas, cambios repentinos cn la prcsióri atmosférica, radiacibn, choque elkctrico Aeente quirnicos y famacos: Ciertos comnuestos tvxicoc,, agentes terapéutica: ; etcétera , Agente hiológicos: Vinis. ri ckettsias, b lngos, fo rmas superiores de p! :~rásilos . ~ 5 i i c n c i de o~igeno: a Falta de Tumrnlsrro sangulneo, deficiencia en la capacidad sanpiiinea para t~mspori :ar oxigeno, intouicaciiin de las enzimns oxidativas Gen6tica: Alteraciones congenita~ r,,, on ~ oiies ininuiioliigicas: Anafilaxia nd nunológic; 1 iilihrio nut riconal: DÍ:ficiencia r :S,

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La investigación bioquimica tiene impacto en la nutrición y la medicina preventiva
Un prerrequisito importante en la conservaci6n dc la salud es la ingestión óptima de cierto numero de compuestos qufmicos; de entre ellos los principales son vitaminas, varios aminoficidos, &cidos grasos, minerales y agua. Dado que el objeto de la bioquimica y la nutrición es precisamente el estudio de los diversos aspectos de estos compuestos, hay una selaci~n estrecha entre las dos ciencias. AdemBs, con la intenci6n de restringir 30s costos en aumento del cuidado médico, se enfatizan los esfiierzos sistemáticos para conservar la salud y anticiparse a la enfermedad, es decir, la medicina preventiva. Por tanto, cada vez tiende a considermsc m6s el aspecto nutricional, por ejemplo, en la prevención de aterosclerosis y c h c e r . El conocimiento de la nutricibn depende en alto grado de la bioquimica.

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Dtsequilibrio en docrino: 1 >eficiencias o excesos hurmonates -* i\dapiado con autori7acion ae KObblnS SL,Colram RS,Kizmm

8.

V Tlie Pafhologic Rasis ojDtseasr, 3rd ed. Saunders, 19R4

a Io Eargo del libro. N o obstante, aquí se presentan s61o siete ejemplos breves para ilustrar la envergadura del tema y estimular e1 interés del lector. I) Los seres humanos deben ingerir cierto numero de rnol&culasorgánicas comple,ja~ llamadas vitaminas para conservar la salud. Si en la dieta hay deficiencia de determinada vitamina, se comprometen las reacciones en que participan. Esta situación puede manifestarse como una enfermedad por deficiencia como escorbuto o raquitismo (resultado de Ingestidn insufíciente de vitamina C y D, respectivamente). Dilucidar la actividad de las vitaminas o sus derivados con acción biolbgica ha sido una inquietud constante de bioquimicos y nutri6logos desde el principio del siglo. Una vez que el estado patologico por deficiencia de una vitamina se estableció, es racional tratarla mediante la administracidn de la vitamina apropiada. 2) El hecho de que numerosos vegetales en África son deficientes en uno o más aminohcidos esenciales (es decir, aminoacidos que deben ingerirse con los alimentos para conservar la salud) ayuda a explicar la desnutrición debilitante (kwashiorkor) que padecen quienes dependen de esos vegetales como fuente principal de proteínas. El tratamiento de deficiencias de aminoácidos esenciales es racional pero, desafortunadamente, n o siempre es posible. Consiste en proporcionar una alimentacibn balanceada que contenga cantidades suficientes de tales aminoácidos.

Todas las enfermedades tienen una base bioquímica Las enfermedades son manifestaciones de anorrnatidades de molécu tas, reacciones quimicas o procesos. En el cuadro 1-1 se enumeran tos principales factores como causa de padecimientos en el ser humano y los animales. Todos ellos afectan a una o más reacciones quimicas criticas Q rnaleculas del cuerpo.

Los estudios bioquimicos contribuyen al diagnóstico, pronóstico y trataltiiento
Existe un caudal de información respecto al uso de la b i a q u i m i c a e n la prevención, d i a g n ó s t i c o y tratamiento de la enfermedad; muchos casos se citarhn

3) Los esquimales Tnuit de Gruenlandia consumen cantidades abundantes de aceites de pescado ricos en ciertos acidos grasos poliinsaturadosy se sabe que su concentración plasrnática de colesterol es baja, lo mismo que la frecuencia de aterosclerocis. Estas observaciones han estimulado el interés en el uso de esos Bcidos para reducir los valores plasrná~icos colesteral. de Las enfermedades por deficiencia vitamínica o de aminoácidos esenciales son ejemplos de desequi librios nutricionales (cuadro 1 -1 ). La aterosclerosis puedc considerar~eun desequilibrio de la nutricjon, pero tambikn intervienen otros factores (corno el genético). 4) El estado conocido como fcnilcetonuria si no se trata, puede cotiducir en la infancia a retraso mental grave. Desdc 1953, se conoce la base bioquimica de este trastorno, el cual está. detcrminado gencticarnente y se debe a la actividad escasa o nula de la enzima que convierte el aminoácido fenilalanina en tirosina. Esto, a su vez, eleva la concentración sanguínea de fenilalanina, lo que dafia al sistema nervioso central en desmollo. Cuando se descubrió la naturaleza del daAo bioquímico, se trató la enfermedad haciendo que los lactantes afectados ingirieran una alimentación pobre en fenilalanina. Una vez que se dispuso de pruebas bioquimicas selectivas para diagnosticar feni lcetonuria al nacimiento, pudo instituirse el tratamiento desde el principio en el niño afectado. 5 ) La fibrosis quistica es una enfermedad genMica común de las glindulas exocrinas y las glhndtilas sudoríparas ecrinas. Se caracteriza por secseciones anomalmente viscosas que obstruyen los conductos secretores del phncreas y los bronquiolos. Ademhs. los pacientes con esta afección muestran una concentración elevada de cloruro en el sudor. A menudo, las víctimas mueren a temprana edad por infecciones pulmonares. En 1989, se inform6 sohrc el aislamiento y la secuencia completa del gen causante de esta enfermedad. El gen normal codifica una proteína transrnembrana (regulador de la conductancia transmembrana en la fibrosis quísticaj formada de 1480 arninoacidos, la cual funciona como un conducto del cloruro. En 70% de los pacientes con la enfermedad se ha observado una deleción de tres bases en el gen, lo cual hace que en la proteina transmembrana falte el aminoacido 508, un residuo de fenilalanina. Se esth determinando la forma en que esta omisión altera la hnciún de la proteína transmembrana con produccion de moco demasiado denso. Este importante estudio facilitarii la identificacion de portadores del gen de la fibrosis quistica y se espera que conducirá a un tratamiento rnás racional dc la enfermedad que el existente hasta ahora, Por ejemplo, quizfi será posible desarrollar fhrrnacos que corrijan la anor-

malidad en la proteina transmembrana; de igual modo, podría introducirse un gen normal en las células pulmonares por manipulaciiin genética. Ida fenilcetonuria y la fibrosis quistica son ejemplos de enfermedades g e i a i c a s (cuadro 1-1 ). 6) El análisis del mecanismo de accihn de la toxina bacteriana que causa el cálera ha proporcionado infonacibn importante sobre el modo en que ocurren las manifestaciones clínicas de la enfermedad (diarrea copiosa y pérdida de sal y agua). 7) El hallazgo de que los mosquitos transmisores de parásitos (plasmodios) que causan el paludismo pueden desarrollar resistencia bioquímica a la acción de insecticidas, tiene consecuenciac importantes s o b r e los intentos para erradicar esta enfermedad. Este caso y el anterior, son ejemplos de enfermedades causadas por agentes bioliigicos (cuadro 1-1).

Muchos estudios bioquirnicos aclaran mecanismos patológicos y, a su ver, las enfermedades inspiran estudios en áreas especificas de la bioquímica
Las observaciones iniciales reali~adas el mhdico por inglés Archibald Garrod en un grupo pequeño de errores congknitos del metabolismo al principio del decenio de 1900, estimulb la investigación de las vias hiliqiiimicas afectadas en estas alteraciones. Los esfuerzos para comprender la base de la enfermedad genktica conocida como hipercolesterr)lemia familiar, que lleva a aterosclerosis grave a edad temprana, condujeron al notable progreso en el conocimiento de los receptores celulares de los mecanismos de captación ddel colesterol por las cÉlulas. Los estudios actuales de los onrogenes en células cancerosas han dirigido la atención a mecanismos moleculares que interv-ncn en el control de la inultiplicacibn celular normal. Estos y otros numerosos ejemplos posibles ilustran la forma en que el estudio de la enfermedad puede abrir areas enteras de la funci6n celular para la investigación bioquimica bhsica.

ESTE TEXTO AYUDARÁ A RELACIONAR CONOCIMIENTOS BIOQU¡MICOS CON PROBLEMAS CL~NICOS
En cl texto se encuentran dispersas, breves descripciones de los mecanismos bioquímicos en que sc basan muchas enfermedades. En particular, las capítulos 63, 64 y 65 se refieren a las bases bioquimicas de varias enfermedades importantes. En el apcndice se analizan brevemente algunos conceptos basicos para interprctar los resultados de las pruebas bioquimicas de labo-

Bioyuimicu y medicina

5

Cuadro 1-2. Algunas investigaciones bialhgicas y pruebas de laboratorio aplicadas al estudio de las enfermedadi
--- - .-.. . - -

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2 -

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1. Revelar, ;I ,, ,, u Au,,uu,,,L,,,ules y los mccanicmos dc la enfermedad 2. Sugerir tratamientos racionales de las enfi con base en las causas mencionadas antes ( 3. Ayudar al diagnóstico de enfermedades especirlcas 4 , Actuar colmo pruebas para deteccibn y dlagnóstid:O tcmpranci dc ciertas cnfemedades 5 . Ayudar ein la vigilancia de le. evolucifin (por qemp,lo 111 ,,,,,,,,,cien, empeoramiento. remisibn o recaid,, de ciertas en remidades 6. Ay udar a evaluar la respuesta dc las cnfcrmedad
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al tratamiento

ucibn de laihepatitis i nfrcciosa -r,irilileo de mrurL1uiie.i de anti~eiiu~a~iriuernbrionario (CEA) sanguíneo en cierta s tratados por cáncer de

ratorio y se presenta una lista de las mas empleadas junto con el intervalo en el cual varian sus valores normales. El propbsito global es animar at lector a dar a SU ~0nocitTlient0de bioquimica U n USO ~ l i n i c 0 eficaz.

Las inve~tigaciones bioquimicas en relacion con
las enfermedades se resumen en el cuadro 1-2. En

varias secciones de este libro se presentan ejemplos de muchos de estos usos.

RESUMEN
La bioquimica es la ciencia que se ocupa del estudio de las diversas molkculas que componen las células y organismos vivos así c o n o de sus reacciones quimicas, Debido a que la vida depende de estas reacciones, la bioquimica se ha convertido en el lenguaje b;isico de todas las ciencias biológicas. bioquímica se interesa en la totalidad de las forma? vivientes, desde virus y bacterias, relativamente simples, hasta les cornpIejos seres humanos.

La bioquimica y la medicina tienen una relacion estrecha. La salud depende del equilibrio armonioso de [as reacciones bioquimicas que tienen lugar en cl ,,,mo,. y la enfermedad en biornold~ulas, reacciones bioquimicas o procesos biológicos, Los adelantos en el conocimiento bioquirnico han iluminado numerosas áreas de la medicina. De modo inverso, a menudo el estudio de las enfermedades ha revelado aspectos previamente no sospechados de la bioquimica. Con frecuencia, un enfoque bioquímico es fundamental para aclarar las caus& de Ias enfermedades e idear terapéuticas E uso racional de varias pruebas bioquimicas de E laboratorio es un componente integral del diagnhstico Y vigilmcia Un conocimiento sólido de la bioquimica y de otras disciplinas bQsicasrelacionadas es esencial para la practica racional de la medicina y ciencias de la salud afines. I
+sadaiporpa

REFERENCIAS
Garrod AE: Inhorn errors of metabolism (Croonian Lec-

tures). Lance[ 1908;2: 1.73, 142,2 14. Kornberg A: Basic rssearch: The lireline of medicine
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1995. Willilims DL, Marks V: Scient13c Fooundaiions o Biof chemi.~tryin Clin~cal Practice, 2nd ed. Bunenuorth1 leinemann, 1994.

RiornoAéculas y métodos bioquímicos

Este capitulo tiene cinca objetivos. El primero se refiere a la camposici6n del cuerpo y a las principales clases de moléculas que se encuentran en 61. El estudio de estas mol&culasconfonnagrnn parte de este texto. La ctluIa es la principal unidad estructural y funcional de la biología. La mayor parte de las reacciones químicas dentro del cuerpo tienen lugar en las c6lulas. Por tanta, el segundo objetivo es dar una descripci6n concisa de los componentes de las c&lulas y de la forma en que pueden aislarse; los detalles de las funciones de estos componentes constituyen gran parte de la estructura del libro. El tercer objetivo concierne al hecho de que la biquimica es una ciencia experimental. Es importante comprender y apreciar el enfoque experimental y los mbtodos usados en bioquimica, para permitir que su estudio se convierta en un ejercicio rutinario del aprendizaje. Más aún, la bioquímica no es un cuerpo inmutable de conocimiento, sino un campo en evolución constante. Los adelantos, como en otras lireas de la bioquímica, dependen de la innovación en el enfoque experimental y tecnológico. El cuarto objetivo consiste en resumir de manera breve los principales logros obtenidos en bioquímica. La visibn concisa de la ciencia, que se presentad aquí, ayudará a impartir en el lector un sentido de la direccibn global del resto del texto. El quinto objetiva se dirige a destacar lo poco que conocemos en ciertas Areas, por ejemplo, sobre el desarrollo, la di ferenciacidn y funcibn cerebral, el cáncer y muchas otras enfermedades humanas. Quizá esto sirva de estimulo a algunos lectores para contribuir a la investigacibn de estas Areas.

EL CUERPO HUMANO SE COMPONE DE UNOS CUANTOS ELEMENTOS QUE COMBINADOS FORMAN UNA EXTENSA VARIEDAD DE MOLÉCULAS
Los principales elementos san carbono, hidrágeno, oxígeno y nitrógeno
Se ha determinado la composición elemental del cuerpo humano y en el cuadro 2-1 se muestran los principales resultados. El carbono, oxígeno, hidrbgeno y nitrógeno son los constituyentes principales de casi todas las biomol&culas.El fosfato es un componente de los Iicidos nucleicos as1 como de otras moléculas y tambikn se distribuye ampliamente en su forma ionizada en el cuerpo humana. Por su parte el calcio tiene una funci6n importante en innumerables procesos biolbgicos y sobre él esta enfocada buena parte de la investigacibn. Los elementos enumerados en la tercera columna desempefían diversas funciones. Muchos de ellos se manejan casi diariamente en la prhctica mkdica al atender a pacientes con desequilibrios electroliticos (K', Na', C1- y Mg2+},anemia por deficiencia de hierro (Fe2+) y enfermedades de la tiroides (1-1.

Las cinco principales biomolécufas complejas son DNA, RNA, proteínas, polisacaráridos y Iípidos complejos
Como se muestra en el cuadro 2-2, las principales biomol~culas complejas encontradas en las células y tejidos de los animales superiores (incluyendo al ser humano) son DNA, RNA, proteínas, polisacfiridos

8

Biuqriim ica de Hrrrper

Cuadro 2-1. Composición ekemental aproximada del cuerpo humano (con base en peso seco)*
-

Carbono

50
Azufre

Ovigeno I lidrógeno N itrógcno
alcio F.cjsforo

-- 0.00005 * Reproducido con autorizacibn de West ES. l o d d WR. T?xzbook
ofRiochcmist~. e d . Macmillan, 1961. 3rd

ques estructurales de los Iipidos, aunque éstos no son polimeros de acidos grasos. Al DNA, RNA, proteinas y polisacaridos se les conoce como hiopolimeros debido a que esthn compuestos de unidades repetidas de sus bloques estructurales (los mon6meros). Las rnol~culasantes mencionadas constituyen esencialmente el "ingrediente vital" de este texto; la rnayor parte se ocupa de describir sus características bioquímicas y las de sus bloques estructurales. Por lo general se encuentran las mismas moleculas complejas en los organismos inferiores, pero pueden diferir de los que se muestran en el cuadro 2-2. Por ejemplo, las bacterias no contienen giucogeno o triaci!gliceroles, pero poseen otros polisacaridos y Iípidos.

y lipidos. Lac moiéculac complejas se construyen a partir de biomoMculas simples, tainbien enumeradas. Los bloques estructurales del DNA y el RNA (Ilarnados colectivamente ácidos nucleicoc) son los desoxinucleótidos y los ribonucle6tidos, respcctivamente. Por su parte, las bases estructurales de las protehas con los arninoitcidos, mientras que los polisacaridos estan constituidos por carbohidratos simples; en el caso del glucógeno (polisacárido principal de los tejidos humanos), el carbohidrato es la glucosa. Los ácidos grasos pueden considerarse como los bloCuadro 2-2. Biomol&culas orghnicas comptejas principales de células y tejidos. Los &cidos nucleicos, proteinas y plisadridos son biopolimems, constrriidm a partir de las bases estructurales mostradas. Por lo general, tos lipidos no son biopolimaros y no todos tienen ácidos grasos como bases estructurates -. -. .
. ..

Proteínas, I ípidos, carbohid ratos, agua y minerales son los principales componentes del cuerpo humano
Ya se mencionb cual es la composici6n elemental del cuerpo humano. Su composición quimica se muestra en el cuadro 2-3; proteina, grasa, carbohidrato, agua y minerales son los elementos principales. E1 agua coristituye la proporción mayor, aunque su cantidad varia ampliamente en los difcrentes tejidos. Su naturaleza polar y su propiedad de formar puentes de hidrogeno hacen al agua idealmente adecuada para su función como solvente en el cuerpo. En el capítulo 3 se presentan con mayor detalle las propiedades del agua.

LA CÉLULA ES LA UNIDAD BÁSICA DE LA BIOLOG~A
La célula fue reconocida como la unidad fundamental de la actividad biológica por Schleidcn y Schwann y por otros pioneros como Virchow en el sigloXIX. Sin embargo, en los aRos posteriores a la Segunda Guerra

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Cuadro 2-3. Composici6n química normal d Sn que pesa 65 kg". . . -

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Milierales * Reproducido con

4. I i 51 - i SD, Parsmore R,- s .- ' I ación de D avidson : autor17

1

aliccroles

Hrock JF: Iiuman ,l'uiri rion and Di ererrcs, 5th ed. Churchill Livingstone, 1973. El valor para el agua pucdc variar ampliamente entre los riircrentes tejidos, siendo tan bajo como 22 5% para e l hueso sin mtdula Además, el porcentaje dcf agua tiende a disminuir confunnc alimenta 13 grasa curpura)

Biomoléculas y métodos hioquímrcos * 9

Mundial, tres sucesos ayudaron al inicio de un periodo de actividad sin paralelo en la bioquimica y la biologia celular. Fueron: 1 ) la disponibilidad creciente del microscopio electrónico; 2) la introducci~n rnktodos de que permiten separar las células bajo condiciones relativamente poco agresivas de modo que se preserve su función: 3) el desarrollo y disponibilidad de una ultracentrifuga refrigerada de alta velocidad, capaz de generar fuerzas centrífugas suficientes para aislar los constituyentes de las celuias separadas sin sobrecalentarlos y, por tanto, sin desnaturali7arlos. El uso del microscopio electrónico reve16 muchos de los componentes ce!ularec que hasta entonces eran desconocidos o deficientemente observados, en tanto que la rotura de las células y la ultracentrifugación permitió su aislamiento y anhlisis in vitro.

Retículo endopllrsmico

h

Citoesqueleto

El hepatocito de rata muestra características comunes a muchas células eucariotas
En la figura 2-1 se muestra un diagrama de la estrucmra de una ckIuEa hepatica (hepatocito) de rata; es

probabEe que ésta sea la célula m8s estudiada desde el punto de vista bioquímico, en parte por su disponibilidad en cantidades relativamente grandes, por su facilidad para fraccionarse y por la diversidad de siis funciones. El hepatocito contiene todos los organelos principales que se encuentran en [as células eucariotas (cuadro 2 4 ) ; es decir, niicleo, mitocondrias. retículo endoplásmico, ribosomas libres, aparato de Golgi, lisosomas, peroxisornas, membrana plasrnatica y ciertos elementos citotsque2eticos.

Membrana plasmalica

Peruxisoma

citoso1

Lisosoma

Figura 2-1. Representacibn esquematica d e una d l u l a hep8tica d e rata, con sus organefos principales

Para disgregar células y aislar moléculas intracelulares y organelos subcelulares se usan técnicas físicas
Para estudiar con profundidad la funcidn de cualquier organelo, es necesario primero aislarlo en forma relativamente pura, sin contaminacion importante de otros organelos. El proceso habitual para conseguirlo se llama fraccionamiento subcelular y, por lo general, comprende tres procedimientos: extraccibn, homogeneización y centrifugaci6n. Gran parte de los trabajos iniciales en esta irea utilizaron higado de rata.

A. Extracción Como primer paso hacia el aislamiento de un organelo (o molécula) especifico, es necesario extraerlo de las cAulas en que se localiza. La rnayoria de los organelos y muchas ~iomoleculas bastante Ihbiles y propenson sos a perder sus actividades biolbgicas. De acuerdo a ello, deben extraerse en condiciones poco agresivas

(es decir, usando soiuciones acuosas y evitando sitiiaciones extremas de pH, presibn osmótica y temperaturas altas). En realidad, muchos de los psocedimientos para aislar organelos se efectria aproximadamente entre 0 y 40 "C (por ejemplo, en un cuarto frlo o utilizando materiales conservados en hielo). A la temperatura ambiente puede haber pérdida significativa de la actividad, en parte por la acción de varias enzima5 digestivas (proteasas, nucleasas, etcktera), liberadas cuando se rompen las cdlulas. Una solución comun para la extraccion de organelos consiste en sacarosa 0.25 moVL (Esosmótica), ajustada a un pH de 7.4 con un amortiguador de hcido cIorhidrico-TRIS (tris [hidmimetil] am jnomewno), 0.05 moW, que contiene iones K' y Mg2' a concentraciones casi fisiol~gicas; esta solución se a le conoce con las siglas STKM (del ingles, Sucrosu, Tris, Kulium y Magnesiurn). No todos los solventes usados para la extraccibn son tan suaves como el STKM ; por ejemplo, para extraer lipidos y ácidos nucleicos se emplean solventes orghnicos.

10

Bioquimica de Harper

(Cupitulo 2)

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ieshidrogenasa .. - Citosol* 1 En:zlmas-ae !a gtuco~isis, ". síntesis de:-hcidos & * Un organelo se puedc dcfinir como una entidad suba:eEulwquue está limiida oormembranav se aislarior ccntxifupaci6n a altas .. ..
necesario pnr lo menos, c ierto numerci de ciclos. fracciones de citoesqueleto se pi ieden recont xer por mii:roscopia el carxteristicñs que contiei1P"

Oxidasa del Qido iirica e No tien! marcadc + 'OS'

LoS rihosomas unidos a la mernbrama son un tanite de síntesis proteinica Siritesis de varios Iípidas Ox idación de n u m e ~ o s o s ~ e n ~ i 6 t i ( c ist o c m m o _ i ~ 4 ~ o ~ co io dc almacenaje de muchas hiilrolasas (e e alizan reacciones deg: radativas) . insporte dc molCculm dentro y tiuera dc las herencxa y comunicacibn interce Di:jtribucion intracelular de protein Reacciones de glucosilac:i6n Reacciones de sulfatación gradación iie ciertos ácidos gracos y amino iducción y degtadrtcíiin de peroxido de h d ! .-crofilamentos, microtiÚbulos, filamentos intl
u

D acuerdo a Ia definicihn, los r i b m a 5 , ei crioesqueieto y ei citosoi no son organclos. Sin embargo, aqui se les considera junto con e ellos dehido a que, por lo general. también se aislan p r centrifugacibn F'ueden ctasiiiicarse comcb entidades ci fracciones subcelulares Un organelo al sisl arse por un ciclo ii c ccetrifug aci6n diferencial rara vi2s: es puro; 1Jara obtener una fraccib n pura, habi tudmente eS
por análisis

Laq

oforesis de

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B. Homogeneización
Para extraer un organela (o biomolkcu1a) de las c&lulas, primero es necesario romperlas bajo condiciones suaves. Los 6rganos (hígado, rifion, cerebro) y las células que contienen se pueden separar de manera conveniente mediante el proceso de homogeneizacibn; éste consiste en girar manualmente o por medio de un motor, un agitador dentro de un tubo de vidrio de dimensiones adecuadas que contiene los fragmentos desmenuzados del &gano en estudio con un medio hornogeneizante apropiado como STKM. La rotacibn controlada del agitador ejerce una fuerza mechica en las dtulas y las rompe l i h d o sus constituyentes en la sacarosa. Resulta una suspensión que contiene muchos organelos intactos, la cual se conoce como homogenado.

C. Centn'fugacidn
El subfraccionamiento del contenido de un homogenada por centrifugación diferencial ha sido una tkcnica de importancia capital en bioquimica. El mttodo

clásico utiliza una serie de tres pasos de centrifugación diferencial, con velocidades sucesivamente mayores (figura 2-2) y cada uno produce un sedimento y un sobrenadante. El sobrenadante de cada paso es centrifugado en el siguiente. Este prmedimiento proporciona tres sedimentos, que son las fracciones nuclear, rnitocondrial y rnicrosbmica. Ninguna de las fracciones está compuestade organelos absolutamente puros. Sin embargo, se ha establecido con precisión por el uso del microscopio electrbnico y por mediciones de enzimas "marcadoras" adecuadas y de componentes químicos (por ejemplo, DNA y RNA) que los constituyentes principales de cada 1 de las 3 fracciones son nucleos, mitocondrias y microsomas, respectivamente. Una enzima o un compuesto químico "marcador" es aquel que esta casi exclusivamente confmado a un organelo particular, corno la fosfatasa hcida en los lisosomas y el DNA en el núcleo (cuadro 2 4 ) . Por tanto, sirve para indicar la presencia o ausencia, en una fracción determinada, del organelo en el que esth contenido. La fraccibn microsbmica (mi-

Biomol~culus métodos biquimicos y

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Sobrenadante (1)

-

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Sobrenadante (3)

15 o00 g x 5

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Fraccibn
nuclear

Fraccibn microsbmica

Figura 2-2. Esquema de separacibn de fracciones cubceluTares por centrifugaeibn diferencial. fl tejido hornogeneuado (por ejemplo, hepfitico) se sujeta primero a centrifugacibn a bala velocidad para obtener la fraccidn nuclear (que contiene tanto núcleo como dlulas enteras) y el sobrenadante (1). Este ultimo se decanta y sujeta a centrifugacion a veloadad intermedia para producir la fraccibn mitocondr~af (que contiene rnitocondrias, lisosomas y peroxisomas) y el sobrenadante (2) este se decanta y sujeta a centrifugacibna alta velocidad para obtener la fracción microsórnica (que contiene una mezcla de ribosomas libres y reticuio endoplAsmico liso y rugoso) y una soiucibn final clara, el sobrenadante (3). Este último corresponde aproximadamente al citocol o savia celular. Modificando de varias maneras el mktodo, por lo general, es posible aislar mda organelo en forma casi pura

crosomas) contiene principalmente una mezcla de

reticulo endoplásrnico liso, retículo endopliismico rugoso (es decir, que tiene adheridos ribosomas) y rEbosornas libres. E! contenido del irltimo sobrenadante corresponde a la savia celular (citosol). Las modificaciones a este proceso bácico, que utilizan medios diferentes de homogeneizacibn o protocolos distintos de centrifugacion (por ejemplo, el uso de gradientes, continuos o discontinuos, de sacarosa), han pem itido el aislamiento, en fonna más o menos pura, de todos los organelos ilustrados en la figura 2-1 y enumerados en el cuadro 2 4 . El esquema descrito anteriormente es aplicable en tkrminos generales a la mayoría de los 6rganos y las dlulas; sin embargo, los fraccionamientos celulares de este tipo deben ser valorados con mediciones de enzimas o de compuestos químicos marcadores y por el rnjcroscopio electrónico, hasta que el procedimiento global pueda considerarse estandarizado. La importancia de los estudios d e fraccionamiento subcelular en el desarrollo de la bioquímica y la biologia celular, no se exagera por su enfoque experimental y amplio uso, constituye una parte fundamental en el estudio de las funciones de los organelos celulares. La infomaci6n de estas funciones, resumida en el cuadro 2 4 , representa uno de los mayores logros de la investigac i 6n bioquimica (vkase despubs).

El enfoque experimental tiene tres componentes
Los componentes principaEes del enfoque experimental son tres: 1) el aislamiento de biomoldculas y organelos (vdase Centrifugación, antes) contenidos en las células; 2) la deteminacibn de la estructura de las biomoléculas, y 3) el aniilisis, utiIizando diversas preparaciones, de la funcion y el metabolismo (es decir, sintesis y degradacibn) de las biornoltculas.

El enfoque experimental requiere del aislamiento de biomoléculas
Como en el caso de los organelos, conocer la funci6n de cualquier biomoidcula requiere que primero se le aisle en fonna pura. En el cuadro 2-5 se resumen los mktodos principales empleados para separar y purificar biomolkculas. Aquí no se detall&, pero algunos se explicarán de modo breve en otras partes del libro. Para purificar una biomol&culase necesita casi siempre una cornbinaci6n de mitodos hasta lograr la homogeneidad (la forma pura sin contarninacibn por cualquier otra biomolécula). Es importante apreciar que los adelantos en bioquimica dependen del desarrolIo de ttscnicas nuevas

C u a d r o 2 -5. Prin cipales nmbtodas risados p ara separar y purificar biamoléc:ulas. Mu chos de e 110s son adecu:ados paríi analiza t los comr)orientes i4 "e 1 -- -... 1 - v _ - ..-existen en ius extractos celulart.~ eii virus matcriales bioq uimicos. El uso en secuenciaI de varias d e estas tbcnicas permiitirA, por 1 general1, la purifíca0 cihn de In mmJaJ,,s ,a de las bilirliurrcuid~.Para maY ores deta lles respt: ~ f a cadla uno de los rnétodos d e investig,aci6n bioquimica, el lector d ebe dirigiirse sI los texto1 especiallimdos s . ..-

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CYuadro 2- 6. Principiales meto determinacibn de la1s estructi
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Fraccionarniento srli no (por ejemrnyilo, prec sulfato d :amonio) c Cromatogt-afia

En papel Por intercambio ibnrco (intercan Por afinidad En capa fina Gas-l1qu1 do En fase li quida a alt
Filtración itn gel Electroforr:sis

Anaiisis cielncntñl. .... ... Espectroscopia ultrnvioleta, visilsle, infrarr o,ja y de resonancia magnética nuclear (RMt'4 Uso de hidrólisis ácida o alcalina para degrasdar la hiomolecula balo estudio en sus const,,,,,,,,,, 1 so de una serie dc enz ¡mas de esplecificidad conocidapara 1 degradar la biornolrScula (por ejemplo, piroteasas, r1 ucleaqas o glucosidast 1s) ~spectrometria mas: de Mdtodos es[)ecificos para secuenciaci6n (por cjcmplo, de protcinas o de ácido: ; nucleicos;b Cristalografiia de rayos X m m

En papel Con alto vvltaje En agarosa En acetato de cclulosa En gel de almidiin En poliacrilamida Poliacrilamida y dot
I!ltracentrifugacibn

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de anliIisis, purificacibn y determinación de estmcturas. Por ejemplo, el campo de la bioquimica de los Iípidos avanzó con rapidez gracias a la introduccibn de la crornatografia en capa fina y gas-liquido. El anklisís de la membrana y de muchas proteínas era extremadamente dificil hasta la introducción de la electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato sódico (EGPASDS); el detergente dodecilsulfonato sódico permiti6 la "solubilización" para la electroforesis de muchas proteinas que antes no habían logrado disolverse. Asimismo, el desarrollo de métodos para la secuenciacihn y clonacion del DNA ha tenido un efecto revolucionario en el estudio de los ácidos nucleicos y de la biología en general.

biornoléculas. El lector con algunos conocimientos de química orghnica los encontrara familiares. Ciertas enzimas cuya especificidad se conoce, son medios muy poderosos para revelar estas caracteristicas estructurales. El perfeccionamiento en la resolución respaldado por los adelantos tebricos y tecnolbgicos, está convirtiendo cada vez más a la espectrometria de masa y a la de resonancia magnetita nuclear (RMN), en los métodos de elección rutinarios para estos analisic. Las estructuras de las cadenas extremadamente complejas de los carbohidratos contenidos en ciertas biomoléculas, como las glucoproteinas, se pueden ahora aclarar por la elevada resolucibn de la espectrometría RMN. Una infomacion m8s detallada se logra con la difraccibn de los rayos X y la cristalografia. Su uso fue decisivo para revelar las estructuras dctalIadas de varias proteínas, enzimas y la naturaleza de la doble hélice de DNA.

El enfoque experimental requiere análisis de la función y metabolismo de biomoléculas, utilizando varias preparaciones
La investigacihn bioquímica inicial en el ser humano y los animales se hizo con el anima1 intacto. Son ejemplos los estudios de la respiracibn y el destino de las sustancias ingeridas. Pronto se descubri6 que el animal íntegro erademasiado complejo para permitir dar respuestas definitivas a numerosas interrogantes. En concordancia, se hicieron preparaciones más sencillas in vitro, que eliminaron muchas de las complicaciones experimentadas con el animal intacto. El cuadro 2-7 resume los diversos tipos de preparaciones de que se dispone ahora para estudiar los procesos bioquimicos; la mayosia de tos conocimientos presentados en este texto se han obtenido gracias a su uso. El enlistado se

El enfoque experimental requiere la determinación de la estructura de biomole~ulas
Una vez que una biornoIecula ha sido purificada es necesario determinar su estnictura. De este modo puede hacerse una correlacion entre estnictura y función. En el cuadro 2 4 se enumeran los metodos principales en uso para analizar la estructura de las

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rueaen sc. 1. Bxtirpaci6n de un 6rgano (por ejemplo. hepatectomia) 2. Alteraciones en la alimentación (por qjemplo, ayuno-posprandial) 3. AdministraciOn de un fármaco (por ejemplo. fenobarbital) 4. Administracihn de una toxina (por qemplo, tetracloruro dc carbono) 5. uso de iin anirrial cori una enferrned:id especific:a (por cjernplo, diabc:tes sacarina) 6. Emp leo de tecn icas sofistjcadas corrio espectri3scopia R:MN y tam ografia po:r emisibn dc nositrones .. ' Los Cstiid~ub- - .-. ~ v c sur1 a rricnriuu iibiuiugicoh, pcru uueucri x r uiliciics CYCirricruretar debido achrc n i a la intcracción orgánich mediada por la circulacion ia . . . . -- - nervioso1 central - . En particular higado, ~oraz6n rifiiin son adecuado: y Este método .. -- permite el estudio de un organo aislado de la influencia dc otros o dcl sistema nervioso Especfalnnente se ha n usado cortes de tejido hephtict) Aislíi los cortes tisu1ares de otras influencias. pero lar; preparaciimes tiende o . . de alguna1s heras, cn parte debido al suministro inadecuado. . . . . . . -. . . . ac nutrientcs i . Aplicable en particular a lm células sanguínea, que pueden ser purificad 7.En m u c h a breas de la biología son indispensah-los culi-. -.de teji les - ivos . - . t . Asegura una prcparacibn qiie no contiene cklul;Ls .. ... :... .,. nur ui~hisisi ehrudiar sus ... 2. Pueden agregarse o removerse comnuestos esneciiiuis rnor eiemniri. v
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.3. Pucdc ser subfraccionado por centrifugacibn pa.ra pproduciir orgnnelos: celulares i .- -s, para estud i la~ func ~ b de mitricondrias, r*eticuIoencloplásmico n Ampliamente usados

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presenta en orden decreciente de complejidad. Igual que el uso de animal integro tiene desventajas, las demás preparaciones tambiéin tienen sus limitaciones. De los procesos usados in vitro pueden derivar resultados erroneos (artefactos); por ejemplo, E homoa geneizacién de las células puede liberar enzimas que digieran parcialmente a las moléculas celulares.

reacciones responsables de la síntesis de un com-

puesto complejo a partir de uno o miis compuestos simples o de la degradación de una sustancia hasta su producto final. La existencia de un proceso bioquimico complejo o de cienas vias metabhiicas puede inferirse de las observaciones a nivel del animal intacto. Por ejemplo, observaciones directas de nuestros congeneres indican que los músculos se contraen. Sabemos que la glucosa sirve como fuente de energia para el ser humano y otros animales; por tanto, podemos deducir que debe ser degradada (metabolizada) en el cuerpo para producir energia. Sin embargo, la comprensi6n total de la forma en que la glucosa se metaboliza en las cklulac humanas -su conocimiento está aún lejos de ser completo- se requieren anhlisis a diferentes niveles. Lafiqura2-3 muestravarios tipos de observaciones y anhlisis utilizados en un intento por comprender los procesos bioquimicos, como la degradación inicial de la glucosa para producir ener-

LAS ESTRATEGIAS PARA EL ESTUDIO DE REACCIONES BIOQU~M~CAS COMPLEJAS SON Y EN MÚLTIPLES NIVELES
Gran parte de esta obra se dedica a los procesos bioquimicos complejos (por ejemplo, slntesis de proteinas y contracción muscular), incluyendo las vías rnetabólicas. Una vía metabhlica es una serie de

14

Bioquimiccr de Hurper

(Capituio 2)

gia (proceso conocido como glucblisis). El esquema de la figura 2-3 se aplica en un nivel general a todos los procesos bioquimicos principales por lo cual representa una estrategia global para diIucidarlos; cada uno de los procesos (glucblisis, oxidación de los Acidos grasos, etcétera) debcdn tenerse en mente al estudiar el texto, aunque no siempre encontrarán lugar todos los puntos mencionados. Algunos puntos importantes del cuadro 2-7 y de la figura 2-3 ameritan discusión. 1) A pesar de la posibilidad de artefactos, es absohtamente necesario aislar e identificar cada uno de los componentes de un proceso bioquimico en forma pura para comprenderlo a nivel molecular. Más adelante se encontrarán numerosos ejemplos de esto. 2) También es importante ~ o d e reconstituir in vitro el vroceso en estudio. mer diante el ensamblaje sistemático de sus componentes individuales. Si el proceso no se realiza al ser reensambladas sus partes, una explicacibn puede ser que algun componente critico ha escapado a la identificaci6n y, por tanto, no se ha afiadido. 3) Los adelantos tecnologicos recientes (por ejemplo, en espectroscopia RMN y en tomografia por emisión de positrones [TEP]) han permitido la detección de ciertas biomoléculas a nivel del &gano intacto y la vigilancia de Eos cambios en sus cantidades con e1 tiempo. Estos desarrollos indican que se esti haciendo posible efectuar anhlisis sofisticados de muchos procesos bioquímicos in vivo. 4) Cuando los resultados obtenidos con el uso de varios planteamientos a diferentes niveles son congruentes, entonces sejustifica concluir que se ha logrado un progreso real en la comprensión del proceso bioquímico en estudio. Si utilizando diversos enfoques, se obtienen incongruencias imporiantes, en toncesdekn inrestigme sus causas hastaobtener explicaciones racionales. 5 ) Las preparaciones y niveles de anhlisis delineados pueden utilizarse para estudiar alteraciones bioquimicas en animales con estados metabólicos alterados (como ayuno o ingestión de alimentos) o enfermedades especificas (por ejemplo, diabetes sacarina, o cincer). 6) Muchos de los mktodos y enfoques indicados pueden aplicarse a estudios de ctlulas o tejidos humanos normales o enfermos. Sin embargo, debe tenerse cuidado de obtener material fresco y prestar atención particular a las consideraciones tticas que se aplican a la experimentaci6n en el ser humano.

Deduccibn de la existencia del proceso bioquímico de la vla metabólica por las observaciones hechas a nivel del animal intacto

&
Anhlisis de sus mecanismos de control in vrtro

J
Anhlisis de sus mecanismos de mntrol in vivo

.1
AnBltsis de bc efectos de enfermedades específicas sobre di (por epmpio. errores cong8nitos del metahlismo. cáncer)

&
SU locallzaubn en uno o mas brganoc

1
Su localizacibn en uno o mAs organelos celulares o fracciones sub-

celulares Determinación del número de reacciones que intervienen en 81

3.

4
Purificación de sus susb-atos. productos, enzimas y uifactores individuales u otros componentes

&
Establecimientode los mecanismos de control utilizados en él

.1
Su reconstruccibn

L
Estudios del proceso o vla a nivel genbnm por los mktodos de la tecnología del DNA recombinante

Figura 23. Esquema de la estrategia general utilizada para analizar un proceso bioqulmim o una vía metabblica. Los planteamientos enumerados no necesrtan efectuarse obligadarnente en la secuencia precisa indicada aquí Sin embargo, por lo general mediante su uso se han dilucidado los detalles de los procesos o vías bioquimicos Por tanto, &te es el esquema que se aplica de modo común a M a s las vias rnetabblicas principales explicadas e n los capítulos siguientes

Los Esótopos radiactivos pesados han contribuido de manera importante en el ecclarecimienta de procesos bioquímicos

La introduccibn del uso de isbtopos en la bioquimica en el decenio de 1930 tuvo un impacto notable; en consecuencia, su uso merece discusibn especial. Antes de su empleo, era muy dificil "marcar" las biomo-

Itculas de modo que sus destinos metabblicos pudieran vigilarse de modo conveniente. Los estudios iniciales, en particular los de Schoenheimer y sus colaboradores, se aplicaron a la utilización de ciertos isótopos estables (por ejemplo, D2 y NI5)combinados con su identificación por espectrometría de masa, para dilucidar muchos problemas bioquimicos. Por ejemplo, pudieron sintetizarse varios arninoAcidos, azúcares y iicidos gsasos que contenian un isótopo estable adecuado y, entonces, administrarse a un animal o agregarse a una preparacibn in vitro para trazar su destino metabólico (por ejemplo, vidas medias y conversi611 a otras biomoltculas). Los compuestos marcados con is6topos estables se utilizaron para investigar muchos aspectos del metabolismo de proteinas, carbohidratos y lipidos. De estos estudios, se dedujo que el metabolismo es un proceso muy activo, en donde E mayoría de los compuestos en una cdlula a se estan sintetizando y degradando de manera continua, aunque a velocidades que difieren amplia-

mente. Schoenheimer llam6 a estos hallazgos "la
naturaleza d i n h i c a del metabolismo". La introducción subsiguiente de los is6topos radiactivos y de instrumentos capaces de medirlos también fue muy importante. En el cuadro 2 4 se muestran los isdtopos principales, estables y radiactivos, usados en los sistemas biológicos. El uso de los dos tipos de isótopas es decisivo para el desarrollo de cada irea de Ia bioquimica. La investigación de las biomoléculas complejas y simples, in vivo o ipi vim, se apoya fweftemente en su empleo. El gran avance logrado en la secuenciacib de los hcidos nucleicos y en la rnedici~n de cantidades extremadamente pequeflas de compuestos que se encuentran en los sistemas biolbgims se debe a la radioinmunovaloración que también utiliza isotopos.

LOGROS IMPORTANTES CARACTERIZAN LAS CONTRIBUCIONES DE L A BIOQU~MICA LA CITOLOG~A A Y A LA MEDICINA
Los siguientes piirrafos resumen los descubrimientos principales en el campo de la bioquimica, en particular en relacibn con la bioquimica humana. Gran parte de este texto desarrolla los temas que aquI se enumeran.

1) Se ha determinado la composición quimica global de c&lulas,tejidos y 6rganos; los compuestos principales se han aislado y sus estructuras se han
establecido.

2) Se comprenden, por la menos a un nivel general, las funciones de muchas biomoléculas simples, las
cuales se describirhn en los capitulas subsiguientes. Tambitn se han establecido las funciones de biomol&culas complejas. Es de capital interks el conocimiento actual de que el DNA es el material gendtico que transmite s información a un tipo de u RNA (RNA mensajero, o mRNA) y este RNA a su vez dicta la secuencia lineal de los aminoácidos en

las proteínas. E! flujo de 3 información del DNA a puede ser representado convenientemente como DNA +RNA -+ proteina. Sin embargo, se conocen excepciones importantes de algunos de los enunciados anteriores. El RNA es el material gendtico de ciertos virus. Además, en algunas circunstancias la información contenida en el RNA puede transcrjbirse al DNA; este proceso se conoce como transcripción inversa y es usado, por ejemplo, por el virus HIV-1 (virus de inrnunodeficiencia humana-1), causa posible del SIDA. 3) El desarrollo de la tecnología del DNA recornbinante constituye un logro fundamental. Esta tecnologla revolucion6 el estudio de la estructura y funcibn de los genes y también tuvo un impacto revolucionario en todos los campos de la biologia, incluyendo la medicina. 4) Se han aislado los principales organelos de las células animales y establecido sus funciones principales. 5) Se sabe que casi todas las reacciones que tienen lugar en las células son catalizadas por enzimas; muchas de estas han sido purificadas y estudiadas y se han descubierto las caracteristicas generales de sus mecanismos de acción. Aunque la mayoría de las enzirnas son proteinas, en la actualidad se ha establecido de manera firme que ciertas moldculas de RNA tambidn tienen actividad biocatalitica. 6) Se han delineado las vías membólicas que intervienen en la síntesis y degradacibn de numerosas biomolCculas simples y complejas. En general, se sabe que 1a vía de sintesis de un compuesto es distinta de su via de degradacion. 7) Se han esclarecida algunos aspectos de la regulacidn del metabolismo, 8) Se han reconocido las características generales de la forma en que las cClulas conservan y utiIizan la energia. 9) Se comprenden muchos aspectos de la esmctura y funcion de las diversas membranas encontradas en la ctlula; sus componentes principales son proteínas y lfpidos. 1(3 Se dispone de información importante a nivel general sobre el modo de accibn de las hormonas. 1 )Se han descubierto las bases bioqufmicas para un 1 número considerable de enfermedades.

g. Isatopo,S princip investigaici6n bioc
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QUEDA MUCHO POR APRENDER
Aunque es importante saber que es mucha la información que se ha acumulado, tiene igual relevanciaapreciar lo escaso del conocimiento en numerosas areas. Probablemente los dos problemas principales por resolver
respecto al establecimiento de sus bases bioquirnicas son el desarrollo, la diferenciacibn y la función cere-

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el uso de isotopos. 7th ed. 2nd ed. ~ Freeman.6:3032. de la dcterminación de sus estructuras así como del an8lisis de su funcibn y metabolismo. McGraw-Hill. FASEB J 1992. pueden separarse por fraccionamiento subcelular y. El avance de la bioquímica ha dependido del aislamiento de biomolkculas celulares. 1992. El agua. de este modo. Estos organelos resume la fuerza propulsara de gran parte del esfuerzo contemporáneo en bíoquímica. cloro. bioenergetics. and adaptation in health and disease: Non-invasive biochemistry from nuclear magnefic resonance. estudiar sus fiinciones en detalle. Sólo se riene informacibn muy limitada de los mecanismos de la secrecion celular. M REFERENCIAS Freifelder D: Phys~cal Biochemistry: Applicaiions to Rin- c h e m i . Control. proteínas. Cambrídge Univ Press. sodio.bral. (editors): The Melabolic and MolecuIar Bases o lnhenfedDiseare.: Recombinani DNA. la informacihn disponible gracias a este esfuerzo masivo tendrh un impacto tremendo sobre la biologia humana y la medicina. hormonas y membranas. Es posible que en el año 2005 o antes se logre conocer la secuencia del genoma humano. la diferenciacibn celular y !a función cerebral. los retos principales para el futuro incluyen definir ("mapear") el genorna humano y proporcionar explicaciones moleculares de los mecanismos que intervienen en el desarrollo orghnico. aún es mucho lo que se desconoce. Contienen v e o s organelos que desempeiian numerosas funciones especializadas. A perar de cierto progreso. Virtualmente nada se sabe can respecto a las bases bioquimicac de fenómenos neurolbgicos complejos como la conciencia y la memoria. Sin embargo. Se han descubierto las bases bioquímicas y genéticas de numerosas enfermedades y la aplicación reciente de la tecnología del DNA recombinante ha acelerado enormemente el progreso en esta área. funci6n y metabolismos d e las biomoléculas se han utilizado diferentes planteamientos. potasio. f Radda GK. hidrógeno y nitrbgeno son los constituyentes principales de gran parte de las biomoléculas. Ademls el calcio. manganeso. fbsforo. polisacaridos y lipidos son las moléculas principales de células y tejidos. Cox DR. Para investigar la estructura. El conocimiento de la división y el crecimiento celular -tanto normal como malignoy su regulaci6n es muy primitivo. oxígeno. tanto estables como radiactivos. Watson JD et al. Fruton JS: iWo/ectrJes aridLfe: HrSiorical fisqyson ihe Jnferplay ofChemisfryandBioln~. se desconocen los fundamentos moleculmes de la mayoria de las enfermedades genéticas principales. 4th ed. . como la apreciacibn de la ~omposicibn corporal y la comprensibn parcial de estructuras y funciones de enzimac. Si bien está perfectamente asentada la naturaleza quimica del material genético. R N A .1972. In: Scriver CR et al. Scientific American Books. T 982. se han hecho muchos otros avances en el conocimiento de la bioquimica. 1995. rnagnesio. Walker J: Pnncipdes and Technáques ofPraciical Rinchemistty. La representacihn: Transcripcibn Traslación RNA-Proteina DA N- RESUMEN El carbono. Las células son las unidades biolbgicas hndamentales. ha tenido tremenda importancia en el adelanto del conocimiento hjoquímico. yodo y otros elementos tienen gran importancia biol6gica y medica. Myers RM: The human genamc prajcct and its impact on ihe snidy of human discasc. casi nada se sabe acerca de los mecanismos que activan y desactivan a los genes eucariotas durante el desarrollo. En particular. desde el anima! íntegro al gen aislado. No obstante. hierro. DNA. pero las tentativas proporcionadas por la tecnología del DNA recombinante sugieren que en los próximos afios se logrará un progreso notable en esta hrea. 1994. Wiley-lnterscience. Green ED. r f and MolecuIar Biolo~y. Wilson K. Comprender la regulación génica es tarnbitn un &ea clave en el aprendizaje de la forma en que las células se diferencian y toman cancerosas.

Tanto la conservacibn del agua por la atitidiuresis como la ingestihn de liquido por la sed. en estados de coma) e increniento de la perdida (por ejemplo. el plasma sanguineo constituye cerca de 25 por ciento.0s estados de depleción de agua y exceso de Iíqiiido corporal son bastante comunes. Las alteraciones del equilibrio acidobásico se diagnostican en el labora- . Del liquido extracelular remanente. de la hormona aiitidiurdtica y de la retención o excrecion del agua por los riilones. ingest icin abundante de agua e incapacidad para concentrar la orina o para responder a cambios sutiles en la osmolaridad de liqiiido extracelular. el comportamiento de disociación de los gmpos funcionales de biomol~culas soJuci6n acuosa a diversos valores en de pH e? critico cn la comprensióti de sus reacciones y propiedades tanto en células vivas corno en el laboratorio IMPORTANCIA B I O M ~ D I C A Ida homeostasis. en insuficiencia renal grave). cn donde el sistema amortiguador de bicarbonato tiene una funcihn importante. cuthnea por sudaciún intensa y gastrointestinal eii diarrea intensa en lactantes y en ctilera). [. esto se dehc a la incapacidad de los osmorreceptores de ADH en los túbulos renales para responder a la ADH. perdida renal en la diabetes sacarina. solubiIi75~ modifica las características de biomoléculas coino hcidos nucleicos. Ciertos niecanismos osrnóticos y no osmóticos protegen el agua y la htirneostasis osrn0tica del liquido extracelular.si$ biornoléculas -aun aquéllas relativamei1:e no pulares. conservaci6n de la cornposic~ón del rnedio interno que es esencial para la salud.35 y 7. es cscncial para la salud. PhD Ld5 biomolecula~ polarcs orghicas e inorgánicas de 1% células vivienles existen y reaccionan de manera priniariri en un ambiente acuoso El agua.Estas interacciones mridifican las propiedades de las biomoléculas y si15conformaciones en solucicin. protcinas y carbohidratos al formar puentes de hidr6geno con sil? grupos fi~nciotiales. se caracteriza por sed extrema. Por ultimo. Incrcmentos tan pequefios como 2% en la osmolaridad del liquido r:xtraceluIar pueden provocar sed y Iiberacihn de liorniona antidiurética (ADH) en la hipáfi~is. En inuchos casos se acompañan de deficiencia o exceso de sodio.Un mecanismc) algo menos sensible desencadena la Iiheración no osmólica de ADH y la sed. Dos terceras partes del agua corporal total (55 a 65% del peso corporal eri varones y alrededor de 10% menos en mujeres) cs liquido intracelular. una molécula y notable esencial para la vida.os cambios le dan a las molkciilas ias propiedades esenciales para el ciclo de la vida. La conservación del liquido extracelular dcntto de un p1-E entre 7. Las causas de exceso de agua corporal se deben al incremento en la ingertión (por ejemplo. La el diabetes insípida nefrogeiia. tales como ciertos lipidos. Las causas de dealecibn hidrica son a una disminución de la ingestión (por ejemplo. La regulaciiin del equilibrio hídrico depende de mecanismos hipcitaláinicos para controlar la sed.tambiéti inodificw las propiedades del agua La comprensión de 3us mecanismos honieostáticos utilizados por los organismos para conservar un entorno intraceliilar relativamente constante debe considerar el pH y el amortiguarnierito en liquidos corporales y compartimienlos siibcelulares. ]. incluye considerar la distribucihn dcl agua en el cuerpo y la preservaci~n del ptl así como de concentmciones clecirol iticas apjopiadas. 1. sirven para mantener la homeostasis.Victor W. Rodwell. excesiva administración de liquidos IV) y excrecibn escasa (por ejemplo. de origen genético. cuando disminuye 10nA volumen de liquido circulante extracelular.45.

las moléculas de agua pueden asumir conf~rtmaciones ordenadas (considerese un copo de nieve). El término "dipoEoV se refiere a moléculas como el agua que tienen carga electrica (electrones) distribuida en forma desigual alrededor de su estructura. Los dos enlaces con hidrbgeno se dirigen hacia dos vértices del tetraedro. Con excepcibn de Las rnoléculas de agua forman dipolos Debido a la estructura tetraédrica asimktrica.5). el número es algo menor (mlis o menos 3. El ángulo entre los dos Atomos de hidrogeno (105 grados) es algo menor que el Angulo del tetraedro (109. m e t a que las de inrs la alcalosis (gH sanguineo > 7. cada moltcula de agua se une con otras cuatro. La propiedad de las moltculas de agua de unirse unas con otras tanto en estado líquido como sblido surge del carhcter dipolar del agua. los angulos de enlace entre hidrbgenos (107 grados) se aproximan al ángulo del tetraedro aun miis que en el agua (figura 3-2). Un diagnóstico preciso y un rápido tratamiento del desequilibrio hidrico y de las alteraciones acidobiisicas se apoyan en gran medida en la comprensi6n de los conceptos considerados en este capitulo. Estructura tetraMrica del amoniaw .torio clínico por medicibn del pH de la sangre arteria1 y el contenido de COZde la sangre venosa. En estado sdlido. fosfollpidos. Entre ellos se Incluyen alcoholes.35) incluyen cetoacidosis díabdtica y acidosis 1Actica.45) comprenden el vbmito de contenido ácido gástrico o el tratamiento con ciertos diun5ticos. Se conserva como liquido más que como sblido debido a la naturdeza transitoria de estos complejos macromoleculares (la vida media de asociacibn-disociacidn de las moléculas de agua es de alrededor de un microsegundo). El lado de1 oxigeno opuesto a los dos hidrbgenos muestra cierta riqueza de electrones. formando una figura geomdtrica ligeramente asimktrica. Muchos compuestos químicos son dipolos. Al igual que el hielo. de hidrógeno escasos en electrones forman una regi6n de carga positiva local. el agua liquida muestra una estructura rnacromolecular ankloga a la disposicibn ggeom&tricade las molkculas de agua en el hielo. en tanto que del otro lado. la carga eléctrica no se distribuye de manera uniforme alrededor de la moltcula de agua.5 grados). El amoniaco también es dipolar y tetraédrico En el amoniaco. En estado liquido. los núcleos Figura 3-1. Las causas de la acidosis (pH sangutneo < 7. Estructura tetrabdrica del agua Flgura 3-2. EL AGUA ES UN SOLVENTE BIOLÓGICO IDEAL El agua es una molécula tetraédrica ligeramente asimétrica La molCcula del agua es un tetraedro irregular con oxígeno en el cenúo (figura3-1). LAS MOLÉCULAS DE AGUA FORMAN PUENTES DE HIDRÓGENO Los puentes de hidrogeno confieren una estructura macromolecular Debido a su caríicter dipolar. en tanto que los electrones no compartidos del oxigeno en el orbital 2sp3 híbrido ocupan los dos vertices restantes. aminohcidos y hcidos nucleicos.

sentativos de biomol~culas. Comparados con enlaces covalentes. Fomacibn de puentes de hidrbgeno entre un alcohol y agua. Así.Agua y pH a 19 la naturaleza transitoria de las interacciones intermoleculares en el agua liquida. esleres. aldehidos y cetonas) se sotvatan con facilidad lo que por su solubilidad en agua aumenta. . por tanto. Esta estructura es típica deT hielo y. En el ambiente acuoso de las cClulas vivientes se producen muchas interacciones entre cargas y grupos polares de l s biomoléculas. Nbtese que una mol8wla dada de agua puede actuar como donador o como aceptor de hidrbgeno. El cariicter dipolar de las moldculas de agua favorece los enlaces mutuos en conformaciones ordenadas con una geometría precisa dictada por la configuracibn interna de cada molécula de agua (figura 3-3). Grupos apolares como aquellos presentes en hidrocarburos no tienen capacidad para formar uniones hidrbgeno y. residuos polares de proteinas se presentan primariamente en la superficie biopolímera donde participan extensamente en interacciones con las moléculas de agua. las moléculas apolares forman gotas esfericas con una supeficie mínima expuesta al agua. o ambas cosas a la vez Derecha: Unldn de una rnol6cula central de agua con otras cuatro mol6culas mediante puentes de hidrógeno. Izquierda: Reunibn de dos mol&culasdipolares de agua. Romper un enlace de hidrógeno en agua Iíquida requiere alrededor de 4. De manera similar. aminas. Los puentes de hidrógeno estabiliran proteínas y ácidos nucleicos En tanto que el metano (peso molecular 16) y el amoniaco (peso molecular 17) son gases a la temperatura ambiente. las proteinas solubles están recubiertas con una capa de agua formada por intercambio de enlaces de hidrbgeno intermoleculares superfjciales por puentes de hidrógeno intramoleculares del agua. No obstante. Figura 3-4. Cuando se añaden el agua. e l agua (peso molecular 18) es un liquido. La figura 3 4 ilustra la formacibn de puentes de hidrógeno entre el agua y grupos funcionales repreN6tese que los alcoholes. Las molCculas que pueden formar puentes de hidrógeno con el agua (por ejemplo. lo que incrementa la solubilidad. La interacción electrostAtica entre el nijcleo de hidrdgeno de una moldcula de agua y el par de ekctrones no compartidos de otra se denomina puente de hidrógeno. en menor grado. este fenbmeno se ilustra con la tendencia del aceite de olivo en agua fria para formar una sola gran masa flotante. La reduccibn a mlnimo de la superficie apolar expuesta al agua es E un proceso gobernado entrópicamente. del mismo modo que el agua. los puentes de hidriigeno son bastante debiles. entre dos molbculas de etanol y entre el oxigeno carbonilo de un pbptido y el hidrbgeno del grupo amino de otro pkptido adyacente. compuestos con radicales 4 N o S H . ksta se parece al hielo en su estructura macromolecular mSis de lo que en un principio se imaginaba. del agua líquida. pueden participar como donadores y como aceptores de hidrógeno en la formación de puentes de hidrdgeno con agua o con otras biomoltsculas. El DNA se pliega a de modo que expone su azúcar y sus grupos fosfato polares a las moiéculas de agua. estos grupos no polares pueden afectar la estructura hidrica. ¿Por quc es ast? L a respuesta se apoya en la capacidad del agua para formar puentes de hidrogeno. son insolubles en agua. lo cual explica tambien su viscosidad y su tensibn superficial relativamente altas. La línea punteada representa un puente de hidrógeno.5 kcal de energía por mot -más o menos 4% de la energía que se requiere para romper el enlace O-H del agua ( 1 I O kcal/mol). La presencia de moltculas apolares reduce el numero de posibles orientaciones (grados de libertad) de las rnol~culas Figura 3 3 . El carácter dipolar del agua afecta profundamente sus interacciones con las biomoltculas. La propiedad del agua de servir como solvente para iones y numerosas mol&culasorghnicas se debe a su carácter bipolar y a su capacidad para formar puentes de hidrhgeno.

Por fortuna. Aunque para propósitos prhcticos este protbn ' al parecer 'Vesnudo" se escribe casi siempre como "H'". no puede definirse si un hidrógeno o un oxigeno deterrninado tiene el estado de ion o de una parte de una moiécula de agua En un instante están como ion. los hidrocarburos forman estructuras clatrato rígidas (semejante a cajas). recuérdese que una molkula de agua pesa 1& g. Ahora puede calcularse la K para el agua: . los iones hídr0geno y oxhidrilo contribuyen de modo significativo a las propiedades del agua. Establecer que la probabilidad de que un hidrbgeno exista como un ion es 0. Para calcular este valor. Ya que la probabilidad de que un hidrbgeno en agua pura exista como ion H' es de 1 . Dado que 1 g de agua contiene 3. para crear una nueva constante. en el ambiente acuoso de las ctlulas vivientes.01 significa que un átomo de hidrhgeno tiene una oportunidad en 100 de estar como ion y 99 posibilidades en 100 de estar como parte de una rno4&culade agua. En consecuencia. La relación entre K y K se . m .56 molar. que foma un ion hidronio (I. la concentración del agua pura es 55. Es suficiente conocer la probabilidad de que un hidrbgeno estC presente como ion o como parte de una molécula de agua. En realidad.I. un litro (1 000 g) de agua contiene 1000 + I g = 55. La reducción al minimo del área de la superficie apolar expuesta permite el m k i m o grado de libertad (por ejemplo. muestra a continuación: Nótese que las dimensiones de K son moles por litro y las de K. la concentración molar de iones H' (e de iones OH-)en agua pura se calcula multiplicando la probabi tidad.S bi tlones o 1 .56 moles. designada el producto ibnico para el agua. no es necesario considerar iones o molkculas individuales.S x 1 Omy. es en cifras igual al producto de las concentraciones rnolares de H ' y OH-: * Estrictamente hablando. no siilo como H30. por la concentracion molar del agua.8 x 1 Q4. La disociacion del agua.56 moIL. el producto iónico. las partes no polares de los biopolímeros tienden a situarse dentro de su estructura. iones oxhidrilo y rnolkculas de agua sin disociar*.Como su nombre sugiere. Por tanto. Ya que los iones se recombinan de manera continua para formar rnolécu2as de agua y viceversa.O&) un ion hidr6xido (OH-): y donde los t6rminos entre paréntesis representan concentraciones molares de iones hidrbgeno. Las moléculas de agua presentan una tendencia ligera a disociarse. resulta conveniente considerarla en esencia como una constante. N o obstante. minimiírando asi su contacto con el agua. tiene importancia capital para la vida sobre la tierra. 55. molesZpor litro2. por cada ion hidrbgeno y cada ion oxhidrilo en agua pura.46 x moléculas.0000000018 o 1. K. De manera similar. hay 1.56 moYL) no se afecta de manera significativa por la disociacibn. los tCrtninos entre parkntesis reprcsentan la actividad molar en lugar de la concentración molar. Dado que el agua puede actuar como un hcido o como una base. es posible representar su ionizacibn como una transferencia protónica intermolecular.' adyacentes al agua por lo que se acompafía de un incremento en la entropía. aunque de modo ligero. por tanto.no debe olvidarse que de hecho esta fuertemente hidratado. 109 moléculas de agua. Definido de otra manera. La probabilidad real de que un Atorno de hidrhgeno en agua pura exista coma ion hidr6geno es alrededor de 0. el protbn transferido est6 asociado con un racimo de: mol$culas de agua y existe en solucion... su ionización puede describirse por estadística. Este resultado es 1 x 10" rnoYL. 1. la probabilidad de estar como parte de una rnotecula es casi la unidad. que luego puede incorporarse a la constante de disociación. Por tanto.X x La elevada concentración de agua molecular (55.. lo cual es fisiolciqicarnente importante La propiedad del agua de ioni~arse. un momento después como una parte de una mol6cula. En el agua. rnlentras que la K es la constante de disociación.sino como algo semejante a HrOz' o H703'. K. reduce al mínimo el incremento en entropía. desorden máximo) de las mo!éculas de agua cercanas y.S x 104. Asi. K.

KOH.log (104) = . Esta constante se usarii en el cálculo de valores de pH para soluciones ácidas y alcalinas. En el primer caso. que sea igual a -1og [OH-] y que puede derivarse de la definiciiin de Kw: por tanto: Esta definición. HCI. NaOH) y bases debiles (por ejemplo. Muchas sustancias bioquimicas son Bcidos ddbiles. incluso las que contienen acidos o bases. A temperaturas . que se disocian solo de manera parcial en selucíones bcidas. a la temperatura del cuerpo humano (37 "C).y los valores de pH altos a concentraciones bajas de H'.109[H+] = log (3.0 x . para agua pura a 25 O C : pH = -lag [HJ = .0. Las excepciones son tos intermediarios fosforilados. = lW4 (mol/L)' para todas las soluciones acuosas. hay que definir una cantidad pOH. Los ácidos son donadores de protones y las bases son aceptores de pmtones.5 + 4. K.0 x 1 Oa m o l k de KOH? Los oxhidrilos proceden de dos fuentes: KOH y agua. que poseen el grupo acido fosfórico primario fuertemente acídico.log (3. -' que a menores a 25 O C . es menor de 10-'"mientras superiores a 25 O C . . es adecuada para la mayor parte de los estudios bioquimicos.0 = 3. Ca[OH]:). Para calcular el pH de una solucihn se debe: 1) Calcular la concentración del ion hidrdgeno.os valores de pH bajos corresponden a concentraciones elevadas de H. es preciso considerar los dos orígenes. = .2) .log Para resolver el problema bajo estc enfoque: W+l.2 x 1O-' mol/L? PH = . 2) Calcular el logaritmo de base 10 de ['.K = (1 0-'j2 = I O' (molJL)'.(-7) = 7.2 x lo4) = . No puede decirse lo mismo en el segundo caso Molaridad di:KOH [OH-] KC)H de [OH-1 del agua 2.0 x 1O4 mol/L? Para abordar este problema.la concentración de iones H' en agua pura es algo mayor de 1 mol/L. Por ejemplo. aunque no es rigurosa*. quien lo definió como el logaritrno negativo de l a concentraci~n iones hidrúgeno: de pH = . Dentro de las lim itaciunes establecidas por el efecto de la temperatura. Sin embargo. Ejemplo: cuál es el pH de una solución cuya concentracibn de ion hidrógeno es 3.5 - EL pH ES EL LOGARlTMO NEGATIVO DE LA CONCENTRACI~N DEL ION HIDR~GENO El término pH fue introdiicido en 1909 por Sorensen. H:SOd). Los siguientes ejemplos ilustran el modo de calcular el pH de soluciones ácidas y alcalinas. que se disocian completamente aun en soluciones muy ácidas (pH bajo) y los iicidos débiles. w] 3) El pH es el negativo del valor encontrado en el paso 2. Por ejemplo. Una distinción semejante se hace entre bases fuertes (por ejemplo. K. Dado que el pH esta determinado por el [HA] (y totai pOH por el [OH-] total). - * pH = -log (actividad dcl H +).0 Ahora: ]. es mayor de 1 O-". S610 las bases ruerics sc disocian a pH alto. Ejemplo: ¿Cuales son los valores del pH de a) 2. la contribucion del agua al [OH-] total es despreciable.log [H'] Ejemplo: ¿Cuál es el pH de una colucihn cuya concentracion de ion oxhidrilo es 4.0 x 1OA2mol/L de KOH y de b) 2.A 25 OC. se hace una distinción entre ácidos fuertes (por ejemplo.

es conveniente cxpresar a K como pK. cuando las especies asociada (protonada) y disociada (base conjugada) están presentes C u a d r o 3-1. aminos o fosfatos derivados de la disociación secundaria de esteres de fosfato. posteriormente. nbtese que: o cuando: entonces. Dado que los valores numéricos de K para hcidos débiles son exponentes negativos.--Acktico A Glutdrico Citrico (primero) 8. A la forma protonada de un hcido (por ejemplo. dicarboxílico y tricarboxílico. sus bases conjugadas (centro) y tos valores de pK (derecha) incluyen lo siguiente: Nótese que la relacibn de pK con respecto a K es igual a la de pH con la concentracion de H'. hcidos o bhsicos. A continuacibn se muestran las expresiones de la constante de disociacidn (K) para dos ácidos débiles representativos. tambihn los hay en la rnayoria de las coenzimas y los metabolitos intermediarios.o RNH?}.jemplo. se debe calcular la concentracidn de H (o ' de [OH-1) producida por una molaridad dada del hcido (o base) usando la constante de disociación antes de calcular [H'] total (o [OH-] total) y. Por tanto.08 . Constantes de disociacibn y valores de1 pK para ácidos carhoxllicos r e ~ r e s e n t a t k o s - . pero no para soluciones de acidos o bases dbbiles. el pM puede calcularse como se describid.80 x 1 3. donde: Los grupos funcionales que son ácidos débiles tienen un gran significado fisiológico Numerosos compuestos bioqulmicos poseen grupos funcionales que son ácidos o bases dkbiles. A-o RNH2) y su hcido conjugado (HA o RNH3'). Observese que los grupos hcidos más fuertes tienen los valores de pK mas bajos. es posible referirse a una base (por e. R-LOOH y R-NHJ-. De las ecuaciones anteriores que relacionan K a [ ' y a las concentraciones de un ácido no disociado H] y su base conjugada. base conjugada. De igual modo.40 x 1 O4 (segundo) 1. es fundamental -para comprender la influencia del pH intracelular en la estructiira y actividad bioquimica de estos compuestos. la palabra proviene del latln.(Capitulo 3) Una vez que se ha comprendido el significado de la contribucihn del agua. En otras palabras. En los ejemplos anteriores. Las potencias relativas de ácidos y bases dkbiles se expresan de manera cuantitativa como sus constantes de disociacibn. A. Su sepmtci&ne identificación en los laboratorios clinicos y de investigacidn se facilita tambidn cuando se conoce el comportamiento de disociacibn de sus grupos funcionales. El cuadro 3-1 enumera valores de K y pK ilustrativos para un ácido monocarboxílico. Esta aseveración es válida para soluciones relativamente diluidas de bases o ácidos fuertes. Dado que estos electrólitos dkbiles se disocian sólo un poco en soluci6n. el comportamiento de disociacibn (equilibrios protónicos) de grupos funcionales débiles. Los hcidos débiles representativos (izquierda). calcular el pH. HA o RNH?') se le designa como el hcide y a la forma no protonada (por ejemplo. que expresan su tendencia a ionizarse. la concentracion molar de iones OH-era igual a la concentración molar de KOH. por tanto. se asurni6 que la base Fuerte KOH estaba completamente disociada en la solución y que. cuniungre: reunirse). En todas las proteínas y ácidos nucleicos existen uno o más de estos: carboxilos.

log K = . el resultado describe la curva de titulación para un a ácido débil (figura 3-5). respectivamente. = La constante de equilibrio para esta disociacibn se escribe: 3) Cuando la proporción [A-]/[HA] = 1 : 10. Por ejemplo: 1) Cuando un hcido se ha neutralizado exactamente a la mitad [ A 7 = [HA]. pH PK.Agua y pH 23 en concentraciones iguales. La relación puede establecerse en la forma convenientede la ecuaci6n de Henderson-Hasselbalch. Un acido ddbil. En esta situacibn. El pH resultante seri igual al pK del ácido. luego: es decir. La ecuación puede quedar como: K = [H'] Se sustituye pM y pK en lugar de -log [Ht] y -lag K. la concentración prevalente de ion hidrógeno [H'] numh-icarnente iguat a la es constante de disociacion. el pK de un grupo 4cido es el pH al cual Ias especies protonada y no protonada esthn presentesen la misma concentración. (E) y Las soluciones de ácidos debiles sus sales amortiguan e pH l Las sofuciones de ácidos dkbiles y sus bases conjugadas (o de bases dtbiles y sus k i d o s conjugados) .toa I 4 H [A7 . Si se obtienen los logaritmos de los dos lados de la ecuacibn anterior y la ecuación completa se multiplica por -1. 1 [HAI pH = pK + log f l = p ~ + ~ o g ~ = p ~ + Por tanto. se ioniza de la manera siguiente: HA = H+ + A- La ecuaci6n de Henderson-Hasselbalch ha probado ser una expresión de gran valor predictivo en equilibrios protonicos. -log K se defínib como pK y -1og [H'] es la definicibn de pH.iog [HT Ahora. 2) Cuando la proporci6n [A-JI[HA] = 100:1.5 equivalentes de iilcali por cada equivalente de acido. El pK de un &ido puede determinarse de modo experimental agregando 0. que se desarrolla desputs. las expresiones serfan las siguientes: Se multiplica todo por -1 : . HA.lag K . K. Para eliminar el signo negativo se invierte el ÚItirno El comportamiento de ácidos dkbiles y de amertiguadores se expresan par la ecuación de Henderson-Hasselbalch El pH de una solucihn que contiene un Bcido débil se relaciona con la constante de disociaci6n de dicho acido. Se multiplican los dos términos entre si: pki = pK + log %o = PK + (-1) Se dividen ambos miembros entre [A-]: Se obtiene el logaritmo de toda la ecuacibn: log [H7 = log K Si la ecuación se valora en varias proporciones de [A-]/[HA] entre los limites 103 y 1O-? y los valores de pH obtenidos se grafican.109 [HT = . con 50% de neutralizacibn. como se mosirb antes para el agua como Acido débil.

20 0. Las soluciones de ácidos débiles y sus bases conjugadas amortiguan mejor en valores de pH que oscilan alrededor de pK k 2. La tensión superficial. proteinas plasmhticas y hemoglobinas anormales.12 0.70 0.176 0.69 pH inicial 5. . Forma general de una curva de tlulacibn calculada con la ecuación de Hende~on-Hasselbalch.0 unidades de pIJ del pH X. N o S son solvatados por el agua.80 0. es posible calcular el desplazamiento del pH que acompaiia a la adición de Acido o de base a una solución amortiguada.86 0.agregado varía de modo notable dependiendo del pH iniciai.33 4. la soluciOn resiste los cambios con mayor eficacia y se dice que ejerce un efecto amortiguador.10 0. Curva de titulación para un ácido del tipo HA El el punto (m) ~ndica pK 5.98 0. exhiben la propiedad de amortiguar -tendencia de una solrici6n para resistir con inayor eficacia a un cambio en el pH después de la ztdicibn de un Cicido o una base fuertes que un volumen igual de agua. ya que tienen la propiedad de servir como aceptores o donadores de hidrdgeno para formar puen- 5.6). el amortiguador (mezcla de un ácido débil.00 9.s no significa que una molécula individual posea una carga fraccionaria sino que 0.0 y su base conjugada se encuentra inicialmente en 1 de los 4 valores de pH indicados. Los '/~ amortiguadores no fisiolbgicos usados en experimentacibn bioquirnica comprenden al TRIS (pK S. pK = a 5. En la figura 3-6 se muestra la carga neta en una rnoltcula del ácido como funcihn del pH. A valores de pH próximos al pK.00 ([A-]l[HA])inlclal La adición de O. - Figura 3 4 . El efecto de amortiguador se observa mejor por titulacibn de un hcido o base débil utilizando rin potenciómetro (medidor de pH).tPQ4C2) y proteínas intracelulares.90 0. La consideración de la carga neta de macromoléculas como funcibn del pH constituye Ia base para numerosas tkcnicas de separación.0 unidades de pH.0.30 0. .24 Bioquinaica de Harper Figura 3-5. Una carga fraccionaria de -0. 1 mEq de KOH a 1 mEq de cadauna de estas soIuciones: RESUMEN El agua.40 [HAlfinai 49. En el ejemplo.02 0. .50 [HAI~nicia~ 7. estado líquido a temperatura ambiente y potencia solvente del agua se deben a su capacidad para formar puentes de hidrógeno.5 es la probabilidad estadística de que una rnolkcula dada tenga una carga negativa.60 [A-lfinai 0. incluyendo la separacibn electroforética de aminohcidos. deberfi usarse un Acido o una base débil cuyo pK no se separe mas de 2.88 0.602 0.20 0.. Los amortiguadores fisiol6gicos importantes incluyen bicarbonato (HCOi/H2C0i).69 pHfinal " 5. Ecto significa q u e para amortiguar una solución a pH X. Se calculará el desplazamiento del pH que resulta cuando se agrega O.33 2.00 1.18-_-5:60 5-95 6.50 ([A-[4HA])fina1 log ([A-]I[HA])n.t 0.60 5.00 [A-]inicial L~PH 0. forma puentes tanto con sus propias rnol~culas como con otros donadores o aceptores de protones.T meq de KOH produce 0. De manera alterna. Obskwese que el cambio de pH por miliequivatente de OH. .. viscosidad. que en !os estados liquido y sdlido existe como racimos rnoleculares unidos por hidrógenos.18---"6 0 0 .00 i.95 1.00 4.80 0.37 5. ortofosfato inorgánico ( H ? P O ~ .2) y al HEPES (pK 7. Los compuestos que contienen O.50 0.

Su potencia heida se expresa de manera cuantitativa con el simbola pK.4 0 0 . y nombran a los aceptores protónicos correspondientes ( R . R-NH.tes con el agua. La capacidad amortiguadora máxima a IT I unidad de pH en cualquier región de pK. e[ ortofosfato y las proteínas. el cual es el logaritmo negativo de su constante de disociación. Estos ácidos débiles desernpeíian actividades claves en el metabolismo. Los bioqulmicos consideran tanto a los hcidos carboxilicos (como el R X O O H ) como a las aminas (por ejemplo. expresa la acidez relativa. las bases conjugadas de estos ácidos. 1968 . Los ácidos relativamente fuertes tienen pK bajo mientras que en los relativamente débiles es alto. El agua se disocia para formar iones hidrdxido y protones hidratados de modo masivo. E1 agua modifica las propiedades de biomolkculas como las proteinas y los hcidos nucleicos que poseen gmpos funcionales polares y no polares. Las fuerzas entrópicas indican que las macrornoleculas en soluci6n acuosa se pliegan de modo que sus porciones polares entran en contacto con la interfasr acutisa. en tanto que sus porciones no polares se ocultan en el interior de la biomolCcula. El pH. Entre los amortiguadores fisiológicos importantes se encuentran el bicarbonato. Las proteínas y otras rnacromoteculas se estabili~an intercambio de eniaces de hidrbgeno por intermoleculares superficiales con los enlaces de hidrtigeno del agua. Los amortiguadores resisten los cambios en el pH cuando se producen o consumen protones. los cuales de manera convenciona! se representan como protones desnudos (H'). Un pH bajo denota una solución ácida y uno alto una solución básica o alcalina.') como bcidos.y R-NH2). Wiley. REFERENCIAS Segel 1M: Riocochemicnl Calculations. logaritmo negativo de [H'].

. . . .Enzirnas: mecanismos de acción . . . . 29 . . . . . . . . . . . Enzirnas: cinética . . . . . . . Enzimas: propiedades generales . . . . . . . . . 39 Capitulo 6 . . . . . . . . .Estructura y funciones . . . . . . . . . . . . . 119 Capítulo 4 Aminoácidos . . . . . . . . . . .Yéptidos . . . . . . . . . . .111 Capitulo 11. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Proteínas: estructura y función . . . . . . .Emzimas: regulacióln de actividades . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65 y Capitulo 8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77 Capitulo 9. . . . . . Capítulo S. . 51 Capítulo 7 . . . . . . . . . . . . . . . .Proteínas: mio~lobina hemoglobina . . .91 Capitulo 10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Victor W Rodwell, PhD

Una de las múltiples funciones de los arninohcidos en las ~Clulasvivientes es la de servir como unidades monómeraq a partir de las cuales se sinteticen cadenas pEipéptidicas de proteinas. La mayoría de las proteinas contienen. cn proporciones diferentes, los mismos 20 1,-al fa-am inokidos. Muchas protcinas específicas contienen además aminoicidos 1.-alfa derivados de algunos de los 20 aminoacidos basicos mediante procesos que tienen lugar después de la fbrtnacibn del esqueleto fundamental del polipéptido. Estos aminohcidos "poco habituales" satisfacen funciones altamente específicas de la proteína en cuestidn. El tipo de aminoácido, el orden en que se unen y su relación espacia1 mutua estableceii las estructuras tridimensionales y las propiedades biológicas de proteínas simples y son determinantes importantes de la estructura 4 fiinción de proteinas complejas que contienen aderntis de aininoácidos, hem, carbohidratos, Iípidos, ácidos nucleicos, etcktcra. Este capítuIo estudia las estructuras, propiedades fisicas, estereoquim ica, reacciones químicas y equilibrios iOnicos de los L-alfaaminoacidos presentes en las proteínas.

trastornos graves. Varias enfermedades genéticas. Telativamente raras, del catabolismo de arninoácidos (como la fenilcetonuria y la enfermedad dc la orina de jarabe de rnaple) producen, si no se tratan, retraso mental y muerte temprana. Otros padecimientos genkticos pueden deberse a la alteración de la capacidad para transportar aminoácidos específicos a las células. Dado que estos defectos de transporte por lo común causan una excreción urinaria exagerada de uno a más amino8cidos, a menudo se designan como aminoacidurias. Además de sus actividades como proteinas, los 1,-arninoacidos y sus derivados participan en runciones intraceIuIares tan diversas como Ia transmisión nerviosa, la regulación del desarro110 celular y en la biosintesis de porfirinas, purínas, pirimidinas y de urea. IdosI .-arninohcidos de pkptidos de peso moIecular bajo actúan como hormonas y tanto los aminoicidos ri como los l. esthn presentes en 10% antihioticos polipeptidos elaborados por microorganismos.

PROPIEDADES DE LOS

AMINOACIDOS

El código genético específica 20 L - a l f a - a m i n o á c i d o s
La alimentación humana debe coniencr cantidades adecuadas de 1 0 1,-alfa-aminoácidos esenciales, ya que, ni el ser humano ni los demás animales superiores pueden sintetizarlos en las proporciones necesarias para mantener el crecimiento infantiI o conservar la salud en los adultos. En forma de proteinas, los aminoAcidos realizin una multitud de funciones estructurales, hormonales y cataliticas esenciales para la vida. Por tanto, no sorprende que defectos genttícos en el metabolismo de los aminoacidos puedan conducir a Aunque existen más de 300 arninoácidosdiferentes en la naturaleza, sólo un subconjunta de 20 constituye las unidades monomericas a partir de las cuales se construye el esqueleto básico de las proteínas polipeptidicsts. Un cbdigo genetico de tres letras no repetidas podría incluir más de 20 arninoacidos, pero la redundancia en el código genetico universal limita los codones de arninohcidos disponibles a los 20 arnino8cidos L-alfa que se presentan en e1 cuadro 4-1. Por consiguiente, todas las proteinas contienen diferentes pro-

30

Bioquimic.a de Harper

(cupí6ul 4) o

r i i s d rn 4-1.r.-alfa-~m~no"ácidos presentes
- - -- -

en las proteina~i --

I

iula estrur

Alanina

Lc---.:-'.

I,eu [l

'
i

.

-

-

- .

I--. 2.3
2

m

I -..---- 9.8

Con crdcnas laterales que tienen grupos bidroxila [OH)

1 ;
I

Se?-

Scr FS'

nI

I

CkI2&.
OH

!
Treonina Tre 1 7

I

.NHI

l

i
2.1

~m~-CH-ch'1

I

9.1

Casi 13

.

Tir
Con cadenas laterales que contienen 4tomnr de azufr*

ci:

Cis [C

CH,-CH-

8.3

i
A

~n,-CH2-W S I

-. - -- Con cadenas laterales que contienen grupos hcidos o sus amidas I
A--

Metionina -

~

"

e [I t

2
1.u

,Y.Y

ÁCido asphrtil

o [

I

Asparagina

Asn

Ac ido gIuiárnico Glu [E

Glutamina

A -

1 :on cadenais IatcralejI que conti
NombriLI_- Silmbolo

-

u

Cuadro 4-f. t-milfa-Aminohcidos presentes en las proteínas (continuación) ---.*u..--. -A

'

.

"

A-----A

-."..".

1 A r e m1

1
1 istidina iue contiei

1

Lis 1

Fistidina

icos 1 VCase desputs

F

Tirosina

rolina

porciones de estos 20 L-alfa-aminoAcidos. Sin embargo, ciertas proteínas contienen, además, aminohcidos L-alfa "poco habituales" originados en algunos de los 20 aminoácidos básicos mediante un procesamiento postraslacional (o sea, un proceso que tiene lugar despues de la fomaci6n de un esqueleto de polipép tidos). Un ejemplo frecuente es la cistina, que se produce por oxidacibn a partir de los grupos S H de dos cistefnas para convertirse en una unibn -S-S(disulfuro). Otros aminoficidos modificados menos comunes o "poco habituales" tambidn cumplen funciones muy especificas en las proteínas donde se encuentran. Algunos casos de modificaciones postraslacionales son la metitación, la formilaci6n, la acetilacibn, la psenilacidn, la carboxilacibn y la fosforilacibn (capítulo 40).

En las proteínas sólo existen L-alfa-aminoácidos
Los aminohcidos contienen grupos funcionales amino y carboxilo. En un alfa-aminoAcido, ambos esthn unidos al mismo atomo de carbono (figura 4-1).

R-CI

NH,

COOH

R

o

Flgura 4-1. Dos representacionesde un alfa-aminoAcido.

(Capífulo 4)

Se dice que un átomo de carbono que tiene cuatro sustituyentes diferentes es un carbono quiral. Con excepcion de la glicina, para la cual R es un átomo de hidrógeno (figura 4-l), los cuatro grupos unidos al átomo de carbono alfa de los aminoácidoc son diferentes. Esta orientación tetraedrica de cuatro grupos distintos alrededor del carbono alfa le confiere actividad óptica (la capacidad de rotar el plano de la luz polarizada) a 10s aminoácidos. A~inque las proteien nas se han encontrado algunos aminoácidos dextrorrotatorios y algunos levorrotatorios a pI.1 7.0, todos tienen las configuraciones absolutas del bgliceraldehido por lo cual son L-alfa-aminoacidos. Dado que los u-aminoicidos existen en la naturaleza e inclusive en antibióticos polipeptldicos, ¿por q u e se encuentran sOlo L-aminoácidos en las proteínas? Los autores proponen la hipbtesis dc quc los L - a m i n o a c i d o s f u e r o n s e l e c c i o n a d o s por un fenómeno, en cierta manera fortuito, que tuvo lugar a muy temprano durante la evolución de E vida.

Figura 4-2. Estructura ionicamente correcta para un aminoacido a pH fisiológico o cerca de el (A). La estructura sin carga que se muestra en (B) no puede existir a ningún pH, pero es posible usarla por conveniencia cuando se describe la quimica de los aminoacidos

un grupo carboxilo estará presente como ion carboxi-

lato (R-COO-). Sin embargo, por conveniencia se utiliza la representación i para numerosas ecuaciones 3 en las que no intervienen los equilibrios protbnicos.

Los aminoácidos pueden tener carga neta positiva, negativa o cero
Los aminoácidos portan por lo menos dos grupos Bcidos débiles ionizables, un -COOH y un -NHq'. En solucibn, dos formas de estos grupos, una con carga y otra sin carga. existen en equilibrio protónico:
R-COOH R-NH3'

Las fuenas relativas de los icidos débiles se expresan en términos de su pK,
Las fuer7as relativas de los icidos dhbilec son expresadas en tkrminm de sus constantes de disociaci6n de ácidos, K,, o de su pK., que es simplemente el log negativo de la constante de disociación, esto es.

-

R-COO-

+ H'
El cuadro 4-1 enumera los valores de pK para los grupos funcionales presentes en los 20 arninohcidos de las proteinas. Por conveniencia, el subindice a en K, y pK, queda implicito, pero se omitirá de aquí en adelante. La figura 4-3 iIustra Ias formas protonadas de los grupos R imidazol de la histidina y el grupo R guanidino de la arginina. Ambos existen como híbri-

e R-NH2

+H '

R-COOH y R-NHit representan los miembros protonados o acídicos en estos equilibrios. El R-COOy el R-NH2 son las bases conjugadas (es decir, los aceptores dc protones} de los ácidos correspondientes. Aunque el R X O O H y el R-NHj' son Acidos dhhiles, el R-COOH es un acido con mayor fuerza que el R-NH]'. Al pH de1 plasma sanguíneo o del liquido intracelular (7.4 y 7.1, respectivamente), los grupos carboxilos existen casi enteramente como iones carboxilato, R--COO-. A estos valores de pH, la mayoría de los grupos amino estfin predominantemente en la f o m a proíonada, R-NH?'. Las especies ionicas prevalentes de los aminoácidos en la sangre y en la mayoria de los tejidos, deberán representarse como se muestra en la figura 4-2A. La estructura E3 (figura 4-2) no puede existir a ningún pH. En un pH suficientemente bajo para ionizar al grupo carboxilo, el grupo amino con el Bcido r h débil tambien se protonaría. A un pH n dos unidades por debajo de su pK,, un hcido estarh protonado aproxiniadamente 99 por ciento. Si el pH se eleva de manera gradual, el protbn del ácido carboxílico se perderh mucho tiempo antes que el del R-NH3'. A cualquier pH bastante alto para que predomine [a base conjugada sin carga del grupo amino,

NH

I C - NH,

!I

-

NM

1 0
C=NHi,

=

NH

i. :o
1:

I
N'%

G~NH,
NH2

ONH,

Figura 43. Hlbridos de resonancia de las formas protonadas de los grupos R de histidina y arginina.

dos de resonancia, por lo que se pueden representar como se muestra a la derecha, con la carga positiva distribuida entre ambos nitrógenos (histidina) o sobre P los tres nitrogenos (arginina). La carga neta (la suma algebraica de todos los gnipos con cargas positivas y negativas que se encuentran presentes en la moléculaj de un aminoacido depende del pH o de la concentraci6n de protones de la solucihn en que se encuentren. La capacidad de alterar la carga de los aminoáicidos o de sus derivados por manipuIacíón del pH facilita la separación fisica de aminoácidos, péptidos y proteínas.

En este ejemplo.

Este procedimiento es uti! para todos los aminoácidos con grupos disociables adicionales, como la lisina o la histidina. Qespuks de escribir las fórmulas para todas las especies cargadas posibles de los arninoacidos lisina y arginina, se observa que:

A su pH isoelectrico (pl), un aminoácido tiene una carga neta de cero
Para un aminohcido aIifático como la alanina, la especie isoeléctrica es la forma que se muestra en la figura 4 4 . El pH isoeléctrico es el pH que esta en medio de los valores de pK de ambos lados de la especie isoeléctrica. Para un aminohcido con s61o dos grupos disociables, no puede haber ambigüedad posible, como se muestra abajo en el cálculo del p l para la alanina. Dado que p K l (R-COOH) = 2.35 y pKz(R-NH,') = 9.69, el pH isoeléctrico (pl) de la alanina es:

El calculo del pl para un compuesto con más de dos grupos disociables tiene una posibilidad mayor de m o r . Por ejemplo, considerando la figura 4-5, ¿cuál podria ser el pH isoeléctrico (p1) para el Acido aspartico? Primero, se escriben todas las estructuras ibnicas posibles para un cornpiiesto en el orden en el cual se presentan cuando se va de una solución fuertemente acida a una solución alcalina (por ejemplo, para el ácido aspártico en la figura 4-5). A continuación, se identifica la representaci6n isoibnica, zwitterionica o neutra (como en la figura 4-58). El pI es el pH que esta en medio de los vaiores de pK de ambos lados de las especies isoiónica.

Para la Iisina, el pl es 9.7; para la arginina es 10.8. El ectiidiantc deberli determinar el pl para la histidina. Determinar por inspección de las estructuras cargadas, los valores de pK a ambos lados del zwitterion, no se limita a los aminoicidos. Puede ser aplicado al cálculo de la carga de una molécula con cualquier numero de grupos disociables. [,a capacidad de realizar cálculos de este tipo es valiosa en el laboratorio clínico para predecir la movilidad de los compuestos en los campos elkctricos y para seleccionar Iris arnortiguadores apropiados para Ias separaciones. Por ejemplo, un amortiguador a pH 7.0 podria separar dos moleculas con un pl de 6 y S, respectivamente, debido a que la molécula con pl = 6 tendrfi una carga negativa neta mayor a pH 7.0 que la molécula con pl = 8. Consideraciones análogas se aplican a la comprensión de separaciones sobre soportes ibnicos como las de polimeros con carga positiva o negativa (por ejemplo, celulosa DEAE o resina 1 Dowex).

La solubilidad y el punto de fusión de los aminoácidos reflejan su carácter iónico
Dado que los aminoácidos poseen múltiples grupos con carga, se solvatan con facilidad y, por tanto, son solubles en solventes polares como agua y etanol, pero insoluhles en solventes no polares como benceno, hexano y &ter.Sus elevados puntos de fusidn (> 200 "C) reflejan la gran cantidad de energía necesaria para romper las fuerzas iónicas que estabilimn la red cristalina.

O

II

Fiqura 4-4. Estructura isoeléctrica o "zwttteri6nica" de la alanina Aunque tiene carga, el zwitterlbn Presenta una carga neta igual a cero y por consiguiente no emigra en u n campo elkctrico de corriente directa.

LOS AMINOAGIDOS PUEDEN CLASIFICARSE POR LAS POLARIDADES DE SUS GRUPOS R
dividirse en dos Los aminoficidos proteinicos amplios grupos de acuerdo a la polaridad o no polari-

34

Bioquimica de Hurper

(Capítulo 4)

En actdo fuerte (menor de pH 1); carganeta=+ 1

Aproximadamente pH 3: carga neta = O

Aproximadamente pH6a8 carga neta = -1

En hlcali fuerte (arriba de p i1); W carga neta = -2

Figura 4-5. Equilibrio protbnico del Bcido asplrtico.

dad de los grupos R adheridos a los átomos de carbono alfa (cuadro 4-2). Las abreviaturas de una sola letra (cuadro 4-1) se emplean para representar secuencias extremadamente largas de arninoacidos (por ejemplo, para anotar la secuencia completa de aminoacidos en una proteína). Los aminoácidos que se encuentran en estados libre o combinado (pero no en proteinas} desempefían funciones importantes en los procesos metabólícos. Por ejemplo, la ornitina, la cimilina y el arginosuccinato participan en la formación de la urea. Hay mas de 20 u-aminohcidos en la naturaleza, los cuales incluyen D-alanina y D-glutamato de las paredes celulares de ciertas bacterias y varios D-aminoácidos de antibióticos.

LOS GRUPOS ALFA-R DETERMINAN LAS PROPIEDADES DE CADA AMINOACIDO
La glicina, el más pequefio de los aminoácidos, puede encajar en regiones de la estructura tridimensional de las proteinas inaccesibles para otros aminoácidos y se

Cuadro 6 2 . Ctasificaci6n de los alf fa-aminohcidos

presentes en las proteinas con base en su relativa liidrofilicidad (tendencia a asociarse con el agua) o hi dad (tcnd encia a asociarse a I qte no polar en lugar de agua) .
-

- FIidrbfotLis.A lanina F :niIalanina r 1solcucina

l

-

"

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-

"~

. .. . .

-

- .

1' w : 3 . . c E , . -

Lc M PI Ti Triptófano Valina

do aspártic o Áci do glutamico ,inina imagina Cisi:eina Glic:ina G lutamina

Histiclina
Cisinia
Serin. -reora 1 iína

encuentra en regiones donde tos pdptidos se doblan en forma aguda. Los grupos R alifáticos de alanina, valina, leucina e isoleucina y los gmpos R aromáticos de fenilalanina, tirosina y triptdfano son hidrof6bicos, propiedad que tiene consecuencias importantes para el ordenamiento de !as moldculas de agua de las proteinas que estan en la vecindad inmediata. Es tlpica la presencia de estos aminohcidos en el interior de proteinas citosólicas. Los grupos R con carga, de los aminoácidos básicos y acidicos, estabilizan las conformaciones proteínicas especificaspor intermedio de la formación de enlaces salinos. Por ejemplo, la rotura y reconsúucciSn de enlaces salinos que acompafla a la oxigenación y desoxigenación de la hemoglobina (capitulo 7). Además, los aminokidos con grupos Rde cargapositiva o negativa funcionan en los sistemas de "transmisibn de carga" que las transportan a distancias considerables durante la catálisis enzimática. Por último, la histidina tiene funciones unicas en la catalisis enzimática, debido a que el pK de su protón imidazblico le permite, a pH 7.0, funcionar alternativamente como base o como acido catalitico. El grupo alcohol primario de la serina y el grupo tioalcohot primario (-SI+) de la cistelna son nucleófi los excelentes y pueden funcionar como tales en muchos procesos de la catklisis enzimhtica. Aunque el alcohol secundario de la treonina es tambitn un buen nucleófilo, no se sabe que se comporte como taI en la catálisis. Además de su papel catalitico, el grupo 4 H de la serina y de la tirosina actúa en la regulación de la actividad de ciertas enzirnas cuya acción catatitica depende del estado de fosforilación de residuos seril o tirosil especificas. Los arninohcidos no absorkn la luz visible (es decir, son incoloros) y, con excepcibn de los arninoficidos aromaticos triptófano, tirosina, fenilalanina e histidina, tampoco absorben la luz ultravioleta de una longitud de onda mayor de 240 nm. Varios aminoAcidos, particularmente el triptdfano, absorben luz ultravioleta de longitud de onda de alta frecuencia (250 a 290 nm) (figura 4 4 ) . Aunque el triptofano es relativamente

dos también reaccionan, pero con mayor lentitud que un alfa-aminoácido. La prolina y la 4- hidroxiprolina producen un color amarillo con ninhidrina. La fluorescamina (figura 4 - 9 , un reactivo aun más sensible, puede detectar nanogramos de un aminohcido. Igual que la ninhidrina, S fluorescamina a f u m a un complejo con arninas de otros compuestos además de los arninoácidos.

VARIAS TÉCNICASAISLAN LOS AMINOACIDOS
Crornatog rafía
240
260
Longitud de onda (nm)

280

Figura 4 4 . Espectrode absorcidn ultravioleta del triptbfano, tirosina y fenilalanina.

poco común en la mayoria de las proteínas, contribuye de manera importante a la capacidad de muchas de ellas, para absorber h z en la región de los 280 nm.

En todas las separaciones cromatográficas, las moldculas son separadas dentro de una fase estacionaria y una rnbvil. La separacion depende de la tendencia !elativa de tas moléculas en la mezcla para asociarse con mayor fuerza a una o a otra fase. Aunque estas tkcnicas de separacidn se describen principalmente en reIaci6n con aminoácidos, su uso de ninguna manera está restringido a estas moléculas.

Cromatografía en papel

LA NlNHlDRlNA O LA FLUORESCAMINA DETECTA LOS AMINOACIDOS

La ninhidrina (figura 4-7) descarboxila por oxidación los alfa-aminohcidos a Coz, NN3 y un aldehido con un htomo de carbono menos que el arninoficido precursor. Luego, la ninhidrina reducida reacciona con el amoniaco liberado, formando un complejri azul que absorbe al rnkirno la luz a una longitud de onda de 570 nm. Este color azul es la base de una prueba cuantitativa para alfa-aminohcidos que puede detectar cantidades de aminoAcidos tan pequeflas como 1 pg. Otras arninas distintas a los alfa-aminoicidos también reaccionan con ninhidrina dando un color azul, pero sin liberar Coz. tanto, la formación de COZindica Por E presencia de un alfa-aminohcido. El NH, y los péptia

Para la cromatografia en papel, se coloca una gota de solucibn que contenga uno o mas aminokidos a unos 5 cm del borde de una tira de papel filtro. La tira se coloca en un vaso cerrado donde su extremo entra en contacto CUII un solvente, generalmente un alcohol de bajo peso molecular en solución saturada con agua que contiene un ficido o una base. Despds de la migración del solvente sobre el papel, se seca la tira, se trata con ninhidrina en acetona y se calienta un poco; entonces las posiciones de los arninoácidos aparecen como puntos de color purpura (figura 4-9). Los aminoácidos con grandes cadenas laterales no polares (Leu, Ile, Fen, Tri, Val, Met, Tir) emigran m& que los que tienen cadenas laterales mas cortas no polares (Pro, Ala) o cadenas laterales polares (TE, Glu, Ser, Arg, Asp, His, Lis, Cis) (figura 4-9). Esto

Figura 4-7. Ninhidrina.

Figura 4-8. Fluorescamina.

(Capítulo 4)

sentidode rnigracibn
del solvente

1
*
)

1

-origen

Cis

fases liquidas: una estacionaria y otra móvil de polaridad diferente, conforme la fase móvil pasa sobre [a estacionaria. La separacidn se produce por la diferencia de solubilidad de los componentes en las fases estacionaria y móvil. En la CCFP nonnal, la fase ectacionana es el componente más polar. El solvente desarrollado contiene ambos elementos: polares y débilmente no polares, típicamente agua, un alcohol de 4 o de 5 carbones y
un Acido débil o una base débil como ácido acético o arnoniaco. Conforme se desplaza sobre la placa de apoyo, el solvente cambia de composición debido a los elementos más polares que acornpairan a los grupos - O H polares de la celulosa. Por tanto, el solvente que avanza paulatinamente se convierte en más no polar. Los componentes más no polares de una mczcIa se desplazan mLs lejos que los componentes mas polares de igual tamafio. Por ejemplo, el glutamato y la lisina se retardan, en tanto que la leucina y la valina migran junto con el solvente. En la CCFP en "fase reversa", tanto las polaridades de las fases como las movilidades de los componentes de la mezcla se revierten respecto a la CCFP normal. La fase móvil suministra la fase polar. La fase estacionaria, por lo común celulosa recubierta con un líquido no polar como el aceite de silicon, suministra la fase más no polar. En contraste con la CCFP normal, los componentes polares rnigran con el solvente en tanto que se retrasa el desplazamiento de los componentes menos polares. En la CCF de absorción (CCFA), la separacidn se basa en un principio totalmente diferente. La resolucibn implica absorber los componentes de la mezcla en gel de sílice que se calienta para expulsar toda el agua fija. La fase móvil, típicamente una mezcla simple o binaria de calventes organices, desplaza los compuestos absorbidos compitiendo por los sitios de unibn sobre el gel de sltice. Primero se desplazan los componentes unidos con menor firmeza y asf se logra la resolucibn.

-Iir
Met

4
Tri
'

Figura 4-9. ldentificacibnde los aminoAcidos presentes en las proteínas DespuBc de crornatwrafia descendiente en papel, en A-butanol. ;ícido acético. agua, las manchas fueron vistas al añadir ninhidrina

refleja la mayor solubilidad relativa de las moltculas polares en la fase estacionaria hidr6fila y de las moI&culas no polares en solventes orgánicos. Para una serie no polar (Gli, Ala, Val, Leu), a mayor longitud de !a cadena lateral no polar se incrementa su caracter no polar lo cual aumenta su movilidad. La relacibn entre la distancia recorrida por un aminohcido con la distancia que viaja ei solvente, medidas ambas desde el sitio marcado para la aplicacibn de la rne7cla de arninoácidos, se designa como valor RF (movilidad relativa con el solvente) de ese aminohcido. Los valores RFpara un aminohcido dado varían de acuerdo con las condiciones experimentales, por ejemplo, según solvente usado. Aunque es posible identificar es tentativamente un aminohcido s61o por su valor RF, preferible hacer la cromatografia estandar de aminoácidos conocidos de manera simultáneacon la mezcla desconocida. Luego, la movilidad puede expresarse en relacion a la de uo esthndar (es decir, como RI,m8s que como Rf). Las movilidades expresadas como relativas a un estAndar varían menos que los valores Rf de un experimento a otro.

Cromatografía de intercam bia ionico
El anhlisis de los residuos de aminolicidos despuks de la hidrólisis de un polipéptido, por la general involucra a la crornatografía automatizada d e intercambio i6nico. La separación, identificación y cuantiticación completas requieren menos de tres horas. EI procedimiento de Moore y Stein utiliza una columna corta y una larga las cuales contienen la forma ionizada de Na" de una resina de poliestireno sulfonatada. Cuando e ácido hidrolizado a pH 2 se apZica a las columnas, 3 los arninoácidos se unen mediante el intercambio de cationes con el catión Na'. Las columnas se eluyen despues con citrato de sodio bajo condiciones prede-

Cromatografía en capa fina
Hay dos tipos distintos de cromatografia en capa fina (CCF): CCF de partición (CCFP) y CCF de absorción (CCFA). En Ia CCF de partfcion, la resolucibn implica

particihn de los elementos de una mezcla entrz dos

Aminoácidos

* 37

terminadas de pH y temperatura. El material eluido se hace reaccionar con la solucibn de ninhidrina y las densidades de la coloración se miden en un colorimetro de flujo. Los datos aparecen en un tubo de sayos catbdicos con integración relacionada con cornputadora de las áreas pico (figura 4-1 0 . )

Electroforesic de alto voltaje (EAV)
Las separaciones de aminoacidos, polipkptidos y otros anfhlitos (moléculas cuya carga neta depende del pH del entorno) en un campo el6ctrico de corriente directa tienen extensa aplicación en bioquimica. Para los aminoCicidos. las hojas de papel o capas finas de celulosa en polvo son las que se usan Con mayor frecuencia como soportes inertes. Para poliptptidos grandes o proteínas, se emplea gel de poliacrilamida con enlaces cruzados. Para oligcimeros de nuclehtidos se utilizan soportes de agarosa y poliacrilarnida. Las separaciones dependen de la carga neta del anfólito y del peso molecular de los compuestos que seran separados. Para molécuIas con carga idéntica, la de peso molecular más bajo emigra más lejos. Sin embargo, la carga neta es el factor mas importante que determina la separación. Esta técnica es htil para aminohcidos, polipeptidos de peso molecular bajo, ciertas proteínas, nucleótidos y fosfoazúcares. Las muestras se aplican a! soporte, que a continuación se humedece en una solución amortiguadora de un pH apropiado y se pone en contacto con reservorios de amortiguador

mediante tiras de papel. El papel puede cubrirse con una placa de vidrio o sumergirse en un hidrocarburo refrigerante. Al aplicar lacorriente, las mol&culascon carga negativa neta al pH seIeccionado, emigran hacia el Iinodo y aquellas con carga positiva neta, hacia el chtodo. Para visualizar la separacidn, el electroferograma ya seco es tratado con ninhidrina (aminohcidos, péptidos) o expuesto a la liiz ultravioleta (nuclebtidos). La elección de pH es dictada por los valores de pK de los grupos que se disocian en las rnol&culasde la mezcla.

LOS GRUPOS FUNCIONALES DETERMINAN LAS REACCIONES Q U ~ M ~ C A S LOS AMINOACIDOS DE
Los grupos funcionales que poseen los aminoácidos gobiernan las reacciones quimicas en las que participan, las funciones Bcidas alfa-amino y alfa-carboxílica y los grupos Funcionales presentes en los grupos R. Cada grupo funcional puede participar en todas sus reacciones químicas características. Estas reacciones incluyen para los grupos del Iicido carboxílico, la ionización y ia formación de &teres. amidas y anhidridos ficidos. Estas reacciones incluyen la ionizaciiin, la acilacibn y la esteri ficacibn d e grupos amino, oxidacibn y alquilación de grupos -SH, y esterificacibn de grupos -OH, etcétera.

Figura 4-10. Anhlisis automatizado de los aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteínas. Los arninoacidos se adsorben en una resina intercambiadora de cationes en una base de poliestireno, Dowex 50, se eluyeron con amortiguadores del pH indicado, se sometieron a reaccidn Con ninhidrina y se registr6 la absorbencia a 570 y 440 nrn (para detectar prolina). Las hreas máximas son proporcionales a la canttdad existente de cada aminoácido. Una columna corta (A) determina arninoAciUoc bastms a pH 5.28. La elución de una columna mBc larga (B) a pH 3.25 y 4.25, identifica los amino8cidos restantes. El aminohcido no proteinico norleucina sirve como estBndar intenso

38

Bioquímica de Hurper

comprender la conversion previa en un cloruro de acido. En los procesos biolbgicos, la activación comprende una condensación inicial con ATP con la formacibn de un am inoaciladenilato.

RESUMEN
Sblo los L-alfa-aminoácidos forman las protelnas, aunque en la naturaleza existen o-aminoácidos y no al fa-aminoácidos. Todos los aminoácidos poseen por lo menos dos grupos funcionales acidos débiles, RNHH y R-CQOH, que, para los arninoacidos protelnicos, residen en el átomo de carbono alfa. Adernas, estos y otros grupos funcionares hcidos ddbiles ( 4 H , -SH, guanidino, imidazol) determinan que la carga neta en un aminoácido varíe con el pH. Por tanto, los arninoacidos son anfhlitos cuya carga neta a un pH dado depende de los valores de pK, de sus grupos funcionales. El pI es el pI4 en el que un amínohcido tiene e una carga neta igual a cero y por ende no s mueve en un campo elkctric~ corriente directa. de AdernBs de determinar las relaciones de carga y las clases de reacciones qulmicas que un aminohcido experimentará (por lo cual la formación del enlace peptidico es de suma importancia}, los grupos R y sus funcionalidades definen las funciones bioauimicas únicas para cada aminohcido. Las funcionalidades del grupo R proporcionan también una base para clasificar a los aminoácidos como básicos, ácidos, aramhticos, alifáticos y con contenido de azufre. Después de la separacion de mezclas de aminohcidos por particihn o cromatografia de intercambio iónico, estos compuestos pueden detectarse y cuantificarse por su reaccibn con ninhidrina. E

Figura 4-1 1. Aminoicidos unidos por un enlace peptídim (porei6n sombreada).

LA REACCION MAS IMPORTANTE DE LOS AMINOACIQOS ES LA FORMACIÓN DEL ENLACE PEPTIDICO
En principio, la formacion del enlace peptídico comprende la eliminacion de un m01 de agua entre el grupo aIfa-amino de un aminoácido y el grupo alfa carboxilo de un segundo aminoácido (figura4-11). N o obstante, esta reacción no procede en esta direccibn, ya que la constante de equilibrio favorece con firmeza la hidrólisic del enlace peptídico. Para sintetizar la unibn entre dos aminohcidos, primero debe activarse el grupo carboxilo. Desde el punto de vistaquimico, esto puede

REFERENCIAS
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Rattenbury 1981.

JM: Amrno Acid

Analysis. Halstcad Press,

Péptidos
. .

Vicior W. Rodwell, PhD

La polimerización de los L-alfa-aminoácidos por enlaces peptidicos constituye el marco estructural para las proteínas. Este capitulo describe las características de estos enlaces, las propiedades de los péptidos, los m&todos para deteminar la estructura primaria de los mismos y de las proteínas así como las tdcnicas para la sintesis de péptidos.

LOS L-ALFA-AMINOACIDOSSE UNEN MEDIANTE ENLACES PEPT~DICOS PARA FORMAR LOS PEPTIDOS
En la figura 5-1 se muestra un tripkpcido constituido por alanina, cisteina y valina. Advierta que un tripdptido es aquél formado con tres residuos. no con tres enlaces peptidicos. Por convencion, las estructuras peptidicas se escriben con el residuo amino-terminal (el residuo con un gmpo de alfa amino libre) a ta izquierda y con el residuo carboxiío terminal (et residuo con un gmpo alfacarboxiIo libre) a laderecha. Este péptido tiene un solo grupo alfa amino libre y un solo grupo a3fa carboxilo libre. Sin embargo, en algunos péptidos, los grupos terminales arnino o carboxilo pueden derivarse (por ejemplo, una amina N-fomilo o una amida del gmpo carboxilo) y por tanto no están libres.

Idos pdptidos tienen un enorme inteds biornédico, en particular para endocrinologia. Muchas de las hormonas son péptidos y pueden suminislrarse a los pacientes para corregir deficiencias (como la administración de insulina a pacientes con diabetes sacarina). Ciertos antibibticos son peptidos (por ejemplo, la valinomicina y la gsamicidina A), igual que algunos agentes antitumorales (como la bleomicina). Por su parte, el dipéptido aspartame se utiliza como edulcorante en muchas bebidas. La dpida síntesis quirnica y la tecnologia de recombinacibn del DNA facilitan la producción de cantidades sustanciales de hormonas peptídicas que en el cuerpo existen solo en concentraciones rninimas, por lo cual son dificiles de aislar en cantidad suficiente para usarse en teraptutica. La misma tecnologia permite la slntesis de otras péptidos, también disponibles de fuentes naturales, pero solo en cantidades pequeilas (es e caso de ciertos E peptidos y proteínas viralec), para usarse en vacunas.

Alanil

Cisteinil

Valloa

Figura 5-1. Fbrmula estructural de un tripkptido. Los enlaces peptídicos están sombreados para enfatizarlos.

Las estructuras de los péptidos son fáciles de representar
Por conveniencia, los peptidos se representan con su terminal amino a la izquierda y la terminal carboxilo a la derecha de la página. Para mostrar las estructuras de los péptidos, primero se dibuja la cadena principal o esqueleto y en seguida se agregan los grupos R apropiados. Escriba un zig-zag formado a partir de la secuencia de Atomos que se repite en el esqueleto o cadena principal: alfa-nitrbgeno, alfa-carbono, carbiin carbonilo.

alanilo, aspartilo, tirosilo). Los ptptidos reciben su nombre como derivados de la terminal carboxilo del residuo aminoacilo. Por ejemplo, el tmapéptido LisLeu-Tir-Gln se denomina como derivado de la glutamina y se le llama lisil-leucil-tirosil-glutamina. La terminación -ina en la glutmina indica que su grupo atfa-carboxilo no participa en la formación del enlace del péptido.

La estructura primaria afecta la actividad biológica
La mutación del DNA que altera codones puede producir la inserción de grupos aminoacilo inapropiados en un polipkptido o proteina. Aunque a menudo no tiene el mayor efecto biolbgico, en ocasiones incluso una sola sustitución puede reducir o abolir la actividad bioE6gica con efectos resultantes leves (es el caso de la intolerancia al alcohol en muchos asihtiticos) o mhs serios {como la enfermedad de ckluIas falciformes). Muchos errores metab6licos hereditarios comprenden un cambio sencillo de este tipo. Ai respeczo. b s nuevos mdtodos para determinar la estructura proteinica y del DNA han incrementado de manera notable la comprensión de la bioquimica de numerosas enfermedades metabolicas hereditarias.

Después, se completan las terminales atnino y carboxilo, se agrega un hidrogeno a cada uno de los alfacarbonos y a cada nitrógeno del pbptido; ademhs se añade oxígeno a los carbonos carbonilos.

Para dar nombre a los aminoácidos existentes en los péptidos se utilizan abreviaturas
Por ultimo, se incluyen los grupos R apropiados (con sombra) a cada átomo de alfa-carbono.

l C /c\ /N\ \ / COQN C

Se utilizan las abreviaturas de 3 y de 1 letras de los aminolicidos (cuadro 4-1) para representar las esmcturas primarias (figura 5-2). Las abreviaturas de tres letras ligadas por líneas rectas, qresentan una estructura primaria conocida e inequlvoca. Estas líneas se omiten para las abreviaturas de una sola l&a. Cuando hay
incertidumbre acerca del orden preciso de una porción de un polipkptido, los residuos en duda se encierran en parentesis y separados por comas (figura 5-3).

/ c\
/ Ci-h

H

O

l

H/C\cY I

Numerosos péptidos tienen actividad fisielogica La secuencia de aminoácidos determina la estructura primaria de un péptido
Cuando el número, estructura y orden de todos los residuos de aminoácidos en un polipéptido se conocen, su estructura primaria ha sido determinada. Los aminoácidos cuyos grupos alfa-carboxilo participan en la formacibn de los enjaces del péptido se designan "residuos aminoacilo". Estos se denominan mediante la sustitucibn de las terminaciones -ato o -ina de los arninohcidos libres, por la terminación -ilo (como

Las cklulas animales, vegetales y bacterianas contienen diversos polipkptidos de peso molecular bajo

Glu-Ala-Lis-Gli-Tir-Ala

E A K G Y A
Figura 5-2. Representacibn de 3 y 1 letra de un hexapbptido.

Figura 53. Heptapeptido que contiene una regidn de estruci tura primaria incierta (en el parbntesis)

(3 a 100 residuos aminoacilos) que tienen actividad fisioldgica importante. Algunos, incluyendo la mayoría de las hormonas polipeptidicas de tos marniferos, contienen solo enlaces peptidicos formados entre los grupos alfa-amino y alfa-carboxilo de los L-aifa-aminohcidos de las protelnas. Sin embargo, en los polipéptidos también pueden existir aminoacidos o derivados de aminohcidos proteinicas adicionales. El glutatihn (figura 541,en el cual el glutamato amino-terminal estB enlazado a la cisteína por un enlace alfa no peptidico, es requerido por varias enzimas. El glutatión y la enzima glutatibn reductasa participan en la forrnacibn de los puentes disulfuro correctos de numerosas hormonas proteinicas y polipeptidicas así como tarnbidn en el metabolismo de los xenobióticos (capitulo 6 1). Los antibióticos polipeptidicos elaborados por hongos contienen aminohcidos D y L así como otros no presentes en las proteinas. Ejemplos son la tirocidina y la gramicidina S, polipkptidos clcIicos que contienen n-fenilalanina y e[ aminohcido no proteinico ornitina. La hormona liberadora de tirotropina (TRH, del inglds, flyrotropin-releming hormone} (figura 5-5) ejemplifica otra variante más. El glutamato amino-termina1 experimenta ciclizaci6n a hcido pirogluthmico y el carboxilo del propilo carboxilo terminal se arnida. Un polipéprido de mamífero puede contener más de w +pido con actividad fisiol6gicapotente. Denm de n la estructura primaria de la beta-lipotropina (hormona hipofisaria que estimula la liberación de hcidos grasos del tejido adiposo) hay secuencias de aminohcjdos que son comunes a otras hormonas polipep-

Flgura 5-5. TRH (pir~lutamilhistidiIprolinamida).

tidicas con actividades fisioldgicas diversas (figura 54). El poli@ptido grande es un precursor de los poIipkptidos menores.

Los peptidoc con polielectrólitos
El enlace peptidico (mida) no estA cargado a cualquier pH de interés fisiolligico. Por tanto, la forrnacibn de péptidos a partir de arninohcidos a pH de 7.4 se acompafia de una pérdida neta de una carga positiva y una negativa, por cada en!ace peptidico formado. No obstante, a pH 5siolbgico los peptidos son maléculas con carga debido a sus grupos R ácidos o básicos.

El enlace peptidico tiene carácter de enlace doble parcial
Aunque los péptidos se representan con un enlace sencillo que conecta los htomos alfa-carboxilo y alfanitrdgeno, este enlace tiene en realidad un caracter de doble ligadura parcial (figura 5-7). No posee libertad de rotación alrededor de[ enlace que conecta a los htomos C y N. En consecuencia, los cuatro iitornos mostrados en la figura 5-7yacen en el mismo plano, esto es, son coplanares. Esta semirrigidez tiene consecuencias importantes para órdenes de estructura proteínica superiores al primer nivel. Por el contrario, hay plena libertad de rotacibn alrededor de los enlaces remanentes del esqueleto polipeptidico. En la figura 5-8, que resume estos conceptos, los enlaces que tienen rotación libre estan circundados por flechas y los átomos coplanares se han sombreado.

O II

CH,
I
II

H 1 I COO -

7%
I

/C\N/CH\C/N\CH, CHz 1 I

Las fuenas no covalentes restringen
O

H

la conformación de los péptidos
Un polipkptido puede tener un gran número de conformaciones (disposiciones espaciales). Sin embargo, en solución tiende a predominar un número mucho menor de conformaciones. Estas conformaciones favorecidas resultan de factores como bloqueo espacial,

H-C-NH~+
COO -

Figura 6 4 . Glutatibn (gamma-giutarnilcisteinil-glicha).Obsérvese el enlace ara no peptldiw que une a la Glu con Cis

42

a

Biogulmica de H a r ~ e r

(Capitulo 5)

Metioninaencefalina

Figura 54. Estructura primaria de la beta-lipotropina. Los residuos 41 a 58 son la hormona estimulante de los melanocitoc (0-MSH). Los residuos 61 a 91 mntienen las estructuras primarias de las endorfinas sefíaladas.

interacciones coulómbicas, puentes de hidrhgeno e interacciones hidrbfobas. T m t o para que las proteinas, como para que los poli@ptidos (capítulo 6) tengan actividad fisiológica se reqviercn ~onformaciones específicas.

El m g o de variacibn de los residuos no consewados de una proteína entre especies indica la divergencia de

SECUENCIACI~N PROTE~NICA: DETERMINACION DE LA ESTRUCTURA PRIMARIA

La comparación de las secuencias de
los peptidos muestra residuos clave e interrelaciones filogenéticas
La comparacibn de las estructuras primarias de una proteína determinada entre organismos con reIacibn distante, proporciona indicios vitales respecto al modo en que una proteína puede servir como componente del citoesqueleto, transportador de electrones o catalizador.

Ffgun 5-7. La estabilrzacibn por resonancia del enlace peptidico le confiere un cardcter de doble enlace parcial, de ahi la rigidez en el enlace C-N.

Ftgura 5 4 . Dimensionesde una cadena polipeptidica completamente extendidas. Los cuatro $tomos que se encuentran en las áreas sombreadas, las cuales son coplanares, comprenden al enlace polipeptidico Los átomos en las áreas no sombreadas son los átomos alfa carbono, alfa hidrbgeno y el grupo alfa R de un aminofiado en particular. La libre rotacibn puede producirse alrededor de los enlaces que unen el alfa carbono con el alfa nitrbgeno y las funciones del alfa carbonilo (flechas azules). La cadena de polipéptido extendida es asi una estructura semirrigida con dos teroeras partes de los Btomos de la estructura unidos en una relación planar fijada La distancia entre los Btomos alfa carbono adyacentes es de 0.36 nm (3.6 A) También se muestra la distancia interatbmica y los Angulos de enlace, los cuales no son equivalentes (Redibujada y reproducida con autoriracibn de Pauling L, Corey LP. Branson HR, The structure o€ proteins Two hydrogen-bonded helical configurations of the polypeptide chain. Proc Natl Acad Sci USA 1957;37:205.)

las mismas durante la evolucibn. Las relaciones evolutivas estrechas se vinculan con un alto grado de semejanza de las secuencias. mientras que las relaciones mas distantes corresponden a más diferencias en las secuencias. Esta interrelacibn, que primero se documentb en el iibicuo residuo 104 a 1 11 del polipeptido transportador de electrones citocromo c, se mantiene como verdadera en un número cada vez mayor de proteinas.

Sanger fue el primero en secuenciar un polipéptido
Casi cuatro ddcadas han transcurrido desde que Sanger detenni116 la estructura primaria completa de la hormona polipeptidica insulina. La idea de Sanger h e separar primero las dos cadenas polipeptídicas, A y 0, de la insulina y entonces convertirlas, mediante separación enzimhtica especifica, en péptidos más pequeílos que contuvieran regiones de secuencia sobrepuesta. Utilizando el reactivo l -fluoro-2,4-dinitrobenceno (figura 5-9), entonces removio e identificó, uno en cada ocasibn, los residuos aminoterminales de los aminokcidos de estos pkptidos. Por medio de la comparación de las secuencias de péptidos sobrepuestas. fue capaz de deducir una estructura primaria inequívoca para ambas cadenas, A y B. Las siguientes dos tkcnicas han revolucionado la determinación de las estructuras primarias de los polipkptidos (proteínas). La primera fue la introducci6n por Edman, en 1967, de un procedimiento para la separacion e identificación automfitica de residuos ítmino terminales de aminoácidos asi como sus derivados feniltiohidantoinicos. La segunda fue la introducción independiente por Sanger y por Maxm y Gilbert de tkcnicas para la secuenciación rápida del DNA. En la actualidad, la estrategia óptima consiste en utili7ar ambas técnicas de manera simulthnea.

Los peptidos se purifican antes

del análisis
Los datos de secuenciacion de los pdptidos serlan ininterpretables a menos que la homogeneidad peptídica. valorada por EGPASDS. excediera de 95 por ciento. Por tanto, los pkptidos deben purificarse primero mediante tkcnicas convencionales de purificacibn de proteínas (capitulo 8. )

Por lo general primero se determina la composición de los aminoácidos
1,a determinación de los aminoácidos que componen un péptído, por lo general, se lleva a cabo antes de iniciar la secuenciacion, para identificar los posibles escollos y, de manera subsiguiente verificar los datos de secuenciacidn. Primero se rompen los enlaces peptldicos que unen a los aminohcidos por hidrólisis. Luego, los aminoicidos liberados se separan e identifican por LLAR o cromatografia de intercambio i6nico. Ningun procedimiento hidroliza pkpcidos de manera total sin algunas pdrdidas. El mdtodo de: eIeccibn es la hidrdlisis de muestras repetidas en HCI 6N a 110 "C en tubos de vidrio sellados al vacío por 24, 48,72 y 96 horas. Esto destruye todos los Tri y Cis, y si estan presentes iones rnetblicos, se pierde algo de Met y Tir. I,a recuperacibn de Ser y Tre es incompleta. Los enlaces Val-Val, Ile-[le, Val-Ile e Ile-Val, son muy resistentes a la hidrdlisis, en tanto que Gln y Asn son desarninados a GIu y d s p . ¿Cómo se superan estas dificultades? Antes de la hidrdlisis, la Cis se convierte en hcido cisteico, un derivado ácido estable. El Tri se mide desputs de la hidrdlisis bhsica, proceso que destruye a la Ser, Tre, Arg y Cis. Los datos de Ser y Tre se extrapolan al tiempo cero de la hidrdlisis. La Val y la t e u se determinan de datos obtenidos a las 96 horas. Sobre los hcidos dicarboxilicos y sus arnidas se informan de manera colectiva como "Glx" o "Asx". Por ultimo, dado que las proporciones relativas de cada aminohcido deben expresarse en números enteros, las fracciones decimales se redondean al nhrnero entero más próximo.

Las estructuras primarias de los polipéptidos se determinan por la técnica automatizada de Edman
Dado que numerosas protelnas están constituidas por más de una cadena polipeptidica ligada por fuerzas no covalentes o pos puentes disulfuro, es posible que el primer paso sea disociar y separar las cadenas poli-

Figura 5-9. Reacción de un arnino~cidocon 1-fluoro-2,4dinitrobsnmno (reactivo de Sanger). El reactivo recibe ese nombre en honor del bioqulmico Frederick Sanger, laureado con el premio Nobel en 1958. quien lo us6 para determinar la estructura primarta de la insulina.

peptídicas individuales. Los agentes desnaturalizantes como ta urea o el clorhidrato de guanidina destruyen los puentes de hidrógeno, y disocian polipéptidos unidos de modo no covalente. Por su parte, los agentes oxídantes y reductores rompen los puentes disulfuro (figura 5-1 0). Entonces los polipCptidos son separados pos cromatografia.

anhidrido citracbnico (una reacción reversible) para cambiar su carga de positiva a negativa, ahora la tripsina se separa solo despues de Arg. La obtención de residuos de arginina es menos útil, debido a la abundancia relativa de residuos de lisina. No obstante, resulta de utilidad en la divisihn subsecuente de fraprnentos obtenidos con CNBr.

Los polipéptidos largos se fraccionan antes de su secuenciación
[,os instrumentos automáticos mas eficaces para Ia obtencibn de secuencias (secuenciadores) operan sobre polipéptidos de 20 a 60 residuos de longitud. Por tanto, es deseable una partición especifica y completa en sitios relativamente raros. Los reactivos siguientes cumplen con este requerimiento.

C. o-Yodosobenceno
El o-yodosobenceno fracciona los relativamente escasos residuos de Trí-X. No se requiere una proteccibn previa de los demas residuos.

D. Hidroxiiamina La hidrox i larn ina separa los enlaces comparativamente raros de Asn-Gli, aunque por 1 general no 0
da resultados cuantitativos.

A. Bromuro de cianógeno (CNBr)
Inicialmente, los residuos de cisteina son modificados con ácido yodoacético. Despuks, el CNBr rompe en el lado COOH de la Met. Puesto que la metionina es comparativamente escasa en los polipéptidos, por lo general se producen fragmentos peptidicos dentro de los limites de tamafio deseado.

E. Proteasa V8
La proteasa V8 de Staphylococcus aureus separa los residuos Glu-X-pdptido con preferencia por condiciones en que X es hidrdfobo. La uni6n Glu-Lis resiste el fraccionamiento. Esta reaccibn es útil para la degadacibn subsecuente de fragmentos obtenidos con bromuro de cianógeno.

B. Tripsina
La tripsina rompe el lado COOH de los residuos Lis

y Arg. Si los residuos de lisina son obtenidos con

F. Hidróiisis con ácidos moderadamente débiles
Esta separa el enlace raro ~sp-!+o.

La secuenciación requiere de múltiples digestiones
Las 2 o 3 digestiones del polipdptido original, normalmente en Me[, Tri, Arg y Asn-Gli, combinadas con subdigestiones apropiadas de los fragmentos resultantes, por lo general permitir& la determinacibn de la estructura primaria completa del polipeptido. Exceptuando algunas dificultades extraordinarias en la purificacibn de los fragmentos, kstapuede efectuarse con unos pocos micromoles del polipéptido.

LAS MEZCLAS DE PÉPTIDOS DEBEN SEPARARSE ANTES DE LA SECUENCIACI~N
La purificación de fragmentos se logra principalmente por filt~aci6nen gel en iicido acético o fbmico por cromatografia liquida de alto rendimiento de fase invertida (CLAR) o por cromatografía de intercambio i6nico en fosfocelulosa o en sulfofenil-Sephadex en soluciones de k i d o fosfbrico.

Figura 5-10. Separacibn oxidativa de cadenas polipeptldicas adyacentes enlazadas por puentes disulfuro (sombreado) por Bcido perfbrmrco (lzqulerda) o la separacidn reductiva con beta-mercaptoetanal (derecha) forman dos pbptidos que incorporan residuos de Acido eisteico o de cisteinilo, respectivamente.

A. Cromatografia de intercambio iónico y electroforesis de alto voltaje (EA
Estas técnicas (capitulo 4), que separan con base en la carga, se adican a polipkptidos de peso molecular bajo y también a aminoácidos. El valor de pK para el grupo carboxilo-terminal del hcido alfa-carboxilico de un polipéptido es más alto que el del grupo alfacarboxilo en el aminoAcido correspondiente (es decir, el COOH peptídico es un hcido mas dkbil). De m a n e p inversa, el grupo amino-terminal es un ácido rnhs fuerte (tiene un pK menor) que el aminoacido del cual proviene.

someten a etectroforesic en presencia del compuesto desnaturalizante dodecilsulfato sbdico (SDS). Ea molécula con carga negativa CH3-(CH2)ii-S012recubre a los pkptidos en la proporcibn aproximada de un SDS por cada dos enlaces peptidicos. Esto "sumerge*' la carga original de la proteina, volviendola fuertemente negativa. Así, las separaciones subsiguientes se basan de manera primaria en el tamaflo molecular. El EGPA-SDS se usa de manera extensa para determinar los pesos moleculares de péptidos por comparación de sus movilidades con la de esthdares de pesos moleculares conocidos.

B. Filtracibn en gel
La secuenciación automatizada utiliza cantidades pequeiias de polipéptidos grandestde30 a 100 residuos). Sin embargo, muchos polipkptidos de peso molecular alto desnaturalizados pueden ser insofubles debido a la exposicibn de residuos hidrófobos antes escondidos durante la desnaturalimciiin. Aunque la insolubilidad puede resolverse con urea, alcoholes, hcidos orgánicos o bases, estos restringen el uso subsiguiente de tCcnicas de intercambio ibnico para la purificacibn de péptidos. Sin embargo, la filtración en gel de ptptidos hidrbfobos grandes puede llevarse a cabo entre hcido formico o acético, I y 4 molar. Esta tkcnica separa moliculas de tamaflos diferentes con base en su exclusión o inclusión en los poros de un filtro molccular como Sephadex.

Para la secuenciación se utiliza la reacción de Edman
La secuenciación automatizada utiliza el reactivo de Edman, fenilisotiocianato. La reaccion de secuencia (figura 5-1 1) libera el aminohcido arnino-terminal como un derivado de la feniltiohidantoina, el cual se identifica mediante C LAR. E! prbximo arninoálcido por secuenciar entonces se deriva y se elimina; luego se repite el proceso. Una secuencia de 30 a 40, o, en ocasiones, 60 a 80, residuos aminoácidos se determina en una operación continua. Las reacciones de Edman se llevan a cabo en una pelicula delgada sobre la pared de una cámara de reaccibn giratoria o en una matriz s61ida a la cual el carboxilo terminal del pdptido se ha acoplado de manera covalente. La secuenciación en fase gaseosa, una técnica en fase sblida, emplea reactivos gaseosos y facilita la remoción de productos gaseosos. Los metodos de secuenciacibn en fase sólida son aplicables a cantidades muy pequefias de péptidos, en algunos de hasta 1 pg.

C. CLAR de fase invedida
Una tdcnica potente para la purificación de péptidos no polares de peso molecular grande es la cromatografia líquida de alto rendimiento en material no polar con elucibn mediante solventes polares (CLAR de fase invertida). La filtracibn en gel y la CLAR de fase invertida se emplean juntas para purificar las mezclas complejas de péptidos obtenidas por digestibn parciai de proteinas.

Deben secuenciarse varios péptidos sobrepuestos
Conocer la secuencia de todos los peptidos CNBr de una proteina no proporciona, por si mismo, su estructura primaria completa ya que no se sabe el orden en que estos péptidos se encuentran en la proteína. Para deducir una estructura primaria inequívoca tambikn deben prepararse y cecuenciarse péptidos adicionales cuyas teminaies m i n o y carboxilo se sobrepongan con los de los peptidos CNBr. Estos ptrptidos adicionales se producen por tecnicas (por ejemplo, digestion con quimiotripsina) que dividen la proteina en otros lugares distintos aresiduos Met. Luego, L deduccibn de a una estructura primaria inequivoca por comparación de secuencias peptidicas se efectiia por un proceso aniilogo al ensamblaje de un rompecabezas (figura 5-12). Para localizar los puentes disulfuro, los péptidos de protelna sin tratar y de proteina reducida u oxidada

D. EA V en filtros moleculares
La filtracirin molecular puede usarse junto con la separacibn por carga para facilitar la particibn. Aunque es posible emplear almidbn y agarosa, el soporte mhs común es un polimero de enlaces cruzados de acrilarnida (CHi=CN-CONH2). Para la electroforesis en gel de poliacrilamida (EGPA), las soluciones de proteínas se vacian en tubos o se aplican en placas que contienen un amortiguador de poliacrilamida can 2 a 10% de enlaces cruzados por inclusibn de bisacrilamida de metileno (bis) (CHZ=CH-CONH~)~-CH~ o reactivos con enlaces cruzados similares. Luego se aplica corriente directa. La visualizacián se logra por tincibn con azul de Coornassie o Ag". Una variante popular es la EGPA bajo condiciones de desnaturalizacihn. Las proteinas se hierven y a continuacibn se

46 0 Bioquímica de H q e r (Capítulo 5j Fenilisotrocianato(reactivode Edrnan) y un peptido Pomi6n C-terminal del peptido X Porcibn N-terminal del pbptido Y Figura 5-32. Por tanto. la técnica de Edman continuarii siendo fundamental para demostrar la determinación esrruct~ralde pkptidos y proteínas. La espectometria de masas puede utilizarse para secuenciar péptidos El bombardeo rápido de fitomos (BRA) unido a la espectrometria de masas (EM). la secuenciacibn directa de las proteínas continúa siendo esencial para el anhlisis de su estructura. Por tanto. metano Una feniltiohidantolna y un peptido mds corto en un residuo Figura 5-71. la secuenciacibn de DNA es una ayuda valiosa para detectar prepéptidos y prepropkptidos Ilibiles importantes en la cathlisis (capitulo 10) o en la sefializacibn de péptidos dirigidos a organelos subcelulares específicos. es posible inferir las posiciones de los puentes disulfuro. isoprentilado. Reaccidn de Edman. Uso del peptido Z sobrepuesto para deducir que los pépttdos X y Y ectbn presentes en la proteina original enelom'enX~Y. la secuenciacjbn del DNA no puede revelar la presencia de propilo. El fenilisotiocianato reacciona con el amino-terminal de un residuo de un peptido para dar acido feniltiohidantotw El tratamiento con acido en un solvente hidroxilim libera una feniltiohidantoína la cual es identificada posteriormente mediante su movilidad crornatogrhfica y un phptido mas corto en un residuo. esterifjcado u otros residuos aminoacilo postraslacionales modificados que efecttian funciones esenciales en proteinas especificas. Aunque la secuenciacibn de péptidos no presenta estas desventajas. La secuenciación del DNA no puede mostrar la posición de los puentes disulfuro o la presencia de otras muchas modificaciones postraslacionales. Así. hidroxilisil o un hutsped metilado. Entonces el proceso se repite se separan por cromatografía bidimensional o por electroforesis y cromatografía (huellas dactilares). Con el conocimiento de la estructura primaria de estos péptidos.noYtX. En tanto que las estructuras primarias de las proteínas se pueden deducir mediante la secuenciación de los genes que Eas codifican. en dos espectrómetros . La secuenciación de péptidos y de DNA son técnicas complementarias Aunque la simplicidad y velocidad de la técnica de secuenciacibn del DNA (capítulo 42) ha revolucionado la forma en que se determinan las estructuras peptidicas. Los codones triples y tas moléculas apropiadas de tRNA solo se encuentran disponibles para Eos 20 arninoacidos más comunes. fosforitado. la secuenciación de péptidos y DNA son tecnicas complementarias más que mutuamente exclusivas. cada una con ciertas ventajas. La visualizacidn con ninhidrina revela los piptidos mhs escasos en la digestión de protelna sin tratar y un pkptido adicional en la digestibn de proteina tratada. muchos de ellos experimentan una o más modificaciones postraslación por procesamiento proteolítico.

que evita reacciones colaterales indeseables. permite profundim en el conocimiento de la relacibn entre la estructura del péptido y la actividad bioldgica. las tkcnicas de sintesis de los pbptidos fueron evolucionados por Bmce MerrifieEd (Premio Nobel 19841. proporciona los elementos para la activaci6n de los grupos carboxilo y para la adición y eliminación de los grupos bloqueados. 2) Activar el gmpo carboxilo de t-BOC-B con diciclohexilcarbodiimida (DCC) (b): . proporciona un camino alternativo para secuenciar péptidos con longitud de alrededor de 25 residuos. La tkcnica BRA dirigida por computadora es muy rápida. identifica residuos modificados por traslacibn y. permite la identificación de todos los fragmentes aminoacilo y de la secuencia del péptido completo. puede cecuenciar péptidos cuyas terminales amino están bloqueadas (por ejemplo. de los htomos de un péptido disuelto en glicerol forma un ibn pkptido con carga positiva. El bombardeo rápido por átomos de argon o xenbn. Figura 5-13. Muchos aAos despues. cuyas estnicturas primarias difieren sblo un poco. no requiere pkptidos altamente purificados. El primer espectt-ografo de masa limpia el ion gkptido de iones contaminantes. y luego lo transfiere a una celdilta en donde colisiona con atomos de helio.de masa integrados. a diferencia de la tdcnica de Edman. LOS PÉPTIDOS PUEDEN SINTETIZARSE MEDIANTE TECNICAS AUTOMATIZADAS Las péptidos que se obtienen mediante síntesis qulmica sirven como fArmacos o aditivos alimentarios. el ion pkptido se fragmenta a partir de sus dos terminales con lo cual forma mliltiples iones de tamafío decreciente. La comparacion de los iones de acuerdo con los incrementos sucesivos de masa. En comparación con los secuenciadores avanzados de Edman. desarrollada a fines del decenio de 1800 por el químico a l e m h Emil Fisisher. la termina carboxito del residuo aminoacilo). Estos pasos son como sigue: 1) Proteger las terminales amino del aminohcido A (en blanco) y del arninoiicido B (en negro) con el grupo t-butiloxicnrboniIo (t-BOC) (m): Síntesis de peptidos en fase sólida La figura 5-1 3-muestra sintesic de un dipéptido A-B la representativo (en el cual A es la terminal m i n o y E famando t-BOC-A y t-BOC-B. aciladas). inicib un renacimiento en la química de los péptidos. La tdcnica automeica de síntesis de Merrifield que produce ptptidos largos sintkticos en periodos cortos. las principales desventajas del BRA-EM son su alto costo y menor sensibilidad.Entoncw. rnediante la tkcnica en fase s6lida de Merrifield y resume las reacciones que se requieren para sintetizar un ptptido de cualquier tamaño deseado. La qufmica básica de la sintesis de los péptidos. Debido a la energía que absorbe. quien desarrollb la síntesis en fase dlida. La capacidad para sintetizar conjuntos de peptidos similares. Representaubn sirnbblica de la sintesis de un dipéptido genérico por la técnica de fase s6Fida iniciada por MernReld Véase el texto para explicación de los simbolos. en el segundo espectrómetro de masa se determina la masa molecular de estos fragmentos del ion.

REFERENCIAS Allen G:Sequencing of proteins and peptides. Por lo general pueden secuenciarse hasta 40 residuos mino-tem inales sucesivos. Liberar el dipéptido A-13 de la particula de resina por tratamiento a -2 "C con hcido hidroflubico (HF) en diclorometano. estas conformaciones son restringidas aún m8s por fuerzas no covalentes. Kent SBH: Chemical synthesis of peptides and proteins. se designan de acuerdo al numero de aminoicidos presentes.48 Bioquimica de Hurper (Capítulo 5) 3) Hacer reaccionar al grupo carboxilo del aminoácido A (que se convertírh en el residuo carboxilo4) terminal del peptido) con una resina activada de poliestireno insoluble @I Eliminar al grupo protector de r-BOC-A con ácido tnfluoroac&tico(TFA. Luego pueden enlazarse por su terminal carboxilo a un soporte sólido para facilitar la secuenciacibn. Las péptidos grandes se escinden en sitios raros con reactivos como CNBry los pkptidos resultantes se purifican por filtración en gel y CLAR. CRC Press.61:977. RESUMEN Los pkptidos. Foret P Capillary electrophoresis : of proteins and nucleic acids.1:E 91. Doolittle RF: Reconstructing history with mino acid se- 2nd edl Burdon RH.Lar operaciones automáticas subsiguientes comprenden quimica de líquidos o reactivos y productos gaseosos que facilitan la recuperación y purificacibn de la muestra. Mejoras subsecuentes han reducido el tiempo para la sintesis y han incrementado el rendimiento de manera significativa. Los péptidos pequefios pueden contener enlaces diferentes a alfa-peptidilo y aminolcidos poco comunes. Annu Rev Biophys Biomol Struct 1995.adherida al pol iest ireno. Science 1984. El carácter de doble ligadura parcial del enlace que une al carbono del COOH y al N de un péptido. Por tanto. Como poiielectrblitos. De manera alterna. Ademis. Elsevier. los enlaces entre péptidos pueden inferirse de la secuencia de DNA del gen apropiado. Esto ha abierto el campo para producir vacunas y hormonas polipeptldicas y aun puede pensarse en tratar errores congénitos del metabolismo seleccionados. En solucibn. F 3 C 4 0 0 N )a la temperatura ambiente. 3989. se determina la secuencia de péptidos sobrepuestos generados por diferentes ttcnicas de partición. W i b o n KJ: Contemporary methodology fos protein structure determination. La determinacibn de la estructura primaria emplea tkcnicas de Edman automatizadas. Esto limita el numero de conformaciones peptidicas posibles. Annu Rev Biophys m.57:957. formados por la pérdida de agua entre los grupos carboxilo y amino de los aminohcidos. Methods in Enzymology. Annu Rev Biochem 1992. Deutscher MP (editor): Guide bo Protern PuriJicabron. vol 183. Condensar el grupo carboxilo activado de t-BOCR con el grupo amino libre del inmovilizado A. no mutuamente excluyentes. Despuks de la hidrblisis Acida es posible deteminar la composición de los péptidos purificados.24:579. Bienmann K: Mass spectrometry of peptides and proteins. es posible omitir los pasos 3 y 4 puesto que ya se dispone en el comercio de resinas con cualquier aminoácido f-BOC conectado por un enlace éster a una moltcula "enlazadora" de fenilacetamidometilo. .. (Nota: En la prhctica. Para definir el orden de ensamblaje de los ptptidos secuenciados en el polipéptido original. Hunkapiller Biophys Chem 1991.Knippenberg PH. Karger BL. PAM. Chy YH. Primero se oxidan o reducen los enlaces disuffuro. hace que cuatro Iitomos del enlace peptidiw sean coplanares. p h e ~ lucetamidometkyí). las tkcnicas automáticas permiten la síntesis inequívoca de pdptidos de estructura primaria conocida y actividad biol6gica completa. 1990. Eliminar el grupo protector (d-BOC) con TFA (véase paso 4). los pkptidos se separan por crornatografia de intercambio iónico y técnicas electrofor&ticas. Sus estructuras primarias (orden de aminoácidos listados desde la amino-terminal) determinan la actividad biológica y las conformaciones. pero se requiere correccihn por perdida de ciertos aminolcidos. Strickler JE. Protein Sci 1992.226:304.20:205. In: Laboratory Techniques rn Biochemistry rvnd Molecular Riulo&. que pueden realizar la secuenciacibn en cantidades tan pequefias de hasta microgramos de phptido purificado. las tkcnicas de secuenciacion de DNA y péptidos son complementarias. Fenselau C: Beyond gene sequencing: Analysis of proteín structure with mass spectrometry. 1988. Bhwon AS: ProieidPeptide Sequence Analysis: Current Meihodologies. Annu Rev Biochem 1988. vol 182. del inglks. 5) 6) 7) Los logros iniciales de la técnica de Merrifield fueron la síntesis de las cadenas A y B de inculina y de la enzima pancrektica ribonucleasa. 1990. Doolittle RF (editor): Makcular Evolirtion: Campufer A nalys~s ofProlein nnd Nucleic AcidSeguences Methods in Enzymology. quences.

182:50.182 587 Regnier FE.and solid-phse degradaiion of proteins and peptides al law picomole levels. Methods Enzymol 1990. Hunkapiller MW.McLafferty FW: Mass svctrometry of mac- romolecules Has its time come now? Annu Rev Riophys Riomol Struct 1994:23. sequences.Gooding KM: High performance liquid chromatography of proteins. Trends Biol Sci 1989. Anal Biochem 1980.MerrifieEd RB: S o l i d phasc s y n t h e c i s . Anal Biochem 1984:140:553. Ozols J : Amino acid analysis. Methods Enzymol 1990.763. . Wilson KJ: Utility of the gas-phase sequencer for both liquid. and sequences. Stellwagen E: G e l filtration. M e t h o d s Enzymol 1990:182:317 Stoscheck CM: Quanlilation of proteins. Sanger F Sequences. Science 19&6:232:341.57: 1 . Senko MW.103:1 . Wilson KJ: Micro-leve1 protein and peptide separations. Strickler JE. 14:252. Annu Rev : Hiochem 1988.

Además. no deben sorprender las terribles consecuencias que pueden surgir de mutaciones en genes que codifican proteínas o en regiones de DNA que controlan la expresibn genktica Asimismo. oxígeno y bióxido de carbono. numerosas enzirnas) tienen cadenas polipeptidicas enrolladas. cinasas). Las proteinas fibrosas tienen proporciones axiles mayores de 10 Las proteinas pueden clasiticarse según sus funciones bioIogicas en: cnzimar (deshidrogenasas. pueden derivar consecuencias igualmente desastrosas de la deficiencia de cofictores csenciales para la maduración de una proteína. protectoras (factores de coagulación sanguínea. inrnu- IMPORTANCIA BIOMEDICA Los millares de proteínas presentes en el cuerpo humano realizan funciones demasiado numerosas para enumerarlas. terciaria y cuatemarfa de las proteínas. Un sistema de uso limitado en bioquimica clinica las clasifica como "albiiminas". proteinas de alrnacenainiento (ferritina. hoja beta. PhD dc vilaminas. plegadas cn forma compacta y proporciones axiles (proporciones dc longitud a anchura) menores de 10 y que iio exceden de 3 a 4 por lo general. giro beta y asa. LAS PROTE~NAS CLASIFICAN SE EN NUMEROSAS FORMAS Si bien no existe un sistema universal. el modo en que estas estructuras características secundarias Sorman dominios y estructuras terciarias. así como el ensamblado de polipiptidos en subunidades de proteinas multiméricas. con énfasis en las fuerzas que estabilizan estos ordenes m& elevados de estructum y los metodos físico5 empleados para examinarlos. las proteínas pueden clasificarse con base en su solubilidad. cineticas. El sindrome de EhlersDanlos ilustra defectos geneticos en la rnaduraciOn proteínica y el escorbuto la deficiencia de un coiactor esencial para esta maduracion. etcétera. En este capítulo 5e analizan las estructuras secundaria. estructurales (colligeno. las proteinas globulares (por ejemplo. ademAs de Las características comunes a todas las proteinas incluyen restricciones en su conformación por enlaces covalentes y no covalentes. forma. Por tanto. Tambikn pueden clasificarse bashndose en su fonna global. Los principales temas iiicluyeii hdlice alfa. función biolbgica o estructura tridimensional. Los capitulos subsecuentes amplian esta estrecha reIaci6n al estudiar las proteinar globulares mioglobina y hemoglobiiia así como las proteínas catalíticas conocidas como eiizimas. llevar a cabo actividades estructurales. hormonas peptídicas).Proteínas: estructura y función Victor W Rodwell. dependiendo de su solubilidad en soluciones salinas acuosas. mioglobina). "globulinas". "historias". se examinan las vias propuestas para que las proteíiias se plieguen y el papel de las chaperoninas {proteinas acornpafiantes)y de otras proteinas accesorias que facilitan el rápido y correcto plegamiento in vnJo Las ~amcterísticn~ y comentarios mencionados antes generalmente son validos para todas aunque algunas proteinas especificas pueden mostrar estructuras secundarias y terciarias peculiares que Ies confieren propiedades para cumplir funciones biologicas también especifica. Entre ellas están: servir como portadores . Así. reguladoras (proteínas unidas a DNA. cataliiicas y de señalización. Se ilustra la estrecha vinciilacilin entre estructura y funci6n biolhgica de estas rnolt5culas mediante dos proteinas fibrosas que tienen funciones estructurales: la fibroina de la seda y el colageno. proteoglucanos).

HDL o VHDL basándose en sus propiedades de sedimentación en una ultracentri fugación (figura 6. LDL. HDL. La estructura primaria se determina por métodos descritos para polipkptidos en el capítulo S.6. Iipoproteinas plasnihticas) y contráctiles o dotadas de motilidad (actina. Estas fuenas incluyen puentes de hidrhgeno. !a conversión de 0. lipoproteinas alfa. Las lipoproteínas puedcn clasi ficarse tam bien por deteminacibn inmunol0gica dc las apopruteinas presentes (A. proporcionan una base potencialmente valiosa para la clasificación de proteinas.. E. lrpoproteinas de muy baja densidad. D. de transporte (hemoglobina. Iipoproteinas de baja densidad. Sin embargo.1 ). pero formidables en número. quilomicrones. lipoproteínas de alta densidad. C. Magnitud y densidad de distribucibn de las lipoproteínas (CHYLO. ESTRUCTURA PRIMARIA La estructura primaria de la cadena polipeptidica de una proteína es el orden en el cual los aminoacidos se Diferentes fuenas que estabilizan las estructuras proteínicas Tama Ao Más graride Figura 6-1. unen e incluye la uhlcacidn de los enlaces bisulhro. Las bases de datos importantes continuamente actualizadas inc lu yen EM R L (Europeun Molecu~ur 13ioloa Laboraiory Oaia I. para una cierta proteina s61o un pequefío número de posibles conformaciones tienen significacibn biolbgica. estabilizan la conformacion de una proteina. las semejanzas en la estructura tridimeiisional. Lp [a]. la rotación libre alrededor de las dos terceras partes de las uniones covalentes dc la cadena principal de un polipéptido (figura 5-81 permite clasificar por etapas un gran númcro de conformaciones posibles para una proteína d e t e n i nada. las lipoproteinas plasmhticas se denominan de "origen". interde acciones electrostáticas y f u e r m ~ van der Waals. alfaz o beta de acuerdo con su movilidad elemforéticaap1-I 8. las proteinas qiie unen nuclcótidos comparten un dominio fijador de nucleiitido de estructura terciaria.52 Bioquírnicu de Harper (Capitulo ti) noglobulinas). reveladas principa2rnente por cristalografia con rayos X. . La interconversión de estructuras conformadas no implica la rotura de uniones covalentcs sino la rotura y restablecimiento de fuerzas no covalentes (puentes de hidrógeno. tubilina). las relaciones espaciales de todos los itomos entre sí. El nbrnero de las secuencias conocidas de proteínas es tan grande y crece con tal rapidez que. VLDI. Puentes de hidrógeno En la superficie de las proteinas globulares por lo general se encuentran residuos con grupos R polares. Por ejemplo. B. fl importante término similar "conformación " se refiere a la arquitectura tridirnensional de una proteína. F). 1-DL. VLDL. Sistemas especialiados de clasificacibn distinguen ciertas proteinas complejas de interés médico elevado. y PIK (Protein fdenllficdron Resource S~quence Dufuhuse). en vez de disponer de formas impresas. en la actualidad.a L-alanina) sulo se puede logmr rompiendo y restableciendo uniones covalentes.o como quilomicrones.45 303) Varías interacciones no covalentcs que individualmente son dgbiles. La interconversión de alternativas diferentes de configuracibn (por ejemplo. De este inodo. interacciones hidrófobas.ibrary). Asimismo. GenBank (Genefic Sequence Dafabank). interacciones hidr~fobas) que estabilizan una conformaci6n dada Incluso después de excluir las ~onfonnaciones las que interacciones estcricas impiden. Iipoproteina [a]) (Reproducida con autorizacibn de Segrest JP y colaboradores The amphipathic alfa-helix A rnultrfundionalstructural motrf in plasma Itpoproteins Adv Protein Chem 1995. ESTRUCTURA SECUNDARIA Configuración y conformación El tkrtnino "configuracion" se refiere a las relaciones gcométricas entre un conjunto dado de htomos.. los datos de las secuencias se depositan en bases de datos electrhnicac de secuencias de proteinas a las cuales se puede tencr acceso a través de Internet. puentes salinos.

que son sumamente dkbiles y sblo actúan a distancias extremadamente cortas. pero despuks los analisis cristalográficos de rayos X las confirmaron ampliamente. pues existen grupos polares específicos ejecut a n t e ~de funciones biológicas indispensables. Uniones peptídicas que restringen las posibles conformaciones secundarias La rotacidn solo es posible alrededor de 2 de las 3 uniones covalentes que forman el esqueleto polipeptidico de las proteínas. [. es el ingulo psi (Y). hay excepciones. Las fuerzas repulsivas entran en juego cuando dos Atomos se aproximan tanto que sus orbitales electrónicoc se superponen. Por tanto. La a formación de interacciones hidrhfobas es "conducida por la entropia". Los tipos de estructura secundaria esthn limitados por el carlicter de doble uni6n parcial de la unibn peptídica (figuras 5-7 y 5-8) y por el tarnaiio y la forma de los grupos R arninoácidos. 13uesto que los residuos polares también pueden participar en interacciones ihnicas. Aunque todos los gmpos con carga forma1 tienden a localizarse sobre la supesficie las proteínas globulares. incluyen componentes de airaccihn y de repulsión. Al principio. La distancia a la cual la fuerza de atracciciii es rnAxima y la fuerza de . ciones estéricamente permitidas caracterizan a la Ii&licealfa y a la hoja plegada beta y a la helice triple de colágeno w a l i ~ a d a más adelante. Una forma esférica regular reduce al mínimo el área de supedcie. Ramachandran fue el primero en emplear una grhfica de los Angulos fi contra los ángulos psi para ilustrar tanto los valores permitidos como los numerosos. ademas de Ias unidades hélices alfa regulares repetitivas. Interacciones hidrófobas Las interacciones hidrófobas implican a los grupos R no polares de los residuos arninoacilo que en las proteínas globulares típicas residen en el interior de E proteína. como los gmpos terminales amino y carboxilo de los péptidos y los grupos R cagados de los residuos aminoacilos. la existencia de una estructura secundaria se propuso con bases exclusivamente teoricas. los cuales es posible que residan en hendiduras quc penetran hasta el interior de la proteína.-C.N. G. el anhlisis de los datos crista1ogr. el ambiente no polar dc las membranas biológicas favorece a los residuos hidrófobos de la superficie.1Las combina12.a concentracibnde residuos no polares en el interior de la proteína disminuye cI número de residuos superficiales e incrementa al m b u n o la oportunidad para que la pelicula superficial de moldculas de agua formen puentes dc hidrhgeno entre si. Las conformaciones regulares e irregulares caracterizan a la estructura secundaria La conformacibn de los esqueletos polipeptidicos de las proteínas constituye su estructura secundaria. El carhcter de doble unión parcial de la ligadura que unc el grupo carbonilo al nitrógeno alfa de la uniiin peptidíca restringe de manera significativa las confomaciones posibles de los átomos que la constituyen. Las estructuras secundarias incluyen.ificos empieza con la deteminacilin de los principales ángulos fi y psi de la cadena. cuyos grupos R no polares participan en interacciones hidrlirobas con las cadenas laterales alquil de los ésteres acilgrasos de las bicapas de la membrana. El ángulo alrededor de la unión C. se conoce la conforrnaci6n de la totalidad de Atomos de la cadena principal o esqueleto de u n polipéptido. uii proceso relacionado con un incremeiito de la entropia. Por cI contrario.) y al E al se nitrogeno. Las fuerzas de atraccibn implican interacción enve dipolos inducidos formados por las occilaciones instanthneas en la distribucion de electrones en los htomos cercanos.-N denomina ángulo fi (m) y el que se encuentra alrededor de la unión C. Interacciones de las fuerzas de van der Waals Las fuerzas de van der Waals. las hojas beta y las incurvaciones beta con formaciones irregulares denominadas asas o bobinas. la presencia de sales como KCI puede disminuir de manera significativa las interacciones iónicas entre los residuos de la superfície.Proteinus: esfrucfura función y 53 los cuales forman puentes de hidrógeno principalmente con moléculas de agua. no permitidos (figura 6 . Los átomos tienen un radio van der Waals característico y la distancia de contacto óptima entre dos es la suma de sus radios van der Waals. Cuando se especifican todos los ~ g u l o fi y psi. Interaccionec electrostáticas Las interacciones eiectrosthticac o puentes salinos se forman entre grupos con carga opuesta. los residuos aminoacilo del esqueleto carbhnico forman puentes de hidrogeno entre si. Por otra parte. La rotación sólo puede darse alrededor de las unioncs entre e carbón alfa (Cm) carbbn carbonilo (C. la cual debe ser coplanar (figura 5-8). repulsión es mínima se denomina distancia de contacto van der Waals. No e s t h permitidas las combinaciones de los IinguEos fi-psf qiie produ7can impedimento estérico entre los Atomos no s unidos.

La estabilidad de las P La hélice alfa Cuando se gira el esqueleto de iin polipeptido por una magnitud igual alrededor de cada carbón alfa. Los grupos Rarninoacil se dirigen hacia afuera del eje de la hClice (figuras 6 4 y 6-51. Las hélices polipeptidicas están formadas por aminoácidos quiraIes (estrwcturas que no pueden superponer su imagen en espejo.4 A). El pulgar sefiala en la dirección del carboxilo terminal del polipeptido de hélice derecha. GrBfica de Ramachandrande 10s ángulac fi y pci de la cadena principal para 1000recidvos no giicina aproximadamente.5 A).6 residuos por vuelta y p = 0.- 0 54-nm paso (3 6 residuos) I . Para visualizar a una hElice derecha.- t Figura 6-3. de 4 a 50 residuos (en promedio cerca de 12 residuos). en todas partes.-- 1 1 1 n . además están limitadas por factores cstéricos adicionales y por el numero de posibles puentes de hidrógeno e interacciones de van der -----. Idos tipos de hilices polipeptidicas presentes en las proteinas. el cual avanza en la dirección de los dedos curvados.Waals que pueden formar y estabilizar un tipo determinado de hdice. Aunque los polipéptidos sinteticos de D-aminoácidos pueden furmar hélices izquierdas.-0 -5. lo cual reduce al mínimo la interferencia esterica. como las manos) y por tanto muestran quiralismo -o sea. Las uniones de hidrógeno y las f u e n a s de van der Waals estabilizan las hélices alfa Q Figura 6-2. la interferencia estérica de los grupos R de los residuos L-arninoacilos determina que las hélices izquierdas no pueden tener lugar en las proteinas. La distancia a 10 largo del eje de la hélice que separa htornos equivalentes en las cadenas principales. son hélices con giros hacia E derecha o hacia la izquierda.m. The anatomy and taxonomy of protein structures Adv Protein Chem 1981. los dedos ligeramente curvados y el pulgar apuntando alejándose de uno mismo.34 167. se debe mantener la mano derecha con la palma hacia arriba.) Puesto que la hélice alfa es la confomacibn de menor Y más estable para una cadena de P ~ ~ ~ se forma de manera espontánea. Los puntos representan las mmbinaciones pemitidas y los espacios las combinaciones prohibidas de Bngulos fi-psi (Reproducida con autorización de Richardson JS. Los diferentes tipoc de hélices formados cuando los giroc tienen dirección y extensibn diferentes se describen según el número (n) de residuos aminohcidos por vuelta y el paso Ip) o distancia por vuelta que la hélice se eleva alrededor de su eje. Los parametros relevantes de una helice-alfa (figura 6-3) son n = 3. Las hklices alfa de proteínas contienen. de los residuos adyacentes es de O..54 nm (5. Orientacibn de átomos de la cadena principal de u n peptido alrededor del eje de una h8lice alfa . Las helices alfa tienen ángulos favorables fi y psi y un patrbn de uniones de hidriigeno que les conficre la máxima estabilidad. se forma una bobina o hélice. en ocho proteinas cuyas estructuras fueron resueltas a resolución alta. 15 nrn (1.

Por su parte. glucoproteinas del virus de la inrnunodeficiencia humana y en proteínas cinasa reguladas por calmodulina.Figura 6 6 . Figura 6-4. Sin embargo. pues los átomos firmemente empaquetados en el núcleo de una hélice alfa están en contacto van der Waals con otros a través del eje de la helice alfa. Copyright 1995 por W H Freeman y Cia. n o todas las incurvaciones en las hélices alfa son causadas por residuos prolilo. 1981. Los nitrógenos peptidicos actúan como donadores de hidrhgcno. o Tir. Vista superior del eje de una hélice alfa Las cadenas laterales (R) están en el exterior de la hélice Los radios de van der Waals de los Atomos son mas grandes que los mostrados aqui. venenos. 2a ed Freeman. Estos puentes de hidrógeno tienen una distancia N-a-O practicamente óptima dc 20 nm (2. Leu y Met que Gli.ptjdas. Puesto que el nitrbieno pcptidico de un residuo proilo. no puede I'orrnar un pucn te tle tiidrógeno. Las interacciones van der Waals tambitn confieren mayor estabilidad. antibihticos. un caso especial en el cual los residuos alternan entre hidroSbbicos e hidrofilicos casi cada 3 o 4 residuos (figura 6 4 ) . Sin embargo. Glu. casi no hay espacio libre en el interior de la hélice (Ligeramente modificada y reproducida con autorizacion de Stryer L Biochernistry.) mente encaja en la primera vuelta de una hélice alfa En otro puiito produce una incurvación. Puentes de hidrógeno (puntos) formados entre Alomos de H y O estabilizan un polipeptido en una conformación alfa helicoidal (Reimpreso con autorización de Haggrs GH y colaboradores Introducfronto Molecular Brology Wiley. y el oxigeno del carbonilo del cuarto residiio en linea posterior cn un sentido estructural primario actúa corno aceptador de hidrógeno (figura 6-4). esta tendencia no es util para proncisticos cstructuraIes. las hClices alfa se encuentran en la superficie dc las proteinas. las hélices anfipáticas sc presentan en las lipoproteinas plasrnaticas y en ciertas hormonas polipí. 1964 ) Las hélices alfa pueden ser anfipáticas Aunque por lo común. por tanto. Se le llama beta porque fue la segunda estructura regular descrita. es la hoja plegada-beta. presente en la mayor parte de las proteinas. Ser. Aiiinisrno. también pueden estar total o parcialmente integradas en el interior de una proteína La hélicc antipática. el término "110.ja plegada" describe su aspecto cuando se le obscrva con el borde hacia arriba. Las curvaturas también tienen lugar con frecuencia eii los residuos GIi. Los carbones alfa y sus grupos R relacionados alternati entre un plano ligeramente arriba La prolina puede doblar una hélice alfa En las hélices alfa son residuosmas comunes Ala.8 A). Los aminoácidos de diferentes regiones forman hojas beta La segunda conforn~aciónregular. la psoliaa sola- . tienc lugar donde las helices alfa forman interfase con un ambientc al mismo tiempo polar y no polar. hélices alfa se debe principalmente a la formación del máximo número posible de puentes de hidrúgeno. Pro.

estabilizados con el máximo número posible de uniones de hidrogeno. y estan estabilizados por puentes de hidrógeno que se forman entre los hidrbgenos de los pbptidos nitrogenados y los de los carbonilos oxigenados de tiras adyacentes. Casi todo los cordones de láminas beta están girados en el sentido de la mano derecha. Qui7. Los residuos están gratificados con 100" de separación (360°13. Los polipéptidos se alinean a lo largo. Como las hklices alfa. un término que describe las conformaciones desordenadas y con menos importanciabiológica de las proteinas desnaturalizadas. A diferencia de las helices alfa compactas.56 Bioquimica de Hurper (Capítulo 6) Figura 6-6. aquellas de láminas paralelas. Todos los posibles puentes de hidrbgeno se forman excepto para las tiras de los flancos (figura 6-81. Tiras adyacentes corren en direccionesopuestas (veanse las flechas) Los grupos R se localizan arriba y abajo del plano de la hoja. residuos polares. Regiones en asa de tamaiio y forma variables constituyen una de las principales carac- . Modelo de una hoja plegada beta antiparalela. Estos cordones girados de I h i n a s beta forman el núcleo central de muchas proteinas globulares. Sin embargo. Para estabilizar las hojas antiparalelas se en- M s o menos la mitad de los residuos en una proteína á globular típica se presentan en forma de h6Iices alfa o hojas beta. Los puentes de hidrogeno agrupados por pares estabilizan la conformación de hoja beta En hojas plegadas paralelas (no mostradas). Nbtese que los carbonos alfa sucesivos se localizan justo arriba y abajo de este plano. las cadenas adyacentes corren en la misma dirección. Las hkiicec de las apolipoproteínas plasrn$ticas son anfrpSticas: es decir. El recto reside en conformaciones "asa" o "bobina" que. las lhminas beta paralelas de cinco cordones son un poco más raras. y otro ligeramente abajo de la cadena principal del polipeptido (figura 6-71. las hojas beta implican t~amos de 5 a 10 arninoacidos de diferentes regiones estructurales primarias. Los puentes de hidrogeno que estabilizan cordones paralelos están regularmente espaciados pero angulados transversalmente a travks de las tiras.á por SU estabilidad algo menor. Figura 6-7. Las cadenas adyacentes de polipkptidos de una lámina antiparalela proceden en direcciones opuestas. cuentran ubicadas de manera estrecha y amplia. en E misma a direcciiin.6 residuos = 100" por residuo) mirando hacia abajo del eje de la hblice Los círculos negros representan residuos no polares y los circulos blancos. el esqueleto peptidico de una hoja beta esti casi por completo extendido. dando un efecto plegado. Las asas o bobinas no se deben confundir con "bobinas al m". aunque las hklíces alfa contienen residuos adyacentes en un sentido estructural primario. pares alternos de puentes de hidrdgeno. las hojas beta tienen aningulos fi y psi repetitivos. Representaciónespiral de aminoAcrdos en una hélrce alfa anfipLtica. uno d e t r h de otro. aunque ordenadas de manera irregular no tienen menor importancia biolligica que las esiructuras secundarias regularmente ordenadas. Las regiones en asa forman sitios de unión de antígenos Las hojas beta plegadas pueden ser paralelas o antiparalelas La figura 6-7 ilustra tiras antiparalelas de laminas beta plegadas. Una lámina beta puede estar conformada pw 2 a 15 cordones y son comunes las regiones donde hay laminas mixtas paralelas y antiparalelas. una cara es polar y la otra no polar.

Con Erecuencia. Los pares de puentes de hidrógeno alternan entre pares muy próximos y pares muy separados y esthn orientados en dirección perpendicular aproximada al esqueleto polipeptldico.Estas vueltas invertidas o incuracioncs beta. la horquilla o gancho beta. Las tiras de hojas beta están conectadas por regiones de poliptptidos que. Las estructuras secundarias pueden formar tipos supersecundarios En muchas proteínas globulares. se omitieron los grupos R y los hidrógenos alfa. Las repeticiones de estas figuras supersecundarias pueden Las proteinas globulares contienen giros beta El cwActer compacto de las proteinas globulares se debe a mAs o menos 20 tramos rectos de residuos unidos por regiones de polisacáridos que bruscamente cambian de direccibn. Hay regiones especificas en muchas proteinas que tienen abundantes confomaciones en solucion. pero que carecen de estructura regular secundaria. . por lo que se presentan en verdad desordenadas Los ejemplos incluyen los grupos U largos de los residuos Lis y porciones de los amino o carboxilo terminales de muchos polipéptidos. Los símbolos qtie se emplean son cilindros para hélices alfa. Este desorden significa flexibilidad y puede decempefíar un papel biológico vital. Arriba: Hojas beta antiparalelas. si son lo bastante largos. el sitio para interacciones ligando. La figura 6-9 ejemplifica varios tipos supersecundarias: beta-alfa-beta. teristicas de superficie de las proteinas. dificulta el estudio de las características totales de la estructura proteinica. ESTRUCTURA TERCIARIA Los diagramas esquemáticos simplifican la esttuctura de las proteínas El alto contenido de informacibn de los diagramas o modelos en donde se incluyen todos los atomos de una proteína. dos tiras de hoja beta conectados por una hdlice alfa. afectan cuatro residuos unidos por puentes de hidrbgeno era varias formas y se presentan de manera primaria en la superficie de las proteínas. Los Atomos de nitrágeno alfa donadores de hidrógeno se muestran con eirculos azules. Figura 6 4 . asi denominada porque recuerda un motivo decorativo de un vaso griego antiguo. Las proteinas pueden contener regiones desordenadas Nonecesariamente todos los residuos se presentan como estructuras con ordenamiento secundario. Por otra parte. con frecuencia contienen hélices alfa. compuesta de hojas antiparalelas beta conectadas por una region corta de asa. las asas en gancho u horquilla se conectan con las hojas beta adyacentes antiparalelas. Distancia y ángulos de unibn de los puentes de hidrógeno entre hojas beta plegadas paralelas y antiparalelas Las flechas indican la dirección de cada tira. flechas anchas para tiras beta y cordones semejantes a listones para las demas estructuras como asas y hojas beta. Abajo: Hoja beta paralela Los puentes de hidrbgano están regularmente espaciados. En consecuencia. las formas estmcturales secundarias de una hClice alfa o de una hoja beta plegada forman tipos reconocibles "supercecundanas". Cuando se exponen a solventes. Un caso común es la estabilizacibn de las regiones desordenadas de los centros cataliticos de muchas enzimtls cuando se unen a un ligando. Para mayor claridad en la presentacidn. empleamos representaciones simplificadas de manera convencional para exhibir las caracteristicas estructurales. regiones de asa de estructura primaria y longitud variables forman los sitios de unibn de antigenos en los anticuerpos. muchas regiones desordenadas pueden llegar a ser ordenadas cuando se les une un ligando especifico. y el motivo o figura "llave griega". pero oblicuos en direcciones alternas. ricos en residuos cargados y polares.

el plegamiento de un polipéptido dentro de un dominio se prodiice dc mancra indcpcndienic del plcgamierito en otrni domiiiicis. en las proteina~multimericas. puede interactuar por fuerzas electrostáticas para estabilizar proteínas. los lipandos pucdcn cntrar en contacto con residuos formados de modo exclusivo por un solo dominio. El teririino "estructura terciaria" se refiere a las relaciones espaciales entre los elementos estructurales secundarios. mostrada en una vista de frente. pero estmcturaimente conectadas llamadas dominios. se puede organizar en unidadcs relativamente independientes. Los enlaces electrostáticos unen los residuos de superficie Los enlaces salinos (electrosthticos) unen grupos R con carga opuesta de residuos y grupos al fa con carga de residuos terminales C y N.58 Uinqzdímica de Hut-per (Capitulo 6 ) maneras en las cuales las proteínas plegadas pueden reunir aminoácidos separados en un sentido estriictural primario y los enlaces que estabilizan estas confbrmacicincs. Su gran numero. lnteaacciones hidrofobas enlazan residuos interiores Las cadenas laterales no polares de los aminoicidos Figura 6-1 0. Por lo gcneral. Estas uniones disulfuro confieren estabilidad adicional a la conformación especifica de proteínas tales como enzirnas (como la ribonucleasa) y proteínas estmcturales (ES el caso de la queratina). Idas cstructiiras terciarias describen las relaciones entre estos dominios. Las uniones de disulfuro confieren estabilidad adicional Además de los enlaces pcptidicoc. Figuras supersecundarias Las hélices alfa y hojas plegadas beta de numerosas proteínas globulares estan ordenadas en untdades repetidas como las figuras supersecundarias d e clave griega (izquierda) o ~eta-alfabeta (derecha) entonces formar estructuras como las unidades regularmente repetitivas beta-alfa-beta de toda una proteína (figura 6-1 0). Triosa fosfato isornerasa.as estructuras secundarias y s u p e r w cundarias de una proteina grande casi siempre están organizadas coma dominios -unidades compactas conectadas por el esqueleto polipeptidico. Ios cuales con frecuencia ejecutan funciones discretas tales como la unibn con ligandos específicos. las La estructiira seciindaria-terciaria. carga neta + 1 ) y de aspartato o glutamato (carga neta -1 ). sin embargo. está constituida por cuatro beta-alfa-beta consecutivasen los dos sentidos estruciurales primario y terciario (Cortesia de 3 Richardson ) confluyen en el interior de las protelnas globulares. Alternativamente. un ligando puede establecer contacto con residuos de más de un dominio y así residir rn la interfase entre los dominios. Por ejemplo. en particular de lor polipeptidos grandes. . [. Estructura terciaria. Por su parte. los residuos de los dominios de diferente? subunidades pueden enlazarse con ligandos como las coenzimas en las interfases con subunidades cuyas superficies de contacto se derivan de residuos proccdentes de suburiidades diferentes. determina su importancia para mantener la estructura de la proteina. Los polipeptidos grandes tienen dominios distintos Figura 6-9. Por otro Eado. Estas uniones son individualmente muy debiles y no son estequiom&tricas. se pueden formar ~inii~nch (IisuIfu ni covalentes entre residuos de cfsteína presentes en el mismo o cn un polipéptido diferente. el grupa R de Lis (a pH fisiolhgico.

hornotetrámeras. se encargaria del reconocimiento de ligando0 tendría un papel regulador. mientras que las IieterooligomCricas. puede efectuar una funcion catalítica. numerosos métodos pueden dar información de esta propiedad. Los puentes de hidrbgeno y las uniones electrostaticas formadas entre los residuos de superficie en unidades adyacentes estabilizan la unibn de las subunidades. Idos datos. se analizan por mitodos matemhticoc. . girarlos en todas dirccciones.que permiten generar y manipular modelos sobre la pantalla. Sus contribucio~ies la comprensión de la estructura proa teínica apenas pueden sobreenfatizarse. respectivamente. se traducen a mapas de densidad electrónica y se emplean para construir modelos tridimensionalcs generados por computación. terciaria y cuaternaria Los reactivos como la urca. son dispersados en patrones que dependen de Ias densidades electrbnicac en diferentes partes de la proteína. Las imágenes por resonancia magnética ORM). dominios o ligandos. la cristalografía con rayos X ha revelado vistas tridimensionaIes detalladas de mhs dc 1000 proteinas. consisten en subunidades identicas. ESTRUCTURA CUATERNARIA Las proteínas oligoméricas tienen cadenas polipeptidicas múltiples Se dice que las protehas que contienen dos o mas cadenas de polipbptidos unidos por fuerzas no covalentes muestran una estructura cuaternaria. Las subunidades diferentes de proteinas heterooligoméricas ejecutan de manera tipica funciones discretas. es costosa y requiere personal adiestrado. se han usado para resolver la estructura tridimensional de ciertas proteínas pequcfías y parece que es prometedora para aplicarse a proteinas de mayor tamaño. Los desnaturalizantes de proteínas destruyen su estructura secundaria. Estas mismas técnicas pueden utilizarse para determinar el PM de los protómeros si primero se desnaturaliza el oligómero. añadir o sustraer radicales. En estas proteinas multiméricas. etcétera. Estas coordinaciones pueden cargarse y enlazarse con programas de compuración perfeccionados -muchos del dominio públicc. Las hornodimeras. enlaces hidrbfobos y electrostáticos {peso no los enlaces peptidicos ni los puentes disulfuro). el dodecilsulfato de sodio (SDS). las cadenas polipeptidicas individuales se llaman protómeros o subunidades. etcétera en muchos casos utilizando simplemente una computadora personal Pentium. Una subunidad o un conjunto de subunidades idénticas. y anulan su actividad biológica (figura 6-1 1) Las bases de datos y los programas de computación perfeccionados facilitan el estudio y la manipulación de la estructura de las proteínas Un resumen coordinado de todor los Atomas de las proteínas cuyas estructuras se han determinado mediante cristalografia con rayos X es accesible a travCs de Intemet procedente de bases de datos eIectr0nicas. destruyen todos los 6rdenes de las proteinas. su orientación mutua y las interacciones que los unen. rompen los puentes de hidrógeno. Si se prueba que los oligómeros no experimenten desnaturalizacion durante el procedimiento usado para determinar el peso molecular (PM). Los métodos físicos determinan el peco molecular y la estructura cuatemaria La determinacion de la estructura cuaternaria de las proteínas oligoméricas comprende la identificación del número y clase de protómeros presentes. obtenidos de placas rotográficas o detectores de área unidos a computadoras. Las proteinas compuestas de 2 o 4 siibunidades sc denominan proteínas bimiricas o tetramtricas. Representaeibn de la desnaturalizacibn de un iprotbmero. cambiar ángulos de unión. de subunidades distintac. Las diferentes orientaciones en el espacio de las subunidades les confiere propiedades diferentes en relación con el oligómero y permite a las proteínas multimkricas desempefiar papeles peculiares en la regulación intracelular. Enzima activa (nativa) Enzima inactiva (desnaturalizada) u Figura 6-1 l. Aunque consume tiempo. en tanto que otro conjunto de subunidades. Por tanto. los bcidos ddbiles (H') y las bases débiles (OH-).Proteínas: esfructura yfunción 59 La cristalografía con rayos X muestra la estructura secundaria y terciaria Los rayos X dirigidos a un cristal de proteína y de un derivado que contiene un metal pesado agregado. excepto su estruchrra primaria.

D. que puede amplificar hasta 100 000 diiimetros. El pIegamiento no puede proceder a traves de un enfoque "de búsqueda al azar"'. permite observar particulas virales.oiones de hCIices alfa. se aplica mejor a proteinas globulares. B. excelente para la determinación de pesos moleculares. el contenido del tubo se retira en fracciones y se analiza la proteína contenida en cada fracción. conducen a una estructura polipéptida original. que luego se tifien para la visualizacibn de la proteína usando colorante azul de Coomassie o Ag'. Las proteínas desnaturalizadas pueden volver a naturalizarse Muchas proteinas desnaturalizadas se vuelven a plecon gar esponthneamente in v~tro el restablecimiento subsecuente de su actividad biológica. que implique la exploracibn de todas las conformaciones posibles en la ruta hacia su estado nativo. Ultracentri fugaclon analítica Este procedimicnto. análoga a la anterior. La difusión dirigida hace crecer estos tramos cortos y conduce en últiino termino a un dominio. preparada por congeIación-descongelaci6n repetida de sacarosa a 20 por ciento. Por su parte los cambios menores de la conformación entonces.es decir. se separan con base en su tamafio (no en su carga) por EGPA-SDS en geles que contienen SDS. Las proteinas desnaturalizadas. relativa a estos estándares. Centrifugación en gradiente de densidad de sacarosa Esta tecnica. el repliegue espontán~o mucho más de lo necesario para explicar el plegamiento de las proreinas in vitro. que tienen "poros" de tamaño promedio definido. lo cual es bargo. las proteinas oligomtricas se desnaturalizan primero hirviéndolas en presencia de betamercaptoetanol y el detergente ionico con carganegativa dodecilsulfato sbdico (SDS). Sin embargo. Después de centrifugar toda la noche a 10' x g. ha sido reemplazada en años recientes por métodos menos complejos. Para las proteinas monomeras. En las proteinas de múltiples dominios. La movilidad de la proteina desconocida se expresa en relación con la de estandares de PM conocido. el proceso de plegamiento ya en este momento es completo. Puede haber errores importantes si la proteina es muy asimétrica o interactúa fuertemente con el material del que se ha manufacturado el filtro molecuIar. mide E velocidad a la cual una proteina se scdimenta en un a campo gravitacional de alrededor de 10' x R. Filtración en gel Coliimnas de Sephadex o matrices semejantes. Esta tkcnica física. que quedan recubiertas con SDS en su totalidad y por tanto con carga negativa. mientms que.A. el PM de una proteina desconocida se calcula de su posicibn en la elucidn. Esto condujo a Anfinsen a concluir que la estructura primaria de los poliptptidos era en si misma suficiente para dirigir y orientar los plegarnientos de las protehas. La conclusilin de Anfisen de que P estructura primaria dirige el plea E. Luego. etcétera. luego se computa y se calcula su PM Principios generales Con base en el conocimiento actual. Las proteinas esthndares y las desconocidas se estratifican en un gradiente de sacarosa amortiguada de 5 a 20%. Para utilizar la tkcnica de EGPA-SDS. se calibran usando proteinas de PM conocido. C. CÓMOSE PLIEGAN LAS PROTE~NAS ¿Cómo puede un polipkptido plegarse en sus estados fisiolbgicos nativos en una fraccibn de segundo? Todavía no hay respuestas definitivas disponibles por lo que esta pregunta sigue siendo objeto de investigacihn activa. el plegamiento de los polipéptidos y de las proteínas multimGricas parece invoIucrar las siguientes etapas. pueden observarse algunos principios generales. Los cambios de conformación exitosos convierten el gl6bulo fundido en una forma compacta con una estructura terciariaordenada. hojas beta. Aun para polipéptidos comparativamente pequeños. los dominios plegados se reunen para formar el denominado "glbbulo fundido" que tiene una estnictura secundaria extensa pero muy poca estructura terciaria ordenada. Primero se forman tramos cortos de estnictura secundaria -re. estos polipéptidos ordenados sirven como subunidades que se reúnen para formar multimeros. giros beta. jel plegamiento a travts de una via de búsqueda al azar requeriría no segundos sino un periodo mayor que el estimado para la edad del universo! Es claro que el plegamiento debe ser un proceso más altamente dirigido que implica vias intermedias muy conocidas entre el estado presentc y el estado fisiolbgico normal. . El microscopio electrónico visualiza complejos macromoleculares El microscopio electrbnico. complejos~enzim~ticos. para proteínas con estructura cuaternaria. Sin emtoma horas. protelnas oligoméricns y oligbmeros de PM elevado. desarrollado por Svederg. Electroforesis en gel de poliacrilamida (EGPA) Proteínas desconocidas y esihndar se separan por electroforesis en gelcs de acrilamida con 5 a 15% de enlaces cruzados de diversa porosidad.

Sin embargo. formar muchos pares de enlaces. los cuales sólo uno es apropiado para el plegamiento biológico correcto. GroES y GroEL de E. Las chaperoninas favorecen la? vías que inhiben las interacciones inapropiadas entre superficies complementarias y facilitan las apropiadas. todavia no se comprende bien el mecanismo mediante el cual las chaperoninas logran esto. La mayoría de las proteinas fibrosas desempefían funciones estructurales en piel. la cual revierte la desnaturalizacidn y agregacibn de las proteínas que se produce a temperaturas elevadas. disulfuro diferentes. Pequetras cantidades de residuos como Val o Tir con gmpos R voluminosos aparecen con periodicidad e interrumpen las regiones de hojas beta y le confieren un poco Figura 6-1 t.Proreinas: estructura y función 61 gamiento in vrvo todavía es vhlida. La composición de los aminoAcidos de la fibroina consiste casi por completo (85%) de residuos Gli que alternan con residuos Ala o Ser. aumenta la velocidad de todo el proceso de plegamiento. pero requiere modificaciones para incorporar la participacidn de las proteínas accesorias. una proteína de un insecto. ilustra la estabilizacibn de una estructura secundaria por medio de fuerzas diferentes de los puentes de hidrbgeno. Las secuencias atipicas de aminohcidos en las proteínas fibrosas definen estruchiras secundarias-terciarias especificas que confieren propiedades mecánica específicas. Las cadenas plipeptidicas de Eibroina forman arreglos de hojas beta antiparalelas. Las chaperonhas incluyen las proteínas Hsp60 de choque tkrmino elaborada por las bacterias o los cloroplastos en respuesta a una elevación termica. seda o lana. Las chaperoninas incluyen las proteinas de choque térmico cuya estructura consta de dos anillos de subunidades idknticas dispuestas alrededor de un espacio central en el Las fueizas hidrófobas estabilizan la hoja beta de la fibroína de la seda La fibroína de la seda. Prolil cís-trans isomerasa La configuraci6n de las uniones pdptido X-pro de los poIipéptidos recibn sintentizados es trans. Las 14 subunidades idénticas de las proteínas HsplO y Hsp60. coli y Cpn 10 y Cpn60 de ¡os cloroplastos-forman parejas de anillos de siete subunidades que rodean una espaciosa cavidad central en la cual se pueden acomodar polipéptidos grandes. Chaperonas maleculares Las chaperonas moleculares de bacterias. las cuales aceleran el proceso de plegamiento y lo guían a lo largo de vías específicas. pero mQs de 10% de las uniones X-pro de las proteinas maduras tienen coiifiguración cts. sin embargo. mitocondrias y cloroplastos son proteínas grandes de múltiples subunidades que aceleran el proceso de plegamiento porque suminism un ambiente protegido cuando los p lipéptidos se pliegan en sus conformaciones nativas para formar estructuras cuaternarias. y Proteina dicu lfuro isomerasa [ a uniones disulfuro (-S-S-. por tanto. cejido conjuntiva o fibras como cabellos. La enzima isomerasa prolil cis-fruns caializa esta isomerizacihn y. LA FORMA DETERMINA LA FUNCIÓN El examen minucioso de proteínas representativas ilustra no sblo las estructuras únicas que han evolucionado para cumplir con funciones biologicas especificas sino también el estrecho nexo entre estructura proteinica y funcion biológica. por tanto. en las cuales los gmpos R de residuos Gli (hidrbgeno} se extienden desde una superficie y los grupos R de Ala o Ser de la o m . cual se pueden acomodar polip&ptidosgrandes.s o cistina) se fonrian bajo condiciones de oxidacidn dentro y entre los polipkptidos y estabilizan tanto la estructura secundaria como la terciaria. Estos arreglos esthn estabilizados exclusivamente por interacciones hidrófobas enee los gmpos Rde Gli sobre una superficie y entre los grupos R de Gli o Ser de la otra. . Un residuo cisteinil dado puede. proli-cis-frans-isomerasa las chaperoninas. lsornerizaeibn del enlace peptídiw prolil N-alfa1 de una configuración cis a una trans relacionada can el esqueleto del polipbptido. La proteina enzimática disulfuro isomerasa facilita el "barajeo" de las uniones -S-Sporque acelera el Indice al cual los disulfuros sufren intercambio neto y. Este ambiente protector contrarresta la tendencia de las regiones hidrrifobas expuestas a solventes de los polipCptidos parcialmente pegados o desnaturalizados a autorseunirse y formar agregados insolubles. . facilita el proceso de plegamiento (figura 6-12). Estas proteinas incluyen las disulfuro isomerasa.

La hidroxilacion de los residuos prolil y lisil es catalizadapor laproIiIhidroxiIasa y Iisilhidroxilasa. reducci6n y glucosiIación. estas extensiones terminales carboxilo y amino se retiran medianteproteólisis selectiva. La colagena de los tendones forma estructuras muy asimdtricas de fuerza tensil elevada. Entonces.. como en la hdlice alfa) las cadenas individuales de polip6ptidos (figura 57-1). la cual convierte los grupos no alfa amino a de los residuos Iisil e hidroxil en aldehidos. Las fibras de colhgena maduras altamente asimbtricas miden 1. muestran caracteristiczs estructurales que contrastan notablemente con las de las proteínas globulares. oxidación. por enlaces covalentes formados entre y en el interior de las hdlices. La tropocolágena es una molécula de triple hélice rica en Gli. ilustran de manera notable las diversas relaciones entre estructura y función que caracterizan a las proteinas Eibrosas de tos vertebrados.5 nm por casi 300 nm. Finalmente.. las estabilizan puentes de hidrógeno dentro de la cadena y despuks. Muchas modificaciones postraslacionales caracterizan la maduración de la procolagena A diferencia de las superhelices de la colágena madura. lo cual refleja su conformacibn extendida estable. hueso y músculo que tienen funciones esmcturales protectoras y de motilidad. las terminales carboxiI y m i n o del precursor de la mlágena procolagena tienen una composicibn de aminoácidos típica de una proteina globular. pero todavía son muy flexibles debido al caracter no direccional de las fuerzas hidrófobas estabilizantes. incluyendo las de la piel. mientras que de la piel forma tramos laxos y fibras flexibles. Estructura secundaria de las proteinas fibrosas La esrructura secundaria de las proteínas fibrosas. Cada glicina está precedida por un residuo prolil o hidroxiprolil. Cada tercer residuo es glicina. un polimero de fosfato de calcio. Trastornos nutricionales y genéticos que pueden involucrar estructuras secundarias deficientes La importancia mddica de la estructura secundaria estable está ampliamente documentada por los trastor- . A continuación se analiza la estructura secundaria de la proteina mas abundante de los mamíferos. los residuos hidrosilil específicos son glucosilados por las transferasas galactosil y glucosil.(Capitulo 6) de flexibilidad. Tres hklices izquierdas se giran para formar una triple hdlice derecha o una superespiral. Cada tercer residuo es glicina La figura estructural primaria de la colagena madura es (Gli-X-ProtHip). estabilizada con puentes de hidrdgeno formados entre (no dentro. organizadas como una Iidlice no alfa izquierda que tiene alrededor de tres residuos por giro. La reduccibn subsecuente foma enlaces covalentes cruzados estables que confieren una gran fuerza tensil. Este proceso implica la participación de la enzima oxidasa lisil que requiere cobre. Durante la maduración de la procolhgena. enzimas que requieren ácido ascorbico (vitamina C). Las modificaciones adicionales postraslacionales implican hidroxilacibn. La superespiral resiste la distorsión debido a que sus tres polipéptidos están en espirales con direcciones opuestas. La colágena ejemplifica diversas relaciones entre estructura y función Las colagenas. Por su parte. La repulsibn mutua entre los residuos prolil obliga al polipeptido a formar una hklice extendida con giro a la izquierda. Los enlaces covalentes cruzados estabilizan las fibras de la colagena Las cadenas de tropocolAgena se reúnen para formar rnicrofibrillas de coIhgena. A continuación estos aldehidos sufren una condensación aldol o se condensan con los grupos amino no alfa de la lisina o la hidroxilisina para formar bases Schiff. la colhgena. Los residuos prolil e hidroxiproli1 son inflexibles en su conformaciún y confieren rigidez. en la córnea del ojo está ordenada de manera casi cristalina y es transparente. Regiones largas de fibroina estrechamente empaquetada. la colagena de las regiones d u r a de los dientes y de [os huesos contiene hidroxiapatita. condensación de aldol. un principio que también se usa en los cables de acero para suspender puentes. que comprenden casi 25% del total de las proteinas de un mamífero. tendbn. Al principio. casi completamente extendidas en hojas antiparatelas beta resisten el estiramiento. Pro y Hip La tropocolágena consiste en tres cadenas de polipéptidos con 1000 residuos aproximadamente. el único residuo con un grupo R lo bastante pequeño para encajarse dentro del núcleo central de la superhdlice. Esta triple superespiral helicoidal es sumamente fuerte.

IY9 1. Además. 1993. En tanto que. proteins as molecular chapcroncs. Annu Rev Biochcm 1993. El estrecho nexo entre la estructura proteinica y la función biológica se ilustra con dos proteínas fibrosas: fibroina dc la seda y colágena. causadas por defectos en diferentes genes de la biosintesis de coIágena. Annu Rev Riophys Rinmol Struct 1992.32:645. llames BD. Ciersach LM: Polypeptide interactions with molecular chaperones and their relationship ta in vivo protein folding. secuencia de aminoácidos y ubicación única de cualquier puente disulfuro.62:349. Adv Enzymc Regul 1994. Rickwead D: Gel Eleczrophoresis ofFroteins A Pracaical Approacl~. refleja una defíciencia en la dieta respecto a la IisiIoxidasa que requiere cnbrc. De manera similar. describe puntos de coniacto y otras relaciones entre estos polipéptidos o subunidades. Tooze J: Introductzon lo Prorein Structure Garland. está codificada en los genes.62:653. Neupert W: Protciii foIding in the cell: Thc role of inolecular chaperones Hsp70 and HspóO. King J: Prolein Folding. y la tropocolágena no puede sufrir las reacciones para f o m a r enlaces covalentes cruzados. 1989: 125. Copeland RA: hethods of protein analysis: A practica1 guidc to laboratury protocolc. Los trastornos geneticos de la biosintesis de la colágena incluyen varias formas de osteogénesis imperfecta que. 1990. la muerte. varios tipos del sindrome de Ehlers-Ilanlos se distinguen clinicamente por articulaciones desplazadas y anomalias de la piel que muestran defectos eii los genes que codifican procolágeiiaalfa.Proteinm. Annu REV Biophys Biomol Struct 1994. Las enfennedades relacionadas con defectos en la maduración de la colagena comprenden al síndrome de Ehlers-Danlos y el escorbuto (enfermedad por deficiencia de vitamina C). 1990. Las estructuras secundaria y terciaria. La estructura terciaria se refiere a las relaciones entre dominios estructurales secundarios v entre residuos bastante alejados desde el punín de vista de su estructura primaria. en último término. IRL Press. Como consecuencia se produce el escorbuto. en clinica. l l a r t l FU. 1944 to Georgopoulos C.: Predicting the conformation of proteins from sequcnces: Progress and future progress. En la insuficiencia grave de vitamina C. Los reactivos que rompen enlaces no covalentes (por ejemplo. combinaciones de estos motivos pueden f o m a r estructura^ supersecundarias (por ejemplo. Petsko GA: Wrakly polar interactions in proteins. REFERENCIAS Advances zn Frolein Chemistw Academic Prcss. IRL Psess. urea o SDS) destruyen las estructuras secundaria. deticiente cicatrización de las heridas y.Edelstein Sd: Prntein Meihods. enlaces salinos (electrostáticos) entre residuos de superficie y relación. 1943. la estructura primaria contiene enlaces covalentes. se caracteriza por la fragilidad de los huesos. terciario y cuaternario (para proteínas oligoméricas'). Burley SK. Ann Rcv Ccll Biol 1993. Dunn MJ: Gel electrophoresis of Proteins Wright.. Wiley-Liss. pueden producirse formas geneticamente distinhs de la enfermedad. [Annual publication. beta-alfa-bcta). la enfermedad de Menkes que se distingue por el pelo ensortijado y retardo del crecimiento. Darby NJ. secundario. Adv Protcin Chem 39. presente sólo en proteinas que tienen dos o m& cadenas polipep~ídicas (proteínas oligomdricas). Matthews CR: Pathways of protein folding Annu Rev Biochem 1993. . estructuru y función 63 nos de la biosintesis y maduracibn de la tropocolhgena.34:269.] Benncr SA et al. Welch WJ: Role of major hcat-shock date. Hartl FU: Molecular chaperone functions of heat-shock proteins. Creighton TE: Proteln Structuve A Practica1 Approach Oxford. Bollag DM.21293 Hendrick JP. o l isi l hidroxilasa (capitulo 57) RESUMEN Las caracterlsticas estructurales de las protehas se consideran bajo cuatro órdenes: primario. Creighton TE: Prorein Struchre. De mancra similar. 1986.9:601 Gierasch LM. La estructura cuaternaria. Anierican Asso- ciation for the Advancement of Science. las hidroxilasas prolil y iisil son inactivas. que conciernen a conformaciones proteíni- cas permitidas por los enlaces peptídicos. técniLas cas físicas para estiidio de órdenes superiores de estructura proteinica incluyen cristalografía con rayos X (estructura secundaria v terciaria) mhs ultracetitrifugación. La estructura primaria. terciaria y cuaternaria con perdida concomitante de la actividad biolhgicn (desnaii~alizacion). filtracf~nen gel y electroforesis en gel (estructura cuaternarial. una enfermedad nutricional caracterizada clínicamente por sangrado dc las encías. Chapman & Hall. 1990. 1990 Brrnden C. M a r t i n J. Landry S J . La estructura secundaria hescribe el plegaAiento de cadenas polipeptidicas en figuras unidas por pucntes de hidrbgeno rnuftiples como helice alfa y hoja plegada beta. procoihgcna N-peptidasa. no estequiometrica de grupos R hidrofobos en el interior de las proteínas. Luego. son dictadas Dor la estructura nrimaria. las iirdenes su~eriores estabi lise zan sólo por fuer7as dbbiles que incluyen puentcs de hidrhgena múltiples.

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como el hern .3bisphosphoglicerafe) esencial para comprender los es mecanismos del mal de montafía y de la adaptacihn a las grandes altitudes. Por último. de manera elocuente. M. los grupos son metilo (M). la oxidación del Fe2'de mioglobina y hemoglobina destruye su actividad biológica. rrdlicos (y sus iones methlicos relacionados) incluyen los citocromos (Fe2' y Fe3'). Pr. respectivamente.3-bisfosfoglicerato (BPG. este capitulo estudia la rnioglobina y la hemoglobina. En el centro de este anillo planar. la oxidación y la reducción del htorno de hierro son esenciales para su funci6n bioldgica. IMPORTANCIA BIOMÉDICA Las proteínas hemicas intervienen en el transporte y fijacibn de oxígeno. Los sustituyentes beta deteminan si un tetrapirrol es hem o un compuesto analogo. En un sentido. Pr. caracterizadas por defectos en la síntesis de la hemoglobina). M (figura 7-2). Los carbonos alfa estdn unidos por puentes metileno en un tetrapirrol. las enzima catalasa y triptófano pirrolasa y la clorofila (Mg2*). hay un titorno de hierro ferroso ( ~ e ~ ' ) Otras proteinas con grupos prostt5ticos tetrapi. V. la estabilizacEbn de la eshuctura cuatemariade la desoxihemoglobina por el 2. por lo que su color es rojo intenso. su mayor significado médico consiste en que su conocimiento muestra. V. Ademiis. 2. M. el hem. PhD Como ejemplo de la relación estructura-función proteinica. - Figura 7-1. del inglés. El cianuro y el mon6xido de carbono son tbxicos debido a que interrumpen la función fisiolbgica de las proteinas hdrnicas. El estudio detallado de la hemorrlobina y la mioglobina ejemplifica aspectos estructuraIes comunes a muchas proteinas. La extensa red de enlaces dobles conjugados del hem absorbe luz en el extremo bajo del espectro visible. este conocimiento permite reconocer la base rnolecular de enfermedades genéticas como la enfermedad de cklulas falciformes (que resulta de la alteracibn de las propiedades de superficie de la cubunidad beta de la hemoglobina) y tas talasemias (enfermedades hemoiiticas familiares crbnicas. citocromo oxidasa y hemoglobina.Proteínas: miogIobina y hemoglobina Víctor W. proteinas importantes por derecho propio y porque en ellas puede apreciarse cómo las estructuras de las proteinas conforman o determinan sus funciones bioldgicas. las relaciones estructurafuncibn de las proteínas. Pirrol. EL HEM Y EL HIERRO FERROSO CONFIEREN LA PROPIEDAD DE ALMACENAR Y TRANSPORTAR OX~GENO La mioglobina y la hemoglobina poseen coma grupo prostdtico un tetrapirrol cicIico. Por el contrario. En el hern. vinilo (V) y propionato (Pr) y siguen el orden M. Los carbonos beta sostienen a los sustituyentes característicos de un tetrapirrol específico. en el transporte de electrones y en la fotosintesis.En los citocromos. Rodweii. Los tetrapimoles constan de cuaao mol~culas girrol (figura 7-1) enlazadas en un anillo de planar por cuatro puentes al fa-metileno.

los residuos histidilo Fg (proximal) y E7 (dista]) (figura 7-3). La quinta y la sexta posiciones de coordinacbn del Fe2+con perpendiculares y directamente arriba y abajo del plano del anillo hemico. el Btorno central de hierro y la ubicación del lado polar del anlllo hemica (casi a las siete horas del reloj) que se enfrenta a la superficie de la molécula de mioglabina. Exhiben virtualmente el mismo espectro de absorción. estar en sentido espacial muy juntos. Sin embargo. el oxigeno almacenado se libera para usarse en las mitocondrias musculares para la síntesis de ATP dependiente de oxígeno.La superficie es polar y el interior no polar. "His FX" se refiere al m v o residuo en la hClíce F e identifica a un residuo histidilo. no es excepcional respecto a sus 153 residuos aminoacídicos.5 x 2. Los residuos con regiones polares y no polares (por ejemplo. por ejempIo.66 Rioquímica de Harper (Capitulo 7) Figura 7-2.5 nm (figura 7-3). La oxirnioglobina almacena oxígeno La mioglobina del tejido muscular rojo almacena oxlgeno. Las regiones donde se localizan las hklices alfa se designan con las letras que van de la A hasta la H. no obstante. Academic Press. Hem Los carbonos de los anillos pirrolicos y de los puentes de metileno son coplanares y el átomo de hierro (Fez+) esta casi en el misma plano. en hélices diferentes) pueden. Fen y Met). cadena polipeptfdica sencilla con peso moIecular de 17 000. toscamente esférica. Sin Figura 7 3 . en su distribución espacial hay diferencias evidentes. que mide 4. 1964 Reproducida con autorización ) . en el ejercicio extenuante). se denominan hklíces de la A a la H. Bajo condiciones de escasez (por ejemplo.Las regiones interRelicales se identifican con las letras de las dos hhlices que conectan. Con dos excepciones. los residuos polares están en la superficie de la rnioglobina L a mioglobina. Modelo de mioglobina de baja resolucibn S610 se muestran los Btomos de carbono alfa.jemplo. La estructura secundaria y terciaria de la rnioglobina en solución es muy semejante a la de larnioglobina cristalizada. Val. Comenzando por la terminal amino. Sin contar los dos residuos histidilos que funcionan en lafijacion del oxlgeno. 2 Neurath H [Editor]. Leu. La mioglobina es rica en hélices alfa La mioglobina es una molecula compacta. Tre. la cristalina fija oxígeno y la cantidad de hélice alfa en una solucibn (calculada por la dispersión óptica rotatoria y dicroísmo circular) se aproxima bastante a la mostrada por el análisis cristalográfico con rayos X. a cada hélice alfa. Para facilitar la referencia a regiones particulares de estructura secundaria o terciaria de un polipéptido. Los residuos individuales se designan por la letra de la hdlice en la que residen y un nrjmero que indica su distancia desde [a terminal amino de esa hélice. embargo. patrón típico de las proreinas globulares. Por ejemplo.5 x 3. Obsérvese la naturaleza de los grupos sustitvyentes en los carbonos beta de los anillos pirrblicos. su conformación es atipica. 2nd ed vol. Tri y Tir) orientan sus partes no polares hacia el interior. hoja beta o asa se le asigna un nhmero o letra a partir de la terminal amino del polipeptido. el interior de la mioglobina s61o contiene residuos no polares (por e. Aproximadamente 75% de sus residuos se distribuyen en ocho hhlices alfa (giro a la derecha) de 7 a 20 aminohcidos de longitud. Los residuos que en la esttuctum primaria se encuentran bastante alejados (por ejemplo. (Basada en Dickerson RE en: The Proteins.

01 nm (0. el contenido completo de hélice alfa se recupera y la adiciirn de Fe2' restablece su actividad biolbgica (fijaci6nde oxigeno) integra. la histidina distal (His E7) permanece en el lado del aniilo hdrnico al otro lado de His F8 (figura 7-4). La quinta posici6n de coordinacion del átomo de hierro se une al nitrógeno de un anillo de la histidina proximal. un htorno de oxigeno ocupa la sexta posicion de coordinaci6n del iitorno de hierro y entonces &te se desplaza a 0.1 A) fuera del plano del hem. este importante concepto se extiende a otras proteinas: la estructura primaria de una proteina dirige su conformacibn secundaria y terciaria. En la mioglobina oxigenada. que se encuentra en un surco entre las hélices E y F (figura 7-3). se orienta con sus propionatos polares en la superficie. especificar el plegamiento de la proteina a su conformacibn nativa con actividad biológica. Si se retira la urea por diálisis y se agrega hem. el enlace entre este y Fe2' es perpendicular al plano del anillo hemico. el hierro del hern se encuentra aproximadamente a 0. con excepcidn de His E7 y de His FS. Por tanto. Aunque no estit enlazada a la sexta posicion de coordinacidn del hierro. hacia el plano del anillo. Como se explic6 en el capítulo 6. Anguios pceferidos para el enlace del oxfgeno y el rnonbxido de carbono al átomo de hierro del hern libre [línea gruesa) . los residuos circundantes son no polares. 4 ' HISdista1 (ET) Las histidinas F8 y E7 llevan a cabo funciones únicas en la fijación de oxígeno El hern de la mioglobina. La adicibn subsecuente de urea elimina todo el contenido de hklices atfa. His proximal (Fa) P. 1975 ) La apomioglobina proporciona un ambiente adverso para el hierro hernico Cuando el oxigeno se une a la rnioglobina.03 nm (0. Springer-Verlag. la oxigenacibn de la rnioglobina va acornpaflada por el movimiento del átomo de hierro. la estructura primaria de la apomiogiobína determina un plegamiento proteínico correcto Cuando la apomioglobina (mioglobina sin el grupo hem) es preparada reduciendo el pH a 3.5. Figura 7 4 . Un segundo átomo de oxigeno se une en un dngulo de 121" con respecto al plano del hern y orientado alejándose de la h istidina dista1 (figura 7-51. Por tanto. His F8 (figura 7 4 ) .3 A) fuera del plano del anillo en direccidn a His F8. Figura 7-6. su contenido de h&licealfa decrece de manera notable. El hierro se mueve hacia el plano del hern cuando se fija el oxígeno En la rnioglobina no oxigenada.Proteínw: miog/obinuy hemoglobina 67 En presencia del hem. la infomacidn estnictural primaria contenida en la apomioglobina puede. y el consecuente desplazamiento de His FB y los residuos aminoacldicos enlazados por covalencia a CI. en presencia del hern. El resto se proyecta hacia el interior de la rnolkcula de mioglobina en donde. Este movimiento produce una nueva conformacibn de ciertas porciones de la proteina. Adicidn del oxlgeno al hierro hemico en la oxigenacibn Tambien se muestran las cadenas imidazólicas laterales de los dos resrduos importantes de histidina de la globina que se adhieren al hierro del hem (Reproducida con autoruacion de Harper HA y colaboradores Phys~ologische ChemEe.

COZ Y PROTONES La hemoglobina de los eritrocitos de los vertebrados llevan a cabo dos funciones biolbgicas principales: 1) transportar el 0 2 del aparato respiratorio a los tejidos perifericos y 2) transportar el C01 y los protones. Aunque esta orientacion es posible para el hem aislado. Sin embargo. como PO2 o presión parcial de oxigeno) en et entorno inmediato del hierro h&rtico. Ea relacion entre PO? y la cantidad de oxlgeno unido puede graficarse como una curva de saturacibn de oxigeno (disociacidn del oxígeno).El mon6xido de carbono (CO) se une al hem aislado con una afinidad aproximadamente de 25 000 veces mayor que la del oxigeno. Si la amibsfera contiene restos de CO y el catabolismo normal del propio hern produce cantidades pequefias de este gas. desde los tejidos perifericos hasta los pulmones para ser excretados. en la privacibn de oxigeno que acompaflñ al ejercicio físico extenuante. obstante. La orientacihn preferida del CO para enlazarse al hierro hkmico es con los tres átomos (Fe. pero eficaz para almacenarlo? La cantidad de oxigeno unido a la rnioglobina (expresada como "porcentaje de saturacibn ") depende de la concentracibn de oxigeno (expresada LA HEMOGLOBINA TRANSPORTA 0 2 . por lo común. tejidos (20mm Hg) y el músculo en trabajo activo (5 mm Hg). en la mioglobina la histidina dista! obstaculiza esttricamente a los enlaces de CO en este Angulo (figura 7 6 ) . Para la mioglobina. Dado que la PO2 en el lecho capilar pulmonar es de 100 mm Hg. O) en posición perpendicular respecto al anillo hémico (figura 7-5). Figura 7 4 . . la miaglobina podria retener oxigeno de manera eficaz en los pulmones. no sirve como un vehículo eficaz para el transporte del oxigeno de los pulmones a los tejidos perifkricos. Aunque la bioquímica comparativa de las hemaglobinas de los vertebrados constituye un campo fascinante. aproximadamente 200 veces la fuerza del enlace hem02. Anguios para el enlace del oxigeno y e l rnonbxido de carbono al hierro hérnico de la mioglobina La histidina distal E7 obstaculiza el enlace del CO en su Angulo preferido (1 80 O) respecto al plano del anillo hbmico. Esto obliga al CO a unirse en una configuracibn menos favorabte y reduce la fuerza de la unión hem-CO en más de dos órdenes de magnitud. Curva de fijecibn de oxlgeno para la mioglobina Obsérvese la relacibn entre el porcentaje de saturacidn y las presiones pardaks representativasen pulmones(lO0 mm Hg). No obstante. A esta presión. la mioglobina cede con facilidad su oxigeno pare la síntesis oxidativa de ATP por las rnitocondrias musculares. Puesto que la mioglobina no puede liberar una fracción grande de su oxigeno unido aún a 20 rnm Hg. LAS CURVAS DE DISOCIACIÓN DEL OX~GENO PARA LA MIOGLOBINA Y LA HEMOGLOBINA EXPLICAN SUS FUNCIONES FISIOLQGSCAS ¿Por que la mioglobina es inadecuada como proteina transportadora de oxígeno. aqui sólo se describirkn las hemoglobina~ humanas. C. la forma de la isotenna de absorción de oxígeno es hiperbblica (figura 7-7). ¿por qué entonces no es el CO (en lugar del Oz) e[ que ocupa la sexta posicidn de coordinacibn del hierro hémico de la mioglobina? La respuesta se encuentra en el ambiente adverso del hem en la mioglobina. la POz de la sangre venosa es de 40 mm Hg y la del músculo activo aproximadamente de 20 mm Hg. Flgura 7-7. una pequeila cantidad NO (m8s o menos 1%) de la mioglobina está presente en forma de mioglobina-CO. la PO2 del tejido muscular puede disminuir hasta 5 mrn Hg.

La oxigenación de la hemoglobina se acompaña por cambios en la conformación de la apoproteína La hemoglobina fija cuatro rnol~culas oxlgeno por de tetrhmero (uno por cada subunidad hdmica). compuestas de pares de polipbptidos diferentes (denominados alfa. Aunque semejantes en longitud global. delta y g a m a de las hemoglobinas humanas tienen estructuras primarias altamente conservadas. deltaz (azSz. 4th ed McGraw-Hill. exhiben estructuras secundarias y terciarias casi idrlnticas.shemoglobinas comunes son: H1iA @emoglobina normal del adulto) = alfazbeta2. compdrense estas cantidades a la PO2 de los pulmones humanos (100 mrn Hg) y de tos tejidos (20 mm Hg) con las de la rnioglobina (figura 7-8). Igual que en la rnioglobina. HbF memoglobina fetal) = alfaz. Si ya existe oxigeno unido. steros: espacio} de la hemoglobina proporcionan un modelo para comprender otras proteínas alostericas. aun- 100 . A diferencia de la mioglobina. la hemoglobina muestra una cinética cooperativa de fijacibn. etcétera). también rnkirna. los polipdptidos alfa (14 1 residuos) y beta (146 residuos) de la hemoglobina A (HbA) son codificados por genes diferentes y tienen estructuras primarias distintas.50 P a. La tensión artenal de oxigeno es aproximadamente de 100 mm Hg. Z hemoglobina es una proteína a tetramérica Las hemoglobinas son protcinas tetramdricas. pernoHbS globina de c&lulasfalciformes) = alfa2S2. p 40 30 20 'lo ' 0 20 40 00 80 100 120 140 Presidn gaseosa del oxígeno (mrn Hg) Flgura 7-8. beta. la Psopuede variar ampliamente. Esta semejanza que se extiende a la ubicacibn del hem y de las ocho regiones helicoidales. la facilidad con la que el Ozse une a la hemoglobina depende de la presencia de otras moléculas de 0 2 en el mismo tetrámero. f 978 ) . delta. con la POz baja que prevalece en los tejidos perifdrjcos. Ademh.70 La mioglobina y las su bunidades beta de hemoglobina comparten estructuras secundarias y terciarias casi idénticas A pesar de las diferencias en el tipo y niimero de aminoácidos presentes en la mioglobina y en el polipéptido beta de HbA.LAS PROPIEDADES ALOSTÉRICAS DE LAS HEMOGLOBINAS SON CONSECUENCIA DE SUS ESTRUCTURAS CUATERNARIAS Las propiedades de cada hemoglobina son consecuencia inherente de su estructura cuaternaria. Por tanto. La estructura cuaternaria Z da a la hemoglobina propiedades adicionaIes sore prendentes (no existentes en la mioglobina) que la adaptan a su función biologica única y le permiten una regulacibn precisa de sus actividades. No asi. (Modificada con autorizacidn de Stanbury JB. el polipéptido beta es muy semejante a la rnioglobina a pesar de la presencia de siete hélices en lugar de ocho. es consecuencia en parte de la presencia de aminohcidos de propiedades análogas en puntos equivalentes en las estructuras primarias de ambos. propiedad que le permite retener una cantidad máxima de oxígeno en los pulmones y ceder una cantidad. 2 60 . Las estructuras tekarnéricas de 1a. Por tanto. Wyngaarden JB.&). la fijacibn de subsiguientes moltculas del mismo tiene lugar con mayor facilidad. Dependiendo del organismo. los residuos hidrofobos son internos y (de nuevo con excepci6n de los dos residuos His por subunidad). así como de la secundaria y la terciaria.). allos: otros. Por ejemplo. Ademas las propiedades alostéricas (del griego.gammaz(a2. Curvas defijacibn del oxígeno de la hemoglobina y la mioglobina. tos residuos hidrbfílos son características de la superficie en las subunidades alfa y beta de la HbA. la tensibn caprlar (músculo activo) del oxígeno es de 20 mm Hg y la tensibn de oxígeno minirna requerida por las enzimac citocrómicas es de 5 mm Hg. HbAz (una y hemoglobina menor del adulto) = alfaz.g so 'O c 90 5 . y sus curvas de saturacibn de oxigeno son sigmoideas (figura 7-8). S. Fredrrckson DS [editors]: The Metabolic Basis of lnhented Disease. La P50 compara las afinidades relativas de diferentes hemoglobinas para el oxigeno La PW es la presibn parcial de oxfgeno que satura la mitad de una moltcula de hemoglobina. La agrupacibn de cadenas en una estructura tetramkrica (hemoglobina) permite una cesibn mayor de oxígeno que la que sería posible mn cadenas sencillas. la tensión de oxígeno de la sangre venosa mezdada es de más o menos 40 rnm Hg. las estructuras primarias de las cadenas beta. garnrna.

tiene la camposici6n alFa: gammaz. alfa ha reemplazado a las subunidades zeta y a 10s pCptidos Cpsílon. la hemoglobina F. dcspuks del parto la HbF es inadecuada. Pro = 26 mm Hg. comprende el cambio de un puente de hidrbgeno a otro distinto Los dernac enlaces son no polares (Reproducida con autorización de Perutz MF: Molecular pathology of human hemoglobin Stereochernical interpretation of abnormal oxygen affinities Nature 1971. Enlaces salinos entre las diferentes subunidades de la desoxihemoglobina Estas interaccioneselectrastáticas no covalentec son interrumprdas por la oxigenación (Ligeramente modtficada y reproducida con autorización de Stryer L. el par alfa2lbeta2 derjva un poca hacia el eje. Asi. Para H bA. Brachemistry. 1 Forma T wi Forma R Figura 7-10. cuya sintcsis comienza en el tercer trimestre. Pru= 20 mm Hg. Esta diferencia permite a la HbF extraer oxígeno de la HbA de la sange placentaria. human~iaI hemoglohin) proporciona un ejemplo representativo. Figura 1-9. Al principio. 2nd ed Freernan. que es la hemoglobina de Ia vida fetal tardía.' II. 1981. para HbF.408 ) . Las cadenas beta. En el diagrama.232. ya que su elevada afinidad por el oxígeno la obliga a ceder menos O2a los tejidos. Grandes cambios de conformación acompañan la oxigenación de la hemoglobina La unión del oxígeno ocasiona la rotura de los enlaces salinos entre carboxilo de las cuatro subunidades (figura 7-9). Cambios en el contado alfailbeta2 en la oxigenacion Et contacto se cierra de un Area en forma de cola de paloma a otra. el par aifallbetal no ect6 sombreado y se conserva f ~ oen tantu que el par sombreado . Al final del primer trimestre. Sin embargo. La hemoglobina fetal humana (H bl: del inglés. La fijación subsecuente de O2se facilita ya que se requiere la rotura de un número menor de enlaces salinos. L a estructura cuaternaria de la hemoglobina parcialmente oxigenada se describe como el estado T (tenso) y el de la hemoglobina oxigenada (HbOz) DESOXI (forma T) 0x1 (forma R) His 94 Asn G41102) COO 4 / n= ASP NH. no reemplala en su totalidad a gamrna hasta algunas semanas despues del nacimiento. haciendo compacto al tetramero e incrementando Ia afinidad de los hemes por el O: (figuras 7-1 0 y 7-1 1 ). Un par de unidades alfdheta gira con respecto al otro par alfabeta. Durante la trancicibn de la forma T a la R de la a hemoglobina se produce F rotacibn da un par de subunidades rigidas (alfaZlbeta2) de 15 grados en relación con el otro par de subunidades rígidas (alfallbetal) El eje de rotacibn es excéntrico y además. alfa2lbeta2 gira y se desplaza. Estos cambios alteran lambidn de manera profunda las estructuras secundaria. terciaria y cuaternariade la hemoglobina.) Figura 7-1 1. el feto humano no sintetiza cadenas alfa ni beta sino reta y epsilon.70 Bioquimica de Harper (Capiau/o 7) que en todos los casos es superior a la PO?en !os tejidos periféricos del organismo en cuestihn.

En los pulmones. los puentes salinos (lineas delgadas) que enlazan las sribunidades en la estructura T. Este fenbmeno reversible se llama efecto Bohr: este efecto se acompafía por una desviacibn de la curva de oxigenacibn hacia la derecha. cloro y BPG. debe existir un sistema amortiguador que absorba el exceso de protones. Este se disociacon rapidez en bicarbonato y un protón.06 nm fuera del plano del anillo hérnico) se mueven hacia este plano (figura 7-13). que avanza hacia el plano del anillo y arrastra consigo a residuos adheridos a His F8. Después de la liberación de oxígeno a los tejidos. pero se vuelve rnhs probable con cada oxígeno sucesivo que se une. El bióxido de carbono reacciona con los grupos amino terminales de la hemoglobina. la hemoglobina facilita el transporte del COz de los tejidos a los pulmones para ser exhalado. Para evitar que se aumente la acidez en la sangre. La R y T se utilizan tambikn para describir las estructuras cuaternarias de las enzirnas alostkricas. situación tipica del estado "desoxi". más oxígeno debe unirse para desencadenar la transiudn Aquí no se muestran mol&culac totalmente oxigenadas en la estructura T ni totalmente desoxigenadas en su forma R. bamato y liberando protones que contribuyen al efecto Bohr. laanhidrasa carbónica de Ios eritrocito5 cataliza Ia formación de ácido carbonico (figura 7-14). el proceso se invierte. es decir. que es exhalado. Mientras mayor sea su mncentracion. Este movimiento se tsansmite a la histidina proximal (Fg). Con ayuda de la anhidma carbbnica. debido a que son demasiado inestables para existir en cantidad significativa. la hemoglobina transporta COZy protones a los pulmones Además de llevar el oxigeno de los pulmones a los tejidos periféricos. donde el estado T tiene afinidad menor por el susírato.como el estado R (relajado) (figura 7-12). es decir. (Modificada y redibujada Con autorizacidn de Perutz MF Hemoglobin structure and respiratory transport Sci Am [Dec] 1978:239. Cuando la sangre recibe el Coa. La hemoglobina puede un irse directamente al COI cuando cede su O? y aproximadamente 15% del CO1 acarreado por Ia sangre es transportado asi. m Estructura T Estructura R Figura 7-12. la oxigenacibn de la hemoglobina se acompafía de la expulsi6n y la subsiguiente exhalación de COZ. el hcido carb6nico forma Coz.=ZH'+ H ~b4-COO- La oxigenación de la hemoglobina se acornpaiia de cambios de conformación en la vecindad del grupo hern En la oxigenación. la fijacibn de! oxigeno obliga la expulsibn del COz. La Iransicibn de la estructura T a la estructura R es mfis probable conforme se oxigena cada 1 d e los 4 grupos hem de una hemoglobina tetrhmera En este modelo. incluyendo protones. CO~+H~-NH. La mioglobina no muestra tal efecto. los protones se liberan y se unen al bicarbonato formando hcido carbónico. Por tanto. formando un car- La conversión del amino terminal de una carga positiva a una negativa favorece la formacibn de un puente salino entre las cadenas alfa y beta. La transición entre las dos estructuras es modificada por varios factores. La hemoglobina retiene dos prorones por cada cuatro rnoltculas de oxigeno que pierde y de este modo aumenta la capacidad amortiguadora de la sangre (figura 7-15). En los pulmones. la hemoglobina se encuentra menos saturada a una presión parclal de oxígeno dada. se rompen progresivamente al unirse al oxigeno y aún aquellos enlaces salinos que no se han roto se debilitan cada vez m i s (lineas onduladas) La transicibn de T a R no tiene lugar sino decpu6s de q u e se han filado cierto numero de rnolewlas de oxigeno. los Qtomosde hierro de la desoxihemoglobina (que se encuentran alrededor de 0. conforme el oxígeno se une a la desoxihemoglobina.92 ) . bióxido de carbono. El efecto Bohr es una propiedad de la hemoglobina tetramérica y depende de la interaccibn hem-hem o de efectos cooperativos.

conducen al bicarbonato hacia el acido carbbnico. 1. La cavidad central es de tamaño suficiente para el BPG sblo cuando el espacio entre las hélices H de las cadenas beta es de una anchura adecuada. ración de los enlaces salinos propicia la liberacibn del O2 de la hemoglobina oxigenada (forma R). Efecto Bohr El bibxido de carbono generado en los tejtdos periféricosse combina con el agua para formar Audo carbbnico el cual se disocia en iones bicarbonato y protones. Estos protones. la unibn del oxígeno a la hemoclobina desaloja a los protones. una escasez de oxigeno acumula el 2. en tanto que un incremento en el oxlgeno provoca la liberacibn de protones. Por tanto. La hemoglobina desoxigenada actúa como un amortiguador al fijar protones y liberarlos en los pulmones Aqui. liberados de los itomos de nitrógeno de los residuos HC3 (His 146) de la cadena beta. (Ligeramente modificada y reproducida con autorizacibn de Stryer L Biochemistry. en la cesibn del oxigeno E estructura T y los a puentes salinos se regeneran. Por otro lado. Formacibn de á d o carbónico. que es exhalado desde los pulmones. Los protones que causan el efecto Bohr se generan por rotura de enlaces salinos durante la fijación del oxígeno Los protones que ocasionan el efecto Bohr. el cual es liberado como C 0 2en la sangre alveolar (figura 7-1 5). El primer fenbmeno puede representarse en una curva de disociacibn del oxigeno por un desplazamiento a la derecha al aumentar la concentración de iones hidrbgeno (protones). son generados por la rotura de puentes salinos durante la fijacibn del oxigeno a la estructura T. mtatizada por F anhidrasa carbbnica eritroutaria y disociacibn del áudo a carbbnico a ion bicarbonato y un protbn. es decir cuando la molécula de hemoglo- Figura 7-14. La regene- Figura 7-15.:>-03 TEJIDOS FERIFERICOS (Amortiguador) 2HzCOa PULMONES Generado por el dcb de Krebs /' Figura 7-13. + 2HzO 2HXOs 1l 3 z Il Repulsibn 41 Plano de la porñrina 2HCO3- + 2H + 4% x.. estos se combinan con el ion bicarbonato y regeneran al ácido mrbbnico el cual. y tos protones se unen a los residuos HC3 de la cadena k t a . El Btomo de hierro se mueve en el plano del hem durante la oxigenacibn La histidina F8 y sus residuos relacionadosson arrastrados con el fitomo de hierro.3-bicfosfoglicerato (BPG) estabiliza la estructura T de la hemoglobina En los tejidos perifericos. produce bibxido de carbono.3-difosfoglicerato (BPG)(figura 7-1 6). En resumen.3-bisfosfoglicerato. cuando es dechidratadopor la anhtdrasa carbbnica.(Capítulo 7) Histidina Fa ZCO. la presen~iade protones en los tejidos periféricos favorece la formación de puentes salinos en la residuo His terminales de las subunidades beta. . Este compuesto se forma a partir del intermediario de la vla glucolitica. 2nd ed Freeman 1981. El 2. un incremento en los protones estimula la liberacibn de oxígeno. Una molécula de BPG se une a cada tetrámero de la hemoglobina en una cavidad formada por residuos de las cuatro subunidades.

De los varios cientos de hemoglobinas humanas mutantes conocidas (lamayoría son muy raras y benignas). ya que forma un complejo i6nico firme con el anión fenolato de Tir. El BPG se une de manera más dtsbil a la hemoglobina fetal que a la hemoglobina del adulto debido a que el residuo H21 de las cadenas gamma de la hemoglobina fetal es Ser en lugar de His y no puede formar un puente salino con BPG. por tanto.146. El BPG es unido mediante puentes salinos entre sus Sitornos de oxigeno y las dos cadenas beta a travks de sus grupos m i n o arnino-termina1 (Val NAl ). En la hemoglobina M. el BPG estabiliza la forma T o desoxigenada de la hemoglobina por medio de enlaces cruzados con las cadenas beta y por contribuir con puentes salinos adicionales. la hemoglobina Figura 7-17. La hipoxia tisuIar que se produce lleva a policiternia (incremento en el número de eritrocitos). La cadena beta de estas variantes presenta cambio R-T y. puede ser adquirida (por ejemplo. Las mutaciones (por ejemplo. Tanto los factores espaciales como los electrostáticos median ese desencadenamiento. En las variantes de la cadena alfa de la hemoglobina M. BPG tiene un efecto menos profundo en la estabilización de la HbF y es causa de que esta parezca tener una mayor afinidad por el oxigeno que la hemoglobina del adulto. Modo de enlace del 2-3-bisfosfoglieeratoa la Chesapeake} que favorecen la f o m a R muestran una deaoxihemoglobina humana. no puede participar en el transporte de oxlgeno. en seguida se descriixn algunas. Por lo anterior el SE HAN IDENTIFICADO VARIOS CIENTOS DE HEMOGLOBINAS HUMANAS MUTANTES Las mutaciones en los genes que codifican las cadenas alfa y beta tienen potencial para afectar la functdn bioldgica de la hemoglobina. cuya función biológica esti alterada.3-bisfosfoglicerato(BPG). hereditaria (debido a la presencia de HbM) o causada por la disminuci6n de Ia actividad de la rnetahemoglobina reductasa. el equilibrio R-T favorece a la forma T. Asi. que deben romperse antes de que se produzca la f o m a R. Tir reemplaza a His F8 El hierro hdmico se estabiliza en el estado Fe".Proteinas: miogioblna y hemoglobina 73 Figura 7-16.ceden en suficiente cantidad a los tejidos periftricos.341phospho. se produce el efecto Boht. Estructura del 2. f f glycerate to human deoxyhemoglobin Nature 1972. donde el ion hierro del hem está en estado férrico en lugar de ferroso. un cambio minimo en la posición de Fe2' en relacibn al anillo de porfirina induce variaciones significativas de las confonnaciones de la hemoglobina y afecta de manera decisiva su función biolbgica en respuesta a una sena1 ambiental. El BPG interactba con tres afinidad creciente por el oxigeno.Puesto que la metahemoglobina no fija 01. con la oxidacirin de Fe2' a Fe3+por compuestos tales como las sulfonamidas). Reproducida con autorizacibn. Lis EF6 y His H21 (figura 7-17). bina esta en la forma T. Larnetahemoglobinemia. enzima que reduce el Fe" de MetHb a Fe2+. La afinidad por el oxigeno esta disminuida y no hay efecto Bohr.237. Cuando la alteracibn de la funcibn biolbgica se debe a una rnutacidn en la hemoglobina. El desencadenante de la transicibn entre R y T de la hemoglobina es el movimiento del hierro dentro y fuera del plano del anillo de porfirina.) . el trastorno se conoce como una hemoglobinopatia. Por tanto. por lo cual no lo grupos d e carga positiva en cada cadena k t a (Basada en Arnone A: X-ray diffraction study o binding o 2.

pero en la hemoglobina S oxigenada este sitio complementario esta enrnascarado (figura 7-1 8). capítulo 59) o a la produccibn alterada de eritrocitos (es el caso de la deficiencia de ácido fólico o vitamina Biz. Aunque después de un infarto del mimardio es Q O S ~ ble detectar la mioglobina en el plasma. la uni6n de la hemoglobina S adherente a la desoxihernoglobina A no puede extender el polimero. 1981. Esta zona existe en las formas oxigenada y desoxigenada de la hemoglobina S pero no en la hemoglobina A. ya que esta iiltírna no tiene zona adherente para promover a su vez la unibn de otra molCcula de hemoglobina. pero la presencia de la desoxihernoglobina A termina la polimerizacibn debido a que no posee zona adherente. si [a hemoglobina S pudiera conservarse en su estado oxigenado. la uni6n de la desoxihemoglobina A a la forma R o a la forma T de la hemoglobina S terminará la polimerizacibn. un residuo valil reemplaza al glutamato beta-6 En la hemoglobina S. 2) Anemias: Las anemias comunes (reducciones en la cantidad de eritrocitos o de hemoglobina en la sangre) se deben al deterioro de la slntesis de hemoglobina (por ejemplo. expuesta al agua. [a mioglobina liberada de las fibras muscuIares rotas aparece en la orina. Estas fibras tubulares distorsionan al eritrocito de modo que toma la forma de una hoz (figura 7-20) y son vulnerables a lisis cuando penetran a los intersticios de los sinusoides esplknicos.) . 2nd ed Freernan. oxigenada y desoxigenada (figura 7-1 S). cuya seccion cruzada contiene 14 moléculas de HbS (figura 7-1 9). colorehndola de rojo oscuro. en deficiencia de hierro. En la superficie de la hemoglobina S desoxigenada hay un complemento para la zona adherente. Biochemrstry. Esta union hace que la hemogiobina S desoxigenada se polimerice. 1) Mioglohinuria: Despues de lesiones multiples. es decir. Val reemplaza a Glu A2 (6)P. EI polimero forma una fibra helicoidal torcida. (Modificada y reproducida con autorizaubn de Stryar L. Aunque la desoxihemoglobina A contiene los sitios receptores para ia zona adherente que existe en las hemoglobinas S.En ia hemoglobina S. Esta sustitución reemplaza el residuo polar glutamato por uno no polar y da lugar a una "zona adherente" en la superficie de la cadena beta. no se formarían estos polímeros y se evitaria la aparición de "células falciformes". formando precipitados fibrosos largos que se extienden a través del eritrocito y lo distorsionan mecfinicamente causando lisis y mtiltiples efectos cllnicos secundarios. el andlisis de las enzimas skricas (capitulo 8) proporciona un indice m& sensible del daflo miocárdico. o si la concentracidn de la Forma desoxigenada lograra mantenerse en un mínimo. su zona adherente puede unirse a la zona complementaria de otra molécula S desoxigenada. Representacidn de la zona adherente (A) en la hemoglobina S y su "receptor" ( A ) en las desoxihemoglobinas A y S Las superficies complementarias permiten que la desoxihernoglobina S po/irnerice en una estructura fibrosa. Asl. el residuo 6 de la cadena beta localizado en la superficie de la hemoglobina. capitulo 52). El diagnbstico de las 0 x 1A Desoxi A Oxi S Desoxi S Desoxi A Desoxi S Flgura 7-18. Es evidente que la forma T de la hemoglobina S es la que se polimeriza. Por tanto. La desoxihernoglobina S puede formar una estructura fibrosa que distorsiona los eritrocitoc Cuando la hemoglobina S está desoxigenada.

Reprecentacidn de la estructura helimidal propuesta de una fibra de desoxthamoglobina S agregada En este modelo. Las talasemias y el uso de probadores de DNA para su diagnóstico se consideran en los capitulas 8 y 42. la concentración de HbA i c refleja la concentración sanguínea promedio de glucosa en el periodo de 6 a 8 semanas precedentes. crisis de céluEas Fatciformes y trombosis) provienen de la mutación de un solo residuo polar por uno no polar. La fraccibn de hemoglobina glucosilada. no se traduzca en anormalidades clinicas. Micrografla electrdnica de barrido de un eritrocito normal (A) y uno falciforme {B).Proteínas: miog/ubina y hemoglobina 75 3) Hemoglobinopatias: En tanto que la mutación de ciertos residuos crlticos de la hcmogIobina (como las histidinas E7 o F8) tiene consecuencias graves. las esferas representan moléculas inviduales de HbS (Reproducida con autorizacibnde Maught II: A new understanding of sickle cell emerges Scienoe 1981. es consecuencia de la mutacibn de una sola base en el DNA Ttmina (T) por adenina (A). Figura 7-19. la medicibn de HbAic proporciona Pnfomaci6n util para el manejo de la diabetes sacarina. es posible que la rnutacidn de muchos residuos superficiales. una HbA icelevada. un control m i s riguroso de la alimentación o una dosificacibn mayor de insulina). Figura 7-20. cambio en la mol6cula de El globina beta que causa esta alteracibn estructural. La HbAic. Asi. es proporcional a la concentracibn de glucosa en la sangre. lo cual conduce a la sustitucidn de un residuo de valrna por uno de glutamina en la malécula de globina beta . alejados del sitio de fijacion del hem.211 265 Copyright Q 1981 by the Arnerican Association for tha Advancement of Science ) anemias comienza con la deteminacidn espectrofotométrica de la concentración de hemoglobina sanguinea. la hemoglobina es glucosilada de manera no enzimatica y su hidroxilo anomérico deriva los grupos amino presentes en los residuos lisil y en las terminales amino. Dado que la vida media de un eritrocito es de 60 dias. en donde todos los signos y sintomas (por ejemplo. que indica control deficiente de la glucosa sanguinea. 4) Hemoglobina glucosilada (HbAlr): Cuando la glucosa sanguínea entra a los eritrocitos. normalmente alrededor de 5%. puede guiar al mkdico en la seleccibn del tratamiento apropiado (por ejemplo. puede separarse de HbA por cromatografía de intercambio ionico o electroforesis. Una excepcE6n notable es la anemia de cklulas falciformes. Por tanto.

Por tanto.316:56. la información estructural primaria impEicita en apoMb (y por extensidn. Methods Enzymol23 1 :1994. Eaton WJ. Esto crea una "zona adherente" que tiene un complemento sobre la desoxiHb (pero no en oxi Hb). desoxiHbS polimeriza. en tanto que con Wb es sigmoidea. 6th ed. En la cavidad central de la desoxiHb. RESUMEN Las proteínas globulares compactas. N Engl J Med 1987. Las talasemias al fa y beta son anemias causadas por disminución en la produccibn de subunidades alfa y beta de HbA. H1iA). Embury SH: The clinical pathology of sickle-celI disease. En la oxiMb y oxiHb. Biophysiml methods. His F8 y Pos residuos adyacentes se mueven hacia el anillo htmico. E v e r s ~ Vandergriff KD. el BPG es expulsado y la estructura cuaternaria de nuevo queda laxa. Scriver CR et al (editors). dynamic. de un residuo His. Holfrichter J: Sickle cell hemoglobin polym- eritalion.Winslow RM:Hernoglobiiis: Pmt C. Las curvas de saturación muestran la captacibn y liberacirln del oxigeno. comparten una estructura secundaria y terciaria vimialmente idtnticas (no así la Los residuos de arninoAcidos de sus seis (A a H) regiones helicoidales se denominan (por ejemplo) "His P8" -la histidina que es el octavo residuo en la hClice F o sexta. Entre los cientos de mutantes de Hb (en gran parte benignos) se destaca la hemoglobina de las células falciformes (HbS). Las hernoglobinas se saturan a las presiones parciales de sus respectivos órganos respiratorios (por ejemplo. se une con más fuerza al hierro que el 02. que estabilizan aún m8s la desoxiHb. ésta se pliega de nuevo en su confomación nativa. Page 2281 In: The Metabolic Basis of Inherited Disease. El Fe2' del hem se une a los cuatro átomos de nitrogeno del hem y a los dos ligandos adicionales localizados arriba y abajo del plano del hem. En concentraciones bajas de oxigeno. la cavidad central se c o n h e .3-bisfosfoglicerato (RPG) forma enlaces salinos con las subunidades beta. Un ligando es la histidina FX. respectivamente. . Cuando el grupo hem se agrega a una apomioglobina desnaturalizada (Mb sin hem). Esta ultima forma es critica para una mol6cula transportadora de Oz que debe saturarse con oxígeno en los pulmones y liberarlo al m k i m o en los tejidos. McGraw-Hill. and Clinical Aspects. el compuesto 2. Saiki RK et al.: The hernoglobinopathies.228: 1273. Fe2'. Hb es un tetrhmero de dos tipos de subunidades (alfazbetaz en la hemoglobina del adulto. volviendo laxa la estructura cuaternaria y facilitando la fijación de moliculas adicionales de oxigeno. Generic. funcionan en el almacenaje y transporte de oxigeno. Por tanto. La Hb tiene también la funcibn de transportar COI y protones desde los tejidos al pulmbn. 1986. Adv Protein Chem 1990. La consecuencia es una anemia que puede ser muy grave (capítulo 42). Durante la oxigenacion. el sexto ligando es 02. Winslow RM: Hemoglobins: J. Science 1985. 1995. Methods Enzymol232:1994.40:63. Forget BG: Hemoglobin Molecular. [a oxigenacidn de Hb se acompafía de cambies notorios en la conformación. Everse J. con un Fe" central. and reactivity in hemaglobin. El grupo prostktico hem de Mb y I-Ib es un tetrapirrol ciclico. Vandergriff Kü. mioglobina (Mb) y hemoglobina (Hb).230:1350. Biochernical and analytical rnethods. La liberación de oxigeno de ra oxiHb (HbO2) a los tejidos se acornpaiía de captacibn de protones debido a la disminucirln del valor de pK. REFERENCIAS Bunn HF. Weatheral! DJ et al. rica en hélices aIfa. Friedman JM: Structure. un poco plegado. Saunders. a pesar del obsthculo espacial por la presencia de His F7. La adición de Oza desoxiHb destruye los en taces salinos entre subunidades y dentro de ellas. forma fibras y distorsiona los eritrocitos dándoles formas de hoz.: Rapid prenatal diagnosis of sickle cell anemia by a new method of DNA analysis.2:237. Schacter L et al.37:361. Scienm 1985. . Durante la oxigenacirln. La ~b &S monomerica. en otras proteínas) basta para definir la estructura secundaria y terciaria. La Mb y la subunidad beca de Hb. Annu Rev Med 1986. planar en esencia. Los residuos His proximal (F8) y dista1 (E7) descansan en sitios opuestos del anillo hémico. que es la presi6n parcial de O?a la cual se saturan la mitad de hemoglobinas con oxígeno. el sexto ligando es CO el cual.: Altered amounr and activíty of superoxide dismutase in sickle celE anemia.: Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sicklecell anemia. la síntesis de las cadenas alfa (alfatalasemias} o beta (beta-tarasemias) de la hemoglobina estA disminuida. Part B. Las afinidades relativas de las diferentes hemoglobinas se expresan como Pso. Embury SH et al. La curva de Mb es hiperbblica. respectivamente.En una intoxicacibn con monhxido de carbono.Las talasemias se originan de la síntesis reducida de cadenas alfa o beta En las talasemias. HbF se satura con la PO1 de la placenta). en la cual Val reemplaza a Glu beta6 de HbA. FASEB J 1988.

reacciones de transferencia de grupo. Igual que [a biocatálisis que regula [a velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiológicos. Por ejemplo. el. por ejemplo. Luego se describen las isoenzimas. las lipasas hidrolizaban grasas (lipos. Em enzimas se identificaban por la s adición del sufijo -asa al nombre de la sustancia o sustrato que hidrolizaban. Por ejemplo. LAS ENZIMAS SE CLASIFICAN POR TIPO DE REACCIÓN Y MECANISMO Hace un siglo s61o se conocían algunas enzimas. Despues del daflo tisular grave (por ejemplo. pero inequivoco. durante los estados patoldgicos. Con el descubrimiento de m&. Para remediar esta deficiencia. De este modo. Mientras que en estado de salud todos los -esos fisiológicos se llevan a cabo de una manera ordenada. infarto del miocardio o pulmonar. Un conjunto de enfermedades genbticas raras. las deshidrogenasas catalizan la eliminacibn de hidrógeno y 1% transferasas. proteinas. de la nomenclatura . Asimismo.Enzirnas: propiedades generales Los temas considerados en este capitulo incluyen las clases de reacciones catalizadas por enzirnas. en griego) y las proteasas. la participacibn de coenzimas en reacciones de transfemcia de grupo catalizadas por enzima y aspectos de la especificidad enzimiitica. surgieron ambigtiedades inevitables y con frecuencia no estaba claro cukl era la enzima que un investigador deseaba estudiar. concluyendo con el uso de endonucleasas restrictivas en el diagnostico de enfermedades geneticas. laces covalentes. en la actualidad los nombres de las enzirnas enfatizan el tipo de reaccidn catalizada. La incapacidad celular para convertir el arnoniaco tbxico a urea no tóxica es seguida por intoxicacibn con amoniaco y. Por tanto. Internotional Union o Biochemistry) adoptó un f sistema complejo. las amilasas.y mhs enzimas. esta última puede ser perturbada de manera profunda. diagnbstico y el significado pronóstico de las enzirnas dricas. coma hephtico. Aunque hasta hoy persisten numerosos vestigios de esta terminología. la Uni6n Internacional de Bioquirnica (IIJB. en griego). se introducen los m ttodos para purificación. el dafío tisular grave que caracteriza a la cirrosis hepfitica puede deteriorar de modo notable la propiedad de las células para producir enzimas que catalizan procesos metabólicos claves como la sintesis de urea. por último. pero con frecuencia debilitaiites y a menudo mortales. análisis y deteminacibn de la distribucilin intracetular de enzimas. las enzimas llevan a cabo funciones capitales relacionadas con la salud y la enfemedad. regulada y se conserva la homeostasia. alrnidbn (amylon. las enzimas propias de los tejidos específicos pasan a la sangre. oxidacibn o reducción de la función alcohol de un azúcar. muchas de las cuales catalizaban la hidrbtisis de en- IMPORTANCIA BIOMÉDICA Sin enzimas no sería posible la vida que conocemos. demostr6 ser inadecuada cuando se descubrieron varias enzimas que catalizaban reacciones diferentes del mismo sustrato. la determinación de estas enzirnas intracelulares en el suero sanguineo proporciona a los m6dicos inforrnacidn valiosa para el diagnbstico y pronóstico. Aunque el sufijo -asa sigue en uso. incfusive de una sola enzima. proporciona otros ejemplos impresionantes de las drásticas consecuencias fisiolbgicas del deterioro de la actividad enzirnhtica. del inglis. trituracidn de un miembro) o posterior a la multiplicación celular descontrolada (como en el carcinoma prostktico).

E. Por ejemplo. La reacción sirve solamente para oxidar la coenzima reducida NADH a NAD'. algunos metabolitos derivados del piruvato son utilizados como oxidantes para el NADH y ellos mismos son reducidos (cuadro 8-1).1 denota la clase 2 (una transferasa}. subclase 7 (transferencia de fosfato). Las reacciones liticas que comprenden reacciones hidroliticas catali~adas enzimas digestivas no por necesitan de coenzimas. necesarias para ta actividad de las enzimas. 2. puede seguir en paréntesis. 5 y 6 de la . cuando una rnolecula de sustrato es oxidada. una segunda mol~culaorghnica conocida como coenzima. Un caso es la importancia de la capacidad det músculo que trabaja en condiciones anaerobias para convertir el piruvato en lactato no reside en el piruvato ni en el lactato.C. 4) Cada enzima tiene un número clave (E. Otras reacciones pueden servir iguaImente bien. S/ ' H denomina como 1. en las reacciones de oxidorreducci6n (deshidrogenasa). Para distinguirlas de iones methlicos activadores y de las enzimas mismas.1. Ia segunda. Por esta razón. nombres mis ambiguos. sub-subclase 1 (una función alcohol como aceptor de fosfato).-malato + NAD' = pinivato + COI + NADH t . en las bacterias o Fevaduras que crecen en un medio anaerobio. la reduccion del piruvato en lactato reoxida al NADH y permite la sintesis de ATP. 2. Las coenzimas funcionan como reactivos en la transferencia de grupos Las reacciones bioquímicas de transferencia de grupo del tipo MUCHAS ENZIMAS NECESITAN UNA COENZIMA Muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos y otras reacciones necesitan. enzima que cataliza la transferencia de fosfato desde el ATP al grupo hidroxilo del carbono 6 de la glucosa. con terminación -asa. El NAD+ actúa como cosustrato en la reaccibn de la lactato deshidrogenasa . 2) El nombre de la enzima tiene dos partes. Sin N A D ' la glucólisis no puede continuar y 3 sintesis anaerobia de ATP (y por tanto.7. ademb de su sustrato. Una segunda raz6n para dar igual tiifasis a las reacciones de la coenzima es que este aspecto de lareacción es el que puede tener el mayor significado fisioPogico fundamental. Por ejemplo.) que caracteriza al tipo de reaccibn segun la clase (primer digito). En primer lugar. cada una con 4 a 13 subclases. a continuación se presentan sólo principios generales del sistema IUR: 1) Las reacciones y las enzimas que las catalizan se dividen en seis cIases principales.1. la enzima que cataliza ]. El último digito denota a la enzima hexocinasa o ATP:D-hexosa-6-fosfotransferasa. Las coenzimas pueden considerarse como segundo sustrato Puede ser útil considerar a la coenzima como un segundo sustrato por dos razones. Por ejemplo. Las que forman enlaces covalentes con las enzirnas se denominan tambikn grupos prostkticos.37 ~-malato:NAD oxidorreductasa (descarboxi lante). indica el tipo de reacción catalizada. las coenzimas se definen como compuestos orgánicos termoestables. una rnoIkcula de coenzima es reducida (figura 8-1). La primera es el nombre del o de los sustratos. subclase (segundo digito) y sub-subdase (tercer digito). AsC. las reacciones de transferencia de grupo e isomerizacibn y las reacciones que forman enlaces covalentes (claves 1.enzimhtica basado en el mecanismo de reacción. Aunque su claridad y carencia de ambigüedad recomiendan a[ sistema de nomenclatura IUB para trabajos de invcstigación. c-Lactato o NAD" x O piruvato NADH + H+ Flgura 8-1. el trabajo) a tiene que cesar. los cambios químicos en la cOenzima compensan exactamente a los que se realizan en el sustrato.1. sin la cual son inactivas. Entre las reacciones que necesitan coenzimas están las oxidorreducciones. de peso molecular bajo. En condiciones anaerobias. 3) Infonnacion adicional. La mayoda de las coenzimas se unen a las enzimas por fuerzas no covalentes. El cuarto digito es para la enzima especifica. si es necesario aclarar la reacción. IUB).C. pero afortunadamente: bastante mhs cortos persisten en libros de texto y en el laboratorio clínico.

pr6ximos a adherirse en tres puntos a un sitio de la enzima. representada como un átomo de carbono que tiene tres grupos diferentes. del tos inglés. NADP+ FMN. El esquema siguiente muestra el ultimo concepto. ejemplos incluyen NAD' y NADP' (tlgura 8-2). . FAD. nótese que puede adherirse en tres puntos a un costado del sitio planar con una sola orientaci6n. Girando mentalmente la moldcula de sustrato en el espacio. NAD+. COA-SH.~phate). * Ácido lipoico. - dihidroxini L IVIUSLU la. u. pueden intervenir varios complejos intermediarios C o E 4 en una reacción particular (como la transaminacibn).Enzimas: propiedades generales 79 - Cuadro 8-1. * Biotina. Muchas coenzimas derivan de vitaminas B y del monofosfato de adenosina Aunque esto sugiere la fomacion de un complejo sencillo C o E 4 . por lo gencral comprende la participaci~nde una coenzima como ultimo aceptor (por ejemplo. Mecanismos para l a regeneración obia de iu A n+ - Para la transferencia de grupos distintos del hidrógeno: Fosfatos de azucares. La figura 8-3 muestra una molécula de sustrato. Las enzimas son catalizadores estereoespecificos Que esto representa en realidad sólo un caso especial de la transferencia general de grupos puede apreciarse mejor en tkrminos de las reacciones que tienen lugar en las células intactas (cuadro 8-1 ). D . ribosa y fosfato y se derivan del monofosfato de adenosina (AMP. adenmine monopho. Cuando eI grupo transferido es el hidrhgeno.G . i Coenzimas del folato. la molécula se unira sólo en una forma. se acostumbra representar s61o la "mitad izquierda de la reaccion ": Las vitaminas i forman parte de la estructura de 3 numerosas coenzimas. Se pueden representar de la siguiente manera: Casi todos los sustratos forman por lo menos tres enlaces con las enzirnas. Para la transferencia del hidrbgeno: - ia viviente- Pir :ctaldehido . En consecuencia. Pirofosfato de tiamina. aunque sean idénticos. Si el sitio puede ser alcanzado sblo desde un lado y únicamente los fitomoc compIementarios y los sitios pueden interactuar (ambas suposiciones válidas para las enzimas reales). Coenzimas de cobalamina (R 12). G. vienen a ser distintos Las coenzimas pueden clasificarse de acuerdo al grupo cuya transferencia facilitan BacBndose en este concepto. Coenzima Q. Las nicotinamida. los Atomos 1 y 4. durante el curso de la reacción global. a una moltcula aceptora.L . tiamina.. . Numerosas coenzimas contienen adenina. Esta "adherencia en tres puntos" puede conferir asimetría a una moldcula por otro lado cimCtrica. siboflavina y iicido pantoténico son constituytntes esenciales de las coenzirnas para las oxidaciones y las reducciones bioIógicas mientras que las coenzimas Bcido fhlico y cobamida funcionan en el metabolismo de compuestos de un solo carbono. A. Ácido lipoico. es transferido de una moIecula donadora. a. las reaccicne? de deshidrogenación) o como portador intermediario del grupo (como las reacciones de transaminacion). bacterias lácrica: Levadiira Frr ias lietert en la cual un grupo funcional. 4 Fosfato de piridoxal. La reaccibn misma puede estar confinada a los Atomos unidos en los sitios 1 y 2 aun cuando los htomos 1 y 4 sean idénticos. podrían clasificarse las coenzirnas del siguiente modo: .

Un p a n numero de sustratos pueden ser atacados reduciendo asi. Las enzimas muestran especificidad óptica Figura 8-2. . por ejemplo. Con unas cuantas excepciones (por ejemplo. Representación de la adherencia en tres puntos de un sustrato a un sitio activo planar da una enzima.80 Bioquimica de Harper MUCHAS ENZlMAS CATALIZAN UNA REACCION O UN TIPO DE REACCION ESPEC~F ICA L a capacidad de una enzima para catalizar una reacción específica y esencialmente ninguna otra. que. En NAD'. S bien los sitios activos de i las enzimas no son las supeficies planas que se muestran en la figura 8-3. -R 0~03"'. Que todas las reacciones posibles ocurran en el microorganismo vivo depende de la concentracibn relativa de sustratos alternativos en las células y de la afinidad relativa de la enzima para esos sustratos. Por tanto. las velocidades de procesos metabólicosespecificas pueden regularse por cambios en la eficiencia catalitica de enzimas específicas. las enzirnas de la via glucolitica y de la oxidativa directa catalizan la interconversibn de los D. L a especificidad 6ptica se puede extender a una del porción de la mol~cula sustrato o a su totalidad. Sin embargo. Las enzimas presentan un alta especificidad para el tipo de reacciiin que catalizan Las enzimas líticas actúan sobre grupos de compuestos quimicos particulares. la pn mayoría de las enzirnac de los a marniferos actúan sobre los L-isbmeros de los aminohcidos. en NADP*. = H. Asi. es qui7A su propiedad miis significativa.pero no de los L-fosfoanjcares. Las reacciones con otros sustratos alternativos tienden a efectuarse si ellos se encuentran en altas concentraciones. L-lactato Excepto las epimerasas (racernasas). Las glucosidasas proporcionan ejemplos de ambos casos. Numerosas proteasas Sitio enzimatim Sustrato Figura 8 3 . el número de enzirnas digestivas que de otro modo serian requeridas. un cambio químico puede afectar e1 &tomo 1 (pero no el Btomo 4) o viceversa. etcdtera) con un pequeflo numero de sustratos relacionados estructuralmente. Estas enzimas catalizan la hidrblisis de las uniones glucosidicas entre aziicares y alcoholes. R = cuando el sustrato esta adherido a la enzima. oxidación-reduccióin. pepsina y tripsina sobre los enlaces peptidicos y las esterasas sobe los ksteres. glucosidas% sobre glucbsidos. la figura no puede mostrar la causa de que la reducción catalizada por la enzima del piruvato sin actividad bpticaproduzca L-lactato en vez de D.catalizan la interconversión de 10s idmeros bpticos. la D-aminoacidooxidasa del riilon). las enzimas por lo general muestran una especificidad bptica absoluta por lo menos para una porción de la rnoldcula de sustrato. pero relativamente inespecíficas para la porcion alcohólica o aglicona. la mayoría de las enzima~ catalizm el mismo tipo de reacción (transferencia de fosfato. De este modo. y son altamente especificas para la porcibn azúcar y para la uni6n (alfa o beta). NAD(P)+.

El NADP* y el NADPH tlenen espectros semejantes a los de NAD* y NADH. la medicibn de la velocidad de decrecimiento en DO a 340 nrn permite deducir la cantidad de enzima. Las carboxipeptidasas y las aminopeptidasas desdoblan los aminoácidos I por 1 de la terminal carboxilo o de la amino de [as cadenas polipeptldicas. nanomoles (nmol. expresada en unidades de actividad. lo4 rnol) o picomoles (pmol. En el ejemplo anterior se midi6 la velocidad de formaci6n de un producto (NADH} para determinar ta actividad enzimatica. en la síntesis de ácidos grasos o de esteroles) utilizan NADPH como reductor. ya sea con NAD' o con NADP' como aceptores de electrones. la actividad catitalitica de una enzima provee un dispositivo sensible y especifico para su propia medición. tirosina o triptbfano. 10-'' mol) de sustrato reaccionante o de producto formada por minuto.Espectros de absorcibn del NADt y del NADH.nU y pU. Las densidades corresponden a una solucibn de 44 m g k en una celdilla de 1 m de paso de luz.Enzimm: propied~des generales 81 catalizan tarnbidn la hidrólisis de los tsteres. En general. las oxidorreductasas funcionales en los procesos biosintéticos de los sistemas de mamlferos (por ejemplo. La oxidación de NADH en NAD' se acompaíia de una disminucibn de la densidad bptica (DO) a 340 nm. 1Q4 mot). En circunstancias apropiadas. mediante su s u s ~ oxidado. La quimiotripsina hidroliza los enlaces peptidicos en tos cuales el grupo carboxilo es apostado por los aminohcido~ aromhticos fenilalanina. Ciertas enzimas líticas presentan alta especiftcidad. la DO aumenta en proporcion a la cantidad de NADH que se produce. De igual manera. Tales unidades se expresan mejor en micromoles (prnol. Para medir la cantidad de una enzima en una muestra de extracto tisular o de algún liquido biológico. tal como sigue. Las cantidades relativas de la enzima se pueden entonces comparar en diferentes extractos. Aunque algunas oxidorreductasas funcionan igualmente bien.Por tanto. Para una deshidrogenasa que cataliza la oxidación de NADH. Este cambio de DO. se establece la velocidad de la reacción catalizada por ella. la glucólisis. la veo locidad de decrecimiento de DO a 340 nm es directamente proporcional a la concentracibn enzimática. Las unidades internacionales enzimáticas correspondientes son pU. Por fortuna. cuando el NAD' se reduce. TambEen es posible analizar la ac- tividad de otras enzimas diferentes de las deshidrogenasas por la medicibn de la velocidad de aparición 1 1 200 1 I 1 233 300 350 Longitud de onda (nm) 600 Las deshidragenasas que dependen de NAO' puede analizarse a 340 nm En las reacciones que interviene el NAD' o el NADP' (deshidrogenasas) se utiliza la propiedad del NADH Figura 8 4 . la mayor parte de ellas usan exclusivamente uno o el otro. respectivamente. la velocidad medida es proporcional a la cantidad de enzima presente. la oxidacibn de [os hcidos grasos) utilizan NADkomo oxidante. los resultados se expresan en unidades enzimáticas. . mientras que las funcionales en los procesos de degradación (por ejemplo. Muchas enzirnas pueden analizarse por acoplamiento de una reacción a una deshidrogenasa LA ACTIVIDAD CATAL~TICA DE UNA ENZIMA FACILITA SU IDENTIFICACI~N Las pequeiías cantidades de enzimas presentes en la célula obstaculizan la rnedicidn de la cantidad de una enzima en liquidos o extractos de tejidos. En tanto que esto es probablemente de importancia fisioldgica limitada. presente en una muestra biológica dada como suero o extracto de tejido. o del NADPH (pero no del NAD' o del NADP') para absorber la luz a una longitud de onda de 340 nm (figura 8-41. respectivamente. Dado que es dificil determinar el número de mol&culaso la masa de enzima presente. se puede utilizar para el anhlisis cuantitativo de cualquier NAD' o NADP' dependientes de deshidrogenasa. el uso de ésteres como sustratos sinttticos ha sido importante en el estudio del mecanismo de accion de las proteasas.proporcional a la cantidad de NAD que se oxida.

(mrr) L ~ U 29 1 20 12 . y NADP*. Andlisis acoplado para la actividad de la hexocinasa La reaccibn se acopla a la catalizada por la glucosa-6fosfato deshidrogenasa. cofactores. . La información fidedigna referente a la cinética.. -* mlJ = milienzima: milimolcs de sustrato que cambian por minu A. SU FUNCIÓN.. glucosa6-focfato deshidrogenasa. h2+ mecanismos reguladores que operan a nivel de la catálisis. Idas moléculas pequeiias pueden eliininarse por dialisis o por filtracidn en gel. de modo menos común. En el cuadro &-2 se muestra el progreso de la puri~~cación tipica de una enzima hepática con una recupcraci6n adecuada y una purificación de 490 veces. GLUCO-SA6-FOSFATO DESHIDROGENASA La purificación incrementa la actividad especifica NADPH + H' Figura 8-5. Nótese la forma en que se calcuEan la actividad especifica y la recuperacibn de la actividad inicial El objetivoes lograr la actividad especiiica máxima ( m i dades de enzima por miligramo de proteína) coi1 la mayor recuperación posible de la actividad inicial.. Entonces. la cantidad de hexocinasa presente determina la velocidad de la reacción acoplada global y. glumsa. Las propiedades fisictiquimicac del producto o sustrato determinan el mEtodo especifico seleccionado para la cuaníificacihn. Ia centrifugación diferencial.82 Rioquimicu de Harper (Capitulo 8) Glucosa [HEXC)CINASAI Gluwsa 6-fosfato 1 ATP. la velocidad dc desaparición de un sustrato).. derivan en gran medida de los estudios de enzima purificadas. La absorción celcctiva y la elucion de las proteínas en Cuai accibn dc ia iesumen de un esqluemn típico de pu rificación de una e 1 Actividad ~ii~irria 1 - iteina tota Hornogene izado criidc Liquido sol~rcnadante I'recipitado con (NIld Precipitado con acetorl a 20 a 350/u Fracciones 80 a 1 1 0 e ri. ATP. El objetivo de la purificacihn de la enziina es aislar una proteina enzimhtica especifica dc un cxtracio crudo de celulas que contienen muchos otros compcinentes.. la filtracihn en gel y la electroforesis. . etcktera.- 49 . estructura y mecanismo de acción tam bien nccesita cnzinias altamente purificadas. la cual puede ser medida a 340 nrn de uii produclo (o. la dcsnaturalizacidn diferencial por calor o pH. la velocrdad de formación del NADPH. Todos los reactivos.A "A--"" (mCJ)* 100 00(. columna DBAE I'recipitado con (NH4)?SO443 a 4 8% Prirneroc cristales Recristalixacion 49 O00 . por tanto. se agregan en exceso. A menudo es conveniente "acoplar" el producto de una reacción a una deshidrogenasapara la cual este producto representa un sustrato (figura 8-5). los Licidos nucleicos por precipitacihn con el antibiótico estreptomicina. El problema es separar la enzima deseada de una me7cla de cientos de proteínas quirnica y fisicamente semejantes. 98 995 90 OOC . ES ESENCIAL DISPONER DE ENZlMAS PURAS PARA COMPRENDER SU ESTRUCTURA.~ SU MECANISMO DE REACCION Y SU REGWLACION E:l conocimiento de las reaccionecy los intermediarios quimicus en las vias meiabólicas así como de los Para la purificación se emplean crornatografía de intercambio ionico y cromatografía con soportes de exclusion de tamaño Los procedimientos de purificacibn clásicos útiles incluyen la precipitacilin con concentraciones salinas variables (por lo general con sulfato de sodio o de amonio) o solventes (acetato o etanol). ~ g " ADP. sitios activos.

[NH4]2S04)y se eluyen con gradientes decrecientes de la misma sal.celulosa de intercambio aniónico. Cuando la mezcla proteínica se expone a este ligando inmovilizado. las proteinas grandcs salen de la columna antes que las menores. la introducción de H "ligando" hidrbfobo complica la scparacihn. verde o rojo y E cromatografia de ligando hidrofobo como octil o fenil-Sepharose son técnicas con relación estrecha con la crornatografía pos afinidad. la movilidad de las protefnas pequeflas se retarda en relación con proteínas demasiado grandcs para pasar estos poros. Cuando una mezcla de proteínas fluye a través de una columna que contiene un filtro molecular. los filtros rnoleculares tienen capacidad limitada y eil general sOlo se usan después de haber logrado una piirificación previa por otras técnicas. valor al cual llt. Luego. En la cromatografía de ligando hidrlifobo.5. plantas o . Sin embargo. Por su parte La tecnología del DNA recombinante puede ser una fuente abundante de enzimas Hasta fechas relativaniente recientes. E1 perfil de la clución presenta un patrón graduado que va desde las proteinas mas grandes hasta las pequefias.cla de proteínas de diferentes tarnafios fluye al través de la columna. las de enlace fuerte. Por ejemplo. un extracto acuoso de tejido hepático se ajusta a pH 7. En general. dietilarninoetilcelulosa (DEAE del ingles. se adiciona la mezcla de proteínas solubles a una oolurnna de celulosa D E A E amortiguada a pH 7. una protcína particular o un pequeiio número de ellas.vmeih~~/celJul~ tambien han sido extremadamente utiles para la purificación extensa y ripida de proteínas. 5e La crornatografía de ligando colorante y ligando hidrófobo son técnicas análogas de cromatografia por afinidad La crornatografia de Iigando colorante en soportes a como Sepharose azul. La primera emplea como ligando inmovilizado a un colorante organice que sirve como análogo del sustrato. al agregar a la cromatrigrafia ese elem~ntohidrdfoha (vCase después).ja a alta. Los ligandos favorecidos son derivados dc sustratos y coenzimas adheridos por covalencia a un soporte como Sephadex.5. Las pusificaciones logradas por las técnicas de cromatngrafia por afinidad son iinpresioriantes. la proteína indeseada fluye a lo largo de la columna y descarta. dcl inglds. el emplco subsiguiente de sustsato (mas que de coenzima) a los soportes afínes o la elución con una "mezcla ternaría abortiva" de un producto y un sustrato han probado tener éxito en muchos casos. al último. La retención de proteínas en estos soportes comprende interaccioncc hidrofbbicac entre la cadena alquil y ias regiones hidrófobas de la proteina. la elución se logra usando gradientes salinus. por lo común usando iin gradiente de NaCl que va de concentración ba. por lo general con una concentración elevada de sal o de la Coma soluble dcl ligando. Dado que numerosas deshidrogcnasas puedcn fijarse y ser eluidas juntas cuando la columna es tratada con NAD' soluble.5. valor en el cual la mayoría de las proteínas tienen una carga negativa neta.AE tiene carga positiva. Separaciones proteínicas an5logac emplean un soporte crin cargia negativa como carboximetiIceIulosa o fosfocelulosa a un p l l algo menor.a característica sobresaliente de la cromatografia por afinidad es sil capacidad para remover selectivamente de una mezcla proteínica compleja. Dado que CI-compite con las proteínas por sitios de fijación cn cl soporte con carga positiva. eii tanto que las proieínas sin carga o con carga positiva fluyen libremente a traves de la columna. las proteinac pequeñas se distribuyen cn Iris espacios entre las partículas y en los espacios internos o poros del soporte. Los soportes de cromatografía por afinidad sirven para identificar regiones específicas de las enzimas L. carhox. para asegurar que ias proteínas tcngaii una carga m i s positiva Las separaciones de proteínas también pueden lograrsc sobre nrateriales porosos conocidos como -'filtros moleculares". en general por niedio de utia mtilécula enla7~dora 3 a 8 carbonos de longitud de n Sin embargo. un hidrocarburo alquil o aril se adhiere a un soporte como Sephadex. Entre Ins ejemplos de aplicación exitosa de la cromatograt'ía por aiinidad se incluyen la purificación de muchas dcshidrogenasas diferentes sobre soportes dc afinidad de NAD'. Conforme urja me7. los únicos materiales iniciales disponibles para preparar enzimas purificadas eran las células de animales. La proteina deseada se eluye del Iigando inmovilizado. Las proteínas se adicionan a soluciones que contienen una concentración alta de una sal (por ejemplo. a menudo sucesiba de superando las posibles por la aplicaci~n numerosas técnicas clásicas. disuelto en amortiguador con pH 7. la coliimna se eluye. primero las que se enlazan débilmente y. coenzima a efecror alostCrico. diefhyIunainoe/hyoy en !a de intercambio catiónico carboximetilcclulosa (CMC. Las proteínas con carga negativa sc Lincn a DEAE por interacción de cargas opuestas. las iinicas proteinas que se unen son las que interactúan fuertemente con él. Luego. éstas se eluyen de manera selectiva. Asi. La técnica emplea un ligando inmovilizado que interactúai cspecificamente con la enzima cuya purificacilin se desea..

en estado relativamente inalterado. Si el producto es colorido e insofuble. se puede lograr frecuentemente por procedimientos histoquimicos (histoenzimologia}. las formas distintas y físicamente separables de una enzima dada. levaduras o de cultivos de mamíferos. En las regiones donde se encuentra la enzima se forma el producto de la reacción catalizada por ella. Mientras que el ttmino "isozima" (isoenzirna) podría utilizarse para englobar a todos los ejemplos anteriores de formas fisicarnente distintas con una actividad catalftica dada. Cortes delgados de tejido congelado (2 a 10 pm)son tratados con un sustrato para una enzima particular. La a purificación subsecuente se facilita tanto por las cantidades relativamente grandes de la enzima recombinante como por el hecho de que. hfgado de rata y Escherichia coli). equilibrindolos en un campo eldctrico que contiene urea y se mantiene un gradiente de pH por los anfblitos polimerizados.84 Bioquímica de Harper (Capitulo 8) bacterias. transfosforilasas y proteasas. Se han localimdo isozimas de numerosas deshidrogenasas. con base en los tamailos moleculares de sus unidades protoméricas. la segunda dimensibn separa a las protefnas. Esta situación se ha modificado en gran medida por la tecnología del DNA recombinante. la primera dimensibn separa a las proteinas desnaturalizadas con base en sus valores pI. sustratos y cofactores dentro de las c&lulas son de importancia cardinal. presentes en tipos celulares diferentes o en compartimientossubcelulares de un ser humano. en Ias cuales se encuentran dichas enzimas. hcido cíirico están en las mitocondnas. Entonces. en la prhctica. sus propiedades físicas y quimicas exhibían numerosas diferencias importantes. Pueden existir formas físicamente distintas con la misma actividad catalitica en diferentes tejidos del mismo organismo. Las isozimas son comunes en los sueros y los tejidos de todos los vertebrados. es decir. La distribución de las enzimas entre !3s organelos subcelulares puede estudiarse despues de fraccionar los hornogeneizados de células mediante ultracentrifugación. Por ejemplo. La cantidad existente de una enzima dada en muchos casos era muy pequefía. la presencia de contaminantes protelnicos mayores y menores. insectos. LAS ISOZIMAS SON FORMAS F~SICAMENTE DISTINTAS CON LA MISMA ACTIVIDAD CATALITICA Cuando se aplicaron las tdcnicas de purificación de enzirnas a la malato dechidrogenasa de diversas fuentes (por ejemplo. en compartimientos subcelulares o en pr-otas como E coli Este descubrimiento fue una consecuencia de aplicar los procedimientos de separacidn electroforktica a la separaci6n de entidades electroforéticamente distintas de una actividad enzimktica particular. Estos vectores se trasladan al interior de d l u las. se examina el contenido enzimátiw de cada fraccidn. si bien la malato deshidrogenasa de hlgado de rata y la de E. despuds de su tratamiento con SDS. como serfa E estabilidad al calor. en especial en la medicina clínica. La localizaci6n de una enzima particular en un tejido o cdlula. pronto se obsenib que. Tanto la clase como el número de enzima involucradas es igualmente diverso. tramaminasas. lo que imponía un límite máximo z la cantidad de enzima purificada que se podía obtener con un costo razonable. ya que [os genes que codifican muchas enzimas se han donado y secuenciado y pueden colocarse en un vector de expresibn derivado de pllismido o fago. bajo el control de un promotor fuerte. en tanto que [as del ciclo del . coli. Entonces. catalizan la misma reaccidn. las enzimas de la gluc6lisis están localizadas en el citoplasma. hasta cientos de miligramos de proteína homogCnea por litro de celdas de Escherichia coli. ya sea de Escherichia coli. La electroforesis en gel de po!iacrjlamida detecta contarninantec La homogeneidad de las proteínas se valora mejor por electroforesis en gel de poiiacrilamida (EGPA) bajo diversas condiciones. al provenir de una forma de vida diferente a la del hubsped puede diferir en grado significativo de las propiedades de las proteínas de éste. En presencia de un inductor apropiado. cantidades adecuadas para los amplios estudios de cristalografía de rayos X y otros anklisis fisicos necesarios para deteminar la estructura tridimensional. vegetales y microorganisrnos unicelulares. oxidasas. Las a levaduras varían desde pocos. La EGPA unidimensional de la proteina original revelará. LAS EN2IMAS PUEDEN ENCONTRARSE EN ORGANELOS ESPEC~FICOS El ordenamiento espacial y la compartimentaiizacibn de enzimas. en las cklulas hepáticas. la "isozima" tiene un significado más restringido. fosfatasas. la maquinaria de síntesis proteinica de la célula huésped se [leva a la shtesis de E enzima deseada. si se aplica suficiente muestra. permanece en el sitio de formaci6n y sirve como un indice para la localizaci6n de la enzima. La histoenzimologia proporciona una imagen grhfica y relativamente fisiológica de los patrones de distribucibn enzimática. En la EGPA bidimensional (O'Farrell). Tejidos diferentes pueden contener isozimas distintas y tstas a su vez diferir en su afinidad por los sustratos. en distintos tipos celulares.

Las proporciones aproximadas de las isozimas encontradas son las que resultarian si la relacibn fuera: lsazirna lactato deshidrogenasa 11 12 13 14 Subunidades HHHH HHHM HHMM HMMM 15 MMMM . amortiguador e iones activantes segun sea necesario. o de la lactato deshidrogenasa Is. PMS. consisten en un solo tipo de protómeso. se han descrito numerosos ejemplos adicionales de cambios en las proporciones de isozimas como consecuencia de una enfermedad. Posteriormente.) Las isozimas de la laciato dcshidrtigeiiasa difieren en el orden de la estructura cuaternaria.Enzimas . tarnbikn se producen las lactato deshidrogenasas Iz. La reaccibn procede a una velocidad mensurable s61o en presenciade la lactato deshidrogenasa. Reacciones acopladas para la demostración de la actividad de la lactato deshidrogenasa en un etectroferograma. La figura 8 4 ilustra la aplicacibn de este tipo de anklisis para visualizar y cuantificar isozimas de lactato deshidrogenasa shica (LDH. del ingles. litro blue lelrmolrum) intermediario necesario para la transferencia de eIectrones de NADH a NBT. Una mezcla tipica para anhlisis de deshidrogenasa contiene NADA.tienen lugar las reacciones coordinadas de transferencia de electrones s61o en aquellas regiones donde se encuentra la lactato deshidrogenasa (figura 8 4 ) . del inglks. Cuando la mezcla se rocía sobre el electroferograma y se incuba a 37 "C. La molécula oligomérica de la lactato deshidrogenasa activa (peso molecular de 130 000) consiste en cuatro protomeros de dos tipos.. un tejido produce un protornero de manera predominante y otro tejido sintetiza un prothmero diferente. Market ha usado condiciones que se sabe disgregan y reforman la estructura cuatemaria para esclarecer las relaciones entre las isozimas de la lactato deshidrogenasa i. la forma un oxidada de un colorante redox como nitroaml de tetrazolio (NBT. se dice que se han formado isozimas de esa actividad enzirnática. e 14. Con frezuencia. Si cl urden no e i iinportante.6. 1. un tetrhmero). Sólo la molécula tetramirica posee actividad catalitica. Si es posible que Cstos se combinen de varios modos para construir una enzima activa (por ejemplo. Luego. Las isozimas tienen diferentes cargas a este pH y emigran a cinco regiones distintas del electroferograrna. (NBT nttroazuF de tetrazoilo. Este fenómeno se representa despues mediante una enzima de importancia en el diagnóstico: la deshidrogenasa Ifictica. metoculfato de fenacina. por tanto. La separacidn y reconstitución no produce nuevas isozímas las cuales. La lactato deshidrogenasa cataliza la transferencia de dos electrones y un ion hidrbgeno del lactato al NAD' (figura 8-1). usualmente a pH 8. Cuando una mezcla de lactato deshidrogenasa I l y lactato deshidrogenasa 1s son sujetas al mismo tratamiento. estos prothmeros pueden Fer combinado'. lactnle dehydrogenuse) en el laboratorio clínico.usando un gel de almidon. agar o poliacrilamida como soporte. propiedades generoles 85 La capacidad para separar e identificar isozimas tiene valor diagnóstico El interds mCdico en las isotimas fue estimulado por el descubrimiento de que tos sueros humanos contenían varias isozimas de la lactato deshidrogenasa y quesus proporciones relativascambian significativamente en ciertos estados patol~gicos. Las intensidades relativas de las bandas pueden ser cuantificadas por un foriimetra de barrido (figura 8-7). se localizan por medio de su capacidad para catalizar la reducción de un colorante incoloro a su forma colotida e insoluble. La isozima mas negativa. E-1 y M (peso molecular aproximado de 34 000). de cinco maneras diferentes como se muestra en seguida: HHHH HHHM HHMM HMMM MMMM Las isozimas son productos de genes estrechamente relacionados Las enzimas oiigoméricas con varios protómeros disimiles pueden existir en diversas formas. Las isozimas de la lactato deshidrogenasa del suero pueden demostrarsesometiendo una muestm de suero a laelectroforesis. sustrato reducido. se denomina 1 (Lactato) sH2 WCTATO S k D E S H IDROGENASAJ (Pjruvatc) FMS reducido ~~C'oxidado NBT oxidado (incoloro) (azul) Flgura 8 4 .

) La sfntesis de subunidades H y M es controlada por distintos Iocr geneticos que estiin expresados de manera diferencial en diversos tejidos. Las enzimas plasrnhcicas no funcionafes comprenden a las que existen en las secreciones exocrinac v a las enzimas intracelulares verdaderas. difunden en forma pasiva al plasma. Su presencia en el plasma en cifras mayores que tos valores normales sugiere una velocidad aumentada de destruccibn tisular. fosfatasa biliar alcalina y fosfazasa ácida prostática.6 y tenidas en busca d e la presencia d e enzimas. el coraz6n y el mUsculo esquel&ico. Las enzimas intracelu lares verdadea ras estiin normalmente ausentes de E circulacion. Melvin Black y Mr. Como lo dice su nombre. San Francisco. Los sustratos de ellas con frecuencia faltan en el plasma y las propias enzimas se encuentran en la sangre de personas normales en valores hasta de un mil1611 de veces inferiores a los de los tejidos. amilasa pancsektica. EL ANALISIS CUANTITATIVO DE CIERTAS ENZIMAS PLASMÁTICAS TIENE SIGNIFICADO DIAGNOSTICO Ciertas enzimas. la seudocolinesterasa y las proenzimas de la coagulacibn sanguinea y de la disolución del cohgulo. leucocitos y otras cdlulas. enzimas solubles entran las .86 Bioquimica de Harper (CapifuJo 81 NORMAL Figura 8-7. pero tarnbikn se encuentran en la sangre a concentraciones equivalentes o mayores que en los tejidos. proenzimas y sus sustratos se encuentran siempre en la circulacibn de las personas normales y realizan una funcibn fisiológica en la sangre. (Cortesía del Dr. Las isozimas de LDH del suero fueron separadasen acetatode celulosa a pH 8. la medicion de estos valores de enzimas plasmhticas no funcionales puede constituir para el médico una prueba valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico. Con la muerte acelerada de las c~lulas. Las enzimas exocrinas. Por tanto. aparentemente proceden de la desmiccibn rutinaria normal de los eritrocitos. Generalmente son sintetizadas en el hlgado. Hugh Miller. Algunas de estas enzimas plasmhticas funcionales son la lipoproteinlipasa. lipasa. por ejemplo. las enzimas plasmáticas no funcionales no desempeiian ninguna funcibn conocida en la sangre. Patrones normal y patolbgioode las isozimas de la laetato deshidrogenasa(LDH) en suero humano. El fotbmetro de rastreo muestra la produccibn de las isozimas El patrbn A es suero de un pauente con infarto del rniocardio. St Luke's Hospital. La destrucción normal de c&lulas conduce a la presencia en plasma de concentraciones bajas de enzimas no funcionaIes Los valores bajos de enzima no funcionales que se encuentran por lo general en el plasma. B es suero normat y C de un paciente con enfermedad hsphtica.

-. el cual proviene de unasupresidn en ese gen. como sucede en atgunas alfa talasemias y en ciertos tipos poco frecuentes de beta y beta. Las enzimas plasmáticas no funcionales ayudan en el diagnóstico y pronóstico Por mucho tiempo. Por ejemplo.Varias entermcdades ~~a -- L actato d e . la práctica profesional médica ha usada la cuantificacibn de ciertas enzimas plasmaticas no funcionales.Varias enfermedades bseas. :reat~tisaguda -- 'eruloplasn ina i hepatote nticu :rrnedad Ij c -" Creatinacine stornos m usculares e infarto del mi0cardio F - iíio Carcinoma rnr la prhstata de Eosfatasa alcalina (isozi. capitulo 7)."..minotrans! ferasas I Usa -- uiirriuiriicu uriiiciuaI Aspartat o aminoti .. Por ejemplo. Esta valiosa inforrnacidn para el diagnóstico y el pronóstico se obtiene muchas veces con equipos totalmente automáticos. los trastornos hereditarios p r mapeo de enzirnasde mtricci6n det DN A derivado de las cklulas fetales en el líquido amnibtico. delta talasemias. En el Apendice se incluye la escala de valores normales de las principales enzimas usadas con propositos de diagnostico.-M -.Enzimas. La presencia de una alfa..-antilipsina se ha relacionado con el enfisema y con la cirrosis hephtica infantil. . desde antes del nacimiento.. las técnicas para el examen directo de las secuencias del DNA s610 se han desarrollado en épocas recientes.-A- Enzinna sérica A.. El desarrollo de pruebas de hibridización para fragmentos de DNA ha conducido a técnicas de sensibilidad suficiente para investigar. Cuadra 8-3. . se ha preparado un detector o probador de cDNA sintktico que se hibridiza a la secuencia de una beta-globina que contiene una rnutacidn sin sentido.. . (isozirnas) Lipasa nasa Infarto del miocardio LA DIGESTIQN RESTRICTIVA DE PROBADORES PUEDE REVELAR GENES H O M ~ L O G O S CON DIFERENTES SECUENCIAS DE BASES Los detectores de DNA tambibn pueden usarse para encontrar secuencias de DN A íntimamente enlazadas -Pancreatitis aguda -- . en principio. El cuadro 8-3 contiene una lista de lar enzimas principales utilizadas en el campo de la enzimologla para diagnóstico. Los detectores de hibridizacidn tambitn pueden utilizarse para averiguar alteraciones genkticas que conducen a la pdrdida del sitio de una endonueleasa de restriccibn (capitulo 42). ... tras'tornos he1 1smas) - trucitivos he- y-Glutamil t k m 1 3 p ~ C l ~1 . el ejercicio intenso tambikn libera cantidades importantes de enzimas musculares. la mutación en un punto del coddn Glu (GAG) al codbn Y al (GTG) tipica de la enfermedad de c6lulas falcifonnes puede detectarse en el gen de la beta-globina en las células contenidas en cantidades tan pequeiías de hasta 10 mL de liquido amniótico usando la endonucleasa de restriccion MstII o SauI. Aunque desde hace tiempo se sabe que todas las enfermedades moleculares son consecuencia de una alteracibn del DNA. Las pruebas para el DNA pueden. ser preparadas para el diagnástico de la mayoría de las enfermedades gendticas. . . Aunque los valores elevados de enzirnas plasmiiticas se interpretan generalmente como prueba de necrosis celular. Muchas de kstas no son cas para la enferm ncionada A . La ausencia del inhibidor de la proteasa plasmática alfa. Principales enzimas séricas utitizadas en el diagnóstico clinico. presente en ciertas beta-talasemias.. LAS ENDONUCLEASAS RESTRICTIVAS FACILITAN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES GENÉTICAS El diagnbstico de las enfermedades genéticas ha recibido un impulso tremendo con la tecnología del DNA recombinante.* rerasa (rtST o SGOTI Alanina aminotr ferasa (A LT o SGR 1 Infariu uei ~ n i u .-antitripsina inactiva se ha identificado por un probador construido contra el alelo inactivo que contiene una mutacián en un punto en el gen para la alfai-antitripsina. pero no en el gen normal de la beta-globina. para la detección prenatal de talasemias (que se caracterizan por un defecto en la sintesis de las subunidades de la hemoglobina. De manera alternativa. propiedades generales * 87 en la circulación. -. .. una prueba preparada contra una porcidn del gen para una subunidad de una hemoglcbina normal puede detectar un fmgmento de rwtnccibn acortado o inexistente.

puesto que el PLFR no causa la enfermedad sino que simplemente se localiza cerca del gen defectuoso. En una enfermedad genética ligada a un polimorfismo de la longitud de restriccibn. La localizacibn intracelular precisa de enzimas se infiere por medio de tbcnicas de histoquimica y fraccionamiento celular acopladas con análisis enzimático de cortes de tejido o de fracciones de hornogeneizados celulares. las deficiencias vitamínicas pueden afectar de modo adverso la funci6n enzimiitica y. Las tdcnicac para purificar enzimas incluyen precipitación selectiva por sales o solventes orgánicos y cromatografía en soportes de intercambio idnico. en residuos de guanosil. La actividad de deshidrogenasas dependientes de NAD(P)' s e analiza en espectrofotrimetro a través de la medición del cambio en la absorcion a 340 nrn que acompafla a la oxidacibn o reducción de NAD(P)+/NAD(P)H. En la investigacidn de su estructura. la homeostasia. La mayoría de las enzimas tienen especificidad elevada por sus sustratos. Sin embargo. pero en realidad no dentro de 4. Este enfoque que se ha empleado recientemente en la búsqueda de los fenómenos mutacionales que intervienen en la formación de los retinoblastomas y la enfermedad de Huntington. Aunque los sitios de accibn de las ribozimas se limitan a los enlaces fosfodiésteres de RNA. Los descendientes que heredan el cromosoma portador del defecto exhiben una sola banda de hibridizacibn que difiere de la producida por cromosornas normales. vienen de manera clave en procesos de separacidn de intrones esenciales para la conversián de premRNA a m RNA maduro (capítulo 39). En consecuencia. Se h a desarrollado una exploracibn basada en los PLFR para identificar la fenilcetonuria infantil (capítulo 32): Sin embargo. algunas proteasas tambiéri escinden esteres. se detectan dos bandas de hibndizacibn (que es distinto a una sola banda cuando ambos genes son idénticos). Cuando los fragmentos de restriccibn se analizan y sondean. de los enlaces fosfodidcttres en moléculas de RNA. En el capitulo 42 se encuentran más ejemplos de los usos de las enzimas de restriccibn para diagnóstico. Las enzimas que actúan sobre sustratos de peso molecular bajo. Acoplar otras enzimas a las deshidrogenasas puede facilitar su análisis. ciertos ácidos ribonucleicos (RNA) presentan actividad catalitica altamente específica de sustrato. tambikn pueden reacciona. con análogos de sustratos. isomerimción. El progreso de una purificación se valora con la medición del incremento en la actividad especifica de la enzima (actividad por unidad de masa) y su homogeneidad final mediante la electroforesis en gel de poliacrilamida (EGPA). se conocen como ribozimas. Varias coenzimas también contienen e[ nudebtido AMP. pero en general a velocidades bajas. El fenbmeno de PLFR relacionado se ha aplicado al anhlisis de rasgo de las cdlulas falcifomes (bastsándose en un PLFR I-lpal relacionado) y de la beta-talasemia (ligada a un PLFR HindIII y BamHII. oxidomducción o sintesis de enlaces covalentes necesitan un cosustrato conocido como coenzima. mecanismo de accián y regulacibn de su actividad.al gen que interesa. por ende. Los análisis pueden extenderse a la identificacibn de variaciones específicas de cromosomas (diferencias en la secuencia entre cromosomas hom6logos). La digestión del DNA con una endonucleasa de restricci6n genera diferentes mapas (patrones de fragmentos de DNA) de genes hornúlogos que contienen secuencias diferentes de bases. la hidrólisis. la especificidad de su acci6n se compara plenamente con la de las enzimas clksicas. las deficiencias en la función enzim htica con frecuencia causan patología. Estos RNA. RESUMEN Las enzimas son catalizadores protelnicos que regulan la velocidad a la cual se realizan los procesos fisiolbgicos. Al parecer. en iiltirna instancia. las enzimas deben purificarse a una homogeneidad mayor de 95 por ciento. coenzirnas y tipo de reaccion catalizada. que cumplen con todos los criterios clhsicos de la definicibn de enzirnas. afinidad por sustrato o interaccibn ligando colorante o ligando hidrbfobo. En todas las formas de vida y tejidos existen isozimas. La medicihn de la actividad enzimática es fundamental pam la cuantificacián de enzimas en investigacibn o en e3 laboratorio clínico. Este fenómeno se denomina "polilimorfismo d e la Longitud del fragmento de restriccibn" (PLFR). por ejemplo. que son formas fisi- RNA CATALITICOS Aunque es evidente que no son proteinas. fi ttracibn en gel. Estas reacciones son facilitadas por grupos libres --OH. La capacidad para explotar tdcnicas de QNA secombinante en la expresión de enzimas en hutspedes utiles ha revolucionado la puriftcacibn de enzimas al proporcionar cantidades grandes de enzimas que en la mayorÍa de tos casos ya pueden purificarse hasta la homogeneidad. debe notarse que este enfbque general no es infalible. la importancia firtura del PLFR radica en que es punto de partida para la identificacion del gen de las enfemidades relacionadas. Las ribozimas inter- . Dado que numerosas coenzimas son derivados de la vitamina B. el portador de la enfermedad poseerá un cromosoma con un gen n o m a l y uno con un gen defectuoso. Las enzimas que catalizan reacciones que comprenden trasferencia de grupo. Las ribozimas catalizan la trunsesterificacibn y.

Patrones distintivos de isozimas de enzimas skricas no funcionales revelan daíio de tejidos humanos específicos y proporcionan informacibn valiosa para el diagnóstico y el pronostico. Freeman. Lamente DS.~ E y m n l n m .Enzrmas: propiedades generales 89 misma actividad catatítica. Annu Rev Riochem 1985. Anta~ens anddntibodies. la propiedad de las endonucleasas restrictivas para detectar cambios sutiles en la estructura de los gcnes permite al médico el diagnhstico de enfermedades genkticas donde las mucamente distintas con la taciones conducen a sintesis de enzimas defectuosas o no funcionales. Acadcmic Press Aitken A: IdentiJcactron ofllrotein Lonsensus Sequelnces Active Site . Tijssen P: Practice and Theoty o E w m e Immunoassays. Fersht A: Enzyme Srrucrure and Mechanism.hocCF of Env m i c Analysis. 1985.~ty MolecuIar Bioiom. Grass M: Me. Vol X I . Scapes R: Protern Purr$cation Principlcs nnd Praciice Springer-Verlag. 1955-present in Acadcrnic Press Naqui A: Where are the asymptotes of Michaelis-Menten? Trends 13iochem Sci 1986.b k i t a SE The chernical modi Ii&m ofenzyme spo~ificity. VCH Kaiser T. Honuood.1 1 54. Estas reacciones son importantes en fenómenos de procesamiento que incluyen la maduración de pre-mRNA. se conocen RNA catalíticos. Freifelder D: Physical B~ochem~stv. 1990. 1985. f Elsevier. Suckling CJ: Eníymt Chemistry. Bergmeyer H. Aunque casi todas las enzirnas son proteínas. Puhlishers. 1986. Applicatiom lo Biochemi. . Over 130 volurnes. Frccman.Wetkod. Chaprnan & Hall. como las ribozimas que catalizan de manera muy especifica la hidrolisis de enlaces fosfodiéster en el RNA. Curr Gpinon Structural Biol 1991.Phospho~ialion.WodiJcatrons.Wot!f~. lssued annually. REFERENCIAS Advunces in Enzymolop. and Orher Posttramlatzonal . Por Ultimo. 1982 and Uhlenbeck OC: Catalytic RNAs.54:597. 2nd ed.1:459 . 1990. Bergmeyer J. 19R2.

la disminucibn en la actividad de todas las enzimas que tiene lugar a temperatura corporal baja (hipotermia). EI principio biológico principal del estado homeostático de buena salud requiere que la composición del medio interno corporal se conserve dentro de limites relativamente estrechos. Ambos tienen efectos teraptuticos mediante la alteracion de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. A menudo estos medicamentos tienen una estructura anhloga a la del sustrato natural. Por su parte. El medico debe comprender el modo en que el pH. Por ejemplo. Todos los factores que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas (concentración de enzima y de sustrato. Sin embargo. la concentraci6n de enzimas y de sustrato así como los inhibidores influyen en las velocidades de esas reacciones. La velocidad de ciertas reacciones catalizadas por enzirnas responde a las desviaciones sutiles del pH intracelular que caracterizan a la acidosis o alcalosis metabdlica. con profundas consecuencias potenciales. eszos cambios mínimos pueden convertirse en ventaja para el mtdico. la fiebre y la hipotermia perturban la homeostasia al modificar la velocidad de numerosas reacciones catalizadas por enzirnas. considkrese unareacción de desplazamiento donde un grupo L que . de conceptos propios de la cinbtica de reacciones químicas no catalizadas. Los venenos metabiilicos como los mercuriales. temperatura. por lógica. LAS REACCIONES PROCEDEN A TRAVÉS DE ESTADOS DE TRANSICIÓN El concepto de estados de transicidn es fundamental para la comprensibn de las catfilisis de cualquier tipo. dado que esta velocidad se eleva o baja en respuesta a las fluctuaciones correspondientes en temperatura. válidos para reacciones químicas en general y luego considera los factores exclusivos para reacciones cata1izadas por enzimas. Además. Por tanto. este capitulo describe primero aspectos de la teoría de la velocidad de reaccidn. PhD Muchas caracterisiicas de la cinetica enzirnática provienen. Algunos ejemplos escogidos ejemplifican sobre este puitto. Ejemplos son la lovastatina y la zidovudina (AZT). Por ejemplo. Por ultimo. numerosos fármacos importantes en terapéutica actúan por reduccjon de las velocidades de reacciones metabblicas al competir con el sustrato natural por una enzima clave. respectivamente. No lograrlo perturba el equilibrio horntostatíco de los tejidos.Vicfor W Rodwell. puede explotarse para reducir la demanda rnetabolica global durante cirugia a coraz6n abierto o en el transporte de órganos para trasplante quirúrgico. pH y presencia de inhibidores) tienen interés en clínica. incluyendo la enzirnhtica. la toxicologia y la farmacología aprovechan eI conocimiento de los factores que modifican la velocidad de reacciones enzimiticas. la buena salud exige no sólo que se produzcan cientos de reacciones catalizadas por enzimas. sino que procedan a velocidades apropiadas. famacos usados para tratar la hipercolesterolemia y el SlDA. el curare y los gases nerviosos ejercen su toxicidad mediante la inhibicibn de enzimas y en consecuencia toman lentas o anulan reaccionasmetaMlicas esenciales. Por tanto.

este incremento de la velocidad de reacción no continua de manera indefinida. Como se muestra en la figura 9-1. cualquier elevación de temperatura. cada una con un cambio de energia libre. tanto la cantidad de mol&culas con energia suficiente para reaccionar como su frecuencia de colisión son altas. gración subsiguiente puede representarse con dos ''reacciones parciales". De otro modo. cambio de Z energía libre relacionado con la reacción global. las moléculas reactantes deben poseer energia suficiente para sobrepasar esta barrera energhtica. AGF Temperatura Elevar la temperatura incrementa el número de moléculas que pueden reaccionar. adherido en uii principio a R. que se acercan una de otra a distancias suficientes para formar enlaces. es a igual a la suma de las energías libres de E Iormacibn y degradación del estado de transicihn: De la misma manera que en cualquier ecuación con dos tCrminos. Esta es tarea de la cinética. hay una barrera energetica que debe superarse para que la reacción tenga lugar. Reacciones m i s complejas involucran varios y sucesivos estados de transición y proceden a travhs de una seric de reacciones parciales. respectivamente. E AG. b) abata la barrera energktica para la reacción o c) incrernente la frecuencia de colisión..R*. el numero de mol&culas cuya energia cindtica excede la barrera energktíca para la reaccion (barra vertical) aumenta cuando la temperatura sube desde un valor bajo (A) a travds de uno intermedio (B) a uno alto (C). pero bastante menor de 100 "C para la mayoría de las reacciones de interés biolbgico. . la frecuencia de colisión. Concentración de reactantes A concentraciones elevadas de reactantes. acelera el movimiento molecular y. cualquier cosa que: a) eleve la energía cinética de las nioléculas reactantes. pueden Figuta 3-1. es iniposible. no es posible inferir el signo o magnitud de AGF y AGn por observación del signo algcbraico y magnitud de AG. L. cuya íormacibn y desinte. incorpora dos conceptos claves: 1) s61o las maltculas que chocan. cada una con un cambio caracteristico en la energia libre: E + R-L E. Gn AGF y AGD son 10s cambios de energia libre que se producen en la formación y dcsintegracibn del estado de transicibn. deberá aumentar la velocidad de reacción. Sin embargo.92 Bioqrcím ica de IJarpw se desprende.L = E. E. . Es importante observar que el cambio de energia libre para la reacción global. es independiente del número de estados de transición.R.R. Para que una colisibn termine en una reacción. Dado que la catalisis se relaciona de manera intima con AGF y AGn. su mecanismo). Los dos factores contribuyen al incremento en la velocidad de reacción que acompafia a un aumento dc temperatura. ya sea que todas o s61o una fraccion de las mol&culasposean energia suficiente para reac- Barrera de energia NUMEROSOS FACTORES MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN La teoria cinética o de colisión de la cindticaquimica. Esto es verdad. ya que aumenta la energia cincrica e incrementa la frecuencia de las colisioncs. Esto se deriva del hecho de que AG es la suma algebraica de los cambios de energía libre para cada reacción parcial participante. se deduce que la termodinamica de la reacción global (AG) no puede proporcionar indicios del camino que una reacción sigue [es decir. a partir de la concideracihn del cambio de energia libre en la reaccihn global. AG. dado que finalmente se alcanza una temperatura a la cual las mol6culas reactantes ya no son estables. y 2) para cada reaccion química. es decir. Adernhs. Por tanto. inferir dato alguno respecto a los cambios de la energia libre relacionados con la f o m a ción y degradación de los estados de transición. AG. Barrera energética para las reaeeiones químicas . L = E-R+ L reaccionar. por ende. es desplazado por la entrada del grupo E: E + R-L = E-R+ L En realidad este desplazamiento pasa por un estado de transicion. modwadamente alta para gran parte de las rnolkculas orgánicas. Esta temperatura limitante tiende a ser en extremo elevada para reactantes inorghtcos.

". es decir. B y AnBm en el equilibrio. en lugar de concentraciones debería decirse actividades molares. k... incrementarh cuatro veces la probabilidad de colision.a velocidad de reaccihn es proporcional a las concentraciones de las moléculas reactantes. Dupticar la concentración de ambas. Para el caso general o Velocidad s [A] [B] : las expresiones para las velocidades de reacción hacia la derecha (velocidad I ) y la izquierda (velocidad -I) son: Para la situaciiin representada por: la expresihn de la velocidad es: Velocldad m [A][B][B] Cuando las velocidades de las reacciones hacia la derecha e iquierda son iguales.B. característica de la reacci6n en estudio. 3) El equilibrio es un estado dinámico. la velocidad pe reacción aumenta al cuádruple. 1) La constante de equilibrio es la proporción de las constantes de la velocidad de reacción. Aunque en el equilibrio no existe un cambio neto en la concentracion de nioléculas reactantes o productos. las velocidades (no las constantes de la velocidad} de las reacciones hacia la derecha y hacia Ia izquierda con iguales. El signo "proporcional a" (E) puede reemplazarse con un signo de igualdad mediante la inserción de una constante de proporcionalidad. K.. A y R: la expresidn apropiada de la velocidad es: Velocidad a [AnBd La reversibilidad se presenta por flechas dobles: Duplicar la concentración de A o de 13 elevará la velocidad de reacción al doble. . kik-1. 2) En el equilibrio. La expresihn de la velocidad es: Velocidad E [rnolbculas reactantes] Esta expresión se lee: "ri moléculas de A y m moléculas de B están en equilibrio con A. o Velocidad or [A][B]~ luego Para el caso general donde n moléculas de A reaccionen con m rnoldculas de B: ki[AIn[B]"' = k-~[AnBrn] Y la expresibn de la velocidad es: Velocldad a [Aln[BIm La proporción de ki a kise conoce como la constante de equilibrio. Considtsrense reacciones que comprendan dos moléculas diferentes. TG. Deberh tenerse en mente las siguientes propiedades importantes de un sistema en equilibrio. se dice que el sistema esta en equilibrio. A y B se están convirtiendo de manera continua a AnRm y viceversa. Los corchetes denotan concentraciones molaresk* cr sigriifica "proporcional a". A y B. I. para la reacci6n inversa donde A. 4) La constante de equilibrio puede tener un valor numérico si se conocen las concentraciones de A. Por tanto.B.cionar. es una proporción de constantes de velocidad Dado que todas las reacciones qulmicas son reversibles. forman n moléculas de A y m moléculas de B: * Hablando de manera estricta.

que previamente se demostrb concierne sólo a los estados inicial y final. es decir. no modifican a AG. las enzimas participan de manera directa en la formación de estados de transición. Dado que estas se conocen. el G.. un factor importante que contribuye a la capacidad de una enzima para acelerar la velocidad de una reacci6n dada es que el AGFpara formar un estado de transicidn enzima-sustrato sea bastante menor que el AGF para la reaccibn no catalizada correspondiente. los estados de transicibn enzima-sustrato estan en niveles energeticos significativamente menores que los estados de transici6n cuando la misma reaccibn procede en ausencia de catalisis enzimhtica. Si la constante de equilibrio es > 1. Ias 1) Cada reaccibn parcial comprende tanto la rotura a como 3 formacibn de un enlace covalente. el conocimiento del valor numérico de K permite el chlculo del valor . A. no informa acerca de la magnitud de la barrera energttica para la reacci6n (es decir. una proporcibn mayor de moléculas de sustrato son capaces de reaccionar. las enzimas se recuperan sin cambio después que la reaccibn termina. AGF. Esto se debe a que K.94 a Bioauimica de Hur~er AGO puede calcularse a parkir de K. determina a AGO. no indica si tendra lugar con rapidez. caializadas por enzirnas: Las enzimas proporcionan estados de transición alteinoc Igual que en toda catálisis verdadera. reacciones de isomerización (como la interconversión de glucosa 6-fosfato y glu- . Por tanto. nbtese que si bien las enzimas afectan a AGr. Sin embargo. no de la magnitud de AGO. se requiere 5610 en oligocantidades y puede recuperarse sin cambio cuando lareaccibn ha terminado). tiene lugar lo contrario. 2) La enzima es un reactante coeguivalente con D-G y con A. La reacción global comprende tanto la rotura del enlace D-G como la forrnacidn de un nuevo enlace A-G. A o ambas pueden estar ausentes. durante el proceso. La mayoríade los factores que afectan la velocidad enzimas disminuyen la barrera energéticaen una reaccibn. Si es < 1. es decir. D 4 . Las reacciones de transferencia de grupo. la enzima es un reactante estequiomktrico (esto es. Numerosas reacciones bioquímicas adicionales pueden considerarse casos especiaks de la transferencia de grupo en la cual D. es transferido de un donador. En consecuencia. se requiere en proporcibn molar 1: 1 con los demhs reactantes). la reacción es espontánea. Esto es. La constante de equilibrio se relaciona con AG' de la siguiente manera: R es la constante de los gases y T. la temperatura absoluta. es mas probable que la reacción proceda de derecha a izquierda. nbtese que aunque la constante de equilibrio para una reacci6n indica la direccidn a la cual una seaccibn es espontánea. se favorece la reacci6n según se ha escrito (de izquierda a derecha). para cada reaccidn parcial. Debido a que la constante de equilibrio para una reacción química es una funcibn del cambio de energia libre estandar para una reacciiin se deduce que en las enzimas y otros catalizadores no tienen efecto sobre la constante de equilibrio para una reaccibn. para AGa.. Por ejemplo. a un aceptor. pueden representarse de la siguiente manera: Esto enfatiza tres características importantes de las reacciones de transferencia de grupo. un grupo. No obstante. De otra manera. La AGn de la reacci6n global es igual estt catalizada o no por enzimas. Sin embargo. De manera tipica. catalizadas por enzimas. 3) Si bien en la reaccidn global la enzima actiia de manera catalitica (es decir. vkase antes). Las velocidades de reacción dependen de l a magnitud de la barrera energética. Las enzimas catalisan la formación o rotura de enlaces covalentes Para la reacci6n de transferencia de grupo: de las reacciones catalizadas por enzirnas lo hacen mediante el cambio de la concentraci6n local de reactantes.

era extremadamente enig- * Aunque en muchos textos se establece una equivalencia entre los sitios activos y los catalíticos de las enzimas. Una representación de una reacción de transferencia de grupo que enfatiza estas características podria ser: Así. en la velocidad de la reaccihn.C fuerte. en ausencia de catalizadores. Para comprender estas propiedades distintivas de las enzimas. uno del otro. otros sitios "activos" que se relacionan con la regulación de la actividad enzimática m& que con la enzimologIa intermediaria del proceso cataIítico. Para una solucibn quinrica homogenea. Estacondición yano se cumple despuks de introducir un catalizador. se ocupaba de la catálisis. Una consecuencia importante es que cuando un reactivo se une a un catalizador. Puesto que la velocidad de la reaccibn biomolecular global en la cual EnzG. por ende. Las enzirnas incrementan la proximidad del reactivo y la concentración local Para que cualquiera de las reacciones anteriores tenga lugar. un valor bajo para Kd representa un complejo R . De este modo. ya no m m o s con una soluci6n quimica homogbnea. Si el catalizador para una reacción bimolecular (dos reactantes) se une a ambos. Las enzirnas son catalizadores extremadamente eficaces y muy selectivos. para el complejo R-C o la constante de equilibrio para la reacción: R-C R*C Los complejos EnzS participan en la catálisis Las representaciones anteriores todavia no son suficientes para enfatizar otra característica fundamental de las reacciones catalizadas por enzimas. Aunque este enlace es un procese reversible. como se ve. laconcentracibn local de cada uno aumenta en razún de un factor que depende de su afinidad individual (valor &) por el catalizador. la concenación de las mol~culasreactantes es constante en toda la solución. por arriba de su concentracion en soluci6n libre. . la participacibn en la reacción global de dos o más fonnas intermediarias del complejo EnzS y la participación consecuente de u11 canjunto de varias reacciones parciales secuenciales. éste aumenta la concentracion del reactante en un Area localizada de la solución. C. se ha introducido el concepto de sitio "activo" o "catalitico"*. la fijación de los dos A y l por e! catalizador puede conducir a un incremento enorme (varias miles de veces) en la velocidad de la reacción global. se podría expresar la fortaleza de la relación entre un reactante. sobre éstas. a una distancia que posibilite la formacidn de enlaces (o su rotura). Inicialmente. &. sino heterogknea. es. y un catalizador. EnzG* y EnzG* * representan sucesivamente los complejos EnzS formados durante la reaccion global. hay Cuantitativamente. Los catalizadores tienen sus propios dominios de superficie para unirse a las moIdculas reactantes. A y B. todos los reactantes deben encontrarse. esto podria representarse asl: Reactante + catarizador complejo reactante-catalizador LA CATALISIS SE PRODUCE EN EL SITIO ACTIVO Una propiedad esencial de las enzimas es su capacidad para fijar los reactantes la cual se acompafia de incremento en la soncenmación local de estos y. El gran tamafío de las proteínas en relación con los sustratos condujo al concepto de que una region restringida de la enzima. R.Enzimus: cinética 9j cosa 1-fosfato) podrían presentarse como reacciones en las cuales tanto D como A estan ausentes: en términos de la constante de disociacibn. el "sitio activo". proporcional a la concentracibn de 3 ambos. De manera cualitativa. la constante global de equilibrio para la unión favorece fuertemente las formas enlazadas miis que las libres de mol6culas reactantes.

el cual a su vez es necesarbo para unir a S2 Los sustratos inducen un cambio de conformación en la enzima 1Jna caractcristica desafortunada del modelo de Ficher es que implica rigidez del sitio catalitico. el grupo catalitlcci y el fijador de sustrato estíh separados por varios enlaces. el cual ha recibido un considerable apoyo experimental. Entonces puede producirse la uni6n del sustrato. Hoy en día. Una fosfoserina (-P) y el -SH de un residuo de cisteina intervienen en la catálisis. alineando los grupos correctamesite par. En ausencia de sustrato.matico para los bioquimicos el porqug las enzimas cran tan grandes ciiando s6Io una porción de su estmctura parecía requerirse para unirse con el sustrato y para la catAlisis. están representados por los de lisina y metionina. propuesto por Emil Fischer. pero no todos. los grupos hidrófobos [porción rayada) y los grupos cargados (área punteada) se encuentran implicados en la combinacibn del sustrato. se reconoce que una porcion mucho mayor de la proteina actua reciprocamente con el sustrato que la que se suponia antes. Figura 9-3. no implicados en proceso alguno. El modelo de un sitio catalitico rígido explica muchas de las propiedades de las enzirnas El modelo de un sitio catalitico. En el ejemplo (figura 9 4 ) . la unión ordenada de dos o más sustratos (figura 9-3) o la cin6tica dc una curva de saturación del sustraio simple. En el modelo de ajuste inducido. los residuos qtie comprenden el sitio catalitico. el sustrato induce un cambio en la conformación de la enzima. Cuando aparece también la necesidad de sitios alostdricos de igual ramaiio ya no debe sorprender e! tamafio de las enzimas. pero no la catalisis. Otros residuos. En elmodelo de Fischer se presume que el sitio catalitico esta prefigurado para adaptarse al sustrato. los cambios en la confomacibn correctos (figura 9-5). Como se puede observar en el modelo de ajuste inducido. la cathlisis o ambas. represenro la accion reciproca del sustrato y la enzima en tkrminos de la analogia de una "cerradura y Ilave". pueder! estar niuy distantes entre si en la estructura primaria. Figura 9-2. Esto aIlnea los residuos de aminoácidos y otros grupos de la enzima en ia orientación espacial correcta para la combinacion del sustrato. todavía es útil para entender ciertas propiedades de las enzimas. Los anhlogos del sustrato pueden causar algunos. todos los grupos (representados como circulos negros en todas las ilustraciones) son alineados correctamente.1 combinarse con el sustrato y para la catálisis.0~ polipeptídicos que portan un grupo catat itico. Una caracteristica final es el sitio mostrado como una pequefia muesca a 12 derecha de la enzima. Un modelo mis geneml es el del "ajiiste inducido" de Koshland. Este modelo dc cerradura y Ilave o modelo de plantilla rigida (figura 9-2). Representacibn de la absorcibn sucesiva de una uienzima (CoE) y de dos sustratos ($1 y $2) sobre una encima en término de la hipbtesis de la plantilla. Ida aproximación del sustrato induce un cambio en la conformacibn dc la proteína enzimatica. Representacibn bidimensional de un ajuste inducido por un cambio de conformación en la estructura de la proteina Obsérvenselas pastciones relativasde los residuos clave antes y despues de la unibn del custrato . por ejemplo. las orientaciones espaciales de otras regiones tambikn están alteradas -la lisina y la metionina están ahora más juntas (tigura 9 4 ) . Al adherirse el verdadero sustrato (A). Tal vez se pueda imaginar una molécula reguladora uniéndose en este punto y "bajando" uno de los braz. A1 mismo tiempo. La adherencia de un análogo del sustrato que es demasiado "voluminoso'' (figura 9-5 B) o demasiado "delgadc" (figura 9-5C) induce una alineación incorrecta. pero especialmente cercanos cuando se considera la estructura tridimensional (terciaria). Reprecentacidn de la fomacibn de un complejo EnzS de acuerdo con la hipdtesis de la plantilla de Fischer Figura 9 4 . Se supone que la coenzima porta un grupo esencial que se une al primer sustrato [Si).

segiin la evidencia química.ían varios susrratos. Los residuos cataliticoc se conservan mucho Ciertos arninoacidos.en tanto que Asp 52 Con carga negativa estabiliza el ion c a r b ~ n desde el lado posterior. Sin embargo. se pueden establecer algunas generalizaciones. por tanto. Sin embargo. si estan presentes todos los siistratos se producira la catAlisis. Representación de cambios de c~nformacibn~en la protelna enrimatica cuando ocurre la unión can el sustrato radica dentro de una hendidura semejante a la anterior. El sitio catalItico de la ribonucleasa también Figura 9 4 . soii el sitio catalitico. cn particular la cisteína y otros aminolicidos hidroxllicos. Los residuos aminoacilo de ambos sustratos contribuycn al sitio activo. incluso en el estado de cristales. Arg114 Figura 9-6. como catalimdores generales bhicos Tri 63 ' Asn 46 Los sitios activos a menudo se localizan en hendiduras Para las enzimas que consisten en una subunidad cnica. (Según través de la cual se encuenmn His 12 e FIis 1 19. o de complejos enzima-sustrato anhlogos al inhibidor. Está constituida por una soIa Ser 36 h F. verlas en tres dimensiones y acercar las partes que interesan. cerca de los grupos carhoxiIo de Asp 52 y Glu 35. se ha dei. El tamaiio amplio y 61 carhcter tridimensional de los sitios activos determinan su visualizacibn 6ptima en las pantallas de computadoras mediante programas que permiten girar la estructura en todas las direcciones. enzima presente en las lágrimas y en el moco nasal. Representacibn'bidimencionaldel sitio catalitico en la regibn hendida de la Ircozima De la A a la F representan las fracciones glucosilo de un hexasadrido Algunos residuos en la región hendida se muestran junto con sus números en las secuencias en la Iisorima (Adaptado de Koshland ) . lo cual complica Ia interpretacihn de los datos. al servir para enlazar sustratos o para funcionar en la cathlisis. el sitio activo se encuentra en la interfase entre estas. Los residuos que originan la rotura del enlace se encuentran entre los sitios D y E. Estos residuos sirven como nucle6fi los. Un ejemplo es la lisozima. Muchos residuos arninoacilo participan en el sitio activo ¿Qué partes de una enzima conforman y participan eii su sitio activo? EI sentido de esta pregunta se entiende mejor mediante el examen de las estructuras tridimensionales de un complejo terciario (tres componentes) formado por unaenzima y dos sustratos. Cicídos o bhsicos tienen funciones claves en la catllisis.cadena polipéptida de 129 residuos y tiene una profunda hendidura central que alberga un sitio catalitico con seis subsitios (figura 9 4 ) los cuares enla. a (A) a análogos inactivos del sustrato (B) y (C).. Enz + S EnzS este último cede prolones al enIace acethlico de1 srisA B C @ato. Las limitaciones de la hoja impresa tan solo permiten una representacibn iinperfecta de los sitios activos. el sitio activo amenudo radica en una hendidura de la enzima. que no pueden pasarse por alto. Al parecer. residuos Koshland. constituyen parte del sitio activo. que es la enziina limitante de la velocidad de colesterologenesis (figura 9-7).Estos estudios muestran que muchos residuos aminoacilo esthn en contacto con sustratos o coenzimas unidos y. la cual lisa las paredes celulares de muchas bacterias grarnpositivas trasmitidas por el aire.ostrado que es iitil el examen de la estructura de los denoiniiiados complqjoc terciarios abortivos compuestos de un sustrato y uti producto. Uno de estos ejemplos es la enzima HMG-COA reductasa. Estos complejos. Los sitios activos de enzimas multiméricas pueden encontrarse en subunidades de interface Para ciertas enzimas que contienen multiples polipkptidos o subunidades.) que. propercionan una estrecha aproximacibn al sitio activo durante el paso inicial de erilace con el sustrato en la c a t á l ~ s i s . Por tamo.

Rodwell VW. esto es verdad s610 dentro de limites estrictos de tempemtura (figura 9-81. Estructurade una subunidad rjnica de HMG-COA reductasa de la bacteria Pseudomonasmevalonii La subunidad consta de dos dominios. El cuadro 9-1 muestra esta conservacibn de la estructura primaria en los sitios cataliticos de en7imas hidroliticas relacionadas. Al principio. " 1. i P V V C S G K mncia alred S A A histidina H Y K S G G V T Quimotripsina A C M G D@GC ' - . la estructura primariaglobal de las enzimas esta mucho menos conservada que la terciaria. L C E G iayhoff M 0 M K S P 2. kste no es un parhmetro fundamental.98 Bioauim ica de Hurper ~Cu~íieclo 9) generos. o acicidos o como aceptores de un grupo que esth experimentando transferencia. Stauffacher CV. la energía cinetica de Ia enzima excede a la barrera energética para romper los enlaces dkbiles de hidr6geno e hidrdfobos que conservan su estructura secundaria-terciaria. "I' A P Vol 5 . dado que un "tipo" estructural terciario puede construirse a partir de varias estructuras primarias diferentes. . mientras mhs tiempo se conserve una enzima a una temperatura a la cual su estructura es apenas estable. inclusive entre Cuadro 9-1. hasta cierto grado. Observese que el polipéptido inicia en el dominio grande. Es probable que. entra al dominio pequeno y al final termina en el dominio grande (Rediseriada con autorizaubn de Lawrence CM. No obstante. los aminoácidos que tienen funciones altamente especificas en la cathlisis y. pero diferentes. Por su parte. Crystal structure of Pseudomonas mevalon~i HMG-COAreductase at 3 O angstrom resolution Science 1995:268 1758 ) Temperatura Aunque la elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reaccihn cata1izada por enzimas. el mecanismo de reaccidn sea idéntico sin importar el tejido o forma de vida original. ya que la temperatura óptima depende de la duración del analisis usado para determinarla. 1972.. Las regiones que se muestran son las situadas a cada lada de los residuos serilo S e histidilo J1l Sitio Ir'! -. Por tanto. Ios aminoácidos adyacentes. predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad cataiitica. las enzimas muestran una temperatura optima. para todas las formas de una enzima que cataliza una reacción o una ciase de reaccibn dadas. En consecuencia. C K K N fi G V ? ' lo m n autor 1.' '7 - - - tzi m a t Secuenci ir d e la ser C Q 0 . al final. la velocidad de la reacci6n aumenta cuando latemperatura se eleva. tienden a mostrar una conservación elevada. Swuenrrlaa de los aminohcidos en la vecindad de los sitios catalíticos de varias proteasas bovinas. A esta temperatura. es decir. Sin embargo. el cuadro 9-2 aclara la conservaci0n de "tipos" estructurales primarios a través de los gkneros para la enzima biosintética H M G X o A reductasa. debido al incremento en la energía cinktica de las moléculas reactantes. el mAs pequeíio de los cuales (abajo izquierda) contiene un enlace nuclebtido doblado compuesto de hola beta y h6licec alfa Los residuos aminoacilo esun numerados para facilitar el trazo del polipéptido desde su terminal amino (N) hasta su teminal carboxilo (C). Na Y 1' :dlcnl Rcscarch " J. MULTIPLES FACTORES INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS Figura 9-7. No obstante. -. mayor probabilidad tiene de experimentar desnaturalizacibn.

constituye una caracteristica de supervivencia esencial para formas de vida como las lagartijas que no conservan constante su temperatura corporal. Las de los microorganismos adaptados para crecer en aguas termales o en áreas oceánicas termales profundas muestran temperaturas bptimas prbxirnas al punto de ebullición del agua. La fomia de las curvas de p . por definicibn para este ejemplo. como la pepsina. con lo cual se reduce la . Por tanto. son activadas a valores de pH muy alejados de estos límites. mostiar~uaaurit rodeando al residuo elutan n n la catá tisis realiizada por la e A reduc.. la Enz-adquiere protones y pierde su carga negativa: A valores de pH altos.bptimo estii deterT1 minada por: 1) Desnaturalizaci6n de la enzima a valores de pH altos o bajos.Cuadre 9--2.-. las unicas formas que interaccionan son SH' y Enz-. Para casi todas las enzimas. El factor por el cual la velocidad de un proceso biológico aumentacon un incremento de temperatura de 10 O C es el coeficiente de temperatura o Qio. los cambios en la velocidad de reacción en el ser humano. La estructura primaria de algunas regiones d. -. L Aminohcidc Ser humano C F Y - Levadura" -- m - alteraciones en la temperatura tienen escaso significado fisiológico. los cambios de carga pueden afectar la actividad. SH' se ioniza y pierde su carga positiva: Figura 9-8. 2) Alteraciones en el estado de carga de la enzima del sustrato o de ambos. organismos homottmicos como el ser humano toleran sblo alteraciones estrictamente limitadas en su temperatura. Sin embargo. un sitio catalttico puede conservarse a e través de 1os generris. casi se duplica con una elevacibn de 10 "C en Ia temperatura (Qio = 2). unas cuantas enzimas.S-- - :ima de marniferos . ¿cómo incrementan sus velocidades de reaccibn? La respuesta se apoya en la propiedad de las enzimas de abatir las barreras energéticas para las reacciones y elevar las concentraciones locales de reactantes. ofkce escasas opciones para los organismos homotkrmicos. los valores extremos de pH disminuirán las concentraciones efectivas de Enz.0 y 9. debidos a Cuando se mide la actividad enzimAtica a diversos pH. -.. Para la enzima. excepto cuando hay fiebre o hipotermia. las temperaturas 6ptimas son iguales o mayores a las de las células en las que se encuentran. Por el contrario. considérese una enzima con carga negativa (Enz-) que reacciona con un sustrato cuya carga es positiva (SH*): Temperatura dptime I A pH bajo. La velocidad de numerosos procesos biolbgicos. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de una reaocibn hipotetia catalizada por enzimas.0. Puesto que. L( s residi10s i subrayados se desvian de E secuencia consensual a --.y SH'. entonces. La alteracidn en las velocidades de numerosas reacciones catalizadas por enzimas que acompaña a una elevacibn o caida de la temperatura corporal. Dado que el aumento en el nhrnero de moléculas con energia cinética suficiente para superar la barrera energktica. Para aclarar esto. ya sea cambiando la estructura o la carga en un residuo que funciona para ligar el sustrato o en la catálisis. como la contracci6n de un cosaz6n fuera de la cavidad toiricica.tasa. la hptima generalmente se observa entre los valores de 5. Se piensa que los aminokidos.

V.i = kl [Enz] [P] . Entonces. que es una relacion de constantes de velocidad. para conservar una estructura activa terciaria o cuaternaria. Si se aumenta la concentracion del sustrato [S1 mientras que todas las demás condiciones se conservan constantes. la mayorla de ellas tienen dos o mas sustratos y productos. todo lo cual conduce a la pérdida de la actividad. (la velocidad medida cuando m u y poco sustrato ha reaccionado)..100 Rioquímica de Harper (Capítulo 99) mSH* X m Enz en la expresihn de la constan. LA VELOCIDAD INICIAL ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA La velocidad inicial de una reacción es la velocidad medida antes de que se haya formado suficiente producto para permitir que la reacción inversa ocurra. las reacciones enzimáticas son tratadas como si tuvieran un solo sustrato y un producto unico. Solamente en el área som breada con rayas cruzadas. que se descompone para formar un producto... Efectos del pH cobre la actividad enzimhtica. la K. En su f m a miis simple. la actividad puede ser restablecida o no cuando la enzima regresa a su pH bptimo. los cuales son los factores que determinan a K. la proteína puede desenrollarse.. Figura 9-9. crece hasta un valor mfiximo. la velocidad inicial de una reacción enzirnática es siempre proporcional a la concentracibn de la enzima. enzirnas cambian la via de la reacci6n. Las enzimas no afectan las constantes de equilibrio La enzima es un reactivo que se combina con el sustrato formando un complejo enzirna-sustrato. Podría ser necesario un grupo cargado dista1 a la región donde el sustrato se ha fijado. volverse más compacta o disociarse en protiimeros. mas (figura 9-1 0 ) . velocidad^ = kl [Enz] [S] Veloeidad. La velocidad se incrementa al aumentar la concentracibn del sustrato hasta el punto donde se dice que la enzima estli "saturada" con el mismo. Además. pero no afectan las concentraciones de equilibrio inicial y final de los reactantes y productos. No obstante. puesto que las enzimas afectan a las velocidades y no a las constantes de velocidad. y la enzima libre. no pueden modificar a K. EnzS. velocidad de reacción (figura 9-9). d e una reaccibn es la misma sin importar que se alcance el equilibrio con catálisis enzirnhtica o sin ella (recordar A G ~Las . No obstante. y no . P. esta consideración no invalida lo siguiente. Ademh. Aunque Cste es el caso de algunas reacciones catalizadas por enzirnas. obsdrvese que este enunciado se sostiene sole para velocidades in tiales. La velocidad inicial medida alcan7a un valor máximo y no es afectada por el incremento ulterior en la concentraci6n del sustrato. esto puede representarse como: LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATOAFECTALA VElOClDAD DE LAS REACCIONES En la explicación siguiente. Dependiendo de la gravedad de estos cambios. las enzimaspueden experimentar cambios de conformación con las variaciones del pH. y AGO. Conforme cambia la carga en este grupo. Así. debido a que este está presente en Aunque las expresiones de la velocidad para las reacciones hacia la derecha e izquierda y global incluyen el tCrmino [Enz]. la velocidad inicial medida.te de equilibrio glohaI la [Enz] se cancela. Dicho de otra manera. la concentración de la enzima no tiene efectas sobre la constante de equilibrio.. se encuentran Enz y S en el estado ibnico apropiado y sus concentraciones rnliximas están correctamente cargadas a pH X. v.

un gran exceso molar con relación a la enzima. Efecto de la ooncentracibn del suctrato sobre la velocidad de una reaacibn catalizada por enzimas. muchas de las enzimas poseen dando un exceso molar de lo6 de sustrato sobre la enzima. de manera que un incremento ulterior en [S]. Esto se debe a que la constante de equilibrio para la reaccihn Figura 4-11. aumenta o disminuye la cantidad de Enz ligada con S como EnzS: de aquí que V I dependa de [S]. Representacibn de una enzima a concentraciones bajas (A). la velocidad es la mitad dc la vclocidad rnbxima alcanzable { . En los puntos A o B al aumentar o disminuir [S]. como funcibn de [S] (figura 9-10). o constante de Michaelis. si una enzima de peso molecular de 100 000 actúa sobre un sustrato de peso molecular de 100 y ambos se encuentran a la concentración de 1 mg/mL. se puede determinar experimentalmente graficando v. esencialmente toda la enzima se encuentra combinada con el sustrato. llamada valor K. En C. no puede causar incrementos en la velocidad de reacción.1 mglm L = 1o4 molar Enz + S & EnzS (formación del complejo EnzS) no es infinitamente grande. LAS ECUACIONES DE MICHAELIS-MENTEN DE HlLL REPRESENTAN LOS EFECTOS DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO La ecuación de Michaelis-Menten La concentraci6n del sustrato que produce la mitad de la velocidad mhxima.1 pglmL = 7 0 molar ~ [S] = 0. Cifras mhs realistas serian: [Enz] = 0. El caso B presenta una situacibn de mayor interés tebrico donde exactamente la mitad de las rnol&culas de enzima esthn "saturadas con" sustrato.Figura 9-10. Cuando [S] es aproximadamente igual a K. puesto que no existe enzima libre disponible para reaccionar. existen 1 O00 moles de sustrato por cada mol de enzima. Incluso si [S] decreciera 100 veces. v. altas (C) y a la wncentracibn Km del sustrato (6) Los puntos A. La Km tiene las dimensiones de la concentracidn molar. B y C corresponden a los de la figura 9-1 0 . Por ejemplo. En los puntos A y B solamente una porcihn de la enzima presente estl combinada con el sustrato.. aunque praduce un aumento en la frecuencia de las colisiones entre Enz y S../ ) V2 a esa concentración particular de la enzima. De hecho. B y C de la figura 9-1 0 se aclara en la figura 9-1 1. De acuerdo con esto. el sustrato todavia estaria presente en un exceso molar de 10 000 veces sobre la enzima. aun cuando haya muchas mhs molkculas de sustrato que de enzima. es muy sensible a los cambios en [S] y la enzima esta trabajando precisamente a la mitad de su vclocidad máxima. La situación en los puntos A.

a. 3) Cuando [Si = Km (punto B.. Entonces = 'V d x [SI Km + [C] ' Vd = -x [SI . K: yi Invirtiendo: . La velocidad. las dimensiones de Km esthn en molaridad o moles por litro. v. figuras 9-10 y 9-1 1).. se puede reemplazar su relación por una nueva constante. y la pendiente. miiad de la velocidad miixirna (el valor U) la velocidad inicial v. El valor dc K. es K... de modo que el término [S] puede ser eliminado dcI denominador.(l lv.h. Puesto que el [S] está expresado en rnolaridad. por ejemplo.. la velocidad inicial vi es semimáxima. puede: ser calculado a partir de la grhfica de Lineweawer-Burk o del doble reciproco (figura 9-1 2) usando la pendiente y la intersección en y o la interseccibn negativa en x. VI Si y. b. [a significa Simplificando: ~ s t es la ecuación de una linea recta: a donde: Esto establece que cuando la concentración del sustrato [S] excede con mucho el valor de Km./V. 2) Cuando [S]es mucho mayor que Km(punto C.. El . se puede expresar en cualquier tipo de unidad. La ecuacihn de Michaelis-Menten puede ser invertida y factorizada como sigue: describe el comportamiento de muchas enzimas de acuerdo a las variaciones de la concentracibn de sustrato.la velocidad inicial v. cambia muy poco su valor. el valor de [S] cambia muy poco.) se grhfica contra el reciproco de [S] (l/[S]). es IIV. depende de la concentraci6n del sustrato [S].. es conveniente reordenar la expresión de Michaelis-Menten para simplificar la valoracihn de Km y V.A..m h [ I V S Vrns! p] SI+ [S] 2 [SI . " .. es graficada (y contra [S]. L a expresión de Michaelis-Menten Para determinar Kmy V. En otras palabras.. Dado que tanto Vmav como Km son constantes. se grafican en función de x.cuando la v. por lo tanto el tCrmino Km se elimina del denominador.2 Esto expresa que cuando la concentracion del sustrato es igual al valor de Km. se usa una forma lineal de L ecuación a de Michaelis-Menten Puesto que numerosas enzimas dan curvas de saturación que no permiten fácilmente la valoración de Vmex por tanto de Km).. de determinar de manera experimental la concentracion del sustrato donde la velocidad inicial es la mitad de la rnhxirna. Esta gráfica es llamada gráfica del doble reciproco.v F .. Y. Agregando ahora Km a [S] en el denominador. Tambikn indica la forma de evaluar a Km. o de l/[S]. La interseccibn negativa en x puede ser valorada haciendo y = O. Ln dependencia de la velocidad inicial de una reacción catali7ada por enzirnas en [S] y en Kmpuede aclararse valorando la ecuaci6n Michaelis-Menten como sigue: 1 ) Cuando ISI es mucho menor que Km(punto A en las figuras 9-1 O y 9-1 1).valores de Km que se aproximan a la concentraci6n fisioliigica de sus sustratos. puesto que Km es independiente de [Enzl. o 1/v. esto significa que cuando la concenlracihn del sustrato es considerablemente inferior a la requerida para producir la . es mhxima.vi = !! % = be l !? N Km Km [S] K m + [ I' S K [S] "aproximadamente igual a"]. figuras 9-10 y 9-1 1).. el reclproco de v. esto es. Aííadiendo ahora [S]a Kmen el denominador. la interseccion en y.

Si kz es no a proximadamente igual a km.. subestima la afinidad.Kmpuede aproximarse a una constante de fijación La afinidad de una enzima por su sustrato es igual al inverso de la constante de disociación. y la intersección en x es Vmk.. Aunque la gráfica de Lineweaver-Rruk y el enfoque de Eadie-Hofstee son útiles en los ejemplos escogidos. Para evaluar Kmy V. Un enfoque alternativo a la evaluaci6n experimental de Km y V. En otras palabras. contra [S] usado para valorar K y Vmh m Esto es./K. l l v . 1/K. son de importancia prActica considerable. la determinación rigurosa de Km y V. la velocidad de dicaciacion de EnzS a Enz + S debe ser mucho mhs rápida que su disociación a enzima + producto. el doble reciproca también tienen aplicacihn extensa en la cvaluacion de los inhibidorcs dc enzimas...l[S] (eje y) contra v. . Los valores de K... v.. De manera experimental.= V. el uso de la grhfica de Lineweaver-Burk para valorar Km puede dar origen a una importancia no justificada de los datos reunidos a concentraciones bajas del sustrata./2 es: [S] = .. Figura 9-12.8. La ecuación de Michaelis-Menten puede reordenarse a servir también corno una medida de su Kd. La derivación supone que el primer paso de Izt reacción catalizada enzimáticamente es rapido y siempre esta en equilibrio.. Éste cs el caso cuando las concentraciones del sustrato. 1 /Kd. mayor será la afinidad de la enzima por el sustrato. Sin embargo. Por lo general. seleccionadas para el estiidfo. mientras menor sea la tendencia del sustrato y de la enzima para disociarse. >> entonces kz + k-. en el análisis de enzimas esta situación es deseable....jo enzima-sustrato. EnzS. En la expresion de Michaelis-Menten. cuyos reciprocos difieren por incrementos constantes.La pendiente es -1 /Km...r k2 k-I En estas condiciones. la enzima actuará esencialmente a velocidad mhxima y por tanto la velocidad mhxima (V. difieren por un incremento constante.. Los tratamientos con . (eje x}. para el comple. debe ser válida una hipótesis incluida en la derivacidn de la expresión de Mfchaelis-Menten. Gráfica de Lineweaver-Burk o de/ doble reciproco. El valor Kmde una enzima para su sustrato puede tratamienta por el doble recíproco requiere relativamente pocos puntos para definir Kmy es el método más utilizado para determinarla. para que esto sea verdadero. = Kd = afinidad. es el de Eddie y Hofstee.. rcquiere de tratamiento estadistico. A una concentracion de sustrato de 100 veces K.. Entonces la interstccidn en y es V.) reflejara la cantidad de enzima activa presente. se grafica v. El valor de Km indica la cantidad de sustrato que debe usarse para medir V. Este inconveniente puede superarse seleccionando las concentracioncs de sustratos. Kd.Km kl - 1 3 [S] que da kr + k-1 pero cuando k-.entonces liK.

a. otros lo hacen en alguna región alejada de &te (un sitio alostérico). Si pl 1 1. tanto Los inhibidores competitivos típicos se asemejan al sustrato La inhibicibn competitiva clásica tiene lugar en el sitio de unión del sustrato (catalitico). Si rr < 1. / 2 v. los sitios de union achian de modo independiente uno del otro. el enlace cooperativo del sustrato a sitios múltiples. El enlace en un sitio afecta el enlace en otros como se describió en el capitulo 7 para la hemoglobina.de Hitl es log k' mejor será el cooperativismo y.J(Y. y cuanto mayor sea el valor de n. la velocidad de reacción aumenta a la enésima potencia de [S]. Evaluación grafica de la ecuacibn de Hill para determinar la concentracibn de sustratos que produce la mitad de velocidad mhxima. los sitios son cooperativos. Escrita de manera lineal.. La estructura qulmica de un inhibidor (1) analogo del sustrato (S) Figura 9-1 3. ..) = O. Una grAfica de v. como la hemoglobina. se traza una Ilnea perpendicular al eje de las x desde el punto donde log v. numerosos inhibidores no muestran las propiedades ideales de inhibicibn competitiva o no competitiva puras que se describen despubs... para determinar S r o (concenlracibn del sustrato que produce la mitad de la velocidad maxima).. La ecuación afirma que cuando [S] es baja comparada con k'. De este modo. Esto indica. EL ANALISIS CINETICO DISTINGUE ENTRE INHIBICIÓN COMPETlTlVA Y NO COMPETITIVA Aunque de manera tebtica se distinguen los inhibidores de la actividad enzimática con base en si la inhibici~n se anula o no por el incremento de la concentraci6n del sustrato./(V. Cuando [S] ce grafica contra v. La figura 9-1 4 presenta una gráfica de Hill de datos cinéticos para una enzima con cinbtica de enlace cooperativo. Para la cinktica de saturacibn del sustrato sigmoide no son válidos los métodos dc evaluacibn gráficas de la concentración del sustrato que produce la mitad de la velocidad máxima. donde k' es una constante compleja. Este método se emplea cuando la curva de la cinbtica de saturacibn del sustrato es un sigmoide . = V ) .v. A la mitad de la velocidad máxima (v. que originalmente se derivó para describir el enlace cooperativo de moléculas de oxígeno a la hemoglobina. Un criterio alternativo para la clasificación de inhibidores es su sitio de acción. por lo general.. no muestran la cinética clásica de saturación de Michaelis-Menten. Para valorar la sigmoide de T cinttica a de saturacibn se utiliza una representacidn gráfica de la ecuación de Hill. .J(V. como se describib (no se producen rectas).. -vi) contra log [S] proporciona una recta con pendiente = n. .)= 1. y por tanto. donde n es un pariirnetro empírico cuyo valor depende del número de sitios de enlace del sustrato y del numero y tipo de interacciones entre los sitios de enlace./V. Algunos se unen a la enzima en el mismo sitio que el sustrato (el sitio catalitico). log v. de este modo. será m& "sigmoide" la cinética de saturación.v.104 Bioquímica de Harper La ecuación de Hill Ciertas enzimas y otras proteinas que -jan ligandos.v. Figura 3-14.) = 0. Cuando n = 1. Sigrnoide de la cinética de saturacibn. la ecuacihn . la curva de saturacibn es sigmoide (figura 9-13). se dice que los sitios exhiben una cooperativismo negativo.

) para el sustrato. por tanto. Reaeeibn del suminato deshidrogenasa. la concentración relativa de EnzI desaparecerá. Cuando tanto el sustrato como este tipo de inhibidor están presentes.C-COOII Succinato Fumarato Figura 9-1 5. v. La proporcion de EnzS a EnzI y la velocidad de reacción se incrementan. La gráfica del doble recíproco facilita la evaluación de los inhi bidores La figura 9-1 6 representa un caso tipico de inhibición competitivamostrada gráficamente en la forma de una línea de Lineweaver-Burk.2H H. O b s é ~ e s e liberacibn de la inhibición a la concentración alta [S] (1I[S] baja). Por razones anhlogas. puesta que no hay manera de quitar ni siquiera un atomo de hidrógeno del único atomo de carbono alfa del malonato sin formar un átomo de carbono pentavalente. La succinato deshidrogenasa cataliza la formaci6n de fumarato mediante la remacibn de un htomo de hidrbgeno de cada htomo de carbono alfa del succinato (figura 9-1 5. Esto aumenta la probabilidad de que Enz se combine con S.) a una concentración fija del inhibidor fue medida a diversas concentraciones de S. la velocidad de la reacción catalizada sera la misma que en ausencia del inhibidor (figura 9-1 6). en lugar de hacerlo con 1. Ahora hay una cantidad escasa de enzima libre (Enz) disponible para combinarse con S para formar EnzS y finalmente Enz + P. A una concentracibn suficientemente elevada de S. Puede. Supbngase que a una concentración fija de 1 se agrega más S. Así. ki E R A + S $ Enz + I k-i se fija firmemente a la enzima (K.. la velocidad de reaccibn (formación de P) sera lenta. Las líneas trazadas a travds de los puntos experimentales coinciden en el eje de las y.) en presencia del inhibidor. puesto la constante de equilibrio Ki es: La accibn de los inhibidores competitivos se puede entender en tkrminos de las siguientes reacciones: Enzl (inactivo)+ Enz Enz + P EnzS (activa) -+ Enz + P La velocidad de formacibn del producto depende sOIo de la concentracibn de EnzS. combinarse de manera reversible con la enzima. es mayor que -1/K. una concentración igual de un inhibidor unido con menor fuerza (K. Puesto que la jnterseccibn en y es lIV. Si esto es asi. = una cifra pequefla). formando un complejo enzima-inhibidor (EnzI) en lugar de un complejo EnzS. Así. = un numero mayor) no hará disminuir la velocidad de la reaccibn de manera tan marcada. Este no puede ser deshidrogenado. es la misma que en ausencia del inhibidor. esto dice que a una concentración infinitamente grande de S (l/S = O). ) El malonato (DOC-CT-iz-C003 puede combinarse con la deshidrogenasa formando un complejo EnzI. Sin embargo. compiten por los mismos sitios de unión sobre la superficie de la enzima. la interseccibn sobre el eje de las x (que está relacionado a Km) varia con la concentración del inhibidor y se convierte en un número mayor (-1 K'.. Figura 9-16. Sup6ngase que el inhibidor H H -C -COO I 1 - -0012C-H --OOC-C-H . . Para la reaccibn reversible. Un caso muy estudiado de inhibición competitiva es el del malonato (1) con el succinato (S) por la succinato deshidrogenasa.por lo general es similar a la de este. un inhibidor competitivo eleva la Km aparente (K'. La velocidad de reacción (v. La única reaccion que puede experimentar el complejo EnzI es la descomposicibn regresiva en enzima más inhibidor. GrAfica de Lineweaver-Burk de la inhibicidn cornpetiwa c l h s k .

Si el nbmero de moles de 1 agregado es mucho mayor que el numero de moles de enzima presente [1] puede ser generalmente tomado como la concentracián agregada (conocida) der in hi bidor. denominadas "Bi Bi". en general. a continuación se comentan las reacciones de dos sustratos y de dos productos. agentes oxidantes. la presencia de Sin uno o más sustratos o productos pueden proteger a la enzima contra la inactivacion. Los inhibidores reversibles no competitivos disminuyen la velocidad rnfixima alcanzable con una cantidad dada de enzima (reducen V. Se supone que no ha habido ninguna alteracion importante en la conformacibn del sitio activo cuando está unido 1. reducen la actividad enzimhtica. La inhibicidn reversible no competitiva cs. Para la inhibicion competitiva simple. en presencia y en ausencia de inhibidor. indican cuales son los mas eficaces. Puesto que S e I se pueden combinar en diferentes sitios es posibje la formacibn d e complejos En21 y EnzIS. etcétera. la intersección sobre el eje de las x es: que tran en la figura 9-1 7 son los que se obtienen cuando l l v .. Ya que EnzlS puede descompanerse para formar el producto a una velocidad menor que la de EnzS. esto no se aprecia siempre. Aunque el análisis detallado de la cinCtíca de los mecanismos de las reacciones de rnultisustrato esta m& allá dcl asunto de este capítulo. en todo caso.jantc. la reaccihn puede retrasarse pero no impedirse Es posible que se presenten las siguientes reacciones de competencia: La mayoría de las reacciones implica a dos o mas sustratos Ida exposición anterior de las reacciones enzimhlicas catalizadas considera 3610 las reacciones que involucran sustratos y productos únicos. Un análisis cinetico del tipo anteriormente tratado puede no distinguir entre venenos enzirnáticos e inhibidores no competitivos reversibles verdaderos. Usualmente el inhibidor no muestra analogía estructural con S o esta es muy escasa y puede asumirse que se une a un espacio diferente en la enzima.. Sin embargo. para una serie de inhibidores análogos al susirato (competitivos). embargo. 1-Ig2'). . Inhibidores irreversibles "envenenan" a las enzimas Unagran variedad de "venenos'knzimáticos tales como la yodoacetarnida. A una concentración baja. ya que tanto la inhibicihn no competitiva reversible. los iones de metales pesados (Ag'. la mayoria de las reacciones bioquímicas implican dos o más sustratos y productos.. los resultados que se mues- Figura 9-17. Muchos medicamentos eficaces en clíiiica actúan corno inhibidores competitivos de actividades enzimkticas importantes en las células microbianas y animales. Puesto que estos inhibidores no tienen semejanza estructural con el sustrato. El valor de Kmpuede ser evaluado en ausencia de 1. con los valores más bajos dc K.. Si S tiene igual afinidad par Enz y por En21 (1no afecta la afinidad de Enz por S). y K. rara. también puede serlo usando Ia ecuación anterior. una cantidad sustancial de enzima libre estd disponible para combinarse con el inhibidor. produciran el mayor grado de inhibición.106 nioquim ica de Har-p~r Km es la concentración del sustraío a la cual la concentraci6n de enzima libre es igual a la concentración de enzima como EnzS. como la irreversible.) pero por lo general no afectan a K. un incremento en la concentración de éste. es ineficaz para suprimir esta inhibicr~n. Los inhibidores no competitivos reversibles reducen Vmax pero no afectan a K m En la inhibicibn no competitiva no hay competencia entre S e 1. muestran cinética serne. Por desgracia. Gráfica de Lineweaver-Burk para inhibición reversible no competitiva. Los valores de K. es graficado contra 1 /[S].

Reacciones en ping pong El tkrmino ping pong se aplica a mecanismos en los cuales uno o más productos se desprenden de la enzima antes de la adicibn de todos los sustratos.. característico de muchas oxidorreductasas dependientes de NAD(P) Centro: Una reacción BI Bi aleatoria. Estas tambikn se denominan reacciones de desplazamiento unico porque el grupo sujeto a transferencia (G) se pasa directamente desde el sustrato donador A-G al sustrato aceptor B. t o s datos cineticos sirven para distinguir los tipos de mecanismos Los datos sobre el estado de reposo cinbtico y las ecuaciones apropiadas respecto a la velocidad se utili- . en las cuales la E corresponde a la enzima libre. se mide la dependencia de la velocidad inicial en la concentracihn del sustrato A en varias series de concentraciones diferentes (pero constantes) del sustrato B. Reprecentaci6n de tres clases de mecanismos de reacuones Bi Bi Las líneas representan la enzima y las flechas la adición de sustrato y desprendimiento de productos Arriba: Un mecanismo Bi 61 ordenado. B. Idossustratos se denominan A. propia de l a s arninotransferasas (transaminasas) y de la quimiotripsina zan para distinguir entre diferentes mecanismos. R y S de acuerdo al o r d ~ n que se separan de la enzima. incluyen: 1) V. Abajo: Una reacción de ping pong.Términos especiales describen las reacciones enzimáticas complejas Los siguientes términos convencionalec se emplean pasa caracterizar reacciones compIe. Ter (3. cualquier sustrato puede agregarse primero para formar ya sea E-A o E-8. un mecanismo Bi Bi ordenado. mientras que en las segundas solo A puede reaccionar con E. son análogos a los de la ecuación de sustrato único de Michaelis-Menten.jas catalizadas por enzirnas. se distingue entre reacciones en orden aleatorio y reacciones en orden compulsorio. Aunque Ios t&rminocen estas ecuaciones cinéticas son m& numerosos. reacciones Bi Ter). Los datos se obtienen ahora considerando B coma el sustrato variable y A como el sustrato constante. Las reacciones Bi Ri ping-pong son reacciones de doble desplazamiento porque el grupo sujeto a transferencia ( G ) primero es desplazado de A 4 por E y a continuación de E-G por B. C y D de acuerdo al orden en que se agregan a la enzima. con formación del producto Q-G. en tanto que B reacciona c61o con el complejo E-A (figura 9-1 8). Aun cuando muchas reacciones catalizadas por enzimas involucran mis reactantes y productos (por e. en Los diferentes tipos de la enzima se denominan E. En las primeras.jernplo. es decir. Una explicación para un orden compulsorio en la adicibn de sustratos es que agregar A induce un cambio en la conformación que alinea residuos escnciales para el enlace de B. Dc igual manera. las lineas paralelas indican un mecanismo Bi Bi ping pong. y Los términos Uni ( 1 ). los productos se designan P. Bi ( 2 ) . aquí sblo se consideran las reacciones Bi Bi. Por ejemplo. Figura 9-18. Las gráficas de doble reciproco diferencian entre los mecanismos ping pong y los secuenciales Para distinguir entre diversos tipos de mecanismos.. E EA EAB-EPQ t EQ t E P B a FB-EQ E EA-FP t F t E Reacciones en secuencia o de desplazamiento unico En las reaccioncs en secuencia todos los sustratos deben combinarse con la enzima antes de liberar cualquier producto. Los patrones de las lineas cuando 10s datos se representan mediante grhficas del doble recíproco muestran el tipo de mecanismo. Dependiendo del modo en el cual los sustratos se agregan a la enzima. aquellas que tienen dos sustraios y dos productos. Q. Cuater (4) denotan el número de reactantes y productos. y 3 ) las constantes de disociación para el desprendimiento de A y B de la enzima. y las lintas que se intersectan en el cuadrante negativo. velocidad de reacción media cuando están presentes tanto A como B en concentraciones saturadas. 2) las concentraciones de A y B que dan como resultado la mitad de la velocidad m k i r n a cuando el otro sustrato esth presente en concentracion saturada. típica de algunas deshidrogenasas y cinasas. F y G.

La mayoria de los compuestos quimicos con poca o nula semejanza estructural con sustratos y que se unen al sitio catalitico o a algún otro. Los anhlogos de sustrato que se unen de manera reversible al sitio catalitico y actúan como inhibfdores competitivos de las enzima. Los valores de Km tienen dimensiones de molaridad y se determinan mediante grhficas.. pero sblo hasta que el nivel de la energia cinetica de la enzima excede a la de rotura de las ddbiles fuerzas no covalentes que mantienen su estructura secundaria y terciaria nativa. Ida ecuacidn de MichaelisMenten describe los efectos de la concentracihn del sustrato sobre la actividad de numerosas enzimas.pero no tienen efecto sobre ./2. la concentración enzimática y de sustrato y los inhibidores alteran las velocidades de las reacciones catalizadas por entimas. Aunque las enzimas modifican de manera profunda las velocidades de las reacciones. Cuando la temperahira de una enzima se eleva. región tridimensional de una enxima que. Estos cambios de conformaci6n inducidos por el sustrato pueden crear bolsas para su retenci6n y alinear residuos clave para la catálisis.108 Bioquímica de Harper Los estudios sobre inhibición de producto se utilizan para completar estos anhlisis cintticos y para distinguir entre mecanismos Bi Bi ordenados y Bi Bi aleatorios. los cambios en la concentraci6n del sustrato [S] afectan la velocidad de reacción sbIo cuando alrededor hay suficiente enzima libre para reaccionar. La constante de Michaelis (Km) la concentracihn de es sustrato que produce la mitad de lavelocidad de reaccibn mhxima (V. Cuando toda la enzima está unida como complejo EnzS (condiciones de V. El efecto de [S] sobre las velocidades de reacciones catalizadas por enzimas alostkricas es descritopor laecuacibn de Hill. Para una gráfica de doble recipraco de 1 /v. En este punto.).. Los cambios moderados del pH (es decir. no afectan las constantes de equilibrio ni los cambios globales en la energía libre de esas reacciones. RESUMEN La temperatura. aunque a un grado estrictamente limitado en organismos homotérmicos. Por tanto.. Lamayoriade las reacciones c a t a l i d a s por enzimas implican dos o más sustratos o productos. como el ser humano. Cambios de temperatura mAs moderados también afectan la velocidad de reacciones catalizadas por enzimas in vivo. Los criterios para establecer las diferentes clases de reacciones Bi Bi (reacciones que involucran dos sustratos y dos productos) son si el sustrato se enlaza en secuencia o al azar y si el producto se libera antes de que se una la totalidad del sustrato (reacciones ping p o n d . las enzimas tienen valores de pH a los cuales muestran actividad 6ptima (pI-l óptimo). 2) servir como plantillas para incrementar las concentraciones tocales de sustrato y 3) proporcionar aminoicidos cuyos grupos funcionales cumplan con funciones especificas en la catiilisis. fijación de sustrato o conformaci6n del sitio catalltico. dependiendo del producto que se estudie. En casi todas las situaciones de ínter&s fisio16gic0. cualquier incremento o decremento en la concentración de la enzima va acornpaflado de un aumento o disminucidn en la velocidad de reacción. puede contener coenzimas o iones metálicos. el pH. Por qjemplo. Los sitios activos con frecuencia radican en hendiduras en las enzimas o en la interfase entre subunidades de enzimas multimericas. Sin embargo. incluyen muchos f h a cos de valor en medicina. la mitad de la enzima se encuentra como EnzS). la intercepcidn en el eje horizontal es . Los extremos de pH desnaturalizan las enzimas al protonizar o desprotonizar residuos de arninoácidos acidicos o alcalinos. disminuye la barrera energetica para la reacci6n. de3 sustrato que varia y del que permanece constante. incrementos mayores de [S] ya no aumentan la velocidad de la reaccihn. actúan como inhibidores no competitivos de la actividad enzimhtica. De este modo. La fíjaci6n y catalisis del sustrato se produce en el sitio activo (catalitico). 1.. en una reacción Bi Bi de equilibrio m i d o . Las enzimas alteran las velocidades de reaccidn por medio de: 1) abatir la energía de activacidn para formar estados de transición. Las variaciones de pH t a m b i h pueden alterar la carga elkctrica de los sustratos. en Ia regibn de pH 5 a 9) afectan la actividad enzimktica al alterar la carga de grupos R bcidos o bhsicos dkbites de los arninoácidos que actúan en la caaisis. Cuando los sustratos se aproximan.os patrones mfis complejos de inhibiciOn de las reacciones B i Bi ordenadas involucran patrones de inhibición tanto competitivos como mixtos.. la velocidad de reaccion aumenta. De manera breve. La catAlisis enzimática comprende estados de trancicibn de menor energía que los correspondientes en reacciones no catalizadas..1 K y en el eje de Ins y es lIV. cualquier producto es un inhibidor competitivo de A con [B] constante y de B con [A] constante. los sitios cataliticos experimentan cambios de conformación que pueden propagarse mhs allá del sitio catalitico (recukrdese la fijaci6n de 01 la hemoa globina). la actividad decrece en forma precipitada. de modo que ya no pueden formar los enlaces salinos que conservan la estructura secundaria y terciaria de la enzima. los inhibidores competitivos decrecen la Km. además de residuos de aminoacidos. Dado que se dispone de abundante sustrato para reaccionar con la enzima libre.. contra I/[S]. la concentraci6n molar de una enzima [E] es de un orden de magnitud menorque laconcentración molar de su sustrato [S]. con importantes implicaciones en la salud y la enfermedad.

Estos inhibidores pueden distinguirse por la medicion de la actividad enzimática a varias concentraciones de sustrato en presencia o ausencia del inhibidor. V.'f o Postiramlational ModEjicatinn ofProieins.b disminuye).Vmb. I - - REFERENCIAS Bcnder ML. pero la intercepcibn en x no se modifica. Stauffacher CV: Crystal smicturc of Pseudomonas mevalnnii HMG-COArductaqe at 3. tanto que los inhibidores no competitivos en decrecen V sin afectar a Km. contra lI[S]. la intercepción en y (l/V. pero la intercepcibn (-IJK. Rergeron RJ. Freeman RB. Syrnons RH: Small catalytic RNAs. Vtase tambikn las referencias del capitula T. los dos conjuntos de datos se grafican como l/v.53:493.61:641.) disminuye por la presencia de inhibidor (es decir. Komiyama M: The Rioorganic Chemistty ofEmynalic Latalysis. 1985 Lawrence CM.. las dos líneas se intersec- tan en el eje y (es decir. .. Academic Press. V. Suckling CJ: Eníyme Chemzstv Chapman & Hall. Science 1995368 1758.. Walsh CT: Suicide substrates. . 1984.. En la inhibicibn competitiva clfisica. no cambia). Annu Rev Biochem 1984. en apariencia Kmha disminuido). Wiley-Interscience.) aumenta en presencia del inhibidor (es decir.0 angstrom resolution. Luego. Annu Rcv Biochem 1992. Rodwell VW. 1990. En la inhibicidn no competitiva. Hawkins HC (editors): The Enzymolo~). rnechanism4ased enzyme inactivators: Recent developments.

. Este objetivo todavía lejos de alcanzarse. Sin embargo. facilita ahora la preparación de farmacos que inhiben enzimas especlf'ícas como H M G X o A reductasa. la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis del ~olesterol. Igual que muchas otras proteasas. el de los intermediarios enlazados a las enzimas que se forman durante la cathlisis. las enzimas muestran un orden en extremo alto de especificidad al sustrato y una enorme eficiencia catalítica. Aunque la propiedad de la quirnotipsinapara catalizar la hidriilisis de ésteres no tiene importancia fisiolbgica. estas técnicas facilitarán el diseflo y la introducción en seres humanos de enzimas con las propiedades especificas deseadas. En ultimo caso. mas que uno solo entre la enzima y el sustrato.Enzimas: mecanismos de acción Victor W. Tir. por qud las cnzimas son catalizadores eficientes y específicos. Asimismo. En este capitulo los principales comportamientos de la catálisis enzimática se ejemplifican Gon la enzima quimotripsina. identificación del participante directo en la cathlisis. IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los fenbmenos moleculares que acompafian la conversibn de sustratos a productos constituyen el tema del mecanismo de acción enzimática. grupos prostéticos ni iones metAl3cos. combinada con la información mecanicista. la quimotripsina cataliza también la hidrólisis de ciertos ésteres. coenzimas o grupos prosteticos que participan en el enlace de sustratos.á r e a s dc gran potencial de desarrollo en un futuro inmediato. a nivel molecular. con el fin de modificar la especificidad enzimática o la eficiencia catalítica. esto es consecuencia del prolongado desarrollo evolutivo de sitios adaptados a la perfección pasa la cathlisis rripida y selectiva de reacciones individuales. la identificación de los iones metálicos o grupos funcionales en los residuos de aminohcidos. de ellos. Rodwell. en contraste con la catálisis inorgánica o la orgánica más sencilla. se denomina con toda propiedad "enzimología intermediaria". productos e intermediarios en el sitio activo. Estos estudios conducen a un enfoque racional para la terapéutica y la preparaciiin de medicamentos . los estudios de los mecanismos sugieren ciimo puede usarsc la tecnologia del DNA recombinante y la mutagenesis dirigida a un sitio. si facilita el estudio del mecanismo catalitico. o Tri) o por uno con un grupo R voluminoso no polar (Met). y. la caracterización de todos Tos intermediarias enlamdos en la enzima. PhD INTRODUCCION Los mecanismos de la catAlisis enzimática reflejan muy de cerca 10s mecanismos de las reacciones químicas. La informacihn estructural de alta resolucion obtenida por cristalografía con rayos X. LA "ENZIMOLOG~A INTERMEDIARIA" DE LA QUHMOTRIPSINA MUESTRA LAS C A R A C T E R ~ T I C A S GENERALES DE LA CATÁLISIS ENZIMATICA La quimotripsina cataliza la hidrolisis de los enlaces peptidices en los que el grupo carboxilo es cedido por un aminohcido aromático (Fen. una proteína comparativamente sencilla que no contiene coenzimas. El propósito final de los estudios de estos mecanismos es entender. Por anaIogia con el estudio de los intcrmediarios en las vías del metabolismo intermedio. requiere de: la identificacion de la etapa o fase limitante de la velocidad en la reaccibn global. Los caminos o vías por los cuales las enzimas convierten los sustratos en productos involucran una sucesión de intermediarios.

La mezcla instantanea de la enzima y el sustrato se logra con un dispositivo mecanice que expele con rapidez y de manera simulthnea. La densidad 6ptica como función del tiempo despuds de la mezcla.D O 5 e Z Flgura 10-1. A F . El carhcter bifhico de la liberacibn del anión p-nitrofeniEato se comprende en tkrminos de los pasos sucesivos de la catdlisis mostrados en la figura 10-3. Cste se convierte en el anión amarillo p-nitrofenilato. ya no puede haber más desprendimiento dep-nitrofenilato hasta que se libera quirnotripsina mediante la remocibn hidrolitica lenta del ani6n acetato procedente del complejo CT-AC (figura 10-3). Esta quimotripsina libre queda entonces disponible para la formación posterior de complejos La liberación del anión p-nitrofenilato es bifasica La liberacihn del anión p-nitrofenilato tiene lugar en dos fases distintas (figura 10-2): 1) una fase de "esta- ~ CT + PNPA . debido a que su hidrólisis libera p-nitrofenol. La fase de "estallido" (figura 10-2) corresponde a la conversion de toda la quimotripsina libre disponible en el complejo CT-Ac. Fase de "estallido' Fase de equilibrio El sustrato sintttico p-nitrofenilacetato (figura 10-1) facilita el análisis colorimétrico de la actividad de la quimotripsina.tCT-& ucT CT-PNPA Rapida RBpida Lenta Flgura 1 0 3 .CT-Ac. anrbn pnitrofenilato. el "fenol liberado" se calwfb a partir de la densidad bptica del anión p-nitrofenilato. Pasos intermedios en la cathlicis de la hidrblisis del p-nitrofenifacetato por la quimotripsina (CT.fenol. . La etapa lenta es la hidrólisis del complejo quimotripsina-acetato (CF-Ac) Una vez que toda la quimocsipsina disponible forma parte del complejo CT-Ac. En un medio alcalino. EI aparato tiene dos jeringas: una para la quimotripsina y la otra para el p-nitrofenilacetato. se registra en un tubo de rayos catbdicos. caracterizada por el desprendimiento mhs rApido del anión p-nitrofenilato y 2) una liberaci6n mhs lenta. Estos experimentos utilizan cantidades equivalentes de sustrato (mas o menos cantidades equimolares de enzima y sustrato) y ponderan los fenómenos que tienen lugar en los primeros milisegundos desputs de hacer la mezcla. LA CINÉTICA DE FLUJO INTERRUMPIDO REVELA LA "ENZIMOLOG~A INTERMEDIARIA" DE LA QUlMOTRlPSlNA La cinética de la hidrólisis del p-nitrofenilacetato por la quimotripsina puede estudiarse en un aparato de "flujo interrumpido".) La formación de los complejos CT-PNPA y CT-Ac es rápida en relacibn a la hidrblisis del complejo CT-Ac. el contenido de ambas jeringas en un tubo angosto que pasa a cravts de un espectrofot6metro. CT-PNPA. quirnotripsina.complejo quimotripcina-pnitrofenilacetata. El p-nitrofenilato (feno[PNPA del ingl~s~p-nifropknylafe) ~ + despds ~ de la fase de "estallido" es consecuencia de la formación lenta de quimotripsina libre por hidrbtisis del cornplejo CT-Ac. Figura 10-2. del mismo. complejo quimotripsina-acetato. En esta grfifica. CinBtica de liberación del anión p-nrtrofenilato cuando la quimotripsina hidroliza al p-nitrofenrlacetato en un aparato de flujo interrumpido. pNttrofenilacetato (PNPA) Tiempo (mseg) 1 . Ilido". anibn acetato. PNPA.p-nitrofenilacetato. subsiguiente. con liberaci6n simultánea del ani6n p-nitrofenilato.

tres residuos se encuentm Los alineados en e! orden Asp 102-His 57-Ser 195. Tal como se explicara en el capitulo 1 1. como la es un pCptido. La figura 10-6 muestra la funcibn de siete residuos de sitios activos en la catilisis efectuada por esta fosfohidrolasa. como transaminasas se explican en Figura 1 0 4 .(es decir. ésta implica una "triada catalitica". con mayor frecuencia. en el sentido de la estructura terciaria.O l Enz-CH. Reacciones análogas tienen lugar con otras proteasas de serina. Muchas otras proteasas son inactivadas por el DiPF mediante un mecanismo analogo. d e 1 in g Id S.6-bifosfato. La aproximacibn del ani6n acetato (derivado del pnitrofenilacetato) al Btomo de oxígeno del grupo R de la Ser 195 desencadena el desplazamiento secuencia! de protones que se mueven como "lanzadera" de Ser 195 a travhs de His 57 a Asp 102 (figura 10-5). Un sistema relevador de carga funciona como una lanzadera de protones durante la catá!isis Este proceso utiliza tres residuos aminoacil que están bastante separados respecto a su estructura primaria. His 57 y Ser 195. . En realidad.6-bifosfatasa La fructosa-2. los que pertenecen n la "lanzadera" estan "enterrados" en el interior no polar de la mol~cula. Igual que en la catálisis que producen las proteasas de serina. . de la fuerte carga negativa del sustrato. También se muestra la estabilizacibn por residuos de Arg y Lis con carga positiva. diisopropylphosphoJuuridate) (figura 10-4).6-bifosfatasa es una fosfohidrolasa (capitulo 21) que cataliza la remocibn mediante hidrdlisis del fosfato del carbono 2 de la fructosa2. los protones se mueveii en direccidn contraria. La fomacihn de derivados de la Ser 195 inactiva a la quimotripsina. la quimotripsina se libera desde los ribosomas como precursor de la enzima sin actividad catalitica denominado preenzima o cirnógeno. Ac-) La señina 195 tiene una funcibn clave en la catálisis El grupo acil del intermediario acil-CT está enlaza'do a un residuo seril altamente reactivo -serina 195de la quimotripsina. His ' Sus. -C-O-H- . Operacibn de la lanzadera de protones de la quimotripsina durante la acilacibn de Ser 195 por e sustrate l (Sus3 Durante la desacilacion del intermediario acil-Ser 195. Estos residuos son Asp 102. Al igual que muchas proteasas. Estas se conocen como "serina proteasas".N N-H A O- Ser Figura 10-5.. aunque una parte de ella consta de dos His y un residuo Glu. aunque a distancia suficiente para formar enlaces entre si.OH+ ' f F-P=O 4 S"' Y o I I Enz-CH. los moles dep-nitrofenilato liberados) es directamente proporcional al número de moles de quimotripsina presentes inicialmente. Aunque la mayoría de los residuos cargados de la quimotripsina estan en la superficie de la molkcula. la magnitud de la fase de "estallido'' (es decir. Catálisis mediante fructssa-2. Recuérdese que Ser 195 es el residuo acilado durante la catalisis por quirnotripsina. la conversibn de la preenzima quimotripsinbgeno en la enzima activa quimotripsina implica una serie de fenomenos proteoliticos selectivos cuyo resultado final es la formación del sitio activo y el alineamiento del sistema relevador de carga responsable de la catálisis. La elevada reactividad de la Ser 195 se demuestran por su capacidad (aunque no por la de los 27 residuos seril restantes de la quimotripsina) para reaccionar con el diisopropilfosfofluorjdato ( D 1 P F .Enzirnas: mecanismos de acci& 1 13 CT-PNPA y CT-Ac con iiberacibn concurrente del PNPA. Se cree que una serie análoga de desplazamiento de protones acompaña la hidrblisis de un sustrato fisio16gico de la quimotripsina.-O-P=O A DIPF A LAS COENZIMAS PARTICIPAN DIRECTAMENTE EN LA CATALISIS ENZIMÁTICA La participación directa de las coenzimas para las enzimas conocidas como arninotransferasas. o. Reaccibn del hidroxilo primario de la Ser 195 de quimotripsina con el diisopropilfosfofluoridato (DIPF).

E-CHO y E-CH2NH2 representan los complejosenzima-fosfato de piridoxal y enzima-focfato de piridoxamina. pueden participar en la catálisis al funcionar como catalizadores Acidos o bhsicos.) .6-P. Catálisis por fructosa-2.O EmP. Glu. se dice que es catálisis básica específica (cuando el pH es superior a 7) o catalisisiicida específica (con pH menor a7).6-bisphosphatase. oxnlacetato o aIh cetoglutarata. Lo mismo que muchas reacciones que requieren coenzimas. (1) La mrga negativa cuádruple del sustrato unido se estabiltza por las interacciones d e carga a carga con brg 257.64:799 ) Figura 1 0 4 . la catálisis por medio de las E-cHo dHc 0E N . con liberacion de un producto antes de agregar el segundo sustrato (figura 10-7). los grupos funcionales cargados {o con posibilidad de tener carga) de las cadenas laterales de residuos aminoacil cercanos. Por su parte. Arg 307. estas reacciones son fundamentales para la biosintesis y el catabolismo de los aminoácidos (capitulas 30 y 3 1). se dice que están Sujetas a catálisis ácida específica o bhsica especifica. alanina. Arg 352 y LIS 356. aunque las reacciones cuyas velocidades varían en respuesta a los cambios en la concentraci6n de M' o II3O1son independientes de las concentraciones de otros hcidos o bases presentes en la soluci6n.6-Phosphofructo-2-kinaselfrucose-2. E-P Fru-6-P LOS RESIDUOS EN EL SITIO CATAL~TICO PUEDEN ACTUAR COMO CATALIZADORES ~ci~oaÁsicos Una vez que el sustrato se ha unido al sitio catalítice. Mecanismode ping pong de la transaminacibn. (Ala. forma fosfato inorgánico. Las transaminasas catalizan el intercambio de grupos alfa amino de los aminoacidos por grupos alfa 0x0 de los alfa oxoacidos del piruvato. Las variaciones del pH y de las concentraciones de amortiguador establece la diferencia entre catálisis acidobásica general y la especifica Si la velocidad de la reacci6n cambia como una función del pH a concentracion constante de amortiguador. piruvato. E Fru-2. Uno d e los integrantes de la trfada catalitica.astán sujetas a catálisis hcida general o básica general. sediceque esthsujetaa catálisis bhsica general (cuando el pH es mayor de 7) o cathIisis hcida general (con pH inferior a 7). Arg 307 His 392 *rg 257 HIS asa E-P H. estabiliza la carga positiva d e His 392 (2) L a nucleofilica His 392 ataca al carbono 2 del grupo fosforilo. (4) Se desprende ortofosfato inorg8nim desde Arg 257 y Arg 307 (Reproducida con autorizaci6n de Pilkic SJ et al . Existen dos amplias categorías de catllisis acidobásica efectuada por enzimas: la catálisis Acida (o blsica) general y especifica. ' \ /CHzNHaLE-CH2~H2 \ -E \ E-cHo Giu A I ~ Pir KG Figura 10-7. Pir.6-bifosfatasa. Si seeleva lavelocidad de lareacci6n apH constante con los incrementos en la concentración del amortiguador.transaminacas implica los mecanismos de ping pong que se expusieron en el capitulo 9. Por otro lado. Glu 327. y transfiere el fosfato a His 258 con formación d e un fosfate intermedio Se desprende fructosa 6-fosfato d e la enzima (3) Un segundo ataque nucleofilico por una rnol&culade agua. glutamato. alfa-cetoglutarato. seguida. KG. A rnetabotic signaling enzyrne Annu Rev Biochem 1995. respectwamente. posiblemente asistida por Glu 327 que actua como base. se dice que las reacciones con velocidades sensibles a todos los ácidos (donadores de protones) o a todas las bases (aceptores de protones}en Ia solucibn.

por eso la reacción canismo de accibn de las enzimas. hay también catalisis por el ian irnidazolio de un amortiguador imidazblico. en adicibn a la catlilisis ácida especifica descrita antes. se expresa y la enzima mutante que se obtiene es purificada para examinar SLIS propiedades. Las expresiones de velocidad para la cathlisis hcida general con frecuencia son complejas por lo cual no se describen aquí. que es a su vez el sustrato para el paso determinante de la velocidad en la reacción global. una transferencia de protones rápida y reversible. Dado que la concentraci~n SH' depende de las de concentraciones de S y de &O'. generado por síntesis automatizada. un enfoque mhs general consiste en emplear la mutagenesis dirigida a un sitio para modificar el gen que codifica la enzima. k = constante especifica de la velocidad y [SH '1 = concentracion del acido conjugado del sustrato. de reordenamiento del sustrato protonado a producto: El aumento de la concentracibn del ion hidronio [ H d 3 + jincrementa la velocidad de la reacción aI elevar la concentraci6n de SH'. Sin embargo. Puesto que el imidazol es un ácido débil (pK. LA MUTAGENESIS DlRlGlDA A UN SITIO PROPORClONA NUEVAS PERSPECTIVAS Las técnicas de la biologia molecular proporcionan herramientas poderosas para la investigacion del me- . determinante de la velocidad. Ademas. A continuación. aproximadamente 7). las cuales se considerarAn más tarde. la expresibn general de la velocidad para las reacciones catalizadas ácido especificas es: Nótese que un requisito de la catálisis hcida especifica es que la expresión de la velocidad contenga $610 términos para S y para h O + . la mutagénesis dirigida a un sitio puede producir numerosas mutantes en un punto. Cuando los datos físicos y cinhticos indican que un residuo aminoacídico dado desempefia una funcibn especifica en la catiilisis (es decir. y resonancia del spin del electrón (RSE). Expresado de manera matemhtica. luego expresarlo y caracterizar la enzima mutante. Destaca entre ellas la posibilidad de alterar a voluntad Ia secuencia de bases de nucleótidos de los genes y expresar las proteínas en huespedes unicelulases como células de mamíferos cultivadas o la bacteria EScherichia col[ En combinaci6n con estudios de la estmctura tridirnensional en solución por cristalografía con rayos X 'y con investigaciones cinkticas clasicas. Las funciones de éstos se estudia por medio de la cristalografía con rayos X. por tanto. que sirve como una base general o como un reactivo de transferencia de grupo). Las rnetaloenzimas contienen una cantidad definida de un ion methlico funcional que es retenido es lenta y determina la velocidad para la reacción global. ese gen se traslada a un vector para expresion detrfis de un promotor potente. Velocidad = dlpl dt = WH 7 donde P = producto.Como ejemplo de catálisis ácida especifica. la mutagknesic dirigida a un sitio. considérese la conversihn de un sustrato (S) a un producto (P). DNA ligasa y trifosfatos de ribonucle6tidos. El proceso tiene dos pasos. En algunos casos. es un donador de protones malo. seguida por un pasa más lento y. el acido conjugado del sustrato. e imágenes de resonancia rnagnktica (IRM). esto puede lograrse con la modificaci6n química de la enzima. t = tiempo. puede reemplazar un aminoácido dado por cualquier aminohcido proteínico deseado. LOS IONES METALICOS PUEDEN FACILITAR LA FIJACIÓN Y LA CATÁLISIS DEL SUSTRATO Mfis de 25% de las e n z i m a contienen iones metálicos firmemente unidos o los necesitan para su actividad. Asimismo. Nótese que el paso rhpido y el lento estan invertidos cuando el mecanismo cambia de catfilisis Bcida especifica a general. Un oligonuclebtido corto (es decir. Luego se produce un gen mutante por adición de DNA polisomerasa. Por la alteración de la secuencia de bases de un codón especifico. la posibilidad puede ser respaldada mediante el cambio del aminoacido por otro incapaz de ejecutar Ia funcián postulada. un mer-F 9) que codifica un aminohcido mutante. considbese que. proporcionan una perspectiva de sus funciones en la cathlisis enzimática. es templado in vjtro al gen original aislado. estas tdcnicas moleculares proporcionan nuevas perspectivas sobre los mecanismos de accibn de las enzirnas. Junto con el conocimiento de la formación y [a degradaci~nde los complejos metAlicos y de las reacciones dentro de las esferas de coerdinacion de los iones methlicos.

methtico en la piruvatocinasa mantiene un sustrato (ATP) en su lugar y lo activa. mbredoxina. pero los necesitan para ser activas. la fomaci6n de complejos ternarios de trifosfatos de nucleósido y enzima. En muchas peptidasas. formando el complejo ternario: Complejo can puente metálico cíclico Complejo con puente metálico simple Para las enzimas activadas por metal. Complejos cuyo puente es el sustrato (EnaSAfJ Al parecer. En las reacciones de las fosfotransferasas. por ejemplo: . ya son un complejo BnzM). rnetamioglobina y metahemogfobina. Piruvatocinasa- ATP Creatlna \ En la catálisis funcionan complejos ternarios con metales Para los complejos temario5 (de tres componentes) del sitio catalítico (Enz). forman complejos con puente rnethlico. el paso limitante de la velocidad es en muchos casos la separación del agua de la esfera de coordinación del ion methlico.tos de manera menos firme. citocromo c. Complejos con puente enzimáfico (MEnzS) Se presume que los metales en los complejos con puente enzimático tienen funciones estructurales en el mantenimiento de la conformacibn activa (por ejemplo.116 e Binguímicade Harper (Capíf u10 J O ) durante !a purificación. la glutamina sintetasa) o forman un puente metiilico hacia el sustrato (por ejemplo. de conformación apropiada en el complejo cuaternario activo. pero no todas las cinasas (ATP:fosfotransferasas) forman complejos con puente de sustrato del tip Enz-nuclebtido-M. que utilimn pinivato o fosfoenolpiruvato como sustrato. carboxipeptidasa A. las cuatro disposiciones son posibles. Complejos con puente metálico A. Es probable que la reacciOn lenta sea et reordenamiento confomacional del compIejo binario EnzM para llegar a la forma activa. un ion metálico (M) y el sustrato (S) que presentan estequiometría 1 : 1 : 1. mientras que las rnetaloenzimas no pueden formar el complejo EnzSM. debido a que retienen al metal a travds de la purificacidn (es decir. se cree que el ion Los datos cristalogrhficos y de secuenciación han establecido que un residuo His interviene en la fijación del metal al sitio activo de muchas proteinas (por ejemplo. Para los complejos binarioc (dos componentes) E n N . se atribuye al desplazamiento del HzO desde la esfera de coordinacibn del metal por el ATP: A T P ~+ M ( H ~ o ) ~ ~ATP' ' M ( H ~ O )+ 3H20 ~~' Complejo con puente de sustrato Complejo con puente enzimatico Las enzimas entonces se enlazan. capitulo 7). los iones met8licos se consideran como activadores de los átomos de fbsforo que ast forman un complejo rigido pol ifosfato-aden ina. Pueden enunciarse tres generalizaciones: 1) la mayoria. la activación por los iones metklicos es un proceso lento que requiere muchas horas. metal y sustrato con puentes de sustrato. Por tanto. Ademhs de su función estructural. la piruvatocinasa). la distinci6n entre rnetaloenzimas y enzimas activadas por metal radica en la afinidad de una enzima particular por su ion metálico. 2) Las fosfotransferasas. las enzimas que catalimn otras reacciones del fosfoenolpiruvato y las carboxilasas. son posibles cuatro disposiciones: B. C. Las enzimas activadas por metales se unen con &. Los mecanismos que emplean los iones metAlicos para desempefiar sus funciones parecen ser semejantes en las metaloenzimas y en las enzirnas activadas por metal. 3) Una enzima dada puede formar un tipo de puente en el complejo con un sustrato y uno de tipo diferente con otro.

His 57 y Asp 102) Enz-iUi + S k Enz-M4 o Enz / 'I . IWeinas ftmtm sin. Myrhack K quelatos en una o en otro (rigidez o tensión). Asimismo (a diferencia de los protones). Funcion uei iuii irieiaiicu son importantes para la actividad de ciertas enzirnas. puede lograrse con la propiedad de la esfera de coordinacibn del metal para actuar como un molde tridimensiona! para mantener los grupos reactivos en una orientación espacial especifica (cuadro 10-1).. los metales carboxiplcptidasa. en las metaloenzimas el compleio ternario con puente metfilico debe formarse mediante Ia combinación del sustrato (S) con el complejo binario EnzM : RESUMEN La quimotripsina proteasa (CT) ejempIifica numerosas características generales de la catalisis enzimática.~ + E l i f4 ! A ( H 2 0 ) ~ . Ejemplos escogidos de funciones dc? y el manganeso que funcionan en las proteínas hémilos iones me. K') .. los iones metálicos pueden aceptar Piruvato cinasa.n " y ~ a ? 'aunque otros iones metálicos (por ejemplo. pueden ser considerados "superácidos". k m Por otro lado. Lardy H . (editors) Academrc Press 1970 6 L u F E . Finalmente. . son Cinasas. Además.. los iones metálicos que intervienen más común:nzimas* mente en la catálisis enzimática son ~ g ~~ ' .alysis Vol 2... + nH20 Reordenamiento a una conformacibn activa (Enz'): Lenta un ion metklico puede "enmascarar" a un nuclebfilo y así prevenir una probable reaccibn secundaria.. nucleófi~osellos mismos. Idas funciones. .. . activar electrófilos o nucleófilos (catálisis acidobksica adeni latoci -.. S ' Los iones metálicos desempeñan múltiples funciones en la catálisis 1-0siones methlicos pueden participar en cada 1 de los 4 mecanismos con los que se sabe las enzimas aceleran la velocidad de las reacciones qufmicas: 1) catálisis acidobásica general. Dnsionales metales pueden activar a los nuclebfilos o actuar como xilosa isi3rnerasa..de aminohcidos p&iculares en el sitio catalitico se mostraron por la función de un residuo Ser (SeriYs)como aceptor de un grupo (Ac-) que es transferido a agua y por las funciones de los residuos Ser. el mecani IS cas... los Fosfotrancf crasa.. general). i1 hemoproteirids -de un metal puede atraer a la enzima y al sustrato * Adaptado de Mildvan AS Meials in enzyme cat. este sistema relevador de carga ejemplifica quc los residuos adicionales bastante separados en el sentido de una estructura primaria (Ser 195. ~ Sin embargo... 2) catáIisis covalente. Pi ruvato cal-boxilasa. pueden servir como plantillas tridirnensionaies para la alcohol dr:shidrogeorientación de los grupos bhsicos en la enzima o el nasa sustrato. Además del hierro Cuadro 10-1. el carácter limitante de la velocidad de una reaccibn parcial sencilla (hidrdlisis de CT-Ac) y Ia liberacihn en secuencia de productos (fenol seguida por acetato).. IIisnaina riesarninasa Los iones metblicos. Ademas. el control estereoquimico del curso de una reacción catalizada por enzimas. . la naturaleza escalonada del proceso (tres reacciones parciales}.A - !.descarboxilasa I valo ácidos de Lewis (etectr6filos) y pueden compartir un par de electrones para formar un enlace sigma..Enzimas . pirue y orienia electrones a travhs de los enlaces sigma o pi para vato carlioxilasa. Mediante la donaci6n de electrones. 1-Iis y Asp específicos en la formación d e un sistema relevados de carga. frecuentemente tienen una carga positiva > 1 y pueden formar enlaces pi. . dado En ~rnldicas El meta! actiia como un nucieóque existen en soluci6n neutra. (aproximación) o crear una distorsión que produce Pagc 456 in The Enzymes Boyer P U. al igual que los protones. las cuales incluyen la formación de intermediarios unidos a enzima (CT-PNPA y CT-Ac).. La esfera de coordinación .. Donación nes pi (n) -.. Ar rbbnica i Activaciiin de un nuclebfilo Ademhs.mecanismos de acciún 117 Unibn del metal: Rhplda Enz + M(Hfl)s -+ Enz-M{H20)6. pirii. liasas. 3) aproximación de los reactantes y 4) induccion de rigidez o tension en la enzima o el sustrato. En~-M(Hz0)6.

Free2nd man. 1985. transaminación). Lis) generales. Vol 63. Annu Rev Riophys Biomol Struct 1993. Vol 64.Wechan~sm. Academic Press. metal y sustrato.Hawkins HC (editors): The E q m o l o L w of Post-translational ~ ~ o d ~ J i c a r i o n of Proteins. Los iones met8licos pueden actuar como catalizadores acidos generales o facilitar la aproximaci6n de los reactantes.22:257. Acadernic Press. h u Rev Riophys Biomol Stnict 1992. Regan L: Tne design of metal hinding sites in proteins. Bajo un mecanismo de ping pong (por ejemplo. 1979. Durante la catllisis. la reaccibn avanza a travks de los fenómenos alternos de adicibn de sustrato y liberacibn de producto. Arp. Vease: tambitn las rcfcrencias de los capítulos 7 y 8. ed. Fersht A: E q m e Structure and. 1980. uno de otro.118 * Rioquimica de Hurper {Capitulo 10) pueden formar porciones contiguas del sitio catalítico de una enzima. Freeman RB. La proteblisis selectiva de la preprotefna quimotripsinbgeno inactiva crea el sitio activo de la quimotripsina y lleva los tres residuos que conforman el sistema relevador de carga a una distancia. Los iones methlicos facilitan la fijación del sustrato y la catálisis mediante la creacibn de varias clases de complejos puente. Purich DL (editor): Enzyme kinetics and mechanisms. que permita formar enlaces. 1985. los residuos del sitio catalitico pueden actuar como ácidos (Glu. constítuidoc por enzima. . Parts A and B in: Methods in Eyvmology. REFERENCIAS Coleman JE: Structure and mechanism of alkaline phosphataw. La adicion de sustratos y la liberación de productos pueden proceder en forma ordenada o de una manera aleatoria. Asp) o bases (His.21:MI.

ciertos virus onctjgenos contienen un gen que codifica para una tirosina proteincinma. un cambio de esta naturaleza es la base de ciertos tipos de transformacibn oncogenica vira!. rnetakorfosis. Por ejemplo. se han encontrado ejemplos importantes de regulaciiin n o m a l o anormal. son en cierto grado reversibles*. De nuevo. es posible que no se produzca la reversibilidad porque los productos * Una reacciiin fácilmente reversible tiene un pequeao valor numérico de AG.Enzirnas: regulación de actividades Victor W. Una cCIula u organismo pueden considerarse enfermos cuando no responden o lo hacen inadecuada o incorrectamente a una seiial interna o a un esmés externo. PhD de un medicamento provoca cambios significativos en el metabolismo de otro (capitulo 61). por tanto. El conocimiento de los factores que afectan las velocidades de las reacciones catalizadas por enzirnas. En todo el libro se hace referencia a otros muchos ejemplos espectficos para mostrar las diversas caracterís-ticas de la regulación metabólica. micntras que una con un valor negativo grande para AG podría llamarse "realmentc irreveriihle" cn casi todas las siiuacioncs bioquimicas. Al parecer. IMPORTANCIA BIOMEDICA ¿De qué manera Ias células y ios organismos íntegros regulan y coordinan el metabolismo global? Esta pregunta interesa a los trahaiadores en áreas de las ciencias biornkdicas tan diversas como chncer. fisiologia microbiana. Cuando esta cinasa actúa en las células del hugsped. es esencial para entender el mecanismo de la homeostasia en las células normales y para comprender la base molecular de la enfermedad. . puede fosforilarmuchas proteínas y enzirnas que normalmente no lo estAn y. pues la induccidn enzimática es una causa bioquimica importante en las interacciones medícamentosas. conducir a cambios importantes en el fenotipo celular. Este concepto impIica que todas las reacciones necesarias catalizadas por enzimas se efectúan a velocidades que responden a cambios tanto en el medio interno como en el externo. de qtic las alteraciones del control qenktico son fen6menoS fundamentales en las c&lulascañcerosas. envejecimiento. En todas estas áreas. situaciones en las que la administracibn El flujo de metabolitos tiende a ser unidireccional Todas las reacciones quirnicas. En este capitulo. La accibn de los famiacos proporciona otro ejemplo importante que comprende la regulación enzimática. muchas celulas canmrosas exhikn anormalidadesen Ia regulación de su complemento enzimático (carecen de induccion o de represiOn). accihn h-onal y de Fármacos. caso que ejemplifica la conclusi6n ya establecida. Dentro de la celula viva. Rodwell. LA R E G U L A C I ~ W DEL METABOLISMO LOGRA LA HOMEOSTASIA El concepto de regulación homeostática del medio interno emitido por Claude Bernard a finales del siglo XIX hizo hincapie en la facultad de los animales para mantener constante su medio intracelular a pesar dc los cambios en el exterior. La intención es establecer las características de los patrones globales de regulación. sin embargo. incluyendo las catalizadas pos enzimas. cardiopatias. diferenciación. algunos ejempIos escogidos muestran los mecanismo^ que regulan los procesos metabólicos mediante la cantidad o eficiencia catalítica de las cnzimas.

en la prhctica el fiujo es unidireccional. Una oélula ideal en estado de estabilidad. se alcanza s61o a la muerte de la célula. de los fenómenos superficialmente semejantes de las bacterias. / grandes \m Figura 11-1. Las tres opciones son utili~adasen casi todas las formas de vida. ingestibn de minerales y agua. El equilibrio verdadero. la adicibn o la eliminaci6n de un nutriente). La flexibilidad del sistema estacionario s e manifiesta en los delicados desplazamientos y equilibrios mediante los cuales los microorganismos conservan constante el medio intemo. Se necesita que estos procesos sean coordinados y. deben responder todos a cambios suti les del medio celular. Las velocidades de síntesis y degradación determinan la cantidad de enzima La cantidad absoluta de una enzima presente esta determinada por su velocidad de sintesis (k.) y por Ia velocidad de su degradación (. La produccidn de ATP. las cuales carecen de las complejidades del control hormonal o neurológico y en las cuales los estudios genéticos pueden llevarse a cabo con facilidad para analizar los acontecimientos moleculares. la regulacibn de los procesos metab6licos en &as ser6 el ejemplo a discutir debido a que proporciona un marco conceptual de referencia para considerar la regulación en el ser humano TRES MECANISMOS GENERALES REGULAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTI~A El flujo neto de carbono de una reacción catalizada enzirnAticamente podria ser influido: 3 ) cambiando la cantidad absoluta de enzima presente. En las cklulas maduras. debe regularse el flujo de metabolitos a travks de las vías anabólica y catabólica. si ocurren osciiaciones de corta duración en las concentraciones del meiaholito y de la enzima y tienen gran importancia fisiológica. la sintesis de precursores macromoleculares. respectivamente . Es preciso que todos los fenómenos quimicos necesarios tengan lugar a velocidades congruentes con los requerimientos del organismo en relacidn con su medio. Obsérvese que el flujo de rnetabolitos es unidireccional. El flujo de metabotitos en la d l u l a también lo es en gran parte. a pesar de Ias amplias variaciones en alimentaciiin. La cantidad de enzima se determina por el balance neto entre la sintesic de la enzima su degradación Las K. la secreción y la resorción tubular. La b} cantidad de una enzima dentro de una celula puede Enzima Aminoácidos * Sin emhargo.120 Bioquimica de Harper (Capibulo I 1) de reacciiin son removidos con rapidez mediante reacciones adicionales catalizadas por enzimas. del brgano y del animal integro. Sin embargo. Figura 11-2. respondan a cambios a corto plazo del medio externo (por ejemplo. Las velocidades de reacción responden a las necesidades fisio~ogicas cambiantes Para que la vida proceda de una manera ordenada. los detalles moleculares de la regulacibn son mejor comprendidos en las bacterias. además. el transporte. lejos de ser característico de la vida. El flujo de metabolitos en una celulavivaes análogo al flujo de agua en un acueducto el cual aunque es capaz de transportar agua en ambas direcciones. 2) alterando el tamaiio del conjunto de reactantes distintos de la enzima y 3 ) alterando la eficacia catslitica de la enzima. nuestra comprensihn de la regulacibn rnolecular en la célula animal está en un estado de rhpida expansibn. las concentraciones medias de los metabolitos permanecen relativamente constantes durante periodos considerables*. ncl como a sucesos intracelularcs periddicos (por ejemplo. La célula viva es un sistema dinámico estacionario conservado por un flujo unidiseccional de metabolitos (figura 1 1-1). (figura 1 1-2). I-lasta ahora. En tanto que la regulacion metab6lica en los mamíferos difiere de modo signifi- cativo. la replicación del DNA). rendimiento de trabajo o temperatura externa. y Kdegson las mnstantes de velocidad para el proceso completo de sintesis y degradacibn.

inducible en otra. Ejemplos de enzimas inducibles en los animales son la triptbfano pirrolasa. se les llama inductores gratuitos. como + en k . que representan los extremos de un amplio espectro de respuestas. y proteínas reguladoras trunTactuantes. Frecuentemente. Por ejemplo. Despues de la eliminación o del agotamiento de un intermediario biosintético esencial del medio. Aunque muchos inductores son sustratos para la enzima que inducen.Enztmar: regulación de uctividudes 121 elevarse ya sea por un incremento en su velocidad de síntesis (incremento de k. ciertos compuestos estmcturalmente semejantes al sustrato pueden ser inductores. hay inducción de síntesis de beta gaIactosidasa y entonces el cultivo puede catabolizar la Iactosa. Los mecanismos moleculares de la inducción. Una enzima particular puede ser constitutiva en una cepa. por una disminución en su . secuencias especificas de DNA ubicadas en la parte superior de la cascada de genes que codifican una enzima dada. tanto la naturaleza como la magnitud de la respuesta al inductor.). se ndopt6 el tdrrnino represidn por catabolito. Los ejemplos anteriores muestran la represibn por retroalimentación con el.. puede reducir la nueva síntesis del mismo por medio de la represión. de nuevo se produce la biosintesis enzirnitica. metabolitos especificos sirven corno correpresores o coinductores que al enlazarse a proteínas transactuantes. un inductor estimula a varias enzirnas de una ruta catabdlica(por ejemplo. la adición de histidina reprime la síntesis de todas las enzimas que intervienen en su biosíntesis. términos relativos. Las células capaces de ser inducidas por una enzima particular. Los inductores pueden estimular la síntesis de enzirnas Las celulas pueden sintetizar enzimas especificas en respuesta a la presencia de inductores especificos de peso molecular bajo. Este efecto fue observado primero en cultivos de E. la cual es mediada por el cAMP. y ausente en una tercera. mientras que la adicibn de leucina reprime la síntesis de las tres primeras enzimas peculiares para su biosíntesis. Se not6 que la adición de glucosa reprimía la síntesis de las enzimas encargadas de1 catabolismo de X y este fenómeno fue inicialmente llamado el "efecto de la glucosa*'. Si al medio de cultivo se agrega lactosa o algunos otros beta galactosidos. la síntesis de enzimas a partir de los aminoAcidos y su degradacibn hasta aminohcidos son procesos distintos catalimdos por conjuntos de enzimas por completo diferentes. En todas las formas de vida. pero no un inductor. tanto la beta galactosidopemeasa como la beta galactosidasa son inducidas por lactosa). aun en ausencia del inductor agregado.. la treonina deshidrogenasa. t o s términos "constitutiva'" e "inducible" son. un compuesto puede ser un sustrato. que hidroliza la lactosa a galactosa y glucosa. la represion y la desrepresidn se dcscribirhn en el capitulo 4 1. por tanto. La induccibn enzimhtica tambitn existe en las células eucariotas. A la inversa. en Salrnonelh typhirnurrum. EL RECAMBIO DE PROTE~NAS TIENE LUGAR EN TODAS LAS FORMAS DE VIDA Los procesos combinados de síntesis y degradacibn de [as enzimas constituyen el recambio enzimático reconocido como una propiedad característica de las c&IuIasde los tiamíferos. lo mismo fortalecen que debilitan su integracihn con un elemento cis. producto. Además. Puesto que otros nutrientes oxidables diferentes a este carbohidrato producen efectos semejantes. los valores intracelulares altos de un metabolito como una purina o un aminoácido pueden interrumpir la síntesis de las enzimas que participan en su propia biosíntesis. la invertasa. la tirosina alfa cetoglutaratotransaminasa. De manera semejante. Por ejemplo. las enzimas del ciclo de la u la HMG-COA reductasa y el citocromo P450. Por tanto. La regulación independiente de la sintesis y de la degradacihn de las enzimas se logra asl. Tanto en la induccion como la represión participan elementos cis. O deambos procesos. coli creciendo en una Euente de carbono (X) distinta de la glucosa. Las enzimas cuya concentraci6n en una ctIula es independiente de un inductor agregado se denominan enzimas constitutivas. de un incremento en kdq. como "caliente" o "frio". Los productos finales reprimen la síntesis de enzimas La presencia de un metabolito biosintktico en el medio de crecimiento bacteriano. una cantidad menor de enzima puede resultar de una disminucihn de k. por lo general contienen una cantidad basa1 pequefía medible de esta enzima. Esto constituye lo que se denomina dessepresión. fhcilmente (figura 11-2). En el ser humano se encuentran ejemplos de cambios tanto en k. mucho tiempo antes de que . Por otro lado. pero no sustratos. velocidad de degradacibn (disminucion de h) o por ambos. típica de Ias vias biosinttticas de las bacterias. La herencia gendtica de la ctlula determina así. Escherichia colr cultivada en glucosa no cataboli~ara lactosa debido la a la falta de la enzima beta galactosidasa. la represión por catabolito es un fenómeno relacionado que se refiere a la facultad de un intermediario en una sucesi6n de reacciones catabólicas catalizadas por enzimas para reprimir la sintesis de las enzimas catab0Iicas.

los valores hepriticos de arginasa se elevan debido a un incremento en la velocidad de su sintesis. El efecto de las hormonas es la elevacibn de la velocidad de síntesis de la oxigenasa (aumento de k). La síntesis de ciertas enrimas como precursores inactivos tienen ventajas en la regulación La actividad enzimatica puede regularse con la conversión de una proenzima inactiva a la forma catalítica activa.. En un segundo ejemplo. . pero nuestro conocimiento es fragmentario acerca de los detalles molecularec que intervienen para producir estos cambios. laconcenmci61-ide sustratos. incluyendo los Iípidos y los ficidos nucleicos.). en protehas. La existencia del recambio de proteínas en el ser humano se dedujo de experimentos dietkticos hace bastante más de un siglo. no obstante sus cfectos fisiológicos mutuamente antagbnicos. Las velocidades de degradación de las enz'imas específicas están sujetas a regulación La degrada~ionde proteínas de mamfferos por vías que dependen de ATP y ubiquitina. respectivamente). o en L. su efecto en los marniferos sc qjerce solamente sobre el proceso degradante (abate kd. Schoenheimer concluyó que las proteínas están en un estado de "equilibrio dinamico". aun cuando el triptbfano puede actuar como un inductor en las bacterias (afecta k. presencia La o la falta de sustratas. un concepto extendido desde entonces a otros constituyentes del cuerpo. Los ejemplos de proteinas elaboradas como proproteinas incluyen la hormona insulina (proproteina = profnsulina). La insulina y cl glucagbn. superficialmente.jemplifican estos conceptos. El efecto del glucagón probablemente es mediado a través del cAMP. La arginasa y la triptófano oxigenasa (tripthfano pirrolasa) e. las proproteinas se denominan proenzimas o cimógenos. Aquí.. tripsina y quimotnpsina (proproteínas = pepsindgeno. se describen en el capitulo 3 1. asi como las independientes dc ATP. justamente antes y durante la 11 Guerra Mundial. de coenzímas y posiblemente de iones en las cklulas puede. estabilizando la oxigenasa respecto a la digestibn proteolitica. aunque fue hasta el trabajo clásico de Schoenheimer. Despudc de la ingestidn de una dieta abundante . proceso que convierte la proproteina en una forma que tiene la actividad típica de la proteina madura (su actividad enzimfitica} mediante uno o más "cercenamientos" proteoliticos sucesivos. Este fue el primer caso cSaro de una hormona reguladora de la sintesis dc una enzima de mamíferos. El aumento en Ia velocidad de síntesis de la arginasa se parece así. Se conocen ejemplos para una diversidad de tejidos y vias metabólicas. en tanto que k. Cuando son enzimas. las enzima5 digestivas pepsina. que se estableció concluyentemente. MUCHAS PROTEASAS SE SECRETAN COMO PROENZIMAS SIN ACTIVIDAD CATAL~TICA Ciertas proteinas se elaboran y secretan en forma de proteinas precursoras inactivas conocidas como proproteínas. pero abate be. Esto se mostrara después en relacibn con la enzima quimotripsina. permanece inalterada. un proceso acompañado de cambios en la conformación que revelan o "crean" el sitio catalítico.. Midiendo las velocidades de incorporación de aminoácidos rnarcados con NI5 a las proteinas y los índices de pCrdida de NI5 de las proteinas. a la induccibn por sustrato en las bacterias.). varios factores de la cascada de la coagulacibn sanguínea y de la disolución del cohgulo (capitulo 59). la proenzima debe experimentar una proteólisis limitada. no ejerce efecto sobre k. coenzirnas o iones metálicos. De este modo. hormonales o dietéticos.El triptófano. La conversion de una proteína en proteina madura implica la proteólisis selectiva. La regulación de las cifias hephticas de arginasa puede incluir ya sea un cambio en k. Los mismos valores también aumentan en los animales hambrientos. el incremento en la ingesti6n de nitrhgeno por una dieta abundante en proteinas puede elevar las cifras hepáticas de arginasa (capitulo 3 1). y la proteina cotágena del tejido conjuntivo (proproteina = procoIágena}. influenciar las vclocidades a las cuales son degradadas enzimas especificas. Los glucocorticoides incrementan Ia con~entración de tirosina trancaminasa estimulando su k. que pueden modificarla. tanto la inyeccidn de glucocorticoides como la ingestión de triptófano aumentan 30s valores de triptofano oxigenasa en los mamíferos. es la degradación de la arginasa la que está disminuida. sin embargo. de 4 a 5 veces. sin embargo. Los valores enzimaticos en los tejidos de marniferos pueden ser alterados por una amplia gama de factores fisiologicos. Estos dos casos contrastan con la inducción enzimática en las bacterias. En el caso de Ia arginasa. En el caso de la triptdfano pirrolasa. tripsindgeno y quimotripsinógeno. Para volverse catallticamente activa. sin embargo. de manera independiente. incrementan k. La susceptibilidad de una enzima a la degradacibn proreolitica depende de su ~onfomacibn. alteran lasusceptibilidad proteolítica.se mostrara que también tenia lugar en las bacterias.

Más aun. estar disponible un conjunto completo de los aminohcidos precursores. la sintesis de proteasas como proteinas precursoras sin actividad catalítica sirve para proteger el tejido de origen (por ejemplo. lo cual muestra la manera en que la proteólisis selectiva da lugar al sitio catalítico. sb10 requiere un cercenamiento proteolítico Único. en algunos casos. Nótcse que el contacto y los residuos Figura 113. 4) La principal consecuencia de la proteólisis selectiva es alcanzar una nucva conformación. Ciertos procesos flsiologicos como la digestión son intermitentes.La conversibn de proquimotripsina (pro-QT).Convessi611de la proquimotripsina {pro-QT) a pi-quimotflpsina (pi-QT) y de manera subsecuente a la enzima madura alfa quimotripsina (alfa-QT) con actividad catalitica. el cambio mena cionado en T conformación origina el sitio catalítico de la enzima. La activación de la proquimotripsina requiere de proteolisis selectiva El e. en la enzima alfa quimotripsina activa implica tres cercenamientos y la formación de un intermediario activo conocido como piquimotripsina (pi-QT) (figura 1 1-3). debe forma madura con actividad fisiológica ejernplifica los principios generales siguientes de tal conversión: 1) El proceso implica la proteblisis selectiva que. Como consecuencia. 2) Los productos polipéptidos se pueden separar o permanecer integrados a la proteína madura. cuando estas últimas se necesitan de urgencia. cl proccso de secrecidn puede ser de lentitud relativa con relación a la demanda físiológica.En taI virtud.jernplo de conversihn de una proproteína a s u Las proenzimas facilitan la movilización rápida de una actividad en respuesta a la demanda fisiológica ¿Por qu$ cicrias proteínas se secretan en la forma inactiva? Algunas son necesarias practicamenlc en todo momento. Más aún. como la formacibn y disolución de coágulos sanguíneos y la reparación tisular. polipéptido de 245 residuos aminoacilo. pero bastante regulares y predecibles (aunque éste pudo no ser el caso para los seres humanos primitivos). el pfincreas) de la autodigestibn. Puede apreciarse con facilidad que el proceso de formación y disoluci6n de coágulos sanguíneos debe ser coordinado en el tiempo para alcanzar Ia homeostasia. La sintesis de nuvo de las protehas que se requieren puede no efectuarse con la rapidez suficiente para responder a la presión de una demanda fisiopatolégica como es la pérdida de sangre. Obskrvese que mientras His 57 y Asp 102 se encuentran sobre el peptido B de la alfa quimotripsina. . tan rolo deben estar "en Iinea". la proteolisis selectiva de una proenzima puede verse como un proceso que desencadena cambios esenciales en la conformación que "crean" el sitio catalitico. Otros. 3) El proceso puede (o no) cumplirse con cambio significativo en el peso molecular. La proteblisis selectiva de la proquimotripsina (quimotripsinógeno) facilita la aproximación de los tres residuos del sistema relevador de carga. Además. mientras que otras (como las enzimas de la fomacidn y disolucilin del coágulo sanguíneo) se requieren sólo de manera intermitente. B y C permanecen integradas en virtud de la presencia de dos enlaces disulfuro entre las cadenas (figura 1 1 4 ) . 5) Si la proproteína es una enzima. para responder a la presibn de una necesidad fisiológica o fisiopatológica. Ser 195 se encuentra sobre el peptido C (figura 1 1-3). lacual puede presentarse en lapancreaiitis. En la alfa quimotripsina las cadenas A.

Es necesaria la informaci6n sobre las concentraciones de metabolitos esenciales en la vecindad inmediata de la enzima en cuestibn. pero mantenerse a una distancia que permita formar enlaces con el sustrato enlazado. que convierten el metahlito en una forma permeable para la barrera del compartimiento. por ejemplo. aunque la concentración total del 2. formas citosólicas y mitocondriales de la misma actividad catalítica. Sin embargo. plantea problemas con respecto a lamovilizacion de metabolitos a través de las barreras de los compartimientos. del ciclo del hcido cltrico y de otros intermediarios anfibólicos. este iriodo es posible laamplificacion de los efectos reguladores. Puesto que estas dos formas de la enzima están fisicamente separadas.3-difosfoglicerato en los eritrocitos es extremadamente alta. LA SEPARACIÓNDE ENZIMAS EN COMPARTlMlENTOS FACILITA LA R E G U L A C I ~ N DEL METABOLISMO No se puede pasar por alto la importancia de la disposicidn en compartimientos de Tos procesos metabhlicos en las ct5lulas eucariotas. Por ejemplo. lo cual va seguido por el iransporte y la conversión a la forma original en el otro lado de la barrera. En el capitulo 18 se LAS CONCENTRACIONES LOCALES DE SUSTRATOS. coordina a las enzimas y a los canales intermediarios a lo largo de una via metabdlica. una coenzima o un ion methlico puede tener escaso significado para el camportamiento rn vivo de una enzima.S-S S-C S - S Flgura 1 1 4 Enlaces de disulfuro intra e tntercadenas de la alfa quirnotripsina (alfa-QT). generalmente se le da poca importancia a la discrepancia entre la concentracibn total y libre del metabolito. describe la función de los "mecanismos de lanzadera" para poder lograr el equilibrio de Ias confluencias metabblicas dc equivalentes reductores. La IocaZización de los procesos metabólicos especificas en el citosol o en los organelos subcelulares facilita la regulación de estos procesos independientemente de los que suceden en otras partes. Por último. aun la medicibn de las concentraciones de metabolitos en compartimientos celulares diferentes no toma en cuenta las discontinuidades locales en su concentraci6n dentro de los compartimientos. Al mismo tiempo. Estos metabolitos pasan las barreras mediante "mecanismos de lanzadera". La extensa formación de compartimientos de los procesos metabolicos tipicos de las formas superiores de vida confiere asi el potencial para un ajuste fino de la regulación del metabolismo. En censecuencia. Esto permite un modo más fino de control metabólico que el posible con los componentes aislados del complejo. causadas por factores como la proximidad al sitio de entrada o de producción de un metaboiito. A todos los cambios de la actividad enzimatica sin modificación de la cantidad de enzima presente se les denominara como "efectos en la eficacia catalítica". cataliticos pueden localizarse sobre diferentes cadenas de péptidos. EXISTEN MÚLTIPLES OPCIONES PARA REGULAR LA ACTIVIDAD CATAL~TICA Si una modificacibn fisiológica altera el grado de la actividad enzimatica. LAS ENZIMAS PUEDEN FORMAR COMPLEJOS MACROMOLECULARES La organización de un conjunto de enzimas quecatalizan una secuencia de reacciones metabhlicas. Además. La alineacibn apropiada de las enzirnas puede facilitar la transferencia del producto entre las enzimas sin equilibrio previo con las confluencias metabblicas. estas interconversiones requieren. COENZIMAS Y CATIONES PUEDEN REGULAR LAS ENZIMAS La concentracién intracelular media de un sustrato. su regulación independiente se facilita. se puede preguntar si la cantidad de enzima ha cambiado o si la enzima es un catalizador más o menos eficaz. que incluyen las de los mamíferos. la concentracidn . los cambios de confomacl6n en un componente del complejo puede transmitirse por interacciones de proteína con proDe teína hacia otras ennimas del ~omple~jo.

Frecuentemente. Se observa la tlpica actividad mhxima cuando el cociente molar de ATP a metal es casi la unidad. Por tanto. arninohcidos antes de proteínas o nucleótidos antes de ácidos nucleicos). que es exclusivo para una serie biasintética particular. la inhibicidn por retroalimentaci6n de Enzl mediante D regula la slntesis de D. pueden tener tambien funciones reguladoras particularmente en las reacciones en que el ATP y otros polianiones son sustratos. funcionalmente irreversible*. La figura 1 1-5 muestra los sitios probables de inhibición por setroacción simple en una vía biosintdtica ramificada (por ejemplo. Circuitos múltiples de retroalimentación regulan vías biosintéticas ramificadas Múltiples asas de retroalimentación (figura 3 1 4) proporcionan control fino adicional. existen mecanismos para evitar esta dificultad. Consideraciones semejantes se aplican a otros metabolitos en presencia de proteínas que los fijan de modo eficaz y que reducen su concentracibn en estado libre. catalizada por las enzimas En21 a Enq. Como se anot6. C o D. inhibitii de manera típica la conversion de A en B. esta suposicibn puede no ser vilida in vivo. Enzi EUQ Eny constituyen sucesiones de reacciones lineales de las que puede esperarse sean inhibidas por sus productos finales. Un ejemplo muy estudiado es la inhibición de aspartato transcarbamilasa bacteriana por CTP (véase después y capitulo 36). B. Sin embargo. un exceso de B deberá reducir la síntesis de los cuatro productos finales. esto es. A+B+C-+ D una concentraci6n alta de D. Los Si. por tanto. Por ejemplo. Asi. titiva. La cinetica de la inhibición por retroaccion puede ser no competitiva. el efecto inhibidor de dos o mhs productos finales sobre una sola enzima reguladora es estrictamente aditivo. La inhibición por retroalimentacibn se refiere a la inhibición de la actividad de una enzima inicial en una vía biosintktica. la actividad de ciertas enzimas. De nuevo.La capacidad de B para disminuir la producción de S2 confiere asi una ventaja biolbgíca. Una hiphtesis del enfoque cinético de MichaelisMenten es que la concentración del sustrato total es igual en esencia a la concentración del sustrnto libre. La regulacibn por retroacción tiene Iugar generalmente en el paso mhs temprano. es precursor únicamente de D. C y D). Es la más común en tas vias biosinttticas. parcialmente compe- * Uno favorecido fuertemente (en terminos termodinamicos) en una sola dirección. El S4 e5 un precursor de B y C y S. De manera tlpica. disminuye el requerimiento de S. Frecuentemente. el inhibidor por retroacciones es la ultima molkcula pequefia antes de una macromol~cula (por ejemplo. Claramente esto es indeseable. de este modo. Sin embargo. Para la biosíntesis de D a partir de A. D se une a la enzima sensible en un sitio alost4rico remato del sitio catalítico.25 libre de bisfosfoglicerato (es decir. Esto no implica un simple "retraso" de los intermediarios sino la capacidad de D para unirse a Enzl e inhibirla. sino tambitn porciones comunes a la de la síntesis de A. no unida a la h e m e globina) es comparable a la de otros tejidos.. para aminoácidos. la biosintesis d e nucleotido (capitulo 36) proporciona ejemplos especificas. por medio de un producto final de esa vía. una ruta biosintkticapuede estar ramificada. El exceso de metal o de ATP son inhibitorios. donde es posible que las concentraciones de los sustratos libres se aproximen a las de la concentracibn de enzimas. uno con un gran AG negativo . no acoplada o mixta. purinas o pirimidinas). competitiva. sirviendo la porción inicial para la síntesis de dos o mBs metabolitos esenciales. las secuencias: CIERTAS ENZIMAS SON REGULADAS POR EFECTORES ALOSTÉRICOS La actividad catalítica de ciertas enzimas reguladoras es controlada por efectores alostericos de peso molecular bajo que por lo general tienen poca o ninguna semejan72 estructura1 con los sustratos o coenzimas para la enzima reguladora. Dado que los di y trifosfatos de nucleósidos forman complejos estables con los cationes divalentes. D actúa como un efector alostérico negativo o inhibidor por retroalimentacihn de Enz. si B se encuentra en exceso. Los iones metálicos que desempefian funciones catalíticas y estructurales en mas de una cuarta parte de todas las enzimas conocidas (capitulo 103. Ias concentraciones intracelulares de 30s nucle6tidos pueden influir sobre las concentraciones intracelulares de los iones methlicos libres y. En la inhibicidn por retroalimentación acumulativa.S2y S3 son precursores de los cuatro productos finales (A. si el exceso de B puede inhibir no 5610 la porción de la vía particular de su propia síntesis.Enzimas: regulucidn de actividades 1.

HzN C O CHP I H I Figura ll4. este investigador propuso que las enzimas cuya actividad es regulada por efectores aIost&ricos(por ejemplo. Sitios de inhibicibn por cetroalimentaubn en una via biosintética ramificada.oC II -. Sobrepuestas a las asas de retroalimentaciónsimple (flechas curvas de guiones) estfin las asas de retroalimentacidnmúltiples (flechas curvas eontinuas) que regulan las enzirnas comunes a la biosíntesis de varios productos finales 4 c\ ' o H COO - Figura 11-7. la aspartato transcarbamilasa pierde su sensibilidad a la inhibicion por el CTP. pues. La enzima alosterica más estudiada es la aspartato transcarbamilasa La aspartato transcarbamilasa (ATCasa) cataliza la a primera reaccibn peculiar a E biosintesis de las pirimidinas (figura 1 1-7). sino alostéricos (ocupan otro espacio). pero la inhibición que se observa cuando se encuentran dos o m& productos finales excede. a los efectos aditivos que se ven en la inhibición por retroalimentación acumulativa.pero retiene su actividad completa para la slntesis del carbamilaspartato. del ingles. Dado que los efectos no son kocstéricos con un sustrato. . SI o S5 son intermediariosen la biosintesis de los prcdudos finales R a D. Las enzimas alostdricas son. La ATCasa consiste en múltiples protómeros cataliticos y reguladores. cyfidine triphosphate}. Cada protómero catalitico contiene cuatro sitios aspartato (sustrato) y cadaprotbmero regulador por lo menos dos sitios CTP (reguladores}. La ATCasa es inhibida por retroacción mediante el trifosfato de citidina (CTP.(Capítulo 11) Flgura 11-5. con mucho. la inhibicibn completa se produce sólo cuando dos o más productos finales están presentes en exceso. las flechas rectas representan las entimas que catalizan las conversiones indicadas. un solo producto final presente en exceso inhibe la enzirna regladora. Reacción de la aspartato transcarbamilasa (ATCa sa) . lnhibicibn milltiple por retroalimentacidn por una via ramificada biocint&titica. enzirnas cuya actividad en el sitio catalítico puede ser regulada por la presencia de efectores en un sitio atostérico. Varias pruebas apoyan En la inhibici6n por retroalimentaciónconcertada o multivalente. Las flechas curvas representan asas de relroalimentacibn e ~ndican sitios probables de inhibilos cibn por retroalimentación medlante productos finales esnecificos. En la inhibición por retroalimentación cooperativa. los inhibidores por retroalimentacidn) fijan el efector en un sitio alostérica físicamente distinto del sitio catalítico. Los sitios catalíticos y alostéricos muestran diferencia espacial Monod observ6 la falta de semejanza estructural entre el inhibidor por retroalimentacibn y el sustrato para la enzima cuy a actividad regula. fosfato Carbami'- + L-Aspartato . Después del tratamiento con compuestos mercuriales. Esto sugiere que el CTP esta unido a un sitio (alostérico) diferente del de cada sustrato.

bacterianas y de mamíferos. en presencia y ausencia de un inhibidor alostdrico. el sitio alostkrico se halla colocado en un protómero diferente al que posee el sitie catalitico. . cuando [S] aumenta. la curva de sahraciiin por sustrato es dis&rsionada de una hipdrbola a una curva sigmeidea. Sin embargo. La desnaturalización selectiva de los sitios alostéricos ha sido lograda mediante tratamiento con derivados del mercurio. pmcialmente competitivo de otros tipos. El anhlisis cinktico de la inhibicibn por remalimentaci6n parece ser competitivo. que a concentraciones altas de sustrato puede coincidir con su forma hiperbdlica. Sin embargo. esto sugiere un segundo sitio alostérico en cualquier otra parte de la molkcula enzirnAtica. frecuentemente se vuelven insensibles a sus efectores alostkricos sin alteración de su actividad catalítica. 3) En ciertas células mutantes. Estas cinéticas son congruentes con la presencia de dos o más sitios de uni6n de sustrato que actuan reciprocamente. En su presencia. hay actividad comparable en presencia o ausencia del inhibidor aIostkrico. Dado que parece inverosfmíl que un efector unido al sitio catalitico proteja cuando no lo hacen los sustratos. Cuando este último falta. eenzirnas reguladas. refleja el fenómeno de cooperatividad. las propiedades para ia regulacion de las enzimas reguladoras tienen modificadas sus propiedades para la regulacidn. la estructura de Ios sitios alost&ricosy catalitica son geneticamente distintos. Puesto que los inhibidores alost&ricosactúan en un sitio diferente (alóstérico). con urea. 2) Lo efectos alostéricos frecuentemente protegen el sitio catalitico de la desnaturalización en condiciones en las cuales los propios sustratos no lo hacen. Si aconcentraciones elevadas de S. rayos0X. S) En ciertos casos (por ejemplo. ATCasa). envejecimientode O a 5 "C opor congelación o calentamiento. enzima proteoliticas. Así. entre ellas está la siguiente: 1 ) LE. no es posible obtener resultados significativos graficando los datos para la inhibicibn alostérica por la tkcnica del doble recíproco. dado que la curva de saturacibn por el sustrato es sigmoide y no hiperbólica. Este método de análisis fue elaborado para la inhibicibn competitiva con el suskato en el sitio catalítico. Figura 11-8. el modelo cinético ya no es válido. no competitivo.Emimus: regulación de actividades 127 la existencia de sitios alosttricos fisicamente distintos en las enzimas reguladas. El carácter sigmoide de la curva de v respecto a [S] en presencia de un inhibidor alostérico. pero sus propiedades catalíticas son idénticas a las del tipo nativo de donde deriv6 la mutante. 4) Los estudios sobre uni6n de sustratos y de efectos alost&ricosa las enzima5 reguladas muestran que cada uno se puede unir independientemente del otro. Las enzírnas alostericas por lo general muestran una cinética sigmoidea de saturación con sustrato En la figura 1 1-8 se muestra la velocidad de reaccibn catalizada por una tipica enzima alosttrica medida a varias concentracianes del sustrato. la actividad en presencia del inhibidor es baja con relacibn a la que se observa en su ausencia. donde la presencia de una molécula de sustrato en un sitio catalitico facilita la unión de una segunda molkcula del mismo en un segundo sitio. se observa una cindtica de saturacidn hioerbólica normal. la cindtica superficialmente se parece a la de una inhibicibn competitiva. A bajas concentraciones de sustrato. Nótese la analogía de la relacion con las curvas de saturación de 0 2 de la rnioglobina y la hemoglobina (capitulo 7). el grado de inhibición se vuelve m e w s intenso. fuerza ilinica o pH exmmos. La cooperatividad de la fijacibn del sustrato se describid en los capitulos 7 y 9: la curva sigmoide de saturación de Oz se forma a consecuencia de las interacciones cooperativas entre cuatro sitios de fljacj6n de oxígeno que se localizan en los diferentes protbmeros de hemoglobina y en el uso de la escala de Hill para cuantificar la cooperatividad. Curva sigmoide de saturación para el sustrato en presencia de un inhibidor alostérico. modificadas portkcnicac químicas o fisicas apropiadas.

el colesterol de la dieta restringe la sintesis de1 procedente de acetatos en los tejidos de los mamíferas. disminuya. h concentraciones bajas de sustrato.Para las enzimas de la serie V el inhibidor alostdrico abate V . entonces es menos necesaria una regulación rigurosa.. se debe distinguir entre regulacibn por retroalimentaci6n. la regulación es más eficiente en el momento en que la necesidad es máxima. Tir o His. esta regulación al parecer no hace intervenir a la inhibicibn por retroalimentacidn de una enzima inicial de la biosintesis del ~olesterol. las enzimas reguladoras de orígenes distintos pueden tener curvas sigmoideas de saturacibn desplazadas a la izquierda o a la derecha para acomodarse a los llmites de las concentraciones de sustrato que prevalecen i vivo. cutivos a estos cambios en la confomacibn. En muchos casos. inducidos por Ia fijacion del efector alostérico en el sitio alostérico. el grado de inhibicion disminuye y se formauna cantidad mayor de producto.Para una de la serie V. el catalizador más activo puede ser la fosfoenzima o la que no posee grupo fosfato (cuadro 1 1-1). Las enzirnas interconvertibles existen en dos condiciones de actividad. esto involucra la inhibicibn por retroalimentacibn de una enzima biosintCtica inicial. este cambio en la conformación puede debilitar los enlaces entre el suctrato y los residuos que se fijan a &l. Al igual que con la hemoglobina. Aunque una enzima interconvertible puede contener muchos residuos Ser o Tir.(Capítulo I 1) Los efectos alostéricos pueden ser en Kmo sobre. las de la serie K y las de la serie V. formando el O-fosfoseril o un residuo tirosil es fosforilado para formar el residuo O-fosfotirosil.. Finalmente. Si se comienza a disponer de más sustrato. sin afectar la Km aparente. un termino fenomenol~gico exento de implicaciones mecanísticas. Por ejemplo. Dependiendo de la enzima de que se trate. la fosforilación es sumamente selectiva y se produce s61o en un pequefio nUmero de sitios posibles. LA REGULACIÓN POR RETROALIMENTACI~N. Para una enzima alostérica de la serie K. e inhibición por retroalimentación. una de eficacia catalítica elevada y otra de baja eficacia. se pueden observar efectos intermedios sobre Kmy Y . Asl. cionaies en el sitio catalitico. los productos finales retroalimensan y controlan su propia síntesis. pero el mecanismo comprende la interrupción de la expresibn de los genes que codifican para la formacibn de la HMG-Coh reductasa mediante el colesterol o un metabolito derivado de él. La fijación cooperativa de un sustrato confiere una ventaja fisiológica Las ventajas de la cinCtica de fijación cooperativa de3 sustrato son anklogas a aquetlas que se producen por la fijación cooperativa del O? a Ia hemoglobina. Probablemente estos sitios no f m e n parte del sitlo . cuando la concentración intracelular de los sustratos es baja. Tri. Para !as mzimas alostkricas de la serie K. La referencia a fa cinktica de la inhibición como "competitiva'k ''no competitiva" respecto al sustrato lleva implicaciones mecanicistas que son desorientadoras. Las enzirnac pueden tener numerosos sitios de fosforilación Un residuo seril especifico es fosforilado. Es preferible referirse a dos amplias clases de enzimas reguladas. No obstante. El colesterol agregado directamente a la HMG-COA reductasa no tiene efecto sobre su actividad catalitica. Las enzimas que experimentan modificacibn covalente con regulacilin concomitante de su actividad se denominan "enzimas interconvertibles". por analogla con las diferencias en l a curvas de saturacion de 0 1 de hemoglobinas de diferentes especies. Sin embargo. se logra un control sensible de la actividad catalitica mediante cambios pequefios en la concentración del sustrato.Una enzima inicial (HMG-COA reductasa) es afectada. Cuando la concentración del sustrato se eleva. el efector alostérico es un inhibidor eficaz. Probablemente las alteraciones en Kmo en V resultan de cambios conforma. De este modo. la cinética de saturacibn por sustrato es competitiva en el sentido de que Kmse eleva sin efecto alguno sobre Vmk. Sin embargo.Y . la curva sigrnoide de saturacion del sustrato en presencia del inhibidor también asegura que cambios relativamente pequefíos en la concentraci6n del sustrato ocasionan grandes modificaciones en la actividad. n LA MODIFICACIÓMCOVALENTE REVERSIBLE REGULA ENZIMAS ESENCIALES DE MAM~FEROS La modulacibn reversible de laactividad catalitica de las enzimas puede producirse por la adherencia covalente de un grupo fosfato a uno o mhs residuos Ser. un mecanismo para fa regulación de numerosas enzimas bacterianas y de mamíferos. conse. es decir. ES NO SINÓNIMO DE INHIBICIÓN POR WETROALIMENTACIÓN En ambas clases de ctlulas. de mamíferos y bacterianas. de modo que V.. es posible que el efecto primario sea alterar la orientacion o la carga de los residuos cataliticos.

- * ATP ADP + Glucoca-fi-P -+ + Pi Pi + E n z 4 e r 4 H .l. del flujo de metabolitos en respuesta a señales fisioldgicas específicas. primaria. l. deberhn.P . por lo cual constituyen otro ejernplo de iin sitio alosterico. Por el contrario.arboxilasa ntasa I'iruvalo deshrdrogcnasr HMG-COA ri Glucbpcno fc t f Rnjo Alto 11. con su alta especificidad. HzO + Enr-Ser-O-P 4 ADP Neto: H2O + ATP La modificación covalente regula el flujo del metabolito La regulación de la actividad enzimática por medio de la fosforilación-desfosforilación tiene analogías con la regulacion mediante la inhibicibn por retroalimentaci~n. .E m i m m : reqialacihn de actividades 129 " > Cuadro 1 1-1. dcslosforocn7ima. la inhibición por retroacciiin incluye a una sola proteina y carece de las caracteristicas hormonales y neuroIógicas. fhcilmente reversible. ser reguladas. -- 2. si bien los detalles precisos por los cliales estos agentes actúan están lejos de ser claros en la mayor parte de los casos. que catalizan las reacciones 2 y 4. y de lac fosfatasas. Ejemplos de enzimas dc mamíferos cuya actividad catalítica está alterar'acihn-de! izime La fosforilacion-desfosforilación consume ATP Las reacciones de la figura 1 1-9 se parecen a las de la interconversión de gIricasa y gIucosa 6-fosfato o de fructosa-6-frrsfatoy fnictosa. - - A< GI . El resultado neto de la fosforilaci6n y luego de la desfocforilación de 1 m01 de sustrato (enzima o azúcar) representa la hidrálisis de 1 mol de ATP. que catalizan las reacciones 1 y 3 (abajo). Las actividades de Ias cinasas. respectivamente (figura I 1-9).a capacidad de estas proteínas cfnasac para reconocer figuras o patrones distintivos de la estructura primaria esta relacionada en parte. RESUMEN Figura 11-9. lo mismo que la de la proteina fosfatasa. la regulación de las enzimas de los marniferos por fosforilacilindesfosforil ación comprende a varias proteinas y ATP estk bajo directo control hormonal y ncurol6gica. en sí mismas. aunque su actividad es regulada. Modificacibn covalentede una enzima regulada por la focforilación-desfosfonlacibnde un residuo ser11 La regulaciiin de la actividad enzimática contribuye en gran parte a preservar la homeostasia que mantiene + catalítico.. ciiando menos en lo que se refiere a la estructura.6-difosfato (capitulo 1 4). La actividad de la proteina cinasaestli regulada y. HzO + Glucosa-6-P + Pi + Glucosa Neto: HzO + ATP 3. Ambas proporcionan una regulación a corto plazo. Sin embargo. De este modo hay proteína cinasa y prcrfeina cinasa fosfatasa que catalizan la interconversicin de estas ~roteinas convertidoras. Las tiruebas de que las proteha fosfatasa sean proteínas interconvertibles son menos convincentes.P 1 1' . las mismas protefnas convertidoras pueden ser enzimas convertibles (cuadro 1 1 -1 ). fosfuenzimn. actúan cobre enzimas tempranas de una prolongada secuencia metabólíca (a meniido biosintética} y en los sitios alostéricos más que en los cataliticos. En casos especificas. Enz-Ser4i-I Las prateinas cinasas y las fosfatasas son proteinas convertidoras La fosforilaci0n y la desfosforilacion son catalizadas por una variedad de proteínas cinasas y proteina fosfatasa (proteinas ctinvertidoras). actúan sin alterar la expresión gendtica. EP. ATP ADP + ADP * Pi + ATP +ADP * E n z 4 e r 4 . Citratoliiisii l'cisforil¿isnb L I I I ~ M IIMG-COA reductnsa cinnsa E. csth baja control hormonal y neurolbgico. porque de otra manera podrian actuar juntas para catalizar de modo incontrolable la hidrolisis del ATP.- 4.

J Bio! Chem 199 1. las alteraciones rhpidas y minimas en la actividad catalitica de enzimas clave reguladas tienen funciones importantes en la canalizacibn selectiva de metabolitos hacia uno u otro proceso metabólico. inhibición de la aspartato transcarhomilasa por CTP). Para lograr la homeostasia. dos dipéptidos de QT) o pueden permanecer unidos mediante enlaces disulfiro (los peptidos A. II REFERENCIAS Crabtree B. Falfvey E. las curvas de saturacibn de sustrato para la inhibición aIostéríca son sigmoideas. Km y V. cada una de ellas única para una secuencia particular de reacciones rnetabálicas (asas múltiples de retroalimentacibn). quimotripsina) sin actividad catalitica. En secuencias de reacciones catabólicas. La fosforilación selectiva y la desfosforilaciiin subsiguiente. como precursor inactivo. En el ser humano y otros eucariotes. son catalizados por proteínas cinasas y proteínas fosfatasas (cnzimas convertidoras). para la reacción global o efectos sobre los dos. protege contra su acci6n hasta que surge la necesidad.22:199. Trends Biochcm Sci 1987. la inhibicibn por retroalimentaciOn incluye metaboiitos reguladores. al mismo tiempo que facilita la movilización rhpida de una actividad sin que se requiera nueva sintesis de la proteina. la actividad de numerosas enzimas es regulada por modificacibn covalente. . de V. Adv Enzume Regul 1993. ¿Cómo se logra este propósito? Las concentraciones locales de sustrato.12:5. insulina y las proteasas de las cascadas de la formacibn y disolucibn de los coagulos sanguíneos. Annu Rev Riophys Biomol Stnict 1993. Los ejemplos incluyen quirnotripsina. La secrecibn. Barford D: The effect ofphospho~lationon the structure and function of protcins. A menudo. A su ve& la actividadde estas en7imasconvertidoras puede ser regulada. Para procesos biosintéticos. los cuales aproximan y alinean 30s residuos previamente distantes para formar el sitio catalítico. cooperativa o multivalente.. la enzima blanco y sus enzimas convertidoras pueden constituir una porcibn de una cascada reguladora que responde a una sefial disparada por una hormona o por un segundo mensajero como cAMP. Schibler U: How are the regulators rcgulatcd? Ped Am Soc Exp Riol J 1990. por lo cual no se aplica la ecuación de Michaelis-Menten. contribuyen a la regulacibn de los procesos metabólicos. y C de la QT y las cadenas A y B de la insulina). Muchas proteasa y otras proteinac se secretan como proproteínas biol6gicamente inertes que deben someterse a un desprendimiento proteolitico selectivo para formar una enzima u hormona con actividad biológica.1311 Bioquímiea de Hurper un entorno intracelular e intraorganismo relativamente constante en presencia de arnpl iq fluctuaciones a en el medio ambiente externo (como cambios de temperatura. cambios repetidos entre estados bajo y alto de actividad catalitica) cuando no hay nueva síntesis ni degradaciiin proteinica. un metabolito dado puede regular la actividad de varias enzimas.266:15555. Uno o más procesos proreoliticos desencadenan cambios en la conformación.: Molecular cloning of h e branched-chain a-ketoacid dehydragenase kinase and the COA-dependcnt methylmalonate semialdehyde dehydrogenase. La evaluacibn cuantitativa de la cooperatividad de las enzimas alostericas utiliza la ecuacicin de Hill. Además.. Kennelly PJ.Porteus JW: Control of metabolism.. que se encuentran en la biocintesis "corriente arriba" de la enzima regulada (por ejemplo. Adernris. siendo la forma más cornun la fosforilacibn dependiente de ATP con elirninaci6n hidrolitica de fosfato como ortofosfato inorgánico. La modulación de la actividad enzimbtica por cambios en la conformación del sitio catalitico puede incluir la alteración de Kmpara un sustrato. La modu- lacibn se logra cuando metabolitos específicos se fijan a la enzima regulada.5:309 Harris RA et al. Johnson LN. Ia separacibn de enzimas en compartimientos y la secrecibn como proenzimas o cimiigenos (por ejemplo. Los pkptidos que se forman por la proteblisis selectiva pueden descartarse (qjernplo.12:4. metabolitos "corriente abajo en la biodegradacion" de la enzima en cuestibn actúan como reguladores (como la inhibición de fosfofructocinasa por ATP o citrato). La actividad catalitica de las enzimas reguladas puede modularse (por qjernpto. B. la accion de estos metabolitos reguladores múltiples puede ser acumulativa. cn parlicular de residuos específicos de Ser o Tír. las velocidades de numerosas reacciones bioquímicas deben responder a la necesidad físiolbgica. Por tanto.33:255.. en general a sitios (alost&rfcoc) bastante separados del sitio catalitico. Kacser H. Newsholme EA: A systcmatic approach to describing and analyzing metabolic control systerns. Las enzimas reguladas tienden a ser aquellas que catalizan una reaccibn inicial única (con frecuencia la primera) de una secuencia detenninada de reaccionw metaMlicas. Cuando más de un metabolito puede regular por retroalimentación a una enzima dada. Krebs EG: Consensus sequences as substrate sptcificity determinants for protcin kinases and protein phosphatascs. presencia o ausencia de agua o tipos específicos de alimentos). What have we to rneasurev l'rends 13iochem Sci 1987.

~ 13 1 Pilkis SJ et al. Schlesinger MJ. Scriver CR et al.266 14239. 1995 Soderling TR: Role of hormones and protcin phosphoryla- tion in metabolic re@lation. (editors): The Metabolic Basis of lnheriied Disease. . J Biol Chcm 1991. 1963-present. Academic. McGraw-1 lill. Chock PB (editors): CUrrent Topics in (:ellarlar Hegulatinn. 1988.Enzlmas: regulación de decf ividade. Fed Proc 1982:41:2615. Annu Rev I3iochem 1995. 1969 to the preseni Weber G (editor): Advances in Enzyme Regulalion.6- bisphosphatase: A rnetabolic signaling enzyrne. 6th ed. Stadtman ER. Hershko A: The Ijhiquiiin System Cold Spring Harhour Press. Pcrgarnon Press.: 6-Phosphofructo-2-kinascJfructose-2. Roach FJ: Multisite and hierarchical protein phosphorylation.64:799.

.

energia radiante o energía mecánica en los sistemas vivos. incluyendo la de su entorno. . La segunda ley de la termodinámica establece que si un proceso se produce espanthneamente. que es el cambio total en la energía interna dc la reacción. la entropia total de un sistema debe aumentar. Entender la forma en que los organismos obtienen esta energía de sus alimentos basico para comprender la nutrici6n y el metabolismo nomales. Ia energia química puede convertirse en calor. DSc La bioenergética o termodinhrnica bioquimica. la energía iitil. conocida tarnbikn en los sistemas químicos como potencial qilimica. que combina las dos leyes de la termodinhica: IMPORTANCIA BIOQU~MICA Para proveer la energia que capacite a! ser vivo para llevar a cabo sus procesos normales. PhD. Por ejemplo. Los sistemas no bioldgicos pueden utilizar la energia calorífica para realizar trabajo. En condiciones de temperatura y presibn constantes. La muerte por inanicibn se produce cuando las reservas energeticas disponibles se agotan y ciertas formas de desnutrición se relacionan con un desequilibrio de la energía (marasmo). ksta es también la ley de la conservacibn de la energia. dentro de ese sistema total. la energía puede transferirse de una parte a otra o puede transformarse a otm forma de energia. la relaci6n entre el cambio de energia libre (AG) de un sistema en reacci6n y el cambio de la entropia (AS) estfi dada por la siguiente ecuación. Sin embargo. electricidad. Los sistemas biológicos cumplen con las leyes generales de la termodinámica La primera ley de la termodinhrnica establece que T a energía total de un sistema. una de las enfermedades más frecuentes de la sociedad occidental. El almacenamiento excesivo del suministro de energia produce obesidad. es el estudio de los cambios de energía que acompaíían a las reacciones bioqulmicas. LA ENERG~A LIBRE ES LA ENERG~A UTIL EN UN SISTEMA El cambio en la energia libre (AG) es esa porci6n del cambio de la energía total de un sistema que está disponible para realizar trabajo. debido aque A-3 es aproximadamente igual a AE. Proporciona los principios que explican la causa de que algunas reacciones puedan producirse en tanto que otras no. permanece constante. donde hH es el cambio de la entalpía (calor) y T es la absoluta. Implica que durante cualquier cambio dentro del sistema completo. Bajo las condiciones de las reacciones bioquímicas. Mayes. El índice de emisión de energía. se controla por las hormonas tiroideas cuya disfuncion es una causa de enfermedad. La entropia representa e1 grado de desorden o lo fortuito del sistema y se torna mfixima en un sistema cuando &te se aproxima at equilibrio verdadero. pero los sistemas bioIbgicos son en esencia isotbrmicos y emplean la energla química para energizar el proceso de la vida. se requiere un combustible adecuado.Bioeneraetica: la función de AñP +ir Peter A. medida por el indice rnetab6lic0. es decir. w se pierde ni se gana energia.

es decir. independientemente de la forma de energia de que se trate. de la contracción muscular. segiin la concentracion de los diversos reactantes. la magnitud de AG es grande. el sistema es estable con poca o ninguna tendencia para que se produzca una reaccibn. Las reacciones exergiinicas constituyen el cata bolismo (degradacion u oxidacián de moléculas combustibles). el sistema esta en equilibrio y ningUn cambio neto tiene lugar. varios iones y proteinas. En las reacciones bioquímicas. respectivamente. es decir. En su lugar. si AG es positiva. El cambio de la energia libre estlndar a este pH se designa por AG". Como parte de la energia liberada en la reacci6n degradativa se transfiere a la reaccibn sinte-tica en forma diferente al Energía qulmica Figura q2-1. es exergónica. es decir. incluso el solvente.la relacibn anterior puede expresarse de la manera siguiente: Si AG es de signo negativo.0. un proceso endergónico no puede existir solo. calor.obtienen energía por enlace quimico o acoplamiento. Esta se acopla con otra reacción. en tanto que las reacciones sintéticas que fuman sustancias se denominan anabolismo. Cuando. En la prhctica. Si AG vale cero. la reaccidn procede s61o si puede ganarse energia. Es importante destacar que la 3G real puede ser mayor o menor que AG". . ademas. AG*' . Si la reacción mostrada en la figura 12-1 se mueve de izquierda a derecha.2. la conduccione~ impulsos nerviosos y el transporte activo. los t$minos químicos nomiales exotémico y endotermico no pueden aplicarse a estas reacciories. adembs. e\ proceso global debe estar acompaiiado por pérdida de energia libre como calor.O mol!L. El conjunto de procesos catab6licos y anabblicos constituye el metabolismo. Si. Puede calcularse a partir de la constantedeequilibrio K'. exergbnica y endergbnica. de energía libre. se emplean las palabras exergunico y endergbnico para indicar que un proceso se acornpafia con perdida o ganancia. Por otra parte. De manera más simple. la reaccicín se dirige virtualmente a su consumaci6n y es esencialmente irreversible. con las reacciones oxidativas.303 RT log Ks. En un sistema de reacciones bioquimicas. En los sistemas biolbgicos. AG es de gran magnitud. AG' es el cambio de la energia libre esiandar. DeberA apreciarse que este tipo de sistema tiene incorporado un mecanismo para el control biotogico de la velocidad a la cual se permite que se produzcan los procesos oxidativos. la reacción procede de manera espontánea con pdrdida de energla libre. La conversibn del metabolito A al metabolito B produce energia libre. es endergónica. deja que la velocidad de utilizacibn del producto de la vla sintetica (D) determine por acci6n de masas E velocidad a Calor LOS PROCESOS ENDERGONICOS SE LOGRAN POR ACOPLAMIENTO A PROCESOS EXERGON~COS Los procesos vitales -como las reacciones sintéticas. una condicióti estándar se define con un pH de 7. Puede concebirse un mecanismo posible de acoplamiento si un intermediario comun obligatoria (I)toma parte en ambas reacciones. en la cual se requiere energia libre para convertir el metabolito C al metabolito D. Cuando los reactantes esthn presentes en concentraciones de 1 . algunas reacciones exergónicas y endergbnicas estan acopladas de esta manera. sino que debe ser un componente de un sistema acoplado exergónico-endergónico donde el cambio neto global es exergonico. este tipo de acoplamiento puede ser representado como se muestra en la figura 12-1. = donde R es la constante de los gases y T es la temperatura absoluta (capítulo 9). Aco'plamiento de una reaccidn exergbnica y una endergbnica. ya que la existencia de un intermediario común obligatorio para las dos reacciones. debe apreciarse que una enzima s61o las acelera hasta liegar al equilibrio: esto nunca modifica la concentracion final de los reactantes en equilibrio después de su desprendimiento de la enzima.

) en este proceso (capítulo 19). proceso que evita que un organismo fuera de control se incendie. del iriglés. Por otro lado. al contrario de 1 en el sisten~a anterior. todos los organismos debcn obtener suministros de energia libre a partir de su entorno. udenosine djphosphuie) y del fosfato inorghnico (P. dcI inglés. C o D. como se muestra en la figura 1 2 4 . el principal compuesto intermediario o portador de alta energía (designado es el trifosfato d c adcnosina (ATP. el ATP desempefia una funcihn en la transferencia de la energia libre de las reacciones exerg~nicasa las endergíinicas (figuras 12-3 y 124). En sus actividades celulares. U n metodo alterno de acoplar un proceso exergónico a unti enderghnico es sintetizar un compuesto con alto potencial energético en la reaccion exergonica e incorporar cstc nuevo compuesto a la cndergbnica. Por otro lado. Esto J perm itiria que K actuara como transductor de energía desde una amplia gama de reacciones exerglinicas a un igualmeiite extenso grupo de rcnccioncs o procesos endergónicos. ribosn y tres grupos fosfato.~phate). por . La imporiancia de los fosfatos en el metabolismo intermedio se hizo cvidente con el descubrimiento de los detalles quiniicos de Ia glucólisis y de la función del ATP.Transduccibn de energla a los procesos biolbgiees que la requieren (endergbnims) a través de un compuesto común de alta energia .n la cual A es oxidado. I. no necesita tener una estructura seme-jante a A. Los orgmisinos autótrofos acoplan su metabolismo a aEgiin proceso exergónico simple en su entorno. funciona como un complejo con Mp7+(figura 12-51. del difosfato de adenosina (ADP. R. en la cdlula viva. que están acopladas a hidrogenaciones por iin portador intermediario (figura 12-2). Una extensión del concepto de acoplamiento lo dan las reacciones de deshidrogenación. En todos estos organismos. Acoplamiento de las reacciones de deshidrogenactbn e hidrogenacrón mediante un portador tntermediario Figura 12-4. El ATP se considerh Proceso enderg6nlco Excitacibn nerviosa activo Figura 12-2. En la figura 12-3. De hecho. El ATP es un nucleiitido especiaIizado que contienc adenina. efectuando así una transferencia de energía libre de la a via exerg~nica la endergónica. Figura 12-3. las plantas verdes utilizan la energía de la luz solar y ciertas bacterias autotrofas utilizan la reacción FeZ' -r Fe3'.a ventaja biológica de este mecanismo es que u -@. -@ es un compuesto con un alto potencial energetico y @ cs el compuesto correspondiente con bajo potencial enercélico. estas relaciones proporcionan una base para el concepto del control respiratorio. ~r(ic~i7osine f ripho. -a) LOS FOSFATOS DE ALTA ENERG~A DESEMPENAN UNA FUNCIÓN PRINCIPAL EN LA CAPTURA X TRANSFERENCIA DE ENERGIA Para conservar los procesos de la vida. Transferencia de energla libre de una reacción exergonica a una endergbnica a travhs de la formación de un compuesto de alta energía. los organismos heterbtrofos obtienen energia libre mediante el acoplamiento de su metabolismo a la rotura de moléculas orghnicas cornple-jas procedentes de su entorno.ejemplo.

No fue sino hasta que Lipmann introdu-jo el concepto de "fosfatoc de alta energia" y el de "enlace fosfato de alta energia". La función del ATP en la energdtica bioquimica fue descubierta en experimentos que demostraron que el mencionado ATP y la fosf'ocreatina eran degradados durante la contraccion muscular y que su síntesis ulterior dependia del suministro de energia procedente de procesos oxidativos en el rnUcculo. esteres de aminoácidns que participan en la síntesis proteínica. enolfosfatos (corno el fos. mientras que el enlace fosfato del AMP (monofosfato de adenosina) es del tipo de baja energia ya que se trata de un enlace Cster normal (figura 1 2 4 ) . tiene valores AGO' menores que el del ATP. incluyendo al ATP y al ADP. que la función de estos compuestos en hioenergdtica se apreció con claridad. proteínas acilportadoras. El alto cambio de energía libre en la hidrólisis de ATP Cuadra 12-1. Por esta razlin algunos prefieren el termino "potencial d e transferencia de griipo" al de "enlace de alta energia".foenolpiruva2o)y fosfoguanidinas (por ejemplo.+ . a partir de los AG"' de su hidrólisis (medido a 37 "C). .138 Bioquimica de Harper se debe a la carga de repulsilin de los ritomos de oxigeno adyacentes. El ADP forma u n complejo similar con ~ g ~ ' . de fosfatos de baja energía. S-ad~nosilmetionina (metionina activa) UDPGIc (uridindifosfato glucosa) y PRPP (S-fosforrihosi 1-pirofosfato). ortofosfatc + Valores de ATP y ntms rnbs tomados de Krebs y Krirnberg (1957). Lipmann introdujo el slmbolo -@. Energía libre estlindar de la hidr6lisis de algunos fosfatos orgánicos e import:incia bioc -" -- - -. Uno. en la transferencia a un aceptor apropiado. El trifosfato de adenosina se muestra aquí como un complejo de magnesio. Figura 12-5. el valores igual o misalto queel del ATP. el ATP cnntiene dos grupos fosfato de alta energia y el ADP contiene uno. En et cuadro se puede observar que el valor de la hidról isis del fosfato terminal del ATP divide la lista en dos grupos. . por lo general son anhidridos (pos ejemplo. El valor intermedio para Ia energía libre de la hidrólisis de ATP comparado con el de otros organofosfatos tiene un importante significado bioenergético En el cuadro 12-1 se muestra la enesgla libre esthndar dc la hidrólisis de varios fosfatos importantes desde el punio de vista bioquirnico. Orros compuestoc de importancia bíologica que se clasifican como "compuestos de altaenergia" son tioésteresentre losquese encuentran ésteres de la coenzima A (por ejemplo. Asi.3-Diti)sfi~gI liccrato f a glicerato) Fosfocreatin~ I'P -+ ADP I'il '010S1iit0 A11I' + AMI .A -A ~ l rompuesto Fosfocnolpiruvato CarbamillFisFato 1. en tanto que en el otro grupo. focfato de creatina. el I -fosfato del 1. especialmente fosfatos. Los componentes de este ultimo grupo. acetil-COA). Los fosfatos de alta energia se designan por el símbolo -@ como un medio de transferir radicales fosfato en el proceso de la fosfonlacion. Los valores difieren entre investigadores según las situacioncs precisas bajo la cuales se efeclunron las mediciones. Es posihEe obtener el c8lculo de la tendencia comparativa de cada uno de los grupos dc fosfatos para transferir energia a un aceptor adecuado. designado fosfatos dc alta energia. con carga negativa y a la estabilización de los productos de la reaccion. traspasa la mayor cantidad de energia libre. para indicar la presencia del enlace fosfato de alta energia. La posicicin intermedia del ATP le permite desernpefiar una fi~ncián importante en la transferencia de energía. e~jemplilicado por los fosfoksteres intermediarios de la gIucolisis. - Gl ucosa I-fo!sfato Friuctusa h-fosfato AFvil' G1ucosa 6-foi G1icerol 3-fo! * P i. fosfato de arginina). El simbolo seiiala que cl grupo adherido al enlace. como híbridos de resonancia.3-difosfoglicerato).

esta reaccilin permite que las concentraciones de ATP se conserven en el m. siempre y cuando se disponga de la maquinaria enzimlitica adecuada. y la fosfoarginina. generados en dos reacciones catalizadas por la fosfoglicerato cinasa y la piruvatocina.P . Hay tres ruentes principales de -@.O .6difosfato Glicerol 3-fosfato Glucosa 6-fosfato LOS FOSFATOS DE ALTA ENERG~A ACTUAN COMO LA "ENERGIA CIRCULANTE" DE LA CELULA Como consecuencia de su posición media en la lista de energías libres cstándar de la hidrblisis (cuadro 12-1 ). que existe en el músculo esquelético. En efecto. Estructuras del ATP. respectivamente (figura 19-2).'@ Otras fosforilaciones. el ATP puede actuar como donador de fosfato de alta energía para formar aquellos compuestos que están después de él en Ia lista. En éste se incluye a la fosfocreatina. Función del uclo ATPlADP en la transferencia de fosfato de alta energia.OII 1 O -@-@ Disfosfato de adenosina (ADP) I Adenoctna . que s61o se encuentra en el músculo de los invertebrados. 3) Ciclo del hcido cítrico: En el ciclo se genera un directamente en el paso catalizado pos la succinil tiocinasa (figura 18-3). que toman parte en la conservación o captura de la energía: 1) Fosforilaci6n oxidativa: Ésta es la fuente los organismos cuantitativa mayor de -@en aerobios. ADP y AMP que muestran la posición y el número de fosfatos de alta energía (a) // \ Glucusa 1. Obdrvese que @no existe en un estado libre sino que es transferido en las reacciones que se muestran respiratoria empleando O? rnolecular dentro de Ias mitocondriats (capítulo 13). 2) GIucblisis: Hay una t'ormacibn neta de dos @como resultado de la formación de Iactato a partir de una mol8cula de glucosa. As[. La energía libre para conducir este proceso procede de la oxidacibn de la cadena Figura 12-7.O I a o Adenosina H - P. Asimismo. En condiciones fisiológicas. activaciones y procesos endergbn~cos Monofoslato de adenosina (AMP) Figura 12-6.O- .O .I Adenosina .O - I I Fosfoenol piruvato 1.iisculo. aunque esté utilizindose rhpidamente. un ciclo ATPIADP conecta los procesos que generan *a las reacciones que lo utilizan (figura 12-7). porque la fosfocreatina . Otro grupo de compuestos fosfhgenos representado en el cuadro actúan como formas de almacenamiento de fosfato de alta energía. Esto tiene lugar a una velocidad muy rápida. el ADP puede aceptar fosfato de alta energía proveniente de aquellos compuestos que estén en la parte superior del cuadro. los ecpermatomides y en el cerebro de los vertebrados. el ATP se consume y regenera de manera continua.3-Difosfogliceratc P-0-P-O-P-0- o II o 11 o II Fosforilación oxidativa Trifosfato de adenoslna (ATP) Adenosina . para formar ATP. dado que el depósito ATP/ADP total es en extremo pequeno y suficiente para mantener un tejido activo s61o durante algunos segundos.P o o Adenosina 11 . en el com6n. a.

( 7 ) Glucosa +.16.8 kJlrnol) modelo. actuar como una seflal metabblica (alostérica) para incrementar la velocidad de las reacciones catabólicas. Tal reaccihn es la hidrblisis del fosfato terminal del ATP.I4O Biquímica de Harper (Capítulo 12) sirve como fuente de energía para la contraccion muscular. Cuando el ATP actiia como donador de fosfato para formar aquellos compuestos de menor energia libre de la hídrólisis (cuadro 12-11. La adenilil cinasa produce la interconversión de nucleótidos de adenina La enzima adenilil cinasa (miocinasa) esta presente en la mayoria de las células. En el miocardio. Cataliza la interconversion de ATP y AMP por un lado y de ADF por el otro: ATP + AMP >- f 2 ADP Para que tenga lugar. Transferencia de fosfato de alta energla entre el ATP y la creatina. Glicerol + Adenocina -@ Glicerol -@ + Adenosina . por ejemplo: de la glucosa.6 W/moll Fasfato de creatina - c m Creatina Flgura 724. 3) Permite al AMP. el grupo fosfato es convertido invariablemente en otro de baja energía. este amortiguador puede ser importante para proveer una protección inmediata contra los efectos del infarto. 'Ha \ HIC-N G-N 1 ? 'a ' ADP ATP Coow (dGO' -12. ser fosfosilade nuevamente para formar ADP. la fosforilación de la glucosa avanza con facilidad en una reaccibn altamente exergónica que en condiciones fisiolbgicas dista mucho del equilibrio y. cuando el ATP es abundante. se ha descrito una lanzadera de fosfato de creatina que traslada fosfato de alta energía de las mitocondrias al sarcolema y que actua como un amortiguador del mismo {figura 14-16). podria no proceder en esa forma. la reacci6n debe estar acoplada con otra que sea más exergbnica que la fosforilacibn Esta reaccibn tiene tres funciones: 1) Permite al fosfato de afta energia del ADP ser usado en la formación de A V .@ -) @a Glucosa + ATP 9 - Glucosa 6-fosfato + ADP (AG" . su concentración puede funcionar como almacén de fosfato de alta energia (figura 12-8). las que a su vez llevan a la generacidn de rnhs ATP (capitulo 2 1). es irreversible para propbsitos prhcticos. formado como consecuencia de diversas reacciones de activacibn en las que interviene el A V . en condiciones fisiológicas. que es endergónica por excelencia y que.30. . Tal reacción es la primera en la vía de glucólisis (figura 19-2). 2) Permite al AMP.7 kJlmol) = Muchas reacciones de "activación" siguen este El ATP permite el acoplamiento de reacciones desfavorables en el aspecto termodinámico con otras favorables La energktica de las reacciones acopladas se describe con m& detalfe en las figuras 12-1 y 12-3.@ . el cual aumenta en concentracibn cuando el ATP se agota. En el muscrilo. (2) ATP t ADP + P (AG"= . Por otra parte. Pi + Glucosa 6-fosfato+ H20 (AG" = + 13.5 kJlmol) Cuando (1) y ( 2 ) se acoplan en una reacción catalizada por la hexocinasa. por tanto. la fosforilación de la glucosa a glucosa 6-fosfato.

las nucleósido monofosfato cinasas específicas de cada nucleósido de purina o pirimidina. se forman pirofosfatos inorgánicos (PPi) Este proceso tiene lugar. ATP + Nucleósido -@ P ADP * Nucleósido -@ -@ Por tanto. por ejemplo: ATP + COA SH + R C O OH AMP * PPi + R COCCoA DIFOSFATOClNASA La reaccibn se acompafía de perdida de energia libre en forma de calor. es decir. catalizada por la pirofosfatasa inorghnica. PIROFOSFATASA Todos estos lxifosfatos intervienen en las fosfonlaciones en la célula. 3) Los procesos endergbnicos se efectúan sblo cuando se acoplan a procesos exerg6nicos.. en la activacibn de los ácidos grasos de cadena larga: Otros trifosfatos de nucleósidoc toman parbe en la transferencia de fosfatos de alta energia Por medio de la enzima nucle6sido difosfatocinasa. La combinacibn de las reacciones anteriores hace posible que el fosfato pueda utilizarse de nuevo y que los nucleótidos d e adenina se intercambien (figura 12-9). la reaccibn tiene lugar 5610 si puede disponerse de energIa libre. Si AG es positiva.Cuando el ATP reacciona para formar AMP. son exergiinicas. catalizan la formación de difosfatos de nucleósido a partir de los rnonofosfatos cosrespondientes. 2) Las reacciones son espontheas cuando hay pérdida de energia libre (AG es negativa). pueden ser sintetizados a partir de sus difosfatos. 4) El ATP actúa como la '"moneda circulante" o "corriente energktica" de la cdlula. 1) Los sistemas biolbgicos son isotkrmicos en esencia y usan energia química para suministrar energía a los procesos de los seres vivientes. RESUMEN I ADP Flgura 12-9. De modo similar. es endergbnica. pero que contienen una base distinta de la adenina. transfiriendo energia libre derivada de sustancias con mayor potencial energético a las de potencial menor. A fP + U P D> ATP + GDP ATP + CP> D< - ADP + UTP (trifosfato de uridina) ADP + GPT (trifosfato de guanosina) ADP + CTP (trifosfato de citidina) a. reacción que por sí sola tiene un elevado AGO' de -27. los trifosfatos de nucleósidos semeiantes al A'TP. Ciclos del fosfato e intercambio de los nucledtidos de adanina. la adenilil cinasa es una monofosfato cinasa especializada. .6 kJ/mol. por ejemplo. es decir. esto es facilitado ulteriormente por la escisión hidrolitica del PP. lo cual asegura que la reaccibn de activación se desplace hacia la derecha. Obsérvese que la activacidn por la ruta del pirofosfato produce una perdida de dos en lugar de uno que es lo que se pierde cuando se forman ADP y P.

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Ia oxidacidn se define como la pérdida de electrones y la reducción como la ganancia de ellos. el oxigeno molecular es incorporado a una variedad de sustratos por las enzimas designadas como axigenasas.) a pH 3. aunque puede causar intoxicaciún. ES uso principal de este es en la respiracibn. IMPORTANCIA BIQMÉDICA Aunque ciertas bacterias (anaerobias) sobreviven en ausencia de oxfgeno. para los sistemas biológicos es normal expresar el potencial redox (E'. DSc y. La administración de oxigeno puede salvar la vida de pacientes con insufíciencia respiratoria o circulatoria LAS ENZIMAS QUE INTERVIENEN EN PROCESOS DE OXIPACIÓN Y R E D U C C I ~ N DENOMINAN SE OXIOORREDUCTASAS En la siguiente descripcibn. Se apreciar&que numerosas oxidaciones biologicas pueden tener lugar sin la participaciiin del oxígeno molecular. . que puede ser definida como el proceso por el cual las cdlulas obtienen energía.(electrón) bado ser valiosa. a pH O. en forma de A V . conocida como el sistema del citocromo P450. las deshidrogenaciones.Oxidación biolóqica V Peter A. la vida de los animales superiores depende de manera absoluta de su suministro. de la reaccibn controlada del hidrbgeno con el oxigeno para formar agua. expresarlo numkricamente como un potencial de oxidación-reduccibn o potencial redox (E'& F usual comparar el potencial A redox de un sistema (E. Además. PhD.0 voltios. esto se ilustra mediante la oxidación del ion ferroso en férrico. además de expresar eI cambio de energía en términos de A G ' (capitulo 1S). La lista de potenciales redox que se muestran en el cuadro permite predecir la dirección del flujo de electrones de un par redox al otro. e. Mayes. por ejemplo. deshidrogenasas. Los potenciales de oxidorreducci6n de algunos sistemas redox de interés especial en la fisiología de los mamíferos están indicados en el cuadro 13-1. Este principio de oxidacibn-reducción se apiica del mismo modo a los sistemas bioquimicos y es un concepto importante en la comprensidn de la naturaleza de la oxidacion biolbgica. el intercambio de energia libre es proporcional a la tendencia de las sustancias reaccionantes para donar o aceptar electrones. en ocasiones. Sin embargo. En consecuencia. la oxidación está siempre acompaiíada por la reduccion de un aceptor de electrones.42 voltios. muchos medicamentos. de manera análoga. hidroperoxidasas y oxigenasas. la administración de oxigeno a presiones altas (terapéutica con oxigeno hiperbarica) ha proEn química. ~ es posible.) contra el potencial del electrodo de hidrógeno. De este modo. 'i LOS CAMBIOS DE ENERG~A LIBRE PUEDEN EXPRESARSE EN TÉRMINOS DEL POTENCIAL REDOX En las reacciones que implican oxidacián y reducción. las oxidorreductasas se clasifican en cuatro grupos: oxidasas. contaminantes ambientales y carcinbgenos quimicos (xenobibticos) son metaboli7ados por enzimas de esta clase.0 en el cual el potencial del electrodo de hidrdgeno es -0. el cual. se designa como 0.

de este modo. Es una metaloflavoproteina que contiene molibdeno y hierro no h6mico la cual actúa sobre aldehidos y sustratos N-heterociclicos. en el intestino delgado. Las enzimas que pertenecen a este grupo de oxidasas incluyen a la ~ a m i n a a c i d o oxidasa.-+" I S ' m - - "nlt.nn Figura 13-1. . una enzima FAD especifica preparada a partir de algunos hongos. Contiene dos moleculac de hem. Por lo general. pues tiene cl típico grupo prostetico hem presente en la rnioglobulina. Citocromo I hiquinon l Citocromo tocromo uaf. Forman agua o peróxido de: hidrbgeno como u n producto de la reacción (figura 13-1). es de interés ya que se emplea para deteminar glucosa. están presentes dos aíomos de Cu.durante la oxidacibn y la reduccién. sino también del catabolismo de las protetnas y aminodcidos.del ingl&s. TamhiCn se le ha llamado ci~ocromo A1 principio. pues se encuentra en la leche. El FMN (figura 52-2) y FAD (figura 52-31 se forman en el cuerpo a partir de la vitamina rihoffavina (capitulo 52). teniendo cada una un &tomode Fe. flavin adeninc u'inucleorrde) como grupos Algunas oxidasas contienen cobre Idacitocrorno oxidasa es una hemoproteínaamplíarnente distribuida en muchos tejidos. Es de particular irnportaicia en el higado y los tifionec de las aves. Es el cornpcincnte terminal de la cadena de portadores rcspiratorios que se encuentran en las mitocondrias y resulta. apoenzima. . LAS OXIDASAS UTILlZAN OXÍGENO COMO ACEPTOR DEL HIDRÓGENO Las oxidasas catalirart la eliminacihn de hidrógeno be un sustrato iisando al oxígeno como aceptor de hidriigenoa. e1 oxígeno. Estudios mhs recientes demuestran que los dos citocromos estiin combinados con la misma proteína y el complejo se conoce como ci- * Algunas veces el tkrmino "oxidasa" se utiliza indistintamente para nombrar n todas las enzimas que catalizan reacciones en que interviene oxlgeno rnolecular prost&icos. dado 3 que cada uno tiene un espectro distinto y propiedades diferentes con respecto a los efectos del monóxido de carbono y el cianuro. Además. Contiene molibdeno y desempefla una fincibn importante en la conversión de las bases púricas en ficido úrico (capitulo 36). responsable de la reacción por la cual los electrones que provienen de la oxidación dc las moléculas del sustrato por las deshidrogenasac son transferidos a su aceptor final. EMN y FAD están unidos estrcchamente -pero no por covalencia. se pensó que el citocromo a a. La enzima e5 envenenada por el monbxido de carbono.Algunos potenciales redox importaricia espm temas de oxid acitin en - . una enzima ligada al FMN que se encuentra en el riñiin con especificidad general para la desaminacibn oxidativa de los L-an~inoicidosque se encuentran en la naturaleza. ligado cada uno con una unidad hemica. Numerosas enzimas flnvoproteinicas contienen uno o mAs metales como cofactores esenciales y se conocen como metaloflavoproteinas. que oscila entre Fe" y Fe2. el cianuro y el bcido siilfhídrico. las cuales excretan hcido úrico como el principal producto final nitrogenado. Oxldacibn de un metabolito catalizado por una oxidasa (A) que forma H20. ('B) que forma H202. y el citocrorno a eran compuestos separados. La xantina oxidasa tiene una extensa distribución.flavin rnononucleotide) o dinucleliticlo dc flavina y adenina (FAD. La aldehido deshidmgenasa es una enzima ligada al FAD que se encuentra en el hígado de los marniferos. no sblo del metabolismo de las pwinas. del ingles. La glucosa oxidasa.. hemoglcibulina y otros citocromos (capitulo 7).a su respectiva proteina. el rirlon y el hígado. Otras oxidasas son flavoproteínas Las ~nzimas flavoproteinicascontienen rnononucle6tido de flavina (FMN.(Capitulo 13j Cuadro 13-1.

en el ciclo del Acido citrico y en la cadena respiratoria de la rnitocondria. Sin embargo. Muchas deshidrogenasas dependen de coenzirnas de nicotinamida Muchas deshidrogenasas son especiticas para dinucleótido de adenina y nicotinamida (NAD'.Oxidación biológica 145 Los mecanismos de oxidacibn y reducciiin de estas enzimas son complejos. Por otro lado. Portador-H2 O DEStIIDROGENASA ESPECIFICA A PARA DESHIDROGENASA ESPECIFICA PARA B LAS DESHIDROGENASAS PUEDEN USAR OXIGENO NO Figura f3-3. estas propiedades permiten que los eqiiívalentes reductores se transfieran con libertad dentro de la cklula. AH2 . pero a menudo utilizan la misma coenzima o portador de hidrogeno qiie otras deshidrogenasas por ejemplo NAD'. Llevan a cabo dos funciones principales: 1) Transferencia de hidrdgeno de un sustrato a otro en una seaccibn de oxidacihn-reduccibn acoplada (figura 13-3). tienen la peculiaridad de disociarse libremente y de modo reversible de sus apoenzimas respectivas. la evidencia seaala que la reduccihn del anillo de isoaloxacina se efectúa en dos pasos por la via de una serniquinona (radical libre) intermediaria (figura 13-2). También se encuentran como coenzimas de las deshidrogenasas en la vfa de la pentosafosfato. las deshidrogenasas ligadas al NAD cataban reacciones de oxidorreducciiin en la vía oxidativa del rnetaboIismo. del ingles.Red)-\/D PoFtador (OX. Los NAD' y NADP' son formados en el cuerpo a partir de la vitamina niacina (figura 5 2 4 ) . Las coenzirnas son reducidas por el sustrato específico de la deshidrogenasa y oxidadas de nuevo por un aceptor de electrones adecuado (figura 13-5). nicotinamideadenrne dinucleoride)o para fosfato de dinucieótido de adenina y nicotinamida (NADP'. Oxidación de un metabolita catalizado por deshidroaenacas amaladas Son numerosas las enzimas de esta clase. Estas deshidrogenasas son especificaspara sus sustratos. 2) Como componentes m una cadena respiratoria de transporte de electrones del sustrato al oxigeno (figura 13-43. algunas deshidrogenasas pueden usar en forma in- distinta NAD' o NADP". Las deshidrogenasas ligadas al NADP se encuentran característicamente en la síntesis reductora. Por lo general. en gencral. se ha descubierio que algunas deshidrogenasas dependientes de las coenzimas de nicotinamida contienen cinc. del inglés. nicotinamide adenine dhucleolide phosphare) como coenzimas. particularmente e n la glucólisis. que habilita a un sustrato para ser oxidado a expensas de otro. Sin embargo. Este tipo de reacción. de modo remarcable la alcohol deshidrogenaca del higado y la gliceraldehido-3-fosfatodeshidrogenasa del músculo esquelktico. Están. más estrechamente unidas a sus apoenzimas que las coenzimas Figura 13-2. tiene utilidad particular para permitir los procesos oxidativos en ausencia de oxígeno. como en la vía extrarnitocondrial de la slntesis de los Acidos grasos y de los estecoides. No se considera que los iones cinc participen en la oxidacibn y reducción. Cuando las reacciones son reversibles. A diferencia de FMN y FAD'. Otras deshidrogenasas dependen de la riboflavina Los grupos flavínicos relacionados con estas deshidrogenasas son semejantes a los FMN y FAD que se presentan en las oxidasas. como sucede durante la fase anaerobia de la gIuchlisis (figura 19-2). Oxidorreduccibn del anillo isoaloxacina en los nucléotidoc de Ravina .

de nicotinamida. finalmente. por una oxidasa en una cadena respiratoria.146 Bio~uiminica Harper de (Capitulo 13) Figura 1 3 4 . Otras deshidrogenasas. H 2 y es transferido a la posicidn 4. Oxidacibn de un metabolito por deshidrogenasas y. un intermediario en la descarboxilacibn oxidativa del piruvato y el alfa cetoglutarato (figura 14-4). Los citocromos son hemoproteinas que contienen hierro. La NADH desbidtogenasa es un miembro de la cadena respiratoria que actliacomo un transportador de electrones entre el NADH y los componentes mhs electropositivos (figura 14-3). La mayoría de las deshidrogenasas anaerobias ligadas a la riboflavina están implicadas en el transporte de electrones en (o hacia) la cadena respiratoria (capitulo 14). donde puede de adherirse en las posiciones A o B de acuerdo a la especificidad determinada por la deshidrogenasa particular que cataliza la reaccidn. Los citocromos pueden considerarse también como deshidrogenasas Excepto por la citocromo oxidasa (descrita previamente). la acil-COAdeshidrogenasa y la glicerol-3fosfato deshidrogenasa mitocondrial transfieren equivalentes reductores de manera directa desde el sustrato a la cadena respiratoria (figura 14-4). en las cuales el &romode este metal EzEcl ESPECIFICA PARA 6 Figura 13-5. la flavoproteína (FAD} actiia como un portador de electrones desde el lipoato reducido al NAUt (figura 19-5). Otro papel de las deshidrogenasas dependientes de la flavina es deshidrogenar el lipoato reducido (dihidrolipoil deshidrogenasa). . Mecanismo de oxidación y reduccibnde las coenzimac de nicotinamida Hay estereoespecificidadalrededor de la posicibn 4 de la n~cotinamida cuando es reducida por un sustrato AH2. Su identificación y estudio se facilitan por la presencia. los citocromos están clasificados como deshidrogenasas. En la cadena respiratoria. En este caso particular. Uno de los átomos de hidrbgeno es removido del sustrato como un n~icleo hidrágeno con dos electrones (ion hídndo. 1% cuales desaparecen cn la oxidación. en cl estado reducido. intervienen como portadores de electrones desde las flavoproteinas por un lado hasta la citocromo oxidasa por otro (figura 14-4). debido al bajo potencial redox. La flavoproteína que transfiere electrones es un transportador intermediario de electrones entre la acil-COA deshidrogenasa y la cadena respiratoria (figura 144). de banda5 características de absorción. El hidrbgeno remanente del par removido del cuctrato se conserva libre como ion hidrbgeno. como la succinato deshidrogenasa.

Función de la catalasa en la destruccibn de peroxido de hidrogeno. Ademfis de poseer actividad peroxídfisica. cataliza la destrucción del HzOz y los hidroperbxidos lipidicoc por el glutatibn reducido. 1 A 1 En los eritrocito&y otros tejidos. La catalasa se encuenm en sangre. Las enzirnas de este gmpo calalizan la 1 PEROXIOASA 1 A'H. En la reacción catali~adapor la peroxidasa. la actividad peroxidasica de la catalaca parece ser favorecida. plaquetas y otros tejidos que intervienen en el metabolismo eicosanoide(capítulo 25). . los citocromos se encuentran en otros sitios. por ejemplo. es capa? de usar una molécula de H20?como sustrato donador de electrones y otra molécula de H202 como oxidante o aceptor de electrones. más bien que m las reacciones que proveen de energía a la dlula. que a su vez destruyen membranas y son causa posible de cáncer y aterosclerosis (capítulos 16 y 53 para una descripción y resumen de los mecanismos de defensa contra los radicales librcs). Los microcuerpos o peroxisomas se encuentran en numerosos tejidos incluyendo el hlgado. pero la reaccibn global es como sigue: LAS OXlGENASAS CATALliAN LA TRANSFERENCIA DIRECTA Y LA INCORPORACI~N OX~GENO DE A UNA MOLÉCULA DE SUSTRATO Las oxigenasas intervienen en la síntesis o la degradacibn de numerosos tipos diferentes de metabolitos. a y al (citocromo oxidasa). Las peroxidasas reducen peróxidos usando varios aceptores de electrones Aunque consideradas originalmente como enzimas vegetales. LAS HlDROPEROXlDASAS 'USAN PEROXIDO DE HIDRQGENO U OTRO PERÓXIDO ORGANICO COMO SUSTRATO Dos tipos de enzima entran en esta categoría: las peroxidasas y las catalasas. El grupo prostético es el protohem. la enzima glutatión peroxidasa. el retículo endoplhrnico (citocromo P450 y Bs). los citocromos b.Oxidación hiolh~ica 147 oscila entre Fe3' y Fe2+durante la oxidación y la reducciirn. La catalasa utiliza a l peróxido de hidrogeno como donador y como aceptor de electrones La catalasa es una hemoproteína que cantíene cuatro grupos hem. protegiendo a los Iípidos de la membrana y a la hemoglobina contra la oxidacibn por los peróxidos (capítulo 22). Se supone que su funcidn es la desmiccibn del: peróxido de hidrógeno formado por la accibn de las oxidasas. Además de la cadena respiratoria. De estos. 1CATALASA --A En la mayoría de las condiciones in vivo. Las hidraperoxidasas protegen al cuerpo de los peMoxidos nocivos. el cual. que c o n t i e n e selenio c o m o g r u p o prostktico. lo cual sugiere que puede haber alguna ventaja biológica al agrupar a las enzimas que producen H 2 0 2 con la enzima que la destruye (figura 2 3 4 ) . a diferencia de la mayoria de las hemoproteinas. es decir. médula bsea. esta débilmente unido a la apoproteina. La acumulación de perdxidos pueden conducir a la generación de radicales libres. las peroxidasas se encuentran en la leche y en leucocitos. bacterias y levaduras. Ademhs de las enzimas peroxisomales. el perdxido de hidrdgeno es reducido a expensas de varias sustancias que actúan como dondores de electrones tales come el ascorbato. sólo el citocromo c es soluble. las quinonas y el citocromo c. mucosas. las células vegetales. CI. los sistemas mirocondriales y microsómicos de transporte de electrones asi como la xantina oxidasa se deben considerar como ruentes de H202. Figura 13-6. c. La reacción catalizada por la peroxidasa es compleja. rifiiin e higado. Varios citocromos identificables se encuentran en la cadena respiratoria. En ellos abundan las oxidasas y la catalasa. Estos dos tipos se encuentran en animales y en vegetales.

El cianuro (CN-) inhibe e paso indicado l .Sin embargo. Tanto el NADH como el NADPH donan equivalentes reductores para la reducci6n de estos citocromos (figura 13-71. por ejemplo.y 24. Hay dos subgrupos de oxigenasas: enzimhticas conocidas ~olectivamente como ciclo de la hidroxilasa (figura 13-8).del 25hidroxicolecaIciferoI y el hígado cataliza Ia hidroxilaci6n en 26. morfina y benzotelarnina.l. por ejemplo. la arninopirina.en la biosíntesis de Acidos biliares. la facilidad con la que el oxigeno puede ser citocromo bs. Los sistemas mitocondriales de la monooxigenasa del citocromo P450 catalizan hidroxilaciones de esteroides Estos sistemas se encuentran en tejidos esteroidogenicos como la corteza suprarrenal. Fármaco-H + Oz + 2 ~ e +~2-* H t (P450) Las dioxigenasas: incorporan los dos átomos de oxigeno molecular al sustrato La reacción básica es: F a m i a c o 4 H + HzO + Xe3' (P450) Ejemplos de ese tipo incluyen las enzimas que contienen hierro. el citocromo P450 mitocondrial es seis veces mlis abundante que los citocromos de la cadena respiratoria.148 Bioquimica de Harper (Capítulo 13) incorporacibn del oxigeno a una molécula de sustrato. los ovario y la placenta e intervienen en la biosíntesis de las hormonas esteroides a partir del colesterol (hidroxilaci6n en CZZ CZO la separación de la cadena lateral y en y en las posiciones 1 1P y 18). Muchos fármacos como el fenobarbital tierieri la capacidad de inducir la formación de enzimas rnicrosOmicas y de citocromo P450. Cadena de transporte de electrones en los microsomas. Los sistemas renales catalizan las hidroxilaciones la. los testlculos. hidroxilasas): incorporan sólo un átomo de oxígeno al sustrato El otro átomo de oxígeno es reducido a agua. por lo que es necesario un donador adicional de elecirones o cosustrato. En la corteza suprarrenal. Esto se efectiia en dos etapas: 1) la fijación del oxigeno al sitio activo de la enzima y 2) la reacción en la que el oxígeno unido se reduce o es transferido al sustrato. Los sistemas microsómicos de la monooxigenaca del citocromo P450 son importantes para la hidroxilacion de muchos fhrrnacos Estas monooxigenasas se encuentran en los microsomas del higado junto con el citocromo P450 y el LA TOXICIDAD DEL OX~GENO PUEDE DEBERSE AL RADICAL LIBRE SUPERÓXIDO La potencial toxicidad del oxigeno. la btriptófano dioxigenasa (triptbfano pirrolasa) del hígado. ~~ki*i. la homagentisato dioxigenasa (oxidasa) y la 3-hidroxiantranilato dioxigenasa (oxidasa) de la fracción sobrenadante del higado. Entre los f i m a c o s metabolizados por este sistema están el benzopireno. se ha atribuido por tanto a la formación de H202. recientemente. y las enzimas que utilizan hem como grupo prostktico. Las monooxigenasas (oxidasas de función mixta. anilina. etdtem \ / + FlavoPr~telna2 Flavopmteina3 NADPH Flavoproteina~ /l- - CNEstearil-COA desaturasa Cit bs Cit P450 A + Hidraxilaabn Figura 13-7. los cuales son oxidados a su vez por sustratos en una serie de reacciones NADH Amino oxidasa.

Se origina superóxido cuando las flavinas reducidas -por eiernplo. como en los qziímicos. La enzima citosólica. El superoxido puede reducir cl citocromo c oxidado 0' 2 + Cit c ( ~ e ~4)0 2 + Cit c (Fe2+) ' o ser eliminado por la prcsencia de la enzima especifica superhxido dismutasa. particularniente en loc pulmones. en tanio rlue la enzima mitocondrial contiene Mn". La citocromo P450 hidroxrlasa microsórnica del higado no requiere de la sulfoproteina ferrica Fe2S2 El rnonoxido de carbono (CO) rnhibe el paso indicado rcdiicido en los te-jidos al radical superóxido libre (Oz5} la existencia de una supcróxido dismutasa y en los rnicroorganisrnns acrobios (aiinque no en los aiiaerobios obligados) ha sugerido que latoxicidad del oxigcnri cs dcbida a su conversibn e n superóxidn. Se ha propuesto que el RESUMEN 1) En los sistemas biológicos. Si bien la exposición de los animales a una atmbsfera de 100% de O2 causa un incremento adaptativo de la enzima. la oxidacihn (perdida de electrones) . presentes en la xantina deshidrogenasa. la exposición prolongada ocasiona daRn puIrnonar y muerte. 0 2 ' unido al citocromo f40 es un intermediario en la '5 activación del oxigenri en las reacciones de hidroxilación (figura 13-8). por lo que es similar a la enzima que se encuentra en la bacteria.son reoxidadas de modo univalente por el oxigeno molecular. está compuesta de do?subunidades similares que contienen cada una un equivalente de Cu" y Zn2'. el alfa tocoferol (vitamina E). En esta ieaccicín el super6xido actúa como oxfdantc y como reductor. actúan como recolectorcs d e radicales Iibrcs y reducen la toxicidad del oxígeno (capitulo 53). Los antioxidantes. La runciiin dc Iri superhxidri disinutasa parece ser la de proteger a los microurganismos aerobios contra los efectos deletéreos potenciales del siiperoxído. La enzima se encuentra en varios cornpartimicntos difer~ntes de la célula. La dismutasaesta presentc cn todos los principales te-jidos acrvhios. los efectos quimicos cn los tejidos son amplificados por las reacciones de las cadenas con i-ndicalcs libres (capítulo 16). Figura 13-8.NADPH t H' r A-OH o. Ciclo de 3 citocromo P450 hidraxilasa en los microsomas El sistema mostrado es tipico de las hidroxilasas de a esleroides de la corteza suprarrenal. por ejemplo.. Bstc dcscubrimiento apoya la hiphtesis dc que la? mitocondrias han evolucionado a partir dc uii procariota que entrb en simbiosis con un protoeucariota.

5 2 . hidroperoxidasas y oxigenasas. deshidrogenasas. I REFERENCIAS Ronnett R: Oxygen activation and tetrapyrroles.6:669 Ernster L (editor): Bioenergeticx Elsevier.: Cytochromc P450: Progress and predictions. Coon MJ et al. Nicbolls DG: Cylochromes and Cell Respzraiion Carolina microsomal. and uther hemoprotcin systerns. In: Mernbrane Strucfure and Function Vol. aunque las dos clases de enzimas desempeiian actividades importantes en la respiración.44:147. 1992. 1978. Brrdy JF. Packer L (editors): Biological oxidaiions. Sutdon CM: Respiratoy cnzyme systerns in milochondrial mcmbranes. Hong SY: Dietary effects on cytochromes M50.1SO Rioquimica de Harper (Capilulo 13) se acompafia siempre con la reduccibn de un aceptor de electrones. Tolbert NE: Metabolic pathways in peroxisomes and glyoxysomes Annu Rcv Biochem 198 1. Biomcmbranes. FASEB J 1992. In: Methods in E~izyrnology. Annu Rev Biochcm 1975. 3) Oxidasas y deshidrogenasas tienen diversas funciones en el metabolismo. Tyler DD. and toxicity. Tyler DD: The Mitochondrion in Health and Disease YCH Puhlishers. Fleischer S. V o l . 5) La toxicidad del oxígeno puede ser causada por el radical libre super~xido.xenohiotic metabolism. Essays Biochem 1981:17:1. 2) Las oxidorreductasas se clasifican en cuatro grupos: oxidasas. 1984. part C.La enzima específica super6xido dismutasa protege a los tejidos del superóxido.50: E 33. cytochrome P450. mientras que las oxigenasas realizan la hidroxilaci6n de medicamentos. 1984 Yang CS. I3iological Supply Company. 1984. Acadcmic Press. FASEB J 1992:6:737 . 5 Hittar EE (editor) Wiley. Friedovich 1: Superoxide dismutases. 4) Las hidroperoxidasas protegen al cuerpo contra Iesion por radicales libres.

siendo estas ultimas los constituyentes principales de la membrana interna. La teoría quimiosmóiics ofrece una perspectiva de la forma en que esto ocurre. La glicerol3 -fosfato deshidrogenasa se encuentra en la superficie exterior de la membrana interna. donde transporta equivalentes reducidos por las enzimas de la cadena respiratoria. Las mitocondrias contienen la serie de cataliadores conocidos como la cadena respiratoria que colectan y transportan equivalentes reductores y los dirigen a su reacción final con el oxígeno para formar agua. requ irikndose mechnisrnos para el transporte de metabolitos y nucleótidos a travds de la membrana intema. ATP. lugar adecuado para participar en la lanzadera de glicerofosfato(figura 14-1 S). El fosfolipido cardioiipina se concentra en la membrana intema. En el espacio intermembrana se encuentran adenilil cinasa y creatina cinasa. cncefalopatia y con frecuencia presentan lactacidosis. acil-COA sintetasa. una membrana interna con permeabilidad selectiva y moldeada . la "casa de fuerza" de la célula. Ida 3-hidroxibutirato deshidrogenasa se fija t a m b i h en eI lado de la matriz de la membrana interna. La membrana externa puede removerse por tratamiento con digitonina y se caracteriza por la presencia de monoamino oxidasa. La succinato deshidrogenasa se ubica en la superficie interior de la membrana interna.Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Peter A. LA CADENA RESRlRATORlA COLECTA Y OXIDA EQUIVALENTES REDUCTORES Toda la energia útil liberada durante la oxidacidn de ácidos grasos. amobarbital). Se han informado diversos defectos rnitocondriales hereditarios que comprenden componentes de la cadena respiratoria y de la fosforilación oxidativa. se denomina fosforilaci6n oxidativa. Los pacientes presentan miopatia. puesto que es dentro de este organelo en donde se captura la mayor parte de la energia derivada de la oxidacihn respiratoria. Las enzimas solubles del ciclo del icido citrico y las enzimas de la beta oxidación de Acidos grasos se Iocal izan en la matriz. Cierto número de medicamentos (por ejemplo. La fosforilaci6n oxidativa capacita a los organismos aerobios para aprovechar la energía libre disponible de sustratos respiratorios en una proporción mucho mayor que los organismos anaerobios. y venenos (por ejemplo. en pliegues o crestas y una matriz dentro de la membrana intema (figura 14-1). PhD. inhiben la fosforilación oxidativa. aminoheidos y virtualmente toda la que proviene de la oxidaci6n de los carbohidratos se vuelve disponible dentro de las rnitocondrias en forma de equivalentes reductores (-H o electrones). Tambikn está en las mitocondrias la maquinaria que atrapa la ener- ENZIMAS ESPEC~FICAS ACTÚAN COMO MARCADORES DE LOS COMPARTIMIENTOS SEPARADOS POR tAS MEMBRANAS MITOCONDRIALES Las mitocondrias tienen una membrana externa permeable a la mayor parte de rnetabolitos. por lo general con consecuencias letales. DSc La mitocondria ha sido llamada apropiadamente. cianuro y monbxido de carbono}. El sistema de las rnitocondrias donde la respiración se acopla para la generacion del Intermedio de alta energía. glicerofosfato aciltransferasa y fosfolipasa Az. Mayes.

MATRIZ Particula submitocondrial formada por fragmentos de membrana interna Figura 14-1... Funcibn de la cadena respiratoria mitocondrialen la conversión de energia de los alimentos a ATP La oxidación de los nutrientes principales genera equivalentes reductores (2H) que son capturados por la cadena respiratoria para la oxidac16ny formación acoplada de ATP . Este último es la via mctabólica final corniin para E oxidacion de todos !os alimentos principales. ALIMENTO Lipidos - Carbohidratos .. donde las subunidades fosforilantea estan en el lado externo.1 1 bcidos grasos + 2 P O E . las enzimas de la beta oxidación y del ciclo del acido citrico.etc Acetil-COA :o / .. Estructura de las membranas mitocondriales Las partículas submitocondrialesestán "al revés" y permiten el estudio del sistema encerrado en la membrana. gi'a libre producida como fosfato de alta energia. es decir. ' I I I MITOCONDRION I ADP l I I Fuentes extramitouindrialesde equivalentes reductores Figura 14-2.. a Estas interrelaciones se muestran en la figura 14-2...\ ATP t 4 - $ h Glucosa.. Éstas también contienen los sistemas enzimiiticos responsables de la producción de la mayor parte de los equivalente? reductores en primer lugar. A Glicerol . beta-Oxidacibn \ --.

También es semejante a la plastoquinona que se encuentra en los cloroplastos. Los electrones fluyen desde Q a través de la serie de citocromos que se muestra en la figura 14-4. El punto de vista actual acerca de los componentes principales de la cadena respiratoria se muestra en la figura 1 4 4 . cuadro 13-1 ).1 voltios dcl NAD'/NAUH al 0?/2Hz0 (cuadro 1 3-1). se encuentra unida con firmeza a la cadena respiratoria y pasa equivalentes reductores a Q. glutamato. Los citocromos están arreglados en orden creciente de su potencial redox. esto es compatible con Q actuando sobre un coinponente mhvil de la cadena respiratoria que recoge cquival entes reductores fijados a los complejos de flavoproteinas y los pasa a los citocromos. citocromos. En aAos recientes se ha aclarado que se encuentra otro poriador adicional en la cadena respiratoria que une las flavoproteinas con ei citocromo h. La coenzima Q tiene una estructura muy semejante a la de las vitaminas K y E (capitulo 53). El componente flavina de todas estas deshidrogenasas parece ser el FAD. En las mitocondrias hay un gran exceso estequiométrico de Q coinparado con otros miembros de la cadena respiratoria. hasta llegar aI oxigeno molecular. furnaratolsuccinato. un compo' A NADH 2Fs2' %O* Figura 1 4 3 . Los electrones o el hidrogeno fluyen a travÉs de la cadena de manera escalonada desde los componentes más electronegativos al oxigeno mas electropositivo. Se cree que el azufre y el hierro intervienen en el mecanismo de oxidorreducción entre la flavina y la coenzima Q. debido a que sus potenciales rcdox ron mhs positivos (por ejemplo. las e n z i m a deshidrogenasas catali~an transla ferencia de electrones desde los sustratos hasta el NAD de la cadena. sarcosina. La coenzima Q es un constituyente de los Iípidos mitocondriales. las cuales a su vez esthn ligadas a los citocromos de Ia cadena respiratoria (figura 1 4 4 ) . malato e isocitrato. Se observa que este sistema de enzima contiene cobre. (citocromo oxidasa) es el responsable de la combinacibn final de los equivalentes reductores con el oxigeno rnolecular. glicerol 3-fosfato. Estos sustratos son succinato. La transferencia de electrones de otras deshidrogenasas como las de L (+)-2-hidroxiacil-COA. Esta e n ~ i m contiene FeS y a F M N . existe en las miiocondrias en fuma de quinona oxidada en condiciones acrobias y en la forma de quinol reducido en condiciones anaerobias. que ha sido IIamada uhiquinana o Q (cwnzima Q. Un componente adicional que se encuentra en las preparaciones de la cadena respiratoria es Ia proteína fierrosulfurada (FeS: hierro no himico). En la terminal electronegativa de la cadena. figura 14-51. D (-)-3-hidroxibutirato. a traves de una expansión redox de 1. . El citocromo terminal ua. al parecer se acoplan directamente con el NAD de la cadena respiratoria. siendo los otros lipidos predominantemente fosfolipidos que conslituyen parte de la membrana rnitocondrial. el atomo de hierro experimenta oxidorreduccibn entre Fe2' y Fe3 . colina. flavoproteinas. el cual esta relacionado con las flavoproteinas (metaloflavoproteínas) (figura 1 4 4 ) y con el citocromo h. El NADH reducido de la cadena respiratoria es a su vez oxidado por la enzima metaloflavoproteinica NADH deshidrogenasa. No todos los sustratos esthn ligados a la cadena respiratoria a través de deshidrogenasas específicasde N AD: algunos. prolina. Ida cadena resuiratoria de las rnitocondrias está formada por cierto número de portadores redox que va desde los sistemas de deshidrogenasa unidos aNAD. Existen varias diferencias en la manera como esto se IIeva a cabo. La Q es tambikn el punto de acopio en la cadena respiratoria para los equivalentes reductores derivados de otras sustancias que estan unidas directamente a la cadena respiratoria a través de las flavoproteína deshidrogenasas. Transporte de equivalentes reductores a traves de la cadena respiratoria. Los alfa cetohcidos pirúvico y cetoglutarico tienen sistemas compIejos de deshidrogenasas que implican al lipoato y al FAD antes de1 paso de electrones al NAD de la cadena respiratoria. dimetilglicina y acil-COA (figura 1 4 4 ) . que incluye el cambio de un sor0 e-. esthn ligados directamente a las deshidrogenasas flavoproteinicas. hasta el oxigeno molecular.Cadena respiratoria y fosforilacih~l oxidutrvu 153 Los componentes de la cadena respiratoria están colocados por orden creciente de su potencial redox Los componentes principales de la cadena respiratoria se muestran en la figura 1 4-3. el miembro de la cadena de citocromos de mBs bajo potencial redox Esta sustancia. Todas estas sustancias se caracterizan por la posesi~nde una cadena lateral poli-isoprenoide.

le imparte dirección al movimiento de los equivalentes reductores en la cadena respiratoria y a la producción del ATP a la que está acoplada. en forma de fosfato de alta energia. La organizacibn estructural de la cadena respiratoria ha sido un tema de considerable especulaci6n. Componentes de la cadena respiratoria en las mitomndrias mostrando las puntos de reunibn para las equivalentes reductores a partir de los sustratos importantes. los componentes de la cadena respiratoria se encuentran en la membrana interna de la mitocondria corno cuatro complejos de la cadena respiratoria proteína-llpido que se extienden en la membrana. Estructura de la ubiqulnona (0). El citocromo c es el unico citocrom~ soluble y al igual que Q. LA CADENA RESPIRATORIA APORTA LA MAYOR PARTE DE LA ENERGIA OBTENIDA DEL METABOLISMO El ADP es una molécula que captura. De importancia es el descubrimiento de proporciones molares casi constantes entre los componentes. Dado que &sta es una reaccidn irreversible (la única en la cadena). . parece ser el componente m i s mbvil de la cadena respiratoria que conecta a los complejos fijados (figuras 14-7 Y 14-10). n= es decir. Funcional y estructuralmente. QIO. Forma totalmente oxldada o quinbnica Forma semiquindnica (radical libre) Forma reducida e qulndllca (hidroquinona) Figura 14-5. Asi. FeS ocurre en la secuencia del lado del 0 de Fp o de Cit b 2 nente dc algunas oxidasas. número de unidades isoprenoides el cual es 10 veces mayor en animales. el ATP ha sida llamado la "liqujdez" energética de la cdlula (figura 12-7). algo de la energia libre resultante de los procesos catabblicos y que corno ATP pasa esta energia para impulsar aquellos procesos que la requieren. La citocromo oxidasa tiene una afinidad muy elevada por el oxigeno.Prolina 3-Hidr~~ia~il-Cd 3-Hidroxibutirato Glutamato Malato Piruvato Succinato Colina Isocitrato FP (FAW FeC i Cit b FeS --t Cit CI - Cit c Cit aa3 Cu FP (FAD) ' FP (FTE) FP FAD) t Acil-COA Saruisina Dimetilgliuna t FTE Flavoproteina transferida de electrones Fp Flavoproteína Q Ubiquinona Cd citocromo Flgura 1 4 4 . lo cual permite que la cadena respiratoria funcione a velocidad mkirna hasta que virtualmente se ha agotado el oxigeno en el tejido.

sucunato:ubiquinona oxidorreductasa. Las demhs abreviaturas son c iguales a tas de la figura 1 4 4 . Sitios propuestos de inhibiUbnOds la cadena respiratoriapor medicamentos. Debido a que un m01 de glucosa genera aproximadamente 2780 kJ en la combustibn completa. cuando un susirato es oxidado por la vía de una deshidrogenasa Iigada a flavoproteína. la relacibn P:O = 3 (figura 14-7). azufre lábil a los hudos.2 kJlmol de gfucosa. . tanto en la gludlisis como en el ciclo de! &ido cftrico. es posible ahora das cuenta de al menos 68% de la energía libre que resulta de la combustión de glucosa. es decir. Algunas proteínas fierrosulfuradas contienen dos Btornos de azufre y de hierro (FezS2). la energia capturada por fosforilación en la glucólisis es insignificante.6 kJ/mol. más las fosforilaciones al nivel del sustrato. NAOH ubiquinona oxidorreductasa. la conversi6n de succinil-COA en succinato. FeS De=coliladores 4 1 Piencidina A ArnobarbAl Rotenona I esac copla dar es ADP + PI ATP ADP . incluyen s61o un paso de fosforilaci6n. compuestos qulmieos y antibidtieds especlfims. P:O = 2. Los sitios que al parecer apoyan a la fosforilación estan indicados. es decir. BAL. Tomando en consideración las deshidroger&iones en la r í a del catabolismo de la glucosa. Hay una capturaneta de dos grupos fosfato de alta energia en las reacciones glucoliticas (cuadro 19-1) que equivalen aproximadamente a 103. E[ examen de las mitocondrias intactas respirando. mmplejo IV.0 mol/L). ubiquinol~ferricitocromo oxidorreductasa. se incorporan 3 mol de fosfato inorgáslico al ADP para formar 3 m01 de ATP por medio mol de O2consumido. el cual se obtuvo a partir de una concentracibn estándar de 1. Pr.(ln vivo. Es evidente que la cadena respiratoria es responsable de una proporclbn importante del total de ATT formado. drnercaprol: T F A es un agente quelante del hierro. la via final para la oxidacibn completa de la glucosa. Maloneto Complejo II Suocinato TTFA BAL Antimiuna A H2S CO Complejo IV Complejo r -I FMN. PI T+ Oligomlcina ATP ADP I PI 4 ATP Flgura 14-7. revela que cuando los sustratos son oxidados por la r í a de las deshidrogenasas ligadas al NAD y la cadena respiratoria. residuo de cisteina. Crs.Cadena resprratoriay f~~forilacrón oxidativa 1j5 Gis \ Pr Figura 14%. s61e se forman dos moléculas de ATP. complejo III. El complejo hierro-azufre-proteína (Fe&) @. wrnplejo I . Todas las fosforilaciones descritas hasta ahora ocurren al nivel del sustrato. ferrocitocromo:oxigeno oxidorreductasa. lo cual permite la captura de dos fosfatos de alta energía m& por m01 de glucosa. complejo II. apoproteina. el AG para la síntesis de ATP a partir de ADP se ha calculado que es de aproximadamente 5 1. tomando en cuenta que este valor es a partir de las concentraciones actuales de los reactivos presentes en la cilula. Estas reacciones se conocen como fosforilacidn oxidativa al nivel de la cadena respiratoria. capturada en la forma de fosfato de alta energia. Las reacciones del ciclo del ácido cítrico. Ésta es mayor que el AGQ'para la hidrolisis de ATP como se muestra en el cuadro 12-1. Por otro lado.

-- Cuadro Lados de control riiq?iratorio -. La acción de los desacoplantes consiste en separar la oxidacibn de la fasforilaciiin en la cadena respiratoria y esta accibn puede explicar la toxicidad de estos compuestos i vivo. Sin embargo. esto ha aportado in Cormación sobrc el mecanismo de acción de algunos venenos.ya no limita la velocidad de la -y' y $ . Chance y Williams han definido del cinco condiciones que pueden controlar la velocidad dc respiraciOn en las mitocondrias (cuadro 14-1 ). puesto que E concena tracihn de ABP o P. Cuando se efectúa trabajo. pemitiendo que ociirra m i s respiración. La carhoxina y el TTFA inhiben especificamente la transferencia de equivalentes reductores d e la succinato dcshidrogenasa a Q . en presencia del desacoplante dinitrofennl.-. son rnortaPcs in vivo. .. En general. la célula se aproxima al estado 3 o al 4 ya sea que la capacidad de la cadena respiratoria sc satura o la PO2 decrece a valores menores del Km para el citocromo 01. sino en un paso subsecuente de la fosforilaci6n (figura 14-9). Así. En el animal dc sangre calientc contribuye a la conservación de la temperatura corporal.iercicio).plración -- - . EI atractilásido inhibe la fosforilaci~n oxidativa. A una dosis suficiente. la manera en que lo? procesos oxidativos hiol6gicoc permiten que !a energía libre que resulta dc la oxidacicihn de los alimentos se vuelva disponible y sca capturada. El primero es inhibido por los harbitíiricris como el amobarhital. cs decir. porcl antibiótico piericidina A y por la rotenona. en tanto que el malonato es un ínhibidor competitivo de la succinato dcshidrogenasa. Con propósitos der.3 energía libre remanente. cuantlo to dos los susiratus y componen les esthn psect>ntesen cantidades de. El dimercaprol y la antimicina A inhiben la cadena respiratoria entrc el citrocromo h y el citocromo c. Esto se debe a íluc !a oxidacihn y la fosforilacibn están íntimamente nc. Esto da por resultado una n respiracion no controlada. 'También existe la posibilidad de que el transportador de ADPIATP (figura 14-2).-. inhibidores de la fcisforilacihn oxidativa y desacoplantes de la misma. Conforme la frcciiencia respiratoria aumenta (como con el e. sicndo larespimcion controlada por la disponibilidad del ADP. ? ' --. Estos inliibidores evitan la oxidación dc los sustratos que coinunican directamente con la cadena respiratoria por la via dc una desliidr-ugeilasa ligada al NAD al bloquear la transferencia de FeS a Q. que es un insecticida y veneno de Deces." III'~~JL. rnonóxida de carbono y cianuro inhiben a la citocromo oxidasa.IIILJJ LLU(IU IIC I XIII' ~11StTüivauiniii~iite Y r - Dispcinihil idud de su! - - Estado 3 1 [a ripacidad de la cadena respiralorra misniii. que tjcilita la entrada de ADP citosólico a la mitocondria. en lugar de explosiva. Esta i~ecesidadno debe considerarse coma "despilfarro".I " 1 Dispcinihildad de ADP solamca idad de ox Ipcnci solarnente - . a la inversa. Se considera que inhibe al portador de ADP en la mitocondria y el ATP fuera de ella (figura 14-1 2). 1. Los venenos cl6sicos &S. la mayor parte de las células en estado de repriso se encuentran en el cstado 4.criptivos se pueden dividir en inhibidores dc la propia cadena respiratoria. El antibihiíco oiigomicina bloquea completamente laoxidación y la fosforilación en I& rnitocrindrias intactas. Pareceria que eii ciertas condiciones la concentmcibn de fosfato iiiorgánico podria afectar tambiCn la velocidad de funcionamicnto de la cadena respiratoria. NUMEROSOS VENENOS INHIBEN LA CADENA RESPIRATORIA Mucha de la infot-rnaciiin de la cadena respiratoria ha sido obtenida por el uso de inhibidores y. la oxidaciiin no puede proceder por la vía de la cadena respiratoria sin la fo~forilacion ~oncornitantc ADP. es escalonada. ineficaz y sin control como en muc2ios procesos no biológicos. dado que asegura que cl sistema respiratorio como iin todo sea suficientcrnente exerghico para alejarse del equilibrici y permite un flujo unidireccional cotitiriuo y una provisión constante de ATP. el A'l'P es convertido en ADP. eficaz (apmximadamcnte 68%) y conirolada. bloLos inhibidores que detienen la re~piración queando la cadena respiratoria parecen actuar en tres sitios. la oxidación procede sin fosforilacibn. indicando que la oligomicina no actua directamente en la cadena respiratoria.El control respiratorio asegura un suministro constante de ATP La velocidad de recpimci6n de las mitocondrias se puede controlar por la concentración de ADP.opladas. la cual depende del transporte de nuclebtidos de adenina a t r a v h de la membrana interna de la mitocondria. - - Condic iones que limitan la velocidad de res. se convierta en el limiiante de la velocidad. lo cual a su vez reabastece el depósito de A'I'P (figura 1 4 4 ) . saturaci6r. que no es capturada como fnsfato de alta energía se libera en forma de calor. Este lugar dc accion propuesto se muestra en la figura 14-7.

dinitrofenol. La hiphtesis quimica postula el acoplamiento químico directo en todas las etapas del proceso. El experimento A mllestra la situacibn básica de la respiraudn en el estado 4. Cuando el ADP exdgeno ha sido fosforilado a ATP.sforiiación oxidatrva Y 157 Figura 14-8. El desacoplador que ha sido usado mis frecuentemente es el 2. nunca lograron aislarse intermedios ricos en energíaque enlaman oxidación con fosforilacibn y la hipotesis se desacreditb. pero otros compuestos actúan de una manera semejante. separa a la respiracidn de la fosforilacibn. por ejemplo. comparado con el dfnitrorenol. es decir. respiración. LA TEOR~A QUIMIOSM~TICA EXPLICA EL MECANISMO DE LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA Se han emitido dos hipotesis principales tanto quirnica como quimiosm6tica para explicar el acoplamiento dc la oxidacion y la fosforilación. creando una diferencia de potencial electroquímico a travds de la membrana ( A ~ H + )Esta diferencia con.No se conoce con certeza el numero preciso de protones bombeados por cada NADH oxidado. La adición de un desacoplante separa nuevamente a la recpiractbn de ia fosforilaubn La teorla quimiasmática de Mitchell postula que la energía de la oxidación de componentes en la cadena respiratoria genera iones hidrógeno que son expulsados al exterior de una membrana acopladora en la mitocondria. ) Cada uno de los complejos de la cadena respiratoria 1. ADP Estado 4 1 La cadena respiratoria es una bomba de protones Desacoplamiento 1 1 2 3 Minutos 4 5 Figura 14-9. pero en particular a protones.Cadena res~iraforia fo. FI'j se emplea para dirigir el mecanismo responsable de la formacibn de ATP (figura 14-1 O. No obstante. que se acumulan fuera de la membrana. siste en un potencial químico (diferencia de pH) y un potencial elkcbico. En el experimento E . III y 1V (figuras 14-7 y 14-10) actúan como una bomba de protones. Funcion del ADP en el control respiratorio. Este último compuesto. el pentaclorofenol y la CCCP (m-clorocarbonilcianuro fknilhidrazona). como en las reacciones que generan ATP en la gtucblisis. incluso al dinitrocresol. La adicrón de un desacoplante. pero en la actualidad se calcula que el complejo . la respiración regresa al estado 4. es cerca de 100 veces mBs activo. La diferencia de potencial electroquímico que resulta de la de distribución a~imétrica iones hidrógeno (protoncs. la cual es acelerada por la adiubn de ADP. La membrana interna es en general impermeable a iones. Control respiratorio en las mitocondrias.4-dinitrofenol. la adicibn de oligomicina bloS quea la fosforilacibn del ADP aAadido y por tanto tambibn a la respirac16n. la membrana interna.

no hay intermediario de alta energta común para la oxidacion y la fosforilación como en la hipbtesis química. Específicamente la oiigcrmicina bloquea la conduccidn de H* a través d e Fo el complejo IV. Es interesante observar que unidades fosforilantes similares se encuentran en el interior de la membrana plasrnitica de las bacterias. El mecanismo de acoplamiento de la expulsibn de protones al sistema de la ATP sintasa es una conjetura de la Ripdtesic.En la figura 14-1 1 se muestra un mecanismo posible para el bombeo de protones por el complejo 911. Subunidades F y Fo de la V i proteina las cuales utilizan energfa de la gradiente de protones para promover la fosforilación Los agentes desacoplantes como el dinitrofenol permiten la fuga de iones H' a travbs de la membrana. a una subunidad protetnica de la membrana conocida como Fo. Principios de la teoria quimiosmótica de la fosforitacrbn oxidativa El circuito protbnico principal es creado por el acoplamiento de la oxidacibn a la expulsibn de protones del interior al exterior de la membrana. el complejo I I I . Los estudios sugieren que la sintesis de ATP. se continuarhn utilimdo en este texto un vaior de 3 para la oxidacibn del NADH + H y de 2 ' para la oxidacidn del FADH2. la cual puede tener lugar mientras se encuentra pegado a la enzima.Membrana acopladora Oligommcina Ubiquinona Citocromo c EXTERIOR + (APH) Figura 14-10. + ADP forma ATP (figura 14-1 0). pero en sentido inverso en los cloroplastos. no es el paso principal que requiere energja. esto es. 3. el gradiente electroquimico de protones. sino más bien la liberacibn del ATP del sitio activo. En esta accibnpodrian intervenir cambios de confomaci6n de la subunidad FI. Es significativo que el gradiente de protones es de fuera hacia dentro en mitocondrias y bacterias. Por simplificacibn.2. Así. Esparcidas en la superficie de la membrana interna están los complejos fosforilantes responsables de laproduccibn de ATP (figura 14-1). conducida por los complejos 1. pero es posible que sea 2. que es probable se extienda a travks de la membrana (figura 14-10}. la cual se proy ecta hacia la matriz y contiene a la A V sincasa (figura 14-1 0). colapsando asi.. Las subunidades están adheridas. Por tanto. posiblemente mediante un tallo. asi como en el exterior de la membrana de los tilamides en los cloroplastos. 1expulsa 3 a4. cada uno de los cuales actúa como una bomba de protones. II y 1 de la cadena respiratoria. el ciclo Q. la relacibn P:O puede no ser un enterocabal. 4 y Una ATP sintasa localizada en la membrana forma ATP La diferencia de potencial electroquimico se usa para impulsar a una ATP sintasa localizada en la membrana la cual en presencia de P. .5.. Los protones pasan a travks del complejo FOa F 1con formación de ATP a partir de ADP y P. Estos constan de varias subunidades de protehas que se conocen en conjunto como la subunidad F. por ejemplo.

una vez establecida como resultado de la translocacibn de protones. La teoría quimiosmótica explica la acción de los desacopladores compuestos ( ~ o r e j e m ~ ldinitrofenol) son mo. Esto a su vez depende de la disponibilidad de ADP y P. QH2 Y Q son móviles. La figura muestra corno los componentes del complejo III están organizados como bomba de protones. LA IMPERMEABILIDAD RELATIVA DE LA MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA NECESITA DE INTERCAMBIO DE TRANSPORTADORES Los sistemas de difusidn para intercambio existen en la membrana para cambiar aniones por iones OH-y . Los hallazgos experimentales respaldan la teoria quirniosmótica 1) La adicidn de protones (gcido) al medio extemo de mitocondriasconduce a la generación de ATP. 2) La fosforilaci6n oxidativa no ocurre en sistemas solubles donde no existe la posibilidad de una ATP sintasa vectorial. fiphticos (capitulo 16) e incrementan la permeabilidad de las mitocondrias a los protones (figura 14-10). 3) La cadena respiratoria contiene componentes organizados lateralmente (asimetríatransversal) como los requiere la teoria quimiosm6tica. en tanto que. inhibe el transporte posterior de equivalentes reductores a travks de la cadena respiratoria a menos que se descargue por una translocación retrógrada de protones a traves de la membrana hacia la ATP sintasa vectorial. reduciendo así el potencial electroquímico y el corto circuito de la ATP Por tanta. Los citocromos se muestran como b y ci. Debe haber una membrana cerrada para obtener fosforilacidn oxidativa (figura 14-1 0). Ciclo "Q" generador de protones. la procede focforilacibn. El QH' se anda a cada lado de la membrana a una proteína fijadora de Q. La teoria quimiosrnótica puede explicar el fenómeno de control respiratorio La diferencia de potencial electroqulmica a travts de la membrana.Cadena resprratnriay JosforilaciOn oxidufrva 159 Figura 44-41.. La teoria quimiosmótica explica la existencia de sistemas transportadores de intercambio mitocondrial Estos sistemas son una consecuencia de la membrana acoplada que debe ser impermeable a los protones y otros iones para conservar el gradiente electroquimico (vkase adelante).

Sistemas transportadores en la membrana mitocondrial Transportador de fosfato @ Sirnportador de piruvato @Transportador de dicarboxilato. El transportador de alfa cetoglutarato tambikn necesita intercambio con malato. Transportador de alfa cetoglutarato. EXTERIOR Membrana interna de la INTERIOR mitoccndria Figura 14-12. ornitina. ]. ( Transportadorde nudeótido de adenina. agua. isocitrato o cisaconitato por el transportador de tricarhxilato requiere malato en intercambio. si. Sin embargo. El Na' puede intercambiarse por H'. TambiBn existen (pero aqui no se muestran) sistemas transportadorespara glutarnatolaspartato (fgura 14-1 5)-glutamina. Dcbe apreciarse que el transporte de citrato a traves de la membrana mitocondrial depende no solo del transporte de malato sino tambien dcl intercambio de fosfato inorgánico. Se cree que Membrana interna de EXTERIOR la mitouindria INTERIOR los ácidos sin disociar o m& liposoluhles son la especie molecular que atraviesa mejor la membrana lipoide.(CapituloId) cationes por iones H'. Netilmaleimida. Sin embargo. Al parecer. cori ayuda del gradiente de protones. L a membrana mitocondrial bilipoide interior es totalmente pemeable a moléculas pequefias sin carga. quizá a traves de un antiport Ca2'/H'. El transportador de nucleiitidos de adenina permite el intercambio de ATP y ADP. Tres o posiblemente cuatro protones penetran a la mitocondriapor cada ATP que sale. El transporte de aniones dicarboxílicos y tricarboxilicos se relaciona de manera estrecha con el fosfato inorgánico. el cual atraviesa con facilidad como ion HzP04-enintercambio por OH-. como 3-hidroxibutírico. La captacion neta de citrato.penetra un protbn menos cuando el ATP es usado en el interior de la mitocondria. @ hidroxicinarnato y atratilbsrfo inhiben los sistemas indicados. El simportador H+IP. como oxígeno. pero no AMP. acetoacético y acético. aniones diwboxilato y trimboxilato y amino8cidosrequieren un transportador especifico o sistemas de transportadores para facilitar su paso a rravks de la membrana. Se piensa que la captación activa de Caz' por las mitocondrias ocurre con transferencia de una carga neta con valor de 1 (Ca' "uniport"). Esto es esencial para dejar salir al ATP de las mitocondrias hacia los sitios de su utilización exn-arnitocondrial y permitir el regreso del ADP para la produccibn de ATP denm de la rnitocondria (figura 14-13). Estos sistemas son necesarios para la captación y excreción de metabolitos ionizados en tanto se conserva la neutralidad eldctricn y osrnbtica.(a Transpertador de tricarboxilato. C02 y NHI y a acidos monocarboxilicos. Carnbinacibn del transportador de fosfatosm con el transportador del nuclebtido de adeninacg en la sintesis del ATP. los ácidos monocarboxílicos penetran con mAs facilidad debido asu menor disociacibn.a liberacion de calcio de las mitocondrias es facilitada por el intercambio con Na' . La captacibn neta de malato por el transportador de dicarboxilato requiere fosfato inorghnico para intercambiar10 en direccion opuesta. . ~ o medio de mecanisinos d c intercambio re r conserva el equilibrio osmiitico. es equivalente si antiportador PJOH que se observa en la figura 14-12. Los iicidos grasos de cadena larga son transportados al interior de la mitocondria por el sistema de la ornitina (figura 24-1) y existe también un transportador para piruvato que comprende un "simport" que utiliza el gradiente de t del exterior al interior i ' d e la mitacondria (figura 14-12). aminoácidos neutros y carnitina (figura 24-1) 8 ($2 Figura 14-13.

Debe advertirse que la enzima mitocondrial se enlaza a la cadena respiratoria a travCs de una flavoproteina en lugar de N A D y que en lugar de tres. elimina el gradiente de pIl a travis de la membrana. tanto cl potcnc~aldc niembrana como el gradiente dc pll desaparecen y por tanto.os ionóforos reciben ese nombre por su capacidad para fonnar compIc. la fosforilación es completarnente inhibida. Se cree. el N A DH extram itocondrial no se acumula y sc supone que es oxidado por la cadena respiratoria cn las mitocondrias. los desacoplantes clásiccis como dinitrorenol son ion6foros de proiones. Es necesario que se encuentre la deshidrogenasa especifica en ambos Iados de la mern brana mitocondrial. músculo cardiaco) muestran deficiencia de glic~rol3-fosfato deshidrogenasa. que ayuda al paso de K ' a travCs de In niembrana mitocondrial y luego descarga el potencial de mernbrwa*del interior al exterior de la mitocondria. la actividad de la enzima ligada a FAD decrece despues de tiroidectomia y aumenta después de la administración de tiroxina. Figura 14-14. como glutamñto deshidrogenasa e hidroxilasa. Estos iinplican la transferencia de equivalentes rediictores a travis dc la membrana rnitocondrial por la vía de los parcs dc sustratos. En algunas cspccics. De hecho. otros ie. shlo se fonnan dos moléculas de ATP por átomo de oxígeno consumido. El mecanisrnv de transferencia que utili7a la lanzadera d e glicerofosfato se muestra en la figura 14-14. que es una prciteina de la membrana mitocondrial interna. tejido adiposo oscuro y cn cI miiscrilo blanco y podrta ser importante en el hígado. Aunque esta lanzadera existe en el músculo de las alas de IOF insectos. que iin sistcma de trancporte que implica al malato y al malato citos6lico y mitocondrial es de mayor utilidad universal. Eri presencia de valinomicina y nigericina.jos con cationes específicos y facilitar su transporte a través de membranas biológicas.Los ionóforos permiten a cationes específicos atravesar membranas [. que intervienen en la slntcsis de esteroides. Se han considerado varios mecanismos posibles quc permiten este proceso. que le permite atravesar membranas lipoides como Ia rnitocondrial. La nigericina actúa también como un ionhforo para K' pero en iiiicrcambio por HA. cerebro. Un qiernplo es el antibiótico valinomicina. Lanzadera de glicerofosfato para la transferencra de equivalentes reductores desde el citosol al interior de la mltocondria. En la figura 1 4-1 5 se muestra el sistema lanzadera del malato. La oxidacion del NADH extramitocondrial es mediada por lanzaderas de sustrato Aunque el NADH no piicde penetrar la mcnihrana mitocondria1. Sin embargo. Al parecer actua como un amortiguador redox ligado a energía y como fuente de N A D P H para la? enzimas intramitocondriales. una enzima de la secuencia de la glucólisis (iigtira 19-2).jidos (por ejemplo. Por tanto. Esta propicdad de fonoforesis se debe a su carácter l ipofílico. ligados por deshidrogenasas apropiadas. La com- Una transhidrogenasa traslocadora de protones es fuente del NADPH intramitocondrial Esta trarishidrogenasri ligada a energía. por tanto. en condicione$ aerobias. es producido continuamente en el cftosol por la 3-tos~oglfceraldehido deshidrogenasa. . se acopla al paso de protones corriente abajo del gradiente electroqiifmico del exterior al interior de la mitocondria con transferencia de hidrhgeno del NADI-1 intramitocondrial para formar NADPH.

)que cataliza la transferencia de fosfato de alta energia a la creatina a partir del ATP que surge del nuclebtido transporhdor de la adenina A su vez. El desacoplamiento con dinitrofenol conduce a la pérdida de iones del interior de la mitocondria pero la captacibn de iones no es inhibida por la oligomicina. conservan o acumulan cationes como K'. el cual debe reaccionar con el glutamato y ser transarninado a aspartato alfa cetoglutarato antes de su transporte a travks de la membrana rnitocondrial y reconstituido a oxalacetato en el citosol. contraccion muscular. Diferentes isoenzimas de la creatincinasa median la transferencia de fosfato de alta energia hacia y desde los diversos sistemas que lo utilizan o generan. En el espacio intemembrana de la mitocondria se encuentra una isoenzima de la creatincinasa (CK. como un sistema dinámico . para transferir fosfato de alta energia desde la mitocondria. La lanzadera de creatina fosfato facilita el transporte de fosfato de alta energía desde la mitocondria Esta lanzadera (figura 14-1 6) aumenta las funciones de la creatina fosfato como un amortiguador de energía al actuar en los tejidos activos como son el corazón y el musculo esquelético. gluc6lisis (figura 14-1 6). o ausencia.. Lanzadera del malato para transferencia de equivalentesreductores del citosol al interior de la mitocondria portador del oetoglutarato. Cierto numero de fhrmacos y venenos actúan por inhibicibn de la fosforilacibn oxidativa (vkase antes). La MELA (miopatía. Se considera que una bomba primaria de protones dirige el intercambio catidnico. el dna fosfato se transporta al interior del citosol mediante los poros de proteinas en la membrana mitocondrial exterior y queda disponible para la generación extramitocondrial de ATP. lo que sugiere que la energíano necesita ser suministrada por la fosforilacion del ADP. Ca2'. El transporte de iones en las mitocondrias se enlaza a la energia Las mitocondrias que respiran activamente en donde se lleva a cabo la fosforilacion oxidativa. a plejidad de este sistema se debe a la impermeabilidad de la membrana mitocondrial al oxalacetato. ejemplo. ASPECTOS CL~NICOS M m t o m o de la miopatfa mitocondrialy la disfuncibn renal infantil mortal comprenden disminución grave. MgZ' y P. lactacidosis y apoplej ia) es un estado hereditario causado por NADH: deficiencia de ubiquinona oxidorreductasa (complejo 1) o de citocromo oxidasa. Na'. transportador de glutarnato-aspaflato (nótese el sirnportador protbnica con glutamato). de la mayor parte de las oxidorreductasas de la cadena respiratoria. encefalopatía. Se han descrito las enfermedades que implican deficiencias de gran parte de la fosforilacibn oxidativa.162 Rioquímica de Harper (Capitulo 14) MEMBRANA CITOSOL INTERIOR MITOCONORIA MALATO DESHIDROGENASA + H' transFigura 14-15.

" ATP / \ ADP Espacio intermembrana Figura 14-16. .. ..y. : .: .54:1015. ... ... . como cianuro. Annu Rev Biochem 1985.. : : .-::.:: ..... REFERENCIAS Balaban RS: Regulation of oxidative phosphorylation in the rnammal!an cell Arn J Physiol 1990.. .... . : S .>:... C b es la isoenzlma que acopla la glucblisis a la slntecis de creatina fosfato... .:.:.. A D P ~ -y rnetabolitoc.:. Barold FM: The I/i#olForce. ::. transportadores de intercambio especiales se extienden a travks de la membrana para permitir el paso de iones como OH-. C k . -.. .:.. donde pasan corriente abajo por un gradiente redox de transportadores a su reaccibn final con oxigeno para formar agua.:.::f<<:' p .$: .. Iípidos y proteinas se vuelve disponible en las mitocondrias como equivalentes reducidos (-H o e-).258:C377.:. Annu Rev Biochem 198 1 . . es la creatina ctnasa que interviene en los grandes requerimientos de ATP. Morgan-Huges JA et al.sforilacidn oxidativa 163 / ATP P m s o s que requreren energía ejemplo.. -.! !' '. es la icoenzirna que mantiene el equilibrio entre la creatina y el fosfato de creatina con ATPIADP.. .38:523. Science 1979.... La lanzadera de creatina fosfato del músculo cardiam y esquelético La lanzadera perrnlte el transporte rhpido de fosfato de alta energia desde la matriz de la mitomndria al interior del citosol (Cka.. Nicholls DG: Bioenergetics.... -. Mitchell P: Keílin's respiratory chain concept and its chemiosmotic consequences. .... 1986 Aatefi Y: The rnitochondrial electron transport and oxidativc phosphorylation system.. Boyer PD: 'l'he unusual enzyiiielogy o f A'I'I' synthase... :p: . f Freernan.. P17ATP~-. . 2) Los transportadores redox se agrupan en complejos de la cadena respiratoria en la membrana mitocondrial interna.. Cross RL:The mechanism md regulation o f ATP synthesis by Fi-A'TPases.mi.-. 5) N u m e r o s o s v e n e n o s c o n o c i d o s .. Biochemistry 1987. creando un potencial electroquimico a través de ésta.) oxidación de carbahidratos... la oxidación se acopla en forma íntima a la fosforilacibn para proveer a las necesidades energdticas de la cklula.:. ? . Estos son canalizados a la cadena respiratoria. detienen la respiracibn mitocondrial por inhibicibn de la cadena respiratoria. En esta forma. Estos usan la energía liberada en el gradiente redox para bombear protones al exterior de la membrana. . contraccibn muscular. sin descargar el gradiente electroquimico a través de la membrana..:......embrana mitomndria . 4) Debido a que la membrana mitocondrial intema es impermeable a protones y otros iones. Biochcm SOE Trans 1990.. exterior .. ..:.26 8503. 3) Atravesados de uno a otro lado de la membrana estan los complejos de ATP sintasa que usan la energía potencial del gradiente de protones para sintetizar ATP a partir de ADP y Pi. A Sliru5.>..-. . ...50:6& 1.206:1 148. contraccibn rnuswlar RESUMEN \ ADP 1) Virtualmente toda la energia liberada de la . : ..Cadena respiratoria yfo.. P es el poro de la proteína en la membrana mitocondrial exterior.. ... -.. :::%. 1 982. : :::...: Mitochondrial myopathies: Clinical defects. C b e3 la creatincinasa mitocondrial que media la creaci6n de fosfale de creatina a partir del ATP formado en la fosfoñilacibn oxidativa. :: ' :.. o Bioener~erics. ejemplo. A n Introduction to !he Chemiosmotic T h e o ~Academic Press.

Prince RC: l'he proton pump nl' cytochromc oxidase Trends Biochcm Sci 1988: 13:159. structurc and function of creatinc kinase isoeiiqmes in tisues with high nnd fluctuatiiig energy clernandq Hiocheiii J 1992. ct al.281:21 .: Defecrs in oxidative phosphoqlation. 1992. Scholte HR.: Intrrtcellularcomparírncniation.Suppl 1 :81 Tyler DD:The W~tochondrion Iiealth andllrsease in YCH Publishers. Uiochcrnical investigatiuns in skelehl musclc and exprcssion o f the lesion in other cell5 J lnhcr Metab Dis IYX7.10. Wallimann T et al.

por ejemplo. En los vegetales. en LOS CARBOHfDRATOS SON DERIVADOS ALDEH~DOS CETONAS O DE ALCOHOLES POLIH~QRICOS Se clasifican como sigue: 1) Los monosacásidos son aquerlos carbohidrato~que no pueden ser hidrilizados en moleculas más sencillas. Segun la naturaleza de los monosacAridos a que dan origen por hidrblisis. glucbgeno para almacenaje. y la sucrosa. galactosa en la lactosa de la leche y en ciertos Iípidas complejos y. Es tarnbien el combusliblc principal de los mamíferos (excepto los rumiantes) y un combustible universal para el feto. que produce dos moléculas de glucosa. 4) Los polisachridos so11aquellos carbohidratos que dan. donde desempeñan funciones estructurales y rnetabólicas. pueden formarse los demás carbohidratos en el cuerpo. Mayes. pentosas. La maltotriosa* es un ejemplo. en ocasiones se le designa como hexosanos o pentosanos. mhs de 10 moléculas de monosacaridoc. al ser hidrolizados. 1o animales pueden sintetizar algunos carbohidratos a partir de Iípidos y proteinas. La mayor cantidad del carbohidrato dietético pasa al torrente sanguíneo en forma de glucosa o es convertida en el hígado y. heptosas u octosas. Las enfermedades que se relacionan con carbohidratos incluyen diabetes sacarina. IMPORTANCIA BIOMÉDICA Para comprender su funci6n fundamental en la economia del organismo de los marniferos es esencial el conocimiento de la estructura y propiedades de los carbohidratos de importancia fisiologica. enfermedades por almacenaje d e glucógeno e infolerencia a la lactosa.s de soporte vegetal. a partir de ella. DSc Los carbohidratos esthn ampliamente distribuidos en vegetaIes y animales. En el organismo es convertida a otros carbohidratos que tienen funciones altainente especificas. ribosa en los ácidos nucleicos.os oligosacáridos son los compuestos que por hidrólisis dan 2 a 10 moléculas de rnonosacirido. 3) [. tetrosas. PhD. En el cuadro 15-1 se dan algunos e-jemplos 2) Los disachridos producen dos moléculas del mismo o de diferentes monosacáridos cuando se hidrolizan: ejemplos de estos compuestos son la maltosa.Carkohidratos de importancia fisiológica Peter A. Los almidones y las dextrinas son ejemplos de polisacáridos que pueden ser lineales o ramificados. que produce una inolécula de glucosa y una de fructosa. pero el volumen mayor de los carbohidratos de animales se d ~ r i v a Última instancia de los vegetales. dependiendo de la cantidad de ariíornos de carbón que contengan. . * Obsérvese que esla no es una triosa verdadera sino un trisacárido giic conticnc trcs rcsiduos de alfa glucosa. El azúcar glucosa es el carbohidrato más importante. y como aldosas y cetosas dependiendo si tienen o no grupo aldehido o cetona. hexosas. la glucosa es sintetizada por fotosintesis a partir de bióxido de carbono y agua y almacenada como almidón o convertida a celulosa que forma parte de la estructura . galactosemia. Pueden subdividirse en triosas. combinada con proteinas en las glucoproteínas y los proteoglucanos.

Las formas L y D de este azíicar se muestran en la Figura 15-2. La orientacihn de los grupos -H y -0H alrededor del átomo de carbono adyacente al carbono con el ~ l c o h o l primario terminal (por ejemplo. La presencia de atonios de carbono asimétricos (Atomos de carbono unidos a o cuatro h~omos grupos diferentes) permite la formación de isbrneros. Un compuesto puede scr designado n(-). o-Glucosa A: Forma en cadena recta. el plano de polarizaci0n girarA en el sentido de las manecillas del reloj si el isómero es dextrorrotatario (+). 16 isomeros.OH Figura 15-1. 11 anilisis por difracción de rayos X 3 muestra que el anillo de seis miembro5 contienc un átomo de oxigeno y que en realidad tfenc la forma de una silla (figura 15-1 C).H 1 H -4C . La mayor parte de los monosacaridos dc los mamíferos tienen la configuracibn u y las enzimas qiie intervienen en su metabolismo son específicas para esta configuracibn.indicando su rclación estructural con la glicerosa n o L. Por ejemplo. ctosa Los azúcares poseen varias formas de icornerismo LA GLUCOSA ES EL MONOSACARIDO MÁS IMPORTANTE EN MEDICINA La estructura de la glucosa puede representarse de tres maneras Aunque la fhmula estructural de cadena lineal (aldohexosa.OH l H -=C -OH H -2C 1 1) lsomerismo D y L: La designación de un isiimero como 13 o de su irnagcn en espejo como la forma L está determinada por su relacion espacial con el compuesto progenitor de la familia de carbohidrato~. el Atomo de carbono cinco en la glucosa) determinan si el asicar pertenece a la serie D o a la l. figura 15-1 A) puede ayudar a comprender algunas de sus propiedades. L(-) o c(+). Cuando el grupo -OH en este carbono está a la derecha {como se ve en la figura 15-2). Cuando un rayo de luz polarizada en un plano se hace pasar a través de la soluciiin de u11Eshmero óptico. »(A). por tanto. con cuatro htomos asimttricos de carbono tiene. La presencia de átomos de carbono asimCtncos tambikn confiere actividad óptica a los compuestos. Clasificaciónde aziicares importnntes ---L. pero que difieren en configuracibn espacial se conocen camo etercoisómeros. " - -- 1 -- ulosa ulosa Para la mayor parte de los praphsito~. C: alfa-o-Glucosa forma de silla.la fbrmula estructural puede ser representada como un simple anillo en perspectiva como lo propuso Haworth (figura 15-1 R).jiinto con los correspondientes isdmeros de la glucosa. una estructura cíclica cs favorecida por razones temodinSimicas y expIica completamente el resto de sus propiedades quimicas. la glicerosa (gliceraldehído). . pero no necesariamente exhibiendo la misma rotacibn 6ptica. Los compuestos que tienen Ia misma formula estructural. Los tipos más importantes de isomeria que se encuentran en la glucosa son los siguientes: o 'C-H 11 I .OH HO -3C .Cuadro 15-1. la forma de F fructuosa que ocurre en la naturaleza. La glucosa. El numero de isbrneros posibles de un compuesto depende de1 numero de htomos asimétricos de carbono (n) y es igual ri 2". 1 6CH. pertenece a la serie L. o en el sentido opuesto si es levomtatorio (-1. el azúcar es miembro de la serie D.el azúcar de tres carbonos. B alfao-Glucosa proyección de Haworth. a es el isiimcro D(-).. cuando esti a la izquierda.

Isomeria o. Tal mezcla se designa como racemica o mezcla ni. dc cadena recta. 3) Anbrneros alfa y beta: La estructura ciclica de una aldosa es un sem iacética.jempi0.. Este equilibrio se acompaña de rotacibn 6ptica (mutarrotación) cuando el anillo semiadtico se abre y se vuelve a formar con cambio de la posicibn de los grupos -H y 4 H del carbono 1. [.OH CH?OH Figura 15-2. de aqul.3% e s t $ representado principalmente por Figura 15-4. prodriciendo una rnezcIa de alfa-u-glucopiranosa (38%) y beta-glucopiranosa (62%). .y L. En el caso de la glucosa en solucit~n. anbmeros alfa y beta de la glucofuranosa. son 2) Estructuras cíclicas piranosa y furanosa: Esta terminologia se basa en el hecho de que las estructuras ciclicas estables de los rnonosacáridos son sirnilms a las del pirano y del furano (figura 15-3). La glucosa cristalina es alfa-u-glucopiranosa. En forma semejante. D-fsuctofuranosa o D-fn~cto~iranosa) (figura 1 5 . pero el isomerismo tiene lugar alrededor de la posicihn 1. ya que las oportunidades para la forrnacíón de cada ic6mero ~ p t i c o idénticas.menos de 1 % esta en la forma furanosa.os compuestos producidos por síntesis son necesariamente recdrnicos.0025 por ciento. También las cetosas pueden presentar la forma ciclica (por e. el carbonilo o atorno anornérica d i carbono. Formas piranosa y furanosa de la glucosa. m& de 99% esta en la forma piranosa.C -H I H-C I -OH Furane O ti C -H HO- ' -H C I 1 1 H-C 1 -0H -51 HO-C H-C I I I -0M m-" -H I H-C -0H Figura 15-3. puesto que esti formada por la combinacibn de un aldehído y un grupo aIcohol (figura 15-5). Formas piranosa y furanosa de la fructosa. Cuando existen cantidades iguales de isomeros n y l. la mezcla resultante no tiene actividad 6ptica puesto que las actividades de cada isbmero se anulan entre si. la estructura cíclica de una cetusa es un semiacético. El cambio se efectua probablemente via una molécula hidratada. La estructura ciclica se conserva en solución.de la glucerosa y de la glucosa. el nombrc alterno de dextrosa que se usa con frecuencia en medicina. por tanto.. acíclica. 'CH. Menos de 0. La desviación bpticade la glucosa en soIución es dextrorrotatoria.4 ) . aunque la polarografia ha mostrado que la glucosa existe en forma aciclica en una proporción de sólo 0.

Diológicarnente. figura 2 2 4 ) . contienen esteroides como 4). Las pentosas son constituyentes importantes de nucleótidos. También significativos so11 los derivados ácido carboxílicos de la glucosa como el D-glucuronato (importante en la formación de gliicurhnidos y prescnte en los glucosaminog~ucanos) y sus derivados metabolicos 1--iduronato (presente eii glicosarninoglucanos) (figura 15-9) y 1 . pentosas. El aglucano puede ser metanol. glicerol. otro monosacarido. Epimerización de la glucosa . se forma un enlace N-glucosídico. tetrosas. En la figura 15-7 se muestran cinco cetosas que son importantes en el metabolismo. Evímeroq: 3. Los azúcares forman glucósidos con otros compuestos y entre si Los glucósidos son compuestos formado< de la condensación entre el grupo hidroxilo del c ~ r b o n o anomérico de un monosaclirido o un residuo de monosacarido y un segundo compuesto que puede spr o no (en el caso de una aglucona). debido a su acci6n sobre el corazón (glucosidos cardiacos). e1 enlace O-glucosidico es un enlace acetal debido a que resulta de utia reaccihn entre un grupo semiacético (formado de un grupo aldehido y un grupo -0H) y otro grupo -0H. si es la galactrisa. las fisiolúgicamente más importantes son Ja glucosa. Si el segundo grupo es iina arnina. un galactosido. el compuesto resultante es un glucbsido. S') lsom~rismo aldí)sa+etosa: La fructuosa tiene la tnisma formula niolecular de la glucosa. Los glucósidos se encueiitran en muchos medicamentos. dado que hay un grupo cetosa potencial en la posición 2 dc la fmctuosa (figura 15-73 y un grupo aldehido potencial en la posición 1 dc la glucosa (figura 15-8). Si la porcihn serniacética es la glucosa. se forman en la degradacibn de la gliicosa por la vía alterna del fosfato de pentosa. fructosa y manosa (cuadro 1 5-3). ácidos nucleicos y numerosas coenziinac (cuadro 15-2). en las espccias y en las constituyentes de tejidos animales. De las hexosas. Mutarrotaciones de la glucosa. un esterol o fenol. entre adenina y ribosaen nuclcbtidos como ATP (figura 12-5). por c. respectivamente (figura 15-45). los epimeros más importantes de la glucosa qon la manosa y la galactosa. HOCH. HOCH. Todos los gluc6sidas que son irnportantcs en medicina. En la figura 15-8 se muestran las estructuras de los azúcares aldosas de importancia bioquimica. etdtem. pero difiere en su fiirmula estructural.jemplo. galactosa. Figura 15-5. (sedcheptiilosa).0s isomeros que difieren como con- secuencia de variaciones en la configuracibn de los 4 H y -H unidos a los átomos de carbono 2. Si el segundo grupo es un hidroxilo. o una base como adenina. formadas por epimerizaci6n en los carbonos 2 y 4.HO O'd H L. Muchos monosacáridos tienen importancia fisiológica Los derivados de triosas se forman en el ciirso de la degradación metabolicade la glucosapor la vía de la glticólisis.-gulonato (un in iembro de la via del icido urhnico.3 y 4 de la glucosa se conocen corno epimeros. Forma de aldehido aciclico 0h HOCH. a partir del azúcar de siete carbonos HOCH. en tanto que los derivados de iriosas. Figura 15-6.

CHO I CHO HO-C .OH ~Llxosa ~Xllosa -7 CHO [ CHO HO-C .CHIOH I C=O I CH. que es un in hibidor de E Na'f K' -PiTPasa de a las membranas celulares.H l m CHO 1 I $HO H-C .0 H H-C .0 H H-C I H-C .0 H I H-C .H I H-C . Otros glucósidos incluyen antibióticos como la estreptomicina (figura 15-?U). LOS deoxiazúcares carecen de un oxígeno Son aqiiéllos en los cualcs un gnipo hidroxilo unido a la estructura cíclica ha sido reempla7ado por un atomo CHO I H-C-OH CH2OH ~Gllcerosa (Dgllceraldehldo) I CHO f .H I I CHO I H-C-OH HO -C -H H-C-OH 4 HO-C -H H-C I HO -C -H I 4 H-C-OH 1 HO-C -H H-c-OH H -C .0 H I I HO-C-H H-C-DH I H-C -0H H-C -0H H-C -OH I CHzOH Dihidmxiacetona Figura 15-7.OH I CH. Relaciones estructurales de las aldosac de la serie o con importancia fisiológica La o-triosa no tiene importancia fisiológica.OH CHZOH CH20H Figura T5-8. Estos gluciisidas incluyen derivados de la digital y del estrofanto coma la oua baína.0 H H-C . La serie se construye por la adicidn tebrica de una unidad CHzO al grupo -CHO del azúcar .OH I I C=O 1 HO-C I -H C-O I C=O HO-C-H 1 I H-C .0 H I CHIOH .0 H I H -C .0 H CH20H I . Ejemplos de cetosas de importancia fisiol6gica componente aglucona.0 H 4 -OH ~Ribosa &.~Erltrosa HQ-C -H I HO-C .

{>proteínas S fosfatus de rihiisa !Fon intcrm rios en la i de la peintosn fosfa [la . Import:ancia bio~uírnica (ii&zi :mentas es1:ructuraIcs de los acidl ..rvteintis . Jugo : ar" del 1Prescntc cnI la orina (E "lm.Cuadro 15-2. Es un constituyente de Ios gluD-1 imposibilidad de metaboizarla caiisa galact oscmia y :ataratas Hidrblisis del mank y gomas Es un ctinsliiuyente de muchas vegetales glucoproteinas . Tambien se encuentran como un carbohidrato de glucoproteinas en forma de desoxi id-fucosa (figura 1 5-1 7 ) y la 2-desoxiglucesa es un inhibidor impartante del metnbolisma de la glucosa. es iin inxcrrn rinuiusa ) dia. . - - ---.m0 1 I ' iterrnediario en la via aer aciao urnnico ae encucnira en ia orina cn l a -pentosuria cscncial "" T. 3) - 1 del azúcar de cziaa y de la i nulina con v k i r ~ i e iglucosa J (pro1cedente de la alcachi]fa de foirma In lisa iel organisn Jem~ fructuosa r:ondiice a Iación dc c:cte cnrbrih 1izipogluceniia - Hidr ólisis de la zada cn las glándulas mamwias para formar la lactosade la leche.inos un constit!~ y e n t cde u la cual ha Sido aislada diaco hum.. ...- eicos YnbnbU.sus I f i i fosl'ato de : . maltosa y la lac - insporta leI sangre y el que incipalmente usan los tejidos r de In g1ucosa santesgluce~ni. 1 rormada cn los nroce.-- ente - I - - 3 lucosa .rio en la vi a de la pcntosa fosfati 1 rnetüb6licos . . - -- -. la D-galactosamina y la D-ma- Cuadro 15-3. Los aminoazúcares (hexosaminas) son componentes de glucoproteinas.e las coen7imaq com 'P. Pentosas de importancia fisiolbgica . NAD. Un ejemplo es la desoxirribosa (figura 1 5-1 1) que existe en los hcidos nucleicos (DNA). llav..lai~n~ A ..m A de hidrógeiio. --.. gangliócidos y glucosami nog lucanos Ejemplos de aminoazúcares con la r~-glucosarnina (figura 15-12). nsiiluyente dc glucop. 1 ... . Aexosas de importancia Tisiolligica -A.. ciruela Y de rd ~ G I C L ~ ~ v e gel iomas nstituyenie de glucop eptidogliucnnos Iiicosamint)gluc. f U'ADP.

. A menudo se le designa como almidón animal. La hidrblisis de la sacarosa da una mezcla cruda que se denomina "azucar invertida" debido a que la fnictosa que se produce es fuertemente levorrotatoria y cambia (invierte) la previa accibn dextrorrotateria de la sacarosa. Estreptomicina (izquierda) y ouabalna (derecha). y la amilopectina (S0 a 85%). Se cree que los aminoazUcares están relacionados con la actividad antibidtica de estos medicamentos. que consiste en cadenas muy rarnificadas.COO- H 5 HOCH. las legumbres y en otros vegetales. Los disachridos fisiológicamente importantes son maltosa. Varios antibióticos como la eritromicina y la carbomicina contienen aminoazúcares. sacarosa. La glucosarnina es un constituyente del ácido hialurdnico. Compuesto que siilo produce glucosa en la hidrólisis. Figura . alfa-o-Glucuronato (izquierda) y beta-L-iduronato (derecha) Figura 15-17. Los dos constituyentes principales del almid6n son: la amilosa (15 a 20%) que tiene estructura helicoidat no ramificada (figura 15-14). de 24 a 30 residuos de glucosa unidos por enlaces 1 -+ 4 en las cadenas y por enlaces I + 6 en los puntos de ramificación. trehalosa y lactosa (cuadro 1 5 4 ) . Su nombre quimice refleja sus componentes monosacáridos. SACAROSA Y LACTOSA Los disacáridos son azucares compuestos de dos residuos de monosachrido unidos por un enlace glucosidico (figura 15-1 3). 2-Desoxi-D-ribofuranosa (forma beta) nosamina. La galactosamina o condrosamina es un componente de la condroitina (capitulo 57). Figura 15-9. Constituye la fuente más importante de carbohidrato$ de los alimentos y se encuentra en los cereales. las cuales han sido identificadas en la naturaleza. las patatas. El glucógeno (figura 15-15) es el polisacárido que se almacena en el organismo animal. LOS POLISACARIDOS TIENEN FUNCIONES DE ALMACENAJE Y ESTRUCTURALES Entre los polisachridos figuran los siguientes carbohidrato~ son lisiol6gicamente importantes: que El almidón esta formado por una cadena alfaglucosídica. es un homopolímero denominado gIucosano o glucano.15-10. Es una estructura mucho más ramificada que la arnilopectina con cadenas de 12 a 14 residuos de alfa-D-glucopiranosa (con enlaces glucosidicos alfa-D-f l -% 41) y ramificaciones LOS DISACARIDOS MAS IMPORTANTES SON MACTOSA.

Químicamente.g l u c o s a m i n a unidas por enlaces beta (1 -r 4)-glucosídicos (figura 15-I6). como la mayor parte de los demas azucares. ya no muestra propiedades reductoras. Los glucosaminogiucanos ~mucopolisac~ridos) están constituidos por cadenas de carbohídratos complejos que se caracterizan por su contenido en aminoazúcares y iicidos urónicos. es auxiliada por el gran número de grupos 4 H y de cargas negativas de las molkculas. están relacionados LACTOSA HH O H O Q H H oH H H Figura 15-13. Su propiedad de retener grandes cantidades de agua y de ocupar espacio. Se encuentra. en los exosqueletos de los crustáceos e insectos. por ejemplo. hay microorganismos que pueden atacar el enlace beta. haciendo a la celulosa accesible para usarse como fuente energktica importante. Las dextrinas son sustancias que se producen durante el proceso de desintegración liidrolítica del a l m i d ~ nLas . A l igual que la sustancia fundamental o de envoltura. el residuo se convierte en un glucósido conocido corno furanósido o piranbsido Como el azúcar ya no tiene carbono anomerico con un grupo libre potencial. glucoproteinas. L a celulosa no puede ser digerida por numerosos mamíferos. La inulina es un alrnidhn que se encuenbaen los tuMrcu los y raíces de las dalias. La celulosa es el principal constituyente del armazón de los vegetales. con elementos estructurales de los tejidos como el hueso. las cuales por repulsión conservan separadas a las cadenas de carbohidrato. Glucosamina (2-amino-o-glucopiranosa) (forma alfa) La galactosarnina es E 2-amino-o-galactopiraa noca Tanto la glucosamina como la galactosamina a menudo se presentan como derivados N-acetilo en carbomas complelos. Por hidrólisis se obtiene fructosa y por tanto es un h c tosano. Este almidón diferente: al de la patata es fácilmente soluble en agua caliente y se usaen fisiología para determinar la velocidad de filtración glomenilar. incluso el ser humano debido a la ausencia de una hidrolasa que ataca al enlace beta. el sulfato de . dextrinas son los primeros productos que se forman cuando la hidrdlisis alcanza un cierto grado de las ramificaciones. la quitina está formada por unidades de h c e t i l .~ . aldehido o cetona. No es soluble en los solventes ordinarios y consiste en unidades de beta-D-glucopiranosa unidas por enlaces beta (1 + 4) para Fomar cadena rectas. En el intestino de los rumiantes y otros hcrbivoros. alcachofas y dcl diente de león. es fuente importante del "volumen" en la alimentación. largas. reforzadas por enlaces cruzados de puentes de hidrógeno. La quitina es un importante polisacárida estructural de los invertebrados. Por tanto. por ejemplo. Estructuras de disacáridos representativos Los simboloc alfa y beta se refieren a la configuración en el átomo anomériw de carbono (*) Cuando el carbono anormerico del segundo residuo toma parte en la formación del enlace glucosidim. la elastina y la colhgena. hidrato~ SACAROSA unidas por medio de enlaces glucocidicos al fa (1 +6). el compuesro se conoce como un proteoglucano. Cuando estas cadenas se unen a una molicula de proteína. Este proceso puede tener lugar a un grado limitado en el colon humano. Ejemplos son el ácido bialurbnico.17 Rioquírnicu de Hurper 2 MALTOSA (Capitulo ISI Figura 15-1 2. acojinando o lubricando otras estructuras.

Estructura del almidón. por ejemplo.Cuadra 15-4. las lipoproteinas lipode baja densidad (1.DL del ínglks. el análisis de componentes de membranas celulares de los marniferos indica que aproximadamente 5% de ellos son carbohidratos. A: Amilosa. LOS CARBOHIDRATOS ESTÁN PRESENTES EN LAS MEMBRANAS CELULARES Y EN LAS LIPOPROTE~NAS La estructura lipídica de la membrana celular se describe cn los capítulos 16 y 43. flatulenci: Jcar princ ipal de l a condroitina y la heparina (figura 15-16}. kwahorias En la deficiencia de sacarosa. Disachridos -. la glucosa no se encuentra en las glucoproteinas maduras y. Los carbohidratos constituyentes se listan en el cuadro 15-5. caTecen de acidos urónicos. iow-de~sifv proleiris). Sin embargo. B: Amilopectina. incliiyendo las membranas celulares (capítulos 43 y 56). u""-- " .n la deficienciade Iactasü. Las gliicoproteínas (mucoproteinas) existen en muchas condicianes diferentes en los líquidos corporales y en los tejidos. Pifia. Su existencia en la superficie externa de la membrana plasmática (el glucocáliz) ha sido de- Figura 15-14. la rnalabsorciiiii . - " -LA Fuente A - + - clínica n can arnilasa n hir 1 piicdc apnirccer eri l a I. Los ácidos siBlicos son constituyentes de gliicoproteínas y ganglicísidos(capítulos 16 y 56). ramificadas o no. """"" " " " . descritos con detalle en el capítulo 57. Estas se denominan cadenas oligosacáridas (aun cuando en ocaciones pueden exceder de 10 unidades). al contrario de los glucosaminoglucanos y peptidoglucanos. flatulencia Zzúcar de caria y betabcl. mostrando F estructura helicoidal. Sorgo. mostrando un punto a de ramificación 1+ 6. Excepto en la colágena. Los gangliosidos tamhien son glucolípidos. El hcido neurzimínico es un aziicar de nueve carbonos derivado d e la manosarnina (un epimero de la glu- cosamina) y piruvato. Son proteinas que contienen carbohidratos en diversas proporciones adheridos en fonna de cadenas cortas o largas (hasta 15 unidades). Los acidos siirlicos son derivados N-acilo u Oacilo dcl icido neuraminico (figura 15-18). sii nialahsorciún crinduce a diarrea \. Los cm-bohidratos también estan presentes en algunas lipoproteinas.u" . . presentes como glucoproteínas y glucolipidos.

. Tiene una masa rnolecular de 1' Da y consta de cadenas polisacaridas cada una de las cuales contiene alrededor de 13 residuos 0 de glucosa. Las cadenas son ramificadaso no ramificadas y se agrupan en 12 capas conoéntricas (enla figura sdlo se muestran cuatro).c. dejando porciones polipeptidicas libres tanto por el lado externo como por el interno (citoplismico) de la superficie. . 15-18). xosas a( M 4 osa (Gal) RESUMEN 1) Los carbohidratos son constituyentes principales del alimento y los tejidos animales.. . . Acetil hexr samin. .. Las cadenas ramificadas (cada una tiene dos ramas) se localizanen las capas interiores y las cadenas no ramificadas en la capa externa (G. figura predominante C)rlmii A. . Carbohidsatos que se encuentran en las g:lucoprot1eínas -. La molécula es una esfera que se aproxima a los 21 nm de diámetro y puede visualizarse en el microscopio elecirbnim. La glucoforina es la mas importante glucoproteina integral de la membrana de los eritrocitoc humanos.1 74 Binqztitnica de Harper (Capitulo I 5) Figura 15-5. . is Derivados K-acilc1 del ácidom Ineurhico p r ejt:mplo. .h7-aceti'. . ntosas tilglucosmiina (GlcNAc) iilgalactosíimina (GalNAc) Arabinosa (Ara) neurhico.. glumgenina. Tiene 130 residuos de aminohcidos y se extiende por la membrana Eipidica.. la primer molécula de la sintesis del gluc6geno) mostrada con el empleo de las lectinas. - Cuadro 15-5. . Pueden caracterizarse por el tipo y número de residuos monosac8ridos en sus mol&culac. 2) La glucosa es el carbohidrato m b importante en la bioquirnica de los mamíferos debido a que casi todo el carbohidrato de los alimentos se convierte en glucosa por metabolismo adicional. hciilo. Molecula de glurkgeno A: Estructura general B: Amplifimcibn de la estructura en un punto de ramificación. 1 . 3) Los azúcares tienen un número elevado de estereoisbmeros debido aque contienen varios Atomos de carbono asjmétricos.. la concanavalina A tiene especificidad hacia r e s i d u o s alfa-glucosilo y alfa-manosilo. e l ácido sialico . vegetales que se fijan de modo especifico a ciertos residuos glucosilo. Las cadenas de carbohidrato únicamente están adheridas a la porcion arnino terminal del lado externo de la superficie de la membrana (capitulo 43). Por ejemplo. .

respectivamente. 7) Las carbohidmtos complejos contienen otros derivados como aminoazúcares. constituyente importante de nucleótidos y dcidos nucleicos. intermedio importante en la digestión de alrnidbn y glucdgeno. 6 ) El almidón y el glucógeno son polimeros de almacenaje de glucosa en vegetales y animales. incluyendo la membrana celular. ácidos ur6nicos y ácidos sialicos. hnico azticar encontrado en la leche y que contiene galactosa y glucosa. que son elementos estructurales de los tejidos y glucoproteinas. Estructura de algunos polisacaridos complejos y glucosaminoglucanos. irnportante como constituyente dietktico que se compone de h c l o s a y glucosa. que son proteínas que tienen adheridas cadenas de oligosacáridos. y ribosa. se encuentran en los organismos en numerosas ubicaciones. 4) Los monosacaridos de importancia fisiológica cm- H HN*CO*CH - H OH Condro~tin 4-sulfato [Nofa: tambien hay 6-sulfatoj HOCHZ incluyen glucosa. un lcido siálico (Ac = CH3-CO-). Incluyen a proteoglucanos y glucosaminoglucanos. y lactosa. beta-L-Fucoca(6-desoxi-p-L-galactoca) Acido hlalurónico HOCH. Estructura del Bcido N-acetilneuraminico.Quitina Figura 15-77. Son fuentes importantes de energia de la alimentación. Flgura 15-1 8. que es el "azúcar sanguíneo". sacarosa. . I H OH Acido B-glucurónico Suifato de N-acetiigaiactosamina Heparina Glucosamina sulfatada Acido idudniw sulfatado Figura 15-1 6. 5) Los disacaridos de importancia fisiolhgica son rnalíosa.

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alcoholes diferentes al glicerol y los esteroles. y los Iípidos no polares actúan como alslantes clkctricos que permiten la propagacion rápida de las ondas dcspolñrizantes a lo largo de los nervios rnielinizados. 3) Lipidos precursorm y derivados: Incluyen ácidos gracos. vitaminas Eiposolubles y hormonas. c e r a y compuestos relacionados. las grasas sirven como una fuente eficiente. el colesterol y los esteres de colestenlo sc IIaman Iípidos neutros. a. los lipidos incluyen grasas. . Los lipidos son constituyentes importantes de la alimentación no cOlo por su elevado valor energitico. b. obesidad. esteroides. por ejemplo. por ejemplo. El contenido de lipidos en el tejido nervioso es particularmente alto. por sus propiedades físicas. También las lipoproteinas pueden colocarse en esta categoría. el cloroformo y el benceno. Ceras: Esteres de icidos grasos con alcoholes rnonohidricos de peso molecular más elevado. Debido a que no poseen carga eleictrica. Crasas: h t e r e s de hcidos grasos con glicerol. La siguiente clasificaci6n de los lipidos modifica la de Eloor: 1 ) Lípidos simples: Ésteres de hcidos grasos con diversos alcoholes. Mayes. un residuo de acido fosfdrico. Asi. PhD.Lípidos de importancia fisiológica Peter A. a. esteroides. aldehidos de las grasas y cuerpos cetónicos (capitulo 241. en Ios glicerofosfolipidos el alcohol es el glicerol y en los esfingofosfolípidosel alcohol es la esfingosina. glicerol. b. Los lipidos y proteínas combinados (Iipoproteínas) son constituyentes celulares importantes que se encuentran en la membrana celular y en las rnitocondrias y sirven tambien como medios para transportar Iípidos en la sangre. los acilgliceroles (acilglicéridos). 2) Lipidos complejos: Ésteres de ácidos grasos que contienen otros grupos quimicos además de un alcohol y del Acido graso. hidrocarburos. Tienen la propiedad corntín de ser: 1 ) relativamente insoliibles en agua y 2) solubles en los solventes no polares como el Mer. real o potencialmente. aceites. Unagrasaen estado iiquido se conoce como aceite. c. sino tarnbiin por las vitaminas liposolubles y los ticidos grasos escnciales contenidos en lagrasade los alimentos naturales. Con frecuencia tienen bases nitrogenadas y otros sustituyentes. esfingosina y carbohidratos. Glucolipidos (glucoesfingolípidos): Lipidos que contienen un ácido graso. DSc LOS L~PIDOS CLASIFICAN SE COMO SIMPLES O COMPLEJOS Los Iípidos son un grupo heterogéneo de compuestos emparentados. Fasfolfpidos: Lipidos que contienen ademhs de hcidos grasos y un alcohol. aterosclcrosis y la fincibn de varios Acidos grasos poliinsaturadris en la nutrición y la salud. Otros lipidos complejos: Lipidos como sulfolipidos y aminolípidoc. El conocimiento de la bioquirnica de los Iípidos es importante en la comprension de muchas áreas biomkdicas de interés. IMPORTANCIA BIOMÉDICA En el cuerpo. directa y potencial. mis que por las químicas. Sirven como aislante t&rmicocn los tejidos subcucaneos y alrededor de ciertos organos. de energía directa cuando están almacenadas en el tejido adiposo.

-COOH) que sería el primer miembro de la serie en la cual se adicionan progrer~vamente --CH?entre Ins grupos 4 O O H y el CI1..311b1lllaliCLI* IiIIIICLU. [ " - < Cuadro 16-1. el carbono metiiico terminal se conoce como carbono omega o carbono n..LOS ÁCIDOS GRASOS SON ACIDOS CARBOXFLICOS ALIFÁTICOS Los ácidos grasas existen en grasas y aceites naturales en gran parte como ésteres. Se sabe que existen otros miembros de esta.. * r.... Ácidas grasos saturados Numei -. at el.cn.. conduciendo a Eses series de &cidos grasos. Los ritornos de carbono se numeran a partir del carbono mrboxilico(carbonoNo. 1). y los ácidos insatiirados cnn dobles ligaduras terminan en -cnoico. . Así. -.. CLllllcn)CU dra dt:palma.- en mucnas grasas (iiiilla): cspccliil- vegetal .. conocidas como las familias 09. Los que existen en las grasas naturales generaln~ente contienen un níimero par de átomos dc carbono porque sc sintetizan a partir de unidadcs de 2 carbonos. Nuez 1. 3 y Nci.. el ácido octadecenoico (Acido oleico}. La cadena puede ser saturada (esdecir.. :quilla mes cn totins Iss Erasas -is) ' Figura 16-1..c[ric[amcntc...termina1. pero se les encuentra sin esterificar como acidos grasos libres. nianteq .. TarnbiCn se forma en el ciego de los hcxbívor'os y cii menor cantidad en el colon de seres hurnni 10s. Al átomodecarbono adyacente al carbono carboxilico (No. " Nombre común se basa en poner al icido graso el nombre del hidrocarburo con el mismo número de átomos de carbono.. por ejemplo. Ejemplos de los ácidos de esta serie se muestran en cl cziadro 16-1. Fhrmice* Acftico 2 1 Principal producto final de rilmcllt u i i vlVLIUbLU Interviene en cl metabiilisrno de las unidddes *'Cl (fomiato) " Li .arhnhidra tos rumen .&. modalidad plasmritíca de transporte. Se usan varios convencionalismos para indicar el numero y I A posicibn de las dobles ligaduras...:.. w6 u w3) y el carbono del carboxilo. Los acidos grasos se denominan de acuerdo a los hidrocarburos correspondientes a noinenclatura cistemhtica usada mis frecuentemente . por ejemplo. recpcctivamente. A'5ndica una doble ligadura entre Ios &tomos de carbono 9 y 10 del hcido graso.. 2) 5e le conoce también como el carbono alfah1. ' fcrmc:ntacion di: carbohidradel tos pi31.lo iirti>baiiix.no es un aerivauo airIU1111. el símbolo m 4 indica una doble ligadiira en el noveno carbono contando desde el itomo de carbono omega. -a Cerek 1 ... por ejemplo el ácido octanoico. En los animales. sustituycndo la.. irnr criiiii~iíadcs en ciertas grasas (cspccialmente: cn la mntitcquilln) Iln producto final ri e la Ikrrnentar:ihi 7 ne carnohidratos pnr en cn peclueAas cnriti- 1 1 1 ~ ~de la fer1 rncntaciiin de (. n-9 (n menos 9) es equrvalente a (:19 iceite de ciicahiia ...noi del-. --.l* . serie con mayar número dc átomos de carbono. ciiiiiciiui o de aceites dl to. o final por la tenninacion -oico (sistema ginebrino). Acido oleim..>. las dobles ligaduras adicionales se introducen solo entrc la doble ligadura existente (por ejemplo.. .os itomos de carbono No.. sin dobles ligaduras) o no saturada (con una o más dobles ligaduras). Una costumbre in iiy difiindida consiste en indicar el número de atitornos de carbono y el número y la posición de las dobles ligaduras como se muestra en la figura 16-1... 4 son el carbono beta y el carbono gamma. . .. (119. Los acidos grasos saturados no contienen dobles ligaduras Los acidos grasos saturados teóricamente se puedcn considerar como provenientes del ácido acético (CI4.. microor - Caproico ExisTcn mi ntrlueii~x. m 6 y w3. los ácidos saturados terminan en -iinoico.

-. + 1 cir. Tambikn se han aislado algunos hcidos grasos de cadena ramificada de fkentes vegetales y animales. ..Y.6.. l r c e i i c b uc pcxauu.. -. cornponcnte A. que contienen dos o más dobles ligadurac..30. ... . . . huevo. ales - Ácidos trienoicos (tres dohles ligaduras) 18:3. higado d e bacaIao.. m...1 5 .. Ác idos grasi común ... Ácidos pentaenoiicos (cinco dobles lig 22:5...19 aceites de pescado.-..... i u ~ i v ~ ~ l i i u u s uel - Lcr voriico 1 hexanoico I uulii. cites vegct...O C ~ ~ ~ ~ C ~ Maíz.~ Z . - -. ..7...i- noico & - nolenico Todos ci... -.. prenden a los prmtanoides y los Ieumtrienos (LT). Los ácidos grasos insaturados contienen una o más dobles ligaduras (cuadro í6-2) Se pueden subdividir según el grado de insaturacihn en: 1) Ácidos monoinsaturados (rnonoetenoide.~ cacahuate.marcarda.. -% Ácirlos dienoic:os (dos .- I i ac. 3) Eicosanoides: Estos compuestos derivados de IOF Acidosm eeiosapolienoicos (20-421. do 1 h d o s cis-Y..t.. .9.19-ducuhn. monoenoico).. los cerebr IX:2.. -. .. ioico AI gunas plantas. . . semillas de alIC O~CO dhn. .%A rehro 17 16.. t ....-. . crh-. polienoioo). pul iruiiG U< los fosfolipidos en los imales . aceite i de la hierba del asno.. - Cuadro 16-2.. .. llUIrleruuiatomi~T de C y porricibn de as dobles Iligaduras .. . .16. salmiin 1 tenoico icos (seis dlobles ligniiduras) . pero ahora se sabe qiie mportencia fisiolhgica y nutricional .. 2) Ácidos poliimburadm ( p o l i o i d e . shbaio.12 gmrna-l . Las prostaglandinas fueron descubiertas originalmente en el plasma seminal. prostaciclinas (PGI) y tsomboxanos (TX). " .. Los prostanoides incluyen a las prostaglandinas (PG). I u ' - -1. " - - Yambre sir Presencia - oicos (una doble liga I casi todas las grasas isiblemente el icido graso mas rnun en las grasas naturales laidico nicico 1 o nabo j 7 a I erv6nico . . . .Lipidos de importancia fisiol6:ica J 79 en especial en las ceras... d .. . .ietracoseno .cerebro . por gempio.12 - . --.. hcido graso i mi:nor en los animales -- 1 Acidos tetrnenoicos (cuatro dobles lig 1 " " A " - C ) frecuencia se encuentra juntO cn con el áado linoleico pero en pa rtic ular en el eiceite de !iri a a m r n q u i d b Todos c i co 1 -1 encuentra en grasas animales y en aceite de i:acahuatc. . que contienen una doble ligadura. .13.. frijol de soju 1 SS . . .

existen virtualmente en todos los tejidos de marniferos y que actúan como hormonas locales. en lados opuestos. Las variaciones en los grupos sustituyentes adheridos a los anillos originan tipos diferentes en cada serie de prostaglandinas y tromboxanos. etcetera. En los ácidos grasos insaturados existe un tipo de isomeria geométrica. es s6lido a la temperaturacorporal. Esto puede tener un significado profiindo e n el empaquetamiento molecular dentro de las membranas y en las posiciones ocupadas por los acidos grasos en moleculas más complejas como los CosfoIipidos. algunos enlaces giran. dependiendo de la orientación de los átomos o grupos funcionales alrededor del eje de Ias dobles ligaduras. t'G3. con cuatro enlaces dobles crs.I. si estan . PGi. respectivamente. A temperaturas mayores. si los tres residuos de ácido graso son I&:2. tienen importaiites actividades fisiolbgicas y farmacológicas. denominados A. isómero del Acido olclico (figura 16-5). los tromboxanos. ácido araquidónico) para formar un anillo ciclopentano (figura 16-2 j. Figura 1 6 4 . Son sintetizadas in vivo por ciclización del centro de la cadena de carbono de los ácidos grasos poliinsaturados 20-C (eicosanoicos) (por ejemplo. los puntos de fusión de ácidos grasos con un numero par de carbonos se elevan con la longitud de Ia cadena y bajan de acuerdo a la insaturacion. como en el acido elaidico. por ejemplo. Por tanto. En la práctica. Una contribución pequefia adicional proviene de la íngestihn de grasas de n i rniantes que contienen ácidos grasos iruns procedentes de la acción de los rnicroorganismos en el rumen. en tanto que el tipo "F" tiene un grupo hidroxilo en esta posición. Flgura 46-2. Los hcidos grasos insaturados de cadena larga que existen en la naturaleza son casi todos de la configuración cis. se caracterizan por la presencia de tres dobles ligaduras conjugadas. el iicido oleico tiene forma de L. haciendo que la cadena se acorte. puede tener "rizos " o una forma de U. es tran~. B. Prostaglandina E2 (PGE2). Si las cadenas acilo están en el mismo lado del enlace es ~ i scomo en el ácido oleico. tienen el anillo ciciopentano interrumpido por un átomo de oxígeno (anillo oxano) (figura lb-3).jcmplo. descubiertos en las plaquetas. Por ejemplo.a mayor parte son subproductw en la saturacion de los ácidos grasos durante el proceso de hidrogenación o "endurecimieiito" de aceites naturales para fabricar margarina. PG?. corno seria el caso a temperaturas bajas. Tromboxano A2 (TXA2) La mayor parte de los ácidos grasos insaturados naturales tienen dobles ligaduras cls Las cadenas de carbono de los ácidos grasos saturados tienen un patrón de zigzag cuando se extienden. U n triacilglicerol que contienc todos los Bcidos gracos de 12 C omhc saturados. Algunos alimentos contienen hcidos grasas fraris. Los leucotrienos y las Iipoxinas son un tercer grupo dc derivados eicosanoidcs romados por la via de Ia lipoxigenasa mas bien que por ciclización de la cadena del ácido graso (figura 164). en tanto que el ácido elaidico se conserva "recto" en su doble ligadura Irunh. Tres hcidos grasos eicosanoicos diferentes daii origen a tres grupos de eicosanoides caracteri7ados por el niirnere dc dobles ligaduras en sus cadenas laterales. Descritos en un principio en los leucocitos. ácidri araquidonico. con un "doblez" de 120" en la doble ligadura. Leucotrieno A4 (LTA4) .es liquido por abajo de O "C. lo cual explica por que las biornembranas se adelgazan cuando la temperatura aumenta. El aumento en el numero de doblcs ligaduras cis en un Bcido graso conduce a una diversidad de configuraciones espaciales prisi hles de la mulécula. el tipo "E" de prostaglandina (como en PGE:) ricnc un grupo cet6nico en la posición 9. Las propiedades físicas y fisiolcigicas de los ácidos grasos están determinadas por la longitud de su cadena y por su grado de insaturación Por tanto. en tanto que. Figura 1 6 3 . Una sene análoga de compuestos. los acilgliceroles naturales contienen una mezcla de ácidos grasos que los adapta con precisión a sus funciones. La presencia de dobles ligaduras trans alterará las relaciones espaciales. por c.

Inlernaiiunal IJniun nJ Bincirerni. del inglks. por ejempIo. Un ejemplo de acilgliceroles mixtos se muestra en la figura 16-7.diacilglicernles y triacilgliceroles. 2) fosfatidi lcolina. 1. También se encuentran en los tejidos acilgliceroles parciales que consisten de mono y diacilgliceroles en los cuales dos hcidos grasos o solo uno esthn esterificados con el glicerol. los monuglicéridos. dolicol (figura 16-26). Stn embargo. 3 ) fosfatidiletanolarnina. : (Bcido oleico) Forma cis : \ II c '. 7) plasmalógenos y 8) esfingomielinas. la proporción de rnoleculas de triacilgliceroles que contienen el mismo residuo de ácido graso en las tres posiciones esterificadas ES muy pequetia. del ingles. En las grasas que se encuentran en la naturaleza. Es importante comprender que los carbonos 1 y 3 de glicerol no son iddnticos cuando se ven en tres dimensiones. 4) fosfatidilinositol. el colesterol y los alcoholes superiores (por usualmente enejemplo. en adelante como monoacilglicerciles. 4 S Ciertos alcoholes se encuentran en los Fípidos naturales Los alcoholes relacionados con los lipidos incluyen el glicerol. lsomeria geometrica de los ácidos grasoc d9. 5) fosfatidilserina. por ejemplo. . cn particular en la medicina clinica. Los lípidos de la membrana. si los tres ácidos g a s o s representados por R fueran Bcido estchríeo.I 8. se utiliza el sistema -sn(s~ereuchernreal numhering = numcraciún estereoqu imica).m-gliceroI (que se muestran GQmOuna fbmula proyectada tarnbien en la tigura 16-81. I)e acuerdv con la terminología estandarizadaactual dc la Uniún Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC. LOS TRIACILGLICEROLEC (TRIGLICERIDOC)*SON LAS PRINCIPALES FORMAS DE ALMACENAJE DE LOS ÁCIDOS GRASOS Los triacilgliceroles son &eres del alcohol glicerol y ácidos grasos. la terminología anterior se utiliza con amplitud. Los átomos de carbono 1 y 3 del glicerol no son idénticos Cuando es necesario numerar de manera inequívoca a los carbonos del glicerol. rcspcctivamentc. diferentes de las esfingomielinas. LOS FOSFOL~PFDOS SON LOS PRINC1PALES CONSTITUYENTES LIP~DICOS LAS MEMBRANAS DE Los fosfollpidoc comprenden los siguientes grupos: F j hcicido fosfatidico y fosfatidilgl iceroles. En la figura I 6 4 . son más insaturados que Ios lipidos almacenados. digliceridos y triglirkridos se designarj. Pueden considerarse como derivados del hcido fosfafidico (figura 16-9). contrados en las ceras y cl alcohol poliisoprenoide. Los Iipidos que en los tejidos están sujetos a enfriamiento.1 (Acidos oleico y elaidico). el glicerol siempre es fosforilado en sn-3 por la glicerocinasa para dar 3-fosfato de glicerol y no 1-fosfato de glicerol. Todos &tos son fosfoacilgliceroles. lnrernat~onal Union o Prwe and Applled f Chemishy) y de la Unibn Internacional de Riuquiiiiica (IUB.~tg~). pero no se encuentra en gran cantidad en los tejidos. las cuales no contienen glicerol. que deben ser líquidos a todas las temperaturas ambientales. son más insatusados. Estos son de particular importancia en la síntesis e hidrolisis de los triacilgliceroles. Casi todos son acilgliceroles mixtos. en donde el fosfato se esterifica con el . El ácido fosfatídico es muy importante como intermedio en la síntesis de triacilgliceroles y fosfollpidos. por ejemplo. en hihernadores o en las extremidades de animales. C L ~ H ~ ~ Q H ) . la grasa scrla la triestearina. 6j lisofosfolipidos.3-distearil-2-palmitil-. Las enzimas los reconocen con facilidad y son casi siempre especificas para uno u otro carbono.0 H del alcohol adecuado. ("H Y' coo - Figura 16-5.Lipidos de importancia fisinlb~ica 18J puesto que se forma por tres residuos d e acido estearico esterificados por el glicerol. alcohol cetílico.

se encuentra en la mayor parte de los tejidos (figura 16-13). el cual n su vez. II T H . Son los fosfolipidos m6s abundantes de E a membrana celular y constituyen la reserva corporal mhs importante de colina. Triacilglicerol. El 4. que contiene al aminokcido serina en lugar de ebnolamina. de las superficies internas de los pulmones. La Fosfatidiletanolamina (cefalina) difiere de las lecitinas s61o en que la etanolamina reemplaza a In colina (figura 16-12). Figura 16-6. con la estimulaci6n por un agonista hormonal apropiado.O-CH CH.2 0 Bioauimica de Harner (Capítulo 16) O O 'CH. Las fosfatiditcolinas (lecitinas) se encuentran en las membranas celulares Éstas son fosfogliceroles que contienen colina (figura 16-1 1 ).3-Diectearopalmitina. Figura 16-7. Acido fosfatidico. la mayor parte de los! fosfolipidos tienen un radical acilo saturado en la posicidn an-1 y un radical no saturado en la posición sn-2 del glicerol. la lisolecitina que es importante en el metabolismo y en la interconversibn de los fosfolipidos (figura 16-1 5).I I II C-Rl R2- C .18. . .Hifosfato de fosfatidilinositoE es un constituyente importante de los fosfolipidos de la membrana celular. II R. También se han aislado fosfolipidos que contienen tresnina.O-C-R. Esta última se requiere como neurotransmisor y para almacenar grupos metilo libiles. Su ausencia en los pulmones de los Iactantesprernaturos causa el sindrome de insuficiencia respiratoria.0 I R Los lisofosfolípidos son intermedios en el metabolismo de fosfogliceroles Estos fosfoacilgliceroles contienen s61o un radical acilo. se separa en diacilglicerol y trifosfato de inositol. Triacil-snglicerol O O rl CH. 0- Figura 16-9. por ejemplo. I H$- O .C-R. . -C -O 261-1 O I II La cardiolipina es el principal Iipido de las membranas mitocondriales El hcido fosfatidico actúa como precursor del fosfatidilglicerol. actuando ambos como sefiaies internas o segundos mensajeros (capitulo 44). La fosfatidilserina.P . O lf E! fosfatidilinositol es un precursor de segundos mensajeros El inositol se halla como el estereois6mero mioinositol (figura 16-1 4). Sin embargo. da origen a la cardiolipina (figura 16-1 0) en las rnitocondrias. 1.O . -O-C-R. Figura 16-8. La dipalmitil-iecitina es un agente activo de superficie muy eficaz y el principal constituyente de los surfactantes que impide la adherencia debida a la tensión superficial.

Cardiolipina (difocfatidilgiicerol) Los plaamalógenos se encuentran en el cerebro y los músculos o II lp. Figura 16-1 2. Colina F H 3 O- c Figura 16-1 1. la serina o el ínositol pueden sussituirse por la etanolamina. .O-P HHa+ FI -0-CHp-Ctl-C00I o- F C Serina Y Fígura 16-1 3. 14 II 'yH2 -O-C -R1 FH. Por hidrólisis de las esfingomielinas se obtienen un hcido graso. En ocasiones la colina. R r C -02CH 9 T H . hcido fosfbrico. colina y un aminoalcohol complejo. 3-Fosfatidilcolrna Estos compuestos llegan a constituir hasta 10% de los fosfolípidos del encefalo y del músculo. \CH. 3-Fosfatidilserina.o -%tiI .3-Fosfatidiletanolamina. la esfingosina (figura 16-17). -0-7 -O-CI I i. los plasmalogenos semejan a la fosfatidiletanolamina. Figura 16-14. Estructuralmente. N o hay glicerol. La combinación de la esfingosina con un Acido graso se conoce con el nombre de ceramida.NHi Etanolamina J Las esfingomielinas se encuentran en grandes cantidades en el endfalo y tejido nervioso. Las esfingomielinas también se presentan en el sistema nervioso u l7HI -O-C-Rl RrC-OLyH >CHl -O-P 11 f 1 -O-CH2* O- CH.CH.-O-C-R.Fosfatidil acilglicerol Diosfatidil acilglicerol (cardiolipina) Figura 16-10. pero poseen un enlace éter en el carbono SPI-1 en lugar del enlace &ter normal que se encuentra en casi todos los acilgliceroles. estructura que también se encuentra en los glucosfingo1 ipidos (vkase adelante). Clasicamente el radical alquilo es un alcohol insaturado (figura 16-1 6). 3-Fosfatidilinositol. c .

2-CH= CH-CH-CH-N-C- o 11 CH(0H) . que abunda en la mielina.). una molécula de glucosa. La glucosilceramida es el glucoesfingolipido sencillo predominante en los tejidos extraneurales. pero también existe en el cerebro en cantidades pequefias. La galactosilceramida es un glucoesfingolipido mayoritario del cerebro y otros tejidos nerviosos. capitulo 15) es el principal &ido siálico encontrado en los tejidos humanos.(CH2)2i-CH. Los dos más sencillos son galactosilceramida y glucosilceramida. Plasmalbgeno (fosfalidaletanolamina) Ceramida Acido fosfórico I O=P-0 I 1 0 graso - O-CH. Contienen ceramida y una o mas anicares. Lisolecitina. .lI.jidos es Gw.O-C-R 7 LOS GLUCOL~PIDOS (GLUCQESFINGOL~PIDOS) TIENEN IMPORTANCIA EN TEJIDOS NERVIOSOS Y EN LA MEMBRANA CELULAR Los glucolipidos están distribuidos ampliamente en cada tejido del cuerpo. en particular en el tejido nervioso (como en el cerebro). Un ganglidsido es un glucoesfingolipido que contiene adernh una o más moléculas de un ácido sihlico. se encuentran en la capa extenia de la membrana plasmática donde forman partc de los carbohfdratos d e la superficie celular. Estructura de galactosilcerarnida (galactocerebrbcido.CH2. En especial. Colina + Figura 16-1 7. Una esfingomielina f OH \ 1 CH. El gangliósido m8s simple en los te. R = H) y sulfogalactosllceramida (un sulfato. pero se encuentra en cantidades relativamentebajas en el resto del cuerpo. R = ~ 0 4 ~ 7 . Los gangliósidos son glucosfingolipidos complejos que se derivan de la glucosilceramida. La galactosilceramida (figura 1 6-1 8) puede convertirse a sulfogalactosflceramida (el sulfato clasico). una mol&culade Colina Figura 16-15. Ácido graso por ejemplo. El ácido neurarninico (NeuAc.-(CH. Etanolamina Figura 16-1 6.-CHyN(CH. Al parecer tienen funciones de receptor y otras. Bcido cerebróniw H I Galactosa O-CH. Los gangliosidos están presentes también en el tejido nervioso en concentraciones altas. Figura 16-18. Contiene cierto número de acidos grasos C:r caracteristicos. que contiene ceramida. La glucolipidos principales en los tejidos animales son los glucoesfingolipidos.

un que galactosa y una molCcula de NeuAc. Las cadenas laterales de metilo sc señalan como ligaduras sencilIas libres en el extremo (metilo) final. En los esteroides que se encuentran en la naturaleza. no es un anillo bencénico. sitosteroles del reino vegetal y algunos alcaloides. Es impartante Debido a la asimetría en la molécula esteroidea con posibles numerosos estereoisómeros Cada uno de los anillos de seis carbonos del núcleo del esteroide es capaz de existir en la conformacibn tridimensional de "silla" o de "barca" (fígura 16-2 1). Figura 16-21. hormonas suprarrenales. los anillos pueden ser crs o trans (figura 16-22). Esto sucede clásicamente en las posiciones 10 y 13 (constituyendo los atomes de CIs y Cis). M es una especie que contiene un monosialice y el subindice tres es un numero arbitrario asignado con base en SU migración crornatográfica. es decir. etcétera. en bioquimica también tiene importancia debido a que es precursor de un gran numero de esteroides igualmente importantes que incluyen ácidos biliares. El nicle0 esteroide. se trata dc un esterol y el nombre termina en -1. rnonosfa10gangl1~sido es el receptor en el intestino humano para la toxina del cólera. (3 representa al ganglibsido.Ceramida-Glucosa4alaciosa-A-Acetilgalaosa (Acilesfingosina) NeuAc oí I Cer-Glc-Gal-GalNAc-Gal NeuAc I Figura 16-19. Respecto uno del otro. al cual se une un anillo de ciclopentano (anilla D). Otros ganglibsidos pueden contener de 1 a 5 moléculas de Bcido sihlico. hormonas sexuales. muestra en la figura 16-19. En la nomenclatura abreviada que se utiliza. glucósidos cardiacos. trisialogangliósidos. como sucede en el colesterol. Conformaciones de los estereoisdmeros . LOS ESTEROIDES DESARROLLAN NUMEROSAS ACTIVIDADES FISIOLÓGICAS IMPORTANTES El colesterol es quizá el esteroide mejor conocido debido a su relación con la aterosclerosis. Ilamado GM~. Gangliosido G M ~ . No obstante. un simple anillo hexagonal denota 1 de 6 carbonos completamente saturado. B y C). El GMIes se un compuesto de considerable interés biolbgico ya que se sabe es el receptor en el intestino humano para la toxina del colera. Es comun una cadena lateral cn la posicihn 17. Todas las dobles ligaduras se muestran como tales. con todas las valencias satisfechas con ligaduras de hidrógeno a menos que se sefíale de otra manera. Todos los esteroides tienen un núcleo ciclico semejante al del fenantreno (anillos A. virtualmente todos los anillos estan en forma de "silla" que es la conformaci6n m8s estable. La estructura de un gangliósido más complejo derivado de GVI. dando origen a di-. Si el compuesto posee uno o m i s grupos hidroxilo y carece de grupos carbonilo y carboxilo. comprender que en las fórmulas estructurales de los estcroidcs. vitaminas D. Las posiciones de los carbonos en el núcleo esteroide se numeran como se muestra en la figura 16-20. Forma de "silla' Forma de "barca" Figura 16-20.

Las ligaduras que unen grupos de sustitucion por arriba del pIano de los anillos se indican con líneas negras continuas (beta). Figura 16-24. por las bacterias intestinales. Los poliprenoides comparten el mismo COrn~UestQ precursor que el Aunque estos compuestos no son esteroides. pero especialmente en las del teiido nervioso. un miembro de Figura g6-23. cuando se esterifica el grupo hidmilo de la oosicibn 3 con un acido graso de cadena larga. están relacionados debido a que se sintetizan al igual que el colesterol (figura 28-2) a partir de unidades de isop p n o de cinco carbonos (figura 16-25). . A menudo se encuentra combinado con ácidos grasos como &ter de colesterilo. mientras que es cis en un ecteroide Sbeta. de la doble ligadura entre los carbonos 5 y 6 del colesterol. El ergosterol es un precursor de la vitamina D El ergosterol existe en vegetales y levaduras y es importante por ser precursor de la vitamina D (figura 96-24). El coprosterol se encuentra en las heces El coprosterol (coprostanol) existe en las heces como producto de la reducción. El colestro! es un constituyente importante de numerosos tejidos El colesterol (figura 16-23) se encuentra ampliamente distribuido en todas las cdlulas del organismo. pero no en las vegetales. Los grupos metilo unidos los C i n y CI3 esthn invariablemente en la configuración beta. Colesterol. Existe :n Ias grasas animales. 3-htdroxi-58-colesteno.Figura 16-22. Aquélla entre B y C es trans y la unión C/Des truns excepto en los gluc6sidos cardiacos y los venenos de sapo. A La union entre los anillos A y B pueden ser cis O trans en los esteroidec que se encuentran en la naturaleza. Ergosterol. mientras que aquellas que unen grupos por abajo lo están con líneas punteadas (al fa). El anillo A de un esteroide Salfa está siempre en la forma trans con respecto al anillo B. Núcleo generalizado de los esteroides que muestra (A) una mnfiguracibn trans total entre andlos adyacentes. y (E) una configuración cis entre los an~llos y B. Cuando sc irradia con luz ultravioleta adquiere propiedades antirraquiticas debido a la abertura del anillo B (figura 5 3 4 ) . Es un constituiente de mayor importancia de la membrana celular y de las lipoproteinas plasmaticas. En el10s se incluye la u biquinona (capitulo 14).

~a pperoxidaci6n lipidica es una reacción en cadena que produce un suministro continuo de radicales libres que inician la peroxidacibn poste- R' + 0 2 + ROO' ROO' + RH -+ ROOH + R. la cadena respiratoria en la mitocondria y el alcohol de cadena larga. 1. Cgs. la peroxidación de los lipidos es una reaccidn en cadena ramificadora con efectos potencialmente devastadores. dolicol (figura 16-26).Lípidos de in?portanciafisioIOgica 187 Figura 16-25. E y K.OH' ) producidos durante la formación de peróxido a partir de Qcidos grasos que contienen enlaces dobles de grupos metiIenos interrumpidos. usan los anbioxidantes. enfermedades inflamatorias. rior.l P + H' X'+KH+R0+XH LA PEROXIDACIÓN DE LOS L~PIDOS UNA FUENTE ES DE RADICALES LIBRES La peroxidación (autooxidacibn) de los Iípidos expuestos al oxígeno es la causa no sólo del deterioro de los alimentos (sancidez). Figura 16-27. D. el alcanfor. que toma parte en la síntesis de glucoproteínas transfiriendo residuos de carbohidratos a residuos de asparagina del polipkptido (capitulo 56). tanto los seres humanos en sus actividades como la naturaleza. Para controlar y reducir la peroxidacion lipídica. ROO* -LvH H H Al& / :H km Hidroperbxido ROOH +Rm H H Malondialdehldo. . aterosclerosis. RO' . Dolicol a alcohol de 95 carbonos. t o s efectos deletéreos se inician por los radicales libres (ROO'. El malondialdehldo es el único compuesto formado por los Bcidos grasos con tres o mBs dobles ligaduras y se emplea como una medida de la peroxidacibn de los Ilptdos junto con el etano del carbono 2 terminal de los hcidos grasos omega3 y el pentano del carbono 5 terminal de los ácidos grasos omega6. Figura 16-26. etcétera 3) Terminación: ROO' + ROO* -+ ROOR + 0 2 ROO'+ R" +ROOR R' + R ' + R R Puesto que el precursor rnolecular para el proceso de inicio es generalmente el producto hidroperoxido ROOH.. El proceso completo puede ilustrarse como sigue: 1) Inicio: ROOH + metal(")++ ROO' + metal(".os compuestos isoprenoides derivades de los vegetales comprenden el hule. Unidad isoprenica. es decir. El galato R R m R. envejecimiento.donde pueden ser una causa di*chncer. y el beta caroteno (provitamina A). de los Acidos grasos poliinsaturados que se encuentran en la naturaleza (figura 16-27). las vitaminas liposolubles A. Peroxidadón de los lipidoc La reaccidn se inicta por la luz o por ionec metálicos. etcetera. sino tarnbidn del daflo a los tejidos rn vivo.

La peroxidacion rn vivo se cataliza tam bien por los compuestos hemicos y por las lipoxigenasas que se encuentran en plaquetas y leucocitos. y Ia formacibn de micelas mixtas con las productos de la digestión de las grasas son importantes para facilitar la absorción de lipidos en el intestino.del inglés. contienen grupos polares. particularmente cuando se combinan con anticuerpo5 específicos de los tejidos. Los antioxidantes interruptores de la cadena son a menudo fenoles o aminas aromat icas. algunos fosfelipidos. Separaciónde las principales clases de Ifpidos por cromatografia en capa fina. Q L ente del ente Triscilglicerolea l t Ácidos grasos libres Colesterol 1. y la vitamina E. hu~latedhydroxy~nluene) antison oxidantes usados como aditivos en los alimentos. micelas. que reducen la velocidad de iniciación de la cadena y 2 ) los interruptores de la cadena quc interfieren con su propagación Los antioxidantes preventivos incluyen a la catalasa y otras peroxidasas y reaccionan con ROOH y con quelantes de ionec metálicos como el dietilentriaminopentaacetato (DTPA) y etilendiaminotetraacetato (ED'I'A). Antes de aplicar estas técnicas a los tejidos húmedos. se han reemplazado en gran parie por procedimientos cromatograficos. Tienen uso clínico potencial. destilacion y extracción por solventes. LOS L~PIDOS ANFIBÁTICQS SE ORIENTAN POR S! MISMOS EN LAS ENTERFASES ACE1TE:AGUA Forman membranas. Los agregados de salec biliares en micelas asi como Iiposomas. los lipidos son insolubles en el agua puesto que en SU contenido predominan los grupos no polares (de hidrocarburos). que actúan en la rase lipídica para atrapar a los radicales ROO' (figura 53-9). En las interfases aceiteagua se orientan con el grupo polar en la fase acuosa y el no polar en la fase oleosa. Particularmente util para la separación de las diversas clases de lipidos es la cromatografía en capa fina (CCF) (figura 16-28) y para la separación de los Acidos grasos individuales. usualmente formadas por lipidos no polares en un medio acuoso. /n vivo. Los antioxidantes naturales son la vitamina E (tocoferol).3-üiacllgliceroles 1. rorman micelas. Los liposomas pueden formarse sorneticndo a un lipido anliphtico aultrasonido en medio acuoso. la lecitinn) los cuales forman una capa superficial que separa la masa principal del material no polar de la fase acuosa (figura 16-29). o insoluble en agua. liposamas y emulsiones En general. y los uratos y la vitamina C que son hidrosolubIes. hutytated hdroq)unisole)y but ilato de h idrox itolueno (BI-ET. que ec liposoluble. ea1 ve2 el urato. butilato dc hidroxianisol (RHA. . Las ernalsiones son partículas mucho inhs grandes. Cuando se halla una concentración critica de estos lípidos en un medio acuoso. Sin embargo. Un sistema adecuado de solventes para ellos seria hexano-&ter dietilico-acido famiice (80~ O ' ~ V / V / V ) .de propilo. Son estabilizadas por agentcs emulsionantes como los lipidos an fipáticos (por ejemplo. como transportadores de fármacos en la circulacibn. por ejemplo. se les utiliza como gen transferidor hacia el interior de las células vasculares y como porteadores para la administraciiin topica y transd6rmica de medicamentos y cosmeticos. la cromatografía gas-líquido (CGL). y parte es hidrófila o soluble en agua. Los antioxidantes perttnccen a dos clases: 1) preventivos. los lipidos se extraen por un sistema de solventes usualmente basado en una mezcla de clorofomo-metano1 (2: 1). en la terapéutica del cáncer. el colesterol. Una capa doble de lales lipidos polarcs se considera como una estructura básica en las membranas biol~gicac(capitulo 43). del inglCs. Estas moléciilas se describen como anfipáticas (figura 16-29). El heta caroteno es un oxidante cuando la PO: es baja. Consisten en esferas de dobles capas de Iipidos que encierran parte del medio acuoso. orientados a órganos específicos. los principales son: la superóxido dismutasa que actúa en la fase acuosa para atrapar a los radicales superóxido libres (O2-). Ademas.Z-Diacilgliceroles Figura 46-20. PARA IDENTIFICAR Y SEPARAR L~PIDOS UTILIZAN METODOS SE CRQMATOGRÁFICOS Los antiguos métodos de identificación y separacion de lipidos. esfingolipidos (las lipidos polares) y en menor grado. basados cn procedimientos quimicos clasicos de cristaltzación. los ácidos grasos. etcetera. parte de la molécula es hidrhfoba. Por tanto.

donde forman parte de los carbohidratos de la superficie celular. que tiene gran significado como constituyente principal de las lipoproteinas y como manera de almacenaje de Iípidos en el tejido adiposo. precursores de segundos mensajeros y componentes importantes del tejido nervioso.Grupo polar o hidrdfilo Grupo no polar o hidrofob Fase acuosa Fase acuosa Fase "olsosa"o no polar ! 000 Fase acuosa "k Compat4rmientos ~CUOSOS DE ACEITE EN AGUA O Bicapas Iipidicas LlPOSOMA (UNICAMELAR) E LlPOSOMA (MULTILAMELAR) F Figura 16-29. Los fosfoacilgliceroles son Iípidos anfipaticos y cubren numerosas funciones importantes. leucotrienos y lipoxinas. . Formacidn de membrana Iipidicas. como el encéfalo y la capa exterior de la membrana celular. 3) Los lípidos de mayor importancia fisiol6gica son los acidoc grasos y sus esteres. 4) Los eicosanoides se forman de hcidos grasos poliinsaturados de 20 carbonos y constituyen un grupo importante de compuestos activos en aspectos fisiológicos y farmacológicos. iromboxano. de acuerdo con el número de dobles ligaduras presente. junto con colesterol y otros esteroides. por ejemplo. constituyentes mayores de las membranas y de su capa exterior de Iipoproteínas. Sin embargo. micelas. monoinsaturados o poliinsaturados. S) Los Csteres de glicerol son respecta a su cantidad. representados por triacilglicerol ("grasa"). Su fluidez disminuye de acuerdo con la longitud de la cadena y aumenta con el grado de insaturacion. 6) Los glucolipidos son tambiCn constituyentes significativos del tejido nervioso. conocidos como prostaglandinas. 3) Los ácidos grasos de cadena larga pueden ser saturados. los lipidos anfipaticos tienen agregado uno o mhc gmpos polares que los vuelve en particular adecuados como constituyentes de membranas en interfases 1ipidolagurt. ernulsiones y liposomas a partir de lípidos antipatims. fosfolipido RESUMEN 1) Los lipidos tienen la propiedad común de ser relativamente insolubles en agua (hidrofobos) pero solubles en solventes no polares. los lipidos más importantes. por ejemplo. tensoactivos en el pulmón.

Frankel EN: Chernistp of Tree radical and singlel oxidarian of lipids. 2nd ed.ilnnlyris. M REFERENCIAS Christie WW: 1. Ml.190 Broquímica de Hurpr (Capitulo 16) 7) El colesterol. Prog Lipid Res 19X5. J Lipid Res 1984. Éstos incluyen hormonas importantes como las suprarrenacorticales y sexuales. vitamina B y hcidos biliares. Elsevier. 199 1.Orrenius S: 1-Iost hiachemical defense mechanisrns against prooxidants. Padley FB: The Lipid lfandhnok Chapman & 1-Iall. 4th ed. Cunstone FD.28:189.25: 1490. 1991. Chapman & Hall. f Lipoproterns and iUernhranes. es un componente importante de las membranas. Srnall DM: Lateral chainpacking in lipids and membranes. 1986.iprd . Es la rnolecula precursora a partir de la cual se sintetizan los demás estervides corporales. Vance DE. Hawthorne JN. Pergamon Press. Moldeus P. Ansell G R (editors): Phospholipidc Elsevier. Aarwood JL. 1982.23: 197. como lipido anfipático. Vance 3 E (editors): R~ockemisttyo Lipidr. Harwood JL: Lipid Biuc~iemistry An Introduction. Annu Rev Pharmacol Toxicol 1988. Gurr . I OH2 Cotgreave l A .

etdtera Mol&ulas del alimento Digestidn Molbculas sencillas Vlas Otms endergdnicos aníibólicas Figura 1 7 4 . Las vías catabblicas producen energía libre en forma de equivalentes reductores (2H) o fosfato de aRa energia para suministrarla a ias vías anabblicas. Por tanto.Panorama del metabolismo intermediario Peter A. 2) Vias catabólicas. por lo general. Una de ellas es la sintesis de proteinas. la cadena respiratoria y la fosforilacibn oxidativa. sino que intenta comprender sus interrelaciones y los mecanismos que regulan el flujo de los metabolismos a través de ellas. cuando actijan como enlace entre las vías anabblicas y catabdlicas. realizan procesos oxidativos que producen energia libre. Las tres categorlas princrpales de las vías metabblicas. con mhs de una función y tienen lugar en las "encrucijadas" del metabolismo. lipidos. 3) Vías anfibálicas. PhD. Proteinas. La energia libre requerida por estos procesos proviene de la categoría siguiente. por ejernplri. constituye el metabolismo intermediario. por ejemplo. (a) . Las anfibblicas actuan como enlace entre las dos categorías anteriores. DSc El destino de los componentes de [a dieta después de la digestidn y la absorción. Mayes. el ciclo del Acido citrico. en forma de fosfatos de alta energia o de equivalentes reductores. Las vías metabóli cas pueden c tasificarse en tres categorías (figura 17-1): 1) Vías anabhlicss. carbohidratos. Icidos nucleicos. abarca un campo extenso que no sólo describe las vias metabólicas seguidas por las moléculas individuales. se ocupan de la síntesis de los compuestos que constituyen la estruc- tura y la maquinaria corporal.

por ejemplo. como los siguientes: 1) conversi611 a su polimero de almacenaje. lipidos y proteínas de la dieta. originando finalmente ATP en el procese de fosforilacibn oxidativa. precursor de todos los esteroides sintetizados en el cuerpo. Los principales son glucosa. interviene en otros procesos. respectivamente.con producción de gran cantidad de energia libre como ATP en el proceso de fosforilación oxidativa (figura 18-21. El metabolismo normal incluye las variaciones y adaptaciones necesarias en periodos de inanicihn. una deficiencia nutricional. En los teji- . protelnas y grasas dietarias. El metabolismo de los carbohidratos se ocupa del destino de la glucosa (figura 17-31 Todas las cklulas de los mamíferos metabolizan la glucosa a piruvato y lactato por la vía de la glucóIisis. como los lact a n t e ~ . Ios tejidos que pueden utilizar el oxigeno (aerobios) tienen la facultad de metabolizar el piruvato a acetilXoA. Un ejemplo importante de una enfermedad causada por metabolismo alterado ("enfermedad metabólica") es la diabetes sacarina. particularmente en el músculo esqueIético e hígado. acetiE-CoA.aminoAcidos y glicerol. En los rumiantes (y en menor extensihn en otros herbívoros). Es una fuente de equivalentes reductores (2H) para la biosintecis -por ejemplo. de ácidos grasos. la celulosa proveniente de los alimentos la digieren microorganisrnos simbiontes a hcidos grasos de peso molecular bajo (acdtico. 2) La vía de la pentosa fosfato que proviene de intermediarios de la glucólisis. que luego se oxida en el ciclo del icido citrico (figura 17-2). Los mamíferos como el ser humano necesitan procesar los productos a absorbidos de E digestión de carbohidratos. mal se oxida en la el ciclo del ácido citrico. Esquema de las vías para el catabolismo de carbohidratos. EI metabolismo de los fipidos se centra principalmente en los ácidos grasos y en el colesterol (figura 1 7 4 ) El origen de los hcidos grasos de cadena larga es la sintesis de novo de la a c e t i l 4 o A a partir de los carbohidratos o lipidos de los alimentos. gluc6gen0. La glucosa es un sustrato único ya que la gluc6lisis puede realizarse en ausencia de oxígeno (anaerobia) y el producto final es el lactato. Asi. qiercicio. propiónico y butírico) pues en estos animales el metabolismo tisular se ha adaptado para utilizar ácidos grasos de cadena corta como sustratos principales.192 a Bioquirnica de Harper (Capítulo 17) El conocimiento del metabolismo en el animal normal es rin prerrequisito para la comprensión profunda de las anomalías que se producen en muchas enfermedades. Tpdas las vias conducen a la producudn de acetil-COA.y es tambikn fuente de ribosa. Ademis. 3) La triosafosfato da origen a la fracción glicerol de los acilgliceroles (grasas). LAS V ~ A S E T A B ~ L I C A S M BASICAS PROCESAN LOS PRODUCTOS PRINCIPALES DE LA DIGESTION La naturaleza de la alimentación define el patr6n btisico del metabolismo en los tejidos. 4) El piruvato y los intermediarios del ciclo del acido citrico proporcionan los esqueletos de carbono para la sintesis de aminohcidos y la acetil-CoA es el bloque estructural para los hcidos grasos de cadena larga y para el colesterol. Los desequilibrios del metabolismo son consecuencia de. Todos estos productos de digestibn se procesan por sus vias metabólicas respectivas a un producto común. con algunos de sus metabolitos. glicerol y aminoácidos. que se utiliza en la formación de nuclebtidos y hcidos nucleicos. la glucosa es el combustible principal de numerosos tejidos. deficiencia de enzimas o la secreción alterada de hormonas. Por otro lado. Figura t7-2. El proceso que produce glucosa a partir de precursores que no son carbohidratos. embarazo y lactancia. Acidos grasos. se denomina gluconeogénesis. que puede entrar al ciclo del itcido cítrico para su oxidacibn completa a COI y HzO.

Panorama del metabolismo rnlermedrarro 193 Giudgeno Glucofosfatas Vias de la pentosa fosfato 'O 3i O Triosafosfatos -----A- -+ Rtbosafosfato Acilglicerol Acetil-Co-A . 1) Como en el caso de la a c e t i l 4 o A proveniente de los carbohidratos. como triacilgliceroles (grasas). es oxidada completamente a Coz+ H 2 0 en el ciclo del ácido cítrico. constituyen la principal reserva calhrica de! cuerpo.. son combustibles tisulares muy efi- caces. La a c e t i l 4 o A formada por la beta-xidacibn tiene varios destinos importantes. en inanicihn). 3) En el hígado forma cuerpos cetónicos. Los ácidos grasos producen una can- . dos. Esquema del metabolismo de los carbohidratos que muestra las prinupales vlas y productos finalec La gluconeog8nesis no se muestra. donde.f Ácidos grasos Colesterol l Proteína 1 Figura 17-3. tidad considerable de energía en la beta oxidacibn y en el ciclo del Bcido cítrico y. por tanto. los cuales se convierten en importante fuente de energía bajo ciertas condiciones (por ejemplo. 2) Es una fuente de &tomos de carbono para el colesterot y otros esteraidcs. los acidos grasos pueden ser oxidados a acetilCOA(beta-xidación) o esterificadosa acilgficeroles. que son combustibles tisulares hidrosolubles alternos.

los arninoácidos también son precursores de muchos otros compuestos importantes. pues cada organelo (por ejemplo. o 3) forman cuerpos cetónicos. El resto. la naturaleza de los sustratos que entran y los metabolitos que salen de tejidos y brganos es definida y su destino final se conoce. 2) A niver subcelular. también se obtienen de la dieta. ya que los tejidos son incapaces de sintetizarlos. 3-hidroxibutirato y acetona. LAS V ~ A S METABÓLICAS PUEDEN ESTUDIARSE A DlFERENf ES NIVELES DE ORGANIZACI~N Hasta la fecha s610 se ha visturnbrado el metabolismo como ocurre en el organismo intacto.194 Bioqeciminica de Harper (Capitulo 17) Dieta e ' Carbohidrato Aminoácidos \ Cuerpos cetónlcos Figura 17-4. La ubicación e integracihn de vias metabblicas se han identificado por estudios a niveles menores de organización. la circulación sanguínea se integra al metabolismo Los aminohcidos obtenidos de la digestión de las proteínas procedentes de los alimentos y la glucosa . Algunos deben ser suminismdos de manera específica por los alimentos (aminoácidos esenciales). 2) forman glucosa (gluconeogCnesis). Después de la desaminacián. A tisu lar y de órgano. como las purinas. Además de requerirse para la sintesis protelnica. esto es: 1) A nivel tejida y 6rgan0. pirirnidinas y hormonas como adrenalina y tiroxina. o aminohcidos no esenciales. pero pueden formarse a partir de intermediarios por transarninaci6n. Esquema del metabolismo de Iípidos mostrando sus v[as y productos finales más importantes. Los cuerpos oetbnicos comprenden las sustancias acetoacetato. e3 exceso de nitrógeno aminico es eliminado como urea y los esqueletos de carbono que permanecen despuh de [a transaminación: 1) son oxidados a COIpor el ciclo del ácido cítrico. Gran parte del metabolismo de los aminoácidos se enfoca a la transaminación (figura í 7 6 ) Los aminoácidos son necesarios para ta síntesis de proteinas. Ia mitocondria) o compartimiento (como el citosol) posee funciones bioquimicas especificas que determinan un patrón subcelular de vías metabblicas. utilizando el nitrbgeno arninico de otros arninoAcidos que estén en exceso.

tos triacilgliceroles quilomicrones no son captados por el hígado. desputs se secretan. liberando el hcidos grasos que son incorporados a los tipidos tisulares u oxidados como combustible. El musculo constituye aproximadamente 50% de la masa corporal y. por ejemplo. principalmente triacilgliceroles.Panorama del rnetabo/isrno intermediario 195 Cuerpos cetdnlcos Nitrbgeno arnlnica en del aado citrico Figura 17-5. glicerol y aminohcidos en glucosa (gluconeog&nesis). Esquema del metabolismo de aminoAcidos que muestran las vlas productos finales prinupales que se produce durante la digestibn de los carbohidrato~. en particular en el tejido adiposo y en e[ higado. Entre comidas el higado puede extraer sus reservas de glucbgeno para restituir la concentracibn sanguinea de glucosa (glucogen6Iisis) a. el plasma. en consecuencia. mediante la formación de urea. albúmina) y de desarninar a los aminohcidas que exceden los requerimientos. El hígado tiene la funcibn rnetabólica primaria de regula la concentracibn sanguínea de la mayoría de los metabolitos. En el caso de la glucosa. Además.de la glucosa y los arninoácidos. convertir metabolitos no carbohidratos como lactato. representa una reserva considerable de proteína que puede ser aprovechada para suministrar aminoácidos al plasma. Los tejidos extrahepáticos que poseen la enzima lipoproteína lipasa los metabolizan. comparten una via común de absorcion por la vena portal hephtica. inicialmente al torrente linfático y de aht a la circulación como lipoproteínas. esta enPma hidroli~a triacilglicerol. en particular cuando la alimentación es escasa. Almacena glucógeno que se utiliza como combustible en la contracci6n muscular y sintetiza proteínas musculares a partir de aminaácidos procedentes del plasma. La otra fuente principal de Acidos grasos de cadena larga es su síntesis (lipoghesis) a partir de carbohidratos. El trirtcilgliceral del tejido adiposo es la reserva de combustible mhs importante del organismo. formando lactato y Coz. los cuales se recombinan con proteinas en las cdlulas intestinales. La conservaci6n de una concentracidn adecuada de glucosa en la sangre es vital para ciertos tejidos en los que es combustible obligatorio. el exceso es convertido a glucbgeno (glucog~nesis) o a grasa (lipogénesis). Al contrano. durante la digestibn forman monoacilgliceroles y acidos grasos. El mtsculo esqueletico utiliza glucosa como combustible. De este modo se asegura que ambos tipos d e metabolitos y otros productos hidrasolubles de la digestibn se dirijan inicialmente al hígado (figura 1 7 4 ) . el hígado se ocupa de sintetizar las principales protelnas plasmáticas (por ejemplo. en colaboracibn con el rifíón. Todos los productos hidrófoims y liposolub~esde la digestibn. los ácidos graso: pasan a la circulacibn como acidos grasos libres. Despuks de su hidrblisis Oiphlisis). el cerebro y los eritrocitos. lacual es transportada por la circulacibn hasta el rifión para ser excretada. en particular de la glucosa y aminoácidos. Estos son captados por casi todos los tejidos (pero no por el . Los Eipidos de la dieta (figura 17-71. forman lipoproteínas para facilitar su transporte a los tejidos en un ambiente acuoso.conocidas como quilomicrones.

deben entrar al mitocondrión y formar axalacetato antes de su conversion a glucosa. Transporte y destino de sustratos y metabolitos de los carbohidratos y aminoácidos principales. very Sow demi@ lipoprokin). La glucólisis. ya que actúa como base y encrucijada del metabolismo de carbohidratos. lípidos y aminoácidos. es sitio de depbsito para los esqueletos de carbono de arninoácidos después de la transminacion y suministra estos esqueletos para la sintesis de aminoicidos no esenciales. alberga las en7irnas del ciclo del ácido cítrico. de la cadena respiratoria y la ATP sintetasa. Se observará que en la gluconeogénesis. Este triacilglicerol tiene un destino semejante al de los quilomicrones. No obstante. la glucblisis se lleva a cabo en el citosol y el ciclo del ácido cítrico en las rnitocondrias En el cuadro 2 4 se proporciona un resumen de las funciones bioquimicas principales de los componentes y organelos subcelulares. la mayoría de la ceIulas e s t h especializadas en sus funciones y tienden a enfatizar ciertas vias metabólicas y a relegar . De inmediato se observa la funci6n central del mitocondrión. 2) La oxidación parcial de los iicidos grasos libres conduce a la produccibn de cuerpos cetónicos (cetogenesis). La figura 17-8 esquematiza las vías metab6llcas principales y su integracibn en una c61ula del parenquima hephtico. En particular. la vía de la pentosafosfato y la sintesis de ácidos grasos tienen lugar en el citosol. donde actúan como otra fuente importante de combustible. Dos vías de importancia adicional existen en el hígado: I } el triacilglicerol en exceso procedente de la lipogenesis y de los Acidos grasos libres es secretado a la circulación como lipoprotelna de muy baja densidad (VLDL. ya que es fosforilada con rapidez al entrar cerebro y los eritrocitos) y esterificados a acilglicerofes u oxidados como combustible principal a Coz. Además. del inglés. sustancias similares. como lactato y piruvato que se forman en el citosol.196 Bioquimicu de Jirarper - (Capitulo 17) Roteinas plasmaticas Figura i 7 4 . Los cuerpos cetónicos son transportados a los tejidos extsahepáticos. de la beta oxidación de los ácidos grasos y de la producción de cuerpos cet~nicos. Las membranas del retlculo endopliismico contienen el sistema ensirnhtico para la sintesis de acil- . con knfasis especial en su ubicacion intracelular. Nbtese que en el músculo hay escasa cantidad de glucosa libre. otras. A nivel subcelular.

VLOL. gliceroles mientras que los ribosomas se ocupan de la sintesis proteínica. es decir son reacciones equilibradas. Las reacciones "no equilibradas" son puntos de control potenciales EL FLUJO DE METABOLITOS EN LAS VIASMETABOLICAS DEBE REGULARSE DE MANERA COMBINADA La regulacion de todo el flujo a tmvis de una via metabblica a menudo se combina con el control de sólo l o quizá 2 reacciones clave en la vía. capítulo 55). lipoproteina de muy bala densidad). triacilglicerol. Por otra parte.~mo infermediario 19 7 Figura 17-7. Iipoproteina Iipasa. Muchas reacciones en 7% vins metab6licas son de este tipo. las reacciones hacia adelante e inversa se llevan a cabo a velocidades iguales y por tanto no hay un flujo neto en cualquier dirección. la temperatura y et pH son factores que influyen en la actividad enzimatica. Algunos se explicarhn en relacibn con la membrana mitocendrial (capitulo 14) y otros en los capítulos siguientes. ácidos grasos libres: LPL. se conservan constantes cn los vertebrados de sangre caliente y tienen poca irnportancia reguladora. In vrvo. carga y solubilidad a travks de las membranas que separan a [os organelos requiere mecanismos complejos. TG. Los factores fisicoqulmicos que controlan Ia velocidad de una reacción de cathlisis enzimática. bajo condiciones de "estado constante" habría probablemente un flujo neto de . como la concentraci6n de custrato son de primordial importancia en el control de la velocidad En una reacción en equilibrio. Transporte y destino de los sustratos y rnetabofitos prrncipales de los Iípidos (AGL. recuérdese la variación de pH en el aparato gastrointestinal y sus efectos en la digestión.Panorama del mefaholi. Puede apreciarse que el transporte de metabolitos de diferentes tamaiíos. (No obstante. Sin embargo. catalizadas por "enzimas reguladoras". monoacilglicerol. total de una via rnetabblica (capítulo 9) . MG.

AA e.metabolismo de uno o más de los srninoácidos no esenciales) izquierda a derecha debido al aporte continuo de A y la elirninaci~ncontinua de D. En E practica. Esta via podria funcionar. (AA +. metabolismo de uno o m i s aminoAcidos esenciales. pero tendría poco objeto controlar el flujo regulando la actividad enzirnhtica ya que un incremento de ia actividad s61o servirla para acelerar y lograr el equilibrio.CITOSOL m grasoe Figura 1 7 4 . Ubicacibn rntracetular e integracibn de las vías metabblicas principales en una célula del parknquima hepdtico. se producen grandes pérdidas de energía libre en forma de calor. En un intento por alcanzarlo. el cual no puede . en una vía metabolica hay invaa riablemente una o más reacciones del tipo no equilibrado en las que los reactantes se encuentran en concentraciones que están lejos del equilibrio.

C. El flujo tambikn depende de la capacidad del sustrato A para pernear la membrana celular. . Las enzimas que catalizan reacciones no equilibradas suelen estar en concentraciones bajas y sujetas a otros mecanismos de control. Con ft-ecuencia. Estas actúan por varios mecanismos diferentes [capitulo 44). Una caracteristica importante que ayuda al control metabblico es que las vias que catalizan la degradacibn de una sustancia no son una simple inversi6n de la sintesis. en la cual las reacciones A B y C t D son equilibradas y B + C es una reacción . Por lo general participan dos vias independientes por completo. La primera reacción en la glucólisis. B. principales combustibles para los tejidos. Estas enzima5 responden a otras sefíales metabhlicas. LOS MECAN1SMOS ALOSTERICOS Y HORMONALES SON IMPORTANTES EN EL CONTROL METABÓLICO DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS En la figura 17-9 se muestra una vía metabdlica hipotktica. a veces como respuesta inmediata a las necesidades de la dlula (capitulo 1 1). catalizada por hexocinasa (figura 19-Z). D. pero se agotaria a si misma si no se ejerciera control. inhibirá la enzima que cataliza la primera reacción en la via. El flujo a travds de una via de este tipo puede ser regulada por la disponibilidad de sustrato A. Ya que esto incluye [a síntesis de nuevas proteínas. dependerh de la eficacia de la eliminacibn del producto final D y la disponibilidad del cosustrato o cofactores representados por X e Y. por ejemplo: Calor Reaccidn no equilibrada Esta vía tiene flujo y direccidn. por ejemplo. la fosforilasa a) o la enzima desfosforili7ada. Esto es similar a la apertura y cierre de una válvula "unidireccional" permitiendo controlar el flujo total. Esto depende de su abastecimiento por la sangre. por ejernpio. como las enzirnas catalizadoras de procesos de síntesis (como la glucbgeno sintasa a). el cual a su vez convierte una enzima inactiva eii activa. que suministra Bcidos grasos libres. no es un cambio rápida pero a menudo es una respuesta a variaciones nutricionales. lo cual permite el control separado de cada una. Por otro lado. Las enzirnas que catalizan reacciones no equilibradas son a menudo proteinas alostéricas sujetas a la rhpida accibn de "retroalimentación" o "alimentacibn delantera" controladas por modificadores alostericos. o estimulantes de la fase de traslacibn de la sintesis de proteínas a nivel ribosbmico (capítulos 41 y 44). o por fosfatasas especificas que desfosforilan [a enzima. como en enzimas catalizadoras de vías degradativas (por ejemplo. o la proteína cinasa dependiente de Ca2'/calmodulina. la acetil-CeA carboxilasa. es un paso generador de flujo debido a que su Km de 0. cataliadas por la fosforilasa en el higado (figura 20-l ). Algunas enzimas reguladoras pueden ser fosforiladas sin intervencibn del cAMP y proteína cinasa dependiente de cAMP. la síntesis de glucbgeno y su desdoblamiento (figura 20-1 j. Otros mecanismos de control dependen de la acci6n de hormonas que responden a las necesidades del cuerpo como un todo. Adernhs. la cual ataca las reservas de glucbgeno y proporciona la glucosa sanguínea y la lipasa hormona sensible en el tejido adiposo (figura 27-8). A. haciendo que este ripo de reacción sea esencialmente no reversible. las reacciones que generan flujo. Las hormonas pueden afectar la sintests de las enzirnas controiadoras del ritmo. pimvato deshidrogenasa (figura 196). como la acetiI4oA de cadena larga. por ejemplo. por ejemplo. por ejemplo. Ésta ec rápida y con frecuencia mediada a través de la formación del segundo mensajero cAMP.Panorama del me fabolismo intermediario 199 ser utilizado de nuevo. como la relacibn [ATP]/[ADP]. La reacción de generación de flujo es la primera reacci6n en una vía saturada con custrato Puede identificarse como una reaccibn no equilibrada en la cual el Km de la enzima es considerablemente mas bajo que la concentracion normal de sustrato. las hormonas pueden actuar como inductoras o represoras de la formaci6n de mRNA en el núcleo. Este cambio es originado por la actividad de una protetna cinasa dependiente de cAMP que fosforila la enzima. que a su vez esta sujeto a la absarcibn de alimento por el intestino o a ciertas reacciones clave que conservan y liberan sustancias importantes a la sangre. el producto de una via biosintética. Uno es la modificacibn covalente de la enzima por fosforilaci6n y desfosforilacibn.05 mmollL para glucosa es bastante menor que la concentracion sanguínea de glucosa de 5 rnmol/L. La forma activa de la enzima puede ser la enzima fosforilada. no equilibrada. la fosforilasa cinasa (figura 206).

a menudo. las proteínas plasrnaticac. bloques estructurales para la bioslntesis de moleculas complejas. inversibn de una enzima inactiva. por lo general involucra reacciones de fosforilaci6n. El hígado tiene una función directa en la regulaciiin de la concentraciór! de numerosos constituyentes sanguíneos. 4) La glucosa proporciona esqueletos de carbono para la fraccibn glicerol de las grasas y para varios arninohcidos no esenciales. por ejemplo. incluyendo glucosa y aminoAcidos. 2) Casi todos los productos de la digestión de carbohidrato~. alteración d e la velocidad d e traslacibn del mRNA a nivel ribosomico. . 3) La Acetil-CoA se utiliza también como bloque estructirral para la biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga. algunas de las cuales son exportadas al resto del cuerpo. @ y son formas rapidas. acetil<oA. dado que su función primaria es servir a los tejidos extrahepáticos. comprende la oxidacibn o sintesis de moltculas. @ inducción de la formacibn del nuevo mRNA y @ represion de la formacibn de mRNA. desfosforilacion. 5) Todos los productos hidrosolubles de la digestibn son transportados al hlgado a través de la vena portal hepática para procesamiento.200 Bioquim ica de Happer (Capitulo 17) Inactiva Enzl Membrana celular X Y Activa D -c Activación alostArica "alimentacion delantera" Inhibición afostkrica negativa retroalimentacion Producción en el núcleo de mRNA Induccibn Figura 17-9. as1 como combustible para energizar los procesos vivientes. el cual. en tanto que @ a @ son mecanismos más lentos d e regular la actividad enzimatrca. colesterol y otros esteroides a partir de carbohidratos y de colesterol y cuerpos cetiinicos a partir de Acidos grasoc. lípidos y proteínas son catabolizados a un metabolito común. Represibn Mecanismos d e control de una reaccion catalizada por enzimas Los números en 10s círculos indican posibles sitios de actividad d e hormonas @ alteración de la permeabilidad de la membrana. a a RESUMEN 1) Los productos de la digestion proporcionan a los tejidos. antes de su oxidación final a C 0 2 en el ciclo del ácido cítrico.

Hue L. esta ultima es iniciada por la acción de hormonas. Wilcy. donde en los ribosomas. EIsevieriNonh Holland. Las hormonas regulan tambiCn mecanismos mhs prolongados o lentos. Además. Newsholme EA. por ejemplo. Csabtree B: Flux-generüting and regulatory steps in rnetabolic control. hay tres compartimientos metabblicos subcelulares primarios. El metabolismo de aminoacidos tiene lugar no solo en el citosol y las mitocondrias. sino tambien en el retículo endoplásmico. a través de la estimulaciiin o inhibición de la síntesis de protelnas enzimiiticas. A menudo. glucogknesis.6:53. Por su parte.Panorama del metaboiismo rnb~rmediario 201 6) Además del núcleo. glucogenó2isis. Trends Bzochem Ser 1981. Chapman & Hall. del fosfato de pentosa o pentosafosfato y de la lipogénesis. los aminoacidos son convertidos en proteínas. 7) Las vías metabblicas son reguladas por mecanlsmos rapidos que afectan la actividad de enzimas existentes. f Newshome EA. incluyendo la formación de glicerolipidos y el metabolismo de fármacos. Start C: ReguIaiinn in iidetabolasm. 198 1. 1983. beta oxidacibn de Iicidos grasos y cadena respiratoria. incluyendo las del ciclo del ficido cítrico. !a mitocondria contiene las enzimas principales de la oxidacibn. Van de Werve C (editors): Short-Term Regulation o Lzver hdefaholism. las membranas del retículo endoplasmico contienen enzimas para otros numerosos procesos. 1973. El citosol contiene las enzirnas de las vías de glucblisis. F modificacibn alostérica a y covalente. . REFERENCIAS Cohen P: Conaro¡ o f l 3 r y m e Activiv 2nd ed.

PhD. Los residuos acetilo estfin en forma de acetil4oA ( C H 3 . se ha informado muy pocas. un hcido tricarboxílico de seis carbonos. en la transarninación. Ciirato (c6) Figura 18-1. ciclo de los icidos tricarboxilicos) es una serie de reacciones que se efectúan en las mitocondrias. Además. Mayes. anoi-malidades genéticas de sus enzima. las repercusiones con profundas cuando. Esto es porque la glucosa. Por tanto. pero el hepatico es el único donde todos tienen importancia extrema. gran número de células hepaticas esthn dafíadas o han sido reemplazadas por tejido conectivo. las cuales llevan a cabo el catabolismo de los residuos acetilo. lo que da por resultado la fomacibn de citrato. acetato activo). Cielo del dcido cltrim que ilustra la funcibn catalítica del oxalaeetato. Un mudo testimonio de la importancia vital del ciclo del hcido citrico es que. el ciclo comprende la cornbinacibn de una molecula de acetilXoA con el oxalacetato. por ejemplo. permiten la liberación y captura como ATP de la mayor parte de la energía libre de los combustibles tisulares.FiI ciclo del ácido cítrico: Petes A. los ácidos grasos y muchos arninoácidos son metabolizados a a c e t i l 4 o A o a intermediarios del ciclo. Algunos de estos procesos se realizan en casi todos los tejidos. por lo que se presume que estas anomatías sean incompatibles con un desarrollo normal. liberando equivalentes de hidrógeno.lipidos y proteínas. si es que algunas. desempefia un papel principal en la gluconeogénesis. - La función principal del ciclo del ácido cítrico es servir como vía comun final de la oxidación de carbohidrato~. como en la hepatitis aguda y en la cirrosis.C o S-CoA. desaminacibn y lipogdnesís. DSc El ciclo del acido cítrico (ciclo de Krebs. EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO PREPARA EL SUSTRATO PARA LA CADENA RESPIRATORIA En esencia. La COA contiene la vitamina acido pantoténico. hcido dicarboxilico de cuatro carbonos. Sigue despuCs una serie de reacciode nes en el curso de las cuales dos mol~culas Cozson liberadas y se regenera el oxalacetato (figura 18-1 1. un &ter de la coenzima A. respecto a los seres humanos. Puesto que sólo se necesita una pequefia cantidad de oxalacetato para facilitar la cenversibn de una gran cantidad de unidades acetilo en Coz. durante la oxidaciiin. los que. se puede considerar que desempefia una función catalítica. respectivamente. .

Pareceria que el oxalosuccinato permanece unido a la enzima como un intemediario en [a reacci6n global. algo del cual permanece unido a la enzima. es seguida por la hidrólisis del enlace tioCster de la COA. 200 del Comitt de Editores de Hiochemical Journals Recommendations ( 1 975): "De acuerdo Con la regla bioquímica esthndar. que contiene hierro en el estado Fe2' en forma de una proteina compleja La reaccidn es inhibida por la presencia de fluoroacetato. La misma regta se adopta en este texto para todos los ácidos carboxilicos.lipidos y amino8cidos. Una. Es posible que el cis-aconitato no sea un intermediario obligatoria entre el citrato y el isocitrato.. la ausencia (anoxia) o deficiencia (hipoxia) de O1causa la inhibición total o parcial del ciclo. lsocitrato + NAD' e+Oxalosuccinato H (unido a la enzima) * De la circular No. Las otras dos enzimas son NADP+-especIficas y se encuentran en las mitocondrins y en el citosol.ya que el ácido cítrico es un compuesto simktrico.204 Bioquímica de Harper (Capitulo 18) El ciclo del hcido cítrico es una parte integral del proceso por el cual se hace disponible mucha de la energía Iibre liberada durante la oxidación de carbohidrato~. puede apreciarse por referencia del destino de la acetil-COA. ahora se comprende (cuando la mol&culaes visualizada en tres dimensiones) que los dos grupos -CH2C00no son idinticos en el espacio con respecto a los grupos 4 H y 4 0 0 .acompafíada por una considerable pérdida de energia libre como calor. lo cual asegura que la reaccibn prosiga hasta su terminación. el cual en forma de fluoroacetil4oA. La reacción de condensación. con el resultado de que tsta siempre actúa sobre aquella parte de la molécula que deriva del oxaiacetato. Este ÚEtimo inhibe a la aconitasa lo que ocasiona acumulación del citrato. y rehidratación hasta isocitrato. que es NAD+-específica. ya sea libres o adheridas a la superficie interior de la membrana interna. la terminacibn -ato por ejemplo. Citrato Cirsconitato (unido a enzima) H20 HzO LAS REACCIONES DEL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO LIBERAN EQUIVALENTES REDUCTORES Y CO2 (figura 1 8 3 ) " La condensación inicial de acetil-CoA con oxalacetato para formar citrato es catalizada por la enzima condensante. Durante el curso de la oxidacihn de la a c e t i l 4 o A en el ciclo. El isocitrato experimenta deshidrogenacibn en presencia de isacitrato deshidrogenasa formando oxalosuccinato. Este proceso es aerabfo por lo cuaI requiere oxígeno como oxidante final de los equivalentes reductores. que es atraido por el enlace de tres puntos de la enzima hacia el sustrato (figura 8-31. Acetil-CoA + Oxalacetato + HzO + Citrato + COA El citrato es convertido en isocitrato por la enzima aconitasa (aconitato hidratasa). . citrato sintasa. alfa-Cetoglutarato + COI + NADH + H' Sigue una descarboxilacibn a alfa-cetogiutarato.marcada en el ciclo del ácido cítrico. Estos equivalentes reductores entran entonces en la cadena respiratoria donde son generadas grandes cantidades de ATP en el proceso de fosforilaci6n oxidativa (tigura 18-2 y capitulo 14). se condensa con el oxalacetato formando fluorocitrato. respectivamente. Se han descrito tres isocitrato deshidrogenasas diferentes. Los experimentos con intermediarios marcados con C" indican que el citrato reacciona con la aconxtasa de manera asimktrica. lo cual facilita la transferencia de equivalentes reductores a las enzimas adyacentes de la cadena respiratoria. que forma la citrilXoA. Esto era desconcertante. también catalizada por la isocitrato deshidrogenasa. tal como se muestra en la figura 15-3. se forman equivalentes reductores en forma de hidrbgeno o de electrones como resultado de Ia actividad de deshidrogenasas especificas. en palmitato. ferrosulíürada (Fe:S). que efectúa la sintesis de un enlace carbono a carbono entre el carbono del metilo de la acetil-CoA y el del carbonilo del oxalacetato. Por tanto. Esta conversión tiene lugar en dos pasos: deshidratacibn hasta cis-aconitato. Las enzirnas del ciclo del ácido cítrico localizan en la matriz mitocondrial. Las consecuencias de la acci6n asirnktrica de [a aconitasa. se encuentra sblo en las mitocondrias. pero de hecho puede ser una rama lateral de la via principal. La oxidación del isocitrato acoplada con la cadena respiratoria procede casi completamente a travbs de la enzima dependiente del NAD'. Sin embargo. El Mn" (o Mg2') es un componente importante de la reacción descarboxilante. denota cualquier mezcla de ácido libre y la(s) forma(s) ionizada(s) (segUn el pH) en la cual no cstán especificados los cationes". Ia que también esta situada en lamembrana mitocondrial interna.

Ciclo del Bcido cítrico la vía catabblica principal para la acetil-COAen los organismos aerobies La acetil-COA. a . Figura 18-2. y oxidada a C02 con Iiberacibnde equivalentes reductores (2H) La oxidacibn subsiguientede 2H en la cadena respiratoria conduce al acoplamiento de la fosforilación de ADP a ATP Para una vuelta del crclo. producto del catabolismo de carbohidratos. anoxia) Cit Citocromo m@ Fosfato de alta energía H" .El crclo del ácido citr'rrico: cutaholrsrnu de la acetilJoA 0 205 lsocitrato (Ce) t Q ~ r e s p M Fosforilacion oxidativa -@ 5 Flavoproteina anaerobiosis (hipoxia. se generan 11 -@ por medio de fosforilactón oxidativa y un surge a nivel de sustrate a partir de la conversion del succinil-COAen sucunato. proteínas y Iipidos. es introducida al ciclo junto con H20.

COOHO-C-CODCH.~ O O - c-coo- i . los dos Btomos de carbono del radical aoettlo se muestran marcados en el carbono del carboxilo (usando la designacibn y en el carbono del rnetilo (usando la desgnaubn [i]). malonato y arcenito. La oxidación del NADH y del FADH2 en la cadena respiratoria wnduce a la generacibn de ATP a travks de la fosforilacibn oxidativa. se produce un "proceso aleatorio" del marcaje en este paso de modo que los cuatro Btomocde carbono del oxalacetatoaparecen marcados decpuks de una revolucibn del ciclo. el oxalacetato que se regenera está ahora marcado.o COA SH CH.¿ . parte de la marca en el oxalacetato es rncarporado a la glucosa y el gludgeno (figura 21-1) Para una explicacibn de las aspectos estereoquimicos del ciclo del Bcido citrico. Durante la gluwneogenesis. estos dtomos particulares no derivan de acetil-COAque ha entrado inmediatamente antes al ciclo sino que surgen de aquella porción de la moléwla de citrato que derivb del oxalacetato. de él se forma el COZ marcado que se elimina en la segunda vuelta de uclo Debido a que el succinato es un compuesto simétrica y la suminato deshidrogenasa no distingue entre sus dos grupos carboxilo. Sin embargo.-COOCitrato I HO-CH k~. Para seguir el paso del aeetil-COAa travks del ciclo.-gFumarato n 1I CH-COOCls-aconitato A J C H ~ ~ O O Succinato H 0. Aunque se pierden dos &tornos de carbono como CO2 en una revolucrbn del ciclo.00.C 0 0 Isocitrato I ADP + Pi Arsenito NADH + H* Oxalosuccinato O Z C -coo- Figura 18-3.C H . . m) .. al completarse una vuelta del uclo. Se indican los sitios de inhibicibn por fiuoroacetato.-~OOL-Malato 1 -&ONAO* Fluoroacetato ~ H ~ ~ o o - H. consultese Greville (1 968). El ciclo del ácido cltrico (de Krebs).COO- k ~ .

que está unida a la superficie interior de la membrana mitocondrial interna. se producen tres moléculas de NADH y una de FADHz por cada molécula de acetilXoA catabolizada en una vuelta del ciclo. por una deshidrogenacihn más que regenera el oxalacetato. Succinato favor del malato. El equilibrio de esta reaccibn está tan en favor de la fonnacibn de succinil<oA. junto con el otro producto de la reacción (NADH) es eliminado continuamente en reacciones ulteriores. Para continuar el ciclo. el flujo neto es en la direccibn del oxalacetato porque este compuesto.E/ ciclo del úcido cjtrico. Aunque pueden cata1izar reacciones similares. El malato es convertido en oxalacetato por la malato deshidrogenasa. El succinato es metabolizado ahn mfis por medio de una deshidrogenacibn seguida por la adicibn de agua y. L-Malato + NAD* e Oxalacetato * NADH + H' Aunque el equilibrio de esta reaccihn esta muy en Éste es el único ejemplo en el ciclo del hcido citrico de la generación de un fosfato de alta energia a nivel sustrato y se produce debido a que la liberacibn de energia libre procedente de la descarbaxilacibn oxidativa del alfa-cetoglutarato es suficiente para generar un fosfato de alta energía además de la formación de NADH (que equivale: a 3 4. Fumarata + H 2 0o L-Malato Además de ser especifica para el L-is6mero del malato. Como en el caso de la oxidacion del pinivato (capitulo 193. La matriz mitocondrial tambikn contiene una segunda succinil4oA sintetasa. lipoato. La fumarasa (fumarato hidratasa) cataliza la adicibi de agua al fumarato para formar malato. Los experimentos con isótopos han mostrado que la enzima es esteroespecifica para los Atomos de hidrógeno trans de los carbonos metileno del succinato. algunas de las enzimas. al contrario de otras enzimas del ciclo. Estos equivalentes reductores son transferidos a la cadena respiratoria situada en la membrana mitocondrial interna (figura 18-2). por ejemplo. Las enzimas del ciclo del hcido citrico. La enzima contiene FAD y proteína ferrosulfurada (Fe:S). la túmarasa cataliza la adición de los elernentos del agua a la doble ligadura del fumarato en la confíguracibn tranrr. es la conversión de la succinil-CoA en succinato acoplada con la conversión del acetoacetato en acetoacetil-CoA (capitulo 24). NAD'. la malato deshidrogenasa. el alfa-cetoglutarato pasa por una descarboxilaci6n oxidativa de una manera anhloga a la del piruvato (figura 1 9-5). ya que ambos sustratos son aIfa-cetoacidos. ferencia directa de hidrdgeno desde el sustrato a una flavoproteína sin la partictpacibn del NAD'. que se encuentran en la matriz. La adición de rnalonato o de oxaiacetato inhibe a la succinato deshidrogenasa competitivamente. tmbikn se encuentran fuera de la mitocondria. excepto las alfa-~etoglutaratay succinato deshidrogenacas. la succinil-CoA se convierte en succinate por la accibn de la enzima succinato tiocinasa (succinil4oA sintetasa). especifica para nucleótidos de guanina. Succinil-COA+ COI + NADH + H' La reacción catali~ada un complejo de alfa-ceiopor gluhrato deshidrogenasa tarnbitn requiere de idénticos cofactorec -por ejemplo. pero esta no interviene en el ciclo del ácido cihico. Es la única deshidrogenaci6n en el ciclo del k i d o cltrico que incluye la trans- . FAD y COA.y da por resultado la . formación de s u c c i n i l ~ o Aun rioéster de alta energía. tos equivalentes reductores del NADH generaran tres enlaces fosfato de alta energia por la esterificacibn del ADP en ATP en el proceso de F fosforilación oxidatira (capitua * FAD t Fumarato . reaccibn que requiere NAD'. pueden no ser de hecho las mismas proteinas que las enzimas mitocondriales del mismo nombre. dando por resultado [a acumulación de succinato. + FADHz La primera reaccidn de deshidrogenacidn es catalizada por la succinato deshidrogenasa. POR CADA CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO FORMAN SE 12 MOLECULAS DE ATP Como resultado de las oxidaciones cataljzadas por las enzimas deshidrogenacas del ciclo del ácido cítrico. Durante el paso a lo largo de la cadena. Se f m a fumarato como resultado de la deshidrogenacibn. difosfato de tiamina. subsiguientemente. que Pa reaccion se debe considerar fisiológicamente unidireccional. es decir. Una reacción alternativa en los tejidos extrahepaticos catalizada por succinilZoAacetoacetato COAtransferasa (tioforasa). catahoiismo de l acetil-CoA a 207 Luego. el arsenito inhibe la reacción haciendo que se acumule el sustrato alfa<etoglutarato. son isoenzimas.

a nivcl del sustratci) durante Ia conversión de la succinilXoA en succinato.susui m idacihn D I2en la i respiratc in 2 idacibn IDH cn la ia respiratc. isocitrato deshitlrogenasa. a la transaminación y la desaminación Todos los miembros principaIes de ciclo. actuando el GTP como fuente de fosfato de alta cncrgia (figura 184). 1 uirieru Kcacció catalizad~ : prodircci de -@ 4 . - . Las reacciones de la arninotransferasa (transaminasa) producen piruvato a partir de la alanina.208 Bioquimica de Hurper In 14). cs anfihtilico. alfa-cetoglutarato deshidrogenasa y malato deshidrogenasa. El ciclo del ácido cítrico interviene en F gluconeog6nesis.stas vias intervienen en los procesos de gluconeogcncsis. 11 J. hacia dentro de la via principal de gluconeogénesis es la fosfoenolpiruvato carhoxicinasa. Si ésta se acumula. 2) Niacina en forma de diniicleótido de adenina y nicotinamida (NAD).". Organos quc contienen un Jiiego completo de enzima5 para la gluconeogénesis (capitulo 2 1). LAS VITAMINAS TIENEN FUNCIONES ESENCIALES EN EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO Cuatro dc las vitaminas solubles del cornple-jo 3 intervienen de rnancra precisa en el funcionamiento del ciclo dcl hcido cilrico. un irnportante sustrato para la gluconeogénesis. oxalacetato del aspartato y alfa-cetoglutarato del ácido glutamico. 1 Neto 12 Esta reacción se considera importante en conservación de concentraciones adecuadas de oxalacetato para la reacción de condensacibn con la acetil-CoA. Cerieración (i e ATF p del ácido cítrico . actúa como un activador alosterico de la piruvato carboxilasa. Sin embargo.iuncirin iI>t l en la . Sus actividades se resumen a continiiacion. 12 nuevos enlaces fosfato de alta energia son generados en cada vuelta del ciclo EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO ACTÚA COMO P!VOTE EN EL METABOLISMO Algunas vías metabólicas terminan en un ctinstitiiyente del ciclo en tanto que otras se originan de C1. .E 1'. El lactato. A- ---. 3) Tiamina (vitaniina RI). rolCculas d P formada La transferencia neta al cicIo es resultado de varias reacciones diferentes.I. Son: 1) Riboflavina en forma de dinucleótido d c flavina y adenina (FAD) cot'actor en el compleLio la alfa<etoglutarato deshidrogenasa de 4 en el succinato deshidrogenasa. evadiendo asi el primer sitio de iosforilaciDn oxidativa en la cadena respiratoria (flgiira 14-7). entra en el ciclo a través de la conversión en piruvato y oxalacetato. como difosfato de tiamina. es decir. el ciclo del ácido cítrico interviene en ambos procesos. Laenzima clave que facilita la transferencia neta fuera del ciclo. coenzima para la descarboxilaci6n en la reacción de la alfa-cetoglutarato deshidrogenasa. Io cual asegura un abastecimiento de oxalacetato. desde el citrato hasta el oxalacetato. calalizada por la piruvatn carhoxilasa. el FADH? produce s61o dos enlaces fosfato de alta energía porque transfiere su poder reductor a la Q. De este modo. Un nuevo enlace de alta energia es generado a nivel del ciclo mismo (csto es. Oxalacetato + GTP + Fosfoenolpiruvato+ COZ+ GDP -1. puesto que pueden dar origen a una produccián neta de glucosa en el hígado o el riñbn. . Debido a que estas reacciones son reversibles. ia rt'spiralc -idación del rDt l en la ia respiratc Oxalacetato + ADP + Pi 1 1 - e1 uc -u" . cocnzima para tres deshidrogenaas de! cicIo. que catalim la descarboxilación del oxalacetato para dar fosfocnolpiruvato. desaminaci~n sintesis de acidos grasos. Entre las mas importantes está la fomacibn de oxalacetato por la carhoxilacicín del piruvato. transaminación.. ATP + COZ+ HzO + Piruvato + Isocitrato . cofactor adherido a residuos acilo "~ctivos" como en la acctil-CoA y s u c c i n i l ~ o A . el ciclo tambikn sirve como fuente de . oxidativo y sintktico. son glucogénicos en potencia. (cuadro 18-1). 4) Acido pantotknico como parte de la coenzirnn A. y Portanto.

la hidroxiprolína. la metionina y la valina forman succinilCOA. Oxalacetato Tirosina Fenilalanina + Fumarato f COZ Aspartata Citraio lsoleucina Metionina Valina Propionato ~[TRANSAMINASA ) Glutamato ] Histidina Pmlina Glutarnina Arginina 7 Figura 1 8 4 . Se debe notar que las sustancias que forman piruvato tienen la opción de oxidación completa hasta C 0 : si siguen la vía de la piruvato deshidrogenasa hasta acetilZoA o pueden seguir la El ciclo del ácido cítrico interviene en la síntesis de ácidos grasos (figura 1 8 4 ) La acetilXoA formada a partir del piruvaio es el principal bloque de construcción para la síntesis de Acidos grasos de cadena larga en los no rumiantes. . la cdlula necesita transportar acetil-CoA a traves de la membrana de la mitocondria. la ícoleucina. Las flechas gruesas indican la via principal de la glumneog8nesis esqueletos de carbono para la síntesis de aminohcidos no esenciales. la histidina. De particular importancia para los rumiantes es [a conversión del propionato. la cisteina. y la tirosina y fenilalanina forman fumarato (figura 18-4). la cual es imper- . + Glucosa + - P-enolpiruvato . la treonina y el triptdfano. la a c e t i l 4 o A proviene directamente del acetato.El ciclo del ácido clfrico: catabolismo de l aceti/-CoA u \ 209 Hidroxiprollna Serina Cisteina Treonina Glicina 1 Lactato . los cuales forman piruvato. a-Cetoglutarab vla glucogenica a través de la carboxilación formando oxalacetato. Participacibn del ciclo del Bcido citriui en la transaminación y la gluconeog6nesic. en succ i n i l 4 o A por la via de la m e t i l m a l o n i l ~ o A (figura 2 1-2). la glicina. la serina. Otros aminoácidos contribuyen a la gluconeogénesis debido a que el total o parte de sus esqueletos de carbono del entran al C ~ C ~ O ácido cítrico despuks de la desaminacibn o la transaminacion. + Alani"= Grutamato + PiruMto e-. la arginina. Ejemplos son la alanina. + Piruvato t Oxalacetato + . por ejemplo. el principal producto glucogCnico de la fermentación en el rumen. (En los rumiantes.) Dado que la pimvato deshidrogenasa es un enzima mitocondrial y las enzimas responsables de la síntesis de ácidos grasos son extramitocondriales. la glutamina y la prolina forman alfa-cetoglutarato por la vía del glutamato.

el control del ácido cítrico puede producirse en el paso de la piruvato deshidrogenasa. A[ parecer. siempre que se disponga de la cantidad adecuada de 02. NAD). entonces se transporta el citrato fuera de la mitocondria y. Esto se logra permitiendo que la acetil4oA forme citmto en el ciclo del ácido cítrico. varias enzimas son sensibles at estado energético tal como se expresa en las proporciones [ATPlJrADP] y [NADI-I]/[NAD]. Participación del ciclo del hado cítrico en la clntecic de Bcidos grasos a partir de la glucosa Véase tambien la figura 23-5 meable a este compuesto. Así. L ~ N Figura 1 8 4 . en ultima instancia. debido al estrecho acoplamiento entre oxidacibn y fosforilación. La activacibn alostérica de la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NAD mitocondrial por ADP es c o n m t a d a por ATP y NADH. En el propio ciclo. hay inhibición alostérica de citrate sintasa por ATP y por a c i l 4 o A de cadena larga. por último. que depende en gran medida de carbohidratos para el suministro de acetilXoA. hay escasa duda respecto a que el control respiratorio a travks de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa es el regulador dominante de la actividad del ciclo del acido citrico. la actividad depende de manera inmediata del suministro de cofactores oxidados de la deshidrogenasa (por ejemplo. Citrato + ATP + COA + Acetil-COA+ Oxalacetato ADP + Pi * La regulación del ciclo del ácido cítrico depende principalmente del suministro de cofactores oxidados En la mayoría de los tejidos. las cuales son catalizadas por la piruvato deshidrogenasa.JL. de la velocidad de utilizaciiin del ATP. cuya concentraci6n aumenta durante la contracción muscular y secrecibn. donde la funcibn primaria del ciclo del ácido cítrico es proporcionar energia.21 0 Bioquimica de Harper (Capítulo 18) Glucosa * b t~iruvato cido os grasos MEMBRANA MITOCONDRIAL . de- . Los sitios de regulación más probables son las reacciones sin equilibrio. Por tanto. Todas estas deshidrogenasas son activadas por Caz'. dependen de la disponibilidad de ADP y por tanto. velocidad de utilización de ATP para efectuar la trabajo determina el índice de respiracibn y de actividad del ciclo del Acido citrico. Ademhs de este control global y ordinario. el complejo de la alfa-cetoglutarato deshidrogenasa esta bajo un control anilago al de piruvato deshidrogenasa (figura 1 9 4 ) . se hace que quede disponible acetilXoA en el citosol medianie escisihn del citrato en una reacción catalizada por la enzima ATPcitrato liasa. las propiedades de algunas de las enzimas del ciclo indican que la regulación podria ejercerse tambidn n nivel del ciclo mismo para refoszar el control. citrato sintasa. En un tejido como el cerebro. cuando hay un incremento en la demanda de energia. isocitrato deshidrogenasa ligada a NAD y alfa+etoglutarato deshidi-ogenasa. los cuales a su vez. La succinaio deshidrogenasa se inhibe la presencia de oxalacetato y la disponibilidad de oxalacetato regulada por mala10 deshidrogenasa. De este modo.

3rd ed. Aún faSta por resolver cual de estos mecanismos (si es que se trata de alguno de ellos) opera rn vivo. Weitzman PDJ (editors): Krehs ' Ciric Acid Cycle-Hay a cenhity and StiIl Tnrning Rinchemical Society. REFERENCIAS Baldwin JE. liberando equivalentes reductores y 2CO2 y regenerando oxalacetato. Methods in En. la acetil<oA. Control and fimpartmentation. London. Adv Enzymol 1975. RESUMEN 1) El ciclo del Bcido cítrico es la vía final para la oxidaci~nde carbohidratos. 3) El ciclo del ácido citrico es anfbblico.29 1 :38 1. el citrato es degradado. desarninacion y en la síntesis de acidos grasos. Toma parte en la gluconeogénesis. 1968. Goodwin TW (editor): The Metabolic Roles o Cilate. Por tanto. Whelan WJ (editors). Vol 13 in. Boyer PD (editor): The Erqvmes. f Academic Press. Iipidos y proteínas. Lowenstein JM (editor): Citric Acid Cycle. 1 0 7 1L . Dickens F. in: Curhohydrate ~Wetabolism and Its Disorders. Lowenstein JM (editor): Citric Acid Cvcle. 1987. Greville GD: Vol 1. dado que tiene otras funciones metabólicas además de Ia oxidaci6n. Krebs HA: The evolution of rnetabolic cycles. . L 968.El ciclo del iicido cítrico: catubolismo de ¡a acetilXoA 2 11 pende de la proporcibn !?lADHJ/pAD']. Qekker. Academic Press. Academic Press. Nature 198 1. 1969. p 297. Dado que la Kmpara oxalacetato de citrato sintasa es del mismo orden de magnitud que la concentración intramitocondrial. el ciclo es ta vía principal para la generacibn de ATP y se ubica en la matriz de las rnitocondrias adyacente a las enzimas de la cadena respiratoria y la fosforilacibn oxidativa.nzvmolo~. Por una serie de deshidrogenaciones y descarboxilaciones. 1992. 1969. Tyler DD: Ths Mrtochondrion in Healtk and Dilease VCII Publishers. podria parecer que la concentración de oxalacetato interviene en el control de la velocidad de formación de citrato. Cataliza la combinacion de su metabolito comilin. Academic Press. con oxalacetato para formar citrato. Srere Ph: Thc cnzymology of the formation and breakdown of citrate. A .43:57. Kay J. Randle PJ. transaminación. 2) Los equivalentes reductores son oxidados por la cadena respiratoria con forrnacibn de ATP. .

Es una via única. la necesidad es sustancial. el músculo cardiaco. se comprendió que el proceso de fermentacihn en las levaduras es semejante a la degradacihn del gluciigeno en el m ~ s c u l oSe notó que cuando iin . Por el contraria. dado que pucde utili7ar oxigeno si estl disponible (aerohia) o fi~ncioiiar su ausencia total (anaerobia). a E vez a que IOF tc. sino también sistemas eiiziiiiáiicos rnitoccindriales. Mayes. no hay acuinulacion de lactato y el piruvato se convierte en el prodiicto . es decir excnlo de oxigeno. en el cerebro. Cn algunos casos. mientras que el lactato desaparece.iidos con capacidad glucolítica importante pueden obrev vivir a episodios de anoxia. coino fatiga. Tambien se produce acidosis lhctica debida a varios factores incluso a la deficiencia de piruvato desliidrogcnasa. tiene capacidad glucolítica relativamenie deticicntc y escaw supervivencia en condiciones de LA GLuCÓLISIS PUEDE FUNCIONAR EN CONDICIONES ANAEROBIAS Al principio del curso de las investigaciones sobre la gliichlisis. DSc isquemia. IMPORTANCIA BIOMÉDICA L a glircólisis iio sólo es la ruta principal para el metabolisiiio de la glucosa que conduce a la producción de acetil-CoA y a su oxidacihn cn el ciclo del Iicido cítrico. por ejemplo. para que la glucosa se oxide hasta la etapa terminal del piauvnto de laglucólisis. en tanto que en otros. En las cClulas cancerosas que proliferan con rapidez. e1 ciclo del iicido cítrico y la cadena respiratoria. Por tanto. como en los critrocitos. medades donde las enzimas de la gluciilisis (coino la pimvato cinasa) muestran actividad deficiente. se produce inás piruvato que el que puede ser metaboli7. precisa no solaincnte oxigeno moleculas. PhD. que favorece un entornti local relativamente ácido en el tumor. porque permite al musculo csqueletico trabajar con mucha eficiencia aun'cuando la oxidación aerobia se vuelva insuficiente. la fosfofructocinasa). ATP en ausencia de oxígeno tiene crucial significado biomedico.jo acrobio. Sin embargo. La gIuciilisis es la via prii~cipalpara la utililación de la glucosa y se lleva a cabo en el citosol de todas las células. musculo se contrae en un medio anaerohici.ado. que esth adaptado al traba. Existe un número pequeño de enfer- Hay una necesidad mfnima de glucosa en todos los te-jidos. La capacidad de la gluc6lisis para proporcioiiai. como el complejo piruvato deshfdrogenasa. El resultado es una producciiin excesiva de lactato. es casi total. Cuando se intraducc el oxígeno. tiene lugar la recuperacióia aerobia y el glucógeno reaparece. situacióii quc puede tener implicaciones con ciertos tipos de terapéuíicii contra e1 ciinccr. sino que también proporciona una vía importante para metabolizar fiuctosa y galactosa provenientes de los aliineiitos. en Sin embargo. si tienen lugar eii el niiisculo esquelético (por ejemplo. estos trastornos se manifiestan principalmente como anemias hemolíticas o. el glucógeno desaparece y sc forma Iactato como principal producto final.Gbucólisis y la oxidación del piruvato Peter A. la gluc6lisis procede a una velocidad mucho mayor que la precisada por el ciclo del ácido cítrico. si la contracción se produce en condiciones aerobias.

La fiinciiin de la u elucocinasa cs la dc eliminar la glucosa de la sangre después de la ingestihn de alimentos. Actúa sobre ambos anómeros de la gii~cosa. ticne una Km alta para la glucosa y opera de modo dplimo en x . excepto en su extensión y en siis productos finales. formado a partir de NAD' dusaiite In glucóli~is. Resumen de la gluc61isis 0. . reacciona coino el complejo Mg-ATP. función que realiza la enzima hexocinasa. esta distinción es arbitraria ya que las reacciones de la gluclilisis son las mismas tanto en presencia de oxígenci como en su ausencia. el NADH es reoxidado al acoplarse a la reducción dcl piruvato en lactato y el N A D ' que resulta se utiliza para pcrnlitir qiie ulteriormente prosiga la glucólisis (figura 19-1). el alfa y beta y puede también catalizar Ia fosforilación de otras hexosas. Cuando ci aporte de oxígeno es pequeño. Se utiliza un enlace fosfato de alta energia del ATP y sc produce ADP. pero a una velocidad mucho menor que a la glucosa. se altera la reoxidación del NADH.lo obstante. como en muchas reacciones en que interviene la fosforilacihn. se Iia hecho costumbre separar el rnetaboI ismo de los carbohidratos en una fase anaerobia y otra aerobia. es realizada por la glococintisa. baja) por 't una ' su siistrato. La glucólisis pucdc así efectuarse en condiciones anaerobiac. mayor cantidad de glucosa debe intervenir en lagluciilisis anaerobiapara proporcionar la misma cantidad dc energía que la obtenida en condiciones aernbias. Consecuentemente. Ellas catalizan Ias reacciones implicadas en la gluclilisis de la glucosa. en condiciones fisiológicas. en las células del parinquirna hephtico y en Ias dc los islotes pancreáticos. LAS REACCIONES DE LA GLUCÓLISIS SON LA PRINCIPAL V ~ A UTILIZACION DE DE LA GLUCOSA La ecuacihn global para la gIucolisis desde gliicosa hasta lactato e$: Glucosa * 2ADP * 2Pi t 2L(+)-Lactato * 2ATP + 2Hz0 Glucosa Cs Glua6geno (CsIm Todas las enzimas de la vía de Ia gluchlisis (figura 1 9-2) se encuentran en la fracción soluble extirimitocondrial de la célula. Su f u n c i ~ n consiste en asegiirar $* el suministro dc glucosaa los tejidos. El ATP es necesario coma donador de fosfato y. La reacciiin se acompana por una phrdida considerable de energia Eibre como calor y. La hexocinasa es inhibida de modo alostérico por e1 producto glucosad-fosfato. TriosatosfaZa C3 +H+ - Glucosa + ATP - Glucosa-6-fosfato + ADP Triosalosfato o* Figura 19-1. como ocurre en los eritrocitas que existe virtualmente en todas las J ~ i e n e gran afinidad (K. cuya actividad en el hígado puede inducirse y afectarse por los cambios en el estado nutricional. del modo siguiente: La glucosa entraen la vía gluctiIitica mediante su fosforilación a glucocad-iosfato. Como resultado de estas observaciones. este hltitno es oxidado después a COZ y agua (figura 19-1 ).. pero esto tiene un precio. ya que limita lacaiitidad de energía Iiberada por rnol&cula degli~cosaaxidada. por ejemplo. el citoso!. laglucnsa.final principal. fusforilar lo cual mantiene un alto gradiente de cone e n t r a f i de glucosa entre la sangre y el medio intracelular. par consiguiente.En estas circunstancias. En cornparaci0n con la hexocinasa. aiin en presencia q de concentraciones bajas de glucosa sanguínea. bloqueado por condiciones anaerobias o por ausencia de mitowndrias que contengan las enzimas respiratorias claves. puede considerarse como irreversible. aunque se acumula evidencia indicadora de que alguna de las enzimas puede estar integrada con estructuras subcelulares ranto en la celula como en e1 citosol. Sin embargo. hasta piruvato y lactato.

en tanto que difosfato como en el difosfato de adenosina.O 4 C=O COO I CINASA H-c=O H. indica que están juntos e.glucosa ADP tx. 0.3-bisfosfoglicerato 3-fosfatn Mitochondrial respiratory chain dehido FOSFOGLICERATOMUTASA $00H-$-O-@ CHz0H 2-Fosfqlicerato 1 1 I I I I 1 3ADP + p.glucosa 6-fosfato r+Fruciosa 6-fosfato CINASA ~Fructosa l. en tanto que los carbonos 4 a 6 forman gliceraldehido bfosfato El termino bis. HQPQ~'-. indica que los grupos focfato están separados. 3ATP I I I I I Anaembiosi~ I I I I I I Mg2+p.6-bisfosfato EH. inhibicibn *Los átomos de carbono 1 a 3 de bisfosfato de fructosa forman focfato de dihidroacetona.Glucosa 1-fosfato CHz-O- AfP (1. como en bifosfato.DH EspontAnea $00- $00 - CH2 (Enol) piruvato (Ceio) Piruvato L(+)-Lactato Figura 19-2.C-OH CH. $ -0-E) CHI plWvATo CINASA ?O0 - 1 I 1 Fosfoenolpiruvato I Oxrdacibn en el ciclo del I I I q 1 1 1 acrdo cítrico l NADH+H+ t 1 NAD' CoOC II . ) .P~.-O-@ ADP NAOH +H Focfato de dihidroxiacetona 3 ATP + NAD+ Gllceral- 3-Fosfoglicerato 1... Vía de la glucólisis -PO~~-.

h-hisfc>sfato aldolasa) eii dos tricisahsfritos. Es cstxcítica para la glucosa. un e-jempl de fusrorilación "a nivel del sustrato".concentracioriec dc glucosa sanguinea por arriba de loc 5 inmol/C (tigiim 2 1 -S). despucis d c la rosforiilisis. la fosfofructocinaca y la aldolasa en la configuracion de cadena abiertri.c s La energia liberade durante la oxidacihn cs crinccrvada por la formación de un enlacc dc a ~ u f r c alla cncrgía qiie de se vuelve.a aldciliisa A existe en la mayoría cle los te. el NADI Ies fácilmente desplazado por otra molécula de NAD'. I. C 3-fosfoglicerato que proviene de la5 reaccicincs 1 anteriores.a g1ucrisn4-frisfato es un compuesto irnportaiiic ~ L I Cti en el enironque de varias vías metabólicas (gl~icólisis. el sustrato se conibina con ese gmpi -SH. 1. gliceraIdehido-3fosfato dcsliidrogcnasa.3-bisfosfoi ~Iicerato 13 via dcE gliccraldchidn 3-fo~fato. pero reaccionan coi1 la liisfohcxosa isomerasa.6-bisfosfato Ida fructoca 1 . debido a la Puesto que se forman dos mol~culas e triosafosfato d por moléculas de glucosa que experimenta la glucolisis. Estruc- Ectn reacciiin e i scgiiida por otra focforilacibn con ATP. la B se encuentra en el higado y el riñbti.fogliceratopor la eninia fosfogliceratom~itasa.jidoc 4. el fosfato d e diliidroxiacetona es también oxidado .3-bi~fosfnglicerato. es convertidoen 2-fol.) mediante fosforolisis. glucugérieiií y ~lucogenólisis). Si hay arscninto. en esta etapa se generan dos moléculac de ATP por molécula de glucosa.3-Bisfosfoglicerato + NADM + H' La enziina que causa Iaoxidaci~n. y se considera quc su actividad tiene uiia I'~ii1ciiin ir~iportarite la regulación de In velocidad de en la gFuccilisis Tainbien la reacción de la fosfofructocinasa puede considerar~efiincionalmente irreversible cii cciiidiciones fisiológicas. Inicialmente. I.a hifcifi. tiiralmente consiste en cuatro polipéptidos identicos (rnonhmeros) que forman un terrhrnero. D-Fructosa-6-fosfato + ATP -+ 0-Fructosa 1.a yliicOli5i~ prosigue por la oxidacihn del gliceraldeIiido 3-fosfato cn 1. Este es uri importante e. gluconeogénesis.sloglicerato (difosfoglicerato. . proceso que cainprcndc iina isomeriznción nldosa-cetosa.jeinplo dc IR propiedad del nrseniato para IIcvar a cabo el desacoplamiento de la ovidacihn y la Cosforílacibn.Gliceraldehido 3-fosfato u Fosfato de dihidroxiacetona I. es separada por la aldolasa (ftuctosa I .En la glucOlisis. L K P . competirá con el fosfato inorganico (P. se adiciona fosfato inorg5nicn (P. sin gcnerar ATP. El gliceraldchida 3-fosfato y el fosfato de diIiidroxincetrin:i son interconvertidos por la enzima Fosfotriosa isomeraisa. rominndo un tioliemiacctal qiie cs convertido en iin ester tiolico por oxidación: los hidrógenos removidos eii estaoxidacibn ce trancfiereii al NAD' unido a la enzii~ia. [. que se hidroli7a en fnrniri espontanea para dar 3-fosfoglicerrito y calor.3-Bisfosfoglicerato + ADP H 3-Fosfoglicerato + ATP Fosfato de di hidroxiacetona Sc hnii dcscrito diferentes aldola~as quc coiitienen cuatro subiinidades. c:ilalitada por la eri7iina fnifofriictocinass (fosfofructocinasn-1) para prodiicir íiiiictosa 1. Finalmente. a actividad de la fo~fritrio~a isonierasa. adcinis. uiz cnlacc i'isfato dc aIta energia en la posición I del I . formindose I.ies otra cnziina inducibfe y alristérica. coi1 un grupo -SH rcctinstituido. v i n de la pentosafosfato. catali~adapor la fosfogliceratocinasa.3-bi~fr.oc fosfator. O. Este fosfato de alta cncrgia cs capturado como ATP en una rcaccihn posterior con cl ADP. Eii consecuencia. NADH prtid~icido E1 en la eiizima no estiran íirnicincntc unido a clln como el NAD'.Es probable que el 7. sea E1 piso siguiente es catatizado por la enolasa e iinplica unadeshidratacioi~ redistrihución de la energia y . depende del NAD'. y la en7ima libre. desiando 3 fosfogliccrato..(i-hisfoslato. I. Uno de estos grupos se localiza en el sitio activo dc la enziina (figura 19-3). diphu. cs cciiivcrtida a fiuctosa4-fosfato por la Frisfohexosa irornerssa. en inglis.) en las reacciones anteriores para prod~icir I -atscno-3-fosfoglicerato. cl zliceraldehído-3-fosfato y el fosfato de diliiclroxiacetonn. por 1. dc fructosa existen cn la célula principalinenle bajo la forma furanhsica.3-bisfosfoglicerato y.6-bisfosfato. derivados dc los scsiduos de cisteina dentro de la cadena polipeplídica.3-bisfosfnglicerato.vpho~/yccvwie) un intermediario en esta seaccibi~.~ictocinas. 1. Shlo participa el anomero alfa de E glucosa4-losfato. Se encueritran ciiiitro grupos -SH cn cada polipkptido.

iina propiedad que puede usarse cualido se ncccsite impedir la glucólisis antes de calcular la gllicosa sangvinca. se han encontrado varias isoziinac de esta y iicnen importancia clínica (capitulo 8). antes de su conversión en acetil-COA.H-C-OH I CH~O-Q t Gliceraldehido 3. Piruvato + NADH + H' ++ L(+)-Lactato + NAD' El fosfato dc alta energía del fosfoenolpíruvato es transfcrido al A D P por la enzima piruvato cinasa. Si prevalecen las condiciones La reoxidación del NADlI. .fosfato 7 i .. La enolasa cs inhibidri por C] E flririruro. permite que la gluc0lisis prosiga en auscncia de oxigeno al regenerar suficiente NAD' para otro ciclo dc la reacción calalizada por la gliceraldchído3-Tosfato deshidrogenasa. 7 Complejo enzima-sustrato Oxidación del sustrato por I H . Fosfoenolpiruvato + ADP t Piruvato + ATP L'! estado redax dcl tejido determina ahora riifil de las dos vias se debe seguir. el cual de esta manera es capaz de inhibir la glucólisis dei~tro la niolécula. para generar en este estadio dos moléculas de ATP por inolécula de glucosa oxidada. El pirtivato es reducida por el NADH hasta lactato. anaerobias. En condiciones aerobias.H. (Enz. se le oxida a CQ2 en el ciclo del ácido cítrico. en una reaccibn catalizada por I n en7ima lactato deshidrogenasa.OH I Intermediario rico en energia Figura 19-3. La eaizilna depende tambicn de la prcsencia de Mg2'o de Mnn+. se eviia la reoxidacibn del N A U H mediante la transferencia de equivalentcs rcductores a través de la cadena respiratoria liasta el oxigeno. 2-Fosfoglicerato t Fosfoenolpiruvato + H20 . gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa ) La enzima es inhibida por el yodoacetato. que es un veneno para el -SH.quc se forman en la gluc6lisis se introducen a las rnitocondrias por medio de 1 de las 2 lanzaderas que cc describen en el capitulo 14. formándose así e fosfocnolpiriivato. Los equivalentcs reductores a partir de NADH .C . Mecanismo de oxidacrón del gliceraldehido 3-fosfato. lo cual eleva el fosfato de la de posiciiin dos al estado dc alta energía. Esta es otra reacción sin equilibrio que se acompaña de una pérdida considerable de energía libre en forma de calor y debe considerarse fisi<ilhgicainente irreversible. por la via de la formación de lactato. En enolpiriivrtto que se forina eii csta reacciiin cs convertido cspontkneamentc a la forina ceto del piruvato. el piruvato se lleva al interior de las mitocondrias y.

termina siempre en lactato porque la ~nitocondria. donde la velocidad de trabajo del órgano IIO e s t i limitada por su capacidad de oxigenaci6n. que se encuentra en concentracibn elevada. Estas reacciones con catalizadas por la herocinasa (y la glucocinasa). L7 p é d i d s de un r fosfato de alta energía. En los eritrocitos.-bisfosfoglicerato. 700H-C-OH L-- + Piruvato Figura 1 9 4 . el conducto gastrointestinal. por tanto.lnal tratar la regulación de la gluceneogknesis cn el capitiilo 2 1. músculo liso y eritrocitos. Indicadora de que no hay produccihn neta de ATP cuando la gluchlisis toma esta vía. H-c=O H-C-OH I t---Glucosa JNADH + H' j ADP. la in6diila renal.josa para la economía del eritrocito. Las cClulas que son capaces de efectuar un movimiento total de metabolitos en la direccion de la síntesis de la vía glucolitica (gluconeogénesis) lo hacen debido a la presencia de diferentes sistemas enzimáticos. Sin embargo. El último es convertido en 3-fosfoglicerato par la 2. actividad que tambien se atribuye a la fo. tres de ellas son marcadamente exergbnic a i y. se combina con la hemoglobina. puede ser vent. Ciclo del 2.que contiene la maquinaria enzirnhtica para la oxidación aerobia del piruvato no esta presente. . Asi. T coo- La glucólisis se regula en tres pasos que implican ecuaciones no equilibradas Aunque la mayoría de las reacciones glucolíticas son reversibler. aun en condiciones aerobias. el 2.se e. la retina y la piel.. El eritrocito de mamiferos es único en el sentido de qiie 90% de su necesidad total de energia es sumfnistrada por la gluc0lisis. incluyen al cerebro. junto con !a re&<?cidn dt.3-bicfos- foglicemto (figura 194).~tua'ia.3bisfosfogliceratofosfatasa. otros te¡idos que nortnalrnente derivan la mayor parte de SLI cncrgia a partir de la glucólisis y producen Iactato. en forma de calor. Una enzima adiciona!. la energía libre relacionada con el fosfato de alta energía del 1. puede ser desviado por un proceso que disipa eficazmente.2 ¡S Bruquimrca de Hrrrper (Capítulo I9j Tejidos que funcionan en circunstancias hipóxicas tienden a producir lactato (figura 19-2) Esto e5 particularmente cierto en el rnusculo csqueIético.3-b1sfosfoglFceratoen loseritrocitos.ifu rnuktsa. Ademhs de las fibras blancas del niiisculo esqueletico. el paco catalizado por la fosfoglicerato cinasa. Las cantidades adicionales dc lnctato producidas piiedcn ser determinadas eii los tejidos y en la sangre y la orina.3-bisfosfoglicerato. ya que permitiría que la glucólisis continuara cuando la necesidad de ATP fuera mínima.3-bisfosfoglicerato a 2. los cuales proporcionan rutas alternas de las reacciones irreversibles catalizadas por las enzimas mencionadas. riñones y corazón por lo general captan el lactato. Estas. su presencia en los eritrocitos ayuda a la oxihemoglobina a descargar oxigeno (capitulo 7 ) . El hígado. la g~ucóiisS. pcro In producen shln en condiciones de hipoxia. !a bisfosfoglicerato mutasa. causando una disminucibn de la afinidad por el oxigeno y un desplazamiento hacia la derecha de la curva de disociación de la oxihemoglobina. deben considerarse fisiológicamente irrever5ibles. Laglucólisis en los eritrocitos. puede suprimirse el segundo sitia de glucólisis para generación de ATP E n los eritrocitos d e numerosas especies d e mamiferos. cataliza la convcrsfdn dcl 1.~fogliceer. la fosfofructocinasa y el piritvato cinasa y son los principales sitios de regulación de la gluc6lisis.

la flavoproteina reducida cs oxidada por cl NAD-. cI que a su ve7 transfiere equivalentes rediictores a la cadena respiratoria. Se lec designa de manera colectiva coino cl cornple.LA OXIDACIÓN DE PIRUVATO A ACETIL-CoA ES LA V ~ A IRREVERSIBLE DE LA GLUCOLISIS AL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO Aiitcs dc quc cl piriivato pueda entrar en el ciclo del acidocitricci debc Ilcvarsc al interior de lamitocondria 1. In vivo. tambien genera un cnlace tioester de alta energia en la acetilXoA. la piruvaio dcshidrogenasa y. la cual disminuye la actividad. Un aumento en la actividad en el tejido adiposo ocurrc dcspiiks de la administración de insulina.13 iin transportador especial de piruvato que a) uda a su paso a través de la membrana mitocondrial interna. el piruvato es descarboxilado por oxirlaciiin a a c e t i l 4 o A . que a su veL i~acciona la lipoamida oxidada. eii presencia de dihidrolipoil deshidrogenasa. E. acetilCoA y N A D H (figura 1 9 4 ) Tamhibn Fe regula mediante la fosforilaciún de tres recidiios de serina dcl componente piruvato desl-iidrogcnasa del compleio multienzima con participacihii de una cinaa especifica de A'ff'. se liberan aproximadamente 2780 kJ como calor. pADH]rmAD'l o [ATP]/[ADP]. además de generar tina coenzima reducida (NADH). en donde los sustratos se manejan dc una enzima a la siguiente. La cinasa se activa cuando aumeiitan las proporciones de [acetil4oA]ilCoA]. .itci crlmprcnde un mecanisnio simportador q ~ c c o t r i n ~ p o riin proton (figura 14-1 2). quc incrementan estas proporciones.iiialogas al comple. la glucólisis se iiihiben no shlnpor un potencial energético eievado. componente del complejo de la en7inia ii un dcrivado hidroxietilico del anilla tiazhlico del riifosfatn de tiamina unido a la enzima. Aprouimadamcnie 38 moles de A'TP son generados por molécula de glucosa oxidada hnsia CO? 4 agua. El movimiento de las enzimas individuales parcce ser restringido y los intermediarios inctabiilicos no se disocian libremente. Tal complejo enzimatico. Así.jo de vitamina B (capitulo 52). pero no en el Iiigndo. rinnlmcnte. cuando se increnienta la concentración dc icidos graso5 libres. EI aceti 1-Tipoamida reacciona con la cticnrinia A formando acetil-CoA y lipoamida rediicido. Por tanto. Se asume que la energia total capturada en forma de A'I'P por las moleculas de glucosa oxidada es de 1961 kJ. se ha calculado que el AG para la reacción de la sintesis de ATP es de aproxiinadamente de 5 F . La tiamina es un imporiantc miembro del complc. Dentro de ta la iiiitocondria.jo piriivato deshidrogenasa y son .i~cicin nperarido secuencialmente en 1111 comple-jo riiultieiiziinático. sino también bajo condiciones de oxidación de acidos grasos. La oxidación de la glucosa produce hasta 38 moles de ATP en condiciones aerobias. cino que permanecen unidas a las enzirnas.s de notarse que el sistema piruvato deshidrogenasa es suficientemente elecíronegativo con respecto a la cadena respiratoria que. La mayor parte del ATP se produce como consecuencia de la fosforilación oxidativa resultantc de la reoxidación por la cadena respiratoria de las coenzimas reducidas. pero sólo dos cuando no hay oxígeno Cuando un m01 de glucosa es qucmado e n un calorímetro hasta CO? y agua. di+ rninuye la proporcihn dc Ia cnzima en la forma activa lo que ahorra carbohidratos. Piruvato + NAD' + COA 4 La piruvato deshidrogenasa se regula mediante la inhibición por el producto final y la modificación covalente La piruvato deshidrogenasa cc inliiblda por siis productos.io de la alfa-cetoglutarato dcsliitlrogenasa del ciclo del hcido cítrico (figiira 18-3). El resto es generado por fosCoriIacih a "nive1 de sustrato" (capítulo 14). t:l pirutato es descarboxilado por Ia piruvato dcshidrogenasa. incrementa la velocidad de reaccion y elimina reacciones secundarias. Varias enzima5 catalizan esta rc. algo de esta energia no se pierde inmediatamente como calor. o cerca de 68% de la energia de combustión. lo que eleva la eficiencia global. y por medio de la fo~forilacionpor iina fosfiitasa quc iiicrtnientn la actividad de la deshidrogeriasa. k. el grupo prnsiiiico con dc l a riihidrolipolil transacetilasa. del mismo modo. organizadas en una config~iración espacial regular. Acetil-Cok + NADH + H' + CO2 CI coniplejo piruvato hidrogenasa consiste en cierto riiiinero de cadenas polipeptidicas de cada una de las tres en7imas componentes. E1 ciclo de reacción se complcta ciiando el uliimo cs reoxidado por iina flavoprotcina conteniendo FAD. Cuando la oxidacion tiene lugar en los tejidos. 6 kJ. para formar .icciil-liponrnida (figura 19-5). sino quc cs "capturada" en enlaces fosfato de alta energía. en la inanicihn. En el cuadro 19-1 se muestran las reacciones responsablps de la forinacicín de fosfato de alta energia durante la oxidación de la glucosa y la producción total cn condiciones acrobias y anacrubias.

se preseiitan con una acidosis lactica similar.Figura 19-5. Forma un brazo largo y flexible. cl ccrebro es uti tejido relevante para que este defecto metabblico se manifieste en trastornos neurol6gicos. que con frecuencia es mortal. FAD. Descarboxilacion oxidativa por el complejo piruvato deshidrogenasa El acido Iipoico esta unido mediante un enlace amida al residuo de Iisina del componente transacetilasa del complejo enzimatico. permitiendo que el grupo prostetico del Acido Iipoico gire secuencialmente entre el sitio activo de cada una de la$ entimas del complejo (NADt. del mismo modo que una dcftcicncia diet4tica de tiamina. Los alcoh6licos privados de aliinei~iostienen deficiencia de tiamina por lo que. En virtud de su dcpeiidencia de este carbohidrato como combustible. difosfato de tiamina. dinucleotido de adenina y nicotinamida. dinuclebtido de flavina y adenina. que puede deberse a defectos en uno o más de los componentes del complejo de la enzima.) ASPECTOS CL~NICOS La inhibición del metabolismo del piruvato produce acidosis Iáctica Los iones arsenito o mercuricos forman complejos con los grupos -SH del ácido lipoico e inl~ibena la piruvato deshidrogenasa. en especial después de una carga de glucosa. Por su parte. TDP. . cuando reciben glucosa. la cual permite la acurnulaciiin de piruvato. los pacientes con carencia hereditaria de piruvato deshidrogenasa. muestran una acumulacion ripida de piruvato y acidosis lactica.

el segunda sitio donde se lleva a cabo la gluciilisis para producir ATP. en particiilar con dietas ricas en carbohidratos. A: Regulación por inhibición d e producto final B: Regulación por interconverción de formas activa e inactiva Se Fabe de mutaciones de virtualmente todas las enzimas del metabolismo de carbohidratos. en el músculo en ejercicio) o cuando la maquinaria inetabhlica no existe para oxidacion ulteriw del pituvato (comoen los eritrocitoc). por ejemplo. 2) Funciona de manera anaerobia mediante la regeneración del NAD' necesario en la reaccion de gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa. La deficiencia hereditaria de aldolasa A y de piruvato cinaFa en los eritrocitos causa anemia hemolítica. RESUMEN 1) Ln glucolisis es la via para el metabolismo de rlucosa (o gliicbgeno) a piruvata y lactato. Proporcionar iin coinbustible lipidico alterno. hexocinasa (o glucocinasa). durante iriaiiicihn.i-i-1 NADH + H+ PDH-a [ A~etil-COA ] !COA] [NADH] [NAD'] W I [Aopl M~'' fOESFOSF0-ENZIMA activa) 1 PDHFOSFATASA M ~ ' +ca3+ . puedc ser . La capacidad de esfuerzo de los pacientes con deficiencia muscular dc frisfofriictocinasa es baja. 3) El lactato es cl producto final de la glucolisis anaerobia(por ejemplo. ciian'do hcida'. a saber. 4) La glucolisis se regula por tres enzirnas qiie catalizan reacciones sin equilibrio. cada una de el las relacionada con enfermedades Iiumanas. por acoplamiento de csta reacción a la reduccihn de piruvato a lactato. 5) En los eritrocitos. Regulacion de la piruvato deshidrogenasa (PDH) Las flechas onduladas indican afectos alost8ricos. \ 1 Insulina (en el tejido adrposo) Figura 1 9 4 . inejora la capacidad para el trabajo. fosfofiuctocinasa y pinivato cinasa. la cual - se efectúa en el ciiosol de todas las celulas de mamíferos. gmsos y cuerpos cetonicos auincntaii.

: Regulation of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex. importante para disminuir la afinidad de la hemoglobina por 0 2 . Academic Press.19. 13:497..+-tosrato deshiidrogenasa Fosfogliscerato cina Piruvato cinasa Cantidad de ATP consumida por reacciones catalizadas por la hexocinasa y la fosfofructacinasa clo del ido rico deshidrogi iglutmato r o tiocinasa .. lo cual totali r aproximridamente 1 rno1 del ATP'. Whelan W J (editors): Carbohdrate 1Metabolism and lts Dnsorders Val 3 . A. puesto que e l ATP ya no se necesita para la reaccibn de hexocinaa. lo cual conduce a la formacibn de 2..56:89. .222 Binquimfca de Harper (Capitulo 19) - Cuadro 19-1. Randle PJ. 1E :47. Sols A: Multirnodulation of enzyme activity. Srere PA: Complexes of sequential metabolic enzymes.. Malato cleshidroger nasa Qxidacibn de 2 NADH en la cade rcspirato.. 3rd ed. Academic Press. en la cade respira10 0ixidacihn de 2 NADH: en la cadc licL respiratoria ixidacibn al nivel del sustrato .c. ixidaciiin de 2 FADH2 en la cadena respiratolria ixidación de 2 NADH: en la cade . . L> L I ~ I W ~ U ~ tado hacia - esquivado. Phil T m s R Soc London R 1981.P por mo de NADE1. Annu Rev Nutr 1993. Trends Biochem Sci 1986.*"A"" Total 30 4 T c condiciont -)tal por moslkculas de glucosa en Ia glucblisis -St. Nótese qur l hay un beneficio sustancial en condiciones anacrobiaf SI el glucbgeno es el punto de Iinicio. Veneziale CM (editor): The Regulation of Carbohydrnte Formation and L'til~z~tion Mammals. Hess B: Design of glycolysis. Annu Rev Biochem 1987. siendo ent nnces la producción ñetrI total de 36 en lugar de 38 El calculo ignora la pequeiia perdida de ATP debido al transporte de H N con piruvato hacia la niitocondria ) a un transporte semejante de H' en la operacibn de la lanzadera de malato. Mniversiw in Park Press. el NADH que c---.S 6 2 4 - Totai por moiecuia ae glucosa eti condiciones aerobias - as respiratosria . 7) Los trastornos que implican una incapacidad para metabolizar pimvato con frecuencia conducen a acidosis Iáctica. 1972. . dado que . alta cnergil en la glucíilisis se eleve de 2 a 3.3bisfosfoglicerato. Fothergill-Gilmore LA: The evolution of the glycolytic pathway. . Vols 5-9. McGraw Htll. REFERENCIAS Behal RH et al. Curr Top Cell Reg 1981. 1981.urirs -. 6 ) El piruvato es oxidado a acetilXoA por un complejo multienzimatico conocido como piruvato deshidrogenasa que depende del cofactor vitarnínico difosfato de tiamina.77. . a prodiicci6n total 43e fosfato dr . 1995. R Scriver C R (editor): Metabolic Basis oflnheritedDasease 7th ed. Steiner DF.293:5.ria Oxidacibn dc 2 NADH. Boiteux.liiiiiiiiuiii c i i las rnitocandiim ~ J IiiicJio de la l a n ~ ~ suc ai ~ a l a t o i (figura 1 14-16) Si se emplea la lanzadera de glicerofosFato s61o podrian formarse 2 . Generacibn de fosfato de alta energía en el catabolismn de la glucosa acci6n cat ción d e 4 rcspiratoria osforilacion . Boyer PD (editor): The E v m e s . . t 9 t .iE nivel cle1 sirstrato osforilación al nivel cle1 sustrato Gliceralaeniao-.

debido a su masa mayor. de1 ingles. Se encuentra en proporcibn mayor en el hígado (hasta 6%) y en el musculo. El glucógeno muscular funciona como fuente de fácil disponibilidad de unidades d e hexosa para la glucblisis dentro del propio musculo. Al igual que el almidón. 10 L. Esta reacción es catalizada en el rnúscuto por la hexocinasa. El glucógeno hepatico sirve en gran medida para exportar unidades de htxosa para la conservación de la glucosa sanguinea. En seguida. inclubo..6bisfosfato es un intermediario. imen total. La enzima participa misma está fosforilada y cl gmpo fosf~rico en una reacción reversible en la cual la glucosa-1. Por su parte. originando debilidad muscular o. una reaccihn que es comun para la primera reacción en la vía de glucblisis a partir de la glucosa. Sin embargo. Las enfermedades por almacenamiento de glucógeno son un grupo de trastomos hereditarios caracterizados por la deficiente movili7ación de glucógeno o por la deposicibn de formas de glucógeno anormales.-m i del hlgado. 33 ~ g . y en el liigado por la glucocinasa. es un polimero ramificado de alfa-D-glucosa (figura 15-1 5). glucógeno. LA GLUCOGENESIS SE PRESENTA PRINCIPALMENTE EN MÚSCULO E HIGADO La vía de biosíntesis del glucógeno utiliza un nucleótido de glucosa especial (figura 20-1) La glucosa es fosforilada a glucosa-6-fosfato. la muerte. el músculo almacena 3 a 4 veces la cantidad de gluciigeno que tiene el hígado como reserva (cuadro 20-1). en particular entre comidas. a muscular. el glucógeno muscular s61o disminuye de manera significativa después de un qjercicio vigoroso prolongado. la glucosa-1-fosfato reacciona con el . Almacenamiento de carbohidsatos I ser humano adulto normal (70 kg).rifosfato de uridina (UTP. después I Glucógeno hepi (ilucúgtno mus Gluc-osa extrace --. Despuds de 12 a 18 horas de ayuno.El glucaghn es la principal forma de almacenaje de carbohidratos en los animales y corresponde al almidón de las plantas. La glucosa-6-fosfato es convertida en glucosa-l -fosfato en una r e a c c i ~ n que catafiza la enzima fosfoglucomutasa. uridine briphos- . donde rara vez excede de 1 por ciento. el higado casi agota su reserva de dro 20-1.

del inglés. e . adcnosina o citidina.~ Glucosa liberada por la enzima desramificante 2 PI Tnfosfato de uridina (UTP) \ Glucosa-1 -fosfato u CINAJA Glucosa-6-fosfate ATP T alyc0Wsis and mntoss o bhmphaie pathway Glucosa Figura 20-1.Gjucbgeno (Unidades glucos~lo1 4 y 1+6) (Unidades glucosilo 1 +4). inhibición La insulina reduce la concentración de cAMP s61o después de que el glucagón o la adrenalina la han elevado. CI mismo sriicar pucdc citar unido a diferentes nuclchtidiir Por cjcinplo. es decir. UDPGIC+ PPi * hbc conoccii otros compuestos de ~iiiclc~sidosdií'nsfatos de <le wucares. tiinidinn. Vía de la glucog4nesis y glucogenblisis en el higado. asi como a Iris de guatiosina. estimulacion. la glucosa puede enlazarse a los nuclcótidos de iiridina (cumu se muestra desput's). Se emplean dos enlaces fosfato de alta energía en la incorporacion de 1 mol de glucosa al glucbgeno 0 . UJP + Glucosa-1-fosfato c-. Además. antagoniza su accibn El glucagon es activo en el músculo cardiaco pero no en el músculo esquelético. Insulina I "Glucogeno primordial" t 1 0 I Glucagon Adrenalina D~fosfato de uridina y glucosa A la vla del Bcido v r 6 n i c ~ UDPW PPIROFO~~JFORIMSA. la glucanotransferaca y la desramificación son dos actividades separadas de la misma enzima. phcrrc) para formar el nucleótido a c t i v o difosfato de gliicosa de tiridina (UDPGlc. La reacción entre l a glucosa-1-fosfato y el trifosfato de uridina es catalizada por la enzima UDPGIc pirofosforilasa.re)* (figura 20-2). por cjernplo el UDPGal. La consiguiente hidrblisis del p i r o f o s f a t o inorzanico por la pirofosfiitasa inorganica impulsa la reacción la derecha la Gracias a la acción de la enzima gluchgeno sinta-9 el C I de la g l u c ~ s a c t i v a d a de la UnPGlc a forma un enlace glucosidico c o n e l C4 d e l residuo . Al parecer. uridine ~liphmphute pltrrn.

Debe haber una molécula preexisterite d e glucógeno o gluchgeno primordial para iniciar esta reacción. Biosintesis del glucogeno El mecanismo de la ramificación puede observarse por adición de glucosa marcada con C" a la dieta en animales vivos y examinando el glucbgeno hephtiw en posteriores intewalos . Las ramas crcceii por inis adiciones de unidades glucosilo 1 +4 con ramificacihn posterior. P r + (C&-1 + Glucosa-1-fosfato glucogeno glucogeno O Residuos de glumsa no marcado OK3 Enlace glucosidico l+6 ~~~-~lucosa adicionada . transtiere tina parte de la cadena 1 4 4 (longitud rnfnima de seis residuos cfc glucosa) a una cadena vecina. . Otros rcciduos adicionales deglucosa se adhiere11en la pocicibn 1 4 4 para hacer una cadena corta cpe se activa For la gluc6geno sintasa. ~nicntias en el higado. para formar un enIace 1. CC' 1 / Figura 20-3.1" t UOP + (Cs)n+i glucogeno glucogeno LA GLUCOGEN~LISIS 0 ES N LA INVERSA DE LA GLUCOGENES~S SINO UNA V ~ A SEPARADA En la via de degradación interviene un mecanismo de desramificación (figura 20-1 ) Es el paso catalizado pos In fosforilasa. . Difosfato de glucosa de uridina (UDPGlc) teriiiin. que es liinitante de la velocidad en la glucogenhlisis: (C8)n + Ln ~l. UDPGlc L. Ida molécula priinordial dc gliicrjgeno puede a su ycz haberse formado de una ~iroteinaconocida como glicogenina. de manera que las "rainas" dcl "árbol" de glucógerio se vayan alargando conforme se constitiiycn otroc enlaces 1 +4 (figura 20-3). Ciiando el número de residuos terininales no redrictores aumenta.En el mecanismo de ramificación hay desprendimiento de cadenas de glucógeno existentes O I ---HO OH Ribosa Glucrisa Cifosfato Uridina Figura 20-2. Cuando la cadena se ha alargado como minimo a 1 I residiios d e glucosa. En el iiiúsciilo esqueletico. estableciendo de este niodo un punto de ramificación en la molécula. la glucogenina pcrmancce adIierida en el centro de la molécula de glucógeno (figura 15-5 j..il de glucosa dcl glucogeno. .a adición de un residuo de glucosa a una cadena previa de gluc6geiio o molkcula primordial tiene lugar eii el extremo externo no reductor de la molécula. liberando difosfato dc uridina (llDP). una segunda enzima.6. la enzima ramificante ([1+41=tl l k 6 ) amilotransgliicosidasa).liicogeriiriaes una prntcina de 37 kDa qiie se glucohila sobre iin residuo especifico de timsina medinnte UDPGlc. el numero de moléculas qtic tic :I~ic6gcnci supcra al de glucogenina. * (CE. lo cual acelera F taiito la glucogCiiesis como 13 glucogen<ilisic. la cantidad total de ciclos reactivos en lamcil~ciila e eleva.

La adenilato ciclasa es activada por hormonas como la adrenalina y la noradrenalina que actúan a travCs de receptores beta adrenérgicos en la membrana ccEular y en el higado por medio de! glucagdn. permitiendo que la glucosa libre difiinda de fa cklula a la sangre. E1 cAMF es destruido por una fosfodiesterasa y la actividad de esta enzima es la que. hay una enzima específica. La reacción catali7. cAMP). la enzima es cosa por enlaces glucosidi- cos 1+4 Unibnde residuos de glucosa por enlaces glucosldicos 1+6 Figura 2 0 4 .Esta enzima es especifica para la degradacion fosforolítica (fosforólisis confrontese hidrólisic) de Ios enlaces 1 del glucbgeno para producir glucosa-l -fos4 Iaro.5'-adenilico (AMP ciclico. de modo quc puede formarse glucosa-h-fosfato a partir de la glucosa-l-fosfato. L a fosforilasa activa (fosforilasa a) tiene uno de sus grupos hidroxiIo de seriiia fosforilado en un enlace éster. que actúa a traves de un independiente receptor de glucaghn. Con Ia acción de una fosfatasa especifica (proteína fosfatasa-ll ). La accihn combiiiada dc la fosforilasa y de estas otras enzimas conduce a la degradación completa del gIucbgeno. Éste es el paso final de l a glucogenolisis hepática. AMP cíclico) (figura 20-5). Los residuos glucosilo de las cadenas más externas de la inolécula del glucógeno son separadas hasta qiie nihs o mcnns cuatro residuos de glucosa permanecen en cualquier lado de una rama 1 4 6 (figura 2 0 4 ) . por lo c o m h . . Con la eliminacion de la rama. la cual se refiqja en la elevación de fa glucosa canguinea. que se encuentra en la superficie interna de las membranas celulares. Pasos en la glucogenólisis Figura 2 0 6 . La fosforilasa hepática es diferente a la muscular En el higadn. Se sabc que la insulina incrementa su actividad en el liigado. La escisibn hidrnliticii de estos últimos enlaces requiere la acción de una enzima desramificante Q[1+61amilogliicosidasa). a travbs del cual actúan numerosas hormonas. Ácido 3'. Muchas modificaciones covalcntes se deben a la acción del cAM P (ácido 3'. Otra enzima (alfa-1 I +4]-+aIfa-[1-+4] glucano transferasa) transfiere una unidad trisachrida de una rama a la otra. En e1 hígado y e1 riñiin (pero tio en el míisculo).ada por la fosfoglucomutasa e5 reversi hle. exponiendo los puntos f+6 de la rama. conserva baja la concentracihn de cAMP.5' -adenilico cidico. Proviene dcl ATP mediante Ia acción de la enzima adenilato ciclasa. que rctira cl fosfato de la glucosa-6-fosfato. El cAMP es el compuesto intermediario intraccluIar o segundo rncnsajero. la glucosa-ti-fosfatasa. EL AMP C~CLICO INTEGRA LA REGULACIÓN DE GLUCOGENOLIS~S Y GLUCOGÉNESIS Las principales enzimasqlic controlan el metabolismo del glucógeno -gluccigcno fosforilasa y glucógeno sintasa. disminuyendo por tanto la concentración de cAMP. pi~ede proseguir la accfiin de Ia fosforilasa.están controIadas a sti vez por una serie compleja de reacciones que comprenden mecanismos alostéricos y modificaciones cova~entesdebidos a la fosforilacibn y desfosforilación reversible de la proteína enzimatica (capítulo 1 1). la enzima existe en tanto en la forma activa como en Ia inactiva.

a fcisforilasa en el músculo es activada por la adreiialiiia (lisura 20-6). La inactivación de la fosforilasa es efectuada por la proteina fosfatasa-í Tanto la fosforilasa a como la fosfori lasa ciiiasa a son desfosforiladas e inactivadas por la proteína fnsfatasa-l. cada par formado de una subunidad reguladora (R). que contiene cl sitio activo. el cual es aclivo siilo después de que ha sido fosforilado por una proteina cinasa dependiente de cAMP. Sin embargo. el cAM13 controla tanto la activación como la inactivacibn d e la fasforilasa (figura 2 0 4 ) . caiisada por la activación de la fosforilasa c i n a ~ apor el Caz+. la glucógeno sintasa existe en estado fosforilado y no fosforilado. son los principales mediadores de la estimulaci6n de las catecolaminas en la glucogenolisic. por conducto de una fosforilacibn posterior. de las mitocondrias al citosol. 10 cual asegura su sincronizacidn. la fbrma activa está desfosforilada (gliicógeno sintasa a) y puede ser inactivada a gliiciigeno sintasa b mediante la l'osforilaci6n en siete residuos de scrina por no metios dc . EI increinento en la concentraci6n del cA M 1' activa a iina enzima con especificidad amplia. los csiudios han mostrado que los receptores alfa.as subunidades alfa y beta contienen residuos de scrinn que son fosforilados por la proteina cinasa La actividad de la glric0geno sintasa y de la fosforilasa se regula de manera recíproca (figura 20-7) AI igual que la fosforilasa. Esto implica una movili. la proteina . Por tanto. independiente del cAMP. La combinacihn con el cAM13 hacc que el cornple+joR2C2 se disocie.yyno i¡ 22 7 inactiv~da fosforilasa b en una reacción que comprende a In cliiiiinacion hidrolitica del residuo de serina. al contrario de la primera. gamma y deIta en una estructura represcntada como (apyG)4. la fosforilasa cinasa. Esta cinasa catali7a la foshrilación por el ATP de la fosforilasa cinasa b inact ¡va a la fosforilasa cinasa a activa.r. La subunidad beta fija 4 Ca" y es identica a Ia pmtcina .acibn de Ca2-. L. la calmodulina {capítulo 44). la f ~ m a fosforilada sólo es activada por completo en presencia de Caz'. a SLI vez. Sin embargo. La rcaciivacion requiere una nueva fosforilaci6n con A 1'1' y u n a enzima especifica.Metabolismo d ! g/i:cb. Sin embargo. La fijación del Ca2' activa el sitio cataIitico de la subunidad garnma en tanto que la molécula permanece en la configuracicin b desfnsforilada. Existe en dos formas: fosfiirilasa a. la proteína cinasa dependiente de cAMP.¡adora dc Caz+. La proteína cinasa inactiva depeiidiente de cAMP esti ctinslituida por dos partes de subunidades.jadora de Cal' en el mlisculo. beta. aumentando la nctivacibn.a f<isSorilasa muscular es inrnunol~gicay genéticainente distinta a la dcl hígado. mecanismo que proporciona combiistiblc al músculo. Por tanto. la cual esta desfosforilada 4 es activa solo en presencia del AMP. la activaciiin de la contraccibn muscular y de la glucogcn6lisis son realizadas por la misma proteina tijadora de Caz-. la cual esta fosforilada y es activa en precencia o en ausencia de A M P (su rriodificador alosterico) y la fosforilasa h. segiiida por la estimulacion de una fnsforilasa cinasa sensible a Ca2t/ca1modulina. esto ciicede no conio u11 cfccto directo cine por medio de la accion del cAMP. Esta ultima es inhihida por una proteina denominada inhihidor-l. Una segunda molecula de ca!modulina o dc TpC puede interactuar con la fosforilasa cinasa. [. activü a la t'osforilasa b a fosforilasa a. Esto ocurre diirante ejercicio cuando laconcentracibn dc cAM P aumenta. la oxitocina y la angiotensina 11 que acíiian a travds del calcio o de la via del bisfosrato de fosfatidilinositol (figura 44-7). lacual. liberando los inonómeros C activos.Esto comprende la activación rhpida de la fosforilasa. 1. la misma sefía1 que inicia la contracción. La gliicogenólisis independiente de cAMP es causada tambidn por la vasopresina. R2C2 + 4cAMP o 2C + 2(R<AMPz) Enzima Enzima La glucogenólisis en el hígado puede ser independiente del cAMP AdemBs de la importante accihn del gIucag6n en la formacibn del cAMP y en la activacion de la fosforilasa hepática. El cAMP activa la fosforilasa muscular I . La fosforilasa cinasa muscular tiene cuatro tipos de subunidades: alfa.a fosforilasa a es la forma activa Iisiolhgicamente normal de la enxima. inactiva activa El Ca2+sincroniza la activación de la fosforilasa para iniciar la contracción muscular La glucogenólisis aumenta cn el mucculo varios ciendespués del comienzo de tos de veces inmedia~amente la ~nnlraccibn. Es un hecho significativo que la calmodulinn sea analoga cn estructura a la 'lpC. que fija 2 moleculas de cAMP y una subunidad catalitica (C). dependiente de cAMP.

Control d (n = numero de La secuencia de reacciones ordenadas corno una cascada permite la amplificación de la seíial hormonal en cada paso .Adrenalina Receptor p Adenilato clclasa inactiva Adenilato ciclasa activa FQSFODIESTERAJA ATP r- Glu~&geno(~+i] c 5'-AMP CAMP 1 Figura 20-6.

que permite la accioli honnonal mediada por cAM13.iio cs ti11 aclivador alostérico de la glucbgenci sintasa li..~cic proteina cinasas difcrcntcs. flecha ondulada. al proinover la de~fosforiIaciiiri activaciiin y de Iri glucbgeiici sintasa b. Dos de las proteína cinasas son depeiidientes de Caz-'calmodulina (una de estas es E a frisforilasa cinasa). Control de la glucogeno sintasa en el musculo (n = número de residuos de glucosa) La secuencia de reacciones ordenadas en cascada permite la amplificacibn de cada paco.de iiiliibir la síntesis de glucogeno dc inodo siiicronizado con la activación de la glucosenniisis. sino quc al inisnio licinpo la Adrenalina Receptor p @ Adenilato ciclasa activa Adenilatocicla~a inactiva ATP 4 cAMP l 1 FOSFODIESTEWSA 1 t 5'-AMP inactiva DEPENDIENTE Inhibidor-1 (inactivo) pr m a Cl*& r9 u DEFf PI3 E n PROTEINA DEPENDIENTE ADP Glucosa-6-tosfato GlucbgenomF + UDPG Inhibidor-1-fosfato (activo) PROTE~NA FOSFATASA-1 Figura 20-7. Por lo general. la cual estd Iiajo el coritrol de la proteina cinasa dependicntc dc c A M I ' (tigura 20-7). -4 y -5. lo que hace que cantidades nanomolares de hormonas produzcan cambios importantes en la concentracibn de glucbgeno (GSC. -4 y -5. glucógeno sintasa cinasa-3.tratn (por alosterismo) asi coino b control horo i .irnbi&i-i estiinula la ~ i n t e ~ de gluchgcno en cl is iníisculo. inonal. a 5 cinasas rcstnntcs son conocidas como gliicogeno sintnsa cinasa-3. que C¿ILIWLIII~ wduccihn en Ia Klllpara la UDP-glucoca y que permite lii síntesis dcl gluctigeno por la cn~ii-tiai i s h i ilada. EL EQUILIBRIO DE LAS ACTIVIDADES ENTRE LA GLUCOGENO SINTASA Y LA FOCFORILASA REGULA EL METABOLISMO DEL GLUCOGENO (Figura 20-8) La glucógeno sintasa y fosforilasa estan baio control del su.1 . Los siete sitios dc fosfori laciijn ecthri coriten idos eii cada 1 de 4 subunitladts idkilticas. [ . y la insulina t. la decfosfo- rilacion de la glucOgeno sintasa b se efectUa por la acciiin de la proteina fosfatasa. adivacion alostérica) . E l g l u c ~ g e n o l tatnbien e-jeerce una iiihibición sobre su propia forniacibii. La glucosa-ú-iosI'. L a ioslorilasa sc activa no solo por uii aiinicnto en la ~oiicentraciónde c A M t' (por medin de uiia fci~ftirilasaciiiasa). Otra c i In prolcliia ciiiasa depend i c i ~ t edc cAMP.

I y./ ' Y / glucbgeno \ \ / J / Glucosa 1-Fosfato Giuwsa (higade) Glucosa Lactato ( m ú s w i ! ~ } Figura 20-8. Estas fosFnrilaciones secundarias modifican la sensibilidad de los sitios primarios para fosforilacion y desfrisforilaciiin.I (Figura 20-8). Por tanto. de la fnsforilasacinasa g dc la gliicíigeno sintasa h cs llevada a cabo por una sola enziina de especificidad amplia-proteína iosfataw-l. la gliicogenolicis ~ ~ c krminarse y la glucog&nesis estimularse dc d c inanera sincrnnizada o viceversa. conduciendo a glucogenesis . La dos cnzimas. Tn~iibiCi~ la regulacihn del metabolismo del en gluch~eno importante el hallazgo de que la desfoses torilación cie la fosforilasa a. Control coordinado de glucogenólisis y glucog8nesis por proteina cinasa dependiente de cAMP Las reacciones que conducen a glucogenólisis como resultado de un incremento en la concentracibn de cAMP se muestran por flechas gruesas y las que inhiben por activacibn de la proteina focfatasa-1 se muestran por flechas interrumpidas Lo inverso ocurre cuando la concentración de cAMP disminuye debido a la actividad de la fosfodresterasa. fosfo- rilasa y glucógerio sintasa. de El factor principal en el control del metabolismo hepático del glucógeno es la concentración de fosforilasa a Esta cnzima controla no sOlo cl paso limitante de velocidad en la glucogentílisis. Io cuaI se conoce como fosfnril~cihn sitios rnirltiples. debido a que los dos prncecns se sincroilizan por la actividad de la proteína cinasa dependiente de cAMP. esta ultima cs ínhibida por una ~xwteinacii~asadependiente de cAMP a tmvtSs del ilihibidor. Im dos efectos son mediados por una proteína cinasa dependiente dc cAMP.glucógeno sintasa se convierte en la forma inactiva. sino qiie tambien inhibe la actividad de la proteína fosfatasa. a sir vez. la inhihiciOn de ésta incrementa Ia glucogenblisis total. de este modo. Aqí. la inhibición de la glucogenblisis potencia la glucogenesis total y. piicden iosforilarsc de mancrareversible en mhs de un sitio por de las cinasas y la acción de las fosfatasas separadas. controla la sintcsic de glucogeno (figura 20-3). A sii vez. La inactivacibn de la fosforilasa es consecuencia de la inhibición alostérica por glucosa cuando In concen- ' J / PKOTEINA FOSFATASA-1 / PwTEINA CIHASP DEPEND~ENT E DE cAMP PROTE~M A FOSFATASA-í A \ O \ \ .

pero tm bitn eki ste la pos ibilidad di anemia h emolitica Lurrici cri )eficienciaI de fosfo fructociasa en mil:rculos y eri trocitos Jeiicierrcla de fosforilasn ciria- el tino VI . Noin b r e 'aracterist Enfi :von Gierke Deficiencia d e gIu fi . La administración de insulina de inmediato inactiva a la fosforilasa. los musc UIOS tienen ---*--LA -. cnfcrn antc enzima ante: Acumula dos rami- .. .. polisaciri acterísticu: Tipo l V Acumula S con puntos cioncle no esian muy ramificados. como una fuente de combustible metabólico lista para usarse.. 3) El glucógeno se sintetiza a partir de glucosa y otros precursores por la vía de la glucogénesis. a - iipo ir hfemeaaa oe trompe Deficiencia de fa glucosidasa alfa-1 +4 y 1 +6 l isosornal (maltasa ácida) iusencia dr inzima di Tipo III Dex trinosis Iírnite o enf: dad de Forbes o Cori ris. Hipogluceinia. se tienen informes de deficiencias de adenilata cinasa y proteína cinasa dependiente de cAMP. ejercicio:. La muerte se debe a insuficiencia cardiaca o hepática en el primer ano de vida Disminliyc la tol erancia a 1 . cetosiS e hiperlipidemia acumulaci en los lis ~ c i cardia. su función principal es servir a otros tejidos mediante la generación de glucosa sanguinea. . glucogenosis se resumen en el cuadro 20-2. Es degradado por una vía separada conocida como glu- ASPECTOS CL~NICOS Las enfermedades por almacenamiento de glucógeno son hereditarias El termino de "enfemedad por almacenamiento de glucógeno" es una expresidn genkrica que intenta describir a un grupa de trastornos hereditarios que se caracterizan por depósitos de un tipo o de una cantidad anormal de glucógeno en los tejidos. Las ctlulas hephticas y del túbulo renal cargad as con glu cbgcno. Enf . se tiendle hacia 1. cubre las necesidades s61o d e ese órgano. Causa del trasto rno . . . POCO O nada de lactato en la sangre dcsputs de ejeercich 4 Tipo V Deficiencia de miofosfoi sind:reme de McArdlc fosforilasamuscular Tipo VI de fosfor ilasa he- Alto coritcnido de gluchgeni hcphtíco .Metahdi~mo nlucúgeno del 23 1 tracibn de esta se eleva después de una comida. La activación es causada por 5'-AMP que responde a la depleción de ATP. RESUMEN 1) El glucógeno representa la rnhs importante forma de almacenaje de carbohidrato en el cuerpo del mamífero y se encuentra principalmente en hígado y músculo. hipogluclcmia Como eri el tipo V . . Las principales Cuadro : 20-2. Los efectos de la insulina requieren la presencia de giucosa.--- iento de es por alrnacenam. Algunos de los trastornos descritos han me-¡orado con los trasplantes de higado.1%). No se produce regulación de las enzimas de rarnificación y desramificacidn. 2) En el hígado. . -..aiiuiiirale~altos de Luiireriiuub glucbgeno (2. En el músculo. lo cual es seguido por activación de la glucdgeno sintasa. Asimismo.5 a 4..

Am J I'hj. I\cadcrri ic I'ress. Gnnnnn RIL.269:2232R.ZI~tahnlic ~ Husis nflnlicrircrl Disrr~ssp.ericia respectiva de gluciisa-O-fosfataca.: I.lc~nholisni otzd lis Disorcicrs. Elir S Biuchciii 19x5: l j l:130. 1 9x3. Raz I.cogenbli~is. Randle P.siol 1991:200:13430. Vol 3 . etl. 1995.I. .o/ o/ E~qvnli* ctivih 2nd ccl Chnpinnn & 1 Iiil E. 'rciiti N. Katz A. Steiner DF. M o l Ccll Endocrinti1 I 'IX 1 :23:233. Nuttall FQ: Iricrirprirulitin cif glycogc~~¡in iiifo n hcpntic prciteoplycogen allcr nrnl ~Jti~oic: iidininistrati(~[~. REFERENCIAS 11 E::ilicn 1': htirr.Whelan W.324~30. Cierldes R: (. Spcnccr MK: Fpiticpliriric inliiliits iiisulinincdiiitcd gly ccigenesiii h u i enhances glycoly sil. Scrivcr CR et r l.íver transplnntation for typc i V pliictigcn storngc discnsc. Hers HC:: 'l'liecrinlrril cif~pliicngen metaholistn in itic livcr. Annu Rcv Biochcm 1976:. 1% l . i r i tiumaii skele~al muscle. d Riol Cliem 1994. Iliosciencc I k p 198h:Ci:415.(editor): 7 % .15:167. 71h Selhy R et al. Mc( iraw-tiill. N Liigl 1 Mrtl 1Oi)1.il control r i l ' eii/yiiie artivity. 5 ) Dcficicncias Iiercditarias en enziinas c h p c c i f i ~ r i s de metabolismo en hígado y múcciilo ocasionan enfermedades por almacentlrniento de glucógeno. C'cilicn 1': I'lic rrilc rit' prutein phrisphorylation in thc lirirri\iin.T (editors): I 'rirhnl<i:rlvotc A. Exton JH: Molccular mechanisrns i n v o l ~ c d cx-adrenerin pic icsponses.lq~cigcn:14 mctnbnlic viewpoinl. 4) El A M P cíclico integra la rcgiilacion de In glucog c ~ i ~ i l i s iys de l a glucogdnesis cn Iin patroii recíproco nl pi*omovcr la ac~ivaciiinde la fosforilasa y la inhibiciún de In glucógeno ~intasa. ~ t última conduce a la formacion de E a gliicora cri el hígado y de lactato en el músculo dehiclo ¿i la prcsenciñ o aur.

Además. entre la hctosa-l . principal ácido graso glucogénico producido por los rumiantes en la digestión de las carbohidratos. Es evidente que aun en las situaciones en qiie la grasa puede suministrar la mayor parte del requerimiento calórico del organismo. Se rcquiere un suministro constante de gtucosa como fuente de energia. es un sustrato importante para la gluconeogénesis en estas especies. IMPORTANCIA BIOMÉDICA La gliiconeogénesis cubre las necesidades corporales de glucosa cuando el carhhidrato no esta disponible en cantidades suficientes en la alimentacion. liberan gran parte de energia libre como calor y por tanto son fisloliigicarnente irreversibles. PhD. en especial para el sistema nervioso y los eritrocitos. ya que contienen el conjuntocompleto de enzirnas necesarias. la glucosa es el unico cambustible que suministra energia al muscu!o esquelético en condiciones de anaerobiosis. la vitamina B biotina y CQ:. Por debajo de una concentraci6n critica de la glucosa sanguínea. hay disfunción cerebral que puede conducir a coma y muerte. El pmpionato. El higado y el riíión son Tos tejidos donde se realiza principalmente el proceso. lactato.L la gluconeogénesis es por lo general mortal. glicerol y propionato.MAS ALGUNAS REACCIONES ESPECIALES (Figura 21 -1) Las barreras termodinámicas impiden una inversión simple de la glucólisis Krebs seílaló que las barreras energeticas obstruyen la reversión simple de la gluciilisis: entre el pimvato y el fosfoenolpiruvato. Mayes. lactato.B-bisfoshto y la fnictosa-6-fosfato.de la glucosa sanquinea U Peter A. DSc La gluconeogénesis es el temino que se iitiliza para incluir todos los mecanismos y vías responsables de convertir otras sustancias diferentes de los carboa hidrato~ glucosa o glucbgeno. Es precursora del azucar de la leche (lactosa) LA GLUCONEOGENESIS INCLUYE LA GLUCOLISIS Y EL CICLO DEL ÁCIDO C~TRICO. Es posible esquivarlas mediante reacciones especiales. en presencia de ATP. hay siempre un cierto requerimiento basa1 de glucosa. por ejemplo. entre la glucosa-6-fosfato y la glucosa. los mecanismos gluconeogénicos sc utiliran para depurar los productos dcl metabolismo de otros tejidos desde la sangre. Además. Todas estas reacciones no tienen equilibrio. A. en la glándula mamaria y se capta activamente por e! feto. Piruvato y fosfoenoIpiruvato En la mitocondria se locali7a la enzima piruvato carboxilasa. la cual. que se f o m a continilamente por el tejido adiposo. y glicerol. producido por el músculo y los eritrocitos. Los sustratos principales para la gluconeogénesis son los amínoacidos glucogknicos. La insuficiencia L. La glucosa se requiere también por el te-jido adiposo como fuente de glidrido-glicerol y es probable que intervenga en la conservaci6n de la cifra de intermedios en el ciclo del acido cítrico en numerosos tejidos. convierte al piruvato en oxalacetato. . y entre la glucosa-l -fosfato y el gluc6geno.

las flechas cortadas modificación covalente por fosforilacibn reversible Las concentraciones altas de alanina actuan como una "cefial gluconeogifnica" que inhibe la glucblisrs en el paso de piruvato cinasa . Las flechas onduladas significan efecto alost&rico. Los puntos de entrada de aminoácidos glucog&nicosse indican por flechas que salen de circulos (figura 1 8 4 ) . Las enzirnas gluconeogenrcas clave se muestran con un rectángulo doble El ATP requerido para gluconeog8nesis se suministra por oxidacibn de Budos grasos de cadena larga. El propionato s6lo tiene importancia cuantrtativa en los rumiantes. Vias mayores y regulacibn de gluconeog8nesis y gluc6lisis en el higado.234 Bioquím ica de Hurper capitulo 2 1) - Glucosa HEXOCINASA Glucosa 6fosfato Glucógeno AMP A 1 Gliceraldehido 3-tosfato Fosfato de dihidroxiacetona 3-Fosfato de glicerol Fosfoenotpiruvato Oxalacetato Figura 21-1.

la fosfocnolpiruvato carboxicinasa es una enzima mitocondrial y el fosfoenolpiruvato se transporta al citosol para su conversión en 1. En el ser humano. la fructosa-1 . Estas enzimas esenciales que permiten la inversión de la glucólisis tiene una función importante en [a gluconeogenesic. la glucosa ó-fosfa- h . Esta reaccion es anhloga a la fijacibn det C 0 2 en la B.. el lactato forma pinivato y dehe entrar las mitocondrias antes de convertirse en oxalacetato y en último término en glucosa. los aminoacidos glucog~nicos forman ya sea piruvato o miembros del ciclo del ácido cítrico. CoA*SH CO2 +H. Esta es una enzima clave en el sentido de que su presencia determina si un tejido es o no capaz de sintetizar glucógeno a partir no s61o del piruvato sino tambiin de los triosafosfatos. . no .COA SucclnilEoA L-Metilmalonil-COA I Figura 21 -2. a! rebasar la barreraenergetica entre el piruvato y el fosfoenolpinivato. cataliZí! la Conver~at~ si6n dcl oxalacetato en fosfoenolpinivato. Glucosa . Fructosa 6-fosfato y fructosa 7. cítríco C H ~ -C<>Pnlim. Asi. el lactato se puede convertir en fosfoenolpiruvato. experimenta una reaccibn de fijacibn de COZpara formar D-metilmalonil-COA. catalizada por la propionil-COA carboxilasa (figura 2 1-2). o-Metilmalonil-COA lntermedlos del ciclo del Acido e CH.COO- coo Propronato CO. producto de esta reacción. las reacciones descritas pueden dar cuenta de la conversibn tanto de los aminodcidos glucog&nicos como del lactato. Glucosa 6-fosfato y glucosa ~a conversión de glucosa h-fisfato en glucosa se cataIiza por otra fosfatasa especifica. Por tanto. En esta reacción se necesita fosfato de alta energía en la fonna de GTP o ITP v se libera CO. El propionato se activa primero con ATP y COA por una acil-COA sintetasa apropiada. Las relaciones entre e s t a enzimas claves de la gluconeogénesis y la vía glucoIitica se muestran en la fígum 2 1-1 . necesaria para lograr la reversión de la glucolisis. Se sostiene que esth ausente en los musculos cardiaco y liso. las enzima se distribuyen por igual en mitocondrias y citosol. entra a la ruta gluconeog&nica principal por la via del ciclo del hcido cítrico despuis de su conversidn en succinil-COA. La propionil-COA. Esth presente en el hígado y ridones y demostrada en eI músculo estriado. Por tanto.I-fosfato glucógeno y La degradacihn del glucógeno Iiasta gl~icosa -fosfato 1 se efectua por la fosforilasa. D.Bli~~~-tH 60-$-COA CO-S.~a san~uinea 235 La función de la biotinaes ligar el CO?del bicarbonato a la enzima antes de la adición del CO: al pinivato (figura 52-13). en glucosa o glucógeno.Gluconeogknesis y control de la gluco. En el higado de pichones. Esto se resuelve mediante conversión a malato. el cual puede transportarse al interior del citosol y reconvertirse en seguida a oxalacetato mediante la malato deshidrogenasa extramitocondrial.&bisFosfatasa. lo cual genera un problema ya que el oxalacetato no difunde al travCc de la membrana mitocondrial interior. Una segunda enzima la fosf ~ e n ~ l p i r l l carboxicinasa.O CARROXILASA H -$. Decputis de la transarn inacidn o desaminacibn. lo. . cobayoc y vacas. pollos y cone. supresencia a un agregar glucosa a la sangre. que es la fuente principal de glucosa en los rumiantes.S. La sinresis de gluc6geno implica una vía enteramente diferente a travds de la formacibn de la difosfato de widina y glucosa y la actividad de la glucógeno sintasa (fígura 20-1). En la rata y el raton la enzima esta en el citosol. se cataliza por una enzima especifica.6-bisfosfato de fmctosa por inversión de la glucólisis. El propionato.jos. C.6-bisfosfafo La conversión de fnictosa 1. Metabolismo del propionato. Esta enzima se encuentra en higado y pero tejidos muscular y adjpoco.COA ATP A M P + PPI Propionil-COA ATP ADP + p. con la avuda de estas dos enzimas que catalizan transformaciones endergbnícas y de la deshidrogenasa Iáctica.6-bisfosfato en fiuctosa6-fosfato.

La secreción de insulina. se encuentra entre otros tejidos. E hígado y el b riii6n son capaces de convertir el glicerol a glucosa sanguinea haciendo uso de las enzimas anteriores. La infmaci6n en este cuadro se aplica en gran parte a enzima? hepiiticas. Las dos deshidrogenasas de la vía de la pentosa fosfato pueden clasificarse como enzimas adaptativas. influye en el patrón del metabolismo en las diversas vias. que requiere ATP. que a su vez. la cual requiere vitamina B 1 2 como coenzirna. en el higado y riiiones. aumenta la sintesis de las enzirnas responsables de la glucólisis.acetil-COA por la acetil-COA carboxilasa (capitulo 23) en que forma un derivado malonilo y requiere la vitamina biotina como coenzima. Esta via conecta con las etapas de triosafosfatode la vía glucolitica. Del mismo modo. 10 cual indica que estas dos enzimas intervienen en las lipog6nesis mas que en la gluconeogCnesis (capitulo 23). dado que aumentan su actividad en ct animal bien alimentado y cuando la insulina se administra a un animal diabético. La "enzima malica" y la ATP-citrato liasa se comportan de igual moda. Tres tipos de mecanismos pueden identi- La modificación covalente por fosforilación reversible es rápida El glucag6n y en menor grado la adrenalina. y cataliza la conversibn de glicerol en glicerol-3-fosfato. Aunque la via hacia el succinato es su ruta metabólica principal. La deficiencia de vitamina B 7 en el ser humano y los animales conduce 1 a la excrecion de grandes cantidades de metilmalonato (aciduria metilrnalhnica). de los hcidos grasos que tienen un número impar de átomos de carbono en la molécula. Su actividad es baja en diabetes o en ayuno. en el tejido adiposo y glandula mamaria. ficarse como responsables de la regulacíon de la actividad enzimática en el metabolismo d e carhohidratos se muestran en el cuadro 21-1: 1 ) cambios en la velocidad de sintesis enzimática. hormonas que disminuyen la glucosa en la sangre. Esta enzima. lo pueden utilizar. 2) modificación covaientc por fosforilación reversible y 3) efectos alost~ricos. h menudo 10s efectos se refuerzan dado que la actividad de las enzimas que catalizan los cambios en la dirección opuesta varían de manera recíproca (figura 2 1-1 1. I -me& rnalonil-COA. a menudo modificando la actividad de enzimas clave que intentan compensar el cambio original en Ia disponibilidad del sustrato. La inducción y represión de la síntesis de ensimas clave no son rápidas sino que utilizan varias horas Algunos dc los cambios mejor estudiados de la actividad cnzimática que ociirre bajo diversas condiciones rnetaMlicas aparecen en el cuadro 2 1-1. Ias de glucólisis y lipogenesis) son más activas cuando hay un exceso de sustrato y bajo estas condiciones las enzirnas responsables de la pl-oduccibn de glucosa por la vía de gluconeogénesis muestran escasa actividad. Los acidos grasos C I qy C17se encuentran particularmente en los lipidos dc los rumiantes de donde constituyen una fuente importante de estos acidos grasos en la alimentación humana y por iiltimo se degradan en propionato en los tejidos (capitulo 24). El gIicerol es un producto del metaboIismo de[ tejido adiposo y sólo los tejidos que poseen la enzima activadora glicerol cinasa. Las enzimas catali7an reacciones de no equilibrio que fisiológicamente pueden considerarse como " una dirección'' más que ecuaciones balanceadas. que es sensible a la conccntraci6n sanguínea de glucosa. Es importante observar que las enzimas clave que intervienen en una vía metabólica se activan o deprimen d e manera coordinada. el propionato puede también utilizarse como cebo rnolecular para la sintesis. antagoniza el efecto de los glucocorticoides y del cAMF estimulado por glucagón el cual induce la síntesis de las enzimas clave responsables de la gluconeogknesis. Se ha demostrado. por E metilmalonil-COA racemasa a antes de cu isomeracícin final a succinil-COA por la enzima metilmalonil-COA isomerasa. Las tluctuaciones de su concentración sanguínea por cambios en la disponibilidad dietética pueden alterar el indice de secrecidn de hormonas. inhiben la glucólisis y estimulan la gluconeogénesis en el hígado mediante el aumento d e la concentraci6n de . de algunas de las enzimas de la glucólisis y de las enzimas especificas de la via gluconeogénica: fmctuosa-1. Todas las enzimas que a intervienen en S utilízacibn de la glucosa (es decir. El cuadro 2 1-1 muestra con claridad que éste es el caso. porque el glicerol-3-fosfato puede ser oxidado a fosfato de dihidroxiacetona por el NAD' en presencia de la glicerol-3-fosfato desfiidrogenasa. DEBEN REGULARSE DE MANERA REC~PROCA Los cambios en la disponibilidad de sustratos son responsables de manera directa o indirecta de lamayor parte de los cambios en el metabolismo.la regulación d e las especies mRNA de estas enzirnas y la modulacion de la expresión de sus genes. La D-metilmalonilCOA debe convertirse en su estereoisómero.6hisfosfataca y glucosa-6-fosfatasa (figura 2 1-1). TODA VEZ QUE LA GLUCOLISIS Y GLUCONEOGENESIS COMPARTEN LA MISMA V ~ A PERO EN DIRECCIONES OPUESTAS.

II. adrenaAl'l gón? -- Glucagbn (cAMP 1'6 ato. Enzimas reguladoras y adaptativas de la rata (hephticas en gran parte) . cuerm n r o o t Xn.fosfato t l L 1 lnsulina Insulina Enzima m i -P.~ . - . c ras vias d8 fosfatos ii e pen tosa y de lipop L t 1 .".C O A .. ~nsul~na -E C dcshidrol h L giucagui1. oA de ca- A C C LP . tnsulina 1. .n"l - Enzimas ae Piruvata c arboxi11 . .. glucagó~ adrcnalina (CAP dl=) ticoides. aatena- - F carnox~c~ - F t i c o i d e s . J diabetes - Enzimas de gluco~eno. A -. asa HLAVL~LLU~ C. i Insulin fosfori geno -- -- I --. AMP 3SB :n 7 h Glucosa-h-t r "ticoides. glucagh1.A A- -" - Insulina 1 Cilucagón I I - - Piriitfatocin asa - alanina bn (cAMI' ndrcnal ina - Piruvato dt:shidrog cnasa 1 4. ~knesis. A T P * . pin1. glu S istema de glucógeno sini.. adrenalina (cAb L .- i - 1- - carbohidratns -"A" .Citrato (ácidos grasos. .Pi.ADP.Gluconeo.. cuierpos cct& fosfato* n i c o s li * .. .cido grasn - * AIOSIC~IC~ --- 'En tejido adiposo pero nin en higado. fructo!.NADH'.ATP (ácidos grasos.~éncsis control de la nIucosa sanguínea 237 y Cuadro 21-1. T ! 1 NAD*. .L WU"L A CCL ~ xilasa -" dena la T h.vi. ~ Glucor ticoides. i rI. Fosfofructot l 1 zenesrs . glucagún. . + fructesa t5. Activid Dieta con r-1 -.'.a .1P-C itratc .A c e t i l .

en un estado de suficiencia de nuiientes.a activación de esta última enzima. que reduce el valor Km para el bicarbonato. De manera simultánea.6 bisfosfata. inhibe la captacibn adicional de glucosa en tejidos extrahepáticos por inhibicibn alostérica de la hexocinaca.6-bisfosfatasa fosforilación.por ATP e incrementa 1 su afinidad por fructosa 6-fosfato. I. su oxidación ulterior en el ciclo del hcido cítrico por la pinivato carboxilasa. Su concentmcibn esta bajo control del sustrato (alost&rica) y hormonal (modificación coralente) (figura 2 1-3). a su vez.'estimula á la cinasa e inhibe a la fosfatasa. ayuda a explicar la accibn "ahorradora" de esta oxidacibn de Bcidos grasos en el metabolismo del pinivato y en la estimulación de gtuconeog~nesishepatita. en donde. cuando el ATP se usa en procesos que requieren energia y deja como subproducto ADP. Una consecuencia de la inhibición de fosfofructocinasa. Este mecanismo permite que la actividad de fosfofi-uctocinasa.6-bisfosfato. la A M P activa una fosforilasa que incrementa la glucogen6lisis. es decir. la concentracihn de AMP silbe. ya que posee actividad de fructosa-2.1 sea muy sensible inclusive a cambios mínimos en el estado energetico de la celula y controle la cantidad de carbohidratos que experimentan glucólisis antes de entrar al ciclo del ácido cítrico.Como [ATP] puede ser 50 veces mLs elevada que [AMP] en el equilibrio. También afectan la concentracibn de fructosa 2. a su vez. y la inhibicibn recíproca de la piruvato deshidrogenasa por el acetil-COA formada de la oxidacilin de Bcidos grasos. La inhibición de la fosfohctocinasa-1 por citrato y ATP podria ser otra explicación del efecto ahorrador de la oxidación de ácidos grasos en el consumo de glucosa y también del efecto Pasteur donde la oxidación aerobia (por el ciclo del ácido cltrico) inhibe la degradacirin anaerobia de la glucosa. como se expiica adelante. Alivia la inhibicibn de fosfofmct~inasa. a requiere la presencia de acetil-COA como activador alostérico. El AMP actiia como un indicador del estado energktico de E a cklula. la síntesis de oxalacerato a partir de bicarbonato y piruvato que se cataliza por E enzima piruvato carboxilasa.6-bisfosfato y por lanzo la glucólisis y la gluconeogenesis. Inhibe la fructosa1. La relación recíproca entre la actividad de piruvato deshidrogenasa y pimvata carboxilasa en hígado y riiíón altera el destino metabólico del pinrvato cuando el tejido cambia de oxidación de carbohidratos por glucólisis a gtuconeogtnesis durante la transicihn de un estado de nutrición adecuada a inanicihn (figura 2 1-1). Esta enzima bifuncional esta bajo el cona01 alostérico de fnictosa 6-fosfato.ó-bisfosfatasa por incremento de Km para h c t o s a 1. Por tanto. La adición de acetil-COA conduce a un cambio en la estructura Terciaria de la proteína. Una funcibn importante de la oxidacidn de Bcidos grasos en la promocibn de la gluconeogknesic es suministrar el ATP requerido en las reacciones de piruvato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carboxicinasa. Lo cual. cuando la glucosa escasea. Otra enzima que est6 sujeta a control por retroalimentación es Ia fosfoIructocinasa (fosfofructocinasa-1)Ocupa una posicion fündamental en la regulación de la gluc6lisis.cAMP. 6-bifosfatasa en el hígado es la froctosa 2. La presencia de adenilato cinasa en el higado y muchos otros tejidos permite el equilibrio rápido de Asi. y también. un cambio g r a n d e en [ A M P ] a c t ú a c o m o a m p l i f i c a d o r metabólico de un cambio pequefio en [ATP]. La fnictosa 2. el glucagbn estimula la producción de cAMP. una disminuci6n fraccionaria pequeña en [ATP] causará una elevacion importante en [AMPJ. por la reacción: ATP + AMP H 2ADP . el cual cuando aumenta de concentracirin debido a una abundancia de elucosa. invertir la reacción catalizada por fosfoglicerato cinasa en la gluc~lisis.6bisfosfatasa. La misma enzima es también responsable de su degradacidn. asegura de manera automática una produccién constante de oxalacetato y. activando a la ~ r o t e i n a cinasa devendiente de cAMP la cual a su vezrinactiva a la fos'fofructocinasa-2 y activa a la fnictosa-2. La modificación alosterica tambien es rápida Se dispone de varios qjernplos del metabolismo de carbohidratos para ilustrar el control alostérico de la actividad de una enzima. igual que acetil-COA se forma del pinivato. En la gluconeogknesis.6-bisfosfato se forma por fosforilación de la fmctosa 6-fosfato por acción de fosfofructocfnasa-2. ha fructosa 2. por tanto.1 es la acumulaci6n de glucosa6-focfato que. conduciendo a fbsforilación e inactivacion de la piruvato cinasa. cuando [ATF] disminuye. incrernenta la actividad de tina proteína cinasa dependiente de cAMP.6-bisfosfato tiene una función exclusiva en la regulación de la glucólisis y la gluconegoénesis en el hígado El efector aloct6rico positivo más potente de la fosfohctocinasa-1 e inhibidor de la fnictosa-1 . El aumento en [AMP] tambikn puede explicar por qué la glucólisis se acelera durante la hipoxia. Este efecto tiene implícaciones importantes en la autorregulación del metabolicrno intermedio. Por otra parte. La enzima fosfofnictocinasa-1 se inhibe por citrato y por ATP y se activa con AMP.

en el ciclo fosfofructocinasa~fructosa-l.l y h c t o s a I . Cuando la glucosa escasea. piruvato cina~a.l.9.6-bisfosfataca). como en una sobredosis de insulina.6-bisfosfatasa. y glucógeno sintasa y fosforilasa.6-brsfocfatasa. Cuando se ingiere una comida rica en carbohidratos.:luconeogkne. Una disminución repentina de glucosa sanguínea causa ~onvulsiones.s-bisfosfato Piruvato t SANGU~NEA REGULA SE DENTRO DE L~MITES MUY ESTRECHOS Después de la absorción. .~i~s y cnnfi-ni de la glucosa sanguinea - 239 Glucosa - y glucbgeno . Los ciclos (vanos)de sustrato permiten un ajuste fino en la gluctilisic Puede apreciarse que muchos de los puntos de control y el metabolismo del gluciigeno comprenden un ciclo de fosforilación y desfosforilaci0n catalimdo por las enzimas siguientes: glucocinasa y glucosa-6-f'osfatasa.6-bisfosfatasa. Fnictosa 6-fosfato 1 .1 y ddesinhibe a la fnictosa-1.5 a 7.6-bisfosfataca. lnvestigac iones recientes indican que el 1.2. por ejemplo.6-bisfosfato y la enzima bifuncional PKFIF-2.0 rnrnollL) y en rumiantes considerablemente menor (alrededor de 2.6-bisfosfato. (PFK fosfofructocinasa 16-fosfofructo-9-cinasa]. fructosa-l. puede elevarse a 6.6 bisfosfato.6-bisfosfato de glucosa desempeila una funcibn semejante en algunos tejidos extraheplticos. fosfofnictocinasa.5 mmollL.6-bisfosfato aumenta su concentraci6n y estimula la gluc~lisis activación de fosfofructocinasa-1 e inpor hibicion de fnictosa.5 a 5. Este "ajuste fino" del control metabolico causa siempre cierta pérdida de ATP. La glucosa sanguinea en ares es bastante mayor (14. podria ocurrir una amplificación del efecto de un modificador alostérico. bajo abundancia de glucosa. ADP tA CONCENTRACION DE GLUCOSA Fructosa 1. Que esto no ocurra de manera extensa se debe a varios mecanismos de control que aseguran la inhibición de un extremo en tanto que el otro se estimula en cada ciclo.Este mecanismo tambi&nasegura que la estimulación de la glucogen6lisis hephtica por el glucag6n conduzca a liberación de glucosa y no a gluc6lisic.2 mmollL en ovejas y 3. como fnictosa 2. No obstante. de acuerdo al requerimiento tisular y corporal.6-Paca (6-fosfofructo-2-cinasalfructoca-2. se estimula la gluconeogénesis por disminucion de la concentración de fnictosa 2. Por ejemplo. Las flechas onduladas indican efectos alost~riws E Por tanto. es probable que haya alguna ventaja fisiológica en permitir cierta ciclizacibn. la fnictosa2. serian ciclos vanos (inutiles) cuyo resultado neto conduciría a la hidrólisis de ATP.6-bisfosfatasa. la concentración dc glucosa sanguínea en el ser humano y muchos mamíferos se encuentra dentro de los límites de 4. Figura 21-3. los valores bajan entre 3. No obstante. que desactiva la fosfofructocinasa. Durante el ayuno. si se permite una adaptación progresiva es posible tolerar concentraciones sanguínea mucho menores de glucosa. F16-Pasa. Control de gluo61isic y glucuneogénesis en el higada por fnrctoca 2.3 en el ganado vacuno). r a t a adaptadas a dietas ricas en grasas parecen normales con una concentración sanguinea de glucosa tan baja como 1. Si se permitiera a estos ciclos continuar sin freno. pinivato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carhoxicinasa. Al parecer estos valores bajos se relacionan con el hecho de que los rumiantes fermentan casi la totalidad del carbohidrato de los alimentos a hcidos grasos de cadena corta (volátiles) y estos reemplazan en gran parte a la glucosa como combuctible metabolico principal de los tejidos en estado de suficiencia de nutrientes. productor de un cambio algo mayor en el flujo total de mmbolitos en cualquier direccibn que el que ~ u r r i r i a en ausencia de la ciclizaci6n de sustrato.1 mmol/L.3 y 3. debido a la dependencia inmediata del cerebro de! suministro de glucosa.

Este proceso se conoce como cicln de Cori o del heido Ihctico (figura 2 1 4 ) . como algunos aminoácidos y propionato. Mecanismos metabólicos y hormonales regulan la concentración sanguínea de glucosa La conservación de valores estables de glucosa en la sangre es uno de los mecanismos homeostá~icos regulado con mayor precisibn y en el10 toman parte el hígado. Éstas se transportan al higado por la vena portal. se transporta al hígado y riflón para regenerar la glucosa. Esto tia conducido a la hipótesis de un ciclo glucosaalanina. Al parecer. GLUCONEOGENESIS Y GLUCOGENOL~SIS La mayor parte de los carbohidratos digeribles de la alimentación en última instancia forman glucosa. esta es llevada al h igado y sigue gluconeogénesfc de rcgreso a glucosa. Asi.LA GLUCOSA SANGU~NEA DERIVA DE ALIMENTACI~N. con fonnaciiin de pinivato. galactosa y fnictosa que se liberan en el intestino. Estos aciIgliceroles experimentan hidrólisis en forma continua para formarglicerof libre. luego. El 3-fosfato de glicerol para la síntesis de triacilgliceroles en el tejido adiposo deriva de la glucosa sanguinea. y 2) aquellos que son productos del metabolismo parcial de lo glucosa en ciertos tejidos y se llevan a hígado y riflbn. como se muestra en la figura 2 1 4 . predomina la alanina. qiie tiene e1 efecto de un ciclado de glucosa desde hígado al musculo. que no puede utilizarse por el tejido adiposo y por tanto. las celulas hepaticas son totalmente per- Figura 2 1 4 . el lactato. formado por oxidacibn de glucosa en músculo esquelktico y eritrociios. Ciclo del ácido lactico (Cori) y ciclo de la glucosa-alanina. Estos compuestos se agrupan en dos caxegorias: 1) los que tienen conversión neta directa a glucosa sin reciclamiento significativo. donde se sintetizan de nuevo a glucosa.jetos a gluconeogcnesis (figuras 1 8 4 y 21-1). Ocurre una transferencia neta de nitrógeno de amina del rnúsculo al higado y de energia libre del higado al músculo. La galactosa y fnictosa se convierten con facilidad a glucosa en el higado (capitulo 22). difunde a la sangre y sc convierte de nuevo a glucosa por mecanismos gluconeogenéticos en hígado y rifion (figura 71 -1 j. De los aminoácidos tmnsnortadosdesde el músculo al higado durante inanición. . La energia requerida para la síntesis hepática de glucosa a partir de piruvato deriva de la oxidacion de ácidos grasos. seguida por transam inacihn a alan ina. t o s carbohidmtos dietéticos que se digieren en forma activa contienen residuos de glucosa. La glucosa tambien se genera a partir del gluchgeno hephtico por glucogenolisis (capitulo 20). que está de nuevo disponible para oxidación en los tejidos. La glucosa se forma a partir de compuestos glucogénicos su. tejidos extrahepáticos y varias hormonas.

incrementa el influjo de Ca" por la vía de canales de Ca2' sensibles al voltaje y estimula la exocitosis de insulina... Sin embargo. - :lucnsa est ir insulina GLVLJ l. cada 1 con 12 dominios transmembrana. Icariwi A ut. Y -+ A- itacibn de 1 bcración r$ Miisculos.... .Gliaconeogéne~z. I " . a su vez.. nes encontradas en la vena portal después de una comida rica en carbohidraios. cuando la glucosa se eleva..5 rnmol:L) el hígado se comporta como un productor neto de glucosa." -. Transportadores de ~lucosa ... . eritrociin t-ligado. La insulina tiene una función central en E regulación de la glucosa sanguínea a Adernis de los efectos directos de la hiperglucemia para amplificar la captación de glucosa en hígado y tejidos perifericos.. A .. . La glucocinasa.~ I L I C ~ I ' CII CI IUUUIU p~11. . - Cuadro 21-2. la honiiona insulina interviene de manera critica en la regulacion de los valorcs sanguíneos de glucosa.. en donde entra poca glucosa a la vena porta procedente del intestino. la concentracidn de glucosa en sangre es un factor importante en el control del indice de absorcibn tanto en hígado como cn tejidos extrahepáticos. . - -- 'ransportadotes hidlreccionaleS facilitadi~ r e s Cerebro. la excreción hepatica de glucosa cesa. Esta hormona se sintetiza en las ~Clulas de los islotes de Langerhansen el páncreas como 13 una respuesta directa a la hipergiucemia. placenta. itacihn nctiiva de gluc la luz intc: l . Es de remarcarse que los medicamentos de Ia sulfonilurea que se utilizan para estimular la secrecidn de insulina en la diabetes sacarina de tipo 11 (diabetes sacarina no La glucocinasa es importante en la regulación de la glucosa sanguínea posprandial Debe recordarse que la hexocinasa se inhibe por glucosa 6-fosfato. . es compatible con esta función. tejido ad iposo Cal cardiaco y ! . Intestino LC.--.. ]. los índices de absorción y los de excrecihn son iguales a la concentracion de glucosa en E sangre de la vena porta a esto es. es probable que la actividad de ciertas enzimas y la concentracibn de intermedios clave ejerzan un efecto mucho más direcm sobre la captación y salida de gliicosadel hígado.. l l bitación tisula - -- Fu nciiincs .. Por otro lado.. X. se ocupa de manera específica de la captacion de glucosa en el hígado bajo las elevadas concentracio- . intestino del gatlo.3 rnmol/L.irln Transportadores unidireccionalesdepcnd odio 1 ... El higado no esta sujeto a esta restriccion debido a que la glucocinasa no se altera con el 6-fosfato de glucosa. Debido a esto. de modo que a valores altos hay una captación ncta de glucosa. el paso a traves de la membrana celular es la Iimitante de la veIocidad en la absorción de glucosa en tejidos cxtrahepáticos y la glucosa se fosfotila con rapidez por acción dc una hexocinaca al entrar a la célula. el ciclo del ácido cítrico y la generación de A'I'P. Se calcula que en la rata..esquelktico. que tiene una Km (menos afinidad) mas elevada para la glucosa que la hexocinasa..ltina1 . de modo que es posible ejercer cierto control por retroal imentaci6n en la absorción de glucosa por tqjidos extrahepáticos dependientes de hexocinasa mediante la fosforilacihn de glucosa.... En concentraciones sanguineas nonnales de glucosa (4. .. riilon.~L.. '.. - . colon.. . Su ausencia en los rumiantes. se muestran en cl cuadro 2 1-2.UW -Imln...a célula del islote es permeablc a la gliicosa por la via del transportador GLUT 2 y se fosforila por tina glucocinasa de una Kmalta. .~ -v control de la ~Iucosu sanguíneu * 211 meables a glucosa (vía el transportador GLUT 2) en tanto las células de los tcjidos extrahepfiticos (excepto los islotes pancreiiticos) son relativamente impermeables. cal rifiún Ccrcbro.. aumenta su actividad con concentraciones de glucosa por arriba de los límites fisiol6gicos (figura 2 1-5) y al parecer. . Asi la concentración dc glucosa sanguinea determina el flujo por medio de la gluc6lisis. - . El aumento en las concentraciones de IZTP inhibe los canales de K' sensibles al ATP lo que da lugar a despolarizacion de la membrana de la célula B.. Ida funciiin de varias proteínas transporíadoras de glucosa que se encuentran en la membrana celular..\1y LICIII ~U nial renal contra el gradiente dc conccntraciún . esto.-*. céluln B pancrcitica.5 a 5. ...L.. No obstante.

sobreviene glucogenolisis con formacibn de lactato. Esta hormona reduce la captacion de glucosa en ciertos tejidos. La mayor parte del g l u q ó n La hip6fisis anterior secreta hormonas que tienden a elevar la glucosa san~uinea por tanto. También se observa que en animales tirotbxicos no existe glucbgeno hepático. En el ser humano. antagonizan y. por ausencia de accihn de la glucosa-6-focfatasa. la acción de insulina. Es probable que parte de este efecto no sea directo. La insulina tiene un de efecto inmediato de incremento en la captación de glucosa en tejidos como el adiposo y el músculo. secretada por la mddula suprarrenal como~sultndo estímulos intensos (temor. en tanto que en el hígado. para la glucosa de la hexounasa es de O 05 mmollL y de la glucocinasa es de 10 mrnollL. agotamiento de las células B. Los glucocorticoides (1 1-oxiestcroidcs) se secretan en la corteza suprarrenal y lienen importancia en el metabolismo de carbohidratos. la glucosa es el producto principal con elevacidn concomitante de la glucemia. causa glucogenolisis por activacion de la fosforilasa. Esta accirin se debe a una aceleración en el transporte de glucosa através de la membranacelular por reclutamiento de transportadores de glucosa (GLUT4) desde el interior de la cdlula a la membrana plasrnática. QSNID). los glucocorticoides actúan como antagonistas de la insulina. la gtucogénesis y la gluconeog~nesis. Esto es consecuencia del catabolismo proteínico tisular excesivo. En todas estas actividades. hipoxia. También incrementa la glriconeogénesis a partir de aminolcidos y lactato. etcdtera). La hormona tiroidea tambitn d c b r á considerase aquí por su efecto modificador de la glucosa sanguínea. Sin embargo. Además. Idaad rerralina. por ejemplo. glucagbn. cuyas acciones se oponen a las de la insulina. La hipoglucemia estimula la secrecidn de hormona del crecimiento. insulinoclependiente. Variacibn de la actividad fosforilantede glucosa de hexocinasa y glucocinasa con incremento de la concentración sanguinea de glucosa La K. no hay efecto directo de la insulina sobre ta penetración de glucosa a células hephticas. actuan asi al inhibir los canales de K' sensibles al ATP. la insulina incrementa de manera indirecta la captacion hepática a largo plazo de glucosa como resultado de sus acciones sobre la sintesic de las enzirnas que controlan la glucólisis. secretina y el fármacoto!butarnida. No obstante. Laadrenalina y la noradrcnalina bloquean la secreci~n insulina. El glucagón se opone a las acciones de la insufina El glucagón es la hormona producida por las células A de los islotes de Langerhans del pancreas. Otras hormonas inftuencian la glucosa sanguínea Glumsa sanguinea {mmolfL) Figura 2 1 4 . Al c o n m i o de la adrenalina. excitaciún. el glucagón no tiene efecto sobre la fosforilasa muscular. Al causar hiperglucemia estimula la secrecihn de insulina y origina. por ultimo. De esta manera la concentración de insulina en sangre va en paralelo con la glucosa sanguinea y sil administración conduce con rapidez a hipoglucemia. Estas son hormonadel crecimiento. al parecer las personas hipertiroideas utili7an la glucosa a una velocidad nomal o . Cuando alcanza al higado (por la vena porta). La hipoglucemia estimula su secrecion. La administración crhnica de hormona del crecimiento conduce a diabetes. estos hallazgos concuerdan con el hecho de que el metabolismo de glucosa en higado no es16 limitado en velocidad por su permeabilidad a la glucosa. inLa sulina tiene un efecto inmediato al activar la glucógeno sintasa (capítulo 20). ya que moviliza acidoc &rasos libres del tejido adiposo que por si mismos inhihen la uti li7ación de la glucosa. ACTH (corticotropina) y qui& otros principios "diabetogenos". muscular. origina glucogenolisis hepática y muscular debido a activación de la fosforilasa. Se tienen datos experimentales de que la tiroxina tiene accibn diabetógena y que la tiroidectomia inhibe el desarrollo de diabetes. La administración de estos esteroides Encrementa la gluconeogénesis. de hemorragia. del incremento en la absorcion hepática de arninoacidos y del aumento de la actividad de aminotransferasas y otras enzimas que inservienen en la gluconeogénesis hepática.Vmai 100 Hexocinasa endógeno (e insulina) se depura de la circulación por el hígado. hipoglucemia. La glucogen0lisis y gluconeogénesis hepática contribuyen al tfccto hipergluccmiante del glucagón. ticidos d grasos libres. Otras susrancias que provocan la liberacibn d e insulina incluyen aminohcidos. cuerpos cetlinicos. la glitcosa sanguinea en ayunas esth elevada en pacientes hipertiroideos y es baja en hipotiroideos. En el músculo. Por el contrario. los glucocorticoides inhiben la utilizaci6n de glucoca en los tejidos extraheptiticos.

el exceso pasa a la orina para generar glucosuria. La glucosuria de origen renal puede deberse a defeoos renales hereditarios o es posible adquirirla por procesos patolbgicos. Además. Cuando la concentracion sanguínea de glucosa aumenta.6-bisfosfatasa causa lactacidosis e hipoglucemia El bloqueo de la glucogenog&nesispor deficiencia de esta enzima impide que el lactato y otras sustancias glucogenicas se transformen a glucosa en el hígado. estos iiltfmos son mucho menos sensibles a la insulina que las personas normales o hipertiroideas. En personas nomales. . La resorción de glucosa contra su gradiente de concentración se enlaza con el suministro de ATP en las celulas tubulares.~isy control de la glucossa sanguinea 8 243 mayor. Esto se conoce como umbral renal para la glucosa. que inhibe al sistema de resorci6n de la glucosa en el túbulo. Estos trastornos se describen en el capitulo 24. el filtrado glomerular puede contener mis glucosa de la que logra resorber. Esto se conoce como glucosuria renal. En anirnaIes de laboratorio puede producirse glucosuria con florhicina. Aderniis. que podría liberarse a partir del tejido adiposo.5 a 10. El glicerol.Iiiconeogkne. El trastorno puede controlarse con dietas ricas en carbohidratos que contengan cantidad escasa de fnictosa así como sacarosa y evitando el ayuno. en particular si hay un intervalo largo entre las comidas o durante 3 noche. Curvas de la glucosa sanguínea de una persona nomal y de un dtabbtico después de administracibn oral de 50 g de glucosa Nbtece la elevacdn inicial de la concentracidn en el diabetico El criterio de normalidad es que la curva regrese a su valor inicial en dos horas. Prueba d e tolerancia a la glucosa. la presencia de glucosuria es indicador de diabetes sacarina. La capacidad del cuerpo para utilizar glucosa puede investigarse por medición de su tolerancia a la glucosa La tolerancia a la glucosa se indica por la naturaleza de la curva de glucosa en sangre después dc la administraci6n de una dosis de prueba de este azúcar (figura 2 1 4 ) . Las enzimas dc la fungluconeogénesis pueden no estar compl~tamente cionales en tal momento y el proceso depende del suministro de Acidoc grasos libres para la energía. e! riñon también ejerce un efecto regulador. se encuentra menos disponible para glucaneoginesis. El deterioro de la oxidación de ácidos grasos produce hipoglucemia Varios trastornos en los que la oxidacidn de los Bcidos grasos es deficiente se caracterizan por hipogliicemia. en tanto 10shipotiroideos muestran disminucidn en su capacidad para utilizar glucosa. a los niños prematuros o de bajo peso al nacer son mas susceptibles a la hipoglucemia toda vez que tienen escaso te-jidoadiposo para generar combustibles alternativos como son los ácidos gasos libres o los cuerpos cetónicos durante la tmnsicih del estado de dependencia fetal al de la vida independiente. ASPECTOS CL~NICOS ADICIONALES Cuando el umbral renal para glucosa se excede se presenta glucosuria Cuando la glucosa sanguínea se eleva a valores relativamente altos.. La capacidad del sistema tubular para resorber glucosa se limita a una velocidad de alrededor de 350 mg/minuto. La glucosa se filtra de manera continua en los glomemlos pero. La diabetes sacarina (tipo 1. o diabetes sa- La deficiencia de fructcisa-1. Esto se debe a la dependencia de la gluconeogénesis de una oxidacihn activa de estos ácidos (véase antes). Con frecuencia. retorna en su totalidad a la sangre por el sistema de resorción de los tubulos renales. se produce glucosuria cuando la concentración de glucosa en sangre venosa excede de 9. de ordinario. La hipoglucemia se puede presentar durante el embarazo y en el neonate Durante el embarazo aumenta el consumo de glucosa por el feto y existe riesgo de hipoglucemia materna y posiblemente fetal. Tiempo (hora) Figura 2 1 4 .0 mmol/L.

139. que entra a la mitocondria por carboxilación a oxalacctata.5:379. RESUMEN 1) [a gluconeogénesis es el mecanismo que convierte . La insulina incrementa la tolerancia a glucosa. Krebs HA: Gluctineogcnesiq.6-bisfosfatasa y glucosati-forfatasa.7:903. Claus TH: I-EormonaI regulatirin of hepatic gluconeogenesis and glycolysis. Yki-Jarvinen H: Action of insulin cin glucuse rnetabolirm in \ ivo Balllieres Clin Lndocrinol Meiah 1993. I'rnc R Soc London (Biol) 1964. llliochem Soc Tran5 1990:18: 105. Un exceso de insulina puede causar hipoglucernia grave.25h:Eh51 Ruchalter SE. cabe esperar que ocurra en preseiicia de hiperactividad de la hiphfisis o la corteza suprarrenal. que desencadena glucogenólisis y liberacibn dc glucosa a la sangre. Diabetes Mctab Rcv 1989. La insulina. Shar SD. quc prosigue a convulsiones e inclusive muertc a menos que se administre glucosa con prontitud. Pilkis SJ.carina insulinodependiente. Annu Rcv Biochem 198857. Por el contrario. 1973. atribuible a una reduccidn en el antagonismo normal a insulinapor parte de 1% hormonas que estas glindulas sccretan de manera normal. Los sustratos importantes son aminohcidos glucogénicos. Recent Pro& Horm Rec 1991:47:339.l. 6) Las enzirnas defectuosas de la vía de gluconeoginesis conducen a hipoglucemia y lactacidosis. Kreisberg R: Reculation of lactate metabnlism in vivo. Arn J Physiol l9P9. compuestos no carbohidratos a glucosa o glucdgeno. debido al antagonismo de las hormonas de esta glándulas endocrinas a la acción de la insulina. 4) Dado que gluc6lisis y gluconeogenesis comparten la misma vía pero operan en direcciones opuestas. Newsholme EA. Trcnds Biochem Sci 1 984. Watford M: What is the rnetabolic Tait of dievaty glucosc? Trcnds Biochem Scl 1988.13329. 5) La cilula hcpatica. TambiCn. sus actividades deben regiilme de rnariera recíproca. 3) El lactato forma piruvato. Suministra glucosa al cuerpo cuando no dispone de carbohidratos dietéticos. DSID) se caracteriza por disminución de la tolerancia a la glucosa debida a secreción insuficiente de insulina en respuesta a una carga de glucosa. Cryer FE: Iiisulin. utiliza las reacciones de la glucólisis que son reversibles.: Mammnlian gliicose transportcrs: Striictiire aiid rnolecular regulation. Esto se manifiesta por concentraciones altas de glucosa sanguínea (hiperglucemia) y glucosuria y puede acompañarse con cambios en el metabolisino de lipidos. fosfoenolpiruvato carboxicinasa.9 277 Newshotme EA. antes de su conversión a fosfoenolpiruvato seguida por biosíntesis de glucosa en el citosol. 2) La vía de gluconeogenesis. 2) modificaci6n mvalentc por rosforilacibn reversible y 3) efectos aloctéricor. que se secreta en respuesta directa a hiperglucemia. constituye el medio principal de regulación de la concentración sanguínea de glucosa debido a que contiene la glucocinasa dc Km alta que se adapta especificarnente a la disposición dc la glucosa ingerida. Wilcy. El bloqueo de la oxidación de ácidos grasos es causa adicional del deterioro de la gluconeogenesis y de hipoglucernia. Chaliss RAJ. DSNID). La inyección de insulina reduce el contenido de glucosa en sangre e incrementa su utilización y su almacenaje en hígado y musci~locomo glucógeno. mas cuatro reacciones adicionales que evitan las reacciones irreversibles de no equilibrio. lactato.. glicerol y propionato. Esto sc logra por medio de tres mecanismos principales: 1 ) induccilin o represión de la síntesis enzimática. en diabetes sac'uina tipo 11 (diabetes sacarina no insulinodependiente. en algunas infecciones.545. La tolerancia a la glucosa declina no sólo cn diabetes tipo 1 sino tambien en estados donde el higado se Icsiona. que se acompaiia con obesidad y valores elevados de ácidos gasos plasmaticos. Crabtree R: Substraie cyclcs: Thcir role in improving sensitivity in metabolic control. 7 ) Una deficiencia en la secreción de insulina conduce a diabetes sacarina tipo 1. En insuficiencia hipofisaria o suprarrenal se observa un incremento de tolerancia a la glucoca.755. Rurant CF et al.que tiene lugar en el hígado y riñón. qiie es permeable a glucosa. Lenzen S: Hexose recopnition mechanisms i pancrcatic n R-cells. El-Maghrnbi MR. REFERENCIAS Boyle PJ. el glucagbn se secreta en respuesta a hipoglucemia y activa la fosforilasa en el hígado. bajo la influencia de algunos fámacos y en ocasiones en aterosclerosis. . Las enzimas que catalizan las reacciones adicionales son: piruvato carboxilasa. fructuosa. Start C: &~u¡ation fn :Metnholism. Crain MR. colabora con el hígado para el almacenaje de glucosa corno glucógeno y facilita la captacihn de glucosa en tejidos extrahepáticos. and catccholamines in preventiun orhypoglycernia during fistinp. glucagon.

fnictosa y galactosa son por su cantidad las hexosas más importantes que se absorben por las vías gastrointestinales. Mayes.6-fosfato de la vía puede efectuar la oxidacion completa de la glucosa. determinados gedticamente. Las deficiencias de ciertas enzimas de la vía de pentosa fosfato son la causa principal de hemólisis. Cerca de 100 millones de personas en el mundo pueden tener valores bajos de esta enzima. Dado que dos moldculas del gliceraldehido 3-fosfato regeneran a la glucosa. La glucosa. pero de importancia cuantitativa menor para la excreci6n de metabolitos y compuestos quim icos extraaos (xenobi 6ticos) como glucurbnidos. Derivan respectivamente del n l m i d ~ n . fnictosa se usa para alimentación La parenteral. Se han desarrollado vías especializadas en el cuerpo. Una Gliceraldehido 3-fosfato + GNADPH + 6H' . en especial el hígado. La ausencia total de iina enzima particular de la via en todos los primatec explica el hecho de que en la alimentaci~n humana se requiere hcido ascbrbica (vitamina C). para convertir fmctosa y galactosa a glucosa. Deficiencias en enzimas del metabolismo de fructosa y galactosa causan enfermedades metabólicas como fructosuria esencial y gal~ctosemias. mayor significado.sacarosa y lactosa dieteticos. deficiencia en esta vía conduce a un estado conocido como pentosuria esencia1. Las principales vías metabhlicas para la utilización de glucosa son Ia gluc6lisis y el ciclo de la De pentosa fosfa~o. pero tiene dos funciones importantes: 1) La generacibn de NADPFI para la síntesis reductivas como la biosintesis de ácidos grasos y esteroides y 2) la fortnaci6n (provisirin) de ribosa para la biosintesis de nucle6tidos y de acidos nucleicos. que conduce a un tipo de anemia hemolítica. es la elaboracibn de acido glucurbnico por la vía del acido urtínico a partir de glucosa. pero en concentracibn elevada puede causar deplccibn de nucleótidos de adenina en el higado y necrosis hepática. LA V ~ A LA PENTOSA FOSFATO DE GENERA NADPH Y RIBOSA FOSFATO (Figura 22-1) La vía de la pentosa fosfato (derivado de la hexosa monofosfato) es un camino alterno para la oxidacibn de la glucosa. Las principales rutas metabblicac para la utilización de la glucosa son la glucólisis y la via de la pentosa fosfato.Vía de la pentosa fosfato y otras vías eel rnetaboAismo de hexosas Pefer A. Es un proceso multiciclico en el ciial tres mo!éculas de glucosa-6-fosfato dan origen a tres moléculas de COzy a tres residuos de cinco carbonos. DSc El ciclo d t la pentosa fosfato no genera A V . no asi en la mayor parte de otros mamíferos. PhD. Estos últimos se ordenan para regenerar dos moléculas de glucosa-6-fosfato y una del intermedio glucolítico glicemldehido 3-focfato. La principal enzima afectada es la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa.

en tanta que las inferiores con reversibles. Figura 22-7. la via completa consiste en tras ciclos intermneciados donde la glucosa-6-fosfato es tanto sustrato como producto final Las reacciones arriba de la línea punteada son irreversibles. Diagrama de flujo de la via de la pentosa fosfato y sus conexiones con la vía de la gluc6lisis. DNA Gliceraldehido 3-fosfato Cedoheptulosa 7-Iosfato TRANSACDOMSA FructOSa 6-fosíato 1 Eritrosa 4-fosfato C b '*.246 Bioyuimicu dc Hurper (Cupitulo 22) 6-Fosfato de glucosa 6-Fosfato de glucosa 6-Fosfato de glucosa NADP*+ H20 DESHIDROGENASA 6-FOSf0- NADP'+ HIO NADP'+ H10 NADPH + gluconato Ht o-F0SfOgluconato NADPH + Hf Cb P 6~ * ._ NADPH t H' NADPH + Hr NADPH + H* Ribulosa 5-fosfato - Ribulosa 5-fosfalo . ANA. Como se indica. . c..-- Xilulosa 5-fosfato Ribosa 5-fosfato Xilulosa 5-fosfalo Slniesls de nuckalidos.Ribulosa 5-fosfato caz . 6-Fosfato de glucosa Gliceraldehído 3-fosfato 112 Fructosa 6-fosfato 4 112 Fructosa 6-fosfato C6 ' Glucosa 6-losfato ~Glucosa-6-fosfato '11 6-Fosfato de glucosa C* c .

aminohcidos por la ruta de la glutamato deshidrogenasa o glutatión reducido en los eritrocitos. que contiene los carbonos 1 y 2 de una cetosa. tiamina. Todos los tejidos que tienen actividad de la vía utilizan NADPH en síntesis reductoras. En este caso. el 5-fosfato de ribosa. Con el fin de oxidar a la glucosa completamente hasta CO? por la via de la p. La transcetotasa transfiere la unidad de dos carbonos. glucosa 6-fosfato. la ria de pentosa fosfatos es notablemente diferente de la glucolisis. además de iones Mf. que utilizan NADP en lugar de NAD. por ejemplo. La ribiilosa-Sfosfato 3-epimerasa altera la configuraci6n alrededor del carbono 3 . una enzima dependiente del NADP. esto es. La fase oxidativa genera UADPH (figuras 22-1 y 22-2) La deshidrogenacibn de la glucosa-6-fosfato a ó-fosfogluconato se efectúa por la via de la formación de 6-fosfogluconolactona. aroduciendo la cetosa de siete carbonos sedoheatulosa5-fosfato y la aldoca gliceraldehído 3-fosfatg. La fase no oxidativa genera precursores de riboca La ribulosa 5-fasfato sirve ahora como sustrato para dos enzimas diferentes. Por tanto. La reacción probablemente se efectúa en dos pasos a través del intermedio 3-ceto-6-fosfogluconato. en cambio esa es una funcibn principal de glucólisis.LAS REACCIONES EN LA V ~ A PENTOSA FOSFATO SE DESARROLLA EN EL CITOSOL Las enzirnas de la via de la pentosa fosfato como en la gluciilisis se encuentran en el citosol. En la vía de pentosa fosfato no se genera ATP. corteza suprarrenal. la síntesis de hcidos grasos. tiarnina. Estos dos productos entran luego en otra reacción conocida como transaldolación. testículos y glandulas mamarias en lactancia. la ribulosa-5-fosfato se convierte nuevamente a glucosa-6-fosfato por una serie de reacciones en las que intervienen principalmente dos enzimas: la transcetolasa y la transaldolasa (figura 72-11. En las primeras reacciones. tiroides. hay oxidacibn y COZes un producto caracterlstico. eritrocitos. En la segunda fase. formada antes. por ejemplo. Ida secuencia de reacciones de la vía puede dividirse en dos fases: una fase irreversible oxidativa y una fase reversible no oxidativa. El fragmento de dos carbonos transferido es probablemente el glucolaldehido enlazado al difosfato de En los tejidos especializados para síntesis reductivas se generan equivalentes reductores La valoracibn de la actividad de la vía de la pentosa fosfato en varios tejidos indica su importancia metab6lica. la glucow6-fosfaío experimenta deshidrogenación y descarboxilación para dar una pentosa. es necesario que las enzimas esten presentes en el tejido para convertir el glicemldehido-3-fosfato en glucosa-6-fosfato. al carbono aldehidico de una aldosa. pero en el caso de la vía pentosa fosfato. No lo es en las glhndulas mamariaq si no hay lactancia y su actividad es baja en el m ~ s c u l o esquelktico. el 3-fosfato de gliceraldehido sigue la vía normal de la glucólisis a pimvata. . En ausencia de esta enzima. Esto implica que trabajan en sentido inverso las entimas de la vía d e glucólisis. la cual tambikn requiere NADP' como aceptor de hidrbgeno. formando el epimero xilulosa-5-fosfato. La ribosa 5-iosfato cetoisomerasa convierte el 5-fosfato de ribulosa a la aldopentoca correspondiente. La hidr~lisisde la 6-fosfogluconolactona se logra por la accibn de la enzima gluconolactona hidrolasa.&bisfosfatasa. el "glucolaldehido activo". tejido adiposo. Las dos vías principales para el catabolisrno de glucosa tienen poco en común Aunque algunos metabolitosson comunes. Sigue la descarboxilación con la formación de la cetopentosa ribulosa-5-fosfato. la oxidación se logra por deshidrogenacibn. ademas de la enzima gluconeogenicq fructosa-1 . Un segundo paso oxidativo es catalizado por la 6-fosfogluconato deshidrogenasa. efecnía la conversidn de una cetosa en una aldosa con dos carbonos menos y simultáneamente convierte una aldosa en una cetoca con dos carbonos más. esteroides.entosa fosfato. Los fosfatos de ribosa son el principal producto de la vía de la pentosa fosfato. en la cual la xilulosa-5-fosfato sirve como donador del "glucolaldehido activo". pero no de la glucólisis. La reacción requiere una vitamina B. es decir. Como en ella. mismo que es el precursor de los residuos d e ribosa que se requieren en la sintesis de nucleótido y ácido nucleico. que es otra cetopentosa. Es activa en hígado. En la primera. lo que no ocurre en toda la glucblisis. rihulosa-S-fosfato. reacción catalizada por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa. la eritrosa-4-fosfato. se usa NADP' y no NAD' como aceptor de hidrógeno. actua coino aceptor y los productos de Ia reacción son fruct~sa-6-&fato y gliceraldehído-3-fosfato. La transaldnlasa permite la transferencia de un grupo de tres carbonos. Una reacción posterior se efecíwa implicando otra vez a la transcetolasa. como la coenzima difosfato de tiarnina. "la dihidroxiacetona activa" (carbonos I al 3) de la cetosa sedoheptulosa-7-fosfato a la aldosa gliceraldehldo 3fosfato para formar la cetosa fnictosa-6-fosfato y la aldosa de ciiatrci carbonos eritrosa-4-tbsfato. La transcetolasa catali7a la transferencia de la unidad de dos carbonos de la xilulosa-5-fosfato a la ribosa-5-focfato.

) .i .-O-B Gliceraldehido 3-fosfato .-O-@ Xriuiosa 5-tosfato I H-C-OH I CH..-O-@ 3-Ceto-6-fost~luwnato Ribulosa 5-fosfato 3-EPIMERASA ... . ... . H"C=O l H'G-OH 1 *m..C -. I I H-C=O I I H-C-OH H-C-OH I CH..248 Bioauimica de Harner HO (Canírulo 221 NADPH + H ' .... Via de la pentosa fesfato.C... PRPP..H C L.-O-@ Seudoheptulasa 7-fosfato Rtbosa 5-fosfato I H-C-OH O I H ... H -" 1 - / H -*c .M .0 -@ ! Fructosa 6-fosfato HO-c-H ' H-C=O I H-C-OH I H-C-OH H-C-OH I I CH.OH DESHIDROGENASA 79 - 1 ~ g ? :n2: or '\ - 100H-C-OH HO-C-H I H-C-oH I I HIDROLASA I H-C-OH ~H?-O-@ 6-Fosfogluconato 1 NADP' [ !r:H ]m H-C-OH H-C-OH NADPt+ H' CH...-O-@ ZS TRANSALDOMSA . I' O H .GI I FH.- H NADPt rdg2+ or cap' HO-C-H ..o H H. *c=o I t I H O -.. m TH...C i) p I HO-C-H H. 8 + . @ ~ g ~ -G -H H-G-OH Xilulosa 5-fusfato Figura 22-2. .OH I .. ~ ....-O-@ Forma enediol I H-6-OH I CH..OH l C=O I 'd-C-OH CH.-O-@ Gliceraldehido 3-fosfato Fructosa 6-fosfatu PO^^-.H IO t I H-C c l H9 0 ..OH *GH2 .. . H3C-OH *cH. ... 5-focforribosi~-l-~irofocfato. . (@....DH 1 'G 'fH20H j i =O *C=O H-C-OH E H-C-OH 1 I H03C-H I I t I H. ....OH l 1 1 ~iamrna.. 'GH. -O -@ PRPP *c=o HO 'CH.. + ~ ~ M AMP ATL4 Tiamina- @ ..

Es probable que esto se lleve a cabo por inversibn de la fase no oxidatíva de la vía pcntosa fosfato utilizando la fructosa-6-fosfato.Via de /u uentosu fosfato y orrus vías dcl mefaboltsmo de hexosns 218 Es probable que la presencia de lipogénesis activa o de un sistema que utiliza NADPH estimule una degradación activa de la glucosa por la vía de la pentosa rosfato. El UDPGlc se oxida en el carbono 6 por una operaci~n dos pasos para convertirlo en acido en glucurbnico. la cual reacciona entonces con el hifosfato de uridina ( U n ) formando el nuclebtido activo. UN PRECURSOR DE PROTEOGLUCANOS Y DE GLUCURONIDOS CONJUGADOS. En casi todos los tejidos es posible la síntesis de ribosa La vía de la pentosa fosfato proporciona ribosa para la sintesis de nucleótidos y ácidos niicleicos (figura 22-2). Por tanto. (G-S-S-G.el musculo esquelético como miichos otros tejidos. No o'bstante. Por tanto. la UDPGlc deshidmgenasa. En la vía del acido uronico.acido ascórhico y pentosas. Es tambibn una ruta oxidativa alterna para la glucosa. A su vez el glutariiin reducido remueve M O del eritrocito en :2 una reacción catalizadapor laglutation peroxidasa. es capaz de sintetizar ribosa 5-fosfato para la síntesis de nucleótidos. La ribosa no ES un constituyente sanguíneo significativo de la circulacihn general. La glucosa-6-fosfato se convierte en glucosa-lfosfato. FOSFATO DE -PENTOSA PEROXIDASA NADP* 2G-SH Figura 22-3. el acido glucuronico se forma ñ partir de la glucosa por las reacciones que se muestran en la figura 2 2 4 . El UDP-glucuronato es la forma "activa" del glucuronato para las reacciones que implican la incorporacibn de Bcido glucurónico a los proteoglucanor o para las reacciones en las cuales el glucumnato se conjuga con siistratos como las hormonas esteroides. G-SH. es por tanto UDP-glucuronato. glutatión oxidado. Esta ultima reacción se cataliza por la enzima UDPGlc pirnfosforilasa. La fuente es el intermedio ribosa-5-fosfato que reacciona para formar PRPP. ciertos medicamentos o la bilirrubina (figura 34-1 3). Todos estos pasos hasta aqui son los mismos señalados anteriormente en la vía de Ia glucogénesis hepática (capitulo 20). LA VIADE PENTOSA FOSFATO COLABORA CON G L U T A T I ~ N PEROXIDASA EN LA PROTECCIÓN DE LOS ERITROCITOS CONTRA HEM~LISIS La via de la pentosa fosfato en el eritrocito proporciona NADPH para la reducci6n del glutatitin oxidado a glutatión reducido catarizada por la glutation rcductasa. no conduce a la generacibn de ATP. catatizada por una enzima dependiente del NAD. no es necesario tener una via de pcntosa fosfato funcionando completamente para que un tejido cintetice ribosa fosfatos. Tantbién puede inducirse la síntesis dc enzimas glucoca-6-fosfato deshidrogenasa y 6-fosfogluconato deshidrogenasa por la insulina durante circunstancias relacionadas con el "estado nutricional" (cuadro 2 1-1). existe una vía para la conversicin de glucosa en ácido glucurónico. difosfato de uridina y glucosa (UDPGlc}. se obtiene NADP' que normalmente es escaso debido a la naturaleza irreversible de las primeras reacciones en la vía. Se. glutatibn. una enzima que contiene el oligoelemento. EL GLUCURONATO. Funcrbn de la via de la pentosa fosfato en la reaccibn catalizada por glutatibn peroxidasa de los eritrocitos. utilizado en la biosintesis de nucleótidos (capitulo 36). Esta reaccihn es importante. cofactor de celenro ) . De este modo. conocida come la vía del ácido uránico. seleniri (figura 22-3 j. los tejidos deben satisfacer su propio requerimiento de este precursor importante de nucleótidos. ES UN PRODUCTO DE LA VIA DEL ÁCIDO URONICO Aparte de las vias principales del metabolismo de la gliicosa-6-fosfato que se han descrito. El producto de la oxidacihn. ya quc la aciimulación de HzOz puede reducir la duración de la vida del eritrocito al incrementar la velocidad de oxidación de la hemoglobina a metahernoglobina. El te-jidomuscular contiene cantidades muy pequeiías de glucosa-6-fosfato deshidrogenaa y 6-fosfogluconaro deshidrogenasa. una enzima flavoproteinica que contiene FAD. pero al igual que la via pentosa fosfato.

así come en los cobayoc. conducen al ingreso en la vena porta de grandes cantidades de fructosa (y glucosa). @ PO^^-. En el ser humano y otros primates.OH L-Deshtdroascorbato: Via pentosa fosfato Figum 22-4.O Pfokoglucanas n 7-0 ~ NADP' NAQPH + He ~ q - 0 ~ NADH + H' NAO+ $ . después de convertirse en ~xilulosa-5-fosfato metaboliza posteriormente en la se vía pentosa fosfato. que se utilizan en la elaboración de alimentos y bebidas. el cual entonces se oxida en una reaccion dependiente del NAD pasando a D-xilulosa. Esto se debe al hecho de que no requiere el paso en e1 metabolismo de glucosa catalizado por fosfofnictocinasa.250 Bioquirnica de Harper {Capitrrln 2 ) 2 H:c-o-QMUTPGA H-C-OH 1 - H-C-OH 1 UTP PP. o.. este último compuesto. La L-xilulosa se convierte en el D-isomero mediante una reduccidn dependiente del NADPH que la convierte en xilitol.5 -0H HO-$ -H m H-7-OH H-C-OH HO-{ .) En una reacción dependiente del NADPH. Este último compuesto es el precursor directo del ascorbato en aquellos animales que son capaces de sintetizar esta vitamina.W O C-O II c=o H .H 'CH20H L-Xilosa 3-Ceto-~~gulonatn Oxalato 'CH. Esto ocasiona que la fmctosa .OH L-Aswrbato " CH.OH L-Gulonato O ~Glucuronato NADPH + Ht NAOP' BLOQUEO EN LA PENTOSURIA 4 Glucolato Glucolaldehido Gulonolactona BLOQUEO EN PRMATES Y COBAYOS O ' f Y BLOQUEO EN EL SER HUMANO 2-C~~PL-gulonolactona wxiiosa 1-fosiato - ?H. que es donde se ejerce el control sobre la velocidad del catabolismo de glucosa (figura 22-5). (Indica el destino del carbono 1 de la glucosa. Via del Bcido urbnico. El gulonato se oxida a 3-ceto-L-gulonato que es entonces descarboxilado para formar la pentosa t-xilulosa.OH Gluwsa 1 -fosfato 2H* Undindifosfatoglucosa (UDPGlc) / / UDP {-O O Uridindfosfato glucuronato GLUCUR~NIDOS H. La fmctosa se glucoliza por el hígado con mayor rapidez que la glucosa.OH - 1 1 2NADf 2NADH + CH. LA INGESTIÓN DE CANTIDADES MASIVAS DE FRUCTOSA TIENE CONSECUENC~AS METABOLICAS PROFUNDAS Las dietas abundantes en sacarosa o en jarabes de fnictosa alta (HFS).5 7 HO-5 . el glucuronato se reduce a L-gulonato.O ~ .OH t 'FHzDH 12Hl i O HO-C-H Xrlitol aXiioca 5-fosfato HO-C-H &CH. el hcido ascórbico no puede sintetizarse debido a la ausencia de la enzima ~gulonolactona oxidasa.H-C-OW u CH.

1 -fosfato se desdobla en D-glicesaldehida y fosfato de dihidroxiacetona por la aldolasa B. de Ia esterificacih de &os y de la secreci6n de VLDL.Vio de la pen~osu fo. Una cinasa especifica.6 bisfosfato. lo cual indica una gran afinidad de la enzima por su sustrato. La Km de la enzima para la h c t o s a en el higado es muy baja. su actividad no se afecta por el ayuw o por la insulina. Tarnbidn se ha demostrado en el riilon e intestino. Es probable que ésta sea la ruta principal para la fosforilacion de la fi-uctosa. enzima que se encuentra en el higado. a diferencia de la glucocinasa. donde sblo existe aldolasa B. que pueden elevar lo5 triacilgliceroles siricos y al fina! eleva las concentraciones de colesterol de LDL (figura 27-7). Esta enzima no fosforila a la glucosa y. La enzima tambikn ataca a la fnictosa 1. (No se encuentra en el higado ) inunde Ias vías en el hígado causando incremento de la síntesis de hcidos grasos. Metabolismo de la fructoca La aldolasa A se encuentra en todos los tejidos a excepción del higado. se encuentra en el higado y efectúa la transferencia del fosfato desde el ATP a la hctosa.6 bisfosfato FRUCTUOSA 1-P BLOQUEO EN INTOLERANCIA HEREDITARIA A LA FRUCTOSA t AFP OIH1DROXIACETONA FOSFATO TRIQSA 1SOMEWSA GLICERALDEH~DO 3-FOSFATO 4 ATP DGLICERALDEH~DO t pEEiÑzq Figura 22-5. lo que puede explicar por qué la fructosa desaparece a una velocidad normal de la sangre de los pacienres diabdticoc.sas 25 J Dieta [FRUGTUOCIMASA\ BLOQUEO EN LA FRUCTOSURlA ESENCIAL Fructosa 1. que potencia todos estos efectos. La cantidad adicional de glucosa captada por el torrente sanguíneo estimula Ia secrecibn de mhs insulina. formando h c t o s a 1-fosfato. El D-gliceraldehido puede entrar en la serie de reacciones de la .rfato y orrm vías de¡ metabolismo de hexo. La h c t o s a . la fructocinasa.

la cual cataliza su fosforilación a gliceraldehido 3-fosfato. para formar cl difosfato de uridina y galactosa (UDPGal) y glucosa. Lo último es el destino de mucha de In fructosa metabolizada en el hígado. PROTEOGLUCANOS Y GCUCOPROTE~NAS La galactosa proviene de la hidrblisis en el intestino del disacarido lactosa. el fosfato de dihidroxiacetona y el gliceraldehido 3-fosfato. Mhs aún.252 Bioauim ica de H a r ~ e r gluclilisis por medio de otra enzima presente en el hígado. Sin embargo. En todas estas situaciones representa una fuente potencial de energía. reacciona con el difosfato de uridina y glucosa (UDPGlc). Via de convercibn de A: Galactosa a glucosa en el hígado. Los dos triosafosfatos.1 -fosfato. en presencia de glucosa se inhibe en gran medida la fosforilación de la fnictosrt. La fnictosa libre se encuentra en el plasma s ~ m i n ay una cantidad l significativa se secreta hacia la circulación fetal en los ungulados y ballenas donde se acumula en los líquidos amniótico y alantoideo. El producto galactosa. La vía mediante la cual la galactosa se convierte en glucosa se muestm en la figura 2 2 4 . En este paso. En el hígado se convierte facilmente en glucosa. el anicar de la leche. catalizado por una enzima llamada galactosa-1-fosfato uridiltrans- Galactosa t GalaCtOSa-l -1osfato BLOQUEO EN GAIACTOSEML': 7I UDPGlc? FOSFOGLUCOMCITASA 6-FOSFATASA Glucosa-6-fosfato Glucosa - B Glucosa UDPGlc NAD' - UDPGal Lactosa 6-Fosfato de giuwsa - c 1-Fosfato de glucosa Glucosa Figura 22-6. La hexocinasa cataliza la fosforilacion de la mayon'a de los anícares hexosas. LA GALACTOSA ES NECESARIA PARA LA S~NTESIS LACTOSA.l -fosfato. es probable que por esta vía parte de la fnictosa se pueda metabolizar en tejido adiposo y rnusculo. DE GLUCOL¡PIDOS. B: Glucosa a galaciosa en la glandula mamaria . La facultad del hígado para llevar a cabo esta conversibn puede usarse como un examen del funcionamiento hepático en la prueba de tolerancia a la galactosa. la triocinasa. La galactosa se fosfwila mediante la galactocinasa usando ATP como donador de fosfato. pueden degradar por la vía de la glucólisis o comhinarsc por la influencia de la aldosa y convertirse en glucosa. inclusive la fnictosa.

1-fosfato. 6) los azúcares de nucleótidos son las formas en que Tos aminoazúcare5 se utilizan para la biosintesís de las glucoproteinas y de otros compuestos complejos.rus a 233 ferasa. 1. Debido a que la reaccihn con epimema es reversible. probablemente desp~its !a incosporación al glucógeno seguida por fosforólisis. La galactosa se necesita en el organismo no sólo para la formacidn de laciosa. La UDPGal se condensa con la glucosa para dar lactosa catalizada por la factosa sintasa (figura 2 2 4 ) . aparecen en la orina cantidades considerables de L-xilulosa. Este hallazgo puede explicarse por la ausencia cn pacientes pentosíiricos de la enzima necesaria para catalizar la reducción de L-xilulasa a xilitol. La interrupción de la vía del ácido urónico se produce por defectos enximáticos y por algunos fármacos En la pentosuria esencial. Se tienen informes de cierta relación entre la frecuencia de algunos canceres y la presencia de concentraciones sanguineas bajas de selenio y de la actividad de la glutation peroxidasa. la glucosa se libera de la UDPGlc bajo la fonria de glude cosa. En la sintesis de lactosa en la glándula rnamaria. sino también como un constituyente de los glucolipidos (cerebrosidos). Esta anormalidad se manifiesta como hemolisis cuando el individuo susceptible se sujeta a oxidantes. La glucosa es precursor de todos los aminoazúcares (hexosaminas) Los aminoazúcares son componentes importantes de las glucoproteinas (capítulo 56). la administracibn de barbital o de clorobutanol a ratas causa un aumento significativo en la conversión de glucosa a glucuronato. La administración parentera! de xilitol puede conducir a oxalosis que consiste en deposito de oxalato de calcio en encéfalo y rifiones.-enasa. La conversibn de galactosa en glucosa tiene lugar en una reacción del nucleótido que contiene galactosa catalizada por una epimerasa. achía como parte de la defensa corporal contra la peroxidaciún lipidica (figura 16-27). enfermedad hereditaria poco común.Junto con la vitamina E. UDPGalNAc y CMP-NeuAc. que contienen aminoazúcares con UDPGlcNAc. la glucosa pucde convertirse en galactosa. Se forma como glucosamina 6-fosfato a partir de la fnictosa-6fosfato. la glucosa se convierte en UDPGal por las enzima descritas anteriormente. la galactosa se transporta a una posición en la ASPECTOS CL~NICOS El deterioro de la vía de la pentosa fosfato conduce a hemolisis Una mutación presente en algunas poblaciones cauQ una deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidro. El producto es UDPGlc. hipercolesterolemia e hiperuricemla Ya se hizo referencia a los efectos de la fructosa sobre el metabolismo hepático en la promocion de la síntesis de triacilglicerol y secreción de VLDL e hipemiaciIglicerolemia. que puede 1levar a incremen- . con la consecuente perturbación en la formación de NADPH. Por qjcrnplo. con N AD como coenzima. reemplazando a la glucosa. los anícares de nucl&tidos importantes. 4) NeuAc se forma por la condensación de rnanosamina 6-fosfato con fosfoenolpiruvato. las siguientes son sus caracteristicas sobresalientes: 1) la glucosamina es el aminoanicar principal.-xilulosa en sujetos pentoslirícos. 3) la N-acetil manosarnina 6-fosfato se forma por epimerización de la glucosamina 6-fosfato. El donador del radical acetilo es la acetil-COA. proteoglucanos y glucoprotcinas. Varios medicamentos incrementan de manera importante la velocidad de entrada de glucosa a la vía del ácido urónico. La medicí6n sanguínea de la actividad de la transcetolasa refleja el grado de deficiencia de tiamina. La epimerización probablemente implica una oxidacibn y reducción en el carbono 4. Ataca a perhxídos organices ademis del MzO?.-giiIonato y accorbato. de ciertos glucoesfingolipidos (por ejemplo.Yía de d pentosa fusfafo y otras vim del rnerubo/ismo de hexo. de modo que la gaiactosa preformada no es esencial en la dieta. Esto se debe a la conversibn de n-xilulosa a oxalato a travCs de la formación de xilulosa l -fosfato. UDPGlc. glucoaldehído y glucolato (figura 2 2 4 ) . utilizando a la glutamina como donador del grupo amino. como el antipalhdico primacrina. 2) los aminoazúcares aparecen principalmente en la forma N-acetilada. El acido sihlico más importante que se encuentra en los tejidos humanos es el ácido IV-acetilneurarnínico (NeuAc). gangliósidos) (capítulo 16). El unico trastorno donde su actividad se eleva es en la anemia perniciosa. En la figura 22-7 se muestra un resumen de las interrelaciones entre los aminoazúcares. La glutatión peroxidasa es un antioxidante natural que se encuentm en numerosos tejidos y depende del suministro de NADPW. Se sabe que la arninopirina y antipirina aumentan la excreción de 1. aspirina o sulfonamidas o cuando ingiere habas (Y~ciafuvu -favismo). 5) la galactosamina se sintetin por epimerización de UD?-A'-acetilglucosamina (WDPClcNAc) a UDPN-acetilgalactosamina (UDPGlcNAc). Finalmente. La carga hepática con fructosa puede potenciar hipertriacilgliceralemia. galactosamina y manosamina (todas éstas son hexosarninas) y el compuesto de nueve carbonos hcido siilico. Los aminoazúcares principales son glucosamina. y de glucosaminoglucanos (capihllo 57).

Resumen de las interrelaciones en el metabolismo de los aminoazúcares ('Análogo al UDPGlc. Estos efectos son de particular importancia en personas que tienen predisposici6n a la hipertriacilglicerolemia o hipemricernia.254 Bioqtrimicu de Hurper (Capitulo 22) ATP GLUCOSA GLUCOSA 1-FOSFATD ADP GLUCOSA 6-FOSFATC t Glucdl~sis FRUGTOSA 6-FOSFATO - Ciclo del Bcido citnco CO1+H. Además. Los defectos en el metabalismo de fructosa causan patología (figura 2 2 6 ) La carencia de fnictocinasa hepatica causa fructosuria esencial y la ausencia de aldolasa hepitica E. se suprime la inhibicibn por el ATP de la enzima de la degradacibn del nuclebtido de adenina y se promueve la formacibn de hcido urico. que . la sobrecarga aguda del higado con fructosa. En consecuencia. como puede suceder con la infusión intravenosa o ingesta muy grande de ella.) Es posible que otros nucleotidos d e purina o pirimidtna estén enlazados de manera similar a azúcares o aminoazúcares. todo lo cual puede considerarse como potencialmente aterogénico (capitulo 28).O PIRWVATO GLUTAMATO Glucosamina Acetil-COA UTP GLCICOSAMINA* N-ACETICGLUCOSAM INA N-ACETIL- FLUCOSAMINA 6-FOSFATO P> p. N-ACEflLGLUCOSAMINA 1 -FOSFATO 1 b GLUCOSAMINOGLUCANOS (COMO HEPARINA) N-ACETILMANOSAMINA UDP- 6-FOSFATO FOSFOENOLPIRUVATO N-AC ETILGLUCOSAIAINA - GLUCOSAMINOGLUCANOS (AC100 HIALURGNICO) GLUCOPROTEINAS NAO+ t Aciua N-ACETILNEURAM~NICO 9-FOSFATO UDP N-AC ETILGALACTOSAMINA 1 -1 inhibitorio ÁCIDO s r A ~ l c o GANGL16SlDOS GFUCOPROTEINAS GLUCOSAMINOGLUCANOS (CONDROITINAS) GLUCOPROTE~NAS Figura 22-7. produciéndose hipeniricemia. da lugar a secuestro de fosfato inorganico en el 1-fosfato de f r u c t o s a y disminuci6n de la síntesis de ATP. Ejemplos son timidina de difosfalo (TDP)-glucosamina y TDP-N-acetitglucosamina tos en las concentraciones de colesterol LDL. la cual es causa de gota (capinilo 36).

El sorbitol no se difunde con facilidad a través de las membranas celulares y. de la transferasa.6-hisfosfato inhibe la actividad de la fosfori lasa hephtica por mecanismos alostéricos. 2) Esta via tiene una fase oxidativa que es irreversible y genera NADPH y una fase no oxidativa. las concentraciones de rnioinositol bajan. se convierte a fructuosa y no a glucosa. La acurnulaci6n de sorbitol. ocurre insuficiencia hepática y deterioro mental. a La via del sorbitol (poIiol) (no localirada en el higaiio) es responsable de Ia fomacibn de fiuctosa a partir de glucosa (figura 22-5) y su actividad. la acumulaci6n de fructosa l-fosfato y fructosa 1. que se acumula generando cataratas. 3) En los eritrocitos. disminucion de mioinositol y catarata diabctica pueden evitarse en ratas diabéticas mediante la adrninistraciiin de inhibidores de la aldosa reductasa. aumenta confonne la concentración de glucosa aumenta en la diabetes. Esta vía es responsable tambidn de la presencia de fructosa en el liquido seminal. en aquellos tejidos que no son sensibles a la insulina. Las deficiencias enzimáticas en la vía de la galactosa causan galactosemia En las galactosemias existe incapacidad para metabolizar esta hexosa y pueden deberse a deficiencia hereditaria de galactocinasa. el defecto se identifica 5610 en homocigotos.ó-bisfccfato d e fructosa. cristalinos. Los edulcorantes "exentos de azúcar" que contienen sorbitol pueden causar dolor abdominal (intolerancia al sorbitol). por tanto. RESUMEN 1) La vía de la pentosa fosfato. cuya concentracion sanguinea aumenta. La catarata diabética se relaciona con la presencia de fructosa y sorbitol en el cristalino Normalmente. Por ultimo. La galactosa. la fase no oxidativa se encuentra en todas las dlulac que requieren ribosa. por el contrario. Cuando el sorbitol se administra por via intravenosa. conduce a la conversibn del sorbitol a hctosa. El defecto en la aldolasa €3 no afecta de manera tan nociva la actividad hacia el 1. así sólo hay ligero deterioro de la gluconeogenesis.55 degrada a la fmctosa 1-fosfato. la vía tiene la importante hnci6n de evitar la hem6lisis ya que suministra NADPH para mantener al glutation en el estado reducido. se acumula para producir daño osmotico. la patogenia de la catarata diabética puede incluir un aumento en B concentracibn de éstas. por lo que la persona galactosémica aun puede formar UDPGal a partir de glucosa. El estado general es m& grave si la galactosemia se debe a deficiencia de uridilo transferasa. pero en estos individuos aun existe en hfgado y otros drganos y aI parecer este tercer trastorno es asintomático. aunque la me-jor conocida es la deficiencia de uridilo transferasa. si se administra por via oral. A . cuyas enzimas se encuentran en el citosol. gran parte escapa a la absorción en el intestinoy se fermenta por las bacterias del colon a productos como acetato e hidrógeno. La vía completa existe s61o en los tejidos que requieren NADPH para slntesis reductorris. Se han descrito varios defectos gentiticos que causan deficiencia parcial m& que tofal. La presencia de sorbitol deshidrogenasa en el hígado. la epimerasa eszá presente en cantidades adecuadas. Esto explica por qué es posible que los niiios afectados muestren crecimiento y desarrollo normales a pesar de la dieta exenta de galactosa para controlar los sintomas de la enfermedad.:a Vía de la pcnro~ fos fato y otras vIas del rnetaholi. La aldosa reductasa se encuentra en la placenta de la oveja y ocasiona la secrecibn de sorbitol a la sangre fetal. puede realizar la oxidación completa de la glucosa y sus productos principales son NADPH y COL. Al parecer.La via no genera ATP. es decir.vmo de hexosas * 2. Se han encontrado deficiencias eritrocitarias de epimerasa. incluyendo el fetal. seguida por oxidación de1 sorbitol a fructosa en presenciadeNAD4 y sorbitol rleshidrogenasa (polio1 deshidrogenasa). En la deficiencia de uridiE transferasa. el cristalino humano contiene fructosa y sorhitol. por tanto. lipogknesis o esteroidogenesis.dbisfosfatasa es una hipoglucemia inducida por fmctosa a pesar de la presencia de abundante resetva de glucógeno. Una consecuencia de la intolerancia hereditaria a fructosa y otro padecimiento causado por deficiencia de fructosa-l. que es reversible y proporciona precursores de ribosa para la síntesis de nucle6tidos. nervios periféricos y glomérulos renales. una reduccirin de su actividad de 50% o menos no causa síntomas o signos de enfermedad. La aldosa reductasa cataliza la reducción de glucosa a sorbitol por la NADPH. Como normalmente la enzima esta presente en exceso. Las dietas deficientes en fructosa y sacarosa son benéficas en los dos trastornos. De manera sirnulthnea. se reduce por la aldosa reductasa en el ojo al polio1 con-espondiente (galactitol). dado que hay acumulación de galactosa 1-fosfato y perdida de fosfato inorgánico hepatico. conduce a intolerancia hereditaria a la fructosa. en tanto que. por ejemplo. incluyendo RNA y DNA. uridilo transferasa o 4epimerasa (figura 22-6A). y se están oliteniendo resultados promisorios en la practica clínica.

Am J Crin review.ietaboiism and Its Disorders. estimula la síntesis de ácidos grasos y la secrecibn de triacilglicerol hepático. 4) La vía del acido urónico suministra ácido glucurónico necesario para la conjugacibn con numerosas sustancias endógenac y exógenas. Scriver CR et al. Macdonald 1. 1981. que es esencial para eliminar a la H202. que se eliminan en la orina como glucurbnídos. Kador PF: The role af aldose reductase in the development of diabctic complications Mcd Rcs Rcv 1988.8.actose and cataract in humans: A Mayes PA: Intcrrncdiary mctabolism o fructose.We#abolicbfects n f Uietay I:arbol?ydrates Karger.su vez. Steiner DF.~ncc. (editors): The 81!etnbolic und .: Models l'nr ihc meiaholic production o f oxalate from xylitol in hiirnans Aust J Exp Biol Med Sci 1982:60: 1 17. Cox TM: H z r e d i t a ~ fructose intoler. nociva para la celula. Acadernic Press. 7th ed. forma con facilidad glucosa en el higado. Nutr 1943. Jan Dehry G: !.h54S. Vol 3. . Academic Press. Cross NCP. I REFERENCIAS Couet C. J Am Coll Nutr 1991:10:79. 5) La h c t o s a tiene fácil acceso a las vias metabolicas. Igual que la galactosa. Whelan WJ (editors): Carbnhydrare . 6 ) La galactosa se sintetiza a partir de la glucosa en la glándula mamaria y en otros tejidos donde se requiere para la formacidn de glucolipidos. el glutatión sirve como sustrato de la glutatiiin peroxidasa.325. cata1izado por fosfofnictocinasa.14:41.loleculur Bulisr~xuflnheriied Diseme. 1995. V a n den Rerghe G : Inborn crrors of fr~ictose rnetabolism Annu Kei Nutr 1994. Randle PJ. proteoglucanos y glucoprotetnas.Int J Riochem E990. 1 9Xh.I. 1983.58.22:k85 James H M et al. esquivando el paso principal de control de la gliicólisis. McGraiu-Hill. Vrana A (editors): . W o o d T: TIie Pentose Phosphate Parhwq.I. Por tanto.

la glucosa es el sustrato primario para IipogtSnesis. donde su importancia es pariicular para proporcionar lipidos utiluados en la formación del huevo. glucogenólisis y glucogenesic). las variaciones en su actividad pueden determinar la naturaleza y extensión de la obesidad y una de las lesiones causadas por la diabetes sacarina insulinodependiente o tipo 1 es la inhibicion de la lipogénesis. pero en los nimiantes esta función la descrnpefia el acetato. El complejo 5cido graso sintasa es un polipeptido que contiene siete enrimas activas Al parecer hay dos tipos de hcidos grasos sintasas. La enzima contiene un numero variable dc subunidades idénticas. biotina y HCOi(como fuente de CO:). pulmbn. DSc A semejanza de muchos otros procesos degradativos y siniéticos (por ejemplo. rifíbn. Estaultima requierc de la vitamina biotina (figura 23-1). Mayes. Dado que la via de lipogénesis puede ser de poca importancia en el ser humano no sorprende que se carelca de informes acerca de enfermedades criticas de ella. asi como biotina. parece claro que un sistema extrarnitocondrial activo es responsable de la cnmpleta síntesis de palmitato a partir de acetil-CoA en el citosol. IMPORTANCIA BIOMEDICA Existen amplias variaciones entre especies en la dispasicihn de las principales vías lipogknicas en los tejidos y en sustratos principales para síntesis de ácidos grasos. LA PRINCIPAL V ~ A PARA LA NUEVA S~NTESIS ÁC~DOS GRASOS DE (LIPOGÉNESIS) OCURRE EN EL Clf OSOL Este sistema est8 presente en muchos tejidos. la slntesis de los ácidos grasos (lipogénesis) se consideraba como la inversa de la oxidacihn en la mitocondria. Otro sistema para la elongacion de la cadena de ácidos gasos también está presente en el reticulo cndoplismico hepático. proteína portadora de carboxibiotina y transcarboxilasa. ATP. En la rata. En muchos mamíferos. y lambien un sitio alosterico regulador. Ec por tanto una proteína multienzimlitica. La reacciiin tiene lugar en dos pasos: 1) la carboxilacibn de la biofina (que utiliza ATP. En las bacterias. Sus requerimientos de cofactores incluyen el NADPI-I. enckfalo.Biosíntesis de ácidos grasos Peter A. Sin embargo. que es la molécula combustible principal producida por la dieta. una especie que ha proporcionado gran parte de la información acerca de lipogenesis. glándula mamaria y tejido adiposo. que incIuyen el hfgado. las enzimas individuales dcl sistema están separadas y los radicales aciro se encuentran en combinación con una proteina llamada proteina portadora de acilos . figura 52-1 3) y 2) la transfercncia del carboxilo a la acetil-CoA para formar malonilXoA. la lipogénesis se confina al higado. plantas y formas inferiores. en tanto que en el ser humano el tejido adiposo puede no ser un sitio importante y el higado sólo manifiesta escasa actividad. PhD. La producción de malsnil-COA es el paso inicial y de control en la sintesic de ácidos grasos El bicarbonato como fuente de COI resulta necesario en la reacción inicial para la carboxilacion de la acetilCOAa m a l o n i l ~ o A presenciade ATP y acetil-CoA en carboxilasa. Sin embargo. La acetil-CoA es e1 sustrato inmediato y el palmitato libre es el producto final. biotina carboxilasa. En 1% aves. la vía se efectiia de preferencia en tejido adiposo e hígado.

En este sistema la AC asume la función de la COA. . Otra ventaja del polipkptido multienzimático Único es que la sintesis de todas las enzimas del complejo es coordinada ya que todo está codificado por un solo gen.COA . los mamíferos y las aves. El complejo rnultienzimática de los Bcidos grasos sintasa. cada rnonómero es idkntico al otro.) El -SH de la 4'-fosfopanteteina de un rnonbrnero está en proximidad estrecha con el -SH del residuo de cisteina de la cetoacil cintasa de otro monomero. y están formados por una cadena SH SH I I \ OivisiQn .. Sin embargo. de la subunidad . y el Tiol cisteina.- ._ \ - \ \ I -. sugiriendo un arreglo "cabeza a cola" de dos monomeros.O O ~ -CH.CO-S . 1 y 2. (Enz.-- I SH y SH . cada uno constituido por seis adividades enzirnáticas y la proteina portadora de acitos (ACP) (El Cis-SH. La secuencia detallada de las enzimas en cada rnonbmero es tentativa (basada en Wakil) Aunque cada mon6mero contiene todas las actividades parcialesde la secuencia de la reaccibn. acetil-COAcarboxilasa.-- - - I Cvs 4'-Fosfopantetelna Figura 23-2.CH. Biosintesis de la malonil-COA.-. dos cadenas acilo se producen simultáneamente. el sistema sintasa es un comple.. - CO-S- COA Acetil-COA Malonil-CGA ATP + HCOT + Enz-biotina Figura 23-1. La agregación de todas las enzima5 de una vía particular en una unidad funcional rnultienzimática ofrece gran eficacia y libertad de interferencia por procesos competitivos. en las levaduras. sin necesidad de erigir barreras de permeabilidad. En los animales. Tanto la PPA como el complejo rnultientim~ticode las bacterias contienen la vitamina ácido pan totenico en la forma de 4'-fo~fo~anteteina (figura 5 2 4 ) .. y así se logra el efecto de compartimentalización de la actividad en la célula.) (ACP).jo multienzitnAtico que no puede subdividirse sin la pérdida de actividad y la ACP es parte de este complejo. . El complejode la hcidos graws sintasaes un dírnero (figura 23-21.. la actual unidad funcional consiste en una mitad de un monbmero en interaccibn con la mitad complementaria del otro Así. El complejo es un dírnero de dos rnonámeros de polipeptidoc idknticos.

para formar la grupo enzima acetiI [acill-malonit. A e ~ t o . esta cnzima es parte del complejo de la iicidos grasos sintasas.larga con un numero impar de átomos de carbono. Se considera en la actualidad que la utilizacícin del pimvato para la IipogCnesis es mediante el citrato. deshidrata y reduce de nuevo para formar la aci1-Senzima saturada correspondiente. la tioesterasa (deacilasa). La actividad de la ATP-citrato liasa extramitocondrial.polipeptidica notable que contiene las siete enzimns de la sintasa y una ACP con un grupo 4'-fosfopanteteína -SH. La via involucra la glucrilisis seguida por la descarboxilación oxidativa del piruvato a acetil-CoA dentro de las mitocondrias. es decir. acetilo ataca al grupo metileno del residuo malonilo catalizado por 3detoacil sintasa para liberar COZ y fonnar una enzima 3xetoacilasa (enzima acetoacctil). adicion de todas las iinidadec C: subsiguientes es a traves de la formación de rnaloníl<oA. de manera que iio hay barreras de membranas ni de permeabilidad para la transferencia de NADPH a partir de una vía a otra. En la glindula marnaria de: los rumiantes. la acetil-COA no se difunde con facilidad en el interior del citosol extramitocondrial sitio principal de la sintesis de los ácidos grasos. especifica para residuos acilo de Cs C 10 O C 12.. El gmpo 3-zetoacilo se reduce. Orras fuentes de NADPH incluyen la reacci~n convierte el malato a piruvato que y se cataliza por la "enzima miilica" {NADP malato deshidrogenasa) (tigura 23-5) y la reaccibn extramitocondrial de la isocitrato deshidrogenasa (probablemente no sea una riiente s~istancial). La butiril-CoA puede actuar como molécula cebadora en el hígado de Ios mamíferos y en la glándula mamaria. se producen ácidos grasos de cadena. Aunque ambos tíoles participan en la actividad de la sintasa. hay una enzima tioesterasa separada. al igual qiie la de la '-enzima malica". una molécula cebadora d e acetil-CoA se combina con un grupo -SH de cisteina catalizada por acctil transacilasa (figura 23-31. El destino habitual es su esterificación a aciIgliceroles (figura 2 3 4 ) . Además ambas vias metabblicas se localizan en la región extramitocondrial de la celula. El palmitato libre debe activarse a acil-CoA antes de que pueda proceder a otra mita rnetabálica. en correlaci~n estrecha con la actividad del sistema de síntesis de ácidos grasos (cuadro 2 1-1). aumenta en condiciones dc buena nutricibn. En proximidad estrecha esta otro ti01 de un residuo de cisteina adherido a la3<etoaciI sintasa (enzima condensante) de otro rnonómero (figura 23-21. Es significativo que los tejidos que poseen una via pentosa fosfato activa. La secuencia de las reacciones se repite seis veces más incorpohdose un nuevo residuo rnalonilo en cada secuencia. SOR también los especializados en la lipogtncsic activa. Sin embargo. hasta que se ha ensamblado un radical acilo saturado de 16 carbonos (palmitilo). Éste se libera del complejo enzimático por la actividad de una séptima enzima en el complejo. rejido adiposo y glándula mamaria en lactancia. la de los derivados 3<etoaciZos y la dc los derivados acilo 2. Esto se debe a que los dos rnonórneros se encuentran en una configuracibn "cabeza a cola". catalizada por la malonil transacilasa. La fuente principal de equivalentes reductores (NADPH) para lipogenesis es la vía de la pentosa fosfato El NADPFI interviene Como coenzima en ambas reducciones. los cuales se encuentran después en los Iípidos lácteos. Podría parecer que son dos centros de actividad en un complejo dirnérico que funcionan de manera independiente y simultinea para formar dos moleculas de palmitato. Si la propiotiilCOA actúa como cebador. seguida por la condensacion con oxafacetato para formar citrato como parte del ciclo sigue la translocación del del ácido cítrico. La eciiaci~npara la síntesis global de pairnitato a paflir de a c e t i l x o h y rnalonil-COA se muestra en seguida: CH2 COiS*CoA + 7HOOC*CHz COiSiCoA + + 14NADPH + 14H' + CH3 (CH2)11i COOH + 7CO2 + 6H20+ * 8CoAmSH + 14NADP' La acetil-CoA iitilizada como piintal forma los átoLa mos de carbono 15 y 16 del palniita~o. Esto libera el grupo -SH de la cisteina.3-insaturados. s61o el dimero es activo. En un principio. donde el propionato se forma por la acción microbiana en el rumen. Las reacciones oxidat i v a ~de la vía pentosa fosfato (capítulo 22) son la fuente principal del hidrbgcno que s e requiere para la sintesis reductora de k i d o s grasos. ocupado hasta el momento por el grupo acetilo. En la glanduia mamaria. higado. Estos se encuentran en forma particular en los riimiantes. El . Esta descarboxilacion permite que la reaccibn prosiga harta su terminación y actíia como un fuerza de cond~iccion para la secuencia entera de reacciones. La malonil-CoA se combitia con el gmpo -SH en la 4'-fo~fo~anteteínade C A P del otro rnonómero. La acetil-CoA es el bloque estructural de los ácidos grasos Se forma a partir de los carbohidratos a traves de la oxidaciiin del pinivato dentro de las rnitocondrias. Una nueva moltcula de malonil4oA se combina con el -SH de la4'-f~sfo~anteteína desplazaal residuo acilosaturado y en el gmpo -SI-I libre de: la cisteina.

C H ~ . a .) Enzima acilo Figura 23-3.Acetil-COA + Malonil'-COA Cntransferidos desde TRANSACILASA Complefo multienzim8tim de la acldo graso sintasa o 111 a P a n ~ ~ ~ ~ I . Enzima acilo 2.C H .C . (Cis.3-insaturado o a trads de los pasos ( !a : 1 $ Palmttato Despues de 7 ciclos ~ P ~ ~ .C H . Pan. 4'-fosfopanteteina.IC'/ ~ ~ ~ - Enzima Acil (aceti1)-malonila Enzima 3-cetoacilo (enzima-acetoacetiio) Enzima N-)-3-hidroxiacilo - SH O =Pan-s -c- II CH=CH-CH. Biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga.) En la figura 23-2 se muestran los detalles del dimero de la stntasa de los ácidos grasos. . residuo de cisteina. Detalles de la forma e n que la adicion de un residuo malonilo hace que la cadena acilo crezca cada vez dos átomos de carbono. y @ representan los rnonbmeros individuales de la sintasa de hados grasoc.S . 11 (C.

El abastecimiento de aoetil-COA y NADPH para la lipogénecis. Destino del palrnitato después de la biosintesis. transportador de piwvato. T.Biosínresis de ácidos grasos 26 1 ATP + COA Palmilato u AMP PP. + Acilgltceroles cstes de colesterrlo f Estenficactbri Palmitil-COA / \ Alargamiento de la cadena de desaturactbn ' r Acil-COA 1 Figura 2 3 4 . transportador del alfa-celoglutarato. K. P. Glucosa Palmitato Glucosa 6-fosfato 1 f rato - lsocitrato Figura 23-5. transportador del tricarboxilato.) . (VPF.vla de la pentoca fosfato.

deben almacenar gran parte de la energía de su dieta para usarla entre alimentos. el NADPH se tiene disponible para la lipogknesis. Esta vía es un medio de transferir equivalentes reductores del NADH extramitocondrial al NADP. El alargamiento de la cadena de los ácidos grasos tiene lugar en el retículo endoplásmico La vía ("sistema micrnsomat") convierte a los compuestos acil-CoA de los Bcidos grasos a derivados acilo con dos átomos de carbono m6s. El alargamiento de la estearil-CoA en el encdfalo aumenta con rapidez durante la mielinizaci6n con el fin de proporcionar hcidos grasos con 22 y 24 átomos de carbono que estan presentes en los esfingolipidos. lo cual constituye ta fase anabblica de este ciclo. al igual que hcidos grasos insaturados.citrato dentro del compartimiento extrarnitocondria!. Debido a que el acetato surge y es aczivado a a c e t i l 4 o A fuera de las mitocondrias. Hay poca ATP-citrato liasa o enzima malica en los rumiantes probablemente debido a que en estas especies el acetato (proveniente del mmen) es la fuente principal de acetil-CoA. no hay necesidad alguna de transportar citrato fuera de la mitocondria y forme citrato antes de su incorporacion en los ácidos grasos de cadena larga. Es de notarse que el transportador de citi2t~ (tricarboxilato) en la membrana mitocondrial requiere E malato para intercambio con e ciwato (figura 14-13). El estado nutricional del cuerpo y los tejidos es el factor . En forma alterna. debido a la deficiencia de enzima málica. R ~ H ~ O C H .S-COA 2. Laacetil-CoA se tiene por después disponible para la fomacion de malonilCOA y la síntesis de palmitato (figura 23-5). lactato y acetilXoA a lipido.3-ACIL-COA INSATURADA + Ht NADP+ Figura 23-6. A su vez. incluso el ser humano. seguida por la generacion de NADPH a través de la enzima malica.s-Acil-COAinsaturada NADPH 2. Los grupos acilo que pueden actuar como moléculas cebadoras incluyen las series saturadas desde el CIOhacia adelante. Sistema microsbmiul de la elongasa para el alargamiento de las cadenas. EL ESTADO NUTRICIONAL REGULA LA LIPOGÉNESIS Muchos animales. El proceso de lipogknesis se ocupa de la conversi6n de glucosa e intermedios como piruvato. catalizada esta fragment a c i ~ n la ATP-zitrato liasa. mediante la utilización de rnaIonil-CoA como donador de aceti lo y el NADPH como reductor y catalinda por las enzimas del sistema cromosómico de [a clongasa de los 4cidos grasos (figura 2 3 4 ) . El ayuno suprime principalmente el alargamiento de las cadenas. toman su alimento como comidas espaciadas y por tanto. El oxalacetato puede formar malato mediante la maIato deshidrogenasa enlazada al NADH. La generacion de NADPH via la isocitrato deshidrogenasa extramitocondrial es más importante en estas especies.C H ' ~ . el malato puede transportarse al interior de la mitocondria donde puede reformar el oxalacetato. donde en presencia de COAy ATP sufre la ft-apentacihn a a c e t i l 4 o A y a oxalacetato.

La inhibicibn mayor de la lipoghesis ociirre por arriba de los valores de Bcidos grasos libres (0. Asi. un ejemplo de inhibición metablilica por retroaiimentacidn negativa por un producto de la secuencia de acciones s. si la acilXoA se acumula como resultado del aumento de lipolisis o del flujo de hcidos grasos libres hacia el tejido. (Experimento del laboratorio del autor con DC Topping. La sintesis de ácidos grasos de cadena larga se regula a termino corto por modificación alostérica y covalente de enzimas y a largo plazo por cambios en la expresibn genica que regula las velocidades de sintesis enzimáticac. reducid de manera autornatica la sintesis de acido graso nuevo.) . La activacibn alostCrica de la enzima implica Ia agregación de la configuraciiin dimerica en polimCrica de varios millones de masa molecular.0 AGL cbricos (~tmollmC) La insulina estimula la lipogénesis por diversos mecanismos.8 mmollmL de plasma) en los que Acidos grasos plasmáticos aumentan durante la transición de la alimentación a la Inanicibn. en tejido adiposo) y por consiguiente aumenta la disponibilidad de piruvato para la síntesis de hcidogmo y de glicerol 3-fosfatopara esterificación de estos ácidos grasos. DE este modo. si la a c i l 4 o A se acumula debido a que no se esterifica con suficiente rapidez. pero no en el Figurá 23-7. lo cual conduce a incremento en las proporciones [ATP]/[ADP] dentro de la mitocondria y por tanto a conversibn de pimvato deshidrogenasa activa a inactiva (figura 19-6).3 a 0. con dietas ricas en Iípidos o cuando hay deficiencia de insulina. La AciIXoA inhibe a la piruvato deshidrogenasa por bloqueo del transportador del intercambio ATP-ADP de la membrana interna mitocondrial. Sin embargo. Existe una r e l a c i ~ ninversa entre lipogenesis hephtica y la concentracion d r i c a de ácidos grasos libres (figura23-7).principal de control de la velocidad de E Eipogknea sis. e impedir de este modo la salida de citrato de las mitocondrias al citosol. también se inhibirá la formación de acido graso nuevo (figura 23-7). LA LIPOGÉNESISSE REGULA CON MECANISMOS INMEDIATOS Y A LARGO PLAZO La Acil-CoA regula también a la piruvato deshidrogenasa Existe tambien una relacibn inversa entre la concentracirin de hcidos grasos libres y la proporcibn entre piruvato deshidrogenasa activa e inactiva que regula la disponibilidad de acetilXoA para lipoginesis. Erta enzima es alosterica y se activa por citrato. Las hormonas también regulan la lipogénesic 0. la inhiben moléculas a c i l X o A de cadena larga. acelera el transporte de glucosa al interior de la celula (por ejemplo.AGL. La Acil-CoA puede inhihir tambikn al transportador mitocondrial de tricarboxilatos.0 3. bcidoc grasos libres.5 I . y en consecuencia inhibir la piruvato deshidrogenasa. AdemBs. es escasa la conversión de carbohidrato dieteitico a grasa. La grasa de la dieta también deprime la lipogénesis en el higado y cuando la alimentación contiene m&$ de t 0% de lipidos. De igual modo. La regulación del movimiento de icidos grasos libres del tejido adiposo se describe en el capitulo 27. Se deprime en situaciones de ingestión caldrica restringida. ¡a oxidación de a c i l 4 o A por aumento de la concentracibn de acidos grasos libres puede elevar las proporciones [acetil4oA]qCoA] y FADH]/[NADt] en la rnitocondrias.a 2.2 0. cuya concentracion aumenta en estado de nutncion adecuada y es un indicador de suministro complcto de acetilCOA. la velocidad es alta en el animal nutrido cuya dieta contiene una elevada proporcihn de carbohidratos. como en diabetes sacarina. Inhibicibn directa de la lipogénesis hepatica por Acidoc grasos libres La lipog&necis ce deteminb de la incorp~racion 3 ~ z a $cidos grasos libres en hígado de de 0 rata perfundido. La concentración de citrato y acEl4oA regula a la acetil4oA carboxilasa La reacción limitante de la velocidad en la vía lipogénica es el paso de la acctil4oA carboxilasa. La lipogknesis es mayor cuando se ingiere sacarosa en lugar de glucosa debido a que la fructosa esquiva el punto de controt de fosfofmctocinasa en Z glucolisis e inunda la vía lipogénica a (figura 22-51. Todos estos estados se acompañan de incremento en la concentración placmatica de acidos p q o s libres. La insulina convierte la forma inactiva de piruvato deshidrogenasa a la forma activa en el tejido adiposo.

M#. . 4) La lipogénesis se regula en el paso de la acetilCOA carboxi lasa por modifi cadoses alostéricos. los cuales inhiben la a c e t i l 4 o A y por consiguiente la lipogénesis. J Biol Chem 1990. a proficient multifunctional enqrne. biotina.28. E complejo de ácido graso sintasa l y a c e t i l 4 o A carboxilasa son enzirnas adaptativas Esto es.ipid Kes 1994. la a c i l 4 o A de cadena larga inhibe su actividad. Biochemistry 1989. El citrato activa la enzima.: Coordinate regulation of glycolytic and lipogenic gene exprcssion by polyunsaturated fatty acids. ácido pantotenico y HCOt. la insulina. inhibe la lipolisis y por tanto. Haystead TAJ et al. cl complejo multienzim~tico una sola cadena polipeptídica de con siete actividades enzirnaticas separadas.264 0 Bioquirnica de IJarper (Capitulo 23) hígado. La insulina es una hormona importante que produce expresión génica e induce biosíntesis enzimática y el glucagán amagoniza este efecto. por inducción de la síntesis.35: 1076. la acetilXoA carboxilasa es una enzima que puede regularse por fosforilaci6n reversible. IlenjaminlCurnmings. 2) La vía convierte la acetilXoA a palmitato y requiere NADPH. Goodridge AG: Dietav regulation of gcnc expression: Enzyrnes involved in carbohydrate and lipid metaboIism. Page 143 in: B i o c h ~ m r s t yf Lzpids and . se evitan muchos de los mecanismos de control en los que intervienen mitocondrias y por tanto no son aplicables. la insulina activa la acetil-CoA carboxilaca por desfosforilaci6n y a plazo largo. Por este mismo mecanismo.: Aciite hormonal control of . A plazo corto. Wakil SJ:Faay acid synthaie. ATP.: Roles of thc AMP-activated and cyclic-hMP4ependent protein kinascs in the adrcnaline-induced inactivationof acetyl-COA carboxylase in rat adipoqtes. I I. Estos mecanismos para el control a largo plazo de la lipogénesis recién descritos emplean varios días para manifestarse en forma plena y aumentan el efecto directo e inmediato de ácidos grasos libres y hormonas como con la insu Iina y glucagón. la insulina antagoniza las acciones de glucagón y adrenalina. Vance o DE. que permite a la proteína cinasa dependiente de cAMP que inactlve a la enzima por fosforilacilin. el acetato y no la glucosa es el compuesto de inicio de la lipogénesis. se ajustan a los requerimientos fisiolbgicos del organismo por incremento en la cantidad total en estado de nutrícibn adecuada y disminución en ayuno. La insulina activa la a c c t i l Z o h carhoxilasa. 5) El alargamiento de la cadena de los ácidos grasos tiene lugar en el retículo endoplhmico.265:6330. Otra proteina cinasa dependiente de 5'-AMP también inactiva la enzima. 3) El sistema de la a c e t i l 4 o A carboxilasa se requiere para la conversion de la acetil-CoA a malonilCOA.4523. cataliza el ensamble de palmitato a partir de una mol&culade a c e t i l 4 o A y siete de rnalonil4oA. Vance JE (editors). La ingestión de grasas que contienen ficidos grasos poliinsaturados regula la manera ordenada la inhibiciiin de la expresión de enzirnas criticas REFERENCIAS Goodridge AG: Fatty acid synthesis in eukatyotes.Uernhrañes. modificación covalente e induccibn y represidn de Ia sintesis enzimhtica. El glucagbn y la adrenalina tienen acciones ovuestas a-la insulina. en estas especies.ice@COA carboxylase. dieta rica en Iípidos y diabetes. la Bcido graso sintasa. Etir J Biochem 1990.7: 157. Ademhs. En los rumiantes. cataliadapor el sistema enzirnhtico de la etongasa microshíca. RESUMEN 1) La síntesis de hcidos grasos de cadenas largas (lipogenesis) se realiza por dos sistemas enzimá~icos presentes en el citosol de la célula: la acetilXoA carboxilasa y hcido graso sintasa. un inhibidor de la lipogénesis. A su vez. reduce la concentración de la acil-CoA de cadena larga. Annu Rev Nutr 1987.187:199. 1985. por incremento de cAMP. Esta activación implica la desfosforilac i ~ por una proteína n fosfatasa acornpaflada por el cambio en la agregacibn de monomeros a partir de un octbmero a un estado más polimerico. Jump DI3 et al. de la gluctjlisis y la lipogénecis. por 5u propiedad de deprimir la concentraci6n de cAMP intracelular. Se infiere que.como cofactorec. Tarnbidn. Mabrouk C M et al.

donde ocasiona la produccibn de cuerpos cetónicos por el hígado (cctosis). los AGL de cadena larga se combinan con la albumina y en la célula están adheridos a la proteína fijadora d e hcidos grasos o proteína Z. la biosintesis d e los ácidos grasos (Iipogenesís} se desarrolla en el citosol. varios estados de deficiencia de carnitina o de las enzimas esenciales para la oxidacibn de los ácidos grasos (como la carnitina palmitoiltransferasa) o cuando la oxidacihn es inhibida por venenos (por ejemplo la hipoglicina). cualquier alteración de dsta da lugar a hipoglucemia. PhD. Mayes. sino un proceso entemente distinto que tiene lugar en la célula en un compartimiento separado. En el plasma. causa cetoacidasis que finalmente es mortal. Por el contrario. Los acidos grasos de cadena corta son m8s solubles en agua y existen como acido no ionizado a como anion. utiliza NAD' y FAD como coenzimas y genera ATP. La oxidación de hcidos grasos es un proceso aerobio. Aunque la materia prima de un proceso es idéntica al producto de otro y las etapas químicas son comparables. OSC Los ácidos gsasos son oxidados a acetil-COAy sintetizados a partir de la misma. cuya producción excesiva por periodos largos. LA OXIDACION DE LOS ÁCIDOS GRASOS SE PRODUCE EN LAS MITOCONDRIAS Los acidos grasos san transportados en la sangre como ácidos grasos libres lAGL1 El término "acido graso libre" se refiere a los ácidos grasos que no esthn esterificados. En presencia de ATP y de la . los Acidos grasos primero deben convertirse mediante la reaccibn con el ATP a un intermediario activo. La oxidacion de los ácidos grasos se lleva cabo en las mitocondrias.Oxidación de ácidos grasos: cetoaénesis Wd Peter A. Los cuerpos cetónicos son ácidos. cada paso comprende derivados acil-COA catalizados por enzírnas diferentes. la biosintesis de los acidos grasos no es simplemente la inversa de su oxidacihn. dc modo quc en realidad nunca están "librec". Otras nomenclaturas son AGNE (ácidos gracos no esterificados) o AGSE (acidos p o s sin esterificar). Ésta se presenta en Los ácidos grasos deben activarse antes de que puedan ser catabolizados A1 igual que en el metabolismo de la glucosa. La oxidacibn de Bcidos grasos separada de la biosíntesis permite que cada proceso se regule e integre de manera individual de acuerdo a las necesidades tisulares. Esta es ia única a a p a en la degradación completa de un ácido graso que requiere energía a partir dcl ATP. que exige la presencia de oxígeno. antes de que reaccionen con las enzimas responsables de su metabolismo ulterior. IMPORTANCIA BIOMEDICA El incremento de la oxidacibn de los hcidos grasos es tipico de la inanición y de la diabetes sacarina. utiliza NADP' como coenzima y requiere de ionec bicarbonato y ATP. comprende derivados acilo adheridos continuamente a un complejo multienzimatico. como en la diabetes. Debido a que la gluconeogénesis depende de la oxidacihn de Ios hcidos grasoc.

Han sido descritas varias acil-COAsintetasas. En la matriz mitocondrial se desprende la camitina y se regenera acil-COA (figura 24-1). Acil-CoA + Carnitina e Acilcarnitina + Cob La presencia de la pirofosfata~ainorghnicti asegura que la activacihn sea cornplrtta. La función dc esta enzima es poco conocida. Ácido graso + ATP + COA + Acil-COA + PP. la acilcarnitina . La carnitina-acilcarnitina translocasa actúa como un transportador de intercambio dc carnitina. independientemente de la carnitina. Una enzima. la carnitina palrnituiltransferasa 1 esta relacionada con el lado exterior de la rnernbseina mitocondrial interna y convierte a los grupos acil-COA de cadena larga en acilcarnitina. especificas pasa cada ácido graso de diferente longitud de cadena. La acilcarnitina se transporta al interior acoplada con la salida de una molecula de camitina. pero la acil-COA de cadena larga (o AGL} no penetrara a las mitocondrias y no es oxidada a menos que forme acilcarnitinas. paro si su producto metabolico. Es sintetizada en el hígado y el riñén a partir de lisina y metionina. adherida al interior de la membrana intenia. tos acidos grasos de cadena larga atraviesan la membrana mitocondrial interna como derivados de carnitina La carnitina (beta-hidroxi-gamrna-trimeti!amoniobuikato). De este modo. en particular. la cual es capaz de penetrar la membrana interior de las mitocondrias y tener acceso al sistema de enzirnas de la beta oxidacibn (véase la reacción después). la carnitina acctiltransferasa. (CH&W -CH2-CH(Oi-WH:4OO-. la enzima acil-COA slntetaqa (tiocinasa) cataliza la conversión de un ácido graso (o ácido graso libre) a un "ácido grasa activo" o acil-COA. Otra enzima.266 Bioquimica de Harper coenzima A. catalizando la transferencia de grupos acilo de cadena corta entre la COA y Ia carnitina. Luego. es abundante en particular en el musculo.+ AMP ciona con COA. está ampliamente distribuida y. de hecho son dos fosfatos de alta energia los que se gastan durante la activación de cada molécula de ácido graso. facilitando la pérdida del fosfato de alta energia adicional del pirofosfato. la acilcarnitina reacCarnitina Acilcarnitina ! I COA / \ Carnitina Acil-COA Aulwmitina &brnitina - beta ni da cid^ Figura 24-2. se encuentra presente en las mitocondrias. La funcibn de la carnitina en e transporte de 4 los ácidos grasos de cadena larga a travec de la membrana interna de la rnitocondria La cadena larga de acetil-COA no puede atravesar la membrana interna de ta mitomndria. acompanada por el gasto de un focfato de alta energia. por acción de carnitina palmitoiltransfersa 11. La activación de los Acidos grasos mas pequefíos y su oxidacidn pueden ocurrir en el interior de las mitocondrias. pero puede ser que facilite el transporte de grupos acetilo a través de la membrana de la mitocon- PIROFOSFATASA ATP AMP+ PPi La acil-COA sintetasa se encuentra en el retículo endoplasmico y en el interior y sobre la membrana externa de las mitocondrias.

La cadena se toacil-COAcorrespondiente. Esquema global de la beta oxidacion de los ácidos grasos. La acil-COA formada en la reacción dc Diversas enzimas conocidas colectivamente corno fragmentacion vuelve a entrar a la vía oxidativa en la "acidos grasos oxidasas" se localizan en la matriz reaccihn 2 (figura 24-31. Después de que el residuo acilo penetra en Ia mernbma m itmondnal mediante el sistema transporAcetil-COA + Carnitina t Acetilcamitina + COA . dc aquí el nombre de beta oxidación. la acetilcarnitina es una fuente energdtica importante para el esperma.3 palrnitoil-COA forma ocho molt5culas de acetil-COA. De aquí que. Junto con fiuctosa y lactato. Finalmente. un constituyente del ciclo del ácido cítrica (figura 2 1-2). la coenzima rompe entre los Atomos de carbono alfa(2) y beta(3). Estas * catalizan la oxidacibn de la acil-COA a acetil-COA. dria. dos carbonos formadas son acetil-COA. acopliindose el sistema con la fosforilación del ADP a ATP (figura 24-3). por tanto. el la 3-cetoacil-Coa es fragmentada en la posición 2. respaldando su movilidad. Esto resulta en la formación de A'-trans-enoil-COA. la cual cataliza un desdoblamieiito tiolítico que afecta otra molécula de COA. De esta manera. denominada flavoproteina transferenie de GRASOS IMPLICA SU electrones (capitule 13). cataliCON LIBERACION DE ACETIL-COA zada por la enzima A'-enoil-COA hidratasa. cuya nueva oxidacibn por la cadena LA BETA OXIDACION DE ÁCIDOS respiratoria requiere la mediación de otra flavoproteína.cual se encuentra en la membrana interna}. sigue la eliminaciiin de dos átomos de hidrhgeno de los carbonos ?(alfa) y 3(beta). El derivado 3-hidroxi sufre una deshidrogenación posteEn la beta oxidación (figura 24-2). Como la acetil-COA puede ser oxidada a COz y agua a través del ciclo del ácido cítrico (que se encuentra tarnbikn dentro de las mitocondrías}. En este caco. Los acidos grasos con un número impar de átomos de carbono son oxidados por la vía de la beta oxidación produciendo acetil-COA hasta que quede un residuo de tres carbonos (propionil-COA). catalizada por la acilCOAdeshidrogenasa. Las unidades de NAD interviene en la deshidrogenación. tador de la carnitina y la reformacibn de acil-COA. Se afíade agua para saturar DESDOBLAM1ENñO SUCESIVO el doble enlace y formar 3-hidroxiacil-COA. La coenzima para la desh idrogenasa es una flavoproteina que contiene FAD como grupo prostttico. deshidrogenasa) para formar el compuesto 3-cecomenzando por e! extremo carboxilo. el residuo propionilo d e un ácido graso de cadena impar es la única parte glucogénica de 61. La oxidacion de un ácido graso can un número impar de carbonos produce una molécula de acetil-COA y una molécula de propionil-COA 1 Remoción sucesiva de dos unidades C Acetil-CoA Figura 24-2. Este compuesto se convierte en succinil-COA. un ácido mitocondrial adyacente a la cadena respiratoria (la graso de cadena larga puede ser degradado por completo a acetil-COA (unidades C:).Los productos de esta reacción son La secuencia de reacción cíclica la acetil-COA y un derivado acil-COA que contiene genera NADH y FADH2 dos carbonos menos que la motccula original de acilCOAoxidada. por una tiolasa (3-cetoacil-COA-tiolasa). . cada vez se rior sobre el carbono 3 (L(+)-3-hidroxiacil-COA separan dos carbonos de las rnol&culasde acil-COA. se logra Ia oxidacion completa de los ácidos grasos.

L L - MEMBRCrN.'CH$ I -O - S NTETASA 1 AMP+ PP. Aul-COA (Acido graso activo) R"CIi. . ---------- o II Lado M (dentro) Cadena NADH+H Cadena CCdo del af ido Figura 24-3. .-------------------+ . 7CHrC-S-CoA .C -S-COA Acv'-cOA DESHlOROGENASpl . 1 I - Lado C (fuera) -e---------------- +- TRANSPORTADOR CARNITINA - .4 MITOCONDRWL INTERNA C f- R ~ C H T ~ C H . - -.d 0 II Acido graso R3CH.. la acetil-COA es separada en cada cicla por la Ziolasa (reaccibn 5) Cuando el radical acilo tiene únicamente cuatro Atomos de carbono se forman dos moléculas de acetil-COA en la reaccidn 5. Beta oxidacibn de los ácidos gracos La acil-COA de cadena larga participa en el ciclo a través de las reacciories 2 a 5.

t r a n s . CZo C2.c i s .I que posteriormente es oxidado a -COOH. El primer coinpuesto es isomerizado (~"cis-tA~-irunsenoiS-COAisomerasa) a la etapa correspondiente A ~ tram-COA de la beta oxidación para la subsiguiente hidsatacidn y oxidacibn. ~ ~ . un total de 129 x 5 1. la beta oxidacion en las mitocondrias es la via mas importante para la oxidación de los acidos graos.). cualquier d4-cis-acil-COAse conserva. esta primera deshidrogenación no se vincula directamente con la fosforilación y la generación de ATP pero. es decir. los ciialcs se excrefan en la orina. es decir. facilita la oxidación de ácidos grasos cuya cadena tarnbikn es muy larga (por ejemplo. la alfa oxidación. LA OXIDACIÓNDE ÁCIOOS GRASOS INSATURADOS SE PRODUCE POR UNA V ~ A MODIFICADA DE LA BETA OXIDACION Los ésteres COA de estos Acidos son degradados por las enzimas que normalmente se ocupan de la beta oxidacibn hasta que se forma un compuesto A'-cisacil-COA o un AA-cis-acil-COA. rindiendo una ganancia total de 1 29 moles de ATP por mol de palmitato. la secuencia de la beta oxidación termina en el octanoil-COA. A continuación los grupos octanoilo y acetilo se eriminan de los peroxisomas en la forma de octanoil carnitina y acetit carnitina y. Por tanto. por fhrrnacos hipolipiddmicos como el ctofibrato.La oxidación de los ácidos grasos produce un gran numero de msleculas de ATP El transporte de electrones en la cadena respiratoria. más tarde. ambos son oxidados en las mitocondrias. No necesita intermediarios COAy no conduce a la generación de fosfatos de alta energía. conducira a la síntesis de cinco fosfatos de alta energia (capitulo 14) para cada una de las primeras siete rnolticulas de acetil-COAformados por la beta oxidacidn del palmitato (7 x 5 = 35). procedentes del FADEI: y el NAD. intermediario un en la beta oxidación. el proceso captiira como fosfato de alta energia alrededor de 68% de la energia total de combustiiin del acido graso. Como la energia libre de la combustión del ficido palniitico es de 979 1 kJlmol. mediante la activación inicial por la acil-COA sintetasa de cadena muy larga. Sin embargo. Los peroxisomas también participan en la síntesis tanto de Cter glicerolipidos (capitulo 26).~ ~ .d i a enoi 1-COA.dependiendo de la posición de las dobles ligaduras (figura 2 4 4 ) .~ ' ' c i s d ienoil-COAreductasa. como en el caso del hcido linoleico (figura 2 4 4 ) o entra a la via en este punto y es convertido por la acil-COA deshidrogei~asa ~ ~ . en algunas especies. Las cnzimas en los peroxisomas no atacan a los ácidos grasos de cadenas más cortas. t o s peroxisomas no contienen carnitina palmitoiltransferasa. LA ALFA O X I D A C I ~ N LA OMEGA Y OXIDACIQN DE ACIDOS GRASOS SON V ~ A S ESPECIALIZADAS De manera cuantitativa. la eliminación de un carbono a la vez.6* = 6656 kJ. La omega oxidación se origina en el reticulo endoplAsmico por las enzímas hidroxilasas. La A 3 .c i ~ . el higado * AG para la reacción ATP. obteniendoce 8 x 12 = 96 moles de ATP derivados de la acetil-COA formada a partir del pahitato. . como del colesterol y del dolicol (figura 28-2). lo cual forma un acido dicarboxiIico. Se forma un total de ocho moles de acetil-COA y cada uno dar&lugar a 12 moles de ATP en la oxidación en el ciclo del ácido cítrico. El grupo -CHi se convierte en el 4 H l O I . LA CETOGÉMESIS SE PRESENTA CUANDO HAY UN ~NDICE ELEVADO DE OXIDACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS EN EL HÉGADO En ciertas condiciones mctab6licas relacionadas con un índice alto de oxidación de ácidos pasos. tal como se explica cn el capítulo 19. Este es beta oxidado habituarmente a ácido adipico (Cbjy sub6rico (CR). de éstos se restan dos por la activación inicial del ácido graso.t s a n s .f A Z ~ n s e n o i ~ o ~ isomerasa tarnbikn atacará a la doble ligadura A'-iruns para producir A~-rruns-enoil-COA. Una funcihn posterior de la beta oxidación peroxisómica es acortar la cadena lateral del colesterol en la fomaci6n de hcido biliar (capítulo 28). Los peroxisomas oxidan a ácidos grasos de cadena muy larga En los peroxisomas se encuentra una forma moditicada de la beta oxidacion que conducc a la formación de acetil-COA y HzOl (del paso de la deshidrogenasa ligada a flavoproteína). interviniendo un citrocromo P450 (capitulo 13). Ésta es convertida a A3-irans-enoit-COA por una enzima que depende de NADP. del extremo carboxilo de la molécula ha sido detectada en el tejido encefático. y Estas enzimas se inducen por dictas abundantes en grasas y.

El acetoacetato y el 3Aidroxibutirato son interconvertidos por la enzima mitocondrial D(-)-3-hidr~xibutirato deshidrogenasa. Acido linoleiw. para explicar tanto la produccihn de mlis de un equivalente de acetoacetato a partir de un hcido graso de cadena larga. Las fuentes extrahepáticas de cuerpos cetbnicos. . En general la perdida por la orina es menor de 1 mg por 24 horas en el ser Iiumano. Más tarde. es decir. Los Acidos grasos h4-ciso los que forman n4-us-enoil-COA entran a la via en la posicibn que se muestra. no contribuyen de manera importante a la producción de cetosis en estas especies. el hígado parece ser el Unico 6rgano en los no rumiantes que agrega una cantidad significativa de cuerpos cet6nicoc a la sangre. por ejemplo. el equilibrio es controlado por la proporción mitocondrial del fNADt] a WADH]. En los rumiantes es algo mayor debido a la formacidn en la pared del mmen de 3-hidroxibutirato a partir del ácido butirico [un producto de la fermentación en los rumiantes). La proporcibn E-hidroxibutirato]/[acetoacetato] en la sangre varia entre 1 : 1 y 10:1 .cis cis C 0 S .2 mmollL. isocitrato deshidrogenasa y MAD(P)H transhidrogenasa * El termino "ceionaq" no debe usarce debido a que el 3-hidroxibutirato no es iinacetona y ha! muchas ceicinas en la sangre que no son ciicrpos cetónicos.COA - 3 Ciclos de B oxidacibn 0 3 AwtiI-CoA a2-trans-i\6-c~s-Dienoi~-~o~ (A~-tmns-Enoil-COA estado de a-oxidación) Un uclo de p oxidacibn Acetil-COA produce cantidades considerables de acetoacetato y de D(-)-3-hidroxibutirato (beta bidroxibutirato). Estas tres sustancias se conocen colectivamente como cuerpos cetánicos (se designan como cuerpos acetónicos o [incorrectamente*] "cetonas") (figura 24-5). 3-hidroxi-3-metilglutaril-COA (HMG-COA) es un intermediario en la vía de la cetogénecis Las enzimas que forman cuerpos cet6nicos estan relacionadas principalmente con las mitocondrias. La concentración de cuerpos cetónicos totales en la sangre de mamlferos bien arimentados por lo común no excede de 0. el epitelio del rumen en los rumiantes. Secuencia de reacciones en la oxidacibn de Bcidoc grasos insaturados. A l principio se creía que sólo se formaba una molécula de acetoacetato a partir de los cuatro carbonos terminales de un ácido graso despues de oxidacibn. La situacidn inversa tiene lugar en los tejidos extrahepaticos (figura 2 4 4 ) . Los tejidos extrahepAticos los utilizan como sustratos respiratorios. El flu-jo neto de cuerpos cetónicos del hígado a tos tejidos extrahepaticos proviene de un activo mecanismo enzimatica en el hígado para la produccion de cuerpos cet6nicos acoplado con una actividad muy baja de las enzimas encargadas de su utilizacidn. El NADPH para el paso de la dienoil-COA reductasa es tomada de fuentes intramitocondriaies como la acción del glutamato deshidrogenasa. In vivo. el estado redox. por ejemplo cl piniuato y la fructosa. El acetoacetato continuamente se descarboxila de manera esponthnea para dar acetona. como la formación de cuerpos cetbni- 4 Ciclos de p oxidacibn 5-Aoetil-COA ! Figura 24-4. por elernplo.

*. q u e s e e n c u e n t r a en la mitocondria d e muchos tejidos. la 3bidroxi-3-metilglutaril-COA liasa. cuantitativamente.- cm- Figura 2 4 6 . . Aunque la actividad de la HMG-COA liasa aumenta durante el ayuno. Interrelaciones de los cuerpos cetbnicos. utilizacion y excrecion de los cuerpos cetbnims. Los átomos de carbono separados de la molécula de acetil-COA provienen de la molécula de acetoacetil-COA original (figura 24-71. que es el material inicial para la cetogénesis.CH. surge la acetoacetíl-COA.. La o(-)-3-hidroxibutirato deshidrogenasa es una enzima mitoconcirial cos a partir del acido acktico se propiiso que las unidades C2 formadas en la beta oxidación se condensaban entre si para formar acetoacetato. ya sea directamente durante el curso de la beta oxidación o como resultado de la condensación de acetil-COA(figura 24-7). Forrnacidn. Esta vía implica la condencacion de acetoacetil-COA con oua molécula de acetil-COA para formar HMG-COA catalizada por la 3-hidroxi-3-metilglutaril-COA sintasa. El acetoacetato está en equilibrio con el 1i(-)-3hidroxi butirato catalirado por la n(-)-3-hidroxibutirato dcshidrogenasa. cet o~énesis 2 71 de tiolasa donde dos moléculas de acetil-COA se con- Acetoaoetato a[-FJ-HtPROXfBUTiWTO UADH + W f CH. los resultados no sugieren que esta enzima sea limitante de la velocidad en la cetoh~nesis. s e p a r a a la acetil-COA de la HMG-COA. Esto puede ocurrir por una invessiíin de la reacci6n de la densan para formar acetoacetil-COA. Ambas enzimas deben estar presentes en las mitocondrias para que se lleve a cabo la cetogénesis.- CH . Así. incluyendo el hepático (figura 24-5). El n(-)-3-hidroxibutirato es. La presencia de otra enzima en las mitocondrias. L SANGRE --+.. ronos EXTRAWEPATICOS Cuerpos cetaniws Cuerpos cetonicos cuerpos cetonicos del ácido cítrico Figura 24-6.Oxidació~1 úcidos grasos. el cuerpo cetonico predominante en la sangre y orina en la cetosis. (La vía principal está indicada por las flechas continuas ) . dejando acetoacetato libre. Esto sucede exclusivamente en el epitelio del mmen y en el hígado.

la oxidación de los cuerpos cetonicos aumenta hasta que. Los cuerpos cetónicos son oxidados en los tejidos extrahepáticos de modo proporcional a su concentraci6n en la sangre. a una concentracibn de aproximadamente 12 mmol/L. Esto explica la produccion total de cuerpos cet6nicos por el hígado. una gran proporcibn del consumo de oxígeno puede deberse a la oxidación de los cuerpos cetónicos.k.AGL Acii-COA I (Acetii- beta Oxidacibn COA^ Figura 24-7. una vez que se forma. saturan la maquinaria oxidatíva. Bcidos grasos libres. y la COA se transfiere para formar acetoacetil-COA. no puede ser reactivado directamente en este 6rgano excepto en el citosol de su5 cklulas. (AGL. donde es precursor en la síntesis del colesterol. Vias de cetogénesis en el hígado. dejando suc.3-hidroxi-3-metilglutaril ) Los cuerpos cetiinices se utilizan como combustible para los tejidos extrahepáticos Aunque el hígado cuenta con un activo mecanismo enzimático para la producci6n de acetoacetato a partir de acetoacetil-COA. es separada en acetil-COA por la tiolasa y oxidada en el ciclo del ácido cítrico como se muestra en la figura 2 4 4 . Si esta se eleva. mas que a una deficiencia en + ' Ertefificacisn r. HMG. La acetoacetil-COA que se produce. En los tejidos extrahepliticos. E 1 acetato reacciona con la succinil-COA.igiiceroi fosfolípido . La mayoría de las pruebas sugieren que la cetonemia se dcbc a la elevadaproducci6n de cuerpos cetónicos por el higado. la principal via de utilizacion para la activacihn del acetoacetato a acetoacetil-COA irnptica a la succinil-COA y a la enzima succinil-COA-acetoacetato COA transferasa. cinato libre (figura 24-81. Cuando esto ocurre. una via mucho menos activa..

adiposo. La capacidad de esterificaci6n como un factor anticetogénico depende de la disponibilidad. cuando hay concentraciones altas de Acidos grasos libres. tamvoco se tiene información critica acerca de si las actividades i vivo de las enzirnac que intervien nen en la esterificacibn son limitantes de la veloci- LA CETOGENESIS ES REGULADA EN TRES PASOS CR~TICBS 1) Al principio. Por tanto. Coma hay efectos que semejan el renal (aunque no hay verdadero umbral). en En ta cetonemia moderada. Ios cuales varían entre especies y personas. 2) Uno de dos destinos esperan a los ácidos gracos libres despukc de su captacidn por el hígado y de ser activados a acil-COA: se oxidan en COz o en cuerpos cethnicos. Este brgano. los experimentos con ratas despancreatizadas apoyan la posibilidad de que la cetosis en la diabetes grave puede empeorar por una capacidad reducida para catabolizar los cuerpos cetónicos. no de la cetonuria. Sin embargo. su utilización por parte de los tejidos extrahepáticos. Los ácidos grasos son los precursores de los cuerpos cetbnicos en el hígado. en el hígado. tiene la facultad de extraer 30% o más de lbs ácidos grasos libres que pasan a través de él por !o que. el flujo por el hígado es sustancial.7 graso. la pérdida dc cuerpos cetónicos a través de la orina es s610 un pequeño porcentaje de su produccidn y utilización.Oxidación de cicrdo. Transporte de cuerpos cetbniws desde el hígado y mecanismos de utilizacion y oxidación eii los tejidos intra hepatioos. el control se ejerce en el tejido adiposo. Aunque el acetoacetato y el D(-)-3-hidroxibutirato se oxidan con facilidad por los te-jidos extrahepáticos. es el método preferido para valorar la gravedad de la cetosis. la disponibilidad de glicerol 3-fosfato no limita la esterificacibn en hígados sin nutrientes. o se esterifican en triacilglicerol y fosfoiipido. tanto en el animal alimentado como en ayuno. La cetosis no ocurre i vivo a menos que n haya una elevación concomitante en la concentraci6n de hcidos grasos libres en la circulación que resulta de la lipólisis del triacilglicerol en el tejido . de precursores (figura 26-2) que suministran suficiente glicerol 3-fosfato. No obstante. la acetona es difícil de oxidar ir? vivo y una gran cantidad se volatili~a los pulmones.^: cerogénesis 2 73 Figura 24-8. No se sabe si su disponibi1idadchepática es siempre el factor limitante en la esterificación. los factores que regulan la rnovi!i7acirjn de los ácidos grasos desde el tejido adiposo son importantes en el control de la cetogcnesis (figuras 24-9 y 27-9). In medición de la cetonemia.

. que inhibe la carnitina palmitoiltransferasa 1 (figura 24-10). Malonil-COA es un intermediario inicial en la biosintesis de hcidos grasos (figura 23-l). desinhibiendo a la eanitina palrnitoil-transferasa I.. muestra tres etapas cruciales en E via del metabolismo de a los acidos grasos libres (AGL) que determinan la magnitud de la cetogenesis....t . Estos procesos se refuerzan en la inanicibn por una caída en la proporción insulinaJglucag6n. la cetogenesis puede considerarse como un mecanismo que permite al higado oxidar grandes cantidades de hcidoc grasos dentro de un sistema de fosforilacion oxidativa al parecer estrechamente acoplado. permanece constante. asimismo.. ... inhibe a esta enzima.. Conforme aumenta la concentracibn de ácidos grasos libres séricos. al ticmpo que permite que una cantidad mayor de acil-COA sea beta oxidada.. (CPT-1.. Sin embargo.La reparticihn de la acetil-COA entre la via cetogtnica y la de oxidación a COIes regulada de tal modo que laenergia libre total que resulta de la oxidacibn de los hcidos grasos atrapada en e1 ATP. sin aumentar su gasto total de energía. del inglés vepy Iow c l e n ~ lipoproteins). el cual aumenta en estado de nutrición.. conforme la i~ concentración de Acidos grasos libres aumenta con el principio de la inanicihn. Los ácidos grasos libres. Por tanto.) dad de reaccibn. en tanto que solo se producen 33 moles de ATP cuando el acetoacetato es el producto final y sólo 21 moles cuando es el 3-hidroxibutirato. regula la entrada de gmpos acilo de cadena larga en las rnitocondrias antes de la beta oxidación (figuras 24-1 y 24-1 0 ) . Regulacibn de la cetogenesic. hay lipogénecis activa y concentración elevada de malonil-COA. Se han planteado otras varias hipótesis para explicar la desviación de la oxidación de los acidos .... Los hígados con riego sanguíneo de ratas hambrientas oxidaron considerablemente mlis hcidos grasos marcados con C" a ~ 0 ~ cI4 ' "cuerpos cetonicos y esterificaron menos como C'Lacilglicerol que los órganos de ratas nutridas...... carnitina palmitoiltransferasa l.... cuando la oxidacion de hcidos grasos se encuentra deprimida. El resultado directo de este decremento es la inhibición de la acetil-Coh carboxirasa en el higado mediante fosforilación covaIente... Al parecer no es un proceso regulador ya que ni los hcidos grasos librec ni sus intermediarios en la via de esterificación a triacilglicerol (figura 26-2) se acumulan jamás en el hígado.. un mayor número es convertido en cuerpos cetonicos de modo proporcional y una cantidad menor es oxidada por la ruta del ciclo del dcido cítrico a COZ. Partanto. la beta oxidaciiin a partir de los ficidos gmos libres se controla por la compuerta de la camitina palmitoiltransferasa 1 en el interior de la mitocondria.despuks de su capt a c i ~ n f m a n acil-COA en el higado e inhiben la ... cuando lanutrición es adecurula. se eleva en ayunas. lo cual bloquea la beta oxidacibn.. Por tanto. entran a la célula hepática en concentraciones bajas y son ecterificados casi en su totalidad a acilgliceroles y transportados fiera del hígado cn Eipoproteinas de muy baja densidad (VLDL. los cuales. acetil-COA carboxilasa (figura 24-1 0). Su actividad es escasa cuando hay una nutrición adecuada. Es posible apreciarlo cuando se considera que la oxidacibn completa de un mol de palmita10 conduce a una producción neta de 129 moles de ATP por la via de la beta oxidacidn y la produccibn de COZen el ciclo del acido citrico (vease antes). cuando hay nutrición adecuada.. la acetil-COA se inhibe y malonil-COA disminuye... SANGRE AGL Cuerpos cetbnicos Figura 24-9. la acetil-COA formada en la beta oxidacion se oxida en el ciclo del ácido cítrico o entra en la vía de la cetogénesis para formar cuerpos cetbnicos.. 3) A su vez. cl indirecto es el aumento en la lipblisis en el tejido adiposo y la liberacibn dc ácidos grasos libres. Estos resultados pueden explicarse por el hecho de que la actividad de la carnitina palmitoiltransferasa 1 en la membrana mitocondrial exterior. @ a @. y se esterifica el remanente de la captación de ácidos grasos libres no oxidados. cuando la oxidación de ácidos grasos aumenta.

puesto que el oxatacetato se encuentra tambitn en la vía principal de la gluconeogénesis. En algunos individuos. Teóricamente. así como la cetosis del ganado. los pacientes con aciduria pierden grandes cantidades de carnitina. ácidos grasos libres. En consecuencia.) Esterificac16n Acll-CaA t f H~GADO Ac~lgliceroles ACETIC-COA . la deficiencia de carnitina indica un requerimiento dietético semejante al de las vitamina.debido a hiosíntesis insuficiente o escape renal. es activada por la acetil-COA. Glucagon Malonil-COA Insultna -. Regulacion de la oxidacibn de Bcidoc grasos de cadena larga en el higado (AGL. Su pérdida también puede darse en hemdiálisis. debe haber suficiente oxalacetato para iniciar la reacciiin de condensacion en el ciclo del ácido cit~ico. Acil-CzA beta Oxidacibn Mitocondria . .} Los efectos reguladores. cuando existen cantidades importantes de acetil-COA. ASPECTOS CC~NICOS La oxidación defectuosa de los ácidos gracos da origen a enfermedades que con frecuencia se acompañan de hipoglucemia La deficiencia de carnitina puede presentarse en particular en recién nacidos -y de modo especial en lactantes prematuros. Utter y Keech han mostrado que la piruvato carboxilasa. No obstante.) Acetil-COA . . El tratamiento es mediante suplementación . graso5 de la formaci6n de COzhacia la cetogdnesis. que se excreta conjugada con los acidos orginicos. F CARNITIIVA PALM lTOlL TRANSFERASAj I . positivos @ y negativo O están representados por líneas punteadas y el flujo de sustrato por líneas continuas. puede ocasionar las formas graves de cetosis que se encuentran en la diabetes. . que cataliza la conversion del piruvato en oxalacetato. Acetil-COA - Coz Figura 24-10. en particular dentro de las mitocondrias. Krebs ha sugerido que. lipoproteinas de muy baja densidad. --. que disminuye la concentración de oxalacetato. VLDL. producido a su vez por la elevación de la k t a oxidación.Oxidaci&~ úciu'os grasos: cetog&ne. lapotenciación de esta. Esto puede ocurrir debido a un incremento en la relacidn ~ADH]/[NAD']. lo cual puede afectar el equilibrio entre el oxalacetato y el malato. podria restar capacidad al ciclo del Acido cítrico para metabolizar la acetil-COA.~is 275 de AGL Carbohidratos . con disminución de la concentración del oxalacetato. una caída en la concentracibn de oxalacetato. que conducen a la acurnulaci6n de lipidos con debilidad muscular. Los signos y sintomas de deficiencia incluyen episodios peribdicos de hipoglucemia causados por la reduccion de la gluconeogénesis que resulta de una oxidación defectuosa de hcidos grasos y de cetogénesis en presencia de concentraciones plasmáticas elevadas de AGL.

con formación adicional de ATP. aunque también presenta una perdida generalizada de las funciones peroxisdmicas. que es glucogenica. pero en este hltimo las cantidades de carnitina son adecuadas y su origen se desconoce. un constituyente de la clorofila que se encuentra en alimentos vegetales. como la deficiencia en la síntesis de hcido biliar y de &eres de Iípido~. Los ácidos acetoacético y 3-hidroxibutirico son ácidos moderadamente fuertes y necesitan ser amortiguados cuando se presentan en la sangre o en los tejidos. por ejemplo. No obstante. También se han ohservado errores innatos de la cetogénesis. al hígado. La forma más simple de cetosis tiene lugar en la inanicihn y se debe a la deplecibn de los carbohidratos disponibles acoplada con la movilizacic5n de ácidos grasos libres. la cual conduce a excreción urinaria de 2-truns-4-crs decadienoilcarnitina como consecuencia de la deficiencia de E beta oxidacibn de ácidos a grasos pol iinsaturados. una alfa oxidación inicial elimina at grupo metilo. la deficiencia de carnitina palmitoiltransferasa 1 afecta sólo al hígado y conduce a reduccion de la oxidacihn de acidos grasos y cetogcnesis con hipoglucemia. Se conocen bien los defectos en Ios genes para la 3-cetoacil-COA tiolasa. Los síntomasson semejantes al síndrome de Reye (encefalopatía con degeneracidn grasa de las vísceras). la cual también afecta la degradacibn de leucina. Por otro lado. Su causa es la falta de acil-COA deshidroeenasa de cadena media en lar " mitocondrias. pero las personas con esta enfermedad tienen un defecto hereditario en la alfa oxidación que permite la aciimulaci6n del hcido fithnico. hipoglicina. El sindrorne de: Zellwegcr (cerebrohepatorrenal) se presenta en individuos con una rara ausencia hereditaria de peroxisomas en todos los te. La cetoacidosis se debe a la cetosis prolongada La presencia en sangre u orina de cantidades de cuerpos cetónicos mayores de las normales constituye cetoancmia (hipercetonemia) o cetonuria. . toxernia gravidica en ovejas y cetosis en vacas cn lactancia. como es el caso de la deficiencia de H MC-COAliasa. Forrnas no patológicas de cetosis se encuentran en condiciones de alimentación rica en grasas y despues de ejercicio extenuante durante el periodo posabsorción. causando cetoacidosis. que puede ser mortal en diabetes sacarina no controlada. Esto altera la beta oxidacibn. La enfermedad de Refsum es un trastorno neurolbgico poco común causado por acumulación de ácido fithnico. Este defecto causa la acumulación de ácidos poliénicos Ct6 a Cis en el tejido encefalico.oral de carnitina. La aciduria dicarboxilica se caracteriza por la excreción de Bcidoc omega dicarboxilicos C ~ IyD por la hipoglucemia no cetbtica. respectivamente. Por su pme. el cual escinde en secuencia las unidades de acetil-COA de las cadenas de acidos grasos. coma e higado graso. 2) La oxidación de hcidos grasos de un numero impar de carbonos produce acetil-COAmás una molkcula de propionil-COA. debido a Ia incapacidad para oxidar ácidos grasos de cadcna larga en los peroxisomac. a ácidos dicarboxilicos de cadenas media y corta. su excreción continua en cantidad produce cierta pbrdida de amortiguamiento catiónico (a pesar de la produccibn de e o n i a c o en el riñón) que agota de manera progresiva la reserva de álcali. El trastorno global se llama cetosis. aunque: en el aspecto cuantitativo puede exagerarse para producir los estados patológicos encontrados en diabetes sacarina. la deficiencia de carnitina palmitoi~transferasaF1 afecta de manera primaria al músculo esquelético (debilidad y necrosis con mioglobiniiria) y. Al parecer. La acetil-COA se oxida en el ciclo del ácido citrico. En un patrhn semejante. la deficiencia de !a beta oxidación-COA deshidrogenasa de cadena larga puede ser una causa de hígado graso agudo en el embarazo. La enfermedad jamaiquina del vbmito es causada por comer fruta sin madurar del árbol a h e (Blighia sapidaj que contiene una toxina. en su forma más grave. Normalmente. formado del fitol. la cual inactiva a la acil-Co. que luego son acortados por la beta oxidacibn.4 deshidrogenasa de ácidos grasos de cadena media y corta.jidos. El ácido fithnico contiene un grupo metilo en el carbono 3 que bloquea la beta oxidación. pero incrementa la omega oxidación de acidos grasos de cadena larga y media. !os cuales son excretados. Los defectos hereditarios en las enzirnas de la beta oxidación también ocasionan hipoglucemia. En la actualidad se sabe de deficiencias de acil-COA deshidrogenasas de cadena larga y media. un arninohcido cetogénico (capítulo 32). inhibiendo la beta oxidación y causando hipoglucemia con excreción de ácidos mono y dicarboxilicos de cadena media y corta. las sulfonilureas hipoglucémicas (glihurida [glibenclamida]y tolbutamida) reducen la oxidación de iicidos grasos por medio de la inhibición de la camitina palrnitoiltransferasa. ningún otro trastorno donde se presenta la cetosis difiere cualitativamente de este patrbn general de metabolismo. junto con deficiencias de hidroxiacil-COA deshidrogenasa y 2. RESUMEN 1) La oxidaci6n de los ácidos grasos en las mitocondrias produce cantidades abundantes de ATP por un proceso llamado beta oxidacibn.4-dienoil-COA reductasa.

I'rog Lipid Rcs 1989. 19:339. 1995. la cual determina la proporción del flujo de hcidos grasos hacia oxidación en lugar de esterificacilin. Mannaerts GP: Perovisomal lipid metabolism.: Primary carnitine deficiency. . 3-hidroxibutirato y acetona) se forman en las mitocondrias hephticas cuando hay un índice elevado de axidacion de hcidos grasos.h droxyacy 1-coenayme A dehydro~ genase deficiency. ed. Poulos A: Lipid metabolism in Zellaeger's Syndrome. La vía de la cetogknesis comprende la formacion y degradacion de 3hidroxi-3-metilglutaril-COA (HMG-COA) por acc i o n d e dos e n z i m a s c e t o g é n i c a s claves.: Acute fatty livcr ef pregnancy and long-chain 3 . Mepatology 1994. hlayes PA. 6 ) La cetogdnesis es regulada en tres etapas criticas: a) control de la movilización de acidos grasos libres del tejido adiposo. 5) Los cuerpos cetónicos son energéticos importantes en los tejidos extrahepáticos. 1983. Vol 16 of Lipid E ~ y m o l o pAcadcmic f'ress. (editors): The . 7) Las enfermedades relacionadas con el deterioro de la oxidacion de ácidos grasos conducen a hipoglucernia.10R1:109. McGraw-Hill. 4) Los cuerpos cetónicos (acetoacetato.2&:35. McGarry JD. 8 ) La cetosis es leve en la inanicihn. pero siilo hasta octanoil-COA que luego debe ser transferido a las mitocondrias para oxidacihn ulterior. Foster DW: Regulation ofhepatic fatty acid oxidatiun and ketone body production. Laker ME: Rcgiilation of ketogenesis in the liver. Biochcm Soc Trans 198 1 . HMG-COA sintasa y HMG-COA liasa. Annu Rev Riochem 1980.14:343. 16 320.9 339. Havik R: p-oxidation of polyunsatured fa@ acids. Schulz H: Reta oxidation oT faiiy acids. b) actividad de carnitina palmitoiltransferasa 1 en el hlgado. REFERENCIAS 3rd ed. Annu Rev Nutr 1994.28:35 1 . Scriver CR et al.Metaholic and holeculnr Rrrces o lnherited fluear~. . Biochim Biophys Acta 1991.OxidaciBn de ácidos grasos: cetogénesis 2 77 3) Los peroxisornas tienen la propiedad de oxidar ácidos grasos de cadena muy larga. Osmundsen H. c) reparticion de acetil-COAentre las vías de cetog4nesis y ciclo del Acido cítrico. Biochem Soc l'rans 1988. infiltración de grasa de órganos e hipocetonernia. I Clin Chem Riochem 1990. Reddy JK. f 7th Treem WR et al. Enyer PD (editor): The En-?mes.49:395. pero grave en diabetes sacarina y en la cetosis de rumiantes. Schoite HR et al.

DSc Comparados con los vegetales. que sugieren una intervencicin importante en las reacciones aldrgicas y en la inflamacibn. capitulo 16. es posible influir en el tipo de cicosanoides sintesiz. Los antiinflamatorios no esteroides. son de la configuración cis. actiian mediante la inhibición de la síntesis dc prostaglandinas. Se ha identificado a la sustancia de reaccihn lenta de la anafilaxia (SRL-A} como una mezcla de leucotrienos.insa+. Por su LOS MAM~FEROS PUEDEN NO SINTETIZAR ALGUNOS ÁCIDOS GRASOS POLIINSATUMDOS POR LO CUAL SON ESENCIALES EN LA NUTRICIÓN En la figura 25-1 se muestran algunos Iicidos grasos insaturados de cadena larga. IMPORTANCIA BIOMÉDICA El contenida de iicidos grasos insaturados en un lipido natural es un determinante principal de su punto de fusibn y. Tales &cidos grasos esenciales dan origen a los acidos grasos eicosanoicos (&).ados. Las principales actividades fisiol6gicac de las prostaglandinas son como reguladores de la acci6n de la adenililo ciclasa. (Para una revisión de la nomenclatura de los ácidos p s o s . los tejidos animales tienen una capacidad limitada para desaturar a los ácidos grasos. Los acidos palmitoleico y oleico no son esenciales en la alimentacidn. PhD. Estos pueden ser derivados de los ácidos oleico. lo cual indica que sería posible modifícar el curso de la enfermedad por medio de la alimentacibn. linoleico y alfa linolénico mediante el alargamiento de las cadenas.uñados de A s eicosanoides y o Peter A. Cz: y Cz4 pueden detectarse en los tejidos. los leucotrienos y las lipoxinas. de importancia en el metabolismo de los mamíferos. por tanto.jidos pueden introducir una doble ligadura en la posicidn A9 en el Acido graso saturado correspondiente. De modo similar. los tromboxanos. Variando las proporciones dietkticas de los diferentes Bcidos grasos poliinsaturados. ciertos ácidos grasos poliinsaturados derivados en última instancia de fuentes vegetales.) Otros ácidos grasos polienoicos de C2n. por ejemplo. Las prostaglandinas y tromboxanos son hormonas locales sinteti~adas con rapidez en el momento en que se necesitan y que actiian cerca de sus sitios de sintesis. los fosfolipidos de la membrana celular contienen hcidos grasos insaturados importantes en la conservación de la fluidez de la misma membrana. de su fluidez. parte. Por esto requieren ingerir en los alimentos.de los que dwivan familias de compuestos conocidos como eicosanoides. Una proporción alta de ácidos grasos poliinsaturados a Acidos grasos saturados (proporcibn P:S) en la alimentación es un factor importante para reducir el colesterol plasmático por medios dietéticos y se considera benifico en la prevención de la enfermedad coronaria. como la aspirina. 1 ) en el control de la agregaclon plaquetaria y 2) en la inhibicibn del efecto de la hormona antidiuretica en el riR6n. Estos constitiiyen las prostaglandinas. Mayes. Es de notarse que todos los enlaces dobles presentes en los ácidos grasos insaturados naturales en los mamiferos. Los experimentos con el palmitato marcado han demostrado que la marca penetra libremente al interior . debido a que los te. los leucotrienos causan contracción mizccular y tienen propiedades quimiotácticas.

por ejemplo. Estructura de algunos ácidos grasos insaturados.B. pero se haya ausente de los ácidos Iinoleico. y de esta manera pueden sintetizar acidos grasos esenciales en la nutrición. pero no en los felinos. d5. pero nunca más allá de la posición A'. los vegetales pueden introducir dobles ligaduras en las posiciones &'l y A". ~ f Figura 25-1. los números m (porejemplo. que el acida U-linolénica contiene dobles ligaduras comenzando en el tercer carbono desde el metila terminal. ~ ~ . donde debe clasificarse como ricido graso esencial.El acida araquidónico puede formarse a partir del hcido linoleico en la mayoria de los mamíferos (figura 2 5 4 ) .20:5. duodécimo y decimoquinto desde el carboxilo temlnal ("Clasificado como "hcido graso esencial". Por el contrario.dobles ligaduras en las posiciones A ~ A ~ A6 y A' . La primera doble ligadura introducida en un acido graso saturado es siempre en las cercanias de laposicibn A'. se considera que varios tejidos incluyendo al hígado. (contando desde la terminal carboxilo: capítulo 163. Aunque los átomos de carbono en las moléculas ecthn numerados de manera convencianal. Estos son los únicos ácidosgmos conocidosque son esenciales para lanutricion completa de muchas especies de animales. w 7 en el Acido pafmitoleico) se calculan desde el extremo opuesto (del metila terminal) de las mol8culas. . incluyendo al ser humano.4. en el retículo endoplacCOOH 20 Estearoil-COA+ Enzima *Acido amquidbnico (cii6. LOS ÁCIDOS GRASOS MONOlNSATURADOS SE SINTETIZAN POR UN SISTEMA DE DESATURASA A' En cuanto a los ácidos grasos monoinsaturados no esenciales. En la mayoria de 10s animalec. se encargan de su forrnacibn a partir de ácidos grasos saturados. es posible introducir COA SH hansferasa Oleil-COA+ Enzima Figura 25-2. a partrr del carboxilo terminal. Un sistema enzimAtico. en consecuencia se conocen como Acidos grasos esenciales en la nutrición. y alfa linolénico. A9 desaturasa (figura 25-2). es decir.11-14 Estearoil-Enz Ácido eicosapentaenoico ((03.A ~ ~ ~ ~ ' . 20. su cadena es de 18 carbonos w n tres dobles ligaduras en los carbonos novena. por lo que deben incluirse en la dieta. Sistema de desaturasa rnicrosbmica 3" .) de los acidoc pahitolcico y oleico. La informacibn entre paréntesis muestra.

seguida por la adición de una unidad de dos carbonos de la malonil-COA en el sistema microsiimico de alargamiento de las cadenas (figura 2 3 4 ) ) .2 E /@ I I I Ácido a-linolbnico Figura 2 5 3 . Este último forma araquidonato mediante una deshidrogenacibn ulterior.r . LA S~NTESIS ÁCIDOS GRASOS DE POLIINSATURADOS IMPLICA A LOS SISTEMAS ENZIMATICOS DE DESATURASA Y ELONGASA Los dobles enlaces adicionales introducidos en los ácidos grasos monoinsaturados siempre se separan uno de otro por un grupo metileno (intempcidn metilénica). Al principio. inhibicibn). El oxigeno. Biosintesis de las series w9. En los animales. Sin embargo. por tanto. la vía es por deshidrogenacibn del éster COA a aavks de gamma linolenato.Mefabolismo de los Ucidos graso.~anni&s 28 1 mico catalizara la conversi611 de palmitoil-CoA o estearoil-CoA en palmitoleil<oA y oleiE<aA.^ iniaturadmy de los eico. NADPH o el NADH son necesarios para la reaccibn. Las enzimas parecen ser las de un sistema típico de monooxigenasa que involucm al citocromo hs (hidroxilasa. los enlaces dobles adicionales son introducidosentre el enlace doble existente y el grupo carboxilo.Cada paso es cataltzado por los cisternas rnicros6rnims de alargamiento de la cadena o sistema desaturasa. El sistema deshidmgenantc es semejante al descrito antes para los acidos grasos samrados. Los Bcidos grasos poliinsaturados m 9 sólo se vuelven cuanttativamente importantes cuando los ácidos Iinoleico y a-linol&nico se restringen en la dieta Esto se debe a que cada serie compite por los mismos sistemas enzirnátims y las afinidades decrecen desde la familia 0 3 a la 09. Acido . dado que los animales tienen una A' desaturasa.2 - 20:2 * 20:J----+ 22:3 m--+- + 22-4 la deficiencia de acidos grasos esenciales 20. respectivamente. al estar ausentes las desaturasas necesarias.(06 y m3 de Bcidos grasos poliinsaturados. omitirse cuando hay linoleato en la alimentación. pero en las plantas pueden tambien ser introducidos entre el enlace doble existente y el carbono omega (metito terminal). Así. son capaces de sintetizar completamente la familia omega 9 (ácido oleico) de ácidos grasos incaturados mediante una combinación de alargamiento de la cadena y desaturacion (figura 25-3 ). 18. El linoleato puede convertirse en araquidonato (figura 2 5 4 ) . excepto en las bacterias. . estos hcidos necesitan ser surninistrados en la dieta para que se efectúe la síntesis de los demás miembros de la familia omega6 y omega3 de los ácidos grasos poliinsaturados. El requerimiento nutricional para el araquidonato puede. puesto que son incapaces de sintetizar ácidos linoleico (omega6) o alfa IinolCnico (omega3). capitulo 13). (e.para producir eicosatrienoato (dihomo gamma linolenato).

C O A IB II O7 + NADH + H+. manifeszaban reduccibn de lavelocidad de crecimiento y deficiencia reproductiva. La desaturacibn y el sistema de alargamiento de las cadenas están muy disminuidos en el estado de ayuno. SE PRODUCEN SINTOMAS DE DEFICIENCIA En 1928.. 1 C-S m -COA Figura 2 5 4 . Los gatos no pueden reafizar esta wnversibn ya que no poseen ri6 desaturasa y deben recibir araquidonata en su atimentacibn. 1 (Maionil-COA.2:6). El ácido docosahexaenoico (DHA. CUANDO LA DIETA CARECE DE ÁCIDOS GRASOS ESENCIALES (AGE). Los hcidos grasos esenciales que se hallan en los lipidos estructurales de la cklula se relacionan can la integridad estructural de la membrana rnitocondrial.que se sintetiza a partir de Acido alfa linolknico o se obtiene de manera directa de aceites de pescados. Estos ácidos grasos se encuentran en concentraciones altas en diversos aceites vegetales (cuadro 16-21 y en cantidades pequeiias en los canales de animales.NADPH) DE AiARGAMIEN'TO O7 + NADH + Ht-. existe en concentraciones elevadas en la .o C-S . ademas de la fomaci6n de prostaglandinas y leucotrieno (vease después). ornega3. Posteriores características diag- n6sticas del sindrome incluyen piel con escamas. alfa linolénico y araquidbnico a la alimentaci6n. aunque no bien definidas. aunque el trastorno no es mortal. en la administración de glucagón y adrenalina y ante la falta de insulina como en la diabetes sacarina tipo 1. Evans y Burr notaron que las ratas alimentadas con una dieta purificada libre de lipidos a la cual se habían afíadido las vitaminas A y D. necrocis de la cola y lesiones en el sistema urinario. Converstbn del linolealo en araquidonato. Las membranas celulares contienen hcido araquid6nico que constituye entre S y 15% de los hcidos grasos de fosfolípidos. Trabajos posteriores mostraron que el sindrome de deficiencia se curaba mediante la adicibn de hcidos linoleico. Las funciones de los ácidos grasos esenciales parecen ser diversas.

Los hcidos grasos trans-poliinsaturados no poseen actividad de ácido graso esencial por lo que pueden antagonizar el metabolismo de los hcidos grasos esenciales y agravar su deficiencia. En la defia ciencia de hcidos grasos esenciaIes.Metaboll~mo los ácidos grasos insaturudosy de los eico. LA S~NTESIS PROSTANOIDES DE SE E F E C T ~ A POR LA V ~ A DE LA CICLOOXIGENASA La sintesis de prostanoides (figura 25-7) implica el consumo de dos moléculas de 0 7 catalitadas por la prostaglandina-endoperbxidosintasa. Los segmentos exteriores de los bastones de la retina contienen concentracionesmuy altas de DHA.~anoides 283 de retina. es e[ sustrato para la síntesis de los compuestos PGz. TX. donde se originan por la accihn de los rnicroorganismos en et turnen. Sus efectos a largo plam en el ser humano son dificiles de valorar. o directamente del araquidonato y eicosapentaenoato en la dieta (figura 2 5 4 ) . margarina) plantea la interrogante respecto a su seguridad como aditivos de alimentos.*. Al parecer la gran fluidez resultante se necesita para el funcionamiento de la rodopsina. los ácidos grasos esenciales se hallan presentes en los fosfolipidos. LOS EICOSANOIDES SE FORMAN DE ÁCIBOS GRASOS BOLllNSATURADOS C20 El araquidonato y algunos otros ácidos grasos Czocon enlaces interrumpidos por metilenos dan origen a los eicosanoides. Esto puede deberse a su conformaci6n semejante de cadena lineal (capitulo 16). E y F así como en el tromboxano (TXAz) y la prostaciclina (PGI2). es convertido en las prostaglandinas D. En los pacientes con retinitis pigmentosa se encuentran valores sanguíneos bajos de DHA. compuestos activos de manera fisiológica y famacológica. En muchas de sus funciones estructurales. hasta la fecha. los hcidos pol ienoicos no esenciales de la serie omega9 reemplazan a los ácidos grzisos esenciales en los fosfolipídos. la mayoria de los fosfolípidos contiene al menos rnolkculas de éste. La aspirina.. conocidos como prostaglandinas (PC). que consiste en activacion por un fotbn que produce movimientos laterales y rotatorios dentro de la membrana. que habitualmente deriva de la posición 2 de los fosfolípidos de la membrana plasmhtica. Son metabolizados más como hcidos saturados que como hcidos insaturados de forma cis. pero la presencia de cantidades abundantes de ácidos grasos trans-insaturados en los aceites vegetales parcialmente hidrogenados (por ejemplo.' '-eicosatrienoico (figura 25-31. Los ácidos grasos trans pueden competir con ácidos grasos cis Se han encontrado pequehas cantidades de ácidos p o s con insaturación truns en las grasas de los rumiantes.LT4 y LXs. Cada tipo celular produce una sola clase de prostanoide. otros Iípidos complejos y membranas.n de los ácidos grasoc esenciales en . sc considera que actiian como hormonas locales que funcionan a travds de receptores enlazados a proteína G para estimular sus efectos bioquímicoc. lo cual reduce su capacidad para sintetizar DHA a partir de precursores de ácidos grasos n-3. la cual posee dos actividades enzimhticas separadas. En el aspecto físiológico. La fÜnci6. la indometacina y el ibuprofeno inhiben a la ciclooxigenasa. ningún efecto grave ha sido comprobado. un endoperóxido (PGH). LT y posiblemente LX) que con sintetizados de ácidos eicosanoicos Czoderivados a partir de los ácidos grasos esenciales. tos testículosy e! esperma El DEIA se requiere en particular durante el desarrollo cerebral y es suministrado a través de la placenta y la leche. al parecer los hcidos grasos esenciales no ejercen todos sus efectos fisiolbgicos a travds de la síntesis de estas últimas. Sin embargo. trornboxanos (TX) y leucotrienos (LT) y aipoxinas (LX) (capítulo 16). linoleato y alfa tinolenato. El producto de la vía de la ciclooxigmasa. El araquidonato. La actividad de los ácidos grasos esenciales y la producción de prostaglandinas está correlacionada Aunque existe una notable comlaci6n entre Ia actividad de ácido graso esencial en varios hcidos grasos y su propiedad de convertirse en prostaglandinas. Sus vías metabólicas son divergentes. Hasta 15% de hcidos grasos tisulares se han hallado en la configuracibn bram durante las necropsias. cidooxigenasa y peroxidasa. Estas dos vías se conocen respectivamente como la via de la ciclooxigenasa y la de la lipoxigenasa (figura 25-5). Hay tres grupos de eicosanoides (cada una conteniendo PG. Pasa diagnosticar el grado de deficiencia de los ácidos grasos esenciales puede usarse la proporción trieno:tetraeno en los lipidos plasmáticos. A este respecto.la cortezacerebral. TX2. principalmente en E posición 2. aunque han estado en la alirnentaci6n humana por muchos aííos. en particular el hcido A'. como resultado de la actividad de la focfolipasa A2 (figura 26-6). Los recikn nacidos prematuros tienen una baja actividad de A4 desaturasa. tiende a elevar las concentraciones de LDL y bajar las de HDL y por tanto se contraindican en relación con el incremento de aterosclerosisy enfermedad coronaria. compitiendo la síntesis de las series PG2 y TX: (prostanoides) con la de LT4 y LX4 por el sustrato araquidonato.

Solo la 5-lipoxigenasa forma . dando origen a hidroperoxidos (HPETE). La presencia de la enzima 15-hidroxiprostaglandina deshidrogenasa en l a mayoría de los tejidos de mamíferos es quizh la causa de principal. Se piensa que los antiinflamatorios esterordes inhiben la fosfolipasa A2 por ~nduccibn de una proteína rnhibidora llamada Iipocortina la fortnacibn de membranas no se relaciona Con la formacidn de prostaglandinas. Varias lipoxinas (LXA4 a LXE4) se forman de manera similar a la descrita antes para los leucotrienos.que a su vez es metaboli~ado leucotrieno a R4 o a C4. Conversión del Acido araquidbnico en prostaglandinas y tromboxanos por la vía de la ciclooxigenasa y en leucotrienos y lipoxinas por la vía de la Iipoxigenasa. 12 y 15 del ácido araquidbnico.Fosfollpldo de la membrana . El esquema indica por q J los esteroides que inhiben la produoción total de los eicocanoides. trombina o \ Corticosteroides antiinflamatorios Leucotrienos y llpoxlnas Brostaglandinas y tromboxanoc Aspirina lndometacina Ibuprofeno Figura 2 5 6 . lactantes a~imentadosconf6rmulas pobres en grasas. El primero en ser sintetizado es el Ieucotrieno As. Ieucotrienos. no se ha informado de signos de deficiencias de Acidos graos esenciales. cilulas de los rnastocitomas. En los adultos que subsisten con alimentacion ordinaria. son mejores agentes antiinflamatorios que los medicamentos análagos de la aspirina. Tres diferentes lipoxigenasas (dioxigenasas) insertan oxigeno en las posiciones 5. La inactivacibn de las prostaglandinas es ripida. Las deficiencias atribuibles a falta de ácido5 grasas esenciales.adrenalina. estimulos. es una "enzima suicida". incluyendo ácido alfa Iinolénico. ocurren también en pacientes que reciben exclusivamente nutricion intravenosa pobre en lipidos por periodos Iargos. se-observan síntomas cutheos y deterioro del transporte de lipidos. los cuales sblo inhiben la via de la ciclooxigenasa. angiotensina II. que introduce mas oxigeno en la molecuIa. oor Varios ejemplos. las cuales no alivian los síntomas de deficiencia de los hcidas prasos esenciales y un sindrome por esta deficiencia no es causado por inhibicibn crbnica de síntesis de prostaglandinas. L a eliminación subsecuente del glutamato y la glicina genera en secuencia a los leucotrienos D y L. FOSFOLtPhm bradicinina. Este ultimo se forma por la adicibn del péptido glutation mediante un enlace tioéter. plaquetas y macrófagos por la vTa de la Iipoxigenasa en respuesta a estimulos inmunologicos y no inmunoIógicos (figura 25-31. s Las lipoxinas con una familia de tetraenos conjugados tambKn presentes en los leucocitos. ASPECTOS CL~NICOS El ser humano también muestra síntomas cuando tiene deficiencia de ácidos grasos esenciales En seres humanos cuyas dietas carecen de los ácidos grasos esenciales. es decir. La deficiencia puede prevenirse mediante la ingestión de un ticido graso esencial de I a 2% del requerimiento calórico total. Sin embargo. Se forman por la acciiin combinada de una lipoxigenasa. desarrollaron defectos cutaneos que se curaron mediante la administracibn de linoleato. La ciclooxigenasa es una "enzima suicida" La "suspensibn" de la síntesis de prostaglandinas se logra en parte por una propiedad notable de la ci- clooxigenasa: la de catalizar su propia destt-ucci~n. LOS LEUCoTRIENoS Y LAS LIPOXINAS SE FORMAN POR LA VIA DE LA LlPOXlGENASA Los leucotrienos son una familia de trienos conjugados que se forman a partir de hcidos eicosanoicos en los leucocitos. El bloqueo de la a c c i ~ n esta enzima con sulfasalacina o indometacina puede prolongar la vida media de las prostaglandinas en el cuerpo.

t o s prostanoides son potentes sustancias biológicamente activas Los tromboxanos se sintetizan en las plaquetas y su liberación produce vasoconstricción y agregacibn plaquetaria.Metabolismo de los ácidos graaTosinsulzarudo. En los cerebros de pacientes con el síndrome de Zellweger (capítulo 24) se han encontrado concentraciones elevadas de ácidos polienoicos de cadenas muy largas. degeneracion neurona1 multisistimica. prostaciclina. Los tres grupos de eicosanoides y sus orígenes biasint&ticos. leucotriene. acrodermatitis enteropatica.11. prostaglandina: PGI. el cual puede estar conectado con insuficiencia dietktica en la fibrosis quisrica. enfermedad de Crohn. en particular en las lipoproteinas de baja densidad. trornboxano.$.14. l l.~ de los eicosanoides y 285 Dieta 1 y-linolenato kPC B .17- Eiwsapentaenoato Dieta t Dieta t Figura 2 5 6 . @ vía de la ciclooxigenasa. U . En varias enfermedades e! metabolismo de ácidos grasos esenciales es anormal Ademb de la deficiencia de icidos grasos esenciales y de los cambios en los patrones de acidos grasos insatwrados en la desnutrición crónica. TX.l4-Eiwsatrienoato (dihorno-7-linolenato) f icosatstraenoato Eicosatetraenoato \ Octadecatetraenoato 5. (PG. se ha observado un metabolismo anormal de hcidos grasos esenciales.lipoxina. síndrome de Sjtjgren-Larsson.) El subíndice denota el ( numero total de dobles ligaduras en la molécula y las series a las cuales pertenece el compuesto. Esto se considera benéfico en vista de la retacion entre la concentración sbrica de colesterol y la enfermedad coronaria. síndrome hepatorrenal. LT. Las dietas con una alta proporción P:S (ácidos grasos pol iinsaturados: saturados) reducen las concentraciones del colesterol sérico. @ via de la Iipoxigenasa. cimsis y alcoholismo y en el síndrome de Reye. Por tanto. Las prostaciclinas (PG12) son producidas por las paredes de los vasos sanguíneos y son potentes inhibidorec de la agregación plaquetaria. tromboxanos y prostaciclinas son antagónicos .

PGI. el control de la inflamacibn y de Ia presión arteria1 y el alivio del asma y de la congestión nasal. par tanto. inhiben la liberacibn de araquidonatos de los fosfollpidos y la ~onfomaci6n PGz y TXz. se considera que todos estos factores operan contra la aterosclerosis y el infarto del miocardio. la terminación del embarazo. Conversibn del heido araquidbnica en prostaglandinas y tromboxanos de la serie 2. Los leucotrienos y las lipoxinas son potentes reguladores de muchos procesos patológicos La sustancia de reaccibn lenta de la anafilaxia (SRL-A) es una mezcla de los leucotrienos G. Conversiones semejantes tienen lugar en las prostaglandinas y tromboxanos de la sene 1 y 3). la agregacibn plaquetaria disminuida y los tiempos prolongados de coagdacibn de los esquimales de Groenlandia se han atribuido a su elevada ingestion de aceites de pescado que contienen205 omega 3 (EPA o ácidoeicosapentaenoico). La PG3 y el TX. las concentraciones plasmhticas de colesterol.pera el TXA3 es un agregador más dkbil que e E TXA2. Esta . D4y E4. prostaciclina. HHT. Los usos terapéuticos potenciales incluyen la prevencirin de la concepcihn. hidroxiheptadecatnenoato. TX.)' (Lasdos adivklades se atnbuyen a una enzima. triacilglicerol y de las lipoproteinas de baja densidad y de muy baja densidad. pero lo disminuyen en las dlulas de los tiibuloc renales y en el tejido adiposo (capítulo 27). el cual da origen a la serie 3 de las prostaglandinas (PG3)y de los tromboxanos TX3 (figura 2 5 4 ) . Las prostaglandinas aumentan el cAMP en las plaq w . tromboxano. adenohipófisis y pulmones. tiroides.a escasa frecuencia de cardiopatias. Concentraciones de prostaglandinas tan pequehas como de 1 ng/mL provocan la contraccibn del músculo liso en los animales. prostaglandina endoperbxido stntasa. hueso fetal. la prevencibn o alivio de las úlceras gástricas. La PGI. prostaglandina. COOH OH OH OH OH Figura 25-7. son todas bajas en los esquimales. Ademas.286 Bioquirnica de Harper (Capítulo 23) COOH Araquidonato * 8Aspirina Indometactna lbupmfeno 6-ceto PGFl. de es tan potente como antiapgador plaquetario como la PGI2. el equilibrio de la actividad est6 desplazada contra la agregacibn. cuerpo lúteo. L. la induccibn del parto a tkrmino. (PG. en tanto que las de lipoproteinas de alta densidad esthn elevadas.

@ y-glutamrRransferasa. por ejemplo. (HPETE.Merahnlismn de los úcrdos grusos insaiurados y de los eicosunoides 287 COOH + COOH Leucotrieno 8 4 Acido glutamico b -/ Leumtrieno & Lipoxinas. Los leucotrienos son vasoactivos y la 5lipoxigenasa se ha encontrado en las paredes arteriales.) a mezcla es entre 100 y 1000 veces más potente que la histamina o las prostaglandinas como constrictor de la musculatura de las vias respiratorias bronquiales. LXA4 Giutat'6n Cisteina Leucntrieno C4 Leucotrieno D4 Leucotrieno E* Figura 25-8. HETE. RESUMEN 1) La biosintesis de los iicidos grasos insaturados de cadena larga se logra por medio de la combinación . Existen pruebas de que las lipoxinas participan en las funciones vasoactivac e inmunosreguladoras. Conversidn del Acido araquiddnico a leucotrienos y Iipoximas de la serie 4 por la via de la lipoxigenasa Algunas conversiones similares se presentan en las serres 3 y 5 de los leucotrienos. hidroxieicosatetraenoato) @ peroxidasa. leucotrieno A4 epdxldo hidrolaca. como contrarreguladores (chalonas} de la respuesta inmunitaria. es decir.@ ~isteinilglicina dipeptidasa. Estos leucotrienos junto con el Bd provocan también la permeabilidad vascular. la atraccibn y activacibn de los leucocitos y parecen ser reguladores importantes en numerosos trastornos que invoiucran reacciones inflamatorias o de hipersensibilidad inmediata como el asma. hidroperoxieicosatetraenoato. @ @utatibn S-transferasa.

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Esto va seguido por la absorcibn de ácido graso libre en los tejidos y la oxidacidn subsiguiente o su reesterificación. Además. la dipalmitoil lecitina es el componente principal del surfactante pulmonar. Se ha descrito aproximadamente una docena de enfermedades por almacenamiento de glucolipidos (por ejemplo. los acilgllceroles. for- El catabolismo del triacilglicerol comienza con la hidrólisis Los aiacilgliceroles deben ser hidrotizados a sus ácidos grasos constituyentes y glicerol por las lipasas antes de proseguir con su catabolismo. residuos de azúcares y ácidos grasos. fosfoesfingolípidos y glucoesfíngolipidos. 2) como receptores para las toxinas bacterianas (por ejemplo. forman de 5 a 10% de los lipidos de la membrana plasrnática. Los glucoesf3ngolipidos. Algunos fosfolípidos tienen funciones especializadas. Los glucoesfingolIpidos. Los fosfolípidos de inositol actúan como precursores de los segundas mensajeros de las hormonas y el .Peter A. son todos anfipáticos y por tanto. Muchos tejidos (incluyendo hígado. DSc Los acilgliceroIcs constituyen la mayoria de los lipidos en el cuerpo. diabetes e hiperlipoproteinemia se describirá con detalle en los capitulas siguientes. encéfalo y tejido adiposo) tienen la capacidad de oxidar a los Acidos grasos d e cadena larga aunque el encéfalo no puede extraerlos fAcilmente de la sangre. PhD. la enfermedad de Gaucher y la de Tay-Sachs) que se deben a deficiencias en la enzima hidrosiiasa de la via que degrada los glucolipidos en los lisosomas. la toxina que causa el cólera). que se encuentran en la capa externa de la membrana placmhtica con sus cadenas de oligosaclidos protuberante$. Los fosfogliceroles. G a parte de rn esta hidrhlisis tiene lugar en el tejido adiposo con la liberación de acidoc grasos libres en el plasma. en particuiar los fosfolipidos. Mayes. testiculos. Los triacilgliceroles son tambikn los lipidos principales locatizados en los depositos de grasa y en los alimentos.factor activador de plaquetas es un alquilfosfolipido. donde se hallan combinados con la albúmina sérica. pulmones. por ejemplo. cuya ausencia en los lactantes prematuros provoca el sindrome de insuficiencia respiratoria del recien nacido. corazbn. son componentes importantes de la membrana plasmhtica y de otras membranas. EL CATABOLISMO DE LOS AClLGLlCEROLES NO ES EL PROCESO INVERSO DE LA BIOS~NTESIS La función del triacilglicerol en el transporte y almacenaje de los lipidos y en varias enfermedades como la obesidad. rifiiin. La utilización del glicerol depende de la posesion por parte de dichos . Por su parte. que contienen esfingosina. mhsculo. man parte del glucocáliz de la superficie celular y se consideran importantes: 1) en la comunicacián intercelular y contacto. idealmente adecuados como constituyentes lipidicos principales de la membranaplacrnatica. los fosfolipidos intervienen en el metabolismo de muchos lípidos. y 3) como sustancias de los grupos sanguíneos ABO.

Esto se Ileva a cabo en dos etapas mediante la vía del lisofosfatidato. E1 fosfatidato es transformado por la fosfatidato fosfohidrolasa a 1 . pero parte se encuentra tambikn en las mitocondrias. Hay dos puntos de ramificacihn importantes en los pasos intermedios de fosfatidato y diacilglicerol. A partir del glicerol 3-fosfato se forman numerosas sustancias importantes que desempeñan funciones vitales en el metabolismo celular. Debe hacerse notar que el glicerol 3-fosfato o fosfato de dihldroacetona deriva.1 . el tejido adiposo pardo y la glhndiila mamaria en lactancia. la mayor parre del glicerol 3-fosfato debe derivarse de un intermediario del sistema glucolítico. dihidroxiacetona El fosfatidato es el precursor común en la biosíntesis de triacilgliceroles muchos fosfociliceroles Y cardiolipinas Aunque las reacciones en las que interviene la hidrdlisis de los triaciIgliceroles por la lipasa pueden Glicerol 3-fosfato T Fosfato de Fosfatidato plasmalbgenos PAF ~iac~lgliCer~l Fosfatidilinositol Cardiolipina Fosfatidiluilina.2diacilglicerol fosfato). Biosintesis de triacilgliceroles Los ácidos grasos son activados a a c i l 4 o A por la enzima acil-CoA sintetasa. utilizando ATP y COA (capitulo 24).S-diaciIglicerol. mediante la cual este es convcrtldo en 1. 'ramo el glicerol como los k i d o s grasos deben ser activados por el ATP antes de incorporarse a los aci~glíceroles. del inglks. de la via de la glucólisis. catalizada primero por glicerol 3-fosfato-aciltranskrasa y luego por la l~cilglicerol-3-fosfato~ciltransferasa. inositol y cardiolipina. Del fosfato d e dihidroxiacetona derivan fosfogliceroles que contienen un enlace kter ( 2 . un constituyente de las membranas rnitocondriales.290 Rioquimica de ffuvper (Capítulo 26) tejidos de la enzima activante glicerol cinasa. Estos compuestos van de reservas importantes de triacilgticerol a derivados fosfatidilos de colina. etanolamina. En la mucosa intestinal. el riiihn. plo~eletaclivafing factor). factor activador de ptaquetas ) . Una nueva rnoldcula de acil-COA se esterifica con diacilglicerol para formar un triacilglicerol. A. el fosfato de dihidroxiacetona.5-Bisfosfato de fosfatidilinositol Figura 26-2. de los cuales los mejor conocidos son los plasmal6genos y el factor activador de plaquetas (PAF. ser invertidas en el laboratorio. el intestino. existe una via del monoacilglicerol.a enzima ha sido hallada en cantidad significativa en el higado.La glicerol cinasa catalizará la activación de glicerol a sn-glicerol 3-fosfato. catatizada por diaciIgliceml aciltransferasa. ]. fosfatidiletanolamina 1 Triacilglicerol 1 \ 4. éste no es el mecanismo por el cual se sintetizan los acilgliceroles en los tejidos. o es un miembro.0 4 . que forma glicerol 3-fosfato mediante reducción con NADH catalizada por la gliccrol3-fosfato deshidsogenasa (figura 26-2). o esti baja en actividad como ocurre en el músculo o en el tejido adiposo. Si esta enzima se halla ausente. la glicerol3-fosfato aciltransferasa. LOS TRIACILGLICEROLES Y FOSFOGLICEROLES SE FORMAN POR ACILACIÓN DE FOSFATOS DE TRIOSAS En la figura 26-1 se delinean las vías principales de la biosíntesis de triacilgliceroles y fosfogliceroles. Panorámica de la biosíntesic del acilgltcerol y fosfoglicerol (PAF. La mayor parte de la actividad de estas enzimas reside en el retículo endoplásrnico celular. por ejemplo. lo cual sefiala una conexibn muy importante entre los carboy hidrato~ el metabolismo de los lípidos. La actividad de la fosfatidato fosfohidrolasa s e encuentra principalmente en la fraccidn sobrenadante libre de partículas pero tambien est8 iinida a la membrana. Dos moléculas de acil-COA se combinan con glicerol 3-fosfato para formar fosfatidato (1.24iacilglicerol como resultado de la presencia de monoacilglicerolaciltraneferacia.

C-O-@-@ &-C-O-C-H I H O H.ATP H?p-OH HO-C-H \ ADP NAD' ) ..fnasifol.C-O-C-R1 R. HIC-O-C-R.WH 1.-C-O-C-H Il I I HIC-O-@ H.2-DiaciiglicerolCdina CTP Fosfwolina HIC-O-C-R. H.-C-O-C-H O ~~-c-a-c-n II I O I &-c-o-c-H 'i O 1 I 1 o II I I Lb H.?-0: HO-C-H \) . I I HPC-O-C-R.2-Diacilgliceml I INOStTOL CMP H?C-O-C-R.5=Bisfosfato loslatidilinosiiol de I Figura 26-2. NADW t Ht . Biocintesisdel triacilglicerol y f m b l í p i d o s Vía del monoaulglicerol. La fosfa tidiletanolam i n a puede formarse a partir de la e t a n o l a m i n a por una via srmilar a la mostrada p a r a formación de focfatidilcolina a partir de colina 0 . 4DP Fosfatdrkenne O H~C-O-C-A.C-O-@ Colina Fosfatdilcolina I Inositol Fosfa~ilinositol o ~~C-~-e)-l~~~it~l-@i 4-Fosfato de fosf&tidilrnositol Fosratdiletanolarnln.c -OH I &-C-0-C-H &-a-@ 1-Acilglicerol 3-hfata (Ilsoíosfaiidam) mt ge (. I I m3-CH n. R.-C-O-C-H II I a H.C-O-C-R1 Cn A R2-C-O-C-H I I I I O n. I &-C-O-C-H II I H ~ C O- - @.C-O-@ I -- * GIucbI~sis n~Fosfato e ~ d dlhidroxiacetona H2C-O-C-R.c-O-@ 1.F he en l-. .@ @ 4.! r F 7-Act@licemr insaturada\ II O I H~C-OH 2-Monoaolgliceml AUI-COA acl~ansfwesa a~ittransbm H.y-OH C=O I H~C-OH ~GL~CEROL NASA~ C~ I H~C-O-B Glicerol sn-Glicerol 3-íosfato Aul-COA (pnncipalmeniesaturada) E_ 3-fosfato dah'drOgenasa H.C-O-C-n3 Triaalglwml II H. H2C-O-C-R. V í a del glicerol focfato. R.

Este ultimo es desdoblado en diacilglicerol y trifosfato de inositol por las hormonas quc incrementan [Ca"]. La fosfatidilserina puede volver a formar fosfatidiletanolamina mediante descarboxilacibn. tsifosfato de citidina (CTP. Este es un proceso en dos etapas. mediante la metilación progresiva de residuo de etanolamina utilizando la S-adenosilmetionina como donador de metilo. C. Los sintetizan muchas de las ctlulas y otros tejidos y causa agregación plaquetaria a concentraciones tan bajas de hasta lo-'' rnolk.5-bis~osfato. o a "etanolamina activa". por ejemplo.figura 16-1 0). Un fosfolipido presente en las rnitocoridrias es la cardiolipina (difosfa~idilglicerol.e interviene en diversas respuesta biológicas incluyendo quimiotaxis y fosforilación de proteinas. En la sintesis de fosfaiidilinositul. respectivamentc. el ciral en presencia de NA DPH se convierte a 1 -alquil-glicerol-3-focfato. el cual a su vez se ha sintetizado de CDP-diacilg!icerol (figura 26-21 y glicerol 3-fosfato de acuerdo al esquema mostrado en la figura 26-3. cualquiera de ellas reacciona con el 1. Se forma de fosfatidilglicerol. Los p l a s m a lbgenos se forman por desaturación del derivado analogo 3-fosfoetanolamina (figura 2 6 4 ) . La cardiolipina. formado a partir de ATP (capítulo 12) reacciona con fosfatidato para formar citidina4ifosfato4iacilgiicerol (CDPdiacilglicerol). En el higado. del ingles. o a partir del 1.(Capitulo 26j B. la colina o la etanolamina deben primero convertirse a "colinaactiva". En la biosintesis de )a fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolarnina (lecitinas y cefalinas). Se forma fosfatidilserina a partir de la fosfatidiletanolamina directamente por reaccibn con la serina (figum 26-2). una reaccibn con ATP para formar el monofosfato correspondiente.~n-g1icerol-3fosfocolina. pero esto no se ha establecido en el ser humano. este compuesto reacciona con hositol. el grupo metilo de la metionina puede derivar de mefil-Ha fo'Iato(figura 52-1 5). Finalmente. Este compuesto se combina con la acil-CoA para dar 1-acil4ihidroxiacetona fosfato. Biosíntesis de fosfolipidos de glicerol éter Al parecer esta via se encuentra ubicada de manera exclusiva en los peroxisomas. A su vez. Gran parte de los fosfolipidos de las mitocondrias con plasmalbgenos. respectivamente. el fosfatidilinositol es iransformado primero a fosfatidilinositol4-fosfato y despuds a fosfatidilinositol 4. el 1 -alquil-2-acilglicerol-3-fosfato resultante (anhlogo al fosfatidato en la figura 26-2) es hidrolizado para dar el derivado del glicerol libre.2-diacilglicerol como la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina. Biosintesic de la cardiolipina. También tiene propiedades hipotensoras y ulcerogenicas. cataliziida la reaccibn por Ia enzima CDP-diacllglicerol inositol transferasa para formar fosfatidilinositol (figura 26-2). una vía alterna permite a la fosfatidiletanolamina dar lugar directamente a rosfatidilcolina. vasopresina. El factor de activacibn plaquetaria (PAF) se sintetiza a partir del derivado 3-fosfocolina correspondiente y ha sido identificado como 1-alquil-2-acetil-. Despues de acilacion ulterior en la posición 2. ubicada en la membrana interior de la mitocondria. Las fosfolipasas permiten la degradación y remodelación de fosfogliceroles La degradación de muchas moléculas complejas en los tejidos es completa. que implica primero. cytidine friphosphate) un fosfato de alta energía. La citidina transferasa parece ser la enzima que regula la vía de la fosfatidilcolina. .24iacilglicerol de manera que una base fosforilada (ya sea fosfocolina o fosfoetanolamina) es transferida al diacilglicerol para formar fosfatidilcolina o fosfatidiletanolamina. A pesar de estas fuentes de colina. se requiere de manera específica para el funcionamiento del transportador de fosfazo y para la actividad de la citocromooxidasa. Se lleva a cabo una reacción de intercambio entre el grupo acilo y un alcohol de cadena larga para dar I -alquildihidroxiacetonafosfato(que contiene el enlace éter). seguida de una reacción con el CTP para formar citidina difosfocolina ( C D P ~ o l i n a o citidina ) difosfoetanolmina (C&P+tanolamina). se considera un nutriente esencial en muchas especies de mamíferos. El fosfato de dihidroxiacetons es el precursor del residuo fosfolípidos de glicerol &ter(figura 264). Estos dos productos actúan como segundos mensajeros en la acción hormonal (capítulo 44). el fosfatidilinositol. Biosintesis de fosfogliceroles !:$tos festblipidos son sinteti7. Por fosforilaciones sucesivas. En esta forma. de proteínas a Fosfatidilglicerofosfato I Fosfatidilglicerol CMP Cardiolipina (difosfatidilgliceroi} Figura 263. por ejemplo.idos a partir de fosfatidato: por ejemplo.

por ejemplo. En la vía de novo para sintesis de PAF. 1ecitin:cholestesol ucyltran. La iosfolipasa D es una enzima descrita principalmente en los vegetales. el lisofosfolípido (como [a lisolecitina) es atacado por la lisofosfolipasa (fosfolipasa B). Esto se debe a la presencia de enzimas que permiten la degradación parcial seguida por nueva slntesis (figura 26-5).~ ~ q u i f .C-O-rCH. la cuat a su vez puede ser fragmentado poruna bidrolasa. .I.OH H.$era. los cuales pueden ser reacilados por Ia acil-COA en presencia de una aciltransferasa. que hidroliza la base nitrogenada de los fosfolipidos. 2-acilgliceml 3-fosfato FOSFOCOLIND~AC~LGLICEROL TRANSFERASA Alquil. 2-acetilglkerol 3-fosfomlina PAF Figura 2 6 4 . Aunque los fosfolipidos son degradados activamente. Biosíntesis de éteres lipídicoc.-C -O-C-H H.~e).R. liberando 1. del ingles. 2-acilglicerol 3-fosfocolina Acetil-C* Colina \ 1. aoettl-COA s incorpora en la etapa".C -O. d~acilgiiceroies 1-Alquil. e aminoscidos.ICH. Es una de la principales toxinas secretadas por bacterias. Por tanto. liberando glicerol 3-fosfato mas una base. cada porción de la molécula se recambia a una velocidad distinta. I C-O-C-H &o-@ -a+cH2-NI R.C-O-ICH~I~-R NADPH +H' NADP' HiC-O-ICHiIl-R> I HO-C-H HCIOr-R --- 1-Alquilgiiceroi 3-fosfatc Fosfato de dihidroxiacetona Fosfato de 1-acildihidroxiaceton6 1-alqurldihidroxiacetona Fosfata de Acil-COA ACILTRANS. el tiempo de recambio del grupo fosfato es diferente del tiempo de recambio del grupo l-acilo. evitando los dos ultimos pasos de la vía que se muestra aqul. De manera alterna.~ O bI H. La fosfolipasa Ai ataca el enlace éster en la posicion 1 mientras que la fosfolipasa Az ataca el enlace en la posición 2 de los fosfolipidos (figura 2 6 4 ) . I .C-OH RS-C-O -C-H r FOSFOHlbROMSA 1 H?&-O -@ 1-Alquil.COH Acyi-COA I II HIC-O-C-R. 2-fisogltcerol 3-fosíom~ina Coiina 1-Alquil.-~p CDP-Etanolamina? G O H H.-R. La fosfolipasa C ataca el enlace éster en la posición 3. plasmalogenos y del factor activador de plaquetac (PAF).2diacilglicerol miis una base fosforilo. Esta enzima.O H. Al-ECHIIi. La IisoIecitina puede formarse mediante una vla alterna que involucra a la Lecitin:colesterol aciltransfcrasa (LCAT.I. La fosfolipasa A2 cataliza la hidrblisis del enlace dster en ta posicibn 2 de los glicerofosfolípid~s para formar un hcido graso libre y un Iisofosfolipido. eliminando el grupo 1-acilo residual y formando la base glicerilfosforilo correspondiente. puede determinarse un tiempo de recambio para dicha rnolecula. que se: encuentra en el .

Por tanto. particularmente en relación con la introducciiin de hcidos grasos esenciales al interior de las molécuIas de fosfolípidos. la esfingomielina está restringida a la región luminal. cataliza la trmsferencia de un residuo de Acido graso de la posición 2 de la lecitina al colesterol para formar éster de colesterilo y se considera la causa de gran parte del &ter de colesterilo de las lipoproteinas del plasma. este se convierte en dihidroesfingosina en un paso reductor que utiliza NADPH. LEClflN: COLESTEROL ACILTRANSFERASA ACII-CQ A H.C 1 . Idas consecuencias de la deficiencia de LCAT se describen en el cuadro 28-1. mientras que los acidos poliinsaturados (por ejemplo. . se sintetiza en el retículo endoplásmico.C 4 -0 -@ L- Colina Glicerilfoslocolina t H. El grupo acilo se presenta con frecuencia por cadenas largas saturadas o ficidos monoenoicos. La incorporacibn de los Bcidos grasoc a la lecitina tiene lugar por Ia sintesis completa del fosfolipido. es posible un intercambio continuo de los Qcidos grasos. seguida por desaturacihn para originar ceramida.OH Se encuentran icidosgrasos saturados de cadena larga predominantemente en la posición 1 de los fosfoliptdos. los precursores de las prostaglandinas) se incorporan mis en la posicitrn 2. HO-C-H I -0-e. se forma dihidroceramida. En los organelos que participan en los procesos secretorios y endociticos. Primero.C H. y por acilacidn directa de lisolecitina por la acil-CoA. A su vez.C. el aminohcido serina se activa mediante cornbinacibn con fosfato de piridoxal.plasma y es sintetizada en el hígado..H H. Por una combinación con acil-COA.$-OH HO . Metabolismo de la fosfatidilcolina (lecitina). se combina con palmitoil-COA para formar 3-cetoesfingonina. mediante la activacibn de una proteina cinasa y. + Colma sn-Glicerol 3-fosfate TODOS LOS ESF~NGOL~P~DOS SE FORMAN DE CERAMIDA La ceramida (figura 26-7). Figura 26-5. . Sitios de la actividad hidrotitica de las fosfolipasas sobre un sustrato fosfolipido. por oposicihn. Esto se !leva a cabo principalmente en el aparato de Golgi y en menor grado en la membrana plásrnica. Las esfingomielinas san fosfolípidos (figura 16-1 7) y se forman cuando la ceramida reacciona con fosfatidi! colina para formar esfingomielina más diacilglicerol (figura 26-8). a algunas de las acciones del diacilglicerol (capítulo 44).O -@- Lecitina + Colesterol P colina Lisofusfatidilcolina (lisolecitina) Lisolecitina + Éster de colesterilo H. LTO FOSFOLIPASA A i 1 FOSFOLIPACA A ~ A Figura 26-6. Hay evidencia de que la cerarnida puede actuar como un mediador lipido (segundo mensajero). mediante la transacilacion entre el ester colesterilo y la lisolecitina.

i_ Fosfato de piridoxal.).CH . Los glucoesfingolipidos mas sencillos (cerebrásidos) son galactosilceramida (GalCer) y glucosilceramida (GIcCer)... La difosfato de uridina y galactosa epimerasa (figura 26-9) utiliza la difosfato de glucosa de uridina (UDPGlc) como sustrato y epimeriza la fiacci6n de gtucosa en galactosa. en tanto que GlcCer es el glucoesfingol ipido principal de los tejidos extraneurales y un precursor de la mayoría de los glucoesfingolipidos más complejos. "sulfato activo").CH-CH I l -CH. Por Último. La mayoría de las enzirnas que transfieren los anjcares desde los nucledtidos (gIucosil transferasas) se encuentran en el aparato de Golgi. La sulfogalactosilceramida se formadesp d s de reaccionar con e1 31-fosfoadenosina-51-fosfosulfato (PAPS. Bioslntesis de esfingomielina. Bioslntesis de la ceramida. que es el derivado Z-hidroxi de! Bcido lignodrico. "cuifato activo". Figura 26-9.CH. es decir. W I Dihidmesfingosina(esfinganina) A~yl-COA COA SH CH3-/CH.-CH2-CH. el ácido nervhnico (C23H45COOH)r Iicido monoinsaturado. ~ 2 n ~ ' NHj 3-Cstcesfinganina NADPH + Ht 3-CETOESFINGANINA NADP+ OH N .Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos 0 293 II CH3-(CH.-OH OH Dihidroceramida NH-CO-R Figura 26-7. El Bcido lignt>cérico (C23H47COOH) sintetizado completamente a partir es de acetil-COA. La reacción en el cerebro es semejante a la descrita cn la figura 22-6 para el higado y la glándula mamaria. por 10 general el iicido N-mcetilneliramlnico (figura 26-10). focfoadenosina-5'-fosfosulfato. se sinun tetiza por alargamiento del ácido oleico. los sulfo(galacto)gtuccrolipidos y los sulfatos de esteroides. UDPGlc y UDPGal) y un Acido sihlico.) . El PAPS interviene tambikn en la biosintesis de otros sulfolipidos. Puede formarse un gran número de ganglibsidos de peso mdecular creciente. se forma a partir de &te. La GlcCer es un llpido importante de la mielina. Biocíntesic de galactosilceramida y su sulfo derivado (PAPS. formando asi difosfato de galactosa de uridina [UDPGal). eE hcido cerebrónico.Serina OH Los glucoesfingolípidos son una combinación de ceramida con uno o mas residuos de azúcar Es típico que los hcidos grasos de muchos glucoesfingolípidos sean C 4 en particular en el cerebro (ácidos 2. La galactosilceramida es sintetiada en una reacción entre ceramida y UDPGal.).-C S -COA Palmitoil-COA - I W O C . lignocérico. UDPGlc Cerada Fosfatidilcolina Esiingornielina Diacilglicerol UDPGal Ceramida 11- UDP PAPs Sulfogalactosil ceramida (sulfatido) Figura 26-8. Los gangliúsidos son sintetizados a partir de la ceramida por la adicibn escalonada de azúcares activados (por ejemplo. cerebrbnicoy nervhnico). Por su parte.

UDPGlc Ceramida \ /" UDP UDPGal GIUCOSII ceramida (Cer-Glc) < f. La deficiencia pulmonar de surfactante en los pulmones de recién nacidos prematuros da origen al sindrorne de insuficiencia respiratoria. hay una acumulación de lipidos cemplejos que tienen una porción de su estmctura en comijn. para la toxina del cblera. el anzígeno de Forssman y las sustancias de los grupos sanguineos ABO.) Los glucoesfingolipidos son constituyentes de la capa exterior de la membrana plasmática. La administración de surfactante natural o artificial tiene beneficios terap6uticos. Cer-Glc-Gal I NeuAc (D. 4) El grado en que se encuentra disminuida La deficiencia de surfactante pulmonar causa el síndrome de insuficiencia respiratoria El surfactante pulmonar es una secrecion con propiedades notables de tensoactivo. Algunos son antigenos. hay pérdida de fosfol ipidoc (en particutar det plasmalbgeno etanolamina) y de esfingolipidos de la sustancia blanca. al grado que su composición se asemeja a la de la sustancia gris. que se compone en gran parte de lipidos con cantidades pequeñas de proteinas y carbohidratos. por ejemplo. . a menudo en e! sistema nervioso. Ciertos ganglibsidos actúan como receptores de toxinas bacterianas (por ejemplo. ácido N-acetilneurárnico. 7Ga1 UDP-N acetil galadosamina "Dp 4 Gangliósidos superiores(disiaio y trisialogangliósidos) Cer-Glc-Gal-C~INAGG~I I NeuAc (GM~) Cet-Glc-GaCGaiiu~c I NeuAC (GMZ) Figura 26-10. Las enfermedades por almacenamiento de lipidos muestran diversas características constantes: 1) En varios tejidos. que a menudo se manifiestan en la niAez. Se pueden enconh-ar dsteres de colesterilo en la sustancia blanca. El liquido cefalorraquideo muestra elevadas cifras de fosfolipidos. que es una enfermedad desmiel inizante. y pueden ser importantes en la comunicación y el contacto intercelufar. Los fosfolipidos y los esfingolípidos contribuyen a la esclerosis múltiple y a la lipidosis Ciertas enfermedades se caracterizan por cantidades anormales de estos lipidos en los tejidos. UDP CMP-NeuAc Cer-GIc-Gal \ CMP ) = . Pueden clasificarse en dos gmpos: 1) enfermedades desmiclinizantes verdaderas. cuya síntesis comienza poco después del nacimiento en los lactante5 a tdrmino. 2) esfingolipidosis. La esfingolipidosis constituye un grupo de enfermedades hereditarias. aunque por lo común es& ausentes. 2) La velocidad de síntesis del lipido almacenado es comparable a la de las personas E normales. Estos padecimientos son parte de un grupo mayor de trastornos de los lisosomas. 3 ) E defecto enzimático en cada una de de estas enfermedades es una deficiencia ~pecffica una enzima lkodmica hidrolitica necesaria para degradar al lipido. la cual de manera subsecuente activa a la adenilato ciclaca). En la esclerosis múltiple. Cadenas semejantes de oligosacáridos son constituyentes de las glucoproteinas de la membrana plasmática. una ceramida. La actividad del surfactante se atribuye principalmente a la presencia de un fosfolípido. Biosíntesis de ganglibsidos (NeuAc. la digalmitoilfosfittidilcolina. el cual evita el colapso de los alveolos.

La vía se bifurca a fosfatidato.A-. al igual que detectar en el feto la presencia de esfingolipodistrofia. por ejernplo.ivo. que van desde funciones estructurales en las membranas celulares a acciones especializadas. Cuadro 2!6-1. Enfermeaaa ae ciaucner 1 ~r elina casi ie les hur:sos largo S. crecimiento esqueental.. :A--- A- 1- e Farher osina a L~~~~~ ubi aermariris.-. NeuAc = Ácido :Ir-acetilneuraminico: Cer = cernida. - ticidad mu: icular. precursores de segundos mensajeros para hormonas. ' I tRetraso m lidad rnmusciilar j 1Retraqo niental. por ejemplo. En la actualidad la terapiutica génica para los trastornos lisos6micos se encuentra en investigacibn.- Cei-amida lact nida lactc I -inidmi< Cei .iea neta-Glucosidas.. que forma - . RESUMEN 1) Los triacilgliceroles son los principales encargados del almacenaje de lipidos. en tanto que los fosfogliceroles. . esfingomielina y glucoesfingolipidos son anfipáticos y cubren numerosas actividades... ahora es posible descubrir a los portadores heterocigotos de las anormaIidades geneticas quc producen estos padecimientos.--. se han creado procedimientos para ei diagnóstico de pacientes con estos padecimientos. cegilera debi- Enfermedad de Fabry -m.. retraso men--" . es semejante en todos los tejidos de la persona enferma. :r-Glc4al Ceramida Iacthsidc mida Daao ccrcbral progre'.Eje1mplos de esfingoliliidosis . En el cuadro 26-1 se muestra un resumen de las lipidosis más importantes. antes de endocitosis mediada por el receptor. Durante muchos afios se ha intentado la terapéutica de restituciiin de enzimas con escaso éxito. creci. sulfaros los de esteroides y peptidoglricanos. Como resultado de estas consideraciones básicas unificadoras.L ina :: 1 . Glc = glucosa. miento del hígado y brazn- e Krabbc Jalactosid. 3 y C y de esteroides sulfatasa (cuadro 5 7 4 ) . .. retraso nentaI en 1:actantes Enfermedad de NiemannP. . -Gai Enfer zima deficientc Lipidii acumula A - :r4ilc4aINAc4al-Fuc . sin embargo. surfactante pulnionar y factor activador de plaquetas (PAF). Cd = galactosa.. lazo crecidos: retraso &*I*l . . debido a una deficiencia combinada de las arilsulfatasas A. a los macrdfagos en el higado para entregar beta glucocidasa (glucocerebrocidasa) en el tratamiento de la enfermedad de Gaucher. piel gruesa generaiizac nglihsido :eTay-Sacl2s Variante d e enlerme Tay-Sachs de Sandho Hexosamidinase I - WJ~cIngliósido ~ 4 1 ~ 4 obósido m : 1irn6tirn deformación . La deficiencia multiplc dc sulfatasa conduce a la acumulaci6n de sulf~galactosflceramida..Metabolismo de aciiglicerolesy ~sfingolipidos 29 7 la actividad de la enzima afectada. 1 i Sitio de reaccibn enzrmática deficiente. .. ..-. Fuc..--. Asimismo. 2) Los triacilgficeroles y algunos fosfogliceroles se sintetizan por acilación progresiva de glicerol 3fosfato. en época reciente.. . deformabJqueleto. se han logrado tratamientos exitosos con enzimas cuya estructura química se han modificado para asegurar su fijacibn a los receptores de las células blanco.

Snyder F: Platelct-activating factor and related acetylated Iipids as potent biologically active cellular mediators. 3) Los plasmalhgenos y el PAF son éteres de fosfolípidos formados por acilación y alquilacion del fosfato de dihidroxiacetona.1. van Golde LMC: Regulation o[ the biosynihesis of triacylgliccrol. GalCer en la rnielina). phospholipid metabolism.1004. Am J Physiol 1990. aparato de Golgi). Ansell GB (editors): Phospholipids. Batenburg JJ. biochemical aspccts and functional significance.2h8:5341. a esclerosis múltiple (desmielinización) y la esfingolipidosis(incapacidad para degradar esfingolipidos en los lisosornas debido a alteraciones hereditarias de enzirnas hidrolasas). Scriver CR et al.60:257. Los gangliósidos son glucoesfingollpidos rnbs complejos que contienen un número mayor de residuos azúcar más ácido siálico. Sandohoff K: Ganglioside metabolisrn. 1985. ether-linked glycerolipids. Robertson B: The pulmonary surfactant system. Neufeld EF: L) sosemal ctorage discases. J R i o l C h e m 1994269 3125. . 4) Todos los esfingolípidos se forman de ceramida (N-acilesfingosina). S) Los fosfolipidos y esfingolipidos intervienen en varios procesos patol&gicos. Los (por glucoesfingo~ipidos más simples son una combinación de ceramída más un residuo anicar (por ejemplo. donde contribuyen al glucochliz y son importantes como antígenos y receptores celulares. I REFERENCIAS Hannun YA: The sphingomyelin cycle and second messcnger function of ceramidc.MoIecular Bases o lnheriied Disease. Riochim Biophys Acta 1989. f 1995. Aasthorne J N . phosphatidylcholine and pliosphatidyEcthanolamine in the liver. J Riol Chem 1993.fosfolipidos de inositol y cardiolipina por un lado y triacilglicerol. Pagano RE: Intracellular transport and metabolism of sphingomyelin. Se encuentran en la capa externa de la membrana plasmatica. sphingolipids. (editors): The . Vance DE. VanGolde LMG. glycerols. Geelen IWJH. Koval M. Physiol Rev 1988:68:374. 1982.incluyendo el sindrome de insuficiencia respiratoria (carencia de surfactante pulmonar). 7th ed. colina y fosfolipidos de etanolamina.259:C697. La esfingomielina es un fosfolipido que se encuentra de manera típica en las membranas de los organelos que se ocupan de los procesos secre~orios ejemplo. Biochirn Biophys Acta Tijburg LBM. Vance JE (editors): Metabolism o f trracyl- 1991. McGraw-llill.WetaboJic and . por otro. Elscvier. Annu Rev Riochem t 991. In: Riochemistp o Ltpf ids and Hormones Henjamin/Cummings. van Echten G.1082:13.

Se sabe ahora que esta última fracción. para su oxidacibn en gran parte de los tejidos y al tejido adiposo para su almacenamiento. muestra la presencia de triacilgliceroles. la obesidad abdominal es un factor de riesgo para aumentos en la mortalidad. Mayes. Dado que los lípidos son insolubles en el agua. . Los lipidos son movilizados de este último tejido como ácidos grasos libres (AGL) fi-jadosa la albúmina sérica. diabetes sacarina n o insulinodependiente (DSNID). hiperglucemia y varias disfunciones endocrinas. Las lipoproteinas median este ciclo transportando a los Iípidos del intestino como quilomicroncs y a los hephticos como lipoproteinas de muy baja densidad (VLDL}. AGL y la subutilizacilin de quilomicrones y VLDL lo cual provoca hipertriacilglicerolemia. fasfollpidos. PhD. donde la deficiencia de insulina causa la movilízacibn excesiva de LOS L~PIDOS SON TRANSPORTADOS EN EL PLASMA COMO LIPOPROTE~NAS Existen cuatro grupos principales de Iípidos en las lipoproteinas La extraccion de los Iípidos del plasma con un solvente adecuado para lipidos y la subsiguiente separación del extracto en diversas clases de lipidos. Las anormalidadesdel metabolicino de los lipidos se presentan en los sitios de producción o en los deutilización de las lipoproteinas. además de una muy pequeiía fraccibn de ricidoc grasos de cadena larga no esterificados (acidos grasos libres} que cuman menos de 5% del total de ácidos grasos presentes en el plasma (cuadro 27-11. los hcidos grasos libres (AGL). La más común es la diabetes sacarina. Algunos de estos defectos causan hipercolesterolemia y aterosclerosis prematura. de las enzimas clave o de [os receptores de lipoproteinas. Los depbsitos excesivos de grasa producen la obesidad. En particular. DSc Las grasas absorbidas a partir de la alimentación y 10s lipidos sintetizados por el hígado y el tejido adiposo deben ser transportados a los diversos tejidos y organos para su utilizacién y almacenamiento.Transporte y aIrnacenamiento de Iipidos Peter A. La mayor parte de tos demás trastornos patoIbgicos que afectan al transporte lipidico. causando varios tipos de hipo e hiperlipoproteinemias. La solucibn consiste en asociar lípidos no polares (triacilglicerol y esteres de colesterilo) con lipidos anfipáticos (fosfolipidos y colesterol) y protefnas. se deben de manera primaria a defectos hereditarios en la sintesis de la porcion apoproteinica de la lipoproteina. seguido por un periodo de equilibrio calórico negativa en que el organismo utiliza sus reservas de carbohidrato5 y grasas. hiperlipidemia. colesterol y &eres de colesterilo. hipertensibn. son los Iipidos plasmaticos más activos en el metabolismo. se ingieren catorias en exceso en la fase anabólica del ciclo alimentario. para formar lipoproteinas rniscibles en agua. IMPORTANCIA BIOMEDICA En un ornnivoro consumidor de carne como el ser humano. es un problemael transporte en unmedio acuosocomo el plasma sangnineo.

Esta propiedad se utiliza para separar a las diversas Iipoproteinas plasmhticas mediante ultracentrifugacibn.DL) Lipoproteínas de densidad intermedia je'alta der sidad VLDL kli-1 lornicroines Al1juminaAGL - * Una unidad Sf (Svedberg) es igud a 1Ux" ACiL. -. La composición de las diversas fracciones lipoproteinicas obtenidas por ultmcentrifugación se muestra en el cuadro 27-2..21 y 1.ht ) Se han identificado cuatro grupos principales de lipoproteínas plasmáticas ~ c i a o grasos libres (no estcrifi. Se ha observado que concurren varias clases de compuestos químicos en cantidades diferentes en la mayoria de las fracciones lipoproteinicac. Estos son: 1) q u ilom icrones. . : t - . Llpidos del plasma sanguíneo Triacilglicerol Total . imposición . de esto se deduce que cuanda la proporción de lipidos a proteina aumenta en las lipoproteínas.25. 1 Soh Esteres de colesterilo y menos de 3% de ácidos graso5 libres.45% son fnsfolipidos.. Dado que las fracciones representan las entidades fisiologicac presentes en el plasma. Est os limites pueden ex 1 sit~iacionesansormales o 1~atolhgicas - La grasa pura es menos densa que el agua. m :I total de Ilipidos foli- dr* co- Qu i -lomicroncs Intestinc L ~ioproteina s Hígado F 0. Sin contar los AGL.de fosfolipidoc* Tot C - :erol irc (no este1 [meu'uF 0.Cuadro 27-1. derivados de la absorción intestinal - Cuadro 27-2. Composicibn de las lipoproteinas en el niasma human Y- =====e-1 UlZll .rn ' Varia con el estado niitricii El total de acidos grasos. densidad (VI.O s cados) I * Analizado como fhqtoro lir1A. kidos crn/seg!dina/g a 16 ' C libres. VHDL (lipoproteinasj muy alta dewidad) es una fritccihn mnor que se encuenh a una densidad de enbe 1... Ia densidad disminuye (cuadro 27-2).2 a O. se han identificado cuavo grupos mayores de lipoproteinas fisiológicamente importantes y Útiles en el diagnostico clínico. el anhlisis químico simple de los lípidos plasmtiticos (sin incluir los AGL) aporta escasa informacibn sobre su función fisiológica. .OOh 2 ae muy naja (intestinr 3 .95 a l.

en tanto que otras pueden ser transferidas con libertad a otras lipoproteinas (figura 27-2). En las lipoproteínas plasrnhticac se han cncon- Densidad Figura 27-1. y 4) lipoproteínas de alta densidad ([HDL] o alfa lipoproteínas). glucosa. Fígura 2 7 3 ..) La apo E-1 00 es 1a cadena polipeptidica sencilla más larga que se conoce.cn tanto que el colesterol y los fosfolipidos predominan en las LDL y HDL. El triacilglicerol es el lipido predominante en !os quilomicrones y en las VLDL. en el higado de rata se f m a B-48 además de B-100.consiste en un nUcleo Iipidico formado en gm parte de triaciIglicero1no polar y Éster de colesterilo rodeado por una sola capa superficial de moléculas de fosfolípido anfipatico y colesterol.de triacilgEiceroles. La B 4 8 es sintetizñda en el intestino y B-l M) en el hígado. en el intestino. . Se notan las semejanzas con la estructura de la membrana plasmhtica. La fraccidn proteinica de las tipoproteinas se conoce como una apolipoproteina o apoprotelna y constituye casi 60% de algunas HDL y sólo 1% de los quilomicrones. 3) lipoproteínas de baja densidad (LDL. derivadas del hígado para exportar los triacilgliceroles. fucosa. A d e m b del uso de técnicas que dependen de su densidad. apo C) Iipidos no polares principalmente qzj:si Apoproteína lipidos anfipaticos principalmente Los Iípidos anfipáticos son componentes esenciales de las lipoproteinas Una Iipoprotelna tlpica . Las apolipoproteinas C-1. Estas se orientan de modo que sus grupos polares se enfrentan al medio acuoso. 2) lipoproteinas d e muy baja densidad (VLDL o prebetalipoproteínas). Algunas apoproteinas son integrales y no pueden ser removidas. Aparentemente. La distribución de apolipoproteinas caracteriza a la lipoproteína En cada lipoproteina hay una o mhs apolipoproteínas (proteínas o polipéptidoc). Una pequefia cantidad de éster de colesterilo y tnacilglicerof. galactosa. Estructura generalizada de una lipoproteína plasm8tica.c o m o quilomicrones o VLDL. beta y prebetalipoproteinas (figura 27-1) y se identifican con mayor precisión por medio de inmunoelectroforesis. (Al parecer. La apoIipoproteina principal de LDL (beta lipoproteina) se designa B y también se encuentra en VLDL y quilomicrones. que representan una etapa final en el catabolismo de VLDL. algunas lipoproteinas son también gliicoproteínas. La apo B-48 (con 48% de la longitud de B-100) se sintetiza del mismo mRNA como apo E-100. que intervienen en el metaboSismo de las VLDL y los quilomicrones y tambitn en el transporte del colesterol. como en la membrana celular(capitu1o 16). Aproproteina periférim (por ejemplo. De acuerdo a la nomenclatura ABC. respectivamente (cuadro 27-2). Sin embargo. o betalipoproteínac). la apolipoproteina mayor de HDL (alfa lipoproteina) se designa A. pues tiene 4536 arninoácidos. glucosarnina y ácido sialico. un codbn de detencibn que no está presente en el DNA genómico. las lipoproteinas pueden separarse por sus propiedades electraforkticas en alfa. se introduce por un mecanismo editor del RNA que detiene la traslación en el residuo aminoacidico~2153 para liberar la apo B 4 O . se encuentran en la capa cuperficial y algo del colesterol libre se ubica en el núcleo. C-II y C-111 son los polipkptidos más pequefios que se transfieren libremente entre varias lipoproteínas diferentes (cuadro 27-3). Ia apo R de los quilomicrones ( B 4 g ) es m8s pequ&a que la apo B-l O0 de LDL o VLDL. La apo B tiene un contenido aproximado de 5% de carbohidratosque incluyen manosa. Por tanto. Ceparacibn de Iipopmteínas del plasma por ekctroforesis en gel de agarosa.

.i . . polimórlTeas dcpendiendo del is intenido dr:ácidos sialicos ucde actuar como proteina ae transferencia :Iípidas - Apo E ..LIL. Apoproteinas de las lipoproteinas del.. nr de rema 3r la dicta. ao para e1 Apa B 4 . .-. -h:L:. LOS ÁCIDOS GRASOS LIBRES SE METABOLIZAN CON SUMA RAPIDEZ Los ácidos grasoc libres (AGL. HDL. . . Se han descrito sitios de unión sobre la albúmina.DL.DL: HDZ ilomicrnne . acidos palrnitico.plasma hurnan .l*~ . mientras que en los que se alimentan de manera continua como los rumiantes.- . quilom icrnnes [ -. . ---- FMasa mole (Da) s adiciona les Apo A- ctiva~~ora ae p la ~ecitin:co~cstero~ aclltransrasa fl.IDL sociado co n la forma civn de tri acilglicero :o en lipolprotcinas. los ácidos grasos libres permanecen eszables en un valor ba..-... en donde hay constante afluencia de nutrientes a partir del intestino. . I'uncilin di:scnnocida n+at. 1 receptor de LUL resente en t s con hipt is trado otras apolipoprotelnas. -- Lipo proteína 11..A.-. ctivadnrn de Ia lipoproteinn lipa. . HDL.7 y 0.. .jo..r1 V ~ J ~ I ~ O LII~ . la cifra puede elevarse a 2 pEqlmL. es decir. su contenido en arginina ec hasta de 10% del total de aminoacidoc y representa de 5 a 10% de las apolipoproteinas VLDL totales en personas normales.. . rer:eptor .nnnicrones mes iLCAT nanentcs Apo CApo C-1 . por ejemplo.. q u i i v i i r r . . El valor cae inmediatamente después de comer y sube otra vez antes de la siguiente comida.o quilami sc transfiere a I.1 y 2 pEq/mL del plasma y comprenden a los hcidos grasos de cadena larga que se encuentran en el tejido adiposo. -- .. 1 C' A T'I V 1 Sei:retado ccIn Pel. Las apolipoproteinac tienen varias acciones: 1) Son cofactores de enzimas.nt. Apa C-1 Apo D le HDL ariac.CI - Apo B-1 1 IDL en el higr 1.Ligandc1 para ci. ra Ia fornTan dos n?onómeros énticos uinidos por un puente disul ruro. 2) Pueden actuar como Iípidos para transferir proteinas.5 pEqlmL en la posabsorción y entre 0. apo B-100.. L .-. 3 ) Sirven como ligandos para interaccionar con receptores de lipoproteinas en los tejidos. apo E para el receptor LDL.302 Bioquímica de Hurper (Capítulo 27) Cuadro 27-3. polipopro . A .uLk. rica en arginina.. aunque existe en exceso en el espectro de las beta VLDL de pacientes con hiperlipoproteinemia tipo 111. Bcidos grasos inesterificados) aparecen en el plasma a partir de la lipblisis de los triacilgliceroles en el tejido adiposo o como resultado de la accibn de la lipoproteina lipasa durante la incorporación en los tejidos de los triacilgliceroles plasmaticos. palmitoleico. oleico."nA. Se registran valores bajos de hcidos grasos libres en el plasma en estado de alimentacidn completa. IILc. Iinoleico.. Se encuenzran combinados con la albúmina del suera en concentraciones variables entre 0. apo E para el receptor remanente y apo A-1 para el receptor de HDL.. .. .. estclirico. - . de afinidad variable para los ácidos grasos. En la diabetes sacarina no controlada.UUU rinr nl .. A-1 para lecitin:colesterol aciftrancferasa. aislada de las VLDL y HDL. hcidos grasos no esterificados. . ...CA'r). C-11 para lipoproteina lipasa. elevándose a cerca de 0. -.DL.HI31. Ligando 1 : do y para e 1 rntcs de qii ilomicrtine . otros Acidos poliinsaturados y cantidades mas pequeiías de otros Acidoc grasos de cadena larga.-. - (1-VLDI 1 inemia tipc . form.8 pEqlmL en el ayuno total. Una es la apolipoproteina E.e animales con hiperc~ iia inducid:3. por ejemplo.

Las VLDL son secretadas por las células del parénquima hepático dentro del espacio de Disse y luego en los sinusoides hepaticos a través de las venranas del revestimiento endotelial. la velocidad de producción de ácidos &rasos libres en el tejido adiposo controla su concentraci6n en e[ plasma. abriéndose camino fínalmente hacia el sistema linfático (quiliferos) que drena el intestino. Por otro. tos ácidos gmsos se unen a una proteina membrana1 fijadora de Acidas grasos que actúa como un comansportador transrnembrana con Na'. sus Iípidos derivan principalmente de las secreciones biliares e intestinales. altera la proporción de la cantidad que es oxidada comparada con la fraccién que es esterificada. Los quilomicrones pasan a los espacios entre las células intestinales. la cual a su vez determina su captación por otros tejidos. pues su tiempo medio de desapariciones del orden de minutos en los animales pequefios (como trahephticos. LOS QUILOMICRONES Y LAS LIPOPROTE~NAS MUY BAJA DE DENSIDAD SON CATABOLIZADAS RÁPIDAMENTE La depuracibn de la sangre de los quilomicrones marcados es rápida. La incapacidad de un lipido particulado del tamafio de los quilomicrones y de las VLDL para pasar a través de las células endoteliales de los capilares sin una hidrolisis previa es probablemente la razbn por la que las grasas de los alimentos entran a la circulación a travks de los linfhticos (conducto torácico) y no por el sistema portal hepático. Esta diferencia se puede explicar por la oxidación de kipidos esterificados circulantes o de !os presentes en los tejidos. aparte de la glándula marnaria. La apolipoproteína B es sintetizada por los ribosomas en el retículo endopl~smico rugoso y ES incorporada a las lipoproteínas en el retículo endoplasmico liso. Hay partículas m& pequefias y m& densas que tienen características de la VLDL que tarnbikn se encuentran en el quilo.Transuorfe y almacenamiento de linido. Al entrar al citosol. donde se encuentran depósitos considerables de lipidos en las células musculares. Una descripcidn mas detallada de los factores que controlan la secreción hepática de VLDL se da despds. Se ocupan del transporte de todos los Iipidos diet6ticos en la circulaci6n. por tanto. no se forman las lipoproteinas que la contienen y las gotitas de lipidos se acumulan en el intestino y el higado. El recambio de ácidos grasos libres está directamente relacionado con su concentraci6n. Las lipoproteínas atraviesan el aparato de Golgi donde más lipidoc y residuos de carbohidratos se agregan a la lipoproteina. la apoB es incapaz de funcionar a causa de un defecto en una proteina transferidora de triacilglicerot que evita la carga de la apo B con lipidos. Hay muchas semejanzas entre el mecanismo de fomaci6n de los quilomicrones con las cdlulas intesti- . El resto de la incorporación es esterificada.lado. se oxida una cantidad de grasa considerablemente mayor de la que puede ser atribuida a la oxidacion de los acidos grasos libres. los quilomicrones se encuentran en el quilo formado sólo por el sistema linfatico que drena el intestino. En la inanición. Ellas son el vehículo de transporte del triacilglicerol desde el hígado hasta los tejidos ex- nales y el de las VLDL con las células del parénquima hepático (figura 27-3). Las similitudes entre los dos procesos y los mecanismos anatómicos son sorprendentes porque. Sin embargo. Así. la formacibn de quilomicrones aumenta con la carga de triacilglicerol absorbida. Se forman incluso en estado de ayuno. La apo B es indispensable para la formación de quilomicrones y VLDL. y pareceria que el cornplemento de polipéptidos de la apoproteina C y E es tomado por transferencia desde l& HDL una vezque los quiIomicrones y las VLDL han entrado en la circulación (figuras 2 7 4 y 27-5). que es el principal sitio de sintesis de triacilglicerol.~ 303 La velocidad de eliminación de ácidos grasos libres de la sangre es muy rápida. Se cree que E último e n o particular se presenta en el corazón y el músculo esquelCtico. Se liberan los qiiilomicrones y las VLDL ya sea de la célula intestinal o dc la hephfica por medio de la fusión de la vacuola secretora con la membrana celular {pinocitosis inversa). las Iipoproteinac recien secretadas o "nacientes" contienen poca o nada de ella. los acidos grasos libres son retenidos por una proteína fijadora de Bcidos grasos o proteína Z. DesputSs de la disociacion del complejo Iicido grasoalbúmina en la membrana plasmiitica. Aunque tanto los quilomicrones como las VLDL aisladas de la sangre tienen apolipoproteínas C y E. El estado de nutriciiin no parece tener un gran efecto sobre la incorporacibn Fraccionada de los hcidos grasos libres por tos tejidos. LOS TRIACILGLICEROLES SE TRANSPORTAN DESDE EL INTESTINO EN QUILOMICRONES Y DESDE EL H~GADO LIPOPROTE~NAS EN DE MUY BAJA DENSIDAD Por definición. siendo mayor la oxidaci6n en el estado de ayuno que en el de nutrición. En la abetalipoproteinemia (una enfermedad poco frecuente). los tejidos intestinal y hepatico son los únicos desde donde se excretan lipidos particulados. Se piensa que la función de ksta en el transporte intracelular es semejante al de la albúmina serica en el transporte extracelular de los ácidos grasos de cadena larga. La mayoría de las VLDL plasmaticas es de origen hephtico. Parte de la captacihn se oxida y suministra alrededor de 25 a 50% de los requerimientos energéticos durante el ayuno.

Iipoproteínasde alta densidad. VLDL. G. E. (RER.apolipoproteína C.3 04 * Bioauímica de Haraer (Cmítulo 2 7) A Luz intestinal B Capilar sanguineo Vasos Iinfaticos hacia el mndLicto E Luz del sinusoide sangulneo torAcico Figura 27-3. C. que contiene plasma sanguíneo. reticulo endopl~smico Q . E. Figura 2 7 4 . quilomicrones. triaeilglicerol. P. Destino rnetabdlimde los quilomicrones. fosfolípido: LH. apolipoproteina B d 8 . apolipoproteina E. espacio de Disee.) El esquema es una representacióndiagramática de sucesos que pueden observarse con microsmpio electrbniw. 0. núcleo. DE. HDL. colesterol y éster de colestetilo.) Se muestran $610 los Ilpidos más importantes . Forrnacibn y secrecibn de (A) quilomicrones por una célula intestinal y (B) lipoproteinas de muy baja densidad liso. por una dlula hep8tica. endotelio. (A. Iipoproteinac de muy baja densidad. aparato de Golgi: N.TG. apolipoprofeina A. Iipasa hephtica. reticule endoplBsmiw rugoso. REL. 8-48.

. Como los experimentos con organo irrigado han demostrado que el hígado no mesaboliza de manera significativa los quilomicrones o las YLDL locales la marca en el higado debe ser un resultado secundario de su metabolismo en los tejidos extrahepáticos. aorta. Es posible que una parte de IDL sea metabolizada por la via del receptor para el remanente de quilomicrbn (apo E). Las particu las más grandes se catabolizan más rapidamente que las mas pequefias. no es activa en el del adulto. corazón y músculo. después de una inyeccibn de heparina se libera la lipoproteina lipasa de su enlace al sulfato de heparán y entra en la circulacibn acompañada de la desaparicihn de la lipemia. en quienes todavía es menor de una hora. fosfolípidos ) Solamente se presentan los Iipidos mas importantes. por la vía venosa. colesterol y ester de colesterilo: P. quilomicrones marcados en los acidos grasos del triacilglicerol. anclada por ca- denas de peptidoglucano de sulfato de heparhn y se ha encontrado en extractos de corazhn. diafragma. E. tejido adiposo. Se loca!iza en las paredes de los capilares sanguíneos. sin embargo. la lipasa hephtica. Q. pero esta enzima tiene propiedades diferentes de las de la lipoproteina Iipaca y no reacciona facilmente con los quilomicrones. las ratas). La apo C-Fl contiene un sitio específico de fijación de fosfolipido n través del cual se adhiere a la Iipoproteína. casi 80% de la marca se encuentra en el tejido adiposo.Transporte y alrnaceriamiento de lípidos 305 Figura 2 7 6 . lipoproteina de alta densidad. TG. Por consiguiente. aunque es mas largo en los animales grandes (como en el ser humano). triacilglicerot. Tmtiikn del higado se libera una lipasa. y aproximadamente 20% en el hígado. lipoproteína de densidad rntermedia. cuando hay grandes cantidades de heparina. Destino rnetabólico de las Iipoproteinas de muy baja densidad (VLDL) y producción de Iipoprotelnas de baja densidad (LDL) (A. Los triacilglicerol de los quilomicrones y las V L D t se hidrolizan por acción de la lipoproteina lipasa Hay una corretacion significativa entre la capacidad de un tejido para incorporar ácidos graso5 de los triacilgliceroles de l lipoproteinas y la actividad de a la enzima lipoprotefna lipasa. meduIa renal. apolipoproteina C. La sangre noma1 no contiene cantidades apreciables de la enzima. pulmdn. bazo. apolipoproteina B?00. Se encuentraen las células endotelialesdel hígado y se vincula con el quilomicrón remanente y el metabolismo de las HDL. Cuando se administran. C. los quilomicranes y las VLDL proporcionan la enzima para su metabolismo con su sustrato y sus cofactores. Tanto los fosfolipidas como Ia apolipoproteina C-II se requieren como cofactores para la actividad de la lipoproteína lipasa. apolipoproteina A: B-100. apolipoproteina E: HDL. SDL. glhndula mamaria en lactancia y en el hígado del recien nacido.

permitiendo la captacibn de triacilglicerol can hcidos grasos de cadena larga. Cambios semejantes tienen lugar en las VLDL con la formación de VLDL remanentes o IDL (lipoproteinas d e densidad intermedia. Existe una correlación positiva entre la frecuencia de la aterosclerosis coronaria y la concentracibn plasmática de LDL. LA LDL ES METABOLIZADA POR INTERACCIQN CON SU RECEPTOR A1 parecer. Se designa asi debido a que es específico para apo B-100. figura 27-5). y participa así en la mayor concentración de LDL en éstos en comparación con la rata (y muchos otros marniferos). El tiempo promedio de desaparición de la circulación de la apoproteína 0-1 00 en las LDL es d e alrededor de dos días. han demostrado que las VLDL son precursoras de las IDL y que estas Últimas lo son de las LDL. Estos receptores son deficientes en la hipercolesterolemia familiar. E) y el receptor remanente específico para apo E participan en la captación del remanente. Aproximadamente 30% de LDL es degradada en los tejidos extrahepáticos y 70% en el hígado. Algunos de los Acidos grasos liberados regresan a la circi~lacion. La infomacion actual sugiere que tanto el receptor de LDL (apo B-100. Para descripcibn adicional de la regulación del receptor para LDL. Dos destinos posibles esperan a IDL.(Capitulo 27) La hidrdlisis tiene lugar mientras las lipoproteinas esthn adheridas a la enzima en el endotelio. la insulina incrementa la sintesis de lipoproteína lipasa y su traslado a la superficie luminal del endotelio capilar. pero existen evidencias de alguna producción efectuadadirectamente por e[ higado. E). de las lipoprotelnas. solo apolipoproteína A. LAS HDL INTERVIENEN EN EL METABOLISMO DE LOS TR1ACILGLICEROLES Y DEL COLESTEROL Las HDL son sintetizadas y secretadas tanto en el hígado como en el intestina (figura 2 7 4 ) . la mayoria de las IDL se captan por cl higado. El hígado capta las lipoproteínas remanentes Los quilomicrones remanentes son captados por el higado a través de endocitosis mediada por receptor y los Csteres de colesterilo y los triacjlgliceroles son hidrolizados y rnetabolizados. con lo cual la captación se redirige del tejido adiposo hacia el corazbn. en la cual la actividad del te-jido S adiposo disminuye y Ia de la glándiila mamarla aumenta. La IBpoproteina resultante o quilomicr6n remanente tiene un diámetro aproximado de la mitad del quilomimbn precursor y. E) o convertirse en LDL. La acción de la lipoproteína lipasa forma lipoproteinas remanentes La reacción con la lipoproteína lipasa conduce a la pérdida de aproximadamente 90% del triacilglicerol de los quilomicrones y a la pérdida de apo C (la cual regresa a HDL) pero no la apo E (la cual es retenida). las HDL nacientes (recitn secretndas) del intestino no contienen apolipoproteina C o E. Los estudios en cultivos de fibroblastos humanos. La Apo E 4 8 carece del dominio carboxilo terminal de B-100 que contiene el ligando para el receptor de LDL. su composicion se enriquece relativamente en colesterol y en Csteres de colesterilo por la perdida de triacilglicerol (figura 2 7 4 ) . La lipasa hepática tienc una funcion doble: 1) actuar como ligando para la lipoproteina y 2) hidrolizar sus triacilgliceroles y fosfolipidos. unidos a la albúmina. Solamente una de la apo R-100 esta presente en cada particula de esta lipoproteína y se conserva durante las rransformaciones. la apolipoproteina C parece ser sintetizada en el hígado y transferida a las IlDL . pero el volumen mayor es transportado al tejido (figuras 2 7 4 y 27-5). los receptores (B-100. linfocitos y celulas de músculo liso arteria1 han demostrado la existencia de sitios especiiicos de enlace o receptores para las LDL. Conforme la concentraci~n triadel cilglicerol plasmlitico decrece en la transicion del estado de nutrición al de ayuno. pero la saturación de la enzima disminuye en el tejido adiposo. véase capitulo 28. las enzirnas cardiacas permanecen saturadas con sustrato. El triacilglicerol es hidrolizado de modo progresivo a travb de un diacilglicerol a iin monoacilglicer~l finalmente se que hidroliza a hcido graso libre y glicerol. Idos estudios que utilizan VLDL con apo B-100 mascada. En tejido adiposo. Cada pariiculia de LDL deriva de una sola partícula de VLDL (figura 27-5). Pueden ser captados de manera directa por el higado a través del receptor para LDL Capo 8-1 00. En la rata. la mayoria de las LDL se forman a partir de las VLDL como se describió. en tkrrninos de porcentaje. pero no para apo R-48 y bajo ciertas circunstancias captará lipoproteinas ricas en apo E. Un encausamiento semejante se produce d~irante a lactancia. en tanto que en Ios seres humanos una proporcibn mucho mayor forma LDL. Al parecer. Sin embargo. la captacidn es mediada por un receptor específico para apo E (figura 2 7 4 ) . La lipoproteína lipasa cardiaca tiene una Kmbaja para el triacilglicerol en tanto que la ICTl de la enzima en el tejido adiposo es 10 veces mayor. para la sintesis de los lipidos lácteos. Así.

en tanto que la licolecitina es transferida a la albúmina del plasma. La LCAT y la apolipoproteina activadora A-1 de dla. ácidos grasos libres. se unen al disco. lo cual puede explicar los valores plasmáticos más elevados de HDL2 en mujeres. cubierta por una película superficial de lipidos y apolipoprotcinas polates. Bster de colesterila.Transporte y alrnacenumlento de 1i. C. El higado es el sitio final de degradacilin de los esteres de coleste- . Los ésteres de coleszerilo no polares penetran en el interior hidrófobo de la doble capa. la lipasa hepática hidroliza fosfolípidos de la superficie de HDL2. EC. intestinales cuando esths entran al plasma. el sistema de la LCAT interviene en la eliminación del CXGeSO de colesterol no esterificado de tas lipoproteinas y de las tejidos. A-1. La catllisis por la LCAT convierte el fosfoIipido superficial y el colesterol libre en ésteres de colesterilo y en licolecitina. cuadro 27-2 Además de triacilgliceroles. AGL. PL. La reacción continúa generando un nucleo no polar que empuja a E doble capa hasta que se forma a una HDL esferica seudomicélica. lecitin:mlesterolaciltransferasa. fosfolípido. Estas lipoproteinas son similares a las partículas encontradas en el plasma de pacientes can deficiencia de la enzima lecitin:colesterol~ciltransderasa (LCAT) y en el plasma de pacientes con ictericia obstructiva.) La figura muestra el papel de las tres enzimas lipasa hep8tica LCAT y LPL en el ciclo de las HDL postulado para el transporte del colesterol desde los tejidos al hígado HD4. Las HDL nacientes consisten en dobles capas discoides de fosfolipidos que contienen apoproteinas y colesterol libre. lo que permite la formación de HDL3 más pequeños y más densos La actividad de lipasa hepAtica es incrementada por andrbgenos y disminuye por estrógenos. HDL3. Metabolismo de las lipoproteinas de alta densidad (HDL) (LCAT. aproproteina A-l. Una funci6n importante de las HDL es actuar como reservorio de las apoproteinas C y E que son requeridas en el metabolismo de quilomicrones y VLDL (figuras 2 7 4 y 27-5). colesterol. liberando colecterol para captación hepatita. De este modo.aidos* 307 Figura 2 7 4 .

Se ha propuesto un ciclo de las 1-IDLpara explicar el transporte del colesterol de los tejidos al hígado. Sin embargo. digestión mediante la produccibn de bilis. Esto se puede deber a los elementos de superficie. pero también por los receptores para LDL. donde la particula se condensa más.. Este brgano lleva a cabo las siguientes funciones principales en el metabolismo de los lípidos: l} Facilita su absorcion y . En estas condiciones. que a su vez se toma menos densa formando aci HDL?. que incrementan la sintesis y esterificación de hcidos grasos e inhiben su oxidación. La sintesis de triacilglicerol proporciona el estímulo inmediato para la creación y secrecibn de VLDL. Los factores que aumentan tanto la sintesis de triacilgliceroles como la secrecibn de VLDL por e! higado incluyen: 1 ) estado de nutrición adecuada más que ayuno. en las dietas ricas en -as oen la diabetessacarina. Los mecanismos enzimáticos encargados de la síntesis de triacilgliceroles y fosfolipidos han sido descritos en el capitulo 26. por ejemplo. que conduce a velocidades elevadas de lipogknesis y de esterificación de ticidos grasos. Las concenmiones de HDL p L 2 ) tienen relación inversa con la frecuencia de la aterosclerosis coronaria. permitiendo que la partícula libere su carga (colesteril Csrer hacia el hígado. fosfolipidos y apo A-1 liberados durante la hidrólisis de quilomicrones y que contribuye a la formacibn de HDL naciente. Es captada por el hígado por medio del receptor para la apo E remanente. N o parece que el hígado capte las HDL que contienen apo A-1. Los valores de HDL varían reciprocamente con las concentraciones plasmaticas de triacilglicerol y de manera directa con la actividad de la lipoproteina lipasa. 2 ) la alimentación con dietas abundantes en carbohidratos (particularmente si contienen sacarosa o fmcrosa). Las apo A-l son disociadas y eliminadas por el riirbn. y 5) la presencia de concentraciones altas de insulina y bajas de glucagón. 4) Desempefia una parte integral en el metabolismo de las lipoproteínas plasrnhticas (en este capítulo). cuando la síntesis de hcidos grasos es alta y el valor de acidos grasos libres circulantes es bajo. volvit5ndose a fonnar HDL. 3 ) Convierte los ácidos grasos en cuerpos cetonicos (cetoghnesis) (capitulo 24). que contiene colesterol y sales biliares sintetizados en el propio higado de novo o de la captación del colesterol de las lipoproteinas (capítulo 28). 4) la ingestibn de etanol. fosfolípidos (capítulo 26). Es rica en colesterol y su Unica apolipoproteina es apo E. No se sabe con precisibn si en la endocitosis de HDL interviene un receptor verdadero para HDL O apo A-P.100 no es limitante de la velocidad. se debe inferir que son transportados del hígado en las VLDL tan rápidamente como son sintetizados y que la sintesis de apo B. un proceso conocido como transporte inverso de colesterol (figura 2 3 4 ) . la lipogenesis se inhibe y !os Qcidos graos libres son la fuente principal de ácidos gasos de los triacilgliceroles en el hígado y en las VLDL. La secreción de VLDL hepaticas se relaciona con el estado nutricional y hormonal Ya se describieron las acciones celulares que intervíenen en la formación y secrecion de VLDL. La HDL. E! descubrimiento de que muchos tejidos tienen la facultad de oxidar completamente los acidos grasos y el conocimiento acumulado que demuestra que el tejido adiposo es metabólicamente activo en extremo. Parece que todas las lipoprotefnas plasrnáticas son componentes interrelacionados de uno o más ciclos metabolicoc que juntos son responsables del complejo proceso del transporte de los lipidos plasmAticos. Como los triacilgliceroles no se acumulan normalmente en el hígado en este estado. Por otro lado. (HDL. posiblemente debido a que reflejan la eficiencia de la depuración del colesterol de los tejidos. EL H~GADO TIENE UNA FUNC~ÓN PRINCIPAL EN EL TRANSPORTE Y METABOLISMO DE LOS L~PIDOS Al principio se pens6 que mucho del metabolismo de los lipidos del cuerpo era prerrogativa del higado. que asi se reincorpora al ciclo. El ciclo considera captaci~n y esterificación de colesterol mediante HDL. han tendido a modificar el Cnfasis anterior sobre la funci6n del hígado. Es por esta razón que estos hltimos se designan en ocasiones receptores apo B-100. Los triacilgliceroles hepáticos son precursores inmediatos de sus homblogoc contenidos en las VLDL plasmfiticas (figura 27-7). Los ácidos grasos usados en la síntesis de h a cilgliceroles hepáticos se derivan de dos fuentes posibles: 1) sintesis dentro del hígado a partir de ta acetil-CoA derivada principalmente de los carbohidratos (quizls no sea inlportante en los seres humanos) y 2) captación de bcidos grasos libres desde la circulacibn. La primera fuente predomina en estado de buena alimentacibn. 3 ) altos valores de hcidos grasos libres circulantes.rilo HDL. La lipasa hepática hidroliza fosfolípido HDL y triacilglicerol. el concepto de una funcion central y única para el hígado en el metabolismo de los lipidos es todavía importante. se eleva la cifra de hcidos grasos libres circulantes y mAs de ellos son captados por el hígado. durante el ayuno.) se encuentra en la sangre de los animales con hipercolestesolemia causada por la dieta. 2) Tiene sistemas enzimliticos activos para la formacihn y oxidación de los Bcidos grasos (capítulos 23 y 24) y para sintetizar triacilgliceroles. de modo significativo.

y el exceso se destruye por vía hepática . HDL. (AGE. insulina y glucagbn benen efectos inmediatos sobre la secreción de VLDL ya que su concentracibn afecta directamente al depósito precursor pequeiio de triacilglicerol En el estado de alimentación total.7 de 309 Figura 27-7. lipoprotelnac de alta densidad.MTP proteína microsomalde transferencia d e b l a s v i a s indicadasforman la base para los fenbmenos que se muestran en la figura 27-38.A p o apolipoproteina.Transporte y alrnucenamren~o lipido. AGL. AGL. se sintetiza apo 8-100 en exceso a los requerimientos de secrecibn para VLDL.Por tanto. Sintesis de lipoproteinasde muy baja densidad (VLDL) y los posibles sitios de accibn de los factores que causan acumulacibn de triacilglicerolese hígado graso. Sicidos rasos libres. La reserva principal de triacilglicerot en el higado na está en fa via directa de sintesis de VLDL a partir de acil-COA. ácidas grasos esenciales.

El etanol tambien causa acumulación de grasas en el hígado El atcoholismo tarnbien provoca la acumulaci6n de grasas en el higado. principalmente como triacilglicerolcs. Se han sugerido varios mecanismos para explicar la funcihn de la colina como agente Iipotrópim. plomo y arsénico. dc la hidriilisis de triacilgliceroles de las lipoproteínas o de los triacilgliceroles de los quilomicrones por la acción de la lipoproteína lipasa en los tejidos extrahepiiticos.(Capítulo 2 7) El desequilibrio en la velocidad de formación y exportación de triacilglicerol causa la acumulación de grasa en el hígado Por muchas razones. Se cree que la acción de la etionina es causada por una reduccidn en la disponibilidad del ATP. piridoxina y ácido pantoténico) pueden causar infiltracion grasa en el higado. La producción de VLDL no va pareja con la afluencia de dcidos grasos libres. Se cree que la deficiencia de ácidos grasos esenciales deprime la síntesis de fosfolípidos. La administración de vitamina E o una fuente de selenio tiene un efecto protector al combatir la peroxidación del lípidos. El antibibtico puromicina inhibe la sintesis proteinica y provoca la aparición de hígado graso y una marcada reducción en la concentracibn de VLDL en las ratas. cloroformo. su Iiberacibn y explicando la disminución notoria de las lipoproteinas plasrnáticas que contienen apo B. inhibiendo. se considera que el ácido or6tico bloquea la glucosilacibn de S a lipoproteína. 3 ) a una falla en la provisibn de fosfolípidos que se encuentran en las lipoproteínac. Otras sustancias aue actúan en forma similar incluyen a la etionina (&ido alfa-amino-garnmnmercaptobutlrico). Un tipo de hígado graso que ha sido estudiado extensamente en las ratas se debe a una deficiencia de colina. Como la colina puede ser sintetizada usando grupos metílo Iábiles. en la toxemia del embarazo de las ovejas y en la cetosis del ganado. Su efecto no es directo. macicín de radicales libres que pueden desintegrar a las membranas 3ipidas en el reticulo endoplásmico mediante la formación de peróxidos de Ilpidos. Esto resulta cuando la etionina. Es deficiencias de Acidos grasos esenciales a y vitaminas (por ejemplo. Las causas pueden ser concentración baja de insulina y alteración en la sintesis de proteinas. por consiguiente. fosforo. N o estB . El higado incorpora cantidades crecientes de ácidos grasos libres y los esterifica. la deficiencia se debe básicamente a la escasez de ese grupo metilo. en ultima instancia. la infiltración de grasa es suficientemente gravc para causar palidez visible (apariencia grasa) e hipertrofia del hígado. La acumulaciún de grasaen el hígado se cla~ifica en dos categorías principales. ácido linoleico. Cuando se hace crhnica. La acumulación extensa es considerada coma patolbgica. Además de la deficiencia proteinica. En la diabetes sacarina no controlada. atrapa adenina disponible y así evita la síntesis de ATP. se pueden acumular en el higado (figura 27-7). La colina no protege al organismo contra esos agentes pero parece que ayuda en la recuperación. pueden también causar acumulación de grasas en el higado. donados por ta metionina en el proceso de transrnetiZacibn (capítulos 32 y 33). incluyendo su ausencia. la que por esto ha sido llamada factor lipotrdpico. los que progresan hasta lacirrosis y el deterioro de las funciones hepáticas. La cantidad de triacilglicerol que se encuentra en el higado aumenta de modo significativo durante la inanición y en la alimentacibn con dietas ricas en grasas. por tanto. sino que m8s bien depende de la transfomacibn ulterior Esto probablemente implique ta forde la mol~cula. El icido orolico también causa la acumulaci6n de grasas en el higado. permitiendo que se acumulen los triacilgliceroles y dé por resultado un hígado graso. hiperlipidemja y. La primera está relacionada con valores elevados de Acidos grasos libres plasmátkos qiie resultan de la movilizaciiin de kas grasas del tejido adiposo. 2) a un bloqueo en la síntesis de lipoproteína a partir de los lipidos y las apolipoproteinas. La alimentacibn enriquecida con vitamina E proporciona cierta protección contra la peroxidacibn de los lipidos inducida por el tetracloruro de carbono. conforme se acumulan VLDL en el aparato de GoEgi. tetracloruro d e carbono. otras sustancias. en inanicion). que cama alteraciones en la síntesis de los fosfolípidos lipoproteínicos. Tebricamente. que reemplaza a la metionina en la S-adenosilmetionina. El mecanismo exacto de la acción del alcohol a largo pla7o es todavía desconocido. Es muy verosimil que el íetracloruro de carbono afecte tambikn al mecanismo secretor mismo o a la conjugación del lípido con la apoprotcina de la lipoproteina. la capacidad de secretar VLDL también está deteriorada. Una deficiencia de vitamina E aumenta la necrosis hepatica en el hígado graso por deficiencia de colina. cirrosis. o 4) a una falla en el propio mecanismo secretor. se producen cambios fibrsticos en las c&lulas. como el colesterol. En muchos casos (por ejemplo. los Iípidos. El segundo tipo de acumulación de grasa en el higado se debe generalmente a un bloqueo metabólico en la produccion de lipoproteinas plasrniticas lo cual ocasiona que se acumulen los triacilgliceroles. la lesión se puede deber a: 1) un bloqueo en la sintesis de apolipoproteinas. con posible disfuncion hepática. que compiten por los Acjdos grasos esenciales disponibles para"laesterificacihn.

Transportey almacenamiento de lbidos

3I I

claro si la movilización adicional de acidos grasos libres interviene en la acumulación de grasas, pero varios estudios han demostrado valores elevados de ácidos grasos libres en la rata despues de la adrninistración de una sola dosis intoxicante de etanol. Sin embargo, el consumo de alcohol por periodos [argos conduce a la acumulación de ácidos graso5 en el hígado los cuales derivan de la síntesis endógena m8s que del tejido adiposo. Después de la ingestibn de etanol no hay al~eraciánde la síntesis proteinica en el hígado. Existen evidencias de un incremento en la sintesis hepatica de triacilglicerol, disminucihn de la oxidaci6n de Acidos grasos libres y reducción d e la actividad del ciclo del ácido cítrico, causada por la oxidacihn del etanol en el citosol de las células hepaticas por la acción de la alcohol deshidrogenasa que conduce a la producción excesiva de NADH.

inhibe t a m b i h el metabolismo de algunos fatmacos, por ejemplo, barbituratos, al competir con las enzimas dependientes de citocromo P45O (capitulo 61).

C H z - C H 2 4 H + NADPH + H" + 0 2 Etanol CHj-CHO + NADP' + 2HzQ kcetaldehido

!
ALCOHOL
DESHIDROGENASA

La alcohol deshidrogenasa se encuentra tarnbien en la mucosa gástrica, pero su actividad es 60% menor en mujeres que en varones. La elevada disponibilidad de etanol causada por esa escasa utilizacibn gástrica puede explicar por qué las mujeres son más susceptibles a los efectos del consumo de alcohol. DespuCs de L ingestión de etanol, algunas poblaciones asiatia cas y de indios americanos muestran predisposiciiin a un incremento en las reacciones adversas a acetaldehido debido a un defecto genético de la aldehido deshidrogenasa mitocondrial.

CH3-CHz4H p C H 3 Ebnol NAD' NAOH + H'

2 H 0 Acetaldehido

EL TEJIDO ADIPOSO ES EL PRINCIPAL SITIO DE ALMACENAJE

El NADH generado compite con los equivalentes reductores de otros sustratos por la cadena resplratoria, inhibiendo su oxidacibn. El aumento de la proporción [NADH]I[NAD"] origina un desplazamiento a la izquierda en el equilibrio rnaIato = oxalacetato, que puede reducir la actividad del ciclo del ácido citrico. E efecto total de inhibir la oxidacibn de los Acidos E grasos es provocar mayor esterificacidn de los mismos en el triacilglicerol, lo cual parece ser la causa de la acumulación de grasa en el hígado. La oxidacion del etanol conduce a la fomación de acetnldehido, el cual e5 oxidado por la aldehído deshidrogenasa en las mitocondrias, y el acetato es el producto final. O t o s efectos del alcohol pueden incluir aumento de la lipogénesis y de la síntesis de colesterol a partir de acetilXoA. El mayor cociente de [NADH]/[NAD'] provoca también un mayor cociente de [lactato]/[pinivatoj que produce hiperlactiacidemia, la que a su vez disminuye la capacidad del rifibn para excretar acido úrico.Al parecer, esto último es la causa del agmvamiento de la gota por la ingestion alcohblica. Aunque la principal ruta del metabolismo del etanol es a través de la via de la atcoho! deshidrogenasa, algo del rnetabolismo se lleva a cabo mediante el sistema oxidante de etanol de los microsomas (MEOS, del inglds rnicrosomal ethanoi' oxidizing sistem) dependiente del citocromo P45O que involucrael NADPI-Iy al Oz.Este sistema aumenta su actividad en el alcoholismo crónico y explicaría la depuración metabblica acelerada en este trastorno, como lo indican las altas concentraciones sanguineas de acetaldehido y acetato. El etanol

DE TR\AC\LGL\CEROLEN EL CUERPO
Los depisitos de tríacilglicerole~ el tejido adiposo en estan continuamente experimentando lipólisis (hidrblisis) y reesterificaciiin (figura 27-8). Estos dos procesos no son las fases en ambos sentidos de la misma reoccibn. MAS bien con vEas enteramente diferentes en las que intervienen reactivos y enzimas distintos. Muchos de los factores nutritivos, rnetabólicos y hormonales que regulan el metabolismo del tejido adiposo acnian ya sea cobre los procesos de esterificacibn o en la lipblisis. La resultante de estos dos procesos determina la magnitud del depósito de ácidos grasos libres en el tejido adiposo, que a su vez es la fuente y determinante de la cantidad de ácidos grasos libres que circulan en el plasma. Debido a que la cifra plasmaticade acidos grasos libres tiene efectos m& profundos sobre el metabolismo de otros tejidos, particularmente el hepático y muscular, los factores que operan en el tejido adiposo y regulan la salida de ácidos grasos libres qiercen una influencia más alla del zejido mismo.

La provisión de glicerol 3-fosfato regula la esterifícación: la Iipóllsis es controlada por una lipasa sensible a hormona
En el tejido adiposo, el triacilglicerol es sinteti~ado a partir de la acil-CoA y del glicerol 3-fosfato. segun

312

Bioquimicade Hurper

(Capítulo 2 7)

Glrceml3-fosfato

TEJIDO ADIPOSO

Figura 27-8. Metabolismo del tejido adiposo. La lipasa sensible a hormonas es activada por la ACTH, la TSH, el glucagbn, la adrenalina. la noradrenalina y la vasopresina, e inhibida por la insulina, la pmctaglandina Ei y el lcrdo nicotínico. Los detalles de la forrnacibn d e glicerol 3-fosfato a partir d e intermediariosd e la gluCblisis se muestran en la frgura 26-2. (VPF, vía de la VLDL, Iipoproteínas d e muy baja densidad.) pentosa fosfato; TG, triacilglicerol,AGL, ácidos grasoc I~bres;

el mecanismo que se muestra en la figura 26-2. Debido rt la baja actividad de la enzima glicerol cinasa en el tejido adiposo, el glicerol no puede ser utilizado de manera amplia en la esterificación de acil-CoA. Para. la pmvisibn de glicerol 3-fosfato, el tejido depende de la gluc6lisis y de un suministro de glucosa. El triacilglicerol es cometido a hidrotisis por la tipasa sensible a hormona para formar ácidos grasos libres y glicerol. Esta lipasa es distinta de la lipoprotcina lipasa que cataliza la hidrólisis de los triacilgliceroles lipoproteinicos antes de su captacibn por los tejidos extrahepáticos (vCace antes). Puesto que este

tejido no puede aprovechar con facilidad al glicerol, este se difunde al plasma, desde donde ya puede ser utilizado por tejidos como el higado y el rifírjn, los cuales poseen una glicerocinasa activa. Los acidos grasos libres obtenidos en la lipdlisis pueden volver a ser convertidos dentro de1 tejido adiposo en acil<oA por la a c i l z o h sintetasa y reesterificados con glicerol 3-fosfato para formar triacilglicerol. Por tanto, hay un ciclo continua de Iip6lisis y reesterificacibn dentro del tejido. Sin embargo, cuando la velocidad de reesterificacibn no es suficiente para igualar la velocidad de la lipblisis, 30s Acidos grasos

Transporte y almacenutnien~o lbidos de

3 13

libres se acumulan y difunden hacia el plasma, en donde se combinan con la albúmina y elevan laconcentracion de ácidos grasos libres plasmaticos. Estos son una fuente importante de energía para muchos tejidos.

Un metabolismo acelerado de glucosa reduce la salida de ácidos gracoc libres
Cuando aumenta la utilizacibn de glucosa por el tejido adiposo, la salida de ácidos grasas libres disminuye. Sin embargo, la liberacion de glicerol continúa demostrando que el efecto de la glucosa no es mediado por la reduccion de la velocidad de lipólisis. Se cree que el efecto se debe a la provisión de glicerol 3-fosfato, e cual mejora la estesificacion de Lcidos grasos 1 libres por la vía de la acil-CoA. La glucosa puede tomar varias rutas en el tejido adiposo, incluyendo la oxidacihn a COI por la vía del ciclo del ácido citrico, la oxidación en la vía de la pentosa fosfato, converci6n en ácidos grasos de cadena larga y formación de acilglicerol por la via del glicerol 3-fosfato. Cuando la utilizacihn de la glucosa es elevada, una mayor proporcion del consumo es oxidada a COI y convertida en ácidos grasos. Sin embargo, a medida que disminuye la utilización total de glucosa, es más grande la praporcibn de la misma que se dirige a la formacihn de glicerol 3-fosfato y para la esterificacibn de acil-CoA, los cuales ayudan a minimizar la salida de ácidos grasos libres.

Los ácidos grasos libres son captados debido a la actividad de la Fipoproteína lipasa
Existe m 8 de un depbsito de AGL dentro del tejido ms adiposo. Se ha demostrado que el depósito de ácidos grasos libres (figura 27-8, depósito 1) formado por lipdlisis de triacilglicerol es el mismo que surte los kidos grasos para la reesterificacidn; también los libera hacia el medio externo (plasma). Los hcidos grasos captados del entorno como resultado de la accibn de la lipoproteina Eipasa sobre el triacilglicerol de quilomicrones y VLDL, no marcan al depbsito 1 antes de ser incorporados al triacilglicerol, pero viajan a travks de un pequeflo depbsito 2 de recambio rhpido.

hormonas que influyen tanto en el indice de esterificacion como en el de lip6lisis. La insulina inhibe la liberacidn de acidos grasos del tejido adiposo, lo cual va seguido por una disminución de 6cidos grasos libres en el plasma circulante. El efecto es un incrementa de la lipogdnesis, de la síntesis de acilglicerol y de la oxidaciún de la glucosa a CO: por la vía de la pentosa fosfato. Todos estos efectos dependen de la presencia de la glucosa y pueden explicarse en gran parte con base en la capacidad de la insulina para acelerar la captacihn de glucosa por las células del tejido adiposo. Esro lo efectúa la insulina causando la traslocación de los transportadores de glucosa del aparato de Golgi a la membrana plasmhtica (figura 5 1-91. También se ha demostrado que la insulina incrementa la actividad de la piruvato deshidrogenasa, acetil-CoA carboxilasa y glicerofosfato aciltransferasa, que reforzaría los efectos que surgen del incremento en E captaciiin de glucosa sobre la a amplificación de la síntesis de iicido graso y acilglicerol. Se sabe ahora. que estas tres enzimas san reguladoras par una rnodificacibn covalente, esto es, por mecanismos de fosforilaci6n-desfos€orilacion. Una acción principal de la insulina en el tejido adiposo es la de inhibir la actividad de la lipasa sensible a hormona, lo que reduce la liberación no sólo de Bcidos grasos libres sino tambibn la de glicerol. El tejido adiposo es mucho más sensible a la insulina qire otros muchos tejidos, lo cual sefíata al tejido adiposo como un sitio principal de la acción insulinica in vivo.

Un gran número de hormonas estimulan la fipolisis
Otras honnonas aceleran la likracion de acidos gasos

LAS HORMONAS REGULAN LA MOVILIZACIÓNDE LIPIDOS
La insulina reduce la salida de grasos libres La velocidad de liberación de los hcidos grasos libres desde el tejido adiposo es afectada por numerosas

libres del tejido adiposo y elevan el valor plasmático de kidos grasos libres aumentando la velocidad de lipólisis en los depósitos de t~iacilglicerol (figura 27-9). &m incluyen la adrenalina, la noradrenalina, el glucagbn, la hormona adrenocorticotr6pica (ACTH, del inglds, adrenocorticotropic hormone), hormonas alfa y beta estimulantes de los melanocitos (MSH, del inglks alfa y k t a - m e l a n ~ t e 1 ~ t i m u l a t i n g hormones), hormona estimulante de la tiroides (TSH), hormona del crecimiento (GH} y vasopresina. Muchas de éstas activan a la lipasa sensible a hormona. Para un efecto óptimo, la mayoría de estos procesos ljpoliticos requieren la presencia de glucocorticoides y hormonas tiroideas. Por si mismas, estas hormonas particulares noaumentan la lipólisis notablemente, pero actúan como facilitadoras o permisivas con respecto a otros factores endocrinos lipofíticos. Las hormonas que actúan rápidamente en la activncibn de la lipblisis, es decir, las catecolaminas, lo

Adrenalina, noradrelina

Insulina, prostaglandina Eñ,
gluwgdn
1

,Bcrdo nicotinico

Bloqueadores
p-adrenergtcos

'@d * ,
S L _ _ _ .

. 7

1
1

1

Tria~ilglicero~ lipasa b

sen51ble a hormonas

Inhibidores de

sintests proteinica
'

,

Adenosina

Glucocorticoides

'nhibidore$de la sintesis proteinica

Figura 27-9. Control de la lipblisis en el tejido adiposo (TSH, hormona estimulante de la tiroides; AGP, $cidos gracos libres ) Nbtese la secuencia en cascada de las reacciones que permiten la amplificacibn en cada paso. El estimulo lipolitico es "desconectado" por la eliminación de la hormona estimulante; la accidn de la Iipasa fosfatasa; la inhibición de la Iipasa y la adenilato uctasa por mncentraciones altas de AGL, la inhibtaón de la adenilil ucbsa por la densidad. y la depuraubn del dVMP por acción de la fosfodiesterasa La ACTH, TSH y glucagon no pueden activar a la adenilato ciclasa in viw dado que la concentrauon que se requiere in wtmde cada una de ectas homlonas es mucho mayor que la que se enaientra en la circulacibn. Los &dos reguladoresposrtivo @) y negatrvo están representados por líneas punteadas y el sustrato Ruye por las llneas gtuesas.

{e)

logran estimulando la actividad de la adenilil ciclasa que es la enzima que convierte el ATP en cAMP. El mecanismo es anhlogo al que se ocupa de la estimulacibn hormonal de la glucogenólisis (capitulo 20). Al parecer, el cAMP, mediante la estimulación de la proteína cinasa que depende de cAMP, convierte la triacilglicerol lipasa inactiva sensible a hormona, en Iipasa activa. La lipólisis en gran parte es controlada por la cantidad de cAMP presente en el tejido. Se deduce que los procesos que destruyen o preservan el cAMP tienen efecto sobre la lip6lisis. El cAMP es degradado a 5'-AMP por la enzima 3', S'-nucle6tido fosfodiesterasa cíctica. Esta enzima es inhibida por las rnetilxantinas como la cafeina y la teofilina. Es significativo que el tomar café, que contiene cafeina, produzca una elevación marcada y prolongada de acidos graso5 libres en el plasma humano. La insulina antagoniza la acci6n de las hormonas lipoliticas. En la actualidad, se considera que la lipólisis puede ser m6s sensible a los cambios en la

concentraci6n de insulina que lo que son la utilizacion de la glucosa y la esterifícación. Los efectos antilipoliticos d e insulina. acido nicotinico y prostaglandina El pueden explicarse por la inhibicion de la síntesis de cAMP en el sitio de la adenilil ciclasa, actuando a travds de una proteina Gi. Tambiin la insulina estimula a la fosfodiesterasa y a la lipasafocfatasa que inactiva a la lipasa sensible a hormona. Los mecanismos posibles para la accilin de las hormonas tiroideas incluyen un aumento en la concentracion de cAMP mediante la facilitacibn del paso del estímulo desde el sitio receptor en el exterior de la membrana celular al sitio de fa adenilil ciclasa en el lado interno de la membrana y una inhibición de la actividad de la fosfodiesterasa. El efecto de la hormona del crecimiento en la promocibn de la lipdlisis, es lento. Depende de la síntesis de las proteínas que intervienen en la formación del cAMP. Los glucocorticoides favorecen la lipólisis por medio de la síntesis de nueva proteina lipasa pero por una via independiente del cAMP. Este hallazgo tambitn ayuda a explicar la hnci6n de la

Transporte y almacenamrenfode lbidos

315

hipbfisis y de la corteza suprarrenal en el incremento de la movilización de lípidos. El sistema nervioso simphtico, a traves de la liberación de noradrenalina en el tejido adiposo, tiene una funciiin central en la movilización de ácidos grasos libres, al ejercer una influencia tónica aun cuando la actividad nerviosa no aumenta. Así, la lipolisis elevada, causada por muchos de los factores descritos previamente, se puede reducir o abolir por la desnervación del tejido adiposo, el bloqueo ganglionar con hexarnetonio o el agotamiento dc los depósitos de noradrenalina con reserpina.

EL TEJIDO ADIPOSO PARDO FAVORECE LA TERMOGENESIS
EI tejido adiposo pardo interviene en el metabolismo, en partici~laren los momentos en que es necesaria la generación de calor. Así, el tejido es extremadamente activo en algunas especies al despertar de la hibernación, en animales expuestos al frío (temogCnesis sin escalofríos) y en la producción de calor en el animal recitn nacido. Aunque no es un tejido importante en el ser humano, recientemente se ha demostrado que es activo en los individuos normales, donde parece ser la causa de la "termogénesis inducida por los alimentos", que podría explicar ta causa de i u e algunas penonas puedan "comer y no engordar". Es conveniente hacer notar que en las personas obesas el tejido adiposo pardo es escaso o rio existe. Ademis, este tejido se caracteriza por disponer de un suministro sanguíneo bien desarrollado y un contenido elevado de mitocondrias y citocromos, pero poca actividad de ATP sintatasa. El enfasis metahblico está en la oxidacion tanto de la glucosa como de los Bcidos grasos. La noradrenalina liberada dc las terminaciones nerviosas simphticas es importante en el incremento de la lipdlisis tisular. La oxidacilin y la fosforilación no esthn acopladas en la mitocondrias de este teiido, puesto que el dinitrofenol no ejerce efecto alguno y no hay control respiratorio por el ADP. La fosforilación es a nivel del sustrato; es decir, en el paso de la succinato tiocinasa y en la gluc6lisis. Por tanto, la oxidación produce mucho calor y un poco de encrgia libre se atrapa como ATP. En teminos de la teoría quimiosrnótica (capitulo 141, podria parecer que el gradiente de protones normalmente presente a travh de la membrana mitocondrial interna de las rnitocondrias acopladas, es disipado de modo continuo en e[ tejido adiposo pardo por una proteina temogdnica, la termogenina, que actúa como una vía de conduccibn de protones a través de la membrana. Esto explicaría la aparente carencia de efecto de los desacopladores (figura 27-1 0).

Han evolucionado una variedad de mecanismos para el control fino del metabolismo en el tejido adiposo
Es posible que el tejido adiposo humano no sea un sitio importante de lipogenesis. Esto se sehala por la observaci6n de que no hay una incorporaci6n significativa de radiactividad en los ácidos grasos de cadena larga, procedente de glucosa o de piruvato marcados y que a[ parecer no estri presente la ATP-citratoliasa, enzima clave en la lipogénesis, y tiene una actividad extremadamente baja en el higado. Otras enzimas, GOmO la glucosad-fosfato deshidrogenasa y Ia enzima málica, que en la rata experimentan cambios adaptativos coincidentes con un incremento en la Iipogenesis, no sufren cambios semejantes en el tejido adiposo humano. De hecho, se ha sugerido que en e1 ser humano hay un "síndrome de exceso de carbohidrato~"debido a una lirnitacion única en la capacidad para desechar por medio de la lipogénesis. En las aves, la lipoginesis esta confinada al hígado, donde tiene importancia particular en el suministro de lipidos para la f o m a c i b n del huevo, estimulado por los estrbgenos. El tejido adiposo humano no es sensible a la mayoria de las hormonas lipoliticas, excepto a las cateco2aminac. De mayor interés es la ausencia de respuesta lipolitica a la adrenalina en el conejo, cobayo, cerdo y pollo; el efecto lipolitico pronunciado del glucag6n en las aves, junto con la ausencia de efecto antilipolitico de la insulina y la carencia de sintesis de glicerol como aciIglicerol a partir de la glucosa en el pichbn. Al considerar e3 profundo desarreglo del metabolismo en la diabetes sacarina (que se debe en lo principal al incremento en la liberacidn de ácidos grasos libres de los depdsitos) y el hecho de que la insulina corrige esta situacibn en gran medida, se debe concluir que la insulina desernpefia una función prominente en la regulación del metabolismo en el tejido adiposo.

RESUMEN
1) Dado que son insolubles en agua, los lipidos no

polares, como las lipoproteínas, deben combinarse con lipidos y proteínas anfipaticos para volverlos miscibles en agua para su transporte a los tejidos en el plasma sanguineo acuoso. 2) Se reconocen cuatro grupos principales de lipoproteínas; quilomicrones que transportan Iipidos que provienen de la digestión y absorcidn. Las lipoproteínas de muy bajadensidad (VLDL) que imnsportan triacilglicerol desde el hígado. Lipoproteinas de

316

+

Bioquímica de Hurper

EXTERIOR

(

MEMBRANA M ~ T O C O N D R ~ ~ ~ ( INTERIOR INTERNA

1

hormonas

1

r'
, A

W :.u '

,,..\*

"

,,,-

",

\

&l.

Cadena
respiratoria
Triacil1

Figura 27-10. Termogénesis en el tejido adiposo pardo. La adividad de la eadena respiratoria produee calor adem6s de la traslocacibn de protones (capítulo 14). Estos protones disipan más calor por medio de la termogenina cuando regresan al compartimiento mitocondrial interno en lugar de generar ATP, como ocurre cuando regresan por medio de la Fi ATP sintasa. El paso da H* por medio de la termogenina es fnhibido por las nuclebtidos d e purina cuando e tejido l adiposo parda no es estimulado. Bajo la influencia de la noradrenalina, la inhibicibn desaparece por el estimulo de la producci6n de dcidos grasos libres (AGL) y acil-COA. Ndtese el papel doble de la acil-COA en facilitar tanto la accibn de la termogenrna, como el suministro de equivalentes reductores para la cadena respiratoria. Efectos reguladores positivos (O) negativos (O). o

baja densidad (LDL), que son ricas en colesterol y provienen del metabolismo de las VLDL y lipoproteínas de alta densidad (HDL), que tambitin son ricas en colesterol, pero cuya actividad consiste en remover el colesterol de los tejidos y participar en el metabolismo de otras lipoproteinas. 3) Los quilamicrones y VLDL son metabolizados primero por hidrblisis catalizada por la proteina lipasa en tejidos extrahepáticos. Se remueve la mayor parte de triacilgliceroles y en la circulacidn queda un remanente de lipoproteina. Estos remanentes son captados por el hígado por endocitosis mediada por receptor, pero algunos remanentes (IDL) generados de VLDL forman LDL y por último son retirados de la circulacibn por el higado y otros tejidos mediante el receptor para LDL. 4) La fraccibn proteínica de las lipoproteinas recibe el nombre de apolipoproteina. Actiia como activador enzimitico (por ejemplo, apo C-II y apo A-1) o como ligando para receptores celulares (pos ejemplo, apo A-1, apo E y apo B-100). S) El desequilibrio en la velocidad desintesjshepatica de triacilglicerol y en la secrecibn de VLDL causa la acumulacibn de grasa en el hígado. Este efecto tiene importancia clínica ya que se presenta en el alcoholísrno donde prosigue a cirrosis y disfunción hepática. 6 ) El rriacilglicerol es el lipido de almacenaje principal en el tejido adiposo. Despuds de la hidrdlisis por acci6n de una lipasa sensible a hormonas, es eliminado a la ci~ulacibn forma de Acidos graen sos libres y glicerol. Los ácidos grasos libres se unen a la albúmina sCrica para su transporte a los tejidos, donde se utilizan como una importante fuente energktica. La lipasa sensible a hormona es estimulada por la adrenalina y la noradrenalina e inhibida por la insulina. 7) El tejido adiposo pardo es el sitio de "Eemogdnesis sin escalofríos". Se encuentra en animales en hibernacibn y recjkn nacidos y en cantidades pequefias en el ser humano, donde parece ser la causa de la 'Yermogénesis inducida por los alimentos". La termogtnesis se debe a una protelna, la terrnogenina, que actúa como una vía conductora de protones a travks de la membrana interna mitocondrial, que desacopla la oxidación de la fosforilacibn.

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Síntesis, transporte y excreción de! coIesteroI
Peter A. Mayes, PhD, DSc

INTRODUCCIÓN
El colesterol se encuentra en los tejidos y en las lipoproteínas plasmáticas como colesterol libre o, combinado con un Acido graso de cadena larga, como &ter de colesterilo. Es sintetizado en numerosas tejidos a partir de acetil<oA y finalmente eliminado del cuerpo en la bilis, como cotesterol o como sales biliares. Es el precursor de todos los dernls esteroides del organismo. como los corticosteroides, las hormonas sexuales, los ácidos biliwes y la vitamina D. Además, es un producto del metabolismo animal, por lo cual existe en los alimentos de este origen, Como la yema del huevo, carne, hígado y cerebro.

vitales, causando enfermedad cerebrovascular, coronaria y vascular pesiférica. La aterosclerosis coronaria se correlaciona Con un alta proporcibn plasmhtica LDL:HDL colesterol.

EL COLESTEROL DERIVA DE LA ALIMENTACI~N LA BIQS~NTESIS y POR PARTES IGUALES
Un POCO mhs de la mitad del colesterol del organismo Se origina de su síntesis (cerca de 700 mddia) y el resto es proporcionado por una alimentacibn promedio. El higado sintetiza rnhs o menos 10% del total en los seres-humanos y los intestinos cerca de 10 por ciento. Prácticamente todos los tejidos que contienen cklulas nucleadas son capaces de sintetizar colesterol. La fracciiin microcómica (retículo endopl8smico) y el citosol se ocupan del proceso.

IMPORTANCIA BIOMEDICA
El colesterol, como lipido anfiphtico, es un componente estructural esencial de membranas de la capa exterior de las lipoproteínas plasmAticas. AdemBs, 1% lipoproteínas transportan en la circulación colesterol libre, donde fitcilmente se equilibra con el de otras lipoproteínas y de las membranas. El ester de colesterilo es una forma de almacenamiento de colesterol que se encuentra en la mayor parte de los tejidos. Es transportado como cargamento en el centro hidrofobo de las lipoproteinas. La LDL es mediadora de la captación del colesterol y del &ter de colesterilo en muchos tejidos. El colesterol libre es removido de los tejidos por las HDL y transportado al hígado para su conversión en ácidos biliares en el proceso conocido como transporte inverso del colesterol. Es un importante constituyente de los cAlculos biIiares. Sin embargo, su principal función en los procesos patolbgicos es como factor de la gknesis de la aterosclerosis de arterias

La a c e t i l 4 o A proporciona todos los átomos de carbono para el colesterol
La biosintesis del colesterol puede dividirse en cinco etapas: 1) Se sintetiza mevalonato, un compuesto de seis c a h n o s , a partir de acetil-CoA (figura 28-11.2) Se forman unidades isoprenoides por pdrdida de C 0 2del mevalonato (figura 28-2). 3) Se condensan seis unidades isoprenoides para formar el intermediario, escualeno. 4) EI escualeno se c i e m en forma cíclica para dar origen al esteroide precursor, lanosterol. 5) El colesterol se forma de lanosterol después de varios pasos ulteriores, incluyendo la perdida de tres grupos metilo (figura 28-3).

320

Bioquimica de Harper

(Capítulo 28)

Audo biliar miesterol

2NADPH + 2H*
Mevastatina,

lovastatina,

( 3 Mevalonato
O .

etdtera 2NADPt + COA SH

-006-CH,-C-GH2-GH2-OH

" l . II
OH

6~~
O

Mevalonato
Figura 28-1. Biosíntesisdel mevalonato.(HMG, 3-hidroxi-3rnetilglutaril.)La sintesic de HMG-COAfedudasa es inhibida por los metabolitos rnicéticos mevastatina (cornpactina), lovastatina (rnevinolina},provastatina y simvastatina.

Paso 1. La acetilXoA forma HMG-COA y mevalonato: La via a travds de HMGXoA (3hidraxi-3-metilglutaril~oA) sigue la misma secuencia de reacciones que se describen en el capitulo 24 para la síntesis de los cuerpos cetónicos en las mitocondrias. No obstante, dado que la sintesis del colesterol es extrarnitocondrid, las dos vías son distintas. inicialmente, se condensan dos moléculas de acetilCOApara formar acetoacetil-COAcatalindas por una enzima citosólica, la tiolasa. Como altemativñ en el higado, el acetoacetato formado en el interior de la mitocondria en la via de cetogdnesis (capitulo 24) se difunde al citosol y puede ser activado a acetoacilCOApor la acetoacil-COA sintasa, que requiere ATP y COA. La ncetoacil-COA se condensa con otra moldcula de acetil-COA, reaccibn catalizada por la HMG-COA sintssa para formar HMG-COA. Este ultimo es convertido a mevalonato en una reducción de dos etapas por NADPH, catalizada por la HMG-COA reductasa, enzima micros6mica considerada como la que cataliza el paso limitante de la

velocidad en la vía del colesterol y es el sitio de a c c i ~ n de la clase más efectiva de farrnacos reductores del colecterol, esto es, los inhibidores de la HMG-COA reductasa, estatinas (figura 28-1). Paso 2. El mevalonato forma unidades isoprenoides activas: El mevalonato es fosforilado por el ATP para formar varios intermediarios activos (figura 28-2). Por medio de una descarboxilación, se obtiene la unidad isoprenoide activa, el isopentenil pirofosfato. Pasa 3. Seis unidades isoprenoides forman escualeno: Esta etapa comprende E condensación de a tres mol~culas isopentenil pirofosfato para formar de farnesil pirofosfato. Esto sucede por la isomerización del isopentenil pirofosfato con desplazamiento de la doble ligadura que origina dimetilalil pirofosfato, seguido por la condensación con otra molkcula de isopentenil pirofosfato para formar el intermediario de 10 carbonos, geranil pirofosfato (figura 28-2). La condensacibn ulterior con isopentenil pirofosfato produce farnesil pirofosfato. Dos mol4culas de este ultimo se condensan en el extremo pirofosfato en una reacción que comprenden primer lugar, la elim inacion del pirofosfato para formar pre-escualenpirofosfato, seguida por una reduccidn con NADPH para eliminar el radical pirofosfato remanente. E: compuesto resultante es el escualeno. Puede haber una vía alterna conocida la como "la desivacibn tr~ns-metilglutaconato", cual elimina una proporcibn significativa (5% en higados nutridos, que se eleva a 33% en higados sin nutrientes) del dimetilalil pirofosfato y lo regresa, por la vía de la trans-3-metilglutaconato4oA, a HMGqoA. Esta vía puede tener potencial regulador respecto a la velocidad global de la sintesis del colesterol. Paso 4. El escualeno se convierte en lanosterol: El escualeno tiene una estructura muy semejante a la del niicleo de los estemides (figura 28-3). Antes de que el anillo se cierre, el escualeno en el reticulo endoplismico se transforma en 2,3dxido de escualeno por una oxidacibn de función mixta, la escualeno epo-xidasa. El grupometilo del Cides transferido al C i 3 yel del CB al Ci4cuandotiene lugar la ciclizacibn, catalizada por la oxidoescualeno: lanosterol ciclasa. Paso 5. El lanosterol se convierte en colesterol: En esta última etapa (figura 28-3), la formacih del colesterol a partir del lanosterol, tiene lugar en las membranacdel retfculo endoplásmico e implica cambios en el nlicleo esteroide y en la cadena lateral. EI grupo metilo del C 4 es oxidado aCOz para formar 144esmetil 1 lanosterol. De igual modo, se remueven otros dos grupos rnetilo del C d para producir zimosterol. A partir de este iiltirno se forma A7h24-colestadienol la doble por ligadura situada entre CS y C9 que se mueve a la posicibn entre CSy CI.En este punto se forma desmosterol por un desplazamiento ulterior de la doble ligaduraen el anillo B, para quedar entre Cs y C6 como

Sinlesis, Ircsnsporre y excreción del colesterol

3.71

ATP
- OOC

ADP
CH,
- OOC

OH

' t '
Mevalonato 5-fosfato

CH,

CH,

Mevalonato

ADP

CH, CH? O-@-@ Mevalonato-3-fosfo-5pimfosfato

1

ADP

ATP

IzÑzq

- OOC
CH,

CH?

O@ -@

Mevalonato-5pimfocfato

h4 EVACONATO Denvacibn i I del trans-rnetiigluta- t - - C
mnato

CH,

CH,

,
/\
CH

/Y
lsopentenil pirofosfato
TRANSFERACA

3pJ-Dimet~laiii irofosfalo

lsopentenil tRMA

, I t

Protelnas prenilatadas

Geranil pirofosfato
'FRANSFERASA

Cadena lateral de la
ubiquinona

\
Famesri pirofosfato

-

Doticol

Hem a

Escualeno
Figura 28-2. Biosintesis del escualeno, ubiquinona, dolicol y otros derivados de polisopreno. (HMG, 3 hidroxi-metifglutaril; &, citocinina. En el hem a d e citocromo oxidaca hay un residuo d e farnesilo. El carbono con asterisco* se wnviette en C i i o C12 en el escualeno. La eccuareno sintetaca es una enzima miuosbmica, todas las otras enzimas indicadas son proteínas citosblicac solubles.

322

Bioquimica de Harper

(Capitulo 28)

0
II

CH3-

OC

- S -COA+

o .

CH3
0 1 .
O

-0OC-CHz-C-CH1-CH20H OH
O

CHJ-C=CH-CH2-

0

EH~
1 .

O

Acetii-COA

1

CO,

HzO

Unidad isoprenotde

Mevalonato

\
12

*CH
Epdxido de
it

,
1 .

escualeno

I
CH FA D

1

1
CH3
CH

CH,
Eswaleno

LANOSTERQL-

HO
14-~esmetiC lanosterol Zimosterol

1s

'-27

NADPH

NADPH
7

50 1
Trlparanol Coiesteml Desmosterol
(24-deshidrocoksterol)

HO
~~,~~-~oiestadienol

Figura 28-3. Biosíntesis del colesterol. Las posicFones numeradas son las del núcleo esteroide mientras que les circulos claros y oscuros indican el destino de cada carbono en la porción acetil de la cetil-COA Se refiere al marcale, del escualeno en la tigura 28-2

Síntesis, transporte y excreciún del colesterol

323

en el colesterol. Finalmente, se obtiene el colesterot, mediante la reducción de la doble ligadura de la cadena lateral, aunque ésta puede presentarse en cualquier etapa de la conversión global. No se conoce con certeza el orden exacto en que se presentan los pasos descritos. Es probable que los intermediarios desde el escualeno al colesterol. estén adheridos a una proteina portadora especial conocida como proteína portadora de escualeno y esteroles, la cual se une a los esteroks y a otros Iípidos insolubles, pemitikndoles reaccionar en la fase acuosa de la célula. Además, es probable que sea en la forma colesterol-proteína transportadora de esteroles que el colesterot reaccione para convert i s e en hormonas ecteroides y hcidos biliares y participe en la fomacion de membranas y Iipoproteinas.

LDt-co!esterol captado por medio de los receptores para LDL (receptores apo B-100, E). Tanto en Easintesis del colesterol como en la actividad de la reductasa se manifiesta una vnriaciún diurna. Sin embargo, hay efectos mhs rápidos sobre la actividad de la reductasa. que los que pueden explicarse únicamente por los cambios en la velocidad de la síntesis de proteinas. La administracibn de insulina o de hormona tiroidea incrementa la actividad de la FIMGXoA reductasa, en tanto que la de glucaghn o glucocorticoides la reduce. La enzima en las dos formas, activa e inactiva, pueden ser modificadas dc manera reversi ble por mecanismos de fosforilacion, algunos de los cuales pueden depender de cAMP y por tanto ser sensibles al glucagdn

El farsenil pirofosfato origina otros compuestos isoprenoides importantes
El farnesil pirofosfato es el punto de bifirscacilin para la sintesis de los otros poliisoprenoides, dolicol y ubiquinona. El aIcohol poliisoprenil dolicol (figura 16-26 y capítulo 56) se forma por adición ulterior de hasta 16 residuos de isopentenil pirofosfato, en tanto que la cadena lateral de la ubiquinona (figura 14-5) se origina por la adición posterior de 3 a 7 unidades isoprenoides. Algunas de las proteinas fijadoras de GTP de la meinhrana celular pueden experimentar prenilacibn por combinación con residuos geranilo y famesilo. De este modo puede facilitarse el anclaje de proteínas prenilada en las membranas lipoides.

(figura28-4). El efecto de las variaciones de la cantidad de colesterol en la dieta sobre la de su producción endógena se ha estudiado en ratas. Cuando sólo había 0.05% de colecterol en los alimentos, entre 70 y 80% del colesterol dentro del organismo era sintetizado en el higado, intestino delgado y glándulas suprarrenales, en tanto que si la dieta contenía 2% de colesterol, se reducía la producción endbgena. Al parecer, sólo la síntesis hepática es inhibida. Los experimentos con hígado irrigado han demostrado que los quilornicrones remanentes ricos en colesterol, que son captados por el higado (capítulo 27), inhiben la sintesis de esterol. Los intentos para reducir el colesterol plasrnhti co en el ser humano mediante la ingestión dietetjca baja producen resultados variables. En general, una disrninucibn de 100 rng en el colesterol de los alimentos causa una reduccidn aproximada de 0.13 mmol/L en el suero.

LA REGULACIÓN DE LA HMG-COA REDUCTASA CONTROLA LA S~NTESIS DEL COhESf EROL
La segulaci6n de la cintesis del colesterol se ejerce casi al principio de la via, en el paso de H M G X o A reductasa. En los animales en ayuno hay una notable declinacion de la actividad de la HMG-COA reductasa, que explica la reducción de la slntesic del colesterol en esa condición. Hay un mecanismo de retroalimentacibn, por el cual, la HMG-COA reductasa es inhibida en el hígado por el mevalonato, el producto inmediato, y por el colesterol, el producto principal de la vía. Puesto que no se ha demostrado una inhibici6n directa de la enzima por el colesterol, es posible que éste (o un metabolito como el esterol oxigenado) actúe por represión de la sintesis de reductasa nueva o por inducción de síntesis de enzimas que degraden a la reductasa existente. La sintesis del colesterol es inhibida tambiin por eI combinado

NUMEROSOS FACTORES INFLUYEN EN EL EQUILIBRIO TISULAR DEL COLESTEROL
Se considera que, a nivel tisular, los siguientes E procesos gobiernan e equilibrio del colesterol celular (figura 28-5). El incremento se debe a: 1) captacion por los receptores de lipoproteinas que contienen colesterol, por ejemplo, el receptor LDL o por el receptor de limpieza; 2) captacibn de lipoproteinas que contienen colesterol por una viano mediada por receptores; 3) cap1aci6n de colesterol libre a partir del lipoproteinas ricas en colesterol, pasa la membrana celular; 4) sintesis de colesterol; y 5) hidrhlisis de Csteres de colesterilo por la enzima éster d e colesterilo hidrolasa. La reducción se debe a: 1) efusión de colecterol de la membrana a las lipoproteinas pobres en colesterol, en particular a HDL, o HDL naciente, promovida por LCAT (lecitin:colesterol aciltrans-

324 * Bioquim ica de Harper

(Capiiulo 28)

ATP

REOUCTASB CINASA (inactiva)

PI

REDUCTASA
ClNASA CTNASA

FOSFATASAS

I
REDUCTASA
AOP
CINASA
H20

le
I

(activa)

1
ADP

I

Giucagbn

I

I
ATP
Inhibidor-1

fosfato'
HMG-COA

*N
@

P

LDL coiesterol

HMECQA REDUCTAS4 (aaiva)

HME-COA
REDUCTASA
(inadiva)

1 3
I

I

I
H20

I
I

Pl

1

S
I
PROTEIN-

I

SIntesis

Figura 28-4. Mecanismos posibles de la regulacibn de la síntesis del colesterol por la HMG-COAreductasa. La insulina tiene una funcibn dominante comparada con glucagdn.Véase figura 206.

ferasa}; 2) esterificación del colesterol por ACAT (aciI-Cok:colesterol aciltransferasa); y 3) utilizaci6n del colesterol para la síntesis de otros esteroides, como hormonas o ácidos biliares en el higado.

El receptor para LDL tiene una regulación estricta
Los receptores para LDL (apo B-100, E) se encuentran en la superficie celular en hendiduras del lado citosólico de la membrana plasmhtica con una proteína llamada clatrina. El receptor es una glticoproteina que se expande a travts de ia membrana, eskndo la regiiin fijadora B-100 en el extremo m i n o terminal expuesto. Despu&sde fijarse al receptor, la LDL es captada intacta por endocitosis. En los lisosomas es d e gradada por hidrólisis de la apoproteína y del éster de colesterilo, seguida por traslocacibn del colesterol dentro de la ciula. LOS receptores no son destruidos sino que retornan a la superficie celular. Esta entrada del colesterol inhibe a la HMG-CoA reductasa y la sintesis de colesterol, estimulando la actividad de ACAT. El nitmero de receptores para LDL en la

superficie celular es regulado por el requerimiento de colesterol para membranas y para síntesis de hormonas esteroides y de Iicido biliar. Por tanto, la salida de colesterol regula a la baja el número de receptores LDL (figura 28-51, El receptor para apo B-100 E es un receptor LDL de "elevada afinidad" que puede saturarse bajo diversas circunstancias. Al parecer, existen tambikn otros receptores de "baja afinidad" para LDL, adernls de la vía no mediada por receptor o "vía de limpieza", que no es regulada.

EL COLESTEROL SE TRANSPORTA ENTRE LOS TEJIDOS DENTRO DE LAS LIPOPROTE~NAS PLASMÁTICAS (Figura 284)
En los seres humanos cuya subsistencia se basa en dietas de tipo occidental, el colesterol plasmático total es aproximadamente 5.2 mmollL y se eleva con la edad, aunque hay variaciones amplias entre los indi-

Sínresis, transportey excreción del colesterol

325

MEMBRANA CELULAR

Figura 28-5. Factores que afectan el equilibrio del colesterol a nivel celular La inversibn del transporte de colecterol puede ser inicrada por la fijaubn de HDL a su receptor (apo A-l), el cual por medio de la proteína cinaca C (capitulo 44) estimula la traslocacibn del colesterol a la membrana plasrnática. (C, colesterol, CE, ester de colesterlo, ACAT, acil-CoA:colesterol aciltransferasa; LCAT, lecitina:wlesterol aciltransferasa; A-1, apoproteína A-1, LDL, lipoprotelnas de baja densidad; VLDL, lipoproteínas de muy baja densidad.) Las LDL y HDL no se muestran a escala.

viduos. En su mayor parte esta esterificado, es transportado en las lipoproteinas del plasma y su mayor proporcion se encuentra en las LDL. Sin embargo, bajo ciertas situaciones en que predominan cuantitativamente las VLDL, aumenta la cantidad d e colesterol pla~m8tíco reside en esta fracción. que El colesterol dietetico tarda varios días en equilibrarse con el colesterol del plasma y algunas semanas para equilibrarse con el de los tejidos. Su recambio en el hlgado es relativamente rápido comparado con la vida media del colesterol corporal total. El calesterol libre plasmático y hepatico se equilibra en algunas horas, dado que se intercambia y transfiere con facilidad entre las membranas celulares, lipoproteinas plasmhticas y membranas eritrocitarias. El &ter de colesterilode los alimentos es hidrolizado en colesterol libre, que se mezcla con el colesterol libre dietdtico y biliar, antes de su absorcion desde el intestino junto con otros lipidos. Se mezcla cun el wlest m l sintetizado en el intestino para incorporarse a los quilomicrones. Entre 80 y 90% del colesterol absor-

bido es esterificado con ácidos grasos de cadena larga en la mucosa intestinal. Los ecteroles vegetales (sitosteroles) apenas se absorben. Cuando los quilomicrones reaccionan can la lipoproteína lipasa para formar quilomicrones remanentes s61o se pierde 5% de los ksteres de colesterilo, el resto es captado por el hígado cuando los remanentes reaccionan con el receptor apo E o LDL y son hidrolizados a colesterol libre. Las VLDL formadas en el higado transportan colesterol al plasma. La mayor parte del colesterol de las VLDL es retenido en tos remanentes de estas lipoproteinas (IDL) con captadas por el higado o que convertidas en LDL,las que a su vez son captadas por los receptores para LDL, de los hepatocitos y a [os tejidos extrahepáticos.

LCAT se ocupa de la mayoría de los esteres de cotesterilo plasmáticos
La actividad de la LCAT en el plasma se encarga virtualmente de todo el &ter de colesterilo plasrnhtico

326

Biaquímica de Harpcr

(Capitulo 28)

en el ser hurnano. (No es asi en otras especies como la rata, donde hay actividad apreciable de ACAT en el hígado, permitiendo que se exporte un2 cantidad significativa de cster de colesterilo en las VLDL nacGntes.) La actividad de la LCAT ce relaciona con una especie de HDL que contiene apo A-1. Cuando el colesterol de la HDL se esterifica, crea un gradiente de concentración y extrae colesterol de los tejidos y de otras lipoproteínas (figuras 28-5 y 28-61, Se vuelve menos denso y forma HULi, de la cual se piensa que se ocupa de entregar el colesterol al hígado. Por consiguiente, las características de la HDL destacan el transporte inverso dcl colesterol, proceso en el que se lleva el colesterol tis~ilar higado. al

La riroteína de transferencia de esteres colecterilo facilita el movimiento de éstos de las HDL a otras lipoproteínas
Esta proteína, que se encuentra en el plasma humano, pero no en el de rata, se relaciona tambien con la H UL. Facilita la transferencia del éster de colesterilo de HDL a VI,DL, lDL, LDL y, en menor extensibn, a los quilomicrones, lo cual permite al triacilglicerol desplazarse en direccihn opuesta. Por tanto, releva de la inhibicion por producto a la actividad de LCA'T en Eas HDL. Así, en el ser tiurnano. mucho del éster de colesterilo formado por LCAT en IlDL encuentra su camino al

Figura 284. Transporte del colesterol entre los tejidos en los humanos. (C, colesterol libre; CE. éster de colesterila; TG, triacilglicerol; VLDL. lipoproteina de muy baja densidad, IDL, Iipoproteina de densidad intermedia; LDL, lipoproteina de bala densidad. HDL, lipoproteína de alta densidad; ACAT, acil-CoA.colesterol aciltransferasa: LCAT, lecitin:colesterol aciltransferasa: A-1, apoproteína A-1, CETP, ester de colesterilo que transfiere proteínas, LPL, lipoproteina lipasa; LH, Itpasa hepatita.)

hígado por medio de los remanentes de VLDL (IDL) o de LDL (figura 2 8 6 ) . De manera simultanea, HDL;, que se ha enriquecido con triacilgliceroles. se descarga de este en el hígado desp~iksde reaccionar con la lipasa hephtica y se recicla como HDLj.

POR ÚLTIMO, TODO EL COLESTEROL DEBE ENTRAR AL H~GADO Y EXCRETARSE EN LA BILIS, COMO COLESTEROL O COMO ÁCIDOS BlLlARES (SALES)
Aproximadamente el cuerpo elimina 1 g de colesterol por dia. Cerca de la mitad es excretado en las heces después de su conversión en acidos biIiares. El resto se excreta Como colesterol. Gran parte de1 coiesterol secretado en la bilis es resorbido y se cree que por lo menos un poco del que sirve como precursor para los esteroles fecales deriva de la mucosa intestinal. El coprostanol es el estero1 principal en 1 heces; se s forma del colesterol en la parte inferior del intestino por acci6n de la flora bacteriana que ahí reside. Una gran proporcibn de la excreción de sales biliares es absorbida a la circulación portal, captada por el higado y excretada de nuevo a la bilis. Este ciclo se conoce como circulacibn enternhepitica. L a sales biliares no resorbidas o sus derivados, se excretan en las heces.

28-7) para dar las estructuras típicas de los hcidos biliares con núcleo esferoide totalmente sanirado y gmpos alfa-OH en las posiciones 3 y 7. Estos Bcidoc biliares primarios entran a la bilis como conjugados de gllclna o de taurina. En el ser humano, la proporción de los conjugados de glicina a los conjugados de taurina es normalmente 3 :1. Puesto que la bilis contiene caiitidades importantes de sodio y potasio y su p H es alcalino, se presume que los acidos biliares y sus con.juugados están en realidad en r o m a de sales, de aqui el termino "sales biliares". Una proporción de los acidos biiiares primarios en el intestino esth wjeta a ciertos cambios ulteriores por la actividad de las bacterias intestinales. Éstos incluyen la desconjugacibn y la 7 alfa deshidroxilación, que producen los ácidos hiliares secundarios, acido desoxicólico del ácido chlico y acido litocólico dcl Acido quenodesoxiciilico (figura 28-71,

Casi la totalidad de ácidos biliiares retornan al hígado en la circulacíon enterohepática
Aunqiie los productos de digestión de las grasas, inc!uyendo el colesterol, son absorbidos en los primeros 100 cm del intestino delgado, los ácidos biliares primarios y secundarios se absorben casi exclusivamente en el íleon, retornando al higado por la circulación portal cerca de 98 a 99% de los hcidos biliares secretados al intestino. Esto es conocido como la circulaciíin enterohcphtica. Sin embargo, el Bcido litociilico, por su insolubilidad, no es resorbido en cantidad apreciable. Una fracción pequeña de los ácidos biliares, quizh s610 400 mgtdía, escapa a la absorcihn por lo cual es eliminada en las heces. Aunque es una cantidad muy pequeña, no obstante representa una vía mayor para la eliminacibn dei colesterol. La circulacibn enterohepática de las sales biliares es tan eficiente que cada día el depósito relativamente pequelio de acidos biliarec (aproximadamente de 3 a 5 g) puede circular a través del intestino de 6 a 10 veces con sblo una pequefía pkrdida en las heces; es decir, de 1 a 2% por cada paso a través de la circulaci6n enterohepática. No obstante, cada dia, una cantidad de acidos biliares equivalcrite a la que se pierde en las heces es sintetirada a partir del colesterol en el higado, de modo que se mantiene constante e deposito de ácidos biliares. El proceso utiliza 3 un sistema de control por retroalimentación.

El colesterol forma ácidos biliares
Los hcidos biliares primarias son sintetiyados en el higado a partir del colesterol. El acido cólico, el ácido biliar más abundante en la bilis, junto con el ácido quenndesoxicólico, s e forman d e un precursor común, derivado a su vez del colesterol (figura 28-7). La 7 atfa hidroxilación del colesterol es el primer paso obligado en la biosintesis de 5cidos biliares y es la reaccibn limitante de la velocidad en la vía. La reacción es catalizada por la 7 alfa hidroxilasa, una enzima microsbrnica. Requiere oxígeno, NADPH y citocrnmo P450 y al parecer es una monooxigenasa típica; los pasos subsiguientes de la hidroxilaciiin tambikn son catalizados por monooxigenasa. La deficiencia de vitamina C interfiere en la formacibn de los hcidos biliares en el paso de la 3 alfa hidroxilacion y causa acumulaci6n de colesterol y aterosclesosis en los CObayos escorbúticos. La víade la biosíntesis de ácidos biliares se divide pronto en iina derivacibn que conduce s colil COA caracterizado por un grupo alfa OH extra en la posicidn 12 mientras que la otra derivación conduce a quenodesoxicolil COA.Sin contar esta diferencia, las dos vías comprenden reacciones de hidroxilacjón semejantes y el acortamiento de la cadena lateral (figura

La síntesis de acidos biliares se
en

regula

paco de 7 alfa hidroxilasa

El principal p